JP2004143069A - Phosphonic diester derivative - Google Patents

Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a phosphonic diester compound which exhibits an especially strong hyperlipemia-treating and preventing effect, and to provide a medicine composition which contains the same. <P>SOLUTION: Diethyl 4-[(4-(4-chlorophenyl)-5-methylthiazol-2-yl)carbamoyl]benzylphosphonate represented by formula (1). <P>COPYRIGHT: (C)2004,JPO

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ホスホン酸ジエステル誘導体およびその医薬用途に関する。
【０００２】
【従来の技術】
本発明者らの研究グループは、以前より、医薬品分野で有用なホスホン酸ジエステル誘導体につき検索、検討を進める過程で、優れた脂質低下作用、白内障予防及び治療作用、血糖低下作用などを有する一連の化合物を見出し、この知見に基づく発明を完成した（特許文献１参照）。
【０００３】
【特許文献１】
特許第２７８７４０７号明細書
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、更に優れた高脂血症治療効果を奏し得、しかも副作用が少なく、医薬品分野で有用な化合物を提供することを課題とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、引き続く研究において、前記一連の化合物を示す一般式には属するが、その明細書中に具体的な開示のない特定の一つの化合物が、該明細書に具体的に記載された化合物および該一般式に属する他の化合物に比して、殊に卓越した高脂血症治療効果を奏し得、しかもその副作用が非常に少ないという新しい知見を得た。本発明は、この知見を基礎として、更に検討を重ねて完成されたものである。
【０００６】
本発明は、下式（１）で表されるジエチル　４−［（４−（４−クロロフェニル）−５−メチルチアゾール−２−イル）カルバモイル］ベンジルホスホナート（以下「本発明化合物」ということがある）またはその製剤学的に許容される酸付加塩を提供する。
【０００７】
【化２】

【０００８】
また本発明は、本発明化合物およびその製剤学的に許容される酸付加塩からなる群から選ばれる少なくとも１種の有効量を製剤学的に許容される担体と共に含有する医薬組成物、特に高脂血症治療剤である該医薬組成物を提供する。
【０００９】
【発明の実施の形態】
本発明化合物は、前記特許文献１に記載の方法に従って製造することができる。具体的製造法の一つを反応工程式−１として挙げて、以下に詳述する。
【００１０】
【化３】

【００１１】
反応工程式−１に示すアミン化合物（２）とカルボン酸化合物（３）との縮合反応は、一般に適当な溶媒中、縮合剤の存在下に実施することができる。
【００１２】
原料化合物であるアミン化合物（２）は、例えば後記実施例１の（１）に示される方法で製造することができる。また、カルボン酸化合物（３）は、公知で入手容易な化合物である。
【００１３】
縮合反応に用いられる溶媒としては、公知の非プロトン性溶媒、例えばＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）を好ましく利用できる。縮合剤としては、公知の各種のもの、例えばＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド、ジエチルリン酸シアニド、ジフェニルリン酸アジドなどを好ましく利用できる。カルボン酸化合物（３）に対するアミン化合物（２）の使用割合は、通常、等モル量から過剰量、好ましくは等モル量程度とするのがよい。縮合剤は、カルボン酸化合物（３）に対して等モル量から過剰量、好ましくは小過剰量とするのがよい。反応は、氷冷下から室温付近の温度条件下に、約０．５−２時間で完結する。
【００１４】
また、本発明化合物は、下記反応工程式−２として挙げる方法によっても製造することができる。
【００１５】
【化４】

