JP2004131481A - NKT CELL-ACTIVATING AGENT CONTAINING alpha-GLYCOSYL CERAMIDE - Google Patents
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Abstract
Description
発明の分野
本発明は、α−グリコシルセラミドを含有するＮＫＴ細胞活性化剤、自己免疫疾患治療剤および堕胎剤に関する。
FIELD OF THE INVENTION The present invention relates to an NKT cell activator, a therapeutic agent for autoimmune diseases and an abortion agent containing α-glycosylceramide.
関連技術
中等度にＴ細胞レセプター (TCR) を発現する intermediate TCR 細胞（ＴＣ Ｒｉｎｔ細胞) は、Large Granulra Lymphocyte (LGL) 様の形態を示すこと、IL-2R β鎖を常時表出すること、パーフォリン顆粒を有する点などでは、Natural Killer（ＮＫ）細胞と類縁の細胞であるが、ＴＣＲを有するという点でＮＫ細胞とは決定的に異なる細胞群であることが明らかとなった (Watanabe, H. et al.,J. Immunol., 155, 2972 (1995) )。そして、マウスではInterleukin 12 (IL-12)により活性化されたＴＣＲｉｎｔ細胞の中でもＮＫ１．１を発現している ＮＫ １．１＋ＴＣＲｉｎｔ（ＮＫＴ）細胞が、腫瘍の肝臓や肺への血行性転移抑制の重要なエフェクター細胞であることが証明された（Hashimoto, W. et al., J. Immunol., 154, 4333 (1995); Anzai, R. et al., Immunol., 88, 82 (1996)） ことから、このＮＫＴ細胞は、癌細胞、寄生虫や原虫、およびリステリアや結核菌などの細胞内感染細菌の排除に重要な役割を果たす細胞であると考えられている(Seki, S. et al., Clin. Immunol., 28, 1069 (1996))。
Related Art Intermediate TCR cells (TCR int cells) that moderately express T cell receptors (TCRs) exhibit a large Granulra Lymphocyte (LGL) -like morphology, constantly express the IL-2R β chain, It is apparent that this is a cell group that is related to Natural Killer (NK) cells in terms of having perforin granules, but is crucially different from NK cells in having TCR (Watanabe, H. et al., J. Immunol., 155, 2972 (1995)). In mice, among the TCR int cells activated by Interleukin 12 (IL-12), NK1.1 + TCR int (NKT) cells expressing NK1.1 are expressed in the blood circulation to tumor liver and lung. It has been proved to be an important effector cell for suppression of sex metastasis (Hashimoto, W. et al., J. Immunol., 154, 4333 (1995); Anzai, R. et al., Immunol., 88, 82). (1996)) Thus, NKT cells are considered to be cells that play an important role in eliminating cancer cells, parasites and protozoa, and intracellular infectious bacteria such as Listeria and Mycobacterium tuberculosis (Seki, S. et al., Clin. Immunol., 28, 1069 (1996)).
さらに、このＮＫＴ細胞は、骨髄移植における急性期拒絶反応 (Yankelevich, B.et al., J. Immunol., 142, 3423 (1989))やヘルパーＴ細胞のTh1/Th2 の分 化制御によるＩｇＥ抗体産生の制御 (Yoshimoto, T. et al.,J. Exp. Med., 179, 1285 (1994))などにも深く関与する細胞としても知られている。以上のように、このＮＫＴ細胞は、近年、新しい細胞群として非常に注目を集めている細胞群である。 Furthermore, these NKT cells are used for IgE antibody by controlling acute phase rejection in bone marrow transplantation (Yankelevich, B. et al., J. Immunol., 142, 3423 (1989)) and Th1 / Th2 differentiation of helper T cells. It is also known as a cell that is deeply involved in the control of production (Yoshimoto, T. et al., J. Exp. Med., 179, 1285 (1994)). As described above, these NKT cells are a group of cells that have recently attracted much attention as new cell groups.
Ｖα１４＋ＮＫＴ細胞は上記のＮＫＴ細胞の一つのサブセットであり、Ｖα１４＋ＮＫＴ細胞の多くはＶα１４Ｊα２８１ｍＲＮＡを発現しており、これをＴＣＲα鎖として持っている。近年、このＶα１４＋ＮＫＴ細胞が、自己免疫疾患の発症に深く関わっていることが証明された。すなわち、ＭＲＬ ｌｐｒ／ｌｐｒマウスは、生後17 - 20 週齢で異常リンパ球の集積をきたす自己免疫疾患（ヒト全身性エリテマトーデス）のモデルマウスであるが、このマウスにおいては、自己免疫疾患発症に先行して、Ｖα１４＋ＮＫＴ細胞が選択的に減少することが判明した ( Mieza, M. A. et al., J. Immunol., 156, 4035(1996))。 Vα14 + NKT cells are one subset of the above-mentioned NKT cells, and many Vα14 + NKT cells express Vα14Jα281 mRNA and have this as a TCRα chain. In recent years, it has been proved that these Vα14 + NKT cells are deeply involved in the development of autoimmune diseases. That is, the MRL lpr / lpr mouse is a model mouse of an autoimmune disease (human systemic lupus erythematosus) that causes abnormal lymphocyte accumulation at the age of 17 to 20 weeks of age. Thus, it was found that Vα14 + NKT cells were selectively reduced (Mieza, MA et al., J. Immunol., 156, 4035 (1996)).
同様の現象は、他の自己免疫疾患モデルマウスであるgld マウスや (NZBxNZW)F1マウスにおいても観察され、Ｖα１４＋ＮＫＴ細胞が自己免疫疾患の発症に深く関わっていることが判明した ( Makino, Y. et al., Clin. Immunol.,28,1487 (1996))。 A similar phenomenon was observed in other autoimmune disease model mice, gld mice and (NZBxNZW) F1 mice, and it was found that Vα14 + NKT cells were deeply involved in the development of autoimmune diseases (Makino, Y. et al., Clin. Immunol., 28, 1487 (1996)).
さらに、興味深いことに、ヒトにおいても同様の現象が観察された。すなわち、マウスＶα１４Ｊα２８１鎖と相同のヒトホモログであるＶα２４ＪαＱα鎖は、健常人では末梢血のＣＤ４−／ＣＤ８−Ｔ細胞中に20- 50% 存在しているが、強皮症患者ではまったく消失していた ( Sumida, T. et al., J. Exp. Med., 182,1163 (1995))。 Interestingly, a similar phenomenon was observed in humans. That, Varufa24jeiarufakyuarufa chain is a mouse Vα14Jα281 chain homologous human homologues, in healthy human CD4 in peripheral blood - / CD8 - although present in T cells 20- 50%, in scleroderma patients had completely disappeared (Sumida, T. et al., J. Exp. Med., 182, 1163 (1995)).
このように、原因遺伝子や遺伝的背景の異なる様々な自己免疫疾患において、マウスＶα１４＋ＮＫＴ細胞やヒトＶα２４ＪαＱαＴ細胞が関与していることが知られている。このことから、上記のようにＮＫＴ細胞を活性化する作用を有するＩＬ−１２は、ヒト全身性エリテマトーデス（systemic lupus erythematosus : SEL) や全身性強皮症（ systemic sclerosis: SSc）のような 自己免疫疾患の治療剤として期待された。しかし、ＩＬ−１２をＭＲＬ ｌｐｒ／ｌｐｒマウスに投与すると、非投与マウスに比べ脾およびリンパ節に異常リンパ球（ＣＤ３＋Ｂ２２０＋double negative Ｔ細胞）の著明な増加が認められた（筒井建紀ら，日本免疫学会総会・学術集会記録，347 (1996)）。 Thus, it is known that mouse Vα14 + NKT cells and human Vα24JαQαT cells are involved in various autoimmune diseases having different causative genes and genetic backgrounds. From this, as described above, IL-12, which has the effect of activating NKT cells, can be used for autoimmunity such as human systemic lupus erythematosus (SEL) and systemic sclerosis (SSc). It was expected as a therapeutic agent for diseases. However, when IL-12 was administered to MRL lpr / lpr mice, a marked increase in abnormal lymphocytes (CD3 + B220 + double negative T cells) was observed in spleen and lymph nodes compared to non-administered mice (Tsunori Tsutsui) Et al., Records of the General Meeting of the Immunological Society of Japan, Academic Meeting, 347 (1996)).
ところで、生体内には種々の糖がセラミドとβ結合しているβ−ガラクトシルセラミドやβ−グルコシルセラミドが存在している (Svennerholm, L. et al., Biochem. Biophys. Acta, 280, 626(1972) ; Karlsson, K.-A. et al., Biochim. Biophys. Acta, 316,317(1973))。一方、α- ガラクトシルセラミドが顕著な免疫賦活作用および抗腫瘍作用を有すること(Morita,M. et al.,J. Med. Chem.,38, 2176 (1995)) およびα- ガラクトシルセラミドやα- グルコシルセラミドのこれらの作用は、β−ガラクトシルセラミドやβ- グルコシルセラミドの作用よりもはるかに強力であること(Motoki, K. et al., Biol. Pharm. Bull.,18, 1487 (1995)）が知られている。さらに、α- グルコシルセラミド構造を有する化合物は、生体内に投与した場合に放射線防護作用 (Motoki, K. et al.,Bioorg. Med. Chem. Lett., 5, 2413 (1995)) 、マウスメラノーマＢ１６の肺転移抑制作用 (Kobayashi, E. et al.,Oncology Res., 7, 529 (1995)) 、およびマウス大腸癌 Colon26やマウスＴリンパ腫 EL-4 の肝転移抑制作用（元木一宏ら日本癌学会総会記事、523 (1996) ）を有することおよび血小板数や白血球数を増加させるこ と( Motoki, K. et al., Biol. Pharm. Bull., 19,952(1996))が知られている。 By the way, there are β-galactosylceramide and β-glucosylceramide in which various sugars are β-linked to ceramide in the living body (Svennerholm, L. et al., Biochem.Biophys.Acta, 280, 626 ( 1972); Karlsson, K.-A. et al., Biochim. Biophys. Acta, 316,317 (1973)). On the other hand, α-galactosylceramide has remarkable immunostimulatory and antitumor effects (Morita, M. et al., J. Med.Chem., 38, 2176 (1995)). These effects of glucosylceramide are much stronger than those of β-galactosylceramide and β-glucosylceramide (Motoki, K. et al., Biol. Pharm. Bull., 18, 1487 (1995)). It has been known. Furthermore, compounds having an α-glucosylceramide structure have a radioprotective effect when administered in vivo (Motoki, K. et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 5, 2413 (1995)), mouse melanoma B16 suppresses lung metastasis (Kobayashi, E. et al., Oncology Res., 7, 529 (1995)), and suppresses liver metastasis of mouse colon cancer Colon26 and mouse T lymphoma EL-4 (Kazuki Motoki et al. Article 523 (1996)) and increasing platelet count and white blood cell count (Motoki, K. et al., Biol. Pharm. Bull., 19, 952 (1996)). I have.
しかし、α- グリコシルセラミド構造を有する化合物が自己免疫疾患に有効であることや堕胎作用を有することはもちろんのこと、α- グリコシルセラミド構造を有する化合物がＮＫＴ細胞に与える影響に関しても、報告されていない。 However, it has been reported that compounds having an α-glycosylceramide structure are not only effective for autoimmune diseases and have an abortion effect, but also the effects of compounds having an α-glycosylceramide structure on NKT cells. Absent.
本発明者らは、今般、α−グリコシルセラミドがＲＡＧ−１ＫＯ／Ｖα１４ｔｇ/ Ｖβ８．２ｔｇマウス（リンパ球画分にＢ細胞、Ｔ細胞およびＮＫ細胞が 存在せず、ＮＫＴ細胞が多く存在するマウス）におけるＮＫＴ細胞の腫瘍細胞に対する細胞障害活性を増強すること、α−グリコシルセラミドによりＮＫＴ細胞（特にマウスＶα１４＋ＮＫＴ細胞およびヒトＶα２４＋ＮＫＴ細胞）の数が顕著に増加すること、α−グリコシルセラミドがヒト全身性エリテマトーデスのモデルマウスであると考えられる MRL lpr/lprマウスの腋下および鼠径部のリンパ節の異常腫脹（異常リンパ球の集積) を抑制すること、そしてα−グリコシルセラミドが４％ ＤＳＳ誘発マウス大腸炎の進行を抑制することを見出した。 The present inventors have now proposed that α-glycosylceramide is a RAG-1KO / Vα14tg / Vβ8.2tg mouse (a mouse in which B cells, T cells and NK cells are absent in the lymphocyte fraction and NKT cells are abundant) Enhances the cytotoxic activity of NKT cells against tumor cells in α-glycosylceramide, that α-glycosylceramide significantly increases the number of NKT cells (especially mouse Vα14 + NKT cells and human Vα24 + NKT cells), Inhibiting abnormal swelling of lymph nodes in the axillary and inguinal regions (accumulation of abnormal lymphocytes) of MRL lpr / lpr mice, which are considered to be model mice of human systemic lupus erythematosus, and α-glycosylceramide containing 4% DSS It was found that the progression of induced mouse colitis was suppressed.
本発明者らは、また、α−グリコシルセラミドが実験的自己免疫性脳脊髄炎の発症を抑制することを見いだした。マウスにおける実験的自己免疫性脳脊髄炎はヒト多発性硬化症のモデルである。本発明者らは、また、α−グリコシルセラミドがＮＯＤマウスにおいて糖尿病の自然発症を抑制することを見いだした。ＮＯＤマウスはヒトのＩ型糖尿病のモデルである。 The present inventors have also found that α-glycosylceramide suppresses the development of experimental autoimmune encephalomyelitis. Experimental autoimmune encephalomyelitis in mice is a model for human multiple sclerosis. The present inventors have also found that α-glycosylceramide suppresses the spontaneous onset of diabetes in NOD mice. NOD mice are a model for human type I diabetes.
本発明者らは、更に、α−グリコシルセラミドが妊娠マウスに対して堕胎効果を有することをも見いだした。 The present inventors have further found that α-glycosylceramide has an abortion effect on pregnant mice.
本発明は、ＮＫＴ細胞活性化剤および活性化されたＮＫＴ細胞の提供をその目的とする。 An object of the present invention is to provide an NKT cell activator and activated NKT cells.
本発明は、また、自己免疫疾患（例えば、全身性エリテマトーデス、全身性強皮症、潰瘍性大腸炎、脳脊髄炎、多発性硬化症、およびＩ型糖尿病等）の治療剤の提供をその目的とする。 Another object of the present invention is to provide a therapeutic agent for autoimmune diseases (eg, systemic lupus erythematosus, systemic sclerosis, ulcerative colitis, encephalomyelitis, multiple sclerosis, type I diabetes, etc.). And
本発明は、更に、堕胎剤の提供をその目的とする。 The present invention further aims at providing an abortion agent.
本発明によるＮＫＴ細胞活性化剤、自己免疫疾患治療剤および堕胎剤は、下記式（Ｉ）の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を有効成分として含んでなるもの、である：
Ｒ１はＨまたはＯＨであり、
Ｘは７〜２７のいずれかの整数であり、
Ｒ２は下記（ａ）〜（ｅ）からなる群から選択される置換基であり（ここで、Ｙは５〜１７のいずれかの整数である）、
（ａ）−ＣＨ２（ＣＨ２）ＹＣＨ３
（ｂ）−ＣＨ（ＯＨ）（ＣＨ２）ＹＣＨ３
（ｃ）−ＣＨ（ＯＨ）（ＣＨ２）ＹＣＨ（ＣＨ３）２
（ｄ）−ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）ＹＣＨ３
（ｅ）−ＣＨ（ＯＨ）（ＣＨ２）ＹＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３、そして
Ｒ３〜Ｒ９は下記のi)〜v)のいずれかで定義される置換基である：
ｉ）Ｒ３、Ｒ６、およびＲ８がＨのとき
Ｒ４はＨ、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＨＣＯＣＨ３、または下記基（Ａ）〜（Ｄ）：
Ｒ５はＯＨ、または下記基（Ｅ）および（Ｆ）：
Ｒ７は、ＯＨまたは下記基（Ａ）〜（Ｄ）：
Ｒ９はＨ、ＣＨ３、ＣＨ２ＯＨ、または下記基（Ａ’）〜（Ｄ’）：
ii）Ｒ３、Ｒ６およびＲ７がＨのとき
Ｒ４はＨ、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＨＣＯＣＨ３、または下記基（Ａ）〜（Ｄ）：
Ｒ５はＯＨ、または下記基（Ｅ）および（Ｆ）：
Ｒ８はＯＨ、または下記基（Ａ）〜（Ｄ）：
Ｒ９はＨ、ＣＨ３、ＣＨ２ＯＨまたは下記基（Ａ’）〜（Ｄ’）：
R 1 is H or OH;
X is any integer from 7 to 27;
R 2 is a substituent selected from the group consisting of the following (a) to (e) (where Y is an integer of any of 5 to 17);
(A) -CH 2 (CH 2 ) Y CH 3
(B) -CH (OH) ( CH 2) Y CH 3
(C) -CH (OH) ( CH 2) Y CH (CH 3) 2
(D) -CH = CH (CH 2) Y CH 3
(E) -CH (OH) ( CH 2) Y CH (CH 3)
i) When R 3 , R 6 , and R 8 are H R 4 is H, OH, NH 2 , NHCOCH 3 , or the following groups (A) to (D):
R 5 is OH, or the following groups (E) and (F):
R 7 is OH or the following groups (A) to (D):
R 9 is H, CH 3 , CH 2 OH, or the following groups (A ′) to (D ′):
ii) When R 3 , R 6 and R 7 are H R 4 is H, OH, NH 2 , NHCOCH 3 , or the following groups (A) to (D):
R 5 is OH, or the following groups (E) and (F):
R 8 is OH, or the following groups (A) to (D):
R 9 is H, CH 3 , CH 2 OH or the following groups (A ′) to (D ′):
式（Ｉ）の化合物
前記式（Ｉ）の化合物中、セラミド部分のＸは、好ましくは１１〜２５の整数である。
Compound of formula (I) In the compound of formula (I), X in the ceramide moiety is preferably an integer of 11 to 25.
