JP2003534013A - 哺乳動物レセプタータンパク質；関連試薬および方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 哺乳動物、例えば、霊長類のレセプターをコードする核酸、精製されたレセプターおよびこれらのフラグメント。抗体（ポリクローナルおよびモノクローナルの両方）がまた、提供される。診断的利用および治療的利用の両方のためにこれらの組成物を使用する方法を記載する。本発明は、免疫系機能を含む、哺乳動物の生理に影響を与えるための組成物および方法に関する。詳細には、本発明は、発生および／または免疫系を調節するための方法を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 （発明の分野） 本発明は、免疫系機能を含む、哺乳動物の生理に影響を与えるための組成物お
よび方法に関する。詳細には、本発明は、発生および／または免疫系を調節する
ための方法を提供する。これらの物質の診断用途および治療用途もまた開示する
。これらの物質の診断および治療での使用もまた、開示される。

【０００２】 （発明の背景） 組換えＤＮＡ技術は一般に、宿主への導入などを介する、引き続く処理のため
の、ドナー供給源からベクターへの遺伝情報の組み込みの技術をいう。これによ
り移入された遺伝情報は、新しい環境において複製され、そして／または発現さ
れる。通常、遺伝情報は、所望のタンパク質産物をコードするメッセンジャーＲ
ＮＡ（ｍＲＮＡ）から誘導された相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）の形態で存在する。
キャリアはしばしば、宿主での後の複製のためにｃＤＮＡを組込み、そしていく
つかの場合には実際にｃＤＮＡの発現を制御し、それにより宿主においてコード
される産物の合成を指向する能力を有するプラスミドである。例えば、Ｓａｍｂ
ｒｏｏｋら、（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏ
ｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、（第２版）第１〜３巻、ＣＳＨ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ
Ｙを参照のこと。

【０００３】 かねてから、哺乳動物免疫応答は、一連の複雑な細胞性の相互作用（「免疫ネ
ットワーク」と呼ばれる）に基づくことが知られている。近年の研究は、このネ
ットワークの内部の仕組みについて、新たな洞察を提供した。実際に、免疫応答
の多くが、リンパ球、マクロファージ、顆粒球、および他の細胞のネットワーク
様相互作用の周囲で展開されることは、明らかなままであるが、免疫学者は現在
、一般的に、リンホカイン、サイトカイン、またはモノカインとして知られる可
溶性タンパク質が、これらの細胞性の相互作用の制御において重要な役割を果た
すという見解を有している。従って、かなりの興味が、細胞調節性因子の単離、
特徴づけ、および作用機構について存在し、この理解は、多くの医学的な異常（
例えば、免疫系障害）の診断および治療において、顕著な利点をもたらす。

【０００４】 脊椎動物の免疫系は、多くの器官およびいくつかの異なる細胞型からなる。２
つの主要な細胞型としては、骨髄系統およびリンパ系統が挙げられる。リンパ細
胞系統のなかでも、元々胎仔肝臓および成体骨髄において分化するとして特徴付
けられたＢ細胞、および元々胸腺で分化するとして特徴付けられたＴ細胞である
。例えば、Ｐａｕｌ（１９９８編）Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏ
ｇｙ（第４版）Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；およびＴｈｏｍｓ
ｏｎ（１９９４編）Ｔｈｅ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｈａｎｄｂｏｏｋ（第２版）、
Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ ＤＩｅｇｏを参照のこと。リンホカイ
ンは明らかに、種々の方法で細胞活性を媒介する。これらは、細胞（例えば、多
能性の造血幹細胞）が、非常に多くの前駆体（複雑な免疫系を構成する多様な細
胞系統を含む）への増殖（ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ）、増殖（ｇｒｏｗｔｈ
）、および／または分化を補助することが示されている。細胞構成成分間の、適
切かつバランスのとれた相互作用は、健常な免疫応答のために必要である。異な
る細胞系統は、リンホカインが他の薬剤とともに投与される場合、しばしば異な
る様式で応答する。

【０００５】 細胞系統は、２つのクラスのリンパ球：免疫グロブリン（外来物質を認識し、
そして結合する能力を有し、外来物質の除去をもたらすタンパク質）を産生およ
び分泌し得るＢ細胞、ならびにリンホカインを分泌し、そしてＢ細胞および種々
の他の細胞（他のＴ細胞を含む）を、誘導または抑制し、免疫ネットワークを構
成する、種々のサブセットのＴ細胞、を含む免疫応答にとって特に重要である。
これらのリンパ球は、多くの他の細胞型と相互作用する。

【０００６】 一般にインビトロで免疫系の細胞を維持することはできないので、種々の免疫
障害をより理解しそして処置するための研究は、妨げられてきた。免疫学者は、
これらの細胞の多くを培養することが、Ｔ細胞および種々の増殖因子（多くのリ
ンホカインを含む）を含む他の細胞上清の使用を通じて達成され得ることを発見
した。

【０００７】 形態形成的発生を調節する、種々の増殖因子および調節因子が存在する。そし
て、サイトカインの多くのレセプターもまた公知である。機能的なレセプターに
は、しばしば、少なくとも２つの重要なサブユニットが存在する。例えば、Ｇｏ
ｎｄａおよびＤ’Ａｎｄｒｅａ（１９９７）Ｂｌｏｏｄ ８９：３５５〜３６９
；Ｐｒｅｓｋｙら（１９９６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ
Ａ ９３：１４００２〜１４００７；ＤｒａｃｈｍａｎおよびＫａｕｓｈａｎｓ
ｋｙ（１９９５）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｈｅｍａｔｏｌ．２：２２〜２８；Ｔｈ
ｅｚｅ（１９９４）Ｅｕｒ．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｎｅｔｗ．５：３５３〜３６８
；ならびに、ＬｅｍｍｏｎおよびＳｃｈｌｅｓｓｉｎｇｅｒ（１９９４）Ｔｒｅ
ｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｃｉ．１９：４５９〜４６３を参照のこと。

【０００８】 前述より、新規の可溶性タンパク質およびそのレセプター（リンホカインに類
似のものを含む）の発見および開発が、例えば、免疫系および／もしくは造血細
胞の発生、分化または機能に、直接的または間接的に関与する広範囲の変性状態
または異常状態のための新規治療法に寄与するはずであることは、明らかである
。詳細には、他のリンホカインの有益な活性を亢進または増強するリンホカイン
様分子についての新規レセプターの発見および理解が、非常に有利である。しか
し、免疫系がいかにして調節されるか、または分化するかについての理解の欠如
が、生物学的な攻撃に対する正常な防御機構を有利に改変する能力を妨害してき
た。従って、関連の細胞の発生または生理の、異常または不適切な調節によって
特徴付けられる医学的な状態は、管理不能なままである。特定のサイトカインお
よびそれらのレセプターの発見および特徴付けは、免疫系、造血細胞ならびに他
の細胞型に影響する広範な変性または他の状態のための治療の開発に寄与する。
本発明は、サイトカイン様組成物および関連化合物に対する類似性を示すリガン
ドに対する新規レセプター、ならびにそれらの使用のための方法を提供する。

【０００９】 （発明の要旨） 本発明は、サイトカインレセプターに関連する新規なレセプター、例えば、Ｄ
ＮＡＸサイトカインレセプターサブユニット（ＤＮＡＸ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｒ
ｅｃｅｐｔｏｒ Ｓｕｂｕｎｉｔ）（ＤＣＲＳ）と名付けられた、霊長類のサイ
トカインレセプター様分子の構造、およびその生物学的活性に関する。詳細には
、本発明は、ＤＣＲＳ６、ＤＣＲＳ７、ＤＣＲＳ８、ＤＣＲＳ９およびＤＣＲＳ
１０と名付けられた、種々のサブユニットの説明を提供する。種々のサブユニッ
トの、霊長類（例えば、ヒト）およびげっ歯類（例えば、マウス）の実施形態が
、提供される。本発明は、ポリペプチド自体をコードする核酸、ならびにそれら
の生成および使用のための方法を含む。本発明の核酸は、部分的に、本明細書に
包含されるクローニングされた相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）配列に対するその相同
性によって特徴付けられる。

【００１０】 本発明は、下記より選択される組成物を提供する：配列番号２、５、８、１１
、２３または２６のセグメントと同一である少なくとも４アミノ酸の、少なくと
も３つの異なる非重複セグメントを含む、実質的に純粋なポリペプチドまたは組
換えポリペプチド；配列番号１４のセグメントと同一である少なくとも４アミノ
酸の、少なくとも３つの異なる非重複セグメントを含む、実質的に純粋なポリペ
プチドまたは組換えポリペプチド；配列番号１４のセグメントと同一である少な
くとも５アミノ酸の、少なくとも２つの異なる非重複セグメントを含む、実質的
に純粋なポリペプチドまたは組換えポリペプチド；成熟な配列番号１４を含む天
然配列のＤＣＲＳ８；ＤＣＲＳ８配列を含む融合ポリペプチド；配列番号１７ま
たは２０のセグメントと同一である少なくとも４アミノ酸の、少なくとも３つの
異なる非重複セグメントを含む、実質的に純粋なポリペプチドまたは組換えポリ
ペプチド；配列番号１７または２０のセグメントと同一である少なくとも５アミ
ノ酸の、少なくとも２つの異なる非重複セグメントを含む、実質的に純粋なポリ
ペプチドまたは組換えポリペプチド；成熟な配列番号１７または２０を含む天然
配列のＤＣＲＳ９；あるいはＤＣＲＳ９配列を含む融合ポリペプチド。好ましく
は、ここで、同一である異なる非重複セグメントは以下を含む：少なくとも８ア
ミノ酸である１つのセグメント；少なくとも４アミノ酸である１つのセグメント
、および少なくとも５アミノ酸である第２のセグメント；少なくとも４アミノ酸
、５アミノ酸、および６アミノ酸である、少なくとも３つのセグメント、または
少なくとも１２のアミノ酸である１つのセグメント。他の実施形態において、こ
のポリペプチドは、表１、２、３、４または５の成熟配列を含むか；ＤＣＲＳ８
またはＤＣＲＳ９の非グリコシル形態であるか；ヒトのような霊長類由来である
か；配列番号１４または１７の少なくとも１７アミノ酸を含むか；配列番号１４
または１７の少なくとも７つのアミノ酸の、少なくとも４つの非重複セグメント
を示すか；ＤＣＲＳ８またはＤＣＲＳ９の天然の対立遺伝子改変体であるか；少
なくとも約３０アミノ酸長を有するか；霊長類ＤＣＲＳ８またはＤＣＲＳ９に特
異的な少なくとも２つの非重複エピトープを示すか；グリコシル化されているか
；天然のグリコシル化を伴って少なくとも３０ｋＤの分子量を有するか；合成ポ
リペプチドであるか；固体基材に付着されているか；別の化学的部分と結合体化
しているか；天然の配列から５以下の置換（５−ｆｏｌｄ ｏｒ ｌｅｓｓ ｓ
ｕｂｓｔｉｔｕｔｉｏｎ）であるか；あるいは、天然配列由来の欠失改変体もし
くは挿入改変体である。

【００１１】 本発明はさらに、以下を含む組成物を含む：実質的に純粋なＤＣＲＳ８または
ＤＣＲＳ９および別のサイトカインレセプターファミリーのメンバー；滅菌した
ＤＣＲＳ８またはＤＣＲＳ９ポリペプチド；ＤＣＲＳ８またはＤＣＲＳ９ポリペ
プチドおよびキャリア、ここでこのキャリアは：水、生理食塩水、および／また
は緩衝液を含む水性化合物であるか；および／または経口投与、直腸投与、経鼻
投与、局所的投与、または非経口投与のために処方される。さらなる実施形態と
しては、以下を含むポリペプチドが挙げられる：表１、２、３、４または５の成
熟タンパク質配列；ＦＬＡＧ配列、Ｈｉｓ６配列、またはＩｇ配列を含む検出タ
グもしくは精製タグ；あるいは、別のサイトカインレセプタータンパク質の配列
。キットの実施形態としては、以下を含むキットが挙げられる：記載されたポリ
ペプチド、および：このタンパク質またはポリペプチドを含む区画；または、キ
ット中の試薬の使用または廃棄のための説明書。

【００１２】 以下を含む結合化合物が提供される：例えば、天然のＤＣＲＳ８またはＤＣＲ
Ｓ９ポリペプチドに特異的に結合する、抗体由来の抗原結合部位を含む結合化合
物：ここで、この結合化合物は容器中にあるか；ＤＣＲＳ８またはＤＣＲＳ９ポ
リペプチドは、ヒト由来であるか；この結合化合物は、Ｆｖフラグメント、Ｆａ
ｂフラグメント、またはＦａｂ２フラグメントであるか；この結合化合物は、別
の化学的部分と結合するか；あるいは、この抗体は：表３または表４の成熟ポリ
ペプチドのペプチド配列に対して惹起されるか；成熟ＤＣＲＳ８またはＤＣＲＳ
９に対して惹起されるか；精製ヒトＤＣＲＳ８またはＤＣＲＳ９に対して惹起さ
れるか；免疫選択されるか；ポリクローナル抗体であるか；変性ＤＣＲＳ８また
はＤＣＲＳ９に結合するか；少なくとも３０μＭの、抗原に対するＫｄを示すか
；ビーズもしくはプラスチック膜を含む固体基材に付着されるか；滅菌組成物中
に存在するか；または、検出可能に標識される（放射能標識または蛍光標識を含
む）。キットとしては、このような結合化合物、および：この結合化合物を含む
区画；または、キット中の試薬の使用もしくは廃棄のための説明書を含むキット
が挙げられる。

【００１３】 本発明はまた、抗原：抗体複合体を産生するための方法を提供し、この方法は
、適切な条件下で、霊長類ＤＣＲＳ８またはＤＣＲＳ９ポリペプチドを記載され
た抗体と接触させ、これによって複合体の形成を可能にする工程を包含する。好
ましい方法としては、以下を包含する方法が挙げられる：ここで、この複合体は
他のサイトカインレセプターから精製されるか；この複合体は他の抗体から精製
されるか；この接触は、インターフェロンを含むサンプルとであるか；この接触
は抗原の定量的検出を可能にするか；この接触は抗体を含むサンプルとであるか
；またはこの接触は抗体の定量的検出を可能にする。さらなる組成物としては、
以下を含む組成物が挙げられる：記載されたような滅菌結合化合物、または結合
化合物およびキャリア、ここでこのキャリアは：水、生理食塩水、および／また
は緩衝液を含む水性化合物であり；そして／または経口投与、直腸投与、経鼻投
与、局所的投与、または非経口投与のために処方される。

【００１４】 核酸組成物は、所望のポリペプチドをコードする単離された核酸または組換え
核酸を含み、ここで：ＤＣＲＳ８またはＤＣＲＳ９は、ヒト由来であるか；また
はこの核酸は：表３または表４の抗原性ペプチド配列をコードするか；表３また
は表４の複数の抗原性ペプチド配列をコードするか；少なくとも１３ヌクレオチ
ドにわたって、このセグメントをコードする天然のｃＤＮＡ対して同一性を示す
か；発現ベクターであるか；複製起点をさらに含むか；天然供給源由来であるか
；検出可能な標識を含むか；合成ヌクレオチド配列を含むか；６ｋｂ未満、好ま
しくは３ｋｂ未満であるか；霊長類由来であるか；天然の全長コード配列を含む
か；ＤＣＲＳ８またはＤＣＲＳ９をコードする遺伝子に対するハイブリダイゼー
ションプローブであるか；あるいは、ＰＣＲプライマー、ＰＣＲ産物、または変
異誘発プライマーである。このような組換え核酸を含む細胞または組織をまた提
供する。例えば、この細胞は：原核生物細胞；真核生物細胞；細菌細胞；酵母細
胞；昆虫細胞；哺乳動物細胞；マウス細胞；霊長類細胞；またはヒト細胞である
。

【００１５】 キットの実施形態としては、記載された核酸、および：この核酸を含む区画；
霊長類ＤＣＲＳ８またはＤＣＲＳ９ポリペプチドをさらに含む区画；あるいはキ
ット中の試薬の使用または廃棄のための説明書を含むキットが挙げられる。

【００１６】 提供される他の核酸は、以下の核酸を含む：配列番号１３または１６のコード
部分に対し、３０℃かつ２Ｍ未満の塩、３０分間の洗浄条件下でハイブリダイズ
するか；あるいは霊長類ＤＣＲＳ８またはＤＣＲＳ９に対し、少なくとも約３０
ヌクレオチドのストレッチにわたり、同一性を示す。好ましくは、以下のような
核酸である：ここで、洗浄条件は、４５℃および／または５００ｍＭ塩であるか
；洗浄条件は、５５℃および／または１５０ｍＭ塩であるか；あるいはストレッ
チは少なくとも５５ヌクレオチドまたは７５ヌクレオチドである。

【００１７】 細胞または組織培養細胞の生理または発達を調節する方法もまた提供され、こ
の方法は、この細胞を、哺乳動物ＤＣＲＳ８またはＤＣＲＳ９のアゴニストまた
はアンタゴニストと接触させる工程を包含する。好ましくは、この細胞は、ＤＣ
ＲＳ８またはＤＣＲＳ９および別のサイトカインレセプターサブユニットをコー
ドする核酸を用いて形質転換される。

【００１８】 （好ましい実施形態の詳細な説明） （概要） Ｉ．一般 ＩＩ．活性 ＩＩＩ．核酸 Ａ．コードしているフラグメント、配列、プローブ Ｂ．変異、キメラ、融合 Ｃ．核酸の作製 Ｄ．細胞が含有するベクター ＩＶ．タンパク質、ペプチド Ａ．フラグメント、配列、免疫原、抗原 Ｂ．ムテイン Ｃ．アゴニスト／アンタゴニスト、機能的等価物 Ｄ．タンパク質の作製 Ｖ．核酸、タンパク質の作製 Ａ．合成 Ｂ．組換え Ｃ．天然供給源 ＶＩ．抗体 Ａ．ポリクローナル Ｂ．モノクローナル Ｃ．フラグメント；Ｋｄ Ｄ．抗イディオタイプ抗体 Ｅ．ハイブリドーマ細胞株 ＶＩＩ．ＤＣＲＳを定量するためのキットおよび方法 Ａ．ＥＬＩＳＡ Ｂ．コードしているｍＲＮＡのアッセイ Ｃ．定性的／定量的 Ｄ．キット ＶＩＩＩ．治療的組成物、方法 Ａ．組み合わせ組成物 Ｂ．単位用量 Ｃ．投与 ＩＸ．スクリーニング Ｘ．リガンド。

【００１９】 （Ｉ．一般） 本発明は、哺乳動物（本明細書中では霊長類）のサイトカインレセプター様サ
ブユニット分子（これらは、ＤＮＡＸサイトカインレセプターサブユニット６（
ＤＣＲＳ６）、７（ＤＣＲＳ７）、８（ＤＣＲＳ８）、９（ＤＣＲＳ９）および
１０（ＤＣＲＳ１０）と命名され、特定の規定された特性（構造的および生物学
的の両方）を有する）のアミノ酸配列およびＤＮＡ配列を提供する。これらの分
子をコードする種々のｃＤＮＡは、霊長類（例えば、ヒト）および／またはげっ
歯類（例えば、マウス）のｃＤＮＡ配列ライブラリーから得られた。他の霊長類
または他の哺乳動物対応物もまた所望された。

【００２０】 いくつかの適用可能な標準的な方法は、例えば、Ｍａｎｉａｔｉｓら（１９８
２）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎ
ｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏ
ｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ；Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８
９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎ
ｕａｌ，（第２版），１−３巻、ＣＳＨ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ；Ａｕｓｕｂｅｌら
，Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅ
ｓ，Ｂｒｏｏｋｌｙｎ，ＮＹ；またはＡｕｓｕｂｅｌら（１９８７および定期的
な補遺）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂ
ｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ／Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（これらの各々は
、本明細書中で参考として援用される）に記載されるかまたはこれらにおいて引
用される。

【００２１】 霊長類（例えば、ヒト）のＤＣＲＳ６をコードするセグメントのヌクレオチド
配列（配列番号１）および対応するアミノ酸配列（配列番号２）が、逆翻訳物（
配列番号３）と共に表１に示される。げっ歯類（例えば、マウス）の対応物の配
列が、例えば、配列番号４〜６に提供される。

【００２２】 同様に、霊長類（例えば、ヒト）のＤＣＲＳ７をコードするセグメントのヌク
レオチド配列（配列番号７）および対応するアミノ酸配列（配列番号８）が、逆
翻訳物（配列番号９）と共に表２に示される。げっ歯類（例えば、マウス）の対
応物の配列が、例えば、配列番号１０〜１２に提供される。霊長類（例えば、ヒ
ト）のＤＣＲＳ８をコードするセグメントのヌクレオチド配列（配列番号１３）
および対応するアミノ酸配列（配列番号１４）が、逆翻訳物（配列番号１５）と
共に表３に示される。

【００２３】 霊長類（例えば、ヒト）のＤＣＲＳ９をコードするセグメントのヌクレオチド
配列（配列番号１６）および対応するアミノ酸配列（配列番号１７）が、逆翻訳
物（配列番号１８）と共に表４に示される。げっ歯類（例えば、マウス）の対応
物の配列が、例えば、配列番号１９〜２１に提供される。霊長類（例えば、ヒト
）のＤＣＲＳ１０をコードするセグメントのヌクレオチド配列（配列番号２２）
および対応するアミノ酸配列（配列番号２３）が、逆翻訳物（配列番号２４）と
共に表５に示される。げっ歯類（例えば、マウス）の対応物の配列が、例えば、
配列番号２６〜２７に提供される。

【００２４】

【表１】

【００２５】

【表２】

【００２６】

【表３】

【００２７】

【表４】

【００２８】

【表５】

【００２９】

【表６】 表６は、霊長類、げっ歯類および種々の他のレセプターの利用可能な配列の比
較を示す。種々の保存された残基を、整列し、そして示す。構造的に相同的な細
胞質のドメインは、ＩＬ−１７のような経路を介して（例えば、ＮＦκＢを介し
て）おそらくシグナルを伝達するようである。ＩＬ−１シグナル伝達と同様に、
これらのレセプターは、先天的な免疫および／または発達に関連するようである
。

