JP2004002268A - Collagenase inhibitor and its utilization - Google Patents

Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a collagenase inhibitor containing a specific plant extract as an active ingredient, and to provide a periodontal disease utilizing a collagenase-inhibiting action. <P>SOLUTION: This collagenase inhibitor contains the extract of at least one plant selected from the group consisting of Pala, Kemukus, Sariawan, Widara Upas, Jaha, Lempoyang-wangi, Kayu-rapet, Jaha Kling, Kedawung, Kunyit, Adas, and Kaya Legi(all of the above-described names are Indonesian names) as an active ingredient. <P>COPYRIGHT: (C)2004,JPO

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、コラゲナーゼ阻害剤に関する。より詳細には、特定の植物抽出物を有効成分とするコラゲナーゼ阻害剤に関する。さらに本発明は、かかるコラゲナーゼ阻害作用を利用した抗歯周病剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
現在、歯周病の治療剤には、抗菌作用とコラゲナーゼ阻害作用を有するテトラサイクリン系の抗生物質が主流として使用されているが、薬剤耐性菌の出現や副作用の発生が懸念されるため、使用が制限されているのが実情である。そこで、副作用がなく人体への安全性が高い歯周病の予防または治療剤の開発が期待されている。
【０００３】
ところで、歯周病の発症やその進行には、ポルフィロモナス・ジンジバリス（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ　ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ）が関わっており、それが産生するコラゲナーゼによって歯周組織が破壊されることが知られている（ジャーナル・デンタル・リサーチ（Ｊ．Ｄｅｎｔ．Ｒｅｓ．）Ｎｏ．６３，　ｐｐ．４１２−４２１，（１９８４）、及びジャーナル・デンタル・リサーチ（Ｊ．Ｄｅｎｔ．Ｒｅｓ．）Ｎｏ．６５，　ｐｐ．１３３５−１３４０，（１９８６））。
【０００４】
このためコラゲナーゼ、特に歯周病原性細菌であるポルフィロモナス・ジンジバリス（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ　ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ）が産生するコラゲナーゼを阻害することによって、歯周病の発生やその進行を予防したり、または治療することが可能であると考えられる。
【０００５】
従来よりゴミシ、アセンヤク、ゲンノショウコ、ビンロウジ、大黄、生姜、桂皮、人参、ウワウルシ、セネガ、カンゾウ、キキョウ、シャクヤク、ショウキョウ、タイソウなどの植物抽出物中にコラゲナーゼ阻害作用があることは知られているが（特開昭６２−１４８４２６号、特開平４−２９９３３号、特開平１１−２７９０３９号公報）、本発明の植物の抽出物にコラゲナーゼ阻害作用があることについては知られていない。
【０００６】
さらに歯周病の発症やその進行の阻止には、コラゲナーゼ阻害作用に加えて、コラゲナーゼを産生する歯周病原性菌であるポルフィロモナス・ジンジバリス自体の生育を阻止することが望ましい。従来、本発明の植物抽出物がこうした抗菌作用を有することについても知られていないのが実情である。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】
本発明の目的は、歯周病の発生やその進行の予防または治療に有効に利用できるコラゲナーゼ阻害剤を提供することである。また、本発明の目的はコラゲナーゼ阻害作用、好ましくはコラゲナーゼ阻害作用と抗菌作用を利用した抗歯周病剤を提供することである。
【０００８】
【課題を解決するための手段】
本発明者は、上記課題を解決すべく日夜鋭意研究を重ねていたところ、インドネシア地方においてすでに多年にわたって食用（薬用）に供され人体に対する安全性が確認されている植物の抽出物に、コラゲナーゼ阻害作用、特に歯周病原性細菌であるポルフィロモナス・ジンジバリス（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ　ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ）が産生するコラゲナーゼを阻害する作用があることを見いだした。さらに本発明者は、上記植物抽出物の殆どが歯周病原性菌であるポルフィロモナス・ジンジバリスの生育阻止作用を併せて備えていることを見いだし、これらの植物抽出物が抗歯周病剤として有効であるとの確信を得た。本発明は、かかる知見に基づいて完成されたものである。
【０００９】
すなわち本発明は、下記項１及び２に掲げるコラゲナーゼ阻害剤である：
項１．　Ｐａｌａ（学名：Ｍｙｒｉｓｔｉｃａ　ａｒｇｅｎｔｅａ　Ｗａｒｂｕｒｇ．　Ｍｙｒｉｓｔｉｃａｃｅａｅ）　、Ｋｅｍｕｋｕｓ（学名：Ｐｉｐｅｒ　ｃｕｂｅｂａ　Ｌ．．Ｐｉｐｅｒａｃｅａｅ．）、Ｓａｒｉａｗａｎ、Ｗｉｄａｒａ　Ｕｐａｓ（学名：Ｍｅｒｒｅｍｉａ　ｍａｎｍｏｓａ　Ｈａｌｌ．　Ｃｏｎｖｏｌｖｕｌａｃｅａｅ．）、Ｊａｈａ（学名：Ｔｅｒｍｉｎａｌｉａ　ｂｅｌｅｒｉｃａ　Ｒｏｘｂ．）、Ｌｅｍｐｏｙａｎｇ−ｗａｎｇｉ（学名：Ｚｉｎｇｉｂｅｒ　ａｒｏｍａｔｉｃｕｍ　Ｖａｈｌ．　Ｚｉｎｇｉｂｅｒａｃｅａｅ．）、Ｋａｙｕ−ｒａｐｅｔ（学名：Ｐａｒａｍｅｒｉａ　ｌａｅｖｉｇａｔａ　　Ｍｏｌｄｅｎｋｅ．　Ａｐｏｃｙｎａｃｅａｅ．）、Ｊａｈａ　Ｋｌｉｎｇ（学名：Ｔｅｒｍｉｎａｌｉａ　ａｒｂｏｒｅａ　Ｋ．＆Ｖ．）、Ｋｅｄａｗｕｎｇ（学名：Ｐａｒｋｉａ　ｒｏｘｂｕｒｇｈｉｉ　Ｇ．　Ｄｏｎ．　Ｌｅｇｕｍｉｎｏｓａｅ．）、Ｋｕｎｙｉｔ（学名：Ｃｕｒｃｕｍａ　ｄｏｍｅｓｔｉｃａ　Ｖａｌ．　Ｚｉｎｇｉｂｅｒｓｅａｅ）、Ａｄａｓ（学名：Ｆｏｅｎｉｃｕｌｕｍ　ｖｕｌｇａｒａ　Ｍｉｌｌ．　Ｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒａｅ．）、およびＫａｙａ　Ｌｅｇｉよりなる群から選択される少なくとも１種の植物の抽出物を有効成分とするコラゲナーゼ阻害剤。
項２．　ポルフィロモナス・ジンジバリス（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ　ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ）が産生するコラゲナーゼに対して阻害作用を有する項１記載のコラゲナーゼ阻害剤。
【００１０】
また本発明は、上記項１または２に記載のコラゲナーゼ阻害剤を有効成分とする抗歯周病剤である。当該抗歯周病剤には下記の態様が含まれる。
項３−１．　Ｐａｌａ（学名：Ｍｙｒｉｓｔｉｃａ　ａｒｇｅｎｔｅａ　Ｗａｒｂｕｒｇ．　Ｍｙｒｉｓｔｉｃａｃｅａｅ）　、Ｋｅｍｕｋｕｓ（学名：Ｐｉｐｅｒ　ｃｕｂｅｂａ　Ｌ．．Ｐｉｐｅｒａｃｅａｅ．）、Ｓａｒｉａｗａｎ（学名：Ｐｏｌｙｇａｌａ　ｇｌｏｍｅｒａｔａ　Ｌｏｕｒ．）、Ｗｉｄａｒａ　Ｕｐａｓ（学名：Ｍｅｒｒｅｍｉａ　ｍａｎｍｏｓａ　Ｈａｌｌ．　Ｃｏｎｖｏｌｖｕｌａｃｅａｅ．）、Ｊａｈａ（学名：Ｔｅｒｍｉｎａｌｉａ　ｂｅｌｅｒｉｃａ　Ｒｏｘｂ．）、Ｌｅｍｐｏｙａｎｇ−ｗａｎｇｉ（学名：Ｚｉｎｇｉｂｅｒ　ａｒｏｍａｔｉｃｕｍ　Ｖａｈｌ．　Ｚｉｎｇｉｂｅｒａｃｅａｅ．）、Ｋａｙｕ−ｒａｐｅｔ（学名：Ｐａｒａｍｅｒｉａ　ｌａｅｖｉｇａｔａ　Ｍｏｌｄｅｎｋｅ．　Ａｐｏｃｙｎａｃｅａｅ．）、Ｊａｈａ　Ｋｌｉｎｇ（学名：Ｔｅｒｍｉｎａｌｉａ　ａｒｂｏｒｅａ　Ｋ．＆Ｖ．）、Ｋｅｄａｗｕｎｇ（学名：Ｐａｒｋｉａ　ｒｏｘｂｕｒｇｈｉｉ　Ｇ．　Ｄｏｎ．　Ｌｅｇｕｍｉｎｏｓａｅ．）、Ｋｕｎｙｉｔ（学名：Ｃｕｒｃｕｍａ　ｄｏｍｅｓｔｉｃａ　Ｖａｌ．　Ｚｉｎｇｉｂｅｒｓｅａｅ）、Ａｄａｓ（学名：Ｆｏｅｎｉｃｕｌｕｍ　ｖｕｌｇａｒａ　Ｍｉｌｌ．　Ｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒａｅ．）、およびＫａｙａ　Ｌｅｇｉよりなる群から選択される少なくとも１種の植物のコラゲナーゼ阻害作用を有する抽出物を有効成分とする抗歯周病剤。
項３−２．　上記植物の抽出物がポルフィロモナス・ジンジバリス（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ　ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ）が産生するコラゲナーゼに対して阻害作用を有するものである項３−１に記載する抗歯周病剤。
項３−３．　上記植物（但し、Ｋａｙｕ−ｒａｐｅｔ（学名：Ｐａｒａｍｅｒｉａ　ｌａｅｖｉｇａｔａ　Ｍｏｌｄｅｎｋｅ．　Ａｐｏｃｙｎａｃｅａｅ．）を除く）の抽出物がポルフィロモナス・ジンジバリス（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ　ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ）に対して生育阻害作用を有するものである項３−１または項３−２に記載する抗歯周病剤。
【００１１】
【発明の実施の形態】
（Ａ）コラゲナーゼ阻害剤
本発明において抽出物の原料植物として使用される各種植物は、インドネシア地方で古来より各種生薬や香辛料として伝承的に用いられているものである。例えば、Ｋｅｄａｗｕｎｇ（学名：Ｐａｒｋｉａ　ｒｏｘｂｕｒｇｈｉｉ　Ｇ．　Ｄｏｎ．　Ｌｅｇｕｍｉｎｏｓａｅ．）は疥癬の薬；Ｋａｙｕ−ｒａｐｅｔ（学名：Ｐａｒａｍｅｒｉａ　ｌａｅｖｉｇａｔａ　　Ｍｏｌｄｅｎｋｅ．　Ａｐｏｃｙｎａｃｅａｅ．）は創傷の薬；Ｊａｈａ（学名：Ｔｅｒｍｉｎａｌｉａ　ｂｅｌｅｒｉｃａ　Ｒｏｘｂ．）は便通薬；Ｐａｌａ（学名：Ｍｙｒｉｓｔｉｃａ　ａｒｇｅｎｔｅａ　Ｗａｒｂｕｒｇ．　Ｍｙｒｉｓｔｉｃａｃｅａｅ）は芳香性健胃薬、矯味矯臭剤、および香味料；Ａｄａｓ（学名：Ｆｏｅｎｉｃｕｌｕｍ　ｖｕｌｇａｒａ　Ｍｉｌｌ．　Ｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒａｅ．　）は不眠症、喘息、風邪等の治療薬；Ｗｉｄａｒａ　Ｕｐａｓ（学名：Ｍｅｒｒｅｍｉａ　ｍａｎｍｏｓａ　Ｈａｌｌ．　Ｃｏｎｖｏｌｖｕｌａｃｅａｅ．）は扁桃炎や百日咳の治療薬及び解熱剤；Ｋｕｎｙｉｔ（学名：Ｃｕｒｃｕｍａ　ｄｏｍｅｓｔｉｃａ　Ｖａｌ．　Ｚｉｎｇｉｂｅｒｓｅａｅ）は扁桃炎や歯痛の治療剤；Ｌｅｍｐｏｙａｎｇ　ｗａｎｇｉ（学名：Ｚｉｎｇｉｂｅｒ　ａｒｏｍａｔｉｃｕｍ　Ｖａｈｌ．　Ｚｉｎｇｉｂｅｒａｃｅａｅ．）は咳、風邪及び腹痛の治療剤；Ｓａｒｉａｗａｎは解熱剤や扁桃炎治療薬；またＫｅｍｕｋｕｓ（学名：Ｐｉｐｅｒ　ｃｕｂｅｂａ　Ｌ．　Ｐｉｐｅｒａｃｅａｅ．）は淋病薬として古来より用いられている。
【００１２】
本発明のコラゲナーゼ阻害剤は、上記各種の植物の全草またはその一部（例えば根、茎、葉、果実（種子）、花蕾、樹皮、虫えい、木部、心材等）の溶媒抽出物を有効成分とするものである。抽出に用いられる植物部位は、コラゲナーゼ阻害活性を有する部位であれば特に制限されず、用いる植物に応じて適宜選択調製することができる。例えば、Ｋｅｄａｗｕｎｇ（Ｐａｒｋｉａ　ｒｏｘｂｕｒｇｈｉｉ　Ｇ．　Ｄｏｎ．　Ｌｅｇｕｍｉｎｏｓａｅ．）及びＡｄａｓ（Ｆｏｅｎｉｃｕｌｕｍ　ｖｕｌｇａｒａ　Ｍｉｌｌ．　Ｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒａｅ．）は種子；Ｋｅｍｕｋｕｓ（Ｐｉｐｅｒ　ｃｕｂｅｂａ　Ｌ．　Ｐｉｐｅｒａｃｅａｅ．）及びＪａｈａ　Ｋｌｉｎｇ（Ｔｅｒｍｉｎａｌｉａ　ａｒｂｏｒｅａ　Ｋ．＆Ｖ．）は果実；Ｊａｈａ（Ｔｅｒｍｉｎａｌｉａ　ｂｅｌｅｒｉｃａ　Ｒｏｘｂ．）は果皮；Ｌｅｍｐｏｙａｎｇ−ｗａｎｇｉ（Ｚｉｎｇｉｂｅｒａｒｏｍａｔｉｃｕｍ　Ｖａｈｌ．　Ｚｉｎｇｉｂｅｒａｃｅａｅ．）及び　Ｋｕｎｙｉｔ（Ｃｕｒｃｕｍａ　ｄｏｍｅｓｔｉｃａ　Ｖａｌ．　Ｚｉｎｇｉｂｅｒｓｅａｅ）は根または根塊；並びにＳａｒｉａｗａｎは樹皮を挙げることができる。
【００１３】
これらの植物の全草又はその一部はそのまま若しくは破砕物として抽出操作に付してもよいし、また乾燥後、必要に応じて粉砕粉体状として抽出操作に付してもよい。
【００１４】
上記抽出に用いられる溶媒としては、特に制限されず、低級アルコールや多価アルコール等のアルコール類、その他、非極性溶媒および極性溶媒を広く用いることができる。より具体的には低級アルコールとしては、メタノール、エタノール、プロパノール及びイソプロピルアルコール、ブタノール等の炭素数１〜４のアルコール；多価アルコールとしては、グリセリン、ポリエチレングリコール等を挙げることができる。その他の非極性溶媒としては、ペンタン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン、ノナン、デカン等の飽和炭化水素あるいはヘキセン、ヘプテン等の不飽和炭化水素等が、また極性溶媒としては、水、アセトン、エチルエーテル、酢酸エチル、酢酸メチル等が使用される。これらの溶媒は、単独で用いてもよく、二種以上を組み合わせて使用することもできる。例えば脂肪分の多い原料などの場合は、非極性溶媒で脱脂抽出処理した後、各種任意の溶媒で抽出処理してもよいし、また含水有機溶媒を用いて抽出処理することもできる。好ましくは、水、エタノール、プロパノール及びイソプロピルアルコール等の低級アルコール、並びにこれらの混合物である。
【００１５】
抽出方法としては、特に制限されることなく一般に用いられる方法を採用することができる。制限はされないが、例えば溶媒中に全草若しくは部分（そのまま若しくは粗末、細切物）、又はそれらの乾燥破砕物（粗末、細切物、粉末など）を冷浸、温浸等によって浸漬する方法、加温し攪拌しながら抽出を行い、濾過して抽出液を得る方法、またはパーコレーション法等を挙げることができる。
【００１６】
得られた抽出液は、必要に応じてろ過または遠心分離によって固形物を除去した後、使用の態様に応じて、そのまま用いるか、または溶媒を留去して一部濃縮若しくは乾燥して用いてもよい。また濃縮乃至は乾燥後、該濃縮乃至は乾燥物を非溶解性溶媒で洗浄して精製して用いても、またこれを　更に適当な溶剤に溶解もしくは懸濁して用いることもできる。また、抽出液を、慣用されている精製法、例えば向流分配法や液体クロマトグラフィー等を用いて、コラゲナーゼ阻害活性を有する画分を取得、精製して使用することも可能である。更に、本発明においては、例えば、上記のようにして得られた溶媒抽出液を、減圧乾燥、凍結乾燥等の通常の手段により植物エキス乾燥物として使用することもできる。
【００１７】
なお、植物抽出物のコラゲナーゼ阻害活性は、当業界において使用される常法に従って測定し評価することができ（永井ら、炎症４，　１２３（１９８４）等）、簡便には、市販のコラゲナーゼ活性測定キットを用いて実施することができる。本発明において使用される植物抽出物は、好ましくは歯周病原性細菌であるポルフィロモナス・ジンジバリス（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ　ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ）が産生するコラゲナーゼに対して阻害活性を有するものである。かかるコラゲナーゼ阻害活性は、具体的には後述する試験例に記載する方法に従って測定し評価することができる。
【００１８】
