JP2003518000A - プロドラッグ化合物およびその調製方法 - Google Patents
プロドラッグ化合物およびその調製方法Info
- Publication number
- JP2003518000A JP2003518000A JP2000586378A JP2000586378A JP2003518000A JP 2003518000 A JP2003518000 A JP 2003518000A JP 2000586378 A JP2000586378 A JP 2000586378A JP 2000586378 A JP2000586378 A JP 2000586378A JP 2003518000 A JP2003518000 A JP 2003518000A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- seq
- oligopeptide
- leu
- therapeutic agent
- compound
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
- A61K47/65—Peptidic linkers, binders or spacers, e.g. peptidic enzyme-labile linkers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Abstract
(57)【要約】
本発明に係るプロドラッグは、治療剤の修飾形態であり、そして治療剤、オリゴペプチド、安定性基、及び場合によりリンカー基を含む。本プロドラッグは酵素トロアーゼ（ｔｒｏｕａｓｅ）により解裂される。本プロドラッグ化合物の製法も開示する。
Description
【０００１】関連出願の相互参照
本願は、１９９８年１２月１１日に出願された米国特許出願番号第６０／１１
１，７９３号および１９９９年２月８日に出願された米国特許出願番号第６０／
１１９，３１２号の優先権を主張する。緒言 技術分野 本発明は、新規化合物およびその製造法と対象とする。前記化合物は一般的に
プロドラッグとして作用し、ほとんどの場合既存化合物、特に細胞毒性薬剤の修
飾された形態である。これらのプロドラッグは所望の標的に対する特異性はより
高く、所望されない標的に対する特異性は低減されている。背景 アントラサイクリンおよびビンカアルカロイドなど多くの治療薬は、癌の治療
に特に効果的である。しかし、これらの分子は多くの場合、急性毒性、特に骨髄
および粘膜毒性ならびにアントラサイクリンの場合慢性心臓毒性およびビンカア
ルカロイドの場合慢性神経毒性という特徴が生体内である。同様に、メトトレキ
セートはリューマチ性疾患などの炎症性反応の治療に使用されることもあるが、
毒性が高いので用途が限定される。腫瘍細胞に対する効能を高め、これらの製品
の副作用（毒性、非腫瘍細胞の破壊など）の数および重篤性を低減するため、よ
り特異的な抗腫瘍薬の開発が望ましい。より特異的な抗炎症薬の開発も望まれる
。
１，７９３号および１９９９年２月８日に出願された米国特許出願番号第６０／
１１９，３１２号の優先権を主張する。緒言 技術分野 本発明は、新規化合物およびその製造法と対象とする。前記化合物は一般的に
プロドラッグとして作用し、ほとんどの場合既存化合物、特に細胞毒性薬剤の修
飾された形態である。これらのプロドラッグは所望の標的に対する特異性はより
高く、所望されない標的に対する特異性は低減されている。背景 アントラサイクリンおよびビンカアルカロイドなど多くの治療薬は、癌の治療
に特に効果的である。しかし、これらの分子は多くの場合、急性毒性、特に骨髄
および粘膜毒性ならびにアントラサイクリンの場合慢性心臓毒性およびビンカア
ルカロイドの場合慢性神経毒性という特徴が生体内である。同様に、メトトレキ
セートはリューマチ性疾患などの炎症性反応の治療に使用されることもあるが、
毒性が高いので用途が限定される。腫瘍細胞に対する効能を高め、これらの製品
の副作用（毒性、非腫瘍細胞の破壊など）の数および重篤性を低減するため、よ
り特異的な抗腫瘍薬の開発が望ましい。より特異的な抗炎症薬の開発も望まれる
。
【０００２】
毒性の問題を極力抑えるため、治療薬がプロドラッグの形態で患者に与えられ
ると有利である。プロドラッグは、その構造が特定の化学的または酵素的修飾を
受けることにより、生体内で薬剤（活性治療化合物）に変換できる分子である。
毒性を低下させる目的には、この変換は循環系または非標的組織よりも作用部位
または標的組織に限定されるべきである。しかし、プロドラッグは、血液および
血清中での安定性が低いという特徴があり、これは血液および血清がプロドラッ
グを分解する酵素を含むからである。
ると有利である。プロドラッグは、その構造が特定の化学的または酵素的修飾を
受けることにより、生体内で薬剤（活性治療化合物）に変換できる分子である。
毒性を低下させる目的には、この変換は循環系または非標的組織よりも作用部位
または標的組織に限定されるべきである。しかし、プロドラッグは、血液および
血清中での安定性が低いという特徴があり、これは血液および血清がプロドラッ
グを分解する酵素を含むからである。
【０００３】
このような問題を克服した望ましい種類のプロドラッグが、特許協力条約国際
公開ＷＯ ９６／０５８６３および米国特許第５，９６２，２１６号に開示され
ており、両特許を参照により本願に組み込む。しかし、そのようなプロドラッグ
の製造法と同様に、さらに有用なプロドラッグ化合物およびそのようなプロドラ
ッグの製造法が望まれる。
公開ＷＯ ９６／０５８６３および米国特許第５，９６２，２１６号に開示され
ており、両特許を参照により本願に組み込む。しかし、そのようなプロドラッグ
の製造法と同様に、さらに有用なプロドラッグ化合物およびそのようなプロドラ
ッグの製造法が望まれる。
【０００４】
本発明の特殊な目的は、公知の範囲中に存在する類似構造（特に最も近い構造
）のプロドラッグに比較して高い作用の特異性、低減した毒性およびより高い血
中安定性を示すプロドラッグである。発明の開示 本発明の化合物は、安定化基に結合しているオリゴペプチドに直接または間接
的に結合している、プロドラッグ形態の治療薬である。
）のプロドラッグに比較して高い作用の特異性、低減した毒性およびより高い血
中安定性を示すプロドラッグである。発明の開示 本発明の化合物は、安定化基に結合しているオリゴペプチドに直接または間接
的に結合している、プロドラッグ形態の治療薬である。
【０００５】
より一般的には、本発明は、治療薬の新規プロドラッグ化合物、特に従来技術
の製品に比べ治療特性が向上した、特に癌性腫瘍の治療および／またはリューマ
チ性疾患などの炎症性反応の治療において治療特性が向上した抗腫瘍治療薬を含
んでなるプロドラッグであると記載できる。向上した治療特性には、毒性の低減
および薬効の増加がある。高い作用特異性、低減した毒性、血清および血液中で
の高い安定性を示し、標的細胞に関連する酵素により活性化されるまで標的細胞
中に入らないプロドラッグが特に望ましい。腫瘍を特徴づけられる（診断、癌の
進行、腫瘍細胞から分泌される因子のアッセイなど）マーカーであるプロドラッ
グ化合物も企図される。
の製品に比べ治療特性が向上した、特に癌性腫瘍の治療および／またはリューマ
チ性疾患などの炎症性反応の治療において治療特性が向上した抗腫瘍治療薬を含
んでなるプロドラッグであると記載できる。向上した治療特性には、毒性の低減
および薬効の増加がある。高い作用特異性、低減した毒性、血清および血液中で
の高い安定性を示し、標的細胞に関連する酵素により活性化されるまで標的細胞
中に入らないプロドラッグが特に望ましい。腫瘍を特徴づけられる（診断、癌の
進行、腫瘍細胞から分泌される因子のアッセイなど）マーカーであるプロドラッ
グ化合物も企図される。
【０００６】
本発明は、本発明による化合物および任意に製薬上許容される補助薬または賦
形剤を含んでなる薬剤組成物にも関する。 さらに、治療薬の修飾によりプロドラッグを作り毒性を低減する方法が開示さ
れる。 本発明のプロドラッグを作るいくつかの方法が記載される。詳細な説明 略語 Ａｃａ＝６−アミノカプロン酸 Ａｃｎ＝アセトニトリル Ａｉｂ＝アミノイソ酪酸 Ａｌｌ＝アリル Ａｌｏｃ＝アリルオキシカルボニル Ａｍｂ＝４−（アミノメチル）安息香酸 ＡＰＰ＝３−アミノ−３−フェニルプロピオン酸 ＤＣＣ＝Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド Ｂｏｃ＝ｔ−ブチロキシカルボニル Ｃａｐ＝カプロン酸 ＤＢＮ＝１，５−ジアザビシクロ［４．３．０］ノン−５−エン ＤＢＯ＝１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン ＤＢＵ＝１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデセ−７−エン ＤＣＭ＝ジクロロメタン ＤＩＣ＝Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド ＤＩＥＡ＝ジイソプロピルエチルアミン Ｄｇ＝ジグリコール酸 ＤＭＦ＝ジメチルホルムアミド ＤＮＲ＝ダウノルビシン Ｄｏｘ＝ドキソルビシン Ｅｔ2Ｏ＝ジエチルエーテル Ｆｍｏｃ＝９−フルオレニルメチルオキシカルボニル Ｇｌ＝グルタル酸 ＨＡＴＵ＝Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−
テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート ＨＢＴＵ＝２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テ
トラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート ＨＥＰＥＳ＝ヒドロキシエチルピペリジン ＨＯＢｔ＝Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール ＨＰＬＣ＝高速液体クロマトグラフィー ＭｅＯＨ＝メタノール ＮＡＡ＝３−アミノ−４，４−ジフェニル酪酸 Ｎａｌ＝２−ナフチルアラニン Ｎａｐｈ＝１，８−ナフタレンジカルボン酸 Ｎｌｅ＝ノルロイシン ＮＭＰ＝Ｎ−メチルピロリジン Ｎｖａ＝ノルバリン ＰＡＭ樹脂＝４−ヒドロキシメチルフェニルアセトアミドメチル Ｐｈｇ＝フェニルグリシン Ｐｙｇ＝ピログルタミン酸 Ｐｙｒ＝３−ピリジルアラニン ＲＴ，ｒｔ＝室温 Ｓｕｃ＝コハク酸 ＴＣＥ＝トリクロロエチル ＴＦＡ＝トリフルオロ酢酸 ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン Ｔｈｉ＝２−チエニルアラニン Ｔｈｚ＝チアゾリジン−４−カルボン酸 Ｔｉｃ＝テトラヒドロイソキノリン−３−カルボン酸 本発明の化合物は、安定化基に結合したオリゴペプチドに直接または間接的に
結合した、プロドラッグ形態の治療薬である。
形剤を含んでなる薬剤組成物にも関する。 さらに、治療薬の修飾によりプロドラッグを作り毒性を低減する方法が開示さ
れる。 本発明のプロドラッグを作るいくつかの方法が記載される。詳細な説明 略語 Ａｃａ＝６−アミノカプロン酸 Ａｃｎ＝アセトニトリル Ａｉｂ＝アミノイソ酪酸 Ａｌｌ＝アリル Ａｌｏｃ＝アリルオキシカルボニル Ａｍｂ＝４−（アミノメチル）安息香酸 ＡＰＰ＝３−アミノ−３−フェニルプロピオン酸 ＤＣＣ＝Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド Ｂｏｃ＝ｔ−ブチロキシカルボニル Ｃａｐ＝カプロン酸 ＤＢＮ＝１，５−ジアザビシクロ［４．３．０］ノン−５−エン ＤＢＯ＝１，４−ジアザビシクロ［２．２．２］オクタン ＤＢＵ＝１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデセ−７−エン ＤＣＭ＝ジクロロメタン ＤＩＣ＝Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド ＤＩＥＡ＝ジイソプロピルエチルアミン Ｄｇ＝ジグリコール酸 ＤＭＦ＝ジメチルホルムアミド ＤＮＲ＝ダウノルビシン Ｄｏｘ＝ドキソルビシン Ｅｔ2Ｏ＝ジエチルエーテル Ｆｍｏｃ＝９−フルオレニルメチルオキシカルボニル Ｇｌ＝グルタル酸 ＨＡＴＵ＝Ｏ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−
テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート ＨＢＴＵ＝２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テ
トラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート ＨＥＰＥＳ＝ヒドロキシエチルピペリジン ＨＯＢｔ＝Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール ＨＰＬＣ＝高速液体クロマトグラフィー ＭｅＯＨ＝メタノール ＮＡＡ＝３−アミノ−４，４−ジフェニル酪酸 Ｎａｌ＝２−ナフチルアラニン Ｎａｐｈ＝１，８−ナフタレンジカルボン酸 Ｎｌｅ＝ノルロイシン ＮＭＰ＝Ｎ−メチルピロリジン Ｎｖａ＝ノルバリン ＰＡＭ樹脂＝４−ヒドロキシメチルフェニルアセトアミドメチル Ｐｈｇ＝フェニルグリシン Ｐｙｇ＝ピログルタミン酸 Ｐｙｒ＝３−ピリジルアラニン ＲＴ，ｒｔ＝室温 Ｓｕｃ＝コハク酸 ＴＣＥ＝トリクロロエチル ＴＦＡ＝トリフルオロ酢酸 ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン Ｔｈｉ＝２−チエニルアラニン Ｔｈｚ＝チアゾリジン−４−カルボン酸 Ｔｉｃ＝テトラヒドロイソキノリン−３−カルボン酸 本発明の化合物は、安定化基に結合したオリゴペプチドに直接または間接的に
結合した、プロドラッグ形態の治療薬である。
【０００７】
より一般的には、本発明は、治療薬の新規プロドラッグ化合物、特に従来技術
の製品に比べ治療特性が向上した、特に癌性腫瘍の治療および／またはリューマ
チ性疾患などの炎症性反応の治療において治療特性が向上した抗腫瘍治療薬を含
んでなるプロドラッグであると記載できる。向上した治療特性には、毒性の低減
および薬効の増加がある。高い作用特異性、低減した毒性、血清および血液中で
の高い安定性を示し、標的細胞に関連する酵素により活性化されるまで標的細胞
中に入らないプロドラッグが特に望ましい。腫瘍を特徴づけられる（診断、癌の
進行、腫瘍細胞から分泌される因子のアッセイなど）マーカーであるプロドラッ
グ化合物も企図される。
の製品に比べ治療特性が向上した、特に癌性腫瘍の治療および／またはリューマ
チ性疾患などの炎症性反応の治療において治療特性が向上した抗腫瘍治療薬を含
んでなるプロドラッグであると記載できる。向上した治療特性には、毒性の低減
および薬効の増加がある。高い作用特異性、低減した毒性、血清および血液中で
の高い安定性を示し、標的細胞に関連する酵素により活性化されるまで標的細胞
中に入らないプロドラッグが特に望ましい。腫瘍を特徴づけられる（診断、癌の
進行、腫瘍細胞から分泌される因子のアッセイなど）マーカーであるプロドラッ
グ化合物も企図される。
【０００８】
本発明は、本発明による化合物および任意に製薬上許容される補助薬または賦
形剤を含んでなる薬剤組成物にも関する。 さらに、治療薬の修飾によりプロドラッグを作り毒性を低減する方法が開示さ
れる。 本発明のプロドラッグを作るいくつかの方法が記載される。 プロドラッグ 本発明のプロドラッグは、修飾された形態の治療薬であり、以下のようないく
つかの部分を含んでなる： （１）治療薬 （２）オリゴペプチド （３）安定化基 （４）任意に連結基。
形剤を含んでなる薬剤組成物にも関する。 さらに、治療薬の修飾によりプロドラッグを作り毒性を低減する方法が開示さ
れる。 本発明のプロドラッグを作るいくつかの方法が記載される。 プロドラッグ 本発明のプロドラッグは、修飾された形態の治療薬であり、以下のようないく
つかの部分を含んでなる： （１）治療薬 （２）オリゴペプチド （３）安定化基 （４）任意に連結基。
【０００９】
プロドラッグの各部分を以下により詳細に議論する。プロドラッグのこれらの
部分の典型的な配向は以下のとおりである。 （安定化基）−（オリゴペプチド）−（任意の連結基）−（治療薬） 安定化基は、オリゴペプチドの第一の結合部位でオリゴペプチドに直接結合し
ている。オリゴペプチドは、オリゴペプチドの第二の結合部位で、直接または間
接的に治療薬に結合している。オリゴペプチドと治療薬が間接的に結合している
場合、連結基が存在する。
部分の典型的な配向は以下のとおりである。 （安定化基）−（オリゴペプチド）−（任意の連結基）−（治療薬） 安定化基は、オリゴペプチドの第一の結合部位でオリゴペプチドに直接結合し
ている。オリゴペプチドは、オリゴペプチドの第二の結合部位で、直接または間
接的に治療薬に結合している。オリゴペプチドと治療薬が間接的に結合している
場合、連結基が存在する。
【００１０】
プロドラッグの２つの部分の直接的な結合は、その２つの部分の間の共有結合
を意味する。したがって、安定化基およびオリゴペプチドは、オリゴペプチドの
第一の結合部位、通常オリゴペプチドのＮ末端で、共有結合により直接的に結合
している。オリゴペプチドと治療薬が直接的に結合している場合、それらはオリ
ゴペプチドの第二の結合部位で互いに共有結合により結合している。オリゴペプ
チドの第二の結合部位は通常オリゴペプチドのＣ末端であるが、オリゴペプチド
の他の部位でもよい。
を意味する。したがって、安定化基およびオリゴペプチドは、オリゴペプチドの
第一の結合部位、通常オリゴペプチドのＮ末端で、共有結合により直接的に結合
している。オリゴペプチドと治療薬が直接的に結合している場合、それらはオリ
ゴペプチドの第二の結合部位で互いに共有結合により結合している。オリゴペプ
チドの第二の結合部位は通常オリゴペプチドのＣ末端であるが、オリゴペプチド
の他の部位でもよい。
【００１１】
プロドラッグの2つの部分の間接結合は、その２つの部分のそれぞれが連結基
と共有結合により結合していることを意味する。別な実施様態では、プロドラッ
グは、治療薬へのオリゴペプチドの間接的な結合を有する。したがって、通常、
オリゴペプチドは、連結基に共有結合しており、連結基は治療薬に共有結合して
いる。
と共有結合により結合していることを意味する。別な実施様態では、プロドラッ
グは、治療薬へのオリゴペプチドの間接的な結合を有する。したがって、通常、
オリゴペプチドは、連結基に共有結合しており、連結基は治療薬に共有結合して
いる。
【００１２】
本発明のプロドラッグは、治療薬に直接または間接的に結合しているオリゴペ
プチド中で切断可能である。プロドラッグが効力を有するには、治療薬に結合し
ているオリゴペプチドがそれ自体プロドラッグの活性部分であるか、通常１つま
たは複数のエキソペプチダーゼによりプロドラッグの活性部分に容易に変換可能
である。プロドラッグの活性部分は、プロドラッグ化合物の残りの部分から放出
されると同時に標的細胞に入り直接治療効果を発揮するか、標的細胞中でさらな
る変換をしばしば起こすプロドラッグの部分である。
プチド中で切断可能である。プロドラッグが効力を有するには、治療薬に結合し
ているオリゴペプチドがそれ自体プロドラッグの活性部分であるか、通常１つま
たは複数のエキソペプチダーゼによりプロドラッグの活性部分に容易に変換可能
である。プロドラッグの活性部分は、プロドラッグ化合物の残りの部分から放出
されると同時に標的細胞に入り直接治療効果を発揮するか、標的細胞中でさらな
る変換をしばしば起こすプロドラッグの部分である。
【００１３】
安定化基およびオリゴペプチドの構造は、血中または非標識組織中に存在する
可能性のある酵素とは別の酵素によるオリゴペプチドのクリアランスを制限する
ようにさらに選択される。安定化基はプロドラッグの分解を妨げ、エキソペプチ
ドースによるプロドラッグの好ましい変化または他の物理的なプロドラッグ特性
を提供するように働く可能性がある。オリゴペプチドのアミノ酸配列はトロアー
ゼに対する特異性をさらに確実にするように設計される。
可能性のある酵素とは別の酵素によるオリゴペプチドのクリアランスを制限する
ようにさらに選択される。安定化基はプロドラッグの分解を妨げ、エキソペプチ
ドースによるプロドラッグの好ましい変化または他の物理的なプロドラッグ特性
を提供するように働く可能性がある。オリゴペプチドのアミノ酸配列はトロアー
ゼに対する特異性をさらに確実にするように設計される。
【００１４】
治療薬、特に抗腫瘍および／または抗炎症性治療薬を、治療薬の修飾によりプ
ロドラッグ形態にして不活性化することが望ましい。本発明によれば、標的細胞
は通常腫瘍細胞またはマクロファージおよび単核細胞などのリューマチ性疾患に
関連するような抗炎症性反応に関わる細胞である。治療薬を修飾してプロドラッ
グ形態にすると、治療薬の副作用のいくつかが低減される傾向もある。
ロドラッグ形態にして不活性化することが望ましい。本発明によれば、標的細胞
は通常腫瘍細胞またはマクロファージおよび単核細胞などのリューマチ性疾患に
関連するような抗炎症性反応に関わる細胞である。治療薬を修飾してプロドラッ
グ形態にすると、治療薬の副作用のいくつかが低減される傾向もある。
【００１５】
標的細胞では、治療薬（任意に1つまたは２つのアミノ酸に結合し、あるいは
連結基にも結合している）は、直接特定の細胞内作用部位で、または細胞内プロ
テアーゼの作用下で修飾された後、標的細胞を殺し、またはその増殖を阻害する
。正常細胞は生体内でトロアーゼをほとんどまたは全く放出しないので、本発明
による化合物は不活性な状態に保たれ、正常細胞内に入らない、または入るとし
ても比較的少量である。
連結基にも結合している）は、直接特定の細胞内作用部位で、または細胞内プロ
テアーゼの作用下で修飾された後、標的細胞を殺し、またはその増殖を阻害する
。正常細胞は生体内でトロアーゼをほとんどまたは全く放出しないので、本発明
による化合物は不活性な状態に保たれ、正常細胞内に入らない、または入るとし
ても比較的少量である。
【００１６】
プロドラッグは患者に投与され、安定な形態で血流により運ばれ、標的細胞の
周辺にくるとトロアーゼにより作用する。この酵素は正常細胞の細胞外近傍には
最低限の量しか存在しないので、プロドラッグは維持され、その活性な部分（治
療薬を含む）はせいぜい最低限の量しか正常細胞中に入らない。しかし、腫瘍ま
たは他の標的細胞の近傍では、局所的な環境中の関連酵素の存在によりプロドラ
ッグの切断が起こる。図２に示した例は、Ｎキャップテトラペプチドプロドラッ
グが細胞外でプロドラッグの他の部分から切断され標的細胞に入ることを示して
いる。標的細胞に入れば、プロドラッグはさらに修飾されて治療効果を与える。
プロドラッグの活性部分がある程度正常細胞に入ることもあるが、活性部分は主
に標的細胞の近傍でプロドラッグの残りから放出される。したがって正常細胞へ
の毒性は最低限になる。
周辺にくるとトロアーゼにより作用する。この酵素は正常細胞の細胞外近傍には
最低限の量しか存在しないので、プロドラッグは維持され、その活性な部分（治
療薬を含む）はせいぜい最低限の量しか正常細胞中に入らない。しかし、腫瘍ま
たは他の標的細胞の近傍では、局所的な環境中の関連酵素の存在によりプロドラ
ッグの切断が起こる。図２に示した例は、Ｎキャップテトラペプチドプロドラッ
グが細胞外でプロドラッグの他の部分から切断され標的細胞に入ることを示して
いる。標的細胞に入れば、プロドラッグはさらに修飾されて治療効果を与える。
プロドラッグの活性部分がある程度正常細胞に入ることもあるが、活性部分は主
に標的細胞の近傍でプロドラッグの残りから放出される。したがって正常細胞へ
の毒性は最低限になる。
【００１７】
治療薬を含むプロドラッグの活性部分の放出は、標的細胞に隣接した環境中で
起こるのが好ましい。標的細胞中では、治療薬は、その特異的細胞内作用部位で
直接、または細胞内プロテアーゼまたは他の酵素の作用により修飾を受けてから
作用し、他の形態に修飾されて標的細胞を殺しまたはその増殖を阻害する。本発
明の代表的なプロドラッグのこの作用を模式的に示した概略図が図２に示されて
いる。
起こるのが好ましい。標的細胞中では、治療薬は、その特異的細胞内作用部位で
直接、または細胞内プロテアーゼまたは他の酵素の作用により修飾を受けてから
作用し、他の形態に修飾されて標的細胞を殺しまたはその増殖を阻害する。本発
明の代表的なプロドラッグのこの作用を模式的に示した概略図が図２に示されて
いる。
【００１８】
本方法は、正常細胞が分泌しない酵素または他の因子を標的細胞が排出する場
合、標的細胞の破壊に特に有用であり、そのように意図されている。ここで「正
常細胞」とは、プロドラッグが目的とされる使用法に適切に投与されたときプロ
ドラッグが遭遇するであろう非標的細胞を意味する。正常（すなわち非標的）細
胞は、プロドラッグの活性部分（治療薬を含む）を連結している結合をプロドラ
ッグの残りの部分から生体内で切断する原因となる標的細胞酵素をほとんどまた
は全く放出しないので、本発明の化合物は不活性な状態に保たれ、正常細胞内に
入らない。
合、標的細胞の破壊に特に有用であり、そのように意図されている。ここで「正
常細胞」とは、プロドラッグが目的とされる使用法に適切に投与されたときプロ
ドラッグが遭遇するであろう非標的細胞を意味する。正常（すなわち非標的）細
胞は、プロドラッグの活性部分（治療薬を含む）を連結している結合をプロドラ
ッグの残りの部分から生体内で切断する原因となる標的細胞酵素をほとんどまた
は全く放出しないので、本発明の化合物は不活性な状態に保たれ、正常細胞内に
入らない。
【００１９】
別な実施様態において、プロドラッグの配向は、オリゴペプチドのＣ末端ブロ
ックがオリゴペプチドに結合し治療薬がオリゴペプチドのＮ末端に直接または間
接的に結合するように、逆になっていてもよい。 トロアーゼ トロアーゼは、標的組織でのプロドラッグの特異的活性化に重要であると考え
られている酵素である。トロアーゼはオリゴペプチド切断部位のカルボニル側で
ロイシンとイソロイシンの間に著しい識別力を示すエンドペプチドである。顕著
な特性は、適切なアッセイ条件下では、トロアーゼはスクシニルβＡｌａＬｅｕ
ＡｌａＬｅｕ−ダウノルビシンを容易に切断するが、スクシニルβＡｌａＩｌｅ
ＡｌａＬｅｕ−ダウノルビシンの切断ではその活性が２０分の１になることであ
る。
ックがオリゴペプチドに結合し治療薬がオリゴペプチドのＮ末端に直接または間
接的に結合するように、逆になっていてもよい。 トロアーゼ トロアーゼは、標的組織でのプロドラッグの特異的活性化に重要であると考え
られている酵素である。トロアーゼはオリゴペプチド切断部位のカルボニル側で
ロイシンとイソロイシンの間に著しい識別力を示すエンドペプチドである。顕著
な特性は、適切なアッセイ条件下では、トロアーゼはスクシニルβＡｌａＬｅｕ
ＡｌａＬｅｕ−ダウノルビシンを容易に切断するが、スクシニルβＡｌａＩｌｅ
ＡｌａＬｅｕ−ダウノルビシンの切断ではその活性が２０分の１になることであ
る。
【００２０】
トロアーゼは、標的細胞と関連があると考えられている。トロアーゼは、標的
細胞または標的細胞と関連のある間質組織またはマクロファージなどの正常細胞
により製造されている可能性が高い。したがって、例えば、標的細胞の細胞外近
傍では他の方法でトロアーゼが分泌されるか、または存在することもある。多く
の場合、本発明のプロドラッグは癌治療用の治療薬を含み、標的細胞は腫瘍細胞
である。したがって、トロアーゼは標的細胞により細胞外に分泌されるか、また
は一般的に腫瘍に関連してかなりの量の細胞溶解があるためトロアーゼは細胞外
に存在することもある。細胞溶解は、他の標的部位である炎症性組織にも関連が
ある。
細胞または標的細胞と関連のある間質組織またはマクロファージなどの正常細胞
により製造されている可能性が高い。したがって、例えば、標的細胞の細胞外近
傍では他の方法でトロアーゼが分泌されるか、または存在することもある。多く
の場合、本発明のプロドラッグは癌治療用の治療薬を含み、標的細胞は腫瘍細胞
である。したがって、トロアーゼは標的細胞により細胞外に分泌されるか、また
は一般的に腫瘍に関連してかなりの量の細胞溶解があるためトロアーゼは細胞外
に存在することもある。細胞溶解は、他の標的部位である炎症性組織にも関連が
ある。
【００２１】
しかし、トロアーゼ活性はヒトの血漿中で低い。トロアーゼ活性は、癌細胞抽
出物ならびに培養した癌細胞、赤血球およびさまざまなヒトの組織、特に腎臓か
ら得た調整済み培地内で観察されてきた。癌細胞トロアーゼは、約５．１の見か
けのｐＩ、約６８ｋＤのゲル濾過による分子量および中性ｐＨ活性極大を有する
。これは、メタロプロテイナーゼインヒビターＥＤＴＡおよび１，１０−フェナ
ントロリンにより阻害されるが、セリン、チオールあるいはアミノエチルベンゼ
ンスルホネート、Ｅ６４、ペプスタチン、ロイペプシン、アプロチニン、ＣＡ０
７４またはフマギリンなどの酸性プロテイナーゼインヒビターには阻害されない
。さらに、ＥＤＴＡ不活性化トロアーゼは、コバルト（５０〜１００μＭ）およ
びマンガン（５０〜１０００μＭ）により再活性化できるが、亜鉛または銅イオ
ンでは再活性化されない。
出物ならびに培養した癌細胞、赤血球およびさまざまなヒトの組織、特に腎臓か
ら得た調整済み培地内で観察されてきた。癌細胞トロアーゼは、約５．１の見か
けのｐＩ、約６８ｋＤのゲル濾過による分子量および中性ｐＨ活性極大を有する
。これは、メタロプロテイナーゼインヒビターＥＤＴＡおよび１，１０−フェナ
ントロリンにより阻害されるが、セリン、チオールあるいはアミノエチルベンゼ
ンスルホネート、Ｅ６４、ペプスタチン、ロイペプシン、アプロチニン、ＣＡ０
７４またはフマギリンなどの酸性プロテイナーゼインヒビターには阻害されない
。さらに、ＥＤＴＡ不活性化トロアーゼは、コバルト（５０〜１００μＭ）およ
びマンガン（５０〜１０００μＭ）により再活性化できるが、亜鉛または銅イオ
ンでは再活性化されない。
【００２２】
ヒーラ子宮頚管癌細胞ホモジェネート超遠心分離（１４５，０００ｘｇ ３０
分）上清からのトロアーゼの部分的な精製方法は、以下のとおり４つの工程から
なる。 １．１５Ｑカラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）を用い、ｐＨ７．２で０．０１％
Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００を含む２０ｍＭトリエチルアミンクロライド中の、０
から０．５Ｍ ＮａＣｌ直線グラジェントで溶離されるアニオン交換クロマトグ
ラフィー、 ２．ＣｏＣｌ2で予備充填されたＣｈｅｌａｔｉｎｇ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ
Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）を用い、ｐＨ７．２で０．０１％
Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００および０．０２％ＮａＮ3を含む１０ｍＭリン酸ナト
リウム、０．５Ｍ ＮａＣｌ中の、０から１００ｍＭイミダゾール直線グラジェ
ントで溶離されるアフィニティークロマトグラフィー、 ３．予備天然電気泳動 ４．７．８ ｍｍ Ｘ ６０ ｃｍ ＴＳＫ Ｇｅｌ Ｇ−３０００ＳＷＸＬ
（ＴｏｓｏＨａａｓ）を用い０．３ｍＬ／分で５０ｍＭリン酸カリウム、２００
ｍＭ硫酸カリウム、ｐＨ７．２で溶離されるゲル濾過高速液体クロマトグラフィ
ー。
分）上清からのトロアーゼの部分的な精製方法は、以下のとおり４つの工程から
なる。 １．１５Ｑカラム（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）を用い、ｐＨ７．２で０．０１％
Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００を含む２０ｍＭトリエチルアミンクロライド中の、０
から０．５Ｍ ＮａＣｌ直線グラジェントで溶離されるアニオン交換クロマトグ
ラフィー、 ２．ＣｏＣｌ2で予備充填されたＣｈｅｌａｔｉｎｇ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ
Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）を用い、ｐＨ７．２で０．０１％
Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００および０．０２％ＮａＮ3を含む１０ｍＭリン酸ナト
リウム、０．５Ｍ ＮａＣｌ中の、０から１００ｍＭイミダゾール直線グラジェ
ントで溶離されるアフィニティークロマトグラフィー、 ３．予備天然電気泳動 ４．７．８ ｍｍ Ｘ ６０ ｃｍ ＴＳＫ Ｇｅｌ Ｇ−３０００ＳＷＸＬ
（ＴｏｓｏＨａａｓ）を用い０．３ｍＬ／分で５０ｍＭリン酸カリウム、２００
ｍＭ硫酸カリウム、ｐＨ７．２で溶離されるゲル濾過高速液体クロマトグラフィ
ー。
【００２３】
トロアーゼ切断の後、プロドラッグの活性部分のさらなる切断が細胞内または
細胞外で起こる可能性があり、アミノエキソペプチダーゼにより触媒作用を受け
ると考えられている。生体外の実験により、ヒトの血液ならびに癌腫細胞環境中
に、広い特異性を持つアミノエキソペプチダーゼが存在することが示されている
。 安定化基 プロドラッグの重要な部分は安定化基であり、プロドラッグ化合物が患者に投
与される時循環する血液中でプロドラッグが分解しないように保護する役割をし
、プロドラッグが標的細胞の近傍に比較的劣化せずに到達するようにする。安定
化基は、プロドラッグを血液、血清および正常細胞中に存在するプロテイナーゼ
およびペプチダーゼによる分解から保護する。特に、安定化基はオリゴペプチド
のＮ末端をキャップし、そのためＮキャップまたはＮブロックとも呼ばれること
もあるため、Ｎキャップなしではプロドラッグが影響されやすいエキソペプチダ
ーゼに対して保護する役割をする。
細胞外で起こる可能性があり、アミノエキソペプチダーゼにより触媒作用を受け
ると考えられている。生体外の実験により、ヒトの血液ならびに癌腫細胞環境中
に、広い特異性を持つアミノエキソペプチダーゼが存在することが示されている
。 安定化基 プロドラッグの重要な部分は安定化基であり、プロドラッグ化合物が患者に投
与される時循環する血液中でプロドラッグが分解しないように保護する役割をし
、プロドラッグが標的細胞の近傍に比較的劣化せずに到達するようにする。安定
化基は、プロドラッグを血液、血清および正常細胞中に存在するプロテイナーゼ
およびペプチダーゼによる分解から保護する。特に、安定化基はオリゴペプチド
のＮ末端をキャップし、そのためＮキャップまたはＮブロックとも呼ばれること
もあるため、Ｎキャップなしではプロドラッグが影響されやすいエキソペプチダ
ーゼに対して保護する役割をする。
【００２４】
プロドラッグは、血液、心臓、脳、骨髄中、粘膜内などで切断されないので、
この化合物は出発治療薬よりも生体内で毒性が低い。このような毒性の低下は、
特に骨髄および粘膜毒性などの急性効果ならびに心臓または神経毒性に当てはま
る。 理想的には、３７℃で２時間ヒト血液中でのプロドラッグ化合物の保存により
試験される場合安定化基がプロドラッグを分解、特に加水分解から保護し、任意
のアッセイ条件下でヒト血液中に存在する酵素によるプロドラッグの切断が２０
％未満、好ましくは２％未満である場合、安定化基は本発明のプロドラッグに有
用である。
この化合物は出発治療薬よりも生体内で毒性が低い。このような毒性の低下は、
特に骨髄および粘膜毒性などの急性効果ならびに心臓または神経毒性に当てはま
る。 理想的には、３７℃で２時間ヒト血液中でのプロドラッグ化合物の保存により
試験される場合安定化基がプロドラッグを分解、特に加水分解から保護し、任意
のアッセイ条件下でヒト血液中に存在する酵素によるプロドラッグの切断が２０
％未満、好ましくは２％未満である場合、安定化基は本発明のプロドラッグに有
用である。
【００２５】
より詳細には、安定化基は、
（１）非アミノ酸または
（２）（ｉ）炭素数４以上の遺伝学的にコードされていないアミノ酸または（ｉ
ｉ）オリゴペプチドのＮ末端に、βカルボキシ基で結合しているアスパラギン酸
またはγカルボキシ基で結合しているグルタミン酸のいずれかのアミノ酸である
。
ｉ）オリゴペプチドのＮ末端に、βカルボキシ基で結合しているアスパラギン酸
またはγカルボキシ基で結合しているグルタミン酸のいずれかのアミノ酸である
。
【００２６】
例えば、ジカルボン酸（または高次のカルボン酸）または製薬上許容できるそ
の塩は安定化基として使用できる。非アミノ酸安定化基の好ましいリストは、コ
ハク酸、ジグリコール酸、マレイン酸、ポリエチレングリコール、ピログルタミ
ン酸、酢酸、１または２ナフチルカルボン酸およびグルタル酸である。 さらに、凝集性の正に帯電したプロドラッグをマウスに血管内投与すると、急
性毒性が見られた。しかし、負に帯電した安定化基による変換によりプロドラッ
グの電荷が逆になると、そのような毒性は見られなかった。この効果は以下に詳
しく述べる。
の塩は安定化基として使用できる。非アミノ酸安定化基の好ましいリストは、コ
ハク酸、ジグリコール酸、マレイン酸、ポリエチレングリコール、ピログルタミ
ン酸、酢酸、１または２ナフチルカルボン酸およびグルタル酸である。 さらに、凝集性の正に帯電したプロドラッグをマウスに血管内投与すると、急
性毒性が見られた。しかし、負に帯電した安定化基による変換によりプロドラッ
グの電荷が逆になると、そのような毒性は見られなかった。この効果は以下に詳
しく述べる。
【００２７】
したがって、治療薬の凝集が問題である場合、結合された安定化基は負に帯電
または中性であることが好ましい。生体内毒性 多くの細胞毒性化合物は、本来溶解性が低い。例えば、正に帯電したアントラ
サイクリンは高濃度で凝集体を形成し、これらの凝集体が静脈内に投与されると
、静脈内凝固を引き起こす。発明者らは、トロアーゼが、疎水性ペプチド配列の
特定の組を認識することを見出した。これらの疎水性配列（例えば、β−Ａｌａ
−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ）の1つが細胞毒性化合物（例えば、ドキソルビシン
）と結合していると、溶解性が低下した化合物となり、静脈注射用の水性配合物
（抗癌剤の送達の好ましい方法）中で大きな凝集体を形成する。ほとんどのペプ
チドが、生理学的ｐＨにおいて露出された、正に帯電したアミノ末端を有するの
で、このような凝集体は生体内で多価の正に帯電した表面を形成する。静脈内に
与えられたこれらの凝集体は、投与の数分以内（通常３０分未満）でマウスに連
鎖的な凝固および死を引き起こした。これにより、凝集体懸濁液が配合された正
に帯電しているプロドラッグは、使用に不適となる。
または中性であることが好ましい。生体内毒性 多くの細胞毒性化合物は、本来溶解性が低い。例えば、正に帯電したアントラ
サイクリンは高濃度で凝集体を形成し、これらの凝集体が静脈内に投与されると
、静脈内凝固を引き起こす。発明者らは、トロアーゼが、疎水性ペプチド配列の
特定の組を認識することを見出した。これらの疎水性配列（例えば、β−Ａｌａ
−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ）の1つが細胞毒性化合物（例えば、ドキソルビシン
）と結合していると、溶解性が低下した化合物となり、静脈注射用の水性配合物
（抗癌剤の送達の好ましい方法）中で大きな凝集体を形成する。ほとんどのペプ
チドが、生理学的ｐＨにおいて露出された、正に帯電したアミノ末端を有するの
で、このような凝集体は生体内で多価の正に帯電した表面を形成する。静脈内に
与えられたこれらの凝集体は、投与の数分以内（通常３０分未満）でマウスに連
鎖的な凝固および死を引き起こした。これにより、凝集体懸濁液が配合された正
に帯電しているプロドラッグは、使用に不適となる。
【００２８】
いくつかの実験により、凝集体はドキソルビシン結合ペプチドで形成されてい
るという仮説が支持されている。同様に配合された溶液のレーザー光散乱および
サイズ排除限外濾過による観察では、１０ｋＤ未満の分子量を持っている物質は
ごく一部であると示された。凝集体の平均分子量は、約７０ｋＤであると分かっ
た。動物に静脈内投与とともにヘパリンを同時投与すると（実施例６参照）、急
性毒性は著しく低下し、または無くなった。動物に同じ薬剤の希薄溶液を与える
と（合計投与量は同じ）、急性毒性はなかった。これらの結果を文献の報告と合
わせると、不十分な溶解性のため凝集体を形成する化合物のペプチドプロドラッ
グは最適な治療を与えないという結論が支持される。この凝集体問題への解決法
は、これらのペプチドプロドラッグをより実際的にする。所望の配合濃度での不
十分な溶解性のためこれらのペプチドプロドラッグが凝集体を形成する場合、ペ
プチド鎖の安定化基は負に帯電または中性の官能性で終わらなければならない。
ペプチドプロドラッグの安定化基としてスクシニルを使用すると、プロドラッグ
は急性毒性を持たなくする（実施例６参照）。これにより、ヒトの実際的な治療
法としてのペプチドプロドラッグの使用における重大な問題が解決される。
るという仮説が支持されている。同様に配合された溶液のレーザー光散乱および
サイズ排除限外濾過による観察では、１０ｋＤ未満の分子量を持っている物質は
ごく一部であると示された。凝集体の平均分子量は、約７０ｋＤであると分かっ
た。動物に静脈内投与とともにヘパリンを同時投与すると（実施例６参照）、急
性毒性は著しく低下し、または無くなった。動物に同じ薬剤の希薄溶液を与える
と（合計投与量は同じ）、急性毒性はなかった。これらの結果を文献の報告と合
わせると、不十分な溶解性のため凝集体を形成する化合物のペプチドプロドラッ
グは最適な治療を与えないという結論が支持される。この凝集体問題への解決法
は、これらのペプチドプロドラッグをより実際的にする。所望の配合濃度での不
十分な溶解性のためこれらのペプチドプロドラッグが凝集体を形成する場合、ペ
プチド鎖の安定化基は負に帯電または中性の官能性で終わらなければならない。
ペプチドプロドラッグの安定化基としてスクシニルを使用すると、プロドラッグ
は急性毒性を持たなくする（実施例６参照）。これにより、ヒトの実際的な治療
法としてのペプチドプロドラッグの使用における重大な問題が解決される。
【００２９】
３つ以上のカルボン酸を有する化学基もプロドラッグの一部分として許容され
るので、ジカルボン酸（または高次のカルボン酸）を有する末端基はより一般的
にはＮキャップとして定義される。本明細書で使用されるＮキャップは、２つ以
上のカルボン酸を含む化学基のモノアミド誘導体であって、アミドがペプチドの
アミノ末端に結合し残りのカルボン酸が遊離しており結合してないものである。
この目的のため、Ｎキャップは、コハク酸、グルタル酸またはフタル酸であるの
が好ましく、コハク酸が最も好ましい。本発明のプロドラッグ化合物において有
用なＮキャップの他の例は、ジグリコール酸、フマル酸、ナフタレンジカルボン
酸、アコニット酸、カルボキシケイ皮酸、トリアゾールジカルボン酸、グルコン
酸、４−カルボキシフェニルボロン酸、ポリエチレングリコール酸、ブタンジス
ルホン酸およびマレイン酸である。 オリゴペプチド オリゴペプチドは、短鎖のポリペプチド、通常２０以下のアミノ酸と定義され
ている。しかし、本発明のプロドラッグに有用なオリゴペプチドは少なくとも４
つのアミノ酸でできている。上限としては、１２以下のアミノ酸のオリゴペプチ
ドが最も有用であるが、オリゴペプチドは１２のアミノ酸より長い鎖長を有する
こともあり、科学分野で一般的に認められる用語の定義に当てはまり、本発明の
範囲にも該当する。したがって、本発明のプロドラッグのオリゴペプチド部分は
４つ以上のアミノ酸を有する。通常、本発明のプロドラッグのオリゴペプチド部
分は、４から１２のアミノ酸を有する。番号付けの方法 オリゴペプチドは、（ＡＡ）n−ＡＡ4−ＡＡ3−ＡＡ2−ＡＡ1の配列または式
を有し、 上式において ＡＡはそれぞれ独立に遺伝学的にコードされたアミノ酸を表し； ｎは０から１２の整数であり； ＡＡ4は、遺伝学的にコードされていないアミノ酸であり； ＡＡ3は、いかなるアミノ酸でもよく； ＡＡ2は、いかなるアミノ酸でもよく； ＡＡ1は、いかなるアミノ酸でもよい。 これは、位置配列Ｐ（ｎ−２）−Ｐ２−Ｐ１−Ｐ１’−Ｐ２’に相当する。トロ
アーゼはＰ１とＰ１’位置の間を切断すると考えられる。特に断りのない限り、
アミノ酸は全てＬ配置である。
るので、ジカルボン酸（または高次のカルボン酸）を有する末端基はより一般的
にはＮキャップとして定義される。本明細書で使用されるＮキャップは、２つ以
上のカルボン酸を含む化学基のモノアミド誘導体であって、アミドがペプチドの
アミノ末端に結合し残りのカルボン酸が遊離しており結合してないものである。
この目的のため、Ｎキャップは、コハク酸、グルタル酸またはフタル酸であるの
が好ましく、コハク酸が最も好ましい。本発明のプロドラッグ化合物において有
用なＮキャップの他の例は、ジグリコール酸、フマル酸、ナフタレンジカルボン
酸、アコニット酸、カルボキシケイ皮酸、トリアゾールジカルボン酸、グルコン
酸、４−カルボキシフェニルボロン酸、ポリエチレングリコール酸、ブタンジス
ルホン酸およびマレイン酸である。 オリゴペプチド オリゴペプチドは、短鎖のポリペプチド、通常２０以下のアミノ酸と定義され
ている。しかし、本発明のプロドラッグに有用なオリゴペプチドは少なくとも４
つのアミノ酸でできている。上限としては、１２以下のアミノ酸のオリゴペプチ
ドが最も有用であるが、オリゴペプチドは１２のアミノ酸より長い鎖長を有する
こともあり、科学分野で一般的に認められる用語の定義に当てはまり、本発明の
範囲にも該当する。したがって、本発明のプロドラッグのオリゴペプチド部分は
４つ以上のアミノ酸を有する。通常、本発明のプロドラッグのオリゴペプチド部
分は、４から１２のアミノ酸を有する。番号付けの方法 オリゴペプチドは、（ＡＡ）n−ＡＡ4−ＡＡ3−ＡＡ2−ＡＡ1の配列または式
を有し、 上式において ＡＡはそれぞれ独立に遺伝学的にコードされたアミノ酸を表し； ｎは０から１２の整数であり； ＡＡ4は、遺伝学的にコードされていないアミノ酸であり； ＡＡ3は、いかなるアミノ酸でもよく； ＡＡ2は、いかなるアミノ酸でもよく； ＡＡ1は、いかなるアミノ酸でもよい。 これは、位置配列Ｐ（ｎ−２）−Ｐ２−Ｐ１−Ｐ１’−Ｐ２’に相当する。トロ
アーゼはＰ１とＰ１’位置の間を切断すると考えられる。特に断りのない限り、
アミノ酸は全てＬ配置である。
【００３０】
オリゴペプチド中の好ましいアミノ酸は以下のとおりである．
Ｐ２位置では、以下のいずれかである：βアラニン、チアゾリジン−４−カル
ボン酸、２−チエニルアラニン、２−ナフチルアラニン、Ｄ−アラニン、Ｄ−ロ
イシン、Ｄ−メチオニン、Ｄ−フェニルアラニン、３−アミノ−３−フェニルプ
ロピオン酸、γ−アミノ酪酸、３−アミノ−４，４−ジフェニル酪酸。
ボン酸、２−チエニルアラニン、２−ナフチルアラニン、Ｄ−アラニン、Ｄ−ロ
イシン、Ｄ−メチオニン、Ｄ−フェニルアラニン、３−アミノ−３−フェニルプ
ロピオン酸、γ−アミノ酪酸、３−アミノ−４，４−ジフェニル酪酸。
【００３１】
Ｐ２位置中にテトラヒドロイソキノリン−３−カルボン酸、４−アミノメチル
安息香酸、アミノイソ酪酸も可能である。 Ｐ１位置では以下のいずれかである：ロイシン、チロシン、フェニルアラニン
、ｐ−Ｃｌ−フェニルアラニン、ｐ−ニトロフェニルアラニン、バリン、ノルロ
イシン、ノルバリン、フェニルグリシン、トリプトファン、テトラヒドロイソキ
ノリン−３−カルボン酸、３−ピリジルアラニン、アラニン、グリシン、チエニ
ルアラニン。
安息香酸、アミノイソ酪酸も可能である。 Ｐ１位置では以下のいずれかである：ロイシン、チロシン、フェニルアラニン
、ｐ−Ｃｌ−フェニルアラニン、ｐ−ニトロフェニルアラニン、バリン、ノルロ
イシン、ノルバリン、フェニルグリシン、トリプトファン、テトラヒドロイソキ
ノリン−３−カルボン酸、３−ピリジルアラニン、アラニン、グリシン、チエニ
ルアラニン。
【００３２】
Ｐ１位置中にメチオニン、バリン、プロリンも可能である。
Ｐ１’位置では以下のいずれかである：アラニン、ロイシン、チロシン、グリ
シン、セリン、３−ピリジルアラニン、２−チエニルアラニン。 アミノイソ酪酸、スレオニン、フェニルアラニンも可能である。 Ｐ２’位置では以下のいずれかである：ロイシン、フェニルアラニン、イソロ
イシン、アラニン、グリシン、チロシン、２−ナフチルアラニン、セリン。
シン、セリン、３−ピリジルアラニン、２−チエニルアラニン。 アミノイソ酪酸、スレオニン、フェニルアラニンも可能である。 Ｐ２’位置では以下のいずれかである：ロイシン、フェニルアラニン、イソロ
イシン、アラニン、グリシン、チロシン、２−ナフチルアラニン、セリン。
【００３３】
Ｐ２’位置では、βアラニンも可能である。
本発明のプロドラッグに有用なオリゴペプチドは以下のものがある：Ｄ−Ａｌ
ａＴｈｉβＡｌａβＡｌａＬｅｕＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）、Ｔ
ｈｉβＡｌａβＡｌａＬｅｕＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）、βＡｌ
ａβＡｌａＬｅｕＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）、βＡｌａＡｌａＡ
ｌａＩｌｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）、βＡｌａＡｌａＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：５）、βＡｌａＰｈｅＴｙｒＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）
、βＡｌａＰｈｅＴｈｒＰｈｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７）、βＡｌａＰｈｅＧ
ｌｙＩｌｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）、βＡｌａＰｈｅＧｌｙＬｅｕ（ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：９）、βＡｌａＰｈｅＰｈｅＰｈｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０
）、βＡｌａＰｈｅＰｈｅＩｌｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）、βＡｌａＰｈ
ｅＰｈｅＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）、βＡｌａＰｈｅＡｌａＩｌｅ（
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３）、βＡｌａＰｈｅＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ Ｎ
Ｏ：１４）、ＴｈｉＧｌｙＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５）、Ｎａｌ
ＧｌｙＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６）、βＡｌａＬｅｕＴｙｒＬｅ
ｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７）、βＡｌａＬｅｕＴｈｉＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：１８）、βＡｌａＬｅｕＴｈｒＰｈｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）、
βＡｌａＬｅｕＴｈｒＩｌｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０）、βＡｌａＬｅｕＴ
ｈｒＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１）、βＡｌａＬｅｕＳｅｒＬｅｕ（ＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：２２）、βＡｌａＬｅｕＰｙｒＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
２３）、βＡｌａＬｅｕＬｅｕＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）、βＡｌａ
ＬｅｕＧｌｙＰｈｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５）、βＡｌａＬｅｕＧｌｙＩｌ
ｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６）、ＴｈｉＬｅｕＧｌｙＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：２７）、βＡｌａＬｅｕＧｌｙＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８）、Ａ
ｉｂＬｅｕＧｌｙＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９）、βＡｌａＬｅｕＰｈｅ
Ｉｌｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０）、βＡｌａＬｅｕＰｈｅＬｅｕ（ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：３１）、βＡｌａＬｅｕＡｉｂＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２
）、βＡｌａＬｅｕＡｌａＡｌａ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３）、βＡｌａＬｅ
ｕＡｌａβＡｌａ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４）、βＡｌａＬｅｕＡｌａＰｈｅ
（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５）、βＡｌａＬｅｕＡｌａＧｌｙ（ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：３６）、βＡｌａＬｅｕＡｌａＩｌｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７）、β
ＡｌａＬｅｕＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８）、ＴｉｃＬｅｕＡｌａ
Ｌｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９）、ＴｈｚＬｅｕＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ Ｉ
Ｄ ＮＯ：４０）、ＴｈｉＬｅｕＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１）、
ＮａｌＬｅｕＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２）、ＮＡＡＬｅｕＡｌａ
Ｌｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３）、Ｄ−ＬｅｕＬｅｕＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：４４）、Ｄ−ＡｌａＬｅｕＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
４５）、Ｄ−ＭｅｔＬｅｕＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６）、ＡＰＰ
ＬｅｕＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７）、ＡｍｂＬｅｕＡｌａＬｅｕ
（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８）、βＡｌａＬｅｕＡｌａＮａｌ（ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：４９）、βＡｌａＬｅｕＡｌａＳｅｒ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０）、β
ＡｌａＬｅｕＡｌａＴｙｒ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５１）、βＡｌａＭｅｔＴｙ
ｒＰｈｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５２）、βＡｌａＭｅｔＴｙｒＬｅｕ（ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：５３）、βＡｌａＭｅｔＧｌｙＩｌｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５
４）、ＴｈｉＭｅｔＧｌｙＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５５）、βＡｌａＭｅ
ｔＰｈｅＰｈｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６）、βＡｌａＭｅｔＰｈｅＩｌｅ（
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７）、ＴｉｃＭｅｔＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ
：５８）、ＮａｌＭｅｔＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９）、ＮＡＡＭ
ｅｔＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０）、βＡｌａＭｅｔＡｌａＬｅｕ
（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１）、ＡＰＰＭｅｔＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ Ｎ
Ｏ：６２）、βＡｌａＮｌｅＴｙｒＩｌｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３）、βＡ
ｌａＮｌｅＴｙｒＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４）、βＡｌａＮｌｅＴｈｒ
Ｉｌｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５）、βＡｌａＮｌｅＴｈｒＬｅｕ（ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：６６）、βＡｌａＮｌｅＧｌｙＰｈｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７
）、βＡｌａＮｌｅＧｌｙＩｌｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８）、βＡｌａＮｌ
ｅＧｌｙＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９）、βＡｌａＮｌｅＰｈｅＩｌｅ（
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０）、βＡｌａＮｌｅＡｌａＩｌｅ（ＳＥＱ ＩＤ Ｎ
Ｏ：７１）、βＡｌａＮｌｅＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２）、βＡ
ｌａＮｌｅＡｌａＰｈｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３）、βＡｌａＮｖａＡｌａ
Ｌｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４）、βＡｌａＰｈｅＴｙｒＩｌｅ（ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：７５）、ＴｈｉＰｒｏＧｌｙＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６）
、ＴｈｉＰｒｏＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７）、ＮａｌＰｒｏＡｌ
ａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８）、βＡｌａＰｒｏＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：７９）、βＡｌａＰｈｅ（Ｃｌ）ＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：８０）、βＡｌａＰｈｅ（ＮＯ2）ＡｌａＩｌｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
８１）、βＡｌａＰｈｅ（ＮＯ2）ＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８２）
、βＡｌａＰｈｇＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８３）、βＡｌａＰｙｒ
ＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８４）、ＴｉｃＴｈｒＧｌｙＬｅｕ（ＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：８５）、βＡｌａＴｈｉＧｌｙＩｌｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
８６）、βＡｌａＴｈｉＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８７）、βＡｌａ
ＴｉｃＡｌａＩｌｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８）、βＡｌａＴｉｃＡｌａＬｅ
ｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９）、βＡｌａＶａｌＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：９０）、βＡｌａＴｒｐＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９１）、
βＡｌａＴｙｒＴｙｒＰｈｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２）、βＡｌａＴｙｒＴ
ｙｒＩｌｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９３）、βＡｌａＴｙｒＴｙｒＬｅｕ（ＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：９４）、βＡｌａＴｙｒＴｈｒＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
９５）、βＡｌａＴｙｒＰｈｅＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６）、βＡｌａ
ＴｙｒＧｌｙＩｌｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９７）、ＴｈｉＴｙｒＧｌｙＬｅｕ
（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９８）、βＡｌａＴｙｒＧｌｙＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：９９）、βＡｌａＴｙｒＰｈｅＩｌｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１００）、
βＡｌａＴｙｒＡｌａＩｌｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０１）、ＴｈｉＴｙｒＡ
ｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０２）およびβＡｌａＴｙｒＡｌａＬｅｕ
（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０３）。ブロッキングアミノ酸 プロドラッグのオリゴペプチド部分は、オリゴペプチド配列のＡＡ4として、
すなわち上述の番号付け方式による位置配列Ｐ２位置のブロッキングアミノ酸を
含む。ブロッキングアミノ酸は遺伝学的にコードされていないアミノ酸である。
ａＴｈｉβＡｌａβＡｌａＬｅｕＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）、Ｔ
ｈｉβＡｌａβＡｌａＬｅｕＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）、βＡｌ
ａβＡｌａＬｅｕＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３）、βＡｌａＡｌａＡ
ｌａＩｌｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）、βＡｌａＡｌａＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：５）、βＡｌａＰｈｅＴｙｒＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）
、βＡｌａＰｈｅＴｈｒＰｈｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７）、βＡｌａＰｈｅＧ
ｌｙＩｌｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）、βＡｌａＰｈｅＧｌｙＬｅｕ（ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：９）、βＡｌａＰｈｅＰｈｅＰｈｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０
）、βＡｌａＰｈｅＰｈｅＩｌｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）、βＡｌａＰｈ
ｅＰｈｅＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）、βＡｌａＰｈｅＡｌａＩｌｅ（
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３）、βＡｌａＰｈｅＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ Ｎ
Ｏ：１４）、ＴｈｉＧｌｙＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１５）、Ｎａｌ
ＧｌｙＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６）、βＡｌａＬｅｕＴｙｒＬｅ
ｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７）、βＡｌａＬｅｕＴｈｉＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：１８）、βＡｌａＬｅｕＴｈｒＰｈｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１９）、
βＡｌａＬｅｕＴｈｒＩｌｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２０）、βＡｌａＬｅｕＴ
ｈｒＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１）、βＡｌａＬｅｕＳｅｒＬｅｕ（ＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：２２）、βＡｌａＬｅｕＰｙｒＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
２３）、βＡｌａＬｅｕＬｅｕＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２４）、βＡｌａ
ＬｅｕＧｌｙＰｈｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５）、βＡｌａＬｅｕＧｌｙＩｌ
ｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６）、ＴｈｉＬｅｕＧｌｙＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：２７）、βＡｌａＬｅｕＧｌｙＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２８）、Ａ
ｉｂＬｅｕＧｌｙＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９）、βＡｌａＬｅｕＰｈｅ
Ｉｌｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０）、βＡｌａＬｅｕＰｈｅＬｅｕ（ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：３１）、βＡｌａＬｅｕＡｉｂＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２
）、βＡｌａＬｅｕＡｌａＡｌａ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３３）、βＡｌａＬｅ
ｕＡｌａβＡｌａ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４）、βＡｌａＬｅｕＡｌａＰｈｅ
（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５）、βＡｌａＬｅｕＡｌａＧｌｙ（ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：３６）、βＡｌａＬｅｕＡｌａＩｌｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３７）、β
ＡｌａＬｅｕＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３８）、ＴｉｃＬｅｕＡｌａ
Ｌｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９）、ＴｈｚＬｅｕＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ Ｉ
Ｄ ＮＯ：４０）、ＴｈｉＬｅｕＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４１）、
ＮａｌＬｅｕＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４２）、ＮＡＡＬｅｕＡｌａ
Ｌｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３）、Ｄ−ＬｅｕＬｅｕＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：４４）、Ｄ−ＡｌａＬｅｕＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
４５）、Ｄ−ＭｅｔＬｅｕＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４６）、ＡＰＰ
ＬｅｕＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７）、ＡｍｂＬｅｕＡｌａＬｅｕ
（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８）、βＡｌａＬｅｕＡｌａＮａｌ（ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：４９）、βＡｌａＬｅｕＡｌａＳｅｒ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５０）、β
ＡｌａＬｅｕＡｌａＴｙｒ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５１）、βＡｌａＭｅｔＴｙ
ｒＰｈｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５２）、βＡｌａＭｅｔＴｙｒＬｅｕ（ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：５３）、βＡｌａＭｅｔＧｌｙＩｌｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５
４）、ＴｈｉＭｅｔＧｌｙＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５５）、βＡｌａＭｅ
ｔＰｈｅＰｈｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６）、βＡｌａＭｅｔＰｈｅＩｌｅ（
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７）、ＴｉｃＭｅｔＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ
：５８）、ＮａｌＭｅｔＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５９）、ＮＡＡＭ
ｅｔＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０）、βＡｌａＭｅｔＡｌａＬｅｕ
（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１）、ＡＰＰＭｅｔＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ Ｎ
Ｏ：６２）、βＡｌａＮｌｅＴｙｒＩｌｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６３）、βＡ
ｌａＮｌｅＴｙｒＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４）、βＡｌａＮｌｅＴｈｒ
Ｉｌｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５）、βＡｌａＮｌｅＴｈｒＬｅｕ（ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：６６）、βＡｌａＮｌｅＧｌｙＰｈｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７
）、βＡｌａＮｌｅＧｌｙＩｌｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６８）、βＡｌａＮｌ
ｅＧｌｙＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９）、βＡｌａＮｌｅＰｈｅＩｌｅ（
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０）、βＡｌａＮｌｅＡｌａＩｌｅ（ＳＥＱ ＩＤ Ｎ
Ｏ：７１）、βＡｌａＮｌｅＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７２）、βＡ
ｌａＮｌｅＡｌａＰｈｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３）、βＡｌａＮｖａＡｌａ
Ｌｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４）、βＡｌａＰｈｅＴｙｒＩｌｅ（ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：７５）、ＴｈｉＰｒｏＧｌｙＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６）
、ＴｈｉＰｒｏＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７７）、ＮａｌＰｒｏＡｌ
ａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８）、βＡｌａＰｒｏＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：７９）、βＡｌａＰｈｅ（Ｃｌ）ＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：８０）、βＡｌａＰｈｅ（ＮＯ2）ＡｌａＩｌｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
８１）、βＡｌａＰｈｅ（ＮＯ2）ＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８２）
、βＡｌａＰｈｇＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８３）、βＡｌａＰｙｒ
ＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８４）、ＴｉｃＴｈｒＧｌｙＬｅｕ（ＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：８５）、βＡｌａＴｈｉＧｌｙＩｌｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
８６）、βＡｌａＴｈｉＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８７）、βＡｌａ
ＴｉｃＡｌａＩｌｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８）、βＡｌａＴｉｃＡｌａＬｅ
ｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９）、βＡｌａＶａｌＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：９０）、βＡｌａＴｒｐＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９１）、
βＡｌａＴｙｒＴｙｒＰｈｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９２）、βＡｌａＴｙｒＴ
ｙｒＩｌｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９３）、βＡｌａＴｙｒＴｙｒＬｅｕ（ＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：９４）、βＡｌａＴｙｒＴｈｒＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
９５）、βＡｌａＴｙｒＰｈｅＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９６）、βＡｌａ
ＴｙｒＧｌｙＩｌｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９７）、ＴｈｉＴｙｒＧｌｙＬｅｕ
（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９８）、βＡｌａＴｙｒＧｌｙＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：９９）、βＡｌａＴｙｒＰｈｅＩｌｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１００）、
βＡｌａＴｙｒＡｌａＩｌｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０１）、ＴｈｉＴｙｒＡ
ｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０２）およびβＡｌａＴｙｒＡｌａＬｅｕ
（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０３）。ブロッキングアミノ酸 プロドラッグのオリゴペプチド部分は、オリゴペプチド配列のＡＡ4として、
すなわち上述の番号付け方式による位置配列Ｐ２位置のブロッキングアミノ酸を
含む。ブロッキングアミノ酸は遺伝学的にコードされていないアミノ酸である。
【００３４】
Ｐ２位置のブロッキングアミノ酸の機能は、トロアーゼによるプロドラッグの
切断の選択性を維持し、プロドラッグ化合物の治療薬部分に最も近く結合してい
る（直接的に結合または間接的に結合している）オリゴペプチドのその部分で、
他の酵素によるオリゴペプチドの切断を阻害することである。より詳細には、ブ
ロッキングアミノ酸を位置Ｐ２に置くことにより、オリゴペプチド配列ＡＡ4−
ＡＡ3−ＡＡ2−ＡＡ1および位置配列Ｐ２−Ｐ１−Ｐ１’−Ｐ２’の４つのアミ
ノ酸のペプチド結合中の望ましくない切断が低減される。トロアーゼはオリゴペ
プチドのＰ１およびＰ１’位置の間を切断すると考えられている。血液および正
常細胞はさまざまなペプチダーゼと関連があることが知られているので、ブロッ
キングアミノ酸をＰ２位置に置くことにより、プロドラッグが標的細胞の近傍に
行くまでプロドラッグのオリゴペプチド部分を生体内で保護するのに役立つ。具
体的には、ブロッキングアミノ酸をＰ２位置に置くことにより、Ｐ２とＰ１の間
での望ましくない切断からオリゴペプチドが保護されると考えられる。ブロッキ
ングアミノ酸がないと、プロドラッグは血液および正常組織中に存在するエキソ
ペプチダーゼおよびエンドペプチダーゼに影響されやすく、これらの両方の種類
の酵素は、ブロッキングアミノ酸がない場合、プロドラッグがその標的に達する
前にプロドラッグを分解してしまう可能性がある。以下の実施例２はプロドラッ
グの重要な特徴を説明している。 治療薬 本発明によるプロドラッグ形態への修飾に特に有用な治療薬は、狭い治療領域
を持つ治療薬である。狭い治療領域を持つ薬剤または治療薬とは、一般的な医療
標準により毒性が明らかな投与量が、明らかな効能を示す投与量に非常に近いも
のである。
切断の選択性を維持し、プロドラッグ化合物の治療薬部分に最も近く結合してい
る（直接的に結合または間接的に結合している）オリゴペプチドのその部分で、
他の酵素によるオリゴペプチドの切断を阻害することである。より詳細には、ブ
ロッキングアミノ酸を位置Ｐ２に置くことにより、オリゴペプチド配列ＡＡ4−
ＡＡ3−ＡＡ2−ＡＡ1および位置配列Ｐ２−Ｐ１−Ｐ１’−Ｐ２’の４つのアミ
ノ酸のペプチド結合中の望ましくない切断が低減される。トロアーゼはオリゴペ
プチドのＰ１およびＰ１’位置の間を切断すると考えられている。血液および正
常細胞はさまざまなペプチダーゼと関連があることが知られているので、ブロッ
キングアミノ酸をＰ２位置に置くことにより、プロドラッグが標的細胞の近傍に
行くまでプロドラッグのオリゴペプチド部分を生体内で保護するのに役立つ。具
体的には、ブロッキングアミノ酸をＰ２位置に置くことにより、Ｐ２とＰ１の間
での望ましくない切断からオリゴペプチドが保護されると考えられる。ブロッキ
ングアミノ酸がないと、プロドラッグは血液および正常組織中に存在するエキソ
ペプチダーゼおよびエンドペプチダーゼに影響されやすく、これらの両方の種類
の酵素は、ブロッキングアミノ酸がない場合、プロドラッグがその標的に達する
前にプロドラッグを分解してしまう可能性がある。以下の実施例２はプロドラッ
グの重要な特徴を説明している。 治療薬 本発明によるプロドラッグ形態への修飾に特に有用な治療薬は、狭い治療領域
を持つ治療薬である。狭い治療領域を持つ薬剤または治療薬とは、一般的な医療
標準により毒性が明らかな投与量が、明らかな効能を示す投与量に非常に近いも
のである。
【００３５】
安定化基およびオリゴペプチドならびに任意に連結基に結合して本発明のプロ
ドラッグを形成する治療薬は、癌、炎症性疾患または他の健康状態の治療に有用
である可能性がある。好ましくは、前記治療薬は以下に挙げる種類の化合物から
選択される：アルキル化剤、増殖抑制薬、チュービュリン結合剤、ビンカアルカ
ロイド、エネジイン、ポドフィロトキシンまたはポドフィロトキシン誘導体、プ
テリジン族の薬剤、タキサン、アントラサイクリン、ドラスタチン、トポイソメ
ラーゼインヒビター、シスプラチン。
ドラッグを形成する治療薬は、癌、炎症性疾患または他の健康状態の治療に有用
である可能性がある。好ましくは、前記治療薬は以下に挙げる種類の化合物から
選択される：アルキル化剤、増殖抑制薬、チュービュリン結合剤、ビンカアルカ
ロイド、エネジイン、ポドフィロトキシンまたはポドフィロトキシン誘導体、プ
テリジン族の薬剤、タキサン、アントラサイクリン、ドラスタチン、トポイソメ
ラーゼインヒビター、シスプラチン。
【００３６】
詳細には、治療薬は以下の化合物から選択されるのが好都合である：ドキソル
ビシン、ダウノルビシン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、カリケアマイシン
、エトポシド、エトポシドホスフェート、ＣＣ−１０６５、デュオカマイシン、
ＫＷ−２１８９、メトトレキセート、メトプテリン、アミノプテリン、ジクロロ
メトトレキセート、ドセタキセル、パクリタキセル、エピチオロン、コンブレタ
スタチン、コンブレタスタチンＡ4ホスフェート、ドラスタチン１０、ドラスタ
チン１１、ドラスタチン１５、トポテカン、キャンプトテカン、マイトマイシン
Ｃ、ポルフィロマイシン、５−フルオロウラシル、６−メルカプトプリン、フル
ダラビン、タモキシフェン、シトシンアラビノシッド、アデノシンアラビノシッ
ド、コルヒチン、カルボプラチン、マイトマイシンＣ、ブレオマイシン、メルフ
ァランあるいはこれらの誘導体または類似体。 連結基 オリゴペプチドと治療薬の間の連結基は、以下の理由で好都合である。 １．ＡＡ1アミノ酸の酵素的放出を容易にするための立体効果考慮のためのスペ
ーサーとして。 ２．治療薬およびオリゴペプチドの間の適当な付着化学作用を提供するため。 ３．プロドラッグ結合体を作る合成プロセスを改善するため（例えば、収率また
は特異性を増すために結合の前に治療薬またはオリゴペプチドを連結基と予備変
換することにより）。 ４．プロドラッグの物性を向上させるため。 ５．薬剤の細胞内放出の追加機構を提供するため。
ビシン、ダウノルビシン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、カリケアマイシン
、エトポシド、エトポシドホスフェート、ＣＣ−１０６５、デュオカマイシン、
ＫＷ−２１８９、メトトレキセート、メトプテリン、アミノプテリン、ジクロロ
メトトレキセート、ドセタキセル、パクリタキセル、エピチオロン、コンブレタ
スタチン、コンブレタスタチンＡ4ホスフェート、ドラスタチン１０、ドラスタ
チン１１、ドラスタチン１５、トポテカン、キャンプトテカン、マイトマイシン
Ｃ、ポルフィロマイシン、５−フルオロウラシル、６−メルカプトプリン、フル
ダラビン、タモキシフェン、シトシンアラビノシッド、アデノシンアラビノシッ
ド、コルヒチン、カルボプラチン、マイトマイシンＣ、ブレオマイシン、メルフ
ァランあるいはこれらの誘導体または類似体。 連結基 オリゴペプチドと治療薬の間の連結基は、以下の理由で好都合である。 １．ＡＡ1アミノ酸の酵素的放出を容易にするための立体効果考慮のためのスペ
ーサーとして。 ２．治療薬およびオリゴペプチドの間の適当な付着化学作用を提供するため。 ３．プロドラッグ結合体を作る合成プロセスを改善するため（例えば、収率また
は特異性を増すために結合の前に治療薬またはオリゴペプチドを連結基と予備変
換することにより）。 ４．プロドラッグの物性を向上させるため。 ５．薬剤の細胞内放出の追加機構を提供するため。
【００３７】
連結基構造は、要求される機能性により規定される。可能性のある連結基化学
作用の例は、ヒドラジド、エステル、エーテルおよびメルカプトである。アミノ
カプロン酸は二官能性連結基の例である。アミノカプロン酸が連結基に使用され
ている場合、それはオリゴペプチドの番号付け方法においてアミノ酸であると計
算されない。 薬剤組成物 本発明は、本発明による化合物、特にプロドラッグ化合物および任意に製薬上
許容できる補助薬または賦形剤を含んでなる薬剤組成物も含む。
作用の例は、ヒドラジド、エステル、エーテルおよびメルカプトである。アミノ
カプロン酸は二官能性連結基の例である。アミノカプロン酸が連結基に使用され
ている場合、それはオリゴペプチドの番号付け方法においてアミノ酸であると計
算されない。 薬剤組成物 本発明は、本発明による化合物、特にプロドラッグ化合物および任意に製薬上
許容できる補助薬または賦形剤を含んでなる薬剤組成物も含む。
【００３８】
本発明は、健康状態の治療用の医薬製品を調製するための薬剤組成物の使用に
も関する。 薬剤組成物は、例えば、患者に非経口的に、特に静脈中へ、筋肉中へまたは腹
腔内へ投与される。非経口投与用の本発明の薬剤組成物は、滅菌された水性また
は非水性溶液、懸濁液またはエマルションを含んでなる。製薬上許容できる溶媒
または賦形剤としては、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、注射
可能な有機エステル、例えばオレイン酸エチルまたはシクロデキストリンが利用
できる。これらの組成物は、湿潤剤、乳化剤および／または分散剤も含んでもよ
い。
も関する。 薬剤組成物は、例えば、患者に非経口的に、特に静脈中へ、筋肉中へまたは腹
腔内へ投与される。非経口投与用の本発明の薬剤組成物は、滅菌された水性また
は非水性溶液、懸濁液またはエマルションを含んでなる。製薬上許容できる溶媒
または賦形剤としては、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、注射
可能な有機エステル、例えばオレイン酸エチルまたはシクロデキストリンが利用
できる。これらの組成物は、湿潤剤、乳化剤および／または分散剤も含んでもよ
い。
【００３９】
滅菌は、細菌学的フィルターの使用、組成物への殺菌剤の混合または照射など
、いくつかの方法で実施できる。使用時に滅菌水または他の滅菌済み注射可能な
媒体に溶解できる滅菌済み固形組成物の形態で調製することもできる。 薬剤組成物は、投与の目的である健康状態の治療を改善または延長するために
、当業界に公知であり（ビタミンＣ、酸化防止剤など）、本発明の化合物ととも
に使用できる補助薬を含んでもよい。
、いくつかの方法で実施できる。使用時に滅菌水または他の滅菌済み注射可能な
媒体に溶解できる滅菌済み固形組成物の形態で調製することもできる。 薬剤組成物は、投与の目的である健康状態の治療を改善または延長するために
、当業界に公知であり（ビタミンＣ、酸化防止剤など）、本発明の化合物ととも
に使用できる補助薬を含んでもよい。
【００４０】
患者への本発明による化合物の投与量は一般的に、少なくともＢｒｕｃｅ Ａ
．Ｃｈａｂｎｅｒ ａｎｄ Ｊｅｒｒｙ Ｍ．Ｃｏｌｌｉｎｓ，Ｃａｎｃｅｒ
Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｅｄ．，ＩＳＢＮ−０−３
９７−５０９００−６（１９９０）に記載された当分野に公知の通常の治療薬の
投与量であり、あるいは治療する医師の判断において、プロドラッグ配合物の優
れた効果または治療される患者の特定の状況を提供するように調節してもよい。
したがって、本発明による化合物の調製に使用された治療薬によって投与量は変
動する。 プロドラッグ化合物による治療 治療上有効な投与量の薬剤組成物を、特に非経口的にまたは静脈中に患者へ投
与することを含んでなる健康状態の治療処置の方法も本発明の範囲内である。
