JP2004529102A - 併用療法を用いて、腫瘍を治療する方法 - Google Patents
併用療法を用いて、腫瘍を治療する方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2004529102A JP2004529102A JP2002565602A JP2002565602A JP2004529102A JP 2004529102 A JP2004529102 A JP 2004529102A JP 2002565602 A JP2002565602 A JP 2002565602A JP 2002565602 A JP2002565602 A JP 2002565602A JP 2004529102 A JP2004529102 A JP 2004529102A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cells
- tumor
- cell
- dendritic
- subject
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Withdrawn
Links
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title claims abstract description 171
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 title description 8
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 claims abstract description 164
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 111
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 93
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 76
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 89
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 89
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 88
- 108010029697 CD40 Ligand Proteins 0.000 claims description 36
- 102100032937 CD40 ligand Human genes 0.000 claims description 36
- 102100020715 Fms-related tyrosine kinase 3 ligand protein Human genes 0.000 claims description 33
- 101710162577 Fms-related tyrosine kinase 3 ligand protein Proteins 0.000 claims description 30
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 claims description 19
- 102000003812 Interleukin-15 Human genes 0.000 claims description 18
- 108090000172 Interleukin-15 Proteins 0.000 claims description 18
- 239000000556 agonist Substances 0.000 claims description 18
- 230000004041 dendritic cell maturation Effects 0.000 claims description 18
- 230000005909 tumor killing Effects 0.000 claims description 14
- 239000003139 biocide Substances 0.000 claims description 11
- 239000005667 attractant Substances 0.000 claims description 8
- 230000031902 chemoattractant activity Effects 0.000 claims description 7
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 6
- 238000000315 cryotherapy Methods 0.000 claims description 3
- 101150056647 TNFRSF4 gene Proteins 0.000 claims 6
- 230000006041 cell recruitment Effects 0.000 claims 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 abstract description 35
- 230000035800 maturation Effects 0.000 abstract description 34
- 238000011282 treatment Methods 0.000 abstract description 16
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 abstract description 9
- 230000006023 anti-tumor response Effects 0.000 abstract description 5
- 239000002975 chemoattractant Substances 0.000 abstract description 5
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 abstract description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 91
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 40
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 32
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 29
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 24
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 24
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 23
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 21
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 20
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 20
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 20
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 20
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 19
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 19
- 239000000017 hydrogel Substances 0.000 description 19
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 19
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 18
- 239000003504 photosensitizing agent Substances 0.000 description 18
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 16
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 16
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 15
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 14
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 14
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 14
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 14
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 13
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 13
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 13
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 13
- 101100369992 Homo sapiens TNFSF10 gene Proteins 0.000 description 12
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 12
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 12
- 102000046283 TNF-Related Apoptosis-Inducing Ligand Human genes 0.000 description 12
- 108700012411 TNFSF10 Proteins 0.000 description 12
- 229940117681 interleukin-12 Drugs 0.000 description 12
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 12
- 230000001270 agonistic effect Effects 0.000 description 11
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 11
- -1 cysteine amino acid Chemical class 0.000 description 10
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 10
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 10
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 10
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 9
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 9
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 9
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 9
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 9
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 9
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 9
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 9
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 9
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 description 8
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 description 8
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 8
- 102100021592 Interleukin-7 Human genes 0.000 description 8
- 108010002586 Interleukin-7 Proteins 0.000 description 8
- 108010025832 RANK Ligand Proteins 0.000 description 8
- 102000014128 RANK Ligand Human genes 0.000 description 8
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 8
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 8
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 8
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 8
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 8
- 229940100994 interleukin-7 Drugs 0.000 description 8
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 8
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 8
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 7
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 7
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 7
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 102100026890 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 4 Human genes 0.000 description 7
- 102100022153 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Human genes 0.000 description 7
- 101710165473 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4 Proteins 0.000 description 7
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 7
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 7
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 7
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 7
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 7
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 7
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 7
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 7
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 7
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 7
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 7
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 description 6
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 6
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 6
- 108010042215 OX40 Ligand Proteins 0.000 description 6
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 description 6
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 6
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 6
- 229940028885 interleukin-4 Drugs 0.000 description 6
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 6
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 description 6
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 6
- 206010020843 Hyperthermia Diseases 0.000 description 5
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 5
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 5
- 102000000646 Interleukin-3 Human genes 0.000 description 5
- 108010002386 Interleukin-3 Proteins 0.000 description 5
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 5
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 5
- 208000006994 Precancerous Conditions Diseases 0.000 description 5
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 5
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 5
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 5
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 5
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 5
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 5
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 description 5
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 5
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 5
- 238000011124 ex vivo culture Methods 0.000 description 5
- 230000036031 hyperthermia Effects 0.000 description 5
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 5
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 5
- 230000002601 intratumoral effect Effects 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000002428 photodynamic therapy Methods 0.000 description 5
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 5
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 description 4
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 description 4
- 206010062016 Immunosuppression Diseases 0.000 description 4
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 4
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 4
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 4
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 4
- 102100020880 Kit ligand Human genes 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 4
- 101100335081 Mus musculus Flt3 gene Proteins 0.000 description 4
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 4
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 4
- 108010039445 Stem Cell Factor Proteins 0.000 description 4
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 4
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 4
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 4
- 238000011220 combination immunotherapy Methods 0.000 description 4
- 238000002681 cryosurgery Methods 0.000 description 4
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 4
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 4
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 4
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 4
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 4
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 4
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 4
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 4
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 4
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 229940100601 interleukin-6 Drugs 0.000 description 4
- OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N n-methyl-1-(2-naphthalen-1-ylsulfanylphenyl)methanamine Chemical compound CNCC1=CC=CC=C1SC1=CC=CC2=CC=CC=C12 OHDXDNUPVVYWOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000002568 pbsc Anatomy 0.000 description 4
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 4
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 4
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 4
- 238000005829 trimerization reaction Methods 0.000 description 4
- 102000002627 4-1BB Ligand Human genes 0.000 description 3
- 108010082808 4-1BB Ligand Proteins 0.000 description 3
- 102100022005 B-lymphocyte antigen CD20 Human genes 0.000 description 3
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 3
- 201000008808 Fibrosarcoma Diseases 0.000 description 3
- 101000897405 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD20 Proteins 0.000 description 3
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 3
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 3
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 3
- 108050001286 Somatostatin Receptor Proteins 0.000 description 3
- 102000011096 Somatostatin receptor Human genes 0.000 description 3
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 3
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 3
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 3
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 3
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 238000011340 continuous therapy Methods 0.000 description 3
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 3
- 108700014844 flt3 ligand Proteins 0.000 description 3
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 3
- 229940022353 herceptin Drugs 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 3
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 3
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 229960001972 panitumumab Drugs 0.000 description 3
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 3
- 229940109328 photofrin Drugs 0.000 description 3
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 3
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 3
- 230000007115 recruitment Effects 0.000 description 3
- 229960004641 rituximab Drugs 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 3
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 3
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 3
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 2
- NMWKYTGJWUAZPZ-WWHBDHEGSA-N (4S)-4-[[(4R,7S,10S,16S,19S,25S,28S,31R)-31-[[(2S)-2-[[(1R,6R,9S,12S,18S,21S,24S,27S,30S,33S,36S,39S,42R,47R,53S,56S,59S,62S,65S,68S,71S,76S,79S,85S)-47-[[(2S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-3-methylbutanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-4-yl)propanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-18-(4-aminobutyl)-27,68-bis(3-amino-3-oxopropyl)-36,71,76-tribenzyl-39-(3-carbamimidamidopropyl)-24-(2-carboxyethyl)-21,56-bis(carboxymethyl)-65,85-bis[(1R)-1-hydroxyethyl]-59-(hydroxymethyl)-62,79-bis(1H-imidazol-4-ylmethyl)-9-methyl-33-(2-methylpropyl)-8,11,17,20,23,26,29,32,35,38,41,48,54,57,60,63,66,69,72,74,77,80,83,86-tetracosaoxo-30-propan-2-yl-3,4,44,45-tetrathia-7,10,16,19,22,25,28,31,34,37,40,49,55,58,61,64,67,70,73,75,78,81,84,87-tetracosazatetracyclo[40.31.14.012,16.049,53]heptaoctacontane-6-carbonyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-7-(3-carbamimidamidopropyl)-25-(hydroxymethyl)-19-[(4-hydroxyphenyl)methyl]-28-(1H-imidazol-4-ylmethyl)-10-methyl-6,9,12,15,18,21,24,27,30-nonaoxo-16-propan-2-yl-1,2-dithia-5,8,11,14,17,20,23,26,29-nonazacyclodotriacontane-4-carbonyl]amino]-5-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-3-carboxy-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(1S)-1-carboxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-(1H-imidazol-4-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-5-oxopentanoic acid Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](Cc1c[nH]cn1)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CSSC[C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H]2CSSC[C@@H]3NC(=O)[C@H](Cc4ccccc4)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](Cc4c[nH]cn4)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H]4CCCN4C(=O)[C@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](Cc4c[nH]cn4)NC(=O)[C@H](Cc4ccccc4)NC3=O)[C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](Cc3ccccc3)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N3CCC[C@H]3C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](Cc2ccccc2)NC(=O)[C@H](Cc2c[nH]cn2)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(C)C)[C@@H](C)O)C(C)C)C(=O)N[C@@H](Cc2c[nH]cn2)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](Cc2ccc(O)cc2)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O NMWKYTGJWUAZPZ-WWHBDHEGSA-N 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 102100032367 C-C motif chemokine 5 Human genes 0.000 description 2
- 108010040471 CC Chemokines Proteins 0.000 description 2
