JP2003520780A - Ｈｄｌコレステロールとトリグリセリド水準を調節する組成物と方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明はＡＢＣ１発現または活性を調節する化合物を患者に投与することにより、低ＨＤＬ、正常より高いトリグリセリド水準、または心臓血管病を罹患する患者を処置する方法を特徴とする。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の背景】

低ＨＤＬコレステロール（ＨＤＬ−Ｃ）、すなわち低アルファリポタンパク質
症は血液脂質異常であり、高リスクの心臓血管病（ＣＶＤ）、とりわけ冠状動脈
病（ＣＡＤ）、それだけでなく脳血管病、冠状動脈再狭窄、および末梢血管病に
相関する。ＨＤＬ−Ｃ水準は環境および遺伝因子の両方により影響を受ける。

【０００２】 血漿ＨＤＬ−Ｃ濃度はＣＡＤの発生率と逆相関することは疫学研究で絶えず提
示されてきた。ＨＤＬ−Ｃ水準は強く段階付けられ独立した心臓血管危険因子で
ある。高ＨＤＬ−Ｃの保護作用は８０歳まで持続する。低ＨＤＬ−Ｃは正常（＜
５．２ｍｍｏｌ／ｌ）総血漿コレステロール水準においてすらＣＡＤリスクの増
加に関連する。冠状動脈病のリスクはＨＤＬ−Ｃの１ｍｇ／ｄＬ（０．０２６ｍ
ｍｏｌ／ｌ）の減少毎に男性で２％、女性では３％増加し、大多数の研究では他
の脂質および非脂質危険因子の調節後においてもなおこの関係は統計的に有意で
ある。ＨＤＬ−Ｃ水準の減少は早発性ＣＡＤの患者に見られるもっとも一般的な
リポタンパク質異常である。早発性ＣＡＤの患者の４％は他のリポタンパク質異
常がなくてＨＤＬ−Ｃ水準の減少の単離形態を持ち、一方その２５％は併発する
高トリグリセリド症を伴う低ＨＤＬ水準にある。

【０００３】 他の脂血不全症または二次因子を一見してみても、ＨＤＬ−ＣはＣＡＤの重要
な予言者である。糖尿病患者のコホート（部分集団）では、単離された低ＨＤＬ
−Ｃを持つ人は正常ＨＤＬ−Ｃ水準（＞０．９ｍｍｏｌ／ｌ）を持つ糖尿病患者
と比較して死亡率が６５％増加した。更に家族性高コレステロール血症を持つ人
などのような高リスク集団内でも、ＨＤＬ−Ｃ水準はＣＡＤの重要な予言者であ
る。低ＨＤＬ−Ｃ水準はかくしてＣＡＤの主要で、独立したリスクとなることが
示された。

【０００４】 これらの発見は処置のための焦点としてＨＤＬ−Ｃ水準に対する関心を高め、
全米コレステロール教育プログラムの勧告が行われることとなった。これらのガ
イドラインは０．９ｍｍｏｌ／ｌ以下のＨＤＬ−Ｃ値は男性および女性に著しい
リスクを与えることを示唆する。このように、ＣＡＤを持つ患者のほぼ半分は低
ＨＤＬ−Ｃを持つであろう。従って、この表現型に寄与する因子をよりよく理解
することが重要である。低ＨＤＬ−Ｃ水準の薬物介入がこれまでの所、不満足で
あることが証明されたことを考慮して、血液循環でこれらの水準を調節する因子
を理解することは、この理解が新しい治療標的を明らかにするために重要である
。

【０００５】 ＨＤＬ−Ｃの絶対水準は必ずしもＣＡＤのリスクを予言するとは限らない。Ｃ
ＥＴＰ欠損症の場合、個体はＨＤＬ−Ｃ水準の増加にもかかわらず、ＣＡＤ成長
の増加リスクを示す。この場合重要であると見做されるものは逆コレステロール
輸送経路の機能活性であり、このプロセスにより細胞内コレステロールは細胞か
らＡｐｏＡＩまたはＨＤＬなどの受容体タンパク質へと行き交う。ＨＤＬ−Ｃ水
準の他の重要な遺伝的決定基、およびそのＣＡＤとの逆関係はＨＤＬ形成と細胞
間コレステロールの通行および流出に導くプロセスに存在するであろう。今日ま
での所、このプロセスは殆ど理解されておらず、しかしまた明らかにこの経路の
成分すべてが同定されてはいない。かくして適切なＨＤＬ仲介コレステロール流
出を妨げる欠損はＣＡＤの重要な予言者となるであろう。従って細胞間コレステ
ロール通行と流出経路に含まれる新規な遺伝子を同定し理解することはきわめて
重要である。

【０００６】 ＨＤＬ粒子は逆コレステロールに輸送のプロセスの中心にあり、従って組織コ
レステロールホメオスタシス（恒常性）の維持の中心となる。このプロセスは多
段階であり、すなわちＨＤＬの細胞表面成分への結合、受動吸収によるコレステ
ロールの獲得、ＬＣＡＴ（レチシンコレステロールアシルトランスフェラーゼ）
によるこのコレステロールのエステル化および続いて起こるＣＥＴＰ（コレステ
ロールエステル輸送タンパク質）によるエステル化コレステロールのＶＬＤＬ（
超低密度リポタンパク質）への輸送、および肝臓摂取のためのカイロミクロンレ
ムナントを含む。これらの各段階はＨＤＬの血漿濃度に強く影響するものとして
知られる。

【０００７】 ＡｐｏＡＩ−ＣＩＩＩ、リポタンパク質リパーゼ、ＣＥＴＰ、肝性リパーゼお
よびＬＣＡＴの遺伝子の変化はすべてヒトのＨＤＬ−Ｃ水準の決定に寄与する。
遺伝子ＨＤＬ欠損の一つの稀な形態は世界中で約４０人しかいないと診断され、
また（常染色体劣性形質としてＯＭＩＭにリストされた（ＯＭＩＭ２０５４００
））ＨＤＬ−Ｃ水準のほぼ完全な欠除と関連するタンジアー病（ＴＤ）である。
これらの患者は非常に低いＨＤＬ−ＣおよびＡｐｏＡＩ水準にあり、これは脂質
の遅延獲得とそれに伴う成熟ＨＤＬへの転換の不全による発生期ＨＤＬとＡｐｏ
ＡＩの脂質輸送の悪化と異化亢進に帰せられる。ＴＤ患者はコレステロールエス
テルをいくつかの組織で累積し、その結果、拡大黄色扁桃、角膜混濁、肝脾腫大
、末梢ニューロパシー、直腸粘膜でのコレステロールエステル沈着などのような
固有の特性を示す。ＡｐｏＡＩによる細胞コレステロールとリン脂質の欠損除去
同じく細胞間コレステロールのＨＤＬ仲介流出での標識欠損はＴＤ繊維芽細胞で
示された。例えこれが稀な疾患であるにしても、その分子基礎を決定することは
全集団でのコレステロール調節のための関連する経路を同定できるであろう。タ
ンジアー病患者の細胞の表面膜で流出する遊離コレステロール利用度の減少は細
胞脂質代謝または通行での欠損に原因があるように見える。タンジアー病患者の
約４５％は早発性ＣＡＤの徴候を示し、これはコレステロール流出の減少、低Ｈ
ＤＬ−ＣとＣＡＤとの間に強力な関係があることを示唆している。ＴＤにかかっ
ている人の直腸粘膜ではコレステロールの増加が観察されるので、ＴＤに原因が
ある分子機構もまた胃腸（ＧＪ）管からのコレステロール吸着を調節するであろ
う。

【０００８】 より一般的な形態での遺伝子ＨＤＬ欠損は通常年齢と性の第５百分位数以下の
低血漿ＨＤＬ−Ｃを持つが、タンジアー病に特異的な臨床表示の欠損を持つ患者
で発生する（マーシル他、アーテリオスクレロシス・スロンボシス・バスキュラ
ー・バイオロジー、１９巻、１５９−１６９ページ、１９９９年；マーシル他、
アーテリオスクレロシス・スロンボシス・バスキュラー・バイオロジー、１５巻
、１０１５−１０２４，１９９５年）。これらの患者はこの脂質表現型と関連す
る明白な環境因子を持つことはなく、また厳しいＨＤＬ欠損病（ＡｐｏＡＩ，Ｌ
ＣＡＴ，またはＬＰＬ欠損症での変異）の原因として知られている厳しい高トリ
グリセリド症も持たなかったし、糖尿病でもなかった。この異常の継承の様式は
メンデルの優性形質（ＯＭＩＭ １０７６８）ともっともよく一致する。

【０００９】 コレステロール代謝を調節する薬剤の開発はこれまでの所、ゆっくりと進行し
ている。かくしてコレステロールの流出経路の遺伝子成分のよりよい理解が必要
となる。新しく発見された成分は次いで薬剤設計の標的として役立ち得る。

【００１０】

【発明の概要】

第１の見地において、本発明は正常より低いＨＤＬコレステロール水準または
正常より高いトリグリセリド水準を持つと診断された患者を処置する方法を特徴
とする。本方法はＬＸＲ仲介転写活性を調節する化合物を患者に投与することを
含む。望ましくは、化合物は薬理許容担体と共に患者に投与される。化合物は例
えば、２４−（Ｓ），２５−エポキシコレステロール；２４（Ｓ）−ヒドロキシ
コレステロール；２２−（Ｒ）−ヒドロキシコレステロール；２４（Ｒ），２５
−エポキシコレステロール；２２（Ｒ）−ヒドロキシ−２４（Ｓ），２５−エポ
キシコレステロール；２２（Ｓ）−ヒドロキシ−２４（Ｒ），２５エポキシコレ
ステロール；２４−（Ｓ），２５−イミノコレステロール；メチル−３８−ヒド
ロキシコロネード；Ｎ，Ｎ−ジメチル−３β−ヒドロキシコロナミド；２４（Ｒ
）−ヒドロキシコレステロール；２２（Ｓ）−ヒドロキシコレステロール；２２
（Ｒ），２４（Ｓ）−ジヒドロキシコレステロール；２５−ヒドロキシコレステ
ロール；２２（Ｒ）−ヒドロキシコレステロール；２２（Ｓ）−ヒドロキシコレ
ステロール；２４（Ｓ）２５−ジヒドロキシコレステロール；２４（Ｒ），２５
−ジヒドロキシコレステロール；２４，２５−デヒドロキシコレステロール；２
５−エポキシ−２２（Ｒ）−ヒドロキシコレステロール；２０（Ｓ）−ヒドロキ
シコレステロール；（２０Ｒ，２２Ｒ）−コレスト−５−ｅｎｅ−３β，２０，
２２−トリオール；４，４−ジメチル−５−α−コレスタ−８，１４，２４−ト
リエン−３−β−オール；７α−ヒドロキシ−２４（Ｓ），２５−エポキシコレ
ステロール；７β−ヒドロキシ−２４（Ｓ），２５−エポキシコレステロール；
７−オキソ−２４（Ｓ）−エポキシコレステロール；７α−ヒドロキシコレステ
ロール；７−オキソコレステロール；およびデスモステロールより成るグループ
から選択される。望ましい実施例において、化合物はオキシステロールである。

【００１１】 第２の見地において、本発明は正常より低いＨＤＬコレステロール水準または
正常より高いトリグリセリド水準を持つと診断された患者を処置するも一つの方
法を特徴とする。本方法はＲＸＲ仲介転写活性を調節する化合物を患者に投与す
ることを含む。ＲＸＲ調節化合物はこの点に関してエチレン誘導体・三環式レチ
ノイド；トリエンレチノイド；ベンゾシクロアルケニルアルキル；ジエンまたは
トリエン酸誘導体、三環式芳香族化合物とその誘導体；ビシクリルメチルアリル
酸誘導体；フェニルメチル複素環式化合物；テトラヒドロナフチル化合物；アリ
ルチオ−テトラヒドロ−ナフタレン誘導体および複素環式類似体；２，４−ペン
タジエン酸誘導体；テトラリンベイスト化合物；ノナテトラエン酸誘導体；ＳＲ
１１２３７；デキサメタゾン；メソプレンのヒドロキシ，エポキシ、およびカル
ボキシ誘導体；二環式ベンジル，ピリジニル，チオフェン，フラニル，およびピ
ロール誘導体；ベンゾフランアクリル酸誘導体；アリル置換およびアリルと（３
−オキソ−１−プロペニル）置換ベンゾピラン，ベンゾチオピラン，１，２−ジ
ヒドロキノリン，および５，６−ジヒドロナフタレン誘導体；ビタミンＤ３（１
，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３）および類似体；２４−ヒドロキシラーゼ阻
害剤；モノ−またはポリエンカルボン酸誘導体；テトラヒドロキノリン−２−ワ
ン−６または７−イルおよび関連誘導体；テトラヒドロナフタレン；オキシイミ
ノアルカン酸誘導体；ＬＧ １００２６８；およびＬＧＤ １０６９などの化合
物を含む。

【００１２】 第３の見地において、本発明は、（ａ）レポーター遺伝子に操作可能に結合さ
れるＡＢＣ１調節配列またはプロモーターを含む核酸分子を提供し、（ｂ）核酸
分子を候補化合物と接触させ、また（ｃ）レポーター遺伝子の発現を測定する、
ステップを実行することにより候補化合物がＡＢＣ１発現を調節するかどうかを
決定する方法に特に関し、ここで化合物に接触されない対照に比べて変異レポー
ター遺伝子発現は、候補化合物がＡＢＣ１発現を調節することを示す。各種の望
ましい実施例において、調節領域は配列識別番号１のヌクレオチド５８５４乃至
６６９４，７７５６乃至８３１８，１０４７９乃至１０８２５，１５２１４乃至
１６０６８，２１６３６乃至２２１１１，２７８９８乃至２８７２１，３２９５
１乃至３３７４３，３６０６５乃至３６８４７，３９７３０乃至４０５７７，４
５４３乃至５２８７，または４５０８１乃至５５６３９から選択される５０もし
くはそれ以上の連続アミノ酸を含む。他の望ましい実施例において、調節領域は
配列識別番号１のヌクレオチド１乃至２８，７０７または２９，０１１乃至５３
，２２８から選択される５０もしくはそれ以上の連続アミノ酸を含む。望ましく
は調節領域はＬＸＲｓ，ＲＸＲｓ，ＲＯＲｓ，ＳＲＥＢＰｓ、およびＰＰＡＲｓ
より成るグループから選択される転写因子のための結合部位を含む。

【００１３】 第４の見地において、本発明は心臓血管病の徴候を示す変更されたリスクをヒ
トが持つかどうかを決定する方法に特に関する。この方法は多型性または変異に
対するヒトのＡＢＣ１遺伝子を検査することを含む。心臓血管病と関連する多型
性または変異の存在は、ヒトが心臓血管病の徴候を示す変更リスクを持つことを
示す。

【００１４】 関連する見地において、本発明はヒトが薬剤に対するヒトの応答を変更するＡ
ＢＣ１遺伝子に多型性を持つかどうかを決定することにより、薬剤に対するヒト
の応答を予測する方法に特に関する。望ましい多型性は図４で示される。第５お
よび第６の見地の望ましい実施例において、多型性はＡＢＣ１の５′調節領域に
ある。

【００１５】 第６の見地において、本発明はヌクレオチド配列ＡＧＡＴＣＡＮＮＮＮＡＧＧ
ＴＣＡを含む事実上精製されたＬＸＲ応答エレメントに特に関し、ここで各Ｎは
独立してＣ，Ｔ，ＧあるいはＡである（配列識別番号２３１）。望ましくは、Ｌ
ＸＲ応答エレメントは配列ＡＧＡＴＣＡＣＴＴＧＡＧＧＴＣＡを持つ（配列識別
番号２３２）。より以上に望ましくは、ＬＸＲ応答エレメントはヌクレオチド配
列ＡＧＡＴＣＡＮＮＮＮＡＧＧＴＣＡより基本的に成り、ここで各Ｎは独立して
Ｃ，Ｔ，ＧあるいはＡである（配列識別番号２３１）。

【００１６】 第７の見地において、本発明は配列識別番号１の以下のヌクレオチドから選択
される連続ヌクレオチドの少なくとも５０，１００，１５０，３００，５００，
７５０，１０００，２０００，３０００，４０００，５０００またはすべてに事
実上同一である領域より基本的に成る事実上純粋な核酸分子に特に関し、そのヌ
クレオチドは、５８５４乃至６６９４，７７５６乃至８３１８，１０４７９乃至
１０８２５，１５２１４乃至１６０６８，２１６３６乃至２２１１１，２７８９
８乃至２８７２１，３２９５１乃至３３７４３，３６０６５乃至３６８４７，３
９７３０乃至４０５７７，４５０８１乃至５５６３９，４５４３乃至５２８７，
５９１８８乃至６０３０６，６０６８９乃至６３５４８，６３５７４乃至６５１
１０，６５０３０乃至６８３１２，６８６０５乃至７３３７５，７３３９５乃至
７４６９２，７５５８６乃至７７１０３，７４７７４乃至７４９２０，７７５１
９乃至８７６７９，８７６５１乃至９４１６０，９６９１６乃至９７６３４，９
４４０８乃至９６５９５，９７８０７乃至９８９８９，１００３６９乃至１０７
１７１，１０７１７９乃至１０７９８３，１０８０３９乃至１０８９９８，１０
９２２２乃至１１８２１２，１１８６１２乃至１２３９１１，１２４５８６乃至
１３８１８５，１３７７７３乃至１３８３９３，１４７４９７乃至１４８０５１
，１５８４９０乃至１５９１１８，１２３７１８乃至１２５０７７，１３７７７
３乃至１３８９１２，，１３９３０４乃至１３９６９９，１３９３５１乃至１４
６３５９，１４６８６７乃至１４７６３７，１４７７３３乃至１４９４０４，１
４９８５８乃至１５２６９９，１５３０６４乃至１５３９１６，１５３９７８乃
至１５８５１６，１５８７１９乃至１６０２７２，１６０３７５乃至１６４４５
８，１６５２７９乃至１６９８１４，１６４２１５乃至１６４５９２，１６４７
８６乃至１６５１３３，１６５１２５乃至１６５４２９，１６９８８２乃至１７
０１８９，１７００６７乃至１７４０１８，１７６８４５乃至１７８８７５，１
７９１１３乃至１８０６０６，および１８１７２３乃至１８３２８４までのもの
である。関連する見地において、本発明は配列識別番号１の以下のヌクレオチド
に事実上同一である領域を持つ事実上純粋な核酸分子に特に関し、そのヌクレオ
チドは、５８５４乃至６６９４，７７５６乃至８３１８，１０４７９乃至１０８
２５，１５２１４乃至１６０６８，２１６３６乃至２２１１１，２７８９８乃至
２８７２１，３２９５１乃至３３７４３，３６０６５乃至３６８４７，３９７３
０乃至４０５７７，４５０８１乃至５５６３９，４５４３乃至５２８７，５９１
８８乃至６０３０６，６０６８９乃至６３５４８，６３５７４乃至６５１１０，
６５０３０乃至６８３１２，６８６０５乃至７３３７５，７３３９５乃至７４６
９２，７５５８６乃至７７１０３，７４７７４乃至７４９２０，７７５１９乃至
８７６７９，８７６５１乃至９４１６０，９６９１６乃至９７６３４，９４４０
８乃至９６５９５，９７８０７乃至９８９８９，１００３６９乃至１０７１７１
，１０７１７９乃至１０７９８３，１０８０３９乃至１０８９９８，１０９２２
２乃至１１８２１２，１１８６１２乃至１２３９１１，１２４５８６乃至１３８
１８５，１３７７７３乃至１３８３９３，１４７４９７乃至１４８０５１，１５
８４９０乃至１５９１１８，１２３７１８乃至１２５０７７，１３７７７３乃至
１３８９１２，，１３９３０４乃至１３９６９９，１３９３５１乃至１４６３５
９，１４６８６７乃至１４７６３７，１４７７３３乃至１４９４０４，１４９８
５８乃至１５２６９９，１５３０６４乃至１５３９１６，１５３９７８乃至１５
８５１６，１５８７１９乃至１６０２７２，１６０３７５乃至１６４４５８，１
６５２７９乃至１６９８１４，１６４２１５乃至１６４５９２，１６４７８６乃
至１６５１３３，１６５１２５乃至１６５４２９，１６９８８２乃至１７０１８
９，１７００６７乃至１７４０１８，１７６８４５乃至１７８８７５，１７９１
１３乃至１８０６０６，または１８１７２３乃至１８３２８４までのものである
。望ましい核酸分子は、配列識別番号１のヌクレオチド１乃至２８，７０７、ま
たは配列識別番号１のヌクレオチド２９，０１１乃至５３，２２８に事実上同一
であるか全く同一である領域を持つ。

【００１７】 第８の見地において、本発明は正常より低いＨＤＬコレステロール水準、正常
より高いトリグリセリド水準、または心臓血管病を持つヒトを処置する方法に特
に関し、それはＡＢＣ１ポリペプチド、またはそのコレステロール−あるいはト
リグリセリド−調節断片、もしくはＡＢＣ１ポリペプチド、またはそのコレステ
ロール、トリグリセリド調節断片をコーディングする核酸分子をヒトに投与する
ことを含む。望ましい実施例では、ヒトは正常に比べて低いコレステロールまた
は高いトリグリセリド水準を持つ。望ましいくは、ＡＢＣ１ポリペプチドは野生
型ＡＢＣ１であり、またはその安定性もしくはその生物活性を増加する変異を持
つ。望ましくは、核酸分子はプロモーターに操作可能に結合されまた発現ベクタ
ーに含まれる。望ましい変異はＡＢＣ１の位置２１９でＲ→Ｋ変異を、また位置
３９９でＶ→Ａの変異を含む。望ましい生物活性はコレステロール輸送の改良さ
れた調節である。

【００１８】 第９の見地において、本発明は正常より低いＨＤＬコレステロール水準、正常
より高いトリグリセリド水準、または心臓血管病を処置または予防する方法に特
に関し、それは野生型ＡＢＣ１，Ｒ２１９Ｋ ＡＢＣ１、またはＶ３９９Ａ Ａ
ＢＣ１の活性を真似し、あるいはＡＢＣ１の生物活性を調節する化合物を動物（
例えばヒト）に投与することを含む。

【００１９】 本発明の方法を用いて処置できる一つの望ましい心臓血管病は冠状動脈病であ
る。他のものは脳血管病および抹梢血管病を含む。

【００２０】 ＡＢＣ１遺伝子およびタンパク質が血清ＨＤＬ水準に影響するコレステロール
輸送を伴うということの発見は、ＨＤＬ増加、トリグリセリド低下、またはＣＶ
Ｄ阻害薬の確認のための各種の診断検査および検定にＡＢＣ１タンパク質と遺伝
子の使用を可能にする。このような検定の一つのものでは、ＡＴＰに結合するＡ
ＢＣ１タンパク質のドメイン能力が利用される。つまりこの結合を高める化合物
は有力なＨＤＬ増加またはトリグリセリド低下薬である。同時に細胞膜で陰イオ
ン輸送能力と膜孔形成機能は薬剤スクリーニングに使用することができる。

【００２１】 第１０の見地において、ＡＢＣ１発現は更に正常より低いＨＤＬコレステロー
ル水準、正常より高いトリグリセリド水準、またはＣＶＤの診断用ツールとして
役立ち得る。ＡＢＣ１遺伝子配列の遺伝子亜類型化の決定は、正常より低いＨＤ
Ｌまたは正常より高いトリグリセリド表現型がＡＢＣ１機能に関連するかどうか
を決定するために、正常より低いＨＤＬ水準または正常より高いトリグリセリド
水準を持つ個体または族を亜類型化するために使用することができる。この診断
プロセスは、患者の応答（例えば化合物または薬剤の投与に際して効率が増加ま
たは減少しあるいは望ましくない副作用など）の予測を含む患者の遺伝子型に基
づく薬剤処置の仕立てに導くことができる。

【００２２】 ＡＢＣ１ポリペプチドに対する抗体は療法および診断法の両方で使用できる。
抗体はＢ細胞で抗ＡＢＣ１タンパク質の産生を刺激するＡＢＣ１ポリペプチドで
Ｂ細胞含有生物系、例えばマウスなどの動物を免疫的に攻撃し、次いでその生物
系から抗体を単離することで産生される。このような抗体は血清などの生物サン
プルを抗体と接触させ、次いでサンプル内のＡＢＣ１ポリペプチドの尺度として
免疫複合体を測定することによりサンプル内のＡＢＣ１ポリペプチドを測定する
のに使用できるＡＢＣ１に対する抗体は更にＡＢＣ１生物活性の調節のために治
療薬として使用できる。

【００２３】 かくして第１１の見地において、本発明はＡＢＣ１と特異的に結合する精製さ
れた抗体に特に関する。一つの望ましい実施例において、抗体は哺乳類に投与さ
れた時にコレステロールまたはトリグリセリドを調節する。

【００２４】 第１２の見地において、本発明は候補化合物がコレステロールまたはトリグリ
セリド水準を調節するのに有用であるかどうかを決定する方法に特に関し、この
方法は、（ａ）ＡＢＣ１ポリペプチドを提供し、（ｂ）ＡＢＣ１ポリペプチドを
候補化合物と接触させ、（ｃ）ＡＢＣ１ポリペプチドの結合を測定するステップ
を含み、ここでＡＢＣ１ポリペプチドの結合は、候補化合物がコレステロールま
たはトリグリセリド水準の調節に有用であることを示している。

【００２５】 第１３の実施例において、本発明は候補化合物が正常よりも低いＨＤＬコレス
トロール水準、正常よりも高いトリグリセリド水準、または心臓血管病の処置に
有用であるかどうかを決定する方法に特に関する。この方法は（ａ）ＡＢＣ輸送
体（例えばＡＢＣ１）を提供し、（ｂ）輸送体を候補化合物と接触させ、また（
ｃ）ＡＢＣ輸送体の生物活性を測定することを含み、ここで化合物に接触されな
い輸送体と比べて増加ＡＢＣ輸送体生物活性は、候補化合物が正常よりも低いコ
レステロール水準、正常よりも高いトリグリセリド水準、または心臓血管病の処
置に有用であることを示している。望ましくは、ＡＢＣ輸送体は細胞または無細
胞検定システム内にある。

【００２６】 第１４の見地において、本発明は候補化合物がコレステロールまたはトリグリ
セリド水準を調節するのに有用であるかどうかを決定する方法に特に関する。こ
の方法は（ａ）レポーター遺伝子に操作可能に連結されるＡＢＣ輸送体プロモー
ターより成る核酸分子を提供し、（ｂ）核酸分子を候補化合物と接触させ、また
（ｃ）レポーター遺伝子の発現を測定することを含み、ここで化合物に接触され
ない核酸分子と比べてレポーター遺伝子の増加発現は、候補化合物がコレステロ
ールまたはトリグリセリド水準を調節するのに有用であることを示している。

【００２７】 第１５の見地において、本発明は変異ＡＢＣ１ポリペプチドをコーディングす
る核酸分子を含む導入遺伝子を持つ非ヒト哺乳類に特に関する。一つの実施例で
は、変異はＡＢＣ１の位置１０９１でのＭ→Ｔ変異などのような優性ネガティブ
変異である。

【００２８】 第１６の見地において、本発明は本発明のＡＢＣ１核酸分子を含む発現ベクタ
ー、細胞、または非ヒト哺乳類に特に関する。

【００２９】 関連する見地において、本発明は本発明の核酸分子を含む導入遺伝子を持つ非
ヒト哺乳類からの細胞に特に関する。

【００３０】 第１７の見地において、本発明は候補化合物が優性ネガティブＡＢＣ１ポリペ
プチドの阻害を減少させるかどうかを決定する方法に特に関する。この方法は（
ａ）優性ネガティブＡＢＣ１ポリペプチドを発現する細胞を提供し、（ｂ）細胞
を候補化合物と接触させ、また（ｃ）細胞のＡＢＣ１生物活性を測定することを
含み、ここで化合物と接触されない細胞と比べてＡＢＣ１生物活性の増加は、候
補化合物が優性ネガティブＡＢＣ１ポリペプチドの阻害を減少させることを示し
ている。望ましい優性ネガティブＡＢＣ１ポリペプチドはＭ１０９１Ｔ ＡＢＣ
１である。

【００３１】 第１８の見地において、本発明は正常より低いＨＤＬ水準、正常より高いトリ
グリセリド水準、および心臓血管病より成るグループから選択される疾病または
異常に対する性向を被験者内で決定する方法に特に関する。この方法は被験者か
ら得られた領域内で、ＡＢＣ１調節領域、プロモーター、またはコーディング配
列のポリヌクレオチドで、またはＡＢＣ１タンパク質のアミノ酸配列で少なくと
も１個のＡＢＣ１多型性の存在または不在の決定を伴い、ここでＡＢＣ１多型性
の存在または不在は疾病または異常のリスクを示している。望ましくは、この方
法はさらにポリヌクレオチド配列またはアミノ酸配列で少なくとも５個のＡＢＣ
１多型性部位を分析することを含む。

【００３２】 第１９の見地において、本発明はＡＢＣ１多型性が正常より低いＨＤＬ水準、
正常より高いトリグリセリド水準および心臓血管病より成るグループから選択さ
れる疾病または異常に対して被験者でのリスクを示しているかどうかを決定する
方法に特に関する。この方法は（ａ）第１被験者または被験者の組での疾病また
は異常の罹患率が第２被験者または被験者の組での疾病または異常の罹患率と異
なるかどうかを決定し、（ｂ）第１被験者または被験者の組および第２被験者ま
たは被験者の組から得られる試料でのＡＢＣ１調節領域、プロモーターまたはコ
ーディング領域のポリヌクレオチド配列またはＡＢＣ１タンパク質のアミノ酸配
列を分析し、また（ｃ）第１被験者または被験者の組および第２被験者または被
験者の組の間で少なくとも１個の多型性が異なるかどうかを決定し、ここでＡＢ
Ｃ１多型性の存在または不在が疾病または異常の罹患率と相関し、これによりＡ
ＢＣ１多型性がリスクを示しているかどうかを決定することを含む。望ましくは
、この方法はさらにＡＢＣ１調節領域、プロモーター、またはコーディング配列
またはＡＢＣ１のアミノ酸配列で少なくとも５個のＡＢＣ１多型性部位を分析す
ることを含む。

【００３３】 第２０の見地において、本発明は正常より低いＨＤＬ水準、正常より高いトリ
グリセリド水準、および心臓血管病より成るグループから選択される疾病または
異常の素因または罹患率の記録と相関するＡＢＣ１多型性の複数の配列記録を持
つ電子データベースを提供する。

【００３４】 第２１の見地において、本発明は被験者でのＡＢＣ１活性または発現を調節す
るための望ましい治療法を選択する方法に特に関する。この方法は（ａ）被験者
から得られる試料でのＡＢＣ１調節領域、プロモーターまたはコーディング領域
のポリヌクレオチド配列またはＡＢＣ１タンパク質のアミノ酸配列での少なくと
も１個の多型性の存在または不在を決定し、ここでＡＢＣ１多型性の存在または
不在はＡＢＣ１発現または活性を調節するための少なくとも１個の治療法の安全
性または効率を示し、および（ｂ）被験者でのＡＢＣ１発現または活性を調節す
るための望ましい治療法を決定することを含む。望ましくはこの方法は更にＡＢ
Ｃ１調節領域、プロモーターまたはコーディング領域のポリヌクレオチド配列ま
たはＡＢＣ１タンパク質のアミノ酸配列での少なくとも５個のＡＢＣ１多型性部
位を分析することを含む。

【００３５】 第２２の見地において、本発明は候補化合物が正常より低いＨＤＬ水準、正常
より高いトリグリセリド水準、および心臓血管病より成るグループから選択され
る疾病または異常の処置に有用であるかどうかを決定する方法を提供する。この
方法は（ａ）測定可能ＡＢＣ１生物活性を持つ検定システムを提供し、（ｂ）こ
の検定システムを候補化合物に接触させ、また（ｃ）ＡＢＣ１生物活性またはＡ
ＢＣ１リン酸化を測定することを含む。候補化合物に接触されない対応する対照
検定システムでのＡＢＣ１生物活性またはＡＢＣ１リン酸化に比べて、この検定
システムでのＡＢＣ１生物活性またはＡＢＣ１リン酸化の調節は、候補化合物が
疾病または異常に有用であることを示している。望ましい実施例において、検定
システムは細胞ベイストシステムまたは無細胞システムである。望ましくは、候
補化合物はＡＢＣ１タンパク質リン酸化とＡＢＣ１活性の両方を調節する。

【００３６】 第２３の見地において、本発明は候補化合物が正常より低いＨＤＬ水準、正常
より高いトリグリセリド水準、および心臓血管病より成るグループから選択され
る疾病または異常を改善する能力を試験される化合物を確認する方法を提供する
。この方法は（ａ）被験者または細胞を候補化合物に接触させ、（ｂ）被験者ま
たは細胞でのＡＢＣ１発現、活性、またはタンパク質リン酸化を測定することを
含む。候補化合物の接触させない対応する対照被験者または細胞でのＡＢＣ１発
現、活性、またはタンパク質リン酸化と比べて、この被験者または細胞での変更
ＡＢＣ１発現、活性、またはタンパク質リン酸化は、候補化合物を疾病または異
常を改善する能力を試験される化合物として確認する。望ましくは、候補化合物
はＡＢＣ１タンパク質リン酸化とＡＢＣ１活性の両方を調節する。

