JP2004506683A - α−ジフルオロメチルオルニチン（ＤＦＭＯ）は、ヒト前立腺におけるポリアミンレベルを抑制する - Google Patents
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Abstract
本発明は、患者において前立腺癌を処置および／または阻害するための方法を提供し、この方法は、過形成細胞により生成されるポリアミンの量を安定化させるかまたは減少させるに十分な量および期間、α−ジフルオロメチルオルニチン（ＤＦＭＯ）を投与する工程を包含し、ここで、このポリアミンは、スペルミン、スペルミジン、またはスペルミンとスペルミジンとの組み合わせである。本出願において、投与の方法、調薬方法、および併用療法が、記載される。
Description
【０００１】
（発明の背景）
本出願は、米国仮特許出願第６０／２２７，７１４号（２０００年８月２４日出願）に対する優先権を主張し、この出願の内容は、本明細書中で参考として援用される。米国政府は、公衆衛生局からの助成金番号Ｐ３０ＣＡ６２２０３Ｕ１９および国立癌研究所、国立衛生研究所、厚生省からの助成金番号ＣＡ８１８８６に従って、本発明における権利を所有し得る。
【０００２】
（Ｉ．発明の分野）
本発明は、一般に、癌治療の分野に関する。より詳細には、本発明は、ポリアミンの生合成経路の不可逆的な酵素インヒビターであるＤＦＭＯ（α−ジフルオロメチルオルニチン）の、前立腺癌の治療における使用に関する。
【０００３】
（ＩＩ．関連技術の説明）
迅速に増殖する細胞の成長を伴う疾患状態は、世界中に広まり、有意な割合の人口に影響していることから、これらは、集中的な研究努力のテーマとなってきている。残念ながら、かかる努力にも関わらず、かつ、いくつかの成功にも関わらず、これらの疾患の全般の制御は、満足できるものではない。しかし、近年、かかる疾患状態の処置のための有望な治療方法が、細胞成長に必要なポリアミンの生合成に関与する酵素の不可逆的なインヒビターを利用することにより開発されている。特に有用な酵素インヒビターは、オルニチンデカルボキシラーゼ（ＯＤＣ）のインビボでの不可逆的阻害を生じるものであり、この酵素は、オルニチンのプトレシンへの脱炭酸を触媒する。
【０００４】
α−ジフルオロメチルオルニチン（ＤＦＭＯ）は、オルニチンデカルボキシラーゼ（ＯＤＣ）の不可逆的インヒビターであり、プトレシンおよびその誘導体スペルミジンの細胞内濃度の減少を引き起こす（Ｐｅｇｇ、１９８８）。スペルミジン由来のスペルミンのレベルは、酵素阻害によって著しくは影響されない。ＤＦＭＯは、最初、抗癌治療用途のために合成されたが、おそらく悪性脳腫瘍の治療に中程度の活性を示すこと（Ｌｅｖｉｎら、１９８７）を除き、ヒトの癌に対する化学療法試験において活性な細胞傷害性の薬剤であることが見出されなかった（ＭｃＣａｎｎおよびＰｅｇｇ、１９９２）。一般に、この化合物は、聴覚障害の有意な例外を除いて、無毒性であり、薬物治療を中止した後には可逆的であった（Ｍｅｙｓｋｅｎｓら、１９８６）。聴覚障害の発症は、総蓄積用量に関連し得る（Ｃｒｏｇｈａｎら、１９９１）。
【０００５】
実験動物モデルでは、ＤＦＭＯが、結腸の上皮癌を含む、発癌性物質誘発性の多くの器官の上皮癌の予防に特に活性のある、発癌の強力なインヒビターであることが見出されている（Ｗｅｅｋｓら、１９８２、Ｔｈｏｍｐｓｏｎら、１９８５、Ｎｏｗｅｌｓら、１９８６、Ｎｉｇｒｏら、１９８７）。ＤＦＭＯは、動物における腫瘍促進段階の後期で作用するが、それがポリープおよび癌の発達を阻害する正確な機構は知られていない。オルニチンデカルボキシラーゼおよびポリアミンによる、細胞のトランスフォーメーション、浸潤、および血管形成への作用が、報告されている（Ａｕｖｉｎｅｎ， １９９７）。例えば、ＯＤＣの過剰発現は、細胞のトランスフォーメーションおよび浸潤を増強する（Ｋｕｂｏｔａら、１９９７）。
【０００６】
この現象を説明する分子機構は、マイトジェン活性化プロテイン（ＭＡＰ）キナーゼ活性の活性化、マトリクスメタロプロテイナーゼの分泌（Ｗａｌｌｏｎら、１９９４； Ｋｕｂｏｔａら、１９９７）、および癌遺伝子（ｃ−ｍｙｃおよびｒａｓ）を有する経路（Ｍｅｙｓｋｅｎｓら、１９９９； Ｃｌｉｆｆｏｒｄら、１９９５）を含む。ポリアミンの潜在的な細胞相互作用の包括的な概説が、最近提示されている（Ａｕｖｉｎｅｎ、１９９７）。
【０００７】
前立腺癌は、米国男性において最も一般的に診断される悪性疾患であり、米国において男性の癌死亡の、上から２番目の原因である（Ｆｅｕｅｒら、１９９９）。前立腺癌の発生率は年齢とともに上昇するので、前立腺癌と診断されることになる男性の数は、医療および全般的な健康が向上するにつれて、増加する。このように、前立腺癌の予防は、国民的な医療問題である。前立腺癌の予防のための現在のストラテジーは、前立腺中のホルモン環境の変化（Ｐｒｏｓｃａｒ）、あるいは抗酸化剤（セレンおよびビタミンＥ）またはレチノイドの食物への添加に焦点が当てられてきた。別のアプローチは、前立腺中のポリアミンレベルを抑制することであり、これは、ポリアミン経路の第１の酵素であるオルニチンデカルボキシラーゼ（ＯＤＣ）がヒト前立腺癌組織中で過剰発現されることを示す研究により提案される手法である（Ｍｏｈａｎら、１９９９）。
【０００８】
ＯＤＣ活性およびポリアミン含有量は、他の哺乳動物組織と比較して、前立腺組織においてより高い（Ｄｕｎｚｅｎｄｏｒｆｅｒ、１９７８）。１９７９年に、Ｄａｎｚｉｎらは、ラットをＤＦＭＯで２週間処置し、４〜６週間以内でベースライン活性の１０％までの前立腺ＯＤＣの最大の阻害を見出し、研究の間中、ベースライン活性の５０％までの抑制を持続した。前立腺は、精巣、胸腺、脾臓または肝臓よりもＤＦＭＯに対してより感受性があり、前立腺および胸腺は、器官重量の減少を示した。Ｄａｎｚｉｎら（１９７９）はまた、去勢後の外因性のテストステロンを用いる前立腺の再成長に対するＤＦＭＯの効果に注目した。去勢後、前立腺は、ポリアミン含有量と同様に、サイズにおいて減少した。アンドロゲンの補充により、前立腺の萎縮は即座に反転し、ポリアミン含有量は上昇した。ＤＦＭＯは、アンドロゲン処置の間、前立腺（腹側葉）の重量増を顕著に遅らせた。
【０００９】
Ｈｅｓｔｏｎら（１９８２）は、インビトロおよびインビボ（ラットの側腹部中に腫瘍細胞を接種して粗大な腫瘍を産生した後）での、前立腺癌細胞系に対するＤＦＭＯの抑制効果を測定した。インビトロでのＯＤＣ活性は、２つのアンドロゲン非依存性前立腺癌細胞株において最も高く、次いで、腹側葉、ゆっくりと成長する癌細胞株、そして背側葉において高かった。ＤＦＭＯで腹腔的に１８日間処置したインビボでの前立腺腫瘍を有する動物は、全身毒性を伴わずに、非処置コントロールの半分の湿重量を有する腫瘍を発達させた。別の研究では、総ポリアミン抑制（無ポリアミン食、ＤＦＭＯ、ポリアミンオキシダーゼの第２のインヒビターおよび腸管洗浄から構成される処置）が、ラットの側腹部中に移植したＭＡＴ−ＬｙＬｕ前立腺癌細胞株の成長について評価された（Ｍｏｖｌｉｎｏｕｘら、１９９１）。ヒト被験者については、前立腺癌を有する患者のＰＳＡ力価の減少を導くポリアミン欠乏についての報告が、Ｋｅｒｇｏｚｉｅｎ（１９９６）によって解説された。
【００１０】
１９９９年に、Ｍｅｓｓｉｎｇらは、ヒト前立腺ポリアミンレベルに対する２週間の経口ＤＦＭＯの結果を発表した。彼らの研究では、無作為に選択した男性に、根治的な前立腺切除または膀胱前立腺全摘出の前に、２週間のＤＦＭＯ（０．５ｇｍ／ｍ２）（ｎ＝１５）またはプラシーボ（ｎ＝１０）のいずれかを与えた。外科手術の時点で、ポリアミン分析用の組織を、エキソビボコア生検を用いて、前立腺の外科的除去後に採取した。触診可能な場合、疑われしい前立腺癌小節を、サンプリングした。採取した前立腺コアの数は、１被験者あたり２〜６個の範囲であったが、癌の領域をサンプリングしようとする研究者らの努力に反して、これらのコアの大半は、癌を示さなかった。ＯＤＣ活性およびポリアミンレベルを、これらのコアにおいて測定した。加えて、各被験者の血漿テストステロン、血清ＰＳＡ、および前立腺酸ホスファターゼレベル、ならびに手掌上腕皮膚パンチ生検からのＯＤＣ活性を、測定した。１４人の男性が、毒性を伴わずに、２週間のＤＦＭＯを完了した。平均プトレシンレベルは、ＤＦＭＯ処置群では統計的により低かった（１．４３対１．９５、ｐ＝０．０３）。有意なことに、彼らの研究で測定されたＯＤＣ活性、スペルミジンレベルおよびスペルミンレベルにおいて、差異は存在しなかった（Ｍｅｓｓｉｎｇら、１９９９）。
【００１１】
これらの結果を鑑みると、ＤＦＭＯが、前立腺癌を有する患者（特に、スペルミンレベルに対するいかなる効果も伴わない患者）の処置に有用であることは、不明確なままである。
【００１２】
（発明の要旨）
従って、本発明は、ヒト前立腺細胞中のスペルミンレベルおよび／またはスペルミジンレベルを減少させる方法を意図し、この方法は、上記細胞中の上記レベルを減少させるのに十分な量および期間、ＤＦＭＯを上記細胞中に投与する工程を包含する。前立腺は、他の器官と比較して、高レベルのポリアミンを有する。前立腺はまた、本発明の方法を用いたＤＦＭＯに対する曝露時のスペルミンの量および減少％において、他の器官と異なる。
【００１３】
好ましい実施形態では、ヒト前立腺細胞は、癌細胞、非癌性細胞または良性過形成細胞である。上記細胞は、ＤＦＭＯ投与中の患者中にあってもよく、用いられるＤＦＭＯは、Ｌ−鏡像異性体を実質的に含まないものか、または、Ｄ−異性体とＬ−異性体との５０／５０ラセミ体混合物と比べて、Ｄ−鏡像異性体が富化されていてもよい。
【００１４】
好ましい実施形態では、ＤＦＭＯは、約３、４、５、６、８、１０または１２週間投与される。ＤＦＭＯの投与期間は、これよりも長くてよく、２、３、４、５、６、８、１０ヶ月の間または１２ヶ月を超える間、継続されてもよい。ＤＦＭＯ投与期間は、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０、４０または５０年間であってもよく、患者の一生にわたってもよい。好ましい実施形態では、ＤＦＭＯの投与量は、約０．１〜２．０ｇｍ／ｍ２／日、またはより好ましくは、約０．５ｇｍ／ｍ２／日である。ＤＦＭＯ量は、約０．１〜２ｇ／日、またはより好ましくは、０．２５〜１．５ｇ／日、またはさらにより好ましくは、０．５〜１．０ｇ／日であり得る。ＤＦＭＯは、任意の一般的な経路を介して投与されてもよい。好ましい実施形態では、ＤＦＭＯは、経口的に投与される。
【００１５】
好ましい実施形態では、スペルミンレベルが、減少される。この減少は、好ましくは、上記処置の前の上記細胞中のスペルミジンレベルと比較して、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％または８０％である。好ましい実施形態では、スペルミジンレベルが、減少される。この減少は、好ましくは、上記処置の前の上記細胞中のスペルミジンレベルと比較して、約３０％、４５％、５５％、６５％、７５％、８５％、９５％または９９％である。別の好ましい実施形態では、上記細胞のスペルミジン／スペルミン比が、減少される。さらに別の実施形態では、プトレシンレベルが、約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９９％減少される。
【００１６】
本発明はまた、前立腺癌に罹患しているヒト被験者を処置する方法に関し、この方法は、上記被験者の前立腺細胞中のスペルミンレベル、スペルミジンレベル、またはスペルミジン／スペルミン比を減少させるのに十分な量および期間、被験者にＤＦＭＯを投与する工程を包含する。
【００１７】
なお別の実施形態は、第２の治療を包含し、この第２の治療は、ジヒドロキシテストステロンを減少させること、食餌抗酸化剤（例えば、セレン、ビタミンＥまたはその両方）を投与すること、レチノイドを投与すること、前立腺切除、低ポリアミン食、ポリアミンオキシダーゼを阻害すること、放射線療法またはホルモン療法（例えば、ルペロン（ｌｕｐｅｒｏｎ）、ゾルデックス（ｚｏｌｅｄｅｘ）、フルタミドまたはカサデックス（ｃａｓａｄｅｘ））を、単独でか、または組み合わせて、包含する。
【００１８】
さらなる実施形態では、本発明に従うＤＦＭＯ治療の効果は、診断方法によって前立腺癌の処置において決定され得、この診断方法は、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）の分析、前立腺生検、直腸検診、またはＰＳＡの分析および直腸検診を包含するが、これらに限定されない。
【００１９】
他の実施形態は、危険性のある被験者において前立腺癌の発達を阻害するための方法、原発性前立腺癌を有する被験者における前立腺癌の転移を阻害するための方法、ステージ１またはステージ２の前立腺癌を有する被験者における前立腺癌の進行を阻害するための方法、切除不可能な前立腺癌腫瘍を切除可能にするための方法、および前立腺癌腫瘍の成長を阻害するための方法を包含する。これらの方法は、ヒト被験者の前立腺細胞中のスペルミンレベルおよび／またはスペルミジンレベルを減少するのに十分な量および期間、その被験者にＤＦＭＯを投与する工程を包含する。
【００２０】
良性前立腺過形成に罹患しているヒト被験者において良性前立腺過形成を処置する方法もまた、本発明の範囲内にあり、この方法は、その過形成細胞により生成されるポリアミンの量を安定化または減少させるのに十分な量および期間、その被験体にＤＦＭＯを投与する工程を包含し、ここで、上記ポリアミンは、スペルミン、スペルミジン、またはスペルミンとスペルミジンとの組み合わせである。過形成細胞により生成される前立腺特異抗原（ＰＳＡ）のレベルもまた、ＤＦＭＯでの処置において安定化または減少され得る。
【００２１】
本発明のさらなる実施形態は、良性前立腺過形成に罹患しているヒト被験者において良性前立腺過形成を処置するための方法を包含し、この方法は、その過形成細胞によって生成されるポリアミン（スペルミンまたはスペルミジン）レベルの減少または安定化によって測定されるような、治療有効量のＤＦＭＯを、十分な期間、以下から選択される治療有効量の第２の治療薬剤と一緒に、投与する工程を包含する：α−１アドレナリン作用性レセプター遮断薬（例えば、テラゾシン、ドキサゾシン、プラゾシン、インドラミン、タムスロシン（ｔａｍｓｕｌｏｓｉｎ）、プラジシン（ｐｒａｚｉｃｉｎ）およびアルフゾシン（ａｌｆｕｚｏｓｉｎ））；５−α−レダクターゼ酵素遮断薬（例えば、フィナステリド（ｆｉｎａｓｔｅｒｉｄｅ））；アザステロイド誘導体；α−１アドレナリン作用性レセプター遮断薬と５−α−レダクターゼ酵素遮断薬との組み合わせ；カリウムチャネル開放薬（ｏｐｅｎｅｒ）（例えば、ミノキシジル）；またはレチノイン酸誘導体。好ましい実施形態において、第２の治療薬剤は、ノコギリパルメット抽出物である。
【００２２】
（例示的な実施形態の説明）
（Ｉ．本発明）
本発明は、ヒト前立腺中のポリアミンレベルを減少するための方法としての、ＤＦＭＯ（α−ジフルオロメチルオルニチン）の使用を記載する。ＤＦＭＯは、２８日間経口的にＤＦＭＯが与えられた男性被験者の前立腺中のプトレシン、スペルミジン（Ｓｐｄ）およびスペルミン（Ｓｐｍ）のレベルを有意に減少させ得る。従って、ＤＦＭＯは、前立腺癌の治療における治療用途として利用され得る。驚くべきことに、ＤＦＭＯの投与に伴う前立腺中のスペルミンレベルの量および減少％は、ＤＦＭＯが、このような減少を引き起こすのに十分な量および期間、投与される場合、ＤＦＭＯ治療を受けている患者の他の組織中におけるそれらよりも高い。
【００２３】
（ＩＩ．ＤＦＭＯ（α−ジフルオロメチルオルニチン））
多くの高度増殖型癌は、血中および尿中のポリアミン（プトレシン、スペルミジンおよびスペルミン）レベルの上昇に関連している。研究により、これは、律速酵素オルニチンデカルボキシラーゼ（ＯＤＣ）によるポリアミン合成の増大に関連することが示されている。本出願において特に興味が向けられたのは、前立腺癌である。
【００２４】
ポリアミン合成の経路は、Ｌ−オルニチンで開始される。この天然のアミノ酸は、通常はタンパク質に含まれないが、アルギニンをオルニチンと尿素とに代謝する尿素サイクルの一部である。オルニチンは、オルニチンデカルボキシラーゼ（ＯＤＣ）によりプトレシンとＣＯ２とに変換され、これがポリアミン産生の律速段階である。Ｓ−アデノシルメチオニンから与えられるプロピルアミンの付加により、プトレシンはスペルミジンに変換される。スペルミジンは、その後、再びＳ−アデノシルメチオニンの脱炭酸に関連して、スペルミンシンテターゼによりスペルミンに変換される。プトレシン、スペルミジンおよびスペルミンは、哺乳動物組織中の、３つの主要なポリアミンを表わす。ポリアミンは、動物組織および微生物中に見出され、細胞の成長および増殖に重要な役割を果たすことが知られている。細胞の成長および増殖におけるポリアミンの役割の正確な機構は知られていないが、ポリアミンは、ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはタンパク質合成のような高分子プロセスを促進し得ると思われる。ポリアミンレベルは、精巣、腹側前立腺および胸腺において、乾癬性皮膚病変において、ならびに、急速な成長プロセスを起こしている他の細胞において、高いことが知られている。
【００２５】
また、腫瘍組織の急速増殖は、ポリアミンレベルの異常な上昇により特徴付けられることも十分に知られている。すなわち、ポリアミンはまた、腫瘍の成長の維持において重要な役割を果たし得る。このため、ＤＦＭＯのようなＯＤＣインヒビターは、ポリアミンの形成を遮断することによりその治療的効果を発揮し、これにより、腫瘍組織の増殖および転移を、遅らせるか、中断させるか、または阻止し得る。
【００２６】
ＤＦＭＯ（α−ジフルオロメチルオルニチン、エフロルニチン（Ｅｆｌｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）、Ｏｒｎｉｄｙｌ（登録商標））は、アミノ酸Ｌ−オルニチンの構造アナログであり、以下のＣ６Ｈ１２Ｎ２Ｏ２Ｆ２の化学構造を有する。
【００２７】
【化１】
ＤＦＭＯは、本発明の方法において、Ｄ−鏡像異性体およびＬ−鏡像異性体のラセミ（５０／５０）混合物として、または好ましくは、Ｄ−異性体がＬ−異性体と比べて富化された（例えば、Ｌ−異性体と比べて、７０重量％、８０重量％、または９０重量％以上のＤ−異性体）Ｄ−異性体およびＬ−異性体の混合物として、用いられ得る。最も好ましくは、使用されるＤＦＭＯは、Ｌ−鏡像異性体を実質的に含まない。
【００２８】
（ＩＩＩ．ＤＦＭＯの抗腫瘍特性および毒性）
ＤＦＭＯは、腫瘍中のプトレシン合成の阻害を生じさせるものの、宿主に対しては比較的無毒である。ヒトにおける経口的ＤＦＭＯは、耳毒性（聴覚障害）を伴い、これは、化学的予防のための推奨用量を、一日当り一回の０．５ｇｍ／ｍ２の付与用量に制限する。ＤＦＭＯの用量を制限する他の毒性作用は、血小板減少症（血中の血小板が異常に少ないこと）（これは、患者の約５０％に生じる）、白血球減少症（白血球が異常に少ないこと）または貧血である。ＤＦＭＯの別の副作用は、悪心および嘔吐であり、これは、患者の９０％までにおいて生じる。これら全ての毒性作用は、比較的無害かつ可逆的であり、薬物の使用を中止によって停止する。
【００２９】
急速に増殖する腫瘍組織の成長速度の制御のためのＯＤＣインヒビターの効果は、標準動物腫瘍モデルにおいて評価されている。例えば、ＤＦＭＯの抗腫瘍効果は、以下の動物腫瘍モデルにおいて実証されている：マウスのＬ１２１０白血病、Ｂａｌｂ／ＣマウスのＥＭＴ６腫瘍、ラットの７，１２−ジメチルベンズアントラセン誘導性（ＤＭＢＡ誘導性）哺乳動物腫瘍、およびバッファローラットのＤＦＭＯ Ｍｏｒｒｉｓ ７２８８Ｃまたは５１２３ヘパトーム。加えて、種々の細胞傷害性薬剤と組み合わせたＤＦＭＯの抗腫瘍効果は、以下のように実証されている：（ａ）マウスのＬ１２１０白血病、バッファローラットのＭｏｒｒｉｓ ７２８８Ｃヘパトーム、およびマウスのＥＭＴ６腫瘍における、ビンデシンまたはアドリアマイシンとの組み合わせ、（ｂ）マウスのＬ１２１０白血病における、シトシンアラビノシドとの組み合わせ、（ｃ）マウスのＬ１２１０白血病における、メトトレキサートとの組み合わせ、（ｄ）マウスのＥＭＴ６腫瘍およびマウスのＤＭＢＡ誘導性腫瘍における、シクロホスファミドとの組み合わせ、（ｅ）マウスの神経膠腫２６脳腫瘍における、ＢＣＮＵとの組み合わせ、および（ｆ）マウスのＬ１２１０白血病、バッファローラットのＭｏｒｒｉｓ ７２８８Ｃヘパトーム、マウスのＰ３８８リンパ球性白血病、およびマウスのＳ−１８０肉腫における、ＭＧＢＧとの組み合わせ。
【００３０】
ＤＦＭＯは、腫瘍のプトレシン生合成を効果的に遮断し得、得られる抗腫瘍効果は、細胞増殖抑制性であり、細胞傷害性ではない。例えば、ＤＦＭＯは、ＭＣＡ肉腫の成長速度を減少させるが、腫瘍の退行を生じさせない。この知見は、ＤＦＭＯが細胞増殖抑制性因子であることを示す他の研究者の報告と一致する。しかし、研究により、重要な役割がＤＦＭＯ薬剤に関して存在し得ることが示され、これは、ＤＦＭＯを含む、併用化学療法レジメンの将来的な開発を可能とする。