【００１６】
反応工程式−２に示す方法によれば、アミン化合物（２）と公知のカルボン酸ハロゲン化物（４）との反応によって、本発明化合物（１）を得ることができる。該反応は、一般に適当な溶媒中、脱酸剤の存在下に実施することができる。
【００１７】
脱酸剤としては、反応に悪影響を与えない公知の各種のものをいずれも使用することができる。その具体例としては、トリエチルアミン、Ｎ，Ｎ−ジエチルアニリン、Ｎ−メチルモルホリン、ピリジン、４−メチルアミノピリジンなどの第三級アミン類を好ましく例示できる。溶媒としては、公知の各種のもの、例えばトルエン、キシレン、石油エーテルなどの芳香族乃至脂肪族炭化水素類、ジエチルエーテル、１，２−ジメトキシエタン、テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）、１，４−ジオキサンなどの鎖状乃至環状エーテル類、アセトン、メチルエチルケトン、アセトフェノンなどのケトン類、ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素、１，２−ジクロロエタンなどのハロゲン化炭化水素類を例示できる。
【００１８】
カルボン酸ハロゲン化物（４）の使用割合は、アミン化合物（２）に対して、通常、等モル量から過剰量とするのがよい。脱酸剤は、カルボン酸ハロゲン化物（４）に対して等モル量から過剰量とするのが好適である。反応は、氷冷下、室温下および加熱下のいずれでも進行する。通常、室温付近から溶媒の還流温度範囲の条件下に行われるのがよく、一般に、約０．５−１０時間で終了する。
【００１９】
前記反応工程式に示す反応に従い得られる目的化合物は、通常の分離手段により容易に単離精製できる。該手段としては、例えば吸着クロマトグラフィー、プレパラティブ薄層クロマトグラフィー、再結晶、溶媒抽出などを例示することができる。
【００２０】
得られる本発明化合物は、常法に従いこれに適当な酸を付加反応させ、製剤学的に許容される酸付加塩の形態とすることができ、該酸付加塩も本発明の範囲に含まれる。酸付加塩の形成のための酸としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸などの無機酸、蓚酸、フマル酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、ｐ−トルエンスルホン酸などの有機酸を挙げることができる。かくして得られる酸付加塩も、遊離形態の本発明化合物と同等の薬効を有しており、同様に医薬品分野で有用である。
【００２１】
本発明化合物（その塩を含む、以下同じ）は、優れた高脂血症治療作用を有しており、高脂血症治療剤として有用である。殊に、本発明化合物は、構造上類似する既知の各化合物と対比して、高脂血症治療効果において卓越するに加えて、例えば心臓肥大、肝臓肥大などの臓器重量を変化させる副作用が非常に少ない特徴を有している。即ち、該化合物はその投与によっても心臓や肝臓への負担を実質的に増加させるおそれがなく、この点からも安全性の高いものである。
【００２２】
本発明は、本発明化合物の有効量を製剤学的に許容される担体と共に含有する医薬組成物、特に高脂血症治療剤をも提供する。
【００２３】
本発明医薬組成物は、一般的な医薬製剤の形態として実用される。該組成物に利用される上記製剤学的に許容される担体としては、通常使用される希釈剤乃至賦形剤を例示できる。該担体は、製剤の使用形態に応じて適宜選択使用することができる。これには、例えば充填剤、増量剤、結合剤、付湿剤、崩壊剤、表面活性剤、滑沢剤などが含まれる。
【００２４】
本発明医薬組成物の投与単位形態としては、各種の形態が治療目的に応じて選択できる。その代表的なものとしては、錠剤、丸剤、散剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤、カプセル剤、坐剤、注射剤（液剤、懸濁剤など）などが挙げられる。
【００２５】
錠剤の形態に成形するに際しては、上記製剤学的に許容される担体として、例えば、乳糖、白糖、塩化ナトリウム、ブドウ糖、尿素、デンプン、炭酸カルシウム、カオリン、結晶セルロース、ケイ酸、リン酸カリウムなどの賦形剤；水、エタノール、プロパノール、単シロップ、ブドウ糖液、デンプン液、ゼラチン溶液、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、ポリビニルピロリドンなどの結合剤；カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、低置換度ヒドロキシプロピルセルロース、乾燥デンプン、アルギン酸ナトリウム、カンテン末、ナミナラン末、炭酸水素ナトリウム、炭酸カルシウムなどの崩壊剤；ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル類、ラウリル硫酸ナトリウム、ステアリン酸モノグリセリドなどの界面活性剤；白糖、ステアリン、カカオバター、水素添加油などの崩壊抑制剤；第４級アンモニウム塩基、ラウリル硫酸ナトリウムなどの吸収促進剤；グリセリン、デンプンなどの保湿剤；デンプン、乳糖、カオリン、ベンナイト、コロイド状ケイ酸などの吸着剤；精製タルク、ステアリン酸塩、ホウ酸末、ポリエチレングリコールなどの滑沢剤などを使用できる。更に、錠剤は、必要に応じ通常の剤皮を施した錠剤、例えば糖衣錠、ゼラチン被包錠、腸溶被錠、フィルムコーティング錠または二重錠、多層錠とすることができる。
【００２６】
丸剤の形態に成形するに際しては、製剤学的に許容される担体として、例えば、ブドウ糖、乳糖、デンプン、カカオ脂、硬化植物油、カオリン、タルクなどの賦形剤；アラビアゴム末、トラガント末、ゼラチン、エタノールなどの結合剤；ラミナラン、カンテンなどの崩壊剤などを使用できる。
【００２７】
坐剤の形態に形成するに際しては、製剤学的に許容される担体として、例えば、ポリエチレングリコール、カカオ脂、高級アルコール、高級アルコールのエステル類、ゼラチン、半合成グリセライドなどを使用できる。
【００２８】
カプセル剤は、常法に従い、通常本発明化合物を上記で例示した各種の製剤学的に許容される担体と混合して、硬質ゼラチンカプセル、軟質ゼラチンカプセルなどの充填して調製される。
【００２９】
液剤、乳剤、懸濁剤などの注射剤として調製される場合、これらは殺菌され且つ血液となど張であるのが好ましく、これらの形態にするに際しては、希釈剤として、例えば、水、エタノール、マクロゴール、プロピレングリコール、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルなどを使用できる。尚、この場合、など張性の溶液を調製するに充分な量の食塩、ブドウ糖またはグリセリンを医薬製剤中に含有させてもよく、また通常の溶解補助剤、緩衝剤、無痛化剤などを添加してもよい。
【００３０】
更に、本発明医薬組成物中には、必要に応じて着色剤、保存剤、香料、風味剤、甘味剤などや他の医薬品を含有させ、医薬製剤として調製することもできる。
【００３１】
本発明医薬組成物中に含有されるべき本発明化合物（有効成分化合物）の量は、特に限定されず広範囲より適宜選択される。通常、本発明化合物（有効成分化合物）は医薬組成物中に、約０．５−９０重量％、好ましくは約１−８５重量％程度含有されるのがよい。
【００３２】
上記医薬製剤の投与方法は、特に制限がなく、各種製剤形態、患者の年齢、性別その他の条件、疾患の程度などに応じて決定される。例えば、錠剤、丸剤、液剤、懸濁剤、乳剤、顆粒剤およびカプセル剤は経口投与され、注射剤は単独でまたはブドウ糖、アミノ酸などの通常の補液と混合して静脈内に、或いは筋肉内、皮内、皮下または腹腔内に投与され、坐剤は直腸内投与される。
【００３３】
上記医薬製剤の投与量は、その用法、患者の年齢、性別その他の条件、疾患の程度などにより適宜選択される。通常、成人に対しては、有効成分である本発明化合物の量が１日当たり体重１ｋｇ当たり約０．５−２０ｍｇ程度、好ましくは１−１０ｍｇ程度とするのがよく、該製剤は１日に１回または２−４回に分けて投与することができる。
【００３４】
【実施例】
以下、本発明を更に詳しく説明するため、本発明化合物の製造のための原料化合物の製造例および本発明化合物の製造例を実施例として挙げる。また、本発明化合物につき行われた薬理試験例を挙げる。
【００３５】
各例において、^１Ｈ−ＮＭＲは、特に明示しない限りクロロホルム−ｄ_１（ＣＤＣｌ_３）溶媒中、内部標準としてテトラメチルシラン（ＴＭＳ）を用いて測定したものである。
【００３６】
【実施例１】
（１）　　２−アミノ−４−（４−クロロフェニル）−５−メチルチアゾール（原料化合物）の製造４’−クロロプロピオフェノン１６９ｇと塩化アルミニウム２．７ｇとをクロロホルム１０００ｍＬに溶解させ、氷冷撹拌下に臭素１６８ｇをゆっくりと滴下した。氷冷下で更に１時間撹拌後、反応混合物を氷水５００ｍＬに注ぎ込んだ。クロロホルム層を分液し、飽和重曹水５００ｍＬおよび飽和食塩水５００ｍＬで順次洗浄した後、硫酸マグネシウム上で乾燥した。溶媒を減圧留去して、４’−クロロ−２−ブロモプロピオフェノンを得た。
【００３７】
このものを精製することなく、エタノール１０００ｍＬとチオ尿素７７ｇとを加え、７０℃で１２時間撹拌した。溶媒を減圧留去後、酢酸エチル１０００ｍＬと２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液８００ｍＬとを加えて分液した。酢酸エチル層を硫酸マグネシウム上で乾燥後、減圧下に溶媒を留去した。得られた粗結晶をジエチルエーテル−ｎ−ヘキサンより再結晶して、２−アミノ−４−（４−クロロフェニル）−５−メチルチアゾール１８７ｇを得た。
（２）　　ジエチル　４−［（４−（４−クロロフェニル）−５−メチルチアゾール−２−イル）カルバモイル］ベンジルホスホナート（本発明化合物）の製造
４−［（ジエトキシホスホリル）メチル］ベンゾイル　クロリド１３１ｇの塩化メチレン５００ｍＬ溶液に、氷冷撹拌下に、上記（１）で得た２−アミノ−４−（４−クロロフェニル）−５−メチルチアゾール１００ｇのピリジン４００ｍＬ溶液をゆっくりと滴下した。室温で１２時間撹拌後、水５００ｍＬを加えて減圧下に塩化メチレンを留去して粗結晶を得たた。この粗結晶をエタノールより再結晶して、標記化合物の無色結晶１３８ｇを得た。
【００３８】
融点；１７３．５−１７４．５℃
^１Ｈ−ＮＭＲ　（ＣＤＣｌ_３）　δ　１．２５（ｔ，　Ｊ＝７．１Ｈｚ，　６Ｈ），　２．５１（ｓ，　３Ｈ），　３．２０（ｄ，　Ｊ＝２２．０Ｈｚ，　２Ｈ），　４．０−４．１（ｍ，　４Ｈ），　７．３３（ｄ，　Ｊ＝８．７Ｈｚ，　２Ｈ），　７．３８（ｄｄ，　Ｊ＝２．１Ｈｚ，　７．９Ｈｚ，　２Ｈ），７．４８（ｄ，　Ｊ＝８．７Ｈｚ，　２Ｈ），　７．８３（ｄ，　Ｊ＝７．９Ｈｚ，　２Ｈ），　１０．２６（ｂｒｓ，　１Ｈ）
【００３９】
【薬理試験例１】ＬＤＬ−Ｒ量増加効果試験
培養細胞の細胞表面上の低密度リポ蛋白受容体（ＬＤＬ−Ｒ）量を、バイシーゲルらの方法（Ｂｅｉｓｉｅｇｅｌ，　Ｕ．，　ｅｔ　ａｌ．，　Ｊ．　Ｂｉｏｌ．　Ｃｈｅｍ．，　２５６，　１１９２３　（１９８１））を改良した以下の方法により定量した。この方法は、培養プレート上で培養している細胞をパラホルムアルデヒドで固定し、固定された細胞表面上のＬＤＬ−Ｒに、ＬＤＬ−ＲのＬＤＬ結合ドメイン（細胞外領域）を認識する抗体（一次抗体）を結合させ、この抗原−抗体複合体をホースラディッシュパーオキシダーゼ標識抗ＩｇＧ抗体（二次抗体）を用いて、化学発色法で検出するものである。
【００４０】
具体的操作は、以下の通りである。即ち、ＨｅｐＧ２細胞（ヒト由来肝癌細胞株）を白色９６ウェルプレートに播種し、１０％ウシ胎児血清含有ダルベッコー改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）培養液を用いて、３７℃、５％ＣＯ_２インキュベーター中で２４時間培養した。被験物質あるいはジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ，　コントロール）を加えた１０％リポ蛋白除去ウシ胎児血清含有ＤＭＥＭ培養液に培養液を交換し、更に２４時間培養した。培養後、培養液を除き、ＰＢＳ（−）で１回洗浄し、４％パラホルムアルデヒドを１００μＬ／ウェル加え、１５分間固定した。ＰＢＳ（−）で洗浄後、０．１Ｍグリシン−ＰＢＳ（−）を２００μＬ／ウェル加え、１５分間放置することで未反応のアルデヒド基を消去した。５％スキムミルク−ＰＢＳ（−）を２００μＬ／ウェル加え、３０分間ブロッキングした。５％スキムミルク−ＰＢＳ（−）で５００倍希釈した一次抗体（ＰＲＯＧＥＮ社製）を７５μＬ／ウェル加えて３時間放置した。
【００４１】
ＰＢＳ（−）で２回洗浄し、５％スキムミルク−ＰＢＳ（−）で１０００倍希釈した二次抗体（ＢｉｏＳｏｕｒｃｅ社製）を７５μＬ／ウェル加え、更に２時間放置した。ＰＢＳ（−）で５回洗浄した後、発色液ＥＣＬ　Ｗｅｓｔｅｒｎ　Ｂｌｏｔｔｉｎｇ　Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　Ｒｅａｇｅｎｔｓ（アマシャムバイオサイエンス社製）を１００μＬ／ウェル加え、化学発光量をルミネッセンスセンサーＪＮＲ　ＡＢ−２１００（アトー社製）を用いて測定した。
【００４２】
測定後、細胞数を計測するために、白色９６ウェルプレート付着しているＨｅｐＧ２細胞をクリスタルバイオレット溶液で染色した。染色された細胞を１％　ＳＤＳで溶解し、マイクロプレートリーダーで５７０ｎｍの吸光度を測定した。化学発光量測定値をクリスタルバイオレット染色の吸光度測定値で除した値を、細胞表面上のＬＤＬ−Ｒ量として算出した。
【００４３】
コントロールの試験における上記算出値（ＬＤＬ−Ｒ量）を基準（１．００）として、被験物質存在下に試験して得られた算出値（ＬＤＬ−Ｒ量）をその相対値として求めた結果を、表１−６および図１（横軸：被験物質、縦軸：相対ＬＤＬ−Ｒ量）に示す。
【００４４】
なお、被験物質としては、本発明化合物と共に、特許文献１に実施例１−７８として示された各化合物（表１−８にはその構造で示す）を用いた。これらは１×１０^−５および１×１０^−６Ｍの濃度で利用した。また、陽性対照として、高脂血症の治療剤として承認されたスタチン（ｓｔａｔｉｎ）剤の一つであるアトルバスタチン（Ａｔｏｒｖａｓｔａｔｉｎ，　ファイザー−山之内製薬社製）を１×１０^−６、３×１０^−７および１×１０^−７Ｍの濃度で利用した（図１には１×１０^−６Ｍの場合の結果のみ表示する）。
【００４５】
【表１】