Ｒ２におけるＹは好ましくは９〜１７の整数、より好ましくは１１〜１５である。 Y in R 2 is preferably an integer of 9 to 17, more preferably 11 to 15.
式（Ｉ）のセラミド部分におけるＸおよびＲ２の好ましい組み合わせは、Ｘが２１〜２５の整数であり、Ｒ２が置換基（ｂ）（式中、Ｙは１１〜１５である）を表す化合物、およびＸが９〜１３の整数であり、Ｒ２が置換基（ａ）（式中、Ｙは１１〜１５である）を表す化合物である。 Preferred combinations of X and R 2 in the ceramide moiety of formula (I) are compounds wherein X is an integer from 21 to 25 and R 2 represents a substituent (b) wherein Y is 11 to 15. And X is an integer of 9 to 13, and R 2 represents a substituent (a) (wherein, Y is 11 to 15).
式（Ｉ）の糖部分におけるＲ３〜Ｒ９の好ましい組み合わせは、Ｒ３およびＲ６がＨを表し、Ｒ４がＯＨまたは基（Ａ）〜（Ｄ）のいずれかの置換基を表し、Ｒ５がＯＨまたは基（Ｅ）もしくは（Ｆ）の置換基を表し、Ｒ７およびＲ８がそれぞれＨまたはＯＨのいずれかを表し（但し、Ｒ７およびＲ８の両方が同一の基を表すことはない）、Ｒ９がＣＨ２ＯＨ、ＣＨ３、Ｈ、または基（Ａ’）〜（Ｄ’）のいずれかの置換基を表す化合物である。 A preferred combination of R 3 to R 9 in the sugar moiety of formula (I) is that R 3 and R 6 represent H, R 4 represents OH or a substituent of any of groups (A) to (D), R 5 represents OH or a substituent of the group (E) or (F), and R 7 and R 8 each represent either H or OH (provided that both R 7 and R 8 represent the same group) ), R 9 represents CH 2 OH, CH 3 , H, or a substituent of any of groups (A ′) to (D ′).
更に好ましい組み合わせとしては、Ｒ３およびＲ６がＨであり、Ｒ４およびＲ５がＯＨであり、Ｒ７およびＲ８がそれぞれＨまたはＯＨのいずれかを表し（但し、Ｒ７およびＲ８の両方が同一の基を表すことはない）、かつＲ９がＣＨ２ＯＨまたは基（Ａ’）〜（Ｄ’）のいずれかの置換基を表す化合物、およびＲ３、Ｒ６およびＲ８がＨであり、Ｒ４、Ｒ５およびＲ７がＯＨであり、かつＲ９がＣＨ２ＯＨである化合物が挙げられる。 In a more preferred combination, R 3 and R 6 are H, R 4 and R 5 are OH, and R 7 and R 8 each represent either H or OH (provided that R 7 and R 8 Both do not represent the same group) and R 9 represents CH 2 OH or a substituent of any of the groups (A ′) to (D ′), and R 3 , R 6 and R 8 H, R 4 , R 5 and R 7 are OH, and R 9 is CH 2 OH.
式（Ｉ）の化合物の好ましい例としては、
Ｘが２１〜２５の整数であり、
Ｒ２が置換基（ｂ）（式中、Ｙは１１〜１５の整数である）であり、
Ｒ３およびＲ６がＨであり、
Ｒ４がＯＨまたは基（Ａ）〜（Ｄ）からなる群から選択される基であり、
Ｒ５がＯＨまたは基（Ｅ）および（Ｆ）からなる群から選択される基であり、
Ｒ７およびＲ８がそれぞれＨまたはＯＨであり（但し、両方が同一の基を表すことはない）、
Ｒ９がＣＨ２ＯＨまたは基（Ａ’）〜（Ｄ’）からなる群から選択される基である化合物、
Ｘが９〜１３の整数であり、
Ｒ２が置換基（ａ）（式中、Ｙは１１〜１５の整数である）であり、
Ｒ３およびＲ６がＨであり、
Ｒ４およびＲ５がＯＨであり、
Ｒ７およびＲ８がそれぞれＨまたはＯＨであり（但し、両方が同一の基を表すことはない）、
Ｒ９がＨ、ＣＨ３、またはＣＨ２ＯＨである化合物、
Ｘが２１〜２５の整数であり、
Ｒ２が置換基（ｂ）（式中、Ｙは１１〜１５の整数である）であり、
Ｒ３およびＲ６がＨであり、
Ｒ４およびＲ５がＯＨであり、
Ｒ７およびＲ８がそれぞれＨまたはＯＨであり（但し、両方が同一の基を表すことはない）、
Ｒ９がＣＨ２ＯＨまたは基（Ａ’）〜（Ｄ’）からなる群から選択される基である化合物、および
Ｘが２１〜２５の整数であり、
Ｒ２が置換基（ｂ）（式中、Ｙは１１〜１５の整数である）であり、
Ｒ３、Ｒ６、およびＲ８がＨであり、
Ｒ４、Ｒ５、およびＲ７がＯＨであり、
Ｒ９がＣＨ２ＯＨである化合物
が挙げられる。
Preferred examples of the compound of the formula (I) include:
X is an integer of 21 to 25;
R 2 is a substituent (b) (wherein Y is an integer of 11 to 15);
R 3 and R 6 are H;
R 4 is OH or a group selected from the group consisting of groups (A) to (D);
R 5 is OH or a group selected from the group consisting of groups (E) and (F),
R 7 and R 8 are each H or OH, provided that they do not represent the same group,
A compound wherein R 9 is CH 2 OH or a group selected from the group consisting of groups (A ′) to (D ′);
X is an integer of 9 to 13,
R 2 is a substituent (a) (wherein, Y is an integer of 11 to 15);
R 3 and R 6 are H;
R 4 and R 5 are OH;
R 7 and R 8 are each H or OH, provided that they do not represent the same group,
A compound wherein R 9 is H, CH 3 , or CH 2 OH;
X is an integer of 21 to 25;
R 2 is a substituent (b) (wherein Y is an integer of 11 to 15);
R 3 and R 6 are H;
R 4 and R 5 are OH;
R 7 and R 8 are each H or OH, provided that they do not represent the same group,
A compound wherein R 9 is CH 2 OH or a group selected from the group consisting of groups (A ′) to (D ′), and X is an integer of 21 to 25,
R 2 is a substituent (b) (wherein Y is an integer of 11 to 15);
R 3 , R 6 , and R 8 are H;
R 4 , R 5 , and R 7 are OH;
Compounds wherein R 9 is CH 2 OH.
本発明による治療剤の有効成分として好ましい化合物群としては、
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−（α−Ｄ−ガラクトピラノシルオキシ）−２−ヘキサコサノイルアミノ−３，４−オクタデカンジオール（ＫＲＮ７０００）、
（２Ｓ，３Ｒ）−１−（α−Ｄ−ガラクトピラノシルオキシ）−２−テトラデカノイルアミノ−３−オクタデカノール（ＡＧＬ−５１７）、
（２Ｓ，３Ｒ）−１−（α−Ｄ−グルコピラノシルオキシ）−２−テトラデカノイルアミノ−３−オクタデカノール（ＡＧＬ−５６３）、
（２Ｓ，３Ｒ）−１−（６′−デオキシ−α−Ｄ−ガラクトピラノシルオキシ）−２−テトラデカノイルアミノ−３−オクタデカノール（ＡＧＬ−５７１）、
（２Ｓ，３Ｒ）−１−（β−Ｌ−アラビノピラノシルオキシ）−２−テトラデカノイルアミノ−３−オクタデカノール（ＡＧＬ−５７７）、
Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→６）−Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→１）−（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−２−アミノ−Ｎ−ヘキサコサノイル−１，３，４−オクタデカントリオール（ＡＧＬ−５８６）、
Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→６）−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→１）−（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−２−アミノ−Ｎ−ヘキサコサノイル−１，３，４−オクタデカントリオール（ＡＧＬ−５８４）、
Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→２）−Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→１）−（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−２−アミノ−Ｎ−［（Ｒ）−２−ヒドロキシテトラコサノイル］−１，３，４−オクタデカントリオール（Ｓ１１４０Ｂ−９）、
Ｏ−β−Ｄ−ガラクトフラノシル−（１→３）−Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→１）−（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−２−アミノ−Ｎ−［（Ｒ）−２−ヒドロキシテトラコサノイル］−１，３，４−オクタデカントリオール（７１９−７）、および
Ｏ−（Ｎ−アセチル−２−アミノ−２−デオキシ−α−Ｄ−カラクトピラノシル−（１→３）−Ｏ−［α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）］−Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→１）−（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−２−アミノ−Ｎ− ［（Ｒ）−２−ヒドロキシテトラコサノイル］−１，３，４−オクタデカントリオール（ＳＴＬ−８）
が挙げられる。
Preferred compounds as the active ingredient of the therapeutic agent according to the present invention include:
(2S, 3S, 4R) -1- (α-D-galactopyranosyloxy) -2-hexacosanoylamino-3,4-octadecanediol (KRN7000),
(2S, 3R) -1- (α-D-galactopyranosyloxy) -2-tetradecanoylamino-3-octadecanol (AGL-517),
(2S, 3R) -1- (α-D-glucopyranosyloxy) -2-tetradecanoylamino-3-octadecanol (AGL-563),
(2S, 3R) -1- (6′-deoxy-α-D-galactopyranosyloxy) -2-tetradecanoylamino-3-octadecanol (AGL-571),
(2S, 3R) -1- (β-L-arabinopyranosyloxy) -2-tetradecanoylamino-3-octadecanol (AGL-577),
O-α-D-galactopyranosyl- (1 → 6) -O-α-D-galactopyranosyl- (1 → 1)-(2S, 3S, 4R) -2-amino-N-hexacosanoyl- 1,3,4-octadecanetriol (AGL-586),
O-α-D-galactopyranosyl- (1 → 6) -O-α-D-glucopyranosyl- (1 → 1)-(2S, 3S, 4R) -2-amino-N-hexacosanoyl-1,3 , 4-octadecanetriol (AGL-584),
O-α-D-galactopyranosyl- (1 → 2) -O-α-D-galactopyranosyl- (1 → 1)-(2S, 3S, 4R) -2-amino-N-[( R) -2-Hydroxytetracosanoyl] -1,3,4-octadecanetriol (S1140B-9),
O-β-D-galactofuranosyl- (1 → 3) -O-α-D-galactopyranosyl- (1 → 1)-(2S, 3S, 4R) -2-amino-N-[(R ) -2-Hydroxytetracosanoyl] -1,3,4-octadecanetriol (719-7), and O- (N-acetyl-2-amino-2-deoxy-α-D-calactopyranosyl- ( 1 → 3) -O- [α-D-glucopyranosyl- (1 → 2)]-O-α-D-galactopyranosyl- (1 → 1)-(2S, 3S, 4R) -2-amino- N-[(R) -2-hydroxytetracosanoyl] -1,3,4-octadecanetriol (STL-8)
Is mentioned.
本発明による治療剤の有効成分として特に好ましい化合物は、
（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−（α−Ｄ−ガラクトピラノシルオキシ）−２−ヘキサコサノイルアミノ−３，４−オクタデカンジオール（ＫＲＮ７０００）である。
Particularly preferred compounds as the active ingredient of the therapeutic agent according to the present invention include:
(2S, 3S, 4R) -1- (α-D-galactopyranosyloxy) -2-hexacosanoylamino-3,4-octadecanediol (KRN7000).
式（Ｉ）の化合物は、薬学上許容される非毒性塩であることができる。式（Ｉ）の化合物の塩としては、酸付加塩、例えば、無機酸（例えば塩酸、硫酸、硝酸、リン酸）との塩、あるいは有機酸（例えば、酢酸、プロピオン酸、マレイン酸、オレイン酸、パルミチン酸、クエン酸、コハク酸、酒石酸、フマル酸、グルタミン酸、パントテン酸、ラウリルスルホン酸、メタンスルホン酸およびフタル酸）との塩が挙げられる。 化合物 The compound of formula (I) can be a pharmaceutically acceptable non-toxic salt. Salts of the compounds of formula (I) include acid addition salts, for example, salts with inorganic acids (eg, hydrochloric acid, sulfuric acid, nitric acid, phosphoric acid) or organic acids (eg, acetic acid, propionic acid, maleic acid, oleic acid) , Palmitic acid, citric acid, succinic acid, tartaric acid, fumaric acid, glutamic acid, pantothenic acid, laurylsulfonic acid, methanesulfonic acid and phthalic acid).
式（Ｉ）の化合物は溶媒和物（例えば、水和物）であることができる。 化合物 The compound of formula (I) can be a solvate (eg, hydrate).
式（Ｉ）の化合物は、α−グリコシルセラミドを合成するための合目的的な任意の方法により製造することができる。 化合物 Compounds of formula (I) can be prepared by any suitable method for synthesizing α-glycosylceramide.
まず、Ｄ−リキソースを出発物質としてセラミド部分を合成し、次いで、このセラミドに糖を導入することによって、式（Ｉ）の化合物を調製することができる。このようなα−グリコシルセラミドの一般的な合成方法については、例えば、ＷＯ９３／５０５５号、ＷＯ９４／２１６８号、ＷＯ９４／９０２０号、およびＷＯ９４／２４１４２号を参照することができる。 (1) First, a compound of the formula (I) can be prepared by synthesizing a ceramide moiety using D-lyxose as a starting material, and then introducing a sugar into the ceramide. For a general method for synthesizing such α-glycosylceramide, for example, WO93 / 5055, WO94 / 2168, WO94 / 9020, and WO94 / 24142 can be referred to.
また、式（Ｉ）の化合物は、天然物（生物等）からカラムクロマトグラフィー等によって単離、精製することもできる。 化合物 Also, the compound of formula (I) can be isolated and purified from a natural product (such as an organism) by column chromatography or the like.
式（Ｉ）の化合物の用途
本発明による化合物の代表的化合物であるＫＲＮ７０００をＲＡＧ−１ＫＯ／Ｖα１４ｔｇ/ Ｖβ８．２ｔｇマウスに投与すると、ＮＫＴ細胞の腫瘍細胞に対する細胞障害活性を増強することを見出した（薬理試験例１）。
Use of Compound of Formula (I) It has been found that administration of KRN7000, a representative compound of the present invention, to RAG-1 KO / Vα14 tg / Vβ8.2 tg mice enhances the cytotoxic activity of NKT cells against tumor cells. (Pharmacological test example 1).
次いで、本発明者らは、α−グリコシルセラミドがＮＫＴ細胞、特にＶα１４＋ＮＫＴ細胞やＶα２４＋ＮＫＴ細胞、の数を顕著に増加させることを見出した（薬理試験例２、６、および９）。自己免疫疾患モデルマウスではＶα１４＋ＮＫＴ細胞が減少し、強皮症患者ではＶα２４＋ＪαＱαＴ細胞が消失し、Ｉ型糖尿病の進展した患者ではＶα２４＋ＮＫＴ細胞が極端に減少することが示唆されているように、原因遺伝子や遺伝的背景の異なる様々な自己免疫疾患において、マウスＶα１４＋ＮＫＴ細胞やヒトＶα２４＋ＮＫＴ細胞が関与していることが示されている（Mieza, M. A. et al., J. Immunol.,156, 4035 (1996)；Makino, Y.et al., Clin. Immunol., 28, 1487 (1996) ；Sumida,T. et al., J. Exp. Med., 182,1163 (1995); Wilson et al., Nature,391,177(1998)）。また、本発明者らは、ヒト全身性エリテマトーデスのモデルマウスであると考えられるＭＲＬ ｌｐｒ／ｌｐｒマウス(Sakamoto, A. Clin. Immunol., 28, 1558 (1996)) にＫＲＮ７０００を投与したところ、腋下および鼠径部のリンパ節の異常腫脹 （異常リンパ球の集積）が抑制された（薬理試験例３）。リンパ節の異常腫脹はＭＲＬ ｌｐｒ／ｌｐｒマウスにおいて加齢に伴って観察される特徴的な症状である。 Next, the present inventors have found that α-glycosylceramide significantly increases the number of NKT cells, particularly Vα14 + NKT cells and Vα24 + NKT cells (Pharmacological Test Examples 2, 6, and 9). It has been suggested that Vα14 + NKT cells decrease in autoimmune disease model mice, Vα24 + JαQαT cells disappear in scleroderma patients, and Vα24 + NKT cells decrease extremely in patients with advanced type I diabetes. Thus, mouse Vα14 + NKT cells and human Vα24 + NKT cells have been shown to be involved in various autoimmune diseases having different causative genes and genetic backgrounds (Mieza, MA et al., J. Am. Immunol., 156, 4035 (1996); Makino, Y. et al., Clin. Immunol., 28, 1487 (1996); Sumida, T. et al., J. Exp. Med., 182, 1163 (1995). ); Wilson et al., Nature, 391, 177 (1998)). Further, the present inventors administered KRN7000 to MRL lpr / lpr mice (Sakamoto, A. Clin. Immunol., 28, 1558 (1996)), which are considered to be model mice of human systemic lupus erythematosus, Abnormal swelling of the lower and inguinal lymph nodes (accumulation of abnormal lymphocytes) was suppressed (Pharmacological Test Example 3). Abnormal lymph node swelling is a characteristic symptom observed with age in MRL lpr / lpr mice.
