JP2005195562A - Buffer additive agent for electrophoresis - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、生化学、医科薬学に関連する生体関連高分子を簡易、迅速にかつ高い分離能で分離することができる、電気泳動バッファー添加剤に関する。 The present invention relates to an electrophoresis buffer additive capable of easily and rapidly separating a bio-related polymer related to biochemistry and medical pharmacy with high resolution.
生体試料に含まれる生体関連高分子（ゲノム、ゲノム副産物であるタンパク質、ペプチド、アミノ酸、糖鎖、等）の分離・解析法の１つの手段として、電気泳動法がある。このゲノム解析において、極めて実用性が高く広く利用されている遺伝子検査装置がキャピラリー電気泳動法である。近年はさらに、マイクロチップ電気泳動法が出現し、手のひらサイズのマイクロチップとよばれる１ｍｍ程度の厚さのガラスやプラスチック板上に彫られたマイクロオーダーの溝（マイクロチャンネル）の中で、電気泳動が行え、より簡易に生体試料計測ができるようになってきた。 There is an electrophoresis method as one means for separating and analyzing biologically relevant macromolecules (genome, proteins that are genome byproducts, peptides, amino acids, sugar chains, etc.) contained in a biological sample. In this genome analysis, capillary electrophoresis is a gene testing apparatus that is extremely practical and widely used. In recent years, microchip electrophoresis has emerged, and electrophoresis is performed in micro-order grooves (microchannels) carved on a glass or plastic plate with a thickness of about 1 mm, called palm-sized microchips. It has become possible to perform biological sample measurement more easily.
基本的にはゲルやポリマー溶液からなる泳動用バッファーをキャピラリーやマイクロチャンネルの中に充填し、その両端に高電圧を（例えば１００〜３００Ｖ／ｃｍ）を印加、ＤＮＡは電気泳動バッファーの網目を分子ふるい的にサイズ分離され、同時にサイズ、濃度既知の校正マーカーを流すことで、未知のサンプルのサイズや濃度が正しく決定される。これら小型化に伴い、試薬、検体を微量化し、同時に高速分析を実現した。 Basically, a electrophoresis buffer consisting of a gel or polymer solution is filled into a capillary or microchannel, and a high voltage (for example, 100 to 300 V / cm) is applied to both ends thereof. DNA is a molecule of the electrophoresis buffer network. The size and concentration of the unknown sample are correctly determined by sifting through the size and simultaneously passing calibration markers of known size and concentration. Along with these miniaturization, the amount of reagents and specimens was reduced, and at the same time, high-speed analysis was realized.
しかし、キャピラリーやマイクロチップ電気泳動用バッファーとしては、ポリマー溶液等が汎用されている。既存の方法では、小さいサイズのＤＮＡ断片分離には高粘度のポリマー溶液を用いる必要があり、これらの粘性の高いポリマー溶液は、キャピラリーやマイクロチャンネルへの泳動液の注入が困難（１〜２分）、サンプルのマイクロチャンネルへの導入時間がかかる（１〜２分）、温度コントロールが難しい、再現性が劣る等の問題点があり、１サンプルあたりの分離時間は１８０秒で分析時間のトータルは注入時間を含めると４〜６分であった。 However, polymer solutions and the like are widely used as capillaries and buffers for microchip electrophoresis. In existing methods, it is necessary to use high-viscosity polymer solutions for the separation of small-sized DNA fragments, and these high-viscosity polymer solutions are difficult to inject the electrophoretic solution into capillaries and microchannels (1-2 minutes). ), It takes time to introduce the sample into the microchannel (1-2 minutes), the temperature control is difficult, the reproducibility is inferior, and the separation time per sample is 180 seconds, and the total analysis time is Including the injection time, it was 4-6 minutes.
また、大きいサイズのＤＮＡ断片には、小さいサイズとは異なった濃度（粘度）のポリマー溶液を用いなければならないのが現状である。市販のマイクロチップ電気泳動用キットでは、低ＤＮＡ用と高ＤＮＡ用（あるいは中ＤＮＡ用）というように２から３種類のキットを販売しており、測定する検体のＤＮＡサイズに合わせてそれにあったキットを購入して分離を行わなければならない。 In addition, a polymer solution having a concentration (viscosity) different from that of a small size must be used for a large size DNA fragment. There are two or three types of commercially available microchip electrophoresis kits, one for low DNA and one for high DNA (or medium DNA), and it is suitable for the DNA size of the sample to be measured. Separation must be done by purchasing a kit.
大きいサイズのＤＮＡ断片分離用のキットは一般にポリマー濃度は低く、粘度は低いが、これを小さいサイズのＤＮＡ断片の分離に用いた場合には分離度は著しく低下した。従来のポリマー溶液としてＨＰＭＣ−４０００（２％溶液で４０００ｃＰのもの）であるが、近年、低粘度のポリマー溶液 ＨＰＭＣ−５０（２％溶液で５０ｃＰ）のものがマイクロチップ用バッファーとして研究されている。しかし、これは単独では分離度が必ずしも良好ではなく、また１０ｂｐ−数ｋｂｐという幅広いサイズの分離は不可能であった。（Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ２００２，２３，３６０８−３８１４） Large size DNA fragment separation kits generally have a low polymer concentration and a low viscosity, but when used for the separation of small size DNA fragments, the degree of separation is significantly reduced. A conventional polymer solution is HPMC-4000 (2% solution is 4000 cP), but recently a low viscosity polymer solution HPMC-50 (2% solution is 50 cP) has been studied as a buffer for microchips. . However, the degree of separation is not always good alone, and separation of a wide size of 10 bp to several kbp is impossible. (Electrophoresis 2002, 23, 3608-3814)
また、例えば 特願２００２−７２４１２では、重合高分子ミセルを含有してなる電気泳動用バッファーと、電気泳動法からなる手法により、幅広いサイズのＤＮＡに対して、高速分離が達成された。しかしながら、この方法は、外力付加を要し、実用化のために、装置改良を要する。For example, in Japanese Patent Application No. 2002-72412, high-speed separation has been achieved for a wide range of sizes of DNA by a method comprising an electrophoresis buffer containing polymerized polymer micelles and an electrophoresis method. However, this method requires the addition of an external force and requires improvement of the apparatus for practical use.
