JP2005501094A - トコフェロール富化組成物および炎症性症状の回復 - Google Patents

Abstract

本発明は、炎症に関連する炎症性マーカーの減少および例えば、心臓血管疾患または障害、炎症性疾患、糖尿病、ＳＩＲＳ、喘息、神経変性障害、ＰＭＳ；筋肉疲労または筋肉炎症；および皮膚状態に関連する炎症の症状の処置および／または回復における使用のための、非α−トコフェロールを富化したトコフェロール組成物および非αトコフェロール代謝産物を富化した組成物を提供する。本発明はまた、哺乳動物被験体における非心血管性炎症に関連する症状を処置および／または回復する方法を提供し、この方法は、薬学的有効量で、γ−トコフェロール代謝産物富化トコフェロール組成物を被験体に投与し、この投与によって、この炎症に関連する症状を減少させる工程を包含する。

Description

【技術分野】
【０００１】
（技術分野）
本発明は、一般的に、非α−トコフェロール組成物（例えば、γ−トコフェロール、β−トコフェロールもしくはδ−トコフェロール）、および／またはこれらの代謝産物、ならびに哺乳動物被験体における炎症の症状を処置および／または回復するための方法に関する。本発明はまた、このような組成物を作製する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
（背景）
炎症は、宿主保護の重要な成分であり、感染性または非感染性であり得る損傷に応答した連続的な事象を含む複合性の応答である。炎症は、細胞レベル、分子レベルおよび生理学レベルにおける種々の事象に関わる。これらの事象としては、以下が挙げられる：血管拡張；増加した脈管透過性；間質性浮腫を導く血漿の溢出；好中球、マクロファージおよびリンパ球の走化性；サイトカイン産生；急性期反応物質；白血球増加；熱；増加した代謝速度；減少したアルブミン産生および低アルブミン血；補体の活性化；ならびに抗体の刺激。炎症は、例えば、神経変性疾患、ＳＩＲＳ、喘息、糖尿病関連腎症および網膜症、タンパク質消耗（ｗａｓｔｉｎｇ）、筋肉疲労または炎症およびＰＭＳ、感染性疾患、ならびに種々の心血管障害のような疾患または障害に関連する。
【０００３】
炎症の生化学マーカーは、当該分野において公知であり、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）およびインターロイキンファミリーのメンバーが挙げられる。これらのマーカーのうちの特定のマーカーの上昇したレベルの存在は、疾患の発症に関連することが示されている。例えば、ＣＲＰは、全身性炎症に対するマーカーとして報告されている（Ｓｐａｎｈｅｉｍｅｒ（２００１，Ｐｏｓｔｇｒａｄ．Ｍｅｄ．１０９（４）２６）およびＲｉｄｋｌｅｒら（２０００，Ｎ．Ｅ．Ｊ．Ｍ．３４２（１２）：８３６−４３））。
【０００４】
米国特許第６，４１０，５８９号；同第６，２４２，４７９号および同第６，０４８，８９１号は、γ−トコフェロール組成物を開示する。米国特許第６，３４６，５４４号は、デスメチルトコフェロール組成物を開示する。米国特許第４，３２５，９６５号は、乾癬の処置のためのδ−トコフェロールの局所投与を開示する。
【０００５】
炎症の１つ以上の生化学マーカーを減少し、それによって、疾患と関連する炎症の症状を減少または回復するための組成物および方法についての必要性が依然として存在する。さらに、多くの疾患および障害（心血管疾患、糖尿病および感染性疾患が挙げられるが、これらに限定されない）に関連する上昇したＣＲＰレベルを減少させるための方法についての必要性が依然として存在する。
【０００６】
本明細書中に引用される全ての特許および刊行物の開示は、その全体が参考として援用される。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
（発明の開示）
本発明は、非α−トコフェロール富化トコフェロール組成物および哺乳動物被験体における炎症の症状を処置および／または回復するための方法に関する。
【０００８】
本発明は、哺乳動物被験体における非心血管性炎症に関連する症状を処置および／または回復する方法を提供し、この方法は、薬学的有効量で、γ−トコフェロール富化トコフェロール組成物を被験体に投与し、この投与によって、この炎症に関連する症状を減少させる工程を包含する。
【０００９】
本発明はまた、哺乳動物被験体における非心血管性炎症に関連する症状を処置および／または回復する方法を提供し、この方法は、薬学的有効量で、γ−トコフェロール代謝産物富化トコフェロール組成物を被験体に投与し、この投与によって、この炎症に関連する症状を減少させる工程を包含する。好ましい実施形態において、γ−トコフェロール代謝産物は、２，７，８−トリメチル−２−（２’−カルボキシエチル）−６−ヒドロキシクロマン（γ−ＣＥＨＣ）である。
【００１０】
本発明は、哺乳動物被験体における炎症に関連する症状を処置および／または回復する方法を提供し、この方法は、薬学的有効量で、β−トコフェロール富化トコフェロール組成物を被験体に投与し、この投与によって、この炎症に関連する症状を減少させる工程を包含する。
【００１１】
本発明はまた、哺乳動物被験体における炎症に関連する症状を処置および／または回復する方法を提供し、この方法は、薬学的有効量で、β−トコフェロール代謝産物富化組成物を被験体に投与し、この投与によって、この炎症に関連する症状を減少させる工程を包含する。好ましい実施形態において、β−トコフェロール代謝産物は、２，５，８−トリメチル−２−（２−カルボキシエチル）−６−ヒドロキシクロマン（β−ＣＥＨＣ）である。
【００１２】
本発明は、哺乳動物被験体における炎症に関連する症状を処置および／または回復する方法を提供し、この方法は、薬学的有効量で、δ−トコフェロール富化トコフェロール組成物を被験体に投与し、この投与によって、この炎症に関連する症状を減少させる工程を包含し、ここで、この投与は、米国特許第４，３２５，９６５号に記載されるような、乾癬の処置のためのδ−トコフェロール富化トコフェロール組成物の局所投与を特に排除するが、乾癬の処置のためのδ−トコフェロール富化トコフェロール組成物の全身投与をを包含し、非乾癬性皮膚状態、疾患または障害のための、δ−トコフェロール富化トコフェロール組成物の局所投与を包含する。
【００１３】
本発明はまた、哺乳動物被験体における炎症に関連する症状を処置および／または回復する方法を提供し、この方法は、薬学的有効量で、δ−トコフェロール代謝産物富化組成物を被験体に投与し、この投与によって、この炎症に関連する症状を減少させる工程を包含する。好ましい実施形態において、δ−トコフェロール代謝産物は、２，８−ジメチル−２−（２−カルボキシエチル）−６−ヒドロキシクロマン（δ−ＣＥＨＣ）である。
【００１４】
本発明はまた、炎症マーカーおよび炎症に関連するタンパク質（例えば、ＣＲＰ；炎症に関連するサイトカイン（ＩＬ−１〜ＩＬ−１７を含む）；ＴＮＦ−α；およびＢ６１）のレベルを減少させるための方法、ならびに炎症に関連する疼痛を減少させる方法および／または炎症に関連する浮腫を減少させる方法を提供する。
【００１５】
本発明は、ＣＲＰ関連炎症状態に対して個体被験体におけるＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）のレベルを減少させる方法を提供し、この方法は、この個体に、有効量の非α−トコフェロール富化トコフェロール組成物を投与する工程を包含する。いくつかの例において、非α−トコフェロールは、γ−トコフェロールまたはそのγ−トコフェロール代謝産物、β−トコフェロールまたはそのβ−トコフェロール代謝産物、およびδ−トコフェロールまたはそのδ−トコフェロール代謝産物からなる群より選択される。他の例において、非α−トコフェロールは、γ−トコフェロールまたはγ−トコフェロール代謝産物（例えば、γ−ＣＥＨＣ）である。さらなる例において、非α−トコフェロールは、β−トコフェロールまたはβ−トコフェロール代謝産物（例えば、β−ＣＥＨＣ）である。さらなる例において、非α−トコフェロールは、δ−トコフェロールまたはδ−トコフェロール代謝産物（例えば、δ−ＣＥＨＣ）である。
【００１６】
本発明は、炎症状態に対して、個体被験体におけるＣＲＰレベルを減少させるための医薬の製造における非α−トコフェロールの使用を提供する。いくつかの例において、非α−トコフェロールは、γ−トコフェロールまたはそのγ−トコフェロール代謝産物である。他の例において、非α−トコフェロールは、β−トコフェロールまたはそのβ−トコフェロール代謝産物である。さらなる例において、非α−トコフェロールは、δ−トコフェロールまたはそのδ−トコフェロール代謝産物である。
【００１７】
本発明は、末期の腎臓疾患に対して、個体被験体において炎症マーカーのレベルを減少する方法を提供し、この方法は、個体に、非α−トコフェロール富化トコフェロール組成物を有効量で投与する工程を包含する。いくつかの例において、炎症マーカーは、ＣＲＰまたはＩＬ−６である。他の例において、非α−トコフェロールは、γ−トコフェロールである。さらなる例において、γ−トコフェロール富化トコフェロール組成物は、少なくとも６０％のγ−トコフェロール、少なくとも７０％のγ−トコフェロール、少なくとも８０％のγ−トコフェロールまたは少なくとも９０％のγ−トコフェロールを含む。さらなる例において、γ−トコフェロール富化トコフェロール組成物は、少なくとも６０％のγ−トコフェロール、および少なくとも２８％のδ−トコフェロールを含む。
【００１８】
本発明はまた、末期腎臓疾患に対して、個体被験体におけるＣＲＰまたはＩＬ−６のレベルを減少させるための医薬の製造におけるγ−トコフェロールの使用を提供する。
【００１９】
本発明は、炎症状態に対して、個体被験体における炎症状態の症状を回復するための方法を提供し、この方法は、この個体に、γ−トコフェロール富化トコフェロール組成物を、この炎症状態に関連する炎症マーカーのレベルを減少させるのに有効な量で投与する工程を包含する。いくつかの例において、炎症マーカーは、ＣＲＰまたはＩＬ−６である。他の実施形態において、炎症状態は、呼吸器炎症状態、敗血症、糖尿病、筋肉疲労、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、末期腎臓疾患（ＥＳＲＤ）、および歯周疾患からなる群より選択される。
【００２０】
本発明はまた、炎症状態に対して、個体被験体における炎症状態の症状を回復するための方法を提供し、この方法は、この個体に、β−トコフェロール富化トコフェロール組成物を、この炎症状態に関連する炎症マーカーのレベルを減少させるのに有効な量で投与する工程を包含する。いくつかの例において、炎症マーカーは、ＣＲＰまたはＩＬ−６である。他の例において、炎症状態は、呼吸器炎症状態、敗血症、糖尿病、筋肉疲労、ＳＬＥ、腎臓炎症（ＥＳＲＤを含む）、歯周疾患および炎症性皮膚状態からなる群より選択される。
【００２１】
本発明はまた、炎症状態に対して、個体被験体における炎症状態の症状を回復するための方法を提供し、この方法は、この個体に、δ−トコフェロール富化トコフェロール組成物を、この炎症状態に関連する炎症マーカーのレベルを減少させるのに有効な量で投与する工程を包含する。いくつかの例において、炎症マーカーは、ＣＲＰまたはＩＬ−６である。他の例において、炎症状態は、呼吸器炎症状態、敗血症、糖尿病、筋肉疲労、ＳＬＥ、腎臓炎症（ＥＳＲＤを含む）、歯周疾患および非乾癬性炎症性皮膚状態からなる群より選択される。
【００２２】
他の例において、本発明の非α−トコフェロール富化トコフェロール組成物または非α−トコフェロール代謝産物富化組成物は、栄養補助的（ｎｕｔｒａｃｅｕｔｉｃａｌ）組成物または薬学的組成物であり得、そしてさらに、栄養補助的に受容可能なキャリアまたは薬学的に受容可能なキャリアを含み得る。
【００２３】
本発明はまた、本発明の非α−トコフェロール富化トコフェロール組成物または非α−トコフェロール代謝産物富化組成物を作製するための方法を提供する。
【００２４】
図面の簡単な説明
適用されない
（本発明を実施するための最良の形態）
本発明は、非α−トコフェロール富化トコフェロール組成物、非α−トコフェロール代謝産物富化組成物、ならびに炎症の症状または炎症状態の症状の処置および／または回復においてこのような組成物を使用するため、ならびに／あるいは炎症または炎症状態に関連する炎症マーカーのレベルを減少させるため、ならびに／あるいは炎症または炎症状態に関連する症状（例えば、疼痛および浮腫）を減少させるための方法を提供する。いくつかの例において、本発明は、炎症の１つ以上の生化学マーカーを減少させ（例えば、ＣＲＰを減少させるかまたはＩＬ−６を減少させ）、それによって、疾患または炎症状態に関連する炎症性症状を回復し、そして／または長期または慢性の炎症状態への進行という哺乳動物被験体の危険性を減少させるための組成物および方法を提供する。いくつかの例において、本発明は、被験体における炎症マーカーの正常レベルまたは健康レベルを維持するための組成物および方法を提供する。
【００２５】
炎症は、例えば、以下に関連する：心血管疾患または障害；神経変性疾患（例えば、アルツハイマー）；感染性疾患（例えば、心筋炎、心筋症、急性心内膜炎、心膜炎）；アテローム性動脈硬化症；全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）／敗血症；成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）；喘息；慢性関節リウマチ、変形性関節症、全身性エリテマトーデス；気道反応性亢進（ＡＨＲ）；気管支の反応亢進；慢性的な閉塞性の肺疾患（ＣＯＰＤ）；うっ血性心不全（ＣＨＦ）；真性糖尿病の炎症性合併症；末期腎臓疾患（ＥＳＲＤ）、月経前症候群（ＰＭＳ）、または、筋疲労、または、炎症；および皮膚状態。
【００２６】
炎症応答の多くの近いメディエーターが同定されており、そして以下が挙げられる：炎症性サイトカイン、インターロイキン−１〜インターロイキン−１７（インターロイキン−１β（ＩＬ−１β）（米国特許第６，２１０，８７７号に記載される）および腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）（米国特許第５，９９３，８１１号、同第６，２１０，８７７号および同第６，２０３，９９７号に記載される）が挙げられる。他の分子は、全身性炎症（例えば、ＣＲＰ（Ｒｉｄｋｅｒら、上記；Ｓｐａｎｈｅｉｍｅｒ、上記）を含む）のマーカー；ｅ−セレクチン（ＥＬＡＭとしても公知）、ｓＩＣＡＭ−１（米国特許第６，０４９，１４７号）、インテグリン、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−３、ＢＬ−ＣＡＭ、ＬＦＡ−２、ＶＣＡＭ−１、ＮＣＡＭ、ＰＥＣＡＭ、およびネオプトリンのような特定の細胞接着分子；ならびにＢ６１（米国特許第５，６８８，６５６号）としての使用のために報告されている。炎症と関連する他のマーカーとしては、ロイコトリエン、トロンボキサン、およびイソプロスタン（ｉｓｏｐｒｏｓｔａｎｅ）が挙げられる。炎症に関連する他のタンパク質またはマーカーとしては、血清アミロイドＡタンパク質、フィブリネクチン、フィブリノーゲン、レプチン、プロスタグランジン Ｅ２、血清プロカルシトニン、可溶性ＴＮＦレセプター２、および増大した白血球数（パーセンテージおよび合計の顆粒球（多形核白血球）単球、リンパ球および好酸球を含む）が挙げられる。
【００２７】
本発明は、非α−トコフェロール富化トコフェロール組成物および非α−トコフェロール代謝産物富化組成物、ならびに炎症に関連する炎症マーカー（例えば、ＣＲＰ；炎症に関連するサイトカイン（ＩＬ−１〜ＩＬ−１７およびいくつかの例においてＩＬ−６を含む）；ＴＮＦ−α；およびＢ６１）のレベルを減少させるための方法；ならびに炎症に関連する症状を低減（例えば、疼痛の低減、および／または浮腫の低減、および／または炎症に関連する疲労の低減）するための方法を提供する。
【００２８】
いくつかの例において、本発明は、哺乳動物被験体において、炎症に関連するＣＲＰの上昇したレベルを低下させる方法を提供し、この方法は、この被験体に、非α−トコフェロール富化トコフェロール組成物または非α−トコフェロール代謝産物富化組成物を、薬学的に有効な量で投与し、この投与によって、この被験体におけるこの炎症に関連する上昇したレベルのＣＲＰを低下させる工程を包含する。
【００２９】
他の例において、本発明は、本明細書中に開示される疾患または障害に関連する炎症または炎症状態の危険のある哺乳動物被験体において、健康なレベルまたは通常のレベルのＣ−反応性タンパク質（ＣＲＰ）を維持するための方法を提供し、この方法は、この被験体に、非α−トコフェロール富化トコフェロール組成物または非α−トコフェロール代謝産物富化組成物を、薬学的に有効な量で投与し、この投与によって、この哺乳動物被験体における健康なレベルまたは通常のレベルのＣＲＰを維持する工程を包含する。
【００３０】
（定義）
炎症は、以下のような疾患、障害および状態と関連する：例えば、心血管疾患または障害；神経変性疾患（例えば、アルツハイマー）；感染性疾患（例えば、心筋炎、心筋症、急性心内膜炎、心膜炎）；アテローム性動脈硬化症；全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）／敗血症；成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）；喘息；慢性関節リウマチ、変形性関節症、全身性エリテマトーデス；気道反応性亢進（ＡＨＲ）；気管支の反応亢進；慢性的な閉塞性の肺疾患（ＣＯＰＤ）；うっ血性心不全（ＣＨＦ）；真性糖尿病の炎症性合併症；ＥＳＲＤ；月経前症候群（ＰＭＳ）；筋疲労または炎症、および皮膚状態。本明細書中で使用される場合、「呼吸器炎症状態」とは、ＳＩＲＳ、ＡＲＤＳ、喘息およびＡＨＲをいう。
【００３１】
上昇したレベルのＣ反応性タンパク質（ＣＲＰ）は、種々の炎症状態と関連する。本明細書中で使用される場合、「ＣＲＰ関連炎症」とは、以下のような上昇したレベルのＣＲＰと関連した炎症状態および／または炎症をいう：例えば、心血管疾患または障害（心房性細動、不安定狭心症、冠状動脈疾患、末梢動脈疾患、心臓同種移植片血管症（ＣＡＶＤ）を含む）；乳腺炎；プレクランプシア（ｐｒｅｃｌａｍｐｓｉａ）；炎症性腸状態；発作；組織梗塞；ラムボシアティック）（ｌｕｍｂｏｓｃｉａｔｉｃ）；エストロゲン／プロゲスチンホルモン置換療法（ＨＲＴ）；感染（細菌、ウイルスおよび原生動物）；細菌髄膜炎；外傷；外科手術；生体材料移植片；喫煙；肥満；神経変性疾患（例えば、アルツハイマー）；感染性疾患（例えば、心筋炎、心筋症、急性心内膜炎、心膜炎）；アテローム性動脈硬化症；全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）／敗血症；成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）；喘息；慢性関節リウマチ、変形性関節症、全身性エリテマトーデス；気道反応性亢進（ＡＨＲ）；気管支の反応亢進；慢性的な閉塞性の肺疾患（ＣＯＰＤ）；うっ血性心不全（ＣＨＦ）；Ｉ型およびＩＩ型の真性糖尿病の炎症性合併症；代謝症候群；末期腎臓疾患（ＥＳＲＤ）、月経前症候群（ＰＭＳ）、または筋疲労または炎症；多臓器機能不全症候群（ＭＯＤＳ）；気道反応性亢進（ＡＨＲ）；気管支の反応亢進；老化；急性アレルギー性反応；歯肉炎および皮膚状態。
【００３２】
本明細書中で使用されるように、「心血管疾患」としては、心臓−肺および循環器系に関連する疾患（虚血、アンギナ、浮腫状態、アテローム性動脈硬化症、ＬＤＬ酸化、内皮細胞への単球の接着、泡沫細胞形成、脂肪線発生（ｆａｔｔｙ−ｓｔｒｅａｋ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ）、血小板接着、および凝集、平滑筋細胞増殖、再灌流障害、高血圧、および塞栓疾患を含むが、これらに限定されない）が挙げられる。
【００３３】
本明細書中で使用される場合、「炎症に関連するマーカー」としては、以下が挙げられるが、これらに限定されない：ＣＲＰ、炎症に関連するサイトカイン（例えば、炎症に関連するＩＬ−１〜ＩＬ−１７を含む、インターロイキンファミリーのメンバー）、ＴＮＦ−α；Ｂ６１；特定の細胞接着分子（例えば、ｅ−セレクチン（ＥＬＡＭとしても公知）、ｓＩＣＡＭ−１、インテグリン、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−３、ＢＬ−ＣＡＭ、ＬＦＡ−２、ＶＣＡＭ−１、ＮＣＡＭ、およびＰＥＣＡＭ）；ネオプトリン；血清プロカルシトニン；ロイコトリエン、トロンボキサン、およびイソプロスタン。特に、上昇したレベルのＣＲＰは、心血管疾患および障害、感染性疾患（例えば、心筋炎、心筋症、急性心内膜炎、または心膜炎）；ＳＩＲＳ；糖尿病；ＰＭＳ；および全身性炎症に関連する。上昇したレベルの細胞接着分子は、全身性炎症に関連する。上昇したレベルのＩＬ−１およびＴＮＦ−αは、ＩＤＤＭおよびＮＤＤＭ関連炎症に関連する。上昇したレベルのＩＬ−１０およびＩＬ−６は、ＳＩＲＳに関連する。上昇したレベルのネオプテリンは、ＳＩＲＳに関連する。上昇したレベルのプロカルシトニンは、全身性炎症に関連する。炎症に関連する他のタンパク質またはマーカーとしては、以下が挙げられる：血清アミロイドＡタンパク質、フィブリネクチン、フィブリノーゲン、レプチン、ブロスタグランジン Ｅ２、血清プロカルシトニン、可溶性ＴＮＦレセプター２、および増大した白血球数（パーセンテージおよび合計の顆粒球（多形核白血球）単球、リンパ球および好酸球を含む）。
【００３４】
「トコフェロール」とは、６−クロマノール環構造および２位の側鎖によって特徴付けられる分子のファミリーのいずれかを意味する。「非α−トコフェロール富化トコフェロール組成物」とは、本明細書中で使用される場合、組成物中の合計のトコフェロールについて富化されている、非α−トコフェロール（例えば、γ−トコフェロール、β−トコフェロール、またはδ−トコフェロール）をいう。トコフェロールは、４’、８’、１２’−トリメチルトリデシルフィトール側鎖を有する。本明細書中で使用される場合、用語「トコフェロール」は、以下を含むが、これらに限定されない：
