JP2005263647A - Emulsion particle-containing contrast agent - Google Patents

Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a highly safe contrast agent which contains a contrast substance is the form of an emulsion particle with a narrow particle size range, increases blood retention property of a contrast compound and achieves an effective delivery and good targeting of the contrast agent. <P>SOLUTION: The contrast agent is a W/O/W emulsion contrast agent comprising, as a W/O/W emulsion, an aqueous dispersion containing a preparation auxiliary and the contrast substance wherein a water-soluble contrast compound is coated with an oil membrane of an oily contrast compound. Preferably, the water-soluble contrast compound is a nonionic iodine compound, and the oily contrast compound is an oil-soluble iodine compound. The contrast compound can be a near-infrared fluorochrome. In a preparation method of the W/O/W emulsion contrast agent, a W/O emulsion is injected and dispersed in an outer aqueous phase through a porous glass film, wherein the W/O emulsion contains the water-soluble contrast compound in an aqueous phase and an oily contrast compound in an oily phase. <P>COPYRIGHT: (C)2005,JPO&NCIPI

Description

本発明は、水中油中水相型（Ｗ／Ｏ／Ｗ型）エマルション造影剤に関し、詳しくは水溶性造影化合物を油性造影剤油膜で被覆したエマルション粒子を含むＸ線造影剤または近赤外蛍光造影剤に関する。   The present invention relates to a water-in-oil-in-water (W / O / W) emulsion contrast agent, and more specifically, an X-ray contrast agent or near-infrared fluorescence containing emulsion particles obtained by coating a water-soluble contrast compound with an oil-based contrast agent oil film. It relates to a contrast agent.

Ｘ線を用いる単純撮影やＣＴ撮影法（コンピュータ断層撮影法）は、今日の画像診断の中核を占めている。臓器、管腔などの軟組織間ではＸ線吸収の差が小さいため高いコントラスト像を得ることは困難であり、一般的にはコントラストの高い画像を得るために造影剤が使用される。現在実用化されているＸ線造影剤の大部分は、トリヨードフェニル基を含有し水溶性化した化合物を造影物質とするものである。これらの造影剤は、血管、尿管、輸卵管などの管腔部位に投与され、管腔の形状、狭窄などの診断に使用されている。 しかしながら、これらの化合物は組織や疾患部位と相互作用をすることなく管腔部位から速やかに排出されるために、組織や疾患部位、特に癌組織をより詳細に診断する目的には役立たない。このため目標とする組織もしくは疾患部位に選択的に集積し、その周囲またはその他の部位と明瞭なコントラストで区別できる画像を提供するＸ線造影剤もまた望まれている。そのようなＸ線検査用造影剤であれば、微細な癌組織であっても精度良く検出することも可能となるからである。   Simple imaging using CT and CT imaging (computer tomography) occupy the core of today's diagnostic imaging. Since a difference in X-ray absorption is small between soft tissues such as organs and lumens, it is difficult to obtain a high contrast image. Generally, a contrast agent is used to obtain an image with high contrast. Most of the X-ray contrast agents currently in practical use use a compound containing a triiodophenyl group and water-solubilized as a contrast substance. These contrast agents are administered to luminal sites such as blood vessels, ureters, oviducts, and the like, and are used for diagnosis of luminal shape, stenosis, and the like. However, since these compounds are rapidly excreted from the luminal site without interacting with the tissue or diseased site, they are not useful for the purpose of diagnosing the tissue or diseased site, particularly cancer tissue, in more detail. Therefore, an X-ray contrast agent that selectively accumulates in a target tissue or diseased site and provides an image that can be distinguished from the surrounding or other sites with a clear contrast is also desired. This is because with such a contrast medium for X-ray examination, even a fine cancer tissue can be detected with high accuracy.

腫瘍発見のための検査方法として、Ｘ線撮影法だけでなく測定原理を異にする他の方法も開発されている。たとえばＭＲＩ（磁気共鳴造影法）では、癌組織、特に微小な癌組織を精度よく撮像するには感度の面から限界があり、ＰＥＴ（陽電子放射断層撮影法）では、被爆と稼動コストの点で一般的でなく、いずれも大規模な設備と高額の装置を必要としており、今のところ一般的に広く利用される検査法ではない。   In addition to X-ray imaging methods, other methods with different measurement principles have been developed as examination methods for tumor detection. For example, in MRI (magnetic resonance imaging), there is a limit in terms of sensitivity to accurately image cancer tissues, especially minute cancer tissues, and in PET (positron emission tomography), in terms of exposure and operating costs. None of them are general, and both require large-scale equipment and expensive equipment, so far they are not widely used inspection methods.

一方、薬物投与の最適化を実現する基本的概念として薬物送達システムが導入されている。実用薬物の副作用、毒性を減らす努力も引き続き求められている。これらはＸ線造影剤についても例外ではない。国際公開ＷＯ98/46275、同ＷＯ95/31181、同ＷＯ94/19025、同ＷＯ96/28414、同ＷＯ96/00089、米国特許4873075号、同4567034号などには、疎水性ヨウド化合物を界面活性剤や油脂の存在下で水中に分散させたものを投与して、肝臓、脾像、副腎皮質、腫瘍、動脈硬化巣、血液プール、リンパ系などを造影する方法が開示されている。これらの方法は、造影剤を微粒子化することにより体内での滞留時間を長くして疾患部位を選択的に造影しようとするものである。その目的のために提案された製剤方法は、造影の効率および選択性とも充分でない。さらに使用するヨウド化合物が疎水性であるために、造影後、体外へ排出する速度が遅く、患者への負担が大きいという問題点もあった。   On the other hand, a drug delivery system has been introduced as a basic concept for realizing optimization of drug administration. There is a continuing need to reduce the side effects and toxicity of practical drugs. These are no exception for X-ray contrast agents. International publications WO98 / 46275, WO95 / 31181, WO94 / 19025, WO96 / 28414, WO96 / 00089, US Pat. Nos. 4873075, 4567734, etc. include hydrophobic iodine compounds containing surfactants and oils and fats. A method of imaging a liver, a spleen image, an adrenal cortex, a tumor, an arteriosclerotic lesion, a blood pool, a lymph system, etc. by administering a substance dispersed in water under is disclosed. These methods are intended to selectively contrast a diseased site by making the contrast agent fine particles to increase the residence time in the body. The formulation method proposed for that purpose is not sufficient in contrast efficiency and selectivity. Furthermore, since the iodine compound to be used is hydrophobic, there is also a problem that the rate of discharge from the body after imaging is slow and the burden on the patient is large.

造影剤をマイクロカプセルに封入することにより、効率的な造影剤の送達を図ることも検討されてきた。具体的には生体膜類似の脂質から構成され、低い抗原性ゆえに安全性が高いとされているリポソーム粒子に造影化合物を内包させる手法が開示されている。たとえば国際公開ＷＯ88/09165、同ＷＯ89/00988、同ＷＯ90/07491、特開平07-316079、特開2003-5596では、イオン性または非イオン性の造影剤を含有するリポソーム粒子が提案されている。これらの方法では、素材としての安全性が高く、生体内で適度な分解性を有するリポソーム粒子を使用するにもかかわらず、実用化に至っていない（たとえば、特許文献１参照）。製造過程においてリポソーム粒子膜を構成するリン脂質の溶剤として、有機溶媒、特にクロロホルム、ジクロロメタンといったクロル系溶剤を使用することから、どうしても残存する溶剤の毒性が懸念されるためである。   It has also been studied to efficiently deliver a contrast medium by encapsulating the contrast medium in a microcapsule. Specifically, a technique is disclosed in which a contrast compound is encapsulated in liposome particles that are composed of lipids similar to biological membranes and are considered to be highly safe because of their low antigenicity. For example, in International Publications WO88 / 09165, WO89 / 00988, WO90 / 07491, JP07-316079 and JP2003-5596, liposome particles containing an ionic or nonionic contrast agent are proposed. These methods have not yet been put into practical use despite the use of liposome particles that are highly safe as raw materials and have appropriate degradability in vivo (see, for example, Patent Document 1). This is because an organic solvent, particularly a chlorinated solvent such as chloroform and dichloromethane, is used as a phospholipid solvent constituting the liposome particle membrane in the production process, and there is a concern about the toxicity of the remaining solvent.

他方、徐放制御されたＷ／Ｏ／Ｗ型エマルション製剤であって、油相中にポリオキシエチレン硬化ヒマシ油およびポリグリセリン縮合リシノレイン酸エステルを含有することを特徴とする薬物徐放性乳化製剤、ならびにその製剤を、多孔質ガラス膜を使用して製造する方法が開示された（特許文献２）。   On the other hand, a sustained-release controlled W / O / W emulsion preparation comprising a polyoxyethylene hydrogenated castor oil and a polyglycerin condensed ricinoleic acid ester in an oil phase. And a method for producing the preparation using a porous glass membrane has been disclosed (Patent Document 2).

さらに首尾良く造影物質をマイクロカプセルの内部に内包させても、時間経過とともに外部へ漏出する問題、あるいはマイクロカプセル粒子そのものが、加工処理時または保存中に不安定になる事態も考慮されねばならない。さらにマイクロカプセル粒子を生体内へ投与しても、その多くが肝臓、脾臓などの網内系組織で捕捉されるため、所期の効果が得られないことも指摘されている（Cancer Res., 43, 5328(1983)）。
特開平7-316079号公報 特開平10-203962号公報 Furthermore, even if the contrast material is successfully encapsulated inside the microcapsule, the problem of leakage to the outside over time, or the situation where the microcapsule particles themselves become unstable during processing or storage must be considered. Furthermore, it has been pointed out that even when microcapsule particles are administered in vivo, many of them are trapped in the reticuloendothelial tissues such as the liver and spleen, so that the desired effect cannot be obtained (Cancer Res., 43, 5328 (1983)).
Japanese Patent Laid-Open No. 7-316079 Japanese Patent Laid-Open No. 10-203962

本発明は、水溶性造影化合物をＷ／Ｏ／Ｗ型エマルション粒子としてその送達効率を向上させた造影剤を提供することを目的とする。すなわち水溶性ヨウド系化合物などが油膜内に良好に保持されており、造影力にも優れ、かつ、安全性の高い造影剤を提供することを目的とする。   An object of the present invention is to provide a contrast agent having improved delivery efficiency as a water-soluble contrast compound as W / O / W type emulsion particles. That is, an object of the present invention is to provide a highly safe contrast agent in which a water-soluble iodine-based compound or the like is well retained in an oil film, excellent in contrast power, and high in safety.

