JP2006266851A - Calibration method of biosensor, measuring method and biosensor - Google Patents

Calibration method of biosensor, measuring method and biosensor Download PDF

Info

Publication number
JP2006266851A
JP2006266851A JP2005084993A JP2005084993A JP2006266851A JP 2006266851 A JP2006266851 A JP 2006266851A JP 2005084993 A JP2005084993 A JP 2005084993A JP 2005084993 A JP2005084993 A JP 2005084993A JP 2006266851 A JP2006266851 A JP 2006266851A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
calibration
refractive index
liquid
biosensor
substance
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2005084993A
Other languages
Japanese (ja)
Inventor
Koji Kuruma
浩二 来馬
Katsuaki Muraishi
勝明 村石
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Fujifilm Holdings Corp
Original Assignee
Fuji Photo Film Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Fuji Photo Film Co Ltd filed Critical Fuji Photo Film Co Ltd
Priority to JP2005084993A priority Critical patent/JP2006266851A/en
Publication of JP2006266851A publication Critical patent/JP2006266851A/en
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Landscapes

  • Optical Measuring Cells (AREA)
  • Investigating Or Analysing Materials By Optical Means (AREA)

Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To more accurately perform calibration in a case that a biosensor is calibrated using a plurality of calibration liquids different in refractive index. <P>SOLUTION: In a step S10, the liquid amounts of DMSO, a buffer solution and water in each of calibration liquids are calculated so that the concentrations of the buffer solution become equal between respective calibration liquids (a first calibration liquid-a fifth calibration liquid) on the basis of a liquid amount calculation program. In a step S12, the supply indication signal of water is outputted to a head 78B to supply water to calibration liquid containers 86A-86E in respectively calculated amounts. In a step S14, the supply indication signal of the buffer solution is outputted to supply the buffer solution to the calibration liquid containers 86A-86E in respectively calculated amounts. In a step S16, the supply indication signal of DMSO is outputted and DMSO is supplied to the calibration liquid containers 86A-86E in respectively calculated amounts to prepare the first calibration liquid A-the fifth calibration liquid E. <P>COPYRIGHT: (C)2007,JPO&INPIT

Description

本発明は、被解析生体分子の固定された測定領域での光の屈折率を用いて被解析分子と解析分子との間の相互作用を測定するバイオセンサーを較正するバイオセンサー較正方法、このバイオセンサー較正方法を用いた測定方法、及び、前記バイオセンサー較正方法を用いて較正されるバイオセンサーに関する。   The present invention relates to a biosensor calibration method for calibrating a biosensor that measures an interaction between an analyte molecule and an analysis molecule using a refractive index of light in a measurement region where the analyte biomolecule is fixed, and the biosensor calibration method. The present invention relates to a measurement method using a sensor calibration method and a biosensor calibrated using the biosensor calibration method.

従来より、エバネッセント波を利用した測定装置の１つとして、表面プラズモンセンサーが知られている（特許文献１参照）。一般的に、表面プラズモンセンサーは、プリズムと、このプリズムの一面に配置され被解析分子が固定される金属膜と、光ビームを発生させる光源と、光ビームをプリズムに対して、プリズムと金属膜との界面で全反射条件が得られるように種々の角度で入射させる光学系と、界面で全反射した光ビームの強度を検出する光検出手段と、を備え、光検出手段の検出結果に基づいて、被解析分子についての解析を行なうものである。   Conventionally, a surface plasmon sensor is known as one of measuring devices using an evanescent wave (see Patent Document 1). In general, a surface plasmon sensor includes a prism, a metal film disposed on one surface of the prism, to which a molecule to be analyzed is fixed, a light source that generates a light beam, and the light beam to the prism. Based on the detection result of the light detection means, and an optical system that makes the light incident at various angles so that a total reflection condition is obtained at the interface with the light detection means, and a light detection means that detects the intensity of the light beam totally reflected at the interface. Thus, the analysis of the molecule to be analyzed is performed.

この表面プラズモンセンサーによる測定では、金属膜の上に固定化された被解析分子に対して解析分子を含む反応液を供給すると共に、金属膜の反応液が供給されている側と逆側の面へ光ビームを入射し、その反射光から得られる屈折率から得られる情報に基づいて、被解析分子と反応液中の解析分子との相互作用が測定される。   In the measurement using the surface plasmon sensor, a reaction solution containing an analysis molecule is supplied to an analyte molecule immobilized on a metal film, and the surface of the metal film opposite to the side on which the reaction solution is supplied. Based on the information obtained from the refractive index obtained from the reflected light, the interaction between the analyzed molecule and the analyzed molecule in the reaction solution is measured.

このように、屈折率から得られる情報を用いて、被解析分子と反応液中の解析分子との相互作用を測定する場合には、通常、被解析分子の固定されている測定領域の他に、被解析分子の固定されていない参照領域を設け、参照領域から得られる屈折率情報を用いて、測定領域から得られる屈折率情報を補正し、解析分子と被解析分子との相互作用を示す正確なデータを得る。   In this way, when measuring the interaction between the analyte molecule and the analyte molecule in the reaction solution using the information obtained from the refractive index, it is usually not only the measurement region where the analyte molecule is fixed. , Provide a reference region where the analyte molecule is not fixed, and use the refractive index information obtained from the reference region to correct the refractive index information obtained from the measurement region to show the interaction between the analytic molecule and the analyte molecule Get accurate data.

ところで、前述の反応液を調製する際に、屈折率の大きい物質が用いられることがある。例えば、疎水性の解析分子を溶解させるために、有機溶剤として、ジメチル・スルホキシド（ＤＭＳＯ）が用いられるが、ＤＭＳＯは屈折率が大きく、また、測定領域には被解析分子の膜厚があることから、参照領域と測定領域とで、ＤＭＳＯ濃度の変化に対する屈折率変化が異なってしまう。そのため、非特許文献１では、ＤＭＳＯ濃度の異なる複数の較正液を用いて、測定セル毎に、ＤＭＳＯ濃度と屈折率との関係を求め、当該測定セルの初期較正が行なわれている。   By the way, when preparing the above-mentioned reaction liquid, a substance having a large refractive index may be used. For example, dimethyl sulfoxide (DMSO) is used as an organic solvent to dissolve hydrophobic analysis molecules, but DMSO has a large refractive index, and the measurement region has a film thickness of the molecule to be analyzed. Therefore, the change in refractive index with respect to the change in DMSO concentration differs between the reference region and the measurement region. Therefore, in Non-Patent Document 1, a plurality of calibration solutions having different DMSO concentrations are used to obtain the relationship between DMSO concentration and refractive index for each measurement cell, and initial calibration of the measurement cell is performed.

この初期較正を行なうに際しては、複数のＤＭＳＯ濃度の異なる較正液を調製することが必要であり、非特許文献１には、この調整方法が示されている。非特許文献１に記載の方法で調整した複数の較正液では、ＤＭＳＯ濃度と共にバッファー能を有する物質の濃度も異なってしまっている。
Ｂｉａｃｏｒｅ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ Ｔｒａｉｎｉｎｇテキスト In performing this initial calibration, it is necessary to prepare a plurality of calibration solutions having different DMSO concentrations, and Non-Patent Document 1 discloses this adjustment method. In a plurality of calibration solutions adjusted by the method described in Non-Patent Document 1, the concentration of a substance having a buffer capacity is different from the DMSO concentration.
Biacore Application Training text

バッファー能を有する物質としては、通常、屈折率への影響が小さいものが選択されるが、バッファー能を有する物質が静電吸着などにより参照領域や測定領域に付着されることも考えられ、屈折率に変化をもたらすこともある。したがって、複数の較正液間においてバッファー能を有する物質の濃度が異なると、較正の精度が低下してしまう。   As a substance having a buffering ability, a substance having a small influence on the refractive index is usually selected. However, it is considered that a substance having a buffering ability is attached to a reference region or a measurement region by electrostatic adsorption or the like. It can change the rate. Therefore, if the concentration of the substance having the buffer ability is different among a plurality of calibration solutions, the calibration accuracy is lowered.

本発明は上記事実を考慮してなされたものであり、屈折率の異なる複数の較正液を用いてバイオセンサー較正する場合に、より正確に較正することの可能な、バイオセンサー較正方法、このバイオセンサー較正方法を用いた測定方法、及び、前記バイオセンサー較正方法を用いて較正されるバイオセンサーを提供することを目的とする。   The present invention has been made in consideration of the above-described facts, and a biosensor calibration method capable of performing calibration more accurately when biosensor calibration is performed using a plurality of calibration solutions having different refractive indexes. It is an object of the present invention to provide a measurement method using a sensor calibration method and a biosensor calibrated using the biosensor calibration method.

請求項１に記載のバイオセンサー較正方法は、被解析生体分子の固定された測定領域での光の屈折率を用いて被解析分子と解析分子との間の相互作用を測定するバイオセンサーを、屈折率の異なる複数の較正液を用いて較正するバイオセンサー較正方法であって、較正液の屈折率の変化に寄与する屈折率変化物質、及び、バッファー能を有するバッファー能物質を含む複数の較正液を、各較正液間で、前記屈折率変化物質の濃度が異なる共に、前記バッファー能物質の濃度が等しくなるように調製し、調製した前記複数の較正液の各々について、前記測定領域及び被解析生体分子の固定されない参照領域における屈折率情報を取得し、
取得した複数の較正液の屈折率情報に基づいて、前記解析分子供給時における前記測定領域での光の屈折率を較正する、ものである。 The biosensor calibration method according to claim 1, wherein a biosensor that measures an interaction between an analyzed molecule and an analyzed molecule using a refractive index of light in a measurement region where the analyzed biomolecule is fixed, A biosensor calibration method for calibrating using a plurality of calibration liquids having different refractive indexes, a plurality of calibrations including a refractive index changing substance that contributes to a change in the refractive index of the calibration liquid and a buffer ability substance having a buffer ability The liquid is prepared so that the concentration of the refractive index changing substance is different between the calibration liquids and the concentration of the buffering substance is equal, and for each of the prepared calibration liquids, the measurement region and the target solution are prepared. Obtain the refractive index information in the reference region where the analysis biomolecule is not fixed,
Based on the obtained refractive index information of a plurality of calibration solutions, the refractive index of light in the measurement region at the time of supplying the analysis molecule is calibrated.