【００３７】 第２４の見地において、本発明は候補化合物が正常より低いＨＤＬ水準、正常
より高いトリグリセリド水準、および心臓血管病より成るグループから選択され
る疾病または異常を調節するのに有用であるかどうかを決定する方法を提供する
。この方法は（ａ）ＡＢＣ１遺伝子またはその断片を発現する細胞を提供し、（
ｂ）細胞を候補化合物と接触させ、また（ｃ）細胞のＡＢＣ１活性を測定するこ
とを含む。化合物と接触されない対応する対照細胞でのＡＢＣ１活性と比較して
、この細胞にある変更されたＡＢＣ１活性は、候補化合物が疾病または異常を調
節するのに有用であることを示す。

【００３８】 第２５の見地において、本発明は候補化合物が正常より低いＨＤＬ水準、正常
より高いトリグリセリド水準、および心臓血管病より成るグループから選択され
る疾病または異常を調節するのに有用であるかどうかを決定する方法を提供する
。この方法は（ａ）ＡＢＣ１タンパク質を発現する細胞を候補化合物に接触させ
、また（ｂ）ＡＢＣ１タンパク質のリン酸化を測定することを含む。候補化合物
と接触されない対応する対照細胞でのＡＢＣ１タンパク質リン酸化に比べてこの
細胞での変更ＡＢＣ１タンパク質リン酸化は疾病または異常を調節するのに有用
であることを示す。

【００３９】 第２６の見地において、本発明は正常より低いＨＤＬ水準、正常より高いトリ
グリセリド水準、および心臓血管病より成るグループから選択される疾病または
異常の処置に有用な化合物を提供する。この化合物はＡＢＣ１生物活性を調節し
、また（ａ）測定可能生物活性を持つ検定システムを提供し、（ｂ）検定システ
ムを化合物に接触させ、また（ｃ）ＡＢＣ１生物活性を測定するステップにより
確認され、ここで化合物に接触されない対応する対照検定システムでのＡＢＣ１
生物活性に比べてＡＢＣ１生物活性の調節は、化合物が疾病または異常の処置に
有用であることを示す。

【００４０】 第２７の見地において、本発明は正常より低いＨＤＬ水準、正常より高いトリ
グリセリド水準、および心臓血管病より成るグループから選択される疾病または
異常の処置に有用な化合物を提供する。この化合物はＲ２１９Ｋ ＡＢＣ１変異
により誘導されるＡＢＣ１生物活性での変化を擬態するＡＢＣ１生物活性の変化
を誘導する。

【００４１】 第２８の見地において、本発明は正常より低いＨＤＬ水準、正常より高いトリ
グリセリド水準、および心臓血管病より成るグループから選択される疾病または
異常の処置に有用な化合物を提供する。この化合物はＡＢＣ１の残基Ｒ２１９と
結合または相互作用し、これによりＲ２１９Ｋ ＡＢＣ１変異により誘導される
ＡＢＣ１活性での変異を擬態する。

【００４２】 第２９の見地において、本発明は正常より低いＨＤＬ水準、正常より高いトリ
グリセリド水準、および心臓血管病より成るグループから選択される疾病または
異常の処置に有用な化合物を提供する。この化合物はＶ３３９Ａ ＡＢＣ１変異
により誘導されるＡＢＣ１生物活性での変化を擬態するＡＢＣ１生物活性での変
化を誘導する。

【００４３】 第３０の見地において、本発明は正常より低いＨＤＬ水準、正常より高いトリ
グリセリド水準、および心臓血管病より成るグループから選択される疾病または
異常の処置に有用な化合物を提供する。この化合物はＡＢＣ１の残基Ｖ３９９と
結合または相互作用し、これによりＶ３９９Ａ ＡＢＣ１変異により誘導される
ＡＢＣ１活性での変化を擬態する。

【００４４】 第３１の見地において、本発明はＡＢＣ１活性を調節しまたＡＢＣ１のアミノ
酸と結合しまたは相互作用する化合物を提供し、ここでアミノ酸はＡＢＣ１のア
ミノ酸１１９乃至３１９（配列識別番号５）またはＡＢＣ１のアミノ酸２９９乃
至４９９（配列識別番号５）から選択される残基である。

【００４５】 第３２の見地において、本発明は候補化合物が正常より低いＨＤＬ水準、正常
より高いトリグリセリド水準、および心臓血管病より成るグループから選択され
る疾病または異常の処置に有用であるかどうかを決定する方法を提供する。この
方法は（ａ）測定可能ＬＸＲ生物活性を持つ検定システムを提供し、（ｂ）検定
システムを候補化合物を接触させ、また（ｃ）ＬＸＲ生物活性を測定することを
伴い、ここで候補化合物と接触されない対応する対照検定システムでのＬＸＲ生
物活性に比べて、ＬＸＲ生物活性の調節は、候補化合物が疾病または異常の処置
に有用であることを示す。

【００４６】 第３３の見地において、本発明は候補化合物がＡＢＣ１生物活性を調節するの
に有用であるかどうかを決定する方法を提供する。この方法は（ａ）測定可能な
ＬＸＲ生物活性を持つ検定システムを提供し、（ｂ）検定システムを候補化合物
に接触させ、また（ｃ）ＬＸＲ生物活性を測定することを伴い、ここで候補化合
物と接触されない対応する対照検定システムでのＬＸＲ生物活性に比べて、ＬＸ
Ｒ生物活性の調節は候補化合物がＡＢＣ１生物活性を調節するのに有用であるこ
とを示す。望ましくは、ＬＸＲ生物活性はＡＢＣ１発現の調節である。

【００４７】 第３４の見地において、本発明はＡＢＣ１生物活性を調節する能力を試験する
化合物を確認する方法を提供する。この方法は（ａ）被験者または細胞を候補化
合物と接触させ、（ｂ）被験者または細胞でのＬＸＲ遺伝子産物の活性を検定す
ることを伴い、ここで候補化合物と接触されない対応する対照被験者または細胞
での活性に比べて活性の調節は候補化合物がＡＢＣ１の生物活性を調節する能力
を試験する化合物として確認する。

【００４８】 第３５の見地において、本発明は正常より低いＨＤＬ水準、正常より高いトリ
グリセリド水準、および心臓血管病より成るグループから選択される疾病または
異常の処置に有用な化合物を確認する検定でＬＸＲ遺伝子産物の使用を提供する
。

【００４９】 第３６の見地において、本発明は正常より低いＨＤＬ水準、正常より高いトリ
グリセリド水準、および心臓血管病より成るグループから選択される疾病または
異常の処置のためにＬＸＲ遺伝子産物の活性または発現を調節する化合物の使用
に特に関する。

【００５０】 第３７の見地において、本発明は正常より低いＨＤＬ水準、正常より高いトリ
グリセリド水準、および心臓血管病より成るグループから選択される疾病または
異常を処置する能力を試験される化合物を確認する方法を提供する。この方法は
（ａ）測定可能ＬＸＲ生物活性を持つ検定システムを提供し、（ｂ）検定システ
ムを候補化合物と接触させ、また（ｃ）ＬＸＲ生物活性を測定することを伴い、
ここで候補化合物と接触されない対応する対照検定システムでのＬＸＲ生物活性
に比べて、ＬＸＲ生物活性の調節は候補化合物を疾病または異常を処置する能力
を試験される化合物として確認する。

【００５１】 第３８の見地において、本発明は正常より低いＨＤＬ水準、正常より高いトリ
グリセリド水準、および心臓血管病より成るグループから選択される疾病または
異常を処置する能力のために候補ＬＸＲアゴニストをスクリーニングする方法を
提供する。この方法は（ａ）検定システムを候補ＬＸＲアゴニストと接触させ、
また（ｂ）細胞のコレステロール流出活性を測定することを伴い、ここで候補Ｌ
ＸＲアゴニストに接触されない対応する対照細胞でのコレステロール流出に比べ
て、細胞でのコレステロール流出活性は候補ＬＸＲアゴニストが疾病または異常
を処置するのに有用であることを示す。

【００５２】 第３９の見地において、本発明は正常より低いＨＤＬ水準、正常より高いトリ
グリセリド水準、および心臓血管病より成るグループから選択される疾病または
異常を処置する能力について候補ＬＸＲ調節化合物をスクリーニングする方法を
提供する。この方法は（ａ）細胞を候補ＬＸＲ調節化合物に接触させ、また（ｂ
）細胞のＡＢＣ１活性を測定することを伴い、ここでＬＸＲ調節化合物は接触さ
れない対応する対照細胞でのＡＢＣ１生物活性に比べて、細胞でのＡＢＣ１生物
活性の増加はＬＸＲ調節化合物が疾病または異常を処置するのに有用であること
を示す。

【００５３】 も一つの見地において、本発明は候補化合物がトリグリセリド水準を調節する
のに有用であるかどうかを決定する方法を提供する。この方法は（ａ）配列識別
番号５のアミノ酸１乃至６０を含むＡＢＣ１ポリペプチドを含む細胞を提供し、
（ｂ）細胞を候補化合物と接触させ、また（ｃ）ＡＢＣ１ポリペプチドの半減期
を測定することを伴い、ここで化合物に接触されない対応する対照細胞での半減
期に比べて、前記半減期の増加は候補化合物がトリグリセリド水準を調節するの
に有用であることを示す。

【００５４】 関連する見地において、本発明は候補化合物がＡＢＣ１生物活性を擬態するか
どうかを決定する方法に特に関する。この方法は（ａ）ＡＢＣ１ポリペプチドを
発現しない細胞を提供し、（ｂ）この細胞を候補化合物と接触させ、また（ｃ）
細胞のＡＢＣ１生物活性を測定することを含み、ここで化合物と接触されない対
応する対照細胞に比べて、変更ＡＢＣ１生物活性は候補化合物がＡＢＣ１生物活
性を調節することを示す。望ましくは、この細胞はＡＢＣ１ヌル変異を持つ。一
つの望ましい実施例において、この細胞はそのＡＢＣ１遺伝子が変異されている
マウスまたはニワトリ（例えばＷＨＡＭニワトリ）に存在する。

【００５５】 本発明のスクリーニング法の望ましい実施例において、この細胞は動物に存在
する。望ましい生物活性はコレステロール（例えばＨＤＬコレステロールまたは
ＬＤＬコレステロール）あるいはインターロイキン−１の輸送であり、もしくは
ＡＢＣ１ポリペプチドによるＡＴＰの結合または加水分解である。望ましくはス
クリーニング法に使用されるＡＢＣ１ポリペプチドは、配列識別番号５のアミノ
酸１乃至６０を含む。選択として、ＡＢＣ１ポリペプチドは高緊縮条件下で配列
識別番号６のヌクレオチド７５乃至２５４にハイブリッド形成するヌクレオチド
配列によりコードされる領域を含むことができる。望ましくは被験者はヒトであ
る。望ましくは細胞または検定システムは、配列識別番号９４、配列識別番号９
２より成るグループから選択されるＬＸＲＥの外因性供給複製およびイントロン
１の３′末端のヌクレオチド−７６７０でのＬＸＲＥコンセンサスモチーフを持
つ。本発明の各種の方法に関して、望ましいＬＸＲ生物活性はＡＢＣ１発現の調
節である。望ましいＬＸＲ遺伝子産物はＡＢＣ１核酸分子またはタンパク質であ
る。

【００５６】 ＡＢＣ１調節領域の追加配列はここで記載された方法を使用して４Ｉ８，３１
Ｊ２０，４７Ｏ１９，または１７９Ｇ２１リサーチ・ジェネティクスＲＰＣＩ−
１１ ＢＡＣｓの残部を配列化することにより決定されるということも熟慮され
ねばならない。これらの領域の少なくとも５０，１００，１５０，３００，５０
０，７５０，１０００，２０００，３０００，４０００，５０００の連続ヌクレ
オチドに事実上同一の領域を含む事実上純粋な核酸は本発明の方法に使用される
。

【００５７】 「ポリペプチド」とは、糖化またはリン酸化等の翻訳後修飾にも拘らず２個以
上のアミノ酸のいずれかの鎖を意味する。

【００５８】 「レポーター遺伝子」とは、物理的、免疫学的、化学的、生化学的、または生
物学的検定によりその発現が検出可能およびまたは計量可能な産物をコードする
いずれかの遺伝子を意味する。レポーター遺伝子産物は、例えば以下の属性、す
なわち特異的な核酸／チップハイブリッド形成パターン、蛍光（例えばグリーン
蛍光タンパク質）、酸素活性（例えばｌａｃＺ／β−ガラクトシダーゼ、ルシフ
ェラーゼ、クロラムフェニコールアセチルトランスフェラーゼ）、毒性（例えば
リシンＡ）、または第２分子により特異的に結合される能力（例えばビオチンま
たは検出可能標識抗体）などの属性の一つを制約なしに持つことができる。当業
者が十分利用できるレポーター遺伝子のいずれかの遺伝子操作バリアントも前記
定義に制約なく含まれる。

【００５９】 「遺伝子操作可能に連結される」とは、遺伝子および調節配列が調節配列の制
御の下で遺伝子産物の発現を可能にするように結合されることを意味する。プロ
モーターも遺伝子産物の発現がプロモーターの制御の下にある遺伝子に遺伝子操
作可能に結合されることを意味する。

【００６０】 「調節領域」とは、プロモーターおよび遺伝子（例えばレポーター遺伝子）に
遺伝子操作的に結合された時、プロモーターからの遺伝子の発現を調節できる領
域を意味する。調節配列は、例えばここに記載されたイントロン配列で見出され
るもののような核ホルモン転写因子結合部位を含む。

【００６１】 「プロモーター」とは、遺伝子操作結合遺伝子の転写に指向するのに十分な最
小配列を意味する。

【００６２】 「事実上同一」とは、参照アミノ酸または核酸配列と少なくとも５０％、望ま
しくは８５％、より望ましくは９０％、またもっとも望ましくは９５％の同一性
を示すポリペプチドまたは核酸を意味する。ポリペプチドでは、比較配列の長さ
は一般に少なくとも１６個のアミノ酸、望ましくは少なくとも２０個のアミノ酸
、より望ましくは２５個のアミノ酸、またもっとも望ましくは３５個のアミノ酸
である。核酸では、比較配列の長さは一般に少なくとも５０個のヌクレオチド、
望ましくは少なくとも６０個のヌクレオチド、より望ましくは少なくとも７５個
のヌクレオチド、またもっとも望ましくは少なくとも１１０個のヌクレオチドで
ある。一つの配列は第２の配列と比較された時に、２０％またはそれ以下の追加
または欠失（すなわちギャップ）を含む。配列の最適アラインメントは、例えば
ギッシュとステーツ（ネイチャー・ジェネティクス、３巻：２６６−２７９ペー
ジ：１９９３年）、アルツサル他（ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロ
ジー、２１５巻：４０３−４１０ページ、（１９９０年）、マッデン他（メトヘ
モグロビン酵素学、２６６巻：１３１−１４１ページ、１９９６年）アルツサル
他（核酸研究、２５巻：３３８９−３４０２ページ、１９９７年）、またはザン
他（ジーノーム・リサーチ、７巻：６４９−６５６ページ、１９９７年）の方法
により実施される。

【００６３】 配列の同一性は典型的にはそこに特定されたデフォールトパラメーターでの配
列分析ソフトウェア（例えばジェネティクス・コンピューター・グループの配列
分析ソフトウェアパッケージ、５３７０５ ウィスコンシン、マジソン、ユニバ
ーシティ・アベニュー １７１０、ユニバーシティ・オブ・ウィスコンシン・バ
イオテクノロジーセンター）を用いて測定される。このソフトウェアプログラム
は各種の置換、欠失、および他の修飾に対し相同の度合を割当てることで類似の
配列に適合する。保存置換は典型的には下記のグループ：すなわちグリシン、ア
ラニン、バリン、イソロイシン、ロイシン、アスパラギン酸、グルタミン酸、ア
スパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、リシン、アルギニン、およびフ
ェニルアラニン、チロシン内での置換を含む。

【００６４】 「事実上純粋な核酸」とは、本発明の核酸が誘導される生体の自然発生ゲノム
で核酸に隣接する遺伝子を欠いている核酸を意味する。この用語は従って、例え
ばベクターに、自動複製プラスミドまたはウイルスに、原核または真核細胞のゲ
ノム核酸に組み込まれる、あるいは他の配列から独立した別の分子（例えばＰＣ
Ｒまたは制限エンドヌクレアーゼ消化で産生されるｃＤＮＡまたはゲノムあるい
はｃＤＮＡ断片）として存在する組換え核酸を含む。それは更に追加のポリペプ
チド配列をコード化するハイブリッド遺伝子の部分である組換え核酸を含む。

【００６５】 「高い緊縮条件」とは、少なくとも４０個のヌクレオチドのＤＮＡプローブ長
さで２Ｘ ＳＳＣ、４０℃でハイブリッド形成することを意味する。高い緊縮条
件の他の定義については、ここで引用例として組み込まれているＦ．アウスベル
他、分子生物学での現在のプロトコル、６．３．１−６．３．６ページ、ジョン
・ワイリー・アンド・サンズ、ニューヨーク、ニューヨーク、１９９４年を参照
されたい。

【００６６】 「調節する」とは増加または減少を意味する。望ましくは、ＬＸＲ仲介転写、
ＲＸＲ仲介転写、ＡＢＣ１遺伝子発現、ＨＤＬ−Ｃ水準、またはトリグリセリド
水準を調節する化合物は、少なくとも５％、より望ましくは少なくとも１０％、
またもっとも望ましくは少なくとも２５％、あるいは少なくとも５０％でさえ調
節する。

【００６７】 「精製抗体」とは重量で少なくとも６０％のタンパク質と、タンパク質が自然
関連する自然発生有機分子を欠いている抗体を意味する。望ましくは、その調製
は重量で少なくとも７５％、より望ましくは９０％、またもっとも望ましくは少
なくとも重量で９９％の抗体である。精製抗体は多分例えば組換え産生タンパク
質または保存モチーフペプチドを用いるアフィニティクロマトグラフィーおよび
標準手法により得ることができる。

【００６８】 「特異的に結合する」とは、例えばヒトＡＢＣ１ポリペプチドを認識し結合す
るが、例えばサンプル、例えば自然にタンパク質を含む生物学的サンプル内で他
の非ＡＢＣ１分子を事実上認識せずまた結合もしない抗体を意味する。望ましい
抗体は図２Ａ（配列識別番号５）のＡＢＣ１ポリペプチド配列と結合する。

【００６９】 「多型性」とは、ヌクレオチドまたはヌクレオチド領域がいくつかの異なった
形態で発生することで特徴付けられることを意味する。「突然異変」はコード化
タンパク質の発現水準、安定性、機能または生物活性が事実上変更される多型性
の形態である。

【００７０】 「ＬＸＲ」とは、核内受容体ＬＸＲαとＬＸＲβを意味する望ましいＬＸＲｓ
はヒトＬＸＲα（ジェンバンク、アクセス番号Ｑ１３１３３）とヒトＬＸＲβ（
ジェンバンク、アクセス番号Ｐ５５０５５）を含む（アプフェル他、分子細胞生
物学、１４巻：７０２５−７０３５ページ、１９９４年：ワイリー他、遺伝子の
発度、９巻：１０３３−１０４５ページ、１９９５年：およびソング他、全米科
学アカデミー紀要、９１巻：１０８０９−１０８１３ページ、１９９５年を参照
されたい。これらのそれぞれは引用文献としてここに組込まれている。

【００７１】 「ＲＸＲ」とは、核内受容体ＲＸＲα、ＲＸＲβおよびＲＸＲγを意味する。
望ましいＲＸＲｓはヒトＲＸＲα（ジェンバンク、アクセス番号Ｑ１３１３３）
ヒトＲＸＲβ（ジェンバンク、アクセス番号Ｓ３７７８１）、およびヒトＲＸＲ
γ（ジェンバンクアクセス番号Ｑ１３１３３）を含む。

【００７２】 「ＡＢＣ輸送体」または「ＡＢＣポリペプチド」とは、ＡＴＰを加水分解し物
質を膜を通して輸送するいずれかの輸送体を意味する。望ましくは、ＡＢＣ輸送
体ポリペプチドはＡＴＢ結合カセットと膜貫通領域を含む。ＡＢＣ輸送体の例は
必ずしもそれに限定されないが、ＡＢＣ１、ＡＢＣ２、ＡＢＣＲおよびＡＢＣ８
を含む。

【００７３】 「ＡＢＣ１ポリペプチド」とは、配列識別番号５のアミノ酸配列を持つＡＢＣ
１ポリペプチドと事実上同一性を持つポリペプチドを意味する。

【００７４】 「ＡＢＣ生物活性」または「ＡＢＣ１生物活性」とは、ＡＴＰの加水分解また
は結合、化合物（例えばコレステロール、インターロイキン１）あるいは膜を貫
通するイオンの輸送、またはコレステロールもしくはリン脂質水準（例えばＨＤ
ＬコレステロールまたはＬＤＬコレステロール水準の増加あるいは減少のいずれ
かによって）の調節を意味する。

【００７５】 本発明はＡＢＣ１生物活性または発現を調節する化合物を投与することにより
低ＨＤＬ−Ｃおよびまたは正常よりも高いトリグリセリド水準を持つ患者を処置
する方法を提供する。例えば化合物は、ＬＸＲ／ＲＸＲヘテロダイマーの転写活
性を調節する。ＬＸＲ転写活性またはＲＸＲ転写活性を調節する多くの化合物は
従来の知識で公知である。本発明の望ましい化合物はオシキステロールである。
追加の化合物はここで記載される。

【００７６】 本発明はヒト患者に使用できる治療化合物（コレステロール調節剤、トリグリ
セリド調節剤、または抗ＣＶＤ薬剤）を確認するスクリーニング手順を提供する
。ＡＢＣ１生物活性または発現を調節する化合物はＡＢＣ濃度、タンパク質安定
性、制御された異化作用、あるいは他のタンパク質または因子と結合する能力を
調節する化合物として本発明で有用と考えられる。一般に本発明のスクリーニン
グ法はいずれかの数の試験管内または生体内実験システムを採用することにより
治療活性剤としてのいくつかの数の化合物をスクリーニングすることを伴う。こ
のような化合物の確認のために有用な代表的な方法は以下で説明される。

【００７７】 本発明の方法は低ＨＤＬ、正常より高いトリグリセリド水準、およびＣＶＤの
処置と予防のための活性剤の評価、確認および開発を単純化する。一般にスクリ
ーニング法は更に評価されいくつかの活性および選択材料に濃縮される大きな集
団からの対象となる自然産物抽出物または化合物を選択するためのたやすい手段
を提供する。このプールの成分は次いでそのＨＤＬ上昇、トリグリセリド低下、
抗ＣＶＤ活性、またはこれらのものの組合せを決定するために、本発明の方法で
精製され評価される。

【００７８】 本発明の他の特性と利点とは以下の望ましい実施例の下記の明細書から明らか
になるであろう。

【００７９】 我々はこれまでにヒトＡＢＣ１（ＡＢＣＡ１としても知られるもの）ゲノム領
域がＬＸＲｓ、ＲＸＲｓ、ＰＰＡＲｓ、ＳＲＥＢＰｓおよびＲＯＲｓなどの転写
因子のコンセンサス結合部位を含むことを発見した。本発明においては、我々は
同じく転写因子のコンセンサス結合部位を含むＡＢＣ１調節領域の配列を報告す
る。我々はまたＡＢＣ１変異のヘテロ接合体が加齢によるＨＤＬの減少、トリグ
リセリド水準の増加、および著しく増加したＣＡＤのリスクを持つことを発見し
た。更にこの表現型は流出ときわめて相関しており、明らかにコレステロール逆
輸送の機能障害が減少した血漿ＨＤＬコレステロール、増加トリグリセリド水準
、および増加アテローム発生と関連することを示している。従って本発明はＡＢ
Ｃ１機能を増加し、その結果血漿ＨＤＬコレステロールの増加、トリグリセリド
水準の減少、アテローム発生に対する防御、またはこれらの作用の組合せを生じ
る治療法を確認するスクリーニング法に特に関する。

【００８０】 遺伝子はＨＤＬ水準に影響する重要な役割を果す。タンジアー病（ＴＤ）は最
初に報告された遺伝的なＨＤＬ欠損であった。最近までＴＤの分子主成分は未知
であったが、現在ではＡＢＣ１の変異が（下記の通り）ＴＤ患者で確認されてい
る。例えば我々は２個の追加発端者とそのファミリーを同定し、連鎖を確認し、
限定されたゲノム領域に対する遺伝子座を精緻化した。これら２個のファミリー
の４個のすべての対立遺伝子を説明するＡＢＣ１遺伝子の突然変異は検出された
。低ＨＤＬ水準のより多くの原因は異なった疾患、家族性ＨＤＬ欠損（ＦＨＡ）
である。独立した連鎖、減数***組換え体およびハプロタイプ関連疾患を基礎に
して、ＦＨＡはＡＢＣ１遺伝子を取り囲む小さなゲノム領域に局在化された。保
存残基内の突然変異はＦＨＡで分離された。線維芽細胞内のＡＢＣ１転写物のア
ンチセンス減数***はコレステロール流出の著しい減少と関係していた。

【００８１】 コレステロールは通常細胞内脂質で組立てられ分泌されるが、ＴＤではこのプ
ロセスは転換されコレステロールはリソソームに分解される。コレステロールの
細胞間通行の障害は、リソソームの形態的変化とゴルジ装置と、組織球、シュヴ
ァン細胞、平滑筋細胞、肥胖細胞および線維芽細胞でのコレステロールエステル
の蓄積と関連した細胞内コレステロールエステルの蓄積の増加を来たす。

【００８２】 ＴＤを持つ患者の臨床および生化学的異種混交は遺伝的異種混交もまたこの疾
患に横たわる可能性に導く。これを考慮して、我々はまず異なった先祖（ＴＤ−
１はオランダ人、ＴＤ−２はイギリス人；フローリッヒ他、Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅ
ｓｔ．Ｍｅｄ．１０巻；３７７−３８２ページ、１９８７年）のこれら２家族の
連鎖分析を行い、これらの家族にあるＴＤに横たわる遺伝的突然変異が同じ９ｑ
３１領域に局在化され、これに対してＴＤを持つ大型家族が特定されたことを確
認した（ラスト他、ネイチャー・ジェネティクス、２０巻、９６−９８ページ、
１９９８年）。詳細なハプロタイプ分析は物理的地図の構築と共にこの遺伝子の
局在化を明らかにした。ＡＢＣ１遺伝子の突然変異がＴＤで発見された。

【００８３】 ＦＨＡはその正確な頻度は知られていないけれどもＴＤより多く一般にある。
ＴＤは今日まで４０家族のみであると記載されている一方、我々はオランダとケ
ベックだけで４０ＦＨＡ家族を同定した。９ｑ３１への連鎖の最初の提案の後、
この領域での約１０ｃＭに拡がる１３個の多型性標識が類別されＤ９Ｓ２７７で
最高のＬＯＤ得点をした。その両親の血族の故でＴＤに近い標識にホモ接合性で
あることが期待されたＴＤ−２発端者でのマーカーのホモ結合性についての分析
は、ＴＤ遺伝子をＤ９５１２７の遠位の遺伝子に置いた。ＴＤとＦＨＡ家族から
組合せた遺伝子データはＤ９Ｓ１２７とＤ９Ｓ１８６６の間の約１，０００キロ
ベースに広がる同一ゲノムセグメントに向けられた。ＡＢＣ１輸送体遺伝子は最
小ゲノム領域内に含まれた。一家族のＲＴ−ＰＣＲ分析はＡＢＣ１の第１膜貫通
領域の残基６９３（Δ６９３）でのロイシンの欠失を示し、これはこの家族での
ＨＤＬ欠失の表現型で分離された。

【００８４】 ＡＢＣ１はＡＴＰ結合カセット（ＡＢＣ輸送体）上科の部分であり、それは膜
を貫通する各種多様な基質のエネルギー依存輸送を伴う（ディーン他、Ｃｕｒｒ
．Ｏｐｉｎ．Ｇｅｎ．Ｄｅｖ．５巻、７７９−７８５ページ、１９９５年）。こ
れらのタンパク質はこのクラスのタンパク質を他のＡＴＰ結合タンパク質から区
別する進化を通じて保存された特有のモチーフを持つ。ヒトではこれらの遺伝子
は基本的に２個のＡＴＰ結合セグメントと２個の膜貫通ドメインをコード化する
（ディーン他、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｇｅｎ．Ｄｅｖ．５巻、７７９−７８５ペ
ージ、１９９５年）。我々はこれからＡＢＣ１輸送体が細胞間コレステロール輸
送にとって重要であることを示していく。

【００８５】 我々はオリゴヌクレオチドアンチセンスアプローチを用いるＡＢＣ１転写物の
減数***が流出を減少させたことを示し、その遺伝子とその機能作用内の変更の
間の結合を明らかに示した。ＴＤとＦＨＡは今ではタンパク質のＡＢＣ基に欠損
があるため遺伝病の成長するリストに加わっており、それは嚢胞性線維症（ジー
レンスキー他、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｇｅｎｅｔ．，２９巻、７７７−８０７ページ
、１９９５年）、副腎脳白質ジストロフィー（モッサー他、ネイチャ−、３６１
巻、７２６−７３０ページ、１９９３年）。ツェルヴェーガー症候群（ゲルトナ
ー他、Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．１巻２３、１９９２年）、進行性家族性肝臓内胆汁
うつ滞（ブル他、Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．１８巻、２１９−２２４ページ、１９９
８年）、およびシュタルガルト病を含む異なった眼の疾患、（アリクメッツ他、
Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．１５巻、２３６−２４６ページ、１９９７年）、常染色体
退縮性色素性網膜炎（アリクメッツ他、サイエンス、２７７巻、１８０５−１８
０７ページ、１９９７年）、および錐杆体ディストロフィー（クレマース他、Ｈ
ｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．７巻、３５５−３６２ページ１９９８年）を含む。

【００８６】 ＴＤの患者は、タンジアー病が常染色体退縮性疾患（ＯＭＩＭ ２０５４０）
であるのに対してＦＨＡは常染色体優性形質（ＯＭＩＭ １０７６８）として遺
伝することでＦＨＡの患者とは区別されてきた。更にＴＤを持つ患者はＦＨＡ患
者には見られない細胞内コレステロール蓄積の明らかな証拠が見られる。ＴＤの
ヘテロ接合体がＨＤＬ水準をしっかり減少させ、また同じメカニズムがＴＤと同
じくＦＨＡのヘテロ接合体で見られるＨＤＬの欠損とコレステロール流出の欠損
に横たわることは明らかである。更にＴＤでのより厳しい表現型がＡＢＣ１遺伝
子の対立遺伝子両方からの機能の損失を表している。

【００８７】 ＡＢＣ１はおそらくはリン酸化を経由してプロテインキナーゼにより活性化さ
れ、それはまたコレステロール流出を促進する際にプロテインキナーゼＣの基本
的役割のための一つの説明を提供する（ドロブニク他、Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅ
ｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｖａｓｃ．Ｂｉｏｌ．１５巻、１３６９−１３７７ページ、
１９９５年）。小胞体とゴルジの間の通行を阻害するブレフェルジンは、多分Ａ
ＢＣ１生物活性の阻害を通じて基本的にＡＢＣ１内の突然変異の作用を再産生し
てコレステロール流出を著しく阻害する。この発見は未成熟のアテローム硬化に
導くメカニズムの理解にとって重要である。ＴＤホモ接合体は３８年にわたる冠
状動脈症の徴候を持つＴＤ−Ｉ（ＩＩＩ−０１）の発端者に見られるように未成
熟冠状動脈症を成長させる。ＴＤ患者が著しく減少したＨＤＬを提示するのに加
えて、更に低ＬＤＬコレステロールを有し、しかもまだこれにも拘らずアテロー
ム硬化を成長させるので注目するに値する。これはアテローム発生の重要なメカ
ニズムとしてＨＤＬ細胞内輸送の重要性を際立たせる。ＴＤのヘテロ接合体が更
に未成熟の血管病のリスクを増加させる著しい証拠も存在する（シェーファー他
、Ａｎｎ．Ｉｎｔ．Ｍｅｄ．９３巻、２６１−２６６ページ、１９８０年；セル
ファティ−ラクロスニエール他，アテローム硬化，１０７巻８５−９８ページ，
１９９４年）。更にＦＨＡを持つ何人かの発端者に未成熟アテローム硬化の予備
証拠が存在する。例えばＦＨＡ−２（ＩＩＩ−０１）の発端者は４６歳で冠状動
脈バイパス移植を受け、一方ＦＨＡ−３の発端者は約５０歳の頃ＣＡＤの証拠を
示した。ＴＤ−１発端者はＴＤ−２発端者よりもより厳しい流出欠損を有してい
た。興味深いことに、ＴＤ−２発端者は彼が関係のない原因で６２歳で死亡した
時にＣＡＤの何らの徴候も示さず、（突然変異の性質により部分的に仲介された
）コレステロール流出の度合とアテローム硬化の尤度との間の関係のための予備
証拠を提供した。

【００８８】 ＡＢＣ１遺伝子はコレステロール輸送、とりわけ単球と線維芽細胞での細胞内
コレステロール輸送に重大な役割を果す。それはまた神経系、胃腸管、角膜など
の他の組織で重要な役割を果す。完全に欠損のある細胞内コレステロール輸送は
末梢神経障害、角膜混濁、およびコレステロールエステルの直腸粘膜への付着を
来たす。

【００８９】 ＨＤＬ欠損は事実上異質性のものである。ＴＤとＦＨＡの遺伝的基礎について
の概要説明は細胞内コレステロールと輸送でのこの特殊な経路、およびアテロー
ム硬化の病因におけるその役割の重要性を引き起こす。ＴＤとＦＨＡの分子的基
礎の解明は細胞からのコレステロール流出の貧弱に定義された経路での主要なス
テップを定義し、総集団でのＨＤＬ欠損を持つ患者の処置に対する新しいアプロ
ーチに導くことができた。

