JP2006223241A - Ｄｎａ含有物 - Google Patents

Abstract

【課題】 ＤＮＡの使用量が少なく、単価も高くなく、また、紫外線に対する耐光性に優れたＤＮＡ含有物を提供する。
【解決手段】 ＤＮＡと媒体、例えば、水溶性高分子を混合することで、ＤＮＡが水溶性高分子で包まれた状態となり、さらに液状であるので、付加的成分を練り込みやすくなり、このようにした混合物をシート状に展延し、乾燥させることで有用性のあるＤＮＡ含有物を作製することが可能である。さらに、得られたＤＮＡ含有物を粉砕及び／又は裁断して使用することにより、少量の固形物、すなわち少量のＤＮＡの使用で効果を奏するＤＮＡ含有物を提供する。
【選択図】 図１

Description

本発明は、ＤＮＡ含有物に関するものであり、特に、真偽判別、偽造防止技術に用いられるマーカー物質を用いたＤＮＡ含有物で、さらに、耐光性に優れたＤＮＡ含有物を提供する。

従来より、ＤＮＡ（デオキシリボ核酸）は、他の物質と高度に特異的・選択的な相互作用を示す働きがあることから、機能物質への展開が期待されている。しかし、ＤＮＡは、水溶性のため、その構造を安定に保つことが難しく、そのため利用分野が限られていた。

ひとつの利用分野として、偽造防止、真偽判別等にＤＮＡが用いられており、偽造防止用、真偽判別用及び個別情報識別用などの画像の形成のためのインキとしてＤＮＡ等を含有するインキが提案されており、該インキを用いて各種の印刷を行っている（例えば、特許文献１参照。）。また、これらの印刷物の判別、識別などは、画像が形成されたシートを裁断し、所定のバッファー中に懸濁及び攪拌し、ＤＮＡを抽出して、抽出されたＤＮＡを分析することにより行っている。

また、ＤＮＡは水溶性であることから、ＤＮＡを水溶性溶液に溶解し、このような溶液を、偽造防止ラベルとして製品の表面上に適用しているが、この水溶性溶液が、樹脂、ガラス容器等に密着することができないという欠点があり、この水溶性の偽造防止ラベルは、容易に剥がれてしまい、同定することができないという問題があった。

また、一方で、ＤＮＡは、紫外線によりダメージを受けやすいことが問題となっている。それは、ＤＮＡ内部の核酸基チミンが２７０ｎｍの紫外線を吸収することが主要因によるものとされているが、単に紫外線の吸収が問題となるのではなく、紫外線の吸収によりＤＮＡの構造変化が生じることが問題となっており、ＤＮＡの耐光性の向上が図れる手法が求められていた。

しかし、一般に、ＤＮＡは高価であり、例えば、貴重印刷物や用紙に用いて、真偽判別、偽造防止技術に使用するためには、ある程度の多量のＤＮＡを必要とする、という問題があった。

さらに、耐光性の問題として、紫外線によるダメージ分を想定して、その分のＤＮＡの添加量を増やしているため、更にコストが高くなるという問題があった。

特開２００２−０７０９５１号公報

以上詳述したように、現在用いられている方法においては、ＤＮＡの量が多量に必要になるため、単価が高くなるという問題、また、対紫外線に対する対策の問題等があり、本発明はこのような問題を解決するためになされたものであり、本発明者は、ＤＮＡが水溶性であるということに対して、ＤＮＡを水溶性媒体と混合することで、ＤＮＡを媒体で包埋してから固化することによりＤＮＡ含有物を作製することで、現在用いられている方法では得ることができない、付加的成分が練り込みやすい媒体に封じ込めたＤＮＡを固形物にして用いるため、極めて少量のＤＮＡを用いても効果が期待できる。さらにマーカー物質や耐光性向上剤を組み込むことで、偽造防止や耐光性に対して優れたＤＮＡ含有物を提供することを目的としている。また、本発明のＤＮＡ含有物を用紙に透き込むことで、真偽判別及び／又は偽造防止用紙として用いることを可能とする。

