JP2005521677A - 酸素感受性化合物のための製剤及びその製造方法 - Google Patents

Abstract

本発明は，医薬及び／または化粧料製剤中の酸素感受性の活性化合物の酸化を防止する方法であって，少なくとも１種類の強い酸化防止剤と少なくとも１種類の弱い酸化防止剤を入れることからなり，前記強い酸化防止剤が前記活性化合物より前に酸素と反応し，前記弱い酸化防止剤が残留酸素と反応して，酸化後，高いコーティング性を有し，微粉化により活性化合物の周囲に集まって保護プラスターを形成する粒子を形成することを特徴とする方法に関する。本発明は，特に２，６−ジ−第三ブチルから誘導される化合物に適用され得る。

Description

発明の詳細な説明

本発明は，医薬及び／または化粧料組成物において酸素感受性化合物の酸化を防止するための方法に関する。本発明は，また，上記方法により得た製剤，並びにその製造方法に関する。本発明は，特に，しかし非排他的に，２，６−ジ−第三ブチルフェノール誘導体に適用される。

多くの化合物が酸素と反応する。これらの化合物は，それらが使用されるための性質を，その酸化工程の過程で失い得る。

このことは，最初は，石油製品における抗酸化性のために使用され，そして動物の脂肪に対するそれらの効果のために食品添加物として使用された２，６−ジ−第三ブチルフェノール誘導体の場合にも当てはまる〈J．C．ダクレ，生化学Ｊ，１９６１年，７８巻，４号，７５８〜７６６頁（J.C. Dacre, Biochem J., 1961, vol.78, no.4, pp758-766）〉。

さらに，２，６−ジ−第三ブチルフェノール化合物，特に，２，６−ジ−第三ブチル−４−メチルフェノールもしくはBHT（ブチル化ヒドロキシトルエン）としても知られる３，５−ジ−第三ブチル−４−ヒドロキシトルエン，または３，５−ジ−第三ブチル−４−ヒドロキシ安息香酸（ＢＧ４），オクタオキシエチレングリコール３，５−ジ−第三ブチル−４−ヒドロキシベンゾエート(octaoxyethyleneglycol 3,5-di-tert-butyl-4-hydroxybenzoate)（ＡＶＦ１）のようなその誘導体が脂質被覆ウイルス（lipid-coated viruses）に対して抗ウイルス作用を有することがよく知られている〈W.スナイプス他，サイエンス，１９７５年，１８８巻，４１８３号（W. Snipes et al., Science, 1975, vol. 188, No.4183)；Ｒ．ヴェイシー他，米国皮膚科学学会，第５３回年次総会， ニューオリンズ，１９９５年２月４〜９日（R. Vachy et al., American Academy of Dermatology, 53rd Annual Meeting, New Orleans, February 4-9 1995）; R.ヴェイシー他，皮膚科学研究協会会議，ワシントン，１９９７年４月２３〜２７日（R. Vachy et al., Congress of the Society for Investigative Dermatology, Washington, April 23-27 1997）〉。これらの性質により，ウイルス感染，特にヘルペスウイルスによる感染に伴う疾病の治療のための医薬製剤においてそれらは使用される（フランス国特許第２ ５０７ ８９１号，欧州特許第０ ８０４ ４０８号，国際特許公開番号ＷＯ９１ １３６２６号，国際特許公開番号ＷＯ ９２ ０８４５０号）。

しかしながら，これらの化合物は，酸化によりその抗ウイルス性を失うことが見出された。

従って，保護剤として作用する油を用い，それらを油中に入れクリームを製造し，酸素感受性化合物と酸化性化合物もしくは酸素放出化合物または極めて単純に空気中の酸素との接触を妨げることにより解決することが提案された。

さらに，前記クリームを使用まで空気及び紫外線から保護するために，単回投与ゼラチンカプセルに入れることが考案された。

しかしながら，この医薬の剤形は，実用上最も適するものではない。実際，クリームはあまり吸収されず，皮膚に油っぽい感触を残す。

マイクロエマルジョンの開発は，目的とされる用途のための必要な構造を有さない殆ど完全に液体の物質をもたらした。

多相をベースとする方法は，使用される方法及び必要とされる装置の両方の点で，はるかに複雑であることが見出され，必ずしも期待された結果とはならず，またコストもかなり高い。

