JP2006290873A - Aquaporin expression promoter - Google Patents

Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To provide an aquaporin expression promoter in skin cells and to provide an improving agent for the skin cell environment promoting expression of a hyaluronic acid synthase, promoting the expression of the aquaporin in the skin cells and maintaining the state of the whole environment of the skin cells healthy. <P>SOLUTION: The aquaporin expression promoter comprising a tocopheryl retinoate as an active ingredient is provided. The aquaporin expression promoter having excellent humectant effects on the aqueous environment of the skin cells by promoting the expression of the aquaporin is provided. Since the expression of the aquaporin is promoted by increasing the expression of the hyaluronic acid synthase, remarkably increasing the amount of the synthesized hyaluronic acid and simultaneously promoting the expression of the aquaporin using the tocopheryl retinoate as the active ingredient, the excellent improving agent for the skin cell environment preparing the suitable whole environment of the skin cells containing intercellular spaces and maintaining the cells healthy is provided. <P>COPYRIGHT: (C)2007,JPO&INPIT

Description

本発明は、トコフェリルレチノエートを有効成分として含有することを特徴とするアクアポリン発現促進剤に関する。また本発明は、トコフェリルレチノエートを有効成分として含有することを特徴とする皮膚細胞環境改善剤に関する。   The present invention relates to an aquaporin expression promoter characterized by containing tocopheryl retinoate as an active ingredient. The present invention also relates to a skin cell environment improving agent comprising tocopheryl retinoate as an active ingredient.

皮膚の構造は、表面から表皮・真皮・皮下組織の３層構造をとっている。表皮は角層・顆粒層・有棘層・基底層に分かれており、基底細胞が***し細胞が順に押し上げられていき、すべての細胞が２〜４週間で新しく置き換わるサイクルを繰り返している。表皮では細胞が規則的に整列して肌表面のキメを整え、肌表面の立体的な構造を支え肌にハリや艶を保ち、細胞間ネットワークを介して情報や物質交換を行いながら、表皮全体の細胞環境を健康な状態に維持しつつターンオーバーを繰り返すことで表皮細胞環境を維持しているのである。   The skin structure has a three-layer structure from the surface to the epidermis, dermis, and subcutaneous tissue. The epidermis is divided into the stratum corneum, granule layer, spiny layer, and basal layer. The basal cells divide and the cells are pushed up in order, and all the cells are renewed in 2 to 4 weeks. In the epidermis, the cells are regularly arranged to adjust the texture of the skin surface, support the three-dimensional structure of the skin surface, keep the skin firm and shiny, and exchange information and substances through the intercellular network, while exchanging information and substances throughout the epidermis The epidermal cell environment is maintained by repeating the turnover while maintaining the cell environment in a healthy state.

ところで、皮膚細胞には広くヒアルロン酸が分布している。なかでも、表皮には基底層から顆粒層まで広くヒアルロン酸が分布しており、表皮細胞間の細胞外空間の構造を支え、表皮基底層から角層への栄養分・老廃物等の物質輸送に関与したり、表皮細胞のターンオーバーを促進するトリガーとして働いたり、ヒアルロン酸の保水作用によって、細胞間隙に水分を保持する役割を担っていることが知られている。ヒアルロン酸は高分子化合物であるため、皮膚の外側から表皮に供給することは困難であり、生体内で低分子の原料物質からヒアルロン酸合成酵素によって産生されているから、表皮細胞間にヒアルロン酸を供給するためにはヒアルロン酸合成酵素の発現が重要である。   By the way, hyaluronic acid is widely distributed in skin cells. In particular, hyaluronic acid is widely distributed in the epidermis from the basal layer to the granule layer, supporting the structure of the extracellular space between epidermal cells and transporting nutrients and waste materials from the epidermal basal layer to the stratum corneum. It is known that it plays a role of retaining moisture in the cell gap by being involved, acting as a trigger for promoting the turnover of epidermal cells, or the water-retaining action of hyaluronic acid. Since hyaluronic acid is a high molecular compound, it is difficult to supply it to the epidermis from the outside of the skin, and since it is produced by hyaluronic acid synthase from a low-molecular raw material in vivo, hyaluronic acid is produced between epidermal cells. Expression of hyaluronic acid synthase is important to supply

また、皮膚細胞では水チャンネルとして知られるアクアポリンが発現しており、細胞膜上に発現して細胞間隙の水分子等の低分子物質を細胞内へ取り込む役割を担っていることが知られている。ヒトでは１１種類のアクアポリン遺伝子が発見されており、水に加えて保水作用に関わるグリセリンのような低分子化合物をも取り込むアクアポリンの存在も知られている。   It is also known that aquaporin, known as a water channel, is expressed in skin cells, and is expressed on the cell membrane and plays a role of taking in low-molecular substances such as water molecules in the interstitial space into cells. Eleven types of aquaporin genes have been discovered in humans, and the existence of aquaporins that take in low-molecular compounds such as glycerin involved in water retention in addition to water is also known.

従来知られたヒアルロン酸合成促進剤としては、アロエ抽出物、オクラ抽出物、水溶性β−１，３−グルカン誘導体、酵母抽出物（特開２００４−０５１５３３号公報）、ツカサノリ科トサカモドキ属に属する海藻の抽出物（特開２０００−１３６１４７号公報）、ラベンダー抽出物（特開平１０−１８２４０２号公報）、ダービリア科ダービリア属に属する海藻の抽出物（特開平９−１７６０３６号公報）が知られている。また、ヒアルロン酸合成酵素の発現を促進する化合物としては、ホスフェート誘導体（特開２００２−３６３０８１号公報）、Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン含有糖ベンジル誘導体（特開２００４−５１５７９号公報）が知られている。さらに、アクアポリン合成促進剤としては、ノウゼンハレン科植物より得られる抽出物（特開２００４−１６８７３２号公報）が知られている。しかしながら、十分な効果を奏する化合物は未だ知られていない。   Examples of conventionally known hyaluronic acid synthesis promoters include aloe extract, okra extract, water-soluble β-1,3-glucan derivative, yeast extract (Japanese Patent Application Laid-Open No. 2004-051533), belonging to the genus Tosakamodoki. Seaweed extract (Japanese Patent Laid-Open No. 2000-136147), lavender extract (Japanese Patent Laid-Open No. 10-182402), and seaweed extract belonging to the genus Davilia (Japanese Patent Laid-Open No. 9-176036) are known. Yes. Further, as a compound that promotes the expression of hyaluronic acid synthase, a phosphate derivative (Japanese Patent Laid-Open No. 2002-363081) and an N-acetyl-D-glucosamine-containing sugar benzyl derivative (Japanese Patent Laid-Open No. 2004-51579) are known. ing. Furthermore, as an aquaporin synthesis promoter, an extract (Japanese Patent Laid-Open No. 2004-168732) obtained from a Nozenhalenaceae plant is known. However, a compound having a sufficient effect is not yet known.

