JP2004518615A - 癌の処置に有用なインドール化合物 - Google Patents
癌の処置に有用なインドール化合物 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2004518615A JP2004518615A JP2002518166A JP2002518166A JP2004518615A JP 2004518615 A JP2004518615 A JP 2004518615A JP 2002518166 A JP2002518166 A JP 2002518166A JP 2002518166 A JP2002518166 A JP 2002518166A JP 2004518615 A JP2004518615 A JP 2004518615A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- cells
- etodolac
- cancer
- compound
- prostate cancer
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
- C07D491/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains two hetero rings
- C07D491/04—Ortho-condensed systems
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/13—Amines
- A61K31/135—Amines having aromatic rings, e.g. ketamine, nortriptyline
- A61K31/136—Amines having aromatic rings, e.g. ketamine, nortriptyline having the amino group directly attached to the aromatic ring, e.g. benzeneamine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/16—Amides, e.g. hydroxamic acids
- A61K31/165—Amides, e.g. hydroxamic acids having aromatic rings, e.g. colchicine, atenolol, progabide
- A61K31/167—Amides, e.g. hydroxamic acids having aromatic rings, e.g. colchicine, atenolol, progabide having the nitrogen of a carboxamide group directly attached to the aromatic ring, e.g. lidocaine, paracetamol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
- A61K31/403—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with carbocyclic rings, e.g. carbazole
- A61K31/404—Indoles, e.g. pindolol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
- A61K31/407—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with other heterocyclic ring systems, e.g. ketorolac, physostigmine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
- A61K31/4164—1,3-Diazoles
- A61K31/4166—1,3-Diazoles having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring, e.g. phenytoin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
- A61K31/4164—1,3-Diazoles
- A61K31/4184—1,3-Diazoles condensed with carbocyclic rings, e.g. benzimidazoles
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
- A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
- A61K31/475—Quinolines; Isoquinolines having an indole ring, e.g. yohimbine, reserpine, strychnine, vinblastine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
- A61K31/565—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids not substituted in position 17 beta by a carbon atom, e.g. estrane, estradiol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
- A61K31/57—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms, e.g. pregnane or progesterone
- A61K31/573—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms, e.g. pregnane or progesterone substituted in position 21, e.g. cortisone, dexamethasone, prednisone or aldosterone
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/66—Phosphorus compounds
- A61K31/675—Phosphorus compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. pyridoxal phosphate
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
Abstract
本発明は、癌細胞を阻害するか、あるいは化学療法剤、放射線または他の抗癌処置に癌細胞を感受性にするのに有用な下記式（Ｉ）の化合物およびその薬学的に許容される塩に関する：
【化１】
｛式中、Ｒ１は、低級アルキル、低級アルケニル、（ヒドロキシ）低級アルキル、低級アルキニル、フェニル、ベンジルまたは２−チエニルであり、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５は、同一または相違して各々水素または低級アルキルであり、各Ｒ６は、独立的に水素、低級アルキル、ヒドロキシ、（ヒドロキシ）低級アルキル、低級アルコキシ、ベンジルオキシ、低級アルカノイルオキシ、ニトロまたはハロであり、ｎは、１−３であり、Ｒ７は、水素、低級アルキルまたは低級アルケニルであり、Ｘは、オキシまたはチオであり、Ｙは、カルボニル（ＣＨ２）１−３、（ＣＨ２）１−３Ｃ（Ｏ）または（ＣＨ２）１−３ＳＯ２であり、Ｚは、（ω−（４−ピリジル）（Ｃ２−Ｃ４アルコキシ）、（ω−（（Ｒ８）（Ｒ９）アミノ）（Ｃ２−Ｃ４アルコキシ）［うち、Ｒ８ および Ｒ９ は各々Ｈ、（Ｃ１−Ｃ３）アルキルまたはＮと一緒に１−３Ｎ（Ｒ８）、Ｓもしくは非過酸化物Ｏを含む５または６員の複素環である］、（ω−（ＯＨ）（Ｃ２−Ｃ４））アルコキシのアミノ酸エステル、Ｎ（Ｒ８）ＣＨ（Ｒ８）ＣＯ２Ｈ、１’−Ｄ−グルクロニルオキシであり、Ｙ−Ｚは、（ＣＨ２）１−３Ｒ８［うち、Ｒ８は、ＯＨ、（Ｃ２−Ｃ４）アシルオキシ、ＳＯ３Ｈ、ＰＯ４Ｈ２、Ｎ（ＮＯ）（ＯＨ）、ＳＯ２ＮＨ２、ＰＯ（ＯＨ）ＮＨ２またはテトラゾール］である｝。
【化１】
｛式中、Ｒ１は、低級アルキル、低級アルケニル、（ヒドロキシ）低級アルキル、低級アルキニル、フェニル、ベンジルまたは２−チエニルであり、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５は、同一または相違して各々水素または低級アルキルであり、各Ｒ６は、独立的に水素、低級アルキル、ヒドロキシ、（ヒドロキシ）低級アルキル、低級アルコキシ、ベンジルオキシ、低級アルカノイルオキシ、ニトロまたはハロであり、ｎは、１−３であり、Ｒ７は、水素、低級アルキルまたは低級アルケニルであり、Ｘは、オキシまたはチオであり、Ｙは、カルボニル（ＣＨ２）１−３、（ＣＨ２）１−３Ｃ（Ｏ）または（ＣＨ２）１−３ＳＯ２であり、Ｚは、（ω−（４−ピリジル）（Ｃ２−Ｃ４アルコキシ）、（ω−（（Ｒ８）（Ｒ９）アミノ）（Ｃ２−Ｃ４アルコキシ）［うち、Ｒ８ および Ｒ９ は各々Ｈ、（Ｃ１−Ｃ３）アルキルまたはＮと一緒に１−３Ｎ（Ｒ８）、Ｓもしくは非過酸化物Ｏを含む５または６員の複素環である］、（ω−（ＯＨ）（Ｃ２−Ｃ４））アルコキシのアミノ酸エステル、Ｎ（Ｒ８）ＣＨ（Ｒ８）ＣＯ２Ｈ、１’−Ｄ−グルクロニルオキシであり、Ｙ−Ｚは、（ＣＨ２）１−３Ｒ８［うち、Ｒ８は、ＯＨ、（Ｃ２−Ｃ４）アシルオキシ、ＳＯ３Ｈ、ＰＯ４Ｈ２、Ｎ（ＮＯ）（ＯＨ）、ＳＯ２ＮＨ２、ＰＯ（ＯＨ）ＮＨ２またはテトラゾール］である｝。
Description
【０００１】
（技術分野）
関連出願の参照
本出願は、米国特許出願０９／３６０，０２０（１９９９年７月２３日出願）の部分継続であり、米国特許仮出願６０／１８９，９７６（２０００年３月１６日出願）に基づく優先権を享受する（両出願を出典明示により本明細書の一部とする）。
【０００２】
発明の背景
本発明は、米国保健研究所により授与された許可番号５ＲＯＩ ＧＭ２３２００−２４での政府支援でなされた。政府が本発明になんらかの権利を有する。
【０００３】
前立腺癌は、米国における男性の癌による死亡の第２番目に大きい原因である。１９９８年で約１８５，０００人が前立腺癌と診断され、この疾患で３９，０００人以上が死亡したと推測される。参照、Ｓ． Ｈ． Ｌａｎｄｉｅｓ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ， ＣＡ Ｃａｎｃｅｒ Ｊ． Ｃｌｉｎ．， ４８， ６ （１９９８）。前立腺癌の生存率は早期診断ではよいが、進行した疾患の治療はホルモン剥離法および姑息的な処置に限られている。ホルモン剥離法（精巣切除および抗アンドロゲン処置）は一般的に疾患の一時的な軽減をもたらすのみである。通常、１−３年で再発し、再発腫瘍はその成長および生存にアンドロゲンを必要としない。Ｄ． Ｇ． Ｔａｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｓｔａｔｅ， ３２， ２８４ （１９９７）。プロゲステロン、エストラムスチン、ビンブラスチンなどの通常の化学療法剤での治療は、疾患の進行を止めるのに効果を示していない。
【０００４】
非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）の数が別個の分類を要するほど増加している。アスピリンに加えて米国で市販のＮＳＡＩＤに、関節炎についてメクロフェナム酸ナトリウム、オキシフェンブタゾン、フェニルブタゾン、インドメタシン、ピロキシカム、スリンダク、トルメチン；疼痛についてメフェナム酸、ゾメピラック；疼痛および関節炎についてイブプロフェン、フェノプロフェン、ナプロキセンがある。イブプロフェン、メフェナム酸、ナプロキセンは、月経困難症の手当てにも有用である。
【０００５】
ＮＳＡＩＤの臨床上の有用性は、多くの有害作用により制限を受ける。フェニルブタゾンは肝ネクローシスや肉芽腫症に関係し、スリンダク、インドメタシン、イブプロフェン、ナプロキセンは肝炎や胆汁うっ滞性肝炎に関係する。血清アミノトランスフェラーゼ、特にアラニン・アミノトランスフェラーゼの一時的な増加が報告されている。アスピリンを含むこれらの薬剤のすべてがシクロオキシゲナーゼを阻害し、順にプロスタグランジンの合成を阻害する。プロスタグランジンは、糸球体ろ過および腎のナトリウムと水の排出を調節するのを助ける。このように、ＮＳＡＩＤは液体停留を起こし、ナトリウムの***を低下することがあり、ついで高カリウム血症、減尿症、無尿症が生じる。さらに、これらの薬剤のすべてが胃潰瘍を起こすことがある。参照、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｍａｃｋ Ｐｕｂ． Ｃｏ．， Ｅａｓｔｏｎ， ＰＡ （１８ｔｈ ｅｄ．， １９９０） １１１５−１１２２。
【０００６】
癌、特に大腸癌に対するＮＳＡＩＤの作用について、多くの文献がある。例えば、参照、Ｈ． Ａ． Ｗｅｉｓｓ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃａｎｄ Ｊ． Ｇａｓｔｒｏｅｎｔ．， ３１， １３７ （１９９６） （ｓｕｐｐｌ． ２２０） および Ｓｈｉｆｆ ｅｔ ａｌ．， Ｅｘｐ． Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ．， ２２２， １７９ （１９９６）。さらに最近、Ｂ． Ｂｅｌｌｏｓｉｌｌｏ ｅｔ ａｌ．， Ｂｌｏｏｄ， ９２， １４０６ （１９９８） によると、アスピリンおよびサリチル酸塩はインビトロでＢ細胞、ＣＬＬ細胞の生存能を減少せしめるが、インドメタシン、ケトララック、ＮＳ−３９８はそうではない。
【０００７】
Ｃ． Ｐ． Ｄｕｆｆｙ ｅｔ ａｌ．， Ｅｕｒ． Ｊ． Ｃａｎｃｅｒ， ３４， １２５０ （１９９８） によると、ある種の化学療法剤の細胞毒性が、ある種の非ステロイド性抗炎症剤との併用で増加する。ヒト肺癌細胞およびヒト白血病細胞に対する作用は、高度に特異的であり、予測できない。すなわち、あるＮＳＡＩＤと薬剤との併用は効果的であり、また他の併用は効果的でない。結論として言えることは、この作用がＮＳＡＩＤのシクロオキシゲナーゼ阻害活性によるものでないことである。
【０００８】
Ｄｕｆｆｙ グループは、抗癌剤となり得る「ＭＲＳの基質」と抗癌剤の強さを増加し得るＮＳＡＩＤとの組合せについて、１９９７年１０月２４日にＰＣＴ出願を行った（ＷＯ９８／１８４９０）。請求項に揚げられているＮＳＡＩＤは、アセメタシン、インドメタシン、スリンダク、スリンダクスルフィド、スリンダクスルホン、トルメチン、ゾメピラックである。ナプロキセンおよびピロキシカンは活性がないとされている。
【０００９】
最近の報告、Ｗｅｃｈｔｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ６０， ２２０３ （２０００） によると、ＮＳＡＩＤ、Ｒ−フルルビプロフェンが前立腺癌モデルであるＴＲＡＭＰマウスにおいて前立腺癌の進行を阻害した。Ｗｅｃｈｔｅｒ グループは、Ｒ（−）エトドラクおよびＲ−フルルビプロフェンを含むＲ−ＮＳＡＩＤで前立腺癌を治療できることを開示して、１９９７年９月８日にＰＣＴ出願を行った（ＷＯ９８／０９６０３）。Ｒ（−）エトドラクに反して、フルルビプロフェンのＲ−エナンチオマーや他の（Ｒ）−２−アリールプロピオン酸塩ＮＳＡＩＤは体内で抗炎症性Ｓ−エナンチオマーに転換され、従ってＮＳＡＩＤのプロドラッグである。なお、Ｒ（−）エトドラクはそれ自体ＮＳＡＩＤでない。従って、これらの予備的知見を用いて、前立腺癌などの癌を含む腫瘍性疾患を治療する新規化合物を開発することについて、継続的な必要性が存在する。
【００１０】
発明の要旨
本発明は、下記式（Ｉ）の化合物およびその薬学的に許容される塩に関する。
【化３】
式中、Ｒ１は、低級アルキル、低級アルケニル、（ヒドロキシ）低級アルキル、低級アルキニル、フェニル、ベンジルまたは２−チエニルであり、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５は、同一または相違して各々水素または低級アルキルであり、各Ｒ６は、独立的に水素、低級アルキル、ヒドロキシ、（ヒドロキシ）低級アルキル、低級アルコキシ、ベンジルオキシ、低級アルカノイルオキシ、ニトロまたはハロであり、ｎは、１−３であり、Ｒ７は、水素、低級アルキルまたは低級アルケニルであり、Ｘは、オキシまたはチオであり、Ｙは、カルボニル（ＣＨ２）１−３、（ＣＨ２）１−３Ｃ（Ｏ）または（ＣＨ２）１−３ＳＯ２であり、Ｚは、（ω−（４−ピリジル）（Ｃ２−Ｃ４アルコキシ）、（ω−（（Ｒ８）（Ｒ９）アミノ）（Ｃ２−Ｃ４アルコキシ）［うち、Ｒ８ および Ｒ９ は各々Ｈ、（Ｃ１−Ｃ３）アルキルまたはＮと一緒に１−３Ｎ（Ｒ８）、Ｓもしくは非過酸化物Ｏを含む５または６員の複素環である］、（ω−（ＯＨ）（Ｃ２−Ｃ４））アルコキシ、Ｎ（Ｒ８）ＣＨ（Ｒ８）ＣＯ２Ｈ、１’−Ｄ−グルクロニルオキシのアミノ酸エステルであり、Ｙ−Ｚは、（ＣＨ２）１−３Ｒ８［うち、Ｒ８は、ＯＨ、（Ｃ２−Ｃ４）アシルオキシ、ＳＯ３Ｈ、ＰＯ４Ｈ２、Ｎ（ＮＯ）（ＯＨ）、ＳＯ２ＮＨ２、ＰＯ（ＯＨ）ＮＨ２またはテトラゾール］である。
【００１１】
本発明はまた、癌細胞の成長を阻害し、および／または癌細胞を化学療法剤による阻害に敏感にする治療方法に関する。この方法は、癌細胞を有効量の式（Ｉ）の化合物に、好ましくは薬学的に許容される担体と組合せて、接触せしめることを含む。本発明化合物を用いて、ヒト癌患者などの癌罹患の哺乳動物を処置できる。好ましくは、本発明化合物を、アルキル化剤や抗アンドロゲンなどの化学療法剤、放射線および／または他の抗癌治療法と合わせて、投与する。