α−トコフェロール、［２Ｒ−２Ｒ^＊（４Ｒ^＊，８Ｒ^＊）］−３，４−ジヒドロ−２，５，７，８−テトラメチル−２−（４，８，１２−トリメチルトリデシル）−２Ｈ−１−ベンゾピラン−６−オール；２，５，７，８−テトラメチル−２−（４’，８’，１２’−トリメチルトリデシル）−６−クロマノール；５，７，８−トリメチルトコール、Ｆｅｒｎｈｏｌｚ（１９３７）Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．５９：１１５４および６０：７００；
β−トコフェロール、３，４−ジヒドロ−２，５，８−トリメチル−２−（４，８，１２−トリメチルトリデシル）−２Ｈ−１−ベンゾピラン−６−オール；２，５，８−トリメチル−２−（４，８，１２−トリメチルトリデシル）−６−クロマノール；５−８−ジメチルトコール；クモトコフェロール（ｃｕｍｏｔｏｃｏｐｈｅｒｏｌ）；ネオトコフェロール（ｎｅｏｔｏｃｏｐｈｅｒｏｌ）；ｐ−キシロトコフェロール（ｘｙｌｏｔｏｃｏｐｈｅｒｏｌ）；
γ−トコフェロール、３，４−ジヒドロ−２，７，８−トリメチル−２−（４，８，１２−トリメチルトリデシル）−２Ｈ−１−ベンゾピラン−６−オール；２，７，８−トリメチル−２−（４，８，１２−トリメチルトリデシル）−６−クロマノール；７，８−ジメチルトコール；ｏ−キシロトコフェロール；
δ−トコフェロール、［２Ｒ−［２Ｒ^＊（４Ｒ^＊，８Ｒ^＊）］］−３，４−ジヒドロ−２，８−ジメチル−２−（４，８，１２−トリメチルトリデシル）−２Ｈ−１−ベンゾピラン−６−オール；８−メチルトコール；
ε−トコフェロール、［Ｒ−（Ｅ，Ｅ）］−３，４−ジヒドロ−２，５，８−トリメチル−２−（４，８，１２−トリメチル−３，７，１１−トリデカトリエニル）−２Ｈ−１−ベンゾピラン−６−オール；２，５，８−トリメチル−２−（４，８，１２−トリメチルトリデカ−３，７，１１−トリエニル）クロマン−６−オール；５−メチルトコール；
ζ_１−トコフェロール、３，４−ジヒドロ−２，５，７，８−テトラメチル−２−（４，８，１２−トリメチル−３，７，１１−トリデカトリエニル）−２Ｈ−１−ベンゾピラン−６−オール；２，５，７，８−テトラメチル−２−（４，８，１２−トリメチル−３，７，１１−トリデカトリエニル）−６−クロマノール；５，７，８−トリメチルトコトリエン−３’，７’，１１’−オール；
ζ_２−トコフェロール、３，４−ジヒドロ−２，５，７−トリメチル−２−（４，８，１２−トリメチルトリデシル）−２Ｈ−１−ベンゾピラン−６−オール；２，５，７−トリメチル−２−（４，８，１２−トリメチルトリデシル）−６−クロマノール；５，７−ジメチルトコール；および
η−トコフェロール、３，４−ジヒドロ−２，７−ジメチル−２−（４，８，１２−トリメチルトリデシル）−２Ｈ−１−ベンゾピラン−６−オール；２，７−ジメチル−２−（４，８，１２−トリメチルトリデシル）−６−クロマノール；７−メチルトコール。Ｔｈｅ Ｍｅｒｃｋ Ｉｎｄｅｘ（１９９６），第１２版，Ｍｅｒｃｋ ＆ Ｃｏ．，Ｗｈｉｔｅｈｏｕｓｅ Ｓｔａｔｉｏｎ，Ｎ．Ｊ．，１６２０−１６２１頁および１７１２頁、ならびにそこに引用される参考文献を参照のこと。他のトコフェロールとしては、ξ_１−トコフェロール、ξ_２−トコフェロール、およびσ−トコフェロールが挙げられる。
【００３５】
一般的に言って、ビタミンＥの市販の食事栄養補助食品は、α−トコフェロール富化組成物である。本明細書中で使用される場合、「非α−トコフェロール富化トコフェロール組成物」とは、α−トコフェロールを除く、少なくとも５０％の任意のトコフェロールを含む組成物をいう。いくつかの例において、非α−トコフェロールは、γ−トコフェロールまたはその代謝産物、β−トコフェロールまたはその代謝産物、あるいはδ−トコフェロールまたはその代謝産物である。非α−トコフェロール富化トコフェロール組成物は、この組成物が、少なくとも５０％の非αトコフェロールを含む限り、トコフェロール（α−トコフェロールを含む）の混合物を含み得る。本明細書中で使用される場合、「非α−トコフェロール代謝産物」とは、非α−トコフェロールの代謝産物（例えば、γ−ＣＥＨＣのようなγ−トコフェロール代謝産物；例えば、β−ＣＥＨＣのようなβ−トコフェロール代謝産物；または例えば、δ−ＣＥＨＣのようなδ−トコフェロール代謝産物）をいう。
【００３６】
被験体の身体において、非α−トコフェロールは、代謝産物に分解する。本発明は、２，７，８−トリメチル−２−（β−カルボキシエチル）−６−ヒドロキシクロマン（γ−ＣＥＨＣ）、ラセミγ−ＣＥＨＣおよび（Ｓ）γ−ＣＥＨＣのようなγ−トコフェロール代謝産物をさらに含有する、γ−トコフェロール富化トコフェロール組成物の使用を包含する。例えば、γ−トコフェロール代謝産物の開示について、Ｗｅｃｈｔｅｒら、米国特許第６，２４２，４７９号（具体的に、その全体が、本明細書中において援用される）を参照のこと。本発明はまた、γ−トコフェロールをさらに含有する、γ−トコフェロール代謝産物富化組成物の使用を包含する。
【００３７】
本発明は、２，５，８−トリメチル−２−（２−カルボキシエチル）−６−ヒドロキシクロマン（β−ＣＥＨＣ）のようなβ−トコフェロール代謝産物をさらに含有する、β−トコフェロール富化トコフェロール組成物の使用を包含する。本発明はまた、β−トコフェロールをさらに含有する、β−トコフェロール代謝産物富化組成物の使用を包含する。
【００３８】
本発明は、２，８−ジメチル−２−（２−カルボキシエチル）−６−ヒドロキシクロマン（δ−ＣＥＨＣ）のようなδ−トコフェロール代謝産物をさらに含有する、δ−トコフェロール富化トコフェロール組成物の使用を包含する。本発明はまた、δ−トコフェロールをさらに含有する、δ−トコフェロール代謝産物富化組成物の使用を包含する。
【００３９】
「非トコフェロール」とは、トコフェロール、トコトリエノール、またはその誘導体などではない、任意の化合物を意味する。
【００４０】
「天然には存在しない組成物」とは、この形態で天然には見出されない組成物を意味する。天然には存在しない組成物は、例えば、非限定的な例として、精製、単離、濃縮、化学修飾（例えば、化学基の付加もしくは除去）、および／または混合物の場合には、成分もしくは化合物の添加もしくは除去を介して、天然に存在する組成物に由来し得る。天然には存在しない組成物は、天然に存在する組成物の天然には存在しない組み合わせを含み得るか、またはこの組み合わせに由来し得る。従って、天然には存在しない組成物は、精製、単離、修飾および／または濃縮された天然に存在する組成物の混合物を含有し得、そして／あるいは天然に存在する組成物の、天然には見出されない形態、濃度、比、および／またはレベルでの混合物を含有し得る。
【００４１】
「薬剤」または「細胞保護（ｃｙｔｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ）薬剤」とは、本明細書中において、例えば、炎症マーカーのレベルを低下させることによって、そして／または炎症に関連する疼痛および／もしくは浮腫を減少させることによって、炎症の症状を処置または軽減し得る、化合物、混合物、または化合物の処方物として定義される。炎症マーカーは、例えば、ＣＲＰ、炎症に関連するサイトカイン（例えば、インターロイキンファミリーのメンバー（炎症に関連するＩＬ−１〜１７が挙げられる）、ＴＮＦ−α）；Ｂ６１；特定の細胞接着分子（例えば、ｅ−セレクチン（ＥＬＡＭとしてもまた公知）、ｓＩＣＡＭ、インテグリン、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−３、ＢＬ−ＣＡＭ、ＬＦＡ−２、ＶＣＡＭ−１、ＮＣＡＭおよびＰＥＣＡＭ）；ネオプテリン；血清プロカルシトニン；ロイコトリエン、トロンボキサン、イソプロスタン（ｉｓｏｐｒｏｓｔａｎｅ）である。細胞保護薬剤は、炎症に関連する症状の前に、この症状と同時に、そして／またはこの症状に続いて、細胞保護活性を提供し得る。
【００４２】
本明細書中において使用される場合、炎症に関連する細胞、組織、器官および／または生物が患う、炎症の症状および／または損傷（例えば、疼痛および／または浮腫）を、薬剤の投与が減少および／または軽減する場合、その薬剤は、「細胞保護性」である、または「細胞保護特性」もしくは「細胞保護活性」を有するといわれる。細胞保護活性および炎症に関連する損傷は、炎症の結果（例えば、ＣＲＰ、炎症に関連するサイトカイン（例えば、インターロイキンファミリーのメンバー（炎症に関連するＩＬ−１〜１７が挙げられる）、ＴＮＦ−α；Ｂ６１；特定の細胞接着分子（例えば、ｅ−セレクチン（ＥＬＡＭとしてもまた公知）、ｓＩＣＡＭ、インテグリン、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−３、ＢＬ−ＣＡＭ、ＬＦＡ−２、ＶＣＡＭ−１、ＮＣＡＭおよびＰＥＣＡＭ）；ネオプテリン；血清プロカルシトニン；ロイコトリエン、トロンボキサン、およびイソプロスタンの上昇したレベル）を測定するアッセイにおいて、定量され得る。細胞保護薬剤としては、細胞保護量の非α−トコフェロール（例えば、γ−トコフェロール、β−トコフェロールおよびδ−トコフェロール）および／またはその代謝産物が挙げられる。
【００４３】
「炎症および／または炎症に起因する症状を減少させるために有効な量」とは、炎症マーカー（例えば、ＥＬＡＭもしくは炎症サイトカイン（例えば、ＩＬ−６））の減少またはＣＲＰの減少によって、そして／あるいは炎症に関連する症状（例えば、炎症に関連する疼痛および／または浮腫など）の減少によって測定される場合に、細胞保護薬剤（例えば、非α−トコフェロールおよび／またはその代謝産物）が、炎症を減少させるために十分な最終濃度で存在することを意味する。この量としては、炎症の症状に対する完全な予防または処置として作用する濃度が挙げられるが、これに限定されない。「有効量」とは、有利な結果または所望の結果を生じるために十分な量である。有効量は、１回以上の投与で投与され得る。本発明の目的で、細胞保護組成物の有効量とは、ｉ）炎症に関連する疾患、障害または状態に対する危険性のある哺乳動物被験体おける損傷、またはｉｉ）炎症に関連し、炎症に起因し、そして／もしくは炎症に起因する損傷を軽減するか、安定化するか、逆転させるか、その進行の速度を低下させるかまたは遅延させるために十分な量である。好ましくは、炎症に起因する症状の軽減は、例えば、サイトカイン（例えば、炎症に関連するインターロイキン１〜１７（ＩＬ−１〜１７））；およびＴＮＦ−αの減少を測定することによるような、ＣＲＰレベルの低下および／または炎症マーカーの減少を測定するアッセイによって、定量され得る。他のアッセイが、本明細書中に開示されている。例えば、本明細書中に開示される実施例１Ａにおいて、γ−トコフェロール、β−トコフェロールおよびδ−トコフェロールは、ＣＲＰレベルの低下に関して有効であることが示された。軽減とは、炎症または炎症状態に関連する炎症マーカーのレベル、あるいは炎症に関連する症状（例えば、炎症に関連する疼痛および／または浮腫）の、少なくとも約３０％、少なくとも約５０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、および少なくとも約９０％の減少である。
【００４４】
「哺乳動物被験体」または「個体」（本明細書中で交換可能に使用される）としては、ヒト、家畜、競技動物、およびペットが挙げられるが、これらに限定されない。
【００４５】
「軽減」とは、状態の予防、減少または緩和、または被験体の状態の改善を意味する；ストレスの軽減とは、ストレスの負の局面の逆作用である。軽減としては、ストレスの完全な回復または完全な予防が挙げられるが、必須ではない。
【００４６】
「処置」または「処置する」とは、哺乳動物における疾患または障害の任意の処置を意味し、以下が挙げられる：疾患または障害に対して予防または保護すること、すなわち、その疾患の臨床的症状が発達しないようにすること；疾患を阻害すること、すなわち、臨床的症状の発達を停止または抑制すること；ならびに／あるいは疾患を免荷すること、すなわち、臨床的症状の回復を引き起こすこと。
【００４７】
本明細書中において使用される場合、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」およびその同一語源の語は、それらの包括的な意味で使用される；すなわち、用語「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」およびその対応する同一語源の語と等価である。
【００４８】
（一般的方法）
化学的操作のための一般的技術は、当該分野において公知であり、そして一般に、例えば、Ｈａｕｇｌａｎｄ（１９９６）Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ Ｐｒｏｂｅｓ ａｎｄ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，第６版，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｉｎｃ．；Ｃａｒｒｕｔｈｅｒｓ（１９８６）Ｓｏｍｅ Ｍｏｄｅｒｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，第３版，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ；およびＷａｒｒｅｎ（１９７８）Ｄｅｓｉｇｎｉｎｇ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｅｓ，Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，Ｌｔｄ．に記載されている。分子生物学の技術は、一般に、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９），Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，第２版；およびＡｕｓｕｂｅｌら編（１９８７）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ Ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙに記載されている。これらの技術を適用する際に有用な試薬は、当該分野において広く知られており、そして多数の販売者から市販されている。
【００４９】
（炎症マーカー）
炎症応答の多数の近位メディエーターが同定されており、そしてこれらとしては、炎症性サイトカイン、インターロイキン−１β（ＩＬ−１β）（米国特許第６，２１０，８７７号）ならびに米国特許第５，９９３，８１１号、同第６，２１０，８７７号および同第６，２０３，９９７号に記載されるような腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）が挙げられる。全身性炎症のマーカーとして使用するための、他の分子が報告されており、これらの分子としては、例えば、ＣＲＰ（Ｒｉｄｋｅｒら．２０００ Ｎ．Ｅ．Ｊ．Ｍ．３４２（１２）：８３６−４３；Ｓｐａｎｈｅｉｍｅｒ、前出）；ｓＩＣＡＭ−１のような特定の細胞接着分子（米国特許第６，０４９，１４７号）；およびＢ６１（米国特許第５，６８８，６５６号）が挙げられる。炎症に関連する他のタンパク質としては、ロイコトリエン、トロンボキサン、およびイソプロスタンが挙げられる。炎症に関連する他のタンパク質またはマーカーとしては、血清アミロイドＡタンパク質、フィブロネクチン（ｆｉｂｒｉｎｅｃｔｉｎ）、線維素原、レプチン（ｌｅｐｔｉｎ）、プロスタグランジンＥ２、血清プロカルシトニン、可溶性ＴＮＦレセプター２、および上昇した白血球計数（顆粒球（多形核白血球）ｍ単球、リンパ球および好酸球の百分率および総数が挙げられる）が挙げられる。
【００５０】
Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）は、全身性炎症の結果として（例えば、組織損傷、炎症または感染の結果として）、およびＩＤＤＭ患者において、マクロ脈管（ｍａｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ）疾患なしで濃度が急激に上昇する、ヒトにおける急性ファージタンパク質である。本明細書中において使用される場合、「上昇したレベルのＣＲＰ」とは、個体のベースラインＣＲＰレベルに対して上昇したＣＰＲレベルをいう。一般的にいえば、ヒトにおけるＣＲＰの正常範囲は、１リットルあたり０．０８〜２ミリグラム（ｍｇ）である。ＣＲＰレベルは、炎症応答の間に１００〜１０００倍の間で上昇し得る。ＣＲＰの上昇した血清中レベルは、炎症刺激の６〜１２時間後に見られ、そして最大レベルには、４８〜７２時間の間で達する。一般的に、ＣＲＰレベルは、炎症の寛解の５５〜１０日後に正常に戻る。血清中のＣＲＰの蓄積は、炎症および組織損傷の経過に密接に平衡するので、ＣＲＰは、炎症を検出するため、および多数の疾患の臨床的経過をモニタリングするための診断ツールとして使用されている。例えば、ＣＲＰレベルは、慢性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、潰瘍性大腸炎、クローン病、急性膵臓炎、心筋梗塞、敗血症、細菌性髄膜炎、および肺炎において、５０ｍｇ／ｌを超えることが見出されている。さらに、ＣＲＰレベルは、心臓血管病および発作の上昇した危険性に相関している（Ｌａｇｒａｎｄ，Ｗ．Ｋ．ら，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ １００：９６−１０２，１９９９）。ＣＲＰレベルはまた、感染、外傷、手術、組織不全のような炎症性疾患の間、およびＩＤＤＭの患者において、マクロ血管疾患なしで上昇する。増加の程度は、全身性炎症の間、約５０％〜１００倍までも変化する（Ｇａｂａｙ，Ｃ．ら，Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４０：４４８−４５４，１９９９）。大部分のＣＲＰは、炎症誘発性サイトカイン（特に、インターロイキン−６およびインターロイキン−１β）に対する応答の際に、肝実質細胞において産生されるが（Ｇａｎｔｅｒ，Ｕ．ら，ＥＭＢＯ Ｊ．８：３７７３−３７７９，１９８９）、マクロファージもまた、ＣＲＰを放出すると報告されている（Ｄｏｎｇ，Ｑら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５６：４８１５０４８２０，１９９６）。
【００５１】
上昇したＣＲＰレベルは、多数の炎症状態（インスリン依存性真性糖尿病（ＩＤＤＭ；Ｉ型；（Ｓｃｈａｌｋｗｉｊｋ，ＣＧ．ら，１９９９，Ｄｉａｂｅｔｏｌｏｇｉａ ４２（３）：３５１−７）非インスリン依存精神性糖尿病（ＮＩＤＤＭ；ＩＩ型）、代謝症候群、心臓血管疾患、心房性細動（Ｃｈｕｎｇ Ｍ．Ｋら，２００１，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ １０４（２４）：２８８６−９１）、発作性心房性細動（Ｄｅｒｎｅｌｌｉｓ，Ｊ．ら，２００１，Ａｃｔａ Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｉｃａ ５６（６）：３７５−８０）、心臓同種移植片血管症（ＣＡＶＤ；心臓移植患者において）Ｐｅｔｈｉｇ，Ｋ．ら，２０００，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ １０２：１１１２３３−６）、乳腺炎（ＷＯ ９５２２７６７）、子かん前症、末梢動脈疾患、炎症性腸障害（例えば、クローン病；Ｐｏｕｌｌｉｓ，Ａ．Ｐ．ら，Ｅｕｒ Ｊ．Ｇａｓｔｒｏ Ｈｅｐａｔ １４（４）：４０９−４１２（２００２）、発作、組織不全、Ｌｕｍｂｏｓｃｉａｔｉｃ症候群（局所神経根摩擦）（Ｌｅ Ｇａｒｓ，Ｌら，２００１，Ｂｏｎｅ，Ｊｏｉｎｔ，Ｓｐｉｎｅ：Ｒｅｖｕｅ ｄｕ Ｒｈｕｍａｔｉｓｍｅ ６７（５）：４５２−５）、後期腎臓疾患（ＥＳＲＤ）を有する***患者、または炎症関連状態（例えば、感染（細菌、ウイルス、および原生動物）、細菌性髄膜炎（Ｓｈｉｍｅｔａｎｉ，Ｎら，２００１，Ｓｃａｎ．Ｊ．Ｃｌｉｎ Ｌａｂ．Ｉｎｖｅｓｔ．６１（７）：５６７−７４））、外傷、手術、敗血症（Ｔｓｃｈａｉｋｏｗｓｋｙ，Ｋ．ら，２００２，Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．３０（５）：１０１５−２３）、生物材料移植物（Ｌｏｂｌｅｒ，Ｍ．ら，Ｊ．Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ６１（１）；１６５−１６７）、喫煙、肥満症、月経前緊張症候群、慢性関節リウマチ、加齢が挙げられるが、これらに限定されない）において報告されている。ホルモン補充療法（エストロゲン＋プロゲスチン；ＨＲＴ）を受けている女性もまた、上昇したＣＲＴを有し、そして心臓疾患事象の危険性が増していることが見出されている（Ｒｉｄｋｅｒ，ＰＭら，１９９９，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ １００：７１３−７１６；Ｈｕｌｌｅｙ，Ｓら，１９９８，ＪＡＭＡ ２８０：６０５−６１３）。
【００５２】
増加したＣＲＰレベルに関連する他の炎症状態としては、急性アレルギー性反応（Ｌｉｎ，Ｒ．Ｙ．ら，２００１，Ａｎｎ Ａｌｌｅｒｇｙ Ａｓｔｈ Ｉｍｍｕｎｏｌ ８７（５）：４１２−１６）、呼吸状態（例えば、喘息（Ｙａｍａｇｕｃｈｉ，Ａ．ら，２０００，Ｊ：Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４０（３）：２８４−９）、ＣＯＰＤ（Ｍａｌｏ，Ｏら，２００２，Ａｒｃｈ Ｂｒｏｎｃｏｎｅｕｍｏｌ ３８（４）：１７２−６）など）、歯周疾患（例えば、歯肉炎（Ｇｌｕｒｉｃｈ，Ｉ．ら，２００２，Ｃｌｉｎ．Ｄｉａｇ．Ｌａｂ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９（２）：４２５−３２；Ｎｏａｃｋ，Ｂ．ら，２００１，Ｊ．Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｏｌｏｇｙ，７２（９）：１２２１−７））が挙げられる。
【００５３】