- 102000001902 CC Chemokines Human genes 0.000 description 2
- 206010008263 Cervical dysplasia Diseases 0.000 description 2
- 108010055166 Chemokine CCL5 Proteins 0.000 description 2
- 102100030851 Cortistatin Human genes 0.000 description 2
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 description 2
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 description 2
- 102000009024 Epidermal Growth Factor Human genes 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 2
- 102000009465 Growth Factor Receptors Human genes 0.000 description 2
- 108010009202 Growth Factor Receptors Proteins 0.000 description 2
- 101000746373 Homo sapiens Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Proteins 0.000 description 2
- 101001012157 Homo sapiens Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 description 2
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 2
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- VQPPIMUZCZCOIL-GUBZILKMSA-N Leu-Gln-Ala Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O VQPPIMUZCZCOIL-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- 102000004083 Lymphotoxin-alpha Human genes 0.000 description 2
- 108090000542 Lymphotoxin-alpha Proteins 0.000 description 2
- 108090000362 Lymphotoxin-beta Proteins 0.000 description 2
- 102000003959 Lymphotoxin-beta Human genes 0.000 description 2
- 101000874159 Mus musculus Succinate dehydrogenase [ubiquinone] iron-sulfur subunit, mitochondrial Proteins 0.000 description 2
- 208000031481 Pathologic Constriction Diseases 0.000 description 2
- 206010060932 Postoperative adhesion Diseases 0.000 description 2
- 108010007127 Pulmonary Surfactant-Associated Protein D Proteins 0.000 description 2
- 102100027845 Pulmonary surfactant-associated protein D Human genes 0.000 description 2
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 description 2
- 208000006265 Renal cell carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 2
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 description 2
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 2
- 208000000453 Skin Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 102000005157 Somatostatin Human genes 0.000 description 2
- 108010056088 Somatostatin Proteins 0.000 description 2
- 102100021669 Stromal cell-derived factor 1 Human genes 0.000 description 2
- 101710088580 Stromal cell-derived factor 1 Proteins 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 2
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 description 2
- 108091005735 TGF-beta receptors Proteins 0.000 description 2
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 2
- 102000016715 Transforming Growth Factor beta Receptors Human genes 0.000 description 2
- 102400001320 Transforming growth factor alpha Human genes 0.000 description 2
- 101800004564 Transforming growth factor alpha Proteins 0.000 description 2
- 102100031988 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 6 Human genes 0.000 description 2
- 208000024248 Vascular System injury Diseases 0.000 description 2
- 208000012339 Vascular injury Diseases 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 238000009175 antibody therapy Methods 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 2
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 2
- 238000002617 apheresis Methods 0.000 description 2
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 2
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 230000011748 cell maturation Effects 0.000 description 2
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 2
- 208000007951 cervical intraepithelial neoplasia Diseases 0.000 description 2
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 230000003399 chemotactic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 108010005430 cortistatin Proteins 0.000 description 2
- 239000002577 cryoprotective agent Substances 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 229910001873 dinitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 230000008029 eradication Effects 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 2
- 150000004676 glycans Polymers 0.000 description 2
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 108010025306 histidylleucine Proteins 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 230000005865 ionizing radiation Effects 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000741 isoleucyl group Chemical group [H]N([H])C(C(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])[H])C(=O)O* 0.000 description 2
- 125000001909 leucine group Chemical group [H]N(*)C(C(*)=O)C([H])([H])C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N lipid A (E. coli) Chemical compound O1[C@H](CO)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCC)[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](OP(O)(O)=O)O1 GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical group 0.000 description 2
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 210000005170 neoplastic cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 238000006384 oligomerization reaction Methods 0.000 description 2
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 2
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- BBNQQADTFFCFGB-UHFFFAOYSA-N purpurin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C3=C(O)C(O)=CC(O)=C3C(=O)C2=C1 BBNQQADTFFCFGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920013730 reactive polymer Polymers 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 238000002271 resection Methods 0.000 description 2
- 108010038379 sargramostim Proteins 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 230000036262 stenosis Effects 0.000 description 2
- 208000037804 stenosis Diseases 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 2
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 2
- 210000005166 vasculature Anatomy 0.000 description 2
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 2
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NPJIOCBFOAHEDO-AVWFULIKSA-N (3s,6s,9s,12r,15s,18s)-9-(4-aminobutyl)-3-benzyl-15-[(4-hydroxyphenyl)methyl]-12-(1h-indol-3-ylmethyl)-1,18-dimethyl-6-propan-2-yl-1,4,7,10,13,16-hexazacyclooctadecane-2,5,8,11,14,17-hexone Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N(C)[C@@H](C)C(=O)N1)=O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 NPJIOCBFOAHEDO-AVWFULIKSA-N 0.000 description 1
- VVEJUSYNERNRME-XGFVQVCISA-N (4r,7s,10r,13s,16r,19s,22r,25s,28r,31s)-13,28-bis(4-aminobutyl)-25-(2-amino-2-oxoethyl)-31-[[2-[[(2s)-2-aminopropanoyl]amino]acetyl]amino]-19,22-dibenzyl-10-[(1r)-1-hydroxyethyl]-7-(hydroxymethyl)-16-(1h-indol-3-ylmethyl)-6,9,12,15,18,21,24,27,30-nonaoxo- Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N)C(O)=O)=O)[C@H](O)C)C1=CC=CC=C1 VVEJUSYNERNRME-XGFVQVCISA-N 0.000 description 1
- DEQANNDTNATYII-OULOTJBUSA-N (4r,7s,10s,13r,16s,19r)-10-(4-aminobutyl)-19-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-16-benzyl-n-[(2r,3r)-1,3-dihydroxybutan-2-yl]-7-[(1r)-1-hydroxyethyl]-13-(1h-indol-3-ylmethyl)-6,9,12,15,18-pentaoxo-1,2-dithia-5,8,11,14,17-pentazacycloicosane-4-carboxa Chemical compound C([C@@H](N)C(=O)N[C@H]1CSSC[C@H](NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC1=O)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C)C1=CC=CC=C1 DEQANNDTNATYII-OULOTJBUSA-N 0.000 description 1
- PUDHBTGHUJUUFI-SCTWWAJVSA-N (4r,7s,10s,13r,16s,19r)-10-(4-aminobutyl)-n-[(2s,3r)-1-amino-3-hydroxy-1-oxobutan-2-yl]-19-[[(2r)-2-amino-3-naphthalen-2-ylpropanoyl]amino]-16-[(4-hydroxyphenyl)methyl]-13-(1h-indol-3-ylmethyl)-6,9,12,15,18-pentaoxo-7-propan-2-yl-1,2-dithia-5,8,11,14,17-p Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N1)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=C2C=CC=CC2=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(N)=O)=O)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 PUDHBTGHUJUUFI-SCTWWAJVSA-N 0.000 description 1
- JNMPZUZCPFIJGJ-OCZUONHDSA-N (4r,7s,10s,13s,16r,19s,22s,25r)-25-amino-13-(4-aminobutyl)-7,19,22-tribenzyl-10-[(1r)-1-hydroxyethyl]-16-(1h-indol-3-ylmethyl)-6,9,12,15,18,21,24-heptaoxo-1,2-dithia-5,8,11,14,17,20,23-heptazacyclohexacosane-4-carboxamide Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N1)C(N)=O)=O)[C@H](O)C)C1=CC=CC=C1 JNMPZUZCPFIJGJ-OCZUONHDSA-N 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-OFKYTIFKSA-N 1-[(2r,4s,5r)-4-hydroxy-5-(tritiooxymethyl)oxolan-2-yl]-5-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO[3H])O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(C)=C1 IQFYYKKMVGJFEH-OFKYTIFKSA-N 0.000 description 1
- MOTVYDVWODTRDF-UHFFFAOYSA-N 3-[7,12,17-tris(2-carboxyethyl)-3,8,13,18-tetrakis(carboxymethyl)-21,22-dihydroporphyrin-2-yl]propanoic acid Chemical compound N1C(C=C2C(=C(CC(O)=O)C(=CC=3C(=C(CC(O)=O)C(=C4)N=3)CCC(O)=O)N2)CCC(O)=O)=C(CC(O)=O)C(CCC(O)=O)=C1C=C1C(CC(O)=O)=C(CCC(=O)O)C4=N1 MOTVYDVWODTRDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- YCRAFFCYWOUEOF-DLOVCJGASA-N Ala-Phe-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C)CC1=CC=CC=C1 YCRAFFCYWOUEOF-DLOVCJGASA-N 0.000 description 1
- HOVPGJUNRLMIOZ-CIUDSAMLSA-N Ala-Ser-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](C)N HOVPGJUNRLMIOZ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- KBBKCNHWCDJPGN-GUBZILKMSA-N Arg-Gln-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O KBBKCNHWCDJPGN-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- 208000032791 BCR-ABL1 positive chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 description 1
- 108010028885 BIM 23197 Proteins 0.000 description 1
- 108700016019 BIM 23268 Proteins 0.000 description 1
- 208000031729 Bacteremia Diseases 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 108010003118 Bacteriochlorophylls Proteins 0.000 description 1
- 208000018084 Bone neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000003174 Brain Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 102100023702 C-C motif chemokine 13 Human genes 0.000 description 1
- 101710112613 C-C motif chemokine 13 Proteins 0.000 description 1
- 102100023703 C-C motif chemokine 15 Human genes 0.000 description 1
- 102100021933 C-C motif chemokine 25 Human genes 0.000 description 1
- 102100032366 C-C motif chemokine 7 Human genes 0.000 description 1
- 101710155834 C-C motif chemokine 7 Proteins 0.000 description 1
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 238000011735 C3H mouse Methods 0.000 description 1
- UJKPHYRXOLRVJJ-MLSVHJFASA-N CC(O)C1=C(C)/C2=C/C3=N/C(=C\C4=C(CCC(O)=O)C(C)=C(N4)/C=C4\N=C(\C=C\1/N\2)C(C)=C4C(C)O)/C(CCC(O)=O)=C3C Chemical compound CC(O)C1=C(C)/C2=C/C3=N/C(=C\C4=C(CCC(O)=O)C(C)=C(N4)/C=C4\N=C(\C=C\1/N\2)C(C)=C4C(C)O)/C(CCC(O)=O)=C3C UJKPHYRXOLRVJJ-MLSVHJFASA-N 0.000 description 1
- 102000007499 CD27 Ligand Human genes 0.000 description 1
- 108010046080 CD27 Ligand Proteins 0.000 description 1
- 102000004634 CD30 Ligand Human genes 0.000 description 1
- 108010017987 CD30 Ligand Proteins 0.000 description 1
- 102100035793 CD83 antigen Human genes 0.000 description 1
- 206010006895 Cachexia Diseases 0.000 description 1
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 102000000844 Cell Surface Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010001857 Cell Surface Receptors Proteins 0.000 description 1
- 108010082161 Chemokine CCL19 Proteins 0.000 description 1
- 102000003805 Chemokine CCL19 Human genes 0.000 description 1
- 108010078239 Chemokine CX3CL1 Proteins 0.000 description 1
- 208000010833 Chronic myeloid leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 229930185483 Cortistatin Natural products 0.000 description 1
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100031107 Disintegrin and metalloproteinase domain-containing protein 11 Human genes 0.000 description 1
- 101710121366 Disintegrin and metalloproteinase domain-containing protein 11 Proteins 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 206010058314 Dysplasia Diseases 0.000 description 1
- 208000037487 Endotoxemia Diseases 0.000 description 1
- 108010092408 Eosinophil Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 102100023688 Eotaxin Human genes 0.000 description 1
- 101710139422 Eotaxin Proteins 0.000 description 1
- 206010015866 Extravasation Diseases 0.000 description 1
- 108010039471 Fas Ligand Protein Proteins 0.000 description 1
- 102000013818 Fractalkine Human genes 0.000 description 1
- LOJYQMFIIJVETK-WDSKDSINSA-N Gln-Gln Chemical compound NC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O LOJYQMFIIJVETK-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- KVXVVDFOZNYYKZ-DCAQKATOSA-N Gln-Gln-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O KVXVVDFOZNYYKZ-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- CLPQUWHBWXFJOX-BQBZGAKWSA-N Gln-Gly-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O CLPQUWHBWXFJOX-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- ITYRYNUZHPNCIK-GUBZILKMSA-N Glu-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O ITYRYNUZHPNCIK-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- 108010054017 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102100039622 Granulocyte colony-stimulating factor receptor Human genes 0.000 description 1
- 101150054472 HER2 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000002812 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010004889 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010088652 Histocompatibility Antigens Class I Proteins 0.000 description 1
- 102000008949 Histocompatibility Antigens Class I Human genes 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000978376 Homo sapiens C-C motif chemokine 15 Proteins 0.000 description 1
- 101000897486 Homo sapiens C-C motif chemokine 25 Proteins 0.000 description 1
- 101100059511 Homo sapiens CD40LG gene Proteins 0.000 description 1
- 101000946856 Homo sapiens CD83 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000851181 Homo sapiens Epidermal growth factor receptor Proteins 0.000 description 1
- 101000932480 Homo sapiens Fms-related tyrosine kinase 3 ligand Proteins 0.000 description 1
- 101001019455 Homo sapiens ICOS ligand Proteins 0.000 description 1
- 101001033279 Homo sapiens Interleukin-3 Proteins 0.000 description 1
- 101001043807 Homo sapiens Interleukin-7 Proteins 0.000 description 1
- 101000934338 Homo sapiens Myeloid cell surface antigen CD33 Proteins 0.000 description 1
- 101000829127 Homo sapiens Somatostatin receptor type 2 Proteins 0.000 description 1
- 101000829138 Homo sapiens Somatostatin receptor type 3 Proteins 0.000 description 1
- 101000829153 Homo sapiens Somatostatin receptor type 5 Proteins 0.000 description 1
- 101500024338 Homo sapiens Somatostatin-14 Proteins 0.000 description 1
- 101000830565 Homo sapiens Tumor necrosis factor ligand superfamily member 10 Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102100022297 Integrin alpha-X Human genes 0.000 description 1
- 108010014726 Interferon Type I Proteins 0.000 description 1
- 102000002227 Interferon Type I Human genes 0.000 description 1
- 102100026720 Interferon beta Human genes 0.000 description 1
- 108090000467 Interferon-beta Proteins 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 102000003815 Interleukin-11 Human genes 0.000 description 1
- 108090000177 Interleukin-11 Proteins 0.000 description 1
- 102000003816 Interleukin-13 Human genes 0.000 description 1
- 108090000176 Interleukin-13 Proteins 0.000 description 1
- 102000010787 Interleukin-4 Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010038486 Interleukin-4 Receptors Proteins 0.000 description 1
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 1
- 102100039897 Interleukin-5 Human genes 0.000 description 1
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 1
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 description 1
- 108010002335 Interleukin-9 Proteins 0.000 description 1
- 102000000585 Interleukin-9 Human genes 0.000 description 1
- 239000007760 Iscove's Modified Dulbecco's Medium Substances 0.000 description 1
- PMGDADKJMCOXHX-UHFFFAOYSA-N L-Arginyl-L-glutamin-acetat Natural products NC(=N)NCCCC(N)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(O)=O PMGDADKJMCOXHX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BOFAFKVZQUMTID-AVGNSLFASA-N Leu-Gln-His Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N BOFAFKVZQUMTID-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- 208000006552 Lewis Lung Carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229920005479 Lucite® Polymers 0.000 description 1