最後に，ＢＨＴをカプセル封入するためのナノ粒子の使用は，満足のいくものではない。なぜならこれは，複雑でコストがかかる方法であり，この場合には，活性な生成物を要求された濃度でカプセル封入することができないからである。

本発明の目的は，活性化合物の酸化の危険のない迅速かつ柔軟な技術を提供することによりこれらの欠点を克服することにある。

この目的のために，医薬及び／または化粧料製剤に，前記活性化合物と反応し得る前に酸素を消費する，活性化合物よりも反応性の高い酸化防止剤，並びに残留酸素により酸化されると高いカバー能力を獲得し，微粉化により活性化合物の周囲に集まって保護層を形成する少なくとも１種類のより弱い酸化防止剤を入れることからなる方法が提案される。

より有利には，微粉化により，０．１〜２μｍ，より好ましくは０．２μｍ未満の大きさを有する粒子が得られるようにする。

前記活性化合物は，２，６−ジ−第三ブチルフェノール誘導体であり得る。これは，本製剤の総重量の１〜１０重量％，好ましくは５重量％の範囲の量で存在し得る。

本製剤は，二相製剤であり得る。この場合，油相は，前記活性化合物及び弱い酸化防止剤を含むことができ，水相には強い酸化防止剤が溶解するであろう。

この組み合わせは水相が常に一定の割合の酸素を含有するのでその限りにおいて有利である。まず強い酸化防止剤が反応し，その結果，酸素の残存量が油相を横切り，弱い酸化防止剤と接触する。後者は，酸素に結合するので，活性化合物の周りで凝集し，保護フィルムを形成する。従って，この方法は，凝集前の最小限の変化以外にはいかなる変化も生じさせることなく，長期にわたって活性化合物を保護する。

強い酸化防止剤は，二亜硫酸ナトリウムであり得る。これは，本製剤の総重量の０．０５〜０．１重量％，好ましくは０．０５重量％の範囲の量で存在し得る。

弱い酸化防止剤は，亜鉛，チタン，アルミニウム等の酸化物のような金属の酸化物であり得る。

本製剤は２種類の弱い酸化防止剤，例えば酸化亜鉛と二酸化チタンを含有し得る。

酸化亜鉛は，本製剤の総重量の０．１〜２重量％，好ましくは０．５重量％の範囲の量で存在し得る。

二酸化チタンは，本製剤の総重量の５〜１０重量％，好ましくは５重量％の範囲の量で存在し得る。

より一般的には，弱い酸化防止剤の全量は，本製剤の総重量の５．１〜１２重量％，好ましくは５．５重量％であり得る。

亜鉛及びチタンの酸化物が，抗ＵＶフィルター性を有する利点を有することは注目すべきである。これらの性質は，日光に晒されることがヘルペス誘発因子であると知られていると仮定すると，日焼けに対する保護だけでなく，感染しやすくなっている人においてヘルペスを防止するためにも使用し得る。

本製剤は，プロポリス，テペスコフイテ（tepescohuite）抽出物のような治療作用を有する他の化合物，または防腐剤のような賦形剤を含むこともできる。

前記組成物のための式の例を以下に示すが，これは非限定的な実施例である。

実施例１：組成は下記のとおりである。

* PEG: ポリエチレングリコール
** １００ｇに十分な量(quantity sufficient for 100g)
*** パラベン：パラヒドロキシベンゾエート

混合物Ａは，容器内で７０〜７５℃の温度に加熱される。温度が安定したら，一時的な温度の上昇によるＢＨＴのような化合物の酸化の危険を避けるようにタービンにより激しく撹拌しながら（５〜１０ ０００ｒｐｍ），混合物Ａ’の成分を一つずつ混合物Ａに加える。さらに，この時，酸化亜鉛及び酸化チタンによるＢＨＴコーティングが起こり，従って，油粒子をできるだけ小さくすることが重要である。

混合物Ｂをケトル(kettle)内で７０〜７５℃の温度に加熱し，その後，キーステップである転相を進行させるためにゆっくり撹拌しながら，反応混合物（熱い油相）に一度に添加する。

