JP2005508944A - ヒト3レラキシン - Google Patents
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Abstract
Description
本発明の第1の態様は、ヒトH3レラキシン、H3プロレラキシン、およびH3プレプロレラキシンのペプチド、これらの配列を含む個々のペプチド鎖およびその類似体、具体的には切断および/またはアミノ酸置換修飾の類似体に関する。より好ましくは、ペプチドは、様々な治療法によってヒトまたは動物に投与するための製薬的に許容される組成物として提供される。ペプチドは好ましくは、ペプチドおよび蛋白質の混入のない精製された、または均質な形態で、あるいは約90-99%純度の形態で単離される。
以下のアミノ酸配列:
を有するA鎖、またはN−末端から約9アミノ酸以下が切断されたアミノ酸配列、および
以下のアミノ酸配列:
を有するB鎖、またはアミノ末端から9アミノ酸以下および/または該カルボキシル末端から約5アミノ酸以下が切断されているアミノ酸配列を含み、
ここに該A鎖およびB鎖は、A11-B10およびA24-B22間ジスルフィド結合によって連結し、該ヒトH3レラキシンまたはその類似体は、レラキシン生物活性を持つ組成物を提供する。
該H3レラキシンA鎖はアミノ酸配列:
(ここに該カルボキシル末端が、アミド誘導体であって、および/または12位のLysはGluに置換されており、および/または19位のGluはGlnに置換されている)を有し、
該H3レラキシンB鎖のはアミノ酸配列:
(ここに、該カルボキシル末端はアミド誘導体であり、および/または2位のAlaはProに置換されており、および/または8位のArgはLysに置換されている)を有し、
該A鎖およびB鎖は、A11-B10およびA24-B22間ジスルフィド結合によって連結し、該ヒトH3レラキシン類似体は、レラキシン生物活性を持つ組成物を提供する。
該A鎖:
を含み、
該B鎖:
を含み、
該シグナル配列:
を含み、
および該C鎖:
を含む組成物を提供する。
該A鎖配列:
を含み、
該B鎖配列:
を含み、
該C鎖配列:
を含む核酸配列を提供する。
A鎖:
B鎖:
およびC鎖:
をコードする核酸配列を提供する。
ヒトH3レラキシンの該AおよびB鎖は、A11-B10、A24-B22ジスルフィド結合型がこれらのシステイン結合間で起こる、システイン残基で結びついている。
ここで、ヒトH3レラキシンAおよびB鎖のアミノ酸配列を、以下に示す:
A鎖:
B鎖:
であり、該A鎖およびB鎖はA11-B10、A24-B22間ジスルフィド結合によって連結している。
結果、レラキシン類似体は、H3レラキシンAおよびB鎖からなり、A鎖はアミノ酸配列
を有し、アミノ末端から9アミノ酸以下が切断され、
およびB鎖はアミノ酸配列:
を有し、アミノ末端から9アミノ酸以下および/またはカルボキシル末端から約5アミノ酸以下が切断され、
該A鎖およびB鎖はA11-B10、A24-B22間ジスルフィド結合により連結し、該ヒトH3レラキシンまたはその類似体は、レラキシン生物活性を持つ。ヒトH3レラキシンの該A鎖は、10番および15番のCys残基間の鎖内ジスルフィド結合を含む。
該H3レラキシンA鎖はアミノ酸配列:
(ここに、カルボキシル末端がアミド誘導体であり、および/または12位のLysをGluに置換し、19位のGluをGlnに置換されている)を有し、
該修飾されたB鎖はアミノ酸配列:
(ここに、カルボキシル末端がアミド誘導体であり、および/または2位のAlaをProに置換し、8位のArgをLysに置換されている)を有し、
該AおよびB鎖はA11-B10およびA24-B22間ジスルフィド結合により連結し、かつ、ヒトH3レラキシン類似体はレラキシン生物活性を持つ。
ヒトH3レラキシンをコードする核酸配列の単離、精製および特性化は、ヒトH3レラキシンのシグナル配列およびヒトH3レラキシンのプロ配列の特性および産生を可能にする。
ヒトH3レラキシンのシグナル配列およびC鎖の同定、精製、特性化は、プレプロ−およびプロ−ヒトH3レラキシンの産生を可能にする。
