JP2004271522A - Filler for liquid chromatography, manufacturing method therefor, and application - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、液体クロマトグラフィー用充填剤の新規製造法に関するものである。 The present invention relates to a novel method for producing a packing material for liquid chromatography.
液体クロマトグラフィーは医薬品や食品、天然化合物などの分野で重要な分析分離手段として幅広く使用されている。汎用の液体クロマトグラフィー用充填剤は表面をアルキル基などで修飾した多孔性シリカゲルである。表面修飾シリカゲルとしては、表面のＯＨ基にケイ素原子を介してオクタデシル基を導入したもの（ＯＤＳ）が最も一般的であるが、導入基がオクチル基、ブチル基、メチル基などであるものも知られている。また、アルキル基は末端にフェニル基やアミノ基、シアノ基などの官能基を有する場合もある。 Liquid chromatography is widely used as an important analytical separation means in fields such as pharmaceuticals, foods, and natural compounds. A general-purpose packing material for liquid chromatography is porous silica gel whose surface is modified with an alkyl group or the like. The most commonly used surface-modified silica gel is one in which an octadecyl group is introduced via a silicon atom to an OH group on the surface (ODS), but one in which the introduced group is an octyl group, a butyl group, a methyl group, or the like is also known. Have been. Further, the alkyl group may have a functional group such as a phenyl group, an amino group, or a cyano group at a terminal.
しかし、シリカゲルをアルキル化で表面修飾してもシリカ表面にシラノール基（Ｓｉ−ＯＨ）が残存する。残存シラノール基は、塩基性化合物を分析あるいは分取の対象とした場合、同化合物との強い相互作用によりこれを溶出しなかったり、ピークがテーリングするなどの問題がある。それを防ぐため、表面修飾の後、残存シラノール基を二次シリル化によりエンドキャップし、シリカ表面をより不活性にする必要がある。 However, even if the silica gel is surface-modified by alkylation, silanol groups (Si-OH) remain on the silica surface. When a basic compound is subjected to analysis or fractionation, the residual silanol group has a problem that it does not elute due to strong interaction with the basic compound or that a peak tails. To prevent this, after the surface modification, the remaining silanol groups need to be end-capped by secondary silylation to make the silica surface more inert.
従来のエンドキャップ法として、特許文献１には、化学修飾剤で表面修飾されたシリカゲルまたは多孔質ガラスに、エンドキャッピング剤として特定のシクロシロキサン、ハイドロジエンシロキサン、アルコキシシランまたはシロキサンを気相反応させてシリカゲル表面の残存シラノール基にエンドキャッピング剤を化学結合させる方法が記載され、特許文献２には、シリカゲルに特定のポリジメチルシロキサン、ポリフェニルメチルシロキサン、ポリジフェニルジメチルシロキサン、ポリシアノプロピルメチルジメチルシロキサン、ポリシアノプロピルメチルフェニルメチルシロキサンなどを反応させる方法が記載され、特許文献３には、化学修飾剤で表面修飾されたシリカゲルに特定のシラザン、ジシラザン、シロキサン、ポリシロキサンなどの末端付加剤の少なくとも２種を１８０〜２４０℃で気相反応させる方法が記載されている。 As a conventional endcap method, Patent Document 1 discloses a method in which a specific cyclosiloxane, hydrogenenesiloxane, alkoxysilane or siloxane is used as an endcapping agent in a gas phase reaction with silica gel or porous glass surface-modified with a chemical modifier. Patent Document 2 describes a method of chemically bonding an endcapping agent to the remaining silanol groups on the surface of silica gel, and Patent Document 2 discloses a method in which specific polydimethylsiloxane, polyphenylmethylsiloxane, polydiphenyldimethylsiloxane, and polycyanopropylmethyldimethylsiloxane are added to silica gel. And a method of reacting polycyanopropylmethylphenylmethylsiloxane and the like, and Patent Document 3 discloses a method in which a silazane, disilazane, siloxane, A method of vapor-phase reaction of at least two terminal addition agent such as at 180 to 240 ° C. is described.