【００９０】 ＨＤＬは数多くの他の生物学的プロセスで意味を持ってきた。それは必ずしも
それに限定されないが、リポタンパク質酸化の予防、内毒素の吸収、ブルースト
リパノソーマ感染からの保護、内皮細胞の調節、血小板の凝縮の防止を含む（ジ
ェネスト他、Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｍｅｄ．４７巻、３１−４２ページ、１９９９
年、ここで引用例として組み込まれる。ＨＤＬ水準を調節するいずれかの化合物
は、前記プロセスの一つまたはそれ以上を調節するのに有用である。ＡＢＣ１が
ＨＤＬを調節するように機能するという本発見は初めてＡＢＣ１を前記プロセス
に結合させる。

【００９１】 流出経路の主要イニシエーターとしてＡＢＣ１タンパク質を同定することによ
り、流出、ＨＤＬ、トリグリセリド水準、およびＣＡＤの間の関係を直接検討す
ることが可能となってきている。診断が変異同定により行われる場合には大きな
コホートでＡＢＣ１遺伝子のいくつかの変異に対するヘテロ接合体の表現型を我
々は特徴付けた。更にヘテロ接合体の表現型は影響されないファミリーメンバー
の表現型と比較され、少なくとも部分的には他の遺伝子および環境の影響に対し
て結果が制限されえるようにされた。これとは逆に、真正ヘテロ接合体でのこれ
までの研究は小さな数に限定され、しばしば単一ファミリーの接合もあり、その
ため年齢にわたる多重変異での表現型発現を分析する能力が制約されていた。

【００９２】 ＡＢＣ１遺伝子での多重変異に対してヘテロ接合性である７７個体のコホート
が同定され、１１家族での１３ＡＢＣ１変異の特徴づけが可能になった（５ＴＤ
，６ＦＨＡ）。ＡＢＣ１へテロ接合体はＨＤＬコレステロールとａｐｏＡＩが約
５０％の減少を示し、またそれほどではないがａｐｏＡＩＩも著しく減少してい
る。加えてＡＢＣ１へテロ接合体は増加したトリグリセリドを持つが、ＴＤ患者
とは逆にＬＤＬコレステロールには殆んど著しい変化がない。ＨＤＬ，ａｐｏＡ
Ｉ、およびトリグリセリドでの変化は遺伝子用量依存性であり、これはそれらの
ものがＡＢＣ１機能と直接関連することを示唆している。更にヘテロ接合体は影
響を受けていない個体と比べると進行性ＣＡＤと共に平均発症年齢で３倍以上の
増加リスクを持つ。更に流出でもっともきびしい欠損を持つヘテロ接合体はＣＡ
Ｄの頻度と発症度がより高かった。興味深いことに、ヘテロ接合体で観察される
表現型の発症度は変異依存性のように見えたが変異の部位と表現型の間には何ら
明白な関係はみられなかった。ミスセンス突然変異の保因者よりも切形またはヌ
ル対立遺伝子を生じるきびしい変異の保因者がより低いＨＤＬに向う傾向がみら
れた。一つの注目すべき例外は、影響を受ける家族メンバーでのＨＤＬコレステ
ロールと流出が著しく減少するもっともきびしい表現型を持つＭ１０９１Ｔミス
センス変異であり、この変異が優性ネガティブ（変異体）のように行動し野生型
対立遺伝子の機能を下方調節することを示唆している。も一つの興味深い発見は
タンパク質のまさにＣ末端領域での変異の小さなクラスターであり、これはこの
領域がＡＢＣ１機能にとって重要であることを示している。

【００９３】 ＡＢＣ１へテロ接合体でのきびしいＨＤＬ欠損は残存コレステロール流出がＨ
ＤＬコレステロール水準の主要な決定因子であることを示唆している。ここで我
々はコレステロール流出とＨＤＬコレステロール水準の間の比較流出での各８％
の増加がＨＤＬコレステロール水準での０．１ｍｍｏｌ／Ｌの増加と関連してい
ることが予測される。例えば４０歳の男性でＨＤＬコレステロール３０％の増加
を実行するためには、ＡＢＣ１仲介コレステロール流出で５０％の増加が必要と
されるであろう。これらの数字は、他の遺伝因子および環境因子が制御されてい
ない一般集団で観察されるものを直接外挿するものではないが、それにも拘らず
これらのデータは、ＡＢＣ１機能での相対的に小さな変化が血漿ＨＤＬコレステ
ロール水準に著しい影響を与えることを示唆している。更にここで提示されるデ
ータは、ＡＢＣ１機能での変化に起因する流出の変化が血漿ＨＤＬコレステロー
ル水準だけでなくトリグリセリド水準とＣＡＤ罹患性に直接影響を与え、かくし
て逆コレステロール輸送仮説の実証とＨＤＬコレステロールを上昇させトリグリ
セリド水準を低下しまたアテローム発生を防御する治療標的としてのＡＢＣ１の
実証を提供する。

【００９４】 ＡＢＣ１ヘテロ接合体の表現型は更に年齢調節される。対照コホートのメンバ
ーで２０歳の人から、非常に少ないけれども、ヘテロ接合体には明らかに存在し
ない加齢と共にＨＤＬが決定的に増加する。この発見についての一つの説明は、
通常年齢と関連してＡＢＣ１機能の増加があり、これはヘテロ接合体では見られ
ないものであるが多分残存機能実行対立遺伝子が細胞間コレステロールの増加に
二義的に最大に上向き調節されているためであろう。ヘテロ接合体でのＡＢＣ１
機能の年齢関連増加の欠除は老齢者グループでのヘテロ接合体と対照個体の間の
ＨＤＬ水準の差を誇張するためであろう。ＡＢＣ輸送体の発現で年齢関連調節増
加に関しいくつかの証拠が存在する（グプタ、薬剤エージング、７巻：１９−２
０ページ、１９９５年）。更にＡＢＣ１機能での潜在的年齢調節増加の証拠は、
優れたコレステロール受容体であるＨＤＬのプレβ亜分画で見出されるａｐｏＡ
Ｉの割合が年齢と共に減少し、年齢と共に成熟α移動ＨＤＬの形成の増加を示唆
するという観察から得られる。

【００９５】 退化成長評価ステティン研究において、Ｒ２１９Ｋ ＡＢＣ１変異の保因者が
この変異なしで個体化する著しく低いトリグリセリド水準を持つことが発見され
た。この結果は野生型ＡＢＣ１でＡｒｇ２１９近くで結合するか、もしくはＲ２
１９Ｋ ＡＢＣ１バリアントでＬｙｓ２１９により供給される機能を擬態する化
合物はトリグリセリド水準を低下させ、従ってＣＡＤのリスクを減少させる。加
えてＶ３９９Ａ ＡＢＣ１バリアントの保因者はこのバリアントを持たない個体
よりもより高いＨＤＬ水準とより少ない冠状動脈症の事象を持っていた。かくし
て野生型ＡＢＣ１でのＶａ１３９９近くで結合し、またはＶ３３９Ａ ＡＢＣ１
バリアントでＡ１ａ３９９で供給される機能を擬態する化合物は、コレステロー
ル水準を増加しＣＡＤのリスクを減少させる。個体内でのＲ２１９ＫまたはＶ３
９９Ａ ＡＢＣ１バリアントの存在または不在を決定することは、これらの被験
者のための治療法（ＨＤＬ低下、トリグリセリド上昇、または抗ＣＡＤなどの治
療法）を選択するのに有用である。

【００９６】 以下の実施例は本発明を説明するものである。それは本発明を何らかの方法で
限定することを意味するものではない。

【００９７】

【発明を実施するための最良の形態】

ＴＤ家族の分析 コレステロール流出の研究 発端者の両者は、ＴＤ患者でこれまでに示されたものと類似のコレステロール
流出の著しい欠損を持っていた。ＴＤ−１はオランダ人の家系であり、一方ＴＤ
−２はイギリス人の家系である。

【００９８】 物理的地図の連鎖分析と立証 多重ＤＮＡ標識はＴＤへの連鎖が記載された９ｑ３１の領域で遺伝子型にされ
た（ラスト他、Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ．２０巻、９６−９８ページ（１９９８年）
。２点連鎖分析は１０ｃＭまでの間隔ですべての標識に対する連鎖の重要な証拠
でＤ９Ｓ１８３２で６．４９のＬＯＤ得点で最大のピークを与えた。もっとも近
接した標識Ｄ９Ｓ１６９０での組換えはＴＤ−１家族のＩＩ−０９で見られ、疾
病遺伝子に対するセントロメア（動原体）境界を提供した。これらデータの多重
点連鎖分析は疾病形質遺伝子座の位置決めの精度を高めなかった。

【００９９】 この領域で約１０ｃＭに拡がる物理的地図はＹＡＣコンティーグの発現で確立
された。加えて、この特殊な領域で拡がる２２個の他の多型性多対立遺伝子標識
はコンティーグに地図化され、これらのサブセットは更なる分析のためにハプロ
タイプ（アロタイプ）の構築に使用された。

【０１００】 オランダ家系の家族は何らの血族関係も示さなかったが、ＴＤ−２の発端者は
、近親血族結婚の子孫であった。我々は従ってこの発端者が突然変異のホモ接合
体であり、一方オランダ家族の発端者は複雑なヘテロ接合体であるらしいと仮定
した。オランダ発端者は完全に異なったハプロタイプを持つ突然変異を示し、こ
の仮説を支持した。

【０１０１】 ＴＤ−２発端者はＤ９Ｓ１２７に遠位で、試験されたすべての標識にホモ接合
性であったが、Ｄ９Ｓ１２７とそれにセントロメアであるＤＮＡ標識でヘテロ接
合性であった。これはＴＤに対する遺伝子がＤ９Ｓ１２７にテロメア性であるゲ
ノム領域に位置を占めたようであり、またホモ接合性を示す標識で取り込まれた
ことを示唆していた。

【０１０２】 突然変異の検出 ＴＤを持つ患者における細胞内コレステロール輸送の欠陥に基づいて、我々は
このプロセスで役割を果すことに関連するこの領域での遺伝子のＥＳＴデータベ
ースを調査した。

【０１０３】 ＡＢＣ１輸送体遺伝子はこれまで９ｑ３１に位置付けられたが、その正確な物
理的位置は決定されなかった（ルチアーニ他 ジェノミクス、２１：１５０−１
５９、１９９４）。ＡＢＣ１遺伝子はアミの酸、ペプチド、ビタミン、ステロイ
ドホルモンを含む異なった基質の膜輸送を伴う高度保存タンパク質の上科を表す
ＡＴＰ結合カセット輸送体のメンバーである（ルチアーニ他、ジェノミクス、２
１巻：１５０−１５９ページ，１９９４年。ディーン他、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．
Ｇｅｎ．Ｄｅｖ．５巻：７７９−７８５ページ、１９９５年）。この遺伝子の３
’ＵＴＲに対するプライマーは、それがＴＤに対する強力な候補であるためにそ
れと適合するＤ９Ｓ３０６（８８７−Ｂ２と９３０−Ｄ３）に拡がるＹＡＣに位
置付けられた。我々は標識Ｄ９Ｓ３０６の周りに約８００キロベースに拡がるＢ
ＡＣの大型ゲノム配列化を開始した。（リサーチ・ジェネティクスＲＤＣＩ−１
１ ＢＡＣｓ：４１８，３１Ｊ２０，４７Ｏ１９，および１７９Ｇ２１，これら
は合衆国，３５８０１ アラバマ，ハンツビル，メモリアルパークウェイ ２１
３０にあるリサーチ・ジェネティクスから公式に利用できる）ＢＡＣｓ ４Ｉ８
，３１５２０，４７Ｏ１９，および１７９Ｇ２１はそれぞれ前に記載したＢＡＣ
ｓ ２６９，２７４，２７９および２９１と同一である（Ｕ．Ｓ．Ｓ．Ｎ．０９
／５２６，１９３；Ｕ．Ｓ．Ｓ．Ｎ．６０／１２４，７０２；Ｕ．Ｓ．Ｓ．Ｎ．
６０／１３８，０４８；Ｕ．Ｓ．Ｓ．Ｎ．６０／１３９，６００；Ｕ．Ｓ．Ｓ．
Ｎ．６０／１５１，９７７；ブルックス−ウイルソン他．，Ｎａｔ．Ｇｅｎｅｔ
．２２巻：３３６−３４５ページ，１９９９年）。ＡＢＣ１遺伝子は４９個のエ
キソンと少なくとも７５キロベースのゲノム配列を含むことが明らかにされた。
コレステロール輸送体としてのこの科の遺伝子の潜在機能および線維芽細胞での
その発現及びＴＤに横たわる最小ゲノムセグメントの局在化を考慮して、我々は
ＡＢＣ１を候補として正式に認定した。

【０１０４】 患者と対照の全繊維芽細胞はノーザンブロット分析とＲＴ−ＰＣＲと配列分析
で使用された。ＴＤ−１のＲＴ−ＰＣＲと配列分析はＴＤ−１発端者でのヘテロ
接合体ＴからＣへの置換を明らかにし、それはマウスとヒトの間の保存残基でア
ルギニンのシステインへの置換を生じるであろう。ＡＢＣ１遺伝子のエキソン３
１の配列化により確認されたこの突然変異はこの科の一側面での表現型で完全な
分離を示した。この置換はＨｇａＩ部位を創り、増幅ゲノムＤＮＡのＲＦＬＰ分
析と変異の確認を可能にした。エキソン３１での点変異はオランダ家系の影響を
受けないヒトからの２００個の正常染色体および西ヨーロッパ家系の２５０個の
染色体で見られず、それが多型性であることは疑わしいことを示している。遺伝
子のエキソン２乃至５０を包含するｃＤＮＡを用いたこの患者からの繊維芽細胞
ＲＮＡのノーザンブロット分析は、正常サイズで約８キロベースの転写物を、ま
た対照ＲＮＡあるいはＨＤＬ欠損の他の患者からのＲＮＡでは見えない切形変異
体転写物を明らかにした。更にｃＤＮＡの離散領域を含むクローンを用いるノー
ザンブロット分析は、変異体転写物がエキソン２乃至５０、２乃至４２、２乃至
２３を含むｃＤＮＡでは検出され、エキソン２４乃至３０に拡がるプローブでは
ずっと不鮮明であり、またエキソン３１乃至４３を含むプローブ、あるいはエキ
ソン３１乃至５０に拡がるプローブでは見られなかった。これは対照ＲＮＡ、Ｈ
ＤＬ欠損の他の患者および他のＴＤ発端者からのＲＮＡの多数のフィルターでは
繰返され、ＴＤ−１でのみ切形転写物が観察された。コーディング領域の配列分
析はこの発見を説明できる配列での変更を明らかにしなかった。更にサザンブロ
ットによるＤＮＡ分析は必要な再調整を何も示さなかった。ゲノムＤＮＡでのエ
キソン配列化の完成はこの変異がイントロン２４の位置（＋１）でのＧからＣへ
のトランスバージョン変異であることを示し、スプライスドナー部位に影響を与
え異常スプライシングを生じさせることを示した。

【０１０５】 ＴＤ−２の発端者からのＡＢＣ１遺伝子をコード化する繊維芽細胞ＲＮＡのＲ
Ｔ−ＰＣＲ分析はエキソン１４のヌクレオチド１８６４でＡからＧへのホモ接合
性ヌクレオチドの変化を明らかにし、マウスとシーエレガンス（土壌線虫）相同
体に保存される残基で最初に予想されたＡＢＣ１の膜貫通ドメインに丁度近位で
起こる残基５９７でアルギニンのグルタミンへの置換を生起した。この変異はエ
キソン１４内の第２ＡｃｉＩ部位を創造する。この科での変異の分離分析は予想
されたように変異と低ＨＤＬ表現型の間の完全な一致を明らかにした。ＴＤ−２
の発端者はこの血族家族に変異を起こす我々の期待する疾病と一致してこの変異
にホモ接合性である。

【０１０６】 ＦＨＡ家族の分析 ＦＨＡの遺伝子を含む最小ゲノム領域の連鎖結合と改良 フランス系カナダ人の４系統からの個別家族のマイクロサテライト類別化から
のデータが分析された。０．０の組換え分画での９．６７の最高ＬＯＤ得点が染
色体９ｑ３１のＤ９Ｓ２７７で検出された。その後２２個の標識がこれらの家族
でこの遺伝子座の周り１０ｃｍに広がる領域で類別された。これら標識の頻度は
フランス系血統の無関係で影響を受けない被験者のサンプルから評価された。

【０１０７】 ＴＤとＦＨＡはかくしてこれまでの所別の臨床および生化学特性を持つ別個の
ものであると見倣されてきた。たとえこれらの疾患に対する遺伝子が同じ領域に
位置するとしても、ＦＨＡとＴＤが同一遺伝子での変異によるもの、あるいは代
替的に、類似の領域の遺伝子によるものであるかどうかは不確定であった。ＦＨ
Ａの遺伝子を含む領域の改良はハプロタイプ共有の検証と重要な組換え事象の同
定により可能であった。７個の別個の減数***組換え事象がこれらの家族に見ら
れ、これらは潜在的な疾病遺伝子を含む最小ゲノム領域が標識Ｄ９Ｓ１６９０と
Ｄ９Ｓ１８６６により拡がる約４．４ｃＭゲノムＤＮＡの領域であることを明示
した。この領域は標識Ｄ９Ｓ２７７とＤ９Ｓ３０６を持つ最大ＬＯＤ得点を明ら
かにしＤ９Ｓ１６９０にセントロメアでありＤ９Ｓ１８６６にテロメアである領
域を基本的に排除する２点の連鎖分析の結果と一致する。第８減数***組換え事
象は更にＦＨＡ領域をＤ９Ｓ２７７に遠位に改良した。

【０１０８】 ここに記載されたように、ＡＢＣ１遺伝子はこの間隔内に位置を占めた。オー
バーラップ遺伝子データはＦＨＡが事実上ＴＤに対し対立遺伝子にあることを強
く示した。ＦＨＡとＴＤからの一連の遺伝子データの利用はＴＤ−２のホモ接合
性データに基づきＤ９Ｓ１８６６（減数***組換え）でのテロメア境界とＤ９Ｓ
１２７でのセントロメア標識を提供した。これはＤ９Ｓ１２７とＤ９Ｓ１８６６
の間で遺伝子座を約１Ｍｂに改良した。ＡＢＣ１遺伝子はこの最小領域内に位置
を占めた。

【０１０９】 ＦＨＡでの突然変異検出 ＡＢＣ１遺伝子の変異評価がＦＨＡ１で行われた。ｍＲＮＡのオーバーラップ
セグメントを拡げたプライマーを用いて我々はＲＴ−ＰＣＲ分析を行いこれらの
断片に変異分析を与えた。３個のヌクレオチドの欠失がＦＨＡ−１ ＩＩＩ．０
１のＲＴ−ＰＣＲ配列で明らかであり、ヌクレオチド２１５１−２１５３の欠損
とアミノ酸６９３の位置でロイシン（ΔＬ６９３）の欠失を生成する。このロイ
シンはマウスとシーエレガンスで保存される。変化はＲＴ−ＰＣＲ産物と、同じ
くエキソン１５特異的増幅からのゲノム配列で検出された。この変異はＥａｒＩ
制限部位の欠損を来たす。家族からのゲノムＤＮＡの分析は変異がＨＤＬ欠失の
表現型と完全に分離したことを示した。ＥａｒＩ部位の欠損はこの変異でヘテロ
接合性の人に残るより大きな断片を生成する。この変異はＡＢＣ１の第１推定貫
通膜領域に位置を占め、フランス系カナダ人家系の人の１３０染色体にも、また
他のヨーロッパ血統の人の４００染色体以上にも見られなかった。

【０１１０】 変異は更にケベックからの系統ＦＨＡ−３の患者ゲノムＤＮＡで発見された。
エキソン４２内のヌクレオチド５７５２−５７５７の６塩基対欠失はアミノ酸１
８９３（Ｇｌｕ）と１８９４（Ａｓｐ）の欠失をもたらす。この欠失は欠失点か
ら出発する二重に重畳された配列として検出され、双方向での配列読み取りで検
出された。検出は３％アガロースまたは１０％ポリアクリルアミドゲルで検出で
き、ＦＨＡ−３の疾病と共に分離する。それはフランス系カナダ人の１２８染色
体または他の４３４対照染色体では見られなかった。アミノ酸１８９３と１８９
４はヒト、マウス、シーエレガンスの間で保存され、それが機能的に重要である
ことを意味している。

【０１１１】 追加の突然変異はケベックからの系統ＦＨＡ−２の患者ゲノムＤＮＡで発見さ
れた。位置６５０４でのＣからＴへの移行という変化は配列識別番号１の位置２
１４４でアルギニンをＳＴＯＰコドンへ転換し、ＡＢＣ１タンパク質の最後の１
１８アミノ酸の切形を起こす。この変化は家族ＦＨＡ−２の疾病を分離する。

【０１１２】 ＡＢＣ１転写物水準とコレステロール流出の変化の間の機能関係 ＡＢＣ１転写物を減少させ細胞内コレステロール輸送での転写物の変更の作用
を評価するためにアンチセンスアプローチが行われた。ＡＢＣ１の５’末端への
アンチセンスプライマーの使用は正常ＲＮＡ水準の約５０％の減少を来たした。
これはＴＤとＦＨＡを持つ患者のヘテロ接合体で見られるものに類似した対立遺
伝子での突然変異による機能の低下に部位的に擬態するものと期待される。重要
なことは、ＡＢＣ１遺伝子へのｍＲＮＡの減少が細胞コレステロール流出の著し
い減少を起こし、更にコレステロール逆輸送でのこのタンパク質の役割を確立し
、検出された変異が機能突然変異の損失を構成するものになるだろうという証拠
も提供したことであった。更にこれらのデータはタンパク質の最初の６０アミノ
酸の機能的重要性を支持する。アンチセンスオリゴヌクレオチドＤＡＮ−６は新
規な出発コドン５′をＡＪ０１２３７６．１に示されたものに向け、このアンチ
センスオリゴヌクレオチドは効果的に流出を抑制する。

【０１１３】 ＡＢＣ１ ５′調節配列と５′ＵＴＲでの多型 ヒトＡＢＣ１の５′調節配列（配列識別番号１）でいくつかの多型が同定され
た（図４）。それらの位置の故で、ＡＢＣ１遺伝子発現が異なるプロモーター多
型を持つヒトの間で異なり、またこれらの個体が更に同一薬剤処理に対して別個
に応答するであろうということの蓋然性がある。かくして、これらの新規に同定
された多型を使用して、どの多型が患者に存在するのかに依存して薬剤処置を仕
立てることができる。特定のＡＢＣ１多型の存在または不在は更に進行中のＣＶ
Ｄに対する個体の素因を決定するのに使用することができよう。

【０１１４】 本発明の方法は下記の材料と方法を用いて実行される。

【０１１５】 生化学研究 血漿脂質、リポタンパク質コレステロール、ＡｐｏＡＩ、およびトリグリセリ
ド分析のため、また−８０℃での貯蔵のために血液からＥＤＴＡ含有管に抽出さ
れる。白血球はＤＮＡ抽出のために軟膜から分離される。

【０１１６】 リポタンパク質測定は別に記載された新鮮血漿で行われる（ログラー他、Ａｒ
ｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｖａｓｃ．Ｂｉｏｌ．１５巻：６８３−
６９０ページ、１９９５年）。脂質、コレステロールおよびトリグリセリド水準
はデキストランマンガンでの沈殿の前後に（分離用超遠心機で得られた）全血漿
とｄ＜１．００６ｇ／ｍＬの密度での血漿で測定される。アポリポタンパク質測
定はＡｐｏＢとＡｐｏＡＩに対する比濁法で行われる。

【０１１７】 ゲノムクローンアセンブリと９ｑ３１領域の物理的地図構築 ホワイトヘッド・インスティチュート／ＭＩＴセンター・フォー・ゲノム・リ
サーチ地図を参考に使用して、９ｑ３１で対象となる遺伝標識がＹＡＣコンティ
ーグ内で同定された。公共データベースと文献からの約９ｑ３１間隔に位置付け
られた追加標識は次いでＰＣＲとハイブリッド形成分析でＹＡＣクローンに対し
て試験された。ハプロタイプ分析に基づき、Ｄ９Ｓ２２７とＤ９Ｓ３０６の間の
領域は細菌人工染色体（ＢＡＣｓ）を用いる高次転換物理的地図化研究のための
標的とされた。対象となる領域内でのＢＡＣｓはＤＮＡ標識プローブと、ＲＰＣ
Ｉ−１１ヒトＢＡＣライブラリーからのクローンを含む高密度フィルターに対し
ての全ＹＡＣのハイブリッド形成により単離された。

【０１１８】 配列検索とアラインメント ヒトＡＢＣ１ｍＲＮＡ配列はジェンバンク・アクセス番号ＡＪ０１２３７６．
１でアントレ・ヌクレオチド照会を使ってジェンバンクから検索された（バクセ
バニス他、遺伝子とタンパク質の分析のための実務ガイド、Ａ．Ｄ．バクセバニ
ス、Ｂ．Ｆ．Ｆ．ケレット編、９８巻：１２０ページ、１９９８年）。我々が野
生型（正常）として使用したタンパク質配列のバージョンはＣＡＡ１０００５．
１であった。

【０１１９】 我々はこれまで信じられてきた出発メチオニンの枠内で追加の６０個のアミノ
酸を同定した（図９Ａ）。追加アミノ酸の生物情報分析は短い広がりの塩基性ア
ミノ酸残基、次いで疎水性広がり、更にいくつかの極性残基の存在を示す。これ
はリーダー配列、またはも一つのＡＢＣ１タンパク質の膜貫通あるいは膜関連領
域を表す。前記の可能性の中に分化するために、アミノ酸１−６０の領域に向け
られた抗体は細胞膜と関連するアミノ酸１−６０の物理的関係を決定するために
取り上げられ使用される。例えば融合タンパク質の発現および細胞***などの他
の標準方法を使用することもできる。

【０１２０】 使用されたマウスＡＢＣ１配列はアクセス番号Ｘ７５９２６を持つ。このマウ
ス配列はヒトＡＢＣ１でここに記載された追加の６０個のアミノ酸を欠いている
ために十分不完全であるように見える。

【０１２１】 クラスタルＷのバージョン１．７はデフォールトパラメーターでグラフ上で高
めるためにＢＯＸＳＨＡＤＥで多重配列アラインメントのために使用された（ｈ
ｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｓｒｅｃ．ｉｓｂ−ｓｉｂ．ｃｈ：８０８０／ｓｏｆｔ
ｗａｒｅ／ＢＯＸ．ｆｏｒｍ．ｈｔｍｌ）。シーエレガンスＡＢＣ１オルソロー
グはシーエレガンス用の生体フィルターを使うことを除いてデフォールトパラメ
ーターで照会としてＣＡＡ１００５．１（前記参照）を用いるＢＬＡＳＴ（バー
ジョン２．０８）で確認された。選択されたタンパク質配列は３７５の得点と１
０３のＥ値を持つＡＡＣ６９２２３．１であった。

【０１２２】 ゲノムＤＮＡ配列化 ＢＡＣ ＤＮＡはニュークレオ・ボンド・プラスミド・マキシ・キット（カリ
フォルニア、パロアルト、クロンテック）を用いて細菌培養から抽出された。Ｄ
ＮＡ配列化のために、サブライブラリーがまず各ＢＡＣ ＤＮＡｓから構築され
た（ローウェン他、自動ＤＮＡ配列化と分析、Ｍ．Ｄ．アダムス、Ｃ．フィール
ズ、Ｊ．Ｃ．ベンターズ編、１９９４）。要約すると、ＢＡＣ ＤＮＡは単離さ
れ噴霧化で無作為の刈り取られた。刈り取られたＤＮＡは次いでアガロースゲル
電気泳動でサイズ分画され、２キロベース以上の断片は収集され、マングマメ・
ヌクレアーゼで処置され、次いで平滑末端を確保するためＴ４ＤＮＡポリメラー
ゼとクレハウ酵素で処置されＳｍａＩ切断Ｍ１３ｍｐ１９にクローンされた。ラ
ンダムクローンはＡＢＩ３７３または３７７シークエンサーと蛍光標識プライマ
ーで配列された（カリフォルニア、フォスターシティ、アプライド・バイオシス
テムズ）。ＤＮＡＳｔａｒソフトウェアはゲルトレース分析とコンティーグアセ
ンブリのために使用された。すべてのＤＮＡ配列はＢＬＡＳＴｎをリピート・マ
スカー（ユニバーシティ・オブ・ワシントン）を主として使って利用できる公開
データベースに対して検証された。アセンブルされたコンティーグのそれぞれの
配列は図１Ａ−Ｄに示される。

【０１２３】 逆転写（ＲＴ）−ＰＣＲ増幅と配列分析 全ＲＮＡはＴＤとＦＨＡ患者の培養繊維芽細胞から単離され、（ザン他、Ｊ．
Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７巻：１７７６−１７８３ページ、１９９６年に）記載
されたようにスーパースクリプトＩＩ逆転写酵素（メリーランド、ロックビル、
ライフ・テクノロジーズ、インコーポレイテッド）２５０単位を用いてオリゴｄ
（Ｔ）１８を含むＣＤＳプライマーで逆転写された。ｃＤＮＡは公開されたヒト
ＡＢＣ１ ｃＤＮＡ配列（ルチアーニ他、ジェノミクス、２１巻：１５０−１５
９ページ、１９４４年）から誘導されるプライマーを用いてＴａｑＤＮＡポリメ
ラーゼで増幅された。６セットのプライマーに対して各ｃＤＮＡを増幅するよう
に設計され６個のＤＮＡ断片を検出し、それは全長ヒトＡＢＣ１ ｃＤＮＡの１
３５乃至７０１４塩基対にわたり連続してオーバーラップされた。ヌクレオチド
は公開ヒトｃＤＮＡ配列（ＡＪ０１２３７６．１）のオーダーに基づき以下の番
号を付される。プライマー対（１）：１３５−１５８（ｆ）および１１８３−１
１９９（ｒ）；（２）：１０８０−１１０７（ｆ）および２２４７−２２７３（
ｒ）；（３）：２１７１−２１９７（ｆ）および３３７６−３４０４（ｒ）；（
４）：３３２３−３３５３（ｆ）および４５８７−４６１７（ｒ）；（５）４５
１５−４５３９（ｆ）および５７８２−５８１１（ｒ）；（６）５７４２−５７
６９（ｆ）および６９８５−７０１４（ｒ）。ＲＴ−ＰＣＲ産物はキアージェン
回転カラムで精製された。配列化は製造業者のプロトコルに従ってＴａｑジデオ
キシ・ターミネーター・サイクル配列化とビッグダイキットを用いてモデル３７
３Ａ自動ＤＮＡシークエンサー（アプライド・バイオシステム）で実行された。

【０１２４】 ノーザンブロット分析 ノーザン伝達とハイブリッド形成は基本的に記載された通りに行われた（ザン
他、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７巻：１７７６−１７８３ページ、１９９６年
）。要約すると、全繊維芽細胞ＲＮＡサンプル２０μｇがホルムアルデヒド７％
の存在下で変性アガロース（１．２％、重量／容積）ゲル内電気泳動で溶解され
、ナイロン膜に移された。フィルターは指示通り３２Ｐ−標識ヒトＡＢＣ１ ｃ
ＤＮＡでプローブされた。予備ハイブリッド形成とハイブリッド形成が製造業者
のプロトコルに従って６８℃でエクスプレスヒブ（ＥｘｐｒｅｓｓＨｙｂ）溶液
（クロンテク）で行われた。

【０１２５】 細胞培養 皮膚繊維芽細胞培養が文献記載の通りＦＨＤ患者と健康な対照被験者の前腕の
３．０ｍｍパンチ生検から確立された（マーシル他、Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ
．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｖａｓｃ．Ｂｉｏｌ．１９：１５９−１６９、１９９９）。

【０１２６】 細胞コレステロール標識と装荷 細胞コレステロール流出実験のプロトコルに別途詳細に記載された（マーシル
他、Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｖａｓｃ．Ｂｉｏｌ．１９：１
５９−１６９、１９９９）。細胞は成長の間に３Ｈ−コレステロール標識され、
遊離コレステロールは成長停止の際に装荷された。

【０１２７】 コレステロール流出研究 流出研究は精製ＡｐｏＡＩ（１０μｇタンパク質／ｍＬ培地）の存在下で０乃
至２４時間行われた。流出は細胞が特定の時間期間保温された後の培地内の遊離
コレストロールのパーセントで決定された。全ての実験は１個の対照被験物から
の細胞と試験される研究被験物からの細胞の存在下で３組ずつで行われた。

【０１２８】 ＡＢＣ１遺伝子のゲノム構造の決定 大抵のスプライス部位配列はＡＢＣ１遺伝子に広がるＢＡＣクローンから生成
されたゲノム配列から決定された。１６０キロベース以上のゲノム配列が生成さ
れた。ゲノム配列はイントロン／エキソンの境界を確認するためにｃＤＮＡ配列
でアラインされた。ある場合には、隣接エキソンの間の長距離ＰＣＲがｃＤＮＡ
配列に基づき設計された増幅プライマーを用いてイントロン／エキソン境界を増
幅するために使用された。ヒトＡＢＣ１のゲノム配列は図１Ａ−Ｄに示される。