該A鎖:
を含み、
該B鎖:
を含み、
該シグナル配列:
を含み、
および該C鎖は:
を含む、組成物を提供する。
便宜上、特に示さない限り、ヒトH3レラキシン、1つまたはそれ以上のアミノ酸がヒトH3レラキシンの該AおよびB鎖の該N−および/またはC−末端以下を切断したヒトH3レラキシンの類似体、1つまたはそれ以上のアミノ酸がここで述べたような修飾または他のアミノ酸の置換を受けたヒトH3レラキシンの類似体、およびまとめてヒトH3レラキシンと呼ばれるヒトH3プレプロレラキシンを含む。
H3レラキシンの投与は、同様の効用を持つ薬剤のための投与の許容可能な様態のうちのどれによってでも可能であり、好適には全身性投与によって可能である。
投与した組成物の量は、もちろん、処置された被験者、被験者の体重、疾患の程度、投与の方法および内科医の判断に依存するだろう。
核酸配列の同定、特性化、精製および操作
組織RNA/DNA抽出およびRT-PCR−ヒトゲノムDNAは、標準プロトコールを用いてヒトCLより抽出した(Sambrook et al 1989)分子クローニング中: 実験マニュアル、第2版 、 Cold Spring Harbour Laboratory Press, NY)。ヒトCLおよびマウス組織を、液体窒素の存在状態にてきれいにさいの目に切断し、直ちにRNA Wiz 試薬(AmbionInc., Austin, TX) で均質化し、RNAを製造元の取り扱い説明書に従って抽出した。個々のサンプルからの全RNA(5μg)は、逆転写(RT)反応に用い、製造元の取り扱い説明書によれば20μg量にSuperscript II RT-PCR kit (Gibco-BRL, Rockville, MD)を用いて行った。100ngのプライマーおよび150ngのcDNA鋳型を含む50μl反応液を、すべてPCR反応に利用した。マウス組織を、特異的フォワード[5'TGCGGAGGCTCACGATGGCGC 3']およびリバース[5'GACAGCAGCTTGCAGGCACGG 3']プライマーを用いて、319bpの産物の生成によってM3レラキシン発現の選別をした。マウスレラキシン(M1)発現は、公開された配列(Evans et al (1993)J. Mol.Endocrinol. 10,15-23)に基づく特異的フォワード[5'GTGAATATGCCCGTGAATTGATC3']およびリバース[5' AGCGTCGTATCGAAAGGCTCT 3'] プライマーを用いて、150bp産物の生成によって判断した。
心臓、脳、肺、オスマウスの胸腺および脾臓、および卵巣、子宮内膜、子宮筋層、メスマウスの子宮頚管および膣からの全RNA(5−25μg)を、妊娠7.5日、10.5日および18.5日から集め、標準化MOPS/ホルムアルデヒドゲル上で泳動した。その後、RNAを、最適化Hybond-NX膜にトランスファーし、M3レラキシンの特異的プライマー(上記参照)によって生じた、319bpのPCR産物に対応する32P−標識したプローブを備えたM3レラキシンmRNAのプローブとした。この産物を、特異的リバースプライマー(上記)および、前記の(31)に開示されているT7ポリメレースを用いて[α−32P]dCTPにて標識した。膜を、0.25M NaH2P04、pH 7.2、1mM EDTA、 20% SDS中にて65℃で一晩ハイブルリダイズ後、室温で2xSSC、0.1% SDSにて5分間3回洗浄し、最後に0.1xSSC、0.1% SDS中にて65℃で30分間洗浄した。膜を、FujiX 2000 Phosphoimager(Fuji Photo Company, Japan)で分析する前に、室温で48時間phosphoimager プレートにまず感光し、その後80℃でHyperscreen (Amersham Pharmacia, Sydney, Australia)と共にBioMAX MSフィルム(Integrated Sciences, Melbourne, Australia)に感光した。