JP2005323588A - Culturing double vessel and culturing method - Google Patents

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Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a culturing vessel needing no plurality of incubators even in case of simultaneously culturing several kinds of cells liking different gas concentrations, and to provide a culturing method using such a vessel. <P>SOLUTION: The culturing double vessel 1 comprises a gas-permeable culturing vessel 2 having an injection/ejection port 6, a gas-barrier vessel 3 covering the culturing vessel 2, and joints 12 and 13 for holding the culturing vessel 2 in the gas-barrier vessel 3 through ensuring a space to be formed between the culturing vessel 2 and the gas-barrier vessel 3. In culturing cells or microorganisms, the space formed between the culturing vessel 2 and the gas-barrier vessel 3 is accommodated with a gas with its composition controlled. <P>COPYRIGHT: (C)2006,JPO&NCIPI

Description

本発明は、細胞または微生物の培養容器および培養方法に関し、特に培養液の保存、最適培養環境の達成、内容物の抽出の容易性に優れ、浮遊細胞の培養やビーズ、不織布等の担体を用いた付着細胞の培養に適した培養容器およびこの培養容器を用いた培養方法に関する。   The present invention relates to a culture vessel and culture method for cells or microorganisms, and in particular, it is excellent in storage of a culture solution, achievement of an optimal culture environment, and easy extraction of contents, and use of a carrier such as suspension cell culture or beads or nonwoven fabric. The present invention relates to a culture vessel suitable for culturing adherent cells and a culture method using the culture vessel.

従来細胞培養用の培養容器として、ガス透過性の良いプラスチックからなるバッグに培養液を充填した培地入りバッグが知られている。たとえば特許文献１には、可撓性プラスチックシートよりなる袋状本体の上端部の途中に除菌フイルターを配置した溶媒注入チューブと培地導出口を装着し、袋状本体の内部には滅菌された培地が封入されてなる培地入りバッグが開示されている。また特許文献２には、内部に組織培養用培地を収容した通気性の組織培養用密封容器を非通気性材料で包装密封してなり、組織培養時に非通気性材料を除去して使用する保存兼組織培養用容器が開示されている。また特許文献３には、ガス透過率の大なるフイルムからなりγ線で滅菌したカルチャーバッグに、濾過滅菌を施した液体培地を無菌的に充填し、その充填口を無菌的にシールした後、ガス透過率が小さくγ線で滅菌した２次包材を無菌的に包装する液体場培地入りカルチャーバッグの製造方法が開示されている。
実開平２−９３９９９号公報 実開平３−１７２１６９号公報 特開平４−７１４８２号公報 Conventionally, as a culture vessel for cell culture, a medium-filled bag in which a culture solution is filled in a bag made of plastic having good gas permeability is known. For example, in Patent Document 1, a solvent injection tube in which a sterilization filter is disposed in the middle of the upper end of a bag-shaped main body made of a flexible plastic sheet and a medium outlet are mounted, and the bag-shaped main body is sterilized. A medium-filled bag in which a medium is enclosed is disclosed. In Patent Document 2, a hermetic sealed tissue culture container containing a tissue culture medium is packaged and sealed with a non-breathable material, and stored after removing the non-breathable material during tissue culture. A container for cum tissue culture is disclosed. In Patent Document 3, a culture bag made of a film having a large gas permeability and sterilized with γ rays is aseptically filled with a liquid medium subjected to filtration sterilization, and the filling port is aseptically sealed, A method for producing a culture bag containing a liquid field medium in which a secondary packaging material having a low gas permeability and sterilized by γ rays is packaged aseptically is disclosed.
Japanese Utility Model Publication No. 2-93999 Japanese Utility Model Publication No. 3-172169 Japanese Patent Laid-Open No. 4-71482

細胞培養は通常ガス組成を制御されたインキュベータ内で行われるため、異なるガス濃度を好む複数種類の細胞を同時に培養するときには、従来の培養バッグでは、いずれもガス濃度の異なる複数のインキュベータが必要となり、大きなスペースを要する上に操作も複雑となり手間がかかる。また、培養時には、従来の培養バッグはインキュベータ内の網棚の上に扁平な状態で並べるようにして配置され、重ねたり吊すことができないので、大きなスペースを必要とする。   Since cell culture is usually performed in an incubator with a controlled gas composition, when culturing multiple types of cells that prefer different gas concentrations at the same time, conventional culture bags require multiple incubators with different gas concentrations. In addition, a large space is required and the operation is complicated and time-consuming. Further, when culturing, conventional culture bags are arranged in a flat state on a net shelf in an incubator and cannot be stacked or suspended, so a large space is required.

また、従来の培養バッグは薄肉で形状安定性に欠け、流通過程で破損するおそれが多分にあるので、取扱いに極めて注意を要し面倒である。上記特許文献２、３のように保存時に外側に非通気性の包装材を使用するものであっても、培養バッグは内側で浮いた状態にあり形状が不安定であるか外側包装材に密着していて一重の培養バッグと大差ない状態のいずれかであるので、形状安定性に欠け流通過程で破損のおそれがあることには変わりがない。   In addition, the conventional culture bag is thin and lacks shape stability, and is likely to be broken during the distribution process. Even when a non-breathable packaging material is used on the outside during storage as in Patent Documents 2 and 3 above, the culture bag is in a state of floating inside and is unstable in shape or is in close contact with the outer packaging material However, since it is in a state that is not much different from a single culture bag, there is no change in shape stability and there is a risk of breakage in the distribution process.

さらに、従来の培養バッグは、細胞培養が完了して内容物を取出す際には、培養バッグを吊るして重力により内容物を取出しているので、時間がかかり非能率的である。仮に培養バッグ内に内圧を負荷して取出そうとしても、バッグ自体が膨らんでしまい困難である。   Furthermore, the conventional culture bag is time-consuming and inefficient because the contents are taken out by gravity by hanging the culture bag when the contents are taken out after the cell culture is completed. Even if an internal pressure is applied to the culture bag to take it out, it is difficult to swell the bag itself.

本発明は、従来の培養容器における上記問題点にかんがみなされたものであって、異なるガス濃度を好む複数種類の細胞を同時に培養する場合でも複数の異なるインキュベータを必要とせず、培養時に重ねたり吊るすことが可能であって小スペース化を図ることができ、流通過程で破損するおそれがなく流通容器として優れており、さらに細胞培養が完了した後の内容物の取出しを能率的に行うことができる培養容器を提供することを目的とするものである。   The present invention has been made in view of the above-mentioned problems in conventional culture vessels, and does not require a plurality of different incubators even when cultivating a plurality of types of cells that prefer different gas concentrations at the same time. It is possible to reduce the space, and it is excellent as a distribution container without being damaged in the distribution process, and the contents can be efficiently taken out after the cell culture is completed. The object is to provide a culture vessel.

本発明の他の目的は、この培養容器を使用する細胞、微生物の培養方法を提供することである。   Another object of the present invention is to provide a method for culturing cells and microorganisms using this culture vessel.

上記目的を達成する請求項１記載の培養二重容器は、注入・注出口を有するガス透過性の培養容器と、この培養容器を覆うガスバリアー性容器と、該培養容器と該ガスバリアー性容器との間に空間を形成することができるようにして該培養容器を該ガスバリアー性容器内に保持する培養容器保持手段とを備え、細胞または微生物の培養時に該培養容器と該ガスバリアー性容器との間に形成された空間にガス組成を制御したガスを収容することを特徴とするものである。   The culture double container according to claim 1, which achieves the above object, comprises a gas permeable culture container having an injection / outlet, a gas barrier container covering the culture container, the culture container and the gas barrier container And a culture container holding means for holding the culture container in the gas barrier container so that a space can be formed between the culture container and the gas barrier container when the cells or microorganisms are cultured. A gas whose gas composition is controlled is accommodated in a space formed between the two.

請求項２記載の発明は、該培養容器保持手段は該培養容器を該ガスバリアー性容器に部分的に接合する手段である培養二重容器である。   The invention according to claim 2 is a culture double container in which the culture container holding means is means for partially joining the culture container to the gas barrier container.

請求項３記載の発明は、該培養容器と該ガスバリアー性容器との間の空間に連通するガス通口が該ガスバリアー性容器に設けられている培養二重容器である。   The invention described in claim 3 is a culture double container in which a gas communication port communicating with a space between the culture container and the gas barrier container is provided in the gas barrier container.