したがって、電気泳動緩衝液の粘度改善を行い、簡易で、高速かつ高分離度での分析の実現が必要とされている。
上述の電気泳動用バッファーにおいては、電気泳動用バッファーの粘度改善は達成されたものの、装置改良を伴わず高分離な分析の実現が課題であった。 In the above-described electrophoresis buffer, although the viscosity improvement of the electrophoresis buffer has been achieved, the realization of high-resolution analysis without improvement of the apparatus has been a problem.
本発明は上記従来技術の課題を解決するためになされたものであり、電気泳動用バッファーの粘度改善を行いつつ、装置改良を伴わず簡易で、高速かつ高分離な生体高分子の分離・分析の実現を達成することを目的とする。 The present invention has been made in order to solve the above-described problems of the prior art, and is a simple, high-speed, high-separation bioanalytical separation / analysis without improving the apparatus while improving the viscosity of the electrophoresis buffer. The purpose is to achieve the realization of.
上記目的を達成するため、本発明の電気泳動用バッファー添加剤としては、微粒子を含有する溶液を用いて、そのままあるいは既存の電気泳動用バッファーに添加、希釈することにより、粘度改善のみならず、分離度の向上をめざすものである。 In order to achieve the above object, as the electrophoresis buffer additive of the present invention, using a solution containing fine particles, as it is or by adding and diluting to an existing electrophoresis buffer, not only viscosity improvement, The aim is to improve the degree of separation.
微粒子を含有する溶液としては通常知られているラテックス微粒子の他、金属、半導体、セラミックス、シリカ、クレイ等様々な微粒子を含有する溶液が用いられる。ポリエチレングリコールのような非イオン性の水溶性高分子で被覆した微粒子は表面の電位が遮蔽され、そのままでもバッファーとして用いることが可能であるが、上述したように市販の水溶性高分子溶液と混合して用いることも可能である。 As a solution containing fine particles, a solution containing various fine particles such as metals, semiconductors, ceramics, silica, and clay in addition to conventionally known latex fine particles is used. Fine particles coated with a nonionic water-soluble polymer such as polyethylene glycol have a surface potential shielded and can be used as a buffer as it is, but as described above, they are mixed with a commercially available water-soluble polymer solution. It can also be used.
上記構成の電気泳動用バッファー添加剤により、既存の電気泳動用バッファーの粘度改善を行いつつ、装置改良を伴わず簡易で、高速かつ高分離な生体高分子の分離・分析の実現を達成することができる。 Achievement of simple, high-speed, high-separation biopolymer separation and analysis without improving the equipment, while improving the viscosity of the existing electrophoresis buffer with the electrophoresis buffer additive configured as described above Can do.
このように、上記目的を達成するため、本発明は、微粒子を含有する溶液を添加するものであり、これにより、キャピラリーやマイクロチャンネルへの注入を容易にするのみならず、分離度の改善を行うものである。 Thus, in order to achieve the above object, the present invention adds a solution containing fine particles, which not only facilitates injection into capillaries and microchannels, but also improves the degree of separation. Is what you do.
上記キャピラリーまたはマイクロチップ電気泳動においては、レーザあるいはＬＥＤ等の励起光源により発光、フォトダイオードやフォトトランジスター、冷却ＣＣＤ、フォトマル等の受光素子により検出可能となるようにＤＮＡ断片等の生体高分子物質があらかじめ蛍光試薬により修飾されているか、あるいは電気泳動用バッファーに蛍光試薬が添加されていることが好ましい。 In the above capillary or microchip electrophoresis, biopolymeric substances such as DNA fragments so that light can be detected by an excitation light source such as a laser or LED, and can be detected by a light receiving element such as a photodiode, phototransistor, cooled CCD, or photomultiplier. Is preferably modified with a fluorescent reagent in advance, or a fluorescent reagent is added to the electrophoresis buffer.
以上説明したように、本発明によれば、微粒子溶液を既存の電気泳動用バッファーに添加することによって、既存の装置改良することなく、幅広いサイズの試料を高速かつ高分離能で電気泳動分離検出することができる。 As described above, according to the present invention, by adding a microparticle solution to an existing electrophoresis buffer, it is possible to detect a wide range of samples at high speed and with high resolution without any modification to the existing apparatus. can do.
以下、発明を実施するための最良の形態について詳細に説明する。 Hereinafter, the best mode for carrying out the invention will be described in detail.
以下、マイクロチップについて説明する。マイクロチップは、石英もしくはＰＭＭＡ（ポリメチルメタアクリレート），ＰＣ（ポリカーボネート）等のプラスチック基板に長さ数センチメートル、幅１００ミクロン、深さ、１０〜５０ミクロン程度の溝を形成して、これを電気泳動用のキャピラリーとして使用している。最近では、さらにスループットの飛躍的な向上を意図して、電気泳動チャネルをナノメーターサイズ、すなわち１ｎｍから１μｍの範囲にまで微細化し、かつチャネル形状も蛇行、ジグザグ状等複雑な形状を有する、複雑な電気泳動チャネル構造体を形成したナノチャンネル型マイクロチップも現れている。上記のマイクロチップ型電気泳動では、従来のキャピラリー電気泳動と異なり管状のキャピラリーを使用しないため上記基板上に複数のマイクロチャンネルを自由な位置関係で配置形成することが可能である。このため数センチ角程度の基板形状に小型化されているにも拘らず、生体試料解析のスループットは飛躍的に向上されている。 Hereinafter, the microchip will be described. The microchip is formed by forming grooves of several centimeters in length, 100 microns in width, 10 to 50 microns in width on a plastic substrate such as quartz or PMMA (polymethyl methacrylate), PC (polycarbonate). Used as a capillary for electrophoresis. Recently, in order to further improve the throughput, the electrophoretic channel has been reduced to a nanometer size, that is, in the range of 1 nm to 1 μm, and the channel shape has a complicated shape such as a meandering or zigzag shape. Nanochannel-type microchips that have formed an electrophoretic channel structure have also appeared. Unlike the conventional capillary electrophoresis, the above microchip electrophoresis does not use a tubular capillary, and therefore, a plurality of microchannels can be arranged and formed on the substrate in a free positional relationship. For this reason, the throughput of the biological sample analysis is dramatically improved in spite of being downsized to a substrate shape of about several centimeters square.