最近の研究は、冠状動脈疾患を有する患者における死亡率が、高レベルのＣＲＰに相関付けられ得ることを示した（Ｂｉｃｋｅｌ，Ｃ．ら，２００２，Ａｍ．Ｊ．Ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ ８９（８）：９０１−９０８，２００２；Ｊｉａｌａｌ，Ｉ．およびＤｅｖａｒａｊ，Ｓ．Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ Ｐａｔｈ １１６補遺：Ｓ１０８−１５，２００１）。大規模な予測研究において、不安定なアンギナおよび上昇したＣ反応性タンパク質レベルを有する患者は、９０日間の追跡調査の間に、冠状事象の危険性が３倍高かった。（Ｆｅｒｒｅｉｒｏｓら，１９９９，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ９９：２３７−４２）。同様に、上昇したレベルのＩＬ−１およびＩＬ−６は、不安定なアンギナに関連する動脈瘤に関連することが示された（Ｂｉａｓｕｃｃｉ，Ｌ．Ｍ．，１９９９，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ ９９：２０７９−２０８４）。さらに、上昇したＣＲＰレベルは、高血圧症患者における虚血性発作の危険性の倍化（ＤｉＮａｐｏｌｉ，Ｍ．ら，２００１，Ｓｔｒｏｋｅ ３２：１３３−１３８） および加齢性白内障の発症の増加した危険性（Ｓｃｈａｕｍｂｅｒｇ，Ｄ．Ａ．ら，１９９９，Ａｎｎ．Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌ ９：１６６−１７１）に関連した。
【００５４】
同様に、***患者（ＥＳＲＤを有する）において、上昇したＣＲＰおよびＩＬ６のレベルは、増強されたＣＶ罹病率および死亡率に寄与し得る。上昇したＣＲＰレベルはまた、ＩＩ型糖尿病に関連し、そしてまた、これらの状態の死亡率を予測し得る。
【００５５】
サイトカインは、リンパ球および／またはマクロファージによって分泌される、細胞間メディエーターである。サイトカインは、免疫応答（例えば、感染または感染性生物に応答する応答）の発生において、役割を果たす。サイトカイン（例えば、ＩＦＮ−αが挙げられる）およびＴＮＦは、異なる自己免疫状態および疾患の発生に関与する他のサイトカインを誘導する。米国特許第６，３３３，０３２号は、特定の主要なサイトカイン（ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−γおよびＴＮＦ）を中和することによって、これらの主要なサイトカインによって誘導される下流サイトカインの合成の減少、停止または防止を生じることを教示する。さらに、特定の自己免疫状態または疾患（ＩＤＤＭおよびＳＬＥが挙げられる）において、別のサイトカイン（インターロイキン、特に、ＩＬ−６）の誘導もまた、有意である。
【００５６】
ＩＬ−６は、いくつかの細胞（Ｔ細胞、Ｂ細胞など）によって作製され（Ｈｉｒａｎｏら，Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．６２：Ｓ６０（１９９２））、そしてＩＤＤＭにおいて、インスリンを誘導する。ＩＦＮ−γおよびＴＮＦに応答して、膵臓のＢ細胞は、多量のＩＬ−６を産生する。これはまた、ＳＬＥの病因における重要な病理学的因子であり、ＳＬＥにおいて、高いレベルで存在することが見出されている。ＩＬ−６は、Ｂ細胞の分化およびＴ細胞の機能亢進を刺激する（Ｓｎｉｃｋら，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．８：２５３（１９９０））。ＩＬ−６の増加は、ＴＮＦ−αの増加に平行する（Ｍａｊｅｒら，Ｌｕｐｕｓ ２：３５９−３６５（１９９３））。
【００５７】
いくつかの例において、本発明は、非α−トコフェロール富化されたトコフェロール組成物、および非α−トコフェロール代謝産物富化組成物を提供する。これらの組成物は特に、炎症および／または炎症状態（心房性細動、不安定狭心症、冠状動脈疾患、末梢動脈疾患、心臓同種移植片血管症（ＣＡＶＤ）が挙げられる心臓血管疾患または障害；乳腺炎；子かん前症（ｐｒｅｃｌａｍｐｓｉａ）；炎症性腸状態；発作；組織不全；腰部坐骨（ｌｕｍｂｏｓｃｉａｔｉｃ）；エストロゲン／プロゲスチンホルモン補充療法（ＨＲＴ）；感染（細菌、ウイルスおよび原生動物）；細菌性髄膜炎；外傷；手術；生物材料移植物；喫煙；肥満症；神経変性疾患（例えば、アルツハイマー）；感染症（例えば、心筋炎、心筋症、急性心内膜炎、心膜炎）；アテローム性動脈硬化症；全身性炎症応答症候群（ＳＩＲＳ）／敗血症；成人呼吸促進症候群（ＡＲＤＳ）；喘息；慢性関節リウマチ、変形性関節症、全身性エリテマトーデス；気道過剰応答性（ＡＨＲ）；気管支過剰反応性；慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）；うっ血性心不全 （ＣＨＦ）；真性糖尿病Ｉ型およびＩＩ型の炎症性合併症；代謝症候群；後期腎疾患（ＥＳＲＤ）、月経前症候群（ＰＭＳ）または筋肉の疲労もしくは炎症；器官機能不全症候群（ＭＯＤＳ）；気道の過剰応答性（ＡＨＲ）；気管支の過剰反応性；加齢；急性アレルギー性応答；歯周疾患（例えば、歯肉炎）、および皮膚状態（炎症性皮膚状態が挙げられる））に関連する炎症マーカー（特に、ＣＲＰ）を減少させる際に使用するためのものである。
【００５８】
本発明のいくつかの実施例において、γ−トコフェロール富化トコフェロール組成物および／またはγ−トコフェロール代謝産物富化組成物が、炎症の症状を処置および／または軽減するための方法（例えば、呼吸性炎症状態（例えば、ＳＩＲＳ、ＡＲＤＳ、ＡＨＲ、および喘息）が挙げられる炎症；敗血症；糖尿病；筋肉疲労；全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）；ＥＳＲＤにおいてを含む腎臓炎；および歯周疾患に関連するＣＲＰレベルを低下させるための方法）において使用される。
【００５９】
本発明のいくつかの実施例において、β−トコフェロール富化トコフェロール組成物および／またはβ−トコフェロール代謝産物富化組成物が、炎症の症状を処置および／または軽減するための方法（例えば、呼吸性炎症状態（例えば、ＳＩＲＳ、ＡＲＤＳ、ＡＨＲ、および喘息）が挙げられる炎症；敗血症；糖尿病；筋肉疲労；全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）；ＥＳＲＤにおいてを含む腎臓炎；歯周疾患および炎症性皮膚状態に関連するＣＲＰレベルを低下させるための方法）において使用される。
【００６０】
本発明のいくつかの実施例において、δ−トコフェロール富化トコフェロール組成物および／またはδ−トコフェロール代謝産物富化組成物が、炎症の症状を処置および／または軽減するための方法（例えば、呼吸性炎症状態（例えば、ＳＩＲＳ、ＡＲＤＳ、ＡＨＲ、および喘息）が挙げられる炎症；敗血症；糖尿病；筋肉疲労；全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）；ＥＳＲＤにおいてを含む腎臓炎；歯周疾患；および非乾癬性炎症性皮膚状態に関連するＣＲＰレベルを低下させるための方法）において使用される。
【００６１】
（炎症状態）
心筋炎および心筋症は、高血圧症心臓病、先天性心臓病、虚血性心臓病、または弁の心臓病から生じない、心筋層における主要な疾患の群である。心筋炎は、一般に、炎症によって特徴付けられる、急性の心筋層の疾患を規定し、そして心筋症は、炎症特徴が顕著ではない、より慢性的な心筋層の疾患を規定する。心筋炎および心筋症は、熱、胸部の疼痛、白血球増加症、増加した赤血球沈降速度、左心室の不全、不整脈、心臓ブロック、ＥＣＧ変化、および最終的に心不全を導き得る。米国特許第５，４９６，８３２号を参照のこと。
【００６２】
心筋炎および心筋症は、心筋層に対する免疫応答から生じ、リンパ球浸潤および炎症を含む。免疫応答は、以下のような感染症に対して二次的に起こり得る：シャーガス病（アメリカトリパノソーマ症）、トキソプラスマ症、旋毛虫症、リケッチア（ｒｉｃｋｓｅｔｔａｌ）感染（発疹チフス、ロッキー山紅斑熱）、心筋感染、および後生動物寄生生物；または以下のような自己免疫疾患に対して二次的に起こり得る：リウマチ熱、慢性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、進行性全身性硬化症、および結節性多発性動脈炎。心筋炎を導く免疫応答は、フィードラー心筋炎に見られるように、本質的に特発性であり得る。さらに、心筋炎は、例えばペニシリンまたはスルホンアミドに対する薬物反応によって引き起こされ得る。米国特許第５，４９６，８３２号を参照のこと。
【００６３】
急性心膜症は、臓側心膜または壁側心膜の炎症性疾患であると定義され、そして細菌感染、ウイルス（特に、エコーウイルス、およびコクサッキーＢ群）感染、又は真菌感染に対して二次的に起こり得、そして全身疾患（例えば、慢性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、強皮症、および***）に付随し得る。心膜症はまた、免疫学的高血圧症によって引き起こされると示唆されている、心臓の外傷または心臓手術の後に起こり得る。急性心膜症は、慢性的な梗塞性心外膜炎、心膜タンポナーデ、滲出、および出血を導き得、これらの全ては、心不全を生じ得る。米国特許第５，４９６，８３２号を参照のこと。
【００６４】
炎症（特に、マクロファージ媒介炎症および慢性炎症）は、アテローム性動脈硬化症の中心であると実証され（米国特許第５，８７７，２０３号；同第６，２１０，８７７号）、そして心筋層感染の高められた危険性の予後マーカーとして働き得る（Ｂｏｉｓｖｅｒｔら．１９９８ Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１０１（２）：３５３−３６３）。アテローム性動脈硬化症（動脈硬化症としてもまた公知）とは、動脈の進行性の管腔の狭小化および硬化を記載するために使用される用語である。この疾患プロセスは、身体内の任意の動脈において起こり、種々の状態（発作（脳に導く動脈の硬化または狭小化）、壊疽（末梢動脈の硬化または狭小化）、およびＣＡＤ（心筋層に供給する動脈の硬化または狭小化）が挙げられる）を誘導し得る。ＣＡＤは、次に、心筋虚血または心筋梗塞を導き得る。アテローム性動脈硬化症（および従って炎症）に関連する心臓血管障害としては、例えば、心筋梗塞、発作、狭心症および末梢動脈疾患が挙げられる。マクロ血管合併症（アテローム性動脈硬化症および関連する状態が挙げられる）は、しばしば、糖尿病に関連する合併症である。
【００６５】
動脈の管腔の狭小化は、じゅく状斑の発達の結果である。この斑は、炎症性細胞および免疫細胞、線維組織ならびに脂肪材料（例えば、低密度脂質（ＬＤＬ）、その改変物およびα−リポタンパク質）の混合物からなる。アテローム性動脈硬化症の最初の原因は、完全には理解されていないが、その病因は、以下の段階を含み得ることが提唱されている：内皮細胞の機能不全および／または損傷；単球の漸増およびマクロファージの形成；脂質の沈着および改変；血管平滑筋細胞増殖；ならびに細胞外マトリックスの合成。
【００６６】
外傷または感染は、急激な生命の切迫した状態を生じ得、これには、全身性炎症応答症候群（ＳＩＲＳ）、または成人呼吸促進症候群（ＡＲＤＳ）が挙げられる。ＳＩＲＳが感染によって引き起こされる場合、これは敗血症と称され、これは次に、次第に重篤になる段階を有する（重篤な敗血症および敗血症性ショック）。ＳＩＲＳ／敗血症はまた、多数の原因（細菌、ウイルス、寄生生物、リケッチア、または真菌の感染が挙げられる）から生じ得、そして／またはＳＩＲＳは、非感染性の原因（例えば、火傷、膵臓炎、多重外傷（ｍｕｌｔｉｔｒａｕｍａ）、重篤な手術外傷、移植拒絶、顕著な自己免疫拒絶、虚血性再灌流、輸血反応または熱射痛）から生じ得る。ＳＩＲＳを導く炎症誘発性サイトカインの顕著な増強もまた、複数器官の機能不全症候群（ＭＯＤＳ）（例えば、様々な程度の熱、低酸素血症、頻呼吸、心頻拍、内皮炎症、心筋不全症、過少潅流、変化した精神状態、血管虚脱）を導き得、これらは、ＡＲＤＳ、凝固障害、心不全、腎不全、ショックおよび／または昏睡を導き得る。
【００６７】
ＳＩＲＳ／敗血症の重篤度に依存して、死亡率は、平均２０〜７０％である（米国特許第５，９９２，８１１号）。さらに、米国において、ほぼ５０万の症例が毎年起こっており、ＳＩＲＳ／敗血症は、１３番目に主要な死因であり、そして集中治療室内での死亡率の主要な近位の原因であると推定されている（疾病管理センター，ＭＭＷＲ，１９９０Ｌ ３９：３１；Ｌｏｗｒｙら，１９９４ Ｃｒｉｔ，Ｃａｒｅ Ｍｅｄ．２２：Ｓ１−２）。
【００６８】
慢性喘息は、圧倒的に、気管支痙攣が付随する炎症性疾患であると考えられ得る。刺激に応答しての気管支の反応性および狭小化の程度は、正常な個体においてより喘息において大きい。持続性の炎症は、気管支過剰反応性または気道過剰応答性（ＡＨＲ）の原因である。粘膜水腫、粘膜の充填、および分泌過多もまた存在し得、そして肺実質は正常である。気道の狭小化は、一時的にかまたは処置の間に逆転し得る。１型（即時）の免疫応答は、小児および多くの成人における喘息の発生において、重要な役割を果たし得る；しかし、疾患の開始が成人において起こる場合、アレルギー性因子は、同定が困難であり得る。冷たい乾燥空気、運動および他の苛立つ要因への曝露もまた、喘息を引き起こし得る。
【００６９】
気管支過剰反応性（または気道過剰反応性、ＡＨＲ）は、喘息の証明であり、そして基礎にある気道感染の密接に関連する。喘息および気道感染の悪化は、気管支過剰反応性の増加に関連しており、これは、抗原性刺激と非抗原性刺激との両方によって、誘導され得る。β_２−アドレナリン作用性アゴニストは、気管支痙攣の処置のための強力な薬剤であるが、気道炎症または気管支過剰反応性には効果を有さない。実際に、β_２−アドレナリン作用性薬剤の単独での慢性的な使用は、β_２レセプターのダウンレギュレーションを引き起こすことによって、気管支過剰反応性を悪化させ得る。現在、コルチコステロイドが、気管支過剰反応性を減少させる、利用可能な最も効果的な薬剤の１つである。吸入されたコルチコステロイドは、喘息を患う成人患者において比較的安全であるが、これらの薬剤は、小児には恐ろしい毒性（副腎停止ならびに減少した骨密度および成長が挙げられる）を有する。
【００７０】
喘息は、かつて、主として罹病率に関連する疾患であると考えられたが、現在は、喘息は、一般的に考えられるよりしばしば、死亡率に関連することが認識されている。米国において、喘息についての年間の死亡率は、５〜３４歳のヒトの間で、１００，０００あたり０．４である。死は、不十分に処置された気流の閉塞によって引き起こされる窒息の結果であるようであり、そして一般に、病院外で起こる（Ｌｅａｔｈｅｒｍａｎら，１９９２ Ｃｈ．１４（ＩＩ）Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｒｕｂｅｎｓｔｅｉｎ，Ｅ．およびＦｅｄｅｒｍａｎ，Ｄ．Ｄ．編．Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ａｍｅｒｉｃａｎ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）。
【００７１】
炎症はまた、肺または喘息以外の呼吸状態（成人呼吸促進症候群（ＡＲＤＳ）、複数器官の機能不全（ＭＯＤ）を導き得る急性の生命の逼迫した疾患（米国特許第５，７８０，２３７号）、およびしばしば嚢胞性線維症の合併症である慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）（Ｋｅｎｎｅｄｙ ２００１ Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒａｐｙ ２１５：５９３−６０３）が挙げられる）に関連する。ＡＲＤＳは、拘束的な拡散肺疾患の古典的な例であり、一方でＣＯＰＤおよび喘息は、閉塞性（すなわち気道）疾患の例である。閉塞性疾患は、部分的閉塞または完全な閉塞に起因する、気流に対する抵抗の増加によって特徴付けられ、一方で、拘束的弛緩は、肺の実質の減少した拡張および減少した肺の総容量によって特徴付けられる。ＣＯＰＤ（ＣＯＡＤ、慢性閉塞性気道疾患としてもまた公知）とは、肺内での気流の慢性または再発性の閉塞が付随する、気腫、慢性気管支炎、気管支喘息および気管支拡張症の状態の群をいう（Ｃｏｔｒａｎら，「Ｒｏｂｂｉｎｓ Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃ Ｂａｓｉｓ ｏｆ Ｄｉｓｅａｓｅ」第４版．１９８９，Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ Ｃｏ．，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，ＰＡ）。
【００７２】
ＡＲＤＳ（急性呼吸切迫症候群として公知）は、成人または小児の呼吸不全として定義され、（セプシス、胸部外傷、大量輸血、胃内容物吸引、またはびまん性肺炎の場合のような）肺の内皮への広範性損傷から生じ、そして肺水腫、呼吸窮迫および低酸素血症によって特徴付けられる（Ｍｅｒｒｉａｍ−Ｗｅｂｓｔｅｒ’ｓ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｄｅｓｋ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ １９９６ Ｍｅｒｒｉａｍ−Ｗｅｂｓｔｅｒ、Ｉｎｃ．Ｓｐｒｉｎｇｆｉｅｌｄ、ＭＡ）。ＡＲＤＳは、外傷または感染のいずれかに起因し、一般的には、臨床的な設定において生じる。ＣＦ肺疾患は、気道閉塞症、慢性感染および過剰な局所的炎症のサイクルを含む多因子性として特徴付けられ、気管支拡張症の発症を導く（Ｋｅｎｎｅｄｙ（前出））。この気管支拡張症は、慢性炎症または気管支もしくは気管支梢の変性状態であり得る。制御されない慢性炎症は、気道壁を直接損傷し、気管支拡張症および肺機能の低下を導く。
【００７３】
真性糖尿病は、炭水化物代謝、脂肪代謝およびタンパク質代謝に影響する慢性障害である。糖尿病の長期間の合併症は、多くの脈管状態、大血管（ｍａｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ）、微小血管、および神経性の症状を含む。多くのタイプの糖尿病が存在し、これらの糖尿病としては、インスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ、インスリン感応性糖尿病（ｉｎｓｕｌｉｎ−ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｄｉａｂｅｔｅｓ）、Ｉ型糖尿病または若年性糖尿病としても公知）、インスリン非依存性糖尿病（ＮＩＤＤＭ、インスリン不感応性糖尿病（ｉｎｓｕｌｉｎ−ｉｎｓｅｎｓｉｔｉｖｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｄｉａｂｅｔｅｓ）、ＩＩ型糖尿病、成人発症糖尿病または遅発性糖尿病（ｌａｔｅ−ｏｎｓｅｔ ｄｉａｂｅｔｅｓ）としても公知）、二次糖尿病（ｓｅｃｏｎｄａｒｙ ｄｉａｂｅｔｅｓ）および妊娠糖尿病が挙げられる。ＩＤＤＭは、膵臓の島の萎縮と関連する絶対的なインスリン欠乏によって特徴付けられ、一方、ＮＩＤＤＭ患者は、ほぼ正常な島質量を有しているが、インスリン耐性に起因して増加した要求を満たすのに十分なインスリンを分泌しない。二次糖尿病は、膵臓疾患（例えば、慢性膵臓炎）、内分泌疾患（例えば、先端巨大症またはクッシング病）、および特定の薬物または毒（例えば、サイアザイド、糖質コルチコイド）を含む、他の状態と関連する。多嚢胞性卵巣症候群もまた、上昇したインスリンレベル、インスリン耐性または糖尿病と関連する。
【００７４】
妊娠糖尿病は、通常、２４〜３０週の妊娠での妊娠の発症に伴うグルコース不耐性を含む（Ｎａｔｈａｎ １９９３ Ｃｈ．９（ＩＶ）Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｒｕｂｅｎｓｔｅｉｎ ＆ Ｆｅｄｅｒｍａｎ（編）、Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ａｍｅｒｉｃａｎ、Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）。特定の個体はまた、障害性のグルコース耐性（これは、無症候性である）を患い得るが、この症状を有するこれらの個体の３分の１は、最終的にはＮＩＤＤＭを発症する。
【００７５】
真性糖尿病の病因および最終的な要因は変動するが、関連する代謝機能不全と関係のある合併症および真性糖尿病から生じる合併症は、全ての型に対して共通である。共通の合併症としては、微小血管状態、神経性状態および大血管状態が挙げられる。網膜症および腎症のような合併症は、糖尿病に特有である。糖尿病に関連する腎症は、末期前段階（ｐｒｅ−ｅｎｄ ｓｔａｇｅ）の腎臓疾患（ＥＳＲＤ）およびＥＳＲＤを導き得る。
【００７６】
糖尿病は、マクロファージを活性化させるタンパク質のグリコシル化によってかまたは酸化ストレスの増加によって引き起こされ得る、慢性の低度の炎症状態を導き得ることが、報告されている（Ｓｐａｎｈｅｉｍｅｒ、２００１、Ｐｏｓｔｇｒａｄ Ｍｅｄ．１０９（４）２６）。全身性炎症についてのマーカーは、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）である。米国特許第６，０４０，１４７号を参照のこと。ヒトにおいて、ＣＲＰレベルは、感染、外傷、手術、組織梗塞のような炎症性疾患の間および大血管疾患を有さないＩＤＤＭ患者において上昇される。この増加の大きさは、全身性炎症の間に、約５０％から１００倍ほどまで変化する（Ｇａｂａｙ，Ｃ．ら、Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４０：４４８−４５４，１９９９）。最近の証拠は、ＣＲＰはまた、炎症が重要な役割を果たす循環器病および発作についての危険因子であることを示している（Ｌａｇｒａｎｄ，Ｗ．Ｋ．ら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ １００：９６−１０２，１９９９）。ほとんどのＣＲＰ産生は、前炎症性サイトカイン、特にインターロイキン−６およびインターロイキン−１βに応答して、肝細胞から生じる（Ｇａｎｔｅｒ，Ｕ．ら、ＥＭＢＯ Ｊ．８：３７７３−３７７９，１９８９）が、マクロファージもまた、ＣＲＰを放出することが報告されている（Ｄｏｎｇ，Ｑら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５６：４８１５０４８２０，１９９６）。
【００７７】