本発明のコラゲナーゼ阻害剤は上記の植物抽出物を有効成分とするものであり、食品、医薬部外品又は医薬品などの各種口腔用組成物の成分として配合されることにより、歯周病の発生やその進行を防止したりまたは歯周病を改善する抗歯周病剤として有効に利用することができる。また、コラゲナーゼは一般に皮膚の老化やリウマチに関与することが知られている（Ｊ．　Ｅｎｚｙｍｅ　Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ，　２．１　（１９８７）、Ａｒｉｔｈｒｉｔｉｓ　Ｒｈｅｕｍ．，２０，　１２３１　（１９７７））。本発明のコラゲナーゼ阻害剤は、上記のコラゲナーゼを抑制する作用を有することから、皮膚の老化やリウマチ等の予防または改善にも利用できる可能性がある。
【００１９】
なお、本発明のコラゲナーゼ阻害剤は、上記の植物抽出物だけからなるものであってもよいし、また他成分として食品、医薬部外品又は医薬品の分野で使用が許容されている任意の担体や添加剤を含有していてもよい。後者の場合、コラゲナーゼ阻害剤中に配合される植物抽出物の量は、得られるコラゲナーゼ阻害剤が植物抽出物に基づいてコラゲナーゼ阻害活性を有する限り特に制限されない。具体的には、使用する植物の種類によって異なり一概に規定することはできないが、コラゲナーゼ阻害剤１００重量％中、植物抽出物（乾燥物換算）を通常少なくとも０．０００１重量％、好ましくは０．０００１〜２５重量％、より好ましくは０．００１〜１０重量％の割合で含むように調製することができる。
【００２０】
（Ｂ）抗歯周病剤
歯周病は細菌由来の炎症性口腔疾患であり、歯周病原性細菌の増加、細菌の組織内侵入や感染による宿主応答等がその要因となっている。成人性歯周病の病原菌として最も有力視されているものとしてポルフィロモナス・ジンジバリス（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ　ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ）が挙げられ、歯周病患者の歯周ポケット深部から高頻度に分離されることが報告されている。かかる菌は、コラゲナーゼ、フォスフォリパーゼＡ、アルカリフォスファターゼ、酸フォスファターゼなどの分解酵素を産生し、中でもコラゲナーゼは歯周組織のコラーゲンを分解し、組織破壊を導く直接的な因子といわれている。よって、歯周病の発生やその進行を予防したり、また治療するためには、歯周病の病因性因子となるコラゲナーゼの活性を阻害することが重要である。さらに当該コラゲナーゼ産生する歯周病原性菌であるポルフィロモナス・ジンジバリスそのものの生育を阻止して除菌することが好ましい。
【００２１】
本発明の抗歯周病剤は、前述する植物抽出物が有するコラゲナーゼ阻害作用、特に該植物抽出物が有する歯周病原性細菌：ポルフィロモナス・ジンジバリス（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ　ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ　）が産生するコラゲナーゼに対する阻害作用を利用することにより歯周病の発症やその進行を予防したり、またはその改善に有用に使用されるものであり、前述する植物抽出物のいずれか少なくとも１種を有効成分とするものである。
【００２２】
上記抗歯周病剤のうち、好適な抗歯周病剤は、Ｐａｌａ（学名：Ｍｙｒｉｓｔｉｃａ　ａｒｇｅｎｔｅａ　Ｗａｒｂｕｒｇ．　Ｍｙｒｉｓｔｉｃａｃｅａｅ）　、Ｋｅｍｕｋｕｓ（学名：Ｐｉｐｅｒ　ｃｕｂｅｂａ　Ｌ．．Ｐｉｐｅｒａｃｅａｅ．）、Ｓａｒｉａｗａｎ（学名：Ｐｏｌｙｇａｌａ　ｇｌｏｍｅｒａｔａ　Ｌｏｕｒ．）、Ｗｉｄａｒａ　Ｕｐａｓ（学名：Ｍｅｒｒｅｍｉａ　ｍａｎｍｏｓａ　Ｈａｌｌ．　Ｃｏｎｖｏｌｖｕｌａｃｅａｅ．）、Ｊａｈａ（学名：Ｔｅｒｍｉｎａｌｉａ　ｂｅｌｅｒｉｃａ　Ｒｏｘｂ．）、Ｌｅｍｐｏｙａｎｇ−ｗａｎｇｉ（学名：Ｚｉｎｇｉｂｅｒ　ａｒｏｍａｔｉｃｕｍ　Ｖａｈｌ．　Ｚｉｎｇｉｂｅｒａｃｅａｅ．）、Ｊａｈａ　Ｋｌｉｎｇ（学名：Ｔｅｒｍｉｎａｌｉａ　ａｒｂｏｒｅａ　Ｋ．＆Ｖ．）、Ｋｅｄａｗｕｎｇ（学名：Ｐａｒｋｉａ　ｒｏｘｂｕｒｇｈｉｉ　Ｇ．　Ｄｏｎ．　Ｌｅｇｕｍｉｎｏｓａｅ．）、Ｋｕｎｙｉｔ（学名：Ｃｕｒｃｕｍａ　ｄｏｍｅｓｔｉｃａ　Ｖａｌ．　Ｚｉｎｇｉｂｅｒｓｅａｅ）、Ａｄａｓ（学名：Ｆｏｅｎｉｃｕｌｕｍ　ｖｕｌｇａｒａ　Ｍｉｌｌ．　Ｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒａｅ．）、およびＫａｙａ　Ｌｅｇｉよりなる群から選択されるいずれか少なくとも１種の植物の抽出物を有効成分として含有するものである。これらの植物抽出物を有効成分とする抗歯周病剤は、コラゲナーゼ阻害作用に加えて、そのコラゲナーゼを産生する歯周病原性菌であるポルフィロモナス・ジンジバリスに対する生育阻害作用（抗菌作用）を有しているため、より優れた歯周病予防または治療効果を発揮することができる。
【００２３】
なお、本発明の抗歯周病剤は、上記の植物抽出物だけからなるものであってもよいし、また他成分として食品、医薬部外品又は医薬品の分野で使用が許容されている任意の担体や添加剤、特に経口組成物や口腔用組成物への適用が許容されている担体や添加剤を含有していてもよい。後者の場合、抗歯周病剤中に配合される植物抽出物の量は、得られる抗歯周病剤が植物抽出物に基づいてコラゲナーゼ阻害活性を有する限り特に制限されない。具体的には、使用する植物の種類によって異なり一概には規定できないが、抗歯周病剤１００重量％中、植物抽出物（乾燥物換算）を通常少なくとも０．０００１重量％、好ましくは０．０００１〜２５重量％、好ましくは０．００１〜１０重量％の割合で含むように調製することができる。
【００２４】
本発明のコラゲナーゼ阻害剤もしくは抗歯周病剤は、食品、医薬部外品または医薬品などの各種口腔用組成物の成分として配合されることにより、口腔内の歯周病の発生やその進行を予防したりまたは治療するのに有効に利用することができる。
【００２５】
よって本発明は、上記植物抽出物を抗歯周病剤として含む口腔用組成物を提供するものでもある。なお、植物抽出物は前記に掲げる抽出物を１種単独で配合されても、また２種以上の任意に組み合わせて配合されてもよい。
【００２６】
なお、本発明において口腔用組成物とは、例えば飲食物のように経口的に摂取されるもの並びに歯磨きやマウスウオッシュのように口腔内で用いられるものの双方を含むものである。口腔用組成物として具体的には、例えばトローチ、チューインガム、キャンディ、グミキャンディ、チョコレート、ジュース等の各種食品；歯磨剤（練り状、液体状、粉末固形状），マウススプレーなどの口中清涼剤、咀嚼剤、トローチ剤、口腔用パスタ剤、うがい剤、シロップ剤等の医薬品又は医薬部外品；歯磨剤、マウスウォッシュ、マウスリンスなどの口腔内化粧品を挙げることができる。好ましくは、トローチ，チューインガム及びキャンディ等の食品、並びに歯磨剤，マウススプレー，マウスウォッシュ及びマウスリンスなどの医薬品、医薬部外品または口腔内化粧品を挙げることができる。これらの形態並びに剤形は、特に制限されず、種類に応じて任意に定めることができる。
【００２７】
口腔用組成物に配合される植物抽出物の量は、口腔用組成物が植物抽出物に基づいてコラゲナーゼ阻害活性を有する限り特に制限されない。
【００２８】
具体的には、使用する植物の種類によって異なり一概には規定できないが、口腔用組成物１００重量％中、植物抽出物（乾燥物換算）を通常０．０００１重量％以上、好ましくは０．００１重量％以上、より好ましくは０．０１重量％以上の割合で含むように調製することができる。なお、コラゲナーゼ阻害作用または抗歯周病作用という本発明の効果の点からは、植物抽出物の配合割合の上限は特に制限されるものではない。上限は口腔用組成物の安定性や他の成分との関係等から定めることができ、通常口腔用組成物１００重量％中、植物抽出物の乾燥物換算で２５重量％を例示することができる。好ましくは１０重量％である。
【００２９】
本発明の口腔用組成物は、本発明の効果を妨げない限り、他の成分として、公知若しくは将来公知となり得る抗菌剤（例えば、Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ菌、Ｓ．ｍｕｔａｎｓ　菌、Ｓ．ｓｏｂｒｉｎｕｓ菌等の歯周病原性またはう蝕性細菌に対する生育阻止剤等）、抗ＧＴａｓｅ剤等の抗う蝕剤、若しくは消炎剤などの成分と組み合わせて配合することもできる。抗菌剤としては、塩酸クロルヘキシジン、塩化セチルピリジニウム、ソルビン酸、ヒノキチオール等が；抗う蝕剤としてはデキストラナーゼ、ムタナーゼ、モノフルオロリン酸ナトリウム、フッ化ナトリウム、フッ化第一錫等が；また消炎剤としては塩化リゾチーム、グリチルレチン酸、グリチルリチン酸二カリウム等を例示することができる。
【００３０】
本発明の口腔用組成物は、植物抽出物（コラゲナーゼ阻害剤、抗歯周病剤）に加えて、口腔用組成物の種類に応じて、口腔用組成物に通常配合される各種成分を用いて調製することができる。
【００３１】
例えば口腔用組成物が練歯磨の場合、第２リン酸カルシウム、炭酸カルシウム、不溶性メタリン酸ナトリウム、非晶質シリカ、酸化アルミニウム等の研磨剤；カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、アルギン酸塩、カラゲナン、アラビアゴム、ポリビニルアルコール等の粘結剤；ポリエチレングリコール、ソルビトール、グリセリン、プロピレングリコール等の粘稠剤；ラウリル硫酸ナトリウム、ドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウム、水素添加ココナッツ脂肪酸モノグイセリドモノ硫酸ナトリウム、ラウリルスルホ酢酸ナトリウム、Ｎ−ラウロイルサルコシン酸ナトリウム、Ｎ−アシルグルタミン酸塩、ショ糖脂肪酸エステル等の発泡剤等を挙げることができる。また更に、通常用いられるメントール等の香料並びに矯味剤又は甘味剤、防腐剤等を配合することもできる。マウスウオッシュ等の洗口剤並びにチューイングガム等の食品の場合についても、常法の成分を併用することができる。なお、併用配合される甘味剤としては、う蝕性が低いか又はないものが好ましく、例えばＤ−キシロース、キシリトール、サッカリンナトリウム、アスパルテーム、トレハロースなどを好適に挙げることができる。
【００３２】
【実施例】
以下、製造例、試験例及び実施例により本発明をより詳細に説明するが、本発明はかかる実施例等によって何ら制限されるものではない。
【００３３】
＜製造例＞
製造例１
Ｐａｌａ（学名：Ｍｙｒｉｓｔｉｃａ　ａｒｇｅｎｔｅａ　Ｗａｒｂｕｒｇ．　Ｍｙｒｉｓｔｉｃａｃｅａｅ）の乾燥粉砕物１００ｇに対して、３倍量のヘキサンを加え、室温で２４時間抽出し、ろ過した。ろ過残渣に更に１倍量のヘキサン加え攪拌、ろ過を行ない試料の脱脂を行なった。脱脂された試料は乾燥後、５倍量のメタノールにて、室温４８時間抽出を行なった。これをろ過し得られた抽出液をエバポレーターにて濃縮、凍結乾燥を行ない植物抽出物（以下、Ｐａｌａ抽出物という）を４ｇ得た。
【００３４】
製造例２
Ｋｅｍｕｋｕｓ（学名：Ｐｉｐｅｒ　ｃｕｂｅｂａ　Ｌ．　Ｐｉｐｅｒａｃｅａｅ．）の果実乾燥物の粉砕物１００ｇに対して、３倍量のヘキサンを加え、室温で２４時間抽出し、ろ過した。ろ過残渣に更に１倍量のヘキサン加え攪拌、ろ過を行ない試料の脱脂を行なった。脱脂された試料は乾燥後、５倍量のメタノールにて、室温４８時間抽出を行なった。これをろ過し得られた抽出液をエバポレーターにて濃縮、凍結乾燥を行ない植物抽出物（以下、Ｋｅｍｕｋｕｓ抽出物という）を１０ｇ得た。
【００３５】
製造例３
Ｓａｒｉａｗａｎの樹皮乾燥物の粉砕物１００ｇに対して、３倍量のヘキサンを加え、室温で２４時間抽出し、ろ過した。ろ過残渣に更に１倍量のヘキサン加え攪拌、ろ過を行ない試料の脱脂を行なった。脱脂された試料は乾燥後、５倍量のメタノールにて、室温４８時間抽出を行なった。これをろ過し得られた抽出液をエバポレーターにて濃縮、凍結乾燥を行ない植物抽出物（以下、Ｓａｒｉａｗａｎ抽出物という）を５ｇ得た。
【００３６】
製造例４
Ｗｉｄａｒａ　Ｕｐａｓ（学名：Ｍｅｒｒｅｍｉａ　ｍａｎｍｏｓａ　Ｈａｌｌ．　Ｃｏｎｖｏｌｖｕｌａｃｅａｅ．）の乾燥破砕物１００ｇを用いて、製造例１の方法に従って抽出及び凍結乾燥を行ない植物抽出物（以下、Ｗｉｄａｒａ　Ｕｐａｓ抽出物という）を４ｇ得た。
【００３７】
製造例５
Ｊａｈａ（学名：Ｔｅｒｍｉｎａｌｉａ　ｂｅｌｅｒｉｃａ　Ｒｏｘｂ．）の果皮乾燥物の破砕物１００ｇを用いて、製造例１に従って抽出及び凍結乾燥を行い植物抽出物（以下、Ｊａｈａ抽出物という）を１０ｇ得た。
【００３８】
製造例６
Ｌｅｍｐｏｙａｎｇ−ｗａｎｇｉ（学名：Ｚｉｎｇｉｂｅｒ　ａｒｏｍａｔｉｃｕｍ　Ｖａｈｌ．　Ｚｉｎｇｉｂｅｒａｃｅａｅ．）の根茎乾燥物の破砕物１００ｇを用いて、製造例１の方法に従って抽出及び凍結乾燥を行ない植物抽出物（以下、Ｌｅｍｐｏｙａｎｇ　ｗａｎｇｉ抽出物という）を４ｇ得た。
【００３９】
製造例７
Ｋａｙｕ−ｒａｐｅｔ（学名：Ｐａｒａｍｅｒｉａ　ｌａｅｖｉｇａｔａ　Ｍｏｌｄｅｎｋｅ．　Ａｐｏｃｙｎａｃｅａｅ．）の乾燥破砕物１００ｇを用いて、製造例１に従って抽出及び凍結乾燥を行い植物抽出物（以下、Ｋａｙｕ−ｒａｐｅｔ抽出物という）を１０ｇ得た。
【００４０】
製造例８
Ｊａｈａ　Ｋｌｉｎｇ（学名：Ｔｅｒｍｉｎａｌｉａ　ａｒｂｏｒｅａ　Ｋ．＆Ｖ．）の果実の乾燥物の粉砕物１００ｇに対して、３倍量のヘキサンを加え、室温で２４時間抽出し、ろ過した。ろ過残渣に更に１倍量のヘキサン加え攪拌、ろ過を行ない試料の脱脂を行なった。脱脂された試料は乾燥後、５倍量のメタノールにて、室温４８時間抽出を行なった。これをろ過し得られた抽出液をエバポレーターにて濃縮、凍結乾燥を行ない植物抽出物（以下、Ｊａｈａ　Ｋｌｉｎｇ抽出物という）２０ｇを得た。
【００４１】
製造例９
Ｋｅｄａｗｕｎｇ（学名：Ｐａｒｋｉａ　ｒｏｘｂｕｒｇｈｉｉ　Ｇ．　Ｄｏｎ．　Ｌｅｇｕｍｉｎｏｓａｅ．）の種子乾燥物１００ｇを用いて、製造例１に従って抽出及び凍結乾燥を行い植物抽出物（以下、Ｋｅｄａｗｕｎｇ抽出物という）を１０ｇ得た。
【００４２】
製造例１０
Ｋｕｎｙｉｔ（学名：Ｃｕｒｃｕｍａ　ｄｏｍｅｓｔｉｃａ　Ｖａｌ．　Ｚｉｎｇｉｂｅｒｓｅａｅ）の根茎乾燥物の破砕物１００ｇを用いて、製造例１の方法に従って抽出及び凍結乾燥を行ない植物抽出物（以下、Ｋｕｎｙｉｔ抽出物という）を４ｇ得た。
【００４３】
製造例１１
Ａｄａｓ（学名：Ｆｏｅｎｉｃｕｌｕｍ　ｖｕｌｇａｒａ　Ｍｉｌｌ．　Ｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒａｅ．）の種子乾燥物の破砕物１００ｇを用いて、製造例１の方法に従って抽出及び凍結乾燥を行ない植物抽出物（以下、Ａｄａｓ抽出物という）を４ｇ得た。
【００４４】
製造例１２
Ｋａｙｕ　Ｌｅｇｉの乾燥破砕物１００ｇを用いて、製造例１の方法に従って抽出及び凍結乾燥を行ない植物抽出物（以下、Ｋａｙｕ　Ｌｅｇｉ抽出物という）を４ｇ得た。
【００４５】
＜試験例＞
試験例１
上記製造例１〜６及び８〜１２で調製した（１）Ｐａｌａ抽出物、（２）Ｋｅｍｕｋｕｓ抽出物、（３）Ｓａｒｉａｗａｎ抽出物、（４）Ｗｉｄａｒａ　Ｕｐａｓ抽出物、（５）Ｊａｈａ抽出物、（６）Ｌｅｍｐｏｙａｎｇ　ｗａｎｇｉ抽出物、（８）Ｊａｈａ　Ｋｌｉｎｇ抽出物、（９）Ｋｅｄａｗｕｎｇ抽出物、（１０）Ｋｕｎｙｉｔ抽出物、（１１）Ａｄａｓ抽出物、及び（１２）Ｋａｙｕ　Ｌｅｇｉ抽出物を被験試料として用いて、歯周病原性ポルフィロモナス・ジンジバリスに対する生育阻害作用を測定した。
【００４６】
具体的には、まず、これらの各植物抽出物１０ｍｇをメタノール１ｍｌに溶解して植物抽出液とした。次いで、ＧＡＭブイヨン培地（ＧＡＭブイヨン５９ｇ、精製水１０００ｍｌ）に上記で調製した植物抽出液を用いて植物抽出物濃度が５００μｇ／ｍｌとなるような割合で添加し、調製した当該溶液をＧＡＭブイヨン培地で順次希釈することにより、４８穴マイクロプレートに２倍希釈系列を作成した（植物抽出物濃度：５００μｇ／ｍｌ、２５０μｇ／ｍｌ、１２５μｇ／ｍｌ、６３μｇ／ｍｌ、３１μｇ／ｍｌ、１６μｇ／ｍｌ、７．８μｇ／ｍｌ、３．９μｇ／ｍｌ）。調製した各ウエルにポルフィロモナス・ジンジバリス（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ　ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ）（ＡＴＣＣ　３３２７７株）培養菌液を１０％の割合で添加し、３７℃で３日間、嫌気条件で静置培養した。次いで菌の生育の有無から、各植物抽出物の最小生育阻害濃度（ＭＩＣ：μｇ／ｍｌ）を調べた。結果を表１に示す。
【００４７】
【表１】