しかし、これらの方法では、反応に高温が必要である上、シリカ表面の残存シラノール基を十分に少なくすることができない。そのためこれらの方法で得られた充填剤では塩基性化合物のテーリングが防ぎきれない。
本発明は、上記のような実状から、残存シラノール基を極めて少なくし、塩基性化合物のテーリングを著しく抑制した高性能液体クロマトグラフィー用充填剤を提供することを課題とするものである。 An object of the present invention is to provide a packing material for high-performance liquid chromatography in which the amount of residual silanol groups is extremely reduced and the tailing of a basic compound is remarkably suppressed.
本発明者は、上記課題を解決すべく種々の検討を行った結果、特定化合物を用い特定条件下でエンドキャッピング反応を行う液体クロマトグラフィー用充填剤の製造方法を見出した。 The present inventor has conducted various studies to solve the above problems, and as a result, has found a method for producing a packing material for liquid chromatography in which a specific compound is used and an endcapping reaction is performed under specific conditions.
すなわち、本発明による液体クロマトグラフィー用充填剤の製造方法は、化学修飾剤で表面修飾されたシリカゲルに下記一般式［II］で表されるエンドキャッピング剤を液相または気相で反応させてシリカゲル表面の残存シラノール基にエンドキャッピング剤を化学結合させることを特徴とする方法である。
式中、Ｒ３およびＲ４は、同一または異なり、炭素数１〜４のアルキル基、ｎは環を形成するユニットの係数で２〜１０の整数をそれぞれ意味する。 In the formula, R 3 and R 4 are the same or different and each have an alkyl group having 1 to 4 carbon atoms, and n represents an integer of 2 to 10 which is a coefficient of a unit forming a ring.
上記化学修飾剤は下記一般式［Ｉ］で表されるアルキルシランであることが好ましい。ただし化学修飾剤はこれに限定されない。
式中、Ｘ１は水素原子、ハロゲン原子もしくは炭素数１〜４のアルコキシル基、Ｒ０、Ｒ１およびＲ２は、同一または異なり、アルキル基またはアリール基をそれぞれ意味する。ａはＲ０の係数で０〜３の整数、ｂはＲ１の係数で０〜３の整数、ｃはＲ２の係数で０〜 ３の整数、ｄはＸ１の係数で１〜３の整数をそれぞれ意味し、ａ＋ｂ＋ｃ＋ｄ＝４である。 In the formula, X 1 is a hydrogen atom, a halogen atom or an alkoxyl group having 1 to 4 carbon atoms, and R 0 , R 1 and R 2 are the same or different and each represents an alkyl group or an aryl group. a is an integer of 0 to 3 by a factor of R 0, b is an integer of 0 to 3 by a factor of R 1, c is an integer of 0-3 by a factor of R 2, d is 1 to 3 by a factor of X 1 Each means an integer, and a + b + c + d = 4.
本明細書および特許請求の範囲において、アルキル基は、直鎖状、分枝状または脂環式のものであってよい。 In the present description and in the claims, the alkyl group may be linear, branched or alicyclic.
一般式［Ｉ］中のＲ０、Ｒ１およびＲ２としてのアルキル基は、好ましくは１〜５０、より好ましくは１〜３０の炭素原子を有する。このアルキル基は、末端にアリール基、アミノ基もしくはシアノ基を有するか、または、非末端にアミド基（−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−）、カーバメート基（−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−）またはカーバマイド基（−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−）、エステル基（−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−）またはカーボネート基（−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−）を有していてもよい。 The alkyl group as R 0 , R 1 and R 2 in the general formula [I] preferably has 1 to 50, more preferably 1 to 30 carbon atoms. This alkyl group has an aryl group, an amino group or a cyano group at a terminal, or an amide group (—NH—C (O) —) or a carbamate group (—OC—O (NH)) at a non-terminal. ) Or a carbamide group (-NH-C (O) -NH-), an ester group (-OC (O)-) or a carbonate group (-OC (O) -O-). Good.
一般式［Ｉ］中のＲ０、Ｒ１およびＲ２としてのアリール基は、フェニル基、トリル基、ナフチル基などであってよい。 The aryl group as R 0 , R 1 and R 2 in the general formula [I] may be a phenyl group, a tolyl group, a naphthyl group or the like.
