JP2004357719A - Bacteriostatic agent for beverage and beverage having bacteriostatic action - Google Patents

Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a beverage added with a bacteriostatic agent containing a polyphenol fraction having specific effective bacteriostatic actions, and prevented from precipitate formation even when the beverage is allowed to stand for a long time. <P>SOLUTION: The beverage added with the bacteriostatic agent is prevented from precipitate formation causing apparent defection by cooling the bacteriostatic agent for beverage to partially solidify and filtrating the resultant precipitate in production of the natural bacteriostatic agent by separating polyphenol fractions by liquid column chromatography for reversed phase separation. <P>COPYRIGHT: (C)2005,JPO&NCIPI

Description

本発明は、所定のポリフェノールを主成分とする静菌剤を飲料添加剤に加工・処理する際の処理方法、並びに、当該処理方法によって得られた飲料添加剤を含有する飲料に関する。   The present invention relates to a processing method for processing and processing a bacteriostatic agent containing a predetermined polyphenol as a main component into a beverage additive, and a beverage containing the beverage additive obtained by the processing method.

赤ワインの常飲者に動脈硬化等の成人病（生活習慣病）が少ないというフレンチパラドックスという現象がよく知られているが、これは赤ワインに多く含まれるポリフェノールに起因するものであるということが提唱されている。また、このポリフェノールが有する疾病予防効果は、体内の活性酸素を抑制するという抗酸化機能に大きく起因するからではないかというようなことも言われている。   It is well known that the French paradox is a phenomenon in which there are few adult diseases (lifestyle-related diseases) such as arteriosclerosis in regular drinkers of red wine, but it is suggested that this is caused by polyphenols that are often contained in red wine. Have been. It is also said that the disease prevention effect of the polyphenol is largely attributable to the antioxidant function of suppressing active oxygen in the body.

ポリフェノールについて、このような有用性が指摘されるようになったのは、多くのポリフェノールが備える抗酸化物質としての機能が大いに注目されたことに起因している。そして、酸化という現象それだけについて見てみた場合には、それが飲料の品質劣化の一因ともなっていることから、飲料業界の注目をも集めることになり、酸化防止剤としてのポリフェノールを飲料に添加することが本格的に検討されるようになった。   Such usefulness of polyphenols has come to be pointed out due to the great attention given to the functions of many polyphenols as antioxidants. When looking at the phenomenon of oxidation alone, it contributes to the deterioration of the quality of beverages, which also attracts the attention of the beverage industry, and polyphenols as antioxidants are added to beverages. It has come to be considered in earnest.

こうした中にあって、いくつかのポリフェノールについては、抗酸化剤としての飲料への添加が本格的に行われるようになってきたが、そのようになってきたのは、酸化による飲料の劣化が従来よりも問題視されるようになってきたことに加え、ポリフェノール自体が天然由来のものであり、健康志向の消費者に受け入れられやすいということも主な要因の一つとなっている。   Under these circumstances, some polyphenols have been added to beverages as antioxidants in earnest, but this has been caused by deterioration of beverages due to oxidation. One of the main factors is that polyphenols themselves are naturally derived and easily accepted by health-conscious consumers, in addition to becoming increasingly problematic than before.

このように、ポリフェノールの抗酸化物質としての機能とその有用性がよく知られるようになると、いきおい、その抗酸化機能に基づく抽出原料、抽出方法、応用範囲に関しての研究が中心に進められるようになった。   As the function of polyphenols as an antioxidant and its usefulness become well known, research on extraction raw materials, extraction methods, and application ranges based on the antioxidant function will be focused on. became.

しかしながら、本発明者らがポリフェノ−ルに関して鋭意研究を重ねた結果、ポリフェノール（特に、プロアントシアニジンそれ自体及びプロアントシアニジンの近隣に抽出されてくる画分中のポリフェノール）が静菌作用を有するということが明らかになった。   However, as a result of the present inventors' earnest studies on polyphenols, it was found that polyphenols (particularly, proanthocyanidins themselves and polyphenols in fractions extracted in the vicinity of proanthocyanidins) have a bacteriostatic effect. Was revealed.

更に、本発明者らは、所定の条件下、ＨＰＬＣでポリフェノールを分離した際に、ある画分が強力な静菌効果を有することをも併せて見出し、所定のポリフェノールを主成分とする静菌剤に関する本発明を完成するに至り、既に特許出願も行っている（特願平１１‐３３６９５８号）。即ち、本発明者らは、ポリフェノール画分の更なる分離により、従来よりも有効な静菌作用を有するポリフェノール画分を見出し、有効かつ有用な静菌剤及びそれを含有する飲料を既に提案しているのである。   Furthermore, the present inventors have also found that when polyphenols are separated by HPLC under predetermined conditions, it is found that a certain fraction has a strong bacteriostatic effect. The present invention relating to agents has been completed, and a patent application has already been filed (Japanese Patent Application No. 11-336958). That is, the present inventors have found a polyphenol fraction having a more effective bacteriostatic action than before by further separating the polyphenol fraction, and have already proposed an effective and useful bacteriostatic agent and a beverage containing the same. -ing

ところが、上記の静菌剤及びそれを含有する飲料について鋭意研究を継続した結果、上記の静菌剤を添加した飲料を暫く放置した場合には、沈殿が発生してしまい、飲料の外観品質が低下する。   However, as a result of intensive research on the bacteriostatic agent and the beverage containing the same, when the beverage to which the bacteriostatic agent was added was left for a while, precipitation occurred, and the appearance quality of the beverage was reduced. descend.

この場合において、沈殿が発生して外観品質が低下するということは、透明容器がメジャーとなっている現状では、軽んじることができない問題である。また、沈殿が発生するということは、即ち保存性にも問題があるということにつながり、最終的には飲料用の静菌剤としての使用に適さないということにもなる。   In this case, the fact that the appearance quality is degraded due to the occurrence of sedimentation is a problem that cannot be neglected in the current situation where transparent containers are the major. In addition, the occurrence of precipitation leads to a problem in storage stability, which ultimately means that it is not suitable for use as a bacteriostatic agent for beverages.

本発明は以上のような課題に鑑みてなされたものであり、その目的は、所定の有効な静菌作用を有するポリフェノール画分を含む静菌剤を添加した飲料において、これを暫く放置した場合でも沈殿の発生が生じないようにすることにある。   The present invention has been made in view of the above-described problems, and an object thereof is to provide a beverage to which a bacteriostatic agent containing a polyphenol fraction having a predetermined effective bacteriostatic action is added, and leave it for a while. However, the purpose is to prevent precipitation from occurring.

