JP2004513870A - ナトリウムチャネルブロッカーの結合物及びその使用法 - Google Patents

Abstract

一般式Ｐ_１−Ｌ−Ｐ_２（式中、「Ｐ_１」はピラジノイルグアニジンナトリウムチャネルブロッカーであり、「Ｌ」は架橋基であり、「Ｐ_２」は（ｉ）ピラジノイルグアニジンナトリウムチャネルブロッカー又は（ｉｉ）Ｐ２Ｙ_２レセプターアゴニストのいずれかである）の化合物を開示する。これを含む薬学的処方物及び気道粘膜表面などの粘膜表面への水分補給のためのその使用法もまた開示する。

Description

【０００１】
（関連出願）
本出願は、１９９９年７月１９日に提出された米国仮出願６０／１４４，４７９（その開示全体が本明細書中で参考として援用される）の利点を主張する。
【０００２】
（連邦政府援助の供述）
本発明は、国立衛生研究所の助成金番号ＨＬ５１８１８の政府援助を用いて行った。合衆国政府は本発明において一定の権利を有する。
【０００３】
（発明の分野）
本発明は、ナトリウムチャネルブロッカーの結合物（ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ）、特にピラジノイルグアニジンナトリウムチャネルブロッカー及び別のピラジノイルグアニジンナトリウムチャネルブロッカー又はＰ２Ｙ_２レセプターアゴニストなどの別の化合物を含む共有（ｃｏｖａｌｅｎｔ）結合物に関する。
【０００４】
（発明の背景）
Ｂｏｕｃｈｅｒに付与された米国特許第４，５０１，７２９号は気道粘膜分泌物に水分を補給するための呼吸用又は非呼吸用アミロライドの使用を記載し、Ｂｏｕｃｈｅｒ及びＳｔｕｔｔｓに付与された米国特許第５，６５６，２５６号は、肺粘膜分泌物に水分補給するための呼吸用又は非呼吸用ベンザミル及びフェナミルの使用を記載している。Ｊａｃｏｂｕｓに付与された米国特許第５，７８９，３９１号は、副鼻腔内の鼻水の排出を促進させるためのウリジン三リン酸（ＵＴＰ）及び関連化合物（Ｐ^１，Ｐ^４−ジ（ウリジン−５’三リン酸（Ｕ_２Ｐ_４））など）の投与による副鼻腔炎の治療法を記載している。
【０００５】
Ｂｏｕｃｈｅｒに付与された米国特許第５，２９２，４９８号は、気道粘膜分泌物に水分補給するために使用することができるヌクレオチド、特にＰ２Ｙ_２レセプターアゴニストを記載している。気道粘膜分泌物の水分補給に使用することができるジヌクレオチドは、Ｓｔｕｔｔｓらに付与された米国特許第５，６３５，１６０号に記載されている。Ｐ２Ｙ_２レセプターリガンドであり、気道粘膜分泌物の水分補給に使用することができるさらなる化合物は、Ｗ．Ｐｅｎｄｅｒｇａｓｔらに付与された米国特許第５，８３７，８６１号、Ｊａｃｏｂｕｓ及びＬｅｉｇｈｔｏｎに付与された米国特許第５，７６３，４４７号、及びＪａｃｏｂｕｓらに付与された同第５，７８９，３９１号で開示されている。
【０００６】
（発明の要旨）
本発明の第１の態様は、一般式Ｐ_１−Ｌ−Ｐ_２（式中、「Ｐ_１」はピラジノイルグアニジンナトリウムチャネルブロッカーであり、「Ｌ」は架橋基であり、「Ｐ_２」は（ｉ）ピラジノイルグアニジンナトリウムチャネルブロッカー又は（ｉｉ）Ｐ２Ｙ_２レセプターアゴニストのいずれかである）の化合物（以後、「活性化合物」又は「活性剤」ともいう）である。本発明の化合物の利点は、実質的に非吸収又は吸収遅延性であるか、粘膜（例えば、気道、胃腸）表面への吸収の遅延により作用様式が延長されて全身性副作用がより少ないことである。
【０００７】
本発明の第２の態様は、薬学的に受容可能なキャリア中に治療有効量の上記定義の活性化合物を含む組成物である。
【０００８】
本発明の第３の態様は、被験体の治療有効量の本明細書中に記載の化合物を投与するステップを含む、被験体の粘膜表面の治療法である。一般に、被験体の治療とは、本発明の化合物又は組成物で治療される粘膜表面に水分補給することであるか、使用される化合物又は組成物が粘膜表面上の液体の吸収を遮断するか遅らせることか、粘膜表面が粘膜表面上の液体の体積の増加を示すことを意味する。
【０００９】
本発明の第４の態様は、本明細書中に記載のように、必要時に被験体の粘膜表面を治療するための薬物を調製用するための上記の活性化合物の使用である。
【００１０】
本発明の上記及び他の目的及び態様を、以下の明細書中で詳細に説明する。
【００１１】
（発明の詳細な説明）
以後、添付の図面を用いてより完全に本発明を説明し、本明細書中に記載の発明をさらに例示する。しかし、本発明を異なる形態で実施することができ、本明細書中に記載の実施形態に制限されると解釈するべきではない。むしろ、この開示が完璧かつ完全であり、当業者に本発明の範囲が完全に伝わるようにこれらの実施形態を提供する。
【００１２】
本明細書中の本発明の記載で使用した専門用語は、特定の実施形態のみを説明する目的であり、本発明の限定を意図しない。本発明の記載及び添付の特許請求の範囲で使用されるように、文脈で別なふうに明確に示さない限り、単数形態「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、複数形態も同様に含むことが意図される。
【００１３】
別に定義されない限り、本明細書中で使用した全ての技術用語及び科学用語は、本発明の当業者によって一般に理解されているものと同一の意味を有する。本明細書中に記載の全ての刊行物、特許出願書類、特許書類、及び他の参考文献は、その全体が参考として援用される。
【００１４】
本明細書中で使用される、用語「アルキル」又は「低級アルキル」は、Ｃ１〜Ｃ４、Ｃ６、又はＣ８アルキルをいい、直鎖もしくは分岐鎖及び飽和又は不飽和であってもよい。シクロアルキルはそれ自体が本明細書中で特定されており、典型的には、Ｃ３、Ｃ４、又はＣ５〜Ｃ６又はＣ８シクロアルキルである。同様に、本明細書中で使用されるアルケニル又は低級アルケニルはＣ１〜Ｃ４アルケニルをいい、本明細書中で使用されるアルコキシ又は低級アルコキシは、Ｃ１〜Ｃ４アルコキシをいう。本明細書中で使用される、用語「アリール」は、Ｃ３〜Ｃ１０環状芳香基（フェニル、ナフチルなど）をいい、トリルなどの置換アリール基が含まれる。本明細書中で使用される、「ハロ」は、任意のハロゲン基（クロロ、フルオロ、ブロモ、又はヨードなど）をいう。本明細書中で使用される、用語「ヒドロキシアルキル」は、Ｃ１〜Ｃ４直鎖又は分岐鎖ヒドロキシ置換基（すなわち、−ＣＨ_２ＯＨ、−（ＣＨ_２）_２ＯＨなど）をいう。本明細書中で使用される、用語「アミノアルキル」は、Ｃ１〜Ｃ４直鎖又は分岐鎖網の置換アルキルをいい、用語「アミノ」は基ＮＲ’Ｒ’’をいい、Ｒ’及びＲ’’は独立してＨ又は上記定義の低級アルキル（すなわち、−ＮＨ_２、−ＮＨＣＨ_３、−Ｎ（ＣＨ_３）_２など）から選択される。本明細書中で使用される、用語「オキシアルキル」は、Ｃ１〜Ｃ４酸素置換アルキル（すなわち、−ＯＣＨ_３）をいい、本明細書中で使用される、用語「オキシアリール」はＣ３〜Ｃ１０酸素置換環状芳香基をいう。
【００１５】
本発明は、主に、ヒト被験体の治療に関するが、他の家畜動物（すなわち、哺乳動物、トリ）の治療にも使用することができる。哺乳動物が好ましく、特にヒトが好ましい。
【００１６】
本発明は、このような治療を必要とする被験体の粘膜表面の治療に有用である。「治療」には、粘膜表面の水分補給、又は粘膜表面への液体吸収の遮断もしくは遅延、粘膜表面の液体体積の増加（粘膜表面上の水又は液体が増加するかどうか）、表面上の塩の量の増加、又はその両方が含まれる。好ましい実施形態では、粘膜表面は気道表面である。本明細書中で使用される、用語「気道表面」は、喉頭の下で且つ肺の中の気道表面（例えば、気管支通路、肺胞通路）ならびに頭中（副鼻腔及び他の鼻の気道）及び喉頭の上の領域の空気通路をいう。本発明を使用して、気道表面以外の粘膜表面を治療することもできる。このような他の粘膜表面には、胃腸表面、口腔表面、尿生殖器表面、眼球表面又は眼の表面、内耳、及び中耳が含まれる。
【００１７】
本発明の方法によって治療することができる被験体には、嚢胞性線維症、原発性毛様体ジスキネジー、慢性気管支炎、慢性閉塞性気道疾患、人工呼吸患者を患った患者、急性肺炎患者などが含まれる。本発明の方法によって治療することができる被験体には、補足酸素を鼻腔投与している患者（気道表面が乾燥する傾向がある）、鼻腔気道表面に影響を与えるアレルギー疾患又は反応（例えば、花粉、粉塵、動物の毛又は粒子、昆虫又は昆虫粒子などに対するアレルギー反応）を患った患者、鼻腔気道表面に微生物が感染した患者（例えば、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ、Ｈａｅｎｏｐｈｉｌｕｓ　ｉｎｆｌｕｅｎｚａ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ種などのような生物の感染）、鼻腔気道表面に影響を与える炎症疾患の患者、又は副鼻腔炎患者（副鼻腔中の鼻水の排出を促進するための有効量の投与による副鼻腔中の鼻詰まりの粘液性分泌物の排出を促進するために活性因子を投与する）も含まれる。
【００１８】
本発明の化合物を、本明細書中に記載の方法ならびに公知の技術又は上記の開示を考慮して当業者に自明のその変形形態によって調製することができる。例えば、Ｄ．Ｂｅｎｏｓら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８３、８５２５、１９８６、Ｔ．Ｋｌｅｙｍａｎら、Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．、２５０（Ｃｅｌｌ　Ｐｈｙｓｉｏｌ．、１９）、Ｃ１６５〜Ｃ１７０、１９８６、米国特許第３，３１３，８１３号、同第４，５０１，７２９号、同第５，７８９，３９１号、同第５，２９２，４９８号、同第５，６３５，１６０号、同第５，８３７，８６１号、同第５，７６３，４４７号、同第５，７８９，３９１号（本明細書中の全ての特許引用文献の開示は、その全体が本明細書中で参考として援用される）を参照のこと。
【００１９】
１．ナトリウムチャネルブロッカー
任意のナトリウムチャネルブロッカー（すなわち、Ｐ_１−Ｌ−Ｐ_２形態のＰ_１又はＰ_２）を使用して本発明を行うことができる。多数のピラジノイルグアニジンナトリウムチャネルブロッカーは、Ｃｒａｇｏｅに付与された米国特許第３，３１３，８１３号に開示されている。アミロライド（１つの特定のピラジノイルグアニジンナトリウムチャネルブロッカー）はＭｅｒｃｋ　Ｉｎｄｅｘ登録番号４２６（第１２版、１９９６）に記載されている。ベンザミル（３，５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−（ベンジルアミノアミノメチレン）ピラジンカルボキシアミドとしても公知）及びフェナミル（３，５−ジアミノ−６−クロロ−Ｎ−（フェニルアミノアミノメチレン）ピラジンカルボキシアミドとしても公知）は公知の化合物であり、Ｅ．Ｃｒａｇｏｅに付与された米国特許第３，３１３，８１３号にも開示されている。
【００２０】
アミロライドアナログである種々のさらなるピラジノイルグアニジンナトリウムチャネルブロッカーは、Ｔ．Ｋｌｅｙｍａｎ及びＥ．Ｃｒａｇｏｅ、Ｊ．Ｍｅｎｂｒａｎｅ　Ｂｉｏｌ．、１０５、１〜２１、１９８８に記載及び開示されている。
【００２１】
本発明を行うために使用することができる活性化合物の好ましい例は、米国特許第３，３１３，８１３号（参考として援用される）に開示のピラジノイルグアニジンナトリウムチャネルブロッカーである。このような化合物は、式
【化８】