従って、本発明の第一の面として、式（Ｉ）の化合物またはその塩もしくは溶媒和物はＮＫＴ細胞活性化剤として用いることができる。ここで「ＮＫＴ細胞」は、ヒトＶα２４＋ＮＫＴ細胞およびマウスＶα１４＋ＮＫＴ細胞を含む。ヒトＶα２４＋ＮＫＴ細胞はヒトＶα２４ＪαＱαＴ細胞のサブセットであり、Ｖα２４＋ダブルネガティブ（ＣＤ４−ＣＤ８−）Ｔ細胞（Dellabona, P. et al.,J.Exp. Med.,180,1171(1994)）と同義である。また、「ＮＫＴ細胞活性化」は細胞障害活性の増強およびＮＫＴ細胞の増殖促進を含む。 Thus, as a first aspect of the present invention, a compound of formula (I) or a salt or solvate thereof can be used as an NKT cell activator. Here, “NKT cells” include human Vα24 + NKT cells and mouse Vα14 + NKT cells. Human Vα24 + NKT cells are a subset of human Vα24JαQαT cells and include Vα24 + double negative (CD4 - CD8 − ) T cells (Dellabona, P. et al., J. Exp. Med., 180,1171 (1994)). Synonymous. "NKT cell activation" includes enhancement of cytotoxic activity and promotion of NKT cell proliferation.
本発明の第二の面として、式（Ｉ）の化合物またはその塩もしくは溶媒和物は自己免疫疾患治療剤として用いることができる。本発明において、「自己免疫疾患」とは、全身性エリテマトーデス、全身性強皮症、潰瘍性大腸炎、多発性硬化症、脳脊髄炎、Ｉ型糖尿病、慢性関節リュウマチ、シェーグレン症候群、原発性胆汁性肝硬変、特発性血小板減少性紫班病、自己免疫性溶血性貧血、重症筋無力症、交感性眼炎、Goodpasture 症候群（例えば、糸球体腎炎）、悪性貧血、および橋本病を含む。また、本明細書において、「治療」とは「予防」を含む。 と し て As a second aspect of the present invention, the compound of formula (I) or a salt or solvate thereof can be used as a therapeutic agent for autoimmune diseases. In the present invention, "autoimmune disease" refers to systemic lupus erythematosus, systemic scleroderma, ulcerative colitis, multiple sclerosis, encephalomyelitis, type I diabetes, rheumatoid arthritis, Sjogren's syndrome, primary bile Includes cirrhosis, idiopathic thrombocytopenic purpura, autoimmune hemolytic anemia, myasthenia gravis, sympathetic ophthalmitis, Goodpasture syndrome (eg, glomerulonephritis), pernicious anemia, and Hashimoto's disease. Further, in the present specification, “treatment” includes “prevention”.
式（Ｉ）の化合物およびＩＬ−１２は、妊娠マウスの流産を促進する（薬理試験例１０）。従って、本発明の第三の面として、式（Ｉ）の化合物またはその塩もしくは溶媒和物およびＩＬ−１２は堕胎剤として用いることができる。式（Ｉ）の化合物およびＩＬ−１２は妊娠動物だけでなく、妊娠する可能性のある動物にも投与することができる。妊娠する可能性のある動物にあらかじめ式（Ｉ）の化合物またはＩＬ−１２を投与することにより妊娠を阻止することができる。従って、「堕胎剤」とは「避妊剤」を含む意味で用いられる。 化合物 The compound of formula (I) and IL-12 promote abortion in pregnant mice (Pharmacological Test Example 10). Thus, as a third aspect of the present invention, the compound of formula (I) or a salt or solvate thereof and IL-12 can be used as an abortion agent. The compound of formula (I) and IL-12 can be administered not only to pregnant animals, but also to animals that may become pregnant. Pregnancy can be prevented by pre-administering a compound of formula (I) or IL-12 to animals that may become pregnant. Therefore, the term “abortion agent” is used to mean “contraceptive agent”.
式（Ｉ）の化合物またはその塩もしくは溶媒和物およびＩＬ−１２は、治療方法、投与方法、および投与目的によって決まる適当な剤型、具体的には、注射剤、懸濁剤、乳化剤、軟膏剤、クリーム剤錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、丸剤、細粒剤、トローチ錠、直腸投与剤、油脂性坐剤、水溶性坐剤等の製剤、に処方することができる。 The compound of the formula (I) or a salt or solvate thereof and IL-12 can be used in an appropriate dosage form determined by a treatment method, an administration method, and an administration purpose, specifically, an injection, a suspension, an emulsifier, an ointment. Formulations, tablets, capsules, granules, powders, pills, fine granules, troches, rectum, oily suppositories, water-soluble suppositories and the like.
これらの各種製剤は、下記の薬学上許容される担体等を用いて常法により製造することができる：賦形剤、例えば、溶剤（例えば、水、生理食塩水）、増量剤および充てん剤（例えば、乳糖、デンプン、結晶セルロース、マンニトール、マルトース、リン酸水素カルシウム、軟質無水ケイ酸、炭酸カルシウム）；補助剤、例えば、可溶化剤（例えば、エタノール、ポリソルベート剤）、結合剤（例えば、デンプン、ポリビニルピロリドン、ヒドロキシプロピルセルロース、エチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、アラビアゴム）、崩壊剤（例えば、デンプン、カルボキシメチルセルロースカルシウム）、滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク、硬化油）、安定剤（例えば、乳糖、マンニトール、マルトース、ポリソルベート類、マクロゴール類、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油）、等張化剤、湿潤化剤、潤滑剤、分散剤、緩衝剤、溶解補助剤；添加剤、例えば、抗酸化剤、保存剤、矯味矯臭剤、無痛化剤、安定化剤、着色剤、および甘味剤。 These various preparations can be manufactured by a conventional method using the following pharmaceutically acceptable carriers and the like: excipients such as solvents (eg, water and physiological saline), bulking agents and fillers ( Lactose, starch, microcrystalline cellulose, mannitol, maltose, calcium hydrogen phosphate, soft silicic anhydride, calcium carbonate); adjuvants, such as solubilizers (eg, ethanol, polysorbate), binders (eg, starch) , Polyvinylpyrrolidone, hydroxypropylcellulose, ethylcellulose, carboxymethylcellulose, gum arabic), disintegrants (eg, starch, carboxymethylcellulose calcium), lubricants (eg, magnesium stearate, talc, hardened oil), stabilizers (eg, Lactose, mannitol, maltose, poly Rubates, macrogol, polyoxyethylene hydrogenated castor oil), tonicity agent, wetting agent, lubricant, dispersant, buffer, solubilizing agent; additive, for example, antioxidant, preservative, flavor Flavoring, soothing, stabilizing, coloring, and sweetening agents.
また、各種製剤には、必要に応じて、グリセリン、ジメチルアセトアミド、 ７０％乳酸ナトリウム、界面活性剤、塩基性物質（例えば、エチレンジアミン、エタノールアミン、炭酸ナトリウム、アルギニン、メグルミン、トリスアミノメタン）を添加することもできる。 In addition, glycerin, dimethylacetamide, 70% sodium lactate, a surfactant, and basic substances (eg, ethylenediamine, ethanolamine, sodium carbonate, arginine, meglumine, trisaminomethane) are added to various preparations as necessary. You can also.
本発明において、式（Ｉ）の化合物およびＩＬ−１２は、合目的な任意の投与経路、具体的は、動物の場合には、腹腔内投与、皮下投与、静脈または動脈への血管内投与、注射による局所投与などの方法が可能である。また、ヒトの場合には、静脈内投与、動脈内投与、注射による局所投与、腹腔または胸腔への投与、皮下投与、筋肉内投与、舌下投与、経皮吸収または直腸内投与により投与することができる。静脈内投与がもっとも好ましい。 In the present invention, the compound of formula (I) and IL-12 can be administered by any suitable route of administration, in particular in the case of animals, intraperitoneal, subcutaneous, intravenous into the vein or artery, Methods such as local administration by injection are possible. In the case of humans, administration by intravenous administration, intraarterial administration, local administration by injection, intraperitoneal or pleural administration, subcutaneous administration, intramuscular administration, sublingual administration, transdermal absorption or rectal administration Can be. Intravenous administration is most preferred.
本発明による治療剤における各有効成分は、個々の状況に応じて連続的または間欠的に投与できる。具体的な投与量は、投与方法、患者の諸条件、たとえば、年齢、体重、性別、感受性、投与時間、併用薬剤などにより変化する。一般に、式（Ｉ）の化合物およびＩＬ−１２の投与量は、例えば、静脈内投与では、ヒト成人に対して１日あたり０．００１〜１０ｍｇ程度、好ましくは、０．０１〜１ｍｇ、である。式（Ｉ）の化合物は、凍結乾燥製剤にするのが好ましく、投与直前に注射用蒸留水等で溶解し、患者に投与するのが好ましい。 各 Each active ingredient in the therapeutic agent according to the present invention can be administered continuously or intermittently according to individual circumstances. The specific dosage varies depending on the administration method and various conditions of the patient, for example, age, body weight, sex, sensitivity, administration time, concomitant drug, and the like. Generally, the dose of the compound of formula (I) and IL-12 is, for example, about 0.001 to 10 mg, preferably 0.01 to 1 mg per day for a human adult in intravenous administration. . The compound of the formula (I) is preferably in the form of a lyophilized preparation, and is preferably dissolved in distilled water for injection immediately before administration and administered to a patient.
本発明によれば、式（Ｉ）の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を、ヒトを含む哺乳動物に投与することを含む自己免疫疾患の治療法が提供される。 According to the present invention, there is provided a method for treating an autoimmune disease comprising administering a compound of the formula (I) or a salt or solvate thereof to a mammal including a human.
本発明によれば、また、式（Ｉ）の化合物またはその塩もしくは溶媒和物により活性化されたＮＫＴ細胞（活性化ＮＫＴ細胞）をヒトを含む哺乳動物に投与することを含む、自己免疫疾患の治療法が提供される。 According to the present invention, there is also provided an autoimmune disease comprising administering NKT cells (activated NKT cells) activated by a compound of the formula (I) or a salt or solvate thereof to mammals including humans. Is provided.
活性化ＮＫＴ細胞は、ＮＫＴ細胞を式（Ｉ）の化合物またはその塩もしくは溶媒和物の存在下インビトロで培養することにより得ることができる。また、式 （Ｉ）の化合物を投与した哺乳動物の体内から活性化ＮＫＴ細胞を単離することによって得てもよい。 Activated NKT cells can be obtained by culturing NKT cells in vitro in the presence of the compound of formula (I) or a salt or solvate thereof. Alternatively, it may be obtained by isolating activated NKT cells from the body of a mammal to which the compound of formula (I) has been administered.
式（Ｉ）の化合物とともにインビトロで培養するＮＫＴ細胞は、健常人から単離されたものであってもよく、また患者または患者であると疑われる者から単離されたものであってもよい。ヒトを治療する場合、ＮＫＴ細胞はヒトＶα２４＋ＮＫＴ細胞であることが好ましい。 NKT cells cultured in vitro with a compound of formula (I) may be isolated from a healthy individual or may be isolated from a patient or a suspected patient. . When treating humans, the NKT cells are preferably human Vα24 + NKT cells.
活性化ＮＫＴ細胞の哺乳動物への投与は、活性化ＮＫＴ細胞を哺乳動物の体内、例えば、静脈内に移植することにより行うことができる。 投 与 Administration of activated NKT cells to a mammal can be performed by transplanting the activated NKT cells into a mammal, for example, into a vein.
本発明によれば、ＮＫＴ細胞を式（Ｉ）の化合物またはその塩もしくは溶媒和物の存在下インビトロで培養することを含む、ＮＫＴ細胞の活性化法が提供される。 According to the present invention, there is provided a method for activating NKT cells, comprising culturing NKT cells in vitro in the presence of the compound of the formula (I) or a salt or solvate thereof.
本発明によれば、式（Ｉ）の化合物またはその塩もしくは溶媒和物あるいはＩＬ−１２を、ヒトを含む哺乳動物に投与することを含む堕胎法が提供される。 According to the present invention, there is provided an abortion method comprising administering a compound of the formula (I) or a salt or solvate thereof or IL-12 to a mammal including a human.
以下の実施例により本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。 The present invention will be described in detail with reference to the following examples, but the present invention is not limited to these examples.
化合物の合成および単離・精製
実施例１ （２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−１−（α−Ｄ−ガラクトピラノシルオキシ）−２−ヘキサコサノイルアミノ−３，４−オクタデカンジオール（ＫＲＮ７０００）の合成
合成工程は、図１０および１１に示される通りである。
Synthesis, Isolation and Purification of Compound Example 1 Preparation of (2S, 3S, 4R) -1- (α-D-galactopyranosyloxy) -2-hexacosanoylamino-3,4-octadecanediol (KRN7000) Synthesis The synthesis process is as shown in FIGS.
（１）化合物Ｇ１の合成
Ｄ−リキソース（２００ｇ、１．３３ｍｏｌ）に塩化カルシウムで乾燥したアセトン溶液（３．０Ｌ）に硫酸（０．５ｍＬ）を加え、１８時間室温で攪拌した。モレキュラーシーブス４Ａの粉末（１００ｇ）を加え、反応液を中和後、セライト濾過し、残渣をアセトンで洗浄した。濾液と洗液をあわせて減圧濃縮し、Ｇ１の粗生成物を得た。収量２４０ｇ（９５％）。これ以上の精製を行わずに次の工程に用いた。分析用のサンプルは、ヘキサン：アセトン（９：１）を溶出溶媒としてシリカゲルクロマトグラフィーにより精製した。
ｍｐ７６−７８℃；ＦＤＭＳ ｍ／ｚ １９１（Ｍ＋１）+ ；１Ｈ−ＮＭＲ （５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ５．４５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．８Ｈｚ），４．８３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．７，５．５Ｈｚ），４．６４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ），４．２７−４．３０（１Ｈ，ｍ），３．９０−３．９９（２Ｈ，ｍ），１．４８（３Ｈ，ｓ），１．３２（３Ｈ，ｓ）。
(1) Synthesis of Compound G1 Sulfuric acid (0.5 mL) was added to an acetone solution (3.0 L) dried with calcium chloride in D-lyxose (200 g, 1.33 mol), and the mixture was stirred at room temperature for 18 hours. The powder (100 g) of Molecular Sieves 4A was added, and the reaction solution was neutralized, filtered through celite, and the residue was washed with acetone. The filtrate and the washing solution were combined and concentrated under reduced pressure to obtain a crude product of G1. Yield 240 g (95%). Used for the next step without further purification. The sample for analysis was purified by silica gel chromatography using hexane: acetone (9: 1) as an elution solvent.
mp 76-78 ° C; FDMS m / z 191 (M + 1) + ; 1 H-NMR (500 MHz, CDCl 3 ) δ 5.45 (1H, d, J = 1.8 Hz), 4.83 (1H, dd, J = 3.7, 5.5 Hz), 4.64 (1H, d, J = 6.1 Hz), 4.27-4.30 (1H, m), 3.90-3.99 (2H, m), 1.48 (3H, s), 1.32 (3H, s).
（２）化合物Ｇ２の合成
化合物Ｇ１（２３９ｇ、約１．２６ｍｍｏｌ）の塩化メチレン溶液（１６８ｍｌ）に、ピリジン（１０ｍｌ）、塩化トリチル（３９．０ｇ）を加え、３２℃で４時間攪拌した。エタノール（８ｍｌ）を滴下し、室温で２時間攪拌した。飽和塩化アンモニウム水溶液、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、食塩水で洗浄後、減圧濃縮した。残渣は酢酸エチルに溶解し、０℃に冷却して結晶化した。収量５０１ｇ（Ｄ−リキソースより８７％）。
ｍｐ１７４−１７６℃；ＦＤＭＳ ｍ／ｚ ４３２Ｍ+ ；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．２１−７．４９（１５Ｈ，ｍ），５．３８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ），４．７５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．７，６．１Ｈｚ），４．５９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ），４．３１−４．３５（１Ｈ，ｍ），３．４３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝４．９，９．８Ｈｚ），３．３９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６．７，９．８Ｈｚ），１．２９（３Ｈ，ｓ），１．２８（３Ｈ，ｓ）。
(2) Synthesis of Compound G2 Pyridine (10 ml) and trityl chloride (39.0 g) were added to a methylene chloride solution (168 ml) of compound G1 (239 g, about 1.26 mmol), and the mixture was stirred at 32 ° C. for 4 hours. Ethanol (8 ml) was added dropwise, and the mixture was stirred at room temperature for 2 hours. The extract was washed with a saturated aqueous solution of ammonium chloride, a saturated aqueous solution of sodium hydrogen carbonate and brine, and then concentrated under reduced pressure. The residue was dissolved in ethyl acetate and cooled to 0 ° C. for crystallization. Yield 501 g (87% over D-lyxose).
mp174-176 ° C; FDMS m / z 432M + ; 1 H-NMR (500 MHz, CDCl 3 ) δ 7.21-7.49 (15H, m), 5.38 (1H, d, J = 2.4 Hz), 4.75 (1H, dd, J = 3.7, 6.1 Hz), 4.59 (1H, d, J = 6.1 Hz), 4.31-4.35 (1H, m), 3.43 (1H, dd, J = 4.9, 9.8 Hz), 3.39 (1H, dd, J = 6.7, 9.8 Hz), 1.29 (3H, s), 1.28 (3H, s).