以上のような目的を達成するために本発明者らが鋭意研究を行った結果、上記静菌剤についてこれを一度冷却をして部分的固化させてから、それを解凍したときに生ずる沈殿をろ過するという処理を施した場合には、当該処理後の静菌剤を飲料に添加して暫く放置したとしても沈殿が生じないということを見出し、本発明を完成するに至った。   As a result of intensive studies conducted by the present inventors to achieve the above object, the bacteriostatic agent was once cooled and partially solidified, and the precipitate formed when the bacteriostatic agent was thawed was removed. When the treatment of filtration was performed, it was found that precipitation did not occur even if the bacteriostatic agent after the treatment was added to the beverage and left for a while, thereby completing the present invention.

即ち本発明においては、暫く放置した後に沈殿が発生しないようにするために有効な処理方法として、上記静菌剤についてこれを一度凍結させてから、それを解凍したときに生ずる沈殿をろ過するという処理を提供すると共に、当該処理後の静菌剤が添加された保存性の良い飲料を提供するものである。   That is, in the present invention, as an effective treatment method for preventing precipitation after leaving for a while, the bacteriostatic agent is frozen once, and then the precipitate formed when the bacteriostatic agent is thawed is filtered. In addition to providing a treatment, a beverage having good storability to which a bacteriostatic agent after the treatment is added is provided.

より具体的には、本発明は、以下のような飲料及び静菌剤を提供する。   More specifically, the present invention provides the following beverages and bacteriostatic agents.

（１） 果実、果種等から得られたポリフェノール画分を逆相分離用液体カラムクロマトグラフィーにより分離したときに得られるピークの内のメジャーなピークの中で、最後に溶出されるピークに相当する成分を主成分として含む静菌剤を飲料添加剤へと加工・処理する際の処理方法であって、
前記静菌剤を含水エタノールに溶解させ、これを冷却することによって部分的固化させた後に解凍し、当該解凍後に発生した沈殿を限外濾過して除去する工程を含むことを特徴とする処理方法。 (1) Among the major peaks obtained when the polyphenol fraction obtained from fruits, fruit seeds, etc. is separated by liquid column chromatography for reverse phase separation, this corresponds to the peak eluted last. A processing method when processing and processing a bacteriostatic agent containing a component as a main component into a beverage additive,
Dissolving the bacteriostatic agent in aqueous ethanol, partially solidifying by cooling, thawing, and ultrafiltrating and removing the precipitate generated after the thawing. .

（２） 果実、果種等から得られたポリフェノール画分を逆相分離用液体カラムクロマトグラフィーにより分離したときに得られるピークの内のメジャーなピークの中で、ＮＦ膜処理により消失するピークの部分を主成分として含む静菌剤を飲料添加剤へと加工・処理する際の処理方法であって、
前記静菌剤を含水エタノールに溶解させ、これを冷却することによって部分的固化させた後に解凍し、当該解凍後に発生した沈殿を限外濾過して除去する工程を含むことを特徴とする処理方法。 (2) Among the major peaks obtained when the polyphenol fraction obtained from fruits, fruit seeds and the like is separated by liquid column chromatography for reverse phase separation, of the peaks that disappear by the NF membrane treatment, A processing method when processing and processing a bacteriostatic agent containing a part as a main component into a beverage additive,
Dissolving the bacteriostatic agent in aqueous ethanol, partially solidifying by cooling, thawing, and ultrafiltrating and removing the precipitate generated after the thawing. .

（３） 果実、果種等から得られたポリフェノール画分を逆相分離用液体カラムクロマトグラフィーにより分離したときに得られるピークの内のメジャーなピークの中で、最後のほうに溶出されるピークに属し、かつ、ＮＦ膜処理により消失するピークの部分を主成分として含む静菌剤を飲料添加剤へと加工・処理する際の処理方法であって、
前記静菌剤を含水エタノールに溶解させ、これを冷却することによって部分的固化させた後に解凍し、当該解凍後に発生した沈殿を限外濾過して除去する工程を含むことを特徴とする処理方法。 (3) The peak eluted at the end of the major peaks among the peaks obtained when the polyphenol fraction obtained from fruits, fruit seeds, etc. is separated by liquid column chromatography for reverse phase separation. And a processing method for processing and processing a bacteriostatic agent containing, as a main component, a peak portion that disappears due to NF membrane treatment into a beverage additive,
Dissolving the bacteriostatic agent in aqueous ethanol, partially solidifying by cooling, thawing, and ultrafiltrating and removing the precipitate generated after the thawing. .

（４） 果実、果種等から得られたポリフェノール画分を逆相分離用液体カラムクロマトグラフィーにより分離した場合に、より後に溶出されてくる画分をより多く含むように製造された静菌剤を飲料添加剤へと加工・処理する際の処理方法であって、
前記静菌剤を含水エタノールに溶解させ、これを冷却することによって部分的固化させた後に解凍し、当該解凍後に発生した沈殿を限外濾過して除去する工程を含むことを特徴とする処理方法。 (4) A bacteriostatic agent produced so that when a polyphenol fraction obtained from a fruit, a fruit seed, or the like is separated by liquid column chromatography for reverse phase separation, the fraction eluted later is increased. Is a processing method when processing and processing into a beverage additive,
Dissolving the bacteriostatic agent in aqueous ethanol, partially solidifying by cooling, thawing, and ultrafiltrating and removing the precipitate generated after the thawing. .

（５） 前記逆相分離用液体カラムクロマトグラフィーはＨＰＬＣであることを特徴とする（１）から（４）いずれか記載の処理方法。   (5) The method according to any one of (1) to (4), wherein the liquid column chromatography for reverse phase separation is HPLC.

（６） プロアントシアニジンを主成分とする静菌剤を飲料添加剤へと加工・処理する際の処理方法であって、
前記静菌剤を含水エタノールに溶解させ、これを冷却することによって部分的固化させた後に解凍し、当該解凍後に発生した沈殿を限外濾過して除去する工程を含むことを特徴とする処理方法。 (6) A method of processing and processing a bacteriostatic agent containing proanthocyanidin as a main component into a beverage additive,
Dissolving the bacteriostatic agent in aqueous ethanol, partially solidifying by cooling, thawing, and ultrafiltrating and removing the precipitate generated after the thawing. .

（７） 前記ポリフェノール画分はぶどう種子から得られたものであることを特徴とする（１）から（５）いずれか記載の静菌剤。   (7) The bacteriostatic agent according to any one of (1) to (5), wherein the polyphenol fraction is obtained from grape seeds.

（８） 耐熱性好酸性菌に対して静菌作用を有する静菌剤であることを特徴とする（６）または（７）記載の静菌剤。   (8) The bacteriostatic agent according to (6) or (7), which is a bacteriostatic agent having a bacteriostatic action against heat-resistant acidophilic bacteria.