請求項４記載の発明は、培養時に該培養容器の容器壁が実質的に円筒状、横断面が正多角形の角筒状、球状および半球状のいずれかに形成されている培養二重容器である。   The invention according to claim 4 is a culture double container in which the container wall of the culture container is formed into a substantially cylindrical shape, a square tube shape with a regular polygonal cross section, a spherical shape, or a hemispherical shape during culture. It is.

請求項５記載の発明は、該培養容器に培養液を充填・密封し、該培養容器と該ガスバリアー性容器との間の空間を不活性ガスまたは不活性ガスと炭酸ガスの混合ガスで置換してなる培養二重容器である。   According to the invention of claim 5, the culture vessel is filled and sealed with a culture solution, and the space between the culture vessel and the gas barrier container is replaced with an inert gas or a mixed gas of an inert gas and carbon dioxide gas. This is a culture double container.

請求項６記載の発明は、該培養容器に培養液を充填・密封し、該培養容器と該ガスバリアー性容器との間の空間を脱気してなる培養二重容器である。   The invention according to claim 6 is a culture double container in which the culture container is filled and sealed with a culture solution and the space between the culture container and the gas barrier container is deaerated.

請求項７記載の発明は、該培養容器に培養液を充填・密封し、該培養容器と該ガスバリアー性容器との間の空間に酸素吸収剤を封入してなる培養二重容器である。   The invention according to claim 7 is a culture double container in which a culture solution is filled and sealed in the culture container, and an oxygen absorbent is sealed in a space between the culture container and the gas barrier container.

請求項８記載の発明は、該ガスバリアー性容器が酸素吸収部または酸素吸収層を有する培養二重容器である。   The invention according to claim 8 is a culture double container in which the gas barrier container has an oxygen absorbing part or an oxygen absorbing layer.

請求項９記載の発明は、注入・注出口を有するガス透過性の培養容器と、この培養容器を覆うガスバリアー性容器からなる培養二重容器の該培養容器と該ガスバリアー性容器との間の空間にガス組成を制御して培養を行う細胞または微生物の培養方法である。   According to the ninth aspect of the present invention, there is provided a gas permeable culture container having an inlet / outlet and a gas barrier container covering the culture container between the culture container and the gas barrier container. This is a method for culturing cells or microorganisms in which the gas composition is controlled in the space of the cells and the cells are cultured.

請求項１０記載の発明は、ガス組成を制御したガスを該培養容器と該ガスバリアー性容器との間の空間に連通するガス通口から注入・注出する培養方法である。   A tenth aspect of the present invention is a culture method in which a gas whose gas composition is controlled is injected and poured out from a gas passage communicating with a space between the culture container and the gas barrier container.

請求項１１記載の発明は、培養過程において、該培養容器と該ガスバリアー性容器との間の空間に圧搾ガスを注入することにより該培養容器の内容物を抽出する培養方法である。   The invention described in claim 11 is a culture method for extracting the contents of the culture container by injecting a compressed gas into the space between the culture container and the gas barrier container in the culture process.

本発明によれば、細胞の培養時に培養容器とガスバリアー性容器との間に形成された空間にガス組成を制御したガスを収容するので、異なるガス濃度を好む複数種類の細胞を同時に培養する場合は、これらの細胞を培養すべき複数の培養二重容器を共通の恒温室に配置し、必要なガス濃度のガスをこれらの培養二重容器に注入することにより、複数のインキュベータを必要とせず、簡単に細胞培養を行うことができる。また、本発明によれば、培養容器とガスバリアー性容器との間に空間を形成することができるようにして培養容器は培養容器保持手段によってガスバリアー性容器に保持されているので、培養時に培養二重容器を積み重ねて配置してもガスは各培養容器に浸透することができ培養に支障をきたすことない。また、培養容器は縦にして吊るしても容器の形状が変わらないので、恒温室内において多数の培養容器を縦に吊るした状態で配置することができ、従来の培養容器にくらべて設置スペースを減少させることができる。   According to the present invention, the gas having a controlled gas composition is accommodated in the space formed between the culture container and the gas barrier container during cell culture, so that a plurality of types of cells that prefer different gas concentrations are cultured simultaneously. In some cases, multiple incubators are required by placing multiple culture double containers to cultivate these cells in a common temperature-controlled room and injecting gas of the required gas concentration into these double culture containers. In addition, cell culture can be performed easily. Further, according to the present invention, since the culture container is held in the gas barrier container by the culture container holding means so that a space can be formed between the culture container and the gas barrier container, Even if the culture double containers are stacked, the gas can permeate each culture container and does not interfere with the culture. In addition, since the shape of the container does not change even if the culture container is hung vertically, it can be placed in a constant temperature room with many culture containers hung vertically, reducing the installation space compared to conventional culture containers. Can be made.

また、本発明によれば、培養後培養容器とガスバリアー性容器の間の空間に圧搾空気等の圧搾ガスを注入することにより、培養容器内の内容物を迅速に取出すことができ、従来の重力による取出し方法に比べて内容物の取出しを能率的に行うことができる。   Further, according to the present invention, by injecting a compressed gas such as compressed air into the space between the culture container and the gas barrier container after the culture, the contents in the culture container can be quickly taken out. The contents can be taken out more efficiently than by the gravity method.

さらに、本発明の１側面によれば、培養容器は、培養時に容器壁が実質的に円筒状、横断面が正多角形の角筒状、球状および半球状のいずれかに形成されているので、容器内においてガスが拡散する方向が、ほぼ３６０度の方向から容器の中心部に向かってガスが拡散するので、扁平な袋からなる従来の培養容器に比較して、容器壁近傍と容器壁からもっとも離れた部分でのそれぞれの溶存ガスの濃度差が小さくなる。したがって、培養条件を最適培養条件により近づけることが可能となり、細胞等の培養効率および細胞培養の活度を上げることが可能となる。   Furthermore, according to one aspect of the present invention, the culture vessel is formed in any one of a cylindrical shape, a square tube shape having a regular polygonal cross section, a spherical shape, and a hemispherical shape at the time of cultivation. Since the gas diffuses in the container from the direction of approximately 360 degrees toward the center of the container, the vicinity of the container wall and the container wall are compared with the conventional culture container composed of a flat bag. The difference in the concentration of each dissolved gas at the part farthest from the center becomes small. Therefore, the culture conditions can be made closer to the optimum culture conditions, and the culture efficiency of the cells and the cell culture activity can be increased.

さらに、本発明の他の側面によれば、培養容器とガスバリアー性容器との間の空間を不活性ガスまたは不活性ガスと炭酸ガスの混合ガスで置換するか、あるいはこの空間を脱気することにより、培養液の酸化をより完全に防止することが可能となり、培養液の保存期間を延長することができる。同様に、この空間に酸素吸収剤を封入するか、あるいはガスバリアー性容器に酸素吸収部または酸素吸収層を設けることにより同様の効果を挙げることができる。   Furthermore, according to another aspect of the present invention, the space between the culture vessel and the gas barrier vessel is replaced with an inert gas or a mixed gas of inert gas and carbon dioxide, or the space is degassed. This makes it possible to more completely prevent the culture medium from being oxidized, and to extend the storage period of the culture liquid. Similarly, the same effect can be obtained by enclosing an oxygen absorbent in this space or by providing an oxygen absorbing portion or an oxygen absorbing layer in a gas barrier container.

以下添付図面を参照して、本発明の実施の形態について説明する。
図１〜図４は本発明に係る培養二重容器の１実施形態を示すもので、図１はその平面図、図２は図１のＡ−Ａ矢視図、図３は図１のＢ−Ｂ斜視図、図４は培養容器の平面図である。 Embodiments of the present invention will be described below with reference to the accompanying drawings.
1 to 4 show one embodiment of a culture double container according to the present invention, FIG. 1 is a plan view thereof, FIG. 2 is a view taken along arrow AA in FIG. 1, and FIG. -B perspective view, FIG. 4 is a plan view of the culture vessel.