個々の実験にて、脳、脾臓、肝臓および精巣からの全RNA(200μg)は、mRNA精製キット(Amersham Pharmacia)を用いて、ポリA−RNAを精製し、上述のようにノーザンブロットを行った。ヒト複合組織発現アレイ(CLONTECH laboratories, Palo Alto, CA)は、製造元の奨励する32P−標識したH3レラキシン特異的プローブをハイブルリダイズした。ゲノムDNAから分離したH3レラキシン配列の374bp断片は、H3レラキシン特異的リバースプライマー(上述の)、およびT7ポリメレース(Bathgate et al (1999)Biol. Reprod. 61,1090-1098)を用いて[α-32P]dCTPで標識した。膜を、上記のphosphoimager plateおよびBioMAX filmにて感光した。
固相合成−H3遺伝子にコードされた推定ペプチド配列を、シグナルペプチドおよびB鎖、およびH3レラキシンプロホルモンのB/CおよびC/A鎖結合間の推定シグナルペプチドおよび蛋白質分解酵素切断部位に基づく固相合成方法によって作製した(詳細な結果を参照)。簡易な合成として、我々は、そのカルボキシル末端アミド誘導体として該AおよびBペプチドの調製を選択した。選択的S−保護したAおよびB鎖は、前記Dawson et al (1999)J.Pept. Res. 53,542-547の連続フローFmoc固相法によって0.1mmol規模で合成した。選択的S−保護は、以下のシステイン残基に対して行った。: A10,15およびB22のトリチル(Trt)、A24の第3-ブチル、およびA11およびB10のアセトアミドメチル (Acm) (アミノ酸残基の番号に関しては図2Aを参照)。
動物−これらの研究に使用したすべてのオスおよびメスマウスは、年齢を揃え、同じ系統(C57BLK6J)のものを用いた。動物は、制御した環境にて飼育し、げっ歯動物実験のえさ(Barastock Stockfeeds, Melbourne, Australia)および水への到達を備えた14時間の明期、10時間の暗期管理を維持した。メスマウス(3.5月齢)を、交尾させ、膣のプラグの識別から妊娠時期を計った。妊娠7.5日、10.5日および18.5日にて、マウスを組織収集のために犠牲にした。組織を、非妊娠のオスおよびメスマウス(4月齢)からも集めた。これらの実験は、科学的な目的のための実験動物の世話および方法に関するオーストラリア規約に従って、ハワード・フロリー動物研究倫理委員会(Howard Florey Institute's Animal Experimental Ethics Committee)によって承認された。
ヒトおよびマウスのヒトH3レラキシン遺伝子
ヒトおよびマウスのH3レラキシン配列は共に、機能的遺伝子の典型的な特徴を含む(図1Aは、ヒト;図1Bは、マウス)。それぞれ、ヒトおよびマウス各々の推定ATG開始コドンの上流65、および59bpに転写の開始のための推定TATAボックスを含む。ポリアデニル化シグナルは、ヒトおよびマウス遺伝子それぞれのインフレームTAG停止コドンから582および448bp下流部位にて、両遺伝子の3'非翻訳領域中存在する。シグナルイントロンは、他のレラキシンおよびインスリンファミリーメンバーのそれと同様の位置に対応する、両遺伝子の配列中の同一部位にてコーディング部位に挿入する(Hudson et al (1983) Nature 301,628-631 ; Evans et al (1993)J. Mol.Endocrinol. 10,15-23 ; Ivell, R (1997) Rev.Reprod. 2,133- 138)。H3レラキシン遺伝子は、第19番染色体上の19p13.3に位置し、該マウスの遺伝子は、第8番染色体の8C2に位置している。H3およびM3レラキシン遺伝子の派生コーディング部位は、それぞれ142および141アミノ酸であった。
ペプチド合成
H3レラキシンは、低収率での固相合成によって調製した(0.7%)。MALDITOF MSは、5,494. 7のMH+のシグナル産物を示した(理論価値: 5,497. 5)。アミノ酸分析においても、その正確な組成物を確認した。