【００３１】
種々の新形成の処置での使用における治療的ＯＤＣインヒビターとしてのＤＦＭＯの最初の見込みは、幾分薄れてきたが、これは、米国特許第４，９２５，８３５号に記載されているように、ＤＦＭＯが、実際に、ＯＤＣ活性を不可逆的に阻害するが、ＤＦＭＯでインビボにて処置された細胞が、外因性プトレシンの取り込みを有意に増加するからである。その細胞の細胞間輸送機構は、細胞外環境からのプトレシンの移入によって、ＤＦＭＯによって損なわれたＯＤＣ活性の「回避（ｅｎｄ ｒｕｎ）」を行う。従って、インビボでのＤＦＭＯの効果は、インビトロにおけるよりはるかに低い。よって、ＤＦＭＯ処置が、細胞内プトレシン新生を効果的に阻害し、一方、これはまた、細胞外プトレシンの取り込みを増大し、それによって、そのＯＤＣ阻害効果は相殺される。
【００３２】
この問題は、プトレシンが多くの一般的な食物（例えば、オレンジジュース（約４００ｐｐｍのプトレシンを含有））中に存在するという事実によって、より深刻となる。このことは、プトレシンを含まない栄養的に十分な食餌を患者に提供することを事実上不可能とする。従って、ＤＦＭＯで処置した細胞は、細胞***を支持するのに十分な量の細胞外プトレシンを移入し得る。
【００３３】
ＤＦＭＯをヒト患者にとってより受容可能とするためのストラテジーが、米国特許第４，８５９，４５２号（参考として援用される）に記載されている。ＤＦＭＯの処方物が記載されており、これは、ＤＦＭＯ誘導性の毒性の減少を補助するために、必須アミノ酸を、アルギニンまたはオルニチンのいずれかと組み合わせて含む。
【００３４】
表面的病変へのこの薬物の局所適用は、ヒトにおける全身的取り込みが最小または有意でない、化学防御的癌治療を可能とする。本発明の１つの目的は、しばしば前癌性であるゆうぜいおよび表面的肛門性器ＨＰＶ病変に対する、持続性の局所的化学的予防薬剤として使用され得る、軟膏剤を提供する。この軟膏剤はまた、肛門性器領域の癌性病変に直接塗布してもよい。ＤＦＭＯの５％溶液の局所適用により、マウス表皮のＤＮＡ合成が遮断されることが、当該分野で公知である。インビトロでのプトレシンレベルは、コントロールの２５％まで減少したが、スペルミンレベルおよびスペルミジンレベルは、影響を受けなかった（米国特許第４，８５９，４５２号）。さらに、乾癬を患う１０人の患者に１０％ＤＦＭＯクリームを塗布したところ、乾癬病変の周縁の回復とともに、皮膚のスペルミンレベルが６６％減少されることが示された。
【００３５】
（ＩＶ．Ｄ−ＤＦＭＯ）
ＤＦＭＯの毒性は、ＤＦＭＯのＤ−鏡像異性体によって、または、Ｄ−異性体が異性体混合物の少なくとも６０重量％、好ましくは９０重量％以上を含むように、Ｄ−異性体含量について富化されている、Ｄ−異性体とＬ−異性体との混合物によって、大きく減少され得る。Ｄ−ＤＦＭＯは、なおＯＤＣのインヒビターであるが、動物モデルにおいてより低い毒性（耳毒性を含む）を有する。モルモットの研究では、ＤＦＭＯの鏡像異性体は、有意な毒性は示さなかった。ＤＦＭＯのＤ−型は、複合活動電位または蝸牛マイクロホン作用のいずれにも有意な効果を及ぼさないことが見出された。聴覚機能の評価から、ＤＦＭＯのＬ−型は、正常な蝸牛電位の有意な崩壊を生じることが見出された。
【００３６】
Ｄ−ＤＦＭＯまたは富化Ｄ−異性体混合物の使用は、ラセミ（５０／５０）Ｄ，Ｌ−ＤＦＭＯの使用に関連する多くの問題を克服し得る。Ｄ−ＤＦＭＯまたは冨化Ｄ−ＤＭＦＯ異性体混合物は、Ｄ鏡像異性体に関連する予期される毒性が低いことに起因して、ラセミ混合物よりも高い投与量で投与され得る。０．６μＭ〜８０μＭの濃度範囲のＤ−ＤＦＭＯ、Ｌ−ＤＦＭＯ、およびＤ，Ｌ−ＤＦＭＯを用いる３つの個別の研究において、ＯＤＣ活性の５０％を阻害する各々の有効濃度レベル（Ｋｉ）を決定した。両方の鏡像異性体およびラセミ混合物が、抑制性であった。Ｄ−ＤＦＭＯのＫｉは、Ｌ−型よりも４倍低く、混合物よりも３倍低かった（「Ｄ−ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒ ｏｆ ＤＦＭＯ ａｎｄ ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ ｕｓｅ ｔｈｅｒｅｆｏｒ」との表題の米国特許出願、２０００年７月１日出願）。
【００３７】
（Ｖ．ＤＦＭＯおよびヒト前立腺）
ＤＦＭＯおよび良性前立腺過形成の処置におけるその使用が、米国特許第４，４１３，１４１号および第４，３３０，５５９号に記載されている。米国特許第４，４１３，１４１号は、インビトロおよびインビボの両方における、ＯＤＣのインヒビターとしてのＤＦＭＯを記載している。報告によれば、ＤＦＭＯの投与は、ポリアミンが正常に活性に産生される細胞中の、プトレシンおよびスペルミジン濃度を減少させる。加えて、ＤＦＭＯは、標準腫瘍モデルで試験した場合に、腫瘍性の細胞増殖を遅らせることが可能であることが示された。米国特許第４，３３０，５５９号は、良性前立腺過形成の処置のためのＤＦＭＯおよびＤＦＭＯ誘導体の使用を記載している。良性前立腺過形成は、急速な細胞増殖によって特徴付けられる多くの疾患状態と同様に、ポリアミン濃度の異常な上昇を伴う。この参考文献に記載されている処置は、患者に経口的または非経口的に投与され得る。しかし、上記で指摘したように、Ｍｅｓｓｉｎｇら（１９９９）によるより最近の研究では、２週間にわたるＤＦＭＯの０．５ｇｍ／ｍ２での経口投与を伴う処置後に、癌性前立腺中のスペルミジンレベルまたはスペルミンレベルのいかなる減少も検出することはできなかった。
【００３８】
最近、前立腺癌中のポリアミンの役割が再考されている。Ｍｏｈａｎら（１９９９）は、同一の患者からの良性組織および悪性組織におけるＯＤＣ活性を測定し、癌性部分が良性組織の部分のほぼ３倍のレベルを有することを見出した（１１４２＋１００対４２７＋５１）。加えて、彼らは、マッサージにより得られた前立腺液のＯＤＣ活性を評価し、良性肥大を有する男性と比較した、前立腺癌を有する男性における、より高いレベルを見出した（３８４７＋１６２対２７４２＋６７）。
【００３９】
前立腺癌の化学的予防は、ホルモン性薬剤および抗酸化性薬剤の両方を用いて研究されている。前立腺癌に関する最初の大規模な化学的予防研究が、１９９３年にＳｏｕｔｈｗｅｓｔ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｇｒｏｕｐ（ＳＷＯＧ）により開始され、１８，０００人の男性が無作為に選択され、フィナステリド（Ｐｒｏｓｃａｒ）またはプラシーボを７年間与えられた。試験される仮説は、５−α−レダクターゼによるＤＨＴへのテストステロンの変換をブロックすることによる、前立腺中のジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）レベルの減少が、前立腺癌を減少させるということであった。結果は、２００４年に利用可能となると予想される。より小規模の研究では、Ｐｒｏｓｃａｒ処置または非処置のゼロ時および１年後の代理エンドマーカー（ｓｕｒｒｏｇａｔｅ ｅｎｄ ｍａｒｋｅｒ）に注目した（Ｃｏｔｅら、１９９８）。研究する群には、ＰＳＡが上昇し、かつ、陰性の前立腺針生検を有する男性が含まれた。この研究は、Ｐｒｏｓｃａｒについての男性の１年の経過観察生検後に診断された癌の増大を示した（非処置での２５人中１人に対し、２７人中８人（ｐ＝０．０２５））。前立腺癌の危険性が高い２２人の男性における、経口フェンレチニド（ｆｅｎｒｅｔｉｎｉｄｅ）の小規模の第ＩＩ相試験が、Ｐｉｅｎｔａら（１９９７）により行われた。この試験は、研究前の生検で陰性だった８人の男性が、研究が行われている間に悪性腫瘍を示した、初期の時点で中止された。目的の薬剤からの保護効果を実証し得なかったこれら２つの小規模の研究では、ＤＭＦＯのような種々の薬剤に関して、前立腺癌の化学的予防における役割が存在するはずである。
【００４０】
（ＶＩ．前立腺癌の診断）
前立腺癌に関する最も広く一般に用いられる現在の試験は、直腸指診（ｄｉｇｉｔａｌ ｒｅｃｔａｌ ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ）（ＤＲＥ）、および、血清前立腺特異抗原（ＰＳＡ）の分析である。ＰＳＡは、前立腺組織に特異的であるが、これは、正常および良性ならびに悪性の前立腺上皮によって産生され、これが、前立腺癌の検出について高い割合の偽陽性を生じる（Ｐａｒｔｉｎ ＆ Ｏｅｓｔｅｒｌｉｎｇ、１９９４）。
【００４１】
前立腺癌検出用に用いられている他のマーカーには、前立腺酸ホスファターゼ（ＰＡＰ）および前立腺分泌タンパク質（ＰＳＰ）が含まれる。ＰＡＰは、ホルモンの制御下で前立腺細胞により分泌される（Ｂｒａｗｎら、１９９６）。ＰＡＰは、ＰＳＡが有するよりも、低い特異性および感度を有する。結果として、今ではほとんど用いられないが、ＰＡＰは、初期治療に失敗した転移患者をモニターするためのいくつかの用途を依然として有し得る。一般に、ＰＳＰは、ＰＡＰよりも高感度の生体マーカーであるが、ＰＳＡと同程度の高感度ではない（Ｈｕａｎｇら、１９９３）。ＰＳＡと同様に、ＰＳＰレベルは、ＢＰＨを有する患者だけでなく、前立腺癌を有する患者においても、しばしば上昇する。
【００４２】
前立腺疾患に関連する別の血清マーカーは、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）である（Ｈｏｒｏｓｚｅｗｉｃｚら、１９８７；Ｃａｒｔｅｒら、１９９６；Ｍｕｒｐｈｙら、１９９６）。ＰＳＭＡは、ＩＩ型細胞膜タンパク質であり、葉酸ヒドロラーゼ（ＦＡＨ）として同定されている（Ｃａｒｔｅｒら、１９９６）。ＰＳＭＡに対する抗体は、正常な前立腺組織および前立腺癌組織の両方と反応する（Ｈｏｒｏｓｚｅｗｉｃｚら、１９８７）。Ｍｕｒｐｈｙら（１９９５）は、ＥＬＩＳＡを用いて、進行した前立腺癌中の血清ＰＳＭＡを検出した。血清試験として、ＰＳＭＡレベルは、前立腺癌の比較的弱い指標である。しかし、ＰＳＭＡは特定の状況で有用性を有し得る。ＰＳＭＡは、転移性の前立腺腫瘍の毛細血管床において発現され（Ｓｉｌｖｅｒら、１９９７）、そして転移癌患者の血液中でより豊富であることが報告されている（Ｍｕｒｐｈｙら、１９９６）。ＰＳＭＡメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）は、５−α−ジヒドロキシテストステロン（ＤＨＴ）に対する曝露後のＬＮＣａＰ前立腺癌細胞株において、８〜１０倍ダウンレギュレートされる（Ｉｓｒａｅｌｉら、１９９４）。
【００４３】
上記のように、ＤＦＭＯは、上皮発癌の腫瘍促進段階の後期で作用する。ＤＦＭＯによる結腸発癌の阻害についての機構には、マトリクスメタロプロテイナーゼマトリリシン（ｍａｔｒｉｌｙｓｉｎ）（Ｗａｌｌｏｎら、１９９４）の抑制であって、これは、腫瘍の浸潤に関与する分泌プロテアーゼである。ＤＦＭＯはまた、ＬＮＣａＰヒト前立腺癌由来細胞中のインターロイキン−１β（ＩＬ−１β）誘導性マトリリシン発現を抑制するので、この機構は、前立腺癌において機能的である。
【００４４】
前立腺癌についての比較的新しい潜在的生体マーカーは、ヒトカリクレイン２（ｈｕｍａｎ ｋａｌｌｅｋｒｅｉｎ ２）（ＨＫ２）である（Ｐｉｉｒｏｎｅｎら、１９９６）。ＨＫ２は、前立腺により分泌されるカリクレインファミリーのメンバーである。理論的には、ＨＫ２の血清濃度は、前立腺癌の検出または診断において有用であり得るが、このマーカーの有用性は、依然評価されている。
【００４５】
（ＶＩＩ．癌の処置方法）
特定の局面において、本発明は、前立腺癌の処置のための方法を提供する。治療方法は、ＤＦＭＯを含む治療有効量の治療組成物で個体を処置する工程を包含する。有効量は、一般に、疾患またはその症状の程度を、検出可能にかつ繰り返して、改善、減少、最小化または制限するのに、十分な量として説明される。疾患の排除、根絶または治癒を含む、より厳密な定義が、適用され得る。
【００４６】
ＤＦＭＯは、約０．０５〜約２０．０ｇｍ／ｍ２／日の用量で投与され得る。投与されるべきＤＦＭＯの好ましい用量は、約０．１〜約１５．０ｇｍ／ｍ２／日、または約０．１〜１２ｇｍ／ｍ２／日、または約０．１〜１０ｇｍ／ｍ２／日、または約０．１〜８ｇｍ／ｍ２／日、または約０．１〜６ｇｍ／ｍ２／日、または約０．１〜４ｇｍ／ｍ２／日、または約０．１〜２ｇｍ／ｍ２／日、または約０．１〜１ｇｍ／ｍ２／日または約０．１〜０．５ｇｍ／ｍ２／日、または約０．５ｇｍ／ｍ２／日である。ＤＦＭＯはまた、約０．１〜２．０ｇ／日の用量で、または約０．２５〜１．５ｇ／日の用量で、またはより好ましくは約０．５〜１．０ｇ／日の用量で投与され得る。
【００４７】
細胞を死滅させ、細胞増殖を阻害し、転移を阻害し、腫瘍サイズを減少させ、さもなければ腫瘍細胞の悪性の表現型を反転または低減させるため、本発明の方法および組成物を用いて、一般的に、「標的」細胞をこの治療組成物に接触させる。これは、癌の処置に効果的な他の薬剤を含む組成物と組み合わせ得る。これらの組成物は、細胞を死滅させるかまたは細胞増殖を阻害するために有効な、組合せ量で提供される。このプロセスは、ＤＦＭＯおよび薬剤または因子と細胞を同時に接触させること包含し得る。これは、両薬剤を含む単一の組成物または単一の薬理学的処方物と細胞を同時に接触させることにより、または、一方の組成物がＤＦＭＯを含みかつ他方が第２の薬剤を含む２つの別個の組成物または処方物と細胞を同時に接触させることにより、達成され得る。
【００４８】
患者への、本発明の治療的ＤＦＭＯ組成物の投与は、もしあるならば、ＤＦＭＯの毒性を考慮に入れつつ、化学療法剤の投与に関する一般的なプロトコルに従う。処置サイクルは必要なだけ繰り返されることが予想される。種々の標準的な治療、ならびに外科的介入が、記載された治療と組合せて適用され得ることもまた、企図される。
【００４９】
ＤＦＭＯ治療の臨床的適用が企図される場合には、意図される適用のために適切な薬学的組成物としてこの複合体を調製することが必要である。一般的に、これは、発熱物質と、ヒトまたは動物に有害であり得る他の不純物とを実質的に含まない、薬学的組成物を調製することを包含する。また、この複合体に安定性を付与し、かつ、この複合体を標的細胞により取り込み可能とするため、適切な塩および緩衝液を用いることが、一般的に望まれる。
【００５０】
本発明の水性組成物は、薬学的に受容可能なキャリアまたは水性媒体に溶解または分散された、有効量の化合物を含む。このような組成物はまた、接種材料とも呼ばれ得る。句「薬学的に受容可能または薬理学的に受容可能」とは、動物またはヒトに適切に投与された際に、有害な反応、アレルギー性反応、または他の不適当な反応を生じない、分子実体および組成物を指す。本明細書中で用いられる場合、「薬学的に受容可能なキャリア」は、任意のおよび全ての溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延薬剤などを包含する。薬学的活性物質に関するこのような媒体および薬剤の使用は、当該技術分野で周知である。任意の従来の媒体または薬剤が活性成分と不適合である場合を除き、治療組成物におけるその使用が企図される。補助活性成分も、この組成物に組み込まれ得る。
【００５１】
本発明の組成物は、従来の薬学的調製物を含み得る。同様に、分散物を、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、およびその混合物中、ならびに油中に調製し得る。通常の保存および使用の条件下で、これらの調製物は、微生物の増殖を防ぐための保存料を含有する。
【００５２】
特定の癌に依存して、本発明による治療組成物の投与は、標的組織がその経路を介して利用可能である限り、任意の一般的な経路を介される。これは、経口経路、経鼻腔経路、口腔経路、経直腸経路、経膣経路、または局所経路を包含する。局所投与は、皮膚癌の処置に特に有利である。あるいは、投与は、同所注射、皮内注射、皮下注射、筋肉内注射、腹腔内注射、または静脈内注射による。このような組成物は、通常、生理学的に受容可能なキャリア、緩衝液または他の賦形剤を含む、薬学的に受容可能な組成物として投与される。
【００５３】
特定の実施形態では、エキソビボ治療もまた企図される。エキソビボ治療は、患者からの標的細胞の除去を含む。細胞は、患者の体外で処置され、その後で戻される。
【００５４】
処置は、種々の「単位用量」を包含し得る。単位用量は、その投与（すなわち、適切な経路および処置レジメン）に従って所望の応答を生じるように計算された、所定量の治療組成物を含有するものとして定義される。投与されるべき量、ならびに特定の経路および処方は、臨床分野の当業者の技術範囲内にある。同様に重要なことは、処置される被験体、特に、被験体の状態および望まれる防御である。単位用量は、一回の注射として投与される必要はなく、一定期間にわたる連続的な注入を含み得る。
【００５５】
本発明の好ましい実施形態の一つは、ＤＦＭＯ治療組成物の、特定の標的癌細胞についての使用を含む。特に興味深いのは、前立腺癌細胞である。
【００５６】
本発明によれば、ＤＦＭＯまたはアナログ組成物を腫瘍に直接注射することにより、癌を処置し得る。あるいは、腫瘍は、任意の適切な送達ビヒクルを用い、組成物を注入され得るか、または灌流され得る。腫瘍についての局所的投与または領域的投与もまた、企図される。最終的には、全身的投与を行い得る。適切な場合、例えば、腫瘍を切除し、残った微視的な疾患を排除するためこの腫瘍床を処置する場合には、連続的投与もまた、適用され得る。シリンジを介する送達またはカテーテル法が好ましい。このような連続的灌流は、処置の開始後、約１〜２時間から、約２〜６時間まで、約６〜１２時間まで、約１２〜２４時間まで、約１〜２日間まで、約１〜２週間まで、またはこれより長く、行われ得る。一般的に、連続的灌流を介する治療組成物の用量は、一回または多数回の注射により与えられ、灌流が起きる期間中に調節される用量と等しい。４ｃｍを超える腫瘍について、投与されるべき量は、約４〜１０ｍｌ（好ましくは１０ｍｌ）であり、一方、４ｃｍ未満の腫瘍については、約１〜３ｍｌ（好ましくは３ｍｌ）が用いられる。一回の用量として送達される複数回の注射は、約０．１〜約０．５ｍｌの用量から構成される。ウイルス粒子は、約１ｃｍ間隔で配置される、腫瘍への多数回注射を投与することにより、有利に接触され得る。
【００５７】
特定の実施形態では、処置される腫瘍は、少なくとも初期においては、切除可能でないかもしれない。治療的ＤＦＭＯ組成物での処置は、縁での収縮により、または、ある特定の浸潤部分の排除により、腫瘍の切除可能性を高め得る。処置後、切除が可能であり得る。切除後の付加的処置は、腫瘍部位での微視的残余疾患を排除するのに役立つ。
【００５８】
ＤＮＡ損傷を引き起こしかつ広範に用いられてきた他の因子は、γ線、Ｘ線、および／または腫瘍細胞への放射性同位体の誘導された送達として一般に知られるものを含む。ＤＮＡ損傷因子の他の形態（例えば、マイクロ波およびＵＶ照射）もまた、企図される。これらの因子の全ては、ＤＮＡ、ＤＮＡ前駆体、ＤＮＡの複製および修復、ならびに染色体の集合および維持に対して、広範な損傷をもたらす可能性が非常に高い。Ｘ線の投与範囲は、一日当り用量５０〜２００レントゲンで長期間（３〜４週間）から、２０００〜６０００レントゲンの一回用量までの範囲にある。放射性同位体の投与範囲は、広く変化し、同位体の半減期、放出される放射線の強さおよび種類、ならびに新形成細胞による取り込みに依存する。
【００５９】
（ＶＩＩＩ．ＤＦＭＯを用いた併用治療）
本発明は、ＤＦＭＯが他の治療と組合せて用いられ得ることを企図する。アスピリン、およびいくつかの他のＮＳＡＩＤは、結腸直腸癌に対して化学予防的作用を発揮し、多分、胃癌、食道癌（Ｔｈｕｎら、１９９３）およびさらには膀胱癌（Ｅａｒｎｅｓｔら、１９９２）にも発揮することを示唆する、増加する一連の実験データおよび疫学的データが存在する。アスピリン、イブプロフェン、ピロキシカム（Ｒｅｄｄｙら、１９９０、Ｓｉｎｇｈら、１９９４）、インドメタシン（Ｎａｒｉｓａｗａ，１９８１）、およびスリンダク（Ｐｉａｚｚａら、１９９７、Ｒａｏら、１９９５）は、アゾキシメタンＡＯＭ処置ラットモデルにおける結腸癌発生を効果的に阻害する。フルルビプロフェンは、ＡＰＣ（Ｍｉｎ）＋マウスモデルにおける抗腫瘍効果を実証した（Ｗｅｃｈｔｅｒら、１９９７）。ＮＳＡＩＤは、活性化Ｋｉ−ｒａｓを保有する腫瘍の発生も阻害する（ＳｉｎｇｈおよびＲｅｄｄｙ，１９９５）。ＤＦＭＯをアスピリンと組合せて、ＡＯＭ処置ラットにおけるその化学予防的効果を評価する研究が行われている。アスピリンとＤＦＭＯとの組合せが、ＡＯＭが相乗的であることが見出された後に投与された（Ｌｉら、１９９９）。その結果は、アスピリンとＤＦＭＯとの組合せは、ＡＯＭ後に投与された場合に、結腸癌を予防し得ることを示した（Ｌｉら、１９９９）。