上記方法により製造された液体クロマトグラフィー用充填剤は、２９Ｓｉ固体ＮＭＲにより求められるシラノール基残量が極めて少ない（好ましくは５％以下）ものである。該液体クロマトグラフィー用充填剤が充填された液体クロマトグラフィー用カラムは、特に逆相液体クロマトグラフィーに適しており、化合物、とりわけ塩基性化合物の分析および分取において有用である。 The packing material for liquid chromatography produced by the above method has a very small residual amount of silanol groups (preferably 5% or less) as determined by 29 Si solid-state NMR. The column for liquid chromatography packed with the packing material for liquid chromatography is particularly suitable for reversed-phase liquid chromatography, and is useful in the analysis and fractionation of compounds, especially basic compounds.
原料シリカゲルは、粒子径が通常１〜１０００μｍ、好ましくは２〜２００μｍであり、細孔径が通常１０〜１００００オングストローム、好ましくは５０〜３０００オングストロームであり、表面積が通常１〜１０００ｍ２／ｇ、好ましくは５〜６００ｍ２／ｇ である多孔性シリカゲルである。分析カラム用の充填剤の原料シリカゲルとしては高純度の球形物が好ましい。 The raw material silica gel has a particle size of usually 1 to 1000 μm, preferably 2 to 200 μm, a pore size of usually 10 to 10000 angstroms, preferably 50 to 3000 angstroms, and a surface area of usually 1 to 1000 m 2 / g, preferably It is a porous silica gel of 5 to 600 m 2 / g. As the raw material silica gel for the packing material for the analytical column, a high-purity spherical material is preferable.
一般式［Ｉ］で表される化学修飾剤は、一官能性、二官能性もしくは三官能性の、水素原子、ハロゲン原子またはアルコキシル基を有するアルキルシランまたはアリールシランである。化学修飾剤の具体的な例を表１に例示する。
化学修飾剤として一般式［Ｉ］で表されるものを用いる場合、シリカゲルの表面修飾反応は、通常６０〜２００℃、好ましくは１００〜１６０℃で、好ましくは液相中で行う。溶媒としては、シリカゲルおよび化学修飾剤とは反応せずかつ上記反応温度下で安定であるものであればよく、ベンゼン、トルエン、キシレン、メシチレンなどの芳香族炭化水素、ジクロロベンゼンなどの置換芳香族化合物が好ましい。反応圧は通常常圧であるが、反応を１．５〜５．０ｋｇ／ｃｍ２の加圧条件下で行ってもよい。反応時間は通常０．５〜２０時間、好ましくは３〜１０時間である。ピリジン、イミダゾールのような塩基性化合物を添加することが好ましい。 When the one represented by the general formula [I] is used as the chemical modifier, the surface modification reaction of silica gel is usually performed at 60 to 200 ° C, preferably 100 to 160 ° C, and preferably in a liquid phase. The solvent may be any solvent that does not react with the silica gel and the chemical modifier and is stable at the above reaction temperature, such as aromatic hydrocarbons such as benzene, toluene, xylene and mesitylene, and substituted aromatics such as dichlorobenzene. Compounds are preferred. The reaction pressure is usually normal pressure, but the reaction may be carried out under a pressurized condition of 1.5 to 5.0 kg / cm 2 . The reaction time is generally 0.5 to 20 hours, preferably 3 to 10 hours. It is preferable to add a basic compound such as pyridine and imidazole.
表面修飾反応後の反応液をそのままつぎのエンドキャッピング反応に用いてもよいが、表面修飾反応液から固形分を取り出してこれを洗浄乾燥してからエンドキャッピング反応に用いてもよい。 The reaction solution after the surface modification reaction may be used as it is for the next end capping reaction, or a solid content may be taken out from the surface modification reaction solution, washed and dried, and then used for the end capping reaction.