ところで、ビタミンＡ酸とトコフェロールとのエステル化合物であるトコフェリルレチノエート（ビタミンＡ酸トコフェロールエステル）には、α、β、γ等が知られている。このうち、α−トコフェリルレチノエートには、抗老化効果、皮膚炎（熱傷潰瘍、皮膚潰瘍、帯状疱疹、皮膚掻痒症、皮膚角化症、ひび、あかぎれ等）治療効果が知られ（特開昭５４−９２９６７号公報、特開昭６１−２０７３３２号公報）、δ−トコフェリルレチノエートには活性酸素除去作用を有すること（第９６回フレグランスジャーナルセミナー要旨集ｐ２０-２２、２００３年）が知られている。   By the way, α, β, γ and the like are known as tocopheryl retinoate (vitamin A acid tocopherol ester) which is an ester compound of vitamin A acid and tocopherol. Of these, α-tocopheryl retinoate has known anti-aging effects and dermatitis (burn ulcers, skin ulcers, herpes zoster, cutaneous pruritus, cutaneous keratosis, cracks, redheads, etc.) therapeutic effects (JP, A No. 54-92967, JP-A 61-207332, and that δ-tocopheryl retinoate has an action of removing active oxygen (Abstracts of the 96th Fragrance Journal Seminar p20-22, 2003) It has been.

本発明の課題は、皮膚細胞においてアクアポリン発現を促進する化合物を見出すことにある。さらに、個々の表皮細胞のみならず細胞間隙にも作用して皮膚細胞全体の環境を整え維持する効果に優れる化合物を見出すことにある。   An object of the present invention is to find a compound that promotes aquaporin expression in skin cells. Furthermore, another object is to find a compound that is effective not only in individual epidermal cells but also in cell gaps to prepare and maintain the environment of the entire skin cells.

本発明者は、トコフェリルレチノエートが、アクアポリン発現を促進すること、さらに、ヒアルロン酸合成酵素の発現を促進しヒアルロン酸合成を促進し、アクアポリン発現を促進して、皮膚細胞全体の細胞環境を整え維持する効果を有することを見出し、本発明を完成するに至った。   The present inventor has found that tocopheryl retinoate promotes aquaporin expression, further promotes hyaluronic acid synthase expression and hyaluronic acid synthesis, promotes aquaporin expression, and improves the cellular environment of the entire skin cell. It has been found that it has the effect of arranging and maintaining, and the present invention has been completed.

すなわち、本発明は下記に掲げる発明である。
（１）トコフェリルレチノエートを有効成分として含有するアクアポリン発現促進剤、
（２）保湿用組成物である、（１）に記載のアクアポリン発現促進剤、
（３）トコフェリルレチノエートをアクアポリン発現促進剤として含有する保湿用組成物
（４）トコフェリルレチノエートを有効成分として含有し、アクアポリン発現促進作用に基づいて水環境を制御するものである保湿用組成物、
（５）トコフェリルレチノエートを有効成分として含有する皮膚細胞環境改善剤、
（６）トコフェリルレチノエートを、アクアポリン発現促進剤及びヒアルロン酸合成酵素発現促進剤として含有する（５）に記載の皮膚細胞環境改善剤、
（７）保湿用組成物である、（６）に記載の皮膚細胞環境改善剤。
（８）トコフェリルレチノエートを有効成分として含有し、アクアポリン発現促進作用及びヒアルロン酸合成酵素発現促進作用に基づいて皮膚細胞全体の水環境を制御するものである（５）に記載の皮膚細胞環境改善剤。 That is, this invention is the invention hung up below.
(1) an aquaporin expression promoter containing tocopheryl retinoate as an active ingredient,
(2) The aquaporin expression promoter according to (1), which is a moisturizing composition,
(3) Moisturizing composition containing tocopheryl retinoate as an aquaporin expression promoter (4) Moisturizing composition containing tocopheryl retinoate as an active ingredient and controlling the water environment based on aquaporin expression promoting action Composition,
(5) a skin cell environment improving agent containing tocopheryl retinoate as an active ingredient,
(6) The skin cell environment improving agent according to (5), comprising tocopheryl retinoate as an aquaporin expression promoter and a hyaluronic acid synthase expression promoter,
(7) The skin cell environment improving agent according to (6), which is a moisturizing composition.
(8) The skin cell environment according to (5), which contains tocopheryl retinoate as an active ingredient, and controls the aquaporin expression promoting action and hyaluronic acid synthase expression promoting action on the water environment of the entire skin cell. Improver.

