JP2007028917A - Method for producing aldonic acid - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、酢酸菌に属する微生物を用いたアルドン酸の製造方法に関するものである。 The present invention relates to a method for producing aldonic acid using a microorganism belonging to acetic acid bacteria.
近年、カルシウム、鉄、亜鉛などのミネラル補給剤が注目を集めている。中でも、アルドン酸はカルシウムや鉄等の金属との塩形態である場合に、他の金属塩に比べて高い水溶性を示すことから、ミネラル補強効果が高いと考えられており、特に注目されている。また、オリゴ糖を酸化して得られるアルドン酸は、オリゴ糖のヘミアセタール水酸基が酸化されていることから、シュクラーゼやβ−ガラクトシダーゼなどの生体内加水分解酵素等による分解を受け難い。このため、人が摂取した際、分解されることなく腸内に到達でき、ビフィズス菌増殖を誘発する因子として利用することが可能である。このような特性を有するため、各種糖からアルドン酸を製造する方法が探索されてきた。 In recent years, mineral supplements such as calcium, iron, and zinc have attracted attention. Among them, aldonic acid is considered to have a high mineral-reinforcing effect when it is in a salt form with a metal such as calcium or iron, and it is considered to have a high mineral reinforcing effect. Yes. In addition, aldonic acid obtained by oxidizing oligosaccharide is less susceptible to degradation by an in vivo hydrolase such as schuclase or β-galactosidase because the hemiacetal hydroxyl group of oligosaccharide is oxidized. For this reason, when ingested by humans, it can reach the intestine without being decomposed, and can be used as a factor that induces the growth of bifidobacteria. Because of such characteristics, methods for producing aldonic acid from various sugars have been searched.
アルドン酸を得るための具体的な方法としては、ヘミアセタール水酸基を有する糖を臭素ナトリウムとともに電気を印加することによって酸化する方法が知られている。また、微生物変換・発酵法により得る方法としては、アシネトバクター属やブルクホルデリア属などの微生物を、ヘミアセタール水酸基を有する糖に作用し酸化することによって得る方法が知られている(例えば、特許文献1参照)。 As a specific method for obtaining aldonic acid, a method is known in which a sugar having a hemiacetal hydroxyl group is oxidized by applying electricity together with sodium bromide. In addition, as a method obtained by microbial conversion / fermentation method, a method is known in which microorganisms such as Acinetobacter genus and Burkholderia genus are obtained by acting on a sugar having a hemiacetal hydroxyl group and oxidizing (eg, patent document). 1).
アルドン酸の中でも、乳糖のヘミアセタール水酸基を酸化することにより得られるラクトビオン酸(O−β−D−ガラクトピラノシル−(1−4)−D−グルコン酸)は米国では既にFDAの認可を受け、凝固剤としてプリンのプレミックスに添加されたり、保湿剤として化粧品に利用されている。機能面では、ラクトビオン酸はビフィズス菌選択増殖活性を持ち(例えば、特許文献2参照)、ミネラル吸収促進効果があること(例えば、特許文献3参照)が知られている。また、本発明者らはラクトビオン酸に卵殻強化効果があることを見出し既に特許出願を行った(特願2004−030898号)。このような特性を有するため、ラクトビオン酸を容易にかつ安全性の担保された方法で製造することが特に望まれていた。 Among aldonic acids, lactobionic acid (O-β-D-galactopyranosyl- (1-4) -D-gluconic acid) obtained by oxidizing the hemiacetal hydroxyl group of lactose has already been approved by the FDA in the United States. It is added to the pudding premix as a coagulant or used in cosmetics as a moisturizer. In terms of functionality, lactobionic acid is known to have bifidobacterial selective growth activity (for example, see Patent Document 2) and to have a mineral absorption promoting effect (for example, see Patent Document 3). Further, the present inventors have found that lactobionic acid has an effect of strengthening eggshell, and have already filed a patent application (Japanese Patent Application No. 2004-030898). Since it has such characteristics, it has been particularly desired to produce lactobionic acid easily and in a manner that ensures safety.
一方、酢酸菌として知られているアセトバクター属はエタノールを酸化して酢酸にし、酢酸の醸造に使われてきた(例えば、非特許文献1参照)。またグルコノバクター属はグルコースを酸化してグルコン酸や2および5−ケトグルコン酸(例えば、非特許文献2参照)にする。また、グルコノバクター属に属するグルコン酸菌はD−ソルビトールからL-ソルボースの製造に用いられている(例えば、非特許文献3参照)。しかしながら、グルコース以外のヘミアセタール水酸基を有する糖からアルドン酸を生成することについては知られていなかった。
上記のようにラクトビオン酸を容易にかつ安全性の担保された方法で製造することが特に望まれていたが、アルドン酸の化学合成品は国内の法規制上、食品や飼料用途に使用することができない。また、アシネトバクター属やブルクホルデリア属などの微生物は安全性が十分に担保された菌株とはいえず、これらの微生物を用いて生産したアルドン酸を食品や飼料用途に用いることには問題があった。 As mentioned above, it was particularly desirable to produce lactobionic acid in an easy and safe manner. However, chemical synthesis of aldonic acid should be used for food and feed applications in accordance with domestic laws and regulations. I can't. In addition, microorganisms such as Acinetobacter and Burkholderia are not sufficiently safe, and there are problems in using aldonic acid produced using these microorganisms for food and feed applications. It was.
本発明は安全性の担保された微生物を用いて効率よくアルドン酸を製造する方法を提供することを目的とするものである。 An object of the present invention is to provide a method for efficiently producing aldonic acid using a microorganism whose safety is ensured.