【００４６】
【表２】

【００４７】
【表３】

【００４８】
【表４】

【００４９】
【表５】

【００５０】
【表６】

【００５１】
【表７】

【００５２】
【表８】

【００５３】
表１−８および図１から、次のことが明らかである。即ち、特許文献１に具体的に記載されたている化合物は、１×１０^−６Ｍの低濃度では、高脂質血症治療および予防効果の一つの指標となる、ＬＤＬ−Ｒ量を増加させる作用を実質的に奏し得ず、１×１０^−５Ｍの濃度でも、数種の化合物が、コントロールの約１．５倍ＬＤＬ−Ｒ量を増加させた。これに対して、本発明化合物は、１×１０^−６Ｍの低濃度でも、コントロールの約２．５ものＬＤＬ−Ｒ量増加効果を奏し得た。また、１×１０^−５Ｍの濃度では、コントロールの実に３．５倍ものＬＤＬ−Ｒ増加効果を奏し得た。
【００５４】
特に、本発明化合物に認められるこの格別顕著な効果は、本発明化合物に構造的に最も近いと考えられる特許文献１の実施例３１の化合物、即ち、チアゾリル骨格の４位に４−フルオロフェニル基を有する化合物（本発明化合物のクロロ基がフルオロ基に代わったもの）が、そのような優れた効果を奏し得ない事実に鑑みても、実に驚くべきことである。
【００５５】
以下、この最も類似する特許文献１の実施例３１の化合物を比較化合物として、本発明化合物の高脂血症治療および予防効果を明らかにするために、血中トリグリセライド量測定試験を薬理試験例２として実施した。
【００５６】
【薬理試験例２】高脂血症治療および予防効果試験
（１）　　供試ラット
５週齢の雄性ラット（Ｓｐｒａｑｕｅ　Ｄａｗｌｅｙ　ｒａｔ，　ＳＰＦ，　日本チャールス・リバー社より購入）を１週間予備飼育後、この試験に供した。供試ラットは体重別層化無作為抽出法により群分けして、１群５頭とした。
【００５７】
供試ラットの飼料としては、ガンマ線放射ＣＲＦ−１（オリエンタル酵母工業社製）を、水は除菌フィルターを通した水道水を、それぞれ自由摂取させた。
【００５８】
（２）　　被験物質
被験物質として、本発明化合物および前記文献記載の実施例３１の化合物（比較化合物）を用いた。これらの各化合物を、アラビアゴム（和光純薬工業社製）と注射用蒸留水（大塚製薬社製）とを用いて作成した５％アラビアゴム水溶液に懸濁させて投与用液を調製した。投与用液は、被験物質が３０ｍｇ／ｋｇの投与量で供試動物に投与されるように調製し、その１０ｍＬ／ｋｇを投与した。なお、投与用液は、数分間超音波洗浄機にて超音波を照射した後、充分に撹拌してから利用した。
【００５９】
（３）　　試験方法
各群の供試動物に生理食塩水に溶解した１０％トライトン（１０％　Ｔｒｉｔｏｎ　ＷＲ−１３３９，　Ｒｕｇｅｒ　ＣＨＥＭＩＣＡＬ　Ｃｏ．，　Ｉｎｃ．）の３ｍＬ／ｋｇを尾静脈内に投与し、同時に、被験物質を含む投与用液を被験物質が３０ｍｇ／ｋｇ投与される量（１０ｍＬ／ｋｇ）で経口投与した。
【００６０】
また、対照群として、上記トライトン投与と同時に５％アラビアゴム水溶液１０ｍＬ／ｋｇを経口投与する群（１群５頭）を設けた。
【００６１】
トライトン投与後、各群の供試動物を絶食させ、２４時間後に腹部大動脈より採血し、血漿中のトリグリセリド（ＴＧ）量をトリグリセリドＧ−テストワコー（和光純薬社製）を用いて測定した。
【００６２】
また、なんらの薬物も投与していないラット（正常群）についても血漿中トリグリセリド（ＴＧ）量を測定した。
【００６３】
各測定値から下式により、血漿トリグリセリド（ＴＧ）低下率（％）を算出した。
【００６４】
低下率（％）＝［１−（Ｔ−Ｎ）／（Ｃ−Ｎ）］×１００
Ｔ：　被験化合物群平均値
Ｎ：　正常群平均値
Ｃ：　対照群平均値
（４）　　結果
得られた結果を下記表９に示す。
【００６５】
【表９】