（９） （１）から（６）いずれか記載の処理方法を経ることによって製造された飲料添加剤。   (9) A beverage additive produced by undergoing the treatment method according to any one of (1) to (6).

（１０） 酸性飲料に対して静菌作用を有する飲料添加剤であることを特徴とする（９）記載の飲料添加剤。   (10) The beverage additive according to (9), which is a beverage additive having a bacteriostatic action on an acidic beverage.

（１１） （９）または（１０）いずれか記載の飲料添加剤を静菌性有効量含有する飲料。   (11) A beverage containing the bacteriostatically effective amount of the beverage additive according to (9) or (10).

［用語の定義等］
「静菌」とは、細菌を殺傷する作用までもは有しないが、細菌の生育・増殖を抑制し、細菌の活動に基づく製品飲料の変敗を防止できる作用を有することをいい、「静菌剤」とは、飲料に添加された場合に飲料の風味等に悪影響を及ぼすことなく飲料中で静菌作用を発揮し得るものを意味する。 [Definition of terms]
"Bacteriostatic" means not having the action of killing bacteria, but has the action of suppressing the growth and proliferation of bacteria and preventing deterioration of product beverages based on the activity of bacteria. The term "bacterial agent" means an agent capable of exerting a bacteriostatic action in a beverage without adversely affecting the flavor or the like of the beverage when added to the beverage.

「酸性飲料」というのは、典型的にはｐＨが３．０〜３．５程度の果汁飲料であるが、ｐＨが３．０〜４．０付近に調整されているスポーツドリンクやアイソトニック飲料、健康飲料なども含まれる。   An “acid drink” is typically a fruit juice drink having a pH of about 3.0 to 3.5, but a sports drink or an isotonic drink whose pH is adjusted to about 3.0 to 4.0, Also includes health drinks.

「耐熱性好酸性菌」というのは、上記のような「酸性飲料」の中で生育し、増殖する細菌（好酸性菌）の中でも、「酸性飲料」において一般的に行われている加熱殺菌処理によっても死滅しない耐熱性のものを意味し、飲料業界において静菌のターゲットとされるものである。ここで、好酸性菌の中でも耐熱性のもの(耐熱性好酸性菌)は芽胞を形成するが、本発明に係る静菌剤は飲料中に生残した芽胞の発芽による増殖の防止に有効に作用することが認められる。   The term “thermostable acidophilic bacterium” refers to the heat sterilization that is generally performed in “acidic beverages” among the bacteria (acidophiles) that grow and proliferate in the above “acidic beverages”. It means a heat-resistant material that does not die even when treated, and is a target of bacteriostasis in the beverage industry. Here, among the acidophilic bacteria, heat-resistant ones (thermostable acidophilic bacteria) form spores, but the bacteriostatic agent according to the present invention is effective in preventing the growth of spores remaining in the beverage by germination. It is found to work.

［ＨＰＬＣ］
「逆相分離用液体カラムクロマトグラフィー」は、疎水性固定相と親水性移動相の組み合せにより分離を行うカラムクロマトグラフィーのことを意味するが、これを行う場合には、固定相として非極性な固体（普通はシリカゲルの表面に疎水性基（炭化水素鎖）を化学結合した物質）或いは表面が疎水性の合成高分子を用い、移動相として水または水溶液、或いは水と良く混合する有機溶媒と水との混合液を用いる。「逆相分離用液体カラムクロマトグラフィー」その典型的なものは、オクタデシル基を結合したシリカゲルを充填し、溶離液として緩衝溶液を使用した「ＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）」であり、後述の実施例でもこれを採用している。 [HPLC]
“Liquid column chromatography for reverse phase separation” means column chromatography in which separation is performed by a combination of a hydrophobic stationary phase and a hydrophilic mobile phase. Use a solid (usually a substance in which a hydrophobic group (hydrocarbon chain) is chemically bonded to the surface of silica gel) or a synthetic polymer with a hydrophobic surface, and use water or an aqueous solution or an organic solvent that mixes well with water as a mobile phase. Use a mixture with water. A typical example of “liquid column chromatography for reverse phase separation” is “HPLC (high performance liquid chromatography)” using silica gel packed with octadecyl groups and using a buffer solution as an eluent. The example also employs this.

［メジャーなピーク］
本明細書において「メジャーなピーク」というのは、数あるピークの中でも、顕著に目立つものを意味する。「静菌性有効量」は、静菌剤として使用するポリフェノールや画分の種類に応じて適宜決定する。 [Major peak]
As used herein, the term “major peak” means a peak that is conspicuous among a number of peaks. The “bacteriostatically effective amount” is appropriately determined according to the type of polyphenol or fraction used as a bacteriostatic agent.

［部分的固化］
「部分的固化」というのは、対象物が完全な凍結体になるのではなく、一部が固体で一部が液体というような状態を形成していることをいう。そして、含水エタノールを冷却していくと、このような形態が発現する。 [Partial solidification]
The term "partially solidified" means that the object is not completely frozen, but is partially solid and partially liquid. Then, as the aqueous ethanol is cooled, such a form is developed.

従って、上記静菌剤を含水エタノールに溶解させ、発生した沈殿を限外濾過して除去することにより得られた濾液を、好ましくは−３０℃から−４℃、更に好ましくは−２０℃から−７℃程度に冷却すると、完全な固体状の凍結体になるのではなく、どろっとしたシャーベット状のものを形成した状態となる。かかる状態にすることを、本明細書においては基本的に「冷却することによって部分的固化させた」と言っている。   Therefore, the filtrate obtained by dissolving the bacteriostatic agent in aqueous ethanol and removing the generated precipitate by ultrafiltration is preferably from -30 ° C to -4 ° C, more preferably from -20 ° C to- When it is cooled to about 7 ° C., it does not become a completely solid frozen body, but a thick sherbet-like one. This state is basically referred to as "partially solidified by cooling" in the present specification.

［解凍］
「解凍」とは、固体のものに熱を加えて液体状態にすることをいうが、本明細書においては、冷却することによって部分的固化された静菌剤を、固形物が全く残存していない完全な液体状態にすることを主に意味する。 [Thaw]
"Thawing" refers to applying heat to a solid material to make it a liquid state, but in the present specification, the bacteriostatic agent partially solidified by cooling is completely free of solid matter. Not meant to be in perfect liquid state mainly.