【００４８】
表１の結果からわかるように、上記の植物抽出物は、（１０）Ｋｕｎｙｉｔ抽出物、（１２）Ｋａｙｕ　Ｌｅｇｉ抽出物　＞　（３）Ｓａｒｉａｗａｎ抽出物，　（６）Ｌｅｍｐｏｙａｎｇ　ｗａｎｇｉ抽出物　＞　（１）Ｐａｌａ抽出物、（２）Ｋｅｍｕｋｕｓ抽出物、（５）Ｊａｈａ抽出物、（８）Ｊａｈａ　Ｋｌｉｎｇ抽出物，　（１１）Ａｄａｓ抽出物　＞　（４）Ｗｉｄａｒａ　Ｕｐａｓ抽出物、（９）Ｋｅｄａｗｕｎｇ抽出物の順で、歯周病原性ポルフィロモナス・ジンジバリスに対して強い抗菌性（生育阻害作用）を有していることが確認された。
【００４９】
試験例２
上記製造例１〜１２で調製した（１）Ｐａｌａ抽出物、（２）Ｋｅｍｕｋｕｓ抽出物、（３）Ｓａｒｉａｗａｎ抽出物、（４）Ｗｉｄａｒａ　Ｕｐａｓ抽出物、（５）Ｊａｈａ抽出物、（６）Ｌｅｍｐｏｙａｎｇ　ｗａｎｇｉ抽出物、（７）Ｋａｙｕ−ｒａｐｅｔ抽出物、（８）Ｊａｈａ　Ｋｌｉｎｇ抽出物、（９）Ｋｅｄａｗｕｎｇ抽出物、（１０）Ｋｕｎｙｉｔ抽出物、（１１）Ａｄａｓ抽出物、及び（１２）Ｋａｙｕ　Ｌｅｇｉ抽出物を被験試料として用いて、歯周病原性ポルフィロモナス・ジンジバリス産生コラゲナーゼに対する阻害作用を求めた。
【００５０】
コラゲナーゼ阻害作用は、市販のコラゲナーゼ活性測定キット（コラゲノキットＣＬＮ−１００、コラーゲン技術研修会（株）製）を用いて評価した。具体的には、蛍光標識コラーゲンを基質とし被験試料の存在下でコラゲナーゼと反応して生じる分解物を、３５℃で選択的に変性させた後、エタノールで抽出し、抽出された分解物の蛍光強度を測定することにより被験体のコラゲナーゼ阻害活性を算出した。すなわち、被験試料存在下でのコラゲナーゼ活性の減少率を阻害率としてコラゲナーゼ活性阻害率を求めた。
【００５１】
（ａ）　　コラゲナーゼ溶液の調製
ポルフィロモナス・ジンジバリス（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ　ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ）が産生するコラゲナーゼ溶液を以下の方法によって調製した。
【００５２】
ポルフィロモナス・ジンジバリス（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ　ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ）菌ＡＴＣＣ　３３２７７を血液平板培地（トリプチケイス・ソイ・ブロス４０ｇ、ヘミン５ｍｇ、メナジオン０．５ｍｇ、ウマ脱繊維血液１００ｍｌ、精製水９００ｍｌ）に植菌して、４日間嫌気的に培養を行い、次いで得られた菌を酵素抽出用液体培地（ＧＡＭブイヨン５９ｇ、精製水１０００ｍｌ）に接種し、さらに３７℃で３日間嫌気的に培養した。得られた培養液を遠心して、上清を８０％硫酸アンモニウム処理して遠心（１２０００×Ｇ、２０分）により８０％硫酸アンモニウム画分（沈殿物）を収集した。この画分を５ｍＭ　塩化カルシウムを含む０．０５Ｍトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．５）２５０ｍｌに溶解し、同緩衝液に対して透析を行った。透液内液を限外濾過して（０．２２μｍ、ＭＩＬＩＰＯＲＥ）、これをポルフィロモナス・ジンジバリス産生コラゲナーゼ溶液として以下の実験に使用した。
【００５３】
（ｂ）　コラゲナーゼ阻害作用の測定
製造例１〜１２で調製した各種の植物抽出物についてコラゲナーゼ阻害作用を測定した。具体的にまずポルフィロモナス・ジンジバリス産生コラゲナーゼ溶液（２．６９Ｕ／ｍｌ）１００μｌ、蛍光標識コラーゲン溶液２００μｌ及び被験試料（各植物抽出物の希釈液）１００μｌを混合して計４００μｌとし、これを３５℃で２時間反応させて、反応後に分解物の蛍光強度を測定して、コラゲナーゼ活性を算出した。なお、被験試料（植物抽出物の希釈液）は、製造例１〜１２で調製した各植物抽出物を５ｍＭ　塩化カルシウムを含む０．０５Ｍトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．５）で０．１ｍｇ／ｍｌ濃度となるように調製したものを使用した。また、対照試験として、上記試料溶液（植物抽出物の希釈液）に代えて５ｍＭ　塩化カルシウムを含む０．０５Ｍトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７．５）１００μｌを用いて（コントロール）、上記と同様にコラゲナーゼ活性を測定した。植物抽出物のコラゲナーゼ活性阻害率は、以下の式から求めた（１Ｕ＝１μｇのコラーゲン分解／分）。
【００５４】
【数１】