また、請求項５に記載のバイオセンサーは、被解析生体分子の固定された測定領域での光の屈折率を用いて被解析分子と解析分子との間の相互作用を測定するバイオセンサーであって、較正液の屈折率の変化に寄与する屈折率変化物質、バッファー能を有するバッファー能物質を含む複数の較正液を、各較正液間で、前記屈折率変化物質の濃度が異なると共に、前記バッファー能物質の濃度が等しくなるように調製する、較正液調製手段と、調製した前記複数の較正液の各々について、前記測定領域及び被解析生体分子の固定されない参照領域における屈折率情報を取得する屈折率情報取得手段と、取得した複数の較正液の屈折率情報に基づいて、前記解析分子供給時における前記測定領域での光の屈折率を較正する屈折率較正手段と、を備えたものである。   The biosensor according to claim 5 is a biosensor that measures the interaction between the analyzed molecule and the analyzed molecule using the refractive index of light in the measurement region where the analyzed biomolecule is fixed. A plurality of calibration liquids including a refractive index changing substance that contributes to a change in the refractive index of the calibration liquid and a buffer capacity substance having a buffer capacity, and the concentration of the refractive index changing substance differs between the calibration liquids, Refractive index information is acquired in the measurement region and the reference region where the biomolecule to be analyzed is not fixed for each of the prepared calibration solutions and the calibration solution preparation means prepared so that the concentrations of the buffer substances are equal. Refractive index information acquisition means, and refractive index calibration means for calibrating the refractive index of light in the measurement region when supplying the analysis molecule based on the acquired refractive index information of a plurality of calibration solutions. Those were.

ここで、屈折率の変化に寄与する屈折率変化物質とは、その物質自体の屈折率が大きく、較正液の調製に用いられた場合に、較正液の屈折率を大きくする物質をいう。また、バッファー能を有するバッファー能物質とは、ＰＨバッファー能を有するイオン性物質をいう。   Here, the refractive index changing substance that contributes to the change of the refractive index means a substance that increases the refractive index of the calibration liquid when the substance itself has a large refractive index and is used for the preparation of the calibration liquid. In addition, the buffer substance having a buffer ability refers to an ionic substance having a PH buffer ability.

請求項１に記載のバイオセンサー較正方法、及び、請求項５に記載のバイオセンサーによれば、調製された複数の較正液間でバッファー能物質の濃度が等しいので、参照領域と測定領域における、バッファー能物質の濃度に起因する較正の誤差がなくなり、正確に解析分子供給時における測定領域での光の屈折率を較正することができる。   According to the biosensor calibration method according to claim 1 and the biosensor according to claim 5, since the concentration of the buffer capable substance is equal among the plurality of prepared calibration solutions, in the reference region and the measurement region, Calibration error due to the concentration of the buffering substance is eliminated, and the refractive index of light in the measurement region at the time of supplying the analysis molecule can be accurately calibrated.

請求項２に記載のバイオセンサー較正方法、及び、請求項６に記載のバイオセンサーは、前記屈折率変化物質の２５℃における屈折率が１．４以上であること、を特徴とするものである。   The biosensor calibration method according to claim 2 and the biosensor according to claim 6 are characterized in that a refractive index at 25 ° C. of the refractive index changing substance is 1.4 or more. .

通常、屈折率を用いて被解析分子と解析分子との間の相互作用を測定する場合には、調液精度より屈折率の精度を高くする等の理由から、較正液の屈折率範囲を大きくしておく必要がある。そこで、少量の添加で屈折率が大きく変わるように、屈折率変化物質として、屈折率の大きいものを選択することが好ましい。   Normally, when measuring the interaction between the analyte molecule and the analyzed molecule using the refractive index, the refractive index range of the calibration solution is increased for reasons such as increasing the refractive index accuracy over the preparation accuracy. It is necessary to keep it. Therefore, it is preferable to select a material having a large refractive index as the refractive index changing substance so that the refractive index changes greatly with a small amount of addition.

請求項３に記載のバイオセンサー較正方法、及び、請求項７に記載のバイオセンサーは、前記屈折率変化物質が、非イオン性物質であること、を特徴とするものである。   The biosensor calibration method according to claim 3 and the biosensor according to claim 7 are characterized in that the refractive index changing substance is a nonionic substance.

屈折率変化物質がイオン性物質であると、参照領域及び測定領域に付着して屈折率に影響を与えてしまうので、各較正液間で濃度を異ならせている屈折率変化物質は、非イオン性物質であることが好ましい。   If the refractive index changing substance is an ionic substance, it adheres to the reference area and the measurement area and affects the refractive index. Therefore, the refractive index changing substance having a different concentration between the calibration solutions is non-ionic. Preferably, it is a sex substance.

請求項４に記載の測定方法は、請求項１乃至請求項３のいずれか１項に記載のバイオセンサー較正方法を用いて、被解析分子と解析分子との間の相互作用を測定するものである。   A measurement method according to claim 4 is a method for measuring an interaction between an analyte molecule and an analysis molecule using the biosensor calibration method according to any one of claims 1 to 3. is there.

請求項４に記載の測定方法によれば、正確な較正が行なわれているので、より高い精度の測定を行なうことができる。   According to the measurement method of the fourth aspect, since accurate calibration is performed, measurement with higher accuracy can be performed.

本発明は上記構成としたので、より正確な較正、測定を行なうことができる。   Since the present invention is configured as described above, more accurate calibration and measurement can be performed.

以下、図面を参照しながら本発明の実施形態について説明する。   Hereinafter, embodiments of the present invention will be described with reference to the drawings.

本実施形態のバイオセンサー７０は、、金属膜の表面に発生する表面プラズモンを利用して、被解析分子Ｍの特性を測定する、いわゆる表面プラズモンセンサーである。バイオセンサー７０では、被解析分子Ｍに、各種の反応液を供給して、被解析分子Ｍと反応液中の物質との結合の有無、結合速度、結合量、等を測定する。被解析分子Ｍとしては、蛋白質、核酸、脂肪酸などの生理活性物質を解析対象とすることができる。   The biosensor 70 of this embodiment is a so-called surface plasmon sensor that measures the characteristics of the molecule M to be analyzed using surface plasmons generated on the surface of a metal film. In the biosensor 70, various reaction liquids are supplied to the molecule M to be analyzed, and the presence / absence of bonding between the molecule M to be analyzed and the substance in the reaction liquid, the bonding speed, the bonding amount, and the like are measured. As the analyzed molecule M, physiologically active substances such as proteins, nucleic acids, and fatty acids can be analyzed.

図１及び図２に示すように、バイオセンサー７０は、トレイ保持部７２、搬送部７４、反応液プレート保持部７６、液体供給部７８、光学測定部８０、較正液調整部８４、及び、制御部９０を備えている。   As shown in FIGS. 1 and 2, the biosensor 70 includes a tray holding unit 72, a transport unit 74, a reaction liquid plate holding unit 76, a liquid supply unit 78, an optical measurement unit 80, a calibration liquid adjustment unit 84, and a control. Part 90 is provided.

トレイ保持部７２は、載置台７２Ａ、及び、ベルト７２Ｂを含んで構成されている。載置台７２Ａは、矢印Ｉ方向に架け渡されたベルト７３に取り付けられており、ベルト７２Ｂの回転により矢印Ｉ方向に移動可能とされている。載置台７２Ａ上には、トレイ３０が２枚、位置決めして載置される。トレイ３０には、センサースティック４０が８本収納されている。センサースティック４０は、測定対象となる被解析分子Ｍの固定されるチップであり、詳細については後述する。載置台７２Ａの下には、センサースティック４０を後述するスティック保持部材７４Ｃの位置まで押し上げる、押上機構７２Ｄが配置されている。   The tray holding unit 72 includes a mounting table 72A and a belt 72B. The mounting table 72A is attached to a belt 73 spanned in the direction of arrow I, and is movable in the direction of arrow I by the rotation of the belt 72B. Two trays 30 are positioned and placed on the mounting table 72A. Eight sensor sticks 40 are stored in the tray 30. The sensor stick 40 is a chip on which the analyte molecule M to be measured is fixed, and details will be described later. Under the mounting table 72A, a push-up mechanism 72D that pushes up the sensor stick 40 to a position of a stick holding member 74C described later is disposed.

センサースティック４０は、被解析分子Ｍが固定されるものである。図３及び図４に示すように、センサースティック４０は、誘電体ブロック４２、流路部材４４、保持部材４６、接着部材４８、及び、蒸発防止部材４９、で構成されている。   The sensor stick 40 is to which the molecule M to be analyzed is fixed. As shown in FIGS. 3 and 4, the sensor stick 40 includes a dielectric block 42, a flow path member 44, a holding member 46, an adhesive member 48, and an evaporation preventing member 49.

誘電体ブロック４２は、光ビームに対して透明な透明樹脂等で構成されており、断面が台形の棒状とされたプリズム部４２Ａ、及び、プリズム部４２Ａの両端部にプリズム部４２Ａと一体的に形成された被保持部４２Ｂを備ている。プリズム部４２Ａの互いに平行な２面の内の広い側の上面には、図５にも示すように金属膜５０が形成されている。この金属膜５０上に、バイオセンサー７０で解析する解析分子が固定される。誘電体ブロック４２は、いわゆるプリズムとしても機能し、バイオセンサー７０での測定の際には、プリズム部４２Ａの対向する互いに平行でない２つの側面の内の一方から光ビームが入射され、他方から金属膜５０との界面で全反射された光ビームが出射される。   The dielectric block 42 is made of transparent resin or the like that is transparent to the light beam, and has a prism portion 42A having a trapezoidal cross section, and the prism portion 42A integrally with both ends of the prism portion 42A. The formed held portion 42B is provided. A metal film 50 is formed on the upper surface on the wide side of the two parallel surfaces of the prism portion 42A as shown in FIG. Analytical molecules to be analyzed by the biosensor 70 are fixed on the metal film 50. The dielectric block 42 also functions as a so-called prism, and in the measurement by the biosensor 70, the light beam is incident from one of the two opposite side surfaces of the prism portion 42A that are not parallel to each other, and the other is a metal. A light beam totally reflected at the interface with the film 50 is emitted.

金属膜５０の表面の一部で、後述する液体流路４５に露出された部分の下流側に位置する測定領域Ｅ１には、図６にも示すように、被解析分子Ｍを固定するための固定化担体５０Ａが形成されている。固定化担体５０Ａの反応基との共有結合により、被解析分子Ｍがこの部分に固定される。固定化担体５０Ａとしては、デキストラン、カルボキシメチル基、ＮＴＡなどを用いることができ、被解析分子Ｍに応じて選択される。   As shown in FIG. 6, as shown in FIG. 6, for fixing the molecule M to be analyzed, a part of the surface of the metal film 50, which is located on the downstream side of the part exposed to the liquid channel 45 described later. An immobilization carrier 50A is formed. The molecule to be analyzed M is immobilized on this portion by covalent bonding with the reactive group of the immobilization carrier 50A. As the immobilization carrier 50A, dextran, carboxymethyl group, NTA or the like can be used, and is selected according to the molecule M to be analyzed.