上記課題を解決する本発明は、以下の構成を有する。
本発明の造影剤は、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルションとして、水溶性造影化合物を油性造影化合物油膜で被覆した造影物質と製剤助剤とを含有する水性分散物からなるＷ／Ｏ／Ｗ型エマルション造影剤である。 The present invention for solving the above problems has the following configuration.
The contrast agent of the present invention is a W / O / W type emulsion comprising an aqueous dispersion containing a contrast material obtained by coating a water-soluble contrast compound with an oily contrast compound oil film and a formulation aid as a W / O / W type emulsion. Contrast agent.

前記水溶性造影化合物は、好ましくは非イオン系ヨウド化合物であり、前記油性造影化合物が油溶性ヨウド化合物である。
前記水溶性造影化合物と前記油性造影化合物との含有比が、1：0.001〜1：0.1であることを特徴としている。 The water-soluble contrast compound is preferably a nonionic iodine compound, and the oil-based contrast compound is an oil-soluble iodine compound.
The content ratio of the water-soluble contrast compound and the oil-based contrast compound is 1: 0.001 to 1: 0.1.

さらに前記水溶性造影化合物は、全造影化合物の50〜100質量％の造影化合物が油性造
影化合物油膜により被覆されていることが望ましい。
前記油性造影化合物は、好ましくはヨウ素化けし油脂肪酸エチルエステルである。 Furthermore, it is desirable that the water-soluble contrast compound is coated with an oil-based contrast compound oil film in an amount of 50 to 100% by mass of the total contrast compound.
The oily contrast compound is preferably iodinated coconut oil fatty acid ethyl ester.

前記の造影化合物が、近赤外蛍光色素であってもよい。
前記近赤外蛍光色素は、好ましくはシアニン系蛍光色素である。
前記Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルションの粒子の平均粒径は、0.1〜0.3μｍであることを特徴としている。 The contrast compound may be a near infrared fluorescent dye.
The near infrared fluorescent dye is preferably a cyanine fluorescent dye.
The average particle size of the W / O / W type emulsion particles is 0.1 to 0.3 μm.

本発明のＷ／Ｏ／Ｗ型エマルション造影剤の製造方法は、水相中に水溶性造影化合物を含有し、油相中に油性造影化合物を含有するＷ／Ｏ型エマルションを、多孔質ガラス膜を介して外水相中に圧入分散することを特徴としている。   The method for producing a W / O / W emulsion contrast agent of the present invention comprises a water-soluble contrast compound in an aqueous phase, and a W / O emulsion containing an oil-based contrast compound in an oil phase. It is characterized by being press-fitted and dispersed in the outer water phase.

本発明のＷ／Ｏ／Ｗ型エマルション造影剤に含まれるエマルション粒子は、その構造が安定であり、しかも粒子径が揃って実質的に単分散エマルションとなっている。
そのエマルション粒子に内包される水溶性造影化合物に対し、油性造影剤による血管塞栓効果あるいは良好な血中滞留性によるＥＰＲ効果が発揮される。このため目的とする疾
患部位または組織、とりわけ癌組織に選択的に集中し蓄積する。造影後は、該造影化合物の大半が水溶性であるため、体外へ速やかに***される。本発明に係る造影剤は、その製造過程において有機溶剤を使用しないため、毒性、副作用が著しく軽減されている。 The emulsion particles contained in the W / O / W emulsion contrast agent of the present invention have a stable structure, and have a uniform particle diameter to be a substantially monodispersed emulsion.
The water-soluble contrast compound encapsulated in the emulsion particles exhibits a vascular embolization effect by an oil-based contrast agent or an EPR effect by good blood retention. For this reason, it concentrates and accumulates selectively at the target disease site or tissue, especially cancer tissue. After contrast enhancement, most of the contrast compound is water-soluble, so it is rapidly excreted outside the body. Since the contrast agent according to the present invention does not use an organic solvent in the production process, toxicity and side effects are remarkably reduced.

多孔性ガラス膜を使用する膜乳化法を用いることにより、安定なＷ／Ｏ／Ｗ型エマルション粒子を含有するエマルション造影剤を工業的規模で製造することができる。
〔発明の具体的説明〕
乳化型造影剤である本発明の造影剤は、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルションとして、水溶性造影化合物を、油溶性造影化合物油膜で被覆した造影物質および製剤助剤とを含有する水性分散物である。内水相に水溶性造影化合物を溶解し、油相には油性造影剤、外水相には製剤助剤を含む水性分散液とする構成、すなわち、水中油中水相型乳化物である。これを本明細書中ではＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションとも表記する。なお「内水相」とは、油相によって被覆された水溶性造影化合物を含む水性媒体といい、内水相を被覆している油滴を「Ｗ／Ｏ型エマルション粒子」、または単に「エマルション粒子」と称する。Ｗ／Ｏ型エマルション粒子を分散している水溶性媒体を「Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション粒子」といい、その水性分散媒だけを指す場合は「外水相」という。 By using a membrane emulsification method using a porous glass membrane, an emulsion contrast agent containing stable W / O / W type emulsion particles can be produced on an industrial scale.
[Detailed Description of the Invention]
The contrast agent of the present invention, which is an emulsified contrast agent, is an aqueous dispersion containing, as a W / O / W type emulsion, a contrast agent and a formulation aid in which a water-soluble contrast compound is coated with an oil-soluble contrast compound oil film. is there. A water-soluble contrast compound is dissolved in the inner aqueous phase, the oil phase is an oily contrast agent, and the outer aqueous phase is an aqueous dispersion containing a formulation aid, that is, a water-in-oil-in-water emulsion. This is also referred to as a W / O / W emulsion in this specification. The “inner aqueous phase” is an aqueous medium containing a water-soluble contrast compound coated with an oil phase, and oil droplets covering the inner aqueous phase are referred to as “W / O type emulsion particles” or simply “emulsion”. Referred to as “particles”. The water-soluble medium in which the W / O type emulsion particles are dispersed is referred to as “W / O / W type emulsion particles”, and when referring only to the aqueous dispersion medium, it is referred to as “external aqueous phase”.

以下、本発明のＷ／Ｏ／Ｗ型エマルション造影剤を、造影化合物、エマルション粒子、その製造法、エマルション造影剤について詳細に説明する。
水溶性造影化合物
本発明の造影剤がＸ線造影剤である場合、内水相に溶解した造影化合物として水溶性ヨウド系化合物を用いる。これはイオン性、非イオン性を問わず、特に規定されない。一般的には非イオン性ヨウド化合物の方が、イオン性ヨウド化合物よりも浸透圧が低く毒性が低いためにより望ましい。水溶性の非イオン性ヨウド系化合物として、特にヨウ化フェニル基、たとえば2,4,6−トリヨードフェニル基を少なくとも1個有する非イオン性ヨウド化合物が好ましい。 Hereinafter, the W / O / W type emulsion contrast agent of the present invention will be described in detail with respect to the contrast compound, the emulsion particles, the production method thereof, and the emulsion contrast agent.
Water-soluble contrast compound When the contrast agent of the present invention is an X-ray contrast agent, a water-soluble iodide compound is used as a contrast compound dissolved in the inner aqueous phase. This is not particularly defined regardless of whether it is ionic or nonionic. In general, nonionic iodine compounds are more desirable because they have lower osmotic pressure and lower toxicity than ionic iodine compounds. As the water-soluble nonionic iodide compound, a nonionic iodide compound having at least one phenyl iodide group, for example, 2,4,6-triiodophenyl group, is particularly preferable.

具体的には、そのような非イオン性ヨウド化合物として、イオヘキソール、イオペントール、イオジキサノール、イオプロミド、イオトロラン、イオメプロール、N,N′−ビス
〔２−ヒドロキシ−１−（ヒドロキシメチル）−エチル〕−５−〔〔（２−ヒドロキシ−１−オキソプピル）−アミノ〕−2,4,6−トリヨード−1,3−ベンゼン−ジカルボキシアミド（イオパミドール）；メトリザミドなどが挙げられる。 Specifically, such nonionic iodine compounds include iohexol, iopentol, iodixanol, iopromide, iotrolane, iomeprol, N, N′-bis [2-hydroxy-1- (hydroxymethyl) -ethyl] -5 [[(2-hydroxy-1-oxopropyl) -amino] -2,4,6-triiodo-1,3-benzene-dicarboxamide (iopamidol); metrizamide and the like.

また、その他のヨウド系化合物として、ジアトリゾイン酸；ジアトリゾエートナトリウム；メグルミンジアトリゾエート；アセトリゾイン酸およびその可溶性塩；ジプロトリゾ酸；ヨーダミド，ヨージパミドナトリウム、メグルミンヨージパミド、ヨード馬尿酸およびその可溶性塩；ヨードメタム酸；ヨードピラセットヨード−２−ピリドン−Ｎ−酢酸、3,5−ジヨード−４−ピリドン−Ｎ−酢酸（ヨードピラセット）；前記酸のジエチルアン
モニウム塩；イオタラム酸；メトリゾイン酸およびその塩；イオパノ酸、イオセファム酸、イオフェノ酸およびそれらの可溶性塩；チロパノエートナトリウム、イオポダートナトリウムおよび他の同様なヨウ素化された化合物などを挙げることができる。 Other iodine compounds include diatrizoic acid; diatrizoate sodium; meglumine diatrizoate; acetolizoic acid and its soluble salts; diprotrizoic acid; Its soluble salt; iodomethamic acid; iodopyracetoiodo-2-pyridone-N-acetic acid, 3,5-diiodo-4-pyridone-N-acetic acid (iodopyracet); diethylammonium salt of said acid; iotalamic acid; metrizoin Examples include acids and salts thereof; iopanoic acid, iocephamic acid, iofenoic acid and soluble salts thereof; sodium tyropanoate, sodium iopodate and other similar iodinated compounds.

造影化合物はこれらの化合物に限定されるものではない。造影化合物は単独で用いてもよく、あるいは２種以上を組み合わせて用いてもよい。なお本明細書において、化合物は遊離形態の他に、その塩、水和物なども含めて言及することがある。   The contrast compound is not limited to these compounds. The contrast compound may be used alone or in combination of two or more. In addition, in this specification, a compound may be mentioned including the salt, hydrate, etc. other than a free form.

本発明のＸ線検査用造影剤に好適なヨウド系化合物として、高度に親水性であり、かつ高濃度でも浸透圧が高くならないイオメプロール、イオパミドール、イオトロラン、イオジキサノールなどが挙げられる。とりわけイオトラン、イオジキサノールといった二量体非イオン性ヨウド化合物では、同一ヨウド濃度の造影剤を調製しても全体のモル数が低い
ために浸透圧をさらに低下させる利点がある。 Examples of the iodine compound suitable for the contrast agent for X-ray examination of the present invention include iomeprol, iopamidol, iotrolan and iodixanol which are highly hydrophilic and do not increase osmotic pressure even at high concentrations. In particular, dimer nonionic iodine compounds such as iotrane and iodixanol have the advantage of further reducing the osmotic pressure because the total number of moles is low even when a contrast agent having the same iodine concentration is prepared.