本発明者は今般、ＤＮＡと媒体、例えば水溶性高分子を混合することで、ＤＮＡが水溶性高分子で包まれた状態となり、更に液状であるので、付加的成分を練り込みやすくなり、このようにした混合物をシート状に展延し、乾燥させることで有用性のあるＤＮＡ含有物を作製することが可能であり、更に得られたＤＮＡ含有物を粉砕及び／又は裁断して使用することにより、少量の固形物、すなわち、少量のＤＮＡの使用で効果を奏するとの知見を得た。

さらに、ＤＮＡを含む媒体に紫外線吸収剤、光安定剤及び紫外線散乱剤からなる群から選ばれた少なくとも１種を混合することで、ＤＮＡの耐光性が向上した含有物を作製できるとの知見も得た。

すなわち、本発明のＤＮＡ含有物は、ＤＮＡと媒体を混合して固化することにより得られた硬化物を粉砕及び／又は裁断して成るものである。

また、ＤＮＡと媒体の混合物に紫外線吸収剤、光安定剤及び紫外線散乱剤からなる群から選ばれた少なくとも１種を、ＤＮＡを含む媒体に対して０．１〜２０％の割合で混合して成るものである。

また、ＤＮＡと媒体の混合物にマーカー物質を混合して固化することにより得られた硬化物を粉砕及び／又は裁断して成るものである。

また、ＤＮＡ含有物を用紙に透き込むことにより、真偽判別及び／又は偽造防止用紙として使用するものである。

本発明によれば、付加的成分が練り込みやすい媒体に封じ込めたＤＮＡを固化することにより得られた硬化物を粉砕及び／又は裁断して用いるため、極めて少量のＤＮＡを用いても効果を期待できる。さらに、ＤＮＡを含む媒体に耐光性向上剤やマーカー物質を混合し、固化し、粉砕及び／又は裁断することにより、偽造防止や耐光性の優れたＤＮＡ含有物を得ることができた。また、本発明のＤＮＡ含有物を用紙に透き込むことで、真偽判別及び／又は偽造防止用紙として用いることが可能となり、可視識別、不可視識別の２段階識別が簡単に、低コストで可能となる。

以下、本発明を実施の形態に基づき説明するが、本発明は、これら実施例によって限定されるものではない。
本発明において、ＤＮＡ含有物とは、ＤＮＡと高分子を単に混ぜ合わせたものではなく、ＤＮＡを媒体によって周囲を包み込まれた状態してから固化し、粉砕及び／又は裁断しているので、ＤＮＡは周囲を媒体によって包まれた状態となっている。

本実施例に用いるＤＮＡ含有物の作製方法の実施例について説明する。
１ ＤＮＡ含有物の作製
本実施例に用いられるＤＮＡとしては、市販のもので良く、本実施例においては、タカラバイオ社製のラットの遺伝子断片（塩基鎖長３００）をＩＣＡＮ法により増幅したものを用いた。

また、媒体としては、用いるＤＮＡが水溶性であるので、水溶性であるのが好ましい。特に水溶性高分子であればさらに良く、ＤＮＡの媒体として付与するものであり、ＰＶＡ、ゼラチンなどがあげられる。本実施例においては、ＰＶＡ（ゴーセノールＮ３００ 日本合成化学工業製：商標名）を用いた。

（実施例１） 表１に示す材料を用い、それぞれ表に示した配合割合で処方し、スターラーを用いて混合し、混合液をガラス板上に広げて、室温で乾燥を行い、ＤＮＡシートを作製した。このシートをはさみを用いて破断し、ＤＮＡ含有物１を得た。はさみは、一例であり、シートを破断できるものであれば、はさみに限らない。

（表１） ＤＮＡ含有物１を得るための処方
ＰＶＡ（４.５％溶液） ９９重量％
ＤＮＡ ０．００３重量％

（実施例１−１） 次に、得られたＤＮＡ含有物１と調合紙料とを、表２に示す配合割合で混合し、JIS−P 8209（パルプ試験用手すき紙調製方法）に準じて６０グラム／ｍ^２の手すき紙１を作製した。

（表２） 手すき紙１を得るための処方
調合紙料 １００重量％
ＤＮＡ含有物１ ３重量％

（比較例１） 次に、比較用として、比較用ＤＮＡ含有物２を作製する。媒体として、水溶性高分子ではない飽和ポリエステル樹脂、ポリエスターＴＰ２３６（日本合成化学工業製：商標名）を用いた。