［ポリフェノール画分の抽出］
ポリフェノールを含有するものであれば、ブドウや茶等、あらゆる植物を本発明の原料とすることができる。なお、ブドウに関しては、特に種子部分については、未利用副産物の利用ともなるため、種子部分を利用するのも得策である。なお、種子部分については、有用なポリフェノールが多く含有されていることも、当該有用なポリフェノールを効率良く抽出する方法も、様々な研究がなされ、本発明者らによっても知見されている（特願平１１−２０９５７８号）。 [Extraction of polyphenol fraction]
As long as it contains a polyphenol, any plant such as grape or tea can be used as a raw material of the present invention. In the case of grapes, especially for the seed portion, since unused by-products are also used, it is also advisable to use the seed portion. In addition, various studies have been conducted on the seed portion, which contains a large amount of useful polyphenols, and a method for efficiently extracting the useful polyphenols, and the present inventors have also found out (see, for example, Japanese Patent Application No. 2002-214,197). Hei 11-209578).

ポリフェノール画分の抽出は水やエタノール等を溶媒として行う。なお、その後、抽出物の精度を高めるべく、適宜、酵素の添加や遠心分離等を行うことも可能である。   Extraction of the polyphenol fraction is performed using water, ethanol, or the like as a solvent. After that, in order to enhance the accuracy of the extract, it is possible to appropriately add an enzyme, centrifuge, or the like.

［限外濾過］
本発明における「限外濾過」は、いわゆる「膜濾過」の一種であり、基本的には分子量１０万以上のものを、好ましくは分子量８万以上のものを、より好ましくは分子量７万以上のものを、また場合によっては分子量５万以上のものを除く限外濾過のことを意味する。 [Ultrafiltration]
"Ultrafiltration" in the present invention is a kind of so-called "membrane filtration", and basically has a molecular weight of 100,000 or more, preferably 80,000 or more, more preferably 70,000 or more. Means ultrafiltration except for those having a molecular weight of at least 50,000.

ここで、分子量１０万以上のものを除く濾過処理を行った場合には沈殿の発生を十分に防止させることができず、この一方で、分子量２万以上のものを除く濾過処理を行った場合には、静菌作用を有する有効なポリフェノールの大部分（半分程度）が除去されてしまうこととなり、沈殿の発生は防止できたとしても、濾過処理による弊害が顕在化してきてしまうこととなる。   Here, when the filtration treatment is performed to remove those having a molecular weight of 100,000 or more, the generation of precipitation cannot be sufficiently prevented. On the other hand, when the filtration treatment is performed to remove those having a molecular weight of 20,000 or more, In this method, most (about half) of effective polyphenols having a bacteriostatic action are removed, and even if the generation of the precipitate can be prevented, the harmful effects of the filtration treatment become apparent.

従って、本発明の目的を達成する上では、分子量１０万以上のものを除去する一方で、少なくとも分子量２万以上のポリフェノール、より好ましくは分子量５万以上のポリフェノールを残すような濾過処理を行う必要があり、そのような濾過処理としては、限外濾過処理が適しているのである。   Therefore, in order to achieve the object of the present invention, it is necessary to carry out a filtration treatment so as to remove those having a molecular weight of 100,000 or more, while leaving at least polyphenols having a molecular weight of 20,000 or more, more preferably 50,000 or more. Ultrafiltration is suitable for such filtration.

なお、本発明において、限外濾過の代わりに珪藻土（褐色植物）濾過を施した場合には、飲料添加後の沈殿発生を阻止することはできない。   In the present invention, when diatomaceous earth (brown plant) filtration is performed instead of ultrafiltration, it is not possible to prevent precipitation from occurring after the addition of the beverage.

ここで、「珪藻土濾過」とは、充填された珪藻土を濾剤として採用した濾過処理のことを意味し、精製濾過処理の際には一般的に用いられている方法である。珪藻土処理を行うときには、例えば、グラスフィルター上に珪藻土を堆積させ、これを十分に充填させた状態でその上から試料を流し込んで濾過処理をする。   Here, "diatomaceous earth filtration" means a filtration treatment employing the filled diatomaceous earth as a filtering agent, and is a method generally used in the purification filtration treatment. When diatomaceous earth processing is performed, for example, diatomaceous earth is deposited on a glass filter, and a sample is poured from above onto the glass filter in a state where the diatomaceous earth is sufficiently filled, followed by filtration.

［ＮＦ膜処理］
「ＮＦ膜処理」とは、荷電型逆浸透膜もしくは荷電型限外濾過膜を利用して濾過する処理をいうが、これに使用されるナノ濾過膜は分画分子量が数百〜数千の荷電膜であり、電解質の透過を阻止する性質を有する。 [NF membrane treatment]
“NF membrane treatment” refers to a treatment of filtering using a charged reverse osmosis membrane or a charged ultrafiltration membrane, and the nanofiltration membrane used for this has a molecular weight cut-off of hundreds to thousands. It is a charged membrane and has the property of preventing the permeation of the electrolyte.

以上説明したように、本発明により、所定のものから所定のポリフェノールを採取し、或いは、ポリフェノール画分を逆相分離用液体カラムクロマトグラフィーで分離することにより、天然由来の飲料用静菌剤を製造することができ、この画分を飲料中に混合することにより静菌作用を有する飲料とすることができるが、この過程において、前記飲料用静菌剤に対して冷却をして部分的固化後に生じた沈殿を濾過するという処理を施すことによって、静菌剤添加後の飲料に、当該飲料の外観品質を低下させるような沈殿の発生を防ぐことができるようになる。   As described above, according to the present invention, a predetermined polyphenol is collected from a predetermined substance, or a polyphenol fraction is separated by reverse-phase separation liquid column chromatography to obtain a naturally-occurring beverage bacteriostatic agent. It can be manufactured, and by mixing this fraction into a beverage, a beverage having a bacteriostatic action can be obtained. In this process, the beverage bacteriostatic agent is cooled and partially solidified. By performing the treatment of filtering the precipitate formed later, it is possible to prevent the beverage after the addition of the bacteriostatic agent from generating a precipitate that deteriorates the appearance quality of the beverage.

これにより、天然由来のポリフェノール含有性の飲料用静菌剤を添加した飲料を透明容器に安心して充填できるようになり、当該飲料の安定性も確保される。言い換えれば、本発明により、天然由来のポリフェノール含有性の飲料用静菌剤を好適な飲料添加剤、特に透明容器に充填された飲料に好適な飲料添加剤を製造することができるようになる。   This makes it possible to fill a transparent container with a beverage to which a naturally-occurring polyphenol-containing bacteriostatic agent for beverages has been added, and to ensure the stability of the beverage. In other words, according to the present invention, a naturally occurring polyphenol-containing beverage bacteriostatic agent can be produced as a suitable beverage additive, particularly a beverage additive suitable for a beverage filled in a transparent container.