（式中、Ｘはクロロ、ブロモ、ヨード、低級アルキル、３〜７個の炭素を有する低級シクロアルキル、フェニル、クロロフェニル、ブロモフェニル、Ｚ−チオ及びＺ−スルホニル（式中、Ｚは低級アルキル、及びフェニル低級アルキルからなる群から選択される。）からなる群から選択され、好ましくは、Ｘはクロロであり、
Ｙはヒドロキシル、メルカプト、低級アルキルオキシ、低級アルキルチオ、クロロ、低級アルキル、３〜６個の炭素を有する低級シクロアルキル、フェニル、及び下記構造
【化９】

（式中、Ｒは水素、アミノ、アミジノ、３〜６個の炭素を有する低級シクロアルキル、低級アルキル、ヒドロキシ低級アルキル、ハロ低級アルキル、環中に３〜６個の炭素を有する低級（シクロアルキルアルキル）、フェニル低級アルキル、低級（アルキルアミノアルキル）、低級アルケニル、フェニル、ハロフェニル、及び低級アルキルフェニルからなる群から選択され、
Ｒ_１は水素、低級アルキル、低級アルケニルからなる群から選択され、さらに、
ＲとＲ_１が連結して低級アルキレンを形成することができる。）
を有するアミノからなる群から選択され、好ましくはＹはアミノであり、
Ｒ_２は水素及び低級アルキルからなる群から選択され、好ましくはＲ、Ｒ_１、及びＲ_２は水素であり、
Ｒ_３及びＲ_４は独立して水素、低級アルキル、ヒドロキシ低級アルキル、フェニル低級アルキル、（ハロフェニル）低級アルキル、低級（アルキルフェニルアルキル）、（低級アルコキシフェニル）低級アルキル、ナフチル低級アルキル、（オクタヒドロ−１−アゾシニル）低級アルキル、ピリジル低級アルキル、及び結合している窒素原子と連結して１−ピロリジニル、ピペリジノ、モルホリノ、及び４−低級アルキルピペラジニル基を生成する低級アルキルラジカル、ならびにフェニルからなる群から選択され、好ましくは、Ｒ_３は水素、フェニル、又はフェニルアルキルであり、好ましくは、Ｒ_４は水素である。）を有する。
以下に考察のように、Ｒ_４を架橋基Ｌと置換することができる。
【００２２】
２．架橋基
任意の適切な架橋基（すなわち、Ｐ_１−Ｌ−Ｐ_２の形態の「Ｌ」）を使用することができる。架橋基は、非吸収性キャリア部分であり得る。非吸収性キャリア部分は、炭化水素、タンパク質、ペプチド、ポリアミン、又は水溶性直鎖ポリマーであり得る。キャリア部分として有用な水溶性直鎖ポリマーには、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール、ノニルフェノールエトキシレート、及びポリビニルアルコールが含まれる。キャリア部分として有用な炭水化物には、糖及び多糖類（デキストラン、ラクトース、及びマンニトール）が含まれる。さらなる例は、アガロースである。キャリア部分として有用なタンパク質又はペプチドには、アルブミン（例えば、ヒト血清アルブミン）及びプロタミンが含まれる。本発明の実施に有用なポリアミンには、スペルミン及びスペルミジンが含まれる。
【００２３】
架橋基は、一価の形態よりもむしろ二価の形態で提供される以外は上記のＲ_４に記載の基と同一であり得る。架橋基はまた、−Ｏなどのヘテロ原子であり得る。したがって、架橋基は、以下のアルキレン、アルキレンカルボニル、カルボニルアルキレン、又はカルボニル基であり得る。
【化１０】

（ｎが０（すなわち、直接的共有結合）であるか、１〜６）。このようなアルキレン基は飽和又は不飽和であってよく、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、ハロ、フェニル、又はハロ置換フェニルで１、２、３、又は４回置換することができる。例を、以下に示す。
【化１１】

【００２４】
フェニル又はフェニレン基、又は２つ又はそれ以上が連結したフェニレン基を、架橋基として得ることができ、フェニレン基をハロゲン基又はアルキル基で１、２、３、又は４回任意選択的に置換することができる。例を以下に示す。
【化１２】

【００２５】
置換又は非置換フェニレン基のいずれかの末端又は両末端を、上記のように置換又は非置換アルキレン、アルキレンカルボニル、カルボニルアルキレン、又はカルボニル基で置換して架橋基を得ることができる。例を以下に示す。
【化１３】

【００２６】
置換又は非置換アルキレン、アルキレンカルボニル、カルボニルアルキレン、又はカルボニル基のいずれかの末端又は両末端を、上記のように置換又は非置換フェニレン基で置換して架橋基を得ることができる。例を以下に示す。
【化１４】

（式中、「ｎ」を上記のように定義する。）このような化合物のいずれかの末端又は両末端を、上記のように置換又は非置換アルキレン、アルキレンカルボニル、カルボニルアルキレン、又はカルボニル基でさらに置換してさらなる架橋基を得ることができる。例を以下に示す。
【化１５】

（式中、「ｎ」を上記のように定義する。）
【００２７】
３．Ｐ２Ｙ_２レセプターアゴニスト
上記のように、Ｐ_２はまた、ヌクレオチド（例えば、ＡＴＰ、ＵＴＰ）、ジヌクレオチド（以下にさらに詳述）、又はその誘導体などのＰ２Ｙ_２レセプターリガンドであり得る。本発明の実施に使用することができるＰ２Ｙ_２レセプターリガンドには、全ての化合物、特にＰ２Ｙ_２リガンドであるヌクレオチド及びジヌクレオチドが含まれ、これは、Ｗ．Ｐｅｎｄｅｒｇａｓｔらに付与された米国特許第５，８３７，８６１号（１９９８年１１月１７日）に開示されており、Ｊａｃｏｂｕｓ及びＬｅｉｇｈｔｏｎに付与された米国特許第５，７６３，４４７号、Ｊａｃｏｂｕｓらに付与された同第５，７８９，３９１号、Ｓｔｕｔｔｓらに付与された米国特許第５，６３５，１６０号、及びＢｏｕｃｈｅｒに付与された米国特許第５，２９２，４９８号（その全ての開示のその全体が本明細書中で参考として援用される）には全ての化合物と共に開示されている。
【００２８】
このようなヌクレオチドの例を、式Ｉ〜ＩＶに示す。
式Ｉ
【化１６】

（式中、Ｘ_１、Ｘ_２、及びＸ_３は、それぞれ独立してＯ⁻又はＳ⁻であり、好ましくはＸ_２及びＸ_３はＯ⁻であり、
Ｒ_１はＯ、イミド、メチレン、又はジハロメチレン（例えば、ジクロロメチレン又はジフルオロメチレン）であり、好ましくは、Ｒ_１は酸素又はジフルオロメチレンであり、
Ｒ_２はＨ又はＢｒであり、好ましくは、Ｒ_２はＨであり、特に好ましい式Ｉの化合物はウリジン５’−三リン酸（ＵＴＰ）及びウリジン５’−Ｏ−（３−チオ三リン酸）（ＵＴＰγＳ）である）。
【００２９】
ジヌクレオチドを以下の一般式ＩＩで示す。
【化１７】

（式中、Ｘは酸素、メチレン、ジフルオロメチレン、イミドであり、
ｎ＝０、１、又は２、
ｍ＝０、１、又は２、
ｎ＋ｍ＝０、１、２、３、又は４、及び
Ｂ及びＢ’はそれぞれ独立して９位又は１位で連結したプリン残基又はピリミジン残基であり、
Ｚ＝ＯＨ又はＮ_３、
Ｚ’＝ＯＨ又はＮ_３、
Ｙ＝Ｈ又はＯＨ、
Ｙ’＝Ｈ又はＯＨ（ただし、ＺがＮ_３である場合はＹはＨであるか、Ｚ’がＮ_３である場合はＹ’はＨである。）。）
フラノース糖は、β型であることが好ましい。
フラノースは、β−Ｄ型であることが最も好ましい。
【００３０】
式ＩＩの好ましい化合物は、以下の式ＩＩａの化合物である。
【化１８】

（式中、Ｘ＝Ｏ、
ｎ＋ｍ＝１又は２、
Ｚ、Ｚ’、Ｙ、及びＹ’＝ＯＨ、
Ｂ及びＢ’は式ＩＩｃ及びＩＩｄで定義されている、
Ｘ＝Ｏ、
ｎ＋ｍ＝３又は４、
Ｚ、Ｚ’、Ｙ、及びＹ’＝ＯＨ、
Ｂ＝ウラシル、
Ｂ’は式ＩＩｃ及びＩＩｄで定義されている、
Ｘ＝Ｏ、
ｎ＋ｍ＝１又は２、
Ｚ、Ｙ、及びＹ’＝ＯＨ、
Ｂ＝ウラシル、
Ｂ’は式ＩＩｃ及びＩＩｄで定義されている、又は
Ｘ＝Ｏ、
ｎ＋ｍ＝０、１又は２、
Ｚ及びＹ＝ＯＨ、
Ｚ’＝Ｎ_３、
Ｙ’＝Ｈ、
Ｂ＝ウラシル、
Ｂ’＝チミン、又は
Ｘ＝Ｏ、
ｎ＋ｍ＝０、１又は２、
Ｚ及びＺ’＝Ｎ_３、
Ｙ及びＹ’＝Ｈ、
Ｂ及びＢ’＝チミン、又は
Ｘ＝ＣＨ_２、ＣＦ_２、又はＮＨ、
ｎ及びｍ＝１、
Ｚ、Ｚ’、Ｙ、及びＹ’＝ＯＨ、
Ｂ及びＢ’は式ＩＩｃ及びＩＩｄで定義されている。）
【００３１】
式ＩＩの化合物の別の好ましい基は、以下の式ＩＩｂの化合物又はその薬学的受容可能な塩である。
【化１９】