その後，微粉化は，０．１〜２μｍ，好ましくは０．２μｍ未満の範囲の大きさの粒子とするのが好ましい。

その後，前記混合物をゆっくりと撹拌しながら６０〜６５℃に冷却し，その後，混合物Ｃを添加する。

その後，水を循環させたスチーマーで容器を覆うことにより，前記混合物をできるだけ迅速に４０〜４５℃の温度とする。その後，混合物Ｄを添加し，撹拌を２５〜３０℃の温度まで続け，所望の乳濁液，即ち，非常に細かく光沢のある乳濁液を生じさせる。

タービンの回転速度による転相及びそれに続く温度の急激な降下は，酸化亜鉛及び酸化チタンによるＢＨＴコーティングを生じさせ，複数の乳濁液で得られるマイクロカプセル封入と同様の結果が得られるが，この場合は，複雑な操作方法ではなく，単一のステップで十分である。

上記の化合物以外の化合物，例えば追加の治療作用を有する化合物を入れると，低い比率で混合物Ａの割合に変動を生じ得るが，乳濁液の選択された親水性／親油性バランスを保持するには十分であることに注目すべきである。

実施例２
本実施例は，その治療作用が米国特許第６１５３２２６号に記載されたクリームを生成することを可能にする。これは，プロポリスと組み合わせたＢＨＴが増強された抗ウイルス活性を有することを示す。

組成は下記のとおりである。

* PEG: ポリエチレングリコール
** １００ｇに十分な量(quantity sufficient for 100g)
*** パラベン：パラヒドロキシベンゾエート

実施例１と同様の方法により混合物Ａを容器内で７０〜７５℃の温度に加熱した。温度が安定したら，一時的な温度の上昇によるＢＨＴのような化合物の酸化の危険を避けるようにタービンにより激しく撹拌しながら（５〜１０ ０００ｒｐｍ），混合物Ａ’の成分を一つずつ混合物Ａに加える。

混合物Ｂをケトル内で７０〜７５℃の温度に加熱し，その後，転相を進行させるためにゆっくり撹拌しながら，反応混合物（熱い油相）に一度に添加する。

その後，前記混合物をゆっくりと撹拌しながら６０〜６５℃に冷却し，その後，混合物Ｃを添加する。

その後，水を循環させたスチーマーで容器を覆うことにより，前記混合物をできるだけ迅速に４０〜４５℃の温度とすし，その後，混合物Ｄを添加する。

混合物を冷却し続け，３５℃で，混合物Ｅの化合物を添加し，撹拌を２５〜３０℃の温度まで続け，所望の乳濁液，即ち，非常に細かく光沢のある乳濁液を生じさせる。

この方法で得られたクリームについて肌及び目の許容性の研究を行った。

第一の急性肌許容性の研究を，１０人の成人志願者の群に，４８時間密封包帯した前腕の内側の皮膚に１回投与することにより行った。この試験は，密封上皮試験に適用される方法により行った。

この群は，１９〜３６才で，化粧品に対する非許容性またはアレルギー歴がなく，皮膚についての病歴がなく，皮膚の代謝を破壊すると考えられる医薬をのんでいない７人の女性志願者と３人の男性志願者を含む。

この生成物の純品を，各志願者の前腕の内側の皮膚の面積５０mm²に，円形濾紙片上の約０．０２ｍｌの投与量で密封包帯により単回投与する。

連続４８時間，前記生成物を皮膚に接触させた。

陰性コントロールとして，生成物なしに密封包帯のみを同条件で平行して行った。

密封包帯を除去してから３０分後に，巨視的な皮膚試験を即時に行った。

皮膚反応の評価（紅斑，水腫等）の評価は，国際接触皮膚炎研究班〈International Contact Dermatitis Research Group (I.C.D.R.G.)〉に提案される術後をベースとして行った：
− NT:試験しなかった。
− ？＋：疑わしい反応：わずかな紅斑のみ
− ＋：弱い陽性反応（水疱なし)：紅斑，浸潤，時折いくつかの丘疹
− ＋＋：強い陽性反応：紅斑，丘疹，小水泡の存在
− ＋＋＋：水疱を伴う激しい陽性反応
− −：陰性反応
− ＩＲ：刺激反応：
Ｅ０．５：非常に穏やかな紅斑
Ｅ1：穏やかな紅斑
Ｅ２：明らかな紅斑
Ｅ３：著しい紅斑