【００５５】
試験結果を表２に示す。なお、コントロールのコラゲナーゼ活性は２．６９Ｕ／ｍｌだった。
【００５６】
【表２】

【００５７】
この結果から、わかるように、上記植物抽出物はいずれもポルフィロモナス・ジンジバリス（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ　ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ）が産生するコラゲナーゼに対して阻害作用を有しており、中でも（１）Ｐａｌａ抽出物、（２）Ｋｅｍｕｋｕｓ抽出物、（３）Ｓａｒｉａｗａｎ抽出物、（４）Ｗｉｄａｒａ　Ｕｐａｓ抽出物、（５）Ｊａｈａ抽出物、（６）Ｌｅｍｐｏｙａｎｇ　ｗａｎｇｉ抽出物、（８）Ｊａｈａ　Ｋｌｉｎｇ抽出物は強いコラゲナーゼ阻害活性を有し、特に（２）Ｋｅｍｕｋｕｓ抽出物、（５）Ｊａｈａ抽出物は、極めて強いコラゲナーゼ阻害作用を有することが分かった。
【００５８】
＜実施例＞
以下、本発明の植物抽出物（コラゲナーゼ阻害剤、抗歯周病剤）の適用例を実施例として記載する。なお、各実施例において、植物抽出物として上記製造例１〜１２で調製した（１）Ｐａｌａ抽出物、（２）Ｋｅｍｕｋｕｓ抽出物、（３）Ｓａｒｉａｗａｎ抽出物、（４）Ｗｉｄａｒａ　Ｕｐａｓ抽出物、（５）Ｊａｈａ抽出物、（６）Ｌｅｍｐｏｙａｎｇ　ｗａｎｇｉ抽出物、（７）Ｋａｙｕ−ｒａｐｅｔ抽出物、（８）Ｊａｈａ　Ｋｌｉｎｇ抽出物、（９）Ｋｅｄａｗｕｎｇ抽出物、（１０）Ｋｕｎｙｉｔ抽出物、（１１）Ａｄａｓ抽出物、及び（１２）Ｋａｙｕ　Ｌｅｇｉ抽出物を用いた。また、各処方の単位は特に言及しない限り、重量部を意味するものである。
【００５９】