本発明者らは、前記課題を達成するために、安全性の担保された菌について網羅的に検討した結果、酢酸菌から選ばれる微生物がヘミアセタール水酸基を有する糖の前記水酸基を酸化することを見出し、本発明に至った。 In order to achieve the above-mentioned problems, the present inventors have comprehensively examined bacteria with guaranteed safety, and as a result, microorganisms selected from acetic acid bacteria oxidize the hydroxyl groups of sugars having hemiacetal hydroxyl groups. The headline and the present invention were reached.
すなわち、本発明の第1は、グルコース以外のヘミアセタール水酸基を有する糖に、酢酸菌に属する微生物の菌体を接触させ、ヘミアセタール水酸基を酸化しアルドン酸を生成することを特徴とするアルドン酸の製造方法を要旨とするものであり、好ましくは、酢酸菌に属する微生物の菌体が、誘導化剤として、ヘミアセタール水酸基を有する糖及び/またはアルコールを添加した培地により培養して得られた菌体である方法であり、また好ましくは、ヘミアセタール水酸基を有する糖が、D−マンノース、D−ガラクトース、D−リボース、D−キシロース、L−アラビノース、セロビオース、マルトース、マルトトリオース、マルトテトラオース、マルトペンタオース、メリビオース及びラクトースからなる群から選択された少なくとも一つの糖である方法である。 That is, according to the first aspect of the present invention, an aldonic acid is characterized in that a microbial cell belonging to acetic acid bacteria is brought into contact with a sugar having a hemiacetal hydroxyl group other than glucose to oxidize the hemiacetal hydroxyl group to produce aldonic acid. The microbial cells belonging to acetic acid bacteria are preferably obtained by culturing in a medium supplemented with a sugar having a hemiacetal hydroxyl group and / or an alcohol as an inducer. The method is a microbial cell, and preferably the sugar having a hemiacetal hydroxyl group is D-mannose, D-galactose, D-ribose, D-xylose, L-arabinose, cellobiose, maltose, maltotriose, maltotetra At least one selected from the group consisting of ose, maltopentaose, melibiose and lactose Is one sugar.
本発明の第2は、酢酸菌に属する微生物を、グルコース以外のヘミアセタール水酸基を有する糖を含有した培地で培養することにより、培養液中にアルドン酸を蓄積させ、該培養液からアルドン酸を分離することを特徴とするアルドン酸の製造方法を要旨とするものであり、好ましくは、ヘミアセタール水酸基を有する糖が、D−マンノース、D−ガラクトース、D−リボース、D−キシロース、L−アラビノース、セロビオース、マルトース、マルトトリオース、マルトテトラオース、マルトペンタオース、メリビオース及びラクトースからなる群から選択された少なくとも一つの糖である方法である。 In the second aspect of the present invention, microorganisms belonging to acetic acid bacteria are cultured in a medium containing a sugar having a hemiacetal hydroxyl group other than glucose, whereby aldonic acid is accumulated in the culture solution, and aldonic acid is obtained from the culture solution. A method for producing an aldonic acid characterized by separation, wherein a sugar having a hemiacetal hydroxyl group is preferably D-mannose, D-galactose, D-ribose, D-xylose, L-arabinose. And at least one sugar selected from the group consisting of cellobiose, maltose, maltotriose, maltotetraose, maltopentaose, melibiose and lactose.
本発明によれば、古くから食品製造に使用され安全性の担保された微生物によりアルドン酸を効率よく製造することができ、しかもヘミアセタール水酸基を有する糖の種類に制限されずに対応するアルドン酸を製造することができる。 ADVANTAGE OF THE INVENTION According to this invention, aldonic acid can be efficiently manufactured with the microorganisms used for food manufacture from a long time, and the safety | security was ensured, Moreover, it is not restrict | limited to the kind of sugar which has hemiacetal hydroxyl group, Corresponding aldonic acid Can be manufactured.
以下、本発明を詳細に説明する。 Hereinafter, the present invention will be described in detail.
本発明において用いられるヘミアセタール水酸基を有する糖とは、その還元末端がアルデヒドである糖をいう。そのようなものの具体例としては、D−グルコース、D−マンノース、D−ガラクトース、D−リボース、D−キシロース、L−アラビノース等の単糖、セロビオース、マルトース、マルトトリオース、マルトテトラオース、マルトペンタオース、メリビオース、ラクトース等のオリゴ糖があげられる。この中でも好ましくは、D−マンノース、D−ガラクトース、D−リボース、D−キシロース、L−アラビノース、セロビオース、マルトース、マルトトリオース、マルトテトラオース、マルトペンタオース、メリビオース及びラクトースであり、特に好ましくはラクトースである。 The sugar having a hemiacetal hydroxyl group used in the present invention refers to a sugar whose reducing end is an aldehyde. Specific examples of such compounds include monosaccharides such as D-glucose, D-mannose, D-galactose, D-ribose, D-xylose, L-arabinose, cellobiose, maltose, maltotriose, maltotetraose, malto Examples thereof include oligosaccharides such as pentaose, melibiose, and lactose. Among these, D-mannose, D-galactose, D-ribose, D-xylose, L-arabinose, cellobiose, maltose, maltotriose, maltotetraose, maltopentaose, melibiose and lactose are particularly preferable. Lactose.
本発明においてアルドン酸とは、単糖であるアルドースのヘミアセタール水酸基が酸化されたもののほか、還元末端にアルドース構造を有する二糖以上の糖のヘミアセタール水酸基が酸化されたものも含み、さらにこれらの塩の形態も含むものをいう。 In the present invention, aldonic acid includes not only those in which the hemiacetal hydroxyl group of aldose, which is a monosaccharide, is oxidized, but also those in which the hemiacetal hydroxyl group of a sugar having a aldose structure at the reducing end is oxidized, and these The salt form is also included.