【００３０】 本明細書中で使用される場合、用語ＤＣＲＳは、それぞれ、表１〜５に示され
るアミノ酸配列を含むタンパク質を記載するように使用されるべきである。多く
の場合、その実質的なフラグメントは、機能的または構造的に等価であり、（例
えば、細胞外ドメインまたは細胞内ドメインを含む。本発明はまた、配列が提供
されるそれぞれのＤＣＲＳ対立遺伝子のタンパク質バリエーション（例えば、ム
テインまたは可溶性細胞外構築物）を含む。典型的には、このようなアゴニスト
またはアンタゴニストは、約１０％未満の配列の差異を示し、従って、１個と１
１個の間の置換（例えば、２倍、３倍、５倍、７倍およびその他）をしばしば有
する。記載されるタンパク質の対立遺伝子改変体および他の改変体（例えば、天
然の多型性）も含む。典型的には、おそらく、高い親和性（例えば、少なくとも
約１００ｎＭ、通常約３０ｎＭより高く、好ましくは、約１０ｎＭより高く、そ
してより好ましくは、約３ｎＭより高い）で、αレセプターサブユニットの二量
体化状態において、対応する生物学的リガンドに結合する。この用語はまた、関
連する天然に存在する形態（例えば、哺乳動物タンパク質の対立遺伝子、多型、
改変体および代謝改変体）をいうために本明細書中において使用されるべきであ
る。レセプター複合体の好ましい形態は、リガンド―レセプター相互作用につい
て適切な親和性および選択性で、適切なリガンドに結合する。

【００３１】 本発明はまた、表１〜５におけるアミノ酸配列と実質的アミノ酸配列同一性を
有するタンパク質またはペプチドの組み合わせを含む。比較的わずかな残基置換
（例えば、好ましくは、約３〜５未満）を有する配列改変体を含む。

【００３２】 実質的なポリペプチド「フラグメント」または「セグメント」は、少なくとも
約８個のアミノ酸、一般には少なくとも１０個のアミノ酸、さらに一般には少な
くとも１２個のアミノ酸、しばしば少なくとも１４個のアミノ酸、さらにしばし
ば１６個のアミノ酸、典型的には、少なくとも１８個のアミノ酸、さらに典型的
には、少なくとも２０個のアミノ酸、通常少なくとも２２個のアミノ酸、さらに
通常少なくとも２４個のアミノ酸、好ましくは、少なくとも２６個のアミノ酸、
さらに好ましくは、少なくとも２８個のアミノ酸、そして特に好ましい実施形態
において、少なくとも約３０個以上のアミノ酸のアミノ酸残基のストレッチであ
る。これは、例えば、４０、５０、６０、７０、８５、１００、１１５、１３０
、１５０などの長さを含む。異なるタンパク質のセグメントの配列を、適切な長
さのストレッチ（典型的には、保存部分間）にわたって、互いに比較し得る。多
くの状況において、フラグメントは、本質的なサブユニットの機能的な性質を示
し得る（例えば、膜貫通レセプターの細胞外ドメインは、リガンド結合の特徴を
保持し得、そして可溶性レセプター様複合体を調製するために使用され得る）。

【００３３】 アミノ酸配列相同性または配列同一性は、残基の一致を最適化することによっ
て決定される。いくつかの比較において、ギャップは、必要な場合、導入され得
る。例えば、Ｎｅｅｄｌｅｈａｍら，（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８
：４４３−４５３；Ｓａｎｋｏｆｆら，（１９８３）第１章，Ｔｉｍｅ Ｗａｒ
ｐｓ，Ｓｔｒｉｎｇ Ｅｄｉｔｓ、ａｎｄ Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ：Ｔ
ｈｅ Ｔｈｅｏｒｙ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｃ
ｏｍｐａｒｉｓｏｎ．Ａｄｄｉｓｏｎ−Ｗｅｓｌｅｙ，Ｒｅａｄｉｎｇ，ＭＡ；
ならびに ＩｎｔｅｌｌｉＧｅｎｅｔｉｃｓ，Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ，Ｃ
Ａ；およびＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃ
ｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ（ＧＣＧ），Ｍａｄｉｓｏｎ ＷＩ製のソフ
トウェアパッケージ（これらのそれぞれは、参考として本明細書中に援用される
）を参照のこと。保存的な置換を一致として考える場合、これは変化する。保存
的な置換は、典型的には、以下の群の置換を含む：グリシン、アラニン；バリン
、イソロイシン、ロイシン；アスパラギン酸、グルタミン酸；アスパラギン、グ
ルタミン；セリン、スレオニン；ロイシン、アルギニン；およびフェニルアラニ
ン、チロシン。相同的なアミノ酸配列は、サイトカイン配列における天然の対立
遺伝子バリエーションおよび種間バリエーションを含むことを意図する。典型的
な相同タンパク質またはペプチドは、例えば、表３または４のアミノ酸配列セグ
メントと、５０〜１００％の相同性（ギャップが導入され得る場合）から６０〜
１００％の相同性（保存的配列が含まれる場合）を有する。相同性の尺度は、少
なくとも約７０％、一般に少なくとも７６％、さらに一般に少なくとも８１％、
しばしば少なくとも８５％、さらにしばしば少なくとも８８％、典型的には少な
くとも９０％、さらに典型的には少なくとも９２％、通常では少なくとも９４％
、さらに通常では少なくとも９５％、好ましくは、少なくとも９６％、そしてさ
らに好ましくは、少なくとも９７％ならびに特に好ましい実施形態において、少
なくとも９８％以上である。相同性の程度は、比較されるセグメントに長さによ
って変化する。相同タンパク質またはペプチド（例えば、対立遺伝子改変体）は
、表１〜５に記載される実施形態と大部分の生物学的活性を共有する。

【００３４】 本明細書中において使用される場合、用語「生物学的活性」は、限定せずに、
サイトカイン様リガンドによる、炎症応答、先天的な免疫および／または形態的
発達における効果を記載するために使用される。例えば、これらのレセプターは
、ホスファターゼ活性またはホスホリラーゼ活性を媒介するべきであり、これら
の活性は、標準的手順によって容易に決定される。例えば、Ｈａｒｄｉｅら，（
編，１９９５）Ｔｈｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｋｉｎａｓｅ ＦａｃｔＢｏｏｋ 第
Ｉ巻および第ＩＩ巻，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，Ｃ
Ａ；Ｈａｎｋｓら，（１９９１）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２００：３８−６
２；Ｈｕｎｔｅｒら，（１９９２）Ｃｅｌｌ ７０：３７５−３８８；Ｌｅｗｉ
ｎ（１９９０）Ｃｅｌｌ ６１：７４３−７５２；Ｐｉｎｅｓら，（１９９１）
Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｓｙｍｐ．Ｑｕａｎｔ．Ｂｉｏｌ．５
６：４９９−４６３およびＰａｒｋｅｒら，（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ ３６３
：７３６−７３８を参照のこと。レセプターまたはその一部は、一般的な基質ま
たは特異的な基質を標識するためのリン酸標識化酵素として有用であり得る。こ
のサブユニットはまた、認識抗体を誘導するための機能的な免疫原または抗体に
結合し得る抗原であり得る。

【００３５】 例えば、ＤＣＲＳ８またはＤＣＲＳ９の用語リガンド、アゴニスト、アンタゴ
ニストおよびアナログは、サイトカインリガンドタンパク質への特徴的な細胞応
答を調節する分子およびリガンドレセプター相互作用のさらに標準的な構造結合
競合性質をプロセシングする分子（例えば、レセプターが、天然のレセプターま
たは抗体である場合）を含む。細胞応答は、典型的には、レセプターチロシンキ
ナーゼ経路を介して媒介されるようである。

【００３６】 また、リガンドは、そのレセプターまたはそのアナログが結合する天然のリガ
ンドあるいは天然のリガンドの機能的なアナログである分子である。機能的なア
ナログは、構造的な改変を有するリガンドであり得るか、または適切な結合リガ
ンド決定因子と相互作用する分子の形態を有する全体的に関連のない分子であり
得る。リガンドは、アゴニストまたはアンタゴニストとして役立ち得る（例えば
、Ｇｏｏｄｍａｎら（編，１９９０）Ｇｏｏｄｍａｎ＆Ｇｉｌｍａｎ’ｓ：Ｔｈ
ｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｅｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔ
ｉｃｓ，Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照のこと）。

【００３７】 合理的な薬剤設計はまた、レセプターまたは抗体および他のエフェクターまた
はリガンドの分子の形状の構造的な研究に基づき得る。例えば、Ｈｅｒｚら，（
１９９７）Ｊ．Ｒｅｃｅｐｔ．Ｓｉｇｎａｌ Ｔｒａｎｓｄｕｃｔ．Ｒｅｓ．１
７：６７１−７７６；およびＣｈａｉｋｅｎら，（１９９６）Ｔｒｅｎｄｓ Ｂ
ｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１４：３６９−３７５を参照のこと。エフェクターは、リ
ガンド結合に応答し他の機能を媒介する他のタンパク質またはレセプターに正常
と相互作用する他のタンパク質であり得る。特異的な他のタンパク質に相互作用
する部位を決定するための１つの手段は、物理学的な構造決定（例えば、Ｘ線結
晶学または２次元ＮＭＲ技術）である。これらは、どのアミノ酸残基が、分子接
触領域を形成するかに関するガイダンスを提供する。タンパク質構造決定の詳細
な説明に関して、例えば、ＢｌｕｎｄｅｌｌおよびＪｏｈｎｓｏｎ（１９７６）
Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｙ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅ
ｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照のこと（これは、参考として本明細書中に援用さ
れる）。

【００３８】 （ＩＩ．活性） サイトカインレセプター様タンパク質は、多くの異なる生物学的活性（例えば
、細胞増殖の調節、またはリン酸代謝において特定の基質（典型的には、タンパ
ク質）に添加されるかもしくはその基質から除去される、）を有する。これは、
一般的には、炎症機能の調節、他の先天的な免疫応答または形態学的な効果を生
じる。サブユニットは、おそらく、リガンドへの特異的な低親和性結合を有する
。

【００３９】 ＤＣＲＳ８およびＤＣＲＳ９は、ＪＡＫ経路を介してシグナル伝達レセプター
の特徴的な部分を有する。例えば、Ｉｈｌｅら，（１９９７）Ｓｔｅｍ Ｃｅｌ
ｌｓ １５（補遺１）：１０５−１１１；Ｓｉｌｖｅｎｎｏｉｎｅｎら，（１９
９７）ＡＰＭＩＳ １０５：４９７−５０９：Ｌｅｖｙ（１９９７）Ｃｙｔｏｋ
ｉｎｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｖｉｅｗ ８：８１−９０；Ｗｉｎ
ｓｔｏｎおよびＨｕｎｔｅｒ（１９９６）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｂｉｏｌ．６：６６
８−６７１；Ｂａｒｒｅｔｔ（１９９６）Ｂａｉｌｌｉｅｒｅｓ Ｃｌｉｎ．Ｇ
ａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．１０：１−１５；ならびにＢｒｉｓｃｏｅら，（１
９９６）Ｐｈｉｌｏｓ．Ｔｒａｎｓ．Ｒ．Ｓｏｃ．Ｌｏｎｄ．Ｂ．Ｂｉｏｌ．Ｓ
ｃｉ．３５１：１６７−１７１を参照のこと。

【００４０】 サイトカインレセプターサブユニットの生物学的活性は、基質へのリン酸部分
の添加または除去に関連する（典型的には特異的な様式であるが、時折非特異的
な様式において）。例えば、以下に記載されるような標準的な方法によって、基
質は、同定され得るか、または酵素活性のための条件は、アッセイされ得る：Ｈ
ａｒｄｉｅら，（編，１９９５）Ｔｈｅ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｋｉｎａｓｅ Ｆａ
ｃｔＢｏｏｋ 第Ｉ巻および第ＩＩ巻，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ
Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ；Ｈａｎｋｓら，（１９９１）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．
２００：３８−６２；Ｈｕｎｔｅｒら（１９９２）Ｃｅｌｌ ７０：３７５−３
８８；Ｌｅｗｉｎ（１９９０）Ｃｅｌｌ ６１：７４３−７５２；Ｐｉｎｅｓら
（１９９１）Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｓｙｍｐ．Ｑｕａｎｔ．
Ｂｉｏｌ．５６：４９９−４６３ならびにＰａｒｋｅｒら（１９９３）Ｎａｔｕ
ｒｅ ３６３：７３６−７３８。

【００４１】 レセプターサブユニットは、機能的な複合体を形成するために結合し得る。例
えば、これらは、リガンドとの結合または抗体の調製のために有用であえり得る
。これらは、実質的には診断的な使用（検出または定量を含む）を有する。

【００４２】 （ＩＩＩ．核酸） 本発明は、単離された核酸またはフラグメント（例えば、これらは、これらの
タンパク質もしくは密接に関連するタンパク質またはそのフラグメントをコード
する）、例えば、対応するポリペプチド（好ましくは、生物学的に活性である）
の使用を意図する。さらに、本発明は、特徴的な配列（例えば、ＤＣＲＳの配列
）を有するようなタンパク質またはポリペプチドの組み合わせをコードする単離
されたＤＮＡまたは組換えＤＮＡを含む。典型的には、核酸は、適切な条件下で
、表１〜５に示される核酸配列セグメントとハイブリダイズし得るが、好ましく
は、表６に記載される他のレセプターの対応するセグメントとハイブリダイズし
ない。この生物学的に活性なタンパク質またはポリペプチドは、全長タンパク質
またはフラグメントであり得、そして典型的には、表１〜５に示される核酸配列
のセグメントに非常に相同的な（例えば、同一性の有意なストレッチを示す）ア
ミノ酸配列のセグメントを有する。さらに、本発明はＤＣＲＳ８タンパク質また
はＤＣＲＳ９タンパク質に等価であるフラグメントを有するタンパク質をコード
する、単離された核酸またはそれらのフラグメントあるいは組換え核酸またはそ
れらのフラグメントの使用を含む。単離された核酸は、５’隣接部および３’隣
接部においてそれぞれの調節配列（例えば、プロモーター、エンハンサー、ポリ
Ａ付加シグナルおよび天然遺伝子由来の他のもの）を有し得る。記載されるよう
な組み合わせもまた、提供される。

【００４３】 「単離された」核酸は、は実質的に純粋であるに本来付随する他の成分（例え
ば、天然の配列（例えば、起源の種由来のリボソーム、ポリメラーゼおよびフラ
ンキングゲノム配列）から分離される）核酸（例えば、ＲＮＡ、ＤＮＡまたは混
合されたポリマー）である。この用語は、天然に存在する環境から取り除かれた
核酸配列を含み、そして組換えＤＮＡ単離物またはクローニングされたＤＮＡ単
離物を含み、これによって、これらは、天然に存在する組成物および化学的に合
成されたアナログまたは異種の系によって生物学的に合成されたアナログからケ
別可能である。実質的に純粋な分子は、完全にまたは実質的に純粋な、分子の単
離された形態を含む。

【００４４】 単離された核酸は、一般に、分子の均一な組成物であるが、いくつかの実施形
態において、好ましくは、少量の不均一性を含む。この不均一性は、典型的には
、所望される生物学的機能または活性に重要でない、ポリマー末端または一部に
見られる。

【００４５】 「組換え」核酸は、典型的には、生成の方法または構造のいずれかによって定
義される。生成の方法（プロセスによって作製された生成物）に関して、プロセ
スは、組換え核酸技術（例えば、核酸配列中への人為的な介入を含む）の使用で
ある。典型的には、この介入は、インビトロでの操作を含むが、特定の状況下で
、さらに古典的な動物繁殖技術を含み得る。あるいは、お互いに本来隣接してい
ない２つのフラグメントの融合を含む配列の生成によって作製される核酸であり
得るが、天然の生成物（例えば、天然の状態において見られるような天然に存在
する変異体）を除くことを意味する。従って、例えば、天然に存在しないベクタ
ーを使用して細胞を形質転換することによって作製された生成物が、任意の合成
オリゴヌクレオチドプロセスを使用して誘導される配列を含む核酸と同様に含ま
れる。このようなプロセスは、典型的には、制限酵素配列認識部位を導入または
除去して、しばしば、同一または保存的なアミノ酸をコードする冗長なコドンと
コドンとを置換するために行なわれる。あるいは、このプロセスは、所望の機能
の核酸セグメントを一緒に結合して、一般的に入手可能な天然の形態において見
られない機能（例えば、融合タンパク質をコードする）の所望の組み合わせを含
む単一の遺伝子実体を作製するために実施される。制限酵素認識酵素は、しばし
ばこのような人工的な操作の標的であるが、他の部位特異的な標的（例えば、プ
ロモーター、ＤＮＡ複製部位、調節配列、制御配列または他の有用な特徴）は、
設計によって組み込まれ得る。同様の概念が、組換えのために意図される（例え
ば、融合ペプチド）。これは、二量体反復を含む。具体的には、遺伝的コード冗
長性によって、ＤＣＲＳのフラグメントの等価のポリヌクレオチドおよび種々の
異なる分子由来の配列の融合物（例えば、他のサイトカインレセプターファミリ
ーメンバー）をコードする合成核酸が、含まれる。

【００４６】 核酸の状況における「フラグメント」は、少なくとも約１７個のヌクレオチド
、一般的に少なくとも２１個のヌクレオチド、さらに一般的には少なくとも２５
個のヌクレオチド、普通少なくとも３０個のヌクレオチド、さらに普通少なくと
も３５個のヌクレオチド、しばしば少なくとも３９個のヌクレオチド、さらにし
ばしば少なくとも４５個のヌクレオチド、典型的には少なくとも５０個のヌクレ
オチド、さらに典型的には少なくとも５５個のヌクレオチド、通常少なくとも６
０個のヌクレオチド、さらに通常６６個のヌクレオチド、好ましくは、少なくと
も７２個のヌクレオチド、さらに好ましくは少なくとも７９個のヌクレオチドの
連続セグメントであり、そして特に好ましい実施形態において、少なくとも８５
個以上のヌクレオチドである。典型的には、異なる遺伝子配列のフラグメントは
、適切な長さのストレッチにわたって、互いに（特に以下に記載されるドメイン
のような定義されるセグメント）比較され得る。

【００４７】 ＤＣＲＳ８およびＤＣＲＳ９をコードする核酸は、それ自身または密接に関連
するタンパク質をコードする遺伝子、ｍＲＮＡ、およびｃＤＮＡ種および多型性
、対立遺伝子改変体または他の遺伝的改変体（例えば、異なる個体または関連種
由来の）をコードするＤＮＡを同定するのに特に有用である。このようなスクリ
ーニングにおいて好ましいプローブは、異なる多型性改変体間に保存されるか、
または特異性を欠いたヌクレオチドを含むインターロイキンのこれらの領域であ
り、そして好ましくは、全長またはそれに近いものである。他の状況において、
多型性改変体特異的な配列は、さらに有用である。

【００４８】 本発明は、本明細書中に記載される単離されたＤＮＡと同一の核酸配列または
非常に相同な核酸配列を有する組換え核酸分子およびフラグメントをさらに含む
。特に、配列は、しばしば、転写、翻訳およびＤＮＡ複製をコントロールするＤ
Ｎセグメントに作動可能に連結される。これらのさらなるセグメントは、典型的
には、所望の核酸セグメントの発現を補助する。

【００４９】 互いに比較する場合、相同的または非常に相同の核酸配列（例えば、ＤＣＲＳ
８配列）は、有意な類似性を示す。核酸における相同性についての標準は、配列
比較において当該分野で一般的に使用される相同性について測定されるか、また
はハイブリダイゼーション条件下に基づくかのいずれかである。比較的なハイブ
リダイゼーション条件は、以下により詳細に記載される。

【００５０】 核酸配列比較の状況における実質的な同一性とは、セグメントまたはその相補
鎖のいずれかが、比較される場合、適切なヌクレオチド挿入または欠失を伴って
最適に整列された際に、ヌクレオチドの少なくとも約６０％、一般的には少なく
とも６６％、通常少なくとも７１％、しばしば少なくとも７６％、よりしばしば
少なくとも８０％、通常少なくとも８４％、より通常には少なくとも８８％、代
表的には少なくとも９１％、より代表的には少なくとも約９３％、好ましくは少
なくとも約９５％、より好ましくは少なくとも約９６％〜９８％以上において、
そして特定の実施形態では、ヌクレオチドの約９９％以上もの高さにおいて、同
一であることを意味し、例えば、以下に記載されるセグメントのような構造的ド
メインをコードするセグメントを包含する。あるいは、実質的な同一性は、セグ
メントが選択的ハイブリダイゼーション条件下で、鎖またはその相補鎖に、代表
的には表１〜５に由来する配列を使用して、ハイブリダイズする場合に存在する
。代表的には、選択的ハイブリダイゼーションは、少なくとも約１４ヌクレオチ
ドのストレッチにわたって少なくとも約５５％の相同性、より代表的には少なく
とも約６５％、好ましくは少なくとも約７５％、そしてより好ましくは少なくと
も約９０％の相同性が存在する場合に生じる。Ｋａｎｅｈｉｓａ（１９８４）Ｎ
ｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１２：２０３−２１３（これは、本明細書中で参
考として援用される）を参照のこと。相同性比較の長さは、記載されるように、
より長いストレッチにわたり得、そして特定の実施形態においては、少なくとも
約１７ヌクレオチド、一般的には少なくとも約２０ヌクレオチド、通常（ｏｒｄ
ｉｎａｒｉｌｙ）少なくとも約２４ヌクレオチド、通常（ｕｓｕａｌｌｙ）少な
くとも約２８ヌクレオチド、代表的には少なくとも約３２ヌクレオチド、より代
表的には少なくとも約４０ヌクレオチド、好ましくは少なくとも約５０ヌクレオ
チドのストレッチにわたり、そしてより好ましくは少なくとも約７５〜１００以
上のヌクレオチドにわたる。これには、例えば、１２５、１５０、１７５、２０
０、２２５、２４６、２７３および他の長さが挙げられる。