【００６０】

【００６１】
実施例３　糖衣タブレット
錠剤部分２００重量部を、糖衣部１３０重量部で糖衣した口中清涼剤を作成した。
【００６２】

【００６３】

【００６４】

【００６５】

【００６６】

【００６７】

【００６８】

【００６９】

【００７０】
【発明の効果】
本発明のコラゲナーゼ阻害剤は特定の植物抽出物〔（１）Ｐａｌａ抽出物、（２）Ｋｅｍｕｋｕｓ抽出物、（３）Ｓａｒｉａｗａｎ抽出物、（４）Ｗｉｄａｒａ　Ｕｐａｓ抽出物、（５）Ｊａｈａ抽出物、（６）Ｌｅｍｐｏｙａｎｇ　ｗａｎｇｉ抽出物、（７）Ｋａｙｕ−ｒａｐｅｔ抽出物、（８）Ｊａｈａ　Ｋｌｉｎｇ抽出物、（９）Ｋｅｄａｗｕｎｇ抽出物、（１０）Ｋｕｎｙｉｔ抽出物、（１１）Ａｄａｓ抽出物、及び（１２）Ｋａｙｕ　Ｌｅｇｉ抽出物〕を有効成分とするものである。当該植物抽出物は、特に歯周病原性菌であるポルフィロモナス・ジンジバリス（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ　ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ）　が産生するコラゲナーゼを阻害する作用に優れていることから、食品、医薬部外品又は医薬品などの各種口腔用組成物の成分として配合されることにより、歯周病の発生やその進行を防止したりまたは歯周病を改善する作用を有する抗歯周病剤として、また口腔用組成物の成分として有効に利用することができる。
【００７１】
上記植物抽出物の中でも、（１）Ｐａｌａ抽出物、（２）Ｋｅｍｕｋｕｓ抽出物、（３）Ｓａｒｉａｗａｎ抽出物、（４）Ｗｉｄａｒａ　Ｕｐａｓ抽出物、（５）Ｊａｈａ抽出物、（６）Ｌｅｍｐｏｙａｎｇ　ｗａｎｇｉ抽出物、（８）Ｊａｈａ　Ｋｌｉｎｇ抽出物、（９）Ｋｅｄａｗｕｎｇ抽出物、（１０）Ｋｕｎｙｉｔ抽出物、（１１）Ａｄａｓ抽出物、及び（１２）Ｋａｙｕ　Ｌｅｇｉ抽出物、特に（１０）Ｋｕｎｙｉｔ抽出物、（１２）Ｋａｙｕ　Ｌｅｇｉ抽出物、（３）Ｓａｒｉａｗａｎ抽出物、（６）Ｌｅｍｐｏｙａｎｇ　ｗａｎｇｉ抽出物、（１）Ｐａｌａ抽出物、（２）Ｋｅｍｕｋｕｓ抽出物、（５）Ｊａｈａ抽出物、（８）Ｊａｈａ　Ｋｌｉｎｇ抽出物及び（１１）Ａｄａｓ抽出物は、ポルフィロモナス・ジンジバリスに対して優れた抗菌作用（生育阻止作用）を有しており、抗歯周病剤として、また口腔用組成物の成分として有効に利用することができる。
【００７２】
すなわち、本発明の抗歯周病剤または口腔用組成物は、植物抽出物のポルフィロモナス・ジンジバリス産生コラゲナーゼ阻害活性または／及びポルフィロモナス・ジンジバリスに対する抗菌作用（生育阻止作用）に基づいて、歯周病の発生やその進行の防止または歯周病の改善に有用である。[0001]
TECHNICAL FIELD OF THE INVENTION
The present invention relates to collagenase inhibitors. More specifically, the present invention relates to a collagenase inhibitor containing a specific plant extract as an active ingredient. Further, the present invention relates to an anti-periodontal agent utilizing such collagenase inhibitory action.
[0002]
[Prior art]
Currently, tetracycline antibiotics, which have antibacterial and collagenase inhibitory activities, are mainly used as treatments for periodontal disease.However, there is concern about the emergence of drug-resistant bacteria and the occurrence of side effects. The fact is that it is restricted. Therefore, development of a preventive or therapeutic agent for periodontal disease which has no side effects and is highly safe for the human body is expected.
[0003]
By the way, Porphyromonas gingivalis (Porphyromonas gingivalis) Are involved, and it is known that collagenase produced by the enzyme destroys periodontal tissue (Journal Dental Research (J. Dent. Res.) No. 63, pp. 412-4211, ( 1984), and Journal Dental Research (J. Dent. Res.) No. 65, @pp. 1335-1340, (1986)).
[0004]
Therefore, collagenases, especially Porphyromonas gingivalis, a periodontal pathogenic bacterium (Porphyromonas gingivalis) Is considered to be able to prevent or treat the onset and progression of periodontal disease by inhibiting collagenase produced by the enzyme.
[0005]
Conventionally, it is known that collagenase inhibitory action is present in plant extracts such as ground bean, assemblage, gennoshoko, areca, rhubarb, ginger, cinnamon bark, carrot, uwaurushi, senega, licorice, sycamore, peonies, ginger, and syrup. However, it is not known that the plant extract of the present invention has a collagenase inhibitory action (JP-A-62-148426, JP-A-4-29933, JP-A-11-279039).
[0006]
Furthermore, in order to prevent the onset and progression of periodontal disease, in addition to the collagenase inhibitory action, it is desirable to inhibit the growth of Porphyromonas gingivalis itself, which is a periodontopathogenic bacterium that produces collagenase. Conventionally, the fact that the plant extract of the present invention has such an antibacterial effect has not been known.
[0007]
[Problems to be solved by the invention]
An object of the present invention is to provide a collagenase inhibitor that can be effectively used for preventing or treating the occurrence and progression of periodontal disease. Another object of the present invention is to provide an anti-periodontal agent utilizing a collagenase inhibitory action, preferably a collagenase inhibitory action and an antibacterial action.
[0008]
[Means for Solving the Problems]
The inventor of the present invention has been working diligently to solve the above problems, and found that collagenase inhibitory extracts from plant extracts which have been used for food (medicine) in Indonesia for many years and whose safety against the human body has been confirmed have been confirmed. Action, especially the periodontopathogenic bacterium Porphyromonas gingivalis (Porphyromonas gingivalis) Has an inhibitory effect on the collagenase produced. Furthermore, the present inventor has found that most of the above plant extracts also have a growth inhibitory effect of Porphyromonas gingivalis, which is a periodontopathogenic bacterium, and these plant extracts are used as anti-periodontal agents. I was convinced that it was effective. The present invention has been completed based on such findings.
[0009]
That is, the present invention is a collagenase inhibitor listed in the following items 1 and 2:
Item 1. Pala (scientific name:. Myristica argentea Warburg Myristicaceae), Kemukus (scientific name:. Piper cubeba L..Piperaceae), Sariawan, Widara Upas (scientific name:.. Merremia manmosa Hall Convolvulaceae), Jaha (scientific name:. Terminalia belerica Roxb), Lempoyang -Wangi (scientific name: Zingiber @ aromaticum @ Vahl. @ Zingiberaceae.), Kayu-rapet (scientific name: Parameria @ laevigata @ Moldenke. @ Apocynaceae.), Jaha @ Klingin (scientific name) ia @ arborea @ K. & V., Kedawung (scientific name: Parkia @ roxburghii @ G. @ Don. @ Leguminosae.), Knyit (scientific name: Curcuma @ domestica.Val. @ F.a.e.a.e.a., Zingibersea. A collagenase inhibitor comprising an extract of at least one plant selected from the group as an active ingredient.
Item 2. Porphyromonas gingivalis (Porphyromonas gingivalis4. The collagenase inhibitor according to item 1, which has an inhibitory action on collagenase produced by (1).
[0010]
Further, the present invention is an anti-periodontal agent comprising the collagenase inhibitor according to item 1 or 2 as an active ingredient. The anti-periodontal agent includes the following embodiments.
Item 3-1. Pala (scientific name:. Myristica argentea Warburg Myristicaceae), Kemukus (scientific name:. Piper cubeba L..Piperaceae), Sariawan (scientific name:. Polygala glomerata Lour), Widara Upas (scientific name:.. Merremia manmosa Hall Convolvulaceae), Jaha (scientific name : Termalia @ belerica @ Roxb.), Lempoyang-wangi (scientific name: Zingiber @ aromaticum @ Vahl. @ Zingiberaceae.), Kayu-rapet (scientific name: Parameria @ laevikanet.Mad.Mad. @ M.A. eae.), Jaha Kling (scientific name: Terminalia @ arborea @ K. & V.), Kedawung (scientific name: Parkia @ roxburghii G. @ Don. @ Leguminosae.), Knyit (scientific name: Curcuma. Umbelliferae.) And an extract having collagenase inhibitory activity of at least one plant selected from the group consisting of Kaya @ Legi as an active ingredient.
Item 3-2. (4) The anti-periodontal agent according to (3), wherein the plant extract has an inhibitory effect on collagenase produced by Porphyromonas gingivalis.
Item 3-3. The extract of the above-mentioned plant (except for Kayu-rapet (scientific name: Parameria laevigata Moldenke. Apocynaceae.)) Has a growth inhibitory effect of -1 against Porphyromonas gingivalis or -1 with respect to Porphyromonas gingivalis. Item 3. The anti-periodontal agent according to item 3-2.
[0011]
BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION
(A) Collagenase inhibitor
In the present invention, various plants used as raw materials for extracts are traditionally used as various crude drugs and spices in the Indonesian region since ancient times. For example, Kedawung (scientific name: Parkia @ roxburghii @ G. @ Don. @ Leguminosae.) Is a drug for scabies; Kayu-rapet (scientific name is Parameria @ laevigata @ Moldenica. @ Apocynae a. Pala (scientific name: Myristica @ argentea @ Warburg. @ Myristicaceae) is an aromatic stomachic, flavoring, and flavoring agent; Adas (scientific name: Foeniculum @ vulgara Mill. @ Umbelliferae. @; (Scientific name: Merremia @ manmosa @ Ha l. @ Convolvulaceae.) is a therapeutic and antipyretic agent for tonsillitis and pertussis; Knyit (scientific name: Curcuma @ domestica @ Val. @ Zingiberseee) is a therapeutic agent for tonsillitis and toothache; Lempoyang @ wangi (z. Sariawan is a therapeutic agent for antipyretic and tonsillitis; Kemucus (scientific name: Piper @ cubeba @ L. @ Piperaceae.) Has been used since ancient times as a gonorrhea drug.
[0012]
The collagenase inhibitor of the present invention comprises a solvent extract of the whole plant or a part thereof (for example, root, stem, leaf, fruit (seed), flower bud, bark, worm, xylem, heartwood, etc.) of the above various plants. An active ingredient. The plant site used for extraction is not particularly limited as long as it has a collagenase inhibitory activity, and can be appropriately selected and prepared according to the plant used. For example, Kedawung (Parkia roxburghii G. @ Don. @ Leguminosae.) And Adas (Foeniculum @ vulgara.Mill. @ Umbelliferae.) Are seeds; (Terminaria @ belerica @ Roxb.) Is pericarp; Lempoyang-wangi (Zingiberaromaticum @ Vahl. @ Zingiberaceae.) And @Knyit (Curcuma @ domestica @ Val. And Zingibera are lumps; Zingibera). an mention may be made of bark.
[0013]
The whole plant or a part thereof of these plants may be subjected to an extraction operation as it is or as a crushed product, or after drying, may be subjected to an extraction operation as a pulverized powder if necessary.
[0014]
The solvent used for the extraction is not particularly limited, and alcohols such as lower alcohols and polyhydric alcohols, and other non-polar solvents and polar solvents can be widely used. More specifically, lower alcohols include alcohols having 1 to 4 carbon atoms such as methanol, ethanol, propanol, isopropyl alcohol, and butanol; and polyhydric alcohols include glycerin and polyethylene glycol. As other non-polar solvents, pentane, hexane, heptane, octane, nonane, unsaturated hydrocarbons such as decane or hexene, heptene and the like, and as a polar solvent, water, acetone, ethyl ether, Ethyl acetate, methyl acetate and the like are used. These solvents may be used alone or in combination of two or more. For example, in the case of a raw material having a high fat content, the material may be defatted and extracted with a non-polar solvent and then extracted with any desired solvent, or may be extracted with a water-containing organic solvent. Preferred are water, lower alcohols such as ethanol, propanol and isopropyl alcohol, and mixtures thereof.
[0015]
As an extraction method, a method generally used without particular limitation can be adopted. Although not limited, for example, a method of immersing a whole plant or a part (as is or coarse, finely chopped) or a dry crushed product thereof (coarse, finely chopped, powdered, etc.) in a solvent by cold immersion, digestion, or the like. Extraction is carried out while heating and stirring, and a method of obtaining an extract by filtration, or a percolation method can be used.
[0016]
The resulting extract is used after removal of solids by filtration or centrifugation, if necessary, depending on the mode of use, either as it is or by evaporating the solvent and partially concentrating or drying. Is also good. After concentration or drying, the concentrated or dried product may be washed with an insoluble solvent and purified before use, or it may be further dissolved or suspended in a suitable solvent. It is also possible to obtain and purify a fraction having collagenase inhibitory activity from the extract using a conventional purification method, for example, a countercurrent distribution method or liquid chromatography. Furthermore, in the present invention, for example, the solvent extract obtained as described above can be used as a dried plant extract by ordinary means such as drying under reduced pressure and freeze drying.
[0017]
The collagenase inhibitory activity of the plant extract can be measured and evaluated according to a conventional method used in the art (Nagai et al., Inflammation 4, Δ123 (1984), etc.). It can be performed using a kit. The plant extract used in the present invention preferably contains Porphyromonas gingivalis, which is a periodontopathogenic bacterium.Porphyromonas gingivalis) Has an inhibitory activity on collagenase produced by the enzyme. Such collagenase inhibitory activity can be specifically measured and evaluated according to the method described in Test Examples described later.
[0018]
The collagenase inhibitor of the present invention contains the above-described plant extract as an active ingredient, and causes the occurrence of periodontal disease by being blended as a component of various oral compositions such as food, quasi-drugs, and pharmaceuticals. And its progress can be prevented, or it can be effectively used as an anti-periodontal agent for improving periodontal disease. Collagenase is generally known to be involved in skin aging and rheumatism (J. Enzyme Inhibition, 2.1 (1987), Arithritis Rheum., 20, 1231 (1977)). Since the collagenase inhibitor of the present invention has an action of suppressing the above-mentioned collagenase, it may be used for preventing or improving skin aging, rheumatism and the like.
[0019]
The collagenase inhibitor of the present invention may be composed of only the above-mentioned plant extract, or may be any carrier that is permitted to be used in the field of food, quasi-drug or pharmaceutical as other components. And additives may be contained. In the latter case, the amount of the plant extract to be incorporated into the collagenase inhibitor is not particularly limited as long as the obtained collagenase inhibitor has a collagenase inhibitory activity based on the plant extract. Specifically, although it differs depending on the type of plant to be used and cannot be specified unconditionally, the plant extract (in terms of dry matter) is usually at least 0.0001% by weight, preferably 0.1% in 100% by weight of the collagenase inhibitor. It can be prepared so as to contain 0001 to 25% by weight, more preferably 0.001 to 10% by weight.
[0020]
(B) Anti-periodontal agent