したがって、本発明は、上記したヘミアセタール水酸基を有する糖を対応するアルドン酸に変換する方法である。具体的には、D−マンノースをマンノン酸に、D−ガラクトースをガラクトン酸に、D−リボースをリボン酸に、D−キシロースをキシロン酸に、L−アラビノースをアラボン酸に、セロビオースをセロビオン酸に、マルトースをマルトビオン酸に、マルトトリオースをマルトトリオン酸に、マルトテトラオースをマルトテトラオン酸に、マルトペンタオースをマルトペンタオン酸に、メリビオースをメリビオン酸に、ラクトースをラクトビオン酸に変換する方法である。 Accordingly, the present invention is a method for converting a sugar having a hemiacetal hydroxyl group into the corresponding aldonic acid. Specifically, D-mannose is mannonic acid, D-galactose is galactonic acid, D-ribose is ribbon acid, D-xylose is xylonic acid, L-arabinose is alabonic acid, and cellobiose is cellobionic acid. To convert maltose to maltobionic acid, maltotriose to maltotrionic acid, maltotetraose to maltotetraonic acid, maltopentaose to maltopentanoic acid, melibiose to melbionic acid, and lactose to lactobionic acid It is.
本発明に用いる微生物は酢酸菌であり、具体的にはアセトバクター属、グルコノバクター属に属する微生物を言う。上述のようない酢酸菌は古くから食品の発酵などに用いられているため、微生物の安全性が担保されている。 The microorganism used in the present invention is an acetic acid bacterium, and specifically refers to a microorganism belonging to the genus Acetobacter or Gluconobacter. Since acetic acid bacteria not described above have been used for fermentation of foods for a long time, the safety of microorganisms is ensured.
本発明の方法で用いる酢酸菌は、自然界から分離した酢酸菌を用いることもできるが、独立行政法人製品評価技術基盤機構の様に、いずれの人の要求に対しても分譲できるような公的な寄託機関によって保存されている酢酸菌を使用することもできる。それらには、例えば、アセトバクター・アセチ (Acetobacter aceti)NBRC 3281、アセトバクター・シジギ (Acetobacter syzygii)NBRC 16604、アセトバクター・シビノジェシス (Acetobacter cibinongensis)NBRC 16605、アセトバクター・インドネシエンシス (Acetobacter indonesienscis)NBRC 16471、グルコノアセトバクター・キシナス (Gluconacetobacter xylinus)NBRC 16670、グルコノアセトバクター・リフンファシエンス (Gluconacetobacter liquefaciens)NBRC 12388、グルコノアセトバクター (Gluconacetobacter sp.)NBRC 3261、グルコノバクター・セリナス (Gluconobacter cerinus)NBRC 3267、グルコノバクター・フラトゥリ (Gluconobacter fraturii)NBRC 3260、グルコノバクター・オキシダンス (Gluconobacter oxydans)NBRC 3285などが挙げられる。ただし、これらの菌株に限るものではない。 The acetic acid bacterium used in the method of the present invention can be an acetic acid bacterium isolated from the natural world. However, as in the case of the Independent Administrative Institution Product Evaluation Technology Infrastructure, it can be distributed to any person's request. It is also possible to use acetic acid bacteria stored by various depository institutions. These include, for example, Acetobacter aceti NBRC 3281, Acetobacter syzygii NBRC 16604, Acetobacter cibinongensis NBRC 16605, Acetobacter indonesiens , Gluconacetobacter xylinus NBRC 16670, Gluconacetobacter liquefaciens NBRC 12388, Gluconacetobacter sp. NBRC 3261, Gluconobuser cerinas NBRC 3267, Gluconobacter fraturii NBRC 3260, Gluconobacter oxydans NBRC 3285, and the like. However, it is not restricted to these strains.
本発明の第1の製造方法は、グルコース以外のヘミアセタール水酸基を有する糖に、酢酸菌に属する微生物の菌体を接触させ、菌体中の酵素によってヘミアセタール水酸基を酸化しアルドン酸を生成する方法である。本発明で用いられる酢酸菌に属する微生物の菌体は、酢酸菌の生菌体そのまま、あるいは菌体処理物又はそれらを担体に固定化したものをいう。 In the first production method of the present invention, a microbial cell belonging to acetic acid bacteria is brought into contact with a sugar having a hemiacetal hydroxyl group other than glucose, and an aldonic acid is generated by oxidizing the hemiacetal hydroxyl group with an enzyme in the microbial cell. Is the method. The microbial cell belonging to the acetic acid bacterium used in the present invention refers to a living microbial cell of the acetic acid bacterium as it is, or a processed microbial cell product, or those immobilized on a carrier.
先ず酢酸菌の菌体を得るには、培養を行なう必要がある。培地としては、通常の微生物と同様に培養することができる。微生物が通常資化しうる炭素源、窒素源、ビタミン、ミネラルなどの成分を適宜配合したものが用いられる。炭素源としては、グルコース、果糖などの単糖類、ショ糖、麦芽糖などのオリゴ糖類、デンプン等の多糖類、糖アルコール、グリセロールなどが挙げられ、一般的な炭水化物としては、トウモロコシ澱粉、モルトなどがあり、さらには、オリーブ油、コーン油、などの植物油も炭素源にふくめられる。また、CSL(コーンスティーブリカー)や、大豆フレークを用いてもよい。その他、アルコール、有機酸、アルカンの様な炭素化合物でもよい。 First, in order to obtain bacterial cells of acetic acid bacteria, it is necessary to perform culture. The medium can be cultured in the same manner as normal microorganisms. What mixed suitably components, such as a carbon source, a nitrogen source, a vitamin, and a mineral which can be normally utilized by microorganisms, is used. Examples of carbon sources include monosaccharides such as glucose and fructose, oligosaccharides such as sucrose and maltose, polysaccharides such as starch, sugar alcohols, and glycerol. Common carbohydrates include corn starch and malt. In addition, vegetable oils such as olive oil and corn oil are also included in the carbon source. CSL (corn steep liquor) or soybean flakes may be used. In addition, carbon compounds such as alcohol, organic acid, and alkane may be used.
