JP2004537581A

JP2004537581A - Melanin-concentrating hormone antagonist

Info

Publication number: JP2004537581A
Application number: JP2003518580A
Authority: JP
Inventors: ベドナレク，マリア・エイ
Original assignee: Merck and Co Inc
Current assignee: Merck and Co Inc
Priority date: 2001-08-08
Filing date: 2002-08-02
Publication date: 2004-12-16
Also published as: WO2003013574A1; CA2456964A1; US20040254338A1; US7335723B2; EP1416951A1

Abstract

本発明は、ＭＣＨ−１Ｒにおいて活性なＭＣＨ拮抗物質を対象とする。該拮抗物質は、ＭＣＨ−１ＲでのＭＣＨの作用を阻害することができる、場合により修飾されたペプチドである。ＭＣＨ拮抗物質は、研究ツールとして使用すること及び被験対象において有益な作用を達成するために使用することを含む、様々な用途を有する。The present invention is directed to MCH antagonists that are active at MCH-1R. The antagonist is an optionally modified peptide capable of inhibiting the action of MCH on MCH-1R. MCH antagonists have a variety of uses, including as research tools and to achieve beneficial effects in a subject.

Description

【技術分野】
【０００１】
（関連出願のクロスリファレンス）
本出願は、参照してここに組み込まれる、２００１年８月８日出願の米国特許仮出願通し番号第６０／３１０，９２８号による優先権を主張するものである。
【背景技術】
【０００２】
視床下部に存在する神経ペプチドは、体重の調節を仲介する上で重要な役割を果たす。（Ｆｌｉｅｒら、１９９８、Ｃｅｌｌ，９２、４３７−４４０。）哺乳類において産生されるメラニン濃縮ホルモン（ＭＣＨ）は、同様に神経ペプチドＮＥＩ及びＮＧＥをコードする、視床下部内のより大きなプレ−プロホルモン前駆体の一部として合成される環状１９アミノ酸神経ペプチドである。（Ｎａｈｏｎら、１９９０、Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．４、６３２−６３７；Ｖａｕｇｈａｎら、米国特許第５，０４９，６５５号；及びＶａｕｇｈａｎら、１９８９、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ．１２５、１６６０−１６６５。）ＭＣＨはサケの下垂体において最初に特定され、魚においてＭＣＨはメラニンの凝集に影響を及ぼし、それ故皮膚の色素沈着に影響する。マス及びウナギでは、ＭＣＨはストレス誘導性又はＣＲＦ刺激性ＡＣＴＨ放出にも関与することが示された。（Ｋａｗａｕｃｈｉら、１９８３、Ｎａｔｕｒｅ３０５、３２１−３２３。）
ヒトでは、脳内で発現される、ＭＣＨをコードする２つの遺伝子が特定された。（Ｂｒｅｔｏｎら、１９９３、Ｍｏｌ．ＢｒａｉｎＲｅｓ．１８、２９７−３１０。）哺乳類において、ＭＣＨは主として、外側視床下部及び不確帯の核周体を含む、食物摂取の制御に関わる視床下部の神経細胞体に局在した。（Ｋｎｉｇｇｅら、１９９６、Ｐｅｐｔｉｄｅｓ１７、１０６３−１０７３。）
薬理的及び遺伝的データは、ＭＣＨの主要作用機構は栄養補給を促進すること（食欲促進、ｏｒｅｘｉｅｎｉｃ）であると示唆している。ＭＣＨｍＲＮＡは、絶食マウス及びラット、ｏｂ／ｏｂマウス及び神経ペプチドＹ（ＮＰＹ）に関する遺伝子を標的破壊したマウスにおいては、上方調節される。（Ｑｕら、１９９６、Ｎａｔｕｒｅ３８０、２４３−２４７及びＥｒｉｃｋｓｏｎら、１９９６、Ｎａｔｕｒｅ３８１、４１５−４１８。）ＭＣＨの中枢注入（ＩＣＶ）は食物摂取を刺激し、ＭＣＨは、αメラニン細胞刺激ホルモン（αＭＳＨ）で見られる摂食低下作用に拮抗する。（Ｑｕら、１９９６、Ｎａｔｕｒｅ３８０、２４３−２４７。）ＭＣＨ欠損マウスは痩せて、摂食低下性であり、高い代謝率を有する。（Ｓｈｉｍａｄａら、１９９８、Ｎａｔｕｒｅ３９６、６７０−６７３。）ＭＣＨの投与は、摂食行動、食欲若しくは体重の増加又は維持を促進するために有用であることが示唆されている。（Ｍａｒａｔｏｓ−Ｆｌｉｅｒ、米国特許第５，８４９，７０８号。）
視床下部−下垂体−軸への作用が報告されているように、ＭＣＨの作用は食物摂取の調節に限定されない。（Ｎａｈｏｎ，１９９４、ＣｒｉｔｉｃａｌＲｅｖ．ｉｎＮｅｕｒｏｂｉｏｌ．８、２２１−２６２。）ＭＣＨはストレスが誘発する視床下部からのＣＲＦ放出及び下垂体からのＡＣＴＨ放出を調節することができるので、ＭＣＨはストレスに対する身体応答に関与すると考えられる。さらに、ＭＣＨ神経系は生殖又は母性機能に関与すると考えられる。
【０００３】
ＭＣＨは、少なくとも２つの異なる受容体：ＭＣＨ−１Ｒ及びＭＣＨ−２Ｒに結合することができる。（Ｃｈａｍｂｅｒｓら、１９９９、Ｎａｔｕｒｅ４００、２６１−２６５；Ｓａｉｔｏら、１９９９、Ｎａｔｕｒｅ４００、２６５−２６９；Ｂａｃｈｎｅｒら、１９９９、ＦＥＢＳＬｅｔｔｅｒｓ４５７：５２２−５２４；Ｓｈｉｍｏｍｕｒａら、１９９９、ＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌａｎｄＢｉｏｐｈｙｓｉｃａｌＲｅｓｅａｒｃｈＣｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ２６１、６２２−６２６；Ｓａｉｌｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９８：７５６４−７５６９，２００１。）ＭＣＨ−２ＲとＭＣＨ−１Ｒの間のアミノ酸同一性は約３８％である。（Ｓａｉｌｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９８：７５６４−７５６９，２００１。）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、ＭＣＨ−１Ｒにおいて活性なＭＣＨ拮抗物質を対象とする。該拮抗物質は、ＭＣＨ−１ＲにおけるＭＣＨの作用を阻害することができる、場合により修飾されたペプチドである。ＭＣＨ拮抗物質は、研究ツールとしての使用及び被験対象において有益な作用を達成するための使用を含めて、様々な用途を備える。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
哺乳類ＭＣＨへの変更の様々な組合せが、ＭＣＨ拮抗物質を生産するために有用であることをここで特定する。そのような変更の例は、（１）９位及び１０位が５−アミノ吉草酸であること及び（２）６位が５−グアニジノ吉草酸又はＤ−アルギニンであることのいずれか又は両方と組み合わせた、６位から１６位までを含み、その１４位及び１５位が５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸又はβ−アラニンである、トランケート哺乳類ＭＣＨを包含する。
【０００６】
ＭＣＨ拮抗物質を得るために有用なトランケート哺乳類ＭＣＨへの種々の変更の特定は、さらなるＭＣＨ拮抗物質を得るために使用できる指針を提供する。さらなるＭＣＨ拮抗物質は、様々なで大きさをとることができ、様々な位置に様々な種類の変更を含みうる。化合物が拮抗物質として働く能力は、当技術分野において既知の手法を用いて評価することができる。
【０００７】
そこで、本発明の第一の局面はＭＣＨ拮抗物質を説明する。ＭＣＨ拮抗物質は、ジスルフィド又はラクタム環を有する、場合により修飾された環状ペプチドである。構造Ｉはジスルフィド環を表わし、構造ＩＩ及びＩＩＩはラクタム環を示す。
【０００８】
構造Ｉは次の通り。
【０００９】
【化１】

［式中、Ｘ^１は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ^２は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ^３は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ^４は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸、グルタミン酸若しくはノルロイシン、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ^５は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ^６は、存在する場合は、アルギニン、アラニン、ロイシン、グリシン、リシン、プロリン、アスパラギン、セリン、ヒスチジン、ニトロアルギニン、ホモアルギニン、シトルリン、ホモシトルリン、ノルロイシン、Ｄ−アルギニン、デス−アミノ−アルギニン、４−グアニジノ酪酸、３−グアニジノプロピオン酸、グアニジノ酢酸若しくは３−グアニジノプロピオン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ^７は、システイン、ホモシステイン、ペニシラミン若しくはＤ−システイン、又はその誘導体であり；
Ｘ^８は、メチオニン、ノルロイシン、ロイシン、イソロイシン、バリン、メチオニンスルホキシド、γ−アミノ酪酸若しくはメチオニンスルホン、又はその誘導体であり；
Ｘ^９は、ロイシン、イソロイシン、バリン、アラニン、メチオニン、５−アミノペンタン酸、Ｄ−ノルロイシン、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸若しくはβ−アラニン、又はその誘導体であり；
Ｘ^１０は、グリシン、アラニン、ロイシン、ノルロイシン、シクロヘキシルアラニン、５−アミノペンタン酸、アスパラギン、セリン、サルコシン、イソ酪酸、Ｄ−ノルロイシン、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸若しくはβ−アラニン、又はその誘導体であり；
Ｘ^１１は、アルギニン、リシン、シトルリン、ヒスチジン若しくはニトロアルギニン、又はその誘導体であり；
Ｘ^１２は、バリン、ロイシン、イソロイシン、アラニン若しくはメチオニン、又はその誘導体であり；
Ｘ^１３は、フェニルアラニン、チロシン、Ｄ−（ｐ−ベンゾイルフェニルアラニン）、トリプトファン、（１’）−及び（２’）−ナフチルアラニン、シクロヘキシルアラニン、若しくは各々の置換基がＯ−アルキル、アルキル、ＯＨ、ＮＯ_２、ＮＨ_２、Ｆ、Ｉ及びＢｒから成る群より独立して選択される一及び多置換フェニルアラニン、又はその誘導体であり；
Ｘ^１４は、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸、β−アラニン又はシス−４−アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸であり；
Ｘ^１５は、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸、β−アラニン又はシス−４−アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸であり；
Ｘ^１６は、システイン、ホモシステイン若しくはペニシラミン、又はその誘導体であり；
Ｘ^１７は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｚ^１は、存在する場合は、Ｎ−末端アミノ基に共有結合している、場合により存在する保護基であり；
Ｚ^２は、存在する場合は、Ｃ−末端カルボキシ基に共有結合している、場合により存在する保護基であり、
但し、下記：
Ｘ^９及びＸ^１０は、各々５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸、β−アラニン及びシス−４−アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸から成る群より独立して選択されること；及び
Ｘ^６は、５−グアニジノ吉草酸、Ｄ−アルギニン、４−グアニジノ酪酸、３−グアニジノプロピオン酸、グアニジノ酢酸又は３−グアニジノプロピオン酸であることのいずれか又は両方であることを条件とする］
又は前記ペプチドの標識誘導体、又は前記ペプチド若しくは前記標識誘導体の医薬適合性の塩である。
【００１０】
構造ＩＩは次の通り。
【００１１】
【化２】

［式中、Ｘ^１、Ｘ^２、Ｘ^３、Ｘ^４、Ｘ^５、Ｘ^６、Ｘ^８、Ｘ^９、Ｘ^１０、Ｘ^１１、Ｘ^１２、Ｘ^１３、Ｘ^１４、Ｘ^１５及びＺ^１は、構造Ｉについて述べた通りであり；Ｘ^１８は、次の構造：
【００１２】
【化３】

［式中、ｎは１、２、３、４又は５である］
を有するα，ω−ジ−アミノ−カルボン酸であり；及びＸ^１９は、アスパラギン酸、グルタミン酸又はアジピン酸などのω−カルボキシ−α−アミノ酸である］
である。Ｘ^１８のα，ω−ジ−アミノ−カルボン酸のω−アミノ基は、Ｘ^１９のアミノ酸のω−カルボキシ基に結合している。
【００１３】
構造ＩＩＩは次の通り。
【００１４】
【化４】

［式中、Ｘ^１、Ｘ^２、Ｘ^３、Ｘ^４、Ｘ^５、Ｘ^６、Ｘ^８、Ｘ^９、Ｘ^１０、Ｘ^１１、Ｘ^１２、Ｘ^１３、Ｘ^１４、Ｘ^１５、Ｘ^１８及びＺ^１は、構造ＩＩについて述べた通りであり；及びＸ^１８のα，ω−ジ−アミノ−カルボン酸のω−アミノ基は、位置１５のカルボキシ基に結合している］
である。
【００１５】
「アミノ酸」との言及は、天然に生じるアミノ酸及び変化したアミノ酸を含む。特に異なる記載がない限り、キラル中心を有するアミノ酸はＬ−鏡像異性体として提供される。「その誘導体」との言及は、対応するＤ−アミノ酸、Ｎ−アルキル−アミノ酸及びβ−アミノ酸を指す。
【００１６】
本発明のもう１つの局面は、被験対象においてＭＣＨ−１Ｒ活性を阻害する方法を述べる。この方法は、ＭＣＨ拮抗物質の有効量を被験対象に投与する段階を含む。
【００１７】
「有効」量との言及は、所望効果を達成するのに十分な量を示す。本発明のこの局面では、有効量はＭＣＨ−１Ｒ活性を阻害するのに十分である。
【００１８】
本発明のもう１つの局面は、体重減少を達成するため又は体重を維持するために被験対象を治療する方法を述べる。この方法は、ＭＣＨ拮抗物質の有効量を被験対象に投与する段階を含む。
【００１９】
本発明の他の特徴及び利点は、種々の実施例を含めてここで提供するさらなる説明から明白である。提供する実施例は、本発明を実施する上で有用な種々の成分及び方法を例示する。これらの実施例は、特許請求する本発明を限定するものではない。本開示に基づき、当業者は、本発明を実施するために有用な他の成分及び方法を特定し、利用することができる。
【００２０】
（発明の詳細な説明）
ＭＣＨ拮抗物質活性を提供する、哺乳類ＭＣＨへの種々の変更を特定する。そのような変更は、ＭＣＨ又はＭＣＨ様化合物を、ＭＣＨ拮抗物質を生産するように変えることができる種類の変化を示す。
【００２１】
好ましいＭＣＨ拮抗物質は約１１アミノ酸の長さである。より小さなサイズのＭＣＨ拮抗物質は長いＭＣＨ拮抗物質に比べて、合成の容易さ及び／又は生理的緩衝液への高い溶解度などの利点を提供する。
【００２２】
好ましいＭＣＨ拮抗物質は、ＭＣＨ−１Ｒ活性を有意に阻害することができる。ＭＣＨ−１Ｒ活性の有意の阻害は、ＭＣＨ−１Ｒ及びこの受容体を活性化するＭＣＨ−１Ｒ作用物質を含むアッセイにおいて拮抗物質のＩＣ_５０を測定することによって評価できる。種々の実施形態では、機能的活性を測定するアッセイにおいて、ＭＣＨ拮抗物質は約５０ｎＭ未満、約１０ｎＭ未満、及び約５ｎＭ未満のＩＣ_５０値を有する。そのようなアッセイの例を下記の実施例の中で提供する。
【００２３】
本発明の１つの実施形態は、ＭＣＨ−２ＲよりもＭＣＨ−１Ｒにおいて選択的に活性なＭＣＨ−１Ｒ拮抗物質を述べる。好ましい選択的拮抗物質はＭＣＨ−１Ｒを有意に阻害するが、ＭＣＨ−２Ｒ活性は有意に阻害しない。化合物がＭＣＨ−２Ｒ活性を阻害する能力は、拮抗物質活性を評価することによって直接測定できる。選択的に、ＭＣＨ−２Ｒ作用物質活性の測定を利用して、化合物がＭＣＨ−２ＲにおいてＭＣＨ拮抗物質として働きうるかどうかを判定することができる。
【００２４】
ＭＣＨ拮抗物質は、研究ツールとしての使用及び治療的使用を含む様々な用途を備える。研究ツール適用の例は、ＭＣＨの役割又は作用を検討すること及びＭＣＨ拮抗物質の役割又は作用を検討することを含む。
【００２５】
ＭＣＨ拮抗物質は、インビトロ又はインビボでＭＣＨ−１Ｒ活性を阻害するために使用できる。「阻害する」又は「阻害すること」への言及は、検出可能な低下を示す。阻害及び阻害することは、活性の完全な不在を必要としない。例えば、ＭＣＨ−１ＲでのＭＣＨの作用を阻害することができるＭＣＨ拮抗物質は、ＭＣＨ−１ＲにおいてＭＣＨによって引き起こされる１又はそれ以上の活性を検出可能な度合で低下させることができる。
【００２６】
ＭＣＨ拮抗物質は被験対象に投与することができる。「被験対象」は、例えばヒト、ラット、マウス又は家畜を含む哺乳類を指す。被験対象への言及は、必ずしも疾患又は障害の存在を示唆しない。被験対象の語は、例えば、実験の一部としてＭＣＨ拮抗物質を投与される哺乳類、疾患又は障害を軽減するのを助けるために治療される哺乳類、及び予防的に治療される哺乳類を含む。
【００２７】
ＭＣＨ拮抗物質は、患者において有益な作用を達成するために使用できる。例えば、ＭＣＨ拮抗物質は、体重減少、食欲低下、体重維持、癌（例えば結腸癌又は乳癌）の治療、疼痛の軽減、ストレスの軽減及び／又は性機能障害の治療を促進するために使用できる。
【００２８】
（ＭＣＨ拮抗物質）
説明するＭＣＨ拮抗物質は、構造Ｉ、ＩＩ又はＩＩＩの、場合により修飾されたペプチドを含む。構造Ｉは、次の通り。
【００２９】
【化５】