【００６０】
ＤＦＭＯと、化学療法薬剤ピロキシカムとの組合せは、直腸癌発生のＡＯＭ処置ラットモデルにおいて相乗的化学予防効果を有することが示されている（Ｒｅｄｄｙら、１９９０）が、ＤＦＭＯは、各薬剤が個別に投与された場合に、Ｋｉ−ｒａｓ突然変異および腫瘍発生に対して、ピロキシカムよりも高い抑制効果を示した（Ｓｉｎｇｈら、１９９３、Ｒｅｄｄｙら、１９９０、Ｋｕｌｋａｒｎｉら、１９９２）。ある研究では、ＡＯＭ処置ラットへのＤＦＭＯまたはピロキシカムの投与は、Ｋｉ−ｒａｓ変異を有する腫瘍の数を、９０％から、それぞれ３６％および２５％まで低減させた（Ｓｉｎｇｈら、１９９４）。Ａｐｃ変異ＭｉｎマウスモデルをピロキシカムおよびＤＦＭＯの試験に用い、この併用処置が、いずれかの薬剤単独よりもはるかに効果的であり、いかなる腸腺腫も全く有さない有意な数のマウスが得られたことが確認された（Ｊａｃｏｂｙら、２０００）。ＤＦＭＯとピロキシカムとの両方はまた、既存の腫瘍における生化学的に活性なｐ２１ ｒａｓの量を低減させた（Ｓｉｎｇｈら、１９９３）。モデル系における薬剤の成功にもかかわらず、この組合せで行われたフェーズＩ試験は、一定範囲の有害な副作用を生じた（Ｃａｒｂｏｎｅら、１９９８）。
【００６１】
ＤＦＭＯはＯＤＣの効果的なインヒビターであるので、研究者の中には、インターフェロンと組合せた共同的処置の一部としてＤＦＭＯを用いることを試みているものもいる。米国特許第４，４９９，０７２号は、ＯＤＣインヒビターと組み合わせてインターフェロンを使用することによる、ＯＤＣインヒビター（ＤＦＭＯを含む）のポリアミン除去効果の向上を記載している。さらに、この特許は、メトトレキサートのような既知の細胞傷害性薬剤と組み合わせた、ＯＤＣインヒビターとインターフェロンの両方の使用を記載している。米国特許第５，００２，８７９号は、ＯＤＣインヒビター（好ましくはＤＦＭＯ）を、リンホカイン活性化キラー（ＬＡＫ）細胞とインターロイキン−２と組み合わせて用いる、同様の共同的治療を記載している。
【００６２】
癌治療はまた、化学療法および放射線ベースの治療の両方を伴う、ＤＭＦＯの種々の併用治療を含む。化学療法の組み合わせには、例えば、シスプラチン（ＣＤＤＰ）、カルボプラチン、プロカルバジン、メクロルエタミン、シクロホスファミド、カンプトテシン、イホスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン（ｂｉｓｕｌｆａｎ）、ニトロソ尿素類、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ブレオマイシン、プリカマイシン（ｐｌｉｃｏｍｙｃｉｎ）、マイトマイシン、エトポシド（ＶＰ１６）、タモキシフェン、タキソール、トランスプラチナ（ｔｒａｎｓｐｌａｔｉｎｕｍ）、５−フルオロウラシル、ビンクリスチン、ビンブラスチンおよびメトトレキサートあるいはこれらの任意のアナログまたは誘導改変体が含まれる。良性前立腺過形成のような前癌性状態に関して、テラゾシン、ドキサゾシン、プラゾシン、ブナゾシン、インドラミン、タムスロシン、プラジシン（ｐｒａｚｉｃｉｎ）またはアルフゾシンのような、α−１アドレナリン作用性レセプター遮断薬；フィナステリドまたはアザステロイド誘導体のような、５−α−レダクターゼ酵素遮断薬；α−１アドレナリン作用性レセプター遮断薬と５−α−レダクターゼ酵素遮断薬との組み合わせ；ミノキシジルのようなカリウムチャネル開放薬；およびレチノイン酸誘導体から、第２の治療薬剤が選択された。好ましい実施形態では、第２の治療薬剤は、ノコギリパルメット（ｓａｗ ｐａｌｍｅｔｔｏ）抽出物である。
【００６３】
種々の組み合わせ（例えば、ＤＦＭＯ組成物は「Ａ」であり、放射線療法、化学療法または他の治療薬剤は「Ｂ」である場合）が、使用され得る：
Ａ／Ｂ／Ａ Ｂ／Ａ／Ｂ Ｂ／Ｂ／Ａ Ａ／Ａ／Ｂ Ａ／Ｂ／Ｂ Ｂ／Ａ／Ａ Ａ／Ｂ／Ｂ／Ｂ Ｂ／Ａ／Ｂ／Ｂ Ｂ／Ｂ／Ｂ／Ａ Ｂ／Ｂ／Ａ／Ｂ Ａ／Ａ／Ｂ／Ｂ Ａ／Ｂ／Ａ／Ｂ Ａ／Ｂ／Ｂ／Ａ Ｂ／Ｂ／Ａ／Ａ Ｂ／Ａ／Ｂ／Ａ Ｂ／Ａ／Ａ／Ｂ Ａ／Ａ／Ａ／Ｂ Ｂ／Ａ／Ａ／Ａ Ａ／Ｂ／Ａ／Ａ Ａ／Ａ／Ｂ／Ａ。
「接触された」および「曝露された」との用語は、細胞に用いられる場合には、治療組成物および化学療法または放射線治療薬剤が標的細胞に送達されるプロセス、または、標的細胞の直接近位に配置されるプロセスを記載するために、本明細書中で用いられる。細胞の死滅または静止を達成するため、両薬剤は、細胞を死滅させるかまたは細胞が***するのを防ぐのに効果的な、組み合わせ量で細胞に送達される。
【００６４】
ＤＦＭＯ治療は、数分から数週の範囲の間隔で、もう一方の薬剤による処置の前または後に行われ得る。もう一方の薬剤およびＤＦＭＯが細胞に個別に適用される実施形態では、各送達の間に有意な期間が満了しなかった結果、その薬剤およびＤＦＭＯが、細胞に対して有利な組合せ効果を依然として発揮可能であることが、一般的に保証される。このような場合、互いに約１２〜２４時間内に、より好ましくは、互いに約６〜１２時間内に、最も好ましくは約１２時間だけ遅れさせて、両方の治療適用を細胞に接触させることが、企図される。しかし、いくつかの状況において、各投与の間に数日（２日、３日、４日、５日、６日または７日）から数週間（１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間または８週間）が経過する場合に、処置の期間を有意に延長することが望ましくあり得る。
【００６５】
（ＩＸ．薬学的組成物）
本発明の水性組成物は、薬学的に受容可能なキャリアまたは薬学的に受容可能な水性媒体中に溶解または分散された、有効量のＤＦＭＯを含む。句「薬学的に受容可能または薬理学的に受容可能」とは、動物またはヒトに適切に投与された場合に、有害な反応、アレルギー反応、または他の不適当な反応を生じない、分子実体または組成物を指す。
【００６６】
本明細書で用いられる場合「薬学的に受容可能なキャリア」は、任意かつ全ての、溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などを包含する。薬学的活性物質に関するこのような媒体および薬剤の使用は、当該技術分野で周知である。任意の従来の媒体または薬剤が活性成分と不適合性でない限り、この薬学的組成物におけるその使用が、企図される。補助活性成分もまた、この組成物に組込まれ得る。ヒトへの投与に関して、調製物は、ＦＤＡ Ｏｆｆｉｃｅ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓの基準により要求される、滅菌性の基準、発熱原性の基準、一般的安全性の基準および純度の基準を満たすべきである。
【００６７】
生物学的材料は、望ましくない低分子量分子を除去するために徹底的に透析され、かつ／または、適切な場合には、所望のビヒクル中により容易に処方するために凍結乾燥されるべきである。次いで、活性化合物は、一般的に、非経口投与のために処方され、例えば、静脈内経路、筋肉内経路、皮下経路、病変内経路、またはさらに腹腔内経路を介した注射のために、処方される。活性構成成分または活性成分としてのヘッドピン（ｈｅａｄｐｉｎ）薬剤を含有する水性組成物の調製は、本発明の開示を考慮すれば、当業者により知られる。代表的には、このような組成物は、液体溶液または懸濁液のいずれかとして、注射可能物質として調製され得る。注射前の液体の添加の際に溶液または懸濁液を調製するための使用に適切な固体形態もまた、調製され得る。そして、この調製物はまた、乳化され得る。
【００６８】
注射可能な使用に適した薬学的形態としては、滅菌水溶液または滅菌分散液；ゴマ油、落花生油または水性プロピレングリコールを含む、処方物；ならびに、滅菌注射可能溶液および滅菌注射可能分散液の即時調製物用の、滅菌粉末が、挙げられる。全ての場合において、その形態は、滅菌されていなければならず、かつ、簡単にシリンジで注入可能な程度に、液状でなければならない。その形態は、製造条件および保存条件下で安定でなければならず、かつ、細菌および真菌のような微生物の汚染作用に対して保護されなければならない。
【００６９】
遊離塩基または薬学的に受容可能な塩としての活性化合物の溶液は、ヒドロキシプロピルセルロースのような界面活性剤と適切に混合された水中で、調製され得る。分散液はまた、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、およびその混合物中、ならびに油の中で、調製され得る。通常の保存条件および通常の使用条件下で、これらの調製物は、微生物の増殖を防ぐ保存薬を含有する。
【００７０】
本発明のＤＦＭＯは、中性形態または塩の形態で組成物に処方され得る。薬学的に受容可能な塩としては、酸付加塩（タンパク質の遊離アミノ基と形成される）を含み、これは、例えば、塩酸またはリン酸のような無機酸と、あるいは、酢酸、シュウ酸、酒石酸、マンデル酸などの有機酸と、形成される。遊離カルボキシル基と形成された塩はまた、例えば、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、または水酸化鉄（ＩＩＩ）のような、無機塩基、およびイソプロピルアミン、トリエチルアミン、ヒスチヂン、プロカインなどのような、有機塩基に由来し得る。
【００７１】
キャリアはまた、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、これらの適切な混合物、ならびに植物油を含有する、溶媒または分散媒であり得る。例えば、レシチンのようなコーティングの使用により、分散液の場合には必要とされる粒子サイズの維持により、および、界面活性剤の使用により、適切な流動性が、維持され得る。微生物作用の防止は、種々の抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなどにより、達成され得る。多くの場合、等張剤（例えば、糖または塩化ナトリウム）を含むことが、好ましい。注射可能組成物の長期の吸収は、吸収を遅延させる薬剤、（例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチン）を組成物中に用いることにより、達成され得る。
【００７２】
滅菌注射可能溶液は、活性化合物を必要量、上記で列挙した種々の他の成分とともに適切な溶媒中に組み込むことより、そして必要な場合、その後濾過滅菌することにより、調製される。一般的に、分散液は、ベースとなる分散媒と、上記で列挙したもの以外の必要な他の成分とを含有する滅菌ビヒクル中に、種々の滅菌された活性成分を組み込むことにより、調製される。滅菌注射可能溶液を調製するための滅菌粉末の場合、その好ましい調製方法は、前もって滅菌濾過された溶液から、活性物質および他の望ましい任意の成分の粉末を得る、真空乾燥技術および凍結乾燥技術である。より濃縮された、または高度に濃縮された、直接注射用溶液の調製もまた企図され、ここで、溶媒としてのＤＭＳＯの使用が、非常に急速な浸透をもたらし、これにより高濃度の活性薬剤が小さな領域に送達されることが、想像される。
【００７３】
処方の際、溶液は、投薬処方物に適合した様式で、かつ、治療上有効である量で、投与される。この処方物は、上記した注射可能溶液の種類のような、種々の投薬形態で容易に投与されるが、薬剤放出カプセルなどもまた、利用され得る。
【００７４】
水溶液での非経口投与に関し、例えば、その溶液は、必要な場合は適切に緩衝化されるべきであり、そして液体希釈剤は、十分な生理食塩水またはグルコースでまず等張性にされるべきである。これらの特定の水溶液は、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与および腹腔内投与に特に適している。これに関して、利用され得る滅菌水性媒体は、本発明の開示を鑑みて、当業者に知られる。例えば、１回分の投薬量が、１ｍｌの等張性ＮａＣｌ溶液に溶解され得、そして１０００ｍｌの皮下注入流体に添加されるかまたは計画された注入部位に注射されるかのいずれかであり得る（例えば、”Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ”１５ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，１０３５−１０３８頁および１５７０−１５８０頁を参照のこと）。投薬におけるいくつかの変更が、処置される被験体の状態に応じて必然的に発生する。投与の責任者が、いかなる場合でも、個々の被験体にとって適切な用量を決定する。
【００７５】
静脈内または筋肉内注射のような非経口投与用に処方された化合物に加えて、他の薬学的に受容可能な形態としては、例えば、錠剤または経口投与用の他の固体；リポソーム処方物；徐放性カプセル；およびクリームを含む現在用いられている任意の他の形態が挙げられる。
【００７６】
また、本発明において、鼻腔用の溶液あるいはスプレー、エアロゾルまたは吸入剤を用い得る。鼻腔用溶液は、通常、滴薬またはスプレーで鼻孔に投与されるように設計された、水溶液である。鼻腔用溶液は、鼻腔分泌物と多くの点で類似するように、通常の線毛の動作が維持されるように、調製される。このため、この鼻腔用水溶液は、通常、等張性であり、かつ、ｐＨ５．５〜６．５を維持するようにわずかに緩衝化されている。さらに、必要な場合、眼用調製物において使用されているのと同様の抗菌性保存剤および適切な薬剤安定化剤が、処方物中に含まれ得る。種々の市販の鼻腔用調製物が公知であり、それらは、例えば、抗生物質および抗ヒスタミン剤を含み、喘息の予防に用いられている。
【００７７】
他の方式の投与に適した付加的な処方物としては、膣用坐剤および膣坐薬（ｐｅｓｓａｒｙ）が挙げられる。直腸用坐薬（ｐｅｓｓａｒｙ）または直腸用坐剤もまた、使用され得る。坐剤は、通常薬用の、直腸、膣または尿道内への挿入用の、種々の重量および形状を有する、固体投薬形態である。挿入後、坐剤は、腔内の流体中で軟化、溶融または溶解される。概して、坐剤に関し、伝統的な結合剤およびキャリアは、例えば、ポリアルキレングリコールまたはトリグリセリドを含み得る。このような坐剤は、有効成分を０．５％〜１０％、好ましくは１％〜２％の範囲で含有する、混合物から形成され得る。
【００７８】
経口処方物には、例えば、薬学的等級のマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどのような、通常利用される賦形剤が含まれる。これらの組成物は、溶液、懸濁液、錠剤、丸薬、カプセル、徐放性処方物または粉末の形態を取る。ある定義された実施形態では、経口薬学的組成物は、不活性な希釈剤または同化可能な食用キャリアを含む。または、これらは、硬質または軟質の殻のゼラチンカプセル中に封入され得る。または、これらは、治療食の食物に直接組み込まれ得る。経口治療投与のため、活性化合物は、賦形剤に組み込まれ得、摂取可能な錠剤、口腔用錠剤、トローチ、カプセル、エリキシル、懸濁液、シロップ、カシェ剤などの形態で用いられ得る。このような組成物および調製物は、少なくとも０．１％の活性化合物を含有するべきである。この組成物および調製物の割合は、当然変更され得、そして好都合には、単位重量の約２〜約７５％、または好ましくは２５〜６０％であり得る。このような治療に有用な組成物中の活性化合物の量は、適切な投薬が得られるようなものである。
【００７９】
錠剤、トローチ、丸薬、カプセルなどはまた、以下を含み得る：トラガカントゴム、アラビアゴム、コーンスターチまたはゼラチンのような、結合剤；リン酸二カルシウムのような、賦形剤；コーンスターチ、ジャガイモデンプン、アルギン酸などのような、崩壊剤（ｄｉｓｉｎｔｅｇｒａｔｉｎｇ ａｇｅｎｔ）；ステアリン酸マグネシウムのような、滑剤；スクロース、ラクトースまたはサッカリンのような、甘味料；あるいは、ペパーミント、ウインターグリーン油またはサクランボフレーバーのような、矯味矯臭剤。投薬の単位形態がカプセルである場合には、上記種類の材料に加えて、そのカプセルは、液体キャリアを含有し得る。種々の他の材料が、コーティングとして、またはそうでなければ投薬単位の物理形態を修正するために、存在し得る。例えば、錠剤、丸薬、またはカプセルは、セラック、糖またはその両方でコートされ得る。エリキシルのシロップは、活性化合物である、甘味料としてのスクロース、および保存料としてのメチルパラベンおよびプロピルパラベン、染料、ならびにサクランボフレーバーおよびオレンジフレーバーのような矯味矯臭剤を、含有し得る。
【００８０】
特定の実施形態では、リポソームおよび／またはナノ粒子の使用が、ＤＦＭＯまたはそのアナログの処方および投与に関して企図される。リポソームの処方および使用は、一般的に当業者には公知であり、そしてまた以下に記載されている。
【００８１】
ナノカプセルは、一般的に、化合物を安定かつ再生可能な方法で含み得る。分子内のポリマーの過剰負荷による副作用を避けるため、このような超微細粒子（サイズ約０．１μｍ）は、インビボで分解され得るポリマーを用いて設計されるべきである。これらの要件を満たす生分解性ポリアルキル−シアノアクリレートナノ粒子が、本発明での使用に企図され、そしてこのような粒子は、容易に作製され得る。
【００８２】
リポソームは、水性媒体中に分散し、多層の同心円状二重膜小胞（多重膜リポソーム（ＭＬＶ）とも呼ばれる）を自発的に形成する、リン脂質から形成される。ＭＬＶは、一般的に、２５ｎｍ〜４μｍの直径を有する。ＭＬＶの超音波処理により、中心に水性溶液を含有する、２００〜５００Åの範囲の直径を有する小さな単膜リポソーム（ＳＵＶ）が形成される。
【００８３】
以下の情報もまた、リポソーム処方物の生成にも利用され得る。リン脂質は、水中に分散された場合に、脂質と水とのモル比に応じて、リポソーム以外の種々の構造を形成し得る。低い比では、そのリポソームは、好ましい構造である。リポソームの物理的特性は、ｐＨ、イオン強度および二価カチオンの存在に依存する。リポソームは、イオン性物質および極性物質に対して低い透過性を示し得るが、高い温度では、その透過性を顕著に変化させる相転移が生じる。この相転移は、ゲル状態として知られる、緊密に密集した秩序だった構造から、流体状態として知られる、緩く密集した低秩序構造への変化を含む。これは、特徴的な相転移温度で生じ、イオン、糖および薬物に対する透過性の上昇をもたらす。
【００８４】
リポソームは、以下の４つの異なる機構を介して細胞と相互作用する。マクロファージおよび好中球のような細網内皮系の食細胞によるエンドサイトーシス。非特異的な弱い疎水性力または静電気力、あるいは細胞と表面構成要素との特異的相互作用のいずれかによる、細胞表面への吸着。細胞質中へのリポソーム内容物の同時放出を伴う、形質膜へのリポソームの脂質二重膜の挿入による形質細胞膜との融合。リポソーム内容物を全く伴わない、細胞膜または亜細胞成分膜へのリポソーム脂質の移入。その逆方向への移入。リポソーム処方物を変えることにより、働く機構を変更し得るが、１つより多くの機構が同時に働き得る。
【００８５】
（Ｘ．実施例）
以下の実施例は、本発明の好ましい実施形態を示すために含まれる。以下の実施例に開示された技術は、本発明の実施において十分に機能することが本発明者らにより発見された技術を表わすこと、よって、本発明の実施のための好ましい形態を構成すると見なされ得ることが、当業者によって理解されるべきである。しかし、本開示を鑑みて、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく、開示された特定の実施形態において多くの変更をなしかつ依然として類似するかまたは同様の結果を得ることが可能であることを、当業者は理解するべきである。
【００８６】
（実施例１ 実験）
本プロトコルは、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ ＩｒｖｉｎｅおよびＬｏｎｇ Ｂｅａｃｈ Ｖｅｔｅｒａｎｓ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｅｎｔｅｒの治験委員会（ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌ ｒｅｖｉｅｗ ｂｏａｒｄ）により承認された。ＰＳＡの上昇または直腸検査の異常のいずれかのために経直腸前立腺針生検を受けている５０歳〜８５歳の男性が、定期的な現行の生検時に末梢域の４つのさらなるコア針生検を受けるための書面による同意にサインした。さらなる４つの生検は、液体窒素で即時に凍結し、−７０℃のフリーザー中に保存した。６つ一組の（ｓｅｘｔｅｎｔ）生検を、定期分析のために病理部に送った。患者が、（１）前立腺癌のための根治的な外科手術、（２）出口閉塞のための経尿道的切除、または（３）異型性の診断に起因する第２の生検、を選択した場合、その患者に、治験への参加を継続し、第２の手順前２８日間および第２の手順の日にＤＦＭＯ ０．５ｇｍ／ｍ２を経口摂取するよう依頼した。質問表および問診技術を使用して副作用について患者をモニターした。凝固パラメータを、手術前に注意深く評価した。外科手順の直前に手術室にて、末梢域の４つの経直腸コア生検を、採取し、そして凍結させた。組織学的分析およびポリアミン分析のため、ＤＦＭＯ前後の標本を、ドライアイス上に載せて共にアリゾナに送った。根治的な前立腺切除標本を、ＴＭＮ（１９９７年更新）病期分類システム（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｉｎｔ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｎ Ｃａｎｃｅｒ １９９７）により病期分類した。