次に、図１を用いて、本発明で使用されるマイクロチップ基板である電気泳動用マイクロチップ１について説明する。また、この試料注入口４ａ、試料導入チャンネル２、試料アウトレット４ｂ、電気泳動用バッファー注入口５ａ、電気泳動分離チャンネル３及び電気泳動バッファーアウトレット５ｂには電気泳動バッファー６が充填されている。
ここで言う電気泳動用マイクロチップ１とは、文献等（Ｃｈａｏ−Ｘｕａｎ Ｚｈａｎｇ ａｎｄ Ａｎｄｒｅａｓ Ｍａｎｚ，″Ｎａｒｒｏｗ Ｓａｍｐｌｅ Ｃｈａｎｎｅｌ Ｉｎｊｅｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｃａｐｉｉｌｌａｒｙ Ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ ｏｎ Ｍｉｃｒｏｃｈｉｐ″，Ａｎａｌ．ｃｈｅｍ．７３ ２６５６−２６６２（２００１））で公知である十字型電気泳動チャネルのように、短めの試料移送用チャネル２と長めの試料電気泳動分離用チャネル３とが、それぞれ端部に試料及び電気泳動用バッファー注入口４ａ、５ａ、試料及び電気泳動用バッファーアウトレット４ｂ、５ｂを形成して、分離用経路の途中で交差して連結するようにマイクロチップ基板である基板１に形成されている。ここで基板１とは、無機物であれば石英、ガラス、有機物であればポリカーボネート、ポリメチルメタアクリレート、ポリエンチレンテレフタレートに代表されるが、上記性質を有していれば、これ以外の物質であってもかまわない。前記チャネル２，３の幅と深さは、チャネル全体に試料や電気泳動緩衝液を十分に吸い込み充填することができるような毛管現象を発現する幅と深さがあればよく、チャネル全体にわたって均一な幅と深さとを有することが好ましい。具体的には、幅：２０〜３００μｍ、深さ：１０〜２００μｍが好ましく、幅：５０〜１５０μｍ、深さ：２０〜４０μｍがより好ましい。Next, the electrophoresis microchip 1 which is a microchip substrate used in the present invention will be described with reference to FIG. The
Here, the electrophoresis microchip 1 say, literature (Chao-Xuan Zhang and Andreas Manz , "Narrow Sample Channel Injectors for Capiillary Electrophoresis on Microchip", Anal.chem. 73 2656-2662 (2001)) known in Like a certain cross-shaped electrophoresis channel, a short sample transfer channel 2 and a long sample electrophoresis separation channel 3 are provided with sample and
また、前記チャネルの長さは、試料移送用チャネルを形成するものにあっては、適当量の試料を容易に移送できればよく、通常、２〜３０ｍｍが好ましく、３〜５ｍｍがより好ましい。
また試料電気泳動分離用チャネルは、電気泳動によって十分な分離が行える長さがあればよく、通常、１０〜１００ｍｍが好ましく、１５〜５０ｍｍがより好ましい。In addition, the length of the channel is not limited as long as it can easily transfer an appropriate amount of sample in the case of forming a sample transfer channel, and is usually preferably 2 to 30 mm, more preferably 3 to 5 mm.
The sample electrophoresis separation channel only needs to have a length that allows sufficient separation by electrophoresis, and is usually preferably 10 to 100 mm, more preferably 15 to 50 mm.
そして、前記チャネル２，３の両端に形成される試料あるいは電気泳動バッファーの注入口４ａ、５ａ、アウトレットのウエル４ｂ、５ｂの大きさ（直径）は、マイクロピペット等の注入器具によって試料や電気泳動緩衝液を注入することができ、かつ液溜めの機能を有するような大きさであればよく、具体的には直径１〜５ｍｍの大きさがあればよい。また、その深さは、前記チャネル２，３と等しい深さを有していることが好ましい。チャネル形成部分はチャネルカバー６により覆われ、試料あるいは電気泳動バッファー注入口４ａ、５ａ、アウトレットのウエル４ｂ、５ｂで開放されている以外は、密閉された状態となっている。 The sizes (diameters) of the sample or electrophoresis
以下キャピラリー電気泳動について、記述する。キャピラリー電気泳動に使用されるキャピラリーにおいて、内径、外径、全長、有効長は特に限定されるものではなく、通常使用されるサイズのものが使用されうる。有効長に関して、高速での解析を可能にする観点から、短い有効長のキャピラリーを用いることができる。ここで、キャピラリーの有効長とは、試料注入口から検出部までの距離をいう。キャピラリー電気泳動における泳動電場は、有効な分離能を得、移動時間を短縮する観点から、好ましくは、２０Ｖ／ｃｍ〜１０ｋＶ／ｃｍであり、より好ましくは５０Ｖ／ｃｍ〜５ｋＶ／ｃｍであり、特に好ましくは１００Ｖ／ｃｍ〜１ｋＶ／ｃｍであることが望ましい。The following describes capillary electrophoresis. In the capillary used for capillary electrophoresis, the inner diameter, the outer diameter, the total length, and the effective length are not particularly limited, and those that are usually used can be used. With regard to the effective length, a capillary having a short effective length can be used from the viewpoint of enabling analysis at high speed. Here, the effective length of the capillary means the distance from the sample inlet to the detection unit. The electrophoretic electric field in capillary electrophoresis is preferably 20 V / cm to 10 kV / cm, more preferably 50 V / cm to 5 kV / cm, particularly from the viewpoint of obtaining effective resolution and shortening the movement time. Preferably it is 100 V / cm to 1 kV / cm.