．Ｃｈａｂｎｅｒ ａｎｄ Ｊｅｒｒｙ Ｍ．Ｃｏｌｌｉｎｓ，Ｃａｎｃｅｒ
Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｅｄ．，ＩＳＢＮ−０−３
９７−５０９００−６（１９９０）に記載された当分野に公知の通常の治療薬の
投与量であり、あるいは治療する医師の判断において、プロドラッグ配合物の優
れた効果または治療される患者の特定の状況を提供するように調節してもよい。
したがって、本発明による化合物の調製に使用された治療薬によって投与量は変
動する。 プロドラッグ化合物による治療 治療上有効な投与量の薬剤組成物を、特に非経口的にまたは静脈中に患者へ投
与することを含んでなる健康状態の治療処置の方法も本発明の範囲内である。
【００４１】
プロドラッグ化合物は、癌、腫瘍性疾患、腫瘍、炎症性疾患および感染性疾患
など多くの健康状態の治療に有用である。好ましい疾患の例は、乳癌、直腸結腸
癌、肝臓癌、肺癌、前立腺癌、卵巣癌、脳癌および膵臓癌である。製薬上許容で
きる賦形剤（等張性食塩水など）中に処方された状態で、プロドラッグ化合物は
、０．０５ｍｇ／ｋｇ／投与量／日から３００ｍｇ／ｋｇ／投与量／日の範囲の
静脈中投与量で動物またはヒトに投与することができる。点滴静注または他のゆ
っくりとした注入方法により投与することもできる。
など多くの健康状態の治療に有用である。好ましい疾患の例は、乳癌、直腸結腸
癌、肝臓癌、肺癌、前立腺癌、卵巣癌、脳癌および膵臓癌である。製薬上許容で
きる賦形剤（等張性食塩水など）中に処方された状態で、プロドラッグ化合物は
、０．０５ｍｇ／ｋｇ／投与量／日から３００ｍｇ／ｋｇ／投与量／日の範囲の
静脈中投与量で動物またはヒトに投与することができる。点滴静注または他のゆ
っくりとした注入方法により投与することもできる。
【００４２】
獣医学的な使用法も企図されるが、本発明のプロドラッグを通常受け取るのは
ヒトの患者である。 プロセス化学一般的手順 オリゴペプチド：ペプチドの合成の一般的方法 本発明のプロドラッグ結合体中のペプチドすなわちオリゴペプチド配列は、固
相ペプチド合成（ＢｏｃまたはＦｍｏｃ化学を用いる）または溶液相合成により
合成できる。一般的なＢｏｃおよびＦｍｏｃ方法は広く用いられ、以下の参考文
献に記載されている：Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｊ．Ａ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，８
８：２１４９（１９６３）；Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ ａｎｄ Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ
，Ｔｈｅ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｓ
ｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｂｅｒｌｉｎ，７−１６１（１９９４）；Ｓｔ
ｅｗａｒｔ，Ｓｏｌｉｄ Ｐｈｅｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，
Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，（１９８４）。 一般的なＦｍｏｃ固相方法 自動または手作業の好ましい固相合成方法を用いて、固体樹脂に結合した生長
鎖へのアミノ酸の段階的付加により、所望の長さおよび配列のペプチドが合成さ
れる。Ｆｍｏｃ適合樹脂の例には、Ｗａｎｇ樹脂、ＨＰＭＡ−ＰＥＧＡ樹脂、Ｒ
ｉｎｋ酸樹脂またはヒドロキシエチル−フォトリンカー樹脂があるがこれらに限
定されない。ペプチド鎖のＣ末端は高分子樹脂に共有結合しており、保護基のつ
いたαアミノアミノ酸がカップリング試薬により段階的に付加された。好ましい
αアミノ保護基はＦｍｏｃ基であり、カップリング条件に対して安定であり、穏
和なアルキリン条件下で容易に除去できる。反応溶媒は、ＤＭＦ、ＮＭＰ、ＤＣ
Ｍ、ＭｅＯＨおよびＥｔＯＨが好ましいが、これらに限定されない。カップリン
グ剤の例としては、ＤＣＣ、ＤＩＣ、ＨＡＴＵ、ＨＢＴＵがある。Ｎ末端保護基
の切断は、ＤＭＦ中１０〜１００％ピペリジン中で、０〜４０℃、好ましくは室
温で実施される。合成の最後で、最終的なＦｍｏｃ保護基を上記のＮ末端切断処
置により除去する。樹脂上に残ったペプチドを、樹脂を酸性条件下で処理するこ
とにより、酸に敏感な側鎖保護基とともに樹脂から切断する。例えば、酸性切断
条件は、ジクロロメタン中のトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）の混合物である。ヒド
ロキシエチル−フォトリンカー樹脂を使用する場合、切断を引き起こす適切な波
長は、λ３６５ｎｍの紫外光である。この方法を図で表したものを図３に示す。 固相合成による一般的なＮキャップ方法 Ｎ末端変換ペプチドの調製は、固相で行うのが好都合である。ペプチド合成が
終了し、ペプチドがまだ固形担体上にあるうちに末端Ｆｍｏｃを除去する。次に
、選択したＮキャップを、通常のペプチドカップリング条件を用いてペプチドの
Ｎ末端にカップリングする。Ｎキャップカップリング終了と同時に、上述の方法
を用いてペプチドを樹脂から切断する。 一般的なＢｏｃ固相方法 Ｂｏｃ化学を用いた固相方法では、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ樹脂またはＰＡＭ樹
脂が有用である。カップリング剤で活性化されＢｏｃで保護されたアミノ酸の逐
次付加により、固相上の生長鎖にアミノ酸が結合する。カップリング剤の例とし
てはＤＣＣ、ＤＩＣ、ＨＡＴＵ、ＨＢＴＵがある。反応溶媒は、ＤＭＦ、ＤＣＭ
、ＭｅＯＨおよびＮＭＰである。Ｂｏｃ保護基の切断は、ＤＣＭ中１０〜１００
％ＴＦＡ中で、０〜４０℃で、好ましくは室温で実施される。ペプチド鎖組立の
終了と同時に、Ｎ末端保護基（通常Ｂｏｃ）を上述のとおり除去する。液体フッ
化水素またはジクロロメタン中のトリフルオロメタンスルホン酸を用いて樹脂か
らペプチドを除去する。 溶液相合成によるＦｍｏｃオリゴペプチドの調製の一般的手順 別法としては、プロドラッグペプチド中間体は、ＢｏｃまたはＦｍｏｃ化学の
いずれかを用いて溶液相合成により作ることができる。この方法の図式説明にお
いて（図４）、Ｃ末端Ｌｅｕテトラペプチドが一般的に例として用いられるが、
他のＣ末端テトラペプチドを用いても類似の反応が実施できることを理解された
い。固相法と同様な（Ｎ末端方向またはＣ末端方向への）段階的組立により、ま
たは２つの好適に保護されたジペプチドまたはトリペプチドを1つのアミノ酸と
カップリングすることにより、ペプチドを作ることができる。
ヒトの患者である。 プロセス化学一般的手順 オリゴペプチド：ペプチドの合成の一般的方法 本発明のプロドラッグ結合体中のペプチドすなわちオリゴペプチド配列は、固
相ペプチド合成（ＢｏｃまたはＦｍｏｃ化学を用いる）または溶液相合成により
合成できる。一般的なＢｏｃおよびＦｍｏｃ方法は広く用いられ、以下の参考文
献に記載されている：Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，Ｊ．Ａ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，８
８：２１４９（１９６３）；Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ ａｎｄ Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ
，Ｔｈｅ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｓ
ｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｂｅｒｌｉｎ，７−１６１（１９９４）；Ｓｔ
ｅｗａｒｔ，Ｓｏｌｉｄ Ｐｈｅｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，
Ｐｉｅｒｃｅ Ｃｈｅｍｉｃａｌ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，（１９８４）。 一般的なＦｍｏｃ固相方法 自動または手作業の好ましい固相合成方法を用いて、固体樹脂に結合した生長
鎖へのアミノ酸の段階的付加により、所望の長さおよび配列のペプチドが合成さ
れる。Ｆｍｏｃ適合樹脂の例には、Ｗａｎｇ樹脂、ＨＰＭＡ−ＰＥＧＡ樹脂、Ｒ
ｉｎｋ酸樹脂またはヒドロキシエチル−フォトリンカー樹脂があるがこれらに限
定されない。ペプチド鎖のＣ末端は高分子樹脂に共有結合しており、保護基のつ
いたαアミノアミノ酸がカップリング試薬により段階的に付加された。好ましい
αアミノ保護基はＦｍｏｃ基であり、カップリング条件に対して安定であり、穏
和なアルキリン条件下で容易に除去できる。反応溶媒は、ＤＭＦ、ＮＭＰ、ＤＣ
Ｍ、ＭｅＯＨおよびＥｔＯＨが好ましいが、これらに限定されない。カップリン
グ剤の例としては、ＤＣＣ、ＤＩＣ、ＨＡＴＵ、ＨＢＴＵがある。Ｎ末端保護基
の切断は、ＤＭＦ中１０〜１００％ピペリジン中で、０〜４０℃、好ましくは室
温で実施される。合成の最後で、最終的なＦｍｏｃ保護基を上記のＮ末端切断処
置により除去する。樹脂上に残ったペプチドを、樹脂を酸性条件下で処理するこ
とにより、酸に敏感な側鎖保護基とともに樹脂から切断する。例えば、酸性切断
条件は、ジクロロメタン中のトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）の混合物である。ヒド
ロキシエチル−フォトリンカー樹脂を使用する場合、切断を引き起こす適切な波
長は、λ３６５ｎｍの紫外光である。この方法を図で表したものを図３に示す。 固相合成による一般的なＮキャップ方法 Ｎ末端変換ペプチドの調製は、固相で行うのが好都合である。ペプチド合成が
終了し、ペプチドがまだ固形担体上にあるうちに末端Ｆｍｏｃを除去する。次に
、選択したＮキャップを、通常のペプチドカップリング条件を用いてペプチドの
Ｎ末端にカップリングする。Ｎキャップカップリング終了と同時に、上述の方法
を用いてペプチドを樹脂から切断する。 一般的なＢｏｃ固相方法 Ｂｏｃ化学を用いた固相方法では、Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ樹脂またはＰＡＭ樹
脂が有用である。カップリング剤で活性化されＢｏｃで保護されたアミノ酸の逐
次付加により、固相上の生長鎖にアミノ酸が結合する。カップリング剤の例とし
てはＤＣＣ、ＤＩＣ、ＨＡＴＵ、ＨＢＴＵがある。反応溶媒は、ＤＭＦ、ＤＣＭ
、ＭｅＯＨおよびＮＭＰである。Ｂｏｃ保護基の切断は、ＤＣＭ中１０〜１００
％ＴＦＡ中で、０〜４０℃で、好ましくは室温で実施される。ペプチド鎖組立の
終了と同時に、Ｎ末端保護基（通常Ｂｏｃ）を上述のとおり除去する。液体フッ
化水素またはジクロロメタン中のトリフルオロメタンスルホン酸を用いて樹脂か
らペプチドを除去する。 溶液相合成によるＦｍｏｃオリゴペプチドの調製の一般的手順 別法としては、プロドラッグペプチド中間体は、ＢｏｃまたはＦｍｏｃ化学の
いずれかを用いて溶液相合成により作ることができる。この方法の図式説明にお
いて（図４）、Ｃ末端Ｌｅｕテトラペプチドが一般的に例として用いられるが、
他のＣ末端テトラペプチドを用いても類似の反応が実施できることを理解された
い。固相法と同様な（Ｎ末端方向またはＣ末端方向への）段階的組立により、ま
たは２つの好適に保護されたジペプチドまたはトリペプチドを1つのアミノ酸と
カップリングすることにより、ペプチドを作ることができる。
【００４３】
溶液相合成の1つの方法としては、図４に示されるＦｍｏｃ化学を用いたプロ
ドラッグペプチド中間体の段階的組み立てがある。Ｃ末端には副生成物の形成を
減らすため保護基をつけなければならない。図４中のＣ末端Ｒ基は、Ｍｅ、ｔＢ
ｕ、ベンジルまたはＴＣＥである（Ｎキャップがメチルスクシニルであるとき、
Ｃ末端Ｒ基はメチルではあり得ないことに注意されたい）。ＤＭＦが溶媒として
挙げられているが、ＤＭＳＯ、ＣＨ3ＣＮまたはＮＭＰなどの他の溶媒（または
それらの混合物）を代わりに用いてもよい。生長するペプチド鎖の保護されたア
ミノ末端の脱保護において、ピペリジンの代わりに、ピリジン、Ｅｔ3Ｎまたは
他の塩基を用いてもよい。同様に、ＨＢＴＵが活性化剤として上記の図表中で挙
げられているが、ＤＣＣ、ＤＩＣ、ＤＣＣ＋ＨＯＢｔ、ＯＳｕ、活性化エステル
、アジドまたはトリフェニルホスフォニルアジドなどの他の活性剤を用いてもよ
い。また、保護基のついたペプチド酸クロライドまたは酸ブロマイドを用いて、
直接アミノ酸またはペプチドフラグメントにカップリングしてもよい。オリゴペ
プチドの組み立て終了と同時に、Ｎ末端が脱保護されＣ末端に保護基のついたペ
プチドは、所望のＮキャップを受け入れる用意が整っている。 溶液相合成によるＮキャップオリゴペプチドの調製の一般的手順 溶液相合成によりＮキャップオリゴペプチドを組み立てる場合、わずかに変更
された手順でＮキャップを合成する必要がある（図４）。第一に、Ｆｍｏｃオリ
ゴペプチドのＣ末端は、ＮキャップよりもＣ末端の選択的脱保護に適合した酸不
安定または水素化敏感保護基により保護する必要がある。次に、Ｆｍｏｃ保護基
をオリゴペプチドから除去しＮ末端を露出する必要がある。Ｎ末端が脱保護され
Ｃ末端が保護された状態で、オリゴペプチドを所望のＮキャップの活性化された
ヘミエステルと反応させる。Ｎキャップは、塩基および適切な溶媒中で、ＤＣＣ
またはＨＡＴＵなどのアミノ酸を活性化させる方法を用いて活性化できる。また
は、メチルヘミスクシネートが使用される場合、ＤＩＥＡ、トリエチルアミンま
たはＣｓ2ＣＯ3などの有機または無機塩基の存在下で不活性溶媒を用いて、メチ
ルヘミスクシニルクロライド（または他の酸ハライド）（図４）によりカップリ
ングを行ってもよい。このような合成の一例としては、メチルヘミスクシネート
とオリゴペプチド３８ベンジルエステルとの反応がある。このカップリング方法
は、当業界で一般的に用いられる方法のいずれでも良い（例えば、Ｂｏｄａｎｓ
ｚｋｙ，Ｍ．，Ｔｈｅ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈ
ｅｓｉｓ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ，１８５（１９８４）；Ｂｏｄａｎ
ｓｚｋｙ，Ｍ．，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅ
ｓｉｓ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ，１５９（１９８４）を参照）。次い
で、ベンジル基を触媒的水素化により除去して、所望のＮキャップメチルスクシ
ニル形態のオリゴペプチド３８を提供する。好適な、選択的に除去できるＣ末端
保護基の他の例には、ｔＢｕ、アルコキシ−メチルおよびＴＣＥがあるが、これ
らに限定されない。この工程を実施するための他の方法は文献に記載されている
。
ドラッグペプチド中間体の段階的組み立てがある。Ｃ末端には副生成物の形成を
減らすため保護基をつけなければならない。図４中のＣ末端Ｒ基は、Ｍｅ、ｔＢ
ｕ、ベンジルまたはＴＣＥである（Ｎキャップがメチルスクシニルであるとき、
Ｃ末端Ｒ基はメチルではあり得ないことに注意されたい）。ＤＭＦが溶媒として
挙げられているが、ＤＭＳＯ、ＣＨ3ＣＮまたはＮＭＰなどの他の溶媒（または
それらの混合物）を代わりに用いてもよい。生長するペプチド鎖の保護されたア
ミノ末端の脱保護において、ピペリジンの代わりに、ピリジン、Ｅｔ3Ｎまたは
他の塩基を用いてもよい。同様に、ＨＢＴＵが活性化剤として上記の図表中で挙
げられているが、ＤＣＣ、ＤＩＣ、ＤＣＣ＋ＨＯＢｔ、ＯＳｕ、活性化エステル
、アジドまたはトリフェニルホスフォニルアジドなどの他の活性剤を用いてもよ
い。また、保護基のついたペプチド酸クロライドまたは酸ブロマイドを用いて、
直接アミノ酸またはペプチドフラグメントにカップリングしてもよい。オリゴペ
プチドの組み立て終了と同時に、Ｎ末端が脱保護されＣ末端に保護基のついたペ
プチドは、所望のＮキャップを受け入れる用意が整っている。 溶液相合成によるＮキャップオリゴペプチドの調製の一般的手順 溶液相合成によりＮキャップオリゴペプチドを組み立てる場合、わずかに変更
された手順でＮキャップを合成する必要がある（図４）。第一に、Ｆｍｏｃオリ
ゴペプチドのＣ末端は、ＮキャップよりもＣ末端の選択的脱保護に適合した酸不
安定または水素化敏感保護基により保護する必要がある。次に、Ｆｍｏｃ保護基
をオリゴペプチドから除去しＮ末端を露出する必要がある。Ｎ末端が脱保護され
Ｃ末端が保護された状態で、オリゴペプチドを所望のＮキャップの活性化された
ヘミエステルと反応させる。Ｎキャップは、塩基および適切な溶媒中で、ＤＣＣ
またはＨＡＴＵなどのアミノ酸を活性化させる方法を用いて活性化できる。また
は、メチルヘミスクシネートが使用される場合、ＤＩＥＡ、トリエチルアミンま
たはＣｓ2ＣＯ3などの有機または無機塩基の存在下で不活性溶媒を用いて、メチ
ルヘミスクシニルクロライド（または他の酸ハライド）（図４）によりカップリ
ングを行ってもよい。このような合成の一例としては、メチルヘミスクシネート
とオリゴペプチド３８ベンジルエステルとの反応がある。このカップリング方法
は、当業界で一般的に用いられる方法のいずれでも良い（例えば、Ｂｏｄａｎｓ
ｚｋｙ，Ｍ．，Ｔｈｅ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈ
ｅｓｉｓ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ，１８５（１９８４）；Ｂｏｄａｎ
ｓｚｋｙ，Ｍ．，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ｏｆ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅ
ｓｉｓ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ Ｖｅｒｌａｇ，１５９（１９８４）を参照）。次い
で、ベンジル基を触媒的水素化により除去して、所望のＮキャップメチルスクシ
ニル形態のオリゴペプチド３８を提供する。好適な、選択的に除去できるＣ末端
保護基の他の例には、ｔＢｕ、アルコキシ−メチルおよびＴＣＥがあるが、これ
らに限定されない。この工程を実施するための他の方法は文献に記載されている
。
【００４４】
ジまたはトリペプチドの「フラグメント縮合」など上記の方法のいかなる組合
せも考えられる。反応条件は当業界に公知であり、与えられた引用中に詳述され
ている。上記の方法の利点は、溶液相合成により製造された生成物の精製しやす
さである。 プロドラッグ結合体 結合および脱保護工程の一般的方法 本発明において記載されるオリゴペプチド−治療薬のＮキャップ形態（プロド
ラッグ結合体）は、ペプチド合成に使用される標準的な活性化試薬のいずれかを
用い、オリゴペプチドのＦｍｏｃ形態（ＦｍｏｃがオリゴペプチドのＮ末端に結
合している）をダウロルビシンまたは適切な治療薬とカップリングすることによ
り合成できる（図６）。溶媒は、トルエン、酢酸エチル、ＤＭＦ、ＤＭＳＯ、Ｃ
Ｈ3ＣＮ、ＮＭＰ、ＴＨＦ、ＤＣＭまたは当業界に公知な他の好適な不活性溶媒
であり、試薬はその中に可溶である。好ましい溶媒は、ＤＭＦおよびＮＭＰであ
る。適切な温度範囲は、−２５〜２５℃であり、室温が好ましい。活性化剤は以
下のものから選択できる：ＰｙＢＯＰ、ＨＢＴＵ、ＨＡＴＵ、ＥＤＣ、ＤＩＣ、
ＤＣＣ、ＤＣＣ＋ＨＯＢＴ、ＯＳｕ活性化エステル、アジドまたはトリフェニル
ホスホニルアジド。ＨＢＴＵまたはＨＡＴＵが好ましい活性化剤である。または
、保護基のついたペプチドの酸クロライドまたは酸ブロマイドをこのカップリン
グ反応に用いることもできる。２〜４当量の、好都合には２〜２．５当量の塩基
がカップリング反応に必要である。塩基は、ＣｓＣＯ3、ＮａＣＯ3またはＫ2Ｃ
Ｏ3などの無機塩基またはＴＥＡ、ＤＩＥＡ、ＤＢＵ、ＤＢＮ、ＤＢＯ、ピリジ
ン、置換ピリジン、Ｎ−メチルモルホリンなど、好ましくはＴＥＡまたはＤＩＥ
Ａである有機塩基から選択できる。反応は、−１５℃〜５０℃の、好都合には−
１０℃と１０℃の間の温度で実施できる。反応時間は５〜９０分の間であり、好
都合には２０〜４０分である。反応混合物を水に注ぎ形成した沈殿を濾過するこ
とにより、生成物を単離できる。粗生成物を、ＤＣＭ、ＴＨＦ、酢酸エチルまた
はアセトニトリルから、好ましくはジクロロメタンまたはアセトニトリルから再
結晶することにより、さらに精製できる。次いで、単離したオリゴペプチド治療
薬結合体のＦｍｏｃ形態を、１０から１００倍過剰な塩基を−１０℃〜５０℃の
温度で用いて、２〜９０分、好ましくは３〜８分間かけて脱保護する。理想的に
は、５〜６０当量の塩基が好ましい。Ｆｍｏｃ基を脱保護するにはピペリジンが
好ましい塩基である。オリゴペプチド治療薬結合体の脱保護されたアミノ末端を
、活性化ヘミエステルとしてのジアシッドアンハイドライドによりアシル化し、
最終的なオリゴペプチド治療薬のＮキャップ形態（プロドラッグ）を得る。
せも考えられる。反応条件は当業界に公知であり、与えられた引用中に詳述され
ている。上記の方法の利点は、溶液相合成により製造された生成物の精製しやす
さである。 プロドラッグ結合体 結合および脱保護工程の一般的方法 本発明において記載されるオリゴペプチド−治療薬のＮキャップ形態（プロド
ラッグ結合体）は、ペプチド合成に使用される標準的な活性化試薬のいずれかを
用い、オリゴペプチドのＦｍｏｃ形態（ＦｍｏｃがオリゴペプチドのＮ末端に結
合している）をダウロルビシンまたは適切な治療薬とカップリングすることによ
り合成できる（図６）。溶媒は、トルエン、酢酸エチル、ＤＭＦ、ＤＭＳＯ、Ｃ
Ｈ3ＣＮ、ＮＭＰ、ＴＨＦ、ＤＣＭまたは当業界に公知な他の好適な不活性溶媒
であり、試薬はその中に可溶である。好ましい溶媒は、ＤＭＦおよびＮＭＰであ
る。適切な温度範囲は、−２５〜２５℃であり、室温が好ましい。活性化剤は以
下のものから選択できる：ＰｙＢＯＰ、ＨＢＴＵ、ＨＡＴＵ、ＥＤＣ、ＤＩＣ、
ＤＣＣ、ＤＣＣ＋ＨＯＢＴ、ＯＳｕ活性化エステル、アジドまたはトリフェニル
ホスホニルアジド。ＨＢＴＵまたはＨＡＴＵが好ましい活性化剤である。または
、保護基のついたペプチドの酸クロライドまたは酸ブロマイドをこのカップリン
グ反応に用いることもできる。２〜４当量の、好都合には２〜２．５当量の塩基
がカップリング反応に必要である。塩基は、ＣｓＣＯ3、ＮａＣＯ3またはＫ2Ｃ
Ｏ3などの無機塩基またはＴＥＡ、ＤＩＥＡ、ＤＢＵ、ＤＢＮ、ＤＢＯ、ピリジ
ン、置換ピリジン、Ｎ−メチルモルホリンなど、好ましくはＴＥＡまたはＤＩＥ
Ａである有機塩基から選択できる。反応は、−１５℃〜５０℃の、好都合には−
１０℃と１０℃の間の温度で実施できる。反応時間は５〜９０分の間であり、好
都合には２０〜４０分である。反応混合物を水に注ぎ形成した沈殿を濾過するこ
とにより、生成物を単離できる。粗生成物を、ＤＣＭ、ＴＨＦ、酢酸エチルまた
はアセトニトリルから、好ましくはジクロロメタンまたはアセトニトリルから再
結晶することにより、さらに精製できる。次いで、単離したオリゴペプチド治療
薬結合体のＦｍｏｃ形態を、１０から１００倍過剰な塩基を−１０℃〜５０℃の
温度で用いて、２〜９０分、好ましくは３〜８分間かけて脱保護する。理想的に
は、５〜６０当量の塩基が好ましい。Ｆｍｏｃ基を脱保護するにはピペリジンが
好ましい塩基である。オリゴペプチド治療薬結合体の脱保護されたアミノ末端を
、活性化ヘミエステルとしてのジアシッドアンハイドライドによりアシル化し、
最終的なオリゴペプチド治療薬のＮキャップ形態（プロドラッグ）を得る。
【００４５】
または、最終的なプロドラッグは、スクシニルＮキャップオリゴペプチドのメ
チルヘミエステル形態などのオリゴペプチドの保護されたＮキャップ形態から同
様に調製し、治療薬に結合してもよい。この方法は図６に説明されている。 保護されたＮキャップオリゴペプチド治療薬は、治療薬の安定性に適合した方
法で脱保護される。例えば、アントラサイクリンでは、発明者らはメチル基で保
護し、エステラーゼで脱保護する。他の治療薬では、発明者らはベンジル保護基
および脱保護に触媒的水素化を選択するだろう。
チルヘミエステル形態などのオリゴペプチドの保護されたＮキャップ形態から同
様に調製し、治療薬に結合してもよい。この方法は図６に説明されている。 保護されたＮキャップオリゴペプチド治療薬は、治療薬の安定性に適合した方
法で脱保護される。例えば、アントラサイクリンでは、発明者らはメチル基で保
護し、エステラーゼで脱保護する。他の治療薬では、発明者らはベンジル保護基
および脱保護に触媒的水素化を選択するだろう。
【００４６】
負に帯電したＮキャップオリゴペプチド治療薬の塩の形態は、以下の群から選
択された溶媒とともに実施される：アルコール（メタノール、エタノールまたは
イソプロパノールを含む）、水、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、ダイグ
ライムまたは他の極性溶媒。ナトリウム源は、１当量のＮａＨＣＯ3、ＮａＯＨ
、Ｎａ2ＣＯ3、ＮａＯＡｃ、ＮａＯＣＨ3（一般的にナトリウムアルコキシド）
またはＮａＨである。Ｎａ+を充填したイオン交換カラム（強イオンまたは弱イ
オン交換器）も、適切な場合、Ｎキャップオリゴペプチド治療薬の塩形態を作る
最後の工程に有用である。ナトリウムは本願において例としてのみ記載されてい
る。製薬上許容される塩はいかなるものでも、負に帯電したＮキャップに使用で
きる。
択された溶媒とともに実施される：アルコール（メタノール、エタノールまたは
イソプロパノールを含む）、水、アセトニトリル、テトラヒドロフラン、ダイグ
ライムまたは他の極性溶媒。ナトリウム源は、１当量のＮａＨＣＯ3、ＮａＯＨ
、Ｎａ2ＣＯ3、ＮａＯＡｃ、ＮａＯＣＨ3（一般的にナトリウムアルコキシド）
またはＮａＨである。Ｎａ+を充填したイオン交換カラム（強イオンまたは弱イ
オン交換器）も、適切な場合、Ｎキャップオリゴペプチド治療薬の塩形態を作る
最後の工程に有用である。ナトリウムは本願において例としてのみ記載されてい
る。製薬上許容される塩はいかなるものでも、負に帯電したＮキャップに使用で
きる。
【００４７】
一般的に、プロドラッグはその溶解性を増すために、製薬上許容できる塩の形
態に変換してもよい。Ｎキャップオリゴペプチド治療薬は、製薬上許容できる塩
、すなわちＮａＨＣＯ3、Ｎａ2ＣＯ3、ＮａＯＨ、トリ（ヒドロキシメチル）ア
ミノメタン、ＫＨＣＯ3、Ｋ2ＣＯ3、ＣａＣＯ3、ＮＨ4ＯＨ、ＣＨ3ＮＨ2、（Ｃ
Ｈ3）2ＮＨ、（ＣＨ3）3Ｎ、アセチルトリエチルアンモニウムにより中和され、
プロドラッグの好ましい塩形態はナトリウムである。好ましい中和塩は、ＮａＨ
ＣＯ3である。
態に変換してもよい。Ｎキャップオリゴペプチド治療薬は、製薬上許容できる塩
、すなわちＮａＨＣＯ3、Ｎａ2ＣＯ3、ＮａＯＨ、トリ（ヒドロキシメチル）ア
ミノメタン、ＫＨＣＯ3、Ｋ2ＣＯ3、ＣａＣＯ3、ＮＨ4ＯＨ、ＣＨ3ＮＨ2、（Ｃ
Ｈ3）2ＮＨ、（ＣＨ3）3Ｎ、アセチルトリエチルアンモニウムにより中和され、
プロドラッグの好ましい塩形態はナトリウムである。好ましい中和塩は、ＮａＨ
ＣＯ3である。
【００４８】
ドキソルビシンおよびダウノルビシンなどのアントラサイクリンタイプの分子
が、非常に低濃度で有機溶媒中でゲルを形成することが詳細に記載されている（
Ｍａｔｚａｎｋｅ，Ｂ．Ｆ．，ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，
２０７：７４７−５５（１９９２）；Ｃｈａｉｒｅｓ，Ｊ．Ｂ．，ｅｔ ａｌ．
，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２１：３９２７−３２（１９８２）；Ｈａｙａｋ
ａｗａ，Ｅ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，３９：１２
８２−６（１９９１））。発明者らは、ペプチドアントラサイクリン結合体を形
成する際、これが、高収量のきれいな生成物を得ることに対する大きな障害にな
ることを見出した。ゲル形成は、望ましくない副反応の発生に結びつく。この問
題をできるだけ抑える方法としては、非常に希薄な溶液（１〜２％）をカップリ
ング反応に使用することがあるが、プロセス環境では実用的でない（多量の廃物
、複雑な単離）。この問題を克服するために、発明者らは、尿素および他のカオ
トロピック試薬を用いて、ゲルを形成する強い疎水性力および水素結合力を断ち
切る方法を発明した。したがって、カップリング反応が尿素含有溶媒、好都合に
はＤＭＦまたはＮＭＰの２０％から飽和尿素溶液中で行われる場合、反応物の濃
度が１０％を超えても副反応は２％未満に抑えることができる。この発明により
、高濃度での結合工程が実用的になり、良好な収率および他の同位体試薬として
尿素を用いない手順よりも高い純度を得ることができる。 一般的な酵素方法 酸または塩基による触媒作用により、保護基のついたＮキャップオリゴペプチ
ド治療薬を完全なＮキャップ化合物へ加水分解すると、穏和な酸性または塩基性
条件下でも多くの治療薬が不安定であるため、複雑な反応混合物が生成する。発
明者らは、酵素が、基質または生成物を破壊せずに加水分解を促進できることを
見出した。この反応に好適な酵素は、エステラーゼ、リパーゼから選択でき、天
然の水溶性形態でもよいし、市販の固形担持物質にクロスカップリングまたは付
着により固定化されていてもよい。評価された可溶性酵素のうちで、Ｃａｎｄｉ
ｄａ Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ“Ｂ”リパーゼ（Ａｌｔｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ
）が特に有用である。クロスカップリングにより固定化された酵素の例としては
、ＣｈｉｒｏＣＬＥＣ−ＰＣ（商標）（Ａｌｔｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ）があ
る。Ｃａｎｄｉｄａ Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ“Ｂ”リパーゼ（Ａｌｔｕｓ Ｂｉ
ｏｌｏｇｉｃｓ）は、ＮＨＳ活性化Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（商標）４ Ｆａｓｔ
Ｆｌｏｗ（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ）との反応
