JP2004522738A - Cyclic 2-carbonylaminoketones as inhibitors of cruzipaine and other cysteine proteases - Google Patents
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Abstract
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｙ、（Ｘ）o、（Ｗ）n、（Ｖ）m、Ｚ及びＵは、本明細書に記載されるのと同様の定義である、一般式（Ｉ）の化合物は、クルジパインの阻害剤及び他のシステインプロテアーゼの阻害剤であり、例えば、シャーガス病の、治療剤として、または治療のための標的化合物の確認に有用である。R 1 , R 2 , R 3 , Y, (X) o , (W) n , (V) m , Z and U are defined by the general formula (I) having the same definition as described herein. Compounds) are inhibitors of cruzipain and other cysteine proteases and are useful, for example, as target agents for the treatment or treatment of Chagas' disease.
Description
【技術分野】
【０００１】
本発明は、プロテアーゼクルジパイン（ｐｒｏｔｅａｓｅ ｃｒｕｚｉｐａｉｎ）、トリパノソーマ クルージ寄生虫（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｃｒｕｚｉ ｐａｒａｓｉｔｅ）の遺伝子産物の阻害剤である化合物に関するものである。特に、本発明は、トリパノソーマ クルージ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｃｒｕｚｉ）感染の治療のための処置に有用である化合物、これらの化合物の使用、およびこれらを含む薬剤組成物を提供するものである。さらに、本発明は、広範なシステインプロテアーゼの阻害剤である化合物、これらの化合物の使用、およびこれらを含む薬剤組成物に関するものである。このような化合物は、システインプロテアーゼが関与する病気の治療のための処置に有用である。
【背景技術】
【０００２】
トリパノソーマ科の寄生虫は、ヒト及び動物の健康管理にかなりの世界的な衝撃がある（ＭｃＫｅｒｒｏｗ， Ｊ． Ｈ．， ｅｔ ａｌ， Ａｎｎ． Ｒｅｖ． Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ． ４７， ８２１−８５３， １９９３）。この科の寄生虫の一つである、トリパノソーマ クルージ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｃｒｕｚｉ）は、ラテン及び南アメリカで毎年２０００万人を超える人々に罹患し、これらの地域で心臓病の主要な原因であり、毎年、４５，０００人を超える人を死亡させる、シャーガス病の原因物質である（疾患制御センター（Ｃｅｎｔｅｒｓ ｆｏｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ）及び予防ウェブサイト（ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ ｗｅｂｓｉｔｅ））。加えて、田舎から都会への感染集団の移動ならびに南及び中央アメリカから北アメリカへの移動の増加に伴って、感染が輸血を介して、及び誕生時に広がっている。トリパノソーマ クルージ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｃｒｕｚｉ）感染で選択される現在の処置剤である、ニフルティモックス（ｎｉｆｕｒｔｉｍｏｘ）及びベンズニダゾール（ｂｅｎｚｎｉｄａｚｏｌｅ）（ＮＡＤＨフマル酸レダクターゼ阻害剤、Ｔｕｒｒｅｎｓ， ＪＦ， ｅｔ ａｌ， Ｍｏｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ Ｐａｒａｓｉｔｏｌ．， ８２（１），１２５−９， １９９６）が最も中等度にうまくいっており、感染急性期に約６０％の治癒を達成している（一般的な討論に関して、Ｄｏｃａｍｐｏ， Ｒ． Ｃｕｒｒ． Ｐｈａｒｍ． Ｄｅｓｉｇｎ， ７， １１５７−１１６４， ２００１を参照）が、心筋障害が関連する心不全がしばしば起こる慢性期には全く処方されていない（Ｋｉｒｃｈｈｏｆｆ， Ｌ． Ｖ． Ｎｅｗ Ｅｎｇｌ． Ｊ． Ｍｅｄ．， ３２９， ６３９−６４４， １９９３）。加えて、これらの２種の薬は、重篤な悪い毒性効果があり、処置中細かい医学的な監視を必要とし、シャーガス病の乳児に染色体の損傷を誘導することが示された（Ｇｏｒｌａ， Ｎ． Ｂ． ｅｔ ａｌ， Ｍｕｔａｔ． Ｒｅｓ． ２０６， ２１７−２２０， １９８８）。したがって、トリパノソーマ クルージ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｃｒｕｚｉ）感染症の化学療法処置に有効な新規な薬剤に対する強い医療面での必要性がある。
【０００３】
従来、感染疾患の定着または伝播に重要であることが知られている酵素の同定は、アンチウィルス（例えば、ＨＩＶアスパルチルプロテアーゼ阻害剤）及び抗菌（例えば、β−ラクタム系抗生物質）等の良好な薬剤の開発を助けてきた。寄生虫感染における同様の弱点に関する調査により、多くの酵素が試験された（例えば、寄生虫のジヒドロ葉酸レダクターゼ、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ， Ｓ． Ｆ． ｅｔ ａｌ， Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．， ４２（２１）， ４３００−４３１２， １９９９を参照；トリパノチオンレダクターゼ（ｔｒｙｐａｎｏｔｈｉｏｎｅ ｒｅｄｕｃｔａｓｅ）、Ｌｉ， Ｚ． ｅｔ ａｌ， Ｂｉｏｏｒｇ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． Ｌｅｔｔ．， １１（２）， ２５１−２５４， ２００１を参照；寄生虫のグリセルアルデヒド−３−リン酸脱水素酵素、Ａｒａｎｏｖ， Ａ． Ｍ． ｅｔ ａｌ， Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．， ４１（２４）， ４７９０−４７９９， １９９８を参照）。特に顕著な研究領域としては、寄生虫の寿命中に重要な役割を果たす、寄生虫によってコードされる、システインプロテアーゼの役割の同定がある（ＭｃＫｅｒｒｏｗ， Ｊ． Ｈ．， ｅｔ ａｌ， Ｂｉｏｏｒｇ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．， ７， ６３９−６４４， １９９９）。現在まですべての遺伝子産物の約２％を構成する生物分子のかなりの群由来のプロテアーゼが、幾つかのゲノム配列決定プログラムの分析後に同定された（例えば、Ｓｏｕｔｈａｎ， Ｃ． Ｊ． Ｐｅｐｔ． Ｓｃｉ， ６， ４５３−４５８， ２０００を参照）。プロテアーゼは、天然で見出される無数のタンパク質内のペプチドアミド結合の切断によってこれらの効果を仲介する、広範な生物学的プロセスに関与するように展開してきた。この加水分解作用は、正確にプロテアーゼ触媒部位内にある切断に関する結合を並べる、タンパク質によって発揮される特定の３次元の電子表面を、まず認識した後、これに結合することによって行なわれる。次に、触媒による加水分解は、プロテアーゼ自身のアミノ酸側鎖を介して、またはプロテアーゼに結合し、これによって活性化される水分子の作用のいずれかにより切断されるアミド結合の求核性アタックにより開始する。アタックする求核試薬がＣｙｓ残基のチオール側鎖であるプロテアーゼは、システインプロテアーゼとして知られている。「システインプロテアーゼ」の一般的な分類は、ウィルス、細菌、原生動物、植物及び真菌から哺乳動物までの広範な生物にわたって見出される多くのものを含む。
【０００４】
トリパノソーマ クルージ感染の生物学的な調査によって、寄生虫のライフサイクルの継続に重要である数多くの特定の酵素が明らかになった。このような酵素の一つである、クルジパイン（ｃｒｕｚｉｐａｉｎ）、カテプシンＬ様システインプロテアーゼは、シャーガス病の処置を目的とする明らかな治療標的である（（ａ） Ｃａｚｚｕｌｏ， Ｊ． Ｊ． ｅｔ ａｌ， Ｃｕｒｒ． Ｐｈａｒｍ． Ｄｅｓ． ７， １１４３−１１５６， ２００１； （ｂ） Ｃａｆｆｒｅｙ， Ｃ． Ｒ． ｅｔ ａｌ， Ｃｕｒｒ． Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇｅｔｓ， １， １５５−１６２， ２０００）。寄生虫のライフサイクルにおけるクルジパインの正確な生物学的な役割は不明なままであるが、エピマスティゴート発達段階におけるクルジパインｍＲＮＡの上昇はリソソーム様ベシクルにおける宿主分子の栄養分解での役割を示す（Ｅｎｇｅｌ， Ｊ． Ｃ． ｅｔ ａｌ， Ｊ． Ｃｅｌｌ． Ｓｃｉ， １１１， ５９７−６０６， １９９８）。実行可能な治療標的としてのクルジパインの確認は、複雑さのレベルが増して達成された。一般的なシステインプロテアーゼ阻害剤である、Ｚ−Ｐｈｅ−Ａｌａ−ＦＭＫをトリパノソーマ クルージが感染した哺乳動物細胞培養物に添加すると、寄生虫の複製及び分化が遮断され、これにより寄生虫のライフサイクルが停止する（Ｈａｒｔｈ， Ｇ．， ｅｔ ａｌ， Ｍｏｌ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｐａｒａｓｉｔｏｌ． ５８， １７−２４， １９９３）。トリパノソーマ クルージが感染したマウス動物モデルにおけるビニルスルホン系阻害剤の投与は、マウスを致命的な感染から救うのみでなく、完全に回復させた（Ｅｎｇｅｌ， Ｊ． Ｃ． ｅｔ ａｌ， Ｊ． Ｅｘｐ． Ｍｅｄ， １８８（４）， ７２５−７３４， １９９８）。多くの他のインビボでの研究によって、メジャーリーシュマニア（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ ｍａｊｏｒ）（Ｓｅｌｚｅｒ， Ｐ． Ｍ． ｅｔ ａｌ， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔ’ｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ．Ｓ．Ａ．， ９６， １１０１５−１１０２２， １９９９）、マンソン住血吸虫（Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ ｍａｎｓｏｎｉ）及び熱帯熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｉｕｍ）（Ｏｌｓｏｎ， Ｊ． Ｅ． ｅｔ ａｌ， Ｂｉｏｏｒｇ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．， ７， ６３３−６３８， １９９９）等の別の寄生虫による感染がシステインプロテアーゼ阻害剤による処置によって停止または治癒されうることが確認された。
【０００５】
様々な合成方法が、クルジパイン阻害剤の設計について記載されてきた。しかしながら、トリパノソーマ クルージ感染症の処置を目的として生物学的な「プルーフ−オブ−プリンシプル（ｐｒｏｏｆ−ｏｆ−ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ）」を提供するものの、現在の阻害剤は、それらの臨床での開発を妨げる多くの生化学的及び物理的な性質を示す（例えば、（ａ） Ｂｒｉｎｅｎ， Ｌ． Ｓ． ｅｔ ａｌ， Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ， ８， ８３１−８４０， ２０００， ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃ ｖｉｎｙｌ ｓｕｌｐｈｏｎｅｓ， ｐｏｓｓｉｂｌｅ ａｄｖｅｒｓｅ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｃｅｌｌ ｔｏｘｉｃｉｔｙ（ＭｃＫｅｒｒｏｗ， Ｊ． Ｈ． ａｎｄ Ｅｎｇｅｌ， Ｊ． ｕｎｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｒｅｓｕｌｔｓ ｃｉｔｅｄ ｉｎ Ｓｃｈｅｉｄｔ， Ｋ． Ａ． ｅｔ ａｌ， Ｂｉｏｏｒｇ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ， ６， ２４７７−２４９４， １９９８を参照）；（ｂ） Ｄｕ， Ｘ． ｅｔ ａｌ， Ｃｈｅｍ． Ｂｉｏｌ．， ７， ７３３−７４２， ２０００， ａｒｙｌ ｕｒｅａｓ， ｇｅｎｅｒａｌｌｙ ｗｉｔｈ ｌｏｗ μＭ ａｃｔｉｖｉｔｙ， ａｎｄ ｈｉｇｈ ＣｌｏｇＰ ｖａｌｕｅｓ， ｔｈｕｓ ｐｏｏｒ ａｑｕｅｏｕｓ ｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｐｒｏｂａｂｌｙ ｌｏｗ ｏｒａｌ ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ；（ｃ） Ｒｏｕｓｈ， Ｗ． Ｒ． ｅｔ ａｌ， Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ， ５６， ９７４７−９７６２， ２０００， ｐｅｐｔｉｄｙｌ ｅｐｏｘｙｓｕｃｃｉｎａｔｅｓ， ｉｒｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ， ｗｉｔｈ ｐｏｔｅｎｔ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｖｅｒｓｅｓ ｈｏｕｓｅ−ｋｅｅｐｉｎｇ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｐｒｏｔｅａｓｅｓ ｓｕｃｈ ａｓ ｃａｔｈｅｐｓｉｎ Ｂ；（ｄ） Ｌｉ， Ｒ． ｅｔ ａｌ， Ｂｉｏｏｒｇ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． ４（９）， １４２１−１４２７， １９９６， ｂｉｓａｒｙｌａｃｙｌｈｙｄｒａｚｉｄｅｓ ａｎｄ ｃｈａｌｃｏｎｅｓ， ｐｏｌｙｈｙｄｒｏｘｙｌａｔｅｄ ａｒｏｍａｔｉｃｓ；（ｅ） ＵＳ６１４３９３１， ＷＯ ９８４６５５９， ｎｏｎ−ｐｅｐｔｉｄｅ α−ｋｅｔｏａｍｉｄｅｓを参照）。今日までの多くの異なる酵素阻害方法のうち、クルジパインプロテアーゼ阻害剤のみがトリパノソーマ クルージ感染の病気関連動物モデルを治癒するのに有効であることが分かっている。したがって、潜在性、選択性、低毒性及び最適化された薬物動態パラメーターの望ましい組み合わせを有するより有効なクルジパイン阻害剤の発見による、ヒトへの使用に適する、臨床上の候補へのこれらの「プルーフ−オブ−プリンシプル（ｐｒｏｏｆ−ｏｆ−ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ）」知得を続けることが明らかに医療上必要である。
【０００６】
クルジパイン及び多くの他の重要な寄生虫プロテアーゼは、パパイン様ＣＡ Ｃ１科に属し、密接な構造上の哺乳動物の相同性を有する。システインプロテアーゼは、３次元構造での類似性またはプロテアーゼ１次配列内の触媒残基の保存配列に基づいて「クラン」に分類される。加えて、「クラン」はさらに、各プロテアーゼがプロテアーゼ活性に応答できる部分を構成するアミノ酸配列の部分を比較すると他のものとの統計学的に有意な関係を共有する「科」に分類される（徹底的な討論については、Ｂａｒｒｅｔｔ， Ａ．Ｊ ｅｔ ａｌ， ｉｎ ‘Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｏｌｙｔｉｃ Ｅｎｚｙｍｅｓ’， Ｅｄｓ． Ｂａｒｒｅｔｔ， Ａ． Ｊ．， Ｒａｗｌｉｎｇｓ， Ｎ． Ｄ．， 及び Ｗｏｅｓｓｎｅｒ， Ｊ． Ｆ． Ｐｕｂｌ． Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， １９９８を参照）。今日まで、システインプロテアーゼは５種のクラン、ＣＡ、ＣＢ、ＣＣ、ＣＤ及びＣＥに分類される（Ｂａｒｒｅｔｔ， Ａ． Ｊ． ｅｔ ａｌ， １９９８）。トロピカルパパイヤフルーツである「パパイン」のプロテアーゼは、クランＣＡの基礎を形成し、これは、現在、より多くのものが現在のゲノム配列決定の努力により予想されて、様々な配列データベースで８０種を超える別の完全な登録を有する。クランＣＡ／科Ｃ１のプロテアーゼ、例えば、カテプシンＫ（骨粗鬆症）、カテプシンＳ（自己免疫疾患）、カテプシンＬ（転移）等のヒトのプロテアーゼまたはファルシパイン（ｆａｌｃｉｐａｉｎ）（マラリア原虫 熱帯熱マラリア原虫（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ））、クルジパイン（トリパノソーマ クルージ感染）等の寄生虫のプロテアーゼは、多数の病気のプロセスにかかわりがある。最近、細菌のプロテアーゼ、スタフィロパイン（ｓｔａｐｈｙｌｏｐａｉｎ）（Ｓ． ａｕｒｅｕｓ感染）がまた、試験的にクランＣＡに分類された。Ｘ線結晶構造が、ある範囲の阻害剤、例えば、パパイン（ＰＤＢ登録、１ｐａｄ、１ｐｅ６、１ｐｉｐ、１ｐｏｐ、４ｐａｄ、５ｐａｄ、６ｐａｄ、１ｐｐｐ、１ｔｈｅ、１ｃｓｂ、１ｈｕｃ）、カテプシンＫ（１ａｕ０、１ａｕ２、１ａｕ３、１ａｕ４、１ａｔｋ、１ｍｅｍ、１ｂｇｏ、１ａｙｗ、１ａｙｕ）、カテプシンＬ（１ｃｓ８）、カテプシンＳ（現在、待機中であるが、ＭｃＧｒａｔｈ， Ｍ． Ｅ． ｅｔ ａｌ， Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ， ７， １２９４−１３０２， １９９８で公表された）、クルザイン（ｃｒｕｚａｉｎ）（クルジパインの組換え形態、Ｅａｋｉｎ， Ａ． Ｅ． ｅｔ ａｌ， ２６８（９）， ６１１５−６１１８， １９９３を参照）（１ｅｗｐ、１ａｉｍ、２ａｉｍ、１Ｆ２９、１Ｆ２Ａ、１Ｆ２Ｂ、１Ｆ２Ｃ）、スタフィロパイン（ｓｔａｐｈｙｌｏｐａｉｎ）（１ｃｖ８）と複合したある範囲の上記プロテアーゼで利用できる。各構造は、これらの「クラン」及び「科」の分類によって予想されるように、同様の全体の活性部位のトポロジーを示し、このような構造の類似性は、ヒトへの使用に適するクルジパインの選択的な阻害剤を発見するのに伴われる困難性の一概念を具体化する。しかしながら、各ＣＡ Ｃ１プロテアーゼの活性部位溝の深さ及び複雑な形状の点での微妙な相違が明らかであり、これは選択的な阻害剤設計で開発されてもよい。加えて、ＣＡ Ｃ１科プロテアーゼの多くの現在の基質による阻害剤複合体は、阻害剤の潜在性に有意に寄与する、阻害剤及びプロテアーゼバックボーン間の一連の保存された水素結合を示す。主に２座水素結合がプロテアーゼＧｌｙ６６（Ｃ＝Ｏ）／阻害剤Ｎ−Ｈ及びプロテアーゼＧｌｙ６６（ＮＨ）／阻害剤（Ｃ＝Ｏ）の間で観察され、この際、阻害剤（Ｃ＝Ｏ）及び（ＮＨ）は阻害剤内のＳ２サブサイト結合要素を構成するアミノ酸残基ＮＨＣＨＲＣＯによって提供される（プロテアーゼ結合部位の命名の記載に関しては、Ｂｅｒｇｅｒ， Ａ． ａｎｄ Ｓｃｈｅｃｔｅｒ， Ｉ． Ｐｈｉｌｏｓ． Ｔｒａｎｓ． Ｒ． Ｓｏｃ． Ｌｏｎｄ． ［Ｂｉｏｌ．］， ２５７， ２４９−２６４， １９７０を参照）。アスパラギンまたはアスパラギン酸のプロテアーゼ主鎖（Ｃ＝Ｏ）（１５８〜１６３、残基の番号はプロテアーゼによって異なる）及び阻害剤（Ｎ−Ｈ）間のさらなる水素結合が多くの場合観察され、この際、阻害剤（Ｎ−Ｈ）は、阻害剤内のＳ１サブサイト結合要素によって提供される。ゆえに、モチーフＸ−ＮＨＣＨＲＣＯ−ＮＨ−Ｙが、ＣＡ Ｃ１プロテアーゼの従来の基質に基づく阻害剤の中で広範に観察される。
【０００７】
従来技術では、ヒトに使用されるシステインプロテアーゼ阻害剤の開発が、近年、活発に行なわれる領域であった。ＣＡ Ｃ１科のものを考慮すると、ペプチド及びペプチド様（ｐｅｐｔｉｄｏｍｉｍｅｔｉｃ）のニトリル（例えば、ＷＯ−Ａ−０１０９９１０、ＷＯ−Ａ−００５１９９８、ＷＯ−Ａ−０１１９８１６、ＷＯ−Ａ−９９２４４６０、ＷＯ−Ａ−００４９００８、ＷＯ−Ａ−００４８９９２、ＷＯ−Ａ−００４９００７、ＷＯ−Ａ−０１３０７７２、ＷＯ−Ａ−００５５１２５、ＷＯ−Ａ−００５５１２６、ＷＯ−Ａ−０１１９８０８、ＷＯ−Ａ−０１４９２８８、ＷＯ−Ａ−０１４７８８６を参照）、直鎖及び環状ペプチド及びペプチド様ケトン（例えば、Ｖｅｂｅｒ， Ｄ． Ｆ． ａｎｄ Ｔｈｏｍｐｓｏｎ， Ｓ． Ｋ．， Ｃｕｒｒ． Ｏｐｉｎ． Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｄｅｖ．， ３（４）， ３６２−３６９， ２０００，、ＷＯ−Ａ−０１７０２３２、ＷＯ−Ａ−０１７８７３４、ＷＯ−Ａ−０００９６５３、ＷＯ−Ａ−００６９８５５、ＷＯ−Ａ−００２９４０８、ＷＯ−Ａ−０１３４１５３からＷＯ−Ａ−０１３４１６０、ＷＯ−Ａ−００２９４０８、ＷＯ−Ａ−９９６４３９９、ＷＯ−Ａ−９８０５３３６、ＷＯ−Ａ−９８５０５３３を参照）、ケトヘテロ環（例えば、ＷＯ−Ａ−００５５１４４、ＷＯ−Ａ−００５５１２４を参照）およびモノバクタム（例えば、ＷＯ−Ａ−００５９８８１、ＷＯ−Ａ−９９４８９１１、ＷＯ−Ａ−０１０９１６９を参照）の使用により、ヒトのカテプシン、主にカテプシンＫ（骨粗鬆症）、カテプシンＳ（自己免疫疾患）及びカテプシンＬ（転移）の阻害剤の開発が特に強調されてきた。従来技術では、潜在的なインビトロでの阻害剤が記載されるが、ヒトの治療剤を開発する上での多くの困難も明らかにされた。例えば、ＷＯ−Ａ−９８５０５３３及びＷＯ−Ａ−００２９４０８には、環状ケトンに言及し、パパイン科のプロテアーゼ、及び最も好ましい実施態様としては、カテプシンＫを特に参照してシステインプロテアーゼの阻害剤である化合物が記載される。ＷＯ−Ａ−９８５０５３３には、良好な経口生物学的利用能を有するカテプシンＫの潜在的な阻害剤として文献に後に詳述される化合物が記載される（Ｗｉｔｈｅｒｉｎｇｔｏｎ， Ｊ．， ‘Ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｆｕｒａｎｓ ａｓ Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｃａｔｈｅｐｓｉｎ Ｋ Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ’， ＲＳＣ ｍｅｅｔｉｎｇ， Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ Ｈｏｕｓｅ， Ｌｏｎｄｏｎ， １９９９）。ＷＯ−Ａ−９８５０５３３の化合物は、テトラヒドロフランカルボニル及び活性部位触媒性システイン残基間の可逆的な共有結合の形成によりカテプシンＫに結合することが報告された（Ｗｉｔｈｅｒｉｎｇｔｏｎ， Ｊ．， １９９９）。加えて、同様の環状ケトン化合物が、特にファルシパインの阻害によるマラリアの処置について、寄生虫病に関連するシステインプロテアーゼの阻害剤の広範な説明の一部として、ＷＯ−Ａ−９９５３０３９に記載される。しかしながら、後の文献では、ＷＯ−Ａ−９８５０５３３の環状ケトン化合物は、阻害剤の生理化学的な性質、α−アミノケトンキラル中心のキラル安定性が劣っていることにより、さらなる開発または十分な薬物動態評価には不適切であることが記載される（Ｍａｒｑｕｉｓ， Ｒ． Ｗ． ｅｔ ａｌ， Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．， ４４（５）， ７２５−７３６， ２００１）。ＷＯ−Ａ−００６９８５５には、特にカテプシンＳの阻害に関する環状ケトンについても言及される化合物が記載される。ＷＯ−Ａ−００６９８５５の化合物は、環状ケトン環系のα−炭素に向上したキラル安定性を提供する環状ケトン環系のβ−置換基の存在により、ＷＯ−Ａ−９８５０５３３の化合物より進歩していると考えられる。低いキラル保全性の問題を解決しようとして、後の文献では、ＷＯ−Ａ−９８５０５３３に記載されるのに密接に関連する環状ケトン群が提供され、ここでは、阻害剤の潜在性の約３００倍の損失が不安定なα−プロトンの代わりにアルキル基を導入すると観察された（Ｍａｒｑｕｉｓ， Ｒ． Ｗ． ｅｔ ａｌ， Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．， ４４， １３８０−１３９５， ２００１）。加えて、後の文献では、ＷＯ−Ａ−９８５０５３３に記載される環状ケトン群では、α（Ｓ）−異性体は、α（Ｒ）−異性体に比べて１０〜８０倍より潜在的であることが示された（Ｆｅｎｗｉｃｋ， Ａ． Ｅ． ｅｔ ａｌ， Ｂｉｏｏｒｇ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ． Ｌｅｔｔ．， １１， １９９−２０２， ２００１）。
【発明の開示】
【０００８】
ここで、一般式（Ｉ）で規定される、特定の化合物がトリパノソーマ クルージ感染症の処置に有用である潜在的かつ選択的なクルジパインプロテアーゼ阻害剤であることを発見した。一般式（Ｉ）で規定される他の化合物は、広範なＣＡ Ｃ１システインプロテアーゼのプロテアーゼ阻害剤であり、システインプロテアーゼによって引き起こされる病気の処置に有用な化合物である。一般式（Ｉ）で記載される化合物は、Ｒ−立体配置（またはＺ＝‘Ｓ’の場合には、Ｓ−立体配置）の、α−アルキル基を含むが、驚くべきことに、一般式（Ｉ）で規定される化合物は良好な潜在性を保持する。本発明は、一般式（Ｉ）で規定される置換された（２−アルキル−３−アルキル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）アミド、（２−アルキル−３−アルキル−４−オキソ−テトラヒドロ−チオフェン−３−イル）アミド及び（１−アルキル−２−アルキル−５−オキソシクロペンチル）アミド化合物を提供するものである。
【０００９】
したがって、本発明の第一の態様は、一般式（Ｉ）の化合物を提供するものである。
【００１０】
【化１】
ただし、Ｒ1は、Ｃ0-7−アルキル（Ｃ＝０である時は、Ｒ1は、単に水素である）、Ｃ3-6−シクロアルキルまたはＡｒ−Ｃ0-7−アルキル（Ｃ＝０である時は、Ｒ1は、単に芳香族部分Ａｒである）であり；
Ｒ2は、Ｃ0-7−アルキル、Ｃ3-6−シクロアルキルまたはＡｒ−Ｃ0-7−アルキルであり；
Ｒ3は、Ｃ1-7−アルキル、Ｃ3-6−シクロアルキルまたはＡｒ−Ｃ0-7−アルキルであり；
Ｙは、ＣＲ4Ｒ5−ＣＯであり、この際、Ｒ4、Ｒ5は、独立して、Ｃ0-7−アルキル、Ｃ3-6−シクロアルキル及びＡｒ−Ｃ0-7−アルキルから選ばれ；
（Ｘ）oは、ＣＲ6Ｒ7であり、この際、Ｒ6及びＲ7は、独立して、Ｃ0-7−アルキル、Ｃ3-6−シクロアルキル及びＡｒ−Ｃ0-7−アルキルから選ばれ、およびｏは、０〜３の数であり；
（Ｗ）nは、Ｏ、Ｓ、Ｃ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）またはＳ（Ｏ）2またはＮＲ8であり、この際、Ｒ8は、Ｃ0-7−アルキル、Ｃ3-6−シクロアルキル及びＡｒ−Ｃ0-7−アルキルから選ばれ、およびｎは、０または１であり；
（Ｖ）mは、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｓ）、Ｓ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）2、Ｓ（Ｏ）2ＮＨ、ＯＣ（Ｏ）、ＮＨＣ（Ｏ）、ＮＨＳ（Ｏ）、ＮＨＳ（Ｏ）2、ＯＣ（Ｏ）ＮＨ、Ｃ（Ｏ）ＮＨまたはＣＲ9Ｒ10であり、この際、Ｒ9及びＲ10は、独立して、Ｃ0-7−アルキル、Ｃ3-6−シクロアルキル、Ａｒ−Ｃ0-7−アルキルから選ばれ、およびｍは、０〜３の数であり、ｍが１より大きい場合には、（Ｖ）mは、最大１個のカルボニルまたはスルホニル基を含み；
Ｚは、Ｏ（この際、一般式（Ｉ）の化合物は、（２−アルキル−３−アルキル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）アミドと称される）、Ｓ（この際、一般式（Ｉ）の化合物は、（２−アルキル−３−アルキル−４−オキソ−テドラヒドロチオフェン−３−イル）アミドと称される）またはＣＨ2（この際、一般式（Ｉ）の化合物は、（１−アルキル−２−アルキル−５−オキソシクロペンチル）アミドと称される）であり；
Ｕは、（下記に詳述されるように）飽和または不飽和のいずれかであり、０〜４個のヘテロ原子を含む、安定した５−〜７−員の一環または安定した８−〜１１−員の２環であり；
【００１２】
【化２】
ただし、Ｒ11は、Ｃ0-7−アルキル、Ｃ3-6−シクロアルキル、Ａｒ−Ｃ0-7−アルキル、ハロゲン、Ｏ−Ｃ0-7−アルキル、Ｏ−Ｃ3-6−シクロアルキル、Ｏ−Ａｒ−Ｃ0-7−アルキル、Ｓ−Ｃ0-7−アルキル、Ｓ−Ｃ3-6−シクロアルキル、Ｓ−Ａｒ−Ｃ0-7−アルキル、ＮＨ−Ｃ0-7−アルキル、ＮＨ−Ｃ3-6−シクロアルキル、ＮＨ−Ａｒ−Ｃ0-7−アルキル、Ｎ−（Ｃ0-7−アルキル）2、Ｎ−（Ｃ3-6−シクロアルキル）2及びＮ−（Ａｒ−Ｃ0-7−アルキル）2から選ばれる；または基ＣＨＲ11若しくはＣＲ11の一部である際には、Ｒ11は、ハロゲンであってもよい；
Ａは、ＣＨ2、ＣＨＲ11、Ｏ、Ｓ及びＮＲ12から選ばれ、この際、Ｒ11は、上記と同様の定義であり、およびＲ12は、Ｃ0-7−アルキル、Ｃ3-6−シクロアルキル及びＡｒ−Ｃ0-7−アルキルから選ばれ；
Ｂ、Ｄ及びＧは、独立して、ＣＲ11から選ばれ、この際、Ｒ11は、上記と同様の定義である、またはＮであり；
Ｅは、ＣＨ2、ＣＨＲ11、Ｏ、Ｓ及びＮＲ12から選ばれ、この際、Ｒ11及びＲ12は、上記と同様の定義であり；
Ｊ、Ｌ、Ｍ、Ｒ、Ｔ、Ｔ2、Ｔ3及びＴ4は、独立して、ＣＲ11及びＮから選ばれ、この際、Ｒ11は、上記と同様の定義であり；
Ｔ5は、ＣＨまたはＮから選ばれ；
ｑは、１〜３の数であり、これにより５−、６−または７−員環を規定する。
【００１４】
Ｂ、Ｄ、Ｇ、Ｊ、Ｌ、Ｍ、Ｒ、Ｔ、Ｔ2、Ｔ3及びＴ4は、さらに、Ｎ−オキシド（Ｎ→Ｏ）を表わしてもよい。
【００１５】
本発明は、本発明の化合物のすべての塩、水和物、溶媒和化合物、複合体及びプロドラッグを包含する。「化合物」ということばは、特記しない限り、このようなすべての塩、水和物、溶媒和化合物、複合体及びプロドラッグを包含するものとする。
【００１６】
一般式（Ｉ）の化合物の適当な製薬上または獣医学上許容できる塩としては、有機酸、特に、以下に制限されないが、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、乳酸塩、グルコン酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、マレイン酸塩、リンゴ酸塩、パントテン酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、酪酸塩、ジグルコン酸塩、シクロペンタネート、グルコヘプタネート、グリセロリン酸塩、シュウ酸塩、ヘプタノエート、ヘキサン酸塩、フマル酸塩、ニコチネート、パルモエート、ペクチネート、３−フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、酒石酸塩、ラクトビオネート（ｌａｃｔｏｂｉｏｎａｔｅ）、ピボレート（ｐｉｖｏｌａｔｅ）、樟脳酸塩、ウンデカン酸塩及びコハク酸塩などの、カルボン酸、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、樟脳スルホン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−クロロベンゼンスルホン酸塩、及びｐ−トルエンスルホン酸塩等の、有機スルホン酸；ならびに塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、硫酸塩、重硫酸塩、ヘミスルフェート、チオシアン酸塩、過硫酸塩、リン酸塩及びスルホン酸塩等の、無機酸の塩が挙げられる。
【００１７】
プロドラッグは、インビボで一般式（Ｉ）の活性のある親薬剤を放出する共有結合化合物である。プロドラッグは、例えば、（２−アルキル−３−アルキル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）アミド、（２−アルキル−３−アルキル−４−オキソ−テトラヒドロ−チオフェン−３−イル）アミドまたは（１−アルキル−２−アルキル−５−オキソシクロペンチル）アミド足場に存在する環外ケトン官能性を有するアセタールまたはヘミアセタール誘導体を構成してもよい。キラル中心または他の形態の異性体中心が本発明の化合物に存在する際には、鏡像異性体及びジアステレオ異性体等の、すべての形態のこのような一つの異性体または複数の異性体は、本発明に包含される。キラル中心を含む本発明の化合物はラセミ混合物、鏡像異性体が多く含まれる混合物として使用されてもよい、またはラセミ混合物を既知の技術を用いて分離して、個々の鏡像異性体を単独で使用してもよい。
【００１８】
本明細書で適用する際の「ハロゲン」は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉを含むことを意味する。
【００１９】
本明細書で適用する際の「ヘテロ原子」は、Ｏ、Ｓ及びＮを含むことを意味する。
【００２０】
本明細書で適用する際の「Ｃ0-7−アルキル」は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ヘキシル、ヘプチル及びこれらの単純異性体等の０（即ち、単純に水素）〜７炭素原子を有する安定した直鎖及び分岐鎖の脂肪族炭素鎖を含むことを意味する。加えて、Ｃ0-7−アルキルは、必要であれば、１、２または３個のハロゲン原子（上記定義と同様）でいずれかの位置で置換されて、例えば、トリフルオロメチル置換基を形成してもよい。さらに、Ｃ0-7−アルキルは、一以上のヘテロ原子（上記定義と同様）を有して、例えば、エーテル、チオエーテル、スルホン、スルホンアミド、置換アミン、アミジン、グアニジン、カルボン酸、カルボキサミドを形成してもよい。ヘテロ原子が鎖の末端に位置する際には、１または２個の水素原子で適当に置換される。ヘテロ原子またはハロゲンは、Ｃ0-7−アルキルが最小限１個の炭素原子を含む際にのみ存在する。
【００２１】
本明細書で適用する際の「Ｃ1-7−アルキル」は、最小限１個の炭素を有する置換基を記載する以外は（上記と同様の定義の）Ｃ0-7−アルキルの定義を包含することを意味する。
【００２２】
本明細書で適用する際の「Ｃ3-6−シクロアルキル」は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル等の環状炭素をさらに含む「Ｃ0-7−アルキル」のいずれかのバリエーションを含むことを意味する。環状炭素は、必要であれば、一以上のハロゲン（上記定義と同様）またはヘテロ原子（上記定義と同様）で置換されて、例えば、テトラヒドロフラン、ピロリジン、ピペリジン、ピペラジンまたはモルホリン置換基を形成してもよい。
【００２３】
本明細書で適用する際の「Ａｒ−Ｃ0-7−アルキル」は、さらに芳香環部分「Ａｒ」を含むＣ0-7−アルキルのいずれかのバリエーションを含むことを意味する。芳香環部分Ａｒは、一般式（Ｉ）におけるＵで前記したのと同様、不飽和である安定した５−若しくは６−員の一環または安定した９若しくは１０員の２環であってもよい。芳香環部分Ａｒは、（一般式（Ｉ）におけるＵで前記したのと同様）Ｒ11で置換されてもよい。置換基Ａｒ−Ｃ0-7−アルキルでＣ＝０である場合には、置換基は単に芳香環部分Ａｒである。
【００２４】
アルキル及びシクロアルキル等のことばを含む他の表現は、上記定義に従って解されるものとする。例えば、「Ｃ1-4−アルキル」は、１〜４個の炭素原子を含む以外はＣ0-7−アルキルと同様である。
【００２５】
異なる構造の異性体が存在する、および／または一以上のキラル中心が存在する際には、すべての異性体の形態を包含するものと解する。鏡像異性体は、これらのキラル中心の絶対配置によって特徴が明らかであり、Ｃａｈｎ， Ｉｎｇｏｌｄ ａｎｄ ＰｒｅｌｏｇのＲ−及びＳ−配列規則によって記載される。このような規則は当該分野においてよく知られている（例えば、‘Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ’， ３rd ｅｄｉｔｉｏｎ， ｅｄ． Ｍａｒｃｈ， Ｊ．， Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １９８５を参照）。
【００２６】
一般式（Ｉ）の好ましい化合物としては、Ｒ1がＣ0-7−アルキルまたはＡｒ−Ｃ0-7−アルキルを有するものが挙げられる。ゆえに、例えば、好ましいＲ1部分としては、水素または直鎖若しくは分岐鎖アルキル鎖、または直鎖若しくは分岐鎖ヘテロアルキル鎖、または必要であれば置換されてもよいアリールアルキル鎖、または必要であれば置換されてもよいアリールヘテロアルキル鎖がある。
【００２７】
Ｒ1が水素またはＣ1-4−アルキルまたはＡｒ−Ｃ1-4−アルキルであることが特に好ましく、このようなＲ1置換基の例としては、以下に制限されないが、下記がある。
【００２８】
【化３】
ただし、Ｒ11は、上記と同様の定義である。
【００３０】
Ｒ2は、Ｃ0-7−アルキルまたはＡｒ−Ｃ0-7−アルキル、例えば、水素、直鎖若しくは分岐鎖アルキル鎖若しくはヘテロアルキル鎖または必要であれば置換されてもよいアリールアルキル鎖であることが好ましい。特に好ましい化合物としては、Ｒ2がＣ0-4−アルキルまたはＡｒ−Ｃ0-4−アルキルであるものがあり、このようなＲ2置換基の例としては、以下に制限されないが、下記がある。
【００３１】
【化４】
ただし、Ｒ11及びＲ12は、上記と同様の定義である。
【００３３】
このような好ましいＲ1及びＲ2基を含む（２−アルキル−３−アルキル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）アミド足場の例としては、下記がある。
【００３４】
【化５】
一般式（Ｉ）の好ましい化合物において、Ｒ3は、メチル等の単純アルキルまたはアリールアルキル基である。
【００３６】
一般式（Ｉ）の好ましい化合物において、Ｙは、ＣＨＲ5ＣＯであり、この際、Ｒ5は、Ｃ0-7−アルキルまたはＡｒ−Ｃ0-7−アルキル、例えば、水素、直鎖若しくは分岐鎖アルキル鎖、直鎖若しくは分岐鎖ヘテロアルキル鎖、必要であれば置換されてもよいアリールアルキル鎖または必要であれば置換されてもよいアリールヘテロアルキル鎖から選ばれる。加えて、一般式（Ｉ）の好ましい化合物においては、Ｒ5は、Ｃ3-6−シクロアルキルから選ばれ、例えば、シクロヘキシルメチルがある。
【００３７】
好ましいＹ置換基の例としては、下記が挙げられる。
【００３８】
【化６】
ただし、Ｒ11、Ｒ12及びＡｒは、上記と同様の定義である。
【００４０】
より好ましいＲ5基としては、ＯＨ、ＮＲ12Ｒ12、ＣＯＯＲ12、若しくはＣＯＮＲ12で置換されてもよい、Ｃ1-4−アルキルまたはアリール基がＲ11で置換されてもよい、シクロアルキルメチル若しくはＡｒ−Ｃ1-4−アルキルがある；この際、Ｒ11及びＲ12は、それぞれ独立して、上記と同様の定義である。
【００４１】
さらにより好ましいＲ5基は、Ａｒ−ＣＨ2−を有し、この際、芳香環は、必要であれば置換されてもよいフェニルまたは１環式ヘテロ環である。加えて、さらにより好ましいＲ5基は、イソブチル等の単純分岐鎖アルキル基またはベンジルスルファニルメチルまたはベンジルスルホニルメチル等の直鎖のヘテロアルキル鎖を有する。さらに、より好ましいＲ5基は、シクロヘキシルメチルを有する。より好ましいＹ置換基の例としては、下記がある。
【００４２】
【化７】
ただし、Ｒ11及びＡｒは、上記と同様の定義である。
【００４４】
基（Ｘ）oにおいて、Ｒ6及びＲ7は、それぞれ、Ｃ0-7−アルキルまたはＡｒ−Ｃ0-7−アルキル、例えば、水素、直鎖若しくは分岐鎖アルキル鎖、直鎖若しくは分岐鎖ヘテロアルキル鎖、必要であれば置換されてもよいアリールアルキル鎖または必要であれば置換されてもよいアリールへテロアルキル鎖から選ばれることが好ましい。
【００４５】
より好ましい（Ｘ）o基は、水素から選ばれるＲ6を有する；Ｒ7は、ＯＨ、ＮＲ12Ｒ12、ＣＯＯＲ12、若しくはＣＯＮＲ12で置換されてもよい、Ｃ1-4−アルキル；またはアリール基はＲ11で置換されてもよい、Ａｒ−Ｃ1-4−アルキルであり、この際、Ｒ11及びＲ12は、それぞれ独立して、上記と同様の定義である。
【００４６】
好ましい（Ｘ）o基の例としては、下記がある：
【００４７】
【化８】
ただし、Ｒ11及びＲ12は、上記と同様の定義である。
【００４９】
一般式（Ｉ）のさらにより好ましい化合物は、メチレン等の単純アルキル基である（Ｘ）o基を有し、この際、ｏは、０または１である。
【００５０】
基（Ｗ）nにおいて、Ｗは、好ましくは、Ｏ、Ｓ、ＳＯ2、Ｓ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）またはＮＲ8であり、この際、Ｒ8は、Ｃ0-4−アルキルであり；及びｎは、０または１である。
【００５１】
一般式（Ｉ）のより好ましい化合物は、ｎは０または１であるＯ、Ｓ、ＳＯ2、Ｃ（Ｏ）及びＮＨとして規定される（Ｗ）n基を有する。
【００５２】
基（Ｖ）mにおいて：
Ｖは、好ましくはＣ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＨまたはＣＨＲ10であり、この際、Ｒ10は、Ｃ0-4−アルキルであり；およびｍは０または１である。
【００５３】
一般式（Ｉ）に包含される好ましいＶ及びＷ置換基の組み合わせとしては、以下に制限されないが、以下が挙げられる。
【００５４】
【化９】
加えて、一般式（Ｉ）に包含される好ましいＶ及びＷ置換基の組み合わせとしては、以下に制限されないが、以下が挙げられる。
【００５６】
【化１０】
一般式（Ｉ）に包含されるより好ましいＶ、Ｗ及びＸ置換基の組み合わせとしては、以下に制限されないが、以下が挙げられる。
【００５８】
【化１１】
一般式（Ｉ）の好ましい化合物において、Ｕは、必要であれば置換されてもよい５−若しくは６−員の飽和若しくは不飽和のヘテロ環若しくはＡｒ基または必要であれば置換されてもよい飽和若しくは不飽和の９−若しくは１０−員のヘテロ環若しくはＡｒ基を有する。このような好ましいＵ環の例としては、下記：
【００６０】
【化１２】
および下記：
【００６２】
【化１３】
ただし、Ｒ11は、上記と同様の定義である、
がある。
【００６４】
一般式（Ｉ）のより好ましい化合物は、アリールＡｒのパラ位に嵩高いアルキルまたはアリール基を有するＵを含む。また、より好ましい化合物は、メタまたはパラ−２アリールＡｒ−Ａｒを有し、この際、Ａｒは、上記と同様の定義である。加えて、より好ましい化合物は、６，６または６，５または５，６−融合芳香環を有する。より好ましいＵ基の例としては、下記がある。
【００６５】
【化１４】
ただし、Ｒ11、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｊ、Ｌ、Ｍ、Ｒ、Ｔ、Ｔ2、Ｔ3及びＴ4は、上記と同様の定義である。
【００６７】
特にクルジパインの阻害を目的とする、一般式（Ｉ）のさらにより好ましい化合物は、パラ位に嵩高いアルキルまたはアリール基を含む６員のＡｒ環を有するＵ基を含み、この際、Ａｒは、上記と同様の定義である。
【００６８】
【化１５】
ただし、Ｒ11、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｊ、Ｌ、Ｍ、Ｒ及びＴは、上記と同様の定義である。
【００７０】
一般式（Ｉ）のさらにより好ましい化合物は、以下に制限されないが、以下を含むＵ基を有する。
【００７１】
【化１６】
ただし、Ｒ11、Ｄ、Ｅ、Ｇ、Ｊ及びＬは、上記と同様の定義である。
【００７３】
ペプチド及び化学の分野で一般的に使用される略称及び記号は、Ｅｕｒ． Ｊ． Ｂｉｏｃｈｅｍ．， １５８， ９−， １９８４に記載されるのと同様にしてＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ Ｊｏｉｎｔ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ ｏｎ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅによって表わされる一般的なガイドラインに従って、本発明の化合物を説明するのに本明細書において使用される。一般式（Ｉ）の化合物ならびにこれらの調製に使用される中間体及び出発材料は、特定の基が主な基として列挙するために優先度を低くした命名法のＩＵＰＡＣ規則に従って、名付けられる。一般式（Ｉ）の化合物の一例である、Ｒ1はＨであり、Ｒ2はエチルであり、Ｒ3はメチルであり、Ｚは酸素であり、Ｙは４−メチルペンチルであり、（Ｘ）0は０であり、（Ｗ）nは酸素であり、（Ｖ）mはメチレンであり、及びＵはフェニルである化合物（１）は、以下のような名称である。
【００７４】
【化１７】
（２Ｒ，３Ｒ）２−ベンジルオキシ−４−メチルペンタン酸（２−エチル−３−メチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）アミド
一般式（Ｉ）の化合物の第２の例である、Ｒ1はＨであり、Ｒ2はエチルであり、Ｒ3はメチルであり、Ｚは硫黄であり、Ｙは４−メチルペンチルであり、（Ｘ）0は０であり、（Ｗ）nは酸素であり、（Ｖ）mはメチレンであり、及びＵはフェニルである化合物（２）は、以下のような名称である。
【００７６】
【化１８】
（２Ｒ，３Ｓ）２−ベンジルオキシ−４−メチルペンタン酸（２−エチル−３−メチル−４−オキソ−テトラヒドロチオフェン−３−イル）アミド
一般式（Ｉ）の化合物の第３の例である、Ｒ1はＨであり、Ｒ2はエチルであり、Ｒ3はメチルであり、Ｚはメチレンであり、Ｙは４−メチルペンチルであり、（Ｘ）0は０であり、（Ｗ）nは酸素であり、（Ｖ）mはメチレンであり、及びＵはフェニルである化合物（３）は、以下のような名称である。
【００７８】
【化１９】
（１Ｒ，２Ｓ）２−ベンジルオキシ−４−メチルペンタン酸（２−エチル−１−メチル−５−オキソ−シクロペンチル）アミド
本発明の化合物は、以下に制限されないが、Ｚが‘Ｏ’でありＲ1が‘Ｈ’である一般式（Ｉ）の（２Ｒ，３Ｒ）異性体である下記例を包含し、また、ＺならびにＲ1、Ｒ2及びＲ3の全定義に含まれる等価の類似体を包含する。
【００８０】
Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−ベンズアミド
４−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−ベンズアミド
Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−４−トリフルオロメトキシベンズアミド
４−ジメチルアミノ−Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−ベンズアミド
Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−４−イソプロピルベンズアミド
４−ジフルオロメトキシ−Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−ベンズアミド
Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−４−トリフルオロメチルベンズアミド
４−ブロモ−Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−ベンズアミド
３−ブロモ−Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−ベンズアミド
Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−４−ビニルベンズアミド
ナフタレン−２−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−アミド
ナフタレン−１−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−アミド
キノリン−６−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−アミド
ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−アミド
ベンゾ［ｂ］チオフェン−３−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−アミド
ベンゾチアゾール−５−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−アミド
ビフェニル−４−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−アミド
Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−４−イミダゾール−１−イルベンズアミド
Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−４−チオフェン−２−イルベンズアミド
【００８１】
Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−４−オキサゾール−５−イルベンズアミド
Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−４−［１，２，３］チアジアゾール−５−イルベンズアミド
Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−４−ピラゾール−１−イルベンズアミド
Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−５−チオフェン−２−イルニコチンアミド
２−フェニルチアゾール−４−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−アミド
２−ピリジン−３−イルチアゾール−４−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−アミド
５−フェニルチオフェン−２−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−アミド
５−ピリジン−３−イルチオフェン−２−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−アミド
２−メチル−５−フェニルフラン−３−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−アミド
４−フェニルチオフェン−２−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−アミド
４−ピリジン−３−イルチオフェン−２−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−アミド
２−チオフェン−２−イルチアゾール−４−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−アミド
３−フェニルピロール−１−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−アミド
【００８２】
Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］ベンズアミド
４−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−ベンズアミド
Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−４−トリフルオロメトキシベンズアミド
４−ジメチルアミノ−Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−ベンズアミド
４−イソプロピル−Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−ベンズアミド
４−ジフルオロメトキシ−Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−ベンズアミド
Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−４−トリフルオロメチルベンズアミド
４−ブロモ−Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−ベンズアミド
３−ブロモ−Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−ベンズアミド
Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−４−ビニルベンズアミド
ナフタレン−２−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−アミド
ナフタレン−１−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−アミド
キノリン−６−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−アミド
ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−アミド
ベンゾ［ｂ］チオフェン−３−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−アミド
ベンゾチアゾール−５−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−アミド
ビフェニル−４−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−アミド
４−イミダゾール−１−イル−Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］ベンズアミド
【００８３】
Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−４−チオフェン−２−イルベンズアミド
Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−４−オキサゾール−５−イルベンズアミド
Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−４−［１，２，３］ チアジアゾール−４−イルベンズアミド
Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−４−ピラゾール−１−イルベンズアミド
Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−５−チオフェン−２−イルニコチンアミド
２−フェニルチアゾール−４−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−アミド
２−ピリジン−３−イルチアゾール−４−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−アミド
５−フェニルチオフェン−２−カルボン酸［［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−アミド
５−ピリジン−３−イルチオフェン−２−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−アミド
２−メチル−５−フェニルフラン−３−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−アミド
４−フェニルチオフェン−２−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−アミド
４−ピリジン−３−イルチオフェン−２−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−アミド
２−チオフェン−２−イルチアゾール−４−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−アミド
３−フェニルピロール−１−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−アミド
Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（３−ヒドロキシフェニル）−エチル］−ベンズアミド
４−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（３−ヒドロキシフェニル）−エチル］−ベンズアミド
Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（３−ヒドロキシフェニル）−エチル］−４−トリフルオロメトキシベンズアミド
【００８４】
４−ジメチルアミノ−Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（３−ヒドロキシフェニル）−エチル］−ベンズアミド
Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（３−ヒドロキシフェニル）−エチル］−４−イソプロピルベンズアミド
４−ジフルオロメトキシ−Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（３−ヒドロキシフェニル）−エチル］−ベンズアミド
Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（３−ヒドロキシフェニル）−エチル］−４−トリフルオロメチルベンズアミド
４−ブロモ−Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（３−ヒドロキシフェニル）−エチル］−ベンズアミド
３−ブロモ−Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（３−ヒドロキシフェニル）−エチル］−ベンズアミド
Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（３−ヒドロキシフェニル）−エチル］−４−ビニルベンズアミド
ナフタレン−２−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（３−ヒドロキシフェニル）−エチル］−アミド
ナフタレン−１−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（３−ヒドロキシフェニル）−エチル］−アミド
キノリン−６−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（３−ヒドロキシフェニル）−エチル］−アミド
ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（３−ヒドロキシフェニル）−エチル］−アミド
