JP2006208063A - Manufacturing method of multilayered analyzing element - Google Patents

Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a manufacturing method of a multilayered analyzing element having a capacity capable of obtaining a result good in reproducibility more rapidly. <P>SOLUTION: In the manufacturing method of the multilayered analyzing element for analyzing a liquid sample constituted by integrally laminating at least one functional layer and at least one porous liquid sample developing layer comprising a non-fibrous porous film on one side of a water impermeable planar support in this order and characterized in that a water soluble polymer is added to the non-fibrous porous film without interacting with the functional layer, the temperature of at least one of the drying zones of the water soluble polymer is 40-80°C. <P>COPYRIGHT: (C)2006,JPO&NCIPI

Description

本発明は、臨床検査、食品検査又は環境分析等に用いられる多層分析要素の製造方法に関する。   The present invention relates to a method for producing a multilayer analytical element used for clinical examination, food inspection, environmental analysis or the like.

臨床検査、食品検査及び環境分析の分野では、迅速・簡便に検体を処理する要求が年々高くなっておりそのニーズに応えた乾式分析素子が汎用されている。乾式分析要素の中で、血液の受容、展開、拡散を行わせる展開層には、特開昭５５−１６４３５６号公報、特開昭５７−６６３５９号公報、特開昭６０−２２２７６９号公報等に代表されるように、繊維質多孔性材料が用いられてきた。   In the fields of clinical testing, food testing, and environmental analysis, demands for processing samples quickly and simply are increasing year by year, and dry analytical elements that meet the needs are widely used. Among the dry analytical elements, the spreading layer for receiving, spreading and diffusing blood is disclosed in JP-A-55-164356, JP-A-57-66359, JP-A-60-222769, etc. As represented, fibrous porous materials have been used.

この繊維質多孔性材料は、液体試料点着時の展開が速く、製造時の取り扱い性にも優れている。また、全血のような粘性のある試料に対しても適用性があり、広く使用されている。しかし、この分野では、より高い精度（再現性）での測定が要求されるようになってきており、繊維質多孔性材料（布展開層）では、いくつか不具合がでてきている。その一つが、布自身のロット変動の問題である。通常、布展開層には、織物と編物があるが、その織り方、編み方にロット間差及びロット内差が見つかっている。   This fibrous porous material develops quickly when a liquid sample is spotted, and is excellent in handleability during production. It is also applicable to viscous samples such as whole blood and is widely used. However, in this field, measurement with higher accuracy (reproducibility) has been required, and some problems have occurred with fibrous porous materials (cloth spreading layers). One of them is the problem of cloth lot fluctuation. Usually, the fabric spreading layer includes a woven fabric and a knitted fabric. Differences between lots and in-lot differences are found in the weaving and knitting methods.

具体的には、単位面積当たりの編目数、単位面積当たりの重量、厚みなどである。また、中間工程で、材料の洗浄工程があるが、その洗浄の程度により、布の親水性にロット間差、ロット内差がある。さらに、布展開層は、平滑ではないため、積層方式で、十分な接着力を確保して製造しようとすると、下層に展開層を食い込ませざるを得ない。これにより下層は乱れており、より高い精度での測定に対しては、好ましくない。また布は下層に布を接着する際に、その構造上伸びやすく、空隙体積の変化を起こしやすい。そのために液体試料点着時の展開面積が変化しやすく、ロット内差及び高精度測定が達成できない原因となっている。また近年、より少ない試料で測定することが望まれているが、布展開層では、試料液量を少なくしていくと、編目の影響による反射光量のバラツキが顕著になり、さらに展開層を接着する際の下層の不均一な乱れのために高精度の測定ができなくなる問題がある。   Specifically, the number of stitches per unit area, weight per unit area, thickness, and the like. In addition, there is a material washing step as an intermediate step, but there are lot-to-lot differences and lot-to-lot differences in the hydrophilicity of the cloth depending on the degree of washing. Furthermore, since the cloth spreading layer is not smooth, if it is to be manufactured by securing a sufficient adhesive force by the lamination method, the spreading layer has to be bitten into the lower layer. As a result, the lower layer is disturbed, which is not preferable for measurement with higher accuracy. In addition, when the cloth is bonded to the lower layer, the structure tends to stretch due to its structure, and the void volume tends to change. For this reason, the development area at the time of liquid sample spotting tends to change, which is a cause of in-lot difference and high accuracy measurement not being achieved. In recent years, it has been desired to measure with a smaller number of samples. However, in the cloth spreading layer, when the amount of the sample liquid is reduced, the variation in the amount of reflected light due to the influence of the stitch becomes more significant, and the spreading layer is bonded. In this case, there is a problem that high-precision measurement cannot be performed due to non-uniform disturbance in the lower layer.

特許第２５１４０８７号公報に代表される、非繊維性の多孔性膜を有する乾式分析素子では、展開層の非繊維質多孔性材料に、親水性高分子を含有させることが記載されているが、含有させる高分子剤やその作製方法によって、性能（特に液量依存性）が悪く、実用的ではない。   In a dry analytical element having a non-fibrous porous film represented by Japanese Patent No. 2514087, it is described that a non-fibrous porous material of a development layer contains a hydrophilic polymer. Depending on the polymer agent to be contained and the production method thereof, the performance (particularly the liquid volume dependency) is poor and is not practical.

特開昭５５−１６４３５６号公報JP-A-55-164356 特開昭５７−６６３５９号公報JP-A-57-66359 特開昭６０−２２２７６９号公報JP 60-222769 A 特許第２５１４０８７号公報Japanese Patent No. 2514087

本発明は上記した従来技術の問題点を解消することを解決すべき課題とした。即ち、本発明の目的は、より迅速で再現性が良好な結果が得られるような性能を有する分析素子の製造方法を提供することである。   The present invention has been made to solve the above-described problems of the prior art. That is, an object of the present invention is to provide a method for producing an analytical element having such a performance that results can be obtained more quickly and with good reproducibility.

本発明者らは上記課題を解決するために鋭意検討した結果、機能層と非繊維性多孔膜からなる多孔性液体試料展開層が積層一体化され、該非繊維性多孔膜中に水溶性ポリマーが機能層と相互作用することなく含まれている液体試料分析用多層分析要素の製造方法において、該水溶性ポリマーを乾燥させるゾーンの少なくとも一つの温度を４０〜８０℃に設定することによって、上記課題を解決できることを見出し、本発明を完成するに至った。   As a result of intensive studies to solve the above problems, the inventors of the present invention have integrated a porous liquid sample development layer composed of a functional layer and a non-fibrous porous membrane, and a water-soluble polymer is contained in the non-fibrous porous membrane. In the method for producing a multilayer analytical element for analyzing a liquid sample contained without interacting with the functional layer, the above problem is achieved by setting at least one temperature of the zone for drying the water-soluble polymer to 40 to 80 ° C. As a result, the present invention has been completed.

即ち、本発明によれば、水不透過性平面支持体の片面上に、少なくとも１つの機能層と少なくとも１つの非繊維性多孔膜からなる多孔性液体試料展開層が、この順に積層一体化された液体試料分析用多層分析要素において、非繊維性多孔膜中に水溶性ポリマーが機能層と相互作用することなく含まれている液体試料分析用多層分析要素の製造方法であって、該水溶性ポリマーを乾燥させるゾーンの少なくとも一つの温度が４０〜８０℃であることを特徴とする製造方法が提供される。   That is, according to the present invention, the porous liquid sample development layer comprising at least one functional layer and at least one non-fibrous porous membrane is laminated and integrated in this order on one surface of the water-impermeable flat support. A method for producing a multilayer analytical element for analyzing a liquid sample, wherein a water-soluble polymer is contained in a non-fibrous porous membrane without interacting with the functional layer. There is provided a production method characterized in that at least one temperature of the zone for drying the polymer is 40-80 ° C.

好ましくは、該水溶性ポリマーを乾燥させるゾーンの少なくとも一つの温度は５０〜７０℃である。
好ましくは、該ゾーンの露点温度は０〜２０℃である。
さらに好ましくは、該ゾーンの露点温度は０〜１０℃である。 Preferably, at least one temperature of the zone for drying the water-soluble polymer is 50-70 ° C.
Preferably, the dew point temperature of the zone is 0-20 ° C.
More preferably, the dew point temperature of the zone is 0-10 ° C.