Periodontal disease is an inflammatory oral disease derived from bacteria, which is caused by an increase in periodontopathic bacteria, host invasion of bacteria into tissues or host response by infection, and the like. Porphyromonas gingivalis is one of the most promising pathogens of adult periodontal disease.Porphyromonas gingivalis) Is reported to be frequently separated from the deep part of the periodontal pocket of periodontal disease patients. Such bacteria produce degrading enzymes such as collagenase, phospholipase A, alkaline phosphatase, and acid phosphatase. Among them, collagenase is said to be a direct factor that degrades periodontal tissue collagen and leads to tissue destruction. Therefore, in order to prevent or treat the occurrence and progress of periodontal disease, it is important to inhibit the activity of collagenase, which is a pathogenic factor of periodontal disease. Further, it is preferable to inhibit the growth of Porphyromonas gingivalis itself, which is a periodontopathogenic bacterium that produces the collagenase, and to eliminate the bacteria.
[0021]
The anti-periodontal agent of the present invention has a collagenase inhibitory effect of the above-mentioned plant extract, particularly a periodontopathogenic bacterium of the plant extract: Porphyromonas gingivalis (Porphyromonas gingivalis) Is used to prevent the onset and progression of periodontal disease by utilizing the inhibitory effect on collagenase produced by the above) or to be useful for the improvement thereof, and at least one of the aforementioned plant extracts As an active ingredient.
[0022]
Among the above anti-periodontal agents, preferred anti-periodontal agents are Pala (scientific name: Myristica argentea Warburg. Myristicaceae), Kemukus (scientific name: Piper cububa, L. Piperacealog., Scientific name) ), Widara @ Upas (scientific name: Merrenia @ manmosa @ Hall. @ Convolvulaceae.), Jaha (scientific name: Terminaria @ belerica @ Roxb.), Lemoyang @ vania @ Zabiaba. (Scientific name: Zingiab. K. & V.), Kedawung (scientific name: Parkia @ roxburghii @ G. @ Don. @ Leguminosae.), Kunyit (scientific name: Curcuma @ domestica @ Val. @ Zingiberseae from the group of U.e.e., Ulica, and Ulvae. It contains at least one selected plant extract as an active ingredient. The anti-periodontal agents containing these plant extracts as active ingredients have an inhibitory action on collagenase and an inhibitory action on growth (antibacterial action) against Porphyromonas gingivalis, a periodontopathogenic bacterium producing collagenase. As a result, it is possible to exert a more excellent effect of preventing or treating periodontal disease.
[0023]
The anti-periodontal agent of the present invention may be composed of only the above-mentioned plant extract, or may be used as an optional ingredient in the field of food, quasi-drugs or pharmaceuticals. May be contained, in particular, carriers and additives permitted to be applied to oral compositions and oral compositions. In the latter case, the amount of the plant extract incorporated in the anti-periodontal agent is not particularly limited as long as the obtained anti-periodontal agent has a collagenase inhibitory activity based on the plant extract. Specifically, it differs depending on the type of plant to be used and cannot be unconditionally specified. It can be prepared so as to contain 0001 to 25% by weight, preferably 0.001 to 10% by weight.
[0024]
The collagenase inhibitor or the anti-periodontal agent of the present invention is used as a component of various oral compositions such as foods, quasi-drugs, and pharmaceuticals to prevent the occurrence and progress of periodontal disease in the oral cavity. It can be used effectively to prevent or treat.
[0025]
Therefore, the present invention also provides an oral composition containing the above plant extract as an anti-periodontal agent. The plant extracts may be used alone or in combination of two or more of the above-listed extracts.
[0026]
In the present invention, the oral composition includes both those that are taken orally, such as food and drink, and those that are used in the oral cavity, such as toothpaste and mouthwash. Specific examples of the oral composition include various foods such as troches, chewing gums, candy, gummy candy, chocolate, juice, etc .; dentifrices (paste, liquid, powdered solid), mouth fresheners such as mouth spray, Pharmaceutical or quasi-drugs such as chewing agents, troches, oral pasta agents, gargles, syrups; and oral cosmetics such as dentifrices, mouthwashes, mouth rinses. Preferably, foods such as lozenges, chewing gums and candy, and pharmaceuticals such as dentifrices, mouth sprays, mouth washes and mouth rinses, quasi-drugs or oral cosmetics can be mentioned. These forms and dosage forms are not particularly limited, and can be arbitrarily determined according to the type.
[0027]
The amount of the plant extract to be added to the oral composition is not particularly limited as long as the oral composition has a collagenase inhibitory activity based on the plant extract.
[0028]
Specifically, it differs depending on the type of plant to be used and cannot be unconditionally specified. It can be prepared so that it is contained in a proportion of at least 0.01% by weight, more preferably at least 0.01% by weight. The upper limit of the blending ratio of the plant extract is not particularly limited from the viewpoint of the effect of the present invention such as collagenase inhibitory action or anti-periodontal disease action. The upper limit can be determined based on the stability of the oral composition, the relationship with other components, and the like. Usually, 25% by weight of a plant extract in 25% by weight in 100% by weight of the oral composition can be exemplified. . Preferably it is 10% by weight.
[0029]
The oral composition of the present invention may contain, as another component, an antibacterial agent which is known or may be known in the future, as long as the effect of the present invention is not impaired.P. gingivalisFungus,S. mutansBacteria,S. sobrinusIt can also be formulated in combination with components such as periodontopathogenic bacteria such as growth inhibitors against carious bacteria), anti-caries agents such as anti-GTase agents, or anti-inflammatory agents. Antibacterial agents include chlorhexidine hydrochloride, cetylpyridinium chloride, sorbic acid, hinokitiol, etc .; anti-cariogenic agents include dextranase, mutanase, sodium monofluorophosphate, sodium fluoride, stannous fluoride, etc .; Examples of the agent include lysozyme chloride, glycyrrhetinic acid, dipotassium glycyrrhizinate and the like.
[0030]
The oral composition of the present invention uses, in addition to the plant extract (collagenase inhibitor, anti-periodontal agent), various components that are usually blended in the oral composition according to the type of the oral composition. Can be prepared.
[0031]
For example, when the oral composition is toothpaste, an abrasive such as dibasic calcium phosphate, calcium carbonate, insoluble sodium metaphosphate, amorphous silica, aluminum oxide; carboxymethylcellulose, hydroxyethylcellulose, alginate, carrageenan, acacia, polyvinyl Binders such as alcohols; thickeners such as polyethylene glycol, sorbitol, glycerin, and propylene glycol; sodium lauryl sulfate, sodium dodecylbenzenesulfonate, hydrogenated coconut fatty acid sodium monoglyceride monosulfate, sodium lauryl sulfoacetate, N- Foaming agents such as sodium lauroyl sarcosinate, N-acyl glutamate, sucrose fatty acid ester and the like can be mentioned. Further, a flavoring agent such as menthol, a flavoring agent or a sweetening agent, a preservative and the like which are usually used can also be added. In the case of mouthwashes such as mouthwashes and foods such as chewing gums, conventional ingredients can be used in combination. In addition, as the sweetener to be combined and used, those having low or no caries are preferable, and for example, D-xylose, xylitol, saccharin sodium, aspartame, trehalose, and the like can be suitably mentioned.
[0032]
【Example】
Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Production Examples, Test Examples, and Examples, but the present invention is not limited to these Examples and the like.
[0033]
<Production example>
Production Example 1
To 100 g of the dry pulverized product of Pala (scientific name: Myristica argentea Warburg. Myristicaceae), 3 times the amount of hexane was added, extracted at room temperature for 24 hours, and filtered. A 1-fold amount of hexane was further added to the filtration residue, followed by stirring and filtration to degrease the sample. The defatted sample was dried and extracted with 5 times the amount of methanol at room temperature for 48 hours. The extract was filtered and concentrated by an evaporator and freeze-dried to obtain 4 g of a plant extract (hereinafter referred to as Pala extract).
[0034]
Production Example 2
Three times the amount of hexane was added to 100 g of the dried fruit of Kemucus (scientific name: Piper \ cubeba L. \ Piperaceae.), Extracted at room temperature for 24 hours, and filtered. A 1-fold amount of hexane was further added to the filtration residue, followed by stirring and filtration to degrease the sample. The defatted sample was dried and extracted with 5 times the amount of methanol at room temperature for 48 hours. This was filtered, and the obtained extract was concentrated by an evaporator and lyophilized to obtain 10 g of a plant extract (hereinafter, referred to as Kemukus extract).
[0035]
Production Example 3
To 100 g of the crushed dried bark of Sariawan, 3 times the amount of hexane was added, extracted at room temperature for 24 hours, and filtered. A 1-fold amount of hexane was further added to the filtration residue, followed by stirring and filtration to degrease the sample. The defatted sample was dried and extracted with 5 times the amount of methanol at room temperature for 48 hours. The extract was filtered and concentrated by an evaporator and freeze-dried to obtain 5 g of a plant extract (hereinafter referred to as Sariawan extract).
[0036]
Production Example 4
Extraction and freeze-drying were performed according to the method of Production Example 1 using 100 g of dried and crushed product of Widara @ Upas (scientific name: Merrenia @ manmosa @ Hall. @ Convolvulaceae.) To obtain 4 g of a plant extract (hereinafter referred to as Widara @ Upas extract).
[0037]
Production Example 5
Extraction and freeze-drying were performed according to Production Example 1 using 100 g of a crushed dried pericarp of Jaha (scientific name: Terminaria @ belelica @ Roxb.) To obtain 10 g of a plant extract (hereinafter referred to as Jaha extract).
[0038]
Production Example 6
Extraction and freeze-drying were performed according to the method of Production Example 1 using 100 g of a crushed dry rhizome of Lempoyang-wangi (scientific name: Zingiber @ aromaticum @ Vahl. @ Zingiberaceae.), And a plant extract (hereinafter referred to as Lempoyang @ wangi extract). 4 g were obtained.
[0039]
Production Example 7
Extraction and freeze-drying were performed according to Production Example 1 using 100 g of the dried and crushed product of Kayu-rapet (scientific name: Parameria @ laevigata @ Moldenke. @ Apocynaceae.) To obtain 10 g of a plant extract (hereinafter referred to as Kayu-rapet extract).
[0040]
Production Example 8
Three times the amount of hexane was added to 100 g of the dried pulverized fruit of Jaha Kling (scientific name: Terminaria arborea K. & V.), extracted at room temperature for 24 hours, and filtered. A 1-fold amount of hexane was further added to the filtration residue, followed by stirring and filtration to degrease the sample. The defatted sample was dried and extracted with 5 times the amount of methanol at room temperature for 48 hours. This was filtered, and the obtained extract was concentrated by an evaporator and freeze-dried to obtain 20 g of a plant extract (hereinafter, referred to as Jaha Kling extract).
[0041]
Production Example 9
Extraction and freeze-drying were performed according to Production Example 1 using 100 g of dried seeds of Kedawung (scientific name: Parkia @ roxburghi @ G. @ Don. @ Leguminosae.) To obtain 10 g of a plant extract (hereinafter referred to as Kedawung extract).
[0042]
Production Example 10
Extraction and freeze-drying were performed according to the method of Production Example 1 using 100 g of the crushed dried rhizome of Kunyit (scientific name: Curcuma domestica Val. Zingiberseae) to obtain 4 g of a plant extract (hereinafter referred to as Knyit extract).
[0043]
Production Example 11
Using 100 g of a crushed dried seed of Adas (scientific name: Foeniculum vulgara Mill. @ Umbelliferae.), Extraction and freeze-drying were performed according to the method of Production Example 1 to obtain 4 g of a plant extract (hereinafter referred to as an Adas extract). .
[0044]
Production Example 12
Using 100 g of the dried and crushed Kayu Legi product, extraction and freeze-drying were performed according to the method of Production Example 1 to obtain 4 g of a plant extract (hereinafter, referred to as Kayu Legi extract).
[0045]
<Test example>
Test example 1
(1) Pala extract, (2) Kemukus extract, (3) Sariawan extract, (4) Widara @ Upas extract, (5) Jaha extract, prepared in Production Examples 1-6 and 8-12 above. 6) Using Lemoyang @ wangi extract, (8) Jaha @ Kling extract, (9) Kedawung extract, (10) Kunyit extract, (11) Ada extract, and (12) Kayu @ Leggi extract as test samples. The growth inhibitory effect on periodontopathogenic Porphyromonas gingivalis was measured.
[0046]
Specifically, first, 10 mg of each of these plant extracts was dissolved in 1 ml of methanol to obtain a plant extract. Next, the plant extract was added to a GAM bouillon medium (59 g of GAM bouillon, 1000 ml of purified water) at a ratio such that the plant extract concentration became 500 μg / ml, and the prepared solution was added to the GAM bouillon medium. , A 2-fold dilution series was prepared in a 48-well microplate (concentration of plant extract: 500 μg / ml, 250 μg / ml, 125 μg / ml, 63 μg / ml, 31 μg / ml, 16 μg / ml, 7 μg / ml). 0.8 μg / ml, 3.9 μg / ml). Porphyromonas gingivalis (Porphyromonas gingivalis) (ATCC # 33277 strain) A culture solution was added at a ratio of 10%, and the mixture was statically cultured at 37 ° C for 3 days under anaerobic conditions. Next, the minimum growth inhibitory concentration (MIC: μg / ml) of each plant extract was examined based on the presence or absence of growth of the fungus. Table 1 shows the results.
[0047]
[Table 1]

