【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、蛍光検出のための励起光照射装置に関する。
【０００２】
【従来の技術】
ＤＮＡなどの核酸に関する種々の情報を得るための方法として、蛍光検出が広く利用されている。そのような検出方法では、例えば、解析の対象となる核酸を蛍光物質により標識する一方、温度などの条件を変えたり、または所望の反応を実行することによって、当該蛍光物質から生じる蛍光の強度変化を検出する。また、蛍光強度変化を測定には、核酸を標識した蛍光物質に対して最適な励起光を照射し、それにより可視化された蛍光を検出する方法が一般的である。現在、このような検出のために使用される蛍光物質が数多く存在する。従って、それらの蛍光物質を使用するためには、夫々の蛍光物質に対応した波長特性を有する励起光源が必要である。
【０００３】
核酸の反応中の蛍光変化解析のために、従来からリアルタイムＰＣＲ装置が用いられている。リアルタイムＰＣＲ装置の励起光源の例は、非特許文献１に記載されるような、タングステンハロゲンランプを使用し、光学フィルターで波長を選択し、反射板を用いて複数検体に拡散照射するものである。しかしながら、このような励起光源を使用したのでは、均一な強度の励起光を複数検体に対して照射することは困難である。また、拡散照射するので、１検体当たりの励起光の強度が低くなり、検出しようとする蛍光も微弱化されてしまう。
【０００４】
非特許文献２に開示された装置では、ハロゲンランプに４枚の波長選択用光学フィルターが装着されており、ハロゲンランプから照射され且つ波長選択された光が光ファイバーを経て検体に誘導されるようになっている。また、この装置では、光源側または検体側をＸＹ移動させることによって、複数の検体を一検体毎に励起して蛍光を測定するようになっている。このような装置では、複数検体の測定を可能にするために、移動量の大きいＸＹステージを装備してその移動を制御しているため、装置が大型化し、高価な装置にならざるを得ないという問題がある。また、一検体毎に照射および検出を行うので、複数の検体間で測定に時間差が生じることも問題である。
【０００５】
加えて、上述の非特許文献１および非特許文献２に開示されたシステムは、何れもハロゲンランプを採用しているので、測定開始までに光源を安定するための時間を要し、また、ランプの寿命が比較的短いという問題がある。
【０００６】
一方、特許文献１には、光源として発光ダイオード（以下、ＬＥＤと記す）を用いる装置が提案されている。また、非特許文献３および特許文献２には、検体毎にＬＥＤを配置することによって、複数の検体についての解析や電気泳動後のゲルの観察などを行うための装置が開示されている。しかし、これらの技術は１種類のＬＥＤを用いているため、励起波長を変更できない問題がある。
【０００７】
【特許文献１】
特開２００１−２６９１７１号公報
【０００８】
【特許文献２】
特開平１０−２７４６３７号公報
【０００９】
【非特許文献１】
バイオラド個別カタログ、２００２年度版、１〜２頁、「ｉＣｙｃｌｅｒＴＭｉＱ、リアルタイムＰＣＲ解析システム」、ＢＩＯＲＡＤ社発行
【００１０】
【非特許文献２】
ＳＴＲＡＴＡＧＥＮＥ個別カタログ（ＭＸ４０００）、２００２年度版、１〜２頁、「ＭＸ４０００ＴＭ、マルチプレックス定量ＰＣＲシステム」、ＳＴＲＡＴＡＧＥＮＥ社発行
【００１１】
【非特許文献３】
ＭＪ ＪＡＰＡＮカタログ、２００２年度版、２６〜２７頁、「ＯｐｔｉｃｏｎＴＭ Ｓｙｓｔｅｍ」、ＭＪ ＪＡＰＡＮ社発行
【００１２】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の課題は、蛍光検出のための励起光照射装置における上記問題を解決するために、ＬＥＤ光源を用いることによりハロゲンランプ光源の欠点を回避すると共に、同じ検体に対して複数の異なる波長の励起光を照射できる励起光照射装置を提供することである。
【００１３】
【課題を解決するための手段】
上記の課題は、蛍光を測定すべき検体に対して、波長の異なる複数の励起光から任意に選択された励起光を照射できる励起光照射装置において、
異なる発光波長を有する複数のＬＥＤからなる一組の励起光源であって、これらＬＥＤ間の相対的な位置を維持したままＸ軸方向および／またはＹ軸方向に平行移動可能に配置された一組の励起光源と、
前記複数のＬＥＤ光源のうちの任意に選択された一つを、前記検体に近接した照射位置に移動させると共に、該照射位置にあるＬＥＤ光源のみを点灯させて、該ＬＥＤ光源からの励起光のみを前記検体に照射するように構成された点灯制御手段とを具備する励起光照射装置によって達成される。
【００１４】
【発明の実施の形態】
本発明によれば、一つの検体について、複数のＬＥＤからなる一組の励起光源を用いることにより、検体をその近くから励起し、且つ光学フィルターなどの光学部品を使用せずに波長の異なる複数の励起光を使用できる励起光照射装置が提供される。
【００１５】
まず、本発明による励起光照射装置の概要を図１を用いて説明する。図１には、励起光照射装置の主要部の一部分が示されている。例えば、この例では、蛍光を検出すべき検体は容器１に収容される。容器１に含まれる検体に対して励起光を照射するための照射系８は、第１の波長で励起光を照射するための第１の光源２と、第２の波長で励起光を照射するための第２の光源３と、第３の波長で励起光を照射するための第３の光源４と、第４の波長で励起光を照射するための第４の光源５と、目的波長以外の励起光を遮光するための遮光板６と、遮光板６に設けられた照射窓７とを具備している。
【００１６】
ここで、第１の波長、第２の波長、第３の波長および第４の波長は、互いに異なっていても、一部異なっていても、全て同じでもよいが、多くの波長を利用するためには、全ての光源からの励起光の波長は互いに異なることが望ましい。
【００１７】
第１の光源２、第２の光源３、第３の光源４、および第４の光源５は、夫々任意の一定波長を得るための光源であり、典型的には発光ダイオード（ＬＥＤ）である。しかし、本発明においては、任意の一定波長を得ることができる限りＬＥＤの均等物と看做すべきである。
【００１８】