ベンゾ［ｂ］チオフェン−３−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（３−ヒドロキシフェニル）−エチル］−アミド
ベンゾチアゾール−５−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（３−ヒドロキシフェニル）−エチル］−アミド
【００８５】
ビフェニル−４−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（３−ヒドロキシフェニル）−エチル］−アミド
Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（３−ヒドロキシフェニル）−エチル］−４−イミダゾール−１−イルベンズアミド
Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（３−ヒドロキシフェニル）−エチル］−４−チオフェン−２−イルベンズアミド
Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（３−ヒドロキシフェニル）−エチル］−４−オキサゾール−５−イルベンズアミド
Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（３−ヒドロキシフェニル）−エチル］−４−［１，２，３］チアジアゾール−５−イルベンズアミド
Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（３−ヒドロキシフェニル）−エチル］−４−ピラゾール−１−イルベンズアミド
Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（３−ヒドロキシフェニル）−エチル］−５−チオフェン−２−イルニコチンアミド
２−フェニルチアゾール−４−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（３−ヒドロキシフェニル）−エチル］−アミド
２−ピリジン−３−イルチアゾール−４−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（３−ヒドロキシフェニル）−エチル］−アミド
５−フェニルチオフェン−２−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（３−ヒドロキシフェニル）−エチル］−アミド
５−ピリジン−３−イルチオフェン−２−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（３−ヒドロキシフェニル）−エチル］−アミド
２−メチル−５−フェニルフラン−３−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（３−ヒドロキシフェニル）−エチル］−アミド
４−フェニルチオフェン−２−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（３−ヒドロキシフェニル）−エチル］−アミド
４−ピリジン−３−イルチオフェン−２−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（３−ヒドロキシフェニル）−エチル］−アミド
２−チオフェン−２−イルチアゾール−４−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（３−ヒドロキシフェニル）−エチル］−アミド
３−フェニルピロール−１−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（３−ヒドロキシフェニル）−エチル］−アミド
【００８６】
本発明のさらなる化合物は、以下に制限されないが、Ｚが‘Ｏ’でありＲ1が‘Ｈ’である一般式（Ｉ）の（２Ｒ，３Ｒ）異性体である下記例を包含し、また、ＺならびにＲ1、Ｒ2及びＲ3の全定義に含まれる等価の類似体を包含する。
【００８７】
フラン−２−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−アミド
フラン−３−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−アミド
チオフェン−２−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−アミド
チオフェン−３−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−アミド
モルホリン−４−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−アミド
フラン−２−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−アミド
フラン−３−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−アミド
チオフェン−２−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−アミド
チオフェン−３−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−アミド
モルホリン−４−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−アミド
フラン−２−カルボン酸［２−シクロヘキシル−１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−エチル］−アミド
フラン−３−カルボン酸［２−シクロヘキシル−１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−エチル］−アミド
チオフェン−２−カルボン酸［２−シクロヘキシル−１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−エチル］−アミド
チオフェン−３−カルボン酸［２−シクロヘキシル−１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−エチル］−アミド
モルホリン−４−カルボン酸［２−シクロヘキシル−１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−エチル］−アミド
ナフタレン−１−カルボン酸［２−シクロヘキシル−１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−エチル］−アミド
ナフタレン−２−カルボン酸［［２−シクロヘキシル−１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−エチル］−アミド
ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸［２−シクロヘキシル−１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−エチル］−アミド
フラン−２−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３，３−ジメチル−ブチル］−アミド
【００８８】
フラン−３−カルボン酸１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３，３−ジメチル−ブチル］−アミド
チオフェン−２−カルボン酸１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３，３−ジメチル−ブチル］−アミド
チオフェン−３−カルボン酸１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３，３−ジメチル−ブチル］−アミド
モルホリン−４−カルボン酸１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３，３−ジメチル−ブチル］−アミド
ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３，３−ジメチル−ブチル］−アミド
ナフタレン−１−カルボン酸１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３，３−ジメチル−ブチル］−アミド
ナフタレン−２−カルボン酸１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３，３−ジメチル−ブチル］−アミド
Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３，３−ジメチル−ブチル］−ベンズアミド
フラン−２−カルボン酸［２−シクロペンチル−１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−エチル］−アミド
フラン−３−カルボン酸［２−シクロペンチル−１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−エチル］−アミド
チオフェン−２−カルボン酸［２−シクロペンチル−１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−エチル］−アミド
チオフェン−３−カルボン酸［２−シクロペンチル−１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−エチル］−アミド
モルホリン−４−カルボン酸［２−シクロペンチル−１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−エチル］−アミド
Ｎ−［２−シクロペンチル−１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−エチル］−ベンズアミド
ナフタレン−１−カルボン酸［２−シクロペンチル−１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−エチル］−アミド
【００８９】
ナフタレン−２−カルボン酸［２−シクロペンチル−１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−エチル］−アミド
ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸［２−シクロペンチル−１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−エチル］−アミド
フラン−２−カルボン酸［２−ベンジルスルファニル−１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−エチル］−アミド
フラン−３−カルボン酸［２−ベンジルスルファニル−１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−エチル］−アミド
チオフェン−２−カルボン酸［２−ベンジルスルファニル−１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−エチル］−アミド
チオフェン−３−カルボン酸［２−ベンジルスルファニル−１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−エチル］−アミド
モルホリン−４−カルボン酸［２−ベンジルスルファニル−１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−エチル］−アミド
ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸［２−ベンジルスルファニル−１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−エチル］−アミド
Ｎ−［２−ベンジルスルファニル−１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−エチル］−ベンズアミド
ナフタレン−１−カルボン酸［２−ベンジルスルファニル−１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−エチル］−アミド
ナフタレン−２−カルボン酸［２−ベンジルスルファニル−１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−エチル］−アミド
フラン−２−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−フェニルメタンスルホニル−エチル］−アミド
フラン−３−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−フェニルメタンスルホニル−エチル］−アミド
チオフェン−２−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−フェニルメタンスルホニル−エチル］−アミド
チオフェン−３−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−フェニルメタンスルホニル−エチル］−アミド
モルホリン−４−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−フェニルメタンスルホニル−エチル］−アミド
ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−フェニルメタンスルホニル−エチル］−アミド
【００９０】
Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−フェニルメタンスルホニル−エチル］−ベンズアミド
ナフタレン−１−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−フェニルメタンスルホニル−エチル］−アミド
ナフタレン−２−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−フェニルメタンスルホニル−エチル］−アミド
２−ベンジルオキシ−３−シクロヘキシル−Ｎ−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−プロピオンアミド
２−（４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジルスルファニル）−４−メチル−ペンタン酸（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−アミド
２−（４−ｔｅｒｔ−ブチル−フェニルメタンスルホニル）−４−メチル−ペンタン酸（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−アミド
２−（４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジルスルファニル）−Ｎ−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−３−（４−ヒドロキシフェニル）−プロピオンアミド
２−（４−ｔｅｒｔ−ブチル−フェニルメタンスルホニル）−Ｎ−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−３−（４−ヒドロキシフェニル）−プロピオンアミド
２−シクロヘキシルメチル−Ｎ−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−４−モルホリン−４−イル−４−オキソ−ブチルアミド
４，４−ジメチル−２−（２−モルホリン−４−イル−２−オキソ−エチル）−ペンタン酸（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−アミド
２−ビフェニル−３−イル−４−メチル−ペンタン酸（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−アミド
４−（３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル）−Ｎ−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−２−（４−ヒドロキシ−ベンジル）−４−オキソ−ブチルアミド
【００９１】
Ｎ−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−２−（４−ヒドロキシベンジル）−４−オキソ−４−（３−フェニル−ピロール−１−イル）−ブチルアミド
Ｎ−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−２−（４−ヒドロキシ−ベンジル）−４−オキソ−４−（３−フェニル−ピロリジン−１−イル）−ブチルアミド
４−メチル−２−［２−オキソ−２−（３−フェニル−ピロール−１−イル）−エチル］−ペンタン酸（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−アミド
４−メチル−２−［２−オキソ−２−（３−フェニル−ピロリジン−１−イル）−エチル］−ペンタン酸（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−アミド
２−［２−（１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル）−２−オキソ−エチル］−４−メチル−ペンタン酸（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−アミド
４−（１，３−ジヒドロ−イソインドール−２−イル）−Ｎ−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−２−（４−ヒドロキシ−ベンジル）−４−オキソ−ブチルアミド
２−［２−（３，４−ジヒドロ−１Ｈ−イソキノリン−２−イル）−２−オキソ−エチル］−４−メチル−ペンタン酸（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−アミド
【００９２】
本発明のさらなる化合物は、以下に制限されないが、Ｚが‘Ｏ’でありＲ1が‘Ｈ’である一般式（Ｉ）の（２Ｓ，３Ｒ）異性体である下記例を包含し、また、ＺならびにＲ1、Ｒ2及びＲ3の全定義に含まれる等価の類似体を包含する。
【００９３】
４−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−ベンズアミド
Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−４−トリフルオロメトキシベンズアミド
４−ジメチルアミノ−Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−ベンズアミド
Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−４−イソプロピルベンズアミド
４−ジフルオロメトキシ−Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−ベンズアミド
Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−４−トリフルオロメチルベンズアミド
ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−アミド
ベンゾ［ｂ］チオフェン−３−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−アミド
ベンゾチアゾール−５−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−アミド
Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−４−チオフェン−２−イルベンズアミド
５−フェニルチオフェン−２−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−アミド
【００９４】
４−フェニルチオフェン−２−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−アミド
４−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−ベンズアミド
Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−４−トリフルオロメトキシベンズアミド
４−ジメチルアミノ−Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−ベンズアミド
４−イソプロピル−Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−ベンズアミド
４−ジフルオロメトキシ−Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−ベンズアミド
Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−４−トリフルオロメチルベンズアミド
ベンゾ［ｂ］チオフェン−２−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−アミド
ベンゾ［ｂ］チオフェン−３−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−アミド
ベンゾチアゾール−５−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−アミド
Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−４−チオフェン−２−イルベンズアミド
５−フェニルチオフェン−２−カルボン酸［［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−アミド
４−フェニルチオフェン−２−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−アミド
【００９５】
本発明のさらなる化合物は、以下に制限されないが、Ｚが‘Ｏ’でありＲ1が‘Ｈ’である一般式（Ｉ）の（２Ｓ，３Ｒ）異性体である下記例を包含し、また、ＺならびにＲ1、Ｒ2及びＲ3の全定義に含まれる等価の類似体を包含する。
【００９６】
フラン−３−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−アミド
チオフェン−３−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−アミド
フラン−３−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−アミド
チオフェン−３−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−アミド
フラン−３−カルボン酸［２−シクロヘキシル−１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−エチル］−アミド
チオフェン−３−カルボン酸［２−シクロヘキシル−１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−エチル］−アミド
フラン−３−カルボン酸１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３，３−ジメチル−ブチル］−アミド
チオフェン−３−カルボン酸１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３，３−ジメチル−ブチル］−アミド
フラン−３−カルボン酸［２−シクロペンチル−１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−エチル］−アミド
チオフェン−３−カルボン酸［２−シクロペンチル−１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−エチル］−アミド
フラン−３−カルボン酸［２−ベンジルスルファニル−１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−エチル］−アミド
チオフェン−３−カルボン酸［２−ベンジルスルファニル−１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−エチル］−アミド
フラン−３−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−フェニルメタンスルホニル−エチル］−アミド
チオフェン−３−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−フェニルメタンスルホニル−エチル］−アミド
【００９７】
上記すべての例を考慮すると、Ｎ−オキシドを形成するために容易に酸化される窒素またはスルホンを形成するために容易に酸化する硫黄を含むキャッピング基の酸化類似体をも包含するものである。下記構造は、詳細な例である。
【００９８】
【化２０】
有機化学を実施する当業者にとって、一般式（Ｉ）の化合物は、溶液中であるいは固相でのいずれかで行なわれる、数多くの化学ストラテジーによって容易に合成される（固相合成原則の一般的なレビューに関しては、Ａｔｈｅｒｔｏｎ， Ｅ． ａｎｄ Ｓｈｅｐｐａｒｄ， Ｒ． Ｃ． Ｉｎ ‘Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ： Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ’， Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ， Ｏｘｆｏｒｄ， Ｕ．Ｋ． １９８９を参照）。固相ストラテジーは、確立された平行合成方法により、一般的に５〜１００ｍｇのスケールで、何千という類似体を得ることができるという点で魅力的である（例えば、（ａ） Ｂａｓｔｏｓ， Ｍ．； Ｍａｅｊｉ， Ｎ． Ｊ．； Ａｂｅｌｅｓ， Ｒ． Ｈ． Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ， ９２， ６７３８−６７４２， １９９５を参照）。
【０１００】
したがって、一般式（Ｉ）の化合物の合成の一つのストラテジーとしては、下記を有する。
【０１０１】
（ａ）溶液における適当に官能化され（ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｓｅｄ）及び保護された（２−アルキル−３−アルキル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）アミドまたは（２−アルキル−３−アルキル−４−オキソ−テトラヒドロチオフェン−３−イル）アミドまたは（１−アルキル−２−アルキル−５−オキソシクロペンチル）アミド構成単位の調製。
【０１０２】
（ｂ）合成条件に安定であるが、合成終了時に容易に切断されやすいリンカーを介した固相への構成単位（ａ）の結合（固相合成に適用される「リンカー」機能について、例えば、Ｊａｍｅｓ， Ｉ． Ｗ．， Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ， ５５（Ｒｅｐｏｒｔ Ｎ o ４８９）， ４８５５−４９４６， １９９９を参照）。
【０１０３】
（ｃ）残りの分子を構築するための、固相有機化学（Ｂｒｏｗｎ， Ｒ． Ｄ． Ｊ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．， Ｐｅｒｋｉｎ Ｔｒａｎｓ．１， １９， ３２９３−３３２０， １９９８を参照）。
【０１０４】
（ｄ）固相から溶液への化合物の切断。
【０１０５】
（ｅ）切断ウォークアップ（ｗｏｒｋ−ｕｐ）及び化合物の分析。
【０１０６】
一般式（Ｉ）の化合物の合成の第一段階は、官能化され及び保護された構成単位の溶液での調製である。（２−アルキル−３−アルキル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）アミド（７）への具体的なスキームをスキーム１に詳述する。
【０１０７】
【化２１】
ＦｍＯＣ（Ｏ）は、既知のアミン保護基９−フルオレニルメトキシカルボニルを示し（Ｆｍｏｃ、Ａｔｈｅｒｔｏｎ， Ｅ． ａｎｄ Ｓｈｅｐｐａｒｄ， Ｒ． Ｃ．， １９８９を参照）、「Ｐｇ」は、遊離ヒドロキシルまたはｔｅｒｔ−ブチルエーテル等のヒドロキシル保護基のいずれかを示す。詳細には、ジアゾメタンによる縮合によって、Ｒ1＝Ｈが形成される。
【０１０９】
段階（ａ）を考えると、合成は、適当に保護されたβ−ヒドロキシ−α−アルキル−α−アミノ酸（４）から開始する。β−ヒドロキシ−α−のアミノ酸は、様々な文献の方法、例えば、（ａ） Ａｄａｍｓ， Ｚ． Ｍ．， Ｊａｃｋｓｏｎ， Ｒ． Ｆ． Ｗ．， Ｐａｌｍｅｒ， Ｎ． Ｊ．， Ｒａｍｉ， Ｈ． Ｋ．， Ｗｙｔｈｅｓ， Ｍ． Ｊ．， Ｊ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．， Ｐｅｒｋｉｎ Ｔｒａｎｓ Ｉ， ９３７−９４７， １９９９， （ｂ） Ｈｕｂｓｃｈｗｅｒｌｅｎ， Ｃ．， ｅｔ ａｌ， Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ， ４１， ３９７２−３９７５， １９９８， （ｃ） Ｌｕｚｚｉｏ， Ｆ． Ａ．， ｅｔ ａｌ， Ｔｅｔ． Ｌｅｔｔ．， ４１， ７１５１−７１５５， ２０００， （ｄ） Ｍｏｒｇａｎ， Ａ． Ｊ． ｅｔ ａｌ， Ｏｒｇ． Ｌｅｔｔ． １（１２）， １９４９−１９５２， １９９９． （ｅ） Ｚｈａｎｇ， Ｈ．， Ｘｉａ， Ｐ．， Ｚｈｏｕ， Ｗ．， Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ： Ａｓｙｍｍｅｔｒｙ， １１， ３４３９−３４４７， ２０００， （ｆ） Ｂｌａｓｋｏｖｉｃｈ， Ｍ．Ａ．， ｅｔ ａｌ， Ｊ． Ｏｒｇ． Ｃｈｅｍ， ６３， ３６３１−３６４６， １９９８， （ｇ） Ｓｅｅｂａｃｈ， Ｄ． ｅｔ ａｌ， Ｈｅｌｖ． Ｃｈｉｍ． Ａｃｔａ．， ７０， １１９４， １９８７により利用できる。また、α−アルキル−α−アミノ酸は、多くの文献の方法、例えば、Ｃａｔｉｖｉｅｌａ， Ｃ．， Ｄｉａｚ−ｄｅ−Ｖｉｌｌｅｇａｓ， Ｍ． Ｄ． Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ： Ａｓｙｍｍｅｔｒｙ， ９， ３５１７−３５９９， １９９８により容易に利用できる。
【０１１０】
Ｒ2及びＲ3がメチル基である最も簡単な場合では、β−ヒドロキシ−α−−アルキル−α−アミノ酸（４）は、既知の（２Ｒ，３ＳＲ）−a−メチルトレオニン（３Ｓ異性体はＤ−Ｔｈｒに相当し、また３Ｒ異性体はＤ−ａｌｌｏＴｈｒに相当する）である。イソブチルクロロホルメート（ｉｓｏｂｕｔｙｌ ｃｈｌｏｒｏｆｏｒｍａｔｅ）混合無水物を介して適当に保護されたβ−ヒドロキシ−α−−アルキル−α−アミノ酸（４）を活性化した後、ジアゾメタンで縮合することによって、ジアゾメチルケトン中間体（６）が得られる。スキーム１で詳述された反応条件によると、ジアゾケトンの形成が明らかに観察される。しかしながら、ジアゾケトン（６）の単離された収率の全体の向上は、活性の低い（１’ＲまたはＳ，４Ｒ）４−（１’−アルコキシエチル）−２−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）−４−メチル−４Ｈ−オキサゾール−５−オン（５）を形成しにくい、（４）のアシルフルオライド（ａｃｙｌ ｆｌｕｏｒｉｄｅ）を予め形成することによっておよびエーテル性ジアゾメタン（ｅｔｈｅｒｅａｌ ｄｉａｚｏｍｅｔｈａｎｅ）との反応を４８時間続けることによっても得られる。ジアゾメチルケトン中間体（６）を酢酸水溶液中で塩化リチウムで処理すると、保護された（２−アルキル−３−アルキル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）アミド（７）が形成する。単純Ｒ1置換基の導入は、活性化された（４）をジアゾエタン（Ｒ1＝ＣＨ3）、または１−フェニルオキシジアゾエタン（Ｒ1＝ＣＨ2ＯＰｈ）等をジアゾメタンの代わりに使用して縮合することによって達成されてもよい。
【０１１１】
スキーム１で詳述された保護構成単位（（２−アルキル−３−アルキル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）アミド（７）で例示された合成）は、阻害剤分子の固相合成で使用されてもよい（段階（ｂ）〜（ｅ））。段階（ｂ）、アルデヒドまたはケトンの固相結合は、様々な方法によって従来記載されてきた（例えば、（ａ） Ｊａｍｅｓ， Ｉ． Ｗ．， １９９９， （ｂ） Ｌｅｅ， Ａ．， Ｈｕａｎｇ， Ｌ．， Ｅｌｌｍａｎ， Ｊ． Ａ．， Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ， １２１（４３）， ９９０７−９９１４， １９９９， （ｃ） Ｍｕｒｐｈｙ， Ａ． Ｍ．， ｅｔ ａｌ， Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ， １１４， ３１５６−３１５７， １９９２を参照）。（７）等のアルキルケトン官能性の可逆的な結合が可能な適当な方法は、従来記載されてきた化学の組み合わせによる。セミカルバジド（ｓｅｍｉｃａｒｂａｚｉｄｅ）、４−［［（ヒドラジノカルボニル）アミノ］メチルシクロヘキサンカルボン酸トリフルオロアセテート（８）（Ｍｕｒｐｈｙ， Ａ． Ｍ．， ｅｔ ａｌ， Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ， １１４， ３１５６−３１５７， １９９２）を、（２−アルキル−３−アルキル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）アミド（７）の結合で例示した、スキーム２に詳述されるように用いてもよい。
【０１１２】
【化２２】
構築物（９）を、エタノール／酢酸ナトリウムの水溶液中での還流によってリンカー分子（８）及び（２−アルキル−３−アルキル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）アミド（７）の反応により調製する。構築物（９）の形成は２時間の反応で観察されるが、構築物（９）の最適な形成は７２時間の反応で起こる。標準的な固相技術（例えば、Ａｔｈｅｒｔｏｎ， Ｅ． ａｎｄ Ｓｈｅｐｐａｒｄ， Ｒ． Ｃ．， １９８９を参照）を用いて、（９）の遊離カルボン酸官能性を介してアミノ官能化固相（ａｍｉｎｏ−ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｓｅｄ ｓｏｌｉｄ ｐｈａｓｅ）に構築物を固定し、ローディングされた（ｌｏａｄｅｄ）構築物（１０）を形成する。十分構築された化合物の酸による切断は、繰り返しの２４時間の反応時に最適である。
【０１１４】
ローディングされた構築物（１０）を、市販または文献の広範なカルボン酸と反応させて、一般式（Ｉ）の左側の部分「Ｕ−Ｖ−Ｗ−Ｘ−Ｙ」を導入してもよい。最も簡単な例では、一般式（Ｉ）の阻害剤の左側部分全体は、キャップドアミノ酸（ｃａｐｐｅｄ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ）を有し（スキーム３）、例えば、Ｒ4＝‘Ｈ’、（Ｘ）o＝‘−‘、（Ｗ）n＝‘ＮＨ’、Ｒ8＝‘Ｈ’、ｎ＝１、（Ｖ）m＝‘ＣＯ‘、ｍ＝１及びＵ＝アリールの一般式（Ｉ）の類似体を形成する。
【０１１５】
【化２３】
または、カルボン酸を、典型的な有機化学方法によって溶液中で調製し、固相上で構築物（１０）にカップリングしてもよい（スキーム４〜８）。例えば（スキーム４）、亜硝酸ナトリウム／Ｈ2ＳＯ4による、（１２）で例示される、アミノ酸の溶液における処理によって、（１３）で例示される、α−ヒドロキシ酸が形成する（Ｄｅｇｅｒｂｅｃｋ， Ｆ． ｅｔ ａｌ， Ｊ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ， Ｐｅｒｋｉｎ Ｔｒａｎｓ． １， １１−１４， １９９３）。α−ヒドロキシ酸、（１３）を、ジメチルホルムアミド／ジクロロメタン混合物において水素化ナトリウムで処理した後、臭化ベンジルを添加することによって、２ＲＳ−ベンジルオキシ−３−シクロヘキシルプロピオン酸（１４）が形成する。（１４）を固相構築物（１０）にカップリングした後、切断することによって、Ｒ4＝‘Ｈ’、（Ｘ）o＝‘−‘、（Ｗ）n＝‘Ｏ’、ｎ＝１、（Ｖ）m＝‘ＣＨ2’、即ち、Ｒ9、Ｒ10＝‘Ｈ’、ｍ＝１及びＵ＝フェニルの一般式（Ｉ）の一例、（１５）が形成する。有機化学を実施する当業者にとって、（１２）等の広範なアミノ酸が、詳述した一般的な条件により（１３）等の相当するα−ヒドロキシ酸に変換される。加えて、臭化ベンジルの代わりに、適当なＡｒ−ＣＲ9Ｒ10−ハロゲン化物を使用して、詳述した一般的な条件によりカルボン酸（１４）の多くのバリエーションを形成してもよい。場合によっては、アルキルハロゲン化物との反応前にメチルエステルとしてカルボン酸を一時的に保護することが好ましい（例えば、化合物（２０）、スキーム６）。次に、このエステル中間体を、簡単に酸（１４）に加水分解する。一般式（Ｉ）において広範な（Ｖ）m及びＵを調べる、（１５）の類似体が、スキーム４で詳述される一般的な条件で調製される。最終合成段階は固相に結合した化合物のトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）が介する切断を含むため、置換エーテルがＴＦＡに不安定である場合には類似体を別の経路によって溶液中で調製してもよい（スキーム１１を参照）。
【０１１７】
【化２４】
または、構築物（１０）（Ｆｍｏｃの除去後）のα−ヒドロキシ酸（１３）とのカップリングによって、多くの試薬と反応する一般式（Ｉ）の様々な固相結合中間体「Ｙ」置換基が形成する。例えば、α−ヒドロキシルを、ミツノブ条件（Ｍｉｔｓｕｎｏｂｕ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ）下で反応させて（Ｈｕｇｈｅｓ， Ｄ． Ｌ． Ｏｒｇ． Ｒｅａｃｔ．（Ｎ．Ｙ）， ４２， ３３５−６５６， １９９２）、エーテル（即ち、一般式（Ｉ）において、Ｘ＝‘−‘，Ｗ＝‘Ｏ’）を得てもよい（固相上でのミツノブ反応（Ｍｉｔｓｕｎｏｂｕ ｒｅａｃｔｉｏｎ）の一例について、Ｇｒａｂｏｗｓｋａ， Ｕ． ｅｔ ａｌ， Ｊ． Ｃｏｍｂ． Ｃｈｅｍ．， ２（５）， ４７５−４９０， ２０００を参照）。または、α−ヒドロキシルを、カルバミルクロライドと反応させて、カルバメート（即ち、一般式（Ｉ）において、Ｘ＝‘−‘，Ｗ＝‘Ｏ’，Ｖ＝‘ＮＨＣ（Ｏ）’）を得てもよい。
【０１１９】
または、（スキーム５）、亜硝酸ナトリウム／Ｈ2ＳＯ4／臭化カリウムによる（１２）で例示される、アミノ酸の溶液における処理によって、構造を保持した（１６）（Ｓｏｕｅｒｓ， Ａ． Ｊ． ｅｔ ａｌ， Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ， ４， ５８３−５８５， １９９９）で例示される、α−ブロモ酸を得てもよい。ジメチルホルムアミド／トリエチルアミンにおける４−ｔｅｒｔ−ブチルフェニルメタンチオール（１７）で例示されるアルキルチオールによるα−ブロモ酸（１６）の処理によって、逆の構造を有する、２Ｓ−（４−ｔｅｒｔ−ブチルベンジルスルファニル）−４−メチルプロピオン酸（１８）が得られる。（１８）を固相構築物（１０）にカップリングした後、切断することによって、（１９）、Ｒ4＝‘Ｈ’、（Ｘ）o＝‘−‘、（Ｗ）n＝‘Ｓ’、ｎ＝１、（Ｖ）m＝‘ＣＨ2’、即ち、Ｒ9、Ｒ10＝‘Ｈ’、ｍ＝１及びＵ＝４−ｔｅｒｔ−ブチルフェニルの一般式（Ｉ）の一例が得られる。有機化学を実施する当業者にとって、（１２）等の広範なアミノ酸が、詳述された一般的な条件で（１６）等の相当するα−ブロモ酸に変換される。加えて、（１２）のＳ−異性体で出発することによって、（１６）のＳ−ブロモ酸類似体及び（１８）のＲ−チオエーテル類似体が得られる。加えて、（４−ｔｅｒｔ−ブチルフェニル）メタンチオール（１７）の代わりに、適当なＡｒ−ＣＲ9Ｒ10−ＳＨを使用して、詳述した一般的な条件によりカルボン酸（１８）の多くのバリエーションを形成してもよい。ゆえに、一般式（Ｉ）において広範な（Ｖ）m及びＵを調べる、（１９）の類似体が、スキーム５で詳述される一般的な条件で調製される。
【０１２０】
【化２５】
または、構築物（１０）（Ｆｍｏｃの除去後）のα−ブロモ酸、例えば（１６）とのカップリングによって、多くの試薬と反応する一般式（Ｉ）の様々な固相結合中間体「Ｙ」置換基が形成する。例えば、α−ブロミドを、求核試薬、例えば、アルコール、チオール、カルバニオン等で置換して、エーテル（即ち、一般式（Ｉ）において、Ｘ＝‘−‘、Ｗ＝‘Ｏ’）、チオエーテル（即ち、一般式（Ｉ）において、Ｘ＝‘−‘、Ｗ＝‘Ｓ’）を得てもよい。チオエーテルは、必要であれば、スルホンに酸化してもよい（スキーム９参照；即ち、一般式（Ｉ）において、Ｘ＝‘−‘、Ｗ＝‘ＳＯ2’）（固相でのブロミドの置換及びチオエーテルの酸化の一例に関して、Ｇｒａｂｏｗｓｋａ、Ｕ． ｅｔ ａｌ、Ｊ． Ｃｏｍｂ． Ｃｈｅｍ．、２（５）、４７５−４９０、２０００を参照）。
【０１２２】
または、（スキーム６）、（１３）で例示される、α−ヒドロキシ酸を、トリメチルシリルクロライド及びメタノールで処理することによって、メチルエステル（２０）が得られる。ジクロロメタンでのホスゲンによる遊離ヒドロキシルからクロロホルメートへの活性後にモルホリンを添加し、さらに加水分解することによって、モルホリン−４−カルボン酸−１Ｓ−カルボキシ−２−シクロヘキシルエチルエステル（２１）が形成する。（２１）を固相構築物（１０）にカップリングした後切断することによって、（２２）、Ｒ4＝‘Ｈ’，（Ｘ）o＝‘−‘，（Ｗ）n＝‘Ｏ’，ｎ＝１，（Ｖ）m＝‘ＣＯ‘及びＵ＝モルホリノの一般式（Ｉ）の一例が得られる。有機化学を実施する当業者にとって、（２０）等の広範なα−ヒドロキシ酸エステルが、詳述された一般的な条件で活性化クロロホルメートに変換されうる。加えて、モルホリンの代わりに、適当なアミンを使用して、詳述した一般的な条件により、カルボン酸（２１）の多くのバリエーションを形成してもよい。ゆえに、一般式（Ｉ）において広範な（Ｖ）m及びＵを調べる、（２２）の類似体が、スキーム６で詳述される一般的な条件で調製される。
【０１２３】
【化２６】
または、（スキーム７）、２Ｒ−シクロヘキシルメチルコハク酸１−メチルエステル（２３）で例示される広範なアルキルコハク酸エステルは、市販されているまたは既知の方法によって容易に調製される（（ａ） Ａｚａｍ ｅｔ ａｌ， Ｊ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． Ｐｅｒｋｉｎ Ｔｒａｎｓ． １， ６２１−， １９９６； （ｂ） Ｅｖａｎｓ ｅｔ ａｌ， Ｊ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ． Ｐｅｒｋｉｎ Ｔｒａｎｓ． １， １０３， ２１２７， １９８１； （ｃ） Ｏｉｋａｗａ ｅｔ ａｌ， Ｔｅｔ． Ｌｅｔｔ， ３７， ６１６９， １９９６を参照）。アルキルコハク酸エステル（２３）のカルボキシル活性後にジメチルホルムアミドにおけるモルホリンを添加し、さらにエステルの加水分解を行なうことによって、２Ｒ−シクロヘキシルメチル−４−モルホリン−４−イル−４−オキソ−酪酸（２４）が得られる。（２４）を固相構築物（１０）にカップリングした後切断することによって、（２５）、Ｒ4＝‘Ｈ’、（Ｘ）o＝‘ＣＨ2’、即ち、Ｒ6、Ｒ7＝‘Ｈ’、ｏ＝１、（Ｗ）n＝‘ＣＯ’、ｎ＝１、（Ｖ）m＝‘−’及びＵ＝モルホリノの一般式（Ｉ）の一例が得られる。有機化学を実施する当業者にとって、（２３）等の広範なアルキルコハク酸エステルが、詳述された一般的な条件で調製され、（２４）等の相当する置換アルキルコハク酸に変換されてもよい。加えて、モルホリンの代わりに、適当なアミンを使用して、詳述した一般的な条件によりカルボン酸（２４）の多くのバリエーションを形成してもよい。ゆえに、一般式（Ｉ）において広範な（Ｘ）o、（Ｖ）m及びＵを調べる、（２５）の類似体が、スキーム７で詳述される一般的な条件で調製される。
【０１２５】
【化２７】
または、（スキーム８）、２ＲＳ−ビフェニル−３−イル−４−メチルペンタン酸（２７）で例示される、広範なビアリールアルキル酢酸は、既知の方法によって容易に利用できる（（ａ） ＤｅｓＪａｒｌａｉｓ、Ｒ． Ｌ． ｅｔ ａｌ、Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ、１２０、９１１４−９１１５、１９９８； （ｂ） Ｏｂａｌｌａ、Ｒ． Ｍ． ｅｔ ａｌ、ＷＯ ０１４９２８８を参照）。ビアリールアルキル酢酸（２７）を固相構築物に（１０）にカップリングした後切断することによって、（２８）、Ｒ4＝‘Ｈ’、（Ｘ）o＝‘−‘、（Ｗ）n＝‘−’、（Ｖ）m＝‘−’及びＵ＝ｍ−ビフェニルの一般式（Ｉ）の一例が得られる。有機化学を実施する当業者にとって、（２７）等の広範なビアリールアルキル酢酸が、（２６）の遊離酸類似体のα−アニオンのアルキル化によって調製されてもよく、これはさらにフェニルボロン酸（ｐｈｅｎｙｌｂｏｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ）及び３−ブロモフェニル酢酸メチルエステルのスズキカップリング（Ｓｕｚｕｋｉ ｃｏｕｐｌｉｎｇ）によって調製される。フェニルボロン酸の代わりに、スズキカップリングにおいて広範なアリールボロン酸（ａｒｙｌｂｏｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ）を使用して、詳述した一般的な条件によりカルボン酸（２７）の多くのバリエーションを形成してもよい。ゆえに、一般式（Ｉ）において広範な基「Ｕ」を調べる（２８）の類似体が、スキーム８で詳述される一般的な条件で調製される。
【０１２７】
【化２８】
固相有機化学の多くの他の可能性（例えば、最近のＳＰＯＣ公表のレビューに関して、Ｂｒｏｗｎ， Ｒ． Ｄ． Ｊ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．， Ｐｅｒｋｉｎ Ｔｒａｎｓ．１， １９， ３２９３−３３２０， １９９８を参照）を用いて、一般式（Ｉ）の化合物に構築物（１０）を誘導してもよい。例えば、一般式（Ｉ）における左側の部分の‘Ｕ−Ｖ−Ｗ−Ｘ−Ｙ’を、一部溶液中で構築して、構築物（１０）にカップリングし、さらに固相上で修飾してもよい。例えば（スキーム９）、スキーム５の簡単な拡張を、切断前にジクロロメタンにおけるｍ−クロロ過安息香酸を用いて、中間固相結合種の酸化により行ない、スルホン類似体（２９）、Ｒ4＝‘Ｈ’、（Ｘ）o＝‘−‘、（Ｗ）n＝‘ＳＯ2’、ｎ＝１、（Ｖ）m＝‘ＣＨ2’、即ち、Ｒ9，Ｒ10＝‘Ｈ’，ｍ＝１及びＵ＝２−フラニルの一般式（Ｉ）の一例を得る。スキーム５に記載されるのと同様、カルボン酸（１８）の多くのバリエーションが、詳述された一般的な条件により、調製される。ゆえに、一般式（Ｉ）において広範な（Ｖ）m及びＵを調べる（２９）の類似体が、スキーム５及び９で詳述される一般的な条件で調製される。
【０１２９】
【化２９】
一般式（Ｉ）の化合物は、最終的に、トリフルオロ酢酸／水で処理することによって固相から放出され、その後に、蒸発、凍結乾燥及び標準的な分析による特性化を行なう。
【０１３１】
一般式（Ｉ）の化合物の第２の合成ストラテジーは、下記を有する。
【０１３２】
（ｆ）溶液における適当に官能化及び保護された（２−アルキル−３−アルキル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）アミドまたは（２−アルキル−３−アルキル−４−オキソ−テドラヒドロチオフェン−３−イル）アミドまたは（１−アルキル−２−アルキル−５−オキソシクロペンチル）アミド構成単位の調製。液相化学の好ましい保護基は、Ｎα−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基及びＮα−ベンジルオキシカルボニル基である。
【０１３３】
（ｇ）構成単位（ｆ）の一般式（Ｉ）の化合物への変換に関する標準的な有機化学方法（スキーム１０）。
【０１３４】
最も簡単な例では、一般式（Ｉ）の阻害剤の左側部分全体を、典型的な有機化学方法によって溶液中で調製し、構成単位（ｆ）にカップリングしてもよい（（２−アルキル−３−アルキル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（３２）の調製及び使用が例示されるスキーム１０を参照）。
【０１３５】
【化３０】
（３０）の混合無水物による活性化の魅力的な代替法としては、予め形成されたアシルフルオライドを使用することによるものがある（スキーム１で詳述されたのと同様）。スキーム１０で詳述された一般的なストラテジーは、一般式（Ｉ）の化合物がトリフルオロ酢酸で分解されやすい置換基を含む際に特に有用であり、これは固相スキーム４〜９のそれぞれで使用された最終試薬である。例えば（スキーム１１）、ジメチルホルムアミド／ジクロロメタン混合物における水素化ナトリウムによるα−ヒドロキシ酸（３４）の溶液における処理後に、４−ｔｅｒｔ−ブチルベンジルブロミド（４−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｂｅｎｚｙｌ ｂｒｏｍｉｄｅ）を添加することによって、２ＲＳ−（４−ｔｅｒｔ−ブチルベンジルオキシ）−４−メチルペンタン酸（２ＲＳ−（４−ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｂｅｎｚｙｌｏｘｙ）−４−ｍｅｔｈｙｌｐｅｎｔａｎｏｉｃ ａｃｉｄ）（３５）が形成する。（３５）を塩酸塩（３３）にカップリングすると、（３６）、Ｒ4＝‘Ｈ’、（Ｘ）o＝‘−‘、（Ｗ）n＝‘Ｏ’、ｎ＝１、（Ｖ）m＝‘ＣＨ2’、即ち、Ｒ9、Ｒ10＝‘Ｈ’、ｍ＝１及びＵ＝４−ｔｅｒｔ−ブチルフェニルである、一般式（Ｉ）の化合物の一例を得る。有機化学を実施する当業者にとって、４−ｔｅｒｔ−ブチルベンジルブロミドの代わりに、適当なＡｒ−ＣＲ9Ｒ10−ハロゲン化物を用いて、示された条件下で、カルボン酸（３５）の多くのバリエーションを形成してもよい。ゆえに、一般式（Ｉ）において広範な（Ｖ）m及びＵを調べる（３６）の類似体が、スキーム１１で詳述される条件で調製される。
【０１３７】
【化３１】
Ｕ−Ｖ−Ｗ−Ｘ−Ｙの保護された（２−アルキル−３−アルキル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）アミドまたは（２−アルキル−３−アルキル−４−オキソ−テドラヒドロチオフェン−３−イル）アミドまたは（１−アルキル−２−アルキル−５−オキソシクロペンチル）アミド構成単位への添加が多段階有機反応を伴う一般式（Ｉ）の化合物の第３の合成ストラテジーは、下記を有する。
【０１３９】
（ｈ）溶液における適当に官能化及び保護された（２−アルキル−３−アルキル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）アミドまたは（２−アルキル−３−アルキル−４−オキソ−テドラヒドロチオフェン−３−イル）アミドまたは（１−アルキル−２−アルキル−５−オキソシクロペンチル）アミド構成単位の調製。液相化学で好ましい保護基は、Ｎα−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基及びＮα−ベンジルオキシカルボニル基である。
【０１４０】
（ｉ）例えば、ジメチルアセタールとしての、（２−アルキル−３−アルキル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）アミドまたは（２−アルキル−３−アルキル−４−オキソ−テドラヒドロチオフェン−３−イル）アミドまたは（１−アルキル−２−アルキル−５−オキソシクロペンチル）アミド構成単位のケトン官能性の保護。または、ケトンを、アキラル性の第２級アルコールに還元して、最終合成段階として再度酸化してもよい。
【０１４１】
（ｊ）構成単位（ｉ）の一般式（Ｉ）の化合物への変換に関する標準的な有機化学方法。
【０１４２】
中間体を溶液中で調製した後、構成単位（ｉ）にカップリングし、さらに一般式（Ｉ）の化合物に誘導してもよい（（２−アルキル−３−アルキル−４−ヒドロキシテトラヒドロ−フラン−３−イル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（３７）の調製及び使用が例示されるスキーム１２を参照）。
【０１４３】
【化３２】
または、一般式（Ｉ）の化合物の左側のＵ−Ｖ−Ｗ−Ｘ−Ｙを構築するのに使用される化学のタイプによっては、ケトンは、例えば、ジメチルアセタールとしての、保護を必要としてもよい。このような方法は、（２−アルキル−３−アルキル−４，４−ジメトキシ−テトラヒドロフラン−３−イル）カルバミン酸ベンジルエステル（４１）の調製及び使用によってスキーム１３に詳述、例示される。
【０１４５】
【化３３】
本発明は、上記したような新規な中間体、およびその中間前駆体からの一般式（Ｉ）の化合物の調製方法にまで拡張するものである。さらに、これらの中間前駆体からの中間体の調製方法もまた本発明の一部を形成する。
【０１４７】
一般式（Ｉ）の化合物は、実験道具として及び治療剤として有用である。実験室においては、本発明の化合物によっては、既知のまたは新たに発見されたシステインプロテアーゼが、「標的確認（ｔａｒｇｅｔ ｖａｌｉｄａｔｉｏｎ）」と一般的に称されるプロセスである、病気の状態の定着（ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ）または進行中の重要なまたは少なくとも有意な生化学的機能をもたらすかどうかを確立するのに有用である。
【０１４８】
本発明の第二の態様によると、（ａ）単離された既知のまたは推定上のシステインプロテアーゼへの上記したような化合物のインビトロでの結合を評価して、潜在性（ｐｏｔｅｎｃｙ）の基準（ｍｅａｓｕｒｅ）を提供し；さらに必要であれば下記段階：
（ｂ）標的の密接に関連する相同性プロテアーゼ及び一般的なハウスキーピングプロテアーゼ（ｈｏｕｓｅ−ｋｅｅｐｉｎｇ ｐｒｏｔｅａｓｅ）（例えば、トリプシン）への化合物の結合を評価して、選択性の基準を提供する；
（ｃ）化合物の存在下での、特定のシステインプロテアーゼ活性の細胞に基づく機能性マーカーをモニターする；および
（ｄ）化合物の存在下での、特定のシステインプロテアーゼ活性の動物モデルに基づく機能性マーカーをモニターする、
の一以上を有する、治療のための標的としての既知のまたは推定上のシステインプロテアーゼ阻害剤の確認方法が提供される。
【０１４９】
したがって、本発明は、治療標的としての既知のまたは推定上のシステインプロテアーゼ阻害剤の確認方法を提供する。様々なアプローチ及び複雑さのレベルが特定の標的の効果的な阻害及び「確認」に適当である。第一の場合では、本方法は、単離された既知のまたは推定上のシステインプロテアーゼへの一般式（Ｉ）の化合物のインビトロでの結合を評価して、「潜在性」の基準を提供する。標的の密接に関連する相同性プロテアーゼ及び一般的なハウスキーピングプロテアーゼ（例えば、トリプシン）への一般式（Ｉ）の化合物の結合のさらなる評価は、「選択性」の基準を提供する。複雑さの第二のレベルは、一般式（Ｉ）の化合物の存在下で、特定のシステインプロテアーゼ活性の細胞に基づく機能性マーカーをモニターすることによって評価されてもよい。例えば、「ヒト破骨細胞性吸収アッセイ」が、カテプシンＫの活性及びプロテアーゼ阻害剤の生物学的な効果をモニターするための細胞に基づく第二のインビトロの試験系として使用された（例えば、ＷＯ−Ａ−９８５０５３３を参照）。「ＭＨＣ−ＩＩプロセシング−Ｔ細胞活性化アッセイ」は、カテプシンＳの活性及びプロテアーゼ阻害剤の生物学的な効果をモニターするための細胞に基づく第二のインビトロの試験系として使用された（Ｓｈｉ， Ｇ−Ｐ．， ｅｔ ａｌ， Ｉｍｍｕｎｉｔｙ， １０， １９７−２０６， １９９９）。ウィルスまたは細菌感染を調べる際には、このようなマーカーは、単に、ウィルスの（例えば、ｍＲＮＡコピーのカウント）または細菌のローディングの機能的な評価及びプロテアーゼ阻害剤の生物学的な効果の評価であってもよい。複雑さの第三のレベルは、一般式（Ｉ）の化合物の存在下で、特定のシステインプロテアーゼ活性の動物モデルに基づく機能性マーカーをモニターすることによって評価されてもよい。例えば、リーシュマニア（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ ）感染、ピー．ビンクケイ（Ｐ． ｖｉｎｃｋｅｉ）感染、マラリア（ファルシパイン（ｆａｌｃｉｐａｉｎ）の阻害）及びトリパノソーマ クルージ感染（クルジパイン（ｃｒｕｚｉｐａｉｎ））のマウスモデルは、病原の伝播に鍵となる役割を果たすシステインプロテアーゼの阻害が、病気の症状を阻止し、当該標的を「確認する」のに有効であることを示す。
【０１５０】
したがって、本発明は、治療のための標的としての既知のまたは推定上のシステインプロテアーゼ阻害剤の確認における一般式（Ｉ）の化合物の使用を提供する。
【０１５１】
一般式（Ｉ）の化合物は、システインプロテアーゼが関与する病気のインビボでの処置または予防に有用である。
【０１５２】
本発明の第三の態様によると、特に、病気の状態（ｄｉｓｅａｓｅ ｐａｔｈｏｌｏｇｙ）がシステインプロテアーゼを阻害することによって修飾される病気を予防または処置するするための、医薬に使用される一般式（Ｉ）の化合物が提供される。
【０１５３】
本発明の第四の態様によると、病気の状態がシステインプロテアーゼを阻害することによって修飾される病気を予防または処置するための医薬の調製における一般式（Ｉ）の化合物の使用が提供される。
【０１５４】
システインプロテアーゼによっては、ヒトを含む、動物でのタンパク質の分解の正常な生理学的なプロセスで、例えば、結合組織の破壊で機能する。しかしながら、体内でのこれらの酵素のレベルが上昇すると、病気を引き起こす病的な状態が生じうる。ゆえに、システインプロテアーゼは、以下に制限されないが、ニューモシスティス カリニ（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｃａｒｉｎｉｉ）、トリパノソーマ クルージ（Ｔｒｙｐｓａｎｏｍａ ｃｒｕｚｉ）、トリパノソーマ ブルーセイ ブルーセイ（Ｔｒｙｐｓａｎｏｍａ ｂｒｕｃｅｉ ｂｒｕｃｅｉ）及びクリチジア フシキュラタ（Ｃｒｉｔｈｉｄｉａ ｆｕｓｉｃｕｌａｔａ）による感染、さらには、骨粗鬆症、自己免疫性、住血吸虫症、マラリア、腫瘍の転移、変染色性白質ジストロフィー、筋ジストロフィー、脊髄萎縮などの、様々な病気の病態にかかわりがある。ＷＯ−Ａ−９４０４１７２及びＥＰ−Ａ−０６０３８７３ならびに双方に列挙される参考文献を参照。加えて、スタフィロパイン（ｓｔａｐｈｙｌｏｐａｉｎ）と称される黄色ブドウ球菌（Ｓ． Ａｕｒｅｕｓ）から分泌される細菌性のシステインプロテアーゼは細菌力因子として関連がある（Ｐｏｔｅｍｐａ， Ｊ．， ｅｔ ａｌ． Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ， ２６２（６）， ２６６４−２６６７， １９９８）。