本試験は，包帯後，３０分で局部的な皮膚反応が見られない場合は中止した。さもなければ，各志願者に，次の日に反応がなかったかを確認するように依頼した。可視的反応のあった場合はセンターに戻るように志願者に依頼した。

明らかなまたは疑わしい反応の場合には，包帯処理後，４８時間に，必要な場合には７２時間後に読み取りを行った。

結果の解釈を下記のように行った〈「皮膚病学の臨床実験の分析」治療，１９９１年，４６巻，１８３〜１８７頁（"Les Essais Cliniques en Dermatologie" Therapie, 1991, Vol 46, pages 183-187)〉:
各読み取り時間における平均刺激指数を，下記の比により計算した：
Ａ．Ｉ．Ｉ．＝Σ紅斑スコア／志願者数
皮膚刺激のスケール解釈を下記のように行った。
− Ａ．Ｉ．Ｉ．が０．２０未満：非刺激性
− Ａ．Ｉ．Ｉ．が０．２０以上０．５０未満：穏やかな刺激性
− Ａ．Ｉ．Ｉ．が０．５０以上１未満：中程度の刺激性
− Ａ．Ｉ．Ｉ．が１以上：刺激性
結果を下記の表Ｉにまとめる。

＊志願者５：僅かな剥離を伴う皮膚の乾燥
（１）Ｍ＝男 Ｆ＝女

保持された実験条件の下で，一人の志願者は，包帯除去後３０分に穏やかな剥離を伴う皮膚の乾燥及び非常に穏やかな紅斑を適用部位に示した。

包帯除去後２４時間及び４８時間で，この志願者の皮膚は正常であり，副作用は見られなかった。

結論として，１０人の成人志願者の皮膚への４８時間の密封包帯による純粋な生成物の局所的適用は，非刺激性であることが見出された。

急性の目の許容性を，再構成角膜〈スキネシックモデル（SKINETHIC model）〉及びウサギの目について評価した。

初めに，前記生成物を，インビトロ(in vitro)で形質転換された角化細胞培養液により再構成された角膜への細胞編成誘因効果に対するその許容性の期間を評価した。

細胞培養は，科学的文献において一般的に，医薬の，化粧料のまたは医学的生成物の研究のための高度に感受性の且つ信頼される方法とされている。

それらは特定の培地において気液界面で培養されると，形質転換された角膜層のないヒト角化細胞（細胞系ＴＲ１４６）は，ヒトの目と同様の角膜層のない上皮組織を形成する。

研究すべき生成物のサンプル（３０μｌ）を，６個の同等の再構成された角膜培養物に付着させ，細いブラシを用いて広げた。

その後，二つの培養液を，３７℃，５％CO₂で１０分間，１時間，３時間及び２４時間インキュベートした。

陰性コントロール物質（リン酸塩緩衝溶液Ａ）及び陽性コントロール物質（溶液Ａ中の０．４％ＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム）を，滅菌条件で調製し，他の二つの培養液に同時に付着させた。これらの培養液を２４時間インキュベートした。

非処理のネガティブコントロールとして作用する培養液を，平行してインキュベートした。

培養液基底層角化細胞の生死をＭＴＴ細胞生存試験により試験した。

細胞生存は染色後，定性を測定された。

ＭＴＴ系は，生存細胞のミトコンドリアデヒドロゲナーゼ活性を測定する。キー化合物は，３−[４，５−ジメチルチアゾール−２−イル]−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロマイド（ＭＴＴ）である。

ＭＴＴ緩衝塩溶液は，フェノールレッドの不存在下で黄色である。生存細胞のミトコンドリアデヒドロゲナーゼがテトラゾリウムサイクルを破壊し，水溶液に不溶の紫色のＭＴＴホルマザン結晶の生成を引き起こす。