好ましくは、非繊維性多孔膜は、６，６−ナイロン、６−ナイロン、アクリレート共重合体、ポリアクリレート、ポリアクリロニトリル、ポリアクリロニトリル共重合体、ポリアミド、ポリイミド、ポリアミドイミド、ポリウレタン、ポリエーテルスルホン、ポリスルホン、ポリエーテルスルホンとポリスルホンの混合物、セルロースアシレート、セルロースアシレートの鹸化物、ポリエステル、ポリエステルカーボネート、ポリエチレン、ポリエチレンクロロトリフルオロエチレン共重合体、ポリエチレンテトラフルオロエチレン共重合体、ポリ塩化ビニル、ポリオレフィン、ポリカーボネート、ポリテトラフルオロエチレン、ポリビニリデンジフルオライド、ポリフェニレンスルフィド、ポリフェニレンオキシド、ポリフルオロカーボネート、ポリプロピレン、ポリベンズイミダゾール、ポリメタクリル酸メチル、スチレン−アクリロニトリル共重合体、スチレン−ブタジエン共重合体、エチレン−酢酸ビニル共重合体の鹸化物、ポリビニルアルコール、またはこれらの混合物である。
さらに好ましくは、非繊維性多孔膜はポリスルホン、ポリエーテルスルホン、セルロースアシレート、６，６−ナイロン、又は６−ナイロンである。 Preferably, the non-fibrous porous membrane is 6,6-nylon, 6-nylon, acrylate copolymer, polyacrylate, polyacrylonitrile, polyacrylonitrile copolymer, polyamide, polyimide, polyamideimide, polyurethane, polyethersulfone, Polysulfone, mixture of polyethersulfone and polysulfone, cellulose acylate, saponified cellulose acylate, polyester, polyester carbonate, polyethylene, polyethylene chlorotrifluoroethylene copolymer, polyethylene tetrafluoroethylene copolymer, polyvinyl chloride, polyolefin , Polycarbonate, polytetrafluoroethylene, polyvinylidene difluoride, polyphenylene sulfide, polyphenylene oxide, polyfluorocarbon DOO, polypropylene, polybenzimidazole, poly (methyl methacrylate), styrene - acrylonitrile copolymer, styrene - butadiene copolymer, ethylene - saponified vinyl acetate copolymer, polyvinyl alcohol, or a mixture thereof.
More preferably, the non-fibrous porous membrane is polysulfone, polyethersulfone, cellulose acylate, 6,6-nylon, or 6-nylon.

好ましくは、本発明では、非繊維性多孔膜を機能層の上にラミネートした後に、水溶性ポリマーを非繊維性多孔膜に塗布・乾燥する。   Preferably, in the present invention, after laminating the non-fibrous porous film on the functional layer, the water-soluble polymer is applied to the non-fibrous porous film and dried.

本発明の製造方法で作成した液体試料分析用多層分析要素は、タイムコースのプラトーになるまでの時間が早くとれ、測定時間を短くすることができる。また、ある時間を過ぎると、ODが一定であるので、同時再現性が良好になる。さらに、測定がレート法の場合、内因性干渉物質の影響を回避することができる。   The multilayer analytical element for liquid sample analysis created by the production method of the present invention can take a long time until the time course plateau is reached, and can shorten the measurement time. In addition, after a certain time, since the OD is constant, the simultaneous reproducibility becomes good. Furthermore, when the measurement is a rate method, the influence of endogenous interfering substances can be avoided.

以下、本発明の実施の形態について詳細に説明する。
本発明の液体試料分析用多層分析要素の製造方法は、水不透過性平面支持体の片面上に、少なくとも１つの機能層と少なくとも１つの非繊維性多孔膜からなる多孔性液体試料展開層が、この順に積層一体化された液体試料分析用多層分析要素において、非繊維性多孔膜中に水溶性ポリマーが機能層と相互作用することなく含まれている液体試料分析用多層分析要素の製造方法であって、該水溶性ポリマーを乾燥させるゾーンの少なくとも一つの温度が４０〜８０℃であることを特徴とする。 Hereinafter, embodiments of the present invention will be described in detail.
In the method for producing a multilayer analytical element for liquid sample analysis of the present invention, a porous liquid sample development layer comprising at least one functional layer and at least one non-fibrous porous membrane is provided on one surface of a water-impermeable flat support. In the multilayer analysis element for liquid sample analysis, which is laminated and integrated in this order, a method for producing a multilayer analysis element for liquid sample analysis, in which a water-soluble polymer is contained in a non-fibrous porous film without interacting with the functional layer The temperature of at least one of the zones for drying the water-soluble polymer is 40 to 80 ° C.

本発明の方法で製造される液体試料分析用多層分析要素においては、多孔性液体試料展開層として用いる非繊維性多孔膜中に、水溶性ポリマーが機能層と相互作用することなく含まれている。このような構成を採用することにより、非繊維性多孔膜内における検体の拡散速度が実質的に一定になっている。この手段として、本発明では、非繊維性多孔膜を機能層の上にラミネートした後に、下層と相互作用することなく水溶性高分子を非繊維性多孔膜に塗布・乾燥する。   In the multilayer analytical element for liquid sample analysis produced by the method of the present invention, the water-soluble polymer is contained in the non-fibrous porous membrane used as the porous liquid sample spreading layer without interacting with the functional layer. . By adopting such a configuration, the diffusion rate of the specimen in the non-fibrous porous membrane is substantially constant. As a means for this, in the present invention, after laminating the non-fibrous porous film on the functional layer, the water-soluble polymer is applied to the non-fibrous porous film and dried without interacting with the lower layer.

本発明においては、水溶性ポリマー水溶液を多孔性膜上に塗布した後、乾燥ゾーン内の温度４０〜８０℃（好ましくは、５０〜７０℃）の条件下で乾燥することにより、液体試料分析用多層分析要素を製造することができる。ここで言う乾燥ゾーン内の温度とは、乾燥ゾーン内の空気の温度のことを言う。乾燥ゾーン内の温度を上記範囲内にするための手段は特に限定されないが、通常は、ヒーターなどを使用して温度を制御することができる。また乾燥ゾーンは、１つだけでも構わないが、好ましくは２つ以上である。乾燥ゾーンを２つ以上設ける場合には、全ての乾燥ゾーン内の温度を４０〜８０℃に設定してもよいし、あるいは少なくとも一つ以上の乾燥ゾーン内の温度を４０〜８０℃に設定してもよい。   In the present invention, after applying a water-soluble polymer aqueous solution on the porous membrane, the sample is dried under conditions of a temperature of 40 to 80 ° C. (preferably 50 to 70 ° C.) in the drying zone for liquid sample analysis. Multi-layer analytical elements can be produced. Here, the temperature in the drying zone refers to the temperature of air in the drying zone. The means for bringing the temperature in the drying zone within the above range is not particularly limited, but usually the temperature can be controlled using a heater or the like. Moreover, although there may be only one drying zone, it is preferably two or more. When two or more drying zones are provided, the temperature in all the drying zones may be set to 40 to 80 ° C, or the temperature in at least one or more drying zones may be set to 40 to 80 ° C. May be.

また上記の乾燥ゾーンの露点温度は０〜２０℃であることが好ましく、０〜１０℃であることがさらに好ましい。   Moreover, it is preferable that the dew point temperature of said drying zone is 0-20 degreeC, and it is more preferable that it is 0-10 degreeC.

展開層に分散させるポリマーとしては、水溶性ポリマーであれば、特に限定されない。例えば、カルボキシメチルセルロースやメチルセルロースなどのセルロースエーテル、アルギン酸及びアルギン酸誘導体、ポリビニルアルコール及びその誘導体、ポリアクリル酸及びその誘導体、ポリエチレングリコールやポリエチレンオキシド、水溶性多糖類及びその誘導体、等が挙げられる。また、これらの共重合体でもよいし、混合して用いてもよい。   The polymer dispersed in the spreading layer is not particularly limited as long as it is a water-soluble polymer. Examples thereof include cellulose ethers such as carboxymethyl cellulose and methyl cellulose, alginic acid and alginic acid derivatives, polyvinyl alcohol and derivatives thereof, polyacrylic acid and derivatives thereof, polyethylene glycol and polyethylene oxide, water-soluble polysaccharides and derivatives thereof, and the like. Moreover, these copolymers may be used and may be mixed and used.

展開層に分散させる水溶性ポリマーの量は、0.1〜10g/m²が好ましく、1.0〜5ｇ/m²がさらに好ましい。 The amount of the water-soluble polymer to be dispersed in the expanded layer is preferably 0.1 to 10 g / m ^2, more preferably 1.0~5g / m ^2.

水不透過性平面支持体としては、従来公知の乾式分析要素に用いられている水不透過性の支持体を用いることができる。水不透過性支持体の例としては、ポリエチレンテレフタレート、ビスフェノールＡのポリカルボネート、ポリスチレン、セルロースエステル（例、セルロースジアセテート、セルローストリアセテート、セルロースアセテートプロピオネート等）等のポリマーからなる厚さ約５０μｍから約１ｍｍ、好ましくは約８０μｍから約３００μｍの範囲のフィルムもしくはシート状の支持体を挙げることができる。   As the water-impermeable flat support, a water-impermeable support used in a conventionally known dry analytical element can be used. Examples of water-impermeable supports include polyethylene terephthalate, bisphenol A polycarbonate, polystyrene, cellulose esters (eg, cellulose diacetate, cellulose triacetate, cellulose acetate propionate, etc.) Mention may be made of a film or sheet-like support in the range of 50 μm to about 1 mm, preferably about 80 μm to about 300 μm.