【００８７】
前立腺コアのポリアミン含有量を決定するため、まず、コアを解凍し、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中で洗浄し、重量を量った。次に、サンプルを０．２Ｎ過塩素酸中で細分化し、超音波処理して細胞物質を破砕した。次いで、サンプルを２，０００Ｘｇで５分間遠心分離させ、酸溶解画分と酸不溶画分とに分離した。他に記載されているように（Ｇｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ． １９９４、Ｍｅｙｓｋｅｎｓ ｅｔ ａｌ． １９９４、Ｍｅｙｓｋｉｎｓ ｅｔ ａｌ． １９９８）、逆相イオン対高速流体クロマトグラフィー（ＰＨＬＣ）法を用いて、酸溶解画分をポリアミン含有量について評価した。簡潔には、ポリアミンは、Ｃ１８Ｂ Ｏｎｄａｐａｋカラムで分離され、分離後にｏ−フタルデヒド（ｏ−ｐｔｈａｌｄｅｈｙｄｅ）で誘導体化され、この誘導体化した物質の７５０ｎｍでの吸収により検出される。
【００８８】
ポリアミンレベルの平均、メジアン、および範囲は、ｎｍｏｌ／ｍｇタンパク質で報告される。本発明者らの方法の検出限界は、０．０１ｎｍｏｌ／ｍｇである。
【００８９】
慣用的６つ一組の生検および外科標本は、Ｌｏｎｇ Ｂｅａｃｈ Ｖｅｔｅｒａｎｓ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｅｎｔｅｒの病理学部により確立されたプロトコルに従って処理され、報告された。
【００９０】
組織構造の変化を、明視野顕微鏡法により評価した。ＤＦＭＯ前後のポリアミン値は、ウィルコクソン符号付き順位和検定（Ｗｉｌｃｏｘｏｎ ｍａｔｃｈｅｄ−ｐａｉｒｓ ｓｉｇｎｅｄ ｒａｎｋ ｔｅｓｔ）を用いて比較した。このため、各患者について、本発明者らは、ＤＦＭＯによるポリアミン変化の大きさおよび方向の両方を考慮に入れることができた。
【００９１】
（実施例２ 結果）
人口統計：４９人の男性が、本研究の参加同意書にサインした。２２人は、６つ一組の生検の時に、４つの付加的なコアの第１の組を有した。慣用的生検の結果および同意した患者に基づき、１０人の男性がＤＦＭＯを開始した。９人の男性が、生検の第２の組を有した。１人の男性は、ＤＦＭＯの開始後、その前立腺癌のための処置を全く受けないことを選択した。参加者およびその慣用的生検の組織病理の結果の詳細な統計を、表１に示す。
【００９２】
試験を全うした男性の平均年齢は、６５．６歳であった（メジアン６６歳、範囲５６〜７３歳）。群の人種は、白人（３）、ラテンアメリカ人（３）、黒人（１）、アジア人（１）、および白人／アジア人混血（１）であった。生検についての徴候は、ＰＳＡの上昇（５）、直腸指診の数値異常（３）または両方（１）であった。９人の患者の第１の生検前の平均ＰＳＡは、９．４ｎｇ／ｍｌ（メジアン５．１ｎｇ／ｍｌ、範囲１．７〜４７．２）であり、ＤＦＭＯは、平均２８．２日間（メジアン２８日間、範囲２１〜３５日間）与えられた。コンプライアンスは、文書およびインタビューにより測定されたように、１００％であった。第２の手順は、根治的恥骨前立腺切除（ＲＲＲ）（４）、生検の繰返し（４）、および前立腺の経尿道切除（ＴＵＲＰ）（１）であった。
【００９３】
副作用：副作用は、４人の男性に報告された。２人の男性は、軽い臨床的な聴覚障害（純音聴覚学によっては確認されない）、吐き気、下痢、ならびに１人の男性においては倦怠感、およびもう１人の男性においては突発性の一時的衰弱を含む、グレード０の副作用を有した。１人の男性は、グレード１のめまい、これと共に、吐き気および上胃部の痛みを有した。血小板数、あるいはＤＦＭＯを伴うプロタイム（ｐｒｏｔｉｍｅ）の臨床的に有意な変化は無かった。外科手術の前に出血時間を調べたが、ＤＦＭＯによっては変化しなかった。
【００９４】
病理：（表１）第１の生検についての慣用的病理診断は、異型性（２）、炎症を伴う異型性（３）、グリーソン和５（１）、グリーソン和６（２）、グリーソン和７（１）（計９）であった。第２の処置の時の慣用的病理標本は、ＢＰＨ（１）を実証した。ＢＰＨおよび炎症（１）、炎症（１）、異型性（１）、グリーソン和６（１）、Ｐｔ２Ａグリーソン和６（１）、ｐＴ２ｂグリーソン和６（１）、ｐＴ３ａグリーソン和６（１）、ｐＴ４グリーソン和８（１）（計９）。
【００９５】
【表１】
コア組織構造：ＤＦＭＯ処置の前後で得たコア生検サンプルにおいては、組織構造の主要な変化は無かった（ＲＢ Ｎａｇｌｅ、個人的連絡、データ示さず）。
【００９６】
ＰＳＡ：（表１）９人の患者についての第１の生検前の平均ＰＳＡは、９．４ｎｇ／ｍｌ（メジアン５．１ｎｇ／ｍｌ、範囲１．７〜４７．２）であった。最終的に良性の病理を有する４人の患者について、本発明者らは、生検前ＰＳＡまたはＤＦＭＯ前ＰＳＡを、ＤＦＭＯ適用中に抽出したＰＳＡと比較した。ＰＳＡは、各患者において減少した（患者１、４、５、７）。ＰＳＡは、悪性の病理を有する患者の５人のうち３人において上昇した（患者３、８、９）。これら３人の男性の中で、１人の男性のＰＳＡは非常に変わりやすいが（患者８）、別の男性のＰＳＡは６週間の生検内で抽出されており、よってＰＳＡは生検から不正確に上昇した可能性がある（患者９）。
【００９７】
ポリアミンレベル：図１は、経口的ＤＦＭＯの前後に行われた生検を有する９人の男性における、プトレシン、スペルミジン、スペルミン、およびスペルミジン／スペルミン比の値を比較している。治療前のプトレシンは、６人の男性においてはＤＦＭＯ前で検出可能であり、３人の男性においては検出可能ではなかった（０．０１ｎｍｏｌ／ｍｇ未満）。平均プトレシンレベルは、０．４２ｎｍｏｌ／ｍｇ（メジアン０．２７、検出不可範囲〜０．９４）であった。全ての男性が、ＤＦＭＯ後、検出不可能なレベルのプトレシンを有していた。０．０１以上のＤＦＭＯ前プトレシンレベルを有する６人の男性について、基線からの平均減少量は、９７．６％（ｐ＝０．０３１）であった。スペルミジンは、ＤＦＭＯ前の全標本において測定可能であった。平均の処置前レベルは、１．２１ｎｍｏｌ／ｍｇ（メジアン０．８１、範囲０．４９〜３．８２）であり、ＤＦＭＯ後、全標本において減少した。治療後の平均スペルミジンの平均レベルは０．３２（メジアン０．２１、範囲検出不可〜１．１８）であり、２つの標本においてはそのレベルは検出不可能であった。基線からの平均減少％は、７３．６％（ｐ＝０．００４）であった。ＤＦＭＯ前のスペルミンレベルは、試験した全ポリアミンの中で最も高かった。ＤＦＭＯ前の平均スペルミンレベルは２９．１４ｎｍｏｌ／ｍｇ（メジアン２８．８５、範囲９．８８〜５３．６６）であり、ＤＦＭＯ後、全標本において平均スペルミンレベル１４．３３（メジアン１７．４０、範囲３．２４〜２５．２８）まで減少した。基線からの平均減少率は、５０．８％（ｐ＝０．００４）であった。スペルミジン／スペルミン比を各標本について算出した。９人中８人の患者において、ＤＦＭＯが与えられた後、この比は減少していた。基線からの平均減少率は、５０％（メジアン５２％、範囲−２５．３〜９７％）（ｐ＝０．０１９）であった。関節包外前立腺癌を有する２人の患者では、基線からの減少率は最も小さく、または、ＤＦＭＯでの処置後、スペルミジン／スペルミン比は実際に上昇した（患者２および８）。
【００９８】
（実施例３． 考察）
この短期の試験において、本発明者らは、２８日間毎日のＤＦＭＯ０．５ｇｍ／ｍ２の経口投与後における、前立腺ポリアミン（プトレシン、スペルミジンおよびスペルミン）およびスペルミジン／スペルミン比の有意な低減を実証することができた。プトレシンは９８％（ｎ＝６、ｐ＝０．０３１）、スペルミジンは７４％（ｎ＝９、ｐ＝０．００４）、およびスペルミンは５１％（ｎ＝９、ｐ＝０．００４）基線から減少した。特に興味深いのは、スペルミンの大きな低減が実証されたことである。スペルミンレベルに対するＤＦＭＯのこの効果は、ＤＦＭＯが与えられる患者の他の組織において観察されておらず、また、ＤＦＭＯ治療を受ける患者の他の組織において観察されていない（Ｇｅｒｎｅｒら、１９９４、Ｍｅｙｓｋｅｎｓら、１９９４、Ｍｅｙｓｋｅｎｓら、１９９８）。
【００９９】
本発明者らの試験設計についての、および、上述したＭｅｓｓｉｎｇら（１９９９）についての簡単な検討から、２つの研究間の一致しない結果の原因となり得る研究の違いが指摘される。本研究の利点は、ＤＦＭＯ前後の同一の男性からのサンプルを使用することにより、ポリアミン抑制に関する自身のコントロールとして各男性を使用することを、本発明者らが選択したことである。加えて、このサンプルは、サンプルがバッチでの違いを避けるためにともに試行され得る前後両方まで、試行されなかった。データは、操作前の被験者間のポリアミンレベルの広い可変性を示し、プトレシンが試験したポリアミンの中で最も変化が小さいことを実証する（Ｐｕｔ（検出不可能範囲（０．０１未満検出不可能）〜０．９４）、Ｓｐｄ（範囲０．４９〜３．８２）、およびＳｐｍ（範囲９．９６〜５３．７））。この可変性により、少量のコントロールと処置群との違いを評価することが困難となり、なぜ可変性が最も小さいプトレシンのみがＭｅｓｓｉｎｇの試験で有意に変化したかの答えとなり得る。本研究者らの試験では、各男性が自身のコントロールであり、よってＤＦＭＯの効果はより容易に測定された。ポリアミンレベルの可変性の有する同様の困難さは、Ｍｉｔｃｈｅｌｌら（１９９７）により検討されている。彼らは、正常頸部組織と比較した頸部癌中のポリアミンレベルについて報告し、特に、ポリアミンレベルを中間体マーカーとして用いる可能性を検討している。組織のこれらの種類の間にはポリアミンレベルの違いはあったが、著者らは、ポリアミンレベルの可変性のため、多数の被験者が有意な結果を見るために必要とされると結論している。
【０１００】
これら２つの研究の間には、組織を管理する様式に関連する処理問題もある。ＯＤＣ活性は異なったラット前立腺葉において異なっており（これらは背面葉と比較したときに腹葉においてより高い）、かつ、これらの同一の相違がヒト前立腺の帯域中に観察されるかどうかは既知ではなかったので（Ｈｅｓｔｏｎら、１９８２）、本発明者らは前立腺の末梢検体に特定している。加えて、ＤＦＭＯの２８日後、外科手術直前に得られた生検は、外科手術中の前立腺の焼灼または脈管遮断（ｄｅｖａｓｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ）を発生させ得る、いかなるあり得るポリアミンの分解または変化をも回避するため、まず経直腸的にかつ凍結されたように行われた。全身的に脈管遮断されかつ除去されたとき、１〜２時間の虚血の前立腺への影響がどれほどのものであるのかは知られていない。この操作の未知の効果は、最終的な外科手術の前にコアを取ることにより、研究では未然に回避される。
【０１０１】
本発明者らの研究とＭｅｓｓｉｎｇら（１９９９）のそれとの間の別の違いは、処置の長さである。被験者は、４週間のＤＦＭＯを受けた（２週間に対して）。Ｄａｎｚｉｎにより発表されたラット前立腺に関する論文は、ＤＦＭＯの腹腔注射（１２時間毎に１００ｍｇ／ｋｇ）による、コントロール値の１０％までの最も有意なＯＤＣ阻害が４〜６時間後に見られたことを示している。阻害は、２４時間までコントロールと比較して５０％低減まで上昇した。８日間の研究の残りの間中、阻害は、コントロールから３０％〜５０％の範囲にあり、定常状態には到達しなかった。同じ論文中で、Ｄａｎｚｉｎは、処置２週間後のポリアミンレベルを測定し、低用量ＤＦＭＯ（１００ｍｇ／ｋｇ）でのプトレシンおよびスペルミンレベルの、ならびに、より高用量（１ｇｍ／ｋｇ）でのスペルミジンレベルの有意な低減を見出した（Ｄａｎｚｉｎら、１９７９）。１００ｍｇ／ｋｇＤＦＭＯの２週間後の、プトレシンの２０２±３７から４±４ｎｍｏｌ／ｇへの低減は、さらに２週間処置したときのプトレシンについての任意のさらなる影響を推測することを困難にする。しかし、１００ｍｇ／ｋｇＤＦＭＯを用いた２週間後では、スペルミジンにそれほどの低減はなく（７３３４±１９３から１１８８±２８９）、スペルミンには有意な低減はなかった（２９６８±２９３から２７４１±３４６）。これら後者の２つのポリアミンは、ＤＦＭＯを用いた低減を見るのに、より長い処置時間を要する場合がある（Ｄａｎｚｉｎ ｅｔ ａｌ． １９７９）
ポリアミンレベルを、人種、年齢、病理、およびこの小系列で記した明白な傾向を全く伴わない阻害の日数に関して評価した。前立腺外癌を有する男性においてＤＦＭＯに伴うスペルミジン／スペルミン比の低減が明らかに存在しないことは非常に興味深い。前立腺癌を有する５人の男性のうち、２人の男性は、前立腺の外側に前立腺癌を有し（関節包外および膀胱頸部浸潤Ｔ３およびＴ４）、これらの２人の男性（患者２および８）においては、ＤＦＭＯに伴うスペルミジン／スペルミン比はほとんど上昇しないか、または、実際に上昇することがわかった。一方で、腺（Ｔ２、限定された器官）に限定された前立腺癌の標本は、良性前立腺疾患を有するものに見られるように、スペルミジン／スペルミン比における同様の低減を示した（図２）。関節包外および膀胱頸部浸潤とともに見られるように、腫瘍はより攻撃的になり、代替的なポリアミン合成またはポリアミンの脱調節（ｄｙｓｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ）が発生する可能性がある。より大きいコホートにおいてこの観察を追跡することは、非常に興味深い。ポリアミンの脱制御は、予後の悪さの予測に用いられることが可能であり、ポリアミンの脱制御の測定は、どの患者がより積極的な様式で処置される必要があるか、または、ただ観察される必要があるのか、の決定に用いられることが可能である。さらなる研究は、他の組織内への浸潤とポリアミンの脱制御のいずれが最初に発生するのかを決定する助けとなる。前立腺外癌の拡張前に、ポリアミンの脱制御を測定する時間があることも考えられる。
【０１０２】
（参考文献）
以下の参考文献は、本明細書中に示される手順等の詳細を補足する例示的手順等をこれらが提供する程度に、本明細書中に参考として特に援用される。
【０１０３】
【表２】
【図面の簡単な説明】
以下の図面は、本明細書の一部を形成し、本発明の特定の局面をさらに説明するために含まれる。本発明は、本明細書中に提示される特定の実施形態の詳細な説明と組み合わせて、これらの１以上の図面を参照することによって、よりよく理解され得る。
【図１Ａ】図１は、ＤＦＭＯの前（斜線棒）および２８日後（白棒）のコア生検により得られた前立腺組織中のポリアミン含有量。図１Ａ．プトレシン含有量；図１Ｂ．スペルミジン含有量；図１Ｃ．スペルミン含有量。
【図１Ｂ】図１は、ＤＦＭＯの前（斜線棒）および２８日後（白棒）のコア生検により得られた前立腺組織中のポリアミン含有量。図１Ａ．プトレシン含有量；図１Ｂ．スペルミジン含有量；図１Ｃ．スペルミン含有量。
【図１Ｃ】図１は、ＤＦＭＯの前（斜線棒）および２８日後（白棒）のコア生検により得られた前立腺組織中のポリアミン含有量。図１Ａ．プトレシン含有量；図１Ｂ．スペルミジン含有量；図１Ｃ．スペルミン含有量。
【図２】図２は、ＤＦＭＯの前（黒棒）および２８日後（白棒）のコア生検により得られた前立腺組織中のスペルミジン／スペルミン比。
（発明の背景）
本出願は、米国仮特許出願第６０／２２７，７１４号（２０００年８月２４日出願）に対する優先権を主張し、この出願の内容は、本明細書中で参考として援用される。米国政府は、公衆衛生局からの助成金番号Ｐ３０ＣＡ６２２０３Ｕ１９および国立癌研究所、国立衛生研究所、厚生省からの助成金番号ＣＡ８１８８６に従って、本発明における権利を所有し得る。
【０００２】
（Ｉ．発明の分野）
本発明は、一般に、癌治療の分野に関する。より詳細には、本発明は、ポリアミンの生合成経路の不可逆的な酵素インヒビターであるＤＦＭＯ（α−ジフルオロメチルオルニチン）の、前立腺癌の治療における使用に関する。
【０００３】
（ＩＩ．関連技術の説明）
迅速に増殖する細胞の成長を伴う疾患状態は、世界中に広まり、有意な割合の人口に影響していることから、これらは、集中的な研究努力のテーマとなってきている。残念ながら、かかる努力にも関わらず、かつ、いくつかの成功にも関わらず、これらの疾患の全般の制御は、満足できるものではない。しかし、近年、かかる疾患状態の処置のための有望な治療方法が、細胞成長に必要なポリアミンの生合成に関与する酵素の不可逆的なインヒビターを利用することにより開発されている。特に有用な酵素インヒビターは、オルニチンデカルボキシラーゼ（ＯＤＣ）のインビボでの不可逆的阻害を生じるものであり、この酵素は、オルニチンのプトレシンへの脱炭酸を触媒する。
【０００４】
α−ジフルオロメチルオルニチン（ＤＦＭＯ）は、オルニチンデカルボキシラーゼ（ＯＤＣ）の不可逆的インヒビターであり、プトレシンおよびその誘導体スペルミジンの細胞内濃度の減少を引き起こす（Ｐｅｇｇ、１９８８）。スペルミジン由来のスペルミンのレベルは、酵素阻害によって著しくは影響されない。ＤＦＭＯは、最初、抗癌治療用途のために合成されたが、おそらく悪性脳腫瘍の治療に中程度の活性を示すこと（Ｌｅｖｉｎら、１９８７）を除き、ヒトの癌に対する化学療法試験において活性な細胞傷害性の薬剤であることが見出されなかった（ＭｃＣａｎｎおよびＰｅｇｇ、１９９２）。一般に、この化合物は、聴覚障害の有意な例外を除いて、無毒性であり、薬物治療を中止した後には可逆的であった（Ｍｅｙｓｋｅｎｓら、１９８６）。聴覚障害の発症は、総蓄積用量に関連し得る（Ｃｒｏｇｈａｎら、１９９１）。
【０００５】
実験動物モデルでは、ＤＦＭＯが、結腸の上皮癌を含む、発癌性物質誘発性の多くの器官の上皮癌の予防に特に活性のある、発癌の強力なインヒビターであることが見出されている（Ｗｅｅｋｓら、１９８２、Ｔｈｏｍｐｓｏｎら、１９８５、Ｎｏｗｅｌｓら、１９８６、Ｎｉｇｒｏら、１９８７）。ＤＦＭＯは、動物における腫瘍促進段階の後期で作用するが、それがポリープおよび癌の発達を阻害する正確な機構は知られていない。オルニチンデカルボキシラーゼおよびポリアミンによる、細胞のトランスフォーメーション、浸潤、および血管形成への作用が、報告されている（Ａｕｖｉｎｅｎ， １９９７）。例えば、ＯＤＣの過剰発現は、細胞のトランスフォーメーションおよび浸潤を増強する（Ｋｕｂｏｔａら、１９９７）。
【０００６】
この現象を説明する分子機構は、マイトジェン活性化プロテイン（ＭＡＰ）キナーゼ活性の活性化、マトリクスメタロプロテイナーゼの分泌（Ｗａｌｌｏｎら、１９９４； Ｋｕｂｏｔａら、１９９７）、および癌遺伝子（ｃ−ｍｙｃおよびｒａｓ）を有する経路（Ｍｅｙｓｋｅｎｓら、１９９９； Ｃｌｉｆｆｏｒｄら、１９９５）を含む。ポリアミンの潜在的な細胞相互作用の包括的な概説が、最近提示されている（Ａｕｖｉｎｅｎ、１９９７）。
【０００７】
前立腺癌は、米国男性において最も一般的に診断される悪性疾患であり、米国において男性の癌死亡の、上から２番目の原因である（Ｆｅｕｅｒら、１９９９）。前立腺癌の発生率は年齢とともに上昇するので、前立腺癌と診断されることになる男性の数は、医療および全般的な健康が向上するにつれて、増加する。このように、前立腺癌の予防は、国民的な医療問題である。前立腺癌の予防のための現在のストラテジーは、前立腺中のホルモン環境の変化（Ｐｒｏｓｃａｒ）、あるいは抗酸化剤（セレンおよびビタミンＥ）またはレチノイドの食物への添加に焦点が当てられてきた。別のアプローチは、前立腺中のポリアミンレベルを抑制することであり、これは、ポリアミン経路の第１の酵素であるオルニチンデカルボキシラーゼ（ＯＤＣ）がヒト前立腺癌組織中で過剰発現されることを示す研究により提案される手法である（Ｍｏｈａｎら、１９９９）。
【０００８】
ＯＤＣ活性およびポリアミン含有量は、他の哺乳動物組織と比較して、前立腺組織においてより高い（Ｄｕｎｚｅｎｄｏｒｆｅｒ、１９７８）。１９７９年に、Ｄａｎｚｉｎらは、ラットをＤＦＭＯで２週間処置し、４〜６週間以内でベースライン活性の１０％までの前立腺ＯＤＣの最大の阻害を見出し、研究の間中、ベースライン活性の５０％までの抑制を持続した。前立腺は、精巣、胸腺、脾臓または肝臓よりもＤＦＭＯに対してより感受性があり、前立腺および胸腺は、器官重量の減少を示した。Ｄａｎｚｉｎら（１９７９）はまた、去勢後の外因性のテストステロンを用いる前立腺の再成長に対するＤＦＭＯの効果に注目した。去勢後、前立腺は、ポリアミン含有量と同様に、サイズにおいて減少した。アンドロゲンの補充により、前立腺の萎縮は即座に反転し、ポリアミン含有量は上昇した。ＤＦＭＯは、アンドロゲン処置の間、前立腺（腹側葉）の重量増を顕著に遅らせた。