【００１２】
本発明化合物は、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）および多発性骨髄腫（ＭＭ）を含む白血病および骨髄癌などの造血性癌に対して効果がある。本発明化合物は予想外にも、高レベルの核ホルモン受容体、ペルオキシソム増殖物質活性化受容体−γ（ＰＰＡＲ−γ）、および／または高レベルの抗アポトーシスタンパク質、Ｍｃｌ−１および／またはＢａｇ−１を発現する癌細胞に対して効果がある。このような癌細胞は、少なくともいくつかの型の前立腺癌細胞を含む。
【００１３】
活性ＰＰＡＲ−γは、コアクチベーター・タンパク質（ＣＢＰ）、ホルモン抵抗性前立腺癌において過発現されることが知られているアンドロゲン受容体のコアクチベーターを結合する。従って、本発明化合物は、通常の抗アンドロゲン治療の効果を高め、前立腺癌の拡大を阻害するのに作用し得る。
【００１４】
本発明は、ラセミのエトドラクが精製ＣＬＬまたはＭＭ細胞の生存能を、正常な末梢血リンパ球（ＰＢＬ）の生存能を阻害しない濃度で、阻害することを本発明者が見出したことに基づく。予想外にも、エトドラクのＲ（−）エナンチオマーがＳ（＋）エナンチオマーと同様にＣＬＬ細胞に対して毒性であることが分かった。次いで、エトドラクがフルダラビンおよび２−クロロアデノシンと相乗的に相互作用して、化学療法剤単独では不活性である濃度でＣＬＬ細胞を殺すことが分かった。最後に、両Ｒ（−）およびＳ（＋）エトドラクが多くの前立腺癌細胞系を阻害することが分かった。さらに、Ｒ（−）エナンチオマーがＳ（＋）「抗炎症性」エナンチオマーと少なくとも同等に効果的であった。このことは予想外であった。なぜなら、エトドラクのＲ（−）エナンチオマーが意味のある抗炎症活性を有していないし、またＳ（＋）エナンチオマーにインビボで有意な量に転換されないからである。上記のように、他のＲ−２−アリールプロピオン酸塩ＮＳＡＩＤのＲ−エナンチオマーは「活性」抗炎症性Ｓ−エナンチオマーにインビボで転換され、ＮＳＡＩＤのプロドラッグとして機能する。
【００１５】
阻害の程度は、細胞系によるＰＰＡＲ−γの発現レベルに非常に関係する。高いレベルのＰＰＡＲ−γ発現を有する細胞系が、比較的低いレベルでＰＰＡＲ−γを発現する細胞系よりも非常に効果的に阻害される。このことは参考例に開示する。
【００１６】
式（Ｉ）の化合物は、いくつかのＮＳＡＩＤがもたらすシクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）の阻害による望ましくない生物活性を発揮しないような本発明の治療法に好ましい。しかし、式（Ｉ）の好ましい化合物は、顕著な抗炎症活性を示さないので、当技術分野でＮＳＡＩＤとみるべきでない。
【００１７】
本発明はまた、前立腺癌などの特定の癌患者が式（Ｉ）の化合物による処置に適用できるかどうかを決定する方法を提供する。この方法は、癌細胞を単離し、ＰＰＡＲ−γおよび／またはＭｃｌ−１および／またはＢａｇ−１の相対的レベルをインビトロで、式（Ｉ）の化合物による処置に感受的であることが知られている前立腺癌細胞系などの癌細胞系におけるレベルと比較して評価することを含む。
【００１８】
本発明はまた、前立腺癌などの癌細胞を阻害する試験薬剤の能力を決定する方法を提供する。この方法は、前立腺癌細胞系などに由来する癌細胞の集団を該薬剤に接触せしめ、薬剤がＰＰＡＲ−γの発現を増加するか、またはＭｃｌ−１および／またはＢａｇ−１の発現を減少するか（または両者）どうかを測定することを含む。本発明はまた、エトドラク同族体や他のＮＳＡＩＤなどの薬剤を、癌、好ましくは、前立腺癌、ＣＬＬ、ＭＭなどのエトドラク感受性癌を阻害する能力について評価する一般的な多レベルスクリーニング法を提供する。陽性活性を示す、Ｒ（−）エトドラクの活性に少なくとも等しい薬剤、または陰性活性を示さない、すなわちＲ（−）エトドラクを越える活性でない薬剤を次ぎのスクリーニングに移す。
【００１９】
試験薬剤について、エトドラク、例えば、放射標識されたＲ（−）エトドラクの、ＣＬＬ細胞などのエトドラク感受性癌細胞上のその受容体との結合を競合的に阻害する能力を検査する。細胞上のエトドラク結合部位についてＲ（−）エトドラクと効果的に競合し得る薬剤は、ＣＬＬ細胞などの癌細胞におけるＣａ＋２取りこみを、好ましくは、Ｒ（−）エトドラクと同様に効果的に、増加し得るかを測定するアッセイで検査する。細胞内Ｃａ＋２取りこみを誘導し得る薬剤のスクリーニングを行い、Ｂ−ＣＬＬリンパ球などのリンパ球集団における化学運動性活性（化学運動性または化学走化性）を、好ましくは、Ｒ（−）エトドラクと同様に効果的に、その薬剤が誘導し得るかを調べる。ついで、このスクリーニングで陽性である薬剤を検査して、ＣＬＬやエトドラクに対する感受性が知られている他の癌細胞などの癌細胞におけるアポトーシスやプロアポトーシス因子、例えばカスパーゼ活性の増加を、少なくともＲ（−）エトドラクと同様に効果的に、誘導し得るかどうかを調べる。
【００２０】
このスクリーニングで陽性であった薬剤について、マウスでリンパ球を欠失する能力を検査し、ついでＲ（−）エトドラク以上の活性でない薬剤を癌の動物モデルで検査して、癌の誘発または拡大を阻害できるかどうかを調べる。
【００２１】
癌および癌細胞に関しての使用において、用語「阻害」または「阻害する」は、細胞増殖の減少、細胞増殖の遮断、該細胞のいくつかまたはすべてを殺すことを含む。すなわち、この用語は、癌の発生を防止する予防的処置または発生している癌の拡大を阻止または遅延する治療の両方の意味で使用し得る。エトドラク処置に感受性のマーカーの発現レベルがエトドラクまたはそのアナログでの処置を継続するのに十分高いかどうかを、下記するように、抵抗性および感受性の癌細胞系における該マーカーの相対的レベルの比較により決定する。
【００２２】
図面の簡単な説明
図１は、正常な末梢性血リンパ球（ＰＢＬ）のラセミ・エトドラクに対する感受性を表示するグラフである。
図２は、ＣＬＬのラセミ・エトドラクに対する感受性を表示するグラフである。
図３は、ラセミ・エトドラクとフルダラビンの併用のＣＬＬ細胞に対する相乗作用を表示するグラフである。
図４は、５０μＭのエトドラクと１０μＭの２ＣｄＡまたは１０ｍＭのフルダラの併用のＣＬＬ細胞に対する相乗作用を表示するグラフである。
図５は、ＣＬＬ細胞のＳ−およびＲ−エトドラクに対する感受性を表示するグラフである。
【００２３】
図６および７は、エトドラク投与の前と後での２患者に由来するＣＬＬ細胞の生存能を表示する。
図８は、エトドラク投与の前と後でのＣＬＬ細胞についてのフローサイトメトリー分析を表示する。
図９および１０は、Ｒ（−）エトドラクの２患者由来のＭＭ細胞に対する選択的作用を表示する。
【００２４】
図１１は、ＭＧ−１３２により遮断されるＭｃｌ−１（パネルＡ）およびＢａｇ−１（パネルＢ）における急速な下方調整をエトドラクが誘導することを示すＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルの写真である。
図１２は、７癌細胞系によるＰＰＡＲ−γ発現を表示するＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルの写真である。
図１３は、エトドラクおよびインドメタシンによるＰＰＡＲ−γ発現の誘導を表示するグラフである。
図１４は、ヒト単球におけるＴＰＡの存在または不存在で、エトドラクおよびＴＧＺにより誘導されるＣＤ３６の発現を表示するグラフである。
図１５は、エトドラクで非処置（Ａ）および処置（Ｂ、Ｃ、Ｄ）の前立腺癌組織切片の写真である。
【００２５】
本発明のインドール化合物は、下記式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩、例えば、有機酸または無機酸との塩を含む。
【化４】
式中、Ｒ１は、低級アルキル、低級アルケニル、（ヒドロキシ）低級アルキル、低級アルキニル、フェニル、ベンジルおよび２−チエニルよりなる群から選ばれ、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５は、同一または相違して各々水素および低級アルキルよりなる群から選ばれ、各Ｒ６は、独立的に水素、低級アルキル、ヒドロキシ、（ヒドロキシ）低級アルキル、低級アルコキシ、ベンジルオキシ、低級アルカノイルオキシ、ニトロおよびハロよりなる群から選ばれ、ｎは、１−３であり、Ｒ７は、水素、低級アルキルおよび低級アルケニルよりなる群から選ばれ、Ｘは、オキシおよびチオよりなる群から選ばれ、Ｙは、カルボニル（ＣＨ２）１−３、（ＣＨ２）１−３Ｃ（Ｏ）および（ＣＨ２）１−３ＳＯ２よりなる群から選ばれ、Ｚは、ヒドロキシ、低級アルコキシ｛ＯＨ、４−ピリジル、アミノ、低級アルキルアミノ、ジ（低級アルキル）アミノまたはＮ−モルホリノで選択的に置換されている｝、アミノ、低級アルキルアミノ、［（カルボキシ）（低級アルキル）］アミノ、ジ（低級）アルキルアミノおよびフェニルアミノよりなる群から選ばれ、Ｙ−Ｚは、（ＣＨ２）１−３Ｒ８［うち、Ｒ８は、ＯＨ、（Ｃ２−Ｃ４）アシルオキシ、ＳＯ３Ｈ、ＰＯ４Ｈ２、Ｎ（ＮＯ）（ＯＨ）、ＳＯ２ＮＨ２、ＰＯ（ＯＨ）ＮＨ２またはテトラゾール］である。低級アルキル、アルケニル、アルカノイルなどは、分枝、環状または直鎖のＣ１−Ｃ６基、好ましくはＣ１−Ｃ４基を意味し、シクロアルキルおよび（シクロアルキル）アルキルを含む。（ヒドロキシ）低級アルキルまたはアルコキシは、好ましくは１−または２−ヒドロキシエチルである。
【００２６】
上記で説明したように、エトドラクのＲ（−）エナンチオマーの比較的低い水溶性が、経口投与または水性運搬体での投与のときに、癌に対する有用性を低くすることがある。従って、本発明はまた、エトドラクの遊離酸または簡単なアルキルエステルを越える高い水溶性および／またはバイオアベイラビリティを発揮する新規のインドール化合物を提供する。このようなアナログには、エトドラクの（ピリジニル）低級アルキルエステル、（アミノ）低級アルキルエステル、（ヒドロキシ）低級アルキルエステル、１’−Ｄ−グルクロン酸エステル、例えば、式（ＩＩ）の化合物がある。式中、（ａ）Ｙはカルボニル、および（ｂ）Ｚは、（ω−（４−ピリジル）（Ｃ２−Ｃ４アルコキシ）、（ω−（（Ｒ８）（Ｒ９）アミノ）（Ｃ２−Ｃ４アルコキシ）［うち、Ｒ８ および Ｒ９ は、各々Ｈ、（Ｃ１−Ｃ３）アルキルまたはＮと一緒に１−３Ｎ（Ｒ８）、Ｓもしくは非過酸化物Ｏを含む５または６員の複素環である］、（ω−（ＯＨ）（Ｃ２−Ｃ４））アルコキシのアミノ酸エステル、例えば、２−ヒドロキシエトキシ、１’−Ｄ−グルクロニルオキシのＬ−バレリンまたはＬ−グリシン・エステルである。水溶性の増加した他のアナログには、アミノ酸アミドがあり、Ｙがカルボニルであり、ＺがＮ（Ｒ８）ＣＨ（Ｒ８）ＣＯＯＨである。
【００２７】
このような化合物は、下記文献に開示のように調製できる。米国特許３，８４３，６８１、米国特許出願０９／３１３，０４８、ドイツ特許２，２２６，３４０（Ａｍｅｒ． Ｈｏｍｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）、Ｒ． Ｒ． Ｎａｒｔｅｌ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎ． Ｊ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．， ５４， ２４５ （１９７６）、Ｄｅｍｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅ．， １９， ３９１ （１９７６）、ＰＣＴ出願ＵＳ／００／１３４１０、米国特許４，３３７，７６０（Ｒｕｂｉｎ）。
【００２８】
式（Ｉ）のラセミ化合物の分割は、通常の手段、例えば、光学活性分割アミンとのジアステレオマー塩の形成などを用いて行い得る。参照、例えば、”Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ ｃａｒｂｏｎ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，” ｂｙ Ｅ． Ｌ． Ｅｌｉｅｌ （ＭｃＧｒａｗ Ｈｉｌｌ， １９６２）； Ｃ． Ｈ． Ｌｏｃｈｍｕｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ．， １１３， ２８３ （１９７５）； ”Ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｓ， Ｒａｃｅｍａｔｅｓ ａｎｄ Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ，” ｂｙ Ｊ． Ｊａｃｑｕｅｓ， Ａ． Ｃｏｌｌｅｔ， ａｎｄ Ｓ． Ｈ． Ｗｉｌｅｎ， （Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １９８１）； Ｓ． Ｈ． Ｗｉｌｅｎ， Ａ． Ｃｏｌｌｅｔ ａｎｄ Ｊ． Ｊａｃｑｕｅｓ， Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ， ３３， ２７２５ （１９７７）。例えば、ラセミ体の分割は、光学活性１−フェニルエチルアミンを用いるＲＳ−エトドラクの分別結晶により行われ、ＨＰＬＣを用いて、尿中のエトドラクと２ヒドロキシ化代謝体のラセミ・エトドラクとエナンチオマーの比率が測定されている（Ｕ． Ｂｅｃｋｅｒ−Ｓｃｈａｒｆｅｎｋａｍｐ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ．， ６２１， １９９ （１９９３）。Ｂ． Ｍ． Ａｄｇｅｒ ｅｔ ａｌ．（米国特許５，８１１，５５８）は、グルタミンとＮ（Ｃ１−Ｃ４アルキル）グルタミン塩を用いるエトドラクの分割を開示している。
【００２９】
エトドラク自体（１，８−ジエチル−１，３，４，９−テトラヒドロ［３，４−６］インドール−１−酢酸は、ピラノカルボン酸類のＮＳＡＩＤであり、１９７０年代の前半に開発された。その構造を下記に式（ＩＩ）で示す。式中（＊）はキラル中心である。参照、Ｔｈｅ Ｍｅｒｃｋ Ｉｎｄｅｘ （１１ｔｈ ｅｄ．） ６０８ 頁。
【化５】
【００３０】
エトドラクの薬物動態は、Ｄ． Ｒ． Ｂｒｏｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｃｌｉｎ． Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔ．， ２６， ２５６ （１９９４） に詳細に総説されている。エトドラクはラセミ体で市販されている。エナンチオマーの絶対立体配置はＳ（＋）およびＲ（−）であることが知られており、多くの他のＮＳＡＩＤと同じである。しかし、Ｄｅｍｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．， ２６， １７７８ （１９８３） によると、アジュバント多関節炎のラットの足掌量の減少および薬物のプロスタグランジン・シンテアーゼ阻害活性による測定で、エトドラクのＳ（＋）エナンチオマーがラセミ体のほとんどすべての抗炎遮症活性を保有していた。抗炎症活性が（−）エナンチオマーでは認められず、このものがインビボでＳ（＋）エナンチオマーに有意に転換していない。しかし、下記するように、Ｒ（−）エトドラクは、Ｓ（＋）エナンチオマーに少なくとも同等の、癌細胞に対する活性を有することが分かった。
【００３１】
エトドラクは、その立体選択的薬物動態からして、いくつかの特殊な配置特性を有する。血漿において、ＲＳ−エトドラク投与後、「不活性」Ｒ−エナンチオマーの濃度が活性Ｓ−エナンチオマーの濃度よりも約１０倍高い。このことはキラルＮＳＡＩＤで新しいことである。参照、Ｄ． Ｒ． Ｂｒｏｃｋｅｒｓ ｅｔ ａｌ．， Ｃｌｉｎ． Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔ．， ２６， ２５６ （１９９４）。６人の高齢患者に２００ｍｇを投与後、血漿でのＲ−エナンチオマーの濃度が約３３μＭであった。一方、Ｓ−エナンチオマーの濃度は５倍低かった。エトドラクのラセミ混合物の典型的な用量は４００ｍｇＢＩＤであり、その消失半減期は６−８時間である。さらに、精製されたＲ−エナンチオマーの投与が、シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）阻害剤に関連する副作用、潰瘍や腎不全を示さないようである。従って、かなりの高用量で投与できる。それにもかかわらず、Ｒ（−）エトドラクの比較的低い水溶性が、ヒトで癌細胞、特に前立腺癌細胞を阻害し得るような血漿レベルを保持するのに障害になることがある。しかし、式（Ｉ）の化合物は、水などの水性媒体中に、Ｒ（−）エトドラクよりも実質的に高い濃度で溶解し得る。
【００３２】
式（Ｉ）の化合物はまた、その薬学的に許容される塩または薬学的に許容されない塩の形態で調製できる。薬学的に許容されない塩は、薬学的に許容される塩の製造の中間体として有用である。薬学的に許容される塩は、親化合物の望ましい生物活性を保持する塩であり、望ましくない毒性作用を有しない。このような塩の例には、（ａ）無機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸などとの酸付加塩；および有機酸、例えば、酢酸、シュウ酸、酒石酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、グルコン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、安息香酸、タンニン酸、パルミチン酸、アルギニン酸、ポリグルタミン酸、ナフタレンスルホン酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、ポリグルクロン酸などと形成される塩、（ｂ）元素性アニオン、例えば、塩素、臭素、ヨウ素から形成される塩がある。好ましいカルボン酸塩は親水性アミンのもので、例えば、グルカミンやＮ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキルグルカミンである（参照、Ａｄｇｅｒ ｅｔ ａｌ．の米国特許５，８１１，５５８）。