本発明によって、トコフェリルレチノエートを有効成分として含有するアクアポリン発現促進剤又は皮膚細胞環境改善剤を提供する。
本発明のアクアポリン発現促進剤によれば、アクアポリン発現が促進される結果、細胞内への水分子等の物質輸送が促進され代謝が改善されることによって、細胞の状態を健全に保つことができる。また、細胞の保湿効果に優れることから、化粧料として、特に抗シワ用組成物、抗タルミ用組成物、保湿用組成物に有用である。より特に保湿用組成物として有用である。
また本発明の皮膚細胞環境改善剤によれば、皮膚細胞でのアクアポリン発現を促進するとともにヒアルロン酸合成酵素の発現を促進しヒアルロン酸合成量を顕著に増大させることができる。それによって、個々の表皮細胞のみならず細胞間隙にも作用して皮膚細胞環境を整え維持し、肌の本来持っている働きにより肌の健康状態を維持することができる。さらに、肌荒れの改善や皮膚の弾力、張り、ツヤの付与、シワやタルミの改善といった皮膚老化防止にも有効である。本発明の皮膚細胞環境改善剤は、化粧料として、特に抗シワ用組成物、抗タルミ用組成物、保湿用組成物に有用である。より特に、保湿用組成物に有用である。 According to the present invention, there is provided an aquaporin expression promoter or a skin cell environment improving agent containing tocopheryl retinoate as an active ingredient.
According to the aquaporin expression promoting agent of the present invention, aquaporin expression is promoted, and as a result, substance transport such as water molecules into the cell is promoted and metabolism is improved, so that the state of the cell can be kept healthy. . Moreover, since it is excellent in the moisturizing effect of cells, it is useful as a cosmetic, particularly for an anti-wrinkle composition, an anti-tarmi composition, and a moisturizing composition. More particularly, it is useful as a moisturizing composition.
Further, according to the skin cell environment improving agent of the present invention, it is possible to promote the expression of aquaporins in skin cells and promote the expression of hyaluronic acid synthase to significantly increase the amount of hyaluronic acid synthesis. As a result, the skin cell environment is prepared and maintained by acting not only on the individual epidermal cells but also on the cell gaps, and the skin's healthy state can be maintained by the inherent function of the skin. Furthermore, it is also effective in preventing skin aging such as improvement of rough skin, elasticity of skin, application of tension and gloss, and improvement of wrinkles and talmi. The skin cell environment improving agent of the present invention is useful as a cosmetic, particularly for an anti-wrinkle composition, an anti-tarmi composition, and a moisturizing composition. More particularly, it is useful for moisturizing compositions.

本発明のトコフェリルレチノエートとは、トコフェロールとビタミンＡ酸とのエステル化合物であり、公知の方法（特開平４−２４４０７６号公報等）により製造しまたは市販品として入手することができ、ｄ体、ｌ体、ｄｌ体のいずれでもよい。トコフェリルレチノエートは、α，β，δ等のいずれでもよいが、δ−トコフェリルレチノエートが好ましい。   The tocopheryl retinoate of the present invention is an ester compound of tocopherol and vitamin A acid, which can be produced by a known method (Japanese Patent Laid-Open No. 4-2444076 etc.) or obtained as a commercial product, and d-form , L-form, dl-form may be sufficient. Tocopheryl retinoate may be any of α, β, δ, etc., but δ-tocopheryl retinoate is preferred.

本発明のアクアポリン発現促進剤又は皮膚環境改善剤を研究用試薬として培養細胞に対して用いる場合には、その培養用培地中にトコフェリルレチノエートを、たとえば１ｎＭ〜１０００ｍＭ、好ましくは１００ｎＭ〜１０００μＭ、より好ましくは１μＭ〜１００μＭで添加する。   When the aquaporin expression promoter or skin environment improving agent of the present invention is used as a research reagent for cultured cells, tocopheryl retinoate is contained in the culture medium, for example, 1 nM to 1000 mM, preferably 100 nM to 1000 μM, More preferably, it is added at 1 to 100 μM.

本発明のアクアポリン発現促進剤又は皮膚環境改善剤を、外用組成物（医薬品や化粧料など）として用いる場合には、例えばヒトなどの哺乳動物に適用する場合には、その適用量は剤形や患者の体重等に応じて適宜選択することができ特に限定はされないが、組成物中にトコフェリルレチノエートを、好ましくは、０．０００１重量％以上、より好ましくは０．０００５重量％以上、さらに好ましくは０．００１重量％以上、特に好ましくは０．００５重量％以上、またより好ましくは０．０５重量％以上、またさらに好ましくは０．２重量％以上、また特に好ましくは０．５重量％以上であり、配合上限は好ましくは１０重量％以下、より好ましくは５重量％以下、さらに好ましくは２重量％以下で配合するのが好ましい。適用回数は１日１回程度でも可能であり、１日２〜４回、又はそれ以上の回数に分けて投与することも可能である。   When the aquaporin expression promoter or skin environment-improving agent of the present invention is used as a composition for external use (pharmaceuticals, cosmetics, etc.), for example, when applied to a mammal such as a human, It can be appropriately selected according to the body weight of the patient and is not particularly limited. Tocopheryl retinoate in the composition is preferably 0.0001% by weight or more, more preferably 0.0005% by weight or more, Preferably 0.001% by weight or more, particularly preferably 0.005% by weight or more, more preferably 0.05% by weight or more, still more preferably 0.2% by weight or more, and particularly preferably 0.5% by weight. The upper limit is preferably 10% by weight or less, more preferably 5% by weight or less, and still more preferably 2% by weight or less. The application frequency may be about once a day, and administration may be divided into 2 to 4 times a day or more.

本発明のアクアポリン発現促進剤又は皮膚環境改善剤を経口用組成物（医薬品や食品など）として用いる場合には、例えばヒトなどの哺乳動物に適用する場合、その適用量は剤形や患者の体重等に応じて適宜選択することができ特に限定はされないが、組成物中にトコフェリルレチノエートを、ヒト成人の場合通常１０ｎｇ／ｋｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ、好ましくは５０ｎｇ／ｋｇ〜８０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは１００ｎｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇとなるように適用することができる。適用回数は１日１回程度でも可能であり、１日２〜４回、又はそれ以上の回数に分けて投与することも可能である。   When the aquaporin expression promoter or skin environment-improving agent of the present invention is used as an oral composition (pharmaceuticals, foods, etc.), for example, when applied to mammals such as humans, the amount applied is the dosage form and the weight of the patient. Can be appropriately selected according to the like, and is not particularly limited. However, tocopheryl retinoate in the composition is usually 10 ng / kg to 100 mg / kg, preferably 50 ng / kg to 80 mg / kg in the case of human adults. Preferably it can apply so that it may become 100 ng / kg-50 mg / kg. The application frequency may be about once a day, and administration may be divided into 2 to 4 times a day or more.