- 102100035304 Lymphotactin Human genes 0.000 description 1
- 102000043129 MHC class I family Human genes 0.000 description 1
- 108091054437 MHC class I family Proteins 0.000 description 1
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 description 1
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 description 1
- 108010046938 Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000007651 Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 101710125418 Major capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 102100039364 Metalloproteinase inhibitor 1 Human genes 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 101710151805 Mitochondrial intermediate peptidase 1 Proteins 0.000 description 1
- 102000008300 Mutant Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010021466 Mutant Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000033761 Myelogenous Chronic BCR-ABL Positive Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 102100025243 Myeloid cell surface antigen CD33 Human genes 0.000 description 1
- 125000000729 N-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 description 1
- 206010029098 Neoplasm skin Diseases 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 108010016076 Octreotide Proteins 0.000 description 1
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 229930012538 Paclitaxel Natural products 0.000 description 1
- XUSDDSLCRPUKLP-QXEWZRGKSA-N Pro-Asp-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 XUSDDSLCRPUKLP-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 102000002727 Protein Tyrosine Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108010038036 Receptor Activator of Nuclear Factor-kappa B Proteins 0.000 description 1
- 102000010498 Receptor Activator of Nuclear Factor-kappa B Human genes 0.000 description 1
- 102000004278 Receptor Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108090000873 Receptor Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000007660 Residual Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000000582 Retinoblastoma Diseases 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 1
- FUMGHWDRRFCKEP-CIUDSAMLSA-N Ser-Leu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O FUMGHWDRRFCKEP-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- QYSFWUIXDFJUDW-DCAQKATOSA-N Ser-Leu-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O QYSFWUIXDFJUDW-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- 102100029329 Somatostatin receptor type 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100023802 Somatostatin receptor type 2 Human genes 0.000 description 1
- 102100023803 Somatostatin receptor type 3 Human genes 0.000 description 1
- 102100023801 Somatostatin receptor type 4 Human genes 0.000 description 1
- 102100023806 Somatostatin receptor type 5 Human genes 0.000 description 1
- 102400000820 Somatostatin-14 Human genes 0.000 description 1
- 230000033540 T cell apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 108010016283 TCF Transcription Factors Proteins 0.000 description 1
- 102000000479 TCF Transcription Factors Human genes 0.000 description 1
- 206010044248 Toxic shock syndrome Diseases 0.000 description 1
- 231100000650 Toxic shock syndrome Toxicity 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108060008683 Tumor Necrosis Factor Receptor Proteins 0.000 description 1
- 108700025716 Tumor Suppressor Genes Proteins 0.000 description 1
- 102000001742 Tumor Suppressor Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108050002568 Tumor necrosis factor ligand superfamily member 6 Proteins 0.000 description 1
- 108091005956 Type II transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- IWZYXFRGWKEKBJ-GVXVVHGQSA-N Val-Gln-His Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N IWZYXFRGWKEKBJ-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 208000000260 Warts Diseases 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000000999 acridine dye Substances 0.000 description 1
- 208000009621 actinic keratosis Diseases 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 239000002269 analeptic agent Substances 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011319 anticancer therapy Methods 0.000 description 1
- 238000011394 anticancer treatment Methods 0.000 description 1
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000005975 antitumor immune response Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 108010008355 arginyl-glutamine Proteins 0.000 description 1
- 230000005784 autoimmunity Effects 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- BHPNXACHQYJJJS-UHFFFAOYSA-N bacteriochlorin Chemical compound N1C(C=C2N=C(C=C3NC(=C4)C=C3)CC2)=CC=C1C=C1CCC4=N1 BHPNXACHQYJJJS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DSJXIQQMORJERS-AGGZHOMASA-M bacteriochlorophyll a Chemical compound C1([C@@H](C(=O)OC)C(=O)C2=C3C)=C2N2C3=CC([C@H](CC)[C@H]3C)=[N+]4C3=CC3=C(C(C)=O)C(C)=C5N3[Mg-2]42[N+]2=C1[C@@H](CCC(=O)OC\C=C(/C)CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)[C@H](C)C2=C5 DSJXIQQMORJERS-AGGZHOMASA-M 0.000 description 1
- 230000002902 bimodal effect Effects 0.000 description 1
- 102000023732 binding proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000003124 biologic agent Substances 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 1
- 238000010322 bone marrow transplantation Methods 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 229960004562 carboplatin Drugs 0.000 description 1
- 190000008236 carboplatin Chemical compound 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 238000001516 cell proliferation assay Methods 0.000 description 1
- 239000002458 cell surface marker Substances 0.000 description 1
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 1
- 210000001608 connective tissue cell Anatomy 0.000 description 1
- DDRPLNQJNRBRNY-WYYADCIBSA-N cortistatin-14 Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N1)NC(=O)[C@H]1NCCC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O)=O)[C@H](O)C)C1=CC=CC=C1 DDRPLNQJNRBRNY-WYYADCIBSA-N 0.000 description 1
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 description 1
- 229960004397 cyclophosphamide Drugs 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007402 cytotoxic response Effects 0.000 description 1
- 230000003292 diminished effect Effects 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000009510 drug design Methods 0.000 description 1
- 230000002900 effect on cell Effects 0.000 description 1
- 210000003162 effector t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000002121 endocytic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 108700020302 erbB-2 Genes Proteins 0.000 description 1
- 210000003238 esophagus Anatomy 0.000 description 1
- 230000036251 extravasation Effects 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 229960003569 hematoporphyrin Drugs 0.000 description 1
- 102000046157 human CSF2 Human genes 0.000 description 1
- 102000055276 human IL3 Human genes 0.000 description 1
- 102000052622 human IL7 Human genes 0.000 description 1
- 102000044949 human TNFSF10 Human genes 0.000 description 1
- 206010020718 hyperplasia Diseases 0.000 description 1
- 238000009217 hyperthermia therapy Methods 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000007124 immune defense Effects 0.000 description 1
- 239000012642 immune effector Substances 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 239000000367 immunologic factor Substances 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 238000011419 induction treatment Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 108700027921 interferon tau Proteins 0.000 description 1
- 229940076264 interleukin-3 Drugs 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 1
- 238000011813 knockout mouse model Methods 0.000 description 1
- 108010021336 lanreotide Proteins 0.000 description 1
- 229960002437 lanreotide Drugs 0.000 description 1
- 238000002647 laser therapy Methods 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 229940087875 leukine Drugs 0.000 description 1
- 230000023404 leukocyte cell-cell adhesion Effects 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 230000007762 localization of cell Effects 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 210000003810 lymphokine-activated killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 108010019677 lymphotactin Proteins 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 208000037819 metastatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000011575 metastatic malignant neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- ZAHQPTJLOCWVPG-UHFFFAOYSA-N mitoxantrone dihydrochloride Chemical compound Cl.Cl.O=C1C2=C(O)C=CC(O)=C2C(=O)C2=C1C(NCCNCCO)=CC=C2NCCNCCO ZAHQPTJLOCWVPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000008588 molluscum contagiosum Diseases 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 229960002700 octreotide Drugs 0.000 description 1
- 210000004248 oligodendroglia Anatomy 0.000 description 1
- 229960001592 paclitaxel Drugs 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- IEQIEDJGQAUEQZ-UHFFFAOYSA-N phthalocyanine Chemical compound N1C(N=C2C3=CC=CC=C3C(N=C3C4=CC=CC=C4C(=N4)N3)=N2)=C(C=CC=C2)C2=C1N=C1C2=CC=CC=C2C4=N1 IEQIEDJGQAUEQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004926 polymethyl methacrylate Substances 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 150000004804 polysaccharides Polymers 0.000 description 1
- 230000030786 positive chemotaxis Effects 0.000 description 1
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 1
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 108020000494 protein-tyrosine phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003537 radioprotector Effects 0.000 description 1
- 238000003259 recombinant expression Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 201000010174 renal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 229960002530 sargramostim Drugs 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000018448 secretion by cell Effects 0.000 description 1
- 108010052231 seglitide Proteins 0.000 description 1
- 229950002758 seglitide Drugs 0.000 description 1
- 230000036303 septic shock Effects 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 201000000849 skin cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000010153 skin papilloma Diseases 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N somatostatin Chemical compound C([C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)[C@@H](C)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N)C(O)=O)=O)[C@H](O)C)C1=CC=CC=C1 NHXLMOGPVYXJNR-ATOGVRKGSA-N 0.000 description 1
- 229960000553 somatostatin Drugs 0.000 description 1
- 108010064556 somatostatin receptor subtype-4 Proteins 0.000 description 1
- 108010082379 somatostatin receptor type 1 Proteins 0.000 description 1
- GGYTXJNZMFRSLX-DFTNLTQTSA-N somatostatin-28 Chemical compound N([C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H]1C(N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@@H](CC=2C3=CC=CC=C3NC=2)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CSSC1)C(O)=O)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)=O)C(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CO GGYTXJNZMFRSLX-DFTNLTQTSA-N 0.000 description 1
- 210000002325 somatostatin-secreting cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 206010062261 spinal cord neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000011476 stem cell transplantation Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N taxol Chemical compound O([C@@H]1[C@@]2(C[C@@H](C(C)=C(C2(C)C)[C@H](C([C@]2(C)[C@@H](O)C[C@H]3OC[C@]3([C@H]21)OC(C)=O)=O)OC(=O)C)OC(=O)[C@H](O)[C@@H](NC(=O)C=1C=CC=CC=1)C=1C=CC=CC=1)O)C(=O)C1=CC=CC=C1 RCINICONZNJXQF-MZXODVADSA-N 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 1
- 230000002463 transducing effect Effects 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 239000013638 trimer Substances 0.000 description 1
- 125000000430 tryptophan group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C12 0.000 description 1
- 230000004565 tumor cell growth Effects 0.000 description 1
- 102000003298 tumor necrosis factor receptor Human genes 0.000 description 1
- 230000037455 tumor specific immune response Effects 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 239000012646 vaccine adjuvant Substances 0.000 description 1
- 229940124931 vaccine adjuvant Drugs 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- A61K38/20—Interleukins [IL]
- A61K38/2086—IL-13 to IL-16
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- A61K38/191—Tumor necrosis factors [TNF], e.g. lymphotoxin [LT], i.e. TNF-beta
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
- A61K39/4611—T-cells, e.g. tumor infiltrating lymphocytes [TIL], lymphokine-activated killer cells [LAK] or regulatory T cells [Treg]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/461—Cellular immunotherapy characterised by the cell type used
- A61K39/4615—Dendritic cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/462—Cellular immunotherapy characterized by the effect or the function of the cells
- A61K39/4622—Antigen presenting cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/463—Cellular immunotherapy characterised by recombinant expression
- A61K39/4635—Cytokines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/46—Cellular immunotherapy
- A61K39/464—Cellular immunotherapy characterised by the antigen targeted or presented
- A61K39/4643—Vertebrate antigens
- A61K39/4644—Cancer antigens
- A61K39/464402—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- A61K39/464416—Receptors for cytokines
- A61K39/464417—Receptors for tumor necrosis factors [TNF], e.g. lymphotoxin receptor [LTR], CD30
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/515—Animal cells
- A61K2039/5154—Antigen presenting cells [APCs], e.g. dendritic cells or macrophages
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/515—Animal cells
- A61K2039/5158—Antigen-pulsed cells, e.g. T-cells
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Oncology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
腫瘍を持つ被験者治療の改善法であって、前記被験者に2から5の剤の組み合わせを投与することを含んでなる前記方法を開示する。剤は、樹状細胞を動員する剤、腫瘍細胞のアポトーシスおよび/または壊死を引き起こす剤、化学誘引剤、樹状細胞の成熟を刺激する剤、並びにT細胞の抗腫瘍反応を増進する剤であることが可能である。
Description
【0001】
発明の分野
本発明は、腫瘍学療法に関し、そしてより詳細には、集合的に樹状細胞を増加させ、樹状細胞の成熟を刺激し、そして樹状細胞にT細胞へ抗原提示させ、そしてT細胞を刺激する剤の併用で、腫瘍を持つ被験者を治療することを伴う併用療法に関する。
【0002】
関連技術の説明
用語、癌は、正常な細胞増殖が乱されている、非常に多様な疾患状態を含む。癌の治療において、多くの進歩があったが、いくつかの型は、他のものより治療しにくいままである。治療における難問の1つは、正常細胞の多様な種類から派生する、多くの種類の癌があることから生じる。一般的に、疾患への進行は、異常な細胞が免疫系を回避して、そして制御不能に増殖するために起こると考えられる。したがって、免疫系の回避は、すべてでないとしても大部分の癌に共通であるようである。
【0003】
免疫系が癌の発展に重大な役割を果たすことが理解されたため、免疫系を刺激して、癌性細胞を認識させ、そしてこれらの細胞を除去する、多様な手段に関して、多大な関心が生じてきた。抗癌療法使用のため、インターロイキン2、4、および6、並びに他のサイトカインを含め、多様な生物学的反応修飾因子(modifier)が調べられてきている。各因子は、ある患者では、効力を明示することが可能であるが、広く有効であることが示されたものはない。さらに、いくつかのこうした因子は、用量を制限する毒性効果を有することが見出されてきている。したがって、研究者は、最小限の有害な効果で、免疫反応が有効な抗腫瘍活性を発展させるのを可能にするであろう多様な因子の組み合わせを探してきている。しかし、本発明以前に、最適な種類の組み合わせは知られていない。
【0004】
発明の概要
本発明は:(a)DC動員因子(mobilization factor)を投与し;(b)腫瘍殺傷剤を投与し;そして(c)DC成熟剤を投与することによって、腫瘍を持つ被験者を治療する方法を提供する。本発明の1つの態様において、腫瘍殺傷剤は、樹状細胞の成熟を刺激する剤(DC成熟剤)と同一の剤である。本明細書に記載する方法は、所望により、1又はそれより多くのTリンパ球増進剤を投与し、そして/または化学誘引剤を投与して、動員した樹状細胞および/またはT細胞を腫瘍部位などの特定の部位に誘引する工程をさらに含む。所望により、該方法は、腫瘍抗原(類)を被験者に投与することをさらに含んでもよい。
【0005】
1つの態様において、本発明の方法は、直前に記載した剤(DC動員因子、DC成熟剤、腫瘍殺傷剤、Tリンパ球増進剤、および化学誘引剤)を、局所(topically)、皮下、静脈内、腫瘍内、節内(intranodal)または筋内投与、徐放または持続放出処方の型での投与、経口投与、あるいは当該技術分野の日常的な技術を持つ当業者に知られる他の経路いずれかの使用を含む、適切な方法いずれかによって、腫瘍を持つ被験者に投与する、in vivo併用免疫療法である。さらに、例えば、手術、レーザー治療、放射療法、腫瘍のウイルス感染または他の腫瘍切除療法中に、またはそれらの直後に、限局持続放出処方を適用することによって、あるいは当該技術分野に知られる、単数または複数の剤を腫瘍部位に搬送する、他の方法を使用することによって、多様な剤を腫瘍部位内または近傍に、限局(locally)投与することが可能である。
【0006】
別の態様において、本発明の方法は、1又はそれより多くの上述の投与工程をex vivoで行う、併用免疫療法である。例えば、本発明は、(a)腫瘍を持つ被験者にDC動員因子の療法的有効量を投与し;(b)DC動員因子を投与した、腫瘍を持つ被験者から樹状細胞を得て;(c)ex vivo培養において、腫瘍を持つ被験者から得た樹状細胞を培養し;そして(d)腫瘍を持つ被験者に、培養した樹状細胞を投与することを含む、併用療法を提供する。好ましくは、抗腫瘍療法が、投与しようとする樹状細胞に不都合な影響を与えないであろう時点で、樹状細胞を投与する。
【0007】
所望により、本発明のex vivo併用免疫療法は、細胞が他の免疫細胞に腫瘍抗原を提示することが可能な方式で、培養した樹状細胞を腫瘍抗原と接触させる工程をさらに含む。さらに、ex vivo法は、抗原提示を促進するため、樹状細胞の活性化および/または成熟を刺激する剤で、培養した樹状細胞を処理する工程を含んでもよい。樹状細胞の活性化および/または成熟を刺激する剤で、培養した樹状細胞を処理する工程は、抗原がプロセシングを必要とするか否かに応じて、培養した樹状細胞を抗原と接触させる前または後に行うことが可能である。典型的には、抗原が樹状細胞によるプロセシングを要するならば、培養した樹状細胞の処理は、樹状細胞が抗原をプロセシングした後に行う。抗原が、培養した樹状細胞によるプロセシングを必要としないならば、樹状細胞の活性化および/または成熟を刺激する剤で、培養した樹状細胞を処理する工程は、培養した樹状細胞を抗原と接触させる前に行う。
【0008】
さらに別の態様において、本発明は、樹状細胞に特定のサイトカインを分泌させることをさらに含む。ex vivo法において、これは、サイトカイン発現を誘導する1又はそれより多くの剤と樹状細胞を接触させることによって、またはサイトカインをコードする遺伝子で樹状細胞をトランスフェクションすることによって、達成することが可能である。