［式中、Ｘ^１は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；好ましくは、存在する場合Ｘ^１はアスパラギン酸又はグルタミン酸であり；より好ましくは、存在する場合Ｘ^１はアスパラギン酸であり；及びより好ましくは、Ｘ^１は存在せず；
Ｘ^２は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；好ましくは、存在する場合Ｘ^２はフェニルアラニン又はチロシンであり；より好ましくは、存在する場合Ｘ^２はフェニルアラニンであり；及びより好ましくは、Ｘ^２は存在せず；
Ｘ^３は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；好ましくは、存在する場合Ｘ^３はアスパラギン酸又はグルタミン酸であり；より好ましくは、存在する場合Ｘ^３はアスパラギン酸であり；及びより好ましくは、Ｘ^３は存在せず；
Ｘ^４は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸、グルタミン酸若しくはノルロイシン、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；好ましくは、存在する場合Ｘ^４はメチオニン、ロイシン、イソロイシン、バリン、アラニン又はノルロイシンであり；より好ましくは、存在する場合Ｘ^４はメチオニンであり；及びより好ましくは、Ｘ^４は存在せず；
Ｘ^５は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；好ましくは、存在する場合Ｘ^５はロイシン、メチオニン、イソロイシン、バリン又はアラニンであり；より好ましくは、存在する場合Ｘ^５はロイシンであり；及びより好ましくは、Ｘ^５は存在せず；
Ｘ^６は、存在する場合は、アルギニン、アラニン、ロイシン、グリシン、リシン、プロリン、アスパラギン、セリン、ヒスチジン、ニトロアルギニン、ホモアルギニン、シトルリン、ホモシトルリン、ノルロイシン、Ｄ−アルギニン、デス−アミノ−アルギニン、４−グアニジノ酪酸、３−グアニジノプロピオン酸、グアニジノ酢酸若しくは３−グアニジノプロピオン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；好ましくは、Ｘ^６は５−グアニジノ吉草酸、４−グアニジノ酪酸、３−グアニジノプロピオン酸、グアニジノ酢酸又は３−グアニジノプロピオン酸であり；より好ましくはＤ−アルギニン、デス−アミノ−アルギニンであり；より好ましくは、Ｘ^６はデス−アミノ−アルギニンであり；
Ｘ^７は、システイン、ホモシステイン、ペニシラミン若しくはＤ−システイン、又はその誘導体であり；好ましくは、Ｘ^７はシステインであり；
Ｘ^８は、メチオニン、ノルロイシン、ロイシン、イソロイシン、バリン、メチオニンスルホキシド、γ−アミノ酪酸若しくはメチオニンスルホン、又はその誘導体であり；好ましくは、Ｘ^８はメチオニン又はノルロイシンであり；
Ｘ^９は、ロイシン、イソロイシン、バリン、アラニン、メチオニン、５−アミノペンタン酸、Ｄ−ノルロイシン、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸若しくはβ−アラニン、又はその誘導体であり；好ましくは、Ｘ^９はロイシン、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸又はβ−アラニンであり；より好ましくは、Ｘ^９はロイシン又は５−アミノ吉草酸であり；より好ましくは、Ｘ^９は５−アミノ吉草酸であり；
Ｘ^１０は、グリシン、アラニン、ロイシン、ノルロイシン、シクロヘキシルアラニン、５−アミノペンタン酸、アスパラギン、セリン、サルコシン、イソ酪酸、Ｄ−ノルロイシン、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸若しくはβ−アラニン、又はその誘導体であり；好ましくは、Ｘ^１０はグリシン、Ｄ−ノルロイシン又は５−アミノ吉草酸であり；より好ましくは、Ｘ^１０は５−アミノ吉草酸であり；
Ｘ^１１は、アルギニン、リシン、シトルリン、ヒスチジン若しくはニトロアルギニン、又はその誘導体であり；好ましくは、Ｘ^１１はアルギニンであり；
Ｘ^１２は、バリン、ロイシン、イソロイシン、アラニン若しくはメチオニン、又はその誘導体であり；好ましくは、Ｘ^１２はバリン又はアラニンであり；
Ｘ^１３は、フェニルアラニン、チロシン、Ｄ−（ｐ−ベンゾイルフェニルアラニン）、トリプトファン、（１’）−及び（２’）−ナフチルアラニン、シクロヘキシルアラニン、若しくは各々の置換基がＯ−アルキル、アルキル、ＯＨ、ＮＯ_２、ＮＨ_２、Ｆ、Ｉ及びＢｒから成る群より独立して選択される一及び多置換フェニルアラニンであるか、又はその誘導体であり；好ましくは、Ｘ^１３はフェニルアラニン、（２’）ナフチルアラニン、ｐ−フルオロ−フェニルアラニン、チロシン又はシクロヘキシルアラニンであり；より好ましくは、Ｘ^１３はチロシンであり；
Ｘ^１４は、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸、β−アラニン又はシス−４−アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸であり；好ましくは、Ｘ^１４は５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸又はβ−アラニンであり；
Ｘ^１５は、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸、β−アラニン又はシス−４−アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸であり；好ましくは、Ｘ^１５は５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸又はβ−アラニンであり；
Ｘ^１６は、システイン、ホモシステイン若しくはペニシラミン、又はその誘導体であり；好ましくは、Ｘ^１６はシステイン又はＤ−システインであり；
Ｘ^１７は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；好ましくは、存在する場合Ｘ^１７はチロシン又はトリプトファンであり；より好ましくは、Ｘ^１７は存在せず；
Ｚ^１は、存在する場合は、Ｎ−末端アミノ基に共有結合している、場合により存在する保護基であり；
Ｚ^２は、存在する場合は、Ｃ−末端カルボキシ基に共有結合している、場合により存在する保護基である］
又は前記ペプチドの標識誘導体、又は前記ペプチド若しくは前記標識誘導体の医薬適合性の塩である。
【００３０】
構造ＩＩは次の通り。
【００３１】
【化６】

［式中、Ｘ^１、Ｘ^２、Ｘ^３、Ｘ^４、Ｘ^５、Ｘ^６、Ｘ^８、Ｘ^９、Ｘ^１０、Ｘ^１１、Ｘ^１２、Ｘ^１３、Ｘ^１４、Ｘ^１５及びＺ^１は、種々の実施形態を含めて構造Ｉについて述べた通りであり；Ｘ^１８は、次の構造：
【００３２】
【化７】

［式中、ｎは１、２、３、４又は５である］
を有するα，ω−ジ−アミノ−カルボン酸であり；及びＸ^１９は、アスパラギン酸、グルタミン酸又はアジピン酸などのω−カルボキシ−α−アミノ酸である］
である。Ｘ^１８のα，ω−ジ−アミノ−カルボン酸のω−アミノ基は、Ｘ^１９のアミノ酸のω−カルボキシ基に結合している。
【００３３】
構造ＩＩＩは次の通り。
【００３４】
【化８】

［式中、Ｘ^１、Ｘ^２、Ｘ^３、Ｘ^４、Ｘ^５、Ｘ^６、Ｘ^８、Ｘ^９、Ｘ^１０、Ｘ^１１、Ｘ^１２、Ｘ^１３、Ｘ^１４、Ｘ^１５、Ｘ^１８及びＺ^１は、様々な実施形態を含めて構造ＩＩについて述べた通りであり、及びＸ^１８のα，ω−ジ−アミノ−カルボン酸のω−アミノ基は、１５位のカルボキシ基に結合している］
である。
【００３５】
本発明は、ジアステレオマーならびにそれらのラセミ体及び分割された鏡像異性的に純粋な形態を包含することが意図されている。ＭＣＨ拮抗物質は、Ｄ−アミノ酸、Ｌ−アミノ酸又はそれらの組合せを含みうる。好ましくは、ＭＣＨ拮抗物質中に存在するアミノ酸はＬ−鏡像異性体である。
【００３６】
より好ましい実施形態は、種々の位置の各々に好ましい（又はより好ましい）基を含む。種々の実施形態において、ＭＣＨ拮抗物質は、１又はそれ以上の異なる位置に１個の好ましい（又はより好ましい）基を含む；Ｘ^９及びＸ^１０は同じ基であり；及び／又はＸ^１４及びＸ^１５は同じ基である。
【００３７】
Ｎ−末端アミノ基に共有結合した保護基は、インビボ条件下でアミノ末端の反応性を低下させる。アミノ保護基は、場合により置換された−Ｃ_１−１０アルキル、場合により置換された−Ｃ_２−１０アルケニル、場合により置換されたアリール、−Ｃ_１−６アルキル−場合により置換されたアリール、−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ_２）_１−６−ＣＯＯＨ、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ_１−６アルキル、−Ｃ（Ｏ）−場合により置換されたアリール、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｃ_１−６アルキル、又は−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−場合により置換されたアリールを含む。好ましくは、アミノ末端保護基は、アセチル、プロピル、スクシニル、ベンジル、ベンジルオキシカルボニル又はｔ−ブチルオキシカルボニルである。
【００３８】
Ｃ−末端カルボキシ基に共有結合した保護基は、インビボ条件下でカルボキシ末端の反応性を低下させる。カルボキシ末端保護基は、好ましくは最後のアミノ酸のα−カルボニル基に結合している。カルボキシ末端保護基は、アミド、メチルアミド及びエチルアミドを含む。
【００３９】
「アルキル」は、１個の炭素原子の炭化水素基、又は炭素−炭素単結合によって連結された炭化水素基を表わす。アルキル炭化水素基は、直鎖であるか又は１若しくはそれ以上の分枝又は環状基を含んでいてもよい。好ましくは、アルキル基は１個から４個の炭素の長さである。アルキルの例は、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、シクロプロピル、ブチル及びｔ−ブチルを含む。アルキル基は、場合により、ハロゲン（好ましくは−Ｆ又は−Ｃｌ）、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＳＨ、−ＮＨ_２、−ＮＯ_２、１個から６個のハロゲン（好ましくは−Ｆ又は−Ｃｌ、より好ましくは−Ｆ）で置換された−Ｃ_１−２アルキル、−ＣＦ_３、−ＯＣＨ_３、又は−ＯＣＦ_３から成る群より選択される１又はそれ以上の置換基で置換されていてもよい。
【００４０】
「アルケニル」は、１又はそれ以上の炭素−炭素二重結合を含む、場合により置換された炭化水素基を表わす。アルケニル炭化水素基は、直鎖であるか又は１若しくはそれ以上の分枝又は環状基を含んでいてもよい。好ましくは、アルケニル基は２−４個の炭素の長さである。アルケニル基は、場合により、ハロゲン（好ましくは−Ｆ又は−Ｃｌ）、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＳＨ、−ＮＨ_２、−ＮＯ_２、１個から５個のハロゲン（好ましくは−Ｆ又は−Ｃｌ、より好ましくは−Ｆ）で置換された−Ｃ_１−２アルキル、−ＣＦ_３、−ＯＣＨ_３、又は−ＯＣＦ_３から成る群より選択される１又はそれ以上の置換基で置換されていてもよい。
【００４１】
「アリール」は、２個までの共役又は縮合環系を含む、共役π電子系を有する少なくとも１個の環を備えた、場合により置換された芳香族基を表わす。アリールは、炭素環式アリール、ヘテロ環式アリール及びビアリール基を含む。好ましくは、アリールは５又は６員環であり、より好ましくはベンジルである。アリール置換基は、−Ｃ_１−４アルキル、−Ｃ_１−４アルコキシ、ハロゲン（好ましくは−Ｆ又は−Ｃｌ）、−ＯＨ、−ＣＮ、−ＳＨ、−ＮＨ_２、−ＮＯ_２、１個から５個のハロゲン（好ましくは−Ｆ又は−Ｃｌ、より好ましくは−Ｆ）で置換された−Ｃ_１−２アルキル、−ＣＦ_３、又は−ＯＣＦ_３から成る群より選択される。
【００４２】
標識誘導体は、検出可能な標識を有する基の変化を示す。検出可能な標識の例は、蛍光、酵素、及び放射能標識を含む。好ましい放射能標識は^１２５Ｉである。標識は、ＭＣＨ受容体におけるＭＣＨ拮抗物質の活性を実質的に変化させないように選択し、位置を定めるべきである。ＭＣＨ拮抗物質活性への特定標識の影響は、ＭＣＨ活性を測定するアッセイを用いて判定することができる。
【００４３】
好ましい実施形態では、場合により修飾されたペプチドは、構造ＩＶ、Ｖ又はＶＩに対応する、構造Ｉ、ＩＩ又はＩＩＩのトランケート型である：
【００４４】
【化９】