金属膜５０上の液体流路４５に露出された部分の上流側に位置する領域は、参照領域Ｅ２とされている。参照領域Ｅ２は、被解析分子Ｍの固定された測定領域Ｅ１から得られる光の屈折率データを補正するために設けられた領域であり、この参照領域Ｅ２にも、光ビームが入射される。なお、参照領域Ｅ２は、各種のアナライトとの結合が阻止されるように、例えばアルキルチオール、アミノアルコール、アミノエーテル等で処理しておくことが好ましい。   A region located on the upstream side of the portion exposed to the liquid channel 45 on the metal film 50 is a reference region E2. The reference region E2 is a region provided for correcting the refractive index data of light obtained from the measurement region E1 where the analyte molecule M is fixed, and the light beam is also incident on the reference region E2. The reference region E2 is preferably treated with, for example, alkyl thiol, amino alcohol, amino ether or the like so as to prevent binding with various analytes.

プリズム部４２Ａの両側面には、上側の端辺に沿って保持部材５２と係合される係合凸部４２Ｃが、下側の端辺に沿ってプリズム部４２Ａの上面と垂直な仮想面の延長上に構成される垂直凸部４２Ｄが、各々７箇所に形成されている。また、誘電体ブロック４２の下面の長手方向に沿った中央部には、係合溝４２Ｅが形成されている。   On both side surfaces of the prism portion 42A, engaging convex portions 42C that are engaged with the holding member 52 along the upper edge are virtual surfaces perpendicular to the upper surface of the prism portion 42A along the lower edge. Vertical protrusions 42D configured on the extension are formed at seven locations, respectively. Further, an engagement groove 42E is formed in the center portion along the longitudinal direction of the lower surface of the dielectric block 42.

流路部材４４は、誘電体ブロック４２のプリズム部４２Ａと略同じ長さの棒状とされ、図５に示すように、誘電体ブロック４２の金属膜５０との間に、液体流路４５を構成する。液体流路４５は、流路部材４４の流路壁４４Ａと金属膜５０とで囲まれて構成されており、供給された液体を金属膜５０上で貯留可能とされている。流路部材４４には、液体流路４５と連通された供給口４５Ａ及び排出口４５Ｂが形成されている。液体流路４５は、流路部材４４の長手方向に６個並んで配置されている。したがって、１本のセンサースティック４０には、独立した６個の液体流路４５が構成される。流路部材４４の側壁には、保持部材４６の内側の図示しない凹部に圧入されて保持部材４６との密着性を確保するための凸部４４Ｂが形成されている。   The flow path member 44 has a rod shape with substantially the same length as the prism portion 42A of the dielectric block 42, and forms a liquid flow path 45 between the metal film 50 of the dielectric block 42 as shown in FIG. To do. The liquid channel 45 is configured by being surrounded by the channel wall 44 </ b> A of the channel member 44 and the metal film 50, and the supplied liquid can be stored on the metal film 50. The flow path member 44 is formed with a supply port 45 </ b> A and a discharge port 45 </ b> B that communicate with the liquid flow path 45. Six liquid channels 45 are arranged in the longitudinal direction of the channel member 44. Accordingly, six independent liquid channels 45 are formed in one sensor stick 40. On the side wall of the flow path member 44, a convex portion 44 </ b> B is formed that is press-fitted into a concave portion (not shown) inside the holding member 46 to ensure adhesion with the holding member 46.

なお、液体流路４５には、蛋白質を含む液体が供給されることが想定されるので、流路壁４４Ａへので蛋白質の固着を防止するため、流路部材４４の材料としては、蛋白質に対する非特異吸着性を有しないことが好ましい。また、流路部材４４は、金属膜５０との密着性を確保して液漏れを防止するため、弾性を有することが好ましい。具体的にはシリコン、ポリプロピレン等を用いることができる。   In addition, since it is assumed that a liquid containing protein is supplied to the liquid channel 45, the material of the channel member 44 is a non-protein-based material to prevent the protein from adhering to the channel wall 44A. It is preferable not to have specific adsorptivity. The flow path member 44 preferably has elasticity in order to ensure adhesion with the metal film 50 and prevent liquid leakage. Specifically, silicon, polypropylene, or the like can be used.

保持部材４６は、長尺とされ、上面板４６Ａ及び２枚の側面板４６Ｂで構成されている。側面板４６Ｂには、誘電体ブロック４２の係合凸部４２Ｃと係合される係合孔４６Ｃが形成されている。保持部材４６は、流路部材４４を間に挟んで係合孔４６Ｃと係合凸部４２Ｃとが係合されて、誘電体ブロック４２に取り付けられる。これにより、流路部材４４は、誘電体ブロック４２に取り付けられる。上面板４６Ａには、流路部材４４の供給口４５Ａ及び排出口４５Ｂと対向する位置に、流路部材４４に向けて狭くなるテーパー状のピペット挿入孔４６Ｄが形成されている。また、隣り合うピペット挿入孔４６Ｄとピペット挿入孔４６Ｄとの間には、位置決め用のボス４６Ｅが形成されている。   The holding member 46 is long and includes an upper plate 46A and two side plates 46B. The side plate 46B is formed with an engagement hole 46C that is engaged with the engagement convex portion 42C of the dielectric block 42. The holding member 46 is attached to the dielectric block 42 with the engagement hole 46 </ b> C and the engagement protrusion 42 </ b> C engaged with the flow path member 44 interposed therebetween. Thereby, the flow path member 44 is attached to the dielectric block 42. In the upper surface plate 46A, a tapered pipette insertion hole 46D that narrows toward the flow path member 44 is formed at a position facing the supply port 45A and the discharge port 45B of the flow path member 44. A positioning boss 46E is formed between the adjacent pipette insertion hole 46D and the pipette insertion hole 46D.

保持部材４６の上面には、蒸発防止部材４９が接着部材４８を介して接着されている。接着部材４８のピペット挿入孔４６Ｄと対向する位置にはピペット挿入用の孔４８Ｄが形成され、ボス４６Ｅと対向する位置には位置決め用の孔４８Ｅが形成されている。また、蒸発防止部材４９のピペット挿入孔４６Ｄと対向する位置には十字状の切り込みであるスリット４９Ｄが形成され、ボス４６Ｅと対向する位置には位置決め用の孔４９Ｅが形成されている。ボス４６Ｅを孔４８Ｅ及び４９Ｅに挿通させて、蒸発防止部材４９を保持部材５２の上面に接着することにより、蒸発防止部材４９のスリット４９Ｄと流路部材４４の供給口４５Ａ及び排出口４５Ｂとが対向するように構成される。ピペットチップＣＰの非挿入時には、スリット４９Ｄ部分が供給口４５Ｂを覆い、液体流路４５に供給されている液体の蒸発が防止される。   An evaporation preventing member 49 is bonded to the upper surface of the holding member 46 via an adhesive member 48. A pipette insertion hole 48D is formed at a position facing the pipette insertion hole 46D of the adhesive member 48, and a positioning hole 48E is formed at a position facing the boss 46E. Further, a slit 49D, which is a cross-shaped cut, is formed at a position facing the pipette insertion hole 46D of the evaporation preventing member 49, and a positioning hole 49E is formed at a position facing the boss 46E. By inserting the boss 46E into the holes 48E and 49E and bonding the evaporation preventing member 49 to the upper surface of the holding member 52, the slit 49D of the evaporation preventing member 49 and the supply port 45A and the discharge port 45B of the flow path member 44 are formed. Configured to face each other. When the pipette tip CP is not inserted, the slit 49D covers the supply port 45B, and the liquid supplied to the liquid channel 45 is prevented from evaporating.

なお、この蒸発防止部材５４も、スリット４９ＤからピペットチップＣＰを挿入できるように、弾性を有する材料で構成されることが好ましく、具体的にはシリコンまたはポリプロピレン等を用いることができる。   The evaporation preventing member 54 is also preferably made of an elastic material so that the pipette tip CP can be inserted from the slit 49D, and specifically silicon or polypropylene can be used.

図１及び図２に示すように、バイオセンサー７０の搬送部７４は、上部ガイドレール７４Ａ、下部ガイドレール７４Ｂ、及び、スティック保持部材７４Ｃ、を含んで構成されている。上部ガイドレール７４Ａ及び下部ガイドレール７４Ｂは、トレイ保持部７２及び光学測定部８０の上部で、矢印Ｉ方向と直交する矢印Ｊ方向に水平に配置されている。上部ガイドレール７４Ａには、スティック保持部材７４Ｃが取り付けられている。スティック保持部材７４Ｃは、センサースティック４０の両端部の被保持部４２Ｂを保持可能とされていると共に、上部ガイドレール７４Ａに沿って移動可能とされている。スティック保持部材７４Ｃに保持されたセンサースティック４０の係合溝４２Ｅと下部ガイドレール７４Ｂとが係合され、スティック保持部材７４Ｃが矢印Ｊ方向に移動することにより、図２に示すように、センサースティック４０が光学測定部８０上の測定部８２に搬送される。この測定部８２で、センサースティック４０に固定された被解析分子Ｍの測定が行われる。測定部８２では、下部ガイドレール７４Ｂが測定のために一部離間されている
反応液プレート保持部７６は、載置台７６Ａ、及び、ガイドレール７６Ｂを含んで構成されている。ガイドレール７６Ｂは、矢印Ｊ方向に沿って配置されている。載置台７６Ａは、ガイドレール７６Ｂに取り付けられ、反応液がセットされた反応液プレート７７を載置可能とされている。載置台７６Ａは、ガイドレール７６Ｂに沿って移動可能とされている。 As shown in FIGS. 1 and 2, the transport unit 74 of the biosensor 70 includes an upper guide rail 74A, a lower guide rail 74B, and a stick holding member 74C. The upper guide rail 74 </ b> A and the lower guide rail 74 </ b> B are horizontally disposed in the arrow J direction orthogonal to the arrow I direction, above the tray holding unit 72 and the optical measurement unit 80. A stick holding member 74C is attached to the upper guide rail 74A. The stick holding member 74C can hold the held portions 42B at both ends of the sensor stick 40, and can move along the upper guide rail 74A. When the engagement groove 42E of the sensor stick 40 held by the stick holding member 74C and the lower guide rail 74B are engaged and the stick holding member 74C moves in the direction of arrow J, as shown in FIG. 40 is conveyed to the measuring unit 82 on the optical measuring unit 80. The measurement unit 82 measures the analyte molecule M fixed to the sensor stick 40. In the measurement unit 82, the lower guide rail 74B is partially separated for measurement. The reaction liquid plate holding unit 76 includes a mounting table 76A and a guide rail 76B. The guide rail 76B is arranged along the arrow J direction. The mounting table 76A is attached to the guide rail 76B and can mount a reaction liquid plate 77 on which a reaction liquid is set. The mounting table 76A is movable along the guide rail 76B.