遮光板６は、所望の光源から照射される励起光以外の光を遮るため、即ち、検体間の迷光を防ぐために、並びに、複数の検体に対して一定した光量での照射を確実にするために、検体と当該光源と間の光路の間に配置される。また、遮光板６には、目的のＬＥＤ光源から検体に至る光路を形成し、当該ＬＥＤ光源から検体に対して励起光を照射するための照射窓７が存在する。但し、この遮光板６は必ずしも必要ではない。従って、遮光板６を具備しない励起光照射装置も本発明の範囲である。
【００１９】
照射系８による励起光照射は、例えば、次のように行なえばよい。所定の位置に配置された容器１中の検体に対して、所望のＬＥＤ光源から励起光が照射される。例えば、第１のＬＥＤ光源２から光を照射する場合、遮光板６の照射窓７は、第１のＬＥＤ光源２から検体１への光路内にある位置に配置される。このとき、検体１への第２、第３および第４のＬＥＤ光源からの励起光の照射はなされない。即ち、第２、第３および第４のＬＥＤ光源は点灯しない。しかしながら、仮に第２、第３および第４のＬＥＤ光源が点灯したとしても遮光板６により遮光されるので、不完全なスイッチングによりこれらＬＥＤ光源が多少点灯したとしても、目的とする以外の波長の光が検体１へ照射されるのを防止できる。
【００２０】
複数あるうちの所望のＬＥＤ光源のうち、検体１に照射される励起光の波長を変更するためには、例えば以下のようにして、照射するＬＥＤ光源を変更すればよい。図１では、第１のＬＥＤ光源２による励起を行うための状態が模式的に示されている。この状態から、第２のＬＥＤ光源３により励起を行うためには、例えば、容器１と遮光板６は動かさずに、第１のＬＥＤ光源２、第２のＬＥＤ光源３、第３のＬＥＤ光源４および第４のＬＥＤ光源５を、これら光源間の相対的な位置は変えずに、Ｘ軸方向および／またはＹ軸方向に平行移動させる。その結果、第２のＬＥＤ光源３を照射窓７の上部に配置することができる。この状態で第２のＬＥＤ光源３を点灯すれば、ＬＥＤ光源３からの励起光は照射窓７を経て容器１中の検体に照射される。また、第２のＬＥＤ光源３による励起の際には、第１の光源２、第３の光源４および第４の光源５の電圧印加はされないことが好ましい。
【００２１】
或いは、容器１中の検体と第２のＬＥＤ光源３との距離が最短になるように、且つ遮光板６の照射窓７が容器１中の検体と第２のＬＥＤ光源３の間に位置するように、遮光板６と容器１が、Ｘ軸方向およびＹ軸方向からなる水平方向（即ち、遮光板６の面に対して平行に）にスライドされてもよい。
【００２２】
本発明の励起光照射装置は、このような照射系８を１ユニットとして具備して、検体に対して励起光照射を行うための装置であればよい。例えば、本発明に従う励起光照射装置は、図１に示すように２ユニット以上の照射系８を具備してもよい。複数ユニットの照射系が具備される場合、ＬＥＤ光源の選択および点灯の制御は、全てのユニットについて一括して制御されることが望ましい。全てのユニットを一括して制御すれば、多くの検体について一度に波長変更ができる。
【００２３】
使用される照射系のユニット数は、一度に測定しようとする検体の数、または励起光を照射する領域の面積に従って選択すればよい。例えば、一般的な９６ウェルプレートのための励起光照射装置は、９６のユニットを照射系８として具備すればよい。また、光源および照射窓、並びに遮光板の大きさは、検体が存在する領域の大きさに応じて選択すればよい。
【００２４】
上述の照射系８では４つのＬＥＤ光源を用いる例を示したが、５以上の数の光源を１ユニットに具備しても、３以下の数の光源を１ユニットに具備してもよい。また、上述の例では、照射系８を容器１の上部に配置したが、容器１の下方に照射系８を配置してもよい。
【００２５】
更に、上述のような本発明に従う励起光照射装置は照射系８からの照射と同時またはそれに続いて、蛍光に関する情報を検出するための検出系を具備してもよい。そのような検出系はそれ自身公知の何れの蛍光検出手段を利用してよく、またそれらの検出手段は、所望の蛍光に関する情報を検出するのに好ましい位置に配置すればよい。
【００２６】
また、本発明に従う励起光照射装置は、筐体中に上述のような照射系８を所望のユニット数で具備してもよい。また、本発明に従う励起光照射装置は、蛍光検出のための手段と共に筐体中に具備されてもよく、実施者が所望するそれ自身公知のその他の装置と共に筐体中に具備されてもよい。また、当該筐体中に検出対象となる検体も同時に入れることが可能な構造としてもよく、或いは、本発明に従う励起光照射装置からの励起光照射を、当該装置の外に置かれた検体に対して行うような構成にしてもよい。
【００２７】
上述のような本発明に従う励起光照射装置は、一般的な蛍光分析、例えば、一般的に使用される蛍光分光分析、蛍光比色法および蛍光光度法などの分析方法、並びに標的物質を蛍光物質により標識し、生じた蛍光により検出を行う検出方法など、蛍光を利用した何れの分析手段においても広く使用することが可能である。また、このような励起光照射装置を用いる励起方法も本発明の範囲内である。
【００２８】
本発明に従う励起光照射装置およびこれを用いた方法によって、複数の検体に亘り高い均一性を維持しながら、高強度の励起光を得ることが可能である。また、本発明の装置および方法は、光学フィルターなどの光学部品を使用せずに複数波長の選択および励起を行うことが可能なので、安価なシステム構成が提供される。更に、僅かな平行移動量によりＬＥＤ光源の切替が可能なので、小型の光源ユニットも提供される。
【００２９】
【実施例】
本発明の態様に従う１例を以下に説明する。この例は、バイオ分野において汎用的に使用される９６検体処理用の９６ウェルプレートのための励起光照射機構の例である。
【００３０】
図２（Ａ）〜（Ｃ）を参照されたい。図２（Ａ）は、本発明に従う励起光照射機構の斜視図であり、（Ｂ）は（Ａ）の線Ｂ−Ｂに沿った断面図、（Ｃ）は（Ａ）の線Ｃ−Ｃに沿った断面図である。
【００３１】