【0009】
腫瘍を持つ個体に、培養した樹状細胞を投与するのと同時に、本発明は、培養した樹状細胞または成熟した抗原提示樹状細胞を、単独で、またはT細胞増進剤(類)と併用して投与することをさらに含む。別のアプローチにおいて、本発明の方法は、培養した樹状細胞を用いて、ex vivoで腫瘍特異的細胞傷害性T細胞を生成し、そして生成した腫瘍特異的細胞傷害性T細胞を、腫瘍を持つ被験者に投与することを含む。T細胞増進剤は、T細胞を得る前に、腫瘍を持つ被験者に投与することが可能であるし;あるいはまたはさらに、T細胞増進剤は、ex vivoで生成した腫瘍特異的T細胞と組み合わせて、被験者に投与することが可能である。
【0010】
本発明の方法は、化学誘引剤を投与して、動員した樹状細胞および/またはT細胞、NK細胞または他の免疫細胞を腫瘍部位または別の部位に誘引する(すなわち抗原運搬DCをT細胞リッチリンパ節に誘引する)ことをさらに含む。
【0011】
多くの癌が免疫抑制効果を有するため、本明細書に記載する併用免疫療法は、化学療法または放射療法を受けているか、あるいは癌性細胞を有する個体で起こる可能性がある免疫抑制を患う個体を治療するのに有用である。本発明の免疫療法は、抗腫瘍反応を刺激し、そして抗腫瘍療法の副作用からの免疫系の回復を促進する。
【0012】
多くのDC動員因子は、腫瘍を持つ被験者において、骨髄前駆細胞集団を増進する。望ましい場合、本発明の方法は、免疫措置の一部として用いて、腫瘍を持つ被験者において、望ましい抗原に対する有効な免疫反応を生成することが可能である。
【0013】
本発明の方法を用いて:(a)DC動員因子の療法的有効量を被験者に投与し;(b)個体から樹状細胞を得て;(c)ex vivoで該樹状細胞を培養し;そして(d)抗腫瘍療法が、投与しようとする樹状細胞に不都合に影響を与えないであろう時点で、個体に該樹状細胞を投与することによって、ex vivoで、腫瘍を持つ被験者において、免疫反応を生成するか、または再生成することが可能である。
【0014】
本ex vivo療法のさらに別の側面において、腫瘍抗原に関して上述したのと類似の方式で、免疫反応を生成することが望ましい抗原で、樹状細胞を処理する。したがって、樹状細胞には、また、特定の望ましい免疫学的に活性である剤を分泌させることも可能であり;これらを、単独で、あるいは抗原に対する細胞傷害性Tリンパ球もしくはヘルパー細胞反応を増進する剤、またはT細胞の増殖を刺激するT細胞増殖因子と併用して、投与することが可能である。あるいは、該樹状細胞を用いて、ex vivoで、抗原特異的細胞傷害性T細胞またはヘルパー細胞を生成し、これらを、その後、腫瘍を持つ被験者に投与することが可能である。本発明のこれらのおよび他の側面は、一般の当業者に明らかであろう。
【0015】
本発明はまた、抗腫瘍療法の結果として、または腫瘍自体の影響として生じる免疫抑制からの、腫瘍を持つ個体の回復を促進するのにも有用であろう。DC数を増加させる剤を投与し、そしてDCを得て、そして個体への続く再投与用に保存することが可能である。DCをex vivoで処理して、より有効に他の免疫細胞に抗原を提示させることが可能であり;さらに、ex vivo技術はまた、特定の病原性または日和見性生物に特異的な細胞傷害性T細胞などの抗原特異的エフェクター細胞を得るのに適用することも可能である。
【0016】
腫瘍を持つ被験者はまた、免疫抑制を誘導する治療が完了した後に、本発明の併用療法で治療して、免疫抑制誘導治療の結果、腫瘍を持つ被験者の免疫反応が減少する時間の長さを減じることが可能である。こうした併用療法は、個体が、免疫抑制誘導治療の結果、感染性疾患に屈服するであろうリスクを減じるであろう。
【0017】
発明の詳細な説明
好適には、本発明の方法は、死につつある腫瘍細胞近傍の部位に、または死につつある腫瘍細胞が排出される部位に、より多くの非常に利用可能な腫瘍抗原を提供する。該方法はさらに、活性化し、そして成熟させるため、樹状細胞(DC)集団を増加させ、そして樹状細胞が腫瘍抗原をプロセシングし、そしてT細胞に提示する能力を増進する。本発明の方法にしたがって処理した際、これらの腫瘍抗原を持つDCは、腫瘍に特異的な強力なメモリーまたは一次Tリンパ球反応を誘導する。T細胞増殖因子(活性化DCによって内因性に提供されるか、または外因性に添加されるもの)は、腫瘍特異的CD4+およびCD8+ T細胞集団をさらに拡大し、この集団がその後、残った腫瘍負荷の根絶を促進する。
【0018】
本発明の方法には、免疫に基づく腫瘍療法における剤の併用が含まれる。剤の併用には、剤の別個の、連続した、または同時投与が含まれる。本発明で使用するのに適した剤には、DC動員因子;腫瘍細胞アポトーシス剤および/または壊死剤(腫瘍殺傷剤);DC成熟剤;T細胞増進剤;および化学誘引剤が含まれる。本明細書に記載する方法には、個体に直接これらの剤を投与することを含むin vivo工程および/またはin vitro操作で細胞を接触させることを伴うin vivoおよびex vitro工程の併用が含まれる。
【0019】
1つの態様において、本発明は、個体に:少なくとも1つのDC動員因子;少なくとも1つの腫瘍殺傷剤;および少なくとも1つのDC成熟剤を投与することによって、腫瘍を持つ個体を治療する方法を提供する。別の態様において、本発明の方法には、少なくとも1つのT細胞増進剤を個体に投与することがさらに含まれる。さらなる態様には、個体に腫瘍抗原(類)を投与することがさらに含まれる。
【0020】
DC動員因子は、DCの数を増加させるか、またはDC集団を増加させるよう作用する。適切な樹状細胞動員因子(または剤)には、限定されるわけではないが、Flt3L、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子(GM−CSF)、顆粒球コロニー刺激因子(G−CSF)、CD40Lおよびインターロイキン−15(IL−15)が含まれる。異なるDC動員因子は、ヒトにおいて、DCの別個のサブセットを動員する。Flt3Lは、CD11c+およびCD11c−IL−3R+サブセット両方を増加させ;前者のサブセットは40から50倍の間で増加し、そして後者は10から15倍の間で増加する(Pulendranら, J. Immunol. 165:566, 2000;Maraskovskyら, Blood 96:878, 2000)。対照的に、G−CSFは、CD11c−サブセットのみを増加させ、そしてこれは約7倍である(Pulendranら、上記)。DCのこの2つのサブセットは、CD4+ T細胞において異なるサイトカインプロフィールを引き出すため、異なるDC動員因子を用いて、他のものよりある種類の免疫反応を優先的に増進することが可能である(すなわちTH1様反応対TH2様反応)。
【0021】
Flt3Lは、細胞表面チロシンキナーゼ受容体Flt3に結合し、そしてそれによって前駆細胞および幹細胞の増殖および分化を調節するポリペプチドを指す。米国特許第5,554,512号、1996年9月10日発行(本明細書に援用)は、Flt3LをコードするcDNAの単離、および末梢幹細胞移植法におけるこの分子の使用を記載する。ヒトおよびネズミFlt3L両方、融合タンパク質および突然変異タンパク質(mutein)を含む、Flt3Lの多様な型が該特許に記載される。好ましいFlt3Lポリペプチドは、ヒトFlt3L(配列番号1)のアミノ酸28から160、アミノ酸28から182、またはアミノ酸28から235、およびその断片を含んでなる。特に好ましいFlt3Lポリペプチドは、配列番号1のアミノ酸28から179またはアミノ酸26から179を含んでなる。
【0022】
本発明で使用するのに適した他のFlt3L関連樹状細胞動員剤には、Flt3に結合し、そしてシグナルを伝達する剤が含まれる。こうしたFlt3結合タンパク質は、モノクローナル抗体およびヒト化抗体を含むアゴニスト性抗体、並びに少なくとも1つの適切な抗原結合ドメインを有し、そしてFlt3シグナルを伝達するアゴニスト性抗体由来の、組換え的に調製した剤を含む。
【0023】
GM−CSFは、増殖、並びに前駆細胞から顆粒球およびマクロファージへの分化を誘導するリンホカインである。米国特許第5,162,111号、1992年11月10日発行は、ヒトおよびネズミGM−CSF両方のヌクレオチドおよびアミノ酸配列を開示し、そして細菌疾患を治療する際のこのリンホカインの使用を記載する。GM−CSFおよびインターロイキン−3を含んでなる融合タンパク質(米国特許第5,108,910号、1992年4月28日発行に記載)、GM−CSFの突然変異タンパク質(米国特許第5,391,485号、1995年2月21日発行に開示)、およびGM−CSFを含んでなる持続放出組成物(米国特許第5,942,253号、1999年8月24日発行に記載)を含む、他の型のGM−CSFもまた、本発明で有用であろう。上に引用する特許の関連する開示を、特に本明細書に援用する。
【0024】
IL−15は、前駆タンパク質として産生され、そして切断されて活性型になる、分泌サイトカインである。成熟IL−15は、前駆T細胞または成熟T細胞の増殖および/または分化をシグナル伝達することが可能であり、そしてしたがって、(in vivoまたはex vivoで)T細胞免疫反応を制御するのに使用可能である。上皮由来T細胞因子と呼ばれていたIL−15は、米国特許第5,574,138号、1996年11月12日発行(本明細書に援用)に記載される。IL−15の好ましい型は、成熟IL−15ポリペプチドを含んでなる(非切断前駆タンパク質のアミノ酸49から162;配列番号2)。
【0025】
腫瘍殺傷剤には、アポトーシス誘導剤および壊死誘導剤両方が含まれ、これらには、例えば、放射療法、化学療法、超音波、光線力学的療法、熱または非常な低温への曝露、抗体療法、ウイルスでの感染、選択したタンパク質をコードするウイルスベクターでの形質導入、および腫瘍壊死因子(TNF)スーパーファミリーの多様なメンバー(TNF、リンホトキシンアルファおよびベータ、CD40L、およびTNF関連アポトーシス誘導またはTRAILを含む)が含まれる。放射および/または化学療法は、多様な型の癌または前癌性状態を治療するのに、癌学者が用いるツールの1つである。好ましい治療様式は、他の要因の中でも、治療しようとする癌の特定の種類、疾患の段階、および患者の状態に応じるであろう。癌および前癌性状態を治療する当業者は、使用可能な多様な治療措置を認識し、そしてその技術を適用して、各個体の状況の知識に基づいて、好ましい措置を決定するであろう。措置を選択する際、当業者を手助けするのに、いくつかの教科書が有用であり、これらには、Cancer:Principles and Practice of Oncology, 第5版(De Vita, HellmanおよびRosenberg監修;Lippincott−Raven Publishers, 1997)、およびPrinciples and Practice of Radiation Oncology, 第3版(PerezおよびBrady監修;Lippincott Williams and Wilkins Publishers, 1997)が含まれる。
【0026】
多様なコンピューターおよびインターネットに基づく情報源が、アポトーシス剤およびアポトーシス様式決定の補助に利用可能である。典型的なウェブサイトは、米国保健研究所の米国癌研究所によって維持されるものである(http://cancernet.nci.nih.gov/)。該ウェブサイトは、多様な種類の癌、治療オプション、実施中の多様な臨床試験、癌のリスク要因、および他の有用な情報源に関する情報を含有する。
【0027】
いくつかの抗体療法は、本発明を実施する際に適した腫瘍殺傷療法である。リツキサン(Rituxan)(登録商標)(リツキシマブ(Rituximab);IDEC Pharmaceuticals、カリフォルニア州サンディエゴ、およびGenentech, Inc、カリフォルニア州サンフランシスコ)は、CD20発現細胞の補体依存細胞溶解および抗体依存細胞傷害性を仲介する、細胞表面マーカーCD20に対するキメラモノクローナル抗体である。これはまた、化学耐性ヒトリンパ腫細胞株を感作し、そしてアポトーシスを誘導することも示されてきている。リツキサン(Rituxan)(登録商標)は、CD20陽性リンパ腫の治療に、臨床的に有意な効果を有することが示されてきている(McLaughlinら, J. Clin. Oncol. 16:2825;1998)。
【0028】
ハーセプチン(Herceptin)(登録商標)(トラスツズマブ(Transtuzumab);Genentech, Inc.、カリフォルニア州サウスサンフランシスコ)は、ヒト上皮増殖因子受容体2(HER2)の細胞外ドメインに高い親和性および特異性で結合する、ヒト化モノクローナル免疫グロブリンG1カッパ抗体である。前臨床研究によって、ハーセプチン(Herceptin)(を単独で、あるいはパクリタキセルまたはカルボプラチンと併用して投与すると、HER2遺伝子産物を過剰発現する、乳腺腫瘍由来細胞株の増殖が有意に阻害されることが示されてきている。ハーセプチン(Herceptin)((登録商標)の説明は、米国特許第6,054,297号、2000年4月25日発行に提供され、該特許の開示は本明細書に援用される。
【0029】
IMC−C225は、多様な腫瘍細胞上に見られる増殖因子受容体を遮断する別の抗体である。IMC−C225は、ImClone Systems Incorporated(ニューヨーク州ニューヨーク)によって開発され、そして生産されるキメラ抗体であり、そしてOverholserら(Cancer 89:74;2000)に記載される。該抗体は、増殖因子受容体を遮断し、そして腫瘍細胞が細胞死シグナルを回避するのを妨げることによって、作用する。
【0030】
別の有用な抗体は、ヒト上皮増殖因子受容体(EGFr)に高い親和性で結合する、トランスジェニックマウスで生成したヒトIgG2モノクローナル抗体、ABX−EGFである(Yangら, Crit Rev Oncol Hematol 38:17, 2001)。ABX−EGFは、EGFr発現ヒト癌腫細胞株へのEGFおよびトランスフォーミング増殖因子−アルファ(TGF−アルファ)両方の結合を遮断し、そしてEGF依存腫瘍細胞活性化を阻害する。完全なヒト抗体であるため、ABX−EGFは、ヒト患者において、長い血清半減期および最小免疫原性を示すであろう。
【0031】
腫瘍殺傷剤には、限定されるわけではないがTRAILを含む、特定の標的細胞のアポトーシスを誘導するポリペプチドが含まれる。TRAILは、癌細胞およびウイルス感染細胞のアポトーシスを誘導する。TRAILのクローニングおよび性質決定は、米国特許第5,763,223号、1998年6月9日発行に記載される。該特許に開示されるように、TRAILは、N末端細胞質ドメイン、膜貫通領域および細胞外ドメインを含んでなる。本発明において有用なTRAILの可溶性型には、TRAILの細胞外ドメイン、または標的細胞に結合し、そしてアポトーシスを誘導する能力を保持する、細胞外ドメインの断片が含まれる。可溶性TRAILの好ましい型は、米国特許第5,763,223号に開示されるような、ヒトTRAIL(配列番号5)のアミノ酸95から281を含んでなる。
【0032】
TRAILのオリゴマー型もまた有用であり;好ましい型は、三量体化を促進するペプチドに融合したTRAILの細胞外ドメインを含んでなる。天然存在三量体タンパク質由来のペプチドまたはオリゴマー化を促進する合成ペプチドが使用可能である。特に有用なペプチドは、ロイシンジッパー(ジッパードメインまたはロイシンジッパー部分)と称されるものである。特定の態様において、ロイシンジッパー中のロイシン残基を、イソロイシン残基と交換する。イソロイシンを含んでなるこうしたペプチドは、イソロイシンジッパーと称することが可能であるが、本明細書で使用するような用語「ロイシンジッパー」に含まれる。
【0033】
1つの例は、Hoppeら(FEBS Letters 344:191, 1994)および米国特許第5,716,805号に記載されるような、アミノ酸Pro Asp Val Ala Ser Leu Arg Gln Gln Val Glu Ala Leu Gln Gly Gln Val Gln His Leu Gln Ala Ala Phe Ser Glnを含んでなる、肺界面活性物質プロテインD(SPD)由来のロイシンジッパーである。三量体化を促進するロイシンジッパーの別の例は、配列番号4に示すジッパーペプチドである。別の態様において、該ペプチドは、N末端Arg残基を欠く。別の態様において、N末端Asp残基が付加される。適切なロイシンジッパーペプチドのさらに別の例は、アミノ酸配列Ser Leu Ala Ser Leu Arg Gln Gln Leu Glu Ala Leu Gln Gly Gln Leu Gln His Leu Gln Ala Ala Leu Ser Gln Leu Gly Gluを含んでなる。別のペプチドでは、前述の配列のロイシン残基が、イソロイシン残基で交換される。オリゴマー化を促進する特性を保持する、前述のジッパーペプチドの断片もまた、使用可能である。こうした断片の例には、限定されるわけではないが、前述のアミノ酸配列に示すN末端またはC末端残基の1または2残基を欠くペプチドが含まれる。
【0034】
本発明を実施するのに有用な、適切なDC成熟剤には、CD40LおよびCD40シグナル伝達のアゴニスト、RANKL、TNF、IL−1、CpGリッチDNA配列(ISS、または免疫刺激配列)、リポ多糖(LPS)、および単球馴化培地(Reddyら, Blood 90:3640;1997)が含まれる。これらの剤は、有効で、特異的な抗腫瘍細胞傷害性反応を刺激するその能力を増進することによって、DCに作用する。したがって、例えば、CD40Lを投与するかまたはDCをCD40Lと接触させることによって、DC上に発現されるCD40の連結が引き起こされ、これが次に、DC表面上のMHC分子数の増加を刺激する。これは、DCの抗原提示能を増加させる。成熟剤を投与するかまたはDCを成熟剤と接触させることによって、抗腫瘍反応を増大させるよう作用することが可能な、多様な免疫調節サイトカイン(例えばIL−12)の分泌もまた増進される。DCはまた、DCが活性化されたことを示すサイトカインの分泌を刺激する剤(DC活性化因子)と接触させてもよい。したがって、例えば、DCをCD40LおよびIFN−γと(同時に、連続してまたは別個に)接触させて、DCの成熟および活性化を刺激することが可能である。
【0035】
CD40に結合し、そしてそれによってシグナルを伝達することが可能なCD40Lポリペプチドは、本発明において有用である。CD40LをコードするcDNAが、米国特許第5,961,974号、第5,962,406号および第5,981,724号(以後、Armitage特許)に記載される。特に有用な成熟剤であるCD40Lの型には、CD40Lの細胞外部分、およびCD40に結合し、そしてシグナルを伝達する細胞外部分の断片が含まれる。特に、Armitage特許に開示されるような、配列番号3のアミノ酸47−261を含むポリペプチド、配列番号3のアミノ酸113−261を含むポリペプチド、配列番号3のアミノ酸51−261を含むポリペプチドおよびこれらのポリペプチドのオリゴマー型が、本発明で使用可能である。好ましいCD40Lは、ヒトCD40Lのシステインアミノ酸194がトリプトファンで置換されているものである。CD40Lの最も好ましい型は、Armitage特許で三量体CD40Lと称される可溶性CD40L融合タンパク質である。三量体CD40Lは、三量体化を促進するジッパードメインに融合したCD40Lの細胞外ドメインの断片を含んでなる(配列番号4)。
【0036】
さらに適切な樹状細胞成熟剤には、CD40に結合し、そしてシグナルを伝達する化合物が含まれる。これらの中に、モノクローナル抗体HuCD40−M2(ATCC HB11459)などのCD40に対するアゴニスト性抗体と共に、抗体HuCD40M2由来の抗原結合ドメインを含んでなる、ヒト化抗体または他の組換え的に得られる分子がある。
【0037】
RANKLは、CD40L同様、2型膜貫通タンパク質であり、約50アミノ酸未満の細胞内ドメイン、約240から250アミノ酸の膜貫通ドメインおよび細胞外ドメインを持つ(配列番号6)。RANKLは、USSN 08/995,659、1997年12月22日出願(PCT/US97/23775)に記載される。属するTNFファミリーの他のメンバー同様、RANKLは、膜貫通ドメインおよび受容体結合ドメインの間に、受容体結合に必要でない、スペーサー領域を有する。したがって、RANKLの可溶性型は、全細胞外ドメイン、または受容体結合領域を含むその断片を含んでなることが可能である。
【0038】
CD40L同様、RANKに結合し、そしてシグナルを伝達する他の化合物は、有用な成熟剤であり、そしてこれらには、RANKに対するアゴニスト性抗体と共に、RANKに結合する抗体由来の抗原結合ドメインを含んでなる、ヒト化抗体または他の組換え的に得られる分子が含まれる。TNFスーパーファミリーのいくつかの他のメンバーもまた、本発明の多様な側面に使用を有するであろう。これらには、リンホトキシンアルファおよびベータ、Fasリガンド、CD27リガンド、CD30リガンド、CD40リガンド、4−1BBリガンド、OX40リガンド、TRAILおよびRANKLが含まれる。
【0039】
DCはまた、Flt3L、GM−CSF、顆粒球コロニー刺激因子(G−CSF)、シクロホスファミドまたはCD34+細胞を動員することが知られる他の剤での動員後、ex vivoで増殖させることも可能である。こうして得たDCは、Flt3L、GM−CSF、インターロイキン−15(IL−15)、CD40リガンド(CD40L)またはNF−カッパBの受容体活性化因子のリガンド(RANKL)などの剤を用いて、培養してもよい。あるいは、DCは、末梢血単核細胞(PBMC)から、GM−CSFおよびインターロイキン−4(IL−4)を用いて生成することが可能である。培養DCは、上述のように、ex vivoでさらに処理して成熟および/または活性化を刺激してもよい。これらの方法によって、ex vivoで生成したDCは、腫瘍内に限局投与、血流内または排出リンパ節内に全身投与することが可能である。
【0040】
TNFは、炎症および免疫防御でもまた中心的な役割を果たす樹状細胞成熟剤であり、そして悪液質、敗血症ショックおよび自己免疫を含む、いくつかの発病過程に関与する。免疫系の細胞に対するその強力な効果のため、TNFはin vitroで有用である(例えば、細胞のex vivo生成、増殖および/または活性化、並びに/あるいはDCの成熟)。さらに、多様な技術、例えば本明細書に論じるような遺伝子療法あるいは腫瘍部位内またはその近傍での限局投与における使用を用いて、全身性の影響を最小限にすることが可能である。
【0041】
別の樹状細胞成熟剤であるリポ多糖(LPS)は、グラム陰性細菌の細胞壁構成要素である。LPSは、脂質コア(脂質A)および付着する多糖部分からなり;脂質Aは(いくつかの結合する多糖と共に)、毒性ショック症候群(敗血症ショックまたは内毒血症)を含む、グラム陰性菌血症の毒性効果の大部分に関与すると考えられる。LPSをex vivoで使用して成熟DCを生成することが可能であるし;あるいは本明細書に記載する多様な技術を適用して、腫瘍を持つ被験者へのLPSの限局投与を可能にすることが可能である。
【0042】
さらなる適切な樹状細胞成熟剤には、適切なT細胞増進剤でもある剤が含まれる。こうした剤には、インターロイキン2、15、7および12(それぞれIL−2、IL−15、IL−7、およびIL−12)並びにインターフェロン−ガンマおよびアルファ(IFN−γおよびIFN−α)、並びにOX40および4−1BBアゴニストが含まれる。これらの剤、および本発明の併用療法に有用性を有する多くの他の剤は、The Cytokine Handbook(第3版;Angus Thompson監修;Academic Press 1998)に記載される。
【0043】
T細胞増殖因子として最初に同定されたインターロイキン−2(IL−2)はまた、B細胞、ナチュラルキラー(NK)細胞、リンホカイン活性化キラー(LAK)細胞、単球、マクロファージおよびオリゴデンドロサイトにも影響を与えることが知られる。米国特許第6,060,068号、2000年5月9日発行は、IL−2およびワクチンアジュバントとしてのその使用を記載する。遺伝子療法におけるIL−2が、米国特許第6,066,624号、2000年5月23日発行に記載される。腫瘍性疾患の予防および治療のための熱ショックタンパク質/抗原性ペプチド複合体と組み合わせたIL−2の使用が、米国特許第6,017,540号、2000年1月25日発行に記載される。
【0044】
別の樹状細胞成熟剤およびT細胞増進剤である、インターロイキン−7(IL−7)は、免疫および非免疫細胞両方から分泌される約25kDaのサイトカインであり、そして免疫系の発展および細胞性免疫反応の生成に関与する。米国特許第5,328,988号、1994年7月12日発行は、ヒトIL−7の同定および単離を記載する。IL−7は、Tリンパ球の免疫エフェクター細胞機能を増進するため、CTL反応を増大する能力において、T細胞増進剤として、本発明の実施に有用である。IL−7はまた、増殖因子としても作用し、そして骨髄移植または高用量化学療法後の免疫細胞増殖を刺激するのにも用いられてきている。したがって、IL−7はまた、腫瘍細胞死誘導前に免疫細胞を動員するかまたは免疫細胞増殖を刺激する剤としても、本発明において有用である。
【0045】
インターロイキン−12(IL−12)は、インターロイキン−6(IL−6)受容体およびG−CSF受容体に構造的類似性を持つ重鎖(p40)、並びにIL−6およびG−CSFと似た軽鎖(p35)を有する、ヘテロ二量体タンパク質である。TH1免疫反応の優先的な発展を促進する能力があるため、IL−12は、感染性疾患設定と共に、腫瘍モデルで使用されてきている。IL−12は、有用なT細胞増進剤であり、そして本発明の方法において、増進した抗腫瘍CTL活性を提供する。IL−12を投与すると、腫瘍細胞アポトーシスが誘導可能であり、そしてしたがって、IL−12は、本発明において、アポトーシス剤として有用である。さらに、IL−12 DNAは、in vitro法で、例えば腫瘍細胞または樹状細胞がIL−12を発現するように形質導入し、そして該細胞を腫瘍内に投与することによって使用可能である。
【0046】
インターフェロンは、構造的相同性を示し、そして同一の祖先遺伝子に由来すると考えられるI型インターフェロン(IFN−α、IFN−ω、IFN−βおよびIFN−τ)、および他のインターフェロンと相同性を示さないが、いくつかの生物学的活性を共有するII型インターフェロン(IFN−γ)と称される、2つのカテゴリーに属する。どちらの種類のインターフェロンも、T細胞の細胞溶解活性を増大するMHC分子の発現を増進し、したがって、インターフェロンは有用なT細胞増進剤となっている。インターフェロンはまた、ナチュラルキラー(NK)細胞およびマクロファージも活性化し、これらはどちらも、腫瘍細胞を殺傷するのにより有効になる。さらに、いくつかの腫瘍細胞は、インターフェロンによって直接影響を受け、その成長または増殖が遅延される可能性がある。多くの特許が多様なインターフェロンの産生および使用を記載する。例えば、米国特許第5,540,923号は、I型およびII型インターフェロン両方を単離する方法を記載し、そして米国特許第5,376,567号および第4,889,803号は、IFN−γの組換え発現に関する。アクティミューン(Actimmune)TMとして知られるIFN−γ 1bの型が、InterMune、カリフォルニア州パロアルトに製造される。低用量のIFN−αが、慢性骨髄白血病(Schofieldら, Ann. Intern. Med. 121:736;1994)および癌の他の型の治療に用いられてきている。IFN−αの組換え型、イントロナ(Introna)(登録商標)は、多様な抗ウイルスおよび抗癌適応症のため、Schering−Ploughによって販売されている。
【0047】
タンパク質のTNF受容体スーパーファミリーの多様なメンバーに作用する他の剤もまた、本明細書において有用性を有するであろう。典型的な剤には、ヒト化またはその一本鎖型を含む、アゴニスト性抗体が含まれる。例えばMeleroらは、4−1BBに対するモノクローナル抗体が、マウスにおいて、巨大な、免疫原性の劣った腫瘍の根絶を導くことが可能であることを示した(Nature Med. 3:682;1997)。Meleroらによると、アゴニスト性4−1BB抗体は、腫瘍特異的CTL活性を増大させる。したがって、こうした抗体(または4−1BBリガンド)は、本発明の方法において、CTL活性を上方制御するのに使用を有する可能性があり;これらはまた、腫瘍細胞死を引き起こすことによって、利用可能な腫瘍抗原の量を増加させるよう機能する可能性もある。米国特許第5,674,704号、1997年10月7日発行は、細胞質ドメイン、膜貫通領域および細胞外ドメインを含んでなる4−1BBのリガンドを開示する。細胞外ドメインを含んでなる4−1BBリガンドの可溶性型もまた開示され;細胞外ドメインに多量体形成ペプチド(Fc分子またはジッパーペプチドなど)を付加することによって、さらなる多量体型を調製する。特に有用なアゴニスト性モノクローナル抗体は、4−1BBm6(バージニア州マナサスのアメリカンタイプ組織コレクションに、___に寄託し、そして寄託番号___を与えられた)である。ネズミ抗体のヒト化型、一本鎖抗体、およびヒト抗体遺伝子を提示し、そしてしたがって抗原に対するヒト抗体を作成するトランスジェニックマウスで生成する、モノクローナル抗体を含む、4−1BBm6と同一のエピトープに結合する抗体の他の型もまた、有用であろう。
【0048】
同様に、OX40のアゴニスト(アゴニスト性抗体およびOX40リガンドを含めて、OX40に結合し、そしてそれによってシグナルを伝達する分子)は、腫瘍拒絶を導くことが可能な、CD8+ T細胞反応を促進する。米国特許第5,457,035号、1995年10月10日発行は、OX40のリガンドを開示し;Miuraら(Mol. Cell Biol. 11:1313;1991)は、彼らがgp34と称する、ネズミOX40Lのヒト相同体を開示する。TNFスーパーファミリーの他のメンバー同様、OX40Lは、II型膜貫通タンパク質であり;OX40Lの可溶性型は、細胞外ドメインから作成する。OX40Lの多量体型は、標準的な組換えDNA技術を用い、免疫グロブリンFcまたはオリゴマー化ジッパーなどの多量体形成ペプチドを、OX40LをコードするDNAに付加して、調製する。好ましいアゴニスト性モノクローナル抗体は、Ox40m5(バージニア州マナサスのアメリカンタイプ組織コレクションに、___に寄託し、そして寄託番号___を与えられた)である。ネズミ抗体のヒト化型、一本鎖抗体、およびヒト抗体遺伝子を提示し、そしてしたがって抗原に対するヒト抗体を作成するトランスジェニックマウスで生成された、モノクローナル抗体を含む、Ox40m5と同一のエピトープに結合する抗体の他の型もまた、有用であろう。
【0049】
当業者は、トランスフォーミング増殖因子−β(TGF−β)を含む、T細胞に影響を与えるいくつかの他の因子もまた認識するであろう。このサイトカインは、未成熟リンパ球の成長を増進し、T細胞のアポトーシスを阻害し、そしてリンパ球に対する強力な免疫抑制効果を有する。したがって、TGF−βまたはその阻害剤(TGF−βに結合し、そして細胞結合TGF−β受容体への結合を妨げる抗体、TGF−β受容体の可溶性型、またはTGF−βがその受容体に結合するかまたはそれによってシグナルを伝達する能力に干渉する他の分子など)もまた、本発明において有用であろう。当業者は、日常的な実験を適用することによって、望ましい影響に応じて、使用に適した型を選択することが可能であろう。
【0050】
インターロイキン4、5および10を含む他の分子もまた、免疫反応の発展に重大であることが知られ、そしてTH2様である(すなわち細胞傷害性T細胞の生成をほとんどまたはまったく伴わず、抗体産生細胞が優勢である)免疫反応を優先的に増進するようである。これらの分子のアンタゴニストは、TH2様免疫反応を妨げるかまたは減少させるのに有用であろうし;本発明の他の側面と組み合わせて、こうしたアンタゴニストは、個体において、腫瘍細胞を除去するのにより有効である可能性があるTH1様反応に向かう免疫反応の操作を容易にする。アンタゴニストには、これらの分子の1つに結合し、そしてしたがって細胞結合受容体への結合を妨げる抗体、受容体の可溶性型、あるいは分子がその受容体に結合するかまたはそれによってシグナルを伝達する能力に干渉する他の分子が含まれる。米国特許第5,599,905号、1997年2月4日発行は、可溶性IL−4受容体の有用な型を開示する。
【0051】
ケモカインは、多様な種類の免疫系細胞に走化活性を示す、基本的な小タンパク質である。タンパク質のこのファミリーのメンバーは、ほぼ機能と相関する、システイン残基間のジスルフィド結合の形成およびシステイン残基間の介在アミノ酸の存在または非存在に基づいて、おおまかに、4つのグループに分類可能である。したがって、CXCサブグループのメンバーは、最初の2つの特徴的なシステイン残基間に介在するアミノ酸を示し、そして主に好中球を誘引し、そして活性化する傾向がある。CCケモカインは、介在アミノ酸を持たず、そして樹状細胞、リンパ球および単核細胞に走化活性を示す。ケモカインの第三のサブクラスは、Cファミリーであり、4つのシステインのうち2つを欠く;これは、NKおよびCD4 T細胞を腫瘍部位に誘引することが示されている、リンパ特異的誘引剤、リンホタクチンに代表される。介在する3つのアミノ酸を持つ第四の型のケモカイン(CX3C)もまた同定されており;このサブファミリーの代表的な分子であるフラクタルカインは、白血球接着および血管外遊走に関与している可能性がある。
【0052】
したがって、ケモカインは、本発明において、特定の種類の細胞を腫瘍部位に誘引するのに使用を見出すであろう。例えば、MCP1−5、MIP−1アルファまたはベータ、RANTESまたはエオタキシンの1つなどのCCケモカインは、当該技術分野に知られ、そして本明細書に論じる技術いずれかによって(すなわちタンパク質またはそれをコードするDNAの腫瘍内注射によって、あるいは腫瘍部位の細胞によるケモカイン分泌を誘導する遺伝子療法技術の使用を通じて)、腫瘍部位に、限局投与して、動員した樹状細胞を該部位に誘引することが可能である。用いるケモカインは、日常的な実験を適用することによって、誘引しようとする細胞の種類に応じて、選択可能である。
【0053】
さらなる有用な剤が、USSN 60/249,524、2000年11月17日出願に開示され、該出願の開示は本明細書に援用される。特に、ケモカイン、MIP−3アルファ、MIP−3ベータ、MIP−5、MDC、SDF−1、MCP−3、MCP−4、RANTES、TECK、およびSDF−1は、樹状細胞限局因子として作用する、有用なケモカインである。さらに、IL−1、TNF−アルファおよびIL−10などのサイトカインもまた、局在化因子(localization factor)として作用することが可能である。ソマトスタチン細胞表面受容体SSTR1、SSTR2、SSTR3、SSTR4およびSSTR5あるいはその相同体または相同分子種(ortholog)の1又はそれより多くのメンバーに結合し、そして該メンバーを活性化する化合物もまた、本発明において有用であろう。これらには、ソマトスタチンおよびコルチスタチン、並びにソマトスタチンペプチドSST−14、SST−28、並びにコルチスタチンペプチドCST−17およびCST−29を含む、ソマトスタチン受容体の天然存在リガンドが含まれる。SSTRの他の既知のペプチドアゴニストには、オクレオチド(ocreotide)、ランレオチド(lanreotide)、バプレオチド(vapreotide)、セグリチド(seglitide)、BIM23268、NC8−12、BIM23197、CD275およびSSTRに高親和性を有することが見出された他のものが含まれる。これらの化合物いずれかの誘導体、類似体および擬似体(mimetics)もまた、本発明において有用であろう。
【0054】
当業者は、本明細書に開示する多様な剤および/または因子が、細胞表面受容体に結合し、そしてそれによって細胞にシグナルを伝達することによって作用することを理解する。他の剤もまた、これらの特性を示す可能性があることもまた理解する(すなわち既定の受容体に対するアゴニスト性抗体)。したがって、本発明の方法は、具体的に上に開示する因子で生じる、細胞へのシグナル伝達を模倣する他の分子の使用を含む。こうした分子には、アゴニスト性モノクローナル抗体およびそれに由来する組換えタンパク質と共に、小分子ライブラリーのスクリーニングによって、または合理的薬剤設計を通じて単離される、リガンド擬似体が含まれる。
【0055】
当業者はまた、有用な組換えタンパク質を、対応する天然タンパク質と異なる型で発現してもよいことも理解する。例えば、タンパク質のTNFファミリーの特定のメンバーは、三量体型で存在すると考えられる(BeutlerおよびHuffel, Science 264:667, 1994;Bannerら, Cell 73:431, 1993)。TNFファミリーメンバーの好ましい型は、CD40LまたはTRAILに関して本明細書に記載するように、三量体化(または他の多量体化)を促進するペプチドを含んでなることが可能である。