で固定化できる。加水分解の間反応混合物のｐＨを注意深く制御し、ｐＨ安定装
置により、ＮａＨＣＯ3溶液を制御しながら添加して５．５と７．５の間、好都
合には５．７と６．５の間に維持する。反応が終了すると、濾過された反応混合
物の凍結乾燥により生成物を単離する。固定化酵素はフィルターケーキ上に残っ
ており、望まれる場合再利用される。 一般的なアリルエステル法 アリルへミエステル形態のＮキャップオリゴペプチドと治療薬とをカップリン
グし、遊離の酸を結合体から放出することによってもプロドラッグを調製できる
。図８は、スクシニル−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕとドキソルビシンを
用いたこのプロセスを示す。
が、非常に低濃度で有機溶媒中でゲルを形成することが詳細に記載されている（
Ｍａｔｚａｎｋｅ，Ｂ．Ｆ．，ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，
２０７：７４７−５５（１９９２）；Ｃｈａｉｒｅｓ，Ｊ．Ｂ．，ｅｔ ａｌ．
，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、２１：３９２７−３２（１９８２）；Ｈａｙａｋ
ａｗａ，Ｅ．，ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，３９：１２
８２−６（１９９１））。発明者らは、ペプチドアントラサイクリン結合体を形
成する際、これが、高収量のきれいな生成物を得ることに対する大きな障害にな
ることを見出した。ゲル形成は、望ましくない副反応の発生に結びつく。この問
題をできるだけ抑える方法としては、非常に希薄な溶液（１〜２％）をカップリ
ング反応に使用することがあるが、プロセス環境では実用的でない（多量の廃物
、複雑な単離）。この問題を克服するために、発明者らは、尿素および他のカオ
トロピック試薬を用いて、ゲルを形成する強い疎水性力および水素結合力を断ち
切る方法を発明した。したがって、カップリング反応が尿素含有溶媒、好都合に
はＤＭＦまたはＮＭＰの２０％から飽和尿素溶液中で行われる場合、反応物の濃
度が１０％を超えても副反応は２％未満に抑えることができる。この発明により
、高濃度での結合工程が実用的になり、良好な収率および他の同位体試薬として
尿素を用いない手順よりも高い純度を得ることができる。 一般的な酵素方法 酸または塩基による触媒作用により、保護基のついたＮキャップオリゴペプチ
ド治療薬を完全なＮキャップ化合物へ加水分解すると、穏和な酸性または塩基性
条件下でも多くの治療薬が不安定であるため、複雑な反応混合物が生成する。発
明者らは、酵素が、基質または生成物を破壊せずに加水分解を促進できることを
見出した。この反応に好適な酵素は、エステラーゼ、リパーゼから選択でき、天
然の水溶性形態でもよいし、市販の固形担持物質にクロスカップリングまたは付
着により固定化されていてもよい。評価された可溶性酵素のうちで、Ｃａｎｄｉ
ｄａ Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ“Ｂ”リパーゼ（Ａｌｔｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ
）が特に有用である。クロスカップリングにより固定化された酵素の例としては
、ＣｈｉｒｏＣＬＥＣ−ＰＣ（商標）（Ａｌｔｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ）があ
る。Ｃａｎｄｉｄａ Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ“Ｂ”リパーゼ（Ａｌｔｕｓ Ｂｉ
ｏｌｏｇｉｃｓ）は、ＮＨＳ活性化Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（商標）４ Ｆａｓｔ
Ｆｌｏｗ（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ）との反応
で固定化できる。加水分解の間反応混合物のｐＨを注意深く制御し、ｐＨ安定装
置により、ＮａＨＣＯ3溶液を制御しながら添加して５．５と７．５の間、好都
合には５．７と６．５の間に維持する。反応が終了すると、濾過された反応混合
物の凍結乾燥により生成物を単離する。固定化酵素はフィルターケーキ上に残っ
ており、望まれる場合再利用される。 一般的なアリルエステル法 アリルへミエステル形態のＮキャップオリゴペプチドと治療薬とをカップリン
グし、遊離の酸を結合体から放出することによってもプロドラッグを調製できる
。図８は、スクシニル−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕとドキソルビシンを
用いたこのプロセスを示す。
【００４９】
アリルスクシニルβＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕとドキソルビシンとのカ
ップリングは、オリゴペプチド結合方法のいずれによっても実施できる。 アリルスクシニルβＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ドキソルビシンは、公
知の方法（Ｃａｓｉｍｉｒ，Ｊ．Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔ．Ｌｅｔｔ．３６
／１９ ３４０９（１９９５））により調製されたアリルヘミスクシネートをβ
Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ドキソルビシンと反応させることにより、図
４に示した保護基 のついたテトラペプチド前駆体のドキソルビシンへのカップリングが上記の方法
で記載されたのと同様に合成できる。好適な不活性溶媒は、ＴＨＦ、ジクロロメ
タン、酢酸エチル、トルエン、好ましくはＴＨＦであり、反応が進行するにつれ
酸形態の生成物がＴＨＦから沈殿する。単離された酸は、上述のようにそのナト
リウム塩に変換される。反応時間は、０〜６０℃の間、好ましくは１５〜３０℃
の温度で、１０〜１８０分の間、好都合には１０〜６０分である。
ップリングは、オリゴペプチド結合方法のいずれによっても実施できる。 アリルスクシニルβＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ドキソルビシンは、公
知の方法（Ｃａｓｉｍｉｒ，Ｊ．Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔ．Ｌｅｔｔ．３６
／１９ ３４０９（１９９５））により調製されたアリルヘミスクシネートをβ
Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ドキソルビシンと反応させることにより、図
４に示した保護基 のついたテトラペプチド前駆体のドキソルビシンへのカップリングが上記の方法
で記載されたのと同様に合成できる。好適な不活性溶媒は、ＴＨＦ、ジクロロメ
タン、酢酸エチル、トルエン、好ましくはＴＨＦであり、反応が進行するにつれ
酸形態の生成物がＴＨＦから沈殿する。単離された酸は、上述のようにそのナト
リウム塩に変換される。反応時間は、０〜６０℃の間、好ましくは１５〜３０℃
の温度で、１０〜１８０分の間、好都合には１０〜６０分である。
【００５０】
アリル基の除去は、当業界に公知であり専門誌に記載されているとおり（Ｇｅ
ｎｅｔ，Ｊ−Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔ．Ｌｅｔｔ．，５０，４９７，１９９
４；Ｂｒｉｃｏｕｔ，Ｈ．，ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔ．Ｌｅｔｔ，５４：１０７３
（１９９８），Ｇｅｎｅｔ，Ｊ−Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｙｎｌｅｔｔ，６８０（
１９９３）；Ｗａｌｄｍａｎｎ，Ｈ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．
Ｃｈｅｍ．，７：７４９（１９９８）；Ｓｈａｐｈｉｒｏ，Ｇ．，Ｂｕｅｃｈｌ
ｅｒ，Ｄ．，Ｔｅｔ．Ｌｅｔｔ．，３５：５４２１（１１９４））、Ｐｄ（０）
またはＮｉ（０）、好都合にはＰｄ（０）に促進されたアリル基のアクセプター
分子への遷移により実施できる。触媒の量は、基質に対して０．５〜２５モル％
である。 一般的なトリチルまたは置換トリチル法 プロドラッグは、図７に示した方法により合成してもよい。この手法は、Ｒ’
がトリチルまたは置換トリチルであるＲ’テトラペプチドを利用する。Ｒ’テト
ラペプチドと治療薬のカップリングは、０〜２０℃で３０〜１２０分、保護基の
ついたオリゴペプチドと治療薬の結合について上記で記載した方法のいずれによ
っても行うことができる。
ｎｅｔ，Ｊ−Ｐ．，ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔ．Ｌｅｔｔ．，５０，４９７，１９９
４；Ｂｒｉｃｏｕｔ，Ｈ．，ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔ．Ｌｅｔｔ，５４：１０７３
（１９９８），Ｇｅｎｅｔ，Ｊ−Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ｓｙｎｌｅｔｔ，６８０（
１９９３）；Ｗａｌｄｍａｎｎ，Ｈ．，ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．
Ｃｈｅｍ．，７：７４９（１９９８）；Ｓｈａｐｈｉｒｏ，Ｇ．，Ｂｕｅｃｈｌ
ｅｒ，Ｄ．，Ｔｅｔ．Ｌｅｔｔ．，３５：５４２１（１１９４））、Ｐｄ（０）
またはＮｉ（０）、好都合にはＰｄ（０）に促進されたアリル基のアクセプター
分子への遷移により実施できる。触媒の量は、基質に対して０．５〜２５モル％
である。 一般的なトリチルまたは置換トリチル法 プロドラッグは、図７に示した方法により合成してもよい。この手法は、Ｒ’
がトリチルまたは置換トリチルであるＲ’テトラペプチドを利用する。Ｒ’テト
ラペプチドと治療薬のカップリングは、０〜２０℃で３０〜１２０分、保護基の
ついたオリゴペプチドと治療薬の結合について上記で記載した方法のいずれによ
っても行うことができる。
【００５１】
トリチルまたは置換トリチル基の除去は酸性条件下で行われ、正に帯電したプ
ロドラッグが得られる。この正に帯電したプロドラッグは、図４に示され上述の
とおりＮキャップされている。トリチルの脱保護は、酢酸、ギ酸および希塩酸に
より実施できる。 プロドラッグは、無水コハク酸と反応させることによりスクシニルまたはグル
タリルオリゴペプチド３８治療薬に変換できる。スクシニルまたはグルタリルオ
リゴペプチド３８治療薬は、製薬上許容できる塩に変換できる。カップリング工
程の溶媒、ＤＭＦ、ＤＭＳＯ、ＣＨ3ＣＮ、ＮＭＰまたは他の好適な溶媒が当業
界に公知である。 一般的な逆方向固相結合法 本発明のプロドラッグ化合物は、「段階的」逆方向（Ｎ末端からＣ末端へ）法
による固相化学を用いて合成できる。
ロドラッグが得られる。この正に帯電したプロドラッグは、図４に示され上述の
とおりＮキャップされている。トリチルの脱保護は、酢酸、ギ酸および希塩酸に
より実施できる。 プロドラッグは、無水コハク酸と反応させることによりスクシニルまたはグル
タリルオリゴペプチド３８治療薬に変換できる。スクシニルまたはグルタリルオ
リゴペプチド３８治療薬は、製薬上許容できる塩に変換できる。カップリング工
程の溶媒、ＤＭＦ、ＤＭＳＯ、ＣＨ3ＣＮ、ＮＭＰまたは他の好適な溶媒が当業
界に公知である。 一般的な逆方向固相結合法 本発明のプロドラッグ化合物は、「段階的」逆方向（Ｎ末端からＣ末端へ）法
による固相化学を用いて合成できる。
【００５２】
方法の1つとしては、樹脂を利用したスクシニルヘミエステル、例えば、スク
シニルモノベンジルエステルまたはアリルエステルの固定化がある。選択できる
樹脂の例は「Ｗａｎｇ樹脂」（Ｗａｎｇ，Ｓ．Ｓ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏ
ｃ．，９５：１３２８（１９７３）；Ｚｈａｎｇ，Ｃ．，Ｍｊａｉｌｉ，Ａ．Ｍ
．Ｍ．，Ｔｅｔ．Ｌｅｔｔ．，３７：５４５７（１９９６））、「Ｒｉｎｋ樹脂
」（Ｒｉｎｋ，Ｈ．，Ｔｅｔ．Ｌｅｔｔ．，２８：３７８７（１９８７））、「
トリチルまたは置換トリチル樹脂」（Ｃｈｅｎ，Ｃ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ
．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１１６：２６６１（１９９４）；Ｂａｒｔｏｓ，Ｋ．，
ｅｔ ａｌ．，Ｐｅｐｔｉｄｅｓ Ｐｒｏｃ．２２nd Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｐｅ
ｐｔｉｄｅ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ （１９９２）；Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ，Ｃ．Ｈ
．；Ｅｂｅｒｌｅ，Ａ．Ｎ．（ｅｄｓ．），ＥＳＣＯＭ，Ｌｅｉｄｅｎ，ｐｐ．
２８１（１９９３）である。次いで、固定化されたエステルを脱保護し、同じよ
うにＣ末端が保護されたβアラニンと反応させる。これらの工程をロイシン、ア
ラニン、最後にロイシンエステルで繰り返し、その後固定化されたスクシニルテ
トラペプチドへのドキソルビシンのカップリングを行う。次いで、穏和な酸性条
件を用いこの分子を樹脂から外して、遊離のスクシニルオリゴペプチド３８ドキ
ソルビシンを形成する。この方法を図９の図式に示す。相合成の他の形式として
は、スクシニルテトラペプチドエステルが固定化された場合である。それはＣ末
端を脱保護され、ドキソルビシンへのカップリングを行い、図９に示すように最
終的に樹脂から外される。プロドラッグ分子の酸形態は上述のとおり最終的にそ
のナトリウム塩に変換される。 特定の化合物 本発明の化合物には、プロドラッグ、Ｓｕｃ−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌ
ｅｕ−Ｄｏｘ、Ｓｕｃ−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｎｒおよびグル
タリル−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘがある。
シニルモノベンジルエステルまたはアリルエステルの固定化がある。選択できる
樹脂の例は「Ｗａｎｇ樹脂」（Ｗａｎｇ，Ｓ．Ｓ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏ
ｃ．，９５：１３２８（１９７３）；Ｚｈａｎｇ，Ｃ．，Ｍｊａｉｌｉ，Ａ．Ｍ
．Ｍ．，Ｔｅｔ．Ｌｅｔｔ．，３７：５４５７（１９９６））、「Ｒｉｎｋ樹脂
」（Ｒｉｎｋ，Ｈ．，Ｔｅｔ．Ｌｅｔｔ．，２８：３７８７（１９８７））、「
トリチルまたは置換トリチル樹脂」（Ｃｈｅｎ，Ｃ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ
．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１１６：２６６１（１９９４）；Ｂａｒｔｏｓ，Ｋ．，
ｅｔ ａｌ．，Ｐｅｐｔｉｄｅｓ Ｐｒｏｃ．２２nd Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｐｅ
ｐｔｉｄｅ Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ （１９９２）；Ｓｃｈｎｅｉｄｅｒ，Ｃ．Ｈ
．；Ｅｂｅｒｌｅ，Ａ．Ｎ．（ｅｄｓ．），ＥＳＣＯＭ，Ｌｅｉｄｅｎ，ｐｐ．
２８１（１９９３）である。次いで、固定化されたエステルを脱保護し、同じよ
うにＣ末端が保護されたβアラニンと反応させる。これらの工程をロイシン、ア
ラニン、最後にロイシンエステルで繰り返し、その後固定化されたスクシニルテ
トラペプチドへのドキソルビシンのカップリングを行う。次いで、穏和な酸性条
件を用いこの分子を樹脂から外して、遊離のスクシニルオリゴペプチド３８ドキ
ソルビシンを形成する。この方法を図９の図式に示す。相合成の他の形式として
は、スクシニルテトラペプチドエステルが固定化された場合である。それはＣ末
端を脱保護され、ドキソルビシンへのカップリングを行い、図９に示すように最
終的に樹脂から外される。プロドラッグ分子の酸形態は上述のとおり最終的にそ
のナトリウム塩に変換される。 特定の化合物 本発明の化合物には、プロドラッグ、Ｓｕｃ−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌ
ｅｕ−Ｄｏｘ、Ｓｕｃ−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｎｒおよびグル
タリル−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘがある。
【００５３】
また、本発明のプロドラッグの調製方法にとって重要な、以下の中間体化合物
も特許請求される。 中間体： βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘ トリチル−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘ ジフェニルメチル−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘ ベンジロキシカルボニル−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘ Ｆｍｏｃ−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ＯＢｎ βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ＯＢｎ メチル−スクシニル−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ＯＢｎメチル−スク
シニル−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ Ｆｍｏｃ−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ Ｆｍｏｃ−Ｔｈｉ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ Ｆｍｏｃ−βＡＬａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｎｒ Ｆｍｏｃ−Ｔｈｉ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｄｎｒ Ｓｕｃ−Ｔｈｉ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｄｎｒ Ｇｌ−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘ βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘ乳酸エステル アリル−スクシニル−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘ Ｓｕｃ−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ Ｓｕｃ−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕのメチルエステル Ｆｍｏｃ−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘ メチル−スクシニル−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘおよびアリル
ヘミスクシネート実施例 実施例１： トロアーゼおよびヒトの血液による、可能性のあるプロドラッグのスクリーニン
グ 消化生成物のＨＰＬＣ分析に基づき、ペプチジルトキシンの遊離毒素への活性
化は、一連の酵素触媒切断反応により起こる。例えば、Ｎ−キャップテトラペプ
チジルトキシン、スクシニル−βアラニル−ロイシル−アラニル−ロイシル−ド
キソルビシンは、少なくとも２種の酵素に触媒作用を受ける２工程で、癌腫細胞
または癌腫細胞調整済み培地中でロイシル−ドキソルビシンに変換される。最初
のエンドペプチダーゼ切断は、ＡＡ3（Ｐ１）とＡＡ2（Ｐ１’）アミノ酸の間で
おき、アラニル−ロイシル−ドキソルビシンを生じる。続いて、エキソペプチダ
ーゼがアラニンを除去し、ロイシル−ドキソルビシンを与えるが、ロイシル−ド
キソルビシンは細胞に吸収されそこで活性毒素、ドキソルビシンが放出されると
知られている。
も特許請求される。 中間体： βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘ トリチル−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘ ジフェニルメチル−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘ ベンジロキシカルボニル−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘ Ｆｍｏｃ−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ＯＢｎ βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ＯＢｎ メチル−スクシニル−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ＯＢｎメチル−スク
シニル−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ Ｆｍｏｃ−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ Ｆｍｏｃ−Ｔｈｉ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ Ｆｍｏｃ−βＡＬａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｎｒ Ｆｍｏｃ−Ｔｈｉ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｄｎｒ Ｓｕｃ−Ｔｈｉ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｄｎｒ Ｇｌ−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘ βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘ乳酸エステル アリル−スクシニル−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘ Ｓｕｃ−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ Ｓｕｃ−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕのメチルエステル Ｆｍｏｃ−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘ メチル−スクシニル−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘおよびアリル
ヘミスクシネート実施例 実施例１： トロアーゼおよびヒトの血液による、可能性のあるプロドラッグのスクリーニン
グ 消化生成物のＨＰＬＣ分析に基づき、ペプチジルトキシンの遊離毒素への活性
化は、一連の酵素触媒切断反応により起こる。例えば、Ｎ−キャップテトラペプ
チジルトキシン、スクシニル−βアラニル−ロイシル−アラニル−ロイシル−ド
キソルビシンは、少なくとも２種の酵素に触媒作用を受ける２工程で、癌腫細胞
または癌腫細胞調整済み培地中でロイシル−ドキソルビシンに変換される。最初
のエンドペプチダーゼ切断は、ＡＡ3（Ｐ１）とＡＡ2（Ｐ１’）アミノ酸の間で
おき、アラニル−ロイシル−ドキソルビシンを生じる。続いて、エキソペプチダ
ーゼがアラニンを除去し、ロイシル−ドキソルビシンを与えるが、ロイシル−ド
キソルビシンは細胞に吸収されそこで活性毒素、ドキソルビシンが放出されると
知られている。
【００５４】
高治療指数のＮキャップペプチジルトキシンプロドラッグの良好な候補は、癌
細胞により活性化されるが、ヒト全血中では比較的安定でなくてはならない。３
種の異なる癌腫の試料を用いて、種々のＮキャップペプチジルトキシンをスクリ
ーニングした。３種の癌腫は以下のとおりである。 （ａ）ＭＣＦ ７／６ （乳癌）細胞ホモジェネート （ｂ）ＭＣＦ ７／６ （乳癌）調整済み培地および （ｃ）ヒーラ（子宮頚癌）細胞抽出物アニオン交換フラクションプール。
細胞により活性化されるが、ヒト全血中では比較的安定でなくてはならない。３
種の異なる癌腫の試料を用いて、種々のＮキャップペプチジルトキシンをスクリ
ーニングした。３種の癌腫は以下のとおりである。 （ａ）ＭＣＦ ７／６ （乳癌）細胞ホモジェネート （ｂ）ＭＣＦ ７／６ （乳癌）調整済み培地および （ｃ）ヒーラ（子宮頚癌）細胞抽出物アニオン交換フラクションプール。
【００５５】
加水分解により単一のアミノ酸毒素結合体に分解される化合物は、ヒト全血中
の安定性についてさらに試験した。 試験試料は、３種の異なる癌腫酵素の試料および全血とともに３７℃で２時間
インキュベートし、アセトニトリルで抽出し、蛍光検出を用いてＨＰＬＣにより
分析した。例外がいくつかあったが、癌腫酵素切断の結果は、ヒーラ細胞の部分
的に精製したフラクション、ＭＦＣ ７／６細胞ホモジェネートまたはＭＣＦ
７／６調整済み培地で同じであった。 癌腫細胞酵素溶液の調製 （ａ）ＭＣＦ ７／６細胞ホモジェネート ＭＣＦ ７／６細胞を、ＤＭＥＭ：Ｆ１２（１：１）、５０ｍｇ／Ｌウシ血清
アルブミン、ＩＴＳ−ＸおよびＬｉｐｉｄ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅを含む血清
を含まない培地で集密まで成長させた。細胞１００ｍｌを４℃、１０，０００ｘ
ｇで２０分間遠心分離し、上清をデカンテーションすることにより取り入れた。
ペレットを、２ｍＬのリン酸緩衝化生理食塩水（Ｇｉｂｃｏ）に再懸濁し、１８
，０００ｘｇで１０分間遠心分離した。上清をデカンテーションした後、細胞（
およそ３００μＬ湿潤）を、１．７ｍＬの１０ｍＭ ｐＨ７．２ ＨＥＰＥＳ
緩衝液（ナトリウム塩）中で粉砕することにより均質化した。ホモジェネートを
１８，０００ｘｇ、４℃で、５分間遠心分離し、上清を小分けし、その後の化合
物スクリーニングで使用するため−２０℃以下で保存した。 （ｂ）ＭＣＦ ７／６ 調整済み培地 ＭＣＦ ７／６細胞を、１０％ウシ胎仔血清、０．０５％（ｗ／ｖ）Ｌ−グル
タミン、２５０ ＩＵ／ｍＬペニシリンおよび１００μｇ／ｍＬストレプトマイ
シンを含むＤＭＥＭ／Ｆ１２（１：１）培地中で集密まで成長させた。リン酸緩
衝化生理食塩水で細胞を２回洗浄し、ＤＭＥＭ／Ｆ１２（１：１）、０．０２％
ＢＳＡ、ＩＴＳ−Ｘ中で、５％ＣＯ2、３７℃で２４時間インキュベーション
した。調整済み培地をデカンテーションし、ＹＭ１０（１０，０００ＭＷカット
オフ）限外濾過メンブラン（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）とともに撹拌された細胞装置
を用いて、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ 緩衝液、ｐＨ７．２で１回交換し、２０倍に
濃縮した。この溶液を小分けして、化合物スクリーンで使用するため−２０℃で
保存した。 （ｃ）ヒーラ細胞アニオン交換フラクションプール： ３００億の市販ヒーラ細胞（ヒト子宮頚癌、Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｃｅｌｌ Ｃ
ｕｌｔｕｒｅ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｓｅｎｅｆｆｅ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）を、１０８ｍ
Ｌのリーシス水溶液中で、超音波処理器およびダンス型ホモジェナイザーで均質
化した。リーシス溶液は、０．０２％ｗ／ｖ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、０．
０４％ ｗ／ｖアジ化ナトリウムおよびプロテアーゼインヒビターのカクテル（
２錠／５０ｍＬ Ｃｏｍｐｌｅｔｅ（商標）、ＥＤＴＡを含まないタブレット、
Ｒｏｃｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ）を含んでいた。
細胞ホモジェネートを、４℃で、５０００ｘｇで３０分間遠心分離し、ダンス型
ホモジェナイザーを用いて第二のリーシス溶液１０８ｍＬにペレットを均質化し
上記と同じく遠心分離した。上清を合わせ、４℃で、６０，０００ｘｇで９０分
間遠心分離した。 クロマトグラフィー 超遠心分離上清の１部を、０．０１％（ｗ／ｖ）Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００お
よび０．０２％（ｗ／ｖ）アジ化ナトリウムを含む２０ｍＭトリエタノールアミ
ン−ＨＣｌ ｐＨ７．２緩衝液（平衡化緩衝液）で２倍に希釈した。約１８０ｍ
ｇのタンパクに相当する、得られた溶液３０ｍＬを、２．６×９．４ｃｍ Ｓｏ
ｕｒｃｅ（商標）１５Ｑ（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅ
ｃｈ）低圧アニオン交換クロマトグラフィーカラムに４℃で充填した（１ｍｌ／
分）。前記カラムを２５０ｍｌの平衡化緩衝液で１ｍＬ／分の流量で洗浄した。
タンパクは、流量３ｍｌ／分で、ＮａＣｌの直線濃度グラジェント（平衡化緩衝
液中０〜０．５Ｍ、グラジェントの全体積１０００ｍｌ）で溶出した。２分のフ
ラクションを集め、βアラニル−ロイシル−アラニル−ロイシル−ドキソルビシ
ンを基質として酵素活性測定に用いた。Ｌ−アラニル−Ｌ−ロイシル−ドキソル
ビシンへの変換を、アントラサイクリン部分の蛍光検出を利用した逆相ＨＰＬＣ
により定量化した。最も高い活性を持つフラクションを集め（フラクション＃４
３〜４６；約０．１３Ｍ ＮａＣｌ）、プロテアーゼインヒビター（Ｃｏｍｐｌ