液体供給部７８は、上部ガイドレール７４Ａ、及び、ガイドレール７６Ｂよりも上方で、矢印Ｉ方向に架け渡された横断レール７８Ａ、及び、ヘッド７８Ｂを含んで構成されている。ヘッド７８Ｂは、横断レール７８Ａに取り付けられ、図２に示すように、測定部８２と反応液プレート７７との間を移動可能とされている。また、ヘッド７８Ｂは、図示しない駆動機構により、鉛直方向（矢印Ｚ方向）にも移動可能とされている。ヘッド７８Ｂは、先端部に交換可能なピペットチップＣＰが取り付けられ、いわゆるピペットとしての機能を有している。   The liquid supply unit 78 is configured to include a cross rail 78A and a head 78B that are bridged in the direction of arrow I above the upper guide rail 74A and the guide rail 76B. The head 78B is attached to the cross rail 78A, and is movable between the measurement unit 82 and the reaction solution plate 77 as shown in FIG. Further, the head 78B can be moved in the vertical direction (arrow Z direction) by a drive mechanism (not shown). The head 78B has a replaceable pipette tip CP attached to the tip, and has a function as a so-called pipette.

較正液調整部８４には、調製用トレイ８６、及び、原液用トレイ８８が載置されている。原液用トレイ８８には、水を貯留する水容器８８Ａ、バッファー液を貯留するバッファー液容器８８Ｂ、及び、有機溶剤を貯留する溶剤容器８８Ｃが、矢印Ｉ方向に並ぶように収納されている。本実施形態では、有機溶剤として、ジメチル・スルホキシド（ＤＭＳＯ）が用いられている。ＤＭＳＯの屈折率は、２５℃で１．４８程度である。各容器には、ヘッド７８に取り付けられたピペットチップＣＰを差し込んで容器内の液を吸引するための開口Ｈが形成されている。なお、バッファー液としては、リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）などの、ＰＨバッファー能を有するものが、解析分子に応じて適宜選択され使用される。   In the calibration liquid adjusting unit 84, a preparation tray 86 and a stock solution tray 88 are placed. In the stock solution tray 88, a water container 88A for storing water, a buffer liquid container 88B for storing a buffer solution, and a solvent container 88C for storing an organic solvent are accommodated in an arrow I direction. In this embodiment, dimethyl sulfoxide (DMSO) is used as the organic solvent. The refractive index of DMSO is about 1.48 at 25 ° C. Each container has an opening H for inserting a pipette tip CP attached to the head 78 and sucking the liquid in the container. In addition, as buffer solution, what has PH buffer ability, such as phosphate buffered saline (PBS), is suitably selected according to an analysis molecule, and is used.

調製用トレイ８６には、５種類のＤＭＳＯ濃度の異なる較正液を各々調製して貯留しておくことの可能な、５個の較正液容器８６Ａ〜８６Ｅが、矢印Ｉ方向に並ぶように収納されている。これらの容器にも、ヘッド７８に取り付けられたピペットチップＣＰを差し込んで容器内に液を注入、及び容器内の液を吸引するための開口Ｈが形成されている。   In the preparation tray 86, five calibration liquid containers 86A to 86E, each of which can prepare and store five kinds of calibration liquids having different DMSO concentrations, are stored in a line in the direction of arrow I. ing. Also in these containers, an opening H is formed for inserting the pipette tip CP attached to the head 78 to inject the liquid into the container and suck the liquid in the container.

光学測定部８０は、図７に示すように、光源８０Ａ、第１光学系８０Ｂ、第２光学系８０Ｃ、受光部８０Ｄ、信号処理部８０Ｅ、を含んで構成されている。光源８０Ａからは、光ビームＬが出射される。光ビームＬは、第１光学系８０Ｂを介して、２本の光ビームＬ１、Ｌ２となり、測定部８２に配置された誘電体ブロック４２の測定領域Ｅ１と参照領域Ｅ２に入射される。測定領域Ｅ１及び参照領域Ｅ２において、光ビームＬ１、Ｌ２は、金属膜５０と誘電体ブロック４２との界面に対して種々の入射角成分を含んで、かつ全反射角以上の角度で入射される。光ビームＬ１、Ｌ２は、誘電体ブロック４２と金属膜５０との界面で全反射される。全反射された光ビームＬ１、Ｌ２も、種々の反射角成分をもって反射される。この全反射された光ビームＬ１、Ｌ２は、第２光学系８０Ｃを経て受光部８０Ｄで受光されて、各々光電変換され、光検出信号が信号処理部８０Ｅへ出力される。信号処理部８０Ｅでは、入力された光検出信号に基づいて所定の処理が行なわれ、測定領域Ｅ１及び参照領域Ｅ２の全反射減衰角が屈折率データとして求められる。この屈折率データが制御部９０へ出力される。   As shown in FIG. 7, the optical measurement unit 80 includes a light source 80A, a first optical system 80B, a second optical system 80C, a light receiving unit 80D, and a signal processing unit 80E. A light beam L is emitted from the light source 80A. The light beam L becomes two light beams L1 and L2 via the first optical system 80B, and is incident on the measurement region E1 and the reference region E2 of the dielectric block 42 disposed in the measurement unit 82. In the measurement region E1 and the reference region E2, the light beams L1 and L2 are incident on the interface between the metal film 50 and the dielectric block 42 with various incident angle components and at an angle equal to or greater than the total reflection angle. . The light beams L 1 and L 2 are totally reflected at the interface between the dielectric block 42 and the metal film 50. The totally reflected light beams L1 and L2 are also reflected with various reflection angle components. The totally reflected light beams L1 and L2 are received by the light receiving unit 80D through the second optical system 80C, are photoelectrically converted, and a light detection signal is output to the signal processing unit 80E. In the signal processing unit 80E, predetermined processing is performed based on the input light detection signal, and the total reflection attenuation angles of the measurement region E1 and the reference region E2 are obtained as refractive index data. The refractive index data is output to the control unit 90.

制御部９０は、バイオセンサー７０の全体を制御する機能を有し、図７に示すように、光源８０Ａ、信号処理部８０Ｅ、及び、バイオセンサー７０の図示しない駆動系と接続されている。制御部９０は、図８に示すように、バスＢを介して互いに接続される、ＣＰＵ９０Ａ、ＲＯＭ９０Ｂ、ＲＡＭ９０Ｃ、メモリ９０Ｄ、及び、インターフェースＩ／Ｆ９０Ｅ、を有し、各種の情報を表示する表示部９２、各種の指示、情報を入力するための入力部９４と接続されている。   The control unit 90 has a function of controlling the entire biosensor 70, and is connected to a light source 80A, a signal processing unit 80E, and a drive system (not shown) of the biosensor 70 as shown in FIG. As shown in FIG. 8, the control unit 90 includes a CPU 90A, a ROM 90B, a RAM 90C, a memory 90D, and an interface I / F 90E, which are connected to each other via a bus B, and display various types of information. 92, is connected to an input unit 94 for inputting various instructions and information.

メモリ９０Ｄには、バイオセンサー７０を制御するための各種プログラムや、各種データが記録されている。また、メモリ９０Ｄには、後述する初期較正で使用する、複数の較正液を調製する際に、各液の量を算出するための液量算出プログラムが記憶されている。液量算出プログラムは、各較正液間でのバッファー濃度が一定になるように、較正液の調製に使用する各液の液量を算出するためのものである。本実施形態では、ＤＭＳＯ、及びバッファー液の原液情報、各較正液の使用量、ＤＭＳＯ濃度、バッファー濃度などの情報に基づいて、各較正液間におけるバッファー濃度が等しくなるように、ＤＭＳＯ、バッファー液、水、の各々の使用量が算出される。   Various programs for controlling the biosensor 70 and various data are recorded in the memory 90D. In addition, the memory 90D stores a liquid amount calculation program for calculating the amount of each liquid when preparing a plurality of calibration liquids used in initial calibration described later. The liquid volume calculation program is for calculating the liquid volume of each liquid used for preparing the calibration liquid so that the buffer concentration between the calibration liquids is constant. In the present embodiment, DMSO and buffer solution are adjusted so that the buffer concentration is equal among the calibration solutions based on information such as DMSO and buffer solution stock information, the amount of each calibration solution used, DMSO concentration, and buffer concentration. , Water usage amount is calculated.

なお、算出の基礎となる、ＤＭＳＯ、及びバッファー液の原液情報、各較正液の使用量、各較正液のＤＭＳＯ濃度、バッファー濃度などの情報は、ユーザーが入力部９４から入力してもよいし、予め登録しておいてもよい。   The user may input information such as DMSO and buffer solution stock information, the amount of each calibration solution used, the DMSO concentration of each calibration solution, and the buffer concentration, which are the basis of calculation, from the input unit 94. , May be registered in advance.

次に、バイオセンサー７０での、初期較正用の較正液の調製について説明する。初期較正用の較正液としては、ＤＭＳＯ濃度の異なる複数の較正液が調製される。   Next, preparation of a calibration solution for initial calibration in the biosensor 70 will be described. A plurality of calibration solutions having different DMSO concentrations are prepared as calibration solutions for initial calibration.

ユーザーは、予め、水容器８８Ａに水を、バッファー液容器８８Ｂにバッファー液を、溶剤容器８８ＣにＤＭＳＯを準備しておき、入力部９４から、原液となるＤＭＳＯ、及びバッファー液の情報を登録しておく。これらの情報は、メモリ９０Ｄに記憶される。   The user previously prepares water in the water container 88A, buffer liquid in the buffer liquid container 88B, and DMSO in the solvent container 88C, and registers DMSO as a stock solution and information on the buffer liquid from the input unit 94. Keep it. These pieces of information are stored in the memory 90D.