窒素源としては、無機、有機どちらの窒素も利用できるが、無機態の窒素はアンモニアガス、アンモニア塩、硝酸体などを用いる。有機窒素はアミノ酸、たんぱく質または尿素の形で与えられる。天然の有機窒素複合体としては、CSL、大豆や、大豆フレーク、ピーナッツミール、綿花ミール、Distillers’ solubles、カゼイン水解物、屠殺場廃棄物、魚粉、酵母エキスなどを使用する。 As the nitrogen source, both inorganic and organic nitrogen can be used. As the inorganic nitrogen, ammonia gas, ammonia salt, nitric acid or the like is used. Organic nitrogen is provided in the form of amino acids, proteins or urea. As natural organic nitrogen complex, CSL, soybean, soybean flake, peanut meal, cotton meal, Distillers' solubles, casein hydrolyzate, slaughterhouse waste, fish meal, yeast extract and the like are used.
ビタミンとしては、天然の炭素源、窒素源を用いることで微生物の生育にとって必要なビタミン類は十分に補給できるが、パントテン酸カルシウムや、ビオチン、ビタミンB1などを必要に応じて添加する。 As vitamins, vitamins necessary for the growth of microorganisms can be sufficiently supplemented by using natural carbon sources and nitrogen sources, but calcium pantothenate, biotin, vitamin B1 and the like are added as necessary.
ミネラルとしては、マグネシウム、リン酸、カリウム、硫酸、カルシウム、塩素が必要であるが、さらに、コバルト、銅、鉄、マンガン、モリブデン、亜鉛なども微量ながら必要である。 As minerals, magnesium, phosphoric acid, potassium, sulfuric acid, calcium, and chlorine are required, but cobalt, copper, iron, manganese, molybdenum, zinc, and the like are also required in a trace amount.
その他の成分としては、pHのコントロールのために、培養液中に炭酸カルシウムを添加したり、緩衝作用を持たせるために、リン酸塩などを加えてもよい。また、培養系のpHを制御するために、アンモニアや、苛性ソーダ、塩酸、硫酸などを添加してよい。 As other components, for controlling pH, calcium carbonate may be added to the culture solution, or phosphate may be added to provide a buffering action. In order to control the pH of the culture system, ammonia, caustic soda, hydrochloric acid, sulfuric acid or the like may be added.
培養は、使用する菌株の最適培養条件で行うことが好ましいが、概略温度としては、20〜30℃が好適であり、pHとしては、塩酸、水酸化ナトリウム水溶液や炭酸カルシウムなどによりpH5〜8に維持することが好ましい。 Cultivation is preferably carried out under the optimum culture conditions for the strain to be used, but the approximate temperature is preferably 20 to 30 ° C., and the pH is adjusted to 5 to 8 with hydrochloric acid, sodium hydroxide aqueous solution, calcium carbonate or the like. It is preferable to maintain.
培養方法としては静置培養、振とう培養、深部通気撹拌培養があげられる。大量培養の場合、回分法、逐次添加培養法、連続培養法を用いた深部通気撹拌培養が好ましい。このような条件で培養を行うと、培養から15〜72時間で十分な量の微生物が得られる。 Examples of the culture method include stationary culture, shaking culture, and deep aeration and agitation culture. In the case of mass culture, deep aeration and agitation culture using a batch method, a sequential addition culture method or a continuous culture method is preferable. When culturing is performed under such conditions, a sufficient amount of microorganisms can be obtained in 15 to 72 hours after culturing.
本発明においては、上記の培養の際に、培地中に酵素の誘導化剤としてヘミアセタール水酸基を有する糖を添加することが、アルドン酸への変換効率を上昇させることができるという点で好ましい。ここで用いられるヘミアセタール水酸基を有する糖としては、D−グルコース、D−マンノース、D−ガラクトース、D−リボース、D−キシロース、L−アラビノース等の単糖、セロビオース、マルトース、マルトトリオース、マルトテトラオース、マルトペンタオース、メリビオース、ラクトース等のオリゴ糖があげられる。また、これらの糖以外にもエタノール、イソプロパノールなどのアルコールを誘導剤として加えてもよい。 In the present invention, it is preferable to add a saccharide having a hemiacetal hydroxyl group as an enzyme inducer to the medium during the above-described culture because the conversion efficiency to aldonic acid can be increased. Examples of the sugar having a hemiacetal hydroxyl group used herein include monosaccharides such as D-glucose, D-mannose, D-galactose, D-ribose, D-xylose, and L-arabinose, cellobiose, maltose, maltotriose, malto Examples thereof include oligosaccharides such as tetraose, maltopentaose, melibiose, and lactose. In addition to these sugars, alcohols such as ethanol and isopropanol may be added as inducers.
誘導化剤の添加量としては、0.1〜100g/L、さらに好ましくは0.1〜10g/Lである。 The addition amount of the derivatizing agent is 0.1 to 100 g / L, more preferably 0.1 to 10 g / L.