【０１５５】
本発明は、上記したまたは上記に包含される病気の状態の予防および／または処置に有用である。本発明はまた、本発明の化合物を、必要のある動物、特に哺乳動物、最も好ましくはヒトに投与することを有する、システインプロテアーゼ、特にパパイン超科のシステインプロテアーゼの異常なレベルによって引き起こされる病気の処置または予防方法に有用である。本発明は、特に、ニューモシスティス カリニ（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ ｃａｒｉｎｉｉ）、トリパノソーマ クルージ（Ｔｒｙｐｓａｎｏｍａ ｃｒｕｚｉ）、トリパノソーマ ブルーセイ（Ｔｒｙｐｓａｎｏｍａ ｂｒｕｃｅｉ）、メキシコリーシュマニア（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ ｍｅｘｉｃａｎａ）、クロストリジウム ヒストリチカム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃｕｍ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ａｕｒｅｕｓ）、***ウィルス及びクリチジア フシキュラタ（Ｃｒｉｔｈｉｄｉａ ｆｕｓｉｃｕｌａｔａ）による感染；ならびに骨粗鬆症、自己免疫性、住血吸虫症、マラリア、腫瘍の転移、変染色性白質ジストロフィー、筋ジストロフィー、脊髄萎縮などの、システインプロテアーゼが関連する病気の処置方法を提供するものである。
【０１５６】
クルジパインの阻害剤、特にクルジパインに特異的な化合物は、シャーガス病の処置に有用である。
【０１５７】
本発明によると、有効量の一般式（Ｉ）の化合物が投与されて、特定の症状または病気に関連のあるプロテアーゼを阻害してもよい。いうまでもなく、この投与量はさらに、化合物の投与タイプによって修飾されるであろう。例えば、急性治療に関する「有効量」を達成するためには、一般式（Ｉ）の化合物の非経口投与が好ましい。筋肉内大量注射もまた使用できるが、水または正常生理食塩水における５％デキストロースにおける化合物、または適当な賦形剤を含む同様の配合物の静脈内注入が最も有効である。具体的には、非経口投与量は、システインプロテアーゼを阻害するのに有効な濃度で血漿中で薬剤の濃度を維持するように、約０．０１〜約１００ｍｇ／ｋｇ；好ましくは０．１〜２０ｍｇ／ｋｇであろう。化合物は、約０．４〜約４００ｍｇ／ｋｇ／日の１日当たりの全投与量を達成するようなレベルで毎日１〜４回投与されてもよい。治療上有効である本発明の化合物の正確な量、およびこのような化合物が最良に投与される経路は、薬剤の血中レベルを治療効果を有するのに必要な濃度と比較することによって当業者によって容易に決定される。本発明の化合物のプロドラッグを適当な方法によって調製してもよい。プロドラッグ部分がケトン官能性であるこれらの化合物、特にケタールおよび／またはヘミアセタールでは、公知の方法に従って変換を行なってもよい。
【０１５８】
本発明の化合物はまた、薬剤の濃度が骨の再吸収を阻害するのにまたは本明細書に開示されるような他の治療指示を達成するのに十分であるように、患者に経口投与されてもよい。具体的には、化合物を含む薬剤組成物は、患者の状態に適合するように約０．１〜約５０ｍｇ／ｋｇの経口投与量で投与される。好ましくは、経口投与量は、約０．５〜約２０ｍｇ／ｋｇである。
【０１５９】
本発明の化合物を本発明に従って投与する際に、許容できない毒性効果は予想されない。良好な生物学的利用能を有する、本発明の化合物は、所定の薬理効果を有するのに必要である化合物の濃度を決定するために幾つかの生物学的アッセイの一で試験されてもよい。
【０１６０】
本発明の第五の態様によると、一以上の一般式（Ｉ）の化合物及び製薬上または獣医学上許容できる担体を含む薬剤または獣医薬組成物が提供される。処置されるまたは予防される病気または症状に適当であるまたは勧められると考えられる場合には、他の活性材料が存在していてもよい。
【０１６１】
担体、または一以上が存在する場合には、各担体は、配合物の他の成分と適合し、レシピエントに有害でない点で許容できなければならない。
【０１６２】
配合物は、直腸内、経鼻、局所（口腔内及び舌下を含む）、経膣または非経口（皮下、筋肉内、静脈内及び皮内を含む）投与に適するものを含むが、好ましくは、配合物は経口投与される配合物である。配合物は、簡便に、単位投与形態（ｕｎｉｔ ｄｏｓａｇｅ ｆｏｒｍ）、例えば、錠剤及び持続放出性カプセルで提示されてもよく、薬学の分野において既知である方法によって調製されてもよい。
【０１６３】
このような方法は、上記で規定される活性剤を担体と組み合わせて取り入れる（ｂｒｉｎｇｉｎｇ ｉｎｔｏ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ）ことを含む。通常、配合物は、活性剤を液状担体若しくは微粉砕された固体担体または双方と組み合わせて均一かつ均質に取り入れて、さらに必要であれば生成物を成形することによって調製される。本発明は、製薬上または獣医学上許容できる担体またはベヒクルと一緒に（ｉｎ ｃｏｎｊｕｎｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ）または組み合わせて（ｉｎ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｗｉｔｈ）一般式（Ｉ）の化合物を取り入れてなる薬剤組成物の調製方法にまで拡張する。
【０１６４】
本発明における経口投与用の配合物は、各々所定量の活性剤を含むカプセル、カシェ剤若しくは錠剤等の離散単位（ｄｉｓｃｒｅｔｅ ｕｎｉｔ）として；粉末若しくは顆粒として；水性液体若しくは非水性液体における活性剤の溶液若しくは懸濁液として；または水中油液状エマルジョン若しくは油中水液状エマルジョンとして；またはボーラスとしてなどとして提示されてもよい。
【０１６５】
経口投与用の組成物（例えば、錠剤及びカプセル）では、「許容できる担体」ということばは、一般的な賦形剤、例えば、結合剤、例えば、糖ミツ、アカシア、ゼラチン、ソルビトール、トラガカント、ポリビニルピロリドン（ポビドン）、メチルセルロース、エチルセルロース、カルボキシルメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、スクロース及びデンプン；充填剤及び担体、例えば、コーンスターチ、ゼラチン、ラクトース、スクロース、微結晶性セルロース、カオリン、マンニトール、リン酸２カルシウム、塩化ナトリウム及びアルギン酸；ならびにステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム及び他の金属ステアリン酸（ｍｅｔａｌｌｉｃ ｓｔｅａｒａｔｅ）、グリセロールステアレート、ステアリン酸、シリコーン油、タルクワックス、油及びコロイドシリカ等の潤滑剤などのベヒクルを包含する。ペパーミント、ウインターグリーン油、チェリー着香剤（ｃｈｅｒｒｙ ｆｌａｖｏｕｒｉｎｇ）などの着香剤もまた使用できる。容易に同定できる投与形態にできるように着色剤を添加することが望ましい。錠剤は、当該分野において既知の方法によって被覆されてもよい。
【０１６６】
錠剤は、必要であれば一以上の補助成分と共に、圧縮または成形によって作製されてもよい。圧縮錠剤は、必要であれば、結合剤、潤滑剤、不活性希釈剤、保存剤、表面活性剤または分散剤と混合して、粉末または顆粒などの自由に流れる形態（ｆｒｅｅ ｆｌｏｗｉｎｇ ｆｏｒｍ）で活性剤を適当な機械で圧縮することによって調製されてもよい。成形錠剤は、不活性な液状希釈剤で湿潤化された粉末の化合物の混合物を適当な機械で成形することによって作製されてもよい。錠剤は、必要であれば被覆されてもまたは刻み目を入れられてもよく、また、活性剤が緩やかにまたは制御されて放出されるように配合されてもよい。
【０１６７】
経口投与に適する他の配合剤としては、フレーバーベース、一般的には、スクロース及びアカシアまたはトラガカント内に活性剤を含むロゼンジ；ゼラチン及びグリセリン、またはスクロース及びアカシア等の不活性基剤内に活性剤を含む香錠；および適当な液状担体内に活性剤を含むマウスウォッシュがある。
【０１６８】
非経口配合物は通常滅菌されているであろう。
【０１６９】
本発明の第六の態様によると、例えば、混合によって、活性成分を担体と組み合わせて取り入れることを有する、上記した薬剤または獣医薬組成物の調製方法が提供される。
【０１７０】
本発明の各態様の好ましい特徴は、必要であれば変更を加えて、各態様と同様である。
【０１７１】
ここで、本発明を下記実施例により詳細に説明する。
【０１７２】
液相化学−一般的な方法
すべての溶剤は、特記しない限り、ＳｐＳまたはＨｉ−ＤｒｙグレードでＲＯＭＩＬ Ｌｔｄ（Ｗａｔｅｒｂｅａｃｈ， Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ， ＵＫ）から購入した。一般的なペプチド合成試薬は、Ｃｈｅｍ−Ｉｍｐｅｘ Ｉｎｔｌ． Ｉｎｃ．（Ｗｏｏｄ Ｄａｌｅ ＩＬ ６０１９１． ＵＳＡ）から得た。薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）は、予め被覆されたプレート（メルクアルミニウムシートシリカ６０ Ｆ２５４（Ｍｅｒｃｋ ａｌｕｍｉｎｉｕｍ ｓｈｅｅｔｓ ｓｉｌｉｃａ ６０ Ｆ２５４）、ｐａｒｔ ｎｏ． ５５５４）上で行なった。化合物の可視化は、紫外線（２５４ｎｍ）下でまたは適当な染色試薬を用いて達成された。フラッシュカラム精製は、シリカゲル６０（Ｍｅｒｃｋ ９３８５）で行なった。すべての分析用ＨＰＬＣは、２１５および／または２５４ｎｍのＵＶで検出する自動化Ａｇｉｌｅｎｔシステム（ａｕｔｏｍａｔｅｄ Ａｇｉｌｅｎｔ ｓｙｓｔｅｍ）で溶剤Ａ＝０．１％トリフルオロ酢酸水溶液（ＴＦＡ）及び溶剤Ｂ＝９０％アセトニトリル／１０％溶剤Ａの混合液を用いて、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｊｕｐｉｔｅｒ Ｃ4、５μ、３００Ａ、２５０×４．６ｍｍで得られた。特記しない限り、１．５ｍＬ／分での２５分にわたる１０〜９０％ ＡにおけるＢの勾配を、全分析用ＨＰＬＣ分析で行なった。ＨＰＬＣ−ＭＳ分析は、０．４ｍＬ／分でのＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｃｏｌｕｍｂｕｓ Ｃ8、５μ、３００Ａ、５０×２．０ｍｍで１０分にわたり１０〜９０％ ＡにおけるＢの勾配で、自動化Ａｇｉｌｅｎｔ ＨＰＬＣシステム（ａｕｔｏｍａｔｅｄ Ａｇｉｌｅｎｔ ＨＰＬＣ ｓｙｓｔｅｍ）を用いて、Ａｇｉｌｅｎｔ １１００シリーズ ＬＣ／ＭＳＤ（Ａｇｉｌｅｎｔ １１００ ｓｅｒｉｅｓ ＬＣ／ＭＳＤ）で行なった。核磁気共鳴（ＮＭＲ）は、示された溶媒及び温度でＢｒｕｋｅｒ ＤＰＸ４００（４００ＭＨｚ １Ｈ 周波数；ＱＸＩプローブ）で得られた。化学シフトは、部／ミリオン（δ）で表わし、溶剤の残留シグナル（ｒｅｓｉｄｕａｌ ｓｉｇｎａｌ）を参考にする。カップリング定数（Ｊ）は、Ｈｚで表わす。
【０１７３】
固相化学−一般的な方法
例示阻害剤（１〜３７）は、溶液及び固相Ｆｍｏｃによる化学を組み合わせることにより調製した（一般的な説明に関しては、‘Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ’， Ａｔｈｅｒｔｏｎ， Ｅ． ａｎｄ Ｓｈｅｐｐａｒｄ， Ｒ． Ｃ．， ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ Ｌｔｄ， Ｏｘｆｏｒｄ， ＵＫ， １９８９を参照）。適当に保護され官能化された構成単位は、溶液中で調製した（例えば、一般的な化合物（７）、スキーム１）後、適当なリンカーを介して固相に可逆的に結合した。次に、カップリング／脱保護／化学的修飾、例えば、酸化のラウンドを、全長の所望の分子が完了するまで行なった（スキーム２）。さらに、例示の阻害剤（１〜３７）は、固相から放出され（切断され）、分析され、精製されて、ある範囲のプロテアーゼに対する阻害についてアッセイした。
【０１７４】
通常、適当な固相表面が選択されうるものの、マルチピン（ｍｕｌｔｉｐｉｎ）（ポリアミド１．２→１０マイクロモルのローディング、ｗｗｗ．ｍｉｍｏｔｏｐｅｓ．ｃｏｍを参照）を、固相合成に使用した。通常、１．２マイクロモルのギヤを用いて、予備スクリーニング用に小スケールの未精製例示物を得、また、１０マイクロモルのクラウンを好ましい実施例のスケールアップ合成及び精製で使用した。標準的なカップリング及びＦｍｏｃ脱保護方法を使用した（固相マルチピン方法（ｓｏｌｉｄ ｐｈａｓｅ ｍｕｌｔｉｐｉｎ ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ）の徹底的な説明に関しては、Ｇｒａｂｏｗｓｋａ， Ｕ． ｅｔ ａｌ， Ｊ． Ｃｏｍｂ． Ｃｈｅｍ． ２（５）， ４７５−４９０， ２０００を参照）。
【０１７５】
初期アセンブリの調製
構成単位−リンカー構築物（例えば、（９））を、５分間、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、具体的には、１〜１０ｍＬ）中で２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ、１モル当量）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（ＨＯＢＴ、１モル当量）、及びＮ−メチルモルホリン（ＮＭＭ、２モル当量）でカルボキシル活性化を行なった。アミノ官能化ＤＡ／ＭＤＡクラウンまたはＨＥＭＡギア（１クラウン当たり１０マイクロモル／１ギア当たり１．２マイクロモル、活性化構築物に比して０．３３モル当量の全表面アミノ官能化）を添加した後、ＤＭＦを添加して、固相表面を被覆した。ローディング反応を一晩行なった。一晩ローディングした後、クラウン／ギアについて、洗浄、Ｆｍｏｃ脱保護及びローディングの定量の標準的なサイクルを行ない（Ｇｒａｂｏｗｓｋａ， Ｕ． ｅｔ ａｌを参照）、ローディングされた構成単位−リンカー構築物（例えば、（１０））を得た。分析から、すべての実施例においてほとんど定量的なローディングが示された。
【０１７６】
カップリングサイクル
標準的なＦｍｏｃ−アミノ酸および新規なカルボン酸（１０または２０モル当量）のカップリングを、５分間予め活性化して、ジメチルホルムアミド中で２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ、１０または２０モル当量）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（ＨＯＢＴ、１０または２０モル当量）及びＮ−メチルモルホリン（ＮＭＭ、２０または４０モル当量）で活性化されたカルボキシルを介して行なった。活性化された物質を、合成に必要なパターンでポリプロピレン製９６ウェルプレート（Ｂｅｃｋｍａｎ， １ｍＬウェル、クラウンでは１ウェル当たり５００μＬ溶液またはギアでは１ウェル当たり２５０μＬ溶液）の適当なウェルに分取した。ローディングされた遊離アミノ構成単位−リンカー構築物（例えば、（１０））を添加して、カップリング反応を一晩行なった。一晩カップリングした後、クラウン／ギアについて、洗浄、Ｆｍｏｃ脱保護の標準的なサイクルを行なった（Ｇｒａｂｏｗｓｋａ， Ｕ． ｅｔ ａｌを参照）。同様の活性化及びカップリング条件をある範囲のカルボン酸（Ｒ−ＣＯＯＨ）のカップリングに使用した。または、クロロホルメート、例えば、モルホリン−４−カルボニルクロライド（１０モル当量）を、ＮＭＭ（１０モル当量）を添加しながらＤＭＦ中でカップリングした。
【０１７７】
酸分解切断サイクル（Ａｃｉｄｏｌｙｔｉｃ Ｃｌｅａｖａｇｅ Ｃｙｃｌｅ）
９５％ ＴＦＡ／５％水の混合液を、合成のパターンに相当するパターンでポリスチレンの９６ウェルプレート（Ｂｅｃｋｍａｎ１， １ｍＬ ウェル、クラウンでは１ウェル当たり６００μＬ溶液またはギアでは１ウェル当たり３００μＬ溶液）に予め分取した。完了したマルチピンアセンブリを第一のプレート（マザープレート）に添加し、単位を錫箔中でカバーして、２×２４時間切断した。次に、切断されたマルチピンアセンブリを、第一のプレートから除去して、１５分間、第二のプレート（洗浄プレート）に添加した。さらに、消費されたマルチピンアセンブリを捨て、マザー／洗浄プレートをＨＴ−４ ＧｅｎｅＶａｃプレートエバポレーター（ＨＴ−４ ＧｅｎｅＶａｃ ｐｌａｔｅ ｅｖａｐｏｒａｔｏｒ）で蒸発させた。
【０１７８】
切断された例示物の分析及び精製
（ａ）１．２マイクロモルのギアの例。１００μＬのジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を各切断後の乾燥した洗浄プレートのウェルに添加し、よく混合して、相当する切断後の乾燥したマザープレートのウェルに移し、再度よく混合した。１０μＬのこのＤＭＳＯ溶液を、９０％アセトニトリル／１０％ ０．１％ＴＦＡ水溶液の混合液で１００μＬに希釈した。２０μＬのアリコートを、ＨＰＬＣ−ＭＳ及び全分析用ＨＰＬＣ（ｆｕｌｌ ａｎａｌｙｔｉｃａｌ ＨＰＬＣ）で分析した。それぞれの場合、未精製の例示分子は、予想された［Ｍ＋Ｈ］+イオン及び８０％超（２１５ｎｍ ＵＶ分析による）のＨＰＬＣピークを示した。これにより、予備的なプロテアーゼ阻害スクリーニング用に良質な未精製例示物を含む約１０ｍＭ ＤＭＳＯストック溶液が得られた。
【０１７９】
（ｂ）１０マイクロモルのクラウンの例。５００μＬの９０％アセトニトリル／１０％ ０．１％ＴＦＡ水溶液の混合液を、各洗浄プレートのウェルに添加し、よく混合して、相当するマザープレートのウェルに移し、再度よく混合した。５μＬのこの溶液を、９０％アセトニトリル／１０％ ０．１％ＴＦＡ水溶液の混合液で１００μＬに希釈した。２０μＬのアリコートを、ＨＰＬＣ−ＭＳ及び全分析用ＨＰＬＣで分析した。それぞれの場合、未精製の例示分子は、予想された［Ｍ＋Ｈ］+イオン及び８０％超（２１５ｎｍ ＵＶ分析による）のＨＰＬＣピークを示した。次に、未精製例示物を含むポリスチレン単位を凍結乾燥した。
【０１８０】
（ｃ）個々の例示物（例（ｂ））を、０．１％ＴＦＡ水溶液／アセトニトリルの１：１の混合液（１ｍＬ）中に再溶解して、半予備的ＨＰＬＣ（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｊｕｐｉｔｅｒ Ｃ4、５μ、３００Ａ、２５０×１０ｍｍ、２５分にわたる２５〜９０％のＡにおけるＢの勾配、４．０ｍＬ／分、２１５ｎｍ ＵＶ検出）によって精製した。画分を、予めタールが塗布された（ｐｒｅ−ｔａｒｒｅｄ）グラスサンプルバイアル瓶中で凍結乾燥して、精製された例示物（具体的には、２〜４ｍｇ、４０〜８０％収率）を得た。
【０１８１】
（ｄ）精製された例示物を、適当な容積のＤＭＳＯに溶かして、正確なプロテアーゼ阻害スクリーニング用の、１０ｍＭのストック溶液を得た。
【０１８２】
実施例１ （２Ｒ，３Ｒ）４−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−ベンズアミド
【０１８３】
【化３４】
スキーム１の一般的な詳細に従って、必要な２環式の構成単位、（２Ｒ，３Ｒ）（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステル（７ａ）を下記のように調製した。
【０１８５】
（１）（４Ｓ，５Ｒ）５−メチル−２−フェニル−４，５−ジヒドロオキサゾール−４−カルボン酸メチルエステルの調製
【０１８６】
【化３５】
飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）を、ジエチルエーテル（１００ｍＬ）におけるエチルベンズイミデート塩酸塩（ｅｔｈｙｌ ｂｅｎｚｉｍｉｄａｔｅ ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｄｅ）（４ｇ、２１．２５ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。相を激しく混合した後、分離した。エーテル層を乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、減圧下で蒸発させて、未精製残渣を得た。次に、この残渣をジエチルエーテル（８．５ｍＬ）に溶解した後、水（１．５ｍＬ）におけるＬ−トレオニンメチルエステル塩酸塩（２．１ｇ、１２．４ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。この混合物を２０時間攪拌した後、水（２０ｍＬ）を加えた。さらに、この混合物をジエチルエーテルで抽出し（４０ｍＬ×３）、合わせたエーテル層をブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、減圧下で蒸発させて、残渣を得た。過剰のエチルベンズイミデートを、減圧下（０．５〜１ｍｂａｒ）で、１００℃で留去した。残った材料を、酢酸エチル：ヘプタン（１：３）を溶出液として用いたシリカゲル（３００ｇ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、（４Ｓ，５Ｒ）５−メチル−２−フェニル−４，５−ジヒドロオキサゾール−４−カルボン酸メチルエステルを得た（１．８３ｇ、６７％）、ＴＬＣ（単一のＵＶスポット、Ｒf＝０．４７、ヘプタンにおける５０％酢酸エチル）、分析用ＨＰＬＣ Ｒt＝１０．３３分、ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒt＝５．７６分、２２０［Ｍ＋Ｈ］+の単一のメインのＵＶピーク）。
【０１８８】
【化３６】
（２）（４Ｒ，５Ｒ）４，５−ジメチル−２−フェニル−４，５−ジヒドロオキサゾールｅ−４−カルボン酸メチルエステルの調製
【０１９０】
【化３７】
無水テトラヒドロフラン（４３ｍＬ）における（４Ｓ，５Ｒ）５−メチル−２−フェニル−４，５−ジヒドロオキサゾール−４−カルボン酸メチルエステル（８．０ｇ、３６．５３ｍｍｏｌ）の溶液を、窒素雰囲気下で−７８℃で無水テトラヒドロフラン：ヘキサン（２４３ｍＬ、１０：１）におけるリチウムジイソプロピルアミン（２０．２ｍＬ、ヘプタン及びテトラヒドロフランにおける２Ｍ溶液）の溶液に添加した。−７８℃で１時間攪拌した後、ヨウ化メチル（５．７０ｍＬ、９１．７４ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物を−７８℃でさらに４時間攪拌した後、１８時間かけて一晩室温に加温した。次に、飽和塩化アンモニウム水溶液（２００ｍＬ）、次にヘプタン（３００ｍＬ）を添加した。よく混合した後、層を分離して、有機相をブラインで洗浄し、乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、減圧下で蒸発させて、残渣を得た。酢酸エチル：ヘプタン（３：７）を溶出液として用いたシリカゲル（３００ｇ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって、（４Ｒ，５Ｒ）４、５−ジメチル−２−フェニル−４、５−ジヒドロオキサゾール−４−カルボン酸メチルエステルを得た（７．５ｇ、８８％）、ＴＬＣ（単一のＵＶスポット、Ｒf＝０．４９、ヘプタンにおける５０％ＥｔＯＡｃ）、分析用ＨＰＬＣ Ｒt＝１０．９９分、ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒt＝５．８５分、２３４［Ｍ＋Ｈ］+の単一のメインのＵＶピーク）。
【０１９２】
【化３８】
（３）（２Ｒ，３Ｒ）２−アミノ−３−ヒドロキシ−２−メチル酪酸の調製
【０１９４】
【化３９】
塩酸（６Ｍ、１０ｍＬ）を、（４Ｒ，５Ｒ）４、５−ジメチル−２−フェニル−４、５−ジヒドロオキサゾール−４−カルボン酸メチルエステル（１．１２ｇ、４．８１ｍｍｏｌ）に加えた後、混合物を１８時間、還流しながら加熱した。次に、この混合物を室温まで冷却した後、水（７ｍＬ）、次にジエチルエーテル（１４ｍＬ）を添加した。相をよく混合した後、分離した。水相を減圧下で濃縮した後、Ｄｏｗｅｘ ５０Ｗｘ４（０．０１Ｍ ＨＣｌで活性化）で精製した。水（１００ｍＬ）、次に１Ｍ ＮＨ4ＯＨによる溶出によって、２−アミノ−３−ヒドロキシ−２−メチル−酪酸（６４０ｍｇ、９５％）を得た。Ｈ2Ｏ（微量）：ＥｔＯＨ−Ｅｔ2Ｏからの再結晶化によって、鏡像的に純粋な（ｅｎａｎｔｉｏｐｕｒｅ）（２Ｒ，３Ｒ）−異性体（1Ｈ−ＮＭＲ）を得た、ＴＬＣ（単一のＵＶスポット、Ｒf＝０．２７、４：１：１ nＢｕＯＨ：Ｈ2Ｏ：ＡｃＯＨ）、ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒt＝０．４５分、１３４［Ｍ＋Ｈ］+の単一のメインのＵＶピーク）。
【０１９６】
【化４０】
（４）（２Ｒ，３Ｒ）２−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−３−ヒドロキシ−２−メチル酪酸の調製
【０１９８】
【化４１】
（２Ｒ，３Ｒ）２−アミノ−３−ヒドロキシ−２−メチル酪酸（１．５４ｇ、１１．５８ｍｍｏｌ）を、０℃で水（６６ｍＬ）における炭酸ナトリウム（３．０５ｇ、２８．９４ｍｍｏｌ）の激しく攪拌した溶液に添加した。次に、１，４−ジオキサン（３２ｍＬ）を添加して、濁った流動性のある混合物を得た。さらに、１，４−ジオキサン（３５ｍＬ）における９−フルオレニルメチルクロロホルメート（３．１３ｇ、１２．１６ｍｍｏｌ）を４０分かけて添加した。次に、この混合物を３０分かけて室温まで加温した。さらに、水（３００ｍＬ）を加えて、反応混合物をクロロホルムで洗浄し（２×２５０ｍＬ）、合わせた有機層を捨てた。水相を１Ｍ ＨＣｌで酸性化（〜ｐＨ２）して、濃稠な濁った混合物を得た。この酸性化された水性混合物をクロロホルムで抽出し（３×２５０ｍＬ）、合わせた有機相を乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、減圧下で蒸発させて、残渣を得た（４．２ｇ）。（酢酸エチル−ヘプタンからの）再結晶化によって、（２Ｒ，３Ｒ）２−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−３−ヒドロキシ−２−メチル酪酸を得た（３．８ｇ、９２％）、ＴＬＣ（単一のＵＶスポット、Ｒf＝、ＣＨＣｌ3における２０％ＭｅＯＨ）、分析用ＨＰＬＣ Ｒt＝１６．０９分、ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒt＝７．４１分、３５６［Ｍ＋Ｈ］+、３７８［Ｍ＋Ｎａ］+の単一のメインのＵＶピーク）。
【０２００】
【化４２】
（５）（１Ｒ，１’Ｒ）［３−ジアゾ−１−（１−ヒドロキシエチル）−１−メチル−２−オキソプロピル］カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステルの調製
【０２０２】
【化４３】
（２Ｒ，３Ｒ）２−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−３−ヒドロキシ−２−メチル酪酸（１．７７ｇ、５．０ｍｍｏｌ）を、無水ジクロロメタン（３０ｍＬ）及びテトラヒドロフラン（１０ｍＬ）に、攪拌しながら溶解した。反応物に窒素を流し、−１５℃に冷却した。無水ジクロロメタン（５ｍＬ）におけるイソ−ブチルクロロホルメート（０．７４ｍＬ、５．４４ｍｍｏｌ）及び無水ジクロロメタン（５ｍＬ）におけるＮ−メチルモルホリン（１．０３ｍＬ、１０．０ｍｍｏｌ）を、１５分かけて１ｍＬアリコートに同時に添加した。エーテル性ジアゾメタン［６０℃で水（７．５ｍＬ）／エタノール（１５ｍＬ）における水酸化ナトリウム（５．２５ｇ）にジエチルエーテル（７５ｍＬ）におけるジアザルド（ｄｉａｚａｌｄ）（４．７ｇ、〜１５ｍｍｏｌ）を添加することにより生成］を、−２０℃で活性化アミノ酸溶液に添加した。次に、この混合物を室温まで加温し、２０時間攪拌した。数滴の酢酸をこの混合物に添加した。さらに、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル（１００ｍＬ）を混合物に添加した。次に、エーテル層を水で洗浄し（３×７５ｍＬ）、乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、溶剤を減圧下で除去して、黄色の残渣を得た（２ｇ）。（１：３）〜（１：０）の比の酢酸エチル：ヘプタンの勾配での溶出を用いたシリカ（１００ｇ）による残渣のフラッシュクロマトグラフィーおよび真空中での所望の画分の蒸発によって、（１Ｒ，１’Ｒ）［３−ジアゾ−１−（１−ヒドロキシエチル）−１−メチル−２−オキソプロピル］カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステルを得た、収率２２０ｍｇ（１１．６％）。ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒt＝８．８４分、３５２．２［Ｍ？Ｎ2＋Ｈ］+、３７４．２［Ｍ？Ｎ2＋Ｎａ］+のメインのＵＶピーク）。
【０２０４】
（６）（２Ｒ，３Ｒ）（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステルの調製
【０２０５】
【化４４】
水（１．５ｍＬ）及び酢酸（６．０ｍＬ）における塩化リチウム（２４７ｍｇ、５．７ｍｍｏｌ）の溶液を、（１Ｒ，１’Ｒ）［３−ジアゾ−１−（１−ヒドロキシエチル）−１−メチル−２−オキソプロピル］カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステル（２２０ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ）に添加した。ガスを展開し、１時間後、クロロホルム（７５ｍＬ）を添加して、有機相を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２×７０ｍＬ）及びブライン（７０ｍＬ）で洗浄した。クロロホルム層を乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、減圧下で蒸発させて、残渣を得た（２２０ｍｇ）。酢酸エチル：ヘプタン（１：４）を溶出液として用いたシリカ（３５ｇ）での残渣のフラッシュクロマトグラフィーによって、（２Ｒ，３Ｒ）（２，３−ジメチル−４−オキソテトラヒドロ−フラン−３−イル）カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステルを得た（１００ｍｇ、５０％）、ＴＬＣ（単一のＵＶスポット、Ｒf＝０．７２、酢酸エチル：ヘプタン １：１）；分析用ＨＰＬＣ Ｒt＝１８．２１分、ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒt＝８．８５分、３５２［Ｍ＋Ｈ］+、３７４［Ｍ＋Ｎａ］+の単一のメインのＵＶピーク）。
【０２０７】
【化４５】
スキーム２の一般的な詳細に従って、必要な２環式の構成単位、（２Ｒ，３Ｒ）（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステル（７ａ）を、下記のようにして、構成単位−リンカー構築物（９）に変換した。
【０２０９】
（２Ｒ，３Ｒ）（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステル（７）（７８ｍｇ、０．２２３ｍｍｏｌ、１当量）を、酢酸ナトリウム３水和物（４６ｍｇ、０．３３４ｍｍｏｌ、１．５当量）を含むエタノール（３．９ｍＬ）及び水（０．５６ｍＬ）の混合液に溶解した。４−［［（ヒドラジノカルボニル）アミノ］メチル］シクロヘキサンカルボン酸トリフルオロアセテート（７４ｍｇ、０．２２３ｍｍｏｌ、１当量、Ｍｕｒｐｈｙ， Ａ． Ｍ． ｅｔ ａｌ， Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．， １１４， ３１５６−３１５７， １９９２）を添加し、混合物を３日間還流した。クロロホルム（５０ｍＬ）を添加し、有機溶液を希釈塩酸水溶液（０．１Ｍ、２×３０ｍＬ）、ブライン（２５ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、減圧下で蒸発させて、リンカー構築物（９）を白色の固体として得た（８０ｍｇ）。分析用ＨＰＬＣから、Ｚ−異性体についてＲt＝１６．９９分に１つのメインのピーク及びＥ−異性体についてＲt＝１７．３９分にもう１つが示された。ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｚ−異性体についてＲt＝８．０２分、５４９［Ｍ＋Ｈ］+及びＥ−異性体についてＲt＝８．３０分、５４９［Ｍ＋Ｈ］+のメインのＵＶピーク）。未構築物（９）を、構築物のローディングに直接使用した。
【０２１０】
スキーム２の一般的な詳細に従って、必要な構成単位−リンカー構築物（９）を、下記のようにして、ローディングされた構成単位−リンカー構築物（１０）を提供する固相に結合させた。
【０２１１】
構成単位−リンカー構築物（９）（０．１４６ｍｍｏｌｅｓ）、２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ、５５ｍｇ、０．１４６ｍｍｏｌｅ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物及び（ＨＯＢＴ、２２ｍｇ、０．１４６ｍｍｏｌｅ）を、ジメチルホルムアミド（３ｍＬ）に溶解し、Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ、６４μＬ、０．２９ｍｍｏｌｅ）を添加した。５分間予め活性化した後、遊離アミンギア（３５×１．２μｍｏｌｅ）、次にジメチルホルムアミド（２．５ｍＬ）を添加し、一晩放置した。次に、消費されたカップリング溶液を遊離アミンクラウン（３×１０μｍｏｌｅ）に添加し、一晩放置した。標準的な洗浄及び分析から、約７０％でローディングが示された。
【０２１２】
スキーム２の一般的な詳細に従って、必要なローディングされた構成単位−リンカー構築物（１０）を、下記のようにして、固相上で作製した。
【０２１３】
ローディングされた構築物（１０）を、標準的なＦｍｏｃ脱保護及びＦｍｏｃ−Ｔｙｒ（ＯＢｕｔ）−ＯＨ、次に４−ｔｅｒｔ−ブチル安息香酸との順次カップリングによって、実施例１の（２Ｒ，３Ｒ）４−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−ベンズアミドにした。この未精製例示物を切断して、分析した（一般的な技術を参照）。ＨＰＬＣ Ｒｔ＝１７．８０分（＞９５％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ ４５３．２［Ｍ＋Ｈ］+、９２７．５［２Ｍ＋Ｎａ］+。
【０２１４】
下記実施例（２〜３４）を、実施例１で詳述したのと同様にして調製し、必要な試薬を用いてカップリングして、全長分子を得た。
【０２１５】
実施例２ （２Ｒ，３Ｒ）ビフェニル−４−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−アミド
【０２１６】
【化４６】
ＨＰＬＣ Ｒｔ＝１７．３１分（＞９０％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ ４７３．２［Ｍ＋Ｈ］+、９６７．４［２Ｍ＋Ｎａ］+。
【０２１８】
実施例３ （２Ｒ，３Ｒ）Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−４−チオフェン−２−イル−ベンズアミド
【０２１９】
【化４７】
ＨＰＬＣ Ｒｔ＝１６．８４分（＞８０％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ ４７９．１［Ｍ＋Ｈ］+、９７９．２［２Ｍ＋Ｎａ］+。
【０２２１】
実施例４ （２Ｒ，３Ｒ）Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−４−トリフルオロメトキシ−ベンズアミド
【０２２２】
【化４８】
ＨＰＬＣ Ｒｔ＝１６．９３分（＞９０％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ４８１．１［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２２４】
実施例５（２Ｒ，３Ｒ） Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−５−チオフェン−２−イル−ニコチンアミド
【０２２５】
【化４９】
ＨＰＬＣ Ｒｔ＝１２．８６分（＞９５％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ ４８０．１［Ｍ＋Ｈ］+、９５９．３［２Ｍ＋Ｎａ］+。
【０２２７】
実施例６ （２Ｒ，３Ｒ）２−ピリジン−３−イル−チアゾール−４−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−アミド
【０２２８】
【化５０】
ＨＰＬＣ Ｒｔ＝９．９７分（＞９０％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ ４８１．１［Ｍ＋Ｈ］+、９６１．３［２Ｍ＋Ｎａ］+。
【０２３０】
実施例７ （２Ｒ，３Ｒ）２−メチル−５−フェニル−フラン−３−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−アミド
【０２３１】
【化５１】
ＨＰＬＣ Ｒｔ＝１７．７２分（＞８５％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ ４７７．２［Ｍ＋Ｈ］+、９７５．４［２Ｍ＋Ｎａ］+。
【０２３３】
実施例８ （２Ｒ，３Ｒ）４−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−ベンズアミド
【０２３４】
【化５２】
ＨＰＬＣ Ｒｔ＝１９．８０分（＞８５％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ ４０３．３［Ｍ＋Ｈ］+、８２７．５［２Ｍ＋Ｎａ］+。
【０２３６】
実施例９ （２Ｒ，３Ｒ）ビフェニル−４−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−アミド
【０２３７】
【化５３】
ＨＰＬＣ Ｒｔ＝１９．２３分（＞８０％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ ４２３．３［Ｍ＋Ｈ］+、８６７．４［２Ｍ＋Ｎａ］+。
【０２３９】
実施例１０ （２Ｒ，３Ｒ）Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−４−チオフェン−２−イル−ベンズアミド
【０２４０】
【化５４】
ＨＰＬＣ Ｒｔ＝１８．７７分（＞９０％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ ４２９．２［Ｍ＋Ｈ］+、８７９．３［２Ｍ＋Ｎａ］+。
【０２４２】
実施例１１ （２Ｒ，３Ｒ）Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−４−トリフルオロメトキシ−ベンズアミド
【０２４３】
【化５５】
ＨＰＬＣ Ｒｔ＝１８．９１分（＞９５％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ ４３１．２［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２４５】
実施例１２ （２Ｒ，３Ｒ）Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−５−チオフェン−２−イル−ニコチンアミド
【０２４６】
【化５６】
ＨＰＬＣ Ｒｔ＝１４．８３分（＞９０％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ ４３０．２［Ｍ＋Ｈ］+、８８１．３［２Ｍ＋Ｎａ］+。
【０２４８】
実施例１３ （２Ｒ，３Ｒ）２−ピリジン−３−イル−チアゾール−４−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−アミド
【０２４９】
【化５７】
ＨＰＬＣ Ｒｔ＝１１．４０分（＞９５％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ ４３１．２［Ｍ＋Ｈ］+、８８３．３［２Ｍ＋Ｎａ］+。
【０２５１】
実施例１４ （２Ｒ，３Ｒ）２−メチル−５−フェニル−フラン−３−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−アミド
【０２５２】
【化５８】
ＨＰＬＣ Ｒｔ＝１９．８８分（＞８０％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ ４２７．２［Ｍ＋Ｈ］+、８７５．４［２Ｍ＋Ｎａ］+。
【０２５４】
実施例１５ （２Ｒ，３Ｒ）フラン−３−カルボン酸［２−ベンジルスルファニル−１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−エチル］−アミド
【０２５５】
【化５９】
ＨＰＬＣ Ｒｔ＝１５．７９分（＞８０％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ ４１７．０［Ｍ＋Ｈ］+、８５５．１［２Ｍ＋Ｎａ］+。
【０２５７】
実施例１６ （２Ｒ，３Ｒ）フラン−３−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−アミド
【０２５８】
【化６０】
ＨＰＬＣ Ｒｔ＝１２．４４分（＞８５％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ ３３７．１［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２６０】
実施例１７ （２Ｒ，３Ｒ）フラン−３−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−アミド
【０２６１】
【化６１】
ＨＰＬＣ Ｒｔ＝１０．５１分（＞９０％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ ３８７．０［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２６３】
実施例１８ （２Ｒ，３Ｒ）フラン−３−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イルカルバモイル）−３，３−ジメチル−ブチル］−アミド
【０２６４】
【化６２】
ＨＰＬＣ Ｒｔ＝１４．０５分（＞８５％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ ３５１．１［Ｍ＋Ｈ］+、７２３．２［２Ｍ＋Ｎａ］+。
【０２６６】
実施例１９ （２Ｒ，３Ｒ）フラン−３−カルボン酸［２−シクロヘキシル−１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−エチル］−アミド
【０２６７】
【化６３】
ＨＰＬＣ Ｒｔ＝１６．３１分（＞８５％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ ３７７．１［Ｍ＋Ｈ］+、７７５．２［２Ｍ＋Ｎａ］+。
【０２６９】
実施例２０ （２Ｒ，３Ｒ）チオフェン−３−カルボン酸［２−ベンジルスルファニル−１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−エチル］−アミド
【０２７０】
【化６４】
ＨＰＬＣ Ｒｔ＝１６．９７分（＞８０％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ ４３３．０［Ｍ＋Ｈ］+、８８７．１［２Ｍ＋Ｎａ］+。
【０２７２】
実施例２１ （２Ｒ，３Ｒ）チオフェン−３−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−アミド
【０２７３】
【化６５】
ＨＰＬＣ Ｒｔ＝１３．７０分（＞８０％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ ３５３．１［Ｍ＋Ｈ］+、７２７．１［２Ｍ＋Ｎａ］+。
【０２７５】
実施例２２ （２Ｒ，３Ｒ）チオフェン−３−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−アミド
【０２７６】
【化６６】
ＨＰＬＣ Ｒｔ＝１１．７７分（＞９０％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ ４０３．０［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２７８】
実施例２３ （２Ｒ，３Ｒ）チオフェン−３−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３，３−ジメチル−ブチル］−アミド
【０２７９】
【化６７】
ＨＰＬＣ Ｒｔ＝１５．１１分（＞８０％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ ３６７．１［Ｍ＋Ｈ］+、７５５．２［２Ｍ＋Ｎａ］+。
【０２８１】
実施例２４ （２Ｒ，３Ｒ）チオフェン−３−カルボン酸［２−シクロヘキシル−１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−エチル］−アミド
【０２８２】
【化６８】
ＨＰＬＣ Ｒｔ＝１７．２２分（＞８５％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ ３９３．１［Ｍ＋Ｈ］+、８０７．２［２Ｍ＋Ｎａ］+。
【０２８４】
実施例２５ （２Ｒ，３Ｒ）ナフタレン−１−カルボン酸［２−ベンジルスルファニル−１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−エチル］−アミド
【０２８５】
【化６９】
ＨＰＬＣ Ｒｔ＝１９．３６分（＞８０％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ ４７７．１［Ｍ＋Ｈ］+、９７５．１［２Ｍ＋Ｎａ］+。
【０２８７】
実施例２６ （２Ｒ，３Ｒ）ナフタレン−１−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−アミド
【０２８８】
【化７０】
ＨＰＬＣ Ｒｔ＝１６．９１分（＞８０％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ ３９７．１［Ｍ＋Ｈ］+、８１５．２［２Ｍ＋Ｎａ］+。
【０２９０】
実施例２７ （２Ｒ，３Ｒ）ナフタレン−１−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−アミド
【０２９１】
【化７１】
ＨＰＬＣ Ｒｔ＝１４．７０分（＞８５％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ ４４７．１［Ｍ＋Ｈ］+。
【０２９３】
実施例２８ （２Ｒ，３Ｒ）ナフタレン−１−カルボン酸［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３，３−ジメチル−ブチル］−アミド
【０２９４】
【化７２】
ＨＰＬＣ Ｒｔ＝１７．８０分（＞８０％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ ４１１．１［Ｍ＋Ｈ］+、８４３．２［２Ｍ＋Ｎａ］+。
【０２９６】
実施例２９ （２Ｒ，３Ｒ）ナフタレン−１−カルボン酸［２−シクロヘキシル−１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−エチル］−アミド
【０２９７】
【化７３】
ＨＰＬＣ Ｒｔ＝１９．３６分（＞８５％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ ４３７．１［Ｍ＋Ｈ］+、８９５．３［２Ｍ＋Ｎａ］+。
【０２９９】
実施例３０ （２Ｒ，３Ｒ）２−ベンジルオキシ−３−シクロヘキシル−Ｎ−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−プロピオンアミド
【０３００】
【化７４】
ＨＰＬＣ Ｒｔ＝２１．７７分（＞８５％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ ３７４．２［Ｍ＋Ｈ］+、７６９．２［２Ｍ＋Ｈ］+。
【０３０２】
（ａ）３−シクロヘキシル−２Ｓ−ヒドロキシプロピオン酸（化合物（１３）スキーム４）の調製
水（４０ｍｌ）における亜硝酸ナトリウム（１２．１ｇ、１７５ｍｍｏｌ）の溶液を、１．５時間にわたって０℃で０．５Ｍ 硫酸（１２０ｍｌ、６０ｍｍｏｌ）における（Ｓ）−α−アミノシクロヘキサンプロピオン酸水和物（５ｇ、２６．５ｍｍｏｌ）の攪拌懸濁溶液に滴下した。この混合物を２０時間かけて周囲温度にまで加温した。生成物をジエチルエーテルで抽出した（２×２５ｍｌ）後、エーテル層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し（２×２５ｍｌ）、乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、溶剤を真空中で除去した。残渣（５．３ｇ）を、ジエチルエーテル（１０ｍｌ）及びヘプタン（２５ｍｌ）から再結晶化して、３−シクロヘキシル−２Ｓ−ヒドロキシプロピオン酸を白色固体として得た、収率２．４ｇ、（５３％）。
【０３０３】
【化７５】
（ｂ）２ＲＳ−ベンジルオキシ−３−シクロヘキシルプロピオン酸（化合物（１４）スキーム４）の調製
水素化ナトリウム（２６５ｍｇの油における６０％分散液、６．６ｍｍｏｌ）を、５分にわたって０℃で３−シクロヘキシル−２Ｓ−ヒドロキシプロピオン酸（０．５２ｇ、３．０ｍｍｏｌ）、ジメチルホルムアミド（５ｍｌ）及びジクロロメタン（５ｍｌ）の攪拌混合物に２回に分けて添加した。この混合物を０℃で５分間、次に周囲温度で４５分間攪拌した。次に、臭化ベンジル（０．４５ｍｌ、３．８ｍｍｏｌ）を加えた後、この混合物を、ジメチルホルムアミド（５ｍｌ）を添加する前に、１時間、攪拌した。４時間攪拌した後、ヨウ化カリウム（５０ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を２０時間攪拌した後、５５℃で１時間加熱し、さらに周囲温度まで冷却して、水（１５ｍｌ）に注いだ。飽和塩化ナトリウム水溶液（５ｍｌ）を添加した後、混合物をジクロロメタン（５ｍｌ、次に１０ｍｌ）で抽出して、これを捨てた。水層を１Ｍ 塩酸（１０ｍｌ）で酸性化した後、ジクロロメタンで抽出した（２×１０ｍｌ）。ジクロロメタン層を乾燥し（ＭｇＳＯ4）、溶剤を真空中で除去した。残渣（０．５５ｇ）をジメチルホルムアミド（８ｍｌ）に溶解した後、水素化ナトリウム（１９０ｍｇの油における６０％分散液、４．７５ｍｍｏｌ）を添加する前に０℃に冷却した。この混合物を３０分間攪拌した後、ポリマー結合イソシアネート（３８０ｍｇ、２ｍｍｏｌＮｇ-1）を添加した。この混合物を周囲温度で２時間攪拌した後、水（１５ｍｌ）に注いだ。１Ｍ 塩酸（１０ｍｌ）を添加した後、生成物をジクロロメタン（２×１０ｍｌ）で抽出し、乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、さらに溶剤を真空中で除去した。残渣を、メタノール：ジロロメタン ０：１→１：２０の勾配で溶出してシリカゲルによるフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。適当な画分を合わせ、溶剤を真空中で除去したところ、２ＲＳ−ベンジルオキシ−３−シクロヘキシルプロピオン酸を無色の油として得た、収率４１ｍｇ（５．２％）。
【０３０５】
ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒｔ＝９．４７分、２６１．２［Ｍ−Ｈ］-、２８５．２［Ｍ＋Ｎａ］+、５４７．３［２Ｍ＋Ｎａ］+の単一のメインＵＶピーク）。
【０３０６】
【化７６】
化合物（１４）を、（Ｆｍｏｃの標準的な除去後）ローディングされた構成単位−リンカー構築物（１０）に標準的な条件下でカップリングした後、切断して、実施例３０を得た。
【０３０８】
実施例３１ （２Ｒ，３Ｒ）２−（４−ｔｅｒｔ−ブチル−ベンジルスルファニル）−４−メチル−ペンタン酸（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−アミド
【０３０９】
【化７７】
ＨＰＬＣ Ｒｔ＝２４．３１分（＞８５％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ ４０６．２［Ｍ＋Ｈ］+、８３３．２［２Ｍ＋Ｈ］+。
【０３１１】
（ａ）２Ｒ−ブロモ−４−メチルペンタン酸の調製（化合物（１６）、スキーム５）
水（１５ｍｌ）における亜硝酸ナトリウム（５．１ｇ、７３ｍｍｏｌ）の溶液を、水（１００ｍｌ）におけるＤ−ロイシン（８．７５ｇ、６７ｍｍｏｌ）、臭化カリウム（２９．７５ｇ、０．２５ｍｏｌ）及び濃硫酸（８．６ｍｌ）の攪拌混合液に０℃で５時間かけて滴下した。この混合物を０℃で３０分間、次に周囲温度で２０時間攪拌した。生成物をジエチルエーテルで抽出した（２×１５０ｍｌ）後、合わせたエーテル層を飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し（２×１００ｍｌ）、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、さらに溶剤を真空中で除去した。残渣を、メタノール：ジクロロメタン １：５０→１：２０の勾配で溶出してシリカゲルによるフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。適当な画分を合わせ、溶剤を真空中で除去したところ、２Ｒ−ブロモ−４−メチルペンタン酸（１７）が無色の油として残った、収率１．６０ｇ、（１２．３％）。ＴＬＣ（単一のスポット、Ｒｆ＝０．２、メタノール：ジクロロメタン １：２０）。加えて、若干不純物のある生成物の第二の収穫（５．２ｇ、４０％）が得られた。
【０３１２】
【化７８】
（ｂ）２Ｓ−（４−ｔｅｒｔ−ブチルベンジルスルファニル）−４−メチルペンタン酸の調製（化合物（１８）、スキーム５）
ジメチルホルムアミド（１５ｍｌ）における２Ｒ−ブロモ−４−メチルペンタン酸（化合物（１６）、１．１ｇ、５．６ｍｍｏｌ）及び（４−（ｔｅｒｔ−ブチル）フェニル）メタンチオール（１．０ｇ、５．６ｍｍｏｌ）の溶液に窒素を５分間流した後、０℃に冷却した。トリエチルアミン（０．７９ｍｌ、５．７ｍｍｏｌ）を１分かけて滴下した後、混合物を周囲温度で２日間攪拌した。溶剤を真空中で除去し、残渣を、メタノール：ジクロロメタン ０：１→１：２０の勾配で溶出してシリカゲルによるフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。適当な画分を合わせ、溶剤を真空中で除去すると、残渣が残り、これを酢酸エチル：ヘプタン ２：５で溶出してシリカゲルによるフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。適当な画分を合わせ、溶剤を真空中で除去して、２Ｓ−（４−ｔｅｒｔ−ブチルベンジルスルファニル）−４−メチルペンタン酸（１８）を無色の油として得た、収率１５０ｍｇ、（９％）。ＴＬＣ（単一のスポット、Ｒｆ＝０．２、ヘプタン：酢酸エチル ５：２）、Ｒｔ＝２２．１１７分のメインピークを有する分析用ＨＰＬＣ、ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒｔ＝１１．０７２分、３１７．２［Ｍ＋Ｎａ］+の単一のメインＵＶピーク）。
【０３１４】
【化７９】
化合物（１８）を、（Ｆｍｏｃの標準的な除去後）ローディングされた構成単位−リンカー構築物（１０）に標準的な条件下でカップリングした後、切断して、実施例３１を得た。
【０３１６】
実施例３２ （２Ｒ，３Ｒ）２−（４−ｔｅｒｔ−ブチル−フェニルメタンスルホニル）−４−メチル−ペンタン酸（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−アミド
【０３１７】
【化８０】
ＨＰＬＣ Ｒｔ＝２２．２２分（＞９０％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ ４３８．１［Ｍ＋Ｈ］+、８９７．３［２Ｍ＋Ｈ］+。
【０３１９】
スキーム９ 化合物（１８）を、（Ｆｍｏｃの標準的な除去後）ローディングされた構成単位−リンカー構築物（１０）に標準的な条件下でカップリングした。この中間のローディングされたチオエーテル（１．２μｍｏｌｅ ギア）を、５時間、ジクロロメタン（２００μＬ）におけるｍ−クロロ過安息香酸（５当量、６５％試薬、１．６ｍｇ）で酸化した後、標準的な洗浄を行ない、さらに切断して、実施例３２を得た。
【０３２０】
実施例３３ （２Ｒ，３Ｒ）２−シクロヘキシルメチル−Ｎ−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−４−モルホリン−４−イル−４−オキソ−ブチルアミド
【０３２１】
【化８１】
ＨＰＬＣ−ＭＳ ３９５．３［Ｍ＋Ｈ］+、８１１．４［２Ｍ＋Ｎａ］+。
【０３２３】
（ａ）２Ｒ−シクロヘキシルメチル−４−モルホリン−４−イル−４−オキソ−酪酸メチルエステルの調製
１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド・ＨＣｌ（１．１２ｇ、５．６９ｍｍｏｌ）、次に１−ヒドロキシベンゾトリアゾール一水和物（０．８７ｇ、５．６９ｍｍｏｌ）を、アルゴン下で０℃でジメチルホルムアミド（１０ｍｌ）における２Ｒ−（シクロヘキシルメチル）コハク酸１−メチルエステル（化合物（２３）、１．０ｇ、４．３８ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に添加した。この混合物を２５分間攪拌した後、モルホリン（０．７ｍｌ、８．７６ｍｍｏｌ）を１分かけて滴下し、周囲温度で１６時間攪拌し続けた。生成物を酢酸エチル（２００ｍｌ）で抽出した後、１．０Ｍ 塩酸（３×１００ｍｌ）、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（３×１００ｍｌ）、水（１００ｍｌ）、さらに飽和塩化ナトリウム水溶液（１００ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、さらに溶剤を真空中で除去して、２Ｒ−シクロヘキシルメチル−４−モルホリン−４−イル−４−オキソ−酪酸メチルエステルをオフホワイトの固体として得た、収率１．２２ｇ、（９４％）。ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒｔ＝７．９１分、２９８．１［Ｍ＋Ｈ］+、６１７．３［２Ｍ＋Ｎａ］+の単一のピーク）。
【０３２４】