これらの知見は、研究者らに、糖尿病において、炎症がアテローム硬化症に先行し得ること、およびＣＲＰは、この状態をトラッキングするためのマーカーとして働き得ることを示唆させる（Ｓｐａｎｈｅｉｍｅｒ（前述）；Ｒｉｄｋｅｒら、２００１ Ｎ．Ｅ．Ｊ．Ｍ．３４４（２６）：１９５９−１９６５）。
【００７８】
月経前症候群（ＰＭＳ、月経前緊張症（ＰＭＴ）とも呼ばれる）という用語は、女性の月経周期に関連し、周期的に起こる、広範な種々の身体的症状および精神的症状を包含する。症状は、通常、女性の周期の黄体期後期（すなわち、***後）の間にピークをなし、そして月経血の減少の開始とともに軽減する。ＰＭＳと関連する症状の重篤度は、中程度から耐えられないほどまでの範囲であり、月経のある女性の９０％までが、ある程度のＰＭＳにかかり、２０％〜４０％が、身体的不能または精神的不能を導くのに十分重篤な症状を患うことが推定されている（米国特許第６，１７４，５４２号）。症状の重篤度は、特定の女性について、月ごとまたは年ごとで変化し得る。米国における、ＰＭＳに起因する労働損失費用は、毎年１００億を超えると推定されている（米国特許第４，９４５，１０３号）。一酸化窒素産生は、外因性炎症刺激または内因性炎症刺激によって誘導され（米国特許第５，６２９，３２２号）、そして多くの状態と関連する病理に関与している。ＰＭＳ症状のための現行の処置としては、抗炎症薬、特定の非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）（例えば、イブプロフェン、ナプロキセン）の投与、抗ヒスタミン薬、利尿薬、精神活性薬物（例えば、炭酸リチウムおよびベンゾジアゼピン）、ならびにＳＳＲＩ（例えば、Ｐｒｏｚａｃ（登録商標））の投与が挙げられる。
【００７９】
さらに、炎症性サイトカインの役割（およびある程度のＣＲＰに対する役割）は、慢性関節リウマチおよび変形性関節症のような関節破壊の進行であると十分認識される。炎症性サイトカイン（ＩＬ−１、ＩＬ−６およびＴＮＦ−α）はまた、骨粗鬆症のような障害における骨吸収を増加させることが知られている。
【００８０】
（組成物）
本明細書中で、非−α−トコフェロール富化トコフェロール組成物が提供される。非−α−トコフェロール富化トコフェロール組成物の例としては、以下が挙げられる：γ−トコフェロールを含有するγ−トコフェロール富化トコフェロール組成物であって、この組成物は、γ−トコフェロール代謝産物および／または他のトコフェロール（例えば、α−トコフェロール、δ−トコフェロール、および／またはβ−トコフェロール）を含み得、炎症性状態と関連する炎症性マーカー（特に、ＣＲＰ）のレベルを減少させるのに使用するため、および炎症と関連する損傷（ｄａｍａｇｅ）、損傷（ｉｎｊｕｒｙ）および／または症状に対する細胞保護剤として使用するための、組成物；β−トコフェロールを含有するβトコフェロール富化トコフェロール組成物であって、β−トコフェロール代謝産物、および／または他のトコフェロール（例えば、α−トコフェロール、δ−トコフェロール、および／またはγ−トコフェロール）をさらに含み得、炎症性状態と関連する炎症性マーカー（特に、ＣＲＰ）のレベルを減少させるのに使用するため、および炎症と関連する損傷（ｄａｍａｇｅ）、損傷（ｉｎｊｕｒｙ）および／または症状に対する細胞保護剤として使用するための、組成物；ならびにδ−トコフェロールを含有するδ−トコフェロール富化トコフェロール組成物であって、δ−トコフェロール代謝産物、および／または他のトコフェロール、例えば、α−トコフェロール、γ−トコフェロール、および／またはβ−トコフェロール）をさらに含み得、炎症性状態と関連する炎症性マーカー（特に、ＣＲＰ）のレベルを減少させるのに使用するため、および炎症と関連する損傷（ｄａｍａｇｅ）、損傷（ｉｎｊｕｒｙ）および／または症状に対する細胞保護剤として使用するための、組成物。
【００８１】
本発明は、哺乳動物被験体において、非心血管炎症と関連する症状を処置および／または改善する方法を提供し、この方法は、薬学的に有効な量のγ−トコフェロール富化トコフェロール組成物を被験体に投与する工程およびこの投与によって、上記の炎症と関連する症状を軽減する工程を包含する。
【００８２】
本発明はまた、哺乳動物被験体において、非心血管炎症と関連する症状を処置および／または改善する方法を提供し、この方法は、薬学的に有効な量のγ−トコフェロール代謝産物富化組成物を被験体に投与する工程およびこの投与によって、上記の炎症と関連する症状を軽減する工程を包含する。好ましい実施形態において、このγ−トコフェロール代謝産物は、２，７，８−トリメチル−２−（２’−カルボキシエチル）−６−ヒドロキシクロマン（γ−ＣＥＨＣ）である。
【００８３】
本発明は、哺乳動物被験体において、炎症と関連する症状を処置および／または改善する方法を提供し、この方法は、薬学的に有効な量のβ−トコフェロール富化トコフェロール組成物を被験体に投与する工程およびこの投与によって、上記の炎症と関連する症状を軽減する工程を包含する。
【００８４】
本発明は、哺乳動物被験体において、炎症と関連する症状を処置および／または改善する方法を提供し、この方法は、薬学的に有効な量のβ−トコフェロール代謝産物富化組成物を被験体に投与する工程およびこの投与によって、上記の炎症と関連する症状を軽減する工程を包含する。好ましい実施形態において、このβ−トコフェロール代謝産物は、２，５，８−トリメチル−２−（２−カルボキシエチル）−６−ヒドロキシクロマン（β−ＣＥＨＣ）である。
【００８５】
本発明は、哺乳動物被験体において、炎症と関連する症状を処置および／または改善する方法を提供し、この方法は、薬学的に有効な量のδ−トコフェロール富化トコフェロール組成物を被験体に投与する工程およびこの投与によって、上記の炎症と関連する症状を軽減する工程を包含し、ここで、この投与は、具体的には、米国特許第４，３２５，９６５号に記載されるような乾癬の処置のためのδ−トコフェロール富化トコフェロール組成物の局所的投与を除くが、乾癬の処置のためのδ−トコフェロール富化トコフェロール組成物の全身投与は包含し、そして非乾癬皮膚の状態、疾患または障害のためのδ−トコフェロール富化トコフェロール組成物の局所的投与も包含する。
【００８６】
本発明はまた、哺乳動物被験体において、炎症と関連する症状を処置および／または改善する方法を提供し、この方法は、薬学的に有効な量のδ−トコフェロール代謝産物富化組成物を被験体に投与する工程およびこの投与によって、上記の炎症と関連する症状を軽減する工程を包含する。好ましい実施形態において、このδ−トコフェロール代謝産物は、２，８−ジメチル−２−（２−カルボキシエチル）−６−ヒドロキシクロマン（δ−ＣＥＨＣ）である。
【００８７】
本発明はまた、炎症と関連する炎症性マーカーおよびタンパク質（例えば、ＣＲＰ）；炎症と関連するサイトカイン（ＩＬ−１〜ＩＬ−１７を含む）；ＴＮＦ−α；およびＢ６１のレベルを減少させるための方法；ならびに炎症と関連する疼痛を軽減させる方法および／または炎症と関連する水腫と減少させる方法を提供する。
【００８８】
いくつかの実施形態において、本発明の非−α−トコフェロール富化トコフェロール組成物は、少なくとも５０％の非−α−トコフェロール、少なくとも５５％の非−α−トコフェロール、少なくとも６０％の非−α−トコフェロール、少なくとも６５％の非−α−トコフェロール、少なくとも７０％の非−α−トコフェロール、少なくとも７５％の非−α−トコフェロール、少なくとも８０％の非−α−トコフェロール、少なくとも８５％の非−α−トコフェロール、少なくとも９０％の非−α−トコフェロールおよび少なくとも９５％の非−α−トコフェロールを含む。非−α−トコフェロール富化トコフェロール組成物は、５０％未満のα−トコフェロール、４５％未満のα−トコフェロール、４０％未満のα−トコフェロール、３５％未満のα−トコフェロール、３０％未満のαトコフェロール、２５％未満のα−トコフェロール、２０％未満のα−トコフェロール、１５％未満のα−トコフェロール、１０％未満のα−トコフェロールまたは５％未満のα−トコフェロールを含む。いくつかの実施形態において、非−α−トコフェロール富化トコフェロール組成物は、本質的に、活性成分としての非−α−トコフェロールから構成される。本明細書中で使用される場合「活性成分」は、炎症のマーカー（例えば、ＣＲＰ）のレベルを減少させ得、そして／または哺乳動物被験体において、炎症の症状を処置もしくは回復させ得る成分である。
【００８９】
本発明は、非−α−トコフェロール代謝産物富化組成物およびそのような組成物を使用するための方法を提供する。いくつかの実施形態において、本発明の非−α−トコフェロール代謝産物富化組成物は、少なくとも５０％の非−α−トコフェロール代謝産物、少なくとも５５％の非−α−トコフェロール代謝産物、少なくとも６０％の非−α−トコフェロール代謝産物、少なくとも６５％の非−α−トコフェロール代謝産物、少なくとも７０％の非−α−トコフェロール代謝産物、少なくとも７５％の非−αトコフェロール代謝産物、少なくとも８０％の非−α−トコフェロール代謝産物、少なくとも８５％の非−α−トコフェロール代謝産物、少なくとも９０％の非−α−トコフェロール代謝産物および少なくとも９５％の非−α−トコフェロール代謝産物を含む。非−α−トコフェロール代謝産物富化組成物は、５０％未満のα−トコフェロール、４５％未満のα−トコフェロール、４０％未満のα−トコフェロール、３５％未満のα−トコフェロール、３０％未満のαトコフェロール、２５％未満のα−トコフェロール、２０％未満のα−トコフェロール、１５％未満のα−トコフェロール、１０％未満のα−トコフェロールまたは５％未満のα−トコフェロールを含む。いくつかの実施形態において、非−α−トコフェロール代謝産物富化組成物は、本質的に、活性成分としての非−α−トコフェロール代謝産物から構成される。
【００９０】
いくつかの実施形態において、非−α−トコフェロール富化トコフェロール組成物または非−α−トコフェロール代謝産物組成物は、炎症を、少なくとも約３０％、少なくとも約４０％、少なくとも約５０％、少なくとも約６０％、少なくとも約７０％、少なくとも約８０％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９５％減少し得、これは、炎症と関連する炎症マーカー（例えば、ＣＲＰ）および炎症に関連するサイトカインのレベルの減少によって測定されるか；あるいは、炎症と関連する症状（例えば、炎症と関連する疼痛および／または水腫）の軽減によって測定されるか；あるいは、本明細書中に開示されるアッセイおよび実験モデルにおいて測定される。
【００９１】
さらなる実施形態において、γ−トコフェロール富化トコフェロール組成物は、炎症と関連する炎症性マーカー（例えば、ＣＲＰ）および／または炎症と関連するサイトカインのレベルの減少によって測定されるような、炎症を減少させるのに有効な量のγ−トコフェロールを含み、そしてγ−トコフェロール代謝産物をさらに含み得、そしてα−トコフェロール、δ−トコフェロール、および／もしくはβ−トコフェロール、または他の成分をさらに含み得る。さらなる実施形態において、γ−トコフェロール代謝産物富化組成物は、炎症と関連する炎症性マーカー（例えば、ＣＲＰ）および／または炎症と関連するサイトカインのレベルの減少によって測定されるような、炎症を減少させるのに有効な量のγ−トコフェロール代謝産物を含み、そしてγ−トコフェロールをさらに含み得、そしてα−トコフェロール、δ−トコフェロールおよび／もしくはβ−トコフェロール、または他の成分をさらに含み得る。
【００９２】
さらなる実施形態において、β−トコフェロール富化トコフェロール組成物は、炎症と関連する炎症性マーカー（例えば、ＣＲＰ）および／または炎症と関連するサイトカインのレベルの減少によって測定されるような、炎症を減少させるのに有効な量のβ−トコフェロールを含み、そしてβ−トコフェロール代謝産物をさらに含み得、そしてα−トコフェロール、δ−トコフェロール および／もしくはγ−トコフェロール、または他の成分をさらに含み得る。さらなる実施形態において、β−トコフェロール代謝産物富化組成物は炎症と関連する炎症性マーカー（例えば、ＣＲＰ）および／または炎症と関連するサイトカインのレベルの減少によって測定されるような、炎症を減少させるのに有効な量のβ−トコフェロール代謝産物を含み、そしてβ−トコフェロールをさらに含み得、そしてα−トコフェロール、δ−トコフェロールおよび／もしくはγ−トコフェロール、または他の成分をさらに含み得る。
【００９３】
さらなる実施形態において、δ−トコフェロール富化トコフェロール組成物は、炎症と関連する炎症性マーカー（例えば、ＣＲＰ）および／または炎症と関連するサイトカインのレベルの減少によって測定されるような、炎症を減少させるのに有効な量のδ−トコフェロールを含み、そしてδ−トコフェロール代謝産物をさらに含み得、そしてα−トコフェロール、β−トコフェロールおよび／もしくはγ−トコフェロール、または他の成分をさらに含み得る。さらなる実施形態において、δ−トコフェロール代謝産物富化組成物は、炎症と関連する炎症性マーカー（例えば、ＣＲＰ）および／または炎症と関連するサイトカインのレベルの減少によって測定されるような、炎症を減少させるのに有効な量のδトコフェロール代謝産物を含み、そしてδ−トコフェロールをさらに含み得、そしてα−トコフェロール、β−トコフェロールおよび／もしくはγ−トコフェロール、または他の成分をさらに含み得る。
【００９４】
非−α−トコフェロール富化トコフェロール組成物および非−α−トコフェロール代謝産物富化組成物を測定するためのアッセイが、本明細書中で提供され、そしてこれらは、当業者に公知である。
【００９５】
本明細書中で開示されるアッセイのようなＣＲＰアッセイにおいて、γ−トコフェロール、β−トコフェロール、およびδ−トコフェロールは、ＩＬ−１Ｂ、ＩＬ−６およびデキサメタゾンで刺激されたヒトＨｅｐ３Ｂ細胞中のＣＲＰ産生の減少において効果的あった。
【００９６】
トコフェロールは、一般的には、６−クロマノール環構造およびその２位に側鎖を含む、化学物質である。プロトタイプのトコフェロールとしてはは、α−トコフェロール、β−トコフェロール、δ−トコフェロールおよびγ−トコフェロールが挙げられる。非−α−トコフェロールとしては、γ−トコフェロール、β−トコフェロール、およびδ−トコフェロールが挙げられる。このトコフェロールは、以下の一般式を有する：
【００９７】
【表１】

γ−トコフェロール、β−トコフェロール、およびδ−トコフェロールは、Ｂｒｉｇｅｌｉｕｓ−Ｆｌｏｈｅら、１９９９、Ｔｈｅ ＦＡＳＥＢ Ｊｏｕｒｎａｌ、ｖｏｌ．１３：１１４５に示されるとおりの構造を有する。
【００９８】
本発明の好ましい実施形態において、非−α−トコフェロール富化トコフェロール組成物は、例えば、以下を含む：
非−α−トコフェロール富化組成物（９０％より多い非−α−トコフェロールまたは９５％より多い非−α−トコフェロールを含む）；
非−α−トコフェロール代謝産物富化組成物（９０％より多い非−α−トコフェロール代謝産物または９５％より多い非−α−トコフェロール代謝産物を含む）；および
非−α−トコフェロール富化組成物（非−α−トコフェロール代謝産物を含む）。
【００９９】
本明細書中に記載される実施例において、ＥＳＲＤを有する個体に投与される場合、少なくとも６０％のγ−トコフェロールおよび少なくとも２８％のδ−トコフェロールを含む、非−α−トコフェロール富化トコフェロール組成物は、その個体の血清サンプル中のＣＲＰレベルおよびＩＬ−６レベルを減少させ得た。
【０１００】
非−α−トコフェロール富化トコフェロール組成物または非−αトコフェロール代謝産物富化組成物の活性は、（例えば、炎症と関連する炎症性マーカーのレベルを測定するアッセイにおいて）実験的に試験され得る。このようなアッセイは、実施例に詳述され、そして当業者に公知である。
【０１０１】
（炎症に対する特異的マーカーおよびアッセイ）
炎症性応答の多くの近位メディエータ−が同定されており、これらのメディエータ−としては、以下が挙げられる：炎症性サイトカイン、インターロイキン−１β（ＩＬ−１β）（米国特許第６，２１０，８７７号）および腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）（米国特許第５，９９３，８１１号、同第６，２１０，８７７号および同第６，２０３，９９７号）。全身性炎症のマーカーとして使用するために報告されている他の分子としては、例えば、以下が挙げられる：ＣＲＰ（Ｒｉｄｋｅｒら、２０００ Ｎ．Ｅ．Ｊ．Ｍ．３４２（１２）：８３６−４３；Ｓｐａｎｈｅｉｍｅｒ（前述））；ｓＩＣＡＭ−１のような特定の細胞接着分子（米国特許第６，０４９，１４７号）；およびＢ６１（米国特許第５，６８８，６５６号）。炎症と関連する他のタンパク質としては、ロイコトリエン、トロンボキサン、およびイソプロスタン（ｉｓｏｐｒｏｓｔａｎｅ）が挙げられる。
【０１０２】
Ｃ反応性タンパク質のためのアッセイ用の試薬を製造する業者は現在存在し、これには、例えば、ＣａｌＢｉｏｃｈｅｍ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）が挙げられるが、これに限定されない。Ｂ６１は、リポ多糖類ならびに前炎症性サイトカインＩＬ−１およびＴＮＦに応答して、内皮細胞、線維芽細胞およびケラチノサイトによって分泌される。しかし、このＢ６１遺伝子産物は、増殖因子およびインターフェロンのような他の因子には応答を誘導しない。したがって、Ｂ６１の誘導は、炎症に対して高度に特異的である（米国特許第５，６８８，６５６号）。Ｂ６１転写物の存在は、ｃＤＮＡをコードするプローブを使用するインサイチュハイブリダイゼージョンによって直接的に検出され得る。あるいは、このＢ６１タンパク質は、抗体に基づくアッセイを使用して、血漿、脳脊髄液、または尿のような生物学的流体中で測定され得る。これらのアッセイ手順は、当該分野で公知であり、特に米国特許第５，６８８，６５６に記載される手順が、予後適用および診断適用の両方において有用である。
【０１０３】
本発明の支持において実施される研究において、インターロイキン−１β、ＩＬ−６、およびデキサメタゾンの組み合わせは、ＣＲＰ産生を誘導するために使用され、そして反作用剤が、実施例１Ａに詳述されるように、培養された肝細胞中のこの産生を減少させるこれらの能力について試験される。このアッセイは、化合物の高スループットスクリーニングを可能にする９６ウエルフォーマット中の細胞増殖において実施される。本明細書中に記載されるとおり、γ−トコフェロール、β−トコフェロールおよびδ−トコフェロールは、実施例１Ａに詳述したアッセイのようなアッセイ中で、ＣＲＰレベルを減少し得た。
【０１０４】
本明細書中で実施例１Ｂに例示される、別の有用な細胞スクリーニングアッセイは、Ｅ−セレクチン（ＥＬＡＭ）産生アッセイであり、これは、活性化された内皮細胞中のＥＬＡＭの発現を減少させる試験化合物の活性を測定する。簡単に言うと、内皮細胞は、リポ多糖類、ＴＮＦ、またはＩＬ−１βのような活性化因子を、単独でかまたはいくらか組み合わせて加えることによって活性化される。活性化された細胞は、ＥＬＡＭを産生し、このＥＬＡＭは、例えば、Ｅ−セレクチンモノクローナル抗体に基づくＥＬＩＳＡアッセイを使用して測定され得る。本発明の支持において実施される研究において、ＥＬＡＭ産生は、γ−トコフェロール、βトコフェロール、およびδ−トコフェロールによって減少されたが、α−トコフェロールによっては減少されなかった。本発明は、例えば、実施例５に記載されるような組成物（これは、６０％のγ−トコフェロールおよび２８％のδ−トコフェロールを含む）のようなトコフェロールの混合物を包含する。
【０１０５】
抗炎症性活性のインビボでの評価は、ラットにおけるカラゲナン誘導性肢水腫（ｃａｒｒａｇｅｅｎａｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｐａｗ ｅｄｅｍａ）の減少のような十分に特徴付けられたアッセイによって決定され得る（Ｇａｂｏｒ，Ｍ．、Ｍｏｕｓｅ Ｅａｒ Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ Ｍｏｄｅｌｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、２０００）。カラゲナン誘導性肢水腫は、炎症のモデルであり、これは、ラットの肢の足底内（ｉｎｔｒａｐｌａｎｔａｒ）へのカラゲナン投与後に、時間に依存して水腫を引き起こす。本発明の支持において実施される研究において、３日にわたる１０〜１００ｍｇ／ｋｇの経口前処置として、ラットに経口的に与えられるγ−トコフェロールは、このモデルにおける水腫状流体中のＩＬ−６レベルを有意に減少させた（実施例６）。
【０１０６】
米国特許第６，０４０，１４７号は、特定のサイトカイン（例えば、インターロイキン１〜１７）および細胞接着分子（例えば、ｓＩＣＡＭ、インテグリン、ＩＣＡＭ−１、ＩＣＡＭ−３、ＢＬ−ＣＡＭ、ＬＦＡ−２、ＶＣＡＭ−１、ＮＣＡＭおよびＰＥＣＡＭ）を含む、特定の分子のレベルの測定の、予後適用および診断適用の両方を記載する。このようなマーカーの存在は、当該分野で周知の方法（ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着アッセイ）および他の免疫アッセイを含む）によって決定され得、そして体液（例えば、血液、リンパ液、唾液および尿）中で測定され得る。米国特許第６，１８０，６４３号はまた、ＩＤＤＭおよびＮＤＤＭのマーカーとしてのＩＬ−１、ＴＮＦ−αのような分子の使用を記載し、ここで、特定の治療は、これらの分子の産生の阻害を含む。
【０１０７】
ＳＩＲＳ／セプシスと特定の組織マーカーまたは血清マーカー（Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）およびネオプトリンが挙げられる）との間の相関もまた、開示されている。血清プロカルシトニン（ＰｒｏＣＴ、ＰＡＮ−１１６ともいわれる）は、最近、全身性炎症の医療マーカーとして記載されており（米国特許第５，９９３，８１１号）、そして米国特許出願第２００１０００７０２２号は、ＳＩＲＳの治療および検出の両方において、ＰｒｏＣＴ（またはｐＣＴ）に対する抗体の使用および調製を詳細に記載している。ＳＩＲＳのマーカーとして示唆されている他のサイトカインとしては、インターロイキン−１０（ＩＬ−１０）およびインターロイキン−６（ＩＬ−６）が挙げられる（米国特許第６，１０３，７０２号および同６，２０３，９９７号）。
【０１０８】