また内水相に限らず、外水相の水性媒体として水溶性ヨウド化合物の溶液を用いても良い。
本発明に係る造影剤は、近赤外蛍光造影剤であってもよい。ここで近赤外造影剤とは、近赤外領域に蛍光を発する造影剤を意味する。近赤外蛍光造影剤に造影物質として含まれる近赤外蛍光色素は、励起光の照射により近赤外領域、たとえば700〜1300nm、特に700〜900nmで蛍光を放射する化合物であれば特に制限はない。そのモル吸光係数は少なくとも100,000であることが望ましい。たとえば、インドシアニングリーン（ICG）を始めとする
インドシアニングリーン誘導体、従来報告されている種々のシアニン化合物のうち、水溶性シアニン化合物が好適である（ＷＯ９６/１７６２８、ＷＯ９７/１３４９０）。インドシアニングリーンは、従来から肝、循環機能障害検査において使用されてきており、比較的安全である。特に低毒性で充分に水溶性であり、イメージング標的部位に対する選択性が良好な一群のシアニン化合物が提案されている(ＷＯ９７／１３４９０)。
油性造影剤
Ｘ線造影剤の場合、上記内水相に溶解した水溶性造影化合物を被覆する油相としての油膜は、油性造影剤であるヨウ素化ケシ油脂肪酸エチルエステル（商品名「リピオドールＵＦ」ラボラトワール・ゲルベ社）あるいは油脂類に溶解もしくは分散させた油溶性造影ヨウド化合物である。これらのうち1種または２種以上を併用しても良い。油相を構成する
主成分としては、薬理的に許容されるものであれば、特に制限されず、市販のものを使用することができる。大豆油、オリーブ油、ゴマ油、ツバキ油、ナタネ油、ヨード油、強ヨード油、メンジツ油、ラッカセイ油、トウモロコシ油などが挙げられる。好ましくは、加温して流動性を有する液体となり、室温に冷えると固体脂壁材として機能するような油脂である。これは、油性造影剤を含有する脂質キャリヤーとなり得る。 Further, not only the inner aqueous phase but also an aqueous iodine compound solution may be used as the aqueous medium of the outer aqueous phase.
The contrast agent according to the present invention may be a near-infrared fluorescent contrast agent. Here, the near-infrared contrast agent means a contrast agent that emits fluorescence in the near-infrared region. The near-infrared fluorescent dye contained as a contrast material in the near-infrared fluorescent contrast agent is not particularly limited as long as it is a compound that emits fluorescence in the near-infrared region, for example, 700 to 1300 nm, particularly 700 to 900 nm when irradiated with excitation light. Absent. The molar extinction coefficient is desirably at least 100,000. For example, among indocyanine green derivatives such as indocyanine green (ICG) and various conventionally reported cyanine compounds, water-soluble cyanine compounds are preferred (WO96 / 17628, WO97 / 13490). Indocyanine green has been used in liver and circulatory dysfunction tests and is relatively safe. A group of cyanine compounds has been proposed (WO97 / 13490) that is particularly low toxic and sufficiently water soluble and has good selectivity for imaging target sites.
In the case of an oily contrast agent X-ray contrast agent, an oil film as an oil phase covering the water-soluble contrast compound dissolved in the inner aqueous phase is an iodinated poppy oil fatty acid ethyl ester (trade name “Lipiodol UF”). Laboratoire Gerbe) or oil-soluble contrast iodine compounds dissolved or dispersed in oils and fats. Of these, one or two or more may be used in combination. The main component constituting the oil phase is not particularly limited as long as it is pharmacologically acceptable, and commercially available products can be used. Examples include soybean oil, olive oil, sesame oil, camellia oil, rapeseed oil, iodo oil, strong iodine oil, menthol oil, peanut oil, and corn oil. Preferably, it is a fat that functions as a solid fat wall material when heated to a fluid liquid and cooled to room temperature. This can be a lipid carrier containing an oily contrast agent.

近赤外蛍光造影剤の場合、上記内水相に溶解した水溶性造影化合物を被覆する油相としての油膜は、油性の近赤外蛍光造影剤である。あるいは油脂類に溶解もしくは分散させた油性の近赤外蛍光造影化合物、たとえば親油性シアニン化合物でもよい。油脂類は上記のものが使用される。
エマルション粒子
本発明の造影剤は、上記造影化合物を標的部位へ効率よく送達するためにエマルション粒子とした形態で使用される。優れた腫瘍描出性へ導くＥＰＲ（Enhanced permeability and retention、透過性の亢進および滞留）効果を生じさせるために、エマルション粒子
構造の安定性、封入物質の内包化の割合および保持性を改善させるとともに、血中安定性、血中滞留性といった特性を有することが造影剤には求められる。そこで本発明の造影剤は、経時安定性ならびに血中安定性が改善されたエマルション粒子を用いることにより血中滞留性を向上させて、効率的な薬物送達ならびにターゲティングの実現を図っている。 In the case of a near-infrared fluorescent contrast agent, the oil film as an oil phase covering the water-soluble contrast compound dissolved in the inner aqueous phase is an oily near-infrared fluorescent contrast agent. Alternatively, it may be an oily near-infrared fluorescent contrast compound dissolved or dispersed in fats and oils, such as a lipophilic cyanine compound. The above oils and fats are used.
Emulsion particles The contrast agent of the present invention is used in the form of emulsion particles in order to efficiently deliver the contrast compound to a target site. In order to produce an EPR (Enhanced permeability and retention) effect leading to excellent tumor visualization, the emulsion particle structure stability, the encapsulation rate and retention of the encapsulated material are improved, Contrast agents are required to have characteristics such as blood stability and blood retention. Therefore, the contrast agent of the present invention improves the retention in blood by using emulsion particles having improved stability over time and in blood, thereby achieving efficient drug delivery and targeting.

本発明の造影剤では、造影化合物を内包するエマルション粒子の粒子径を適切に設計することによりターゲティング機能を実現することができる。受動的ターゲティングおよび能動的ターゲティングいずれも考慮される。受動的ターゲティングでは、エマルション粒子の粒子径、構成などの調整を通じてその生体内挙動を制御することができる。エマルション粒子の粒子径を狭い範囲に揃える調整は、後述する方法に基づき容易に行われる。さらにエマルション粒子の設計において、後述するように造影剤、油脂類の種類と組成、共存物質を変えることにより、内包物質の保持効率の向上、エマルション粒子の安定化という要件をも満たすことができる。   In the contrast agent of the present invention, the targeting function can be realized by appropriately designing the particle diameter of the emulsion particles encapsulating the contrast compound. Both passive targeting and active targeting are considered. In passive targeting, the in vivo behavior can be controlled through adjustment of the particle size and composition of the emulsion particles. Adjustment for aligning the particle diameter of the emulsion particles within a narrow range is easily performed based on the method described below. Further, in designing the emulsion particles, by changing the type and composition of the contrast agent, fats and oils, and coexisting substances as described later, the requirements for improving the retention efficiency of the encapsulated substance and stabilizing the emulsion particles can be satisfied.

さらに造影剤のより高度な選択性と集積性とを可能とする能動的ターゲティングの採用ならびに造影剤の安全性もまた検討されるべきである。本発明のエマルション造影剤は、油性造影剤油膜の親油性または血管塞栓効果に基づいて標的部位までの誘導過程を制御す
ることができる。血管塞栓効果は、非腫瘍部に比べ組織形成の未発達な腫瘍血管に沈着する油剤（油性造影剤）の性質によりもたらされる。たとえば油性造影剤として用いるヨウ素化ケシ油脂肪酸エチルエステル（「リピオドール」）は、肝臓ガンの組織に対し選択的に沈着する性質を有することで注目されている油である。その油滴の大きさおよび充填密度は沈着性に影響する。リピオドールで被覆されたエマルション粒子は、非腫瘍部に到達しても正常な肝細胞から排除されてしまう。これまで油性ヨウド造影剤は、リンパ造影、唾液腺造影に用いられてきたが、本発明のエマルション造影剤は、これらの組織、子宮卵管などにも指向性が認められる。 In addition, the adoption of active targeting that allows higher selectivity and accumulation of contrast agents and the safety of contrast agents should also be considered. The emulsion contrast agent of the present invention can control the induction process to the target site based on the lipophilicity or vascular embolization effect of the oily contrast agent oil film. The vascular embolization effect is brought about by the nature of an oil agent (oil-based contrast agent) that deposits in an undeveloped tumor blood vessel as compared with a non-tumor part. For example, iodinated poppy oil fatty acid ethyl ester (“Lipiodol”) used as an oily contrast agent is an oil that has attracted attention because it has a property of selectively depositing on liver cancer tissue. The size and packing density of the oil droplets affect the depositability. The emulsion particles coated with lipiodol are excluded from normal hepatocytes even when they reach the non-tumor site. Until now, oily iodine contrast media have been used for lymphography and salivary gland imaging, but the emulsion contrast media of the present invention are also directional to these tissues, uterine fallopian tubes and the like.

癌組織、疾患部位などに到達しなかった造影剤は、正常部位に集積することなく、副作用が発現する前にエマルション粒子が分解されて体外に***される。このことはエマルションを設計する際にその安定性を体外排出時間との関係で適切にコントロールすることにより可能となる。本発明のエマルション造影剤は、エマルション粒子が均一であるため、非腫瘍肝組織からの流出は速い。また造影物質として、その大半が水溶性ヨウド系化合物であるため、腎臓を経由して速やかに尿中に***される。内水相を被覆する油性造影剤油膜に含まれる油性造影剤はこれより***が遅れるが、もともと少量しか使用しないために、したがって徒に体内に留まることによる弊害、遅発性の副作用などを防止できる。   Contrast agents that have not reached cancerous tissue, diseased sites, etc., are not accumulated at normal sites, but are decomposed into emulsion particles before the side effects appear and are excreted outside the body. This is possible by designing the emulsion appropriately by controlling its stability in relation to the extracorporeal discharge time. Since the emulsion contrast agent of the present invention has uniform emulsion particles, the outflow from the non-tumor liver tissue is fast. Further, since most of the contrast substances are water-soluble iodine compounds, they are rapidly excreted in the urine via the kidneys. Oily contrast agent that covers the inner aqueous phase Oily contrast agent contained in the oil film is delayed later than this, but since only a small amount is used originally, it prevents the harmful effects caused by staying in the body, delayed side effects, etc. it can.