（ｂ）２Ｒ−シクロヘキシルメチル−４−モルホリン−４−イル−４−オキソ−酪酸の調製（化合物（２４）、スキーム７）
水（２７ｍｌ）における水酸化リチウム一水和物（０．５１ｇ、１２．１８ｍｍｏｌ）の溶液を、０℃でテトラヒドロフラン（５５ｍｌ）及びメタノール（２７ｍｌ）における２Ｒ−シクロヘキシルメチル−４−モルホリン−４−イル−４−オキソ−酪酸メチルエステル（１．２１ｇ、４．０６ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に添加した。この混合物を１時間周囲温度で攪拌した後、水（１００ｍｌ）で希釈した。水層をジエチルエーテルで抽出し（２×５０ｍｌ）、これを捨てた後、１Ｍ 塩酸でｐＨ＝１〜２に酸性化した。生成物をジクロロメタンで抽出した（３×５０ｍｌ）後、合わせたエーテル層を水（２×５０ｍｌ）、飽和塩化ナトリウム水溶液（２×５０ｍｌ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、さらに溶剤を真空中で除去したところ、残渣が残った。この残渣をメタノール：ジクロロメタン １：１００→３：１００の勾配で溶出してシリカゲルによるクロマトグラフィーによって精製した。適当な画分を合わせ、溶剤を真空中で除去して、２Ｒ−シクロヘキシルメチル−４−モルホリン−４−イル−４−オキソ−酪酸（２４）を白色固体として得た、収率０．８２ｇ、（７１％）。ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒｔ＝６．７６９分、２８４．２［Ｍ＋Ｈ］+、５８９．２［２Ｍ＋Ｎａ］+の単一のピーク）。
【０３２５】
【化８２】
化合物（２４）を、（Ｆｍｏｃの標準的な除去後）ローディングされた構成単位−リンカー構築物（１０）に標準的な条件下でカップリングした後、切断して、実施例３３を得た。
【０３２７】
実施例３４ （２Ｒ，３Ｒ）２−ビフェニル−３−イル−４−メチル−ペンタン酸（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−アミド
【０３２８】
【化８３】
ＨＰＬＣ Ｒｔ＝２１．７１分（＞８０％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ ３８０．２［Ｍ＋Ｈ］+、７８１．３［２Ｍ＋Ｈ］+。
【０３３０】
（ａ）ビフェニル−３−イル−酢酸メチルエステル（化合物（２６）、スキーム８）の調製
濃硫酸（５８８μＬ）を、メタノール（１００ｍＬ）における３−ブロモフェニル酢酸（１０ｇ、４６．５ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。この混合物を１．５時間還流した後、周囲温度に冷却し、減圧下で蒸発させて、残渣を得た。この残渣をジエチルエーテル（５００ｍＬ）に再度溶解し、水（２×１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、さらに減圧下で蒸発させて、３−ブロモフェニル酢酸メチルエステル（１０．６５ｇ）を得た。この３−ブロモフェニル酢酸メチルエステルを、トルエン（１１７ｍＬ）に溶かした後、フェニルボロン酸（６．８ｇ、５５．６９ｍｍｏｌ）、次に炭酸ナトリウムの水溶液（９３ｍＬ、２Ｍ）及びテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（１．６ｇ、１．４１ｍｍｏｌ）を添加した。この混合物を一晩攪拌した後、周囲温度に冷却し、飽和塩化アンモニウムの水溶液（１００ｍＬ）を添加した。この混合物を酢酸エチルで抽出し（２×２００ｍＬ）、乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、さらに減圧下で蒸発させて、残渣を得た。酢酸エチル：ヘプタン（３：４８）を溶出液として用いたシリカ（２００ｇ）による残渣のフラッシュクロマトグラフィーによって、ビフェニル−３−イル酢酸メチルエステルを得た、収率１０．５ｇ、（９９％）。ＴＬＣ（単一のスポット、Ｒf＝０．２４、ヘプタンにおける１０％酢酸エチル）、分析用ＨＰＬＣ Ｒt＝１９．５５分、ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒt＝９．３５分、２２７．１［Ｍ＋Ｈ］+の単一のメインＵＶピーク）。
【０３３１】
【化８４】
（ｂ）ビフェニル−３−イル−酢酸の調製
水（３９ｍＬ）、次に水酸化リチウム一水和物（４．２ｇ、１０１．５ｍｍｏｌ）を、メタノール（２６５ｍＬ）におけるビフェニル−３−イル酢酸メチルエステル（１１．４３ｇ、５０．５７ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。この混合物を周囲温度で２時間攪拌した後、有機溶液を減圧下で除去した。混合物を希釈塩酸（１Ｍ、８０ｍＬ）で酸性化し、クロロホルムで抽出し（２×１００ｍＬ）、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、さらに減圧下で蒸発させて、ビフェニル−３−イル酢酸を白色固体として得た、収率１０．６ｇ、（９９％）、分析用ＨＰＬＣ Ｒt＝１６．５６５分、ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒt＝７．９１分、２１３．１［Ｍ＋Ｈ］+の単一のメインＵＶピーク）。
【０３３３】
【化８５】
（ｃ）２ＲＳ−ビフェニル−３−イル−４−メチルペンテ−４−ン酸（２ＲＳ−ｂｉｐｈｅｎｙｌ−３−ｙｌ−４−ｍｅｔｈｙｌｐｅｎｔ−４−ｅｎｏｉｃ ａｃｉｄ）の調製
無水テトラヒドロフラン（８４ｍＬ）におけるビフェニル−３−イル酢酸（７．０ｇ、３３ｍｍｏｌ）の溶液を、−７８℃で無水テトラヒドロフラン（８４ｍＬ）におけるリチウムジイソプロピルアミド（３６．４ｍＬ、ヘキサンにおける２Ｍ溶液）の溶液に滴下した。この混合物を０℃まで加温し、４０分間攪拌した。次に、混合物を−７８℃まで冷却し、３−ブロモ−２−メチルプロペン（４．９７ｍＬ）をすばやく添加した。この混合物を、−７８℃で１時間攪拌した後、水（２８ｍＬ）を添加して、有機溶液を減圧下で除去した。さらに、混合物を塩酸（６Ｍ、１４ｍｌ）で酸性化し、酢酸エチルで抽出し（３×１００ｍｌ）、乾燥し（ＭｇＳＯ4）、減圧下で蒸発させて、残渣を得た。メタノール：ジクロロメタン（３：９７）を溶出液として用いたシリカ（４００ｇ）による残渣のフラッシュクロマトグラフィーによって、不純物を含む２−ビフェニル−３−イル−４−メチルペンテ−４−ン酸（８．３ｇ）が得られた。メタノール：ジクロロメタン（１．５：９８．５）を用いたシリカ（４００ｇ）による残渣のフラッシュクロマトグラフィーによって、純粋な２−ビフェニル−３−イル−４−メチルペンテ−４−ン酸が得られた、収率５．２７ｇ、（６０％）、ＴＬＣ（単一のＵＶスポット、Ｒf＝０．２８、ジクロロメタンにおける５％メタノール）、分析用ＨＰＬＣ Ｒt＝１９．９９分、ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒt＝９．５７分、２６７．１［Ｍ＋Ｈ］+の単一のメインＵＶピーク）。
【０３３５】
【化８６】
（ｄ）２ＲＳ−ビフェニル−３−イル−４−メチルペンタン酸の調製（化合物（２７）、スキーム８）
炭素上のパラジウム（Ｐａｌｌａｄｉｕｍ ｏｎ ｃａｒｂｏｎ）（１０％、３００ｍｇ）を、０℃でエタノール（４０ｍＬ）における２ＲＳ−ビフェニル−３−イル−４−メチルペンテ−４−ン酸（１ｇ、３．７６ｍｍｏｌ）の溶液に一部ずつ添加した。次に、水素雰囲気を導入し、混合物を周囲温度まで加温した。この混合物を１８時間攪拌した後、水素雰囲気を除去し、混合物をセライトで瀘過し、触媒をエタノール（４０ｍＬ）で洗浄した。合わせた有機濾液を減圧下で濃縮して、残渣を得、これをメタノール：ジクロロメタン（１：９９）を溶出液として用いたシリカ（１５０ｇ）でフラッシュクロマトグラフィーにかけることによって、２ＲＳ−ビフェニル−３−イル−４−メチルペンタン酸を得た、収率９８０ｍｇ、（９８％）、ＴＬＣ（単一のＵＶスポット、Ｒf＝０．４５、ジクロロメタンにおける５％メタノール）、分析用ＨＰＬＣ Ｒt＝２０．９２分、ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒt＝１０．１５分、２６９．１［Ｍ＋Ｈ］+、２９１．１［Ｍ＋Ｎａ］+の単一のメインＵＶピーク）。
【０３３７】
【化８７】
化合物（２７）をローディングされた構成単位−リンカー構築物（１０）に標準的な条件下でカップリングした後、切断して、実施例３４を得た。
【０３３９】
実施例３５ （２Ｓ，３Ｒ）４−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−ベンズアミド
【０３４０】
【化８８】
スキーム１の一般的な詳細に従って、必要な２環式の構成単位、（２Ｓ，３Ｒ）（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステル（７ｂ）を下記のように調製した。
【０３４２】
（１）（２Ｓ）２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−３−フェニルプロピオン酸１−メチル−２−オキソプロピルエステルの調製
【０３４３】
【化８９】
１−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（１０．９ｇ、５７ｍｍｏｌ）及び４−（ジメチルアミノ）ピリジン（７００ｍｇ、５．７ｍｍｏｌ）を、窒素雰囲気下で０℃で無水ジクロロメタン（２０ｍＬ）における（２Ｒ）−２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−３−フェニルプロピオン酸（１１ｇ、４１．８ｍｍｏｌ）の溶液に添加した。この混合物を５分間攪拌した後、３−ヒドロキシブタン−２−オン（６．６ｇ、７５ｍｍｏｌ、単量体形態を呈する）を０℃で添加した。この混合物を室温に加温した後、３日間攪拌した。さらに、この混合物を減圧下で蒸発させて、残渣を得た。酢酸エチル：ヘプタン（３：７）を溶出液として用いたシリカゲル（５００ｇ）での残渣のフラッシュクロマトグラフィーによって、（２Ｓ）２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−３−フェニルプロピオン酸１−メチル−２オキソプロピルエステルを得た（１０．９ｇ、７８％）、ＴＬＣ（単一のＵＶスポット、Ｒf＝０．４０、ヘプタンにおける５０％酢酸エチル）、およびＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒt＝９．１６分、３５８．２［Ｍ＋Ｎａ］+、６９３．３［２×Ｍ＋Ｎａ］+の単一のメインのＵＶピーク）。
【０３４５】
（２）（２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）５−ベンジル−２、３−ジメチル−６−オキソモルホリン−３−カルボニトリルの調製
【０３４６】
【化９０】
トルフルオロ酢酸（７７ｍＬ）を、窒素雰囲気下で０℃で無水ジクロロメタン（１４０ｍＬ）における（２Ｒ）２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−３−フェニルプロピオン酸１−メチル−２−オキソプロピルエステル（７．９９ｇ、２３．８ｍｏｌ）の溶液に添加した。この混合物を０℃で１時間攪拌した後、減圧下で蒸発させて、残渣を得た。次に、トルエン（４０ｍＬ）を残渣に加えて、減圧下で蒸発した。この方法を２回繰り返して、過剰なトルフルオロ酢酸を除去した。さらに、残渣を、窒素雰囲気下で無水２−プロパノール（３９０ｍＬ）に溶解した。次に、粉末状シアン化ナトリウム（２．６ｇ、４７．６ｍｏｌ）を１度に加えて、この混合物を周囲温度で２時間攪拌した。さらに。この混合物をすばやく無水硫酸ナトリウムで瀘過し、減圧下で濃縮した。酢酸エチル：ヘプタン（３：７）を溶出液として用いたシリカゲル（２００ｇ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって、未精製の（２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）５−ベンジル−２，３−ジメチル−６−オキソ−モルホリン−３−カルボニトリル（２．７ｇ、４６％）を得た。再結晶化（ジエチルエーテル−ヘプタン）によって、結晶材料を得た（１．０５ｇ）、ＴＬＣ（単一のＵＶスポット、Ｒf＝０．３８、ヘプタンにおける５０％酢酸エチル）、分析用ＨＰＬＣ Ｒt＝１５．９４分、ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒt＝７．５３分、２４５．１［Ｍ＋Ｈ］+、２６７．１［Ｍ＋Ｎａ］+の単一のメインのＵＶピーク）。
【０３４８】
【化９１】
（３）（２Ｒ，３Ｓ）２−アミノ−３−ヒドロキシ−２−メチル酪酸の調製
【０３５０】
【化９２】
無水ジエチルエーテル（１２０ｍＬ）における（２Ｓ，３Ｓ，５Ｓ）５−ベンジル−２，３−ジメチル−６−オキソモルホリン−３−カルボニトリル（１．３８ｇ、５．６３ｍｍｏｌ）の溶液に、窒素雰囲気下で０℃で次亜塩素酸ｔｅｒｔ−ブチル（１．２６ｍＬ、１１．２５ｍｍｏｌ）添加した。この溶液を室温で２時間攪拌した後、トリエチルアミン（１．２６ｍＬ）を０℃で添加した。次に、この混合物を室温まで加温し、２０時間攪拌した。得られた懸濁液を瀘過し、固体残渣をジエチルエーテル（２０ｍＬ）で洗浄した。さらに、水（１００ｍＬ）を濾液に加え、生成物をエーテルで抽出した（５０ｍＬ×３）。合わせたエーテル層を乾燥し（ＭｇＳＯ4）、減圧下で蒸発させて、残渣を得た（１．９ｇ）。次に、濃塩酸（７０ｍＬ）を０℃で残渣に添加した。この混合物を、０℃で１時間、次に室温で２４時間攪拌した。さらに、混合物を密閉加圧管に移して、８０℃で２日間加熱した。さらに、この混合物を冷却し、ジエチルエーテルで抽出した（５０ｍＬ×３）。次に、水層を減圧下で濃縮した後、Ｄｏｗｅｘ５０ＷＸ４（０．０１Ｍ 塩酸で活性化）で精製した。水（溶出液が〜ｐＨ＝７に近づくまで）、次に水酸化アンモニウム（１Ｍ）で溶出することによって、不純物を含む（２Ｒ，３Ｓ）２−アミノ−３−ヒドロキシ−２−メチル酪酸を得た（５５５ｍｇ）。Ｈ2Ｏ（微量）；ＥｔＯＨ−Ｅｔ2Ｏから再結晶化することによって、純粋なアミノ酸を得た（２５０ｍｇ）、ＴＬＣ（単一のＵＶスポット、Ｒf＝０．２７、４：１：１ nＢｕＯＨ：Ｈ2Ｏ：ＡｃＯＨ）、ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒt＝０．４５分、１３４［Ｍ＋Ｈ］+の単一のメインのＵＶピーク）。
【０３５２】
【化９３】
（４）（２Ｒ，３Ｓ）２−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−３−ヒドロキシ−２−メチル酪酸の調製
【０３５４】
【化９４】
（２Ｒ，３Ｓ）２−アミノ−３−ヒドロキシ−２−メチル酪酸（２８８ｍｇ、２．１７ｍｍｏｌ）を、０℃で水（１２ｍＬ）における炭酸ナトリウム（５７０ｍｇ、５．４１ｍｍｏｌ）の激しく攪拌した溶液に添加した。次に、１，４−ジオキサン（６ｍＬ）を添加して、濁った流動性のある混合物を得た。さらに、１，４−ジオキサン（６ｍＬ）における９−フルオレニルメチルクロロホルメート（５８５ｍｇ、２．２７ｍｍｏｌ）を４０分かけて添加した。次に、この混合物を４０分かけて室温まで加温した。さらに、水（１００ｍＬ）を加えて、反応混合物をクロロホルムで洗浄し（１００ｍＬ）、有機層を捨てた。水相を１Ｍ ＨＣｌで酸性化（〜ｐＨ２）して、濃稠な濁った混合物を得た。この酸性化された水性混合物をクロロホルムで抽出し（５×８０ｍＬ）、合わせた有機相を乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、減圧下で蒸発させて、（２Ｒ，３Ｓ）２−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−３−ヒドロキシ−２−メチル酪酸を得た（６１６ｍｇ、８０％）、ＴＬＣ（単一のＵＶスポット、Ｒf＝０．２４、クロロホルムにおける２０％メタノール）、分析用ＨＰＬＣ Ｒt＝１５．５４分およびＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒt＝７．７０分、３５６．２［Ｍ＋Ｈ］+、３７８．１［Ｍ＋Ｎａ］+の単一のメインのＵＶピーク）。
【０３５６】
（５）（２Ｒ、３Ｓ）２−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−３−ヒドロキシ−２−メチル酪酸アリルエステルの調製
【０３５７】
【化９５】
ジクロロメタン（２．６ｍＬ）における（６１６ｍｇ、１．７４ｍｍｏｌ）及びトリカプリルメチルアンモニウムクロライド（７０１ｍｇ、１．７４ｍｍｏｌ）の溶液を、水（２．６ｍＬ）における炭酸水素ナトリウム（１４６ｍｇ、１．７４ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に添加した後、臭化アリル（０．１５ｍＬ、１．７４ｍｍｏｌ）を一度に添加した。２相混合物を５日間激しく攪拌した後、水（４０ｍｌ）で希釈し、生成物をジクロロメタンで抽出した（３×８０ｍＬ）。合わせた有機層を乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、減圧下で蒸発させて、残渣を得た（１．１ｇ）。酢酸エチル：ヘプタン（３：７）を溶出液として用いたシリカゲル（２００ｇ）での残渣のフラッシュクロマトグラフィーによって、（２Ｒ，３Ｓ）２−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−３−ヒドロキシ−２−メチル酪酸アリルエステルを得た（３６０ｍｇ、５２％）、ＴＬＣ（単一のＵＶスポット、Ｒf＝０．４８、ヘプタンにおける５０％酢酸エチル）、分析用ＨＰＬＣ Ｒt＝１８．４２分およびＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒt＝９．３０分、３９６．２［Ｍ＋Ｈ］+、４１８．２［Ｍ＋Ｎａ］+の単一のメインのＵＶピーク）。
【０３５９】
【化９６】
（６）（２Ｒ，３Ｓ）３−ｔｅｒｔ−ブトキシ−２−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−２−メチル酪酸アリルエステルの調製
【０３６１】
【化９７】
ジクロロメタン（１０ｍＬ）における（２Ｒ，３Ｓ）２−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−３−ヒドロキシ−２−メチル酪酸アリルエステル（３１２ｍｇ、０．６９ｍｍｏｌ）の攪拌溶液を、−７８℃に密閉した加圧容器中で冷却した後、イソブチレンガス（〜８ｍＬ）を溶液中に凝縮させた。濃硫酸（２７μｌ）を添加した後、加圧容器を密閉した。この混合物を周囲温度で３日間攪拌した後、−７８℃に冷却した。Ｎ−メチルモルホリン（５６μｌ）を加えた後、開放した加圧容器を周囲温度まで加温した。次に、この混合物を、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）で希釈した後、生成物をジクロロメタンで抽出した（３×１００ｍＬ）。合わせたジクロロメタン層を、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、減圧下で蒸発させて、残渣を得た。酢酸エチル：ヘプタン（３：７）を溶出液として用いたシリカゲル（３５ｇ）での残渣のフラッシュクロマトグラフィーによって、（２Ｒ，３Ｓ）３−ｔｅｒｔ−ブトキシ−２−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−２−メチル酪酸アリルエステルを得た（３１０ｍｇ、９９％）、ＴＬＣ（単一のＵＶスポット、Ｒf＝０．７０、ヘプタンにおける５０％酢酸エチル）、分析用ＨＰＬＣ Ｒt＝２３．５９分およびＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒt＝１２．０９分、４７４．１［Ｍ＋Ｎａ］+の単一のメインのＵＶピーク）。
【０３６３】
【化９８】
（７）（２Ｒ，３Ｓ）３−ｔｅｒｔ−ブトキシ−２−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−２−メチル酪酸の調製
【０３６５】
【化９９】
テトラキストリフェニルホスフィンパラジウム（０）（１７．２５ｍｇ、０．０１５ｍｍｏｌ）、ジクロロメタン（１０ｍＬ）、次にフェニルトリヒドロシラン（０．１８ｍＬ、１．３３ｍｍｏｌ）を、窒素下で（２Ｒ，３Ｓ）３−ｔｅｒｔ−ブトキシ−２−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−２−メチル酪酸アリルエステル（３００ｍｇ、０．６６５ｍｍｏｌ）に連続して添加した。この混合物を、９０分間攪拌した後、シリカゲル（２ｇ）に吸収させた。酢酸エチル：ヘプタン（２：３）、次に（１：１）を溶出液として用いたシリカゲル（３５ｇ）での吸収させた残渣のフラッシュクロマトグラフィーによって、（２Ｒ，３Ｓ）３−ｔｅｒｔ−ブトキシ−２−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−２−メチル酪酸を得た（１４０ｍｇ、５１％）、ＴＬＣ（単一のＵＶスポット、Ｒf＝０．３３、ヘプタンにおける５０％酢酸エチル）、分析用ＨＰＬＣ Ｒt＝２０．２０分およびＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒt＝１０．２５分、４３４．１［Ｍ＋Ｎａ］+の単一のメインのＵＶピーク）。
【０３６７】
【化１００】
（８）（１Ｒ，２Ｓ）（２−ｔｅｒｔ−ブトキシ−１−フルオロカルボニル−１−メチルプロピル）−カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステルの調製
【０３６９】
【化１０１】
ピリジン（４７μＬ、０．５５ｍｍｏｌ）、次にシアヌル酸フッ化物（６３μＬ、０．７１ｍｍｏｌ）を、窒素下でジクロロメタン（８ｍＬ）における（２Ｒ，３Ｓ）３−ｔｅｒｔ−ブトキシ−２−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−２−メチル酪酸（１３０ｍｇ、０．３１６ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に、０℃で連続して添加した。懸濁液を、周囲温度までゆっくり加温し、２０時間攪拌した。砕いた氷（〜１０ｍｌ）及び氷冷した水（１０ｍｌ）を添加した後、生成物をジクロロメタン（４０ｍｌ）中で抽出した。ジクロロメタン層を乾燥し（ＭｇＳＯ4）、減圧下で蒸発させて、（１Ｒ，２Ｓ）（２−ｔｅｒｔ−ブトキシ−１−フルオロカルボニルｌ−１−メチルプロピル）−カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステルを得た（１３８ｍｇ）、ＴＬＣ（単一のＵＶスポット、Ｒf＝０．７５、ヘプタンにおける５０％酢酸エチル）、ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒt＝１１．６６分、４３６．１［Ｍ＋Ｎａ］+の単一のメインのＵＶピーク）。
【０３７１】
（９）（１Ｒ，１’Ｓ）［１−（１−ｔｅｒｔ−ブトキシエチル）−３−ジアゾ−１−メチル−２−オキソプロピル］−カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステルの調製
【０３７２】
【化１０２】
エーテル性ジアゾメタン［６０℃で水（７．５ｍＬ）／エタノール（１５ｍＬ）における水酸化ナトリウム（５．２５ｇ）にジエチルエーテル（７５ｍＬ）におけるジアザルド（ｄｉａｚａｌｄ）（〜１５ｍｍｏｌ）を添加することにより生成し、水酸化カリウムペレットで乾燥した］を、０℃でジクロロメタン（３ｍＬ）における（１Ｒ，２Ｓ）（２−ｔｅｒｔ−ブトキシ−１−フルオロカルボニル−１−メチルプロピル）−カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステル（１３８ｍｇ、〜０．３１６ｍｍｏｌ）の攪拌溶液に添加した。次に、この混合物を周囲温度に加温し、２０時間、攪拌した。数滴の酢酸を添加して、過剰のジアゾメタンを消失させた後、溶液を、ｔ−ブチルメチルエーテル（１００ｍｌ）を添加する前に、５分間攪拌した。エーテル層を、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄した（２×５０ｍＬ）後、乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、減圧下で蒸発させて、残渣を得た。酢酸エチル：ヘプタン（０．１：１９）を溶出液として用いたシリカゲル（３５ｇ）での残渣のフラッシュクロマトグラフィーによって、（４Ｒ，４’Ｓ）４−（１−ｔｅｒｔ−ブトキシエチル）−２−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）−４−メチル−４Ｈ−オキサゾール−５−オンを得た（５５ｍｇ、４５％）、ＴＬＣ（単一のＵＶスポット、Ｒf＝０．７７、ヘプタンにおける５０％酢酸エチル）、分析用ＨＰＬＣ Ｒt＝２１．１５分およびＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒt＝１０．４２分、４３４．２［Ｍ＋Ｈ2Ｏ＋Ｎａ］+及びＲt＝１１．６５分、４３４．２［Ｍ＋Ｈ2Ｏ＋Ｎａ］+での単一のメインのＵＶピーク）。
【０３７４】
【化１０３】
さらに、溶出によって、上記オキサゾロン及び（１Ｒ，１’Ｓ）［１−（１−ｔｅｒｔ−ブトキシエチル）−３−ジアゾ−１−メチル−２−オキソプロピル］−カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステル［ＴＬＣ（ＵＶスポット、Ｒf＝０．７５、ヘプタンにおける５０％酢酸エチル］及び３−ｔｅｒｔ−ブトキシ−２−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−２−メチル酪酸メチルエステル（３５ｍｇ）を含む混合画分を得た。
【０３７６】
（１０）（２Ｓ，３Ｒ）（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステルの調製
【０３７７】
【化１０４】
水（０．２５ｍＬ）及び酢酸（１ｍＬ）における塩化リチウム（２１．７ｍｇ、０．５１ｍｍｏｌ）の溶液を、（１Ｒ，１’Ｓ）［１−（１−ｔｅｒｔ−ブトキシエチル）−３−ジアゾ−１−メチル−２−オキソプロピル］−カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステルを含む上記混合画分（３５ｍｇ）に添加した。ガスを展開し、１時間後、クロロホルム（４０ｍＬ）を添加して、有機相を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２０ｍＬ）で洗浄した。クロロホルム層を乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、減圧下で蒸発させて、残渣を得た（４０ｍｇ）。酢酸エチル：ヘプタン（１：４）、次に（１：１）を溶出液として用いたシリカ（２０ｇ）での残渣のフラッシュクロマトグラフィーによって、（２Ｓ，３Ｒ）（２，３−ジメチル−４−オキソテトラヒドロフラン−３−イル）カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステルを得た（６ｍｇ）、ＴＬＣ（単一のＵＶスポット、Ｒf＝０．５７、酢酸エチル：ヘプタン １：１）；分析用ＨＰＬＣ Ｒt＝１８．２２分およびＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｒt＝８．９２分、３５２［Ｍ＋Ｈ］+、３７４［Ｍ＋Ｎａ］+の単一のメインのＵＶピーク）。
【０３７９】
【化１０５】
スキーム２の一般的な詳細に従って、必要な２環式の構成単位、（２Ｓ，３Ｒ）、（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステル（７ｂ）を、下記のようにして、構成単位−リンカー構築物（９）に変換した。
【０３８１】
（２Ｓ，３Ｒ）（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）−カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステル（７ｂ）（８ｍｇ、０．０２１４ｍｍｏｌ、１当量）を、酢酸ナトリウム３水和物（２２ｍｇ、０．１６０５ｍｍｏｌ、７．５当量）を含むエタノール（１．８６ｍＬ）及び水（０．２７ｍＬ）の混合液に溶解した。４−［［（ヒドラジノカルボニル）アミノ］メチル］シクロヘキサンカルボン酸トリフルオロアセテート（３５ｍｇ、０．１６０５ｍｍｏｌ、７．５当量、Ｍｕｒｐｈｙ， Ａ． Ｍ． ｅｔ ａｌ， Ｊ． Ａｍ． Ｃｈｅｍ． Ｓｏｃ．， １１４， ３１５６−３１５７， １９９２）を添加し、混合物を２日間還流した。クロロホルム（５０ｍＬ）を添加し、有機溶液を希釈塩酸水溶液（０．１Ｍ、２×３０ｍＬ）、ブライン（２５ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、減圧下で蒸発させて、リンカー構築物（９）を白色の固体として得た（１０ｍｇ）。分析用ＨＰＬＣから、Ｚ−異性体についてＲt＝１７．５３分に１つのメインのピーク及びＥ−異性体についてＲt＝１７．８８分にもう１つが示された。ＨＰＬＣ−ＭＳ（Ｚ−異性体についてＲt＝８．３７分、５４９［Ｍ＋Ｈ］+及びＥ−異性体についてＲt＝８．９８分、５４９［Ｍ＋Ｈ］+のメインのＵＶピーク）。未構築物（９）を、構築物のローディングに直接使用した。
【０３８２】
スキーム２の一般的な詳細に従って、必要な構成単位−リンカー構築物（９）を、下記のようにして、ローディングされた構成単位−リンカー構築物（１０）を提供する固相に結合させた。
【０３８３】
構成単位−リンカー構築物（９）（１０．６ｍｇ、０．０１９３ｍｍｏｌｅ）、２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ、７．３ｍｇ、０．０１９３ｍｍｏｌｅ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物及び（ＨＯＢＴ、２．９６ｍｇ、０．０１９３ｍｍｏｌｅ）を、ジメチルホルムアミド（０．５ｍＬ）に溶解し、Ｎ−メチルモルホリン（ＮＭＭ、４．２μＬ、０．０３８６ｍｍｏｌｅ）を添加した。５分間予め活性化した後、遊離アミンギア（６×１．２μｍｏｌｅ）、次にジメチルホルムアミド（１．０ｍＬ）を添加し、一晩放置した。次に、消費されたカップリング溶液を遊離アミンクラウン（１×１０μｍｏｌｅ）に添加し、一晩放置した。標準的な洗浄及び分析から、約７０％でローディングが示された。
【０３８４】
スキーム２の一般的な詳細に従って、必要なローディングされた構成単位−リンカー構築物（１０）を、下記のようにして、固相上で作製した。
【０３８５】
ローディングされた構築物（１０）を、標準的なＦｍｏｃ脱保護及びＦｍｏｃ−Ｔｙｒ（ＯＢｕｔ）−ＯＨ、次に４−ｔｅｒｔ−ブチル安息香酸との順次カップリングによって、実施例３５の（２Ｓ，３Ｒ）４−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）２−（４−ヒドロキシフェニル）−エチル］−ベンズアミドにした。この未精製例示物を切断して、分析した（一般的な技術を参照）。ＨＰＬＣ Ｒｔ＝１７．３１分（＞９０％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ ４５３．２［Ｍ＋Ｈ］+。
【０３８６】
下記実施例（３６〜３７）を、実施例３５で詳述したのと同様にして調製し、必要な試薬を用いてカップリングして、全長分子を得た。
【０３８７】
実施例３６ （２Ｓ，３Ｒ）４−ｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ−［１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−３−メチル−ブチル］−ベンズアミド
【０３８８】
【化１０６】
ＨＰＬＣ Ｒｔ＝１９．４分（＞９０％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ ４０３．３［Ｍ＋Ｈ］+、８２７．５［２Ｍ＋Ｎａ］+。
【０３９０】
実施例３６ （２Ｓ，３Ｒ）フラン−３−カルボン酸［２−シクロヘキシル−１−（２，３−ジメチル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イルカルバモイル）−エチル］−アミド
【０３９１】
【化１０７】
ＨＰＬＣ Ｒｔ＝１６．３分（＞９０％）、ＨＰＬＣ−ＭＳ ３７７．２［Ｍ＋Ｈ］+、７７５．４［２Ｍ＋Ｎａ］+。
【０３９３】
実施例Ａ システインプロテアーゼ活性に関するアッセイ
本発明の化合物を、化合物の阻害の特徴を明瞭にするように設計された数多くの文献に基づいた生化学的なアッセイの一で試験してもよい。これらのタイプのアッセイのデータから、化合物の潜在性及び反応の率を測定、定量できる。この情報は、単独であるいは他の情報と組み合わせて、所定の薬理学な効果を生じるのに必要な化合物の量が測定できるであろう。
【０３９４】
一般的な材料および方法
特記しない限り、すべての一般的な化学物質及び生化学物質は、Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙ， Ｐｏｏｌｅ， Ｄｏｒｓｅｔ， Ｕ．Ｋ．からまたはＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ＵＫ， Ｌｏｕｇｈｂｏｒｏｕｇｈ， Ｌｅｉｃｅｓｔｅｒｓｈｉｒｅ， Ｕ．Ｋのいずれかから購入した。吸光度アッセイは、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ ＰＬＵＳ３８４ ｐｌａｔｅ ｒｅａｄｅｒ （Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ， Ｃｒａｗｌｅｙ， Ｕ．Ｋ．）を用いて平底の９６ウェルプレート（Ｓｐｅｃｔｒａ； Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ−Ｏｎｅ Ｌｔｄ．， Ｓｔｏｎｅｈｏｕｓｅ， Ｇｌｏｕｃｅｓｔｅｒｓｈｉｒｅ， Ｕ．Ｋ．）で行なった。蛍光高スループットアッセイ（Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｈｉｇｈ ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ａｓｓａｙ）は、３８４ウェルのマイクロタイタープレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｃｏｓｔａｒ ３７０５ ｐｌａｔｅｓ， Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）または９６ウェルの「Ｕ」底マイクロフオーＷ１マイクロタイタープレート（‘Ｕ’ ｂｏｔｔｏｍｅｄ Ｍｉｃｒｏｆｌｕｏｒ Ｗ１ ｍｉｃｒｏｔｉｔｒｅ ｐｌａｔｅ）（Ｔｈｅｒｍｏ Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ， Ａｓｈｆｏｒｄ， Ｍｉｄｄｌｅｓｅｘ， Ｕ．Ｋ．）で行なった。蛍光アッセイは、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ Ｇｅｍｉｎｉ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｐｌａｔｅ ｒｅａｄｅｒ （Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）を用いてモニターした。７−アミノ−４−メチルクマリン（ＡＭＣ）または７−アミノ−４−トリフルオロメチルクマリン（ＡＦＣ）蛍光体のいずれかを用いる基質では、アッセイは、３６５ｎｍの励起波長及び４５０ｎｍの発光波長（ｅｍｉｓｓｉｏｎ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ）でモニターし、蛍光プレートリーダーをＡＭＣで較正した。３−アミノ−ベンゾイル（Ａｂｚ）蛍光体を用いる基質では、アッセイは、３１０ｎｍの励起波長及び４４５ｎｍの発光波長でモニターし；蛍光プレートリーダーを３−アミノ−ベンズアミド（Ｆｌｕｋａ）で較正した。特記しない限り、すべてのペプチダーゼ基質は、Ｂａｃｈｅｍ ＵＫ， Ｓｔ． Ｈｅｌｅｎｓ， Ｍｅｒｓｅｙｓｉｄｅ， ＵＫから購入した。蛍光共鳴エネルギー転移方法（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｒｅｓｏｎａｎｃｅ ｅｎｅｒｇｙ ｔｒａｎｓｆｅｒ ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ）を用いた基質（即ち、ＦＲＥＴ−系基質（ＦＲＥＴ−ｂａｓｅｄ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ））は、公表された方法（Ａｔｈｅｒｔｏｎ ＆ Ｓｈｅｐｐａｒｄ， Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ， ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ， Ｏｘｆｏｒｄ， Ｕ．Ｋ．， １９８９）を用いてＩｎｃｅｎｔａ Ｌｉｍｉｔｅｄで合成され、蛍光ドナーとしてＡｂｚ（２−アミノベンゾイル）を及び蛍光消光剤として３−ニトロ−チロシン［Ｔｙｒ（ＮＯ2）］を用いた（Ｍｅｌｄａｌ， Ｍ． ａｎｄ Ｂｒｅｄｄａｍ， Ｋ．， Ａｎａｌ． Ｂｉｏｃｈｅｍ．， １９５， １４１−１４７， １９９１）。ヒドロキシエチルピペラジンエタンスルホネート（ＨＥＰＥＳ）、トリス−ヒドロキシメチルアミノメタン（トリス）ベース、ビス−トリス−プロパン及びすべての生物界面活性剤（例えば、ＣＨＡＰＳ、チッタージェント（ｚｗｉｔｔｅｒｇｅｎｔ）など）は、ＣＮ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ＵＫ， Ｂｅｅｓｔｏｎ， Ｎｏｔｔｉｎｇｈａｍｓｈｉｒｅ， Ｕ．Ｋから購入した。グリセロールは、Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ， Ｌｉｔｔｌｅ Ｃｈａｌｆｏｎｔ， Ｂｕｃｋｉｎｇｈａｍｓｈｉｒｅ， Ｕ．Ｋから購入した。基質または阻害剤のストック溶液は、１００％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）（Ｒａｔｈｂｕｒｎｓ， Ｇｌａｓｇｏｗ， Ｕ．Ｋ．）中で１０ｍＭ以下に作製され、適当に必要であるように希釈した。すべての場合において、アッセイ中のＤＭＳＯ濃度は１％（ｖｏｌ．／ｖｏｌ．）未満に維持した。
【０３９５】
アッセイプロトコルは、先の文献（表１；Ｂａｒｒｅｔｔ， Ａ．Ｊ．， Ｒａｗｌｉｎｇｓ， Ｎ．Ｄ． 及び Ｗｏｅｓｓｎｅｒ， Ｊ．Ｆ．， １９９８， Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｏｌｙｔｉｃ Ｅｎｚｙｍｅｓ， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ， Ｌｏｎｄｏｎ及びこれの引用文献）に基づき、局所アッセイプロトコルに適するのに必要であるように修飾した。酵素を反応を開始するのに必要であるように添加し、生成物への基質の変換時の蛍光の変化によって判断される際の、活性を経時的にモニターした。すべてのアッセイは２５±１℃で行なった。
【０３９６】
【表１】
Ｉ：１ｍＭ ＥＤＴＡ、５ｍＭ ２−メルカプトエタノール及び１ｍＭ ＣａＣｌ2を含む１０ｍＭ ＢＴＰ、ｐＨ６．５
ＩＩ：１ｍＭ ＥＤＴＡ、１４２ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＤＴＴ、１ｍＭ ＣａＣｌ2、０．０３５ｍＭ チッタージェント３−１６（Ｚｗｉｔｔｅｒｇｅｎｔ ３−１６）を含む１０ｍＭ ＢＴＰ、ｐＨ６．５
ＩＩＩ：５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．２、１０％グリセロール、０．１％ ＣＨＡＰＳ、１４２ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、５ｍＭ ＤＴＴ
ＩＶ：１ｍＭ ＥＤＴＡ及び１０ｍＭ Ｌ−システインを含む１００ｍＭ リン酸ナトリウム、ｐＨ６．７５
Ｖ：１ｍＭ ＥＤＴＡ、１０ｍＭ Ｌ−システイン及び０．２５％（ｗ／ｖ） ＣＨＡＰＳを含む５０ｍＭ トリスアセテート、ｐＨ８．４
ＶＩ：５ｍＭ ＣａＣｌ2を含む１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ８．０
ＶＩＩ：２ｍＭ ２−メルカプトエタノール及び１００μＭ ＣａＣｌ2を含む１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５
ＶＩＩＩ：２ｍＭ ２−メルカプトエタノール及び２００μＭ ＣａＣｌ2を含む１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５
ＩＸ：１０ｍＭ Ｌ−システイン及び１ｍＭ ＥＤＴＡを含む１００ｍＭ 酢酸ナトリウム；ｐＨ５．５
Ｘ：１０ｍＭ Ｌ−システイン；０．０５％（ｗ／ｖ）ブリッジ３５及び１ｍＭ ＥＤＴＡを含む１００ｍＭ 酢酸ナトリウム；ｐＨ５．５
ＸＩ：１０ｍＭ Ｌ−システイン；１４２ｍＭ 塩化ナトリウム及び１ｍＭ ＥＤＴＡを含む１００ｍＭ 酢酸ナトリウム；ｐＨ５．５
【０３９８】
【化１０８】
トリパノソーマ クルージ クルジパインペプチダーゼ活性アッセイ
トリパノソーマ クルージＤｍ２８（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ ｃｒｕｚｉ Ｄｍ２８）エピマスティゴート由来の、野生型のクルジパインは、Ｄｒ． Ｊｕｌｉｏ Ｓｃｈａｒｆｓｔｅｉｎ （Ｉｎｓｔｉｔｕｔｏ ｄｅ Ｂｉｏｆiｓｉｃａ Ｃａｒｌｏｓ Ｃｈａｇａｓ Ｆｉｌｈｏ， Ｕｎｉｖｅｒｓｉｄａｄｅ Ｆｅｄｅｒａｌ ｄｏ Ｒｉｏ ｄｅ Ｊａｎｅｉｒｏ， Ｒｉｏ ｄｅ Ｊａｎｅｉｒｏ， Ｂｒａｚｉｌ）から得た。活性アッセイは、２．５ｎＭ 酵素を用いて１ｍＭ ＥＤＴＡ及び１０ｍＭ Ｌ−システインを含む１００ｍＭ リン酸ナトリウム、ｐＨ６．７５中で行なわれた。Ａｃ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−ＡＭＣ（ＫM app＝約１２μＭ）及びＤ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−ＡＭＣ（ＫM app＝約４μＭ）を、基質として用いた。定常的に、Ａｃ−ＦＲ−ＡＭＣを、ＫM appと等しい濃度で使用し、Ｄ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−ＡＭＣを、２５μＭの濃度で使用した。基質の生成物への変換率は、経時的に連続してモニターされた蛍光の増加の傾斜から求めた。
【０４００】
メキシコリーシュマニア（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ ｍｅｘｉｃａｎａ）システインプロテアーゼＢ（ＣＰＢ）ペプチダーゼ活性アッセイ
Ｃ末端拡張を持たない野生型の組み換えＣＰＢ（即ち、ＣＰＢ２．８．ＣＴＥ；Ｓａｎｄｅｒｓｏｎ， Ｓ．Ｊ．， ｅｔ． ａｌ．， Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｊ．， ３４７， ３８３−３８８， ２０００）を、Ｄｒ． Ｊｅｒｅｍｙ Ｍｏｔｔｒａｍ （Ｗｅｌｌｃｏｍｅ Ｃｅｎｔｒｅ ｆｏｒ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐａｒａｓｉｔｏｌｏｇｙ， Ｔｈｅ Ａｎｄｅｒｓｏｎ Ｃｏｌｌｅｇｅ， Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｇｌａｓｇｏｗ， Ｇｌａｓｇｏｗ， Ｕ．Ｋ．）から得た。活性アッセイは、０．２５ｎＭの酵素を用いて１ｍＭ ＥＤＴＡ；２００ｍＭ ＮａＣｌ及び１０ｍＭ ＤＴＴ（Ａｌｖｅｓ， Ｌ．Ｃ．， ｅｔ． ａｌ．， Ｍｏｌ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｐａｒａｓｉｔｏｌ， １１６， １−９， ２００１）を含む１００ｍＭ 酢酸ナトリウム；ｐＨ５．５中で行なわれた。Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−ＡＭＣ（ＫM app＝約３８μＭ）をＫM appと等しい濃度で基質として使用した。基質の生成物への変換率は、経時的に連続してモニターされた蛍光の増加の傾斜から求めた。
【０４０１】
カテプシンペプチダーゼ活性アッセイ
ウシカテプシンＳ、ヒトカテプシンＬ、ヒトカテプシンＨ及びヒトカテプシンＢは、ＣＮ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから得た。組み換えヒトカテプシンＳ、ヒトカテプシンＫ及びヒトカテプシンＸは、Ｄｒ． Ｂｏｒｉｓ Ｔｕｒｋ （Ｊｏｓｅｆ Ｓｔｅｆａｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ， Ｌｊｕｂｌｊａｎａ， Ｓｌｏｖｅｎｉａ）から得た。特記しない限り、すべてのペプチダーゼ活性アッセイは、１ｍＭ ＥＤＴＡ、５ｍＭ ２−メルカプトエタノール及び１ｍＭＣａＣｌ2を含む１０ｍＭ ビス−トリス−プロパン（ＢＴＰ）、ｐＨ６．５中で行なった。ヒトカテプシンＨ活性アッセイは、１０ｍＭ ＢＴＰ、ｐＨ６．５、１４２ｍＭ ＮａＣｌ2、１ｍＭ ＣａＣｌ2、１ｍＭ ＥＤＴＡ、１ｍＭ ＤＴＴ、０．０３５ｍＭ チッタージェント３−１６中で行なった。ヒトカテプシンＫアッセイは、２０ｍＭ Ｌ−システイン及び１ｍＭ ＥＤＴＡを含む１００ｍＭ 酢酸ナトリウム；ｐＨ５．５中で行なった（Ｂｏｓｓａｒｄ， Ｍ．Ｊ．， ｅｔ． ａｌ．， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２１， １２５１７−１２５２４， １９９６）。ヒトカテプシンＸアッセイは、２０ｍＭ Ｌ−システイン；０．０５％（ｗ／ｖ） ブリッジ３５及び１ｍＭ ＥＤＴＡを含む１００ｍＭ 酢酸ナトリウム；ｐＨ５．５中で行なった（Ｓａｎｔａｍａｒｉａ， Ｉ．， ｅｔ． ａｌ．， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２７３， １６８１６−１６８２３， １９９８； Ｋｌｅｍｅｎｃｉｃ， Ｊ， ｅｔ ａｌ．， Ｅｕｒ． Ｊ． Ｂｉｏｃｈｅｍ．， ２６７， ５４０４−５４１２， ２０００）。アッセイに使用される最終的な酵素濃度は、０．５ｎＭ ウシカテプシンＳ、１ｎＭ カテプシンＬ、０．１ｎＭ カテプシンＢ、０．２５ｎＭ カテプシンＫ；１ｎＭ カテプシンＸ及び１０ｎＭ カテプシンＨであった。阻害アッセイでは、カテプシンＳ、カテプシンＬ、カテプシンＢ、カテプシンＫ及びカテプシンＨに使用される基質は、それぞれ、ｂｏｃ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−ＡＭＣ（ＫM app＝約３０μＭ）、Ａｃ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−ＡＭＣ（ＫM app＝約２０μＭ）、Ｚ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−ＡＭＣ（ＫM app＝約４０μＭ）、Ｚ−Ｌｅｕ−Ａｒｇ−ＡＭＣ（ＫM app＝約２μＭ）；Ｂｚ−Ｐｈｅ−Ｖａｌ−Ａｒｇ−ＡＭＣ（ＫM app＝約１５０μＭ）であった。それぞれの場合において、各アッセイに使用される基質濃度はＫM appに等しくした。基質の生成物への変換率は、経時的に連続してモニターされた蛍光の増加の傾斜から求めた。
【０４０２】
トリプシンペプチダーゼ活性アッセイ
ヒト膵臓トリプシン（ヨウ素化グレード；ＣＮ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）活性アッセイは、０．１ｎＭ トリプシンを用いて５ｍＭ ＣａＣｌ2を含む１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ８．０中で行なった。阻害アッセイでは、Ｚ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−ＡＭＣ（ＫM app＝約８４μＭ）を、ＫM appと等しい濃度で基質として使用した。基質の生成物への変換率は、経時的に連続してモニターされた蛍光の増加の傾斜から求めた。
【０４０３】
クロストリパインペプチダーゼ活性アッセイ
クロストリパイン（Ｓｉｇｍａ）活性アッセイは、０．３ｎＭ酵素を用いて１ｍＭ ＥＤＴＡ、５ｍＭ ２−メルカプトエタノール及び１ｍＭ ＣａＣｌ2を含む１０ｍＭ ＢＴＰ、ｐＨ６．５中で行なった。阻害アッセイでは、Ｚ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−ＡＭＣ（ＫM app＝約１００μＭ）を、ＫM appと等しい濃度で基質として使用した。基質の生成物への変換率は、経時的に連続してモニターされた蛍光の増加の傾斜から求めた。
【０４０４】
カルパインペプチダーゼ活性アッセイ
カルパイン（ヒト赤血球μ−カルパイン及びブタの腎臓ｍ−カルパイン；ＣＮ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）活性アッセイを、２５ｎＭのいずれかの酵素（Ｓａｓａｋｉ， ｅｔ． ａｌ．， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２５９， １２４８９−１２４９４， １９８４）を用いて２ｍＭ ２−メルカプトエタノール及びＣａＣｌ2を含む１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５中で行なった。μ−カルパイン阻害アッセイでは、緩衝液に１００μＭ ＣａＣｌ2を含ませ、Ａｂｚ−Ａｌａ−Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｐｒｏ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ（ＮＯ2）−Ａｓｐ−ＮＨ2（ＫM app＝約２０μＭ；Ｉｎｃｅｎｔａ Ｌｉｍｉｔｅｄ）を基質として使用した。ｍ−カルパイン阻害アッセイでは、アッセイ緩衝液に２００μＭ ＣａＣｌ2を含ませ、Ａｂｚ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｃｙｓ（Ｂｚｌ）−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ｔｙｒ（ＮＯ2）−Ａｓｐ−ＮＨ2（ＫM app＝約２２μＭ；Ｉｎｃｅｎｔａ Ｌｉｍｉｔｅｄ）を基質として使用した。双方の場合において、アッセイに使用される基質濃度はＫM appに等しくした。基質の生成物への変換率は、経時的に連続してモニターされた蛍光の増加の傾斜から求めた。
【０４０５】
細胞外Ｓ． ａｕｒｅｕｓ Ｖ８システインペプチダーゼ（スタフィロパイン）ペプチダーゼ活性アッセイ
Ｓ． ａｕｒｅｕｓ Ｖ８は、Ｐｒｏｆ． Ｓ． Ａｒｖｉｄｓｏｎ， Ｋａｒｏｌｉｎｓｋａ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ， Ｓｔｏｃｋｈｏｌｍ， Ｓｗｅｄｅｎから得た。細胞外Ｓ． ａｕｒｅｕｓ Ｖ８システインペプチダーゼ（スタフィロパイン）活性アッセイを、部分精製されたＳ． ａｕｒｅｕｓ Ｖ８培養物の上清（Ｄｒ． Ｐｅｔｅｒ Ｌａｍｂｅｒｔ， Ａｓｔｏｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ， Ｕ．Ｋ．から得た）を用いて行なった。活性アッセイを、２倍希釈した部分精製抽出物を用いて１ｍＭ ＥＤＴＡ、５ｍＭ ２−メルカプトエタノール及び１ｍＭＣａＣｌ2を含む１０ｍＭ ＢＴＰ、ｐＨ６．５中で行なった。阻害アッセイでは、Ａｂｚ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｔｙｒ（ＮＯ2）−Ｇｌｕ−ＮＨ2（ＫM app＝約１１７μＭ；Ｉｎｃｅｎｔａ Ｌｉｍｉｔｅｄ）を、ＫM appと等しい濃度で基質として使用した。基質の生成物への変換率は、経時的に連続してモニターされた蛍光の増加の傾斜から求めた。
【０４０６】
***リーダーペプチダーゼ（ＦＭＤＶ−ＬＰ）活性アッセイ
組み換え野生型ＦＭＤＶ−ＬＰは、Ｄｒ． Ｔｉｍ Ｓｋｅｒｎ （Ｉｎｓｔｉｔｕｔ ｆuｒ Ｍｅｄｉｚｉｎｉｓｃｈｅ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｅ， Ａｂｔｅｉｌｕｎｇ ｆuｒ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｅ， Ｕｎｉｖｅｒｓｔaｔ Ｗｉｅｎ， Ｗｉｅｎ， Ａｕｓｔｒｉａ）から得た。活性アッセイを、１０ｎＭ酵素を用いて１ｍＭ ＥＤＴＡ、１０ｍＭ Ｌ−システイン及び０．２５％（ｗ／ｖ） ＣＨＡＰＳを含む５０ｍＭ トリス・アセテート中で行なった。阻害アッセイでは、Ａｂｚ−Ａｒｇ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｔｙｒ（ＮＯ2）−Ｇｌｕ−ＮＨ2（ＫM app＝約５１μＭ、Ｉｎｃｅｎｔａ Ｌｉｍｉｔｅｄ）を、ＫM appと等しい濃度で基質として使用した。基質の生成物への変換率は、経時的に連続してモニターされた蛍光の増加の傾斜から求めた。
【０４０７】
カスパーゼペプチダーゼ活性アッセイ
カスパーゼ（Ｃａｓｐａｓｅ）１−１０は、ＣＮ ＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓまたはＢｉｏＶｉｓｉｏｎ Ｉｎｃ． （Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ， ＣＡ， ＵＳＡ）から得、すべてのアッセイを、アッセイ当たり０．１〜１Ｕを用いて５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ；ｐＨ７．２、１０％（ｖ／ｖ） グリセロール、０．１％（ｗ／ｖ） ＣＨＡＰＳ、１４２ｍＭ ＮａＣｌ、１ｍＭ ＥＤＴＡ、５ｍＭ ジチオトレイトール（ＤＴＴ）中で行なった。カスパーゼ１では、Ａｃ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−ＡＭＣを基質として使用した；カスパーゼ２では、Ｚ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ａｌａ−Ａｓｐ−ＡＦＣを基質として使用した；カスパーゼ３では、Ａｃ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−ＡＭＣを基質として使用した；カスパーゼ４では、Ｓｕｃ−Ｔｙｒ−Ｖａｌ−Ａｌａ−Ａｓｐ−ＡＭＣを基質として使用した；カスパーゼ５では、Ａｃ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−ＡＭＣを基質として使用した；カスパーゼ６では、Ａｃ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ−Ａｓｐ−ＡＭＣを基質として使用した；カスパーゼ７では、Ａｃ−Ａｓｐ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ａｓｐ−ＡＭＣを基質として使用した；カスパーゼ８では、Ａｃ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−ＡＭＣを基質として使用した；カスパーゼ９では、Ａｃ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｈｉｓ−Ａｓｐ−ＡＭＣを基質として使用した；カスパーゼ１０では、Ａｃ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−ＡＭＣを基質として使用した（Ｎｉｃｈｏｌｓｏｎ， Ｄ．Ｗ． 及び Ｔｈｏｒｎｂｅｒｒｙ， Ｎ．Ａ．， ＴＩＢＳ， ２２， ２９９−３０６， １９９７； Ｓｔｅｎｎｉｃｋｅ， Ｈ．Ｒ． 及び Ｓａｌｖｅｓｅｎ， Ｇ．Ｓ．， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２７２（４１）， ２５７１９−２５７２３， １９９７； Ｔａｌａｎｉａｎ， Ｒ．Ｖ．， ｅｔ． ａｌ．， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２７２（１５）， ９６７７−９６８２， １９９７； Ｗｏｌｆ， Ｂ．Ｂ． 及び Ｇｒｅｅｎ， Ｄ．Ｒ．， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２７４（１８）， ２００４９−２００５２， １９９９）。基質の生成物への変換率は、経時的に連続してモニターされた蛍光の増加の傾斜から求めた。
【０４０８】
基質に関する見かけの巨視的結合（ミカエリス）定数（ＫＭ app ）の測定
各基質に関する見かけの巨視的結合定数（ＫＭapp）を、基質濃度の関数としての酵素活性の依存性から、算出した。観察された比を、横座標の関連基質濃度に対して縦座標にプロットして、データを、式１を用いて直接回帰分析（Ｐｒｉｓｍ ｖ ３．０２； ＧｒａｐｈＰａｄ， Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ， ＵＳＡ）にあわせた（Ｃｏｒｎｉｓｈ−Ｂｏｗｄｅｎ， Ａ． Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌｓ ｏｆ ｅｎｚｙｍｅ ｋｉｎｅｔｉｃｓ Ｐｏｒｔｌ及び Ｐｒｅｓｓ； １９９５， ９３−１２８）。
【０４０９】
【数１】
式１において、「ｖi」は、観察された初期率であり、「Ｖmax app」は、飽和基質濃度での観察された最大活性であり、「ＫM app」は、基質に関する見かけの巨視的結合（ミカエリス）定数であり、「［Ｓo］」は、初期基質濃度である。
【０４１１】
阻害定数の測定
各化合物に関する見かけの阻害定数（Ｋi）を、阻害が可逆的であり、純競合メカニズム（ｐｕｒｅ−ｃｏｍｐｅｔｉｔｉｖｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ）によって起こることに基づいて測定した。Ｋi値は、式２を用いて直接回帰分析（Ｐｒｉｓｍ ｖ ３．０２）によって、阻害剤濃度の関数としての酵素活性の依存性から、算出した（Ｃｏｒｎｉｓｈ−Ｂｏｗｄｅｎ， Ａ．， １９９５．）。
【０４１２】
【数２】
式２において、「ｖi」は、観察された残存活性であり、「Ｖmax app」は、（即ち、阻害剤不存在下での）観察された最大活性であり、「ＫM app」は、基質に関する見かけの巨視的結合（ミカエリス）定数であり、「［Ｓ］」は、初期基質濃度であり、「Ｋi」は、見かけの解離定数であり、および「［Ｉ］」は、阻害剤濃度である。
【０４１４】