【００５１】 ストリンジェントな条件は、ハイブリダイゼーションの状況において相同性を
いう場合、ハイブリダイゼーション反応において代表的に制御される塩、温度、
有機溶媒、および他のパラメーターを組み合わせたストリンジェントな条件であ
る。ストリンジェントな温度条件は、通常、約３０℃を超える温度、より通常に
は約３７℃を超える温度、代表的には約４５℃を超える温度、より代表的には約
５５℃を超える温度、好ましくは約６５℃を超える温度、そしてより好ましくは
約７０℃を超える温度を含む。ストリンジェントな塩条件は、通常、約５００ｍ
Ｍ未満、通常、約４００ｍＭ未満、より通常には、約３００ｍＭ未満、代表的に
は、約２００ｍＭ未満、好ましくは、約１００ｍＭ未満、そしてより好ましくは
約８０ｍＭ未満、さらに約２０ｍＭ未満までである。しかし、パラメーターの組
み合わせは、いかなる単一のパラメーターの尺度よりもさらに重要である。例え
ば、ＷｅｔｍｕｒおよびＤａｖｉｄｓｏｎ（１９６８）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．
３１：３４９−３７０（これは、本明細書中によって参考として本明細書中に援
用される）を参照のこと。

【００５２】 単離されたＤＮＡは、ヌクレオチド置換、ヌクレオチド欠失、ヌクレオチド挿
入およびヌクレオチドストレッチの反転によって容易に改変され得る。これらの
改変は、このタンパク質またはその誘導体をコードする新規のＤＮＡ配列を生じ
る。これらの改変された配列は、変異タンパク質（ムテイン）を作製するため、
または改変体種の発現を増強するために使用され得る。増強された発現は、遺伝
子増幅、増大した転写、増大した翻訳および他の機構を含み得る。このような変
異ＤＣＲＳ８様誘導体は、タンパク質またはそのフラグメントの予め決められた
または部位特異的な変異（遺伝子コード縮重を使用するサイレント変異を含む）
を含む。本明細書中において使用される「変異ＤＣＲＳ８」は、欠失、置換また
は挿入のいずれかの手段によって、天然において見られるような他のサイトカイ
ンレセプター様タンパク質のアミノ酸配列と異なるアミノ酸配列を有することを
除き、その点では、上に示されるＤＣＲＳ８の相同性の定義内にあるポリペプチ
ドを含む。特に、「部位特異的変異ＤＣＲＳ８」は、表３のタンパク質と実質的
な配列同一性を有するタンパク質を含み、そして、典型的には、本明細書中に開
示される形態の生物学的活性または効果の多くを共有する。

【００５３】 部位特異的変異部位は、予め決定されるが、変異体は、部位特異的である必要
はない。哺乳動物ＤＣＲＳ８突然変異誘発は、発現に関連する、遺伝子において
アミノ酸挿入またはアミノ酸欠失を作製することによって達成され得る。置換、
欠失、挿入または多くの組み合わせを生じて、最終構築物に到達し得る。挿入は
、アミノ末端融合またはカルボキシ末端融合を含む。無作為な突然変異誘発は、
標的コドンにおいて実施され得、次いで、発現された哺乳動物ＤＣＲＳ変異体は
、所望の活性についてスクリーニングされ、構造−活性の関連のいくつかの局面
を提供する。既知の配列を有するＤＮＡの予め決定された部位における置換変異
を作製するための方法（例えば、Ｍ１３プライマー突然変異誘発による）は、当
該分野において周知である。Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）ならびにＡｕｓｕ
ｂｅｌら（１９８７および周期的な補遺）も参照のこと。

【００５４】 ＤＮＡにおける変異は、一般に、読み取り枠外にコード配列を配置するべきで
なく、そして好ましくは、ループまたはヘアピンのような二次ｍＲＮＡ構造を産
生するためにハイブリダイズし得る相補的な領域を作製しない。

【００５５】 ＢｅａｕｃａｇｅおよびＣａｒｒｕｔｈｅｒｓ（１９８１）Ｔｅｔｒａ．Ｌｅ
ｔｔｓ．２２：１８５９−１８６２に記載されるホスホロアミダイト法は、適切
な合成ＤＮＡフラグメントを作製する。二本鎖フラグメントは、しばしば、相補
鎖を合成し、そして適切な条件下で鎖を一緒にアニーリングすることによってか
、または適切なプライマー配列で、ＤＮＡポリメラーゼを使用して相補鎖を添加
することによってかのいずれかによって得られる。

【００５６】 ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）技術は、しばしば、突然変異誘発において適
用され得る。あるいは、突然変異誘発プライマーは、予め決定された部位におい
て規定された変異を作製するため通常、使用される方法である。例えば、Ｉｎｎ
ｉｓら（編，１９９０）ＰＣＲ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ Ｇｕｉｄｅ ｔｏ
Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒ
ｅｓｓ，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ；ならびにＤｉｅｆｆｅｎｂａｃｈおよびＤ
ｖｅｋｓｌｅｒ（１９９５，編）ＰＣＲ Ｐｒｉｍｅｒ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏ
ｒｙ Ｍａｎｕａｌ Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｃ
ＳＨ，ＮＹを参照のこと。

【００５７】 本発明の特定の実施形態は、記載されるレセプターまたはリガンド配列を含む
組み合わせ組成物に関連する。他の実施形態において、配列の機能的な部分を、
結合して、融合タンパク質をコードし得る。他の形態において、記載される配列
の改変体は、置換され得る。

【００５８】 （ＩＶ．タンパク質、ペプチド） 上記されるように、本発明は、（例えば、表１〜５に開示される配列を有し、
そして上記される）霊長類ＤＣＲＳ６〜１０を含む。例えば、エピトープタグお
よび機能的ドメインを例えば含む、他のものとこのような配列の部分とを組み合
わせる融合タンパク質を含む、対立遺伝子改変体および他の改変体もまた意図さ
れる。

【００５９】 本発明はまた、組換えタンパク質（例えば、これらの霊長類タンパク質または
げっ歯類タンパク質由来のセグメントを使用する異種融合タンパク質）を提供す
る。異種融合タンパク質は、天然で同じ形式において正常では融合されないタン
パク質またはセグメントの融合体である。従って、例えば、別のサイトカインレ
セプターとのＤＣＲＳ８の融合生成物は、単一の翻訳生成物として典型的に生成
される、典型的なペプチド結合において融合される配列を有し、そして各供給源
ペプチド由来の性質（例えば、配列または抗原性）を示す連続タンパク質分子で
ある。類似の概念は、異種の核酸配列に適用される。複合体への種々の設定され
たタンパク質の組み合わせもまた、提供される。

【００６０】 さらに、新しい構築物は、他の関連タンパク質（例えば、サイトカインレセプ
ターまたはＴｏｌｌ様レセプター（種改変体を含む））由来の類似の機能的ドメ
インまたは構造ドメインの結合から作製され得る。例えば、リガンド−結合セグ
メントまたは他のセグメントは、異なる新しい融合ポリペプチドまたはフラグメ
ント間で「交換され」得る。例えば、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍら（１９８９）Ｓｃ
ｉｅｎｃｅ ２４３：１３３０−１３３６：およびＯ’Ｄｏｗｄら（１９８８）
Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６３：１５９８５−１５９９２（これらのそれぞれ
は、参考として本明細書中に援用される）を参照のこと。従って、特異性の新し
い組み合わせを示す新しいキメラポリペプチドは、レセプター結合特異性の機能
的な結合から生じる。例えば、他の関連するレセプター分子由来のリガンド結合
ドメインは、添加され得るか、あるいは、このタンパク質または関連タンパク質
の他のドメインと置換される。得られたタンパク質は、しばしば、ハイブリッド
機能および性質を有する。例えば、融合タンパク質は、特定の細胞下オルガネラ
と融合タンパク質との隔離を提供するのに役立ち得る標的ドメインを含む。

【００６１】 候補の融合パートナーおよび配列は、種々の配列データベース（例えば、Ｇｅ
ｎＢａｎｋ，ｃ／ｏ ＩｎｔｅｌｌｉＧｅｎｅｔｉｃｓ，Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖ
ｉｅｗ，ＣＡ；およびＢＣＧ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉ
ｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏｍｐｕｔｉｎｇ Ｇｒｏｕｐ，Ｍａｄｉ
ｓｏｎ，ＷＩ（これらは、それぞれ、参考として本明細書中に援用される））か
ら選択され得る。特に、表１〜５に提供されるポリペプチド配列の組み合わせは
、特に好ましい。タンパク質の改変体形態は、記載される組み合わせにおいて置
換され得る。

【００６２】 本発明は、特に、サイトカイン様リガンドに結合する、および／またはシグナ
ル伝達に影響を与える、ムテインを提供する。サイトカインレセプターファミリ
ーの他のメンバーとのヒトＤＣＲＳの構造的整列は、保存された性質／残基を示
す。表６を参照のこと。サイトカインレセプターファミリーの他のメンバーとの
ヒトＤＣＲＳ８配列の整列は、種々の構造的かつ機能的に共有される特徴を示す
。Ｂａｚａｎら（１９９６）Ｎａｔｕｒｅ ３７９：５９１：Ｌｏｄｉら（１９
９４）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６３：１７６２−１７６６；ＳａｙｌｅおよびＭｉｌ
ｎｅｒ−Ｗｈｉｔｅ（１９９５）ＴＩＢＳ ２０：３７４−３７６；ならびにＧ
ｒｏｎｅｎｂｅｒｇら（１９９１）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ
４：２６３−２６９もまた参照のこと。

【００６３】 マウス配列またはヒト配列のいずれかでの置換は、特に好ましい。逆に、リガ
ンド結合相互作用領域からの保存的な置換は、おそらく多くのシグナル伝達活性
を保存し；そして細胞内ドメインからの保存的な置換は、おそらく多くのリガン
ド結合性質を保存する。

【００６４】 霊長類ＤＣＲＳ８の「誘導体」は、アミノ酸配列変異体、グリコシル化改変体
、代謝誘導体および他の化学的部分との共有結合体の結合体または凝集体の結合
体を含む。共有結合体の誘導体は、例えば、当該分野で周知の手段によって、Ｄ
ＣＲＳ８アミノ酸側鎖またはＮ末端またはＣ末端に見出される基への官能基の結
合によって調製され得る。これらの誘導体は、限定しないが、カルボキシル末端
またはカルボキシ鎖を含む残基の脂肪族エステルまたはアミド、ヒドロキシル基
含有残基のＯ−アシル誘導体およびアミノ酸末端アミノ酸のＮ−アシル誘導体ま
たはアミノ基含有残基のＮ−アシル誘導体（例えば、リジンまたはアルギニン）
を含み得る。アシル基は、アルキル部分（Ｃ３〜Ｃ１８の直鎖アルキルを含む）
の群から選択され、それによってアルカノイルアロイル種を形成する。

【００６５】 特に、グリコシル化改変は、含まれる（例えば、合成およびプロセシングの間
またはさらなるプロセシング工程において、ポリペプチドのグリコシル化パター
ンを改変することによって形成される）。これを達成するための特に好ましい手
段は、通常このようなプロセシングを提供する細胞由来のグリコシル化酵素（例
えば、哺乳動物グリコシル化酵素）にポリペプチドを曝露することによってであ
る。脱グリコシル化酵素もまた、意図される。ホスホリル化アミノ酸残基（例え
ば、ホスホチロシン、ホスホセリンまたはホスホスレオニン）を含む、他のわず
かな改変を有する同じ一次アミノ酸配列のバージョンも含まれる。

【００６６】 誘導体の主要な群は、ポリペプチドの他のタンパク質とそのレセプターまたは
フラグメントとの共有結合体である。これらの誘導体は、Ｎ末端融合体またはＣ
末端融合体のような組換え培養において合成され得るか、あるいは反応性側鎖を
介してタンパク質の架橋におけるその有用性について当該分野で公知の試薬の使
用によって合成され得る。架橋試薬を用いた好ましい誘導体化部位は、遊離のア
ミノ基、炭水化物部分およびシステイン残基である。

【００６７】 レセプターと他の同種タンパク質または異種タンパク質との間の融合ポリペプ
チドもまた、提供される。同種ポリペプチドは、異なるレセプター間の融合物で
あり得る（例えば、複数の異なるサイトカインリガンドに結合特異性を示すハイ
ブリッドタンパク質、あるいは基質効果の広域な特異性または弱い特異性を有し
得るレセプターを生じる。同様に、誘導体タンパク質の性質または活性の組み合
わせを示す、異種融合を、構築し得る。典型的な例は、レセプターのセグメント
またはドメイン（例えば、リガンド結合セグメント）と、レポーターポリペプチ
ド（例えば、ルシフェラーゼ）との融合体であり、その結果所望のリガンドの存
在または位置は、容易に決定され得る。例えば、Ｄｕｌｌら，米国特許第４，８
５９，６０９号（これは、参考として本明細書中に援用される）を参照のこと。
他の遺伝子融合パートナーは、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ
）、細菌のβ−ガラクトシダーゼ、ｔｒｐＥ、ＰｒｏｔｅｉｎＡ、β−ラクタマ
ーゼ、α−アミラーゼ、アルコール脱水素酵素および酵母α接合因子を含む。例
えば、Ｇｏｄｏｗｓｋｉら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４１：８１２−８１
６を参照のこと。標識化タンパク質は、しばしば、タンパク質の記載される組み
合わせにおいて置換される。

【００６８】 ＢｅａｕｃａｇｅおよびＣａｒｒｕｔｈｅｒｓ（１９８１）Ｔｅｔｒａ．Ｌｅ
ｔｔｓ ２２：１８５９−１８６２によって記載されるホスホロアミダイト法は
、適切な合成ＤＮＡフラグメントを産生する。二本鎖フラグメントは、しばしば
、相補鎖を合成し、そして適切な条件下で鎖を一緒にアニーリングすることによ
ってか、または適切なプライマー配列で、ＤＮＡポリメラーゼを使用して相補鎖
を添加することによってかのいずれかによって得られる。

【００６９】 このようなポリペプチドはまた、リン酸化、スルホン化、ビオチン化または他
の部分の添加もしくは除去によって化学的に改変されるアミノ酸残基、特にリン
酸基と同様の分子形状を有するアミノ酸残基を有し得る。いくつかの実施形態に
おいて、改変は、有用な標的化試薬であるか、または精製標的（例えば、アフィ
ニティーリガンド）として役立つ。

【００７０】 融合タンパク質は、典型的には、組換え核酸法か、合成ポリペプチド法かのい
ずれかによって作製され得る。核酸操作および発現のための技術は、一般に例え
ば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ（第２編）１〜３巻，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒ
ｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ：ならびにＡｕｓｕｂｅｌら（編
，１９８７、および定期的な補遺）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ／Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ（これらは、それぞれ参考として本明細書中に援用される）に記載され
る。ポリペプチドの合成のための技術は、例えば、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ（１９
６３）Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５：２１４９−２１５６；Ｍｅｒｒ
ｉｆｉｅｌｄ（１９８６）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３２：３４１−３４７；およびＡ
ｔｈｅｒｔｏｎら（１９８９）Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙ
ｎｔｈｅｓｉｓ：Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｏｒｏａｃｈ，ＩＲＬ Ｐｒ
ｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ（これらのそれぞれは、本明細書中に参考として援用され
る）に記載される。より大きなポリペプチドを作製するための方法についてＤａ
ｗｓｏｎら（１９９４）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６６：７７６−７７９も参照のこと
。

【００７１】 本発明はまた、アミノ酸配列またはグリコシル化におけるバリエーション以外
のＤＣＲＳ８の誘導体の使用を意図する。このような誘導体は、化学的部分との
共有結合による会合または凝集による会合を含む。これらの誘導体は、一般に、
３つのクラスに分類される：（１）塩、（２）側鎖および末端残基共有結合改変
体および（３）吸着複合体（例えば、細胞膜との）。このような共有結合体の誘
導体または凝集の誘導体は、免疫原として、免疫アッセイの試薬として、または
例えば、レセプターもしくは他の結合分子（例えば、抗体）のアフィニティー精
製のような精製方法において有用である。例えば、サイトカインリガンドは、当
該分野で周知の方法によって、固体支持体（例えば、ブロモシアン活性化セファ
ロースに共有結合によって固定化され得るか、あるいはサイトカインレセプター
、抗体または他の類似の分子のアッセイまたは精製における使用のための、グル
タルアルデヒド架橋を有するか、または有しない、ポリオレフィン表面に吸着さ
れ得る。リガンドはまた、検出可能な基（例えば、クロラミンＴ手順によって放
射ヨウ素標識された基、希土類キレートに共有結合した基または診断アッセイに
おける使用のために別の蛍光部分に結合した基）を用いて標識され得る。

【００７２】 本発明の組み合わせ（例えば、ＤＣＲＳ８を含む）は、記載される組み合わせ
に特異的である（例えば、他のサイトカインレセプターファミリーメンバー間を
区別し得る）抗血清または抗体の産生のための免疫原として使用され得る。次い
で、この複合体を使用して、タンパク質を含む不純な調製物の形態での免疫によ
って調製されたモノクローナル抗体または抗原結合フラグメントをスクリーニン
グし得る。特に、用語「抗体」はまた、天然の抗体（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ２
、Ｆｖなど）の抗原結合フラグメントを含む。精製されたＤＣＲＳ８をまた、試
薬として使用して、上昇したレベルの発現または内因性レセプターの抗体生成を
導く免疫障害の存在に応答して生じる抗体を検出し得る。さらに、ＤＣＲＳ８フ
ラグメントはまた、直ぐ下に記載されるように、本発明の抗体を産生するための
免疫原として役立ち得る。例えば、本発明は、表１〜５に示されるアミノ酸配列
、それらのフラグメントまたは種々の相同なペプチドに対して結合親和性を有す
る、またはこれらに対して惹起される抗体を意図する。特に、本発明は、天然の
ＤＣＲＳ８またはＤＣＲＳ９の外部タンパク質表面に曝露されることが予想され
るか、または現に曝露される特定のフラグメントに対して結合親和性を有するか
、またはこのフラグメントに対して惹起された抗体を意図する。タンパク質の組
み合わせの複合体はまた、有用であり、そしてそれに対する抗体調製物は、作製
され得る。

【００７３】 レセプターリガンドに対する生理学的応答のブロックは、おそらく競合的阻害
を介する、レセプターに対するリガンドの結合の阻害から生じ得る。従って、本
発明のインビトロアッセイは、抗体、またはこれらの抗体の抗原結合セグメント
、または固相基体に付着されるフラグメントを、しばしば使用する。これらのア
ッセイはまた、リガンド結合領域の変異および改変、または他の変異および改変
（例えば、シグナル伝達または酵素機能に影響する）のいずれかの効果の診断的
な決定を可能にする。

【００７４】 本発明はまた、競合的な薬物スクリーニングアッセイの使用を意図し、例えば
ここで、レセプター複合体またはフラグメントに対する中和抗体は、リガンドま
たは他の抗体への結合について、試験化合物と競合する。この様式において、中
和抗体またはフラグメントは、レセプターに対する１つ以上の結合部位を共有す
るポリペプチドの存在を検出するために使用され得、そしてそうでなければリガ
ンドを結合し得る、レセプターにおける結合部位を占有するためにまた使用され
得る。

【００７５】 （Ｖ．核酸およびタンパク質の作製） タンパク質またはそのフラグメントをコードするＤＮＡは、化学合成、ｃＤＮ
Ａライブラリーのスクリーニングによって、または広範な種々の細胞株もしくは
組識サンプルから調製されたゲノムライブラリーのスクリーニングによって入手
され得る。天然の配列は、標準的な方法、および本明細書中（例えば、表１〜５
）に提供される配列を使用して、単離され得る。他の種対応物は、ハイブリダイ
ゼーション技術によって、または種々のＰＣＲ技術によって、配列データベース
（例えば、ＧｅｎＢａｎｋ）における検索と組合わせて、またはこの検索によっ
て、同定され得る。

【００７６】 このＤＮＡは、完全長のレセプターまたはフラグメントの合成のために、広範
な種々の宿主細胞において発現され得、次いで完全長のレセプターまたはフラグ
メントは、例えば、ポリクローナルまたはモノクローナル抗体を生成するために
；結合研究のために；改変されたリガンド結合またはキナーゼ／ホスファターゼ
ドメインの構築および発現のために；および構造／機能研究のために、使用され
得る。改変体またはフラグメントは、適切な発現ベクターで形質転換またはトラ
ンスフェクトされる宿主細胞において発現され得る。これらの分子は、組換え宿
主に由来する分子以外のタンパク質または細胞性の夾雑物を実質的に含有しない
ことが可能であり、それゆえ、薬学的に受容可能なキャリアおよび／または希釈
剤と組合わされる場合、薬学的組成物において特に有用である。タンパク質、ま
たはその部分は、他のタンパク質との融合物として発現され得る。記載されたタ
ンパク質、またはそれらをコードする核酸の組み合わせは、特に興味深い。

【００７７】 発現ベクターは、代表的には、所望のレセプター遺伝子またはそのフラグメン
ト（通常、適切な宿主細胞において認識される適切な遺伝子制御エレメントに作
動可能に連結される）を含有する自己複製するＤＮＡまたはＲＮＡ構築物である
。これらの制御エレメントは、適切な宿主中で発現をもたらし得る。複数の遺伝
子が、協調的に発現され得、そしてポリシストロニックメッセージ上にあり得る
。発現をもたらすために必要な制御エレメントの特定の型は、結果として使用さ
れる宿主細胞に依存する。一般に、遺伝子制御エレメントは、原核生物プロモー
ター系または真核生物プロモーター発現制御系を含み得、そして代表的に、転写
プロモーター、必要に応じて、転写の開始を制御するオペレーター、ｍＲＮＡの
発現のレベルを上昇する転写エンハンサー、適切なリボソーム結合部位をコード
する配列、ならびに転写および翻訳を終結する配列を含み得る。発現ベクターは
また、通常、ベクターが宿主細胞から独立して複製することを可能にする、複製
の起点を含む。