支持体の表面には必要により下塗層を設けて、支持体の上に設けられる接着層と支持体との接着を強固なものにすることができる。また、下塗層の代りに、支持体の表面を物理的あるいは化学的な活性化処理を施して接着力の向上を図ってもよい。   If necessary, an undercoat layer may be provided on the surface of the support to strengthen the adhesion between the adhesive layer provided on the support and the support. Further, instead of the undercoat layer, the surface of the support may be subjected to a physical or chemical activation treatment to improve the adhesion.

多層分析要素は、少なくとも１つの非繊維性多孔膜からなる多孔性液体試料展開層を含む。多孔性液体試料展開層は、水性の検体に含有されている成分を実質的に偏在させることなしに平面的に拡げ、単位面積当りほぼ一定量の割合で、機能層に供給する機能を有する層である。   The multilayer analytical element includes a porous liquid sample spreading layer composed of at least one non-fibrous porous membrane. The porous liquid sample spreading layer is a layer having a function of spreading in a plane without substantially uneven distribution of components contained in an aqueous specimen and supplying the functional layer at a substantially constant rate per unit area. It is.

多孔性液体試料展開層は、１層だけに限定する必要はなく、２層以上の非繊維性多孔膜を部分的に配置された接着剤により接着された積層物を用いることができる。また、少なくとも１つの非繊維性多孔膜からなる多孔性液体試料展開層は特開昭５７−６６３５９に開示の物理的活性化処理、好ましくはグロー放電処理またはコロナ放電処理を非繊維性多孔膜の少なくとも片面に施すか、あるいは特開昭５５−１６４３５６、特開昭５７−６６３５９等に開示の界面活性剤含浸処理、好ましくはノニオン性界面活性剤含浸処理、または親水性ポリマー含浸処理などの親水化処理、またはこれらの処理工程の二つ以上の組合わせを逐次実施することにより非繊維性多孔膜を親水化し、下側（支持体に近い側）の機能層との接着力の強化、または展開面積のコントロールをすることができる。更に、目的とする検出反応を行うための試薬、該検出反応を促進するための試薬、あるいは干渉・妨害反応を低減又は阻止するための各種試薬、もしくはこれらの試薬の一部を含ませることができる。   The porous liquid sample spreading layer need not be limited to only one layer, and a laminate in which two or more non-fibrous porous membranes are bonded with an adhesive partially disposed can be used. Further, the porous liquid sample spreading layer composed of at least one non-fibrous porous membrane is subjected to physical activation treatment disclosed in JP-A-57-66359, preferably glow discharge treatment or corona discharge treatment. It is applied to at least one surface, or hydrophilic treatment such as surfactant impregnation treatment disclosed in JP-A-55-164356, JP-A-57-66359, preferably nonionic surfactant impregnation treatment, or hydrophilic polymer impregnation treatment. Treatment or a combination of two or more of these treatment steps is performed sequentially to hydrophilize the non-fibrous porous membrane and strengthen or develop adhesion with the functional layer on the lower side (side closer to the support) The area can be controlled. Furthermore, a reagent for performing a target detection reaction, a reagent for promoting the detection reaction, various reagents for reducing or preventing interference / interfering reactions, or a part of these reagents may be included. it can.

本発明における多孔性液体試料展開層は、非繊維性多孔膜からなるものである。好ましくは、非繊維性多孔膜は有機高分子からなる多孔膜である。上記した有機高分子からなる多孔膜は、対称性膜又は非対称性膜の何れも使用することができる。非対称性多孔膜の場合、非対称率は好ましくは２．０以上であり、対称性多孔膜の場合、非対称率は好ましくは２．０未満である。本明細書で言う非対称性多孔膜とは、一方の表面の平均孔径が他方の表面の平均孔径よりも大きい多孔膜のことであり、非対称率とは、大きい方の平均孔径を小さい方の平均孔径で割った値のことである。   The porous liquid sample development layer in the present invention is made of a non-fibrous porous film. Preferably, the non-fibrous porous membrane is a porous membrane made of an organic polymer. As the porous film made of the organic polymer described above, either a symmetric film or an asymmetric film can be used. In the case of an asymmetric porous membrane, the asymmetry rate is preferably 2.0 or more, and in the case of a symmetric porous membrane, the asymmetry rate is preferably less than 2.0. The asymmetric porous membrane referred to in the present specification is a porous membrane in which the average pore diameter of one surface is larger than the average pore diameter of the other surface, and the asymmetry rate is the average of the larger average pore diameter of the smaller one. It is the value divided by the hole diameter.

有機高分子からなる多孔膜の好ましい具体例としては、６，６−ナイロン、６−ナイロン、アクリレート共重合体、ポリアクリレート、ポリアクリロニトリル、ポリアクリロニトリル共重合体、ポリアミド、ポリイミド、ポリアミドイミド、ポリウレタン、ポリエーテルスルホン、ポリスルホン、ポリエーテルスルホンとポリスルホンの混合物、セルロースアシレート、セルロースアシレートの鹸化物、ポリエステル、ポリエステルカーボネート、ポリエチレン、ポリエチレンクロロトリフルオロエチレン共重合体、ポリエチレンテトラフルオロエチレン共重合体、ポリ塩化ビニル、ポリオレフィン、ポリカーボネート、ポリテトラフルオロエチレン、ポリビニリデンジフルオライド、ポリフェニレンスルフィド、ポリフェニレンオキシド、ポリフルオロカーボネート、ポリプロピレン、ポリベンズイミダゾール、ポリメタクリル酸メチル、スチレン−アクリロニトリル共重合体、スチレン−ブタジエン共重合体、エチレン−酢酸ビニル共重合体の鹸化物、ポリビニルアルコール、またはこれらの混合物などが挙げられる。   Preferable specific examples of the porous film made of organic polymer include 6,6-nylon, 6-nylon, acrylate copolymer, polyacrylate, polyacrylonitrile, polyacrylonitrile copolymer, polyamide, polyimide, polyamideimide, polyurethane, Polyethersulfone, polysulfone, mixture of polyethersulfone and polysulfone, cellulose acylate, saponified cellulose acylate, polyester, polyester carbonate, polyethylene, polyethylene chlorotrifluoroethylene copolymer, polyethylene tetrafluoroethylene copolymer, poly Vinyl chloride, polyolefin, polycarbonate, polytetrafluoroethylene, polyvinylidene difluoride, polyphenylene sulfide, polyphenylene oxide, Examples include trifluorocarbonate, polypropylene, polybenzimidazole, polymethyl methacrylate, styrene-acrylonitrile copolymer, styrene-butadiene copolymer, saponified ethylene-vinyl acetate copolymer, polyvinyl alcohol, or a mixture thereof. It is done.

上記の中でも、６，６−ナイロン、６−ナイロン、ポリエーテルスルホン、ポリスルホン、ポリエーテルスルホンとポリスルホンの混合物、セルロースアシレート、セルロースアシレートの鹸化物、ポリエステル、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリオレフィン、ポリアクリロニトリル、ポリビニルアルコール、ポリカーボネート、ポリエステルカーボネート、ポリフェニレンオキシド、ポリアミド、ポリイミド、ポリアミドイミド、またはこれらの混合物がさらに好ましい。   Among these, 6,6-nylon, 6-nylon, polyethersulfone, polysulfone, a mixture of polyethersulfone and polysulfone, cellulose acylate, saponified cellulose acylate, polyester, polyethylene, polypropylene, polyolefin, polyacrylonitrile, More preferred are polyvinyl alcohol, polycarbonate, polyester carbonate, polyphenylene oxide, polyamide, polyimide, polyamideimide, or a mixture thereof.

さらに好ましくは、ポリスルホン、ポリエーテルスルホン、セルロースアシレート、６，６−ナイロン、又は６−ナイロンであり、特に好ましくはポリスルホン、又はポリエーテルスルホンであり、最も好ましくはポリスルホンである。   More preferred is polysulfone, polyethersulfone, cellulose acylate, 6,6-nylon, or 6-nylon, particularly preferred is polysulfone or polyethersulfone, and most preferred is polysulfone.

非繊維性多孔膜からなる多孔性液体試料展開層の厚さ、孔径、空隙率、透水速度などに特に制限はないが、厚さについては５０〜５００μｍ、好ましくは５０〜３５０μｍ、更に好ましくは８０〜２００μｍであることが望ましい。孔径については好ましくは０．００１〜１００μｍ、更に好ましくは０．１〜５０μｍ程度の平均孔径を有するものが望ましい。空隙率については好ましくは５０〜９５％、更に好ましくは６０〜９０％が望ましい。また透水速度については２５℃で１Ｋｇ／ｃｍ²の圧力で水を透過させたときの透水量が好ましくは非繊維性多孔膜１ｃｍ²当たり1分間に１〜５０００ｍｌ、更に好ましくは５〜２０００ｍｌであることが望ましい。 There are no particular restrictions on the thickness, pore diameter, porosity, water permeation rate, etc. of the porous liquid sample development layer comprising a non-fibrous porous membrane, but the thickness is 50 to 500 μm, preferably 50 to 350 μm, more preferably 80. It is desirable that it is -200 micrometers. The pore diameter is preferably 0.001 to 100 [mu] m, more preferably about 0.1 to 50 [mu] m. The porosity is preferably 50 to 95%, more preferably 60 to 90%. The water permeation rate when water is permeated at a pressure of 1 kg / cm ² at 25 ° C. is preferably 1 to 5000 ml per minute per 1 cm ² of non-fibrous porous membrane, more preferably 5 to 2000 ml. It is desirable.