【0056】
腫瘍細胞死を刺激する剤の投与
腫瘍細胞死を誘導する多様な手段が当該技術分野に知られる;投与の正確な方法は、他の要因の中でも、治療しようとする癌の種類、癌の段階および患者の健康状態に応じるであろう。当業者は、これらの要因に基づいて、適切な投与法を選択可能であろう。一般的に、因子が化学療法剤(またはその組み合わせ)、または生物学的剤である場合、生理学的に許容しうるキャリアー、賦形剤(excipients)または希釈剤と組み合わせて精製化合物を含んでなる薬剤組成物の形で投与されるであろう。こうしたキャリアーは、使用する投薬量および濃度で、被験者に非毒性である。
【0057】
通常、こうした組成物の調製は、化合物を、緩衝剤、アスコルビン酸などの酸化防止剤、低分子量(約10残基未満)ポリペプチド、タンパク質、アミノ酸、グルコース、スクロースまたはデキストラン類を含む炭水化物、EDTAなどのキレート剤、グルタチオン並びに他の安定化剤および賦形剤と合わせることを含む。中性緩衝生理食塩水または同種の血清アルブミンと混合した生理食塩水は、典型的な適切な希釈剤である。さらに、多様な型の徐放技術が使用可能である;米国特許第5,942,253号は、GM−CSFを含んでなる持続放出組成物を開示する。こうした組成物および一般の当業者が調製可能な他のもの(例えば本明細書に開示するようなヒドロゲルの使用)もまた、本発明において有用であろう。使用する特定の療法的有効量は、本発明にとって重要でなく、そして選択する特定の因子、治療しようとする疾患または状態と共に、被験者の年齢、体重および性別に応じて多様であろう。
【0058】
化学療法剤は、癌細胞に作用して増殖を阻害する;化学療法の多くの副作用は、これらの剤が、正常な、迅速に***している細胞に引き起こす損傷のためである。癌に罹患した患者は、化学療法によって、単独で、または他の抗癌治療と併用して、治療することが可能である。多くの化学療法剤が知られ;いくつかは多くの種類の腫瘍に対して有効であり、そして多くの異なる種類の癌を治療するのに用いるが、他のものは1または2種類の癌のみに関して、最も有効である。化学療法剤は、静脈内、経口、注射によって投与するか、あるいは皮膚に適用することが可能である。したがって、化学療法を用いるかどうか、そしてどの剤またはその組み合わせを投与すべきであるかは、他の要因の中でも、癌の種類、腫瘍の位置、および患者の健康状態に応じる。
【0059】
腫瘍細胞死を引き起こすのに用いられている治療の別の型は、凍結手術(または凍結療法)であり、これは非常な低温を癌細胞に適用し、細胞死を引き起こすものである。凍結手術は、最も頻繁には、腫瘍に直接液体窒素を適用することによって、皮膚腫瘍(または他の外部腫瘍)を治療するのに用いられてきている。しかし、内部腫瘍を治療する際の極端な低温の使用を可能にする技術が開発されてきている。例えば、超音波を用いて、取り巻く正常細胞への損傷を最小限にしつつ、腫瘍細胞への液体窒素の適用を監視し、そして導き、凍結短針(cryoprobe)を通じて液体窒素を循環させることが可能である。凍結手術は、多様な種類の皮膚癌、網膜芽細胞腫、前立腺癌、肝癌、骨、脳および脊髄の腫瘍、並びに食道で形成される腫瘍を治療するのに用いられてきているか、またはそれに関して調べられている;凍結手術はまた、光線性角化症および子宮頚上皮内腫瘍などの前癌性状態にも用いられる。さらに、凍結療法は、いぼ(ある場合では、癌性または前癌性状態である可能性があるもの)および伝染性軟属腫の治療に用いて成功してきている;本明細書に開示する併用療法の使用もまた、こうした状態で有益であることが立証される可能性がある。
【0060】
高温(高体温)もまた、通常、他の種類の療法と併用して、癌細胞を根絶する試みの中で用いられてきている。限局(local)高体温では、体外の装置、滅菌プローブ(細い、加熱した針金または温水で満たした中空管)、移植したマイクロ波アンテナ;または高周波電極から腫瘍に向けた高周波を用いて、熱を腫瘍に適用する。肢または器官もまた、局所的高体温と称する方法で加熱可能である。この技術では、磁石または高エネルギーを産生する装置を、加熱しようとする領域上に置くか、あるいは肢または器官を灌流(患者血液のある程度を除去し、該血液を加熱し、そして該血液を器官または肢に戻す)によって加熱する。全身加熱は、温水ブランケット、ホットワックス、誘導、または熱チャンバーの使用を通じて、転移性癌を治療するのに使用可能である。
【0061】
放射療法は、細胞の遺伝子成分を損傷するのに、電離(ionizing)放射線を利用する;正常および癌性細胞両方が損傷を受ける可能性があるが、正常細胞は損傷を修復する能力を保持し、一方、この能力は癌細胞で減少する。限局された固形腫瘍は、しばしば、放射療法を用いて治療する;白血病およびリンパ腫もまた、放射療法で治療可能である。X線およびガンマ線を含む、いくつかの種類の電離放射線が使用可能である。放射療法は、放射線を腫瘍上に集中させる機械を用いて、あるいは腫瘍内に直接、または近傍の体腔に、放射性移植物を置くことによって、適用可能である。さらに、放射標識抗体を用いて、腫瘍細胞をターゲティングすることが可能である。科学者はまた、術中照射、および粒子ビーム照射と共に、腫瘍細胞を放射線により感受性にする放射感作剤(熱を含む)、または正常細胞を保護する放射保護剤を含む、他の放射療法技術も研究している。
【0062】
癌療法の別の種類、光線力学的療法(PDT)は、光エネルギーを利用して癌細胞を殺す。PDTでは、光感作剤を患者に投与して、患者を続いて光に曝露する(通常、罹患した体領域のみ)。光感作剤の多様な投与様式が当該技術分野に知られ、そして本発明において有用であろう。例えば、光感作剤を経口、局所、非経口、または限局(すなわち腫瘍または前癌性領域中に直接またはその近傍に)投与することが可能である。光感作剤はまた、リン脂質小胞または油エマルジョンなどのビヒクルを用いても搬送可能である。脂質に基づく搬送ビヒクルを使用した結果、腫瘍性細胞における光感作剤の集積が増進する可能性がある。やはり本発明に含まれる搬送の代替法には、微小球体、あるいは腫瘍性細胞表面上に位置するタンパク質(またはタンパク質類)に特異的に結合する、モノクローナル抗体、または他のタンパク質の使用が含まれる。
【0063】
使用する特定の光感作剤は、本発明に重要でない。本発明において有用な光感作剤の例には、ヘマトポルフィリン、ウロポルフィリン、フタロシアニン、プルプリン、アクリジン色素、バクテリオクロロフィル、バクテリオクロリンが含まれ、そして他のものが本明細書に開示される。使用される好ましい光感作剤は、フォトフリン(Photofrin)(登録商標)(QLT、カナダ・バンクーバー)であり;さらなる例が本明細書に開示され、そしてDoughertyらと共に、本明細書に開示する多様な他の情報源に論じられる。光感作剤のさらなる例は、米国特許出願20010022970として公表された、USSN 09/799,785、2001年3月6日出願に論じられる。化学療法剤に関して言えるように、投与する光感作剤の量は、使用する特定の光感作剤、被験者の年齢、体重および性別、並びに投与様式と共に、腫瘍の種類、大きさおよび位置に応じて多様であろう。
【0064】
さらに、被験者を曝露する光の波長は、使用する光感作剤、並びに腫瘍または前癌性細胞の位置および深さに応じて多様であろう。一般的に、被験者は、フォトフリン(Photofrin)(登録商標)に関して、約600から900nm、好ましくは約600から約640nmの波長を有する光に曝露されるであろう。いくつかの他の光感作剤は、約650から850nmの、より高い波長で、より強い吸光を有し、これは、より長い波長の光が組織にさらに浸透する傾向があるため、より深部の腫瘍に有益である可能性がある。逆に、約410nmの波長は、浅い浸透が望ましい場合、より優れた結果を提供する可能性があり;こうした用量もまた、本発明の範囲内に属する。
【0065】
被験者を曝露する光の用量は、使用する光感作剤に応じて多様であろう。一般的に、被験者は、フォトフリンに関して、赤い光、約50から500J/cm2の光用量に曝露されるであろう。他の感作剤がより効率的であり、そしてそれにより、典型的には約10J/cm2の、より小さいフルエンスしか要しない可能性がある。より高いフルエンスでは、高体温が起こる可能性があり、これがPDTを増進する可能性がある;さらに、高体温およびPDTは相乗的に作用する可能性がある。よって、本明細書中に記載の内容を包含する。いくつかの異なる光供給源が当該技術分野に知られ;本発明の方法において、選択した波長の適切な用量を搬送することが可能な、いかなる適切な光供給源を使用してもよい。
【0066】
光曝露のタイミングは、使用する光感作剤、腫瘍または前癌性細胞の性質および位置、並びに投与法に応じるであろう。典型的には、光曝露は、光感作剤投与の約1時間から4日後に起こる。さらに、やはり、光感作剤、並びに腫瘍の性質および位置に応じて、より短い期間を用いてもよい。例えば、光感作剤の局所投与後の光曝露は、投与後、約10分後程度に早いか、または約3時間で起こってもよい(本明細書にその全体を援用する、米国特許第6,011,563号を参照されたい)。
【0067】
腫瘍細胞死を誘導するさらに別の方法は、遺伝子療法技術の適用を伴う。米国特許第6,066,624号、2000年5月23日発行は、腫瘍細胞に「自殺遺伝子」を導入することによって、限局された腫瘍を治療する方法を記載する。この技術では、自殺遺伝子を含んでなる組換えアデノウイルスベクターを腫瘍に搬送する。その後、自殺遺伝子にコードされるタンパク質によって作用し、腫瘍細胞死を生じるプロドラッグを、患者に投与する。さらに、こうした技術を用いて、サイトカイン遺伝子を腫瘍細胞内に導入することもまた可能である;サイトカインは、腫瘍をより免疫原性にするよう作用することが可能である。ウイルスベクターもまた、正常腫瘍抑制遺伝子または発癌遺伝子阻害剤を腫瘍細胞に搬送するのに使用可能である。したがって、例えば、p53の突然変異体型を発現する腫瘍は、腫瘍細胞の増殖抑止を導く、野生型p53でトランスフェクションすることが可能である。受容体様プロテインチロシンホスファターゼであるCD148は、いくつかの癌細胞で下方調節されているようであるタンパク質である(Autschbachら, Tissue Antigens 54:485;1999);癌性細胞へのCD148をコードするDNAの導入は、その増殖抑止を導く可能性がある。
【0068】
限局投与は、全身使用が望ましくない腫瘍殺傷剤(例えばTNF、FasL、または非常に高用量のCD40L)の使用を可能にする可能性があり、そしてこれを用いると、全身投与を用いて安全に達成可能であるよりも、腫瘍部位での多様な剤のより高い濃度が達成可能である。タンパク質の腫瘍内注射、腫瘍内または近傍での組換えタンパク質の発現を誘導する遺伝子療法技術の使用、および部位特異的および/または徐放技術の使用を含む、多様な手段を用いて、限局投与を達成可能である。さらに、生の(raw)DNAは、哺乳動物に注射すると、しばしば細胞に取り込まれ、そして発現されることが見出されてきている。したがって、望ましい因子をコードするDNAを腫瘍部位内またはその近傍に注射して、そして該DNAが近傍細胞に取り込まれると、コードされる因子の限局発現が生じるであろう。
【0069】
限局投与に有用である可能性がある技術の1つの種類は、ヒドロゲル素材、例えば光重合可能ヒドロゲル(Sawhneyら, Macromolecules 26:581;1993)を利用して、望ましい因子または因子類の持続放出を達成するものである。同様のヒドロゲルが、術後癒着形成を防止し(Hill−Westら, Obstet. Gynecol. 83:59;1994)、そして血管傷害後の血栓症および血管狭窄を防止する(Hill−Westら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:5967;1994)のに用いられてきている。タンパク質を、こうしたヒドロゲルに取り込み、活性剤の持続した限局放出を提供することが可能である(WestおよびHubbell, Reactive Polymers 25:139;1995;Hill−Westら, J. Surg. Res. 58:759;1995)。
【0070】
したがって、本明細書に開示する多様な因子はまた、限局投与が望ましい組織への適用のため、ヒドロゲルに取り込むことも可能である。例えば、腫瘍殺傷剤、DC誘引剤、DC成熟因子、またはCTL増進因子、あるいはこうした多様な因子の組み合わせを取り込んだヒドロゲルを、腫瘍の外科的除去または減少後に、組織に適用することが可能である。さらに、こうしたヒドロゲルに基づく処方は、当該技術分野に知られる他の方法によって、例えばカテーテルを用いて、血管系の望ましい位置でヒドロゲルを適用して、または腫瘍内投与が達成可能な他の手段いずれかによって、投与することが可能である。一般的な当業者は、例えばWestおよびHubbell、上記に論じられるように、標準的な薬物動態学的研究を適用することによって、適切なヒドロゲルを処方することが可能であろう。
【0071】
抗腫瘍反応を制御する因子の投与
DC動員因子、DC成熟因子、DC誘引因子およびT細胞増進因子は、適切な希釈剤またはキャリアー中で、被験者、好ましくはヒトに投与可能である。したがって、例えば、これらの因子のいずれか1つまたはすべてを、多量(bolus)注射、連続注入、移植物からの持続放出、または他の適切な技術によって、投与することが可能である。さらに、因子は、限局投与(すなわち腫瘍内投与)するか、または遺伝子療法技術を用いることによって投与することが可能である。例えば、IL−2、IL−12、またはIL−15などのCTL増進因子をコードする遺伝子で腫瘍細胞をトランスフェクションしてもよい。トランスフェクションされた腫瘍細胞を個体に投与して(例えば腫瘍内)、抗原に対して、より強く、そして改善された免疫反応を提供する。当業者は、動物モデルまたは他のモデリング系を用いて日常的な実験を行って、好ましい投与経路および搬送する多様な因子の量を決定することが可能であろう(例えば投薬量計算および動物モデルに関する、米国特許第6,017,540号、2000年1月25日発行の議論を参照されたい)。
【0072】
典型的には、因子は、生理学的に許容しうるキャリアー、賦形剤または希釈剤と組み合わせて精製化合物を含んでなる薬剤組成物の型で投与されるであろう。こうしたキャリアーは、使用する投薬量および濃度で、被験者に非毒性である。通常、こうした組成物の調製は、化合物を、緩衝剤、アスコルビン酸などの酸化防止剤、低分子量(約10残基未満)ポリペプチド、タンパク質、アミノ酸、グルコース、スクロースまたはデキストラン類を含む炭水化物、EDTAなどのキレート剤、グルタチオン並びに他の安定化剤および賦形剤と合わせることを含む。中性緩衝生理食塩水または同種の血清アルブミンと混合した生理食塩水は、典型的な適切な希釈剤である。
【0073】
使用する特定の療法的有効量は、本発明には重大でなく、そして選択される特定の因子、治療しようとする疾患または状態と共に、被験者の年齢、体重および性別に応じて多様であろう。さらに、既定の因子を投与する時点は、投与する個々の因子およびその活性に応じるであろう。典型的には、DC動員因子は、腫瘍細胞死を誘導する剤の投与の10から15日前に投与し、そして腫瘍殺傷剤の投与後、5から10日間、続けることが可能である。DC成熟因子は、腫瘍細胞死誘導の24から48時間後に投与し;T細胞増進剤は、ほぼ同じ時点で投与する。
【0074】
腫瘍細胞死を引き起こす剤を、延長された期間投与する場合(特定の化学療法および放射措置におけるように)、DC動員および成熟因子、並びにT細胞増進剤を投与する措置を設計する際には、樹状細胞およびT細胞に対する連続療法の影響を考慮しなければならない。例えば連続療法の結果、動員されそして/または活性化されたDCおよび/またはCTLが死ぬ場合、DC成熟およびT細胞増進因子は、連続療法が完了するまで、または連続腫瘍殺傷措置において、エフェクター細胞が連続腫瘍殺傷療法によって負に影響を受ける可能性がより低い段階まで、抗腫瘍免疫反応が成熟する時間が十分にあるであろう時点まで、投与しない。
【0075】
多様な因子の典型的な療法的有効投薬量およびこれらを投与する典型的な間隔を、以下の表1に示す。当業者は、日常的な実験を適用することによって、これらおよび他の因子の投薬量および投与経路を最適化することが可能である。
【0076】
表1:典型的な療法的投薬量
【0077】
【表1】
【0078】
DC動員または成熟因子あるいはT細胞増進因子を限局剤(local agent)として、腫瘍内にまたは近傍に投与すると、全身使用に望ましくない剤(例えばTNF)の使用が可能になる可能性があり、そしてこれを用いると、全身投与を用いて安全に達成可能であるよりも、腫瘍部位での多様な剤のより高い濃度が達成可能である。同様に、DCまたはCTLの誘引剤として作用する剤もまた、腫瘍部位内またはその近傍の投与に有用であろう。こうした限局投与は、全身性の影響を最小限にしつつ、腫瘍部位でのエフェクター細胞の濃縮を可能にする。
【0079】
タンパク質の腫瘍内注射、腫瘍内または近傍での組換えタンパク質の発現を誘導する遺伝子療法技術の使用、および部位特異的および/または徐放技術の使用を含む、多様な手段を用いて、限局投与を達成可能である。さらに、生のDNAは、哺乳動物に注射すると、しばしば細胞に取り込まれ、そして発現されることが見出されてきている。したがって、望ましい因子をコードするDNAを腫瘍部位内またはその近傍に注射して、そして該DNAが近傍細胞に取り込まれると、コードされる因子の局在化された発現が生じるであろう。
【0080】
限局投与に有用である可能性がある技術の1つの種類は、ヒドロゲル素材、例えば光重合可能ヒドロゲル(Sawhneyら, Macromolecules 26:581;1993)を利用して、望ましい因子または因子類の持続放出を達成するものである。同様のヒドロゲルが、術後癒着形成を防止し(Hill−Westら, Obstet. Gynecol. 83:59;1994)、そして血管傷害後の血栓症および血管狭窄を防止する(Hill−Westら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:5967;1994)のに用いられてきている。タンパク質を、こうしたヒドロゲルに取り込み、活性剤の持続した限局放出を提供することが可能である(WestおよびHubbell, Reactive Polymers 25:139;1995;Hill−Westら, J. Surg. Res. 58:759;1995)。
【0081】
したがって、本明細書に開示する多様な因子はまた、限局投与が望ましい組織への適用のため、ヒドロゲルに取り込むことも可能である。例えば、DC誘引剤、DC成熟因子、またはCTL増進因子、あるいはこうした多様な因子の組み合わせを取り込んだヒドロゲルを、腫瘍の外科的除去または減少後に、組織に適用することが可能である。さらに、こうしたヒドロゲルに基づく処方は、当該技術分野に知られる他の方法によって、例えばカテーテルを用いて、血管系の望ましい位置でヒドロゲルを適用して、または腫瘍内投与が達成可能な他の手段いずれかによって、投与することが可能である。一般的な当業者は、例えばWestおよびHubbell、上記に論じられるように、標準的な薬物動態学的研究を適用することによって、適切なヒドロゲルを処方することが可能であろう。
【0082】
DCおよび/またはCTLのex vivo培養
当業者はまた、多様なex vivo培養技術もまた、本発明において使用可能であることも認識するであろう。造血幹細胞および前駆細胞のex vivo増殖法は、本明細書に援用される米国特許第5,199,942号に記載される。米国特許第6,017,527号は、DCを培養し、そして活性化する方法を記載する;他の適切な方法が当該技術分野に知られる。本発明の1つの側面において、ex vivo培養および増殖は:(1)末梢血採取物または骨髄外植片から、患者由来のCD34+造血幹細胞および前駆細胞を収集し;そして(2)こうした細胞をex vivoで増殖させることを含んでなる。特許第5,199,942号に記載される細胞増殖因子に加え、Flt3L、IL−1、IL−3、RANKLおよびc−kitリガンドなどの他の因子も使用可能である。
【0083】
CD34マーカーを有する幹細胞または前駆細胞は、骨髄中の単核細胞の約1%から3%しか構成しない。末梢血中のCD34+幹細胞または前駆細胞の量は、骨髄よりもおよそ10−100倍少ない。本発明において、Flt3L、GM−CSF、CD40LおよびIL−15などのサイトカインを用いて、in vivoで、幹細胞数を増加させるかまたは動員することが可能である。その後、当該技術分野に知られる方法を用いて、こうした細胞を得て、そして培養する(例えば米国特許第5,199,942号および第6,017,527号を参照されたい)。
【0084】
凍結保護剤としてジメチルスルホキシドを用いて、単離した幹細胞を管理下速度凍結装置(例えばCryo−Med、ミシガン州マウントクレメンス)中で凍結し、その後、液体窒素の気相に保存することが可能である;この技術は、例えば特定の化学療法措置に関するように、時間に渡って腫瘍細胞死を誘導する剤を投与する際に、特に有用であろう。樹状細胞(新鮮または凍結)の増殖および培養には、血清枯渇または血清に基づく培地を含む、多様な増殖用および培養用培地が使用可能である。有用な増殖用培地には、RPMI、TC 199、イスコーブ修飾ダルベッコ培地(Iscoveら, F.J. Exp. Med., 147:923(1978))、DMEM、フィッシャー培地、アルファ培地、NCTC、F−10、リーボビッツのL−15、MEMおよびマッコイ培地が含まれる。
【0085】
収集したCD34+細胞を、例えば本明細書に、そして前述の特許に記載されるように、適切なサイトカインと培養する。その後、CD34+細胞を分化させ、そして樹状細胞系譜の細胞に関係付ける(commit)。その後、これらの細胞は、CD1a、HLA DR、CD80および/またはCD86などの樹状細胞に特徴的なマーカーを用いて、フローサイトメトリーまたは同様の手段によってさらに精製する。精製樹状細胞を望ましい抗原(例えば問題の腫瘍に特異的な精製抗原、未精製腫瘍抗原調製、あるいは腫瘍抗原または抗原類をコードするDNAまたはRNA)でパルス処理して(該抗原に曝露して)、免疫系の他の細胞への提示に適した方式で、抗原を取り込むのを可能にすることが可能である。
【0086】
抗原は、古典的には、プロセシングされ、そして2つの経路を通じて提示される。細胞質ゾル区画中のタンパク質由来のペプチドは、クラスI MHC分子の背景で提示され、一方、エンドサイトーシス経路で見られるタンパク質由来のペプチドは、クラスII MHCの背景で提示される。しかし、当業者は、例外があることを認識する;例えば、MHC クラスI上に発現する外因性腫瘍抗原を認識する、CD8+腫瘍特異的T細胞の反応である。MHC依存抗原プロセシングおよびペプチド提示の概説は、Germain, R.N., Cell 76:287(1994)に見られる。
【0087】
抗原で樹状細胞をパルス処理する多くの方法が知られ;当業者は、選択した抗原に適した方法の発展を日常的な実験とみなす。一般的に、細胞の生存性を促進する条件下で、培養した樹状細胞に抗原を添加して、そしてその後、約24時間(約18から約30時間、好ましくは24時間)の期間、細胞が抗原を取り込みそしてプロセシングし、そしてクラスIまたはクラスII MHCいずれかと結合して細胞表面上に抗原ペプチドを発現するかまたは提示するのに十分な時間を許容する。樹状細胞はまた、抗原をコードするDNAでトランスフェクションすることによって、抗原に曝露することも可能である。DNAが発現され、そして抗原はおそらく、細胞質ゾル/クラスI経路を介してプロセシングされる。さらに、例えばBoczkowskiら, Cancer Res. 60:1028, 2000に記載されるように、腫瘍細胞から増幅したmRNAとDCを接触させることによって、腫瘍抗原を提示するよう誘導することが可能である。
【0088】
抗原をプロセシングした後、DCをCD40LなどのDC成熟因子と接触させる。CD40Lおよび他のDC成熟因子は、DC表面上のMHC分子(並びにCD80およびCD83などの共刺激分子)の数を増加させ、それによってその抗原提示能を増進させる。さらに、成熟因子に曝露されたDCは、活性化の示標となるサイトカイン(例えばIL−12、IL−15)を分泌する。成熟した活性化DCによって抗原を提示されたCD4+細胞は、T細胞増殖因子として作用する、IL−2、IL−4、およびIFN−γを発現するであろう。したがって、成熟した活性化DCは、有効な腫瘍特異的免疫反応を刺激することが可能である。
【0089】
ペプチドなどのより小さい抗原は、樹状細胞によるプロセシングを必要としないが、ペプチドへのDCの曝露に際して、適切なMHC分子に結合する。ペプチド抗原を用いた場合、利用可能なMHC分子数を増加させ、そしてそれによって抗原運搬能を増加させるため、ペプチド抗原への曝露前に、DCの成熟を刺激するのが好適である。より大きいタンパク質抗原をプロセシングし終えた、DCの成熟を刺激するのに有用である同一のDC成熟因子はまた、DCがより小さいペプチド抗原を提示する能力を増大するのにも有用であろう。
【0090】
その後、抗原特異的免疫反応を刺激するため、活性化された抗原運搬DCを個体に投与する。DCは全身投与することが可能であるし、あるいは腫瘍内または近傍に限局投与することが可能である。望ましい場合、CTL増進因子などのさらなる剤を個体に投与して、免疫反応をさらに増進することが可能である。DCは、さらなる剤の投与前に、投与と同時に、または投与後に、投与可能である。あるいは、T細胞もまた、個体から収集して、そして活性化された抗原運搬樹状細胞にin vitroで曝露して、ex vivoで抗原特異的T細胞の発展を刺激して、これをその後、個体に投与することも可能である。T細胞は、全身投与することが可能であるし、あるいは腫瘍内または近傍に限局投与することが可能である。望ましい場合、T細胞増進因子を個体に投与して、免疫反応をさらに増進することが可能である。T細胞は、さらなる剤の投与前に、投与と同時に、または投与後に、投与可能である。
【0091】
疾患の予防または治療
本明細書に提示するこれらの結果は、併用療法が、多様な腫瘍の治療において、重要な臨床的使用のものである可能性があることを示す。用語、治療は、当該技術分野に一般的に理解されるように、臨床的症状または疾患の徴候が観察された後の療法開始を指す。しかし、癌にはしばしば、厳密には悪性と性質決定することが不可能な細胞の異常増殖が先行する。例えば、細胞は、数が増加するが、同一組織起源の正常細胞と有意には異ならない、過形成を示す可能性がある。上皮または結合組織細胞は転移性になる可能性があり、これは、完全に分化した細胞の1種類を別のものに置換することを意味する。細胞が均一性および構築的配向を失い、そして他の異常な特徴を示す、異形成(dysplasia)が、しばしば癌に先行する。したがって、本発明は、潜在的な免疫反応を最大化することによって、前癌性状態(例えば子宮頚上皮内腫瘍)の治療、転移性疾患の予防または減少、および癌の再発または再発生の予防に有用であろう。この方式で使用すると、本明細書に記載する本発明の方法は、罹患した個体の厳密に定義された治療よりむしろ、予防的処置と考えることが可能である。
【0092】
本明細書に引用するすべての参考文献の関連する開示は、特に本明細書に援用される。以下の実施例は、特定の態様を例示することを意図し、そして本発明の範囲を限定することを意図しない。一般の当業者は、さらなる態様が本発明に含まれることを容易に認識するであろう。
【0093】
【実施例】
実施例1
本実施例は、腫瘍細胞を接種されたマウスの平均および中央値生存時間に対する、Flt3LおよびCD40Lと併用した放射療法の効果を記載する。6から8週齢のC57BL/6マウスに、約1x105の非常に転移性であり免疫原性が劣ったルイス肺癌腫(3LL/D122)細胞を、実質的にChakravartyら(Cancer Research 59:6028;1999)に記載されるように、足に皮下接種した。接種3週間後、すべてのマウスは、肺の出現前(pre−emergent)微小転移病巣と共に、原発足蹠腫瘍を発展させた。
【0094】
体を鉛で保護して、マウスをルサイトジグ(lucite jig)に入れることによって、コナル(conal)放射に供した。40MCG Philips電圧装置を320kVp、5mAおよび0.5mm Cuろ過で操作して用い、足蹠領域を限局照射した。照射を行った時点を第0日と称した。マウスの1つのサブセットに、Flt3Lを投与し(第1日から第12日まで、各日、マウスあたり10μgを腹腔内投与);1つのサブセットにCD40Lを投与し(第8日から第12日まで、各日、マウスあたり10μgを腹腔内投与)、そして1つのサブセットに第1日から第12日までFlt−3L、そして第8日から第12日までCD40Lを投与した(先に示したのと同一投薬量)。結果を下の表2に示す。
【0095】
表2:併用療法で処置したマウスの生存
【0096】
【表2】
【0097】
これらの結果は、DC動員因子およびDC成熟因子の併用が、放射療法に供した哺乳動物の抗腫瘍反応を増大させることを示す。したがって、このおよび同様の技術はまた、ex vivoでも使用を見出すであろう。DCは、以下に記載するように、腫瘍を持つ被験者から得て、そして腫瘍抗原(例えば、腫瘍切除中に除去した照射腫瘍細胞、または腫瘍抗原の他の型いずれか)に曝露することが可能である。DCをプロセシング前(ペプチド抗原)または後(プロセシングを要する大きなまたは複雑な抗原)いずれかに、成熟剤または因子(すなわちCD40L)に曝露して、MHCおよび共刺激分子数を増加させ、そして抗原提示を増進する。
【0098】
抗原提示DCは、腫瘍を持つ個体に、単独で、またはT細胞増殖因子と併用して投与して、残った腫瘍細胞(手術または腫瘍除去の他の伝統的な手段で接近不能な転移または腫瘍病巣を含む)を除去する能力増加を生じることが可能である。あるいは、またはさらに、腫瘍特異的T細胞は、以下に記載するように、ex vivoで得て、そしてDCおよび/またはT細胞増殖因子と共に、腫瘍を持つ被験者に投与することが可能である。
【0099】
実施例2
本実施例は、ex vivoで、精製樹状細胞を生成する方法を記載する。ヒト骨髄を得て、そしてCD34+表現型を有する細胞を単離して、そして適切な培地、例えば樹状細胞の増殖を促進するサイトカイン(すなわち各20ng/mlのGM−CSF、IL−4、TNF−a、あるいは100ng/mlのFlt3Lまたはc−kitリガンド、あるいはその組み合わせ)を含有する、マッコイの強化培地中で培養する。培養は、湿った空気中、10% CO2中で、37℃でおよそ2週間続ける。その後、CD1a+、HLA−DR+およびCD86+に対する抗体を用いたフローサイトメトリーによって、細胞を分別する。GM−CSF、IL−4およびTNF−αの併用は、培養2週間後に得られる細胞数の6から7倍の増加を生じることが可能であり、このうち50−80%の細胞がCD1a+HLA−DR+CD86+である。Flt3Lおよび/またはc−kitリガンドの添加は、総細胞の増殖、そしてしたがって樹状細胞の増殖をさらに増進する。これらの条件下で単離し、そして培養した細胞の表現型解析は、調べたすべての因子の組み合わせで、細胞の60−70%の間がHLA−DR+、CD86+であり、細胞の40−50%がCD1aを発現することを示す。
【0100】
実施例3
本実施例は、腫瘍に罹患した個体から樹状細胞を収集し、そして増殖させる方法を記載する。細胞収集前に、Flt3Lを、単独で、またはサーグラモスティム(sargramostim)(GM−CSF;リューカイン(Leukine)、Immunex Corporation、ワシントン州シアトル)と併用して個体に投与し、循環PBPCおよびPBSCを動員するか、またはその数を増加させる。CSF−1、GM−CSF、c−kitリガンド、G−CSF、EPO、IL−1、IL−2、IL−3、IL−4、IL−5、IL−6、IL−7、IL−8、IL−9、IL−10、IL−11、IL−12、IL−13、IL−14、IL−15、GM−CSF/IL−3融合タンパク質、LIF、FGFなどの他の増殖因子およびその組み合わせは、同様に、Flt3Lと別個に、連続して、または同時に投与することが可能である。
【0101】
動員PBPCおよびPBSCは、当該技術分野に知られるアフェレーシス法を用いて収集する。例えば、Bishopら, Blood, vol.83, No.2, pp.610−616(1994)を参照されたい。簡潔には、PBPCおよびPBSCは、慣用的な装置、例えばHaemoneticsモデルV50アフェレーシス装置(Haemonetics、マサチューセッツ州ブレインツリー)を用いて収集する。およそ6.5x108単核細胞(MNC)/kg個体が収集されるまで、典型的には週5回を超えないように、4時間の収集を行う。
【0102】
収集したPBPCおよびPBSCのアリコットを顆粒球−マクロファージコロニー形成単位(CFU−GM)含量に関してアッセイする。簡潔には、MNC(およそ300,000)を単離し、修飾マッコイ5A培地、0.3%寒天、200U/ml組換えヒトGM−CSF、200U/ml組換えヒトIL−3、および200U/ml組換えヒトG−CSF中、完全に加湿した空気中、5%CO2中で、37℃で約2週間培養する。Flt3LまたはGM−CSF/IL−3融合分子(PIXY321)を含む他のサイトカインを培養に添加してもよい。これらの培養をライト染色で染色し、そして解剖顕微鏡を用いて、CFU−GMコロニーを記録する(Wardら, Exp. Hematol., 16:358(1988))。あるいは、CFU−GMコロニーは、Sienaら, Blood, Vol.77, No.2, pp400−409(1991)のCD34/CD33フローサイトメトリー法、または当該技術分野に知られる他のいずれかの方法を用いてアッセイすることが可能である。
【0103】
CFU−GM含有培養は、管理下速度凍結装置(例えばCryo−Med、ミシガン州マウントクレメンス)中で凍結し、その後、液体窒素の気相に保存する。10パーセントのジメチルスルホキシドを凍結保護剤として使用することが可能である。個体からのすべての収集が終了した後、CFU−GM含有培養を融解して、そしてプールし、その後、Flt3Lと、単独で接触させるか、CFU−GMを樹状細胞系譜に駆動する、上に列挙した他のサイトカインを、Flt3Lと連続して併用するか、または同時に併用して接触させる。樹状細胞を培養し、そして上述のように選択したマーカーを示す細胞の割合に関して解析する。
【0104】
実施例4
本実施例は、樹状細胞がT細胞の抗原特異的増殖を刺激する能力を例示する。細胞は、実質的に実施例2および/または3に記載するように、腫瘍に罹患した個体から得る。樹状細胞を単離し、そして選択したサイトカインの存在下で2週間培養する。腫瘍抗原調製を作成し、そして樹状細胞を抗原と共に提供し、そして樹状細胞が抗原をプロセシングするのを可能にする。樹状細胞増殖を補助するサイトカインを含有するマッコイの強化培地中、CD40L(1μg/ml)の可溶性三量体型の存在下または非存在下で、抗原でパルス処理した樹状細胞をさらに24時間培養し、その後、37℃で10%CO2大気中、腫瘍抗原(Modyら, J. Infectious Disease 178:803;1998)で24時間パルス処理する。あるいは、腫瘍抗原が樹状細胞によるプロセシングを必要としない小ペプチドである場合、樹状細胞は、抗原曝露前にCD40Lと培養する。これは、樹状細胞表面上のHLA分子数を増加させ、そしてその抗原提示能を増進するであろう。
【0105】
自己腫瘍反応性T細胞は、個体由来のCD34−細胞を、腫瘍抗原および低濃度のIL−2および/またはIL−7および/またはIL−15(2ng/mlから5ng/ml)の存在下で、約2週間培養することによって得る。CD34−集団は、そのうち一部が腫瘍に対して反応性である、ある割合のT細胞(約5%)と共に、抗原提示細胞として作用する他の細胞種を含有する。第2週までに、細胞集団は、約90%のT細胞を含んでなるであろうし、その大部分は、腫瘍特異的であり、T細胞活性化マーカーは低レベルであろう。
【0106】
抗原特異的T細胞増殖アッセイは、10%熱不活性化ウシ胎児血清(FBS)を添加したRPMI中、抗原でパルス処理した樹状細胞の存在下、37℃10%CO2大気中、腫瘍特異的T細胞を用いて行う。ウェルあたりおよそ1x105 T細胞を、力価測定した(titrated)数の樹状細胞の存在下、丸底96ウェルマイクロタイタープレート(Corning)中、三つ組で5日間培養する。細胞は、培養の最後の4から8時間、トリチウム標識チミジン(25Ci/nmol、Amersham、イリノイ州アーリントンハイツ)1mCi/ウェルでパルス処理する。自動化細胞採取装置で、ガラスファイバーディスク上に細胞を採取し、そして取り込まれたcpmを液体シンチレーション分光測定によって測定した。