（式中、Ｘは酸素、メチレン、ジフルオロメチレン、又はイミドであり、
ｎ＝０又は１、
ｍ＝０又は１、
ｎ＋ｍ＝０、１、又は２、及び
Ｂ及びＢ’はそれぞれ独立して、９位又は１位を介して連結した式ＩＩｃではプリン残基又は式ＩＩｄではピリミジン残基である。例えば、Ｂ及びＢ’がウラシルであり、Ｎ−１位でリボシル部分に連結する場合、ｍ＋ｎの合計はＸが酸素の場合３又は４である。表示のようにリボシル部分がＤ型であるが、Ｌ型又はＤ型及びＬ型でもよい。Ｄ型が好ましい。）
【化２０】

【００３２】
アデニンの置換誘導体には、アデニン１オキシド、１，Ｎ^６−（４−又は５−置換エテノ）アデニン、６−置換アデニン、又は８−置換アミノアデニンが含まれ、６−置換又は８−置換ＨＮＲ’基のＲ’は、以下から選択される。下記のように官能基が任意選択的に結合したアリールアルキル（Ｃ_１〜_６）基、アルキル、及び官能基を含むアルキル基（（［６−アミノヘキシル］カルバモイルメチル）−及びω−アシル化アミノ（ヒドロキシ、チオ、及びカルボキシ）誘導体（アシル基がアセチル、トリフルオロアセチル、ベンゾイル、置換ベンゾイルなど（これらに限定されない）から選択されるか、カルボキシル部分がそのエステル又はアミド誘導体（例えば、エチル又はメチルエステル又はそのメチル、エチルもしくはベンズアミド誘導体）として存在する）など）。ω−アミノ（ヒドロキシ、チオール）部分を、Ｃ_１〜_４アルキル基でアルキル化することができる。
【００３３】
同様に、式ＩＩｂのＢ又はＢ’又はその両方は、１位で連結した以下の一般式ＩＩｄのピリミジンでも良い。
【化２１】

（式中、Ｒ_４は、ヒドロキシ、メルカプト、アミノ、シアノ、アラルコキシ、Ｃ_１〜_６アルコキシ、Ｃ_１〜_６アルキルアミノ、及びジアルキルアミノであり、アルキル基が任意選択的に連結して複素環を形成し、
Ｒ_５は水素、アシル、Ｃ_１〜_６アルキル、アロイル、Ｃ_１〜_５アルカノイル、ベンゾイル、又はスルホン酸基であり、
Ｒ_６は水素、メルカプト、アラルコキシ、Ｃ_１〜_６アルキルチオ、Ｃ_１〜_５２置換アミノ、トリアゾリル、アルキルアミノ、又はジアルキルアミノであり、アルキル基が任意選択的に連結して複素環を形成するか、任意選択的にＮ−３に連結して置換環を形成し、
Ｒ_７は水素、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、アルケニル（アルケニル部分が酸素を介して任意選択的に連結して、酸素に隣接する炭素上で任意選択的にアルキル基もしくはアリール基に置換された環を形成する）、置換アルキニル、又は水素であり、Ｒ_８はアミノもしくは置換アミノ及びハロゲン、アルキル、置換アルキル、ペルハロメチル（例えば、ＣＦ_３）、Ｃ_２〜_６アルキル、Ｃ_２〜_３アルケニル、又は置換エテニル（例えば、アリルアミノ、ブロムビニル、及びエチルプロペノエート、又はプロペン酸）、Ｃ_２〜_３アルキニル又は置換アルキニルであり、Ｒ_６がアミノ又は置換アミノ以外であり、Ｒ_５−Ｒ_６が共にＲ_６でＮ又はＯを介して結合した５又は６員環の置換又は非置換環を形成し得る場合、このような環はそれ自体が官能基を含む置換基を含み得る、
Ｒ_８は水素、アルコキシ、アリールアルコキシ、アルキルチオ、アリールアルキルチオ、カルボキシアミドメチル、カルボキシメチル、メトキシ、メチルチオ、フェノキシ、又はフェニルチオである。）
【００３４】
上記式ＩＩｄの一般構造では、２位〜６位の点線はこれらの位置での単結合又は二重結合の存在を示すことを意図し、二重結合又は単結合の関連位置は、Ｒ_４、Ｒ_６、及びＲ_７置換基がケト−エノール相互異性化することができるかどうかによって同定される。
【００３５】
上記式ＩＩｃ及びＩＩｄの一般構造では、アシル基は、アルカノイル又はアロイル基を含むことが有利である。アルキル基は、有利には、１〜８個の炭素原子、特に下記の１つ又は複数の適切な置換基で任意選択的に置換された１〜４個の炭素原子を含む。アリールオキシなどの基のアリール部分を含むアリール基は、下記の１つ又は複数の置換基で任意選択的に置換されたフェニル基であることが好ましい。上記のアルケニル及びアルキニル基は、有利には、２〜８個の炭素原子、特に下記の１つ又は複数の適切な置換基で置換された２〜６個の炭素原子（例えば、エテニル又はエチニル）を含む。上記アルキル、アルケニル、アルキニル、及びアリール基上の適切な置換基は、有利には、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ_１〜_４アルコキシ、Ｃ_１〜_４アルキル、Ｃ_６〜_１２アリールアルコキシ、カルボキシ、シアノ、ニトロ、スルホンアミド、スルホン酸基、リン酸基、スルホン基、アミノ、及び置換アミノから選択され、アミノ基はＣ_１〜_４アルキルで１置換又は２置換され、２置換の場合はアルキル基は任意選択的に連結して複素環を形成する。
【００３６】
式ＩＩｃ及びＩＩｄの上記説明をさらに明白にするために、説明を以下のように簡略化することができる。
Ｒ_２はＯであるか存在しない、又は
Ｒ_１及びＲ_２は共に任意選択的に置換された５員環融合イミダゾール環を形成することができるか、
６−ＨＮＲ_１基のＲ_１又は８−ＨＮＲ_３基のＲ_３は、
（ａ）任意選択的に置換されたアリール部分を含むアリールアルキル（Ｃ_１〜_６）基、
（ｂ）アルキル、
（Ｃ）（［６−アミノヘキシル］カルバモイルメチル）、
（ｄ）ω−アミノアルキル（Ｃ_２〜_１０）、
（ｅ）ω−ヒドロキシアルキル（Ｃ_２〜_１０）、
（ｆ）ω−チオールアルキル（Ｃ_２〜_１０）、
（ｇ）ω−カルボキシアルキル（Ｃ_２〜_１０）、
（ｈ）アシル基がアセチル、トリフルオロアセチル、ベンゾイル又は置換ベンゾイルアルキル（Ｃ_２〜_１０）のいずれかである（ｂ）、（ｃ）又は（ｄ）のω−アシル化誘導体、及び
（ｉ）カルボキシル部分がエステル又はアミドである上記（ｅ）のω−カルボキシアルキル（Ｃ_２〜_１０）からなる群から選択され、
【化２２】

（式中、Ｒ_４は、ヒドロキシ、メルカプト、アミノ、シアノ、アラルコキシ、Ｃ_１〜_６アルキルチオ、Ｃ_１〜_６アルコキシ、Ｃ_１〜_６アルキルアミノ、及びジアルキルアミノであり、ジアルキルアミノのアルキル基が任意選択的に連結して複素環を形成し、
Ｒ_５は水素、アシル、Ｃ_１〜_６アルキル、アロイル、Ｃ_１〜_５アルカノイル、ベンゾイル、又はスルホン酸基であり、
Ｒ_６は水素、メルカプト、アルコキシ、アラルコキシ、Ｃ_１〜_６アルキルチオ、Ｃ_１〜_５２置換アミノ、トリアゾリル、アルキルアミノ、又はジアルキルアミノであり、ジアルキルアミノのアルキル基が任意選択的に連結して複素環を形成するか、任意選択的にＮ^３に連結して置換環を形成し、
Ｒ_５−Ｒ_６は共にＲ_６でＮ又はＯを介して結合した５員環又は６員環の飽和又は不飽和環を形成し、前記環は任意選択的に置換され、
Ｒ_７は、
（ａ）水素、
（ｂ）ヒドロキシ、
（ｃ）シアノ、
（ｄ）ニトロ、
（ｅ）アルケニル（アルケニル部分が酸素を介して任意選択的に連結して酸素に隣接する炭素上でアルキル基もしくはアリール基に置換される）、
（ｆ）置換アルキニル、
（ｇ）ハロゲン、
（ｈ）アルキル、
（ｉ）置換アルキル、
（ｊ）ペルハロメチル、
（ｋ）Ｃ_２〜_６アルキル、
（ｌ）Ｃ_２〜_３アルケニル、
（ｍ）置換エテニル、
（ｎ）Ｃ_２〜_３アルキニル、及び
（ｏ）置換アルキニル（Ｒ_６がアミノ又は置換アミノ以外の場合）からなる群から選択され、
Ｒ_８は、
（ａ）水素、
（ｂ）アルコキシ、
（ｃ）アリールアルコキシ、
（ｄ）アルキルチオ、
（ｅ）アリールアルキルチオ、
（ｆ）カルボキシアミドメチル、
（ｇ）カルボキシメチル、
（ｈ）メトキシ、
（ｉ）メチルチオ、
（ｊ）フェノキシ、及び
（ｋ）フェニルチオからなる群から選択される）。
【００３７】
ＣＴＰ及びそのアナログを、以下の一般式ＩＩＩに示す。
【化２３】

（式中、Ｒ_１、Ｘ_１、Ｘ_２、及びＸ_３は式Ｉで定義されており、
Ｒ_５及びＲ_６はＨであり、Ｒ_７は存在せず、Ｎ−３とＣ−４との間に二重結合が存在する（シトシン）か、
Ｒ_５、Ｒ_６、及びＲ_７が共に−ＣＨ＝ＣＨ−となり、Ｎ−４とＣ−４との間に二重結合を有するＮ−３からＮ−４までの環を形成し（３，Ｎ^４−エテノシトシン）、これはエテノ環の４位又は５位で任意選択的に置換される。）
【００３８】
ＡＴＰ及びそのアナログを、以下の一般式ＩＶで示す。
【化２４】

（式中、Ｒ_１、Ｘ_１、Ｘ_２、及びＸ_３は式Ｉで定義されており、
Ｒ_３及びＲ_４はＨであり、Ｒ_２は存在せず、Ｎ−１とＣ−６との間に二重結合が存在する（アデニン）か、
Ｒ_３及びＲ_４はＨであり、Ｒ_２はＯであり、Ｎ−１とＣ−６との間に二重結合が存在する（アデニン１−オキシド）か、
Ｒ_３、Ｒ_４、及びＲ_２が共に−ＣＨ＝ＣＨ−となり、Ｎ−６とＣ−６との間に二重結合を有するＮ−６からＮ−１までの環を形成する（１，Ｎ^６−エテノアデニン）。）
【００３９】
簡単にするために、本明細書中の式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、及びＩＶは、天然に存在するＤ型の化合物を例示するが、特記しない限り、本発明はＬ型及びＤ型とＬ型との混合物も含む。天然に存在するＤ型が好ましい。
【００４０】
式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ，及びＩＶのいくつかの化合物を、当業者に周知の方法及び公知の手順（Ｚａｍｅｃｎｉｋ，Ｐ．ら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８９、２３７０〜２３７３、１９９２、Ｎｇ，Ｋ．ら、Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓ．、１５、３５７２〜３５８０、１９７７、Ｊａｃｏｂｕｓ，Ｋ．Ｍ．らに付与された米国特許第５，７８９，３９１号、Ｐｅｎｄｅｒｇａｓｔ，Ｗ．らの国際特許出願ＷＯ９８／３４９４２）で作製することができ、いくつかは、例えばＳｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙ、ＰＯ　Ｂｏｘ１４５０８、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ６３１７８から市販されている。米国特許第５，７８９，３９１号及び国際特許出願ＷＯ９８／３４９４２の合成法は、その全体が本明細書中で参考として援用される。
【００４１】
したがって、上記式Ｉ―ＩＶの化合物を含む本発明の実施に使用することができる化合物の例には、以下の一般式を有する化合物が含まれる。
【化２５】