【００６６】
表９に示される結果から、比較化合物は、トライトン誘発高脂血症ラットのＴＧ値を４１．２％しか低下させ得ないのに対して、本発明化合物は実に８２．８％も低下させ得る、非常に優れた高脂血症治療および予防効果を奏し得ることが明らかである。
【００６７】
【薬理試験例３】２週間反復経口投与毒性試験
（１）　　供試ラット
５週齢の雄性ラット（Ｓｐｒａｑｕｅ　Ｄａｗｌｅｙ　ｒａｔ，　ＳＰＦ，　日本チャールス・リバー社より購入）を１週間予備飼育後、この試験に供した。供試ラットは体重別層化無作為抽出法により群分けして、１群５頭とした。
【００６８】
供試ラットの飼料としては、ガンマ線放射ＣＲＦ−１（オリエンタル酵母工業社製）を、水は除菌フィルターを通した水道水を、それぞれ自由摂取させた。なお、最終投与日の午後４時以降、剖検まで絶食させた。
【００６９】
（２）　　被験物質
被験物質として本発明化合物および前記特許文献１記載の実施例３１の化合物（比較化合物）を用いた。これら各化合物をアラビアゴム（和光純薬工業社製）と注射用蒸留水（大塚製薬社製）とを用いて作成した５％アラビアゴム水溶液に懸濁させて投与用液とした。投与用液は、被験物質が１００ｍｇ／ｋｇまたは１０００ｍｇ／ｋｇの投与量で供試動物に投与されるように調製し、その１０ｍＬ／ｋｇを投与した。なお、投与用液は、その投与に当たり、数分間超音波洗浄機にて超音波を照射した後、充分に撹拌してから利用した。
【００７０】
（３）　　試験方法
投与経路としては、臨床的適用経路に準じて経口経路を採用した。ラット用胃ゾンデを用いて１日１回１４日間連日強制投与した。実験群には、被験物質を含む投与用液を投与した。また、対照群には５％　アラビアゴム水溶液の同量（１０ｍＬ／ｋｇ）を投与した。
【００７１】
１４日間の連続投与の翌日にエーテル麻酔下で放血致死させ、次の臓器を採取し重量を測定した。
脳、下垂体、胸腺、甲状腺（ホルマリン固定後に測定）、肺、心臓、肝臓、脾臓、膵臓、腎臓、副腎、前立腺（腹様）、精巣、精巣上体。
【００７２】
（４）　　統計学的処理
臓器の実重量について各群別の平均値と標準偏差を求め、対照群と各実験群との比較をＤｕｎｎｅｔｔの多重比較により行った。
【００７３】
（５）　　結果
本発明化合物および比較化合物を用いて得られた結果のうち、対照群と比較して有意な変化があったものは、以下に示す通りである。
【００７４】
即ち、比較化合物の投与では、投与量１００ｍｇ／ｋｇおよび１０００ｍｇ／ｋｇの場合に、心臓重量がそれぞれ１２％および１８％増加した。
【００７５】
心臓肥大作用は、循環器系に対し直接あるいは間接的な作用を及ぼし、その代償作用として現れた副作用と考えられる。特に、高脂血症治療剤が、虚血性心疾患などの循環器系疾病発症予防のために服用される薬剤であることを考慮すると、該薬剤のための有効成分化合物は、このような循環器系に対する副作用のできるだけ少ないものであることが望ましい。この副作用の点で、比較化合物は、高脂血症治療剤有効成分化合物として好ましいものではなく、特に、高脂血症の合併症，基礎疾患として循環器系疾患を併発している患者への適用はできない不利があることが判った。
【００７６】
また、比較化合物の投与では、投与量１０００ｍｇ／ｋｇの場合に、肝臓重量が２０％増加した。
【００７７】
肝臓重量の増加は、薬物代謝酵素の誘導の結果と考えられ、反復投与によって薬物血中濃度の低下が考えられる。高脂血症のような慢性疾患の治療薬としては回避しなければならない副作用である。この副作用の点からも、比較化合物は高脂血症治療剤の有効成分としては好ましいものではないことが明らかとなった。
【００７８】
これに対して、本発明化合物の投与では、比較化合物にみられるような心臓および肝臓に対する副作用は認められなかった。
【００７９】
なお、本発明化合物の投与では、１０００ｍｇ／ｋｇの場合に、比較化合物の同量の投与の場合には認められなかった胸腺重量の低下が確認されたが、この作用は、ストレスなどの環境要因でも起こる変化であり、毒性学的意義はないと考えられる。
【００８０】
以下、本発明化合物を利用した製剤例を挙げる。
【００８１】
【製剤例１】錠剤の調製
有効成分として本発明化合物を１錠当たり３００ｍｇ含有する錠剤（２０００錠）を、次の処方により調製した。
本発明化合物　　　　　　　　　　　　　　　　６００ｇ
乳糖（日本薬局方品）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　６７ｇ
コーンスターチ（日本薬局方品）　　　　　　　　　　　　　　　　　　３３ｇ
カルボキシメチルセルロースカルシウム　　　　　２５ｇ
（日本薬局方品）
メチルセルロース（日本薬局方品）　　　　　　　　　　　　　　　　１２ｇ
ステアリン酸マグネシウム（日本薬局方品）　　　　　　　　　３ｇ
上記処方に従い、本発明化合物、乳糖、コーンスターチおよびカルボキシメチルセルロースカルシウムを充分に混合し、メチルセルロース水溶液を用いて混合物を顆粒化し、２４メッシュの篩を通し、これをステアリン酸マグネシウムと混合して、錠剤にプレスして目的の錠剤を得た。
【００８２】
【製剤例２】
カプセル剤の調製
有効成分として本発明化合物を１カプセル当たり２００ｍｇ含有する硬質ゼラチンカプセル（２０００カプセル）を、次の処方により調製した。
本発明化合物　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　４００ｇ
結晶セルロース（日本薬局方品）　　　　　　　　　　　　　　　　　　６０ｇ
コーンスターチ（日本薬局方品）　　　　　　　　　　　　　　　　　　３４ｇ
タルク（日本薬局方品）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　４ｇ
ステアリン酸マグネシウム（日本薬局方品）　　　　　　　２ｇ
上記処方に従い、各成分を細かく粉末にし、均一な混合物となるように混合した後、所望の寸法を有する経口投与用ゼラチンカプセルに充填して、目的のカプセル剤を得た。
【図面の簡単な説明】
【図１】薬理試験例１に従って求められた各供試物質の低密度リポ蛋白受容体量を示すグラフである。[0001]
TECHNICAL FIELD OF THE INVENTION
The present invention relates to phosphonic acid diester derivatives and their pharmaceutical uses.
[0002]
[Prior art]
The research group of the present inventors has been searching for phosphonate diester derivatives useful in the pharmaceutical field for a long time, and in the process of proceeding with the investigation, a series of series having excellent lipid lowering action, cataract prevention and treatment action, blood glucose lowering action, etc. A compound was found, and an invention based on this finding was completed (see Patent Document 1).
[0003]
[Patent Document 1]
Patent No. 2787407
[0004]
[Problems to be solved by the invention]
An object of the present invention is to provide a compound which can exert a further excellent therapeutic effect on hyperlipidemia, has few side effects, and is useful in the pharmaceutical field.
[0005]
[Means for Solving the Problems]
The present inventors have found in a subsequent study that a particular compound belonging to the general formula representing the above series of compounds but not specifically disclosed in the specification is specifically described in the specification. In particular, the present inventors have obtained a new finding that they can exert a remarkable therapeutic effect on hyperlipidemia and have very few side effects as compared with the compound of the formula (1) and other compounds belonging to the general formula. The present invention has been completed by further study based on this finding.
[0006]
The present invention relates to diethyl 4-[(4- (4-chlorophenyl) -5-methylthiazol-2-yl) carbamoyl] benzylphosphonate represented by the following formula (1) (hereinafter referred to as “the compound of the present invention”. Or a pharmaceutically acceptable acid addition salt thereof.
[0007]
Embedded image