培養二重容器１は、培養容器２とガスバリアー性容器３からなる。
本発明においては、培養容器２は、培養時に容器壁が実質的に円筒状、横断面が正多角形の角筒状、球状および半球状のいずれかに形成されていることが好ましい。本明細書において、「実質的に円筒状」とは、断面が図７（ａ）に示すように真円の円筒ばかりでなく、図７（ｄ）に示すような多少変形した円形断面または楕円形断面等本発明の目的を達成するために妨げとならない程度に真円を変形した断面形状を含む円筒を含むことを意味するものである。同様に、「実質的に横断面が正多角形の角筒状」とは、断面が正三角形、正方形（図７（ｅ）に示す）、正５角形、正６角形（図７（ｂ）に示す）、正８角形（図７（ｃ）に示す）等の正多角形の角筒ばかりでなく、本発明の目的を達成するために妨げとならない程度にこれらの正多角形を多少変形した横断面形状も角筒を含むことを意味するものである。 The culture double container 1 includes a culture container 2 and a gas barrier container 3.
In the present invention, it is preferable that the culture vessel 2 is formed in one of a substantially cylindrical shape, a square tube shape having a regular polygonal cross section, a spherical shape, and a hemispherical shape during culture. In this specification, “substantially cylindrical” means not only a perfect circular cylinder as shown in FIG. 7 (a) but also a slightly modified circular cross section or ellipse as shown in FIG. 7 (d). It is meant to include a cylinder including a cross-sectional shape obtained by deforming a perfect circle to such an extent that it does not hinder the object of the present invention, such as a cross-sectional shape. Similarly, “substantially a square polygonal cross section” means that the cross section is a regular triangle, square (shown in FIG. 7 (e)), regular pentagon, regular hexagon (FIG. 7 (b)). In addition to regular polygonal square tubes such as regular octagons (shown in FIG. 7 (c)), these regular polygons are slightly modified to the extent that they do not hinder the achievement of the object of the present invention. It is meant that the cross-sectional shape thus formed also includes a square tube.

培養容器２は、ガス透過性に優れたプラスチックからなり、複数本（図示の例では５本）の円筒５をビーチマット状に配置してなる円筒部４と、円筒部４の長手方向両端に連続して形成された端部２ａ、２ｂを備える全体として平面視矩形の袋状の容器であり、両端部２ａ、２ｂの外端縁はそれぞれ閉じられている。端部２ａ、２ｂは平坦な表面形状であり、各円筒５は端部２ａ、２ｂを介して相互に連通している。端部２ａには培養液、細胞、細胞増殖因子等の各種薬品類などのための注入・抽出口６が設けられており、培養容器２の内部と連通している。
尚、こうした注入・抽出口６は目的に合わせて必要数設けることができ、必要に応じて接続用のチューブやその先端にコネクターなどを設けることができる。 The culture vessel 2 is made of a plastic having excellent gas permeability, and includes a cylindrical portion 4 in which a plurality of (5 in the illustrated example) cylinders 5 are arranged in a beach mat shape, and both ends of the cylindrical portion 4 in the longitudinal direction. As a whole, it is a bag-like container having a rectangular shape in plan view, provided with continuously formed end portions 2a, 2b, and outer end edges of both end portions 2a, 2b are closed. The end portions 2a and 2b have a flat surface shape, and the cylinders 5 communicate with each other via the end portions 2a and 2b. The end 2 a is provided with an injection / extraction port 6 for various chemicals such as a culture solution, cells, and cell growth factors, and communicates with the inside of the culture vessel 2.
Note that the required number of injection / extraction ports 6 can be provided in accordance with the purpose, and a connection tube or a connector or the like can be provided at the tip of the connection tube as needed.

この培養容器２を製造する際は、図９に示すように、矩形の可撓性プラスチックシート７，８を相互間に間隔をおいて対向するように配置し、４辺の端縁部７ａ、８ａにおいてヒートシールにより接合した後対向するシート７、８の対応する長手方向の線７ｂと８ｂ、７ｃと８ｃ、７ｄと８ｄ、７ｅと８ｅに沿って両シート７、８を部分的にヒートシールすることにより、５本の円筒５からなる円筒部４を形成することができる。   When the culture vessel 2 is manufactured, as shown in FIG. 9, rectangular flexible plastic sheets 7 and 8 are arranged so as to face each other with an interval therebetween, and end edges 7a on four sides, 8a, the sheets 7, 8 are partially heat-sealed along the corresponding longitudinal lines 7b and 8b, 7c and 8c, 7d and 8d, and 7e and 8e of the opposing sheets 7 and 8 after being joined by heat sealing. By doing so, the cylindrical part 4 which consists of the five cylinders 5 can be formed.

このように可撓性を有する柔軟な培養容器２の対向する壁面をヒートシールするとともに培養液を一定以上充填することにより、培養容器２に形状保持性を付与でき、培養容器２とガスバリアー性容器３との間での密着を防止乃至は低減させ、培養容器２へのガス拡散を損なうことを防止乃至は低減させることができる。なお、形状保持性を付与する手段としては、ヒートシールの他、冶具やクリップあるいは磁石等の容器押え手段を用いて、対向する可撓性の容器壁を部分的に接触するように押えて行うことができる。また、密着を防止乃至は低減する手段としては、培養容器２とガスバリアー性容器３間の容器壁間に密着を防止するための部材を挟んだり、各容器壁に凹凸部を設けたりしてもよい。   By thus heat-sealing the opposing wall surfaces of the flexible culture vessel 2 having flexibility and filling the culture solution more than a certain amount, the culture vessel 2 can be given shape retention, and the culture vessel 2 and gas barrier properties can be provided. Adhesion with the vessel 3 can be prevented or reduced, and loss of gas diffusion into the culture vessel 2 can be prevented or reduced. As a means for imparting shape retainability, in addition to heat sealing, container pressing means such as jigs, clips or magnets are used to press the flexible container walls facing each other so as to be in partial contact. be able to. Further, as means for preventing or reducing the adhesion, a member for preventing adhesion between the culture vessel 2 and the gas barrier container 3 is sandwiched, or an uneven portion is provided on each vessel wall. Also good.

ガス透過性の培養容器２としては、ガス透過性が良くγ線の滅菌に耐える材質のものを使用することが好ましい。たとえば、ポリエチレン（ＰＥ）、ポリ塩化ビニル（ＰＶＣ）、エチレンビニルアセテートコポリマー（ＥＶＡ）、エチレンエチルアクリレートコポリマー（ＥＥＡ）、エチレンメチルメタアクリレートコポリマー（ＥＥＭＡ）、スチレンーエチレンーブチレンースチレン（ＳＥＢＳ）とポリプロピレン（ＰＰ）またはポリエチレンとのポリマーブレンド等の軟質プラスチックを素材としたフイルムバッグないしブローバッグ等の容器である。その他、滅菌をγ線によらない場合は、テフロン(登録商標）、
シリコーンゴム、４−メチル−１−ペンテンの単独重合体ないし共重合体、ブタジエンの単独重合体ないし共重合体を用いることができる。共重合体の他の単量体としては、たとえば、炭素数２〜２４のα―オレフインやスチレン等が用いられ、前記α―オレフインの１種ないし２種以上からなる重合体をブレンドして用いることもできる。 As the gas permeable culture vessel 2, it is preferable to use a material having good gas permeability and capable of withstanding γ-ray sterilization. For example, polyethylene (PE), polyvinyl chloride (PVC), ethylene vinyl acetate copolymer (EVA), ethylene ethyl acrylate copolymer (EEA), ethylene methyl methacrylate copolymer (EEMA), styrene-ethylene-butylene-styrene (SEBS) A container such as a film bag or a blow bag made of a soft plastic such as polypropylene (PP) or a polymer blend with polyethylene. In addition, when sterilization is not based on γ rays, Teflon (registered trademark),
Silicone rubber, 4-methyl-1-pentene homopolymer or copolymer, and butadiene homopolymer or copolymer can be used. As the other monomer of the copolymer, for example, α-olefin having 2 to 24 carbon atoms, styrene or the like is used, and a polymer composed of one or more of the α-olefins is blended and used. You can also

図１の実施形態においては、図３に示すように、ガスは各円筒５の容器壁から矢印Ｃ方向すなわち３６０度の方向から各円筒５の中心部に向けて拡散するので、容器壁近傍と容器壁からもっとも離れた中心部でのそれぞれの溶存ガスの濃度差が小さくなり、培養条件を最適培養条件により近づけることができる。なお、培養時には、必要に応じて、細胞にダメージを与えないレベルで、培養容器２を振盪、揺動あるいは回転運動を与えてもよく、これにより浮遊細胞乃至は微生物の培養の際にみられる細胞乃至は微生物の沈降を防止することができ、かつ培養液の攪拌を促すことができるため、均一性を保持する点からも望ましい。   In the embodiment of FIG. 1, as shown in FIG. 3, the gas diffuses from the container wall of each cylinder 5 toward the center of each cylinder 5 from the direction of arrow C, that is, from the direction of 360 degrees. The difference in concentration of each dissolved gas at the center farthest from the vessel wall is reduced, and the culture conditions can be made closer to the optimum culture conditions. When culturing, the culture vessel 2 may be shaken, rocked or rotated at a level that does not damage the cells, if necessary, and this is observed when culturing floating cells or microorganisms. Since the sedimentation of cells or microorganisms can be prevented and the agitation of the culture solution can be promoted, it is desirable from the viewpoint of maintaining uniformity.