［ポリフェノール類の検出］
ポリフェノール類の検出（定質・定量分析）は、常法に従って行う。ポリフェノール類の検出方法としては、例えば液体クロマトグラフィーによる分析法、酒石酸鉄法、Folin-Denis法などが挙げられる。後に示す実施例においては、ポリフェノール量は全てFolin-Denis法（タンニン酸換算）で測定した。 [Detection of polyphenols]
Detection (qualitative / quantitative analysis) of polyphenols is performed according to a conventional method. Examples of the method for detecting polyphenols include an analytical method by liquid chromatography, an iron tartrate method, and a Folin-Denis method. In the examples described later, the amounts of polyphenols were all measured by the Folin-Denis method (converted to tannic acid).

ポリフェノールというものそれ自体は、殆ど全ての植物に含まれる物質であり、また、ポリフェノール自体の種類も多いことから、研究の当初からその成分と機能との関係についての実証は難しかった。しかし、ポリフェノールに対する研究が進むにつれ、このポリフェノールの一種であるプロアントシアニジンという成分が極めて優れた抗酸化機能を有するということが見出され（例えば、特開平３−２００７８１号公報、特開平９−２２１４８４号公報、特開平１１−８０１４８号公報）、現在では、この成分を多く有するブドウ種子からの抽出物が、酸化防止剤として食品添加物の一つに登録され（厚生省告示第120号の既存添加物名簿第367号記載）、商業的に生産され、販売されるに至っている。   Since polyphenol itself is a substance contained in almost all plants, and there are many types of polyphenol itself, it has been difficult to prove the relationship between its component and function from the beginning of the research. However, as research on polyphenols has progressed, it has been found that a component called proanthocyanidin, which is a kind of polyphenol, has an extremely excellent antioxidant function (for example, JP-A-3-200781, JP-A-9-222484). At present, an extract from grape seeds having a large amount of this component is registered as one of the food additives as an antioxidant (Ministry of Health and Welfare Notification No. 120). (List No. 367), commercially produced and sold.

プロアントシアニジンを多く含有するポリフェノールとして商業的に入手可能なものとしては、市販品であるグラヴィノール（商品名）を挙げることができ、実施に際しては、これを使用するのが好適である。グラヴィノール（商品名）は、エタノール／水の混合溶媒を用いてブドウ種子からプロアントシアニジンを抽出したものであり、製品として一般に販売されているものである。なお、飲料の静菌剤としては、このグラヴィノールをそのまま使用してもよいし、或いは、さらに分離処理（例えば、先に述べたＨＰＬＣによる分離）を行って使用するようにしてもよい。   Commercially available polyphenols containing a large amount of proanthocyanidins include Gravinol (trade name) which is a commercially available product, and it is preferable to use this in practice. Gravinol (trade name) is obtained by extracting proanthocyanidins from grape seeds using a mixed solvent of ethanol / water, and is generally sold as a product. In addition, as a bacteriostatic agent for beverages, this gravinol may be used as it is, or may be used after further performing a separation treatment (for example, separation by HPLC described above).

因みに、グラヴィノール（商品名）の主成分であるプロアントシアニジンは、ポリフェノールの一種として、以下の表に示すところに位置付けられる成分である。   Incidentally, proanthocyanidin, which is a main component of Gravinol (trade name), is a component positioned as shown in the following table as a kind of polyphenol.

このプロアントシアニジンという物質は、カテキンが重合した縮合型タンニンであり、そして、それが備える強い抗酸化作用から、フランスにおいては医薬品（血管治療薬）として用いられているものでもある。   The substance called proanthocyanidin is a condensed tannin in which catechin is polymerized, and is also used as a pharmaceutical (vascular treatment) in France because of its strong antioxidant action.

なお、プロアントシアニジンそれ自体に関しては、コーヒー飲料の品質安定法についての特許出願がなされてはいるが（特開平８‐２２８６８５号公報)、それは抗酸化作用を離れたものではなく、むしろその抗酸化作用に基づいた品質安定化を図ったものに過ぎない。   As for proanthocyanidin itself, a patent application for a method for stabilizing the quality of coffee beverages has been filed (Japanese Patent Application Laid-Open No. 8-228885), but it does not leave the antioxidant action, but rather its antioxidant action. It is merely a stabilization of quality based on the action.

市販のグラヴィノール（商品名）を、下記の条件でＨＰＬＣにかけた。   Commercially available Gravinol (trade name) was subjected to HPLC under the following conditions.

その結果、図１に示されるようなクロマトグラムが得られた。   As a result, a chromatogram as shown in FIG. 1 was obtained.

また、同じく市販のグラヴィノール（商品名）を、表２と同等の条件下でＨＰＬＣにかけたところ、図２に示されるようなクロマトグラムが得られた。   When a commercially available gravinol (trade name) was subjected to HPLC under the same conditions as in Table 2, a chromatogram as shown in FIG. 2 was obtained.

更に、液化炭酸ガス抽出を行って得られたブドウ種子抽出物（特願平１１−２０９５７８号）を、図２と同じ条件でＨＰＬＣにかけたところ、図３に示されるようなクロマトグラムが得られた。また、ブドウ種子から熱水抽出することにより得られたブドウ種子抽出物についてこれをＮＦ膜処理したものを、図２と同じ条件でＨＰＬＣにかけたところ、図４に示されるようなクロマトグラムが得られた。   Further, when the grape seed extract (Japanese Patent Application No. 11-209578) obtained by liquefied carbon dioxide extraction was subjected to HPLC under the same conditions as in FIG. 2, a chromatogram as shown in FIG. 3 was obtained. Was. Further, the grape seed extract obtained by hot water extraction from grape seeds and subjected to NF membrane treatment was subjected to HPLC under the same conditions as in FIG. 2 to obtain a chromatogram as shown in FIG. Was done.

そして更に、お茶から得られたカテキンを、基本的には図２と同じ条件でＨＰＬＣにかけたところ（但し、溶出の速度を遅くするために２０分以降のグラジエント（アセトニトリルの添加量の増分（即ち、溶離液の極性の下げ方））を適宜小さくするようにした（表２の下部分の右端参照））、図５に示されるようなクロマトグラムが得られた。   Further, catechin obtained from tea was subjected to HPLC under basically the same conditions as in FIG. 2 (however, in order to slow the elution rate, a gradient after 20 minutes (increase in the amount of acetonitrile added (ie, , The method of lowering the polarity of the eluent) was appropriately reduced (see the right end of the lower part of Table 2), and a chromatogram as shown in FIG. 5 was obtained.