（３）化合物Ｇ３の合成
トリデカントリフェニルホスホニウムブロミド（９６２ｇ、１．１６ｍｏｌ；１−ブロモトリデカン、トリフェニルホスフィンを４．５時間、１４０℃に加熱して調製した）のＴＨＦ溶液（１５００ｍｌ）に、アルゴン雰囲気下、ｎ−ブチルリチウムの２．５Ｍヘキサン溶液（４６２ｍＬ；３６６ｍｍｏｌ）を０℃で滴下した。滴下終了後、１５分間攪拌し、化合物Ｇ２（２５０ｇ、５７９ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（４５０ｍｌ）を滴下した。室温まで、徐々に温度を上げつつ１８時間攪拌した。反応液を減圧濃縮し、残渣にヘキサン：メタノール：水（１０：７：３、１０００ｍｌ）の混液を加え、飽和塩化アンモニウム水溶液で洗浄した。水層はヘキサン（５００ｍｌ）で抽出し、すべての有機層をあわせて無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、Ｇ３の粗生成物を得た。これ以上の精製を行わずに次の工程に用いた。収量３３９ｇ（９８％）。分析用のサンプルは、ヘキサン：酢酸エチル（９：１）を溶出溶媒としてシリカゲルクロマトグラフィーにより精製した。
ＦＤＭＳ ｍ／ｚ ５９８Ｍ+ ；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．２１−７．４５（１５Ｈ，ｍ），５．４８−５．５９（２Ｈ，ｍ），４．９１（０．７Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），４．４４（０．３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），４．２６（０．３Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝４．３，７．３Ｈｚ），４．２１（０．７Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝４．３，６．７Ｈｚ），３．７５（０．７Ｈ，ｍ），３．６９（０．３Ｈ，ｍ），３．２４（０．３Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝４．９，９．８Ｈｚ），３．１７（０．７Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝４．９，９．８Ｈｚ），３．０９−３．１４［１Ｈ，（３．１１，ｄｄ，Ｊ＝４．９，９．２Ｈｚ），Ｈ１ｂＥoverlapped］，１．７５−２．０３（２Ｈ，ｍ），１．４９（３Ｈ，ｓ），１．３９ａｎｄ１．３８ （３Ｈ，ｅａｃｈ ｓ），１．２１−１．３４（２０Ｈ，ｍ），０．８８（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ）。
(3) Synthesis of Compound G3 To a THF solution (1500 ml) of tridecanetriphenylphosphonium bromide (962 g, 1.16 mol; prepared by heating 1-bromotridecane and triphenylphosphine to 140 ° C. for 4.5 hours). Under an argon atmosphere, a 2.5 M hexane solution of n-butyllithium (462 mL; 366 mmol) was added dropwise at 0 ° C. After completion of the dropwise addition, the mixture was stirred for 15 minutes, and a THF solution (450 ml) of compound G2 (250 g, 579 mmol) was added dropwise. The mixture was stirred for 18 hours while gradually increasing the temperature to room temperature. The reaction solution was concentrated under reduced pressure, a mixture of hexane: methanol: water (10: 7: 3, 1000 ml) was added to the residue, and the mixture was washed with a saturated aqueous ammonium chloride solution. The aqueous layer was extracted with hexane (500 ml), and all the organic layers were combined, dried over anhydrous magnesium sulfate, and concentrated under reduced pressure to obtain a crude product of G3. Used for the next step without further purification. Yield 339 g (98%). The sample for analysis was purified by silica gel chromatography using hexane: ethyl acetate (9: 1) as an elution solvent.
FDMS m / z 598 M + ; 1 H-NMR (500 MHz, CDCl 3 ) δ 7.21-7.45 (15H, m), 5.48-5.59 (2H, m), 4.91 (0.7H) , T, J = 7.3 Hz), 4.44 (0.3 H, t, J = 7.3 Hz), 4.26 (0.3 H, dd, J = 4.3, 7.3 Hz), 4. 21 (0.7H, dd, J = 4.3, 6.7 Hz), 3.75 (0.7H, m), 3.69 (0.3H, m), 3.24 (0.3H, dd) , J = 4.9, 9.8 Hz), 3.17 (0.7 H, dd, J = 4.9, 9.8 Hz), 3.09-3.14 [1H, (3.11, dd, J = 4.9, 9.2 Hz), H1bEoverlapped], 1.75-2.03 (2H, m), 1.49 (3H, s), 1.39 and 1.38 (3H, each s) , 1.21-1.34 (20H, m), 0.88 (3H, t, J = 6.7Hz).
（４）化合物Ｇ４の合成
化合物Ｇ３（３３８ｇ、約５６５ｍｍｏｌ）の塩化メチレン溶液（１５００ｍｌ）にピリジン（５００ｍｌ）を加え、塩化メタンスルホニル（４９ｍｌ、６３３ｍｍｏｌ）を滴下し、３１℃で２４時間攪拌した。エタノール（４０ｍｌ）を滴下し、室温で１時間攪拌した。減圧濃縮後、残渣にヘキサン：メタノール：水（１０：７：３、１０００ｍｌ）の混液を加え、分液した。水層はヘキサン（２００ｍｌ）で３回抽出し、すべての有機層をあわせて無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、Ｇ４の粗生成物を得た。これ以上の精製を行わずに次の工程に用いた。収量３６３ｇ（９５％）。分析用のサンプルは、ヘキサン：酢酸エチル（９：１）を溶出溶媒としてシリカゲルクロマトグラフィーにより精製した。
ＦＤＭＳ ｍ／ｚ ６７６Ｍ+ ；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．２１−７．４７（１５Ｈ，ｍ），５．４１（０．７Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝５．５，９．２，１１．０Ｈｚ），５．３２（０．７Ｈ，ｂｔ，Ｊ＝１１．０Ｈｚ），５．２２（０．３Ｈ，ｂｄｄ，Ｊ＝９．２，１５．０Ｈｚ），５．０２（０．３Ｈ，ｄｔ，Ｊt ＝７．３Ｈｚ，Ｊd ＝１５．０Ｈｚ），４．８（０．７Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝３．１，５．５，７．９Ｈｚ），４．７３（０．７Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．５，９．８Ｈｚ），４．６４−４．６７（０．３Ｈ，ｍ），４．６１（０．３Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．５，９．２Ｈｚ），４．４８（０．７Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．５，７．９Ｈｚ），４．２２（０．３Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．５，９．２Ｈｚ），３．５５ （０．３Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝２．４，１１．６Ｈｚ），３．４５（０．７Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．２，１１．０Ｈｚ），３．０６−３．１２［４Ｈ，（３．１２，ｓ），（３．１１，ｓ），（３．０９，ｄｄ，Ｊ＝３．１，１１．０Ｈｚ）］，１．６６−１．８２（２Ｈ，ｍ），１．４７ａｎｄ１．４６（３Ｈ，ｅａｃｈ ｓ），１．３９（３Ｈ，ｓ），１．１３−１．３５（２０Ｈ，ｍ），０．８８（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ）。
(4) Synthesis of compound G4 To a methylene chloride solution (1500 ml) of compound G3 (338 g, about 565 mmol) was added pyridine (500 ml), methanesulfonyl chloride (49 ml, 633 mmol) was added dropwise, and the mixture was stirred at 31 ° C for 24 hours. Ethanol (40 ml) was added dropwise, and the mixture was stirred at room temperature for 1 hour. After concentration under reduced pressure, a mixed solution of hexane: methanol: water (10: 7: 3, 1000 ml) was added to the residue, and the mixture was separated. The aqueous layer was extracted three times with hexane (200 ml). All organic layers were combined, dried over anhydrous magnesium sulfate, and concentrated under reduced pressure to obtain a crude G4 product. Used for the next step without further purification. Yield 363 g (95%). The sample for analysis was purified by silica gel chromatography using hexane: ethyl acetate (9: 1) as an elution solvent.
FDMS m / z 676M + ; 1 H-NMR (500 MHz, CDCl 3 ) δ 7.21-7.47 (15H, m), 5.41 (0.7H, ddd, J = 5.5, 9.2). 11.0 Hz), 5.32 (0.7 H, bt, J = 11.0 Hz), 5.22 (0.3 H, bdd, J = 9.2, 15.0 Hz), 5.02 (0.3 H , Dt, J t = 7.3 Hz, J d = 15.0 Hz), 4.8 (0.7 H, ddd, J = 3.1, 5.5, 7.9 Hz), 4.73 (0.7 H) , Dd, J = 5.5, 9.8 Hz), 4.64-4.67 (0.3 H, m), 4.61 (0.3 H, dd, J = 5.5, 9.2 Hz), 4.48 (0.7H, dd, J = 5.5, 7.9 Hz), 4.22 (0.3H, dd, J = 5.5, 9.2 Hz), 3.55 (0.3H, dd J = 2.4, 11.6 Hz), 3.45 (0.7H, dd, J = 3.2, 11.0 Hz), 3.06-3.12 [4H, (3.12, s), (3.11, s), (3.09, dd, J = 3.1, 11.0 Hz)], 1.66-1.82 (2H, m), 1.47 and 1.46 (3H, each s ), 1.39 (3H, s), 1.13-1.35 (20H, m), 0.88 (3H, t, J = 6.8 Hz).
（５）化合物Ｇ５の合成
化合物Ｇ４（３６２ｇ、約５３６ｍｍｏｌ）の塩化メチレン溶液（１５００ｍｌ）にメタノール（３５０ｍｌ）を加え、これに濃塩酸（２００ｍｌ）を滴下し、５ｈ室温で攪拌した。反応液に炭酸水素ナトリウムを加えて中和後、濾過した。濾液を減圧濃縮し、残渣に酢酸エチルを加え、食塩水で洗浄した。水層は酢酸エチルで抽出し、すべての有機層をあわせて無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。ヘキサンより結晶化した。収量１６１ｇ（Ｇ２より７０％）。
ｍｐ６６−６７℃；ＦＤＭＳ ｍ／ｚ ３７７（Ｍ−Ｈ２Ｏ）+ ；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３＋Ｄ２Ｏ）δ５．８６（０．３Ｈ，ｄｔ，Ｊt ＝７．３Ｈｚ，Ｊd ＝１４．７Ｈｚ），５．７７（０．７Ｈ，ｄｔ，Ｊt ＝７．３，Ｊd ＝１０．４Ｈｚ），５．５５（０．３Ｈ，ｂｒ．ｄｄ，Ｊ＝７．３，１４．７Ｈｚ），５．４９（０．７Ｈ，ｂｔ，Ｊ＝９．８Ｈｚ），４．９１−４．９７（１Ｈ，ｍ），４．５１（０．７Ｈ，ｂｔ，Ｊ＝９．８Ｈｚ），４．１１（０．３Ｈ，ｂｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），３．９４−４．０３（２Ｈ，ｍ），３．６７−３．７３［１Ｈ，（３．７０，ｄｄ，Ｊ＝３．１，６．７Ｈｚ），（３．６９，ｄｄ，Ｊ＝３．１，７．３Ｈｚ）］，３．２０ａｎｄ３．１９（３Ｈ，ｅａｃｈｓ），２．０５−２．２２（２Ｈ，ｍ），１．２２−１．４３（２０Ｈ，ｍ），０．８８（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ）。
(5) Synthesis of Compound G5 Methanol (350 ml) was added to a methylene chloride solution (1500 ml) of compound G4 (362 g, about 536 mmol), and concentrated hydrochloric acid (200 ml) was added dropwise thereto, followed by stirring at room temperature for 5 hours. The reaction solution was neutralized with sodium hydrogen carbonate and filtered. The filtrate was concentrated under reduced pressure, ethyl acetate was added to the residue, and the mixture was washed with brine. The aqueous layer was extracted with ethyl acetate, and all the organic layers were combined, dried over anhydrous magnesium sulfate, and concentrated under reduced pressure. Crystallized from hexane. Yield 161 g (70% over G2).
FDMS m / z 377 (MH 2 O) + ; 1 H-NMR (500 MHz, CDCl 3 + D 2 O) δ 5.86 (0.3 H, dt, J t = 7.3 Hz, J d = 14.7 Hz), 5.77 (0.7 H, dt, J t = 7.3, J d = 10.4 Hz), 5.55 (0.3 H, br.dd, J = 7.3, 14.7 Hz), 5.49 (0.7 H, bt, J = 9.8 Hz), 4.91-4.97 (1 H, m), 4.51 (0.7 H, bt, J = 9.8 Hz) ), 4.11 (0.3H, bt, J = 7.3 Hz), 3.94-4.03 (2H, m), 3.67-3.73 [1H, (3.70, dd, J). = 3.1,6.7 Hz), (3.69, dd, J = 3.1,7.3 Hz)], 3.20 and 3.19 (3H, eachs), 2.05- .22 (2H, m), 1.22-1.43 (20H, m), 0.88 (3H, t, J = 6.7Hz).
（６）化合物Ｇ６の合成
化合物Ｇ５（１６０ｇ、４０５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ溶液（７８０ｍｌ）に５％パラジウム−硫酸バリウム（１６ｇ）を加え、反応容器を水素ガスで置換後、室温にて２０時間攪拌した。反応液をセライト濾過後、クロロホルム：メタノールの混液（１：１）で洗浄した。濾液と洗液をあわせ、減圧濃縮した。残渣は酢酸エチルより結晶化した。収量１４６ｇ（９１％）。
［α］23 Ｄ＋１２°（ｃ１，ＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨ＝１：１）；ｍｐ１２４−１２６℃；ＦＤＭＳ ｍ／ｚ ３９７（Ｍ＋１）+ ；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３／ＣＤ３ＯＤ＝１：１）δ４．９３−４．９６（１Ｈ，ｍ，Ｈ２），３．９１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６．７，１２．２Ｈｚ），３．８５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝４．９，１２．２Ｈｚ），３．５４−３．６０（１Ｈ，ｍ），３．５０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝１．８，８．５Ｈｚ），３．１９（３Ｈ，ｓ），１．７５−１．８３（１Ｈ，ｍ），１．５３−１．６２（１Ｈ，ｍ），１．２１−１．４５（２４Ｈ，ｍ），０．８９（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ）。
(6) Synthesis of compound G6 To a THF solution (780 ml) of compound G5 (160 g, 405 mmol) was added 5% palladium-barium sulfate (16 g). After the reaction vessel was replaced with hydrogen gas, the mixture was stirred at room temperature for 20 hours. The reaction solution was filtered through celite and washed with a mixed solution of chloroform: methanol (1: 1). The filtrate and the washing were combined and concentrated under reduced pressure. The residue was crystallized from ethyl acetate. Yield 146 g (91%).
[Α] 23 D + 12 ° (c1, CHCl 3 / MeOH = 1: 1); mp124-126 ° C .; FDMS m / z 397 (M + 1) + ; 1 H-NMR (500 MHz, CDCl 3 / CD 3 OD = 1 : 1) δ 4.93-4.96 (1H, m, H2), 3.91 (1H, dd, J = 6.7, 12.2 Hz), 3.85 (1H, dd, J = 4.9). , 12.2 Hz), 3.54-3.60 (1H, m), 3.50 (1H, dd, J = 1.8, 8.5 Hz), 3.19 (3H, s), 1.75 -1.83 (1H, m), 1.53-1.62 (1H, m), 1.21-1.45 (24H, m), 0.89 (3H, t, J = 6.7 Hz) .
（７）化合物Ｇ７の合成
化合物Ｇ６（１４５ｇ、３６５ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（１０００ｍｌ）にアジ化ナトリウム（４７ｇ、７３０ｍｍｏｌ）を加え、９５℃で４時間攪拌した。反応液を濃縮し、残渣に酢酸エチル（４５０ｍｌ）を加え、水洗した。水層は酢酸エチルで再抽出した。すべての有機層をあわせて食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥、減圧濃縮し、Ｇ７の粗生成物を得た。収量１２２ｇ（９７％）。これ以上の精製を行わずに次の工程に用いた。収量１２６ｇ（９５％）。分析用のサンプルは、ヘキサン：酢酸エチル（９：１）を溶出溶媒としてシリカゲルクロマトグラフィーにより精製した。
［α］23 Ｄ＋１６．５°（ｃ０．５，ＣＨＣｌ３−ＭｅＯＨ，１：１）；ｍｐ９２−９３℃；ＦＤＭＳ ｍ／ｚ ３４４（Ｍ＋１）+ ；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ３．９１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．７，１１．６Ｈｚ），３．７５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．９，１１．６Ｈｚ），３．４９−３．６１（３Ｈ，ｍ），１．５０−１．７１（２Ｈ，ｍ），１．２２−１．４６（２４Ｈ，ｍ），０．９０（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ）。
(7) Synthesis of Compound G7 To a DMF solution (1000 ml) of compound G6 (145 g, 365 mmol) was added sodium azide (47 g, 730 mmol), and the mixture was stirred at 95 ° C for 4 hours. The reaction solution was concentrated, ethyl acetate (450 ml) was added to the residue, and the mixture was washed with water. The aqueous layer was re-extracted with ethyl acetate. All organic layers were combined, washed with brine, dried over anhydrous magnesium sulfate, and concentrated under reduced pressure to obtain a crude G7 product. Yield 122 g (97%). Used for the next step without further purification. Yield 126 g (95%). The sample for analysis was purified by silica gel chromatography using hexane: ethyl acetate (9: 1) as an elution solvent.
[Α] 23 D + 16.5 ° (c0.5, CHCl 3 -MeOH, 1: 1); mp 92-93 ° C .; FDMS m / z 344 (M + 1) + ; 1 H-NMR (500 MHz, CD 3 OD) δ 3.91 (1H, dd, J = 3.7, 11.6 Hz), 3.75 (1H, dd, J = 7.9, 11.6 Hz), 3.49-3.61 (3H, m) , 1.50-1.71 (2H, m), 1.22-1.46 (24H, m), 0.90 (3H, t, J = 6.7 Hz).
（８）化合物Ｇ８の合成
化合物Ｇ７（１２１ｇ、約３５２ｍｍｏｌ）の塩化メチレン溶液（７５０ｍｌ）にピリジン（２５０ｍｌ）、塩化トリチル（１２４ｇ、４４５ｍｍｏｌ）を加え、室温で１６時間攪拌した。エタノール（３０ｍｌ）を滴下し、室温で３０分間攪拌した後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、飽和塩化アンモニウム水溶液、食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥、減圧濃縮した。残渣は、ヘキサン：酢酸エチル（１０：１）を溶出溶媒としてシリカゲルクロマトグラフィーにより精製した。収量３４．４ｇ（Ｇ６より５２％）。
［α］24 Ｄ＋１１．９°（ｃ０．９，ＣＨＣｌ３），ＦＤＭＳ ｍ／ｚ ５８５Ｍ+ ；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３＋Ｄ２Ｏ）δ７．２４−７．６１（１５Ｈ，ｍ），３．６２−３．６６（２Ｈ，ｍ），３．５１−３．５７ （２Ｈ，ｍ），３．４２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６．０，１０．４Ｈｚ），１．２３−１．５６（２６Ｈ，ｍ），０．８８（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ）。
(8) Synthesis of Compound G8 To a solution of Compound G7 (121 g, about 352 mmol) in methylene chloride (750 ml) was added pyridine (250 ml) and trityl chloride (124 g, 445 mmol), and the mixture was stirred at room temperature for 16 hours. Ethanol (30 ml) was added dropwise, and the mixture was stirred at room temperature for 30 minutes, washed with a saturated aqueous solution of sodium hydrogencarbonate, a saturated aqueous solution of ammonium chloride, and brine, dried over anhydrous magnesium sulfate, and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by silica gel chromatography using hexane: ethyl acetate (10: 1) as an eluent. Yield 34.4 g (52% over G6).