本発明のアクアポリン発現促進剤又は皮膚環境改善剤には、前述するトコフェリルレチノエートに加えて、トコフェリルレチノエートの各種の作用を増強または補足する目的で、あるいは他の有用な作用を付加するため美白成分、抗炎症成分、細胞賦活化成分、収斂成分、抗酸化成分、ニキビ改善成分、コラーゲン等の生体成分合成促進成分、血行促進成分、保湿成分、老化防止成分等の各種成分を１種または２種以上組み合わせて配合することができる。好ましくは美白成分、抗炎症成分、細胞賦活化成分、収斂成分、抗酸化成分、老化防止成分または保湿成分の１種または２種以上の成分である。これらの各成分としては、医薬品、医薬部外品、食品または化粧品分野において従来より使用され、また将来使用されるものであれば特に制限されず、任意のものを適宜選択し使用することができる。   In addition to the above-mentioned tocopheryl retinoate, the aquaporin expression promoter or skin environment improving agent of the present invention is added for the purpose of enhancing or supplementing various actions of tocopheryl retinoate, or adding other useful actions. Therefore, one kind of various components such as a whitening component, an anti-inflammatory component, a cell activation component, an astringent component, an antioxidant component, an acne improving component, a biological component synthesis promoting component such as collagen, a blood circulation promoting component, a moisturizing component, an antiaging component Or it can mix | blend in combination of 2 or more types. Preferably, it is one or more components of a whitening component, an anti-inflammatory component, a cell activation component, an astringent component, an antioxidant component, an anti-aging component or a moisturizing component. These components are not particularly limited as long as they are conventionally used in the fields of pharmaceuticals, quasi drugs, foods or cosmetics, and are used in the future, and any one can be appropriately selected and used. .

本発明のアクアポリン発現促進剤又は皮膚細胞環境改善剤は、上記各成分に加えて組成物の用途あるいは剤形に応じて、食品、医薬部外品、医薬品に通常使用される成分を適宜配合しても良い。配合できる成分としては、特に制限されないが、例えば、アミノ酸類、アルコール類、多価アルコール類、糖類、ガム質、多糖類などの高分子化合物、界面活性剤、可溶化成分、油脂類、経皮吸収促進成分、防腐・抗菌・殺菌剤、ｐＨ調整剤、キレート剤、抗酸化剤、酵素成分、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、流動化剤、清涼化剤の他、ミネラル類、細胞賦活剤、滋養強壮剤、賦形剤、増粘剤、安定化剤、保存剤、等張化剤、分散剤、吸着剤、崩壊補助剤、湿潤剤または湿潤調節剤、防湿剤、着色料、着香剤または香料、芳香剤、還元剤、可溶化剤、溶解補助剤、発泡剤、粘稠剤または粘稠化剤、溶剤、基剤、乳化剤、可塑剤、緩衝剤、光沢化剤などをあげることができる。特に界面活性剤、可溶化成分または油脂類を配合することによって、水性溶媒中におけるトコフェリルレチノエートの安定性、有効性、使用感をより向上させることができる。また、本発明の組成物が外用組成物である場合には、界面活性剤、可溶化成分、油脂類または経皮吸収促進成分を配合するのが好ましい。   The aquaporin expression promoting agent or skin cell environment improving agent of the present invention is appropriately formulated with ingredients usually used in foods, quasi-drugs and pharmaceuticals according to the use or dosage form of the composition in addition to the above-mentioned components. May be. The component that can be blended is not particularly limited, but for example, amino acids, alcohols, polyhydric alcohols, saccharides, gums, polysaccharides and other high molecular compounds, surfactants, solubilizing components, fats and oils, transdermal Absorption-promoting ingredients, antiseptic / antibacterial / bactericidal agents, pH adjusters, chelating agents, antioxidants, enzyme components, binders, disintegrating agents, lubricants, fluidizing agents, cooling agents, minerals, cell activation Agents, nourishing tonics, excipients, thickeners, stabilizers, preservatives, isotonic agents, dispersants, adsorbents, disintegration aids, wetting agents or wetting regulators, dampening agents, coloring agents, wearing Perfume or fragrance, fragrance, reducing agent, solubilizer, solubilizer, foaming agent, thickener or thickener, solvent, base, emulsifier, plasticizer, buffer, brightener, etc. be able to. In particular, by adding a surfactant, a solubilizing component, or fats and oils, the stability, effectiveness, and feeling of use of tocopheryl retinoate in an aqueous solvent can be further improved. Moreover, when the composition of this invention is a composition for external use, it is preferable to mix | blend surfactant, a solubilizing component, fats and oils, or a percutaneous absorption promoting component.

本発明のアクアポリン発現促進剤又は皮膚細胞環境改善剤は、食品、医薬部外品、化粧品等に通常使用される剤形をとることができ、通常、固形剤、半固形剤または液剤である。具体的には、錠剤（口腔内側崩壊錠、咀嚼可能錠、発泡錠、トローチ剤、ゼリー状ドロップ剤などを含む）、丸剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、硬カプセル剤、軟カプセル剤、ドライシロップ剤、液剤（ドリンク剤、懸濁剤、シロップ剤を含む）、ゲル剤、リポソーム剤、エキス剤、チンキ剤、レモネード剤、軟膏剤、ゼリー剤などの公知の形態をとることができる。また、必要に応じてその他の溶媒や通常使用される基剤等を配合することによって、ペースト状、ムース状、ジェル状、液状、乳液状、クリーム状、シート状（基材担持）、エアゾール状、スプレー状などの各種所望の形態に調製することができる。   The aquaporin expression promoter or skin cell environment-improving agent of the present invention can take a dosage form usually used for foods, quasi drugs, cosmetics, etc., and is usually a solid, semi-solid or liquid. Specifically, tablets (including orally disintegrating tablets, chewable tablets, effervescent tablets, troches, jelly drops, etc.), pills, granules, fine granules, powders, hard capsules, soft capsules , Dry syrups, liquids (including drinks, suspensions, syrups), gels, liposomes, extracts, tinctures, lemonades, ointments, jellys and the like. In addition, pastes, mousses, gels, liquids, emulsions, creams, sheets (substrate support), aerosols can be added by blending other solvents and commonly used bases as necessary. It can be prepared in various desired forms such as spray.