図２に示す本発明に従う励起光照射装置の例では、９６ウェルプレート１６の上部に励起光照射機構が配置される（図２（Ａ））。励起光照射機構は、ＬＥＤ実装基板１１と、その下方に位置するＬＥＤ位置決めホルダー１２と、前記ＬＥＤ実装基板１１に支持され、前記ＬＥＤ位置決めホルダー１２によって位置が定められた３８４個のＬＥＤ光源１４と、前記ＬＥＤ位置決めホルダー１２および９６ウェルプレートの間に位置する照射窓付遮光板１５とを具備する（図２（Ｂ）および（Ｃ））。前記ＬＥＤ実装基板１１と前記ＬＥＤ位置決めホルダー１２は、互いに固定されている（図２（Ｂ））。
【００３２】
９６ウェルプレートには、８ｘ１２で配置された計９６個のウェルが具備される。それらのウェルを励起するために、１ウェル当たり４個のＬＥＤ光源が装備される。即ち、ＬＥＤ実装基板１１には、１６ｘ２４で計３８４個のＬＥＤ光源が具備される。図２（Ｂ）および（Ｃ）に示すように、１つのウェル１７の励起のためには、第１のＬＥＤ光源１４ａ、第２のＬＥＤ光源１４ｂ、第３のＬＥＤ光源１４ｃおよび第４のＬＥＤ光源１４ｄが２ｘ２のマトリックス状に配置された、計４個のＬＥＤ光源１４が具備される。他のウェルについても同様に、第１〜第４のＬＥＤ光源が２ｘ２のマトリックス状に配置された、計４個のＬＥＤ光源１４が設けられる。また、照射窓２１が１つのウェル当たり１つで配置される。即ち、１ユニット当たりの構成およびＬＥＤ光源１４ａ〜１４ｄの配置は、図１に示す構成と同じである。また、１ウェルに対する相対位置は全てのユニットで等しい。
【００３３】
第１のＬＥＤ光源１４ａ、第２のＬＥＤ光源１４ｂ、第３のＬＥＤ光源１４ｃおよび第４のＬＥＤ光源１４ｄは、互いに異なる波長特性を有する。具体的には、第１のＬＥＤ光源１４ａは青ＬＥＤ、第２のＬＥＤ光源１４ｂは緑ＬＥＤ、第３のＬＥＤ光源１４ｃは赤ＬＥＤ、および第４のＬＥＤ光源１４ｄは青緑ＬＥＤからなる。これらのＬＥＤ光源は、波長特性毎に点灯制御がなされる。
【００３４】
具体的には、９６個の第１のＬＥＤ光源１４ａに電圧を印加し、点灯するための電極１３ａは、前記ＬＥＤ実装基板１１の第１の角に位置する。第１の角は、ＬＥＤ実装基板１１において、当該９６個の第１のＬＥＤ光源１４ａのうちの最も遠くに位置する第１のＬＥＤ光源１４ａの位置の対角に存在する。全ての第１のＬＥＤ光源１４ａは電極１３ａに接続されている。更に、当該電極１３ａの近くには、当該電極１３ａに主電源を供給するためのＬＥＤ１４ａ点灯用電極１８ａが存在する。
【００３５】
同様に、９６個の第２のＬＥＤ光源１４ｂに電圧を印加するための電極１３ｂは、前記ＬＥＤ実装基板１１の第２の角に位置する。第２の角は、ＬＥＤ実装基板１１において、当該９６個の第２のＬＥＤ光源１４ｂのうちの最も遠くに位置する第２のＬＥＤ光源１４ｂの位置の対角に存在する。全ての第２のＬＥＤ光源１４ｂは電極１３ｂに接続されている。更に、当該電極１３ｂの近くには、当該電極１３ｂに主電源を供給するためのＬＥＤ１４ｂ点灯用電極１８ｂが存在する。
【００３６】
同様に、９６個の第３のＬＥＤ光源１４ｃに電圧を印加するための電極１３ｃは、前記ＬＥＤ実装基板１１の第３の角に位置する。第３の角は、ＬＥＤ実装基板１１において、当該９６個の第３のＬＥＤ光源１４ｃのうちの最も遠くに位置する第３のＬＥＤ光源１４ｃの位置の対角に存在する。全ての第３のＬＥＤ光源１４ｃは電極１３ｃに接続されている。更に、当該電極１３ｃの近くには、当該電極１３ｃに主電源を供給するためのＬＥＤ１４ｃ点灯用電極１８ｃが存在する。
【００３７】
同様に、９６個の第４のＬＥＤ光源１４ｄに電圧を印加するための電極１３ｄは、前記ＬＥＤ実装基板１１の第４の角に位置する。第４の角は、ＬＥＤ実装基板１１において、当該９６個の第４のＬＥＤ光源１４ｄのうちの最も遠くに位置する第４のＬＥＤ光源１４ｄの位置の対角に存在する。全ての第４のＬＥＤ光源１４ｄは、電極１３ｄに接続されている。更に、当該電極１３ｄの近くには、当該電極１３ｄに主電源を供給するためのＬＥＤ１４ｄ点灯用電極１８ｄが存在する。
【００３８】
全てのＬＥＤ点灯用電極１８は、（図示はしていないが）主電源に接続される。何れかの電極１３と対応するＬＥＤ点灯用電極１８との接続は、実施者の所望に応じて達成される。４つの電極１３と対応するＬＥＤ点灯用電極１８との接続は、一度になされることはない。接続が達成される際には、何れか１つの電極１３とその対応するＬＥＤ点灯用電極１８のみが接続される。
【００３９】
本発明に従う励起光照射機構の各構成要素と９６ウェルプレートのうち、波長変更のためにスライドされるのは、当該ＬＥＤ光源を具備したＬＥＤ実装基板１１と、その下方に位置するＬＥＤ位置決めホルダー１２からなる照射系である。照射系は、Ｘ軸移動用ラック＆ピニオン２０ｘと、それを起動するためのモーター１９ｘと、Ｙ軸移動用ラック＆ピニオン２０ｙと、それを起動するためのモーター１９ｙとによって、９６ウェルプレート面に平行な面上を、Ｘ軸方向および／またはＹ軸方向にスライドされる。当該スライドの結果、照射窓２１の上方に移動され、ウェル１７にへの光路が開かれたＬＥＤ光源は、それと同時に当該ＬＥＤ光源のための電極１３とＬＥＤ点灯用電極１８との接続が達成される。それにより当該ＬＥＤ光源は点灯する。このように所望の波長特性を有するＬＥＤ光源が、９６ウェルに亘り、１ウェル毎に一つのＬＥＤ光源によって励起される。
【００４０】
例えば、第１のＬＥＤ光源１４ａによる照射を行う場合には、照射窓１７の上部に、且つ対応するウェル１７との距離が最短になるような位置に、第１のＬＥＤ光源１４ａが来るように、照射系はＸ軸方向および／またはＹ軸方向にスライドされる。このスライドにより、第１のＬＥＤ光源１４ａのための電極１３ａが、ＬＥＤ１４ａ点灯用電極１８ａに接続され、その結果、第１のＬＥＤ光源１４ａが点灯される。このとき、電極１３ｂ、ｃおよびｄと、夫々に対応するＬＥＤ点灯用電極１８ｂ、ｃおよびｄとの接続はなく、従って、第２のＬＥＤ光源１４ｂ、第３のＬＥＤ光源１４ｃおよび第４のＬＥＤ光源１４ｄからの照射はない。また、第２のＬＥＤ光源１４ｂの照射の場合には、電極１３ｂが、ＬＥＤ１４ｂ点灯用電極１８ｂに接続される。同様に、第３のＬＥＤ光源１４ｃまたは第４のＬＥＤ光源１４ｄの照射の場合には、電極１３ｃまたは電極１３ｄが、ＬＥＤ点灯用電極１８ｃまたはＬＥＤ点灯用電極１８ｄに各々接続される。
【００４１】