なお、本発明の微粒子溶液を添加するもとの既存の電気泳動用バッファーとは、メチルセルロースおよびハイドロキシエチルセルロース（ＨＥＣ）、ハイドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、ハイドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）などのセルロース誘導体、ポリエチレングリコール、ポリエチレンオキサイド、ポリアクリルアミド、アガロース、アクリルアミド誘導体のポリマー溶液を指す。上記ポリマーの希釈には、水、トリス−グリシンバッファートリス−ホウ酸バッファー、トリス−塩酸バッファー、トリス−トリシンバッファー、トリス−リン酸−水酸化ナトリウムバッファー、トリス−ホウ酸−ＥＤＴＡバッファー等、一般に高分子化合物の電気泳動用緩衝液として使用される緩衝液があげられる。希釈用の水または緩衝バッファーを調整するための水または超純水、超脱イオン水、ＭｉｌｌｉＱ水等、通常電気泳動に使用される水が使用されるが、ＭｉｌｌｉＱ水が特に好ましい。被検高分子化合物がタンパク質やペプチドである場合、前記ポリマー及び緩衝液に加えて、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）やペプチドの場合、ＴｒｉｔｏｎＸ−１００、ε−アミノカプロン酸、３−（Ｃ３−コラミドプロピル）−ジメチルアミノ）−１−プロパン、ＣＨＡＰＳ、６〜８Ｍ尿素、テトラメチルエチレンジアミン（ＴＥＭＥＤ）、ヘキシルトリメチルアンモニュウムブロマイド（ＨＴＡＢ）等を添加することができる。上記、緩衝液の電気泳動用バッファーのｐＨは、好適な電気泳動と正常なピーク分離の観点から、披検高分子化合物がタンパク質の場合、２〜９が好ましく、６．８〜９．６がより好ましい。被検高分子化合物がペプチドの場合、２〜１１が好ましく、２．５〜３．１がより好ましい。被検高分子が核酸の場合、好適な電気泳動と正常なピークの観点から、６．８〜９．２が好ましく、７．５〜８．５がより好ましい。マイクロチップ電気泳動における泳動電場は、良好な分離能を得、移動時間を短縮する観点から、２０Ｖ／ｃｍ〜５０ｋＶ／ｃｍであり、より好ましくは５０Ｖ／ｃｍ〜５ｋＶ／ｃｍであり、特に好ましくは１００Ｖ／ｃｍ〜１ｋＶ／ｃｍであることが望ましい。 In addition, the existing electrophoresis buffer to which the fine particle solution of the present invention is added is a cellulose derivative such as methyl cellulose, hydroxyethyl cellulose (HEC), hydroxypropyl cellulose (HPC), hydroxypropyl methyl cellulose (HPMC), or polyethylene glycol. , Refers to a polymer solution of polyethylene oxide, polyacrylamide, agarose, and acrylamide derivatives. For dilution of the above polymer, water, tris-glycine buffer tris-borate buffer, tris-hydrochloric acid buffer, tris-tricine buffer, tris-phosphate-sodium hydroxide buffer, tris-borate-EDTA buffer, etc. Examples thereof include a buffer used as a buffer for electrophoresis of molecular compounds. Water used for normal electrophoresis, such as water for adjusting dilution water or water for adjusting a buffer buffer, ultrapure water, ultradeionized water, MilliQ water, or the like is used, and MilliQ water is particularly preferable. When the test high molecular compound is a protein or peptide, in addition to the polymer and buffer, in the case of sodium dodecyl sulfate (SDS) or a peptide, Triton X-100, ε-aminocaproic acid, 3- (C3-colamidopropyl) ) -Dimethylamino) -1-propane, CHAPS, 6-8M urea, tetramethylethylenediamine (TEMED), hexyltrimethylammonium bromide (HTAB) and the like can be added. From the viewpoint of suitable electrophoresis and normal peak separation, the pH of the buffer for electrophoresis of the buffer is preferably 2 to 9, and preferably 6.8 to 9.6 when the test polymer compound is a protein. More preferred. When a test high molecular compound is a peptide, 2-11 are preferable and 2.5-3.1 are more preferable. When the test polymer is a nucleic acid, 6.8 to 9.2 is preferable and 7.5 to 8.5 is more preferable from the viewpoint of suitable electrophoresis and normal peaks. The electrophoretic electric field in microchip electrophoresis is 20 V / cm to 50 kV / cm, more preferably 50 V / cm to 5 kV / cm, particularly preferably from the viewpoint of obtaining good resolution and shortening the movement time. It is desirable that it is 100V / cm-1kV / cm.
微粒子としては限定されるものではないが、高分子、金属、半導体、セラミックス、シリカ、クレイなどの微粒子を用いることが可能である。分散安定化のために表面をポリエチレングリコール誘導体のような水溶性高分子で被服することもできる。高分子微粒子は通常のスチレンやメタクリル酸メチルのような疎水性モノマーを重合性基を片末端に有するポリエチレングリコールマクロモノマー存在下にて分散重合することにより調製される。これらの調製法に関しては〔Ｒ．Ｏｇａｗａ，ｅｔ ａｌ、Ｐｏｌｙｍｅｒ Ｊｏｕｒｎａｌ，Ｖｏｌ．３４，Ｎｏ．１２，ｐｐ．７１９−７２６（２００２）〕等に開示されている方法を用いても合成できる。
金属微粒子の場合には市販の金コロイドを使うことも可能であるが、ＰＥＧ化によって分散安定化された粒子を用いることが可能であり、公知文献〔Ｔ．Ｉｓｈｉｉ， ｅｔ ａｌ．，Ｌａｎｇｍｕｉｒ，ｉｎｐｒｅｓｓ〕などによって製造可能である。半導体微粒子の調製は、市販の半導体量子ドットの利用や発明者らがすでに開発してきたＰＥＧ化量子ドット〔特開２００２−８０９０３〕を利用することができる。
また、シリカやクレイをＰＥＧ化により安定化させた粒子は〔特願２００３−２９３２４２〕に示されているようにＰＥＧ／ポリアミンブロック共重合体と混合することにより表層にＰＥＧ層を有する分散安定化微粒子が製造可能である。
このような微粒子のサイズとしては電気泳動用バッファーに混合できるものであればサイズは特に限定はないが、通常０．５ｎｍ〜１０ｍｍ、好ましくは１ｎｍ〜１００μｍ、より好ましくは３ｎｍ〜１０μｍのものを利用することができる。
図２には本発明でThe fine particles are not limited, but fine particles of polymers, metals, semiconductors, ceramics, silica, clay, etc. can be used. The surface can be coated with a water-soluble polymer such as a polyethylene glycol derivative for dispersion stabilization. The polymer fine particles are prepared by dispersion polymerization of a normal hydrophobic monomer such as styrene or methyl methacrylate in the presence of a polyethylene glycol macromonomer having a polymerizable group at one end. Regarding these preparation methods [R. Ogawa, et al, Polymer Journal, Vol. 34, no. 12, pp. 719-726 (2002)] and the like.
In the case of metal fine particles, a commercially available gold colloid can be used, but particles dispersed and stabilized by PEGylation can be used. Ishii, et al. , Langmuir, inpress] and the like. For the preparation of the semiconductor fine particles, a commercially available semiconductor quantum dot or a PEGylated quantum dot [JP-A-2002-80903] already developed by the inventors can be used.