ｅｔｅ（商標）、ＥＤＴＡを含まないタブレット、Ｒｏｃｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌ
ａｒ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ）を補い、小分けして−８０℃で保存した。 ヒトの全血 ヒトの全血は、市販の酸緩衝化クエン酸全血採取チューブを用いて集めた。 化合物スクリーニング 試験化合物を、以下の酵素溶液とともに、１２．５μｇ／ｍＬの濃度で、３７
℃で２時間インキュベートした。 ａ）１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１ｍＭ ＣｏＣｌ2，ｐＨ ７．２中で１：２７に
希釈したＭＦＣ ７／６ 細胞ホモジェネート ｂ）ＭＦＣ ７／６ 調整済み培地 ｃ）１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１ｍＭ ＣｏＣｌ2，ｐＨ ７．２中で１：５７に
希釈したヒーラ細胞アニオン交換フラクションプール１ ｄ）１ｍＭ ＣｏＣｌ2を含むヒト全血 インキュベーションに続き、３体積のアセトニトリルを加えて反応を停止し、
混合物からタンパクを除いた。試料を、１８，０００ｇで５分間遠心分離し、１
００μＬの上清を３００μＬの水と混合してからＨＰＬＣ分析を行った。
の安定性についてさらに試験した。 試験試料は、３種の異なる癌腫酵素の試料および全血とともに３７℃で２時間
インキュベートし、アセトニトリルで抽出し、蛍光検出を用いてＨＰＬＣにより
分析した。例外がいくつかあったが、癌腫酵素切断の結果は、ヒーラ細胞の部分
的に精製したフラクション、ＭＦＣ ７／６細胞ホモジェネートまたはＭＣＦ
７／６調整済み培地で同じであった。 癌腫細胞酵素溶液の調製 （ａ）ＭＣＦ ７／６細胞ホモジェネート ＭＣＦ ７／６細胞を、ＤＭＥＭ：Ｆ１２（１：１）、５０ｍｇ／Ｌウシ血清
アルブミン、ＩＴＳ−ＸおよびＬｉｐｉｄ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅを含む血清
を含まない培地で集密まで成長させた。細胞１００ｍｌを４℃、１０，０００ｘ
ｇで２０分間遠心分離し、上清をデカンテーションすることにより取り入れた。
ペレットを、２ｍＬのリン酸緩衝化生理食塩水（Ｇｉｂｃｏ）に再懸濁し、１８
，０００ｘｇで１０分間遠心分離した。上清をデカンテーションした後、細胞（
およそ３００μＬ湿潤）を、１．７ｍＬの１０ｍＭ ｐＨ７．２ ＨＥＰＥＳ
緩衝液（ナトリウム塩）中で粉砕することにより均質化した。ホモジェネートを
１８，０００ｘｇ、４℃で、５分間遠心分離し、上清を小分けし、その後の化合
物スクリーニングで使用するため−２０℃以下で保存した。 （ｂ）ＭＣＦ ７／６ 調整済み培地 ＭＣＦ ７／６細胞を、１０％ウシ胎仔血清、０．０５％（ｗ／ｖ）Ｌ−グル
タミン、２５０ ＩＵ／ｍＬペニシリンおよび１００μｇ／ｍＬストレプトマイ
シンを含むＤＭＥＭ／Ｆ１２（１：１）培地中で集密まで成長させた。リン酸緩
衝化生理食塩水で細胞を２回洗浄し、ＤＭＥＭ／Ｆ１２（１：１）、０．０２％
ＢＳＡ、ＩＴＳ−Ｘ中で、５％ＣＯ2、３７℃で２４時間インキュベーション
した。調整済み培地をデカンテーションし、ＹＭ１０（１０，０００ＭＷカット
オフ）限外濾過メンブラン（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）とともに撹拌された細胞装置
を用いて、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ 緩衝液、ｐＨ７．２で１回交換し、２０倍に
濃縮した。この溶液を小分けして、化合物スクリーンで使用するため−２０℃で
保存した。 （ｃ）ヒーラ細胞アニオン交換フラクションプール： ３００億の市販ヒーラ細胞（ヒト子宮頚癌、Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｃｅｌｌ Ｃ
ｕｌｔｕｒｅ Ｃｅｎｔｅｒ，Ｓｅｎｅｆｆｅ，Ｂｅｌｇｉｕｍ）を、１０８ｍ
Ｌのリーシス水溶液中で、超音波処理器およびダンス型ホモジェナイザーで均質
化した。リーシス溶液は、０．０２％ｗ／ｖ Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、０．
０４％ ｗ／ｖアジ化ナトリウムおよびプロテアーゼインヒビターのカクテル（
２錠／５０ｍＬ Ｃｏｍｐｌｅｔｅ（商標）、ＥＤＴＡを含まないタブレット、
Ｒｏｃｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ）を含んでいた。
細胞ホモジェネートを、４℃で、５０００ｘｇで３０分間遠心分離し、ダンス型
ホモジェナイザーを用いて第二のリーシス溶液１０８ｍＬにペレットを均質化し
上記と同じく遠心分離した。上清を合わせ、４℃で、６０，０００ｘｇで９０分
間遠心分離した。 クロマトグラフィー 超遠心分離上清の１部を、０．０１％（ｗ／ｖ）Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００お
よび０．０２％（ｗ／ｖ）アジ化ナトリウムを含む２０ｍＭトリエタノールアミ
ン−ＨＣｌ ｐＨ７．２緩衝液（平衡化緩衝液）で２倍に希釈した。約１８０ｍ
ｇのタンパクに相当する、得られた溶液３０ｍＬを、２．６×９．４ｃｍ Ｓｏ
ｕｒｃｅ（商標）１５Ｑ（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅ
ｃｈ）低圧アニオン交換クロマトグラフィーカラムに４℃で充填した（１ｍｌ／
分）。前記カラムを２５０ｍｌの平衡化緩衝液で１ｍＬ／分の流量で洗浄した。
タンパクは、流量３ｍｌ／分で、ＮａＣｌの直線濃度グラジェント（平衡化緩衝
液中０〜０．５Ｍ、グラジェントの全体積１０００ｍｌ）で溶出した。２分のフ
ラクションを集め、βアラニル−ロイシル−アラニル−ロイシル−ドキソルビシ
ンを基質として酵素活性測定に用いた。Ｌ−アラニル−Ｌ−ロイシル−ドキソル
ビシンへの変換を、アントラサイクリン部分の蛍光検出を利用した逆相ＨＰＬＣ
により定量化した。最も高い活性を持つフラクションを集め（フラクション＃４
３〜４６；約０．１３Ｍ ＮａＣｌ）、プロテアーゼインヒビター（Ｃｏｍｐｌ
ｅｔｅ（商標）、ＥＤＴＡを含まないタブレット、Ｒｏｃｈｅ Ｍｏｌｅｃｕｌ
ａｒ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ）を補い、小分けして−８０℃で保存した。 ヒトの全血 ヒトの全血は、市販の酸緩衝化クエン酸全血採取チューブを用いて集めた。 化合物スクリーニング 試験化合物を、以下の酵素溶液とともに、１２．５μｇ／ｍＬの濃度で、３７
℃で２時間インキュベートした。 ａ）１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１ｍＭ ＣｏＣｌ2，ｐＨ ７．２中で１：２７に
希釈したＭＦＣ ７／６ 細胞ホモジェネート ｂ）ＭＦＣ ７／６ 調整済み培地 ｃ）１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１ｍＭ ＣｏＣｌ2，ｐＨ ７．２中で１：５７に
希釈したヒーラ細胞アニオン交換フラクションプール１ ｄ）１ｍＭ ＣｏＣｌ2を含むヒト全血 インキュベーションに続き、３体積のアセトニトリルを加えて反応を停止し、
混合物からタンパクを除いた。試料を、１８，０００ｇで５分間遠心分離し、１
００μＬの上清を３００μＬの水と混合してからＨＰＬＣ分析を行った。
【００５６】
ＨＰＬＣ分析には、５０μＬの試料を４．６×５０ｍＭ ２μ ＴＳＫ Ｓｕ
ｐｅｒ−ＯＤＳクロマトグラフィーカラムに４０℃で注入し、２０ｍＭ酢酸アン
モニウム水性緩衝液ｐＨ４．５中の２６％から６８％アセトニトリルの３分間直
線勾配を用いて２ｍＬ／分で溶出させた。検出は、励起波長２３５ｎｍおよび発
光波長５６０ｎｍを用いた蛍光により行った。
ｐｅｒ−ＯＤＳクロマトグラフィーカラムに４０℃で注入し、２０ｍＭ酢酸アン
モニウム水性緩衝液ｐＨ４．５中の２６％から６８％アセトニトリルの３分間直
線勾配を用いて２ｍＬ／分で溶出させた。検出は、励起波長２３５ｎｍおよび発
光波長５６０ｎｍを用いた蛍光により行った。
【００５７】
与えられた条件下でトロアーゼにより切断されヒト全血中で安定なオリゴペプ
チドを、図９Ａ〜９Ｃに示す。 実施例２ トロアーゼの特異性は、Ｐ２位置の遺伝学的にコードされていないアミノ酸に
より提供されている。
チドを、図９Ａ〜９Ｃに示す。 実施例２ トロアーゼの特異性は、Ｐ２位置の遺伝学的にコードされていないアミノ酸に
より提供されている。
【００５８】
特異性は、Ｐ２位置での遺伝学的にコードされたアミノ酸よりも遺伝学的にコ
ードされていないアミノ酸の取り込みにより提供される。具体的には、遺伝学的
にコードされていないアミノ酸βアラニンを位置Ｐ２に含む（スクシニルＮキャ
ップ）−（オリゴペプチド３８）−ダウノルビシンを、実施例１に記載したとお
り調製された各酵素試料とともに、３７℃で２時間インキュベートした。得られ
た混合物をＨＰＬＣ分析にかけ、切断の程度を評価した。これらの結果を、遺伝
学的にコードされたアミノ酸Ｌ−アラニンがＰ２位置に置換されている以外同じ
化合物について同じインキュベーションをした結果と比較した。細胞ホモジェネ
ートによる切断の程度（速度）は、Ｐ２ β−アラニン化合物に対してＰ２ Ｌ
−アラニン化合物では１．３倍速かった。調整済み培地による切断の程度は、２
つの化合物で同じであった。しかし、部分的に精製されたトロアーゼ試料では、
Ｐ２ Ｌ−アラニン化合物の切断の程度は、Ｐ２ βアラニン化合物の０．６倍
でしかなかった。これらの結果は、Ｐ２のＬ−アラニンの存在が酵素のより粗な
混合物の第二の切断部位を与えており；したがって生体内で活性のある薬剤の放
出が腫瘍細胞に局所化する可能性を低下させることを示している。 実施例３： プロドラッグは、腫瘍異種移植片モデル中で効果があり良好に許容される。 （スクシニルＮキャップ）−（オリゴペプチド３８）−Ｄｏｘ治療薬は、エスト
ロゲン依存性ＭＣＦ ７／６乳癌およびアドリアマイシン耐性直腸結腸癌腫 Ｃ
ＸＦ２８０／１０およびＬＳ−１７４Ｔを含む、いくつかのヌードマウス異種移
植片モデル中でヒトの腫瘍の成長を阻害するのに有効であると分かっている。例
えば、皮下にＬＳ−１７４Ｔを移植された１０匹のマウスを、週一回の（スクシ
ニルＮキャップ）−（オリゴペプチド３８）−Ｄｏｘ治療薬の静脈投与を５回行
い治療すると、有意で、投与量に依存した、再製可能な平均生存日数（ＭＤＳ）
の伸びが見られ、同時に、賦形剤処理群（第１群）に比べ（スクシニルＮキャッ
プ）−（オリゴペプチド３８）−Ｄｏｘ治療薬の投与量５７（第２群）、６４（
第３群）および７１（第４群）ｍｇ／ｋｇで腫瘍の大きさ（腫瘍体積）の減少が
見られ、最も高い投与量はドキソルビシン４０ ｍｇ／ｋｇに相当する（図１１
）。この薬剤は、抗腫瘍効能を示す反復投与濃度および投与の頻度で、安全で良
好に許容された。投与量に依存した体重減少がある程度観察された。これを支持
する研究では、１０６．８ ｍｇ／ｋｇまでの（スクシニルＮキャップ）−（オ
リゴペプチド３８）−Ｄｏｘ治療薬の投与量で、腎臓毒性および骨髄抑制は観察
されなかった。 実施例４ プロドラッグは、コンパレーターよりも安全で有効である。
ードされていないアミノ酸の取り込みにより提供される。具体的には、遺伝学的
にコードされていないアミノ酸βアラニンを位置Ｐ２に含む（スクシニルＮキャ
ップ）−（オリゴペプチド３８）−ダウノルビシンを、実施例１に記載したとお
り調製された各酵素試料とともに、３７℃で２時間インキュベートした。得られ
た混合物をＨＰＬＣ分析にかけ、切断の程度を評価した。これらの結果を、遺伝
学的にコードされたアミノ酸Ｌ−アラニンがＰ２位置に置換されている以外同じ
化合物について同じインキュベーションをした結果と比較した。細胞ホモジェネ
ートによる切断の程度（速度）は、Ｐ２ β−アラニン化合物に対してＰ２ Ｌ
−アラニン化合物では１．３倍速かった。調整済み培地による切断の程度は、２
つの化合物で同じであった。しかし、部分的に精製されたトロアーゼ試料では、
Ｐ２ Ｌ−アラニン化合物の切断の程度は、Ｐ２ βアラニン化合物の０．６倍
でしかなかった。これらの結果は、Ｐ２のＬ−アラニンの存在が酵素のより粗な
混合物の第二の切断部位を与えており；したがって生体内で活性のある薬剤の放
出が腫瘍細胞に局所化する可能性を低下させることを示している。 実施例３： プロドラッグは、腫瘍異種移植片モデル中で効果があり良好に許容される。 （スクシニルＮキャップ）−（オリゴペプチド３８）−Ｄｏｘ治療薬は、エスト
ロゲン依存性ＭＣＦ ７／６乳癌およびアドリアマイシン耐性直腸結腸癌腫 Ｃ
ＸＦ２８０／１０およびＬＳ−１７４Ｔを含む、いくつかのヌードマウス異種移
植片モデル中でヒトの腫瘍の成長を阻害するのに有効であると分かっている。例
えば、皮下にＬＳ−１７４Ｔを移植された１０匹のマウスを、週一回の（スクシ
ニルＮキャップ）−（オリゴペプチド３８）−Ｄｏｘ治療薬の静脈投与を５回行
い治療すると、有意で、投与量に依存した、再製可能な平均生存日数（ＭＤＳ）
の伸びが見られ、同時に、賦形剤処理群（第１群）に比べ（スクシニルＮキャッ
プ）−（オリゴペプチド３８）−Ｄｏｘ治療薬の投与量５７（第２群）、６４（
第３群）および７１（第４群）ｍｇ／ｋｇで腫瘍の大きさ（腫瘍体積）の減少が
見られ、最も高い投与量はドキソルビシン４０ ｍｇ／ｋｇに相当する（図１１
）。この薬剤は、抗腫瘍効能を示す反復投与濃度および投与の頻度で、安全で良
好に許容された。投与量に依存した体重減少がある程度観察された。これを支持
する研究では、１０６．８ ｍｇ／ｋｇまでの（スクシニルＮキャップ）−（オ
リゴペプチド３８）−Ｄｏｘ治療薬の投与量で、腎臓毒性および骨髄抑制は観察
されなかった。 実施例４ プロドラッグは、コンパレーターよりも安全で有効である。
【００５９】
ドキソルビシンと比べて著しく高い投与量の（スクシニルＮキャップ）−（オ
リゴペプチド３８）−Ｄｏｘ治療薬を投与し、ＬＳ−１７４Ｔヒト結腸直腸癌腫
異種移植片モデル中に著しい毒性なしに効能をもたらすことができた。有効投与
量４９（第３群）、５７（第４群）および６４ｍｇ／ｋｇ（第５群）の（スクシ
ニル（第五群）Ｎキャップ）−（オリゴペプチド３８）−Ｄｏｘ治療薬は、急速
に成長するアドリアマイシン耐性ＬＳ−１７４Ｔ腫瘍の阻害において、３．０ｍ
ｇ／ｋｇのドキソルビシン（第２群）および食塩水（第１群）に比べ、優れた効
能を示した（図１２）。３ｍｇ／ｋｇ以上のドキソルビシンの反復投与で（第２
群）、投与を限定する毒性（心臓毒性および骨髄抑制）が観察された。したがっ
て、発明者らは、ドキソルビシンよりも高い投与量の（スクシニルＮキャップ）
−（オリゴペプチド３８）−Ｄｏｘ治療薬が投与でき、全身性毒性よりも腫瘍阻
害に好都合であることを示した。 実施例５ βＡｌａＬｅｕＡｌａＬｅｕ−Ｄｏｘ 凝集体 溶解性の低いアントラサイクリン薬剤は、水性緩衝液中に調製されるとき凝集
体を形成することが示されている。Ｍｅｎｏｚｚｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｌｆ−
ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ ａｎｄ ｒｅｌａｔ
ｅｄ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ｉｎ ａｑｕｅｏｕｓ ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ，Ｊ．
Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．Ｓｃｉ．，７３（６）：７６６−７７０（１９８４）。
Ｃｏｎｆａｌｏｎｉｅｒｉ，Ｃ． ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ ｎｅ
ｗ ｌａｓｅｒ ｐａｒｔｉｃｌｅ ｓｉｚｅｒ ａｎｄ ｓｈａｐｅ ａｎａ
ｌｙｚｅｒ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ａｎｄ ｅｖａｌｕａｔｅ ｇｅｌａｔｉｎ
ｏｕｓ ｍｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｓｕｓｐｅｎｄｅｄ ｉｎ ｒｅｃｏ
ｎｓｔｉｔｕｔｅｄ ａｎｔｈｒａｃｙｃｌｉｎｅ ｉｎｆｕｓｉｏｎ ｓｏｌ
ｕｔｉｏｎｓ，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ａｎａｌ．，９（１
）：１−８（１９９１）。Ａｍｉｃｏｎ Ｃｅｎｔｒｉｃｏｎ（商標）フィルタ
ーユニットで溶液を濾過する試みによる、１７．４μＭｏｌ／ｍｌ水溶液中のβ
ＡｌａＬｅｕＡｌａＬｅｕ−Ｄｏｘ 凝集体の大きさの推定。ドキソルビシン（
１７．４μＭｏｌ／ｍｌ）およびβＡｌａＬｅｕＡｌａＬｅｕ−Ｄｏｘ（１７．
４μＭｏｌ／ｍｌ）をそれぞれ蒸留水に溶解し、３，０００、１０，０００、３
０，０００および５０，０００分子量カットオフ（ＭＷＣＯ）のＣｅｎｔｒｉｃ
ｏｎフィルター中に入れた。フィルターユニットのそれぞれを、１５００ｇの力
で２時間遠心分離した。残った薬剤とフィルターを通った薬剤の量を、λ４７５
ｎｍで定量化し、パーセントに変換した。以下の表１は、８１％のドキソルビシ
ンが３，０００ＭＷＣＯフィルターを通過したが、結合体βＡｌａＬｅｕＡｌａ
Ｌｅｕ−Ｄｏｘはわずか５％しか３，０００ＭＷＣＯフィルターを通過しなかっ
たことを示す。データは、５０，０００ＭＷＣＯユニットが４０％を超えるβＡ
ｌａＬｅｕＡｌａＬｅｕ−Ｄｏｘを保持することも示している。これらのデータ
は、βＡｌａＬｅｕＡｌａＬｅｕ−Ｄｏｘ凝集体の相当なパーセンテージが５０
ｋＤ（凝集体あたり５０分子を超える）より大きいことを示している。これは、
以下の実施例６の特定投与量で、結合体が凝集体の形態であることを示している
。したがって、このデータは、オリゴペプチド３８−ドキソルビシン治療薬凝集
体は、この正に帯電した分子凝集体に見られる急性毒性の原因であることを支持
している。
リゴペプチド３８）−Ｄｏｘ治療薬を投与し、ＬＳ−１７４Ｔヒト結腸直腸癌腫
異種移植片モデル中に著しい毒性なしに効能をもたらすことができた。有効投与
量４９（第３群）、５７（第４群）および６４ｍｇ／ｋｇ（第５群）の（スクシ
ニル（第五群）Ｎキャップ）−（オリゴペプチド３８）−Ｄｏｘ治療薬は、急速
に成長するアドリアマイシン耐性ＬＳ−１７４Ｔ腫瘍の阻害において、３．０ｍ
ｇ／ｋｇのドキソルビシン（第２群）および食塩水（第１群）に比べ、優れた効
能を示した（図１２）。３ｍｇ／ｋｇ以上のドキソルビシンの反復投与で（第２
群）、投与を限定する毒性（心臓毒性および骨髄抑制）が観察された。したがっ
て、発明者らは、ドキソルビシンよりも高い投与量の（スクシニルＮキャップ）
−（オリゴペプチド３８）−Ｄｏｘ治療薬が投与でき、全身性毒性よりも腫瘍阻
害に好都合であることを示した。 実施例５ βＡｌａＬｅｕＡｌａＬｅｕ−Ｄｏｘ 凝集体 溶解性の低いアントラサイクリン薬剤は、水性緩衝液中に調製されるとき凝集
体を形成することが示されている。Ｍｅｎｏｚｚｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｌｆ−
ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ ａｎｄ ｒｅｌａｔ
ｅｄ ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ｉｎ ａｑｕｅｏｕｓ ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ，Ｊ．
Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．Ｓｃｉ．，７３（６）：７６６−７７０（１９８４）。
Ｃｏｎｆａｌｏｎｉｅｒｉ，Ｃ． ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ ｎｅ
ｗ ｌａｓｅｒ ｐａｒｔｉｃｌｅ ｓｉｚｅｒ ａｎｄ ｓｈａｐｅ ａｎａ
ｌｙｚｅｒ ｔｏ ｄｅｔｅｃｔ ａｎｄ ｅｖａｌｕａｔｅ ｇｅｌａｔｉｎ
ｏｕｓ ｍｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ｓｕｓｐｅｎｄｅｄ ｉｎ ｒｅｃｏ
ｎｓｔｉｔｕｔｅｄ ａｎｔｈｒａｃｙｃｌｉｎｅ ｉｎｆｕｓｉｏｎ ｓｏｌ
ｕｔｉｏｎｓ，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ａｎａｌ．，９（１
）：１−８（１９９１）。Ａｍｉｃｏｎ Ｃｅｎｔｒｉｃｏｎ（商標）フィルタ
ーユニットで溶液を濾過する試みによる、１７．４μＭｏｌ／ｍｌ水溶液中のβ
ＡｌａＬｅｕＡｌａＬｅｕ−Ｄｏｘ 凝集体の大きさの推定。ドキソルビシン（
１７．４μＭｏｌ／ｍｌ）およびβＡｌａＬｅｕＡｌａＬｅｕ−Ｄｏｘ（１７．
４μＭｏｌ／ｍｌ）をそれぞれ蒸留水に溶解し、３，０００、１０，０００、３
０，０００および５０，０００分子量カットオフ（ＭＷＣＯ）のＣｅｎｔｒｉｃ
ｏｎフィルター中に入れた。フィルターユニットのそれぞれを、１５００ｇの力
で２時間遠心分離した。残った薬剤とフィルターを通った薬剤の量を、λ４７５
ｎｍで定量化し、パーセントに変換した。以下の表１は、８１％のドキソルビシ
ンが３，０００ＭＷＣＯフィルターを通過したが、結合体βＡｌａＬｅｕＡｌａ
Ｌｅｕ−Ｄｏｘはわずか５％しか３，０００ＭＷＣＯフィルターを通過しなかっ
たことを示す。データは、５０，０００ＭＷＣＯユニットが４０％を超えるβＡ
ｌａＬｅｕＡｌａＬｅｕ−Ｄｏｘを保持することも示している。これらのデータ
は、βＡｌａＬｅｕＡｌａＬｅｕ−Ｄｏｘ凝集体の相当なパーセンテージが５０
ｋＤ（凝集体あたり５０分子を超える）より大きいことを示している。これは、
以下の実施例６の特定投与量で、結合体が凝集体の形態であることを示している
。したがって、このデータは、オリゴペプチド３８−ドキソルビシン治療薬凝集
体は、この正に帯電した分子凝集体に見られる急性毒性の原因であることを支持
している。
【００６０】
【表１】
【００６１】
実施例６
マウスへのβＡｌａＬｅｕＡｌａＬｅｕ−Ｄｏｘの静脈注射
プロタミン、ポリリジンまたはそれらの凝集体などの正に帯電したポリマーと
血管の管腔表面との相互作用により急性毒性が起こる可能性があるということが
知られている。ＤｅＬｕｃｉａ ＩＩＩ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｅｆｆｉｃａｃ
ｙ ａｎｄ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｌｙ ｃｈａｒｇｅ
ｄ ｐｏｌｙｃａｔｉｏｎｉｃ ｐｒｏｔａｍｉｎｅ−ｌｉｋｅ ｐｅｐｔｉｄ
ｅｓ ｆｏｒ ｈｅｐａｒｉｎ ａｎｔｉｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ ｒｅｖｅｒ
ｓａｌ，Ｊ．Ｖａｓｃ．Ｓｕｒｇ．１８：４９−６０（１９９３）。Ｅｋｒａｍ
ｉ，Ｈ．Ｍ ａｎｄ Ｓｈｅｎ，Ｗ．Ｃ．，Ｃａｒｂａｍｙｌａｔｉｏｎ ｄｅ
ｃｒｅａｓｅｓ ｔｈｅ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ｂｕｔ ｎｏｔ ｔｈｅ
ｄｒｕｇ−ｃａｒｒｉｅｒ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｐｏｌｙｌｙｓｉ
ｎｅｓ，Ｊ．Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇ．，２：４６９−４７５（１９９５）。さらに
、ラビットの心筋層中で、ヘパリンがプロタミンサルフェートの毒性効果を低減
することが示されている。Ｗａｋｅｆｉｅｌｄ，Ｔ．Ｗ．，ｅｔ ａｌ．，Ｈｅ
ｐａｒｉｎ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｒｅｄｕｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ ｔｏｘ
ｉｃ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｐｒｏｔａｍｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ ｏｎ ｒ
ａｂｂｉｔ ｍｙｏｃａｒｄｉｕｍ，Ｊ．Ｖａｓｃ．Ｓｕｒｇ．，１６：４７−
５３（１９９２）。ここで見られる急性毒性が正に帯電したプロドラッグ凝集体
によるものであるという仮説を試験するため、対照（ｉｖ）と４，０００Ｉ．Ｕ
．ヘパリンｉｖのいずれかによる１時間の前処理に続き、βＡｌａＬｅｕＡｌａ
Ｌｅｕ−Ｄｏｘ（１７４μＭｏｌ／ｍｌ）をマウスに与えた。表２は、ヘパリン
の後では、以前には急性致死量であったβＡｌａＬｅｕＡｌａＬｅｕ−Ｄｏｘの
毒性が著しく低下したことを示す。
血管の管腔表面との相互作用により急性毒性が起こる可能性があるということが
知られている。ＤｅＬｕｃｉａ ＩＩＩ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｅｆｆｉｃａｃ
ｙ ａｎｄ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｌｙ ｃｈａｒｇｅ
ｄ ｐｏｌｙｃａｔｉｏｎｉｃ ｐｒｏｔａｍｉｎｅ−ｌｉｋｅ ｐｅｐｔｉｄ
ｅｓ ｆｏｒ ｈｅｐａｒｉｎ ａｎｔｉｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ ｒｅｖｅｒ
ｓａｌ，Ｊ．Ｖａｓｃ．Ｓｕｒｇ．１８：４９−６０（１９９３）。Ｅｋｒａｍ
ｉ，Ｈ．Ｍ ａｎｄ Ｓｈｅｎ，Ｗ．Ｃ．，Ｃａｒｂａｍｙｌａｔｉｏｎ ｄｅ
ｃｒｅａｓｅｓ ｔｈｅ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃｉｔｙ ｂｕｔ ｎｏｔ ｔｈｅ
ｄｒｕｇ−ｃａｒｒｉｅｒ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｐｏｌｙｌｙｓｉ
ｎｅｓ，Ｊ．Ｄｒｕｇ Ｔａｒｇ．，２：４６９−４７５（１９９５）。さらに
、ラビットの心筋層中で、ヘパリンがプロタミンサルフェートの毒性効果を低減
することが示されている。Ｗａｋｅｆｉｅｌｄ，Ｔ．Ｗ．，ｅｔ ａｌ．，Ｈｅ
ｐａｒｉｎ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｒｅｄｕｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ｔｈｅ ｔｏｘ
ｉｃ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｐｒｏｔａｍｉｎｅ ｓｕｌｆａｔｅ ｏｎ ｒ
ａｂｂｉｔ ｍｙｏｃａｒｄｉｕｍ，Ｊ．Ｖａｓｃ．Ｓｕｒｇ．，１６：４７−
５３（１９９２）。ここで見られる急性毒性が正に帯電したプロドラッグ凝集体
によるものであるという仮説を試験するため、対照（ｉｖ）と４，０００Ｉ．Ｕ
．ヘパリンｉｖのいずれかによる１時間の前処理に続き、βＡｌａＬｅｕＡｌａ
Ｌｅｕ−Ｄｏｘ（１７４μＭｏｌ／ｍｌ）をマウスに与えた。表２は、ヘパリン
の後では、以前には急性致死量であったβＡｌａＬｅｕＡｌａＬｅｕ−Ｄｏｘの
毒性が著しく低下したことを示す。
【００６２】
これらのデータは、急性毒性は、プロタミンまたはポリリジンに見られるのと
類似な効果を起こす正に帯電した凝集体によるものであるという仮説を支持して
いる。負に帯電または中性である本発明のプロドラッグは、この望ましくない副
作用を克服している。
類似な効果を起こす正に帯電した凝集体によるものであるという仮説を支持して
いる。負に帯電または中性である本発明のプロドラッグは、この望ましくない副
作用を克服している。
【００６３】
【表２】
【００６４】
上記の仮説と一致して、βＡｌａＬｅｕＡｌａＬｅｕ−Ｄｏｘの末端アミノ基
を負に帯電した部分でキャップをすると、２５０ｍｇドキソルビシン，ＨＣｌ
ｅｑ／Ｋｇもの高い投与量での急性毒性効果が完全に消失した。 この証拠として、関連した実験では、群あたり３匹から５匹のマウスが、２５
０ｍｇ／ｋｇ（Ｄｏｘ−ＨＣｌｅ．ｇ．）スクシニルβＡｌａＬｅｕＡｌａＬｅ
ｕ−ＤｏｘおよびグルタリルβＡｌａＬｅｕＡｌａＬｅｕ−Ｄｏｘのｉｖ丸薬で
処理された時、全てのマウスが最長８日まで生存した。 以下の実施例の分析方法 固相または溶液相手法を用いて合成されたペプチドシーケンスは、分析ＨＰＬ
Ｃ（方法Ａ、ＢおよびＤ）により粗生成物の純度が８０％を超えると示された場
合、さらなる精製なしに用いた。そうでない場合、分取ＨＰＬＣ方法Ｃを用いて
物質を精製した。
を負に帯電した部分でキャップをすると、２５０ｍｇドキソルビシン，ＨＣｌ
ｅｑ／Ｋｇもの高い投与量での急性毒性効果が完全に消失した。 この証拠として、関連した実験では、群あたり３匹から５匹のマウスが、２５
０ｍｇ／ｋｇ（Ｄｏｘ−ＨＣｌｅ．ｇ．）スクシニルβＡｌａＬｅｕＡｌａＬｅ
ｕ−ＤｏｘおよびグルタリルβＡｌａＬｅｕＡｌａＬｅｕ−Ｄｏｘのｉｖ丸薬で
処理された時、全てのマウスが最長８日まで生存した。 以下の実施例の分析方法 固相または溶液相手法を用いて合成されたペプチドシーケンスは、分析ＨＰＬ
Ｃ（方法Ａ、ＢおよびＤ）により粗生成物の純度が８０％を超えると示された場
合、さらなる精製なしに用いた。そうでない場合、分取ＨＰＬＣ方法Ｃを用いて
物質を精製した。
【００６５】
ＨＰＬＣ方法Ａ
分析ＨＰＬＣ分析を、Ｃ−１８カラム（４μｍ、３．９×１５０ ｍｍ ＩＤ
、流量１ｍＬ／分）を用い、溶媒Ａ（０．１％ ＴＦＡ／Ｈ2Ｏ）と溶媒Ｂ（０
．１％ ＴＦＡ／ＡＣＮ）のグラジェントで溶離してＷａｔｅｒｓ ２６９０で
行い、データをλ２５４ｎｍでＷａｔｅｒｓ Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ ｓｙｓｔ
ｅｍを用いて処理した。分析ＨＰＬＣグラジェントは、溶媒Ａ９０％で始め、１
４分かけて溶媒Ｂ１００％で終わった（直線）。この方法および以下の方法の化
合物の純度は、ピーク曲線の下の相対面積パーセントである。
、流量１ｍＬ／分）を用い、溶媒Ａ（０．１％ ＴＦＡ／Ｈ2Ｏ）と溶媒Ｂ（０
．１％ ＴＦＡ／ＡＣＮ）のグラジェントで溶離してＷａｔｅｒｓ ２６９０で
行い、データをλ２５４ｎｍでＷａｔｅｒｓ Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ ｓｙｓｔ
ｅｍを用いて処理した。分析ＨＰＬＣグラジェントは、溶媒Ａ９０％で始め、１
４分かけて溶媒Ｂ１００％で終わった（直線）。この方法および以下の方法の化
合物の純度は、ピーク曲線の下の相対面積パーセントである。
【００６６】
ＨＰＬＣ方法Ｂ