これらの図から明らかなように、図１に示されるグラヴィノール（商品名）のＨＰＬＣクロマトグラムでは、メジャーなピークとして、「ピーク１」、「ピーク２」及び「ピーク３」の３つのピークが得られており、これは図２のものも同様である。   As is apparent from these figures, in the HPLC chromatogram of Gravinol (trade name) shown in FIG. 1, three peaks “peak 1”, “peak 2” and “peak 3” were identified as major peaks. The same is true for FIG.

そして、この中で最後に溶出されてくるメジャーピークである「ピーク３」と同様のピークは、液化炭酸ガス抽出を行って得られたブドウ種子抽出物のＨＰＬＣクロマトグラムである図３のものにも見られるが（図３中の「ピーク３’」）、熱水抽出したものをＮＦ膜処理した図４や、お茶から得られたカテキンのＨＰＬＣクロマトグラムである図５には見られない。   The peak similar to “peak 3”, which is the last major peak to be eluted, is shown in FIG. 3, which is the HPLC chromatogram of the grape seed extract obtained by performing liquefied carbon dioxide gas extraction. Although it is also observed ("peak 3 '" in FIG. 3), it is not shown in FIG. 4 in which the extract extracted with hot water was treated with an NF membrane or in FIG. 5, which is an HPLC chromatogram of catechin obtained from tea.

なお、最後に溶出されてくるメジャーピークである「ピーク３」（或いは「ピーク３’」）については、分子量が高いポリフェノールが多く含有されていると考えられるため、その実体は、プロアントシアニジンであろうことが予測されるが、現時点では、確証を得られるまでには至っていない。しかしながら、少なくとも、最後に溶出されてくるメジャーピークと同程度のプロアントシアニジンが含有されていたということが何らかの方法によって検出された場合には、本発明に係る静菌剤であろうと推測することができる。   The major peak "Peak 3" (or "Peak 3 '"), which is eluted last, is considered to contain a large amount of polyphenol having a high molecular weight. Therefore, the substance is proanthocyanidin. It is expected to be deaf, but at this time it has not yet been confirmed. However, at least, when it is detected by some method that the same proanthocyanidin was contained as the major peak eluted last, it is assumed that the bacteriostatic agent according to the present invention would be used. it can.

［実施例１］
ここでまず、市販のグラヴィノール（商品名）を、一般的な混濁タイプスポーツ飲料（果汁３％、可溶性固形分１Ｂｒｉｘ未満、ｐＨ約３．８）、混濁タイプ果汁飲料（果汁１０％未満、可溶性固形分７〜８Ｂｒｉｘ、ｐＨ約３．０）、透明タイプ果汁飲料（果汁１０％未満、可溶性固形分４〜５Ｂｒｉｘ、ｐＨ約３．２）のそれぞれに添加し、そこに耐熱性好酸性菌２種（ＤＳＭ2498株（Deutsche Sammlung von Microorganismen und Zellkulturen GmbH）、ＡＴＣＣ49025株（American Type Culture Collection）を「胞子数１０００個／５００ｍｌ ＰＥＴボトル」の割合で接種し、経過を見た。各試験区の母数は３であり、菌が接種された飲料は、３７℃で１４日間放置された。 [Example 1]
First, commercially available gravinol (trade name) is used for general turbidity type sports drink (juice 3%, soluble solid content less than 1 Brix, pH about 3.8), turbidity type juice drink (juice less than 10%, soluble Solid content 7 to 8 Brix, pH about 3.0), transparent type juice drink (juice less than 10%, soluble solid content 4 to 5 Brix, pH about 3.2) and heat-resistant acidophilus 2 Seeds (DSM2498 strain (Deutsche Sammlung von Microorganismen und Zellkulturen GmbH) and ATCC49025 strain (American Type Culture Collection) were inoculated at a ratio of "1000 spores / 500 ml PET bottle" and the progress was observed. Was 3, and the beverage inoculated with the bacteria was left at 37 ° C. for 14 days.

以下の表３に、本実施例に係る抽出物の添加量（但し、抽出物中に含まれる総ポリフェノールの濃度に換算してある）を変化させた場合の結果を示す。   Table 3 below shows the results when the amount of the extract according to the present example was changed (however, converted to the concentration of the total polyphenol contained in the extract).

この表３では、製品中での菌の増殖及びそれに伴う異味・異臭がしたものを＋としている（なお、表３中、「+」「-」の符号につき、カンマの左３つがＤＳＭ2498株の結果を、カンマの右３つがＡＴＣＣ49025株の結果を示す）。   In Table 3, the growth of the bacteria in the product and the off-flavor / odor associated with the product are indicated by + (in Table 3, the signs of "+" and "-" indicate that the left three commas correspond to the DSM2498 strain). The results are shown with the right three commas for ATCC49025 strain).

この結果により、市販のグラヴィノール（商品名）においては、ポリフェノール濃度が１０ｐｐｍ以上となるように飲料に混合した場合には、飲料の種類を問わず、静菌効果があるということが分かる。   From these results, it can be seen that commercially available Gravinol (trade name) has a bacteriostatic effect regardless of the type of beverage when mixed with the beverage so that the polyphenol concentration becomes 10 ppm or more.

［実施例２］
次に、ポリフェノール画分を、上述したようにＨＰＬＣによって分離したときに得られるメジャーなピーク（「ピーク１」、「ピーク２」及び「ピーク３」（図１））について、それぞれ静菌効果を比較してみることとした。そして、そのためにはまず、グラヴィノールをポリフェノール換算０.５％の溶液とし、その３６ｍｌをＨＰＬＣにより「ピーク１」、「ピーク２」及び「ピーク３」の３画分に分離した。そして、分離された各部分について、回収後に濃縮・希釈をして7.2ｍｌとした。ピーク比較による回収率を、以下の表に示す。 [Example 2]
Next, the bacteriostatic effects of the major peaks (“Peak 1”, “Peak 2” and “Peak 3” (FIG. 1)) obtained when the polyphenol fraction was separated by HPLC as described above were determined. I decided to make a comparison. For that purpose, first, gravinol was made into a 0.5% solution in terms of polyphenol, and 36 ml of the solution was separated into three fractions of “Peak 1”, “Peak 2” and “Peak 3” by HPLC. Then, each of the separated portions was concentrated and diluted after collection to make 7.2 ml. The recoveries by peak comparison are shown in the table below.