（式中、ＸはＯ又はＳであってよく、
Ａはプリン又はピリミジン塩基（例えば、アデニン、グアニン、チミジン、シトシン、ウラシル）（プリン又はピリミジン塩基は、それぞれプリンの場合は第９窒素への共有結合によって又はピリミジンの場合は第１窒素への共有結合によってリボース又はデオキシリボースに連結することが好ましい）であり、
Ｒ_１はＨ又はＯＨであり、
ｎは１〜４又は６、好ましくは３、３、又は４
である。）
【００４２】
本発明の実施で使用することができるレセプターアゴニストのさらなる例はジヌクレオチドであり、以下の一般式を有するものが含まれる。
【化２６】

（式中、Ａ及びＢはそれぞれ独立してプリン又はピリミジン塩基（アデニン、グアニン、チミジン、シトシン、ウラシル）であり、好ましくはＡはウラシルであり、Ｂはシトシンであり、
Ｒ_１及びＲ_２はそれぞれ独立してＨ又はＯＨからなる群から選択され、ｎは１〜６であり、好ましくは３又は４である。）
【００４３】
本明細書中に記載のＰ２Ｙ_２レセプターリガンドについて、架橋基とリガンドが共有結合し得る任意の適切な位置（例えば、ピリミジン中の第５炭素又はプリン中の第２、６、又は８炭素などの環の炭素）中の架橋基への共有結合などの任意の適切な手段によって、架橋基をプリンもしくははピリミジン塩基、又は（例えば、上記式Ｉ〜ＩＶの化合物の）対応するリボースもしくはデオキシリボース環に共有結合させることができるか、上記式Ｉ、ＩＩ、及びＩＶで示される化合物の末端リン酸部分に結合させることができる。
【００４４】
４．結合化合物の例
本発明の活性化合物の特定の例（Ｐ_２がピラジノイルグアニジンナトリウムチャネルブロッカーである）には、以下が含まれるがこれらに限定されない。
【化２７】

【００４５】
本発明で有用な結合化合物のさらなる例には、その構造を以下の表１及び実施例に示す化合物が含まれる。
【００４６】
本発明の活性化合物（Ｐ_２がＰ２Ｙ_２レセプターリガンド）の例を、以下に示す。
【化２８】

【００４７】
５．薬学的に受容可能な塩
本明細書中で使用される、用語「活性剤」には、化合物の薬学的に受容可能な塩（ベンザミルヒドロクロリド又はフェナミルヒドロクロリドなどであるが、これらに限定されない）が含まれる。薬学的に受容可能な塩は、親化合物の所望の生物活性を保持し、且つ望ましくない毒性を付与しない塩である。このような塩の例は、（ａ）無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸など）を用いて形成させた酸付加塩及び有機酸（例えば、酢酸、シュウ酸、酒石酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、グルコン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、安息香酸、タンニン酸、パルミチン酸、アルギニン酸、ポリグルタミン酸、ナフタレン硫酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、ポリガラクツロン酸など）を用いて形成させた酸付加塩、ならびに（ｂ）塩素、臭素、及びヨウ素などの元素陰イオンから形成された塩である。
【００４８】
ヌクレオチド又はジヌクレオチド活性化合物のために、化合物をアルカリ金属（ナトリウム、カリウム）、アルカリ土類金属、アンモニウム、及びテトラアルキルアンモニウム塩、ＮＸ_４ ^＋（ＸはＣ_１〜_４）アルキル基として調製することができる。薬学的に受容可能な塩は、親化合物の所望の生物活性を保持し、且つ望ましくない毒性を付与しない塩である。
【００４９】
あるいは、本発明の組成物の調製に使用した活性剤は、活性剤の薬学的に受容可能な遊離塩の形態であり得る。化合物の遊離塩は塩より溶解性が低いので、遊離塩組成物を使用して肺に対してより徐放性の高い活性剤が得られる。溶液にならない特定の形態の肺に存在する活性剤は、生理学的反応の誘導に利用できないが、段階的に溶解する生物が利用可能な薬物の貯蔵所として利用される。
【００５０】
６．処方及び投与
本発明の第３の態様は、薬学的に受容可能なキャリア中の上記の活性化合物（例えば、キャリア水溶液）を含む薬学的処方物（ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ）である。一般に、活性化合物は、粘膜表面を治療する（鼻腔気道表面を含む気道表面による水の再吸収を阻害する）ための有効量を組成物に含む。
【００５１】
本明細書中で開示の活性化合物を、任意の適切な手段（局所、非経口（例えば、静脈内、筋肉内、又は腹腔内注射）、経口、直腸、吸入、経皮などが含まれる）によって粘膜表面に投与することができる。例えば、便秘治療のために、活性化合物を経口又は胃腸粘膜表面に直腸から投与することができる。活性化合物を、任意の適切な形態（注射用又は局所用溶液用の滅菌生理食塩水、経口投与用のドロップ、錠剤など、直腸又は尿生殖器投与用の座薬など）の薬学的に受容可能なキャリアと組み合わせることができる。例として、要望どおりに活性化合物の溶解度を高めるための処方を含み得る。
【００５２】
本明細書中で開示の活性化合物を、適切な手段（生理食塩水又は蒸留水などの薬学的に受容可能なキャリア中の活性化合物のスプレー、ミスト、液滴を含む）によって患者の気道表面に投与することができる。例えば、活性化合物を、Ｊａｃｏｂｕｓに付与された米国特許第５，７８９，３９１号（その開示全体が本明細書中で参考として援用される）に記載のように処方物として調製して投与することができる。
【００５３】
１つの好ましい実施形態では、活性化合物を、被験体が鼻を通して吸入する活性化合物から構成される呼吸用又は非呼吸用粒子（好ましくは、非呼吸用粒子）のエアゾール懸濁液の投与によって投与することができる。呼吸用又は非呼吸用粒子は、液体又は固体であり得る。活性剤の量は、約１０^−９、１０^−８、又は１０^−７〜約１０^−３、１０^−２、又は１０^−１モル／リットル、より好ましくは約１０^−６〜約１０^−４モル／リットルの被験体の気道表面への活性剤の溶解濃度を達成するために十分な量であり得る。
【００５４】
本発明の１つの実施形態では、特定の活性剤組成物は、活性剤の遊離塩基及び薬学的に受容可能な塩（鼻腔の粘膜分泌物への溶解用の活性剤の早期放出及び徐放の両方を得るためのベンザミルヒドロクロリド又はフェナミルヒドロクロリドなど）の両方を含み得る。このような組成物は、患者への早期放出及び長時間にわたる徐放の両方を得るように作用する。１日に必要な投与回数の減少によって、徐放は、１治療単位で活性剤治療の患者の服薬率を増加させることが予想される。
【００５５】
上記のように、本発明を実施するために調製する固体又は液体粒子活性剤は、呼吸用又は非呼吸用サイズの粒子（すなわち、呼吸用粒子については、吸入時の口腔及び喉頭ならびに気管支及び肺の肺胞を通過するのに十分に小さいサイズの粒子、非呼吸粒子については、咽頭ならびに気管支及び肺の肺胞よりもむしろ鼻腔気道で維持されるのに十分に大きな粒子）を含むはずである。一般に、約１〜５ミクロンのサイズ範囲（より詳細には、約４．７ミクロン未満のサイズ）の粒子が呼吸用である。非呼吸用粒子サイズは、約５ミクロン以上のサイズから目視可能な液体のサイズである。したがって、鼻腔投与用には、１０〜５００μｍの粒子サイズ範囲を使用して、鼻腔中での維持を確実にすることができる。
【００５６】
活性化合物の投薬量は、治療条件及び被験体の健康状態に依存して変化するが、一般に、約１０^−９、１０^−８、又は１０^−７〜約１０^−３、１０^−２、又は１０^−１モル／リットル、より好ましくは約１０^−６〜約３×１０^−４モル／リットルの被験体の気道表面への活性剤の溶解濃度を達成するために十分な量であり得る。投与する活性化合物の特定の処方物の溶解度に依存して、１日の用量を１回又は数回の単位用量投与に分割することができる。重量あたりの１日の用量は、ヒトでは、被験体の年齢及び条件に依存して約０．１、０．５、又は１〜１０又は２０ミリグラムの活性剤粒子範囲であり得る。現在好ましい単位用量は、１日４回の投与の投薬計画で投与される約０．００５ミリグラムの活性剤である。投薬量を、任意の適切な手段（例えば、ゼラチンカプセル中のカプセル化）によって予め包装された単位として得ることができる。
【００５７】
気道投与に適切な薬学的処方物には、溶液、乳濁液、懸濁液、及び抽出物の処方物が含まれる。一般に、Ｊ．Ｎａｉｒｎ、「溶液、乳濁液、懸濁液、及び抽出物」、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｐｒａｃｔｉｃｅ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ、第８６章、第１９版を参照のこと。鼻腔投与に適切な薬学的処方物を、Ｓｃｈｏｒに付与された米国特許第４，３８９，３９３号、Ｉｌｌｕｍに付与された同第５，７０７，６４４号、Ｓｕｚｕｋｉに付与された同第４，２９４，８２９号、Ｓｕｚｕｋｉに付与された同第４，８３５，１４２号（その開示全体が本明細書中で参考として援用される）に記載のように調製することができる。
【００５８】
本発明の処方物の製造では、活性剤又は生理学的に受容可能な塩又はその遊離塩を、典型的には特に受容可能なキャリアと混合する。キャリアは、勿論、処方物中の任意の他の成分と適合するという意味で受容可能でなければならず、患者に有害であってはならない。キャリアは、固体又は液体又はその両方であってよく、０．５重量％〜９９重量％の活性化合物を含むことができる単位用量処方物（例えば、カプセル）として化合物と処方されることが好ましい。１つ又は複数の化合物を、本発明の処方物に組み込むことができ、処方物を、本質的に成分の混合からなる任意の周知の製薬学技術によって調製することができる。
【００５９】
活性化合物を含む液体粒子のミスト又はエアゾールを、任意の適切な手段（滅菌生理食塩水又は滅菌水などの薬学的に受容可能な水性キャリア中の活性剤を含む単純な鼻用スプレーなど）によって得ることができる。圧力によって噴霧する噴霧器又は超音波噴霧器を用いて投与することができる。例えば、米国特許第４，５０１，７２９号及び同第５，６５６，２５６号を参照のこと。鼻用液滴又はスプレーボトル又は噴霧器に適切な処方物は、有効成分の液体キャリア溶液からなり、有効成分は処方物の４０％ｗ／ｗまで含まれるが、２０％ｗ／ｗ未満が好ましい。キャリアは、典型的には水（最も好ましくは、滅菌無ピロゲン水）又は希釈アルコール溶液であり、好ましくは、例えば、塩化ナトリウムの添加によって体液と等張にする。最適な添加物には、防腐剤（処方物が滅菌されていない場合）（例えば、メチルヒドロキシベンゾエート）、抗酸化剤、香料、揮発油、緩衝剤、及び界面活性剤が含まれる。
【００６０】
同様に、活性化合物を含む固体粒子のミスト又はエアゾールを、任意の固体粒子薬物エアゾール煙霧発生器を使用して得ることができる。被験体への固体粒子薬物投与用のエアゾール煙霧発生器により、上記で説明した呼吸用又は非呼吸用の粒子を得て、ヒト投与に適切な速度で予め同定した薬物の用量を含む一定体積のミスト又はエアゾールを発生させる。固体粒子煙霧発生器空の１つの例は、吸入器である。吸入投与用の適切な処方物には、吸入器で送達させるか鼻吸入様式で鼻腔に取り込ませることができる粉砕粉末が含まれる。吸入器では、粉末（例えば、本明細書中に記載の治療の実施に有効な量）を、典型的には、吸入時にインサイツで穴をあけて開封するか又は手動で操作するポンプによってデバイスを介して引き込まれた空気によって粉末が送達されるゼラチン又はプラスチック製のカプセル又はカートリッジに封入する。煙霧発生器で使用される粉末は、有効成分のみ又は有効成分、適切な粉末希釈剤（ラクトースなど）、及び最適な界面活性剤を含む粉末ブレンドのいずれかからなる。有効成分は、典型的には、処方物の０．１〜１００ｗ／ｗ含まれる。例としての煙霧発生器の第２の型は、定量吸入器を含む。定量吸入器は、加圧エアゾールディスペンサーであり、典型的には、液化噴霧剤中に有効成分の懸濁液又は溶液処方物を含む。使用中、これらのデバイスは、有効成分を含む細かい粒子スプレーを得るために典型的には１０〜１５０又は２００μｌの計量体積を送達するように適合させたバルブを介して処方物を放出する。適切な噴霧剤には、一定のクロロフルオロカーボン化合物（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、及びその混合物）が含まれる。処方物は、さらに、１つ又は複数の共溶媒（例えば、エタノール）界面活性剤（オレイン酸又はソルビタントリオレエート）、抗酸化剤、及び適切な香料を含む。
【００６１】
微粉末化活性剤の呼吸用又は非呼吸用乾燥粒子を含む組成物を、乳鉢及び乳棒での乾燥活性剤の粉砕及び微粉末化組成物の４００メッシュの篩の通過による大きな塊の粉砕又は分離によって調製することができる。
【００６２】
粒子活性剤組成物は、任意選択的に、エアゾールの形成を促進するために使用する分散剤を含むことができる。適切な分散剤は、任意の適切な比（例えば、１：１の重量比）で活性剤とブレンドすることができるラクトースである。
【００６３】
７．ピラジノイルグアニジンナトリウムチャネルブロッカー及び非吸収性キャリア部分との共有結合物
上記に加えて、上記のピラジノイルグアニジンナトリウムチャネルブロッカーを、上記の非吸収性キャリア部分と結合させて、粘膜表面の水分補給に活性な化合物を得ることができる。これらの化合物のいくつかは、以下の式
【化２９】