[Α] 24 D + 11.9 ° (c 0.9, CHCl 3 ), FDMS m / z 585 M + ; 1 H-NMR (500 MHz, CDCl 3 + D 2 O) δ 7.24-7.61 (15H, m) , 3.62-3.66 (2H, m), 3.51-3.57 (2H, m), 3.42 (1H, dd, J = 6.0, 10.4 Hz), 1.23- 1.56 (26H, m), 0.88 (3H, t, J = 6.7 Hz).
（９）化合物Ｇ９の合成
化合物Ｇ８（３３．５ｇ、５７．３ｍｍｏｌ）のＤＭＦ溶液（３００ｍｌ）に６０％水素化ナトリウム（５．５ｇ、ＮａＨとして約１３８ｍｍｏｌ）を加え、室温で４０分間攪拌した。反応液を０℃に冷却し、臭化ベンジル（１５ｍｌ、１２０ｍｍｏｌ）を滴下した。室温まで徐々に温度をあげながら１８時間攪拌した。反応液に氷水（１００ｍｌ）を加えて、反応を停止した後、酢酸エチルを用いて抽出した。抽出液は食塩水で３回洗浄し、すべての有機層をあわせて無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、Ｇ９の粗生成物を得た。これ以上の精製を行わずに次の工程に用いた。収量４２．２ｇ（９６％）。分析用のサンプルは、ヘキサン：酢酸エチル（１００：１）を溶出溶媒としてシリカゲルクロマトグラフィーにより精製した。
［α］24 Ｄ＋９．８°（ｃ１．０，ＣＨＣｌ３），ＦＤＭＳ ｍ／ｚ ７３８（Ｍ−Ｎ２）+ ；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．０７−７．４８（２５Ｈ，ｍ），４．５７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ），４．４４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ），４．４１（２Ｈ，ｓ），３．７３−３．７９（１Ｈ，ｍ），３．４６−３．５６（２Ｈ，ｍ），３．３７（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．６，１０．４Ｈｚ），１．２０−１．６４（２６Ｈ，ｍ），０．８８（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ）。
(9) Synthesis of compound G9 To a DMF solution (300 ml) of compound G8 (33.5 g, 57.3 mmol) was added 60% sodium hydride (5.5 g, about 138 mmol as NaH), and the mixture was stirred at room temperature for 40 minutes. The reaction was cooled to 0 ° C. and benzyl bromide (15 ml, 120 mmol) was added dropwise. The mixture was stirred for 18 hours while gradually raising the temperature to room temperature. Ice water (100 ml) was added to the reaction solution to stop the reaction, and the mixture was extracted with ethyl acetate. The extract was washed three times with a saline solution, and all the organic layers were combined, dried over anhydrous magnesium sulfate, and concentrated under reduced pressure to obtain a crude G9 product. Used for the next step without further purification. Yield 42.2 g (96%). A sample for analysis was purified by silica gel chromatography using hexane: ethyl acetate (100: 1) as an elution solvent.
[Α] 24 D + 9.8 ° (c1.0, CHCl 3 ), FDMS m / z 738 (M-N 2 ) + ; 1 H-NMR (500 MHz, CDCl 3 ) δ 7.07 to 7.48 (25H) , M), 4.57 (1H, d, J = 11.6 Hz), 4.44 (1H, d, J = 11.6 Hz), 4.41 (2H, s), 3.73-3.79. (1H, m), 3.46-3.56 (2H, m), 3.37 (1H, dd, J = 8.6, 10.4 Hz), 1.20-1.64 (26H, m) , 0.88 (3H, t, J = 6.7 Hz).
（10）化合物Ｇ１０およびＧ１１の合成
化合物Ｇ９（４１．２ｇ、約５４ｍｍｏｌ）の１−プロパノール溶液（２５０ｍｌ）にメタノール（３０ｍｌ）を加え、更に５％パラジウム炭素（４．１ｇ）、蟻酸アンモニウム（２７．１ｇ、４．３ｍｏｌ）を加えた。室温で１６時間攪拌後、酢酸エチルで希釈し、セライト濾過した。濾液を減圧濃縮し、酢酸エチルで溶解後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、食塩水で３回洗浄し、すべての有機層をあわせて無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、Ｇ１０の粗生成物を得た。収量３８．９ｇ（９８％）。得られたＧ１０は、これ以上の精製を行わずに次の工程に用いた。
(10) Synthesis of compounds G10 and G11 To a solution of compound G9 (41.2 g, about 54 mmol) in 1-propanol (250 ml) was added methanol (30 ml), and further 5% palladium on carbon (4.1 g) and ammonium formate (27 g). .1 g, 4.3 mol). After stirring at room temperature for 16 hours, the mixture was diluted with ethyl acetate and filtered through celite. The filtrate was concentrated under reduced pressure, dissolved in ethyl acetate, washed three times with a saturated aqueous solution of sodium hydrogen carbonate and brine, and the combined organic layers were dried over anhydrous magnesium sulfate and concentrated under reduced pressure to obtain a crude product of G10. Obtained. Yield 38.9 g (98%). The obtained G10 was used in the next step without further purification.
化合物Ｇ１０の塩化メチレン溶液（３００ｍｌ）に、ヘキサコサン酸（２２．４ｇ、５６．５ｍｍｏｌ）、ＷＳＣ塩酸塩（１２．６ｇ、６４．６ｍｍｏｌ）を加え、２時間加熱還流した。室温まで冷却後、減圧濃縮した。残渣に酢酸エチル（５００ｍｌ）を加え、０．５Ｍ塩酸水溶液、食塩水、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、更に食塩水で洗浄した。すべての有機層をあわせて無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮し、Ｇ１１の粗生成物を得た。収量５３．２ｇ（８８％）。得られたＧ１１は、これ以上の精製を行わずに次の工程に用いた。分析用のサンプルは、ヘキサン：酢酸エチル（１００：１）を溶出溶媒としてシリカゲルクロマトグラフィーにより精製した。
［α］24 Ｄ＋５．３°（ｃ０．４，ＣＨＣｌ３）；ＦＤＭＳ ｍ／ｚ １１１８Ｍ+ ；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．２０−７．３８（２５Ｈ，ｍ），５．５７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ），４．８０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ），４．４８−４．５０（３Ｈ，ｍ），４．２４−４．３２（１Ｈ，ｍ），３．８３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．０，６．７Ｈｚ），３．４３−３．５１（２Ｈ，ｍ，Ｈ１ａ），３．２９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝４．３，９．８Ｈｚ），１．９２（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），１．２８−１．６０（７２Ｈ，ｍ），０．８８（６Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ）。
Hexacosanoic acid (22.4 g, 56.5 mmol) and WSC hydrochloride (12.6 g, 64.6 mmol) were added to a methylene chloride solution (300 ml) of compound G10, and the mixture was heated under reflux for 2 hours. After cooling to room temperature, the mixture was concentrated under reduced pressure. Ethyl acetate (500 ml) was added to the residue, and the mixture was washed with a 0.5 M aqueous hydrochloric acid solution, brine, a saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution, and further brine. All the organic layers were combined, dried over anhydrous magnesium sulfate, and concentrated under reduced pressure to obtain a crude product of G11. Yield 53.2 g (88%). The obtained G11 was used in the next step without further purification. A sample for analysis was purified by silica gel chromatography using hexane: ethyl acetate (100: 1) as an elution solvent.
[Α] 24 D + 5.3 ° (c0.4, CHCl 3 ); FDMS m / z 1118 M + ; 1 H-NMR (500 MHz, CDCl 3 ) δ 7.20-7.38 (25H, m), 5. 57 (1H, d, J = 9.1 Hz), 4.80 (1H, d, J = 11.6 Hz), 4.48-4.50 (3H, m), 4.24-4.32 (1H , M), 3.83 (1H, dd, J = 3.0, 6.7 Hz), 3.43-3.51 (2H, m, H1a), 3.29 (1H, dd, J = 4. 3,9.8 Hz), 1.92 (2H, t, J = 7.3 Hz), 1.28-1.60 (72H, m), 0.88 (6H, t, J = 6.7 Hz).
（11）化合物Ｇ１２の合成
化合物Ｇ１１（５２．２ｇ、約４７ｍｍｏｌ）の塩化メチレン溶液（１８０ｍｌ）にメタノール（３６ｍｌ）を加え、次いで１０％塩酸メタノール溶液（３．０ｍｌ）を滴下し、室温で２時間攪拌した。反応液は粉状の炭酸水素ナトリウム（１８ｇ）で中和し、セライト濾過した。残渣は塩化メチレンで洗浄した。濾液と洗液をあわせ、食塩水で洗浄し、有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥後、減圧濃縮した。残渣をアセトンに加熱溶解し、０℃に冷却して沈殿化により精製した。収量３８．６ｇ（Ｇ９より７７％）。
［α］24 Ｄ−２９．７°（ｃ０．７，ＣＨＣｌ３）；ｍｐ７５−７６．５℃；ＦＤＭＳ ｍ／ｚ ８７６Ｍ+ ；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．３０−７．４７（１０Ｈ，ｍ），６．０３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ），４．７２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ），４．６６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ），４．６１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ），４．４５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ），４．１２−４．１７（１Ｈ，ｍ），４．００（１Ｈ，ｄｔ，Ｊt ＝４．３，Ｊd ＝７．３Ｈｚ），３．６７−３．７２（２Ｈ，ｍ），３．６１（１Ｈ，ｄｄｄ，Ｊ＝４．３，８．６，１１．６Ｈｚ），１．９４−２．０５ （２Ｈ，ｍ），１．１５−１．６９（７２Ｈ，ｍ），０．８８（６Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．１Ｈｚ）。
(11) Synthesis of compound G12 To a methylene chloride solution (180 ml) of compound G11 (52.2 g, about 47 mmol) was added methanol (36 ml), and then a 10% methanolic hydrochloric acid solution (3.0 ml) was added dropwise. Stirred for hours. The reaction solution was neutralized with powdery sodium hydrogen carbonate (18 g) and filtered through celite. The residue was washed with methylene chloride. The filtrate and the washing solution were combined, washed with brine, and the organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate and concentrated under reduced pressure. The residue was dissolved by heating in acetone, cooled to 0 ° C., and purified by precipitation. Yield 38.6 g (77% over G9).
[Α] 24 D −29.7 ° (c0.7, CHCl 3 ); mp 75-76.5 ° C .; FDMS m / z 876 M + ; 1 H-NMR (500 MHz, CDCl 3 ) δ 7.30-7.47 (10H, m), 6.03 (1H, d, J = 7.9 Hz), 4.72 (1H, d, J = 11.6 Hz), 4.66 (1H, d, J = 11.6 Hz) , 4.61 (1H, d, J = 11.6 Hz), 4.45 (1H, d, J = 11.6 Hz), 4.12-4.17 (1H, m), 4.00 (1H, dt, J t = 4.3, J d = 7.3Hz), 3.67-3.72 (2H, m), 3.61 (1H, ddd, J = 4.3,8.6,11. 6 Hz), 1.94-2.05 (2H, m), 1.15-1.69 (72H, m), 0.88 (6H, t, J = 6.1 Hz).
（12）化合物Ｇ１３の合成
1) ２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−Ｄ−ガラクトピラノシルアセテート（７９．８ｇ）をトルエン（１６０ｍｌ）およびイソプロピルエーテル（５２０ｍｌ）の混液に溶解し、−１０〜０℃に冷却した。これに、２．０等量のＨＢｒを含むイソプロピルエーテル溶液を加えた（２．８ｍｍｏｌ／ｍｌ、約１００ｍｌ）。−１０〜０℃で約９０分間攪拌後、反応液に５％炭酸水素ナトリウム水溶液を注ぎ、攪拌して過剰のＨＢｒを中和した。全量を分液ロートに移して分液後、水層を廃棄し、１０％塩化ナトリウム水溶液で２回洗浄した。減圧濃縮して２，３，４，６−テトラ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−ガラクトピラノシルブロミド（Ｇａ１Ｂｒ）のシロップを得た。
2) 化合物Ｇ１２（６０．０ｇ、６８．６ｍｍｏｌ）、テトラヘキシルアンモニウムブロミド（８９．４ｇ、２０６ｍｍｏｌ）、モレキュラーシーブス４Ａ （６０ｇ）のトルエン溶液（４２０ｍｌ）に、ＤＭＦ（１４０ｍｌ）次いで、Ｇａ１Ｂｒ（約１３７ｍｍｏｌ）のトルエン溶液（２５０ｍｌ）を加え、室温で７２時間攪拌した。反応液にメタノール（１２ｍｌ）を加え、２時間攪拌した。セライト濾過後、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、食塩水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、減圧濃縮した。残渣にアセトニトリルを加え、２時間攪拌し、沈殿を得た。得られた沈殿を減圧乾燥し、乾燥粉体を得た。これをヘキサン：酢酸エチル（８：１）を溶出溶媒としてシリカゲルクロマトグラフィーにより精製した。収量７０．９ｇ（７４％）。
［α］24 Ｄ＋１８．８°（ｃ０．９，ＣＨＣｌ３）；ｍｐ７４−７５℃；ＦＤＭＳ ｍ／ｚ １３９９（Ｍ＋１）+ ；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ７．２１−７．３７（３０Ｈ，ｍ），６．１２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），４．９１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ），４．８４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ），４．７２−４．８０（４Ｈ，ｍ），４．３５−４．６５（７Ｈ，ｍ），４．１２−４．１８（１Ｈ，ｍ），３．９９−４．０５（２Ｈ，ｍ），３．８４−３．９３（４Ｈ，ｍ），３．７３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．７，１１．０Ｈｚ），３．４７−３．５１（２Ｈ，ｍ），３．４２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝６．１，９．１Ｈｚ），１．８７−１．９９（２Ｈ，ｍ），１．１８−１．７０（７２Ｈ，ｍ），０．８８（６Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ）。
(12) Synthesis of Compound G13 1) Dissolve 2,3,4,6-tetra-O-benzyl-D-galactopyranosyl acetate (79.8 g) in a mixture of toluene (160 ml) and isopropyl ether (520 ml) And cooled to -10 to 0 ° C. To this was added an isopropyl ether solution containing 2.0 equivalents of HBr (2.8 mmol / ml, about 100 ml). After stirring at −10 to 0 ° C. for about 90 minutes, a 5% aqueous sodium hydrogen carbonate solution was poured into the reaction solution, and the mixture was stirred to neutralize excess HBr. After transferring the whole amount to a separating funnel, the aqueous layer was discarded and washed twice with a 10% aqueous sodium chloride solution. After concentration under reduced pressure, a syrup of 2,3,4,6-tetra-O-benzyl-α-D-galactopyranosyl bromide (Ga1Br) was obtained.
2) To a toluene solution (420 ml) of compound G12 (60.0 g, 68.6 mmol), tetrahexylammonium bromide (89.4 g, 206 mmol) and molecular sieves 4A (60 g), DMF (140 ml), and then Ga1Br (about 137 mmol) )) (250 ml) and stirred at room temperature for 72 hours. Methanol (12 ml) was added to the reaction solution, and the mixture was stirred for 2 hours. After filtration through celite, the extract was washed with a saturated aqueous solution of sodium hydrogen carbonate and brine, dried over anhydrous magnesium sulfate, and concentrated under reduced pressure. Acetonitrile was added to the residue and stirred for 2 hours to obtain a precipitate. The obtained precipitate was dried under reduced pressure to obtain a dry powder. This was purified by silica gel chromatography using hexane: ethyl acetate (8: 1) as an elution solvent. Yield 70.9 g (74%).
[Α] 24 D + 18.8 ° (c0.9, CHCl 3 ); mp 74-75 ° C .; FDMS m / z 1399 (M + 1) + ; 1 H-NMR (500 MHz, CDCl 3 ) δ 7.21-7.37. (30H, m), 6.12 (1H, d, J = 9.0 Hz), 4.91 (1H, d, J = 11.6 Hz), 4.84 (1H, d, J = 3.7 Hz) , 4.72-4.80 (4H, m), 4.35-4.65 (7H, m), 4.12-4.18 (1H, m), 3.99-4.05 (2H, m), 3.84-3.93 (4H, m), 3.73 (1H, dd, J = 3.7, 11.0 Hz), 3.47-3.51 (2H, m), 3. 42 (1H, dd, J = 6.1, 9.1 Hz), 1.87-1.99 (2H, m), 1.18-1.70 (72H, m), 0.88 (6 H, t, J = 7.4 Hz).