上記各画分の回収率を考慮し、グラヴィノール（商品名）のポリフェノール換算１０ｐｐｍ添加相当となるように、各画分を混濁タイプスポーツ飲料に添加した。この混濁タイプスポーツ飲料を５００ｍｌＰＥＴボトルに８５℃ホットパック充填後、耐熱性好酸性菌（ＤＳＭ2498株）を「胞子数１０００個／５００ｍｌ ＰＥＴボトル」の割合で接種し、閉栓した後に１分３０秒間転倒保持し、冷却した。   In consideration of the recovery rate of each of the above fractions, each fraction was added to the turbid sports drink so as to be equivalent to the addition of Gravinol (trade name) at 10 ppm in terms of polyphenol. After hot-packing this cloudy type sports drink into a 500 ml PET bottle at 85 ° C., heat-resistant acidophilic bacteria (DSM2498 strain) were inoculated at a ratio of “1000 spores / 500 ml PET bottle”, closed, and turned over for 1 minute 30 seconds. Hold and cool.

静菌の効果は、３５℃１４日間培養後、製品液１ｍｌの混釈培養により、菌の増殖の有無で確認した。また、いずれの画分が静菌作用を有するのかを一層明確にするため、単独添加、混合添加の双方を行った。   The effect of bacteriostasis was confirmed by the presence or absence of bacterial growth by pour culture of 1 ml of the product solution after culturing at 35 ° C for 14 days. In order to further clarify which fraction has a bacteriostatic action, both single addition and mixed addition were performed.

その結果、下表のような結果が得られた。   As a result, the following results were obtained.

この表５では、製品中での菌の増殖があったものを＋としているが、この結果から明らかなように、単独添加、混合添加のいずれにおいても「ピーク３」の画分が飲料に添加されている場合に、菌の増殖が抑制されていることが認められた。   In Table 5, the case where the growth of the bacteria in the product was positive is indicated as "+". As is clear from the results, the fraction of "Peak 3" was added to the beverage in both the single addition and the mixed addition. In this case, it was confirmed that the growth of the bacteria was suppressed.

従って、上記実施例１によれば、グラヴィノール（商品名）に静菌作用があるということが立証され、この実施例２によれば、グラヴィノール（商品名）を逆相液体カラムクロマトグラフィーによって分離したときの最後に溶出される画分の中に静菌作用を備える成分が含まれているということが明らかになった。   Thus, according to Example 1 above, it was proved that Gravinol (trade name) has a bacteriostatic effect, and according to Example 2, Gravinol (trade name) was obtained by reversed-phase liquid column chromatography. It was revealed that components having a bacteriostatic action were contained in the fraction eluted at the end of the separation.

よって、グラヴィノール（商品名）を逆相液体カラムクロマトグラフィーによって分離したときに最後に溶出される画分を常法に従って取り出し、当該画分の部分を飲料に添加することによって、飲料中において静菌作用を発現させることができることが明らかである。   Therefore, the fraction eluted last when Gravinol (trade name) is separated by reversed-phase liquid column chromatography is taken out according to a conventional method, and the fraction is added to the beverage, so that it can be added to the beverage. It is clear that fungal action can be expressed.

［実施例３］
次に、異なる抽出方法で抽出したブドウ抽出物、並びに他のポリフェノールの静菌作用について、それらを相互に比較した。具体的には、（１）水／エタノールの混合溶媒を使用して抽出されたブドウ種子抽出物であるグラヴィノール（商品名）、（２）液化炭酸ガスで抽出されたブドウ種子抽出物、（３）熱水抽出されたブドウ種子抽出物をＮＦ膜濾過処理したブドウ種子抽出物、（４）緑茶カテキン製剤、をそれぞれ一般的な混濁タイプスポーツ飲料（果汁３％、可溶性固形分１Ｂｒｉｘ未満、ｐＨ約３．８）に添加し、そこに耐熱性好酸性菌（ＤＳＭ2498株）を「胞子数１０００個／５００ｍｌ ＰＥＴボトル」の割合で接種し、経過を見た。各試験区の母数は２であり、菌が接種された飲料は、３７℃で１４日間放置された。 [Example 3]
Next, the grape extracts extracted by different extraction methods, as well as the bacteriostatic action of other polyphenols, were compared with each other. Specifically, (1) Gravinol (trade name) which is a grape seed extract extracted using a mixed solvent of water / ethanol, (2) a grape seed extract extracted with liquefied carbon dioxide, ( 3) A grape seed extract obtained by subjecting a grape seed extract extracted with hot water to NF membrane filtration, and (4) a green tea catechin preparation, each of a general turbidity type sports drink (fruit juice 3%, soluble solid content less than 1 Brix, pH About 3.8), and heat-resistant acidophilic bacterium (DSM2498 strain) was inoculated therein at a ratio of "1000 spores / 500 ml PET bottle", and the progress was observed. The population of each test plot was 2, and the beverage inoculated with the bacteria was left at 37 ° C. for 14 days.

以下の表６に、本実施例に係る抽出物の添加量（但し、抽出物中に含まれる総ポリフェノールの濃度に換算してある）を変化させた場合の結果を示す。   Table 6 below shows the results obtained when the amount of the extract according to the present example (which was converted to the concentration of the total polyphenol contained in the extract) was changed.

この表６では、製品中での菌の増殖及びそれに伴う異味・異臭がしたものを＋としている。   In Table 6, the growth of the bacteria in the product and the off-flavor and odor associated with the growth are indicated by +.

この結果から、ブドウ種子抽出物をＮＦ膜で濾過をした場合には、ブドウ種子抽出物中から静菌作用が消失してしまうということが分かる。上述したように、これは、最後に溶出されて来る「ピーク３」もしくは「ピーク３’」に相当するピークが、ＮＦ膜処理を経ることによって消失してしまうからであると考えられるため、この現象からも、「ピーク３」もしくは「ピーク３’」の部分に静菌作用があることの事実の裏付けがなされている。   From this result, it can be seen that when the grape seed extract is filtered through the NF membrane, the bacteriostatic action disappears from the grape seed extract. As described above, this is thought to be because the peak corresponding to “Peak 3” or “Peak 3 ′” eluted last disappears after passing through the NF membrane treatment. The phenomenon also supports the fact that the “peak 3” or “peak 3 ′” has a bacteriostatic action.

同様に、緑茶カテキンに静菌作用が無いのは、元々「ピーク３」もしくは「ピーク３’」に相当するピークが存在しないためであると考えられる。   Similarly, it is considered that the reason why green tea catechin has no bacteriostatic action is that a peak corresponding to "peak 3" or "peak 3 '" does not originally exist.

［実施例４］
本発明は、ぶどう種子抽出物（例えばグラヴィノール（商品名））を使用して、以下のようなフローに従って実施することができる。 [Example 4]
The present invention can be carried out using grape seed extract (for example, Gravinol (trade name)) according to the following flow.