[0008]
The present invention also relates to a pharmaceutical composition comprising at least one effective amount selected from the group consisting of the compound of the present invention and a pharmaceutically acceptable acid addition salt thereof together with a pharmaceutically acceptable carrier, The pharmaceutical composition which is a therapeutic agent for lipemia is provided.
[0009]
BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION
The compound of the present invention can be produced according to the method described in Patent Document 1. One of the specific production methods will be described in detail below, given as Reaction Step Formula-1.
[0010]
Embedded image

[0011]
The condensation reaction between the amine compound (2) and the carboxylic acid compound (3) shown in the reaction step formula-1 can be generally performed in a suitable solvent in the presence of a condensing agent.
[0012]
The amine compound (2) as a raw material compound can be produced, for example, by the method shown in (1) of Example 1 described later. The carboxylic acid compound (3) is a known and easily available compound.
[0013]
As the solvent used for the condensation reaction, a known aprotic solvent, for example, N, N-dimethylformamide (DMF) can be preferably used. As the condensing agent, various known ones, for example, N, N'-dicyclohexylcarbodiimide (DCC), 1-hydroxybenzotriazole, N-hydroxysuccinimide, diethyl phosphate cyanide, diphenyl phosphate azide and the like can be preferably used. . The use ratio of the amine compound (2) to the carboxylic acid compound (3) is usually from equimolar to excess, preferably about equimolar. The condensing agent is used in an equimolar amount to an excess amount, preferably a small excess amount, based on the carboxylic acid compound (3). The reaction is completed in about 0.5 to 2 hours under ice cooling to a temperature around room temperature.
[0014]
In addition, the compound of the present invention can also be produced by the method given as the following reaction step formula-2.
[0015]
Embedded image