（式中、Ｘ、Ｙ、Ｒ_２、及びＲ_３は上記のように定義され、Ｚは隣接する窒素原子に共有結合した非吸収性キャリア部分）又は薬学的に受容可能な塩を有する。このような化合物を、本質的に上記と同一の用途で上記と同一の様式で調製し、処方し、投与することができる。
【００６４】
以下の実施例は、本発明の例示のために記載し、本発明の限定と解釈すべきではない。これらの実施例では、内部標準としてテトラメチルシランを使用したＢｒｕｋｅｒ　ＷＭ−３６０分光計によってプロトンＮＭＲスペクトル（３６０ＭＨｚ）及び炭素ＮＭＲスペクトル（９０ＭＨｚ）を得た。以下の方法によるＰｅｒｋｉｎ　Ｅｌｍｅｒ　Ｓｃｉｅｓ　ＡＰＩ　１００によって液体クロマトグラフィー（ＬＣ）／質量分光法（ＭＳ）を行った。
【００６５】
方法Ａ：ＹＭＣ　Ｐｒｏ　Ｃ８カラム（５μ、１５０×４．６ｍｍ）；移動相Ａ＝水＋０．４％酢酸、Ｂ＝アセトニトリル（ＭｅＣＮ）＋０．４％酢酸；勾配：５％Ｂを１分間、８０％Ｂを７分間、その後１００％Ｂを５分間。
【００６６】
方法Ｂ：ＹＭＣ　Ｐｒｏ　Ｃ８カラム（５μ、１５０×４．６ｍｍ）；移動相Ａ＝水＋０．４％酢酸、Ｂ＝ＭｅＣＮ＋０．４％酢酸；勾配：５％Ｂを１分間、５分間で８０％Ｂに上昇させる。
【００６７】
方法Ｃ：Ｌｕｎａ　Ｃ８（２）カラム（１５０×４．６ｍｍ、５μ、検出器のλ＝３６０ｎｍ）；移動相Ａ＝水＋０．４％酢酸、Ｂ＝ＭｅＣＮ＋０．４％酢酸；勾配：５％Ｂを１分間、８０％Ｂを７分間、その後１００％Ｂを５分間。
【００６８】
以下の方法の１つによってＳｈｉｍａｄｚｕ　ＨＰＬＣ　１０ＡｖｐでＨＰＬＣ分析を行った。
【００６９】
方法Ｄ：Ｌｕｎａ　Ｃ１８（２）カラム（５μ、２５０×４．６ｍｍ、検出器のλ＝３６０ｎｍ）；勾配：Ａ＝水＋０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、Ｂ＝ＭｅＣＮ＋０．１％ＴＦＡ、ＭｅＣＮ濃度を０〜１１分間隔で１０〜６０％に増加させ、１１〜１２分で６０〜１００％にした。
【００７０】
方法Ｅ：Ｌｕｎａ　Ｃ８（２）カラム（１５０×４．６ｍｍ、検出器のλ＝３６０ｎｍ）；勾配：Ａ＝水＋０．１％ＴＦＡ、ｂ＝ＭｅＣＮ＋０．１％ＴＦＡ、Ｂの濃度をＡ／Ｂ混合物中で０〜１１分間隔で１０〜６０％に増加させ、Ｂを１１〜１２分で６０〜１００％にした。
【００７１】
以下の実施例に記載の方法によって、Ｇｉｌｓｏｎ　ＣｏｍｂｉＣｈｅｍでＨＰＬＣ分離を行った。
【００７２】
実施例１
二量体化合物の合成
スキーム１に記載のように、式Ｉの二量体化合物を、表１に記載のように合成した。１−（３，５−ジアミノ−６−クロロピラジノイル）−２−メチル−２−チオプソイド尿素ヒドロイオダイド（Ｃｒａｇｏｅらに付与された米国特許第４，２４６，４０６号に記載のように調製した中間体ＩＩ）から合成を開始する。中間体ＩＩを、Ｎ−（ベンジルオキシカルボニルオキシ）スクシンイミド及びトリエチルアミンのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）溶液で処理して、カルボベンジルオキシ（Ｃｂｚ）保護中間体ＩＩＩを得た。塩化水銀（ＩＩ）及びトリエチルアミンのＤＭＦ溶液の存在下での適切なジアミンＩＶとの処理によって、中間体ＩＩＩ・Ｃｂｚ保護二量体Ｖが形成される（Ｃｂｚ保護グアニジン調製用のＷ．Ｓｕ、Ｓｙｎｔｈ．Ｃｏｍｍ．、２６、４０７〜４１３、１９９６に報告された条件）。二量体中間体Ｖの臭化水素酸の酢酸溶液での処理により、Ｃｂｚ保護基を除去して、臭化水素酸塩としてアミロライド二量体Ｉが得られる。Ｉの臭化水素酸塩を、水性溶媒中での水酸化カリウムなどの強塩基での処理によって遊離塩基に変換することができる。次いで、遊離塩基を、適切な酸での処理によって他の塩形態（例えば、塩酸塩又は他の薬学的に受容可能な塩の形態）に変換することができる。
【００７３】
【表１】