本発明によるＷ／Ｏ／Ｗ型エマルション粒子の粒子径分布は、平均粒径の75％から150
％の粒子径を有するＷ／Ｏ／Ｗ型エマルション粒子が、全粒子の50容積％以上であることが好ましい。すなわち実質的に単分散であることが望ましい。
エマルション粒子の製造法
本発明によるＷ／Ｏ／Ｗ型エマルション造影剤の製造方法は、水相中に水溶性造影化合物を含有し、油相中に油溶性造影化合物を含有するＷ／Ｏ型エマルションを、多孔質ガラス膜を介して外水相中に圧入分散することを特徴としている。 The particle size distribution of the W / O / W emulsion particles according to the present invention is from 75% to 150% of the average particle size.
It is preferable that W / O / W type emulsion particles having a particle size of 50% or more are 50% by volume or more of all particles. That is, it is desirable that it is substantially monodispersed.
Method for Producing Emulsion Particles A method for producing a W / O / W emulsion contrast agent according to the present invention comprises a water-soluble contrast compound in an aqueous phase and a W / O emulsion containing an oil-soluble contrast compound in an oil phase. Is characterized by being pressed and dispersed in the outer aqueous phase through a porous glass membrane.

具体的には、水溶性造影化合物を溶解した水溶液からなる水相を、油性造影化合物を溶解させた油相または液状油性造影化合物の油相に対して分散させることにより、Ｗ／Ｏ型エマルションを調製し、次いでこのＷ／Ｏ型エマルションを、多孔質ガラス膜を介して外水相に圧入することにより、本発明のエマルション造影剤を作製することができる。上記油相に分散させる方法は、一般的に用いられている乳化方法を使用すればよく、特に限定されない。たとえば断続振とう法、プロペラ型撹拌機等による混合、ホモジナイザー、超音波乳化機などの公知技術を挙げられる。本発明の造影剤の製造方法においては、多孔質ガラス膜を介する膜乳化法で行うことがさらに望ましい。   Specifically, an aqueous phase composed of an aqueous solution in which a water-soluble contrast compound is dissolved is dispersed in an oil phase in which an oil-based contrast compound is dissolved or an oil phase of a liquid oil-based contrast compound, thereby forming a W / O emulsion. The emulsion contrast agent of the present invention can be prepared by preparing and then press-fitting this W / O type emulsion into the outer aqueous phase through a porous glass membrane. The method of dispersing in the oil phase is not particularly limited as long as a generally used emulsification method is used. For example, known techniques such as intermittent shaking, mixing with a propeller type stirrer, homogenizer, ultrasonic emulsifier and the like can be mentioned. In the method for producing a contrast agent of the present invention, it is more desirable to carry out by a membrane emulsification method through a porous glass membrane.

膜乳化法は、従来の分散相の破壊に基づく乳化法ではなく、膜の界面化学的性質を利用した静的乳化法であり、従来の乳化技術では得にくい単分散エマルションを容易に得られるという特徴を有する。膜乳化法を用いると、0.05〜10μｍ程度の微小水相粒子が得られ、かつこの範囲で粒子の粒径を自由に調整することができる。本発明の造影剤におけるエマルション粒子は分散性、通針性を満足させる範囲であればよい。この方法によると、粒子の粒設計は具体的には、多孔質ガラス膜の細孔を変えることにより容易に行うことができる。しかも生成するエマルション粒子は極めて均一で、実質的に単分散のエマルションを得ることができる。機械的方法による方法と異なり、乳化する際に局部的に熱が発生することもないため、熱による分解または副生物もない。   The membrane emulsification method is not a conventional emulsification method based on the disruption of the dispersed phase, but a static emulsification method utilizing the interfacial chemical properties of the membrane, and it is easy to obtain a monodisperse emulsion that is difficult to obtain with conventional emulsification techniques. Has characteristics. When the membrane emulsification method is used, fine aqueous phase particles of about 0.05 to 10 μm are obtained, and the particle size of the particles can be freely adjusted within this range. The emulsion particles in the contrast agent of the present invention may be in a range that satisfies dispersibility and needle penetration. According to this method, specifically, the particle design can be easily performed by changing the pores of the porous glass film. Moreover, the emulsion particles produced are extremely uniform, and a substantially monodispersed emulsion can be obtained. Unlike the mechanical method, no heat is locally generated during emulsification, so there is no thermal decomposition or by-product.

実際には、２段膜乳化によりＷ／Ｏ型エマルションを経て、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルションを作製してもよい。まず第1段乳化で、疎水性の多孔質ガラス膜を用いて、水溶性造影化
合物などを溶解した水溶液を、油性造影化合物で被覆する、またはその油相中に分散させることにより、単分散W／Oエマルションを調製する。単分散Ｗ／Ｏ型エマルションが確実に得られるという点でこの方法の方が望ましい。いずれの方法を用いてＷ／Ｏ型エマルシ
ョンを調製する場合にも、水相の浸透圧は、特に制限されないが、一般には0.01〜7.0
ＭＰａ程度の範囲に調整すればよい。 Actually, a W / O / W type emulsion may be prepared via a W / O type emulsion by two-stage membrane emulsification. First, in the first stage emulsification, an aqueous solution in which a water-soluble contrast compound is dissolved using a hydrophobic porous glass membrane is coated with an oil-based contrast compound, or dispersed in the oil phase to obtain a monodisperse W / O emulsion is prepared. This method is preferable in that a monodispersed W / O emulsion can be obtained with certainty. In preparing the W / O emulsion using any method, the osmotic pressure of the aqueous phase is not particularly limited, but is generally 0.01 to 7.0.
What is necessary is just to adjust to the range of about MPa.

このエマルションを第２段乳化において、第1段階のガラス膜よりも孔径が大きく、か
つ親水性のガラス膜に通過させることによりＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションが得られる。上記のようにして作製されたＷ／Ｏ型エマルションは、製剤助剤を必要に応じて含む水性分散媒中に加えて（Ｗ／Ｏ）／Ｗ型の３相乳化物を形成させる。外水相の浸透圧は、特に制限されないが、一般には0.1〜0. 7 ＭＰａ程度の範囲に調整すればよい。 In the second stage emulsification, a W / O / W type emulsion is obtained by passing the emulsion through a hydrophilic glass film having a pore size larger than that of the first stage glass film. The W / O type emulsion prepared as described above is added to an aqueous dispersion medium containing a formulation aid as necessary to form a (W / O) / W type three-phase emulsion. The osmotic pressure of the outer water phase is not particularly limited, but generally may be adjusted to a range of about 0.1 to 0.7 MPa.

膜乳化装置として、各種の装置（たとえば清本鐵工株式会社製）が市販されており使用することができる。
上記多孔質ガラス膜としては、公知のものが使用でき、たとえばシラス、ホウ酸、石灰を添加して形成されたガラスのミクロ相分離により製造されたガラス膜が示される。CaO-B₂O₃-SiO₂-Al₂O₃系多孔質ガラス（特許第1504002号）、特許第1518989号および米国特許
第4657875号に開示されたCaO-B₂O₃-SiO₂-Al₂O₃‐NaO₂系多孔質ガラス、CaO-B₂O₃-SiO₂-Al₂O₃‐MgO系多孔質ガラス、CaO-B₂O₃-SiO₂-Al₂O₃‐ZrO₂系多孔質ガラスなどが挙げられる
。 As a membrane emulsification device, various devices (for example, manufactured by Kiyomoto Seiko Co., Ltd.) are commercially available and can be used.
A well-known thing can be used as said porous glass membrane, For example, the glass membrane manufactured by the micro phase separation of the glass formed by adding Shirasu, boric acid, and lime is shown. CaO-B ₂ O ₃ —SiO ₂ —Al ₂ O ₃ based porous glass (Patent No. 1504002), CaO—B ₂ O ₃ —SiO ₂ —Al disclosed in Patent No. 1518989 and US Pat. No. 4,657,875 ₂ O ₃ -NaO ₂ based porous _{glass, CaO-B 2 O 3 -SiO} 2 -Al 2 O 3 -MgO based porous _{glass, CaO-B 2 O 3 -SiO} 2 -Al 2 O 3 -ZrO 2 system Examples thereof include porous glass.

これら多孔質ガラスの細孔のサイズは、熱処理の条件を設定することにより、極めて均一に、しかも広範囲に調整できる。膜乳化法に使用する際には、上記多孔質ガラスの中でも、とりわけ相対累積細孔分布曲線において、細孔容積が全体の10%を占めるときの細孔
径を、細孔容積が全体の90%を占める場合の細孔径で割った値が、実質的に１〜1.5の範囲内にあるミクロ多孔膜体を使用することが好ましい。かかる膜は、特に細孔が均一であるためである。 The size of the pores of these porous glasses can be adjusted extremely uniformly and over a wide range by setting the heat treatment conditions. When used in the membrane emulsification method, among the above porous glasses, in the relative cumulative pore distribution curve, in particular, the pore diameter when the pore volume accounts for 10% of the whole, the pore volume is 90% of the whole It is preferable to use a microporous membrane having a value divided by the pore diameter in the case of occupying substantially 1 to 1.5. This is because such a membrane has particularly uniform pores.

圧入する際の圧力は、水相、油相の組成などに基づいて選択されるが、通常は、Pc >２γcosθ/r (ただし、Pcは圧力、γは界面張力、θは接触角、rは多孔膜体細孔半径を示
す。)となる圧力を定めるのがよい。 The pressure at the time of press-fitting is selected based on the composition of the water phase and oil phase, but usually Pc> 2γcosθ / r (where Pc is the pressure, γ is the interfacial tension, θ is the contact angle, and r is It is desirable to determine the pressure at which the porous membrane body pore radius is indicated.

膜乳化操作における温度は特に制限されないが、通常は０〜40℃とすればよい。その際、好ましくは多孔質ガラス膜の細孔が、油性造影剤の析出物または油相の凝固による閉塞などを起こさない間に膜乳化操作を終了する。好ましくは、恒温状態に保持する温度調節を行うのがよい。たとえばエマルション容器、多孔質ガラス膜モジュール、分散相容器などで構成される膜乳化装置全体を恒温とするか、ジャケット式の装置などを使用して所定の温度に制御する。   The temperature in the membrane emulsification operation is not particularly limited, but is usually 0 to 40 ° C. At this time, the membrane emulsification operation is preferably terminated while the pores of the porous glass membrane do not cause the oily contrast agent precipitate or the blockage due to the solidification of the oil phase. Preferably, temperature adjustment to keep the temperature constant is performed. For example, the entire membrane emulsifying apparatus composed of an emulsion container, a porous glass membrane module, a dispersed phase container and the like is kept at a constant temperature or controlled to a predetermined temperature using a jacket type apparatus or the like.