これらは当業界の通常の方法にて製造することができる。例えば、半固形剤であれば、トコフェリルレチノエート並びに必要に応じて上記各任意成分を配合混合し、さらに必要に応じてその他の溶媒や通常使用される外用剤の基剤等を配合することによって、ペースト状、ムース状、ジェル状、液状、乳液状、クリーム状、シート状（基材担持）、エアゾール状、スプレー状などの各種所望の形態に調製することができる。   These can be produced by conventional methods in the art. For example, in the case of a semi-solid preparation, tocopheryl retinoate and, if necessary, the above-mentioned optional components are blended and mixed, and if necessary, other solvents and commonly used external preparation bases are blended. Can be prepared in various desired forms such as paste, mousse, gel, liquid, emulsion, cream, sheet (supported substrate), aerosol, and spray.

本発明のアクアポリン発現促進剤又は皮膚細胞環境改善剤は、通常ｐＨ１〜８の液性を備えていればよいが、半固形剤又は液剤にする場合、トコフェリルレチノエートの安定性、皮膚や粘膜に対する低刺激性、及び皮膚使用感のよさという観点から、好ましくはｐＨ２〜７、より好ましくはｐＨ２〜６の酸性領域であることが望ましい。   The aquaporin expression promoting agent or skin cell environment improving agent of the present invention may be usually provided with a liquid property of pH 1-8, but when it is a semi-solid agent or solution, the stability of tocopheryl retinoate, skin and mucous membranes From the viewpoint of low irritation to the skin and good skin feeling, it is preferably an acidic region of pH 2 to 7, more preferably pH 2 to 6.

本発明のアクアポリン発現促進剤又は皮膚細胞環境改善剤は、本発明の効果を奏すれば特に限定されないが、例えば医薬品、医薬部外品、食品［菓子、健康食品、栄養補助食品（バランス栄養食、サプリメントなど）を含む）、栄養機能食品、特定保健用食品を含む］、化粧料ではファンデーション、口紅、マスカラ、アイシャドウ、アイライナー、眉墨及び美爪料等のメーキャップ化粧料；乳液、クリーム、ローション、オイル及びパックなどの基礎化粧料；洗顔料やクレンジング、ボディ洗浄料などの洗浄料、入浴剤などとすることができる。   The aquaporin expression promoting agent or skin cell environment improving agent of the present invention is not particularly limited as long as the effects of the present invention are exhibited. For example, pharmaceuticals, quasi-drugs, foods [confectionery, health foods, dietary supplements (balance nutritional foods) Cosmetics), cosmetics for specific health, foods for specified health use, etc., cosmetics such as foundation, lipstick, mascara, eye shadow, eyeliner, eyebrow and beauty nails, etc .; emulsion, cream, Basic cosmetics such as lotions, oils and packs; cleansing agents such as facial cleansers, cleansing and body cleansing agents, bathing agents and the like.

本発明のアクアポリン発現促進剤又は皮膚細胞環境改善剤は内服用組成物として用いても外用組成物として用いてもよいが、本発明は外用組成物、特に化粧料として使用されることが好ましい。本発明は、美容上の問題を予防又は治療するための組成物（抗シワ用組成物、抗タルミ用組成物、抗保湿用組成物、皮膚代謝改善用組成物、皮膚バリア機能改善用組成物等）として用いることができる。特に、肌の角質水分量を増加させ、乾燥を防ぎカサツキを抑え肌をしっとりさせる保湿用組成物として用いるのが好適である。   The aquaporin expression promoter or skin cell environment-improving agent of the present invention may be used as an internal composition or an external composition, but the present invention is preferably used as an external composition, particularly as a cosmetic. The present invention relates to a composition for preventing or treating cosmetic problems (an anti-wrinkle composition, an anti-tarmi composition, an anti-moisturizing composition, a composition for improving skin metabolism, and a composition for improving skin barrier function). Etc.). In particular, it is preferably used as a moisturizing composition that increases the amount of keratinous moisture in the skin, prevents dryness, suppresses roughness and moisturizes the skin.