【００３３】
癌、すなわち前立腺癌の急性または慢性的処置における式（Ｉ）化合物の予防または治療用量の大きさは、癌の型および／または段階、使用された補助の化学療法剤などの抗癌治療、投与経路により変ってくる。用量および投与頻度も個々の患者の年齢、体重、状態、反応により変わる。一般的に、式（Ｉ）の化合物の全１日用量は、本明細書に記載の状態について、単回または分割投与で約５０ｍｇから約５０００ｍｇである。好ましくは、１日用量は、単回または分割投与で約１００ｍｇから約４０００ｍｇである。さらに好ましくは、約１０００ｍｇから約３０００ｍｇであり、例えば、６時間ごとに７５０ｍｇを経口投与する。これにより、約５００−７５０μＭの血漿濃度が得られ、癌細胞を殺すのに効果的であり得る。患者を処置する場合に、治療を低い量から始め、患者の全身的状態に応じて増量する。さらに、幼児、小児、６５歳以上の患者および腎や肝の機能に障害のある患者には、特にＣＯＸ阻害活性を保持するアナログの低量で始め、その全身的応答および血中レベルに基づいて用量を定めることが推奨される。ある場合には、この範囲外の用量が必要となることもある。さらに、臨床家や担当医が個々の患者の反応に応じて、どのように、いつ治療を中断、調整、中止するのかを知っているであろう。用語「有効な阻害量」または「有効な感受量」は、上記の投与量および投与頻度スケジュールに含まれる。
【００３４】
式（Ｉ）の化合物の有効量を患者に与えるために、適当な投与経路を用い得る。例えば、経口、経直腸、非経口（皮下、静脈内、筋肉内）、鞘内、経皮などの投与形態をとることができる。用量形態には、錠剤、トローチ、分散剤、懸濁液、溶液、カプセル、パッチなどがある。化合物の投与は、化学療法剤の投与の前、同時または後に、または継続的に１日量で、化学療法の全体または一部分として行い得る。ある場合、抗癌化学療法剤の運搬に使用されるのと同じ担体または運搬体と組合すことができる。
【００３５】
すなわち、本発明化合物は、例えば経口で、不活性稀釈剤または適応性の担体などの薬学的に許容される運搬体と組合せて、全身的に投与できる。本発明化合物は、硬または軟カプセルとすることも、錠剤に打錠することも、患者の食物に直接入れることもできる。経口治療での投与では、活性化合物を１以上の賦形剤と組合せ、服用錠、口腔錠、トローチ、カプセル、エリキシル、懸濁液、シロップ、ウェファーなどとし得る。このような組成物および製剤は、活性化合物を少なくとも０．１％含有する。この組成物および製剤の％は、もちろん変るものであって、通常は所定の単位用量形態の重量の約２〜６０％である。この治療上有用な組成物中の活性化合物の量は、有効な用量レベルが得られるであろう量である。
【００３６】
錠剤，トローチ、丸剤、カプセルは、下記のものも含有し得る：トラガントガム、アラビアゴム、トウモロコシデンプン、ゼラチンなどの結合剤；ステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤；スクロース、フルクトース、ラクトース、アスパラテームなどの甘味剤；ペパミント、アカモノ油、チェリーフレイバーなどの香料。単位用量形態がカプセルの場合、上記のものに加えて、植物油やポリエチレングリコールなどの液体担体を含有し得る。種々の他の物質が、被膜として、あるいは固体単位用量の物理的形態を改変するものとして存し得る。例えば、錠剤、丸剤、カプセルは、ゼラチン、ワックス、シェラック、糖などで被膜し得る。錠剤、丸剤、カプセル、顆粒、微粒子などは、腸溶被覆することができる。例えば、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（商標）ポリマーのひとつでの被覆で、腸で活性化合物を放出するが、胃の酸性状態では放出しない形態にできる。このものは、顕著なＣＯＸ阻害活性をもつ化合物で高齢または虚弱体質の癌患者を処置する場合や潰瘍が併存する場合に利点がある。
【００３７】
シロップまたはエリキシルは、活性化合物、甘味剤としてスクロースまたはフルクトース、保存剤としてメチルパラベンおよびプロピルパラベン、チェリーやオレンジ風味などの色素および香料を含有し得る。もちろん、単位用量形態の調製に使用される物質は、適用量で、薬学的に許容され、実質的に非毒性でなければならない。さらに、活性化合物を持続放出製剤や装具に組込むこともできる。
【００３８】
活性化合物は、注入や注射で静脈内または腹腔内に投与できる。活性化合物またはその塩の溶液を水で、選択的に非毒性の界面活性剤と混合して、調製できる。分散液もグリセロール、液体ポリエチレングリコール、トリアセチンおよびこれらの混合物中で、または油中で調製できる。貯蔵または使用についての通常の状態で、これらの製剤は微生物の発生を防ぐために保存剤を含有する。
【００３９】
注射や注入に適する薬学的用量形態には、無菌の注射または注入可能の溶液または分散液の即席調製に適合するようになされた活性成分を、リポソーム中に選択的に封入、含有する無菌の水溶液または分散液または無菌の粉末がある。すべての場合、最終用量形態は、製造および貯蔵の条件で、無菌、流動的、安定でなければならない。液体の担体および運搬体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールなど）、植物油、非毒性グリセリルグリコール、およびこれらの適当な混合物を含む溶媒または液体分散媒体である。適当な流動性は、リポソームの形成、分散液の場合の必要な粒子サイズの維持、または界面活性剤の使用により保持できる。微生物作用の防止は種々の抗菌剤または抗真菌剤により行い得る。例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサルなどによる。多くの場合、等張剤、例えば、糖、緩衝剤、塩化ナトリウムなどを含むのが好ましい。注射用組成物を長時間で吸収さすには、吸収を遅らす物質、例えば、モノステアリン酸アルミニウムやゼラチンなどの組成物を使用する。
【００４０】
無菌注射液は、活性化合物を必要量で適当な溶媒中に上記の種々の成分とともに組込み、必要に応じてろ過滅菌を行って調製できる。無菌注射液を調製するための無菌粉末の場合、好ましい調製法は真空乾燥および凍結乾燥であり、予め滅菌ろ過した溶液中に活性成分および追加の所望成分を得る。
【００４１】
式（Ｉ）の化合物の有用な用量は、インビトロ活性および動物モデルでのインビボ活性を比較することで決定できる。マウスなどの動物での有効用量をヒトに外挿する方法は当技術分野で既知である。例えば、参照、米国特許４，９３８，９４９。
【００４２】
ＰＰＡＲ−γレベルを高め、ホルモン無反応性前立腺癌において過剰発現されることが知られているアンドロゲン発現を減少する式（Ｉ）の化合物の能力からして、ＰＰＡＲ−γを上方調節する化合物は、前立腺癌の処置において使用されるステロイドまたは非ステロイド性の抗アンドロゲン剤と併用して、好都合に用い得る。抗アンドロゲン剤には、酢酸ロイプロリド、酢酸ゴセレリン、ビカルタミド、フルタミド、ニルタミド、シクロプロテロンなどがある。
【００４３】
前立腺癌細胞を感受性とするＰＰＡＲ−γレベルを通常の化学療法剤の有効レベルまで低下せしめる式（Ｉ）の化合物の能力からして、この化合物は、前立腺癌などの癌の処置に用いられる化学療法剤と併用できる。この化学療法剤には、エストラムスチン、ビンブラスチン、ミトキサントロン、プレドニソンなどがあり、またはＭＭの処置のメルファレンがある。他の化学療法剤、放射線、または抗腫瘍性抗体やサイトカインなどの他の抗癌剤を本発明化合物とともに使用し得る。参照、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ （１８ｔｈ ｅｄ． １９９０） １１３８−１１６２ 頁。
本発明を下記の詳細な実施例でさらに説明する。
【００４４】
実施例１ 正常な末梢血リンパ球およびＣＬＬ細胞のエトドラクに対する感受性
単核細胞を、Ｂ−ＣＬＬ患者および正常ドナーの末梢血から、密度勾配遠心法（Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ） を用いて単離した。細胞を２Ｘ１０６細胞／ｍＬでＲＰＭＩ中２０％自己血漿とともに９６ウエルプレートにおいて、表示のμＭ濃度のエトドラク（ラセミ、Ｓ−エトドラク、Ｒ−エトドラク）の存在または不存在で、および２−クロロ−２’−デオキシアデノシン（２ＣｄＡ）またはフルダラビンと組合せて、培養した。表示の時間（１２、２４、３６、４８、６０、７０時間）で、生存能アッセイを、エリスロシンＢ排除アッセイ法（Ｄ． Ｃａｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， ＰＮＡＳ ＵＳＡ， ８９， ２９７０ （１９９２） に記載）を用いて行った。
図１に示すように、正常ＰＢＬの有意の死が、インビボで得られない濃度、８００μＭのラセミ・エトドラクで生じた。
【００４５】
正常ドナーからの末梢血リンパ球を１．０ｍＭエトドラクとともに２４時間培養した。Ｂリンパ球を抗ＣＤ１９抗体での着色で同定し、生存能をＤｉＯＣ６蛍光法で検査した。この条件でエトドラクは正常Ｂ細胞の生存能を対照培養物に比して減少せしめなかった。同じ生存能アッセイをＣＬＬ患者の末梢血からの精製ＣＬＬ細胞で行うと、結果が異なった。図２に示すように、５０％のＣＬＬが２００μＭラセミ・エトドラクへの４８時間曝露で死滅した。処置された細胞の９５％以上が悪性Ｂリンパ球であった。
【００４６】
実施例２ エトドラクと化学療法剤の相乗的併用
フルダラビンはＣＬＬの治療に普通に使用されるヌクレオシド・アナログである。この試験において、ＣＬＬ細胞のインビトロ生存を表示時間点で、媒体のみ（「Ｃｏｎ」、四角）、１０ｎＭフルダラビン（菱形）、１０μＭエトドラク（黒丸）、１０ｎＭフルダラビン＋１０μＭエトドラク（白丸）を含有する培地で比較した。２薬剤は一緒になって相乗的な細胞毒性効果を発揮した。図３は、この組合せが４８時間の培養において５０％のＣＬＬ細胞を殺したことを示す。一方、いずれの薬剤も単独では効果がなかった。図４は、同じ試験条件での５０μＭエトドラクおよび１０ｎＭの２−クロロデオキシアデノシンおよびフルダラビンの相乗作用を示す。
【００４７】
実施例３ Ｒ（−）およびＳ（＋）エトドラクのＣＬＬ細胞に対する作用
エトドラク錠を乳鉢で砕き、酢酸エチルで抽出した。得たエナンチオマーのラセミ混合物を、Ｂｅｃｋｅｒ−Ｓｃｈａｒｆｅｎｋａｍｐ ａｎｄ Ｂｌａｓｃｈｋｅ， Ｊ． Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ．， ６２１， １９９ （１９９３） 法のフラクション結晶化により分取スケールで分離した。すなわち、ラセミ混合物固体を絶対２−プロパノールに溶解し、その溶液にＳ−１−フェニルエチルアミンを加えた。得た塩溶液を冷蔵庫に４日間貯蔵した。結晶性の白色塩産物をろ過し、冷２−プロパノールで洗い、２−プロパノールから２回以上再結晶した。分割剤としてＲ−１−フェニルエチルアミンを用いる以外は同じ方法をＲ異性体に繰り返した。最後にＲおよびＳ塩を１０％硫酸（ｖ／ｖ）で分解、酢酸エチルで抽出した。キラル純粋の各異性体を、Ｃｈｒｏｍ Ｔｅｃｈ の Ｃｈｉｒａｌ−ＡＧＰ カラムを用いるＨＰＬＣで確認した。
【００４８】
１０％自己血漿を有するＲＰＭＩ−１６４０培地で培養したＣＬＬ細胞に対する２エナンチオマーの毒性を表示の濃度および時間点で比較した。図５に示す。Ｒ−およびＳ−エナンチオマーは等しくＣＬＬ細胞に対し細胞毒性である。
【００４９】
実施例４ エトドラク処置の前と後のＣＬＬ細胞生存能
ＣＬＬの２人の患者（ＪＫおよびＮＡ）からの血液を取り、ヘパリン処理した。ついで、各患者はすぐに４００ｍｇエトドラク錠を服用し、１２時間後に第２錠を服用した。１２時間後に、第２血液標本を採取した。ＣＬＬ細胞を単離し、実施例１のように、そのインビトロでの生存を１０％自己血漿含有ＲＰＭＩ−１６４０培地で比較した。黒丸はエトドラク処置前のＣＬＬ細胞を示す。図６および７において、上向き三角はエトドラク処置後のＣＬＬ細胞生存能を示す。なお、細胞は前処置血漿を含有する培地に分散されている。下向き三角は処置後血漿の培地に保持されている処置後ＣＬＬ細胞である。
【００５０】
図６は、患者ＪＫからの２細胞集団の生存を示す。処置後の細胞は処置前の細胞よりも生存が短い。図７は、患者ＮＡでの劇的でないが同様の効果を示す。図８は、患者ＪＫのＣＬＬ細胞についてエトドラク処置の前および後でのフローサイトメトリー分析を示す。ＤｉＯＣ６はミトコンドリアにより捕捉される染料である。細胞がアポトーシスにより死ぬと、染色強度が低下する。図８の４パネルのＸ軸はＤｉＯＣ６染色を示す。左下ボックス中のドット数の増加がアポトーシスによる死を表す。患者からの細胞をエトドラク処置前と処置後で比較すると、左下ボックス中のドット数が薬剤投与後に非常に高いことがわかる。この効果は１２時間で検出でき、２４時間後にさらに増加する。
【００５１】
フローサイトメトリー分析を行うために、ミトコンドリア膜貫通能を３，３’−ジヘキシルオキサカルボンシアナミドヨウ化物（ＤｉＯＣ６）により、細胞膜浸透性をヨウ化プロピジウム（ＰＩ）３により、ミトコンドリア呼吸をジヒドロローダニン１２３（ＤＨＲ）により分析した（参照、Ｊ． Ａ． Ｒｏｙａｌｌ ｅｔ ａｌ ａｌ．， Ａｒｃｈ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ．， ３０２， ３４８ （１９９３））。ＣＬＬ細胞を１２時間または２４時間、表示量のエトドラクとともに培養した後、４０ｎＭのＤｉＯＣ６および５μｇ／ｍｌのＰＩを含有する培地で、細胞を１０分間３７℃で培養した。細胞をまた、表示量のエトドラクとともに３時間培養し、２００ｘｇで１０分間回転沈降し、新鮮な呼吸緩衝液（２５０ｍＭスクロース、１ｇ／Ｌウシ血清アルブミン、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、１０ｍＭのＫ／Ｈｅｐｅｓ、５ｍＭのＫＨ２ＰＯ４（ｐＨ７．４））に再懸濁し、１０分間３７℃で０．０４％ジギトニンとともに培養した。細胞を５分間０．１μＭジヒドロローダニン（ＤＨＲ）で処理した。細胞を３０分間 Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ＦＡＣ−Ｓｃａｌｉｂｕｒ サイトフルオロメーターで解析した。適当な処理の後、蛍光を異なる波長で記録した：ＤｉＯＣ６およびＤＨＲを５２５ｎｍ（ＦＬ−１）、ＰＩを６００ｎｍ（ＦＬ）。
【００５２】
一般的に、インビトロ培養１６時間後で、処置後の悪性細胞の生存に１０％の減少が前処置悪性細胞に比してあり、この試験で「陽性」であり、ＣＬＬなどの癌治療におけるエトドラク、すなわちＲ（−）エトドラクの有用性を表す。
【００５３】
実施例５ ＭＭ細胞を選択的に殺すＲ（−）エトドラクの能力
骨髄を多発性骨髄腫の２患者から得た。骨髄は、高レベル発現のＣＤ３８膜抗原を含む悪性細胞と正常細胞の混合物を含有していた。懸濁した骨髄細胞を、７２時間、ＲＰＭＩ−１６４０培地で１０％ウシ胎児血清および種々の濃度の精製エトドラクのＲ−エナンチオマーとともにインキュベートした。ついで、死細胞をヨウ化プロピジウムで染色し、多発性骨髄腫細胞を蛍光モノクローナル抗ＣＤ３８抗体で着色した。データを蛍光活性化細胞ソーティングで分析した。図９および１０は、両患者に由来する骨髄細胞において、Ｒ−エトドラクが正常の骨髄細胞を殺さなかったが、多発性骨髄腫を用量依存的に殺したことを示す。
【００５４】
実施例６ エトドラクの癌細胞系に対する細胞毒性
表１に要約するように、Ｒ（−）エトドラクの前立腺癌細胞およびひとつの大腸癌細胞に対する細胞毒性効果を、１ｇ用量のＲ（−）エトドラクがヒトにおいて最大血漿濃度約４００μＭをもたらすとすると、臨床的に達し得る濃度で発揮する。Ｒ（−）およびＳ（＋）エナンチオマーの両者が細胞毒性であることから、抗前立腺癌活性はＣＯＸ依存性であるといえる。Ｒ（−）エトドラクは、抗炎症活性を欠くにもかかわらず、Ｓ（＋）エナンチオマーよりも前立腺癌細胞に対し毒性である。
【００５５】
【表１】
＊エトドラクＲ／Ｓ，ＲまたはＳのＩＣ５０（μＭ）。細胞毒性を、減少さした濃度の薬剤に対する連続的曝露の３日間後にＭＴＴアッセイで検査した。結果はヨウ化プロピジウム摂取を用いるＦＡＣＳで検定した。
【００５６】
平面的疎水性化合物として、エトドラクおよび他のＮＳＡＩＤは、細胞および器官の膜を容易に通過し、その構造および機能を破壊する（Ｓ． Ｂ． Ａｂｒａｍｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ａｎｄ Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ， ３２， １ （１９８９））。タンパク質Ｍｃｌ−１およびＢａｇ−１はミトコンドリアに存するｂｃｌ−２ファミリーの抗アポトーシス性メンバーである（Ｘ． Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｅｘｐ． Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ．， ２３５， ２１０ （１９９７））。１００μＭエトドラクとのインキュベーション後早くも２時間で、Ｍｃｌ−１およびＢａｇ−１がエトドラク感受性前立腺癌細胞系（ＬＮＣａＰ）において低下した。Ｍｃｌ−１およびＢａｇ−１レベルの低下は、５．０μＭのＭＧ−１３２（最近発表されたプロテアソーム阻害剤）との前立腺細胞のインキュベーションで防止できる（夫々、図１１のパネルＡおよびＢ）（Ｄ． Ｈ． Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．， Ｔｒｅｎｄｓ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．， ８， ３９７ （１９９８）。洗剤分解物（レーンごと２０μｇ）をＳＤＳ−ＰＡＧＥにかけ、抗Ｍｃｌ−１および抗Ｂａｇ−１抗体でイムノブロットした。広スペクトル・カスパーゼ阻害剤であるＺ−ＶＡＤとの前インキュベーションはＭｃｌ−１およびＢａｇ−１下方調整を防止しなかった。エトドラクのインキュベーションはＢｃｌ−２およびＢａｘレベルを変えなかった（データを表示しない）。すなわち、エトドラクはＭｃｌ−１合成を妨害しないが、その取り込みをおそらく加速する。両Ｒ−およびＳ−エトドラクがＭｃｌ−１変性を等しい量で誘導した。