米国特許第５，４９６，８３２号は、ヒトにおいて免疫媒介性の心筋炎のラットのモデルを詳細に記載してる。このモデルは、以下に簡潔に再現され、そして本発明の非αトコフェロール組成物を試験するのに使用され得る。
【０１０９】
簡潔に述べると、雄性Ｌｅｗｉｓラット３００〜３５０ｇを体重測定し、そしてベースラインＥＣＧを記録する前に２０ｍｇのペントバルビタールの腹腔内注射で落ち着かせた。このラットを４つの群に分けた。群１のラットは、心筋炎を発症しているラットに対するコントロール群として役立ち、心臓ミオシンのみを受ける。群２のラットは試験化合物についてのコントロール群として役立ち、そして試験化合物を受けた。第３群および第４群のラットを、心臓ミオシンで免疫し、次いで、試験化合物で処置する。
【０１１０】
群１、群３および群４のラットに、０．１Ｍリン酸緩衝化生理食塩水に懸濁した、１００μｇのブタ心臓ミオシンを左後脚パッドに皮下注射する。７日後、群１、群３および群４のラットを、対側の脚パッドに同じミオシン濃度で再免疫する。試験化合物の腹腔内投与を、ビヒクル（２０％ ジメチルアセトアミド、１０％ Ｔｗｅｅｎ ８０、および７０％ ポリエチレングリコール）を使用して、免疫初日に１ｍｇ／ｋｇ／日（群３；ｎ＝１０）、および１２ｍｇ／ｋｇ／日（群４；ｎ＝６）で開始し、そして１４日間にわたり毎日維持した。群１のラット（ｎ＝１０）に、１４日間、毎日ビヒクルのみでｉ．ｐ．注射する。群２のラット（ｎ＝７）は免疫されないが、１４日間毎日、試験化合物のｉ．ｐ．レジメンを受ける。
【０１１１】
ＥＣＧは、以下の手順に従って得られる。全ての動物の腹側の頸部胸郭、背側の骨盤帯、および腹側の骨盤帯の領域の体毛を剃る。これらは、４つの標準的なＥＣＧ四肢電極部位（左右の前足および左右の後ろ脚）、および標準的な背側の接地電極部位に、入墨マーカーで同じように印を付け；そしてチャート速度１００ｍｍ／秒でレコーダーを使用して、ＩＩ ＥＣＧに先行する０日目のベースラインを得る。入墨マーカーは、その後の記録のための永続的な参照点として役立った。心電図プロフィールを、７日目、１４日目、２１日目および２８日目に得る。各々の場合において、これらプロフィールを、個々のベースラインＥＣＧおよび群２の対応する日のＥＣＧと比較する。初期心拍数および最終心拍数を測定し、そして以下の標準ＥＣＧ変数の平均値を、ミリメーター単位で、個々の記録につき４つの異なる心臓のＱＲＳ群（ｃｏｍｐｌｅｘ）のカリパス測定によって得る。
１）−−ＯＲＳ群長（ミリ秒）
２）−−Ｑ_αＴ セグメント長（ミリ秒）
３）−−Ｒ−−Ｒセグメント長（ミリ秒）
４）−−心拍数（拍数／分）
２８日目に、全ての生存する動物を、２０ｍｇのペントバルビタールのｉ．ｐ．注射で麻酔し、体重測定し、そして最終ＥＣＧを得る。次いでこれらを過剰量のＣＯ_２吸入によって安楽死させ、そして心臓、脾臓、右腎臓、および肝臓を視診し、取り出し、秤量し、そして１０％緩衝化ホルマリンの２５ｍｌを収容した滅菌コンテナに置いた。最終心臓重量を、個々の値として、および全ての群についての最終体重に対する心臓の割合の両方として記録する。器官の巨視的な評価を、以下の包括的な病理学スコア系の適用により達成する。：
０）−−明確な肥大も病巣もなし；
１）−−肥大の存在および／または１つの良く定義された病巣；ならびに
２）−−肥大および複数の病巣の存在。
【０１１２】
心臓を、ホルマリンから取り出し、そして冠状溝の直ぐ下で横に切断する；次いで心室を切片化および染色のためにパラフィン包埋する。ミクロトームを使用して、５μｍの厚さの切片にカットし、この切片を直ちにヘマトキシンおよびエオシンで染色し、そして１００倍および４００倍の倍率で、顕微鏡で検査する。心室当たりおよそ７つの切片を評価して、均一性を確認し、そしてコントロール群および実験群の両方の個々の動物についての平均の組織病理学的スコアを決定する。検査した任意の個々の動物のこれらの切片の間で、明らかな差異は存在しない。顕微鏡写真を得る。心臓組織の顕微鏡評価は、以下の系の適用によって達成される：
０）−−心筋全体への視認可能なリンパ球の浸潤なし。
１）−−０．２５ｍｍ^２以内の領域の中程度の浸潤。
２）−−４．０ｍｍ^２未満の領域内の中程度の浸潤または複数の浸潤。
３）−−４．０ｍｍ^２を超える領域内の複数の浸潤。
【０１１３】
米国特許第５，７８０，２３７号は、体液中の選択された飽和および不飽和の遊離脂肪酸（ＦＦＡ）のレベルを決定すること、ならびに飽和ＦＦＡの総計で割った不飽和ＦＦＡの総計を含む比率の値を決定することに基づく、ＳＩＲＳ、ＡＲＤＳ、セプシスおよびＭＯＤＳについての診断アッセイを記載する。これらの不飽和ＦＦＡとしては、リノール酸、オレイン酸、アラキドン酸（ａｒａｃｈｉｎｏｎａｔｅ）が挙げられ、そして飽和ＦＦＡとしては、ミリスチン酸、パルミチン酸塩、ステアリン酸が挙げられる。
【０１１４】
（ＳＩＲＳ／セプシスの動物モデル）
ＳＩＲＳ／セプシスのインビボ動物モデルは、当該分野で公知であり、そしてこれらモデルを使用して、非α−トコフェロールを富化したトコフェロール組成物または処置プロトコルの有効性を決定し得る。米国特許第６，１０３，７０２号に詳細に記載され、そして本明細書中に簡潔に示されるように、ラットにおける１つのこのようなモデルは、全身性炎症応答性症候群（ＳＩＲＳ）を生じる、慢性の腹膜セプシスのモデルを使用する。セプシスを、各々のラットにおいて、ペントバルビタール麻酔（５０ｍｇ／ｋｇ）下で、２００ｍｇ／ｋｇのラット盲腸内容物（水中の５％デキストロース（Ｄ５Ｗ）のスラリーとして混合される）の腹膜内（ｉｐ）注射により誘導する。この盲腸スラリーは、ドナーラットの新鮮な盲腸内容物から調製され、そして収集の２時間以内に使用してセプシスを誘導する。非セプシス性のコントロールは、等量のＤ５Ｗのｉｐ注射を受ける。ポリエチレンカテーテル（Ｉｎｔｒａｍｅｄｉｃ ＰＥ−５０、Ｂａｘｔｅｒ、Ｄｅｅｒｆｉｅｌｄ、ＩＬ）を、右内部頸静脈および右頸動脈に挿入する。この頸静脈カテーテルを、静脈中へのアクセス（薬物注入、容量置換など）のために使用する。この頸動脈カテーテルを使用して、動脈血液サンプルを取得し、そして動脈の血圧および心拍数をモニタリングする。これらのカテーテルは、それぞれの血管に固定され、肩甲骨内領域に出口を設ける（ｅｘｉｔ）ように皮下でトンネルとなり（ｔｕｎｎｅｌ）、そしてヘパリン処理した生理食塩水（５０単位／ｍｌ、０．９％通常の生理食塩水）で充填される。切開を、３−０絹糸を使用して重ねて閉じる。ラットを、麻酔から回復させて、そして食餌および水が自由に提供される。
【０１１５】
上記のＳＩＲＳ／セプシスのモデルは、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）の濃度上昇に関係する。インビボの処置有効性を、米国特許第６，１０３，７０２号に詳細に記載され、そして以下に簡潔に示されるように、脾臓および肝臓のような組織、または血清におけるＴＮＦ−αのレベルをモニターすることにより、決定し得る。
【０１１６】
血清および組織の腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）の濃度を、固相酵素免疫検定法（ＥＬＩＳＡ）によって決定する。血清、肝臓、および脾臓のサンプルを収集し、直ちに秤量し、そして液体窒素中で凍結させる。アッセイの日に、組織を、溶解緩衝液を含む、ラベルを付したチューブに加え（容量は、１ｇの重量あたり１０ｍｌ（１：１０に希釈））、そしてこれを氷上に静置する。溶解緩衝液は、２０ｍＭ Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．４）であり、プロテアーゼを阻害するために、１７０ ｌ／ｍｌ フェニルメチルスルホニルフルオライド（ＰＭＳＦ）、０．５ｇ／ｍｌ ロイペプチン、０．７ｇ／ｍｌ ペプスタチンおよび２．０ｇ／ｍｌ アプロチニンを含む。３秒のバーストを５回掛けてサンプルを速やかにホモジナイズし、サンプルの間に、リン酸緩衝化生理食塩水で粉砕ピストル（ｇｒｉｎｄｉｎｇ ｐｉｓｔｏｌ）を洗浄する（３回）。次いで、サンプルを２２００ＲＰＭで２０分間４℃で遠心分離する。この上清を取り出し、そしてＴＮＦ−αの測定のために使用する。簡潔に述べると、各マクロプレートのウェルは５０μｌのアッセイ希釈液を収容した。各ウェルに、５０μｌの標準、コントロール、または血清／ホモジナイズした上清サンプルを添加し、回転式プレート振盪機で混合する。プレートを室温で２時間インキュベートする。次いで、各ウェルを吸引し、そして洗浄緩衝液で４回洗浄する。洗浄緩衝液を最後に吸引した後、１００μｌのラットＴＮＦ−α結合体を各ウェルに添加する。次いでウェルに覆いを掛け、そして室温で２時間インキュベートする。インキュベーションの終了後、吸引／洗浄手順を４回繰り返し、その後、１００μｌの固定化色素原溶液を各ウェルに添加する。次に、プレートを４５分間室温で暗所でインキュベートする。この最後のインキュベーション期間の後、１００μｌの停止溶液を各ウェルに添加する。Ｂｉｏｔｅｋ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（Ｗｉｎｏｏｓｋｉ、ＶＭ）ＥＬ３１２ｅマイクロタイタープレートリーダーを使用して、４５０ｎＭでの各ウェルの吸光度を３０分以内に測定する。ＴＮＦ−αの濃度を、標準曲線から計算する。
【０１１７】
ＴＨ２細胞部分集団内で差示的に発現されるタンパク質（ＳＴＩＦ）をコードする、ＴＨ２特異的遺伝子は、増殖性障害およびＴリンパ球関連障害（例えば、慢性炎症性疾患および障害、ならびに喘息のようなアトピー性状態と結び付いていると報告されている（米国特許第６，１９０，９０９号）。米国特許第６，１９０，９０９号は、ＳＴＩＦおよびＳＴＩＦ関連分子についての種々の使用を詳細に記載している。
【０１１８】
多くのサイトカイン（例えば、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）、インターロイキン−１β、インターロイキン−６および／またはインターロイキン−８（ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−８）は、ＡＲＤＳおよび喘息に関連する炎症の媒介に関連している。（米国特許第６，１８０，６４３号）。ＴＮＦ−αおよびＩＬ−１の両方は、炎症誘導性サイトカインであり、基底よりも上昇したそのレベルが、喘息およびＡＲＤＳの両方、ならびに他の炎症関連状態を媒介または増悪することに、関連している。従って、当該分野で公知でありそして米国特許第６，１８０，６４３号にさらに詳細に記載されるように、これらの分子は、これらの状態の存在についてのマーカーとして使用され得、ならびに喘息およびＡＲＤＳのような状態を改善する、非α−トコフェロールを富化したトコフェロール組成物についてスクリーニングすることに使用され得る。特に、試験化合物によってＴＮＦ−αおよびＩＬ−１βの産生の阻害を測定するように設計されたアッセイを使用して、効果的な処置をスクリーニングし得る。
【０１１９】
肺炎または呼吸性炎症に関連した状態の処置の有効性を決定するためのモデルおよびプロトコルは、当該分野で公知である（例えば、米国特許第６，１９３，９５７号；同６，０５１，５６６号；同５，０８０，８９９号；同第６，１８０，６４３号；同第６，０２８，２０８号、および米国特許出願第２００１００００３４１号、同第２００１０００６６５６号）。さらに、米国特許出願第２００１０００４６７７号は、肺のストレスを測定するための方法および装置を記載する。米国特許第６，１９３，９５７号は、肺の気流の抵抗性についてのヒツジのインビボモデルを詳細に記載する。このヒツジは、二重の応答者として特徴付けられる。このモデルは、以下に簡潔に記載される。
【０１２０】
以前に記載された、Ａｓｃａｒｉｓ ｓｕｕｍ抗原に対する二重の気管支収縮性応答を有するアレルギー性ヒツジを使用する。このヒツジを、折り返しのある経鼻気管内挿管をつけて挿管し、そして肺気流抵抗性（Ｒ_Ｉ）を、食道バルーンカテーテル技術によって測定し、一方、胸部気体容量を身体の体積変動記録法により測定する。データは、特定のＲ^Ｌとして表記される（ＳＲ_Ｌ、胸部気体容量Ｖ_ｔｇのＲ_Ｌ倍として規定される）。
【０１２１】
気道応答性を検査するために、吸入されたカルバコール（ｃａｂａｃｈｏｌ）に対する蓄積量応答曲線が、緩衝化生理食塩水の吸引前および吸引後、そして漸増濃度（０．２５％、０．５％、１．０％、２．０％および４．０％（重量／容量）の溶液）のカルバコールの、１０回の呼吸の各々の投与の後に、ＳＲ_Ｌを測定することによって実行される。気道応答性を、ベースラインを超えて４００％にＳＲ_Ｌを増加させるカルバコールの累積吸入誘発用量（ＰＤ_４００）（呼吸単位で）を決定することによって測定する。１呼吸単位は、１％カルバコール溶液の１呼吸として定義される。各動物のベースラインの気道応答性（ＰＤ_４００）を決定し、次いで、異なる実験日に、ヒツジはＡｓｃａｒｉｓ ｓｕｕｍ抗原を用いた気道チャレンジを受ける。ＳＲ_Ｌを、チャレンジの前および直後、次いで８時間にわたって１時間毎に測定する。チャレンジ後のＰＤ_４００を、ＡＨＲが出現する場合に抗原のチャレンジの２４時間後に測定する。このプロトコルを、少なくとも１４日後に繰り返すが、各動物に、抗原のチャレンジの約３０分前、またはチャレンジ後のＳＲ_Ｌ測定直後のいずれかで試験薬物フラクションの１つの用量を投与する。
【０１２２】
米国特許第６，０５１，５６６号は、患者における非特異的な気管支反応亢進の研究についての詳細なプロトコールを記載する。米国特許第５，０８０，８９９号は、肺炎症の処置のために経口投与される薬物の効力を研究するための、インビボモルモットモデルを詳述する。このモデルを、以下に簡単に記載する。
【０１２３】
一晩絶食させた雄性Ｈａｒｔｌｅｙモルモット（４００〜７００ｇ）を、Ｄｕｎｎら（１９８８ Ａｍ．Ｒｅｖ．Ｒｅｓｐ．Ｄｉｓ．１３７：５４１）の方法の改変によって感作する。モルモットは、それぞれの後肢に、等張滅菌生理食塩水中にある０．３５ｍｌ（総容量＝０．７ｍｌ）のオボアルブミン（ＯＡ；５０ｍｇ／ｍｌ）のｉ．ｍ．注射を１回受ける。３週間にわたる感作期間の後、各動物に、ピリラミン（２．５ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｐ．）で予め処理（−１時間）して、低酸素性虚脱および死滅を防止し、次いで、ＤｅＶｉｌｂｉｓｓ Ｕｌｔｒａ−Ｎｅｂ １００ネブライザを使用して３分間にわたり、０．２％のＯＡ（蒸留脱イオン水中）のエアロゾルでチャレンジする。薬物またはビヒクル（０．５％Ｔｗｅｅｎ ８０）を、ＯＡチャレンジの前および後の適切な時点で、１ｍｌ／５００ｇ体重の容量で経口投与する。試験化合物を、ＯＡエアロゾルに対して−４８時間目、−２４時間目、−１時間目、および＋４時間目に、経口投与する。ポジティブコントロール動物には、ＯＡエアロゾルをチャレンジし、そしてネガティブコントロール動物には、蒸留水のエアロゾルのみをチャレンジする。
【０１２４】
２４時間後に、各動物を、ウレタン
【０１２５】
【数１】

の過剰投薬によって人道的に屠殺する。各動物の気管を単離し、そして肺を、等張滅菌生理食塩水によりインサイチュで３回２０ｍｌで洗浄することによって洗浄する。すべてのサンプルを氷上に放置する。次いで、各動物由来のこの気管支肺胞洗浄液を、５℃において１０分間にわたり４００×ｇで遠心分離する。上清を捨て、そして各細胞ペレットを、３ｍｌの等張滅菌生理食塩水中に再懸濁する。次いで、存在する炎症細胞の数を、Ｃｏｕｌｔｅｒ ｍｏｄｅｌ ＺＭ ｐａｒｔｉｃｌｅ ｃｏｕｎｔｅｒ（Ｂｅｃｋｍａｎ Ｃｏｕｌｔｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎ，ＣＡ）を使用して決定する。
【０１２６】
すべての値を、ネガティブコントロール群の平均（ｘ）値を他のすべての個別サンプルから差し引くことによって補正する。個別サンプルについての％阻害値を、以下の式において、これらの補正された細胞計数を使用することにより算出する：
【０１２７】
【数２】

平均％阻害を、各群について決定し、そしてｘ％阻害±Ｓ．Ｅ．として表す。９５％の信頼限界を有するＥＤ_５０を算出する（Ｌｉｔｃｈｆｉｅｌｄら，１９４９ Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．９６：９９−１１３）。
【０１２８】
米国特許出願第２００１００００３４１号および同第２００１０００６６５６号は、マウスにおけるＬＰＳ誘導性気道炎症のインビボモデルを記載する。米国特許第６，０２８，２０８号は、ハムスターにおけるＬＰＳ誘導性気道炎症に関する同様のインビボモデルを記載する。
【０１２９】
慢性閉塞性肺疾患の処置における試験化合物の効力を、鼻腔内点滴注入を介したリポポリサッカリドにより誘導される肺好中球増加症のマウスモデルにおいて試験し得る。細菌性リポポリサッカリド（ＬＰＳ）は、インビボに適用された場合に炎症応答のネットワークを誘発する、細菌の高分子細胞表面抗原である。このＬＰＳにより誘導される肺炎症モデルの主な特徴である、マクロファージの活性化、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）の生成、ならびに好中球の浸潤および活性化は、慢性閉塞性肺疾患の特徴である。このモデルは、気道管腔において２〜４時間後に起こる急性損傷として肺炎症を引き起こす。ここですべての炎症パラメーターは、気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）によって評価され得る。
【０１３０】
米国特許出願第２００１００００３４１号に記載されるように、試験化合物を、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解し、そして得られた溶液に、滅菌リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）（５０μｌ）を添加する。ＤＭＳＯの最終濃度は、２％である。雌性Ｂａｌｂ／Ｃマウス（２０〜２５ｇ）に、ハロタン／酸素／亜酸化窒素麻酔下において、適切な用量（０．１〜３０ｍｇ／ｋｇ）の試験化合物を含有するＰＢＳ ＤＭＳＯ希釈液、または希釈液のみで鼻腔内処置し、そして３０分後に、０．３ｍｇ／ｋｇのＬＰＳ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ Ｔｙｐｈｏｓａ，Ｓｉｇｍａ）で処置する。この動物を、２４℃で空調設備の整った室内でプラスチックゲージにおいて飼育する。食物および水は、自由に利用できる。ＬＰＳの鼻腔内投与から３時間後に、最後の麻酔を、ペントバルビタールナトリウム（６０ｍｇ／ｋｇ，ｉ．ｐ．）で誘導し、腹腔を開き、そして主要な血管から血液を引き抜くことによって、動物を瀉血する。
【０１３１】
気管にカニューレ挿入し、そして気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）を、気管を介して肺に４×０．３ｍｌのＰＢＳを注入することによって実施する。次いで、液体を迅速に引き抜き、そして細胞懸濁物を氷上で保存する。総細胞計数を測定し、そしてサイトスピン調製物（Ｓｈａｎｄｏｎ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｌｔｄ，Ｃｈｅｓｈｉｒｅ，ＵＫ）を調製する。細胞を、Ｄｉｆ−Ｑｕｉｃｋ（Ｂａｘｔｅｒ Ｄａｄｅ ＡＧ，Ｄｕｄｉｎｇｅｎ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）で染色し、そして２００個の細胞の示差的な計数を、標準的な形態学的判断基準を使用して実施する。残りの洗浄液を１０分間にわたり１２００ｒｐｍで遠心分離し、上清を等分し、そして−８０℃で保存する。
【０１３２】
ＢＡＬミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）活性を、９６ウェルプレート形式の比色アッセイを使用して、新鮮なＢＡＬ上清において測定する。二連の５０μｌのサンプルを、室温で５分間にわたり１００μｌの基質緩衝液（０．５％ヘキサデシルトリメチルアンモニウムブロミド、０．１６７ｎＭ ｏ−ジアニシジンジヒドロクロリドおよび０．４ｍＭ Ｈ_２Ｏ_２を含有する、リン酸ナトリウム５０ｍＭ、ｐＨ６．０）と混合する。反応を、蒸留水中にある５％アジ化ナトリウム１００μｌで停止させ、そして光学密度（ＯＤ）を４５０ｎｍで読取る。結果を、ヒト白血球ミエロペルオキシダーゼ（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）で確立された検量線を使用して、Ｕ／ｍｌで表す。
【０１３３】
肺炎症に対する試験下の化合物の阻害効果を、希釈液単独の投与後に得られるものと比較した、その化合物の投与後に得られる好中球数の減少および／またはＭＰＯ活性の減少によって示す。米国特許第６，０２８，２０８号に記載されるように、雄性ゴールデンハムスターを、吸入チャンバー（容積：１２リットル）内に入れ、そして３０分間にわたり超音波ネブライザによって生成されたＬＰＳ（ネブライザ充填濃度：２．０ｍｇ／ｍｌ）を吸入させて、気道炎症を起こさせる。ＬＰＳを吸入させた直後に、試験化合物を、ハロタン麻酔下で、気道内投与を通してかまたは経口的に投与する。２４時間後に、気管枝および肺胞を洗浄し、そして洗浄液中の好中球数を決定する。試験化合物の非存在下において得られる好中球の数をコントロールとして使用し、好中球数の減少割合を、コントロールに基づく抑制％として表す。
【０１３４】
このモデルは、炎症性肺疾患モデルとして広範に使用されており（Ｅｓｂｅｎｓｈａｄｅら，１９８２ Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．５３：９６７−９７６）、そしてこのモデルは、炎症性肺疾患の急性憎悪の病的状態を示すことが報告されている（Ｈｕｒｌａｒら，１９８３ Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ，５４：１４６３−１４６８）。
【０１３５】
米国特許第６，１８０，６４３号は、ＴＮＦ−αおよびＩＬ−１βの生成を阻害する化合物の能力を特徴付けるために使用されるいくつかのアッセイを詳細に記載している。
【０１３６】