【００４５】
【化１０】

【００４６】
【化１１】

［式中、種々の基及び好ましい基は、前述した通りである］。
【００４７】
さらなる実施形態では、該ペプチドは、配列番号１１、１２、１３、１４、１６、１８、１９、２０、２１、２５、２７、２９、３０、３２及び３３から成る群より選択される配列を有するか、又くは前記ペプチドの標識誘導体、又は前記ペプチド若しくは前記標識誘導体の医薬適合性の塩である。好ましいペプチドは、より低いＩＣ_５０値を有することが示されたＭＣＨ拮抗物質である。好ましいＭＣＨ拮抗物質の例は、配列番号１１、１３、１４、１６、２０、２７、３０及び３３によって提供される。
【００４８】
ＭＣＨ拮抗物質は、当技術分野において周知の手法を用いて生産することができる。例えば、ＭＣＨ拮抗物質のポリペプチド領域は、化学的又は生化学的に合成することができ、所望する場合は、ブロックＮ末端及び／又はブロックＣ末端を生じるように修飾することができる。ポリペプチドの化学合成のための手法は当技術分野において周知である。（例えば、Ｖｉｎｃｅｎｔ，ＰｅｐｔｉｄｅａｎｄＰｒｏｔｅｉｎＤｒｕｇＤｅｌｉｖｅｒｙ、ＮｅｗＹｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，Ｄｅｋｋｅｒ，１９９０参照。）細胞への核酸の導入及び核酸の発現を含む生化学的合成のための手法の例は、Ａｕｓｕｂｅｌ，ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ，１９８７−１９９８、及びＳａｍｂｒｏｏｋら、ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ，ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ，第２版、ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ，１９８９の中で提供される。
【００４９】
（ＭＣＨ拮抗物質についてのスクリーニング）
ＭＣＨ拮抗物質についてのスクリーニングは、組換え発現したＭＣＨ受容体を使用して容易に実施される。組換え発現ＭＣＨ受容体を使用することの利点は、ＭＣＨ受容体活性化合物への応答を他の受容体に対する応答からより容易に識別できるように、規定された細胞系において該受容体を発現できることを含む。例えば、発現ベクターを使用してＨＥＫ２９３、ＣＯＳ７及びＣＨＯなどの細胞系にＭＣＨ受容体を導入することができ、その場合、発現ベクターを含まない同じ細胞系が対照として使用できる。
【００５０】
ＭＣＨ拮抗物質のスクリーニングは、アッセイにおけるＭＣＨ作用物質の使用を通して容易になる。スクリーニングアッセイでのＭＣＨ作用物質の使用はＭＣＨ受容体活性を提供する。そのような活性への被験化合物の作用を測定して、例えばその化合物がＭＣＨ受容体活性を阻害する能力を評価することができる。
【００５１】
ＭＣＨ受容体活性は、ＭＣＨ受容体の細胞内コンフォメーションの変化、Ｇｉ又はＧｑ活性及び／又は細胞内メッセンジャーの変化を検出することなどの様々な手法を用いて測定することができる。Ｇｉ活性は、黒色素胞アッセイ、ｃＡＭＰ産生を測定するアッセイ、ｃＡＭＰ蓄積の阻害を測定するアッセイ、及び^３５Ｓ−ＧＴＰの結合を測定するアッセイなどの当技術分野において周知の手法を用いて測定することができる。ｃＡＭＰは、放射線免疫検定法などの種々の手法を用いて、及びｃＡＭＰ応答性遺伝子レポータータンパク質によって間接的に測定することができる。
【００５２】
Ｇｑ活性は、細胞内Ｃａ^２＋を測定するなどの手法を用いて測定できる。Ｃａ^２＋を測定するために使用できる当技術分野で周知の手法の例は、Ｆｕｒａ−２などの染料の使用及びエクオリンなどのＣａ^２＋−生物発光感受性レポータータンパク質の使用を含む。Ｇタンパク質活性を測定するためにエクオリンを使用する細胞系の一例は、ＨＥＫ２９３／ａｅｑ１７である。（どちらも参照してここに組み込まれる、Ｂｕｔｔｏｎら、１９９３、ＣｅｌｌＣａｌｃｉｕｍ１４，６６３−６７１、及びＦｅｉｇｈｎｅｒら、１９９９、Ｓｃｉｅｎｃｅ２８４，２１８４−２１８８。）
（ＭＣＨ拮抗物質の使用）
ＭＣＨ拮抗物質は、被験対象において有益な作用を達成するため及び研究のための方法において使用できる。ＭＣＨ拮抗物質の有益な作用は、次の事柄の１つ又はそれ以上を含む：体重減少、食欲低下、体重維持、癌（例えば結腸癌又は乳癌）の治療、疼痛の軽減、ストレスの軽減及び／又は性機能障害の治療。
【００５３】
体重の維持又は体重減少を促進することは、過剰体重及び肥満の患者にとって特に有用である。過剰体重は、高血圧、高脂血症、心臓血管疾患、胆石、変形性関節症及びある種の形態の癌を含む様々な疾患に寄与する因子である。体重減少を生じさせることは、例えば、そのような疾患の可能性を低下させるため及びそのような疾患の治療の一部として、使用できる。
【００５４】
過剰体重の患者は、「正常」体重範囲の上限又はボディマス指数（「ＢＭＩ」）を約１０％若しくはそれ以上、２０％若しくはそれ以上、３０％若しくはそれ以上、又は５０％若しくはそれ以上上回る体重を有する患者を含む。「正常」体重範囲は当技術分野において周知であり、患者の年齢、身長及び体型などの因子を考慮に入れる。
【００５５】
ＢＭＩは身長／体重の比率を測定する。キログラムで表わした体重をメーターで表わした身長の二乗で除して算定することによって決定される。ＢＭＩの「正常」範囲は１９−２２である。
【００５６】
（投与）
ＭＣＨ拮抗物質は、当技術分野で周知の手法と共にここで提供する手引きを使用して、製剤し、被験対象に投与することができる。好ましい投与経路は、化合物の有効量が標的に達することを確実にする。一般に薬剤投与についてのガイドラインは、例えば、どちらも参照してここに組み込まれる、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ第１８版、Ｇｅｎｎａｒｏ編集、ＭａｃｋＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，１９９０、及びＭｏｄｅｒｎＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ第２版、ＢａｎｋｅｒとＲｈｏｄｅｓ編集、ＭａｒｃｅｌＤｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，１９９０に示されている。
【００５７】
ＭＣＨ拮抗物質は酸性又は塩基性塩として製造することができる。医薬適合性の塩（水溶性又は油溶性又は分散性生成物の形態）は、従来の非毒性塩又は、例えば無機又は有機酸又は塩基から生成される第四級アンモニウム塩を含む。そのような塩の例は、酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、硫酸水素塩、酪酸塩、クエン酸塩、ショウノウ酸塩、ショウノウスルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、シュウ酸塩、パモイン酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トシラート、及びウンデカン酸塩などの酸付加塩；及びアンモニウム塩などの塩基性塩、ナトリウム及びカリウム塩などのアルカリ金属塩、カルシウム及びマグネシウム塩などのアルカリ土類金属塩、ジシクロヘキシルアミン塩などの有機塩基との塩、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン、及びアルギニン及びリシンなどのアミノ酸との塩を含む。
【００５８】
ＭＣＨ拮抗物質は、経口、経鼻、注射、経皮及び経粘膜を含む様々な経路を用いて投与することができる。懸濁液として経口的に投与する有効成分は、医薬製剤の技術分野において周知の手法に従って調製することができ、かさを与えるための微結晶性セルロース、沈殿防止剤としてのアルギン酸又はアルギン酸ナトリウム、増粘剤としてのメチルセルロース、及び甘味料／香味料を含有しうる。即時放出性錠剤として、これらの組成物は、微結晶性セルロース、リン酸ジカルシウム、デンプン、ステアリン酸マグネシウム及びラクトース及び／又は他の賦形剤、結合剤、増量剤、崩壊剤、希釈剤及び潤滑剤を含有しうる。
【００５９】
ＭＣＨ拮抗物質はまた、静脈内経路（ボーラス及び注入）、腹腔内経路、皮下経路、閉鎖を伴う若しくは伴わない局所経路、又は筋肉内経路を利用して投与することもできる。注射によって投与するときは、リンガー溶液若しくは等張塩化ナトリウム溶液などの、適切な非毒性で非経口的に許容される希釈剤若しくは溶剤、又は合成モノ−又はジグリセリドを含む無菌で無刺激性の不揮発性油及びオレイン酸を含む脂肪酸などの、適切な分散剤又は湿潤剤と沈殿防止剤を使用して、注射用溶液又は懸濁液を製剤することができる。
【００６０】
適切な投与プログラムは、好ましくは、投与される被験対象の種類；被験対象の年齢、体重、性別及び医学的状態；投与経路；被験対象の腎及び肝機能；所望効果；及び使用する特定化合物を含む、当技術分野で周知の因子を考慮に入れて決定される。
【００６１】
毒性を伴わずに効力を生じる範囲内の薬剤の最適濃度を厳密に達成するには、標的部位への薬剤のアベイラビリティーの動態に基づく投与プログラムを必要とする。これは、薬剤の分布、平衡及び排出を考慮することを含む。被験対象についての一日量は、０．０１ｍｇから１，０００ｍｇ／被験対象／日と予想される。
【００６２】
ＭＣＨ拮抗物質はキットとして提供することができる。そのようなキットは、典型的には、投与用剤型中に活性化合物を含有する。剤型は、１日当り１回から６回などの規則正しい間隔で、１日又はそれ以上の日数の期間にわたって被験対象に投与したとき有益な作用が得られるような、十分な量の活性化合物を含有する。好ましくは、キットは、体重減少（例えば肥満を治療するため）又はストレスの軽減のための剤型の用法及び規定された期間にわたって服用すべき剤型の量を示す指示書を含む。
【００６３】
（実施例）
本発明の種々の特徴をさらに説明するために実施例を下記に示す。これらの実施例はまた、本発明を実施するための有用な方法も例示する。これらの実施例は、特許請求する本発明を限定するものではない。
【実施例１】
【００６４】
ＭＣＨ拮抗物質の合成
ＭＣＨ拮抗物質を製造するための手順の一例を下記に述べる。ペプチドを生産し、修飾するための他の手順は当技術分野において周知である。
【００６５】
４−（２’、４’−ジメトキシフェニル−Ｆｍｏｃ−アミノメチル）−フェノキシ樹脂上のペプチジル鎖の伸長及び前記ペプチドのＮ−末端アミノ基のアセチル化を４３１ＡＡＢＩペプチドシンセイサイザーで実施した。Ｎ−メチルピロリドン（ＮＭＰ）内のアミノ酸のヒドロキシベンゾトリアゾールエステルのカップリングのために、製造者が提供するプロトコールを適用した。フルオレニルメチルオキシカルボニル（Ｆｍｏｃ）基を半永久的α−アミノ保護基として使用し、一方側鎖保護基は、アスパラギン酸及びチロシンについてはｔｅｒｔ−ブチル、アルギニンについては２，２，４，６，７−ペンタメチルジヒドロベンゾフラン−５−スルホニル（Ｐｂｆ）、及びシステインについてはトリチルであった。
【００６６】
５％アニソールを含むＴＦＡでペプチドを樹脂から開裂した。室温で２時間後、樹脂をろ過し、ＴＦＡで洗って、併合ろ液を真空中で蒸発乾固させた。その残留物をエーテルで粉砕し、形成された沈殿物をろ取して、エーテルで洗い、乾燥した。
【００６７】
粗ペプチドを５％酢酸水溶液に溶解し、その溶液のｐＨを希薄水酸化アンモニウムで約８．２に調整した。その反応混合物を強く攪拌しながら、反応混合物が約５分間黄色のままになるまで０．０５％フェリシアン化カリウム（Ｋ_３Ｆｅ（ＣＮ）_６）水溶液を滴下した。さらに２０分後、酢酸約１ｍｌを加えて酸化を終了させ、その反応混合物を凍結乾燥した。
【００６８】
粗凍結乾燥ペプチドを、自動Ｗｉｓｐ７１２インジェクター及び９９１ＰｈｏｔｏｄｉｏｄｅＡｒｒａｙ検出器を備えるＷａｔｅｒｓ６００Ｅシステムに接続したＣ１８Ｖｙｄａｃカラムでの分析用逆相高圧液体クロマトグラフィー（ＲＰＨＰＬＣ）によって分析した。３０分間で０％から１００％緩衝液Ｂの標準勾配系を分析に使用した：緩衝液Ａは０．１％トリフルオロ酢酸水溶液であり、緩衝液Ｂはアセトニトリル中０．１％トリフルオロ酢酸であった。ＨＰＬＣプロフィールを２１０ｎｍ及び２８０ｎｍで記録した。半分取用Ｃ１８ＲＰＷａｔｅｒｓカラムを備えるＷａｔｅｒｓＤｅｌｔａＰｒｅｐ４０００システムで分取分離を実施した。６０分間で２０％から８０％緩衝液Ｂの勾配において、上述した水とアセトニトリルの溶媒系を分離に使用した。クロマトグラフィーで均一な化合物をエレクトロスプレー質量分析法によって分析した。
【実施例２】
【００６９】
エクオリン生物発光機能アッセイ
エクオリン生物発光アッセイを使用して、Ｇｑ及びＧ１１から成るＧαタンパク質サブユニットファミリーを通して共役するＧタンパク質共役受容体の活性を測定することができる。そのような共役は、ホスホリパーゼＣの活性化、細胞内カルシウムの動員及びプロテインキナーゼＣの活性化を導く。
【００７０】
ラットＭＣＨ−１Ｒ及びヒトＭＣＨ−２Ｒ受容体活性の測定を、これらの受容体を発現する安定な細胞系を使用して、エクオリン発現安定レポーター細胞系２９３−ＡＥＱ１７（Ｂｕｔｔｏｎら、ＣｅｌｌＣａｌｃｉｕｍ１４：６６３−６７１，１９９３）において実施した。前記細胞中のアポ−エクオリンに、ＥＣＢ緩衝液（ＮａＣｌ１４０ｍＭ、ＫＣｌ２０ｍＭ、ＨＥＰＥＳ−ＮａＯＨ［ｐＨ＝７．４］２０ｍＭ、グルコース５ｍＭ、ＭｇＣｌ_２１ｍＭ、ＣａＣｌ_２１ｍＭ、ウシ血清アルブミン０．１ｍｇ／ｍｌ）中、還元条件下で（還元グルタチオン３００μＭ）、コエレンテラジン（１０μＭ）を１時間充填した。
【００７１】
前記細胞を採集し、ＥＣＢ緩衝液中で１回洗って、５００，０００細胞／ｍｌに再懸濁した。次に細胞懸濁液１００μｌ（５×１０^４細胞に相当する）を、ＭＣＨ又は被験化合物を含む試験平板に注入し、積算発光を０．５秒単位で３０秒間にわたって記録した。次に溶解緩衝液（０．１％のＴｒｉｔｏｎＸ−１００最終濃度）２０μＬを注入し、その積算発光を０．５秒単位で１０秒間にわたって記録した。ＴｒｉｔｏｎＸ−１００溶解応答を含む総積算発光に対する初期誘発への積算応答の比率を考慮することにより、各々のウエルについての「分別応答」値を算定した。
【実施例３】
【００７２】
結合アッセイ
ヒトＭＣＨ−１Ｒ又はヒトＭＣＨ−２Ｒへの結合を、ＭＣＨ−１Ｒ又はＭＣＨ−２Ｒ受容体を安定に発現する細胞から調製した膜への［^１２５Ｉ］−ヒトＭＣＨ（Ｐｈｅ^１３、Ｔｙｒ^１９置換）の結合を阻害する化合物の能力を測定することによって検定した。アッセイに使用したヒトＭＣＨ（Ｐｈｅ^１３、Ｔｙｒ^１９置換）は、^１９Ｔｙｒで^１２５Ｉにより〜２０００Ｃｉ／ｍｍｏｌの比活性に放射能標識した（ＮＥＮＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅＰｒｏｄｕｃｔｓ，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）。
【００７３】
細胞膜を氷上で調製した。各々のＴ−７５フラスコを無酵素細胞分離緩衝液（ＳｐｅｃｉａｌｔｙＭｅｄｉａ，Ｌａｖａｌｌｅｔｔｅ，ＮＪ）１０ｍｌで２回洗い、室温で１０分間インキュベートすることにより、さらなる１０ｍｌの無酵素細胞分離緩衝液中で細胞単層を分離した。分離した細胞を遠心分離し（５００×ｇ、４℃で１０分間）、均質化緩衝液（Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ１０ｍＭ、ｐＨ７．４、Ｐｅｆａｂｌｏｃ０．０１ｍＭ、ホスホルアミドン１０μＭ、バシトラシン４０μｇ／ｍｌ）５ｍｌに再懸濁して、その後ガラス製ホモジナイザー（１０ストロークから１５ストローク）を用いて均質化した。ホモジネートを１０分間遠心分離した（４℃で１，０００×ｇ）。次に、生じた上清を３８，７００×ｇ、４℃で１５分間遠心分離した。ペレット化した膜を再懸濁し（２５ゲージの針に５回通した）、液体窒素でスナップ凍結して、使用時まで−８０℃で保存した。
【００７４】
ＭＣＨ−１Ｒ又はＭＣＨ−２Ｒを発現する安定なＣＨＯ又はＨＥＫ−２９３細胞系からの細胞膜を使用して、９６穴フィルターアッセイ又はシンチレーションプロキシミティアッセイ（ＳＰＡ）に基づく方式で結合を実施した。フィルターアッセイについては、次のものを含む総容量０．２ｍｌ中、２０℃で１時間反応を実施した：膜懸濁液０．０５ｍｌ（〜３μｇタンパク質）、［^１２５Ｉ］−ヒトＭＣＨ（Ｐｈｅ^１３、Ｔｙｒ^１９置換；３０ｐＭ）０．０２ｍｌ、競合物質０．０１ｍｌ及び結合緩衝液（Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ５０ｍＭ、ｐＨ７．４、ＭｇＣｌ_２１０ｍＭ、ＥＤＴＡ２ｍＭ、バシトラシン２００μｇ／ｍｌ、ホスホルアミドン１μＭ）０．１２ｍｌ。
【００７５】
結合した放射性リガンドを、１％ポリエチレンイミンで１時間、前処理したＧＦ／Ｃフィルターを通して急速真空ろ過（ＰａｃｋａｒｄＦｉｌｔｅｒｍａｔｅ９６穴セルハーベスター）によって分離した。膜懸濁液をフィルターに適用したあと、フィルターを氷冷Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ５０ｍＭ、ｐＨ７．４、ＭｇＣｌ_２１０ｍＭ、ＥＤＴＡ２ｍＭ、０．０４％Ｔｗｅｅｎ２０の各々３ｍｌで３回洗い、フィルター上の結合放射能をシンチレーション計数（ＴｏｐＣｏｕｎｔ装置）によって定量した。特異的結合（＞総結合の８０％）を、総結合と、非標識ヒトＭＣＨ１００ｎＭの存在下で実施した非特異的結合の間の差として定義する。
【００７６】
ＳＰＡに基づくアッセイについては、ＷＧＡ−ＰＶＴビーズ（ＮＥＮＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓＰｒｏｄｕｃｔｓ）を、カルシウム及びマグネシウムを含むダルベッコＰＢＳに再懸濁した（ＰＢＳ４ｍｌ中ビーズ５００ｍｇ）。各々の９６穴アッセイ平板について、ビーズ０．１８ｍｌを、ＭＣＨ受容体ＣＨＯ細胞膜０．２ｍｌ（〜０．２−４ｍｇタンパク質）及びＳＰＡアッセイ緩衝液（Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ５０ｍＭ、ｐＨ７．４、ＭｇＣｌ_２１０ｍＭ、ＥＤＴＡ２ｍＭ、０．１％ＢＳＡ、１２％グリセロール）１．５ｍｌと混合することにより、ＭＣＨ受容体で前被覆した。前記懸濁液を２０分間静かに混合し、アッセイ緩衝液１２．３ｍｌ及びプロテアーゼ阻害因子を加えた（所与の最終濃度）：ロイペプチン２μｇ／ｍｌ、ホスホルアミドン１０μＭ、バシトラシン４０μｇ／ｍｌ、アプロチニン５μｇ／ｍｌ、Ｐｅｆａｂｌｏｃ０．１ｍＭ。
【００７７】
被覆したビーズを使用時まで氷上に保持した。各々の穴について、ビーズ０．１４５ｍｌをＯｐｔｉｐｌａｔｅアッセイ平板（Ｐａｃｋａｒｄ６００５１９０）に加え、次いで競合物質０．００２ｍｌから０．００４ｍｌ及び［^１２５Ｉ］−ヒトＭＣＨ（Ｐｈｅ^１３、Ｔｙｒ^１９置換；３０ｐＭ）０．０５ｍｌを加えた。室温で３時間、結合反応を進行させた。シンチレーション計数（ＴｏｐＣｏｕｎｔ装置）によって定量を実施した。
【実施例４】
【００７８】
拮抗物質アッセイ
化合物がＭＣＨ拮抗物質として働く能力を、ラットＭＣＨ−１Ｒを発現する、エクオリン発現安定レポーター細胞系２９３−ＡＥＱ１７を使用して評価した。Ｔ７５フラスコ中、１０％ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）、Ｇ４１８５００μｇ／ｍｌ、ヒグロマイシン２００μｇ／ｍｌ及びＨＥＰＥＳ２５ｍＭを補足したＤＭＥＭ（高グルコース）において細胞を増殖させた。
【００７９】
アッセイ自体は、コエレンテラジンｃｐ（ＭｏｌｅｃｕｌａｒＰｒｏｂｅｓ，Ｃ−１４２６０）をアポエクオリンに充填することを含み、次のように実施した：
１．集密なＴ７５フラスコをＨａｍｓＦ１２培地１２ｍｌ＋グルタチオン３００μＭ＋１％ＦＢＳで１回洗う。
２．ＨａｍｓＦ１２８ｍｌ＋１％ＦＢＳ＋グルタチオン３００μＭ＋コエレンテラジン１０μＭを加えて細胞に充填し、３７℃で１時間インキュベートする。
３．Ｔ７５フラスコをＥＣＢ（ＮａＣｌ１４０ｍＭ、ＫＣｌ２０ｍＭ、ＨＥＰＥＳ２０ｍＭ、グルコース５ｍＭ、ＭｇＣｌ_２１ｍＭ、ＣａＣｌ_２１ｍＭ、ＢＳＡ０．１ｍｇ／ｍｌｐＨ７．３−７．４）６ｍｌで洗う。
４．ＥＣＢ６ｍｌをフラスコに加え、先端がゴムのスクレイパーで分離して、２５００ｒｐｍで５分間遠心分離し、細胞ペレットをＥＣＢ５ｍｌに再懸濁する。細胞を計数し、５×１０^５／ｍｌに希釈する。
５．２Ｘリガンド濃度０．１ｍｌを含む９６穴平板に５０，０００細胞／０．１ｍｌを注入することにより、ＬｕｍｉｎｏｓｃａｎＲＴルミノメーターを使用してラットＭＣＨ−１ＲでのＥＣ_５０を測定する。
６．結合アッセイにおいてＩＣ_５０＜１０００ｎＭを示す化合物の拮抗物質活性を、５０，０００／０．１ｍｌ充填細胞を化合物と共に１０分間プレインキュベートし、その後２ＸＥＣ_５０濃度のＭＣＨ０．１ｍｌを注入して反応を開始させることによって測定する。
【実施例５】
【００８０】
ＭＣＨ活性
ＭＣＨ−１Ｒ及びＭＣＨ−２Ｒでの種々の被験化合物の活性を表１に示す。ＭＣＨ−１Ｒ及びＭＣＨ−２Ｒでの結合及び拮抗物質活性は、実施例２及び３で述べたように測定した。拮抗物質のＩＣ_５０は実施例４で述べたように測定した。Ｋ_ｂは、ＴｒｅｎｄｓｉｎＰｈａｒｍａｃｏｌ．Ｓｃｉ．１４：２３７−２３９，１９９３に述べられている手順を用いて測定した。
【００８１】
表１の上部の構造を表の中で指示されているように修飾することにより、化合物２から３６の構造を表１に示す。ヒトＭＣＨは下記の構造を有する（「^＊」は環化（Ｓ−Ｓ）を示す）：
【００８２】
【化１２】