この場合、酢酸菌が前記糖のみで生育できないときには、資化することができる炭素源を添加して培養することが必要である。酢酸菌が通常資化できる炭素源としては、グルコース、果糖などの単糖類、ショ糖、麦芽糖などのオリゴ糖類、デンプン等の多糖類、糖アルコール、グリセロールなどが挙げられる。炭素源の添加量としては、一般的に10〜200g/L、さらに好ましくは、10〜50g/Lである。他の培地成分として、培養条件を最適化するために、前述の窒素源や、ミネラル、ビタミン、緩衝剤などを加えてもよい。 In this case, when acetic acid bacteria cannot grow only with the sugar, it is necessary to add and cultivate a carbon source that can be assimilated. Examples of carbon sources that can be generally assimilated by acetic acid bacteria include monosaccharides such as glucose and fructose, oligosaccharides such as sucrose and maltose, polysaccharides such as starch, sugar alcohol, and glycerol. The amount of carbon source added is generally 10 to 200 g / L, more preferably 10 to 50 g / L. As other medium components, the aforementioned nitrogen source, minerals, vitamins, buffers and the like may be added in order to optimize the culture conditions.
上記のようにして得られた酢酸菌の生菌体をそのまま用いる場合は、回収した菌体をそのまま用いることができる。 In the case where the live cells of acetic acid bacteria obtained as described above are used as they are, the collected cells can be used as they are.
酢酸菌の菌体処理物として用いる場合は、アセトン、第四アンモニウム化合物、硫酸ラウリルソーダ、Tweenまたは、微生物の細胞壁の特異的な結合を分解する酵素などで薬剤処理した菌体、凍結した菌体を減圧下で水分を昇華することで得られる凍結乾燥菌体、ホモジナイザーやガラスビーズを用い、物理的に破砕した菌体破砕物、さらには菌体破砕物の上清である無細胞抽出物、これらから酵素を抽出した粗酵素液などを用いることができる。 When used as a cell-treated product of acetic acid bacteria, cells treated with drugs with acetone, quaternary ammonium compounds, lauryl soda sulfate, Tween, or an enzyme that breaks down the specific binding of the cell walls of microorganisms, frozen cells Freeze-dried microbial cells obtained by sublimating water under reduced pressure, homogenizers and glass beads, physically crushed microbial cells, and cell-free extract that is the supernatant of microbial cell crushed materials, A crude enzyme solution obtained by extracting an enzyme from these can be used.
酢酸菌の菌体あるいは処理物を担体に固定化するには、セルロース担体、セラミック担体、ガラスビーズ担体のような物質に吸着させる方法や、格子構造を持つゲル状物質、たとえば寒天、アルギン酸カルシウム、カラギーナンや、公知のポリマーに包括する方法などが挙げられる。この方法は微生物を繰り返し使用することを可能にする。 In order to immobilize acetic acid bacterial cells or treated products on a carrier, a method of adsorbing to a substance such as a cellulose carrier, a ceramic carrier, a glass bead carrier, a gel-like substance having a lattice structure, such as agar, calcium alginate, Examples thereof include carrageenan and a method included in known polymers. This method allows the microorganism to be used repeatedly.
本発明の第1の製造方法においては、基質となるヘミアセタール水酸基を有する糖を反応溶媒に溶解し、上記したように調製した酢酸菌の培養液、菌体、または菌体処理物を加えて必要により反応温度、反応液のpHを制御しながら反応させる。反応溶媒としては、イオン交換水、緩衝液などの水性溶媒が使用できる。反応液の基質濃度は特に制限はないが、基質となる前記糖の溶解度、生産性などを考慮すると10〜50質量%で実施するのが好ましい。 In the first production method of the present invention, a sugar having a hemiacetal hydroxyl group serving as a substrate is dissolved in a reaction solvent, and a culture solution, bacterial cells, or treated bacterial cells prepared as described above are added. If necessary, the reaction is carried out while controlling the reaction temperature and the pH of the reaction solution. As the reaction solvent, an aqueous solvent such as ion-exchanged water or a buffer solution can be used. The substrate concentration of the reaction solution is not particularly limited, but it is preferably 10 to 50% by mass in consideration of the solubility and productivity of the sugar as a substrate.
反応時間に特に制限はないが、通常6〜24時間、好ましくは6〜12時間で反応が終了する条件を選択することが好ましい。反応pHは、用いる微生物の酵素の至適pHに依存するが、一般的にはpH4〜8の範囲で、特に5〜7が好ましい。また、反応温度は微生物酵素が失活しない条件であればよく、20〜60℃が好ましいが、30〜45℃がより好ましい。 Although there is no restriction | limiting in particular in reaction time, It is preferable to select the conditions which reaction completes normally in 6 to 24 hours, preferably 6 to 12 hours. The reaction pH depends on the optimum pH of the microbial enzyme to be used, but is generally in the range of pH 4 to 8, particularly 5 to 7. Moreover, the reaction temperature should just be the conditions which a microbial enzyme does not deactivate, 20-60 degreeC is preferable, but 30-45 degreeC is more preferable.
反応方法としては静置、振とう、深部通気撹拌があげられる。このような条件で培養を行うと、15〜72時間で十分な量の生産物が得られる。 Examples of the reaction method include standing, shaking, and deep aeration stirring. When culture is performed under such conditions, a sufficient amount of product is obtained in 15 to 72 hours.
以上のようにして得られた反応液から、目的とするアルドン酸を単離精製するには、抽出、カラム分離などの一般的な分離方法を用いることができる。例えば、エタノールを反応液に添加して、目的産物を沈殿し回収する方法、活性炭や、多孔性有機樹脂粒子を用いた吸着クロマトグラフィーや、ゲルろ過、イオン交換樹脂クロマトグラフィーを用いて単離することができる。 In order to isolate and purify the target aldonic acid from the reaction solution obtained as described above, a general separation method such as extraction or column separation can be used. For example, ethanol is added to the reaction solution, and the target product is precipitated and collected, and is isolated using activated carbon, adsorption chromatography using porous organic resin particles, gel filtration, or ion exchange resin chromatography. be able to.