【０１２９】 ＡＢＣ１ヘテロ接合体の分析 被験者の同定 ＡＢＣ１遺伝子の変異にヘテロ接合溝の被験者は、前に記載のＴＤおよびＦＨ
Ａの７家族からの個体であった（ブルックス・ウイルソン他、前掲：マーシル他
、前掲）。加えて新しいダンジーマ病３家族（ＴＤ３−５）と新しいＦＨＡ１血
族ＦＨＡ６からの接合体個体が含まれていた。第２の変異はＴＤ血族の１人（Ｔ
Ｄ４）では同定されなかった。しかしＡＢＣ１に直に隣接する標識は低ＨＤＬ表
現型も同時分離する。影響を受けるハプロタイプを持つ個体はヘテロ接合体と考
えられた。各家族からの発端者のゲノム配列により同定された変異の存在または
不在は続いてヘテロ接合性および影響されない個体をそれぞれ決定するために、
制限断片長多型（ＲＦＬＰ）により確認された。

【０１３０】 対照コホートは影響されない１１家族のメンバーより成るものであった。これ
らの個体はヘテロ接合性の遺伝的背景を分ち、環境因子は家族のメンバーの間で
類似していると期待される。かくしてＨＤＬに影響する数多くの追加の因子は制
御され、ヘテロ接合体と影響されない個体との間の表現型はＡＢＣ１遺伝子活性
の変化に大きく帰属する。

【０１３１】 すべての被験者は本研究に参加することにインフォームドコンセントを与え、
遺伝分析プロトコルはユニバーシティ・オブ・ブリティッシュ・コロンビア、ア
カデミック・メディカル・センター・イン・アムステルダム、およびクリニカル
・リサーチ・インスティテュート・オブ・モントリオール（ＩＲＣＭ）の各倫理
委員会で承認された。

【０１３２】 脂質とコレステロール流出測定 ＡＢＣＡ１ヘテロ接合体の脂質水準はバンクーバー、モントリオールおよびア
ムステルダムの標準化脂質診療所で前の記載の通り測定された（ブルックス−ウ
イルソン他、前掲；マーシル他、前掲）。ＬＤＬはフリーデバルド他の方法（Ｃ
ｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．１８巻：４９９−５０２ページ，１９７２年）で計算され、
ｍｍｏｌ／Ｌでの脂質測定を説明するように修飾された。

【０１３３】 線維芽細胞培養物からの細胞コレステロール流出は前記の通り測定された（ブ
ルックス・ウイルソン他、前掲；マーシル他、前掲）。各実験は三つ組のウエル
で行われ平均された。測定値は同じ実験内に含まれる少なくとも２個の健康対照
の平均に対する各被験者での流出パーセントで報告された。別個実験は少なくと
も２回繰返され、すべての実験にわたる平均相対流出量が使用された。

【０１３４】 統計値 ヘテロ接合体の分析で、グループ内の平均基線デモグラフィクスと脂質水準の
差が学生のｔ−試験と比較された。男性と女性の間の頻度の比較または各種百分
位数範囲を通じての分布の比較がカイ二乗検定を用いて行われた。影響を受けた
状態とどちらかの性またはＢＭＩの間の潜在相互作用の分析は一般の線型モデル
を使用して行われた。統計分析はプリズム（グラフパッド・ソフトウェア、バー
ジョン３．００）またはシスタット（ＳＰＳＳインコーポレイテッド、バージョ
ン８．０）を用いて行われた。すべての値は平均±標準偏差で報告された。

【０１３５】 ＡＢＣ１ヘテロ接合体でのＨＤＬコレステロール減少とＣＡＤリスクの増加 １１家族からの７７個体よりなる分析されたコホートはＡＢＣ１遺伝子の変異
でヘテロ接合性であった。ヘテロ接合体の平均脂質水準とすべての影響されない
家族メンバー（ｎ＝１５６）の平均水準との比較が図６で示される。ヘテロ接合
体は影響されない家族メンバーに比較すると、ＨＤＬとａｐｏＡ−Ｉで約４０−
４５％減少し、またａｐｏＡ−ＩＩでは軽い（約１０％）の減少を示した。平均
トリグリセリド値（ＴＧ）は影響されない家族メンバーと比べて約４０％増加し
、ＴＤ患者では更に増加した。ＴＤ患者とは異なり、ヘテロ接合体での全コレス
テロールまたはＬＤＬコレステロールのいずれも著しい減少はなく、またａｐｏ
Ｂ水準はヘテロ接合体で対照ともあまり差はなかった。変異のそれぞれの保因者
での平均ＨＤＬ水準は影響を受けない家族メンバーと比べて同様に約４０−５０
％減少した（図９）。

【０１３６】 ヘテロ接合体表現型は、ＬＲＣ基準に基づく年齢および性特異的百分位数の一
定の範囲内に入る割合を計算することで検討された（ハイス他、前掲；ハイス他
、血液循環、６１巻：３０２−３１５ページ、１９８０年）。ヘテロ接合体表現
型で多くの変化が明らかであった。図５Ａで示されるように、著しく高い割合の
ヘテロ接合体が影響されない対照に比べて年齢および性に対して第５百分位数以
下のＨＤＬコレステロールを持っていたが（６５％対５％、Ｐ＜０．０００１）
、ヘテロ接合体の５％は年齢と性で第２０百分位数以上のＨＤＬを持ち、年齢と
性でＨＤＬは第３１百分位数まで達した。かくしてある個体では、低いＨＤＬ表
現型は明らかに重症ではなくなる。トリグリセリド（ＴＧ）水準の広い分布も明
らかであった（図５Ｂ）。ヘテロ接合体個体の著しく低い割合が年齢と性が影響
されない家族メンバーに比べて第２０百分位数以下のＴＧを持ち（ｐ＝０．０３
）、また著しく大きな割合が第８０百分位数以上のＴＧであった（ｐ＝０．００
５）が、この二つの分布の間でかなりの重複が見られた。

【０１３７】 も一つの重要な疑問は、ＡＢＣ１変異にヘテロ接合性である個体が冠状動脈病
（ＣＡＤ）を進展させるリスクを増加するかどうかということである。我々の大
型コホートで、症候性血管病は影響されない家族メンバーでの成人ヘテロ接合体
の３倍以上の頻度であった（図６）。血管病の形態は一般に影響されない家族メ
ンバーよりもヘテロ接合体でより厳しかった（図７）。ヘテロ接合体は（５件、
１件は致死性の）心筋梗塞を持ち多数の介入を要する厳しい血管病を有していた
が影響されない個体では、ＣＡＤは２例がアンギナでまたも一人８０歳での一過
性虚血発作で明白であった。更に平均発症年齢は影響されない対照に比べてヘテ
ロ接合体では平均１０年若かった（図６）。

【０１３８】 ＡＢＣ１ヘテロ接合体でのコレステロール流出、ＨＤＬ水準、およびＣＡＤ 我々はこれまでにＡＢＣ１変異にヘテロ接合体の個体がコレステロール流出を
減少させたことを示した。本研究では、コレステロール流出水準、ＨＤＬコレス
テロール水準、およびＣＡＤの間の関係が更に評価された。ＡＢＣ１変異にヘテ
ロ接合性の個体の相対的コレステロール流出が、その変異の保因者で観察された
平均ＨＤＬコレステロール水準に対してプロットされ、その家族内の影響されな
いメンバーの割合で表現された（図８）。各変異に関連したコレステロール流出
水準は家族の対応するＨＤＬコレステロール水準を強く予測し、ＨＤＬコレステ
ロールの変化の８２％を占めた（ｒ²＝０．８２、ｐ＝０．００５）更に一つの
大きな家族（ＦＨＡ２）で、流出が３個の独立したヘテロ接合体で測定されたが
、ここの血漿ＨＤＬ水準がここの流出測定値に対してプロットされた時に、ｒ²
値０．８１が得られた。ヘテロ接合体保因者の流出水準（ｐ＝０．０２）でヘテ
ロ接合体の平均ＨＤＬ水準の退化方程式を使用してＡＢＣ１流出活性とＨＤＬ水
準の間の期待変化の関係が推定された。この分析に基づき、我々は流出水準で各
８％の変化がＤＨＬコレステロールの０．１ｍｍｏｌ／Ｌの変化と関係するであ
ろうと予測する。

【０１３９】 相対コレステロール流出水準は更に家族内のＣＡＤと関連する。未成熟ＣＡＤ
のもっとも明白な証拠を持つ家族は最小コレステロール流出の個体を有していた
（図８と図９のボールド部分）。これらのデータは、残存ＡＢＣ１機能の水準が
ＨＤＬコレステロール水準とＣＡＤへの感受性両方について重要な決定因子であ
ることを示している。

【０１４０】 ＡＢＣ１変異にヘテロ接合性個体での表現型の発病度に対する変異の型と位
置の比較 我々はこれまでＦＨＡへテロ接合体の表現型表示が我々のヘテロ接合体のそれ
よりもずっと厳しいものであることを記載した。更に我々はＴＤ家族よりもＦＨ
Ａ家族タンパク質のより多い欠失と未成熟切形があることも述べた。かくして残
存ＡＢＣ１活性が表現型の発病度の重要な予言者であるため、ＡＢＣ１遺伝子で
の変異の表現型発現についての変異の性質の影響が検討された。非機能性対立遺
伝子で生じると期待される厳しい変異はタンパク質の未成熟切形（フレームシフ
ト変異およびノンセンス変異）を起こし、またはタンパク質の天然スプライシン
グを破壊した欠失または変異と定義された。一方ミスセンス変異は単一アミノ酸
のみの変化で起こりまた未だに部分的活性を留めるタンパク質産物で起こる。

【０１４１】 脂質水準は重症およびミスセンス変異のヘテロ接合体保因者で比較された。ミ
スセンス変異に比べて重症変異の保因者のＨＤＬ水準が一方で減少する傾向があ
り、この傾向は有意には達しなかった（図１０）。個々のミスセンスと重症変異
でのＨＤＬ水準の範囲が観察された（図９）。Ｍ１０９１Ｔミスセンス変異が流
出の作用とＨＤＬ水準に関してもっとも重症の変異であり、タンパク質の初期切
形（例えばＲ９０９Ｘ）よりも重症の表現型を有していた。

【０１４２】 ＡＢＣ１タンパク質内の変異部位（例えばＮ末端またはＣ末端）は表現型に影
響を与えなかった（図１１）。ＣＡＤの存在はタンパク質のいくつかのドメイン
にある変異の保因者に見られる。両対立遺伝子に変異を持つ患者は巨脾腫単独ま
たはＣＡＤ（ＴＤ１）と関連する巨脾腫の徴候を表す。かくして表現型は変異特
異的であり、多分恐らくはＡＢＣ１の密接な相同体であるＡＢＣＲでの変異で示
されてきたものに類似して野生型対立遺伝子の残存ＡＢＣ１機能と変異対立遺伝
子の残存機能に依存しているように見える（ファン・ドリール他、眼科遺伝子学
、１９巻：１１７−１２２ページ、１９９８年）。

【０１４３】 ＡＢＣ１遺伝子と年齢での変異の表現型の間の関係 家族で明らかになった表現型発現に影響する一つの因子は年齢であった。我々
はまず２個のこれまでに報告した家族での個体のＨＤＬ水準の年齢の影響を特徴
付けた（マーシル他、前掲）（図１２Ａと１２Ｂ）。ＦＨＡ３家族では、ＩＩお
よびＩＩＩ世代のヘテロ接合性個体すべてが年齢と性で第５百分位数以下のＨＤ
Ｌコレステロール水準を持っていた一方、ＩＶ世代はずっと変動的な表現型でＨ
ＤＬコレステロール水準は第２０百分位数までにわたっていた。ＦＨＡ１家族で
は同じパターンが観察された。

【０１４４】 ＨＤＬ百分位数範囲を横断して３０歳以下の個体の分布がＨＤＬ百分位数を横
断する３０−７０歳の対応する個体の分布と比較された（図１３）。３０−７０
歳の個体の著しく大きな割合が第５百分位数以下のＨＤＬコレステロールを持つ
３０歳以下の個体の割合と比べて第５百分位数以下のＨＤＬコレステロールを有
していた。平均ＨＤＬは３０歳以下のものと比べて３０歳以上のヘテロ接合体で
減少する。これとは逆に影響されない対照では何らの著しい変化も見られない（
図１４）。類似の結果が別個に男性と女性で見られまた女性の閉経期前および閉
経後年齢の両方でみられる（図１５Ａと１５Ｂ）。トリグリセリド水準はヘテロ
接合体と無影響家族メンバー両方で年齢と共に増加する。

【０１４５】 ＡＢＣ１変異の表現型発現で性とＢＭＩの影響の評価 女性は男性に比べて高いＨＤＬと低いトリグリセリドを持つものとして知られ
ている。かくしてＡＢＣ１ヘテロ接合体の表現型は表現型が性に影響されるかど
うかを決定するために分析された。ＨＤＬコレステロールはヘテロ接合体男性と
女性両方で無影響対照よりも著しく低い（それぞれ０．７０±０．２４対１．２
１＋０．２９、Ｐ＜０．０００１；０．７６±０．２５対１．４１±０．３８、
Ｐ＜０．０００１）。これは減少ａｐｏＡＩ（男性および女性それぞれで０．９
２±０．２７対１．３６±０．２２、Ｐ＜０．０００１；０．９２±０．３６対
１．４９±０．２８、Ｐ＜０．０００１）無影響家族メンバーに比べて男性およ
び女性両方でａｐｏＡＩＩのゆるやかな減少への傾向（それぞれ０．３５±０．
０８対０．４０±０．０９、ｐ＝０．０８；０．３５±０．０９対０．３９±０
．０７、ｐ＝０．０６）に反映された。トリグリセリドは無影響家族メンバーに
比べて男性（２．０７±２．１６対１．３０±１．３０、ｐ＝０．０２）および
女性（１．３４±０．８６対１．０９±０．６３、ｐ＝０．０８）へテロ接合体
でいずれも高かった。男性および女性の間のＨＤＬの差は対照（ｐ＝０．１１）
に比べてヘテロ接合体で減少し、一方トリグリセリドでの差は対照（ｐ＝０．１
３）に比べて増加した。

【０１４６】 ＨＤＬとトリグリセリドに影響するものとして知られるも一つの因子はＢＭＩ
である。全コホートはＢＭＩの３グループ（ｔｅｒｔｉｌｅ）に分割され、ＢＭ
Ｉ ｔｅｒｔｉｌｅによるヘテロ接合体と無影響個体の平均ＨＤＬとトリグリセ
リド水準は図１６Ａと１６Ｂに示される。ＢＭＩはヘテロ接合体と対照（Ｐ＜０
．０００１）の両方でＨＤＬとトリグリセリド両方に著しい影響を与えた。ＢＭ
ＩのＨＤＬ−Ｃとトリグリセリド水準に対する影響はヘテロ接合体の下部ＢＭＩ
（ｍｉｄ−ｔｅｒｔｉｌｅ）で明らかなように、対照よりもＡＢＣ１のヘテロ接
合体でより厳しかった。提起されたように、ＢＭＩは対照に比べてヘテロ接合体
でＨＤＬとトリグリセリド水準での変化により明らかに関連していた。しかしど
ちらの影響も統計的有意には到達しなかった。ＨＤＬはすべてのＢＭＩ ｔｅｒ
ｅｔｉｌｅで対照に比べてヘテロ接合体で減少した（各ｔｅｒｔｉｌｅでＰ＜０
．０００１）。トリグリセリド水準が無影響家族メンバーに比べてヘテロ接合体
のＢＭＩ ｔｅｒｔｉｌｅで増加した一方、この差異は中間中間ＢＭＩ ｔｅｒ
ｔｉｌｅで有意であったに過ぎなかった（ｐ＝０．００９）。

【０１４７】 ＲＥＧＲＥＳＳ研究からのＡＢＣ１ ＳＮＰの分析 ＳＮＰｓの同定 ＡＢＣ１遺伝子のＳＮＰｓは低ＨＤＬ−Ｃを持つ１４の無関係な発端者の完全
ゲノム配列化の間に同定された（ブルックス・ウイルソン他、前掲１９９９年；
マーシル他、前掲、１９９９年）。低ＨＤＬ表現型と同時分離せず、また無影響
個体で観察された低ＨＤＬ家族内で同定した変異体はＳＮＰｓであると推定され
た。（前に記載の）全ＡＢＣ１領域に広がるＢＡＣクローンの配列化に基づいて
、ヘテロ接合体として同定されまたは配列化個体で発見されたものとは異なる部
位も同じく多型と同定された。配列データはすべての変異体コーディング部位で
少なくとも１個の対照個体から利用できた。ＳＮＰｓは位置１と記載されたヌク
レオチドから番号を付され（パリンジャー他、バイオケミカル・アンド・バイオ
フィジカル・リサーチ・コミュニケーションズ、２７１巻：４５１−４５５ペー
ジ、２０００年）、第１エキソン番号１と名付けられた。すべての変異体の標準
用語法として、（ＲＥＧＲＥＳＳ集団でより頻繁に現れる）「野生型」対立遺伝
子はＡと指名され、一方（頻度の少ない）変異体対立遺伝子はＢと指名される。

【０１４８】 被験者 これらＳＮＰｓの脂質水準とＣＡＤへの影響を評価するために我々はこれまで
に詳細に記載（ジューケマ他、血液循環、９１巻：２５２８−２５４０ページ、
１９９５年）に記載された退化成長評価スタチン研究（ＲＥＧＲＥＳＳ）に協力
する証明された冠状動脈症を患う８０４人のコホートを研究した。要約すると、
研究協力者は冠動脈造影で評価された５０％以上の狭窄の少なくとも１個の冠状
動脈、４乃至８ｍｍｏｌ／Ｌ（１５５乃至３１０ｍ８／ｄＬ）の血漿コレステロ
ール濃度、および４ｍｍｏｌ／Ｌ（３５０ｍｇ／ｄＬ）以下の血漿トリグリセリ
ド濃度を持つことが要求された。ｃＳＮＰｓの表現型作用は基線脂質パラメータ
ーとの関係で試験された。

【０１４９】 患者は２年間プラバスタチン（プラバコール、ブリストル−マイヤーズ・スク
イブ、プリンストン、ニュージャージー）またはプラセボでの処置を無作為に課
せられた。コンピュータ支援計量冠動脈造影が前に記載（ジューケマ他、前掲（
１９９５年））の通り研究の開始と終結時に行われた。血管に沿いまた最小閉塞
径（ＭＯＤ）における平均非閉塞径の尺度であり、最小非閉塞セグメントの尺度
である平均セグメント径（ＭＳＤ）における基線値と変化がＣＡＤの一次手段と
して使用された。ＭＳＤはアテローム硬化のびまん性変化を反映し、ＭＯＤは病
巣アテローム硬化の変化を反映する。大きなＭＳＤおよびＭＯＤ測定値は血管の
閉塞が少ないことを反映し、またこれらのパラメーターの減少は冠状動脈アテロ
ーム硬化の進行を反映する。加えて心筋梗塞、予定外の冠動脈造影またはバイパ
ス手術（ＰＴＣＡ、ＣＡＢＧ）、あるいは心筋発作／一過性脳虚血発作などの死
に導びく冠動脈事象が検討された。

【０１５０】 血液は基線で各患者から収集され、ＤＮＡが標準手続きに基づき抽出された。
続くいくつかの遺伝研究がこのコホートで行われてきた（ライマー他、ネイチャ
ー・ジェネティクス、１０巻：２８−３４ページ、１９９５年；ジューケマ他、
血液循環、９巻、１９１３−１９１８ページ、１９９６年；クリューイトマンズ
他、血液循環、９６巻：２５７３−２５７７ページ、１９９７年；キャステライ
ン他、クリニカル・ジェネティクス、５３巻：２７−３３ページ、１９９８年；
クイバンホーフェン他、ニューイングランド・オブ・ジャーナル・オブ・メディ
スン、３３８巻：８６−９３ページ、１９９８年）。ＲＥＧＲＥＳＳとそのＤＮ
Ａ副次研究は協力センターのすべての７制度検討会とその医療民族委員会により
承認された。

【０１５１】 低ＨＤＬと早発性冠状動脈病を持つ追加のオランダ人被験者が前記手段から得
られた（クイバンホーフェン他、アテローム硬化、血栓症および血管生物学、１
７巻：５６０−５６８ページ、１９９７年；バーホフ他、アテローム硬化、１４
１巻：１６１−１６６ページ、１９９８年；フランコ他、ブリティッシュ・ジャ
ーナル・オブ・ヘマトロジー、１０２巻：１１７２−１１７５ページ、１９９８
年；ビッテコーク他、アテローム硬化、１４６巻、２７１−２７９ページ、１９
９９年；フランコ他、ブリティッシュ・ジャーナル・オブ・ヘマトロジー、１０
４巻：５０−５４ページ、１９９９年）。オランダ人対照被験者はＣＡＤへの各
種のリスク因子の作用を評価するよう設計された大型集団ベイスト研究から取ら
れた（サイデル他、インターナショナル・ジャーナル・オブ・オビーシティ、１
９巻：９２４−９２７ページ、１９９５年；クイバンホーフェン他、アテローム
硬化、血栓症および血管生物学、１７巻：５９５−５９９ページ１９９７年）。
フランス系カナダ人被験者は個体の無作為サンプルであった。南アフリカ系黒人
と広東人コホートはこれまでに記載されている（エーレンボリ他、アテローム硬
化、血栓症および血管生物学、１７巻：２６７２−２６７８ページ、１９９７年
）。すべての被験者はインフォームドコンセントを受けた。

【０１５２】 ｃＳＮＰスクリーニング 各変異体に対して、その切断パターンが変異体で変更される制限酵素がＲＦＬ
Ｐ検定の発度を確認された。もし適切な酵素が発見されなければ、ミスマッチ戦
略が採用され、これにより単一ヌクレオチドミスマッチはＰＣＲプライマーに取
り込まれ、野生型または変異対立遺伝子のどちらかと組合せて制限部位を創生す
る。すべての検定の特異的条件は図１７に記載される。すべてのＰＣＲ反応は１
×ＰＣＲ緩衝液と１．５μＭ、ＭｇＣｌ₂（ライフ・テクノロジーズ）の存在下
で５μＬ容量で実行された。すべての検定に対するサーモサイクリングパラメー
タは下記の通りであった：９５℃で３分；９５℃で１０秒の変性３５サイクル、
図１７で特定された温度で３０秒のアニーリング、および７２℃で３０秒の延伸
、最後に１０分７２℃での延伸であった。すべての消化（１５〜２０μＬ，ＰＣ
Ｒ産物）は製造業者による指定の温度で２時間製造業者の緩衝液（ニューイング
ランド．バイオラブ）で実行された。一例としてＲ２１９Ｋの消化結果は図１８
で示される。Ａ対立遺伝子を持つ１７７塩基対断片はＥｃｏＮＩでは切断されず
、一方Ｂ対立遺伝子は消化されて１０７の断片と７０塩基対を産生する。ヘテロ
接合性個体はかくしてすべて３個のバンド（１７７，１０７，および７０塩基対
）を示す。

【０１５３】 ＴａｑＭａｎ（ｒ）検定での遺伝子型形成 いくつかの変異体の質量スクリーニングを容易にするため、ＴａｑＭａｎベイ
ストポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）検定（ホランド他、全米科学アカデミー紀
要、８８巻、１６号、７２７６−７２８０ページ、１９９１年；リー他、核酸研
究、２１巻（１６号）：３７６１−３７６６ページ、１９９３年）がＡＢＣ１遺
伝子で多型の検出のために開発された。このワンチューブ検定では、２個の異な
る蛍光原性ハイブリッド形質プローブ（各対立遺伝子に対して１個）がその５′
末端では異なる蛍光レポーター染料（ＦＡＭまたはＴＥＴ）で、同じくその３′
末端では普通のクエンチャー染料（ＴＡＭＲＡ）で標識される。これらのプロー
ブはＰＣＲ増幅の際にＴａｑ酵素の５′ヌクレアーゼ活性で切断される。この切
断はレポーターをクエンチャー染料から分離し、レポーター蛍光の増加を生成す
る。２個の異なるレポーター染料の使用により、対立遺伝子特異的プローブの切
断は単一ＰＣＲで検出できる。２個のＴａｑＭａｎプローブの間の測定蛍光強度
の差は正確な対立遺伝子呼び出しを可能にする。

【０１５４】 ２個のＴａｑＭａｎプローブ（それぞれ２５ｎＭ）と４．５ｍＭ、ＭｇＣｌ₂
の存在下でプライマー（３００ｎＭ）のフランキングセットでのＰＣＲ増幅は下
記のサーモサイクリングプロトコルを用いて行われた：９６℃１０分の最初の変
性、続いて９６℃３０秒、６３℃で１分および７２℃で１５秒の３９サイクル、
続いて７２℃で１０分の最終延長がそれであった。各平板は対照（ＤＮＡ鋳型無
し）同じくそれぞれ公知の遺伝子型の標準を含んでいた。蛍光計量と遺伝子型決
定はパーキン．エルマー・ＬＳ５０ＢまたはＡＢＩプリズム７７００シーケンス
デテクターで行われた。各反応からの蛍光は鋳型無し対照からの信号に標準化さ
れた。

【０１５５】 細胞コレステロール流出研究 線維芽細胞培養からの細胞コレステロール流出は「ＡＢＣ１ヘテロ接合体の分
析」のセクションで前記の通り測定された。

【０１５６】 統計 ＲＥＧＲＥＳＳ集団内で、３個の遺伝子型（ＡＡ，ＡＢ，ＢＢ）の基線特性が
変動のワンウェイ分析と適当であればカイニ乗試験を用いて比較された。ＢＢ遺
伝子型が稀である場合にはＡＡグループはＡＡ＋ＢＢの組合せグループと比較さ
れた。これらの遺伝子型グループでの累積冠動脈症事象出現率はログランク試験
を用いて比較された。年齢とＨＤＬ水準の間の関係は線型回帰モデルを利用して
調査され、この回帰直線の傾斜に関して遺伝子型の間の差は共分散分析を用いて
試験された。この退化分析を加えて、Ｒ２１９Ｋ遺伝子型が年齢明示サブグルー
プ間で比較された。プラセボおよびプラバスチタンへの無作為抽出はカイニ乗分
析で評価され、Ｒ１５８７Ｋ変異体を除きすべての変異体へのすべての遺伝子型
グループで同等であった。この変異体では、保因者の低い比率のものが、プラバ
スチン処置のために無作為抽出された。加えてＭＯＤ，ＭＳＤ，および冠動脈事
象の有病率（試験の間および続く無作為抽出の間に測定された３個の変数）での
変化が別個にプラセボとプラバスタチンサブグループのために分析された。変異
体のそれぞれの類似、遺伝子型作用が処置サブグループ（すなわちプラバスタチ
ンとプラセボの対照グループ）で観察された。

【０１５７】 すべての脂質水準はｍｍｏｌ／Ｌで報告される。すべて値は平均値±標準偏差
で報告される。

【０１５８】 Ｒ２１９Ｋ多型と減少トリグリセリド水準およびＣＡＤリスクの減少との関
係 普通のＲ２１９多型はＡＢＣ１タンパク質のアミノ酸２１９でリシンのアルギ
ニンとの置換で生じる。変異体、すなわち「Ｂ」対立遺伝子の対立遺伝子頻度は
４６．３％で図１９に示された。

【０１５９】 この多型とＣＡＤの間の関係が検討された。Ｒ２１９ＫのＢ対立遺伝子は減少
した基線ＣＡＤと関係していた。ＭＳＤとＭＯＤの両方はＡＡからＡＢまたＢＢ
への対立遺伝子用量依存様式で著しく増加した（図２０）。

【０１６０】 血管造影データは臨床冠動脈事象割合での差で平行していた。より稀なＢ対立
遺伝子（ＢＢ）にヘテロ接合型の個体より小さな割合は試行の開始に先立ち心筋
梗塞（ＭＩ）になっていた。Ｂ対立遺伝子の保因者は研究機関を通じて事象なし
の有病率の増加に向かう強い傾向を示した（図２１、ｐ＝０．０７）。

【０１６１】 Ｒ２１９Ｋ多型と減少したＣＡＤの関係は、ＣＡＤに選択されたＲＥＧＲＥＳ
Ｓコホートでのこの対立遺伝子の減少頻度により更に指示された。事実この変異
体で観察された遺伝子型頻度はハーディ−ヴァインベルク平衡とは一致しない（
ｐ＝０．００４）。期待されたものよりもＢＢ個体はより少なく、ＡＢ個体はよ
り多く存在する（４２４ＡＡ、３３０ＡＢ、および３６ＢＢの個体が期待された
４３９ＡＡ、３００ＡＢ、および５１ＢＢ個体に比べて観察された）。ＲＥＧＲ
ＥＳＳコホートはＣＡＤを持つ男性で選択されたので、ハーディ−ヴァインベル
ク平衡の欠除はＢＢ個体に対し望ましい選択であったこと、このグループで観察
されたＣＡＤの減少と一致したことを示唆している。

【０１６２】 グループ全体として遺伝子型の間に平均ＨＤＬ−Ｃ水準での明らかな差異は存
在しなかった（図２２）、しかしトリグリセリドはＢ対立遺伝子の保因者で著し
く低かった。これはＡＢＣ１機能が更に血漿トリグリセリド水準に直接影響を与
え、またこの変異体がＡＢＣ１機能の獲得と関係するであろうことを示唆してい
る。これらの発見は更に保因者で観察された減少ＣＡＤと一致し、トリグリセリ
ド水準のＡＢＣ１調節がも一つの機構であり、これによりＡＢＣ１活性がＣＡＤ
のリスクに影響を与えることを示唆している。

【０１６３】 更にこの変異体のＨＤＬ−Ｃに対する作用の明らかな欠除を探るために、各種
の年齢でＲ２１９Ｋ遺伝子型とＨＤＬの間の関係が検討された。より若い個体で
は、Ｂ対立遺伝子の保因者は非保因者に比べてＨＤＬ−Ｃの増加が見られた（図
２３）。更にＨＤＬ−ＣがＡＡ個体で年齢と共に増加したが、ヘテロ接合型保因
者はずっとゆるやかな増加を示し、ＨＤＬコレステロールはヘテロ接合型保因者
では年齢と共に減少した（図２４）。ＡＡ個体においては、ＨＤＬコレステロー
ルは年齢と確に相関した（Ｐ＜０．００１）。それとは逆に、この関係はこの変
異体のヘテロ接合性個体では明らかではなく、ＨＤＬコレステロールはＢＢ歩も
接合体では年齢との相関はなかった。もっともＡＢ個体またはＢＢ個体のいずれ
かの相関も統計的にゼロから異なることはなかった（図２５Ａ）。ＡＡ個体のＨ
ＤＬ−Ｃの年齢に関連する増加はＢ対立遺伝子の保因者では維持されない（Ｐ値
比較傾斜＝０．０４）。かくしてＲ２１９Ｋの保因者での減少ＣＡＤは更に彼等
の寿命の大半で保因者が非保因者に比べて増加ＨＤＬ−Ｃを持ち続けたという事
実に関連するであろう。

【０１６４】 各種のＲ２１９Ｋ遺伝子型での年齢に伴うＨＤＬ−Ｃの変化は年齢に伴うコレ
ステロール流出の変化の類似の傾向を反映する（図２５Ｂ）。我々はこの変異体
を我々が流出を測定しＡＢＣ１変異を持たないずべての個体に遺伝子型分別した
。ＡＡ個体（ｎ＝３０）では、コレステロール流出は年齢と共に増加し、一方Ａ
ＢとＢＢ個体（ｎ＝２４）では、流出は年齢と共に減少する（Ｐ値比較傾斜＝０
．１５）。かくして異なるＲ２１９Ｋ遺伝子で見られるＨＤＬの特異的な年齢関
連変化はＡＢＣ１活性での類似機能変化と一致する。

【０１６５】 図２３からトリグリセリド水準はすべてのＲ２１９Ｋ遺伝子型で見られる発見
である一般に年齢と共に減少する。トリグリセリド水準の減少パーセントは非保
因者（１７．３％、ｐ＝０．０７）に比べて保因者ではほぼ半分（９．３％）で
あった。遺伝子型での差は更にＭＳＤとＭＯＤでも観察される。非保因者におい
て、ＭＳＤとＭＯＤ測定値は年齢で著しく減少し、より加齢の個体でのアテロー
ム硬化の増加を反映する（図２３と２６）。これとは逆に、Ｒ２１９Ｋ変異体の
保因者では、これらの測定値は加齢での著しい変化はなかった。かくして血管病
は非保因者と比べるとＲ２１９Ｋ変異体の保因者で年齢と共にずっとゆっくり進
行する。

【０１６６】 アジアとアフリカ起源の集団はコーカシア集団に比べて増加ＨＤＬ−Ｃ、減少
トリグリセリド水準、ＣＡＤ減少リスクを持つことが示された（タイロラー他、
血液循環、６２巻（補遺ＩＶ）：ＩＶ−９９−ＩＶ−１０７、１９８０年；田尾
他、インターナショナル・ジャーナル・オブ・エピデミオロジー、２１巻（５号
）：８９３−９０３ページ、１９９２年；ブラウン他、アテローム硬化と血栓症
、１３巻：１１３９−１１５９ページ、１９９３年；アデデージ、熱帯と地理学
上の医薬、４６巻（１号）：２３−２６ページ、１９９４年；サイモン他．，ア
メリカン・ジャーナル・オブ・パブリク・ヘルス、８５巻（１２号）：１６９８
−１７０２ページ、１９９５年；モリソン他、代謝、４７巻（５号）：５１４−
５２１ページ、１９９８年）。この発見はこの変異体の表現型作用に類似する。
かくしてＳＮＰ頻度は異なる人種グループでしばしば異なるために、これら２種
の集団グループ内での変異体が試験された（図２７）。この変異体は広東人また
は南アフリカ系黒人の子孫のいずれかの個体でより一般に見られ、ここでそれは
優性対立遺伝子である。これはこの変異体の増加頻度が、コーカシア集団に比べ
てこれらの集団で観察される増加ＨＤＬ、減少トリグリセリド水準および減少Ｃ
ＡＤを部分的に説明することを示唆している。