【０００９】
Ｈｅｓｔｏｎら（１９８２）は、インビトロおよびインビボ（ラットの側腹部中に腫瘍細胞を接種して粗大な腫瘍を産生した後）での、前立腺癌細胞系に対するＤＦＭＯの抑制効果を測定した。インビトロでのＯＤＣ活性は、２つのアンドロゲン非依存性前立腺癌細胞株において最も高く、次いで、腹側葉、ゆっくりと成長する癌細胞株、そして背側葉において高かった。ＤＦＭＯで腹腔的に１８日間処置したインビボでの前立腺腫瘍を有する動物は、全身毒性を伴わずに、非処置コントロールの半分の湿重量を有する腫瘍を発達させた。別の研究では、総ポリアミン抑制（無ポリアミン食、ＤＦＭＯ、ポリアミンオキシダーゼの第２のインヒビターおよび腸管洗浄から構成される処置）が、ラットの側腹部中に移植したＭＡＴ−ＬｙＬｕ前立腺癌細胞株の成長について評価された（Ｍｏｖｌｉｎｏｕｘら、１９９１）。ヒト被験者については、前立腺癌を有する患者のＰＳＡ力価の減少を導くポリアミン欠乏についての報告が、Ｋｅｒｇｏｚｉｅｎ（１９９６）によって解説された。
【００１０】
１９９９年に、Ｍｅｓｓｉｎｇらは、ヒト前立腺ポリアミンレベルに対する２週間の経口ＤＦＭＯの結果を発表した。彼らの研究では、無作為に選択した男性に、根治的な前立腺切除または膀胱前立腺全摘出の前に、２週間のＤＦＭＯ（０．５ｇｍ／ｍ２）（ｎ＝１５）またはプラシーボ（ｎ＝１０）のいずれかを与えた。外科手術の時点で、ポリアミン分析用の組織を、エキソビボコア生検を用いて、前立腺の外科的除去後に採取した。触診可能な場合、疑われしい前立腺癌小節を、サンプリングした。採取した前立腺コアの数は、１被験者あたり２〜６個の範囲であったが、癌の領域をサンプリングしようとする研究者らの努力に反して、これらのコアの大半は、癌を示さなかった。ＯＤＣ活性およびポリアミンレベルを、これらのコアにおいて測定した。加えて、各被験者の血漿テストステロン、血清ＰＳＡ、および前立腺酸ホスファターゼレベル、ならびに手掌上腕皮膚パンチ生検からのＯＤＣ活性を、測定した。１４人の男性が、毒性を伴わずに、２週間のＤＦＭＯを完了した。平均プトレシンレベルは、ＤＦＭＯ処置群では統計的により低かった（１．４３対１．９５、ｐ＝０．０３）。有意なことに、彼らの研究で測定されたＯＤＣ活性、スペルミジンレベルおよびスペルミンレベルにおいて、差異は存在しなかった（Ｍｅｓｓｉｎｇら、１９９９）。
【００１１】
これらの結果を鑑みると、ＤＦＭＯが、前立腺癌を有する患者（特に、スペルミンレベルに対するいかなる効果も伴わない患者）の処置に有用であることは、不明確なままである。
【００１２】
（発明の要旨）
従って、本発明は、ヒト前立腺細胞中のスペルミンレベルおよび／またはスペルミジンレベルを減少させる方法を意図し、この方法は、上記細胞中の上記レベルを減少させるのに十分な量および期間、ＤＦＭＯを上記細胞中に投与する工程を包含する。前立腺は、他の器官と比較して、高レベルのポリアミンを有する。前立腺はまた、本発明の方法を用いたＤＦＭＯに対する曝露時のスペルミンの量および減少％において、他の器官と異なる。
【００１３】
好ましい実施形態では、ヒト前立腺細胞は、癌細胞、非癌性細胞または良性過形成細胞である。上記細胞は、ＤＦＭＯ投与中の患者中にあってもよく、用いられるＤＦＭＯは、Ｌ−鏡像異性体を実質的に含まないものか、または、Ｄ−異性体とＬ−異性体との５０／５０ラセミ体混合物と比べて、Ｄ−鏡像異性体が富化されていてもよい。
【００１４】
好ましい実施形態では、ＤＦＭＯは、約３、４、５、６、８、１０または１２週間投与される。ＤＦＭＯの投与期間は、これよりも長くてよく、２、３、４、５、６、８、１０ヶ月の間または１２ヶ月を超える間、継続されてもよい。ＤＦＭＯ投与期間は、２、３、４、５、１０、１５、２０、２５、３０、４０または５０年間であってもよく、患者の一生にわたってもよい。好ましい実施形態では、ＤＦＭＯの投与量は、約０．１〜２．０ｇｍ／ｍ２／日、またはより好ましくは、約０．５ｇｍ／ｍ２／日である。ＤＦＭＯ量は、約０．１〜２ｇ／日、またはより好ましくは、０．２５〜１．５ｇ／日、またはさらにより好ましくは、０．５〜１．０ｇ／日であり得る。ＤＦＭＯは、任意の一般的な経路を介して投与されてもよい。好ましい実施形態では、ＤＦＭＯは、経口的に投与される。
【００１５】
好ましい実施形態では、スペルミンレベルが、減少される。この減少は、好ましくは、上記処置の前の上記細胞中のスペルミジンレベルと比較して、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％または８０％である。好ましい実施形態では、スペルミジンレベルが、減少される。この減少は、好ましくは、上記処置の前の上記細胞中のスペルミジンレベルと比較して、約３０％、４５％、５５％、６５％、７５％、８５％、９５％または９９％である。別の好ましい実施形態では、上記細胞のスペルミジン／スペルミン比が、減少される。さらに別の実施形態では、プトレシンレベルが、約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％または９９％減少される。
【００１６】
本発明はまた、前立腺癌に罹患しているヒト被験者を処置する方法に関し、この方法は、上記被験者の前立腺細胞中のスペルミンレベル、スペルミジンレベル、またはスペルミジン／スペルミン比を減少させるのに十分な量および期間、被験者にＤＦＭＯを投与する工程を包含する。
【００１７】
なお別の実施形態は、第２の治療を包含し、この第２の治療は、ジヒドロキシテストステロンを減少させること、食餌抗酸化剤（例えば、セレン、ビタミンＥまたはその両方）を投与すること、レチノイドを投与すること、前立腺切除、低ポリアミン食、ポリアミンオキシダーゼを阻害すること、放射線療法またはホルモン療法（例えば、ルペロン（ｌｕｐｅｒｏｎ）、ゾルデックス（ｚｏｌｅｄｅｘ）、フルタミドまたはカサデックス（ｃａｓａｄｅｘ））を、単独でか、または組み合わせて、包含する。
【００１８】
さらなる実施形態では、本発明に従うＤＦＭＯ治療の効果は、診断方法によって前立腺癌の処置において決定され得、この診断方法は、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）の分析、前立腺生検、直腸検診、またはＰＳＡの分析および直腸検診を包含するが、これらに限定されない。
【００１９】
他の実施形態は、危険性のある被験者において前立腺癌の発達を阻害するための方法、原発性前立腺癌を有する被験者における前立腺癌の転移を阻害するための方法、ステージ１またはステージ２の前立腺癌を有する被験者における前立腺癌の進行を阻害するための方法、切除不可能な前立腺癌腫瘍を切除可能にするための方法、および前立腺癌腫瘍の成長を阻害するための方法を包含する。これらの方法は、ヒト被験者の前立腺細胞中のスペルミンレベルおよび／またはスペルミジンレベルを減少するのに十分な量および期間、その被験者にＤＦＭＯを投与する工程を包含する。
【００２０】
良性前立腺過形成に罹患しているヒト被験者において良性前立腺過形成を処置する方法もまた、本発明の範囲内にあり、この方法は、その過形成細胞により生成されるポリアミンの量を安定化または減少させるのに十分な量および期間、その被験体にＤＦＭＯを投与する工程を包含し、ここで、上記ポリアミンは、スペルミン、スペルミジン、またはスペルミンとスペルミジンとの組み合わせである。過形成細胞により生成される前立腺特異抗原（ＰＳＡ）のレベルもまた、ＤＦＭＯでの処置において安定化または減少され得る。
【００２１】
本発明のさらなる実施形態は、良性前立腺過形成に罹患しているヒト被験者において良性前立腺過形成を処置するための方法を包含し、この方法は、その過形成細胞によって生成されるポリアミン（スペルミンまたはスペルミジン）レベルの減少または安定化によって測定されるような、治療有効量のＤＦＭＯを、十分な期間、以下から選択される治療有効量の第２の治療薬剤と一緒に、投与する工程を包含する：α−１アドレナリン作用性レセプター遮断薬（例えば、テラゾシン、ドキサゾシン、プラゾシン、インドラミン、タムスロシン（ｔａｍｓｕｌｏｓｉｎ）、プラジシン（ｐｒａｚｉｃｉｎ）およびアルフゾシン（ａｌｆｕｚｏｓｉｎ））；５−α−レダクターゼ酵素遮断薬（例えば、フィナステリド（ｆｉｎａｓｔｅｒｉｄｅ））；アザステロイド誘導体；α−１アドレナリン作用性レセプター遮断薬と５−α−レダクターゼ酵素遮断薬との組み合わせ；カリウムチャネル開放薬（ｏｐｅｎｅｒ）（例えば、ミノキシジル）；またはレチノイン酸誘導体。好ましい実施形態において、第２の治療薬剤は、ノコギリパルメット抽出物である。
【００２２】
（例示的な実施形態の説明）
（Ｉ．本発明）
本発明は、ヒト前立腺中のポリアミンレベルを減少するための方法としての、ＤＦＭＯ（α−ジフルオロメチルオルニチン）の使用を記載する。ＤＦＭＯは、２８日間経口的にＤＦＭＯが与えられた男性被験者の前立腺中のプトレシン、スペルミジン（Ｓｐｄ）およびスペルミン（Ｓｐｍ）のレベルを有意に減少させ得る。従って、ＤＦＭＯは、前立腺癌の治療における治療用途として利用され得る。驚くべきことに、ＤＦＭＯの投与に伴う前立腺中のスペルミンレベルの量および減少％は、ＤＦＭＯが、このような減少を引き起こすのに十分な量および期間、投与される場合、ＤＦＭＯ治療を受けている患者の他の組織中におけるそれらよりも高い。
【００２３】
（ＩＩ．ＤＦＭＯ（α−ジフルオロメチルオルニチン））
多くの高度増殖型癌は、血中および尿中のポリアミン（プトレシン、スペルミジンおよびスペルミン）レベルの上昇に関連している。研究により、これは、律速酵素オルニチンデカルボキシラーゼ（ＯＤＣ）によるポリアミン合成の増大に関連することが示されている。本出願において特に興味が向けられたのは、前立腺癌である。
【００２４】
ポリアミン合成の経路は、Ｌ−オルニチンで開始される。この天然のアミノ酸は、通常はタンパク質に含まれないが、アルギニンをオルニチンと尿素とに代謝する尿素サイクルの一部である。オルニチンは、オルニチンデカルボキシラーゼ（ＯＤＣ）によりプトレシンとＣＯ２とに変換され、これがポリアミン産生の律速段階である。Ｓ−アデノシルメチオニンから与えられるプロピルアミンの付加により、プトレシンはスペルミジンに変換される。スペルミジンは、その後、再びＳ−アデノシルメチオニンの脱炭酸に関連して、スペルミンシンテターゼによりスペルミンに変換される。プトレシン、スペルミジンおよびスペルミンは、哺乳動物組織中の、３つの主要なポリアミンを表わす。ポリアミンは、動物組織および微生物中に見出され、細胞の成長および増殖に重要な役割を果たすことが知られている。細胞の成長および増殖におけるポリアミンの役割の正確な機構は知られていないが、ポリアミンは、ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはタンパク質合成のような高分子プロセスを促進し得ると思われる。ポリアミンレベルは、精巣、腹側前立腺および胸腺において、乾癬性皮膚病変において、ならびに、急速な成長プロセスを起こしている他の細胞において、高いことが知られている。
【００２５】
また、腫瘍組織の急速増殖は、ポリアミンレベルの異常な上昇により特徴付けられることも十分に知られている。すなわち、ポリアミンはまた、腫瘍の成長の維持において重要な役割を果たし得る。このため、ＤＦＭＯのようなＯＤＣインヒビターは、ポリアミンの形成を遮断することによりその治療的効果を発揮し、これにより、腫瘍組織の増殖および転移を、遅らせるか、中断させるか、または阻止し得る。
【００２６】
ＤＦＭＯ（α−ジフルオロメチルオルニチン、エフロルニチン（Ｅｆｌｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）、Ｏｒｎｉｄｙｌ（登録商標））は、アミノ酸Ｌ−オルニチンの構造アナログであり、以下のＣ６Ｈ１２Ｎ２Ｏ２Ｆ２の化学構造を有する。
【００２７】
【化１】
【００２８】
（ＩＩＩ．ＤＦＭＯの抗腫瘍特性および毒性）
ＤＦＭＯは、腫瘍中のプトレシン合成の阻害を生じさせるものの、宿主に対しては比較的無毒である。ヒトにおける経口的ＤＦＭＯは、耳毒性（聴覚障害）を伴い、これは、化学的予防のための推奨用量を、一日当り一回の０．５ｇｍ／ｍ２の付与用量に制限する。ＤＦＭＯの用量を制限する他の毒性作用は、血小板減少症（血中の血小板が異常に少ないこと）（これは、患者の約５０％に生じる）、白血球減少症（白血球が異常に少ないこと）または貧血である。ＤＦＭＯの別の副作用は、悪心および嘔吐であり、これは、患者の９０％までにおいて生じる。これら全ての毒性作用は、比較的無害かつ可逆的であり、薬物の使用を中止によって停止する。
【００２９】
急速に増殖する腫瘍組織の成長速度の制御のためのＯＤＣインヒビターの効果は、標準動物腫瘍モデルにおいて評価されている。例えば、ＤＦＭＯの抗腫瘍効果は、以下の動物腫瘍モデルにおいて実証されている：マウスのＬ１２１０白血病、Ｂａｌｂ／ＣマウスのＥＭＴ６腫瘍、ラットの７，１２−ジメチルベンズアントラセン誘導性（ＤＭＢＡ誘導性）哺乳動物腫瘍、およびバッファローラットのＤＦＭＯ Ｍｏｒｒｉｓ ７２８８Ｃまたは５１２３ヘパトーム。加えて、種々の細胞傷害性薬剤と組み合わせたＤＦＭＯの抗腫瘍効果は、以下のように実証されている：（ａ）マウスのＬ１２１０白血病、バッファローラットのＭｏｒｒｉｓ ７２８８Ｃヘパトーム、およびマウスのＥＭＴ６腫瘍における、ビンデシンまたはアドリアマイシンとの組み合わせ、（ｂ）マウスのＬ１２１０白血病における、シトシンアラビノシドとの組み合わせ、（ｃ）マウスのＬ１２１０白血病における、メトトレキサートとの組み合わせ、（ｄ）マウスのＥＭＴ６腫瘍およびマウスのＤＭＢＡ誘導性腫瘍における、シクロホスファミドとの組み合わせ、（ｅ）マウスの神経膠腫２６脳腫瘍における、ＢＣＮＵとの組み合わせ、および（ｆ）マウスのＬ１２１０白血病、バッファローラットのＭｏｒｒｉｓ ７２８８Ｃヘパトーム、マウスのＰ３８８リンパ球性白血病、およびマウスのＳ−１８０肉腫における、ＭＧＢＧとの組み合わせ。
【００３０】
ＤＦＭＯは、腫瘍のプトレシン生合成を効果的に遮断し得、得られる抗腫瘍効果は、細胞増殖抑制性であり、細胞傷害性ではない。例えば、ＤＦＭＯは、ＭＣＡ肉腫の成長速度を減少させるが、腫瘍の退行を生じさせない。この知見は、ＤＦＭＯが細胞増殖抑制性因子であることを示す他の研究者の報告と一致する。しかし、研究により、重要な役割がＤＦＭＯ薬剤に関して存在し得ることが示され、これは、ＤＦＭＯを含む、併用化学療法レジメンの将来的な開発を可能とする。
【００３１】
種々の新形成の処置での使用における治療的ＯＤＣインヒビターとしてのＤＦＭＯの最初の見込みは、幾分薄れてきたが、これは、米国特許第４，９２５，８３５号に記載されているように、ＤＦＭＯが、実際に、ＯＤＣ活性を不可逆的に阻害するが、ＤＦＭＯでインビボにて処置された細胞が、外因性プトレシンの取り込みを有意に増加するからである。その細胞の細胞間輸送機構は、細胞外環境からのプトレシンの移入によって、ＤＦＭＯによって損なわれたＯＤＣ活性の「回避（ｅｎｄ ｒｕｎ）」を行う。従って、インビボでのＤＦＭＯの効果は、インビトロにおけるよりはるかに低い。よって、ＤＦＭＯ処置が、細胞内プトレシン新生を効果的に阻害し、一方、これはまた、細胞外プトレシンの取り込みを増大し、それによって、そのＯＤＣ阻害効果は相殺される。
【００３２】
この問題は、プトレシンが多くの一般的な食物（例えば、オレンジジュース（約４００ｐｐｍのプトレシンを含有））中に存在するという事実によって、より深刻となる。このことは、プトレシンを含まない栄養的に十分な食餌を患者に提供することを事実上不可能とする。従って、ＤＦＭＯで処置した細胞は、細胞***を支持するのに十分な量の細胞外プトレシンを移入し得る。
【００３３】
ＤＦＭＯをヒト患者にとってより受容可能とするためのストラテジーが、米国特許第４，８５９，４５２号（参考として援用される）に記載されている。ＤＦＭＯの処方物が記載されており、これは、ＤＦＭＯ誘導性の毒性の減少を補助するために、必須アミノ酸を、アルギニンまたはオルニチンのいずれかと組み合わせて含む。
【００３４】
表面的病変へのこの薬物の局所適用は、ヒトにおける全身的取り込みが最小または有意でない、化学防御的癌治療を可能とする。本発明の１つの目的は、しばしば前癌性であるゆうぜいおよび表面的肛門性器ＨＰＶ病変に対する、持続性の局所的化学的予防薬剤として使用され得る、軟膏剤を提供する。この軟膏剤はまた、肛門性器領域の癌性病変に直接塗布してもよい。ＤＦＭＯの５％溶液の局所適用により、マウス表皮のＤＮＡ合成が遮断されることが、当該分野で公知である。インビトロでのプトレシンレベルは、コントロールの２５％まで減少したが、スペルミンレベルおよびスペルミジンレベルは、影響を受けなかった（米国特許第４，８５９，４５２号）。さらに、乾癬を患う１０人の患者に１０％ＤＦＭＯクリームを塗布したところ、乾癬病変の周縁の回復とともに、皮膚のスペルミンレベルが６６％減少されることが示された。
【００３５】
（ＩＶ．Ｄ−ＤＦＭＯ）
ＤＦＭＯの毒性は、ＤＦＭＯのＤ−鏡像異性体によって、または、Ｄ−異性体が異性体混合物の少なくとも６０重量％、好ましくは９０重量％以上を含むように、Ｄ−異性体含量について富化されている、Ｄ−異性体とＬ−異性体との混合物によって、大きく減少され得る。Ｄ−ＤＦＭＯは、なおＯＤＣのインヒビターであるが、動物モデルにおいてより低い毒性（耳毒性を含む）を有する。モルモットの研究では、ＤＦＭＯの鏡像異性体は、有意な毒性は示さなかった。ＤＦＭＯのＤ−型は、複合活動電位または蝸牛マイクロホン作用のいずれにも有意な効果を及ぼさないことが見出された。聴覚機能の評価から、ＤＦＭＯのＬ−型は、正常な蝸牛電位の有意な崩壊を生じることが見出された。
【００３６】
Ｄ−ＤＦＭＯまたは富化Ｄ−異性体混合物の使用は、ラセミ（５０／５０）Ｄ，Ｌ−ＤＦＭＯの使用に関連する多くの問題を克服し得る。Ｄ−ＤＦＭＯまたは冨化Ｄ−ＤＭＦＯ異性体混合物は、Ｄ鏡像異性体に関連する予期される毒性が低いことに起因して、ラセミ混合物よりも高い投与量で投与され得る。０．６μＭ〜８０μＭの濃度範囲のＤ−ＤＦＭＯ、Ｌ−ＤＦＭＯ、およびＤ，Ｌ−ＤＦＭＯを用いる３つの個別の研究において、ＯＤＣ活性の５０％を阻害する各々の有効濃度レベル（Ｋｉ）を決定した。両方の鏡像異性体およびラセミ混合物が、抑制性であった。Ｄ−ＤＦＭＯのＫｉは、Ｌ−型よりも４倍低く、混合物よりも３倍低かった（「Ｄ−ｅｎａｎｔｉｏｍｅｒ ｏｆ ＤＦＭＯ ａｎｄ ｍｅｔｈｏｄｓ ｏｆ ｕｓｅ ｔｈｅｒｅｆｏｒ」との表題の米国特許出願、２０００年７月１日出願）。
【００３７】
（Ｖ．ＤＦＭＯおよびヒト前立腺）
ＤＦＭＯおよび良性前立腺過形成の処置におけるその使用が、米国特許第４，４１３，１４１号および第４，３３０，５５９号に記載されている。米国特許第４，４１３，１４１号は、インビトロおよびインビボの両方における、ＯＤＣのインヒビターとしてのＤＦＭＯを記載している。報告によれば、ＤＦＭＯの投与は、ポリアミンが正常に活性に産生される細胞中の、プトレシンおよびスペルミジン濃度を減少させる。加えて、ＤＦＭＯは、標準腫瘍モデルで試験した場合に、腫瘍性の細胞増殖を遅らせることが可能であることが示された。米国特許第４，３３０，５５９号は、良性前立腺過形成の処置のためのＤＦＭＯおよびＤＦＭＯ誘導体の使用を記載している。良性前立腺過形成は、急速な細胞増殖によって特徴付けられる多くの疾患状態と同様に、ポリアミン濃度の異常な上昇を伴う。この参考文献に記載されている処置は、患者に経口的または非経口的に投与され得る。しかし、上記で指摘したように、Ｍｅｓｓｉｎｇら（１９９９）によるより最近の研究では、２週間にわたるＤＦＭＯの０．５ｇｍ／ｍ２での経口投与を伴う処置後に、癌性前立腺中のスペルミジンレベルまたはスペルミンレベルのいかなる減少も検出することはできなかった。
【００３８】
最近、前立腺癌中のポリアミンの役割が再考されている。Ｍｏｈａｎら（１９９９）は、同一の患者からの良性組織および悪性組織におけるＯＤＣ活性を測定し、癌性部分が良性組織の部分のほぼ３倍のレベルを有することを見出した（１１４２＋１００対４２７＋５１）。加えて、彼らは、マッサージにより得られた前立腺液のＯＤＣ活性を評価し、良性肥大を有する男性と比較した、前立腺癌を有する男性における、より高いレベルを見出した（３８４７＋１６２対２７４２＋６７）。
【００３９】