一般的に９６検体を処理ための９６ウェルプレートでは、各検体間、即ち、各ウェル１７間のピッチは９ｍｍである。従って、検体１に対して、青ＬＥＤ光源１４ａ、緑ＬＥＤ光源１４ｂ、赤ＬＥＤ光源１４ｃおよびは青緑ＬＥＤ光源１４ｄは、何れも隣合うＬＥＤ光源間が４．５ｍｍ間隔で配置される。このような間隔の場合、図２（Ｂ）において照射の状態にある赤ＬＥＤ光源１４ｃから、緑ＬＥＤ光源１４ｂの照射状態に変更するためには、Ｙ軸方向へ４．５ｍｍだけ照射系をスライドすればよい。他の光源への切替も、同様にＹ軸方向および／またはＸ軸方向へスライドすればよい。
【００４２】
図３を用いて、当該ＬＥＤ光源の移動と電圧制御（即ち、電極のスイッチング）についての例を更に説明する。図３は、ＬＥＤ光源３１、遮光板３０、照射窓３５、電極３２およびＬＥＤ点灯用電極３４の位置関係と、それらの移動によるＬＥＤ点灯切替を模式的に示した図である。ここでは複数の検体間のピッチを９ｍｍとする。
【００４３】
点灯するＬＥＤ光源と対応する電極は、対角位置に配置される。なお、本例では照射窓付遮光板および照射窓、ＬＥＤ点灯用電極は不動である。
【００４４】
図３（Ａ）において、青ＬＥＤ光源３１ａは、照射窓付遮光板３３の照射窓３５の上部に配置されている。このとき、青ＬＥＤ光源３１ａ用の電極３２ａは、ＬＥＤ点灯用電極３４ａと接して、青ＬＥＤ光源３１ａのみが点灯される。
【００４５】
次に、ＬＥＤ実装基板とＬＥＤ位置決めホルダーからなる照射系を、検体間隔の半ピッチ（即ち、４．５ｍｍ）だけＹ軸方向に移動する。その結果、図３（Ｂ）に示す状態になり、照射窓３５上部には、赤ＬＥＤ光源３１ｃが配置される。それと同時に青ＬＥＤ光源３１ａ用の電極３２ａはＬＥＤ点灯用電極３４ａから離れ、赤ＬＥＤ光源３１ｃ用の電極３２ｃはＬＥＤ点灯用電極３４ｃと接して、赤ＬＥＤ光源３１ｃのみが点灯される。
【００４６】
更に、ＬＥＤ実装基板とＬＥＤ位置決めホルダーからなる照射系を、検体間隔の半ピッチ（即ち、４．５ｍｍ）だけＸ軸方向に移動する。その結果、図３（Ｃ）に示す状態になり、照射窓３５上部には、緑ＬＥＤ光源３１ｂが配置される。それと同時に赤ＬＥＤ光源３１ｃ用の電極３２ｃはＬＥＤ点灯用電極３４ｃから離れ、緑ＬＥＤ光源３１ｂ用の電極３２ｂはＬＥＤ点灯用電極３４ｂと接して、緑ＬＥＤ光源３１ｂのみが点灯される。
【００４７】
更に、ＬＥＤ実装基板とＬＥＤ位置決めホルダーからなる照射系を、検体間隔の半ピッチ（即ち、４．５ｍｍ）だけＹ軸方向に移動する。その結果、図３（Ｄ）に示す状態になり、照射窓３５上部には、青緑ＬＥＤ光源３１ｄが配置される。それと同時に緑ＬＥＤ光源３１ｂ用の電極３２ｂはＬＥＤ点灯用電極３４ｂから離れ、青緑ＬＥＤ光源３１ｄ用の電極３２ｄはＬＥＤ点灯用電極３４ｄと接して、青緑ＬＥＤ光源３１ｄのみが点灯される。
【００４８】
以上のようにして、励起用ＬＥＤ光源の点灯の切替が可能である。上記の例では、説明の便宜上、４つの光源を含む１ユニットについての点灯切替例を示した。しかしながら、このような方法は、所望の数の光源を含み、複数のユニットを具備する励起光照射装置についても同様に利用することが可能である。
【００４９】
上記の例では、９６ウェルプレートのための装置を示したが、本発明の装置による照射対象は９６ウェルプレートに限定するものではなく、所望のウェルを有するプレートに対して利用できるようにウェル間のピッチに合わせて構成を変更してよい。或いは、マルチウェルプレートに限らず、電気泳動ゲルなど、蛍光測定を行うそれ自身公知の何れの対象に対しても本発明に従う装置を利用することが可能である。
【００５０】
また、上記の例では、９６ウェルプレート用の１検体毎に４種類の光源を具備する装置の例を示したが、ウェル間のピッチを考慮して４種類以下でも４種類以上でも、所望に応じた種類の光源を装備する装置としてもよく、それにより同様の効果が得られる。
【００５１】
更に上記の例では、ラック＆ピニオンとモーターを使用する例を示したが、ソレイドなど、それ自身公知の何れの他の移動手段も好ましく本発明において使用することが可能である。点灯制御手段についても、上記の例のような電極と点灯用電極を利用し、それらを上記のように配置して利用する手段に制限されるものではなく、それ自身公知の何れの点灯制御手段であっても、好ましく本発明において使用されてよい。例えば、センサーなどの点灯制御手段も、本発明において好ましく使用される。
【００５２】
本発明に従うと、１検体につき１つの光源を用いて、検体の近くから励起することが可能である。それによって、複数の検体に亘り高い均一性を維持しながら、高強度の励起光を得ることが可能である。また、光学フィルターなどの光学部品を使用せずに複数波長の選択および励起が可能であるために、安価なシステム構成が提供される。また、僅かなスライド量によりＬＥＤ光源の切替が可能であるので、小型の光源ユニットが提供される。
【００５３】
【発明の効果】
本発明によって、蛍光検出のための励起光照射装置、特に、複数の検体または広域に対して複波長を照射するための励起光照射装置が提供された。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明に従う励起光照射装置の照射系の１例を示す概要図。
【図２】本発明に従う励起光照射装置に具備される励起光照射機構の１例を示す図。
【図３】本発明に従う励起光照射装置に具備される励起光照射機構の１例を示す図。
【符号の説明】
１…検体容器、２…第１の光源、３…第２の光源、４…第３の光源、５…第４の光源、６…遮光板、７…照射窓、８…照射系、１１…ＬＥＤ実装基板、１２…ＬＥＤ位置決めホルダー、１３…電極、１４…ＬＥＤ光源、１５…照射窓付遮光板、１６…９６ウェルプレート、１７…ウェル、１８…ＬＥＤ点灯用電極、１９…モーター、２０ｘ…Ｘ軸移動用ラック＆ピニオン、２０ｙ…Ｙ軸移動用ラック＆ピニオン、２１…照射窓、３０…遮光板、３１…ＬＥＤ、３２…電極、３３…電極支持板、３４…ＬＥＤ点灯用電極、３５…照射窓[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to an excitation light irradiation device for fluorescence detection.