【0107】
実施例5
本実施例は、実質的にLynchら, Eur. J. Immunol. 21:1403(1991)に記載されるような線維肉腫のネズミモデルにおいて、マウスが線維肉腫細胞のチャレンジを拒絶する能力に対する、Flt3Lを伴うまたは伴わない、抗体Ox40m5の影響を記載する。6から8週齢のC57BL/10J(B10)マウスに、約1x105のB10線維肉腫細胞を、足に皮下接種した。Flt3L(第10日から第29日まで、各日、マウスあたり10μgを腹腔内投与)、Ox40m5(第10日から第27日まで、3日ごとに、マウスあたり10μgを腹腔内投与)、または両方いずれかでの療法を、接種10日後に開始した。すべての対照マウスは、腫瘍を発展させ、Flt3Lのみを投与したマウスの80%も同様であったが、Ox40m5で処置したマウスの30%、およびOx40m5に加えてFlt3Lで処置したマウスの50%は、腫瘍を拒絶した。
【0108】
C3Hマウスにおいて、Ox40m5の2つの異なる用量(マウスあたり100μgまたはマウスあたり500μgいずれか)を第5日、第9日、第11日および第13日に投与して、87と称される別の線維肉腫で同様の実験を行った。より高い用量(マウスあたり500μg)では、40%のマウスが腫瘍を拒絶し、一方、より低い用量を投与したマウスの30%が腫瘍を拒絶した。実質的に同一のパラメーターを用いて、4−1BBm6と併用してOx40m5を投与した場合、両抗体を投与したマウスの100%が腫瘍を拒絶し、一方、4−1BBm6のみを投与したマウスの60%が腫瘍チャレンジを拒絶した。
【0109】
Ox40m5および4−1BBm6の併用はまた、腎細胞癌腫モデルでも調べた。この併用は、単独でまたはFlt3Lの添加を伴っても、腫瘍チャレンジからの有意な保護を生じなかった(マウスの10%しか、腫瘍チャレンジを拒絶しなかった)が、Ox40m5および4−1BBm6またはOx40m5、4−1BBm6およびFlt3Lいずれかで処置した動物において、腫瘍増殖は遅くなった。用いた腎癌腫細胞は、迅速に増殖する腫瘍を生成することが知られ;したがって、Ox40m5および4−1BBm6の組み合わせは、腫瘍の増殖に影響を与える他の療法と併用して投与すると、腫瘍が非常に侵襲性であることが知られる場合であっても、有用であることが立証される可能性がある。
【0110】
実施例6
本実施例は、OX40アゴニスト、Ox40m5が、樹状細胞に誘導されるCD8 T細胞活性化を増加させる能力を例示する。OVA特異的CD8トランスジェニックマウス(OT.I)由来の、少数だが検出可能な数の未処置細胞を、未処置レシピエントの静脈内に移植した。移植1日後、クラスI OVAペプチドでパルス処理した3x105成熟樹状細胞(Flt3L処置した野生型またはMHCクラスIIノックアウト動物由来)で、後足蹠において、動物を皮下的に免疫した。同じ日、動物にまた、Ox40m5(100μg)または対照モノクローナル抗体を腹腔内注射した。排出リンパ節中のT細胞増殖は、免疫5日後、FACSによって監視した。
【0111】
Ox40m5およびOVAペプチドパルス処理野生型樹状細胞の同時注射は、CD8 T細胞増殖を強く増進した(が、クラスIノックアウトマウス由来の樹状細胞の場合はしなかった)。これらの免疫動物由来のリンパ節細胞もまた、in vitroで、該抗原で再刺激した。これらの培養由来の上清をIFN−γ産生に関して評価した。野生型樹状細胞およびOx40m5で同時免疫すると、樹状細胞のみで免疫したのに比較して、IFN−γの産生が増進された。クラスIノックアウト樹状細胞で免疫したマウス由来のリンパ節細胞は、in vitroでの再刺激に際して、低レベルのIFN−γを産生し、そしてOx40m5の同時注射は、この産生を増進しなかった。これらのデータは、OX40アゴニストが、in vivoで、CD8 T細胞増殖および活性化を増進し、そしてしたがって、抗原特異的エフェクターT細胞反応を増進することを示す。
【図面の簡単な説明】
【図1】図1は、本発明の方法(類)における多様な工程を示すフローチャートである。in vivoで行わなければならない工程は、フローチャートの左側に列挙し、一方、ex vivoで行うことが可能な工程は、右側に示す。工程は、通常行われるであろう、一般的な順序で示しているが、当業者は、日常的な実験によって、工程の順序および/またはタイミングと共に、投薬量および投与経路を最適化することが可能である。したがって、例えば、腫瘍殺傷剤は、本明細書に開示するいかなる手段によって投与してもよいし;樹状細胞(DC)成熟剤および/または培養したDC(未成熟または活性化した成熟DC)を投与するのに最適な時間は、腫瘍殺傷剤の性質、およびあるとすればDCに対するその影響に応じるであろう。同様に、本明細書に詳細に記載するように、成熟した活性化抗原運搬DCをex vivoで調製する際、当業者は、ex vivoで行う工程を調整して、活性化および抗原提示能を最適化するであろう(すなわち、一般的に、ペプチド抗原では、成熟後にDCをペプチドと接触させるが、一方、プロセシングを要する、より大きい抗原では、通常、成熟前にDCを抗原と接触させ、そしてプロセシングを可能にする)。さらに、当業者は化学誘引を利用して、ケモカインまたはケモカイン誘導剤の限局投与(本明細書に記載する方法いずれかによって達成する)によって、特定の部位への細胞の輸送を増進することが可能であり、例えばDCを誘引するケモカイン(またはケモカイン誘導剤)を腫瘍内に投与して、腫瘍抗原を取り込むDCの数を増加させるか、またはケモカイン(またはケモカイン誘導剤)をリンパ節内に投与して、抗原運搬DCのT細胞リッチ領域への輸送を促進する。さらに、ex vivo培養用にT細胞を得る前に、腫瘍を持つ被験者に循環T細胞数を増進する剤を投与することが可能である。増殖させたT細胞を被験者に投与する際、同じ剤(または別のT細胞増進剤)を投与することが可能である。
【図2】図2は、ヒト顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子のヌクレオチドおよびアミノ酸配列を示す。
発明の分野
本発明は、腫瘍学療法に関し、そしてより詳細には、集合的に樹状細胞を増加させ、樹状細胞の成熟を刺激し、そして樹状細胞にT細胞へ抗原提示させ、そしてT細胞を刺激する剤の併用で、腫瘍を持つ被験者を治療することを伴う併用療法に関する。
【0002】
関連技術の説明
用語、癌は、正常な細胞増殖が乱されている、非常に多様な疾患状態を含む。癌の治療において、多くの進歩があったが、いくつかの型は、他のものより治療しにくいままである。治療における難問の1つは、正常細胞の多様な種類から派生する、多くの種類の癌があることから生じる。一般的に、疾患への進行は、異常な細胞が免疫系を回避して、そして制御不能に増殖するために起こると考えられる。したがって、免疫系の回避は、すべてでないとしても大部分の癌に共通であるようである。
【0003】
免疫系が癌の発展に重大な役割を果たすことが理解されたため、免疫系を刺激して、癌性細胞を認識させ、そしてこれらの細胞を除去する、多様な手段に関して、多大な関心が生じてきた。抗癌療法使用のため、インターロイキン2、4、および6、並びに他のサイトカインを含め、多様な生物学的反応修飾因子(modifier)が調べられてきている。各因子は、ある患者では、効力を明示することが可能であるが、広く有効であることが示されたものはない。さらに、いくつかのこうした因子は、用量を制限する毒性効果を有することが見出されてきている。したがって、研究者は、最小限の有害な効果で、免疫反応が有効な抗腫瘍活性を発展させるのを可能にするであろう多様な因子の組み合わせを探してきている。しかし、本発明以前に、最適な種類の組み合わせは知られていない。
【0004】
発明の概要
本発明は:(a)DC動員因子(mobilization factor)を投与し;(b)腫瘍殺傷剤を投与し;そして(c)DC成熟剤を投与することによって、腫瘍を持つ被験者を治療する方法を提供する。本発明の1つの態様において、腫瘍殺傷剤は、樹状細胞の成熟を刺激する剤(DC成熟剤)と同一の剤である。本明細書に記載する方法は、所望により、1又はそれより多くのTリンパ球増進剤を投与し、そして/または化学誘引剤を投与して、動員した樹状細胞および/またはT細胞を腫瘍部位などの特定の部位に誘引する工程をさらに含む。所望により、該方法は、腫瘍抗原(類)を被験者に投与することをさらに含んでもよい。
【0005】
1つの態様において、本発明の方法は、直前に記載した剤(DC動員因子、DC成熟剤、腫瘍殺傷剤、Tリンパ球増進剤、および化学誘引剤)を、局所(topically)、皮下、静脈内、腫瘍内、節内(intranodal)または筋内投与、徐放または持続放出処方の型での投与、経口投与、あるいは当該技術分野の日常的な技術を持つ当業者に知られる他の経路いずれかの使用を含む、適切な方法いずれかによって、腫瘍を持つ被験者に投与する、in vivo併用免疫療法である。さらに、例えば、手術、レーザー治療、放射療法、腫瘍のウイルス感染または他の腫瘍切除療法中に、またはそれらの直後に、限局持続放出処方を適用することによって、あるいは当該技術分野に知られる、単数または複数の剤を腫瘍部位に搬送する、他の方法を使用することによって、多様な剤を腫瘍部位内または近傍に、限局(locally)投与することが可能である。
【0006】
別の態様において、本発明の方法は、1又はそれより多くの上述の投与工程をex vivoで行う、併用免疫療法である。例えば、本発明は、(a)腫瘍を持つ被験者にDC動員因子の療法的有効量を投与し;(b)DC動員因子を投与した、腫瘍を持つ被験者から樹状細胞を得て;(c)ex vivo培養において、腫瘍を持つ被験者から得た樹状細胞を培養し;そして(d)腫瘍を持つ被験者に、培養した樹状細胞を投与することを含む、併用療法を提供する。好ましくは、抗腫瘍療法が、投与しようとする樹状細胞に不都合な影響を与えないであろう時点で、樹状細胞を投与する。
【0007】
所望により、本発明のex vivo併用免疫療法は、細胞が他の免疫細胞に腫瘍抗原を提示することが可能な方式で、培養した樹状細胞を腫瘍抗原と接触させる工程をさらに含む。さらに、ex vivo法は、抗原提示を促進するため、樹状細胞の活性化および/または成熟を刺激する剤で、培養した樹状細胞を処理する工程を含んでもよい。樹状細胞の活性化および/または成熟を刺激する剤で、培養した樹状細胞を処理する工程は、抗原がプロセシングを必要とするか否かに応じて、培養した樹状細胞を抗原と接触させる前または後に行うことが可能である。典型的には、抗原が樹状細胞によるプロセシングを要するならば、培養した樹状細胞の処理は、樹状細胞が抗原をプロセシングした後に行う。抗原が、培養した樹状細胞によるプロセシングを必要としないならば、樹状細胞の活性化および/または成熟を刺激する剤で、培養した樹状細胞を処理する工程は、培養した樹状細胞を抗原と接触させる前に行う。
【0008】
さらに別の態様において、本発明は、樹状細胞に特定のサイトカインを分泌させることをさらに含む。ex vivo法において、これは、サイトカイン発現を誘導する1又はそれより多くの剤と樹状細胞を接触させることによって、またはサイトカインをコードする遺伝子で樹状細胞をトランスフェクションすることによって、達成することが可能である。
【0009】
腫瘍を持つ個体に、培養した樹状細胞を投与するのと同時に、本発明は、培養した樹状細胞または成熟した抗原提示樹状細胞を、単独で、またはT細胞増進剤(類)と併用して投与することをさらに含む。別のアプローチにおいて、本発明の方法は、培養した樹状細胞を用いて、ex vivoで腫瘍特異的細胞傷害性T細胞を生成し、そして生成した腫瘍特異的細胞傷害性T細胞を、腫瘍を持つ被験者に投与することを含む。T細胞増進剤は、T細胞を得る前に、腫瘍を持つ被験者に投与することが可能であるし;あるいはまたはさらに、T細胞増進剤は、ex vivoで生成した腫瘍特異的T細胞と組み合わせて、被験者に投与することが可能である。
【0010】
本発明の方法は、化学誘引剤を投与して、動員した樹状細胞および/またはT細胞、NK細胞または他の免疫細胞を腫瘍部位または別の部位に誘引する(すなわち抗原運搬DCをT細胞リッチリンパ節に誘引する)ことをさらに含む。
【0011】
多くの癌が免疫抑制効果を有するため、本明細書に記載する併用免疫療法は、化学療法または放射療法を受けているか、あるいは癌性細胞を有する個体で起こる可能性がある免疫抑制を患う個体を治療するのに有用である。本発明の免疫療法は、抗腫瘍反応を刺激し、そして抗腫瘍療法の副作用からの免疫系の回復を促進する。
【0012】
多くのDC動員因子は、腫瘍を持つ被験者において、骨髄前駆細胞集団を増進する。望ましい場合、本発明の方法は、免疫措置の一部として用いて、腫瘍を持つ被験者において、望ましい抗原に対する有効な免疫反応を生成することが可能である。
【0013】
本発明の方法を用いて:(a)DC動員因子の療法的有効量を被験者に投与し;(b)個体から樹状細胞を得て;(c)ex vivoで該樹状細胞を培養し;そして(d)抗腫瘍療法が、投与しようとする樹状細胞に不都合に影響を与えないであろう時点で、個体に該樹状細胞を投与することによって、ex vivoで、腫瘍を持つ被験者において、免疫反応を生成するか、または再生成することが可能である。
【0014】
本ex vivo療法のさらに別の側面において、腫瘍抗原に関して上述したのと類似の方式で、免疫反応を生成することが望ましい抗原で、樹状細胞を処理する。したがって、樹状細胞には、また、特定の望ましい免疫学的に活性である剤を分泌させることも可能であり;これらを、単独で、あるいは抗原に対する細胞傷害性Tリンパ球もしくはヘルパー細胞反応を増進する剤、またはT細胞の増殖を刺激するT細胞増殖因子と併用して、投与することが可能である。あるいは、該樹状細胞を用いて、ex vivoで、抗原特異的細胞傷害性T細胞またはヘルパー細胞を生成し、これらを、その後、腫瘍を持つ被験者に投与することが可能である。本発明のこれらのおよび他の側面は、一般の当業者に明らかであろう。
【0015】
本発明はまた、抗腫瘍療法の結果として、または腫瘍自体の影響として生じる免疫抑制からの、腫瘍を持つ個体の回復を促進するのにも有用であろう。DC数を増加させる剤を投与し、そしてDCを得て、そして個体への続く再投与用に保存することが可能である。DCをex vivoで処理して、より有効に他の免疫細胞に抗原を提示させることが可能であり;さらに、ex vivo技術はまた、特定の病原性または日和見性生物に特異的な細胞傷害性T細胞などの抗原特異的エフェクター細胞を得るのに適用することも可能である。
【0016】
腫瘍を持つ被験者はまた、免疫抑制を誘導する治療が完了した後に、本発明の併用療法で治療して、免疫抑制誘導治療の結果、腫瘍を持つ被験者の免疫反応が減少する時間の長さを減じることが可能である。こうした併用療法は、個体が、免疫抑制誘導治療の結果、感染性疾患に屈服するであろうリスクを減じるであろう。
【0017】
発明の詳細な説明
好適には、本発明の方法は、死につつある腫瘍細胞近傍の部位に、または死につつある腫瘍細胞が排出される部位に、より多くの非常に利用可能な腫瘍抗原を提供する。該方法はさらに、活性化し、そして成熟させるため、樹状細胞(DC)集団を増加させ、そして樹状細胞が腫瘍抗原をプロセシングし、そしてT細胞に提示する能力を増進する。本発明の方法にしたがって処理した際、これらの腫瘍抗原を持つDCは、腫瘍に特異的な強力なメモリーまたは一次Tリンパ球反応を誘導する。T細胞増殖因子(活性化DCによって内因性に提供されるか、または外因性に添加されるもの)は、腫瘍特異的CD4+およびCD8+ T細胞集団をさらに拡大し、この集団がその後、残った腫瘍負荷の根絶を促進する。
【0018】
本発明の方法には、免疫に基づく腫瘍療法における剤の併用が含まれる。剤の併用には、剤の別個の、連続した、または同時投与が含まれる。本発明で使用するのに適した剤には、DC動員因子;腫瘍細胞アポトーシス剤および/または壊死剤(腫瘍殺傷剤);DC成熟剤;T細胞増進剤;および化学誘引剤が含まれる。本明細書に記載する方法には、個体に直接これらの剤を投与することを含むin vivo工程および/またはin vitro操作で細胞を接触させることを伴うin vivoおよびex vitro工程の併用が含まれる。
【0019】
1つの態様において、本発明は、個体に:少なくとも1つのDC動員因子;少なくとも1つの腫瘍殺傷剤;および少なくとも1つのDC成熟剤を投与することによって、腫瘍を持つ個体を治療する方法を提供する。別の態様において、本発明の方法には、少なくとも1つのT細胞増進剤を個体に投与することがさらに含まれる。さらなる態様には、個体に腫瘍抗原(類)を投与することがさらに含まれる。
【0020】
DC動員因子は、DCの数を増加させるか、またはDC集団を増加させるよう作用する。適切な樹状細胞動員因子(または剤)には、限定されるわけではないが、Flt3L、顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子(GM−CSF)、顆粒球コロニー刺激因子(G−CSF)、CD40Lおよびインターロイキン−15(IL−15)が含まれる。異なるDC動員因子は、ヒトにおいて、DCの別個のサブセットを動員する。Flt3Lは、CD11c+およびCD11c−IL−3R+サブセット両方を増加させ;前者のサブセットは40から50倍の間で増加し、そして後者は10から15倍の間で増加する(Pulendranら, J. Immunol. 165:566, 2000;Maraskovskyら, Blood 96:878, 2000)。対照的に、G−CSFは、CD11c−サブセットのみを増加させ、そしてこれは約7倍である(Pulendranら、上記)。DCのこの2つのサブセットは、CD4+ T細胞において異なるサイトカインプロフィールを引き出すため、異なるDC動員因子を用いて、他のものよりある種類の免疫反応を優先的に増進することが可能である(すなわちTH1様反応対TH2様反応)。
【0021】
Flt3Lは、細胞表面チロシンキナーゼ受容体Flt3に結合し、そしてそれによって前駆細胞および幹細胞の増殖および分化を調節するポリペプチドを指す。米国特許第5,554,512号、1996年9月10日発行(本明細書に援用)は、Flt3LをコードするcDNAの単離、および末梢幹細胞移植法におけるこの分子の使用を記載する。ヒトおよびネズミFlt3L両方、融合タンパク質および突然変異タンパク質(mutein)を含む、Flt3Lの多様な型が該特許に記載される。好ましいFlt3Lポリペプチドは、ヒトFlt3L(配列番号1)のアミノ酸28から160、アミノ酸28から182、またはアミノ酸28から235、およびその断片を含んでなる。特に好ましいFlt3Lポリペプチドは、配列番号1のアミノ酸28から179またはアミノ酸26から179を含んでなる。
【0022】
本発明で使用するのに適した他のFlt3L関連樹状細胞動員剤には、Flt3に結合し、そしてシグナルを伝達する剤が含まれる。こうしたFlt3結合タンパク質は、モノクローナル抗体およびヒト化抗体を含むアゴニスト性抗体、並びに少なくとも1つの適切な抗原結合ドメインを有し、そしてFlt3シグナルを伝達するアゴニスト性抗体由来の、組換え的に調製した剤を含む。
【0023】
GM−CSFは、増殖、並びに前駆細胞から顆粒球およびマクロファージへの分化を誘導するリンホカインである。米国特許第5,162,111号、1992年11月10日発行は、ヒトおよびネズミGM−CSF両方のヌクレオチドおよびアミノ酸配列を開示し、そして細菌疾患を治療する際のこのリンホカインの使用を記載する。GM−CSFおよびインターロイキン−3を含んでなる融合タンパク質(米国特許第5,108,910号、1992年4月28日発行に記載)、GM−CSFの突然変異タンパク質(米国特許第5,391,485号、1995年2月21日発行に開示)、およびGM−CSFを含んでなる持続放出組成物(米国特許第5,942,253号、1999年8月24日発行に記載)を含む、他の型のGM−CSFもまた、本発明で有用であろう。上に引用する特許の関連する開示を、特に本明細書に援用する。
【0024】
IL−15は、前駆タンパク質として産生され、そして切断されて活性型になる、分泌サイトカインである。成熟IL−15は、前駆T細胞または成熟T細胞の増殖および/または分化をシグナル伝達することが可能であり、そしてしたがって、(in vivoまたはex vivoで)T細胞免疫反応を制御するのに使用可能である。上皮由来T細胞因子と呼ばれていたIL−15は、米国特許第5,574,138号、1996年11月12日発行(本明細書に援用)に記載される。IL−15の好ましい型は、成熟IL−15ポリペプチドを含んでなる(非切断前駆タンパク質のアミノ酸49から162;配列番号2)。
【0025】
腫瘍殺傷剤には、アポトーシス誘導剤および壊死誘導剤両方が含まれ、これらには、例えば、放射療法、化学療法、超音波、光線力学的療法、熱または非常な低温への曝露、抗体療法、ウイルスでの感染、選択したタンパク質をコードするウイルスベクターでの形質導入、および腫瘍壊死因子(TNF)スーパーファミリーの多様なメンバー(TNF、リンホトキシンアルファおよびベータ、CD40L、およびTNF関連アポトーシス誘導またはTRAILを含む)が含まれる。放射および/または化学療法は、多様な型の癌または前癌性状態を治療するのに、癌学者が用いるツールの1つである。好ましい治療様式は、他の要因の中でも、治療しようとする癌の特定の種類、疾患の段階、および患者の状態に応じるであろう。癌および前癌性状態を治療する当業者は、使用可能な多様な治療措置を認識し、そしてその技術を適用して、各個体の状況の知識に基づいて、好ましい措置を決定するであろう。措置を選択する際、当業者を手助けするのに、いくつかの教科書が有用であり、これらには、Cancer:Principles and Practice of Oncology, 第5版(De Vita, HellmanおよびRosenberg監修;Lippincott−Raven Publishers, 1997)、およびPrinciples and Practice of Radiation Oncology, 第3版(PerezおよびBrady監修;Lippincott Williams and Wilkins Publishers, 1997)が含まれる。
【0026】
多様なコンピューターおよびインターネットに基づく情報源が、アポトーシス剤およびアポトーシス様式決定の補助に利用可能である。典型的なウェブサイトは、米国保健研究所の米国癌研究所によって維持されるものである(http://cancernet.nci.nih.gov/)。該ウェブサイトは、多様な種類の癌、治療オプション、実施中の多様な臨床試験、癌のリスク要因、および他の有用な情報源に関する情報を含有する。
【0027】
いくつかの抗体療法は、本発明を実施する際に適した腫瘍殺傷療法である。リツキサン(Rituxan)(登録商標)(リツキシマブ(Rituximab);IDEC Pharmaceuticals、カリフォルニア州サンディエゴ、およびGenentech, Inc、カリフォルニア州サンフランシスコ)は、CD20発現細胞の補体依存細胞溶解および抗体依存細胞傷害性を仲介する、細胞表面マーカーCD20に対するキメラモノクローナル抗体である。これはまた、化学耐性ヒトリンパ腫細胞株を感作し、そしてアポトーシスを誘導することも示されてきている。リツキサン(Rituxan)(登録商標)は、CD20陽性リンパ腫の治療に、臨床的に有意な効果を有することが示されてきている(McLaughlinら, J. Clin. Oncol. 16:2825;1998)。
【0028】
ハーセプチン(Herceptin)(登録商標)(トラスツズマブ(Transtuzumab);Genentech, Inc.、カリフォルニア州サウスサンフランシスコ)は、ヒト上皮増殖因子受容体2(HER2)の細胞外ドメインに高い親和性および特異性で結合する、ヒト化モノクローナル免疫グロブリンG1カッパ抗体である。前臨床研究によって、ハーセプチン(Herceptin)(を単独で、あるいはパクリタキセルまたはカルボプラチンと併用して投与すると、HER2遺伝子産物を過剰発現する、乳腺腫瘍由来細胞株の増殖が有意に阻害されることが示されてきている。ハーセプチン(Herceptin)((登録商標)の説明は、米国特許第6,054,297号、2000年4月25日発行に提供され、該特許の開示は本明細書に援用される。
【0029】
IMC−C225は、多様な腫瘍細胞上に見られる増殖因子受容体を遮断する別の抗体である。IMC−C225は、ImClone Systems Incorporated(ニューヨーク州ニューヨーク)によって開発され、そして生産されるキメラ抗体であり、そしてOverholserら(Cancer 89:74;2000)に記載される。該抗体は、増殖因子受容体を遮断し、そして腫瘍細胞が細胞死シグナルを回避するのを妨げることによって、作用する。
【0030】
別の有用な抗体は、ヒト上皮増殖因子受容体(EGFr)に高い親和性で結合する、トランスジェニックマウスで生成したヒトIgG2モノクローナル抗体、ABX−EGFである(Yangら, Crit Rev Oncol Hematol 38:17, 2001)。ABX−EGFは、EGFr発現ヒト癌腫細胞株へのEGFおよびトランスフォーミング増殖因子−アルファ(TGF−アルファ)両方の結合を遮断し、そしてEGF依存腫瘍細胞活性化を阻害する。完全なヒト抗体であるため、ABX−EGFは、ヒト患者において、長い血清半減期および最小免疫原性を示すであろう。
【0031】
腫瘍殺傷剤には、限定されるわけではないがTRAILを含む、特定の標的細胞のアポトーシスを誘導するポリペプチドが含まれる。TRAILは、癌細胞およびウイルス感染細胞のアポトーシスを誘導する。TRAILのクローニングおよび性質決定は、米国特許第5,763,223号、1998年6月9日発行に記載される。該特許に開示されるように、TRAILは、N末端細胞質ドメイン、膜貫通領域および細胞外ドメインを含んでなる。本発明において有用なTRAILの可溶性型には、TRAILの細胞外ドメイン、または標的細胞に結合し、そしてアポトーシスを誘導する能力を保持する、細胞外ドメインの断片が含まれる。可溶性TRAILの好ましい型は、米国特許第5,763,223号に開示されるような、ヒトTRAIL(配列番号5)のアミノ酸95から281を含んでなる。
【0032】
TRAILのオリゴマー型もまた有用であり;好ましい型は、三量体化を促進するペプチドに融合したTRAILの細胞外ドメインを含んでなる。天然存在三量体タンパク質由来のペプチドまたはオリゴマー化を促進する合成ペプチドが使用可能である。特に有用なペプチドは、ロイシンジッパー(ジッパードメインまたはロイシンジッパー部分)と称されるものである。特定の態様において、ロイシンジッパー中のロイシン残基を、イソロイシン残基と交換する。イソロイシンを含んでなるこうしたペプチドは、イソロイシンジッパーと称することが可能であるが、本明細書で使用するような用語「ロイシンジッパー」に含まれる。
【0033】
1つの例は、Hoppeら(FEBS Letters 344:191, 1994)および米国特許第5,716,805号に記載されるような、アミノ酸Pro Asp Val Ala Ser Leu Arg Gln Gln Val Glu Ala Leu Gln Gly Gln Val Gln His Leu Gln Ala Ala Phe Ser Glnを含んでなる、肺界面活性物質プロテインD(SPD)由来のロイシンジッパーである。三量体化を促進するロイシンジッパーの別の例は、配列番号4に示すジッパーペプチドである。別の態様において、該ペプチドは、N末端Arg残基を欠く。別の態様において、N末端Asp残基が付加される。適切なロイシンジッパーペプチドのさらに別の例は、アミノ酸配列Ser Leu Ala Ser Leu Arg Gln Gln Leu Glu Ala Leu Gln Gly Gln Leu Gln His Leu Gln Ala Ala Leu Ser Gln Leu Gly Gluを含んでなる。別のペプチドでは、前述の配列のロイシン残基が、イソロイシン残基で交換される。オリゴマー化を促進する特性を保持する、前述のジッパーペプチドの断片もまた、使用可能である。こうした断片の例には、限定されるわけではないが、前述のアミノ酸配列に示すN末端またはC末端残基の1または2残基を欠くペプチドが含まれる。
【0034】
本発明を実施するのに有用な、適切なDC成熟剤には、CD40LおよびCD40シグナル伝達のアゴニスト、RANKL、TNF、IL−1、CpGリッチDNA配列(ISS、または免疫刺激配列)、リポ多糖(LPS)、および単球馴化培地(Reddyら, Blood 90:3640;1997)が含まれる。これらの剤は、有効で、特異的な抗腫瘍細胞傷害性反応を刺激するその能力を増進することによって、DCに作用する。したがって、例えば、CD40Lを投与するかまたはDCをCD40Lと接触させることによって、DC上に発現されるCD40の連結が引き起こされ、これが次に、DC表面上のMHC分子数の増加を刺激する。これは、DCの抗原提示能を増加させる。成熟剤を投与するかまたはDCを成熟剤と接触させることによって、抗腫瘍反応を増大させるよう作用することが可能な、多様な免疫調節サイトカイン(例えばIL−12)の分泌もまた増進される。DCはまた、DCが活性化されたことを示すサイトカインの分泌を刺激する剤(DC活性化因子)と接触させてもよい。したがって、例えば、DCをCD40LおよびIFN−γと(同時に、連続してまたは別個に)接触させて、DCの成熟および活性化を刺激することが可能である。
【0035】
CD40に結合し、そしてそれによってシグナルを伝達することが可能なCD40Lポリペプチドは、本発明において有用である。CD40LをコードするcDNAが、米国特許第5,961,974号、第5,962,406号および第5,981,724号(以後、Armitage特許)に記載される。特に有用な成熟剤であるCD40Lの型には、CD40Lの細胞外部分、およびCD40に結合し、そしてシグナルを伝達する細胞外部分の断片が含まれる。特に、Armitage特許に開示されるような、配列番号3のアミノ酸47−261を含むポリペプチド、配列番号3のアミノ酸113−261を含むポリペプチド、配列番号3のアミノ酸51−261を含むポリペプチドおよびこれらのポリペプチドのオリゴマー型が、本発明で使用可能である。好ましいCD40Lは、ヒトCD40Lのシステインアミノ酸194がトリプトファンで置換されているものである。CD40Lの最も好ましい型は、Armitage特許で三量体CD40Lと称される可溶性CD40L融合タンパク質である。三量体CD40Lは、三量体化を促進するジッパードメインに融合したCD40Lの細胞外ドメインの断片を含んでなる(配列番号4)。
【0036】
さらに適切な樹状細胞成熟剤には、CD40に結合し、そしてシグナルを伝達する化合物が含まれる。これらの中に、モノクローナル抗体HuCD40−M2(ATCC HB11459)などのCD40に対するアゴニスト性抗体と共に、抗体HuCD40M2由来の抗原結合ドメインを含んでなる、ヒト化抗体または他の組換え的に得られる分子がある。
【0037】
RANKLは、CD40L同様、2型膜貫通タンパク質であり、約50アミノ酸未満の細胞内ドメイン、約240から250アミノ酸の膜貫通ドメインおよび細胞外ドメインを持つ(配列番号6)。RANKLは、USSN 08/995,659、1997年12月22日出願(PCT/US97/23775)に記載される。属するTNFファミリーの他のメンバー同様、RANKLは、膜貫通ドメインおよび受容体結合ドメインの間に、受容体結合に必要でない、スペーサー領域を有する。したがって、RANKLの可溶性型は、全細胞外ドメイン、または受容体結合領域を含むその断片を含んでなることが可能である。
【0038】
CD40L同様、RANKに結合し、そしてシグナルを伝達する他の化合物は、有用な成熟剤であり、そしてこれらには、RANKに対するアゴニスト性抗体と共に、RANKに結合する抗体由来の抗原結合ドメインを含んでなる、ヒト化抗体または他の組換え的に得られる分子が含まれる。TNFスーパーファミリーのいくつかの他のメンバーもまた、本発明の多様な側面に使用を有するであろう。これらには、リンホトキシンアルファおよびベータ、Fasリガンド、CD27リガンド、CD30リガンド、CD40リガンド、4−1BBリガンド、OX40リガンド、TRAILおよびRANKLが含まれる。
【0039】
DCはまた、Flt3L、GM−CSF、顆粒球コロニー刺激因子(G−CSF)、シクロホスファミドまたはCD34+細胞を動員することが知られる他の剤での動員後、ex vivoで増殖させることも可能である。こうして得たDCは、Flt3L、GM−CSF、インターロイキン−15(IL−15)、CD40リガンド(CD40L)またはNF−カッパBの受容体活性化因子のリガンド(RANKL)などの剤を用いて、培養してもよい。あるいは、DCは、末梢血単核細胞(PBMC)から、GM−CSFおよびインターロイキン−4(IL−4)を用いて生成することが可能である。培養DCは、上述のように、ex vivoでさらに処理して成熟および/または活性化を刺激してもよい。これらの方法によって、ex vivoで生成したDCは、腫瘍内に限局投与、血流内または排出リンパ節内に全身投与することが可能である。
【0040】
TNFは、炎症および免疫防御でもまた中心的な役割を果たす樹状細胞成熟剤であり、そして悪液質、敗血症ショックおよび自己免疫を含む、いくつかの発病過程に関与する。免疫系の細胞に対するその強力な効果のため、TNFはin vitroで有用である(例えば、細胞のex vivo生成、増殖および/または活性化、並びに/あるいはDCの成熟)。さらに、多様な技術、例えば本明細書に論じるような遺伝子療法あるいは腫瘍部位内またはその近傍での限局投与における使用を用いて、全身性の影響を最小限にすることが可能である。
【0041】
別の樹状細胞成熟剤であるリポ多糖(LPS)は、グラム陰性細菌の細胞壁構成要素である。LPSは、脂質コア(脂質A)および付着する多糖部分からなり;脂質Aは(いくつかの結合する多糖と共に)、毒性ショック症候群(敗血症ショックまたは内毒血症)を含む、グラム陰性菌血症の毒性効果の大部分に関与すると考えられる。LPSをex vivoで使用して成熟DCを生成することが可能であるし;あるいは本明細書に記載する多様な技術を適用して、腫瘍を持つ被験者へのLPSの限局投与を可能にすることが可能である。
【0042】
さらなる適切な樹状細胞成熟剤には、適切なT細胞増進剤でもある剤が含まれる。こうした剤には、インターロイキン2、15、7および12(それぞれIL−2、IL−15、IL−7、およびIL−12)並びにインターフェロン−ガンマおよびアルファ(IFN−γおよびIFN−α)、並びにOX40および4−1BBアゴニストが含まれる。これらの剤、および本発明の併用療法に有用性を有する多くの他の剤は、The Cytokine Handbook(第3版;Angus Thompson監修;Academic Press 1998)に記載される。
【0043】
T細胞増殖因子として最初に同定されたインターロイキン−2(IL−2)はまた、B細胞、ナチュラルキラー(NK)細胞、リンホカイン活性化キラー(LAK)細胞、単球、マクロファージおよびオリゴデンドロサイトにも影響を与えることが知られる。米国特許第6,060,068号、2000年5月9日発行は、IL−2およびワクチンアジュバントとしてのその使用を記載する。遺伝子療法におけるIL−2が、米国特許第6,066,624号、2000年5月23日発行に記載される。腫瘍性疾患の予防および治療のための熱ショックタンパク質/抗原性ペプチド複合体と組み合わせたIL−2の使用が、米国特許第6,017,540号、2000年1月25日発行に記載される。
【0044】
別の樹状細胞成熟剤およびT細胞増進剤である、インターロイキン−7(IL−7)は、免疫および非免疫細胞両方から分泌される約25kDaのサイトカインであり、そして免疫系の発展および細胞性免疫反応の生成に関与する。米国特許第5,328,988号、1994年7月12日発行は、ヒトIL−7の同定および単離を記載する。IL−7は、Tリンパ球の免疫エフェクター細胞機能を増進するため、CTL反応を増大する能力において、T細胞増進剤として、本発明の実施に有用である。IL−7はまた、増殖因子としても作用し、そして骨髄移植または高用量化学療法後の免疫細胞増殖を刺激するのにも用いられてきている。したがって、IL−7はまた、腫瘍細胞死誘導前に免疫細胞を動員するかまたは免疫細胞増殖を刺激する剤としても、本発明において有用である。
【0045】
インターロイキン−12(IL−12)は、インターロイキン−6(IL−6)受容体およびG−CSF受容体に構造的類似性を持つ重鎖(p40)、並びにIL−6およびG−CSFと似た軽鎖(p35)を有する、ヘテロ二量体タンパク質である。TH1免疫反応の優先的な発展を促進する能力があるため、IL−12は、感染性疾患設定と共に、腫瘍モデルで使用されてきている。IL−12は、有用なT細胞増進剤であり、そして本発明の方法において、増進した抗腫瘍CTL活性を提供する。IL−12を投与すると、腫瘍細胞アポトーシスが誘導可能であり、そしてしたがって、IL−12は、本発明において、アポトーシス剤として有用である。さらに、IL−12 DNAは、in vitro法で、例えば腫瘍細胞または樹状細胞がIL−12を発現するように形質導入し、そして該細胞を腫瘍内に投与することによって使用可能である。