一般式［II］で表されるエンドキャッピング剤は二官能性環状シラザンであり、好ましくは１，１，３，３，５，５−ヘキサメチルシクロトリシラザン、１，１，３，３，５，５，７，７−オクタメチルシクロテトラシラザン、１，１，３，３，５，５，７，７，９，９−デカメチルシクロペンタシラザン、１，１，３，３，５，５，７，７，９，９，１１，１１−ドデカメチルシクロヘキサシラザン、１，１，３，３，５，５−ヘキサエチルシクロトリシラザン、１，１，３，３，５，５，７，７−オクタエチルシクロテトラシラザン、１，１，３，３，５，５，７，７，９，９−デカエチルシクロペンタシラザン、１，１，３，３，５，５，７，７，９，９，１１，１１−ドデカエチルシクロヘキサシラザンなどが例示される。これらは単独で用いても２種以上の混合物で用いてもよい。エンドキャッピング剤［II］を一般式［III］で表される二官能性シラン（例えば、ジメチルジクロロシラン、ジメチルジメトキシシランなど）と混合して用いてもよい。
式中、Ｘ２およびＸ３は、同一または異なり、水素原子、ハロゲン原子または炭素数１〜４のアルコキシル基、Ｒ５およびＲ６は、同一または異なり、炭素数１〜４のアルキル基またはアリール基をそれぞれ意味する。 In the formula, X 2 and X 3 are the same or different, a hydrogen atom, a halogen atom, or an alkoxyl group having 1 to 4 carbon atoms, R 5 and R 6 are the same or different, and an alkyl group or an aryl having 1 to 4 carbon atoms. Each means a group.
エンドキャッピング剤としての二官能性環状シラザンは、トリメチルクロロシランやヘキサメチルジシラザンなどの一官能性のものに比べると、反応できるサイトが多く、より活性であり、またメチルトリクロロシランなどの三官能性のものに比べると、副反応が少ないといった利点がある。二官能性環状シラザンは、類似構造の環状シロキサンに比べると約５０℃ほど高い沸点を有し、液相反応に適している。また、シロキサンの反応では水が副生するのに対し、シラザンを用いた液相反応では、アンモニアが気相に脱して反応の進行に有利である上、未反応シラザンの回収再利用が可能である。 Bifunctional cyclic silazanes as end-capping agents have more sites that can react and are more active than monofunctional ones such as trimethylchlorosilane and hexamethyldisilazane, and trifunctionality such as methyltrichlorosilane. There is an advantage that there are few side reactions as compared with those of the above. Bifunctional cyclic silazanes have a boiling point about 50 ° C. higher than cyclic siloxanes of similar structure, and are suitable for liquid phase reactions. In the siloxane reaction, water is produced as a by-product, whereas in the liquid phase reaction using silazane, ammonia is removed to the gas phase, which is advantageous for the progress of the reaction, and the unreacted silazane can be recovered and reused. is there.
エンドキャッピング剤の使用量は、エンドキャッピング剤／表面修飾シリカゲルの重量比で通常０．１〜２０で、好ましくは０．２〜２である。 The amount of the endcapping agent to be used is generally 0.1 to 20, preferably 0.2 to 2, by weight of the endcapping agent / surface-modified silica gel.
エンドキャッピング剤はそれ自体をそのまま反応に使用してもよいが、有機溶媒で希釈して使用することもでき、この場合コストが削減できる。希釈に用いる有機溶媒は、エンドキャッピング剤と反応せずかつ反応温度下で安定であるものであればよく、ベンゼン、トルエン、キシレン、メシチレンなどの芳香族炭化水素、ジクロロベンゼンなどの置換芳香族化合物が好適である。希釈倍率は、溶媒／エンドキャッピング剤の重量比で通常０．１〜２００で、好ましくは１〜２０である。 The endcapping agent itself may be used as it is in the reaction, but it may be used after being diluted with an organic solvent, in which case the cost can be reduced. The organic solvent used for dilution may be any solvent that does not react with the endcapping agent and is stable at the reaction temperature, and aromatic hydrocarbons such as benzene, toluene, xylene, and mesitylene, and substituted aromatic compounds such as dichlorobenzene. Is preferred. The dilution ratio is usually from 0.1 to 200, preferably from 1 to 20, in terms of the weight ratio of solvent / endcapping agent.