In addition, particles stabilized by PEGylation of silica and clay are dispersed and stabilized by having a PEG layer on the surface layer by mixing with PEG / polyamine block copolymer as shown in [Japanese Patent Application No. 2003-293242]. Fine particles can be produced.
The size of such fine particles is not particularly limited as long as it can be mixed with the electrophoresis buffer, but usually 0.5 nm to 10 mm, preferably 1 nm to 100 μm, more preferably 3 nm to 10 μm is used. can do.
FIG. 2 shows the present invention.
本発明に使用の微粒子溶液は、既存の電気泳動用バッファーに適宜添加して用いることができる。既存の電気泳動用バッファーとしては、メチルセルロース、ハイドロキシエチルセルロース（ＨＥＣ）、ハイドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、ハイドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）などのセルロース誘導体、ポリエチレングリコール、ポリエチレンオキサイド、ポリアクリルアミド、アガロース、アクリルアミド誘導体などのポリマー溶液を指す。上記ポリマーの希釈には、水、トリス−グリシンバッファートリス−ホウ酸バッファー、トリス−塩酸バッファー、トリス−トリシンバッファー、トリス−リン酸−水酸化ナトリウムバッファー、トリス−ホウ酸−ＥＤＴＡバッファー等、一般に高分子化合物の電気泳動用緩衝液として使用される緩衝液があげられる。
微粒子溶液の添加量は、電気泳動分離の際の生体試料のピーク分離度の観点から、最終濃度（重量％）が０．５〜６％が好ましく、１〜３％がより好ましく、さらに、２．０〜２．２５％がより好ましい。これは例えば、７．５％濃度の微粒子溶液を、既存の泳動緩衝液に１：１の割合、あるいは２：１、あるいは６：４の割合、４：６の割合、３対７の割合、あるいは２：８の割合等、適宜添加することによって達成され得る。The fine particle solution used in the present invention can be used by appropriately adding to an existing electrophoresis buffer. Existing electrophoresis buffers include cellulose derivatives such as methylcellulose, hydroxyethylcellulose (HEC), hydroxypropylcellulose (HPC), and hydroxypropylmethylcellulose (HPMC), polyethylene glycol, polyethylene oxide, polyacrylamide, agarose, acrylamide derivatives, etc. Refers to a polymer solution. For dilution of the above polymer, water, tris-glycine buffer tris-borate buffer, tris-hydrochloric acid buffer, tris-tricine buffer, tris-phosphate-sodium hydroxide buffer, tris-borate-EDTA buffer, etc. Examples thereof include a buffer used as a buffer for electrophoresis of molecular compounds.
The addition amount of the fine particle solution is preferably 0.5 to 6%, more preferably 1 to 3% in terms of final concentration (% by weight) from the viewpoint of the peak resolution of the biological sample during electrophoretic separation. 0.0-2.25% is more preferable. For example, a 7.5% concentration microparticle solution may be added to an existing electrophoresis buffer in a ratio of 1: 1, alternatively 2: 1, alternatively 6: 4, 4: 6, 3: 7, Or it can be achieved by adding suitably, such as a ratio of 2: 8.
また、試料成分としては、特に制限されないが、ｄｒｕｇ ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，アミノ酸、ペプチド、ＤＮＡ、オリゴヌクレチオド、比較的大きなたんぱく質等の生化学に関連した高分子物質が好ましく例示できる。 The sample components are not particularly limited, but preferred examples include biochemically related high molecular substances such as drug molecules, amino acids, peptides, DNA, oligonucleotides, and relatively large proteins.
本発明に使用される発光形態には、蛍光発光、化学発光、生物発光等を含む。さらにまた、蛍光試薬とは、エチジュウムブロマイド〔５１０／５９５（励起／蛍光波長、以下同様）〕、エチジウムホモダイマー−１（Ｅｔｈｄｉｕｍ ｈｏｍｏｄｉｍｅｒ−１）〔５２８／６１７〕、アクリジンオレンジ（Ａｃｒｉｄｉｎｅ Ｏｒａｎｇｅ）〔５０２／５２６〕、チアゾールオレンジ（ＴＯ：Ｔｈｉａｚｏｌｅ ｏｒａｎｇｅ）〔５０９／５２５〕、ＹＯ−ＰＲＯ−１〔４９１／５０９〕、ＹＯ−ＰＲＯ−３〔６２１／６３１〕、ＴＯ−ＰＲＯ−１〔５１５／５３１〕、ＴＯ−ＰＲＯ−３〔６４２／６６１〕、ＹＯ−ＹＯ−１〔４９１／５０９〕、ＴＯ−ＴＯ−１〔５１４／５３３〕、ＹＯ−ＹＯ−３〔６１２／６３１］、ＴＯ−ＴＯ−３〔６４２／６６０〕、サイバーグリーンＩ（ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ Ｉ）〔４９４／５２１〕、ＳＹＢＲサイバーグリーン〔２５４／５２０〕、ＳＹＢＲ Ｇｏｌｄ〔３００、４９５／５３７〕、オリグリーン（Ｏｌｉ Ｇｒｅｅｎ）（ｓｓＤＮＡ用）〔５００／５２０〕、リボグリーン（Ｒｉｂｏ Ｇｒｅｅｎ）（ＲＮＡ用）〔５００／５２５〕、ＦＩＴＣ〔４９４／５１９〕、６−ＦＡＭ〔４８８／５３５〕、ＨＥＸ〔５１５／５５９〕Ｃｙ５〔６４９／６７０〕、Ｃｙ３〔５５０／５７０〕等、励起光によって発光するものを指す。これらは装置によって適宜選択され得る。またこれらの濃度は、検出系の検出感度に応じて、適宜設定されうる。
化学発光（化学ルミネッセンス）とは化学反応を伴う発光で、青紫、青、青緑色の発光であり、化学反応に伴う励起や衝突によって生じるものをさす。生物発光（バイオルミネッセンス）は生物による発光であり、夜光虫、蛍、くらげのＣａ２＋によるエクオーリン発光、ウミシイタケのルシフェリンールシフェラーゼによる発光、くらげのグリーン蛍光タンパク質（ＧＦＰ）（３９６ｎｍ励起、５０８ｎｍ蛍光）等がある。発光現象に加えて、本発明ではＵＶ波長光の吸収も利用され得る。The light emission forms used in the present invention include fluorescence, chemiluminescence, bioluminescence and the like. Furthermore, fluorescent reagents include ethidium bromide [510/595 (excitation / fluorescence wavelength; the same applies hereinafter)], ethidium homodimer-1 (528/617), acridine orange (Acridine Orange) [ 502/526], thiazole orange (TO) [509/525], YO-PRO-1 [491/509], YO-PRO-3 [6211/631], TO-PRO-1 [515/531 ], TO-PRO-3 [642/661], YO-YO-1 [491/509], TO-TO-1 [514/533], YO-YO-3 [612/631], TO-TO- 3 [642/660], SYBR Green I [494/5 1], SYBR Cyber Green [254/520], SYBR Gold [300, 495/537], Oli Green (for ssDNA) [500/520], Ribo Green (for RNA) [500 / 525], FITC [494/519], 6-FAM [488/535], HEX [515/559] Cy5 [649/670], Cy3 [550/570], and the like. These can be appropriately selected depending on the apparatus. These concentrations can be appropriately set according to the detection sensitivity of the detection system.
