JP2007064766A - 被検物質の検出方法、増感剤及びイムノクロマトグラフィー用キット - Google Patents
被検物質の検出方法、増感剤及びイムノクロマトグラフィー用キット Download PDFInfo
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Abstract
【解決手段】 被検物質の所定部位を認識する第1抗体1を固定化したテストストリップ4に対し、被検物質3と、当該被検物質3の所定部位とは異なる部位を認識する第2抗体2を標識物質5に結合させた標識第2抗体6とを展開した後、所定のシグナルを発する増感物質に被検物質の所定部位を認識する抗体を介して被検物質を結合させた増感剤7を展開する。増感剤7を構成する抗体として第1抗体1を用いることが好ましい。増感物質としては例えば発色物質を用いる。
【選択図】 図3
Description
本実施例では、被検物質として妊娠検査のマーカーであるHCG(ヒトゴナドトロピン)を用いてモデル実験を行った。第1抗体としてはHCGのα−サブユニットを認識するモノクローナル抗体(抗HαS抗体)を用いた。第2抗体としては、HCGのβ−サブユニットを認識するモノクローナル抗体(抗HCG抗体)を用いた。
実験1では、増感剤の効果について検討した。
先ず、メンブレンのテストラインに対応する領域に抗HαS抗体を塗布し、コントロールラインに対応する領域に抗マウスIgG抗体を塗布した。その後、ブロッキング、ウオッシングを行い、テストストリップを得た。
前記テストストリップ、金コロイド標識抗HCG抗体及び増感剤を用いて、HCGの検出を行った。先ず、40μlの抗原溶液(HCG濃度:0.1ng/ml,0.05ng/ml,0.025ng/ml)に対して前記金コロイド標識抗HCG抗体を4μl加え混合した。混合した溶液をテストストリップに吸収させ、テストラインにおける金コロイドの集積による呈色を観察した。結果を図5に示す。図5中、矢印で示すラインがテストラインに相当する。
実施例では、前記比較例の操作を行った後のテストストリップに増感剤を展開させた。具体的には、濃度を1ng/mlに調整したHCG溶液40μlと前記金コロイド標識抗HαS抗体含有溶液4μlとを混合して増感剤を調製し、比較例の操作後のテストストリップに対し増感剤を含む溶液を吸収させ、展開させた。その後、テストラインにおける金コロイドの集積による呈色を観察した。結果を図6に示す。
図5から明らかなように、試験溶液と金コロイド標識抗HCG抗体との混合物を展開しただけの比較例においては、テストラインにおける赤色の呈色はほとんど確認できず、HCGの検出は困難であった。
実験2では、BIACORE社製の分析装置を用いて増感剤と金コロイド標識抗HCG抗体との結合を分析した。
Claims (12)
- 被検物質の所定部位を認識する第1抗体を固定化したテストストリップに対し、被検物質と、当該被検物質の前記所定部位とは異なる部位を認識する第2抗体を標識物質に結合させた標識第2抗体とを展開した後、
所定のシグナルを発する増感物質に被検物質の前記所定部位を認識する抗体を介して被検物質を結合させた増感剤を展開することを特徴とする被検物質の検出方法。 - 前記増感剤を構成する抗体として、前記第1抗体を用いることを特徴とする請求項1記載の被検物質の検出方法。
- 前記増感物質として発色物質、発光物質から選ばれる少なくとも1種を用いることを特徴とする請求項1又は2記載の被検物質の検出方法。
- 前記増感物質と前記標識物質とが同種材料からなることを特徴とする請求項1〜3のいずれか1項記載の被検物質の検出方法。
- 前記増感物質と前記標識物質とが異種材料からなることを特徴とする請求項1〜3のいずれか1項記載の被検物質の検出方法。
- 前記増感物質と前記標識物質との組合せが、金コロイド−銀微粒子包含リポソームであることを特徴とする請求項5記載の被検物質の検出方法。
- 前記増感物質と前記標識物質とで異種蛍光微粒子を用いるとともに、蛍光共鳴エネルギー転移の原理を利用して発せられる蛍光を検出することを特徴とする請求項5記載の被検物質の検出方法。
- 前記増感剤において、被検物質が結合した抗原結合部位と被検物質が結合していない抗原結合部位との両方を存在させることを特徴とする請求項1〜7のいずれか1項記載の被検物質の検出方法。
- 前記増感剤における被検物質が結合した抗原結合部位と被検物質が結合していない抗原結合部位との比率が概ね1:1であることを特徴とする請求項8記載の被検物質の検出方法。
- 被検物質の所定部位を認識する第1抗体を固定化したテストストリップに対し、被検物質と、当該被検物質の前記所定部位とは異なる部位を認識する第2抗体を標識物質に結合させた標識第2抗体とを展開するイムノクロマトグラフィー法に用いられ、
所定のシグナルを発する増感物質に被検物質の前記所定部位を認識する抗体を介して被検物質を結合させたことを特徴とする増感剤。 - 被検物質の所定部位を認識する第1抗体を固定化したテストストリップと、
前記被検物質の前記所定部位とは異なる部位を認識する第2抗体を標識物質に結合させた標識第2抗体と、
所定のシグナルを発する増感物質に被検物質の前記所定部位を認識する抗体を介して被検物質を結合させた増感剤とを備えることを特徴とするイムノクロマトグラフィー用キット。 - 被検物質の所定部位を認識する第1抗体を固定化したテストストリップと、
前記被検物質の前記所定部位とは異なる部位を認識する第2抗体を標識物質に結合させた標識第2抗体と、
所定のシグナルを発する増感物質で被検物質の前記所定部位を認識する抗体を標識した標識抗体と、
被検物質とを備えることを特徴とするイムノクロマトグラフィー用キット。
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