（13）化合物ＫＲＮ７０００の合成
化合物Ｇ１３（６０．０ｇ、４２．９ｍｍｏｌ）をエタノール（９６０ｍｌ）に加えて懸濁させ、これに２０％水酸化パラジウム（６．０ｇ）のエタノール懸濁液を加えた。更に水素源となる４−メチルシクロヘキセン（１２０ｍｌ、９３．５ｍｍｏｌ）を加え、４時間加熱還流した後、濾過し、触媒を除いた。残渣は加温したエタノールで洗浄した。濾液を室温放置することによって得た白色沈殿を濾過、減圧乾燥した。得られた粉体をエタノール：水（９２：８、３．５Ｌ）に懸濁し、攪拌しながら加熱溶解後、室温放置することによって再度沈殿化した。沈殿液を濾過し、濾取したケーキを減圧乾燥し、白色粉末を得た。収量３５．０ｇ（９５％）。
［α］23 Ｄ＋４３．６°（ｃ１．０，pyridine）；ｍｐ１８９．５−１９０．５℃；negativeＦＡＢＭＳ ｍ／ｚ ８５７（Ｍ−Ｈ）- ；ＩＲ（ｃｍ-1，ＫＢｒ）３３００，２９３０，２８５０，１６４０，１５４０，１４７０，１０７０；１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，Ｃ５Ｄ５Ｎ）δ８．４７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ），５．５８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ），５．２７（１Ｈ，ｍ），４．６３−４．７０（２Ｈ，ｍ），４．５６（１Ｈ，ｍ），４．５２（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．１Ｈｚ），４．３７−４．４７（４Ｈ，ｍ），４．３３（２Ｈ，ｍ），２．４５（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ），２．２５−２．３４（１Ｈ，ｍ），１．８７−１．９７（２Ｈ，ｍ），１．７８−１．８５（２Ｈ，ｍ），１．６２−１．７２（１Ｈ，ｍ），１．２６−１．４５（６６Ｈ，ｍ），０．８８（６Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ），13Ｃ−ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，Ｃ５Ｄ５Ｎ）δ１７３．２ （ｓ），１０１．５（ｄ），７６．７（ｄ），７３．０（ｄ），７２．５（ｄ），７１．６（ｄ），７１．０（ｄ），７０．３（ｄ），６８．７（ｔ），６２．７（ｔ），５１．４（ｄ），３６．８（ｔ），３４．４（ｔ），３２．１（ｔ），３０．４（ｔ），３０．２（ｔ），３０．０３（ｔ），３０．００（ｔ），２９．９３（ｔ），２９．８７（ｔ），２９．８１（ｔ），２９．７６（ｔ），２９．６（ｔ），２６．５（ｔ），２６．４（ｔ），２２．９（ｔ），１４．３（ｑ）。
(13) Synthesis of Compound KRN7000 Compound G13 (60.0 g, 42.9 mmol) was suspended in ethanol (960 ml), and a 20% palladium hydroxide (6.0 g) suspension in ethanol was added thereto. . Further, 4-methylcyclohexene (120 ml, 93.5 mmol) as a hydrogen source was added, and the mixture was heated under reflux for 4 hours, and then filtered to remove the catalyst. The residue was washed with warm ethanol. A white precipitate obtained by allowing the filtrate to stand at room temperature was filtered and dried under reduced pressure. The obtained powder was suspended in ethanol: water (92: 8, 3.5 L), dissolved by heating while stirring, and left to stand at room temperature to precipitate again. The precipitate was filtered, and the cake collected by filtration was dried under reduced pressure to obtain a white powder. Yield 35.0 g (95%).
[Α] 23 D + 43.6 ° (c1.0, pyridine); mp 189.5-190.5 ° C .; negativeFABMS m / z 857 (MH) − ; IR (cm −1 , KBr) 3300, 2930, 2850, 1640, 1540, 1470, 1070; 1 H-NMR (500 MHz, C 5 D 5 N) δ 8.47 (1 H, d, J = 8.5 Hz), 5.58 (1 H, d, J = 3. 7 Hz), 5.27 (1H, m), 4.63-4.70 (2H, m), 4.56 (1H, m), 4.52 (1H, t, J = 6.1 Hz), 4 .37-4.47 (4H, m), 4.33 (2H, m), 2.45 (2H, t, J = 7.3 Hz), 2.25-2.34 (1H, m), 1 .87-1.97 (2H, m), 1.78-1.85 (2H, m), 1.62-1.72 (1H, m), 1 26-1.45 (66H, m), 0.88 (6H, t, J = 6.7Hz), 13 C-NMR (125MHz, C 5 D 5 N) δ173.2 (s), 101.5 ( d), 76.7 (d), 73.0 (d), 72.5 (d), 71.6 (d), 71.0 (d), 70.3 (d), 68.7 (t ), 62.7 (t), 51.4 (d), 36.8 (t), 34.4 (t), 32.1 (t), 30.4 (t), 30.2 (t) , 30.03 (t), 30.00 (t), 29.93 (t), 29.87 (t), 29.81 (t), 29.76 (t), 29.6 (t), 26.5 (t), 26.4 (t), 22.9 (t), 14.3 (q).
実施例２ Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→２）−Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→１）−（２Ｓ，３Ｓ，４Ｒ）−２−アミノ−Ｎ−［（Ｒ）−２−ヒドロキシテトラコサノイル］−１，３，４−オクタデカントリオール （Ｓ１１４０Ｂ−９）の単離および精製
沖縄県久米島近海の海底水深１５〜２５ｍで採取された海綿を、凍結乾燥した粉末４４７．１ｇをクロロホルムとメタノールの混液で抽出し、抽出液を減圧下濃縮して５１．２８ｇのエキスを得た。これを酢酸エチルと水で分配後、上層と中間層を無水硫酸ナトリウムで乾燥後、減圧下濃縮してそれぞれ１８．３７ｇと９．４４ｇのフラクションを得た。上層より得たフラクションを１０％水性メノタールとｎ−ヘキサンとで分配したアルコール層と、中間層より得たフラクションを合わせて濃縮後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーに繰り返して順相ＴＬＣ上単一の活性成分を１６９．９ｍｇ得た。さらにＯＤＳ−ＡＭカラム（ＹＭＣ製、250mm×20mm径、メタノール、９．０ml/min)を用いた逆相ＨＰＬＣで精製し(保持時間：３０．３分)、純粋な表題化合物（S1140B-9）を１０．２ｍｇ得た。 なお、表題化合物は、F.Cafieri et al.,Liebigs Ann. Chem. 1995,1477-1481を参照し、単離、精製することもできる。
Example 2 O-α-D-galactopyranosyl- (1 → 2) -O-α-D-galactopyranosyl- (1 → 1)-(2S, 3S, 4R) -2-amino-N -Isolation and purification of [(R) -2-hydroxytetracosanoyl] -1,3,4-octadecanetriol (S1140B-9) A sponge collected at a depth of 15 to 25 m below the seabed near Kumejima, Okinawa Prefecture, 447.1 g of the freeze-dried powder was extracted with a mixture of chloroform and methanol, and the extract was concentrated under reduced pressure to obtain 51.28 g of an extract. After partitioning this with ethyl acetate and water, the upper layer and the intermediate layer were dried over anhydrous sodium sulfate and concentrated under reduced pressure to obtain 18.37 g and 9.44 g fractions, respectively. The alcohol layer obtained by partitioning the fraction obtained from the upper layer with 10% aqueous menotal and n-hexane and the fraction obtained from the intermediate layer were combined, concentrated, and then repeatedly subjected to silica gel column chromatography to obtain a single active component on normal phase TLC. Was obtained in 169.9 mg. The product was further purified by reverse-phase HPLC using an ODS-AM column (YMC, 250 mm × 20 mm diameter, methanol, 9.0 ml / min) (retention time: 30.3 minutes), and the pure title compound (S1140B-9) was obtained. Was obtained 10.2 mg. The title compound can also be isolated and purified with reference to F. Cafieri et al., Liebigs Ann. Chem. 1995, 1477-1481.
ｎｅｇａｔｉｖｅ ＦＡＢＭＳ ｍ／ｚ １００７［（Ｍ−Ｈ）- ］；ＩＲ；１ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ，Ｃ５Ｄ５Ｎ，２４℃）δ（ｐｐｍ）８．５５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，ＮＨ），５．６０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ，Ｈ１´´），５．５７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝３．７Ｈｚ，Ｈ１´´´ ），５．１３（１Ｈ，ｍ，Ｈ２），４．７５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．７，１０．４Ｈｚ，Ｈ２´´），４．６２（２Ｈ，ｍ），４．５４（４Ｈ，ｍ），４．２５−４．４７（１０Ｈ，ｍ），２．１７（２Ｈ，ｍ），１．９９（１Ｈ，ｍ），１．８７（２Ｈ，ｍ），１．７５（１Ｈ，ｍ），１．６５（２Ｈ，ｍ），１．１２−１．４９（６０Ｈ，ｍ），０．８５（６Ｈ，ｍ，ｔｅｒｍｉｎａｌ ｍｅｔｈｙｌ）；１３Ｃ ＮＭＲ（１２５ＭＨｚ，Ｃ５Ｄ５Ｎ，４５℃）δ（ｐｐｍ）１７５．５（ｓ，Ｃ１′），９９．５（ｄ，Ｃ１´´´ ），９８．６（ｄ，Ｃ１´´），７６．７（ｄ，Ｃ２´´），７６．０（ｄ，Ｃ３），７２．８（ｄ，Ｃ４），７２．６（ｄ，Ｃ５´´），７２．６ （ｄ，Ｃ４´´），７２．５（ｄ，Ｃ２），７１．３（ｄ，Ｃ３´´´ ），７１．０（ｄ），７０．８（ｄ），７０．５（ｄ，Ｃ２´´´ ），６９．７（ｄ，Ｃ３´´），６８．６（ｔ，Ｃ１），６２．７（ｔ），６２．５（ｔ），５１．２（ｔ，Ｃ２），３９．４（ｔ），３５．６（ｔ），３３．７（ｔ），３２．２（ｔ），３０．５（ｔ），３０．３（ｔ），３０．１（ｔ），３０．０（ｔ），２９．７（ｔ），２９．６（ｔ），２６．７（ｔ），２６．０（ｔ），２３．０（ｔ），２２．９（ｔ），１４．３（ｑ，ｔｅｒｍｉｎａｌ ｍｅｔｈｙｌ）
Negative FABMS m / z 1007 [(M−H) − ]; IR; 1 HNMR (500 MHz, C 5 D 5 N, 24 ° C.) δ (ppm) 8.55 (1 H, d, J = 9.2 Hz, NH) ), 5.60 (1H, d, J = 3.7 Hz, H1 "), 5.57 (1H, d, J = 3.7 Hz, H1"), 5.13 (1H, m, H2). ), 4.75 (1H, dd, J = 3.7, 10.4 Hz, H2 "), 4.62 (2H, m), 4.54 (4H, m), 4.25-4.47. (10H, m), 2.17 (2H, m), 1.99 (1H, m), 1.87 (2H, m), 1.75 (1H, m), 1.65 (2H, m) , 1.12-1.49 (60H, m), 0.85 (6H, m, terminal methyl); 13 C NMR (125MHz,
実施例３
下記に記載の化合物は、その右側の文献に記載の方法に従って合成した。
化合物名 文献名
（２Ｓ，３Ｒ）−１−（α−Ｄ−ガラクトピラノシル ＷＯ９３／５０５５
オキシ）−２−テトラデカノイルアミノ−３−オクタ
デカノール（ＡＧＬ−５１７）
（２Ｓ，３Ｒ）−１−（α−Ｄ−グルコピラノシルオ ＷＯ９４／９０２０
キシ）−２−テトラデカノイルアミノ−３−オクタデ
カノール（ＡＧＬ−５６３）
（２Ｓ，３Ｒ）−１−（６′−デオキシ−α−Ｄ−ガ ＷＯ９４／９０２０
ラクトピラノシルオキシ）−２−テトラデカノイルア
ミノ−３−オクタデカノール（ＡＧＬ−５７１）
（２Ｓ，３Ｒ）−１−（β−Ｌ−アラビノピラノシル ＷＯ９４／９０２０
オキシ）−２−テトラデカノイルアミノ−３−オクタ
デカノール（ＡＧＬ−５７７）
Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→６）−Ｏ− ＷＯ９４／２４１４２
α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→１）−（２Ｓ，
３Ｓ，４Ｒ）−２−アミノ−Ｎ−ヘキサコサノイル−
１，３，４−オクタデカントリオール（ＡＧＬ−５８６）
Ｏ−α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→６）−Ｏ− ＷＯ９４／２４１４２
α−Ｄ−グルコピラノシル−（１→１）−（２Ｓ，
３Ｓ，４Ｒ）−２−アミノ−Ｎ−ヘキサコサノイル−
１，３，４−オクタデカントリオール（ＡＧＬ−５８４）
Ｏ−α−Ｄ−ガラクトフラノシル−（１→３）−Ｏ− ＷＯ９４／２４１４２
α−Ｄ−ガラクトピラノシル−（１→１）−（２Ｓ，
３Ｓ，４Ｒ）−２−アミノ−Ｎ−［（Ｒ）−２−ヒド
ロキシテトラコサノイル］−１，３，４−オクタデカ
ントリオール（７１９−７）
Ｏ−（Ｎ−アセチル−２−アミノ−２−デオキシ−α ＷＯ９４／２４１４２
−Ｄ−カラクトピラノシル−（１→３）−Ｏ−［α−
Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）］−Ｏ−α−Ｄ−
ガラクトピラノシル−（１→１）−（２Ｓ，３Ｓ，４
Ｒ）−２−アミノ−Ｎ−［（Ｒ）−２−ヒドロキシテ
トラコサノイル］−１，３，４−オクタデカントリオ
ール（ＳＴＬ−８）
Example 3
The compounds described below were synthesized according to the method described in the literature on the right.
Compound name Document name
(2S, 3R) -1- (α-D-galactopyranosyl WO93 / 5055
Oxy) -2-tetradecanoylamino-3-octadecanol (AGL-517)
(2S, 3R) -1- (α-D-glucopyranosylo WO94 / 9020
Xy) -2-tetradecanoylamino-3-octadecanol (AGL-563)
(2S, 3R) -1- (6'-deoxy-α-D-Ga WO94 / 9020
(Lactopyranosyloxy) -2-tetradecanoylamino-3-octadecanol (AGL-571)
(2S, 3R) -1- (β-L-arabinopyranosyl WO94 / 9020
Oxy) -2-tetradecanoylamino-3-octadecanol (AGL-577)
O-α-D-galactopyranosyl- (1 → 6) -O-WO94 / 24142
α-D-galactopyranosyl- (1 → 1)-(2S,
3S, 4R) -2-Amino-N-hexacosanoyl-
1,3,4-octadecanetriol (AGL-586)
O-α-D-galactopyranosyl- (1 → 6) -O-WO94 / 24142
α-D-glucopyranosyl- (1 → 1)-(2S,
3S, 4R) -2-Amino-N-hexacosanoyl-
1,3,4-octadecanetriol (AGL-584)
O-α-D-galactofuranosyl- (1 → 3) -O-WO94 / 24142
α-D-galactopyranosyl- (1 → 1)-(2S,
3S, 4R) -2-Amino-N-[(R) -2-hydroxytetracosanoyl] -1,3,4-octadecanetriol (719-7)
O- (N-acetyl-2-amino-2-deoxy-α WO94 / 24142
-D-calactopyranosyl- (1 → 3) -O- [α-
D-glucopyranosyl- (1 → 2)]-O-α-D-
Galactopyranosyl- (1 → 1)-(2S, 3S, 4
R) -2-Amino-N-[(R) -2-hydroxytetracosanoyl] -1,3,4-octadecanetriol (STL-8)
式（Ｉ）の化合物と上記実施例に記載の化合物との対応は、下記表１に示されるとおりである。
生物学的試験
薬理試験例１：ＫＲＮ７０００のＮＫＴ細胞の腫瘍細胞障害活性増強作用
本発明の配糖体化合物の代表として、実施例１の化合物（ＫＲＮ７０００）を用いて以下の実験を行った。
Biological Test Pharmacological Test Example 1: Effect of KRN7000 on tumor cell cytotoxicity of NKT cells The following experiment was carried out using the compound of Example 1 (KRN7000) as a representative glycoside compound of the present invention.
ＲＡＧ−１ＫＯ／Ｖα１４ｔｇ／Ｖβ８．２ｔｇマウス（このマウスのリンパ球画分にはＢ細胞、Ｔ細胞およびＮＫ細胞が存在せず、ＮＫＴ細胞が多く存在する）にビヒクル（0.025 ％ ポリソルベート20含有生理食塩水）あるいはＫＲＮ７０００ １００μｇ／ｋｇを静脈内投与し、２４時間後にそれぞれのマウスから脾臓を摘出し、定法により脾臓細胞を調製した。ＲＡＧ−１ＫＯ／Ｖα１４ｔｇ／Ｖβ８．２ｔｇマウスは、ＲＡＧ−１遺伝子を欠損させ、Ｖα１４およびＶβ８．２遺伝子を強制発現させることにより作製した（Kawano T. et al., Science, 278, 1626-1629 (1997)）。このマウスは千葉大学医学部、谷口克らより入手可能である。これらの脾臓細胞のマウスリンパ腫ＹＡＣ−１細胞に対する細胞障害活性を４時間 -51Cr-release 法（Kobayashi, E. et al., Oncology Res., 7, 529 (1995)）により検討した。結果を図１に示す。 RAG-1 KO / Vα14tg / Vβ8.2tg mice (the lymphocyte fraction of this mouse does not contain B cells, T cells and NK cells, and abundant NKT cells) are injected into a vehicle (physiological saline containing 0.025% polysorbate 20). Water) or 100 μg / kg of KRN7000 was intravenously administered, and 24 hours later, spleens were excised from each mouse, and spleen cells were prepared by a standard method. RAG-1 KO / Vα14tg / Vβ8.2tg mice were prepared by deleting the RAG-1 gene and forcibly expressing the Vα14 and Vβ8.2 genes (Kawano T. et al., Science, 278, 1626-1629 ( 1997)). This mouse is available from Katsushi Taniguchi et al., Chiba University School of Medicine. The cytotoxic activity of these spleen cells against mouse lymphoma YAC-1 cells was examined by the 4-hour- 51 Cr-release method (Kobayashi, E. et al., Oncology Res., 7, 529 (1995)). The results are shown in FIG.
図１に示すように、ＫＲＮ７０００投与マウスから調製した脾臓細胞は、ビヒクル投与マウスから調製した脾臓細胞に比べて、有意に高いＹＡＣ−１細胞に対する細胞障害活性を示した。 脾 As shown in FIG. 1, spleen cells prepared from KRN7000-administered mice showed significantly higher cytotoxic activity on YAC-1 cells than spleen cells prepared from vehicle-administered mice.