【００７８】 本発明のベクターとしては、記載されるようなタンパク質の組み合わせ、また
は生物学的に活性な等価なポリぺプチドををコードするＤＮＡを含むベクターが
挙げられる。ＤＮＡは、ウイルスプロモーターの制御下にあり得、そして選択マ
ーカーをコードし得る。本発明はさらに、原核生物宿主または真核生物宿主にお
いて、このようなタンパク質をコードする真核生物ｃＤＮＡを発現し得る、この
ような発現ベクターの使用を意図し、ここでベクターは、宿主と適合性であり、
および真核生物ｃＤＮＡはベクターに挿入され、それによってベクターを含む宿
主の増殖は、問題のｃＤＮＡを発現する。通常、発現ベクターは、それらの宿主
細胞における安定な複製のために、または細胞あたりの所望の遺伝子の総コピー
数を非常に増加する増幅のために、設計される。発現ベクターが、宿主細胞にお
いて複製することが、いつも必要であるわけではなく、例えば、宿主細胞によっ
て認識される複製起点を含まないベクターを使用して、種々の宿主において、タ
ンパク質またはそのフラグメントの一過性の発現を生じることが可能である。組
換えによる、宿主ＤＮＡへの、タンパク質をコードする部分の組込みを引き起こ
すベクターの使用はまた、可能である。

【００７９】 本明細書中で使用される場合、ベクターは、プラスミド、ウイルス、バクテリ
オファージ、組込み可能なＤＮＡフラグメント、および宿主のゲノムへのＤＮＡ
フラグメントの組込みを可能にする他のビヒクルを含む。発現ベクターは、作動
可能に連結された遺伝子の発現をもたらす遺伝子制御エレメントを含む特殊化さ
れたベクターである。プラスミドは、ベクターの最も一般に使用される形態であ
るが、等価な機能を提供し、および当該分野において公知であるか、または公知
になる、全ての他の形態は、本明細書における使用に適切である。例えば、Ｐｏ
ｕｗｅｌｓら（１９８５および補遺）Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｖｅｃｔｏｒｓ：Ａ Ｌ
ａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、Ｅｌｓｅｖｉｅｒ、Ｎ．Ｙ．、およびＲｏ
ｄｒｉｇｕｅｚら（編、１９８８）Ｖｅｃｔｏｒｓ：Ａ Ｓｕｒｖｅｙ ｏｆ
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ Ｖｅｃｔｏｒｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ
Ｕｓｅｓ、Ｂｕｔｔｅｒｓｗｏｒｔｈ、Ｂｏｓｔｏｎ（これらは本明細書中に参
考として援用される）を参照のこと。

【００８０】 形質転換された細胞は、組換えＤＮＡ技術を使用して構築されたベクターで形
質転換されたまたはトランスフェクトされた細胞、好ましくは哺乳動物細胞であ
る。形質転換された宿主細胞は、通常、所望のタンパク質を発現するが、そのＤ
ＮＡのクローニング、増幅、および操作の目的のために、本発明のタンパク質を
発現する必要はない。本発明はさらに、栄養培地において、形質転換された細胞
を培養することを意図し、従って、タンパク質が、蓄積することを可能する。タ
ンパク質は、培養物または特定の場合において培養培地のいずれかから、回収さ
れ得る。

【００８１】 本発明の目的のために、核配列は、それが互いに機能的に関連する場合、作動
可能に連結している。例えば、プレ配列または分泌リーダーについてのＤＮＡは
、それがプレタンパク質として発現されるか、あるいはポリペプチドを細胞膜へ
と指向させるのに関与する場合、またはそのポリペプチドの分泌に関与する場合
、そのポリペプチドに作動可能に連結されている。プロモーターは、それがポリ
ペプチドの転写を制御する場合、コード配列に作動可能に連結されている；リボ
ソーム結合部位は、それが翻訳を可能にする位置にある場合、コード配列に作動
可能に連結されている。通常、作動可能な連結とは、連続でかつリーディングフ
レームであることを意味するが、しかし、リプレッサー遺伝子のような特定の遺
伝子エレメントは、連続して連結していないが、オペレーター配列になお結合し
ており、これは次いで発現を制御する。

【００８２】 適切な宿主細胞は、例えば、原核生物、下等真核生物および高等真核生物を含
む。原核生物は、グラム陰性およびグラム陽性の両方の生物を含む（例えば、Ｅ
．ｃｏｌｉおよびＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）。下等真核生物は、酵母（例えば、Ｓ
．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅおよびＰｉｃｈｉａ）、およびＤｉｃｔｙｏｓｔｅｌｉ
ｕｍ属の種を含む。高等真核生物は、非哺乳動物起源（例えば、昆虫細胞および
鳥類）および哺乳動物起源（例えば、ヒト、霊長類および齧歯類）の両方の動物
細胞から樹立された組織培養細胞株を含む。

【００８３】 原核生物宿主ベクター系は、多数の異なる種について広範な種々のベクターを
含む。本明細書において使用される場合、Ｅ．ｃｏｌｉおよびそのベクターは、
他の原核生物において使用される等価なベクターを包含するために遺伝的に使用
される。ＤＮＡを増幅するための代表的なベクターは、ｐＢＲ３２２またはその
多くの誘導体である。レセプターまたはそのフラグメントを発現するために使用
され得るベクターとしては、例えば、以下を含有するベクターが挙げられるが、
これらに限定されない：ｌａｃプロモーター（ｐＵＣシリーズ）；ｔｒｐプロモ
ーター（ｐＢＲ３２２−ｔｒｐ）；Ｉｐｐプロモーター（ｐＩＮシリーズ）；λ
−ｐＰまたはｐＲプロモーター（ｐＯＴＳ）；またはハイブリッドプロモーター
（例えば、ｐｔａｃ（ｐＤＲ５４０））。Ｂｒｏｓｉｕｓら、（１９８８）「Ｅ
ｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｖｅｃｔｏｒｓ Ｅｍｐｌｏｙｉｎｇ Ｌａｍｂｄａ−、
ｔｒｐ−、ｌａｃ−、ａｎｄ Ｉｐｐ−ｄｅｒｉｖｅｄ Ｐｒｏｍｏｔｏｒｓ」
Ｖｅｃｔｏｒｓ：Ａ Ｓｕｒｖｅｙ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎ
ｇ Ｖｅｃｔｏｒｓ ａｎｄ Ｔｈｅｉｒ Ｕｓｅｓ（Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚおよ
びＤｅｎｈａｒｄｔ編）、Ｂｕｔｔｅｒｓｗｏｒｔｈ、Ｂｏｓｔｏｎ、第１０章
、２０５−２３６頁（本明細書中で参考として援用される）を参照のこと。

【００８４】 下等真核生物（例えば、酵母およびＤｉｃｔｙｏｓｔｅｌｉｕｍ）は、ＤＣＲ
Ｓ８配列含有ベクターで形質転換され得る。本発明の目的のために、最も一般的
な下等真核生物宿主は、パン酵母Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓ
ｉａｅである。これは、一般的に下等真核生物を代表するように使用されるが、
多くの他の株および種もまた利用可能である。酵母ベクターは、代表的に、複製
起点（組み込み型でない場合）、選択遺伝子、プロモーター、レセプターまたは
そのフラグメントをコードするＤＮＡ、ならびに翻訳終結、ポリアデニル化およ
び転写終結のための配列からなる。酵母のための適切な発現ベクターは、３−ホ
スホグリセリン酸キナーゼおよび種々の他の解糖系酵素遺伝子プロモーターのよ
うな構成的プロモーター、またはアルコールデヒドロゲナーゼ２プロモーターま
たはメタロチオネインプロモーターのような誘導性プロモーターが挙げられる。
適切なベクターとしては、以下の型の誘導体が挙げられる：自己複製性低コピー
数（例えば、ＹＲｐシリーズ）、自己複製性高コピー数（例えば、ＹＥｐシリー
ズ）；組み込み型（例えば、ＹＩｐシリーズ）またはミニ染色体（例えば、ＹＣ
ｐシリーズ）。

【００８５】 高等真核生物組織培養細胞は、通常には、機能的に活性なインターロイキンま
たはレセプタータンパク質の発現のための好ましい宿主細胞である。原理的に、
多くの高等真核生物組織培養細胞株（例えば、昆虫バキュロウイルス系）が、無
脊椎動物供給源または脊椎動物供給源にかかわらず、実用可能である。しかし、
哺乳動物細胞が好ましい。このような細胞の形質転換またはトランスフェクショ
ンおよび増殖は、慣用的手段となっている。有用な細胞株の例は、ＨｅＬａ細胞
、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞株、乳仔ラット腎臓（ＢＲＫ）細
胞株、昆虫細胞株、鳥類細胞株、およびサル（ＣＯＳ）細胞株が挙げられる。こ
のような細胞株のための発現ベクターは、通常、複製起点、プロモーター、翻訳
開始部位、ＲＮＡスプライス部位（ゲノムＤＮＡを使用する場合）、ポリアデニ
ル化部位、および転写終結部位を含む。これらのベクターはまた、通常、選択遺
伝子または増幅遺伝子を含む。適切な発現ベクターは、例えば、アデノウイルス
、ＳＶ４０、パルボウイルス、ワクシニアウイルスまたはサイトメガロウイルス
のような供給源由来のプロモーターを含有する、プラスミド、ウイルス、あるい
はレトロウイルスであり得る。適切な発現ベクターの代表的な例は、ｐＣＤＮＡ
１；ｐＣＤ（Ｏｋａｙａｍａら（１９８５）Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．５：
１１３６−１１４２を参照のこと）；ｐＭＣ１ｎｅｏ ＰｏｌｙＡ（Ｔｈｏｍａ
ｓら（１９８７）Ｃｅｌｌ ５１：５０３−５１２を参照のこと）；およびバキ
ュロウイルスベクター（例えば、ｐＡＣ３７３またはｐＡＣ６１０）が挙げられ
る。

【００８６】 分泌タンパク質およびいくつかの膜タンパク質について、オープンリーディン
グフレームは、通常、そのＮ末端でシグナルペプチドに共有結合的に連結されて
いる成熟産物または分泌産物からなるポリペプチドをコードする。このシグナル
ペプチドは、成熟、すなわち、活性なポリペプチドの分泌前に切断される。切断
部位は、経験則（例えば、ｖｏｎ−Ｈｅｉｊｎｅ（１９８６）Ｎｕｃｌｅｉｃ
Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ １４：４６８３−４６９０およびＮｉｅｌｓｅ
ｎら（１９９７）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇ．１０：１−１２）から高度な正確性
で予測され得、そしてシグナルペプチドの正確なアミノ酸組成は、しばしばその
機能に重要ではないようである（例えば、Ｒａｎｄａｌｌら（１９８９）Ｓｃｉ
ｅｎｃｅ ２４３：１１５６−１１５９；およびＫａｉｓｅｒら（１９８７）Ｓ
ｃｉｅｎｃｅ ２３５：３１２−３１７）。本発明の成熟タンパク質は、標準的
な方法を使用して容易に決定され得る。

【００８７】 特定のグリコシル化パターンまたは規定されたグリコシル化パターンを提供す
る系においてこれらのポリペプチドを発現することが、しばしば所望される。こ
の場合において、通常のパターンは、その発現系によって自然に提供されるパタ
ーンである。しかし、このパターンは、このポリペプチド（例えば、非グリコシ
ル化形態）を、異種発現系に導入された適切なグリコシル化タンパク質に曝露す
ることによって、改変可能である。例えば、レセプター遺伝子を、哺乳動物また
は他のグリコシル化酵素をコードする１以上の遺伝子と同時形質転換し得る。こ
のアプローチを使用して、特定の哺乳動物グリコシル化パターンが、原核生物ま
たは他の細胞において達成可能である。原核生物細胞における発現は、代表的に
、タンパク質の非グリコシル化形態を導く。

【００８８】 ＤＣＲＳ８の供給源は、上記のような組換えＤＣＲＳ８を発現する真核生物ま
たは原核生物宿主であり得る。この供給源はまた、細胞株であり得るが、他の哺
乳動物細胞株もまた、本発明に意図され、好ましい細胞株は、ヒト種由来である
。

【００８９】 現在配列が公知であるので、霊長類ＤＣＲＳ８またはＤＣＲＳ９、そのフラグ
メントまたは誘導体は、ペプチドを合成するための従来のプロセスによって調製
され得る。これらは、以下に記載されるようなプロセスを含む：Ｓｔｅｗａｒｔ
およびＹｏｕｎｇ（１９８４）Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙ
ｎｔｈｅｓｉｓ、Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ
、ＩＬ；ＢｏｄａｎｓｚｋｙおよびＢｏｄａｎｓｚｋｙ（１９８４）Ｔｈｅ Ｐ
ｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、Ｓｐｒｉｎｇｅ
ｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；およびＢｏｄａｎｓｚｋｙ（１９８４）
Ｔｈｅ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、
Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ（これらは全て、本明細書
中に参考として援用される）。例えば、アジドプロセス、酸塩化物プロセス、酸
無水物プロセス、混合無水物プロセス、活性エステルプロセス（例えば、ｐ−ニ
トロフェニルエステル、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル、またはシアノ
メチルエステル）、カルボジイミダゾールプロセス、酸化還元プロセス、または
ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣＤ）／付加プロセスが使用され得る。
固相合成および液相合成の両方は、上記のプロセスに適用可能である。類似の技
術が、部分ＤＣＲＳ８配列または部分ＤＣＲＳ９配列と共に使用され得る。

【００９０】 ＤＣＲＳ８タンパク質、フラグメントまたは誘導体が、ペプチド合成において
代表的に使用されるような、上記のプロセスに従って適切に調製され、これは、
一般に、いわゆる段階プロセス（これは、アミノ酸を末端アミノ酸に１つずつ順
番に縮合させる工程を包含する）によるか、または末端アミノ酸にペプチドフラ
グメントを結合させることによる。結合反応において使用されないアミノ基は、
代表的に、不正確な位置での結合を予防するために保護されねばならない。

【００９１】 固相合成が適用される場合、Ｃ末端アミノ酸は、そのカルボキシル基を介して
不溶性キャリアまたは支持体に結合される。その不溶性キャリアは、それが反応
性カルボキシル基への結合能を有する限り、特に限定されない。このような不溶
性のキャリアの例としては、ハロメチル樹脂（例えば、クロロメチル樹脂または
ブロモメチル樹脂、ヒドロキシメチル樹脂、フェノール樹脂、ｔｅｒｔ−アルキ
ルオキシカルボニルヒドラジド化樹脂など）が挙げられる。

【００９２】 アミノ基保護アミノ酸は、その活性化されたカルボキシル基と先に形成された
ペプチドまたは鎖の反応性アミノ基との縮合を介して順番に結合されて、ペプチ
ドを段階的に合成する。完全な配列を合成した後、ペプチドを、不溶性キャリア
から分離して、そのペプチドを産生する。この固相アプローチは、Ｍｅｒｒｉｆ
ｉｅｌｄら（１９６３）、Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５：２１４９−２１
５６（本明細書中に参考として援用される）によって一般的に記載される。

【００９３】 調製されたタンパク質およびそのフラグメントは、ペプチド分離（例えば、抽
出、沈澱、電気泳動および種々の形態のクロマトグラフィーなど）によって反応
混合物から単離および精製され得る。本発明のレセプターは、その所望される用
途に応じて、種々の程度の純度で入手され得る。精製は、本明細書に開示される
タンパク質精製技術の使用によって（以下を参照のこと）、または免疫吸収アフ
ィニティークロマトグラフィーの方法において記載される本明細書中の抗体の使
用によって、達成され得る。この免疫吸収アフィニティークロマトグラフィーは
、まずその抗体を固相支持体に結合し、次いでその結合された抗体に、適切な細
胞の可溶化溶解物、レセプターを発現する他の細胞の溶解物、あるいはＤＮＡ技
術の結果としてこのタンパク質を産生する細胞の溶解物または上清を接触させる
ことによって実行される。下記を参照のこと。

【００９４】 一般に、精製されたタンパク質は、少なくとも約４０％純粋であり、通常少な
くとも約５０％純粋であり、通常少なくとも約６０％純粋であり、代表的に少な
くとも約７０％純粋であり、より代表的には少なくとも約８０％純粋であり、好
ましくは少なくとも約９０％純粋であり、より好ましくは少なくとも約９５％純
粋であり、および特定の実施形態において、９７％〜９９％以上純粋である。純
度は、通常、重量基準であるが、またモル基準でもあり得る。異なるアッセイが
、適切な場合、適用される。個々のタンパク質は精製され、その後合わせられ得
る。

【００９５】 （ＶＩ．抗体） 抗体は、種々の哺乳動物（例えば、霊長類）のＤＣＲＳ８タンパク質またはＤ
ＣＲＳ９タンパク質ならびにそのフラグメント（天然に存在するネイティブな形
態およびそれらの組換え形態の両方）に対して惹起され得、その差異は、活性な
レセプターに対する抗体が、ネイティブな立体構造においてのみ存在するエピト
ープをより認識するようであるということである。変性された抗原の検出はまた
、例えば、ウエスタン分析において、有用であり得る。抗イディオタイプ抗体が
また、意図され、これは、天然のレセプターまたは抗体のアゴニストまたはアン
タゴニストとして有用である。

【００９６】 タンパク質の予め決定されたフラグメントに対する抗体（結合フラグメントお
よび単鎖バージョンを含む）は、そのフラグメントと免疫原性タンパク質との結
合体での動物の免疫によって惹起され得る。モノクローナル抗体は、所望の抗体
を分泌する細胞から調製される。これらの抗体は、正常なタンパク質もしくは欠
損性タンパク質への結合についてスクリーニングされ得るか、またはアゴニスト
活性もしくはアンタゴニスト活性についてスクリーニングされ得る。これらのモ
ノクローナル抗体は通常、少なくとも約１ｍＭ、より通常には少なくとも約３０
０μＭ、代表的には少なくとも約１００μＭ、より代表的には少なくとも約３０
μＭ、好ましくは少なくとも約１０μＭ、およびより好ましくは少なくとも約３
μＭまたはそれよりも良好なＫ_Ｄで結合する。

【００９７】 本発明の抗体（抗原結合フラグメントを含む）は、有意な診断的または治療学
的な価値を有し得る。それらは、レセプターに結合しそしてリガンドへの結合を
阻害するか、またはレセプターが生物学的応答を誘発する（例えば、その基質に
作用する）能力を阻害する、強力なアンタゴニストであり得る。それらはまた、
非中和抗体として有用であり得、そしてトキシンまたは放射性核種に結合されて
、産生細胞（またはインターロイキンの供給源に局在化される細胞）を結合し得
る。さらに、これらの抗体は、薬物または他の治療薬剤に、直接的に、またはリ
ンカーによって間接的にのいずれかで、結合され得る。

【００９８】 本発明の抗体はまた、診断的適用において有用であり得る。捕捉抗体または非
中和抗体として、これらは、リガンド結合または基質結合を阻害することなくレ
セプターに結合し得る。中和抗体として、これらは、競合結合アッセイにおいて
有用であり得る。これらはまた、リガンドの検出または定量に有用である。これ
らは、それぞれのタンパク質のウエスタンブロット分析あるいは免疫沈降または
免疫精製のための試薬として使用され得る。同様に、核酸およびタンパク質は、
アフィニティー精製または検出方法のための固体基材に固定され得る。この基材
は、例えば、固体樹脂ビーズまたはプラスチックシートであり得る。

【００９９】 タンパク質フラグメントは、免疫原として使用される融合されたポリペプチド
または共有結合されたポリぺプチドのように、他の物質（特に、ポリぺプチド）
に結合され得る。哺乳動物サイトカインレセプターおよびフラグメントは、種々
の免疫原（例えば、キーホールリンペットヘモシアニン、ウシ血清アルブミン、
破傷風トキソイドなど）に融合されるか、または共有結合的に連結され得る。ポ
リクローナル抗血清を調製する方法の記載については、（１９６９）Ｍｉｃｒｏ
ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｈｏｅｂｅｒ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｄｉｖｉｓｉｏｎ、Ｈａｒｐ
ｅｒおよびＲｏｗ；Ｌａｎｄｓｔｅｉｎｅｒ（１９６２）Ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔ
ｙ ｏｆ Ｓｅｒｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ、Ｄｏｖｅｒ Ｐｕｂ
ｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；およびＷｉｌｌｉａｍｓら（１９６７
）Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅ
ｍｉｓｔｒｙ、第１巻、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；（
これらは各々、本明細書中に参考として援用される）を参照のこと。代表的な方
法は、抗原での動物の超免疫を含む。次いで、この動物の血液を、繰返しの免疫
のすぐ後に回収し、そしてγグロブリンを単離する。

【０１００】 いくつかの例において、種々の哺乳動物宿主（例えば、マウス、齧歯類、霊長
類、ヒトなど）からモノクローナル抗体を調製することが望ましい。このような
モノクローナル抗体を調製するための技術の記載は、例えば、Ｓｔｉｔｅｓら（
編）Ｂａｓｉｃ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第４版）
、Ｌａｎｇｅ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｌｏｓ Ａｌｔｏ
ｓ、ＣＡおよびそこに引用される参考文献；ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９
８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、ＣＳ
Ｈ Ｐｒｅｓｓ；Ｇｏｄｉｎｇ（１９８６）Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂ
ｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ（第２版）Ａｃ
ａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；および特に、Ｋｏｈｌｅｒおよ
びＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５−４９７（これ
は、モノクローナル抗体を作製する１つの方法を議論する）において、見出され
得る。これらの参考文献のそれぞれは、本明細書中に参考として援用される。簡
潔にまとめると、この方法は、免疫原を動物に注射する工程を包含する。次いで
、この動物を屠殺し、そして細胞をその脾臓から採取し、次いで、この細胞を骨
髄腫細胞と融合する。結果は、ハイブリッド細胞すなわち「ハイブリドーマ」で
あり、これはインビトロで増殖（ｒｅｐｒｏｄｕｃｅ）させることが可能である
。次いで、このハイブリドーマの集団をスクリーニングして、個々のクローンを
単離し、このクローンの各々は、この免疫原に対する単一の抗体種を分泌する。
この様式において、得られる個々の抗体種は、この免疫動物由来の不死化および
クローン化された単一Ｂ細胞の産物であり、これは、免疫原性物質で認識される
特異的部位に応答して作製される。