試験化合物はまた、カラゲナン（ｃａｒａｇｅｅｎａｎ）足浮腫モデル（Ｗｉｎｔｅｒら １９６２ Ｐｒｏｃ．Ｓｏｃ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．１１１：５４４；Ｓｗｉｎｇｌｅ，Ｒ．Ａ．ＳｃｈｅｒｒｅｒおよびＭ．Ｗ．Ｗｈｉｔｅｈｏｕｓｅ編，１９７４ Ａｎｔｉｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ Ａｇｅｎｔｓ，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１３−ＩＩ：３３，Ａｃａｄｅｍｉｃ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）およびコラーゲン誘導性関節炎（Ｔｒｅｎｔｈａｍら １９７７ Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１４６：８５７；Ｃｏｕｒｔｅｎａｙ １９８０ Ｎａｔｕｒｅ（Ｎｅｗ Ｂｉｏｌ．）２８３：６６６）を含む炎症モデルにおいて、抗炎症特性について試験され得る。
【０１３７】
抗島細胞抗体（ＩＣＡ）は、疾患の臨床的発現よりも１０年も前から存在する、ＩＤＤＭマーカーとして示唆されている（Ｎａｔｈａｎ，前出）。米国特許第６，０５７，０９７号はまた、予後適用および診断適用のために、ＩＤＤＭに関連した抗核自己抗体（ＡＮＡ）を使用する方法を詳細に記載している。
【０１３８】
ＴＨ２細胞の亜集団において示差的に発現されるタンパク質（ＳＴＩＦ）をコードするＴＨ２特異的遺伝子は、ＩＤＤＭを含む慢性炎症性疾患および慢性炎症性障害のような、増殖性障害およびＴリンパ球関連障害と関連付けられるとして報告されている（米国特許第６，１９０，９０９号）。
【０１３９】
糖尿病は、マクロファージを活性化するタンパク質のグリコシル化または増加した酸化ストレスによっておそらく引き起こされる、低いグレードの慢性炎症状態を導き得ることが報告されている（Ｓｐａｎｈｅｉｍｅｒ 前出）。全身炎症のマーカーが、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ；米国特許第６，０４０，１４７号）であり、そしていくつかの研究により、ＣＲＰのレベルは、大血管（ｍａｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ）疾患を有さないＩＤＤＭ患者において上昇することが見出されている。これらの知見は、研究者らに、ＣＲＰが炎症を追跡するためのマーカーとして役立ち得るという示唆へと導いた（Ｓｐａｎｈｅｉｍｅｒ 前出；Ｒｉｄｋｅｒら ２００１ Ｎ．Ｅ．Ｊ．Ｍ．３４４（２６）：１９５９−１９６５）。
【０１４０】
米国特許第５，７８９，６５２号は、ＮＩＤＤＭの処置における試験化合物の効力を決定するために使用され得る非インスリン依存性糖尿病ラットに関する。米国特許第５，８７７，２０３号は、胸大動脈への単球の結合に対する試験化合物の効力をモデリングするためのコレステロール摂食ラットの使用を詳細に記載している。米国特許第６，２６１，６０６号は、これらの状態の処置における試験化合物の効力をスクリーニングする際に使用するための、いくつかの糖尿病動物モデル（ＩＤＤＭ、ＮＩＤＤＭ、およびステロイド誘導性）を記載している。これらのモデルの説明を、以下に簡単に複写する。
【０１４１】
ストレプトゾトシンラット−ＩＤＤＭについてのモデル（米国特許第６，２６１，６０６号）
１２０〜１３０ｇの体重のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｙ雄性ラットに、０．５ｍｌクエン酸緩衝液（０．０５Ｍ ｐＨ４．５）中にあるストレプトゾトシン（６０ｍｇ／ｋｇ体重）の単回用量を皮下注射する。血漿グルコース濃度を、市販のグルコメーターを使用して、７日後に測定する。２５０ｍｇ／ｄｌよりも高い血中グルコースを有する動物を、試験化合物を用いた以後の試験のために選択する。試験化合物を、経口的に導入する。血液を、３０分間隔で尾静脈から収集し、そしてグルコース、遊離脂肪酸およびトリグリセリドのレベルを、当該分野で公知のようにして測定する。Ｍｉｒｓｋｙ １９９３ Ｊ．Ｉｎｏｒｇ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．４９：１２３−１２８。
【０１４２】
ホリネズミ（Ｓａｎｄ Ｒａｔ）およびハリネズミ（Ｓｐｉｎｙ Ｍｉｃｅ）−ＮＩＤＤＭについてのモデル（米国特許第６，２６１，６０６号）
ホリネズミ（Ｐｓａｍｍｏｍｙｓ ｏｂｅｓｕｓ）およびハリネズミ（Ａｃｏｍｙｓ ｒｕｓａｔｕｓ）は、高エネルギー食餌を摂食した場合に、ＮＩＤＤＭを発症する。Ｓｃｈｍｉｄｔ−Ｎｉｅｌｓｅｎら，１９６４ Ｓｃｉｅｎｃｅ １４３：６８９−６９０。このようなモデルを使用して、ＮＩＤＤＭに関連した炎症の症状を減少させる能力（１つ以上の炎症マーカー（例えば、ＣＲＰのような）のレベルを減少させることを含む）について、本発明の非αトコフェロール組成物を試験し得る。
【０１４３】
ラットにおけるステロイド誘導性糖尿病（米国特許第６，２６１，６０６号）
コルチコステロイド処置はしばしば、グルコース寛容減損および糖尿病へと導く。Ｍｅｒｃｋ ｍａｎｕａｌ，第１４版，Ｒａｈｗａｙ，Ｎ．Ｊ．：Ｍｅｒｃｋ Ｓｈａｒｐ ａｎｄ Ｄｏｈｍｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，１９８２，２３８５。ステロイド性糖尿病は、ケトーシスおよびアシドーシスの非存在下におけるインスリン抵抗性によって特徴付けられる。
【０１４４】
本発明の処方物は、当該分野で公知の種々の炎症の細胞性モデルにおいて、効力について試験される。例えば、Ｅ−セレクチン（内皮球接着分子（すなわち、ＥＬＡＭ）とも呼ばれる）は、内皮細胞の表面において活性に発現される細胞接着分子であり、この内皮細胞表面において、Ｅ−セレクチンは、循環している白血球の最初の接着の媒介を補助する。従って、Ｅ−セレクチンは、炎症の感受性かつ特異的なマーカーとして役立つ。リポポリサッカリドおよびインターロイキン−１β（ＩＬ−１Ｂ）のような炎症刺激に供された内皮細胞によるＥ−セレクチンの発現を減少させる試験化合物の能力を測定するために細胞アッセイが考案された。この応答を阻害する試験化合物は、抗炎症特性を有する。このようなアッセイを、本明細書中において実施例１Ｂに記載する；他のアッセイプロトコールは、当該分野で公知である（例えば、Ｈｅｓｓ，Ｄ．Ｃ．ら Ｎｅｕｒｓｃｉ．Ｌｅｔｔ．２１３（ｌ）：３７−４０，１９９６を参照のこと）。本発明の組成物は、Ｅ−セレクチンの発現を減少させるその能力について、このようなアッセイにおいて試験され得る。
【０１４５】
本発明の非αトコフェロール富化トコフェロール組成物はさらに、本明細書中の実施例３に記載されるような、筋肉での動作に関するモデルにおいて試験される。簡潔には、ウェイトトレーニングに通常は関与しないヒト被験体に、プラシーボまたは予め決められた１日量の本発明の非αトコフェロール富化処方物のいずれかを与える。血中の代謝産物および炎症マーカーを、エクササイズマシーンにおいて、伸張性運動前および伸張性運動後の規定された時間間隔において測定する（例えば、規定された腕の「ねじ曲げ」）。主観的な疼痛の評価も得る。抗炎症トコフェロール処方物は、本明細書中に規定されるような少なくとも１つ以上の炎症マーカーにおける減少、またはプラシーボ処置コントロール被験体と比較した場合の疼痛における減少を与える。
【０１４６】
（本発明の化合物を用いた方法）
本発明の組成物は、炎症に関連した炎症マーカー（例えば、ＣＲＰを含む）の上昇したレベルを低減するため、または炎症に関連した炎症マーカー（例えば、ＣＲＰ）、本明細書中に記載されるとおりの炎症に関連した特定のサイトカイン（例えば、この被験体における炎症に関連した、ＩＬ−６、ＴＮＦ−αおよびＢ６１）の健常レベルおよび／もしくは正常レベルの維持および促進するために、哺乳動物被験体へと投与される。このような炎症マーカーの健常な範囲または正常な範囲は、当該分野で公知である。例えば、ＣＲＰについての健常な範囲または正常な範囲を提供する、米国特許第６，０４０，１４７号を参照のこと。例えば、本発明の非α−トコフェロール富化組成物および／または非α−トコフェロール代謝産物富化組成物は、ＣＲＰの健常レベルまたは正常レベルを維持するために、本明細書中に開示される疾患または障害（例えば、ＥＳＲＤ）に関連した炎症を発症する危険性のある哺乳動物被験体へと投与される。本発明の組成物は、炎症に関連したタンパク質（例えば、ＣＲＰ、本明細書中に記載されるとおりの炎症に関連した特定のサイトカイン、この被験体における炎症に関連した、ＴＮＦ−αおよびＢ６１）の上昇したレベルを低減するために、哺乳動物被験体に対して投与される。
【０１４７】
本発明のいくつかの例では、γ−トコフェロール富化トコフェロール組成物および／またはγ−トコフェロール代謝産物富化組成物は、炎症の症状の処置および／または改善のための方法において（例えば、この炎症（呼吸器炎症状態（例えば、ＳＩＲＳ、ＡＲＤＳ、ＡＨＲ、および喘息）；敗血症；糖尿病；筋肉疲労；全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）；腎臓の炎症（ＥＳＲＤにおける炎症を含む）；および歯周疾患を包含する）に関連したＣＲＰレベルを低減するための方法において）用いられる。
【０１４８】
本発明のいくつかの例では、β−トコフェロール富化トコフェロール組成物および／またはβ−トコフェロール代謝産物富化組成物は、炎症の症状の処置および／または改善のための方法（例えば、この炎症（呼吸器炎症状態（例えば、ＳＩＲＳ、ＡＲＤＳ、ＡＨＲ、および喘息）；敗血症；糖尿病；筋肉疲労；全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）；腎臓の炎症（ＥＳＲＤにおける炎症を含む）；歯周疾患および炎症性皮膚状態を包含する）に関連したＣＲＰレベルを低減するための方法において）において用いられる。
【０１４９】
本発明の他の例では、δ−トコフェロール富化トコフェロール組成物および／またはδ−トコフェロール代謝産物富化組成物は、炎症の症状の処置および／または改善のための方法（例えば、この炎症（呼吸器炎症状態（例えば、ＳＩＲＳ、ＡＲＤＳ、ＡＨＲ、および喘息）；敗血症；糖尿病；筋肉疲労；全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）；腎臓の炎症（ＥＳＲＤにおける炎症を含む）；歯周疾患および炎症性皮膚状態を包含する）に関連したＣＲＰレベルを低減するための方法において）において用いられる。
【０１５０】
さらなる例では、本発明の方法は、炎症マーカー（例えば、ＣＲＰ）のレベルを低減するに有効な量、および／あるいはさもなければ生じる炎症を改善または低減することによって、状態の症状を改善するかまたはその状態に関連するかもしくは起因する炎症の程度および／もしくは重篤度を最小にするに有効な量の、γ−トコフェロール富化トコフェロール組成物またはγ−トコフェロール代謝産物富化組成物を投与することによって、ＥＳＲＤに関連した炎症の危険性があるかまたはＥＳＲＤに関連した炎症に罹患している被験体における、末期腎臓疾患（ＥＳＲＤ）の症状を処置または改善することに関する。この方法は、γ−トコフェロール富化トコフェロール組成物および／またはγ−トコフェロール代謝産物富化組成物を、ＥＳＲＤになるまで、個々の被験体に対して投与する工程を包含する。投与される量およびこの処置の持続期間は、例えば、炎症に関連した特定の細胞接着分子；この炎症に関連したサイトカイン（例えば、ＩＬ−６）またはこの状態に関連したＣＲＰのレベルによって測定した場合、哺乳動物被験体中の状態に関連した炎症のサイズおよび／または重篤度を最小にするに有効である。従って、このような処置の結果として、発症する炎症に関連した任意の症状のサイズおよび／または重篤度は最小になると予期される。末期腎臓疾患（ＥＳＲＤ）を有する患者は、腎臓機能を全く有さないかまたは非常に最小に有し、それゆえ、ナトリウム***増加できない。腎臓機能は、人工的腎臓透析によって提供される。炎症マーカー（血清ＣＲＰレベルを含む）は、心臓血管死亡率と同様に、透析患者において顕著に上昇する。さらに、ＣＲＰは、透析患者における心臓血管による死亡およびあらゆる原因による死亡の有意な予測因子である（Ｆｏｌｅｙ ＲＮら，Ｊ Ａｍ Ｓｏｃ Ｎｅｐｈｒｏｌ １９９８；９：Ｓ１６−２３；Ｈａｎｄｅｌｍａｎ ＧＪら，Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ ２００１；５９：１９６０−６；Ｚｉｍｍｅｒｍａｎ Ｊら，Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔ １９９９；５５：６４８−５８；Ｉｓｅｋｉ Ｋら，Ｎｅｐｈｒｏｌ Ｄｉａｌ Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ １９９９；１４：１９５６−６０）。
【０１５１】
実施例５に詳述されるように、本発明に支持されて実施された研究では、δ−トコフェロールをさらに含むγ−トコフェロール富化トコフェロール組成物の投与は、最初の処置の２週間以内において、血清ＣＲＰおよびＩＬ−６によって例示される炎症マーカーの低減をもたらした。
【０１５２】
上記のとおりの組成物は、医薬調製物（例えば、注射用水溶液）として、または種々の他の媒体（例えば、ヒトまたは動物用の食品（医療用食品および栄養補助食品を包含する））中で、調製され得る。「医療用食品」は、特有の栄養要求が存在する疾患または状態の特定の食事管理が意図される製品である。限定ではないが、例として、医療用食品は、熱傷被害者へと栄養管を通して供給されるビタミンおよび無機質の処方物（腸内投与または栄養投与といわれる）を含み得る。「栄養補助食品」は、製品を意味しなければならない。ヒトの食事を補充することが意図され、そして代表的には、丸剤、カプセル剤、錠剤または同様の処方物の形態で提供される、限定ではないが、例として、栄養補助食品は、以下の成分のうちの１以上を含み得る：ビタミン、無機質、ハーブ、生薬、アミノ酸、総食事摂取を増大させることによって食事を補充することが意図される食事物質、ならびに上記のいずれかの濃縮物、代謝産物、構成成分、抽出物または組合わせ。栄養補助食品はまた、食料品（例えば、組織健康を促進するかまたは炎症を予防することが設計された機能性食品）中に組み込まれ得る。医薬調製物として投与される場合、この組成物は、予防または処置のいずれかとして、多数の方法のうちのいずれかにおいて、患者へと投与され得る。この本発明の組成物は、単独で、または他の薬学的薬剤との組合わせで投与され得、そしてそれらの生理学的に受容可能なキャリアと合わされ得る。特定の処方物の有効量および投与方法は、個々の被験体、疾患の病期、および当業者に明らかな他の要因に基づいて変化し得る。この処置経過の間、本発明の組成物の濃度をモニタリングして、所望のレベルが維持されることを保証し得る。
【０１５３】
一般に、特定の適用において有用な投与経路は、当業者に明らかである。投与経路としては、経口、局所、皮膚、経皮、経粘膜、表皮、非経口、胃腸が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１５４】
インビトロまたはエキソビボでの投与のために、この化合物は、細胞および／または器官の培地中に、１回のボーラスとして、複数回の添加によって、連続注入などによって提供され得る。
【０１５５】
投与のために、本発明は、経口投与のために適切な本発明の組成物（薬学的受容可能な錠剤、カプセル剤、散剤、液剤、分散剤、もしくは液体を含むがこれらに限定されない）、または摂取され得る生理学的に受容可能な他の物質（食品（フードバー、飲料、粉末、シリアル、調理済み食品、食品添加物およびキャンディを含むがこれらに限定されない）を含むがこれらに限定されない）と混合された本発明の組成物を含む。直腸投与のために、本発明の組成物は、坐剤として、浣腸または他の便利な適用のための溶液として提供され得る。さもなければ、本発明の組成物は、脈管内に、動脈に、または静脈に、皮下に、腹腔内に、器官内に、筋肉内に、皮膚パッチによってなどで投与され得る。
【０１５６】
投与のために、この処方物は、単位投薬量形態で便利に提示され得、そして製薬の分野で周知の任意の方法によって調製され得る。このような方法は、活性成分を、１以上の補助成分を構成するキャリアと会合させる工程を包含する。一般に、この処方物は、活性成分を液体キャリアもしくは細かく分割された固体キャリアまたは両方と均質にそして密接に会合させ、次いで必要な場合には製品を成型することによって、調製される。
【０１５７】
この組成物を食品のような種々の媒体中に取り込ませる場合、これは、単純に経口摂取され得る。この食品は、栄養補助食品（例えば、スナックまたは健康栄養補助食品）であり得るか、または特に動物については、栄養バルク（例えば、一次動物食餌に取り込まれる場合）を含み得る。
【０１５８】
摂取、消費、さもなければ投与される組成物の量は、所望の最終濃度に依存する。代表的に、本発明の組成物の単一投与の量は、約０．１ｍｇ／ｋｇ体重〜約１０００ｍｇ／ｋｇ体重、または約０．５ｍｇ／日〜約１０，０００ｍｇ／日であり得る。これらの用量のいずれかは、別個の投与へとさらに細分され得、そして複数投薬量は、任意の個々の患者に対して与えられ得る。ビタミンＥ投与についての代表的な投薬量は、成人について、１００ｍｇ／日〜６００ｍｇ／日である。しかし、種々の異なる投薬量が、科学文献において記載される；例えば、Ｎｇら（１９９９）Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３７：５０３−８；Ｋｏら（１９９９）Ａｒｃｈ．Ｐｈｙｓ．Ｍｅｄ．Ｒｅｈａｂｉｌ．８０：９６４−７；Ｃｈｅｎら（１９９９）Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓ Ｏｔｈｅｒ Ｌｉｐｉｄ Ｍｅｄｉａｔ．５７：９９−１１１；およびＴｈａｂｒｅｗら（１９９９）Ａｎｎ．Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．３６：２１６−２０を参照のこと。
【０１５９】
任意の適用のための最適濃度を決定するために、従来技術が用いられ得る。従って、インビトロおよびエキソビボでの使用のために、種々の濃度が用いられ得、そして種々のアッセイを用いて炎症の程度が決定され得る。
【０１６０】
本発明の組成物は、脈管内に、動脈に、または静脈に、皮下に、皮内に、腹腔内に、器官内に、筋肉内になどを含め、非経口的に投与され得る。
【０１６１】
非経口投与のための処方物としては、緩衝剤、静菌剤および処方物を意図されるレシピエントの血液と等張にする溶質を含み得る、水性および非水性の等張無菌注射溶液；ならびに懸濁剤および増粘剤を含み得る、水性および非水性の無菌懸濁液が挙げられる。
この処方物は、単位用量または複数用量のシールされた容器（例えば、アンプルおよびバイアル）中に提示され得、そして使用直前に、無菌の液体キャリア（例えば、注射用水）の添加のみを必要とするフローズドライ（凍結乾燥）状態で保存され得る。即時調合注射溶液および懸濁液は、上記に記載された類の、無菌の散剤、顆粒剤および錠剤から調製され得る。
【０１６２】
局所投与のために、本発明の組成物は、ローション剤、クリーム剤、ゲル剤、スティック剤、スプレー剤、軟膏およびペースト剤を含むがこれらに限定されない、広範な種々の製品型として提供され得る。これらの製品型は、液剤、乳濁剤、ゲル剤、固体およびリポソームを含むがこれらに限定されない数種類の処方物を含み得る。
【０１６３】
液剤として処方された本発明の組成物の局所投与に有用な組成物は、代表的に、薬学的に受容可能な水性溶媒または有機溶媒を包含する。用語「薬学的に受容可能な有機溶媒」とは、非α−トコフェロール組成物および／もしくはそれらの代謝産物および／もしくは誘導体、またはそれらのトコフェロールの混合物が、その中に分散または溶解され得、かつ需要可能な安全性特性（例えば、刺激特徴および感作特徴）を保有し得る溶媒をいう。適切な有機溶媒の例としては、以下が挙げられる：プロピレングリコール、ポリエチレングリコール（２００−６００）、ポリプロピレングリコール（４２５−２０２５）、グリセロール、１，２，４−ブタントリオール、ソルビトールエステル、１，２，６−ヘキサントリオール、エタノール、イソプロパノール、ブタントリオール、ソルビタンエステル、１，２，６−ヘキサントリオール、エタノール、イソプロパノール、ブタンジオール、およびこれらの混合物。
【０１６４】
本発明において有用な局所組成物が、エアゾールとして処方され、そしてスプレーとして皮膚に適用される場合、プロペラントが溶液組成物に添加される。本明細書中で有用なプロペラントの例としては、塩化低分子量炭化水素、フッ化低分子量炭化水素、および塩化−フッ化低分子量炭化水素が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１６５】
本発明において有用な組成物は、皮膚軟化剤を含む溶液として処方され得る。本明細書中で用いられる場合、「皮膚軟化剤」とは、乾燥の予防または緩和のため、ならびに皮膚の保護のために用いられる物質をいう。広範な種々の適切な皮膚軟化剤が公知であり、そして本明細書中で用いられ得る。
【０１６６】
非α−トコフェロール富化トコフェロール組成物および／または非α−トコフェロール代謝産物富化組成物から処方され得る別の型の製品は、クリーム剤である。本発明の溶液から処方され得る別の型の製品は、ローション剤である。
【０１６７】
本発明の組成物から処方され得るなお別の型の製品は、軟膏である。軟膏は、動物油もしくは植物油、または半固体炭化水素（油性）の単純基剤を含み得る。軟膏はまた、水を吸収して乳濁剤を形成する、吸収性軟膏基剤を含み得る。軟膏キャリアはまた、水溶性であり得る。
【０１６８】
別の型の処方物は、乳濁剤であり得る。乳化剤は、非イオン性、アニオン性またはカチオン性であり得、乳化剤の例は、例えば、米国特許第３，７５５，５６０号および同第４，４２１，７６９号に記載される。
【０１６９】
ローション剤およびクリーム剤は、乳濁液および溶液として処方され得る。
【０１７０】
局所調製物のための、水中油型および油中水型の単純乳濁液（例えば、ローション剤およびクリーム剤）は、当該分野で周知である。多相乳濁液組成物（例えば、水中油中水型）もまた、例えば、米国特許第４，２５４，１０５号に開示されるように公知である。三重乳濁液もまた、本発明の局所投与のために有用であり、そして例えば、米国特許第４，９６０，７６４号に開示されるようなシリコーン流体中水中油乳濁液（ｏｉｌ−ｉｎ−ｗａｔｅｒ−ｉｎ−ｓｉｌｉｃｏｎｅ ｆｌｕｉｄ ｅｍｕｌｓｉｏｎ）を包含する。