分離したH3レラキシンペプチド鎖のアミノ酸配列に相当する、選択的S−保護したAおよびB鎖は、Atherton, E and Sheppard, RC. (固相ペプチド合成。IRL Press at Oxford University Press, Oxford, United Kingdom,1989)に記載のある一般的な手法を用いた連続フロ−型9-フルオレニルメトキシカルボニル固相合成法によって合成した(Fmoc)。両ペプチドを、Fmocペプチドアミド連結ポリエチレングリコールポリスチレン(Fmoc-PAL-PEG-PS)支持体(Biosystems提供)を用いて、ペプチド−カルボキシル末端アミドとして0.1 mmol規模で調製した。A鎖会合のために、Fmoc−アミノ酸の4倍過剰量を (Auspep, Melbourne, Australia)、ジメチルホルムアミド (DMF)中にて1,3-ジイソプロピルカルボジイミド(DIC)および1-ヒドロキシベンゾトリアゾール (HOBt)によって活性化し、B鎖合成の間それぞれの残基を、DMF中にて2- (1H-ベンゾトラゾール-1-yl)-1, 1,3, 3-テトラメチルウロニウムヘキサフルロホスフェート(HBTU)およびジイソプロピルエチルアミン(DIEA)によって活性化した。両鎖合成のためのNα-Fmoc脱保護は、DMF中にて20%のピペリジンと共に行った。カップリングは、ダブルカップリングを除き一般に30分間行い、A鎖残基のSer7,8,21およびすべてのシステイン、およびB鎖残基のArg1,12,16、Ala2,3,17およびCys10のダブルカップリングのための時間を拡張した。側鎖保護は、第3ブチルエステルおよびAsp、Glu、ThrおよびSerのためのエーテル、LysおよびTrpのためのブトキシカルボニル(Boc)、Argのための2,2,4,6,7-ペンタメチルジヒドロベンゾフラン-5-スルホニル基(Pbf)およびB鎖Gly11のためのアミド結合保護Nα−(2- Fmoc-オキシ-4-メトキシベンジル)[FmocHmb]によって行った。選択的S−保護は、以下のシステイン残基のために行った。:A鎖中のCys10,15のトリチル(Trt)、およびB鎖中のCys22、A鎖中のCys24第4-ブチル (tBu)、およびA鎖Cys11およびB鎖 Cys10のアセトアミドメチル(Acm)である。
[1]
合成の組成物にて、チオールの急冷を助長するために、保護したA鎖樹脂を、95%トリフルオロ酢酸(TFA)/2.5%エタンジチオール(EDT)/2.5%水に4滴のトリエチルシランを加えたものと2.5時間室温で処理した。TFAを、窒素気流下で最小容量になるまで除き、冷却したジエチルエーテルから2度沈殿した。その後、沈殿物を0.1%TFA溶液に溶解し、凍結乾燥した。該天然のS−縮小した[チオール-Cys10,15, Cys11(Acm), Cys24(t-Bu)]A鎖を、室温で4時間0.1M Gly-NaOH, pH 8.3中にて直接空気酸化した。分析的逆過程高性能液体クロマトグラフィー(RP-HPLC)モニタリングで、分子内ジスルフィド結合構成の完全性を確認し、その後きれいなTFAを数滴加え、粗酸化した物質を直接凍結乾燥した。
合成の組成物にて、チオールの急冷を助長するために、保護したB鎖樹脂を、82. 5% TFA/5% フェノール/5% 水/5% チオアニソール/2.5% エタンジチオールに4滴のトリエチルシランを加えたもので2.5時間室温で処理した。TFAを、窒素気流下で最小容量になるまで除き、冷却したジエチルエーテルから2度沈殿した。その後、沈殿物を0.1%TFA溶液に溶解し、凍結乾燥した。その後、該天然のB鎖を、以下に記載のようにRP-HPLCによって精製した。