本発明における液体試料分析用多層分析要素の構成例としては、（１）透明支持体上に、1または複数の機能層が設けられ、さらに該機能層の上に多孔性液体試料展開層が設けられている液体試料分析用多層分析要素、並びに、（２）透明支持体上に、１または複数の機能層が設けられ、さらに機能層の上に、試料分析用の試薬を含有する多孔性液体試料展開層が設けられている液体試料分析用多層分析要素、が挙げられる。即ち、本発明における多孔性液体試料展開層は、試料分析用の試薬を含んでいてもよいし、含んでいなくてもよい。   Examples of the configuration of the multilayer analysis element for liquid sample analysis in the present invention are as follows: (1) One or more functional layers are provided on a transparent support, and further a porous liquid sample development layer is provided on the functional layer. A multilayer analysis element for liquid sample analysis, and (2) a porous liquid in which one or a plurality of functional layers are provided on a transparent support, and a reagent for sample analysis is further provided on the functional layers And a multilayer analytical element for liquid sample analysis provided with a sample development layer. That is, the porous liquid sample development layer in the present invention may or may not contain a sample analysis reagent.

また、多孔性液体試料展開層が試薬を含有する場合、予め多孔膜を試薬溶液に浸漬後、乾燥させることにより試薬含有膜を作製できる。また、別法として多孔膜上に試薬溶液を塗布後乾燥させることにより試薬含有非繊維性多孔膜を作製できるが、特に手段は限定されない。   Further, when the porous liquid sample developing layer contains a reagent, the reagent-containing film can be produced by previously immersing the porous film in a reagent solution and drying it. Alternatively, a reagent-containing non-fibrous porous membrane can be produced by applying a reagent solution on the porous membrane and drying it, but the means is not particularly limited.

本発明における多層分析要素は、少なくとも１つの機能層を含む。機能層の数は１以上であれば特に限定されず、１層でもよいし、２層以上の複数の層とすることもできる。   The multilayer analytical element in the present invention includes at least one functional layer. The number of functional layers is not particularly limited as long as it is 1 or more, and may be one layer or a plurality of layers of two or more layers.

機能層の具体例としては、展開層と機能層を接着する接着層、液状試薬を吸水する吸水層、化学反応により生成した色素の拡散を防止する媒染層、ガスを選択的に透過させるガス透過層、層間での物質移動を抑制・促進させる中間層、内因性物質を除去する除去層、反射測光を安定に行うための光遮蔽層、内因性色素の影響を抑制する色遮蔽層、血球と血漿を分離する分離層、分析対象物と反応する試薬を含む試薬層、発色剤を含む発色層などが挙げられる。   Specific examples of the functional layer include an adhesive layer that bonds the spreading layer and the functional layer, a water absorbing layer that absorbs the liquid reagent, a mordant layer that prevents the diffusion of the dye generated by the chemical reaction, and a gas permeation that selectively permeates the gas. Layer, an intermediate layer that suppresses and promotes mass transfer between layers, a removal layer that removes endogenous substances, a light shielding layer that stably performs reflection photometry, a color shielding layer that suppresses the influence of endogenous dyes, blood cells and Examples include a separation layer for separating plasma, a reagent layer containing a reagent that reacts with an analyte, and a coloring layer containing a color former.

本発明の一例としては、例えば、支持体の上には、場合によっては下塗層等の他の層を介して、機能層として親水性ポリマー層を設けることができる。親水性ポリマー層としては、例えば、無孔性、吸水性かつ水浸透性の層であり、基本的に親水性ポリマーのみなる吸水層、親水性ポリマーをバインダーとし発色反応に直接関与する発色試薬の一部又は全部を含む試薬層、及び親水性ポリマー中に発色色素を固定し不動にする成分（例：媒染剤）を含有する検出層などを設けることができる。   As an example of the present invention, for example, a hydrophilic polymer layer can be provided as a functional layer on a support, optionally via another layer such as an undercoat layer. The hydrophilic polymer layer is, for example, a non-porous, water-absorbing and water-permeable layer, basically a water-absorbing layer consisting only of a hydrophilic polymer, or a coloring reagent that directly participates in a coloring reaction using a hydrophilic polymer as a binder. A reagent layer including a part or all of it, and a detection layer containing a component (for example, mordant) that fixes and immobilizes the coloring dye in the hydrophilic polymer can be provided.

（試薬層）
試薬層は水性液体中の被検成分と反応して光学的に検出可能な変化を生じる試薬組成物の少なくとも一部が親水性ポリマーバインダー中に実質的に一様に分散されている吸水性で水浸透性の層である。この試薬層には指示薬層、発色層なども含まれる。 (Reagent layer)
The reagent layer is a water-absorbing material in which at least a portion of the reagent composition that reacts with a test component in an aqueous liquid to produce an optically detectable change is substantially uniformly dispersed in the hydrophilic polymer binder. It is a water-permeable layer. This reagent layer also includes an indicator layer, a coloring layer and the like.

試薬層のバインダーとして用いることができる親水性ポリマーは、一般には水吸収時の膨潤率が３０℃で約１５０％から約２０００％、好ましくは約２５０％から約１５００％の範囲の天然または合成親水性ポリマーである。そのような親水性ポリマーの例としては、特開昭６０−１０８７５３号公報等に開示されているゼラチン（例、酸処理ゼラチン、脱イオンゼラチン等）、ゼラチン誘導体（例、フタル化ゼラチン、ヒドロキシアクリレートグラフトゼラチン等）、アガロース、プルラン、プルラン誘導体、ポリアクリルアミド、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン等をあげることができる。   Hydrophilic polymers that can be used as a binder in the reagent layer generally have natural or synthetic hydrophilic properties with a water swell ratio of from about 150% to about 2000%, preferably from about 250% to about 1500% at 30 ° C. Polymer. Examples of such hydrophilic polymers include gelatin (eg, acid-treated gelatin, deionized gelatin, etc.) and gelatin derivatives (eg, phthalated gelatin, hydroxyacrylate) disclosed in JP-A-60-108753 and the like. Graft gelatin, etc.), agarose, pullulan, pullulan derivatives, polyacrylamide, polyvinyl alcohol, polyvinylpyrrolidone and the like.

試薬層は架橋剤を用いて適宜に架橋硬化された層とすることができる。架橋剤の例として、ゼラチンに対する１，２−ビス（ビニルスルホニルアセトアミド）エタン、ビス（ビニルスルホニルメチル）エーテル等の公知のビニルスルホン系架橋剤、アルデヒド等、メタリルアルコールコポリマーに対するアルデヒド、２個のグリシジル基含有エポキシ化合物等がある。   The reagent layer can be a layer that is appropriately crosslinked and cured using a crosslinking agent. Examples of cross-linking agents include known vinyl sulfone cross-linking agents such as 1,2-bis (vinylsulfonylacetamido) ethane and bis (vinylsulfonylmethyl) ether for gelatin, aldehydes such as aldehydes for methallyl alcohol copolymers, Examples include glycidyl group-containing epoxy compounds.

試薬層の乾燥時の厚さは約１μｍから約１００μｍの範囲であることが好ましく、より好ましくは約３μｍから約３０μｍの範囲である。また試薬層は実質的に透明であることが好ましい。   The dry thickness of the reagent layer is preferably in the range of about 1 μm to about 100 μm, more preferably in the range of about 3 μm to about 30 μm. The reagent layer is preferably substantially transparent.