【0046】
インターフェロンは、構造的相同性を示し、そして同一の祖先遺伝子に由来すると考えられるI型インターフェロン(IFN−α、IFN−ω、IFN−βおよびIFN−τ)、および他のインターフェロンと相同性を示さないが、いくつかの生物学的活性を共有するII型インターフェロン(IFN−γ)と称される、2つのカテゴリーに属する。どちらの種類のインターフェロンも、T細胞の細胞溶解活性を増大するMHC分子の発現を増進し、したがって、インターフェロンは有用なT細胞増進剤となっている。インターフェロンはまた、ナチュラルキラー(NK)細胞およびマクロファージも活性化し、これらはどちらも、腫瘍細胞を殺傷するのにより有効になる。さらに、いくつかの腫瘍細胞は、インターフェロンによって直接影響を受け、その成長または増殖が遅延される可能性がある。多くの特許が多様なインターフェロンの産生および使用を記載する。例えば、米国特許第5,540,923号は、I型およびII型インターフェロン両方を単離する方法を記載し、そして米国特許第5,376,567号および第4,889,803号は、IFN−γの組換え発現に関する。アクティミューン(Actimmune)TMとして知られるIFN−γ 1bの型が、InterMune、カリフォルニア州パロアルトに製造される。低用量のIFN−αが、慢性骨髄白血病(Schofieldら, Ann. Intern. Med. 121:736;1994)および癌の他の型の治療に用いられてきている。IFN−αの組換え型、イントロナ(Introna)(登録商標)は、多様な抗ウイルスおよび抗癌適応症のため、Schering−Ploughによって販売されている。
【0047】
タンパク質のTNF受容体スーパーファミリーの多様なメンバーに作用する他の剤もまた、本明細書において有用性を有するであろう。典型的な剤には、ヒト化またはその一本鎖型を含む、アゴニスト性抗体が含まれる。例えばMeleroらは、4−1BBに対するモノクローナル抗体が、マウスにおいて、巨大な、免疫原性の劣った腫瘍の根絶を導くことが可能であることを示した(Nature Med. 3:682;1997)。Meleroらによると、アゴニスト性4−1BB抗体は、腫瘍特異的CTL活性を増大させる。したがって、こうした抗体(または4−1BBリガンド)は、本発明の方法において、CTL活性を上方制御するのに使用を有する可能性があり;これらはまた、腫瘍細胞死を引き起こすことによって、利用可能な腫瘍抗原の量を増加させるよう機能する可能性もある。米国特許第5,674,704号、1997年10月7日発行は、細胞質ドメイン、膜貫通領域および細胞外ドメインを含んでなる4−1BBのリガンドを開示する。細胞外ドメインを含んでなる4−1BBリガンドの可溶性型もまた開示され;細胞外ドメインに多量体形成ペプチド(Fc分子またはジッパーペプチドなど)を付加することによって、さらなる多量体型を調製する。特に有用なアゴニスト性モノクローナル抗体は、4−1BBm6(バージニア州マナサスのアメリカンタイプ組織コレクションに、___に寄託し、そして寄託番号___を与えられた)である。ネズミ抗体のヒト化型、一本鎖抗体、およびヒト抗体遺伝子を提示し、そしてしたがって抗原に対するヒト抗体を作成するトランスジェニックマウスで生成する、モノクローナル抗体を含む、4−1BBm6と同一のエピトープに結合する抗体の他の型もまた、有用であろう。
【0048】
同様に、OX40のアゴニスト(アゴニスト性抗体およびOX40リガンドを含めて、OX40に結合し、そしてそれによってシグナルを伝達する分子)は、腫瘍拒絶を導くことが可能な、CD8+ T細胞反応を促進する。米国特許第5,457,035号、1995年10月10日発行は、OX40のリガンドを開示し;Miuraら(Mol. Cell Biol. 11:1313;1991)は、彼らがgp34と称する、ネズミOX40Lのヒト相同体を開示する。TNFスーパーファミリーの他のメンバー同様、OX40Lは、II型膜貫通タンパク質であり;OX40Lの可溶性型は、細胞外ドメインから作成する。OX40Lの多量体型は、標準的な組換えDNA技術を用い、免疫グロブリンFcまたはオリゴマー化ジッパーなどの多量体形成ペプチドを、OX40LをコードするDNAに付加して、調製する。好ましいアゴニスト性モノクローナル抗体は、Ox40m5(バージニア州マナサスのアメリカンタイプ組織コレクションに、___に寄託し、そして寄託番号___を与えられた)である。ネズミ抗体のヒト化型、一本鎖抗体、およびヒト抗体遺伝子を提示し、そしてしたがって抗原に対するヒト抗体を作成するトランスジェニックマウスで生成された、モノクローナル抗体を含む、Ox40m5と同一のエピトープに結合する抗体の他の型もまた、有用であろう。
【0049】
当業者は、トランスフォーミング増殖因子−β(TGF−β)を含む、T細胞に影響を与えるいくつかの他の因子もまた認識するであろう。このサイトカインは、未成熟リンパ球の成長を増進し、T細胞のアポトーシスを阻害し、そしてリンパ球に対する強力な免疫抑制効果を有する。したがって、TGF−βまたはその阻害剤(TGF−βに結合し、そして細胞結合TGF−β受容体への結合を妨げる抗体、TGF−β受容体の可溶性型、またはTGF−βがその受容体に結合するかまたはそれによってシグナルを伝達する能力に干渉する他の分子など)もまた、本発明において有用であろう。当業者は、日常的な実験を適用することによって、望ましい影響に応じて、使用に適した型を選択することが可能であろう。
【0050】
インターロイキン4、5および10を含む他の分子もまた、免疫反応の発展に重大であることが知られ、そしてTH2様である(すなわち細胞傷害性T細胞の生成をほとんどまたはまったく伴わず、抗体産生細胞が優勢である)免疫反応を優先的に増進するようである。これらの分子のアンタゴニストは、TH2様免疫反応を妨げるかまたは減少させるのに有用であろうし;本発明の他の側面と組み合わせて、こうしたアンタゴニストは、個体において、腫瘍細胞を除去するのにより有効である可能性があるTH1様反応に向かう免疫反応の操作を容易にする。アンタゴニストには、これらの分子の1つに結合し、そしてしたがって細胞結合受容体への結合を妨げる抗体、受容体の可溶性型、あるいは分子がその受容体に結合するかまたはそれによってシグナルを伝達する能力に干渉する他の分子が含まれる。米国特許第5,599,905号、1997年2月4日発行は、可溶性IL−4受容体の有用な型を開示する。
【0051】
ケモカインは、多様な種類の免疫系細胞に走化活性を示す、基本的な小タンパク質である。タンパク質のこのファミリーのメンバーは、ほぼ機能と相関する、システイン残基間のジスルフィド結合の形成およびシステイン残基間の介在アミノ酸の存在または非存在に基づいて、おおまかに、4つのグループに分類可能である。したがって、CXCサブグループのメンバーは、最初の2つの特徴的なシステイン残基間に介在するアミノ酸を示し、そして主に好中球を誘引し、そして活性化する傾向がある。CCケモカインは、介在アミノ酸を持たず、そして樹状細胞、リンパ球および単核細胞に走化活性を示す。ケモカインの第三のサブクラスは、Cファミリーであり、4つのシステインのうち2つを欠く;これは、NKおよびCD4 T細胞を腫瘍部位に誘引することが示されている、リンパ特異的誘引剤、リンホタクチンに代表される。介在する3つのアミノ酸を持つ第四の型のケモカイン(CX3C)もまた同定されており;このサブファミリーの代表的な分子であるフラクタルカインは、白血球接着および血管外遊走に関与している可能性がある。
【0052】
したがって、ケモカインは、本発明において、特定の種類の細胞を腫瘍部位に誘引するのに使用を見出すであろう。例えば、MCP1−5、MIP−1アルファまたはベータ、RANTESまたはエオタキシンの1つなどのCCケモカインは、当該技術分野に知られ、そして本明細書に論じる技術いずれかによって(すなわちタンパク質またはそれをコードするDNAの腫瘍内注射によって、あるいは腫瘍部位の細胞によるケモカイン分泌を誘導する遺伝子療法技術の使用を通じて)、腫瘍部位に、限局投与して、動員した樹状細胞を該部位に誘引することが可能である。用いるケモカインは、日常的な実験を適用することによって、誘引しようとする細胞の種類に応じて、選択可能である。
【0053】
さらなる有用な剤が、USSN 60/249,524、2000年11月17日出願に開示され、該出願の開示は本明細書に援用される。特に、ケモカイン、MIP−3アルファ、MIP−3ベータ、MIP−5、MDC、SDF−1、MCP−3、MCP−4、RANTES、TECK、およびSDF−1は、樹状細胞限局因子として作用する、有用なケモカインである。さらに、IL−1、TNF−アルファおよびIL−10などのサイトカインもまた、局在化因子(localization factor)として作用することが可能である。ソマトスタチン細胞表面受容体SSTR1、SSTR2、SSTR3、SSTR4およびSSTR5あるいはその相同体または相同分子種(ortholog)の1又はそれより多くのメンバーに結合し、そして該メンバーを活性化する化合物もまた、本発明において有用であろう。これらには、ソマトスタチンおよびコルチスタチン、並びにソマトスタチンペプチドSST−14、SST−28、並びにコルチスタチンペプチドCST−17およびCST−29を含む、ソマトスタチン受容体の天然存在リガンドが含まれる。SSTRの他の既知のペプチドアゴニストには、オクレオチド(ocreotide)、ランレオチド(lanreotide)、バプレオチド(vapreotide)、セグリチド(seglitide)、BIM23268、NC8−12、BIM23197、CD275およびSSTRに高親和性を有することが見出された他のものが含まれる。これらの化合物いずれかの誘導体、類似体および擬似体(mimetics)もまた、本発明において有用であろう。
【0054】
当業者は、本明細書に開示する多様な剤および/または因子が、細胞表面受容体に結合し、そしてそれによって細胞にシグナルを伝達することによって作用することを理解する。他の剤もまた、これらの特性を示す可能性があることもまた理解する(すなわち既定の受容体に対するアゴニスト性抗体)。したがって、本発明の方法は、具体的に上に開示する因子で生じる、細胞へのシグナル伝達を模倣する他の分子の使用を含む。こうした分子には、アゴニスト性モノクローナル抗体およびそれに由来する組換えタンパク質と共に、小分子ライブラリーのスクリーニングによって、または合理的薬剤設計を通じて単離される、リガンド擬似体が含まれる。
【0055】
当業者はまた、有用な組換えタンパク質を、対応する天然タンパク質と異なる型で発現してもよいことも理解する。例えば、タンパク質のTNFファミリーの特定のメンバーは、三量体型で存在すると考えられる(BeutlerおよびHuffel, Science 264:667, 1994;Bannerら, Cell 73:431, 1993)。TNFファミリーメンバーの好ましい型は、CD40LまたはTRAILに関して本明細書に記載するように、三量体化(または他の多量体化)を促進するペプチドを含んでなることが可能である。
【0056】
腫瘍細胞死を刺激する剤の投与
腫瘍細胞死を誘導する多様な手段が当該技術分野に知られる;投与の正確な方法は、他の要因の中でも、治療しようとする癌の種類、癌の段階および患者の健康状態に応じるであろう。当業者は、これらの要因に基づいて、適切な投与法を選択可能であろう。一般的に、因子が化学療法剤(またはその組み合わせ)、または生物学的剤である場合、生理学的に許容しうるキャリアー、賦形剤(excipients)または希釈剤と組み合わせて精製化合物を含んでなる薬剤組成物の形で投与されるであろう。こうしたキャリアーは、使用する投薬量および濃度で、被験者に非毒性である。
【0057】
通常、こうした組成物の調製は、化合物を、緩衝剤、アスコルビン酸などの酸化防止剤、低分子量(約10残基未満)ポリペプチド、タンパク質、アミノ酸、グルコース、スクロースまたはデキストラン類を含む炭水化物、EDTAなどのキレート剤、グルタチオン並びに他の安定化剤および賦形剤と合わせることを含む。中性緩衝生理食塩水または同種の血清アルブミンと混合した生理食塩水は、典型的な適切な希釈剤である。さらに、多様な型の徐放技術が使用可能である;米国特許第5,942,253号は、GM−CSFを含んでなる持続放出組成物を開示する。こうした組成物および一般の当業者が調製可能な他のもの(例えば本明細書に開示するようなヒドロゲルの使用)もまた、本発明において有用であろう。使用する特定の療法的有効量は、本発明にとって重要でなく、そして選択する特定の因子、治療しようとする疾患または状態と共に、被験者の年齢、体重および性別に応じて多様であろう。
【0058】
化学療法剤は、癌細胞に作用して増殖を阻害する;化学療法の多くの副作用は、これらの剤が、正常な、迅速に***している細胞に引き起こす損傷のためである。癌に罹患した患者は、化学療法によって、単独で、または他の抗癌治療と併用して、治療することが可能である。多くの化学療法剤が知られ;いくつかは多くの種類の腫瘍に対して有効であり、そして多くの異なる種類の癌を治療するのに用いるが、他のものは1または2種類の癌のみに関して、最も有効である。化学療法剤は、静脈内、経口、注射によって投与するか、あるいは皮膚に適用することが可能である。したがって、化学療法を用いるかどうか、そしてどの剤またはその組み合わせを投与すべきであるかは、他の要因の中でも、癌の種類、腫瘍の位置、および患者の健康状態に応じる。
【0059】
腫瘍細胞死を引き起こすのに用いられている治療の別の型は、凍結手術(または凍結療法)であり、これは非常な低温を癌細胞に適用し、細胞死を引き起こすものである。凍結手術は、最も頻繁には、腫瘍に直接液体窒素を適用することによって、皮膚腫瘍(または他の外部腫瘍)を治療するのに用いられてきている。しかし、内部腫瘍を治療する際の極端な低温の使用を可能にする技術が開発されてきている。例えば、超音波を用いて、取り巻く正常細胞への損傷を最小限にしつつ、腫瘍細胞への液体窒素の適用を監視し、そして導き、凍結短針(cryoprobe)を通じて液体窒素を循環させることが可能である。凍結手術は、多様な種類の皮膚癌、網膜芽細胞腫、前立腺癌、肝癌、骨、脳および脊髄の腫瘍、並びに食道で形成される腫瘍を治療するのに用いられてきているか、またはそれに関して調べられている;凍結手術はまた、光線性角化症および子宮頚上皮内腫瘍などの前癌性状態にも用いられる。さらに、凍結療法は、いぼ(ある場合では、癌性または前癌性状態である可能性があるもの)および伝染性軟属腫の治療に用いて成功してきている;本明細書に開示する併用療法の使用もまた、こうした状態で有益であることが立証される可能性がある。
【0060】
高温(高体温)もまた、通常、他の種類の療法と併用して、癌細胞を根絶する試みの中で用いられてきている。限局(local)高体温では、体外の装置、滅菌プローブ(細い、加熱した針金または温水で満たした中空管)、移植したマイクロ波アンテナ;または高周波電極から腫瘍に向けた高周波を用いて、熱を腫瘍に適用する。肢または器官もまた、局所的高体温と称する方法で加熱可能である。この技術では、磁石または高エネルギーを産生する装置を、加熱しようとする領域上に置くか、あるいは肢または器官を灌流(患者血液のある程度を除去し、該血液を加熱し、そして該血液を器官または肢に戻す)によって加熱する。全身加熱は、温水ブランケット、ホットワックス、誘導、または熱チャンバーの使用を通じて、転移性癌を治療するのに使用可能である。
【0061】
放射療法は、細胞の遺伝子成分を損傷するのに、電離(ionizing)放射線を利用する;正常および癌性細胞両方が損傷を受ける可能性があるが、正常細胞は損傷を修復する能力を保持し、一方、この能力は癌細胞で減少する。限局された固形腫瘍は、しばしば、放射療法を用いて治療する;白血病およびリンパ腫もまた、放射療法で治療可能である。X線およびガンマ線を含む、いくつかの種類の電離放射線が使用可能である。放射療法は、放射線を腫瘍上に集中させる機械を用いて、あるいは腫瘍内に直接、または近傍の体腔に、放射性移植物を置くことによって、適用可能である。さらに、放射標識抗体を用いて、腫瘍細胞をターゲティングすることが可能である。科学者はまた、術中照射、および粒子ビーム照射と共に、腫瘍細胞を放射線により感受性にする放射感作剤(熱を含む)、または正常細胞を保護する放射保護剤を含む、他の放射療法技術も研究している。
【0062】
癌療法の別の種類、光線力学的療法(PDT)は、光エネルギーを利用して癌細胞を殺す。PDTでは、光感作剤を患者に投与して、患者を続いて光に曝露する(通常、罹患した体領域のみ)。光感作剤の多様な投与様式が当該技術分野に知られ、そして本発明において有用であろう。例えば、光感作剤を経口、局所、非経口、または限局(すなわち腫瘍または前癌性領域中に直接またはその近傍に)投与することが可能である。光感作剤はまた、リン脂質小胞または油エマルジョンなどのビヒクルを用いても搬送可能である。脂質に基づく搬送ビヒクルを使用した結果、腫瘍性細胞における光感作剤の集積が増進する可能性がある。やはり本発明に含まれる搬送の代替法には、微小球体、あるいは腫瘍性細胞表面上に位置するタンパク質(またはタンパク質類)に特異的に結合する、モノクローナル抗体、または他のタンパク質の使用が含まれる。
【0063】
使用する特定の光感作剤は、本発明に重要でない。本発明において有用な光感作剤の例には、ヘマトポルフィリン、ウロポルフィリン、フタロシアニン、プルプリン、アクリジン色素、バクテリオクロロフィル、バクテリオクロリンが含まれ、そして他のものが本明細書に開示される。使用される好ましい光感作剤は、フォトフリン(Photofrin)(登録商標)(QLT、カナダ・バンクーバー)であり;さらなる例が本明細書に開示され、そしてDoughertyらと共に、本明細書に開示する多様な他の情報源に論じられる。光感作剤のさらなる例は、米国特許出願20010022970として公表された、USSN 09/799,785、2001年3月6日出願に論じられる。化学療法剤に関して言えるように、投与する光感作剤の量は、使用する特定の光感作剤、被験者の年齢、体重および性別、並びに投与様式と共に、腫瘍の種類、大きさおよび位置に応じて多様であろう。
【0064】
さらに、被験者を曝露する光の波長は、使用する光感作剤、並びに腫瘍または前癌性細胞の位置および深さに応じて多様であろう。一般的に、被験者は、フォトフリン(Photofrin)(登録商標)に関して、約600から900nm、好ましくは約600から約640nmの波長を有する光に曝露されるであろう。いくつかの他の光感作剤は、約650から850nmの、より高い波長で、より強い吸光を有し、これは、より長い波長の光が組織にさらに浸透する傾向があるため、より深部の腫瘍に有益である可能性がある。逆に、約410nmの波長は、浅い浸透が望ましい場合、より優れた結果を提供する可能性があり;こうした用量もまた、本発明の範囲内に属する。
【0065】
被験者を曝露する光の用量は、使用する光感作剤に応じて多様であろう。一般的に、被験者は、フォトフリンに関して、赤い光、約50から500J/cm2の光用量に曝露されるであろう。他の感作剤がより効率的であり、そしてそれにより、典型的には約10J/cm2の、より小さいフルエンスしか要しない可能性がある。より高いフルエンスでは、高体温が起こる可能性があり、これがPDTを増進する可能性がある;さらに、高体温およびPDTは相乗的に作用する可能性がある。よって、本明細書中に記載の内容を包含する。いくつかの異なる光供給源が当該技術分野に知られ;本発明の方法において、選択した波長の適切な用量を搬送することが可能な、いかなる適切な光供給源を使用してもよい。
【0066】
光曝露のタイミングは、使用する光感作剤、腫瘍または前癌性細胞の性質および位置、並びに投与法に応じるであろう。典型的には、光曝露は、光感作剤投与の約1時間から4日後に起こる。さらに、やはり、光感作剤、並びに腫瘍の性質および位置に応じて、より短い期間を用いてもよい。例えば、光感作剤の局所投与後の光曝露は、投与後、約10分後程度に早いか、または約3時間で起こってもよい(本明細書にその全体を援用する、米国特許第6,011,563号を参照されたい)。
【0067】
腫瘍細胞死を誘導するさらに別の方法は、遺伝子療法技術の適用を伴う。米国特許第6,066,624号、2000年5月23日発行は、腫瘍細胞に「自殺遺伝子」を導入することによって、限局された腫瘍を治療する方法を記載する。この技術では、自殺遺伝子を含んでなる組換えアデノウイルスベクターを腫瘍に搬送する。その後、自殺遺伝子にコードされるタンパク質によって作用し、腫瘍細胞死を生じるプロドラッグを、患者に投与する。さらに、こうした技術を用いて、サイトカイン遺伝子を腫瘍細胞内に導入することもまた可能である;サイトカインは、腫瘍をより免疫原性にするよう作用することが可能である。ウイルスベクターもまた、正常腫瘍抑制遺伝子または発癌遺伝子阻害剤を腫瘍細胞に搬送するのに使用可能である。したがって、例えば、p53の突然変異体型を発現する腫瘍は、腫瘍細胞の増殖抑止を導く、野生型p53でトランスフェクションすることが可能である。受容体様プロテインチロシンホスファターゼであるCD148は、いくつかの癌細胞で下方調節されているようであるタンパク質である(Autschbachら, Tissue Antigens 54:485;1999);癌性細胞へのCD148をコードするDNAの導入は、その増殖抑止を導く可能性がある。
【0068】
限局投与は、全身使用が望ましくない腫瘍殺傷剤(例えばTNF、FasL、または非常に高用量のCD40L)の使用を可能にする可能性があり、そしてこれを用いると、全身投与を用いて安全に達成可能であるよりも、腫瘍部位での多様な剤のより高い濃度が達成可能である。タンパク質の腫瘍内注射、腫瘍内または近傍での組換えタンパク質の発現を誘導する遺伝子療法技術の使用、および部位特異的および/または徐放技術の使用を含む、多様な手段を用いて、限局投与を達成可能である。さらに、生の(raw)DNAは、哺乳動物に注射すると、しばしば細胞に取り込まれ、そして発現されることが見出されてきている。したがって、望ましい因子をコードするDNAを腫瘍部位内またはその近傍に注射して、そして該DNAが近傍細胞に取り込まれると、コードされる因子の限局発現が生じるであろう。
【0069】
限局投与に有用である可能性がある技術の1つの種類は、ヒドロゲル素材、例えば光重合可能ヒドロゲル(Sawhneyら, Macromolecules 26:581;1993)を利用して、望ましい因子または因子類の持続放出を達成するものである。同様のヒドロゲルが、術後癒着形成を防止し(Hill−Westら, Obstet. Gynecol. 83:59;1994)、そして血管傷害後の血栓症および血管狭窄を防止する(Hill−Westら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:5967;1994)のに用いられてきている。タンパク質を、こうしたヒドロゲルに取り込み、活性剤の持続した限局放出を提供することが可能である(WestおよびHubbell, Reactive Polymers 25:139;1995;Hill−Westら, J. Surg. Res. 58:759;1995)。
【0070】
したがって、本明細書に開示する多様な因子はまた、限局投与が望ましい組織への適用のため、ヒドロゲルに取り込むことも可能である。例えば、腫瘍殺傷剤、DC誘引剤、DC成熟因子、またはCTL増進因子、あるいはこうした多様な因子の組み合わせを取り込んだヒドロゲルを、腫瘍の外科的除去または減少後に、組織に適用することが可能である。さらに、こうしたヒドロゲルに基づく処方は、当該技術分野に知られる他の方法によって、例えばカテーテルを用いて、血管系の望ましい位置でヒドロゲルを適用して、または腫瘍内投与が達成可能な他の手段いずれかによって、投与することが可能である。一般的な当業者は、例えばWestおよびHubbell、上記に論じられるように、標準的な薬物動態学的研究を適用することによって、適切なヒドロゲルを処方することが可能であろう。
【0071】
抗腫瘍反応を制御する因子の投与
DC動員因子、DC成熟因子、DC誘引因子およびT細胞増進因子は、適切な希釈剤またはキャリアー中で、被験者、好ましくはヒトに投与可能である。したがって、例えば、これらの因子のいずれか1つまたはすべてを、多量(bolus)注射、連続注入、移植物からの持続放出、または他の適切な技術によって、投与することが可能である。さらに、因子は、限局投与(すなわち腫瘍内投与)するか、または遺伝子療法技術を用いることによって投与することが可能である。例えば、IL−2、IL−12、またはIL−15などのCTL増進因子をコードする遺伝子で腫瘍細胞をトランスフェクションしてもよい。トランスフェクションされた腫瘍細胞を個体に投与して(例えば腫瘍内)、抗原に対して、より強く、そして改善された免疫反応を提供する。当業者は、動物モデルまたは他のモデリング系を用いて日常的な実験を行って、好ましい投与経路および搬送する多様な因子の量を決定することが可能であろう(例えば投薬量計算および動物モデルに関する、米国特許第6,017,540号、2000年1月25日発行の議論を参照されたい)。
【0072】
典型的には、因子は、生理学的に許容しうるキャリアー、賦形剤または希釈剤と組み合わせて精製化合物を含んでなる薬剤組成物の型で投与されるであろう。こうしたキャリアーは、使用する投薬量および濃度で、被験者に非毒性である。通常、こうした組成物の調製は、化合物を、緩衝剤、アスコルビン酸などの酸化防止剤、低分子量(約10残基未満)ポリペプチド、タンパク質、アミノ酸、グルコース、スクロースまたはデキストラン類を含む炭水化物、EDTAなどのキレート剤、グルタチオン並びに他の安定化剤および賦形剤と合わせることを含む。中性緩衝生理食塩水または同種の血清アルブミンと混合した生理食塩水は、典型的な適切な希釈剤である。
【0073】
使用する特定の療法的有効量は、本発明には重大でなく、そして選択される特定の因子、治療しようとする疾患または状態と共に、被験者の年齢、体重および性別に応じて多様であろう。さらに、既定の因子を投与する時点は、投与する個々の因子およびその活性に応じるであろう。典型的には、DC動員因子は、腫瘍細胞死を誘導する剤の投与の10から15日前に投与し、そして腫瘍殺傷剤の投与後、5から10日間、続けることが可能である。DC成熟因子は、腫瘍細胞死誘導の24から48時間後に投与し;T細胞増進剤は、ほぼ同じ時点で投与する。
【0074】
腫瘍細胞死を引き起こす剤を、延長された期間投与する場合(特定の化学療法および放射措置におけるように)、DC動員および成熟因子、並びにT細胞増進剤を投与する措置を設計する際には、樹状細胞およびT細胞に対する連続療法の影響を考慮しなければならない。例えば連続療法の結果、動員されそして/または活性化されたDCおよび/またはCTLが死ぬ場合、DC成熟およびT細胞増進因子は、連続療法が完了するまで、または連続腫瘍殺傷措置において、エフェクター細胞が連続腫瘍殺傷療法によって負に影響を受ける可能性がより低い段階まで、抗腫瘍免疫反応が成熟する時間が十分にあるであろう時点まで、投与しない。
【0075】
多様な因子の典型的な療法的有効投薬量およびこれらを投与する典型的な間隔を、以下の表1に示す。当業者は、日常的な実験を適用することによって、これらおよび他の因子の投薬量および投与経路を最適化することが可能である。
【0076】
表1:典型的な療法的投薬量
【0077】
【表1】
【0078】
DC動員または成熟因子あるいはT細胞増進因子を限局剤(local agent)として、腫瘍内にまたは近傍に投与すると、全身使用に望ましくない剤(例えばTNF)の使用が可能になる可能性があり、そしてこれを用いると、全身投与を用いて安全に達成可能であるよりも、腫瘍部位での多様な剤のより高い濃度が達成可能である。同様に、DCまたはCTLの誘引剤として作用する剤もまた、腫瘍部位内またはその近傍の投与に有用であろう。こうした限局投与は、全身性の影響を最小限にしつつ、腫瘍部位でのエフェクター細胞の濃縮を可能にする。
【0079】
タンパク質の腫瘍内注射、腫瘍内または近傍での組換えタンパク質の発現を誘導する遺伝子療法技術の使用、および部位特異的および/または徐放技術の使用を含む、多様な手段を用いて、限局投与を達成可能である。さらに、生のDNAは、哺乳動物に注射すると、しばしば細胞に取り込まれ、そして発現されることが見出されてきている。したがって、望ましい因子をコードするDNAを腫瘍部位内またはその近傍に注射して、そして該DNAが近傍細胞に取り込まれると、コードされる因子の局在化された発現が生じるであろう。
【0080】
限局投与に有用である可能性がある技術の1つの種類は、ヒドロゲル素材、例えば光重合可能ヒドロゲル(Sawhneyら, Macromolecules 26:581;1993)を利用して、望ましい因子または因子類の持続放出を達成するものである。同様のヒドロゲルが、術後癒着形成を防止し(Hill−Westら, Obstet. Gynecol. 83:59;1994)、そして血管傷害後の血栓症および血管狭窄を防止する(Hill−Westら, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:5967;1994)のに用いられてきている。タンパク質を、こうしたヒドロゲルに取り込み、活性剤の持続した限局放出を提供することが可能である(WestおよびHubbell, Reactive Polymers 25:139;1995;Hill−Westら, J. Surg. Res. 58:759;1995)。
【0081】
したがって、本明細書に開示する多様な因子はまた、限局投与が望ましい組織への適用のため、ヒドロゲルに取り込むことも可能である。例えば、DC誘引剤、DC成熟因子、またはCTL増進因子、あるいはこうした多様な因子の組み合わせを取り込んだヒドロゲルを、腫瘍の外科的除去または減少後に、組織に適用することが可能である。さらに、こうしたヒドロゲルに基づく処方は、当該技術分野に知られる他の方法によって、例えばカテーテルを用いて、血管系の望ましい位置でヒドロゲルを適用して、または腫瘍内投与が達成可能な他の手段いずれかによって、投与することが可能である。一般的な当業者は、例えばWestおよびHubbell、上記に論じられるように、標準的な薬物動態学的研究を適用することによって、適切なヒドロゲルを処方することが可能であろう。
【0082】
DCおよび/またはCTLのex vivo培養
当業者はまた、多様なex vivo培養技術もまた、本発明において使用可能であることも認識するであろう。造血幹細胞および前駆細胞のex vivo増殖法は、本明細書に援用される米国特許第5,199,942号に記載される。米国特許第6,017,527号は、DCを培養し、そして活性化する方法を記載する;他の適切な方法が当該技術分野に知られる。本発明の1つの側面において、ex vivo培養および増殖は:(1)末梢血採取物または骨髄外植片から、患者由来のCD34+造血幹細胞および前駆細胞を収集し;そして(2)こうした細胞をex vivoで増殖させることを含んでなる。特許第5,199,942号に記載される細胞増殖因子に加え、Flt3L、IL−1、IL−3、RANKLおよびc−kitリガンドなどの他の因子も使用可能である。
【0083】
CD34マーカーを有する幹細胞または前駆細胞は、骨髄中の単核細胞の約1%から3%しか構成しない。末梢血中のCD34+幹細胞または前駆細胞の量は、骨髄よりもおよそ10−100倍少ない。本発明において、Flt3L、GM−CSF、CD40LおよびIL−15などのサイトカインを用いて、in vivoで、幹細胞数を増加させるかまたは動員することが可能である。その後、当該技術分野に知られる方法を用いて、こうした細胞を得て、そして培養する(例えば米国特許第5,199,942号および第6,017,527号を参照されたい)。
【0084】
凍結保護剤としてジメチルスルホキシドを用いて、単離した幹細胞を管理下速度凍結装置(例えばCryo−Med、ミシガン州マウントクレメンス)中で凍結し、その後、液体窒素の気相に保存することが可能である;この技術は、例えば特定の化学療法措置に関するように、時間に渡って腫瘍細胞死を誘導する剤を投与する際に、特に有用であろう。樹状細胞(新鮮または凍結)の増殖および培養には、血清枯渇または血清に基づく培地を含む、多様な増殖用および培養用培地が使用可能である。有用な増殖用培地には、RPMI、TC 199、イスコーブ修飾ダルベッコ培地(Iscoveら, F.J. Exp. Med., 147:923(1978))、DMEM、フィッシャー培地、アルファ培地、NCTC、F−10、リーボビッツのL−15、MEMおよびマッコイ培地が含まれる。
【0085】
収集したCD34+細胞を、例えば本明細書に、そして前述の特許に記載されるように、適切なサイトカインと培養する。その後、CD34+細胞を分化させ、そして樹状細胞系譜の細胞に関係付ける(commit)。その後、これらの細胞は、CD1a、HLA DR、CD80および/またはCD86などの樹状細胞に特徴的なマーカーを用いて、フローサイトメトリーまたは同様の手段によってさらに精製する。精製樹状細胞を望ましい抗原(例えば問題の腫瘍に特異的な精製抗原、未精製腫瘍抗原調製、あるいは腫瘍抗原または抗原類をコードするDNAまたはRNA)でパルス処理して(該抗原に曝露して)、免疫系の他の細胞への提示に適した方式で、抗原を取り込むのを可能にすることが可能である。
【0086】
抗原は、古典的には、プロセシングされ、そして2つの経路を通じて提示される。細胞質ゾル区画中のタンパク質由来のペプチドは、クラスI MHC分子の背景で提示され、一方、エンドサイトーシス経路で見られるタンパク質由来のペプチドは、クラスII MHCの背景で提示される。しかし、当業者は、例外があることを認識する;例えば、MHC クラスI上に発現する外因性腫瘍抗原を認識する、CD8+腫瘍特異的T細胞の反応である。MHC依存抗原プロセシングおよびペプチド提示の概説は、Germain, R.N., Cell 76:287(1994)に見られる。
【0087】
抗原で樹状細胞をパルス処理する多くの方法が知られ;当業者は、選択した抗原に適した方法の発展を日常的な実験とみなす。一般的に、細胞の生存性を促進する条件下で、培養した樹状細胞に抗原を添加して、そしてその後、約24時間(約18から約30時間、好ましくは24時間)の期間、細胞が抗原を取り込みそしてプロセシングし、そしてクラスIまたはクラスII MHCいずれかと結合して細胞表面上に抗原ペプチドを発現するかまたは提示するのに十分な時間を許容する。樹状細胞はまた、抗原をコードするDNAでトランスフェクションすることによって、抗原に曝露することも可能である。DNAが発現され、そして抗原はおそらく、細胞質ゾル/クラスI経路を介してプロセシングされる。さらに、例えばBoczkowskiら, Cancer Res. 60:1028, 2000に記載されるように、腫瘍細胞から増幅したmRNAとDCを接触させることによって、腫瘍抗原を提示するよう誘導することが可能である。
【0088】
抗原をプロセシングした後、DCをCD40LなどのDC成熟因子と接触させる。CD40Lおよび他のDC成熟因子は、DC表面上のMHC分子(並びにCD80およびCD83などの共刺激分子)の数を増加させ、それによってその抗原提示能を増進させる。さらに、成熟因子に曝露されたDCは、活性化の示標となるサイトカイン(例えばIL−12、IL−15)を分泌する。成熟した活性化DCによって抗原を提示されたCD4+細胞は、T細胞増殖因子として作用する、IL−2、IL−4、およびIFN−γを発現するであろう。したがって、成熟した活性化DCは、有効な腫瘍特異的免疫反応を刺激することが可能である。
【0089】
ペプチドなどのより小さい抗原は、樹状細胞によるプロセシングを必要としないが、ペプチドへのDCの曝露に際して、適切なMHC分子に結合する。ペプチド抗原を用いた場合、利用可能なMHC分子数を増加させ、そしてそれによって抗原運搬能を増加させるため、ペプチド抗原への曝露前に、DCの成熟を刺激するのが好適である。より大きいタンパク質抗原をプロセシングし終えた、DCの成熟を刺激するのに有用である同一のDC成熟因子はまた、DCがより小さいペプチド抗原を提示する能力を増大するのにも有用であろう。
【0090】
その後、抗原特異的免疫反応を刺激するため、活性化された抗原運搬DCを個体に投与する。DCは全身投与することが可能であるし、あるいは腫瘍内または近傍に限局投与することが可能である。望ましい場合、CTL増進因子などのさらなる剤を個体に投与して、免疫反応をさらに増進することが可能である。DCは、さらなる剤の投与前に、投与と同時に、または投与後に、投与可能である。あるいは、T細胞もまた、個体から収集して、そして活性化された抗原運搬樹状細胞にin vitroで曝露して、ex vivoで抗原特異的T細胞の発展を刺激して、これをその後、個体に投与することも可能である。T細胞は、全身投与することが可能であるし、あるいは腫瘍内または近傍に限局投与することが可能である。望ましい場合、T細胞増進因子を個体に投与して、免疫反応をさらに増進することが可能である。T細胞は、さらなる剤の投与前に、投与と同時に、または投与後に、投与可能である。