表３に示す材料を用い、それぞれ表に示した配合割合で処方し、スターラーを用いて混合したが、ＤＮＡが分離し、ＤＮＡシートを作製することができなかったため、比較用ＤＮＡ含有物２を得ることができなかった。このことからも媒体としては、水溶性高分子であることが好ましい。

（表３） 比較用ＤＮＡ含有物２を得るための処方
飽和ポリエステル樹脂（４.５％溶液） ９９重量％
ＤＮＡ ０．００３重量％

２ 手すき紙１からのＤＮＡの確認
確認方法としては、対象から確認物質を取り出し、次いで溶媒を使用して該確認物質からＤＮＡを抽出し、最終的にＰＣＲ反応によってＤＮＡを増幅することにより、対象の真偽を判別することができる。

（実施例１−１）で得られた手すき紙１を、５ｍｍφに打ち抜き、非イオン性の界面活性剤とエチレンジアミン四酢酸二ナトリウム水塩（ＥＤＴＡ）を使用して抽出を行った。この抽出物をＤＮＡに対応する所定のプライマーを用いてＰＣＲ（Polymerase Chain Reaction)による増幅反応を行い、ＤＮＡの増幅を行った。得られたＰＣＲ産物、分子量マーカー、及びＤＮＡに対して電気泳動を行い、エチジウムプロミド染色液を用いて染色し、紫外線下でゲルを観察し、電気泳動パターンを得た。

図1に、手すき紙1の電気泳動パターンを示す。図１のレーン１は分子量マーカー、レーン２はＤＮＡ、レーン３はＤＮＡ含有物１、レーン４は手すき紙１からの抽出物のＰＣＲ産物である。

この図から、ＤＮＡ含有物1から抽出したＰＣＲ産物、手すき紙1より抽出したＰＣＲ産物の電気泳動パターンは、用いたＤＮＡの電気泳動パターンと同一であることが分かる。さらに、レーン１の分子量マーカーを参照に用いると、前記ＤＮＡ含有物1から抽出したＰＣＲ産物、手すき紙1からの抽出物のＰＣＲ産物のＤＮＡ鎖長が、ＰＶＡに混入したＤＮＡと同じ、塩基鎖長３００であることが分かり、破断、粉砕され微小となったＤＮＡ含有物中に確実にＤＮＡが存在していることが確認された。

３ 紫外線吸収剤、光安定剤及び紫外線散乱剤からなる群から選ばれた少なくとも１種を含むＤＮＡ含有物の作製

紫外線吸収剤は、高エネルギーをもつ紫外線を吸収し、無害のエネルギーに転換し、再輻射することによって紫外線遮蔽効果をもたらし、耐光性や耐候性を向上させるもので、ベンゾフェノン系、ベンゾトリアゾール系などがあげられる。また、紫外線散乱剤は、紫外線を散乱させることによって紫外線遮蔽効果をもたらす材料であり、主に金属酸化物粉末などの無機系材料が用いられ、二酸化チタン、酸化亜鉛などを微粒子化した粉体などがあげられる。また、光安定剤としては、ヒンダードアミン系のような、耐光性や耐候性を向上させるものがあげられる。

本実施例においては、これらの紫外線遮蔽材料は単独で用いてもよいし、２種以上を組み合わせて用いてもよい。これらの紫外線遮蔽材料の添加量は、０．１〜２０重量％で、好ましくは１〜１０重量％であり、２種以上を組み合わせて用いる場合は、全体の添加量がこの範囲を超えないものとする。

また、媒体に配合する紫外線吸収剤としては、市販のもので良く、ＤＡＮ含有物の耐光性を向上させるために付与するものであり、ベンゾトリアゾール系、ベンゾフェノン系があげられる。本実施例においては、ベンゾトリアゾール系のチヌビン３２８（チバ・ガイギー社製：商標名）を用いた。紫外線吸収剤の添加量は、０．１〜２０重量％で、好ましくは１〜１０重量％である。