【００５７】
実施例８ 癌細胞系におけるＰＰＡＲ−γの発現
エトドラクについては前に検討されていないが、高濃度の他のＮＳＡＩＤが核ホルモン受容体ＰＰＡＲ−γを活性化すると報告されている（Ｊ． Ｍ． Ｌｅｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２７２， ３４０６ （１９９７）。さらに、ＰＰＡＲ−γの最大活性化がヒトのマクロファージでアポトーシスを誘導する（Ｇ． Ｃｈｉｎｅｔｔｉ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２７３， ２５５７９ （１９９８））。前立腺細胞がＰＰＡＲ−γを発現するかを調べ、他の癌型と発現レベルを比較することは興味深い。サブコンフルエント細胞系から得た洗剤分解物（レーンごと２０μｇ）をＳＤＳ−ＰＡＧＥにかけ、抗ＰＰＡＲ−γ抗体でイムノブロットした。ＰＰＡＲ−γ内容物を正常にするために、膜を抗アクチン・モノクローナル抗体で再ブロットした。レーン１：ＰＣ−３、レーン２：ＳＷ２６０、レーン３：Ａ５４９、レーン４：ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、レーン５：Ａｌｖａ−３１、レーン６：ＬＮＣａＰ、レーン７：ＨＣＴ−１１６（参照、表１）。いくつかのエトドラク感受性前立腺細胞（特にＰＣ３）が非常に高レベルの免疫反応性ＰＰＡＲ−γを発現したことがわかる（図１２）。
【００５８】
実施例９ エトドラクによるＰＰＡＲ−γの活性化
ＲＡＷ２６４．７細胞を密度３ｘ１０５細胞／ｍｌで６ウエルプレートにおいて、リポフェクタミンをＰＰＡＲ−γ発現ベクターｐＣＭＸ−ＰＰＡＲ−γ（０．１μｇ）およびＰＰＡＲ−γ受容体構築体（ＡＯｘ）３−ＴＫ−Ｌｕｃ（１μｇ）とともに用いて、Ｍ． Ｒｉｃｏｔｅ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ， ３９１， ７９ （１９９８） に記載のように、トランスフェクトした。細胞を２４時間、図１３に表示の化合物で処理し、採取し、ルシフェラーゼ活性についてアッセイした。結果を平均±ＳＤで示す。図１３に示すように、エトドラクの両Ｒ−およびＳ−エナンチオマーがＰＰＡＲ−γレポーター遺伝子構築体を、ヒト血漿で容易に活性化される濃度で、インビボ投与後に活性化した。ＴＨＰ−１ヒト単球細胞（ＡＴＣＣ）をホルボルエステル（４０ｎｇＴＰＡ）および２００μＭラセミ・エトドラクまたは２０μＭトログリタゾンの存在または不存在で、インキュベートした。培養３日後に、スカベンジャー受容体ＣＤ３６の表面発現をフローサイトメトリーで測定した。図１４に示すように、両Ｒ−およびＳ−エトドラクがＣＤ３６、ＰＰＡＲ−γ活性化のマーカーの発現を、ヒト細胞系ＴＨＰ−１においてマクロファージ分化の際に起こした。
【００５９】
実施例１０ 前立腺癌組織サンプルのエトドラク処置
新たに得た前立腺切除サンプルを３ｍｍ３片に切断し、７２時間１０％ＦＢＳおよび抗体を補充したＲＰＭＩ−１６４０中で、ラセミ・エトドラクの不存在（Ａ、４００ｘ）または存在（Ｂ、４００ｘ）、または精製Ｒエナンチオマーの不存在（Ｃ、４００ｘ）または存在（Ｄ、４００ｘ）でインキュベートした。組織を４％パラホルムアルデヒドＰＢＳに固定し、パラフィンに埋没し、切片とし、エキサトキシリンおよびエオシンで着色した。図１５Ａは、浸潤腫瘍細胞（大核）およびいくつかの残留正常上皮を示す。図１５Ｂから１５Ｄは、エトドラクの作用を示す：濃縮アポトーシス性核の豊富な存在（黒矢印、ＢおよびＤ）および新生の腺構築の崩壊（Ｂ＋Ｃ）に注意。エトドラクは、腫瘍細胞に選択的に毒性であるが、正常な基細胞に影響を与えなかった。ラセミ混合物（Ｒ／Ｓ）ならびに精製ＲおよびＳアナログはともに活性であった。
【００６０】
実施例１１ エトドラク・アナログを同定するスクリーニングのための予期プロトコール
Ａ．放射標識Ｒ−エトドラクとの競合によるアナログのスクリーニング
エトドラク感受性の慢性リンパ球白血病（ＣＬＬ）細胞などの癌細胞を放射受容体結合アッセイにおける薬剤スクリーニングに用いる。簡単にいうと、冷凍ＣＬＬを３回ハンクス・バランス塩溶液（ＨＢＳＳ）で洗い、ＨＢＳＳ−ＨＥＰＥＳに再懸濁する。約２百万の細胞、［３Ｈ］−Ｒ−エトドラク（ｓｐ．ａｃｔ． ２０−２５ Ｃｉ／ｍｍｏｌ、Ｓｉｂｔｅｃｈ 調製）、および可能性ある競合物または緩衝液を含有する全量２００μｌを、温度（４および３７℃）および時間（０−６０分）を変えてインキュベートする。各サンプルにつき、３回の５０μｌアリコットを、３００μｌの２０％スクロースＨＢＳＳ−ＨＥＰＥＳ上に１．５ｍｌポリプロピレン・スナップ・トップ・チューブ中で重ね、ベックマン ｍｉｃｒｏｆｕｇｅ 中で２．５分間１５０００ｒｐｍでペレット化する。この操作により細胞結合と細胞遊離のエトドラクを迅速に分離する。チューブ・チップを切除し、細胞ペレットを可溶化し、シンチレーション計数器で数える。いくつかのインキュベーション混合物は対照として過剰の非標識エトドラクを含有する。特異的結合は、放射標識エトドラク含有のチューブでの結合ｃｐｍ引く放射標識エトドラクおよび非標識冷競合エトドラク含有のチューブでのｃｐｍの差である。試験薬剤を非標識冷競合エトドラクと、放射標識エトドラク結合を阻害する能力について比較する。放射標識エトドラクのその受容体との結合を阻害し得る化合物を次ぎのスクリーニングにかける。
【００６１】
Ｂ．ＣＬＬにおける細胞内Ｃａ２＋の動員
エトドラク・アナログなどの試験化合物によるＣＬＬ細胞中のカルシウムレベルの増加を、フローサイトメトリーアッセイ（ＦＡＣＳ）により、およびＦｌｕｏ−４染料（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ） を用いる蛍光造影プレートリーダー・システム（ＦＬＩＰＲ， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ Ｃｏｒｐ．， Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ， ＣＡ）により測定する。簡単にいうと、ＣＬＬ細胞（５ｘ１０６／ｍｌ）を３０分間４μＭのＦｌｕｏ−４染料で３７℃、血清なしの培地中で処理し、２回洗い、さらに３０分間、通常の細胞培養基中に再懸濁する。処理細胞をＦＡＣＳチューブ中で試験薬剤含有の培地に混合し、直ちに３分間以上ＦＡＣＳ分析で蛍光を調べる。高情報量スクリーニング（ＨＴＳ）アッセイのために、同じ蛍光染料（Ｆｌｕｏ−４）を用いて、ＦＬＩＰＲに基づくアッセイにより９６ウエル・プレート・ホーマットでスクリーニングを行う。正対照として、カルシウム・イオノフォア・イオノマイシンを５０ｎｇ／ｍｌの最終濃度で、ＳＤＦ−１およびＩＰ−１０などのケモカインとともに、および抗ＩｇＭ架橋抗体とともに使用する。ＣＬＬ細胞によるＣａ＋２摂取を増加する化合物、好ましくはＲ（−）エトドラクにより誘導されるレベルまで増加する化合物を次ぎのスクリーニングにかける。
【００６２】
Ｃ．化学走性および化学運動性アッセイ
細胞移動を２４ウエル修飾Ｂｏｙｄｅｎチェンバー（Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ， Ｃｏｒｎｉｎｇ−Ｃｏｓｔａｒ， ＮＹ） で調べる。組換えヒトＩＰ−１０ケモカイン（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ， ＭｃＫｉｎｌｅｙ Ｐｌａｃｅ， ＮＥ）をＲＰＭＩ−１６４０培地に２００ｎｇ／ｍｌに稀釈して、Ｂ−ＣＬＬ患者からのリンパ球の化学走性を検査するのに用いる。３ｍｍの孔サイズのポリカルボン酸塩膜を使用する。全６００ｍｌのケモカインまた対照培地をウエル底に入れて、ＲＰＭＩ−１６４０に再懸濁された１００ｍＬの２〜５．０ｘ１０６細胞／ｍｌ細胞をウエルの上方に加える。チェンバーを３７℃で５％ＣＯ２とともに２時間インキュベートする。ついで膜を除き、底に存在する細胞をフローサイトメトリーで定量する。細胞定量のために、固定された獲得時間３０秒をサンプルごとに用い、ビードを各試験中用い、再製可能な獲得を確認する。化学走性応答などのリンパ球中の化学運動性応答を誘導する試験薬剤、少なくともＲ（−）エトドラクと同等に有効な試験薬剤を次ぎのスクリーニングに進める。
【００６３】
Ｄ．癌細胞におけるアポトーシスの誘発
試験薬剤、例えば、Ｒ−エトドラク・アナログのアポトーシス性活性を、主要なＣＬＬ細胞および他の腫瘍細胞において、ＭＴＴアッセイを用いることにより、および蛍光アッセイを用いるカスパーゼ−３の触媒性活性化の測定により試験する。簡単にいうと、細胞を３日まで、連続的稀釈の選択された試験薬剤の存在でインキュベートする。細胞生存性を９６ウエルプレート中で、ＭＴＴ試薬（最終１ｍｇ／ｍｌ）を２４時間加え、次いでＳＤＳ細胞分解および分光測光分析に５７０ｎｍでかけて、定量する。カスパーゼ触媒活性を９６ウエル・プレート・アッセイで、特異的蛍光測定基質（ＤＥＶＤ−ＡＭＣ）を用いて、ＣＨＡＰＳ／ＮＰ−４０分解緩衝液で処理細胞を分解し、蛍光測定アッセイにより測定する。アポトーシス性活性を発揮する試験薬剤、例えば、好ましくは少なくともＲ（−）エトドラクと同様に効果的に増加する試験薬剤を次のスクリーニングにかける。
【００６４】
Ｅ．マウスにおけるリンパ球除去
選択された試験薬剤を種々の経歴のマウスに単回量２５および１００ｍｇ／ｋｇで与える。白血球細胞の数を、ノイバウエル・チェンバーを用い、処置の４および２４時間後、７および１４日後に数える。白血球レベルを実質的に減少しない試験薬剤、好ましくはＲ（−）エトドラクよりも減少しない薬剤を次ぎのスクリーニングに進める。
【００６５】
Ｆ．腫瘍動物モデル
Ｒ−エトドラク・アナログの抗癌および予防的活性をプリスタン誘導マウス骨髄腫モデルおよびトランスジェニック腺癌マウス前立腺（ＴＲＡＭＰ）モデルを用いて試験する。マウスに、０．０５〜０．５％の選択試験薬剤または対照を補充した食餌を与える。試験の食餌は試験薬剤を含有する無菌のペレットの形態にある。マウス骨髄腫モデルにおける癌予防試験について、最初のプリスタン注射と同じ時に食餌投与を開始する。トランスジェニック前立腺癌モデルについては、食餌投与を出生時に始める。治療試験について、食餌投与をＴＲＡＭＰマウスで１０週で始め、その時に最初の組織学的病理マーカーを常に調べる。これらのスクリーニングの少なくとも１つで癌を阻害する活性に基づき、アナログを臨床試験またはさらなる開発に進める。
【００６６】
上記で引用した発表文献および特許文献のすべてを出典明示により本明細書の一部とする。本発明を種々の具体的で好ましい実施態様および技術で説明した。しかし、多くの変更および修飾を本発明の精神および範囲の内でなし得ることを理解すべきである。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、正常な末梢性血リンパ球（ＰＢＬ）のラセミ・エトドラクに対する感受性を表示するグラフである。
【図２】図２は、ＣＬＬのラセミ・エトドラクに対する感受性を表示するグラフである。
【図３】図３は、ラセミ・エトドラクとフルダラビンの併用のＣＬＬ細胞に対する相乗作用を表示するグラフである。
【図４】図４は、５０μＭのエトドラクと１０μＭの２ＣｄＡまたは１０ｍＭのフルダラビンの併用のＣＬＬ細胞に対する相乗作用を表示するグラフである。
【図５】図５は、ＣＬＬ細胞のＳ−およびＲ−エトドラクに対する感受性を表示するグラフである。
【図６】図６は、エトドラク投与の前と後での２患者に由来するＣＬＬ細胞の生存能を表示する。
【図７】図７は、エトドラク投与の前と後での２患者に由来するＣＬＬ細胞の生存能を表示する。
【図８】図８は、エトドラク投与の前と後でのＣＬＬ細胞についてのフローサイトメトリー分析を表示する。
【図９】図９は、Ｒ（−）エトドラクの２患者由来のＭＭ細胞に対する選択的作用を表示する。
【図１０】図１０は、Ｒ（−）エトドラクの２患者由来のＭＭ細胞に対する選択的作用を表示する。
【図１１】図１１は、ＭＧ−１３２により遮断されるＭｃｌ−１（パネルＡ）およびＢａｇ−１（パネルＢ）における急速な下方調整をエトドラクが誘導することを示すＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルの写真である。
【図１２】図１２は、７癌細胞系によるＰＰＡＲ−γ発現を表示するＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルの写真である。
【図１３】図１３は、エトドラクおよびインドメタシンによるＰＰＡＲ−γ発現の誘導を表示するグラフである。
【図１４】図１４は、ヒト単球におけるＴＰＡの存在または不存在で、エトドラクおよびＴＧＺにより誘導されるＣＤ３６の発現を表示するグラフである。
【図１５】図１５は、エトドラクで非処置（Ａ）および処置（Ｂ、Ｃ、Ｄ）の前立腺癌組織切片の写真である。
（技術分野）
関連出願の参照
本出願は、米国特許出願０９／３６０，０２０（１９９９年７月２３日出願）の部分継続であり、米国特許仮出願６０／１８９，９７６（２０００年３月１６日出願）に基づく優先権を享受する（両出願を出典明示により本明細書の一部とする）。
【０００２】
発明の背景
本発明は、米国保健研究所により授与された許可番号５ＲＯＩ ＧＭ２３２００−２４での政府支援でなされた。政府が本発明になんらかの権利を有する。
【０００３】
前立腺癌は、米国における男性の癌による死亡の第２番目に大きい原因である。１９９８年で約１８５，０００人が前立腺癌と診断され、この疾患で３９，０００人以上が死亡したと推測される。参照、Ｓ． Ｈ． Ｌａｎｄｉｅｓ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ， ＣＡ Ｃａｎｃｅｒ Ｊ． Ｃｌｉｎ．， ４８， ６ （１９９８）。前立腺癌の生存率は早期診断ではよいが、進行した疾患の治療はホルモン剥離法および姑息的な処置に限られている。ホルモン剥離法（精巣切除および抗アンドロゲン処置）は一般的に疾患の一時的な軽減をもたらすのみである。通常、１−３年で再発し、再発腫瘍はその成長および生存にアンドロゲンを必要としない。Ｄ． Ｇ． Ｔａｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｓｔａｔｅ， ３２， ２８４ （１９９７）。プロゲステロン、エストラムスチン、ビンブラスチンなどの通常の化学療法剤での治療は、疾患の進行を止めるのに効果を示していない。
【０００４】
非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）の数が別個の分類を要するほど増加している。アスピリンに加えて米国で市販のＮＳＡＩＤに、関節炎についてメクロフェナム酸ナトリウム、オキシフェンブタゾン、フェニルブタゾン、インドメタシン、ピロキシカム、スリンダク、トルメチン；疼痛についてメフェナム酸、ゾメピラック；疼痛および関節炎についてイブプロフェン、フェノプロフェン、ナプロキセンがある。イブプロフェン、メフェナム酸、ナプロキセンは、月経困難症の手当てにも有用である。
【０００５】
ＮＳＡＩＤの臨床上の有用性は、多くの有害作用により制限を受ける。フェニルブタゾンは肝ネクローシスや肉芽腫症に関係し、スリンダク、インドメタシン、イブプロフェン、ナプロキセンは肝炎や胆汁うっ滞性肝炎に関係する。血清アミノトランスフェラーゼ、特にアラニン・アミノトランスフェラーゼの一時的な増加が報告されている。アスピリンを含むこれらの薬剤のすべてがシクロオキシゲナーゼを阻害し、順にプロスタグランジンの合成を阻害する。プロスタグランジンは、糸球体ろ過および腎のナトリウムと水の排出を調節するのを助ける。このように、ＮＳＡＩＤは液体停留を起こし、ナトリウムの***を低下することがあり、ついで高カリウム血症、減尿症、無尿症が生じる。さらに、これらの薬剤のすべてが胃潰瘍を起こすことがある。参照、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｍａｃｋ Ｐｕｂ． Ｃｏ．， Ｅａｓｔｏｎ， ＰＡ （１８ｔｈ ｅｄ．， １９９０） １１１５−１１２２。
【０００６】
癌、特に大腸癌に対するＮＳＡＩＤの作用について、多くの文献がある。例えば、参照、Ｈ． Ａ． Ｗｅｉｓｓ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃａｎｄ Ｊ． Ｇａｓｔｒｏｅｎｔ．， ３１， １３７ （１９９６） （ｓｕｐｐｌ． ２２０） および Ｓｈｉｆｆ ｅｔ ａｌ．， Ｅｘｐ． Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ．， ２２２， １７９ （１９９６）。さらに最近、Ｂ． Ｂｅｌｌｏｓｉｌｌｏ ｅｔ ａｌ．， Ｂｌｏｏｄ， ９２， １４０６ （１９９８） によると、アスピリンおよびサリチル酸塩はインビトロでＢ細胞、ＣＬＬ細胞の生存能を減少せしめるが、インドメタシン、ケトララック、ＮＳ−３９８はそうではない。
【０００７】
Ｃ． Ｐ． Ｄｕｆｆｙ ｅｔ ａｌ．， Ｅｕｒ． Ｊ． Ｃａｎｃｅｒ， ３４， １２５０ （１９９８） によると、ある種の化学療法剤の細胞毒性が、ある種の非ステロイド性抗炎症剤との併用で増加する。ヒト肺癌細胞およびヒト白血病細胞に対する作用は、高度に特異的であり、予測できない。すなわち、あるＮＳＡＩＤと薬剤との併用は効果的であり、また他の併用は効果的でない。結論として言えることは、この作用がＮＳＡＩＤのシクロオキシゲナーゼ阻害活性によるものでないことである。