見かけの解離定数（Ｋi app）が酵素濃度に近づくと、Ｋi app値は、式３に記載された形態の二次解決法（ｑｕａｄｒａｔｉｃ ｓｏｌｕｔｉｏｎ）を用いて算出した（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ， Ｊ．Ｆ． Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｓｃｉ．， ７， １０２−１０５， １９８２； Ｍｏｒｒｉｓｏｎ， Ｊ．Ｆ． Ｂｉｏｃｈｉｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． Ａｃｔａ， １８５， ２６９−２８６， １９６９； Ｓｔｏｎｅ， Ｓ．Ｒ． 及び Ｈｏｆｓｔｅｅｎｇｅ， Ｊ． Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， ２５， ４６２２−４６２８， １９８６）。
【０４１５】
【数３】
式３において、「ｖi」は、観察された残存活性であり、「Ｆ」は、（即ち、阻害剤不存在下での）観察された最大活性及び最小酵素活性の差であり、「Ｅo」は、全酵素濃度であり、「Ｋi app」は、見かけの解離定数であり、および「Ｉo」は、阻害剤濃度である。曲線を、酵素濃度に関する固定値を用いて非線形回帰分析（Ｐｒｉｓｍ）に合わせた。式４は、基質動態を説明するのに使用され、この際、「Ｋi」は、阻害定数であり、「［Ｓo］」は、初期基質濃度であり、および「ＫM app」は、基質に関する見かけの巨視的結合（ミカエリス）定数である（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ， １９８２）。
【０４１７】
阻害剤の酵素との反応の二次率（ｓｅｃｏｎｄ−ｏｒｄｅｒ ｒａｔｅ）
該当する場合には、各化合物の酵素との反応の観察された率（ｋobs）の濃度依存性を、基質の存在下での擬１次条件下での酵素不活化の割合を測定することによって分析した（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ， Ｊ．Ｆ．， ＴＩＢＳ， １０２−１０５， １９８２； Ｔｉａｎ， Ｗ．Ｘ． 及び Ｔｓｏｕ， Ｃ．Ｌ．， Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ， ２１， １０２８−１０３２， １９８２； Ｍｏｒｒｉｓｏｎ， Ｊ．Ｆ． 及び Ｗａｌｓｈ， Ｃ．Ｔ．， ｆｒｏｍ Ｍｅｉｓｔｅｒ （Ｅｄ．）， Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌ．， ６１， ２０１−３０１， １９８８； Ｔｓｏｕ， Ｃ．Ｌ．， ｆｒｏｍ Ｍｅｉｓｔｅｒ （Ｅｄ．）， Ａｄｖａｎｃｅｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌ．， ６１， ３８１−４３６， １９８８；）。アッセイは、様々な濃度の阻害剤を添加して、基質を含む緩衝液をアッセイすることによって行なった。アッセイを、酵素を反応混合物に添加することによって開始し、蛍光の変化を経時的にモニターした。アッセイ期間中、１０％未満の基質が消費された。
【０４１８】
【数４】
活性蛍光経過曲線（ａｃｔｉｖｉｔｙ ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｃｕｒｖｅ）を、式５を用いて非線形回帰分析（Ｐｒｉｓｍ）に合わせた（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ， １９６９； Ｍｏｒｒｉｓｏｎ， １９８２）；この際、「Ｆ」は、蛍光応答であり、「ｔ」は、時間であり、「ｖo」は、初期速度であり、「ｖs」は、平衡定常状態速度であり、「ｋobs」は、観察された擬１次速度定数であり、および「Ｄ」は、０時間での切片（即ち、曲線の縦座標変位（ｏｒｄｉｎａｔｅ ｄｉｓｐｌａｃｅｍｅｎｔ））である。２次速度定数は、阻害剤濃度に対するｋobsのプロットの線の傾斜（即ち、ｋobs／［Ｉ］）から得られた。基質動態を修正するために、式６が使用され、この際、「［Ｓo］」は、初期基質濃度であり、「ＫM app」は、基質に関する見かけの巨視的結合（ミカエリス）定数である。
【０４２０】
【数５】
本発明の化合物を、上記したアッセイによって試験したところ、１００μＭ以下のインビトロのＫｉ阻害定数でクルジパイン阻害活性または別のＣＡ Ｃ１システインプロテアーゼに対する阻害活性を示すことが観察された。本発明の数多くの例示化合物に関する具体的な阻害データを表２に示す。
【０４２２】
【表２】
[0001]
The present invention relates to a compound that is an inhibitor of the protease cruzipain, a gene product of Trypanosoma cruzi parasite. In particular, the present invention provides compounds that are useful in the treatment for the treatment of Trypanosoma cruzi infection, the use of these compounds, and pharmaceutical compositions containing them. The invention further relates to compounds that are inhibitors of a wide range of cysteine proteases, the use of these compounds, and pharmaceutical compositions containing them. Such compounds are useful for treatment for the treatment of diseases involving cysteine proteases.
[Background Art]
[0002]
Trypanosomatid parasites have a significant worldwide impact on human and animal health care (McKerrow, JH, et al, Ann. Rev. Microbiol.47, 821-853, 1993). One of the parasites in this family, Trypanosoma cruzi, affects more than 20 million people each year in Latin and South America and is the leading cause of heart disease in these areas, It is the causative agent of Chagas disease, which kills more than 45,000 people (Centers for Disease Control and prevention website). In addition, with the migration of infected populations from the countryside to cities and from South and Central America to North America, infections are spreading via blood transfusions and at birth. The current treatments of choice for Trypanosoma cruzi infection, nifurtimox and benznidazole (NADH fumarate reductase inhibitor, Turrens, JFol, Petrol. ,82 (1), 125-9, 1996) are the most moderately successful, achieving approximately 60% healing during the acute phase of infection (for general discussion, Docampo, R. Curr. Pharm. Design,7, 1157-1164, 2001), but are not prescribed at all in the chronic phase in which heart failure associated with myocardial injury often occurs (Kirchhoff, LV New Engl. J. Med.,329, 639-644, 1993). In addition, these two drugs have been shown to have severe adverse toxic effects, require close medical surveillance during treatment, and induce chromosomal damage in infants with Chagas disease (Gorla, NB et al, Mutat. Res.206, 217-220, 1988). Therefore, there is a strong medical need for new agents that are effective in treating chemotherapeutics for Trypanosoma cruzi infection.
[0003]
Heretofore, the identification of enzymes known to be important in the establishment or transmission of infectious diseases has been well established by antiviruses (eg, HIV aspartyl protease inhibitors) and antibacterials (eg, β-lactam antibiotics). Has helped develop new drugs. Investigations for similar weaknesses in parasitic infections have tested a number of enzymes (e.g., parasite dihydrofolate reductase, Chowhury, SF et al, J. Med. Chem.,42 (21), 4300-4312, 1999; trypanothione reductase, Li, Z. et al. et al, Bioorg. Med. Chem. Lett. ,11 (2), 251-254, 2001; parasite glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, Aranov, A .; M. et al. Med. Chem. ,41 (24), 4790-4799, 1998). A particularly prominent area of research is the identification of the role of cysteine proteases, encoded by parasites, which play an important role during the life of the parasite (McKerrow, JH, et al, Bioorg. Med. Chem.,7, 639-644, 1999). To date, proteases from a significant group of biomolecules that make up about 2% of all gene products have been identified after analysis of several genomic sequencing programs (eg, Southan, CJ Pept. Sci,6, 453-458, 2000). Proteases have evolved to participate in a wide range of biological processes that mediate these effects by breaking peptide amide bonds in numerous proteins found in nature. This hydrolysis is achieved by first recognizing and then binding to a particular three-dimensional electronic surface exerted by the protein that aligns the cleavage-related bond exactly within the protease catalytic site. Second, catalytic hydrolysis is due to the nucleophilic attack of the amide bond, which is cleaved either through the amino acid side chain of the protease itself or by the action of a water molecule that binds to and activates the protease. Start. Proteases whose attacking nucleophile is the thiol side chain of a Cys residue are known as cysteine proteases. The general category of "cysteine proteases" includes many found in a wide range of organisms from viruses, bacteria, protozoa, plants and fungi to mammals.
[0004]
Biological studies of Trypanosoma cruzi infection have revealed a number of specific enzymes that are important for the continuation of the parasite life cycle. One such enzyme, cruzipain, cathepsin L-like cysteine protease, is an obvious therapeutic target for the treatment of Chagas' disease ((a) Cazzulo, JJ et al, Curr. Pharm Des.7, 1143-1156, 2001; (b) Caffrey, C .; R. et al, Curr. Drug Targets,1, 155-162, 2000). Although the precise biological role of cruzipain in the parasite life cycle remains unclear, elevated cruzipain mRNA during epimastigote development indicates a role in trophic degradation of host molecules in lysosomal-like vesicles (Engel , JC et al, J. Cell. Sci,111, 597-606, 1998). Confirmation of cruzipaine as a viable therapeutic target has been achieved with increasing levels of complexity. The addition of a common cysteine protease inhibitor, Z-Phe-Ala-FMK, to mammalian cell cultures infected with Trypanosoma cruzi blocks the replication and differentiation of parasites, thereby reducing the parasite life cycle. Stop (Harth, G., et al, Mol. Biochem. Parasitol.58, 17-24, 1993). Administration of a vinyl sulfone inhibitor in a mouse animal model infected with Trypanosoma cruzi not only rescued mice from lethal infection, but also completely recovered them (Engel, JC et al, J. Exp. Med.). ,188 (4), 725-73, 1998). Numerous other in vivo studies have shown that Leishmania major (Selzer, PM et al, Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA,96Chem., 11015-11022, 1999), Schistosoma mansoni and Plasmodium falciparium (Olson, JE et al, Bioorg. Chem., 1988).7, 633-638, 1999), it has been determined that infection with another parasite can be halted or cured by treatment with a cysteine protease inhibitor.
[0005]
Various synthetic methods have been described for the design of cruzipain inhibitors. However, while providing biological "proof-of-principles" for the treatment of Trypanosoma cruzi infections, current inhibitors have a number of hindrances to their clinical development. Exhibit biochemical and physical properties (eg, (a) Brinen, L.S. et al, Structure,8, 831-840, 2000, peptidomimatic vinyl sulphones, available advanced mammarian cell toxicity, (McKerrow, J. H. ed., Ed., Ed.,, Ed.6, 2477-2494, 1998); (b) Du, X. et al. et al, Chem. Biol. ,7, 733-742, 2000, aryl ureas, generally with low μM activity, and high ClogP values, thus poor aqueous solubilty and available from the lab. R. et al, Tetrahedron,56, 9747-9762, 2000, peptidyl epoxysuccinates, irreversible inhibitors, with potential activity houses in the case of living-as-a-peases. et al, Bioorg. Med. Chem.4 (9), 1421-1427, 1996, bisarylacylhydrazides and chalcones, polyhydroxylated aromatics; (e) US Pat. No. 6,143,931, WO 9846559, non-peptide alpha-ketoamied). Of the many different enzyme inhibition methods to date, only cruzipaine protease inhibitors have been found to be effective in curing disease-related animal models of Trypanosoma cruzi infection. Thus, by discovering more effective cruzipain inhibitors with the desired combination of potential, selectivity, low toxicity and optimized pharmacokinetic parameters, these "proofs" into clinical candidates suitable for human use There is clearly a medical need to continue to learn "proof-of-principle".
[0006]
Cruzipain and many other important parasite proteases belong to the papain-like CA C1 family and have close structural mammalian homology. Cysteine proteases are classified as "clan" based on similarity in three-dimensional structure or conserved sequence of catalytic residues in the primary protease sequence. In addition, "clans" are further classified as "families" that share a statistically significant relationship with others when comparing the portions of the amino acid sequence that make up each protease's ability to respond to protease activity. (For a thorough discussion, see Barrett, A. J et al, in 'Handbook of Proteolytic Enzymes', Eds. Barrett, A. J., Rawlings, N. D. D.A., J.B.A., U.C. Press, 1998). To date, cysteine proteases have been classified into five clans, CA, CB, CC, CD and CE (Barrett, AJ et al, 1998). The protease of the tropical papaya fruit "papain" forms the basis of Clan CA, which now has 80 species in various sequence databases, with more expected from current genomic sequencing efforts. Having another full registration exceeds. Clan CA / family C1 proteases, for example, human proteases such as cathepsin K (osteoporosis), cathepsin S (autoimmune disease), cathepsin L (metastasis) or falcipain (malaria parasite Plasmodium falciparum) )), Parasite proteases such as cruzipain (trypanosome cruzi infection) are involved in a number of disease processes. Recently, a bacterial protease, staphylopain (S. aureus infection), has also been experimentally classified as Clan CA. The X-ray crystal structure shows a range of inhibitors, such as papain (PDB registration, 1pad, 1pe6, 1pip, 1pop, 4pad, 5pad, 6pad, 1ppp, 1the, 1csb, 1huc), cathepsin K (1au0, 1au2, 1au3). , 1au4, 1atk, 1mem, 1bgo, 1ayw, 1ayu), Cathepsin L (1cs8), Cathepsin S (currently waiting, but McGrath, ME et al, Protein Science,7, 1294-1302, 1998), cruzain (recombinant form of cruzipain, Eakin, AE et al,268 (9), 6115-6118, 1993) (1ewp, 1aim, 2aim, 1F29, 1F2A, 1F2B, 1F2C), and a range of the above proteases complexed with staphylopain (1cv8). Each structure exhibits a similar overall active site topology, as predicted by these "clan" and "family" classifications, and the similarity of such structures indicates that cruzipaine is suitable for human use. Embodies one concept of the difficulties involved in finding selective inhibitors. However, subtle differences in the depth and complexity of the active site groove of each CA C1 protease are evident and may be developed with selective inhibitor designs. In addition, inhibitor complexes with many current substrates of CA C1 family proteases exhibit a series of conserved hydrogen bonds between the inhibitor and the protease backbone that significantly contribute to the potential of the inhibitor. Predominantly bidentate hydrogen bonds are observed between the protease Gly66 (C = O) / inhibitor NH and the protease Gly66 (NH) / inhibitor (C = O), where the inhibitor (C = O) And (NH) are amino acid residues constituting the S2 subsite binding element in the inhibitorNHCHRCO(For a description of the nomenclature of protease binding sites, see Berger, A. and Sector, I. Philos. Trans. R. Soc. London. [Biol.],257, 249-264, 1970). An additional hydrogen bond between the asparagine or aspartic acid protease backbone (C = O) (158-163, the number of residues depending on the protease) and the inhibitor (N-H) is often observed, The inhibitor (N-H) is provided by an S1 subsite binding element within the inhibitor. Therefore, motif X-NHCHRCO−NH-Y is widely observed among conventional substrate-based inhibitors of CA C1 protease.
[0007]
In the prior art, the development of cysteine protease inhibitors for use in humans has been an active area in recent years. Considering those of the CA C1 family, peptides and peptidomimetic nitriles (eg, WO-A-0109910, WO-A-0051998, WO-A-0119816, WO-A-9924460, WO-A-0049008) WO-A-0048992, WO-A-0049007, WO-A-0130772, WO-A-0055125, WO-A-0055126, WO-A-0119808, WO-A-0149288, WO-A-0147886. ), Linear and cyclic peptides and peptide-like ketones (eg, Veber, DF and Thompson, SK, Curr. Opin. Drug Discovery Dev.,3 (4), 362-369, 2000, WO-A-0170232, WO-A-0178734, WO-A-00099653, WO-A-00699855, WO-A-0029408, WO-A-0134153 to WO-A-0134160, See WO-A-0029408, WO-A-9964399, WO-A-9805336, WO-A-9850533), ketoheterocycles (see for example WO-A-0055144, WO-A-0055124) and monobactams (e.g. Use of human cathepsins, mainly cathepsin K (osteoporosis), cathepsin S (autoimmune disease) and cathepsin L (metastasis) The development of inhibitors of steroids has been particularly emphasized Was. While the prior art describes potential in vitro inhibitors, it also revealed many difficulties in developing human therapeutics. For example, WO-A-9850533 and WO-A-0029408 refer to cyclic ketones, compounds of the papain family, and, in the most preferred embodiment, cathepsin K, with particular reference to compounds which are inhibitors of cysteine proteases. Is described. WO-A-9850533 describes compounds detailed below in the literature as potential inhibitors of cathepsin K with good oral bioavailability (Witherington, J., 'Tetrahydrofurans as Selective capsin. K Inhibitors', RSC meeting, Burlington House, London, 1999). The compound of WO-A-9850533 was reported to bind to cathepsin K by forming a reversible covalent bond between tetrahydrofuran carbonyl and the active site catalytic cysteine residue (Witherington, J., 1999). In addition, similar cyclic ketone compounds are described in WO-A-9953039 as part of a broader description of cysteine protease inhibitors associated with parasitic diseases, especially for the treatment of malaria by inhibiting falcipain. . However, in later literature, the cyclic ketone compounds of WO-A-9850533 show that the inhibitor physiochemical properties, the poor chiral stability of the α-aminoketone chiral center, may lead to further development or sufficient drug use. It is described as inappropriate for kinetic evaluation (Marquis, RW et al, J. Med. Chem.,44 (5), 725-736, 2001). WO-A-0069855 describes compounds which are mentioned in particular also for cyclic ketones with regard to the inhibition of cathepsin S. The compound of WO-A-0069855 is an improvement over the compound of WO-A-9850533 due to the presence of a β-substituent of the cyclic ketone ring system that provides enhanced chiral stability to the α-carbon of the cyclic ketone ring system. It is thought that there is. In an attempt to solve the problem of low chiral integrity, the later literature provided a group of closely related cyclic ketones as described in WO-A-9850533, in which about 300 times the potential of the inhibitor was provided. Was observed to introduce an alkyl group instead of an unstable α-proton (Marquis, RW et al, J. Med. Chem.,44, 1380-1395, 2001). In addition, in the later literature, in the cyclic ketones described in WO-A-9850533, the α (S) -isomer is 10-80 times more latent than the α (R) -isomer. (Fenwick, AE et al, Bioorg. Med. Chem. Lett.,11, 199-202, 2001).
DISCLOSURE OF THE INVENTION
[0008]
It has now been discovered that certain compounds defined by general formula (I) are potential and selective cruzipain protease inhibitors that are useful in treating Trypanosoma cruzi infections. Other compounds defined by general formula (I) are protease inhibitors of a wide range of CA C1 cysteine proteases and are useful in the treatment of diseases caused by cysteine proteases. The compounds described by the general formula (I) contain an α-alkyl group in the R-configuration (or S-configuration if Z = 'S'), but surprisingly, The compounds defined in (I) retain good potential. The present invention relates to substituted (2-alkyl-3-alkyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-yl) amides defined by the general formula (I), (2-alkyl-3-alkyl-4-oxo-) Tetrahydro-thiophen-3-yl) amide and (1-alkyl-2-alkyl-5-oxocyclopentyl) amide compounds.
[0009]
Accordingly, a first aspect of the present invention provides a compound of general formula (I).
[0010]
Embedded image
Where R1Is C0-7Alkyl (when C = 0, R1Is simply hydrogen), C3-6-Cycloalkyl or Ar-C0-7Alkyl (when C = 0, R1Is simply the aromatic moiety Ar);
RTwoIs C0-7-Alkyl, C3-6-Cycloalkyl or Ar-C0-7-Is alkyl;
RThreeIs C1-7-Alkyl, C3-6-Cycloalkyl or Ar-C0-7-Is alkyl;
Y is CRFourRFive—CO, where RFour, RFiveIs independently C0-7-Alkyl, C3-6-Cycloalkyl and Ar-C0-7-Selected from alkyl;
(X)oIs CR6R7In this case, R6And R7Is independently C0-7-Alkyl, C3-6-Cycloalkyl and Ar-C0-7-Selected from alkyl, and o is a number from 0 to 3;
(W)nIs O, S, C (O), S (O) or S (O)TwoOr NR8In this case, R8Is C0-7-Alkyl, C3-6-Cycloalkyl and Ar-C0-7-Selected from alkyl, and n is 0 or 1;
(V)mAre C (O), C (S), S (O), S (O)Two, S (O)TwoNH, OC (O), NHC (O), NHS (O), NHS (O)Two, OC (O) NH, C (O) NH or CR9RTenIn this case, R9And RTenIs independently C0-7-Alkyl, C3-6-Cycloalkyl, Ar-C0-7Selected from alkyl, and m is a number from 0 to 3, and when m is greater than 1, (V)mContains at most one carbonyl or sulfonyl group;
Z is O (in this case, the compound of the general formula (I) is called (2-alkyl-3-alkyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-yl) amide), S (in this case, Compounds of (I) are referred to as (2-alkyl-3-alkyl-4-oxo-tedrahydrothiophen-3-yl) amides) or CHTwo(Wherein the compound of general formula (I) is referred to as (1-alkyl-2-alkyl-5-oxocyclopentyl) amide);
U is either saturated or unsaturated (as detailed below) and contains a stable 5- to 7-membered or stable 8- to 11-membered, containing 0 to 4 heteroatoms. -A two-membered ring;
[0012]
Embedded image
Where R11Is C0-7-Alkyl, C3-6-Cycloalkyl, Ar-C0-7-Alkyl, halogen, OC0-7-Alkyl, OC3-6-Cycloalkyl, O-Ar-C0-7-Alkyl, S-C0-7-Alkyl, S-C3-6-Cycloalkyl, S-Ar-C0-7-Alkyl, NH-C0-7-Alkyl, NH-C3-6-Cycloalkyl, NH-Ar-C0-7-Alkyl, N- (C0-7-Alkyl)Two, N- (C3-6-Cycloalkyl)TwoAnd N- (Ar-C0-7-Alkyl)TwoOr a group CHR11Or CR11Is a part of11May be halogen;
A is CH2, CHR11, O, S and NR12And at this time, R11Is the same definition as above, and R12Is C0-7-Alkyl, C3-6-Cycloalkyl and Ar-C0-7-Selected from alkyl;
B, D and G are independently CR11And at this time, R11Is as defined above, or is N;
E is CH2, CHR11, O, S and NR12And at this time, R11And R12Is the same definition as above;
J, L, M, R, T, TTwo, TThreeAnd TFourIs independently CR11And N, where R11Is the same definition as above;
TFiveIs selected from CH or N;
q is a number from 1 to 3, thereby defining a 5-, 6- or 7-membered ring.
[0014]
B, D, G, J, L, M, R, T, TTwo, TThreeAnd TFourMay further represent an N-oxide (N → O).
[0015]
The present invention includes all salts, hydrates, solvates, conjugates and prodrugs of the compounds of the present invention. The term "compound" is intended to include all such salts, hydrates, solvates, complexes and prodrugs, unless otherwise indicated.
[0016]
Suitable pharmaceutically or veterinarily acceptable salts of the compounds of general formula (I) include organic acids, in particular, but not limited to, acetate, trifluoroacetate, lactate, gluconate, citric acid Salt, tartrate, maleate, malate, pantothenate, adipate, alginate, aspartate, benzoate, butyrate, digluconate, cyclopentanate, glucoheptanate, glycerophosphate Oxalate, heptanoate, hexanoate, fumarate, nicotinate, palmoate, pectinate, 3-phenylpropionate, picrate, pivalate, propionate, tartrate, lactobionate, Carbohydrates, such as pivorate, camphorate, undecanoate and succinate Acid, methanesulfonate, ethanesulfonate, 2-hydroxyethanesulfonate, camphor sulfonate, 2-naphthalenesulfonate, benzenesulfonate, p-chlorobenzenesulfonate, and p-toluenesulfonate Organic sulfonic acids such as salts; and salts such as hydrochlorides, hydrobromides, hydroiodides, sulfates, bisulfates, hemisulfates, thiocyanates, persulfates, phosphates and sulfonates. And salts of inorganic acids.
[0017]
Prodrugs are covalent compounds that release the active parent drug of general formula (I) in vivo. Prodrugs are, for example, (2-alkyl-3-alkyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-yl) amide, (2-alkyl-3-alkyl-4-oxo-tetrahydro-thiophen-3-yl) amide or Acetal or hemiacetal derivatives having exocyclic ketone functionality present on (1-alkyl-2-alkyl-5-oxocyclopentyl) amide scaffolds may be constructed. When a chiral center or other form of isomer center is present in a compound of the invention, all forms of such one or more isomers, such as enantiomers and diastereoisomers, , Included in the present invention. Compounds of the invention containing a chiral center may be used as a racemic mixture, an enantiomerically enriched mixture, or the racemic mixture may be separated using known techniques and the individual enantiomers used alone. May be.
[0018]
“Halogen,” as applied herein, is meant to include F, Cl, Br, I.
[0019]
“Hetero atom,” as applied herein, is meant to include O, S, and N.
[0020]
As used herein, “C0-7-Alkyl "is 0 (i.e., simply hydrogen) such as methyl, ethyl, n-propyl, isopropyl, n-butyl, isobutyl, t-butyl, pentyl, isopentyl, hexyl, heptyl and their simple isomers. It is meant to include stable linear and branched aliphatic carbon chains having carbon atoms. In addition, C0-7-Alkyl may be substituted at any position with 1, 2 or 3 halogen atoms (as defined above), if necessary, to form, for example, a trifluoromethyl substituent. Furthermore, C0-7-Alkyl may have one or more heteroatoms (as defined above) to form, for example, ethers, thioethers, sulfones, sulfonamides, substituted amines, amidines, guanidines, carboxylic acids, carboxamides. When the heteroatom is located at the end of the chain, it is appropriately substituted with one or two hydrogen atoms. Heteroatom or halogen is C0-7Present only when the alkyl contains at least one carbon atom.
[0021]
As used herein, “C1-7-Alkyl "is a C.C. (as defined above) except that a substituent having at least one carbon is described.0-7-Meant to include the definition of alkyl.
[0022]
As used herein, “C3-6“-Cycloalkyl” is a “C” that further includes a cyclic carbon such as cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, etc.0-7-Alkyl "is meant to include any variation. The cyclic carbon is optionally substituted with one or more halogens (as defined above) or heteroatoms (as defined above) to form, for example, a tetrahydrofuran, pyrrolidine, piperidine, piperazine or morpholine substituent. Is also good.
[0023]
As used herein, “Ar-C0-7-Alkyl "is a C-alkyl further comprising an aromatic ring moiety" Ar "0-7-Means to include any variation of alkyl. The aromatic ring moiety Ar may be an unsaturated stable 5- or 6-membered part or a stable 9- or 10-membered two-ring as described above for U in formula (I). The aromatic ring moiety Ar is represented by R (same as described above for U in formula (I)).11May be substituted. Substituent Ar-C0-7When -alkyl is C = 0, the substituent is simply the aromatic moiety Ar.
[0024]
Other expressions, including the words alkyl and cycloalkyl, shall be construed in accordance with the above definitions. For example, "C1-4-Alkyl "is a C-alkyl except that it contains 1-4 carbon atoms.0-7-Same as alkyl.
[0025]
The presence of different structural isomers and / or the presence of one or more chiral centers is understood to include all isomeric forms. Enantiomers are characterized by the absolute configuration of these chiral centers, and are described by the R- and S-sequence rules of Cahn, Ingold and Prelog. Such rules are well known in the art (eg, 'Advanced Organic Chemistry', 3).rd edition, ed. March, J.M. , John Wiley and Sons, New York, 1985).
[0026]
Preferred compounds of the general formula (I) include R1Is C0-7-Alkyl or Ar-C0-7-Having an alkyl. Thus, for example, the preferred R1The moiety may be hydrogen or a straight-chain or branched alkyl chain, or a straight-chain or branched heteroalkyl chain, or an optionally substituted arylalkyl chain, or an optionally substituted arylhetero. There is an alkyl chain.
[0027]
R1Is hydrogen or C1-4-Alkyl or Ar-C1-4-Alkyl is particularly preferred;1Examples of substituents include, but are not limited to:
[0028]
Embedded image
Where R11Is the same definition as above.
[0030]
RTwoIs C0-7-Alkyl or Ar-C0-7-Alkyl, for example hydrogen, straight or branched alkyl or heteroalkyl chains or arylalkyl chains which may be substituted if desired. Particularly preferred compounds include RTwoIs C0-4-Alkyl or Ar-C0-4-Alkyl, such RTwoExamples of substituents include, but are not limited to:
[0031]
Embedded image
Where R11And R12Is the same definition as above.
[0033]
Such preferred R1And RTwoExamples of (2-alkyl-3-alkyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-yl) amide scaffolds containing groups include:
[0034]
Embedded image
In preferred compounds of the general formula (I)ThreeIs a simple alkyl or arylalkyl group such as methyl.