前立腺癌の化学的予防は、ホルモン性薬剤および抗酸化性薬剤の両方を用いて研究されている。前立腺癌に関する最初の大規模な化学的予防研究が、１９９３年にＳｏｕｔｈｗｅｓｔ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ Ｇｒｏｕｐ（ＳＷＯＧ）により開始され、１８，０００人の男性が無作為に選択され、フィナステリド（Ｐｒｏｓｃａｒ）またはプラシーボを７年間与えられた。試験される仮説は、５−α−レダクターゼによるＤＨＴへのテストステロンの変換をブロックすることによる、前立腺中のジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）レベルの減少が、前立腺癌を減少させるということであった。結果は、２００４年に利用可能となると予想される。より小規模の研究では、Ｐｒｏｓｃａｒ処置または非処置のゼロ時および１年後の代理エンドマーカー（ｓｕｒｒｏｇａｔｅ ｅｎｄ ｍａｒｋｅｒ）に注目した（Ｃｏｔｅら、１９９８）。研究する群には、ＰＳＡが上昇し、かつ、陰性の前立腺針生検を有する男性が含まれた。この研究は、Ｐｒｏｓｃａｒについての男性の１年の経過観察生検後に診断された癌の増大を示した（非処置での２５人中１人に対し、２７人中８人（ｐ＝０．０２５））。前立腺癌の危険性が高い２２人の男性における、経口フェンレチニド（ｆｅｎｒｅｔｉｎｉｄｅ）の小規模の第ＩＩ相試験が、Ｐｉｅｎｔａら（１９９７）により行われた。この試験は、研究前の生検で陰性だった８人の男性が、研究が行われている間に悪性腫瘍を示した、初期の時点で中止された。目的の薬剤からの保護効果を実証し得なかったこれら２つの小規模の研究では、ＤＭＦＯのような種々の薬剤に関して、前立腺癌の化学的予防における役割が存在するはずである。
【００４０】
（ＶＩ．前立腺癌の診断）
前立腺癌に関する最も広く一般に用いられる現在の試験は、直腸指診（ｄｉｇｉｔａｌ ｒｅｃｔａｌ ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ）（ＤＲＥ）、および、血清前立腺特異抗原（ＰＳＡ）の分析である。ＰＳＡは、前立腺組織に特異的であるが、これは、正常および良性ならびに悪性の前立腺上皮によって産生され、これが、前立腺癌の検出について高い割合の偽陽性を生じる（Ｐａｒｔｉｎ ＆ Ｏｅｓｔｅｒｌｉｎｇ、１９９４）。
【００４１】
前立腺癌検出用に用いられている他のマーカーには、前立腺酸ホスファターゼ（ＰＡＰ）および前立腺分泌タンパク質（ＰＳＰ）が含まれる。ＰＡＰは、ホルモンの制御下で前立腺細胞により分泌される（Ｂｒａｗｎら、１９９６）。ＰＡＰは、ＰＳＡが有するよりも、低い特異性および感度を有する。結果として、今ではほとんど用いられないが、ＰＡＰは、初期治療に失敗した転移患者をモニターするためのいくつかの用途を依然として有し得る。一般に、ＰＳＰは、ＰＡＰよりも高感度の生体マーカーであるが、ＰＳＡと同程度の高感度ではない（Ｈｕａｎｇら、１９９３）。ＰＳＡと同様に、ＰＳＰレベルは、ＢＰＨを有する患者だけでなく、前立腺癌を有する患者においても、しばしば上昇する。
【００４２】
前立腺疾患に関連する別の血清マーカーは、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）である（Ｈｏｒｏｓｚｅｗｉｃｚら、１９８７；Ｃａｒｔｅｒら、１９９６；Ｍｕｒｐｈｙら、１９９６）。ＰＳＭＡは、ＩＩ型細胞膜タンパク質であり、葉酸ヒドロラーゼ（ＦＡＨ）として同定されている（Ｃａｒｔｅｒら、１９９６）。ＰＳＭＡに対する抗体は、正常な前立腺組織および前立腺癌組織の両方と反応する（Ｈｏｒｏｓｚｅｗｉｃｚら、１９８７）。Ｍｕｒｐｈｙら（１９９５）は、ＥＬＩＳＡを用いて、進行した前立腺癌中の血清ＰＳＭＡを検出した。血清試験として、ＰＳＭＡレベルは、前立腺癌の比較的弱い指標である。しかし、ＰＳＭＡは特定の状況で有用性を有し得る。ＰＳＭＡは、転移性の前立腺腫瘍の毛細血管床において発現され（Ｓｉｌｖｅｒら、１９９７）、そして転移癌患者の血液中でより豊富であることが報告されている（Ｍｕｒｐｈｙら、１９９６）。ＰＳＭＡメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）は、５−α−ジヒドロキシテストステロン（ＤＨＴ）に対する曝露後のＬＮＣａＰ前立腺癌細胞株において、８〜１０倍ダウンレギュレートされる（Ｉｓｒａｅｌｉら、１９９４）。
【００４３】
上記のように、ＤＦＭＯは、上皮発癌の腫瘍促進段階の後期で作用する。ＤＦＭＯによる結腸発癌の阻害についての機構には、マトリクスメタロプロテイナーゼマトリリシン（ｍａｔｒｉｌｙｓｉｎ）（Ｗａｌｌｏｎら、１９９４）の抑制であって、これは、腫瘍の浸潤に関与する分泌プロテアーゼである。ＤＦＭＯはまた、ＬＮＣａＰヒト前立腺癌由来細胞中のインターロイキン−１β（ＩＬ−１β）誘導性マトリリシン発現を抑制するので、この機構は、前立腺癌において機能的である。
【００４４】
前立腺癌についての比較的新しい潜在的生体マーカーは、ヒトカリクレイン２（ｈｕｍａｎ ｋａｌｌｅｋｒｅｉｎ ２）（ＨＫ２）である（Ｐｉｉｒｏｎｅｎら、１９９６）。ＨＫ２は、前立腺により分泌されるカリクレインファミリーのメンバーである。理論的には、ＨＫ２の血清濃度は、前立腺癌の検出または診断において有用であり得るが、このマーカーの有用性は、依然評価されている。
【００４５】
（ＶＩＩ．癌の処置方法）
特定の局面において、本発明は、前立腺癌の処置のための方法を提供する。治療方法は、ＤＦＭＯを含む治療有効量の治療組成物で個体を処置する工程を包含する。有効量は、一般に、疾患またはその症状の程度を、検出可能にかつ繰り返して、改善、減少、最小化または制限するのに、十分な量として説明される。疾患の排除、根絶または治癒を含む、より厳密な定義が、適用され得る。
【００４６】
ＤＦＭＯは、約０．０５〜約２０．０ｇｍ／ｍ２／日の用量で投与され得る。投与されるべきＤＦＭＯの好ましい用量は、約０．１〜約１５．０ｇｍ／ｍ２／日、または約０．１〜１２ｇｍ／ｍ２／日、または約０．１〜１０ｇｍ／ｍ２／日、または約０．１〜８ｇｍ／ｍ２／日、または約０．１〜６ｇｍ／ｍ２／日、または約０．１〜４ｇｍ／ｍ２／日、または約０．１〜２ｇｍ／ｍ２／日、または約０．１〜１ｇｍ／ｍ２／日または約０．１〜０．５ｇｍ／ｍ２／日、または約０．５ｇｍ／ｍ２／日である。ＤＦＭＯはまた、約０．１〜２．０ｇ／日の用量で、または約０．２５〜１．５ｇ／日の用量で、またはより好ましくは約０．５〜１．０ｇ／日の用量で投与され得る。
【００４７】
細胞を死滅させ、細胞増殖を阻害し、転移を阻害し、腫瘍サイズを減少させ、さもなければ腫瘍細胞の悪性の表現型を反転または低減させるため、本発明の方法および組成物を用いて、一般的に、「標的」細胞をこの治療組成物に接触させる。これは、癌の処置に効果的な他の薬剤を含む組成物と組み合わせ得る。これらの組成物は、細胞を死滅させるかまたは細胞増殖を阻害するために有効な、組合せ量で提供される。このプロセスは、ＤＦＭＯおよび薬剤または因子と細胞を同時に接触させること包含し得る。これは、両薬剤を含む単一の組成物または単一の薬理学的処方物と細胞を同時に接触させることにより、または、一方の組成物がＤＦＭＯを含みかつ他方が第２の薬剤を含む２つの別個の組成物または処方物と細胞を同時に接触させることにより、達成され得る。
【００４８】
患者への、本発明の治療的ＤＦＭＯ組成物の投与は、もしあるならば、ＤＦＭＯの毒性を考慮に入れつつ、化学療法剤の投与に関する一般的なプロトコルに従う。処置サイクルは必要なだけ繰り返されることが予想される。種々の標準的な治療、ならびに外科的介入が、記載された治療と組合せて適用され得ることもまた、企図される。
【００４９】
ＤＦＭＯ治療の臨床的適用が企図される場合には、意図される適用のために適切な薬学的組成物としてこの複合体を調製することが必要である。一般的に、これは、発熱物質と、ヒトまたは動物に有害であり得る他の不純物とを実質的に含まない、薬学的組成物を調製することを包含する。また、この複合体に安定性を付与し、かつ、この複合体を標的細胞により取り込み可能とするため、適切な塩および緩衝液を用いることが、一般的に望まれる。
【００５０】
本発明の水性組成物は、薬学的に受容可能なキャリアまたは水性媒体に溶解または分散された、有効量の化合物を含む。このような組成物はまた、接種材料とも呼ばれ得る。句「薬学的に受容可能または薬理学的に受容可能」とは、動物またはヒトに適切に投与された際に、有害な反応、アレルギー性反応、または他の不適当な反応を生じない、分子実体および組成物を指す。本明細書中で用いられる場合、「薬学的に受容可能なキャリア」は、任意のおよび全ての溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延薬剤などを包含する。薬学的活性物質に関するこのような媒体および薬剤の使用は、当該技術分野で周知である。任意の従来の媒体または薬剤が活性成分と不適合である場合を除き、治療組成物におけるその使用が企図される。補助活性成分も、この組成物に組み込まれ得る。
【００５１】
本発明の組成物は、従来の薬学的調製物を含み得る。同様に、分散物を、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、およびその混合物中、ならびに油中に調製し得る。通常の保存および使用の条件下で、これらの調製物は、微生物の増殖を防ぐための保存料を含有する。
【００５２】
特定の癌に依存して、本発明による治療組成物の投与は、標的組織がその経路を介して利用可能である限り、任意の一般的な経路を介される。これは、経口経路、経鼻腔経路、口腔経路、経直腸経路、経膣経路、または局所経路を包含する。局所投与は、皮膚癌の処置に特に有利である。あるいは、投与は、同所注射、皮内注射、皮下注射、筋肉内注射、腹腔内注射、または静脈内注射による。このような組成物は、通常、生理学的に受容可能なキャリア、緩衝液または他の賦形剤を含む、薬学的に受容可能な組成物として投与される。
【００５３】
特定の実施形態では、エキソビボ治療もまた企図される。エキソビボ治療は、患者からの標的細胞の除去を含む。細胞は、患者の体外で処置され、その後で戻される。
【００５４】
処置は、種々の「単位用量」を包含し得る。単位用量は、その投与（すなわち、適切な経路および処置レジメン）に従って所望の応答を生じるように計算された、所定量の治療組成物を含有するものとして定義される。投与されるべき量、ならびに特定の経路および処方は、臨床分野の当業者の技術範囲内にある。同様に重要なことは、処置される被験体、特に、被験体の状態および望まれる防御である。単位用量は、一回の注射として投与される必要はなく、一定期間にわたる連続的な注入を含み得る。
【００５５】
本発明の好ましい実施形態の一つは、ＤＦＭＯ治療組成物の、特定の標的癌細胞についての使用を含む。特に興味深いのは、前立腺癌細胞である。
【００５６】
本発明によれば、ＤＦＭＯまたはアナログ組成物を腫瘍に直接注射することにより、癌を処置し得る。あるいは、腫瘍は、任意の適切な送達ビヒクルを用い、組成物を注入され得るか、または灌流され得る。腫瘍についての局所的投与または領域的投与もまた、企図される。最終的には、全身的投与を行い得る。適切な場合、例えば、腫瘍を切除し、残った微視的な疾患を排除するためこの腫瘍床を処置する場合には、連続的投与もまた、適用され得る。シリンジを介する送達またはカテーテル法が好ましい。このような連続的灌流は、処置の開始後、約１〜２時間から、約２〜６時間まで、約６〜１２時間まで、約１２〜２４時間まで、約１〜２日間まで、約１〜２週間まで、またはこれより長く、行われ得る。一般的に、連続的灌流を介する治療組成物の用量は、一回または多数回の注射により与えられ、灌流が起きる期間中に調節される用量と等しい。４ｃｍを超える腫瘍について、投与されるべき量は、約４〜１０ｍｌ（好ましくは１０ｍｌ）であり、一方、４ｃｍ未満の腫瘍については、約１〜３ｍｌ（好ましくは３ｍｌ）が用いられる。一回の用量として送達される複数回の注射は、約０．１〜約０．５ｍｌの用量から構成される。ウイルス粒子は、約１ｃｍ間隔で配置される、腫瘍への多数回注射を投与することにより、有利に接触され得る。
【００５７】
特定の実施形態では、処置される腫瘍は、少なくとも初期においては、切除可能でないかもしれない。治療的ＤＦＭＯ組成物での処置は、縁での収縮により、または、ある特定の浸潤部分の排除により、腫瘍の切除可能性を高め得る。処置後、切除が可能であり得る。切除後の付加的処置は、腫瘍部位での微視的残余疾患を排除するのに役立つ。
【００５８】
ＤＮＡ損傷を引き起こしかつ広範に用いられてきた他の因子は、γ線、Ｘ線、および／または腫瘍細胞への放射性同位体の誘導された送達として一般に知られるものを含む。ＤＮＡ損傷因子の他の形態（例えば、マイクロ波およびＵＶ照射）もまた、企図される。これらの因子の全ては、ＤＮＡ、ＤＮＡ前駆体、ＤＮＡの複製および修復、ならびに染色体の集合および維持に対して、広範な損傷をもたらす可能性が非常に高い。Ｘ線の投与範囲は、一日当り用量５０〜２００レントゲンで長期間（３〜４週間）から、２０００〜６０００レントゲンの一回用量までの範囲にある。放射性同位体の投与範囲は、広く変化し、同位体の半減期、放出される放射線の強さおよび種類、ならびに新形成細胞による取り込みに依存する。
【００５９】
（ＶＩＩＩ．ＤＦＭＯを用いた併用治療）
本発明は、ＤＦＭＯが他の治療と組合せて用いられ得ることを企図する。アスピリン、およびいくつかの他のＮＳＡＩＤは、結腸直腸癌に対して化学予防的作用を発揮し、多分、胃癌、食道癌（Ｔｈｕｎら、１９９３）およびさらには膀胱癌（Ｅａｒｎｅｓｔら、１９９２）にも発揮することを示唆する、増加する一連の実験データおよび疫学的データが存在する。アスピリン、イブプロフェン、ピロキシカム（Ｒｅｄｄｙら、１９９０、Ｓｉｎｇｈら、１９９４）、インドメタシン（Ｎａｒｉｓａｗａ，１９８１）、およびスリンダク（Ｐｉａｚｚａら、１９９７、Ｒａｏら、１９９５）は、アゾキシメタンＡＯＭ処置ラットモデルにおける結腸癌発生を効果的に阻害する。フルルビプロフェンは、ＡＰＣ（Ｍｉｎ）＋マウスモデルにおける抗腫瘍効果を実証した（Ｗｅｃｈｔｅｒら、１９９７）。ＮＳＡＩＤは、活性化Ｋｉ−ｒａｓを保有する腫瘍の発生も阻害する（ＳｉｎｇｈおよびＲｅｄｄｙ，１９９５）。ＤＦＭＯをアスピリンと組合せて、ＡＯＭ処置ラットにおけるその化学予防的効果を評価する研究が行われている。アスピリンとＤＦＭＯとの組合せが、ＡＯＭが相乗的であることが見出された後に投与された（Ｌｉら、１９９９）。その結果は、アスピリンとＤＦＭＯとの組合せは、ＡＯＭ後に投与された場合に、結腸癌を予防し得ることを示した（Ｌｉら、１９９９）。
【００６０】
ＤＦＭＯと、化学療法薬剤ピロキシカムとの組合せは、直腸癌発生のＡＯＭ処置ラットモデルにおいて相乗的化学予防効果を有することが示されている（Ｒｅｄｄｙら、１９９０）が、ＤＦＭＯは、各薬剤が個別に投与された場合に、Ｋｉ−ｒａｓ突然変異および腫瘍発生に対して、ピロキシカムよりも高い抑制効果を示した（Ｓｉｎｇｈら、１９９３、Ｒｅｄｄｙら、１９９０、Ｋｕｌｋａｒｎｉら、１９９２）。ある研究では、ＡＯＭ処置ラットへのＤＦＭＯまたはピロキシカムの投与は、Ｋｉ−ｒａｓ変異を有する腫瘍の数を、９０％から、それぞれ３６％および２５％まで低減させた（Ｓｉｎｇｈら、１９９４）。Ａｐｃ変異ＭｉｎマウスモデルをピロキシカムおよびＤＦＭＯの試験に用い、この併用処置が、いずれかの薬剤単独よりもはるかに効果的であり、いかなる腸腺腫も全く有さない有意な数のマウスが得られたことが確認された（Ｊａｃｏｂｙら、２０００）。ＤＦＭＯとピロキシカムとの両方はまた、既存の腫瘍における生化学的に活性なｐ２１ ｒａｓの量を低減させた（Ｓｉｎｇｈら、１９９３）。モデル系における薬剤の成功にもかかわらず、この組合せで行われたフェーズＩ試験は、一定範囲の有害な副作用を生じた（Ｃａｒｂｏｎｅら、１９９８）。
【００６１】
ＤＦＭＯはＯＤＣの効果的なインヒビターであるので、研究者の中には、インターフェロンと組合せた共同的処置の一部としてＤＦＭＯを用いることを試みているものもいる。米国特許第４，４９９，０７２号は、ＯＤＣインヒビターと組み合わせてインターフェロンを使用することによる、ＯＤＣインヒビター（ＤＦＭＯを含む）のポリアミン除去効果の向上を記載している。さらに、この特許は、メトトレキサートのような既知の細胞傷害性薬剤と組み合わせた、ＯＤＣインヒビターとインターフェロンの両方の使用を記載している。米国特許第５，００２，８７９号は、ＯＤＣインヒビター（好ましくはＤＦＭＯ）を、リンホカイン活性化キラー（ＬＡＫ）細胞とインターロイキン−２と組み合わせて用いる、同様の共同的治療を記載している。
【００６２】
癌治療はまた、化学療法および放射線ベースの治療の両方を伴う、ＤＭＦＯの種々の併用治療を含む。化学療法の組み合わせには、例えば、シスプラチン（ＣＤＤＰ）、カルボプラチン、プロカルバジン、メクロルエタミン、シクロホスファミド、カンプトテシン、イホスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ブスルファン（ｂｉｓｕｌｆａｎ）、ニトロソ尿素類、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ブレオマイシン、プリカマイシン（ｐｌｉｃｏｍｙｃｉｎ）、マイトマイシン、エトポシド（ＶＰ１６）、タモキシフェン、タキソール、トランスプラチナ（ｔｒａｎｓｐｌａｔｉｎｕｍ）、５−フルオロウラシル、ビンクリスチン、ビンブラスチンおよびメトトレキサートあるいはこれらの任意のアナログまたは誘導改変体が含まれる。良性前立腺過形成のような前癌性状態に関して、テラゾシン、ドキサゾシン、プラゾシン、ブナゾシン、インドラミン、タムスロシン、プラジシン（ｐｒａｚｉｃｉｎ）またはアルフゾシンのような、α−１アドレナリン作用性レセプター遮断薬；フィナステリドまたはアザステロイド誘導体のような、５−α−レダクターゼ酵素遮断薬；α−１アドレナリン作用性レセプター遮断薬と５−α−レダクターゼ酵素遮断薬との組み合わせ；ミノキシジルのようなカリウムチャネル開放薬；およびレチノイン酸誘導体から、第２の治療薬剤が選択された。好ましい実施形態では、第２の治療薬剤は、ノコギリパルメット（ｓａｗ ｐａｌｍｅｔｔｏ）抽出物である。
【００６３】
種々の組み合わせ（例えば、ＤＦＭＯ組成物は「Ａ」であり、放射線療法、化学療法または他の治療薬剤は「Ｂ」である場合）が、使用され得る：
Ａ／Ｂ／Ａ Ｂ／Ａ／Ｂ Ｂ／Ｂ／Ａ Ａ／Ａ／Ｂ Ａ／Ｂ／Ｂ Ｂ／Ａ／Ａ Ａ／Ｂ／Ｂ／Ｂ Ｂ／Ａ／Ｂ／Ｂ Ｂ／Ｂ／Ｂ／Ａ Ｂ／Ｂ／Ａ／Ｂ Ａ／Ａ／Ｂ／Ｂ Ａ／Ｂ／Ａ／Ｂ Ａ／Ｂ／Ｂ／Ａ Ｂ／Ｂ／Ａ／Ａ Ｂ／Ａ／Ｂ／Ａ Ｂ／Ａ／Ａ／Ｂ Ａ／Ａ／Ａ／Ｂ Ｂ／Ａ／Ａ／Ａ Ａ／Ｂ／Ａ／Ａ Ａ／Ａ／Ｂ／Ａ。
「接触された」および「曝露された」との用語は、細胞に用いられる場合には、治療組成物および化学療法または放射線治療薬剤が標的細胞に送達されるプロセス、または、標的細胞の直接近位に配置されるプロセスを記載するために、本明細書中で用いられる。細胞の死滅または静止を達成するため、両薬剤は、細胞を死滅させるかまたは細胞が***するのを防ぐのに効果的な、組み合わせ量で細胞に送達される。
【００６４】
ＤＦＭＯ治療は、数分から数週の範囲の間隔で、もう一方の薬剤による処置の前または後に行われ得る。もう一方の薬剤およびＤＦＭＯが細胞に個別に適用される実施形態では、各送達の間に有意な期間が満了しなかった結果、その薬剤およびＤＦＭＯが、細胞に対して有利な組合せ効果を依然として発揮可能であることが、一般的に保証される。このような場合、互いに約１２〜２４時間内に、より好ましくは、互いに約６〜１２時間内に、最も好ましくは約１２時間だけ遅れさせて、両方の治療適用を細胞に接触させることが、企図される。しかし、いくつかの状況において、各投与の間に数日（２日、３日、４日、５日、６日または７日）から数週間（１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間または８週間）が経過する場合に、処置の期間を有意に延長することが望ましくあり得る。
【００６５】
（ＩＸ．薬学的組成物）
本発明の水性組成物は、薬学的に受容可能なキャリアまたは薬学的に受容可能な水性媒体中に溶解または分散された、有効量のＤＦＭＯを含む。句「薬学的に受容可能または薬理学的に受容可能」とは、動物またはヒトに適切に投与された場合に、有害な反応、アレルギー反応、または他の不適当な反応を生じない、分子実体または組成物を指す。
【００６６】
本明細書で用いられる場合「薬学的に受容可能なキャリア」は、任意かつ全ての、溶媒、分散媒、コーティング、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などを包含する。薬学的活性物質に関するこのような媒体および薬剤の使用は、当該技術分野で周知である。任意の従来の媒体または薬剤が活性成分と不適合性でない限り、この薬学的組成物におけるその使用が、企図される。補助活性成分もまた、この組成物に組込まれ得る。ヒトへの投与に関して、調製物は、ＦＤＡ Ｏｆｆｉｃｅ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓの基準により要求される、滅菌性の基準、発熱原性の基準、一般的安全性の基準および純度の基準を満たすべきである。