【０００８】
Ｄｕｆｆｙ グループは、抗癌剤となり得る「ＭＲＳの基質」と抗癌剤の強さを増加し得るＮＳＡＩＤとの組合せについて、１９９７年１０月２４日にＰＣＴ出願を行った（ＷＯ９８／１８４９０）。請求項に揚げられているＮＳＡＩＤは、アセメタシン、インドメタシン、スリンダク、スリンダクスルフィド、スリンダクスルホン、トルメチン、ゾメピラックである。ナプロキセンおよびピロキシカンは活性がないとされている。
【０００９】
最近の報告、Ｗｅｃｈｔｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．， ６０， ２２０３ （２０００） によると、ＮＳＡＩＤ、Ｒ−フルルビプロフェンが前立腺癌モデルであるＴＲＡＭＰマウスにおいて前立腺癌の進行を阻害した。Ｗｅｃｈｔｅｒ グループは、Ｒ（−）エトドラクおよびＲ−フルルビプロフェンを含むＲ−ＮＳＡＩＤで前立腺癌を治療できることを開示して、１９９７年９月８日にＰＣＴ出願を行った（ＷＯ９８／０９６０３）。Ｒ（−）エトドラクに反して、フルルビプロフェンのＲ−エナンチオマーや他の（Ｒ）−２−アリールプロピオン酸塩ＮＳＡＩＤは体内で抗炎症性Ｓ−エナンチオマーに転換され、従ってＮＳＡＩＤのプロドラッグである。なお、Ｒ（−）エトドラクはそれ自体ＮＳＡＩＤでない。従って、これらの予備的知見を用いて、前立腺癌などの癌を含む腫瘍性疾患を治療する新規化合物を開発することについて、継続的な必要性が存在する。
【００１０】
発明の要旨
本発明は、下記式（Ｉ）の化合物およびその薬学的に許容される塩に関する。
【化３】
【００１１】
本発明はまた、癌細胞の成長を阻害し、および／または癌細胞を化学療法剤による阻害に敏感にする治療方法に関する。この方法は、癌細胞を有効量の式（Ｉ）の化合物に、好ましくは薬学的に許容される担体と組合せて、接触せしめることを含む。本発明化合物を用いて、ヒト癌患者などの癌罹患の哺乳動物を処置できる。好ましくは、本発明化合物を、アルキル化剤や抗アンドロゲンなどの化学療法剤、放射線および／または他の抗癌治療法と合わせて、投与する。
【００１２】
本発明化合物は、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）および多発性骨髄腫（ＭＭ）を含む白血病および骨髄癌などの造血性癌に対して効果がある。本発明化合物は予想外にも、高レベルの核ホルモン受容体、ペルオキシソム増殖物質活性化受容体−γ（ＰＰＡＲ−γ）、および／または高レベルの抗アポトーシスタンパク質、Ｍｃｌ−１および／またはＢａｇ−１を発現する癌細胞に対して効果がある。このような癌細胞は、少なくともいくつかの型の前立腺癌細胞を含む。
【００１３】
活性ＰＰＡＲ−γは、コアクチベーター・タンパク質（ＣＢＰ）、ホルモン抵抗性前立腺癌において過発現されることが知られているアンドロゲン受容体のコアクチベーターを結合する。従って、本発明化合物は、通常の抗アンドロゲン治療の効果を高め、前立腺癌の拡大を阻害するのに作用し得る。
【００１４】
本発明は、ラセミのエトドラクが精製ＣＬＬまたはＭＭ細胞の生存能を、正常な末梢血リンパ球（ＰＢＬ）の生存能を阻害しない濃度で、阻害することを本発明者が見出したことに基づく。予想外にも、エトドラクのＲ（−）エナンチオマーがＳ（＋）エナンチオマーと同様にＣＬＬ細胞に対して毒性であることが分かった。次いで、エトドラクがフルダラビンおよび２−クロロアデノシンと相乗的に相互作用して、化学療法剤単独では不活性である濃度でＣＬＬ細胞を殺すことが分かった。最後に、両Ｒ（−）およびＳ（＋）エトドラクが多くの前立腺癌細胞系を阻害することが分かった。さらに、Ｒ（−）エナンチオマーがＳ（＋）「抗炎症性」エナンチオマーと少なくとも同等に効果的であった。このことは予想外であった。なぜなら、エトドラクのＲ（−）エナンチオマーが意味のある抗炎症活性を有していないし、またＳ（＋）エナンチオマーにインビボで有意な量に転換されないからである。上記のように、他のＲ−２−アリールプロピオン酸塩ＮＳＡＩＤのＲ−エナンチオマーは「活性」抗炎症性Ｓ−エナンチオマーにインビボで転換され、ＮＳＡＩＤのプロドラッグとして機能する。
【００１５】
阻害の程度は、細胞系によるＰＰＡＲ−γの発現レベルに非常に関係する。高いレベルのＰＰＡＲ−γ発現を有する細胞系が、比較的低いレベルでＰＰＡＲ−γを発現する細胞系よりも非常に効果的に阻害される。このことは参考例に開示する。
【００１６】
式（Ｉ）の化合物は、いくつかのＮＳＡＩＤがもたらすシクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）の阻害による望ましくない生物活性を発揮しないような本発明の治療法に好ましい。しかし、式（Ｉ）の好ましい化合物は、顕著な抗炎症活性を示さないので、当技術分野でＮＳＡＩＤとみるべきでない。
【００１７】
本発明はまた、前立腺癌などの特定の癌患者が式（Ｉ）の化合物による処置に適用できるかどうかを決定する方法を提供する。この方法は、癌細胞を単離し、ＰＰＡＲ−γおよび／またはＭｃｌ−１および／またはＢａｇ−１の相対的レベルをインビトロで、式（Ｉ）の化合物による処置に感受的であることが知られている前立腺癌細胞系などの癌細胞系におけるレベルと比較して評価することを含む。
【００１８】
本発明はまた、前立腺癌などの癌細胞を阻害する試験薬剤の能力を決定する方法を提供する。この方法は、前立腺癌細胞系などに由来する癌細胞の集団を該薬剤に接触せしめ、薬剤がＰＰＡＲ−γの発現を増加するか、またはＭｃｌ−１および／またはＢａｇ−１の発現を減少するか（または両者）どうかを測定することを含む。本発明はまた、エトドラク同族体や他のＮＳＡＩＤなどの薬剤を、癌、好ましくは、前立腺癌、ＣＬＬ、ＭＭなどのエトドラク感受性癌を阻害する能力について評価する一般的な多レベルスクリーニング法を提供する。陽性活性を示す、Ｒ（−）エトドラクの活性に少なくとも等しい薬剤、または陰性活性を示さない、すなわちＲ（−）エトドラクを越える活性でない薬剤を次ぎのスクリーニングに移す。
【００１９】
試験薬剤について、エトドラク、例えば、放射標識されたＲ（−）エトドラクの、ＣＬＬ細胞などのエトドラク感受性癌細胞上のその受容体との結合を競合的に阻害する能力を検査する。細胞上のエトドラク結合部位についてＲ（−）エトドラクと効果的に競合し得る薬剤は、ＣＬＬ細胞などの癌細胞におけるＣａ＋２取りこみを、好ましくは、Ｒ（−）エトドラクと同様に効果的に、増加し得るかを測定するアッセイで検査する。細胞内Ｃａ＋２取りこみを誘導し得る薬剤のスクリーニングを行い、Ｂ−ＣＬＬリンパ球などのリンパ球集団における化学運動性活性（化学運動性または化学走化性）を、好ましくは、Ｒ（−）エトドラクと同様に効果的に、その薬剤が誘導し得るかを調べる。ついで、このスクリーニングで陽性である薬剤を検査して、ＣＬＬやエトドラクに対する感受性が知られている他の癌細胞などの癌細胞におけるアポトーシスやプロアポトーシス因子、例えばカスパーゼ活性の増加を、少なくともＲ（−）エトドラクと同様に効果的に、誘導し得るかどうかを調べる。
【００２０】
このスクリーニングで陽性であった薬剤について、マウスでリンパ球を欠失する能力を検査し、ついでＲ（−）エトドラク以上の活性でない薬剤を癌の動物モデルで検査して、癌の誘発または拡大を阻害できるかどうかを調べる。
【００２１】
癌および癌細胞に関しての使用において、用語「阻害」または「阻害する」は、細胞増殖の減少、細胞増殖の遮断、該細胞のいくつかまたはすべてを殺すことを含む。すなわち、この用語は、癌の発生を防止する予防的処置または発生している癌の拡大を阻止または遅延する治療の両方の意味で使用し得る。エトドラク処置に感受性のマーカーの発現レベルがエトドラクまたはそのアナログでの処置を継続するのに十分高いかどうかを、下記するように、抵抗性および感受性の癌細胞系における該マーカーの相対的レベルの比較により決定する。
【００２２】
図面の簡単な説明
図１は、正常な末梢性血リンパ球（ＰＢＬ）のラセミ・エトドラクに対する感受性を表示するグラフである。
図２は、ＣＬＬのラセミ・エトドラクに対する感受性を表示するグラフである。
図３は、ラセミ・エトドラクとフルダラビンの併用のＣＬＬ細胞に対する相乗作用を表示するグラフである。
図４は、５０μＭのエトドラクと１０μＭの２ＣｄＡまたは１０ｍＭのフルダラの併用のＣＬＬ細胞に対する相乗作用を表示するグラフである。
図５は、ＣＬＬ細胞のＳ−およびＲ−エトドラクに対する感受性を表示するグラフである。
【００２３】
図６および７は、エトドラク投与の前と後での２患者に由来するＣＬＬ細胞の生存能を表示する。
図８は、エトドラク投与の前と後でのＣＬＬ細胞についてのフローサイトメトリー分析を表示する。
図９および１０は、Ｒ（−）エトドラクの２患者由来のＭＭ細胞に対する選択的作用を表示する。
【００２４】
図１１は、ＭＧ−１３２により遮断されるＭｃｌ−１（パネルＡ）およびＢａｇ−１（パネルＢ）における急速な下方調整をエトドラクが誘導することを示すＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルの写真である。
図１２は、７癌細胞系によるＰＰＡＲ−γ発現を表示するＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルの写真である。
図１３は、エトドラクおよびインドメタシンによるＰＰＡＲ−γ発現の誘導を表示するグラフである。
図１４は、ヒト単球におけるＴＰＡの存在または不存在で、エトドラクおよびＴＧＺにより誘導されるＣＤ３６の発現を表示するグラフである。
図１５は、エトドラクで非処置（Ａ）および処置（Ｂ、Ｃ、Ｄ）の前立腺癌組織切片の写真である。
【００２５】
本発明のインドール化合物は、下記式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容される塩、例えば、有機酸または無機酸との塩を含む。
【化４】
【００２６】
上記で説明したように、エトドラクのＲ（−）エナンチオマーの比較的低い水溶性が、経口投与または水性運搬体での投与のときに、癌に対する有用性を低くすることがある。従って、本発明はまた、エトドラクの遊離酸または簡単なアルキルエステルを越える高い水溶性および／またはバイオアベイラビリティを発揮する新規のインドール化合物を提供する。このようなアナログには、エトドラクの（ピリジニル）低級アルキルエステル、（アミノ）低級アルキルエステル、（ヒドロキシ）低級アルキルエステル、１’−Ｄ−グルクロン酸エステル、例えば、式（ＩＩ）の化合物がある。式中、（ａ）Ｙはカルボニル、および（ｂ）Ｚは、（ω−（４−ピリジル）（Ｃ２−Ｃ４アルコキシ）、（ω−（（Ｒ８）（Ｒ９）アミノ）（Ｃ２−Ｃ４アルコキシ）［うち、Ｒ８ および Ｒ９ は、各々Ｈ、（Ｃ１−Ｃ３）アルキルまたはＮと一緒に１−３Ｎ（Ｒ８）、Ｓもしくは非過酸化物Ｏを含む５または６員の複素環である］、（ω−（ＯＨ）（Ｃ２−Ｃ４））アルコキシのアミノ酸エステル、例えば、２−ヒドロキシエトキシ、１’−Ｄ−グルクロニルオキシのＬ−バレリンまたはＬ−グリシン・エステルである。水溶性の増加した他のアナログには、アミノ酸アミドがあり、Ｙがカルボニルであり、ＺがＮ（Ｒ８）ＣＨ（Ｒ８）ＣＯＯＨである。
【００２７】
このような化合物は、下記文献に開示のように調製できる。米国特許３，８４３，６８１、米国特許出願０９／３１３，０４８、ドイツ特許２，２２６，３４０（Ａｍｅｒ． Ｈｏｍｅ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）、Ｒ． Ｒ． Ｎａｒｔｅｌ ｅｔ ａｌ．， Ｃａｎ． Ｊ． Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．， ５４， ２４５ （１９７６）、Ｄｅｍｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅ．， １９， ３９１ （１９７６）、ＰＣＴ出願ＵＳ／００／１３４１０、米国特許４，３３７，７６０（Ｒｕｂｉｎ）。
【００２８】
式（Ｉ）のラセミ化合物の分割は、通常の手段、例えば、光学活性分割アミンとのジアステレオマー塩の形成などを用いて行い得る。参照、例えば、”Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ｏｆ ｃａｒｂｏｎ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，” ｂｙ Ｅ． Ｌ． Ｅｌｉｅｌ （ＭｃＧｒａｗ Ｈｉｌｌ， １９６２）； Ｃ． Ｈ． Ｌｏｃｈｍｕｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｊ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ．， １１３， ２８３ （１９７５）； ”Ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒｓ， Ｒａｃｅｍａｔｅｓ ａｎｄ Ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｓ，” ｂｙ Ｊ． Ｊａｃｑｕｅｓ， Ａ． Ｃｏｌｌｅｔ， ａｎｄ Ｓ． Ｈ． Ｗｉｌｅｎ， （Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， １９８１）； Ｓ． Ｈ． Ｗｉｌｅｎ， Ａ． Ｃｏｌｌｅｔ ａｎｄ Ｊ． Ｊａｃｑｕｅｓ， Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ， ３３， ２７２５ （１９７７）。例えば、ラセミ体の分割は、光学活性１−フェニルエチルアミンを用いるＲＳ−エトドラクの分別結晶により行われ、ＨＰＬＣを用いて、尿中のエトドラクと２ヒドロキシ化代謝体のラセミ・エトドラクとエナンチオマーの比率が測定されている（Ｕ． Ｂｅｃｋｅｒ−Ｓｃｈａｒｆｅｎｋａｍｐ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ．， ６２１， １９９ （１９９３）。Ｂ． Ｍ． Ａｄｇｅｒ ｅｔ ａｌ．（米国特許５，８１１，５５８）は、グルタミンとＮ（Ｃ１−Ｃ４アルキル）グルタミン塩を用いるエトドラクの分割を開示している。
【００２９】
エトドラク自体（１，８−ジエチル−１，３，４，９−テトラヒドロ［３，４−６］インドール−１−酢酸は、ピラノカルボン酸類のＮＳＡＩＤであり、１９７０年代の前半に開発された。その構造を下記に式（ＩＩ）で示す。式中（＊）はキラル中心である。参照、Ｔｈｅ Ｍｅｒｃｋ Ｉｎｄｅｘ （１１ｔｈ ｅｄ．） ６０８ 頁。
【化５】
エトドラクの薬物動態は、Ｄ． Ｒ． Ｂｒｏｃｋｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｃｌｉｎ． Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔ．， ２６， ２５６ （１９９４） に詳細に総説されている。エトドラクはラセミ体で市販されている。エナンチオマーの絶対立体配置はＳ（＋）およびＲ（−）であることが知られており、多くの他のＮＳＡＩＤと同じである。しかし、Ｄｅｍｅｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｍｅｄ． Ｃｈｅｍ．， ２６， １７７８ （１９８３） によると、アジュバント多関節炎のラットの足掌量の減少および薬物のプロスタグランジン・シンテアーゼ阻害活性による測定で、エトドラクのＳ（＋）エナンチオマーがラセミ体のほとんどすべての抗炎遮症活性を保有していた。抗炎症活性が（−）エナンチオマーでは認められず、このものがインビボでＳ（＋）エナンチオマーに有意に転換していない。しかし、下記するように、Ｒ（−）エトドラクは、Ｓ（＋）エナンチオマーに少なくとも同等の、癌細胞に対する活性を有することが分かった。
【００３１】
エトドラクは、その立体選択的薬物動態からして、いくつかの特殊な配置特性を有する。血漿において、ＲＳ−エトドラク投与後、「不活性」Ｒ−エナンチオマーの濃度が活性Ｓ−エナンチオマーの濃度よりも約１０倍高い。このことはキラルＮＳＡＩＤで新しいことである。参照、Ｄ． Ｒ． Ｂｒｏｃｋｅｒｓ ｅｔ ａｌ．， Ｃｌｉｎ． Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔ．， ２６， ２５６ （１９９４）。６人の高齢患者に２００ｍｇを投与後、血漿でのＲ−エナンチオマーの濃度が約３３μＭであった。一方、Ｓ−エナンチオマーの濃度は５倍低かった。エトドラクのラセミ混合物の典型的な用量は４００ｍｇＢＩＤであり、その消失半減期は６−８時間である。さらに、精製されたＲ−エナンチオマーの投与が、シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）阻害剤に関連する副作用、潰瘍や腎不全を示さないようである。従って、かなりの高用量で投与できる。それにもかかわらず、Ｒ（−）エトドラクの比較的低い水溶性が、ヒトで癌細胞、特に前立腺癌細胞を阻害し得るような血漿レベルを保持するのに障害になることがある。しかし、式（Ｉ）の化合物は、水などの水性媒体中に、Ｒ（−）エトドラクよりも実質的に高い濃度で溶解し得る。
【００３２】