[0036]
In preferred compounds of general formula (I), Y is CHRFiveCO, where RFiveIs C0-7-Alkyl or Ar-C0-7-Alkyl, for example hydrogen, straight or branched alkyl chains, straight or branched heteroalkyl chains, optionally substituted arylalkyl chains or optionally substituted arylheteroalkyl chains Selected from. In addition, in preferred compounds of general formula (I)FiveIs C3-6-Cycloalkyl, for example cyclohexylmethyl.
[0037]
Examples of preferred Y substituents include:
[0038]
Embedded image
Where R11, R12And Ar have the same definition as above.
[0040]
More preferred RFiveThe groups include OH, NR12R12, COOR12Or CONR12Which may be substituted by1-4The alkyl or aryl group is R11Cycloalkylmethyl or Ar-C1-4There is an alkyl;11And R12Are each independently defined as above.
[0041]
Even more preferred RFiveThe group is Ar-CHTwoWherein the aromatic ring is an optionally substituted phenyl or monocyclic heterocycle. In addition, an even more preferred RFiveThe group has a simple branched alkyl group such as isobutyl or a straight heteroalkyl chain such as benzylsulfanylmethyl or benzylsulfonylmethyl. Further, a more preferable RFiveThe group has cyclohexylmethyl. Examples of more preferred Y substituents include:
[0042]
Embedded image
Where R11And Ar have the same definition as above.
[0044]
Group (X)oIn, R6And R7Is C0-7-Alkyl or Ar-C0-7Alkyl, for example hydrogen, straight or branched alkyl chain, straight or branched heteroalkyl chain, optionally substituted arylalkyl chain or optionally substituted arylheteroalkyl Preferably it is selected from chains.
[0045]
More preferred (X)oThe group is an R selected from hydrogen6R;7Is OH, NR12R12, COOR12Or CONR12Which may be substituted by1-4An alkyl; or aryl group is R11Ar-C which may be substituted with1-4-Alkyl, wherein R11And R12Are each independently defined as above.
[0046]
Preferred (X)oExamples of groups include:
[0047]
Embedded image
Where R11And R12Is the same definition as above.
[0049]
Even more preferred compounds of general formula (I) are simple alkyl groups such as methylene (X)oWherein o is 0 or 1.
[0050]
Group (W)nW is preferably O, S, SOTwo, S (O), C (O) or NR8In this case, R8Is C0-4-Alkyl; and n is 0 or 1.
[0051]
More preferred compounds of general formula (I) are O, S, SO wherein n is 0 or 1.Two, C (O) and NH (W)nHaving a group.
[0052]
Group (V)mAt:
V is preferably C (O), C (O) NH or CHRTenIn this case, RTenIs C0-4-Alkyl; and m is 0 or 1.
[0053]
Preferred combinations of V and W substituents included in general formula (I) include, but are not limited to, the following.
[0054]
Embedded image
In addition, preferred combinations of V and W substituents included in general formula (I) include, but are not limited to, the following.
[0056]
Embedded image
More preferred combinations of V, W and X substituents included in general formula (I) include, but are not limited to, the following.
[0058]
Embedded image
In preferred compounds of the general formula (I), U is a 5- or 6-membered saturated or unsaturated heterocycle or Ar group optionally substituted or an optionally substituted saturated group. Alternatively, it has an unsaturated 9- or 10-membered heterocyclic ring or an Ar group. Examples of such preferred U rings include:
[0060]
Embedded image
And below:
[0062]
Embedded image
Where R11Is the same definition as above,
There is.
[0064]
More preferred compounds of general formula (I) include U having a bulky alkyl or aryl group at the para-position of aryl Ar. Further, a more preferred compound has a meta or para-2 aryl Ar-Ar, wherein Ar is as defined above. In addition, more preferred compounds have a 6,6 or 6,5 or 5,6-fused aromatic ring. Examples of more preferred U groups include:
[0065]
Embedded image
Where R11, D, E, G, J, L, M, R, T, TTwo, TThreeAnd TFourIs the same definition as above.
[0067]
An even more preferred compound of general formula (I), especially for the inhibition of cruzipaine, comprises a U group having a 6-membered Ar ring containing a bulky alkyl or aryl group at the para position, wherein Ar This is the same definition as above.
[0068]
Embedded image
Where R11, D, E, G, J, L, M, R and T have the same definitions as above.
[0070]
Even more preferred compounds of general formula (I) have a U group that includes, but is not limited to:
[0071]
Embedded image
Where R11, D, E, G, J and L have the same definitions as above.
[0073]
Abbreviations and symbols commonly used in the field of peptides and chemistry are described in Eur. J. Biochem. ,158, 9-, 1984, and is used herein to describe the compounds of the present invention according to the general guidelines set forth by the IUPAC-IUB Joint Commission on Biochemical Nomenclature. The compounds of general formula (I) and the intermediates and starting materials used in their preparation are named according to the IUPAC rules of nomenclature, where certain groups have been given lower priority for enumeration as major groups. R, which is an example of a compound of the general formula (I),1Is H and RTwoIs ethyl and RThreeIs methyl, Z is oxygen, Y is 4-methylpentyl, (X)0Is 0 and (W)nIs oxygen and (V)mIs methylene, and U is phenyl. The compound (1) is named as follows.
[0074]
Embedded image
(2R, 3R) 2-benzyloxy-4-methylpentanoic acid (2-ethyl-3-methyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-yl) amide
R, a second example of a compound of general formula (I)1Is H and RTwoIs ethyl and RThreeIs methyl, Z is sulfur, Y is 4-methylpentyl, (X)0Is 0 and (W)nIs oxygen and (V)mIs methylene and U is phenyl. The compound (2) is named as follows.
[0076]
Embedded image
(2R, 3S) 2-benzyloxy-4-methylpentanoic acid (2-ethyl-3-methyl-4-oxo-tetrahydrothiophen-3-yl) amide
R, a third example of a compound of general formula (I)1Is H and RTwoIs ethyl and RThreeIs methyl, Z is methylene, Y is 4-methylpentyl, (X)0Is 0 and (W)nIs oxygen and (V)mIs methylene and U is phenyl. The compound (3) is named as follows.
[0078]
Embedded image
(1R, 2S) 2-benzyloxy-4-methylpentanoic acid (2-ethyl-1-methyl-5-oxo-cyclopentyl) amide
Compounds of the present invention include, but are not limited to, Z is 'O' and R1Are the (2R, 3R) isomers of the general formula (I) wherein H is 'H';1, RTwoAnd RThreeAnd equivalent analogs included in all definitions of.
[0080]
N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -benzamide
4-tert-butyl-N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -benzamide
N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -4-trifluoromethoxybenzamide
4-dimethylamino-N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -benzamide
N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -4-isopropylbenzamide
4-difluoromethoxy-N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -benzamide
N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -4-trifluoromethylbenzamide
4-bromo-N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -benzamide
3-bromo-N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -benzamide
N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -4-vinylbenzamide
Naphthalene-2-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -amide
Naphthalene-1-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -amide
Quinoline-6-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -amide
Benzo [b] thiophene-2-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -amide
Benzo [b] thiophen-3-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -amide
Benzothiazole-5-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -amide
Biphenyl-4-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -amide
N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -4-imidazol-1-ylbenzamide
N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -4-thiophen-2-ylbenzamide
[0081]
N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -4-oxazol-5-ylbenzamide
N- [1- (2,3-Dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -4- [1,2,3] thiadiazol-5-yl Benzamide
N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -4-pyrazol-1-ylbenzamide
N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -5-thiophen-2-ylnicotinamide
2-phenylthiazole-4-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -amide
2-Pyridin-3-ylthiazole-4-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -amide
5-phenylthiophene-2-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -amide
5-pyridin-3-ylthiophen-2-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -amide
2-methyl-5-phenylfuran-3-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -amide
4-phenylthiophene-2-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -amide
4-pyridin-3-ylthiophen-2-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -amide
2-thiophen-2-ylthiazole-4-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -amide
3-phenylpyrrole-1-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -amide
[0082]
N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] benzamide
4-tert-butyl-N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -benzamide
N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -4-trifluoromethoxybenzamide
4-dimethylamino-N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -benzamide
4-isopropyl-N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -benzamide
4-difluoromethoxy-N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -benzamide
N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -4-trifluoromethylbenzamide
4-bromo-N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -benzamide
3-bromo-N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -benzamide
N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -4-vinylbenzamide
Naphthalene-2-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -amide
Naphthalene-1-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -amide
Quinoline-6-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -amide
Benzo [b] thiophene-2-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -amide
Benzo [b] thiophen-3-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -amide
Benzothiazole-5-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -amide
Biphenyl-4-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -amide
4-Imidazol-1-yl-N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] benzamide
[0083]
N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -4-thiophen-2-ylbenzamide
N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -4-oxazol-5-ylbenzamide
N- [1- (2,3-Dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -4- [1,2,3] thiadiazol-4-ylbenzamide
N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -4-pyrazol-1-ylbenzamide
N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -5-thiophen-2-ylnicotinamide
2-phenylthiazole-4-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -amide
2-pyridin-3-ylthiazole-4-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -amide
5-phenylthiophene-2-carboxylic acid [[1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -amide
5-pyridin-3-ylthiophen-2-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -amide
2-methyl-5-phenylfuran-3-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -amide
4-phenylthiophene-2-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -amide
4-pyridin-3-ylthiophen-2-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -amide
2-thiophen-2-ylthiazole-4-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -amide
3-phenylpyrrole-1-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -amide
N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (3-hydroxyphenyl) -ethyl] -benzamide
4-tert-butyl-N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (3-hydroxyphenyl) -ethyl] -benzamide
N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (3-hydroxyphenyl) -ethyl] -4-trifluoromethoxybenzamide
[0084]
4-dimethylamino-N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (3-hydroxyphenyl) -ethyl] -benzamide
N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (3-hydroxyphenyl) -ethyl] -4-isopropylbenzamide
4-difluoromethoxy-N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (3-hydroxyphenyl) -ethyl] -benzamide
N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (3-hydroxyphenyl) -ethyl] -4-trifluoromethylbenzamide
4-bromo-N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (3-hydroxyphenyl) -ethyl] -benzamide
3-bromo-N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (3-hydroxyphenyl) -ethyl] -benzamide
N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (3-hydroxyphenyl) -ethyl] -4-vinylbenzamide
Naphthalene-2-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (3-hydroxyphenyl) -ethyl] -amide
Naphthalene-1-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (3-hydroxyphenyl) -ethyl] -amide
Quinoline-6-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (3-hydroxyphenyl) -ethyl] -amide
Benzo [b] thiophen-2-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (3-hydroxyphenyl) -ethyl] -amide
Benzo [b] thiophen-3-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (3-hydroxyphenyl) -ethyl] -amide
Benzothiazole-5-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (3-hydroxyphenyl) -ethyl] -amide
[0085]
Biphenyl-4-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (3-hydroxyphenyl) -ethyl] -amide
N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (3-hydroxyphenyl) -ethyl] -4-imidazol-1-ylbenzamide
N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (3-hydroxyphenyl) -ethyl] -4-thiophen-2-ylbenzamide
N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (3-hydroxyphenyl) -ethyl] -4-oxazol-5-ylbenzamide
N- [1- (2,3-Dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (3-hydroxyphenyl) -ethyl] -4- [1,2,3] thiadiazol-5-yl Benzamide
N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (3-hydroxyphenyl) -ethyl] -4-pyrazol-1-ylbenzamide
N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (3-hydroxyphenyl) -ethyl] -5-thiophen-2-ylnicotinamide
2-phenylthiazole-4-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (3-hydroxyphenyl) -ethyl] -amide
2-Pyridin-3-ylthiazole-4-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (3-hydroxyphenyl) -ethyl] -amide
5-phenylthiophene-2-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (3-hydroxyphenyl) -ethyl] -amide
5-pyridin-3-ylthiophen-2-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (3-hydroxyphenyl) -ethyl] -amide
2-methyl-5-phenylfuran-3-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (3-hydroxyphenyl) -ethyl] -amide
4-phenylthiophene-2-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (3-hydroxyphenyl) -ethyl] -amide
4-pyridin-3-ylthiophen-2-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (3-hydroxyphenyl) -ethyl] -amide
2-thiophen-2-ylthiazole-4-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (3-hydroxyphenyl) -ethyl] -amide
3-phenylpyrrole-1-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (3-hydroxyphenyl) -ethyl] -amide
[0086]
Further compounds of the present invention include, but are not limited to, Z is 'O' and R1Are the (2R, 3R) isomers of the general formula (I) wherein H is 'H';1, RTwoAnd RThreeAnd equivalent analogs included in all definitions of.
[0087]
Furan-2-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -amide
Furan-3-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -amide
Thiophene-2-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -amide
Thiophene-3-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -amide
Morpholine-4-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -amide
Furan-2-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -amide
Furan-3-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -amide
Thiophene-2-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -amide
Thiophene-3-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -amide
Morpholine-4-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -amide
Furan-2-carboxylic acid [2-cyclohexyl-1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -ethyl] -amide
Furan-3-carboxylic acid [2-cyclohexyl-1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -ethyl] -amide
Thiophene-2-carboxylic acid [2-cyclohexyl-1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -ethyl] -amide
Thiophene-3-carboxylic acid [2-cyclohexyl-1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -ethyl] -amide
Morpholine-4-carboxylic acid [2-cyclohexyl-1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -ethyl] -amide
Naphthalene-1-carboxylic acid [2-cyclohexyl-1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -ethyl] -amide
Naphthalene-2-carboxylic acid [[2-cyclohexyl-1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -ethyl] -amide
Benzo [b] thiophene-2-carboxylic acid [2-cyclohexyl-1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -ethyl] -amide
Furan-2-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3,3-dimethyl-butyl] -amide
[0088]
Furan-3-carboxylic acid 1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3,3-dimethyl-butyl] -amide
Thiophene-2-carboxylic acid 1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3,3-dimethyl-butyl] -amide
Thiophene-3-carboxylic acid 1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3,3-dimethyl-butyl] -amide
Morpholine-4-carboxylic acid 1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3,3-dimethyl-butyl] -amide
Benzo [b] thiophene-2-carboxylic acid 1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3,3-dimethyl-butyl] -amide
Naphthalene-1-carboxylic acid 1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3,3-dimethyl-butyl] -amide
Naphthalene-2-carboxylic acid 1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3,3-dimethyl-butyl] -amide
N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3,3-dimethyl-butyl] -benzamide
Furan-2-carboxylic acid [2-cyclopentyl-1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -ethyl] -amide
Furan-3-carboxylic acid [2-cyclopentyl-1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -ethyl] -amide
Thiophene-2-carboxylic acid [2-cyclopentyl-1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -ethyl] -amide
Thiophene-3-carboxylic acid [2-cyclopentyl-1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -ethyl] -amide
Morpholine-4-carboxylic acid [2-cyclopentyl-1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -ethyl] -amide
N- [2-cyclopentyl-1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -ethyl] -benzamide
Naphthalene-1-carboxylic acid [2-cyclopentyl-1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -ethyl] -amide
[0089]
Naphthalene-2-carboxylic acid [2-cyclopentyl-1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -ethyl] -amide
Benzo [b] thiophene-2-carboxylic acid [2-cyclopentyl-1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -ethyl] -amide
Furan-2-carboxylic acid [2-benzylsulfanyl-1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -ethyl] -amide
Furan-3-carboxylic acid [2-benzylsulfanyl-1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -ethyl] -amide
Thiophene-2-carboxylic acid [2-benzylsulfanyl-1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -ethyl] -amide
Thiophene-3-carboxylic acid [2-benzylsulfanyl-1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -ethyl] -amide
Morpholine-4-carboxylic acid [2-benzylsulfanyl-1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -ethyl] -amide
Benzo [b] thiophene-2-carboxylic acid [2-benzylsulfanyl-1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -ethyl] -amide
N- [2-benzylsulfanyl-1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -ethyl] -benzamide
Naphthalene-1-carboxylic acid [2-benzylsulfanyl-1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -ethyl] -amide
Naphthalene-2-carboxylic acid [2-benzylsulfanyl-1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -ethyl] -amide
Furan-2-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2-phenylmethanesulfonyl-ethyl] -amide
Furan-3-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2-phenylmethanesulfonyl-ethyl] -amide
Thiophene-2-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2-phenylmethanesulfonyl-ethyl] -amide
Thiophene-3-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2-phenylmethanesulfonyl-ethyl] -amide
Morpholine-4-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2-phenylmethanesulfonyl-ethyl] -amide
Benzo [b] thiophen-2-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2-phenylmethanesulfonyl-ethyl] -amide
[0090]
N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2-phenylmethanesulfonyl-ethyl] -benzamide
Naphthalene-1-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2-phenylmethanesulfonyl-ethyl] -amide
Naphthalene-2-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2-phenylmethanesulfonyl-ethyl] -amide
2-benzyloxy-3-cyclohexyl-N- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-yl) -propionamide
2- (4-tert-butyl-benzylsulfanyl) -4-methyl-pentanoic acid (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-yl) -amide
2- (4-tert-butyl-phenylmethanesulfonyl) -4-methyl-pentanoic acid (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-yl) -amide
2- (4-tert-butyl-benzylsulfanyl) -N- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-yl) -3- (4-hydroxyphenyl) -propionamide
2- (4-tert-butyl-phenylmethanesulfonyl) -N- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-yl) -3- (4-hydroxyphenyl) -propionamide
2-cyclohexylmethyl-N- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-yl) -4-morpholin-4-yl-4-oxo-butylamide
4,4-dimethyl-2- (2-morpholin-4-yl-2-oxo-ethyl) -pentanoic acid (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-yl) -amide
2-biphenyl-3-yl-4-methyl-pentanoic acid (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydro-furan-3-yl) -amide
4- (3,4-dihydro-1H-isoquinolin-2-yl) -N- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-yl) -2- (4-hydroxy-benzyl) -4- Oxo-butyramide
[0091]
N- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydro-furan-3-yl) -2- (4-hydroxybenzyl) -4-oxo-4- (3-phenyl-pyrrol-1-yl) -butyramide
N- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-yl) -2- (4-hydroxy-benzyl) -4-oxo-4- (3-phenyl-pyrrolidin-1-yl) -butyramide
4-methyl-2- [2-oxo-2- (3-phenyl-pyrrol-1-yl) -ethyl] -pentanoic acid (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-yl) -amide
4-methyl-2- [2-oxo-2- (3-phenyl-pyrrolidin-1-yl) -ethyl] -pentanoic acid (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-yl) -amide
2- [2- (1,3-dihydro-isoindol-2-yl) -2-oxo-ethyl] -4-methyl-pentanoic acid (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-yl) -Amide
4- (1,3-dihydro-isoindol-2-yl) -N- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-yl) -2- (4-hydroxy-benzyl) -4-oxo -Butyramide
2- [2- (3,4-dihydro-1H-isoquinolin-2-yl) -2-oxo-ethyl] -4-methyl-pentanoic acid (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-yl ) -Amide
[0092]
Further compounds of the present invention include, but are not limited to, Z is 'O' and R1Are the (2S, 3R) isomers of the general formula (I) wherein ‘is 'H';1, RTwoAnd RThreeAnd equivalent analogs included in all definitions of.
[0093]
4-tert-butyl-N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -benzamide
N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -4-trifluoromethoxybenzamide
4-dimethylamino-N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -benzamide
N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -4-isopropylbenzamide
4-difluoromethoxy-N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -benzamide
N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -4-trifluoromethylbenzamide
Benzo [b] thiophene-2-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -amide
Benzo [b] thiophen-3-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -amide
Benzothiazole-5-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -amide
N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -4-thiophen-2-ylbenzamide
5-phenylthiophene-2-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -amide
[0094]
4-phenylthiophene-2-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -amide
4-tert-butyl-N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -benzamide
N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -4-trifluoromethoxybenzamide
4-dimethylamino-N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -benzamide
4-isopropyl-N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -benzamide
4-difluoromethoxy-N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -benzamide
N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -4-trifluoromethylbenzamide
Benzo [b] thiophene-2-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -amide
Benzo [b] thiophen-3-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -amide
Benzothiazole-5-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -amide
N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -4-thiophen-2-ylbenzamide
5-phenylthiophene-2-carboxylic acid [[1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -amide
4-phenylthiophene-2-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -amide
[0095]
Further compounds of the present invention include, but are not limited to, Z is 'O' and R1Are the (2S, 3R) isomers of the general formula (I) wherein ‘is 'H';1, RTwoAnd RThreeAnd equivalent analogs included in all definitions of.
[0096]
Furan-3-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -amide
Thiophene-3-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -amide
Furan-3-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -amide
Thiophene-3-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -amide
Furan-3-carboxylic acid [2-cyclohexyl-1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -ethyl] -amide
Thiophene-3-carboxylic acid [2-cyclohexyl-1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -ethyl] -amide
Furan-3-carboxylic acid 1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3,3-dimethyl-butyl] -amide
Thiophene-3-carboxylic acid 1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3,3-dimethyl-butyl] -amide
Furan-3-carboxylic acid [2-cyclopentyl-1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -ethyl] -amide
Thiophene-3-carboxylic acid [2-cyclopentyl-1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -ethyl] -amide
Furan-3-carboxylic acid [2-benzylsulfanyl-1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -ethyl] -amide
Thiophene-3-carboxylic acid [2-benzylsulfanyl-1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -ethyl] -amide
Furan-3-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2-phenylmethanesulfonyl-ethyl] -amide
Thiophene-3-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2-phenylmethanesulfonyl-ethyl] -amide
[0097]
In view of all the above examples, it is also intended to include oxidized analogs of capping groups containing nitrogen that are easily oxidized to form N-oxides or sulfur that are easily oxidized to form sulfones. The following structure is a detailed example.
[0098]
Embedded image
For those skilled in the art of performing organic chemistry, compounds of general formula (I) are readily synthesized by a number of chemical strategies, performed either in solution or in the solid phase (general of the principles of solid phase synthesis). For a complete review, see Atherton, E. and Sheppard, RC In'Solid Phase Peptide Synthesis: A Practical Approach ', Oxford University Press, Oxford. Solid phase strategies are attractive in that thousands of analogs can be obtained on established parallel synthesis methods, typically on a scale of 5-100 mg (see, for example, (a) Bastos, M .; Maeji, NJ; Abeles, RH Proc. Natl. Acad. Sci. USA,92, 6738-6742, 1995).
[0100]
Thus, one strategy for the synthesis of compounds of general formula (I) includes:
[0101]
(A) Appropriately functionalized and protected (2-alkyl-3-alkyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-yl) amide or (2-alkyl-3-alkyl-4-oxo) solution in solution Preparation of -tetrahydrothiophen-3-yl) amide or (1-alkyl-2-alkyl-5-oxocyclopentyl) amide building blocks.
[0102]
(B) binding of structural unit (a) to a solid phase via a linker that is stable to the synthesis conditions but is easily cleaved at the end of the synthesis (for the “linker” function applied to solid phase synthesis, for example, James, IW, Tetrahedron, 55 (Report N o 489), 4855-4946, 1999).
[0103]
(C) Solid-phase organic chemistry (Brown, RDJ Chem. Soc., Perkin Trans. 1,19, 3293-3320, 1998).
[0104]
(D) cleavage of the compound from the solid phase into solution.
[0105]
(E) Cleavage walk-up and compound analysis.
[0106]
The first step in the synthesis of compounds of general formula (I) is the preparation of functionalized and protected building blocks in solution. A specific scheme for (2-alkyl-3-alkyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-yl) amide (7) is detailed in Scheme 1.
[0107]
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FmOC (O) denotes the known amine protecting group 9-fluorenylmethoxycarbonyl (see Fmoc, Atherton, E. and Sheppard, RC, 1989), and "Pg" refers to free hydroxyl or tert- Indicates any of hydroxyl protecting groups such as butyl ether. Specifically, by condensation with diazomethane, R1= H is formed.
[0109]
Given step (a), the synthesis starts with a suitably protected β-hydroxy-α-alkyl-α-amino acid (4). The amino acids of β-hydroxy-α- can be prepared by various literature methods, for example, (a) Adams, Z .; M. , Jackson, R.A. F. W. Palmer, N .; J. , Rami, H .; K. , Wythes, M.A. J. , J. et al. Chem. Soc. , Perkin Trans I, 937-947, 1999, (b) Hubschwerlen, C. et al. , Et al, J.A. Med. Chem,41, 3972-3975, 1998, (c) Luzzio, F. et al. A. , Et al, Tet. Lett. ,41, 7151-7155, 2000, (d) Morgan, A .; J. et al, Org. Lett.1 (12), 1949-1952, 1999. (E) Zhang, H .; , Xia, P .; , Zhou, W.W. , Tetrahedron: Asymmetry,11, 3439-3447, 2000, (f) Blaskovich, M .; A. , Et al, J.A. Org. Chem,63, 3631-3646, 1998, (g) Seebach, D .; et al, Helv. Chim. Acta. ,70, 1194, 1987. Α-Alkyl-α-amino acids can also be prepared by methods described in many literatures, for example, Cativiela, C .; , Diaz-de-Villegas, M.W. D. Tetrahedron: Asymmetry,9, 3517-3599, 1998.
[0110]
RTwoAnd RThreeIn the simplest case where is a methyl group, the β-hydroxy-α-alkyl-α-amino acid (4) has the known (2R, 3SR) -a-methylthreonine (3S isomerD-Thr and the 3R isomerD-AllThr). Activation of a suitably protected β-hydroxy-α-alkyl-α-amino acid (4) via isobutyl chloroformate mixed anhydride followed by condensation with diazomethane to afford diazomethyl ketone Intermediate (6) is obtained. According to the reaction conditions detailed in Scheme 1, the formation of diazoketone is clearly observed. However, the overall improvement in the isolated yield of diazoketone (6) is due to the less active (1′R or S, 4R) 4- (1′-alkoxyethyl) -2- (9H-fluorene-9-). (Ylmethoxy) -4-methyl-4H-oxazol-5-one (5), which is difficult to form, by pre-forming acylfluoride of (4) and reaction with ethereal diazomethane For 48 hours. Treatment of the diazomethylketone intermediate (6) with lithium chloride in aqueous acetic acid forms the protected (2-alkyl-3-alkyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-yl) amide (7). Simple R1Introduction of a substituent can be carried out by converting activated (4) into diazoethane (R1= CHThree) Or 1-phenyloxydiazoethane (R1= CHTwoOPh) or the like may be used instead of diazomethane for condensation.
[0111]
The protected building blocks detailed in Scheme 1 (synthesis exemplified by (2-alkyl-3-alkyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-yl) amide (7)) are used in the solid-phase synthesis of inhibitor molecules. May be used (steps (b)-(e)). Step (b), the solid phase binding of the aldehyde or ketone, has been described previously by various methods (eg, (a) James, IW, 1999, (b) Lee, A., Huang, L .; , Ellman, JA, J. Am. Chem. Soc,121 (43), 9907-9914, 1999, (c) Murphy, A. et al. M. , Et al, J.A. Am. Chem. Soc,114, 3156-3157, 1992). Suitable methods that allow the reversible attachment of alkyl ketone functionality, such as (7), rely on a combination of chemistry described previously. Semicarbazide, 4-[[(hydrazinocarbonyl) amino] methylcyclohexanecarboxylic acid trifluoroacetate (8) (Murphy, AM, et al, J. Am. Chem. Soc,114, 3156-3157, 1992) can also be used as detailed in Scheme 2, exemplified by the linkage of (2-alkyl-3-alkyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-yl) amide (7). Good.
[0112]
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Construct (9) is prepared by reaction of the linker molecule (8) and (2-alkyl-3-alkyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-yl) amide (7) by refluxing in an aqueous solution of ethanol / sodium acetate. I do. While the formation of construct (9) is observed in a 2 hour reaction, optimal formation of construct (9) occurs in a 72 hour reaction. Using standard solid phase techniques (see, for example, Atherton, E. and Sheppard, RC, 1989), the amino-functionalized solid phase (amino-functionalized) via the free carboxylic acid functionality of (9). The construct is fixed in a solid phase to form a loaded construct (10). Cleavage of the well-constructed compound by acid is optimal during repeated 24-hour reactions.
[0114]
The loaded construct (10) may be reacted with a wide variety of commercially available or literature carboxylic acids to introduce the left part "UVWXY" of general formula (I). In the simplest example, the entire left-hand portion of the inhibitor of general formula (I) has a capped amino acid (Scheme 3), eg, RFour= 'H', (X)o= ‘-‘, (W)n= 'NH', R8= 'H', n = 1, (V)m= {CO}, m = 1 and U = aryl form analogs of general formula (I).
[0115]
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Alternatively, the carboxylic acid may be prepared in solution by typical organic chemistry methods and coupled to construct (10) on a solid phase (Scheme 4-8). For example (Scheme 4), sodium nitrite / HTwoSOFour, An α-hydroxy acid, exemplified by (13), is formed by treatment in a solution of an amino acid, exemplified by (12) (Degerbeck, F. et al, J. Chem. Soc, Perkin Trans. 1). , 11-14, 1993). The α-hydroxy acid, (13), is treated with sodium hydride in a dimethylformamide / dichloromethane mixture, followed by the addition of benzyl bromide to form 2RS-benzyloxy-3-cyclohexylpropionic acid (14). After coupling (14) to the solid phase construct (10) and then cleaving,Four= 'H', (X)o= ‘-‘, (W)n= 'O', n = 1, (V)m= CHTwo’, Ie, R9, RTen= (H), m = 1 and U = Phenyl form an example of general formula (I), (15). For those skilled in the art of organic chemistry, a wide range of amino acids, such as (12), are converted to the corresponding α-hydroxy acids, such as (13), by the general conditions detailed. In addition, instead of benzyl bromide, a suitable Ar-CR9RTenThe halide may be used to form many variations of the carboxylic acid (14) according to the general conditions detailed. In some cases, it may be preferable to temporarily protect the carboxylic acid as a methyl ester before reacting with the alkyl halide (eg, compound (20), Scheme 6). This ester intermediate is then simply hydrolyzed to the acid (14). A wide range of (V) in the general formula (I)mAn analog of (15), examining and U, is prepared under the general conditions detailed in Scheme 4. Since the final synthesis step involves trifluoroacetic acid (TFA) mediated cleavage of the compound bound to the solid phase, analogs may be prepared in solution by alternative routes if the substituted ether is unstable to TFA. Good (see Scheme 11).
[0117]
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Alternatively, coupling of construct (10) (after removal of Fmoc) with α-hydroxy acid (13) to react with a variety of reagents with various solid phase bound intermediate “Y” substituents of general formula (I) Is formed. For example, α-hydroxyl is reacted under Mitsunobu conditions (Hughes, D. L. Org. React. (NY), 42, 335-656, 1992) to give an ether (ie, a general formula). In (I), X = '-', W = 'O') may be obtained (for an example of Mitsunobu reaction on a solid phase, see Grabowska, U. et al, J. Comb. Chem. ,2 (5), 475-490, 2000). Alternatively, the α-hydroxyl is reacted with carbamyl chloride to give a carbamate (ie, in general formula (I), X = '-', W = 'O', V = 'NHC (O)'). Is also good.
[0119]
Or (Scheme 5), sodium nitrite / HTwoSOFourThe structure was retained (16) by treatment with a solution of the amino acid, exemplified in (12) with potassium bromide (12) (Souers, AJ et al, Synthesis,4, 583-585, 1999). Treatment of α-bromoacid (16) with an alkyl thiol exemplified by 4-tert-butylphenylmethanethiol (17) in dimethylformamide / triethylamine results in 2S- (4-tert-butylbenzylsulfanyl) having the opposite structure ) -4-Methylpropionic acid (18) is obtained. After coupling (18) to the solid phase construct (10) and then cleaving, (19), RFour= 'H', (X)o= ‘-‘, (W)n= 'S', n = 1, (V)m= CHTwo’, Ie, R9, RTen= 'H', m = 1 and U = 4-tert-butylphenyl An example of the general formula (I) is obtained. For those skilled in the art of performing organic chemistry, a wide range of amino acids such as (12) are converted to the corresponding α-bromo acids such as (16) under the general conditions specified. In addition, starting with the S-isomer of (12) gives the S-bromo acid analog of (16) and the R-thioether analog of (18). In addition, instead of (4-tert-butylphenyl) methanethiol (17), a suitable Ar-CR9RTen-SH may be used to form many variations of carboxylic acid (18) with the general conditions detailed. Therefore, in general formula (I), a wide range of (V)mAn analog of (19), examining and U, is prepared under the general conditions detailed in Scheme 5.
[0120]
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Alternatively, coupling of construct (10) (after removal of Fmoc) with an α-bromo acid, eg, (16), allows the various solid phase-bound intermediates “Y” of general formula (I) to react with many reagents. Substituents form. For example, α-bromide is substituted with a nucleophile, for example, alcohol, thiol, carbanion, etc., to form an ether (ie, in the general formula (I), X = '-', W = 'O'), thioether ( That is, in the general formula (I), X = '-' and W = 'S') may be obtained. The thioether may be oxidized to the sulfone if necessary (see Scheme 9; ie, in general formula (I), X = ‘-‘, W = ‘SOTwo') (For an example of bromide substitution and thioether oxidation on the solid phase, see Grabowska, U. et al, J. Comb. Chem.,2 (5)475-490, 2000).
[0122]
Alternatively, a methyl ester (20) is obtained by treating an α-hydroxy acid exemplified in (Scheme 6) and (13) with trimethylsilyl chloride and methanol. Addition of morpholine after activation of the free hydroxyl to chloroformate by phosgene in dichloromethane and further hydrolysis forms morpholine-4-carboxylic acid-1S-carboxy-2-cyclohexylethyl ester (21). By coupling (21) to solid phase construct (10) followed by cleavage, (22), RFour= 'H', (X)o= ‘-‘, (W)n= 'O', n = 1, (V)m= {CO} and U = morpholino An example of the general formula (I) is obtained. For those skilled in the art of performing organic chemistry, a wide variety of α-hydroxy acid esters, such as (20), can be converted to activated chloroformates under the general conditions specified. In addition, many variations of the carboxylic acids (21) may be formed using the appropriate amines instead of morpholine and by the general conditions detailed above. Therefore, in general formula (I), a wide range of (V)mAn analog of (22), examining and U, is prepared under the general conditions detailed in Scheme 6.
[0123]
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Alternatively, (Scheme 7) a wide range of alkyl succinates exemplified by 2R-cyclohexylmethyl succinate 1-methyl ester (23) are commercially available or readily prepared by known methods ((a) Azam et al, J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1, 621, 1996; (b) Evans et al, J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1, 103, 2127, 1981; (c) Oikaw. , Tet. Lett,37, 6169, 1996). After the carboxyl activity of the alkyl succinate (23), morpholine in dimethylformamide is added and the ester is further hydrolyzed to give 2R-cyclohexylmethyl-4-morpholin-4-yl-4-oxo-butyric acid (24) Is obtained. By coupling (24) to solid phase construct (10) followed by cleavage, (25), RFour= 'H', (X)o= CHTwo’, Ie, R6, R7= 'H', o = 1, (W)n= {CO}, n = 1, (V)m= '-' And U = morpholino An example of the general formula (I) is obtained. For those skilled in the art of performing organic chemistry, a wide range of alkyl succinates, such as (23), may be prepared under the general conditions detailed and converted to the corresponding substituted alkyl succinic acid, such as (24). Good. In addition, a suitable amine may be used in place of morpholine to form many variations of carboxylic acid (24) according to the general conditions specified. Therefore, in general formula (I), a wide range of (X)o, (V)mAn analog of (25), examining and U, is prepared under the general conditions detailed in Scheme 7.
[0125]
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Alternatively, (Scheme 8) a wide range of biarylalkyl acetic acids, exemplified by 2RS-biphenyl-3-yl-4-methylpentanoic acid (27), are readily available by known methods ((a) DesJarralis, R L. et al, J. Am. Chem. Soc,120, 9114-9115, 1998; (b) Oballa, R .; M. et al, WO 0149288). By coupling the biarylalkylacetic acid (27) to the solid phase construct after (10) followed by cleavage, (28), RFour= 'H', (X)o= ‘-‘, (W)n= '-', (V)m= '-' And U = m-biphenyl. An example of the general formula (I) is obtained. For those skilled in the art of performing organic chemistry, a wide range of biarylalkylacetic acids such as (27) may be prepared by alkylation of the α-anion of the free acid analog of (26), which further comprises phenylboronic acid ( Prepared by Suzuki coupling of phenylboronic acid and 3-bromophenylacetic acid methyl ester. Instead of phenylboronic acid, a wide variety of arylboronic acids may be used in the Suzuki coupling to form many variations of the carboxylic acid (27) according to the general conditions detailed. Thus, analogs of (28) looking for the broad group "U" in general formula (I) are prepared under the general conditions detailed in Scheme 8.
[0127]
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Many other possibilities for solid-phase organic chemistry (eg, for a review of recent SPOC publications, see Brown, RDJ Chem. Soc., Perkin Trans. 1,19, 3293-3320, 1998) may be used to derive construct (10) to a compound of general formula (I). For example, 'U-V-W-X-Y' on the left side of the general formula (I) is partially constructed in a solution, coupled to the construct (10), and further modified on a solid phase. You may. For example (Scheme 9), a simple extension of Scheme 5 is carried out by oxidation of an intermediate solid-bound species using m-chloroperbenzoic acid in dichloromethane prior to cleavage to give the sulfone analog (29), RFour= 'H', (X)o= ‘-‘, (W)n= ‘SOTwo, N = 1, (V)m= CHTwo’, Ie, R9, RTen= 'H', m = 1 and U = 2-furanyl An example of the general formula (I) is obtained. As described in Scheme 5, many variations of carboxylic acid (18) are prepared according to the general conditions specified. Therefore, in general formula (I), a wide range of (V)mThe analogs of (29), which test for and U, are prepared under the general conditions detailed in Schemes 5 and 9.
[0129]
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The compound of general formula (I) is finally released from the solid phase by treatment with trifluoroacetic acid / water, followed by evaporation, lyophilization and characterization by standard analyses.
[0131]
A second synthetic strategy for compounds of general formula (I) has the following:
[0132]
(F) suitably functionalized and protected (2-alkyl-3-alkyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-yl) amide or (2-alkyl-3-alkyl-4-oxo-tedrahydro) in solution Preparation of (thiophen-3-yl) amide or (1-alkyl-2-alkyl-5-oxocyclopentyl) amide building blocks. Preferred protecting groups for liquid phase chemistry are the Nα-tert-butoxycarbonyl group and the Nα-benzyloxycarbonyl group.
[0133]
(G) Standard organic chemistry methods for the conversion of structural units (f) to compounds of general formula (I) (Scheme 10).
[0134]
In the simplest case, the entire left part of the inhibitor of general formula (I) may be prepared in solution by typical organic chemistry methods and coupled to building block (f) ((2-alkyl (See Scheme 10 which illustrates the preparation and use of -3-alkyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-yl) carbamic acid tert-butyl ester (32)).
[0135]
Embedded image
An attractive alternative to the mixed anhydride activation of (30) is by using a preformed acylfluoride (as detailed in Scheme 1). The general strategy detailed in Scheme 10 is particularly useful when the compound of general formula (I) contains a substituent that is susceptible to degradation with trifluoroacetic acid, which is useful in each of the solid-phase schemes 4-9. The final reagent used. For example (Scheme 11), after treatment of a solution of the α-hydroxy acid (34) with sodium hydride in a dimethylformamide / dichloromethane mixture, by adding 4-tert-butylbenzyl bromide. 2RS- (4-tert-butylbenzyloxy) -4-methylpentanoic acid (2RS- (4-tert-butylbenzyloxy) -4-methylpentanoic acid) (35) is formed. When (35) is coupled to hydrochloride (33), (36), RFour= 'H', (X)o= ‘-‘, (W)n= 'O', n = 1, (V)m= CHTwo’, Ie, R9, RTenAn example of a compound of general formula (I) is obtained in which = H ', m = 1 and U = 4-tert-butylphenyl. For those skilled in the art of performing organic chemistry, instead of 4-tert-butylbenzylbromide, a suitable Ar-CR9RTen-With halides, many variations of carboxylic acids (35) may be formed under the indicated conditions. Therefore, in general formula (I), a wide range of (V)mAnd the analog of (36), which tests for U, is prepared under the conditions detailed in Scheme 11.
[0137]
Embedded image
U-V-W-X-Y protected (2-alkyl-3-alkyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-yl) amide or (2-alkyl-3-alkyl-4-oxo-tedrahydro A third synthetic strategy for compounds of general formula (I) wherein the addition to a thiophen-3-yl) amide or (1-alkyl-2-alkyl-5-oxocyclopentyl) amide building block involves a multi-step organic reaction is: It has the following:
[0139]
(H) suitably functionalized and protected (2-alkyl-3-alkyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-yl) amide or (2-alkyl-3-alkyl-4-oxo-tedrahydro) in solution Preparation of (thiophen-3-yl) amide or (1-alkyl-2-alkyl-5-oxocyclopentyl) amide building blocks. Preferred protecting groups in liquid phase chemistry are the Nα-tert-butoxycarbonyl group and the Nα-benzyloxycarbonyl group.
[0140]
(I) (2-alkyl-3-alkyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-yl) amide or (2-alkyl-3-alkyl-4-oxo-tedrahydrothiophene-3), for example, as dimethyl acetal Protection of the ketone functionality of the -yl) amide or (1-alkyl-2-alkyl-5-oxocyclopentyl) amide building blocks. Alternatively, the ketone may be reduced to an achiral secondary alcohol and re-oxidized as a final synthesis step.
[0141]
(J) Standard organic chemistry methods for the conversion of structural units (i) to compounds of general formula (I).
[0142]
After the intermediate is prepared in a solution, it may be coupled to the structural unit (i) and further derivatized to the compound of the general formula (I) ((2-alkyl-3-alkyl-4-hydroxytetrahydro-furan) -3-yl) carbamic acid tert-butyl ester (37) (see Scheme 12 which illustrates the preparation and use).
[0143]
Embedded image
Alternatively, depending on the type of chemistry used to construct the UVWXY on the left side of the compounds of general formula (I), ketones may require protection, for example as dimethyl acetal. Good. Such a method is illustrated in detail in Scheme 13 by the preparation and use of (2-alkyl-3-alkyl-4,4-dimethoxy-tetrahydrofuran-3-yl) carbamic acid benzyl ester (41).
[0145]
Embedded image
The present invention extends to novel intermediates as described above, and methods for preparing compounds of general formula (I) from the intermediate precursors. In addition, methods of preparing intermediates from these intermediate precursors also form part of the invention.
[0147]
The compounds of general formula (I) are useful as laboratory tools and as therapeutic agents. In the laboratory, depending on the compounds of the present invention, known or newly discovered cysteine proteases can be used in the establishment of disease states, a process commonly referred to as "target validation". ) Or to establish whether an important or at least significant biochemical function is ongoing.
[0148]
According to a second aspect of the present invention, (a) assessing the in vitro binding of a compound as described above to an isolated known or putative cysteine protease to determine potency criteria ( measures); and, if necessary, the following steps:
(B) assessing the binding of the compound to closely related homologous proteases of the target and common house-keeping proteases (eg, trypsin) to provide a measure of selectivity;
(C) monitoring a cell-based functional marker for specific cysteine protease activity in the presence of the compound; and
(D) monitoring a functional marker based on an animal model of the specific cysteine protease activity in the presence of the compound;
A method is provided for identifying a known or putative cysteine protease inhibitor as a target for therapy, having one or more of the following:
[0149]
Thus, the present invention provides a method for identifying a known or putative cysteine protease inhibitor as a therapeutic target. Various approaches and levels of complexity are appropriate for effective inhibition and "confirmation" of a particular target. In the first case, the method evaluates the in vitro binding of a compound of general formula (I) to an isolated known or putative cysteine protease and provides a measure of "potential" . Further evaluation of the binding of the compound of general formula (I) to the target's closely related homologous proteases and common housekeeping proteases (eg, trypsin) provides a measure of “selectivity”. The second level of complexity may be assessed by monitoring a cell-based functional marker of a particular cysteine protease activity in the presence of the compound of general formula (I). For example, the "human osteoclast resorption assay" has been used as a second cell-based in vitro test system to monitor the activity of cathepsin K and the biological effects of protease inhibitors (eg, WO -A-9850533). The "MHC-II processing-T cell activation assay" was used as a second cell-based in vitro test system to monitor the activity of cathepsin S and the biological effects of protease inhibitors (Shi, GP, et al, Immunity,10, 197-206, 1999). In examining viral or bacterial infections, such markers simply provide a functional assessment of viral (eg, mRNA copy count) or bacterial loading and assessment of the biological effects of protease inhibitors. There may be. A third level of complexity may be assessed by monitoring a functional marker based on an animal model of a particular cysteine protease activity in the presence of a compound of general formula (I). See, for example, Leishmania infection, p. Murine models of P. vinckei infection, malaria (inhibition of falcipain) and trypanosoma cruzi infection (cruzipain) show that inhibition of cysteine protease, which plays a key role in pathogen transmission, To be effective in "confirming" the target.
[0150]
Accordingly, the present invention provides the use of a compound of general formula (I) in the identification of a known or putative cysteine protease inhibitor as a target for therapy.
[0151]
The compounds of general formula (I) are useful for treating or preventing cysteine protease related diseases in vivo.
[0152]
According to a third aspect of the invention, the general formula (I) for use in medicine, in particular for the prevention or treatment of a disease whose disease state is modified by inhibiting a cysteine protease: Are provided.
[0153]
According to a fourth aspect of the present invention there is provided the use of a compound of general formula (I) in the preparation of a medicament for preventing or treating a disease state in which the disease state is modified by inhibiting cysteine protease.
[0154]
Some cysteine proteases function in the normal physiological process of protein degradation in animals, including humans, for example, in the destruction of connective tissue. However, elevated levels of these enzymes in the body can result in pathological conditions that cause disease. Thus, cysteine proteases are not limited to, but include, but are not limited to, Pneumocystis carinii, Trypanosoma cruzi, Trypanosoma brucei, Cryptia cruzi, Cryptia cruzi, and Cryptia brutusi infection with Trypanoma brucei cruzi. It has been implicated in various disease states, such as autoimmunity, schistosomiasis, malaria, tumor metastasis, metachromatic leukodystrophy, muscular dystrophy, and spinal cord atrophy. See WO-A-9404172 and EP-A-0603873 and references listed in both. In addition, a bacterial cysteine protease secreted from S. Aureus called staphylopain has been implicated as a bacterial force factor (Potempa, J., et al. J. Biol). Chem,262 (6), 2664-2667, 1998).
[0155]
The present invention is useful for the prevention and / or treatment of the above mentioned or encompassed disease states. The present invention also includes administering a compound of the present invention to an animal in need thereof, particularly a mammal, most preferably a human, wherein the disease caused by abnormal levels of cysteine proteases, especially cysteine proteases of the papain superfamily, is disclosed. Useful for treatment or prevention methods. The present invention is particularly applicable to Pneumocystis carinii, Trypanosoma cruzi, Trypanosoma brucei, Trypanosoma brucei, Leishmania sciutumium, and Leishmania cisternia moss. ), Infection with foot-and-mouth disease virus and Crithidia fusiculata; and cysteine proteins such as osteoporosis, autoimmunity, schistosomiasis, malaria, metastasis of tumor, metachromatic leukodystrophy, muscular dystrophy, spinal cord atrophy, etc. There is to provide a method of treatment of the relevant disease.
[0156]
Inhibitors of cruzipain, especially compounds specific for cruzipain, are useful for treating Chagas' disease.