本発明の第2の製造方法は、酢酸菌に属する微生物を、グルコース以外のヘミアセタール水酸基を有する糖を含有した培地で培養することにより、培養液中にアルドン酸を蓄積させ、培養液からアルドン酸を分離するものである。培養に用いられる培地成分としては、培地中にヘミアセタール水酸基を有する糖を含有させる以外は、本発明の第1の製造方法で用いる上記の培地成分が同様に用いられる。ヘミアセタール水酸基を有する糖としては、上記したものと同様のものが利用できる。これらの含有量としては、10〜500g/L、さらに好ましくは、10〜100g/Lである。 The second production method of the present invention comprises culturing a microorganism belonging to acetic acid bacteria in a medium containing a sugar having a hemiacetal hydroxyl group other than glucose, thereby accumulating aldonic acid in the culture solution, The acid is separated. As the medium component used for the culture, the above-described medium components used in the first production method of the present invention are similarly used except that the medium contains a sugar having a hemiacetal hydroxyl group. As the sugar having a hemiacetal hydroxyl group, the same sugars as described above can be used. As these content, it is 10-500 g / L, More preferably, it is 10-100 g / L.
また、培養条件としては、培養期間が通常1〜10日間であることを除いて、前記した培養条件と同様に行うことができる。 The culture conditions can be the same as the culture conditions described above except that the culture period is usually 1 to 10 days.
培養液中に蓄積したアルドン酸は、前述した方法と同様に分離、精製することができる。 Aldonic acid accumulated in the culture solution can be separated and purified in the same manner as described above.
本発明により製造されたアルドン酸は、整腸作用、脂質代謝改善作用、ミネラル吸収促進作用、卵殻強化作用を示し、医薬品、食品や、飼料として有用である。上記アルドン酸を医薬品として用いる場合は、当該分野で常套的に用いられている賦形剤、潤沢剤、希釈剤、pH調節剤、防腐剤、甘味剤、芳香剤、乳化散剤などを用いて錠剤、粉剤、水和剤、乳剤として経口的にまたは非経口的に投与することができる。また、上記アルドン酸を食品や、飼料として用いる場合、そのままで、または他の食品や飼料に添加もしくは混合して使用することができる。 The aldonic acid produced by the present invention exhibits an intestinal regulating action, a lipid metabolism improving action, a mineral absorption promoting action, and an eggshell strengthening action, and is useful as a pharmaceutical product, food or feed. When the aldonic acid is used as a pharmaceutical product, tablets using excipients, lubricants, diluents, pH adjusters, preservatives, sweeteners, fragrances, emulsifying powders and the like conventionally used in the field are used. Can be administered orally or parenterally as powders, wettable powders, emulsions. Moreover, when using the said aldonic acid as a foodstuff or a feed, it can be used as it is, or it can be added or mixed with another foodstuff or a feed.
以下、実施例によって本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらの例のみに限定されるものではない。なお、実施例中、%は、質量%を表す。 EXAMPLES Hereinafter, although an Example demonstrates this invention concretely, this invention is not limited only to these examples. In the examples,% represents mass%.
実施例において、反応液中あるいは培養液中のアルドン酸の定量は高速液体クロマトグラフィー(HPLC)を用い以下の条件により行なった。
HPLC分析条件
カラムAsahipak NH2P−50(Shodex社製)
溶離液 アセトニトリル:40mMクエン酸−NaH2PO4緩衝液(pH5.0)=60:40(体積比)
条件 温度:40℃
流速:0.8mL/mL
検出器:示差屈折計
実施例1
〔菌体の調製〕(誘導化剤としてラクトースを添加)
試験管(18 mm×200 mm)に、ラクトース0.5%、グルコース0.5%、酵母エキス0.5%、ポリペプトン0.5%、硫酸マグネシウム0.1%(pH7.0)を含む培地3mLを分注し、121℃で20分間殺菌した。その試験管に表1に示した各種グルコノバクター(独立行政法人製品評価技術基盤機構から入手)の一白金耳を植菌し、30℃で3日間振とう培養(220rpm)した。その後、培養液を遠心し菌体を回収した。
〔ラクトビオン酸の生産〕
上記の方法で得られた菌体を2%ラクトース1mLに再懸濁し、40度で6時間インキュベーションし、反応液中のラクトビオン酸を測定した。結果を表1に示す。
In the examples, the aldonic acid in the reaction solution or the culture solution was quantified using high performance liquid chromatography (HPLC) under the following conditions.
HPLC analysis condition column Asahipak NH2P-50 (manufactured by Shodex)
Eluent Acetonitrile: 40 mM citrate-NaH2PO4 buffer (pH 5.0) = 60: 40 (volume ratio)
Condition Temperature: 40 ℃
Flow rate: 0.8mL / mL
Detector: differential refractometer Example 1
[Preparation of bacterial cells] (Lactose added as inducer)
In a test tube (18 mm × 200 mm), dispense 3 mL of medium containing 0.5% lactose, 0.5% glucose, 0.5% yeast extract, 0.5% polypeptone, and 0.1% magnesium sulfate (pH 7.0). Sterilized for a minute. One platinum loop of various gluconobacters (obtained from the National Institute for Product Evaluation and Technology) shown in Table 1 was inoculated into the test tube, and cultured with shaking (220 rpm) at 30 ° C. for 3 days. Thereafter, the culture broth was centrifuged to collect the cells.