[0016]
According to the method shown in Reaction Scheme 2, the compound (1) of the present invention can be obtained by reacting the amine compound (2) with a known carboxylic acid halide (4). The reaction can be generally performed in a suitable solvent in the presence of a deoxidizing agent.
[0017]
As the deoxidizing agent, any known various agents that do not adversely affect the reaction can be used. Specific examples thereof preferably include tertiary amines such as triethylamine, N, N-diethylaniline, N-methylmorpholine, pyridine, and 4-methylaminopyridine. As the solvent, various known solvents, for example, aromatic or aliphatic hydrocarbons such as toluene, xylene, petroleum ether, diethyl ether, 1,2-dimethoxyethane, tetrahydrofuran (THF), 1,4-dioxane, etc. Examples thereof include linear or cyclic ethers, ketones such as acetone, methyl ethyl ketone, and acetophenone, and halogenated hydrocarbons such as dichloromethane, chloroform, carbon tetrachloride, and 1,2-dichloroethane.
[0018]
The use ratio of the carboxylic acid halide (4) is usually preferably equimolar amount to excess amount with respect to the amine compound (2). The deoxidizing agent is preferably used in an equimolar amount to an excess amount based on the carboxylic acid halide (4). The reaction proceeds under ice cooling, at room temperature, or under heating. Usually, the reaction is preferably carried out under the condition of a temperature around room temperature to a reflux temperature of the solvent, and is generally completed in about 0.5 to 10 hours.
[0019]
The target compound obtained according to the reaction shown in the above reaction scheme can be easily isolated and purified by ordinary separation means. Examples of the means include adsorption chromatography, preparative thin-layer chromatography, recrystallization, and solvent extraction.
[0020]
The obtained compound of the present invention can be subjected to an addition reaction with a suitable acid according to a conventional method to form a pharmaceutically acceptable acid addition salt, which is also included in the scope of the present invention. . Examples of the acid for forming the acid addition salt include inorganic acids such as hydrochloric acid, hydrobromic acid, and sulfuric acid, and organic acids such as oxalic acid, fumaric acid, maleic acid, tartaric acid, citric acid, and p-toluenesulfonic acid. Can be. The acid addition salt thus obtained also has a drug effect equivalent to that of the free form of the compound of the present invention, and is similarly useful in the pharmaceutical field.
[0021]
The compound of the present invention (including salts thereof, hereinafter the same) has an excellent therapeutic effect on hyperlipidemia, and is useful as a therapeutic agent for hyperlipidemia. In particular, the compounds of the present invention, in addition to being excellent in the therapeutic effect of hyperlipidemia, as compared with each of the known compounds having similar structures, in addition to the side effects of changing organ weight such as cardiac hypertrophy and liver hypertrophy, are extremely high. It has few features. That is, the compound does not substantially increase the burden on the heart and liver even by its administration, and is also highly safe in this respect.
[0022]
The present invention also provides a pharmaceutical composition, particularly a therapeutic agent for hyperlipidemia, comprising an effective amount of the compound of the present invention together with a pharmaceutically acceptable carrier.
[0023]
The pharmaceutical composition of the present invention is used as a general pharmaceutical preparation. Examples of the pharmaceutically acceptable carrier used in the composition include commonly used diluents and excipients. The carrier can be appropriately selected and used depending on the use form of the preparation. This includes, for example, fillers, extenders, binders, humectants, disintegrants, surfactants, lubricants and the like.
[0024]
As the dosage unit form of the pharmaceutical composition of the present invention, various forms can be selected according to the purpose of treatment. Representative examples include tablets, pills, powders, solutions, suspensions, emulsions, granules, capsules, suppositories, injections (solutions, suspensions, etc.).
[0025]
When formed into tablets, the pharmaceutically acceptable carrier includes, for example, lactose, sucrose, sodium chloride, glucose, urea, starch, calcium carbonate, kaolin, crystalline cellulose, silicic acid, potassium phosphate, and the like. Excipients; binders such as water, ethanol, propanol, simple syrup, glucose solution, starch solution, gelatin solution, carboxymethylcellulose, hydroxypropylcellulose, methylcellulose, polyvinylpyrrolidone; sodium carboxymethylcellulose, calcium carboxymethylcellulose, low degree of substitution Disintegrators such as hydroxypropylcellulose, dried starch, sodium alginate, agar powder, naminaran powder, sodium bicarbonate, calcium carbonate; polyoxyethylene sorbitan fatty acid esters Surfactants such as sodium lauryl sulfate and stearic acid monoglyceride; disintegration inhibitors such as sucrose, stearin, cocoa butter and hydrogenated oil; absorption promoters such as quaternary ammonium base and sodium lauryl sulfate; moisturizing glycerin and starch Agents; adsorbents such as starch, lactose, kaolin, benite, and colloidal silicic acid; lubricating agents such as purified talc, stearates, boric acid powder, and polyethylene glycol; Further, the tablet can be a tablet coated with a usual coating, if necessary, for example, a sugar-coated tablet, a gelatin-encapsulated tablet, an enteric-coated tablet, a film-coated tablet or a double tablet, or a multilayer tablet.
[0026]
When formed into pill form, as a pharmaceutically acceptable carrier, for example, excipients such as glucose, lactose, starch, cocoa butter, hydrogenated vegetable oil, kaolin, talc; gum arabic powder, tragacanth powder, Binders such as gelatin and ethanol; disintegrants such as laminaran and agar can be used.
[0027]
In forming a suppository, pharmaceutically acceptable carriers such as polyethylene glycol, cocoa butter, higher alcohols, higher alcohol esters, gelatin, and semi-synthetic glyceride can be used.
[0028]
Capsules are prepared according to a conventional method, usually by mixing the compound of the present invention with the various pharmaceutically acceptable carriers exemplified above and filling in hard gelatin capsules, soft gelatin capsules and the like.
[0029]
When prepared as injections such as solutions, emulsions and suspensions, these are preferably sterilized and isotonic with blood. In preparing these forms, water, ethanol, Macrogol, propylene glycol, ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitan fatty acid ester and the like can be used. In this case, a sufficient amount of salt, glucose or glycerin to prepare an isotonic solution may be contained in the pharmaceutical preparation, and ordinary solubilizing agents, buffers, soothing agents and the like are added. May be.
[0030]
Further, the pharmaceutical composition of the present invention may contain a coloring agent, a preservative, a flavoring agent, a flavoring agent, a sweetening agent, and other pharmaceuticals as necessary, and may be prepared as a pharmaceutical preparation.
[0031]
The amount of the compound of the present invention (active ingredient compound) to be contained in the pharmaceutical composition of the present invention is not particularly limited and is appropriately selected from a wide range. Usually, the compound of the present invention (active ingredient compound) is contained in the pharmaceutical composition in an amount of about 0.5-90% by weight, preferably about 1-85% by weight.
[0032]
The administration method of the above pharmaceutical preparation is not particularly limited, and is determined according to various preparation forms, patient age, gender and other conditions, degree of disease, and the like. For example, tablets, pills, solutions, suspensions, emulsions, granules, and capsules are orally administered, and injections are used alone or mixed with normal replenishers such as glucose and amino acids for intravenous or intramuscular use. It is administered intradermally, subcutaneously or intraperitoneally, and suppositories are rectal.
[0033]
The dose of the above pharmaceutical preparation is appropriately selected depending on its usage, age, sex and other conditions of the patient, degree of disease and the like. In general, for an adult, the amount of the compound of the present invention as an active ingredient is preferably about 0.5-20 mg / kg, preferably about 1-10 mg / kg of body weight per day. It can be administered in two or four divided doses.
[0034]
【Example】
Hereinafter, in order to explain the present invention in more detail, Production Examples of the starting compound for producing the compound of the present invention and Production Examples of the compound of the present invention will be given as Examples. Examples of pharmacological tests performed on the compound of the present invention are also described.
[0035]
In each example, ¹ H-NMR was measured using chloroform-d unless otherwise specified. ₁ (CDCl ₃ ) Measured using tetramethylsilane (TMS) as an internal standard in a solvent.
[0036]
Embodiment 1
(1) Production of 2-amino-4- (4-chlorophenyl) -5-methylthiazole (raw compound) 169 g of 4'-chloropropiophenone and 2.7 g of aluminum chloride were dissolved in 1000 mL of chloroform, and the mixture was stirred under ice-cooling. 168 g of bromine were slowly added dropwise thereto. After further stirring for 1 hour under ice cooling, the reaction mixture was poured into 500 mL of ice water. The chloroform layer was separated, washed sequentially with 500 mL of saturated aqueous sodium hydrogen carbonate and 500 mL of saturated saline, and dried over magnesium sulfate. The solvent was distilled off under reduced pressure to obtain 4'-chloro-2-bromopropiophenone.
[0037]
Without purification, 1000 mL of ethanol and 77 g of thiourea were added and stirred at 70 ° C. for 12 hours. After evaporating the solvent under reduced pressure, 1000 mL of ethyl acetate and 800 mL of a 2N aqueous sodium hydroxide solution were added, and the mixture was separated. After the ethyl acetate layer was dried over magnesium sulfate, the solvent was distilled off under reduced pressure. The obtained crude crystals were recrystallized from diethyl ether-n-hexane to obtain 187 g of 2-amino-4- (4-chlorophenyl) -5-methylthiazole.
(2) Production of diethyl 4-[(4- (4-chlorophenyl) -5-methylthiazol-2-yl) carbamoyl] benzylphosphonate (the compound of the present invention)
100 g of 2-amino-4- (4-chlorophenyl) -5-methylthiazole obtained in the above (1) was added to a solution of 131 g of 4-[(diethoxyphosphoryl) methyl] benzoyl chloride in 500 mL of methylene chloride under ice-cooling and stirring. Of pyridine was slowly added dropwise. After stirring at room temperature for 12 hours, 500 mL of water was added, and methylene chloride was distilled off under reduced pressure to obtain crude crystals. The crude crystals were recrystallized from ethanol to give 138 g of the title compound as colorless crystals.
[0038]
Melting point: 173.5-174.5C
¹ H-NMR (CDCl ₃ ) Δ 1.25 (t, J = 7.1 Hz, 6H), 2.51 (s, 3H), 3.20 (d, J = 22.0 Hz, 2H), 4.0-4.1 (m , 4H), 7.33 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.38 (dd, J = 2.1 Hz, 7.9 Hz, 2H), 7.48 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 7.83 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 10.26 (brs, 1H)
[0039]
[Pharmacological test example 1] LDL-R amount increasing effect test
The amount of low-density lipoprotein receptor (LDL-R) on the cell surface of the cultured cells was determined by the method of Bissiegel et al. (Beisiegel, U., et al., J. Biol. Chem., 256, 11923 (1981)). It was quantified by the following improved method. In this method, cells cultured on a culture plate are fixed with paraformaldehyde, and an antibody recognizing the LDL-binding domain (extracellular region) of LDL-R is attached to LDL-R on the fixed cell surface (primary cell). Antibody), and the antigen-antibody complex is detected by a horseradish peroxidase-labeled anti-IgG antibody (secondary antibody) by a chemical coloring method.
[0040]
The specific operation is as follows. That is, HepG2 cells (human-derived hepatocellular carcinoma cell line) were seeded in a white 96-well plate, and cultured at 37 ° C. in 5% CO 2 using a Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM) containing 10% fetal bovine serum. ₂ The cells were cultured in an incubator for 24 hours. The culture medium was replaced with a DMEM culture medium containing 10% lipoprotein-depleted fetal bovine serum to which a test substance or dimethyl sulfoxide (DMSO, control) was added, and the cells were further cultured for 24 hours. After the culture, the culture solution was removed, washed once with PBS (-), and 4% paraformaldehyde was added at 100 μL / well and fixed for 15 minutes. After washing with PBS (−), 200 μL / well of 0.1 M glycine-PBS (−) was added, and the mixture was left for 15 minutes to eliminate unreacted aldehyde groups. 200 μL / well of 5% skim milk-PBS (−) was added, and blocking was performed for 30 minutes. A primary antibody (manufactured by PROGEN) diluted 500-fold with 5% skim milk-PBS (−) was added at 75 μL / well and left for 3 hours.
[0041]
After washing twice with PBS (-), a secondary antibody (manufactured by BioSource) diluted 1000-fold with 5% skim milk-PBS (-) was added at 75 μL / well, and the mixture was further left for 2 hours. After washing 5 times with PBS (-), 100 µL / well of a coloring solution ECL Western Blotting Detection Reagents (manufactured by Amersham Bioscience) is added, and the amount of chemiluminescence is measured using a luminescence sensor JNR AB-2100 (manufactured by Atto). did.
[0042]
After the measurement, HepG2 cells attached to a white 96-well plate were stained with a crystal violet solution in order to measure the number of cells. The stained cells were lysed with 1% SDS, and the absorbance at 570 nm was measured using a microplate reader. The value obtained by dividing the measured value of the amount of chemiluminescence by the measured value of the absorbance of crystal violet staining was calculated as the amount of LDL-R on the cell surface.
[0043]
Using the above calculated value (LDL-R amount) in the control test as a reference (1.00), the result of calculating the calculated value (LDL-R amount) obtained by performing the test in the presence of the test substance as a relative value is shown. Table 1-6 and FIG. 1 (horizontal axis: test substance, vertical axis: relative LDL-R amount).
[0044]
In addition, as a test substance, each compound (shown by its structure in Table 1-8) shown as Example 1-78 in Patent Document 1 was used together with the compound of the present invention. These are 1 × 10 ^-5 And 1 × 10 ^-6 M concentration was used. As a positive control, atorvastatin (Atorvastatin, Pfizer-Yamanouchi Pharmaceutical Co., Ltd.), which is one of the statins approved as a therapeutic agent for hyperlipidemia, was 1 × 10 5 ^-6 , 3 × 10 ^-7 And 1 × 10 ^-7 M concentration (1 × 10 in FIG. 1). ^-6 Only the result in the case of M is displayed).
[0045]
[Table 1]