エンドキャッピング反応は気相で行ってもよいが、液相で行うと反応設備が簡易なものでよい上にバッチ当たりの処理量を増やすことができる。 The end-capping reaction may be performed in the gas phase, but when performed in the liquid phase, the reaction equipment can be simplified and the throughput per batch can be increased.
エンドキャッピング反応の反応温度は好ましくは１００〜２００℃、より好ましくは１４０〜１８０℃である。反応温度が高いほどエンドキャッピング反応を促進する効果があるが、設備にかかる負担が大きい。 The reaction temperature of the end capping reaction is preferably 100 to 200C, more preferably 140 to 180C. The higher the reaction temperature, the more the effect of accelerating the endcapping reaction, but the greater the load on the equipment.
エンドキャッピング反応は常圧でも行えるが、１．５〜５．０ｋｇ／ｃｍ２の加圧条件下で行うことが好ましい。また、反応温度に近い沸点を有する有機溶媒を選択することで、反応時の圧力を低く抑えることができ、反応設備の耐圧性に対する要求が緩和される。 The end capping reaction can be carried out under normal pressure, but is preferably carried out under a pressure of 1.5 to 5.0 kg / cm 2 . Further, by selecting an organic solvent having a boiling point close to the reaction temperature, the pressure during the reaction can be kept low, and the demand for the pressure resistance of the reaction equipment is eased.
エンドキャッピング反応の反応時間は通常０．５〜２０時間、好ましくは３〜１０時間である。 The reaction time of the end capping reaction is usually 0.5 to 20 hours, preferably 3 to 10 hours.
エンドキャッピング反応後、固液分離により未反応のエンドキャッピング剤を回収し、再利用することができる。分離した固形分をメタノールで洗浄し、乾燥して液体クロマトグラフィー用充填剤を得る。 After the endcapping reaction, the unreacted endcapping agent can be recovered by solid-liquid separation and reused. The separated solid is washed with methanol and dried to obtain a packing material for liquid chromatography.
本発明によれば、２００℃以下という比較的温和な温度で、したがって比較的簡易な反応設備でかつ低コストで、高性能液体クロマトグラフィー用充填剤を製造することができる。 According to the present invention, a packing material for high-performance liquid chromatography can be produced at a relatively mild temperature of 200 ° C. or less, and thus with relatively simple reaction equipment and at low cost.
本発明による液体クロマトグラフィー用充填剤は、シラノール基残量が極めて少なく(２９Ｓｉ固体ＮＭＲにより求められるシラノール基残量が好ましくは５％以下)、塩基性化合物のテーリングを著しく抑制し、ピークの対称性を大幅に改善した高性能なものであり、特に逆相液体クロマトグラフィーに適し、かつ塩基性化合物の分析および分取に有用である。 The packing material for liquid chromatography according to the present invention has an extremely low residual amount of silanol groups (the residual amount of silanol groups determined by 29 Si solid-state NMR is preferably 5% or less), significantly suppresses tailing of basic compounds, It is a high-performance one with greatly improved symmetry, and is particularly suitable for reversed-phase liquid chromatography and useful for analyzing and fractionating basic compounds.
以下、本発明の実施例を幾つか挙げ、本発明を具体的に説明する。ただし、これら実施例は本発明を限定するものではない。比較として従来のエンドキャッピング剤を用いた例を挙げる。また、市販の代表的なＯＤＳカラムについても比較試験を行った。 Hereinafter, the present invention will be specifically described with reference to some examples of the present invention. However, these examples do not limit the present invention. For comparison, an example using a conventional endcapping agent will be described. A comparative test was also performed on a typical ODS column on the market.