【００８３】
【表１】

【００８４】
他の実施形態は本発明の特許請求の範囲内である。いくつかの実施形態を示し、説明したが、本発明の精神と範囲から逸脱することなく様々な修正を加えることができる。【Technical field】
[0001]
(Cross reference of related applications)
This application claims the benefit of US Provisional Patent Application Serial No. 60 / 310,928, filed August 8, 2001, which is incorporated herein by reference.
[Background Art]
[0002]
Neuropeptides present in the hypothalamus play an important role in mediating body weight regulation. (Flier et al., 1998, Cell, 92, 437-440.) Melanin-concentrating hormone (MCH) produced in mammals is a larger pre-prohormone precursor in the hypothalamus that also encodes the neuropeptides NEI and NGE. Is a cyclic 19 amino acid neuropeptide synthesized as part of (Nahon et al., 1990, Mol. Endocrinol. 4, 632-637; Vaughan et al., U.S. Pat. No. 5,049,655; and Vaughan et al., 1989, Endocrinology. 125, 1660-1665). In fish, MCH affects melanin aggregation and therefore skin pigmentation. In trout and eels, MCH has also been shown to be involved in stress-induced or CRF-stimulated ACTH release. (Kawauchi et al., 1983, Nature 305, 321-323.)
In humans, two genes encoding MCH have been identified that are expressed in the brain. (Breton et al., 1993, Mol. Brain Res. 18, 297-310.) In mammals, MCH is primarily a neurons of the hypothalamus involved in controlling food intake, including the outer hypothalamus and the perinuclear body of the zone of uncertainty. Localized in the body. (Knige et al., 1996, Peptides 17, 1063-1073.)
Pharmacological and genetic data suggest that the main mechanism of action of MCH is to promote nutritional supplementation (orexigenic). MCH mRNA is upregulated in fasted mice and rats, ob / ob mice, and mice with targeted disruption of the gene for neuropeptide Y (NPY). (Qu et al., 1996, Nature 380, 243-247 and Erickson et al., 1996, Nature 381, 415-418.) Central injection (ICV) of MCH stimulates food intake and MCH stimulates α-melanocyte stimulating hormone (αMSH). ) Antagonizes the feeding-lowering effect seen in). (Qu et al., 1996, Nature 380, 243-247.) MCH-deficient mice are lean, hypophagic, and have a high metabolic rate. (Shimada et al., 1998, Nature 396, 670-673.) The administration of MCH has been suggested to be useful for promoting eating behavior, appetite or gaining or maintaining weight. (Maratos-Flier, U.S. Pat. No. 5,849,708.)
As the effects on the hypothalamus-pituitary-axis have been reported, the effects of MCH are not limited to regulating food intake. (Nahon, 1994, Critical Rev. in Neurobiol. 8, 221-262.) Since MCH can regulate stress-induced CRF release from the hypothalamus and ACTH release from the pituitary, MCH is It is thought to be involved in the response. In addition, the MCH nervous system is thought to be involved in reproductive or maternal function.
[0003]
MCH can bind to at least two different receptors: MCH-1R and MCH-2R. (Chambers et al., 1999, Nature 400, 261-265; Saito et al., 1999, Nature 400, 265-269; Bachner et al., 1999, FEBS Letters 457: 522-524; Shimomura et al., 1999, Biochemical physics and biochemical physic. Sair et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 98: 7564-7569, 2001.) The amino acid identity between MCH-2R and MCH-1R is about 38%. (Sailer et al., Proc. Natl. Acad. Sci. 98: 7564-7569, 2001.)
DISCLOSURE OF THE INVENTION
[Problems to be solved by the invention]
[0004]
The present invention is directed to MCH antagonists that are active at MCH-1R. The antagonist is an optionally modified peptide capable of inhibiting the action of MCH on MCH-1R. MCH antagonists have a variety of uses, including use as a research tool and to achieve beneficial effects in a subject.
[Means for Solving the Problems]
[0005]
It is now specified that various combinations of changes to mammalian MCH are useful for producing MCH antagonists. Examples of such changes include (1) that positions 9 and 10 are 5-aminovaleric acid and (2) that position 6 is 5-guanidinovaleric acid or D-arginine, or both. Combinations include truncated mammalian MCH, including positions 6 through 16, wherein positions 14 and 15 are 5-aminovaleric acid, γ-aminobutyric acid, or β-alanine.
[0006]
The identification of various changes to truncated mammalian MCH useful for obtaining MCH antagonists provides guidance that can be used to obtain additional MCH antagonists. Additional MCH antagonists can vary in size and can include various types of modifications at various locations. The ability of a compound to act as an antagonist can be evaluated using techniques known in the art.
[0007]
Thus, a first aspect of the invention describes MCH antagonists. MCH antagonists are optionally modified cyclic peptides having a disulfide or lactam ring. Structure I represents a disulfide ring and structures II and III represent lactam rings.
[0008]
Structure I is as follows:
[0009]
Embedded image

Where X ¹ Is alanine, valine, leucine, isoleucine, proline, tryptophan, phenylalanine, methionine, glycine, serine, threonine, tyrosine, cysteine, asparagine, glutamine, lysine, arginine, histidine, aspartic acid or glutamic acid, or the like. An optionally occurring amino acid that is a derivative;
X ² Is alanine, valine, leucine, isoleucine, proline, tryptophan, phenylalanine, methionine, glycine, serine, threonine, tyrosine, cysteine, asparagine, glutamine, lysine, arginine, histidine, aspartic acid or glutamic acid, or the like. An optionally occurring amino acid that is a derivative;
X ³ Is alanine, valine, leucine, isoleucine, proline, tryptophan, phenylalanine, methionine, glycine, serine, threonine, tyrosine, cysteine, asparagine, glutamine, lysine, arginine, histidine, aspartic acid or glutamic acid, or the like. An optionally occurring amino acid that is a derivative;
X ⁴ Is alanine, valine, leucine, isoleucine, proline, tryptophan, phenylalanine, methionine, glycine, serine, threonine, tyrosine, cysteine, asparagine, glutamine, lysine, arginine, histidine, aspartic acid, glutamic acid or norleucine, Or an optionally present amino acid that is a derivative thereof;
X ⁵ Is alanine, valine, leucine, isoleucine, proline, tryptophan, phenylalanine, methionine, glycine, serine, threonine, tyrosine, cysteine, asparagine, glutamine, lysine, arginine, histidine, aspartic acid or glutamic acid, or the like. An optionally occurring amino acid that is a derivative;
X ⁶ Is arginine, alanine, leucine, glycine, lysine, proline, asparagine, serine, histidine, nitroarginine, homoarginine, citrulline, homocitrulline, norleucine, D-arginine, des-amino-arginine, 4- An optionally present amino acid that is guanidinobutyric acid, 3-guanidinopropionic acid, guanidinoacetic acid or 3-guanidinopropionic acid, or a derivative thereof;
X ⁷ Is cysteine, homocysteine, penicillamine or D-cysteine, or a derivative thereof;
X ⁸ Is methionine, norleucine, leucine, isoleucine, valine, methionine sulfoxide, γ-aminobutyric acid or methionine sulfone, or a derivative thereof;
X ⁹ Is leucine, isoleucine, valine, alanine, methionine, 5-aminopentanoic acid, D-norleucine, 5-aminovaleric acid, γ-aminobutyric acid or β-alanine, or a derivative thereof;
X ¹⁰ Is glycine, alanine, leucine, norleucine, cyclohexylalanine, 5-aminopentanoic acid, asparagine, serine, sarcosine, isobutyric acid, D-norleucine, 5-aminovaleric acid, γ-aminobutyric acid or β-alanine, or a derivative thereof. And;
X ¹¹ Is arginine, lysine, citrulline, histidine or nitroarginine, or a derivative thereof;
X ¹² Is valine, leucine, isoleucine, alanine or methionine, or a derivative thereof;
X ^Thirteen Is phenylalanine, tyrosine, D- (p-benzoylphenylalanine), tryptophan, (1 ′)-and (2 ′)-naphthylalanine, cyclohexylalanine, or each substituent is O-alkyl, alkyl, OH, NO ₂ , NH ₂ , F, I and Br are mono- and polysubstituted phenylalanines independently selected from the group consisting of:
X ¹⁴ Is 5-aminovaleric acid, γ-aminobutyric acid, β-alanine or cis-4-amino-1-cyclohexanecarboxylic acid;
X ^Fifteen Is 5-aminovaleric acid, γ-aminobutyric acid, β-alanine or cis-4-amino-1-cyclohexanecarboxylic acid;
X ¹⁶ Is cysteine, homocysteine or penicillamine, or a derivative thereof;
X ¹⁷ Is alanine, valine, leucine, isoleucine, proline, tryptophan, phenylalanine, methionine, glycine, serine, threonine, tyrosine, cysteine, asparagine, glutamine, lysine, arginine, histidine, aspartic acid or glutamic acid, or the like. An optionally occurring amino acid that is a derivative;
Z ¹ Is an optional protecting group, if present, covalently linked to the N-terminal amino group;
Z ² Is an optionally present protecting group, if present, covalently linked to the C-terminal carboxy group;
However, the following:
X ⁹ And X ¹⁰ Is each independently selected from the group consisting of 5-aminovaleric acid, γ-aminobutyric acid, β-alanine and cis-4-amino-1-cyclohexanecarboxylic acid; and
X ⁶ Is 5-guanidinovaleric acid, D-arginine, 4-guanidinobutyric acid, 3-guanidinopropionic acid, guanidinoacetic acid or 3-guanidinopropionic acid, or both.]
Or a labeled derivative of the peptide, or a pharmaceutically acceptable salt of the peptide or the labeled derivative.
[0010]
Structure II is as follows:
[0011]
Embedded image

Where X ¹ , X ² , X ³ , X ⁴ , X ⁵ , X ⁶ , X ⁸ , X ⁹ , X ¹⁰ , X ¹¹ , X ¹² , X ^Thirteen , X ¹⁴ , X ^Fifteen And Z ¹ Is as described for Structure I; X ¹⁸ Has the following structure:
[0012]
Embedded image

[Wherein n is 1, 2, 3, 4 or 5]
Α, ω-di-amino-carboxylic acid having the formula: ¹⁹ Is an ω-carboxy-α-amino acid such as aspartic acid, glutamic acid or adipic acid]
It is. X ¹⁸ The ω-amino group of the α, ω-di-amino-carboxylic acid of the formula ¹⁹ To the ω-carboxy group of the amino acid.
[0013]
Structure III is as follows:
[0014]
Embedded image

Where X ¹ , X ² , X ³ , X ⁴ , X ⁵ , X ⁶ , X ⁸ , X ⁹ , X ¹⁰ , X ¹¹ , X ¹² , X ^Thirteen , X ¹⁴ , X ^Fifteen , X ¹⁸ And Z ¹ Is as described for Structure II; and X ¹⁸ The ω-amino group of the α, ω-di-amino-carboxylic acid of the above is attached to the carboxy group at position 15.
It is.
[0015]
References to "amino acids" include naturally occurring and altered amino acids. Unless otherwise stated, amino acids having a chiral center are provided as L-enantiomers. Reference to “derivatives thereof” refers to the corresponding D-amino acid, N-alkyl-amino acid and β-amino acid.
[0016]
Another aspect of the invention describes a method of inhibiting MCH-1R activity in a subject. The method includes administering to a subject an effective amount of an MCH antagonist.
[0017]
Reference to an "effective" amount indicates an amount sufficient to achieve the desired effect. In this aspect of the invention, the effective amount is sufficient to inhibit MCH-1R activity.
[0018]
Another aspect of the invention describes a method of treating a subject to achieve weight loss or maintain weight. The method includes administering to a subject an effective amount of an MCH antagonist.
[0019]
Other features and advantages of the invention will be apparent from the further description provided herein, including the various examples. The provided examples illustrate various components and methods useful in practicing the present invention. These examples do not limit the claimed invention. Based on the present disclosure, those skilled in the art will be able to identify and utilize other components and methods useful for practicing the present invention.
[0020]
(Detailed description of the invention)
Various alterations to mammalian MCH that provide MCH antagonist activity are identified. Such alterations indicate a type of alteration in which the MCH or MCH-like compound can be altered to produce an MCH antagonist.
[0021]
Preferred MCH antagonists are about 11 amino acids in length. Smaller size MCH antagonists offer advantages over longer MCH antagonists, such as ease of synthesis and / or higher solubility in physiological buffers.
[0022]
Preferred MCH antagonists can significantly inhibit MCH-1R activity. Significant inhibition of MCH-1R activity is indicated by the antagonist IC's in assays involving MCH-1R and MCH-1R agonists that activate this receptor. ₅₀ Can be evaluated by measuring In various embodiments, the MCH antagonist is less than about 50 nM, less than about 10 nM, and less than about 5 nM in an assay that measures functional activity. ₅₀ Has a value. Examples of such assays are provided in the Examples below.
[0023]
One embodiment of the present invention describes MCH-1R antagonists that are selectively active in MCH-1R over MCH-2R. Preferred selective antagonists significantly inhibit MCH-1R, but not MCH-2R activity. The ability of a compound to inhibit MCH-2R activity can be measured directly by assessing antagonist activity. Alternatively, measurement of MCH-2R agonist activity can be used to determine whether a compound can act as an MCH antagonist at MCH-2R.
[0024]
MCH antagonists have a variety of uses, including use as research tools and therapeutic uses. Examples of research tool applications include examining the role or effect of MCH and examining the role or effect of an MCH antagonist.
[0025]
MCH antagonists can be used to inhibit MCH-1R activity in vitro or in vivo. References to "inhibit" or "inhibiting" indicate a detectable decrease. Inhibition and inhibiting do not require a complete absence of activity. For example, an MCH antagonist capable of inhibiting the action of MCH-IR on MCH-IR can reduce one or more activities caused by MCH in MCH-IR with a detectable degree.
[0026]
The MCH antagonist can be administered to a test subject. "Subject" refers to a mammal, including, for example, a human, rat, mouse, or livestock. Reference to a subject does not necessarily indicate the presence of a disease or disorder. The terms subject include, for example, mammals that are administered a MCH antagonist as part of an experiment, mammals that are treated to help reduce a disease or disorder, and mammals that are treated prophylactically.
[0027]
MCH antagonists can be used to achieve beneficial effects in patients. For example, MCH antagonists can be used to promote weight loss, loss of appetite, weight maintenance, treatment of cancer (eg, colon or breast cancer), relief of pain, relief of stress, and / or treatment of sexual dysfunction.
[0028]
(MCH antagonist)
The described MCH antagonists include peptides of structure I, II or III, optionally modified. Structure I is as follows:
[0029]
Embedded image

Where X ¹ Is alanine, valine, leucine, isoleucine, proline, tryptophan, phenylalanine, methionine, glycine, serine, threonine, tyrosine, cysteine, asparagine, glutamine, lysine, arginine, histidine, aspartic acid or glutamic acid, or the like. An optionally present amino acid that is a derivative; preferably X ¹ Is aspartic acid or glutamic acid; more preferably X when present ¹ Is aspartic acid; and more preferably X ¹ Does not exist;
X ² Is alanine, valine, leucine, isoleucine, proline, tryptophan, phenylalanine, methionine, glycine, serine, threonine, tyrosine, cysteine, asparagine, glutamine, lysine, arginine, histidine, aspartic acid or glutamic acid, or the like. An optionally present amino acid that is a derivative; preferably X ² Is phenylalanine or tyrosine; more preferably X when present ² Is phenylalanine; and more preferably X ² Does not exist;
X ³ Is alanine, valine, leucine, isoleucine, proline, tryptophan, phenylalanine, methionine, glycine, serine, threonine, tyrosine, cysteine, asparagine, glutamine, lysine, arginine, histidine, aspartic acid or glutamic acid, or the like. An optionally present amino acid that is a derivative; preferably X ³ Is aspartic acid or glutamic acid; more preferably X when present ³ Is aspartic acid; and more preferably X ³ Does not exist;
X ⁴ Is alanine, valine, leucine, isoleucine, proline, tryptophan, phenylalanine, methionine, glycine, serine, threonine, tyrosine, cysteine, asparagine, glutamine, lysine, arginine, histidine, aspartic acid, glutamic acid or norleucine, Or an optional amino acid that is a derivative thereof; preferably, X ⁴ Is methionine, leucine, isoleucine, valine, alanine or norleucine; more preferably X when present ⁴ Is methionine; and more preferably X ⁴ Does not exist;
X ⁵ Is alanine, valine, leucine, isoleucine, proline, tryptophan, phenylalanine, methionine, glycine, serine, threonine, tyrosine, cysteine, asparagine, glutamine, lysine, arginine, histidine, aspartic acid or glutamic acid, or the like. An optionally present amino acid that is a derivative; preferably X ⁵ Is leucine, methionine, isoleucine, valine or alanine; more preferably X when present ⁵ Is leucine; and more preferably X ⁵ Does not exist;
X ⁶ Is arginine, alanine, leucine, glycine, lysine, proline, asparagine, serine, histidine, nitroarginine, homoarginine, citrulline, homocitrulline, norleucine, D-arginine, des-amino-arginine, 4- An optionally present amino acid that is guanidinobutyric acid, 3-guanidinopropionic acid, guanidinoacetic acid or 3-guanidinopropionic acid, or a derivative thereof; ⁶ Is 5-guanidinovaleric acid, 4-guanidinobutyric acid, 3-guanidinopropionic acid, guanidinoacetic acid or 3-guanidinopropionic acid; more preferably D-arginine, des-amino-arginine; more preferably X ⁶ Is des-amino-arginine;
X ⁷ Is cysteine, homocysteine, penicillamine or D-cysteine, or a derivative thereof; ⁷ Is cysteine;
X ⁸ Is methionine, norleucine, leucine, isoleucine, valine, methionine sulfoxide, γ-aminobutyric acid or methionine sulfone, or a derivative thereof; ⁸ Is methionine or norleucine;
X ⁹ Is leucine, isoleucine, valine, alanine, methionine, 5-aminopentanoic acid, D-norleucine, 5-aminovaleric acid, γ-aminobutyric acid or β-alanine, or a derivative thereof; ⁹ Is leucine, 5-aminovaleric acid, γ-aminobutyric acid or β-alanine; more preferably X ⁹ Is leucine or 5-aminovaleric acid; more preferably X ⁹ Is 5-aminovaleric acid;
X ¹⁰ Is glycine, alanine, leucine, norleucine, cyclohexylalanine, 5-aminopentanoic acid, asparagine, serine, sarcosine, isobutyric acid, D-norleucine, 5-aminovaleric acid, γ-aminobutyric acid or β-alanine, or a derivative thereof. Preferably; X ¹⁰ Is glycine, D-norleucine or 5-aminovaleric acid; more preferably X ¹⁰ Is 5-aminovaleric acid;
X ¹¹ Is arginine, lysine, citrulline, histidine or nitroarginine, or a derivative thereof; ¹¹ Is arginine;
X ¹² Is valine, leucine, isoleucine, alanine or methionine, or a derivative thereof; ¹² Is valine or alanine;
X ^Thirteen Is phenylalanine, tyrosine, D- (p-benzoylphenylalanine), tryptophan, (1 ′)-and (2 ′)-naphthylalanine, cyclohexylalanine, or each substituent is O-alkyl, alkyl, OH, NO ₂ , NH ₂ , F, I and Br are mono- and polysubstituted phenylalanines independently selected from the group consisting of, or derivatives thereof; ^Thirteen Is phenylalanine, (2 ′) naphthylalanine, p-fluoro-phenylalanine, tyrosine or cyclohexylalanine; more preferably X ^Thirteen Is tyrosine;
X ¹⁴ Is 5-aminovaleric acid, γ-aminobutyric acid, β-alanine or cis-4-amino-1-cyclohexanecarboxylic acid; preferably X ¹⁴ Is 5-aminovaleric acid, γ-aminobutyric acid or β-alanine;
X ^Fifteen Is 5-aminovaleric acid, γ-aminobutyric acid, β-alanine or cis-4-amino-1-cyclohexanecarboxylic acid; preferably X ^Fifteen Is 5-aminovaleric acid, γ-aminobutyric acid or β-alanine;
X ¹⁶ Is cysteine, homocysteine or penicillamine, or a derivative thereof; ¹⁶ Is cysteine or D-cysteine;
X ¹⁷ Is alanine, valine, leucine, isoleucine, proline, tryptophan, phenylalanine, methionine, glycine, serine, threonine, tyrosine, cysteine, asparagine, glutamine, lysine, arginine, histidine, aspartic acid or glutamic acid, or the like. An optionally present amino acid that is a derivative; preferably X ¹⁷ Is tyrosine or tryptophan; more preferably, X ¹⁷ Does not exist;
Z ¹ Is an optional protecting group, if present, covalently linked to the N-terminal amino group;
Z ² Is an optional protecting group, if present, covalently linked to the C-terminal carboxy group.
Or a labeled derivative of the peptide, or a pharmaceutically acceptable salt of the peptide or the labeled derivative.
[0030]
Structure II is as follows:
[0031]
Embedded image