培養容器２の端部２ａ、２ｂの培養容器長手方向外側および円筒部４の培養容器幅方向外側、すなわち培養容器２の４辺には、図４から明らかなように、２枚のシートをヒートシールすることによりシール部２ｃ、２ｄ、２ｅ、２ｆが形成されている。これらシール部の中シール部２ｄは、後述のガスバリアー性容器３のガス注出口の設置を妨げないように、ガス注出口の部分を切り欠いた形状に形成されている。   As shown in FIG. 4, two sheets are heated on the outside of the culture vessel 2 in the longitudinal direction of the culture vessel 2 in the end portions 2a and 2b and on the outside of the cylindrical portion 4 in the width direction of the culture vessel. Seal portions 2c, 2d, 2e, and 2f are formed by sealing. The middle seal portion 2d of these seal portions is formed in a shape in which a portion of the gas outlet is cut out so as not to prevent the installation of a gas outlet of the gas barrier container 3 to be described later.

ガスバリアー容器３は、内側の培養容器２との間にガスが流通するために十分な空間が形成される大きさの容器であって、全体として平面視矩形に形成され、その４辺は閉じられている。ガスバリアー性容器３は、たとえば２枚のガスバリアー性プラスチックシートを重ね合わせ、中央部が膨出し、かつ４辺にシール部３ａ、３ｂ、３ｃ、３ｄが形成されるように熱成形して製造することができる。
ガスバリアー性容器３の一端部にはガス注入口９が、他端部にはガス排出口１０が設けられており、容器３の内部と連通している。ガス注入口９、ガス排出口１０は本発明のガス通口を構成する。なお、ガス通口は注入口９と排出口１０を兼用してもよく、少なくとも一つ、望ましくは２つ以上設ける。また、培養ガスの組成は培養する細胞や微生物に合わせて適宜選択すればよい。更に、培養ガスは間欠的にあるいは連続的に流すことができ、培養ガスの圧力を調整することにより、圧力を負荷した状態での培養や圧力を変動させた状態での培養が可能となる。 The gas barrier container 3 is a container having a size sufficient to allow a gas to flow between the inner culture container 2 and is formed in a rectangular shape in plan view as a whole, and its four sides are closed. It has been. The gas barrier container 3 is manufactured by, for example, superposing two gas barrier plastic sheets, thermoforming them so that the center part swells and seal parts 3a, 3b, 3c, 3d are formed on four sides. can do.
A gas inlet 9 is provided at one end of the gas barrier container 3, and a gas outlet 10 is provided at the other end, and communicates with the inside of the container 3. The gas inlet 9 and the gas outlet 10 constitute the gas inlet of the present invention. In addition, the gas inlet may serve as both the inlet 9 and the outlet 10 and is provided with at least one, preferably two or more. The composition of the culture gas may be appropriately selected according to the cells or microorganisms to be cultured. Furthermore, the culture gas can flow intermittently or continuously, and by adjusting the pressure of the culture gas, it is possible to perform culture in a state where pressure is applied or culture in a state where the pressure is changed.

ガスバリアー性容器３のシール部３ａ、３ｂは、それぞれ培養容器２のシール部２ｃ、２ｄを挟み込むようにしてこれらシール部２ｃ、２ｄに融着されており、これによってガスバリアー性容器３と培養容器２の接合部１２、１３が形成されている。接合部１２、１３は培養容器２をガスバリアー性容器３との間に空間を形成することができるようにして培養容器２をガスバリアー性容器３内に保持する機能を有し、本発明における培養容器保持手段を構成する。   The seal portions 3a and 3b of the gas barrier container 3 are fused to the seal portions 2c and 2d so as to sandwich the seal portions 2c and 2d of the culture container 2, respectively. Joint portions 12 and 13 of the container 2 are formed. The junctions 12 and 13 have a function of holding the culture vessel 2 in the gas barrier container 3 so that a space can be formed between the culture vessel 2 and the gas barrier vessel 3. A culture container holding means is comprised.

ガス通口は、図５に示すように、培養二重容器の製造時にガスバリアー性容器３の端部に先付けで形成することもできるし、あるいはガス通口が設けられていない培養二重容器の形で流通させ、培養時に図６に示すように後付けでガスバリアー性容器３のシール部以外の部分にガス通口１４を取付けることもできる。   As shown in FIG. 5, the gas inlet can be formed in advance at the end of the gas barrier container 3 during the production of the culture double container, or the culture double container in which no gas inlet is provided. As shown in FIG. 6, the gas passage port 14 can be attached to a portion other than the seal portion of the gas barrier container 3 as a retrofit as shown in FIG.

ガスバリアー性容器３としては、単層ないし多層のブローバッグや単層ないし多層のフイルムバッグであってもよく、特に制限はない。単層のブローバッグまたはフイルムバッグの場合には、培養容器の表面層とヒートシールし易く、かつ可撓性を有する材質のフイルムたとえばポリエチレン（ＰＥ）、ポリプロピレン（ＰＰ）、エチレンーオレフイン共重合体、エチレンー酢酸ビニル共重合体（ＥＶＡ）等からなるプラスチックフイルムであることが好ましい。特に、容器本体の表面積と同一または同系統の材質からなることが好ましく、酸素吸収剤との併用が望ましい。   The gas barrier container 3 may be a single layer or multilayer blow bag or a single layer or multilayer film bag, and is not particularly limited. In the case of a single-layer blow bag or film bag, a film of a material that is easy to heat seal with the surface layer of the culture vessel and has flexibility, such as polyethylene (PE), polypropylene (PP), ethylene-olefin copolymer A plastic film made of ethylene-vinyl acetate copolymer (EVA) or the like is preferable. In particular, it is preferably made of the same or the same material as the surface area of the container body, and is preferably used in combination with an oxygen absorbent.

高いバリアー性を付与する場合には多層フイルムとすることが好ましく、ガスバリアー性を有する材料としては、たとえば、ニ軸延伸ポリエチレンテレフタレートフイルム、ニ軸延伸ナイロンフイルム等の単層ないし多層の延伸フイルム、エチレンービニルアルコールコポリマー（ＥＶＯＨ）、ポリグリコール酸、芳香族ポリアミド、ポリ塩化ビニリデン（ＰＶＤＣ）等からなるフイルム、各種ポリ塩化ビニリデンコートフイルム、アルミナ蒸着ないしシリカ蒸着のポリエステルないしポリアミドフイルム等合成樹脂フイルムと、上記プラスチックフイルムをシーラントとした多層フイルムが好適に用いられる。   In the case of imparting high barrier properties, it is preferable to use a multilayer film, and as the material having gas barrier properties, for example, biaxially stretched polyethylene terephthalate film, biaxially stretched nylon film, or other single layer or multilayer stretched film, Synthetic resin films such as ethylene-vinyl alcohol copolymer (EVOH), polyglycolic acid, aromatic polyamide, polyvinylidene chloride (PVDC), various polyvinylidene chloride coated films, alumina-deposited or silica-deposited polyester, polyamide films, etc. A multilayer film using the plastic film as a sealant is preferably used.

これらの多層化には、共押出ブロー成形の他、ドライラミネーション、サンドイッチラミネーション、押出ラミネーション等の公知の任意の積層方法を適用することができる。   In addition to coextrusion blow molding, any known lamination method such as dry lamination, sandwich lamination, extrusion lamination, etc. can be applied to the multilayering.