本発明における多層分析要素の試薬層やその他の層に含める試薬としては、被験物質に応じてその検出に適した試薬を選択することができる。
例えば、アンモニア（被験物質がアンモニア又はアンモニア生成物質である場合）を分析する場合には、呈色性アンモニア指示薬として、ロイコシアニン染料、ニトロ置換ロイコ染料およびロイコフタレイン染料のようなロイコ染料（米国再発行特許第３０２６７号明細書または特公昭５８−１９０６２号公報記載）：ブロムフェノールブルー、ブロムクレゾールグリーン、ブロムチモールブルー、キノリンブルーおよびロゾール酸のようなｐＨ指示薬（共立出版(株)、化学大辞典、第１０巻６３〜６５頁参照）：トリアリールメタン系染料前駆体: ロイコベンジリデン色素（特開昭５５−３７９号および特開昭５６−１４５２７３号各公報に記載）：ジアゾニウム塩とアゾ染料カプラー：塩基漂白可能染料等を用いることができる。バインダーの重量に対する呈色性アンモニア指示薬の配合量は約１〜２０重量％の範囲内であることが好ましい。 As a reagent to be included in the reagent layer or other layers of the multilayer analytical element in the present invention, a reagent suitable for detection can be selected according to the test substance.
For example, when analyzing ammonia (when the test substance is ammonia or an ammonia-producing substance), leuco dyes such as leucocyanine dyes, nitro-substituted leuco dyes and leucophthalein dyes (US Reissued Patent No. 30267 or Japanese Patent Publication No. 58-19062): pH indicators such as bromophenol blue, bromocresol green, bromthymol blue, quinoline blue and rosoleic acid (Kyoritsu Shuppan Co., Ltd., Chemical University) Dictionary, Vol. 10, pages 63-65): Triarylmethane dye precursor: Leucobenzylidene dye (described in JP-A-55-379 and JP-A-56-145273): Diazonium salt and azo dye Coupler: A base-bleachable dye or the like can be used. The blending amount of the color developing ammonia indicator with respect to the weight of the binder is preferably in the range of about 1 to 20% by weight.

被験物質であるアンモニア生成物質と反応してアンモニアを生成させる試薬は、酵素または酵素を含有する試薬であることが好ましく、被験物質であるアンモニア生成物質の種類に応じて、分析に適した酵素を選択して用いることができる。上記試薬として酵素を用いる場合には、その酵素の特異性からアンモニア生成物質と試薬の組み合わせが決定される。アンモニア生成物質と試薬としての酵素の組合せの具体例としては、尿素：ウレアーゼ、クレアチニン：クレアチニンデイミナーゼ、アミノ酸：アミノ酸デヒドロゲナーゼ、アミノ酸：アミノ酸オキシダーゼ、アミノ酸：アンモニアリアーゼ、アミン：アミンオキシダーゼ、ジアミン：アミンオキシダーゼ、グルコースおよびホスホアミダート：ホスホアミダートヘキソースホスホトランスフェラーゼ、ＡＤＰ：カルバミン酸塩キナーゼおよび燐酸カルバモル、酸アミド：アミドヒドロラーゼ、ヌクレオ塩基：ヌクレオ塩基デアミナーゼ、ヌクレオシド／ヌクレオシドデアミナーゼ、ヌクレオチド：ヌクレオチドデアミナーゼ、グアニン：グアナーゼ等を挙げることができる。アンモニアを分析する場合の試薬層に用いることができるアルカリ性緩衝剤としては、ｐＨが７．０〜１２．０、好ましくは７.５〜１１.５の範囲の緩衝剤を用いることができる。   The reagent that reacts with the ammonia-producing substance that is the test substance to generate ammonia is preferably an enzyme or a reagent containing an enzyme, and an enzyme suitable for analysis is selected according to the type of the ammonia-producing substance that is the test substance. It can be selected and used. When an enzyme is used as the reagent, the combination of the ammonia-generating substance and the reagent is determined from the specificity of the enzyme. Specific examples of a combination of an ammonia-generating substance and an enzyme as a reagent include urea: urease, creatinine: creatinine deiminase, amino acid: amino acid dehydrogenase, amino acid: amino acid oxidase, amino acid: ammonia lyase, amine: amine oxidase, diamine: amine oxidase Glucose and phosphoamidate: phosphoamidate hexose phosphotransferase, ADP: carbamate kinase and phosphate carbamol, acid amide: amide hydrolase, nucleobase: nucleobase deaminase, nucleoside / nucleoside deaminase, nucleotide: nucleotide deaminase, guanine: guanase Etc. As an alkaline buffer that can be used for the reagent layer in the case of analyzing ammonia, a buffer having a pH in the range of 7.0 to 12.0, preferably 7.5 to 11.5 can be used.

アンモニアを分析する場合の試薬層には、アンモニア生成物質と反応してアンモニアを生成させる試薬、アルカリ性緩衝剤およびフィルム形成能を有する親水性ポリマーバインダー以外にも必要に応じて湿潤剤、バインダー架橋剤（硬化剤）、安定剤、重金属イオントラップ剤(錯化剤)等を含有させることができる。重金属イオントラップ剤は、酵素活性を阻害するような重金属イオンをマスキングするために使用されるものである。重金属イオントラップ剤の具体例としては、ＥＤＴＡ・２Ｎａ、ＥＤＴＡ・４Ｎａ、ニトリロトリ酢酸（ＮＴＡ）、ジエチレントリアミンペンタ酢酸のようなコンプレクサン（ｃｏｍｐｌｅｘａｎｅ）を挙げることができる。   In the case of analyzing ammonia, the reagent layer includes a reagent that reacts with the ammonia-generating substance to generate ammonia, an alkaline buffering agent, and a hydrophilic polymer binder having film-forming ability. (Curing agent), stabilizer, heavy metal ion trapping agent (complexing agent) and the like can be contained. The heavy metal ion trapping agent is used for masking heavy metal ions that inhibit enzyme activity. Specific examples of the heavy metal ion trapping agent include complexane such as EDTA · 2Na, EDTA · 4Na, nitrilotriacetic acid (NTA), and diethylenetriaminepentaacetic acid.

グルコース測定試薬組成物の例としては、米国特許３，９９２，１５８；特開昭５４−２６７９３；特開昭５９−２０８５３；特開昭５９−４６８５４；特開昭５９−５４９６２等に記載のグルコースオキシダーゼ、ペルオキシダーゼ、４−アミノアンチピリン又はその誘導体、１，７−ジヒドロキシナフタレンを含む改良Ｔｒｉｎｄｅｒ試薬組成物がある。   Examples of the glucose measuring reagent composition include glucose described in U.S. Pat. No. 3,992,158; JP-A-54-26793; JP-A-59-20853; JP-A-59-46854; There is an improved Trinder reagent composition comprising oxidase, peroxidase, 4-aminoantipyrine or a derivative thereof, 1,7-dihydroxynaphthalene.

（光遮蔽層）
前記試薬層の上に必要に応じて光遮蔽層を設けることができる。光遮蔽層は、光吸収性または光反射性（これらを合わせて光遮蔽性という。）を有する微粒子が少量の被膜形成能を有する親水性ポリマーバインダーに分散保持されている水透過性または水浸透性の層である。光遮蔽層は試薬層にて発生した検出可能な変化（色変化、発色等）を光透過性を有する支持体側から反射測光する際に、後述する展開層に点着供給された水性液体の色、特に試料が全血である場合のヘモグロビンの赤色等、を遮蔽するとともに光反射層または背景層としても機能する。 (Light shielding layer)
A light shielding layer can be provided on the reagent layer as necessary. The light shielding layer has water permeability or water penetration in which fine particles having a light absorbing property or light reflecting property (collectively referred to as light shielding property) are dispersed and held in a hydrophilic polymer binder having a small amount of film forming ability. Is a sex layer. The light shielding layer is a color of an aqueous liquid spotted and supplied to a developing layer, which will be described later, when a detectable change (color change, color development, etc.) generated in the reagent layer is reflected and measured from the support side having light permeability. Especially, when the sample is whole blood, the red color of hemoglobin is shielded and also functions as a light reflection layer or a background layer.

光反射性を有する微粒子の例としては、二酸化チタン微粒子（ルチル型、アナターゼ型またはブルカイト型の粒子径が約０．１μｍから約１．２μｍの微結晶粒子等）、硫酸バリウム微粒子、アルミニウム微粒子または微小フレーク等を挙げることができ、光吸収性微粒子の例としては、カーボンブラック、ガスブラック、カーボンミクロビーズ等を挙げることができ、これらのうちでは二酸化チタン微粒子、硫酸バリウム微粒子が好ましい。特に好ましいのは、アナターゼ型二酸化チタン微粒子である。   Examples of the light-reflecting fine particles include titanium dioxide fine particles (rutile type, anatase type or brookite type fine crystal particles having a particle diameter of about 0.1 μm to about 1.2 μm, etc.), barium sulfate fine particles, aluminum fine particles or Examples of the light-absorbing fine particles include carbon black, gas black, and carbon micro beads. Among these, titanium dioxide fine particles and barium sulfate fine particles are preferable. Particularly preferred are anatase-type titanium dioxide fine particles.

被膜形成能を有する親水性ポリマーバインダーの例としては、前述の試薬層の製造に用いられる親水性ポリマーと同様の親水性ポリマーのほかに、弱親水性の再生セルロース、セルロースアセテート等を挙げることができ、これらのうちではゼラチン、ゼラチン誘導体、ポリアクリルアミド等が好ましい。なお、ゼラチン、ゼラチン誘導体は公知の硬化剤（架橋剤）を混合して用いることができる。   Examples of the hydrophilic polymer binder having a film-forming ability include weakly hydrophilic regenerated cellulose, cellulose acetate, etc. in addition to the hydrophilic polymer similar to the hydrophilic polymer used in the production of the reagent layer described above. Of these, gelatin, gelatin derivatives, polyacrylamide and the like are preferable. In addition, gelatin and a gelatin derivative can be used by mixing a known hardening agent (crosslinking agent).