以下、実施例により、本発明をより具体的に説明するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。
実施例１ アクアポリン３発現試験
ヒト正常表皮角化細胞（Ｅｐｉｄｅｒ ｃｅｌｌ／新生児***： クラボウ社製） を、表皮角化細胞培養用培地（ＨｕＭｅｄｉａ−ＫＧ２：クラボウ社製）を用い、５％ＣＯ_２／空気、３７℃条件下でコンフルエントになるまで９６ウェルプレート（コーニング社製）で培養し、培地を、δ−トコフェリルレチノエート１×１０^−５Ｍ濃度含むＨｕＭｅｄｉａ−ＫＧ２に交換して５％ＣＯ_２／空気、３７℃条件下で２４時間培養した。２４時間後、培地を吸引除去し、４％パラホルムアルデヒド含有リン酸緩衝液を加え、４℃で１２時間放置した。リン酸緩衝液で５分間、３回洗浄し、０．０５％ペプシン／０．０１Ｎ塩酸溶液を加え、３７℃で３０分間反応させた。リン酸緩衝液で５分間、３回洗浄した後、ブロッキング液（商品名「ブロックエース」大日本製薬製）を加えて室温に１時間放置後、抗アクアポリン３抗体（ケミコン インターナショナル社製）を加え、室温で１時間反応させた。リン酸緩衝液で５分間、３回洗浄した後に、ＦＩＴＣ標識二次抗体（ダコ社製）を加え、室温で1時間反応させた。リン酸緩衝液で５分間、３回洗浄したのち、各ウェルの蛍光強度を、蛍光光度計（大日本製薬製）で測定した。 EXAMPLES Hereinafter, although an Example demonstrates this invention more concretely, this invention is not limited to a following example.
Example 1 Aquaporin 3 Expression Test Human normal epidermal keratinocytes (Epider cell / newborn foreskin: manufactured by Kurabo Industries Co., Ltd.) were used in an epidermal keratinocyte culture medium (HuMedia-KG2: manufactured by Kurabo Industries), 5% CO ₂ / The cells were cultured in a 96-well plate (manufactured by Corning) until confluent under conditions of 37 ° C. in air, and the medium was replaced with HuMedia-KG2 containing 1 × 10 ⁻⁵ M concentration of δ-tocopheryl retinoate and 5% CO ₂ / Incubate for 24 hours at 37 ° C under air. After 24 hours, the medium was removed by suction, 4% paraformaldehyde-containing phosphate buffer was added, and the mixture was allowed to stand at 4 ° C. for 12 hours. The plate was washed 3 times with a phosphate buffer solution for 5 minutes, 0.05% pepsin / 0.01N hydrochloric acid solution was added, and the mixture was reacted at 37 ° C. for 30 minutes. After washing 3 times with phosphate buffer for 5 minutes, add blocking solution (trade name “Block Ace” manufactured by Dainippon Pharmaceutical) and let stand at room temperature for 1 hour, then add anti-aquaporin 3 antibody (Chemicon International) And reacted at room temperature for 1 hour. After washing with a phosphate buffer solution for 3 minutes for 5 minutes, a FITC-labeled secondary antibody (manufactured by Dako) was added and reacted at room temperature for 1 hour. After washing 3 times with a phosphate buffer solution for 5 minutes, the fluorescence intensity of each well was measured with a fluorometer (manufactured by Dainippon Pharmaceutical).

試料無添加群の蛍光強度を１００％として、各サンプルの蛍光強度を％として表しアクアポリン３の発現量を比較した。試料無添加群と比べ、δ−トコフェリルレチノエート添加群では、顕著な蛍光強度の増加が認められ、アクアポリン３の合成促進効果を有することが認められた。皮膚細胞におけるアクアポリン３は、細胞への水の取り込みをコントロールするうえで重要な役割を担っていると考えられており（Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ、１５２２巻、２００１年、ｐ８２−８８）、また、アクアポリン３遺伝子を欠損したマウスの皮膚細胞で、角層水分量、皮膚粘弾性、バリアー回復の低下すると報告されている（Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ、２９巻、ｐ１４３）。トコフェリルレチノエートはアクアポリン３の合成を促進することが示されたことから、皮膚細胞における水環境の制御を介して、皮膚の角質水分量を増加させ保湿効果を奏すると考えられる。   The expression level of aquaporin 3 was compared with the fluorescence intensity of the sample-free group as 100% and the fluorescence intensity of each sample as%. Compared with the sample-free group, the δ-tocopheryl retinoate-added group showed a significant increase in fluorescence intensity, and was found to have an effect of promoting aquaporin 3 synthesis. Aquaporin 3 in skin cells is thought to play an important role in controlling water uptake into cells (Biochimica et Biophysica Acta, 1522, 2001, p82-88), and aquaporins It has been reported that skin cells of mice deficient in 3 genes have decreased stratum corneum water content, skin viscoelasticity, and barrier recovery (Journal of Dermatological Science, Vol. 29, p143). It has been shown that tocopheryl retinoate promotes the synthesis of aquaporin 3, and therefore, it is considered that the keratin water content of the skin is increased and the moisturizing effect is exerted through the control of the water environment in the skin cells.

実施例２
ヒアルロン酸合成酵素３ｍＲＮＡ及びアクアポリン３ｍＲＮＡ発現測定試験
ａ）細胞培養と試料添加
ヒト正常表皮角化細胞（ Ｅｐｉｄｅｒ ｃｅｌｌ／新生児***：クラボウ社製） を、表皮角化細胞培養用培地（ＨｕＭｅｄｉａ−ＫＧ２ クラボウ社製）を用い、５％ＣＯ_２／空気、３７℃条件下でコンフルエントになるまで直径６０ｍｍの培養プレート（コーニング社製）で培養し、培地を、δ−トコフェリルレチノエート３×１０^−５Ｍ濃度含むＨｕＭｅｄｉａ−ＫＧ２に交換して５％ＣＯ_２／空気、３７℃条件下で24時間培養した。細胞を回収し、全ＲＮＡ溶液を調製した。 Example 2
Hyaluronic acid synthase 3 mRNA and aquaporin 3 mRNA expression measurement test a) Cell culture and sample addition Human normal epidermal keratinocytes (Epider cell / newborn foreskin: manufactured by Kurabo Industries) are used as epidermal keratinocyte culture medium (HuMedia-KG2 Kurabo Industries) Cultivated on a 60 mm diameter culture plate (Corning) until confluent under conditions of 5% CO ₂ / air and 37 ° C., and the medium was δ-tocopheryl retinoate 3 × 10 ⁻⁵ M The medium was replaced with HuMedia-KG2 containing a concentration, and cultured under conditions of 5% CO ₂ / air and 37 ° C. for 24 hours. Cells were harvested and a total RNA solution was prepared.