[0002]
[Prior art]
Fluorescence detection is widely used as a method for obtaining various information related to nucleic acids such as DNA. In such a detection method, for example, while the nucleic acid to be analyzed is labeled with a fluorescent substance, the intensity of fluorescence generated from the fluorescent substance is changed by changing conditions such as temperature or executing a desired reaction. Is detected. In order to measure the change in fluorescence intensity, a general method is to irradiate a fluorescent substance labeled with a nucleic acid with an optimum excitation light and thereby detect the visualized fluorescence. There are currently many fluorescent materials used for such detection. Therefore, in order to use these fluorescent materials, an excitation light source having a wavelength characteristic corresponding to each fluorescent material is required.
[0003]
Conventionally, a real-time PCR apparatus has been used for analyzing changes in fluorescence during the reaction of nucleic acids. An example of an excitation light source of a real-time PCR apparatus is one that uses a tungsten halogen lamp as described in Non-Patent Document 1, selects a wavelength with an optical filter, and diffuses and irradiates multiple specimens with a reflector. . However, when such an excitation light source is used, it is difficult to irradiate a plurality of specimens with excitation light with uniform intensity. Further, since the diffusion irradiation is performed, the intensity of the excitation light per specimen is lowered, and the fluorescence to be detected is weakened.
[0004]
In the apparatus disclosed in Non-Patent Document 2, four wavelength selection optical filters are attached to a halogen lamp so that the light irradiated from the halogen lamp and the wavelength-selected light is guided to the specimen through the optical fiber. It has become. Further, in this apparatus, fluorescence is measured by exciting a plurality of specimens for each specimen by moving the light source side or the specimen side by XY. In such an apparatus, in order to enable measurement of a plurality of samples, an XY stage having a large amount of movement is installed and the movement is controlled, so that the apparatus becomes large and expensive. There is a problem. In addition, since irradiation and detection are performed for each specimen, there is a problem that a time difference occurs in measurement among a plurality of specimens.
[0005]
In addition, since the systems disclosed in Non-Patent Document 1 and Non-Patent Document 2 described above both employ halogen lamps, it takes time to stabilize the light source before starting measurement. There is a problem that the lifetime of is relatively short.
[0006]
On the other hand, Patent Document 1 proposes an apparatus using a light emitting diode (hereinafter referred to as LED) as a light source. Non-Patent Document 3 and Patent Document 2 disclose an apparatus for analyzing a plurality of samples, observing gels after electrophoresis, and the like by arranging an LED for each sample. However, since these technologies use one type of LED, there is a problem that the excitation wavelength cannot be changed.
[0007]
[Patent Document 1]
JP-A-2001-269171
[Patent Document 2]
Japanese Patent Application Laid-Open No. 10-274637
[Non-Patent Document 1]
BioRad individual catalog, 2002 edition, 1-2 pages, “iCycler ™ iQ, real-time PCR analysis system”, published by BIORAD Inc. [0010]
[Non-Patent Document 2]
STRATAGENE individual catalog (MX4000), 2002 edition, 1-2 pages, “MX4000 ™ , Multiplex Quantitative PCR System”, published by STRATAGENE
[Non-Patent Document 3]
MJ JAPAN Catalog, 2002 edition, pp. 26-27, “Opticon ™ System”, published by MJ JAPAN
[Problems to be solved by the invention]
In order to solve the above-mentioned problem in the excitation light irradiation apparatus for fluorescence detection, the problem of the present invention is to avoid the disadvantages of the halogen lamp light source by using an LED light source, and to have a plurality of different wavelengths for the same specimen. It is providing the excitation light irradiation apparatus which can irradiate excitation light.
[0013]
[Means for Solving the Problems]
In the excitation light irradiation apparatus capable of irradiating excitation light arbitrarily selected from a plurality of excitation lights having different wavelengths, the above-mentioned problem is directed to the specimen whose fluorescence is to be measured.
A set of excitation light sources composed of a plurality of LEDs having different emission wavelengths, the set being arranged so as to be movable in parallel in the X-axis direction and / or the Y-axis direction while maintaining the relative position between the LEDs. An excitation light source of
An arbitrarily selected one of the plurality of LED light sources is moved to an irradiation position close to the specimen, and only the LED light source at the irradiation position is turned on, and only excitation light from the LED light source is turned on. Is achieved by an excitation light irradiation device comprising a lighting control means configured to irradiate the specimen.
[0014]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
According to the present invention, by using a set of excitation light sources composed of a plurality of LEDs for one specimen, the specimen is excited from the vicinity thereof, and a plurality of different wavelengths can be obtained without using an optical component such as an optical filter. An excitation light irradiation apparatus that can use the excitation light is provided.