ペプチド1の25mg(9.65μmol)および2,2'-ジピリジルジスルフィド(DPDS)の35mg(158.86 μmol)を、4.5 mlのTFAおよび0.5 mlのチオアニソール中に共に溶解し、その後生じた溶液を冷却した。これに、5mlのトリフルオロメタン硫酸(TFMSA)/TFA(1: 5 v/v)を加え、全混合物を30分間0℃以下にて攪拌しておいた。該 [Cys11 (Acm), Cys24 (Pyr) ] A鎖アミドペプチドを、冷エーテルから沈殿し、その後、遠心して得た該沈殿物を、6M グアニン塩酸塩(GdHCI) pH 8.0に懸濁し、RP-HPLCによって精製した (生成ペプチド 3: 4%)。(RP-HPLC精製に代わる方策として、ペプチド3を、20%酢酸溶液中でセファデックスG-25ゲルろ過カラム上にて脱塩した。)
精製したA鎖ペプチド3(1.0 mg、0.38 μmol)および精製したB鎖ペプチド2(1.2 mg、0.38 μmol)を、それぞれ1.0 mlおよび0.5 mlの0.1M NH4HC03に別々に溶解した。その後、該B鎖溶液にA鎖をゆっくり加え、反応混合物を室温で30分間強力に攪拌した。溶液を、詳細を以下に示すように0.5mlの氷酢酸で酸性化し、続いてRP-HPLCを行い、ビスージスルフィド結合鎖結合産物を分離した。(RP-HPLC精製に代わる方策として、生じたA/B産物であるペプチド4を、20%酢酸溶液中でセファデックスG-25ゲルろ過カラム上にて脱塩した。)。
精製した4つのペプチドすべてを、第3および最後のジスルフィド結合を形成するために使用した(100%回収を仮定し, 0.39 μmolと予測した)。ペプチドを、80mM HClおよび酢酸の溶液中に溶解した。その後、95%酢酸溶液中の20mMヨウ素に滴下し加えた(Acm群に対してヨウ素の25倍量)。該反応は、過酸化物を20mMのアスコルビン酸水溶液で急冷後、室温にて暗中で1時間行った。レラキシンの精製は、RP-HPLCによって行い、ペプチド3開始物質と比較して0.74%の最終産物のを得た。
分離した天然の鎖および中間ペプチドは、モデル996フォトダイオード配列検知器(model 996 photodiode array detector)に関連したウオーター600多溶解性配達システム(Waters 600 multisolvent delivery system)を使用し、RP-HPLCによって精製した。C4 シリカゲルが詰まった10x250mm Vydac 218 TPカラム (330A 穴サイズ,10μm 粒子サイズ)を用いた。ペプチドは、線形勾配モード中に(A)0.1%TFA (v/v)溶液および(B)アセトニトリル(v/v)中の0.1%TFAの溶解システムで溶出した(25-50% B 30分以上)。所望画分を、マトリックス−支持したレーザー脱着電離質量分析(MALDI-TOF MS)によって収集および同定し、凍結乾燥した。
ペプチド定量を、GBC自動分析機(Melbourne, Aust)にて24時間の酸加水分解物の複製アミノ酸分析によって行った。MALDITOF MSは、遅延イオン抽出を備えたBruker Biflex機器(Bremen, Germany)にて19.5kvの線状モードで行った。
レラキシン生物活性
合成H3レラキシンのレラキシン生物活性の証明−合成H3レラキシンC末端アミド誘導体を、レラキシン受容体発現細胞株THP−1(Parsell et al (1996) J.Biol. Chem. 271,27936-27941)にてレラキシン生物活性の検討をした。H2レラキシンは、これらの細胞からのcAMP生産にて濃度依存的に生産増加した(図3A)。合成H3レラキシンもまた、H1(pEC50 = 9.10 ± 0.05 [0.794 nM] ;n=3)およびH2(pEC50 = 9.67 ± 0.11 [0.214 nM] ;n=3) レラキシンよりわずかに低い活性ではあるが、cAMP(pEC50 = 8.68 ± 0.08 [2.11nM] ;n=3)の濃度依存的に刺激増加した。この応答の特異性を、1μM以内の濃度上昇にてcAMP応答を刺激するためのウシインスリン(bINSL)、またはヒトインスリン3(hINSL3)の不活化により証明した。
H3レラキシンの発現