式（Ｉ）の化合物はまた、その薬学的に許容される塩または薬学的に許容されない塩の形態で調製できる。薬学的に許容されない塩は、薬学的に許容される塩の製造の中間体として有用である。薬学的に許容される塩は、親化合物の望ましい生物活性を保持する塩であり、望ましくない毒性作用を有しない。このような塩の例には、（ａ）無機酸、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸などとの酸付加塩；および有機酸、例えば、酢酸、シュウ酸、酒石酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、グルコン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、安息香酸、タンニン酸、パルミチン酸、アルギニン酸、ポリグルタミン酸、ナフタレンスルホン酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、ポリグルクロン酸などと形成される塩、（ｂ）元素性アニオン、例えば、塩素、臭素、ヨウ素から形成される塩がある。好ましいカルボン酸塩は親水性アミンのもので、例えば、グルカミンやＮ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキルグルカミンである（参照、Ａｄｇｅｒ ｅｔ ａｌ．の米国特許５，８１１，５５８）。
【００３３】
癌、すなわち前立腺癌の急性または慢性的処置における式（Ｉ）化合物の予防または治療用量の大きさは、癌の型および／または段階、使用された補助の化学療法剤などの抗癌治療、投与経路により変ってくる。用量および投与頻度も個々の患者の年齢、体重、状態、反応により変わる。一般的に、式（Ｉ）の化合物の全１日用量は、本明細書に記載の状態について、単回または分割投与で約５０ｍｇから約５０００ｍｇである。好ましくは、１日用量は、単回または分割投与で約１００ｍｇから約４０００ｍｇである。さらに好ましくは、約１０００ｍｇから約３０００ｍｇであり、例えば、６時間ごとに７５０ｍｇを経口投与する。これにより、約５００−７５０μＭの血漿濃度が得られ、癌細胞を殺すのに効果的であり得る。患者を処置する場合に、治療を低い量から始め、患者の全身的状態に応じて増量する。さらに、幼児、小児、６５歳以上の患者および腎や肝の機能に障害のある患者には、特にＣＯＸ阻害活性を保持するアナログの低量で始め、その全身的応答および血中レベルに基づいて用量を定めることが推奨される。ある場合には、この範囲外の用量が必要となることもある。さらに、臨床家や担当医が個々の患者の反応に応じて、どのように、いつ治療を中断、調整、中止するのかを知っているであろう。用語「有効な阻害量」または「有効な感受量」は、上記の投与量および投与頻度スケジュールに含まれる。
【００３４】
式（Ｉ）の化合物の有効量を患者に与えるために、適当な投与経路を用い得る。例えば、経口、経直腸、非経口（皮下、静脈内、筋肉内）、鞘内、経皮などの投与形態をとることができる。用量形態には、錠剤、トローチ、分散剤、懸濁液、溶液、カプセル、パッチなどがある。化合物の投与は、化学療法剤の投与の前、同時または後に、または継続的に１日量で、化学療法の全体または一部分として行い得る。ある場合、抗癌化学療法剤の運搬に使用されるのと同じ担体または運搬体と組合すことができる。
【００３５】
すなわち、本発明化合物は、例えば経口で、不活性稀釈剤または適応性の担体などの薬学的に許容される運搬体と組合せて、全身的に投与できる。本発明化合物は、硬または軟カプセルとすることも、錠剤に打錠することも、患者の食物に直接入れることもできる。経口治療での投与では、活性化合物を１以上の賦形剤と組合せ、服用錠、口腔錠、トローチ、カプセル、エリキシル、懸濁液、シロップ、ウェファーなどとし得る。このような組成物および製剤は、活性化合物を少なくとも０．１％含有する。この組成物および製剤の％は、もちろん変るものであって、通常は所定の単位用量形態の重量の約２〜６０％である。この治療上有用な組成物中の活性化合物の量は、有効な用量レベルが得られるであろう量である。
【００３６】
錠剤，トローチ、丸剤、カプセルは、下記のものも含有し得る：トラガントガム、アラビアゴム、トウモロコシデンプン、ゼラチンなどの結合剤；ステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤；スクロース、フルクトース、ラクトース、アスパラテームなどの甘味剤；ペパミント、アカモノ油、チェリーフレイバーなどの香料。単位用量形態がカプセルの場合、上記のものに加えて、植物油やポリエチレングリコールなどの液体担体を含有し得る。種々の他の物質が、被膜として、あるいは固体単位用量の物理的形態を改変するものとして存し得る。例えば、錠剤、丸剤、カプセルは、ゼラチン、ワックス、シェラック、糖などで被膜し得る。錠剤、丸剤、カプセル、顆粒、微粒子などは、腸溶被覆することができる。例えば、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（商標）ポリマーのひとつでの被覆で、腸で活性化合物を放出するが、胃の酸性状態では放出しない形態にできる。このものは、顕著なＣＯＸ阻害活性をもつ化合物で高齢または虚弱体質の癌患者を処置する場合や潰瘍が併存する場合に利点がある。
【００３７】
シロップまたはエリキシルは、活性化合物、甘味剤としてスクロースまたはフルクトース、保存剤としてメチルパラベンおよびプロピルパラベン、チェリーやオレンジ風味などの色素および香料を含有し得る。もちろん、単位用量形態の調製に使用される物質は、適用量で、薬学的に許容され、実質的に非毒性でなければならない。さらに、活性化合物を持続放出製剤や装具に組込むこともできる。
【００３８】
活性化合物は、注入や注射で静脈内または腹腔内に投与できる。活性化合物またはその塩の溶液を水で、選択的に非毒性の界面活性剤と混合して、調製できる。分散液もグリセロール、液体ポリエチレングリコール、トリアセチンおよびこれらの混合物中で、または油中で調製できる。貯蔵または使用についての通常の状態で、これらの製剤は微生物の発生を防ぐために保存剤を含有する。
【００３９】
注射や注入に適する薬学的用量形態には、無菌の注射または注入可能の溶液または分散液の即席調製に適合するようになされた活性成分を、リポソーム中に選択的に封入、含有する無菌の水溶液または分散液または無菌の粉末がある。すべての場合、最終用量形態は、製造および貯蔵の条件で、無菌、流動的、安定でなければならない。液体の担体および運搬体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコールなど）、植物油、非毒性グリセリルグリコール、およびこれらの適当な混合物を含む溶媒または液体分散媒体である。適当な流動性は、リポソームの形成、分散液の場合の必要な粒子サイズの維持、または界面活性剤の使用により保持できる。微生物作用の防止は種々の抗菌剤または抗真菌剤により行い得る。例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサルなどによる。多くの場合、等張剤、例えば、糖、緩衝剤、塩化ナトリウムなどを含むのが好ましい。注射用組成物を長時間で吸収さすには、吸収を遅らす物質、例えば、モノステアリン酸アルミニウムやゼラチンなどの組成物を使用する。
【００４０】
無菌注射液は、活性化合物を必要量で適当な溶媒中に上記の種々の成分とともに組込み、必要に応じてろ過滅菌を行って調製できる。無菌注射液を調製するための無菌粉末の場合、好ましい調製法は真空乾燥および凍結乾燥であり、予め滅菌ろ過した溶液中に活性成分および追加の所望成分を得る。
【００４１】
式（Ｉ）の化合物の有用な用量は、インビトロ活性および動物モデルでのインビボ活性を比較することで決定できる。マウスなどの動物での有効用量をヒトに外挿する方法は当技術分野で既知である。例えば、参照、米国特許４，９３８，９４９。
【００４２】
ＰＰＡＲ−γレベルを高め、ホルモン無反応性前立腺癌において過剰発現されることが知られているアンドロゲン発現を減少する式（Ｉ）の化合物の能力からして、ＰＰＡＲ−γを上方調節する化合物は、前立腺癌の処置において使用されるステロイドまたは非ステロイド性の抗アンドロゲン剤と併用して、好都合に用い得る。抗アンドロゲン剤には、酢酸ロイプロリド、酢酸ゴセレリン、ビカルタミド、フルタミド、ニルタミド、シクロプロテロンなどがある。
【００４３】
前立腺癌細胞を感受性とするＰＰＡＲ−γレベルを通常の化学療法剤の有効レベルまで低下せしめる式（Ｉ）の化合物の能力からして、この化合物は、前立腺癌などの癌の処置に用いられる化学療法剤と併用できる。この化学療法剤には、エストラムスチン、ビンブラスチン、ミトキサントロン、プレドニソンなどがあり、またはＭＭの処置のメルファレンがある。他の化学療法剤、放射線、または抗腫瘍性抗体やサイトカインなどの他の抗癌剤を本発明化合物とともに使用し得る。参照、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ （１８ｔｈ ｅｄ． １９９０） １１３８−１１６２ 頁。
本発明を下記の詳細な実施例でさらに説明する。
【００４４】
実施例１ 正常な末梢血リンパ球およびＣＬＬ細胞のエトドラクに対する感受性
単核細胞を、Ｂ−ＣＬＬ患者および正常ドナーの末梢血から、密度勾配遠心法（Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ） を用いて単離した。細胞を２Ｘ１０６細胞／ｍＬでＲＰＭＩ中２０％自己血漿とともに９６ウエルプレートにおいて、表示のμＭ濃度のエトドラク（ラセミ、Ｓ−エトドラク、Ｒ−エトドラク）の存在または不存在で、および２−クロロ−２’−デオキシアデノシン（２ＣｄＡ）またはフルダラビンと組合せて、培養した。表示の時間（１２、２４、３６、４８、６０、７０時間）で、生存能アッセイを、エリスロシンＢ排除アッセイ法（Ｄ． Ｃａｒｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， ＰＮＡＳ ＵＳＡ， ８９， ２９７０ （１９９２） に記載）を用いて行った。
図１に示すように、正常ＰＢＬの有意の死が、インビボで得られない濃度、８００μＭのラセミ・エトドラクで生じた。
【００４５】
正常ドナーからの末梢血リンパ球を１．０ｍＭエトドラクとともに２４時間培養した。Ｂリンパ球を抗ＣＤ１９抗体での着色で同定し、生存能をＤｉＯＣ６蛍光法で検査した。この条件でエトドラクは正常Ｂ細胞の生存能を対照培養物に比して減少せしめなかった。同じ生存能アッセイをＣＬＬ患者の末梢血からの精製ＣＬＬ細胞で行うと、結果が異なった。図２に示すように、５０％のＣＬＬが２００μＭラセミ・エトドラクへの４８時間曝露で死滅した。処置された細胞の９５％以上が悪性Ｂリンパ球であった。
【００４６】
実施例２ エトドラクと化学療法剤の相乗的併用
フルダラビンはＣＬＬの治療に普通に使用されるヌクレオシド・アナログである。この試験において、ＣＬＬ細胞のインビトロ生存を表示時間点で、媒体のみ（「Ｃｏｎ」、四角）、１０ｎＭフルダラビン（菱形）、１０μＭエトドラク（黒丸）、１０ｎＭフルダラビン＋１０μＭエトドラク（白丸）を含有する培地で比較した。２薬剤は一緒になって相乗的な細胞毒性効果を発揮した。図３は、この組合せが４８時間の培養において５０％のＣＬＬ細胞を殺したことを示す。一方、いずれの薬剤も単独では効果がなかった。図４は、同じ試験条件での５０μＭエトドラクおよび１０ｎＭの２−クロロデオキシアデノシンおよびフルダラビンの相乗作用を示す。
【００４７】
実施例３ Ｒ（−）およびＳ（＋）エトドラクのＣＬＬ細胞に対する作用
エトドラク錠を乳鉢で砕き、酢酸エチルで抽出した。得たエナンチオマーのラセミ混合物を、Ｂｅｃｋｅｒ−Ｓｃｈａｒｆｅｎｋａｍｐ ａｎｄ Ｂｌａｓｃｈｋｅ， Ｊ． Ｃｈｒｏｍａｔｏｇ．， ６２１， １９９ （１９９３） 法のフラクション結晶化により分取スケールで分離した。すなわち、ラセミ混合物固体を絶対２−プロパノールに溶解し、その溶液にＳ−１−フェニルエチルアミンを加えた。得た塩溶液を冷蔵庫に４日間貯蔵した。結晶性の白色塩産物をろ過し、冷２−プロパノールで洗い、２−プロパノールから２回以上再結晶した。分割剤としてＲ−１−フェニルエチルアミンを用いる以外は同じ方法をＲ異性体に繰り返した。最後にＲおよびＳ塩を１０％硫酸（ｖ／ｖ）で分解、酢酸エチルで抽出した。キラル純粋の各異性体を、Ｃｈｒｏｍ Ｔｅｃｈ の Ｃｈｉｒａｌ−ＡＧＰ カラムを用いるＨＰＬＣで確認した。
【００４８】
１０％自己血漿を有するＲＰＭＩ−１６４０培地で培養したＣＬＬ細胞に対する２エナンチオマーの毒性を表示の濃度および時間点で比較した。図５に示す。Ｒ−およびＳ−エナンチオマーは等しくＣＬＬ細胞に対し細胞毒性である。
【００４９】
実施例４ エトドラク処置の前と後のＣＬＬ細胞生存能
ＣＬＬの２人の患者（ＪＫおよびＮＡ）からの血液を取り、ヘパリン処理した。ついで、各患者はすぐに４００ｍｇエトドラク錠を服用し、１２時間後に第２錠を服用した。１２時間後に、第２血液標本を採取した。ＣＬＬ細胞を単離し、実施例１のように、そのインビトロでの生存を１０％自己血漿含有ＲＰＭＩ−１６４０培地で比較した。黒丸はエトドラク処置前のＣＬＬ細胞を示す。図６および７において、上向き三角はエトドラク処置後のＣＬＬ細胞生存能を示す。なお、細胞は前処置血漿を含有する培地に分散されている。下向き三角は処置後血漿の培地に保持されている処置後ＣＬＬ細胞である。
【００５０】
図６は、患者ＪＫからの２細胞集団の生存を示す。処置後の細胞は処置前の細胞よりも生存が短い。図７は、患者ＮＡでの劇的でないが同様の効果を示す。図８は、患者ＪＫのＣＬＬ細胞についてエトドラク処置の前および後でのフローサイトメトリー分析を示す。ＤｉＯＣ６はミトコンドリアにより捕捉される染料である。細胞がアポトーシスにより死ぬと、染色強度が低下する。図８の４パネルのＸ軸はＤｉＯＣ６染色を示す。左下ボックス中のドット数の増加がアポトーシスによる死を表す。患者からの細胞をエトドラク処置前と処置後で比較すると、左下ボックス中のドット数が薬剤投与後に非常に高いことがわかる。この効果は１２時間で検出でき、２４時間後にさらに増加する。
【００５１】
フローサイトメトリー分析を行うために、ミトコンドリア膜貫通能を３，３’−ジヘキシルオキサカルボンシアナミドヨウ化物（ＤｉＯＣ６）により、細胞膜浸透性をヨウ化プロピジウム（ＰＩ）３により、ミトコンドリア呼吸をジヒドロローダニン１２３（ＤＨＲ）により分析した（参照、Ｊ． Ａ． Ｒｏｙａｌｌ ｅｔ ａｌ ａｌ．， Ａｒｃｈ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ．， ３０２， ３４８ （１９９３））。ＣＬＬ細胞を１２時間または２４時間、表示量のエトドラクとともに培養した後、４０ｎＭのＤｉＯＣ６および５μｇ／ｍｌのＰＩを含有する培地で、細胞を１０分間３７℃で培養した。細胞をまた、表示量のエトドラクとともに３時間培養し、２００ｘｇで１０分間回転沈降し、新鮮な呼吸緩衝液（２５０ｍＭスクロース、１ｇ／Ｌウシ血清アルブミン、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、１０ｍＭのＫ／Ｈｅｐｅｓ、５ｍＭのＫＨ２ＰＯ４（ｐＨ７．４））に再懸濁し、１０分間３７℃で０．０４％ジギトニンとともに培養した。細胞を５分間０．１μＭジヒドロローダニン（ＤＨＲ）で処理した。細胞を３０分間 Ｂｅｃｔｏｎ Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ ＦＡＣ−Ｓｃａｌｉｂｕｒ サイトフルオロメーターで解析した。適当な処理の後、蛍光を異なる波長で記録した：ＤｉＯＣ６およびＤＨＲを５２５ｎｍ（ＦＬ−１）、ＰＩを６００ｎｍ（ＦＬ）。
【００５２】
一般的に、インビトロ培養１６時間後で、処置後の悪性細胞の生存に１０％の減少が前処置悪性細胞に比してあり、この試験で「陽性」であり、ＣＬＬなどの癌治療におけるエトドラク、すなわちＲ（−）エトドラクの有用性を表す。
【００５３】
実施例５ ＭＭ細胞を選択的に殺すＲ（−）エトドラクの能力
骨髄を多発性骨髄腫の２患者から得た。骨髄は、高レベル発現のＣＤ３８膜抗原を含む悪性細胞と正常細胞の混合物を含有していた。懸濁した骨髄細胞を、７２時間、ＲＰＭＩ−１６４０培地で１０％ウシ胎児血清および種々の濃度の精製エトドラクのＲ−エナンチオマーとともにインキュベートした。ついで、死細胞をヨウ化プロピジウムで染色し、多発性骨髄腫細胞を蛍光モノクローナル抗ＣＤ３８抗体で着色した。データを蛍光活性化細胞ソーティングで分析した。図９および１０は、両患者に由来する骨髄細胞において、Ｒ−エトドラクが正常の骨髄細胞を殺さなかったが、多発性骨髄腫を用量依存的に殺したことを示す。
【００５４】
実施例６ エトドラクの癌細胞系に対する細胞毒性
表１に要約するように、Ｒ（−）エトドラクの前立腺癌細胞およびひとつの大腸癌細胞に対する細胞毒性効果を、１ｇ用量のＲ（−）エトドラクがヒトにおいて最大血漿濃度約４００μＭをもたらすとすると、臨床的に達し得る濃度で発揮する。Ｒ（−）およびＳ（＋）エナンチオマーの両者が細胞毒性であることから、抗前立腺癌活性はＣＯＸ依存性であるといえる。Ｒ（−）エトドラクは、抗炎症活性を欠くにもかかわらず、Ｓ（＋）エナンチオマーよりも前立腺癌細胞に対し毒性である。
【００５５】
【表１】
【００５６】
平面的疎水性化合物として、エトドラクおよび他のＮＳＡＩＤは、細胞および器官の膜を容易に通過し、その構造および機能を破壊する（Ｓ． Ｂ． Ａｂｒａｍｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ ａｎｄ Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ， ３２， １ （１９８９））。タンパク質Ｍｃｌ−１およびＢａｇ−１はミトコンドリアに存するｂｃｌ−２ファミリーの抗アポトーシス性メンバーである（Ｘ． Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．， Ｅｘｐ． Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ．， ２３５， ２１０ （１９９７））。１００μＭエトドラクとのインキュベーション後早くも２時間で、Ｍｃｌ−１およびＢａｇ−１がエトドラク感受性前立腺癌細胞系（ＬＮＣａＰ）において低下した。Ｍｃｌ−１およびＢａｇ−１レベルの低下は、５．０μＭのＭＧ−１３２（最近発表されたプロテアソーム阻害剤）との前立腺細胞のインキュベーションで防止できる（夫々、図１１のパネルＡおよびＢ）（Ｄ． Ｈ． Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．， Ｔｒｅｎｄｓ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．， ８， ３９７ （１９９８）。洗剤分解物（レーンごと２０μｇ）をＳＤＳ−ＰＡＧＥにかけ、抗Ｍｃｌ−１および抗Ｂａｇ−１抗体でイムノブロットした。広スペクトル・カスパーゼ阻害剤であるＺ−ＶＡＤとの前インキュベーションはＭｃｌ−１およびＢａｇ−１下方調整を防止しなかった。エトドラクのインキュベーションはＢｃｌ−２およびＢａｘレベルを変えなかった（データを表示しない）。すなわち、エトドラクはＭｃｌ−１合成を妨害しないが、その取り込みをおそらく加速する。両Ｒ−およびＳ−エトドラクがＭｃｌ−１変性を等しい量で誘導した。