生存細胞により生成した結晶は，上皮培養液のサポートとして作用するポリカーボネートフィルターに捕捉される。

生存しているときは，全ての培養液が暗青／紫色に変わるが，細胞死が起きているときは，白／黄色である。

結果を陰性及び陽性のコントロール物質と比較する。

実際に，１０容量％／容量のＭＴＴ溶液を含有する培養液０．１５ｍｌを，培養液フィルター／サポートの形態で添加する。

室温で３０分間インキュベートした後，各培養液の色を観察し，記録する。
− 陰性コントロール培養液は，接触後２４時間に基底層の細胞の生存の証拠である暗青／紫色となるべきである。
− 陽性コントロールは，接触後，１時間で細胞死の証拠である白色となるべきである。

結果の解釈は下記のように行う。
− 非刺激性（ＮＩ）：１０分間，１時間，３時間及び２４時間で青。
− 非常に穏やかな刺激性（ＶＭＩ）：１０分間，１時間，３時間で青，２４時間で白。
− 穏やかな刺激性（ＭＩ）：１０分間で青，１時間及び３時間で青／白，２４時間で白。
− 刺激性（Ｉ）：２４時間
− 著しい刺激性（ＶＩ）：１０分，１時間，３時間及び２４時間で白。

結果を下記の表ＩＩにまとめる。

角膜層を形成する細胞の細胞生存性は，試験された純粋な生成物に接触後１０分間，１時間，３時間で損なわれていなかった。２４時間後，ほぼ全ての細胞死となる。

結論として，純粋な形態では，研究されたクリームは，インビトロ「再構成角膜」モデルを形成するのに使用された細胞に対して，非常に穏やかな刺激性を有する。

この研究は，１９９２年６月９日付けのウサギの目についての「フランス国公式機関紙("Journal Officiel de la Republique Francaise")」に記載の方法をベースとする追加のコントロール試験により完結させた。

一匹のウサギを使用した。

研究される純粋な生成物を滴下したところ，病的影響は見られなかった：ウサギの目は正常であった。

これらの結果から，この生成物は，ウサギの目に穏やかな刺激性として保持され得る。

従って，異なる実験条件で得られた結果も合わせると，試験され，目と接触させたクリームには，目に対する危険性はなかった。従って，穏やかな刺激性が保持され得る。

さらに，行われた試験及び研究は，この生成物が，その使用が禁止されている出発物質を含まず，特に不純物の点で基準に合っており，抗菌剤の有効性に関する欧州薬剤ガイドライン（European Pharmacopoeia guidelines）に合っていることを示す。

急性条件で行われた試験は，正常な使用条件で，この生成物が特定の非許容性反応を起こさないことを示す。

最後に，本発明の製剤におけるＢＨＴの安定性を試験した。
４０ｋｇの製剤を入れた容器を，不活性ガス（例えば窒素）の添加のような特別な包装をせずに，単純な蓋で覆い，３年間貯蔵した。

３年後に行われた液体クロマトグラフィーによる分析は，使用された技術の誤差率を考慮すると，ＢＨＴ濃度が同一性を保っていることを示した。

従って，本発明の製剤におけるＢＨＴの安定性は優れている。

Claims (17)