マウスでのレラキシン遺伝子の発現−M3レラキシンmRNAの発現を、RT-PCR産物のサザンブロッティングを用いてM1レラキシンmRNA発現と比較した。本技術は単に半量的であるが、我々にM1レラキシンと比較して、M3レラキシン発現の潜在部位を決定することを可能にした。発現実験および複製実験の結果が、同じ結果であった。M3レラキシンmRNAは、M1レラキシンが発見されたC57BLK6Jマウスの多くの組織で発現しているが、2つのマウスレラキシン間の発現パターンは、違っている。オスの非再生組織にてM1レラキシン発現の最も高いレベルは、脳にて見られ、胸腺、心臓および腎臓で中程度のレベル、肺、脾臓および皮膚でより低いレベルの発現が見られ、腸での発現は見られなかった。興味深いことに、M3レラキシン発現は、脳で最も高いレベルで検知されたが、胸腺、肺および脾臓で中程度のレベルが発現し、心臓および肝臓ではほんの低レベルでのみであり、かつ腎臓、皮膚および腸にて全く発現しない。メスのマウスでは、これらの組織での両遺伝子の発現のほぼ同じパターンを示した。オスの再生組織にてM3レラキシンmRNAは、精巣でのみ著しく発現するが、M1レラキシンmRNAは、精巣、副睾丸および前立腺にて検知した。両レラキシンとも、乳腺、非妊娠、妊娠および授乳中のマウスの卵巣、および妊娠マウスの子宮内膜および子宮筋層中の女性生殖器に検出した。M1レラキシン発現が、非妊娠および授乳中のマウスからの卵巣と比較して妊娠後期の卵巣においてより高かったが、M3レラキシンmRNAのかなりの発現を、すべての卵巣の段階にて観察した。M3レラキシンmRNAの高レベルが、脳にて検出され、さらにこの組織の詳しい分析が、両レラキシンがいくつかの異なる部位で発現することを明らかにした。一方、M1レラキシンmRNAは、常に視床下部、海馬、皮質、視床、脳橋/骨髄および小脳に発現し、M3レラキシンmRNAは、視床および脳橋/骨髄に高発現することが明らかとなり、よって2つのレラキシンは、マウスにて別の役割を果たすかもしれないことが示唆された。
ヒト、マウスおよびラットの前駆レラキシンH3cDNA配列は、好適な発現トランスファーベクターを用いて原核性および真核性両方の細胞システムにて発現している。これらのシステムは、バクテリアおよび酵母発現システムのみならず昆虫細胞、植物細胞および鳥類細胞を含む他の高等真核細胞および適したほ乳類宿主細胞を含む。さらに、これらの3つの配列の融合タンパク産物は、宿主細胞の原核性および真核性蛋白質特性の関連部分によって生産される。融合産物は、融合産物が続いて取り除かれうる蛋白質産物の精製を促進する。すべてのトランスファーベクターを、修飾されたCペプチド配列の除去を促進するためにB/CおよびC/A結合修正を備えた短いCペプチド前駆レラキシンを生じる修正を備えたコドン置換/削除/付加産物によって修飾することもできる。
配列番号1 シグナルペプチド配列
配列番号2 B鎖ペプチド配列
配列番号3 C鎖ペプチド配列
配列番号4 A鎖ペプチド配列
配列番号6 ゲノムDNA配列
配列番号7 A鎖核酸配列
配列番号8 B鎖核酸配列
配列番号9 C鎖核酸配列
Claims (44)
- 血管疾患;動脈性高血圧症の処置;無制御または異常なコラーゲンあるいはフィブロネクチン形成と関連する疾患;腎臓疾患;精神障害;うつまたは抑うつ障害;神経疾患または神経変成疾患;学習力、注意力および意欲の障害;中毒障害;活動および運動障害;免疫疾患;乳腺疾患;子宮内膜疾患;内分泌障害;分娩開始遅延、子宮頚部成熟損傷;および胎児性難産による長期分娩の予防;洞性徐脈;脱毛;脱毛症;バソプレッシンの減少または不適当な分泌を含む水分平衡障害;または胎盤不足;の1つまたはそれ以上を処置するための方法であって、任意に1つまたはそれ以上の製薬的に許容される担体および/希釈剤および/または賦形剤とともに、ヒトH3レラキシン、または本明細書にて定義するその類似体の治療上有効な量をそのような処置を必要とする被験者に投与する方法。
- H3レラキシンまたはその類似体が、ヒトH3レラキシン、ヒトH3プロレラキシン、ヒトH3プレプロレラキシン、またはその構成成分A、BまたはCペプチド鎖である、請求項1に記載の方法。