二重培養容器１の流通段階においては、培養容器２とガスバリアー性容器３との間の空間を不活性ガスまたは不活性ガスと炭酸ガスの混合ガスで置換するか、あるいはこの空間を脱気することにより、培養液の保存性を高め、保存期間を延長することができる。同様に、この空間に酸素吸収剤を封入するか、あるいはガスバリアー性容器３に酸素吸収部または酸素吸収層を設けることにより同様の効果を挙げることができる。   In the distribution stage of the double culture vessel 1, the space between the culture vessel 2 and the gas barrier vessel 3 is replaced with an inert gas or a mixed gas of inert gas and carbon dioxide gas, or this space is deaerated. By doing so, the preservation | save property of a culture solution can be improved and a preservation | save period can be extended. Similarly, the same effect can be obtained by enclosing an oxygen absorbent in this space or by providing an oxygen absorbing portion or an oxygen absorbing layer in the gas barrier container 3.

酸素吸収剤ないし酸素吸収樹脂には公知の任意のものが使用可能である。たとえば、鉄系の酸素吸収剤としては、鉄または鉄系化合物からなる鉄粉およびハロゲン化金属の混合物が好ましい。鉄粉としては、酸素吸収反応を起こすものであれば純度等は特に制限なく、例えば、還元鉄粉、噴霧鉄粉、電解鉄粉等の鉄粉、鋳鉄、鋼材等の各種鉄の粉砕物や研削品や、炭化鉄、鉄カルボニル、酸化第１鉄、水酸化第１鉄、珪酸鉄等の鉄系化合物等が用いられる。一般に粒状のものが好ましく、粒径としては、取扱い性や、酸素吸収層の膜厚を薄くできること、フイルム外観に現れる酸素吸収剤の凹凸を考慮して、１〜８０μｍの範囲とすることが好ましく、特に１〜５０μｍの範囲とすることが好ましい。   Any known oxygen absorber or oxygen absorbing resin can be used. For example, the iron-based oxygen absorber is preferably a mixture of iron powder and metal halide made of iron or an iron-based compound. The iron powder is not particularly limited as long as it causes an oxygen absorption reaction, for example, iron powder such as reduced iron powder, sprayed iron powder, electrolytic iron powder, pulverized products of various iron such as cast iron and steel materials, Grinded products and iron-based compounds such as iron carbide, iron carbonyl, ferrous oxide, ferrous hydroxide, and iron silicate are used. In general, the particle size is preferable, and the particle size is preferably in the range of 1 to 80 μm in consideration of handling properties, the thickness of the oxygen absorbing layer can be reduced, and the unevenness of the oxygen absorbent appearing in the film appearance. In particular, the range of 1 to 50 μm is preferable.

鉄系酸素吸収剤の助剤であるハロゲン化金属としては、たとえば、アルカリ金属またはアルカリ土類金属の塩化物、臭化物またはヨウ化物が用いられ、リチウム、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウム、バリウム等の塩化物またはヨウ化物が好ましく用いられる。鉄粉１００重量部あたりのハロゲン化金属の配合量は、０．１〜２０重量部が好ましく、特に０．１〜５重量部が好ましい。ハロゲン化金属は、予め鉄粉と混合して添加することが、それぞれが容易に分離しないことから好ましい。好ましい酸素吸収剤は、鉄粉とハロゲン化金属を含む鉄粉系組成物であり、特に好ましくは、鉄粉にハロゲン化金属を付着させたハロゲン化金属被覆鉄粉系組成物である。   Examples of the metal halide that is an auxiliary agent for the iron-based oxygen absorber include alkali metal or alkaline earth metal chlorides, bromides, or iodides, such as lithium, sodium, potassium, magnesium, calcium, and barium. Chloride or iodide is preferably used. The blending amount of the metal halide per 100 parts by weight of the iron powder is preferably 0.1 to 20 parts by weight, particularly preferably 0.1 to 5 parts by weight. It is preferable to add the metal halide in advance by mixing with iron powder because they are not easily separated. A preferable oxygen absorbent is an iron powder-based composition containing iron powder and a metal halide, and particularly preferably a metal halide-coated iron powder-based composition in which a metal halide is attached to the iron powder.

鉄系の酸素吸収剤は、ガス透過性の培養容器２とこれを覆うガスバリアー性容器３との間に形成される空間あるいはこれにつながる空間に、不織布、紙等に漏れないように詰めて用いてもよいし、容器を構成するスパウト、キャップ等の一部の樹脂に混合してもよい。また、ガスバリアー性容器３の任意の層に酸素吸収層として用いることもでき、ガスバリアー性容器３の内部を観察できるようにするために、ガスバリアー性容器３の片面ないし一部とすることが好ましい。   The iron-based oxygen absorbent is packed in a space formed between the gas permeable culture container 2 and the gas barrier container 3 covering the gas permeable culture container 2 or a space connected thereto so as not to leak into the nonwoven fabric, paper or the like. It may be used, or may be mixed with some resins such as spouts and caps constituting the container. In addition, it can be used as an oxygen absorbing layer in any layer of the gas barrier container 3, so that it can be observed on one side or a part of the gas barrier container 3 so that the inside of the gas barrier container 3 can be observed. Is preferred.

樹脂に対する鉄系酸素吸収剤の配合量は、１０〜７０重量％の範囲とすることが好ましく、１０〜６０重量％の範囲がより好ましい。酸素吸収剤の配合量が１０重量％よりも低いと、酸素吸収能力が不充分であり、７０重量％より高いと、射出成形、圧縮成形、製膜加工等での加工が困難となることがある。酸素吸収層の膜厚は構成材料によらず、１０〜１００μｍの範囲とすることが好ましく、特に好ましくは２０〜８０μｍの範囲である。
酸素吸収層の膜厚が１０μｍより薄いと、フイルム単位面積あたりの酸素吸収剤量が少なくなり、充分な酸素吸収性能が得られないことがある。また、１００μｍより厚いと、フイルム総厚みが厚くなり、取扱いに不便を生じる場合があったり、コストに問題が生じる。 The blending amount of the iron-based oxygen absorbent with respect to the resin is preferably in the range of 10 to 70% by weight, and more preferably in the range of 10 to 60% by weight. When the blending amount of the oxygen absorbent is lower than 10% by weight, the oxygen absorbing ability is insufficient, and when it is higher than 70% by weight, it may be difficult to process by injection molding, compression molding, film forming process or the like. is there. The film thickness of the oxygen absorbing layer is preferably in the range of 10 to 100 μm, particularly preferably in the range of 20 to 80 μm, regardless of the constituent materials.
When the film thickness of the oxygen absorbing layer is thinner than 10 μm, the amount of oxygen absorbent per unit film area decreases, and sufficient oxygen absorbing performance may not be obtained. On the other hand, if it is thicker than 100 μm, the total thickness of the film becomes thick, which may cause inconvenience in handling and a problem in cost.

酸素吸収樹脂としては、金属系の酸化触媒と酸化性樹脂ないし酸化性有機成分とを含有するもの、ポリフエノール類、アスコルビン酸類等と塩基性物質とを含有するものとが使用される。   As the oxygen-absorbing resin, those containing a metal-based oxidation catalyst and an oxidizing resin or an oxidizing organic component, and those containing a polyphenol, ascorbic acid or the like and a basic substance are used.

酸化性樹脂ないし酸化性有機成分としては、遷移金属系触媒の作用により、空気中の酸素により酸化を受ける樹脂または有機成分である。   The oxidizing resin or the oxidizing organic component is a resin or an organic component that is oxidized by oxygen in the air by the action of the transition metal catalyst.

酸化性樹脂としては、（１）ポリプロピレンのように３級炭素を有する樹脂、（２）エチレンー一酸化炭素共重合体のようにカルボニル基を有する樹脂、（３）ＭＸＤ６等ベンゼン環を有するポリアミド樹脂、（４）ポリブタジエン、ポリイソプレンおよびこれらの共重合体のように、主鎖に不飽和二重結合を有する樹脂、（５）シクロヘキセン基等のような不飽和二重結合を側鎖に有する樹脂、（６）ポリシクロヘキサジエン等の環状共役ジエン系樹脂等が使用される。酸化性有機成分としては、（７）アスコルビン酸、（８）システイン等が挙げられ、これらは炭酸ナトリウム、酢酸カリウム等の塩基性物質との共存下で、水分を吸収し、酸素を吸収する。   The oxidizing resin includes (1) a resin having a tertiary carbon such as polypropylene, (2) a resin having a carbonyl group such as an ethylene-carbon monoxide copolymer, and (3) a polyamide resin having a benzene ring such as MXD6. (4) Resins having an unsaturated double bond in the main chain, such as polybutadiene, polyisoprene and copolymers thereof, (5) Resins having an unsaturated double bond such as a cyclohexene group in the side chain (6) Cyclic conjugated diene resins such as polycyclohexadiene are used. Examples of the oxidizing organic component include (7) ascorbic acid, (8) cysteine, and the like, which absorb moisture and absorb oxygen in the presence of a basic substance such as sodium carbonate and potassium acetate.