【００６７】
生物学的材料は、望ましくない低分子量分子を除去するために徹底的に透析され、かつ／または、適切な場合には、所望のビヒクル中により容易に処方するために凍結乾燥されるべきである。次いで、活性化合物は、一般的に、非経口投与のために処方され、例えば、静脈内経路、筋肉内経路、皮下経路、病変内経路、またはさらに腹腔内経路を介した注射のために、処方される。活性構成成分または活性成分としてのヘッドピン（ｈｅａｄｐｉｎ）薬剤を含有する水性組成物の調製は、本発明の開示を考慮すれば、当業者により知られる。代表的には、このような組成物は、液体溶液または懸濁液のいずれかとして、注射可能物質として調製され得る。注射前の液体の添加の際に溶液または懸濁液を調製するための使用に適切な固体形態もまた、調製され得る。そして、この調製物はまた、乳化され得る。
【００６８】
注射可能な使用に適した薬学的形態としては、滅菌水溶液または滅菌分散液；ゴマ油、落花生油または水性プロピレングリコールを含む、処方物；ならびに、滅菌注射可能溶液および滅菌注射可能分散液の即時調製物用の、滅菌粉末が、挙げられる。全ての場合において、その形態は、滅菌されていなければならず、かつ、簡単にシリンジで注入可能な程度に、液状でなければならない。その形態は、製造条件および保存条件下で安定でなければならず、かつ、細菌および真菌のような微生物の汚染作用に対して保護されなければならない。
【００６９】
遊離塩基または薬学的に受容可能な塩としての活性化合物の溶液は、ヒドロキシプロピルセルロースのような界面活性剤と適切に混合された水中で、調製され得る。分散液はまた、グリセロール、液体ポリエチレングリコール、およびその混合物中、ならびに油の中で、調製され得る。通常の保存条件および通常の使用条件下で、これらの調製物は、微生物の増殖を防ぐ保存薬を含有する。
【００７０】
本発明のＤＦＭＯは、中性形態または塩の形態で組成物に処方され得る。薬学的に受容可能な塩としては、酸付加塩（タンパク質の遊離アミノ基と形成される）を含み、これは、例えば、塩酸またはリン酸のような無機酸と、あるいは、酢酸、シュウ酸、酒石酸、マンデル酸などの有機酸と、形成される。遊離カルボキシル基と形成された塩はまた、例えば、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、または水酸化鉄（ＩＩＩ）のような、無機塩基、およびイソプロピルアミン、トリエチルアミン、ヒスチヂン、プロカインなどのような、有機塩基に由来し得る。
【００７１】
キャリアはまた、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコールなど）、これらの適切な混合物、ならびに植物油を含有する、溶媒または分散媒であり得る。例えば、レシチンのようなコーティングの使用により、分散液の場合には必要とされる粒子サイズの維持により、および、界面活性剤の使用により、適切な流動性が、維持され得る。微生物作用の防止は、種々の抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、ソルビン酸、チメロサールなどにより、達成され得る。多くの場合、等張剤（例えば、糖または塩化ナトリウム）を含むことが、好ましい。注射可能組成物の長期の吸収は、吸収を遅延させる薬剤、（例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチン）を組成物中に用いることにより、達成され得る。
【００７２】
滅菌注射可能溶液は、活性化合物を必要量、上記で列挙した種々の他の成分とともに適切な溶媒中に組み込むことより、そして必要な場合、その後濾過滅菌することにより、調製される。一般的に、分散液は、ベースとなる分散媒と、上記で列挙したもの以外の必要な他の成分とを含有する滅菌ビヒクル中に、種々の滅菌された活性成分を組み込むことにより、調製される。滅菌注射可能溶液を調製するための滅菌粉末の場合、その好ましい調製方法は、前もって滅菌濾過された溶液から、活性物質および他の望ましい任意の成分の粉末を得る、真空乾燥技術および凍結乾燥技術である。より濃縮された、または高度に濃縮された、直接注射用溶液の調製もまた企図され、ここで、溶媒としてのＤＭＳＯの使用が、非常に急速な浸透をもたらし、これにより高濃度の活性薬剤が小さな領域に送達されることが、想像される。
【００７３】
処方の際、溶液は、投薬処方物に適合した様式で、かつ、治療上有効である量で、投与される。この処方物は、上記した注射可能溶液の種類のような、種々の投薬形態で容易に投与されるが、薬剤放出カプセルなどもまた、利用され得る。
【００７４】
水溶液での非経口投与に関し、例えば、その溶液は、必要な場合は適切に緩衝化されるべきであり、そして液体希釈剤は、十分な生理食塩水またはグルコースでまず等張性にされるべきである。これらの特定の水溶液は、静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与および腹腔内投与に特に適している。これに関して、利用され得る滅菌水性媒体は、本発明の開示を鑑みて、当業者に知られる。例えば、１回分の投薬量が、１ｍｌの等張性ＮａＣｌ溶液に溶解され得、そして１０００ｍｌの皮下注入流体に添加されるかまたは計画された注入部位に注射されるかのいずれかであり得る（例えば、”Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ”１５ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，１０３５−１０３８頁および１５７０−１５８０頁を参照のこと）。投薬におけるいくつかの変更が、処置される被験体の状態に応じて必然的に発生する。投与の責任者が、いかなる場合でも、個々の被験体にとって適切な用量を決定する。
【００７５】
静脈内または筋肉内注射のような非経口投与用に処方された化合物に加えて、他の薬学的に受容可能な形態としては、例えば、錠剤または経口投与用の他の固体；リポソーム処方物；徐放性カプセル；およびクリームを含む現在用いられている任意の他の形態が挙げられる。
【００７６】
また、本発明において、鼻腔用の溶液あるいはスプレー、エアロゾルまたは吸入剤を用い得る。鼻腔用溶液は、通常、滴薬またはスプレーで鼻孔に投与されるように設計された、水溶液である。鼻腔用溶液は、鼻腔分泌物と多くの点で類似するように、通常の線毛の動作が維持されるように、調製される。このため、この鼻腔用水溶液は、通常、等張性であり、かつ、ｐＨ５．５〜６．５を維持するようにわずかに緩衝化されている。さらに、必要な場合、眼用調製物において使用されているのと同様の抗菌性保存剤および適切な薬剤安定化剤が、処方物中に含まれ得る。種々の市販の鼻腔用調製物が公知であり、それらは、例えば、抗生物質および抗ヒスタミン剤を含み、喘息の予防に用いられている。
【００７７】
他の方式の投与に適した付加的な処方物としては、膣用坐剤および膣坐薬（ｐｅｓｓａｒｙ）が挙げられる。直腸用坐薬（ｐｅｓｓａｒｙ）または直腸用坐剤もまた、使用され得る。坐剤は、通常薬用の、直腸、膣または尿道内への挿入用の、種々の重量および形状を有する、固体投薬形態である。挿入後、坐剤は、腔内の流体中で軟化、溶融または溶解される。概して、坐剤に関し、伝統的な結合剤およびキャリアは、例えば、ポリアルキレングリコールまたはトリグリセリドを含み得る。このような坐剤は、有効成分を０．５％〜１０％、好ましくは１％〜２％の範囲で含有する、混合物から形成され得る。
【００７８】
経口処方物には、例えば、薬学的等級のマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなどのような、通常利用される賦形剤が含まれる。これらの組成物は、溶液、懸濁液、錠剤、丸薬、カプセル、徐放性処方物または粉末の形態を取る。ある定義された実施形態では、経口薬学的組成物は、不活性な希釈剤または同化可能な食用キャリアを含む。または、これらは、硬質または軟質の殻のゼラチンカプセル中に封入され得る。または、これらは、治療食の食物に直接組み込まれ得る。経口治療投与のため、活性化合物は、賦形剤に組み込まれ得、摂取可能な錠剤、口腔用錠剤、トローチ、カプセル、エリキシル、懸濁液、シロップ、カシェ剤などの形態で用いられ得る。このような組成物および調製物は、少なくとも０．１％の活性化合物を含有するべきである。この組成物および調製物の割合は、当然変更され得、そして好都合には、単位重量の約２〜約７５％、または好ましくは２５〜６０％であり得る。このような治療に有用な組成物中の活性化合物の量は、適切な投薬が得られるようなものである。
【００７９】
錠剤、トローチ、丸薬、カプセルなどはまた、以下を含み得る：トラガカントゴム、アラビアゴム、コーンスターチまたはゼラチンのような、結合剤；リン酸二カルシウムのような、賦形剤；コーンスターチ、ジャガイモデンプン、アルギン酸などのような、崩壊剤（ｄｉｓｉｎｔｅｇｒａｔｉｎｇ ａｇｅｎｔ）；ステアリン酸マグネシウムのような、滑剤；スクロース、ラクトースまたはサッカリンのような、甘味料；あるいは、ペパーミント、ウインターグリーン油またはサクランボフレーバーのような、矯味矯臭剤。投薬の単位形態がカプセルである場合には、上記種類の材料に加えて、そのカプセルは、液体キャリアを含有し得る。種々の他の材料が、コーティングとして、またはそうでなければ投薬単位の物理形態を修正するために、存在し得る。例えば、錠剤、丸薬、またはカプセルは、セラック、糖またはその両方でコートされ得る。エリキシルのシロップは、活性化合物である、甘味料としてのスクロース、および保存料としてのメチルパラベンおよびプロピルパラベン、染料、ならびにサクランボフレーバーおよびオレンジフレーバーのような矯味矯臭剤を、含有し得る。
【００８０】
特定の実施形態では、リポソームおよび／またはナノ粒子の使用が、ＤＦＭＯまたはそのアナログの処方および投与に関して企図される。リポソームの処方および使用は、一般的に当業者には公知であり、そしてまた以下に記載されている。
【００８１】
ナノカプセルは、一般的に、化合物を安定かつ再生可能な方法で含み得る。分子内のポリマーの過剰負荷による副作用を避けるため、このような超微細粒子（サイズ約０．１μｍ）は、インビボで分解され得るポリマーを用いて設計されるべきである。これらの要件を満たす生分解性ポリアルキル−シアノアクリレートナノ粒子が、本発明での使用に企図され、そしてこのような粒子は、容易に作製され得る。
【００８２】
リポソームは、水性媒体中に分散し、多層の同心円状二重膜小胞（多重膜リポソーム（ＭＬＶ）とも呼ばれる）を自発的に形成する、リン脂質から形成される。ＭＬＶは、一般的に、２５ｎｍ〜４μｍの直径を有する。ＭＬＶの超音波処理により、中心に水性溶液を含有する、２００〜５００Åの範囲の直径を有する小さな単膜リポソーム（ＳＵＶ）が形成される。
【００８３】
以下の情報もまた、リポソーム処方物の生成にも利用され得る。リン脂質は、水中に分散された場合に、脂質と水とのモル比に応じて、リポソーム以外の種々の構造を形成し得る。低い比では、そのリポソームは、好ましい構造である。リポソームの物理的特性は、ｐＨ、イオン強度および二価カチオンの存在に依存する。リポソームは、イオン性物質および極性物質に対して低い透過性を示し得るが、高い温度では、その透過性を顕著に変化させる相転移が生じる。この相転移は、ゲル状態として知られる、緊密に密集した秩序だった構造から、流体状態として知られる、緩く密集した低秩序構造への変化を含む。これは、特徴的な相転移温度で生じ、イオン、糖および薬物に対する透過性の上昇をもたらす。
【００８４】
リポソームは、以下の４つの異なる機構を介して細胞と相互作用する。マクロファージおよび好中球のような細網内皮系の食細胞によるエンドサイトーシス。非特異的な弱い疎水性力または静電気力、あるいは細胞と表面構成要素との特異的相互作用のいずれかによる、細胞表面への吸着。細胞質中へのリポソーム内容物の同時放出を伴う、形質膜へのリポソームの脂質二重膜の挿入による形質細胞膜との融合。リポソーム内容物を全く伴わない、細胞膜または亜細胞成分膜へのリポソーム脂質の移入。その逆方向への移入。リポソーム処方物を変えることにより、働く機構を変更し得るが、１つより多くの機構が同時に働き得る。
【００８５】
（Ｘ．実施例）
以下の実施例は、本発明の好ましい実施形態を示すために含まれる。以下の実施例に開示された技術は、本発明の実施において十分に機能することが本発明者らにより発見された技術を表わすこと、よって、本発明の実施のための好ましい形態を構成すると見なされ得ることが、当業者によって理解されるべきである。しかし、本開示を鑑みて、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく、開示された特定の実施形態において多くの変更をなしかつ依然として類似するかまたは同様の結果を得ることが可能であることを、当業者は理解するべきである。
【００８６】
（実施例１ 実験）
本プロトコルは、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ ＩｒｖｉｎｅおよびＬｏｎｇ Ｂｅａｃｈ Ｖｅｔｅｒａｎｓ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｅｎｔｅｒの治験委員会（ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌ ｒｅｖｉｅｗ ｂｏａｒｄ）により承認された。ＰＳＡの上昇または直腸検査の異常のいずれかのために経直腸前立腺針生検を受けている５０歳〜８５歳の男性が、定期的な現行の生検時に末梢域の４つのさらなるコア針生検を受けるための書面による同意にサインした。さらなる４つの生検は、液体窒素で即時に凍結し、−７０℃のフリーザー中に保存した。６つ一組の（ｓｅｘｔｅｎｔ）生検を、定期分析のために病理部に送った。患者が、（１）前立腺癌のための根治的な外科手術、（２）出口閉塞のための経尿道的切除、または（３）異型性の診断に起因する第２の生検、を選択した場合、その患者に、治験への参加を継続し、第２の手順前２８日間および第２の手順の日にＤＦＭＯ ０．５ｇｍ／ｍ２を経口摂取するよう依頼した。質問表および問診技術を使用して副作用について患者をモニターした。凝固パラメータを、手術前に注意深く評価した。外科手順の直前に手術室にて、末梢域の４つの経直腸コア生検を、採取し、そして凍結させた。組織学的分析およびポリアミン分析のため、ＤＦＭＯ前後の標本を、ドライアイス上に載せて共にアリゾナに送った。根治的な前立腺切除標本を、ＴＭＮ（１９９７年更新）病期分類システム（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｉｎｔ Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ ｏｎ Ｃａｎｃｅｒ １９９７）により病期分類した。
【００８７】
前立腺コアのポリアミン含有量を決定するため、まず、コアを解凍し、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中で洗浄し、重量を量った。次に、サンプルを０．２Ｎ過塩素酸中で細分化し、超音波処理して細胞物質を破砕した。次いで、サンプルを２，０００Ｘｇで５分間遠心分離させ、酸溶解画分と酸不溶画分とに分離した。他に記載されているように（Ｇｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ． １９９４、Ｍｅｙｓｋｅｎｓ ｅｔ ａｌ． １９９４、Ｍｅｙｓｋｉｎｓ ｅｔ ａｌ． １９９８）、逆相イオン対高速流体クロマトグラフィー（ＰＨＬＣ）法を用いて、酸溶解画分をポリアミン含有量について評価した。簡潔には、ポリアミンは、Ｃ１８Ｂ Ｏｎｄａｐａｋカラムで分離され、分離後にｏ−フタルデヒド（ｏ−ｐｔｈａｌｄｅｈｙｄｅ）で誘導体化され、この誘導体化した物質の７５０ｎｍでの吸収により検出される。
【００８８】
ポリアミンレベルの平均、メジアン、および範囲は、ｎｍｏｌ／ｍｇタンパク質で報告される。本発明者らの方法の検出限界は、０．０１ｎｍｏｌ／ｍｇである。
【００８９】
慣用的６つ一組の生検および外科標本は、Ｌｏｎｇ Ｂｅａｃｈ Ｖｅｔｅｒａｎｓ Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｅｎｔｅｒの病理学部により確立されたプロトコルに従って処理され、報告された。
【００９０】
組織構造の変化を、明視野顕微鏡法により評価した。ＤＦＭＯ前後のポリアミン値は、ウィルコクソン符号付き順位和検定（Ｗｉｌｃｏｘｏｎ ｍａｔｃｈｅｄ−ｐａｉｒｓ ｓｉｇｎｅｄ ｒａｎｋ ｔｅｓｔ）を用いて比較した。このため、各患者について、本発明者らは、ＤＦＭＯによるポリアミン変化の大きさおよび方向の両方を考慮に入れることができた。
【００９１】
（実施例２ 結果）
人口統計：４９人の男性が、本研究の参加同意書にサインした。２２人は、６つ一組の生検の時に、４つの付加的なコアの第１の組を有した。慣用的生検の結果および同意した患者に基づき、１０人の男性がＤＦＭＯを開始した。９人の男性が、生検の第２の組を有した。１人の男性は、ＤＦＭＯの開始後、その前立腺癌のための処置を全く受けないことを選択した。参加者およびその慣用的生検の組織病理の結果の詳細な統計を、表１に示す。
【００９２】
試験を全うした男性の平均年齢は、６５．６歳であった（メジアン６６歳、範囲５６〜７３歳）。群の人種は、白人（３）、ラテンアメリカ人（３）、黒人（１）、アジア人（１）、および白人／アジア人混血（１）であった。生検についての徴候は、ＰＳＡの上昇（５）、直腸指診の数値異常（３）または両方（１）であった。９人の患者の第１の生検前の平均ＰＳＡは、９．４ｎｇ／ｍｌ（メジアン５．１ｎｇ／ｍｌ、範囲１．７〜４７．２）であり、ＤＦＭＯは、平均２８．２日間（メジアン２８日間、範囲２１〜３５日間）与えられた。コンプライアンスは、文書およびインタビューにより測定されたように、１００％であった。第２の手順は、根治的恥骨前立腺切除（ＲＲＲ）（４）、生検の繰返し（４）、および前立腺の経尿道切除（ＴＵＲＰ）（１）であった。
【００９３】
副作用：副作用は、４人の男性に報告された。２人の男性は、軽い臨床的な聴覚障害（純音聴覚学によっては確認されない）、吐き気、下痢、ならびに１人の男性においては倦怠感、およびもう１人の男性においては突発性の一時的衰弱を含む、グレード０の副作用を有した。１人の男性は、グレード１のめまい、これと共に、吐き気および上胃部の痛みを有した。血小板数、あるいはＤＦＭＯを伴うプロタイム（ｐｒｏｔｉｍｅ）の臨床的に有意な変化は無かった。外科手術の前に出血時間を調べたが、ＤＦＭＯによっては変化しなかった。
【００９４】
病理：（表１）第１の生検についての慣用的病理診断は、異型性（２）、炎症を伴う異型性（３）、グリーソン和５（１）、グリーソン和６（２）、グリーソン和７（１）（計９）であった。第２の処置の時の慣用的病理標本は、ＢＰＨ（１）を実証した。ＢＰＨおよび炎症（１）、炎症（１）、異型性（１）、グリーソン和６（１）、Ｐｔ２Ａグリーソン和６（１）、ｐＴ２ｂグリーソン和６（１）、ｐＴ３ａグリーソン和６（１）、ｐＴ４グリーソン和８（１）（計９）。
【００９５】
【表１】
【００９６】
ＰＳＡ：（表１）９人の患者についての第１の生検前の平均ＰＳＡは、９．４ｎｇ／ｍｌ（メジアン５．１ｎｇ／ｍｌ、範囲１．７〜４７．２）であった。最終的に良性の病理を有する４人の患者について、本発明者らは、生検前ＰＳＡまたはＤＦＭＯ前ＰＳＡを、ＤＦＭＯ適用中に抽出したＰＳＡと比較した。ＰＳＡは、各患者において減少した（患者１、４、５、７）。ＰＳＡは、悪性の病理を有する患者の５人のうち３人において上昇した（患者３、８、９）。これら３人の男性の中で、１人の男性のＰＳＡは非常に変わりやすいが（患者８）、別の男性のＰＳＡは６週間の生検内で抽出されており、よってＰＳＡは生検から不正確に上昇した可能性がある（患者９）。
【００９７】