- ヒトH3レラキシン類似体が修飾されたA鎖および/または修飾されたB鎖を含み、該H3レラキシンA鎖はアミノ酸配列:
(ここに、カルボキシル末端はアミド誘導体であり、および/または12位のLysはGluに置換されており、および/または19位のGluはGlnに置換されている)を有し、
該H3レラキシンB鎖はアミノ酸配列:
(ここに、カルボキシル末端はアミド誘導体であり、および/または2位のAlaはProに置換されており、および/または8位のArgはLysに置換されている)を有し、
該A鎖およびB鎖は、A11-B10およびA24-B22間ジスルフィド結合によって連結し、該ヒトH3レラキシン類似体はレラキシン生物活性を持つ、請求項1に記載の方法。 - 動脈性高血圧症の処置のための方法である、請求項1に記載の方法。
- 冠状動脈疾患、末梢血管障害を含む末梢血管障害、レイノー症候群を含む血管痙攣、中枢および末梢神経系、腎臓、眼および他の器官に関する微小血管疾患の処置のための方法である、請求項1に記載の方法。
- 血管障害、間質性線維症、糸球体硬化症、または他の腎臓疾患を含む腎臓疾患の処置のための方法である、請求項1に記載の方法。
- パニック性発作、広場恐怖症、広域不安症、恐怖状態を含む不安症状態を含む精神疾患の処置のための方法である、請求項1に記載の方法。
- 主要なうつ病、気分変調症、双極性および単極性のうつ病;神経障害または神経変成疾患(記憶喪失または他の記憶障害、痴呆、アルツハイマー病を含む)を含むうつ病または抑うつ障害の処置のための方法である、請求項1に記載の方法。
- 注意欠陥多動性障害、トゥレット症候群、衝動性、***性および人格障害、統合失調症に起因するものを含む精神疾患の陰性症状、獲得脳障害および前頭葉傷害を含む学習力、注意力および意欲の障害の処置のための方法である、請求項1に記載の方法。
- 薬物、アルコールおよびニコチン依存症を含む脱毛症の処置のための方法である、請求項1に記載の方法。
- 記憶喪失または他の記憶障害、痴呆、アルツハイマー病を含む神経障疾患または神経変成疾患の処置のための方法である、請求項1に記載の方法。
- パーキンソン病、ハンチントン病、および食事後の運動不足、頭部外傷、外科、腫瘍または脊髄損傷を含む活動および運動障害の処置のための方法である、請求項1に記載の方法。
- 肺、心臓および心臓血管系、腎臓および尿生殖路、胃腸システム、皮膚、リウマチ性および肝胆汁性システムの繊維症を含む無制御または異常なコラーゲンあるいはフィブロネクチン形成と関連する疾患の処置のための方法である、請求項1に記載の方法。
- 分娩開始遅延、子宮頚部成熟損傷、および胎児性難産による長期分娩の予防の処置のための方法である、請求項1に記載の方法。
- ステロイドまたはペプチドホルモン生産に関連する副腎、卵巣および睾丸障害を含む内分泌障害の処置のための方法である、請求項1に記載の方法。
- 繊維嚢胞性疾患、乳汁分泌障害およびがんを含む乳腺疾患の処置のための方法である、請求項1に記載の方法。
- 免疫不全症、血液疾患および網内皮系悪性腫瘍を含む免疫障害の処置のための方法である、請求項1に記載の方法。
- 着床障害による不妊症を含む子宮内膜性疾患の処置のための方法である、請求項1に記載の方法。
- ステロイドまたはペプチドホルモン生産に関係のある副腎障害、卵巣障害および睾丸障害を含む内分泌障害の処置のための方法である、請求項1に記載の方法。
- バソプレッシンの減少または不適当な分泌を含む水分平衡に関連する疾患の処置のための方法である、請求項1に記載の方法。
- 胎盤機能不全の処置のための方法である、請求項1に記載の方法。
- 血管疾患;動脈性高血圧症の処置;無制御または異常なコラーゲンあるいはフィブロネクチン形成と関連する疾患;腎臓疾患;精神障害;うつ病または抑うつ障害;神経疾患または神経変成疾患;学習力、注意力および意欲の障害;中毒障害;活動および運動障害;免疫疾患;乳腺疾患;子宮内膜疾患;内分泌障害;分娩開始遅延、子宮頚部成熟損傷;および胎児性難産による長期分娩の予防;洞性徐脈;脱毛;脱毛症;バソプレッシンの減少または不適当な分泌を含む水分平衡障害;または胎盤不足;の1つまたはそれ以上を処置するための薬剤の製造およびH3レラキシンまたはその類似体の使用であって、任意に1つまたはそれ以上の製薬的に許容される担体および/希釈剤および/または賦形剤とともに、ヒトH3レラキシン、または本明細書にて定義するその類似体の治療上有効な量をそのような処置を必要とする被験者に投与する。