また、媒体に配合する光安定剤としては、ヒンダードアミン系があげられる。本実施例においては、ヒンダードアミン系のチヌビン１２３（チバ・ガイギー社製：商標名）を用いた。光安定剤の添加量は、０．１〜２０重量％で、好ましくは１〜１０重量％である。

また、媒体に配合する紫外線散乱剤としては、酸化チタンを用いても良好な結果を得ることができた。この場合の酸化チタンの添加量は、０．１〜２０重量％で、好ましくは１〜１０重量％である。

また、媒体に配合する紫外線吸収剤、光安定剤及び紫外線散乱剤を混合しても良好な結果を得ることができた。この場合の紫外線吸収剤、光安定剤及び紫外線散乱剤の添加量は、総量で０．１〜２０重量％で、好ましくは１〜１０重量％である。

（実施例２） 表４に示す材料を用い、それぞれ表に示した配合割合で処方し、スターラーを用いて混合し、混合液をガラス板上に広げて、室温で乾燥を行い、紫外線吸収剤入りＤＮＡシートを作製した。このシートをはさみを用いて破断し、紫外線吸収剤を含むＤＮＡ含有物３を得た。

（表４） ＤＮＡ含有物３を得るための処方
ＰＶＡ（４.５％溶液） ９９重量％
紫外線吸収剤 １重量％
ＤＮＡ ０．００３重量％

（実施例２−１） 次に、得られたＤＮＡ含有物３と調合紙料とを、表５に示す配合割合で混合し、JIS−P 8209（パルプ試験用手すき紙調製方法）に準じて６０グラム／ｍ^２の手すき紙２を作製した。

（表５） 紫外線吸収剤を含む手すき紙２を得るための処方
調合紙料 １００重量％
ＤＮＡ含有物３ ３重量％

（比較例２） 比較用として表６に示す材料を用い、それぞれ表に示した配合割合で処方し、スターラーを用いて混合し、混合液をガラス板上に広げて、室温で乾燥を行い、紫外線吸収剤を含まない比較用ＤＮＡシートを作製した。このシートをはさみを用いて破断し、比較用ＤＮＡ含有物４を得た。

（表６） 比較用ＤＮＡ含有物４を得るための処方
ＰＶＡ（４.５％溶液） ９９重量％
ＤＮＡ ０．００３重量％

（比較例２−１） 次に、得られた比較用ＤＮＡ含有物４と調合紙料とを、表７に示す配合割合で混合し、JIS−P 8209（パルプ試験用手すき紙調製方法）に準じて６０グラム／ｍ^２の手すき紙３を作製した。

（表７） 紫外線吸収剤を含まない比較用手すき紙３を得るための処方
調合紙料 １００重量％
比較用ＤＮＡ含有物４ ３重量％

（実施例３） 次に、光安定剤を含むＤＮＡ含有物５を作製する。ここで、紫外線安定剤の代わりに光安定剤を使用する以外は、（実施例２）の紫外線吸収剤を含むＤＮＡ含有物３と同様にして光安定剤を含むＤＮＡ含有物５を作製した。

（実施例３−１） この光安定剤を含むＤＮＡ含有物５を使用して、（実施例２−１）の紫外線吸収剤を含む手すき紙２と同様にして光安定剤を含む手すき紙４を作製する。

（実施例４） 次に、光安定剤と光散乱剤を含むＤＮＡ含有物６を作製する。表８に示す材料を用い、それぞれ表に示した配合割合で処方し、スターラーを用いて混合し、混合液をガラス板上に広げて、室温で乾燥を行い、光安定剤と光散乱剤入りＤＮＡシートを作製した。このシートをはさみを用いて破断し、光安定剤と光散乱剤を含むＤＮＡ含有物６を得た。

（表８） ＤＮＡ含有物６を得るための処方
ＰＶＡ（４.５％溶液） ９９重量％
光安定剤 １重量％
光散乱剤 １重量％
ＤＮＡ ０．００３重量％

（実施例４−１） この光安定剤と光散乱剤を含むＤＮＡ含有物６を使用して、（実施例２−１）の紫外線吸収剤を含む手すき紙２と同様にして光安定剤と光散乱剤を含む手すき紙５を作製する。