[0046]
[Table 2]

[0047]
[Table 3]

[0048]
[Table 4]

[0049]
[Table 5]

[0050]
[Table 6]

[0051]
[Table 7]

[0052]
[Table 8]

[0053]
The following is clear from Table 1-8 and FIG. That is, the compound specifically described in Patent Document 1 is 1 × 10 ^-6 When the concentration of M is low, the effect of increasing the amount of LDL-R, which is one index of the therapeutic and preventive effects of hyperlipidemia, cannot be substantially exerted, and 1 × 10 ^-5 Even at M concentrations, some compounds increased LDL-R levels approximately 1.5-fold over controls. On the other hand, the compound of the present invention is 1 × 10 ^-6 Even at a low concentration of M, an effect of increasing the amount of LDL-R as much as about 2.5 of the control could be obtained. Also, 1 × 10 ^-5 At the concentration of M, the LDL-R increasing effect was as much as 3.5 times as high as that of the control.
[0054]
In particular, this remarkable effect observed in the compound of the present invention is the compound of Example 31 of Patent Document 1 which is considered to be structurally closest to the compound of the present invention, that is, a 4-fluorophenyl group at the 4-position of the thiazolyl skeleton. Is very surprising even in view of the fact that the compound having the above formula (in which the chloro group of the compound of the present invention is replaced by a fluoro group) cannot exhibit such excellent effects.
[0055]
Hereinafter, using the most similar compound of Example 31 of Patent Document 1 as a comparative compound, in order to clarify the therapeutic and preventive effects of the compound of the present invention on hyperlipidemia, a blood triglyceride amount measurement test was performed in pharmacological test example 2. It was carried out as.
[0056]
[Pharmacological test example 2] Hyperlipidemia treatment and prevention effect test
(1) Test rat
Five-week-old male rats (Sprague Dawley rat, SPF, purchased from Charles River Japan) were preliminarily reared for one week and then subjected to this test. The test rats were divided into groups by the stratified random extraction method according to body weight, and were divided into five groups.
[0057]
Gamma-ray radiation CRF-1 (manufactured by Oriental Yeast Co., Ltd.) was freely fed as feed for the test rats, and tap water through a sterilization filter was freely fed as water.
[0058]
(2) Test substance
As the test substance, the compound of the present invention and the compound of Example 31 described in the literature (comparative compound) were used. Each of these compounds was suspended in a 5% aqueous solution of gum arabic prepared using gum arabic (manufactured by Wako Pure Chemical Industries) and distilled water for injection (manufactured by Otsuka Pharmaceutical) to prepare a solution for administration. The solution for administration was prepared such that the test substance was administered to the test animal at a dose of 30 mg / kg, and 10 mL / kg thereof was administered. The liquid for administration was used after irradiating ultrasonic waves with an ultrasonic cleaner for several minutes and then sufficiently stirring.
[0059]
(3) Test method
To the test animals of each group, 3 mL / kg of 10% Triton (10% Triton WR-1339, Ruger CHEMICAL Co., Inc.) dissolved in physiological saline was administered into the tail vein, and at the same time, containing the test substance. The solution for administration was orally administered in an amount (10 mL / kg) at which the test substance was administered at 30 mg / kg.
[0060]
In addition, as a control group, a group (5 animals per group) in which 10 mL / kg of a 5% arabic gum aqueous solution was orally administered simultaneously with the above-mentioned Triton administration was provided.
[0061]
After the administration of Triton, the test animals in each group were fasted, and 24 hours later, blood was collected from the abdominal aorta, and the amount of triglyceride (TG) in plasma was measured using Triglyceride G-Test Wako (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.).
[0062]
In addition, the plasma triglyceride (TG) level was also measured for rats to which no drug was administered (normal group).
[0063]
From the measured values, the plasma triglyceride (TG) reduction rate (%) was calculated by the following equation.
[0064]
Reduction rate (%) = [1- (TN) / (CN)] × 100
T: Average value of test compound group
N: Normal group mean
C: average value of control group
(4) Result
The results obtained are shown in Table 9 below.
[0065]
[Table 9]