ｂ）ｃＤＮＡの合成
ｃＤＮＡの合成は、ｃＤＮＡ合成キット（ファーストストランドシステム：インビトロジェン社製）を使用して行った。得られた全ＲＮＡ５００ｎｇに純水を加えて全量を１０μｌとし、１０ｍＭ ｄＮＴＰ Ｍｉｘを１μｌ、オリゴｄＴ溶液を１μｌ加えて、６５℃、５分間保温した後、４℃まで急速冷却して熱変性を行った。さらに５×反応バッファーを４μｌ、０．１Ｍ ジチオトレイトールを２μｌ、ＲＮａｓｅインヒビターを０．５μｌ、ＲＮａｓｅを含まない純水を０．５μｌ、およびスーパースクリプト^ＴＭＩＩ逆転写酵素を１μｌ加え、４℃で５分間、２３℃で１０分間、４２℃で１２０分間、７０℃で１５分間放置することで、一本鎖ｃＤＮＡの合成を行った。さらに、ＲＮａｓｅＨを１μｌ添加して３７℃で２０分間放置することで、ＲＮＡを分解した。 b) Synthesis of cDNA cDNA was synthesized using a cDNA synthesis kit (First Strand System: manufactured by Invitrogen). To 500 ng of the total RNA obtained, pure water was added to make a total volume of 10 μl, 1 μl of 10 mM dNTP Mix and 1 μl of oligo dT solution were added, kept at 65 ° C. for 5 minutes, and then rapidly cooled to 4 ° C. for heat denaturation. It was. Add 4 μl of 5 × reaction buffer, 2 μl of 0.1 M dithiothreitol, 0.5 μl of RNase inhibitor, 0.5 μl of pure water without RNase, and 1 μl of Superscript ^TM II reverse transcriptase at 4 ° C. Single-stranded cDNA was synthesized by leaving it to stand for 5 minutes, 23 ° C. for 10 minutes, 42 ° C. for 120 minutes, and 70 ° C. for 15 minutes. Furthermore, RNA was decomposed by adding 1 μl of RNase H and allowing to stand at 37 ° C. for 20 minutes.

ｃ）リアルタイム ＰＣＲ
リアルタイムＰＣＲ用のプライマーおよびＴａｑＭａｎ（登録商標）プローブには、標的遺伝子としてヒアルロン酸合成酵素３およびアクアポリン３、また参照遺伝子としてリボゾーマルＲＮＡのそれぞれについてアプライドバイオシステムズ社製のアッセイズオンデマンド（登録商標）ジーンエクスプレッションミックスを使用した。ＰＣＲ反応溶液の組成は、１サンプルあたり、ｃＤＮＡ溶液３μｌ、２０×アッセイズオンデマンド^ＴＭジーンエクスプレッションミックス１．２５μl、ＰＣＲ増幅用混合液（ＴａｑＭａｎユニバーサルＰＣＲマスター・ミックス、アプライドバイオシステムズジャパン社製）１２．５μl、超純水８．２５μlとした。 c) Real-time PCR
Primers for real-time PCR and TaqMan (registered trademark) probes include Hyaluronic Acid Synthase 3 and Aquaporin 3 as target genes, and Ribosomal RNA as a reference gene, respectively, and Assays On Demand (registered trademark) Gene manufactured by Applied Biosystems. An expression mix was used. The composition of the PCR reaction solution is 3 μl of cDNA solution per sample, 1.25 μl of 20 × Assays On Demand ^TM Gene Expression Mix, PCR amplification mixture (TaqMan Universal PCR Master Mix, Applied Biosystems Japan) 12. The amount was 5 μl and ultrapure water 8.25 μl.

これら反応液を９６穴反応プレート（マイクロアンプ・オプチカル・９６ウェル・リアクション・プレート、アプライドバイオシステムズジャパン社製）のウェルに入れ、ＴａｑＭａｎ（登録商標）ＰＣＲ専用サーマルサイクラー・検出器（ＡＢＩ７０００、アプライドバイオシステムズ社製）を用いてＰＣＲを行った。反応は、５０℃で２分間、９５℃で１０分間保温の後、９５℃で１５秒間、６０℃で１分間の反応を４０サイクル繰り返し、１サイクル毎にレポーター色素の発光量を測定した。   These reaction solutions are put into wells of a 96-well reaction plate (Microamp Optical 96-well reaction plate, manufactured by Applied Biosystems Japan) and TaqMan (registered trademark) PCR dedicated thermal cycler / detector (ABI7000, Applied Bio). PCR was carried out using Systems). The reaction was incubated at 50 ° C. for 2 minutes and at 95 ° C. for 10 minutes, followed by 40 cycles of reaction at 95 ° C. for 15 seconds and 60 ° C. for 1 minute, and the amount of luminescence of the reporter dye was measured every cycle.

ｄ）解析
各サイクル毎のレポーター色素の発光量からリボゾーマルＲＮＡ、アクアポリン３、およびヒアルロン酸合成酵素３のそれぞれをコードするＤＮＡ断片の増幅曲線を作成した。対数増幅期において任意に設定した一定の発光量を超えたサイクル数を検量線上にプロットし、発現量を算出した。標的遺伝子（アクアポリン３およびヒアルロン酸合成酵素３）の相対的発現量は、同一サンプルにおける参照遺伝子（リボゾーマルＲＮＡ）の発現量の値で補正した後、試料無添加群を１．００とした割合として算出した。なお、参照遺伝子（リボゾーマルＲＮＡ）は、試料添加及び無添加において発現量にほとんど差が認められなかった。結果は表２に示す。 d) Analysis An amplification curve of a DNA fragment encoding each of ribosomal RNA, aquaporin 3 and hyaluronic acid synthase 3 was prepared from the amount of light emitted from the reporter dye in each cycle. The number of cycles exceeding a certain amount of light emission set arbitrarily in the logarithmic amplification phase was plotted on a calibration curve to calculate the expression level. The relative expression level of the target genes (aquaporin 3 and hyaluronic acid synthase 3) was corrected with the value of the expression level of the reference gene (ribosomal RNA) in the same sample, and then the ratio of the sample-free group as 1.00 Calculated. In addition, the reference gene (ribosomal RNA) showed almost no difference in the expression level when the sample was added or not added. The results are shown in Table 2.