４ 手すき紙の耐光性試験
得られた紫外線吸収剤を含む手すき紙２、紫外線吸収剤を含まない比較用手すき紙３、光安定剤を含む手すき紙４、光安定剤と光散乱剤を含む手すき紙５について耐光性試験を行った。JIS−K 7360-2（プラスチック-実験室光源による曝露試験方法 第２部：キセノンアーク光源）に準じて、相対湿度50％、ブラックパネル温度６３℃、紫外線放射照度１８０Ｗ/ｍ^２の条件下で１時間〜４０時間の紫外線の照射を行い、耐光性試験を行った。このときの放射露光量は６２０Ｊ/ｍ^２〜２５６７０Ｊ/ｍ^２であった。

５．手すき紙からのＤＮＡの確認
耐光性試験を行った紫外線吸収剤を含む手すき紙２、紫外線吸収剤を含まない比較用手すき紙３、光安定剤を含む手すき紙４、光安定剤と光散乱剤を含む手すき紙５のそれぞれを、5ｍｍφに打ち抜き、非イオン性の界面活性剤とエチレンジアミン四酢酸二ナトリウム水塩（ＥＤＴＡ）を使用して抽出を行った。この抽出物をＤＮＡに対応する所定のプライマーを用いてＰＣＲ（Polymerase Chain Reaction）による増幅反応を行い、ＤＮＡの増幅を行った。得られたＰＣＲ産物、分子量マーカー及びＤＮＡに対して電気泳動を行い、エチジウムプロミド染色液を用いて染色し、紫外線下でゲルを観察し、電気泳動パターンを得た。

図２に、紫外線吸収剤を含む手すき紙２の電気泳動パターンを示す。図２のレーン５及びレーン１２は分子量マーカー、レーン６は用いたＤＮＡ、レーン７はＤＮＡ含有物２からの抽出物のＰＣＲ産物、レーン８は紫外線照射を行わないときの手すき紙２からの抽出物のＰＣＲ産物、レーン９は紫外線を１０時間照射した後の手すき紙２からの抽出物のＰＣＲ産物、レーン１０は紫外線を２０時間照射した後の手すき紙２からの抽出物のＰＣＲ産物、レーン１１は紫外線を４０時間照射した後の手すき紙２からの抽出物のＰＣＲ産物である。

この図から、ＤＮＡ含有物３から抽出したＰＣＲ産物、手すき紙２より抽出したＰＣＲ産物の電気泳動パターンはＤＮＡの電気泳動パターンと同一であることが分かる。さらに、レーン５及びレーン１２の分子量マーカーを参照に用いると、前記ＤＮＡ含有物３から抽出したＰＣＲ産物、手すき紙２からの抽出物のＰＣＲ産物のＤＮＡ鎖長が、ＰＶＡに混入したＤＮＡと同じ、塩基鎖長３００であることが分かる。

図３に、紫外線吸収剤を含まない比較用手すき紙３の電気泳動パターンを示す。図３のレーン１３及びレーン２０は分子量マーカー、レーン１４は用いたＤＮＡ、レーン１５は比較用ＤＮＡ含有物４からの抽出物のＰＣＲ産物、レーン１６は紫外線照射を行わないときの比較用手すき紙３からの抽出物のＰＣＲ産物、レーン１７は紫外線を１０時間照射した後の比較用手すき紙３からの抽出物のＰＣＲ産物、レーン１８は紫外線を２０時間照射した後の比較用手すき紙３からの抽出物のＰＣＲ産物、レーン１９は紫外線を４０時間照射した後の比較用手すき紙３からの抽出物のＰＣＲ産物である。

紫外線吸収剤を含まない比較用手すき紙３についても、得られたＰＣＲ産物の電気泳動パターンがＤＮＡの電気泳動パターンと同一であることを確認した。さらに、分子量マーカーを参照に用いることで、比較用ＤＮＡ含有物４、比較用手すき紙３からの抽出物のＰＣＲ産物のＤＮＡ鎖長が、ＰＶＡに混入したＤＮＡと同じ塩基鎖長３００であることが確認された。しかし、レーン１８、レーン１９から明らかなように、紫外線の照射時間が20時間を超えると耐光性がおちているのがわかる。