この工程は従来用いられてきた水中乾燥法なども利用できる。しかしながら、Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルションは、他のエマルションより構造が複雑なため、安定なＷ／Ｏ／Ｗ型エマルション粒子を調製することが難しく、これが実用化の障害となっていた。膜乳化法を使用すれば、安定なＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションが生成し、しかもその生成率がほぼ１００％である。   For this step, a conventionally used underwater drying method or the like can also be used. However, since the structure of a W / O / W type emulsion is more complicated than that of other emulsions, it is difficult to prepare stable W / O / W type emulsion particles, which has been an obstacle to practical use. If the membrane emulsification method is used, a stable W / O / W type emulsion is produced, and the production rate is almost 100%.

引き続きエマルション粒子を、遠心分離、限外濾過、ゲル濾過などの方法により未保持の薬剤を除去して精製してもよい。濃縮、希釈、凍結乾燥などの操作を任意に行ってもよい。次いで、滅菌処理、パッケージングなどの製剤過程を経て、本発明の造影剤が調製される。   Subsequently, the emulsion particles may be purified by removing unretained drug by a method such as centrifugation, ultrafiltration or gel filtration. Operations such as concentration, dilution, and lyophilization may be optionally performed. Subsequently, the contrast medium of the present invention is prepared through a preparation process such as sterilization and packaging.

本発明の造影剤エマルション粒子の平均粒径は、通常0.05〜0.3μｍ、好ましくは0.05
〜0.2μｍ、より好ましくは0.05〜0.13μｍである。Ｘ線撮像の目的に応じて、粒径を適
切に設定することができる。たとえば腫瘍部分の選択的撮像目的の場合には、特に0.11〜
0.13μｍが好ましい。エマルション粒子の粒径を0.1〜0.2μｍ、より好ましくは0.11〜0.13μｍの範囲に揃えることにより癌組織へ選択的にＸ線造影剤を集中させることが可能となる（「ＥＰＲ効果」）。固形癌組織にある新生血管壁の孔は、正常組織の毛細血管壁窓（fenestra）の孔サイズ、0.03〜0.08μｍ未満に比べて異常に大きく、約0.1μｍ〜約0.2μｍの大きさの分子でも血管壁から漏れ出る。ＥＰＲ効果は、癌組織にある新生血管壁では、正常組織の微小血管壁より透過性が高いことによるものであるため、血中滞留性の向上が図られねばならない。本発明のＸ線造影剤は、特に大きい粒子を含まないため、細網系内皮細胞による捕獲の対象になりにくい。またエマルション粒子がいわば赤血球類似の姿と挙動をしていて腎臓を経由して速やかに排出されることはなく、さらにステルス（隠蔽）化されている場合には細網系内皮細胞に貪食されることもなく、血流中に比較的長くとどまる。 The average particle diameter of the contrast agent emulsion particles of the present invention is usually 0.05 to 0.3 μm, preferably 0.05.
It is -0.2 micrometer, More preferably, it is 0.05-0.13 micrometer. The particle size can be set appropriately according to the purpose of X-ray imaging. For example, for the purpose of selective imaging of the tumor part,
0.13 μm is preferable. By making the particle size of the emulsion particles 0.1 to 0.2 μm, more preferably 0.11 to 0.13 μm, the X-ray contrast agent can be selectively concentrated on the cancer tissue (“EPR effect”). The pores of the neovascular wall in solid cancer tissue are abnormally larger than the pore size of the capillary wall window (fenestra) of normal tissue, less than 0.03 to 0.08 μm, and the size of the molecule is about 0.1 μm to about 0.2 μm. But it leaks out of the blood vessel wall. The EPR effect is due to the fact that the neovascular wall in cancer tissue is more permeable than the microvessel wall of normal tissue, so that the retention in blood must be improved. Since the X-ray contrast agent of the present invention does not contain particularly large particles, it is difficult to be captured by reticuloendothelial cells. In addition, the emulsion particles behave like erythrocytes and are not rapidly discharged via the kidneys. If they are stealthed, they are phagocytosed by reticuloendothelial cells. Instead, it stays relatively long in the bloodstream.

本発明の造影剤における水溶性造影化合物の濃度は、該造影化合物の性質、意図する製剤の投与経路および臨床上の指標といった要因に基づき任意に設定することができる。造影剤のコントラスト性能を規定する標的臓器へのヨウ素または近赤外蛍光化合物の必要な送達量は明らかにされている（たとえば特許２６１９０３７号公報）。X線造影剤を使用
した場合、ヨウド含有量として、通常、想定される10〜300mlの製剤溶液の投与量では、100〜500mgI／mlであり、好ましくは、150〜300mgI／mlである。近赤外蛍光造影剤の投与
量は、最終的に診断する部位を検出できる量であれば特に限定されず、使用する近赤外蛍光を発するシアニン系化合物の種類よって適宜増減できる。通常、想定される10〜300ml
の製剤溶液の投与量で、シアニン系化合物が0.1〜100ミリグラム／kg（体重）、好ましくは0.5〜20ｍｇ／kg（体重）となる範囲で投与できるよう調製される。 The concentration of the water-soluble contrast compound in the contrast agent of the present invention can be arbitrarily set based on factors such as the nature of the contrast compound, the intended administration route of the preparation, and clinical indicators. The required delivery amount of iodine or near-infrared fluorescent compound to the target organ that defines the contrast performance of the contrast agent has been elucidated (for example, Japanese Patent No. 2619037). When an X-ray contrast agent is used, the iodine content is usually 100 to 500 mgI / ml, preferably 150 to 300 mgI / ml, in the assumed dosage of 10 to 300 ml of the preparation solution. The dose of the near-infrared fluorescent contrast agent is not particularly limited as long as it can detect a site to be finally diagnosed, and can be appropriately increased or decreased depending on the type of cyanine compound that emits near-infrared fluorescence. Usually expected 10-300ml
It is prepared such that the cyanine compound can be administered at a dose of 0.1 to 100 mg / kg (body weight), preferably 0.5 to 20 mg / kg (body weight).

Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルションにおける水溶性造影化合物と前記油性造影化合物との含有質量比は、通常1：0.001〜1：0.2、好ましくは1：0.01〜1：0.1、より好ましくは1：0.01〜1：0.05である。内水相と外水相との体積比は、通常1:100〜1:0.1程度、好ましくは1:10
〜1:1の範囲である。内水相と油相との体積比は、通常1:0.001〜1:0.1程度、好ましくは1:0.01〜1:0.1の範囲である。これらの体積比は、水相、油相の種類などに応じて適宜設定できる。さらに前記水溶性造影化合物は、全造影化合物の50〜100質量％、好ましくは70
〜98質量％の造影化合物が油性造影化合物油膜により被覆されていることが望ましい。 The mass ratio of the water-soluble contrast compound and the oil-based contrast compound in the W / O / W type emulsion is usually 1: 0.001-1: 0.2, preferably 1: 0.01-1: 0.1, more preferably 1: 0.01- 1: 0.05. The volume ratio of the inner aqueous phase to the outer aqueous phase is usually about 1: 100 to 1: 0.1, preferably 1:10.
It is in the range of ˜1: 1. The volume ratio of the inner aqueous phase to the oil phase is usually in the range of about 1: 0.001 to 1: 0.1, preferably 1: 0.01 to 1: 0.1. These volume ratios can be appropriately set according to the type of the water phase and the oil phase. Furthermore, the water-soluble contrast compound is 50 to 100% by weight of the total contrast compound, preferably 70%.
It is desirable that ˜98% by mass of the contrast compound is covered with an oil-based contrast compound oil film.

Ｗ／Ｏ型エマルションにおける水相の浸透圧を、外水相となる水相の浸透圧以上の値とし、しかも得られたＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションにおける内水相および外水相の浸透圧を、生理食塩水の浸透圧を超える値とすることが望ましい。これにより沈着性などに優れたＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションの造影剤を得ることができる。得られたＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションの内水相および外水相の浸透圧は、生理食塩水の浸透圧の通常1.1〜５倍（３７℃で0.75〜3.5ＭＰａ）とすることが望ましい。   The osmotic pressure of the aqueous phase in the W / O emulsion is set to a value equal to or higher than the osmotic pressure of the aqueous phase serving as the outer aqueous phase, and the osmotic pressure of the inner aqueous phase and the outer aqueous phase in the obtained W / O / W emulsion Is preferably a value exceeding the osmotic pressure of physiological saline. Thereby, a contrast agent of a W / O / W type emulsion excellent in deposition properties and the like can be obtained. The osmotic pressure of the inner aqueous phase and the outer aqueous phase of the obtained W / O / W emulsion is preferably 1.1 to 5 times the osmotic pressure of physiological saline (0.75 to 3.5 MPa at 37 ° C.).

本発明のＸ線検査用造影剤は、上記のようにエマルション粒子自体の安定性が向上しているために、製剤化工程における処理時、貯蔵・保管期間にもエマルション粒子内に造影物質が安定的に保持される。さらに造影剤の血中安定性も上記エマルション粒子内への内包により図られている。
エマルション造影剤
本発明の造影剤において内水相および外水相を構成する水性媒体には、蒸留水、局方注射用水、純水などの水のほか、生理食塩水、各種緩衝液、塩類などを含む水溶液などが好適に用いられる。製剤化に際し、必要に応じてさらに製剤助剤を内水相および／または外水相に含めてもよい。「製剤助剤」とは、製剤化に際し、造影物質とともに添加されるものであり、これまでの薬剤製造技術に基づいて各種の物質が適宜使用される。具体的には生理学的に許容される各種の緩衝剤、キレート化剤、さらに必要に応じて、浸透圧調節剤、安定化剤、粘度調節剤、α‐トコフェロールなどの抗酸化剤、パラオキシ安息香酸メチ
ルといった保存剤、界面活性剤などが挙げられる。 As described above, the contrast agent for X-ray examination of the present invention has improved stability of the emulsion particles themselves, so that the contrast material is stable in the emulsion particles during the preparation process and also during storage and storage. Retained. Furthermore, the blood stability of the contrast agent is also achieved by inclusion in the emulsion particles.
Emulsion Contrast Agent In the contrast agent of the present invention, the aqueous medium constituting the inner aqueous phase and the outer aqueous phase includes distilled water, pharmacopoeia water, pure water, and other physiological saline, various buffers, salts, and the like. An aqueous solution containing is preferably used. In formulation, a formulation aid may be further included in the inner aqueous phase and / or the outer aqueous phase as necessary. The “formulation aid” is added together with the contrast material at the time of formulation, and various substances are appropriately used based on conventional drug production techniques. Specifically, various physiologically acceptable buffers, chelating agents, and if necessary, osmotic pressure regulators, stabilizers, viscosity regulators, antioxidants such as α-tocopherol, paraoxybenzoic acid Examples include a preservative such as methyl, a surfactant, and the like.