Where X ¹ , X ² , X ³ , X ⁴ , X ⁵ , X ⁶ , X ⁸ , X ⁹ , X ¹⁰ , X ¹¹ , X ¹² , X ^Thirteen , X ¹⁴ , X ^Fifteen And Z ¹ Is as described for Structure I, including the various embodiments; X ¹⁸ Has the following structure:
[0032]
Embedded image

[Wherein n is 1, 2, 3, 4 or 5]
Α, ω-di-amino-carboxylic acid having the formula: ¹⁹ Is an ω-carboxy-α-amino acid such as aspartic acid, glutamic acid or adipic acid]
It is. X ¹⁸ The ω-amino group of the α, ω-di-amino-carboxylic acid of the formula ¹⁹ To the ω-carboxy group of the amino acid.
[0033]
Structure III is as follows:
[0034]
Embedded image

Where X ¹ , X ² , X ³ , X ⁴ , X ⁵ , X ⁶ , X ⁸ , X ⁹ , X ¹⁰ , X ¹¹ , X ¹² , X ^Thirteen , X ¹⁴ , X ^Fifteen , X ¹⁸ And Z ¹ Is as described for structure II, including various embodiments, and X ¹⁸ The ω-amino group of the α, ω-di-amino-carboxylic acid of the above is attached to the carboxy group at position 15.]
It is.
[0035]
The present invention is intended to encompass diastereomers and their racemates and resolved enantiomerically pure forms. MCH antagonists can include D-amino acids, L-amino acids, or combinations thereof. Preferably, the amino acids present in the MCH antagonist are L-enantiomers.
[0036]
More preferred embodiments include preferred (or more preferred) groups at each of the various positions. In various embodiments, the MCH antagonist comprises one preferred (or more preferred) group at one or more different positions; X ⁹ And X ¹⁰ Are the same groups; and / or X ¹⁴ And X ^Fifteen Is the same group.
[0037]
Protecting groups covalently linked to the N-terminal amino group reduce the amino terminal reactivity under in vivo conditions. The amino protecting group is optionally substituted -C _1-10 Alkyl, optionally substituted -C _2-10 Alkenyl, optionally substituted aryl, -C _1-6 Alkyl-optionally substituted aryl, -C (O)-(CH ₂ ) _1-6 -COOH, -C (O) -C _1-6 Alkyl, -C (O) -optionally substituted aryl, -C (O) -OC _1-6 Including alkyl, or -C (O) -O- optionally substituted aryl. Preferably, the amino terminal protecting group is acetyl, propyl, succinyl, benzyl, benzyloxycarbonyl or t-butyloxycarbonyl.
[0038]
Protecting groups covalently linked to the C-terminal carboxy group reduce the reactivity of the carboxy terminus under in vivo conditions. The carboxy terminal protecting group is preferably attached to the α-carbonyl group of the last amino acid. Carboxy terminal protecting groups include amide, methylamide and ethylamide.
[0039]
"Alkyl" represents a hydrocarbon group of one carbon atom or a hydrocarbon group connected by a single carbon-carbon bond. The alkyl hydrocarbon group may be straight-chain or contain one or more branched or cyclic groups. Preferably, an alkyl group is one to four carbons in length. Examples of alkyl include methyl, ethyl, propyl, isopropyl, cyclopropyl, butyl and t-butyl. The alkyl group may optionally be halogen (preferably -F or -Cl), -OH, -CN, -SH, -NH ₂ , -NO ₂ -C substituted with 1 to 6 halogens (preferably -F or -Cl, more preferably -F) _1-2 Alkyl, -CF ₃ , -OCH ₃ Or -OCF ₃ And may be substituted with one or more substituents selected from the group consisting of
[0040]
"Alkenyl" refers to an optionally substituted hydrocarbon group containing one or more carbon-carbon double bonds. An alkenyl hydrocarbon group may be straight-chain or contain one or more branched or cyclic groups. Preferably, alkenyl groups are 2-4 carbons in length. An alkenyl group optionally includes a halogen (preferably -F or -Cl), -OH, -CN, -SH, -NH ₂ , -NO ₂ -C substituted with 1 to 5 halogens (preferably -F or -Cl, more preferably -F) _1-2 Alkyl, -CF ₃ , -OCH ₃ Or -OCF ₃ And may be substituted with one or more substituents selected from the group consisting of
[0041]
"Aryl" refers to an optionally substituted aromatic group with at least one ring having a conjugated pi-electron system, including up to two conjugated or fused ring systems. Aryl includes carbocyclic aryl, heterocyclic aryl and biaryl groups. Preferably, the aryl is a 5- or 6-membered ring, more preferably benzyl. The aryl substituent is -C _1-4 Alkyl, -C _1-4 Alkoxy, halogen (preferably -F or -Cl), -OH, -CN, -SH, -NH ₂ , -NO ₂ -C substituted with 1 to 5 halogens (preferably -F or -Cl, more preferably -F) _1-2 Alkyl, -CF ₃ Or -OCF ₃ Selected from the group consisting of:
[0042]
A labeled derivative shows a change in the group with a detectable label. Examples of detectable labels include fluorescent, enzyme, and radioactive labels. Preferred radioactive labels are ¹²⁵ I. The label should be selected and located such that it does not substantially alter the activity of the MCH antagonist at the MCH receptor. The effect of a particular label on MCH antagonist activity can be determined using an assay that measures MCH activity.
[0043]
In a preferred embodiment, the optionally modified peptide is a truncated form of structure I, II or III, corresponding to structure IV, V or VI:
[0044]
Embedded image

[0045]
Embedded image

[0046]
Embedded image

[Wherein the various groups and preferred groups are as described above].
[0047]
In a further embodiment, the peptide has a sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 11, 12, 13, 14, 16, 18, 19, 20, 21, 25, 27, 29, 30, 32 and 33. Or a labeled derivative of the peptide, or a pharmaceutically acceptable salt of the peptide or the labeled derivative. Preferred peptides have a lower IC ₅₀ MCH antagonists that have been shown to have values. Examples of preferred MCH antagonists are provided by SEQ ID NOs: 11, 13, 14, 16, 20, 27, 30, and 33.
[0048]
MCH antagonists can be produced using techniques well known in the art. For example, the polypeptide region of the MCH antagonist can be synthesized chemically or biochemically and, if desired, modified to yield a block N-terminus and / or a block C-terminus. Techniques for chemical synthesis of polypeptides are well known in the art. (See, for example, Vincent, Peptide and Protein Drug Delivery, New York, NY, Dekker, 1990.) Examples of techniques for biochemical synthesis, including the introduction of nucleic acids into cells and the expression of nucleic acids, are described in Ausubel. , Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley, 1987-1998, and Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor, Vol.
[0049]
(Screening for MCH antagonist)
Screening for MCH antagonists is readily performed using recombinantly expressed MCH receptors. The advantage of using a recombinantly expressed MCH receptor is that it can be expressed in defined cell lines so that responses to MCH receptor active compounds can be more easily distinguished from responses to other receptors. including. For example, an expression vector can be used to introduce the MCH receptor into a cell line such as HEK 293, COS 7, and CHO, in which case the same cell line without the expression vector can be used as a control.
[0050]
Screening for MCH antagonists is facilitated through the use of MCH agonists in the assay. Use of an MCH agent in a screening assay provides MCH receptor activity. The effect of a test compound on such activity can be measured, for example, to assess the ability of the compound to inhibit MCH receptor activity.
[0051]
MCH receptor activity can be measured using various techniques, such as detecting changes in the intracellular conformation of the MCH receptor, Gi or Gq activity and / or changes in intracellular messengers. Gi activity is measured in melanophore assays, assays measuring cAMP production, assays measuring inhibition of cAMP accumulation, and ³⁵ It can be measured using techniques well known in the art, such as an assay for measuring S-GTP binding. cAMP can be measured using various techniques, such as radioimmunoassay, and indirectly by a cAMP-responsive gene reporter protein.
[0052]
Gq activity is determined by intracellular Ca ²⁺ Can be measured by using a technique such as measuring. Ca ²⁺ Examples of techniques well known in the art that can be used to measure the use of dyes such as Fura-2 and Ca such as aequorin ²⁺ -Use of a bioluminescent sensitive reporter protein. One example of a cell line that uses aequorin to measure G protein activity is HEK293 / aeq17. (Button et al., 1993, Cell Calcium 14, 663-671, and Feighner et al., 1999, Science 284, 2184-2188, both of which are incorporated herein by reference.)
(Use of MCH antagonist)
MCH antagonists can be used in methods to achieve beneficial effects in subjects and in research. The beneficial effects of MCH antagonists include one or more of the following: weight loss, loss of appetite, weight maintenance, treatment of cancer (eg, colon or breast cancer), relief of pain, reduction of stress and / or Or treatment of sexual dysfunction.
[0053]
Promoting weight maintenance or weight loss is particularly useful for overweight and obese patients. Excess weight is a contributing factor to various diseases including hypertension, hyperlipidemia, cardiovascular disease, gallstones, osteoarthritis and certain forms of cancer. Producing weight loss can be used, for example, to reduce the likelihood of such a disease and as part of treating such a disease.
[0054]
An overweight patient has a weight above the upper end of the "normal" weight range or about 10% or more, 20% or more, 30% or more, or 50% or more above the body mass index ("BMI"). Includes patients with. "Normal" weight ranges are well known in the art and take into account factors such as the age, height and size of the patient.
[0055]
BMI measures the height / weight ratio. It is determined by calculating the weight in kilograms divided by the height in meters squared. The "normal" range for BMI is 19-22.
[0056]
(Administration)
MCH antagonists can be formulated and administered to a subject using the guidance provided herein along with procedures well known in the art. Preferred routes of administration ensure that an effective amount of the compound reaches the target. In general, guidelines for drug administration can be found, for example, in Remington's Pharmaceutical Sciences 18th Edition, Gennaro Edit, Mack Publishing, 1990, and Modern Pharmaceutics 2nd Edition, Banker and Rhodes, Rh., Both incorporated herein by reference. Dekker, Inc. , 1990.
[0057]
MCH antagonists can be prepared as acidic or basic salts. Pharmaceutically acceptable salts (in the form of water-soluble or oil-soluble or dispersible products) include conventional non-toxic salts or quaternary ammonium salts formed, for example, from inorganic or organic acids or bases. Examples of such salts are acetate, adipate, alginate, aspartate, benzoate, benzenesulfonate, bisulfate, butyrate, citrate, camphorate, camphorsulfonate , Cyclopentanepropionate, digluconate, dodecyl sulfate, ethanesulfonate, fumarate, glucoheptanate, glycerophosphate, hemisulfate, heptanoate, hexanoate, hydrochloride, bromide Hydrochloride, hydroiodide, 2-hydroxyethanesulfonate, lactate, maleate, methanesulfonate, 2-naphthalenesulfonate, nicotinate, oxalate, pamoate, pectin Acid salt, persulfate, 3-phenylpropionate, picrate, pivalate, propionate, succinate, tartrate, thiocyanate, Acid addition salts such as silates and undecanoates; and basic salts such as ammonium salts; alkali metal salts such as sodium and potassium salts; alkaline earth metal salts such as calcium and magnesium salts; organic bases such as dicyclohexylamine salts. And N-methyl-D-glucamine, and salts with amino acids such as arginine and lysine.
[0058]
MCH antagonists can be administered using a variety of routes including oral, nasal, injection, transdermal and transmucosal. The active ingredient, administered orally as a suspension, can be prepared according to techniques well known in the art of pharmaceutical formulation, including microcrystalline cellulose for providing bulk, alginic acid or sodium alginate as suspending agent, It may contain methylcellulose as a thickener, and sweeteners / flavors. As immediate release tablets, these compositions comprise microcrystalline cellulose, dicalcium phosphate, starch, magnesium stearate and lactose and / or other excipients, binders, bulking agents, disintegrants, diluents and It may contain a lubricant.
[0059]
MCH antagonists can also be administered using the intravenous route (bolus and infusion), the intraperitoneal route, the subcutaneous route, the local route with or without closure, or the intramuscular route. When administered by injection, a suitable non-toxic parenterally-acceptable diluent or solvent, such as Ringer's solution or isotonic sodium chloride solution, or a sterile, non-irritating non-volatile, including synthetic mono- or diglycerides Injectable solutions or suspensions can be formulated using suitable dispersing or wetting agents and suspending agents, such as fatty oils and fatty acids, including oleic acid.
[0060]
A suitable dosing program preferably includes the type of subject to be administered; the age, weight, sex and medical condition of the subject; the route of administration; the renal and hepatic function of the subject; the desired effect; It is determined taking into account factors well known in the art, including:
[0061]
Exactly achieving the optimal concentration of drug within the range that yields efficacy without toxicity requires a dosing program based on the kinetics of drug availability to the target site. This involves taking into account the distribution, equilibrium and excretion of the drug. The daily dose for a subject is expected to be from 0.01 mg to 1,000 mg / subject / day.
[0062]
The MCH antagonist can be provided as a kit. Such a kit typically contains the active compound in a dosage form for administration. The dosage form contains a sufficient amount of the active compound to produce a beneficial effect when administered to the subject at regular intervals, such as one to six times per day, for a period of one or more days. I do. Preferably, the kit includes directions for using the dosage form for weight loss (eg, to treat obesity) or reducing stress and instructions indicating the amount of the dosage form to be taken over a defined period of time.
[0063]
(Example)
Examples are provided below to further illustrate different features of the present invention. These examples also illustrate useful methods for practicing the present invention. These examples do not limit the claimed invention.
Embodiment 1
[0064]
Synthesis of MCH antagonist
One example of a procedure for producing an MCH antagonist is described below. Other procedures for producing and modifying peptides are well known in the art.
[0065]
Extension of the peptidyl chain on 4- (2 ', 4'-dimethoxyphenyl-Fmoc-aminomethyl) -phenoxy resin and acetylation of the N-terminal amino group of the peptide were performed on a 431A ABI peptide synthesizer. For coupling of hydroxybenzotriazole esters of amino acids in N-methylpyrrolidone (NMP), the protocol provided by the manufacturer was applied. The fluorenylmethyloxycarbonyl (Fmoc) group is used as a semi-permanent α-amino protecting group, while the side chain protecting groups are tert-butyl for aspartic acid and tyrosine and 2,2,4,6, for arginine. Trityl was used for 7-pentamethyldihydrobenzofuran-5-sulfonyl (Pbf) and cysteine.
[0066]
The peptide was cleaved from the resin with TFA containing 5% anisole. After 2 hours at room temperature, the resin was filtered, washed with TFA, and the combined filtrate was evaporated to dryness in vacuo. The residue was triturated with ether, the precipitate formed was filtered off, washed with ether and dried.
[0067]
The crude peptide was dissolved in 5% aqueous acetic acid and the pH of the solution was adjusted to about 8.2 with dilute ammonium hydroxide. While stirring the reaction mixture vigorously, 0.05% potassium ferricyanide (K ₃ Fe (CN) ₆ A) The aqueous solution was added dropwise. After another 20 minutes, about 1 ml of acetic acid was added to terminate the oxidation, and the reaction mixture was freeze-dried.
[0068]
Crude lyophilized peptides were analyzed by analytical reverse phase high pressure liquid chromatography (RP HPLC) on a C18 Vydac column connected to a Waters 600E system equipped with an automatic Wisp 712 injector and a 991 Photodiode Array detector. A standard gradient system of 0% to 100% buffer B over 30 minutes was used for the analysis: buffer A was 0.1% aqueous trifluoroacetic acid and buffer B was 0.1% trifluoroacetic acid in acetonitrile. there were. HPLC profiles were recorded at 210 nm and 280 nm. Preparative separations were performed on a Waters Delta Prep 4000 system equipped with a semi-preparative C18 RP Waters column. The water and acetonitrile solvent system described above was used for the separation in a gradient of 20% to 80% buffer B over 60 minutes. Chromatographically homogeneous compounds were analyzed by electrospray mass spectrometry.
Embodiment 2
[0069]
Aequorin bioluminescence functional assay
Aequorin bioluminescence assay can be used to measure the activity of G protein-coupled receptors that couple through the Gα protein subunit family consisting of Gq and G11. Such coupling leads to activation of phospholipase C, mobilization of intracellular calcium and activation of protein kinase C.
[0070]
Measurement of rat MCH-1R and human MCH-2R receptor activity was performed using stable cell lines expressing these receptors using the aequorin-expressing stable reporter cell line 293-AEQ17 (Button et al., Cell Calcium 14: 663). -671, 1993). Apo-aequorin in the cells was added to ECB buffer (NaCl 140 mM, KCl 20 mM, HEPES-NaOH [pH = 7.4] 20 mM, glucose 5 mM, MgCl 2 ₂ 1 mM, CaCl ₂ Coelenterazine (10 μM) was loaded for 1 hour under reducing conditions (reduced glutathione 300 μM) in 1 mM, bovine serum albumin 0.1 mg / ml).
[0071]
The cells were harvested, washed once in ECB buffer and resuspended at 500,000 cells / ml. Then 100 μl of cell suspension (5 × 10 ⁴ (Corresponding to cells) were injected into test plates containing MCH or the test compound, and the integrated luminescence was recorded in 0.5 second increments over 30 seconds. Next, 20 μL of lysis buffer (0.1% Triton X-100 final concentration) was injected and the integrated luminescence was recorded in 0.5 second increments over 10 seconds. The "fractionated response" value for each well was calculated by considering the ratio of the cumulative response to the initial challenge to the total cumulative luminescence, including the Triton X-100 lysis response.
Embodiment 3
[0072]
Binding assay
Binding of human MCH-1R or human MCH-2R to membranes prepared from cells stably expressing the MCH-1R or MCH-2R receptor [ ¹²⁵ I] -human MCH (Phe ^Thirteen , Tyr ¹⁹ Assayed by measuring the ability of the compound to inhibit the binding of the compound. The human MCH (Phe ^Thirteen , Tyr ¹⁹ Replacement) ¹⁹ At Tyr ¹²⁵ I was radiolabeled to a specific activity of ２０００2000 Ci / mmol (NEN Life Science Products, Boston, Mass.).
[0073]
Cell membranes were prepared on ice. Each T-75 flask was washed twice with 10 ml of Enzyme-free Cell Separation Buffer (Specialty Media, Lavallette, NJ) and incubated at room temperature for 10 minutes to give a cell monolayer in an additional 10 ml of Enzyme-Free Cell Separation Buffer. Was isolated. The separated cells were centrifuged (500 × g, 4 ° C. for 10 minutes), and placed in 5 ml of a homogenization buffer (Tris-HCl 10 mM, pH 7.4, Pefabloc 0.01 mM, phosphoramidone 10 μM, bacitracin 40 μg / ml). Resuspended and then homogenized using a glass homogenizer (10 to 15 strokes). The homogenate was centrifuged for 10 minutes (1,000 × g at 4 ° C.). Next, the resulting supernatant was centrifuged at 38,700 × g at 4 ° C. for 15 minutes. The pelleted membrane was resuspended (passed through a 25 gauge needle 5 times), snap frozen in liquid nitrogen and stored at -80 ° C until use.
[0074]
Binding was performed in a 96-well filter assay or scintillation proximity assay (SPA) based format using cell membranes from stable CHO or HEK-293 cell lines expressing MCH-1R or MCH-2R. For the filter assay, reactions were performed at 20 ° C. for 1 hour in a total volume of 0.2 ml containing: 0.05 ml membrane suspension (（3 μg protein), [ ¹²⁵ I] -human MCH (Phe ^Thirteen , Tyr ¹⁹ Displacement; 30 pM) 0.02 ml, competitor 0.01 ml and binding buffer (Tris-HCl 50 mM, pH 7.4, MgCl 2 ₂ 10 mM, EDTA 2 mM, bacitracin 200 μg / ml, phosphoramidone 1 μM) 0.12 ml.
[0075]
Bound radioligand was separated by rapid vacuum filtration (Packard Filtermate 96-well cell harvester) through GF / C filters pretreated with 1% polyethyleneimine for 1 hour. After applying the membrane suspension to the filter, the filter was washed with ice-cold Tris-HCl 50 mM, pH 7.4, MgCl 2 ₂ The cells were washed three times with 3 ml each of 10 mM, 2 mM EDTA, and 0.04% Tween 20, and the bound radioactivity on the filters was quantified by scintillation counting (TopCount device). Specific binding (> 80% of total binding) is defined as the difference between total binding and non-specific binding performed in the presence of 100 nM unlabeled human MCH.
[0076]
For the SPA-based assay, WGA-PVT beads (NEN Life Sciences Products) were resuspended in Dulbecco's PBS containing calcium and magnesium (500 mg beads in 4 ml PBS). For each 96-well assay plate, 0.18 ml of beads was combined with 0.2 ml of MCH receptor CHO cell membrane (〜0.2-4 mg protein) and SPA assay buffer (Tris-HCl 50 mM, pH 7.4, MgCl 2 ₂ MCH receptor was pre-coated by mixing with 1.5 ml of 10 mM, 2 mM EDTA, 0.1% BSA, 12% glycerol. The suspension was mixed gently for 20 minutes and 12.3 ml of assay buffer and protease inhibitors were added (final concentrations given): leupeptin 2 μg / ml, phosphoramidone 10 μM, bacitracin 40 μg / ml, aprotinin 5 μg / Ml, Pefabloc 0.1 mM.
[0077]
The coated beads were kept on ice until use. For each well, 0.145 ml of beads was added to an Optiplate assay plate (Packard 600005190), then 0.002 ml to 0.004 ml of competitor and [ ¹²⁵ I] -human MCH (Phe ^Thirteen , Tyr ¹⁹ (Substitution; 30 pM) 0.05 ml was added. The coupling reaction was allowed to proceed at room temperature for 3 hours. Quantification was performed by scintillation counting (TopCount instrument).
Embodiment 4
[0078]
Antagonist assay
The ability of the compounds to act as MCH antagonists was evaluated using the aequorin-expressing stable reporter cell line 293-AEQ17, which expresses rat MCH-1R. Cells were grown in TMEM flasks in DMEM (high glucose) supplemented with 10% FBS (Hyclone), G418 500 μg / ml, hygromycin 200 μg / ml and HEPES 25 mM.
[0079]
The assay itself involved loading coelenterazine cp (Molecular Probes, C-14260) into apoaequorin and was performed as follows:
1. Wash the confluent T75 flask once with 12 ml Hams F12 medium + 300 μM glutathione + 1% FBS.
2. The cells are loaded with 8 ml of Hams F12 + 1% FBS + 300 μM glutathione + 10 μM coelenterazine, and the cells are incubated at 37 ° C. for 1 hour.
3. The T75 flask was charged with ECB (NaCl 140 mM, KCl 20 mM, HEPES 20 mM, glucose 5 mM, MgCl 2 ₂ 1 mM, CaCl ₂ Wash with 6 ml of 1 mM, BSA 0.1 mg / ml pH 7.3-7.4).
4. Add 6 ml of ECB to the flask, separate with a rubber tip scraper, centrifuge at 2500 rpm for 5 minutes and resuspend the cell pellet in 5 ml of ECB. Count cells, 5 × 10 ⁵ / Ml.
EC on rat MCH-1R using a Luminoscan RT luminometer by injecting 50,000 cells / 0.1 ml into a 96-well plate containing 0.1 ml of 5.2 × ligand concentration. ₅₀ Is measured.
6. IC in binding assays ₅₀ The antagonist activity of compounds exhibiting <1000 nM was determined by preincubating 50,000 / 0.1 ml packed cells with compounds for 10 minutes followed by 2XEC ₅₀ The concentration is measured by injecting 0.1 ml of MCH and initiating the reaction.
Embodiment 5
[0080]
MCH activity
Table 1 shows the activity of various test compounds on MCH-1R and MCH-2R. Binding and antagonist activity at MCH-1R and MCH-2R were measured as described in Examples 2 and 3. Antagonist IC ₅₀ Was measured as described in Example 4. K _b Is described in Trends in Pharmacol. Sci. 14: 237-239, 1993.
[0081]
The structures of compounds 2 to 36 are shown in Table 1 by modifying the structure at the top of Table 1 as indicated in the table. Human MCH has the following structure (" ^* "Indicates cyclization (SS)):
[0082]
Embedded image