図４に、光安定剤を含む手すき紙４の電気泳動パターンを示す。
図４のレーン２１及びレーン２８は分子量マーカー、レーン２２はＤＮＡ、レーン２３はＤＮＡ含有物５からの抽出物のＰＣＲ産物、レーン２４は紫外線照射を行わないときの手すき紙４からの抽出物のＰＣＲ産物、レーン２５は紫外線を１０時間照射した後の手すき紙４からの抽出物のＰＣＲ産物、レーン２６は紫外線を20時間照射した後の手すき紙４からの抽出物のＰＣＲ産物、レーン２７は紫外線を40時間照射した後の手すき紙４からの抽出物のＰＣＲ産物である。

図５に、光安定剤と光散乱剤を含む手すき紙５の電気泳動パターンを示す。
図５のレーン２９及びレーン３６は分子量マーカー、レーン３０はＤＮＡ、レーン３１はＤＮＡ含有物６からの抽出物のＰＣＲ産物、レーン３２は紫外線照射を行わないときの手すき紙５からの抽出物のＰＣＲ産物、レーン３３は紫外線を１０時間照射した後の手すき紙５からの抽出物のＰＣＲ産物、レーン３４は紫外線を20時間照射した後の手すき紙５からの抽出物のＰＣＲ産物、レーン３５は紫外線を40時間照射した後の手すき紙５からの抽出物のＰＣＲ産物である。

図２、図３、図４及び図５に示した電気泳動パターンから、ＰＣＲ産物のＤＮＡのバンド濃度を目視で比較することで、手すき紙からの抽出物のＰＣＲ増幅が可能であるかを比較した結果を表９に示す。

（表９）

○：増幅できた、×：増幅できない

表９に示すように、本実施例において、ＤＮＡの耐光性が飛躍的に増大することが確認できた。

５ マーカー物質を含む用紙の作製及び確認
マーカー物質としては、紫外線吸収物質、光安定物質、光散乱物質、機能性色素、磁気特性を有する物質等の一般的に用いられている物質があり、機能性色素としては、蛍光又はりん光を発光する物質、サーモクロミズムを起こす物質、化学変化を起こす物質等がある。本実施例においては、マーカー物質として、化学変化を起こす物質であるＰＨ指示薬のうちのフェノールフタレインを用いて説明するが、他のマーカー物質についても、それぞれのマーカー物質の性質に基いて同様に作製し、確認を行う。

（実施例５） マーカー物質として、ＰＨ指示薬であるフェノールフタレインを含むＤＮＡ含有物７を作製する、表１０に示す材料を用い、それぞれ表に示した配合割合で処方し、スターラーを用いて混合し、混合液をガラス板上に広げて、室温で乾燥を行い、ｐＨ指示薬入りＤＮＡシートを作製した。このシートをはさみを用いて破断し、ｐＨ指示薬を含むＤＮＡ含有物７を得た。

（表１０） ＤＮＡ含有物７を得るための処方
ＰＶＡ（４．５％溶液） ９９重量％
フェノールフタレイン（１０％溶液） １重量％
ＤＮＡ ０．００３重量％

（実施例５−１） 次に、得られたＤＮＡ含有物７と調合紙料とを、表１１に示す配合割合で混合し、JIS−P 8209（パルプ試験用手すき紙調製方法）に準じて６０グラム／ｍ^２の手すき紙６を作製した。

（表１１） ｐＨ指示薬を含む手すき紙６を得るための処方
調合紙料 １００重量％
ＤＮＡ含有物７ ３重量％

上記で作製した手すき紙６と［比較例２−１］で作製した比較用手すき紙３に４％水酸化ナトリウム溶液を滴下し、ＤＮＡ含有物部分の変色を観察した。手すき紙６に含まれる、フェノールフタレインを含むＤＮＡ含有物の部分のみが紅色に変化することが確認でき、手すき紙３のＤＮＡ含有物部分には、色変化は認められなかった。