実施例１
シリカゲルとしてダイソーゲルＳＰ−１００−５Ｐ（球形高純度シリカゲル、平均粒子径５μｍ、細孔径１００オングストローム、表面積４５０ｍ２／ｇ）１５ｇを２００ｍｌトルエン中で共沸脱水したのち、化学修飾剤としてオクタデシルジメチルクロロシラン４．７ｇとピリジン１．３ｇを加え、この混合物を加熱して５時間還流させ、反応混合物の冷却およびろ過の後、得られた固形分をメタノールで数回洗浄し、乾燥して、表面修飾シリカゲル１９ｇを得た。
Example 1
15 g of Daiso Gel SP-100-5P (spherical high-purity silica gel, average particle diameter 5 μm,
得られた表面修飾シリカゲル１９ｇとエンドキャッピング剤として１，１，３，３，５，５−ヘキサメチルシクロトリシラザン２０ｇとキシレン２００ｇをオートクレーブに仕込み、液相中で温度１６０℃、圧力１．５〜３．０ｋｇ／ｃｍ２で５時間エンドキャップ反応 を行い、反応混合物の冷却およびろ過の後、得られた固形分をメタノールで数回洗浄し、乾燥して、液体クロマトグラフィー用充填剤２０ｇを得た。 19 g of the obtained surface-modified silica gel, 20 g of 1,1,3,3,5,5-hexamethylcyclotrisilazane as an endcapping agent and 200 g of xylene were charged into an autoclave, and the temperature was 160 ° C. and the pressure was 1.5 in the liquid phase. An end cap reaction was performed at ~ 3.0 kg / cm 2 for 5 hours. After cooling and filtration of the reaction mixture, the obtained solid was washed several times with methanol and dried to obtain 20 g of a packing material for liquid chromatography. Obtained.
実施例２
化学修飾剤としてオクタデシルメチルジクロロシラン５．０ｇを用いピリジンの添加量を２．６ｇに変えた以外、実施例１と同じ操作を行い、液体クロマトグラフィー用充填剤２０ｇを得た。
Example 2
Except that 5.0 g of octadecylmethyldichlorosilane was used as a chemical modifier and the amount of pyridine was changed to 2.6 g, the same operation as in Example 1 was performed to obtain 20 g of a filler for liquid chromatography.
実施例３
化学修飾剤としてオクタデシルトリクロロシラン５．３ｇを用いピリジンの添加量を３．９ｇに変えた以外、実施例１と同じ操作を行い、液体クロマトグラフィー用充填剤２０ｇを得た。
Example 3
The same operation as in Example 1 was carried out except that 5.3 g of octadecyltrichlorosilane was used as a chemical modifier and the amount of pyridine was changed to 3.9 g, to obtain 20 g of a filler for liquid chromatography.
比較例１
実施例１と同じ化学修飾剤を用いて同じ操作で得られた表面修飾シリカゲル１９ｇを、エンドキャッピング剤としてトリメチルクロロシラン２０ｇとトルエン２００ｇ中に仕込み、液相中で温度１１０℃、常圧で５時間エンドキャップ反応を行い、得られた反応混合物を実施例１と同様に処理して液体クロマトグラフィー用充填剤２０ｇを得た。
Comparative Example 1
19 g of surface-modified silica gel obtained by the same operation using the same chemical modifying agent as in Example 1 was charged into 20 g of trimethylchlorosilane and 200 g of toluene as an end-capping agent, and a temperature of 110 ° C. and a normal pressure of 5 hours in a liquid phase. An end-cap reaction was performed, and the obtained reaction mixture was treated in the same manner as in Example 1 to obtain 20 g of a filler for liquid chromatography.
比較例２
実施例１と同じ化学修飾剤を用いて同じ操作で得られた表面修飾シリカゲル１９ｇとヘキサメチルジシラザン２０ｇとトルエン２００ｇをオートクレーブに仕込み、液相中で温度１４０℃、圧力１．５〜３．０ｋｇ／ｃｍ２で５時間エンドキャップ反応を行い、得られた反応混合物を実施例１と同様に処理して液体クロマトグラフィー用充填剤２０ｇを得た。
Comparative Example 2
19 g of surface-modified silica gel, 20 g of hexamethyldisilazane, and 200 g of toluene obtained by the same operation using the same chemical modifier as in Example 1 were charged into an autoclave, and the temperature was 140 ° C. and the pressure was 1.5 to 3 in the liquid phase. An end cap reaction was performed at 0 kg / cm 2 for 5 hours, and the obtained reaction mixture was treated in the same manner as in Example 1 to obtain 20 g of a packing material for liquid chromatography.