[0048]
As can be seen from the results in Table 1, the above plant extracts were (10) Knyit extract, (12) Kayu {Leggi extract}> {(3) Sariawan extract, {(6) Lempoyang {Wangi extract}>} (1) Pala Extract, (2) Kemucus extract, (5) Jaha extract, (8) JahaｈKling extract, {(11) Ada extract> (4) Widara Upas extract, (9) Kedawung extract, It was confirmed to have strong antibacterial properties (growth inhibitory action) against periodontopathogenic Porphyromonas gingivalis.
[0049]
Test example 2
(1) Pala extract, (2) Kemucus extract, (3) Sariawan extract, (4) Widara @ Upas extract, (5) Jaha extract, (6) Lempoyang @ wangi prepared in Production Examples 1 to 12 above. Extract, (7) Kayu-rapet extract, (8) Jaha @ Kling extract, (9) Kedawung extract, (10) Kunyit extract, (11) Adas extract, and (12) Kayu @ Legi extract. Using it as a test sample, the inhibitory effect on periodontal pathogenic Porphyromonas gingivalis-producing collagenase was determined.
[0050]
The collagenase inhibitory activity was evaluated using a commercially available collagenase activity measurement kit (collageno kit CLN-100, manufactured by Collagen Technology Training Institute Co., Ltd.). Specifically, a degradation product produced by reacting with collagenase in the presence of a test sample using a fluorescence-labeled collagen as a substrate is selectively denatured at 35 ° C., and then extracted with ethanol. The collagenase inhibitory activity of the subject was calculated by measuring the intensity. That is, the collagenase activity inhibition rate was determined using the rate of decrease in collagenase activity in the presence of the test sample as the inhibition rate.
[0051]
(A) Preparation of collagenase solution
Porphyromonas gingivalis (Porphyromonas gingivalis) Was prepared by the following method.
[0052]
Porphyromonas gingivalis (Porphyromonas gingivalis) Bacterial ATCC # 33277 was inoculated into a blood plate medium (Trypticus soy broth 40 g, hemin 5 mg, menadione 0.5 mg, horse defibrinated blood 100 ml, purified water 900 ml), anaerobically cultured for 4 days, and then The obtained bacteria were inoculated into a liquid medium for enzyme extraction (59 g of GAM broth, 1000 ml of purified water), and further anaerobically cultured at 37 ° C. for 3 days. The obtained culture was centrifuged, the supernatant was treated with 80% ammonium sulfate, and the 80% ammonium sulfate fraction (precipitate) was collected by centrifugation (12000 × G, 20 minutes). This fraction was dissolved in 250 ml of a 0.05 M Tris-HCl buffer (pH 7.5) containing 5 mM calcium chloride, and the buffer was dialyzed. The liquid in the permeate was ultrafiltered (0.22 μm, MILIPORE), and used as a collagenase solution produced by Porphyromonas gingivalis in the following experiments.
[0053]
(B) Measurement of collagenase inhibitory action
Collagenase inhibitory activity was measured for various plant extracts prepared in Production Examples 1 to 12. Specifically, first, 100 µl of a collagenase solution (2.69 U / ml) produced by Porphyromonas gingivalis, 200 µl of a fluorescence-labeled collagen solution, and 100 µl of a test sample (diluted solution of each plant extract) were mixed to make a total of 400 µl. The reaction was carried out at 2 ° C. for 2 hours. After the reaction, the fluorescence intensity of the decomposition product was measured to calculate the collagenase activity. The test sample (diluted solution of the plant extract) was prepared by mixing each plant extract prepared in Production Examples 1 to 12 with a 0.05 M Tris-HCl buffer (pH 7.5) containing 5 mM calcium chloride at a concentration of 0.1 mg / ml. The one prepared so as to have a concentration of ml was used. In addition, as a control test, 100 μl of 0.05 M Tris-HCl buffer (pH 7.5) containing 5 mM calcium chloride was used instead of the sample solution (diluted solution of plant extract) (control). Collagenase activity was measured. The collagenase activity inhibition rate of the plant extract was determined by the following equation (1U = 1 μg of collagen degradation / min).
[0054]
(Equation 1)