【０１０１】 他の適切な技術としては、抗原性ポリぺプチドあるいはファージベクターまた
は同様のベクターにおける抗体のライブラリーの選択への、インビトロでのリン
パ球の曝露を含む。Ｈｕｓｅら（１９８９）「Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ａ
Ｌａｒｇｅ Ｃｏｍｂｉｎａｔｏｒｉａｌ Ｌｉｂｒａｒｙ ｏｆ ｔｈｅ
Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ Ｒｅｐｅｒｔｏｒｉｅ ｉｎ Ｐｈａｒｇｅ
Ｌａｍｂｄａ」、Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：１２７５−１２８１；およびＷａｒ
ｄら（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４−５４６（これらのそれぞれは
、本明細書中に参考として援用される）を参照のこと。本発明のポリぺプチドお
よび抗体は、改変を伴うかまたは伴わないで使用され得、これはキメラ抗体また
はヒト化抗体を含む。しばしば、ポリぺプチドおよび抗体は、共有結合的にまた
は非共有結合的にのいずれかで、検出可能なシグナルを提供する物質を結合する
ことによって標識される。広範な種々の標識および結合体化技術が公知であり、
そして科学文献および特許文献の両方において、広範に報告される。適切な標識
としては、放射性核種、酵素、基質、補因子、インヒビター、蛍光部分、化学発
光部分、磁性粒子などが挙げられる。このような標識の使用を教示する特許とし
ては、米国特許第３，８１７，８３７号；同第３，８５０，７５２号；同第３，
９３９，３５０号；同第３，９９６，３４５号；同第４，２７７，４３７号；同
第４，２７５，１４９号；および同第４，３６６，２４１号が挙げられる。また
、組換え免疫グロブリンまたはキメラ免疫グロブリンが生成され得るか（Ｃａｂ
ｉｌｌｙ、米国特許第４，８１６，５６７号を参照のこと）；またはトランスジ
ェニックマウスにおいて作製され得る（Ｍｅｎｄｅｚら（１９９７）Ｎａｔｕｒ
ｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ １５：１４６−１５６；Ａｂｇｅｎｉｘ；およびＭｅｄ
ａｒｅｘを参照のこと）。これらの参考文献は、本明細書中に参考として援用さ
れる。

【０１０２】 本発明の抗体はまた、ＤＣＲＳ８タンパク質またはペプチドの単離における、
アフィニティークロマトグラフィーのために使用され得る。抗体が固体支持体（
例えば、アガロース、Ｓｅｐｈａｄｅｘなどのような粒子）に連結されているカ
ラムを調製し得、ここで、細胞溶解物を、カラムに通過させ得、カラムを洗浄し
、続いて、漸増濃度の穏やかな変性剤で洗浄し、これにより、精製タンパク質を
放出させる。あるいは、このタンパク質を使用して、抗体を精製し得る。適切な
交差吸収または枯渇が適用され得る。

【０１０３】 抗体はまた、特定の発現産物について、発現ライブラリーをスクリーニングす
るために使用され得る。通常、このような手順において使用される抗体は、抗体
結合によって抗原の存在の容易な検出を可能にする部分で標識される。

【０１０４】 サイトカインレセプターに対して惹起される抗体はまた、抗イディオタイプ抗
体を惹起するために使用される。これらは、タンパク質の発現、またはそのタン
パク質を発現する細胞に関連する、種々の免疫学的状態を検出または診断するの
に有用である。これらはまた、リガンドのアゴニストまたはアンタゴニストとし
て有用であり、天然に存在するリガンドについての、競合的なインヒビターまた
は置換体であり得る。

【０１０５】 規定された免疫原（例えば、配列番号１４のアミノ酸配列からなる免疫原）に
対して生成された抗体と特異的に結合するか、またはこのような抗体と特異的に
免疫反応性であるサイトカインレセプタータンパク質は、代表的に、イムノアッ
セイにおいて決定される。イムノアッセイは、代表的には、例えば、配列番号１
４のタンパク質に対して惹起されたポリクローナル抗血清を使用する。この抗血
清は、他のサイトカインレセプターファミリーメンバー（好ましくは同じ種由来
の）に対して、低い交差反応性を有するように選択され、そしてこのような交差
反応性はいずれも、イムノアッセイで使用する前に免疫吸収法により除去される
。

【０１０６】 イムノアッセイで使用する抗血清を生成するために、例えば、配列番号１４の
タンパク質を、本明細書に記載されるように単離する。例えば、組換えタンパク
質を哺乳動物細胞株で生成し得る。適切な宿主、例えば、Ｂａｌｂ／ｃのような
マウスの同系交配系統を、代表的には標準的アジュバント（例えば、フロイント
アジュバント）および標準的マウス免疫プロトコル（ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎ
ｅ、前出を参照のこと）を使用して、選択されたタンパク質で免疫する。あるい
は、本明細書中に開示された配列に由来し、そしてキャリアタンパク質に結合体
化させた合成ペプチドを免疫原に使用し得る。ポリクローナル血清を収集し、イ
ムノアッセイ（例えば、固体支持体上に固定した免疫原による固相イムノアッセ
イ）において免疫原タンパク質に対して力価測定する。力価が１０^４以上のポリ
クローナル抗血清が選択され、他のサイトカインレセプターファミリーメンバー
に対する交差反応性について、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ、前述、５７０−５
７３頁に記載されるような競合結合イムノアッセイを使用して試験される。好ま
しくは、少なくとも２つのサイトカインレセプターファミリーメンバーが、この
決定において使用される。これらのサイトカインレセプターファミリーメンバー
は、組換えタンパク質として生成され得、そして本明細書に記載される標準的分
子生物学技術およびタンパク質化学技術を使用して単離され得る。

【０１０７】 競合結合形式のイムノアッセイが、交差反応性の決定に使用され得る。例えば
、配列番号１４のタンパク質を、固体支持体に固定し得る。このアッセイに添加
されるタンパク質は、固定された抗原に対する抗血清の結合と競合する。固定さ
れたタンパク質に対する抗血清の結合と競合する上記タンパク質の能力を、他の
タンパク質の能力と比較する。上記タンパク質に対するパーセント交差反応性を
、標準的算出法を使用して算出する。上記に列挙した各タンパク質との交差反応
性が１０％より低い抗血清を選択およびプールする。次いで、上記に列挙したタ
ンパク質との免疫吸収法により、交差反応抗体をプール抗血清から取り出す。

【０１０８】 次いで、免疫吸収およびプールした抗血清を、上記のように、競合結合イムノ
アッセイで使用し、第２のタンパク質を免疫原タンパク質（例えば、配列番号１
４のＤＣＲＳ８様タンパク質）と比較する。この比較を行うため、この２つのタ
ンパク質を広範囲の濃度でそれぞれアッセイし、そして固定されたタンパク質へ
の抗血清の結合を５０％阻害するのに必要な各タンパク質量を決定する。必要と
される第２のタンパク質の量が、選択されたタンパク質または必要とされるタン
パク質のタンパク質の量の２倍より少ない場合、第２のタンパク質は、免疫原に
対して生成した抗体と特異的に結合すると言われる。

【０１０９】 これらのサイトカインレセプタータンパク質は、これまで同定された少なくと
も９つのメンバー（６つの哺乳動物および３つの蠕虫体の実施形態）を含む相同
性タンパク質のファミリーのメンバーであることが理解される。ＤＣＲＳ８のよ
うな特定の遺伝子産物に対して、この用語は、本明細書に開示したアミノ酸配列
だけではなく、対立遺伝子、非対立遺伝子または種改変体である他のタンパク質
をもいう。また、この用語は、単一の部位変異のような従来の組換え技術を使用
する意図的な変異によるか、またはそれぞれのタンパク質をコードするＤＮＡの
短い部分を切除することによるか、または新規アミノ酸を置換するかもしくは新
規アミノ酸の付加により導入された非天然の変異を含むことが理解される。代表
的にはこのような重大でない改変は、本来の分子の免疫同一性および／またはそ
の生物学的活性を実質的に維持する。従って、これらの改変は、示された天然に
存在するＤＣＲＳ８タンパク質と特異的に免疫反応性であるタンパク質を含む。
タンパク質を適切な細胞株で発現させ、そして例えばトランスフェクトされたリ
ンパ球に及ぼす適切な効果を測定することにより、改変タンパク質の生物学的特
性が決定され得る。重大でないと考えられる特定のタンパク質の改変には、サイ
トカインレセプターファミリーについて上で総括して記載したように、類似した
化学特性を有するアミノ酸の保存的置換が含まれる。タンパク質をサイトカイン
レセプタータンパク質と最適にアラインメントさせ、そして本明細書に記載した
従来のイムノアッセイを使用して免疫同一性を決定することにより、本発明のタ
ンパク質組成を決定し得る。

【０１１０】 （ＶＩＩ．キットおよび定量） 本発明のサイトカインレセプター様分子の天然に存在する形態および組換え形
態は共に、キットおよびアッセイ法において特に有用である。例えば、これらの
方法はまた、結合活性（例えば、これらのタンパク質に対するリガンド）につい
てのスクリーニングに適用される。最近、いくつかの自動化アッセイ法が開発さ
れており、１年当たり何万もの化合物のスクリーニングを可能にしている。例え
ば、ＢＩＯＭＥＫ自動化ワークステーション、Ｂｅｃｋｍａｎ Ｉｎｓｔｒｕｍ
ｅｎｔｓ，Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ、およびＦｏｄｏｒら、
（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５１：７６７−７７３（これらは、参考として
本明細書中に援用される）を参照のこと。後者は、固体基質上に合成された複数
の規定されたポリマーによる結合を試験する手段を記載している。リガンドまた
はアゴニスト／アンタゴニストの相同性タンパク質のスクリーニングに適したア
ッセイの開発は、本発明により提供されるように、大量の精製可溶性サイトカイ
ンレセプターが活性状態で入手可能なことにより、非常に容易にされ得る。

【０１１１】 前述のリガンドスクリーニング技術での使用のために、精製タンパク質はプレ
ート上に直接コートされ得る。しかし、これらのタンパク質に対する非中和抗体
は、例えば、診断的な使用において、有用な固相上に各レセプターを固定化する
捕獲抗体として使用され得る。

【０１１２】 本発明はまた、様々な診断用キットにおける、レセプターサブユニット、その
フラグメント、ペプチド、およびそれらの融合産物の使用、ならびにタンパク質
またはそのリガンドの存在を検出する方法を意図する。あるいは、またはさらに
、この分子に対する抗体が、キットおよび方法に組み込まれ得る。代表的には、
キットは、例えばＤＣＲＳ８ペプチド、または遺伝子セグメント、あるいは一方
もしくは他方を認識する試薬を含む区画を有する。代表的には、ペプチドの場合
、認識試薬はレセプターまたは抗体であり、あるいは遺伝子セグメントの場合に
は、通常、ハイブリダイゼーションプローブである。

【０１１３】 サンプル中のＤＣＲＳ８の濃度を決定するために好ましいキットは、代表的に
は、ＤＣＲＳ８に対する既知の結合親和性を有する標識化化合物（例えば、リガ
ンドまたは抗体）、ポジティブコントロールとしてのＤＣＲＳ８の供給源（天然
に存在する、または組換え体）、および遊離の標識化合物（例えば、試験サンプ
ル中のＤＣＲＳ８を固定化する固相）から結合体を分離する手段、を含む。試薬
を含む区画、および説明書が、通常提供される。適切な核酸またはタンパク質を
含むキットもまた、提供される。

【０１１４】 抗体（哺乳動物ＤＣＲＳ８またはペプチドフラグメントに特異的な抗原結合フ
ラグメントあるいはレセプターフラグメントを含む）は、上昇したレベルのリガ
ンドおよび／またはそのフラグメントの存在を検出するための診断的な適用に有
用である。診断アッセイは、均質性（遊離試薬と抗体−抗原複合体との間の分離
工程を含まない）または異質性（分離工程を含む）であり得る。種々の市販のア
ッセイ（例えば、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、酵素結合イムノソルベント
検定法（ＥＬＩＳＡ）、酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、酵素増幅イムノアッセ
イ技術（ＥＭＩＴ）、基質−標識化蛍光イムノアッセイ（ＳＬＦＩＡ）など）が
存在する。例えば、標識され、かつサイトカインレセプターまたはその特定のフ
ラグメントに対する抗体を認識する二次抗体を使用することにより、非標識化抗
体が使用され得る。これらのアッセイもまた、文献で広範囲に議論されている。
例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ（１９８８）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ
Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，ＣＳＨ．、ならびにＣｏｌｉｇａｎ（編
、１９９１および定期的な補遺）、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ Ｉｎ
Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｇｒｅｅｎｅ／Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋを参照
のこと。

【０１１５】 抗イディオタイプの抗体は、サイトカインレセプターのアゴニストまたはアン
タゴニストとして作用する類似の用途を有し得る。これらは、適切な状況下で治
療用試薬として有用でなければならない。

【０１１６】 しばしば、診断アッセイのための試薬は、アッセイの感受性を最適化するため
に、キットに補充される。本発明について、アッセイの性質、プロトコル、およ
び標識に依存して、標識化または非標識化抗体あるいは標識化リガンドのいずれ
かが提供される。これは、通常、緩衝剤、安定化剤、酵素の基質などのようなシ
グナルの産生に必要な材料などの他の添加物と組み合わされる。好ましくは、キ
ットはまた、適切な使用および使用後の含有物の廃棄についての説明書を包含す
る。代表的には、キットは、有用な各試薬の区画を有し、そして適切な使用およ
び試薬の廃棄についての説明書を含む。望ましくは、試薬は乾燥した凍結乾燥粉
末として提供され、この試薬は、アッセイを行うのに適した濃度を有する水性媒
体中で再構成され得る。

【０１１７】 診断アッセイの上記の構成成分は、改変を行うことなく使用され得るか、また
は種々の方法において改変され得る。例えば、標識は、検出可能なシグナルを直
接または間接的に提供する部分を共有結合または非共有結合することによって達
成され得る。多くのこれらのアッセイにおいて、試験化合物、サイトカインレセ
プター、またはそれに対する抗体は、直接的または間接的のいずれかで標識され
得る。直接標識についての可能性は、標識基：放射性標識（例えば、^１２５Ｉ）
、酵素（米国特許第３，６４５，０９０号）（例えば、ペルオキシダーゼおよび
アルカリホスファターゼ、ならびに蛍光標識（米国特許第３，９４０，４７５号
）（これは、蛍光強度における変化、波長シフト、または蛍光偏光をモニターし
得る）を含む。これらの特許の両方は、本明細書中に参考として援用される。間
接標識についての可能性としては、１つの構成成分のビオチン化、続いて上記の
標識基の一つに結合したアビジンへの結合が挙げられる。

【０１１８】 遊離のリガンドから結合したもの、あるいは遊離の試験化合物から結合したも
のを分離する多くの方法もまた存在する。サイトカインレセプターは、種々のマ
トリクスに固定され得、続いて洗浄され得る。適切なマトリックスは、ＥＬＩＳ
Ａプレート、フィルター、およびビーズのようなプラスチックを含む。レセプタ
ーをマトリックスに固定する方法としては、プラスチックへの直接接着、捕捉抗
体の使用、化学結合、およびビオチン−アビジンが挙げられるがこれらに限定さ
れない。このアプローチの最後の工程は、いくつかの方法（これは、例えばポリ
エチレングリコールのような有機溶媒または硫酸アンモニウムのような塩を利用
する方法を含む）のいずれかによる抗体／抗原複合体の沈殿を含む。他の適切な
分離技術は、Ｒａｔｔｌｅら（１９８４）Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．３０（９）１４
５７−１４６１に記載されるフルオレセイン抗体磁化粒子方法、および米国特許
第４，６５９，６７８号に記載されるような二重抗体磁性粒子分離（これらの各
々は、本明細書において参考として援用される）を含むが、これに限定されない
。

【０１１９】 種々の標識へ、タンパク質またはフラグメントを連結するための方法は、文献
において広範に報告されており、そしてここでは詳細な議論を必要としない。こ
れらの技術の多くは、ペプチド結合を形成するためのカルボジイミドまたは活性
エステルのいずれかの使用を介した活性化カルボキシル基の使用、連結のために
、活性化ハロゲン（例えば、クロロアセチル）または活性化オレフィン（例えば
、マレイミド）とメルカプト基との反応によるチオエーテルの形成などを含む。
融合タンパク質もまた、これらの適用において用途が見出される。

【０１２０】 本発明の別の診断的局面は、サイトカインレセプターの配列から採取したオリ
ゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチド配列の使用を含む。これらの配列は、免
疫学的障害を有すると疑われる患者におけるそれぞれのサイトカインレセプター
のレベルを検出するためのプローブとして使用され得る。ＲＮＡおよびＤＮＡの
両方のヌクレオチド配列の調製、配列の標識、および好ましい大きさの配列は、
文献において、充分な記載および議論がなされている（ｒｅｃｅｉｖｅ）。通常
、オリゴヌクレオチドプローブは、少なくとも約１４ヌクレオチド、通常少なく
とも約１８ヌクレオチドを有するべきであり、そしてポリヌクレオチドプローブ
は数キロベースにまで及び得る。種々の標識、最も一般的には、放射性核種、特
に^３２Ｐが使用され得る。しかし、他の技術もまた、使用され得る。例えば、ポ
リヌクレオチドへの導入のためのビオチン改変ヌクレオチドの使用である。次い
で、ビオチンは、アビジンまたは抗体への結合のための部位として作用し、これ
は、広範な種々の標識（例えば、放射性核種、蛍光剤、酵素など）で標識され得
る。あるいは、特定の二重鎖（ＤＮＡ二重鎖、ＲＮＡ二重鎖、ＤＮＡ−ＲＮＡハ
イブリッド二重鎖、またはＤＮＡ−タンパク質二重鎖を含む）を認識し得る抗体
が使用され得る。次いで抗体は標識され得、そして二重鎖が表面に結合され、そ
の結果、表面上での二重鎖の形成の際に、二重鎖に結合した抗体の存在が検出さ
れ得るアッセイが、行われる。新規のＲＮＡに対するプローブの使用は、従来の
技術（例えば、核酸ハイブリダイゼーション、プラスおよびマイナススクリーニ
ング、組換えプロービング、ハイブリッド遊離翻訳（ｈｙｂｒｉｄ ｒｅｌｅａ
ｓｅｄ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ）（ＨＲＴ）、およびハイブリッド拘束翻訳（
ｈｙｂｒｉｄ ａｒｒｅｓｔｅｄ ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ）（ＨＡＲＴ））に
おいて行われ得る。タンパク質発現をブロックするために用いられ得るアンチセ
ンス核酸もまた提供される。例えば、Ｉｓｉｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ
ｓ，Ｓｅｑｕｉｔｕｒ，Ｉｎｃ．，またはＨｙｂｒｉｄｏｎを参照のこと。これ
はまた、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）のような増幅技術を含む。

【０１２１】 他のマーカーの定性的存在または定量的存在についてもまた試験する診断キッ
トもまた、意図される。診断または予後は、マーカーとして使用される複数の指
標の組合せに依存し得る。従って、キットはマーカーの組み合わせについて試験
し得る。例えば、Ｖｉａｌｌｅｔら、（１９８９）Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ Ｇ
ｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｓ．１；８９−９７を参照のこと。

【０１２２】 （ＶＩＩＩ．治療的有用性） 本発明は、有意な治療的価値を有する試薬を提供する。例えば、Ｌｅｖｉｔｚ
ｋｉ（１９９６）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．８：２３９−２４
４を参照のこと。サイトカインレセプター（天然に存在するかまたは組換え）、
そのフラグメント、ムテインレセプター、および抗体、ならびにこのレセプター
または抗体に対する結合親和性を有するとして同定された化合物は、これらのリ
ガンドのレセプターの異常な発現を示す状態の処置において有用であるはずであ
る。このような異常性は、代表的には、免疫障害（例えば、先天性の免疫または
発達性の免疫）によって明らかにされる。さらに、本発明は、リガンドへの応答
の異常な発現または異常な誘発と関連する、種々の疾患または障害において治療
的価値を提供するはずである。例えば、ＩＬ−１リガンドは、形態発生（例えば
、背腹極性決定および免疫応答、特に初期の先天性応答）に関与することが示唆
されている。例えば、Ｓｕｎら（１９９１）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１９
６：２４７−２５４；およびＨｕｌｔｍａｒｋ（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ ３６
７：１１６−１１７を参照のこと。

【０１２３】 組換えサイトカインレセプター、ムテイン、アゴニスト、またはそれらに対す
るアンタゴニスト抗体、あるいは抗体は精製され、次いで患者に投与され得る。
これらの試薬は、さらなる活性成分とともに治療的使用のために、例えば、従来
の薬学的に受容可能なキャリアまたは希釈剤中で、生理的に無害な安定剤および
賦形剤とともに併用され得る。これらの組み合わせは、例えば、濾過により滅菌
され得、そして投薬バイアル中での凍結乾燥または安定化した水性調製物中での
凍結乾燥によるような投薬形態へと配置される。本発明はまた、相補的結合では
ない抗体またはその結合フラグメントの使用を意図する。

【０１２４】 サイトカインレセプターまたはそのフラグメントを用いたリガンドスクリーニ
ングを行って、レセプターに対する結合親和性を有する分子を同定し得る。次い
で、その後の生物学的アッセイを利用して推定リガンドが競合的な結合を提供し
、内因性の刺激活性をブロックし得るか否かを決定し得る。レセプターフラグメ
ントは、リガンドの活性をブロックするという点で、ブロッカーまたはアンタゴ
ニストとして使用され得る。同様に、内因性刺激活性を有する化合物は、レセプ
ターを活性化し得、従って、この化合物は、リガンドの活性を刺激する（例えば
、シグナル伝達を誘導する）という点で、アゴニストである。本発明はさらに、
サイトカインレセプターに対する抗体のアンタゴニストとしての治療的用途を意
図する。