比較例３
Ｇ社製ＯＤＳカラムＩ（内径４．６ｍｍ、長さ１５０ｍｍ）を用意した。
Comparative Example 3
GDS ODS column I (inner diameter 4.6 mm,
比較例４
Ｙ社製ＯＤＳカラムＰ（内径４．６ｍｍ、長さ１５０ｍｍ）を用意した。
Comparative Example 4
An YDS ODS column P (inner diameter 4.6 mm,
比較例５
Ｎ社製ＯＤＳカラムＭ（内径４．６ｍｍ、長さ１５０ｍｍ）を用意した。
Comparative Example 5
An ODS column M (inner diameter 4.6 mm,
比較例６
Ｓ社製ＯＤＳカラムＣ（内径４．６ｍｍ、長さ１５０ｍｍ）を用意した。
Comparative Example 6
An ODS column C (inner diameter 4.6 mm,
評価試験
１）シラノール基残量の定量
実施例および比較例で得られた液体クロマトグラフィー用充填剤すなわちエンドキャップされたシリカゲルについて、高分解能５００ＭＨｚ２９Ｓｉ固体ＮＭＲ（日本電子社製「Ｊｅｏｌ ＥＣＰ−５００」）を用いて、シングルパルスマジックアングルスピニング法で、下記条件で、Ｓｉ種のＮＭＲ測定を行い、得られたＮＭＲスペクトルから下記式によりシラノール基残量を算出した。
Evaluation Test 1) Determination of Residual Silanol Group The filler for liquid chromatography obtained in Examples and Comparative Examples, that is, end-capped silica gel, was subjected to high-resolution 500 MHz 29 Si solid state NMR (“Jeol ECP-500” manufactured by JEOL Ltd.). )), The NMR measurement of Si species was performed by the single pulse magic angle spinning method under the following conditions, and the residual silanol group was calculated from the obtained NMR spectrum by the following formula.
シラノール基残量＝［Ｑ３／（Ｑ３＋Ｑ４ ］×１００％
Ｑ３：−１００ｐｐｍ付近にシラノール基を持つＳｉ種に属するピークの積分値
Ｑ４ ：−１１０ｐｐｍ付近にシラノール基を持たないＳｉ種に属するピークの積分値
シラノール基残量はもちろん低い方がよく、５％以下であることが好ましい。２９Ｓｉ−ＮＭＲ測定条件
回転数：５０００Ｈｚ
磁場強度：１１．７Ｔ
共鳴周波数：９９．３６ＭＨｚ
パルス長：２．８μｓ
測定周期：２５ｓ
スキャン回数：２５００
実施例１〜３および比較例１〜２で得られた液体クロマトグラフィー用充填剤の２９Ｓｉ−ＮＭＲチャートを図１、図３、図５、図７および図９にそれぞれ示す。これらから分かるように、実施例１〜３の液体クロマトグラフィー用充填剤では、残存シラノール基（−１００ｐｐｍ付近のピーク（Ｑ３））は検出されなかった。
Silanol group remaining amount = [Q 3 / (Q 3 + Q 4 ) × 100%
Q 3: integral value of peaks belonging to Si species having a silanol group near -100 ppm Q 4: integrated value silanol groups remaining peaks belonging to Si species having no silanol group near -110ppm course lower well, It is preferably at most 5%. 29 Si-NMR measurement conditions Rotation speed: 5000 Hz
Magnetic field strength: 11.7T
Resonance frequency: 99.36 MHz
Pulse length: 2.8 μs
Measurement cycle: 25s
Number of scans: 2500
The 29 Si-NMR charts of the packing materials for liquid chromatography obtained in Examples 1 to 3 and Comparative Examples 1 and 2 are shown in FIGS. 1, 3, 5, 7 and 9, respectively. As can be seen from these, no residual silanol group (peak (Q 3 ) around -100 ppm) was detected in the packing materials for liquid chromatography of Examples 1 to 3.