[0055]
Table 2 shows the test results. The collagenase activity of the control was 2.69 U / ml.
[0056]
[Table 2]

[0057]
As can be seen from the results, all of the above plant extracts were Porphyromonas gingivalis (Porphyromonas gingivalis) Has an inhibitory effect on the collagenase produced, among which (1) Pala extract, (2) Kemukus extract, (3) Sariawan extract, (4) Widara @ Upas extract, (5) Jaha The extract, (6) Lempoyang @ wangi extract, (8) Jaha @ Kling extract has strong collagenase inhibitory activity, and particularly (2) Kemukus extract and (5) Jaha extract have extremely strong collagenase inhibitory activity. I found out.
[0058]
<Example>
Hereinafter, application examples of the plant extract (collagenase inhibitor, anti-periodontal agent) of the present invention will be described as examples. In each example, (1) Pala extract, (2) Kemukus extract, (3) Sariawan extract, (4) Widara @ Upas extract, prepared as the plant extract in Production Examples 1 to 12 above, 5) Jaha extract, (6) Lempoyang @ wangi extract, (7) Kayu-rapet extract, (8) Jaha @ Kling extract, (9) Kedawung extract, (10) Kunyit extract, (11) Adas extract And (12) Kayu @ Legi extract. The unit of each prescription means part by weight unless otherwise specified.
[0059]

[0060]

[0061]
Example 3Sugar coated tablet
A mouthwash was prepared by coating 200 parts by weight of the tablet portion with 130 parts by weight of the sugar-coated portion.
[0062]

[0063]

[0064]

[0065]

[0066]

[0067]

[0068]

[0069]

[0070]
【The invention's effect】
The collagenase inhibitor of the present invention comprises a specific plant extract [(1) Pala extract, (2) Kemukus extract, (3) Sariawan extract, (4) Widara @ Upas extract, (5) Jaha extract, 6) Lempoyang @ wangi extract, (7) Kayu-rapet extract, (8) Jaha @ Kling extract, (9) Kedawung extract, (10) Kunyit extract, (11) Adas extract, and (12) Kayu Legi extract] as an active ingredient. The plant extract is particularly excellent in the action of inhibiting collagenase produced by Porphyromonas gingivalis, which is a periodontopathogenic bacterium, and is therefore useful in various oral cavities such as foods, quasi-drugs, and pharmaceuticals. Is effective as an anti-periodontal agent having the effect of preventing the occurrence and progress of periodontal disease or improving periodontal disease, and as a component of oral compositions Can be used for
[0071]
Among the above plant extracts, (1) Pala extract, (2) Kemuku extract, (3) Sariawan extract, (4) Widara @ Upas extract, (5) Jaha extract, (6) Lempoyang @ wangi extract (8) Jaha @ Kling extract, (9) Kedawung extract, (10) Kunyit extract, (11) Adas extract, and (12) Kayu @ Legi extract, especially (10) Kunyit extract, (12) Kayu Legi extract, (3) Sariawan extract, (6) Lempoang wangi extract, (1) Pala extract, (2) Kemukus extract, (5) Jaha extract, (8) Jaha Kling extract and ( 11) The Adas extract was added to Porphyromonas gingivalis To have excellent antibacterial activity (growth inhibition effect), as an anti-periodontal disease agents, also it can be effectively used as a component of the oral composition.
[0072]
That is, the anti-periodontal agent or the oral composition of the present invention is based on the Porphyromonas gingivalis-producing collagenase inhibitory activity of the plant extract and / or the antibacterial action (growth inhibiting action) on Porphyromonas gingivalis. It is useful for preventing the occurrence and progression of periodontal disease or improving periodontal disease.

Claims (3)

Ｐａｌａ（学名：Ｍｙｒｉｓｔｉｃａ　ａｒｇｅｎｔｅａ　Ｗａｒｂｕｒｇ．　Ｍｙｒｉｓｔｉｃａｃｅａｅ）、Ｋｅｍｕｋｕｓ（学名：Ｐｉｐｅｒ　ｃｕｂｅｂａ　Ｌ．　Ｐｉｐｅｒａｃｅａｅ．）、Ｓａｒｉａｗａｎ、Ｗｉｄａｒａ　Ｕｐａｓ（学名：Ｍｅｒｒｅｍｉａ　ｍａｎｍｏｓａ　Ｈａｌｌ．　Ｃｏｎｖｏｌｖｕｌａｃｅａｅ．）、Ｊａｈａ（学名：Ｔｅｒｍｉｎａｌｉａ　ｂｅｌｅｒｉｃａ　Ｒｏｘｂ．）、Ｌｅｍｐｏｙａｎｇ−ｗａｎｇｉ（学名：Ｚｉｎｇｉｂｅｒ　ａｒｏｍａｔｉｃｕｍ　Ｖａｈｌ．　Ｚｉｎｇｉｂｅｒａｃｅａｅ．）、Ｋａｙｕ−ｒａｐｅｔ（学名：Ｐａｒａｍｅｒｉａ　ｌａｅｖｉｇａｔａ　Ｍｏｌｄｅｎｋｅ．　Ａｐｏｃｙｎａｃｅａｅ．）、Ｊａｈａ　Ｋｌｉｎｇ（学名：Ｔｅｒｍｉｎａｌｉａ　ａｒｂｏｒｅａ　Ｋ．＆Ｖ．）、Ｋｅｄａｗｕｎｇ（学名：Ｐａｒｋｉａｒｏｘｂｕｒｇｈｉｉ　Ｇ．　Ｄｏｎ．　Ｌｅｇｕｍｉｎｏｓａｅ．）、Ｋｕｎｙｉｔ（学名：Ｃｕｒｃｕｍａ　ｄｏｍｅｓｔｉｃａ　Ｖａｌ．Ｚｉｎｇｉｂｅｒｓｅａｅ）、Ａｄａｓ（学名：Ｆｏｅｎｉｃｕｌｕｍ　ｖｕｌｇａｒａ　Ｍｉｌｌ．　Ｕｍｂｅｌｌｉｆｅｒａｅ．）、およびＫａｙａ　Ｌｅｇｉよりなる群から選択される少なくとも１種の植物の抽出物を有効成分とするコラゲナーゼ阻害剤。Pala (scientific name:. Myristica argentea Warburg Myristicaceae), Kemukus (scientific name:. Piper cubeba L. Piperaceae), Sariawan, Widara Upas (scientific name:.. Merremia manmosa Hall Convolvulaceae), Jaha (scientific name:. Terminalia belerica Roxb), Lempoyang- Wangi (scientific name: Zingiber @ aromaticum @ Vahl. @ Zingiberaceae.), Kayu-rapet (scientific name: Parameria @ laevigata @ Moldenke. @ Apocynaceae.), Jaha @ Kingling name. Arborea@K.&V., Kedawung (scientific name: Parkiaroxburghii @ G. @ Don. @ Leguminosae.), Knyit (scientific name: Curcuma @ domestica @ Val.King.eul.Municip. A collagenase inhibitor comprising an extract of at least one selected plant as an active ingredient. ポルフィロモナス・ジンジバリス（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ　ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ）が産生するコラゲナーゼに対して阻害作用を有する請求項１記載のコラゲナーゼ阻害剤。The collagenase inhibitor according to claim 1, which has an inhibitory effect on collagenase produced by Porphyromonas gingivalis . 請求項１または２に記載のコラゲナーゼ阻害剤を有効成分とする抗歯周病剤。An anti-periodontal agent comprising the collagenase inhibitor according to claim 1 or 2 as an active ingredient.