[0083]
[Table 1]

[0084]
Other embodiments are within the claims of the present invention. Although several embodiments have been shown and described, various modifications can be made without departing from the spirit and scope of the invention.

Claims

次の構造：

［式中、Ｘ^１は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ^２は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ^３は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ^４は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸、グルタミン酸若しくはノルロイシン、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ^５は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ^６は、存在する場合は、アルギニン、アラニン、ロイシン、グリシン、リシン、プロリン、アスパラギン、セリン、ヒスチジン、ニトロアルギニン、ホモアルギニン、シトルリン、ホモシトルリン、ノルロイシン、Ｄ−アルギニン、デス−アミノ−アルギニン、４−グアニジノ酪酸、３−グアニジノプロピオン酸、グアニジノ酢酸若しくは３−グアニジノプロピオン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ^７は、システイン、ホモシステイン、ペニシラミン若しくはＤ−システイン、又はその誘導体であり；
Ｘ^８は、メチオニン、ノルロイシン、ロイシン、イソロイシン、バリン、メチオニンスルホキシド、γ−アミノ酪酸若しくはメチオニンスルホン、又はその誘導体であり；
Ｘ^９は、ロイシン、イソロイシン、バリン、アラニン、メチオニン、５−アミノペンタン酸、Ｄ−ノルロイシン、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸若しくはβ−アラニン、又はその誘導体であり；
Ｘ^１０は、グリシン、アラニン、ロイシン、ノルロイシン、シクロヘキシルアラニン、５−アミノペンタン酸、アスパラギン、セリン、サルコシン、イソ酪酸、Ｄ−ノルロイシン、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸若しくはβ−アラニン、又はその誘導体であり；
Ｘ^１１は、アルギニン、リシン、シトルリン、ヒスチジン若しくはニトロアルギニン、又はその誘導体であり；
Ｘ^１２は、バリン、ロイシン、イソロイシン、アラニン若しくはメチオニン、又はその誘導体であり；
Ｘ^１３は、フェニルアラニン、チロシン、Ｄ−（ｐ−ベンゾイルフェニルアラニン）、トリプトファン、（１’）−及び（２’）−ナフチルアラニン、シクロヘキシルアラニン、若しくは各々の置換基がＯ−アルキル、アルキル、ＯＨ、ＮＯ_２、ＮＨ_２、Ｆ、Ｉ及びＢｒから成る群より独立して選択される一及び多置換フェニルアラニン、又はその誘導体であり；
Ｘ^１４は、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸、β−アラニン又はシス−４−アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸であり；
Ｘ^１５は、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸、β−アラニン又はシス−４−アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸であり；
Ｘ^１６は、システイン、ホモシステイン若しくはペニシラミン、又はその誘導体であり；
Ｘ^１７は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｚ^１は、存在する場合は、Ｎ−末端アミノ基に共有結合している、場合により存在する保護基であり；
Ｚ^２は、存在する場合は、Ｃ−末端カルボキシ基に共有結合している、場合により存在する保護基であり、
但し、下記：
Ｘ^９及びＸ^１０は、各々５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸、β−アラニン及びシス−４−アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸から成る群より独立して選択されること；及び
Ｘ^６は、５−グアニジノ吉草酸、Ｄ−アルギニン、４−グアニジノ酪酸、３−グアニジノプロピオン酸、グアニジノ酢酸又は３−グアニジノプロピオン酸であることのいずれか又は両方であることを条件とする］
を有する、場合により置換されたペプチド、又は前記ペプチドの標識誘導体、又は前記ペプチド若しくは前記標識誘導体の医薬適合性の塩。The following structure:

[Wherein, when X ¹ is present, alanine, valine, leucine, isoleucine, proline, tryptophan, phenylalanine, methionine, glycine, serine, threonine, tyrosine, cysteine, asparagine, glutamine, lysine, arginine, histidine, asparagine An optional amino acid which is an acid or glutamic acid, or a derivative thereof;
X ^2, if present, alanine, valine, leucine, isoleucine, proline, tryptophan, phenylalanine, methionine, glycine, serine, threonine, tyrosine, cysteine, asparagine, glutamine, lysine, arginine, histidine, aspartic acid or glutamic acid, Or an optionally present amino acid that is a derivative thereof;
X ^3, if present, alanine, valine, leucine, isoleucine, proline, tryptophan, phenylalanine, methionine, glycine, serine, threonine, tyrosine, cysteine, asparagine, glutamine, lysine, arginine, histidine, aspartic acid or glutamic acid, Or an optionally present amino acid that is a derivative thereof;
X ^4, if present, alanine, valine, leucine, isoleucine, proline, tryptophan, phenylalanine, methionine, glycine, serine, threonine, tyrosine, cysteine, asparagine, glutamine, lysine, arginine, histidine, aspartic acid, glutamic acid or An optionally present amino acid that is norleucine or a derivative thereof;
X ^5, when present, alanine, valine, leucine, isoleucine, proline, tryptophan, phenylalanine, methionine, glycine, serine, threonine, tyrosine, cysteine, asparagine, glutamine, lysine, arginine, histidine, aspartic acid or glutamic acid, Or an optionally present amino acid that is a derivative thereof;
X ^6, when present, arginine, alanine, leucine, glycine, lysine, proline, asparagine, serine, histidine, nitro arginine, homoarginine, citrulline, homocitrulline, norleucine, D- arginine, des - amino - arginine, An optionally present amino acid that is 4-guanidinobutyric acid, 3-guanidinopropionic acid, guanidinoacetic acid or 3-guanidinopropionic acid, or a derivative thereof;
X ⁷ is cysteine, homocysteine, penicillamine or D- cysteine, or a derivative thereof;
X ⁸ is methionine, norleucine, leucine, isoleucine, valine, methionine sulfoxide, .gamma.-aminobutyric acid or methionine sulfone, or a derivative thereof;
X ⁹ is leucine, isoleucine, valine, alanine, methionine, 5-amino pentanoic acid, D- norleucine, 5-amino valeric acid, .gamma.-aminobutyric acid or β- alanine, or a derivative thereof;
X ¹⁰ is glycine, alanine, leucine, norleucine, cyclohexylalanine, 5-amino pentanoic acid, asparagine, serine, sarcosine, isobutyric acid, D- norleucine, 5-amino valeric acid, .gamma.-aminobutyric acid or β- alanine, or Derivatives thereof;
X ¹¹ is arginine, lysine, citrulline, histidine or nitroarginine, or a derivative thereof;
X ¹² is valine, leucine, isoleucine, alanine or methionine, or a derivative thereof;
X ¹³ is phenylalanine, tyrosine, D- (p-benzoylphenylalanine), tryptophan, (1 ′)-and (2 ′)-naphthylalanine, cyclohexylalanine, or each of the substituents is O-alkyl, alkyl, OH, Mono- and polysubstituted phenylalanines independently selected from the group consisting of NO ₂ , NH ₂ , F, I and Br, or derivatives thereof;
X ¹⁴ is 5-amino valeric acid, .gamma.-aminobutyric acid, be β- alanine or cis-4-amino-1-cyclohexanecarboxylic acid;
X ¹⁵ is 5-aminovaleric acid, γ-aminobutyric acid, β-alanine or cis-4-amino-1-cyclohexanecarboxylic acid;
X ¹⁶ is cysteine, homocysteine or penicillamine, or a derivative thereof;
X ^17, if present, alanine, valine, leucine, isoleucine, proline, tryptophan, phenylalanine, methionine, glycine, serine, threonine, tyrosine, cysteine, asparagine, glutamine, lysine, arginine, histidine, aspartic acid or glutamic acid, Or an optionally present amino acid that is a derivative thereof;
Z ¹ is an optional protecting group, if present, covalently linked to the N-terminal amino group;
Z ^2, if present is covalently linked to the C- terminal carboxy group, an optionally present protecting group,
However, the following:
X ⁹ and X ¹⁰ are each independently selected from the group consisting of 5-aminovaleric acid, γ-aminobutyric acid, β-alanine and cis-4-amino-1-cyclohexanecarboxylic acid; and X ⁶ is , 5-guanidinovaleric acid, D-arginine, 4-guanidinobutyric acid, 3-guanidinopropionic acid, guanidinoacetic acid or 3-guanidinopropionic acid, or both.]
Or an optionally substituted peptide, or a labeled derivative of said peptide, or a pharmaceutically acceptable salt of said peptide or said labeled derivative.

前記Ｘ^６アミノ酸が存在し、及び下記：
Ｘ^６は、デス−アミノ−アルギニン又はＤ−アルギニンであること、及び
Ｘ^９及びＸ^１０は、各々５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸及びβ−アラニンから成る群より独立して選択されることのいずれか又は両方である、請求項１に記載のペプチド。The ^{X 6} amino acids are present, and the following:
X ⁶ is des-amino-arginine or D-arginine, and X ⁹ and X ¹⁰ are each independently selected from the group consisting of 5-aminovaleric acid, γ-aminobutyric acid, and β-alanine The peptide of claim 1, wherein the peptide is either or both.