次に、入力部９４から、各較正液の使用量、ＤＭＳＯ濃度、バッファー液濃度を入力する。この入力は、例えば、表示部９２に表示される図９に示すような入力画面９６から行なうことができる。入力画面９６には、測定範囲を入力するための測定範囲ウインドウ９６Ａ、各較正液の使用量を入力するための使用量入力ウインドウ９６Ｂ、バッファー液の濃度を入力するためのバッファー液濃度入力ウインドウ９６Ｃ、複数の較正液についてのＤＭＳＯ濃度を入力するためのＤＭＳＯ濃度入力ウインドウ９６Ｄ、及び、予め登録されている汎用パターンを入力するための汎用パターン入力ウインドウ９６Ｅが表示されている。ユーザーは、使用量入力ウインドウ９６Ｂから各較正液の使用量を入力し、バッファー液濃度入力ウインドウ９６Ｃから所望のバッファー液濃度を入力し、ＤＭＳＯ濃度入力ウインドウ９６Ｄから各較正液のＤＭＳＯ濃度を入力する。   Next, the input amount of each calibration solution, DMSO concentration, and buffer solution concentration are input from the input unit 94. This input can be performed, for example, from an input screen 96 as shown in FIG. On the input screen 96, a measurement range window 96A for inputting a measurement range, a usage amount input window 96B for inputting the usage amount of each calibration solution, and a buffer solution concentration input window 96C for inputting the concentration of the buffer solution. A DMSO concentration input window 96D for inputting DMSO concentrations for a plurality of calibration solutions and a general pattern input window 96E for inputting pre-registered general patterns are displayed. The user inputs the usage amount of each calibration solution from the usage amount input window 96B, inputs the desired buffer solution concentration from the buffer solution concentration input window 96C, and inputs the DMSO concentration of each calibration solution from the DMSO concentration input window 96D. .

なお、ユーザーは、必ずしもＤＭＳＯ濃度入力ウインドウ９６ＤからＤＭＳＯ濃度を入力する必要はなく、測定範囲ウインドウ９６Ａから測定範囲を入力することにより、測定範囲に対応させて予め登録されているＤＭＳＯ濃度が自動的に選択されるようにすることもできる。また、すべての較正液についてのＤＭＳＯ濃度を入力するのではなく、測定の際に基準となるバッファー液（ランニングバッファー液）のＤＭＳＯ濃度を入力することにより、このＤＭＳＯ濃度の前後に所定値振られたＤＭＳＯ濃度が自動的に選択されるようにすることもできる。   It is not always necessary for the user to input the DMSO concentration from the DMSO concentration input window 96D. By inputting the measurement range from the measurement range window 96A, the DMSO concentration registered in advance corresponding to the measurement range is automatically set. It can also be made to be selected. Also, instead of inputting the DMSO concentration for all calibration solutions, by inputting the DMSO concentration of the buffer solution (running buffer solution) that serves as a reference at the time of measurement, a predetermined value is shaken before and after this DMSO concentration. The DMSO concentration can also be automatically selected.

また、ユーザーは、予め汎用のバッファー液濃度、ＤＭＳＯ濃度を対応させて汎用パターンとして登録しておき、この汎用パターンの登録番号を汎用パターン入力ウインドウ９６Ｅから入力することにより、バッファー液濃度、ＤＭＳＯ濃度の入力を省略することもできる。   In addition, the user registers the general-purpose buffer solution concentration and the DMSO concentration in advance as a general-purpose pattern, and inputs the general-purpose pattern registration number from the general-purpose pattern input window 96E. Can be omitted.

入力の完了後、入力部９４から調製開始指示を入力すると、制御部９０では、図１０に示す較正液調製処理が実行される。   When the preparation start instruction is input from the input unit 94 after the input is completed, the control unit 90 executes the calibration liquid preparation process shown in FIG.

ステップＳ１０で、液量算出プログラムにより、各較正液（第１較正液〜第５較正液）間で、バッファー液の濃度が等しくなるように、各較正液での、ＤＭＳＯ、バッファー液、水、の各々の液量が算出される。例えば、図９に示すように、使用量１００ｍｌ、バッファー液濃度１０％、ＤＭＳＯ濃度４％、４．５％、５％（ランニングバッファー液）、５．５％、６％の情報が入力された場合には、図１１の表に示すように、各較正液に使用されるＤＭＳＯ、バッファー液、水、の量が算出される。   In step S10, DMSO, buffer solution, water, and so on in each calibration solution so that the concentration of the buffer solution is equal between each calibration solution (first calibration solution to fifth calibration solution) by the solution amount calculation program. The amount of each liquid is calculated. For example, as shown in FIG. 9, information on a usage amount of 100 ml, a buffer solution concentration of 10%, a DMSO concentration of 4%, 4.5%, 5% (running buffer solution), 5.5%, and 6% was input. In this case, as shown in the table of FIG. 11, the amounts of DMSO, buffer solution, and water used for each calibration solution are calculated.

次に、ステップＳ１２で、ヘッド７８Ｂへ、水の供給指示信号が出力される。これにより、ヘッド７８Ｂで水容器８８Ａから較正液容器８６Ａ〜８６Ｅへ各々算出された量の水が供給される。   Next, in step S12, a water supply instruction signal is output to the head 78B. Accordingly, the calculated amount of water is supplied from the water container 88A to the calibration liquid containers 86A to 86E by the head 78B.

次に、ステップＳ１４で、ヘッド７８Ｂへ、バッファー液の供給指示信号が出力される。これにより、ヘッド７８Ｂでバッファー液容器８８Ｂから較正液容器８６Ａ〜８６Ｅへ各々算出された量のバッファー液が供給される。   In step S14, a buffer solution supply instruction signal is output to the head 78B. Thus, the calculated amount of buffer solution is supplied from the buffer solution container 88B to the calibration solution containers 86A to 86E by the head 78B.

次に、ステップＳ１６で、ヘッド７８Ｂへ、ＤＭＳＯの供給指示信号が出力される。これにより、ヘッド７８Ｂで溶剤容器８８Ｃから較正液容器８６Ａ〜８６Ｅへ各々算出された量のＤＭＳＯが供給され、較正液調製処理は終了する。各較正液容器８６Ａ〜８６Ｅには、ＤＭＳＯ濃度が異なり、バッファー液濃度が等しい、第１較正液Ａ〜第５較正液Ｅが調製される。   Next, in step S16, a DMSO supply instruction signal is output to the head 78B. As a result, the calculated amount of DMSO is supplied from the solvent container 88C to the calibration liquid containers 86A to 86E by the head 78B, and the calibration liquid preparation process ends. In each of the calibration liquid containers 86A to 86E, the first calibration liquid A to the fifth calibration liquid E having different DMSO concentrations and equal buffer solution concentrations are prepared.

上記較正液調製処理によれば、自動的に各較正液間でバッファー液の濃度が等しくなるように、複数の較正液を調製することができる。   According to the calibration solution preparation process, it is possible to prepare a plurality of calibration solutions so that the concentration of the buffer solution is automatically equal between the calibration solutions.

次に、バイオセンサー７０での、測定について説明する。   Next, measurement by the biosensor 70 will be described.

まず、バイオセンサー７０の載置台７２Ａに被解析分子Ｍの固定化されたセンサースティック４０入りのトレイ３０をセットする。また、載置台７６Ａに反応液の入った反応液プレート７７をセットする。反応液プレート７７には、各種の解析分子Ｎを含む反応液Ｓが貯留されている。   First, the tray 30 containing the sensor stick 40 with the analyte molecule M immobilized thereon is set on the mounting table 72A of the biosensor 70. Further, the reaction solution plate 77 containing the reaction solution is set on the mounting table 76A. In the reaction solution plate 77, a reaction solution S containing various analysis molecules N is stored.

測定時には、押上機構７２Ｄにより、プレート３０にセットされた１のセンサースティック４０がスティック保持部材７４Ｃの位置まで押し上げられ、スティック保持部材７４Ｃにより保持される。そして、スティック保持部材７４Ｃは、センサースティック４０を保持したまま下部ガイドレール７４Ｂに沿って移動して、センサースティック４０を測定部８２へ搬送する。   At the time of measurement, one sensor stick 40 set on the plate 30 is pushed up to the position of the stick holding member 74C by the push-up mechanism 72D and held by the stick holding member 74C. The stick holding member 74 </ b> C moves along the lower guide rail 74 </ b> B while holding the sensor stick 40, and conveys the sensor stick 40 to the measurement unit 82.

測定部８２での測定は、１つの液体流路４５ずつ順に行なわれる。そして、測定に先立ち、液体流路４５毎に初期較正が行なわれる。初期較正は、以下の手順で行なわれる。   The measurement by the measurement unit 82 is performed sequentially for each liquid channel 45. Prior to the measurement, initial calibration is performed for each liquid channel 45. Initial calibration is performed according to the following procedure.

入力部９４から初期較正の開始指示が入力されると、制御部９０では、まず、図１２に示す屈折率情報取得処理が実行される。屈折率情報取得処理は、光ビームＬを測定領域Ｅ１及び参照領域Ｅ２に入射させて、反射光から得られる各々の領域の屈折率に関する情報を得るものである。   When an initial calibration start instruction is input from the input unit 94, the control unit 90 first executes refractive index information acquisition processing shown in FIG. In the refractive index information acquisition process, the light beam L is incident on the measurement region E1 and the reference region E2, and information on the refractive index of each region obtained from the reflected light is obtained.

まず、ステップＳ２２で、光源８０Ａへ光ビームＬの出射指示信号を出力する。これにより、光源８０Ａから光ビームＬが出射される。出射された光ビームＬは、第１光学系８０Ｂで２本の光ビームＬ１、Ｌ２となり、液体流路４５の測定領域Ｅ１、参照領域Ｅ２へ各々入射される。また、ステップＳ２４で、受光部８０Ｄ及び信号処理部８０Ｅへ、作動指示信号を出力する。これにより、測定領域Ｅ１、参照領域Ｅ２で全反射され第２光学系８０Ｃを経た光ビームＬ１、Ｌ２は、受光部８０Ｄで受光され、受光された光は、測定領域Ｅ１、参照領域Ｅ２毎に光電変換されて光検出信号が信号処理部８０Ｅへ出力される。信号処理部８０Ｅでは、光検出信号に所定の処理が加えられ、測定領域Ｅ１、参照領域Ｅ２の各々についての屈折率データが生成され、屈折率データが継続して制御部９０へ出力される。   First, in step S22, an output instruction signal for the light beam L is output to the light source 80A. Thereby, the light beam L is emitted from the light source 80A. The emitted light beam L becomes two light beams L1 and L2 by the first optical system 80B, and is incident on the measurement region E1 and the reference region E2 of the liquid channel 45, respectively. In step S24, an operation instruction signal is output to the light receiving unit 80D and the signal processing unit 80E. Thus, the light beams L1 and L2 that are totally reflected by the measurement region E1 and the reference region E2 and pass through the second optical system 80C are received by the light receiving unit 80D, and the received light is received for each of the measurement region E1 and the reference region E2. The photoelectric conversion is performed and a light detection signal is output to the signal processing unit 80E. In the signal processing unit 80E, predetermined processing is applied to the light detection signal, and refractive index data for each of the measurement region E1 and the reference region E2 is generated, and the refractive index data is continuously output to the control unit 90.