[0015]
First, an outline of an excitation light irradiation apparatus according to the present invention will be described with reference to FIG. FIG. 1 shows a part of the main part of the excitation light irradiation apparatus. For example, in this example, the specimen whose fluorescence is to be detected is accommodated in the container 1. The irradiation system 8 for irradiating the specimen contained in the container 1 with the excitation light irradiates the first light source 2 for irradiating the excitation light with the first wavelength and the excitation light with the second wavelength. A second light source 3 for irradiating, a third light source 4 for irradiating excitation light at a third wavelength, a fourth light source 5 for irradiating excitation light at a fourth wavelength, and a wavelength other than the target wavelength A light-shielding plate 6 for shielding the excitation light, and an irradiation window 7 provided on the light-shielding plate 6.
[0016]
Here, the first wavelength, the second wavelength, the third wavelength, and the fourth wavelength may be different from each other, partially different, or all the same, but in order to use many wavelengths. It is desirable that the wavelengths of the excitation light from all the light sources are different from each other.
[0017]
The first light source 2, the second light source 3, the third light source 4, and the fourth light source 5 are each a light source for obtaining an arbitrary constant wavelength, and is typically a light emitting diode (LED). . However, in the present invention, it should be regarded as an equivalent of an LED as long as an arbitrary constant wavelength can be obtained.
[0018]
The light shielding plate 6 shields light other than excitation light emitted from a desired light source, that is, prevents stray light between specimens and ensures irradiation with a constant light quantity to a plurality of specimens. In addition, it is disposed between the optical path between the specimen and the light source. Further, the light shielding plate 6 has an irradiation window 7 for forming an optical path from the target LED light source to the specimen and irradiating the specimen with the excitation light from the LED light source. However, the light shielding plate 6 is not always necessary. Therefore, an excitation light irradiation device that does not include the light shielding plate 6 is also within the scope of the present invention.
[0019]
Excitation light irradiation by the irradiation system 8 may be performed as follows, for example. Excitation light is irradiated from a desired LED light source to the specimen in the container 1 arranged at a predetermined position. For example, when irradiating light from the first LED light source 2, the irradiation window 7 of the light shielding plate 6 is disposed at a position in the optical path from the first LED light source 2 to the specimen 1. At this time, the sample 1 is not irradiated with excitation light from the second, third, and fourth LED light sources. That is, the second, third, and fourth LED light sources are not turned on. However, even if the second, third, and fourth LED light sources are turned on, they are shielded by the light shielding plate 6. Therefore, even if these LED light sources are turned on somewhat due to incomplete switching, the wavelength of light other than the intended wavelength It is possible to prevent the sample 1 from being irradiated with light.
[0020]
Of the plurality of desired LED light sources, in order to change the wavelength of the excitation light irradiated to the specimen 1, the LED light source to be irradiated may be changed as follows, for example. In FIG. 1, a state for performing excitation by the first LED light source 2 is schematically shown. In order to perform excitation with the second LED light source 3 from this state, for example, the first LED light source 2, the second LED light source 3, and the third LED light source are not moved without moving the container 1 and the light shielding plate 6. The fourth and fourth LED light sources 5 are translated in the X-axis direction and / or the Y-axis direction without changing the relative positions between the light sources. As a result, the second LED light source 3 can be disposed above the irradiation window 7. If the second LED light source 3 is turned on in this state, the excitation light from the LED light source 3 is irradiated to the specimen in the container 1 through the irradiation window 7. In addition, it is preferable that no voltage is applied to the first light source 2, the third light source 4, and the fourth light source 5 during excitation by the second LED light source 3.
[0021]
Alternatively, the irradiation window 7 of the light shielding plate 6 is positioned between the sample in the container 1 and the second LED light source 3 so that the distance between the sample in the container 1 and the second LED light source 3 is the shortest. As described above, the light shielding plate 6 and the container 1 may be slid in the horizontal direction composed of the X-axis direction and the Y-axis direction (that is, parallel to the surface of the light shielding plate 6).
[0022]
The excitation light irradiation apparatus of the present invention may be any apparatus that includes such an irradiation system 8 as one unit and performs excitation light irradiation on a specimen. For example, the excitation light irradiation apparatus according to the present invention may include two or more units of irradiation system 8 as shown in FIG. When a multi-unit irradiation system is provided, it is desirable that the LED light source selection and lighting control be collectively controlled for all units. If all the units are controlled at once, the wavelength can be changed at once for many specimens.
[0023]
The number of irradiation system units to be used may be selected according to the number of samples to be measured at one time or the area of the region irradiated with excitation light. For example, a general excitation light irradiation apparatus for a 96-well plate may include 96 units as the irradiation system 8. Further, the size of the light source, the irradiation window, and the light shielding plate may be selected according to the size of the region where the specimen exists.
[0024]
Although the example using four LED light sources was shown in the above-mentioned irradiation system 8, you may equip 5 units or more of light sources in 1 unit, or equip 3 units or less of light sources in 1 unit. In the above example, the irradiation system 8 is arranged at the upper part of the container 1, but the irradiation system 8 may be arranged below the container 1.
[0025]
Furthermore, the excitation light irradiation apparatus according to the present invention as described above may include a detection system for detecting information about fluorescence simultaneously with or subsequent to the irradiation from the irradiation system 8. Such a detection system may use any fluorescence detection means known per se, and these detection means may be arranged at a preferable position for detecting information relating to desired fluorescence.
[0026]
Moreover, the excitation light irradiation apparatus according to the present invention may include the irradiation system 8 as described above in a desired number of units in a housing. Moreover, the excitation light irradiation device according to the present invention may be provided in the case together with the means for detecting fluorescence, or may be provided in the case together with other devices known per se desired by the practitioner. . In addition, a structure in which a specimen to be detected can be placed in the casing at the same time, or excitation light irradiation from the excitation light irradiation apparatus according to the present invention is applied to a specimen placed outside the apparatus. You may make it the structure performed with respect to it.
[0027]
The excitation light irradiation apparatus according to the present invention as described above is used for general fluorescence analysis, for example, commonly used fluorescence spectroscopy, analysis methods such as fluorescence colorimetry and fluorescence photometry, and a target substance as a fluorescent substance. It can be widely used in any analysis means using fluorescence, such as a detection method in which detection is performed by using the generated fluorescence. Moreover, the excitation method using such an excitation light irradiation apparatus is also within the scope of the present invention.