Ｘ^１、Ｘ^２、Ｘ^３、Ｘ^４、Ｘ^５及びＸ^１７が存在しない、請求項２に記載のペプチド。 ^{^{^{^{X 1, X 2, X 3}}}} , X 4, X 5 and ^{X 17} is absent, a peptide of claim 2.

Ｘ^６はデス−アミノ−アルギニンである、請求項３に記載のペプチド。X ⁶ is des - amino - arginine peptide according to claim 3.

Ｘ^７は、システインであり；
Ｘ^８は、メチオニン又はノルロイシンであり；
Ｘ^９は、ロイシン、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸又はβ−アラニンであり；
Ｘ^１０は、グリシン、Ｄ−ノルロイシン、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸又はβ−アラニンであり；
Ｘ^１１は、アルギニンであり；
Ｘ^１２は、バリン又はアラニンであり；
Ｘ^１３は、チロシンであり；及び
Ｘ^１６は、システインである、請求項４に記載のペプチド。X ⁷ is cysteine;
X ⁸ is an methionine or norleucine;
X ⁹ is leucine, 5-amino valeric acid, be γ- aminobutyric acid or β- alanine;
X ¹⁰ is glycine, D- norleucine, be a 5-amino valeric acid, .gamma.-aminobutyric acid or β- alanine;
X ¹¹ is arginine;
X ¹² is valine or alanine;
5. The peptide of claim 4, wherein X ¹³ is tyrosine; and X ¹⁶ is cysteine.

Ｘ^１４及びＸ^１５は各々５−アミノ吉草酸である、請求項５に記載のペプチド。X ¹⁴ and ^{X 15} are each 5-aminovaleric acid, peptide of claim 5.

Ｘ^１４及びＸ^１５は各々γ−アミノ酪酸である、請求項５に記載のペプチド。The peptide according to claim 5, wherein X ¹⁴ and X ¹⁵ are each γ-aminobutyric acid.

Ｘ^１４及びＸ^１５は各々β−アラニンである、請求項５に記載のペプチド。The peptide according to claim 5, wherein X ¹⁴ and X ¹⁵ are each β-alanine.

Ｚ^１は−Ｃ（Ｏ）ＣＨ_３であり、及びＺ^２は−ＮＨ_２である、請求項５に記載のペプチド。Z ¹ is -C (O) CH _3, and ^{Z 2} is -NH _2, peptide of claim 5.

前記ペプチドが、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１６、配列番号２０、配列番号２７、配列番号３３又は医薬適合性のその塩である、請求項１に記載のペプチド。The peptide of claim 1, wherein the peptide is SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 33 or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

前記ペプチドが、配列番号１１、配列番号２７又は医薬適合性のその塩である、請求項１０に記載のペプチド。11. The peptide according to claim 10, wherein said peptide is SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 27 or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

次の構造：

［式中、Ｘ^１は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ^２は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ^３は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ^４は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸、グルタミン酸若しくはノルロイシン、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ^５は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ^６は、存在する場合は、アルギニン、アラニン、ロイシン、グリシン、リシン、プロリン、アスパラギン、セリン、ヒスチジン、ニトロアルギニン、ホモアルギニン、シトルリン、ホモシトルリン、ノルロイシン、Ｄ−アルギニン、デス−アミノ−アルギニン、４−グアニジノ酪酸、３−グアニジノプロピオン酸、グアニジノ酢酸若しくは３−グアニジノプロピオン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ^８は、メチオニン、ノルロイシン、ロイシン、イソロイシン、バリン、メチオニンスルホキシド、γ−アミノ酪酸若しくはメチオニンスルホン、又はその誘導体であり；
Ｘ^９は、ロイシン、イソロイシン、バリン、アラニン、メチオニン、５−アミノペンタン酸、Ｄ−ノルロイシン、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸若しくはβ−アラニン、又はその誘導体であり；
Ｘ^１０は、グリシン、アラニン、ロイシン、ノルロイシン、シクロヘキシルアラニン、５−アミノペンタン酸、アスパラギン、セリン、サルコシン、イソ酪酸、Ｄ−ノルロイシン、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸又はβ−アラニン、若しくはその誘導体であり；
Ｘ^１１は、アルギニン、リシン、シトルリン、ヒスチジン若しくはニトロアルギニン、又はその誘導体であり；
Ｘ^１２は、バリン、ロイシン、イソロイシン、アラニン若しくはメチオニン、又はその誘導体であり；
Ｘ^１３は、フェニルアラニン、チロシン、Ｄ−（ｐ−ベンゾイルフェニルアラニン）、トリプトファン、（１’）−及び（２’）−ナフチルアラニン、シクロヘキシルアラニン、若しくは各々の置換基がＯ−アルキル、アルキル、ＯＨ、ＮＯ_２、ＮＨ_２、Ｆ、Ｉ及びＢｒから成る群より独立して選択される一及び多置換フェニルアラニンであるか、又はその誘導体であり；
Ｘ^１４は、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸、β−アラニン又はシス−４−アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸であり；
Ｘ^１５は、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸、β−アラニン又はシス−４−アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸であり；
Ｘ^１８は、次の構造：

［式中、ｎは、１、２、３、４又は５である］
を有するα，ω−ジ−アミノ−カルボン酸であり；
Ｘ^１９は、存在する場合はω−カルボキシ−α−アミノ酸である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｚ^１は、存在する場合は、Ｎ−末端アミノ基に共有結合している、場合により存在する保護基であり；
但し、下記：
Ｘ^９及びＸ^１０は、各々５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸、β−アラニン及びシス−４−アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸から成る群より独立して選択されること；及び
Ｘ^６は、５−グアニジノ吉草酸、Ｄ−アルギニン、４−グアニジノ酪酸、３−グアニジノプロピオン酸、グアニジノ酢酸又は３−グアニジノプロピオン酸であること
のいずれか又は両方であることを条件とする］
を有する、場合により置換されたペプチド、又は前記ペプチドの標識誘導体、又は前記ペプチド若しくは前記標識誘導体の医薬適合性の塩。The following structure:

[Wherein, when X ¹ is present, alanine, valine, leucine, isoleucine, proline, tryptophan, phenylalanine, methionine, glycine, serine, threonine, tyrosine, cysteine, asparagine, glutamine, lysine, arginine, histidine, asparagine An optional amino acid which is an acid or glutamic acid, or a derivative thereof;
X ^2, if present, alanine, valine, leucine, isoleucine, proline, tryptophan, phenylalanine, methionine, glycine, serine, threonine, tyrosine, cysteine, asparagine, glutamine, lysine, arginine, histidine, aspartic acid or glutamic acid, Or an optionally present amino acid that is a derivative thereof;
X ^3, if present, alanine, valine, leucine, isoleucine, proline, tryptophan, phenylalanine, methionine, glycine, serine, threonine, tyrosine, cysteine, asparagine, glutamine, lysine, arginine, histidine, aspartic acid or glutamic acid, Or an optionally present amino acid that is a derivative thereof;
X ^4, if present, alanine, valine, leucine, isoleucine, proline, tryptophan, phenylalanine, methionine, glycine, serine, threonine, tyrosine, cysteine, asparagine, glutamine, lysine, arginine, histidine, aspartic acid, glutamic acid or An optionally present amino acid that is norleucine or a derivative thereof;
X ^5, when present, alanine, valine, leucine, isoleucine, proline, tryptophan, phenylalanine, methionine, glycine, serine, threonine, tyrosine, cysteine, asparagine, glutamine, lysine, arginine, histidine, aspartic acid or glutamic acid, Or an optionally present amino acid that is a derivative thereof;
X ^6, when present, arginine, alanine, leucine, glycine, lysine, proline, asparagine, serine, histidine, nitro arginine, homoarginine, citrulline, homocitrulline, norleucine, D- arginine, des - amino - arginine, An optionally present amino acid that is 4-guanidinobutyric acid, 3-guanidinopropionic acid, guanidinoacetic acid or 3-guanidinopropionic acid, or a derivative thereof;
X ⁸ is methionine, norleucine, leucine, isoleucine, valine, methionine sulfoxide, .gamma.-aminobutyric acid or methionine sulfone, or a derivative thereof;
X ⁹ is leucine, isoleucine, valine, alanine, methionine, 5-amino pentanoic acid, D- norleucine, 5-amino valeric acid, .gamma.-aminobutyric acid or β- alanine, or a derivative thereof;
X ¹⁰ is glycine, alanine, leucine, norleucine, cyclohexylalanine, 5-amino pentanoic acid, asparagine, serine, sarcosine, isobutyric acid, D- norleucine, 5-amino valeric acid, .gamma.-aminobutyric acid or β- alanine, or Derivatives thereof;
X ¹¹ is arginine, lysine, citrulline, histidine or nitroarginine, or a derivative thereof;
X ¹² is valine, leucine, isoleucine, alanine or methionine, or a derivative thereof;
X ¹³ is phenylalanine, tyrosine, D- (p-benzoylphenylalanine), tryptophan, (1 ′)-and (2 ′)-naphthylalanine, cyclohexylalanine, or each of the substituents is O-alkyl, alkyl, OH, A mono- and polysubstituted phenylalanine independently selected from the group consisting of NO ₂ , NH ₂ , F, I and Br, or a derivative thereof;
X ¹⁴ is 5-amino valeric acid, .gamma.-aminobutyric acid, be β- alanine or cis-4-amino-1-cyclohexanecarboxylic acid;
X ¹⁵ is 5-aminovaleric acid, γ-aminobutyric acid, β-alanine or cis-4-amino-1-cyclohexanecarboxylic acid;
X ¹⁸ has the following structure:

Wherein n is 1, 2, 3, 4 or 5.
Α, ω-di-amino-carboxylic acid having the formula:
X ¹⁹ when present is an amino acid optionally present is ω- carboxy -α- amino;
Z ¹ is an optional protecting group, if present, covalently linked to the N-terminal amino group;
However, the following:
X ⁹ and X ¹⁰ are each independently selected from the group consisting of 5-aminovaleric acid, γ-aminobutyric acid, β-alanine and cis-4-amino-1-cyclohexanecarboxylic acid; and X ⁶ is , 5-guanidinovaleric acid, D-arginine, 4-guanidinobutyric acid, 3-guanidinopropionic acid, guanidinoacetic acid or 3-guanidinopropionic acid, or both.]
Or an optionally substituted peptide, or a labeled derivative of said peptide, or a pharmaceutically acceptable salt of said peptide or said labeled derivative.

Ｘ^１、Ｘ^２、Ｘ^３、Ｘ^４及びＸ^５が存在しない、請求項１２に記載のペプチド。 ^{^{^{X 1, X 2, X 3}}} , X 4 and ^{X 5} is absent, a peptide of claim 12.

Ｘ^８は、メチオニン又はノルロイシンであり；
Ｘ^９は、ロイシン、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸又はβ−アラニンであり；
Ｘ^１０は、グリシン、Ｄ−ノルロイシン、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸又はβ−アラニンであり；
Ｘ^１１は、アルギニンであり；
Ｘ^１２は、バリン又はアラニンであり；
Ｘ^１３は、チロシンであり；
Ｘ^１９は、存在する場合は、アスパラギン酸、グルタミン酸又はアジピン酸であり；及び
Ｚ^１は、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ_３である、請求項１３に記載のペプチド。X ⁸ is an methionine or norleucine;
X ⁹ is leucine, 5-amino valeric acid, be γ- aminobutyric acid or β- alanine;
X ¹⁰ is glycine, D- norleucine, be a 5-amino valeric acid, .gamma.-aminobutyric acid or β- alanine;
X ¹¹ is arginine;
X ¹² is valine or alanine;
X ¹³ is tyrosine;
X ¹⁹ when present is an aspartic acid, glutamic acid or adipic acid; and ^{Z 1} are -C (O) CH _3, peptides of claim 13.

次の構造：

［式中、Ｘ^１は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ^２は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ^３は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ^４は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸、グルタミン酸若しくはノルロイシン、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ^５は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ^６は、存在する場合は、アルギニン、アラニン、ロイシン、グリシン、リシン、プロリン、アスパラギン、セリン、ヒスチジン、ニトロアルギニン、ホモアルギニン、シトルリン、ホモシトルリン、ノルロイシン、Ｄ−アルギニン、デス−アミノ−アルギニン、４−グアニジノ酪酸、３−グアニジノプロピオン酸、グアニジノ酢酸若しくは３−グアニジノプロピオン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ^７は、システイン、ホモシステイン、ペニシラミン若しくはＤ−システイン、又はその誘導体であり；
Ｘ^８は、メチオニン、ノルロイシン、ロイシン、イソロイシン、バリン、メチオニンスルホキシド、γ−アミノ酪酸若しくはメチオニンスルホン、又はその誘導体であり；
Ｘ^９は、ロイシン、イソロイシン、バリン、アラニン、メチオニン、５−アミノペンタン酸、Ｄ−ノルロイシン、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸若しくはβ−アラニン、又はその誘導体であり；
Ｘ^１０は、グリシン、アラニン、ロイシン、ノルロイシン、シクロヘキシルアラニン、５−アミノペンタン酸、アスパラギン、セリン、サルコシン、イソ酪酸、Ｄ−ノルロイシン、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸若しくはβ−アラニン、又はその誘導体であり；
Ｘ^１１は、アルギニン、リシン、シトルリン、ヒスチジン若しくはニトロアルギニン、又はその誘導体であり；
Ｘ^１２は、バリン、ロイシン、イソロイシン、アラニン若しくはメチオニン、又はその誘導体であり；
Ｘ^１３は、フェニルアラニン、チロシン、Ｄ−（ｐ−ベンゾイルフェニルアラニン）、トリプトファン、（１’）−及び（２’）−ナフチルアラニン、シクロヘキシルアラニン、若しくは各々の置換基がＯ−アルキル、アルキル、ＯＨ、ＮＯ_２、ＮＨ_２、Ｆ、Ｉ及びＢｒから成る群より独立して選択される一及び多置換フェニルアラニンであるか、又はその誘導体であり；
Ｘ^１４は、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸、β−アラニン又はシス−４−アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸であり；
Ｘ^１５は、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸、β−アラニン又はシス−４−アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸であり；
Ｘ^１６は、システイン、ホモシステイン若しくはペニシラミン、又はその誘導体であり；
Ｘ^１７は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｚ^１は、存在する場合は、Ｎ−末端アミノ基に共有結合している、場合により存在する保護基であり；
Ｚ^２は、存在する場合は、Ｃ−末端カルボキシ基に共有結合している、場合により存在する保護基であり、
但し、下記：
Ｘ^９及びＸ^１０は、各々５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸、β−アラニン及びシス−４−アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸から成る群より独立して選択されること；及び
Ｘ^６は、５−グアニジノ吉草酸、Ｄ−アルギニン、４−グアニジノ酪酸、３−グアニジノプロピオン酸、グアニジノ酢酸又は３−グアニジノプロピオン酸であることのいずれか又は両方が該当することを条件とする］
を有する、場合により置換されたペプチド、又は前記ペプチドの標識誘導体、又は前記ペプチド若しくは前記標識誘導体の医薬適合性の塩の有効量を被験対象に投与する段階を含む、前記被験対象においてＭＣＨ−１Ｒ活性を阻害する方法。The following structure:

[Wherein, when X ¹ is present, alanine, valine, leucine, isoleucine, proline, tryptophan, phenylalanine, methionine, glycine, serine, threonine, tyrosine, cysteine, asparagine, glutamine, lysine, arginine, histidine, asparagine An optional amino acid which is an acid or glutamic acid, or a derivative thereof;
X ^2, if present, alanine, valine, leucine, isoleucine, proline, tryptophan, phenylalanine, methionine, glycine, serine, threonine, tyrosine, cysteine, asparagine, glutamine, lysine, arginine, histidine, aspartic acid or glutamic acid, Or an optionally present amino acid that is a derivative thereof;
X ^3, if present, alanine, valine, leucine, isoleucine, proline, tryptophan, phenylalanine, methionine, glycine, serine, threonine, tyrosine, cysteine, asparagine, glutamine, lysine, arginine, histidine, aspartic acid or glutamic acid, Or an optionally present amino acid that is a derivative thereof;
X ^4, if present, alanine, valine, leucine, isoleucine, proline, tryptophan, phenylalanine, methionine, glycine, serine, threonine, tyrosine, cysteine, asparagine, glutamine, lysine, arginine, histidine, aspartic acid, glutamic acid or An optionally present amino acid that is norleucine or a derivative thereof;
X ^5, when present, alanine, valine, leucine, isoleucine, proline, tryptophan, phenylalanine, methionine, glycine, serine, threonine, tyrosine, cysteine, asparagine, glutamine, lysine, arginine, histidine, aspartic acid or glutamic acid, Or an optionally present amino acid that is a derivative thereof;
X ^6, when present, arginine, alanine, leucine, glycine, lysine, proline, asparagine, serine, histidine, nitro arginine, homoarginine, citrulline, homocitrulline, norleucine, D- arginine, des - amino - arginine, An optionally present amino acid that is 4-guanidinobutyric acid, 3-guanidinopropionic acid, guanidinoacetic acid or 3-guanidinopropionic acid, or a derivative thereof;
X ⁷ is cysteine, homocysteine, penicillamine or D- cysteine, or a derivative thereof;
X ⁸ is methionine, norleucine, leucine, isoleucine, valine, methionine sulfoxide, .gamma.-aminobutyric acid or methionine sulfone, or a derivative thereof;
X ⁹ is leucine, isoleucine, valine, alanine, methionine, 5-amino pentanoic acid, D- norleucine, 5-amino valeric acid, .gamma.-aminobutyric acid or β- alanine, or a derivative thereof;
X ¹⁰ is glycine, alanine, leucine, norleucine, cyclohexylalanine, 5-amino pentanoic acid, asparagine, serine, sarcosine, isobutyric acid, D- norleucine, 5-amino valeric acid, .gamma.-aminobutyric acid or β- alanine, or Derivatives thereof;
X ¹¹ is arginine, lysine, citrulline, histidine or nitroarginine, or a derivative thereof;
X ¹² is valine, leucine, isoleucine, alanine or methionine, or a derivative thereof;
X ¹³ is phenylalanine, tyrosine, D- (p-benzoylphenylalanine), tryptophan, (1 ′)-and (2 ′)-naphthylalanine, cyclohexylalanine, or each of the substituents is O-alkyl, alkyl, OH, A mono- and polysubstituted phenylalanine independently selected from the group consisting of NO ₂ , NH ₂ , F, I and Br, or a derivative thereof;
X ¹⁴ is 5-amino valeric acid, .gamma.-aminobutyric acid, be β- alanine or cis-4-amino-1-cyclohexanecarboxylic acid;
X ¹⁵ is 5-aminovaleric acid, γ-aminobutyric acid, β-alanine or cis-4-amino-1-cyclohexanecarboxylic acid;
X ¹⁶ is cysteine, homocysteine or penicillamine, or a derivative thereof;
X ^17, if present, alanine, valine, leucine, isoleucine, proline, tryptophan, phenylalanine, methionine, glycine, serine, threonine, tyrosine, cysteine, asparagine, glutamine, lysine, arginine, histidine, aspartic acid or glutamic acid, Or an optionally present amino acid that is a derivative thereof;
Z ¹ is an optional protecting group, if present, covalently linked to the N-terminal amino group;
Z ^2, if present is covalently linked to the C- terminal carboxy group, an optionally present protecting group,
However, the following:
X ⁹ and X ¹⁰ are each independently selected from the group consisting of 5-aminovaleric acid, γ-aminobutyric acid, β-alanine and cis-4-amino-1-cyclohexanecarboxylic acid; and X ⁶ is , 5-guanidinovaleric acid, D-arginine, 4-guanidinobutyric acid, 3-guanidinopropionic acid, guanidinoacetic acid or 3-guanidinopropionic acid, or both.]
Administering to the subject an effective amount of an optionally substituted peptide, or a labeled derivative of the peptide, or a pharmaceutically acceptable salt of the peptide or the labeled derivative, the MCH-1R in the subject. A method of inhibiting activity.