分析ＨＰＬＣ分析を、Ｃ−８カラム（３．５μｍ、４．６×１５０ ｍｍ Ｉ
Ｄ、流量１ｍＬ／分）を用い、溶媒Ａ（８０％ ２０ｍＭギ酸アンモニウムおよ
び２０％アセトニトリル）と溶媒Ｂ（２０％ ２０ｍＭギ酸アンモニウムおよび
８０％アセトニトリル）のグラジェントで溶離してＷａｔｅｒｓ ２６９０で行
い、データをλ２５４ｎｍでＷａｔｅｒｓ Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ ｓｙｓｔｅ
ｍを用いて処理した。分析ＨＰＬＣグラジェントは、溶媒Ａ１００％で始め、３
０分かけて溶媒Ｂ１００％で終わった（直線）。 ＨＰＬＣ方法Ｃ 粗生成物の分取精製を、Ｃ−４カラム（１５μｍ、４０×１００ ｍｍ ＩＤ
、流量３０ｍＬ／分）を用い、溶媒Ａ（Ｈ2Ｏ）と溶媒Ｂ（ＭｅＯＨ）のグラジ
ェントで溶離してＷａｔｅｒｓ Ｄｅｌｔａ Ｐｒｅｐ ４０００ ｓｙｓｔｅ
ｍで行った。分取ＨＰＬＣグラジェントは、溶媒Ａ８０％で始め、７０分かけて
溶媒Ｂで終わった（直線）。データは、λ２５４ｎｍでＷａｔｅｒｓ Ｍｉｌｌ
ｅｎｎｉｕｍ ｓｙｓｔｅｍを用いて処理した。
Ｄ、流量１ｍＬ／分）を用い、溶媒Ａ（８０％ ２０ｍＭギ酸アンモニウムおよ
び２０％アセトニトリル）と溶媒Ｂ（２０％ ２０ｍＭギ酸アンモニウムおよび
８０％アセトニトリル）のグラジェントで溶離してＷａｔｅｒｓ ２６９０で行
い、データをλ２５４ｎｍでＷａｔｅｒｓ Ｍｉｌｌｅｎｎｉｕｍ ｓｙｓｔｅ
ｍを用いて処理した。分析ＨＰＬＣグラジェントは、溶媒Ａ１００％で始め、３
０分かけて溶媒Ｂ１００％で終わった（直線）。 ＨＰＬＣ方法Ｃ 粗生成物の分取精製を、Ｃ−４カラム（１５μｍ、４０×１００ ｍｍ ＩＤ
、流量３０ｍＬ／分）を用い、溶媒Ａ（Ｈ2Ｏ）と溶媒Ｂ（ＭｅＯＨ）のグラジ
ェントで溶離してＷａｔｅｒｓ Ｄｅｌｔａ Ｐｒｅｐ ４０００ ｓｙｓｔｅ
ｍで行った。分取ＨＰＬＣグラジェントは、溶媒Ａ８０％で始め、７０分かけて
溶媒Ｂで終わった（直線）。データは、λ２５４ｎｍでＷａｔｅｒｓ Ｍｉｌｌ
ｅｎｎｉｕｍ ｓｙｓｔｅｍを用いて処理した。
【００６７】
ＨＰＬＣ方法Ｄ
分析ＨＰＬＣを、Ｈｅｗｌｅｔｔ Ｐａｃｋａｒｄ ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ：
カラム：ＴＳＫ ｓｕｐｅｒＯＤＳ（ＴｏｓｏＨａａｓ）；溶媒Ａ（ＴＦＡ ０
．１％水溶液）溶媒Ｂ（０．１％ＴＦＡアセトニトリル溶液）；グラジェント：
溶媒Ｂ３０〜３６％を２分間、溶媒Ｂ３６〜４１％を１０分間、溶媒Ｂ４１〜９
０％を３分間、９０％Ｂで５分間、検出λ２５４ｎｍで行った。 ＮＭＲおよびＭＳ 追加の構造決定を、ＮＭＲおよびＭＳ技術により行い、その結果は特許請求さ
れた化合物を支持した。 ＴＬＣ法 シリカゲル６０Ｆ−２５４ｎｍ−０．２５ｍｍプレート（Ｍｅｒｃｋ）で、Ｄ
ＣＭ／ＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏ／ギ酸８８％ ８５／１５／１／２を溶離に用いてＴＬ
Ｃ分析を行った。
カラム：ＴＳＫ ｓｕｐｅｒＯＤＳ（ＴｏｓｏＨａａｓ）；溶媒Ａ（ＴＦＡ ０
．１％水溶液）溶媒Ｂ（０．１％ＴＦＡアセトニトリル溶液）；グラジェント：
溶媒Ｂ３０〜３６％を２分間、溶媒Ｂ３６〜４１％を１０分間、溶媒Ｂ４１〜９
０％を３分間、９０％Ｂで５分間、検出λ２５４ｎｍで行った。 ＮＭＲおよびＭＳ 追加の構造決定を、ＮＭＲおよびＭＳ技術により行い、その結果は特許請求さ
れた化合物を支持した。 ＴＬＣ法 シリカゲル６０Ｆ−２５４ｎｍ−０．２５ｍｍプレート（Ｍｅｒｃｋ）で、Ｄ
ＣＭ／ＭｅＯＨ／Ｈ2Ｏ／ギ酸８８％ ８５／１５／１／２を溶離に用いてＴＬ
Ｃ分析を行った。
【００６８】
ニンヒドリン試験
溶液Ａ：エタノール（１０ｍＬ）中のニンヒドリン（５００ｍｇ）；溶液Ｂ：
エタノール（２０ｍＬ）中のフェノール（８０ｍｇ）；溶液Ｃ：ピリジン（１０
０ｍＬ）中のＫＳＣＮ（０．０１Ｍ水溶液、２ｍＬ）。方法：数ミリグラムの生
成物を試験管に導入し、溶液Ａを２滴、溶液Ｂを２滴、溶液Ｃを２滴加えた。混
合物を沸騰している水浴中に５分間放置した。遊離アミンが存在すると、溶液は
紫になる。 特定のオリゴペプチド合成実施例 市販試薬の入手源 ドキソルビシンおよびダウノルビシンは明治製菓（日本）から、Ｐｄ（ＰＰｈ 3 ）4はＳｔｒｅｍ ｃｈｅｍ（Ｎｅｗｂｕｒｙｐｏｒｔ、ＭＡ）から、ＰＥＧは
Ｓｈｅａｒｗａｔｅｒ（Ｈｕｎｔｓｖｉｌｌｅ，Ａｌａｂａｍａ）から、溶媒、
ＨＡＴＵはＡｌｄｒｉｃｈ（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，ＷＩ）から入手した。全ての
樹脂およびアミノ酸は、ＡＢＩ（Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ）、Ｎｏｖａｂ
ｉｏｃｈｅｍ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｃｈｅｍ Ｔ
ｅｃｈ（Ｌｏｕｉｓｖｉｌｌｅ，ＫＹ）、Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉ
ｏｎａｌ（Ｌｏｕｉｓｖｉｌｌｅ，ＫＹ）、ＳｙｎＰｅｐ（Ｄｕｂｌｉｎ，ＣＡ
）のいずれかから入手した。
エタノール（２０ｍＬ）中のフェノール（８０ｍｇ）；溶液Ｃ：ピリジン（１０
０ｍＬ）中のＫＳＣＮ（０．０１Ｍ水溶液、２ｍＬ）。方法：数ミリグラムの生
成物を試験管に導入し、溶液Ａを２滴、溶液Ｂを２滴、溶液Ｃを２滴加えた。混
合物を沸騰している水浴中に５分間放置した。遊離アミンが存在すると、溶液は
紫になる。 特定のオリゴペプチド合成実施例 市販試薬の入手源 ドキソルビシンおよびダウノルビシンは明治製菓（日本）から、Ｐｄ（ＰＰｈ 3 ）4はＳｔｒｅｍ ｃｈｅｍ（Ｎｅｗｂｕｒｙｐｏｒｔ、ＭＡ）から、ＰＥＧは
Ｓｈｅａｒｗａｔｅｒ（Ｈｕｎｔｓｖｉｌｌｅ，Ａｌａｂａｍａ）から、溶媒、
ＨＡＴＵはＡｌｄｒｉｃｈ（Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，ＷＩ）から入手した。全ての
樹脂およびアミノ酸は、ＡＢＩ（Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ）、Ｎｏｖａｂ
ｉｏｃｈｅｍ（Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｃｈｅｍ Ｔ
ｅｃｈ（Ｌｏｕｉｓｖｉｌｌｅ，ＫＹ）、Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉ
ｏｎａｌ（Ｌｏｕｉｓｖｉｌｌｅ，ＫＹ）、ＳｙｎＰｅｐ（Ｄｕｂｌｉｎ，ＣＡ
）のいずれかから入手した。
【００６９】
実施例７
Ｆｍｏｃ形態のオリゴペプチド３８ベンジルエステル［Ｆｍｏｃ−βＡｌａ−Ｌ
ｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ＯＢｎ］ Ｆｍｏｃ形態のオリゴペプチド３８（２４．３４ｇ、０．０４モル）を、ＤＭ
Ｆ（３５０ｍＬ）およびマグネティックスターラーの入っている丸底フラスコに
入れた。テトラペプチドが溶解した後、ベンジルブロマイド（４．７６ｍＬ、０
．０４モル）、続いて炭酸セシウム（１３．０４ｇ、０．０４モル）を撹拌しな
がら溶液に加えた。反応混合物を室温で１．５時間撹拌した。次いで、反応混合
物を、４５０ｍＬの氷水が入っているフラスコにゆっくりと注いだ。大量の白色
固形物が沈殿し、それを吸引濾過で集めた。生成物を水で洗浄し（２×２００ｍ
Ｌ）、真空デシケーター中においた。生成物（２４．２ｇ、８７％）をＨＰＬＣ
で同定した（純度：９５％）。ＭＳ ｍ／ｚ Ｃ40Ｈ50Ｎ4Ｏ7の計算値６９８．
４、実測値６９９．５。
ｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ＯＢｎ］ Ｆｍｏｃ形態のオリゴペプチド３８（２４．３４ｇ、０．０４モル）を、ＤＭ
Ｆ（３５０ｍＬ）およびマグネティックスターラーの入っている丸底フラスコに
入れた。テトラペプチドが溶解した後、ベンジルブロマイド（４．７６ｍＬ、０
．０４モル）、続いて炭酸セシウム（１３．０４ｇ、０．０４モル）を撹拌しな
がら溶液に加えた。反応混合物を室温で１．５時間撹拌した。次いで、反応混合
物を、４５０ｍＬの氷水が入っているフラスコにゆっくりと注いだ。大量の白色
固形物が沈殿し、それを吸引濾過で集めた。生成物を水で洗浄し（２×２００ｍ
Ｌ）、真空デシケーター中においた。生成物（２４．２ｇ、８７％）をＨＰＬＣ
で同定した（純度：９５％）。ＭＳ ｍ／ｚ Ｃ40Ｈ50Ｎ4Ｏ7の計算値６９８．
４、実測値６９９．５。
【００７０】
実施例８
オリゴペプチド３８ベンジルエステル［βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｏ
Ｂｎ］ 丸底フラスコ（２５ｍＬ）中で、Ｆｍｏｃ形態のオリゴペプチド３８ベンジル
エステル（０．７ｇ、１．０ｍｍｏｌ）を、５ｍＬの無水ＤＭＦに溶解した。ピ
ペリジン（１．２ｍＬ、１２．１ｍｍｏｌ）を溶液に加え、混合物を室温で２５
分間撹拌した。水（６ｍＬ）で反応を停止し、酢酸エチル（２×１０ｍＬ）で抽
出した。合わせた有機層を水（２×５ｍＬ）、塩水（５ｍＬ）でさらに洗浄し、
硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を除去すると白色固形物（０．８ｇ）が得られ
た。生成物の純度はわずか６７％であった。ＭＳ ｍ／ｚ Ｃ25Ｈ40Ｎ4Ｏ5の計
算値４７６．３、実測値４７７．２。
Ｂｎ］ 丸底フラスコ（２５ｍＬ）中で、Ｆｍｏｃ形態のオリゴペプチド３８ベンジル
エステル（０．７ｇ、１．０ｍｍｏｌ）を、５ｍＬの無水ＤＭＦに溶解した。ピ
ペリジン（１．２ｍＬ、１２．１ｍｍｏｌ）を溶液に加え、混合物を室温で２５
分間撹拌した。水（６ｍＬ）で反応を停止し、酢酸エチル（２×１０ｍＬ）で抽
出した。合わせた有機層を水（２×５ｍＬ）、塩水（５ｍＬ）でさらに洗浄し、
硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を除去すると白色固形物（０．８ｇ）が得られ
た。生成物の純度はわずか６７％であった。ＭＳ ｍ／ｚ Ｃ25Ｈ40Ｎ4Ｏ5の計
算値４７６．３、実測値４７７．２。
【００７１】
実施例９
オリゴペプチド３８ベンジルエステルのメチルスクシニルＮキャップ形態［モノ
メチル−スクシニル−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ＯＢｎ］ 丸底フラスコ（２５０ｍＬ）中で、メチルヘミスクシネート（３．１９ｇ、２
４．２ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（５０ｍｌ）に溶解した。ＤＩＥＡ（４．２２ｍ
Ｌ、２４．２ｍｍｏｌ）、続いてＨＢＴＵ（９．１７ｇ、２４．２ｍｍｏｌ）を
溶液に加えた。混合物を室温で４５分間撹拌した。この混合物に、無水ＤＭＦ（
１５０ｍＬ）に溶かしたオリゴペプチド３８ベンジルエステル（未精製、１０．
１４ｇ、２１．３ｍｍｏｌを含む）の溶液を加えた。この混合物を室温で２．５
時間連続して撹拌した。次いで、反応混合物を、撹拌しながら２００ｍＬの氷水
を入れたフラスコにゆっくりと注いだ。大量の白色固形物が沈殿し、それを酢酸
エチル（３×２００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を、水（２×２００ｍＬ
）、塩水（２００ｍＬ）でさらに洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を除
去すると、白色固形物が得られた。この粗生成物を酢酸エチル中で再結晶すると
、純度８０％の生成物７．５３ｇ（６０％）が得られた。ＭＳ ｍ／ｚ Ｃ30Ｈ 46 Ｎ4Ｏ8の計算値５９１．４、実測値５９０．３３。
メチル−スクシニル−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ＯＢｎ］ 丸底フラスコ（２５０ｍＬ）中で、メチルヘミスクシネート（３．１９ｇ、２
４．２ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（５０ｍｌ）に溶解した。ＤＩＥＡ（４．２２ｍ
Ｌ、２４．２ｍｍｏｌ）、続いてＨＢＴＵ（９．１７ｇ、２４．２ｍｍｏｌ）を
溶液に加えた。混合物を室温で４５分間撹拌した。この混合物に、無水ＤＭＦ（
１５０ｍＬ）に溶かしたオリゴペプチド３８ベンジルエステル（未精製、１０．
１４ｇ、２１．３ｍｍｏｌを含む）の溶液を加えた。この混合物を室温で２．５
時間連続して撹拌した。次いで、反応混合物を、撹拌しながら２００ｍＬの氷水
を入れたフラスコにゆっくりと注いだ。大量の白色固形物が沈殿し、それを酢酸
エチル（３×２００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層を、水（２×２００ｍＬ
）、塩水（２００ｍＬ）でさらに洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を除
去すると、白色固形物が得られた。この粗生成物を酢酸エチル中で再結晶すると
、純度８０％の生成物７．５３ｇ（６０％）が得られた。ＭＳ ｍ／ｚ Ｃ30Ｈ 46 Ｎ4Ｏ8の計算値５９１．４、実測値５９０．３３。
【００７２】
実施例１０
オリゴペプチド３８のメチルスクシニルＮキャップ形態［メチルスクシニル−β
Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ］ オリゴペプチド３８ベンジルエステルのメチルスクシニルＮキャップ形態（１
．０ｇ、純度８６％；１．４６ｍｍｏｌ）を、１００ｍＬのエタノールの入った
三角フラスコに入れた。数分間撹拌の後溶液は濁った。エタノール５０ｍＬを加
えたが、溶液は依然として不透明であった。溶液を水素化反応器に移した。この
反応器に、Ｐｄ−Ｃ（９０ｍｇ、１０％湿潤、５０％水；０．０４２ｍｍｏｌ）
を加えた。室温で２時間水素化の後、反応を停止し触媒を濾過した。溶媒を除去
すると、白色固形物（０．７７ｇ、７８％）が得られた。ＭＳ ｍ／ｚＣ23Ｈ40 Ｎ4Ｏ8の計算値５０１．２、実測値５００．３。 実施例１１ Ｎキャップアリルヘミスクシネートの合成 Ｃａｓｉｍｉｒ，Ｊ．Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔ．Ｌｅｔｔ．３６（１９）
：３４０９，（１９９５）の手順に従ってこの分子を合成した。１０．０７ｇ（
０．１モル）のコハク酸無水物および５．８０８ｇ（０．１モル）のアリルアル
コールを１００ｍＬトルエン中で６時間還流した。反応混合物を減圧下で濃縮し
た。１５．５ｇ；９８％。得られた物質は、後の反応に使用できるほど純度が高
かった。この半固形生成物の純度および同定を、1ＨＮＭＲおよび13ＣＮＭＲ、
ＬＣ／ＭＳにより行った。
Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ］ オリゴペプチド３８ベンジルエステルのメチルスクシニルＮキャップ形態（１
．０ｇ、純度８６％；１．４６ｍｍｏｌ）を、１００ｍＬのエタノールの入った
三角フラスコに入れた。数分間撹拌の後溶液は濁った。エタノール５０ｍＬを加
えたが、溶液は依然として不透明であった。溶液を水素化反応器に移した。この
反応器に、Ｐｄ−Ｃ（９０ｍｇ、１０％湿潤、５０％水；０．０４２ｍｍｏｌ）
を加えた。室温で２時間水素化の後、反応を停止し触媒を濾過した。溶媒を除去
すると、白色固形物（０．７７ｇ、７８％）が得られた。ＭＳ ｍ／ｚＣ23Ｈ40 Ｎ4Ｏ8の計算値５０１．２、実測値５００．３。 実施例１１ Ｎキャップアリルヘミスクシネートの合成 Ｃａｓｉｍｉｒ，Ｊ．Ｒ．，ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔ．Ｌｅｔｔ．３６（１９）
：３４０９，（１９９５）の手順に従ってこの分子を合成した。１０．０７ｇ（
０．１モル）のコハク酸無水物および５．８０８ｇ（０．１モル）のアリルアル
コールを１００ｍＬトルエン中で６時間還流した。反応混合物を減圧下で濃縮し
た。１５．５ｇ；９８％。得られた物質は、後の反応に使用できるほど純度が高
かった。この半固形生成物の純度および同定を、1ＨＮＭＲおよび13ＣＮＭＲ、
ＬＣ／ＭＳにより行った。
【００７３】
実施例１２
アリルスクシニルオリゴペプチド３８−Ｄｏｘの合成
丸底フラスコ（５０ｍＬ）中で、オリゴペプチド３８のＮ−キャップ−アリル
ヘミスクシニル形態（１ｇ、１．９ｍｍｏｌ）およびドキソルビシン（１．１ｇ
、１．９ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（５０ｍｌ）中で溶解した。混合物を５分間撹
拌した後、ＤＩＥＡ（０．６６ｍｌ、３．８ｍｍｏｌ）、続いてＨＡＴＵ（０．
７６ｇ、１．９ｍｍｏｌ）を溶液に加え、混合物を室温で２時間撹拌した。ＤＭ
Ｆをロータリーエバポレーターで除き、残渣を４．０ｍｌの１：１ ＤＣＭ：Ｍ
ｅＯＨに溶解した。この溶液に、１００ｍｌのエーテルを撹拌しながらゆっくり
と加えた。赤い沈殿が生じ、吸引濾過で集めた。固形物をエーテル（２×２ｍｌ
）で洗浄し、真空デシケーター中で乾燥すると、方法ＢによるＨＰＬＣ純度９０
％のアリル−スクシニル−オリゴペプチド３８−Ｄｏｘ治療薬を得た。
ヘミスクシニル形態（１ｇ、１．９ｍｍｏｌ）およびドキソルビシン（１．１ｇ
、１．９ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（５０ｍｌ）中で溶解した。混合物を５分間撹
拌した後、ＤＩＥＡ（０．６６ｍｌ、３．８ｍｍｏｌ）、続いてＨＡＴＵ（０．
７６ｇ、１．９ｍｍｏｌ）を溶液に加え、混合物を室温で２時間撹拌した。ＤＭ
Ｆをロータリーエバポレーターで除き、残渣を４．０ｍｌの１：１ ＤＣＭ：Ｍ
ｅＯＨに溶解した。この溶液に、１００ｍｌのエーテルを撹拌しながらゆっくり
と加えた。赤い沈殿が生じ、吸引濾過で集めた。固形物をエーテル（２×２ｍｌ
）で洗浄し、真空デシケーター中で乾燥すると、方法ＢによるＨＰＬＣ純度９０
％のアリル−スクシニル−オリゴペプチド３８−Ｄｏｘ治療薬を得た。
【００７４】
実施例１３
アリルスクシニル−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ドキソルビシンからの
ＳＳＬＤの調製 アリル−スクシニル−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ドキソルビシン０
．１ｇ（０．０９５ｍｍｏｌ）を２ｍＬのＴＨＦに溶かした撹拌中の溶液に、０
．０５ｇ（０．０９５ｍｍｏｌ）のテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラ
ジウムを固体として窒素雰囲気下で加えた。１０分後、反応中に生成した沈殿を
濾過して除き、ＴＨＦで洗浄した。乾燥重量：０．１ｇ。固形物を、ＨＰＬＣ、 1 ＨＮＭＲ、ＬＣ／ＭＳでスクシニル−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄ
ｏｘであると同定した。
ＳＳＬＤの調製 アリル−スクシニル−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ドキソルビシン０
．１ｇ（０．０９５ｍｍｏｌ）を２ｍＬのＴＨＦに溶かした撹拌中の溶液に、０
．０５ｇ（０．０９５ｍｍｏｌ）のテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラ
ジウムを固体として窒素雰囲気下で加えた。１０分後、反応中に生成した沈殿を
濾過して除き、ＴＨＦで洗浄した。乾燥重量：０．１ｇ。固形物を、ＨＰＬＣ、 1 ＨＮＭＲ、ＬＣ／ＭＳでスクシニル−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄ
ｏｘであると同定した。
【００７５】
実施例１４
オリゴペプチド３８のＦｍｏｃ形態の合成［Ｆｍｏｃ−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌ
ａ−Ｌｅｕ］ オリゴペプチド３８のＦｍｏｃ形態を、標準的なＦｍｏｃ化学により固相手法
を用いて合成した。典型的な合成は、Ｗａｎｇのアルコキシ樹脂（０．６０ｍｍ
ｏｌ／ｇｍ添加量）を使用した。Ｆｍｏｃに保護されたアミノ酸を、固相ペプチ
ド合成に用いた。樹脂上１ｍＭのペプチドの規模で、３当量のアミノ酸を、活性
化剤としてのＨＢＴＵにより５分間予備活性化し、その後２当量のＤＩＥＡとと
もに樹脂に加えた。カップリング反応を２時間行い、次いでＤＭＦ（２５ｍＬ×
３）およびＤＣＭ（２５ｍＬ×３）で洗浄した。類似な条件を用いて、カップリ
ング反応を２当量のアミノ酸を用いて繰り返した。ニンヒドリン試験を用いて反
応の進行をモニターし、ニンヒドリン試験により２時間後に不完全な反応が示さ
れた場合、３回目のカップリング反応を行った。２０％ピペリジンのＤＭＦ溶液
を用いて、１５〜２０分間で脱保護を行った。所望のペプチドが樹脂上で組み立
てられるまで、次のアミノ酸でカップリング工程を繰り返した。樹脂を９５％Ｔ
ＦＡおよび５％水の溶液で処理することにより、樹脂からペプチドを最終的に切
断した。反応混合物を２時間室温で撹拌した後、樹脂を減圧下で濾過し、ＴＦＡ
で２回洗浄した。濾液を合わせ、４００ｍＬの冷エーテルを加えてペプチドを沈
殿させた。ペプチドを減圧下で濾過し乾燥すると、オリゴペプチド３８のＦｍｏ
ｃ形態が得られた（方法ＡによるＨＰＬＣ純度９４％）。粗ペプチドを、さらな
る精製なしに次の工程で用いた。
ａ−Ｌｅｕ］ オリゴペプチド３８のＦｍｏｃ形態を、標準的なＦｍｏｃ化学により固相手法
を用いて合成した。典型的な合成は、Ｗａｎｇのアルコキシ樹脂（０．６０ｍｍ
ｏｌ／ｇｍ添加量）を使用した。Ｆｍｏｃに保護されたアミノ酸を、固相ペプチ
ド合成に用いた。樹脂上１ｍＭのペプチドの規模で、３当量のアミノ酸を、活性
化剤としてのＨＢＴＵにより５分間予備活性化し、その後２当量のＤＩＥＡとと
もに樹脂に加えた。カップリング反応を２時間行い、次いでＤＭＦ（２５ｍＬ×
３）およびＤＣＭ（２５ｍＬ×３）で洗浄した。類似な条件を用いて、カップリ
ング反応を２当量のアミノ酸を用いて繰り返した。ニンヒドリン試験を用いて反
応の進行をモニターし、ニンヒドリン試験により２時間後に不完全な反応が示さ
れた場合、３回目のカップリング反応を行った。２０％ピペリジンのＤＭＦ溶液
を用いて、１５〜２０分間で脱保護を行った。所望のペプチドが樹脂上で組み立
てられるまで、次のアミノ酸でカップリング工程を繰り返した。樹脂を９５％Ｔ
ＦＡおよび５％水の溶液で処理することにより、樹脂からペプチドを最終的に切
断した。反応混合物を２時間室温で撹拌した後、樹脂を減圧下で濾過し、ＴＦＡ
で２回洗浄した。濾液を合わせ、４００ｍＬの冷エーテルを加えてペプチドを沈
殿させた。ペプチドを減圧下で濾過し乾燥すると、オリゴペプチド３８のＦｍｏ
ｃ形態が得られた（方法ＡによるＨＰＬＣ純度９４％）。粗ペプチドを、さらな
る精製なしに次の工程で用いた。
【００７６】
実施例１５
オリゴペプチド９８のＦｍｏｃ形態の合成［Ｆｍｏｃ−Ｔｈｉ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ
−Ｌｅｕ］ オリゴペプチド９８のＦｍｏｃ形態を、標準的なＦｍｏｃ化学による固相手法
およびＷａｎｇアルコキシ樹脂（０．６０ｍｍｏｌ／ｇｍ 添加量）を用いて合
成した。Ｆｍｏｃ保護アミノ酸およびＦｍｏｃ−Ｔｈｉ−ＯＨを固相ペプチド合
成に用いた。樹脂上１ｍＭのペプチドの規模で、３当量のアミノ酸を、活性化剤
としてのＨＢＴＵにより５分間予備活性化し、その後２当量のＤＩＥＡとともに
樹脂に加えた。カップリング反応を２時間行い、次いでＤＭＦ（２５ｍＬ×３）
およびＤＣＭ（２５ｍＬ×３）で洗浄した。類似な条件を用いて、カップリング
反応を２当量のアミノ酸を用いて繰り返した。ニンヒドリン試験を用いて反応の
進行をモニターし、ニンヒドリン試験により２時間後に不完全な反応が示された
場合、３回目のカップリング反応を行った。２０％ピペリジンのＤＭＦ溶液を用
いて、１５〜２０分間で脱保護を行った。所望のペプチドが樹脂上で組み立てら
れるまで、次のアミノ酸でカップリング工程を繰り返した。樹脂を９５％ＴＦＡ
および５％水の溶液で処理することにより、樹脂からペプチドを最終的に切断し
た。反応混合物を２時間室温で撹拌した後、樹脂を減圧下で濾過し、ＴＦＡで２
回洗浄した。濾液を合わせ、４００ｍＬの冷エーテルを加えてペプチドを沈殿さ
せた。ペプチドを減圧下で濾過し乾燥すると、オリゴペプチド９８のＦｍｏｃ形
態が得られた（方法ＡによるＨＰＬＣ純度８８％）。オリゴペプチド９８の未精
製Ｆｍｏｃ形態を、さらなる精製なしに次の工程で用いた。
−Ｌｅｕ］ オリゴペプチド９８のＦｍｏｃ形態を、標準的なＦｍｏｃ化学による固相手法
およびＷａｎｇアルコキシ樹脂（０．６０ｍｍｏｌ／ｇｍ 添加量）を用いて合
成した。Ｆｍｏｃ保護アミノ酸およびＦｍｏｃ−Ｔｈｉ−ＯＨを固相ペプチド合
成に用いた。樹脂上１ｍＭのペプチドの規模で、３当量のアミノ酸を、活性化剤
としてのＨＢＴＵにより５分間予備活性化し、その後２当量のＤＩＥＡとともに
樹脂に加えた。カップリング反応を２時間行い、次いでＤＭＦ（２５ｍＬ×３）
およびＤＣＭ（２５ｍＬ×３）で洗浄した。類似な条件を用いて、カップリング
反応を２当量のアミノ酸を用いて繰り返した。ニンヒドリン試験を用いて反応の
進行をモニターし、ニンヒドリン試験により２時間後に不完全な反応が示された
場合、３回目のカップリング反応を行った。２０％ピペリジンのＤＭＦ溶液を用
いて、１５〜２０分間で脱保護を行った。所望のペプチドが樹脂上で組み立てら
れるまで、次のアミノ酸でカップリング工程を繰り返した。樹脂を９５％ＴＦＡ
および５％水の溶液で処理することにより、樹脂からペプチドを最終的に切断し
た。反応混合物を２時間室温で撹拌した後、樹脂を減圧下で濾過し、ＴＦＡで２
回洗浄した。濾液を合わせ、４００ｍＬの冷エーテルを加えてペプチドを沈殿さ
せた。ペプチドを減圧下で濾過し乾燥すると、オリゴペプチド９８のＦｍｏｃ形
態が得られた（方法ＡによるＨＰＬＣ純度８８％）。オリゴペプチド９８の未精
製Ｆｍｏｃ形態を、さらなる精製なしに次の工程で用いた。
【００７７】
実施例１６
オリゴペプチド３８−Ｄｎｒ治療薬のＦｍｏｃ形態の合成［Ｆｍｏｃ−βＡｌａ
−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｎｒ］ ダウノルビシン塩酸塩（１８５ｍｇ、０．３２９ｍｍｏｌ）およびオリゴペプ
チド３８のＦｍｏｃ形態（２００ｍｇ、０．３２９ｍｍｏｌ）を室温で無水ＤＭ
Ｆ（１５ｍＬ）に溶かした。高速で撹拌中のこの溶液に、ＤＩＥＡ（０．１１５
ｍＬ、０．６５８ｍｍｏｌ）を一回で加え、反応混合物を室温で１５分間撹拌し
た。反応混合物を、氷浴を用いて０℃に冷却し、１３８ｍｇ（０．３６２ｍｍｏ
ｌ）のＨＡＴＵを１０分かけてゆっくりと加えた。反応混合物を室温でさらに９
０分間撹拌した。氷冷水（２００ｍＬ）を反応混合物に加えると、赤色沈殿が形
成された。沈殿を、コースフリット上で集め、３×５０ｍＬの水および３×５０
ｍＬジエチルエーテルで洗浄し、減圧下で乾燥すると、オリゴペプチド３８−Ｄ
ｎｒ治療薬のＦｍｏｃ形態を得た（収率９４％、方法ＡによるＨＰＬＣ純度９５
％）。この生成物を、さらなる精製なしに次の工程で使用した。 実施例１７ オリゴペプチド９８−ダウノルビシン治療薬のＦｍｏｃ形態の合成（Ｆｍｏｃ−
Ｔｈｉ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｄｎｒ） ダウノルビシン塩酸塩（９０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）およびオリゴペプチド
９８のＦｍｏｃ形態（１２０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）を室温で無水ＤＭＦ（１
５ｍＬ）に溶解した。この高速で撹拌中の溶液に、ＤＩＥＡ（０．５６ｍＬ、０
．１６ｍｍｏｌ）を一回で加え、反応混合物を室温で１５分間撹拌した。氷浴を
用いて反応混合物を０℃に冷却し、６１ｍｇ（０．１６ｍｍｏｌ）のＨＡＴＵを
１０分かけてゆっくりと加えた。反応混合物を室温でさらに９０分撹拌した。氷
冷水（１５０ｍＬ）を反応混合物に加えると、赤色の沈殿が生じた。この沈殿を
コースフリット上に集め、３×５０ｍＬの水と３×５０ｍＬのジエチルエーテル
で洗浄し減圧下で乾燥すると、オリゴペプチド９８−ダウノルビシン治療薬のＦ
ｍｏｃ形態（収率９４％、方法ＡによるＨＰＬＣ純度９１％）を得た。この生成
物を、さらなる精製なしに次の工程で用いた。
−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｎｒ］ ダウノルビシン塩酸塩（１８５ｍｇ、０．３２９ｍｍｏｌ）およびオリゴペプ
チド３８のＦｍｏｃ形態（２００ｍｇ、０．３２９ｍｍｏｌ）を室温で無水ＤＭ
Ｆ（１５ｍＬ）に溶かした。高速で撹拌中のこの溶液に、ＤＩＥＡ（０．１１５
ｍＬ、０．６５８ｍｍｏｌ）を一回で加え、反応混合物を室温で１５分間撹拌し
た。反応混合物を、氷浴を用いて０℃に冷却し、１３８ｍｇ（０．３６２ｍｍｏ
ｌ）のＨＡＴＵを１０分かけてゆっくりと加えた。反応混合物を室温でさらに９
０分間撹拌した。氷冷水（２００ｍＬ）を反応混合物に加えると、赤色沈殿が形
成された。沈殿を、コースフリット上で集め、３×５０ｍＬの水および３×５０
ｍＬジエチルエーテルで洗浄し、減圧下で乾燥すると、オリゴペプチド３８−Ｄ
ｎｒ治療薬のＦｍｏｃ形態を得た（収率９４％、方法ＡによるＨＰＬＣ純度９５
％）。この生成物を、さらなる精製なしに次の工程で使用した。 実施例１７ オリゴペプチド９８−ダウノルビシン治療薬のＦｍｏｃ形態の合成（Ｆｍｏｃ−
Ｔｈｉ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｄｎｒ） ダウノルビシン塩酸塩（９０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）およびオリゴペプチド
９８のＦｍｏｃ形態（１２０ｍｇ、０．１６ｍｍｏｌ）を室温で無水ＤＭＦ（１
５ｍＬ）に溶解した。この高速で撹拌中の溶液に、ＤＩＥＡ（０．５６ｍＬ、０
．１６ｍｍｏｌ）を一回で加え、反応混合物を室温で１５分間撹拌した。氷浴を
用いて反応混合物を０℃に冷却し、６１ｍｇ（０．１６ｍｍｏｌ）のＨＡＴＵを
１０分かけてゆっくりと加えた。反応混合物を室温でさらに９０分撹拌した。氷
冷水（１５０ｍＬ）を反応混合物に加えると、赤色の沈殿が生じた。この沈殿を
コースフリット上に集め、３×５０ｍＬの水と３×５０ｍＬのジエチルエーテル
で洗浄し減圧下で乾燥すると、オリゴペプチド９８−ダウノルビシン治療薬のＦ
ｍｏｃ形態（収率９４％、方法ＡによるＨＰＬＣ純度９１％）を得た。この生成