【００５７】
実施例８ 癌細胞系におけるＰＰＡＲ−γの発現
エトドラクについては前に検討されていないが、高濃度の他のＮＳＡＩＤが核ホルモン受容体ＰＰＡＲ−γを活性化すると報告されている（Ｊ． Ｍ． Ｌｅｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２７２， ３４０６ （１９９７）。さらに、ＰＰＡＲ−γの最大活性化がヒトのマクロファージでアポトーシスを誘導する（Ｇ． Ｃｈｉｎｅｔｔｉ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ．， ２７３， ２５５７９ （１９９８））。前立腺細胞がＰＰＡＲ−γを発現するかを調べ、他の癌型と発現レベルを比較することは興味深い。サブコンフルエント細胞系から得た洗剤分解物（レーンごと２０μｇ）をＳＤＳ−ＰＡＧＥにかけ、抗ＰＰＡＲ−γ抗体でイムノブロットした。ＰＰＡＲ−γ内容物を正常にするために、膜を抗アクチン・モノクローナル抗体で再ブロットした。レーン１：ＰＣ−３、レーン２：ＳＷ２６０、レーン３：Ａ５４９、レーン４：ＭＤＡ−ＭＢ−２３１、レーン５：Ａｌｖａ−３１、レーン６：ＬＮＣａＰ、レーン７：ＨＣＴ−１１６（参照、表１）。いくつかのエトドラク感受性前立腺細胞（特にＰＣ３）が非常に高レベルの免疫反応性ＰＰＡＲ−γを発現したことがわかる（図１２）。
【００５８】
実施例９ エトドラクによるＰＰＡＲ−γの活性化
ＲＡＷ２６４．７細胞を密度３ｘ１０５細胞／ｍｌで６ウエルプレートにおいて、リポフェクタミンをＰＰＡＲ−γ発現ベクターｐＣＭＸ−ＰＰＡＲ−γ（０．１μｇ）およびＰＰＡＲ−γ受容体構築体（ＡＯｘ）３−ＴＫ−Ｌｕｃ（１μｇ）とともに用いて、Ｍ． Ｒｉｃｏｔｅ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ， ３９１， ７９ （１９９８） に記載のように、トランスフェクトした。細胞を２４時間、図１３に表示の化合物で処理し、採取し、ルシフェラーゼ活性についてアッセイした。結果を平均±ＳＤで示す。図１３に示すように、エトドラクの両Ｒ−およびＳ−エナンチオマーがＰＰＡＲ−γレポーター遺伝子構築体を、ヒト血漿で容易に活性化される濃度で、インビボ投与後に活性化した。ＴＨＰ−１ヒト単球細胞（ＡＴＣＣ）をホルボルエステル（４０ｎｇＴＰＡ）および２００μＭラセミ・エトドラクまたは２０μＭトログリタゾンの存在または不存在で、インキュベートした。培養３日後に、スカベンジャー受容体ＣＤ３６の表面発現をフローサイトメトリーで測定した。図１４に示すように、両Ｒ−およびＳ−エトドラクがＣＤ３６、ＰＰＡＲ−γ活性化のマーカーの発現を、ヒト細胞系ＴＨＰ−１においてマクロファージ分化の際に起こした。
【００５９】
実施例１０ 前立腺癌組織サンプルのエトドラク処置
新たに得た前立腺切除サンプルを３ｍｍ３片に切断し、７２時間１０％ＦＢＳおよび抗体を補充したＲＰＭＩ−１６４０中で、ラセミ・エトドラクの不存在（Ａ、４００ｘ）または存在（Ｂ、４００ｘ）、または精製Ｒエナンチオマーの不存在（Ｃ、４００ｘ）または存在（Ｄ、４００ｘ）でインキュベートした。組織を４％パラホルムアルデヒドＰＢＳに固定し、パラフィンに埋没し、切片とし、エキサトキシリンおよびエオシンで着色した。図１５Ａは、浸潤腫瘍細胞（大核）およびいくつかの残留正常上皮を示す。図１５Ｂから１５Ｄは、エトドラクの作用を示す：濃縮アポトーシス性核の豊富な存在（黒矢印、ＢおよびＤ）および新生の腺構築の崩壊（Ｂ＋Ｃ）に注意。エトドラクは、腫瘍細胞に選択的に毒性であるが、正常な基細胞に影響を与えなかった。ラセミ混合物（Ｒ／Ｓ）ならびに精製ＲおよびＳアナログはともに活性であった。
【００６０】
実施例１１ エトドラク・アナログを同定するスクリーニングのための予期プロトコール
Ａ．放射標識Ｒ−エトドラクとの競合によるアナログのスクリーニング
エトドラク感受性の慢性リンパ球白血病（ＣＬＬ）細胞などの癌細胞を放射受容体結合アッセイにおける薬剤スクリーニングに用いる。簡単にいうと、冷凍ＣＬＬを３回ハンクス・バランス塩溶液（ＨＢＳＳ）で洗い、ＨＢＳＳ−ＨＥＰＥＳに再懸濁する。約２百万の細胞、［３Ｈ］−Ｒ−エトドラク（ｓｐ．ａｃｔ． ２０−２５ Ｃｉ／ｍｍｏｌ、Ｓｉｂｔｅｃｈ 調製）、および可能性ある競合物または緩衝液を含有する全量２００μｌを、温度（４および３７℃）および時間（０−６０分）を変えてインキュベートする。各サンプルにつき、３回の５０μｌアリコットを、３００μｌの２０％スクロースＨＢＳＳ−ＨＥＰＥＳ上に１．５ｍｌポリプロピレン・スナップ・トップ・チューブ中で重ね、ベックマン ｍｉｃｒｏｆｕｇｅ 中で２．５分間１５０００ｒｐｍでペレット化する。この操作により細胞結合と細胞遊離のエトドラクを迅速に分離する。チューブ・チップを切除し、細胞ペレットを可溶化し、シンチレーション計数器で数える。いくつかのインキュベーション混合物は対照として過剰の非標識エトドラクを含有する。特異的結合は、放射標識エトドラク含有のチューブでの結合ｃｐｍ引く放射標識エトドラクおよび非標識冷競合エトドラク含有のチューブでのｃｐｍの差である。試験薬剤を非標識冷競合エトドラクと、放射標識エトドラク結合を阻害する能力について比較する。放射標識エトドラクのその受容体との結合を阻害し得る化合物を次ぎのスクリーニングにかける。
【００６１】
Ｂ．ＣＬＬにおける細胞内Ｃａ２＋の動員
エトドラク・アナログなどの試験化合物によるＣＬＬ細胞中のカルシウムレベルの増加を、フローサイトメトリーアッセイ（ＦＡＣＳ）により、およびＦｌｕｏ−４染料（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ） を用いる蛍光造影プレートリーダー・システム（ＦＬＩＰＲ， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ Ｃｏｒｐ．， Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ， ＣＡ）により測定する。簡単にいうと、ＣＬＬ細胞（５ｘ１０６／ｍｌ）を３０分間４μＭのＦｌｕｏ−４染料で３７℃、血清なしの培地中で処理し、２回洗い、さらに３０分間、通常の細胞培養基中に再懸濁する。処理細胞をＦＡＣＳチューブ中で試験薬剤含有の培地に混合し、直ちに３分間以上ＦＡＣＳ分析で蛍光を調べる。高情報量スクリーニング（ＨＴＳ）アッセイのために、同じ蛍光染料（Ｆｌｕｏ−４）を用いて、ＦＬＩＰＲに基づくアッセイにより９６ウエル・プレート・ホーマットでスクリーニングを行う。正対照として、カルシウム・イオノフォア・イオノマイシンを５０ｎｇ／ｍｌの最終濃度で、ＳＤＦ−１およびＩＰ−１０などのケモカインとともに、および抗ＩｇＭ架橋抗体とともに使用する。ＣＬＬ細胞によるＣａ＋２摂取を増加する化合物、好ましくはＲ（−）エトドラクにより誘導されるレベルまで増加する化合物を次ぎのスクリーニングにかける。
【００６２】
Ｃ．化学走性および化学運動性アッセイ
細胞移動を２４ウエル修飾Ｂｏｙｄｅｎチェンバー（Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ， Ｃｏｒｎｉｎｇ−Ｃｏｓｔａｒ， ＮＹ） で調べる。組換えヒトＩＰ−１０ケモカイン（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ， ＭｃＫｉｎｌｅｙ Ｐｌａｃｅ， ＮＥ）をＲＰＭＩ−１６４０培地に２００ｎｇ／ｍｌに稀釈して、Ｂ−ＣＬＬ患者からのリンパ球の化学走性を検査するのに用いる。３ｍｍの孔サイズのポリカルボン酸塩膜を使用する。全６００ｍｌのケモカインまた対照培地をウエル底に入れて、ＲＰＭＩ−１６４０に再懸濁された１００ｍＬの２〜５．０ｘ１０６細胞／ｍｌ細胞をウエルの上方に加える。チェンバーを３７℃で５％ＣＯ２とともに２時間インキュベートする。ついで膜を除き、底に存在する細胞をフローサイトメトリーで定量する。細胞定量のために、固定された獲得時間３０秒をサンプルごとに用い、ビードを各試験中用い、再製可能な獲得を確認する。化学走性応答などのリンパ球中の化学運動性応答を誘導する試験薬剤、少なくともＲ（−）エトドラクと同等に有効な試験薬剤を次ぎのスクリーニングに進める。
【００６３】
Ｄ．癌細胞におけるアポトーシスの誘発
試験薬剤、例えば、Ｒ−エトドラク・アナログのアポトーシス性活性を、主要なＣＬＬ細胞および他の腫瘍細胞において、ＭＴＴアッセイを用いることにより、および蛍光アッセイを用いるカスパーゼ−３の触媒性活性化の測定により試験する。簡単にいうと、細胞を３日まで、連続的稀釈の選択された試験薬剤の存在でインキュベートする。細胞生存性を９６ウエルプレート中で、ＭＴＴ試薬（最終１ｍｇ／ｍｌ）を２４時間加え、次いでＳＤＳ細胞分解および分光測光分析に５７０ｎｍでかけて、定量する。カスパーゼ触媒活性を９６ウエル・プレート・アッセイで、特異的蛍光測定基質（ＤＥＶＤ−ＡＭＣ）を用いて、ＣＨＡＰＳ／ＮＰ−４０分解緩衝液で処理細胞を分解し、蛍光測定アッセイにより測定する。アポトーシス性活性を発揮する試験薬剤、例えば、好ましくは少なくともＲ（−）エトドラクと同様に効果的に増加する試験薬剤を次のスクリーニングにかける。
【００６４】
Ｅ．マウスにおけるリンパ球除去
選択された試験薬剤を種々の経歴のマウスに単回量２５および１００ｍｇ／ｋｇで与える。白血球細胞の数を、ノイバウエル・チェンバーを用い、処置の４および２４時間後、７および１４日後に数える。白血球レベルを実質的に減少しない試験薬剤、好ましくはＲ（−）エトドラクよりも減少しない薬剤を次ぎのスクリーニングに進める。
【００６５】
Ｆ．腫瘍動物モデル
Ｒ−エトドラク・アナログの抗癌および予防的活性をプリスタン誘導マウス骨髄腫モデルおよびトランスジェニック腺癌マウス前立腺（ＴＲＡＭＰ）モデルを用いて試験する。マウスに、０．０５〜０．５％の選択試験薬剤または対照を補充した食餌を与える。試験の食餌は試験薬剤を含有する無菌のペレットの形態にある。マウス骨髄腫モデルにおける癌予防試験について、最初のプリスタン注射と同じ時に食餌投与を開始する。トランスジェニック前立腺癌モデルについては、食餌投与を出生時に始める。治療試験について、食餌投与をＴＲＡＭＰマウスで１０週で始め、その時に最初の組織学的病理マーカーを常に調べる。これらのスクリーニングの少なくとも１つで癌を阻害する活性に基づき、アナログを臨床試験またはさらなる開発に進める。
【００６６】
上記で引用した発表文献および特許文献のすべてを出典明示により本明細書の一部とする。本発明を種々の具体的で好ましい実施態様および技術で説明した。しかし、多くの変更および修飾を本発明の精神および範囲の内でなし得ることを理解すべきである。
【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、正常な末梢性血リンパ球（ＰＢＬ）のラセミ・エトドラクに対する感受性を表示するグラフである。
【図２】図２は、ＣＬＬのラセミ・エトドラクに対する感受性を表示するグラフである。
【図３】図３は、ラセミ・エトドラクとフルダラビンの併用のＣＬＬ細胞に対する相乗作用を表示するグラフである。
【図４】図４は、５０μＭのエトドラクと１０μＭの２ＣｄＡまたは１０ｍＭのフルダラビンの併用のＣＬＬ細胞に対する相乗作用を表示するグラフである。
【図５】図５は、ＣＬＬ細胞のＳ−およびＲ−エトドラクに対する感受性を表示するグラフである。
【図６】図６は、エトドラク投与の前と後での２患者に由来するＣＬＬ細胞の生存能を表示する。
【図７】図７は、エトドラク投与の前と後での２患者に由来するＣＬＬ細胞の生存能を表示する。
【図８】図８は、エトドラク投与の前と後でのＣＬＬ細胞についてのフローサイトメトリー分析を表示する。
【図９】図９は、Ｒ（−）エトドラクの２患者由来のＭＭ細胞に対する選択的作用を表示する。
【図１０】図１０は、Ｒ（−）エトドラクの２患者由来のＭＭ細胞に対する選択的作用を表示する。
【図１１】図１１は、ＭＧ−１３２により遮断されるＭｃｌ−１（パネルＡ）およびＢａｇ−１（パネルＢ）における急速な下方調整をエトドラクが誘導することを示すＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルの写真である。
【図１２】図１２は、７癌細胞系によるＰＰＡＲ−γ発現を表示するＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルの写真である。
【図１３】図１３は、エトドラクおよびインドメタシンによるＰＰＡＲ−γ発現の誘導を表示するグラフである。
【図１４】図１４は、ヒト単球におけるＴＰＡの存在または不存在で、エトドラクおよびＴＧＺにより誘導されるＣＤ３６の発現を表示するグラフである。
【図１５】図１５は、エトドラクで非処置（Ａ）および処置（Ｂ、Ｃ、Ｄ）の前立腺癌組織切片の写真である。
Claims (50)
- 下記式（Ｉ）：
- Ｚが２−ヒドロキシエトキシのＬ−バリンまたはＬグリシンのエステルである、請求項１の化合物。
- ＺがＮ−モルホリノエトキシである、請求項１の化合物。
- 各Ｒ８がＨ、ＣＨ３またはｉ−Ｐｒである、請求項１の化合物。
- ＺがＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）３ ＋ である、請求項１の化合物。
- 請求項１の化合物を薬学的に許容される担体との組合せで含む組成物。
- 錠剤、顆粒またはカプセルである、請求項６の組成物。
- 担体が水性運搬体である、請求項６の組成物。
- 水溶液である、請求項８の組成物。
- 有効量の請求項１の化合物を癌に罹っている哺乳動物に投与することを含む、癌を阻害する方法。
- 有効量の請求項６の組成物を癌に罹っている哺乳動物に投与することを含む、癌を阻害する方法。
- 癌が前立腺癌である、請求項１０または１１の方法。
- 癌が多発性骨髄腫である、請求項１０または１１の方法。
- 癌が慢性リンパ球白血病である、請求項１０または１１の方法。
- 組成物が経口投与される、請求項１１の方法。
- 腸溶被膜用量形態で投与される、請求項１５の方法。
- 組成物が非経口投与される、請求項１１の方法。
- 組成物が化学療法剤との併用で投与される、請求項１１の方法。
- 組成物が化学療法剤との併用で投与される、請求項１２の方法。
- 化学療法剤がミトキサントロン、プレドニソン、エストラムスチン、ビンブラスチンまたはこれらの組合せである、請求項１８の方法。
- 化学療法剤が抗アンドロゲン剤である、請求項１２の方法。
- 抗アンドロゲン剤がビカルタミド、ニルタミド、フルタミド、酢酸シクロプロテロンまたはこれらの組合せである、請求項２１の方法。
- 抗アンドロゲン剤が酢酸ロイプロリド、酢酸ゴセレリンまたはこれらの組合せである、請求項２１の方法。
- （ａ）前立腺癌に罹っている患者から単離された癌細胞中のＰＰＡＲ−γ、Ｍｃｌ−１またはＢａｇ−１の少なくともひとつのレベルを検査し、該細胞が下記式（Ｉ）の化合物およびその薬学的に許容される塩による阻害に対して感受性を有する程度に十分、該レベルが高いかを測定し：
（ｂ）該患者に式（Ｉ）の化合物を、該細胞を阻害するのに有効な量か、または化学療法剤の投与による阻害に該細胞を感受性にするのに有効な量で投与すること、
を含む治療方法。 - Ｙ−Ｚがピリジルアルキルエステル、モルホリノアルキルエステル、アミノアルキルエステルまたはヒドロキシアルキルエステルである、請求項２４の方法。
- Ｙ−ＺがＣＨ２ＣＯ２ＨのグルカミンエステルまたはＮ−（Ｃ１−Ｃ４）アルキル−グルカミンエステルである、請求項２４の方法。
- Ｙ−ＺがＣＨ２ＣＯ２Ｈの１’−Ｄ−グルクロン酸エステルである、請求項２４の方法。
- Ｙ−ＺがＣＨ２ＣＯ２Ｈの水溶性アミドである、請求項２４の方法。
- Ｙ−ＺがＣＨ２ＣＯ２Ｈのアミノ酸アミドである、請求項２８の方法。
- ＰＰＡＲ−γレベルを検査する、請求項２４の方法。
- ＰＰＡＲ−γを発現する前立腺癌細胞系からの細胞集団を試験薬剤に接触せしめ、該薬剤が該細胞中でＰＰＡＲ−γの発現を増加するかを測定することを含む、前立腺癌細胞を阻害する試験薬剤の能力を調べる方法。
- Ｍｃｌ−１またはＢａｇ−１を発現する前立腺癌細胞系からの細胞集団を試験薬剤に接触せしめ、該薬剤が該細胞中でＭｃｌ−１の発現を減少するかを測定することを含む、前立腺癌細胞を阻害する試験薬剤の能力を調べる方法。
- 試験薬剤が放射標識エトドラクの癌細胞との受容体仲介結合を競合的に阻害するかどうかを測定することを含む、癌を阻害する試験薬剤の能力を調べる方法。
- 癌細胞がエトドラク感受性である、請求項３３の方法。
- エトドラクがＲ（−）エトドラクである、請求項３３の方法。
- 薬剤が癌細胞によるカルシウムの取り込みを増加するかどうかを測定することを含む、請求項３１−３５の方法。
- 試験薬剤がリンパ球集団における化学運動性応答を誘導するかどうかを測定することをさらに含む、請求項３６の方法。
- 応答が化学走化性を発揮するリンパ球の能力を高める、請求項３７の方法。
- リンパ球がＢ−ＣＬＬリンパ球を含む、請求項３８の方法。
- 試験薬剤が癌細胞におけるアポトーシスを誘導し得るかどうかを測定することを含む、請求項３７の方法。
- 癌細胞がＣＬＬ細胞である、請求項４０の方法。