表２に各試料添加における、アクアポリン３遺伝子およびヒアルロン酸合成酵素３遺伝子の相対的発現量を示した。この結果から、δ−トコフェリルレチノエートにより、アクアポリン３ｍＲＮＡおよびヒアルロン酸合成酵素３ｍＲＮＡの発現が著しく増加することが確認された。δ−トコフェリルレチノエートが、アクアポリンの発現とともにヒアルロン酸合成酵素の発現を促進することによって、細胞内及び細胞間隙の水環境を整え、皮膚細胞全体の保水効果が高まることが示唆された。   Table 2 shows the relative expression levels of the aquaporin 3 gene and the hyaluronic acid synthase 3 gene in each sample addition. From these results, it was confirmed that the expression of aquaporin 3 mRNA and hyaluronic acid synthase 3 mRNA was remarkably increased by δ-tocopheryl retinoate. It was suggested that δ-tocopheryl retinoate promotes the expression of aquaporin and the expression of hyaluronic acid synthase, thereby adjusting the water environment in the cell and intercellular space and enhancing the water retention effect of the whole skin cell.

実施例３ へアレスマウスを用いた保湿性試験
表３に示す比較例１、製剤例１及び製剤例２について、皮膚の保湿性に対するδ−トコフェリルレチノエートの効果を塗布試験により検討した。１０週齡雌性へアレスマウスに、製剤例１、製剤例２又は比較例１を５０μｌずつ、１日１回、週５日塗布した。試験開始から６週間後に、表皮角層水分測定装置 （Ｓｋｉｃｏｎ−２００ＥＸ、ＩＢＳ株式会社製）を用いて角質水分量を測定した。結果を表４に示す。 Example 3 Moisturizing Test Using Hairless Mice For Comparative Example 1, Formulation Example 1 and Formulation Example 2 shown in Table 3, the effect of δ-tocopheryl retinoate on skin moisturizing properties was examined by an application test. 50 μl of Formulation Example 1, Formulation Example 2 or Comparative Example 1 was applied to a female hairless mouse for 10 weeks once a day for 5 days a week. Six weeks after the start of the test, the amount of stratum corneum was measured using a skin stratum corneum moisture measuring device (Skicon-200EX, manufactured by IBS Co., Ltd.). The results are shown in Table 4.

表４に示されるとおり、δ-トコフェリルレチノエートの配合濃度に依存して、角質水分量の増加が認められた。トコフェリルレチノエートを有効成分として含有するアクアポリン発現促進剤又は皮膚細胞環境改善剤は、角質水分量を増加させ優れた保湿効果を奏することが示された。   As shown in Table 4, an increase in the amount of horny water was observed depending on the blending concentration of δ-tocopheryl retinoate. It has been shown that an aquaporin expression promoter or a skin cell environment improving agent containing tocopheryl retinoate as an active ingredient increases the amount of keratin water and has an excellent moisturizing effect.

製剤例３（化粧水）
δ−トコフェリルレチノエート ０．１（ｗ／ｗ％）
トリ（カプリル・カプリン酸）グリセリン ０．９
リン酸Ｌ−アスコルビルマグネシウム ３．０
ヒアルロン酸 ０．０５
１，３−ブチレングリコール ５．０
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（ＨＣＯ−８０） １．０
パラオキシ安息香酸メチル ０．０５
精製水 ８９．９
合 計 １００．０（ｗ／ｗ％） Formulation Example 3 (Lotion)
δ-tocopheryl retinoate 0.1 (w / w%)
Tri (capryl / capric acid) glycerin 0.9
L-ascorbyl magnesium phosphate 3.0
Hyaluronic acid 0.05
1,3-butylene glycol 5.0
Polyoxyethylene hydrogenated castor oil (HCO-80) 1.0
Methyl paraoxybenzoate 0.05
Purified water 89.9
Total 100.0 (w / w%)

製剤例４（クリーム）
δ−トコフェリルレチノエート ０．２５（ｗ／ｗ％）
トリ（カプリル・カプリン酸）グリセリン ２．２５
白色ワセリン ２．０
ステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタン ２．０
カルボキシビニルポリマー ０．１
１，３−ブチレングリコール ５．０
セタノール ０．５
濃グリセリン ５．０
シアノコバラミン ０．０１
Ｌ−アルギニン ０．１
キサンタンガム ０．１
ヒドロキシエチルセルロース ０．１
アルギン酸ナトリウム ０．１
パラオキシ安息香酸メチル ０．０５
パラオキシ安息香酸プロピル ０．０５
精製水 ８２．３９
合 計 １００．０（ｗ／ｗ％）
Formulation Example 4 (Cream)
δ-tocopheryl retinoate 0.25 (w / w%)
Tri (capryl / capric acid) glycerin 2.25
White petrolatum 2.0
Polyoxyethylene sorbitan stearate 2.0
Carboxyvinyl polymer 0.1
1,3-butylene glycol 5.0
Cetanol 0.5
Concentrated glycerin 5.0
Cyanocobalamin 0.01
L-Arginine 0.1
Xanthan gum 0.1
Hydroxyethyl cellulose 0.1
Sodium alginate 0.1
Methyl paraoxybenzoate 0.05
Propyl paraoxybenzoate 0.05
Purified water 82.39
Total 100.0 (w / w%)

Claims (5)

トコフェリルレチノエートを有効成分として含有するアクアポリン発現促進剤。 An aquaporin expression promoter containing tocopheryl retinoate as an active ingredient. 保湿用組成物である、請求項１に記載のアクアポリン発現促進剤。 The aquaporin expression promoter according to claim 1, which is a moisturizing composition. トコフェリルレチノエートを有効成分として含有する皮膚細胞環境改善剤。 A skin cell environment-improving agent comprising tocopheryl retinoate as an active ingredient. トコフェリルレチノエートを、アクアポリン発現促進剤及びヒアルロン酸合成酵素発現促進剤として含有する請求項３に記載の皮膚細胞環境改善剤。 The skin cell environment improving agent according to claim 3, comprising tocopheryl retinoate as an aquaporin expression promoter and a hyaluronic acid synthase expression promoter. 保湿用組成物である、請求項３に記載の皮膚細胞環境改善剤。 The skin cell environment improving agent according to claim 3, which is a moisturizing composition.