【０１６７】 血漿脂質水準とＣＡＤのリスクに対する他のｃＳＮＰｓの作用 対応する非保因者に比べて、Ｔ７７４Ｐ（ｎ＝４）、Ｋ７７６Ｎ（ｎ＝３）ま
たはＥ１１７２Ｄ変異体（ｎ＝３４）では脂質水準またはＣＡＤでの著しい差は
観察されなかった。Ｖ８２５Ｉ（ｎ＝１０３ ＡＢ、４ＢＢ）の保因者は脂質水
準または基線ＭＳＤあるいはＭＯＤで明らかな差を示さなかった。しかしＶ８２
５Ｉ変異体の保因者は試行の間に事象を著しく増加させた（４４％対３３％．ｐ
＝０．００１）。

【０１６８】 Ｓ１７３１Ｃ変異体の保因者はＲＥＧＲＥＳＳ集団では見出されなかったが、
この変異体はＦＨＡ家族の一つ（ＦＨＡ２）で検出された。ＡＢＣ１変異にヘテ
ロ接合体の個体では、この変異体は著しく減少したＨＤＬ−Ｃを関連していた（
０．１６±０．０４，ｎ＝２対０．６４±０．１４，ｎ＝１０；保因者対非保因
者でｐ＝０．０００９）。影響されない家族メンバーではしかし、Ｓ１７３１Ｃ
の保因者が非保因者に比べて低いＨＤＬ−Ｃを有していた（１．０３±０．２２
対１．０９±０．２３）が、これは統計的には有意でない。この変異体が同じく
見られる（図１９）対照個体は低い血漿ＨＤＬ−Ｃ（０．７２ｍｍｏｌ／Ｌ）を
持っていた。

【０１６９】 Ｒ２１９Ｋの保因者に類似して、Ｖ７７１Ｍ変異体の保因者は非保因者に比べ
てもＨＤＬ−Ｃで差は見せなかった。しかしＨＤＬ−Ｃ水準で年齢と遺伝子型の
間の限界的に著しい相互作用が認められた（ｐ＝０．０５）。Ｖ７７１Ｍ変異体
の２個の保因者を除くすべてがＲ２１９Ｋ変異体の保因者である。ＨＤＬ−Ｃに
対する年齢と遺伝子型の間の相互作用はＲ２１９Ｋ遺伝子型（ｐ＝０．１１）に
調節された時に僅かに有意であり、かくしてこの変異体はＲ２１９Ｋに帰属でき
るものとは独立した年齢作用を持つことになる。ＣＡＤが少なくなる傾向（ＭＯ
Ｄの増加）は非保因者に比べてこの変異体の保因者で観察された（１．８９±０
．３８対１．７６±０．３５、ｐ＝０．１３）。

【０１７０】 Ｉ８８３Ｍ ｃＳＮＰでは、ホモ接合性ＢＢ個体（ｎ＝１４）はＭＯＤでの進
行を増加した（０．５３±０．７９対０．１１±０．２５の平均値変化、Ｐ＜０
．００１）。ＢＢ個体はＡＡ個体のそれに比べて倍の事象率を有していた（２１
．４％対１０．６％）が、これは統計的には有意ではなかった（ｐ＝０．１９）
。Ｉ８８３Ｍ遺伝子型の間の平均脂質水準で差は観察されなかった。更にハーデ
ィ−ヴァインベルク平衡で期待されたもの以上にＢＢ個体が著しく存在した（期
待された８ＢＢ、９８ＡＢ、および３１４ＡＡ個体と比較して１４ＢＢ、８６Ａ
Ｂ、および３２０ＡＡ個体が観察された）。このコホートはＣＡＤに関連した個
体として選択されたので、これはＢＢ遺伝子型のものを優先的に含むことを示唆
している。この変異体のＣＡＤとの関連は更に未成熟ＣＡＤ集団のこの変異体の
著しく増加した頻度により支援される（この変異体の保因者のＣＡＤのオッズ比
＝０．４３、９５％信頼区間０．２２−０．８５、ｐ＝０．０１）（図１９）。
これらの発見は、このｃＳＮＰのホモ接合体保因者がＨＤＬ−Ｃを増加させるこ
とを示唆するごく最近の報告とは相違する（ワン他、アテローム硬化、血栓症お
よび血管生物学、２０巻：１９８３−１９８９年、２０００年）。

【０１７１】 Ｖ３９９Ａの保因者（ＡＢ，ｎ＝９）はこの部位でＡＡであった個体（ｎ＝４
０）と比べてより高いＨＤＬ−Ｃに向かう傾向にあった（１．０３±０．２８対
０．９２±０．２３、ｐ＝０．１５）。ＡＢグループでは（ＡＡ′ｓの１４％、
ｐ＝ＮＳに比べて）何らの事象も観察されず、保因者はＣＡＤの家族の歴史で半
分の罹患率を有していた（２２．２％対４９．４％、ｐ＝０．１８）。更にこの
データと一致して、保因者は試行期間に基線ＭＯＤを増加し（１．９２±０．３
２対１．７３±０．３５、ｐ＝０．１３）およびＭＳＤでの進行を少なくする（
−０．０５±０．１０対０．０８±０．１９、ｐ＝０．１６）傾向を有していた
。しかしいかんせん保因者数が小さすぎるために、この変異体がＨＤＬ−Ｃを増
加してＣＡＤを減少させるという確固とした結論は引き出すことができない。

【０１７２】 Ｒ１５８７Ｋ変異体の保因者（ＡＢ、ＢＢ）は対立遺伝子用量依存型傾向で非
保因者と比べてＨＤＬ−Ｃを増加した（ＢＢ、ＡＢ、およびＡＡそれぞれに対し
て０．８６±０．１６、０．９１±０．２３および０．９４±０．２３、ｐ＝０
．０３）。年齢に伴う著しい相互作用は認められなかった（ｐ＝０．３２）。更
に共同変異体として年齢、ＢＭＩ、喫煙、およびトリグリセリド水準を含む多数
の退行に基づき、Ｒ１５８７Ｋ遺伝子型はＨＤＬ−Ｃの重要な予言者である。し
かし、試行期間中に非保因者に比べて保因者でＣＡＤまたは事象での著しい差は
見られなかった。

【０１７３】 ＡＢＣ１遺伝子の変異体およびＨＤＬ水準または心臓血管病の相関性研究の要 約 下記の多型がコレステロール調節および心臓血管病の発症素因に対するそれら
の作用について調べられた。これらの多型は、位置１として記載されるヌクレオ
チドからの番号が付けられ（パリンジャ−他、前掲）、第１エキソン番号１と名
付けられる。

【０１７４】 ヌクレオチド１０５１におけるＧのＡへの置換（Ｒ２１９Ｋ）。この変異体の
保因者は、減少したトリグリセリド水準、増加したＨＤＬコレステロール水準（
特に若年個体において）、および減少したＣＡＤを有する。

【０１７５】 ヌクレオチド１５９１におけるＴのＣへの置換（Ｖ３９９Ａ）。この変異体は
、保因者における増大したＨＤＬコレステロールに対する傾向と関連づけられた
。

【０１７６】 ヌクレオチド２７０６におけるＧのＡへの置換（Ｖ７７１Ｍ）。この変異体の
保因者は、減少したＣＡＤを有することが示された。

【０１７７】 ヌクレオチド２７１５におけるＡのＣへの置換（Ｔ７７４Ｐ）。この変異体は
、対照よりも低ＨＤＬコレステロール水準またはＣＡＤを有する個体でより多く
は見られなかった。

【０１７８】 ヌクレオチド２７２３におけるＧのＣへの置換（Ｋ７７６Ｎ）。この変異体は
、オランダ人の類似する背景の対照集団に対して、冠状動脈疾患集団ではより低
い頻度（０．５４％対１．８９％）で見出された。

【０１７９】 ヌクレオチド３９１１におけるＧのＣへの置換（Ｅ１１７２Ｄ）。この変異体
は、ＨＤＬが低い個体において、また初期冠状動脈疾患を有する一部の集団にお
いてより低い頻度で認められる。

【０１８０】 ヌクレオチド５１５５におけるＧのＡへの置換（Ｒ１５８７Ｋ）。この変異体
は、保因者における減少ＨＤＬコレステロール水準と関連づけられる。

【０１８１】 ヌクレオチド５５８７におけるＣのＧへの置換（Ｓ１７３１Ｃ）。この変異体
をそれ以外の対立遺伝子に有する２つのＦＨＡ個体は、この変異体をそれ以外の
対立遺伝子に有しない家族のＦＨＡ個体よりもはるかに低いＨＤＬコレステロー
ル（０．１５５±０．０２５）を有する（０．６４±０．１４、ｐ＝０．０００
９）。この変異体はまた下記においても見出される：ＨＤＬが第８百分位数にあ
るフランス系カナダ人対照の１つの一般的な集団（０．９２）、また低ＨＤＬコ
レステロール水準および冠状動脈疾患について選択された集団に由来する１つの
フランス系カナダ人個体（０．７２）がそれである。

【０１８２】 ヌクレオチド２７２３におけるＡのＧへの置換（Ｉ８８３Ｍ）。この変異体は
、オランダ人を祖先とする初期冠状動脈疾患の個体においてより大きな頻度で認
められた。さらに、この変異体のホモ接合型保因者は、非保因者と比べて著しく
増加したＣＡＤ進行を有する。

【０１８３】 ヌクレオチド２８６８におけるＧのＡへの置換（Ｖ８２５Ｉ）。この変異体の
保因者は、この変異体を有しない個体よりも著しく多いＣＡＤ事象を有していた
。

【０１８４】 ヌクレオチド−１９１におけるＧのＣへの置換。この変異体のホモ接合型保因
者は、冠状動脈事象頻度の３倍の増加（３３．３％対１１．２％、ｐ＝０．００
３）およびＣＡＤの明らかな家族歴のほぼ２倍の頻度（７３．３％対４７．７％
、ｐ＝０．０１）を有する。

【０１８５】 ヌクレオチド−１７におけるＣのＧへの置換。この変異体の保因者は、著しく
減少した冠状動脈事象（１２．３％対１８．２％、ｐ＝０．０４）および著しく
減少した発症率の心筋梗塞（心臓発作、４３．６％対５２．８％、ｐ＝０．０２
）を有する。

【０１８６】 ヌクレオチド６９におけるＣのＴへの置換。この変異体の保因者は、非保因者
に比べて増加したＣＡＤ進行を有する。

【０１８７】 ヌクレオチド１２７におけるＣのＧへの置換。この変異体の保因者は、非保因
者に比べてＣＡＤの減少した進行に向かう傾向を有する。

【０１８８】 イントロン１のヌクレオチド−１１６３におけるＣＣＣＴの挿入。この変異体
の保因者は、ＨＤＬコレステロール水準を減少させる傾向を有する。

【０１８９】 イントロン１のヌクレオチド−１０９５におけるＡのＧへの置換。この変異体
のホモ接合型保因者は、非保因者に比べて減少したＨＤＬコレステロール水準お
よび増加したトリグリセリド水準に向かう傾向を有する。

【０１９０】 イントロン１のヌクレオチド−１０２７におけるＧのＡへの置換。この変異体
の保因者はまた、Ｇ（−７２０）Ａの保因者でもある。従って、その変異に起因
する作用はまた、この変異体の保因者にも起因し得る。

【０１９１】 イントロン１のヌクレオチド−７２０におけるＧのＡへの置換。この変異体の
ホモ接合型保因者は、心筋梗塞の明らかな家族歴の増加した頻度に向かう傾向を
有していた。

【０１９２】 イントロン１のヌクレオチド−４６１におけるＡのＣへの置換。この変異体の
保因者はまた、Ａ（−３６２）Ｇの保因者でもある。従って、その変異に起因す
る作用はまた、この変異体の保因者にも起因し得る。

【０１９３】 イントロン１のヌクレオチド−３６２におけるＡのＧへの置換。この変異体の
保因者は、非保因者に比べて減少したトリグリセリド水準を有する。

【０１９４】 ヌクレオチド３１９におけるＧの挿入。この変異体の保因者は、非保因者と比
べて増加したＣＡＤを有する。

【０１９５】 ヌクレオチド３７８におけるＣのＧへの置換。この変異体の保因者はまた、Ｉ
ｎｓＧ３１９の保因者でもある。従って、その変異体に起因する作用はまた、こ
の変異体の保因者にも起因し得る。

【０１９６】 ＡＢＣ１ゲノム配列におけるＬＸＲＥ結合部位の機能的役割 配列識別番号１のＡＢＣ１ゲノム配列において同定されたＬＸＲコンセンサス
結合部位の３つの部位の機能的役割が、標準的なゲルシフト法実験を使用して確
認された。要約すると、プロモーター領域の−４３８９位および−１６４１位、
エキソン１の＋４、ならびに３′イントロン１の−７６７０および−７１８８に
存在するＬＸＲＥコンセンサス結合部位の配列（図３）を、正の調節としてレー
マン他により記載されるｃｙｐ７ＬＸＲＥ（レーマン他、ジャーナル・オブ・バ
イオロジー・アンド・ケミストリー、２７２巻：３１３７−３１４０ページ、１
９９７年）を使用するゲルシフト法で試験した。

【０１９７】 最初のゲルシフト法では、標識ｃｙｐ７ＬＸＲＥプローブの結合を４００倍過
剰の非標識ｃｙｐ７プローブ、−４３８９プローブ、−１６４１プローブ、＋４
プローブまたは−７６７０プローブによって競合させた。シグナルはすべての場
合において完全に消失した。

【０１９８】 つぎのアッセイのために、−４３８９プローブ、−１６４１プローブ、＋４プ
ローブ、−７６７０プローブおよび−７１８８プローブを標識して、ＬＸＲ−Ｒ
ＸＲ複合体に対する結合を試験した。正の調節のシグナルと類似するシグナルが
ＡＢＣ１のＬＸＲＥプローブのそれぞれについて観察されたが、＋４プローブの
場合、シグナルはそれらよりも僅かに強かった。

【０１９９】 競合アッセイもまた、より少ない量のそれぞれの非標識プローブ、すなわち、
標識されたｃｙｐ７プローブよりも５倍、２５倍および５０倍多い非標識プロー
ブを使用して行った。それぞれのプローブについて、シグナルは用量依存的に低
下した。この低下は、＋４プローブおよび−７６７０プローブでは他よりも著し
かった。さらに、シグナルは、非標識のＤｒ２様プローブとの競合により変化し
なかった。このことは、競合作用が確かに特異的であることを示唆している。

【０２００】 従って、試験された潜在的なＬＸＲＥ結合部位のそれぞれが試験管内ＬＸＲ−
ＲＸＲヘテロ二量体に結合するものと考えられる。エキソン１内の＋４のＬＸＲ
Ｅ結合部位がもっとも大きな親和性を有し、３′イントロン１内の−７６７０の
ＬＸＲＥ結合部位がそのすぐ後に続くようである。

【０２０１】 アゴニストおよびアンタゴニスト 有用な治療化合物には、ＡＢＣ１の発現、活性または安定性を調節する化合物
が含まれる。そのような化合物を単離するために、ＡＢＣ１の発現、生物学的活
性または調節された代謝が、候補化合物をＡＢＣ１発現細胞の培養培地に加えた
後に測定される。あるいは、候補化合物は、動物（例えば、マウス、ブタまたは
ニワトリ）に直接投与され、そしてＡＢＣ１の発現に対するその作用をスクリー
ニングするために使用することができる。

【０２０２】 コレステロールの調節におけるその役割に加えて、ＡＢＣ１はまた、ＡＢＣ１
モジュレーターの開発が有用である他の様々な生物学的プロセスに関与している
。一例において、ＡＢＣ１は、細胞膜を通過して細胞外からインターロイキン−
１β（ＩＬ−１β）を輸送する。ＩＬ−１βは炎症応答の前駆体であり、そのた
め、ＡＢＣ１の発現または生物学的活性の阻害剤またはアンタゴニストは、必ず
しもそれに限定されないが、慢性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス（ＳＬ
Ｅ）、甲状腺機能低下症または甲状腺機能亢進症、炎症性腸疾患および糖尿病を
含む任意の炎症性疾患の処置において有用であり得る。も一つの別の例において
、マクロファージで発現するＡＢＣ１は、死細胞の包み込みおよびクリアランス
に関与していることが示されている。これらのアポトーシス体を取り込むマクロ
ファージの能力は、ＡＢＣ１が抗体仲介により阻止された後で損なわれる。従っ
て、ＡＢＣ１の発現、安定性または生物学的活性を調節する化合物は、これらの
疾患を処置するために有用である。

【０２０３】 ＡＢＣ１の発現は、例えば、ＡＢＣ１の核酸配列（またはそのフラグメント）
をハイブリッド形式プローブとして使用する標準的なノーザンブロット分析によ
って、または抗ＡＢＣ１抗体および標準的な技術を使用するウエスタンブロット
によって測定される。候補分子の存在下でのＡＢＣ１の発現水準は、同じ培養培
地において、または試験動物の平行した群において、しかし候補分子の非存在下
で同じ細胞について測定された水準と比較される。ＡＢＣ１の活性はまた、コレ
ステロール流出アッセイを使用して測定することができる。

【０２０４】 ＡＢＣ１発現の転写調節 ＡＢＣ１のｍＲＮＡは、コレステロール負荷したときに約８倍増大する。この
増大は転写水準で制御されていると考えられる。本明細書に記載されるゲノム配
列を使用して５′調節配列に結合する転写因子を、例えば、ゲルシフト法、ＤＮ
Ａｓｅ保護アッセイ、あるいは試験管内または生体内でのレポーター遺伝子型ア
ッセイを行うことによって同定することができる。同定された転写因子は、それ
自体、薬剤化合物は、ＨＤＬの調節、トリグリセリドの調節、アテローム硬化の
防止、および心臓血管病の処置のために使用することができる。例えば、ＡＢＣ
１を制御する転写因子を阻害する化合物を使用することにより、ＡＢＣ１のアッ
プレギュレーション、従ってＨＤＬコレステロール水準のアップレギュレーショ
ンおよびトリグリセリド水準のダウンレギュレーションがもたらされることが予
想される。別の例では、転写因子の発現または活性を増大させる化合物もまた、
ＡＢＣ１の発現を増加させ、ＨＤＬ水準を増加させ、そしてトリグリセリドのレ
ベルを減少させると考えられる。

【０２０５】 アポリポタンパク質遺伝子あるいは他のコレステロール調節遺伝子または脂質
調節遺伝子の調節において他の遺伝子を調節することが知られている転写因子が
特に関連する。そのような因子には、必ずしもそれに限定されないが、ステロイ
ド応答エレメント結合タンパク質（ＳＲＥＢＰ−１およびＳＲＥＢＰ−２）、な
らびにＰＰＡＲ（ペルオキシソーム増殖応答受容体）、ＲＸＲおよびＬＸＲの転
写因子が含まれる。特定のエレメントに対するいくつかのコンセンサス部位が、
ＡＢＣ１遺伝子の５′側の配列決定された領域に存在し（図３）、従って、ＡＢ
Ｃ１の発現を調節していることが考えられる。例えば、ＬＸＲは、様々なレチノ
イドＸ受容体（ＲＸＲ）とヘテロ二量体を形成し、その後、様々な特異的な応答
エレメント（ＬＸＲＥ）に結合することを含む様々な機構によってＡＢＣ１の転
写を変化させることができる。そのようなＬＸＲの例には、ＬＸＲαおよびＬＸ
Ｒβが含まれる。ＬＸＲによって仲介される転写活性を調節する化合物は、ＡＢ
Ｃ１遺伝子の発現を調節することができると見做され、従ってＨＤＬコレステロ
ール水準およびトリグリセリド水準を調節することに関して有用である。ジャノ
ウスキー他（全米科学アカデミー紀要、９６巻：２６６−２７１ページ、１９９
９年）は、胆汁酸合成における律速酵素であるコレステロール７ａ−ヒドロキシ
ラーゼ（Ｃｙｐ７ａ）のプロモーターを介したＬＸＲ依存的トランス活性化にお
ける天然に存在するオキシステロールの役割を報告した。ジャノウスキーはさら
に、オキシステロールが様々なＬＸＲに直接結合することを明らかにした。ステ
ロール側鎖の位置特異的なモノ酸化が、ＬＸＲの高親和性結合および活性化には
必要である。強化された結合が２４−オキソリガンドの使用によって達成され得
る。コレステロールの側鎖における２つ以上の炭素に存在する酸素は、モノ酸素
化されたアナログと比較して、ＬＸＲの結合および活性化を低下させた。ＬＸＲ
のリガンドは、水素の受容体として機能する１個の立体選択的な酵素をステロー
ル側鎖に必要とすることが見出された。ジメチルアミドの導入は、エステル基ま
たはカルボニル基と比較して、最も大きな結合および活性化を示した。

【０２０６】 ＬＸＲ活性を調節することで知られる化合物は必ずしも限定されないが、２４
−（Ｓ），２５−エポキシコレステロール；２４（Ｓ）−ヒドロキシコレステロ
ール；２２−（Ｒ）−ヒドロキシコレステロール；２４（Ｒ），２５−エポキシ
コレステロール；２２（Ｒ）−ヒドロキシ−２４（Ｓ），２５−エポキシコレス
テロール；２２（Ｓ）−ヒドロキシ−２４（Ｒ），２５−エポキシコレステロー
ル；２４−（Ｓ），２５−イミノコレステロール；メチル−３８−ヒドロキシコ
ロネート；Ｎ，Ｎ−ジメチル−３β−ヒドロキシコロンアミド；２４（Ｒ）−ヒ
ドロキシコレステロール；２２（Ｓ）−ヒドロキシコレステロール；２２（Ｒ）
，２４（Ｓ）−ジヒドロキシコレステロール；２５−ヒドロキシコレステロール
；２２（Ｒ）−ヒドロキシコレステロール；２２（Ｓ）−ヒドロキシコレステロ
ール；２４（Ｓ），２５−ジヒドロキシコレステロール；２４（Ｒ），２５−ジ
ヒドロキシコレステロール；２４，２５−デヒドロコレステロール；２５−エポ
キシ−２２（Ｒ）−ヒドロキシコレステロール；２０（Ｓ）−ヒドロキシコレス
テロール；（２０Ｒ，２２Ｒ）−コレスト−５−ｅｎｅ−３β，２０，２２−ト
リオール；４，４−ジメチル−５−α−コレスタ−８，１４，２４−トリエン−
３−β−オール；７α−ヒドロキシ−２４（Ｓ），２５−エポキシコレステロー
ル；７β−ヒドロキシ−２４（Ｓ），２５−エポキシコレステロール；７−オキ
ソ−２４（Ｓ），２５−エポキシコレステロール；７α−ヒドロキシコレステロ
ール；７−オキソコレステロール；およびデモステロールを含む。

【０２０７】 追加のＬＸＲ調節化合物は、例えば、ジャノウスキー他、ネイチャー、３８３
巻：７２８−７３１ページ、１９９６年；レーマン他、ジャーナル・オブ・バイ
オロジー・アンド・ケミストリー、２７２巻：３１３７−３１４０ページ、１９
９７年；またジャノウスキー他、全米科学アカデミー紀要、９６巻：２９９−２
７１ページ、１９９８年に記載されており、そのそれぞれが引用例としてここに
組込まれている。加えてＬＸＲ調節活性を持つ合成ステロールが従来の技術で公
知であるスクリーニング法を使用して容易に同定できることを当業者は認識する
であろう（例えばジャノウスキー他、全米科学アカデミー紀要、９６巻：２６６
−２７１ページ、１９９８年を参照のこと）。ＲＩＰ１４０タンパク質、ＬＸＲ
αまたはＬＸＲβに特異的な（モノクローナルまたはポリクローナル）抗体など
の非ステロイド系アゴニスト；テトラデシクロキシ−フルナカルボキシル酸（Ｔ
ＯＦＡ）；テトラデシルチオ酢酸；同じく他の脂肪酸（例えばトービン他、Ｍｏ
ｌｅｃ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎ．１４巻：７４１−７５２ページ、２０００年、参照
）なども有用なＬＸＲ調節剤である。

【０２０８】 更にＡＢＣ１遺伝子発現を調節し、それによりＨＤＬ水準、トリグリセリド水
準、アテローム硬化、およびＣＡＤリスクに作用する追加の転写因子は、ＲＥＶ
−ＥＲＢα、ＳＲＥＢＰ−１および２、ＡＤＤ−１、ＥＢＰα、ＣＲＥＢ結合タ
ンパク質、Ｐ３００、ＨＮＦ４、ＲＡＲ、およびＲＯＲαを含む。典型的な結合
部位は図３で示される。これらの因子の追加結合部位は、例えば配列識別番号１
の配列の検討を通じて発見することができる。

【０２０９】 ＲＸＲはＬＸＲを含む多くの核レセプターでヘテロ二量体化し、標的遺伝子を
トランス転写活性化するのを助ける。かくしてＲＸＲ仲介転写活性を調節する化
合物は更にＡＢＣ１発現を調節するであろう。数多くのＲＸＲ調節化合物（レチ
ノイド化合物）が従来の技術で公知であり、例えばヘテロエチレン誘導体・三環
式レチノイド；トリエンレチノイド；ベンゾシクロアルケニルアルキル；ジエン
またはトリエン酸誘導体、三環式芳香族化合物とその誘導体；ビシクリルメチル
アリル酸誘導体；フェニルメチル複素環式化合物；テトラヒドロナフチル化合物
；アリルチオ−テトラヒドロ−ナフタレン誘導体および複素環式類似体；２，４
−ペンタジエン酸誘導体；テトラリンベイスト化合物；ノナテトラエン酸誘導体
；ＳＲ１１２３７；デキサメタゾン；メソプレンのヒドロキシ，エポキシ、およ
びカルボキシ誘導体；二環式ベンジル，ピリジニル，チオフェン，フラニル，お
よびピロール誘導体；ベンゾフランアクリル酸誘導体；アリル置換およびアリル
と（３−オキソ−１−プロペニル）置換ベンゾピラン，ベンゾチオピラン，１，
２−ジヒドロキノリン，および５，６−ジヒドロナフタレン誘導体；ビタミンＤ
３（１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３）および類似体；２４−ヒドロキシラ
ーゼ阻害剤；モノーまたはポリエンカルボン酸誘導体；テトラヒドロキノリン−
２−ワン−６または７−イルおよび関連誘導体；テトラヒドロナフタレン；オキ
シイミノアルカン系酸誘導体；ＬＧ １００２６８；およびＬＧ Ｄ １０６９
を含む。追加の化合物はＢＲＬ４９６５３；トログリタゾン；ピオグリタゾン；
シグリタゾン；ＷＡＹ−１２０；エングリタゾン；ＡＤ５０７５；およびダルグ
リタゾンを含む。

【０２１０】 ＰＰＡＲｓはレチノイドＸレセプター（ＲＸＲｓ）でのヘテロ二量体化とつい
で特異的な増殖応答エレメント（ＰＰＲＥｓ）との結合を含む機構によりＡＢＣ
１の転写を変更する。このようなＰＰＡＲｓの例はＰＰＡＲα、β、γおよびδ
を含む。これらの異なるＰＰＡＲは異なった遺伝子に転写調節作用を持つことが
示された。ＰＰＡＲαは主として肝臓で発現され、ＰＰＡＲγは主とて脂肪細胞
で発現される。ＰＰＡＲαとＰＰＡＲγは冠動脈と頸動脈アテロームプラーク内
で、また内皮細胞、平滑筋、単球および単球誘導マクロファージで見出される。
ＰＰＡＲαの活性化は、リポタンパク質リパーゼ（ＬＰＬ）、アポリポタンパク
質ＣＩＩＩ（アポＩＩＩ）およびアポリポタンパク質ＡＩ（アポＡＩ）とＡＩＩ
（アポＩＩ）などの遺伝子へのＰＰＡＲαの作用を通じて変性リポタンパク質代
謝を生み出す。ＰＰＡＲα活性化はＬＰＬとアポＡ−ＩならびにアポＡ−ＩＩに
過発現を来たし、しかしアポＣＩＩＩの発現を阻害する。ＰＰＡＲα活性化は更
に治療を阻害し、脂質酸化を刺激し、肝臓の取込みと遊離脂肪酸（ＦＦＡｓ）の
エステル化をもたらす。ＰＰＡＲαとＰＰＡＲγの活性はマクロファージ内での
一酸化窒素（ＮＯ）シンターゼを阻害し、ＩＬ−６のインターロイキン−１（Ｉ
Ｌ−１）誘導発現とシクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）およびＮＦ−ＫＢ
の負の転写調節に二次的なトロンビン誘導エンドセリン−１発現およびタンパク
質１信号送付経路の活性化を予防する。ＰＰＡＲαがＮＦ−ＫＢ活性の阻害を通
じで単球誘導マクロファージのアポトーシスを誘導することも示された。

【０２１１】 ＰＰＡＲαの活性化はフィブレート、β−エストラジオール、アラキドン酸誘
導体、ＷＹ−１４、６４３およびＬＴＢ４または８（ｓ）ＨＥＴＥなどの化合物
により達成できる。ＰＰＡＲγの活性化はチオゾリジンジオン抗糖尿病薬、９−
ＨＯＤＥおよび１３−ＨＯＤＥなどの化合物を通じて達成できる。ニコチン酸ま
たはＨＭＧ ＣｏＡレダクターゼ阻害薬などの追加化合物もＰＰＡＲｓの活性を
変更する。

【０２１２】 いずれかのＰＰＡＲｓ（例えばＰＰＡＲαまたはＰＰＡＲγ）の活性を変更す
る化合物はＡＢＣ１発現に作用し、そのためＨＤＬ水準、トリグリセリド水準、
アテローム硬化およびＣＡＤのリスクに作用できる。ＰＰＡＲｓは更に（３チア
脂肪酸などの修飾脂肪酸を含む）脂肪酸、ロイコトリエンＢ４などのロイコトリ
エン、およびＰＰＡＲγの天然活性化合物質／リガンドであるプロスタグランジ
ンＪ２などにより調節される。ＰＰＡＲｓを調節する薬剤は従って（ＨＤＬとト
リグリセリド水準を含む）調節脂質水準および変更されたＣＡＤリスクに重要な
作用を持つ。この作用はＡＢＣ１遺伝子発現の調節を通じて達成することができ
た。薬剤は更に脂肪細胞分化決定因子１（ＡＤＤ−１）およびステロール調節エ
レメント結合タンパク質１および２（ＳＲＥＢＰ−１、ＳＲＥＢＰ−２）などの
他の転写因子を経由してＰＰＡＲｓに間接的作用することにより、ＡＢＣ１遺伝
子発現ならびに従ってＨＤＬおよびトリグリセリド水準に作用する。実施例と組
合せて与えられるＰＰＡＲαとＰＰＡＲγアゴニスト活性を組合せた薬剤、また
は実施例の組合せで与えられたＰＰＡＲαとＰＰＡＲγアゴニストはＨＤＬ水準
を更に高め、またはトリグリセリド水準を減少させるであろう。

【０２１３】 ＰＰＡＲ結合部位（ＰＰＲＥエレメント）はＡＢＣ１遺伝子の５′に見出され
る（図３）。Ｃ−ＡＣＳ、ＨＤ、ＣＹＰ４Ａ６およびＡｐｏＡＩ遺伝子で見出さ
れるＰＰＲＥエレメントと同じように、このＰＰＲＥ部位はＰＰＲＥコンセンサ
ス配列に関連する三量体である。このＰＰＡＲ結合部位での反復の数と配列が一
部類似しているために、とりわけこのエレメントはＡＢＣ１遺伝子の調節に生理
学的関連が非常にあるように見える。

【０２１４】 ＡＢＣ１ポリペプチド：核酸、およびモジュレーターの追加効用 ＡＢＣ１は細胞からの有毒タンパク質またはタンパク質断片（例えばＡＰＰ）
の輸送体として作用する。かくしてＡＢＣ１アゴニスト／上向き調節物質はアル
ツハイマー病、ニーマン−ピック病およびハンティングトン舞踏病を含む他の疾
病領域の処置に有用である。

【０２１５】 ＡＢＣ輸送体は細胞質ゾルからペルオキシソームへの長鎖脂肪酸の取込みを増
加しまた更により長鎖の脂肪酸のβ酸化で役割を果たすことが示された。重要な
ことは、Ｘ−連鎖副腎脳白質ジストロフィー（ＡＬＤ）で脂肪酸代謝はペルオキ
シソームＡＢＣ輸送体での欠陥により異常である。ＡＢＣ輸送体発現または生物
活性を上向き調節するいずれかの薬剤はこのためＡＬＤまたはいずれか他の脂質
疾患の処置に有用となる。

【０２１６】 ＡＢＣ１はマクロファージで発現され、プログラムされた細胞死を受ける細胞
の沈下を必要とする。アポトーシスプロセスそれ自身とその調節は細胞死を適切
に受ける細胞の破損のメカニズムの一つである癌などの疾患に対して重要な意味
を持つ。ＡＢＣ１はアポトーシスを促進し、このようにして癌処置の介入点を表
す。ＡＢＣ１発現または活性を高め、あるいはいずれかの方法によるＡＢＣ１の
上向き調節はアポトーシスを高め、かくしてこの疾病で特徴付けられる異常な細
胞増殖を潜在的に減少させることで癌に対する処置法を構築する。これとは逆に
いずれかの方法によるＡＢＣ１の下向き調節は、アポトーシスを減少させ細胞成
長が制限される条件で細胞増殖の増加を可能にする。このような疾患は必ずしも
それに限定されないが、神経欠損と神経退化、および発育疾患を含む。従ってＡ
ＢＣ１は潜在的に癌の処置、または変形性疾患の処置で使用される化合物の確認
のため方法として使用することができる。