【００７４】
【化３０】

【００７５】
実施例２〜１０
アミロライドの二量アナログの調製
実施例２
Ｎ−Ｃｂｚ−１−（３，５−ジアミノ−６−クロロピラジノイル）−２−メチル−プソイドチオ尿素（ＩＩＩ）
１−（３，５−ジアミノ−６−クロロピラジノイル）−２−メチル−２−チオプソイド尿素ヒドロイオダイド（ＩＩ、４９４ｍｇ、１．２７ｍｍｏｌ）を、無水ＤＭＦ（１０ｍＬ）とトリエチルアミン（３ｍＬ）との混合物に溶解し、ＤＭＦ（３ｍＬ）に溶解したＮ−（ベンジルオキシカルボニルオキシ）スクシンイミド（４７０ｍｇ、１．７ｍｍｏｌ）で処理した。反応混合物を、室温で一晩撹拌した。その後、反応混合物を、減圧下で濃縮し、残渣を酢酸エチル（３０ｍＬ）中に懸濁した。シリカゲル（２５ｇ）を溶液に添加し、溶媒を蒸発させて粗生成物と共に浸透したシリカゲルを取り出し、９０ｇシリカゲルカートリッジ（溶出：ヘキサン：酢酸エチル＝１：２）を使用したＥｌｕｔｉｏｎ　Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（Ｐ．Ｏ．Ｂｏｘ５１４７、Ｃｈａｒｌｏｔｔｅｓｖｉｌｌｅ、Ｖｉｒｇｉｎｉａ　２２９０５）のＦｌａｓｈＥｌｕｔｅ（登録商標）システムでのフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。淡黄色固体として、精製されたＮ−Ｃｂｚ−１−（３，５−ジアミノ−６−クロロピラジノイル）−２−メチル−プソイドチオ尿素（ＩＩＩ）（４１６ｍｇ（収率８３％））を得た。４１６ｍｇ（収率８３％）；^１Ｈ　ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ２．３３（ｓ，３Ｈ）、２．６１（ｓ，３Ｈ）、４．９９（ｓ，２Ｈ）、７．３９（ｍ，１０Ｈ）、１３．７（ｓ，１Ｈ）；ＡＰＩ　ＭＳ　ｍ／ｚ＝３９５［Ｃ_１５Ｈ_１５ＣＩＮ_６Ｏ_３Ｓ＋Ｈ］^＋；ＬＣ／ＭＳ（方法Ａ）＞９９％、ｔ_ｒ＝１０．１分。
【００７６】
実施例３
１，５−ビス［（３，５−ジアミノ−６−クロロピラジノイル）グアニジノ］−３−オキサ−ペンタンジヒドロブロミド（Ｉａ）
１，５−ジアミノ−３−オキサ−ペンタン（ＩＶａ、３０μＬ，０．３ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＦ溶液（１００μＬ）を、中間体ＩＩＩ（２２６ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）に添加し、無水ＤＭＦ（１０ｍＬ）中で撹拌した。トリエチルアミン（４８０μＬ、３．４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（１ｍＬ）及び塩化水銀（ＩＩ）（１５４ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（１００μＬ）を添加し、反応混合物を、室温で一晩撹拌した。反応混合物をシリカゲルで濾過し、濾過物を減圧下で濃縮した。残渣を、９０ｇシリカゲルカートリッジ（溶出：酢酸エチル：ヘキサン＝７：１）を使用したＥｌｕｔｉｏｎ　ＳｏｌｕｔｉｏｎのＦｌａｓｈＥｌｕｔｅ（登録商標）システムでのフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。画分をＬＣ／ＭＳ（方法Ｂ）で分析し、所望の生成物を含む画分を合わせて濃縮し、１，５−ビス［（Ｎ−Ｃｂｚ−３，５−ジアミノ−６−クロロピラジノイル）グアニジノ］−３−オキサ−ペンタン（Ｖａ、１０２ｍｇ、収率４４％）を得た。ＬＣ／ＭＳ＞９９％（方法Ｂ）；ＡＰＩ　ＭＳ　ｍ／ｚ＝７９７［Ｃ_３２Ｈ_３４Ｃｌ_２Ｎ_１４Ｏ_７＋Ｈ］^＋。
【００７７】
中間体Ｖａ（５０ｍｇ）を、３０％ＨＢｒの酢酸溶液（１０ｍＬ）に溶解し、混合物を２日間撹拌した。沈殿物を形成した場合、反応混合物の体積は減少した（４ｍＬに）。エチルエーテル（１０ｍＬ）を酢酸／生成物混合物に添加し、沈殿物を減圧濾過によって回収し、さらにエーテルで洗浄し、乾燥し、Ｌｕｎａカラム［Ｃ１８（２）、５μ、２５０×２１２．２ｍｍ；移動相は０．１％ＴＦＡを含むＭｅＣＮ／水；勾配：０〜２分間隔で５％ＭｅＣＮ、２〜１０分で５％〜４０％ＭｅＣＮ、１０〜１９分で４０％〜８０％ＭｅＣＮ、１９〜２３分で４０％〜８０％ＭｅＣＮ、２３〜２５分で８０〜１００％ＭｅＣＮ及び１００％ＭｅＣＮに増加］でのＨＰＬＣ分離によって精製した。標的化合物を含む画分を合わせ、減圧下で濃縮し、残渣を１０％ＨＢｒで再溶解し、蒸発乾燥し、ＴＨＦで洗浄した。黄色粉末として生成物Ｉａを得た。１８．９ｍｇ（Ｖからの収率４１％）；^１Ｈ　ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ_７）δ３．８０（ｍ，４Ｈ）、３．８８（ｍ，４Ｈ）、７．５１（ｂｒ　ｓ，４Ｈ）、９．５８（ｍ，２Ｈ）、１０．９７（ｓ，２Ｈ）；ＡＰＩ　ＭＳ　ｍ／ｚ＝５２９［Ｃ_１６Ｈ_２２Ｃｌ_２Ｎ_１４Ｏ_３＋Ｈ］^＋；ＨＰＬＣ（方法Ｄ）＞９９％、ｔ_ｒ＝６．７２分。
【００７８】
実施例４
１，４−ビス［（３，５−ジアミノ−６−クロロピラジノイル）グアニジノ］ブタンジヒドロブロミド（Ｉｂ）
１，４−ジアミノブタン（ＩＶｂ、２４ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＦ溶液（２３０μＬ）を、ＩＩＩ（２１３ｍｇ、０．５４ｍｍｏｌ）の無水ＤＭＦ溶液（１０ｍＬ）に添加し、その後トリエチルアミン（４８０μＬ、３．４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（１ｍＬ）及び塩化水銀（ＩＩ）（１４６ｍｇ、０．５３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（６００μＬ）を添加した。反応混合物を室温で３日間撹拌し、シリカゲルで濾過した。濾過物を減圧下で濃縮し、残渣を３０％ＨＢｒの酢酸溶液（２０ｍＬ）中に溶解し、室温で一晩撹拌した。反応混合物にエチルエーテル（１５０ｍＬ）を注いで沈殿を形成し、これを減圧濾過で単離して水（３×０．５ｍＬ）で洗浄した。固体沈殿をＬｕｎａ　Ｃ１８（２）カラム［５μ、２５０×２１．２ｍｍ；流速＝２０ｍＬ／分；移動相は０．１％ＴＦＡを含むＭｅＣＮ／水からなる；勾配：０〜２分間隔で１０％ＭｅＣＮ、２〜１０分で１０％〜４０％、１０〜１９分で４０％〜１００％ＭｅＣＮ、１９〜２３分で１００％ＭｅＣＮに増加したＭｅＣＮの濃縮、２３〜２５分で１００％〜１０％に減少したＭｅＣＮ］でのＨＰＬＣ分離で精製した。標的化合物を含む画分を合わせ、減圧下で濃縮して残渣を１０％ＨＢｒ中に再溶解し、蒸発乾燥して、エチルエーテルで洗浄して、淡黄色固体としてＩｂを得た。１９．４ｍｇ（１０．１％の収率）^１Ｈ　ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ１．６２（ｂｒ　ｓ，４Ｈ）、７．４３（ｓ，４Ｈ）、８．７７（ｂｒ　ｓ，２Ｈ）、８．８９（ｂｒ　ｓ，２Ｈ）、９．２４（ｓ，２Ｈ）、１０．４８（２，２Ｈ）；^１３Ｃ　ＮＭＲ（９０ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ２４．８、４０．４、１０８．９、１１９．５、１５３．１、１５４．２、１５５．９、及び１６５．１；ＡＰＩ　ＭＳ＝５１３［Ｃ_１６Ｈ_２２Ｃｌ_２Ｎ_１４Ｏ_３＋Ｈ］^＋；ＨＰＬＣ（方法Ｄ）＞９９％、ｔ_ｒ＝６．２６分。
【００７９】
実施例５
１，５−ビス［（３，５−ジアミノ−６−クロロピラジノイル）グアニジノ］ヘキサンジヒドロブロミド（Ｉｃ）
Ｉｂと同一の手順に従って化合物Ｉｃを調製した。Ｃｂｚ保護プソイドチオ尿素ＩＩＩ（２２６ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）及び１，６−ジアミノへキサン（ＩＶｃ、３４．９ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）をトリエチルアミン（４８０μＬ、３．４ｍｍｏｌ）及び塩化水銀（ＩＩ）（１６２．９ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）の存在下で反応させて粗中間体Ｖｃを得て、上記のように３０％ＨＢｒの酢酸溶液で処理した。粗生成物を、Ｌｕｎａ　Ｃ１８（２）カラム［５μ、２５０×２１．２ｍｍ；流速＝２０ｍＬ／分；移動相：ＭｅＣＮ／水（０．１％ＴＦＡを含む）；勾配：０〜２分間隔で１５％ＭｅＣＮ、２〜１０分で１５％〜３０％、１０〜１９分で３０％〜５０％ＭｅＣＮ、１９〜２３分で５０％〜１００％ＭｅＣＮに増加したＭｅＣＮの濃縮、２３〜２５分で１００％〜１５％に減少したＭｅＣＮ］でのＨＰＬＣ分離で精製した。標的化合物を含む画分を合わせ、減圧下で濃縮して残渣を１０％ＨＢｒ中に再溶解し、蒸発乾燥して、エチルエーテルで洗浄して、Ｉｃを得た。２８．８ｍｇ（ＩＩＩに基づいて１３．５％の収率）^１Ｈ　ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ１．３８（ｂｒ　ｓ，４Ｈ）、１．５９（ｂｒ　ｓ，４Ｈ）、３．３８（ｍ，２Ｈ）、７．４４（ｓ，４Ｈ）、８．７５（ｂｒ　ｓ，２Ｈ）、８．９０（ｂｒ　ｓ，２Ｈ）、９．１９（ｓ，２Ｈ）、及び１０．４７（ｓ，２Ｈ）；^１３Ｃ　ＮＭＲ（９０ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ２５．５、２７．５、４０．９、１０８．９、１１９．６、１５３．１、１５４．２、１５５．８、及び１６５．１；ＡＰＩ　ＭＳ　ｍ／ｚ＝５４１［Ｃ_１８Ｈ_２６Ｃｌ_２Ｎ_１４Ｏ_２＋Ｈ］^＋；ＨＰＬＣ（方法Ｄ）９５．２％、ｔ_ｒ＝７．２６分。
【００８０】
実施例６
１，３−ビス［（３，５−ジアミノ−６−クロロピラジノイル）グアニジノ］キシレンジヒドロブロミド（Ｉｄ）
Ｉｂと同一の手順に従って化合物Ｉｄを調製した。トリエチルアミン（４８０μＬ、３．４ｍｍｏｌ）及び塩化水銀（ＩＩ）（１９２ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ）をＣｂｚ保護プソイドチオ尿素ＩＩＩ（２８０ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ）及び１，３−キシレンジアミン（ＩＶｄ、５０ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（３０ｍＬ）に添加した。反応混合物を室温で４８時間撹拌し、Ｉｂと同一の手順を行い、その後上記のように粗中間体Ｖｄと３０％ＨＢｒの酢酸溶液で処理した。得られた粗生成物（黄色固体）を、メタノールで結晶化し、対称Ｃ８カラム［７μ、２００×４０ｍｍ；流速＝４０ｍＬ／分；移動相：ＭｅＣＮ／水（０．１％ＴＦＡを含む）；勾配：０〜２分間隔で５％ＭｅＣＮ、２〜１０分で５％〜２０％ＭｅＣＮ、１０〜３０分で２０％〜６０％ＭｅＣＮ、３０〜３３分で６０％〜１００％ＭｅＣＮに増加したＭｅＣＮの濃縮、濃縮物を３３〜３５分で１００％〜５％ＭｅＣＮに減少させた］でのＨＰＬＣ分離で精製した。上記のように生成物の単離及びＨＢｒでのさらなる処理により淡黄色固体として生成物Ｉｄが得られた。３１．２ｍｇ（ＩＩＩに基づいて１２．１％の収率）^１Ｈ　ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ４．６０（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ，４Ｈ）、７．４０〜７．４２（ｍ，７Ｈ）、９．０３（ｂｒ　ｓ，４Ｈ）、９．６１（ｓ，２Ｈ）、及び１０．５９（ｓ，２Ｈ）；ＡＰＩ　ＭＳ　ｍ／ｚ＝５６１［Ｃ_２０Ｈ_２２Ｃｌ_２Ｎ_１４Ｏ_２＋Ｈ］^＋；ＨＰＬＣ（方法Ｅ）９７．３％、ｔ_ｒ＝５．５分。
【００８１】
実施例７
１，５−ビス［（３，５−ジアミノ−６−クロロピラジノイル）グアニジノ］ペンタンジヒドロブロミド（Ｉｅ）