光遮蔽層は、光遮蔽性微粒子と親水性ポリマーとの水性分散液を公知の方法により試薬層の上に塗布し乾燥することにより設けることができる。また光遮蔽層を設ける代りに、前述の展開層中に光遮蔽性微粒子を含有させてもよい。   The light shielding layer can be provided by applying an aqueous dispersion of light shielding fine particles and a hydrophilic polymer on the reagent layer by a known method and drying. Further, instead of providing the light shielding layer, light spreading fine particles may be contained in the above-described spreading layer.

（接着層）
試薬層の上に、場合によっては光遮蔽層等の層を介して、展開層を接着し積層するために接着層を設けてもよい。 (Adhesive layer)
An adhesive layer may be provided on the reagent layer in order to adhere and laminate the spreading layer, optionally via a layer such as a light shielding layer.

接着層は水で湿潤しているとき、または水を含んで膨潤しているときに展開層を接着することができ、これにより各層を一体化できるような親水性ポリマーからなることが好ましい。接着層の製造に用いることができる親水性ポリマーの例としては、試薬層の製造に用いられる親水性ポリマーと同様な親水性ポリマーがあげられる。これらのうちではゼラチン、ゼラチン誘導体、ポリアクリルアミド等が好ましい。接着層の乾燥膜厚は一般に約０．５μｍから約２０μｍ、好ましくは約１μｍから約１０μｍの範囲である。   The adhesive layer is preferably made of a hydrophilic polymer that can adhere the spreading layer when wetted with water or when swollen with water, thereby allowing the layers to be integrated. Examples of the hydrophilic polymer that can be used for the production of the adhesive layer include hydrophilic polymers similar to the hydrophilic polymer used for the production of the reagent layer. Of these, gelatin, gelatin derivatives, polyacrylamide and the like are preferable. The dry film thickness of the adhesive layer is generally in the range of about 0.5 μm to about 20 μm, preferably about 1 μm to about 10 μm.

なお、接着層は試薬層上以外にも、他の層間の接着力を向上させるため所望の層上に設けてもよい。接着層は親水性ポリマーと、必要によって加えられる界面活性剤等を含む水溶液を公知の方法で、支持体や試薬層等の上に塗布する方法などにより設けることができる。   In addition to the reagent layer, the adhesive layer may be provided on a desired layer in order to improve the adhesive strength between other layers. The adhesive layer can be provided by a known method, such as a method of applying an aqueous solution containing a hydrophilic polymer and a surfactant added as necessary onto a support or a reagent layer.

（吸水層）
本発明における多層分析要素には、支持体と試薬層の間に吸水層を設けることができる。吸水層は水を吸収して膨潤する親水性ポリマーを主成分とする層で、吸水層の界面に到達または浸透した水性液体試料の水を吸収できる層であり、全血試料を用いる場合には水性液体成分である血漿の試薬層への浸透を促進する作用を有する。吸水層に用いられる親水性ポリマーは前述の試薬層に使用されるもののなかから選択することができる。吸水層には一般的にはゼラチンまたはゼラチン誘導体、ポリアクリルアミド、ポリビニルアルコール、特に前述のゼラチン又は脱イオンゼラチンが好ましく、試薬層と同じ前述のゼラチンが最も好ましい。吸水層の乾燥時の厚さは約３μｍから約１００μｍ、好ましくは約５μｍから約３０μｍの範囲、被覆量では約３ｇ／ｍ²から約１００ｇ／ｍ²、好ましくは約５ｇ／ｍ²から約３０ｇ／ｍ²の範囲である。吸水層には後述するｐＨ緩衝剤、公知の塩基性ポリマー等を含有させて使用時（分析操作実施時）のｐＨを調節することができる。さらに吸水層には公知の媒染剤、ポリマー媒染剤等を含有させることができる。 (Water absorption layer)
The multilayer analytical element in the present invention can be provided with a water absorbing layer between the support and the reagent layer. The water-absorbing layer is a layer mainly composed of a hydrophilic polymer that swells by absorbing water, and is a layer that can absorb water of an aqueous liquid sample that reaches or penetrates the interface of the water-absorbing layer. It has the effect of promoting the penetration of plasma, which is an aqueous liquid component, into the reagent layer. The hydrophilic polymer used for the water absorbing layer can be selected from those used for the reagent layer. In general, gelatin or a gelatin derivative, polyacrylamide, polyvinyl alcohol, particularly the aforementioned gelatin or deionized gelatin is preferred for the water-absorbing layer, and the aforementioned gelatin as the reagent layer is most preferred. The dry thickness of the water-absorbing layer is about 3 μm to about 100 μm, preferably about 5 μm to about 30 μm, and the coating amount is about 3 g / m ² to about 100 g / m ² , preferably about 5 g / m ² to about 30 g. / M ² range. The water-absorbing layer can contain a pH buffer, which will be described later, a known basic polymer, or the like to adjust the pH during use (when the analysis operation is performed). Further, the water-absorbing layer can contain a known mordant, polymer mordant and the like.

（検出層）
検出層は、一般に、被検成分の存在下で生成した色素等が拡散し、光透過性支持体を通して光学的に検出され得る層で、親水性ポリマーにより構成することができる。媒染剤、例えばアニオン性色素に対してカチオン性ポリマーを、含んでもよい。吸水層は、一般に、被検成分の存在下で生成する色素が実質的に拡散しないような層を言い、この点で検出層とは区別される。 (Detection layer)
The detection layer is generally a layer in which a dye or the like produced in the presence of a test component diffuses and can be optically detected through a light-transmitting support, and can be composed of a hydrophilic polymer. A mordant may be included, for example, a cationic polymer relative to the anionic dye. The water absorption layer generally refers to a layer in which the dye produced in the presence of the test component does not substantially diffuse, and is distinguished from the detection layer in this respect.

試薬層、吸水層、接着層、展開層等には界面活性剤を含有させることができる。その例としてノニオン性界面活性剤がある。ノニオン性界面活性剤の具体例として、ｐ−オクチルフェノキシポリエトキシエタノール、ｐ−ノニルフェノキシポリエトキシエタノール、ポリオキシエチレンオレイルエーテル、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、ｐ−ノニルフェノキシポリグリシドール、オクチルグルコシド等がある。ノニオン性界面活性剤を展開層に含有させることにより水性液体試料の展開作用（メータリング作用）がより良好になる。ノニオン性界面活性剤を試薬層又は吸水層に含有させることにより、分析操作時に水性液体試料中の水が試薬層または吸水層に実質的に一様に吸収されやすくなり、また展開層との液体接触が迅速に、かつ実質的に一様になる。
非繊維性多孔膜からなる多孔性液体試料展開層を試薬層、吸水層または接着層等の機能層にラミネートするには特開昭５５−１６４３５６、特開昭５７−６６３５９等に開示の方法に従うことができる。すなわち試薬層、吸水層または接着層等の機能層が塗布後未乾燥のうちに、または乾燥後の機能層に水、界面活性剤を含む水溶液、界面活性剤と親水性ポリマーを含む水溶液、有機溶媒または有機溶媒を含有する水溶液等をワイヤーバー塗布装置及びダイを用いた塗布装置等で実質的に均一に供給し、機能層を膨潤または溶解させ、ついで非繊維性多孔膜からなる多孔性液体試料展開層を膨潤または溶解している機能層の上に実質的に均一に軽く圧力をかけながらラミネートし、一体化する。機能層の膨潤または溶解に際しては、赤外線ヒーター等の輻射熱の照射による加温、支持体にヒーターを接触させ加温する方法等を用いることができる。 A surfactant can be contained in the reagent layer, the water absorbing layer, the adhesive layer, the spreading layer, and the like. An example is a nonionic surfactant. Specific examples of nonionic surfactants include p-octylphenoxypolyethoxyethanol, p-nonylphenoxypolyethoxyethanol, polyoxyethylene oleyl ether, polyoxyethylene sorbitan monolaurate, p-nonylphenoxypolyglycidol, octyl glucoside, etc. There is. By incorporating the nonionic surfactant in the spreading layer, the spreading action (metering action) of the aqueous liquid sample becomes better. By including a nonionic surfactant in the reagent layer or the water absorption layer, water in the aqueous liquid sample is easily absorbed into the reagent layer or the water absorption layer substantially uniformly during the analysis operation, and the liquid with the development layer Contact is quick and substantially uniform.
In order to laminate a porous liquid sample development layer made of a non-fibrous porous film on a functional layer such as a reagent layer, a water absorption layer or an adhesive layer, the method disclosed in JP-A-55-164356, JP-A-57-66359, etc. be able to. That is, the functional layer such as the reagent layer, the water absorbing layer or the adhesive layer is not dried after application, or the functional layer after drying is water, an aqueous solution containing a surfactant, an aqueous solution containing a surfactant and a hydrophilic polymer, organic A porous liquid composed of a non-fibrous porous film by supplying an aqueous solution containing a solvent or an organic solvent substantially uniformly with a wire bar coating device and a coating device using a die, etc., to swell or dissolve the functional layer. The sample spreading layer is laminated and integrated on the swollen or dissolved functional layer while applying light substantially uniformly and lightly. In swelling or dissolving the functional layer, heating by irradiation of radiant heat such as an infrared heater, a method in which a heater is brought into contact with a support, and the like can be used.