- 試験薬剤がカスパーゼ−３活性を増加し得るかどうかを測定することを含む、請求項４０の方法。
- 試験薬剤が試験動物の白血球数を低下するかどうかを測定することをさらに含む、請求項４０の方法。
- 試験動物がマウスである、請求項４３の方法。
- 試験薬剤がプリスタン誘導ネズミＭＬＬモデルにおいて癌誘発を阻害し得るかを測定することを含む、請求項４３の方法。
- 試験化合物がトランスジェニック腺癌マウス前立腺癌モデルにおいて癌を阻害し得るかを測定することをさらに含む、請求項４３の方法。
- （ａ）ヒト対象から前立腺癌細胞を単離し、
（ｂ）前立腺癌細胞におけるＰＰＡＲ−γを活性化する化合物による阻害を該対象に与えるのに十分なレベルで、該細胞がＰＰＡＲ−γを発現するかどうか検査すること、
を含む、該化合物による処置に対する前立腺癌の感受性を測定する方法。 - （ａ）ヒト対象から前立腺癌細胞を単離し、
（ｂ）前立腺癌細胞におけるＭｃｌ−１またはＢａｇ−１発現を下方調節する化合物による阻害を該対象に与えるのに十分なレベルで、該細胞がＭｃｌ−１を発現するかどうか検査すること、
を含む、該化合物による処置に対する前立腺癌の感受性を測定する方法。 - 医学上の治療における使用のための請求項１記載の化合物
- ヒトなどの哺乳動物における疾患の処置に有用な医薬の製造のための請求項１記載の化合物の使用。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US09/634,207 US7151100B1 (en) | 1999-07-23 | 2000-08-09 | Indole compounds useful for the treatment of cancer |
| PCT/US2001/024978 WO2002012188A2 (en) | 2000-08-09 | 2001-08-09 | Indole compounds useful for the treatment of cancer |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2004518615A true JP2004518615A (ja) | 2004-06-24 |
Family
ID=24542833
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2002518166A Pending JP2004518615A (ja) | 2000-08-09 | 2001-08-09 | 癌の処置に有用なインドール化合物 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP1307459A2 (ja) |
| JP (1) | JP2004518615A (ja) |
| AU (2) | AU2001283224B2 (ja) |
| CA (1) | CA2419060A1 (ja) |
| WO (1) | WO2002012188A2 (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2014530877A (ja) * | 2011-10-19 | 2014-11-20 | ファーマサイクリックス，インク． | ブルトン型チロシンキナーゼ（Ｂｔｋ）阻害剤の使用 |
| US9814721B2 (en) | 2010-06-03 | 2017-11-14 | Pharmacyclics Llc | Use of inhibitors of bruton'S tyrosine kinase (BTK) |
| US9885086B2 (en) | 2014-03-20 | 2018-02-06 | Pharmacyclics Llc | Phospholipase C gamma 2 and resistance associated mutations |
| US10954567B2 (en) | 2012-07-24 | 2021-03-23 | Pharmacyclics Llc | Mutations associated with resistance to inhibitors of Bruton's Tyrosine Kinase (BTK) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2255287T3 (es) | 1998-07-09 | 2006-06-16 | Cephalon, Inc. | Composiciones para el tratamiento de la leucemia linfocitica cronica. |
| US6545034B1 (en) | 1999-07-23 | 2003-04-08 | The Regents Of The University Of California | Use of etodolac for the treatment of chronic lymphocytic leukemia |
| US7151100B1 (en) | 1999-07-23 | 2006-12-19 | The Regents Of The University Of California | Indole compounds useful for the treatment of cancer |
| US7105560B1 (en) | 1999-07-23 | 2006-09-12 | The Regents Of The University Of California | Use of etodolac in the treatment of multiple myeloma |
| US7129262B2 (en) | 1999-07-23 | 2006-10-31 | The Regents Of The University Of California | Indole compounds useful for the treatment of cancer |
| US7361680B2 (en) | 1999-07-23 | 2008-04-22 | The Regents Of The University Of California | Indole compounds useful for the treatment of cancer |
| US20040152672A1 (en) * | 2000-08-09 | 2004-08-05 | Carson Dennis A. | Indole compounds useful for the treatment of cancer |
| WO2004026116A2 (en) | 2002-09-19 | 2004-04-01 | The Regents Of The University Of California | Use of etodoclac to treat hyperplasia |
| JP2007507523A (ja) | 2003-10-02 | 2007-03-29 | セフアロン・インコーポレーテツド | 置換インドール誘導体 |
| FR2869231B1 (fr) * | 2004-04-27 | 2008-03-14 | Sod Conseils Rech Applic | Composition therapeutique contenant au moins un derive de la pyrrolobenzodiazepine et la fludarabine |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3974179A (en) * | 1971-06-01 | 1976-08-10 | American Home Products Corporation | 1,3,4,9-Tetrahydropyrano[3,4-b]indole-1-acetamides and derivatives |
| US3843681A (en) * | 1971-06-01 | 1974-10-22 | American Home Prod | 1-carboxamido pyrano(thiopyrano)(3,4-6)indole derivatives |
| US4337760A (en) * | 1978-10-13 | 1982-07-06 | Adolf Schwimmer | Method for the treatment of tumors with β-glucuronidase activity dependent pharmaceuticals |
| AU1508988A (en) * | 1987-04-27 | 1988-10-27 | Syntex Pharmaceuticals International Ltd. | Omega-quaternary ammonium alkyl esters and thioesters of acidic nonsteroidal antiinflammatory drugs |
| US6160018A (en) * | 1995-03-13 | 2000-12-12 | Loma Linda University Medical Center | Prophylactic composition and method for alzheimer's Disease |
-
2001
- 2001-08-09 EP EP01962006A patent/EP1307459A2/en not_active Withdrawn
- 2001-08-09 AU AU2001283224A patent/AU2001283224B2/en not_active Ceased
- 2001-08-09 CA CA002419060A patent/CA2419060A1/en not_active Abandoned
- 2001-08-09 WO PCT/US2001/024978 patent/WO2002012188A2/en active IP Right Grant
- 2001-08-09 JP JP2002518166A patent/JP2004518615A/ja active Pending
- 2001-08-09 AU AU8322401A patent/AU8322401A/xx active Pending
Cited By (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9814721B2 (en) | 2010-06-03 | 2017-11-14 | Pharmacyclics Llc | Use of inhibitors of bruton'S tyrosine kinase (BTK) |
| US10004746B2 (en) | 2010-06-03 | 2018-06-26 | Pharmacyclics Llc | Use of inhibitors of Bruton's tyrosine kinase (Btk) |
| US10004745B2 (en) | 2010-06-03 | 2018-06-26 | Pharmacyclics Llc | Use of inhibitors of Bruton'S tyrosine kinase (Btk) |
| US10016435B2 (en) | 2010-06-03 | 2018-07-10 | Pharmacyclics Llc | Use of inhibitors of Bruton's tyrosine kinase (Btk) |
| US10478439B2 (en) | 2010-06-03 | 2019-11-19 | Pharmacyclics Llc | Use of inhibitors of bruton's tyrosine kinase (Btk) |
| US10653696B2 (en) | 2010-06-03 | 2020-05-19 | Pharmacyclics Llc | Use of inhibitors of bruton's tyrosine kinase (BTK) |
| US10751342B2 (en) | 2010-06-03 | 2020-08-25 | Pharmacyclics Llc | Use of inhibitors of Bruton's tyrosine kinase (Btk) |
| US11672803B2 (en) | 2010-06-03 | 2023-06-13 | Pharmacyclics Llc | Use of inhibitors of Brutons tyrosine kinase (Btk) |
| JP2014530877A (ja) * | 2011-10-19 | 2014-11-20 | ファーマサイクリックス，インク． | ブルトン型チロシンキナーゼ（Ｂｔｋ）阻害剤の使用 |
| US10954567B2 (en) | 2012-07-24 | 2021-03-23 | Pharmacyclics Llc | Mutations associated with resistance to inhibitors of Bruton's Tyrosine Kinase (BTK) |
| US9885086B2 (en) | 2014-03-20 | 2018-02-06 | Pharmacyclics Llc | Phospholipase C gamma 2 and resistance associated mutations |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA2419060A1 (en) | 2002-02-14 |
| EP1307459A2 (en) | 2003-05-07 |
| AU2001283224B2 (en) | 2007-06-28 |
| AU8322401A (en) | 2002-02-18 |
| WO2002012188A3 (en) | 2002-10-03 |
| WO2002012188B1 (en) | 2003-03-20 |
| WO2002012188A2 (en) | 2002-02-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20070111950A1 (en) | Indole compounds useful for the treatment of cancer | |
| US7361680B2 (en) | Indole compounds useful for the treatment of cancer | |
| US20040152672A1 (en) | Indole compounds useful for the treatment of cancer | |
| WO2017202274A1 (zh) | 烟醇醚类衍生物、及其制法和药物组合物与用途 | |
| JP2004518615A (ja) | 癌の処置に有用なインドール化合物 | |
| US10583129B2 (en) | Use of EP4 receptor antagonists for the treatment of NASH-associated liver cancer | |
| AU785089B2 (en) | Use of etodolac to treat cancer | |
| EP1395255A2 (en) | Cddo-compounds and combination therapies thereof | |
| US7129262B2 (en) | Indole compounds useful for the treatment of cancer | |
| AU2001283224A1 (en) | Indole compounds useful for the treatment of cancer | |
| US10975069B2 (en) | Sigma-2 receptor ligand drug conjugates as antitumor compounds, methods of synthesis and uses thereof | |
| CN112423743A (zh) | 未折叠蛋白反应的激活剂 | |
| CA2314259A1 (en) | Multicatalytic protease inhibitors for use as anti-tumor agents | |
| US8501792B2 (en) | Treating cancer with desthiazolyl ritonavir | |
| CN111759827B (zh) | 一种用于预防或治疗关节炎或炎性疾病的药物组合物 | |
| WO2013138600A1 (en) | Radioprotector compounds | |
| WO2012078982A2 (en) | Xzh-5 inhibits constitutive and interleukin-6-induced stat3 phosphorylation in human hepatocellular carcinoma cells | |
| US20190365680A1 (en) | Use of ep4 receptor antagonists for the treatment of nash-associated liver cancer | |
| TW383337B (en) | Process of making (2S,5S)-5-fluoromethylornithine | |
| WO2023141719A1 (en) | Psma-targeted radiopharmaceuticals and checkpoint inhibitor combination therapy |