[0157]
According to the present invention, an effective amount of a compound of general formula (I) may be administered to inhibit a protease associated with a particular condition or disease. Of course, this dosage will be further modified by the type of administration of the compound. For example, parenteral administration of a compound of general formula (I) is preferred to achieve an "effective amount" for acute therapy. Intramuscular bolus injection can also be used, but intravenous infusion of the compound in 5% dextrose in water or normal saline, or a similar formulation with suitable excipients, is most effective. Specifically, the parenteral dosage is from about 0.01 to about 100 mg / kg; preferably from 0.1 to about 100 mg / kg, to maintain the concentration of the drug in plasma at a concentration effective to inhibit cysteine protease. Will be 20 mg / kg. The compound may be administered one to four times daily at a level to achieve a total daily dose of about 0.4 to about 400 mg / kg / day. The exact amount of a compound of the invention that is therapeutically effective, and the route by which such compound is best administered, will be determined by comparing blood levels of the agent to the concentrations required to have a therapeutic effect. Is easily determined by Prodrugs of the compounds of the present invention may be prepared by a suitable method. For those compounds where the prodrug moiety is ketone functional, particularly ketals and / or hemiacetals, the conversion may be performed according to known methods.
[0158]
The compounds of the present invention may also be administered orally to a patient such that the concentration of the drug is sufficient to inhibit bone resorption or to achieve other therapeutic indications as disclosed herein. You may. Specifically, the pharmaceutical composition containing the compound is administered at an oral dosage of from about 0.1 to about 50 mg / kg to suit the condition of the patient. Preferably, the oral dose will be from about 0.5 to about 20 mg / kg.
[0159]
No unacceptable toxic effects are expected when administering a compound of the present invention in accordance with the present invention. Compounds of the present invention having good bioavailability may be tested in one of several bioassays to determine the concentration of the compound that is required to have a given pharmacological effect. .
[0160]
According to a fifth aspect of the present invention there is provided a medicament or veterinary composition comprising one or more compounds of general formula (I) and a pharmaceutically or veterinarily acceptable carrier. Other active ingredients may be present if deemed appropriate or recommended for the disease or condition being treated or prevented.
[0161]
Carriers, or one or more, if present, must be acceptable in that they are compatible with the other ingredients of the formulation and are not harmful to the recipient.
[0162]
Formulations include those suitable for rectal, nasal, topical (including buccal and sublingual), vaginal or parenteral (including subcutaneous, intramuscular, intravenous and intradermal) administration, but preferably The formulation is a formulation that is administered orally. The formulations may conveniently be presented in unit dosage form, such as tablets and sustained release capsules, and may be prepared by methods known in the art of pharmacy.
[0163]
Such methods include bringing the active agent as defined above into association with a carrier (bringing into association with). In general, formulations are prepared by incorporating the active agent uniformly and homogeneously in combination with a liquid carrier or a finely divided solid carrier or both, and, if necessary, shaping the product. The invention also extends to a method of preparing a pharmaceutical composition that incorporates a compound of general formula (I) in association with or in association with a pharmaceutically or veterinarily acceptable carrier or vehicle. Expand.
[0164]
Formulations for oral administration in the present invention may be formulated as discrete units, such as capsules, cachets or tablets, each containing a predetermined amount of the active agent; as powders or granules; It may be presented as a solution or suspension; or as an oil-in-water or water-in-oil liquid emulsion; or as a bolus and the like.
[0165]
For compositions for oral administration (eg, tablets and capsules), the term “acceptable carrier” refers to common excipients, for example, binders such as molasses, acacia, gelatin, sorbitol, tragacanth, polyvinyl. Pyrrolidone (povidone), methylcellulose, ethylcellulose, sodium carboxymethylcellulose, hydroxypropylmethylcellulose, sucrose and starch; fillers and carriers such as corn starch, gelatin, lactose, sucrose, microcrystalline cellulose, kaolin, mannitol, dicalcium phosphate, Sodium chloride and alginic acid; and magnesium stearate, sodium stearate and other metal stearate, glycerol stearate, Stearate include, silicone oils, talc waxes, vehicles such as a lubricant, such as oil and colloidal silica. Flavorings such as peppermint, wintergreen oil, cherry flavoring can also be used. It may be desirable to add a coloring agent to make the dosage form readily identifiable. Tablets may be coated by methods known in the art.
[0166]
A tablet may be made by compression or molding, optionally with one or more accessory ingredients. Compressed tablets may be mixed with binders, lubricants, inert diluents, preservatives, surfactants or dispersants, if necessary, and activated in a free flowing form such as a powder or granules. It may be prepared by compressing the agent with a suitable machine. Molded tablets may be made by molding in a suitable machine a mixture of the powdered compound moistened with an inert liquid diluent. The tablets may be coated or scored if necessary and may be formulated so as to provide slow or controlled release of the active agent.
[0167]
Other formulations suitable for oral administration include lozenges containing the active ingredient in a flavor base, generally sucrose and acacia or tragacanth; gelatin and glycerin, or active ingredients in inert bases such as sucrose and acacia. And mouthwashes containing the active agent in a suitable liquid carrier.
[0168]
Parenteral formulations will usually be sterile.
[0169]
According to a sixth aspect of the present invention there is provided a method of preparing a medicament or veterinary composition as described above, comprising incorporating the active ingredient in combination with a carrier, for example by mixing.
[0170]
Preferred features of each aspect of the invention are as for each aspect mutatis mutandis.
[0171]
Now, the present invention will be described in detail with reference to the following examples.
[0172]
Liquid phase chemistry-general methods
All solvents were purchased from ROMIL Ltd (Waterbeach, Cambridge, UK) in SpS or Hi-Dry grade unless otherwise noted. General peptide synthesis reagents are available from Chem-Impex Intl. Inc. (Wood Dale IL 60191. USA). Thin layer chromatography (TLC) was performed on pre-coated plates (Merck aluminum sheets silica 60 F254, part no. 5554). Visualization of the compounds was achieved under ultraviolet light (254 nm) or using appropriate staining reagents. Flash column purification was performed on silica gel 60 (Merck 9385). All analytical HPLC was run on an automated Agilent system with UV detection at 215 and / or 254 nm, Solvent A = 0.1% aqueous trifluoroacetic acid (TFA) and Solvent B = 90% acetonitrile / 10% Phenomenex Jupiter C using a mixture of solvent AFour, 5μ, 300A, 250 × 4.6 mm. Unless otherwise noted, a gradient of B at 10-90% A over 25 minutes at 1.5 mL / min was performed on all analytical HPLC analyses. HPLC-MS analysis was performed on a Phenomenex Columnus C at 0.4 mL / min.8Agilent 1100 Series LC / MSD (Agilent 1100 series LC) using an automated Agilent HPLC system with a gradient of B at 10-90% A over 10 minutes at 5μ, 300A, 50 × 2.0 mm. / MSD). Nuclear magnetic resonance (NMR) was obtained on a Bruker DPX400 (400 MHz 1H frequency; QXI probe) at the indicated solvents and temperatures. Chemical shifts are expressed in parts / million (δ) and refer to the residual signal of the solvent. Coupling constant (J) is expressed in Hz.
[0173]
Solid Phase Chemistry-General Methods
Exemplary inhibitors (1-37) were prepared by combining solution and solid phase Fmoc chemistry (for a general description, 'Solid Phase Peptide Synthesis', Atherton, E. and Sheppard, RC, See IRL Press Ltd, Oxford, UK, 1989). Appropriately protected and functionalized building blocks were prepared in solution (eg, general compound (7), Scheme 1) and then reversibly linked to the solid phase via a suitable linker. Next, a round of coupling / deprotection / chemical modification, eg, oxidation, was performed until the full length of the desired molecule was completed (Scheme 2). In addition, the exemplary inhibitors (1-37) were released (cleaved) from the solid phase, analyzed, purified, and assayed for inhibition against a range of proteases.
[0174]
Usually, multipin (polyamide 1.2 → 10 micromolar loading, see www.mimotopes.com) was used for solid phase synthesis, although an appropriate solid surface could be selected. Typically, 1.2 micromolar gears were used to obtain a small-scale crude example for preliminary screening, and 10 micromolar crown was used in the scale-up synthesis and purification of the preferred embodiment. For a thorough description of the standard coupling and Fmoc deprotection methods (solid phase multipin methodology), see Grabowska, U. et al, J. Comb.2 (5), 475-490, 2000).
[0175]
Preparation of initial assembly
The building block-linker construct (e.g., (9)) is treated with 2- (1H-benzotriazol-1-yl) -1,1,1 in dimethylformamide (DMF, specifically 1-10 mL) for 5 minutes. Carboxyl activity with 3,3-tetramethyluronium hexafluorophosphate (HBTU, 1 molar equivalent), 1-hydroxybenzotriazole hydrate (HOBT, 1 molar equivalent), and N-methylmorpholine (NMM, 2 molar equivalents) Was performed. After addition of amino-functionalized DA / MDA crown or HEMA gear (10 micromoles per crown / 1.2 micromoles per gear, 0.33 molar equivalents of total surface amino-functionalization relative to activated construct) , DMF was added to coat the solid surface. The loading reaction was performed overnight. After overnight loading, the crown / gear is subjected to a standard cycle of washing, Fmoc deprotection and quantification of loading (see Grabowska, U. et al) and the loaded building block-linker construct (eg, ( 10)) was obtained. The analysis showed almost quantitative loading in all examples.
[0176]
Coupling cycle
The coupling of the standard Fmoc-amino acid and the new carboxylic acid (10 or 20 molar equivalents) was preactivated for 5 minutes to give 2- (1H-benzotriazol-1-yl) -1,1 in dimethylformamide. , 3,3-tetramethyluronium hexafluorophosphate (HBTU, 10 or 20 molar equivalents), 1-hydroxybenzotriazole hydrate (HOBT, 10 or 20 molar equivalents) and N-methylmorpholine (NMM, 20 or 40 molar equivalents) (Molar equivalent) via activated carboxyl. The activated material was aliquoted into the appropriate wells of a 96-well polypropylene plate (Beckman, 1 mL well, 500 μL solution per well for crown or 250 μL solution per well for gear) in the pattern required for synthesis. The loaded free amino building block-linker construct (eg, (10)) was added and the coupling reaction was performed overnight. After overnight coupling, the crown / gear underwent a standard cycle of washing, Fmoc deprotection (see Grabowska, U. et al). Similar activation and coupling conditions were used for coupling a range of carboxylic acids (R-COOH). Alternatively, a chloroformate such as morpholine-4-carbonyl chloride (10 molar equivalents) was coupled in DMF with the addition of NMM (10 molar equivalents).
[0177]
Acidolytic Cleavage Cycle
A mixture of 95% TFA / 5% water is pre- aliquoted into a 96 well plate of polystyrene in a pattern corresponding to the pattern of synthesis (Beckman, 1 mL well, 600 μL solution per well for crown or 300 μL solution per well for gear). I took it. The completed multi-pin assembly was added to the first plate (mother plate), the units were covered in tin foil and cut for 2x24 hours. Next, the cut multi-pin assembly was removed from the first plate and added to the second plate (wash plate) for 15 minutes. In addition, the spent multipin assembly was discarded and the mother / wash plate was evaporated with an HT-4 GeneVac plate evaporator.
[0178]
Analysis and purification of truncated examples
(A) Example of 1.2 micromole gear. 100 μL of dimethyl sulfoxide (DMSO) was added to the wells of each cut dry wash plate, mixed well, transferred to the corresponding wells of the dry cut mother plate, and mixed well again. 10 μL of this DMSO solution was diluted to 100 μL with a mixture of 90% acetonitrile / 10% 0.1% TFA aqueous solution. A 20 μL aliquot was analyzed by HPLC-MS and full analytical HPLC. In each case, the unpurified exemplary molecule was the expected [M + H]+It showed the ion and the HPLC peak above 80% (by 215 nm UV analysis). This resulted in an approximately 10 mM DMSO stock solution containing good quality unpurified examples for preliminary protease inhibition screening.
[0179]
(B) Example of 10 micromolar crown. 500 μL of a mixture of 90% acetonitrile / 10% 0.1% TFA aqueous solution was added to the wells of each washing plate, mixed well, transferred to the corresponding wells of the mother plate, and mixed well again. 5 μL of this solution was diluted to 100 μL with a mixture of 90% acetonitrile / 10% 0.1% TFA aqueous solution. 20 μL aliquots were analyzed by HPLC-MS and HPLC for total analysis. In each case, the unpurified exemplary molecule was the expected [M + H]+It showed the ion and the HPLC peak above 80% (by 215 nm UV analysis). Next, the polystyrene units containing the crude example were lyophilized.
[0180]
(C) The individual examples (example (b)) were redissolved in a 1: 1 mixture of 0.1% aqueous TFA / acetonitrile (1 mL) and purified by semi-preparative HPLC (Phenomenex Jupiter C).FourPurification by 5 μ, 300 A, 250 × 10 mm, gradient of B at 25-90% A over 25 min, 4.0 mL / min, 215 nm UV detection). The fractions are lyophilized in pre-tarred glass sample vials to give purified examples (specifically 2-4 mg, 40-80% yield). Was.
[0181]
(D) The purified example was dissolved in an appropriate volume of DMSO to give a 10 mM stock solution for accurate protease inhibition screening.
[0182]
Example 1 (2R, 3R) 4-tert-butyl-N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) 2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -benzamide
[0183]
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According to the general details of Scheme 1, the required bicyclic building block, (2R, 3R) (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-yl) -carbamic acid 9H-fluoren-9-yl The methyl ester (7a) was prepared as follows.
[0185]
(1) Preparation of (4S, 5R) 5-methyl-2-phenyl-4,5-dihydrooxazole-4-carboxylic acid methyl ester
[0186]
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Saturated aqueous sodium bicarbonate solution (100 mL) was added to a solution of ethyl benzimidate hydrochloride (4 g, 21.25 mmol) in diethyl ether (100 mL). The phases were mixed vigorously and then separated. The ether layer is dried (NaTwoSOFour), Evaporated under reduced pressure to give a crude residue. The residue was then dissolved in diethyl ether (8.5 mL) and added to a solution of L-threonine methyl ester hydrochloride (2.1 g, 12.4 mmol) in water (1.5 mL). After stirring the mixture for 20 hours, water (20 mL) was added. Further, the mixture was extracted with diethyl ether (40 mL × 3), and the combined ether layers were washed with brine (20 mL), dried (NaTwoSOFour), Evaporated under reduced pressure to give a residue. Excess ethyl benzimidate was distilled off at 100 ° C. under reduced pressure (0.5-1 mbar). The remaining material was purified by flash chromatography on silica gel (300 g) using ethyl acetate: heptane (1: 3) as eluent to give (4S, 5R) 5-methyl-2-phenyl-4,5- Dihydrooxazole-4-carboxylic acid methyl ester was obtained (1.83 g, 67%), TLC (single UV spot, Rf= 0.47, 50% ethyl acetate in heptane), analytical HPLC Rt= 10.33 min, HPLC-MS (Rt= 5.76 minutes, 220 [M + H]+Single main UV peak).
[0188]
Embedded image
(2) Preparation of (4R, 5R) 4,5-dimethyl-2-phenyl-4,5-dihydrooxazole e-4-carboxylic acid methyl ester
[0190]
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A solution of (4S, 5R) 5-methyl-2-phenyl-4,5-dihydrooxazole-4-carboxylic acid methyl ester (8.0 g, 36.53 mmol) in anhydrous tetrahydrofuran (43 mL) was added under a nitrogen atmosphere under a nitrogen atmosphere. At 78 ° C. was added to a solution of lithium diisopropylamine (20.2 mL, 2M solution in heptane and tetrahydrofuran) in anhydrous tetrahydrofuran: hexane (243 mL, 10: 1). After stirring at −78 ° C. for 1 hour, methyl iodide (5.70 mL, 91.74 mmol) was added. The mixture was stirred at −78 ° C. for a further 4 hours, then warmed to room temperature overnight over 18 hours. Next, a saturated aqueous ammonium chloride solution (200 mL) was added, followed by heptane (300 mL). After mixing well, the layers were separated and the organic phase was washed with brine, dried (NaTwoSOFour), Evaporated under reduced pressure to give a residue. Flash chromatography on silica gel (300 g) using ethyl acetate: heptane (3: 7) as eluent gave (4R, 5R) 4,5-dimethyl-2-phenyl-4,5-dihydrooxazole-4-. The carboxylic acid methyl ester was obtained (7.5 g, 88%), TLC (single UV spot, Rf= 0.49, 50% EtOAc in heptane), analytical HPLC Rt= 10.99 min, HPLC-MS (Rt= 5.85 minutes, 234 [M + H]+Single main UV peak).
[0192]
Embedded image
(3) Preparation of (2R, 3R) 2-amino-3-hydroxy-2-methylbutyric acid
[0194]
Embedded image
Hydrochloric acid (6M, 10 mL) was added to (4R, 5R) 4,5-dimethyl-2-phenyl-4,5-dihydrooxazole-4-carboxylic acid methyl ester (1.12 g, 4.81 mmol), The mixture was heated at reflux for 18 hours. The mixture was then cooled to room temperature before adding water (7 mL) and then diethyl ether (14 mL). The phases were mixed well and then separated. The aqueous phase was concentrated under reduced pressure and then purified on Dowex 50Wx4 (activated with 0.01 M HCl). Water (100 mL), then 1M NHFourElution with OH provided 2-amino-3-hydroxy-2-methyl-butyric acid (640 mg, 95%). HTwoO (trace): EtOH-EtTwoBy recrystallization from O, the enantiopure (2R, 3R) -isomer (1H-NMR), TLC (single UV spot, Rf= 0.27, 4: 1: 1nBuOH: HTwoO: AcOH), HPLC-MS (Rt= 0.45 min, 134 [M + H]+Single main UV peak).
[0196]
Embedded image
(4) Preparation of (2R, 3R) 2- (9H-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino) -3-hydroxy-2-methylbutyric acid
[0198]
Embedded image
(2R, 3R) 2-Amino-3-hydroxy-2-methylbutyric acid (1.54 g, 11.58 mmol) at 0 ° C. with vigorous stirring of sodium carbonate (3.05 g, 28.94 mmol) in water (66 mL). Was added to the solution. Next, 1,4-dioxane (32 mL) was added to give a cloudy, fluid mixture. Further, 9-fluorenylmethyl chloroformate (3.13 g, 12.16 mmol) in 1,4-dioxane (35 mL) was added over 40 minutes. Next, the mixture was warmed to room temperature over 30 minutes. Further water (300 mL) was added and the reaction mixture was washed with chloroform (2 × 250 mL) and the combined organic layers were discarded. The aqueous phase was acidified (〜pH 2) with 1 M HCl to give a thick cloudy mixture. The acidified aqueous mixture was extracted with chloroform (3 × 250 mL) and the combined organic phases were dried (NaTwoSOFour) And evaporated under reduced pressure to give a residue (4.2 g). Recrystallization (from ethyl acetate-heptane) gave (2R, 3R) 2- (9H-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino) -3-hydroxy-2-methylbutyric acid (3.8 g, 92 %), TLC (single UV spot, Rf=, CHClThree20% MeOH in HPLC), analytical HPLC Rt= 16.09 min, HPLC-MS (Rt= 7.41 min, 356 [M + H]+378 [M + Na]+Single main UV peak).
[0200]
Embedded image
(5) Preparation of (1R, 1′R) [3-diazo-1- (1-hydroxyethyl) -1-methyl-2-oxopropyl] carbamic acid 9H-fluoren-9-ylmethyl ester
[0202]
Embedded image
(2R, 3R) 2- (9H-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino) -3-hydroxy-2-methylbutyric acid (1.77 g, 5.0 mmol) was added to anhydrous dichloromethane (30 mL) and tetrahydrofuran (10 mL). Dissolved with stirring. The reaction was flushed with nitrogen and cooled to -15 ° C. Iso-butyl chloroformate (0.74 mL, 5.44 mmol) in anhydrous dichloromethane (5 mL) and N-methylmorpholine (1.03 mL, 10.0 mmol) in anhydrous dichloromethane (5 mL) were added in 1 mL aliquots over 15 minutes. Added at the same time. Ethereal diazomethane [adding diazald (4.7 g, １５15 mmol) in diethyl ether (75 mL) to sodium hydroxide (5.25 g) in water (7.5 mL) / ethanol (15 mL) at 60 ° C. Produced at −20 ° C. to the activated amino acid solution. Next, the mixture was warmed to room temperature and stirred for 20 hours. A few drops of acetic acid were added to the mixture. Further, tert-butyl methyl ether (100 mL) was added to the mixture. Next, the ether layer was washed with water (3 × 75 mL) and dried (NaTwoSOFour), The solvent was removed under reduced pressure to give a yellow residue (2 g). By flash chromatography of the residue over silica (100 g) using a gradient of ethyl acetate: heptane in a ratio of (1: 3) to (1: 0) and evaporation of the desired fractions in vacuo, 1R, 1′R) [3-diazo-1- (1-hydroxyethyl) -1-methyl-2-oxopropyl] carbamic acid 9H-fluoren-9-ylmethyl ester was obtained in a yield of 220 mg (11. 6%). HPLC-MS (Rt= 8.84 minutes, 352.2 [M? NTwo+ H]+374.2 [M? NTwo+ Na]+Main UV peak).
[0204]
(6) Preparation of (2R, 3R) (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-yl) -carbamic acid 9H-fluoren-9-ylmethyl ester
[0205]
Embedded image
A solution of lithium chloride (247 mg, 5.7 mmol) in water (1.5 mL) and acetic acid (6.0 mL) was added to (1R, 1′R) [3-diazo-1- (1-hydroxyethyl) -1- Methyl-2-oxopropyl] carbamic acid 9H-fluoren-9-ylmethyl ester (220 mg, 0.57 mmol). The gas was developed and after 1 hour, chloroform (75 mL) was added and the organic phase was washed with saturated aqueous sodium bicarbonate (2 × 70 mL) and brine (70 mL). The chloroform layer is dried (NaTwoSOFour) And evaporated under reduced pressure to give a residue (220 mg). Flash chromatography of the residue on silica (35 g) using ethyl acetate: heptane (1: 4) as eluent gave (2R, 3R) (2,3-dimethyl-4-oxotetrahydro-furan-3-yl). ) Carbamic acid 9H-fluoren-9-ylmethyl ester was obtained (100 mg, 50%), TLC (single UV spot, Rf= 0.72, ethyl acetate: heptane 1: 1); HPLC R for analysist= 18.21 min, HPLC-MS (Rt= 8.85 minutes, 352 [M + H]+, 374 [M + Na]+Single main UV peak).
[0207]
Embedded image
According to the general details of Scheme 2, the required bicyclic building block, 9H-fluoren-9-yl (2R, 3R) (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-yl) -carbamate The methyl ester (7a) was converted to a building block-linker construct (9) as described below.
[0209]
(2R, 3R) (2,3-Dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-yl) -carbamic acid 9H-fluoren-9-ylmethyl ester (7) (78 mg, 0.223 mmol, 1 equivalent) was treated with acetic acid. Dissolved in a mixture of ethanol (3.9 mL) and water (0.56 mL) containing sodium trihydrate (46 mg, 0.334 mmol, 1.5 eq). 4-[[(hydrazinocarbonyl) amino] methyl] cyclohexanecarboxylic acid trifluoroacetate (74 mg, 0.223 mmol, 1 eq., Murphy, A. M. et al, J. Am. Chem. Soc.,114, 3156-3157, 1992) and the mixture was refluxed for 3 days. Chloroform (50 mL) was added and the organic solution was washed with dilute aqueous hydrochloric acid (0.1 M, 2 × 30 mL), brine (25 mL) and dried (NaTwoSOFour), Evaporated under reduced pressure to give the linker construct (9) as a white solid (80 mg). From analytical HPLC, it was determined that thet= 1 main peak at 16.99 min and R for E-isomert= 17.39 min showed another. HPLC-MS (R for Z-isomert= 8.02 min, 549 [M + H]+And for the E-isomer Rt= 8.30 minutes, 549 [M + H]+Main UV peak). Unconstructed (9) was used directly for construct loading.
[0210]
According to the general details of Scheme 2, the required building block-linker construct (9) was attached to a solid phase providing the loaded building block-linker construct (10) as described below.
[0211]
Structural unit-linker construct (9) (0.146 mmoles), 2- (1H-benzotriazol-1-yl) -1,1,3,3-tetramethyluronium hexafluorophosphate (HBTU, 55 mg, 0.146 mmole) ), 1-hydroxybenzotriazole hydrate and (HOBT, 22 mg, 0.146 mmole) were dissolved in dimethylformamide (3 mL) and N-methylmorpholine (NMM, 64 μL, 0.29 mmole) was added. After pre-activation for 5 minutes, free amine gear (35 × 1.2 μmole) was added followed by dimethylformamide (2.5 mL) and left overnight. Next, the consumed coupling solution was added to the free amine crown (3 × 10 μmole) and left overnight. Standard washing and analysis showed loading at about 70%.
[0212]
According to the general details of Scheme 2, the required loaded building block-linker construct (10) was made on a solid phase as described below.
[0213]
The loaded construct (10) was purified by standard Fmoc deprotection and sequential coupling with Fmoc-Tyr (OBut) -OH, followed by 4-tert-butylbenzoic acid (2R, 3R) of Example 1. 4-tert-Butyl-N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) 2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -benzamide. The crude example was cut and analyzed (see general techniques). HPLC Rt = 17.80 min (> 95%), HPLC-MS 453.2 [M + H].+, 927.5 [2M + Na]+.
[0214]
The following Examples (2-34) were prepared in a manner similar to that described in detail in Example 1 and coupled using the necessary reagents to obtain full-length molecules.
[0215]
Example 2 (2R, 3R) biphenyl-4-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -amide
[0216]
Embedded image
HPLC Rt = 17.31 min (> 90%), HPLC-MS 473.2 [M + H].+, 967.4 [2M + Na]+.
[0218]
Example 3 (2R, 3R) N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -4-thiophen-2- Il-benzamide
[0219]
Embedded image
HPLC Rt = 16.84 min (> 80%), HPLC-MS 479.1 [M + H].+, 979.2 [2M + Na]+.
[0221]
Example 4 (2R, 3R) N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -4-trifluoromethoxy- Benzamide
[0222]
Embedded image
HPLC Rt = 16.93 min (> 90%), HPLC-MS 481.1 [M + H].+.
[0224]
Example 5 (2R, 3R) N- [1- (2,3-Dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -5-thiophen-2- Il-nicotinamide
[0225]
Embedded image
HPLC Rt = 12.86 min (> 95%), HPLC-MS 480.1 [M + H].+, 959.3 [2M + Na]+.
[0227]
Example 6 (2R, 3R) 2-Pyridin-3-yl-thiazole-4-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxy Phenyl) -ethyl] -amide
[0228]
Embedded image
HPLC Rt = 9.97 min (> 90%), HPLC-MS 481.1 [M + H].+, 961.3 [2M + Na]+.
[0230]
Example 7 (2R, 3R) 2-methyl-5-phenyl-furan-3-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxy Phenyl) -ethyl] -amide
[0231]
Embedded image
HPLC Rt = 17.72 min (> 85%), HPLC-MS 477.2 [M + H].+, 975.4 [2M + Na]+.
[0233]
Example 8 (2R, 3R) 4-tert-butyl-N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -benzamide
[0234]
Embedded image
HPLC Rt = 19.80 min (> 85%), HPLC-MS 403.3 [M + H].+, 827.5 [2M + Na]+.
[0236]
Example 9 (2R, 3R) biphenyl-4-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -amide
[0237]
Embedded image
HPLC Rt = 19.23 min (> 80%), HPLC-MS 423.3 [M + H].+, 867.4 [2M + Na]+.
[0239]
Example 10 (2R, 3R) N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -4-thiophen-2-yl-benzamide
[0240]
Embedded image
HPLC Rt = 18.77 min (> 90%), HPLC-MS 429.2 [M + H].+, 879.3 [2M + Na]+.
[0242]
Example 11 (2R, 3R) N- [1- (2,3-Dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -4-trifluoromethoxy-benzamide
[0243]
Embedded image
HPLC Rt = 18.91 min (> 95%), HPLC-MS 431.2 [M + H].+.
[0245]
Example 12 (2R, 3R) N- [1- (2,3-Dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -5-thiophen-2-yl-nicotinamide
[0246]
Embedded image
HPLC Rt = 14.83 min (> 90%), HPLC-MS 430.2 [M + H].+, 881.3 [2M + Na]+.
[0248]
Example 13 (2R, 3R) 2-Pyridin-3-yl-thiazole-4-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -Amide
[0249]
Embedded image
HPLC Rt = 11.40 min (> 95%), HPLC-MS 431.2 [M + H].+, 883.3 [2M + Na]+.
[0251]
Example 14 (2R, 3R) 2-Methyl-5-phenyl-furan-3-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -Amide
[0252]
Embedded image
HPLC Rt = 19.88 min (> 80%), HPLC-MS 427.2 [M + H].+, 875.4 [2M + Na]+.
[0254]
Example 15 (2R, 3R) furan-3-carboxylic acid [2-benzylsulfanyl-1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -ethyl] -amide
[0255]
Embedded image
HPLC Rt = 15.79 min (> 80%), HPLC-MS 417.0 [M + H].+, 855.1 [2M + Na]+.
[0257]
Example 16 (2R, 3R) furan-3-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydro-furan-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -amide
[0258]
Embedded image
HPLC Rt = 12.44 min (> 85%), HPLC-MS 337.1 [M + H].+.
[0260]
Example 17 (2R, 3R) furan-3-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydro-furan-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl]- Amide
[0261]
Embedded image
HPLC Rt = 10.51 min (> 90%), HPLC-MS 387.0 [M + H].+.
[0263]
Example 18 (2R, 3R) furan-3-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydro-furan-3-ylcarbamoyl) -3,3-dimethyl-butyl] -amide
[0264]
Embedded image
HPLC Rt = 14.05 min (> 85%), HPLC-MS 351.1 [M + H].+, 723.2 [2M + Na]+.
[0266]
Example 19 (2R, 3R) furan-3-carboxylic acid [2-cyclohexyl-1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -ethyl] -amide
[0267]
Embedded image
HPLC Rt = 16.31 min (> 85%), HPLC-MS 377.1 [M + H].+, 775.2 [2M + Na]+.
[0269]
Example 20 (2R, 3R) thiophen-3-carboxylic acid [2-benzylsulfanyl-1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -ethyl] -amide
[0270]
Embedded image
HPLC Rt = 16.97 min (> 80%), HPLC-MS 433.0 [M + H].+, 887.1 [2M + Na]+.
[0272]
Example 21 (2R, 3R) thiophen-3-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -amide
[0273]
Embedded image
HPLC Rt = 13.70 min (> 80%), HPLC-MS 353.1 [M + H].+, 727.1 [2M + Na]+.
[0275]
Example 22 (2R, 3R) thiophen-3-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -amide
[0276]
Embedded image
HPLC Rt = 11.77 min (> 90%), HPLC-MS 403.0 [M + H].+.
[0278]
Example 23 (2R, 3R) thiophen-3-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3,3-dimethyl-butyl] -amide
[0279]
Embedded image
HPLC Rt = 15.11 min (> 80%), HPLC-MS 367.1 [M + H].+, 755.2 [2M + Na]+.
[0281]
Example 24 (2R, 3R) thiophen-3-carboxylic acid [2-cyclohexyl-1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -ethyl] -amide
[0282]
Embedded image
HPLC Rt = 17.22 min (> 85%), HPLC-MS 393.1 [M + H].+, 807.2 [2M + Na]+.
[0284]
Example 25 (2R, 3R) Naphthalene-1-carboxylic acid [2-benzylsulfanyl-1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -ethyl] -amide
[0285]
Embedded image
HPLC Rt = 19.36 min (> 80%), HPLC-MS 477.1 [M + H].+, 975.1 [2M + Na]+.
[0287]
Example 26 (2R, 3R) naphthalene-1-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -amide
[0288]
Embedded image
HPLC Rt = 16.91 min (> 80%), HPLC-MS 397.1 [M + H].+, 815.2 [2M + Na]+.
[0290]
Example 27 (2R, 3R) Naphthalene-1-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -amide
[0291]
Embedded image
HPLC Rt = 14.70 min (> 85%), HPLC-MS 447.1 [M + H].+.
[0293]
Example 28 (2R, 3R) Naphthalene-1-carboxylic acid [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3,3-dimethyl-butyl] -amide
[0294]
Embedded image
HPLC Rt = 17.80 min (> 80%), HPLC-MS 411.1 [M + H].+, 843.2 [2M + Na]+.
[0296]
Example 29 (2R, 3R) Naphthalene-1-carboxylic acid [2-cyclohexyl-1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -ethyl] -amide
[0297]
Embedded image
HPLC Rt = 19.36 min (> 85%), HPLC-MS 437.1 [M + H].+, 895.3 [2M + Na]+.
[0299]
Example 30 (2R, 3R) 2-Benzyloxy-3-cyclohexyl-N- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-yl) -propionamide
[0300]
Embedded image
HPLC Rt = 21.77 min (> 85%), HPLC-MS 374.2 [M + H].+, 769.2 [2M + H]+.
[0302]
(A) Preparation of 3-cyclohexyl-2S-hydroxypropionic acid (compound (13) scheme 4)
A solution of sodium nitrite (12.1 g, 175 mmol) in water (40 ml) was treated with (S) -α-aminocyclohexanepropionic acid hydrate in 0.5 M sulfuric acid (120 ml, 60 mmol) at 0 ° C. for 1.5 hours (5 g, 26.5 mmol) was added dropwise to the stirred suspension. The mixture was warmed to ambient temperature over 20 hours. After extracting the product with diethyl ether (2 × 25 ml), the ether layer was washed with a saturated aqueous sodium chloride solution (2 × 25 ml) and dried (NaTwoSOFour), The solvent was removed in vacuo. The residue (5.3 g) was recrystallized from diethyl ether (10 ml) and heptane (25 ml) to give 3-cyclohexyl-2S-hydroxypropionic acid as a white solid, yield 2.4 g, (53%) .
[0303]
Embedded image
(B) Preparation of 2RS-benzyloxy-3-cyclohexylpropionic acid (compound (14) scheme 4)
Sodium hydride (265 mg of a 60% dispersion in oil, 6.6 mmol) was added to 3-cyclohexyl-2S-hydroxypropionic acid (0.52 g, 3.0 mmol), dimethylformamide (5 ml) at 0 ° C. over 5 minutes. It was added in two portions to a stirred mixture of dichloromethane (5 ml). The mixture was stirred at 0 ° C. for 5 minutes and then at ambient temperature for 45 minutes. Next, benzyl bromide (0.45 ml, 3.8 mmol) was added and the mixture was stirred for 1 hour before adding dimethylformamide (5 ml). After stirring for 4 hours, potassium iodide (50 mg, 0.3 mmol) was added. The mixture was stirred for 20 hours, then heated at 55 ° C. for 1 hour, cooled to ambient temperature and poured into water (15 ml). After addition of a saturated aqueous sodium chloride solution (5 ml), the mixture was extracted with dichloromethane (5 ml, then 10 ml) and discarded. The aqueous layer was acidified with 1M hydrochloric acid (10 ml) and extracted with dichloromethane (2 × 10 ml). Dry the dichloromethane layer (MgSO 4Four), The solvent was removed in vacuo. The residue (0.55 g) was dissolved in dimethylformamide (8 ml) and then cooled to 0 ° C. before adding sodium hydride (190 mg of a 60% dispersion in oil, 4.75 mmol). After stirring the mixture for 30 minutes, the polymer-bound isocyanate (380 mg, 2 mmol Ng-1) Was added. The mixture was stirred at ambient temperature for 2 hours before being poured into water (15 ml). After addition of 1 M hydrochloric acid (10 ml), the product was extracted with dichloromethane (2 × 10 ml), dried (NaTwoSOFour) And the solvent was removed in vacuo. The residue was purified by flash chromatography on silica gel, eluting with a gradient of methanol: dichloromethane 0: 1 → 1: 20. Appropriate fractions were combined and the solvent was removed in vacuo to give 2RS-benzyloxy-3-cyclohexylpropionic acid as a colorless oil, yield 41 mg (5.2%).
[0305]
HPLC-MS (Rt = 9.47 min, 261.2 [MH]-, 285.2 [M + Na]+, 547.3 [2M + Na]+Single main UV peak).
[0306]
Embedded image
Compound (14) was coupled to the loaded building block-linker construct (10) under standard conditions (after standard removal of Fmoc) and then cleaved to give Example 30.
[0308]
Example 31 (2R, 3R) 2- (4-tert-Butyl-benzylsulfanyl) -4-methyl-pentanoic acid (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-yl) -amide
[0309]
Embedded image
HPLC Rt = 24.31 min (> 85%), HPLC-MS 406.2 [M + H].+, 833.2 [2M + H]+.
[0311]
(A) Preparation of 2R-bromo-4-methylpentanoic acid (compound (16), scheme 5)
A solution of sodium nitrite (5.1 g, 73 mmol) in water (15 ml) was combined with D-leucine (8.75 g, 67 mmol), potassium bromide (29.75 g, 0.25 mol) and concentrated sulfuric acid in water (100 ml). (8.6 ml) was added dropwise to the stirred mixture at 0 ° C. over 5 hours. The mixture was stirred at 0 ° C. for 30 minutes and then at ambient temperature for 20 hours. After the product was extracted with diethyl ether (2 × 150 ml), the combined ether layers were washed with saturated aqueous sodium chloride (2 × 100 ml) and dried (MgSO 4).Four) And the solvent was removed in vacuo. The residue was purified by flash chromatography on silica gel, eluting with a gradient of methanol: dichloromethane 1: 50 → 1: 20. The appropriate fractions were combined and the solvent was removed in vacuo, leaving 2R-bromo-4-methylpentanoic acid (17) as a colorless oil, yield 1.60 g, (12.3%). TLC (single spot, Rf = 0.2, methanol: dichloromethane 1:20). In addition, a second crop of the slightly impure product (5.2 g, 40%) was obtained.
[0312]
Embedded image
(B) Preparation of 2S- (4-tert-butylbenzylsulfanyl) -4-methylpentanoic acid (compound (18), scheme 5)
2R-bromo-4-methylpentanoic acid (compound (16), 1.1 g, 5.6 mmol) and (4- (tert-butyl) phenyl) methanethiol (1.0 g, 5.6 mmol) in dimethylformamide (15 ml) ) Was passed through the solution for 5 minutes, and then cooled to 0 ° C. After triethylamine (0.79 ml, 5.7 mmol) was added dropwise over 1 minute, the mixture was stirred at ambient temperature for 2 days. The solvent was removed in vacuo and the residue was purified by flash chromatography on silica gel, eluting with a gradient of methanol: dichloromethane 0: 1 → 1: 20. The appropriate fractions were combined and the solvent was removed in vacuo to leave a residue, which was purified by flash chromatography on silica gel, eluting with ethyl acetate: heptane 2: 5. Appropriate fractions were combined and the solvent was removed in vacuo to give 2S- (4-tert-butylbenzylsulfanyl) -4-methylpentanoic acid (18) as a colorless oil, yield 150 mg, (9 %). TLC (single spot, Rf = 0.2, heptane: ethyl acetate 5: 2), analytical HPLC with main peak at Rt = 22.117 min, HPLC-MS (Rt = 11.072 min, 317. 2 [M + Na]+Single main UV peak).
[0314]
Embedded image
Compound (18) was coupled to the loaded building block-linker construct (10) under standard conditions (after standard removal of Fmoc) and then cleaved to give Example 31.
[0316]
Example 32 (2R, 3R) 2- (4-tert-Butyl-phenylmethanesulfonyl) -4-methyl-pentanoic acid (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydro-furan-3-yl) -amide
[0317]
Embedded image
HPLC Rt = 22.22 min (> 90%), HPLC-MS 438.1 [M + H].+, 897.3 [2M + H]+.
[0319]
Scheme 9 Compound (18) was coupled under standard conditions to the loaded building block-linker construct (10) (after standard removal of Fmoc). This intermediate loaded thioether (1.2 μmole gear) was oxidized with m-chloroperbenzoic acid (5 eq, 65% reagent, 1.6 mg) in dichloromethane (200 μL) for 5 hours followed by a standard wash. And further cut to obtain Example 32.
[0320]
Example 33 (2R, 3R) 2-Cyclohexylmethyl-N- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydro-furan-3-yl) -4-morpholin-4-yl-4-oxo-butylamide
[0321]
Embedded image
HPLC-MS 395.3 [M + H]+, 811.4 [2M + Na]+.
[0323]
(A) Preparation of 2R-cyclohexylmethyl-4-morpholin-4-yl-4-oxo-butyric acid methyl ester
1- (3-Dimethylaminopropyl) -3-ethylcarbodiimide.HCl (1.12 g, 5.69 mmol) and then 1-hydroxybenzotriazole monohydrate (0.87 g, 5.69 mmol) were added under argon. At 0 ° C. to a stirred solution of 2R- (cyclohexylmethyl) succinic acid 1-methyl ester (Compound (23), 1.0 g, 4.38 mmol) in dimethylformamide (10 ml). After stirring the mixture for 25 minutes, morpholine (0.7 ml, 8.76 mmol) was added dropwise over 1 minute and stirring was continued at ambient temperature for 16 hours. After the product was extracted with ethyl acetate (200 ml), it was washed with 1.0 M hydrochloric acid (3 × 100 ml), a saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution (3 × 100 ml), water (100 ml), and a saturated aqueous sodium chloride solution (100 ml). , Dried (MgSO 4)Four), And the solvent was removed in vacuo to give 2R-cyclohexylmethyl-4-morpholin-4-yl-4-oxo-butyric acid methyl ester as an off-white solid, yield 1.22 g, (94% ). HPLC-MS (Rt = 7.91 min, 298.1 [M + H]+, 617.3 [2M + Na]+Single peak).
[0324]
(B) Preparation of 2R-cyclohexylmethyl-4-morpholin-4-yl-4-oxo-butyric acid (Compound (24), Scheme 7)
A solution of lithium hydroxide monohydrate (0.51 g, 12.18 mmol) in water (27 ml) was treated at 0 ° C. with 2R-cyclohexylmethyl-4-morpholin-4-yl in tetrahydrofuran (55 ml) and methanol (27 ml). -4-Oxo-butyric acid methyl ester (1.21 g, 4.06 mmol) was added to a stirred solution. The mixture was stirred for 1 hour at ambient temperature and then diluted with water (100ml). The aqueous layer was extracted with diethyl ether (2 × 50 ml), discarded and acidified to pH = 1-2 with 1M hydrochloric acid. After extracting the product with dichloromethane (3 × 50 ml), the combined ether layers were washed with water (2 × 50 ml), saturated aqueous sodium chloride (2 × 50 ml), dried (MgSO 4).Four), And the solvent was removed in vacuo to leave a residue. The residue was purified by chromatography on silica gel, eluting with a gradient of methanol: dichloromethane 1: 100 → 3: 100. The appropriate fractions were combined and the solvent was removed in vacuo to give 2R-cyclohexylmethyl-4-morpholin-4-yl-4-oxo-butyric acid (24) as a white solid, yield 0.82 g, (71%). HPLC-MS (Rt = 6.769 min, 284.2 [M + H]+589.2 [2M + Na]+Single peak).
[0325]
Embedded image
Compound (24) was coupled to the loaded building block-linker construct (10) under standard conditions (after standard removal of Fmoc) and then cleaved to give Example 33.
[0327]
Example 34 (2R, 3R) 2-Biphenyl-3-yl-4-methyl-pentanoic acid (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-yl) -amide
[0328]
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HPLC Rt = 21.71 min (> 80%), HPLC-MS 380.2 [M + H].+, 781.3 [2M + H]+.
[0330]
(A) Preparation of biphenyl-3-yl-acetic acid methyl ester (compound (26), scheme 8)
Concentrated sulfuric acid (588 μL) was added to a solution of 3-bromophenylacetic acid (10 g, 46.5 mmol) in methanol (100 mL). After refluxing the mixture for 1.5 hours, it was cooled to ambient temperature and evaporated under reduced pressure to give a residue. This residue was redissolved in diethyl ether (500 mL), washed with water (2 × 100 mL), brine (100 mL) and dried (MgSO 4).Four) And further evaporated under reduced pressure to give 3-bromophenylacetic acid methyl ester (10.65 g). After dissolving this 3-bromophenylacetic acid methyl ester in toluene (117 mL), phenylboronic acid (6.8 g, 55.69 mmol), then an aqueous solution of sodium carbonate (93 mL, 2M) and tetrakis (triphenylphosphine) Palladium (1.6 g, 1.41 mmol) was added. After stirring the mixture overnight, it was cooled to ambient temperature and an aqueous solution of saturated ammonium chloride (100 mL) was added. The mixture was extracted with ethyl acetate (2 × 200 mL), dried (NaTwoSOFour) And further evaporated under reduced pressure to give a residue. Flash chromatography of the residue on silica (200 g) using ethyl acetate: heptane (3:48) as eluent afforded biphenyl-3-ylacetic acid methyl ester, yield 10.5 g, (99%). TLC (single spot, Rf= 0.24, 10% ethyl acetate in heptane), analytical HPLC Rt= 19.55 min, HPLC-MS (Rt= 9.35 minutes, 227.1 [M + H]+Single main UV peak).
[0331]
Embedded image
(B) Preparation of biphenyl-3-yl-acetic acid
Water (39 mL), then lithium hydroxide monohydrate (4.2 g, 101.5 mmol) was added to a solution of biphenyl-3-ylacetic acid methyl ester (11.43 g, 50.57 mmol) in methanol (265 mL). Was added. After stirring the mixture at ambient temperature for 2 hours, the organic solution was removed under reduced pressure. The mixture was acidified with dilute hydrochloric acid (1M, 80 mL), extracted with chloroform (2 × 100 mL), dried (MgSO 4)Four), And further evaporated under reduced pressure to give biphenyl-3-ylacetic acid as a white solid, yield 10.6 g, (99%), analytical HPLC Rt= 16.565 min, HPLC-MS (Rt= 7.91 min, 213.1 [M + H]+Single main UV peak).
[0333]
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(C) Preparation of 2RS-biphenyl-3-yl-4-methylpent-4-acid (2RS-biphenyl-3-yl-4-methylpent-4-enoic acid)
A solution of biphenyl-3-ylacetic acid (7.0 g, 33 mmol) in anhydrous tetrahydrofuran (84 mL) was added dropwise at −78 ° C. to a solution of lithium diisopropylamide (36.4 mL, 2M solution in hexane) in anhydrous tetrahydrofuran (84 mL). did. The mixture was warmed to 0 ° C. and stirred for 40 minutes. Next, the mixture was cooled to -78 ° C and 3-bromo-2-methylpropene (4.97 mL) was added quickly. After the mixture was stirred at -78 C for 1 hour, water (28 mL) was added and the organic solution was removed under reduced pressure. Further, the mixture was acidified with hydrochloric acid (6 M, 14 ml), extracted with ethyl acetate (3 × 100 ml), dried (MgSO 4)Four), Evaporated under reduced pressure to give a residue. Flash chromatography of the residue on silica (400 g) using methanol: dichloromethane (3:97) as the eluent indicated the presence of impure 2-biphenyl-3-yl-4-methylpente-4-ic acid (8.3 g). was gotten. Flash chromatography of the residue on silica (400 g) using methanol: dichloromethane (1.5: 98.5) provided pure 2-biphenyl-3-yl-4-methylpent-4-ic acid, Yield 5.27 g, (60%), TLC (single UV spot, Rf= 0.28, 5% methanol in dichloromethane), analytical HPLC Rt= 19.99 minutes, HPLC-MS (Rt= 9.57 minutes, 267.1 [M + H]+Single main UV peak).
[0335]
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(D) Preparation of 2RS-biphenyl-3-yl-4-methylpentanoic acid (compound (27), scheme 8)
Palladium on carbon (10%, 300 mg) at 0 ° C. in 2 mL of 2RS-biphenyl-3-yl-4-methylpente-4-ic acid (1 g, 3.76 mmol) in ethanol (40 mL). Was added in portions. Next, a hydrogen atmosphere was introduced and the mixture was warmed to ambient temperature. After stirring the mixture for 18 hours, the hydrogen atmosphere was removed, the mixture was filtered through celite, and the catalyst was washed with ethanol (40 mL). The combined organic filtrates were concentrated under reduced pressure to give a residue, which was flash chromatographed on silica (150 g) using methanol: dichloromethane (1:99) as eluent to give 2RS-biphenyl-3. -Yl-4-methylpentanoic acid was obtained, yield 980 mg, (98%), TLC (single UV spot, Rf= 0.45, 5% methanol in dichloromethane), analytical HPLC Rt= 20.92 min, HPLC-MS (Rt= 10.15 minutes, 269.1 [M + H]+, 291.1 [M + Na]+Single main UV peak).