次に、手すき紙６、比較用手すき紙３を、５ｍｍφに打ち抜き、非イオン性の界面活性剤とエチレンジアミン四酢酸二ナトリウム水塩（ＥＤＴＡ）を使用して抽出を行った。この抽出物をＤＮＡに対応する所定のプライマーを用いてＰＣＲによる増幅反応を行い、ＤＮＡの増幅を行った。得られたＰＣＲ産物、分子量マーカー及びＤＮＡに対して電気泳動を行い、エチジウムプロミド染色液を用いて染色し、紫外線下でゲルを観察し、電気泳動パターンを得た。

得られた電気泳動パターンから、手すき紙６から抽出したＰＣＲ産物電気泳動パターンはＤＮＡの電気泳動パターンと同一であることが分かった。さらに、分子量マーカーを参照に用いると、手すき紙６から抽出したＰＣＲ産物のＤＮＡ鎖長が、ＰＶＡに混入したＤＮＡと同じ、塩基鎖長３００であることが分かる。

以上の結果から、上記実施例で得られたＤＮＡ含有物自体が偽造防止機能を持つマーカー物質であることが分かる。このようなＤＮＡ含有物は、あらゆる種類の真偽判別、偽造防止製品を製造するために使用することが可能となる。その結果、該ＤＮＡ含有物が入った手すき紙から、用いたＤＮＡを同定することが可能であること、耐光性向上剤を添加することにより、耐光性の飛躍的な増大を図ることが可能であること及びマーカー物質として、上記実施例のＰＨ指示薬を含んだＤＮＡ含有物が入った手すき紙と比較例で得られた手すき紙からＤＮＡを含有しているか否かを調べることにより識別が可能であることが確認された。

上記のＤＮＡ含有物の同定方法としては、対象から該ＤＮＡ含有物の一部分を取り出し、次いで溶媒を用いて、該ＤＮＡ含有物中の既知の塩基鎖長をもつＤＮＡを、該一部分から抽出することにより、該ＤＮＡ含有物を再生するものであり、ＤＮＡの組成は、所定のＰＣＲプライマーを用いることにより同定できる特定の長さ及び配列に設計される。したがって、検査対象から取り出したＤＮＡ含有物が、元のＤＮＡ含有物を含まない場合には、増幅ＤＮＡ生成物が存在しない。したがって、ＰＣＲ生成物のＤＮＡ鎖長を比較することで、検査対象の真偽を確認することができる。

次に、本実施例で得られたＤＮＡ含有物を抄き込んだ用紙を、偽造防止用紙及び／又は真偽判別用紙として用いた一実施例を説明する。
前述したように、本発明のＤＮＡ含有物は、それ自体でも偽造防止機能を有するが、更に何らかの識別物を含有させることにより、２段階識別を可能とする偽造防止用紙及び／又は真偽判別用紙を提供するものである。ＤＮＡを水溶性高分子が包み込んだ状態となっているので、用紙を抄造する場合に、繊維状物に固着し離脱することがないので、歩留まりがよい。また、これにより紙層強度を損なわしめるものでない。すなわち、添加したマーカー物質等の1段階識別、更に機能をあげて確認が必要な場合には、用いたＤＮＡの同定をすることで識別される２段階識別が可能となる。本実施例で得られる偽造防止用紙及び／又は真偽判別用紙は、有価証券、証券等の貴重印刷物、旅券、運転免許証等の偽造防止及び／又は真偽判別技術が必要とされる用紙として使用することが可能となる。

（実施例６） 一般に用紙を得るための公知の紙料調製をした中に、前述したような方法で調製したマーカー物質としてＰＨ指示薬のフェノールフタレインを含んだＤＮＡ含有物を添加し、長網抄紙機や丸網抄紙機等の公知の抄紙機を使用して抄紙する。このようにして製造した偽造防止用紙に所定の印刷を施し偽造防止印刷物を得た。

上記で作製した偽造防止印刷物に４％水酸化ナトリウム溶液を綿棒を用いて塗布し、ＤＮＡ含有物部分の変色を観察した。偽造防止印刷物に含まれる、フェノールフタレインを含むＤＮＡ含有物の部分のみが紅色に変化することが確認でき、それ以外の部分には、色変化は認められなかった。