1. 医薬及び／または化粧料製剤中の酸素感受性の活性化合物の酸化を防止する方法であって，
   少なくとも１種類の強い酸化防止剤と少なくとも１種類の弱い酸化防止剤を入れることからなり，前記強い酸化防止剤が前記活性化合物より前に酸素と反応し，前記弱い酸化防止剤が残留酸素と反応して，酸化後，高いコーティング性を有し，微粉化により前記活性化合物の周囲に集まって保護層を形成する粒子を形成することを特徴とする方法。
2. 酸化が防止されるべき酸素感受性活性化合物を含有する医薬及び／または化粧料製剤であって，前記活性化合物に加えて，少なくとも１種類の強い酸化防止剤と，微粉化により高いコーティング性を有する少なくとも１種類の弱い酸化防止剤を含有することを特徴とする製剤。
3. 前記活性化合物が，２，６−ジ−第三ブチルフェノール誘導体である請求項２記載の製剤。
4. 前記活性化合物が，本製剤の総重量の１〜１０重量％，好ましくは５重量％の範囲の量で存在する請求項２記載の製剤。
5. 前記弱い酸化防止剤が金属酸化物である請求項２記載の製剤。
6. 前記弱い酸化防止剤が，全量で，本製剤の総重量の５．１〜１２重量％，好ましくは５．５重量％の範囲の量で存在することを特徴とする請求項５記載の製剤。
7. ２種類の弱い酸化防止剤を含むことを特徴とする請求項２記載の製剤。
8. 前記２種類の酸化防止剤が本製剤の総重量の０．１〜２重量％，好ましくは０．５重量％の範囲の量で存在する酸化亜鉛と本製剤の総重量の５〜１０重量％，好ましくは５重量％の範囲の量で存在する二酸化チタンであることを特徴とする請求項７記載の製剤。
9. 前記強い酸化防止剤が二亜硫酸ナトリウムであることを特徴とする請求項２記載の製剤。
10. 前記強い酸化防止剤が，本製剤の総重量の０．０５〜０．１重量％，好ましくは０．０５重量％の範囲の量で存在することを特徴とする請求項９記載の製剤。
11. 前記製剤が，油相と水相の二相製剤である特徴とする請求項２記載の製剤。
12. 前記製剤の粒子が０．１〜２μｍ，より好ましくは０．２μｍ未満の大きさを有することを特徴とする前記請求項のいずれか１項記載の製剤。
13. 前記油相が前記活性化合物及び前記弱い酸化防止剤を含むことを特徴とする請求項１〜１２のいずれか１項記載の製剤。
14. 前記水相が前記強い酸化防止剤を含むことを特徴とする請求項１〜１３のいずれか１項記載の製剤。
15. 下記の５つの混合物を含むことを特徴とする請求項１〜１４のいずれか１項記載の製剤。
    −ステアリン酸グリセリル，セテアリールアルコール，セチルパルミテート及びココグリセリド，ＰＥＧ−６ステアレート，ＰＥＧ−３２ステアレート，トリグリセリドを含む混合物Ａ，
    −前記活性化合物及び前記弱い酸化防止剤を含む混合物Ａ’，
    −脱塩水及びグリセロールを含む混合物Ｂ，
    −防腐剤を含む混合物Ｃ，
    −脱塩水及び前記強い酸化防止剤を含む混合物Ｄ。
16. 下記の６つの混合物を含むことを特徴とする請求項１〜１５のいずれか１項記載の製剤。
    −ステアリン酸グリセリル，セテアリールアルコール，セチルパルミテート及びココグリセリド，ＰＥＧ−６ステアレート，ＰＥＧ−３２ステアレート，トリグリセリドを含む混合物Ａ，
    −前記活性化合物及び前記弱い酸化防止剤を含む混合物Ａ’，
    −脱塩水及びグリセロールを含む混合物Ｂ，
    −防腐剤を含む混合物Ｃ，
    −脱塩水及び前記強い酸化防止剤を含む混合物Ｄ，
    −プロポリス及びテペスコフイテグリコール抽出物を含む混合物Ｅ。
17. 少なくとも１種類の活性化合物，少なくとも１種類の強い酸化防止剤及び少なくとも１種類の弱い酸化防止剤を含み，前記強い酸化防止剤が前記活性化合物より前に酸素と反応し，前記弱い酸化防止剤が残留酸素と反応して，酸化後，高いコーティング性を有し，微粉化により前記活性化合物の周囲に集まって保護層を形成する粒子を形成する酸素感受性化合物製剤の製造方法であって，
    ａ）混合物Ａを７０〜７５℃に加熱し，その後混合物Ａ’の成分を一つずつ添加し，
    ｂ）混合物Ｂを７０〜７５℃に加熱し，その後反応混合物に添加し，
    ｃ）全混合物を６０〜６５℃に冷却し，その後混合物Ｃを添加し，
    ｄ）該混合物を４０〜４５℃の温度に合わせ，混合物Ｄを添加し，
    ｅ）所望により，混合物Ｅを３５℃で添加し，
    ｆ）温度が約２５〜３０℃に降下するまで撹拌を続ける
    ことを特徴とする方法。