JP2005509426A5 - - Google Patents
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Claims (34)
- ルシフェラーゼとルシフェリンリサイクリングタンパク質とをコードする構築物で細胞を形質転換し、ルシフェリンを該細胞内に導入し、該細胞からの生物発光シグナルをモニターすることを含んでなる、細胞内ＡＴＰおよび／または遺伝子発現の測定方法。
- 細胞内ＡＴＰレベルをモニターするために使用する、請求項１記載の方法。
- ルシフェラーゼの発現をモニターするために使用する、請求項１記載の方法。
- 該細胞をルシフェリンと接触させ、ｐＨを５未満に減少させた後、該アッセイを開始し、ついで該細胞を生理的ｐＨ条件に戻す、前記請求項のいずれか１項記載の方法。
- さらに、該細胞を、それがＬ−システインラセマーゼを発現するよう形質転換する、前記請求項のいずれか１項記載の方法。
- 該細胞が、前記の第１のルシフェラーゼとは異なるＫｍ値および異なる波長出力を有するもう１つのルシフェラーゼを発現しうる、前記請求項のいずれか１項記載の方法。
- （ｉ）ルシフェラーゼ酵素をコードする核酸配列と、（ｉｉ）ルシフェリンリサイクリングタンパク質をコードする核酸配列とを含んでなるＤＮＡ構築物。
- ルシフェラーゼとルシフェリンリサイクリングタンパク質とを含む融合タンパク質を発現するよう（ｉ）の核酸配列と（ｉｉ）の核酸配列とが連結されている、請求項７記載のＤＮＡ構築物。
- （ｉｉｉ）もう１つのルシフェラーゼ酵素をコードする核酸配列と、（ｉｖ）Ｌ−システインラセマーゼ酵素をコードする核酸配列とから選ばれる１以上の追加的成分を更に含む、請求項７または請求項８記載のＤＮＡ構築物。
- 単一のベクターを含む、請求項７〜９のいずれか１項記載のＤＮＡ構築物。
- 細胞の共形質転換において使用しうる２以上のベクターを含む、請求項７〜９のいずれか１項記載のＤＮＡ構築物。
- 請求項７〜１１のいずれか１項記載のＤＮＡ構築物で形質転換された細胞。
- 哺乳類細胞または植物細胞である、請求項１２記載の細胞。
- 該ルシフェリンリサイクリングタンパク質が配列番号１、６２もしくは６３のタンパク質またはそのルシフェリンリサイクリング断片またはこれらのいずれかの変異体である、請求項１〜６のいずれか１項記載の方法、請求項７〜１１のいずれか１項記載のＤＮＡ構築物または請求項１２〜１３のいずれか１項記載の細胞。
- 該ルシフェリンリサイクリングタンパク質が、配列番号３、配列番号３９、配列番号５９もしくは配列番号６１を含むルシフェリンリサイクリングタンパク質またはそのルシフェリンリサイクリング断片もしくは変異体である、請求項１〜６のいずれか１項記載の方法、請求項７〜１１のいずれか１項記載のＤＮＡ構築物または請求項１２〜１３のいずれか１項記載の細胞。
- 該ルシフェリンリサイクリングタンパク質が、配列番号５９を含むルシフェリンリサイクリングタンパク質またはそのルシフェリンリサイクリング断片もしくは変異体である、請求項１５記載の方法、ＤＮＡ構築物または細胞。
- 発光虫種から入手可能なルシフェリンリサイクリングタンパク質またはそのルシフェリンリサイクリング断片またはそれに対して少なくとも６０％の相同性を有するタンパク質。
- 該発光虫種がラムピリス・ノクチルカ（Ｌａｍｐｙｒｉｓ ｎｏｃｔｉｌｕｃａ）である、請求項１７記載のルシフェリンリサイクリングタンパク質。
- 配列番号３、配列番号３９もしくは配列番号５９またはルシフェリンリサイクリング断片またはこれらのいずれかの変異体を含む、請求項１７または請求項１８記載のルシフェリンリサイクリングタンパク質。
- 配列番号３もしくは配列番号３９またはルシフェリンリサイクリング断片またはこれらのいずれかの変異体を含む、請求項１７〜１９のいずれか１項記載のタンパク質。
- 配列番号５９またはルシフェリンリサイクリング断片またはこれらのいずれかの変異体を含む、請求項１７〜１９のいずれか１項記載のタンパク質。
- 配列番号５９を含む、請求項２１記載のタンパク質。
- 異なる種のルシフェラーゼリサイクリングタンパク質遺伝子において見出されるエキソンによりコードされる断片を含んでなるキメラルシフェラーゼリサイクリングタンパク質。
- 該エキソンの少なくとも１つが発光虫種の遺伝子に由来する、請求項２３記載のキメラルシフェラーゼリサイクリングタンパク質。
- 該エキソンの少なくとも１つがホタル種の遺伝子に由来する、請求項２３または請求項２４記載のキメラルシフェラーゼリサイクリングタンパク質。
- ラムピリス・ノクチルカ（Ｌａｍｐｙｒｉｓ ｎｏｃｔｉｌｕｃａ）ルシフェラーゼリサイクリング遺伝子のエキソン２、３、４および５によりコードされる断片に連結された、フォチヌス・ピラリス（Ｐｈｏｔｉｎｕｓ ｐｙｒａｌｉｓ）ルシフェラーゼリサイクリング遺伝子のエキソン１によりコードされる断片を含む、請求項２３〜２５のいずれか１項記載のキメラルシフェラーゼリサイクリングタンパク質。
- ルシフェラーゼ酵素とルシフェラーゼリサイクリングタンパク質とを含んでなる融合タンパク質。
- 該ルシフェリンリサイクリングタンパク質が請求項１７〜２６のいずれか１項記載のタンパク質である、請求項１８記載の融合タンパク質。
- 請求項１７〜２８のいずれか１項記載のタンパク質をコードする核酸。
- 配列番号４または配列番号３１〜３７のいずれか１つを含む、請求項２９記載の核酸。
- 配列番号４０またはその変異体を含む、請求項２９記載の核酸。
- 配列番号５８またはその変異体を含む、請求項２９記載の核酸。
- ｃＤＮＡ配列である、請求項２９記載の核酸。
- Ｄ−ルシフェリンのような光学活性酵素基質の製造方法であって、該基質の酸化形態（例えば、オキシルシフェリン）を、前記請求項のいずれか１項記載のリサイクリングタンパク質、および該変換を行うのに必要ないずれかの他のアミノ酸（例えば、システイン）と接触させることを含んでなる製造方法。
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