次に、上記で色変化を認められた、フェノールフタレインを含むＤＮＡ含有物の部分に塩酸（１+１１）溶液を綿棒を用いて塗布し、ＤＮＡ含有物部分の変色を観察した。偽造防止印刷物に含まれる、フェノールフタレインを含むＤＮＡ含有物の部分の紅色が消失することが確認でき、それ以外の部分には、色変化は認められなかった。

以上のようにして、偽造防止印刷物の1段階識別が可能である。本実施例で使用した、４％水酸化ナトリウム溶液／塩酸（１+１１）溶液は一例であり、ｐＨをフェノールフタレインの変色領域に変化できるものであれば、これに限らない。また、４％水酸化ナトリウム溶液／塩酸（１+１１）溶液の塗布方法も、塗布できるものであれば、綿棒に限らない。

さらに、必要ならば、用いたＤＮＡの同定をすることで識別される２段階識別を実施する。

偽造防止印刷物に含まれるＤＮＡ含有物部分を、５ｍｍφに打ち抜き、非イオン性の界面活性剤とエチレンジアミン四酢酸二ナトリウム水塩（ＥＤＴＡ）を使用して抽出を行った。この抽出物をＤＮＡに対応する所定のプライマーを用いてＰＣＲによる増幅反応を行い、ＤＮＡの増幅を行った。得られたＰＣＲ産物、分子量マーカー、及びＤＮＡに対して電気泳動を行い、エチジウムプロミド染色液を用いて染色し、紫外線下でゲルを観察し、電気泳動パターンを得た。

得られた電気泳動パターンから、偽造防止印刷物から抽出したＰＣＲ産物電気泳動パターンはＤＮＡの電気泳動パターンと同一であることが分かった。さらに、分子量マーカーを参照に用いると、偽造防止印刷物から抽出したＰＣＲ産物のＤＮＡ鎖長が、ＰＶＡに混入したＤＮＡと同じ、塩基鎖長３００であることが分かる。

以上の結果から、上記実施例で得られた偽造防止用紙に印刷された偽造防止印刷物が、添加したマーカー物質等の1段階識別、更に機能をあげて確認が必要な場合には、用いたＤＮＡの同定をすることで識別される２段階識別が可能であることが分かる。

実施例１−１の手すき紙のＤＮＡの電気泳動パターンを示す図である。 紫外線吸収剤を含む手すき紙のＤＮＡの電気泳動パターンを示す図である。 紫外線吸収剤を含まない比較用手すき紙のＤＮＡの電気泳動パターンを示す図である。 光安定剤を含む手すき紙のＤＮＡの電気泳動パターンを示す図である。 光安定剤と光散乱剤を含む手すき紙のＤＮＡの電気泳動パターンを示す図である。

Claims (10)

1. ＤＮＡと媒体を含む混合物を固化して得られた硬化物を含んで成ることを特徴とするＤＮＡ含有物。
2. 前記硬化物を粉砕及び／又は裁断して得られたことを特徴とする請求項１記載のＤＮＡ含有物。
3. 前記媒体が水溶性高分子であることを特徴とする請求項１又は２記載のＤＮＡ含有物。
4. 前記水溶性高分子が、合成高分子及び／又は天然高分子である、請求項３記載のＤＮＡ含有物。
5. 前記混合物が、紫外線吸収剤、光安定剤及び紫外線散乱剤からなる群から選ばれた少なくとも１種を含有する、請求項１〜４のいずれか１項に記載のＤＮＡ含有物。
6. 前記紫外線吸収剤、光安定剤及び紫外線散乱剤のいずれか１つ以上を、前記ＤＮＡ含有物に対して０．１〜２０％の割合で混合して成る、請求項５に記載のＤＮＡ含有物。
7. 前記混合物が、マーカー物質を含有してなる請求項１〜６のいずれか１項に記載のＤＮＡ含有物。
8. 前記マーカー物質が、蛍光又はりん光を発光する物質、化学変化を起こす物質、サーモクロミズムを起こす物質、磁気特性を有する物質である、請求項７に記載のＤＮＡ含有物。
9. 請求項１〜８のいずれか１項に記載のＤＮＡ含有物を含む用紙。
10. 請求項９記載の用紙の、偽造防止用紙及び／又は真偽判別用紙としての使用。
    

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