[Production of lactobionic acid]
The cells obtained by the above method were resuspended in 1 mL of 2% lactose and incubated at 40 degrees for 6 hours, and lactobionic acid in the reaction solution was measured. The results are shown in Table 1.
〔菌体の調製〕(誘導化剤は無添加)
試験管(18 mm×200 mm)に、グルコース0.5%、酵母エキス0.5%、ポリペプトン0.5%、硫酸マグネシウム0.1%(pH7.0)を含む培地3mLを分注し、121℃で20分間殺菌した。その試験管に表1に示した各種グルコノバクター(独立行政法人製品評価技術基盤機構から入手)の一白金耳を植菌し、30℃で3日間振とう培養(220rpm)した。
〔ラクトビオン酸の生産〕
実施例1と同様の方法で行った。反応液中に含まれるラクトビオン酸を表2に示した。
[Preparation of bacterial cells] (No inducer added)
A test tube (18 mm × 200 mm) was dispensed with 3 mL of medium containing 0.5% glucose, 0.5% yeast extract, 0.5% polypeptone, and 0.1% magnesium sulfate (pH 7.0), and sterilized at 121 ° C. for 20 minutes. One platinum loop of various gluconobacters (obtained from the National Institute for Product Evaluation and Technology) shown in Table 1 was inoculated into the test tube, and cultured with shaking (220 rpm) at 30 ° C. for 3 days.
[Production of lactobionic acid]
The same method as in Example 1 was used. The lactobionic acid contained in the reaction solution is shown in Table 2.
実施例3〔各種アルドン酸の生産〕
実施例1と同様にして、グルコノバクター・オキシダンス NBRC 3285の菌体を調製し、ヘミアセタール水酸基を有する糖12種(D−マンノース、D−ガラクトース、D−リボース、D−キシロース、L−アラビノース、セロビオース、マルトース、マルトトリオース、マルトテトラオース、マルトペンタオース、メリビオース、ラクトース)の2%水溶液1mLに再懸濁し、40度で6時間インキュベーションした。反応液中に含まれる各種アルドン酸の定量結果を表3に示した。
Example 3 [Production of various aldonic acids]
In the same manner as in Example 1, cells of Gluconobacter oxydans NBRC 3285 were prepared, and 12 types of sugars having a hemiacetal hydroxyl group (D-mannose, D-galactose, D-ribose, D-xylose, L- (Arabinose, cellobiose, maltose, maltotriose, maltotetraose, maltopentaose, melibiose, lactose) were resuspended in 1 mL of a 2% aqueous solution and incubated at 40 ° C. for 6 hours. Table 3 shows the quantitative results of various aldonic acids contained in the reaction solution.
〔前培養〕
試験管(18 mm×200 mm)に、グルコース0.5%、酵母エキス0.5%、ポリペプトン0.5%、硫酸マグネシウム0.1%(pH7.0)を含む培地3mLを分注し、121℃で20分間殺菌した。その試験管に一白金耳のグルコノバクター・セリナス NBRC 3267を植菌し、30℃で1晩振とう培養(220rpm)した。次に上記組成培地を1L分注し121℃で20分間殺菌した3L三角フラスコに上記試験管培養液を植菌し30℃で3日間振とう培養(220rpm)した。
〔本培養〕
ジャーファーメンターによる培養を行った。グルコース1.5%、ラクトース15%、酵母エキス0.5%、ポリペプトン0.5%、硫酸マグネシウム0.1%、炭酸カルシウム7.5%を含む培地(pH7.0)を20L調製し121℃で20分間殺菌した。これに上記前培養液1Lを植菌し、30℃で深部撹拌培養(300回転、1vvm)をした。培養液中に蓄積したラクトビオン酸の量と転換率を図1に示す。
[Pre-culture]
A test tube (18 mm × 200 mm) was dispensed with 3 mL of medium containing 0.5% glucose, 0.5% yeast extract, 0.5% polypeptone, and 0.1% magnesium sulfate (pH 7.0), and sterilized at 121 ° C. for 20 minutes. One platinum loop of Gluconobacter cerinas NBRC 3267 was inoculated into the test tube, and cultured with shaking (220 rpm) at 30 ° C. overnight. Next, 1 L of the above composition medium was dispensed and the test tube culture solution was inoculated into a 3 L Erlenmeyer flask sterilized at 121 ° C. for 20 minutes, and cultured with shaking (220 rpm) at 30 ° C. for 3 days.
[Main culture]
Cultivation was performed using a jar fermenter. 20 L of a medium (pH 7.0) containing 1.5% glucose, 15% lactose, 0.5% yeast extract, 0.5% polypeptone, 0.1% magnesium sulfate and 7.5% calcium carbonate was prepared and sterilized at 121 ° C. for 20 minutes. This was inoculated with 1 L of the above pre-cultured solution and subjected to deep agitation culture (300 rpm, 1 vvm) at 30 ° C. The amount and conversion rate of lactobionic acid accumulated in the culture medium are shown in FIG.