ＲＡＧ−１ＫＯ／Ｖα１４ｔｇ／Ｖβ８．２ｔｇマウスの脾臓のリンパ球画分にはＢ細胞、Ｔ細胞およびＮＫ細胞が存在せず、ＮＫＴ細胞が多く存在することを考え合わせると、この結果は、ＫＲＮ７０００が、脾臓のＮＫＴ細胞の癌細胞に対する細胞障害活性を増強させる作用を有することを示す。 Considering that the spleen lymphocyte fraction of RAG-1 KO / Vα14tg / Vβ8.2tg mice does not contain B cells, T cells and NK cells, and that NKT cells are abundant, this result indicates that KRN7000 Shows that it has the effect of enhancing the cytotoxic activity of splenic NKT cells against cancer cells.
以上の結果より、ＫＲＮ７０００はＮＫＴ細胞の腫瘍に対する細胞障害活性増強作用を有することが判明した。 From the above results, it was revealed that KRN7000 has an effect of enhancing the cytotoxic activity of NKT cells against tumors.
薬理試験例２：ＫＲＮ７０００の脾臓のＮＫＴ細胞増加作用
ビヒクル（０．５％ ポリソルベート20含有生理食塩水）あるいは１、１０、および１００ｎｇ／ｋｇのＫＲＮ７０００をＣ５７ＢＬ／６マウス（日本ＳＬＣ（株））に静脈内投与を行い、その２４時間後にそれぞれのマウスの脾臓を摘出し、定法により脾臓細胞を調製した。この脾臓細胞をプラスチックデッシュで３０分間培養することにより、浮遊細胞を調製した。さらに、この浮遊細胞中のＢ細胞を除去することによりリンパ球画分を調製した。これらのリンパ球画分中のＴ細胞、ＮＫ細胞、ＮＫＴ細胞およびＶα１４＋ＮＫＴ細胞の解析は、ＦＩＴＣ標識抗ＴＣＲαβモノクローナル抗体（ファーミンジェン（Pharmingen）社）、Cychrome標識抗ＮＫ１．１モノクローナル抗体（ファーミンジェン社）、およびＰＥ標識抗Ｖα１４モノクローナル抗体を用いた３−color ＦＡＣＳ解析により行った（図２）。抗Ｖα１４モノクローナル抗体は、抗Ｖα１４モノクローナル抗体産生ハイブリドーマ（ＣＭＳ−１：千葉大学医学部、谷口克らより入手可能）をヌードマウスに移植し、腹水を回収し精製することによって得た。図２ＡおよびＢ中、リンパ球画分中のＮＫ１．１細胞、ＴＣＲαβ細胞、およびＶα１４細胞の量を、これらの細胞に対する標識化抗体の蛍光強度として表した。
Pharmacological test example 2: KRN7000 spleen NKT cell increasing action vehicle (0.5% polysorbate 20-containing saline) or 1, 10, and 100 ng / kg KRN7000 in C57BL / 6 mice (Japan SLC Co., Ltd.) Intravenous administration was performed, and 24 hours later, the spleen of each mouse was excised, and spleen cells were prepared by a standard method. The spleen cells were cultured in a plastic dish for 30 minutes to prepare floating cells. Further, a lymphocyte fraction was prepared by removing B cells in the floating cells. Analysis of T cells, NK cells, NKT cells and Vα14 + NKT cells in these lymphocyte fractions was performed using FITC-labeled anti-TCRaβ monoclonal antibody (Pharmingen), Cychrome-labeled anti-NK1.1 monoclonal antibody (Pharmingen). Pharmingen) and 3-color FACS analysis using a PE-labeled anti-Vα14 monoclonal antibody (FIG. 2). The anti-Vα14 monoclonal antibody was obtained by transplanting an anti-Vα14 monoclonal antibody-producing hybridoma (CMS-1: available from Katsushi Taniguchi, Chiba University School of Medicine) into nude mice, collecting and purifying ascites. 2A and 2B, the amounts of NK1.1 cells, TCRαβ cells, and Vα14 cells in the lymphocyte fraction were expressed as the fluorescence intensity of the labeled antibodies against these cells.
図２Ａに示すように、ＫＲＮ７０００を１００ｎｇ／ｋｇ投与すると、ビヒクル投与に比べ、脾臓リンパ球画分中のＮＫ１．１＋ＴＣＲαβ＋細胞の割合の顕著な増加が観察された。 As shown in FIG. 2A, when KRN7000 was administered at 100 ng / kg, a remarkable increase in the proportion of NK1.1 + TCRaβ + cells in the spleen lymphocyte fraction was observed as compared to vehicle administration.
また、図２Ｂに示すように、ＮＫ１．１＋ＴＣＲαβ＋細胞中のＶα１４＋細胞の割合を検討したところ、上記の用量のＫＲＮ７０００を投与した場合には、ビヒクル投与に比べ、ＮＫ１．１＋ＴＣＲαβ＋細胞中のＶα１４＋細胞の割合が明らかに増加することが判明した。 Further, as shown in FIG. 2B, when the ratio of Vα14 + cells in NK1.1 + TCRαβ + cells was examined, it was found that when the above-mentioned dose of KRN7000 was administered, NK1.1 + TCRαβ was compared with vehicle administration. + the proportion of Varufa14 + cells in the cell increases apparently has been found.
更に、図２Ｃに示すように、ＫＲＮ７０００を１０および１００ｎｇ／ｋｇ投与することにより、脾臓リンパ球画分中のＮＫ細胞数はビヒクル投与マウスのそれと同じであったが、脾臓リンパ球画分の細胞数および脾臓リンパ球画分中のＴ細胞数は、ビヒクル投与マウスのそれらの約２倍に増加した。さらに、脾臓リンパ球画分中のＶα１４−ＮＫＴ細胞数およびＶα１４＋ＮＫＴ細胞数がビヒクル投与マウスのそれらのそれぞれ３倍以上（データ省略）および４倍以上に増加した。 Furthermore, as shown in FIG. 2C, the administration of KRN7000 at 10 and 100 ng / kg resulted in the same number of NK cells in the spleen lymphocyte fraction as that of the vehicle-administered mouse, but the cells in the spleen lymphocyte fraction The number and number of T cells in the spleen lymphocyte fraction increased about twice as those of vehicle-treated mice. Furthermore, the number of Vα14 − NKT cells and the number of Vα14 + NKT cells in the spleen lymphocyte fraction increased 3 times or more (data not shown) and 4 times or more those of the vehicle-administered mice, respectively.
更にまた、肝臓中のＴ細胞、ＮＫ細胞、Ｖα１４−ＮＫＴ細胞およびＶα１４＋ＮＫＴ細胞の解析も行ったところ、脾臓の場合と同様にＶα１４−ＮＫＴ細胞数およびＶα１４＋ＮＫＴ細胞数が顕著に増加することも判明した（データ省略）。 Furthermore, T cells, NK cells in the liver, Varufa14 - was also performed the analysis of NKT cells and Vα14 + NKT cells, as in the case of spleen Varufa14 - NKT cell number and Varufa14 + number NKT cells significantly increased (Data omitted).
以上の結果から、ＫＲＮ７０００は、生体中のＮＫＴ細胞数、特にＶα１４＋ＮＫＴ細胞数、を増加させる作用を有することが判明した。 From the above results, it was revealed that KRN7000 has an effect of increasing the number of NKT cells in a living body, in particular, the number of Vα14 + NKT cells.
薬理試験例３：ＫＲＮ７０００のMRL lpr/lpr マウスのリンパ腫脹抑制作用
メスのMRL lpr/lpr マウス (Sakamoto, A. Clin. Immunol., 28, 1558(1996))を1 群10匹として以下の実験を行った。6 週齢で購入した21匹のMRL マウスの観察を行っていたところ、10週齢に達した時に、1 匹のマウスに腋下リンパ節の腫脹が認められた。そこで、他の20匹のマウスを無作為に2 群に分けた。そして、マウスが11週齢に達した時点より、上記の2 群に対してビヒクル（ 0.025% ポリソルベート20含有生理食塩水) あるいはＫＲＮ７０００ (100 μｇ/kg)の週2 回(火曜日と金曜日) の腹腔内投与を開始した。1 週間に2 度、腋下および鼠径部 リンパ節の触診を行うことにより、リンパ腫脹の進展を経時的に観察した。各リンパ節をその大きさにより、- (0) 、+ (1) 、++ (2) 、+++ (3) の4 段階にス コアー化し、各マウスの左右の腋下あるいは鼠径部リンパ節のスコアーの合計をリンパ腫脹 indexとして、図３に示した。
Pharmacological test example 3: KRN7000 inhibitory effect on lymph swelling of MRL lpr / lpr mice The following experiment was conducted using 10 female MRL lpr / lpr mice (Sakamoto, A. Clin. Immunol., 28, 1558 (1996)) per group. Was done. When observing 21 MRL mice purchased at 6 weeks of age, when one reached 10 weeks of age, one mouse showed swollen axillary lymph nodes. Thus, the other 20 mice were randomly divided into two groups. From the time when the mice reached the age of 11 weeks, the two groups were intraperitoneally administered twice weekly (Tuesday and Friday) with vehicle (physiological saline containing 0.025% polysorbate 20) or KRN7000 (100 μg / kg). Intravenous administration was started. Twice a week, palpation of the axillary and inguinal lymph nodes was used to monitor the progress of lymphoma swelling over time. Depending on the size of each lymph node, it is scored into four stages-(0), + (1), ++ (2), +++ (3), and the left and right axillary or inguinal lymph of each mouse. The sum of the node scores is shown in FIG. 3 as the lymph swelling index.
図３Ａに示すように、ＫＲＮ７０００投与により、MRL マウスの加齢に伴う腋下リンパ腫脹が明らかに抑制された。また、図３Ｂに示すように、MRL マウスの加齢に伴う鼠径部リンパ腫脹も明らかに抑制された。すなわち、ＫＲＮ７０００は、MRL マウスのリンパ腫脹を抑制する作用を有することが明らかとなった。 (3) As shown in FIG. 3A, administration of KRN7000 clearly suppressed axillary lymph swelling with age in MRL mice. In addition, as shown in FIG. 3B, inguinal lymph swelling with age of MRL mice was also clearly suppressed. That is, it was revealed that KRN7000 has an effect of suppressing lymph swelling in MRL mice.
MRL マウスはヒト全身性エリテマトーデスのモデルマウスである(Sakamoto, A. Clin. Immunol., 28, 1558(1996)）。従って、以上の結果は、ＫＲＮ７０００ が全身性エリテマトーデスの治療に有効であることを示す。 MRL mouse is a model mouse of human systemic lupus erythematosus (Sakamoto, A. Clin. Immunol., 28, 1558 (1996)). Thus, the above results indicate that KRN7000 is effective in treating systemic lupus erythematosus.
薬理試験例４：ＫＲＮ７０００のＭＲＬ ｌｐｒ／ｌｐｒマウスの生存率に対する効果
メスのＭＲＬ ｌｐｒ／ｌｐｒマウスを１群10匹として以下の実験を行った。４週齢で購入したＭＬＲマウスを無行為に２群（10匹／群）に分けた。５週齢に達した時点より、ビヒクル（0.025 ％ポリソルベート20含有生理食塩水）あるいはＫＲＮ７０００（100 μg ／kg）の週２回の腹腔内投与を開始した。各マウスの生死の観察を毎日行った。
Pharmacological Test Example 4: Effect of KRN7000 on the Survival Rate of MRL lpr / lpr Mice The following experiment was performed using 10 female MRL lpr / lpr mice per group. MLR mice purchased at the age of 4 weeks were indiscriminately divided into two groups (10 / group). At the age of 5 weeks of age, intraperitoneal administration of vehicle (physiological saline containing 0.025% polysorbate 20) or KRN7000 (100 μg / kg) twice a week was started. The observation of the survival of each mouse was performed every day.
図４に示すように、ビヒクル投与群は、投与開始後250 日以内に全例死亡したのに対し、ＫＲＮ７０００は、投与開始350 日後でも、３匹のマウスが生存した。 As shown in FIG. 4, in the vehicle-administered group, all the animals died within 250 days after the start of administration, whereas with KRN7000, three mice survived even 350 days after the start of administration.
薬理試験例５：ＫＲＮ７０００の４％ＤＳＳ誘発マウス大腸炎抑制作用
CDF1マウス (6 週齢、メス) （日本ＳＬＣ（株））を１群10匹として以下の実験を行った。DSS ( dextran sodium sulfate)を飲料水に４％( ｗ／ｖ) の割合 で溶解した４％ＤＳＳ溶液を飲料水として与え始めた日を第０日とする。ＫＲＮ７０００ １００μｇ／ｋｇを第１、５、９日目に腹腔内投与する群、IL-12 １μｇ/ マウスを第１、３、５、７、９日目に腹腔内投与する群、および無処理群（コントロール）の３群に分けて、各マウスの体重測定および生死の観察を毎日行った。各群の体重の変動を図５Ａ、生存期間を図５Ｂに示した。
Pharmacological Test Example 5: 4% DSS-Induced Mouse Colitis Inhibitory Effect of KRN7000 CDF1 mice (6 weeks old, female) (Japan SLC Co., Ltd.) were subjected to the following experiment using 10 animals per group. The day when DSS (dextran sodium sulfate) was dissolved in drinking water at a ratio of 4% (w / v) and the 4% DSS solution was started to be given as drinking water is defined as
図５Ａに示すように、IL-12 投与群では、無処理群に比べて、非常に早期から体重の減少が観察された。しかし、ＫＲＮ７０００を投与した群では、無処理群に比べ、体重減少の始まる時期が明らかに遅延した。 (5) As shown in FIG. 5A, in the IL-12-administered group, a decrease in body weight was observed from a very early stage as compared with the untreated group. However, in the group to which KRN7000 was administered, the onset of weight loss was clearly delayed compared to the untreated group.
また、図５Ｂに示すように、IL-12 投与群では、マウスの生存期間は無処理群に比べて有意に短かった。しかし、ＫＲＮ７０００投与群では、無処理群に比べて、有意な生存期間延長が認められた。 Moreover, as shown in FIG. 5B, the survival time of the mice was significantly shorter in the IL-12 administration group than in the untreated group. However, in the KRN7000 administration group, a significant prolongation of the survival period was observed as compared with the non-treatment group.
４％ＤＳＳ誘発マウス大腸炎はヒト潰瘍性大腸炎のモデルである（Elson, C. et al., Gastroenterology, 109, 1344(1995)）。従って、以上の結果は、ＫＲ Ｎ７０００が潰瘍性大腸炎の治療に有効であることを示す。 4% DSS-induced mouse colitis is a model of human ulcerative colitis (Elson, C. et al., Gastroenterology, 109, 1344 (1995)). Thus, the above results indicate that KR N7000 is effective in treating ulcerative colitis.
薬理試験例６：α−グリコシルセラミド構造を有する化合物のＮＫＴ細胞増殖促進作用
薬理試験例１に示したＲＡＧ−１ＫＯ／Ｖα１４ｔｇ／Ｖβ８．２ｔｇマウスの脾臓細胞を用いて、α−グリコシルセラミド構造を有する化合物のＮＫＴ細胞増殖促進作用を検討した。
Pharmacological Test Example 6: NKT cell proliferation promoting action of compound having α-glycosylceramide structure Using spleen cells of RAG-1KO / Vα14tg / Vβ8.2tg mouse shown in Pharmacological Test Example 1, having a α-glycosylceramide structure The NKT cell proliferation promoting effect of the compound was examined.
ＲＡＧ−１ＫＯ／Ｖα１４ｔｇ／Ｖβ８．２ｔｇマウスの脾臓細胞より常法に従って、脾臓細胞を調製した。この脾臓細胞を10% ＦＣＳ添加RPMI１６４０培地に２×１０６個／ｍｌに浮遊させ、９６穴丸底プレートに 100μｌずつ添加した。図１２に示した10種類のα−グリコシルセラミド構造を有する化合物を最終濃度が１、10、100ng/mlとなるように上記プレートに添加し、2 日間培養した。［３Ｈ］チミジン(0.5μCi/well ）を添加し、16時間後に細胞を収集し、細胞内に取り込まれた［３Ｈ］チミジンの量を液体シンチレーションカウンターで測定した。結果を表２に示す。
以上の結果はα−Ｄ−グリコシルセラミド構造を有する配糖体、および糖部分に他の糖が結合したα−Ｄ−グリコシルセラミド構造を有する配糖体が、自己免疫疾患の治療に有効であることを示す。 The above results indicate that a glycoside having an α-D-glycosylceramide structure and a glycoside having an α-D-glycosylceramide structure in which another sugar is bonded to a sugar moiety are effective for treating an autoimmune disease. It indicates that.