Chemiluminescence (chemiluminescence) is light emission accompanied by a chemical reaction, and is blue-violet, blue, and blue-green light emission, which is caused by excitation or collision associated with a chemical reaction. Bioluminescence is bioluminescence, such as nocturnal insects, fireflies, jellyfish Ca 2+ aequorin luminescence, Renilla luciferin luciferase, jellyfish green fluorescent protein (GFP) (396 nm excitation, 508 nm fluorescence), etc. is there. In addition to the luminescence phenomenon, absorption of UV wavelength light can also be used in the present invention.
なお、泳動用バッファーとして、蛍光試薬エチジウムブロマイドを含む０．７％ヒドロキシルプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）ポリマー溶液（日立化成）を用いた。測定試料としてＤＮＡ１００ｂｐＬａｄｄｅｒのｄｓＤＮＡの標準試料１０ｎｇ／ｕＬ（タカラバイオ株式会社；ピークは１００，２００，３００，４００，５００，６００，７００，８００，９００，１０００，１５００の１１本）を１マイクロリットルをミリポア水９マイクロリットルで希釈して１０マイクロリットル供した。マイクロチップとして図１に示したもの（日立化成）を用いた。マイクロチップはすべてチャネルの幅０．１ミリメーター、深さ３０マイクロメートル、試料導入チャネルと電気泳動分離チャネルとのクロス位置からのチャネル有効長は、３０ミリメートルである。ＤＮＡの分離、検出装置として、マイクロチップ電気泳動装置（ＳＶ１１００ 日立電子）を用い所定の方法により電気泳動に供した。泳動条件は、試料導入電圧として３００Ｖ、１分、分離泳動電圧は戻し泳動電圧として１３０Ｖ、分離電圧として７５０Ｖ として１８０秒間、泳動分離を行った。励起波長は４７０ナノメートル、蛍光波長は５８０ナノメートルである。結果を図３に示す。それぞれのピークはそれぞれ、移動時間の速いほうから１００ｂｐである。これを基準データ、 As a migration buffer, a 0.7% hydroxylpropylmethylcellulose (HPMC) polymer solution (Hitachi Chemical) containing a fluorescent reagent ethidium bromide was used. 1 microliter of
として以下、微粒子を添加したものについて、実施例を挙げて本発明の有効性を具体的に説明する。Hereinafter, the effectiveness of the present invention will be specifically described with reference to examples to which fine particles are added.
微粒子サイズ８０ｎｍの７．５％溶液、ＤＮＡサンプルとして１００ｂｐＤＮＡ Ｌａｄｄｅｒを用いた結果を示す。微粒子溶液：日立化成ポリマー溶液の混合比を１：９、２：８、３：７、４：６、５：５として前記条件にて測定を行った。エレクトロフェログラム（蛍光強度と時間の関係）を、１：９（図４）、２：８（図５）、３：７（図６）、４：６（図７）、５：５（図８）に示す。図３の比較例１の既存ポリマーでは７００ｂｐ以上の分離が悪いのに対し、図６の３：７の混合比率で微粒子を添加した際、最もよい分離を示した。移動度の向上も示した。The result of using a 7.5% solution with a fine particle size of 80 nm and 100 bp DNA Ladder as a DNA sample is shown. The measurement was carried out under the above conditions with the mixing ratio of the fine particle solution: Hitachi Kasei polymer solution being 1: 9, 2: 8, 3: 7, 4: 6, 5: 5. Electropherograms (relationships between fluorescence intensity and time) are shown as 1: 9 (Fig. 4), 2: 8 (Fig. 5), 3: 7 (Fig. 6), 4: 6 (Fig. 7), and 5: 5 (Fig. Shown in 8). In the existing polymer of Comparative Example 1 in FIG. 3, the separation of 700 bp or more was poor, whereas when the fine particles were added at a mixing ratio of 3: 7 in FIG. 6, the best separation was shown. It also showed improved mobility.
粒子径１９０ｎｍ、５％溶液をＭＩＬＬＥＸ−ＨＶ ＭＩＬＬＩＰＯＲＥ ０．４５ｕｍを用いて濾過後使用した。ＤＮＡサンプルとして１００ｂｐＤＮＡ Ｌａｄｄｅｒを用いた結果を示す。微粒子溶液：日立化成ポリマー溶液の混合比を１：９、３．３：６．７、４：６、５：５、６：４、６．７：３．３、７：３として、前記条件にて測定を行った。エレクトロフェログラム（蛍光強度と時間の関係）を、１：９（図９）、４：６（図１０）、３．３：６：７（図１１）、５：５（図１２）、５：５（図１３）、５：５（図１４）、５：５（図１５）、５：５（図１６）５：５（図１７）、６：４（図１８）、６．７：３．３（図１９）に示す。図３と比較して図９の１：９の混合比、および、図１０〜図１７の４．６〜５：５の混合比の際１．５ｋｂｐまでの良好な分離を示した。 A 5% solution with a particle size of 190 nm was used after filtration using MILLEX-HV MILLIPORE 0.45 um. The result using 100 bp DNA Ladder as a DNA sample is shown. The mixing ratio of fine particle solution: Hitachi Chemical polymer solution is 1: 9, 3.3: 6.7, 4: 6, 5: 5, 6: 4, 6.7: 3.3, 7: 3, and the above conditions. Measurements were made at Electropherograms (relationship between fluorescence intensity and time) were calculated as 1: 9 (FIG. 9), 4: 6 (FIG. 10), 3.3: 6: 7 (FIG. 11), 5: 5 (FIG. 12), 5 : 5 (FIG. 13), 5: 5 (FIG. 14), 5: 5 (FIG. 15), 5: 5 (FIG. 16), 5: 5 (FIG. 17), 6: 4 (FIG. 18), and 6.7: This is shown in 3.3 (FIG. 19). Compared to FIG. 3, the separation ratio of 1: 9 in FIG. 9 and the separation ratio of 4.6 to 5: 5 in FIGS. 10 to 17 showed good separation up to 1.5 kbp.