制御部９０では、ステップＳ２６で、所定時間経過したかどうかを判断し、所定時間の経過後、ステップＳ２８で、入力された屈折率データを測定領域Ｅ１、参照領域Ｅ２毎にメモリ９０Ｄへ記憶する。これにより、測定領域Ｅ１、参照領域Ｅ２の屈折率データが時間毎に記録される。   In step S26, the control unit 90 determines whether or not a predetermined time has elapsed. After the predetermined time has elapsed, the control unit 90 stores the input refractive index data in the memory 90D for each of the measurement region E1 and the reference region E2 in step S28. . Thereby, the refractive index data of the measurement area E1 and the reference area E2 are recorded every time.

一方、上記の屈折率情報取得処理中に、液体流路４５へ各較正液の供給が順に行なわれる。制御部９０は、屈折率情報取得処理中の所定のタイミングで、図１３に示す較正液供給処理を実行する。   On the other hand, during the above refractive index information acquisition process, each calibration solution is supplied to the liquid channel 45 in order. The control unit 90 executes the calibration liquid supply process shown in FIG. 13 at a predetermined timing during the refractive index information acquisition process.

まず、ステップＳ４０で、第１較正液Ａの供給指示信号をヘッド７８Ｂへ出力する。これにより、ヘッド７８Ｂで、屈折率情報取得処理実行中の液体流路４５へ第１較正液Ａが供給される。第１較正液Ａの供給は、具体的には以下のように行なわれる。まず、ヘッド７８Ｂが第１較正液Ａのセットされた較正液容器８６Ａ上部に移動すると共に下降して、ヘッド７８Ｂに取り付けられているピペットチップＣＰの先端を第１較正液Ａが貯留された較正液容器８６Ａの開口Ｈへ挿入し、ピペットチップＣＰ内に第１較正液Ａを吸引する。次に、ヘッド７８Ｂを上昇させて測定部８２の上部に移動すると共に下降して、ピペットチップＣＰの先端を液体流路４５の供給口４５Ａへ挿入する。そして、液体流路４５へ、吸引していた第１較正液Ａを注入する。これにより、液体流路４５に供給されていたバッファー液（被解析分子Ｍの維持用に予め充填されていたもの）が、排出口４５Ｂから排出され、バッファー液が第１較正液Ａで置換される。これにより、液体流路４５が第１較正液Ａで満たされ、第１較正液Ａについての、測定領域Ｅ１、参照領域Ｅ２での屈折率データが得られる。   First, in step S40, a supply instruction signal for the first calibration liquid A is output to the head 78B. As a result, the first calibration liquid A is supplied to the liquid channel 45 during execution of the refractive index information acquisition process by the head 78B. The supply of the first calibration liquid A is specifically performed as follows. First, the head 78B moves to the upper part of the calibration liquid container 86A in which the first calibration liquid A is set and descends, and the calibration of the first calibration liquid A stored at the tip of the pipette tip CP attached to the head 78B. The first calibration liquid A is sucked into the pipette tip CP by inserting into the opening H of the liquid container 86A. Next, the head 78 </ b> B is lifted and moved to the upper part of the measuring unit 82 and is lowered to insert the tip of the pipette tip CP into the supply port 45 </ b> A of the liquid channel 45. Then, the first calibration liquid A that has been sucked is injected into the liquid channel 45. As a result, the buffer solution supplied to the liquid channel 45 (the one previously filled for maintaining the molecule M to be analyzed) is discharged from the discharge port 45B, and the buffer solution is replaced with the first calibration solution A. The Thereby, the liquid channel 45 is filled with the first calibration liquid A, and the refractive index data in the measurement area E1 and the reference area E2 for the first calibration liquid A is obtained.

ここで、供給口４５Ａから液体流路４５へ第１較正液Ａが注入されると、液体流路４５に充填されていたバッファー液は、排出口４５Ｂから排出され、センサースティック４０の上面に溢れる。そこで、ステップＳ４２で、廃液回収指示信号をヘッド７８Ｂへ出力する。これにより、ヘッド７８Ｂは、排出口４５Ｂの上部に移動し、溢れたバッファー液を吸引し、吸入された排出液を図示しない廃液セルへ廃棄する。   Here, when the first calibration liquid A is injected from the supply port 45 </ b> A into the liquid channel 45, the buffer solution filled in the liquid channel 45 is discharged from the discharge port 45 </ b> B and overflows to the upper surface of the sensor stick 40. . In step S42, a waste liquid recovery instruction signal is output to the head 78B. As a result, the head 78B moves to the upper part of the discharge port 45B, sucks the overflowing buffer solution, and discards the sucked discharge solution to a waste liquid cell (not shown).

次に、ステップＳ４４で、第２較正液Ｂの供給指示信号をヘッド７８Ｂへ出力する。これにより、ヘッド７８Ｂで、第１較正液Ａで満たされている液体流路４５へ第２較正液Ｂが供給され、液体流路４５の第１較正液Ａは、第２較正液Ｂで置換される。第２較正液Ｂの供給は、第１較正液Ａの供給と同様にして行なわれる。これにより、液体流路４５が第２較正液Ａで満たされ、第２較正液Ａについての、測定領域Ｅ１、参照領域Ｅ２での屈折率データが得られる。そして、ステップＳ４６で、廃液回収信号を出力して、センサースティック４０上面に溢れた第１較正液Ａを回収する。回収は、ステップＳ４２と同様にして行なわれる。   Next, in step S44, a supply instruction signal for the second calibration liquid B is output to the head 78B. Thereby, the second calibration liquid B is supplied to the liquid flow path 45 filled with the first calibration liquid A by the head 78B, and the first calibration liquid A in the liquid flow path 45 is replaced with the second calibration liquid B. Is done. The supply of the second calibration liquid B is performed in the same manner as the supply of the first calibration liquid A. Thereby, the liquid channel 45 is filled with the second calibration liquid A, and the refractive index data in the measurement area E1 and the reference area E2 for the second calibration liquid A is obtained. In step S46, a waste liquid recovery signal is output to recover the first calibration liquid A overflowing from the upper surface of the sensor stick 40. The collection is performed in the same manner as in step S42.

次に、ステップＳ４８で、第４較正液Ｄの供給指示信号をヘッド７８Ｂへ出力する。これにより、ヘッド７８Ｂで、第２較正液Ｂで満たされている液体流路４５へ第４較正液Ｄが供給され、液体流路４５の第２較正液Ｂは、第４較正液Ｄで置換される。第４較正液Ｄの供給は、第１較正液Ａの供給と同様にして行なわれる。これにより、液体流路４５が第４較正液Ｄで満たされ、第４較正液Ｄについての、測定領域Ｅ１、参照領域Ｅ２での屈折率データが得られる。そして、ステップＳ５０で、廃液回収信号を出力して、センサースティック４０上面に溢れた第２較正液Ｂを回収する。回収は、ステップＳ４２と同様にして行なわれる。   Next, in step S48, a supply instruction signal for the fourth calibration liquid D is output to the head 78B. As a result, the fourth calibration liquid D is supplied to the liquid flow path 45 filled with the second calibration liquid B by the head 78B, and the second calibration liquid B in the liquid flow path 45 is replaced with the fourth calibration liquid D. Is done. The supply of the fourth calibration liquid D is performed in the same manner as the supply of the first calibration liquid A. Thereby, the liquid flow path 45 is filled with the 4th calibration liquid D, and the refractive index data in the measurement area | region E1 and the reference area | region E2 about the 4th calibration liquid D are obtained. In step S50, a waste liquid recovery signal is output, and the second calibration liquid B overflowing on the upper surface of the sensor stick 40 is recovered. The collection is performed in the same manner as in step S42.

次に、ステップＳ５２で、第５較正液Ｅの供給指示信号をヘッド７８Ｂへ出力する。これにより、ヘッド７８Ｂで、第４較正液Ｄで満たされている液体流路４５へ第５較正液Ｅが供給され、液体流路４５の第４較正液Ｄは、第５較正液Ｅで置換される。第５較正液Ｅの供給は、第１較正液Ａの供給と同様にして行なわれる。これにより、液体流路４５が第５較正液Ｅで満たされ、第５較正液Ｅについての、測定領域Ｅ１、参照領域Ｅ２での屈折率データが得られる。そして、ステップＳ５４で、廃液回収信号を出力して、センサースティック４０上面に溢れた第４較正液Ｄを回収する。回収は、ステップＳ４２と同様にして行なわれる。   Next, in step S52, a supply instruction signal for the fifth calibration liquid E is output to the head 78B. As a result, the fifth calibration liquid E is supplied to the liquid flow path 45 filled with the fourth calibration liquid D by the head 78B, and the fourth calibration liquid D in the liquid flow path 45 is replaced with the fifth calibration liquid E. Is done. The supply of the fifth calibration liquid E is performed in the same manner as the supply of the first calibration liquid A. Thereby, the liquid channel 45 is filled with the fifth calibration liquid E, and the refractive index data in the measurement region E1 and the reference region E2 for the fifth calibration liquid E is obtained. In step S54, a waste liquid recovery signal is output to recover the fourth calibration liquid D overflowing on the upper surface of the sensor stick 40. The collection is performed in the same manner as in step S42.

次に、ステップＳ５６で、第３較正液Ｃ（ランニングバッファー液）の供給指示信号をヘッド７８Ｂへ出力する。これにより、ヘッド７８Ｂで、第５較正液Ｅで満たされている液体流路４５へ第３較正液Ｃが供給され、液体流路４５の第５較正液Ｅは、第３較正液Ｃで置換される。第３較正液Ｃの供給は、第１較正液Ａの供給と同様にして行なわれる。これにより、液体流路４５が第３較正液Ｃで満たされ、第３較正液Ｃについての、測定領域Ｅ１、参照領域Ｅ２での屈折率データが得られる。そして、ステップＳ５８で、廃液回収信号を出力して、センサースティック４０上面に溢れた第４較正液Ｄを回収する。回収は、ステップＳ４２と同様にして行なわれる。   Next, in step S56, a supply instruction signal for the third calibration liquid C (running buffer liquid) is output to the head 78B. Thereby, the third calibration liquid C is supplied to the liquid flow path 45 filled with the fifth calibration liquid E by the head 78B, and the fifth calibration liquid E in the liquid flow path 45 is replaced with the third calibration liquid C. Is done. The third calibration liquid C is supplied in the same manner as the first calibration liquid A is supplied. Thereby, the liquid channel 45 is filled with the third calibration liquid C, and the refractive index data of the third calibration liquid C in the measurement area E1 and the reference area E2 is obtained. In step S58, a waste liquid recovery signal is output, and the fourth calibration liquid D overflowing the upper surface of the sensor stick 40 is recovered. The collection is performed in the same manner as in step S42.