Ｘ線検査用造影剤に残存する遊離ヨウ素イオンなどのトラップ剤として機能するキレート化剤を加えることが好ましい。そのようなキレート剤として製剤学的に使用が認められるEDTA、ＥＤＴＡNa₂−Ca（エデト酸二ナトリウムカルシウム）、ＥＤＴＡNa₂、ヘキサメタリン酸などが挙げられる。 It is preferable to add a chelating agent that functions as a trapping agent such as free iodine ions remaining in the contrast medium for X-ray examination. Examples of such chelating agents include EDTA, EDTANa ₂ -Ca (disodium calcium edetate), EDTANa ₂ , hexametaphosphoric acid, and the like, which are pharmaceutically accepted.

本発明のＸ線検査用造影剤は、体内の浸透圧に対し、等張の溶液または懸濁液の形で調製される。そうした溶液もしくは懸濁液の媒質として、水、各種の緩衝液、たとえば水溶性アミン系緩衝剤、トリス−塩酸緩衝液、リン酸緩衝液、クエン酸緩衝液、炭酸塩緩衝剤、酢酸系緩衝剤などを使用することができる。   The contrast medium for X-ray examination of the present invention is prepared in the form of an isotonic solution or suspension with respect to the osmotic pressure in the body. As a medium for such a solution or suspension, water, various buffers such as water-soluble amine buffer, Tris-HCl buffer, phosphate buffer, citrate buffer, carbonate buffer, acetate buffer Etc. can be used.

上記溶液もしくは懸濁液の好ましいｐＨ範囲は、室温で6.5〜8.5、さらに好ましくは6.8〜7.8である。造影剤が多ヒドロキシル基を有する水溶性ヨウド系化合物である場合、好ましい緩衝液は、米国特許第4278654号に記載されているような負の温度係数を有する緩
衝液である。水溶性アミン系緩衝液はこのような要求を満たす性質を有しており、具体的には、トリス、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエチルアミン、モルホリンなどが例示される。特に好ましくはトリス（TRIS）である。このタイプの緩衝液は、オートクレーブ温度で低いｐＨを有し、このことがオートクレーブ中の造影剤の安定性を増し、他方、室温では生理的に許容されるｐＨに戻る。したがって、注射用無菌造影剤を製造するためにオートクレーブ滅菌できることは極めて便利であり、貯蔵安定性なども確保できる。しかしオートクレーブ滅菌を適用できない場合には、ろ過滅菌を行なうのがよい。 The pH range of the solution or suspension is preferably 6.5 to 8.5, more preferably 6.8 to 7.8 at room temperature. When the contrast agent is a water-soluble iodine-based compound having multiple hydroxyl groups, a preferred buffer is a buffer having a negative temperature coefficient as described in US Pat. No. 4,278,654. The water-soluble amine-based buffer has properties that satisfy such requirements, and specific examples include tris, ethanolamine, diethanolamine, triethylamine, morpholine, and the like. Particularly preferred is Tris. This type of buffer has a low pH at the autoclave temperature, which increases the stability of the contrast agent in the autoclave, while returning to a physiologically acceptable pH at room temperature. Therefore, it is extremely convenient to be able to sterilize by autoclave to produce a sterile contrast medium for injection, and storage stability and the like can be ensured. However, if autoclave sterilization is not applicable, filter sterilization should be performed.

等張の溶液または懸濁液を得るには、等張液を提供する濃度で造影剤を媒質中に溶解もしくは懸濁させる。たとえば造影剤化合物の溶解性が低いために造影剤が単独では等張液を提供できない場合、等張の溶液もしくは懸濁液が形成されるように他の非毒性の水溶性物質、たとえば塩化ナトリウムのごとき塩類、マンニトール、グルコース、ショ糖、ソルビトールなどの糖類を媒質中に添加してもよい。   To obtain an isotonic solution or suspension, the contrast agent is dissolved or suspended in the medium at a concentration that provides the isotonic solution. For example, if the contrast agent alone is unable to provide an isotonic solution due to the low solubility of the contrast agent compound, other non-toxic water-soluble materials such as sodium chloride will form an isotonic solution or suspension. Salts such as mannitol, glucose, sucrose, sorbitol and the like may be added to the medium.

従来技術におけるマイクロカプセルの製造は、油相の溶剤として有機溶剤を使用している。すなわち親油性高分子、脂質、リン脂質、ステロール、レシチンといった脂質成分をほとんど例外なく、まず溶媒、たとえばクロロホルム、ジクロロメタン、エチルエーテル、四塩化炭素、酢酸エチル、ジオキサン、THFなどとともに容器中で、溶解、混合するこ
とにより調製されている。最終的には水中乾燥法により有機溶媒が除去される。このような調製品は、必ず有機溶媒を含んでいる。残存するこれらの有機溶媒を除去するために、多段階の工程および長時間の処理を要しているのが現状である。そうした残留する有機溶媒、特にクロル系有機溶媒は、完全に除去することが困難であり、生体に及ぼす悪影響、具体的には副作用が懸念される。 The production of microcapsules in the prior art uses an organic solvent as the oil phase solvent. That is, there are almost no exceptions for lipid components such as lipophilic polymers, lipids, phospholipids, sterols, and lecithins. First, dissolve them in a container with solvents such as chloroform, dichloromethane, ethyl ether, carbon tetrachloride, ethyl acetate, dioxane, and THF. , Have been prepared by mixing. Finally, the organic solvent is removed by an underwater drying method. Such preparations always contain organic solvents. At present, in order to remove these remaining organic solvents, a multi-step process and a long-time treatment are required. Such remaining organic solvents, particularly chlorinated organic solvents, are difficult to remove completely, and there are concerns about adverse effects on living bodies, specifically side effects.

本発明の方法においては、水溶性造影化合物を被覆するために油性造影剤の油膜を用いるか、あるいは油性造影化合物を溶解する溶媒として薬理的に許容される脂質類を使用し、そのまま油膜として利用する膜乳化法を用いているため、そうした残存する有機溶剤の問題はない。   In the method of the present invention, an oil film of an oil-based contrast agent is used to coat the water-soluble contrast compound, or a pharmacologically acceptable lipid is used as a solvent for dissolving the oil-based contrast compound, and used as an oil film as it is. Therefore, there is no problem of such remaining organic solvent.

本発明の造影剤において、必要に応じてその水相または油相に、薬理的に許容される水性または油性の界面活性剤を含んでいてもよい。界面活性剤として人体に実質的に無害なものである限り、特に制限されない。これにはたとえば、市販の胆汁酸、レシチン、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油などが例示される。   In the contrast agent of the present invention, a pharmacologically acceptable aqueous or oily surfactant may be contained in the aqueous phase or oil phase as necessary. The surfactant is not particularly limited as long as it is substantially harmless to the human body. Examples thereof include commercially available bile acids, lecithin, polyoxyethylene hydrogenated castor oil, and the like.

本発明のＸ線造影剤を注射剤または点滴注入剤として、非経口的に、具体的には血管（
静脈、動脈）内投与、好ましくは静脈内投与により被験者に投与されＸ線照射により撮像される。近赤外蛍光造影剤は、血管内、経口内、腹腔内、皮下、皮内、膀胱内、気管（支）内などへ注射、注入、噴霧もしくは塗布などの手段により生体内に投与することができる。その用量は、従来のヨウド系造影剤または近赤外蛍光造影剤に準じる。油膜で被覆されたヨウドもしくは近赤外蛍光色素の総量、またはそれ以外のヨウドもしくは近赤外蛍光色素の総量の和が、従来の投与量と同程度になるようにしてもよい。実際の診断的検査においては、本発明の造影剤を、コンピュータ断層撮影装置（CT）と組み合わせたＸ線撮影装置または近赤外蛍光撮影装置に使用することにより、その造影剤性能をさらに有効に発揮することも期待される。
〔実施例〕
以下、本発明を実施例に基づいてさらに具体的に説明する。本発明は、かかる実施例によりなんら限定されるものではない。 The X-ray contrast medium of the present invention is used parenterally, specifically blood vessels (injection or instillation).
Intravenous, arterial, preferably intravenous administration to the subject and imaged by X-ray irradiation. A near-infrared fluorescent contrast agent can be administered into a living body by means of injection, injection, spraying or application into blood vessels, oral, intraperitoneal, subcutaneous, intradermal, intravesical or intratracheal (branch). it can. The dose is in accordance with conventional iodine-based contrast agents or near-infrared fluorescent contrast agents. The total amount of iodine or near-infrared fluorescent dye coated with an oil film, or the total amount of other iodine or near-infrared fluorescent dyes may be the same as the conventional dose. In actual diagnostic examinations, the contrast agent of the present invention is used in an X-ray imaging apparatus or near-infrared fluorescence imaging apparatus combined with a computed tomography apparatus (CT), thereby further improving the contrast agent performance. It is also expected to demonstrate.
〔Example〕
Hereinafter, the present invention will be described more specifically based on examples. The present invention is not limited in any way by such examples.