[0028]
With the excitation light irradiation apparatus and the method using the same according to the present invention, it is possible to obtain high-intensity excitation light while maintaining high uniformity over a plurality of specimens. Further, since the apparatus and method of the present invention can select and excite a plurality of wavelengths without using an optical component such as an optical filter, an inexpensive system configuration is provided. Furthermore, since the LED light source can be switched by a small amount of parallel movement, a small light source unit is also provided.
[0029]
【Example】
An example according to an embodiment of the invention is described below. This example is an example of an excitation light irradiation mechanism for a 96-well plate for processing 96 specimens that is widely used in the bio field.
[0030]
See FIGS. 2A to 2C. 2A is a perspective view of an excitation light irradiation mechanism according to the present invention, FIG. 2B is a cross-sectional view taken along line BB in FIG. 2A, and FIG. 2C is a line CC in FIG. FIG.
[0031]
In the example of the excitation light irradiation device according to the present invention shown in FIG. 2, the excitation light irradiation mechanism is arranged on the upper part of the 96-well plate 16 (FIG. 2A). The excitation light irradiation mechanism includes an LED mounting substrate 11, an LED positioning holder 12 positioned below the LED mounting substrate 11, 384 LED light sources 14 supported by the LED mounting substrate 11 and positioned by the LED positioning holder 12. The LED positioning holder 12 and the light shielding plate 15 with an irradiation window located between the 96 well plates are provided (FIGS. 2B and 2C). The LED mounting substrate 11 and the LED positioning holder 12 are fixed to each other (FIG. 2B).
[0032]
The 96 well plate has a total of 96 wells arranged in 8 × 12. Four LED light sources are provided per well to excite those wells. That is, the LED mounting substrate 11 is provided with a total of 384 LED light sources of 16 × 24. As shown in FIGS. 2B and 2C, for the excitation of one well 17, the first LED light source 14a, the second LED light source 14b, the third LED light source 14c and the fourth LED are used. A total of four LED light sources 14 having light sources 14d arranged in a 2 × 2 matrix are provided. Similarly for the other wells, a total of four LED light sources 14 in which the first to fourth LED light sources are arranged in a 2 × 2 matrix are provided. Further, one irradiation window 21 is arranged per well. That is, the configuration per unit and the arrangement of the LED light sources 14a to 14d are the same as those shown in FIG. The relative position with respect to one well is the same for all units.
[0033]
The first LED light source 14a, the second LED light source 14b, the third LED light source 14c, and the fourth LED light source 14d have different wavelength characteristics. Specifically, the first LED light source 14a is a blue LED, the second LED light source 14b is a green LED, the third LED light source 14c is a red LED, and the fourth LED light source 14d is a blue-green LED. These LED light sources are turned on for each wavelength characteristic.
[0034]
Specifically, the electrodes 13a for applying a voltage to the 96 first LED light sources 14a to light them are positioned at the first corner of the LED mounting substrate 11. The first corner exists in the LED mounting substrate 11 at a diagonal of the position of the farthest first LED light source 14a among the 96 first LED light sources 14a. All the first LED light sources 14a are connected to the electrode 13a. Further, an LED 14a lighting electrode 18a for supplying main power to the electrode 13a exists near the electrode 13a.
[0035]
Similarly, the electrode 13b for applying a voltage to the 96 second LED light sources 14b is located at the second corner of the LED mounting substrate 11. The second corner exists in the LED mounting substrate 11 at a diagonal of the position of the farthest second LED light source 14b among the 96 second LED light sources 14b. All the second LED light sources 14b are connected to the electrode 13b. Further, an LED 14b lighting electrode 18b for supplying main power to the electrode 13b exists near the electrode 13b.
[0036]
Similarly, the electrode 13c for applying a voltage to the 96 third LED light sources 14c is located at the third corner of the LED mounting substrate 11. The third corner exists in the LED mounting substrate 11 at the diagonal of the position of the farthest third LED light source 14c among the 96 third LED light sources 14c. All the third LED light sources 14c are connected to the electrode 13c. Further, an LED 14c lighting electrode 18c for supplying main power to the electrode 13c exists near the electrode 13c.
[0037]
Similarly, the electrode 13d for applying a voltage to the 96 fourth LED light sources 14d is located at the fourth corner of the LED mounting substrate 11. The fourth corner exists in the LED mounting substrate 11 at a diagonal of the position of the farthest fourth LED light source 14d among the 96 fourth LED light sources 14d. All the fourth LED light sources 14d are connected to the electrode 13d. Further, an LED 14d lighting electrode 18d for supplying main power to the electrode 13d exists near the electrode 13d.
[0038]
All the LED lighting electrodes 18 are connected to a main power source (not shown). Connection between any of the electrodes 13 and the corresponding LED lighting electrode 18 is achieved as desired by the practitioner. Connections between the four electrodes 13 and the corresponding LED lighting electrodes 18 are not made at a time. When the connection is achieved, only one of the electrodes 13 and the corresponding LED lighting electrode 18 are connected.
[0039]
Among the components of the excitation light irradiation mechanism according to the present invention and the 96-well plate, the LED mounting substrate 11 provided with the LED light source and the LED positioning holder 12 positioned below the LED well are slid for wavelength change. An irradiation system consisting of The irradiation system has a 96-well plate surface by an X-axis moving rack and pinion 20x, a motor 19x for starting it, a Y-axis moving rack and pinion 20y, and a motor 19y for starting it. It is slid on the parallel plane in the X-axis direction and / or the Y-axis direction. As a result of the slide, the LED light source that has been moved above the irradiation window 21 and opened the optical path to the well 17 is simultaneously connected to the electrode 13 for the LED light source and the LED lighting electrode 18. The Thereby, the LED light source is turned on. Thus, the LED light source having a desired wavelength characteristic is excited by one LED light source per well over 96 wells.
[0040]
For example, when irradiation with the first LED light source 14a is performed, the first LED light source 14a is positioned above the irradiation window 17 and at a position where the distance from the corresponding well 17 is the shortest. The irradiation system is slid in the X-axis direction and / or the Y-axis direction. By this slide, the electrode 13a for the first LED light source 14a is connected to the LED 14a lighting electrode 18a, and as a result, the first LED light source 14a is turned on. At this time, there is no connection between the electrodes 13b, c and d and the corresponding LED lighting electrodes 18b, c and d, and accordingly, the second LED light source 14b, the third LED light source 14c and the fourth LED There is no irradiation from the light source 14d. In the case of irradiation with the second LED light source 14b, the electrode 13b is connected to the LED 14b lighting electrode 18b. Similarly, in the case of irradiation with the third LED light source 14c or the fourth LED light source 14d, the electrode 13c or the electrode 13d is connected to the LED lighting electrode 18c or the LED lighting electrode 18d, respectively.