【0091】
疾患の予防または治療
本明細書に提示するこれらの結果は、併用療法が、多様な腫瘍の治療において、重要な臨床的使用のものである可能性があることを示す。用語、治療は、当該技術分野に一般的に理解されるように、臨床的症状または疾患の徴候が観察された後の療法開始を指す。しかし、癌にはしばしば、厳密には悪性と性質決定することが不可能な細胞の異常増殖が先行する。例えば、細胞は、数が増加するが、同一組織起源の正常細胞と有意には異ならない、過形成を示す可能性がある。上皮または結合組織細胞は転移性になる可能性があり、これは、完全に分化した細胞の1種類を別のものに置換することを意味する。細胞が均一性および構築的配向を失い、そして他の異常な特徴を示す、異形成(dysplasia)が、しばしば癌に先行する。したがって、本発明は、潜在的な免疫反応を最大化することによって、前癌性状態(例えば子宮頚上皮内腫瘍)の治療、転移性疾患の予防または減少、および癌の再発または再発生の予防に有用であろう。この方式で使用すると、本明細書に記載する本発明の方法は、罹患した個体の厳密に定義された治療よりむしろ、予防的処置と考えることが可能である。
【0092】
本明細書に引用するすべての参考文献の関連する開示は、特に本明細書に援用される。以下の実施例は、特定の態様を例示することを意図し、そして本発明の範囲を限定することを意図しない。一般の当業者は、さらなる態様が本発明に含まれることを容易に認識するであろう。
【0093】
【実施例】
実施例1
本実施例は、腫瘍細胞を接種されたマウスの平均および中央値生存時間に対する、Flt3LおよびCD40Lと併用した放射療法の効果を記載する。6から8週齢のC57BL/6マウスに、約1x105の非常に転移性であり免疫原性が劣ったルイス肺癌腫(3LL/D122)細胞を、実質的にChakravartyら(Cancer Research 59:6028;1999)に記載されるように、足に皮下接種した。接種3週間後、すべてのマウスは、肺の出現前(pre−emergent)微小転移病巣と共に、原発足蹠腫瘍を発展させた。
【0094】
体を鉛で保護して、マウスをルサイトジグ(lucite jig)に入れることによって、コナル(conal)放射に供した。40MCG Philips電圧装置を320kVp、5mAおよび0.5mm Cuろ過で操作して用い、足蹠領域を限局照射した。照射を行った時点を第0日と称した。マウスの1つのサブセットに、Flt3Lを投与し(第1日から第12日まで、各日、マウスあたり10μgを腹腔内投与);1つのサブセットにCD40Lを投与し(第8日から第12日まで、各日、マウスあたり10μgを腹腔内投与)、そして1つのサブセットに第1日から第12日までFlt−3L、そして第8日から第12日までCD40Lを投与した(先に示したのと同一投薬量)。結果を下の表2に示す。
【0095】
表2:併用療法で処置したマウスの生存
【0096】
【表2】
【0097】
これらの結果は、DC動員因子およびDC成熟因子の併用が、放射療法に供した哺乳動物の抗腫瘍反応を増大させることを示す。したがって、このおよび同様の技術はまた、ex vivoでも使用を見出すであろう。DCは、以下に記載するように、腫瘍を持つ被験者から得て、そして腫瘍抗原(例えば、腫瘍切除中に除去した照射腫瘍細胞、または腫瘍抗原の他の型いずれか)に曝露することが可能である。DCをプロセシング前(ペプチド抗原)または後(プロセシングを要する大きなまたは複雑な抗原)いずれかに、成熟剤または因子(すなわちCD40L)に曝露して、MHCおよび共刺激分子数を増加させ、そして抗原提示を増進する。
【0098】
抗原提示DCは、腫瘍を持つ個体に、単独で、またはT細胞増殖因子と併用して投与して、残った腫瘍細胞(手術または腫瘍除去の他の伝統的な手段で接近不能な転移または腫瘍病巣を含む)を除去する能力増加を生じることが可能である。あるいは、またはさらに、腫瘍特異的T細胞は、以下に記載するように、ex vivoで得て、そしてDCおよび/またはT細胞増殖因子と共に、腫瘍を持つ被験者に投与することが可能である。
【0099】
実施例2
本実施例は、ex vivoで、精製樹状細胞を生成する方法を記載する。ヒト骨髄を得て、そしてCD34+表現型を有する細胞を単離して、そして適切な培地、例えば樹状細胞の増殖を促進するサイトカイン(すなわち各20ng/mlのGM−CSF、IL−4、TNF−a、あるいは100ng/mlのFlt3Lまたはc−kitリガンド、あるいはその組み合わせ)を含有する、マッコイの強化培地中で培養する。培養は、湿った空気中、10% CO2中で、37℃でおよそ2週間続ける。その後、CD1a+、HLA−DR+およびCD86+に対する抗体を用いたフローサイトメトリーによって、細胞を分別する。GM−CSF、IL−4およびTNF−αの併用は、培養2週間後に得られる細胞数の6から7倍の増加を生じることが可能であり、このうち50−80%の細胞がCD1a+HLA−DR+CD86+である。Flt3Lおよび/またはc−kitリガンドの添加は、総細胞の増殖、そしてしたがって樹状細胞の増殖をさらに増進する。これらの条件下で単離し、そして培養した細胞の表現型解析は、調べたすべての因子の組み合わせで、細胞の60−70%の間がHLA−DR+、CD86+であり、細胞の40−50%がCD1aを発現することを示す。
【0100】
実施例3
本実施例は、腫瘍に罹患した個体から樹状細胞を収集し、そして増殖させる方法を記載する。細胞収集前に、Flt3Lを、単独で、またはサーグラモスティム(sargramostim)(GM−CSF;リューカイン(Leukine)、Immunex Corporation、ワシントン州シアトル)と併用して個体に投与し、循環PBPCおよびPBSCを動員するか、またはその数を増加させる。CSF−1、GM−CSF、c−kitリガンド、G−CSF、EPO、IL−1、IL−2、IL−3、IL−4、IL−5、IL−6、IL−7、IL−8、IL−9、IL−10、IL−11、IL−12、IL−13、IL−14、IL−15、GM−CSF/IL−3融合タンパク質、LIF、FGFなどの他の増殖因子およびその組み合わせは、同様に、Flt3Lと別個に、連続して、または同時に投与することが可能である。
【0101】
動員PBPCおよびPBSCは、当該技術分野に知られるアフェレーシス法を用いて収集する。例えば、Bishopら, Blood, vol.83, No.2, pp.610−616(1994)を参照されたい。簡潔には、PBPCおよびPBSCは、慣用的な装置、例えばHaemoneticsモデルV50アフェレーシス装置(Haemonetics、マサチューセッツ州ブレインツリー)を用いて収集する。およそ6.5x108単核細胞(MNC)/kg個体が収集されるまで、典型的には週5回を超えないように、4時間の収集を行う。
【0102】
収集したPBPCおよびPBSCのアリコットを顆粒球−マクロファージコロニー形成単位(CFU−GM)含量に関してアッセイする。簡潔には、MNC(およそ300,000)を単離し、修飾マッコイ5A培地、0.3%寒天、200U/ml組換えヒトGM−CSF、200U/ml組換えヒトIL−3、および200U/ml組換えヒトG−CSF中、完全に加湿した空気中、5%CO2中で、37℃で約2週間培養する。Flt3LまたはGM−CSF/IL−3融合分子(PIXY321)を含む他のサイトカインを培養に添加してもよい。これらの培養をライト染色で染色し、そして解剖顕微鏡を用いて、CFU−GMコロニーを記録する(Wardら, Exp. Hematol., 16:358(1988))。あるいは、CFU−GMコロニーは、Sienaら, Blood, Vol.77, No.2, pp400−409(1991)のCD34/CD33フローサイトメトリー法、または当該技術分野に知られる他のいずれかの方法を用いてアッセイすることが可能である。
【0103】
CFU−GM含有培養は、管理下速度凍結装置(例えばCryo−Med、ミシガン州マウントクレメンス)中で凍結し、その後、液体窒素の気相に保存する。10パーセントのジメチルスルホキシドを凍結保護剤として使用することが可能である。個体からのすべての収集が終了した後、CFU−GM含有培養を融解して、そしてプールし、その後、Flt3Lと、単独で接触させるか、CFU−GMを樹状細胞系譜に駆動する、上に列挙した他のサイトカインを、Flt3Lと連続して併用するか、または同時に併用して接触させる。樹状細胞を培養し、そして上述のように選択したマーカーを示す細胞の割合に関して解析する。
【0104】
実施例4
本実施例は、樹状細胞がT細胞の抗原特異的増殖を刺激する能力を例示する。細胞は、実質的に実施例2および/または3に記載するように、腫瘍に罹患した個体から得る。樹状細胞を単離し、そして選択したサイトカインの存在下で2週間培養する。腫瘍抗原調製を作成し、そして樹状細胞を抗原と共に提供し、そして樹状細胞が抗原をプロセシングするのを可能にする。樹状細胞増殖を補助するサイトカインを含有するマッコイの強化培地中、CD40L(1μg/ml)の可溶性三量体型の存在下または非存在下で、抗原でパルス処理した樹状細胞をさらに24時間培養し、その後、37℃で10%CO2大気中、腫瘍抗原(Modyら, J. Infectious Disease 178:803;1998)で24時間パルス処理する。あるいは、腫瘍抗原が樹状細胞によるプロセシングを必要としない小ペプチドである場合、樹状細胞は、抗原曝露前にCD40Lと培養する。これは、樹状細胞表面上のHLA分子数を増加させ、そしてその抗原提示能を増進するであろう。
【0105】
自己腫瘍反応性T細胞は、個体由来のCD34−細胞を、腫瘍抗原および低濃度のIL−2および/またはIL−7および/またはIL−15(2ng/mlから5ng/ml)の存在下で、約2週間培養することによって得る。CD34−集団は、そのうち一部が腫瘍に対して反応性である、ある割合のT細胞(約5%)と共に、抗原提示細胞として作用する他の細胞種を含有する。第2週までに、細胞集団は、約90%のT細胞を含んでなるであろうし、その大部分は、腫瘍特異的であり、T細胞活性化マーカーは低レベルであろう。
【0106】
抗原特異的T細胞増殖アッセイは、10%熱不活性化ウシ胎児血清(FBS)を添加したRPMI中、抗原でパルス処理した樹状細胞の存在下、37℃10%CO2大気中、腫瘍特異的T細胞を用いて行う。ウェルあたりおよそ1x105 T細胞を、力価測定した(titrated)数の樹状細胞の存在下、丸底96ウェルマイクロタイタープレート(Corning)中、三つ組で5日間培養する。細胞は、培養の最後の4から8時間、トリチウム標識チミジン(25Ci/nmol、Amersham、イリノイ州アーリントンハイツ)1mCi/ウェルでパルス処理する。自動化細胞採取装置で、ガラスファイバーディスク上に細胞を採取し、そして取り込まれたcpmを液体シンチレーション分光測定によって測定した。
【0107】
実施例5
本実施例は、実質的にLynchら, Eur. J. Immunol. 21:1403(1991)に記載されるような線維肉腫のネズミモデルにおいて、マウスが線維肉腫細胞のチャレンジを拒絶する能力に対する、Flt3Lを伴うまたは伴わない、抗体Ox40m5の影響を記載する。6から8週齢のC57BL/10J(B10)マウスに、約1x105のB10線維肉腫細胞を、足に皮下接種した。Flt3L(第10日から第29日まで、各日、マウスあたり10μgを腹腔内投与)、Ox40m5(第10日から第27日まで、3日ごとに、マウスあたり10μgを腹腔内投与)、または両方いずれかでの療法を、接種10日後に開始した。すべての対照マウスは、腫瘍を発展させ、Flt3Lのみを投与したマウスの80%も同様であったが、Ox40m5で処置したマウスの30%、およびOx40m5に加えてFlt3Lで処置したマウスの50%は、腫瘍を拒絶した。
【0108】
C3Hマウスにおいて、Ox40m5の2つの異なる用量(マウスあたり100μgまたはマウスあたり500μgいずれか)を第5日、第9日、第11日および第13日に投与して、87と称される別の線維肉腫で同様の実験を行った。より高い用量(マウスあたり500μg)では、40%のマウスが腫瘍を拒絶し、一方、より低い用量を投与したマウスの30%が腫瘍を拒絶した。実質的に同一のパラメーターを用いて、4−1BBm6と併用してOx40m5を投与した場合、両抗体を投与したマウスの100%が腫瘍を拒絶し、一方、4−1BBm6のみを投与したマウスの60%が腫瘍チャレンジを拒絶した。
【0109】
Ox40m5および4−1BBm6の併用はまた、腎細胞癌腫モデルでも調べた。この併用は、単独でまたはFlt3Lの添加を伴っても、腫瘍チャレンジからの有意な保護を生じなかった(マウスの10%しか、腫瘍チャレンジを拒絶しなかった)が、Ox40m5および4−1BBm6またはOx40m5、4−1BBm6およびFlt3Lいずれかで処置した動物において、腫瘍増殖は遅くなった。用いた腎癌腫細胞は、迅速に増殖する腫瘍を生成することが知られ;したがって、Ox40m5および4−1BBm6の組み合わせは、腫瘍の増殖に影響を与える他の療法と併用して投与すると、腫瘍が非常に侵襲性であることが知られる場合であっても、有用であることが立証される可能性がある。
【0110】
実施例6
本実施例は、OX40アゴニスト、Ox40m5が、樹状細胞に誘導されるCD8 T細胞活性化を増加させる能力を例示する。OVA特異的CD8トランスジェニックマウス(OT.I)由来の、少数だが検出可能な数の未処置細胞を、未処置レシピエントの静脈内に移植した。移植1日後、クラスI OVAペプチドでパルス処理した3x105成熟樹状細胞(Flt3L処置した野生型またはMHCクラスIIノックアウト動物由来)で、後足蹠において、動物を皮下的に免疫した。同じ日、動物にまた、Ox40m5(100μg)または対照モノクローナル抗体を腹腔内注射した。排出リンパ節中のT細胞増殖は、免疫5日後、FACSによって監視した。
【0111】
Ox40m5およびOVAペプチドパルス処理野生型樹状細胞の同時注射は、CD8 T細胞増殖を強く増進した(が、クラスIノックアウトマウス由来の樹状細胞の場合はしなかった)。これらの免疫動物由来のリンパ節細胞もまた、in vitroで、該抗原で再刺激した。これらの培養由来の上清をIFN−γ産生に関して評価した。野生型樹状細胞およびOx40m5で同時免疫すると、樹状細胞のみで免疫したのに比較して、IFN−γの産生が増進された。クラスIノックアウト樹状細胞で免疫したマウス由来のリンパ節細胞は、in vitroでの再刺激に際して、低レベルのIFN−γを産生し、そしてOx40m5の同時注射は、この産生を増進しなかった。これらのデータは、OX40アゴニストが、in vivoで、CD8 T細胞増殖および活性化を増進し、そしてしたがって、抗原特異的エフェクターT細胞反応を増進することを示す。
【図面の簡単な説明】
【図1】図1は、本発明の方法(類)における多様な工程を示すフローチャートである。in vivoで行わなければならない工程は、フローチャートの左側に列挙し、一方、ex vivoで行うことが可能な工程は、右側に示す。工程は、通常行われるであろう、一般的な順序で示しているが、当業者は、日常的な実験によって、工程の順序および/またはタイミングと共に、投薬量および投与経路を最適化することが可能である。したがって、例えば、腫瘍殺傷剤は、本明細書に開示するいかなる手段によって投与してもよいし;樹状細胞(DC)成熟剤および/または培養したDC(未成熟または活性化した成熟DC)を投与するのに最適な時間は、腫瘍殺傷剤の性質、およびあるとすればDCに対するその影響に応じるであろう。同様に、本明細書に詳細に記載するように、成熟した活性化抗原運搬DCをex vivoで調製する際、当業者は、ex vivoで行う工程を調整して、活性化および抗原提示能を最適化するであろう(すなわち、一般的に、ペプチド抗原では、成熟後にDCをペプチドと接触させるが、一方、プロセシングを要する、より大きい抗原では、通常、成熟前にDCを抗原と接触させ、そしてプロセシングを可能にする)。さらに、当業者は化学誘引を利用して、ケモカインまたはケモカイン誘導剤の限局投与(本明細書に記載する方法いずれかによって達成する)によって、特定の部位への細胞の輸送を増進することが可能であり、例えばDCを誘引するケモカイン(またはケモカイン誘導剤)を腫瘍内に投与して、腫瘍抗原を取り込むDCの数を増加させるか、またはケモカイン(またはケモカイン誘導剤)をリンパ節内に投与して、抗原運搬DCのT細胞リッチ領域への輸送を促進する。さらに、ex vivo培養用にT細胞を得る前に、腫瘍を持つ被験者に循環T細胞数を増進する剤を投与することが可能である。増殖させたT細胞を被験者に投与する際、同じ剤(または別のT細胞増進剤)を投与することが可能である。
【図2】図2は、ヒト顆粒球−マクロファージコロニー刺激因子のヌクレオチドおよびアミノ酸配列を示す。
Claims (24)
- 腫瘍を持つ被験者を治療する方法であって:
(a)樹状細胞動員因子の療法的有効量を被験者に投与し;そして
(b)樹状細胞の成熟を刺激する腫瘍殺傷剤の療法的有効量を被験者に投与する工程を含んでなる、前記方法。 - 樹状細胞動員因子がFlt3Lであり、そして樹状細胞の成熟を刺激する腫瘍殺傷剤がCD40Lである、請求項1の方法。
- 腫瘍を持つ被験者を治療する方法であって:
(a)樹状細胞動員因子の療法的有効量を被験者に投与し;
(b)腫瘍殺傷剤の療法的有効量を被験者に投与し;そして
(c)樹状細胞成熟剤の療法的有効量を被験者に投与する
工程を含んでなる、前記方法。 - 樹状細胞動員因子がFlt3Lであり、そして樹状細胞成熟剤がCD40Lである、請求項1の方法。
- 樹状細胞成熟剤と組み合わせて、T細胞増進因子を投与する、請求項1から4のいずれか1つの方法。
- T細胞増進因子がインターロイキン−15である、請求項5の方法。
- T細胞増進因子が:
(a)Ox40アゴニスト;
(b)4−1BBアゴニスト;および
(c)Ox40アゴニストおよび4−1BBアゴニストの組み合わせ
からなる群より選択される、請求項5の方法。 - 腫瘍を持つ被験者を治療する方法であって:
(a)樹状細胞動員因子の療法的有効量を被験者に投与し;そして
(b)凍結療法で被験者を治療する
工程を含んでなる、前記方法。 - 樹状細胞動員因子がFlt3Lである、請求項8の方法。
- 腫瘍を持つ被験者に樹状細胞成熟剤を投与する、請求項8または9の方法。
- T細胞増進因子を樹状細胞成熟因子5と組み合わせて投与する、請求項10の方法。
- 樹状細胞成熟剤がCD40Lであり、そしてT細胞増進因子が:
(a)Ox40アゴニスト;
(b)4−1BBアゴニスト;
(c)Ox40アゴニストおよび4−1BBアゴニストの組み合わせ;および
(d)インターロイキン−15
からなる群より選択される、請求項11の方法。 - 樹状細胞誘引剤を投与して、腫瘍部位に樹状細胞を誘引する、請求項1から12のいずれか1つの方法。
- T細胞誘引剤を投与して、腫瘍部位にT細胞を誘引する、請求項1から12のいずれか1つの方法。
- 腫瘍を持つ被験者を治療する方法であって:
(a)樹状細胞動員因子の療法的有効量を被験者に投与し;
(b)個体から樹状細胞を得て、そしてex vivoで該樹状細胞を培養し;
(c)腫瘍殺傷剤を個体に投与し;そして
(d)樹状細胞を個体に投与する
工程を含んでなる、前記方法。 - ex vivoで樹状細胞を樹状細胞成熟剤と接触させる、請求項15の方法。
- 樹状細胞を樹状細胞成熟剤と接触させる前に、抗原と接触させる、請求項16の方法。
- 樹状細胞を樹状細胞成熟剤と接触させた後に、抗原と接触させる、請求項16の方法。
- 樹状細胞動員因子がFlt3Lであり、そして樹状細胞成熟剤がCD40Lである、請求項16から18のいずれか1つの方法。
- 腫瘍を持つ被験者を治療する方法であって:
(e)樹状細胞動員因子の療法的有効量を被験者に投与し;
(f)個体から樹状細胞を得て、そしてex vivoで該樹状細胞を培養し;
(g)樹状細胞を成熟させそして活性化させ、そして抗原を発現させ;
(h)個体からT細胞を得て;
(i)ex vivoで、成熟し活性である抗原発現樹状細胞と該T細胞を接触させて、活性化された抗原特異的T細胞を得て;そして
(j)活性化された抗原特異的T細胞を個体に投与する
工程を含んでなる、前記方法。 - T細胞を個体から得る前に、T細胞増進剤を個体に投与する、請求項20の方法。
- 活性化された抗原特異的T細胞と組み合わせて、T細胞増進剤を個体に投与する、請求項20または請求項21の方法。
- T細胞増進因子が:
(a)Ox40アゴニスト;
(b)4−1BBアゴニスト;
(c)Ox40アゴニストおよび4−1BBアゴニストの組み合わせ;および
(d)インターロイキン−15
からなる群より選択される、請求項22の方法。 - T細胞誘引剤を投与して、腫瘍部位にT細胞を誘引する、請求項20から23のいずれか1つの方法。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US24286800P | 2000-10-24 | 2000-10-24 | |
PCT/US2001/046254 WO2002066044A2 (en) | 2000-10-24 | 2001-10-23 | Method for dendritic cells based immunotherapy of tumors using combination therapy |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2004529102A true JP2004529102A (ja) | 2004-09-24 |
JP2004529102A5 JP2004529102A5 (ja) | 2005-12-22 |
Family
ID=22916470
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2002565602A Withdrawn JP2004529102A (ja) | 2000-10-24 | 2001-10-23 | 併用療法を用いて、腫瘍を治療する方法 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20040131587A1 (ja) |
EP (1) | EP1427813A2 (ja) |
JP (1) | JP2004529102A (ja) |
AU (1) | AU2001297677B2 (ja) |
CA (1) | CA2426659A1 (ja) |
MX (1) | MXPA03003632A (ja) |
WO (1) | WO2002066044A2 (ja) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2008152822A1 (ja) * | 2007-06-15 | 2008-12-18 | Medinet Co., Ltd. | 医薬 |
JP2022512540A (ja) * | 2018-08-29 | 2022-02-07 | シャタック ラボ,インコーポレイテッド | Flt3l系キメラタンパク質 |
Families Citing this family (19)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20050214268A1 (en) * | 2004-03-25 | 2005-09-29 | Cavanagh William A Iii | Methods for treating tumors and cancerous tissues |
EP1621550A1 (en) * | 2004-07-29 | 2006-02-01 | Dompé S.P.A. | Tumor-homing cells engineered to produce tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) |
EP1877090B1 (en) * | 2005-05-06 | 2014-01-15 | Providence Health System | Trimeric ox40-immunoglobulin fusion protein and methods of use |
AU2011265482B2 (en) * | 2005-05-06 | 2013-08-29 | Providence Health & Services - Oregon | Trimeric OX40L-immunoglobulin fusion protein and methods of use |
US9387344B2 (en) | 2006-11-21 | 2016-07-12 | The Johns Hopkins University | Methods for determining absorbed dose information |
WO2008068717A2 (en) * | 2006-12-08 | 2008-06-12 | Koninklijke Philips Elecronics N.V. | A system, method, computer-readable medium, and use for planning combined therapy |
US9757084B2 (en) * | 2011-12-22 | 2017-09-12 | The Johns Hopkins University | Method and system for administering radiopharmaceutical therapy (RPT) |
JP5883787B2 (ja) | 2009-08-19 | 2016-03-15 | スミス アンド ネフュー インコーポレーテッド | 多孔質インプラント構造物 |
WO2013119202A1 (en) * | 2012-02-06 | 2013-08-15 | Providence Health & Services - Oregon | Cancer treatment and monitoring methods using ox40 agonists |
RU2718988C2 (ru) | 2013-02-22 | 2020-04-15 | Куревак Аг | Комбинация противораковой рнк-вакцины и ингибитора пути pd-1 и ее применение |
EP3096787A4 (en) * | 2014-01-22 | 2018-02-07 | The Board of Trustees of the Leland Stanford Junior University | Methods and compositions for antibody and antibody-loaded dendritic cell mediated therapy |
US10307472B2 (en) | 2014-03-12 | 2019-06-04 | Curevac Ag | Combination of vaccination and OX40 agonists |
US20180127717A1 (en) * | 2015-05-07 | 2018-05-10 | Baylor College Of Medicine | Dendritic cell immunotherapy |
WO2018009916A1 (en) | 2016-07-07 | 2018-01-11 | The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University | Antibody adjuvant conjugates |
US11350988B2 (en) | 2017-09-11 | 2022-06-07 | Uptake Medical Technology Inc. | Bronchoscopic multimodality lung tumor treatment |
EP3503118A1 (en) | 2017-12-21 | 2019-06-26 | Koninklijke Philips N.V. | Methods and apparatus for reducing risk to a subject undergoing radiotherapy-based treatment |
US11246908B2 (en) * | 2018-01-10 | 2022-02-15 | The Johns Hopkins University | Compositions comprising albumin-FMS-like tyrosine kinase 3 ligand fusion proteins and uses thereof |
WO2020190725A1 (en) | 2019-03-15 | 2020-09-24 | Bolt Biotherapeutics, Inc. | Immunoconjugates targeting her2 |
WO2022036495A1 (en) | 2020-08-17 | 2022-02-24 | Utc Therapeutics Inc. | Lymphocytes-antigen presenting cells co-stimulators and uses thereof |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6143292A (en) * | 1995-05-25 | 2000-11-07 | Baxter International Inc. | Allogeneic cell therapy for cancer following allogeneic stem cell transplantation |
US6017527A (en) * | 1996-07-10 | 2000-01-25 | Immunex Corporation | Activated dendritic cells and methods for their activation |
US20030035790A1 (en) * | 1999-01-15 | 2003-02-20 | Shu-Hsia Chen | Combination therapy for the prevention or treatment of cancer, inflammatory disorders or infectious diseases in a subject |
-
2001
- 2001-10-23 WO PCT/US2001/046254 patent/WO2002066044A2/en active IP Right Grant
- 2001-10-23 CA CA002426659A patent/CA2426659A1/en not_active Abandoned
- 2001-10-23 EP EP01273795A patent/EP1427813A2/en not_active Withdrawn
- 2001-10-23 AU AU2001297677A patent/AU2001297677B2/en not_active Ceased
- 2001-10-23 MX MXPA03003632A patent/MXPA03003632A/es not_active Application Discontinuation
- 2001-10-23 JP JP2002565602A patent/JP2004529102A/ja not_active Withdrawn
-
2003
- 2003-06-16 US US10/381,160 patent/US20040131587A1/en not_active Abandoned
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2008152822A1 (ja) * | 2007-06-15 | 2008-12-18 | Medinet Co., Ltd. | 医薬 |
JPWO2008152822A1 (ja) * | 2007-06-15 | 2010-08-26 | 株式会社メディネット | 医薬 |
JP2022512540A (ja) * | 2018-08-29 | 2022-02-07 | シャタック ラボ,インコーポレイテッド | Flt3l系キメラタンパク質 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2002066044A3 (en) | 2004-03-25 |
MXPA03003632A (es) | 2003-09-10 |
CA2426659A1 (en) | 2002-08-29 |
EP1427813A2 (en) | 2004-06-16 |
AU2001297677B2 (en) | 2007-07-05 |
WO2002066044A2 (en) | 2002-08-29 |
US20040131587A1 (en) | 2004-07-08 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
AU2001297677B2 (en) | Method for dendritic cells based immunotherapy of tumors using combination therapy | |
JP6162778B2 (ja) | ワクチン免疫療法 | |
Liau et al. | Treatment of intracranial gliomas with bone marrow—derived dendritic cells pulsed with tumor antigens | |
AU2001297677A1 (en) | Method for dendritic cells based immunotherapy of tumors using combination therapy | |
Salem et al. | Recovery from cyclophosphamide-induced lymphopenia results in expansion of immature dendritic cells which can mediate enhanced prime-boost vaccination antitumor responses in vivo when stimulated with the TLR3 agonist poly (I: C) | |
US20040247563A1 (en) | Method of enhancing lymphocyte-mediated immune responses | |
US20140178334A1 (en) | Methods and compositions for liquidation of tumors | |
AU2023208190A1 (en) | Methods relating to activated dendritic cell compositions and immunotherapeutic treatments for subjects with advanced cancers | |
JP2017141287A (ja) | 免疫療法を用いたil−12の誘導 | |
KR20070086663A (ko) | 암 백신 보조제로서 알파 티모신 펩티드류 | |
EP1276501B9 (en) | Method for treatment of tumors using photodynamic therapy | |
EP1959007A1 (en) | Method for providing mature dendritic cells | |
di Pietro et al. | Oncophage®(vitespen®)-Heat shock protein peptide complex 96-based vaccines in melanoma: How far we are, how far we can get? | |
Terando et al. | Enhancing dendritic cell-based vaccines by gene modification |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20041022 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20041022 |
|
A761 | Written withdrawal of application |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A761 Effective date: 20071026 |