Ｉｂと同一の手順に従って化合物Ｉｅを調製した。Ｃｂｚ保護プソイドチオ尿素ＩＩＩ（２８０ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ）及び１，５−ジアミノペンタン（ＩＶｅ、３７ｍｇ、０．３５ｍｍｏｌ）を、トリエチルアミン（４８０μＬ、３．４ｍｍｏｌ）及び塩化水銀（ＩＩ）（１９２ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ）の存在下で反応させた。反応混合物を、室温で２４時間撹拌し、Ｉｂと同一の手順を行い、得られた粗中間体Ｖｅを上記のように３０％ＨＢｒの酢酸溶液で２４時間処理した。反応混合物を、エチルエーテル（２００ｍＬ）に注ぎ、濾過によって沈殿を回収し、エーテル、ＴＨＦで洗浄し１２％ＨＢｒで２回結晶化させ、黄色固体として粗Ｉｅ（１１７ｍｇ、重度８７％、ＩＩＩからの収率４７％）を得た。この物質の一部（７８ｍｇ）を１２％ＨＢｒで再結晶し、淡黄色固体としてＩｅを得た。３２ｍｇ（ＩＩＩに基づいて１２．８％の収率）^１Ｈ　ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ１．３９（ｍ，２Ｈ）、１．６１（ｍ，４Ｈ）、３．３１（ｍ，４Ｈ）、７．４４（ｂｒ　ｓ，４Ｈ）、８．７２（ｂｒ　ｓ，２Ｈ）、８．９０（ｂｒ　ｓ，２Ｈ）、９．２０（ｓ，２Ｈ）、及び１０．４９（ｓ，２Ｈ）；^１３Ｃ　ＮＭＲ（９０ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ２３．１、２７．３、４０．８、１０９．０、１１９．７、１５３．１、１５４．２、１５５．９、及び１６５．２；ＡＰＩ　ＭＳ　ｍ／ｚ＝５２７［Ｃ_１７Ｈ_２４Ｃｌ_２Ｎ_１４Ｏ_２＋Ｈ］^＋；ＨＰＬＣ（方法Ｅ）９５．３％、ｔ_ｒ＝５．７２分。
【００８２】
実施例８
１，５−ビス［（３，５−ジアミノ−６−クロロピラジノイル）グアニジノ］ペンタンジヒドロクロリド（Ｉｅ・２ＨＣｌ）
Ｉｅの結晶化由来の合わせた母液を、溶液がｐＨ＝１１に達するまで粉末ＫＯＨで処理した。形成された沈殿を減圧濾過で回収し、水で洗浄し、１０％ＨＣＬ水溶液で２回再結晶して、淡黄色固体としてＩｅ・２ＨＣｌを得た。２７．３ｍｇ（ＩＩＩに基づいて１３％の収率）；^１Ｈ　ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ１．４０（ｍ，２Ｈ）、１．６１（ｍ，４Ｈ）、３．３４（ｍ，４Ｈ）、７．４１（ｂｒ　ｓ，４Ｈ）、８．８０（ｂｒ　ｓ，２Ｈ）、８．９３（ｂｒ　ｓ，２Ｈ）、９．２９（ｓ，２Ｈ）、及び１０．５２（ｓ，２Ｈ）；^１３Ｃ　ＮＭＲ（９０ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ２３．１、２７．３、４０．８、１０９．０、１１９．７、１５３．２、１５４．２、１５５．９、及び１６５．２；ＡＰＩ　ＭＳ　ｍ／ｚ＝５２７［Ｃ_１７Ｈ_２４Ｃｌ_２Ｎ_１４Ｏ_２＋Ｈ］^＋；ＨＰＬＣ（方法Ｅ）９５．２％、ｔ_ｒ＝５．７８分。
【００８３】
実施例９
１，４−ビス［（３，５−ジアミノ−６−クロロピラジノイル）グアニジノ］キシレンジヒドロブロミド（Ｉｆ）
Ｉｂと同一の手順に従って化合物Ｉｆを調製した。Ｃｂｚ保護プソイドチオ尿素ＩＩＩ（２８０ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ）及び１，４−キシレンジアミン（ＩＶｆ、５０ｍｇ、０．３０ｍｍｏｌ）を、トリエチルアミン（４８０μＬ、３．４ｍｍｏｌ）及び塩化水銀（ＩＩ）（１９２ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ）の存在下で反応させた。反応混合物を室温で４時間撹拌し、これをシリカゲルで濾過し、減圧下で濃縮した。残渣を無水ＤＭＦ（１ｍＬ）に懸濁し、テトラブチルアンモニウムボロヒドライド（５０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（１ｍＬ）で処理し、室温で１５分間撹拌して残渣の塩化水銀（ＩＩ）を除去した。反応混合物をシリカゲルで濾過し、濃縮して残渣（ＶＦ）を得て、３０％ＨＢｒの酢酸溶液（２０ｍＬ）で室温で７日間及び４５℃で１日間処理した。反応混合物をエーテル（２００ｍＬ）に注ぎ、沈殿した固体を濾過によって回収し、エーテル、ＴＨＦで洗浄し、メタノールで２回結晶化して、淡黄色固体を得た。７４ｍｇ（ＩＩＩに基づいて３１％の収率）；^１Ｈ　ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ４．６０（ｄ、Ｊ＝４．３　Ｈｚ，４Ｈ）、７．４５（ｓ，４Ｈ）、８．９１（ｂｒ　ｓ，２Ｈ）、８．９９（ｂｒ　ｓ，２Ｈ）、９．６０（ｓ，２Ｈ）、１０．５６（ｓ，２Ｈ）；^１３Ｃ　ＮＭＲ（９０ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ４４．１、１０９．１、１１９．７、１２８．１、１３５．４、１５３．３、１５４．３、１５６．０、及び１６５．３；ＡＰＩ　ＭＳ　ｍ／ｚ＝５６１［Ｃ_２０Ｈ_２２Ｃｌ_２Ｎ_１４Ｏ_２＋Ｈ］^＋；ＨＰＬＣ（方法Ｅ）９５．７％、ｔ_ｒ＝６．３１分。
【００８４】
実施例１０
１，８−ビス［（３，５−ジアミノ−６−クロロピラジノイル）グアニジノ］−３，６−ジオキサ−オクタンジヒドロクロリド（Ｉｇ）
２，２’−（エチレンジオキシ）ビス（エチルアミン）（ＩＶｇ、４５ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＦ溶液（１００μＬをＩＩＩ（２４０ｍｇ、０．７ｍｍｏｌ）の乾燥ＤＭＦ溶液（３０ｍＬ）に添加した）、その後、トリエチルアミン（４８０μＬ、３．４ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（１ｍＬ）及び塩化水銀（ＩＩ）（１６５ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（６００μＬ）を添加した。反応混合物を室温で１６時間撹拌し、さらなるＩＩＩ（２０ｍｇ）を添加し、反応混合物を４０℃でさらに８時間撹拌した。反応混合物を室温まで冷却し、室温で１５分間撹拌しながらテトラブチルアンモニウムボロハイドライド（５０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（１ｍＬ）で処理した。反応混合物を、シリカゲルで濾過し、減圧下で濃縮して固体残渣を得た。これを、３０％ＨＢｒの酢酸溶液（２０ｍＬ）に溶解し、４０℃で８時間撹拌し、エーテル（２００ｍＬ）に注いだ。得られた沈殿を濾過によって回収し、エーテルで洗浄した。固体を水（２５ｍＬ）に溶解し、溶液を濾過し、濾過物を減圧下で濃縮した。得られた残渣を最小限の１０％ＨＢｒに溶解し、粉末ＮａＯＨを添加してｐＨ＝１１にした。形成された沈殿を濾過によって回収し、水で洗浄し、乾燥して、遊離塩基（９８ｍｇ、収率５６％）を得た。この物質の一部（５８ｍｇ）を１０％ＨＣｌに溶解し、減圧下で濃縮した。残渣をエーテルで洗浄し、乾燥して淡黄色固体としてＩｇを得た。６４ｍｇ（ＩＩＩに基づいて３２％の収率）；^１Ｈ　ＮＭＲ（３６０ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ３．５６（ｂｒ　ｓ，４Ｈ）、３．６３（ｂｒ　ｓ，８Ｈ）、７．４（ｂｒ　ｓ，４Ｈ）、９．０９（ｂｒ　ｓ，４Ｈ）、９．５２（ｂｒ　ｓ，２Ｈ）、及び１０．７０（ｓ，２Ｈ）；^１３Ｃ　ＮＭＲ（９０ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ_６）δ４１．１、６７．７、６９．５、１０８．９、１１９．７、１５３．３、１５４．２、１５５．８、及び１６５．３；ＡＰＩ　ＭＳ　ｍ／ｚ＝５７３［Ｃ_１８Ｈ_２６Ｃｌ_２Ｎ_１４Ｏ_４＋Ｈ］^＋；ＨＰＬＣ（方法Ｃ）９７．６％、ｔ_ｒ＝４．２３分。
【００８５】
実施例１１
二量体化合物の効力
２つの薬理学的アッセイを使用して、本明細書中に記載の二量体の相対的効力を同定した。第１のアッセイで、Ｘｅｎｏｐｕｓ卵母細胞中の組換え先端膜上皮Ｎａ^＋チャネル（すなわち「ｒＥＮａＣ」）のα、β、γ発現を試験した。３つ全てのＥＮａＣサブユニットのｃＲＮＡを従来のマイクロインジェクション技術によって卵母細胞に注射した。２〜３日後、２つの電極電圧固定プロトコールを使用して、ＥＮａＣ媒介Ｎａ^＋電流を測定した。試験化合物を、当該分野で公知の蓄積薬物のさらなるプロトコールを使用してアッセイした。１つの化合物に対して１つの卵母細胞を使用した。試験化合物を、注射された卵の同一のバッチ中でのアミロライド及びベンザミルと用量−効果関係を比較した。
【００８６】
第２の保護アッセイでは、気道上皮単層を、Ｕｓｓｉｎｇチャンバーにおいた。主要なアッセイは、気道上皮Ｎａ^＋電流の管腔薬物試験からなる。新たに摘出したヒト又はイヌ気道を、ＳＮＡＰウェルインサート（ＣｏＳｔａｒ）に播種し、空気−液体（ＡＬＩ）条件下、ホルモン限定培地中で培養した。電圧固定条件下でＵｓｓｉｎｇチャンバー中のクレブス重炭酸リンガー液（ＫＢＲ）中に浸漬しながら、細胞をＮＡ^＋輸送活性について評価した。半対数用量添加プロトコールを使用して、全ての試験薬物添加物を粘膜浴に合わせた。全ての薬物を、１０^−２Ｍ薬物のＤＭＳＯ溶液の標準的ストックとした。典型的には、８調製物を平均して行い、通常、試験あたり２調製物を使用してアミロライド及びベンザミルをアッセイした。最大濃度（１０^−４Ｍ）を投与した後、管腔浴を新鮮なＫＢＲ溶液に３回交換し、これを「洗い流し」効果と定義する。電圧固定法由来の全てのデータを、コンピュータインターフェースを介して回収し、オフラインで分析した。
【００８７】
全ての化合物についての用量−効果関係を考察し、Ｐｒｉｓｍ　３．０プログラムによって分析した。ＩＣ_５０（最大有効濃度）及び洗い流し％を計算し、基準化合物としてのアミロライド及びベンザミルと比較した。
【００８８】
実施例１３
吸収アッセイ
本発明で有用な化合物は、高い有効性と、粘膜表面に吸収しないか吸収が少ないという特徴を有することが好ましい。２つの薬理学的アッセイを使用して、表１に例示した化合物の吸収を試験した。
【００８９】
第１のアッセイを、可逆性アッセイという。経験的に、洗い出し％は細胞取り込みに相関する。可逆性は又は効力の関数であるので、この関係は複雑である。しかし、可逆性は迅速で簡単なスクリーニングである。このアッセイなどによって得られた情報の例を、図１に示す。ベンザミルを基準としたこのアッセイで最大の「可逆性を示す」化合物はまた、以下に記載の共焦点アッセイで最も吸収が少ない。
【００９０】
第２のアッセイは、アミロライド同属種取り込みの共焦点顕微鏡法（ＵＶ範囲での実質的に全てのアミロライド様分子の蛍光）を利用する。これらの分子のこの特性を使用して、ｘ−ｚ強焦点顕微鏡（Ｌｅｉｃａ）によって細胞取り込みを直接測定した。このアッセイによって得られた結果の例を、図２に示す。図２に示した実験では、等モル濃度のアミロライド及び急速（ベンザミル）及び非常に急速（フェナミル）な取り込みを示す化合物を、共焦点顕微鏡のステージ上の気道培養物の先端表面に置いた。定量及びプロットした細胞区画中に蓄積された蛍光の時間及び大きさを示す連続的ｘ−ｚ画像を得た。次いで、アミロイドよりも急速でなく吸収された化合物についての試験にアッセイを最適化した。上記の一連の合成由来の２つの化合物（ＣＦ−５０９及びＣＦ−５１９）はこの基準を満たすようである。アミロライドと同等又はそれを超える能力を有する化合物を、上記の洗い出しについて試験した。しかし、洗い出しは効力及び細胞取り込みの両方に影響を受け得るので、時間の関数としての細胞区画中の蛍光の蓄積率（書く化合物の特定の蛍光／放出スペクトルを示す）もまた日常的に測定した。次いで、各試験化合物の相対細胞取り込みを効力試験に関する基準化合物（アミロライド、ベンザミル）と比較した。
【００９１】
上記は本発明の例示であり、本発明を限定すると解釈されない。本発明を、以下の特許請求の範囲に定義するが、特許請求の範囲の等価物は本発明に含まれる。
【図面の簡単な説明】
【図１】
洗い流しが細胞取り込みに相関する場合の、本発明の化合物の先端洗い流しの効果を示すグラフである。これは可逆性の程度を示し、化合物ＣＦ−５１９は完全に可逆性である。
【図２】
培養気道上皮への薬物取り込みの共焦点顕微鏡アッセイの例を示す図である。このアッセイでは、化合物（１０^−４Ｍ）を、気道表面上に配置し、細胞由来の蛍光をｘ−ｚ走査型共焦点顕微鏡によって回収した。左側に示した画像は、アミロイド、ベンザミル、及びフェナミルへの暴露から２０分後の細胞中の蛍光を示す。薬物取り込み量を蛍光単位として右側にグラフで示す。