ポリアミンレベル：図１は、経口的ＤＦＭＯの前後に行われた生検を有する９人の男性における、プトレシン、スペルミジン、スペルミン、およびスペルミジン／スペルミン比の値を比較している。治療前のプトレシンは、６人の男性においてはＤＦＭＯ前で検出可能であり、３人の男性においては検出可能ではなかった（０．０１ｎｍｏｌ／ｍｇ未満）。平均プトレシンレベルは、０．４２ｎｍｏｌ／ｍｇ（メジアン０．２７、検出不可範囲〜０．９４）であった。全ての男性が、ＤＦＭＯ後、検出不可能なレベルのプトレシンを有していた。０．０１以上のＤＦＭＯ前プトレシンレベルを有する６人の男性について、基線からの平均減少量は、９７．６％（ｐ＝０．０３１）であった。スペルミジンは、ＤＦＭＯ前の全標本において測定可能であった。平均の処置前レベルは、１．２１ｎｍｏｌ／ｍｇ（メジアン０．８１、範囲０．４９〜３．８２）であり、ＤＦＭＯ後、全標本において減少した。治療後の平均スペルミジンの平均レベルは０．３２（メジアン０．２１、範囲検出不可〜１．１８）であり、２つの標本においてはそのレベルは検出不可能であった。基線からの平均減少％は、７３．６％（ｐ＝０．００４）であった。ＤＦＭＯ前のスペルミンレベルは、試験した全ポリアミンの中で最も高かった。ＤＦＭＯ前の平均スペルミンレベルは２９．１４ｎｍｏｌ／ｍｇ（メジアン２８．８５、範囲９．８８〜５３．６６）であり、ＤＦＭＯ後、全標本において平均スペルミンレベル１４．３３（メジアン１７．４０、範囲３．２４〜２５．２８）まで減少した。基線からの平均減少率は、５０．８％（ｐ＝０．００４）であった。スペルミジン／スペルミン比を各標本について算出した。９人中８人の患者において、ＤＦＭＯが与えられた後、この比は減少していた。基線からの平均減少率は、５０％（メジアン５２％、範囲−２５．３〜９７％）（ｐ＝０．０１９）であった。関節包外前立腺癌を有する２人の患者では、基線からの減少率は最も小さく、または、ＤＦＭＯでの処置後、スペルミジン／スペルミン比は実際に上昇した（患者２および８）。
【００９８】
（実施例３． 考察）
この短期の試験において、本発明者らは、２８日間毎日のＤＦＭＯ０．５ｇｍ／ｍ２の経口投与後における、前立腺ポリアミン（プトレシン、スペルミジンおよびスペルミン）およびスペルミジン／スペルミン比の有意な低減を実証することができた。プトレシンは９８％（ｎ＝６、ｐ＝０．０３１）、スペルミジンは７４％（ｎ＝９、ｐ＝０．００４）、およびスペルミンは５１％（ｎ＝９、ｐ＝０．００４）基線から減少した。特に興味深いのは、スペルミンの大きな低減が実証されたことである。スペルミンレベルに対するＤＦＭＯのこの効果は、ＤＦＭＯが与えられる患者の他の組織において観察されておらず、また、ＤＦＭＯ治療を受ける患者の他の組織において観察されていない（Ｇｅｒｎｅｒら、１９９４、Ｍｅｙｓｋｅｎｓら、１９９４、Ｍｅｙｓｋｅｎｓら、１９９８）。
【００９９】
本発明者らの試験設計についての、および、上述したＭｅｓｓｉｎｇら（１９９９）についての簡単な検討から、２つの研究間の一致しない結果の原因となり得る研究の違いが指摘される。本研究の利点は、ＤＦＭＯ前後の同一の男性からのサンプルを使用することにより、ポリアミン抑制に関する自身のコントロールとして各男性を使用することを、本発明者らが選択したことである。加えて、このサンプルは、サンプルがバッチでの違いを避けるためにともに試行され得る前後両方まで、試行されなかった。データは、操作前の被験者間のポリアミンレベルの広い可変性を示し、プトレシンが試験したポリアミンの中で最も変化が小さいことを実証する（Ｐｕｔ（検出不可能範囲（０．０１未満検出不可能）〜０．９４）、Ｓｐｄ（範囲０．４９〜３．８２）、およびＳｐｍ（範囲９．９６〜５３．７））。この可変性により、少量のコントロールと処置群との違いを評価することが困難となり、なぜ可変性が最も小さいプトレシンのみがＭｅｓｓｉｎｇの試験で有意に変化したかの答えとなり得る。本研究者らの試験では、各男性が自身のコントロールであり、よってＤＦＭＯの効果はより容易に測定された。ポリアミンレベルの可変性の有する同様の困難さは、Ｍｉｔｃｈｅｌｌら（１９９７）により検討されている。彼らは、正常頸部組織と比較した頸部癌中のポリアミンレベルについて報告し、特に、ポリアミンレベルを中間体マーカーとして用いる可能性を検討している。組織のこれらの種類の間にはポリアミンレベルの違いはあったが、著者らは、ポリアミンレベルの可変性のため、多数の被験者が有意な結果を見るために必要とされると結論している。
【０１００】
これら２つの研究の間には、組織を管理する様式に関連する処理問題もある。ＯＤＣ活性は異なったラット前立腺葉において異なっており（これらは背面葉と比較したときに腹葉においてより高い）、かつ、これらの同一の相違がヒト前立腺の帯域中に観察されるかどうかは既知ではなかったので（Ｈｅｓｔｏｎら、１９８２）、本発明者らは前立腺の末梢検体に特定している。加えて、ＤＦＭＯの２８日後、外科手術直前に得られた生検は、外科手術中の前立腺の焼灼または脈管遮断（ｄｅｖａｓｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ）を発生させ得る、いかなるあり得るポリアミンの分解または変化をも回避するため、まず経直腸的にかつ凍結されたように行われた。全身的に脈管遮断されかつ除去されたとき、１〜２時間の虚血の前立腺への影響がどれほどのものであるのかは知られていない。この操作の未知の効果は、最終的な外科手術の前にコアを取ることにより、研究では未然に回避される。
【０１０１】
本発明者らの研究とＭｅｓｓｉｎｇら（１９９９）のそれとの間の別の違いは、処置の長さである。被験者は、４週間のＤＦＭＯを受けた（２週間に対して）。Ｄａｎｚｉｎにより発表されたラット前立腺に関する論文は、ＤＦＭＯの腹腔注射（１２時間毎に１００ｍｇ／ｋｇ）による、コントロール値の１０％までの最も有意なＯＤＣ阻害が４〜６時間後に見られたことを示している。阻害は、２４時間までコントロールと比較して５０％低減まで上昇した。８日間の研究の残りの間中、阻害は、コントロールから３０％〜５０％の範囲にあり、定常状態には到達しなかった。同じ論文中で、Ｄａｎｚｉｎは、処置２週間後のポリアミンレベルを測定し、低用量ＤＦＭＯ（１００ｍｇ／ｋｇ）でのプトレシンおよびスペルミンレベルの、ならびに、より高用量（１ｇｍ／ｋｇ）でのスペルミジンレベルの有意な低減を見出した（Ｄａｎｚｉｎら、１９７９）。１００ｍｇ／ｋｇＤＦＭＯの２週間後の、プトレシンの２０２±３７から４±４ｎｍｏｌ／ｇへの低減は、さらに２週間処置したときのプトレシンについての任意のさらなる影響を推測することを困難にする。しかし、１００ｍｇ／ｋｇＤＦＭＯを用いた２週間後では、スペルミジンにそれほどの低減はなく（７３３４±１９３から１１８８±２８９）、スペルミンには有意な低減はなかった（２９６８±２９３から２７４１±３４６）。これら後者の２つのポリアミンは、ＤＦＭＯを用いた低減を見るのに、より長い処置時間を要する場合がある（Ｄａｎｚｉｎ ｅｔ ａｌ． １９７９）
ポリアミンレベルを、人種、年齢、病理、およびこの小系列で記した明白な傾向を全く伴わない阻害の日数に関して評価した。前立腺外癌を有する男性においてＤＦＭＯに伴うスペルミジン／スペルミン比の低減が明らかに存在しないことは非常に興味深い。前立腺癌を有する５人の男性のうち、２人の男性は、前立腺の外側に前立腺癌を有し（関節包外および膀胱頸部浸潤Ｔ３およびＴ４）、これらの２人の男性（患者２および８）においては、ＤＦＭＯに伴うスペルミジン／スペルミン比はほとんど上昇しないか、または、実際に上昇することがわかった。一方で、腺（Ｔ２、限定された器官）に限定された前立腺癌の標本は、良性前立腺疾患を有するものに見られるように、スペルミジン／スペルミン比における同様の低減を示した（図２）。関節包外および膀胱頸部浸潤とともに見られるように、腫瘍はより攻撃的になり、代替的なポリアミン合成またはポリアミンの脱調節（ｄｙｓｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ）が発生する可能性がある。より大きいコホートにおいてこの観察を追跡することは、非常に興味深い。ポリアミンの脱制御は、予後の悪さの予測に用いられることが可能であり、ポリアミンの脱制御の測定は、どの患者がより積極的な様式で処置される必要があるか、または、ただ観察される必要があるのか、の決定に用いられることが可能である。さらなる研究は、他の組織内への浸潤とポリアミンの脱制御のいずれが最初に発生するのかを決定する助けとなる。前立腺外癌の拡張前に、ポリアミンの脱制御を測定する時間があることも考えられる。
【０１０２】
（参考文献）
以下の参考文献は、本明細書中に示される手順等の詳細を補足する例示的手順等をこれらが提供する程度に、本明細書中に参考として特に援用される。
【０１０３】
【表２】
【図面の簡単な説明】
以下の図面は、本明細書の一部を形成し、本発明の特定の局面をさらに説明するために含まれる。本発明は、本明細書中に提示される特定の実施形態の詳細な説明と組み合わせて、これらの１以上の図面を参照することによって、よりよく理解され得る。
【図１Ａ】図１は、ＤＦＭＯの前（斜線棒）および２８日後（白棒）のコア生検により得られた前立腺組織中のポリアミン含有量。図１Ａ．プトレシン含有量；図１Ｂ．スペルミジン含有量；図１Ｃ．スペルミン含有量。
【図１Ｂ】図１は、ＤＦＭＯの前（斜線棒）および２８日後（白棒）のコア生検により得られた前立腺組織中のポリアミン含有量。図１Ａ．プトレシン含有量；図１Ｂ．スペルミジン含有量；図１Ｃ．スペルミン含有量。
【図１Ｃ】図１は、ＤＦＭＯの前（斜線棒）および２８日後（白棒）のコア生検により得られた前立腺組織中のポリアミン含有量。図１Ａ．プトレシン含有量；図１Ｂ．スペルミジン含有量；図１Ｃ．スペルミン含有量。
【図２】図２は、ＤＦＭＯの前（黒棒）および２８日後（白棒）のコア生検により得られた前立腺組織中のスペルミジン／スペルミン比。
Claims (99)
- ヒト前立腺細胞におけるスペルミンレベルおよび／またはスペルミジンレベルを減少させるための方法であって、該細胞におけるスペルミンレベルおよび／またはスペルミジンレベルを減少させるに十分な量および期間、該細胞にα−ジフルオロメチルオルニチン（ＤＦＭＯ）を投与する工程を包含する、方法。
- 前記前立腺細胞が、癌細胞である、請求項１に記載の方法。
- 前記前立腺細胞が、非癌性細胞である、請求項１に記載の方法。
- 前記前立腺細胞が、良性過形成細胞である、請求項１に記載の方法。
- 前記細胞が患者中にある、請求項１に記載の方法。
- 前記ＤＦＭＯが、Ｌ−鏡像異性体を実質的に含まない、請求項１に記載の方法。
- 前記期間が、約３〜８週間である、請求項５に記載の方法。
- 前記期間が、２〜６ヶ月である、請求項５に記載の方法。
- 前記期間が、少なくとも６ヶ月である、請求項５に記載の方法。
- 前記期間が、少なくとも１年である、請求項５に記載の方法。
- 前記期間が、少なくとも１０年である、請求項５に記載の方法。
- 前記期間が、少なくとも２０年である、請求項５に記載の方法。
- 前記期間が、少なくとも４０年である、請求項５に記載の方法。
- 前記量が、約０．１〜２．０ｇ／ｍ２／日である、請求項５に記載の方法。
- 前記量が、少なくとも約０．５ｇ／ｍ２／日である、請求項５に記載の方法。
- 前記量が、約０．５ｇ／ｍ２／日である、請求項５に記載の方法。
- 前記量が、約０．１〜２．０ｇ／日である、請求項５に記載の方法。
- 前記量が、約０．２５〜１．５ｇ／日である、請求項５に記載の方法。
- 前記量が、約０．５〜１．０ｇ／日である、請求項５に記載の方法。
- 前記ＤＦＭＯが、経口投与される、請求項５に記載の方法。
- 前記スペルミンレベルが、減少される、請求項１に記載の方法。
- 前記スペルミンレベルが、前記処置の前の前記細胞におけるスペルミジンレベルと比較して約２０％減少される、請求項２１に記載の方法。
- 前記スペルミンレベルが、前記処置の前の前記細胞におけるスペルミジンレベルと比較して約３０％減少される、請求項２１に記載の方法。
- 前記スペルミンレベルが、前記処置の前の前記細胞におけるスペルミジンレベルと比較して約４０％減少される、請求項２１に記載の方法。
- 前記スペルミンレベルが、前記処置の前の前記細胞におけるスペルミジンレベルと比較して約５０％減少される、請求項２１に記載の方法。
- 前記スペルミンレベルが、前記処置の前の前記細胞におけるスペルミジンレベルと比較して約６０％減少される、請求項２１に記載の方法。
- 前記スペルミンレベルが、前記処置の前の前記細胞におけるスペルミジンレベルと比較して約７０％減少される、請求項２１に記載の方法。
- 前記スペルミジンレベルが、減少される、請求項１に記載の方法。
- 前記スペルミジンレベルが、前記処置の前の前記細胞におけるスペルミジンレベルと比較して約３０％減少される、請求項２８に記載の方法。
- 前記スペルミジンレベルが、前記処置の前の前記細胞におけるスペルミジンレベルと比較して約４５％減少される、請求項２８に記載の方法。
- 前記スペルミジンレベルが、前記処置の前の前記細胞におけるスペルミジンレベルと比較して約５５％減少される、請求項２８に記載の方法。
- 前記スペルミジンレベルが、前記処置の前の前記細胞におけるスペルミジンレベルと比較して約６５％減少される、請求項２８に記載の方法。
- 前記スペルミジンレベルが、前記処置の前の前記細胞におけるスペルミジンレベルと比較して約７５％減少される、請求項２８に記載の方法。
- 前記スペルミジンレベルが、前記処置の前の前記細胞におけるスペルミジンレベルと比較して約８５％減少される、請求項２８に記載の方法。
- 前記スペルミジンレベルが、前記処置の前の前記細胞におけるスペルミジンレベルと比較して約９９％減少される、請求項２８に記載の方法。
- 前記細胞のスペルミジン／スペルミン比もまた、減少される、請求項１に記載の方法。
- 前記スペルミジンレベルが、前記処置の前の前記細胞におけるスペルミジンレベルと比較して約９９％減少される、請求項３６に記載の方法。
- 少なくとも５０％のプトレシンレベルの減少をさらに包含する、請求項１に記載の方法。
- 少なくとも７０％のプトレシンレベルの減少をさらに包含する、請求項３８に記載の方法。
- 少なくとも９０％のプトレシンレベルの減少をさらに包含する、請求項３９に記載の方法。
- 前立腺癌に罹患しているヒト被験体を処置する方法であって、該被験体の前立腺細胞におけるスペルミンレベルおよび／またはスペルミジンレベルを減少するために十分な量および期間、該被験体にＤＦＭＯを投与する工程を包含する、方法。
- 前記ＤＦＭＯが、Ｌ−鏡像異性体を実質的に含まない、請求項４１に記載の方法。
- 前記期間が、約３〜８週間である、請求項５に記載の方法。
- 前記期間が、２〜６ヶ月である、請求項５に記載の方法。
- 前記期間が、少なくとも６ヶ月である、請求項５に記載の方法。
- 前記期間が、少なくとも１年である、請求項５に記載の方法。
- 前記期間が、少なくとも１０年である、請求項５に記載の方法。
- 前記期間が、少なくとも２０年である、請求項５に記載の方法。
- 前記期間が、少なくとも４０年である、請求項５に記載の方法。
- 前記量が、約０．１〜２．０ｇ／ｍ２／日である、請求項４１に記載の方法。
- 前記量が、少なくとも約０．５ｇ／ｍ２／日である、請求項４１に記載の方法。
- 前記量が、約０．５ｇ／ｍ２／日である、請求項４１に記載の方法。
- 前記量が、約０．１〜２．０ｇ／日である、請求項５に記載の方法。
- 前記量が、約０．２５〜１．５ｇ／日である、請求項５に記載の方法。
- 前記量が、約０．５〜１．０ｇ／日である、請求項５に記載の方法。
- 前記ＤＦＭＯが、経口投与される、請求項４１に記載の方法。
- 第２の治療をさらに含む、請求項４１に記載の方法。
- 前記第２の治療が、ジヒドロキシテストステロンを減少させることを包含する、請求項５７に記載の方法。
- 前記第２の治療が、食事性抗酸化薬を含む、請求項５７に記載の方法。
- 前記食事性抗酸化薬が、セレン、ビタミンＥ、またはこれらの両方である、請求項５９に記載の方法。
- 前記第２の治療が、レチノイドを含む、請求項５７に記載の方法。
- 前記第２の治療が、前立腺切除を包含する、請求項５７に記載の方法。
- 前記第２の治療が、低ポリアミン食を含む、請求項５７に記載の方法。
- 前記第２の治療が、ポリアミンオキシダーゼのインヒビターを含む、請求項５７に記載の方法。
- 前記第２の治療が、照射を包含する、請求項５７に記載の方法。
- 前記第２の治療が、ホルモン療法を包含する、請求項５７に記載の方法。
- 前記ホルモン療法が、ルペロンを使用することを包含する、請求項６６に記載の方法。
- 前記ホルモン療法が、ゾルデックスを使用することを包含する、請求項６６に記載の方法。
- 前記ホルモン療法が、フルタミドを使用することを包含する、請求項６６に記載の方法。
- 前記ホルモン療法が、カサデックスを使用することを包含する、請求項６６に記載の方法。
- 前記スペルミンレベルが、減少される、請求項４１に記載の方法。
- 前記スペルミジンレベルが、減少される、請求項４１に記載の方法。
- 前記スペルミジン／スペルミン比もまた、減少される、請求項４１に記載の方法。
- 診断をさらに包含する、請求項４１に記載の方法。
- 前記診断が、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）の分析を含む、請求項７４に記載の方法。
- 前記診断が、前立腺生検を包含する、請求項７４に記載の方法。
- 前記診断が、直腸検査を包含する、請求項７４に記載の方法。
- 前記診断が、ＰＳＡ分析および直腸検査を包含する、請求項７４に記載の方法。
- ヒト被験体における前立腺癌の発症を阻害するための方法であって、該被験体の前立腺細胞におけるスペルミンレベルおよび／またはスペルミジンレベルを減少させるために十分な量および期間、該被験体にＤＦＭＯを投与する工程を包含する、方法。
- 原発性前立腺癌を有するヒト被験体において前立腺癌転移を阻害するための方法であって、該被験体の前立腺細胞におけるスペルミンレベルおよび／またはスペルミジンレベルを減少させるために十分な量および期間、該被験体にＤＦＭＯを投与する工程を包含する、方法。
- ステージ１またはステージ２の前立腺癌を有するヒト被験体において前立腺癌の進行を阻害するための方法であって、該被験体の前立腺細胞におけるスペルミンレベルおよび／またはスペルミジンレベルを減少させるために十分な量および期間、該被験体にＤＦＭＯを投与する工程を包含する、方法。
- ヒトの切除不可能な前立腺癌腫瘍を切除可能にする方法であって、該被験体の前立腺細胞におけるスペルミンレベルおよび／またはスペルミジンレベルを減少させるために十分な量および期間、該被験体にＤＦＭＯを投与する工程を包含する、方法。
- ヒト被験体における前立腺癌腫瘍の増殖を阻害する方法であって、該被験体の前立腺細胞におけるスペルミンレベルおよび／またはスペルミジンレベルを減少させるために十分な量および期間、該被験体にＤＦＭＯを投与する工程を包含する、方法。
- 良性前立腺過形成に罹患しているヒト該被験体において良性前立腺過形成を処置する方法であって、該過形成細胞により生成されるポリアミンの量を安定化させるかまたは減少させるために十分な量および期間、該被験体にＤＦＭＯを投与する工程を包含し、該ポリアミンは、スペルミン、スペルミジン、またはスペルミンとスペルミジンとの組み合わせである、方法。
- 前記ポリアミンが、スペルミンである、請求項８４に記載の方法。
- 前記ポリアミンが、スペルミジンである、請求項８４に記載の方法。
- 前記過形成細胞により生成される前立腺特異抗原（ＰＳＡ）のレベルもまた、ＤＦＭＯを用いた処置により安定化されるかまたは減少される、請求項８４に記載の方法。
- 良性前立腺過形成に罹患しているヒト被験体において良性前立腺過形成を処置するための方法であって、該過形成細胞により生成されるポリアミンレベルの減少または安定化により測定される、治療上有効な量のＤＦＭＯを、十分な期間の間、治療上有効な量の第２の治療薬剤とともに投与する工程を包含し、該第２の治療薬剤は、α−１アドレナリン作用性レセプター遮断薬、５−α−レダクターゼ酵素遮断薬、およびα−１アドレナリン作用性レセプター遮断薬と５−α−レダクターゼ酵素遮断薬との組み合わせから、選択される、方法。
- 前記ポリアミンが、スペルミンである、請求項８８に記載の方法。
- 前記ポリアミンが、スペルミジンである、請求項８８に記載の方法。
- 前記第２の薬剤が、α−１アドレナリン作用性レセプター遮断薬である、請求項８８に記載の方法。
- 前記α−１アドレナリン作用性レセプター遮断薬が、テラゾシン、ドキサゾシン、タムスロシン、プラジシン、またはアルフゾシンである、請求項９１に記載の方法。
- 前記第２の薬剤が、５−α−レダクターゼ酵素遮断薬である、請求項８８に記載の方法。
- 前記５−α−レダクターゼ酵素遮断薬が、フィナステリドである、請求項９３に記載の方法。
- 前記第２の薬剤が、ホルモンである、請求項８８に記載の方法。
- 良性前立腺過形成に罹患しているヒト被験体において良性前立腺過形成を処置するための方法であって、該過形成細胞により生成されるポリアミンレベルの減少または安定化により測定される、治療上有効な量のＤＦＭＯを、十分な期間にわたって、治療上有効な量のノコギリパルメット抽出物と一緒に投与する工程を包含する、方法。
- 前記ポリアミンが、スペルミンである、請求項９６に記載の方法。
- 前記ポリアミンが、スペルミジンである、請求項９６に記載の方法。
- スペルミンレベルおよびスペルミジンレベルの両方が、減少されるかまたは安定化される、請求項９６に記載の方法。
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