【０１２５】 効果的な治療に必要な試薬の量は、多くの異なる因子（投与手段、標的部位、
試薬の生理学的な寿命、薬理学的な寿命、患者の生理学的状態、および投与され
る他の医薬品が含まれる）に依存する。従って、処置投薬量を、力価測定して、
安全性および効力を最適化するべきである。代表的には、インビトロで使用され
る投薬量によって、これらの試薬のインサイチュでの投与のために有用な量にお
ける、有用なガイダンスを提供し得る。特定の障害の処置についての有効用量の
動物試験はさらに、ヒトの投薬量の予測的な指標を提供する。種々の考慮事項が
以下に記載されている。例えば、Ｇｉｌｍａｎら（編）（１９９０）Ｇｏｏｄｍ
ａｎおよびＧｉｌｍａｎ：Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｅ
ｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、第８版、Ｐｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ
；およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎ
ｃｅｓ、第１７版（１９９０）、Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．、Ｅ
ａｓｔｏｎ、Ｐｅｎｎ。これらは、各々が本明細書において参考として本明細書
によって援用される。投与方法は、それらおよび以下で議論されている（例えば
、経口投与、静脈内投与、腹腔内投与、または筋肉内投与、経皮拡散など）。薬
学的に受容可能なキャリアには、水、生理食塩水、緩衝液、および、例えば、Ｍ
ｅｒｃｋ Ｉｎｄｅｘ，Ｍｅｒｃｋ ＆ Ｃｏ．Ｒａｈｗａｙ，Ｎｅｗ Ｊｅｒ
ｓｅｙに記載される他の化合物が挙げられる。推定リガンドとそのレセプターと
の間の予想される高親和性結合、すなわちターンオーバー数に起因して、まず、
低用量のこれらの試薬が、有効であることが予想される。そして、シグナル伝達
経路により、極めて少量のリガンドが効果を有し得ることが示唆される。従って
、投薬量範囲は、通常、１ｍＭ濃度よりも低い量であり、代表的には、約１０μ
Ｍ濃度より低く、通常、約１００ｎＭより低く、好ましくは約１０ｐＭ（ピコモ
ル濃度）より低く、そして最も好ましくは約１ｆＭ（フェムトモル濃度）より低
い量で、適切なキャリアと共に存在することが予想される。徐放性処方物または
徐放性装置が、しばしば、連続投与に利用される。

【０１２６】 サイトカインレセプター、そのフラグメント、および抗体またはそのフラグメ
ント、アンタゴニストおよびアゴニストが、処置される宿主に直接投与され得る
か、または化合物の大きさに依存して、オボアルブミンまたは血清アルブミンの
ようなキャリアタンパク質にそれらを結合させた後、投与されるのが望ましくあ
り得る。治療用処方物を、従来の多くの投薬処方で投与し得る。活性成分を単独
投与することは可能であるが、薬学的処方物として活性成分を存在させるのが好
ましい。処方物は、上記に規定したような少なくとも一種の活性成分を、一種以
上のそれらの受容可能なキャリアと共に含む。各キャリアは、他の成分と適合性
があり、患者に対して有害ではないという意味で、薬学的および生理学的の両方
で受容可能でなければならない。処方物は、経口投与、直腸内投与、鼻腔内投与
または非経口的（皮下、筋肉内、静脈内および皮内を含む）投与に適した処方物
を含む。これらの処方物は、都合良く、単位投薬量形態で存在し得、そして薬学
分野において周知の方法により調製され得る。例えば、Ｇｉｌｍａｎら（編）（
１９９０年）Ｇｏｏｄｍａｎ ａｎｄ Ｇｉｌｍａｎ：Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃ
ｏｌｏｇｉｃａｌ Ｂａｓｅｓ ｏｆ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，第８版，Ｐ
ｅｒｇａｍｏｎ Ｐｒｅｓｓ；およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃ
ｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１７版（１９９０），Ｍａｃｋ Ｐｕｂ
ｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎ．；Ａｖｉｓら（編、１９９
３年）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｐａｒｅｎ
ｔｅｒａｌ Ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；Ｌｉｅｂｅｒｍａ
ｎら（編、１９９０年）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒ
ｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹ；およびＬｉｅｂｅｒｍａｎら（編
、１９９０年）Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｄｏｓａｇｅ Ｆｏｒｍｓ：Ｄ
ｉｓｐｅｒｓｅ Ｓｙｓｔｅｍｓ Ｄｅｋｋｅｒ，ＮＹを参照のこと。本発明の
治療は、他の治療的薬剤（特に、他のサイトカインレセプターファミリーのメン
バーのアゴニストまたはアンタゴニスト）と組み合わせられ得るか、またはそれ
らと関連して使用され得る。

【０１２７】 （ＩＸ．スクリーニング） ＤＣＲＳ８またはそのフラグメントを使用する薬物スクリーニングは、レセプ
ターサブユニットへの結合親和性を有する化合物を同定するために実施され得、
これは会合した成分の単離する工程を包含する。次いで、その後の生物学的アッ
セイを利用して、化合物が固有の刺激活性を有し、それによってリガンドの活性
をブロックするという点で、遮断薬またはアンタゴニストであるか否かを決定す
る。同様に、固有の刺激活性を有する化合物は、レセプターを活性化し得、故に
サイトカインリガンドの活性を刺激するという点で、アゴニストである。本発明
は、さらに、サイトカインのアゴニストまたはアンタゴニストとしてのレセプタ
ーに対する抗体の治療用途を意図する。

【０１２８】 同様に、複数のタンパク質を含む複合体が、この複合体を認識し得る、リガン
ドまたは試薬をスクリーニングするために使用され得る。ほとんどのサイトカイ
ンレセプターは、少なくとも２つのサブユニットを含み、それは同一であり得る
か、または別個のものであり得る。あるいは、膜貫通レセプターは、別の可溶性
タンパク質（例えば、第二のレセプターサブユニットとして）に関連するサイト
カイン様リガンドを含む複合体に結合し得る。

【０１２９】 薬物スクリーニングの１つの方法は、別のサイトカインレセプターサブユニッ
トと組み合わせて、ＤＣＲＳ８を発現する組換えＤＮＡ分子で安定に形質転換さ
れる真核生物または原核生物の宿主細胞を利用する。他の機能的レセプターから
の単離において、レセプターを発現する細胞を単離し得る。このような細胞は、
生存可能なまたは固定された形態のいずれかで、標準的な抗原／抗原またはリガ
ンド／レセプター結合アッセイのために使用され得る。Ｐａｒｃｅら（１９８９
）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：２４３−２４７；およびＯｗｉｃｋｉら（１９９０
）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８７：４００７−４０１
１（これらは、細胞性応答を検出するための高感度の方法を記載する）もまた参
照のこと。競合アッセイが、特に有用であり、ここで、細胞（推定のリガンドの
供給源）が、リガンドに対する既知の結合親和性を有する標識レセプターまたは
標識抗体（例えば、^１２５Ｉ−抗体）および結合組成物に対する結合親和性が測
定される試験サンプルと接触されそしてインキュベートされる。次いで、結合し
た標識結合組成物および遊離の標識結合組成物を分離して、リガンド結合の程度
を評価する。結合した試験化合物の量は、公知の供給源に対する標識レセプター
結合の量に反比例する。多くの技術が、リガンド結合の程度を評価するために、
遊離のリガンドから結合したリガンドを分離するために使用され得る。この分離
工程は、代表的には、フィルターへの接着とその後の洗浄、プラスチックへの接
着とその後の洗浄、または細胞膜の遠心分離のような手順を包含し得る。生存細
胞もまた、サイトカイン媒介機能、例えば第２メッセンジャーレベル（例えば、
Ｃａ^＋＋）；細胞増殖；イノシトールリン酸プール変化（ｐｏｏｌ ｃｈａｎｇ
ｅ）；などに対する薬物の効果についてスクリーニングするために使用され得る
。いくつかの検出方法は、分離工程の削除を可能にする（例えば、近接感度検出
システム）。カルシウム感受性色素は、蛍光定量器（ｆｌｕｏｒｉｍｅｔｅｒ）
または蛍光細胞選別装置を用いて、Ｃａ^＋＋レベルを検出するのに有用である。

【０１３０】 （Ｘ．リガンド） 本明細書におけるＤＣＲＳ８の説明は、上記のように、リガンドを同定する手
段を提供する。このようなリガンドは、適度に高い親和性を有するそれぞれのレ
セプターと特異的に結合するはずである。種々の構築物が利用可能とされ、これ
によっていずれのレセプターの標識方法によってもそのリガンドを検出し得る。
例えば、二次標識のためのマーカー（例えば、ＦＬＡＧまたは他のエピトープタ
グ等）を融合させたサイトカインレセプターの直接標識は、レセプターの検出を
可能にする。これは、生化学的精製のための親和性方法、または発現クローニン
グアプローチでの標識もしくは選択のような、組織学的な方法であり得る。ツー
ハイブリッド選択系もまた、利用可能なサイトカインレセプター配列を有する適
切な構築物の作製に応用され得る。例えば、ＦｉｅｌｄｓおよびＳｏｎｇ（１９
８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４０：２４５−２４６を参照のこと。

【０１３１】 最も可能性のある候補は、ＩＬ−１７ファミリーのメンバーに構造的に関連す
る。例えば、ＵＳＳＮ０９／４８０，２８７を参照のこと。

【０１３２】 本発明の広範な範囲は、以下の実施例を参照することにより最良に理解される
が、これらは本発明を特定の実施形態に限定することを意図するものではない。

【０１３３】 （実施例） （Ｉ．一般的な方法） いくつかの標準的な方法が、例えば、Ｍａｎｉａｔｉｓら、（１９８２）Ｍｏ
ｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，
Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ Ｓ
ｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ；Ｓａｍｂｒｏｏｋら、（１９８９）Ｍ
ｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ
、（第２版）、第１〜３巻、ＣＳＨ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ；またはＡｕｓｕｂｅｌ
ら、（１９８７および補遺）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏ
ｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｇｒｅｅｎｅ／Ｗｉｌｅｙ、Ｎｅｗ Ｙｏｒ
ｋに記述または参照される。タンパク質の精製のための方法としては、硫酸アン
モニウム沈殿、カラムクロマトグラフィー、電気泳動、遠心分離、結晶化などの
ような方法が挙げられる。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら、（１９８７および周期的
な補遺）；Ｃｏｌｉｇａｎら、（編、１９９６年）および定期的な補遺、Ｃｕｒ
ｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ Ｉｎ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｇｒ
ｅｅｎｅ／Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ；Ｄｅｕｔｓｃｈｅｒ（１９９０）「
Ｇｕｉｄｅ ｔｏ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ」Ｍｅｔｈｏｄ
ｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、第１８２巻およびこのシリーズの他の巻；な
らびにタンパク質精製製品の使用の際の製造業社の文献（例えば、Ｐｈａｒｍａ
ｃｉａ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、Ｎ．Ｊ．、またはＢｉｏ−Ｒａｄ、Ｒｉｃｈｍ
ｏｎｄ、ＣＡ．）を参照のこと。組換え技術と組み合わせて、適切なセグメント
（例えば、ＦＬＡＧ配列またはプロテアーゼ除去可能な配列を介して融合され得
る等価物）への融合を可能にする。例えば、Ｈｏｃｈｕｌｉ（１９９０）「Ｐｕ
ｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｗ
ｉｔｈ Ｍｅｔａｌ Ｃｈｅｌａｔｅ Ａｂｓｏｒｂｅｎｔ」 Ｓｅｔｌｏｗ（
編）Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ ａｎｄ
Ｍｅｔｈｏｄｓ １２：８７−９８、Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．；お
よびＣｒｏｗｅら、（１９９２）ＱＩＡｅｘｐｒｅｓｓ：Ｔｈｅ Ｈｉｇｈ Ｌ
ｅｖｅｌ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ＆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉ
ｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ ＱＵＩＡＧＥＮ，Ｉｎｃ．、Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ、ＣＡ
を参照のこと。

【０１３４】 コンピューター配列分析を、例えば、ＧＣＧ（Ｕ．Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ）およ
びＧｅｎＢａｎｋ供給源からのプログラムを含む、入手可能なソフトウェアプロ
グラムを用いて実行する。公の配列データベースはまた、例えば、ＧｅｎＢａｎ
ｋなどからのデータベースを使用した。

【０１３５】 ＩＬ−１０レセプターに対して適用可能な多くの技術は、例えば、ＵＳＳＮ
０８／１１０，６８３号（ＩＬ−１０レセプター）（これは、本明細書中に参考
として援用される）に記述されるようにＤＣＲＳに対して適用され得る。

【０１３６】 （ＩＩ．コンピューター分析） サイトカインレセプターに関するヒト配列を、例えば、ＢＬＡＳＴサーバー（
Ａｌｔｓｃｈｕｌら、（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔ．６：１１９−１
２９）を用いてゲノム配列データベースから同定した。標準的な分析プログラム
を用いて、構造を評価し得る（例えば、ＰＨＤ（ＲｏｓｔおよびＳａｎｄｅｒ（
１９９４）Ｐｒｏｔｅｉｎｓ １９：５５−７２）およびＤＳＣ（Ｋｉｎｇおよ
びＳｔｅｒｎｂｅｒｇ（１９９６）Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｃｉ．５：２２９８−２
３１０））。標準的な比較ソフトウェアとしては、例えば、Ａｌｔｓｃｈｕｌら
、（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−１０；Ｗａｔｅｒｍａ
ｎ（１９９５）Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ
Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ｍａｐｓ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ，ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｅｓ
Ｃｈａｐｍａｎ ＆ Ｈａｌｌ；ＬａｎｄｅｒおよびＷａｔｅｒｍａｎ（編、１
９９５）Ｃａｌｃｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ Ｓｅｃｒｅｔｓ ｏｆ Ｌｉｆｅ：
Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｍａｔｈｅｍａｔｉｃａｌ Ｓｃｉ
ｅｎｃｅｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｎａｔｉｏｎａｌ
Ａｃａｄｅｍｙ Ｐｒｅｓｓ；ならびにＳｐｅｅｄおよびＷａｔｅｒｍａｎ（編
、１９９６）Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｍａｐｐｉｎｇ ａｎｄ ＤＮＡ Ｓｅｑｕｅｎ
ｃｉｎｇ（ＩＭＡ Ｖｏｌｕｍｅｓ ｉｎ Ｍａｔｈｅｍａｔｉｃｓ ａｎｄ
Ｉｔｓ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ、第８１巻）Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａ
ｇが挙げられる。各参考文献は、本明細書中で参考として援用される。

【０１３７】 （ＩＩＩ．全長ｃＤＮＡのクローニング；染色体の位置決定） この配列由来のＰＣＲプライマーを使用して、ヒトｃＤＮＡライブラリーを調
査する。配列は、例えば、表１〜５（好ましくは、配列の末端に隣接した配列か
ら）に由来し得る。霊長類、げっ歯類、または他の種のＤＣＲＳ８についての全
長ｃＤＮＡを、例えば、λｇｔ１０ファージのＤＮＡハイブリダイゼーションス
クリーニングによってクローニングする。ＰＣＲ反応を、適切な条件下でＴ．ａ
ｑｕａｔｉｃｕｓ Ｔａｑｐｌｕｓ ＤＮＡポリメラーゼ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎ
ｅ）を用いて行う。代表的に、部分的な長さのｃＤＮＡクローンを伸長すること
は慣用的である。

【０１３８】 染色体スプレッドを調製する。インサイチュハイブリダイゼーションを、７２
時間培養したフィトヘムアグルチニン刺激したヒトリンパ球から得た染色体調製
物に対して実行する。良質のハイブリダイゼーション後の染色体バンド形成を確
実にするために、培養の最後の７時間、５−ブロモデオキシウリジンを添加した
（６０μｇ／ｍｌ培地）。

【０１３９】 プライマーの補助により増幅されたＰＣＲフラグメントを、適切なベクターに
クローニングする。このベクターをニックトランスレーションによって^３Ｈで標
識する。放射性標識プローブを、Ｍａｔｔｅｉら（１９８５）Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ
ｔ．６９：３２７−３３１に記載のように、最終濃度２００ｎｇ／ｍｌのハイブ
リダイゼーション溶液で、中期スプレッドにハイブリダイズさせる。

【０１４０】 核トラックエマルジョン（ＫＯＤＡＫ ＮＴＢ_２）でコーティングした後、ス
ライドを露出させる。バンド形成手順の間の銀粒の任意のスリッピングを避ける
ために、染色体スプレッドを緩衝化ギムザ溶液でまず染色し、そして中期を写真
撮影する。次いで、蛍光色素−光分解−ギムザ（ＦＰＧ）法によってＲバンド形
成を行い、そして中期を再度写真撮影し、その後分析する。

【０１４１】 同様の適切な方法を、他の種に対して用いる。

【０１４２】 （ＩＶ．ｍＲＮＡの位置決定） １レーンあたり約２μｇのポリ（Ａ）^＋ＲＮＡを含む、ヒト複合組織（Ｃａｔ
番号１，２）および癌細胞株のブロット（Ｃａｔ番号７７５７−１）を、Ｃｌｏ
ｎｔｅｃｈ（Ｐａｌｏ Ａｌｔｏ，ＣＡ）から購入する。プローブを、例えば、
Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｒｅｄｉｐｒｉｍｅランダムプライマー標識キット（ＲＰＮ
１６３３）を使用して、［α−^３２Ｐ］ｄＡＴＰで放射標識する。プレハイブリ
ダイゼーションおよびハイブリダイゼーションを、例えば、０．５Ｍ Ｎａ_２Ｈ
ＰＯ_４、７％ ＳＤＳ、０．５Ｍ ＥＤＴＡ（ｐＨ ８．０）中、６５℃にて行
う。高ストリンジェンシーの洗浄を、６５℃にて、最初に２回、２×ＳＳＣ、０
．１％ ＳＤＳで４０分間、続く洗浄を０．１×ＳＳＣ、０．１％ ＳＤＳで２
０分間行う。次いで、膜を増感スクリーンの存在下で−７０℃にてＸ線フィルム
（Ｋｏｄａｋ）に露光する。ｃＤＮＡライブラリーサザンによるより詳細な研究
を、選択された適切なヒトＤＣＲＳクローンを用いて行って、造血細胞のサブセ
ットまたは他の細胞のサブセットにおけるそれらの発現を調べる。

【０１４３】 あるいは、２つの適切なプライマーを表１〜５から選択する。ＲＴ−ＰＣＲを
、メッセージの存在について選択された適切なｍＲＮＡサンプル（例えば、この
遺伝子を発現するサンプル）に対して用いて、ｃＤＮＡを生成する。

【０１４４】 全長クローンを、ＰＣＲシグナルによって前もって選択された適切な組織由来
のｃＤＮＡライブラリーのハイブリダイゼーションによって単離し得る。ノーザ
ンブロットを行い得る。

【０１４５】 ＤＣＲＳをコードする遺伝子のメッセージを、適切な技術（例えば、ＰＣＲ、
免疫アッセイ、ハイブリダイゼーションまたは他の技術）によってアッセイする
。組織および器官のｃＤＮＡ調製物は、例えば、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ，Ｍｏｕｎｔ
ａｉｎ Ｖｉｅｗ，ＣＡから入手可能である。天然発現の供給源の同定は記載さ
れるように有用である。そして、機能的レセプターサブユニット対形成の同定は
、細胞が、サイトカインリガンドの各々に対する生理学的応答性を生じるレセプ
ターサブユニットの組み合わせを発現するという予測を可能にする。

【０１４６】 マウス対応物（ｃｏｕｎｔｅｒｐａｒｔ）分布のために、例えば、サザン分析
が行われ得る：１次増幅したｃＤＮＡライブラリー由来のＤＮＡ（５μｇ）を、
適切な制限酵素を用いて消化し、挿入物を遊離させ、１％アガロースゲル上で泳
動させ、そしてナイロン膜（Ｓｃｈｌｅｉｃｈｅｒ ａｎｄ Ｓｃｈｕｅｌｌ、
Ｋｅｅｎｅ、ＮＨ）に転写した。

【０１４７】 マウスｍＲＮＡの単離ためのサンプルとしては、以下が挙げられ得る：休止マ
ウス繊維芽細胞性Ｌ細胞株（Ｃ２００）；Ｂｒａｆ：ＥＲ（エストロゲンレセプ
ターに対するＢｒａｆ融合物）トランスフェクト細胞（コントロール）（Ｃ２０
１）；Ｔ細胞（ＴＨ１極性化した）（Ｍｅｌ１４明，脾臓由来の、ＩＦＮγおよ
び抗ＩＬ−４で７日間極性化したＣＤ４＋細胞；Ｔ２００）；Ｔ細胞（ＴＨ２極
性化した）（Ｍｅｌ１４明，脾臓由来の、ＩＬ−４および抗ＩＦＮγで７日間極
性化したＣＤ４＋細胞；Ｔ２０１）；Ｔ細胞（高度にＴＨ１極性化した）（Ｏｐ
ｅｎｓｈａｗら（１９９５）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８２：１３５７−１３６７
を参照のこと；抗ＣＤ３で２、６、１６時間活性化し、プールした；Ｔ２０２）
；Ｔ細胞（高度にＴＨ２極性化した）（Ｏｐｅｎｓｈａｗら（１９９５）Ｊ．Ｅ
ｘｐ．Ｍｅｄ．１８２：１３５７−１３６７を参照のこと；抗ＣＤ３で２、６、
１６時間活性化し、プールした；Ｔ２０３）；ＣＤ４４−ＣＤ２５＋プレＴ細胞
（胸腺から分類した）（Ｔ２０４）；ＴＨ１ Ｔ細胞クローン Ｄ１．１（抗原
での最後の刺激後３週間休止する）（Ｔ２０５）；ＴＨ１ Ｔ細胞クローンＤ１
．１（１０μｇ／ｍｌ ＣｏｎＡを１５時間刺激した）（Ｔ２０６）；ＴＨ２
Ｔ細胞クローンＣＤＣ３５（抗原での最後の刺激後３週間休止する）（Ｔ２０７
）；ＴＨ２ Ｔ細胞クローンＣＤＣ３５（１０μｇ／ｍｌ ＣｏｎＡを１５時間
刺激した）（Ｔ２０８）；Ｍｅｌ１４＋脾臓由来ナイーブＴ細胞（休止）（Ｔ２
０９）；Ｍｅｌ１４＋ Ｔ細胞（ＩＦＮ−γ／ＩＬ−１２／抗ＩＬ−４でＴｈ１
を６、１２、２４時間極性化し、プールした）（Ｔ２１０）；Ｍｅｌ１４＋ Ｔ
細胞（ＩＬ−４／抗ＩＦＮ−γでＴｈ２を６、１３、２４時間極性化し、プール
した）（Ｔ２１１）；未刺激成熟Ｂ細胞白血病細胞株Ａ２０（Ｂ２００）；未刺
激Ｂ細胞株ＣＨ１２（Ｂ２０１）；未刺激脾臓由来大Ｂ細胞（Ｂ２０２）；全脾
臓由来Ｂ細胞（ＬＰＳ活性化した）（Ｂ２０３）；脾臓由来のメトリザマイド富
化樹状細胞（休止）（Ｄ２００）；骨髄由来の樹状細胞（休止）（Ｄ２０１）；
ＬＰＳで４時間活性化した単球細胞株ＲＡＷ２６４．７（Ｍ２００）；ＧＭおよ
びＭ−ＣＳＦ由来骨髄マクロファージ（Ｍ２０１）；マクロファージ細胞株Ｊ７
７４（休止）（Ｍ２０２）；０．５、１、３、６、１２時間プールしたマクロフ
ァージ細胞株Ｊ７７４＋ＬＰＳ＋抗ＩＬ１０（Ｍ２０３）；０．５、１、３、５
、１２時間プールしたマクロファージ細胞株Ｊ７７４＋ＬＰＳ＋ＩＬ１０（Ｍ２
０４）；エアロゾルでチャレンジしたマウス肺組織（Ｔｈ２プライマー、７、１
４、２３時間プールしたエアロゾルＯＶＡチャレンジ）（Ｇａｒｌｉｓｉら、（
１９９５）Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｐ
ａｔｈｏｌｏｇｙ ７５：７５−８３を参照のこと；Ｘ２０６）；Ｎｉｐｐｏｓ
ｔｒｏｎｇｕｌｕｓ−感染肺組織（Ｃｏｆｆｍａｎら、（１９８９）Ｓｃｉｅｎ
ｃｅ ２４５：３０８−３１０を参照のこと；Ｘ２００）；全成人肺（正常）（
Ｏ２００）；全肺ｒａｇ−１（Ｓｃｈｗａｒｔら（１９９３）Ｉｍｍｕｎｏｄｅ
ｆｉｃｉｅｎｃｙ ４：２４９−２５２を参照のこと；Ｏ２０５）；ＩＬ−１０
Ｋ．Ｏ．脾臓（Ｋｕｈｎ ら、（１９９１）Ｃｅｌｌ ７５：２６３−２７４
を参照のこと；Ｘ２０１）；全成人脾臓（正常）（Ｏ２０１）；全脾臓ｒａｇ−
１（Ｏ２０７）；ＩＬ−１０ Ｋ．Ｏ．パイアー斑（Ｏ２０２）；全パイアー斑
（正常）（Ｏ２１０）；ＩＬ−１０ Ｋ．Ｏ．腸間膜リンパ節（Ｘ２０３）；全
腸間膜リンパ節（正常）（Ｏ２１１）；ＩＬ−１０ Ｋ．Ｏ．結腸（Ｘ２０３）
；全結腸（正常）（Ｏ２１２）；ＮＯＤ マウス膵臓（Ｍａｋｉｎｏら、（１９
８０）Ｊｉｋｋｅｎ Ｄｏｂｕｔｓｕ ２９：１−１３を参照のこと；Ｘ２０５
）；全胸腺ｒａｇ−１（Ｏ２０８）；全腎臓ｒａｇ−１（０２０９）；全心臓ｒ
ａｇ−１（Ｏ２０２）；全脳ｒａｇ−１（Ｏ２０３）；全精巣ｒａｇ−１（Ｏ２
０４）；全肝臓ｒａｇ−１（Ｏ２０６）；ラット正常関節組織（Ｏ３００）；ラ
ット関節炎関節組織（Ｘ３００）。