前記Ｘ^６アミノ酸が存在し、及び下記：
Ｘ^６は、デス−アミノ−アルギニン又はＤ−アルギニンであること、及び
Ｘ^９及びＸ^１０は、各々５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸及びβ−アラニンから成る群より独立して選択されることのいずれか又は両方が該当する、請求項１５に記載の方法。The ^{X 6} amino acids are present, and the following:
X ⁶ is des-amino-arginine or D-arginine, and X ⁹ and X ¹⁰ are each independently selected from the group consisting of 5-aminovaleric acid, γ-aminobutyric acid, and β-alanine 16. The method of claim 15, wherein either or both of the above are true.

Ｘ^１、Ｘ^２、Ｘ^３、Ｘ^４、Ｘ^５及びＸ^１７が存在しない、請求項１６に記載の方法。 ^{^{^{^{X 1, X 2, X 3}}}} , X 4, X 5 and ^{X 17} is absent, the method according to claim 16.

Ｘ^７は、システインであり；
Ｘ^８は、メチオニン又はノルロイシンであり；
Ｘ^９は、ロイシン、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸又はβ−アラニンであり；
Ｘ^１０は、グリシン、Ｄ−ノルロイシン、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸又はβ−アラニンであり；
Ｘ^１１は、アルギニンであり；
Ｘ^１２は、バリン又はアラニンであり；
Ｘ^１３は、チロシンであり；及び
Ｘ^１６は、システインである、請求項１７に記載の方法。X ⁷ is cysteine;
X ⁸ is an methionine or norleucine;
X ⁹ is leucine, 5-amino valeric acid, be γ- aminobutyric acid or β- alanine;
X ¹⁰ is glycine, D- norleucine, be a 5-amino valeric acid, .gamma.-aminobutyric acid or β- alanine;
X ¹¹ is arginine;
X ¹² is valine or alanine;
18. The method of claim 17, wherein X ¹³ is tyrosine; and X ¹⁶ is cysteine.

Ｘ^６はデス−アミノ−アルギニンである、請求項１８に記載の方法。X ⁶ is des - amino - is arginine, A method according to claim 18.

Ｘ^１４及びＸ^１５は各々５−アミノ吉草酸である、請求項１８に記載の方法。X ¹⁴ and ^{X 15} are each 5-amino-valerate A method according to claim 18.

Ｘ^１４及びＸ^１５は各々γ−アミノ酪酸である、請求項１８に記載の方法。X ¹⁴ and ^{X 15} are each γ- aminobutyric acid A method according to claim 18.

Ｘ^１４及びＸ^１５は各々β−アラニンである、請求項１８に記載の方法。X ¹⁴ and ^{X 15} are each β- alanine The method of claim 18.

Ｚ^１は−Ｃ（Ｏ）ＣＨ_３であり、及びＺ^２は−ＮＨ_２である、請求項１８に記載の方法。Z ¹ is -C (O) CH _3, and ^{Z 2} is -NH _2, The method of claim 18.

前記ペプチドが、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１６、配列番号２０、配列番号２７、配列番号３０、配列番号３３又は医薬適合性のその塩である、請求項１５に記載の方法。16. The peptide of claim 15, wherein the peptide is SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 33, or a pharmaceutically acceptable salt thereof. the method of.

前記ペプチドが、配列番号１１、配列番号２７又は医薬適合性のその塩である、請求項２１に記載の方法。22. The method of claim 21, wherein the peptide is SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 27, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

次の構造：

［式中、Ｘ^１は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ^２は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ^３は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ^４は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸、グルタミン酸若しくはノルロイシン、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ^５は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ^６は、存在する場合は、アルギニン、アラニン、ロイシン、グリシン、リシン、プロリン、アスパラギン、セリン、ヒスチジン、ニトロアルギニン、ホモアルギニン、シトルリン、ホモシトルリン、ノルロイシン、Ｄ−アルギニン、デス−アミノ−アルギニン、４−グアニジノ酪酸、３−グアニジノプロピオン酸、グアニジノ酢酸若しくは３−グアニジノプロピオン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｘ^７は、システイン、ホモシステイン、ペニシラミン若しくはＤ−システイン、又はその誘導体であり；
Ｘ^８は、メチオニン、ノルロイシン、ロイシン、イソロイシン、バリン、メチオニンスルホキシド、γ−アミノ酪酸若しくはメチオニンスルホン、又はその誘導体であり；
Ｘ^９は、ロイシン、イソロイシン、バリン、アラニン、メチオニン、５−アミノペンタン酸、Ｄ−ノルロイシン、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸若しくはβ−アラニン、又はその誘導体であり；
Ｘ^１０は、グリシン、アラニン、ロイシン、ノルロイシン、シクロヘキシルアラニン、５−アミノペンタン酸、アスパラギン、セリン、サルコシン、イソ酪酸、Ｄ−ノルロイシン、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸若しくはβ−アラニン、又はその誘導体であり；
Ｘ^１１は、アルギニン、リシン、シトルリン、ヒスチジン又はニトロアルギニン、若しくはその誘導体であり；
Ｘ^１２は、バリン、ロイシン、イソロイシン、アラニン若しくはメチオニン、又はその誘導体であり；
Ｘ^１３は、フェニルアラニン、チロシン、Ｄ−（ｐ−ベンゾイルフェニルアラニン）、トリプトファン、（１’）−及び（２’）−ナフチルアラニン、シクロヘキシルアラニン、若しくは各々の置換基がＯ−アルキル、アルキル、ＯＨ、ＮＯ_２、ＮＨ_２、Ｆ、Ｉ及びＢｒから成る群より独立して選択される一及び多置換フェニルアラニンであるか、又はその誘導体であり；
Ｘ^１４は、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸、β−アラニン又はシス−４−アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸であり；
Ｘ^１５は、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸、β−アラニン又はシス−４−アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸であり；
Ｘ^１６は、システイン、ホモシステイン若しくはペニシラミン、又はその誘導体であり；
Ｘ^１７は、存在する場合は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、トリプトファン、フェニルアラニン、メチオニン、グリシン、セリン、トレオニン、チロシン、システイン、アスパラギン、グルタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸若しくはグルタミン酸、又はその誘導体である、場合により存在するアミノ酸であり；
Ｚ^１は、存在する場合は、Ｎ−末端アミノ基に共有結合している、場合により存在する保護基であり；
Ｚ^２は、存在する場合は、Ｃ−末端カルボキシ基に共有結合している、場合により存在する保護基であり、
但し、下記：
Ｘ^９及びＸ^１０は、各々５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸、β−アラニン及びシス−４−アミノ−１−シクロヘキサンカルボン酸から成る群より独立して選択されること；及び
Ｘ^６は、５−グアニジノ吉草酸、Ｄ−アルギニン、４−グアニジノ酪酸、３−グアニジノプロピオン酸、グアニジノ酢酸又は３−グアニジノプロピオン酸であることのいずれか又は両方であることを条件とする］
を有する、場合により置換されたペプチド、又は前記ペプチドの標識誘導体、又は前記ペプチド若しくは前記標識誘導体の医薬適合性の塩の有効量を被験対象に投与する段階を含む、体重減少を達成する又は体重を維持するために前記被験対象を治療する方法。The following structure:

[Wherein, when X ¹ is present, alanine, valine, leucine, isoleucine, proline, tryptophan, phenylalanine, methionine, glycine, serine, threonine, tyrosine, cysteine, asparagine, glutamine, lysine, arginine, histidine, asparagine An optional amino acid which is an acid or glutamic acid, or a derivative thereof;
X ^2, if present, alanine, valine, leucine, isoleucine, proline, tryptophan, phenylalanine, methionine, glycine, serine, threonine, tyrosine, cysteine, asparagine, glutamine, lysine, arginine, histidine, aspartic acid or glutamic acid, Or an optionally present amino acid that is a derivative thereof;
X ^3, if present, alanine, valine, leucine, isoleucine, proline, tryptophan, phenylalanine, methionine, glycine, serine, threonine, tyrosine, cysteine, asparagine, glutamine, lysine, arginine, histidine, aspartic acid or glutamic acid, Or an optionally present amino acid that is a derivative thereof;
X ^4, if present, alanine, valine, leucine, isoleucine, proline, tryptophan, phenylalanine, methionine, glycine, serine, threonine, tyrosine, cysteine, asparagine, glutamine, lysine, arginine, histidine, aspartic acid, glutamic acid or An optionally present amino acid that is norleucine or a derivative thereof;
X ^5, when present, alanine, valine, leucine, isoleucine, proline, tryptophan, phenylalanine, methionine, glycine, serine, threonine, tyrosine, cysteine, asparagine, glutamine, lysine, arginine, histidine, aspartic acid or glutamic acid, Or an optionally present amino acid that is a derivative thereof;
X ^6, when present, arginine, alanine, leucine, glycine, lysine, proline, asparagine, serine, histidine, nitro arginine, homoarginine, citrulline, homocitrulline, norleucine, D- arginine, des - amino - arginine, An optionally present amino acid that is 4-guanidinobutyric acid, 3-guanidinopropionic acid, guanidinoacetic acid or 3-guanidinopropionic acid, or a derivative thereof;
X ⁷ is cysteine, homocysteine, penicillamine or D- cysteine, or a derivative thereof;
X ⁸ is methionine, norleucine, leucine, isoleucine, valine, methionine sulfoxide, .gamma.-aminobutyric acid or methionine sulfone, or a derivative thereof;
X ⁹ is leucine, isoleucine, valine, alanine, methionine, 5-amino pentanoic acid, D- norleucine, 5-amino valeric acid, .gamma.-aminobutyric acid or β- alanine, or a derivative thereof;
X ¹⁰ is glycine, alanine, leucine, norleucine, cyclohexylalanine, 5-amino pentanoic acid, asparagine, serine, sarcosine, isobutyric acid, D- norleucine, 5-amino valeric acid, .gamma.-aminobutyric acid or β- alanine, or Derivatives thereof;
X ¹¹ is arginine, lysine, citrulline, histidine or nitroarginine, or a derivative thereof;
X ¹² is valine, leucine, isoleucine, alanine or methionine, or a derivative thereof;
X ¹³ is phenylalanine, tyrosine, D- (p-benzoylphenylalanine), tryptophan, (1 ′)-and (2 ′)-naphthylalanine, cyclohexylalanine, or each of the substituents is O-alkyl, alkyl, OH, A mono- and polysubstituted phenylalanine independently selected from the group consisting of NO ₂ , NH ₂ , F, I and Br, or a derivative thereof;
X ¹⁴ is 5-amino valeric acid, .gamma.-aminobutyric acid, be β- alanine or cis-4-amino-1-cyclohexanecarboxylic acid;
X ¹⁵ is 5-aminovaleric acid, γ-aminobutyric acid, β-alanine or cis-4-amino-1-cyclohexanecarboxylic acid;
X ¹⁶ is cysteine, homocysteine or penicillamine, or a derivative thereof;
X ^17, if present, alanine, valine, leucine, isoleucine, proline, tryptophan, phenylalanine, methionine, glycine, serine, threonine, tyrosine, cysteine, asparagine, glutamine, lysine, arginine, histidine, aspartic acid or glutamic acid, Or an optionally present amino acid that is a derivative thereof;
Z ¹ is an optional protecting group, if present, covalently linked to the N-terminal amino group;
Z ^2, if present is covalently linked to the C- terminal carboxy group, an optionally present protecting group,
However, the following:
X ⁹ and X ¹⁰ are each independently selected from the group consisting of 5-aminovaleric acid, γ-aminobutyric acid, β-alanine and cis-4-amino-1-cyclohexanecarboxylic acid; and X ⁶ is , 5-guanidinovaleric acid, D-arginine, 4-guanidinobutyric acid, 3-guanidinopropionic acid, guanidinoacetic acid or 3-guanidinopropionic acid, or both.]
Administering to a subject an optionally substituted peptide, or a labeled derivative of the peptide, or a pharmaceutically acceptable salt of the peptide or the labeled derivative, to achieve weight loss or weight. A method of treating the subject to maintain

前記Ｘ^６アミノ酸が存在し、及び下記：
Ｘ^６は、デス−アミノ−アルギニン又はＤ−アルギニンであること、及び
Ｘ^９及びＸ^１０は、各々５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸及びβ−アラニンから成る群より独立して選択されることのいずれか又は両方である、請求項２６に記載の方法。The ^{X 6} amino acids are present, and the following:
X ⁶ is des-amino-arginine or D-arginine, and X ⁹ and X ¹⁰ are each independently selected from the group consisting of 5-aminovaleric acid, γ-aminobutyric acid, and β-alanine 27. The method of claim 26, wherein either or both of

Ｘ^１、Ｘ^２、Ｘ^３、Ｘ^４、Ｘ^５及びＸ^１７が存在しない、請求項２７に記載の方法。 ^{^{^{^{X 1, X 2, X 3}}}} , X 4, X 5 and ^{X 17} is absent, the method according to claim 27.

Ｘ^７は、システインであり；
Ｘ^８は、メチオニン又はノルロイシンであり；
Ｘ^９は、ロイシン、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸又はβ−アラニンであり；
Ｘ^１０は、グリシン、Ｄ−ノルロイシン、５−アミノ吉草酸、γ−アミノ酪酸又はβ−アラニンであり；
Ｘ^１１は、アルギニンであり；
Ｘ^１２は、バリン又はアラニンであり；
Ｘ^１３は、チロシンであり；及び
Ｘ^１６は、システインである、請求項２８に記載の方法。X ⁷ is cysteine;
X ⁸ is an methionine or norleucine;
X ⁹ is leucine, 5-amino valeric acid, be γ- aminobutyric acid or β- alanine;
X ¹⁰ is glycine, D- norleucine, be a 5-amino valeric acid, .gamma.-aminobutyric acid or β- alanine;
X ¹¹ is arginine;
X ¹² is valine or alanine;
29. The method of claim 28, wherein X ¹³ is tyrosine; and X ¹⁶ is cysteine.

Ｘ^６はデス−アミノ−アルギニンである、請求項２９に記載の方法。X ⁶ is des - amino - is arginine, A method according to claim 29.

Ｘ^１４及びＸ^１５は各々５−アミノ吉草酸である、請求項２９に記載の方法。X ¹⁴ and ^{X 15} are each 5-amino-valerate A method according to claim 29.

Ｘ^１４及びＸ^１５は各々γ−アミノ酪酸である、請求項２９に記載の方法。X ¹⁴ and ^{X 15} are each γ- aminobutyric acid A method according to claim 29.

Ｘ^１４及びＸ^１５は各々β−アラニンである、請求項２９に記載の方法。X ¹⁴ and ^{X 15} are each β- alanine The method of claim 29.

Ｚ^１は−Ｃ（Ｏ）ＣＨ_３であり、及びＺ^２は−ＮＨ_２である、請求項２９に記載の方法。Z ¹ is -C (O) CH _3, and ^{Z 2} is -NH _2, The method of claim 29.

前記ペプチドが、配列番号１１、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１６、配列番号２０、配列番号２７、配列番号３０、配列番号３３又は医薬適合性のその塩である、請求項２６に記載の方法。27. The peptide of claim 26, wherein the peptide is SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 33, or a pharmaceutically acceptable salt thereof. the method of.

前記ペプチドが、配列番号１１、配列番号２７又は医薬適合性のその塩である、請求項３５に記載の方法。36. The method of claim 35, wherein the peptide is SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 27, or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

前記方法が体重減少を引き起こす、請求項２９に記載の方法。30. The method of claim 29, wherein said method causes weight loss.

前記被験対象が肥満である、請求項２９に記載の方法。30. The method of claim 29, wherein said subject is obese.

請求項１２、１３又は１４のいずれかに記載の、場合により置換されたペプチドの有効量を被験対象に投与する段階を含む、前記被験対象においてＭＣＨ−１Ｒ活性を阻害する方法。15. A method of inhibiting MCH-1R activity in a subject, comprising administering to the subject an effective amount of the optionally substituted peptide according to any of claims 12, 13 or 14.

請求項１２、１３又は１４のいずれかに記載の、場合により置換されたペプチドの有効量を被験対象に投与する段階を含む、体重減少を達成する又は体重を維持するために前記被験対象を治療する方法。15. Treating the subject to achieve weight loss or maintain weight, comprising administering to the subject an effective amount of the optionally substituted peptide of any of claims 12, 13 or 14. how to.