本発明における多層分析要素が対象とする被検物質は特に限定されず、任意の液体試料（例えば、全血、血漿、血清、リンパ液、尿、唾液、髄液、膣液などの体液；あるいは飲料水、酒類、河川水、工場廃水等）中の特定成分を分析することができる。例えば、アルブミン（ＡＬＢ）、グルコース、尿素、ピリルビン、コレステロール、タンパク質、酵素（例えば、乳酸脱水素酵素、ＣＰＫ（クレアチンキナーゼ）、ＡＬＴ（アラニンアミノトランスフェラーゼ）、ＡＳＴ（アスパルテートアミノトランスフェラーゼ）、ＧＧＴ（γ−グルタミルトランスペプチダーゼ）等の血中酵素）などを分析することができる。   The test substance targeted by the multilayer analytical element in the present invention is not particularly limited, and any liquid sample (for example, body fluid such as whole blood, plasma, serum, lymph, urine, saliva, spinal fluid, vaginal fluid; or beverage) Specific components in water, alcoholic beverages, river water, factory wastewater, etc.) can be analyzed. For example, albumin (ALB), glucose, urea, pyrilbin, cholesterol, protein, enzyme (for example, lactate dehydrogenase, CPK (creatine kinase), ALT (alanine aminotransferase), AST (aspartate aminotransferase), GGT (γ -Blood enzymes such as glutamyl transpeptidase) can be analyzed.

本発明における多層分析要素は、公知の方法により調製することができる。溶血試薬は塗布または含浸される試薬水溶液に予め加えておけばよい。他の方法としては、単独又は界面活性剤・展開面積制御のための親水性ポリマーなどを含む水溶液、有機溶媒（エタノール、メタノールなど）溶液又は水−有機溶媒混合液溶液を展開層の上から塗布して含浸させることもできる。これを用いた被験物質の分析も公知の方法に従って行なうことができる。   The multilayer analytical element in the present invention can be prepared by a known method. The hemolytic reagent may be added in advance to the aqueous reagent solution to be applied or impregnated. As another method, an aqueous solution containing a surfactant or a hydrophilic polymer for controlling the development area, an organic solvent (ethanol, methanol, etc.) solution, or a water-organic solvent mixed solution is applied from above the development layer. It can also be impregnated. Analysis of a test substance using this can also be performed according to a known method.

例えば、本発明における多層分析要素は、一辺約５ｍｍから約３０ｍｍの正方形またはほぼ同サイズの円形等の小片に裁断し、特公昭５７−２８３３３１号公報（対応米国特許４，１６９，７５１）、実開昭５６−１４２４５４号公報（対応米国特許４，３８７，９９０）、特開昭５７−６３４５２号公報、実開昭５８−３２３５０号公報、特表昭５８−５０１１４４号公報（対応国際公:ＷＯ０８３／００３９１）等に記載のスライド枠に収めて化学分析スライドとして用いることができ、これは製造，包装，輸送，保存，測定操作等の観点で好ましい。使用目的によっては、長いテープ状でカセットまたはマガジンに収めて用いたり、又は小片を開口のある容器内に収めて用いたり、又は小片を開口カードに貼付または収めて用いたり、あるいは裁断した小片をそのまま用いることなどもできる。   For example, the multi-layer analytical element in the present invention is cut into small pieces such as a square having a side of about 5 mm to about 30 mm or a circle having substantially the same size, and disclosed in Japanese Patent Publication No. 57-283331 (corresponding US Pat. No. 4,169,751), Japanese Unexamined Patent Publication No. 56-142454 (corresponding US Pat. No. 4,387,990), Japanese Unexamined Patent Publication No. 57-63452, Japanese Utility Model Publication No. 58-32350, Japanese Patent Publication No. 58-501144 (corresponding international publication: WO083). / 00391) and the like and can be used as a chemical analysis slide, which is preferable from the viewpoint of manufacturing, packaging, transportation, storage, measurement operation, and the like. Depending on the purpose of use, it is used in a long tape form in a cassette or magazine, or a small piece is placed in a container with an opening, or a small piece is affixed or placed in an open card, or a cut piece is used. It can be used as it is.

本発明における多層分析要素は、例えば約２μＬ〜約３０μＬ、好ましくは４μＬ〜１５μＬの範囲の水性液体試料液を、多孔性液体試料展開層に点着する。点着した多層分析要素を約２０℃〜約４５℃の範囲の一定温度で、好ましくは約３０℃〜約４０℃の範囲内の一定温度で１〜１０分間インキュベーションする。多層分析要素内の発色又は変色を光透過性支持体側から反射測光し、予め作成した検量線を用いて比色測定法の原理により検体中の被験物質の量を求めることができる。   In the multilayer analytical element of the present invention, for example, an aqueous liquid sample solution in the range of about 2 μL to about 30 μL, preferably 4 μL to 15 μL is spotted on the porous liquid sample developing layer. The spotted multilayer analytical element is incubated at a constant temperature in the range of about 20 ° C to about 45 ° C, preferably at a constant temperature in the range of about 30 ° C to about 40 ° C for 1 to 10 minutes. Color development or discoloration in the multilayer analytical element is reflected and photometrically measured from the side of the light-transmitting support, and the amount of the test substance in the sample can be determined based on the principle of the colorimetric measurement method using a calibration curve prepared in advance.

測定操作は特開昭６０−１２５５４３号公報、特開昭６０−２２０８６２号公報、特開昭６１−２９４３６７号公報、特開昭５８−１６１８６７号公報（対応米国特許４，４２４，１９１）などに記載の化学分析装置により極めて容易な操作で高精度の定量分析を実施できる。なお、目的や必要精度によっては目視により発色の度合いを判定して、半定量的な測定を行ってもよい。   The measuring operation is disclosed in JP-A-60-125543, JP-A-60-220862, JP-A-61-294367, JP-A-58-161867 (corresponding to US Pat. No. 4,424,191). With the described chemical analyzer, highly accurate quantitative analysis can be performed with extremely easy operation. Depending on the purpose and required accuracy, semi-quantitative measurement may be performed by visually judging the degree of color development.

本発明における多層分析要素は、分析を行うまでは乾燥状態で貯蔵・保管されるため、試薬を用時調製する必要がなく、また一般に乾燥状態の方が試薬の安定性が高いことから、試薬溶液を用時調製しなければならないいわゆる湿式法より簡便性、迅速性に優れている。また、微量の液体試料で、精度の高い検査を迅速に行うことができる検査方法としても優れている。
以下の実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明は実施例によって限定されるものではない。 Since the multilayer analytical element in the present invention is stored and stored in a dry state until analysis is performed, it is not necessary to prepare the reagent at the time of use, and generally, the reagent in the dry state has higher stability of the reagent. It is easier and quicker than the so-called wet method in which the solution must be prepared at the time of use. Moreover, it is also excellent as an inspection method capable of quickly performing a high-accuracy inspection with a small amount of liquid sample.
The following examples further illustrate the present invention, but the present invention is not limited to the examples.

実施例１（高温で乾燥させた分析要素の作製）
ゼラチン下塗りされている１８０μｍのポリエチレンテレフタレ−ト無色透明平滑なフィルムに下記組成の水溶液（ｐＨ＝7.0）を、乾燥後の厚さが14μｍになるように塗布し、乾燥した。
界面活性剤 11.63 g/m2
ゼラチン 16.34 g/m2 Example 1 (Preparation of analytical element dried at high temperature)
An aqueous solution (pH = 7.0) having the following composition was coated on a 180 μm polyethylene terephthalate colorless and transparent smooth film coated with gelatin so that the thickness after drying was 14 μm and dried.
Surfactant 11.63 g / m2
Gelatin 16.34 g / m2

ここで、界面活性剤は、ポリオキシ（２−ヒドロキシ）プロピレンノニルフェニルエーテル（Surfactant 10G、 オーリン社製）を 用いた。次に上記フィルム上に約３０ｇ／ｍ２の供給量で水を全面に供給して湿潤させた後、ポリスルフォン多孔膜ＨＳ２００（「富士写真フィルム社」製）をラミネートした。   Here, polyoxy (2-hydroxy) propylene nonylphenyl ether (Surfactant 10G, manufactured by Aurin) was used as the surfactant. Next, water was supplied to the entire surface of the film at a supply rate of about 30 g / m 2 and moistened, and then a polysulfone porous film HS200 (manufactured by “Fuji Photo Film Co., Ltd.”) was laminated.