【０１４８】 ヒトｍＲＮＡの単離のためのサンプルとしては、以下が挙げられ得る：末梢血
単核細胞（単球、Ｔ細胞、ＮＫ細胞、顆粒球、Ｂ細胞）（休止）（Ｔ１００）；
末梢血単核細胞（抗ＣＤ３で２、６、１２時間活性化し、プールした）（Ｔ１０
１）；Ｔ細胞ＴＨ０クローンＭｏｔ７２（休止）（Ｔ１０２）；Ｔ細胞ＴＨ０ク
ローンＭｏｔ７２（抗ＣＤ２８および抗ＣＤ３で３、６、１２時間活性化し、プ
ールした）（Ｔ１０３）；Ｔ細胞ＴＨ０クローンＭｏｔ７２（特異的ペプチドで
２、７、１２時間アネルギー処理し、プールした）（Ｔ１０４）；Ｔ細胞ＴＨ１
クローンＨＹ０６（休止）（Ｔ１０７）；Ｔ細胞、ＴＨ１クローンＨＹ０６（抗
ＣＤ２８および抗ＣＤ３で３、６、１２時間活性化し、プールした）（Ｔ１０８
）；Ｔ細胞、ＴＨ１クローンＨＹ０６（特異的ペプチドで２、６、１２時間アネ
ルギー処理し、プールした）（Ｔ１０９）；Ｔ細胞、ＴＨ２クローンＨＹ９３５
（休止）（Ｔ１１０）；Ｔ細胞、ＴＨ２クローンＨＹ９３５（抗ＣＤ２８および
抗ＣＤ３で２、７、１２時間活性化し、プールした）（Ｔ１１１）；Ｔ細胞ＣＤ
４＋ＣＤ４５ＲＯ− Ｔ細胞（抗ＣＤ２８、ＩＬ−４、および抗ＩＦＮ−γにお
いて２７日間極性化し、ＴＨ２極性化し、抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８で４時間活
性化した）（Ｔ１１６）；Ｔ細胞腫瘍株ジャーカットおよびＨｕｔ７８（休止）
（Ｔ１１７）；Ｔ細胞クローン、プールしたＡＤ１３０．２、Ｔｃ７８３．１２
、Ｔｃ７８３．１３、Ｔｃ７８３．５８、Ｔｃ７８２．６９（休止）（Ｔ１１８
）；Ｔ細胞ランダムγδＴ細胞クローン（休止）（Ｔ１１９）；脾細胞（休止）
（Ｂ１００）；脾細胞（抗ＣＤ４０およびＩＬ−４で活性化した）（Ｂ１０１）
；Ｂ細胞ＥＢＶ株、プールしたＷＴ４９、ＲＳＢ、ＪＹ、ＣＶＩＲ、７２１．２
２１、ＲＭ３、ＨＳＹ（休止）（Ｂ１０２）；Ｂ細胞株ＪＹ（ＰＭＡおよびイオ
ノマイシンで１、６時間活性化し、プールした）（Ｂ１０３）；プールしたＮＫ
２０クローン（休止）（Ｋ１００）；プールしたＮＫ２０クローン（ＰＭＡおよ
びイオノマイシンで６時間活性化した）（Ｋ１０１）；ＮＫＬクローン（ＬＧＬ
白血病患者の末梢血由来、ＩＬ−２処理した）（Ｋ１０６）；ＮＫ細胞傷害性ク
ローン６４０−Ａ３０−１（休止）（Ｋ１０７）；造血前駆株ＴＦ１（ＰＭＡお
よびイオノマイシンで１、６時間活性化し、プールした）（Ｃ１００）；Ｕ９３
７前単球株（休止）（Ｍ１００）；Ｕ９３７前単球株（ＰＭＡおよびイオノマイ
シンで１、６時間活性化し、プールした）（Ｍ１０１）；溶離した単球（ｅｌｕ
ｔｒｉａｔｅｄ ｍｏｎｏｃｙｔｅ）（ＬＰＳ、ＩＦＮγ、抗ＩＬ−１０で１、
２、６、１２、２４時間活性化し、プールした）（Ｍ１０２）；溶離した単球（
ＬＰＳ、ＩＦＮγ、ＩＬ−１０で１、２、６、１２、２４時間活性化し、プール
した）（Ｍ１０３）；溶離した単球（ＬＰＳ、ＩＦＮγ、抗ＩＬ−１０で４、１
６時間活性化し、プールした）（Ｍ１０６）；溶離した単球（ＬＰＳ、ＩＦＮγ
、ＩＬ−１０で４、１６時間活性化し、プールした）（Ｍ１０７）；溶離した単
球（ＬＰＳで１時間活性化した（Ｍ１０８）；溶離した単球（ＬＰＳで６時間活
性化した）（Ｍ１０９）；ＤＣ ７０％ ＣＤ１ａ＋（ＣＤ３４＋ＧＭ−ＣＳＦ
、ＴＮＦα１２日間由来、休止）（Ｄ１０１）；ＤＣ ７０％ ＣＤ１ａ＋（Ｃ
Ｄ３４＋ ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦα１２日間由来、ＰＭＡおよびイオノマイシン
で１時間活性化した）（Ｄ１０２）；ＤＣ ７０％ ＣＤ１ａ＋（ＣＤ３４＋
ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦα１２日間由来、ＰＭＡおよびイオノマイシンで６時間活
性化した）（Ｄ１０３）；ＤＣ ９５％ ＣＤ１ａ＋（ＣＤ３４＋ ＧＭ−ＣＳ
Ｆ、ＴＮＦα１２日間ＦＡＣＳ選別由来、ＰＭＡおよびイオノマイシンで１、６
時間活性化し、プールした）（Ｄ１０４）；ＤＣ ９５％ ＣＤ１４＋（ＣＤ３
４＋ ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦα１２日間ＦＡＣＳ選別由来、ＰＭＡおよびイオノ
マイシンで１、６時間活性化し、プールした）（Ｄ１０５）；ＤＣ ＣＤ１ａ＋
ＣＤ８６＋（ＣＤ３４＋ ＧＭ−ＣＳＦ、ＴＮＦα１２日間ＦＡＣＳ選別由来
、ＰＭＡおよびイオノマイシンで１、６時間活性化し、プールした）（Ｄ１０６
）；ＤＣ（単球ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−４ ５日間由来、休止）（Ｄ１０７）；Ｄ
Ｃ（単球ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−４ ５日間由来、休止）（Ｄ１０８）；ＤＣ（単
球ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−４ ５日間由来、ＬＰＳで４、１６時間活性化し、プー
ルした）（Ｄ１０９）；ＤＣ（単球ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−４ ５日間由来、ＴＮ
Ｆα、単球上清（ｓｕｐｅ）で４、１６時間活性化し、プールした）（Ｄ１１０
）；平滑筋腫Ｌ１１良性腫瘍（Ｘ１０１）；正常子宮筋層Ｍ５（Ｏ１１５）；悪
性平滑筋肉腫ＧＳ１（Ｘ１０３）；肺繊維芽細胞肉腫株ＭＲＣ５（ＰＭＡおよび
イオノマイシンで１、６時間活性化し、プールした）（Ｃ１０１）；腎臓上皮癌
細胞株ＣＨＡ（ＰＭＡおよびイオノマイシンで１、６時間活性化し、プールした
）（Ｃ１０２）；２８週齢雄性胎児腎（Ｏ１００）；２８週齢雄性胎児肺（Ｏ１
０１）；２８週齢雄性胎児肝臓（Ｏ１０２）；２８週齢雄性胎児心臓（Ｏ１０３
）；２８週齢雄性胎児脳（Ｏ１０４）；２８週齢雄性胎児胆嚢（Ｏ１０６）；２
８週齢雄性胎児小腸（Ｏ１０７）；２８週齢雄性胎児脂肪組織（Ｏ１０８）；２
５週齢雌性胎児卵巣（Ｏ１０９）；２５週齢雌性胎児子宮（Ｏ１１０）；２８週
齢雄性胎児精巣（Ｏ１１１）；２８週齢雄性胎児脾臓（Ｏ１１２）；成人２８週
齢胎盤（Ｏ１１３）；および１２歳由来の炎症扁桃（Ｘ１００）。

【０１４９】 ＴａｑＭａｎ定量ＰＣＲ技術は、マウスおよびヒトの両方においてＤＣＲＳ６
が、Ｔ細胞（胸腺細胞および未処理ＣＤ４^＋を含む）上で発現され、そして胃腸
組織（胃、腸、結腸、結腸、および関連するリンパ組織（例えば、パイアー斑お
よび腸間膜リンパ節）を含む）において分化され（ｈＤＣＲＳ６はまた樹状細胞
上で発現される）、そして腸疾患の炎症モデル（例えば、ＩＬ−１０ ＫＯマウ
ス）においてアップレギュレートされることを示した。ｈＤＣＲＳ７を、休止樹
状細胞と活性化樹状細胞の両方、上皮細胞、および粘膜組織（ＧＩおよび生殖路
を含む）において検出した。これらのデータは、ファミリーメンバーが、粘膜組
織および免疫系細胞型において、ならびに／または胃腸路、気道路、および生殖
路の発達において発現されることを示唆する。

【０１５０】 その結果、治療的指標として、例えば、短い腸の症候群、後化学療法／後放射
線療法、またはアルコール性回復、潰瘍処置または関節炎薬物療法との組み合わ
せ、Ｔｈ２妊娠ひずみ（Ｔｈ２ ｐｒｅｇｎａｎｃｙ ｓｋｅｗｉｎｇ）、胃内
層／組織再生、吸着性表面状態の喪失などが挙げられる。例えば、Ｙａｍａｄａ
ら、（編、１９９９）Ｔｅｘｔｂｏｏｋ ｏｆ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏ
ｇｙ；Ｙａｍａｄａら、（編、１９９９）Ｔｅｘｔｂｏｏｋ ａｎｄ Ａｔｌａ
ｓ ｏｆ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ；ＧｏｒｅおよびＬｅｖｉｎｅ（
２０００）Ｔｅｘｔｂｏｏｋ ｏｆ Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ Ｒａ
ｄｉｏｌｏｇｙ；および（１９８７）Ｔｅｘｔｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｅｄｉａｔｒ
ｉｃ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙを参照のこと。

【０１５１】 同様のサンプルを、評価のために他の種において単離し得る。

【０１５２】 ＩＬ−１７ＲＡに特異的なプライマーを設計し、そして種々のヒトライブラリ
ーに対するＴａｑｍａｎ定量ＰＣＲにおいて使用した。ＩＬ−１７ＲＡは、先天
的な免疫骨髄性細胞（樹状細胞および単球を含む）において高度に発現される。
発現はまた、Ｔ細胞ライブラリーにおいて検出される。これらのデータは、この
レセプターが、免疫細胞型において発現され、そして活性化条件により調節され
得ることを実証する。

【０１５３】

【表７】 ＤＣＲＳ６＿Ｈに対して特異的なプライマーを設計し、そして様々なヒトライブ
ラリーに対してＴａｑｍａｎ定量ＰＣＲにおいて使用した。ＤＣＲＳ６＿Ｈは、
樹状細胞および単球を含む先天性免疫骨髄性細胞（ｉｎｎａｔｅ ｉｍｍｕｎｅ
ｍｙｅｌｏｉｄ ｃｅｌｌ）において発現される。発現はまた、Ｔ細胞ライブ
ラリーで検出される。これらのデータはこのレセプターが免疫細胞型において発
現されており、そして活性化条件によって調節され得ることを実証する。

【０１５４】 （ＤＣＲＳ６＿Ｈについての表）

【０１５５】

【表８】 ＤＣＲＳ７＿Ｈに対して特異的なプライマーを設計し、そして様々なヒトライブ
ラリーに対してＴａｑｍａｎ定量ＰＣＲで使用した。ＤＣＲＳ７＿Ｈは、樹状細
胞および単球を含む先天性免疫骨髄性細胞において発現される。胎児ライブラリ
ーで検出される。これらのデータはこのレセプターが免疫細胞型において発現さ
れており、そして活性化条件によって調節され得ることを実証する。

【０１５６】 （ＤＣＲＳ７＿Ｈについての表）

【０１５７】

【表９】 ＤＣＲＳ９＿Ｈに対して特異的なプライマーを設計し、そして様々なヒトライブ
ラリーに対してＴａｑｍａｎ定量ＰＣＲで使用した。ＤＣＲＳ９＿Ｈは、Ｔ細胞
、胎児の肺、および休止期単球において発現される。これらのデータはこのレセ
プターが免疫細胞型において発現されており、そして活性化条件によって調節さ
れ得ることを実証する。

【０１５８】 （ＤＣＲＳ９＿Ｈについての表）

【０１５９】

【表１０】 （Ｖ．種対応物のクローニング） 様々なストラテジーを用いて、好ましくは、他の霊長類または齧歯類からのＤ
ＣＲＳの種対応物を得る。１つの方法は、近接する関連種のＤＮＡプローブを使
用する交差ハイブリダイゼーションによる。中間工程として進化的に類似の種を
調べることは、有用であり得る。別の方法は、遺伝子間の類似性のブロックまた
は遺伝子間の差異のブロック（例えば、高度に保存されたポリペプチドもしくは
ポリヌクレオチドの領域または非保存的なポリペプチドもしくはポリヌクレオチ
ドの領域）の同定に基づいた特定のＰＣＲプライマーを使用することによるもの
である。配列データベース検索によって、種対応物が同定され得る。

【０１６０】 （ＶＩ．哺乳動物タンパク質の作製） 適切な、例えば、ＧＳＴの融合構築物を、例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ中の発現のた
めに操作する。例えば、マウスＩＧＩＦ ｐＧｅｘプラスミドを構築し、そして
Ｅ．ｃｏｌｉの中へ形質転換した。新たに形質転換した細胞を例えば、５０μｇ
／ｍｌのアンピシリンを含んだＬＢ培地の中で増殖させ、そしてＩＰＴＧ（Ｓｉ
ｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）で導入する。一晩の導入の後、この細菌を収
集し、そして適切なタンパク質を含むペレットを単離する。このペレットを、例
えば、２リットルのＴＥ緩衝液（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−塩基（ｐＨ８．０）、１
０ｍＭ ＥＤＴＡおよび２ｍＭ ｐｅｆａｂｌｏｃ）中で均質化する。この物質
を、マイクロフルイダイザー（ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ）（Ｍｉｃｒｏｆ
ｌｕｉｄｉｃｓ，Ｎｅｗｔｏｎ，ＭＡ）中を３回通過させる。流動化した上清を
、Ｓｏｒｖａｌｌ ＧＳ−３ ｒｏｔｏｒにて１時間、１３，０００ｒｐｍで沈
降させる。サイトカインレセプタータンパク質を含む得られた上清を濾過し、そ
して５０ｍＭのＴｒｉｓ−塩基（ｐＨ８．０）で平衡化したグルタチオン−ＳＥ
ＰＨＡＲＯＳＥカラムに流す。ＤＣＲＳ８−ＧＳＴ融合タンパク質を含む画分プ
ールし、そして、例えば、トロンビン（Ｅｎｚｙｍｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａ
ｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｓｏｕｔｈ Ｂｅｎｄ，ＩＮ）を用いて切断
した。次いで、この切断したプールを、５０ ｍＭ Ｔｒｉｓ−塩基で平衡化し
たＱ−ＳＥＰＨＡＲＯＳＥカラムに流す。ＤＣＲＳ８を含む画分をプールし、そ
して冷蒸留Ｈ_２Ｏで、より低い伝導度（ｃｏｎｄｕｃｔｉｖｉｔｙ）まで希釈し
、そして新しいＱ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅカラム上に、単独でまたは免疫親和性抗
体カラムと連続して戻した。ＤＣＲＳ８タンパク質を含む画分をプールし、等分
し、そして−７０℃冷凍庫に保存する。

【０１６１】 サイトカインレセプタータンパク質とのＣＤスペクトル比較によって、タンパ
ク質が正しく折りたたまれていることが示唆され得る。Ｈａｚｕｄａら（１９６
９）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４：１６８９−１６９３．を参照のこと。

【０１６２】 （ＶＩＩ．特異的な抗体の調製） 純系Ｂａｌｂ／ｃマウスを、このタンパク質の組換え形態（例えば、精製した
ＤＣＲＳ８）または安定にトランスフェクトしたＮＩＨ−３Ｔ３細胞をを用いて
腹腔内で免疫する。動物を適切な時点でタンパク質を用いてブーストするが、こ
れは、さらに抗体産生を刺激するために、さらなるアジュバントを伴うか、また
は伴わない。血清を回収するか、またはハイブリドーマを収集した脾臓で作製す
る。

【０１６３】 あるいは、Ｂａｌｂ／ｃマウスを、これらの遺伝子もしくはこれらのフラグメ
ントで形質転換した細胞、内因性細胞もしくは外因性細胞、または抗原の発現に
ついて強化した単離膜で免疫する。血清を適切な時点、代表的には多くのさらな
る投与の後で回収する。様々な遺伝子治療技術が、例えば、免疫応答を生じるた
めのインサイチュでのタンパク質の作製において有用であり得る。血清または抗
体の調製を、交差吸収（ｃｒｏｓｓ−ａｂｓｏｒｂｅｄ）するか、または免疫選
択（ｉｍｍｕｎｏｓｅｌｅｃｔｅｄ）して、規定した特異性および高い親和性の
実質的に精製した抗体を調製し得る。

【０１６４】 モノクローナル抗体を作製し得る。例えば、脾細胞（ｓｐｌｅｎｏｃｙｔｅｓ
）を適切な融合パートナーを融合して、そしてハイブリドーマを、標準的な手順
によって増殖培地中で選択する。ハイブリドーマ上清を、例えば、ＥＬＩＳＡま
たは他のアッセイによって、ＤＣＲＳ８に結合する抗体の存在についてスクリー
ニングする。特定のＤＣＲＳ８の形態を特異的に認識する抗体はまた、選択され
得るかまたは調製され得る。

【０１６５】 別の方法において、合成ペプチドまたは精製したタンパク質が、免疫系に対し
提示され、モノクローナル抗体またはポリクロナール抗体を生じる。例えば、Ｃ
ｏｌｉｇａｎ（編、１９９１）Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉ
ｍｍｕｎｏｌｏｇｙ Ｗｉｌｅｙ／Ｇｒｅｅｎｅ；ならびにＨａｒｌｏｗおよび
Ｌａｎｅ（１９８９）Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａ
ｎｕａｌ Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓを参照のこと。
適切な状況において、この結合試薬は、例えば、蛍光または他の方法で、上記の
ように標識されるか、またはパニング法のために基材に固定化されるかのいずれ
かである。核酸はまた、動物において細胞内へ導入され得、免疫応答を誘発する
役割を果たす抗原を生成し得る。例えば、Ｗａｎｇら（１９９３）Ｐｒｏｃ．
Ｎａｔ’１．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．９０：４１５６−４１６０；Ｂａｒｒｙら（１
９９４）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ １６：６１６−６１９；およびＸｉａｎ
ｇら（１９９５）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ ２：１２９−１３５を参照のこと。