Claims (17)

1. 式　Ｐ_１−Ｌ−Ｐ_２
   （式中、Ｐ_１はピラジノイルグアニジンナトリウムチャネルブロッカーであり、Ｌは架橋基であり、Ｐ_２はピラジノイルグアニジンナトリウムチャネルブロッカー及びＰ２Ｙ_２レセプターアゴニストからなる群から選択される。）の化合物又はその薬学的に受容可能な塩。
2. 上記Ｐ_２が、ピラジノイルグアニジンナトリウムチャネルブロッカーである請求項１に記載の化合物。
3. 上記Ｐ_１とＰ_２が、それぞれ独立して式
   

   

   （式中、Ｘはクロロ、ブロモ、ヨード、低級アルキル、３〜７個の炭素を有する低級シクロアルキル、フェニル、クロロフェニル、ブロモフェニル、Ｚ−チオ及びＺ−スルホニル（式中、Ｚは低級アルキル、オキシアルキル、及びフェニル−低級アルキルからなる群から選択される。）からなる群から選択され、
   Ｙはヒドロキシル、メルカプト、低級アルキルオキシ、低級アルキルチオ、クロロ、低級アルキル、３〜６個の炭素を有する低級シクロアルキル、フェニル、及び下記構造
   

   

   （式中、Ｒは水素、アミノ、アミジノ、３〜６個の炭素原子を有する低級シクロアルキル、低級アルキル、ヒドロキシ低級アルキル、ハロ低級アルキル、環中に３〜６個の炭素を有する低級（シクロアルキルアルキル）、フェニル低級アルキル、低級（アルキルアミノアルキル）、低級アルケニル、フェニル、ハロフェニル、及び低級アルキルフェニルからなる群から選択され、Ｒ_１は水素、低級アルキル、低級アルケニルからなる群から選択され、さらに、ＲとＲ_１が連結して低級アルキレンを形成することができる。）
   を有するアミノからなる群から選択され、
   Ｒ_２は水素及び低級アルキルからなる群から選択され、
   Ｒ_３及びＲ_４は独立して水素、低級アルキル、ヒドロキシ低級アルキル、フェニル低級アルキル、（ハロフェニル）低級アルキル、低級（アルキルフェニルアルキル）、（低級アルコキシフェニル）低級アルキル、ナフチル低級アルキル、（オクタヒドロ−１−アゾシニル）低級アルキル、ピリジル低級アルキル、及び結合している窒素原子と連結して１−ピロリジニル、ピペリジノ、モルホリノ、及び４−低級アルキルピペラジニル基を生成する低級アルキルラジカル、ならびにフェニルからなる群から選択され、
   Ｌは低級アルキル、ヒドロキシ低級アルキル、フェニル低級アルキル、（ハロフェニル）低級アルキル、低級（アルキルフェニルアルキル）、（低級アルコキシフェニル）低級アルキル、ナフチル低級アルキル、（オクタヒドロ−１−アゾシニル）低級アルキル、ピリジル低級アルキル、及び結合している窒素原子と連結して１−ピロリジニル、ピペリジノ、モルホリノ、及び４−低級アルキルピペラジニル基を生成する低級アルキルラジカル、ならびにフェニルからなる群から選択される。）
   の化合物からなる群から選択される請求項２に記載の化合物。
4. 上記Ｐ_２が、ヌクレオチド又はジヌクレオチドＰ２Ｙ_２レセプターアゴニストである請求項１に記載の化合物。
5. 上記Ｐ_２が、式
   

   

   （式中、Ａ及びＢはそれぞれ独立してプリン又はピリミジン塩基であり、Ｒ_１及びＲ_２はそれぞれ独立してＨ又はＯＨからなる群から選択され、ｎは１〜６である。）を有するジヌクレオチドであり、該ジヌクレオチドはＡ若しくはＢへの共有結合又はＡとＢが連結されたリボース若しくはデオキシリボース環への共有結合によってＬに共有結合している請求項４に記載の化合物。
6. 上記化合物が、下記構造
   

   

   を有する請求項１の化合物。
7. 上記化合物が、下記構造
   

   

   を有する請求項１の化合物。
8. 上記Ｐ_１が、アミロライド、ベンザミル、及びフェナミルからなる群から選択される請求項１の化合物。
9. 薬学的に受容可能なキャリア溶液中に請求項１に記載の化合物を含む薬学的処方物。
10. 請求項１に記載の化合物を粘膜表面の治療をするのに有効な量で被験体に投与するステップを包む、被験体の粘膜表面の治療法。
11. 上記粘膜表面が、気道粘膜表面である請求項１０に記載の方法。
12. 上記粘膜表面が、胃腸粘膜表面である請求項１０に記載の方法。
13. 粘膜表面の治療をするのに有効な量でピラジノイルグアニジンナトリウムチャネルブロッカーと非吸収性キャリア部分の共有結合物を含む化合物を被験体に投与するステップを含む、被験体の粘膜表面の治療法。
14. 上記粘膜表面が、鼻粘膜表面ではないという条件付きである請求項１３に記載の方法。
15. 上記粘膜表面が、気道粘膜表面である請求項１３に記載の方法。
16. 上記粘膜表面が胃腸粘膜表面である請求項１３に記載の方法。
17. 上記結合物が、式
    

    

    （式中、Ｘはクロロ、ブロモ、ヨード、低級アルキル、３〜７個の炭素を有する低級シクロアルキル、フェニル、クロロフェニル、ブロモフェニル、Ｚ’−チオ及びＺ’−スルホニル（式中、Ｚ’は低級アルキル及びフェニル低級アルキルからなる群から選択される。）からなる群から選択され、
    Ｙはヒドロキシル、メルカプト、低級アルキルオキシ、低級アルキルチオ、クロロ、低級アルキル、３〜６個の炭素を有する低級シクロアルキル、フェニル、及び下記構造
    

    

    （式中、Ｒは水素、アミノ、アミジノ、３〜６個の炭素原子を有する低級シクロアルキル、低級アルキル、ヒドロキシ低級アルキル、ハロ低級アルキル、環中に３〜６個の炭素を有する低級（シクロアルキルアルキル）、フェニル低級アルキル、低級（アルキルアミノアルキル）、低級アルケニル、フェニル、ハロフェニル、及び低級アルキルフェニルからなる群から選択され、
    Ｒ_１は水素、低級アルキル、低級アルケニルからなる群から選択され、さらに、
    ＲとＲ_１が連結して低級アルキレンを形成することができる）を有するアミノからなる群から選択され、
    Ｒ_２は水素及び低級アルキルからなる群から選択され、
    Ｒ_３は水素、低級アルキル、ヒドロキシ低級アルキル、フェニル低級アルキル、（ハロフェニル）低級アルキル、低級（アルキルフェニルアルキル）、（低級アルコキシフェニル）低級アルキル、ナフチル低級アルキル、（オクタヒドロ−１−アゾシニル）低級アルキル、ピリジル低級アルキル、及び結合している窒素原子と連結して１−ピロリジニル、ピペリジノ、モルホリノ、及び４−低級アルキルピペラジニル基を生成する低級アルキルラジカル、ならびにフェニルからなる群から選択され、
    Ｌは低級アルキル、ヒドロキシ低級アルキル、フェニル低級アルキル、（ハロフェニル）低級アルキル、低級（アルキルフェニルアルキル）、（低級アルコキシフェニル）低級アルキル、ナフチル低級アルキル、（オクタヒドロ−１−アゾシニル）低級アルキル、ピリジル低級アルキル、及び結合している窒素原子と連結して１−ピロリジニル、ピペリジノ、モルホリノ、及び４−低級アルキルピペラジニル基を生成する低級アルキルラジカル、ならびにフェニルからなる群から選択され、
    Ｚは隣接する窒素原子に共有結合した非吸収性キャリア部分である。）
    又はその薬学的に受容可能な塩を有する請求項１３に記載の方法。

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