【０２１７】 ＡＢＣ１を阻害することが示された薬剤は、例えば糖尿病薬グリベンクラミド
とグルブリド、フルフェナム酸、ジフェニルアミン−２−カルボン酸、スルホブ
ロモフタレイン、およびＤＩＤＳを含む。

【０２１８】 ＡＢＣ１発現または生物活性を上向き調節する薬剤は必ずしもそれに限定され
ないがプロテインキナーゼＡ、プロテインキナーゼＣ、バナジウム酸塩、オカダ
酸、およびＩＢＭＸ１を含む。

【０２１９】 当業者は他の化合物もＡＢＣ１生物活性を調節することができることを認識す
るであろうし、これ他の化合物はまたこの発明の精神の下にある。

【０２２０】 ＡＢＣ１遺伝子またはタンパク質に基づく薬剤スクリーン ＡＢＣ１タンパク質と遺伝子はその活性を調節しまたコレステロールまたはト
リグリセリド水準を調節する潜在的薬剤になる化合物の識別のためのスクリーニ
ング検定に使用することができる。ＡＢＣ１５′調節配列および他の調節配列（
例えばエキソン１とエキソン２）は、ＡＢＣ１発現を調節し、また例えばＨＤＬ
−Ｃ、ＬＤＬ−Ｃ、およびトリグリセリドを含む脂質水準を調節する潜在的薬剤
になる化合物を同定するためのスクリーニング検定に使用することができる。Ａ
ＢＣ１発現を調節する化合物を同定する薬剤スクリーンはＡＢＣ１と操作可能に
連続されたＡＢＣ１調節領域を採用する。しかし望ましくは、調節領域はレポー
ター遺伝子（例えばＧＦＰ、クロラムフェニコールトランスフェラーゼ、または
ベータガラクトシダーゼをコードする遺伝子）と操作可能に連続される。

【０２２１】 有用なＡＢＣ１タンパク質は組換え形態でのまたは内在的に発現された野生型
および突然変異体ＡＢＣ１タンパク質またはタンパク質断片を含む。ＡＢＣ１発
現産物に作用する化合物を同定する薬剤スクリーンはタンパク質のいずれかの機
能特性を利用する。一つの実施例において、リン酸化機能または他の翻訳後修復
がＡＢＣ１生物活性の尺度としてもモニターされる。ＡＢＣ１はＡＴＰ結合部位
を持ち、かくして検定は全体としてまたは部分的にＡＴＰに結合しまたはアデノ
シントリホスファターゼ（ＡＴＰａｓｅ）活性を提示するＡＢＣ１の能力を全体
としてまたは部分的に試験する。ＡＢＣ１は類似のタンパク質との相似によりチ
ャンネル状構造を形成できるものと見做される。薬剤スクリーニング検定はチャ
ンネルを形成するタンパク質の能力を検定することに、またはコレステロールあ
るいはも一つの分子を輸送する能力に基づき、もしくはチャンネルを形成するた
めにＡＢＣ１と結合されまたは調節される他のタンパク質の能力に基づくことが
できた。選択肢として、リン脂質または脂質輸送は同じくＡＢＣ１生物活性の尺
度として使用することができる。

【０２２２】 コレステロール水準の調節物質としての役割に加えて、ＡＢＣ１は更に陰イオ
ンを輸送するという証拠が存在する。機能検定はこの特性に基づき、また例えば
（必ずしもそれに限定されないが）、そのような検定で特異的なイオン濃度での
変化に対応して色を変える各種の染料の能力がリボソームなどの小胞で行うこと
ができる、あるいは全細胞を使用するように適応させることができるような薬剤
スクリーニング技術を採用することができる。

【０２２３】 薬剤スクリーニング検定は更に他のタンパク質と相互作用するＡＢＣ１または
他のＡＢＣ輸送体の能力に基づくこともできる。このような相互作用タンパク質
は、例えば放射性免疫沈降法、同時免疫沈降法、同時精製法、酵素ツーハイブリ
ッドスクリーニングを含む各種の従来公知の方法で識別することができる。この
ような相互作用は更に必ずしもそれに限定されないが蛍光偏光法またはシンチレ
ーション近接法により検定することができる。薬剤スクリーンはまたタンパク質
のＸ線クリスタログラフィーで推定されたＡＢＣ１タンパク質の機能と、その３
Ｄ構造の機能が公知であるタンパク質のそれとの比較に基づくことができる。そ
のようなクリスタル構造は原核ＡＢ科部材であるＨｉｓＰ、ヒスチジン透過酵素
と決定された。薬剤スクリーンは遺伝子導入マウスまたはノックアウトマウスの
作成、または試験管内哺乳類細胞でのタンパク質またはタンパク質断片の過剰発
現に対して明らかな機能または特性に基づくことができる。その上、酵母菌また
はシーエレガンス内での哺乳類（例えばヒト）ＡＢＣ１の発現は野生型と変異体
バックグラウンドでの候補化合物のスクリーニング、同じくＡＢＣ１依存性表現
型を高めまたは抑制する突然変異のスクリーニングを可能にする。修飾スクリー
ンも遺伝子導入マウスまたはノックアウトマウスで行うことができる。

【０２２４】 更に薬剤スクリーニング検定は遺伝子機能でアンチセンス干渉から推定される
ＡＢＣ１機能に基づくことができる。ＡＢＣ１の細胞内局在化、またはタンパク
質の細胞内局在化での変化で起こる作用は薬剤スクリーニングのための検定とし
て使用することができる。免疫細胞化学法はＡＢＣ１タンパク質の正確な位置を
決定するのに使用されるであろう。

【０２２５】 ヒトおよびネズミＡＢＣ１タンパク質はモノクローナル抗体を含む抗体を高め
る抗原として使用できる。このような抗体は必ずしもそれに限定されないが、薬
剤スクリーニング検定と診断の機能的研究と開発を含む各種の目的に有用である
。ＡＢＣ１の発現または生物活性に関し作用薬（例えば薬剤化合物等）の影響を
モニターすることは基本薬剤スクリーニングだけでなく、臨床試験にも適用でき
る。例えばＡＢＣ１遺伝子発現、タンパク質水準、または生物活性を高めるため
にここで記載されたスクリーニング検定により決定される作用薬の効果は変化し
たＡＢＣ１遺伝子発現、タンパク質水準、または生物活性を示す被験者の臨床試
験でモニターできる。選択肢として、ＡＢＣ１遺伝子発現、タンパク質水準、ま
たは生物活性を調節するスクリーニング検定により決定される作用薬の効果は変
化したＡＢＣ１遺伝子発現、タンパク質水準、または生物活性の減少を示す被験
者の臨床試験でモニターできる。このような臨床試験において、例えば心臓血管
病に関係してきたＡＢＣ１および望ましくは他の遺伝子の発現または活性は特殊
な薬剤の効果を確かめるために使用できる。

【０２２６】 例えば、またそれを限定することなく、（例えばここで記載されたようにスク
リーニング検定で確認された）ＡＢＣ１生物活性を調節する作用薬（例えば化合
物、薬剤または小さい分子）での処置により細胞内で調節されるＡＢＣ１を含む
遺伝子を確認することができる。かくして例えば臨床試験でコレステロール水準
、トリグリセリド水準または心臓血管病に対する作用薬の作用を研究するために
、細胞が単離されＲＮＡが調節され疾患に関連するＡＢＣ１および他の遺伝子の
発現水準が分析された。遺伝子発現の水準はノーザンブロット分析またはＲＴ−
ＰＣＲにより、あるいは選択肢として産生されるタンパク質の量を測定すること
により、従来公知の数多くの技術の一つにより、またはＡＢＣ１あるいは他の遺
伝子の生物活性の水準を測定することにより計量することができる。このように
遺伝子発現は細胞の作用薬に対する生理学的応答を示す標識として役立ち得る。
従ってこの応答機能は作用薬での個体の処置の前、および処置の間の各時点で決
定される。

【０２２７】 望ましい実施例において、本発明は作用薬（たとえばアゴニスト、アンタゴニ
スト、ペプチド擬態薬、タンパク質、ペプチド、核酸、小分子、またはここに記
載されたスクリーニング検定で確認される薬剤候補）を用いて被験者の処置の効
果をモニターする方法を含み、それは以下のステップ、すなわち（ｉ）作用薬の
投与の前に被験者から投与前サンプルを確保し、（ｉｉ）投与前サンプルのＡＢ
Ｃ１タンパク質、ｍＲＮＡ、あるいはゲノムＤＮＡの発現水準を検出し、（ｉｉ
ｉ）被験者から投与後の１個以上のサンプルを獲得し、（ｉｖ）投与後のサンプ
ルのＡＢＣ１タンパク質、ｍＲＮＡ、あるいはゲノムＤＮＡの発現水準または活
性水準を検出し、（ｖ）投与前サンプルのＡＢＣ１タンパク質、ｍＲＮＡ、また
はゲノムＤＮＡの発現または活性水準を投与後サンプルのＡＢＣ１タンパク質、
ｍＲＮＡ、またはゲノムＤＮＡのそれと比較し、また（ｖｉ）従って被験者への
作用薬の投与を変更するステップを含む。例えば、作用薬の増加投与は検出され
たもの以上の高い水準でＡＢＣ１の発現または活性を増加し、すなわち作用薬の
効果を増加するために望ましい。選択肢として、作用薬の減少投与は検出された
もの以下の低い水準でＡＢＣ１の発現または活性を減少させるために望ましい。

【０２２８】 ＡＢＣ１遺伝子またはその断片はタンパク質を試験管内または生体内の適切な
細胞で発現する用具として使用でき（遺伝子治療）、または薬剤スクリーニング
のための試験管内検定に使用される大量のＡＢＣ１タンパク質を産生するのに使
用できる発現ベクターにクローン化することができる。採用される発現システム
はバキュロウイルス、ヘルペスウイルス、アデノウイルス、アデノ関連性ウイル
ス、バクテリアシステムおよびＣＨＯ細胞などの真核システムを含む。裸ＤＮＡ
とＤＮＡリポソーム複合体も使用できる。

【０２２９】 ＡＢＣ１活性の検定は、細胞内相互作用タンパク質との結合、ＡＢＣ１活性を
上向き調節するタンパク質との相互作用、ＨＤＬ粒子または構成物との相互作用
、ＨＤＬまたはその構成物との相互作用を促進する他のタンパク質との相互作用
、およびコレステロール流出の測定を含む。更に検定は蛍光タンパク質バイオセ
ンサーにより高分子、代謝およびイオンの分子力学に基礎をおく。選択肢として
、発現または活性に対する候補調節物質の作用は、ＡＢＣ１特異的抗体を用いる
ウエスタンブロッティングまたは免疫沈降法などのような標準免疫検出法と組合
せた同じ一般的アプローチを使用したＡＢＣ１タンパク質産生の水準で測定され
る。更にまた有用なコレステロール調節、トリグリセリド調節または抗ＣＶＤ治
療調節物質がＡＢＣ１ポリペプチド産生での変化を産生するものとして確認され
る。作用薬も発現水準に何らの作用も与えることなしにＡＢＣ１活性の影響を与
える。

【０２３０】 候補調節物質は精製（または事実上精製）された分子あるいは化合物の混合物
の一成分（例えば細胞から得られた抽出物または上澄み）である。混合化合物検
定において、ＡＢＣ１発現は単一化合物または最小化合物混合物がＡＢＣ１発現
を調節することを示すようになるまで、（例えば標準精製技術、例えばオースベ
ル他、ＨＰＬＣまたはＦＰＬＣにより産生された）候補化合物プールの次第に小
さくなるサブセットに対して試験される。

【０２３１】 細胞ＡＢＣ１発現または活性の水準を調節するのに有効なアゴニスト、アンタ
ゴニスト、または擬態薬は動物モデル（例えばマウス、ブタ、ラビットまたはニ
ワトリ）で有用であることが発見された。例えば化合物はマウスまたはニワトリ
の低アルファリポタンパク質症の低ＨＤＬ水準を改良し、あるいは動物モデルの
トリグリセリド水準を低下させる。

【０２３２】 ＡＢＣ１発現または活性の増加を促進する化合物は本発明でとりわけ有用であ
ると見做される。このような分子は、例えば天然細胞ＡＢＣ１の水準または活性
を増加し、これにより動物（例えばヒト）の低ＨＤＬ条件を処置するための治療
薬として使用される。もし望ましければ、本発明のアゴニストでの処置はいずれ
か他のＨＤＬ増加、トリグリセリド低下または抗ＣＶＤ治療と組み合わされる。

【０２３３】 ＡＢＣ生物活性を増加する一つの方法はＡＢＣタンパク質の安定性を高めまた
はその分解を予防することである。かくしてタンパク質の安定性を高めるように
導くＡＢＣポリペプチド（例えばＡＢＣ１）における突然変異を確認することが
有用となる。これらの突然変異は低ＨＤＬ−Ｃまたはいずれか他のＡＢＣ１生物
活性の損失から生じる異常を処理するためにとられる何らかのタンパク質治療ま
たは遺伝子治療に組み込むことができる。同様に、野生型ＡＢＣポリペプチドの
安定性を増加しまたはその異化作用を減少する化合物もまた低ＨＤＬ−Ｃまたは
いずれか他のＡＢＣ１生物活性の損失から生じる異常の処理に有用である。この
ような突然変異と化合物はここに記載の方法を用いて確認することができる。

【０２３４】 一つの実施例においては、突然変異を持つＡＢＣポリペプチドを発現する細胞
は翻訳の間に遷移的に代謝標識され、ＡＢＣポリペプチドの半減期は標準技術を
使って決定される。ＡＢＣポリペプチドの半減期を増加する突然変異はＡＢＣタ
ンパク質の安定性を高める変異である。これらの突然変異は次いでＡＢＣ生物活
性を評価できる。それらはまたＡＢＣ１ ｍＲＮＡまたはタンパク質の安定性に
影響するタンパク質を同定するために使用できる。次いでＡＢＣ１に結合するた
めにこれらの因子にまたはこれらの因子の能力に作用する化合物を検定すること
ができる。

【０２３５】 も一つの実施例においては、野生型ＡＢＣポリペプチドを発現する細胞は翻訳
の間に遷移的に代謝標識され、候補化合物と接触され、ＡＢＣポリペプチドの半
減期は標準技術を用いて決定される。ＡＢＣポリペプチドの半減期を増加する化
合物は本発明での有用な化合物である。

【０２３６】 ＡＢＣ１がここに記載された薬剤スクリーンのための望ましいＡＢＣ輸送体で
ある一方、他のＡＢＣ輸送体も使用することができることは理解される。ＡＢＣ
１をも一つのＡＢＣ輸送体に置換することはＡＢＣ２，ＡＢＣＲ，またはＡＢＣ
８などが同じような調節のメカニズムを持つであろうことから可能である。

【０２３７】 代表的な検定は以下で特に詳細に記載される。

【０２３８】 タンパク質ベイスト検定 ＡＢＣ１ポリペプチド（精製または未精製のもの）は（必ずしもそれに限定さ
れないが、特異的にＡＢＣ１と相互作用することが発見されたタンパク質を含む
）も一つのタンパク質に結合する能力を決定する検定に使用できる。その結合に
対する化合物の作用が次いで決定される。

【０２３９】 タンパク質相互作用検定 ＡＢＣ１タンパク質（またはポリペプチド断片あるいはエピトープ標識形態も
しくはその断片）は適切な源から（例えば原核発現システム、真核細胞、無細胞
システムから、あるいはＡＢＣ１発現細胞から免疫沈降法によって）収穫される
。ＡＢＣ１ポリペプチドは次いで適切な支持材（例えばＡＢＣ１のｈｉｓ標識形
態の場合例えばニトロセルロースまたは抗体もしくは金属アガロースカラム）に
結合される。支持材への結合は望ましくはＡＢＣ１ポリペプチドと関連するタン
パク質がそれと関連したままで留まるような条件の下で行なわれる。このような
条件はタンパク質相互作用での干渉を最小にする緩衝液の使用を含む。結合段階
はＡＢＣ１と他の分子の間の相互作用に干渉するその能力が試験された化合物の
存在または不在の下で行うこととができる。もし望ましければ、他のタンパク質
（例えば細胞ライゼート）が加えられ、ＡＢＣポリペプチドと結合する時間が与
えられる。固定されたＡＢＣ１ポリペプチドは次いでポリペプチドまたは支持材
と非特異的に結合するタンパク質または他の細胞を除去するために洗浄される。
固定ＡＢＣ１ポリペプチドは次いでその支持材から解離され、そのためそれと結
合していたタンパク質は（例えば加熱により）放出され、または代替的に結合タ
ンパク質は支持材からＡＢＣ１ポリペプチドを放出することなしでＡＢＣ１から
放出される。放出タンパク質と他の細胞構成物は例えばＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル電
気泳動，ウエスタンブロッティングと特異的抗体での検出、ホスホアミノ酸分析
、プロテアーゼ消化、タンパク質配列化、または等電点電気泳動により分析する
ことができる。ＡＢＣ１の正常および変異形態がＡＢＣ１のどの部分に与えられ
た因子が結合するのかに関して追加の情報を得るためにこれらの検定で採用する
ことができる。加えて不完全に精製されたポリペプチドが採用される時、タンパ
ク質の正常および変異形態の比較が真の結合タンパク質を区別するのに役立つよ
うに使用することができる。

【０２４０】 前記の検定はＡＢＣ１と相互作用することが知られる精製または半精製あるい
は他の分子を用いて行うことができる。この検定は以下のステップを含み、 １．ＡＢＣ１タンパク質を収穫し適切な蛍光標識をそれに結合する ２．相互作用タンパク質（または他の分子）を第２の異なる蛍光標識で標識す
る。染料が相互に非常に近くにある時、対それが物理的に離れている場合（すな
わち染料が相互に近くある時には相互に消光しそれらが近くにいない場合には消
光しない染料）異なった消光パターンを産生する染料を使用し、 ３．相互作用する分子を固定されたＡＢＣ１に、これら２個の間の相互作用に
干渉する能力を試験された化合物の存在下または存在下で露出し、また ４．蛍光読み出しデータを収集する、 ステップである。

【０２４１】 も一つの検定は蛍光共鳴エネルギー移転（ＦＲＥＴ）検定である。この検定は
次のように実施できる。

【０２４２】 １．ＡＢＣ１タンパク質またはその適切なポリペプチド断片を提供し適切なＦ
ＲＥＴ供与体（例えばニトロベンゾキサジアゾール（ＮＢＤ））をそれと結合し
、 ２．相互作用タンパク質（または他の分子）をＦＲＥＴ受容体（例えばローダ
ミン）で標識し、 ３．受容体標識相互作用分子を供与体標識ＡＢＣ１に、その２個の間の相互作
用に干渉する能力を試験された化合物の存在下または不在下で露出し、また ４．蛍光共鳴エネルギー移転を測定する。

【０２４３】 消光検定とＦＲＥＴ検定は関連する。どちらもどのフルオロフォア（蛍光標識
）の対が検定に使用されたかに依存して与えられた場合に適用できる。

【０２４４】 膜透過性検定 ＡＢＣ１タンパク質は更に膜透過性に対する作用を試験することができる。例
えば脂質を置き換えるその推定上の能力を越えて、ＡＢＣ１はイオンに対する膜
透過性に影響する。他の膜関連タンパク質、もっとも著名なものである嚢胞性線
維症膜貫通コンダクタンス調節物質およびスルホニル尿素受容体はイオンチャン
ネルと関連しそれを調節する。

【０２４５】 ＡＢＣ１またはＡＢＣ１の断片は合成小胞に組み込まれ、あるいは選択肢とし
て、細胞と小胞に発現され、またはＡＢＣ１を含む他の細胞サブ構造は単離され
る。ＡＢＣ１含有小胞または細胞は（外側への動きを観察するために）イオンを
検出できるレポーター分子（それが特殊なイオンと結合する時にその蛍光性質を
変化させるような蛍光イオン支持薬など）を装荷され、あるいは選択肢として、
外部媒体が（内側への動きを観察するために）そのような分子を装荷される。分
子が小胞の外側にある時に比べて分子が小胞の内側にある時に異なる性質を示す
分子が望ましい。例えば分子が高濃度にある時に、しかしそれがも一つの低い濃
度にある時には存在しない消光性質を持つ分子が適切であろう。（移動する能力
または動きの運動学のいずれかの）装荷分子の運動は、そのプロセスに影響する
能力を試験された化学物の存在下または不在下で決定することができる。

【０２４６】 も一つの検定において、膜透過性は標準電気生理学手法によりＡＢＣ１で仲介
または調節されるイオン流入または流出を測定することにより電気生理学的に決
定される。適切な対照（例えはＴＤ細胞または非常に低い内因性ＡＢＣ１発現を
持つ細胞系）は観察された作用がＡＢＣ１を発現する細胞に特異的であるかどう
かを決定するための検定で対照として使用できる。

【０２４７】 更にも一つの検定において小胞へのまたはそれからの放射性同位元素の取り入
れが測定できる。小胞は小胞外培地から分離され、また小胞内および培地内の放
射能は計量され比較される。

【０２４８】 核酸ベイスト検定 ＡＢＣ１核酸はＡＢＣ１遺伝子転写に必要な因子の結合に基礎を置く検定に使
用される。ＡＢＣ１ ＤＮＡと結合因子との間の結合はタンパク質結合およびタ
ンパク質結合ＤＮＡの間を識別するいずれかのシステム（例えばゲルシフト検定
）により評価される。因子のＡＢＣ１ ＤＮＡの結合に対する化合物の作用はこ
のような検定により評価される。試験管内結合検定に加えて、ＡＢＣ１遺伝子の
調節領域がレポーター遺伝子と連鎖する生体内検定が同じように実行される。

【０２４９】 ＡＢＣ１安定性を測定する検定 細胞ベースまたは無細胞システムはＡＢＣ１ ｍＲＮＡまたはＡＢＣ１タンパ
ク質の半減期に対する作用に基づく化合物をスクリーンするために使用できる。
この検定は標識ｍＲＮＡまたはタンパク質を採用する。選択肢としてＡＢＣ１
ｍＲＮＡは特異的にハイブリッド形成するプローブまたは計量ＰＣＲ検定により
検出される。タンパク質は例えば蛍光抗体ベイスト方法により計量される。

【０２５０】 試験管内ｍＲＮＡ安定性検定 １．試験管内転写によりＡＢＣ１ ｍＲＮＡの適切な量を単離または産生し、 ２．ＡＢＣ１ ｍＲＮＡを標識し、 ３．ＡＢＣ１ ｍＲＮＡ安定性を調節する能力を試験された化合物の存在下ま
たは不在下でｍＲＮＡのアリコートを細胞ライゼートに露出し、 ４．残存ｍＲＮＡの無傷状態を適切な時間点で評価する。

【０２５１】 試験管内タンパク質安定性検定 １．適切な量のＡＢＣ１タンパク質を発現し、 ２．タンパク質を標識し、 ３．ＡＢＣ１タンパク質安定性を調節する能力を試験された化合物の存在下ま
たは不在下で標識タンパク質のアリコートを細胞ライゼートに露出し、 ４．残存ｍＲＮＡの無傷状態を適切な時間点で評価する。

【０２５２】 生体内ｍＲＮＡまたはタンパク質安定性検定 １．ｍＲＮＡまたはタンパク質に対する作用を調節された化合物の存在下また
は不在下で非常に短い時間（例えば５分内）でＡＢＣ１ ｍＲＮＡまたはタンパ
ク質を発現する細胞をトレーサー（それぞれ放射標識リボヌクレオチドまたは放
射線標識アミノ酸）と共に保温し、 ２．未標識リボヌクレオチドまたはアミノ酸と共に保温し、 ３．ステップ２の出発に始まるＡＢＣ１ ｍＲＮＡまたはタンパク質の放射能
が約８０％減少する時間までにわたる時間間隔でＡＢＣ１ ｍＲＮＡまたはタン
パク質放射能を計量する。ｍＲＮＡまたはタンパク質を計量するために例えばゲ
ル電気泳動のような手段により放射性分解産物から無傷または殆ど無傷のｍＲＮ
Ａまたはタンパク質を分離することが望ましい。

【０２５３】 優先ネガティブ活性の阻害を測定する検定 変異体ＡＢＣ１ポリペプチドは優先ネガティブ活性（すなわち野生型ＡＢＣ１
機能に干渉する活性）を持つように見える。そのような変異体に干渉できる化合
物の検定は変異体の存在下で正常なＡＢＣ１活性を計量する何れかの方法に基づ
く。例えば、正常ＡＢＣ１はコレステロール流出を促進し、優先ネガティブ変異
体はこの作用に干渉するであろう。優先ネガティブ変異体の作用を妨害する化合
物の能力は細胞コレステロール流出に、または変異体により抑制可能となった野
生型ＡＢＣ１の他の正常な活性に基づくものである。

【０２５４】 リン酸化を測定する検定 野生型ニワトリＡＢＣ１ポリペプチドのＧｌｕ８９はリン酸化モチーフの一部
であるように見られ、かくしてＷＨＡＭニワトリ（以下で更に議論される）での
Ｅ→Ｋ ＡＢＣ１によるこのリン酸化モチーフの排除は、ＷＨＡＭニワトリＡＢ
Ｃ１の生物活性の減少に原因がある。かくしてＡＢＣ１のリン酸化状態を調節す
る化合物は、ヒトＡＢＣ１活性の臨床的に関連ある調節物質であると考えられる
。

【０２５５】 ＡＢＣ１リン酸化に対する化合物の作用はタンパク質またはＡＢＣ１の特異的
残基のリン酸化状態を評価するものに対するリン酸塩を計量する方法により検定
することができる。このような方法は必ずしもそれに限定されないが³²Ｐ標識化
と免疫沈降法、抗ホスホアミノ酸抗体（例えば抗ホスホセリン抗体）での検出、
２次元ＴＬＣ平板に対するホスホアミノ酸分析、およびタンパク質のプロテアー
ゼ消化フィンガープリンティングと続く、³²Ｐ標識断片の検出を含む。

【０２５６】 他の翻訳後修飾を測定する検定 ＡＢＣ１の翻訳後修飾に対する化合物の作用は特定の修飾を計量できるいずれ
かの方法に基礎を置く。例えば糖鎖形成に対する化合物の作用はＡＢＣ１をグリ
コシラーゼで処置し放出された炭水化合物の量と性質を計量することにより検定
される。

【０２５７】 ＡＴＰ結合を測定する検定 ＡＴＰに結合するＡＢＣ１の能力はＡＢＣ１に影響する化合物をスクリーンす
るも一つの検定を提供する。ＡＴＰ結合は以下のように計量することができる。

【０２５８】 １．ＡＢＣ１タンパク質を適切な純度水準で提供し、それを脂質小胞に再構成
する。

【０２５９】 ２．ＡＴＰ結合への影響を試験された化合物の存在下または不在下で標識され
るが加水分解できないＡＴＰ類似体（例えばガンマ３５Ｓ−ＡＴＰ）などに小胞
を露出する。アジドＡＴＰ類似体がアジドＡＴＰのタンパク質の（紫外線による
）共有付着を可能にしタンパク質に結合するＡＴＰの量の計量をより容易にさせ
る。

【０２６０】 ３．ＡＢＣ１と結合するＡＴＰ類似体の量を計量する。

【０２６１】 ＡＴＰａｓｅ活性を測定する検定 ＡＢＣ１のＡＴＰａｓｅ活性の計量はＡＢＣ１に対する化合物の作用について
検定することができる。これは望ましくはＡＢＣ１を細胞内で多くの他のＡＴＰ
ａｓｅから分離するのと同じように無細胞検定で行われる。ＡＴＰａｓｅ検定は
膜の存在または不在下で、またＡＢＣ１タンパク質の膜への取り込みありまたは
無しで行われる。もし小胞ベース検定で行われる場合には、産生されるＡＴＰ加
水分解産物または加水分解されたＡＴＰは小胞内でまたは小胞外であるいはその
両方で測定される。このような検定はＡＴＰの消失またはＡＴＰ加水分解産物の
出現を基礎にする。

【０２６２】 高処理量のスクリーニングにとっては、結合ＡＴＰａｓｅ検定が望ましい。例
えばピルビン酸キナーゼと乳酸デヒドロゲナーゼを含む反応混合物を使用するこ
とができる。混合物はホスホエノールピルビン酸塩（ＰＥＰ）、ニコチンアミド
アデニンジヌクレオチド（ＮＡＤ⁺）、およびＡＴＰを含む。ＡＢＣ１のＡＴＰ
ａｓｅ活性はＡＴＰからＡＤＰを精製する。ＡＤＰは次いでピルビン酸キナーゼ
反応の一部としてＡＴＰに戻される。後の反応は無色の基質（ＮＡＤ⁺）から染
色キノン（ＮＡＤＨ）を生成し、また全反応はＮＡＤＨの形成に際して色の変化
の検出によりモニターすることができる。ＡＤＰはピルビン酸キナーゼを制限す
るために、この結合システムは正確にＡＢＣ１のＡＴＰａｓｅ活性をモニターす
る。

【０２６３】 コレステロール流出を測定する検定 輸送ベースの検定は生体内または試験管内で実行することができる。例えば検
定はコレステロールまたはリン酸脂質流出などのように、培養で容易に再創出で
きる逆コレステロール輸送プロセスの一部を基礎にする。選択肢として、検定は
標識物質（コレステロールなど）により評価される全生体での正味コレステロー
ル輸送に基礎を置く。

【０２６４】 高処理のために蛍光脂質はＡＢＣ１触媒流出を測定するために使用できる。リ
ン酸脂質のために、蛍光前駆体であるＣ６−ＮＢＤ−ホスファチジン酸が使用で
きる。この脂質は細胞により取り上げられたホスファチジン酸ホスホヒドロラー
ゼにより脱リン酸される。この産物であるＮＢＤ−ジグリセリドは次いでホスフ
ァチジルコリン（レシチン）などのグリセロリン脂質の合成のための前駆体とな
る。ＮＢＤ−ホスファチジルコリンの流出は細胞培養培地の適切な受容体に対す
るＮＢＤの蛍光共鳴エネルギー移転（ＦＲＥＴ）の検出によりモニターできる。
この受容体は細胞により容易に取り込まれないリン脂質であるローダミン標識ホ
スファチジルエタノールアミンであることができる。短鎖前駆体の使用は培地で
のリン脂質輸送タンパク質の必要を不要にする。コレステロールのために、ＮＢ
Ｄ−コレステロールエステルはＬＤＬに再構築することができる。ＬＤＬはこの
脂質を細胞にＬＤＬ受容経路を通じて有効に輸送できる。ＮＢＤコレステロール
エステルはリソソームに加水分解され、血漿膜に戻され細胞から流出できるＮＢ
Ｄ−コレステロールを生成する。流出はＮＢＤがその蛍光共鳴エネルギーをロー
ダミンホスファチジルエタノリン受容体に移す前記のＦＲＥＴ検定によりモニタ
ーすることができる。

【０２６５】 動物モデルシステム 前記検定のいずれかで活性を持つものとして同定された化合物は、次いで必ず
しもそれに限定されないが、ブタ、ラビット、ＷＨＡＭニワトリを含むいずれか
の利用できる動物モデルシステムでスクリーンされる。試験化合物はこれらの動
物に標準方法に基づいて投与される。試験化合物は更にＡＢＣ１遺伝子に突然変
異を持つマウスで試験される。更に化合物はＡＢＣ１と、ＡｐｏＡＩ、ＡｐｏＡ
ＩＩ、またはＡｐｏＥなどを構成するいずれかのＡＤＬ粒子の間の相互作用を高
めるそれらの能力をスクリーンされる。

【０２６６】 薬剤スクリーンとしてのコレステロール流出検定 コレステロール流出検定はコレステロールを細胞外受容体分子に運ぶ細胞の能
力を測定しまたＡＢＣ１機能に依存する。この手順で、細胞はいずれかいくつか
の生化学経路により放射線標識コレステロールを装荷される（マーシル他、Ａｒ
ｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．Ｖａｓｃ．Ｂｉｏｌ．１９巻：１５９−
１６９ページ．１９９９年）。コレステロール流出は次いでＨＤＬ３または精製
ＡｐｏＡＩの存在下で各種時間（典型的には０乃至２４時間）の保温の後測定さ
れる。コレステロール流出は各種の保温時間後培養培地で全コレステロールのパ
ーセンテージとして測定される。ＡＢＣ１発現水準およびまたは生物活性は流出
の増加と関連し、一方ＡＢＣ１の水準の減少はコレステロール流出の減少と関連
する。

【０２６７】 この検定は薬剤スクリーニングに使用される形式（フォーマット）に容易に適
応することができ、それは多ウエル（例えば９６ウエル）形式より成る。薬剤ス
クリーニングにそれを最適化する検定の修飾は手続を減少して簡素化し、標識方
法を修飾し、異なったコレステロール受容体を使用し、保温時間を変更し、コレ
ステロール計算方法を変えることを含む。これらすべての場合、コレステロール
流出検定は実験の修飾は行うけれども、その概念としては変わらず同じである。
ＡＢＣ１を過剰発現する遺伝子導入マウスは正常ＨＬＤ水準より高い値を持つも
のと期待される。