ここで、上記の表７に示されるフローに従い、グラヴィノール2.5％の含水エタノール溶解液（総ポリフェノール約1％）にＵＦ20,000の限外濾過膜、ＵＦ50,000の限外濾過膜、及びＵＦ100,000の限外濾過膜を用いて本発明を実施した場合において、得られた静菌剤を飲料添加剤として飲料（透明タイプ果汁飲料：果汁１０％未満、可溶性固形分８〜9Brix、pH約3.9）に添加したものを放置（４８〜１２０時間程度）して沈殿の発生を見た結果、以下のような結果が得られた（なお、添加量は、各処理液の飲料への添加濃度で示す）。   Here, according to the flow shown in Table 7 above, a UF20,000 ultrafiltration membrane, a UF50,000 ultrafiltration membrane, and a UF100 ultrafiltration membrane were added to a 2.5% gravinol aqueous ethanol solution (about 1% of total polyphenols). In the case where the present invention is carried out using an ultrafiltration membrane of 2,000, the obtained bacteriostatic agent is used as a beverage additive in a beverage (clear juice juice: less than 10% juice, soluble solid content of 8 to 9 Brix, pH about 3.9) was added (approximately 48 to 120 hours), and the occurrence of precipitation was observed. As a result, the following results were obtained. ).

この表に示されるように、ＵＦ100,000の限外濾過膜を用いて本発明を実施した場合には沈殿の発生が見られたものの、ＵＦ20,000の限外濾過膜及びＵＦ50,000の限外濾過膜を用いて本発明を実施した場合には、いずれも沈殿の発生は見られなかった。   As shown in this table, when the present invention was carried out using a UF100,000 ultrafiltration membrane, precipitation was observed, but the UF20,000 ultrafiltration membrane and the UF50,000 ultrafiltration membrane were used. When the present invention was carried out using an ultrafiltration membrane, no precipitation was observed in any case.

次に、表７に示されるフローに従い、ＵＦ20,000の限外濾過膜及びＵＦ50,000の限外濾過膜を用いて本発明を実施した場合において、得られた静菌剤を飲料添加剤として飲料(透明タイプ果汁飲料：果汁10％未満、可溶性固形分８〜９Brix、pH約3.9)に添加した場合の静菌効果の発現について調べた結果、以下のような結果が得られた（なお、添加量は、各処理液の飲料への添加濃度で表す。）。   Next, according to the flow shown in Table 7, when the present invention was carried out using an ultrafiltration membrane of UF20,000 and an ultrafiltration membrane of UF50,000, the obtained bacteriostatic agent was used as a beverage additive. The following results were obtained as a result of examining the expression of the bacteriostatic effect when added to a beverage (clear juice beverage: less than 10% fruit juice, soluble solid content of 8 to 9 Brix, pH of about 3.9). The amount of addition is represented by the concentration of each treatment liquid added to the beverage.)

因みに、各処理液について、これをＨＰＬＣにかけた結果が図２（未処理の場合）、図６（ＵＦ50,000の限外濾過膜の場合）及び図７（ＵＦ20,000の限外濾過膜の場合）に示されている。   By the way, for each of the treatment solutions, the results obtained by subjecting them to HPLC are shown in FIG. 2 (in the case of untreated), FIG. 6 (in the case of the UF50,000 ultrafiltration membrane) and FIG. Case).

このような表９、並びに図２、図６及び図７の結果より、ＵＦ20,000の限外濾過膜を使用した場合にはポリフェノールロスが大きく、静菌作用の低下が見られるようである。   From the results shown in Table 9 and FIGS. 2, 6 and 7, it is apparent that when an ultrafiltration membrane having a UF of 20,000 is used, the polyphenol loss is large and the bacteriostatic action is reduced.

市販のグラヴィノール（商品名）をＨＰＬＣにかけた結果得られたクロマトグラムを示す図である（表２参照）。It is a figure which shows the chromatogram obtained as a result of having performed HPLC with commercially available Gravinol (brand name) (refer Table 2). 市販のグラヴィノール（商品名）を、表２の条件下でＨＰＬＣにかけた結果得られたクロマトグラムを示す図である。FIG. 4 is a diagram showing a chromatogram obtained by subjecting commercially available Gravinol (trade name) to HPLC under the conditions shown in Table 2. 液化炭酸ガス抽出を行って得られたブドウ種子抽出物を、図２と同じ条件でＨＰＬＣにかけた結果得られたクロマトグラムを示す図である。FIG. 3 is a view showing a chromatogram obtained as a result of subjecting a grape seed extract obtained by liquefied carbon dioxide extraction to HPLC under the same conditions as in FIG. 2. ブドウ種子から熱水抽出することにより得られたブドウ種子抽出物についてＮＦ膜処理したものを、図２と同じ条件でＨＰＬＣにかけた結果得られたクロマトグラムを示す図である。FIG. 3 is a diagram showing a chromatogram obtained as a result of subjecting a grape seed extract obtained by hot water extraction from a grape seed to NF membrane treatment under HPLC under the same conditions as in FIG. 2. お茶から得られたカテキンを、表２の条件（下部分の右端）でＨＰＬＣにかけた結果得られたクロマトグラムを示す図である。FIG. 4 is a diagram showing a chromatogram obtained as a result of subjecting catechin obtained from tea to HPLC under the conditions of Table 2 (right end of the lower part). 冷却することによる部分的固化→解凍→濾過（ＵＦ50,000の限外濾過膜の場合）を経た静菌剤を図２と同じ条件でＨＰＬＣにかけた結果を示すチャート図である。FIG. 3 is a chart showing the results of subjecting a bacteriostatic agent that has undergone partial solidification by cooling to thawing to filtration (in the case of an ultrafiltration membrane with a UF of 50,000) to HPLC under the same conditions as in FIG. 2. 冷却することによる部分的固化→解凍→濾過（ＵＦ20,000の限外濾過膜の場合）を経た静菌剤を図２と同じ条件でＨＰＬＣにかけた結果を示すチャート図である。FIG. 3 is a chart showing the results of subjecting a bacteriostatic agent that has undergone partial solidification by cooling to thawing to filtration (in the case of an ultrafiltration membrane of UF20,000) to HPLC under the same conditions as in FIG. 2.

Claims (1)

プロアントシアニジンを主成分とする静菌剤を飲料添加剤へと加工・処理する際の処理方法であって、
前記静菌剤を含水エタノールに溶解させ、これを冷却することによって部分的固化させた後に解凍し、当該解凍後に発生した沈殿を限外濾過して除去する工程を含むことを特徴とする処理方法。 A processing method when processing and processing a bacteriostatic agent containing proanthocyanidin as a main component into a beverage additive,
Dissolving the bacteriostatic agent in aqueous ethanol, partially solidifying by cooling, thawing, and ultrafiltrating and removing the precipitate generated after the thawing. .

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