微粒子溶液の代わりにミリポア水を希釈液として用いて、水：日立化成ポリマー溶液の混合比を５：５、前記条件にて測定を行った。ＤＮＡサンプルとして１００ｂｐＤＮＡ Ｌａｄｄｅｒを用いた結果を示す。エレクトロフェログラム（蛍光強度と時間の関係）を図２０，２１に示す。実施例１、２と比較して、水を微粒子溶液の代わりに添加したもの（水５：５）は７００ｂｐ以上の分離度が悪い。 Millipore water was used as a diluent instead of the fine particle solution, and the measurement was performed under the above conditions with a water: Hitachi Chemical Polymer solution mixing ratio of 5: 5. The result using 100 bp DNA Ladder as a DNA sample is shown. Electropherograms (relationship between fluorescence intensity and time) are shown in FIGS. Compared with Examples 1 and 2, water added in place of the fine particle solution (water 5: 5) has a poor separation degree of 700 bp or more.
図２２に既存のポリマー溶液（０．７％ＨＰＭＣ）で ＤＮＡサンプルとして２ＬｏｎｇＤＮＡｌｎｇ／ｕＬ（ＢｉｏＬａｂｓ）（１００，２００，３００，４００，５００，６００，７００，８００，９００，１０００ｂｐ，１．２ｋｂｐ，１．５ｋｂｐ，２ｋｂｐ，３ｋｂｐ，４ｋｂｐ，５ｋｂｐ，６ｋｂｐ，８ｌｂｐ，１０ｋｂｐ）を前記同様に分離した結果を示す。 FIG. 22 shows an example of 2 LongDNA lng / uL (BioLabs) (100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000 bp, 1.2 kbp, 1) as a DNA sample using an existing polymer solution (0.7% HPMC). .5 kbp, 2 kbp, 3 kbp, 4 kbp, 5 kbp, 6 kbp, 8 lbp, 10 kbp) are shown in the same manner as described above.
図２３〜３１に微粒子サイズ８０ｎｍの微粒子溶液を添加剤として、ＤＮＡサンプルとして２ＬｏｎｇＤＮＡ Ｌａｄｄｅｒを用いた結果を示す。微粒子溶液：日立化成ポリマー溶液の混合比を、１：９（図２３）、２：８（図２４）、３：７（図２５）、４：６（図２６）、５：５（図２７）、６：４（図２８）、７：３（図２９）、８：２（図３０）、１０：０（図３１）、を調べた。図２３の既存ポリマーでは７００ｂｐ以上の分離が悪いのに対し、図２５の３：７〜図２７の５：５の混合比の際、最もよい分離を示し、２ｋｂｐまでのピークの分離を確認した。移動度の向上も示した。23 to 31 show the results of using 2Long DNA Ladder as a DNA sample with a fine particle solution having a fine particle size of 80 nm as an additive. The mixing ratio of fine particle solution: Hitachi Chemical polymer solution was 1: 9 (FIG. 23), 2: 8 (FIG. 24), 3: 7 (FIG. 25), 4: 6 (FIG. 26), and 5: 5 (FIG. 27). ), 6: 4 (FIG. 28), 7: 3 (FIG. 29), 8: 2 (FIG. 30), 10: 0 (FIG. 31). In the existing polymer of FIG. 23, the separation of 700 bp or more was poor, whereas the mixing ratio of 3: 7 in FIG. 25 to 5: 5 in FIG. 27 showed the best separation and confirmed the separation of peaks up to 2 kbp. . It also showed improved mobility.
図３２に既存のポリマー溶液（０．７％ＨＰＭＣ）でＤＮＡサンプルとして１０ｂｐＤＮＡＬａｄｄｅｒ １ｕｇ／ｕＬ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）（１０，２０，４０，６０，８０，１００，３３０）を分離した結果を示す。 FIG. 32 shows the result of separating 10 bp DNALadder 1 ug / uL (Invitrogen) (10, 20, 40, 60, 80, 100, 330) as a DNA sample using an existing polymer solution (0.7% HPMC).
図３３〜図３９に微粒子サイズ゛８０ｎｍ ＤＮＡサンプルとして１０ｂｐＤＮＡＬａｄｄｅｒを用いた結果を示す。 微粒子溶液：日立化成ポリマー溶液の混合比を、１：９（図３３）、２：８（図３４）、３：７（図３５）、４：６（図３６）、５：５（図３７）、８：２（図３８）、９：１（図３９）を調べた。図３２の既存ポリマー単独では１００と３００の分離が悪いのに対し、図３５の３：７の混合比の際、３０ｂｐまでのピークの分離を確認した。33 to 39 show the results of using 10 bp DNALadder as a DNA sample having a fine particle size of 80 nm. The mixing ratio of fine particle solution: Hitachi Chemical polymer solution was 1: 9 (FIG. 33), 2: 8 (FIG. 34), 3: 7 (FIG. 35), 4: 6 (FIG. 36), 5: 5 (FIG. 37). ), 8: 2 (FIG. 38), 9: 1 (FIG. 39). While the separation of 100 and 300 was poor with the existing polymer alone in FIG. 32, the separation of peaks up to 30 bp was confirmed at the mixing ratio of 3: 7 in FIG.