Claims (4)
A group in which the sugar having a hemiacetal hydroxyl group is composed of D-mannose, D-galactose, D-ribose, D-xylose, L-arabinose, cellobiose, maltose, maltotriose, maltotetraose, maltopentaose, melibiose and lactose The method for producing aldonic acid according to any one of claims 1 to 3, wherein the aldonic acid is at least one sugar selected from the group consisting of:
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Cited By (11)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2008245587A (en) * | 2007-03-30 | 2008-10-16 | Unitika Ltd | Method for producing lactobionic acid-containing milk beverage |
JP2008278776A (en) * | 2007-05-09 | 2008-11-20 | Unitika Ltd | Method for producing lactobionic acid-containing fermented milk |
JP2008303208A (en) * | 2007-05-09 | 2008-12-18 | Unitika Ltd | Mineral absorption enhancer |
JP2012005401A (en) * | 2010-06-24 | 2012-01-12 | San-Ei Sucrochemical Co Ltd | Method of producing carboxylic acid and/or carbohydrate carboxylic acid and/or salt thereof belonging to genus pantoea |
JP2012131765A (en) * | 2010-12-03 | 2012-07-12 | Yamaguchi Univ | 4-keto-d-arabonic acid, 4-keto-d-arabinose, and production method of the same |
JP2013059327A (en) * | 2011-08-25 | 2013-04-04 | Unitika Ltd | METHOD OF PRODUCING OLIGOSACCHARIDE HAVING ALDONIC ACID RESIDUE AT REDUCING TERMINAL AND HAVING α1→6 GLUCOSIDE BOND OR β1→6 GLUCOSIDE BOND |
JP2013091661A (en) * | 2013-01-21 | 2013-05-16 | San-Ei Sucrochemical Co Ltd | Mineral solubilizing stabilizer |
CN104206919A (en) * | 2014-09-23 | 2014-12-17 | 山东滨州智晟科技创新促进中心 | Roman hen feed containing D-ribose feed additive |
US9315834B2 (en) | 2009-03-18 | 2016-04-19 | Teknologian Tutkimuskeskus Vtt | Manufacture of xylonic acid |
WO2019163853A1 (en) | 2018-02-20 | 2019-08-29 | サンエイ糖化株式会社 | Method for producing sugar carboxylic acid |
CN111139211A (en) * | 2018-11-05 | 2020-05-12 | 华东理工大学 | Gluconobacter oxydans adaptive evolution method for efficiently utilizing non-glucose carbon source and application thereof |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3862005A (en) * | 1969-05-20 | 1975-01-21 | Hayashibara Co | Process for producing aldonic acids and starch sugars containing aldonic acids |
JP2001245657A (en) * | 1999-12-27 | 2001-09-11 | Takehara Kagaku Kogyo Kk | New microbial cell for producing aldonic acid and its enzyme |
WO2003078347A2 (en) * | 2002-03-13 | 2003-09-25 | W.R. Grace & Co.-Conn | Beneficiated water reducing compositions |
-
2005
- 2005-07-22 JP JP2005212745A patent/JP5100987B2/en active Active
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US3862005A (en) * | 1969-05-20 | 1975-01-21 | Hayashibara Co | Process for producing aldonic acids and starch sugars containing aldonic acids |
JP2001245657A (en) * | 1999-12-27 | 2001-09-11 | Takehara Kagaku Kogyo Kk | New microbial cell for producing aldonic acid and its enzyme |
WO2003078347A2 (en) * | 2002-03-13 | 2003-09-25 | W.R. Grace & Co.-Conn | Beneficiated water reducing compositions |
Cited By (15)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2008245587A (en) * | 2007-03-30 | 2008-10-16 | Unitika Ltd | Method for producing lactobionic acid-containing milk beverage |
JP2008278776A (en) * | 2007-05-09 | 2008-11-20 | Unitika Ltd | Method for producing lactobionic acid-containing fermented milk |
JP2008303208A (en) * | 2007-05-09 | 2008-12-18 | Unitika Ltd | Mineral absorption enhancer |
US9315834B2 (en) | 2009-03-18 | 2016-04-19 | Teknologian Tutkimuskeskus Vtt | Manufacture of xylonic acid |
JP2012005401A (en) * | 2010-06-24 | 2012-01-12 | San-Ei Sucrochemical Co Ltd | Method of producing carboxylic acid and/or carbohydrate carboxylic acid and/or salt thereof belonging to genus pantoea |
JP2012131765A (en) * | 2010-12-03 | 2012-07-12 | Yamaguchi Univ | 4-keto-d-arabonic acid, 4-keto-d-arabinose, and production method of the same |
JP2013059327A (en) * | 2011-08-25 | 2013-04-04 | Unitika Ltd | METHOD OF PRODUCING OLIGOSACCHARIDE HAVING ALDONIC ACID RESIDUE AT REDUCING TERMINAL AND HAVING α1→6 GLUCOSIDE BOND OR β1→6 GLUCOSIDE BOND |
JP2013091661A (en) * | 2013-01-21 | 2013-05-16 | San-Ei Sucrochemical Co Ltd | Mineral solubilizing stabilizer |
CN104206919A (en) * | 2014-09-23 | 2014-12-17 | 山东滨州智晟科技创新促进中心 | Roman hen feed containing D-ribose feed additive |
CN104206919B (en) * | 2014-09-23 | 2016-08-31 | 山东滨州智晟科技创新促进中心 | A kind of Roman egghen feed containing D-ribose feed addictive |
WO2019163853A1 (en) | 2018-02-20 | 2019-08-29 | サンエイ糖化株式会社 | Method for producing sugar carboxylic acid |
KR20200120722A (en) | 2018-02-20 | 2020-10-21 | 상-에이 도오까 가부시끼가이샤 | Method for producing sugar carboxylic acid |
US11384373B2 (en) | 2018-02-20 | 2022-07-12 | San-Ei Sucrochemical Co., Ltd. | Method for producing sugar carboxylic acid |
CN111139211A (en) * | 2018-11-05 | 2020-05-12 | 华东理工大学 | Gluconobacter oxydans adaptive evolution method for efficiently utilizing non-glucose carbon source and application thereof |
CN111139211B (en) * | 2018-11-05 | 2022-11-18 | 山西合成生物研究院有限公司 | Gluconobacter oxydans adaptive evolution method for efficiently utilizing non-glucose carbon source and application thereof |
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