＜試料１＞
Ｗ／Ｏ型エマルション
イオパミドール306.2mg/mL（ヨウド含有率150mg/mL、添加物として、トロメタモール1mg/mL、エデト酸カルシウム２ナトリウム0.1mg/mL、塩酸および水酸化ナトリウム（ｐＨ調整剤）適量を含有）溶液2gを内水相とした。油溶性造影剤リピオドールＵＦ0.2ｇを油相
とし、この油相に上記内水相を平均細孔径0.05μｍの多孔質ガラス膜を介して圧入分散し、25℃において膜乳化を行い、Ｗ／Ｏ型エマルションを得た。
Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション
次いで、油性界面活性剤ＨＣＯ−６０（日光ケミカルズ（株）製）0.7ｇおよび生理食
塩水7ｇを外水相とし、平均細孔径0.1μｍの多孔質ガラス膜を介して前記であらかじめ調製したＷ／Ｏ型エマルションを圧入分散し、25℃において膜乳化を行った。その結果、得られたＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションを試料１とした。凍結破砕法による透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）観察によって評価したエマルションの平均粒径は0.129μｍであった。
＜試料２＞
Ｗ／Ｏ型エマルション
イオパミドール306.2mg/mL（ヨウド含有率150mg/mL、添加物として、トロメタモール1mg/mL、エデト酸カルシウム２ナトリウム0.1mg/mL、塩酸および水酸化ナトリウム（ｐＨ調整剤）適量を含有）溶液2gを内水相とした。一方、乳化助剤としてグリコール脂質、SUNBRIGHT DSPE-020CN （日本油脂（株）製）0.06g、グリセロール脂質、コートソーム MG-6060LS （日本油脂（株）製）0.04gを油溶性造影剤リピオドールＵＦ0.12ｇに分散混合し
たものを油相とし、この油相に上記内水相を少しずつホモジナイザーで激しく撹拌しながら加え、内水相が均一に油相に分散したＷ／Ｏ型エマルションを得た。
Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション
次いで、イオパミドール306.2mg/mL（ヨウド含有率150mg/mL、添加物として、トロメタモール1mg/mL、エデト酸カルシウム２ナトリウム0.1mg/mL、塩酸および水酸化ナトリウム（ｐＨ調整剤）適量を含有）溶液7gを外水相とし、平均細孔径0.2μｍの多孔質ガラス膜
を介して前記であらかじめ調製したＷ／Ｏ型エマルションを圧入分散し、25℃において膜乳化を行った。その結果、得られたＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションを試料２とした。凍結破砕法による透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）観察によって評価したエマルションの平均粒径は0.183μｍであった。
＜試料3＞
Ｗ／Ｏ型エマルション
イオパミドール306.2mg/mL（ヨウド含有率150mg/mL、添加物として、トロメタモール1mg/mL、エデト酸カルシウム２ナトリウム0.1mg/mL、塩酸および水酸化ナトリウム（ｐＨ調整剤）適量を含有）溶液2gを内水相とした。一方、油性界面活性剤ＴＧＣＲ0.1ｇ、ＨＣ
Ｏ−４０ 0.1ｇを油溶性造影剤リピオドールＵＦ0.2ｇに分散混合したものを油相とし、
この油相に上記内水相を少しずつホモジナイザーで激しく撹拌しながら加え、内水相が均一に油相に分散したＷ／Ｏ型エマルションを得た。なお「ＴＧＣＲ」は、テトラグリセリン縮合リシノレイン酸エステル（「ＣＲ−３１０」阪本薬品工業(株)製）、「ＨＣＯ−４０」はポリオキシエチレン硬化ヒマシ油「ＨＣＯ−４０」（日光ケミカルズ（株）製）をそれぞれ示す。
Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション
次いで、油性界面活性剤ＨＣＯ−６０（日光ケミカルズ（株）製）0.7ｇおよび生理食
塩水7ｇを外水相とし、平均細孔径0.2μｍの多孔質ガラス膜を介して前記であらかじめ調製したＷ／Ｏ型エマルションを圧入分散し、25℃において膜乳化を行った。その結果、得られたＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションを試料３とした。凍結破砕法による透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）観察によって評価したエマルションの平均粒径は0.281μｍであった。 <Sample 1>
W / O type emulsion iopamidol 306.2mg / mL (Iodide content 150mg / mL, trometamol 1mg / mL, calcium edetate disodium 0.1mg / mL, hydrochloric acid and sodium hydroxide (pH adjuster) appropriate amount ) 2 g of the solution was used as the inner aqueous phase. Oil-soluble contrast agent Lipiodol UF 0.2g was used as an oil phase, and the inner aqueous phase was pressed into and dispersed in this oil phase through a porous glass membrane having an average pore size of 0.05 μm, and membrane emulsification was performed at 25 ° C. A mold emulsion was obtained.
W / O / W type emulsion Next, 0.7 g of oil-based surfactant HCO-60 (manufactured by Nikko Chemicals Co., Ltd.) and 7 g of physiological saline are used as the outer water phase, through a porous glass membrane having an average pore diameter of 0.1 μm. The above-prepared W / O emulsion was press-dispersed and membrane emulsified at 25 ° C. As a result, the obtained W / O / W type emulsion was used as Sample 1. The average particle size of the emulsion evaluated by observation with a transmission electron microscope (TEM) by the freeze crushing method was 0.129 μm.
<Sample 2>
W / O type emulsion iopamidol 306.2mg / mL (Iodide content 150mg / mL, trometamol 1mg / mL, calcium edetate disodium 0.1mg / mL, hydrochloric acid and sodium hydroxide (pH adjuster) appropriate amount ) 2 g of the solution was used as the inner aqueous phase. On the other hand, as an emulsifying aid, glycol lipid, SUNBRIGHT DSPE-020CN (manufactured by NOF Corporation) 0.06g, glycerol lipid, coatsome MG-6060LS (manufactured by NOF Corporation) 0.04g, oil-soluble contrast agent Lipiodol UF0. An oil phase was prepared by dispersing and mixing in 12 g, and the inner aqueous phase was added to the oil phase little by little with vigorous stirring with a homogenizer to obtain a W / O type emulsion in which the inner aqueous phase was uniformly dispersed in the oil phase.
W / O / W emulsion, then iopamidol 306.2 mg / mL (iodine content 150 mg / mL, trometamol 1 mg / mL, calcium disodium edetate 0.1 mg / mL, hydrochloric acid and sodium hydroxide (pH adjuster) ) Contain appropriate amount) 7 g of the solution was used as the outer water phase, and the W / O emulsion prepared in advance was injected and dispersed through a porous glass membrane having an average pore diameter of 0.2 μm, and membrane emulsification was performed at 25 ° C. As a result, the obtained W / O / W emulsion was used as Sample 2. The average particle diameter of the emulsion evaluated by observation with a transmission electron microscope (TEM) by a freeze crushing method was 0.183 μm.
<Sample 3>
W / O type emulsion iopamidol 306.2mg / mL (Iodide content 150mg / mL, trometamol 1mg / mL, calcium edetate disodium 0.1mg / mL, hydrochloric acid and sodium hydroxide (pH adjuster) appropriate amount ) 2 g of the solution was used as the inner aqueous phase. Meanwhile, oil-based surfactant TGCR 0.1g, HC
An oil phase is obtained by dispersing and mixing 0.1 g O-40 in 0.2 g oil-soluble contrast agent Lipiodol UF,
The inner aqueous phase was added to this oil phase little by little with vigorous stirring with a homogenizer to obtain a W / O type emulsion in which the inner aqueous phase was uniformly dispersed in the oil phase. “TGCR” is tetraglycerin condensed ricinoleate (“CR-310” manufactured by Sakamoto Yakuhin Kogyo Co., Ltd.), “HCO-40” is polyoxyethylene hydrogenated castor oil “HCO-40” (Nikko Chemicals Co., Ltd.) Each).
W / O / W type emulsion Next, 0.7 g of an oil-based surfactant HCO-60 (manufactured by Nikko Chemicals Co., Ltd.) and 7 g of physiological saline are used as an outer water phase, and passed through a porous glass membrane having an average pore size of 0.2 μm. The above-prepared W / O emulsion was press-dispersed and membrane emulsified at 25 ° C. As a result, the obtained W / O / W emulsion was used as Sample 3. The average particle size of the emulsion evaluated by observation with a transmission electron microscope (TEM) by the freeze crushing method was 0.281 μm.

Ｘ線画像試験
家兎の皮下にＶＸ２カルシノーマの細胞浮遊液を移植した。移植２週間後に、実施例１で得た試料１〜３を家兎に静脈内注射し、注射後にＸ線画像で観察した。比較は、イオパミドール306.2mg/mLを注射したものを用いた。その結果、本発明の試料１〜３を用いた場合には、比較に対していずれも、家兎の移植部分の造影レベルが高く、造影レベルの低下速度は緩やかであった。 X-ray imaging test A cell suspension of VX2 carcinoma was implanted subcutaneously in rabbits. Two weeks after the transplantation, the samples 1 to 3 obtained in Example 1 were intravenously injected into a rabbit and observed with an X-ray image after the injection. For comparison, an injection of 306.2 mg / mL of iopamidol was used. As a result, when Samples 1 to 3 of the present invention were used, the contrast level of the transplanted part of the rabbit was high and the rate of decrease of the contrast level was gradual for comparison.

近赤外蛍光造影剤の調製
以下の近赤外造影用蛍光色素、３種類を用意し、それぞれの濃度が0.5mg/mlとなるように各色素、50mgにリン酸緩衝液（PBS、ｐＨ7.4）を加えて100mlとした。得られた近赤外
造影剤溶液をＡ〜Ｃとした。
Ａ：インドシアニングリーン
Ｂ：化合物１（特開2000-95758号の実施例に使用されたNo.29の色素） Preparation of near-infrared fluorescent contrast agent Prepare the following three near-infrared contrast fluorescent dyes, each dye, 50 mg phosphate buffer (PBS, pH 7. 4) was added to make 100 ml. The obtained near-infrared contrast agent solution was set to AC.
A: Indocyanine green B: Compound 1 (No. 29 dye used in Examples of JP-A-2000-95758)

Ｃ：化合物２（特開2003-261464号の実施例に使用されたNo.7の色素） C: Compound 2 (No. 7 dye used in Examples of JP-A-2003-261464)