【０１７１】
局所組成物において有用な別の乳濁液は、微小乳濁液系である。例えば、このような系は、約９％〜約１５％のスクアレン、約２５％〜約４０％のシリコーン油；約８％〜約２０％の脂肪アルコール；約１５％〜約３０％のポリオキシエチレンソルビタンモノ脂肪酸（商品名ＴＷＥＥＮＳの下で市販される）または他の非イオン性剤；および約７％〜約２０％の水を含む。
【０１７２】
リポソーム処方物はまた、本発明の組成物について有用である。このような組成物は、非α−トコフェロール、および／もしくはそれらの代謝産物、および／もしくはそれらの誘導体、および／またはそれらの混合物と、リン脂質（例えば、ジパルミトイルホスファチジルコリン）、コレステロールおよび水とを、例えば、Ｍｅｚｅｉら（１９８２）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ ３４：４７３ ４７４またはその改変版に記載されるような公知の方法に従って合わせることによって調製され得る。リポソームを形成するために適切な組成物の表皮脂質は、リン脂質の代わりになり得る。次いで、リポソーム調製物は、リポソーム処方物を産生するために、上記の局所処方物（例えば、ゲル剤または水中油型乳濁剤）のうちの１つに取り込まれる。局所適用されるリポソームの他の組成物および薬剤用途は、例えば、Ｍｅｚｅｉ（１９８５）Ｔｏｐｉｃｓ ｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｒｅｉｍｅｒら編，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，３４５−３５８頁に記載される。
【０１７３】
直腸の投与のために、本発明の組成物は、浣腸のための溶液として、例えば、カカオ脂もしくはサリチレートを含む適切な基剤を用いて坐剤として、または他の便利な適用物として、提供され得る。
【０１７４】
膣投与のための処方物は、活性成分に加えて、適用可能であることが当該分野で公知であるようなキャリアを含む、ペッサリー、タンポン、クリーム剤、ゲル剤、ペースト、フォームまたはスプレー処方物として提示され得る。
【０１７５】
任意の適用についての最適濃度を決定するために、従来技術が用いられ得る。従って、インビトロおよびエキソビボでの用途のために、種々の濃度が用いられ得、そして種々のアッセイを用いて、ストレスに曝露した場合の細胞の機能不全の程度が決定され得る。このようなアッセイの例は、本明細書中に記載され、そして例えば、米国特許第５，８０１，１５９号において記載されている。
【０１７６】
上記の組成物および投与方法は、本発明の方法および組成物を記載することを意味するが、限定しない。種々の組成物およびデバイスを産生する方法は、当業者の能力内であり、そして本明細書に詳細には記載されない。
【０１７７】
本発明の非α−トコフェロール富化トコフェロール組成物、および／または非α−トコフェロール代謝産物富化組成物、ならびにこれらの組成物を用いた方法は、炎症に関連した炎症マーカー（例えば、ＣＲＰおよびＩＬ−６）のレベルを低減し得る。これらの状態は、化学的妨害によって、または実験室における環境条件を変更すること（例えば、無酸素、低体温、高体温などを誘導することによる）によって、実験的に誘導され得る。
【０１７８】
組織損傷を低減するための組成物および方法を同定するために有用な種々のアッセイ、組成物および方法は、実施例に提供される。
【０１７９】
以下の実施例は、本発明を例示するために提供され、本発明を限定するためには提供されない。
【実施例】
【０１８０】
（実施例１：細胞炎症）
本実施例は、細胞株中での炎症反応を測定するための例示的アッセイを提供する。特に、このアッセイは、本発明の処方物の抗炎症活性の予測的尺度を提供する。
【０１８１】
（Ａ．ヒトＨｅｐ３Ｂ細胞−ＣＲＰアッセイ）
Ｈｅｐ３Ｂ細胞株を、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣカタログ番号ＨＢ−８０６４）から入手する。Ｈｅｐ３Ｂ細胞株を、８歳の黒人男性の肝臓組織から誘導した。この細胞は、形態が上皮であり、ヌードマウスにおいて腫瘍を産生する。この細胞は、α−フェトプロテイン、Ｂ型肝炎表面抗原、アルブミン、α−２−マクログロブリン、α−１−アンチトリプシン、トランスフェリン、プラスミノゲン、補体Ｃ３およびβ−リポタンパク質を産生する（Ｋｎｏｗｌｅｓ ＢＢら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９８０，２０９：４９７−４９９）。この細胞株は、肝細胞サイトカインおよび急性期タンパク質放出を研究するために広範に用いられている（例えば、Ｄａｍｔｅｗ Ｂら，１９９３，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １５０：４００１−４００７）。
【０１８２】
ＨＥＰ３Ｂ細胞を、１０％ウシ胎仔血清（Ｆｅｔａｌ Ｂｏｖｉｎｅ Ｓｅｒｕｍ；ＦＢＳ；Ｈｙｃｌｏｎｅ）、１×ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ／Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ；ＧＩＢＣＯ、カタログ番号１５１４０−１２２）および０．１ｍＭ非必須アミノ酸（ＧＩＢＣＯ、カタログ番号１１１４０−０５０）を補充した最小必須培地（Ｍｉｎｉｍｕｍ Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ Ｍｅｄｉｕｍ；ＭＥＭ；ＧＩＢＣＯ）中で増殖させる。細胞を解凍し、そして当該分野で公知の標準的方法に従って、温かい培地中に移植する。
【０１８３】
細胞を、空気雰囲気インキュベーター中で３７℃にて、５％ＣＯ_２を用いて、フラスコ中でインキュベートする。ＨＥＰ３Ｂ増殖培地を、この細胞が７０〜８０％コンフルエンスに到達するまで（約３〜４日間）、２日毎に交換する。アッセイのために、この細胞を９６ウェルプレートに移植し、培養培地中５０００細胞／ウェルで播種し、そして３７℃のインキュベーター（５％ＣＯ_２を補充した空気）中で７日間増殖させる。培地を、アッセイまで毎日交換する。
【０１８４】
試験化合物を、１０ｎｇ／ｍｌ ＩＬ−１β、２０ｎｇ／ｍｌ ＩＬ−６および１μＭデキサメタゾンを含む、「刺激緩衝液（Ｓｔｉｍｕｌｕｓ Ｂｕｆｆｅｒ）」（０．１ｍＭ非必須アミノ酸、１×ペニシリン／ストレプトマイシン、１０％ ＦＢＳを含むＭＥＭ培地）中に希釈する。培地を細胞から除去し、そして２００μｌの試験希釈物で交換する。細胞を、インキュベーター中に３７℃で３日間戻す。次いで、この細胞由来の上清について、以下の通り、ＣＲＰ ＥＬＩＳＡを実施する。
【０１８５】
Ｃｏｓｔａｒ ＥＩＡ／ＲＩＡプレートを、炭酸緩衝液（１００μｌ／ウェル）中に４０００：１希釈されたウサギ抗ヒトＣＲＰ（ＤＡＫＯ）を用いて、３７℃にて４５分間コーティングする。次いで、プレートをＣＲＰ洗浄緩衝液（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、０．３Ｍ ＮａＣｌ、０．５μｌ Ｔｗｅｅｎ−２０、ｐＨ８．０）を用い、自動プレート洗浄機を用いて５回洗浄する。プレートを、乾燥させ、覆いをし、そして使用するまで冷蔵し得る。上清（１００μｌ）を試験プレートの各ウェルから取り出し、そして予めコーティングしたＥＬＩＳＡプレートの対応するウェルに添加する。
【０１８６】
（ＣＲＰ洗浄緩衝液中に）５００：１希釈したＨＲＰ結合体化ウサギ抗ヒトＣＲＰ（ＤＡＫＯ）１００μｌを各ウェルに添加し、続いて３７℃にて３０分間インキュベートする。プレートを、ＣＲＰ洗浄緩衝液を用い、自動化プレート洗浄機を用いて５回洗浄する。２００μｌの３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）液体基質系（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）を各ウェルに添加し、続いて暗所にて１５分間、室温でインキュベートする。最後に、５０μｌの１Ｍ Ｈ_２ＳＯ_４を各ウェルに添加し、そして４５０ｎｍでの吸光度を、マイクロタイター分光光度計において直ちに測定する。
【０１８７】
上記の通りに測定されたＣＲＰは、細胞生存率アッセイ（例えば、細胞トラッカーグリーンアッセイ（Ｃｅｌｌ Ｔｒａｃｋｅｒ Ｇｒｅｅｎ ａｓｓａｙ））を用いて、ウェルあたりの細胞数について正規化される。これを実施するために、培地の残余部は、この細胞試験プレート由来であり、細胞を、２００μｌの予備加温１×ハンクス基本塩溶液（Ｈａｎｋｓ Ｂａｓｉｃ Ｓａｌｔ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ；ＨＢＳＳ；ＧＩＢＣＯ）を用いて洗浄し、そして１００μＬの５μＭ細胞トラッカーグリーン（Ｃｅｌｌ Ｔｒａｃｋｅｒ Ｇｒｅｅｎ；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）を各ウェルに添加する。次いで、プレートを、３７℃で３０分間インキュベートする。次いで、細胞を、予備加温した１×ＨＢＳＳを用いて２回洗浄する。プレートを、４８５励起／５３８発光フィルター対にてＦｌｕｏｒｏｓｋａｎ（登録商標）蛍光計を用いて直ちに読取る。
【０１８８】
ＣＲＰアッセイ（例えば、本明細書中に開示されるアッセイ）では、γ−トコフェロールは、約１０マイクロモルにて、ＣＲＰのレベルを約４０％〜約６０％低減する際に有効であった。ＣＲＰアッセイ（例えば、本明細書中に開示されるアッセイ）では、β−トコフェロールは、約３〜約１０マイクロモルにて、ＣＲＰのレベルを約５０％低減する際に有効であった。ＣＲＰアッセイ（例えば、本明細書中に開示されるアッセイ）では、約９〜約１５マイクロモルの間のＥＣ_５０でのδ−トコフェロールは、ＣＲＰレベルを低下する際に有効であった。他の非α−トコフェロールは、ＣＲＰレベルのそれらの低減を決定するためにこのアッセイにおいて試験され得る。
【０１８９】
（細胞−ＥＬＡＭアッセイ）
内皮−白血球接着分子（Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ−Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ Ａｄｈｅｓｉｏｎ Ｍｏｌｅｃｕｌｅ；ＥＬＡＭ）は、Ｅ−セレクチンとしても公知であり、内皮細胞の表面で発現される。このアッセイでは、リポ多糖（ＬＰＳ）およびＩＬ−１βを用いて、ＥＬＡＭの発現を刺激する；内皮細胞表面に対する白血球の接着が、細胞損傷の低減に関連することを示す研究（例えば、Ｔａｋａｄａ，Ｍ．ら，Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ ６４：１５２０−２５，１９９７；Ｓｔｅｉｎｂｅｒｇ，Ｊ．Ｂ．ら，Ｊ．Ｈｅａｒｔ Ｌｕｎｇ Ｔｒａｎｓ．１３：３０６−３１３，１９９４）に従って、試験薬剤を、この発現を低減する能力について試験する。
【０１９０】
以下を含む内皮細胞を、任意の多数の供給源から選択し得、そして当該分野で公知の方法に従って培養し得る；例えば、冠状動脈内皮細胞、ヒト脳微小血管内皮細胞（ＨＢＭＥＣ；Ｈｅｓｓ，Ｄ．Ｃ．ら，Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｌｅｔｔ．２１３（１）：３７−４０，１９９６）または肺内皮細胞。細胞を、９６ウェルプレートにおいて好都合に培養する。試験薬剤の存在下で６時間にわたって、各ウェルに、１０μｇ／ｍｌ ＬＰＳおよび１００ｐｇ／ｍｌ ＩＬ−１βを含む溶液を添加することによって、細胞を刺激する（特定の濃度および時間は、細胞型に依存して調整され得る）。処置緩衝液を除去し、そして予備加温したＦｉｘｉｎｇ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（登録商標）（１００μＬ／ウェル）で２５分間、室温にて置き換える。次いで、細胞を３回洗浄し、そしてブロッキング緩衝液（Ｂｌｏｃｋｉｎｇ Ｂｕｆｆｅｒ）（ＰＢＳ＋２％ ＦＢＳ）を用いて２５分間、室温にてインキュベートする。モノクローナルＥ−セレクチン抗体（Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ｅ−Ｓｅｌｅｃｔｉｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙ）（１：７５０、Ｓｉｇｍａカタログ番号Ｓ−９５５５）を含むブロッキング緩衝液を各ウェルに添加する。プレートをシールし、そして４℃で一晩保存する。プレートを、１ウェルあたり１６０μＬのブロッキング緩衝液で４回洗浄する。次いで、ブロッキング緩衝液中に５０００：１で希釈した二次抗体（Ｓｅｃｏｎｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ）−ＨＲＰ（１００μＬ／ウェル）を添加し、そしてプレートを、室温にて（光から保護して）２時間インキュベートする。次いで、プレートを、ブロッキング緩衝液で４回洗浄し、その後、１００μＬのＡＢＴＳ基質溶液（Ｚｙｍｅｄ、カタログ番号００−２０２４）を室温にて添加する。ウェルを、３５分間発光させ、その後、１０秒間の振盪プログラムを用いて、Ｆｌｕｏｒｏｓｋａｎ（登録商標）Ｒｅａｄｅｒにて４０２ｎｍにて測定する。陽性の結果を、コントロールウェルと比較した場合の、試験したウェルにおけるＥＬＡＭ濃度の低減として記録する。
【０１９１】
ＥＬＡＭアッセイ（例えば、本明細書中に記載されるアッセイ）では、１００〜１０００マイクロモルの範囲、特に４００マイクロモルのＥＣ_５０のγ−トコフェロールは、ＥＬＡＭの発現を低減し得た。ＥＬＡＭアッセイ（例えば、本明細書中に記載されるアッセイ）では、３００〜１０００マイクロモルの範囲、特に６００マイクロモルのＥＣ_５０のδトコフェロールは、ＥＬＡＭの発現を低減し得た。α−トコフェロールは、１０００マイクロモルでは活性でなかった。他の非αトコフェロール富化トコフェロール組成物または非α−トコフェロール代謝産物富化組成物をこのアッセイにおいて試験して、ＣＲＰレベルのそれらの低減を決定し得た。
【０１９２】
（実施例２：細胞炎症のインビボモデル）
このアッセイは、試験化合物が、オキサゾロン（ｏｘａｚｏｌｏｎｅ）またはアラキドン酸に対する二次的な炎症を予防または低減する能力を測定する。
【０１９３】
（Ａ．アラキドン酸）
アルビノの雄性ＣＤ−１マウス（７〜９週齢）を、この試験において用いた。アセトン中の２０％（ｗ／ｖ）アラキドン酸溶液を調製する。２０μｌのアラキドン酸溶液を、このマウスの左耳の背側に塗布する。その直後、試験化合物（７０％エタノール／３０％プロピレングリコール中２０μＬ）を、この左耳に塗布する。未処置の右耳を、コントロールとして供した。マウスを、処置の１時間後にＣＯ_２吸入によって屠殺する。左耳および右耳を取り出し、そして７ｍｍのパンチ生検を各々から採取する。このパンチ生検を計量し、そして相違を算出する。γ−トコフェロールは、このアッセイにおいて測定した場合、アラキドン酸の曝露に対して二次的な炎症を低減し得た。他の非α−トコフェロール富化トコフェロール組成物は、このモデルにおいて炎症を低減するそれらの能力について試験され得る。
【０１９４】
（Ｂ．オキサゾロン）
ＣＤ−１マウスを、３％オキサゾロン（シグマ）（コーン油：アセトン中で３０ｍｇ／ｍｌに調製）を剃毛した腹部に付与することにより誘導する。５日後、マウスに、アセトン中の２％オキサゾロン（２０ｍｇ／ｍｌ）を左耳上に抗原投与する（右耳は非処置コントロールであった）。抗原投与の１時間後、試験化合物を、７０％エタノール／３０％プロピレングリコール中、左耳に付与する。動物を、２４時間後屠殺し、そして７ｍｍの耳のパンチ（ｐｕｎｃｈ）を得た。この耳のパンチを、バランススケール上に置き、そして非処置耳と処置耳との間の差異を測定した。阻害％を、ビヒクル群の平均に対する各群の平均を比較することにより算出する。（ハイドロコルチゾンを、この試験におけるポジティプコントロールとして供する）。非−α−トコフェロール富化トコフェロール組成物は、このモデルにおける炎症を低減するそれらの能力について試験され得る。
【０１９５】
（実施例３：筋肉炎症）
健常な、運動していない若年男性成人（１８〜２５才）は、ベースライン代謝物試験（以下に規定）のために血液のサンプルを提供し、そして７日間の間、試験製品または偽薬を与えられる。次いで、被験体は、Ｃｙｂｅｘ（登録商標）アームカールマシン（Ｃｙｂｅｘ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃ、．Ｍｅｄｗａｙ、ＭＡ）上、それらの偏心１−反復最大の８０％を用いて、１０の反復の３セットを実施する。被験体には、各セットの間に２分の休息を与えられ、そして疲れるまで反復を継続する。運動の３日後、被験体は、ＣＢＣ、および代謝物およびマーカー（イソプロスタン、脂質ヒドロペルオキシド、ＬＤＨ、ＣＫ、ミオグロビン、ＣＲＰ、ＩＬ−６、ミエロペルオキシダーゼ）のレベル、ならびにトコフェロール（追従モニタリング）の試験のための血液を提供する。被験体はまた、筋肉痛の主観的な評価を提供する。これらの指標が測定され、そして４日後に再び収集される。
【０１９６】
代謝産物およびマーカーのベースラインレベルは、摂取時および運動の直前に測定された値の平均として採られる；ベースラインから差異は、運動の３および７日後に算出される。試験化合物は、それらが、任意の炎症性マーカー、特にＣＲＰにおける、ベースラインと比較した減少を生成する場合、またはコントロール（偽薬処理）被験体において測定された平均増加における減少を生成する場合、抗炎症性効果を有すると考えられる。非αトコフェロール富化組成物または非αトコフェロール代謝物富化組成物は、このモデルにおける例えばＣＲＰレベルのような炎症性マーカーを減少するそれらの能力について試験される。
【０１９７】
（実施例４：トコフェロールおよびトコフェロール代謝物についての血清サンプルの分析）
（材料）
試薬。（＋）−γ−トロフェロールおよび（±）−α−トコフェロールは、Ｓｉｇｍａ（それぞれ、カタログ番号Ｔ−１７８２およびＴ−３２５１）から購入した。γ−およびα−トコフェロールストック溶液を、個々に、アセトニトリル（４ｍｇ／ｍｌ）中に調製し、そしてアンバーバイアル中、−８０℃で貯蔵した。γ−ＣＥＨＣは、Ｇａｌｉｌｅｏ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．において、当該分野で公知の方法に従って調製され、その一方、α−ＣＥＨＣは、Ｅｎｃｏｒｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（Ｒｉｖｅｒｓｉｄｅ、ＣＡ、カタログ番号Ｅ−８２０１）から購入した。γ−およびα−ＣＥＨＣストック溶液を、個々に、アセトニトリル（１ｍｇ／ｍｌ）中に調製し、そしてアンバーバイアル中、−８０℃で貯蔵した。抽出に用いたアセトニトリルおよびメタノールならびにＨＰＬＣは、Ｂｕｒｄｉｃｋ ａｎｄ Ｊａｃｋｓｏｎから購入した。酢酸、エタノール、およびヘキサンは、ＥＭ Ｓｃｉｅｎｃｅから得た。ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ、カタログ番号Ｂ−１３７８）、Ｌ−アスコルビン酸（カタログ番号Ａ−７６３１）、Ｅ．ｃｏｌｉ β−グルクロニダーゼ（カタログ番号Ｇ−７３９６）、トリフルオロ酢酸、およびリン酸第一カリウムはＳｉｇｍａから購入した。ＥＤＴＡとともにプールされ凍結されたヒト血清および血漿をバックグラウンド掃引するために用い、そして標準は、Ｖａｌｌｅｙ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌから得た（それぞれ、カタログ番号ＨＳ−１００４およびＨＰ−１０５１）。Ｃｅｎｔｒｉｃｏｎ ＹＭ−３０およびＹＭ−５０メンブレン濾過デバイスをＭｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｃｏｒｐ．から得た。
【０１９８】
器具。トコフェロール分析を、Ａｌｌｔｅｃｈ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ、Ｉｎｃ．から購入したＡｌｌｔｉｍａＣ_１８ＨＰＬＣカラム（５μｍ、１５０×２．１ｍｍ）（カタログ番号８８３７０）を用いるダイオードアレイ検出器を備えた、Ａｇｉｌｅｎｔ １１００ Ｓｅｒｉｅｓ ＨＰＬＣ上ＬＣ−ＵＶ検出により実施した。ＣＥＨＣ分析は、同じ型のＨＰＬＣカラムを用いる、ダイオードアレイ検出器およびエレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）源を備えたＡｇｉｌｅｎｔ １１００ Ｓｅｒｉｅｓ ＬＣ−ＭＳＤ上のＬＣ−ＭＳにより実施した。溶媒除去は、Ｓｐｅｅｄｖａｃ ＳＣ２１０Ａ遠心エバポレーター（Ｓａｖａｎｔ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）を用いて達成された。
【０１９９】
（方法）
トコフェロール標準。アセトニトリル中のγ−およびα−トコフェロール（１：１）の標準混合物（各々、１０、２０、５０、１００、５００、１０００、および２０００μｇ／ｍＬ）を、分析の各々の日に、ストック溶液から調製した。各標準混合物（１０μＬ）を、９０μＬのプールされたヒト血清に添加し、標準曲線（１、２、５、１０、５０、１００、および２００μｇ／ｍＬトコフェロール）を生成するために用いたサンプルを生成した。
【０２００】
トコフェロール抽出。エタノール（１５０μＬ）を、上記のように調製した各標準血清サンプルに、および各研究被験体血清サンプル（１００μＬ）に添加し、タンパク質を沈殿させ、そして次に２５０μＬの水を添加し、抽出のための容量を増加した。トコフェロールを２ｍＬのヘキサン／エチルアセテート（５：１）で抽出した。ボルテックス攪拌、遠心分離、および−８０℃でサンプルを凍結した後、上部の有機層を、取り除き、そして溶媒を蒸発させた。残渣を１００μＬのアセトニトリル／メタノール（１：１）中に再懸濁し、そしてＨＰＬＣ分析のために用いた。
【０２０１】