- H3レラキシンまたはその類似体が、ヒトH3レラキシン、ヒトH3プロレラキシン、ヒトH3プレプロレラキシン、またはその構成成分A、BまたはCペプチド鎖である、請求項23に記載の使用。
- ヒトH3レラキシン類似体が修飾されたA鎖および/または修飾されたB鎖を含み、該H3レラキシンA鎖はアミノ酸配列:
(ここに、カルボキシル末端はアミド誘導体であり、および/または12位のLysはGluに置換されており、および/または19位のGluはGlnに置換されている)を有し、
該H3レラキシンB鎖はアミノ酸配列:
(ここに、カルボキシル末端はアミド誘導体であり、および/または2位のAlaはProに置換されており、および/または8位のArgはLysに置換されている)を有し、
該A鎖およびB鎖は、A11-B10およびA24-B22間ジスルフィド結合によって連結し、該ヒトH3レラキシン類似体はレラキシン生物活性を持つ、請求項23に記載の使用。 - 動脈性高血圧症の処置のための請求項23に記載の使用。
- 冠状動脈疾患、末梢血管障害を含む末梢血管障害、レイノー症候群を含む血管痙攣、中枢および末梢神経系、腎臓、眼および他の器官に関連する微小血管疾患の処置のための請求項23に記載の使用。
- 血管障害、間質性線維症、糸球体硬化症、または他の腎臓疾患を含む腎臓疾患の処置のための請求項23に記載の使用。
- パニック性発作、広場恐怖症、広域不安症、恐怖状態を含む不安症状態を含む精神疾患の処置のための請求項23に記載の使用。
- 主要なうつ病、気分変調症、双極性および単極性のうつ病;神経障害または神経変成疾患(記憶喪失または他の記憶障害、痴呆、アルツハイマー病を含む)を含むうつ病または抑うつ障害の処置のための請求項23に記載の使用。
- 注意欠陥多動性障害、トゥレット症候群、衝動性、***性および人格障害、統合失調症に起因するものを含む精神疾患の陰性症状、獲得脳障害および前頭葉傷害を含む学習力、注意力および意欲の障害の処置のため請求項23に記載の使用。
- 薬剤、アルコールおよびニコチン依存症を含む脱毛症の処置ための請求項23に記載の使用。
- 記憶喪失または他の記憶障害、痴呆、アルツハイマー病を含む神経疾患または神経変成疾患の処置のための請求項23に記載の使用。
- パーキンソン病、ハンチントン病、および食事後の運動不足、頭部外傷、外科、腫瘍または脊髄損傷を含む活動および運動障害の処置のための請求項23に記載の使用。
- 肺、心臓および心臓血管系、腎臓および尿生殖路、胃腸システム、皮膚、リウマチ性および肝胆汁性システムの繊維症を含む無制御または異常なコラーゲンあるいはフィブロネクチン形成と関連する疾患の処置のための請求項23に記載の使用。
- 分娩開始遅延、子宮頚部成熟損傷、および胎児性難産による長期分娩の予防の処置のための請求項23に記載の使用。
- ステロイドまたはペプチドホルモン生産に関連する副腎、卵巣および睾丸障害を含む内分泌障害の処置のための請求項23に記載の使用。
- 繊維嚢胞性疾患、乳汁分泌障害およびがんを含む乳腺疾患の処置のための請求項23に記載の使用。
- 免疫不全症、血液疾患および網内皮系の悪性腫瘍を含む免疫障害の処置のための請求項23に記載の使用。
- 着床障害による不妊症を含む子宮内膜性疾患の処置のための請求項23に記載の使用。
- ステロイドまたはペプチドホルモン生産に関連する副腎障害、卵巣障害および睾丸障害を含む内分泌障害の処置のための請求項23に記載の使用。
- バソプレッシンの減少または不適当な分泌を含む水分平衡に関連する疾患の処置のための請求項23に記載の使用。
- 胎盤機能不全の処置のための請求項23に記載の使用。
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