すべての較正液の供給が終了したら、較正液供給処理を終了する。   When the supply of all the calibration liquid is completed, the calibration liquid supply process is terminated.

図１２の屈折率情報取得処理では、ステップＳ３０で、較正液供給処理が終了したかどうかを判断し、終了した場合には、ステップＳ３２で、第１〜第５較正液の、測定領域Ｅ１、参照領域Ｅ２での屈折率データに基づいて、補正係数αを算出する。この補正係数αは、反応液を液体流路４５へ供給して測定する際に、参照領域Ｅ２から得られる屈折率データを補正するための係数である。   In the refractive index information acquisition process of FIG. 12, it is determined in step S30 whether or not the calibration liquid supply process has been completed, and if completed, in step S32, the measurement areas E1, A correction coefficient α is calculated based on the refractive index data in the reference region E2. The correction coefficient α is a coefficient for correcting the refractive index data obtained from the reference region E2 when the reaction liquid is supplied to the liquid channel 45 and measured.

上記屈折率情報取得処理では、バッファー液濃度が等しい複数の較正液か用いられているので、正確な補正係数αを得ることができる。   In the refractive index information acquisition process, since a plurality of calibration solutions having the same buffer solution concentration are used, an accurate correction coefficient α can be obtained.

次に、バイオセンサー７０での、被解析分子Ｍの測定処理について説明する。ここでの測定は、前述の初期較正に続いて行なわれる。   Next, the measurement process of the molecule M to be analyzed by the biosensor 70 will be described. This measurement is performed following the initial calibration described above.

図１４に示す、ステップＳ２２〜ステップＳ２８については、前述の屈折率情報取得処理と同様に行なわれる。ステップＳ６０で、補正係数αで、参照領域Ｅ２からの光検出信号により得られる屈折率データを補正して補正後屈折率データを求め、ステップＳ６２で、測定領域Ｅ１からの光検出信号により得られる屈折率データを、補正後屈折率データで補正して、被解析分子Ｍと反応液中の物質との結合状態を示す結合状態データを生成する。そして、ステップＳ６４で、結合状態データを表示部９２へ出力する。これにより、所定時間毎の結合状態データがメモリ９０Ｄへ記憶されると共に、表示部９２へ表示される。この測定処理は、測定処理終了信号を受けるまで継続される。   Steps S22 to S28 shown in FIG. 14 are performed in the same manner as the refractive index information acquisition process described above. In step S60, corrected refractive index data is obtained by correcting the refractive index data obtained from the photodetection signal from the reference region E2 with the correction coefficient α, and obtained in step S62 from the photodetection signal from the measurement region E1. The refractive index data is corrected with the corrected refractive index data, and binding state data indicating the binding state between the molecule to be analyzed M and the substance in the reaction solution is generated. In step S64, the combined state data is output to the display unit 92. As a result, the coupling state data for each predetermined time is stored in the memory 90D and displayed on the display unit 92. This measurement process is continued until a measurement process end signal is received.

一方、上記の測定処理中に、液体流路４５へ反応液Ｓの供給が行なわれる。制御部９０は、測定処理中の所定のタイミングで、図１５に示す反応液供給処理を実行する。   On the other hand, the reaction solution S is supplied to the liquid channel 45 during the above measurement process. The control unit 90 executes the reaction liquid supply process shown in FIG. 15 at a predetermined timing during the measurement process.

まず、ステップＳ７０で、反応液Ｓの供給指示信号をヘッド７８Ｂへ出力する。これにより、ヘッド７８Ｂで、測定中の液体流路４５へ反応液Ｓが供給される。   First, in step S70, a supply instruction signal for the reaction liquid S is output to the head 78B. Thereby, the reaction liquid S is supplied to the liquid channel 45 under measurement by the head 78B.

反応液Ｓの供給は、具体的には以下のように行なわれる。まず、ヘッド７８Ｂが反応液Ｓのセットされた反応液プレート７７の上部に移動すると共に下降して、ヘッド７８Ｂに取り付けられているピペットチップＣＰの先端を反応液Ｓが貯留されたセルへ挿入し、ピペットチップＣＰ内に反応液Ｓを吸引する。次に、ヘッド７８Ｂを上昇させて測定部８２の上部に移動すると共に下降して、ピペットチップＣＰの先端を液体流路４５の供給口４５Ａへ挿入する。そして、液体流路４５へ、吸引していた反応液Ｓを注入する（図１６（Ａ）参照）。これにより、被解析分子Ｍへ解析分子Ｎが供給され、相互作用を観察することができる。   The supply of the reaction solution S is specifically performed as follows. First, the head 78B moves to the upper part of the reaction solution plate 77 in which the reaction solution S is set and descends, and the tip of the pipette tip CP attached to the head 78B is inserted into the cell in which the reaction solution S is stored. The reaction solution S is sucked into the pipette tip CP. Next, the head 78 </ b> B is lifted and moved to the upper part of the measuring unit 82 and is lowered to insert the tip of the pipette tip CP into the supply port 45 </ b> A of the liquid channel 45. Then, the sucked reaction liquid S is injected into the liquid channel 45 (see FIG. 16A). Thereby, the analysis molecule N is supplied to the molecule M to be analyzed, and the interaction can be observed.

ここで、供給口４５Ａから液体流路４５へ反応液Ｓが注入されると、液体流路４５に充填されていたランニングバッファー液は、排出口４５Ｂから排出され、センサースティック４０の上面に溢れる。そこで、ステップＳ７２で、廃液回収指示信号をヘッド７８Ｂへ出力する。これにより、ヘッド７８Ｂは、排出口４５Ｂの上部に移動し、溢れたバッファー液を吸引し、吸入された排出液を図示しない廃液セルへ廃棄する。   Here, when the reaction liquid S is injected from the supply port 45 </ b> A into the liquid channel 45, the running buffer solution filled in the liquid channel 45 is discharged from the discharge port 45 </ b> B and overflows to the upper surface of the sensor stick 40. In step S72, a waste liquid recovery instruction signal is output to the head 78B. As a result, the head 78B moves to the upper part of the discharge port 45B, sucks the overflowing buffer solution, and discards the sucked discharge solution to a waste liquid cell (not shown).

その後、ステップＳ７４で、所定の反応時間Ｔ１が経過するまで待機する。この反応時間Ｔ１は、反応液Ｓに含まれる解析分子Ｎと被解析分子Ｍとの相互作用が飽和状態となるのに十分な時間であり、予めメモリ９０Ｄへ記録しておいてもよいし、前述の結合状態データに基づいて相互作用が飽和状態かどうかを判断してもよい。反応時間Ｔ１中も、測定処理は実行されている。このとき、液体流路４５では、供給された反応液Ｓの流れが停止された状態（反応液Ｓの送液がない状態）で測定処理は行なわれている。   Thereafter, in step S74, the process waits until a predetermined reaction time T1 elapses. This reaction time T1 is a time sufficient for the interaction between the analyzed molecule N and the analyzed molecule M contained in the reaction solution S to be saturated, and may be recorded in the memory 90D in advance. It may be determined whether the interaction is saturated based on the binding state data described above. The measurement process is also executed during the reaction time T1. At this time, the measurement process is performed in the liquid channel 45 in a state where the flow of the supplied reaction solution S is stopped (a state in which no reaction solution S is fed).

反応時間Ｔ１の経過後、ステップＳ７６で、測定終了指示信号を出力し、反応液供給処理を終了する。   After the elapse of the reaction time T1, in step S76, a measurement end instruction signal is output, and the reaction liquid supply process ends.

一方、測定処理も、測定終了指示信号を受けて終了される。   On the other hand, the measurement process is also terminated in response to the measurement end instruction signal.

本実施形態によれば、正確な補正係数αを用いて参照領域Ｅ２の屈折率データが補正され、補正後の屈折率データにより測定領域Ｅ１の屈折率データが補正されて結合状態データが求められているので、より正確な結合状態データを得て正確な測定を行なうことができる。   According to the present embodiment, the refractive index data of the reference region E2 is corrected using the accurate correction coefficient α, and the refractive index data of the measurement region E1 is corrected by the corrected refractive index data to obtain the coupling state data. Therefore, more accurate binding state data can be obtained and accurate measurement can be performed.

なお、本実施形態では、液体流路４５から排出された液体を、液体を供給したピペットチップＣＰを排出口４５Ｂまで移動させて吸引することにより回収したが、排出された液体の回収は他の方法で行なうこともできる。例えば、図１７に示すように、供給口４５Ａから１つのピペットチップＣＰを挿入して液体を供給すると共に、排出口４５Ｂへ他のピペットチップＣＰを挿入して液体を吸引することにより、液体流路４５内の液置換を行なうことができる。   In the present embodiment, the liquid discharged from the liquid channel 45 is recovered by moving the pipette tip CP supplied with the liquid to the discharge port 45B and sucking it. It can also be done by the method. For example, as shown in FIG. 17, one pipette tip CP is inserted from the supply port 45A to supply the liquid, and another pipette tip CP is inserted to the discharge port 45B to suck the liquid. Liquid replacement in the passage 45 can be performed.

また、本実施形態では、バイオセンサーとして、表面プラズモンセンサーを一例として説明したが、バイオセンサーとしては、表面プラズモンセンサーに限定されるものではなく、測定領域における屈折率を用いて測定を行なう、あらゆるバイオセンサー、例えば、二面偏波式干渉計を用いた解析装置などに、本実施形態での較正方法を適用することができる。   In the present embodiment, the surface plasmon sensor has been described as an example of the biosensor. However, the biosensor is not limited to the surface plasmon sensor, and the measurement is performed using the refractive index in the measurement region. The calibration method according to this embodiment can be applied to a biosensor, for example, an analysis apparatus using a two-plane polarization interferometer.