トコフェロール分析。抽出されたトコフェロールを、ＡｌｌｔｉｍａＣ_１８逆相ＨＰＬＣカラム（５μｍ、１５０×２．１ｍｍ）を用いるＨＰＬＣ（２５μＬ注入）を用い、流速０．３ｍＬ／分の流速のトリフルオロ酢酸（０．１％）を含むアセトニトリル／メタノール（８０：２０）で溶出することにより分離した。２９５ｎｍにおけるＵＶモニタリングは、γ−トコフェロールおよびα−トコフェロールのそれぞれ１１．１分および１２．９分における検出を可能にした。
【０２０２】
トコフェロールデータ分析。γ−トコフェロールおよびα−トコフェロールの標準曲線を作成するためのデータは、上記のように調製された標準（１、２、５、１０、５０、１００、および２００μｇ／ｍＬトコフェロール）の二重または三重の分析により生成した。各サンプルについて、ピークの積分は、２９５ｎｍにおけるクロマトグラムから生成し、そしてバックグラウンド（抽出されプールされたヒト血清）を掃引した。曲線フィッティングは、Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌ中で実施した。２９５ｎｍにおけるＵＶ吸収の直線状または重み付けした（１／ｘ、または１／ｘ^２）標準曲線 対 μｇ／ｍＬ濃度を作成した。一般に、γ−トコフェロールおよびα−トコフェロールの定量の直線範囲は、１〜１００μｇ／ｍＬであり、そして定量の下限（ＬＬＯＱ）は、１μｇ／ｍＬであった。各研究被験体からのサンプルのトコフェロールレベルは、分析のその日に作成した標準曲線を用いて算出した。
【０２０３】
ＣＥＨＣ標準。水中のγ−ＣＥＨＣおよびα−ＣＥＨＣ（１：１）の標準混合物（各々５０、１００、２５０、５００、１０００、および５０００ｎｇ／ｍＬ）を、分析の各々の日にストック溶液から調製した。各標準混合物（１０μL）を、９０μＬのプールされたヒト血清に添加し、標準曲線を生成するために用いたサンプルを生成した（５、１０、２５、５０、１００、５００ｎｇ／ｍＬのＣＥＨＣ）。
【０２０４】
ＣＥＨＣ抽出。水中のアスコルビン酸（１０μＬ、５ｍｇ／ｍｌ）を、上記のように調製した各標準血清サンプルに、および各研究被験体血清サンプル（１００μＬ）に添加してＣＥＨＣを安定化し、そして次に１００μＬのβ−グルクロニダーゼ溶液［１０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６．８）中７，５００単位／ｍＬ］を各サンプルに添加し、複合体化したＣＥＨＣを遊離させる。３７℃で３０分のインキュベーションの後、８００μＬのメタノール含有１０μｇ／ｍＬ ＢＨＴを添加してタンパク質を沈殿させ、そしてＣＥＨＣを抽出した。ボルテックス攪拌および遠心分離の後、各上清液を、予め１ｍＬの水の添加により調製されたＣｅｎｔｒｉｃｏｎ ＹＭ−３０またはＹＭ−５０メンブレン濾過デバイスに移した。次いで、抽出物を、１５℃、３，７００ｒｐｍで４５分間遠心分離し、サンプルから汚染物を除いた。濾液から溶媒を取り除き、そして残渣を５０μｇ／ｍＬのアスコルビン酸を含む、１００μＬの４５％メタノール−０．１％酢酸中に再懸濁した。
【０２０５】
ＣＥＨＣ分析。抽出されたＣＥＨＣを、ＡｌｌｔｉｍａＣ_１８逆相ＨＰＬＣカラム（５μｍ、１５０×２．１ｍｍ）を用い、水（０．１％ＨＯＡｃ）／メタノール（５５：４５）の１分間で開始し、その後の０．２５ｍＬ／分の流速の、１０分で８０％メタノールまでの直線状グラジエントで溶出されるＬＣ−ＭＳ（３０μＬ注入）により分析した。これらの条件は、１００％メタノールまでの急速（０．５分）グラジエントを用いてカラムを洗浄したとき（２５分まで継続される）、１５分まで維持された。２６３．１ａｍｕ（γ−ＣＥＨＣ）および２７７．１（α−ＣＥＨＣ）における選択的イオンモニタリング（ＳＩＭ）でのネガティブイオンモードで作動するエレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）源を用いる質量スペクトル法による分離をモニターすることで、それぞれ、１２．９分および１３．８分でγ−ＣＥＨＣおよびα−ＣＥＨＣの検出を可能にした。
【０２０６】
（ＣＥＨＣデータ解析）γ−ＣＥＨＣおよびα−ＣＥＨＣについての標準曲線を作成するためのデータを、上記のように調製された標準の二連または三連の解析により生成した（５、１０、２５、５０、１００、５００ｎｇ／ｍＬ）。各サンプルについて、ピークの積分を、２６３．１ａｍｕ（γ−ＣＥＨＣ）および２７７．１（α−ＣＥＨＣ）におけるＳＩＭクロマトグラムから作成し、そしてバックグラウンド（プールされたヒト血清から抽出）を減算した。Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌで曲線の当てはめを行った。ＳＩＭピーク面積対濃度（ｎｇ／ｍＬ）の線形（１／ｘ）標準曲線または加重（１／ｘ^２）標準曲線を作成した。一般的に、計量（ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ）のための線形範囲は１０〜５００ｎｇ／ｍＬまたは５〜５００ｎｇ／ｍＬであり、そして計量の下限（ＬＬＯＱ）は、γ−ＣＥＨＣおよびα−ＣＥＨＣについてそれぞれ、１０ｎｇ／ｍＬおよび５ｎｇ／ｍＬであった。各研究対象からのサンプルのＣＥＨＣレベルを、解析の日に作成した標準曲線を使用して計算した。
【０２０７】
（実施例５：末期腎臓疾患を有する成体における炎症メディエータに対するトコフェロールの効果）
慢性の血液透析をしている末期腎臓疾患（ＥＳＲＤ）を有する患者を、研究のために募集した。被験体は、３０歳〜６０歳の間の年齢であり、かつ臨床的に受容可能な肝機能（トランスアミナーゼが正常の２倍未満および白血球（ＷＢＣ）が４．５〜１０．５Ｋ）を有することを必要とした。健常で年齢および性別の合う成体をまた、研究のために募集した。全ての被験体にインフォームドコンセントを行い、そして研究プロトコルは参加している診療所のＩｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ Ｒｅｖｉｅｗ Ｂｏａｒｄにより承認された。
【０２０８】
α−トコフェロールまたはγ／δ−トコフェロールを富化した混合トコフェロール調製物（以下に規定される）のいずれかの単回の６００ｍｇ用量を投与されるように患者を無作為に振り分けた（「急性期」）。３〜４週間の洗い流し（ｗａｓｈｏｕｔ）期間の後、患者に、３００ｍｇ／日を２週間投与した（「慢性期」）。試験品を、契約ＧＭＰ設備において標準的な方法により、以下のいずれかを含む同一の軟質ゲルカプセルで調製した：「α−Ｔ」−９５％ｄ−α−トコフェロール；または「γ／δ−Ｔ」−６０％ｄ−γ−トコフェロール、２８％のｄ−δ−トコフェロール、および１０％のｄ−α−トコフェロールを含有する、γ−トコフェロールを富化したトコフェロール混合物。
【０２０９】
臨床パラメーターを、急性期における急性投薬の１日前ならびに１日後および６日後に評価した。慢性期については、臨床パラメーターを、ベースラインにおいて、そして１週間および２週間の処置後に評価した。示差的生命徴候（体重、血圧、体温および心拍数）と共に血液化学（ＣＢＣ）を訪問毎に決定した。血清α−トコフェロール（α−Ｔ）、γ−トコフェロール（γ−Ｔ）、α−ＣＥＨＣおよびγ−ＣＥＨＣを、各訪問時に採取した血液に対して、実施例４に記載されるようにＨＰＬＣおよびＬＣ−ＭＳにより分析した。血清ＣＲＰ、ならびにＩＬ−６およびプレアルブミンを、本研究の２週間の投薬期の初めの終わりに測定した。２回の訪問時（急性投薬（ａｃｕｔｅ ｄｏｓｅ）の１日後および本研究の第２期における２週間の別の時点）に、血液サンプルを、透析の開始時および透析セッションの終了直後にも抜き取り、トコフェロールおよびＣＥＨＣの血清レベルに対する透析の効果の評価を可能にした。患者の健康状態および安全性を、身体検査、生命徴候、臨床実験評価、およびこの研究全体を通しての不利な事象の報告により評価した。
【０２１０】
（データの解析）：Ｗｉｌｃｏｘｏｎ徴候の（ｓｉｇｎｅｄ）ランク試験をグループ内の比較について行い、そしてＭａｎｎ−Ｗｈｉｔｎｅｙ Ｕ試験をグループ間で行った。Ｓｐｅａｒｍａｎランク相関試験を使用して、血清ＣＲＰとＩＬ−６との間の関係を測定した。解析を、Ｗｉｎｄｏｗｓ(登録商標)９８／９５／ＮＴ用のＩｎｔｅｒｃｏｏｌｅｄ Ｓｔａｔａ６．０（Ｓｔａｔａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｃｏｌｌｅｇｅ Ｓｔａｔｉｏｎ，ＴＸ）を使用して行った。データは、他に記載が無ければ平均＋／−ＳＥＭとして報告する。
【０２１１】
（結果）：ベースラインの血清γ−トコフェロール代謝産物γ−ＣＥＨＣレベルは、健常コントロールにおけるレベルよりもＥＳＲＤ患者において６倍高かった（５８２．２対９５．３ｎｇ／ｍｌ）；同様に、α−トコフェロール血清α−ＣＥＨＣレベルは、コントロールにおけるレベルよりもＥＳＲＤ患者においてほぼ１０倍高かった（７２．３対７．４ｎｇ／ｍｌ）。
【０２１２】
６００ｍｇのγ／δ−Ｔ投与の１日後、γ-ＣＥＨＣレベルは、ＥＳＲＤ群（７３０〜１８４８ｎｇ／ｍｌ）において二倍より大きくなり、そしてコントロール（６７〜３４８ｎｇ／ｍｌ）において、数倍に増加した。透析の直後、γ−ＣＥＨＣは、ベースラインに戻り、そして５日後に再び測定すると、γＣＥＨＣは、ＥＳＲＤ群およびコントロール群の両方において、ベースライン付近であった。
【０２１３】
２８日目の洗浄、続く７日間の３００ｍｇのγ／δＴ／日の後、血清γ−ＣＥＨＣは、ＥＳＲＤ群（７４９．２〜３８９２．６ｎｇ／ｍｌ）において４倍より多く増加したが、予備透析（３３９５．４ｎｇ／ｍｌ）処置のさらに７日後にはそれ以上上昇せず、そして透析後（１５２１ｎｇ／ｍｌ）には、半分未満減少した。コントロール群において、γ−ＣＥＨＣは、１週間後に、６７ｎｇ／ｍｌから３４７ｎｇ／ｍｌまで増加し、次いでそれ以上上昇しなかった（２８０ｎｇ／ｍｌ）。
【０２１４】
対照的に、６００ｍｇのαＴの単回投薬を行った後のＥＳＲＤ群またはコントロール群のいずれにおいても、α−ＣＥＨＣの明らかな変化ははかった。２８日目の洗浄、続く７日間の３００ｍｇ／日のαＴの後、血清α−ＣＥＨＣは、４倍より大きく増加し（５６ｎｇ／ｍｌから２６７ｎｇ／ｍｌまで）、そして処置のさらに７日後には、３５４ｎｇ／ｍｌまで増加した。透析後のαＣＥＨＣレベルは、半分以上減少した（１５２ｎｇ／ｍｌ）。コントロール群において、α−ＣＥＨＣは、１週間後に、１１ｎｇ／ｍｌから４９ｎｇ／ｍｌまで増加し、次いで変化しないままであった（３６ｎｇ／ｍｌ）。
【０２１５】
（炎症マーカー：血清Ｃ反応性タンパク質、ＩＬ−６）
中央血清ＣＲＰは、ＥＳＲＤ群において、γ／δ−トコフェロールの毎日の二週間にわたる投与の後に、５２％減少した（４．４ｍｇ／Ｌから２．１ｍｇ／Ｌ、ｐ＜０．０２）。血清ＩＬ−６レベルは、１９．４ｐｇ／ｍｌから１５．８ｐｇ／ｍｌまで減少し、そしてＩＬ−６の変化は、ＥＳＲＤ群における２週間にわたるγ／δ−トコフェロールの毎日の投与に対する血清ＣＲＰレベルの変化とポジティブに相関した（ρ＝０．６２、ｐ＝０．０７５）。
【０２１６】
従って、本研究の結果は、この危険性のある患者集団において、δ−トコフェロールを含有するγ−トコフェロール富化トコフェロール組成物の保護効果の証拠を、そのＣＲＰ低下効果によって提供する。さらに、この処置は、２週間の研究の間に手術を受けた患者からのデータ（従ってそのデータは、研究結果に含まれなかった）によって証明されるように、急性期損傷に応答して、ＣＲＰにおける正常な生理学的増加を抑制しなかった。このような外傷に対する正常な生理学的応答として予想されるように、手術後のＣＲＰは、８倍より大きく増加した。このことは、本発明に従う処置が、損傷または感染に対する急性期応答に関連するＣＲＰにおける正常な生理学的上昇を防止しないという証拠を提供する。このような急性期応答が、感染と戦うのに有利であるという証拠は、ヒトＣ反応性タンパク質トランスジェニックマウスにより提供される。これらのトランスジェニックマウスは、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅに感染した場合、野生型マウスと比較して低い死亡率および減少した菌血症を有することが示されている（Ｓｚａｌａｉ ＡＪら、Ｃｌｉｎ Ｃｈｅｍ Ｌａｂ Ｍｅｄ １９９９；３７：２６５−７０）。
【０２１７】
（実施例６：カラゲナン誘導性ラット足浮腫アッセイ）
（方法）
動物の準備：雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（体重１７５〜２００ｇ）を、この研究に使用した。動物に、標準的な研究室条件下で、水および市販のげっ歯類用食餌が自由にとれるようにした。室温を、２０〜２３℃に保ち、そして室内照明を、１２／１２時間の明／暗サイクルに設定する。動物を、研究の５〜７日前に研究室環境に順応させる。
【０２１８】
（実験手順）
ビヒクル、基準物質または試験物質を、カラゲナン注射の１時間前に投与することによって、各動物を以下のように処置する：
Ｉ．Ｖ．大腿静脈を介する注射： 麻酔を、酸素中３．０％のイソフルラン（Ａｅｒｒａｎｅ，Ｆｒｏｎｔ Ｄｏｄｇｅ，ＩＡ）の吸入によって、この手順全体にわたって維持する。手術の前に、右大腿静脈の外側部位を、剃毛し、そして消毒する。右鼡径部領域を３ｃｍ切開し、そして大腿静脈を単離する。この大腿静脈を、微小血管クリップで一時的に結紮し、この大腿静脈上に小さな切開部を作成して、ポリエチレン（ＰＥ−５０）カテーテル（Ｂｅｃｔｏｎ．Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ａｎｄ Ｃｏ．，Ｓｐａｒｋｓ，ＭＤ）を導入し、進める。このカテーテルを、縫合糸（シルク ５／０，Ｃａｒｌｉｓｌｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｆａｒｍｅｒｓ Ｂｒａｎｃｈ，ＴＸ）で適所に固定する。このカテーテルの他方の端部を、ボーラス注射のための生理食塩水で満たした注射器に取り付ける。止血剤を使用して、動物の背部の皮下に、ポケットを作成し、その結果、ＰＥカテーテルは、ボーラス注射または浸透圧ポンプによる連続的な注射のいずれかのために、肩甲骨の間の体外点まで挿入され得る。
【０２１９】
栄養供給： 標準的なラット栄養補給チューブ（Ｐｏｐｐｅｒ ＆ Ｓｏｎｓ Ｉｎｃ，ＮＹ）を、３ｃｃの皮下注射器に取り付ける。この動物を、垂直位置に保持する。給餌チューブを、口に入れ、次いで、このチューブが胃に達するまで進める。この注射器の内容物を、ゆっくりと送達し、次いで、このチューブを引き抜く。
【０２２０】
Ｉ．Ｐ．注射： 目覚めたラットを、標準的な手掴み位置に保持する。２３ ３／４Ｇ針を、腹部の右下４分の１に、腹膜の中央からわずかに離れた場所を通して注射する。臓器拒絶を回避するために、注射器のプランジャーをわずかに引き戻す。流体が排出されない場合、この注射器の内容物は、腹腔中に送達される。
【０２２１】
処置の１時間後、各動物を、酸素中３．０％のイソフルラン（Ａｅｒｒａｎｅ，Ｆｒｏｎｔ Ｄｏｄｇｅ，ＩＡ）で麻酔し、生理食塩水中１％のカラゲナンλＩＶ型（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）懸濁液（使用の２〜３時間以内に新たに作製した）１００μｌを、右後足の足底内表面に投与する。足浮腫を、カラゲナン注射の４時間後に、容量測定器を使用して足容量の増加を測定することによって、または精密はかりを使用して足重量の増加を測定することによってのいずれかで測定した。浮腫の測定の直前に、これらの動物を、ＣＯ_２窒息により安楽死させ、そして以後の分析のために、５００μｌの血液を心臓穿刺によって採取する。足容量を、この足により置き換えられる、予め較正したチャンバから水の程度によって決定する。左後足（コントロール）の容量を、右後足（カラゲナンで処置）の容量から引いて、カラゲナン誘導性浮腫の容量を決定する。足間の重量差を測定するために、両足を切断し、別々に計量した。浮腫液を取り出し、そして、当該分野で公知の標準的なＥＬＩＳＡ技術を使用して、炎症マーカー（例えば、ＩＬ−６）について試験した。
【０２２２】
（統計的分析）
右足と左足との間の重量もしくは容量またはバイオマーカーレベルの差異を、この分析のための各動物について計算した。群データを、平均＋／−ＳＥＭとして表し、そしてｐ＜０．０５を有意であるとみなす。群間の比較を、独立スチューデントｔ検定（２つの群の間）または一方向ＡＮＯＶＡに続くＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉ多重比較によって行う。
【０２２３】
（結果）
γ−トコフェロール（３日間、１０〜１００ｍｇ／ｋｇ／日の経口予備処置）は、この方法により試験される浮腫液中に存在するＩＬ−６における有意な減少（４２、ｐ＜０．００１）を生じた。他の非α−トコフェロール富化トコフェロール組成物または非α−トコフェロール代謝産物富化組成物を、このモデルにおいて試験して、ＩＬ−６の減少を決定し得る。

Claims (36)

1. Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）関連炎症性状態に罹患する個体においてＣＲＰのレベルを減少する方法であって、該方法は、有効量の非α−トコフェロールを富化したトコフェロール組成物を該個体に投与する工程を包含する、方法。
2. 前記非α−トコフェロールが、γ−トコフェロールまたはそのγ−トコフェロール代謝産物、β−トコフェロールまたはそのβ−トコフェロール代謝産物、およびδ−トコフェロールまたはそのδ−トコフェロール代謝産物、からなる群から選択される、請求項１に記載の方法。
3. 前記非α−トコフェロールが、γ−トコフェロールまたはそのγ−トコフェロール代謝産物である、請求項１に記載の方法。
4. 前記非α−トコフェロールが、γ−トコフェロール代謝産物である、請求項３に記載の方法。
5. 前記γ−トコフェロール代謝産物がγ−ＣＥＨＣである、請求項４に記載の方法。
6. 前記非α−トコフェロールが、β−トコフェロールまたはβ−トコフェロール代謝産物である、請求項１に記載の方法。
7. 前記非α−トコフェロールが、β−トコフェロール代謝産物である、請求項６に記載の方法。
8. 前記β−トコフェロール代謝産物がβ−ＣＥＨＣである、請求項７に記載の方法。
9. 前記非α−トコフェロールが、δ−トコフェロールまたはδ−トコフェロール代謝産物である、請求項１に記載の方法。
10. 前記非α−トコフェロールがδ−トコフェロール代謝産物である、請求項９に記載の方法。
11. 前記δ−トコフェロール代謝産物がδ−ＣＥＨＣである、請求項１０に記載の方法。
12. 炎症性状態に罹患する個体においてＣＲＰのレベルを減少するための医薬の製造における、非α−トコフェロールの使用。
13. 前記非α−トコフェロールが、γ−トコフェロールまたはそのγ−トコフェロール代謝産物である、請求項１２に記載の使用。
14. 前記非α−トコフェロールが、γ−トコフェロールである、請求項１３に記載の使用。
15. 前記非α−トコフェロールが、β−トコフェロールまたはそのβ−トコフェロール代謝産物である、請求項１２に記載の使用。
16. 前記非α−トコフェロールが、β−トコフェロールである、請求項１５に記載の使用。
17. 前記非α−トコフェロールが、δ−トコフェロールまたはそのδ−トコフェロール代謝産物である、請求項１２に記載の使用。
18. 前記非α−トコフェロールが、δ−トコフェロールである、請求項１７に記載の使用。
19. 末期の腎臓疾患に罹患する個体において、炎症性マーカーのレベルを減少する方法であって、該方法は、有効量の、非α−トコフェロールを富化したトコフェロール組成物を該個体に投与する工程を包含する、方法。
20. 前記炎症性マーカーがＣＲＰまたはＩＬ−６である、請求項１９に記載の方法。
21. 前記非α−トコフェロールがγ−トコフェロールである、請求項１９に記載の方法。
22. 前記γ−トコフェロールを富化したトコフェロール組成物が、少なくとも６０％のγ−トコフェロールを含む、請求項２１に記載の方法。
23. 前記γ−トコフェロールを富化したトコフェロール組成物が、少なくとも７０％のγ−トコフェロールを含む、請求項２１に記載の方法。
24. 前記γ−トコフェロールを富化したトコフェロール組成物が、少なくとも９０％のγ−トコフェロールを含む、請求項２１に記載の方法。
25. 前記γ−トコフェロールを富化したトコフェロール組成物が、少なくとも６０％のγ−トコフェロールおよび少なくとも２８％のδ−トコフェロールを含む、請求項２１に記載の方法。
26. 末期の腎臓疾患に罹患する個体において、ＣＲＰレベルまたはＩＬ−６レベルを減少するための医薬の製造におけるγ−トコフェロールの使用。
27. 炎症性状態に罹患する個体において炎症性状態の症状を回復する方法であって、該方法は、該炎症性状態に関連する炎症性マーカーのレベルを減少するために有効な量の、γ−トコフェロールを富化したトコフェロール組成物を該個体に投与する工程を包含する、
    方法。
28. 前記炎症性マーカーがＣＲＰまたはＩＬ−６である、請求項２７に記載の方法。
29. 前記炎症性状態が、呼吸性炎症状態、セプシス、糖尿病、筋肉疲労、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、末期腎臓疾患（ＥＳＲＤ）および歯周疾患からなる群から選択される、請求項２７に記載の方法。
30. 炎症性状態に罹患する個体において炎症性状態の症状を回復する方法であって、該方法は、該炎症性状態に関連する炎症性マーカーのレベルを減少するために有効な量の、β−トコフェロールを富化したトコフェロール組成物を該個体に投与する工程を包含する、方法。
31. 前記炎症性マーカーがＣＲＰまたはＩＬ−６である、請求項３０に記載の方法。
32. 前記炎症性状態が、呼吸性炎症状態、セプシス、糖尿病、筋肉疲労、ＳＬＥ、ＥＳＲＤを含む腎臓炎症、歯周疾患および炎症性皮膚状態からなる群から選択される、請求項３０に記載の方法。
33. 炎症性状態に罹患する個体において炎症性状態の症状を回復する方法であって、該方法は、該炎症性状態に関連する炎症性マーカーのレベルを減少するために有効な量の、δ−トコフェロールを富化したトコフェロール組成物を該個体に投与する工程を包含する、方法。
34. 前記炎症性マーカーがＣＲＰまたはＩＬ−６である、請求項３３に記載の方法。
35. 前記炎症性状態が、呼吸性炎症状態、セプシス、糖尿病、筋肉疲労、ＳＬＥ、ＥＳＲＤを含む腎臓炎症、歯周疾患および非乾癬炎症性皮膚状態からなる群から選択される、請求項３３に記載の方法。
36. 前記組成物が、薬学的に受容可能なキャリアをさらに含む、請求項１、１９、２７、３０または３３に記載の方法。