なお、使用したリン酸緩衝液（PBS）は、以下の組成を有する（注射用水により最終1リットル（L）に仕上げた。）。
NaCl:8ｇ、 Na₂HPO₄・12H₂O:2.9ｇ、 KCl：0.2ｇ、 KH₂PO₄：0.2ｇ
＜試料Ａ＞
Ｗ／Ｏ型エマルション
近赤外造影剤溶液Ａ、2gを内水相とした。油溶性造影剤リピオドールＵＦ0.2ｇを油相
とし、この油相に上記内水相を平均細孔径0.05μｍの多孔質ガラス膜を介して圧入分散し、25℃において膜乳化を行い、Ｗ／Ｏ型エマルションを得た。
Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション
次いで、油性界面活性剤ＨＣＯ−６０（日光ケミカルズ（株）製）0.7ｇおよび生理食
塩水7ｇを外水相とし、平均細孔径0.1μｍの多孔質ガラス膜を介して前記であらかじめ調製したＷ／Ｏ型エマルションを圧入分散し、25℃において膜乳化を行った。その結果、得られたＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションを試料Ａとした。凍結破砕法による透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）観察によって評価したエマルションの平均粒径は0.132μｍであった。
＜試料Ｂ＞
Ｗ／Ｏ型エマルション
近赤外造影剤溶液Ｂ、2gを内水相とした。一方、乳化助剤としてグリコール脂質、SUNBRIGHT DSPE-020CN （日本油脂（株）製）0.06g、グリセロール脂質、コートソーム MG-6060LS （日本油脂（株）製）0.04gを油溶性造影剤リピオドール0.12ｇに分散混合したも
のを油相とし、この油相に上記内水相を少しずつホモジナイザーで激しく撹拌しながら加え、内水相が均一に油相に分散したＷ／Ｏ型エマルションを得た。
Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション
次いで、近赤外造影剤溶液Ｂ、7gを外水相とし、平均細孔径0.2μｍの多孔質ガラス膜
を介して前記であらかじめ調製したＷ／Ｏ型エマルションを圧入分散し、25℃において膜乳化を行った。その結果、得られたＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションを試料Ｂとした。凍結破砕法による透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）観察によって評価したエマルションの平均粒径は0.177μｍであった。
＜試料Ｃ＞
Ｗ／Ｏ型エマルション
近赤外造影剤溶液Ｃ、2gを内水相とした。一方、油性界面活性剤ＴＧＣＲ0.1ｇ、ＨＣ
Ｏ−４０ 0.1ｇを油溶性造影剤リピオドール0.2ｇに分散混合したものを油相とし、この油相に上記内水相を少しずつホモジナイザーで激しく撹拌しながら加え、内水相が均一に油相に分散したＷ／Ｏ型エマルションを得た。なお「ＴＧＣＲ」は、テトラグリセリン縮合リシノレイン酸エステル（「ＣＲ−３１０」阪本薬品工業(株)製）、「ＨＣＯ−４０」はポリオキシエチレン硬化ヒマシ油「ＨＣＯ−４０」（日光ケミカルズ（株）製）をそれぞれ示す。
Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルション
次いで、油性界面活性剤ＨＣＯ−６０（日光ケミカルズ（株）製）0.7ｇおよび生理食
塩水7ｇを外水相とし、平均細孔径0.2μｍの多孔質ガラス膜を介して前記であらかじめ調製したＷ／Ｏ型エマルションを圧入分散し、25℃において膜乳化を行った。その結果、得られたＷ／Ｏ／Ｗ型エマルションを試料Ｃとした。凍結破砕法による透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）観察によって評価したエマルションの平均粒径は0.265μｍであった。 The phosphate buffer (PBS) used had the following composition (finalized to 1 liter (L) with water for injection).
NaCl: 8 g, Na ₂ HPO ₄ · 12H ₂ O: 2.9 g, KCl: 0.2 g, KH ₂ PO ₄ : 0.2 g
<Sample A>
W / O type emulsion near-infrared contrast agent solution A, 2 g was used as the inner aqueous phase. Oil-soluble contrast agent Lipiodol UF 0.2g was used as an oil phase, and the inner aqueous phase was pressed into and dispersed in this oil phase through a porous glass membrane having an average pore size of 0.05 μm, and membrane emulsification was performed at 25 ° C. A mold emulsion was obtained.
W / O / W type emulsion Next, 0.7 g of oil-based surfactant HCO-60 (manufactured by Nikko Chemicals Co., Ltd.) and 7 g of physiological saline are used as the outer water phase, through a porous glass membrane having an average pore diameter of 0.1 μm. The above-prepared W / O emulsion was press-dispersed and membrane emulsified at 25 ° C. As a result, the obtained W / O / W emulsion was used as Sample A. The average particle diameter of the emulsion evaluated by observation with a transmission electron microscope (TEM) by the freeze crushing method was 0.132 μm.
<Sample B>
W / O emulsion near-infrared contrast agent solution B, 2 g was used as the inner aqueous phase. On the other hand, glycol lipid, SUNBRIGHT DSPE-020CN (manufactured by NOF Corporation) 0.06g, glycerol lipid, coatsome MG-6060LS (manufactured by NOF Corporation) 0.04g as an emulsification aid, 0.12g of oil-soluble contrast agent Lipiodol The oil phase was added to the oil phase and the inner aqueous phase was added to the oil phase little by little with vigorous stirring with a homogenizer to obtain a W / O type emulsion in which the inner aqueous phase was uniformly dispersed in the oil phase.
W / O / W type emulsion Next, 7 g of near-infrared contrast agent solution B is used as the outer aqueous phase, and the W / O type emulsion prepared above is injected and dispersed through a porous glass membrane having an average pore diameter of 0.2 μm. Then, membrane emulsification was performed at 25 ° C. As a result, the obtained W / O / W emulsion was designated as Sample B. The average particle size of the emulsion evaluated by observation with a transmission electron microscope (TEM) by the freeze crushing method was 0.177 μm.
<Sample C>
W / O type emulsion near-infrared contrast agent solution C, 2 g was used as the inner aqueous phase. Meanwhile, oil-based surfactant TGCR 0.1g, HC
The oil phase was prepared by dispersing and mixing 0.1 g of O-40 in 0.2 g of oil-soluble contrast agent Lipiodol. The oil phase was added to the oil phase while stirring vigorously with a homogenizer. A W / O type emulsion dispersed in was obtained. “TGCR” is tetraglycerin condensed ricinoleate (“CR-310” manufactured by Sakamoto Yakuhin Kogyo Co., Ltd.), “HCO-40” is polyoxyethylene hydrogenated castor oil “HCO-40” (Nikko Chemicals Co., Ltd.) Each).
W / O / W type emulsion Next, 0.7 g of an oil-based surfactant HCO-60 (manufactured by Nikko Chemicals Co., Ltd.) and 7 g of physiological saline are used as an outer water phase, and passed through a porous glass membrane having an average pore size of 0.2 μm. The above-prepared W / O emulsion was press-dispersed and membrane emulsified at 25 ° C. As a result, the obtained W / O / W emulsion was used as Sample C. The average particle size of the emulsion evaluated by observation with a transmission electron microscope (TEM) by the freeze crushing method was 0.265 μm.

蛍光造影試験
蛍光励起光源としてチタン・サファイアレーザーを使用した。照射の分散が２％以内になるようにリングタイプの光ガイド（住田光学グラス社）を用いて、試験用家兎にレーザー光を均一に照射した。照射出力は家兎の皮膚表面付近で約36μW/cm²になるように調整
した。蛍光は各化合物の最大励起波長で励起させ、家兎からの蛍光放射をＣＣＤカメラ（
Ｃ４８８０，浜松フォトニクス社）を用いて、短波長カットフィルターを通して検出および造影した。カットフィルターは、化合物の励起波長（800〜900nm）に適合するように選択した。また、照射時間は各化合物の蛍光強度によって調整した。近赤外造影剤溶液の投与後に、家兎をジエチルエーテルで麻酔し、家兎全身の蛍光イメージを造影した。センサーは蛍光光度計（日本分光FP-750）のフォトダイオード（波長範囲220〜730nm）を使用した。 Fluorescence contrast test A titanium / sapphire laser was used as a fluorescence excitation light source. Using a ring-type light guide (Sumita Optical Glass Co., Ltd.) so that the dispersion of irradiation was within 2%, the test rabbits were uniformly irradiated with laser light. The irradiation power was adjusted to be about 36 μW / cm ² near the skin surface of the rabbit. Fluorescence is excited at the maximum excitation wavelength of each compound, and fluorescence emission from the rabbit is captured by a CCD camera (
C4880, Hamamatsu Photonics Co.) was used for detection and imaging through a short wavelength cut filter. The cut filter was selected to match the excitation wavelength (800-900 nm) of the compound. The irradiation time was adjusted according to the fluorescence intensity of each compound. After administration of the near-infrared contrast agent solution, the rabbit was anesthetized with diethyl ether, and a fluorescent image of the whole rabbit was imaged. The sensor used was a photodiode (wavelength range 220-730 nm) of a fluorometer (JASCO FP-750).

家兎の皮下にＶＸ２カルシノーマの細胞浮遊液を移植した。移植２週間後に、実施例３で得た試料Ａ〜Ｃを家兎に静脈内注射し、注射後に上記蛍光造影試験で画像を観察した。比較は、インドシアニングリーンを用いた。その結果、本発明の試料Ａ〜Ｃを用いた場合には、比較に対していずれも、家兎の移植部分の造影レベルが高く、造影レベルの低下速度は緩やかであった。   A cell suspension of VX2 carcinoma was implanted subcutaneously in the rabbit. Two weeks after transplantation, samples A to C obtained in Example 3 were intravenously injected into rabbits, and images were observed in the fluorescence contrast test after injection. For comparison, indocyanine green was used. As a result, when the samples A to C of the present invention were used, the contrast level of the transplanted part of the rabbit was high in comparison with the comparison, and the rate of decrease in the contrast level was slow.

Claims (8)

Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルションとして、水溶性造影化合物を油性造影化合物油膜で被覆した造影物質と製剤助剤とを含有する水性分散物からなる造影剤。   A contrast medium comprising an aqueous dispersion containing a contrast material obtained by coating a water-soluble contrast compound with an oil-based contrast compound oil film as a W / O / W emulsion, and a formulation aid. 前記水溶性造影化合物が、非イオン系ヨウド化合物であり、前記油性造影化合物が油溶性ヨウド化合物であることを特徴とする請求項１に記載の造影剤。   The contrast agent according to claim 1, wherein the water-soluble contrast compound is a nonionic iodine compound, and the oil-based contrast compound is an oil-soluble iodine compound. 前記水溶性造影化合物と、前記油性造影化合物との含有比が、1：0.001〜1：0.1であることを特徴とする請求項１または２に記載の造影剤。   The contrast agent according to claim 1 or 2, wherein a content ratio of the water-soluble contrast compound and the oil-based contrast compound is 1: 0.001 to 1: 0.1. 前記油性造影化合物が、ヨウ素化けし油脂肪酸エチルエステルであることを特徴とする請求項１に記載の造影剤。   The contrast agent according to claim 1, wherein the oil-based contrast compound is iodized poppy oil fatty acid ethyl ester. 前記の造影化合物が、近赤外蛍光色素であることを特徴とする請求項１に記載の造影剤。   The contrast agent according to claim 1, wherein the contrast compound is a near-infrared fluorescent dye. 前記近赤外蛍光色素が、シアニン系蛍光色素であることを特徴とする請求項５に記載の造影剤。   The contrast agent according to claim 5, wherein the near-infrared fluorescent dye is a cyanine fluorescent dye. 前記Ｗ／Ｏ／Ｗ型エマルションの粒子の平均粒径が、0.1〜0.3μｍであることを特徴とする請求項１に記載の造影剤。   The contrast agent according to claim 1, wherein an average particle diameter of the W / O / W emulsion particles is 0.1 to 0.3 μm. 水相中に水溶性造影化合物を含有し、油相中に油性造影化合物を含有するＷ／Ｏ型エマルションを、多孔質ガラス膜を介して外水相中に圧入分散することを特徴とするＷ／Ｏ／Ｗ型エマルション造影剤の製造方法。   A W / O emulsion containing a water-soluble contrast compound in an aqueous phase and an oil-based contrast compound in an oil phase is press-dispersed and dispersed in an outer aqueous phase through a porous glass film. / O / W type emulsion contrast agent production method.