金属系の酸化触媒としては、鉄、コバルト、ニッケル等の周期律表第ＶＩＩＩ族の金属化合物が好ましいが、他に銅、銀等（第Ｉ族）、錫、チタン、ジルコニウム等（第ＩＶ族）、バナジウム（第Ｖ族）、クロム等（第ＶＩ族）、マンガン等（第ＶＩＩ族）の金属化合物を挙げることができる。これらの金属化合物の中、コバルト化合物は、酸素吸収速度が大きく、特に好適である。遷移金属触媒は、上記遷移金属の低価数の無機酸塩あるいは有機酸塩あるいは錯塩の形で一般に使用される。これらの触媒は、樹脂あたり１００ないし２０００ｐｐｍの量で用いるのがよい。   The metal-based oxidation catalyst is preferably a group VIII metal compound of the periodic table such as iron, cobalt, nickel, etc., but also copper, silver, etc. (Group I), tin, titanium, zirconium, etc. (Group IV) ), Vanadium (Group V), chromium and the like (Group VI), manganese and the like (Group VII). Among these metal compounds, a cobalt compound is particularly suitable because of its high oxygen absorption rate. The transition metal catalyst is generally used in the form of a low-valent inorganic acid salt, organic acid salt or complex salt of the transition metal. These catalysts are preferably used in an amount of 100 to 2000 ppm per resin.

酸化性樹脂ないし酸化性有機成分は、鉄系酸素吸収剤を用いた場合に対し透視性を損なうことなく適用できることが好ましく、ガス透過性の培養容器２とガスバリアー性容器３の一方または双方の任意の部分または全面に酸素吸収層として用いることができる。また、培養容器２とガスバリアー性容器３の間に形成される空間あるいはこれにつながる空間に位置する任意の容器構成部材、たとえば、スパウト、キャップ等の一部の樹脂に混合して用いることもできる。   The oxidizing resin or the oxidizing organic component is preferably applicable without impairing the transparency with respect to the case where the iron-based oxygen absorbent is used. One or both of the gas-permeable culture container 2 and the gas-barrier container 3 are preferably used. It can be used as an oxygen absorbing layer on any part or the entire surface. Further, it may be used by mixing with a part of resin such as a spout, a cap or the like, which is located in a space formed between the culture vessel 2 and the gas barrier vessel 3 or a space connected thereto. it can.

ガスバリアー性容器３に酸素吸収層を設けた場合の材料構成例としては、これに限定されるわけではないが、
酸素吸収層（単層の場合）
外層／酸素吸収層（２層の場合）
外層/酸素吸収層／シーラント層
外層／ガスバリアー層/酸素吸収層／シーラント層
外層／ガスバリアー層/酸素吸収層／ガスバリアー層／シーラント層
等種々の任意の構成とすることができる。 As a material configuration example in the case where an oxygen absorption layer is provided in the gas barrier container 3, it is not limited to this,
Oxygen absorbing layer (single layer)
Outer layer / oxygen absorbing layer (in the case of two layers)
Outer layer / oxygen absorbing layer / sealant layer Outer layer / gas barrier layer / oxygen absorbing layer / sealant layer Outer layer / gas barrier layer / oxygen absorbing layer / gas barrier layer / sealant layer, etc.

本実施形態の培養二重容器を製造する場合は、必要に応じ酸素吸収剤を封入した培養二重容器を製造した後γ線滅菌（または紫外線滅菌、電子線滅菌、加熱滅菌）を施し、次いで培養液を無菌充填し、充填口を無菌的に密封して製造を完成する。   When producing the culture double container of this embodiment, after producing a culture double container in which an oxygen absorbent is sealed, if necessary, sterilized with γ rays (or UV sterilization, electron beam sterilization, heat sterilization), and then The culture solution is aseptically filled, and the filling port is aseptically sealed to complete the production.

従来の容器は、培養時にこれを吊るすと、図８（ａ）に示すように、形状が変形して容器壁近傍と容器壁からもっとも離れた部分におけるガス拡散の不均一性が甚だしくなり、最適ガス組成が達成できないので、このように吊るすことができないが、上記実施形態の培養二重容器は、図８（ｂ）に示すように培養時に培養二重容器を縦に吊るしても容器の形状が変わらないので、多数の培養二重容器１を縦に吊るした状態で配置することができ、配置スペースを減少させることができる。   As shown in Fig. 8 (a), when the conventional container is hung during culture, the shape is deformed and the non-uniformity of gas diffusion near the container wall and the part farthest from the container wall becomes severe. Since the gas composition cannot be achieved, it cannot be suspended in this way. However, the culture double container of the above embodiment can be shaped even if the culture double container is suspended vertically during culture as shown in FIG. 8 (b). Therefore, a large number of culture double containers 1 can be arranged in a vertically suspended state, and the arrangement space can be reduced.

図１０及び図１１は本発明に係る培養二重容器の他の実施形態を示し、本実施形態では、注入・抽出口６ａ、６ｂを設けた培養容器２を製造した後、２枚のバリアー材を用いて図１１に示すように、培養容器２を覆うようにヒートシールして、バリアー容器３を形成し、培養二重容器１を製造する。   10 and 11 show another embodiment of the culture double container according to the present invention. In this embodiment, after manufacturing the culture container 2 provided with the injection / extraction ports 6a and 6b, two barrier materials are produced. As shown in FIG. 11, the culture container 2 is heat-sealed so as to cover the barrier container 3, and the culture double container 1 is manufactured.

この例では、先ず、注入・抽出口・ガス排出口収納部１６、ガス注入口収納部１７、及び注入・抽出口収納部１８を設けるが、前記注入・抽出口収納部１８を含めてＣ−Ｃで区画された部分１９を未シール部とし、注入・抽出口６ａ、６ｂ、ガス注入口９、ガス排出口１０を、ガスバリアー性容器３を構成するバリアー材によって覆う。このとき、注入・抽出口・ガス排出口収納部１６内に酸素吸収剤を封入してもよい。このようにすることにより、ガス排出口１０を介して、容器本体内の酸素を除去する機能を付与できるとともに、使用時には酸素吸収剤を除去することもできる。   In this example, first, the injection / extraction port / gas discharge port storage unit 16, the gas injection port storage unit 17, and the injection / extraction port storage unit 18 are provided. The portion 19 partitioned by C is used as an unsealed portion, and the injection / extraction ports 6 a and 6 b, the gas injection port 9, and the gas discharge port 10 are covered with a barrier material constituting the gas barrier container 3. At this time, an oxygen absorbent may be enclosed in the injection / extraction port / gas discharge port storage unit 16. By doing in this way, while being able to provide the function which removes the oxygen in a container main body via the gas exhaust port 10, an oxygen absorbent can also be removed at the time of use.

次に、このように製造した培養二重容器１の一つ乃至複数を滅菌袋に入れ、γ線滅菌を施す。この後、無菌環境下で開梱し、Ｃ−Ｃに沿って開いている未シール部１９にある注入・抽出口６ａより培養液を無菌充填した後、無菌的に密封する。この後、注入口収納部１８を残してヒートシールして培養二重容器とする。
このようにすることにより、注入・抽出口６ａ、６ｂがバリアー材により保護されるという利点が得られる。 Next, one or a plurality of the culture double containers 1 manufactured in this way are put in a sterilization bag and subjected to γ-ray sterilization. Thereafter, the container is unpacked in an aseptic environment, and after aseptically filling the culture solution from the injection / extraction port 6a in the unsealed portion 19 opened along C-C, it is aseptically sealed. Then, heat sealing is carried out leaving the inlet accommodating part 18, and it is set as a culture | cultivation double container.
By doing in this way, the advantage that the injection | pouring / extraction port 6a, 6b is protected by a barrier material is acquired.

尚、使用時には、抽出口・ガス排出口収納部１６をＤ−Ｄに沿って開封し用いるが、注入・抽出口６ｂはすでにγ線滅菌により滅菌した状態に保たれているので細胞などを注入する際には、外側のみ消毒し抽出口６ｂは滅菌しなくてもよいという利点がある。   At the time of use, the extraction port / gas discharge port storage unit 16 is opened along the line DD, but the injection / extraction port 6b is already in a sterilized state by γ-ray sterilization, so that cells and the like are injected. In doing so, there is an advantage that only the outside is disinfected and the extraction port 6b need not be sterilized.