本実施形態のバイオセンサーの全体斜視図である。It is a whole perspective view of the biosensor of this embodiment. 本実施形態のバイオセンサーの全体斜視図において、ヘッドが測定部付近に位置している状態を示す図である。In the whole perspective view of the biosensor of this embodiment, it is a figure showing the state where the head is located near the measurement part. 本実施形態のセンサースティックの斜視図である。It is a perspective view of the sensor stick of this embodiment. 本実施形態のセンサースティックの分解斜視図である。It is a disassembled perspective view of the sensor stick of this embodiment. 本実施形態のセンサースティックの１の液体流路部分の断面図である。It is sectional drawing of the 1 liquid flow path part of the sensor stick of this embodiment. 本実施形態のセンサースティックの測定領域及び参照領域へ光ビームが入射している状態を示す図である。It is a figure which shows the state in which the light beam is injecting into the measurement area | region and reference area | region of the sensor stick of this embodiment. 本実施形態のバイオセンサーの光学測定部付近の概略図である。It is the schematic of the optical measurement part vicinity of the biosensor of this embodiment. 本実施形態の制御部とその周辺の概略ブロック図である。It is a schematic block diagram of the control part of this embodiment, and its periphery. 本実施形態の入力画面を示す図である。It is a figure which shows the input screen of this embodiment. 本実施形態の較正液調製処理のフローチャートである。It is a flowchart of the calibration liquid preparation process of this embodiment. 本実施形態での液量算出結果の一例を示す表である。It is a table | surface which shows an example of the liquid amount calculation result in this embodiment. 本実施形態の屈折率情報取得処理のフローチャートである。It is a flowchart of the refractive index information acquisition process of this embodiment. 本実施形態の較正液供給処理のフローチャートである。It is a flowchart of the calibration liquid supply process of this embodiment. 本実施形態の測定処理のフローチャートである。It is a flowchart of the measurement process of this embodiment. 本実施形態の反応液供給処理のフローチャートである。It is a flowchart of the reaction liquid supply process of this embodiment. 本実施形態での液体流路の反応液供給手順を説明する図である。It is a figure explaining the reaction liquid supply procedure of the liquid channel in this embodiment. 液置換の他の方法を示す説明図である。It is explanatory drawing which shows the other method of liquid replacement.

符号の説明Explanation of symbols

４０ センサースティック
４５ 液体流路
７０ バイオセンサー
８０ 光学測定部
８４ 較正液調整部
９０Ｄ メモリ
９０ 制御部
Ｌ 光ビーム
Ｅ１ 測定領域
Ｅ２ 参照領域
Ｓ 反応液
Ｍ 被解析分子
Ｎ 解析分子
α 補正係数
Ａ 第１較正液
Ｂ 第２較正液
Ｃ 第３較正液
Ｄ 第４較正液
Ｅ 第５較正液 40 Sensor stick 45 Liquid flow path 70 Biosensor 80 Optical measurement unit 84 Calibration solution adjustment unit 90D Memory 90 Control unit L Light beam E1 Measurement region E2 Reference region S Reaction solution M Analytical molecule N Analytical molecule α Correction coefficient A First calibration Liquid B Second calibration liquid C Third calibration liquid D Fourth calibration liquid E Fifth calibration liquid

Claims (7)

被解析生体分子の固定された測定領域での光の屈折率を用いて被解析分子と解析分子との間の相互作用を測定するバイオセンサーを、屈折率の異なる複数の較正液を用いて較正するバイオセンサー較正方法であって、
較正液の屈折率の変化に寄与する屈折率変化物質、及び、バッファー能を有するバッファー能物質を含む複数の較正液を、各較正液間で、前記屈折率変化物質の濃度が異なる共に、前記バッファー能物質の濃度が等しくなるように調製し、
調製した前記複数の較正液の各々について、前記測定領域及び被解析生体分子の固定されない参照領域における屈折率情報を取得し、
取得した複数の較正液の屈折率情報に基づいて、前記解析分子供給時における前記測定領域での光の屈折率を較正する、バイオセンサー較正方法。 A biosensor that measures the interaction between the analyte molecule and the analyzed molecule using the refractive index of light in the measurement region where the analyte biomolecule is fixed is calibrated using multiple calibration solutions with different refractive indices. A biosensor calibration method for
A plurality of calibration liquids including a refractive index changing substance that contributes to a change in the refractive index of the calibration liquid and a buffer capacity substance having a buffer capacity, and the concentration of the refractive index changing substance is different between the calibration liquids. Prepare the same concentration of buffering substance,
For each of the prepared calibration solutions, obtain refractive index information in the measurement region and a reference region where the analyzed biomolecule is not fixed,
A biosensor calibration method that calibrates the refractive index of light in the measurement region at the time of supplying the analysis molecule based on the obtained refractive index information of a plurality of calibration solutions. 前記屈折率変化物質の２５℃における屈折率が１．４以上であること、を特徴とする請求項１に記載のバイオセンサー較正方法。   The biosensor calibration method according to claim 1, wherein the refractive index changing substance has a refractive index of 1.4 or more at 25 ° C. 前記屈折率変化物質が、非イオン性物質であること、を特徴とする請求項１または請求項２に記載のバイオセンサー較正方法。   The biosensor calibration method according to claim 1, wherein the refractive index changing substance is a nonionic substance. 請求項１乃至請求項３のいずれか１項に記載のバイオセンサー較正方法を用いて、被解析分子と解析分子との間の相互作用を測定する測定方法。   A measurement method for measuring an interaction between an analyzed molecule and an analyzed molecule using the biosensor calibration method according to any one of claims 1 to 3. 被解析生体分子の固定された測定領域での光の屈折率を用いて被解析分子と解析分子との間の相互作用を測定するバイオセンサーであって、
較正液の屈折率の変化に寄与する屈折率変化物質、バッファー能を有するバッファー能物質を含む複数の較正液を、各較正液間で、前記屈折率変化物質の濃度が異なると共に、前記バッファー能物質の濃度が等しくなるように調製する、較正液調製手段と、
調製した前記複数の較正液の各々について、前記測定領域及び被解析生体分子の固定されない参照領域における屈折率情報を取得する屈折率情報取得手段と、
取得した複数の較正液の屈折率情報に基づいて、前記解析分子供給時における前記測定領域での光の屈折率を較正する屈折率較正手段と、
を備えた、バイオセンサー。 A biosensor that measures an interaction between an analyzed molecule and an analyzed molecule using a refractive index of light in a measurement region where the analyzed biomolecule is fixed,
A plurality of calibration liquids including a refractive index changing substance that contributes to a change in the refractive index of the calibration liquid and a buffer capacity substance having a buffer capacity, and the concentration of the refractive index changing substance differs between the calibration liquids, and the buffer capacity Calibration solution preparation means for preparing the substance concentrations to be equal;
Refractive index information acquisition means for acquiring refractive index information in the measurement region and a reference region where the biomolecule to be analyzed is not fixed, for each of the prepared calibration solutions,
Refractive index calibration means for calibrating the refractive index of light in the measurement region at the time of supplying the analytical molecule based on the obtained refractive index information of a plurality of calibration solutions;
A biosensor with 前記屈折率変化物質の２５℃における屈折率が１．４以上であること、を特徴とする請求項５に記載のバイオセンサー。   The biosensor according to claim 5, wherein the refractive index changing substance has a refractive index of 1.4 or more at 25 ° C. 前記屈折率変化物質が、イオン性物質でないこと、を特徴とする請求項５または請求項６に記載のバイオセンサー。   The biosensor according to claim 5 or 6, wherein the refractive index changing substance is not an ionic substance.
JP2005084993A 2005-03-23 2005-03-23 Calibration method of biosensor, measuring method and biosensor Pending JP2006266851A (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2005084993A JP2006266851A (en) 2005-03-23 2005-03-23 Calibration method of biosensor, measuring method and biosensor

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2005084993A JP2006266851A (en) 2005-03-23 2005-03-23 Calibration method of biosensor, measuring method and biosensor

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2006266851A true JP2006266851A (en) 2006-10-05

Family

ID=37202990

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2005084993A Pending JP2006266851A (en) 2005-03-23 2005-03-23 Calibration method of biosensor, measuring method and biosensor

Country Status (1)

Country Link
JP (1) JP2006266851A (en)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2519505C2 (en) * 2009-02-18 2014-06-10 Конинклейке Филипс Электроникс Н.В. Sensor device for target substance identification
WO2020246963A1 (en) * 2019-06-04 2020-12-10 Hewlett-Packard Development Company, L.P. Integrated microfluidic ejector chips

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2519505C2 (en) * 2009-02-18 2014-06-10 Конинклейке Филипс Электроникс Н.В. Sensor device for target substance identification
WO2020246963A1 (en) * 2019-06-04 2020-12-10 Hewlett-Packard Development Company, L.P. Integrated microfluidic ejector chips

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP4657803B2 (en) Liquid feeding system, liquid feeding method and flow path unit.
JP4607684B2 (en) Flow path block, sensor unit, and measuring device using total reflection attenuation
JP4516477B2 (en) Measuring apparatus using total reflection attenuation and measuring method thereof
JP2006194624A (en) Flow channel member and sensor unit
JP2005257455A (en) Measuring apparatus and measuring unit
US11047798B2 (en) Measurement method, measurement apparatus, and measurement system
JP2006105911A (en) Unidimensional measuring unit
JP2007163323A (en) Measuring method and biosensor
KR101472504B1 (en) Method of adjust the path length automatically for sample analysis, and it includes sample analysis method and its device.
JP2006266851A (en) Calibration method of biosensor, measuring method and biosensor
JP2009002864A (en) Analysis apparatus and analysis method
EP3477298B1 (en) Measurement method
JP6805637B2 (en) Hematocrit value measuring method, hematocrit value measuring device, amount of substance to be measured, and amount of substance to be measured
CN108474794B (en) Component measuring device, component measuring method, and computer-readable recording medium
JP4485959B2 (en) Sensor unit
JP2006105610A (en) Measuring instrument and method using total reflection attenuation
JP2006208035A (en) Measuring instrument using attenuated total reflection, and tilt correction method therefor
US20010041367A1 (en) Analysis method using dry chemical analysis element
JP2006266850A (en) Measuring method and biosensor
JP2006090718A (en) Sensor in utilizing attenuated total reflection
JP2006226841A (en) Sensor unit, measuring method and measuring apparatus using total reflection attenuation
JP2005221274A (en) Measuring method and measuring instrument
JP2006242857A (en) Sensor unit and manufacturing method
JP2006284350A (en) Dispenser, attaching method of pipette chip of dispenser and measuring instrument utilizing attenuation of total reflection
JP2007093395A (en) Sensor unit and measuring method using attenuated total reflection

Legal Events

Date Code Title Description
A711 Notification of change in applicant

Effective date: 20070223

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A712