【０２６８】 ノックアウトマウスモデル （例えば相同組換えなどにより）不活性化された１個または両方のＡＢＣ１対
立遺伝子を持つマウスなどのような動物は低ＨＤＬ−Ｃ水準と正常よりも高いト
リグリセリド水準を持つように見え、かくしてＨＤＬ−Ｃ水準を高め、トリグリ
セリド水準を低下させる化合物をスクリーンニングするための望ましい動物モデ
ルである。そのような動物は標準方法で産生することができる。試験化合物の初
期スクリーニングに加えて、変異体ＡＢＣ１遺伝子を持つ動物はここに記載され
た他のスクリーニング法の一つを用いる最初に同定された薬剤または作用薬の効
果と安定性を更に試験するために有用である。動物から取り出され培養に配置さ
れる細胞はまた試験化合物に露出することができる。ＨＤＬ−Ｃおよびトリグリ
セリド水準はここで記載されるような標準技術を用いて測定することができる。

【０２６９】 ＷＨＡＭニワトリ：低ＨＤＬコレステロール用動物モデル ウイスコンシン低アルファ変異体（ＷＨＡＭ）ニワトリが閉鎖群の自発的突然
変異により発生した。変異体ニワトリは「劣性ホワイトスキン」として引用され
るＺ連鎖ホワイトシャンクおよびホワイトビーク表現型を通じて注目をあび（マ
クギボン、１９８１年）、続いてＨＤＬを大きく欠いていることが発見された（
ペーナマ他、１９９０年）。

【０２７０】 このニワトリの低ＨＤＬ遺伝子座（Ｙ）はＺ連鎖あるいは性連鎖している（鳥
では、雌はＺＷで雄はＺＺである）。遺伝子地図ではＹ遺伝子座はＩＤ遺伝子座
（ビットグット、１９８８年）に近位のＺ染色体（ビットグッド、１９８５年）
の長腕部に配置した。ニワトリゲノム地図化プロジェクト、チックマップ（ロス
リン・インスティチュートで保有；ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｒｉ．ｂｂｓｒｃ．
ａｃ．ｕｋ／ｃｈｉｃｋｍａｐ／ＣｈｉｃｋＭａｐＨｏｍｅＰａｇｅ．ｈｔｍｌ
）の現在地図化データの検討は、ヒト染色体９とのシンテニーの領域がＩＤ遺伝
子座近位のニワトリＺ染色体（Ｚｑ）の長腕部にあることを示した。シンテニー
のこの領域の証拠は、この領域内でのニワトリアルドラーゼＢ遺伝子座（ＡＬＤ
ＯＢ）の位置にある。ヒトＡＬＤＯＢ遺伝子座はヒトＡＢＣ１の位置から遠くな
い染色体９ｑ２２．３に位置する（ザ・ゲノム・データベース，ｈｔｔｐ：／／
ｇｄｂｗｗｖ．ｇｄｂ．ｏｒｇ．／）。この地図の比較は、ニワトリＡＬＤＯＢ
近くのニワトリＺｑ領域およびヒトＡＬＤＯＢ近くのヒト９ｑ領域がヒトとニワ
トリの間のシンテニー領域を表すことを示した。

【０２７１】 低ＨＤＬ遺伝子座がヒトでは９ｑ位置またニワトリではＺｑ領域に位置するた
めに、これらのＨＤＬ遺伝子座はシンテニー領域内にほぼ位置している。かくし
て我々はＡＢＣ１がＷＨＡＭニワトリで突然変異していることを予言した。これ
を支援して、我々はヒトＡＢＣ１のアミノ酸８９に一致する位置でのＥ⇒Ｋ突然
変異をこれまでに同定した。この非保存置換はヒト、マウス、およびニワトリの
間に保存される位置にあり、機能的重要性を持つように見えるタンパク質の領域
にあることを示している。

【０２７２】 ＡＢＣ１タンパク質のアミノ末端部分でのＷＨＡＭ突然変異の発見は同じくア
ミノ末端領域の重要性を立証する。この領域はコレステロール流出または関連す
る課題を運ぶのに必要な他のタンパク質と関連するために重要となる。それは重
要な調節領域であり（突然変異残基の近くにカゼインキナーゼのためのリン酸化
部位がある）、またはそれは細胞膜と正確な位相関係を指示することに役立つ（
Ｎ末端６０アミノ酸領域は推定上の膜広がりまたは膜関連セグメントを含む）。

【０２７３】 タンパク質のアミノ酸末端領域（約アミノ酸６３９での最初の６−ＴＭ領域ま
で）はＡＢＣ１活性に影響するスクリーニング因子のための理想的な用具である
。切形タンパク質により正常ＡＢＣ１機能の干渉を試験するために、それはＡＢ
Ｃ１野生型細胞どの切形タンパク質として発現することができる。もし断片が優
性ネガティブな方法で作用するとすれば、それは正常な内因性タンパク質から離
れて競争するタンパク質を同定する免疫沈降法で使用できたであろう。

【０２７４】 Ｃ末端もまた膜貫通領域不在下で断片または標識であるいは融合タンパク質と
して発現される、分子の細胞内部分が行うのと同じような実験に手を貸す。

【０２７５】 コレステロール流出に影響するヒトゲノムにいくつかの遺伝子が存在すること
が可能であるため、ヒト遺伝子病に使用される何らかの動物モデルがその動物で
の相同性遺伝子座を表し、類似の機能を持つ異なった遺伝子座は表さないことを
立証することが重要である。前記の証拠はニワトリＹ遺伝子座とヒト染色体９低
ＨＤＬ遺伝子座が相同であることを立証する。ＷＨＡＭニワトリは従ってコレス
テロール流出を調節する薬剤の同定のために重要な動物となる。

【０２７６】 しかしＷＨＡＭニワトリのＨＤＬ欠損症候群はニワトリの短い寿命を反映する
。我々はヒトのＨＤＬを高める薬剤の開発と試験のためのヒト低ＨＤＬのモデル
としてＷＨＡＭニワトリを提案する。このようなモデルはこれらニワトリの細胞
または他の誘導体の使用を通じて、または薬剤有効性、毒性、および他の薬剤開
発目的の試験にニワトリ自身を使用することにより、いくつかの形態で採用する
ことができた。

【０２７７】 療法 必ずしもそれに限定されないが、ＡＢＣ１ポリペプチド、ＡＢＣ１核酸、他の
ＡＢＣ輸送体、ＬＸＲ調節化合物、ＲＸＲ調節化合物、およびここで開示された
いずれかの方法を用いて同定されたＡＢＣ１の生物活性または発現を調節するい
ずれかの治療薬は、単位用量形態で薬理許容希釈剤、担体、または賦形剤と共に
投与される。従来の薬理業務はそのような組成物を患者に投与する適切な処方ま
たは組成物を提供するために採用される。いずれかの適切な投与のルート、例え
ば静脈内、非経口、皮下、筋肉内、頭蓋骨、眼窩内、眼内、心室内、被膜内、骨
髄腔内、クモ膜下槽内、腹腔内、鼻腔内、エアゾルまたは経口投与が採用される
。治療処方は水溶液または懸濁液の形態にある。経口投与では、処方は錠剤また
はカプセルの形である。鼻腔処方では粉体、鼻腔滴またはエアゾルである。

【０２７８】 処方を作成する従来よく知られている方法は、例えばレミントン：薬局の科学
と業務（１９版）．Ａ．Ｒ．ゲネーロ編．１９９５年、ペンシルベニア、イース
トン、マック・パプリッシング・カンパニーで見られる。非経口投与の処方は、
例えば賦形剤、無菌水、食塩水、ポリエチレングリコールなどのポリアルキレン
グリコール、植物源の油、または水素添加ナフタレンを含む。生体適合性、生物
分解性ラクチドポリマー、ラクチド／グリコリドコポリマー、またはポリオキシ
エレレン−ポリオキシプロピレンコポリマーは化合物の放出を制御するたに使用
される。本発明の作用薬の他の潜在的に有用な非経口送達システムはエチレンビ
ニルアセテートコポリマー粒子、浸透ポンプ、移植可能注入システム、およびリ
ポソームを含む。吸入の処方は、例えばラクトースなどの賦形剤を含み、あるい
は例えばポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル、グリココール酸塩および
デオキシコール酸塩などを含む水溶液、あるいは鼻腔用滴の形でまたはゲルとし
て投与れる油状溶液である。

【０２７９】 化合物 一般に異常脂質水準およびまたはＣＶＤの処置のための新規な薬剤は従来公知
の方法に基づいて天然産物または合成（もしくは半合成）抽出物あるいは化学ラ
イブラリーの両方の大型ライブラリーから同定される。この分野または薬剤発見
および開発に熟練した人は、試験抽出物または化合物の正確な源が本発明のスク
リーニング手順にとっては重要でないことを理解するであろう。従って、事実上
化学抽出物または化合物のいずれかの数はここに記載された典型的な方法を使用
してスクリーンすることができる。このような抽出物または化合物の例は、必ず
しもそれに限定されないが、植物ベース抽出物、真菌ベース抽出物、原核ベース
抽出物または動物ベース抽出物、発酵肉汁、および合成化合物、同じく現存する
化合物の修飾物を含む。数多くの方法もまた、必ずしもそれに限定されないが、
糖類ベース化合物、脂質ベース化合物、ペプチドベース化合物、および核酸ベー
ス化合物を含むいずれかの数の化学化合物の無作為のまたはそれらに向けた合成
（例えば半合成もしくは全合成）を創り出すのに利用される。合成化合物ライブ
ラリーは商業的にブランドン・アソシエーツ（ニューハンプシャー．メリマック
）とオルドリッチ・ケミカル（ウイスコンシン、ミルウォーキー）から利用でき
る。選択肢として化合物のライブラリーはバイオティックス（英国、サセックス
）、ゼノバ（英国、スラウ）、ハーバー・ブランチ・オーシャングラフィックス
・インスティチュート（フロリダ、フォートピアス）およびファーママー，Ｕ．
Ｓ．Ａ．（マサチューセッツ、ケンブリッジ）を含む数多くの源から商業的に利
用できる。加えて、天然および合成産出ライブラリーは、もし望ましければ従来
公知の方法に従って、例えば標準抽出および分留方法により産生される。更にも
し望ましければ、標準の化学、物理学またはバイオケミカルの方法を使っていず
れのライブラリーまたは化合物でも容易に修飾できる。

【０２８０】 加えて、薬剤発見と開発の分野での当業者は、複製消失（例えば分類学的複製
消失、生物学的複製消失、および化学的複製消失、またはこれらのいずれかの組
合わせ）の方法が、またはＨＤＬ上昇、トリグリセリド低下、または抗ＣＶＤ活
性で既に公知の物質の複製または反復の除去が採用できるところではどこでも採
用されねばならないことを容易に理解する。

【０２８１】 粗抽出物がＡＢＣ１遺伝子発現、ＡＢＣ１生物活性あるいはそれらの組合せを
持つことが発見される時には、更に正の主要な抽出物の分留が観察された作用の
原因となる化学構成物を単離する必要がある。かくして抽出物、分留、および精
製プロセスの目標はＨＤＬ増加、トリグリセリド低下、または抗ＣＶＤ活性、Ａ
ＢＣ遺伝子発現を調節する能力、またはそれらの組合せを持つ粗抽出物内で化学
成分全体の注意深い特徴付けと同定である。化合物の混合物での活性の検出に対
してここに記載された同じ生体内および試験管内検定は活性成分を精製し、その
誘導体を試験するのに使用することができる。このような異種抽出物の分留と精
製は従来公知である。もし望ましければ、病原性の処置のための有用な作用薬で
あることが示される化合物は従来の技術で公知の方法に従って化学的に修飾され
る。治療価値があると確認された化合物は、次いで従来公知の糖尿病または肥満
症のいずれかの標準動物モデルを用いて分析される。

【０２８２】 ＡＢＣ１を調節しまたはＡＢＣ１により調節されるタンパク質の活性を調節す
る化合物はコレステロール水準およびトリグリセリド水準を調節するための有用
な化合物であることが理解される。典型的な化合物がここに提供されており、他
のものは公知のものである。

【０２８３】 コレステロールに構造的に関連し、またはＡｐｏＡＩあるいは関連するアポリ
ポタンパク質を擬態し、またＡＢＣ１生物活性を高める化合物は本発明のとりわ
け有用な化合物である。ＭＤＲタンパク質に作用するものとして知られる他の化
合物は更にＡＢＣ１生物活性を高めるために使用され誘導体にされその能力を検
定される。典型的なＭＤＲ調節物質はＰＳＣ８３３、ブロモクリプチン、および
シクロスポリンＡである。ＡＢＣ１生物活性を高めるためにその能力を検定され
る他の化合物の例はオキシステロールとその誘導体である。

【０２８４】 低ＨＤＬ−Ｃまたは抗トリグリセリド水準を持つ患者のスクリーニング ＡＢＣ１発現、生物活性および突然変異分析はそれぞれ低ＨＤＬまたは正常よ
りも高いトリグリセリド水準の診断用具として役立ち得る。かくしてＡＢＣ１遺
伝子配列の遺伝的亜類型化の確認は低ＨＤＬまたは正常よりも高いトリグリセリ
ド表現型がＡＢＣ１機能に関係するかどうかを決定するために低ＨＤＬまたは正
常よりも高いトリグリセリドの個体または家族を亜類型化するために使用するこ
とができる。この診断プロセスはＨＤＬ増加またはトリグリセリド低下薬剤の投
与に際しての副作用の予測を含む患者の遺伝子型に基づく薬剤処置の特別仕立て
（以下薬理ゲノミクスとして引用）に導くことができる。薬理ゲノミクスは（例
えば個体の遺伝子型は特定の作用薬に応答する個体の能力を決定するために試験
される）個体の遺伝子型に基づく個体の治療または予防処置のために作用薬（例
えば薬剤）の選択を可能にする。

【０２８５】 ＡＢＣ１生物活性または遺伝子発現に対する刺激または阻害作用を持つ薬剤ま
たは調節物質は、異常ＡＢＣ１活性と関連する疾患（例えば心臓血管症、低ＨＤ
Ｌコレステロールまたは正常より高いトリグリセリド水準）を処置するために個
体に投与することができる。このような処置と関連して、個体の薬理ゲノミクス
（すなわち個体遺伝子型と外部化合物または薬剤に対する個体の応答との間の関
係の研究）が考慮される。治療効果の差は薬理活性薬剤の用量とその血液濃度の
間の関係を変更することで厳しい毒性または治療失敗に導くことがある。かくし
て個体の薬理ゲノミクスは個体の遺伝子型の考慮に基づく予防または治療処置の
ための効果的な作用薬（例えば薬剤）の選択を可能にする。このような薬理ゲノ
ミクスは更に適切な用量と治療処方を決定するのに使用することができる。従っ
て、個体におけるＡＢＣ１タンパク質の活性、ＡＢＣ１核酸の発現、またはＡＢ
Ｃ１遺伝子の突然変異容量はそれにより個体の治療または予防処置に適切な作用
薬を選択するように決定することができる。

【０２８６】 薬理ゲノミクスは影響を受ける人での変更された薬剤準備と異常な行為に起因
する薬剤への応答で臨床的に重要な遺伝的変化に対処する（Ｍ．アイケルバウム
、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２３巻：９８３−
９８５ページ、１９９６年；Ｍ．Ｗ．リンダー，Ｃｌｉｎ．Ｃｈｅｍ．４３巻、
２５４−２６６ページ、１９９７年）。一般に二つの型の薬理遺伝学的条件に分
化することができる。それは薬剤が身体に作用する方法を変更する単一因子とし
て伝達される遺伝条件（変更された薬剤作用）と、身体が薬剤に作用する方法を
変更する単一因子として伝達される遺伝条件（変更された薬剤代謝）である。変
更された薬剤作用はＡＢＣ１のプロモーター配列、イントロン配列またはエキソ
ン配列内で多型性（たとえば単一ヌクレオチド多型性すなわちＳＮＰ）を持つ患
者に生じる。かくして多型性の存在とその罹患率を決定することにより患者の特
定の治療薬に対する応答を予測することが可能となる。とりわけ、プロモーター
領域での多型性はＨＤＬ欠損、正常より高いトリグリセリド水準とＣＶＤのリス
クを決定するのに重要である。

【０２８７】 ここで記載されたＡＢＣ１遺伝子での突然変異に加えて、我々はヒトＡＢＣ１
遺伝子の多型性を検出した（図４）。これらの多型性はＡＢＣ１のプロモーター
、イントロン、およびエキソン配列に位置する。標準方法を例えば直接配列決定
、ＰＣＲ，ＳＳＣＰ，あるいはいずれか他の多型性検出システムを用いて低ＨＤ
Ｌ、正常より高いトリグリセリド水準、心臓血管病、またはいずれか他のＡＢＣ
１仲介病状を持つ患者に対する薬剤処置処方の確定の前に、これらの多型性が患
者に存在するかどうかを容易に確認することができた。これらのいくつかの多型
性が事実上弱い変異であることもあり得る。このような変異を宿している個体は
心臓血管症のリスクが高い。かくしてこれらの多型性も診断決定には有用である
。

【０２８８】 他の実施例 本明細書で言及されたすべての公開文献はあたかも個々の独立した公開文献が
特異的または個別的に引用例で組み込まれることを指示されたように、同じ範囲
で引用例としてここに組み込まれる。

【０２８９】 本発明はこの特異的実施例と関連して記載されてきたが、一方それは更なる修
飾ができることも理解されるであろう。本出願は本発明が関係しこれまでに設定
された基本的特徴に適用される従来の技術内での公知のかつ慣習上の業務内での
本発明の原理に一般に基づきかつ本開示からの逸脱を含むすべての変化、用途、
または適用を取り扱うことを意図するものである。

【配列表】

【図面の簡単な説明】

【図１（１）】 エキソン１−５０を含むヒトＡＢＣ１のゲノム配列を示す
図（配列識別番号１）。大文字はエキソン配列を示し、小文字は５′調節配列ま
たはイントロン配列を示す。「Ｚ」はいずれかのヌクレオチドまたはヌクレオチ
ドを含まない他のものを示す。配列識別番号１でヌクレオチドにここで使用され
た番号付けは「ｚ」で示された位置にはヌクレオチドが存在しないものと仮定す
る。しかしこれらの配列でもし「ｚ」で示されたいくつかまたはずべての位置に
存在するならばヌクレオチドの番号付けは変化することを当業者には容易に明ら
かであろう。「Ｋ」はヌクレオチドＧまたはＴを示す。「Ｙ」はヌクレオチドＡ
またはＣを示す。「Ｓ」はヌクレオチドＣまたはＧを示す。「Ｈ」はヌクレオチ
ドＡ、Ｃ、またはＴを示す。「Ｂ」はヌクレオチドＣ、Ｇ、またはＴを示す。我
々がこれまでに開示したエキソン０α上流のＡＢＣ１エキソンの同定の故で、Ａ
ＢＣ１エキソンをここで引用する番号付けは、我々がこれまでに使用して番号付
けしたものに比べて１個増加している（Ｕ．Ｓ．Ｓ．Ｎ．０９／５２６，１９３
；Ｕ．Ｓ．Ｓ．Ｎ．６０／１２４，７０２；Ｕ．Ｓ．Ｓ．Ｎ．６０／１３８，０
４８；Ｕ．Ｓ．Ｓ．Ｎ．６０／１３９，６００；Ｕ．Ｓ．Ｓ．Ｎ．６０／１５１
，９７７）。例えばこれまでに記載されたエキソン０はここでエキソン０はここ
でエキソン１として引用される。

【図１（２）】 図１（１）と同じ

【図１（３）】 図１（１）と同じ

【図１（４）】 図１（１）と同じ

【図１（５）】 図１（１）と同じ

【図１（６）】 図１（１）と同じ

【図１（７）】 図１（１）と同じ

【図１（８）】 図１（１）と同じ

【図１（９）】 図１（１）と同じ

【図１（１０）】 図１（１）と同じ

【図１（１１）】 図１（１）と同じ

【図１（１２）】 図１（１）と同じ

【図１（１３）】 図１（１）と同じ

【図１（１４）】 図１（１）と同じ

【図１（１５）】 図１（１）と同じ

【図１（１６）】 図１（１）と同じ

【図１（１７）】 図１（１）と同じ

【図１（１８）】 図１（１）と同じ

【図１（１９）】 図１（１）と同じ

【図１（２０）】 図１（１）と同じ

【図１（２１）】 図１（１）と同じ

【図１（２２）】 図１（１）と同じ

【図１（２３）】 図１（１）と同じ

【図１（２４）】 図１（１）と同じ

【図１（２５）】 図１（１）と同じ

【図１（２６）】 図１（１）と同じ

【図１（２７）】 図１（１）と同じ

【図１（２８）】 図１（１）と同じ

【図１（２９）】 図１（１）と同じ

【図１（３０）】 図１（１）と同じ

【図１（３１）】 図１（１）と同じ

【図１（３２）】 図１（１）と同じ

【図１（３３）】 図１（１）と同じ

【図１（３４）】 図１（１）と同じ

【図１（３５）】 図１（１）と同じ

【図１（３６）】 図１（１）と同じ

【図１（３７）】 図１（１）と同じ

【図１（３８）】 図１（１）と同じ

【図１（３９）】 図１（１）と同じ

【図１（４０）】 図１（１）と同じ

【図１（４１）】 図１（１）と同じ

【図１（４２）】 図１（１）と同じ

【図１（４３）】 図１（１）と同じ

【図１（４４）】 図１（１）と同じ

【図１（４５）】 図１（１）と同じ

【図２Ａ】 ヒトＡＢＣ１タンパク質のアミノ酸配列を示す図（配列識別番
号５）

【図２Ｂ（１）】 ヒトＡＢＣ１ ｃＤＮＡのヌクレオチド配列を示す図（
配列識別番号６）

【図２Ｂ（２）】 ヒトＡＢＣ１ ｃＤＮＡのヌクレオチド配列を示す図（
配列識別番号６）

【図２Ｂ（３）】 ヒトＡＢＣ１ ｃＤＮＡのヌクレオチド配列を示す図（
配列識別番号６）

【図２Ｂ（４）】 ヒトＡＢＣ１ ｃＤＮＡのヌクレオチド配列を示す図（
配列識別番号６）

【図３（１）】 ヒトＡＢＣ１ ５′調節配列内のコンセンサス転写因子の
位置に要約図。略語は以下のとおりである：ＰＰＲＥ＝ペルオキシソーム増殖剤
応答性受容体。ＳＲＥＢＰ＝ステロイド応答エレメント結合タンパク質部位。Ｒ
ＯＲ＝ＲＡＲ−関連オーファン受容体。転写因子結合部位の位置でここで使用さ
れる番号付けは、配列識別番号１で「ｚ」と示された位置ではヌクレオチドが存
在しないものと仮定する。プロモーター領域での多型に対しては、番号付けはヌ
クレオチド番号−１のプロモーターの第１塩基を基礎にする。エキソン１では、
番号付けは、ヌクレオチド番号＋１のエキソン１の第１塩基を基礎にする。５′
末端イントロンでは、番号付けは＋１でのイントロン１の第１位置に基礎を置く
。イントロン１の３′末端では、番号付けはヌクレオチド番号−１の第１塩基５
′からエキソン２の出発点までに基礎を置く。

【図３（２）】 図３（１）と同じ

【図３（３）】 図３（１）と同じ

【図３（４）】 図３（１）と同じ

【図３（５）】 図３（１）と同じ

【図３（６）】 図３（１）と同じ

【図４（１）】 ゲノムＡＢＣ１配列での多型を要約した表

【図４（２）】 ゲノムＡＢＣ１配列での多型を要約した表

【図４（３）】 ゲノムＡＢＣ１配列での多型を要約した表

【図４（４）】 ゲノムＡＢＣ１配列での多型を要約した表

【図４（５）】 ゲノムＡＢＣ１配列での多型を要約した表

【図４（６）】 ゲノムＡＢＣ１配列での多型を要約した表

【図５Ａ】 ＬＲＣ基準に基づく年齢と性の一定の百分位数内でＨＤＬ（図
５Ａ）とトリグリセリド（ＴＧ）（図５Ｂ）のヘテロ接合体また影響されない家
族メンバーの割合を示す棒グラフ（ハイス他、血液循環、６２巻：IV−１１６−
IV−１３６、１９８０年）。ＨＤＬ水準の広い分布がヘテロ接合体で観察され、
年齢と性の第３１百分位数まで広がる。ヘテロ接合体と感染されない家族メンバ
ーの間でトリグリセリドの分布にオーバーラップが存在するが、ヘテロ接合体の
大部分は年齢と性で第８０百分位数以上のトリグリセリド水準を持つ。

【図５Ｂ】 図５Ａと同じ

【図６】 ＴＤ患者と、ＡＢＣ１ヘテロ接合体と、影響されない家族メンバ
ーを特徴付ける表

【図７】 ＡＢＣ１ヘテロ接合体でＣＡＤの発生率を要約した表

【図８】 各変異のヘテロ接合体保因者で測定された各変異のヘテロ接合体
での平均ＨＤＬ水準対流出水準を示すグラフ。ＨＤＬ水準はその家族の影響され
ないメンバーの平均ＨＤＬ水準の割合で表される。流出水準はＨＤＬコレステロ
ールの水準と密接に相関して折りＨＤＬコレステロール水準での変化の８２％と
関連する。

【図９】 ＡＢＣ１ヘテロ接合体のＨＤＬ水準とＣＡＤの存在または不在を
要約する表。Ｒ２１４４ＸとＲ９０９Ｘ ＡＢＣ１変異ではＡｒｇ２１３３また
はＡｒｇ９０９をコードするコドンはＳＴＯＰコドンに変異され、コードコドン
の切形を生じる。「Ｄｅｌ Ｅ，Ｄ １８９３，９４」変異では、Ｇｌｎ１８９
３およびＡｓｐ１８９４をコードするコドンは欠失される。「ｉｎｖｓ２５＋１
Ｇ・・・＞Ｃ″」変異はイントロン２５の第１ヌクレオチドを「Ｇ」から「Ｃ」
に転換し、スプライス部位を除去する。「ｄｅｌ Ｃ ６８２５・・・＞２１４
５Ｘ変異にとっては、ヌクレオチド配列でのＣ６８２５の欠失はコード化タンパ
ク質のアミノ酸２１４５に対応するコドンでＳＴＯＰコドンを生じる。「ＣＴＣ
６９５２−４ＴＴ・・・＞２２０３Ｘ」変異では、「ＣＴＣ」はヌクレオチド配
列で「ＴＴ」により置換されアミノ酸２２０３をコードするコドンを停止コドン
に転換する結果となる。

【図１０】 ミスセンス変異または重症変異のいずれかで影響されない家族
メンバーとＡＢＣ１ヘテロ接合体での平均脂質水準を比較する表

【図１１】 変異の位置および変異の保因者でのＣＡＤの存在または不在を
説明するＡＢＣ１タンパク質の概略図。４０歳またはそれ以上のヘテロ接合体の
数（ｎ）がリストされている。

【図１２Ａ】 ＦＨＡの親族であるＦＨＡ３とＦＨＡ１それぞれの系統を示
す図（マーシル他、ランセット３５４巻：１３４１−１３４６ページ、１９９９
年）。男性は四角記号で女性は円記号で示される。変異でヘテロ接合型個体は半
分陰影記号が与えられ、保管者は矢印で示される。斜線は故人の個体を示す。共
に個体は年輩の世代の人よりも高い百分位数の範囲のＨＤＬコレステロールを持
つ。

【図１２Ｂ】 図１２Ａと同じ

【図１３】 与えられた百分位数範囲のＨＤＬコレステロール水準にある３
０歳以下と３０歳から７０歳以上の個体の割合を示す棒グラフ。共に個体ははる
かに広いＨＤＬコレステロール水準の分布を持ち、ＡＢＣ１のＨＤＬ水準への影
響が年齢によってその影響を受けることを明らかに示している。

【図１４】 ＡＢＣ１ヘテロ接合体と影響されない家族メンバーの異なった
年齢グループでのＨＤＬとＴＧ水準を要約した表

【図１５Ａ】 ＬＲＣ集団での第１０百分位数分布と比較した１０歳グルー
プ（中間地点でプロットしたもの）でのヘテロ接合型男性（図１５Ａ）と女性（
図１５Ｂ）での平均ＨＤＬ水準を示すグラフ（ハイス他、前掲）。誤り棒グラフ
は書く平均値の標準偏差値を示す。各グループでの個体数は下部各データ点で示
される。３０歳以上ではヘテロ接合体の平均ＨＤＬ水準は第１０百分位数分布よ
りはるかに低いものになる。これとは逆に、３０歳以下のヘテロ接合体の平均Ｈ
ＤＬコレステロール水準は第１０百分位数分布にほぼ近づく。

【図１５Ｂ】 図１５Ａと同じ

【図１６Ａ】 ＢＭＩの各３グループ内のヘテロ接合体と影響されない家族
メンバーの平均ＨＤＬ（図１６Ａ）とトリグリセリド水準（図１８Ｂ）を示すグ
ラフ。ＢＭＩの３グループは以下の値に一致する：（１）ＢＭＩ＜２１．４；（
２）２１．４＜ＢＭＩ＜２５．１；（３）ＢＭＩ＞２５．１

【図１６Ｂ】 図１６Ａと同じ

【図１７（１）】 ＡＢＣ１多型のＲＦＬＰスクリーニングに使用されるオ
リゴヌクレオチドと反応条件を示す表

【図１７（２）】 ＡＢＣ１多型のＲＦＬＰスクリーニングに使用されるオ
リゴヌクレオチドと反応条件を示す表

【図１８】 Ｒ２１９Ｋ変異体のＲＦＬＰ遺伝子型を示すゲルの画。１７７
塩基対ＰＣＲ産物はＡ対立遺伝子を消化しないか、Ｂ対立遺伝子は消化されて１
０７および７０塩基対を産生する。

【図１９】 ＡＢＣ１遺伝子で多型の対立遺伝子頻度を示す表。

【図２０】 対照と比べたＲ２１９Ｋ ＡＢＣ１でのＭＳＤ、ＭＯＤ、およ
び冠動脈事象を比較する表

【図２１】 Ｒ２１９Ｋ ＡＢＣ１変異体の保因者（ＡＢ＋ＢＢ）および非
保因者（ＡＡ）の無事象生存曲線を示すグラフ。変異体の保因者は非保因者に比
べて２年間の試行にわたり無事象生存を２９％増加した。

【図２２】 Ｒ２１９Ｋ ＡＢＣ１遺伝子型での退化成長評価スタティン研
究（ＲＥＧＲＥＳＳ）での基線デモグラフィックスと脂質水準を示す表

【図２３】Ｒ２１９Ｋ ＡＢＣ１保因者と対照での平均年齢以上および以下
の脂質水準とＣＡＤを示す表

【図２４】 各Ｒ２１９Ｋ遺伝子型での中位年齢（５６．７歳）以上および
未満の人の間のＨＤＬコレステロール水準の差の割合を示す棒グラフ

【図２５Ａ】 Ｒ２１９Ｋ遺伝子型での年齢によるＨＤＬコレステロール（
図２５Ａ）と流出（図２５Ｂ）の相関を示すグラフ

【図２５Ｂ】 図２５Ａと同じ

【図２６Ａ】 Ｒ２１９Ｋ ＡＢＣ１変異体の保因者（ＡＢ＋ＢＢ）および
非保因者（ＡＡ）の中位年齢によるＭＳＤ（図２６Ａ）とＭＯＤ（図２６Ｂ）で
の変化を示すグラフ

【図２６Ｂ】 図２６Ａと同じ

【図２７】 Ｒ２１９Ｋ ＡＢＣ１変異体の人種分布を示す表

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 48/00 Ａ６１Ｐ 3/06 Ａ６１Ｐ 3/06 9/00 9/00 9/10 9/10 43/00 １１１ 43/00 １１１ Ｃ１２Ｑ 1/02 Ｃ１２Ｎ 5/10 1/68 Ａ 15/09 Ｚ Ｃ１２Ｑ 1/02 Ａ６１Ｋ 37/02 1/68 Ｃ１２Ｎ 15/00 Ａ 5/00 Ｂ (31)優先権主張番号 ６０／２１３，９５８ (32)優先日 平成12年６月23日(2000．6．23) (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ， ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ， ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＢＺ，Ｃ Ａ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ， ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，Ｋ Ｅ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ， ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，Ｒ Ｕ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ， ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 ヘイドン，マイケル，アール． カナダ，ヴィー６アール １ダブリュ９ ブリティッシュ コロンビア，バンクーバ ー，ウェスト セブンス アベニュー 4484 (72)発明者 ブルックス−ウイルソン，アンジェラ，ア ール． カナダ，ヴィー７シー ４ビー２ ブリテ ィッシュ コロンビア，リッチモンド，ラ ングトン ロード 7100 (72)発明者 ピムストーン，サイモン，エヌ． カナダ，ヴィー６ティー １シー５ ブリ ティッシュ コロンビア，バンクーバー， ウエスト シックスス アベニュー 4746 (72)発明者 クリー，スーザン，エム． カナダ，ヴィー７エヌ １エム８ ブリテ ィッシュ コロンビア，ノース バンクー バー，イー．オズボーン ロード 627 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA11 CA04 CA09 DA02 HA14 4B063 QA12 QA18 QA19 QQ43 QR38 QR55 QR80 QS34 4B065 AA90 AB01 CA44 CA46 4C084 AA02 AA07 AA13 AA17 BA01 BA08 BA23 DC50 NA14 ZA362 ZC022 ZC332 4C086 AA01 AA02 AA03 DA08 EA16 MA01 MA04 NA14 ZA36 ZC02 ZC33