薬理試験７：ＫＲＮ７０００による実験的自己免疫性脳脊髄炎発症の抑制
Ｃ５７ＢＬ／６マウス（ 6 週齢、メス）を１群１０匹として以下の実験を行った。２００μｇのミエリンオリゴ希突起膠細胞糖タンパク質（ Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein ）の部分ペプチド（ＭＯＧ３３−５５）と５０ ０μｇの結核菌（ Mycobacterium tuberculosis ）Ｈ３７Ｒａを不完全フロイントアジュバンドに加えてエマルジョンを作製し、第０日目と７日目に各マウスの皮下に注射して免疫を行った。さらに、第０日目と第２日目に５００ｎｇの百日咳毒（pertussis roxin）をマウスの腹腔内に投与し、マウスの実験的自己免疫 性脳脊髄炎（ＥＡＥ）の発症を誘導した。ＫＲＮ７０００ ２０μｇ／ｋｇを第１、５、８、１２、１５日目に腹腔内投与する群およびビヒクル（０．５％、ポリソルベート２０）を投与する群の２群に分けて、各マウスのＥＡＥの発症の程度を毎日観察した。各群の各マウスのＥＡＥの発症の程度を図６に示した。
Pharmacological test 7: Inhibition of the development of experimental autoimmune encephalomyelitis by KRN7000 The following experiment was performed using 10 C57BL / 6 mice (6 weeks old, female) per group. 200 μg of a partial peptide (MOG33-55) of Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein and 500 μg of Mycobacterium tuberculosis H37Ra were added to incomplete Freund's adjuvant to prepare an emulsion. Immunization was performed by subcutaneous injection of each mouse on
図６に示すように、ビヒクル投与群（図６Ａ）では、最初のＭＯＧペプチドによる免疫から１５日以内に、全例のマウスがＥＡＥを発症し、その内の８０％のマウスが死亡した。しかし、ＫＲＮ７０００を投与した群（図６Ｂ）では、１０匹中４匹のマウスＥＡＥが発症し、その内の２匹が死亡したのみであった。 示 す As shown in FIG. 6, in the vehicle-administered group (FIG. 6A), within 15 days of the first MOG peptide immunization, all mice developed EAE, of which 80% died. However, in the group receiving KRN7000 (FIG. 6B), 4 out of 10 mice developed EAE, only 2 of which died.
以上の結果により、ＫＲＮ７０００は、マウスにおけるＥＡＥの発症を抑制することが判明した。このＥＡＥは、ヒト多発性硬化症（ＭＳ）のモデルである （Autoimmune Disease Models, edited by Cohen I. R. & Miller A. Acadenic Press, Inc. (1994), Chapter 1,pp1）。従って、以上の結果は、ＫＲＮ７００ ０が多発性硬化症の治療に有効であることを示す。
From the above results, KRN7000 was found to suppress the development of EAE in mice. This EAE is a model of human multiple sclerosis (MS) {Autoimmune Disease Models, edited by Cohen IR & Miller A. Acadenic Press, Inc. (1994),
薬理試験８：ＫＲＮ７０００のマウス糖尿病の発症抑制作用
ＮＯＤ／ＳｈｉＪｉｃ（ＮＯＤ）マウス（６週齢、メス）（日本クレア（株））を１群１０匹として以下の実験を行った。ＮＯＤマウスは、加齢にともなって糖尿病を発症する。ＫＲＮ７０００ １００μｇ／ｋｇを７週齢より週２回腹腔内投与する群および無処理群の２群に分けて、各マウスの糖尿病の発症の有無を毎週調べた。血糖値はＧｌｕｃｏｍｅｔｅｒ（マイルス三共）を用いて測定し、２００ｍｇ／ｄＬ以上の値を連続して２回示した個体を糖尿病とした。各群の糖尿病発症マウスの割合を図７に示した。
Pharmacological test 8: KRN7000 suppresses the onset of diabetes in mice The following experiment was conducted using 10 NOD / ShiJic (NOD) mice (6 weeks old, female) (CLEA Japan, Inc.) per group. NOD mice develop diabetes with age.
図７に示すように、無処理群では、３５週齢に達した時点で、８０％のマウスが糖尿病を発症したが、ＫＲＮ７０００を投与した群では、３５週齢に達した時点においても、一匹のマウスも糖尿病を発症しなかった。 As shown in FIG. 7, in the untreated group, 80% of the mice developed diabetes at the age of 35 weeks, whereas in the group to which KRN7000 was administered, one day at the age of 35 weeks. None of the mice developed diabetes.
以上の結果から、ＫＲＮ７０００は、ＮＯＤマウスにおける糖尿病の自然発症を抑制することが判明した。このＮＯＤマウスは、ヒトＩ型糖尿病のモデルである（Autoimmune Disease Models, edited by Cohen I. R. & Miller A. Acadenic Press, Inc. (1994), Chapter 9, pp149）。従って、以上の結果はＫＲＮ７０００がＩ型糖尿病の治療に有効であることを示す。
From the above results, KRN7000 was found to suppress the spontaneous onset of diabetes in NOD mice. This NOD mouse is a model of human type I diabetes (Autoimmune Disease Models, edited by Cohen IR & Miller A. Acadenic Press, Inc. (1994),
薬理試験９：ＫＲＮ７０００のＶα２４ ＋ ＮＫＴ細胞増殖促進作用
健丈人の抹梢血単核球細胞を１０％ＦＣＳ添加ＡＩＭ培地を用い、ＧＭ−ＣＳＦ（４００Ｕ／ｍｌ）、ＩＬ−４（２００Ｕ／ｍｌ）およびＫＲＮ７０００（１００ｎｇ／ｍｌ）を添加し、４日間培養することにより、抗原提示細胞を調製した。
Pharmacological test 9: VRN24 + NKT cell proliferation promoting effect of KRN7000 Peripheral blood mononuclear cells of healthy humans were subjected to GM-CSF (400 U / ml), IL-4 (200 U / ml) using AIM medium supplemented with 10% FCS. And KRN7000 (100 ng / ml) were added and cultured for 4 days to prepare antigen-presenting cells.
これらの抗原提示細胞を刺激細胞とし、同じ人の抹梢血単核球細胞を応答細胞として、自己混合リンパ球反応（autologous mixed leukocyte reaction:MLR ）を行った。１０日間培養した後、ＩＬ−２（５Ｕ／ｍｌ）を添加し、さらに、４日間培養を行い、細胞の回収を行った。さらに、この回収した細胞中のＣＤ４、ＣＤ８二重ネガティブ細胞を回収し、その表現型の解析を行った。表現型の解析は、種々の表現型を示す細胞に対する標識化抗体の蛍光強度として表した。その結果を、図８に示す。 自己 Autologous mixed leukocyte reaction (MLR) was performed using these antigen-presenting cells as stimulator cells and peripheral blood mononuclear cells of the same person as responder cells. After culturing for 10 days, IL-2 (5 U / ml) was added, culturing was further performed for 4 days, and the cells were collected. Further, CD4 and CD8 double negative cells in the collected cells were collected, and their phenotype was analyzed. The phenotypic analysis was expressed as the fluorescence intensity of the labeled antibody against cells showing various phenotypes. FIG. 8 shows the result.
図８に示すように、これらの細胞群には、ＣＤ４−ＣＤ８−ＣＤ３＋Ｖα２４＋Ｖβ１１＋ＮＫＲＰ１Ａ＋の表現型を有する細胞（Ｖα２４＋ＮＫＴ細胞のサブセット）が大多数存在することが判明した。 As shown in FIG. 8, it was found that a large number of cells having a phenotype of CD4 - CD8 - CD3 + Vα24 + Vβ11 + NKRP1A + (subset of Vα24 + NKT cells) existed in these cell groups.
上記の細胞群をＩＬ−２（５Ｕ／ｍｌ）を用いて培養し、Ｖα２４＋ＮＫＴ細胞を増殖させて、以下の自己混合リンパ球反応において応答細胞として用いた。同じ抹梢血単核球細胞をＧＭ−ＣＳＦ＋ＩＬ４およびＫＲＮ７０００ １００ｎｇ／ｍｌ、ＡＧＬ−５８３（β−ガラクトシルセラミド、β−ＧａｌＣｅｒ）あるいは０．１％ＤＭＳＯ（ビヒクル）を添加し、４日間培養することにより、抗原提示細胞を調製した。これらの抗原提示細胞を刺激細胞として自己混合リンパ球反応を行った。２日間倍養後、［３Ｈ］ミチジン（０．５μＣｉ／ｍｌ）を添加し、８時間後に細胞を収集し、細胞内に取り込まれた［３Ｈ］チミジンの量を液体シンチレーションカウンターで測定した。結果を図９に示す。 The above cell group was cultured using IL-2 (5 U / ml), and Vα24 + NKT cells were expanded and used as responding cells in the following self-mixed lymphocyte reaction. The same peripheral blood mononuclear cells were cultured for 4 days by adding GM-CSF + IL4 and 100 ng / ml of KRN7000, AGL-583 (β-galactosylceramide, β-GalCer) or 0.1% DMSO (vehicle). Then, antigen-presenting cells were prepared. A self-mixed lymphocyte reaction was performed using these antigen-presenting cells as stimulator cells. After double cultivation for 2 days, [ 3 H] mitidine (0.5 μCi / ml) was added, and after 8 hours, cells were collected, and the amount of [ 3 H] thymidine incorporated into the cells was measured with a liquid scintillation counter. . FIG. 9 shows the results.
図９に示すように、ビヒクルおよびβ−ガラクトシルセラミドで処理した抗原提示細胞はＶα２４＋ＮＫＴ細胞の増殖に何ら影響を与えなかったが、ＫＲＮ７０００で処理した抗原提示細胞の場合には、顕著な、抗原提示細胞の数依存的なＶα２４＋ＮＫＴ細胞の増殖促進作用が観察された。さらに、抗ＣＤ１ａ、ＣＤ１ｂ、ＣＤ１ｃ、ＣＤ１ｄ抗体を用いて、上記のＫＲＮ７０００で処理した抗原提示細胞によるＶα２４＋ＮＫＴ細胞の増殖促進作用に対する阻害実験を行ったところ、抗ＣＤ１ｄ抗体によってのみ、Ｖα２４＋ＮＫＴ細胞の増殖促進作用が阻害された（データ省略）。 As shown in FIG. 9, antigen-presenting cells treated with vehicle and β-galactosylceramide had no effect on the growth of Vα24 + NKT cells, whereas in the case of antigen-presenting cells treated with KRN7000, The effect of promoting the growth of Vα24 + NKT cells in a number-dependent manner of the number of antigen-presenting cells was observed. Furthermore, an anti-CD1a, CD1b, CD1c and CD1d antibody was used to carry out an inhibition experiment on the growth promoting effect of Vα24 + NKT cells by the antigen-presenting cells treated with KRN7000 as described above. As a result, Vα24 + NKT was detected only by the anti-CD1d antibody. Cell growth promotion was inhibited (data not shown).
以上の結果から、ＫＲＮ７０００は、マウスのＶα１４＋ＮＫＴ細胞に相当するヒトのＶα２４＋ＮＫＴ細胞の増殖を促進させる効果を有することが判明した。Ｉ型糖尿病の進展した患者ではＶα２４＋ＮＫＴ細胞の数が極端に少ないという最近の報告（Wilson et al.,Nature,391,177(1998)) 、および薬理試験３、７および８の結果を考えあわせると、上記の結果は、ＫＲＮ７０００はヒトのＶα２４＋ＮＫＴ細胞が関係している全身性エリテマトーデス、全身性強皮症、多発性硬化症あるいはＩ型糖尿病等の自己免疫疾患の予防や治療に有効であることを強く示している。
From the above results, it was revealed that KRN7000 has an effect of promoting the growth of human Vα24 + NKT cells corresponding to mouse Vα14 + NKT cells. Considering the recent report that the number of Vα24 + NKT cells is extremely low in patients with advanced type I diabetes (Wilson et al., Nature, 391, 177 (1998)), and the results of
薬理試験例１０：ＫＲＮ７０００の流産促進作用
Ｃ５７ＢＬ／６マウス（日本ＳＬＣ（株））を用いて実験を行なった。膣栓を確認した日を第０日目とする。妊娠マウスを１群６匹として、ＫＲＮ７０００ １５０μｇ／ｋｇを第７，８，９日目に静脈内投与する群とＰＢＳ（phasphate buffer saline）をそれらの日に静脈内投与する群に分けた。第１２日目に子宮 を剖出し、胎児の状態を観察した。
Pharmacological Test Example 10: KRN7000 Abortion-Promoting Effect An experiment was performed using C57BL / 6 mice (Japan SLC Co., Ltd.). The day when the vaginal plug is confirmed is defined as
ＰＢＳ投与群では、合計５３の胎児（embryo）のうち、死亡吸収されている胎児は３匹で、５．６％の流産率であり、Ｃ５７ＢＬ／６マウスの自然流産率（約５％とよく一致した。 In the PBS-administered group, out of a total of 53 embryos, 3 fetuses had been absorbed and died and had a miscarriage rate of 5.6%, and the spontaneous miscarriage rate of C57BL / 6 mice (about 5% Matched.
ＫＲＮ７０００投与群では、合計３６の胎児のうち、死亡吸収されている胎児は、１２匹で、流産率は３３％と、無処理群に比べて明らかに高い値を示した。 In the KRN7000 administration group, out of a total of 36 fetuses, 12 fetuses were absorbed and absorbed, and the miscarriage rate was 33%, which was clearly higher than the untreated group.
一方、ＫＲＮ７０００を同用量、同スケジュールで、Ｖα１４＋ＮＫＴ欠損 （Ｊα２８１ＫＯ）マウス（Kawano T.et al., Science, 278, 1626-1629(1997)）に投与したところ、流産率は、５．３％であり、ＰＢＳ投与群の流産率（５．０％）と同等であった。Ｖα１４＋ＮＫＴ欠損マウスは千葉大医学部、谷口克らより入手可能である。 On the other hand, when KRN7000 was administered to Vα14 + NKT-deficient (Jα281KO) mice (Kawano T. et al., Science, 278, 1626-1629 (1997)) at the same dose and on the same schedule, the abortion rate was 5.3. %, Which was equivalent to the miscarriage rate (5.0%) of the PBS administration group. Vα14 + NKT-deficient mice are available from Katsushi Taniguchi, Chiba University School of Medicine.
ＫＲＮ７０００がＮＫＴ細胞を活性化する作用を有することを考え合わせると、ＮＫＴ細胞の活性化と流産促進作用は、良好な相関関係を示すことが示された。 Considering that ＮKRN7000 has an effect of activating NKT cells, it was shown that the activation of NKT cells and the effect of promoting abortion show a good correlation.
また、ＩＬ−１２もＮＫＴ細胞を活性化することが知られているが、ＩＬ−１２を同用量、同スケジュールでマウス（（ＣＢＡ×ＤＢＡ／２）Ｆ１）に投与すると、３４％の割合で流産が観察された。この結果は上記の相関関係を強く支持する。 IL-12 is also known to activate NKT cells. However, when IL-12 is administered to mice ((CBA × DBA / 2) F 1 ) at the same dose and the same schedule, a rate of 34% Miscarriage was observed at. This result strongly supports the above correlation.
以上の結果から、ＫＲＮ７０００およびＩＬ−１２は、流産促進作用を有することが判明した。 From the above results, it was revealed that KRN7000 and IL-12 have an abortion promoting effect.
薬理試験例１１：単回投与による急性毒性試験
マウスに対して実施例１の化合物を静脈内投与した。その結果、ＬＤ50値は10ｍｇ／ｋｇ以上であった。また、10ｍｇ／ｋｇで何等特別の症状を示さず低毒性であった。
Pharmacological Test Example 11: Acute toxicity test by single administration The compound of Example 1 was intravenously administered to mice. As a result, the LD50 value was 10 mg / kg or more. Also, at 10 mg / kg, no special symptoms were exhibited and the toxicity was low.
Claims (22)
Ｒ１はＨまたはＯＨであり、
Ｘは７〜２７のいずれかの整数であり、
Ｒ２は下記（ａ）〜（ｅ）からなる群から選択される置換基であり（ここで、Ｙは５〜１７のいずれかの整数である）、
（ａ）−ＣＨ２（ＣＨ２）ＹＣＨ３
（ｂ）−ＣＨ（ＯＨ）（ＣＨ２）ＹＣＨ３
（ｃ）−ＣＨ（ＯＨ）（ＣＨ２）ＹＣＨ（ＣＨ３）２
（ｄ）−ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）ＹＣＨ３
（ｅ）−ＣＨ（ＯＨ）（ＣＨ２）ＹＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３、そして
Ｒ３〜Ｒ９は下記のi)またはii)で定義される置換基である：
ｉ）Ｒ３、Ｒ６、およびＲ８がＨのとき
Ｒ４はＨ、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＨＣＯＣＨ３、または下記基（Ａ）〜（Ｄ）：
Ｒ５はＯＨ、または下記基（Ｅ）および（Ｆ）：
Ｒ７は、ＯＨまたは下記基（Ａ）〜（Ｄ）：
Ｒ９はＨ、ＣＨ３、ＣＨ２ＯＨ、または下記基（Ａ’）〜（Ｄ’）：
ii）Ｒ３、Ｒ６およびＲ７がＨのとき
Ｒ４はＨ、ＯＨ、ＮＨ２、ＮＨＣＯＣＨ３、または下記基（Ａ）〜（Ｄ）：
Ｒ５はＯＨ、または下記基（Ｅ）および（Ｆ）：
Ｒ８はＯＨ、または下記基（Ａ）〜（Ｄ）：
Ｒ９はＨ、ＣＨ３、ＣＨ２ＯＨまたは下記基（Ａ’）〜（Ｄ’）：
R 1 is H or OH;
X is any integer from 7 to 27;
R 2 is a substituent selected from the group consisting of the following (a) to (e) (where Y is an integer of any of 5 to 17);
(A) -CH 2 (CH 2 ) Y CH 3
(B) -CH (OH) ( CH 2) Y CH 3
(C) -CH (OH) ( CH 2) Y CH (CH 3) 2
(D) -CH = CH (CH 2) Y CH 3
(E) -CH (OH) ( CH 2) Y CH (CH 3) CH 2 CH 3, and R 3 to R 9 is a substituent as defined in i) or ii) following:
i) When R 3 , R 6 , and R 8 are H R 4 is H, OH, NH 2 , NHCOCH 3 , or the following groups (A) to (D):
R 5 is OH, or the following groups (E) and (F):
R 7 is OH or the following groups (A) to (D):
R 9 is H, CH 3 , CH 2 OH, or the following groups (A ′) to (D ′):
ii) When R 3 , R 6 and R 7 are H R 4 is H, OH, NH 2 , NHCOCH 3 or the following groups (A) to (D):
R 5 is OH, or the following groups (E) and (F):
R 8 is OH, or the following groups (A) to (D):
R 9 is H, CH 3 , CH 2 OH or the following groups (A ′) to (D ′):
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