図４０，４１に市販のラテックス溶液（Ｉｎｔｅｒｆａｃｉａｌ Ｄｙｎａｍｉｃｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）８０ｎｍ（ＩＤＣ Ｓｕｌｆａｔｅ Ｌａｔｅｘｅｓ １−８０、８．３％）を用いて、ＤＮＡサンプルとして１００ｂｐＤＮＡＬａｄｄｅｒを分離した結果を示す。ラテックス溶液：日立化成ポリマー溶液の混合比を１：９（図４０）、２：８（図４１）を調べた。ポリマー溶液との混合性が悪く、分離も低下した。 40 and 41 show the results of separating a 100 bp DNALadder as a DNA sample using a commercially available latex solution (Interfacial Dynamics Corporation) 80 nm (IDC Sulfurate Latex 1-80, 8.3%). The mixing ratio of latex solution: Hitachi Kasei polymer solution was examined as 1: 9 (FIG. 40) and 2: 8 (FIG. 41). The mixing with the polymer solution was poor and the separation was also reduced.
図４２〜４４に市販のラテックス溶液（Ｉｎｔｅｒｆａｃｉａｌ Ｄｙｎａｍｉｃｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）１９３ｎｍ（ＩＤＣ Ｓｕｌｆａｔｅ Ｌａｔｅｘｅｓ １−２００、５．１％）を用いて、ＤＮＡサンプルとして１００ｂｐＤＮＡＬａｄｄｅｒを分離した結果を示す。ラテックス溶液：日立化成ポリマー溶液の混合比を１：９（図４２）、２：８（図４３）、３：７（図４４）を調べた。ポリマー溶液との混合性が悪く、分離も低下した。 42 to 44 show the results of separating 100 bp DNALadder as a DNA sample using a commercially available latex solution (Interfacial Dynamics Corporation) 193 nm (IDC Sulfate Latexes 1-200, 5.1%). The mixing ratio of latex solution: Hitachi Kasei polymer solution was examined as 1: 9 (FIG. 42), 2: 8 (FIG. 43), and 3: 7 (FIG. 44). The mixing with the polymer solution was poor and the separation was also reduced.
図４５−４６に市販のラテックス溶液（Ｉｎｔｅｒｆａｃｉａｌ Ｄｙｎａｍｉｃｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）１００ｎｍ（ＩＤＣ Ｃａｒｂｏｘｙｌ Ｌａｔｅｘｅｓ ７−１００、１０．５％）を用いて、ＤＮＡサンプルとして１００ｂｐＤＮＡＬａｄｄｅｒを分離した結果を示す。ラテックス溶液：日立化成ポリマー溶液の混合比を１：９（図４５）、２：８（図４６）を調べた。ポリマー溶液との混合性が悪く、分離も低下した。 FIGS. 45-46 show the results of separation of 100 bp DNALadder as a DNA sample using a commercially available latex solution (Interfacial Dynamics Corporation) 100 nm (IDC Carboxyl Latex 7-100, 10.5%). The mixing ratio of latex solution: Hitachi Kasei polymer solution was examined as 1: 9 (FIG. 45) and 2: 8 (FIG. 46). The mixing with the polymer solution was poor and the separation was also reduced.
図４７〜４８に市販のラテックス溶液（Ｉｎｔｅｒｆａｃｉａｌ Ｄｙｎａｍｉｃｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）１００ｎｍ（ＩＤＣ Ｃａｒｂｏｘｙｌ／Ｓｕｌｆａｔｅ Ｌａｔｅｘｅｓ ８−１００、５．０％）を用いて、ＤＮＡサンプルとして１００ｂｐＤＮＡＬａｄｄｅｒを分離した結果を示す。ラテックス溶液：日立化成ポリマー溶液の混合比を１：９（図４７）、２：８（図４８）を調べた。ポリマー溶液との混合性が悪く、分離も低下した。47 to 48 show the results of separating 100 bp DNALadder as a DNA sample using a commercially available latex solution (Interfacial Dynamics Corporation) 100 nm (IDC Carboxyl / Sulphate Latex 8-100, 5.0%). The mixing ratio of latex solution: Hitachi Kasei polymer solution was examined as 1: 9 (FIG. 47) and 2: 8 (FIG. 48). The mixing with the polymer solution was poor and the separation was also reduced.
法医学分析、遺伝子解析のＰＣＲ（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ）解析、癌の遺伝子診断解析、痴呆症、筋ジストロフイー、心臓病、心筋梗塞、ダウン症、感染症、糖尿病、フェニルケトン尿症等の各種疾患解析の応用、プロテオーム解析、グライコーム解析における、タンパク質または糖鎖のハイスループットスクリーニング解析をとおした、医療診断装置への応用、および生体機能、疾患発症機構等の解析、ＳＳＣＰ（ｓｉｎｇｌｅ ｓｔｒａｎｄ ｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｐｏｌｙｍｏｒｈｉｓｍ）のＳＮＰｓ（ｓｉｎｇｌｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ）解析、ＶＮＴＲ（ｖａｒｉａｂｌｅ ｎｕｍｂｅｒ ｏｆ ｔａｎｄｅｍ ｒｅｐｅａｔ）解析、ＰＣＲ−ＲＦＬＰ（ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｌｅｎｇｔｈ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ）解析、マイクロサテライト解析等では、簡易な高分解能・高速分析が必須となりつつあり、本発明による電気泳動マイクロチップは上記医療分野への応用に極めて有用であると言える。 Application of forensic analysis, gene analysis PCR (polymerase chain reaction) analysis, cancer genetic diagnosis analysis, dementia, muscular dystrophy, heart disease, myocardial infarction, Down syndrome, infection, diabetes, phenylketonuria, etc. , Application to medical diagnostic equipment through high-throughput screening analysis of protein or sugar chain in proteome analysis, glycome analysis, analysis of biological function, disease onset mechanism, SSCP (single strand conformation polymorphism) SNPs (single Nucleotide polymorphisms analysis, VNTR (variable number of tandem repeat) analysis, PCR-RFLP (restr In the case of an analysis of a fragmentation length polymorphism (simulation fragment length analysis), a microsatellite analysis, and the like, simple high-resolution and high-speed analysis is becoming essential.
１ マイクロチップ基板
２ 試料導入チャネル
３ 試料電気泳動分離用チャネル
４ａ 試料注入口
４ｂ 試料アウトレット
５ａ 電気泳動バッファー注入口
５ｂ 電気泳動バッファーアウトレット
６ 電気泳動バッファー1 Microchip substrate 2 Sample introduction channel 3 Sample
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| JP2019066354A (en) * | 2017-10-02 | 2019-04-25 | 株式会社島津製作所 | Separation medium for electrophoresis, reagent kit for electrophoresis reagent, and method for electrophoresis |
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- 2004-01-05 JP JP2004028672A patent/JP2005195562A/en active Pending
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