【０１６６】 （ＶＩＩＩ．融合タンパク質の作製） 様々な融合構築物をＤＣＲＳ８またはＤＣＲＳ９を用いて作製する。適切な遺
伝子の一部を、エピトープタグ（例えば、ＦＬＡＧタグ）に対して融合するか、
またはツーハイブリッドシステム構築物に対して融合する。例えば、Ｆｉｅｌｄ
ｓおよびＳｏｎｇ（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４０：２４５−２４６を参照の
こと。

【０１６７】 このエピトープタグを、結合パートナー（例えば、それぞれのサイトカインレ
セプターに対するリガンド）を検出するために、抗ＦＬＡＧ抗体で検出する発現
クローニング手順において使用し得る。また、ツーハイブリッドシステムを使用
して、そのレセプターサブユニットに特異的に結合するタンパク質を単離し得る
。

【０１６８】 （ＩＸ．構造活性関係） 特定の残基の重要性についての情報は、標準的な手順および分析を使用して決
定される。標準的な突然変異誘発分析を、例えば、決められた位置（例えば、上
記で同定された位置）に多くの異なる改変体を作製すること、そしてこの改変体
の生物学的活性を評価することによって実施する。これを、活性を改変する位置
を決定する程度まで実施し得、すなわち特定の位置に焦点をあて、生物学的活性
を保持するか、遮断するか、または調節するために置換し得る残基を決定し得る
。

【０１６９】 あるいは、天然の改変体分析によって、どの位置が自然突然変異を許容してい
るのかを示し得る。これは、個体間おいてか、または株もしくは種を横断して、
改変の集団分析から結論し得る。選択された個体からのサンプルを、例えば、Ｐ
ＣＲ分析および配列決定によって分析する。これによって、集団多型の評価が可
能になる。

【０１７０】 （Ｘ．リガンドの単離） サイトカインレセプターを、特異的な結合試薬として使用し、抗体が使用され
ることにそっくりの、その結合特異性を利用することによってこの結合パートナ
ーを同定し得る。この結合レセプターは、レセプターサブユニットのヘテロダイ
マーであり得るか；またはこのレセプターとしては、例えば、ＤＣＲＳ８と別の
サイトカインレセプターサブユニットとの複合体が挙げられる。結合試薬は上記
のように、例えば、蛍光またはその他の方法で標識されるか、またはパニング法
のために基材に固定される。

【０１７１】 結合組成物を、結合パートナー、すなわちリガンド（好ましくは膜結合してい
る）を発現する細胞株から作製した発現ライブラリーをスクリーニングするため
に使用する。標準的な染色技術を使用して、表面に発現しているリガンドを検出
するか、またはこれらを分類するか、あるいは、形質転換した細胞を発現する表
面をパニングによってスクリーニングする。細胞内発現のスクリーニングを、様
々な染色手順または免疫蛍光手順によって実施する。ＭｃＭａｈａｎら、（１９
９１）ＥＭＢＯ Ｊ．１０：２８２１−２８３２．をまた参照のこと。

【０１７２】 例えば、第０日目において、２−チャンバｐｅｒｍａｎｏｘスライドをチャン
バ当たり１ｍｌのフィブロネクチン（ＰＢＳ中の１０ｎｇ／ｍｌ）で室温にて３
０分間予めコートする。ＰＢＳで１回リンスする。次いで、チャンバ当たり２〜
３×１０^５細胞のＣＯＳ細胞を、１．５ｍｌの増殖培地中でプレートする。３７
℃で一晩インキュベートする。

【０１７３】 各サンプルについて第１日目に、６６μｇ／ｍｌのＤＥＡＥデキストラン、６
６μＭクロロキン、および無血清ＤＭＥ中の４μｇのＤＮＡの溶液（０．５ｍｌ
）を調製する。各セットに対して、例えば、１および１／２００希釈でＤＣＲＳ
８−ＦＬＡＧ ｃＤＮＡのポジティブコントロールを調製し、そしてネガティブ
モックを調製する。無血清ＤＭＥで細胞をリンスする。ＤＮＡ溶液を添加し、そ
して３７℃で５時間インキュベートする。この培地を取り除き、ＤＭＥ中の０．
５ｍｌの１０％ＤＭＳＯを２．５分間で添加した。ＤＭＥで１回除去洗浄する。
１．５ｍｌの増殖培地を添加し、一晩インキュベートする。

【０１７４】 第２日目、この培地を替える。第３日目または第４日目に、この細胞を固定し
、そして染色した。この細胞をＨａｎｋ’ｓ Ｂｕｆｆｅｒｅｄ Ｓａｌｉｎｅ
Ｓｏｌｕｔｉｏｎ（ＨＢＳＳ）で２回リンスし、４％パラホルムアルデヒド（
ＰＦＡ）／グルコース中で５分間固定する。ＨＢＳＳで３回洗浄する。このスラ
イドは、全ての液体を取り除いた後に−８０℃で保存し得る。各チャンバに対し
て、０．５ｍｌのインキュベーションを以下のように実施した。ＨＢＳＳ／サポ
ニン（０．１％）に３２μｌ／ｍｌの１Ｍ ＮａＮ_３を２０分間添加する。次い
で、細胞をＨＢＳＳ／サポニンで１回洗浄する。適切なＤＣＲＳ８またはＤＣＲ
Ｓ８／抗体複合体を細胞に添加し、そして３０分間インキュベートする。細胞を
２回ＨＢＳＳ／サポニンで洗浄する。適切である場合、第１の抗体を３０分間添
加する。第２の抗体、例えば、Ｖｅｃｔｏｒ抗マウス抗体を、１／２００希釈で
加えそして３０分間インキュベートする。ＥＬＩＳＡ溶液、例えば、Ｖｅｃｔｏ
ｒ Ｅｌｉｔｅ ＡＢＣ西洋ワサビペルオキシダーゼ溶液を調製し、そして３０
分間プレインキュベートする。例えば、２．５ｍｌのＨＢＳＳ／サポニン当たり
１滴の溶液Ａ（アビジン）および１滴の溶液Ｂ（ビオチン）を使用する。細胞を
ＨＢＳＳ／サポニンで細胞を２回洗浄した。ＡＢＣ ＨＲＰ溶液を添加し、そし
て３０分間インキュベートした。ＨＢＳＳで細胞を２回洗浄し、第２の洗浄を２
分間行い、これで細胞をクローズする（ｃｌｏｓｅｓ ｃｅｌｌｓ）。次いで、
Ｖｅｃｔｏｒジアミノ安息香酸（ＤＡＢ）を５〜１０分間で添加した。５ｍｌの
グラスの蒸留水あたり２滴の緩衝液と４滴のＤＡＢと２滴のＨ_２Ｏ_２を使用する
。チャンバを慎重に取り除き、水でスライドをリンスした。数分間空気乾燥し、
次いで、１滴のＣｒｙｓｔａｌ Ｍｏｕｎｔおよびカバースリップ（ｃｏｖｅｒ
ｓｌｉｐ）を加えた。５分間、８５〜９０℃で焼いた。

【０１７５】 プールのポジティブ染色を評価し、そして結合を担う単一の遺伝子の単離に対
して進行性サブクローニングする。

【０１７６】 あるいは、レセプター試薬を使用して、推定リガンドを発現する細胞を親和性
精製（ａｆｆｉｎｉｔｙ ｐｕｒｉｆｙ）するか、またはこれらを分類する。例
えば、ＳａｍｂｒｏｏｋらまたはＡｕｓｕｂｅｌらを参照のこと。

【０１７７】 別のストラテジーは、パニングによって膜結合レセプターに対してスクリーニ
ングすることである。このレセプターｃＤＮＡを、上記のように構築する。固定
化を、例えば、ＤＣＲＳ８融合構築物のＦＬＡＧ配列を認識する適切な抗体の使
用によってか、または第１の抗体に対して惹起された抗体の使用によって達成し
得る。選択および増幅の循環的なサイクルによって、適切なクローンの富化およ
びレセプター発現クローンの最終的な単離をもたらす。

【０１７８】 ファージ発現ライブラリーを、哺乳動物ＤＣＲＳ８によってスクリーニングし
得る。適切な標識技術、例えば、抗ＦＬＡＧ抗体は、適切なクローンの特異的な
標記化を可能にする。

【０１７９】 本発明者らは、ＤＣＲＳレセプターがＩＬ−１７ファミリーサイトカインに特
異的に結合する能力を試験した。組換えＦＬＡＧ−ｈＩＬ−１７ファミリ−サイ
トカインを、組換えＩＬ−１７Ｒ＿Ｈ、組換えＤＣＲＳ６＿Ｈ、組換えＤＣＲＳ
７＿Ｈ、組換えＤＣＲＳ８＿ＨおよびＤＣＲＳ９＿Ｈを発現するトランスフェク
トされたＢａｆ／３ ＤＣＲＳレセプターについての結合実験に使用し、そして
ＦＡＣＳによって分析した。本発明者らは、ＤＣＲＳ６発現Ｂａｆ／３細胞に対
するＩＬ−１７ファミリーメンバーＩＬ−７４の特異的な結合を実証し得る。さ
らなる実験において、本発明者らは、ＩＬ−１７Ｒ＿Ｈ、ＤＣＲＳ７＿Ｈ、ＤＣ
ＲＳ８＿Ｈに対するＩＬ−１７の特異的結合を示した。さらに実験によって、Ｄ
ＣＲＳ８＿Ｈｕトランスフェクト体に対するＩＬ−７１の結合が示された。これ
らの実験によって、ＩＬ−１７関連サイトカインレセプター間の配列相同性がＩ
Ｌ−１７サイトカインに対する機能的な結合を与えることが実証される。

【０１８０】 本明細書中での全ての引用は、各個々の刊行物または特許出願が具体的および
個別に示され、参考として援用されるのと同程度に本明細書中で参考として援用
される。

【０１８１】 本発明の多くの改変および変更が、当業者とって明らかであるように、本発明
の精神および特許請求の範囲から逸脱することなしに行われ得る。本明細書中に
記載の特定の実施形態は、例示のみのために与えられ、そして本発明は特許請求
の範囲に付与される等価物の全範囲に沿ったこのような特許請求の範囲によって
限定される。そして、本発明は、本明細書中で例示のために提示された特定の実
施形態によって限定されるべきではない。

【図面の簡単な説明】

【図１】 図１Ａ〜Ｂは、アミノ酸配列の比較を表す。

【配列表】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ０７Ｋ 16/46 Ｃ１２Ｎ 1/15 19/00 1/19 Ｃ１２Ｎ 1/15 1/21 1/19 15/00 ＺＮＡＡ 1/21 5/00 Ａ 5/10 Ａ６１Ｋ 37/02 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ， ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，Ｇ Ｍ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ， ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ， ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，Ｂ Ｚ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＯ，ＣＲ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＣ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ， ＧＥ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，Ｋ Ｇ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ， ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，Ｓ Ｋ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＺ ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ (72)発明者 ゴーマン， ダニエル エム． アメリカ合衆国 カリフォルニア 94560， ニューアーク， セントラル アベニュ ー 6371 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA11 CA04 CA09 4B065 AB01 BA01 CA24 CA44 CA46 4C084 AA01 AA06 AA07 CA53 DA45 ZB072 4H045 AA10 AA30 BA10 BA41 CA40 DA51 EA22

Claims (20)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 組成物であって、以下： ａ）配列番号１４のセグメントと同一である少なくとも４アミノ酸の、少なく
   とも３つの異なる非重複セグメントを含む、実質的に純粋なポリペプチドまたは
   組換えポリペプチド； ｂ）配列番号１４のセグメントと同一である少なくとも５アミノ酸の、少なく
   とも２つの異なる非重複セグメントを含む、実質的に純粋なポリペプチドまたは
   組換えポリペプチド； ｃ）成熟な配列番号１４を含む天然配列のＤＣＲＳ８； ｄ）ＤＣＲＳ８配列を含む融合ポリペプチド； ｅ）配列番号１７または２０のセグメントと同一である少なくとも４アミノ酸
   の、少なくとも３つの異なる非重複セグメントを含む、実質的に純粋なポリペプ
   チドまたは組換えポリペプチド； ｆ）配列番号１７または２０のセグメントと同一である少なくとも５アミノ酸
   の、少なくとも２つの異なる非重複セグメントを含む、実質的に純粋なポリペプ
   チドまたは組換えポリペプチド； ｇ）成熟な配列番号１７または２０を含む天然配列のＤＣＲＳ９；あるいは ｈ）ＤＣＲＳ９配列を含む融合ポリペプチド から選択される、組成物。
2. 【請求項２】 請求項１に記載の、実質的に純粋な抗原性ポリペプチドまた
   は単離された抗原性ポリペプチドであって、ここで、同一である前記異なる非重
   複セグメントが、以下： ａ）少なくとも８アミノ酸である１つのセグメント； ｂ）少なくとも４アミノ酸である１つのセグメントおよび少なくとも５アミノ
   酸である第２のセグメント； ｃ）少なくとも４アミノ酸、少なくとも５アミノ酸および少なくとも６アミノ
   酸である、少なくとも３セグメント；または ｄ）少なくとも１２アミノ酸である１つのセグメント を含む、ポリペプチド。
3. 【請求項３】 請求項１に記載の組成物であって、ここで： （ａ）前記ポリペプチドが： ｉ）表３または表４の成熟配列を含むか； ｉｉ）ＤＣＲＳ８またはＤＣＲＳ９の非グリコシル化形態であるか； ｉｉｉ）ヒトのような、霊長類由来であるか； ｉｖ）配列番号１４または１７の少なくとも１７アミノ酸を含むか； ｖ）配列番号１４または１７の少なくとも７アミノ酸の、少なくとも４つの
   非重複セグメントを示すか； ｖｉ）ＤＣＲＳ８またはＤＣＲＳ９の天然の対立遺伝子改変体であるか； ｖｉｉ）少なくとも約３０アミノ酸の長さを有するか； ｖｉｉｉ）霊長類ＤＣＲＳ８またはＤＣＲＳ９に特異的である少なくとも２
   つの非重複エピトープを示すか； ｉｘ）グリコシル化されているか； ｘ）天然のグリコシル化を伴って少なくとも３０ｋＤの分子量を有するか； ｘｉ）合成ポリペプチドであるか； ｘｉｉ）固体基材に付着されているか； ｘｉｉｉ）別の化学部分に結合体化されているか； ｘｉｖ）天然の配列から５以下の置換であるか；あるいは ｘｖ）天然の配列由来の欠失改変体または挿入改変体である、 組成物。
4. 【請求項４】 以下： ａ）実質的に純粋なＤＣＲＳ８またはＤＣＲＳ９および別のサイトカインレセ
   プターファミリーのメンバー； ｂ）滅菌した請求項１に記載のＤＣＲＳ８またはＤＣＲＳ９ポリペプチド； ｃ）請求項１に記載のＤＣＲＳ８またはＤＣＲＳ９ポリペプチドおよびキャリ
   アであって、ここで該キャリアは、 ｉ）水、生理食塩水、および／もしくは緩衝液を含む水性化合物であり；そ
   して／または ｉｉ）経口投与、直腸投与、経鼻投与、局所投与、または非経口投与のため
   に処方されている、キャリア、 を含む、組成物。
5. 【請求項５】 請求項１に記載の融合ポリペプチドであって、以下： ａ）表３または表４に記載の成熟タンパク質配列； ｂ）ＦＬＡＧ配列、Ｈｉｓ６配列、もしくはＩｇ配列を含む、検出タグまたは
   精製タグ；あるいは ｃ）別のサイトカインレセプタータンパク質の配列、 を含む、融合ポリペプチド。
6. 【請求項６】 請求項１に記載のポリペプチド、および以下： ａ）該タンパク質もしくはポリペプチドを含む区画；または ｂ）該キットにおける試薬の使用もしくは廃棄のための説明書 を含む、キット。
7. 【請求項７】 抗体に由来する抗原結合部位を含む結合化合物であって、該
   結合化合物は、請求項１に記載の天然のＤＣＲＳ８またはＤＣＲＳ９ポリペプチ
   ドに特異的に結合し、ここで： ａ）該結合化合物が、容器の中にあるか； ｂ）該ＤＣＲＳ８またはＤＣＲＳ９ポリペプチドが、ヒト由来であるか； ｃ）該結合化合物が、Ｆｖフラグメント、Ｆａｂフラグメント、またはＦａｂ
   ２フラグメントであるか； ｄ）該結合化合物が、別の化学部分に結合されているか；あるいは ｅ）該抗体が： ｉ）表３または表４の成熟ポリペプチドのペプチド配列に対して惹起される
   か； ｉｉ）成熟ＤＣＲＳ８またはＤＣＲＳ９に対して惹起されるか； ｉｉｉ）精製されたヒトＤＣＲＳ８またはＤＣＲＳ９に対して惹起されるか
   ； ｉｖ）免疫選択されるか； ｖ）ポリクローナル抗体であるか； ｖｉ）変性ＤＣＲＳ８またはＤＣＲＳ９に結合するか； ｖｉｉ）少なくとも３０μＭの、抗原に対するＫｄを示すか； ｖｉｉｉ）固体基材に付着されるか、ここで、該固体基材としては、ビーズ
   もしくはプラスチック膜が挙げられ； ｉｘ）滅菌組成物中に存在するか；または ｘ）検出可能に標識され、これらとしては、放射性標識もしくは蛍光標識が
   挙げられる、 結合化合物。
8. 【請求項８】 請求項７に記載の結合化合物および以下： ａ）該結合化合物を含む区画；または ｂ）該キットにおける試薬の使用もしくは廃棄のための説明書 を含む、キット。
9. 【請求項９】 抗原：抗体複合体を生成する方法であって、適切な条件下で
   、霊長類ＤＣＲＳ８またはＤＣＲＳ９ポリペプチドを請求項７に記載の抗体と接
   触させる工程であって、それによって該複合体の形成を可能にする、工程、 を包含する、方法。
10. 【請求項１０】 請求項９に記載の方法であって、ここで： ａ）前記複合体が、他のサイトカインレセプターから精製されるか； ｂ）前記複合体が、他の抗体から精製されるか； ｃ）前記接触させる工程が、インターフェロンを含むサンプルを用いるか； ｄ）前記接触させる工程が、前記抗原の定量的検出を可能にするか； ｅ）前記接触させる工程が、前記抗体を含むサンプルを用いるか；または ｆ）前記接触させる工程が、前記抗体の定量的検出を可能にする、 方法。
11. 【請求項１１】 以下： ａ）滅菌した請求項７に記載の結合化合物、あるいは ｂ）請求項７に記載の結合化合物およびキャリアであって、ここで、該キャリ
    アが： ｉ）水、生理食塩水、および／もしくは緩衝液を含む水性化合物であり；そ
    して／または ｉｉ）経口投与、直腸投与、経鼻投与、局所投与、または非経口投与のため
    に処方されている、キャリア、 を含む、組成物。
12. 【請求項１２】 請求項１に記載のポリペプチドをコードする、単離された
    核酸または組換え核酸であって、ここで： ａ）前記ＤＣＲＳ８またはＤＣＲＳ９が、ヒト由来であるか；あるいは ｂ）該核酸が： ｉ）表３もしくは表４に記載の抗原性ペプチド配列をコードするか； ｉｉ）表３もしくは表４に記載の抗原性ペプチド配列のうちの複数をコード
    するか； ｉｉｉ）少なくとも１３ヌクレオチドにわたって、前記セグメントをコード
    する天然のｃＤＮＡに対して同一性を示すか； ｉｖ）発現ベクターであるか； ｖ）複製起点をさらに含むか； ｖｉ）天然の供給源由来であるか； ｖｉｉ）検出可能な標識を含むか； ｖｉｉｉ）合成ヌクレオチド配列を含むか； ｉｘ）６ｋｂ未満、好ましくは３ｋｂ未満であるか； ｘ）霊長類由来であるか； ｘｉ）天然の全長コード配列を含むか； ｘｉｉ）該ＤＣＲＳ８もしくはＤＣＲＳ９をコードする遺伝子についてのハ
    イブリダイゼーションプローブであるか；または ｘｉｉｉ）ＰＣＲプライマー、ＰＣＲ産物、もしくは変異誘発プライマーで
    ある、 核酸。
13. 【請求項１３】 請求項１２に記載の組換え核酸を含む、細胞または組織。
14. 【請求項１４】 請求項１３に記載の細胞であって、ここで該細胞は、以下
    ： ａ）原核生物細胞； ｂ）真核生物細胞； ｃ）細菌細胞； ｄ）酵母細胞； ｅ）昆虫細胞； ｆ）哺乳動物細胞； ｇ）マウス細胞； ｈ）霊長類細胞；または ｉ）ヒト細胞、 である、細胞。
15. 【請求項１５】 請求項１２に記載の核酸および以下： ａ）該核酸を含む区画； ｂ）霊長類ＤＣＲＳ８もしくはＤＣＲＳ９ポリペプチドをさらに含む区画；ま
    たは ｃ）該キットにおける試薬の使用もしくは廃棄のための説明書、 を含む、キット。
16. 【請求項１６】 核酸であって、該核酸は、以下： ａ）３０℃および２Ｍ未満の塩で３０分間の洗浄条件下で、配列番号１３また
    は１６のコード部分にハイブリダイズするか；あるいは ｂ）少なくとも約３０ヌクレオチドのストレッチにわたって、霊長類ＤＣＲＳ
    ８またはＤＣＲＳ９に対して同一性を示す、 核酸。
17. 【請求項１７】 請求項１６に記載の核酸であって、ここで： ａ）前記洗浄条件が、４５℃および／もしくは５００ｍＭの塩であるか；また
    は ｂ）前記ストレッチが、少なくとも５５ヌクレオチドである、 核酸。
18. 【請求項１８】 請求項１６に記載の核酸であって、ここで： ａ）前記洗浄条件が、５５℃および／もしくは１５０ｍＭの塩であるか；また
    は ｂ）前記ストレッチが、少なくとも７５ヌクレオチドである、 核酸。
19. 【請求項１９】 細胞または組織培養細胞の生理機能または発生を調節する
    方法であって、該細胞と哺乳動物ＤＣＲＳ８またはＤＣＲＳ９のアゴニストまた
    はアンタゴニストを接触させる工程を包含する、方法。
20. 【請求項２０】 請求項１９に記載の方法であって、ここで、前記細胞が、
    前記ＤＣＲＳ８またはＤＣＲＳ９および別のサイトカインレセプターサブユニッ
    トをコードする核酸を用いて形質転換される、方法。