[0066]
From the results shown in Table 9, the comparative compound can reduce the TG value of the Triton-induced hyperlipidemic rat by only 41.2%, whereas the compound of the present invention can reduce the TG value by as much as 82.8%. It is clear that a very excellent effect of treating and preventing hyperlipidemia can be achieved.
[0067]
[Pharmacological test example 3] 2-week repeated oral dose toxicity test
(1) Test rat
Five-week-old male rats (Sprague Dawley rat, SPF, purchased from Charles River Japan) were preliminarily reared for one week and then subjected to this test. The test rats were divided into groups by the stratified random extraction method according to body weight, and were divided into five groups.
[0068]
Gamma-ray radiation CRF-1 (manufactured by Oriental Yeast Co., Ltd.) was freely fed as feed for the test rats, and tap water through a sterilization filter was freely fed as water. After 4:00 pm on the last administration day, the animals were fasted until necropsy.
[0069]
(2) Test substance
As the test substance, the compound of the present invention and the compound of Example 31 described in Patent Document 1 (comparative compound) were used. Each of these compounds was suspended in a 5% aqueous gum arabic solution prepared using gum arabic (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) and distilled water for injection (manufactured by Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd.) to prepare a liquid for administration. The solution for administration was prepared such that the test substance was administered to the test animal at a dose of 100 mg / kg or 1000 mg / kg, and 10 mL / kg thereof was administered. In addition, the administration liquid was used after irradiating ultrasonic waves with an ultrasonic cleaner for several minutes and then sufficiently stirring the administration.
[0070]
(3) Test method
As an administration route, an oral route was adopted according to the clinical application route. It was forcibly administered once a day for 14 days using a gastric tube for rats. The experimental group was administered a liquid for administration containing a test substance. The control group received the same amount of a 5% gum arabic aqueous solution (10 mL / kg).
[0071]
On the day after continuous administration for 14 days, the animals were sacrificed by exsanguination under ether anesthesia, and the next organ was collected and weighed.
Brain, pituitary, thymus, thyroid (measured after formalin fixation), lung, heart, liver, spleen, pancreas, kidney, adrenal gland, prostate (abdomen), testis, epididymis.
[0072]
(4) Statistical processing
With respect to the actual weight of the organ, the average value and the standard deviation of each group were determined, and the comparison between the control group and each experimental group was performed by Dunnett's multiple comparison.
[0073]
(5) Result
Among the results obtained using the compound of the present invention and the comparative compound, those having significant changes compared to the control group are as shown below.
[0074]
That is, the administration of the comparative compound increased the heart weight by 12% and 18% at the doses of 100 mg / kg and 1000 mg / kg, respectively.
[0075]
Cardiac hypertrophy has a direct or indirect effect on the circulatory system, and is considered to be a side effect that appears as a compensatory effect. In particular, considering that the therapeutic agent for hyperlipidemia is a drug taken for preventing the onset of circulatory diseases such as ischemic heart disease, the active ingredient compound for the drug is such a circulating agent. It is desirable to have as few side effects as possible on the organs. In terms of this side effect, the comparative compound is not preferable as an active ingredient compound for a therapeutic agent for hyperlipidemia, and is particularly useful for patients with complications of hyperlipidemia and cardiovascular diseases as underlying diseases. It turned out that there were disadvantages that could not be applied.
[0076]
In addition, administration of the comparative compound increased liver weight by 20% at a dose of 1000 mg / kg.
[0077]
The increase in liver weight is considered to be a result of induction of drug metabolizing enzymes, and the blood concentration of the drug may be decreased by repeated administration. It is a side effect that must be avoided as a therapeutic drug for chronic diseases such as hyperlipidemia. From the viewpoint of these side effects, it has become clear that the comparative compound is not preferable as an active ingredient of the therapeutic agent for hyperlipidemia.
[0078]
In contrast, administration of the compound of the present invention did not show any side effects on the heart and liver as seen in the comparative compound.
[0079]
In the administration of the compound of the present invention, a decrease in thymus weight was observed at 1000 mg / kg, which was not observed when the same amount of the comparative compound was administered, but this effect was caused by environmental factors such as stress. However, it is a change that occurs and is not considered to have toxicological significance.
[0080]
Hereinafter, preparation examples using the compound of the present invention will be described.
[0081]
[Formulation Example 1] Preparation of tablet
Tablets (2000 tablets) each containing 300 mg of the compound of the present invention as an active ingredient were prepared according to the following formulation.
600 g of the compound of the present invention
Lactose (Japanese Pharmacopoeia) 67g
Corn starch (Japanese Pharmacopoeia) 33g
Carboxymethylcellulose calcium 25g
(Japanese Pharmacopoeia product)
Methylcellulose (Japanese Pharmacopoeia) 12g
Magnesium stearate (Japanese Pharmacopoeia) 3g
According to the above formula, the compound of the present invention, lactose, corn starch and carboxymethylcellulose calcium are thoroughly mixed, and the mixture is granulated with an aqueous methylcellulose solution, passed through a 24-mesh sieve, and mixed with magnesium stearate to give tablets. Press to obtain the desired tablet.
[0082]
[Formulation Example 2]
Preparation of capsules
Hard gelatin capsules (2000 capsules) containing the compound of the present invention as an active ingredient in an amount of 200 mg per capsule were prepared according to the following formulation.
400 g of the compound of the present invention
Crystalline Cellulose (Japanese Pharmacopoeia) 60g
Corn starch (Japanese Pharmacopoeia) 34g
Talc (Japanese Pharmacopoeia) 4g
Magnesium stearate (Japanese Pharmacopoeia) 2g
According to the above formulation, each component was finely powdered, mixed to form a uniform mixture, and then filled into a gelatin capsule for oral administration having desired dimensions to obtain a desired capsule.
[Brief description of the drawings]
FIG. 1 is a graph showing the amount of low-density lipoprotein receptor of each test substance determined according to Pharmacological Test Example 1.

Claims (3)

下式

で表されるジエチル　４−［（４−（４−クロロフェニル）−５−メチルチアゾール−２−イル）カルバモイル］ベンジルホスホナートまたはその製剤学的に許容される酸付加塩。Lower formula

4-[(4- (4-chlorophenyl) -5-methylthiazol-2-yl) carbamoyl] benzylphosphonate represented by the formula: or a pharmaceutically acceptable acid addition salt thereof. 請求項１に記載の化合物およびその製剤学的に許容される酸付加塩からなる群から選ばれる少なくとも１種の有効量を製剤学的に許容される担体と共に含有する医薬組成物。A pharmaceutical composition comprising at least one effective amount selected from the group consisting of the compound according to claim 1 and a pharmaceutically acceptable acid addition salt thereof together with a pharmaceutically acceptable carrier. 高脂血症治療剤である請求項２に記載の医薬組成物。The pharmaceutical composition according to claim 2, which is a therapeutic agent for hyperlipidemia.

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