[0041]
In general, in a 96-well plate for processing 96 specimens, the pitch between specimens, that is, the pitch between the wells 17 is 9 mm. Accordingly, the blue LED light source 14a, the green LED light source 14b, the red LED light source 14c, and the blue-green LED light source 14d are all arranged with an interval of 4.5 mm between the adjacent LED light sources. In the case of such an interval, in order to change from the red LED light source 14c in the irradiation state in FIG. 2B to the irradiation state of the green LED light source 14b, the irradiation system is slid by 4.5 mm in the Y-axis direction. do it. Similarly, switching to another light source may be performed by sliding in the Y-axis direction and / or the X-axis direction.
[0042]
An example of movement of the LED light source and voltage control (that is, electrode switching) will be further described with reference to FIG. FIG. 3 is a diagram schematically showing the positional relationship among the LED light source 31, the light shielding plate 30, the irradiation window 35, the electrode 32, and the LED lighting electrode 34, and LED lighting switching by their movement. Here, the pitch between a plurality of specimens is 9 mm.
[0043]
The LED light source to be turned on and the corresponding electrode are arranged at diagonal positions. In this example, the light shielding plate with irradiation window, the irradiation window, and the LED lighting electrode are stationary.
[0044]
In FIG. 3A, the blue LED light source 31a is disposed above the irradiation window 35 of the light shielding plate 33 with irradiation window. At this time, the electrode 32a for the blue LED light source 31a is in contact with the LED lighting electrode 34a, and only the blue LED light source 31a is turned on.
[0045]
Next, the irradiation system composed of the LED mounting substrate and the LED positioning holder is moved in the Y-axis direction by a half pitch (that is, 4.5 mm) of the specimen interval. As a result, the state shown in FIG. 3B is obtained, and the red LED light source 31c is arranged on the upper portion of the irradiation window 35. At the same time, the electrode 32a for the blue LED light source 31a is separated from the LED lighting electrode 34a, the electrode 32c for the red LED light source 31c is in contact with the LED lighting electrode 34c, and only the red LED light source 31c is lit.
[0046]
Further, the irradiation system including the LED mounting substrate and the LED positioning holder is moved in the X-axis direction by a half pitch (that is, 4.5 mm) of the specimen interval. As a result, the state shown in FIG. 3C is obtained, and the green LED light source 31b is disposed above the irradiation window 35. At the same time, the electrode 32c for the red LED light source 31c is separated from the LED lighting electrode 34c, the electrode 32b for the green LED light source 31b is in contact with the LED lighting electrode 34b, and only the green LED light source 31b is lit.
[0047]
Further, the irradiation system composed of the LED mounting substrate and the LED positioning holder is moved in the Y-axis direction by a half pitch (that is, 4.5 mm) of the specimen interval. As a result, the state shown in FIG. 3D is obtained, and a blue-green LED light source 31d is disposed above the irradiation window 35. At the same time, the electrode 32b for the green LED light source 31b is separated from the LED lighting electrode 34b, the electrode 32d for the blue-green LED light source 31d is in contact with the LED lighting electrode 34d, and only the blue-green LED light source 31d is lit.
[0048]
As described above, the lighting of the excitation LED light source can be switched. In the above example, for convenience of explanation, an example of lighting switching for one unit including four light sources is shown. However, such a method can be similarly used for an excitation light irradiation apparatus including a desired number of light sources and including a plurality of units.
[0049]
In the above example, an apparatus for a 96-well plate is shown. However, the irradiation target by the apparatus of the present invention is not limited to the 96-well plate, and the well-to-well plate can be used for a plate having a desired well. The configuration may be changed according to the pitch. Alternatively, the apparatus according to the present invention can be used not only for a multiwell plate but also for any object known per se for performing fluorescence measurement, such as an electrophoresis gel.
[0050]
In the above example, an example of an apparatus having four types of light sources for each specimen for a 96-well plate has been shown. A device equipped with a corresponding type of light source may be used, whereby the same effect can be obtained.
[0051]
Further, in the above example, an example in which a rack and pinion and a motor are used has been described. However, any other moving means known per se, such as solenoid, can be preferably used in the present invention. The lighting control means is not limited to the means that uses the electrodes and the lighting electrodes as in the above example, and arranges and uses them as described above, and any lighting control means known per se. Even so, it may preferably be used in the present invention. For example, lighting control means such as a sensor is also preferably used in the present invention.
[0052]
According to the present invention, it is possible to excite from the vicinity of the specimen using one light source per specimen. As a result, it is possible to obtain high-intensity excitation light while maintaining high uniformity over a plurality of specimens. In addition, since a plurality of wavelengths can be selected and excited without using an optical component such as an optical filter, an inexpensive system configuration is provided. In addition, since the LED light source can be switched by a slight slide amount, a small light source unit is provided.
[0053]
【The invention's effect】
According to the present invention, there is provided an excitation light irradiation apparatus for detecting fluorescence, particularly an excitation light irradiation apparatus for irradiating a plurality of specimens or a wide area with multiple wavelengths.
[Brief description of the drawings]
FIG. 1 is a schematic diagram showing an example of an irradiation system of an excitation light irradiation apparatus according to the present invention.
FIG. 2 is a diagram showing an example of an excitation light irradiation mechanism provided in the excitation light irradiation apparatus according to the present invention.
FIG. 3 is a diagram showing an example of an excitation light irradiation mechanism provided in the excitation light irradiation apparatus according to the present invention.
[Explanation of symbols]
DESCRIPTION OF SYMBOLS 1 ... Sample container, 2 ... 1st light source, 3 ... 2nd light source, 4 ... 3rd light source, 5 ... 4th light source, 6 ... Light-shielding plate, 7 ... Irradiation window, 8 ... Irradiation system, 11 ... LED mounting substrate, 12 ... LED positioning holder, 13 ... electrode, 14 ... LED light source, 15 ... light shielding plate with irradiation window, 16 ... 96 well plate, 17 ... well, 18 ... LED lighting electrode, 19 ... motor, 20x ... Rack and pinion for X axis movement, 20y ... Rack and pinion for Y axis movement, 21 ... Irradiation window, 30 ... Light shielding plate, 31 ... LED, 32 ... Electrode, 33 ... Electrode support plate, 34 ... Electrode for LED lighting, 35 ... irradiation window