実施例１〜３および比較例１〜２の液体クロマトグラフィー用充填剤について求めたシラノール基残量を表２に示す。表２から分かるように、実施例１〜３の液体クロマトグラフィー用充填剤ではシラノール基残量は０％であり、好ましい結果であった。比較例１〜２の液体クロマトグラフィー用充填剤ではシラノール基残量が多く、好ましくない結果であった。 Table 2 shows the residual silanol groups determined for the packing materials for liquid chromatography of Examples 1 to 3 and Comparative Examples 1 and 2. As can be seen from Table 2, in the packing materials for liquid chromatography of Examples 1 to 3, the residual amount of the silanol group was 0%, which was a favorable result. In the packing materials for liquid chromatography of Comparative Examples 1 and 2, the residual amount of the silanol group was large, which was an undesirable result.
２）液体クロマトグラフィー評価
実施例および比較例で得られた液体クロマトグラフィー用充填剤をステンレススチールカラム（内径４．６ｍｍ、長さ１５０ｍｍ）に充填し、アミトリプチリンを標準サンプルに用いて、液体クロマトグラフィー評価試験を行った。アミトリプチリンは抗うつ作用を有する強塩基性の化合物であり（ｐＫａ＝９．４）、液体クロマトグラフィにおいてテーリングが激しく分析が難しい代表的な化合物である。液体クロマトグラフィー評価試験は、移動相を構成する緩衝液として残存シラノール基の影響を最も受けやすいもの（ｐＨ７．０、温度２０℃）を用い、下記操作条件で行った。実施例１〜３および比較例１〜６の液体クロマトグラフィー用充填剤のアミトリプチリンの液体クロマトグラフィーチャートを図２、図４、図６、図８、図１０、図１１、図１２、図１３および図１４にそれぞれ示す。
2) Liquid chromatography evaluation The packing material for liquid chromatography obtained in Examples and Comparative Examples was packed in a stainless steel column (inner diameter 4.6 mm,
実施例１〜３および比較例１〜６の液体クロマトグラフィー用充填剤について、非対称係数（Ａｓ）を下記式のように１０％ピーク高さ基準で計算した。得られた値を表２および表３に示す。非対称係数は好ましくは３．０以下、理想的には１．０であり、値が低いほどピークの対称性がよく、テーリングが少ないことを意味する。これらの表から分かるように、実施例１〜３の液体クロマトグラフィー用充填剤では、非対称係数は３．０以下であり、好ましい結果であった。比較例１〜６の液体クロマトグラフィー用充填剤では、非対称係数は３．０を大きく上回り、好ましくない結果であった。 For the packing materials for liquid chromatography of Examples 1 to 3 and Comparative Examples 1 to 6, the asymmetry coefficient (As) was calculated on the basis of a 10% peak height as in the following formula. Tables 2 and 3 show the obtained values. The asymmetry coefficient is preferably 3.0 or less, and ideally 1.0. The lower the value, the better the symmetry of the peak and the less the tailing. As can be seen from these tables, in the packing materials for liquid chromatography of Examples 1 to 3, the asymmetry coefficient was 3.0 or less, which was a favorable result. In the packings for liquid chromatography of Comparative Examples 1 to 6, the asymmetry coefficient greatly exceeded 3.0, which was an undesirable result.
Ａｓ＝ｂ／ａ
ａ：１０％ピーク高さにおけるピーク前半のピーク幅である。
As = b / a
a: The peak width in the first half of the peak at 10% peak height.
ｂ：１０％ピーク高さにおけるピーク後半のピーク幅である。 b: The peak width in the latter half of the peak at 10% peak height.
液体クロマトグラフィーの操作条件
移動相：２０ｍＭ Ｋ２ＨＰＯ４−ＫＨ２ＰＯ４緩衝液（ｐＨ＝７．０）
／メタノール
＝３５／６５ (体積比)
流速：１．４ｍｌ／分
カラム温度：２０℃
検出器：ＵＶ２４０ｎｍ
サンプル：アミトリプチリン（０．７５ｍｇ／ｍｌ、１０μｌ）
/methanol
= 35/65 (volume ratio)
Flow rate: 1.4 ml / min Column temperature: 20 ° C
Detector: UV 240nm
Sample: Amitriptyline (0.75 mg / ml, 10 μl)
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