上記の多孔膜上に下記組成の水溶液（ｐＨ＝9.5）を、塗布・乾燥した。
ヒドロキシプロピルセルロース 3.9 g/m2
界面活性剤 0.62 g/m2
この水溶液を塗布乾燥する際、以下に示すとおり、4つの乾燥ゾーンの温度と露点温度を調整して乾燥させた。 An aqueous solution (pH = 9.5) having the following composition was applied and dried on the porous film.
Hydroxypropylcellulose 3.9 g / m2
Surfactant 0.62 g / m2
When this aqueous solution was applied and dried, it was dried by adjusting the temperatures of the four drying zones and the dew point as described below.

比較例１（比較的低温にて乾燥させた分析要素の作製）
下層は実施例１と全く同一の処方で、塗布した。
オーバーコート水溶液を下記条件にて、乾燥した。
この水溶液を塗布乾燥する際、以下に示すとおり、4つの乾燥ゾーンの温度と露点温度を調整して乾燥させた。 Comparative Example 1 (Preparation of analytical element dried at a relatively low temperature)
The lower layer was applied in exactly the same formulation as in Example 1.
The overcoat aqueous solution was dried under the following conditions.
When this aqueous solution was applied and dried, it was dried by adjusting the temperatures of the four drying zones and the dew point as described below.

上記の一体型多層分析要素を12mm×13mm四方のチップに切断し、マウント部材に収納して分析要素を作製した。実施例及び、比較例にて作製した分析要素に、下記構造式の赤色色素（富士写真フィルム社）3レベルの異なる濃度（0,0.2,0.4,0.8mg/ml)の７％ＢＳＡ水溶液10μLを滴下して、540ｎｍODを測定した。   The integrated multilayer analytical element was cut into a 12 mm × 13 mm square chip and housed in a mounting member to produce an analytical element. Analytical elements produced in the examples and comparative examples were added with 10 μL of a 7% BSA aqueous solution with different concentrations (0, 0.2, 0.4, 0.8 mg / ml) of three levels of red pigment (Fuji Photo Film Co., Ltd.) of the following structural formula. The solution was added dropwise to measure 540 nm OD.

測定は、37℃でインキュベートしながら、前記540nmの波長について、6分間実施した。
その時のタイムコースを図１に示す。
前記タイムコースより、実施例で作成した分析要素及び、比較例で作成した分析要素各々について6分後のOD値及び、3分後のODをもとに検量線を作成し、その結果を図２に示す。 The measurement was performed for 6 minutes at the wavelength of 540 nm while incubating at 37 ° C.
The time course at that time is shown in FIG.
From the time course, create a calibration curve based on the OD value after 6 minutes and the OD after 3 minutes for each of the analytical elements created in the examples and the comparative elements created in the comparative examples. It is shown in 2.

実施例１で作成した分析要素の場合、6分後のODを用いて作成した検量線と、3分後のODを用いて作成した検量線は、ほぼ同等のダイナミックレンジを有する検量線となるが、比較例１で作成した分析要素の場合、3分後のODを用いて作成した検量線は、6分後のODを用いた場合に比較して、ODのレンジが狭くなっていることがわかる。   In the case of the analytical element created in Example 1, the calibration curve created using the OD after 6 minutes and the calibration curve created using the OD after 3 minutes become a calibration curve having substantially the same dynamic range. However, in the case of the analytical element created in Comparative Example 1, the calibration curve created using the OD after 3 minutes has a narrower OD range than when using the OD after 6 minutes. I understand.

次に、前記色素液0.8mg/mlを用いて、N=10の測定を行い、同時再現性を比較した。6分時と3分時の各々の検量線を用いて、換算した結果を表３に示す。表３より、実施例で作成した分析要素が短い時間でも、精度よく測定できることを確認した。   Next, N = 10 was measured using 0.8 mg / ml of the dye solution, and the simultaneous reproducibility was compared. Table 3 shows the results of conversion using the respective calibration curves at 6 minutes and 3 minutes. From Table 3, it was confirmed that the analysis element created in the example can be measured accurately even in a short time.

図１は、実施例と比較例の分析素子を用いたタイムコースの測定結果を示す。FIG. 1 shows the measurement results of the time course using the analytical elements of Examples and Comparative Examples. 図２は、実施例と比較例の分析素子について6分後のOD値及び3分後のODをもとに検量線を作成した結果を示す。FIG. 2 shows the results of creating a calibration curve based on the OD value after 6 minutes and the OD after 3 minutes for the analytical elements of the example and the comparative example.

Claims (7)

水不透過性平面支持体の片面上に、少なくとも１つの機能層と少なくとも１つの非繊維性多孔膜からなる多孔性液体試料展開層が、この順に積層一体化された液体試料分析用多層分析要素において、非繊維性多孔膜中に水溶性ポリマーが機能層と相互作用することなく含まれている液体試料分析用多層分析要素の製造方法であって、該水溶性ポリマーを乾燥させるゾーンの少なくとも一つの温度が４０〜８０℃であることを特徴とする製造方法。 Multi-layer analytical element for liquid sample analysis in which a porous liquid sample developing layer comprising at least one functional layer and at least one non-fibrous porous membrane is laminated and integrated in this order on one side of a water-impermeable flat support The method for producing a multilayer analytical element for analyzing a liquid sample, wherein the water-soluble polymer is contained in the non-fibrous porous membrane without interacting with the functional layer, wherein at least one of the zones in which the water-soluble polymer is dried. One temperature is 40-80 degreeC, The manufacturing method characterized by the above-mentioned. 該水溶性ポリマーを乾燥させるゾーンの少なくとも一つの温度が５０〜７０℃であることを特徴とする、請求項１に記載の製造方法。 The production method according to claim 1, wherein at least one temperature of the zone for drying the water-soluble polymer is 50 to 70 ° C. 該ゾーンの露点温度が０〜２０℃である、請求項１又は２に記載の製造方法。 The manufacturing method of Claim 1 or 2 whose dew point temperature of this zone is 0-20 degreeC. 該ゾーンの露点温度が０〜１０℃である、請求項１又は２に記載の製造方法。 The manufacturing method of Claim 1 or 2 whose dew point temperature of this zone is 0-10 degreeC. 非繊維性多孔膜が、６，６−ナイロン、６−ナイロン、アクリレート共重合体、ポリアクリレート、ポリアクリロニトリル、ポリアクリロニトリル共重合体、ポリアミド、ポリイミド、ポリアミドイミド、ポリウレタン、ポリエーテルスルホン、ポリスルホン、ポリエーテルスルホンとポリスルホンの混合物、セルロースアシレート、セルロースアシレートの鹸化物、ポリエステル、ポリエステルカーボネート、ポリエチレン、ポリエチレンクロロトリフルオロエチレン共重合体、ポリエチレンテトラフルオロエチレン共重合体、ポリ塩化ビニル、ポリオレフィン、ポリカーボネート、ポリテトラフルオロエチレン、ポリビニリデンジフルオライド、ポリフェニレンスルフィド、ポリフェニレンオキシド、ポリフルオロカーボネート、ポリプロピレン、ポリベンズイミダゾール、ポリメタクリル酸メチル、スチレン−アクリロニトリル共重合体、スチレン−ブタジエン共重合体、エチレン−酢酸ビニル共重合体の鹸化物、ポリビニルアルコール、またはこれらの混合物である、請求項１から４の何れかに記載の製造方法。 Non-fibrous porous membrane is 6,6-nylon, 6-nylon, acrylate copolymer, polyacrylate, polyacrylonitrile, polyacrylonitrile copolymer, polyamide, polyimide, polyamideimide, polyurethane, polyethersulfone, polysulfone, poly A mixture of ether sulfone and polysulfone, cellulose acylate, saponified cellulose acylate, polyester, polyester carbonate, polyethylene, polyethylene chlorotrifluoroethylene copolymer, polyethylene tetrafluoroethylene copolymer, polyvinyl chloride, polyolefin, polycarbonate, Polytetrafluoroethylene, polyvinylidene difluoride, polyphenylene sulfide, polyphenylene oxide, polyfluorocarbonate, polypropylene From pyrene, polybenzimidazole, polymethyl methacrylate, styrene-acrylonitrile copolymer, styrene-butadiene copolymer, saponified ethylene-vinyl acetate copolymer, polyvinyl alcohol, or a mixture thereof. 4. The production method according to any one of 4 above. 非繊維性多孔膜がポリスルホン、ポリエーテルスルホン、セルロースアシレート、６，６−ナイロン、又は６−ナイロンである、請求項１から５の何れかに記載の製造方法。 The production method according to any one of claims 1 to 5, wherein the non-fibrous porous membrane is polysulfone, polyethersulfone, cellulose acylate, 6,6-nylon, or 6-nylon. 非繊維性多孔膜を機能層の上にラミネートした後に、水溶性ポリマーを非繊維性多孔膜に塗布・乾燥する、請求項１から６の何れかに記載の製造方法。


The manufacturing method according to any one of claims 1 to 6, wherein the water-soluble polymer is applied to the non-fibrous porous film and dried after laminating the non-fibrous porous film on the functional layer.