さらに、ガス排出口１０をガス注入口９として兼用する場合には、前記ガス排注入口９及びガス注入口収納部１７は設けなくても良いし、設けてあっても開封しなければよい。   Furthermore, when the gas discharge port 10 is also used as the gas injection port 9, the gas discharge injection port 9 and the gas injection port storage portion 17 do not have to be provided, and even if provided, they need not be opened.

上記した実施形態においては、培養容器保持手段は接合部１２、１３で構成しているが、培養容器保持手段は、このような接合手段に限らず、たとえば、図１２の断面図に示すように、剛性のプラスチックからなるガスバリアー性容器３の内側の４隅に培養容器２の外側４隅に当接して培養容器２を支持する培養容器支持アーム１５を容器の長手方向に形成することにより培養容器２を保持するようにしてもよく、要は培養容器２とガスバリアー性容器３の間に空間を形成することができるようにして培養容器２をガスバリアー性容器３内に保持することができる手段であればどのような手段でもよい。   In the above-described embodiment, the culture container holding means is constituted by the joining portions 12 and 13. However, the culture container holding means is not limited to such a joining means, for example, as shown in a sectional view of FIG. Cultivation is performed by forming culture vessel support arms 15 in the longitudinal direction of the vessel in contact with the four outer corners of the culture vessel 2 at the four inner corners of the gas barrier vessel 3 made of rigid plastic. The container 2 may be held. In short, the culture container 2 may be held in the gas barrier container 3 so that a space can be formed between the culture container 2 and the gas barrier container 3. Any means can be used as long as it is possible.

上記実施形態においては、培養容器を複数の円筒をビーチマット状に並列に配置して構成しているが、培養容器は単一の円筒からなるものであってもよい。容器壁を角筒状、球状、半球状に形成する場合も同様であり、種々の変更例が考えられる。   In the above embodiment, the culture vessel is configured by arranging a plurality of cylinders in parallel in a beach mat shape, but the culture vessel may be formed of a single cylinder. The same applies to the case where the container wall is formed in a rectangular tube shape, a spherical shape, or a hemispherical shape, and various modifications can be considered.

培養容器およびガスバリアー性容器は、それぞれ可撓性を有する柔軟なプラスチックからなるパウチ状のものであってもよいし、剛性を有するボトル等の容器であってもよいし、これらの組み合わせであってもよい。   The culture container and the gas barrier container may each be a pouch made of a flexible plastic, may be a container such as a rigid bottle, or a combination of these. May be.

図１３〜図１７は本発明の他の実施形態を示す図２と同一断面における断面図である。図３の例では、培養容器２は、対向する壁面にヒートシールが施され、ビーチマット状となっており、形状保持性が付与されているが、図１３〜図１７は培養容器２にヒートシールが施されてなく、形状保持性が付与されてない場合を例示している。すなわち、本発明においては、培養容器２とガスバリアー性容器３の間に空間を形成することができるようにして、培養容器２へのガス拡散を損なうことを防止乃至は低減させることができ、かつ培養容器２をガスバリアー性容器３内に保持することができる手段であればどのような手段を採用してもよく、図１３〜図１７はそれらの例を示すもので以下に説明する。なお、図１３〜図１７において、図１〜図１２の実施形態と同一構成要素は同一符号で示し、その説明を省略する。
図１３の実施形態においては、ガスバリアー性容器３は剛性を有するプラスチックからなる容器であり、ガス透過性の培養容器２は可撓性のある柔軟なプラスチックからなる容器であって、容器２と３の間には不織布等通気性を有する材料からなる通気性マット１７が敷き詰められている。この通気性マット１７によって両容器２、３の間にガス組成を制御したガスを収容するための空間が形成されている。細胞培養過程においては、細胞の増殖性を顕微鏡等で観察することがあるため、通気性マット１７は必ずしも全面に設ける必要はなく一部が欠けていてもよく、その機能を果たす範囲で設ければよい。また、通気性マット１７がずれないようにガスバリアー性容器３に公知の手段で接着乃至は固定してあってもよい。
なお、この実施形態においては、培養液等の注入・抽出口６の内端部６ａは培養容器２内に突出していないので、培養液を取り出すときに培養液の一部が培養容器２内に残留することがなく便利である。 13-17 is sectional drawing in the same cross section as FIG. 2 which shows other embodiment of this invention. In the example of FIG. 3, the culture vessel 2 is heat-sealed on the opposing wall surface, has a beach mat shape, and is given shape retention, but FIGS. The case where seal is not given and shape retainability is not given is illustrated. That is, in the present invention, a space can be formed between the culture container 2 and the gas barrier container 3 to prevent or reduce the loss of gas diffusion into the culture container 2, Any means may be employed as long as it can hold the culture vessel 2 in the gas barrier container 3, and FIGS. 13 to 17 show examples thereof and will be described below. 13 to 17, the same components as those of the embodiment of FIGS. 1 to 12 are denoted by the same reference numerals, and the description thereof is omitted.
In the embodiment of FIG. 13, the gas barrier container 3 is a rigid plastic container, and the gas permeable culture container 2 is a flexible flexible plastic container, Between 3, a breathable mat 17 made of a breathable material such as a nonwoven fabric is spread. A space for accommodating a gas whose gas composition is controlled is formed between the containers 2 and 3 by the breathable mat 17. In the cell culturing process, cell proliferation may be observed with a microscope or the like. Therefore, the air-permeable mat 17 does not necessarily have to be provided on the entire surface, and a part of the air-permeable mat 17 may be missing. That's fine. Further, the gas-permeable container 3 may be bonded or fixed by a known means so that the air-permeable mat 17 is not displaced.
In this embodiment, since the inner end 6a of the injection / extraction port 6 for the culture solution or the like does not protrude into the culture vessel 2, a part of the culture solution is placed in the culture vessel 2 when the culture solution is taken out. It is convenient because it does not remain.

図１４の実施形態においては、ガスバリアー性容器３、培養容器２の双方がいずれも可撓性のある柔軟なプラスチックからなる容器であり、容器２と３の間には通気性マット１７が敷き詰められてガス収容用の空間が形成されている。このニ重容器１を縦方向に吊す場合は、容器の両側を板状または複数本の棒状の部材等剛性を有する部材からなる補強治具１８により支持することにより、図８（ｂ）と同様の効果が得られ、培養容器２がビーチマット状となってなくとも、形状保持性を付与した状態とすることができる。   In the embodiment of FIG. 14, both the gas barrier container 3 and the culture container 2 are containers made of flexible plastic, and a breathable mat 17 is laid between the containers 2 and 3. Thus, a space for accommodating gas is formed. When the double container 1 is suspended in the vertical direction, both sides of the container are supported by a reinforcing jig 18 made of a rigid member such as a plate or a plurality of rod-shaped members, and the same as in FIG. Even if the culture container 2 does not have a beach mat shape, it is possible to obtain a shape retaining property.

図１５（ａ）の断面図及び図１５（ａ）のＥ−Ｅ断面斜示図（ガスバリアー性容器３を取り除いて示す）である１５（ｂ）に示す実施形態においては、ガスバリアー性容器３、培養容器２の双方がいずれも可撓性のある柔軟なプラスチックからなる容器であり、容器３の内側平坦面周縁部と容器２の外側平坦面周縁部の間にはそれぞれ矩形の枠状の剛性を有する部材とこの枠状部材に張られたネット２０からなる補強治具１９が介装されており、この補強治具１９によって両容器２、３の間にガス収容用の空間が形成されている。なお、ガスバリアー性容器３の内側と補強治具１９の外側の間には隙間２１が形成されるように、ガスバリアー性容器３の内側と補強治具１９は固定されてなく、容器２、３の間の空間に圧搾空気等の圧搾ガスを注入することにより培養容器内の内容物を取り出す場合圧搾ガスの流通を妨げないようにしている。   In the embodiment shown in FIG. 15 (b) which is a cross-sectional view of FIG. 15 (a) and an EE cross-sectional oblique view (shown by removing the gas barrier container 3) of FIG. 15 (a), the gas barrier container 3 and both of the culture containers 2 are containers made of flexible plastic, and a rectangular frame shape is formed between the inner flat surface periphery of the container 3 and the outer flat surface periphery of the container 2, respectively. A reinforcing jig 19 composed of a rigid member and a net 20 stretched on the frame-like member is interposed, and the reinforcing jig 19 forms a gas storage space between the containers 2 and 3. Has been. The inner side of the gas barrier container 3 and the reinforcing jig 19 are not fixed so that a gap 21 is formed between the inner side of the gas barrier container 3 and the outer side of the reinforcing jig 19. When the contents in the culture vessel are taken out by injecting a compressed gas such as compressed air into the space between the three, the flow of the compressed gas is not disturbed.