Claims (79)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 正常値よりも低いＨＤＬコレステロール水準、正常値よりも
   高いトリグリセリド水準、または心臓血管病を持つと診断された患者を処置する
   一つの方法であって、前記方法がＬＸＲ仲介転写活性を調節する化合物を前記患
   者に投与することよりなることを特徴とする方法。
2. 【請求項２】 請求項１記載の方法であって、ここで前記化合物がオキシス
   テロールであることを特徴とする方法。
3. 【請求項３】 請求項１記載の方法であって、ここで前記化合物が下記の化
   合物、すなわち、 ２４−（Ｓ），２５−エポキシコレステロール；２４（Ｓ）−ヒドロキシコレス
   テロール；２２−（Ｒ）−ヒドロキシコレステロール；２４（Ｒ），２５−エポ
   キシコレステロール；２２（Ｒ）−ヒドロキシ−２４（Ｓ），２５−エポキシコ
   レステロール；２２（Ｓ）−ヒドロキシ−２４（Ｒ），２５−エポキシコレステ
   ロール；２４−（Ｓ），２５−イミノコレステロール；メチル−３８−ヒドロキ
   シコロネート；Ｎ，Ｎ−ジメチル−３β−ヒドロキシコロンアミド；２４（Ｒ）
   −ヒドロキシコレステロール；２２（Ｓ）−ヒドロキシコレステロール；２２（
   Ｒ），２４（Ｓ）−ジヒドロキシコレステロール；２５−ヒドロキシコレステロ
   ール；２２（Ｒ）−ヒドロキシコレステロール；２２（Ｓ）−ヒドロキシコレス
   テロール；２４（Ｓ），２５−ジヒドロキシコレステロール；２４（Ｒ），２５
   −ジヒドロキシコレステロール；２４，２５−デヒドロコレステロール；２５−
   エポキシ−２２（Ｒ）−ヒドロキシコレステロール；２０（Ｓ）−ヒドロキシコ
   レステロール；（２０Ｒ，２２Ｒ）−コレスト−５−ｅｎｅ−３β，２０，２２
   −トリオール；４，４−ジメチル−５−α−コレスタ−８，１４，２４−トリエ
   ン−３−β−オール；７α−ヒドロキシ−２４（Ｓ），２５−エポキシコレステ
   ロール；７β−ヒドロキシ−２４（Ｓ），２５−エポキシコレステロール；７−
   オキソ−２４（Ｓ），２５−エポキシコレステロール；７α−ヒドロキシコレス
   テロール；７−オキソコレステロール；およびデモステロール， より成るグループから選択されることを特徴とする方法。
4. 【請求項４】 請求項１記載の方法であって、ここで前記ＬＸＲがＬＸＲα
   であることを特徴とする方法。
5. 【請求項５】 正常値よりも低いＨＤＬコレステロール水準、正常値よりも
   高いトリグリセリド水準、または心臓血管病を持つと診断された患者を処置する
   一つの方法であって、前記方法がＲＸＲ仲介転写活性を調節する化合物を前記患
   者に投与することより成ることを特徴とする方法。
6. 【請求項６】 請求項５記載の方法であって、ここで前記ＲＸＲがＲＸＲα
   であることを特徴とする方法。
7. 【請求項７】 候補化合物がＡＢＣ１発現を調節するかどうかを決定する方
   法であって、ここで前記方法が （ａ）レポーター遺伝子に連結されたＡＢＣ１調節領域またはプロモーターよ
   り成る核酸分子を提供し、 （ｂ）前記核酸分子を前記候補化合物に接触させ、および （ｃ）前記レポーター遺伝子の発現を測定する ステップより成り、ここで前記化合物と接触されなかった対応する対照核酸分子
   の前記レポーター遺伝子発現と対比して、変更レポーター遺伝子発現は前記候補
   化合物がＡＢＣ１発現を調節することを示すことを特徴とする方法。
8. 【請求項８】 請求項７記載の方法であって、ここで前記調節領域が配列識
   別番号１のヌクレオチド５８５４乃至６６９４、７７５６乃至８３１８、１０４
   ７９乃至１０８２５、１５２１４乃至１６０６８、２１６３６乃至２２１１１、
   ２７８９８乃至２８７２１、３２９５１乃至３３７４３、３６０６５乃至３６８
   ４７、３９７３０乃至４０５７７、４５４３乃至５２８７、及び４５０８１乃至
   ５５６３９から選択される５０個の連続ヌクレオチドを含むことを特徴とする方
   法。
9. 【請求項９】 請求項７記載の方法であって、ここで前記調節領域がＬＸＲ
   ｓ、ＲＸＲｓ、ＲＯＲｓ、ＳＲＥＢＰｓ、およびＰＰＡＲｓより成るグループか
   ら選択される転写因子の結合部位を含むことを特徴とする方法。
10. 【請求項１０】 一つの事実上純粋な核酸分子であって、配列識別番号１の
    ヌクレオチド５８５４乃至６６９４、７７５６乃至８３１８、１０４７９乃至１
    ０８２５、１５２１４乃至１６０６８、２１６３６乃至２２１１１、２７８９８
    乃至２８７２１、３２９５１乃至３３７４３、３６０６５乃至３６８４７、３９
    ７３０乃至４０５７７、４５４３乃至５２８７、または４５０８１乃至５５６３
    ９の少なくとも５０個の隣接ヌクレオチドに事実上同一である領域を含むことを
    特徴とする方法。
11. 【請求項１１】 配列識別番号１のヌクレオチド１乃至２８，７０７に事実
    上同一である領域を含むことを特徴とする一つの事実上純粋な核酸分子。
12. 【請求項１２】 配列識別番号１のヌクレオチド２９，０１１乃至５３，２
    ２８に事実上同一である領域を含むことを特徴とする一つの事実上純粋な核酸分
    子。
13. 【請求項１３】 請求項１０記載の核酸分子を発現することを特徴とする一
    つの細胞。
14. 【請求項１４】 請求項１０記載の核酸分子を発現することを特徴とする一
    つの非ヒト哺乳類。
15. 【請求項１５】 正常より高いトリグリセリド水準を持つヒトを処置する一
    つの方法であって、前記方法が前記ヒトにＡＢＣ１ポリペプチド、またはそのト
    リグリセリド調節断片を投与することを含むことを特徴とする方法。
16. 【請求項１６】 請求項１５記載の方法であって、ここで前記ＡＢＣ１ポリ
    ペプチドが配列識別番号５の配列を持つことを特徴とする方法。
17. 【請求項１７】 請求項１５記載の方法であって、ここで前記ＡＢＣ１ポリ
    ペプチドが位置２１９でＲ→Ｋ変異または位置３９９でＶ→Ａ変異を含むことを
    特徴とする方法。
18. 【請求項１８】 請求項１５記載の方法であって、ここで前記ＡＢＣ１ポリ
    ペプチドがその安定性を増加する変異を含むことを特徴とする方法。
19. 【請求項１９】 請求項１５記載の方法であって、ここで前記ＡＢＣ１ポリ
    ペプチドが生物活性を増加する変異を含むことを特徴とする方法。
20. 【請求項２０】 正常より高いトリグリセリド水準を持つヒトを処置する一
    つの方法であって、前記方法が前記ヒトにＡＢＣ１ポリペプチドまたはトリグリ
    セリド調節断片をコーディングする核酸分子を投与することを含むことを特徴と
    する方法。
21. 【請求項２１】 請求項２０記載の方法であって、ここで前記ＡＢＣ１ポリ
    ペプチドが配列識別番号５のアミノ酸配列を持つことを特徴とする方法。
22. 【請求項２２】 請求項２０記載の方法であって、ここで前記ＡＢＣ１ポリ
    ペプチドが位置２１９でＲ→Ｋ変異または位置３９９でＶ→Ａ変異を含むことを
    特徴とする方法。
23. 【請求項２３】 請求項２０記載の方法であって、ここで前記ＡＢＣ１ポリ
    ペプチドがその安定性を増加する変異を含むことを特徴とする方法。
24. 【請求項２４】 請求項２０記載の方法であって、ここで前記ＡＢＣ１ポリ
    ペプチドが生物活性を増加する変異を含むことを特徴とする方法。
25. 【請求項２５】 請求項２０記載の方法であって、ここで前記生物活性がコ
    レステロールの調節であることを特徴とする方法。
26. 【請求項２６】 請求項２０記載の方法であって、ここで前記ヒトが正常よ
    り低いＨＤＬコレステロール水準を持つことを特徴とする方法。
27. 【請求項２７】 正常よりも高いトリグリセリド水準を持つヒトを処置する
    一つの方法であって、前記方法が前記ヒトにＡＢＣ１生物活性を増加しまたは野
    生型ＡＢＣ１、Ｒ２１９Ｋ ＡＢＣ１、あるいはＶ３９９Ａ ＡＢＣ１の活性を
    擬態する化合物を投与することを含むことを特徴とする方法。
28. 【請求項２８】 優性ネガティブＡＢＣ１ポリペプチドをコーディングする
    核酸分子を含む導入遺伝子を含む一つの非ヒト哺乳類であって、前記優性ネガテ
    ィブポリペプチドが位置１０９１でＭ→Ｔ変異を含むことを特徴とする非ヒト哺
    乳類。
29. 【請求項２９】 候補化合物が優性ネガティブＡＢＣ１ポリペプチドの阻害
    を減らすかどうかを決定する一つの方法であって、前記優性ネガティブポリペプ
    チドが位置１０９１でＭ→Ｔ変異を含み、前記方法が （ａ）優性ネガティブＡＢＣ１ポリペプチドを発現する細胞を提供し、 （ｂ）前記細胞を前記候補化合物に接触させ、また、 （ｃ）前記細胞のＡＢＣ１生物活性を測定する、 ステップを含み、ここで前記化合物に接触されない対応する対照細胞での前記Ａ
    ＢＣ１生物活性に比べて前記ＡＢＣ１生物活性での増加は、前記候補化合物が優
    性ネガティブＡＢＣ１ポリペプチドの阻害を減らすことを示すことを特徴とする
    方法。
30. 【請求項３０】 トリグリセリド低減薬剤に対するヒトの反応を予測する一
    つの方法であって、前記薬剤に対する人の反応を変更するＡＢＣ１遺伝子、プロ
    モーターまたは調節配列に多型性を持つかどうかを決定することを特徴とする方
    法。
31. 【請求項３１】 候補化合物がトリグリセリド水準を調節するのに有用であ
    るかどうかを決定する一つの方法であって前記方法が （ａ）ＡＢＣ１遺伝子に変異を含むニワトリを提供し、 （ｂ）前記候補化合物を前記ニワトリに投与し、また （ｃ）前記ニワトリのＡＢＣ１生物活性を測定する、 ステップを含み、ここで前記化合物に接触されない対応する対照ニワトリの前記
    生物活性に比べて、変更ＡＢＣ１生物活性は前記候補化合物がトリグリセリド水
    準を調節するのに有用であることを示すことを特徴とする方法。
32. 【請求項３２】 請求項３１記載の方法であって、ここで前記ＡＢＣ１生物
    活性がコレステロールの輸送であることを特徴とする方法。
33. 【請求項３３】 候補化合物がトリグリセリド水準を調節するのに有用であ
    るかどうかを決定する一つの方法であって、前記方法が （ａ）配列識別番号５のアミノ酸１乃至６０を含むＡＢＣ１ポリペプチドを発
    現する細胞を提供し、 （ｂ）前記細胞を前記候補化合物に接触させ、また （ｃ）前記細胞のＡＢＣ１生物活性を測定する、 ステップを含み、ここで前記化合物に接触されない対応する対照細胞のＡＢＣ１
    生物活性に比べて、変更ＡＢＣ１生物活性は前記候補化合物がトリグリセリド水
    準を調節するのに有用であることを示すことを特徴とする方法。
34. 【請求項３４】 候補化合物がトリグリセリド水準を調節するのに有用であ
    るかどうかを決定する方法であって、前記方法が （ａ）ＡＢＣ１遺伝子を発現する細胞またはその断片を提供し、 （ｂ）前記細胞を前記候補化合物に接触させ、また （ｃ）前記細胞のＡＢＣ１発現を測定する、 ステップを含み、 ここで前記候補化合物に接触されない対応する対照細胞の前記ＡＢＣ１発現に比
    べて、変更ＡＢＣ１発現は前記候補化合物がトリグリセリド水準を調節するのに
    有用であることを示すことを特徴とする方法。
35. 【請求項３５】 候補化合物がトリグリセリド水準を調節するのに有用であ
    るかどうかを決定する一つの方法であって、前記方法が （ａ）配列識別番号１のアミノ酸１乃至６０を含むＡＢＣ１ポリペプチドを提
    供し、 （ｂ）前記ポリペプチドを前記候補化合物と接触させ、また （ｃ）ＡＢＣ１生物活性を測定する、 ステップを含み、 ここで前記候補化合物に接触されない対応する対照ＡＢＣ１ポリペプチドのＡＢ
    Ｃ１生物活性に比べて、変更ＡＢＣ１生物活性は前記候補化合物がトリグリセリ
    ド水準を調節するのに有用であることを特徴とする方法。
36. 【請求項３６】 候補化合物がトリグリセリド水準を調節するのに有用であ
    るかどうかを決定する一つの方法であって、前記方法が （ａ）配列識別番号５のアミノ酸１乃至６０を含むＡＢＣ１ポリペプチドを提
    供し、 （ｂ）前記ポリペプチドを前記候補化合物に接触させ、また （ｃ）前記ＡＢＣ１ポリペプチドの発現を測定する、 ステップを含み、 ここで前記化合物に接触されない対応する対照ＡＢＣ１ポリペプチドの前記発現
    に比べて、前記ＡＢＣ１ポリペプチドの発現の変化は前記候補化合物がトリグリ
    セリド水準を調節するのに有用であることを示すことを特徴とする方法。
37. 【請求項３７】 候補化合物がトリグリセリド水準を調節するのに有用であ
    るかどうかを決定する一つの方法であって、前記方法が （ａ）配列識別番号５のアミノ酸１乃至６０を含むＡＢＣ１ポリペプチドを提
    供し、 （ｂ）前記ポリペプチドを前記候補化合物に接触させ、また （ｃ）前記ＡＢＣ１ポリペプチドの前記候補化合物の結合を測定する、 ステップを含み、ここで前記ＡＢＣ１ポリペプチドの前記候補化合物への結合は
    、前記候補化合物がトリグリセリド水準を調節するのに有用であることを示すこ
    とを特徴とする方法。
38. 【請求項３８】 候補化合物がトリグリセリド水準を調節するのに有用であ
    るかどうかを決定する一つの方法であって、前記方法は （ａ）（ｉ）配列識別番号５のアミノ酸１乃至６０を含むＡＢＣ１ポリペプチ
    ド、および（ｉｉ）前記ＡＢＣ１ポリペプチドと相互作用する第２ポリペプチド
    を提供し、 （ｂ）前記ポリペプチドを候補化合物と接触させ、また （ｃ）前記ＡＢＣ１ポリペプチドと前記第２ポリペプチドとの相互作用を測定
    する、 ステップを含み、ここで前記ポリペプチドと前記第２ポリペプチドとの相互作用
    の変更は、前記候補化合物がトリグリセリド水準を調節するのに有用であること
    を示すことを特徴とする方法。
39. 【請求項３９】 候補化合物がトリグリセリド水準を調節するのに有用であ
    るかどうかを決定する一つの方法であって、前記方法は （ａ）配列識別番号５のアミノ酸１乃至６０を含むＡＢＣ１ポリペプチドを含
    む細胞を提供し （ｂ）前記細胞を前記候補化合物に接触させ、また （ｃ）前記ＡＢＣ１ポリペプチドの半減期を測定する、 ステップを含み、ここで前記化合物に接触されない対応する対照細胞の前記半減
    期に比べて、前記半減期の増加は前記候補化合物がトリグリセリド水準を調節す
    るのに有用であることを示すことを特徴とする方法。
40. 【請求項４０】 候補化合物がトリグリセリド水準を調節するのに有用であ
    るかどうかを決定する一つの方法であって、前記方法が （ａ）脂質膜にＡＢＣ１ポリペプチドを提供し、 （ｂ）前記ポリペプチドを前記候補化合物に接触させ、また （ｃ）前記脂質膜を交差してＡＢＣ１仲介脂質輸送を測定する、 ステップを含み、 ここで前記化合物に接触されない対応する対照ＡＢＣ１ポリペプチドの前記脂質
    輸送に比べて脂質輸送の変化は、前記候補化合物がトリグリセリド水準を調節す
    るのに有用であることを示すことを特徴とする方法。
41. 【請求項４１】 請求項３５乃至３８、または４０記載の方法であって、こ
    こで前記ＡＢＣ１ポリペプチドが無細胞系にあることを特徴とする方法。
42. 【請求項４２】 請求項３５乃至３８、または４０に記載の方法であって、
    ここで前記ＡＢＣ１ポリペプチドが細胞にあることを特徴とする方法。
43. 【請求項４３】 請求項４２記載の方法であって、ここで前記細胞がＷＨＡ
    Ｍニワトリからのものであることを特徴とする方法。
44. 【請求項４４】 請求項４２記載の方法であって、ここで前記細胞がヒトま
    たは非ヒト哺乳類にあることを特徴とする方法。
45. 【請求項４５】 請求項４４記載の方法であって、ここで前記動物がＷＨＡ
    Ｍニワトリであることを特徴とする方法。
46. 【請求項４６】 請求項３１、３３、または３５記載の方法であって、ここ
    で前記生物活性が脂質またはインターロイキン−１の輸送であることを特徴とす
    る方法。
47. 【請求項４７】 請求項４６記載の方法であって、ここで前記脂質がコレス
    テロールであることを特徴とする方法。
48. 【請求項４８】 請求項４７記載の方法であって、ここで前記コレステロー
    ルがＨＤＬコレステロールであることを特徴とする方法。
49. 【請求項４９】 請求項３１、３３、または３５記載の方法であって、ここ
    で前記生物活性がＡＢＣ１ポリペプチドによるＡＴＰの結合または加水分解であ
    ることを特徴とする方法。
50. 【請求項５０】 被験者の疾病または異常の性向を決定する一つの方法であ
    って、ここで前記疾病または異常が正常より低いＨＤＬ水準、正常より高いトリ
    グリセリド水準、および心臓血管病より成るグループから選択され、前記方法は
    前記被験者から得られる試料でのＡＢＣ１調節領域、プロモーター、またはコー
    ディング配列のポリヌクレオチド配列にあるいはＡＢＣ１タンパク質のアミノ酸
    配列に少なくとも１個のＡＢＣ１多型性の存在または不在を決定することを含み
    、ここで前記多型性の存在または不在が前記疾病または異常のリスクを示してい
    ることを特徴とする方法。
51. 【請求項５１】 請求項５０記載の方法であって、さらに前記ポリヌクレオ
    チド配列または前記アミノ酸配列にある少なくとも５個のＡＢＣ１多型性部位を
    分析することを含むことを特徴とする方法。
52. 【請求項５２】 ＡＢＣ１多型性が被験者の疾病または異常のリスクを示し
    ているかどうかを決定する一つの方法であって、ここで前記疾病または異常が正
    常より低いＨＤＬ水準、正常より高いトリグリセリド水準、および心臓血管病よ
    り成るグループから選択され、前記方法は （ａ）第１被験者または被験者の組での前記疾病または異常の罹患率が第２被
    験者または被験者の組での前記疾病または異常の前記罹患率と異なるかどうかを
    決定し、 （ｂ）前記第１被験者または被験者の組および前記第２被験者または被験者の
    組から得られる試料でのＡＢＣ１調節領域、プロモーター、またはコーディング
    配列のポリヌクレオチド配列、あるいはＡＢＣ１タンパク質のアミノ酸配列を分
    析し、 （ｃ）少なくとも１個の多型性が前記第１被験者または被験者の組と前記第２
    被験者または被験者の組の間で異なる、 ステップを含み、 ここで前記ＡＢＣ１多型性の存在または不在が前記疾病または異常の前記罹患率
    と相関し、これにより前記ＡＢＣ１多型性が前記リスクを示しているかどうかを
    決定することを特徴とする方法。
53. 【請求項５３】 請求項５２記載の方法であって、さらに前記ポリヌクレオ
    チド配列または前記アミノ酸配列にある少なくとも５個のＡＢＣ１多型性部位を
    分析することを含むことを特徴とする方法。
54. 【請求項５４】 正常より低いＨＤＬコレステロール水準、正常より高いト
    リグリセリド水準、および心臓血管病より成るグループから選択される疾病また
    は異常の素因または罹患率の記録に相関するＡＢＣ１多型性の複数の配列記録よ
    り成ることを特徴とする一つの電子データベース。
55. 【請求項５５】 被験者のＡＢＣ１活性または発現を調節するための望まし
    い治療を選択する一つの方法であって、前記方法が、 （ａ）前記被験者から得られる試料でのＡＢＣ１調節領域、プロモーター、ま
    たはコーディング配列のポリヌクレオチド配列、あるいはＡＢＣ１タンパク質の
    アミノ酸配列にある少なくとも１個のＡＢＣ１多型性の存在または不在を決定し
    、ここで前記ＡＢＣ１多型性の存在または不在がＡＢＣ１発現または活性を調節
    する少なくとも１個の治療の安全性と効率を示し、また （ｂ）前記被験者のＡＢＣ１発現または活性を調節する望ましい治療を決定す
    る、 ことを特徴とする方法。
56. 【請求項５６】 請求項５５記載の方法であって、更に前記ポリヌクレオチ
    ド配列または前記アミノ酸配列で少なくとも５個のＡＢＣ１多型性部位を分析す
    ることを含むことを特徴とする方法。
57. 【請求項５７】 候補化合物が正常よりも低いＨＤＬコレステロール水準、
    正常より高いトリグリセリド水準、および心臓血管病より成るグループからの選
    択される疾病または異常の処置に有用であるかどうかを決定する一つの方法であ
    って、前記方法が （ａ）測定可能ＡＢＣ１生物活性を持つ検定システムを提供し、 （ｂ）前記検定システムを前記候補化合物に接触させ、また （ｃ）ＡＢＣ１生物活性またはＡＢＣ１リン酸化を測定する、 ステップを含み、 ここで前記候補化合物に接触されない対応する対照検定システムでの前記ＡＢＣ
    １生物活性またはＡＢＣ１リン酸化に比べて、ＡＢＣ１生物活性またはＡＢＣ１
    リン酸化の調節は、前記候補化合物が前記疾病または異常の処置に有用であるこ
    とを示すことを特徴とする方法。
58. 【請求項５８】 請求項５７記載の方法であって、ここで前記検定システム
    が細胞ベイストシステムであることを特徴とする方法。
59. 【請求項５９】 請求項５７記載の方法であって、ここで前記システムが無
    細胞システムであることを特徴とする方法。
60. 【請求項６０】 正常より低いＨＤＬコレステロール水準、正常より高いト
    リグリセリド水準、および心臓血管病より成るグループから選択される疾病また
    異常を改善する能力を試験する化合物を確認する一つの方法であって、ここで前
    記方法が、 （ａ）被験者または細胞を候補化合物と接触させ、 （ｂ）前記被験者または細胞でＡＢＣ１発現、活性またはタンパク質リン酸化
    を測定する、 ステップを含み、 ここで前記候補化合物に接触されない対応する対照被験者または細胞での前記Ａ
    ＢＣ１発現、活性、またはタンパク質リン酸化と比べて、変更ＡＢＣ１発現、活
    性、またはタンパク質リン酸化は、前記候補化合物を前記疾病または異常を改善
    する能力を試験する化合物として確認することを特徴とする方法。
61. 【請求項６１】 請求項５７または６０記載の方法であって、ここで前記候
    補化合物が前記ＡＢＣ１タンパク質リン酸化および前記ＡＢＣ１活性を調節する
    ことを特徴とする方法。
62. 【請求項６２】 候補化合物が正常より低いＨＤＬコレストロール水準、正
    常より高いトリグリセリド水準、および心臓血管病よりなるグループから選択さ
    れる疾病または異常を調節するのに有用であるかどうかを決定するための一つの
    方法であって、前記方法は、 （ａ）ＡＢＣ１遺伝子またはその断片を発現する細胞を提供し、 （ｂ）前記細胞を前記候補化合物と接触させ、また （ｃ）前記細胞のＡＢＣ１活性を測定する、 ステップを含み、 ここで前記化合物に接触されない対応する対照細胞での前記ＡＢＣ１活性に比べ
    て、変更ＡＢＣ１活性は、前記候補化合物が前記疾病または異常を調節するのに
    有用であることを示すことを特徴とする方法。
63. 【請求項６３】 候補化合物が正常より低いＨＤＬコレストロール水準、正
    常より高いトリグリセリド水準、および心臓血管病より成るグループから選択さ
    れる疾病または異常を調節するのに有用であるかどうかを決定するための一つの
    方法であって、前記方法は、 （ａ）ＡＢＣ１タンパク質を発現する細胞を前記候補化合物に接触させ、 （ｂ）前記ＡＢＣ１タンパク質のリン酸化を測定する、 ステップを含み、 ここで前記化合物に接触されない対応する対照細胞での前記ＡＢＣ１タンパク質
    リン酸化に比べて、変更ＡＢＣ１タンパク質リン酸化は、前記候補化合物が前記
    疾病または異常を調節するのに有用であることを示すことを特徴とする方法。
64. 【請求項６４】 正常より低いＨＤＬコレステロール水準、正常より高いト
    リグリセリド水準、および心臓血管病より成るグループから選択される疾病また
    は異常の処置に有用な一つの化合物であって、ここで前記化合物がＡＢＣ１生物
    活性を調節し、またここで前記化合物が （ａ）測定可能ＡＢＣ１生物活性を持つ検定システムを提供し、 （ｂ）前記検定システムを前記化合物に接触させ、また （ｃ）ＡＢＣ１生物活性を測定する、 ステップにより確認され、 ここで前記化合物に接触されない対応する対照細胞での前記ＡＢＣ１生物活性に
    比べて、ＡＢＣ１生物活性の調節は、前記候補化合物が前記疾病または異常を調
    節するのに有用であることを示すことを特徴とする方法。
65. 【請求項６５】 正常より低いＨＤＬコレストロール水準、正常より高いト
    リグリセリド水準、および心臓血管病より成るグループから選択される疾病また
    は異常の処置に有用な一つの化合物であって、ここで前記化合物がＲ２１９Ｋ
    ＡＢＣ１変異により誘導されるＡＢＣ１生物活性での変化を擬態するＡＢＣ１生
    物活性に変化を誘導することを特徴とする化合物。
66. 【請求項６６】 正常より低いＨＤＬコレストロール水準、正常より高いト
    リグリセリド水準、および心臓血管病より成るグループから選択される疾病また
    は異常の処置に有用な一つの化合物であって、ここで前記化合物がＡＢＣ１の残
    基Ｒ２１９と結合または相互作用し、これによりＲ２１９Ｋ ＡＢＣ１変異によ
    り誘導されるＡＢＣ１活性で変化を擬態することを特徴とする化合物。
67. 【請求項６７】 正常より低いＨＤＬコレストロール水準、正常より高いト
    リグリセリド水準、および心臓血管病より成るグループから選択される疾病また
    は異常の処置に有用な一つの化合物であって、ここで前記化合物がＶ３３９Ａ
    ＡＢＣ１変異により誘導されるＡＢＣ１生物活性での変化を擬態するＡＢＣ１生
    物活性に変化を誘導することを特徴とする化合物。
68. 【請求項６８】 正常より低いＨＤＬコレストロール水準、正常より高いト
    リグリセリド水準、および心臓血管病より成るグループから選択される疾病また
    は異常の処置に有用な一つの化合物であって、ここで前記化合物がＡＢＣ１の残
    基Ｖ３９９と結合または相互作用し、これによりＶ３９９Ａ ＡＢＣ１変異によ
    るＡＢＣ１活性での変化を擬態することを特徴とする化合物。
69. 【請求項６９】 ＡＢＣ１活性を調節し、ＡＢＣ１のアミノ酸と結合または
    相互作用する一つの化合物であって、ここで前記アミノ酸がＡＢＣ１（配列識別
    番号５）のアミノ酸１１９乃至３１９またはＡＢＣ１（配列識別番号５）のアミ
    ノ酸２９９乃至４９９から選択される残基であることを特徴とする化合物。
70. 【請求項７０】 候補化合物が正常より低いＨＤＬコレストロール水準、正
    常より高いトリグリセリド水準、および心臓血管病より成るグループから選択さ
    れる疾病または異常の処置に有用であるかどうか決定する一つの方法であって、
    前記方法は、 （ａ）測定可能ＬＸＲ生物活性を持つ検定システムを提供し、 （ｂ）この検定システムを前記候補化合物と接触させ、また （ｃ）ＬＸＲ生物活性を測定する、 ステップを含み、 ここで前記候補化合物に接触されない対応する対照検定システムでの前記ＬＸＲ
    生物活性に比べて、ＬＸＲ生物活性の調節は、前記候補化合物が前記疾病または
    異常の処置に有用であること示すことを特徴とする方法。
71. 【請求項７１】 候補化合物がＡＢＣ１生物活性を調節するのに有用である
    かどうかを決定する一つの方法であって、前記方法は、 （ａ）測定可能なＬＸＲ生物活性持つ検定システムを提供し、 （ｂ）前記検定システムを前記候補化合物に接触させ、また （ｃ）前記ＬＸＲ生物活性を測定する、 ステップを含み、 ここで前記候補化合物に接触されない対応する対照検定システムでの前記ＬＸＲ
    生物活性に比べてＬＸＲ生物活性の調節は、前記候補化合物がＡＢＣ１生物活性
    を調節するのに有用なことを示すことを特徴とする方法。
72. 【請求項７２】 請求項７１記載の方法であって、ここでＬＸＲ生物活性が
    ＡＢＣ１発現の調節であることを特徴とする方法。
73. 【請求項７３】 ＡＢＣ１生物活性を調節する能力を試験される化合物を確
    認するための一つの方法であって、前記方法は、 （ａ）被験者または細胞を候補化合物と接触させ、 （ｂ）前記被験者または細胞でのＬＸＲ遺伝子産物の活性を検定する、 ステップを含み、 ここで前記化合物に接触されない対応する対照被験者または細胞での前記活性に
    比べて、前記活性の調節は、前記候補化合物をＡＢＣ１の生物活性を調節する能
    力を試験される化合物として確認することを特徴とする方法。
74. 【請求項７４】 正常より低いＨＤＬコレストロール水準、正常より高いト
    リグリセリド水準、および心臓血管病より成るグループから選択される疾病また
    は異常の処置に有用な一つの化合物を確認する検定でのＬＸＲ遺伝子産物の使用
    。
75. 【請求項７５】 正常より低いＨＤＬコレストロール水準、正常より高いト
    リグリセリド水準、および心臓血管病より成るグループから選択される疾病また
    は異常の処置のためにＬＸＲ遺伝子産物の活性または発現を調節することを特徴
    とする化合物の使用。
76. 【請求項７６】 正常より低いＨＤＬコレストロール水準、正常より高いト
    リグリセリド水準、および心臓血管病より成るグループから選択される疾病また
    は異常の処置する能力を検定される化合物を確認する一つの方法であって、前記
    方法が （ａ）測定可能ＬＸＲ生物活性を持つ検定システムを提供し、 （ｂ）前記検定システムを候補化合物と接触させ、また （ｃ）ＬＸＲ生物活性を測定する、 ステップを含み、 ここで前記候補化合物と接触されない対応する検定システムでの前記ＬＸＲ生物
    活性に比べて、前記ＬＸＲ生物活性の調節は、前記候補化合物を前記疾病または
    異常を処置する能力を試験される化合物として確認することを特徴とする方法。
77. 【請求項７７】 正常より低いＨＤＬコレストロール水準、正常より高いト
    リグリセリド水準、および心臓血管病より成るグループから選択される疾病また
    は異常の処置を処置する能力のために候補ＬＸＲアゴニストをスクリーニングす
    る一つの方法であって、前記方法は （ａ）前記細胞を前記候補ＬＸＲアゴニストに接触させ、また （ｂ）前記細胞のコレステロールに流出活性を測定する、 ステップを含み、 ここで前記候補ＬＸＲアゴニストに接触されない対応する対照細胞に比べて前記
    細胞での前記コレステロールに流出活性の増加は、前記候補ＬＸＲアゴニストが
    前記疾病または異常を処置するのに有用であることを示すことを特徴とする方法
    。
78. 【請求項７８】 正常より低いＨＤＬコレストロール水準、正常より高いト
    リグリセリド水準、および心臓血管病より成るグループから選択される疾病また
    は異常の処置する能力のために候補ＬＸＲ調節化合物をスクリーニングする一つ
    の方法であって、前記方法は （ａ）細胞を前記候補ＬＸＲ調節化合物と接触させ、また （ｂ）前記細胞のＡＢＣ１生物活性を測定する、 ステップを含み、 ここで前記ＬＸＲ調節化合物に接触されない対応する対照細胞での前記ＡＢＣ１
    生物活性に比べて、前記細胞でのＡＢＣ１生物活性の増加は、前記ＬＸＲ調節化
    合物での前記疾病または異常の処置のために有用であることを示すことを特徴と
    する方法。
79. 【請求項７９】 請求項７１乃至７８のいずれか１項記載の方法であって、
    ここで前記細胞または検定システムが、配列識別番号９４，配列識別番号９２、
    およびイントロン１の３′末端のヌクレオチド−７６７０前後でのＬＸＲＥコン
    センサスモチーフより成るグループから選択されるＬＸＲＥの外因性供給複製を
    含むことを特徴とする方法。