[0337]
Embedded image
Compound (27) was coupled to the loaded building block-linker construct (10) under standard conditions and then cleaved to give Example 34.
[0339]
Example 35 (2S, 3R) 4-tert-butyl-N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) 2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -benzamide
[0340]
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According to the general details of Scheme 1, the required bicyclic building block, 9H-fluoren-9-yl (2S, 3R) (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-yl) -carbamate, The methyl ester (7b) was prepared as follows.
[0342]
(1) Preparation of (2S) 2-tert-butoxycarbonylamino-3-phenylpropionic acid 1-methyl-2-oxopropyl ester
[0343]
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1- [3- (Dimethylamino) propyl] -3-ethylcarbodiimide hydrochloride (10.9 g, 57 mmol) and 4- (dimethylamino) pyridine (700 mg, 5.7 mmol) were dried at 0 ° C. under a nitrogen atmosphere. Added to a solution of (2R) -2-tert-butoxycarbonylamino-3-phenylpropionic acid (11 g, 41.8 mmol) in dichloromethane (20 mL). After stirring the mixture for 5 minutes, 3-hydroxybutan-2-one (6.6 g, 75 mmol, in monomer form) was added at 0 ° C. After the mixture was warmed to room temperature, it was stirred for 3 days. Further, the mixture was evaporated under reduced pressure to give a residue. Flash chromatography of the residue on silica gel (500 g) using ethyl acetate: heptane (3: 7) as eluent gave 1-methyl-2oxo (2S) 2-tert-butoxycarbonylamino-3-phenylpropionate. The propyl ester was obtained (10.9 g, 78%), TLC (single UV spot, Rf= 0.40, 50% ethyl acetate in heptane), and HPLC-MS (Rt= 9.16 min, 358.2 [M + Na]+, 693.3 [2 × M + Na]+Single main UV peak).
[0345]
(2) Preparation of (2S, 3S, 5S) 5-benzyl-2,3-dimethyl-6-oxomorpholine-3-carbonitrile
[0346]
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Trifluoroacetic acid (77 mL) was added to (2R) 2-tert-butoxycarbonylamino-3-phenylpropionic acid 1-methyl-2-oxopropyl ester in anhydrous dichloromethane (140 mL) at 7.degree. C. under a nitrogen atmosphere (7.99 g, 23.8 mol). The mixture was stirred at 0 ° C. for 1 hour and then evaporated under reduced pressure to obtain a residue. Next, toluene (40 mL) was added to the residue and evaporated under reduced pressure. This procedure was repeated twice to remove excess trifluoroacetic acid. Further, the residue was dissolved in anhydrous 2-propanol (390 mL) under a nitrogen atmosphere. Next, powdered sodium cyanide (2.6 g, 47.6 mol) was added in one portion and the mixture was stirred at ambient temperature for 2 hours. further. The mixture was quickly filtered over anhydrous sodium sulfate and concentrated under reduced pressure. Flash chromatography on silica gel (200 g) using ethyl acetate: heptane (3: 7) as eluent gave crude (2S, 3S, 5S) 5-benzyl-2,3-dimethyl-6-oxo-. Morpholine-3-carbonitrile (2.7 g, 46%) was obtained. Recrystallization (diethyl ether-heptane) gave crystalline material (1.05 g), TLC (single UV spot, Rf= 0.38, 50% ethyl acetate in heptane), analytical HPLC Rt= 15.94 min, HPLC-MS (Rt= 7.53 min, 245.1 [M + H]+, 267.1 [M + Na]+Single main UV peak).
[0348]
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(3) Preparation of (2R, 3S) 2-amino-3-hydroxy-2-methylbutyric acid
[0350]
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A solution of (2S, 3S, 5S) 5-benzyl-2,3-dimethyl-6-oxomorpholine-3-carbonitrile (1.38 g, 5.63 mmol) in anhydrous diethyl ether (120 mL) under nitrogen atmosphere At 0 ° C., tert-butyl hypochlorite (1.26 mL, 11.25 mmol) was added. After stirring the solution at room temperature for 2 hours, triethylamine (1.26 mL) was added at 0 ° C. Next, the mixture was warmed to room temperature and stirred for 20 hours. The resulting suspension was filtered and the solid residue was washed with diethyl ether (20mL). Further, water (100 mL) was added to the filtrate, and the product was extracted with ether (50 mL × 3). Dry the combined ether layers (MgSO 4Four) And evaporated under reduced pressure to give a residue (1.9 g). Next, concentrated hydrochloric acid (70 mL) was added to the residue at 0 ° C. The mixture was stirred at 0 ° C. for 1 hour and then at room temperature for 24 hours. Further, the mixture was transferred to a sealed pressure tube and heated at 80 ° C. for 2 days. Further, the mixture was cooled and extracted with diethyl ether (50 mL × 3). Next, the aqueous layer was concentrated under reduced pressure, and then purified with Dowex 50WX4 (activated with 0.01 M hydrochloric acid). Eluting with water (until the eluate approaches ~ pH = 7) and then with ammonium hydroxide (1M) gives impure (2R, 3S) 2-amino-3-hydroxy-2-methylbutyric acid. (555 mg). HTwoO (trace); EtOH-EtTwoPure amino acid was obtained by recrystallization from O (250 mg), TLC (single UV spot, Rf= 0.27, 4: 1: 1nBuOH: HTwoO: AcOH), HPLC-MS (Rt= 0.45 min, 134 [M + H]+Single main UV peak).
[0352]
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(4) Preparation of (2R, 3S) 2- (9H-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino) -3-hydroxy-2-methylbutyric acid
[0354]
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(2R, 3S) 2-Amino-3-hydroxy-2-methylbutyric acid (288 mg, 2.17 mmol) is added to a vigorously stirred solution of sodium carbonate (570 mg, 5.41 mmol) in water (12 mL) at 0 ° C. did. Next, 1,4-dioxane (6 mL) was added to give a cloudy, fluid mixture. In addition, 9-fluorenylmethyl chloroformate (585 mg, 2.27 mmol) in 1,4-dioxane (6 mL) was added over 40 minutes. The mixture was then warmed to room temperature over 40 minutes. Further, water (100 mL) was added, and the reaction mixture was washed with chloroform (100 mL), and the organic layer was discarded. The aqueous phase was acidified (〜pH 2) with 1 M HCl to give a thick cloudy mixture. The acidified aqueous mixture was extracted with chloroform (5 × 80 mL) and the combined organic phases were dried (NaTwoSOFour) And evaporated under reduced pressure to give (2R, 3S) 2- (9H-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino) -3-hydroxy-2-methylbutyric acid (616 mg, 80%), TLC One UV spot, Rf= 0.24, 20% methanol in chloroform), analytical HPLC Rt= 15.54 min and HPLC-MS (Rt= 7.70 minutes, 356.2 [M + H]+378.1 [M + Na]+Single main UV peak).
[0356]
(5) Preparation of (2R, 3S) 2- (9H-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino) -3-hydroxy-2-methylbutyric acid allyl ester
[0357]
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A solution of (616 mg, 1.74 mmol) and tricaprylmethylammonium chloride (701 mg, 1.74 mmol) in dichloromethane (2.6 mL) was stirred with sodium bicarbonate (146 mg, 1.74 mmol) in water (2.6 mL). After addition to the solution, allyl bromide (0.15 mL, 1.74 mmol) was added in one portion. After vigorously stirring the biphasic mixture for 5 days, it was diluted with water (40 ml) and the product was extracted with dichloromethane (3 × 80 mL). Dry the combined organic layers (NaTwoSOFour), Evaporated under reduced pressure to give a residue (1.1 g). Flash chromatography of the residue on silica gel (200 g) using ethyl acetate: heptane (3: 7) as eluent gave (2R, 3S) 2- (9H-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino) -3- Allyl hydroxy-2-methylbutyrate (360 mg, 52%) was obtained, TLC (single UV spot, Rf= 0.48, 50% ethyl acetate in heptane), analytical HPLC Rt= 18.42 min and HPLC-MS (Rt= 9.30 minutes, 396.2 [M + H]+, 418.2 [M + Na]+Single main UV peak).
[0359]
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(6) Preparation of (2R, 3S) 3-tert-butoxy-2- (9H-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino) -2-methylbutyric acid allyl ester
[0361]
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A stirred solution of (2R, 3S) 2- (9H-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino) -3-hydroxy-2-methylbutyric acid allyl ester (312 mg, 0.69 mmol) in dichloromethane (10 mL) was added at -78 ° C. After cooling in a pressurized vessel sealed with isobutylene gas (〜8 mL) was condensed into the solution. After adding concentrated sulfuric acid (27 μl), the pressure vessel was sealed. The mixture was stirred at ambient temperature for 3 days before cooling to -78 ° C. After the addition of N-methylmorpholine (56 μl), the open pressurized vessel was warmed to ambient temperature. Next, the mixture was diluted with saturated aqueous sodium bicarbonate (100 mL) and the product was extracted with dichloromethane (3 × 100 mL). The combined dichloromethane layers were washed with brine (50 mL), dried (NaTwoSOFour), Evaporated under reduced pressure to give a residue. Flash chromatography of the residue on silica gel (35 g) using ethyl acetate: heptane (3: 7) as eluent gave (2R, 3S) 3-tert-butoxy-2- (9H-fluoren-9-ylmethoxy). Allyl carbonylamino) -2-methylbutyrate was obtained (310 mg, 99%), TLC (single UV spot, Rf= 0.70, 50% ethyl acetate in heptane), analytical HPLC Rt= 23.59 min and HPLC-MS (Rt= 12.09 min, 474.1 [M + Na]+Single main UV peak).
[0363]
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(7) Preparation of (2R, 3S) 3-tert-butoxy-2- (9H-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino) -2-methylbutyric acid
[0365]
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Tetrakistriphenylphosphine palladium (0) (17.25 mg, 0.015 mmol), dichloromethane (10 mL), and then phenyltrihydrosilane (0.18 mL, 1.33 mmol) were added under nitrogen to (2R, 3S) 3-tert. -Butoxy-2- (9H-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino) -2-methylbutyric acid allyl ester (300 mg, 0.665 mmol) was added successively. The mixture was stirred for 90 minutes before being absorbed on silica gel (2 g). Flash chromatography of the absorbed residue on silica gel (35 g) using ethyl acetate: heptane (2: 3) then (1: 1) as eluent gave (2R, 3S) 3-tert-butoxy- 2- (9H-Fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino) -2-methylbutyric acid was obtained (140 mg, 51%), TLC (single UV spot, Rf= 0.33, 50% ethyl acetate in heptane), analytical HPLC Rt= 20.20 min and HPLC-MS (Rt= 10.25 min, 434.1 [M + Na]+Single main UV peak).
[0367]
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(8) Preparation of (1R, 2S) (2-tert-butoxy-1-fluorocarbonyl-1-methylpropyl) -carbamic acid 9H-fluoren-9-ylmethyl ester
[0369]
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Pyridine (47 μL, 0.55 mmol), then cyanuric fluoride (63 μL, 0.71 mmol) was added to (2R, 3S) 3-tert-butoxy-2- (9H-fluorene-) in dichloromethane (8 mL) under nitrogen. To a stirred solution of 9-ylmethoxycarbonylamino) -2-methylbutyric acid (130 mg, 0.316 mmol) was added continuously at 0 ° C. The suspension was slowly warmed to ambient temperature and stirred for 20 hours. After addition of crushed ice (（10 ml) and ice-cold water (10 ml), the product was extracted in dichloromethane (40 ml). Dry the dichloromethane layer (MgSO 4Four) And evaporated under reduced pressure to give (1R, 2S) (2-tert-butoxy-1-fluorocarbonyl-1-methylpropyl) -carbamic acid 9H-fluoren-9-ylmethyl ester (138 mg). , TLC (single UV spot, Rf= 0.75, 50% ethyl acetate in heptane), HPLC-MS (Rt= 11.66 minutes, 436.1 [M + Na]+Single main UV peak).
[0371]
(9) Preparation of (1R, 1'S) [1- (1-tert-butoxyethyl) -3-diazo-1-methyl-2-oxopropyl] -carbamic acid 9H-fluoren-9-ylmethyl ester
[0372]
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Ethereal diazomethane [formed by adding diazald (〜15 mmol) in diethyl ether (75 mL) to sodium hydroxide (5.25 g) in water (7.5 mL) / ethanol (15 mL) at 60 ° C. Dried over potassium hydroxide pellets] at 0 ° C. with 9H-fluoren-9-yl (1R, 2S) (2-tert-butoxy-1-fluorocarbonyl-1-methylpropyl) -carbamate in dichloromethane (3 mL). Methyl ester (138 mg, メ チ ル 0.316 mmol) was added to a stirred solution. The mixture was then warmed to ambient temperature and stirred for 20 hours. After the addition of a few drops of acetic acid to drive off the excess diazomethane, the solution was stirred for 5 minutes before adding t-butyl methyl ether (100 ml). The ether layer was washed with a saturated aqueous solution of sodium hydrogencarbonate (2 × 50 mL) and then dried (NaTwoSOFour), Evaporated under reduced pressure to give a residue. Flash chromatography of the residue on silica gel (35 g) using ethyl acetate: heptane (0.1: 19) as eluent gave (4R, 4'S) 4- (1-tert-butoxyethyl) -2-. (9H-Fluoren-9-ylmethoxy) -4-methyl-4H-oxazol-5-one was obtained (55 mg, 45%), TLC (single UV spot, Rf= 0.77, 50% ethyl acetate in heptane), analytical HPLC Rt= 21.15 min and HPLC-MS (Rt= 10.42 min, 434.2 [M + HTwoO + Na]+And Rt= 11.65 min, 434.2 [M + HTwoO + Na]+Single main UV peak at
[0374]
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Furthermore, the above oxazolone and (1R, 1 ′S) [1- (1-tert-butoxyethyl) -3-diazo-1-methyl-2-oxopropyl] -9H-fluoren-9-ylcarbamate are eluted by elution. Methyl ester [TLC (UV spot, Rf= 0.75, 50% ethyl acetate in heptane] and methyl ester of 3-tert-butoxy-2- (9H-fluoren-9-ylmethoxycarbonylamino) -2-methylbutyrate (35 mg). Was.
[0376]
(10) Preparation of (2S, 3R) (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-yl) -carbamic acid 9H-fluoren-9-ylmethyl ester
[0377]
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A solution of lithium chloride (21.7 mg, 0.51 mmol) in water (0.25 mL) and acetic acid (1 mL) was treated with (1R, 1 ′S) [1- (1-tert-butoxyethyl) -3-diazo- 1-Methyl-2-oxopropyl] -carbamic acid 9H-fluoren-9-ylmethyl ester was added to the above mixed fraction (35 mg). The gas was developed and after 1 hour, chloroform (40 mL) was added and the organic phase was washed with a saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution (20 mL). The chloroform layer is dried (NaTwoSOFour), Evaporated under reduced pressure to give a residue (40 mg). Flash chromatography of the residue on silica (20 g) using ethyl acetate: heptane (1: 4) then (1: 1) as eluent gave (2S, 3R) (2,3-dimethyl-4-). Oxotetrahydrofuran-3-yl) carbamic acid 9H-fluoren-9-ylmethyl ester was obtained (6 mg), TLC (single UV spot, Rf= 0.57, ethyl acetate: heptane 1: 1); HPLC R for analysist= 18.22 min and HPLC-MS (Rt= 8.92 min, 352 [M + H]+, 374 [M + Na]+Single main UV peak).
[0379]
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According to the general details of Scheme 2, the required bicyclic building block, (2S, 3R), (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-yl) -carbamic acid 9H-fluorene-9- The yl methyl ester (7b) was converted to the building block-linker construct (9) as described below.
[0381]
(2S, 3R) (2,3-Dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-yl) -carbamic acid 9H-fluoren-9-ylmethyl ester (7b) (8 mg, 0.0214 mmol, 1 equiv.) Was treated with acetic acid. Dissolved in a mixture of ethanol (1.86 mL) and water (0.27 mL) containing sodium trihydrate (22 mg, 0.1605 mmol, 7.5 equiv). 4-[[(hydrazinocarbonyl) amino] methyl] cyclohexanecarboxylic acid trifluoroacetate (35 mg, 0.1605 mmol, 7.5 eq., Murphy, AM et al, J. Am. Chem. Soc.,114, 3156-3157, 1992) and the mixture was refluxed for 2 days. Chloroform (50 mL) was added and the organic solution was washed with dilute aqueous hydrochloric acid (0.1 M, 2 × 30 mL), brine (25 mL) and dried (NaTwoSOFour), Evaporated under reduced pressure to give the linker construct (9) as a white solid (10 mg). From analytical HPLC, it was determined that thet= 1 main peak at 17.53 min and R for E-isomert= 17.88 minutes showed another. HPLC-MS (R for Z-isomert= 8.37 min, 549 [M + H]+And for the E-isomer Rt= 8.98 min, 549 [M + H]+Main UV peak). Unconstructed (9) was used directly for construct loading.
[0382]
According to the general details of Scheme 2, the required building block-linker construct (9) was attached to a solid phase providing the loaded building block-linker construct (10) as described below.
[0383]
Structural unit-linker construct (9) (10.6 mg, 0.0193 mmole), 2- (1H-benzotriazol-1-yl) -1,1,3,3-tetramethyluronium hexafluorophosphate (HBTU, 7 0.3 mg, 0.0193 mmole), 1-hydroxybenzotriazole hydrate and (HOBT, 2.96 mg, 0.0193 mmole) were dissolved in dimethylformamide (0.5 mL), and N-methylmorpholine (NMM, 4. 2 μL, 0.0386 mmole) were added. After pre-activation for 5 minutes, free amine gear (6 × 1.2 μmole) was added followed by dimethylformamide (1.0 mL) and left overnight. Next, the consumed coupling solution was added to the free amine crown (1 × 10 μmole) and left overnight. Standard washing and analysis showed loading at about 70%.
[0384]
According to the general details of Scheme 2, the required loaded building block-linker construct (10) was made on a solid phase as described below.
[0385]
The loaded construct (10) was purified by standard Fmoc deprotection and sequential coupling with Fmoc-Tyr (OBut) -OH, followed by 4-tert-butylbenzoic acid (Example 2), (2S, 3R). 4-tert-Butyl-N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) 2- (4-hydroxyphenyl) -ethyl] -benzamide. The crude example was cut and analyzed (see general techniques). HPLC Rt = 17.31 min (> 90%), HPLC-MS 453.2 [M + H].+.
[0386]
The following Examples (36-37) were prepared in a manner similar to that described in detail in Example 35 and coupled using the necessary reagents to obtain full length molecules.
[0387]
Example 36 (2S, 3R) 4-tert-butyl-N- [1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -3-methyl-butyl] -benzamide
[0388]
Embedded image
HPLC Rt = 19.4 min (> 90%), HPLC-MS 403.3 [M + H].+, 827.5 [2M + Na]+.
[0390]
Example 36 (2S, 3R) furan-3-carboxylic acid [2-cyclohexyl-1- (2,3-dimethyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-ylcarbamoyl) -ethyl] -amide
[0391]
Embedded image
HPLC Rt = 16.3 min (> 90%), HPLC-MS 377.2 [M + H].+, 775.4 [2M + Na]+.
[0393]
Example A Assay for Cysteine Protease Activity
The compounds of the present invention may be tested in one of a number of literature-based biochemical assays designed to characterize the inhibition of the compounds. From the data of these types of assays, the potency of the compound and the rate of reaction can be measured and quantified. This information, alone or in combination with other information, could determine the amount of compound required to produce a given pharmacological effect.
[0394]
General materials and methods
Unless otherwise specified, all common chemicals and biochemicals are available from Sigma Chemical Company, Poole, Dorset, U.S.A. K. Or Fisher Scientific UK, Loughborough, Leicestershire, U.S.A. Purchased from any of K. The absorbance assay was performed using a SpectraMax PLUS 384 plate reader (Molecular Devices, Crawley, UK) with a flat bottom 96-well plate (Spectra; Greiner Bio-One Ltd., Stonehouse, Scotland). Fluorescence high throughput assays were performed on 384-well microtiter plates (Corning Costar 3705 plates, Fisher Scientific) or 96-well "U" bottom microfor W1 micrometer Witroti microliter plates ('Utrom's micrometer) ) (Thermo Labsystems, Ashford, Middlesex, UK). Fluorescence assays were monitored using a SpectraMax Gemini fluorescence plate reader (Molecular Devices). For substrates using either 7-amino-4-methyl coumarin (AMC) or 7-amino-4-trifluoromethyl coumarin (AFC) fluorophores, the assay provides an excitation wavelength of 365 nm and an emission wavelength of 450 nm. ) And the fluorescence plate reader was calibrated with AMC. For substrates using 3-amino-benzoyl (Abz) fluorophore, the assay was monitored at an excitation wavelength of 310 nm and an emission wavelength of 445 nm; the fluorescence plate reader was calibrated with 3-amino-benzamide (Fluka). Unless otherwise noted, all peptidase substrates were obtained from Bachem UK, St. Purchased from Helens, Merseyside, UK. A substrate using a fluorescence resonance energy transfer method (i.e., a FRET-based substrate) is disclosed in a published method (Atherton & Shipyard, International Shipping Company, Azerbaijan, Germany). , UK, 1989) using Abz (2-aminobenzoyl) as a fluorescent donor and 3-nitro-tyrosine [Tyr (NOTwo)] (Meldal, M. and Breddam, K., Anal. Biochem.,195, 141-147, 1991). Hydroxyethylpiperazineethanesulfonate (HEPES), tris-hydroxymethylaminomethane (Tris) base, bis-tris-propane and all biosurfactants (such as CHAPS, zittergent, etc.) are available from CN Biosciences UK, Beeston, Nottinghamshire, U.S.A. Purchased from K. Glycerol is available from Amersham Pharmacia Biotech, Little Chalfont, Buckinghamshire, U.S.A. Purchased from K. Stock solutions of substrate or inhibitor were made up to 10 mM or less in 100% dimethyl sulfoxide (DMSO) (Rathburns, Glasgow, UK) and diluted as needed. In all cases, the DMSO concentration in the assay was kept below 1% (vol./vol.).
[0395]
The assay protocol is described in the preceding literature (Table 1; Barrett, AJ, Rawlings, ND and Woessner, JF, 1998, Handbook of Proteolytic Enzymes, Academic Press, London). And modified as needed to be suitable for the local assay protocol. Enzyme was added as needed to start the reaction and activity was monitored over time as judged by the change in fluorescence upon conversion of the substrate to product. All assays were performed at 25 ± 1 ° C.
[0396]
[Table 1]
I: 1 mM EDTA, 5 mM 2-mercaptoethanol and 1 mM CaClTwo10 mM BTP, pH 6.5
II: 1 mM EDTA, 142 mM NaCl, 1 mM DTT, 1 mM CaClTwo, 10 mM BTP, pH 6.5 containing 0.035 mM Zittergent 3-16
III: 50 mM HEPES, pH 7.2, 10% glycerol, 0.1% CHAPS, 142 mM NaCl, 1 mM EDTA, 5 mM DTT
IV: 100 mM sodium phosphate with 1 mM EDTA and 10 mM L-cysteine, pH 6.75
V: 1 mM EDTA, 50 mM Tris-acetate containing 10 mM L-cysteine and 0.25% (w / v) CHAPS, pH 8.4.
VI: 5 mM CaClTwo10 mM HEPES, pH 8.0
VII: 2 mM 2-mercaptoethanol and 100 μM CaClTwo10 mM HEPES, pH 7.5
VIII: 2 mM 2-mercaptoethanol and 200 μM CaClTwo10 mM HEPES, pH 7.5
IX: 100 mM sodium acetate with 10 mM L-cysteine and 1 mM EDTA; pH 5.5
X: 10 mM L-cysteine; 100 mM sodium acetate with 0.05% (w / v) bridge 35 and 1 mM EDTA; pH 5.5
XI: 10 mM L-cysteine; 100 mM sodium acetate with 142 mM sodium chloride and 1 mM EDTA; pH 5.5
[0398]
Embedded image
Trypanosoma cruzi cruzipain peptidase activity assay
Wild-type cruzipain, derived from Trypanosoma cruzi Dm28 epimastigote, was obtained from Dr. Julio Scharstein (obtained from Instituto de Biofisica Carlos Chagas Filho, Universidade Federal do Rio de Janeiro, Rio de Janeiro, Brazil). The activity assay was performed in 100 mM sodium phosphate, pH 6.75 with 1 mM EDTA and 10 mM L-cysteine using 2.5 nM enzyme. Ac-Phe-Arg-AMC (KM app= About 12 μM) andD-Val-Leu-Lys-AMC (KM app= About 4 μM) was used as the substrate. Constantly, Ac-FR-AMC is replaced by KM appUse at a concentration equal toD-Val-Leu-Lys-AMC was used at a concentration of 25 μM. The conversion of substrate to product was determined from the slope of the increase in fluorescence monitored continuously over time.
[0400]
Leishmania mexicana cysteine protease B (CPB) peptidase activity assay
Wild-type recombinant CPB without C-terminal extension (ie, CPB 2.8. CTE; Sanderson, SJ, et. Al., Biochem. J.,347383-388, 2000). Jeremy Motram (Wellcome Center for Molecular Parasitology, The Anderson College, University of Glasgow, Glasgow, UK). The activity assay was performed using 1 mM EDTA; 200 mM NaCl and 10 mM DTT (Alves, LC, et. Al., Mol. Biochem. Parasitol, using 0.25 nM enzyme).116, 1-9, 2001) in 100 mM sodium acetate; pH 5.5. Pro-Phe-Arg-AMC (KM app= About 38 μM)M appUsed as substrate at a concentration equal to The conversion of substrate to product was determined from the slope of the increase in fluorescence monitored continuously over time.
[0401]
Cathepsin peptidase activity assay
Bovine cathepsin S, human cathepsin L, human cathepsin H and human cathepsin B were obtained from CN Biosciences. Recombinant human cathepsin S, human cathepsin K and human cathepsin X were obtained from Dr. Boris Turk (Josef Stefan Institute, Ljubljana, Slovenia). Unless otherwise stated, all peptidase activity assays were performed with 1 mM EDTA, 5 mM 2-mercaptoethanol and 1 mM CaCl2.TwoIn 10 mM Bis-Tris-propane (BTP), pH 6.5. The human cathepsin H activity assay comprises 10 mM BTP, pH 6.5, 142 mM NaCl2, 1 mM CaCl2.TwoPerformed in 1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0.035 mM Zittergent 3-16. The human cathepsin K assay was performed in 100 mM sodium acetate with 20 mM L-cysteine and 1 mM EDTA; pH 5.5 (Bossard, MJ, et. Al., J. Biol. Chem.,21, 12517-12524, 1996). The human cathepsin X assay was performed in 20 mM L-cysteine; 100 mM sodium acetate with 0.05% (w / v) bridge 35 and 1 mM EDTA; pH 5.5 (Santamaria, I., et al., J. Biol.273, 16816-16823, 1998; Klemenic, J, et al. , Eur. J. Biochem. ,267, 5404-5412, 2000). The final enzyme concentrations used in the assay were 0.5 nM bovine cathepsin S, 1 nM cathepsin L, 0.1 nM cathepsin B, 0.25 nM cathepsin K; 1 nM cathepsin X and 10 nM cathepsin H. In the inhibition assay, the substrates used for cathepsin S, cathepsin L, cathepsin B, cathepsin K and cathepsin H were respectively boc-Val-Leu-Lys-AMC (KM app= About 30 μM), Ac-Phe-Arg-AMC (KM app= About 20 μM), Z-Phe-Arg-AMC (KM app= About 40 μM), Z-Leu-Arg-AMC (KM app= About 2 μM); Bz-Phe-Val-Arg-AMC (KM app= About 150 μM). In each case, the substrate concentration used for each assay was KM appWas equal to The conversion of substrate to product was determined from the slope of the increase in fluorescence monitored continuously over time.
[0402]
Trypsin peptidase activity assay
Human pancreatic trypsin (iodinated grade; CN Biosciences) activity assay was performed using 5 mM CaCl 2 with 0.1 nM trypsin.TwoIn 10 mM HEPES, pH 8.0. In the inhibition assay, Z-Gly-Gly-Arg-AMC (KM app= Approximately 84 μM)M appUsed as substrate at a concentration equal to The conversion of substrate to product was determined from the slope of the increase in fluorescence monitored continuously over time.
[0403]
Clostripain peptidase activity assay
Clostripain (Sigma) activity assay was performed using 1 mM EDTA, 5 mM 2-mercaptoethanol and 1 mM CaCl2 using 0.3 nM enzyme.TwoIn 10 mM BTP, pH 6.5. In the inhibition assay, Z-Gly-Gly-Arg-AMC (KM app= About 100 μM)M appUsed as substrate at a concentration equal to The conversion of substrate to product was determined from the slope of the increase in fluorescence monitored continuously over time.
[0404]
Calpain peptidase activity assay
Calpain (human erythrocyte μ-calpain and porcine kidney m-calpain; CN Biosciences) activity assays were performed using 25 nM of any enzyme (Sasaki, et al., J. Biol. Chem., 259, 12489-12494, 1984). ) Using 2 mM 2-mercaptoethanol and CaClTwoIn 10 mM HEPES, pH 7.5. For the μ-calpain inhibition assay, 100 μM CaCl was added to the buffer.TwoAbz-Ala-Asn-Leu-Gly-Arg-Pro-Ala-Leu-Tyr (NOTwo) -Asp-NHTwo(KM app= About 20 μM; Incenta Limited) was used as the substrate. For the m-calpain inhibition assay, 200 μM CaCl 2 was added to the assay buffer.TwoAbz-Lys-Leu-Cys (Bzl) -Phe-Ser-Lys-Gln-Tyr (NOTwo) -Asp-NHTwo(KM app= About 22 μM; Incenta Limited) was used as the substrate. In both cases, the substrate concentration used in the assay is KM appWas equal to The conversion of substrate to product was determined from the slope of the increase in fluorescence monitored continuously over time.
[0405]
Extracellular S. Aureus V8 Cysteine Peptidase (Staphylopine) Peptidase Activity Assay
S. aureus V8 is available from Prof. S. Obtained from Arvidson, Karolinska Institute, Stockholm, Sweden. Extracellular S. aureus V8 cysteine peptidase (staphylopain) activity assay was performed using partially purified S. aureus aureus V8 cultures (obtained from Dr. Peter Lambert, Aston University, Birmingham, UK). The activity assay was performed using 1-fold diluted partially purified extract with 1 mM EDTA, 5 mM 2-mercaptoethanol and 1 mM CaCl2.TwoIn 10 mM BTP, pH 6.5. In the inhibition assay, Abz-Ile-Ala-Ala-Pro-Tyr (NOTwo) -Glu-NHTwo(KM app= About 117 μM; Incenta Limited)M appUsed as substrate at a concentration equal to The conversion of substrate to product was determined from the slope of the increase in fluorescence monitored continuously over time.
[0406]
Foot and mouth disease leader peptidase (FMDV-LP) activity assay
Recombinant wild-type FMDV-LP was obtained from Dr. Tim Skern (Institut fur Medizinische Biochemie, Abteiling fur Biochemie, Universalstat Wien, Wien, Austria). The activity assay was performed in 50 mM Tris acetate containing 1 mM EDTA, 10 mM L-cysteine and 0.25% (w / v) CHAPS using 10 nM enzyme. In the inhibition assay, Abz-Arg-Lys-Leu-Lys-Gly-Ala-Gly-Ser-Tyr (NOTwo) -Glu-NHTwo(KM app= About 51 μM, Incenta Limited)M appUsed as substrate at a concentration equal to The conversion of substrate to product was determined from the slope of the increase in fluorescence monitored continuously over time.
[0407]
Caspase peptidase activity assay
Caspase 1-10 is available from CN Biosciences or BioVision Inc. (Mountain View, CA, USA) and all assays were performed in 50 mM HEPES with 0.1-1 U per assay; pH 7.2, 10% (v / v) glycerol, 0.1% (w / v). 2.) Performed in CHAPS, 142 mM NaCl, 1 mM EDTA, 5 mM dithiothreitol (DTT). For caspase 1, Ac-Leu-Glu-His-Asp-AMC was used as a substrate; for caspase 2, Z-Val-Asp-Val-Ala-Asp-AFC was used as a substrate; for caspase 3, Ac- Asp-Glu-Val-Asp-AMC was used as substrate; for caspase 4, Suc-Tyr-Val-Ala-Asp-AMC was used as substrate; for caspase 5, Ac-Leu-Glu-His-Asp-. AMC was used as substrate; caspase 6 used Ac-Val-Glu-Ile-Asp-AMC as substrate; caspase 7 used Ac-Asp-Glu-Val-Asp-AMC as substrate; caspase 8, Ac-Ile-Glu-Thr-Asp-AMC was used as a substrate. For caspase 9, Ac-Leu-Glu-His-Asp-AMC was used as a substrate; for caspase 10, Ac-Ile-Glu-Thr-Asp-AMC was used as a substrate (Nicholson, D .; W. and Thornberry, NA, TIBS,22, 299-306, 1997; Stennicke, H .; R. And Salvesen, G .; S. , J. et al. Biol. Chem. ,272(41), 25719-25723, 1997; Talanian, R .; V. , Et. al. , J. et al. Biol. Chem. ,272(15), 9677-9682, 1997; Wolf, B .; B. And Green, D.A. R. , J. et al. Biol. Chem. ,274(18), 20059-0052, 1999). The conversion of substrate to product was determined from the slope of the increase in fluorescence monitored continuously over time.
[0408]
Apparent macroscopic binding (Michaelis) constant (KM app ) Measurement
The apparent macroscopic binding constant (KM for each substrate)app) Was calculated from the dependence of enzyme activity as a function of substrate concentration. The observed ratios were plotted on the ordinate against the relevant substrate concentration on the abscissa and the data were fitted to a direct regression analysis (Prism v 3.02; GraphPad, San Diego, USA) using Equation 1. (Cornish-Bowden, A. Fundamentals of Enzyme Kinetics Portl and Press; 1995, 93-128).
[0409]
(Equation 1)
In Equation 1, “vi"Is the observed initial rate," Vmax app"Is the maximal activity observed at saturating substrate concentration and" KM app"Is the apparent macroscopic binding (Michaelis) constant for the substrate," [So] "Is the initial substrate concentration.
[0411]
Measurement of inhibition constant
The apparent inhibition constant (Ki) Was measured based on the fact that the inhibition was reversible and occurred by a pure-competitive mechanism. KiValues were calculated by direct regression analysis (Prism v 3.02) using Equation 2 from the dependence of enzyme activity as a function of inhibitor concentration (Cornish-Bowden, A., 1995.).
[0412]
(Equation 2)
In Equation 2, “vi"" Is the observed residual activity and "Vmax app"Is the maximal activity observed (i.e., in the absence of inhibitor) and" KM app"Is the apparent macroscopic binding (Michaelis) constant for the substrate," [S] "is the initial substrate concentration," Ki"" Is the apparent dissociation constant, and "[I]" is the inhibitor concentration.
[0414]
Apparent dissociation constant (Ki app) Approaches the enzyme concentration, Ki appValues were calculated using a quadratic solution of the form described in Equation 3 (Morrison, JF Trends Biochem. Sci.,7Morrison, J. et al., 102-105, 1982; F. Biochim. Biophys. Acta, 185Stone, S., 269-286, 1969; R. And Hofsteeng, J .; Biochemistry,25, 4622-4628, 1986).
[0415]
(Equation 3)
In Equation 3, “vi"Is the observed residual activity and" F "is the difference between the observed maximum and minimum enzymatic activities (i.e., in the absence of inhibitor) and" E "o"" Is the total enzyme concentration and "Ki app"Is the apparent dissociation constant and" Io"Is the inhibitor concentration. Curves were fitted to a non-linear regression analysis (Prism) using fixed values for enzyme concentration. Equation 4 is used to describe the substrate kinetics, where "Ki"Is the inhibition constant and" [So]] Is the initial substrate concentration and "KM app"Is the apparent macroscopic binding (Michaelis) constant for the substrate (Morrison, 1982).
[0417]
Second-order rate of the reaction of the inhibitor with the enzyme
Where applicable, the observed rate of reaction of each compound with the enzyme (kobs) Was analyzed by measuring the rate of enzyme inactivation under pseudo-primary conditions in the presence of substrate (Morrison, JF, TIBS, 102-105, 1982; Tian, W. X. and Tsou, CL, Biochemistry, 21, 1028-1032, 1982; Morrison, JF and Walsh, CT, from Meister (Ed.), Advances in Enzymol.61Tsou, C., 201-301, 1988; L. , From Meister (Ed.), Advances in Enzymol. ,61, 381-436, 1988;). The assay was performed by adding various concentrations of inhibitor and assaying the buffer containing the substrate. The assay was started by adding the enzyme to the reaction mixture and the change in fluorescence was monitored over time. Less than 10% of the substrate was consumed during the assay.
[0418]
(Equation 4)
The activity fluorescence progress curve was fitted to a non-linear regression analysis (Prism) using Equation 5 (Morrison, 1969; Morrison, 1982), where "F" is the fluorescence response and "F" is the fluorescence response. “t” is time and “v”o"Is the initial speed and" vs"Is the equilibrium steady state velocity and" kobs"Is the observed pseudo-first-order rate constant, and" D "is the intercept at time 0 (i.e., the ordinate displacement of the curve). The second order rate constant is kobsThe slope of the line in the plot of (ie, kobs/ [I]). Equation 6 is used to modify the substrate kinetics, where "[So]] Is the initial substrate concentration and “KM app"Is the apparent macroscopic binding (Michaelis) constant for the substrate.
[0420]
(Equation 5)
Compounds of the invention were tested by the assay described above and were found to exhibit cruzipain inhibitory activity or an inhibitory activity against another CA C1 cysteine protease with an in vitro Ki inhibition constant of 100 μM or less. Table 2 shows specific inhibition data for a number of exemplary compounds of the invention.
[0422]
[Table 2]
Claims (40)
Ｒ2は、Ｃ0-7−アルキル、Ｃ3-6−シクロアルキルまたはＡｒ−Ｃ0-7−アルキルであり；
Ｒ3は、Ｃ1-7−アルキル、Ｃ3-6−シクロアルキルまたはＡｒ−Ｃ0-7−アルキルであり；
Ｙは、ＣＲ4Ｒ5−ＣＯであり、この際、Ｒ4、Ｒ5は、独立して、Ｃ0-7−アルキル、Ｃ3-6−シクロアルキル及びＡｒ−Ｃ0-7−アルキルから選ばれ；
（Ｘ）oは、ＣＲ6Ｒ7であり、この際、Ｒ6及びＲ7は、独立して、Ｃ0-7−アルキル、Ｃ3-6−シクロアルキル及びＡｒ−Ｃ0-7−アルキルから選ばれ、およびｏは、０〜３の数であり；
（Ｗ）nは、Ｏ、Ｓ、Ｃ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）またはＳ（Ｏ）2またはＮＲ8であり、この際、Ｒ8は、Ｃ0-7−アルキル、Ｃ3-6−シクロアルキル及びＡｒ−Ｃ0-7−アルキルから選ばれ、およびｎは、０または１であり；
（Ｖ）mは、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｓ）、Ｓ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）2、Ｓ（Ｏ）2ＮＨ、ＯＣ（Ｏ）、ＮＨＣ（Ｏ）、ＮＨＳ（Ｏ）、ＮＨＳ（Ｏ）2、ＯＣ（Ｏ）ＮＨ、Ｃ（Ｏ）ＮＨまたはＣＲ9Ｒ10であり、この際、Ｒ9及びＲ10は、独立して、Ｃ0-7−アルキル、Ｃ3-6−シクロアルキル、Ａｒ−Ｃ0-7−アルキルから選ばれ、およびｍは、０〜３の数であり、ｍが１より大きい場合には、（Ｖ）mは、最大１個のカルボニルまたはスルホニル基を含み；
Ｚは、Ｏ（この際、一般式（Ｉ）の化合物は、（２−アルキル−３−アルキル−４−オキソ−テトラヒドロフラン−３−イル）アミドと称されてもよい）、Ｓ（この際、一般式（Ｉ）の化合物は、（２−アルキル−３−アルキル−４−オキソ−テドラヒドロチオフェン−３−イル）アミドと称されてもよい）またはＣＨ2（この際、一般式（Ｉ）の化合物は、（１−アルキル−２−アルキル−５−オキソシクロペンチル）アミドと称されてもよい）であり；
Ｕは、（下記に詳述されるように）飽和または不飽和のいずれかであり、０〜４個のヘテロ原子を含む、安定した５−〜７−員の一環または安定した８−〜１１−員の２環であり；
Ａは、ＣＨ2、ＣＨＲ11、Ｏ、Ｓ及びＮＲ12から選ばれ、この際、Ｒ11は、上記と同様の定義であり、およびＲ12は、Ｃ0-7−アルキル、Ｃ3-6−シクロアルキル及びＡｒ−Ｃ0-7−アルキルから選ばれ；
Ｂ、Ｄ及びＧは、独立して、ＣＲ11、またはＮから選ばれ、この際、Ｒ11は、上記と同様の定義である；
Ｅは、ＣＨ2、ＣＨＲ11、Ｏ、Ｓ及びＮＲ12から選ばれ、この際、Ｒ11及びＲ12は、上記と同様の定義であり；
Ｊ、Ｌ、Ｍ、Ｒ、Ｔ、Ｔ2、Ｔ3及びＴ4は、独立して、ＣＲ11及びＮから選ばれ、この際、Ｒ11は、上記と同様の定義であり；
Ｔ5は、ＣＨまたはＮから選ばれ；
ｑは、１〜３の数であり、これにより５−、６−または７−員環を規定する。Compounds of general formula (I):
R 2 is C 0-7 -alkyl, C 3-6 -cycloalkyl or Ar—C 0-7 -alkyl;
R 3 is C 1-7 -alkyl, C 3-6 -cycloalkyl or Ar—C 0-7 -alkyl;
Y is CR 4 R 5 —CO, wherein R 4 and R 5 are independently from C 0-7 -alkyl, C 3-6 -cycloalkyl and Ar—C 0-7 -alkyl Chosen;
(X) o is CR 6 R 7 , wherein R 6 and R 7 are independently C 0-7 -alkyl, C 3-6 -cycloalkyl and Ar—C 0-7 -alkyl And o is a number from 0 to 3;
(W) n is O, S, C (O), S (O) or S (O) 2 or NR 8 , wherein R 8 is C 0-7 -alkyl, C 3-6- Selected from cycloalkyl and Ar- C0-7 -alkyl, and n is 0 or 1;
(V) m is C (O), C (S), S (O), S (O) 2 , S (O) 2 NH, OC (O), NHC (O), NHS (O), NHS (O) 2 , OC (O) NH, C (O) NH or CR 9 R 10 , wherein R 9 and R 10 are independently C 0-7 -alkyl, C 3-6-. cycloalkyl, Ar-C 0-7 - is selected from alkyl, and m is a number from 0 to 3, when m is greater than 1, (V) m, the maximum one carbonyl or sulfonyl group Including;
Z is O (in this case, the compound of the general formula (I) may be referred to as (2-alkyl-3-alkyl-4-oxo-tetrahydrofuran-3-yl) amide), S (in this case, The compound of general formula (I) may be referred to as (2-alkyl-3-alkyl-4-oxo-tedrahydrothiophen-3-yl) amide) or CH 2 (wherein the compound of general formula (I) A) may be referred to as (1-alkyl-2-alkyl-5-oxocyclopentyl) amide);
U is either saturated or unsaturated (as detailed below) and contains a stable 5- to 7-member or stable 8- to 11-membered group containing 0 to 4 heteroatoms. -A two-membered ring;
A is selected from CH 2 , CHR 11 , O, S and NR 12 , wherein R 11 has the same definition as above, and R 12 is C 0-7 -alkyl, C 3-6 Selected from -cycloalkyl and Ar- C0-7 -alkyl;
B, D and G are independently selected from CR 11 or N, wherein R 11 has the same definition as above;
E is selected from CH 2 , CHR 11 , O, S and NR 12 , wherein R 11 and R 12 have the same definition as above;
J, L, M, R, T, T 2 , T 3 and T 4 are independently selected from CR 11 and N, wherein R 11 has the same definition as above;
T 5 is selected from CH or N;
q is a number from 1 to 3, thereby defining a 5-, 6- or 7-membered ring.
の一から選ばれる、請求項４に記載の化合物。R 2 is the following part:
The compound according to claim 4, which is selected from the group consisting of:
の一から選ばれる、請求項７に記載の化合物。Y is the following part:
The compound according to claim 7, which is selected from the group consisting of:
から選ばれる、請求項１〜８のいずれか１項に記載の化合物。Y is:
The compound according to any one of claims 1 to 8, which is selected from:
の一である、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の化合物。(X) o is the following part:
The compound according to any one of claims 1 to 13, which is one of the following.
Ｗは、Ｏ、Ｓ、ＳＯ2、ＳＯ、Ｃ（Ｏ）またはＮＲ8であり、この際、Ｒ8は、Ｃ0-4−アルキルであり；ならびにｎは、０または１である、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の化合物。In group (W) n :
W is O, S, SO 2, SO, a C (O) or NR 8, this time, R 8 is C 0-4 - alkyl; and n is 0 or 1, claim 15. The compound according to any one of 1 to 14.
Ｗは、Ｏ、Ｓ、ＳＯ2、Ｃ（Ｏ）またはＮＨであり、この際、ｎは、０または１である、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の化合物。In group (W) n :
W is O, S, an SO 2, C (O) or NH, this time, n is 0 or 1, A compound according to any one of claims 1 to 15.
Ｖは、Ｃ（Ｏ）、Ｃ（Ｏ）ＮＨまたはＣＨＲ10であり、この際、Ｒ10は、Ｃ0-4−アルキルであり；およびｍは、０または１である、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の化合物。In group (V) m :
V is, C (O), C ( O) NH or CHR 10, this time, R 10 is C 0-4 - alkyl; and m is 0 or 1, claim 1-16 The compound according to any one of the above.
の一を有する、請求項２２に記載の化合物。U is:
23. The compound of claim 22, having one of the following:
を表わす、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の化合物。U is the following group:
22. A compound according to any one of claims 1 to 21 which represents
を表わす、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の化合物。U is the following group:
22. A compound according to any one of claims 1 to 21 which represents
を表わす、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の化合物。U is a group:
22. A compound according to any one of claims 1 to 21 which represents
（ｂ）標的の密接に関連する相同性プロテアーゼ及び一般的なハウスキーピングプロテアーゼ（例えば、トリプシン）への請求項１〜２９のいずれか１項に記載の化合物の結合を評価して、「選択性」の基準を提供する；
（ｃ）請求項１〜２９のいずれか１項に記載の化合物の存在下での、特定のシステインプロテアーゼ活性の細胞に基づく機能性マーカーをモニターする；および
（ｄ）請求項１〜２９のいずれか１項に記載の化合物の存在下での、特定のシステインプロテアーゼ活性の動物モデルに基づく機能性マーカーをモニターする、
の一以上を有する、治療のための標的としての既知のまたは推定上のシステインプロテアーゼ阻害剤の確認方法。(A) assessing the in vitro binding of the compound of any one of claims 1-29 to an isolated known or putative cysteine protease to provide a "potential" criterion. The following steps, if necessary:
(B) assessing the binding of the compound according to any one of claims 1 to 29 to closely related homologous proteases of the target and common housekeeping proteases (e.g. trypsin); "Provide the criteria;
(C) monitoring a cell-based functional marker of a particular cysteine protease activity in the presence of the compound of any one of claims 1-29; and (d) any of claims 1-29. Monitoring a functional marker based on an animal model of a specific cysteine protease activity in the presence of the compound of claim 1;
A method for identifying a known or putative cysteine protease inhibitor as a target for therapy, having one or more of the following:
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