図１６および図１７の実施形態においては、ガスバリアー性容器３は片面のみが剛性を有するプラスチックからなり、他面は可撓性のある柔軟なプラスチックからなる容器であり、ガス透過性の培養容器２は可撓性のある柔軟なプラスチックからなる容器であって、ガスバリアー性容器３の剛性側に面する培養容器３の側はガスバリアー性容器３の内側に密着しており、その反対側の面とガスバリアー性容器３の柔軟な側の内側との間にのみガス収容用の空間が形成されている。なお、これらの実施形態ではガスバリアー性容器３の両面の容器壁は必要に応じて可撓性のある柔軟なものや剛性のあるものを採用することができる。   In the embodiment of FIGS. 16 and 17, the gas barrier container 3 is a container made of plastic having rigidity only on one side and the other side is made of flexible plastic, and is a gas permeable culture container. 2 is a container made of a flexible plastic, and the side of the culture container 3 facing the rigid side of the gas barrier container 3 is in close contact with the inside of the gas barrier container 3, and the opposite side. A space for accommodating gas is formed only between the surface of the gas barrier and the inner side of the flexible side of the gas barrier container 3. In these embodiments, the container walls on both sides of the gas barrier container 3 may be flexible or rigid as required.

本発明の１実施形態にかかる培養二重容器の平面図である。It is a top view of a culture double container concerning one embodiment of the present invention. 図１のＡ−Ａ断面図である。It is AA sectional drawing of FIG. 図１のＢ−Ｂ断面斜視図である。It is a BB cross-sectional perspective view of FIG. 培養容器の平面図である。It is a top view of a culture container. 先付けのガス通口を示すためにガスバリアー性容器の一部を切り欠いて示す斜視図である。It is a perspective view which cuts and shows a part of gas barrier container in order to show a gas-attachment opening of a front. 後付けのガス通口を示す培養二重容器の断面図である。It is sectional drawing of the culture | cultivation double container which shows a retrofit gas port. 容器壁の各種形状を示す断面図である。It is sectional drawing which shows the various shapes of a container wall. 従来の容器と本発明の培養二重容器をそれぞれ縦に吊るした状態を示す側断面図である。It is a sectional side view which shows the state which suspended the conventional container and the culture | cultivation double container of this invention vertically, respectively. 培養容器の製造方法を示す断面図である。It is sectional drawing which shows the manufacturing method of a culture container. 本発明の他の実施形態にかかる培養二重容器における培養容器の平面図である。It is a top view of the culture container in the culture double container concerning other embodiment of this invention. 本発明の他の実施形態にかかる培養二重容器の平面図である。It is a top view of the culture double container concerning other embodiments of the present invention. 培養容器保持手段の他の例を示す断面図である。It is sectional drawing which shows the other example of a culture container holding means. 本発明の他の実施形態を示す断面図である。It is sectional drawing which shows other embodiment of this invention. 本発明の他の実施形態を示す断面図である。It is sectional drawing which shows other embodiment of this invention. 本発明の他の実施形態を示す図で、（ａ）は断面図、（ｂ）は（ｂ）のＥ−Ｅ断面斜視図である。It is a figure which shows other embodiment of this invention, (a) is sectional drawing, (b) is EE sectional perspective view of (b). 本発明の他の実施形態を示す断面図である。It is sectional drawing which shows other embodiment of this invention. 本発明の他の実施形態を示す断面図である。It is sectional drawing which shows other embodiment of this invention.

符号の説明Explanation of symbols

１ 培養二重容器
２ 培養容器
３ ガスバリアー性容器
５ 円筒
１２、１３ 接合部

DESCRIPTION OF SYMBOLS 1 Culture double container 2 Culture container 3 Gas barrier container 5 Cylinders 12, 13

Claims (11)

注入・注出口を有するガス透過性の培養容器と、この培養容器を覆うガスバリアー性容器と、該培養容器と該ガスバリアー性容器との間に空間を形成することができるようにして該培養容器を該ガスバリアー性容器内に保持する培養容器保持手段とを備え、細胞または微生物の培養時に該培養容器と該ガスバリアー性容器との間に形成された空間にガス組成を制御したガスを収容することを特徴とする培養二重容器。  A gas-permeable culture container having an injection / outlet, a gas barrier container covering the culture container, and a space formed between the culture container and the gas barrier container so as to form a space; A culture container holding means for holding the container in the gas barrier container, and a gas whose gas composition is controlled in a space formed between the culture container and the gas barrier container when cells or microorganisms are cultured. A culture double container characterized by containing. 該培養容器保持手段は、該培養容器を該ガスバリアー性容器に部分的に接合する手段である請求項１記載の培養二重容器。  The culture double container according to claim 1, wherein the culture container holding means is means for partially joining the culture container to the gas barrier container. 該培養容器と該ガスバリアー性容器との間の空間に連通するガス通口が該ガスバリアー性容器に設けられている請求項１または２記載の培養二重容器。  The culture double container according to claim 1 or 2, wherein a gas communication port communicating with a space between the culture container and the gas barrier container is provided in the gas barrier container. 培養時に該培養容器の容器壁が実質的に円筒状、横断面が正多角形の角筒状、球状および半球状のいずれかに形成されている請求項１〜３のいずれかに記載の培養二重容器。  The culture according to any one of claims 1 to 3, wherein a vessel wall of the culture vessel is formed into a substantially cylindrical shape, a square tube shape having a regular polygonal cross-section, a spherical shape, or a hemispherical shape during culture. Double container. 該培養容器に培養液を充填・密封し、該培養容器と該ガスバリアー性容器との間の空間を不活性ガスまたは不活性ガスと炭酸ガスの混合ガスで置換してなる請求項１〜４のいずれかに記載の培養二重容器。  The culture container is filled and sealed with a culture solution, and the space between the culture container and the gas barrier container is replaced with an inert gas or a mixed gas of an inert gas and a carbon dioxide gas. A culture double container according to any one of the above. 該培養容器に培養液を充填・密封し、該培養容器と該ガスバリアー性容器との間の空間を脱気してなる請求項１〜４のいずれかに記載の培養二重容器。  The culture double container according to any one of claims 1 to 4, wherein the culture container is filled and sealed with a culture solution, and a space between the culture container and the gas barrier container is deaerated. 該培養容器に培養液を充填・密封し、該培養容器と該ガスバリアー性容器との間の空間に酸素吸収剤を封入してなる請求項１〜６のいずれかに記載の培養二重容器。  The culture double container according to any one of claims 1 to 6, wherein the culture container is filled and sealed with a culture solution, and an oxygen absorbent is sealed in a space between the culture container and the gas barrier container. . 該ガスバリアー性容器が酸素吸収部または酸素吸収層を有する請求項１〜７のいずれかに記載の培養二重容器。  The culture double container according to any one of claims 1 to 7, wherein the gas barrier container has an oxygen absorbing part or an oxygen absorbing layer. 注入・注出口を有するガス透過性の培養容器と、この培養容器を覆うガスバリアー性容器からなる培養二重容器の該培養容器と該ガスバリアー性容器との間の空間にガス組成を制御して培養を行う培養方法。  The gas composition is controlled in a space between the culture container and the gas barrier container of a culture double container composed of a gas permeable culture container having an injection / outlet and a gas barrier container covering the culture container. A culture method for culturing. ガス組成を制御したガスを該培養容器と該ガスバリアー性容器との間の空間に連通するガス通口から注入・注出する請求項９記載の培養方法。  The culture method according to claim 9, wherein a gas having a controlled gas composition is injected and poured out from a gas passage communicating with a space between the culture container and the gas barrier container. 培養過程において、該培養容器と該ガスバリアー性容器との間の空間に圧搾ガスを注入することにより該培養容器の内容物を抽出する請求項９または１０記載の培養方法。

The culture method according to claim 9 or 10, wherein the contents of the culture container are extracted by injecting a compressed gas into a space between the culture container and the gas barrier container in the culture process.

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