物を、さらなる精製なしに次の工程で用いた。
【００７８】
実施例１８
Ｆｍｏｃ−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ドキソルビシンの調製
３．０ｇ（５．１７ｍｍｏｌ）のドキソルビシン塩酸塩と３．１５ｇ（５．１
７ｍｍｏｌ）のＦｍｏｃ−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕを、窒素雰囲気下
で、室温で２３０ｍＬの乾燥ＤＭＦに溶解した。高速で撹拌中のこの溶液に、１
．７９８ｍＬ（１０．３４ｍｍｏｌ）のＤＩＥＡを一回で加え、反応混合物を室
温で１５分撹拌した。反応混合物を氷／塩水浴で約−２℃に冷却し、５８ｍＬの
ＤＭＦに溶かした２．５６ｇ（６．７３ｍｍｏｌ）のＨＡＴＵを、高速で撹拌し
ながら１２分かけて滴下した。反応混合物を−２℃でさらに３０分撹拌し、０．
２８５ｍＬ（１．６４ｍｍｏｌ）のＤＩＥＡを一回で加えた。０℃の水５８０ｍ
Ｌを加えると、直ちに綿状の赤色沈殿が生じた。沈殿を粗いガラスフリット上に
集め、３×５０ｍＬの水と３×５０ｍＬのジエチルエーテルで洗浄し１６時間風
乾すると、５．２１ｇのＦｍｏｃ−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘ
を物理的収率９０．２３％、方法ＢによるＨＰＬＣ純度９０．２３％で得た。 実施例１９ Ｆｍｏｃ−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘからのスクシニル−βＡ
ｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘの調製 ２３０ｍＬの乾燥ＤＭＦに溶かした５．０ｇ（４．４１ｍｍｏｌ）のＦｍｏｃ
−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘの溶液に、室温および窒素雰囲気
下で、２１．８ｍＬ（２２０ｍＬ）のピペリジンを一回で加えると、赤から紫に
変色した。反応混合物を室温で５分間撹拌し、ドライアイス／アセトン浴で約−
２０℃に冷却した。反応温度を−５℃未満に保ちながら２２．５ｇ（０．２２５
ｍｏｌ）のコハク酸無水物を一回で加えた。−１０℃から−５℃で約２分撹拌す
ると、紫から赤／オレンジに変色した。冷却浴を取り除き、反応混合物を１０分
間撹拌した。次いで、ロータリーエバポレーターにより反応混合物の体積を約１
００ｍＬに減らし、１２５ｍＬのクロロホルムで希釈した。この溶液に、１４０
０ｍＬのジエチルエーテルを素早く加えると赤色沈殿が生じた。この沈殿を、中
程度のガラスフリット上に単離し、５×２００ｍＬのジエチルエーテルで粉砕す
ると、８９．１３％のＨＰＬＣ純度を持つ物質が生じた。この沈殿を１×２０ｍ
Ｌのジエチルエーテルで再び洗浄し、風乾すると、３．６２ｇのスクシニル−β
Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘ（物理的収率８１％、ＨＰＬＣ純度８
８．２％）を得た。この物質を、０℃で３０ｍＬの水の中で撹拌し、３３．９８
ｍＬ（０．９５当量）０．１Ｍ炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、得られた懸濁
液を、固形物が全て溶解するまで攪拌した。溶液を凍結乾燥すると、３．７７ｇ
のスクシニル−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘが９９％の物理的収
率で得られた（方法ＢによるＨＰＬＣ純度８９．０６％）。
７ｍｍｏｌ）のＦｍｏｃ−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕを、窒素雰囲気下
で、室温で２３０ｍＬの乾燥ＤＭＦに溶解した。高速で撹拌中のこの溶液に、１
．７９８ｍＬ（１０．３４ｍｍｏｌ）のＤＩＥＡを一回で加え、反応混合物を室
温で１５分撹拌した。反応混合物を氷／塩水浴で約−２℃に冷却し、５８ｍＬの
ＤＭＦに溶かした２．５６ｇ（６．７３ｍｍｏｌ）のＨＡＴＵを、高速で撹拌し
ながら１２分かけて滴下した。反応混合物を−２℃でさらに３０分撹拌し、０．
２８５ｍＬ（１．６４ｍｍｏｌ）のＤＩＥＡを一回で加えた。０℃の水５８０ｍ
Ｌを加えると、直ちに綿状の赤色沈殿が生じた。沈殿を粗いガラスフリット上に
集め、３×５０ｍＬの水と３×５０ｍＬのジエチルエーテルで洗浄し１６時間風
乾すると、５．２１ｇのＦｍｏｃ−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘ
を物理的収率９０．２３％、方法ＢによるＨＰＬＣ純度９０．２３％で得た。 実施例１９ Ｆｍｏｃ−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘからのスクシニル−βＡ
ｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘの調製 ２３０ｍＬの乾燥ＤＭＦに溶かした５．０ｇ（４．４１ｍｍｏｌ）のＦｍｏｃ
−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘの溶液に、室温および窒素雰囲気
下で、２１．８ｍＬ（２２０ｍＬ）のピペリジンを一回で加えると、赤から紫に
変色した。反応混合物を室温で５分間撹拌し、ドライアイス／アセトン浴で約−
２０℃に冷却した。反応温度を−５℃未満に保ちながら２２．５ｇ（０．２２５
ｍｏｌ）のコハク酸無水物を一回で加えた。−１０℃から−５℃で約２分撹拌す
ると、紫から赤／オレンジに変色した。冷却浴を取り除き、反応混合物を１０分
間撹拌した。次いで、ロータリーエバポレーターにより反応混合物の体積を約１
００ｍＬに減らし、１２５ｍＬのクロロホルムで希釈した。この溶液に、１４０
０ｍＬのジエチルエーテルを素早く加えると赤色沈殿が生じた。この沈殿を、中
程度のガラスフリット上に単離し、５×２００ｍＬのジエチルエーテルで粉砕す
ると、８９．１３％のＨＰＬＣ純度を持つ物質が生じた。この沈殿を１×２０ｍ
Ｌのジエチルエーテルで再び洗浄し、風乾すると、３．６２ｇのスクシニル−β
Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘ（物理的収率８１％、ＨＰＬＣ純度８
８．２％）を得た。この物質を、０℃で３０ｍＬの水の中で撹拌し、３３．９８
ｍＬ（０．９５当量）０．１Ｍ炭酸水素ナトリウム水溶液を加え、得られた懸濁
液を、固形物が全て溶解するまで攪拌した。溶液を凍結乾燥すると、３．７７ｇ
のスクシニル−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘが９９％の物理的収
率で得られた（方法ＢによるＨＰＬＣ純度８９．０６％）。
【００７９】
実施例２０
オリゴペプチド３８−Ｄｎｒ治療薬のＮキャップスクシニル形態の合成［Ｓｕｃ
−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｎｒ］ ピペリジン（０．４４２ｍＬ、４．４８ｍｍｏｌ）を、オリゴペプチド３８−
Ｄｎｒ治療薬のＦｍｏｃ形態（１００ｍｇ、０．０８９ｍｍｏｌ）を５ｍＬの乾
燥ＤＭＦに溶かした溶液に加えた。反応混合物を室温で５分間攪拌し、次いでド
ライアイス／アセトン浴を用いて−２０℃に冷却した。無水コハク酸（４５８ｍ
ｇ、４．５４ｍｍｏｌ）を、冷却した反応混合物に一回で加えた。反応を−５℃
で５分間高速で攪拌し、次いで室温でさらに９０分間攪拌した。無水ジエチルエ
ーテル２５０ｍＬを反応混合物に加え、得られた赤色沈殿を中程度のガラスフリ
ット上に単離した。フィルターケーキを、５０ｍＬのジエチルエーテルで２回連
続して洗浄し、減圧乾燥すると、オリゴペプチド３８−Ｄｎｒ−治療薬のＮキャ
ップスクシニル形態が得られた（収率８０％、方法ＢによるＨＰＬＣ純度８８％
）。ＬＣ／ＭＳにより、分子量９９５（理論値９９６）が得られた。
−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｎｒ］ ピペリジン（０．４４２ｍＬ、４．４８ｍｍｏｌ）を、オリゴペプチド３８−
Ｄｎｒ治療薬のＦｍｏｃ形態（１００ｍｇ、０．０８９ｍｍｏｌ）を５ｍＬの乾
燥ＤＭＦに溶かした溶液に加えた。反応混合物を室温で５分間攪拌し、次いでド
ライアイス／アセトン浴を用いて−２０℃に冷却した。無水コハク酸（４５８ｍ
ｇ、４．５４ｍｍｏｌ）を、冷却した反応混合物に一回で加えた。反応を−５℃
で５分間高速で攪拌し、次いで室温でさらに９０分間攪拌した。無水ジエチルエ
ーテル２５０ｍＬを反応混合物に加え、得られた赤色沈殿を中程度のガラスフリ
ット上に単離した。フィルターケーキを、５０ｍＬのジエチルエーテルで２回連
続して洗浄し、減圧乾燥すると、オリゴペプチド３８−Ｄｎｒ−治療薬のＮキャ
ップスクシニル形態が得られた（収率８０％、方法ＢによるＨＰＬＣ純度８８％
）。ＬＣ／ＭＳにより、分子量９９５（理論値９９６）が得られた。
【００８０】
実施例２１
オリゴペプチド９８−ダウノルビシン治療薬のＮキャップスクシニル形態の合成
［Ｓｕｃ−Ｔｈｉ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｄｎｒ］ オリゴペプチド９８−ダウノルビシン治療薬のＦｍｏｃ形態（１００ｍｇ、０
．０７９ｍｍｏｌ）を５ｍＬの乾燥ＤＭＦに溶かした溶液に、ピペリジン（０．
３９１ｍＬ、３．９５ｍｍｏｌ）を一回で加えると赤から紫に変色した。反応混
合物を室温で５分間攪拌し、次いでドライアイス／アセトン浴を用いて−２０℃
に冷却した。無水コハク酸４０７ｍｇ（４．０２ｍｍｏｌ）を、冷却した反応混
合物に一回で加えた。反応を−５℃で５分間攪拌し、次いで室温でさらに９０分
間攪拌した。無水ジエチルエーテル２００ｍＬを反応混合物に加えると、赤色沈
殿が生じた。この沈殿を中程度のガラスフリット上に単離し、３×５０ｍＬのジ
エチルエーテルで洗浄し、減圧下で乾燥すると、オリゴペプチド９８−Ｄｎｒ治
療薬のＮキャップスクシニル形態が得られた（収率８０％、方法ＡによるＨＰＬ
Ｃ純度８１％）。ＬＣ／ＭＳにより１１４１の分子量を得た（理論値１１４２）
。
［Ｓｕｃ−Ｔｈｉ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｄｎｒ］ オリゴペプチド９８−ダウノルビシン治療薬のＦｍｏｃ形態（１００ｍｇ、０
．０７９ｍｍｏｌ）を５ｍＬの乾燥ＤＭＦに溶かした溶液に、ピペリジン（０．
３９１ｍＬ、３．９５ｍｍｏｌ）を一回で加えると赤から紫に変色した。反応混
合物を室温で５分間攪拌し、次いでドライアイス／アセトン浴を用いて−２０℃
に冷却した。無水コハク酸４０７ｍｇ（４．０２ｍｍｏｌ）を、冷却した反応混
合物に一回で加えた。反応を−５℃で５分間攪拌し、次いで室温でさらに９０分
間攪拌した。無水ジエチルエーテル２００ｍＬを反応混合物に加えると、赤色沈
殿が生じた。この沈殿を中程度のガラスフリット上に単離し、３×５０ｍＬのジ
エチルエーテルで洗浄し、減圧下で乾燥すると、オリゴペプチド９８−Ｄｎｒ治
療薬のＮキャップスクシニル形態が得られた（収率８０％、方法ＡによるＨＰＬ
Ｃ純度８１％）。ＬＣ／ＭＳにより１１４１の分子量を得た（理論値１１４２）
。
【００８１】
実施例２２
オリゴペプチド３８−Ｄｏｘ治療薬のＮキャップグルタリル形態［Ｇｌ−βＡｌ
ａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘ］のナトリウム塩の合成 オリゴペプチド３８−Ｄｏｘ治療薬のＦｍｏｃ形態の（１００ｍｇ、００８８
ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（４．５ｍＬ）に溶かした溶液にピペリジン（４３６μＬ、
４．４１３ｍｍｏｌ）を加えた。室温で５分間攪拌した後、反応混合物を−５℃
に冷却し、無水グルタル酸（６２４ｍｇ、５．４７２ｍｍｏｌ）を素早く加えた
。色が変わると同時に冷却浴を取り除き、混合物を室温でさらに１０分間攪拌し
た。ＤＭＦをロータリーエバポレーターで除去し、残渣をクロロホルム（２．５
ｍＬ）に溶かした。ジエチルエーテル（１４ｍＬ）を加え、得られた沈殿を濾過
した。フィルターケーキをジエチルエーテルで洗浄し、風乾し、水（１４ｍＬ）
で再懸濁した。固形物が完全に溶解するまで０．０２５Ｍ ＮａＯＨ（４ｍＬ、
０．１０ｍｍｏｌ）を懸濁液に滴下するとナトリウム塩が生じた。この溶液を凍
結乾燥すると、オリゴペプチド３８−Ｄｏｘ治療薬のグルタリルＮキャップ形態
のナトリウム塩が、収率９７％および方法ＤでのＨＰＬＣ純度８７％で得られた
。
ａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘ］のナトリウム塩の合成 オリゴペプチド３８−Ｄｏｘ治療薬のＦｍｏｃ形態の（１００ｍｇ、００８８
ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（４．５ｍＬ）に溶かした溶液にピペリジン（４３６μＬ、
４．４１３ｍｍｏｌ）を加えた。室温で５分間攪拌した後、反応混合物を−５℃
に冷却し、無水グルタル酸（６２４ｍｇ、５．４７２ｍｍｏｌ）を素早く加えた
。色が変わると同時に冷却浴を取り除き、混合物を室温でさらに１０分間攪拌し
た。ＤＭＦをロータリーエバポレーターで除去し、残渣をクロロホルム（２．５
ｍＬ）に溶かした。ジエチルエーテル（１４ｍＬ）を加え、得られた沈殿を濾過
した。フィルターケーキをジエチルエーテルで洗浄し、風乾し、水（１４ｍＬ）
で再懸濁した。固形物が完全に溶解するまで０．０２５Ｍ ＮａＯＨ（４ｍＬ、
０．１０ｍｍｏｌ）を懸濁液に滴下するとナトリウム塩が生じた。この溶液を凍
結乾燥すると、オリゴペプチド３８−Ｄｏｘ治療薬のグルタリルＮキャップ形態
のナトリウム塩が、収率９７％および方法ＤでのＨＰＬＣ純度８７％で得られた
。
【００８２】
実施例２３
結合体すなわちオリゴペプチド３８とドキソルビシンのメチルスクシニルＮキャ
ップ形態の酵素経路カップリングの前駆体を調製する「尿素法」 乾燥した窒素雰囲気下で、２６．０４ｇ（５２．０ｍｍｏｌ）のオリゴペプチ
ド３８のメチルスクシニル−Ｎ−キャップ形態、２３．２６ｇ（４０．２ｍｍｏ
ｌ）のドキソルビシン塩酸塩を、８００ｍＬの乾燥した尿素飽和（約３０％ｗ／
ｖ）ＤＭＦに懸濁／溶解し、１４．８ １９．９４８ｍＬ。１１４．１６ｍｍｏ
ｌ ＤＩＥＡ。この混合物を、約２５分かけて０〜３℃に冷却した。この時点で
、２１．２ｇ（５６．０ｍｍｏｌ）のＨＡＴＵを、約１００ｍＬの尿素飽和ＤＭ
Ｆ溶液として、１０分かけて加えた（この溶液の体積は最小限に保たれなくては
ならない）。反応混合物を−２〜２℃で１０分間攪拌し、激しく攪拌しながら、
約５分かけて２％ｖ／ｖ酢酸を含む氷冷した塩水４０００ｍＬに注いだ。生成物
を、多孔度が中程度の溶融ガラスフィルターで濾過し、多量の水で洗浄し、減圧
下で乾燥した。物理的収率４３ｇ：１０４．４７％、ＨＰＬＣ方法Ｂによる純度
９３．４５％。
ップ形態の酵素経路カップリングの前駆体を調製する「尿素法」 乾燥した窒素雰囲気下で、２６．０４ｇ（５２．０ｍｍｏｌ）のオリゴペプチ
ド３８のメチルスクシニル−Ｎ−キャップ形態、２３．２６ｇ（４０．２ｍｍｏ
ｌ）のドキソルビシン塩酸塩を、８００ｍＬの乾燥した尿素飽和（約３０％ｗ／
ｖ）ＤＭＦに懸濁／溶解し、１４．８ １９．９４８ｍＬ。１１４．１６ｍｍｏ
ｌ ＤＩＥＡ。この混合物を、約２５分かけて０〜３℃に冷却した。この時点で
、２１．２ｇ（５６．０ｍｍｏｌ）のＨＡＴＵを、約１００ｍＬの尿素飽和ＤＭ
Ｆ溶液として、１０分かけて加えた（この溶液の体積は最小限に保たれなくては
ならない）。反応混合物を−２〜２℃で１０分間攪拌し、激しく攪拌しながら、
約５分かけて２％ｖ／ｖ酢酸を含む氷冷した塩水４０００ｍＬに注いだ。生成物
を、多孔度が中程度の溶融ガラスフィルターで濾過し、多量の水で洗浄し、減圧
下で乾燥した。物理的収率４３ｇ：１０４．４７％、ＨＰＬＣ方法Ｂによる純度
９３．４５％。
【００８３】
実施例２４
オリゴペプチド３８−Ｄｏｘ治療薬のメチルスクシニルＮキャップ形態の合成［
メチルスクシニル−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘ（ＭｅＯＳｕＳ
ＬＤ）］ 丸底フラスコ（５０ｍＬ）中で、オリゴペプチド−３８のＮキャップメチルヘ
ミスクシニル形態（０．２５ｇ、０．５ｍｍｏｌ）およびドキソルビシン（０．
２９ｇ、０．５ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（２０ｍＬ）に溶解した。混合物を５分
攪拌した後、ＤＩＥＡ（０．１７ｍＬ、１．０ｍｍｏｌ）、続いてＨＢＴＵ（０
．１９ｇ、０．５ｍｍｏｌ）を溶液に加えた。溶液を室温で４時間攪拌した。Ｄ
ＭＦをロータリーエバポレーターで除去し、残渣を４．０ｍＬのメチレンクロラ
イド：メタノール １：１に溶解した。この溶液に、攪拌しながら４０ｍＬのエ
ーテルをゆっくりと加えた。赤色沈殿が生じ、吸引濾過で集めた。固形物をエー
テル（２×１０ｍＬ）で洗浄し、真空デシケーターで乾燥した。０．５０ｇの生
成物（９８％）が純度９６％で生成した。
メチルスクシニル−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘ（ＭｅＯＳｕＳ
ＬＤ）］ 丸底フラスコ（５０ｍＬ）中で、オリゴペプチド−３８のＮキャップメチルヘ
ミスクシニル形態（０．２５ｇ、０．５ｍｍｏｌ）およびドキソルビシン（０．
２９ｇ、０．５ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（２０ｍＬ）に溶解した。混合物を５分
攪拌した後、ＤＩＥＡ（０．１７ｍＬ、１．０ｍｍｏｌ）、続いてＨＢＴＵ（０
．１９ｇ、０．５ｍｍｏｌ）を溶液に加えた。溶液を室温で４時間攪拌した。Ｄ
ＭＦをロータリーエバポレーターで除去し、残渣を４．０ｍＬのメチレンクロラ
イド：メタノール １：１に溶解した。この溶液に、攪拌しながら４０ｍＬのエ
ーテルをゆっくりと加えた。赤色沈殿が生じ、吸引濾過で集めた。固形物をエー
テル（２×１０ｍＬ）で洗浄し、真空デシケーターで乾燥した。０．５０ｇの生
成物（９８％）が純度９６％で生成した。
【００８４】
実施例２５
オリゴペプチド３８−Ｄｏｘ治療薬のメチルスクシニルＮキャップ形態の加水分
解 架橋酵素の使用 オリゴペプチド３８−Ｄｏｘ治療薬のメチルスクシニルＮキャップ形態（１．
０ｇ、０．９７５ｍｍｏｌ）および１００ｍＬのＤＭＦを５００ｍＬのフラスコ
に入れた。懸濁液をマグネティックスターラーで激しく攪拌した。オリゴペプチ
ド３８−Ｄｏｘ治療薬のメチルスクシニルＮキャップ形態が完全に溶解したとき
、４００ｍＬの脱イオン水を加え、得られた溶液を３５℃で攪拌した。１ｇの洗
浄済みＣＬＥＣ−ＰＣ（Ａｌｔｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ）固定化酵素のスラリ
ーを脱イオン水で３回すすぎ、使用前に１０ｍＬの２０％ＤＭＦ水溶液に再懸濁
し、１０ｍＬの２０％ＤＭＦ水溶液に懸濁し、得られた懸濁液を、一定時間毎に
ＨＰＬＣでモニターしながら３５℃で攪拌した。オリゴペプチド３８−Ｄｏｘ治
療薬のメチルスクシニルＮキャップ形態が全て消費されると（約１８時間）、反
応混合物を０．４５μＭナイロンメンブレンフィルターで濾過し、ＣＬＥＣ−Ｐ
Ｃ酵素を除いた。ＣＬＥＣ−ＰＣケーキを３×１０ｍＬのメタノールで洗浄し、
メタノール洗液を濾過した反応混合物と合わせた。濾過した反応混合物とメタノ
ール洗液を、高真空ポンプと３０℃の水浴を備えたロータリーエバポレーターで
赤いゴム状になるまで濃縮した。次いで、赤いゴム状物質を、５０ｍＬ脱イオン
水に室温で懸濁し、メカニカルスターラーにより高速で攪拌した。この懸濁液に
、１００ｍＬの脱イオン水に７７．８ｍｇの炭酸水素ナトリウム（０．９２６ｍ
ｍｏｌ、０．９５当量）を溶かした溶液を２分かけて加えた。懸濁液を室温で２
０分攪拌した。反応混合物を０．４５μＭナイロンメンブレンフィルターで濾過
し、凍結乾燥した。０．９３６ｇのオリゴペプチド３８−Ｄｏｘ治療薬のスクシ
ニルＮキャップ形態のナトリウム塩が、収率およそ１００％、ＨＰＬＣ方法Ｂで
の純度８４％で単離された。1Ｈおよび13Ｃ ＮＭＲスペクトルを、それぞれ６
００および１５０ＭＨｚの分光器で測定し、エレクトロスプレーＭＳは所望の構
造と一致していた。
解 架橋酵素の使用 オリゴペプチド３８−Ｄｏｘ治療薬のメチルスクシニルＮキャップ形態（１．
０ｇ、０．９７５ｍｍｏｌ）および１００ｍＬのＤＭＦを５００ｍＬのフラスコ
に入れた。懸濁液をマグネティックスターラーで激しく攪拌した。オリゴペプチ
ド３８−Ｄｏｘ治療薬のメチルスクシニルＮキャップ形態が完全に溶解したとき
、４００ｍＬの脱イオン水を加え、得られた溶液を３５℃で攪拌した。１ｇの洗
浄済みＣＬＥＣ−ＰＣ（Ａｌｔｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ）固定化酵素のスラリ
ーを脱イオン水で３回すすぎ、使用前に１０ｍＬの２０％ＤＭＦ水溶液に再懸濁
し、１０ｍＬの２０％ＤＭＦ水溶液に懸濁し、得られた懸濁液を、一定時間毎に
ＨＰＬＣでモニターしながら３５℃で攪拌した。オリゴペプチド３８−Ｄｏｘ治
療薬のメチルスクシニルＮキャップ形態が全て消費されると（約１８時間）、反
応混合物を０．４５μＭナイロンメンブレンフィルターで濾過し、ＣＬＥＣ−Ｐ
Ｃ酵素を除いた。ＣＬＥＣ−ＰＣケーキを３×１０ｍＬのメタノールで洗浄し、
メタノール洗液を濾過した反応混合物と合わせた。濾過した反応混合物とメタノ
ール洗液を、高真空ポンプと３０℃の水浴を備えたロータリーエバポレーターで
赤いゴム状になるまで濃縮した。次いで、赤いゴム状物質を、５０ｍＬ脱イオン
水に室温で懸濁し、メカニカルスターラーにより高速で攪拌した。この懸濁液に
、１００ｍＬの脱イオン水に７７．８ｍｇの炭酸水素ナトリウム（０．９２６ｍ
ｍｏｌ、０．９５当量）を溶かした溶液を２分かけて加えた。懸濁液を室温で２
０分攪拌した。反応混合物を０．４５μＭナイロンメンブレンフィルターで濾過
し、凍結乾燥した。０．９３６ｇのオリゴペプチド３８−Ｄｏｘ治療薬のスクシ
ニルＮキャップ形態のナトリウム塩が、収率およそ１００％、ＨＰＬＣ方法Ｂで
の純度８４％で単離された。1Ｈおよび13Ｃ ＮＭＲスペクトルを、それぞれ６
００および１５０ＭＨｚの分光器で測定し、エレクトロスプレーＭＳは所望の構
造と一致していた。
【００８５】
実施例２６
オリゴペプチド３８−Ｄｏｘ治療薬のメチルスクシニルＮキャップ形態の加水分
解［メチルスクシニルβＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ｄｏｘ］ 可溶性酵素の使用 １１．０ｇ（１０．７２ｍｍｏｌ）のオリゴペプチド３８−Ｄｏｘ治療薬のメ
チルスクシニルＮキャップ形態を、８００ｍＬのＨＰＬＣグレードの水に懸濁し
、Ｕｌｔｒａｔｕｒｒａｘ Ｔ８ホモジナイザーで６０分間均質化すると、均一
に分散した懸濁液が得られた。この懸濁液を３５℃で攪拌し（５００ｒｐｍ）、
７６ｍＭ炭酸水素ナトリウム水溶液でｐＨ６．０５に調整した。１．０ｇのＣ．
Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ“Ｂ”リパーゼ（Ａｌｔｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ）を加
え、反応混合物を３５℃で４８時間攪拌した。４８時間の反応時間の間、一定時
間毎に７６ｍＭ炭酸水素ナトリウムを添加してｐＨを５．３から６．２の間に保
ち、反応をＨＰＬＣで一定時間毎にモニターした。４８時間後、ＨＰＬＣにより
反応は約９８％終了した。７６ｍＭ炭酸水素ナトリウム水溶液で反応混合物をｐ
Ｈ７に調整し、Ｃｅｌｉｔｅ ５２１のパッドで濾過した。澄んだ反応混合物を
、５ｍＬの氷酢酸でｐＨ約３に酸性化すると、ゴム状の赤色沈殿が形成した。こ
の沈殿を、Ｃｅｌｉｔｅ ５２１で濾過し、Ｃｅｌｉｔｅパッドをメタノールで
すすぎ、メタノール溶液を１０〜２０μＭ溶融ガラスフィルターにより濾過し、
濾液をロータリーエバポレーターにより除去することにより単離し、ゴム状の赤
色生成物７．３１ｇを得た。この生成物を、７０ｍＬの７６ｍＭ炭酸水素ナトリ
ウム（０．９５当量）に溶かしてナトリウム塩に変換し、凍結乾燥すると、７．
３０ｇのオリゴペプチド３８−Ｄｏｘ治療薬のスクシニルＮキャップ形態のナト
リウム塩を、物理的収率６６．１％、ＨＰＬＣによる純度８４．５％で得た。
解［メチルスクシニルβＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ｄｏｘ］ 可溶性酵素の使用 １１．０ｇ（１０．７２ｍｍｏｌ）のオリゴペプチド３８−Ｄｏｘ治療薬のメ
チルスクシニルＮキャップ形態を、８００ｍＬのＨＰＬＣグレードの水に懸濁し
、Ｕｌｔｒａｔｕｒｒａｘ Ｔ８ホモジナイザーで６０分間均質化すると、均一
に分散した懸濁液が得られた。この懸濁液を３５℃で攪拌し（５００ｒｐｍ）、
７６ｍＭ炭酸水素ナトリウム水溶液でｐＨ６．０５に調整した。１．０ｇのＣ．
Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ“Ｂ”リパーゼ（Ａｌｔｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ）を加
え、反応混合物を３５℃で４８時間攪拌した。４８時間の反応時間の間、一定時
間毎に７６ｍＭ炭酸水素ナトリウムを添加してｐＨを５．３から６．２の間に保
ち、反応をＨＰＬＣで一定時間毎にモニターした。４８時間後、ＨＰＬＣにより
反応は約９８％終了した。７６ｍＭ炭酸水素ナトリウム水溶液で反応混合物をｐ
Ｈ７に調整し、Ｃｅｌｉｔｅ ５２１のパッドで濾過した。澄んだ反応混合物を
、５ｍＬの氷酢酸でｐＨ約３に酸性化すると、ゴム状の赤色沈殿が形成した。こ
の沈殿を、Ｃｅｌｉｔｅ ５２１で濾過し、Ｃｅｌｉｔｅパッドをメタノールで
すすぎ、メタノール溶液を１０〜２０μＭ溶融ガラスフィルターにより濾過し、
濾液をロータリーエバポレーターにより除去することにより単離し、ゴム状の赤
色生成物７．３１ｇを得た。この生成物を、７０ｍＬの７６ｍＭ炭酸水素ナトリ
ウム（０．９５当量）に溶かしてナトリウム塩に変換し、凍結乾燥すると、７．
３０ｇのオリゴペプチド３８−Ｄｏｘ治療薬のスクシニルＮキャップ形態のナト
リウム塩を、物理的収率６６．１％、ＨＰＬＣによる純度８４．５％で得た。
【００８６】
生成物は、上記の実施例と同一であった。
実施例２７
オリゴペプチド３８−Ｄｏｘ治療薬のメチルスクシニルＮキャップ形態の固定化
Ｃａｎｄｉｄａ Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ “Ｂ”リパーゼ加水分解 ３０．０ｇのＣａｎｄｉｄａ Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ “Ｂ”リパーゼ（Ａｌ
ｔｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ）を３００ｍＬの水に溶かし、３×４ｌの５０ｍＭ
炭酸水素ナトリウム水溶液（ｐＨ＝６．４）で透析した。透析の後、透析された
溶液は約３００ｍＬであった。３６０ｍＬのＰｈａｒｍａｃｉａ ＮＨＳ−活性
化Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗを粗いガラス溶融ロートにおき
、５×４５０ｍＬ氷冷１ｍＭ塩酸ですすいだ。すすいだＮＨＳ−活性化Ｓｅｐｈ
ａｒｏｓｅを透析した酵素溶液と合わせた。得られた懸濁液を室温（約２２℃）
で２．０時間攪拌した。次いで、ｓｅｐｈａｒｏｓｅ／酵素結合体を、粗い溶融
ガラスフィルターで単離し、１０００ｍＬの１００ｍＭ ＴＲＩＳ水溶液（ｐＨ
＝７．４５）中で１５分間攪拌した。この懸濁液を濾過し、他の１０００ｍＬの
１００ｍＭ ＴＲＩＳ水性緩衝液（ｐＨ＝７．４５）とともに４℃で終夜インキ
ュベーションした。翌朝固定化酵素を濾過し、水で洗浄後、２０００ｍＬ三口丸
底フラスコに入れた。４３ｇのオリゴペプチド３８−Ｄｏｘ治療薬のメチルスク
シニルＮキャップ形態を加え、固形物を８００ｍＬ脱イオン水中に懸濁した。フ
ラスコにオーバーヘッドスターラーおよびｐＨ安定器を付け、シリンジポンプの
調節により反応混合物のｐＨを５．９〜６．２に保った。シリンジポンプには、
０．１Ｍ炭酸水素ナトリウムが充填されていた。反応の進行をＨＰＬＣによりモ
ニターした。６日後、固定化酵素を濾過し、液相を凍結乾燥した。乾燥固形物を
約１ｌの乾燥ＴＨＦ中に懸濁し、濾過した。４２．６６ｇ、物理的収率９８．３
４％、方法ＢによるＨＰＬＣ純度９３．４３％（２５４ｎｍ）、９４．４３％（
４８０ｎｍ）。 実施例２８ オリゴペプチド３８−治療薬の乳酸塩の合成［βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅ
ｕ−Ｄｏｘ乳酸塩］ ピペリジン（２６ｍＬ、２６４ｍｍｏｌ）を、オリゴペプチド３８−Ｄｏｘ治
療薬のＦｍｏｃ形態（６．００ｇ、５．３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２６５ｍＬ）に
溶かした溶液に加えた。室温で５分攪拌の後、反応混合物を氷塩浴中におき、予
備冷却した（４℃）ｐＨ３の１０％乳酸緩衝液（６００ｍＬ）を直ちに加えた。
水溶液をＤＣＭ（３×５００ｍＬ）で抽出し、過剰な塩を固相抽出により除いた
。Ｃ１８ ＯＤＳ−Ａシリカゲル（１２０ｇ）をガラスフリット中で調整し（５
００ｍＬメタノール、２×５００ｍＬ水）、粗生成物乳酸塩の水溶液を充填した
。水で洗浄し（２×５００ｍＬ）乾燥した後、フィルターケーキをメタノールに
溶解した。メタノールを蒸発させ、残渣を水に溶解した。得られた溶液を凍結乾
燥すると、オリゴペプチド３８−Ｄｏｘ治療薬の乳酸塩３．５４ｇ（収率６７％
、ＨＰＬＣ純度方法Ｂ：８９％）が得られた。
Ｃａｎｄｉｄａ Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ “Ｂ”リパーゼ加水分解 ３０．０ｇのＣａｎｄｉｄａ Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ “Ｂ”リパーゼ（Ａｌ
ｔｕｓ Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ）を３００ｍＬの水に溶かし、３×４ｌの５０ｍＭ
炭酸水素ナトリウム水溶液（ｐＨ＝６．４）で透析した。透析の後、透析された
溶液は約３００ｍＬであった。３６０ｍＬのＰｈａｒｍａｃｉａ ＮＨＳ−活性
化Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４ Ｆａｓｔ Ｆｌｏｗを粗いガラス溶融ロートにおき
、５×４５０ｍＬ氷冷１ｍＭ塩酸ですすいだ。すすいだＮＨＳ−活性化Ｓｅｐｈ
ａｒｏｓｅを透析した酵素溶液と合わせた。得られた懸濁液を室温（約２２℃）
で２．０時間攪拌した。次いで、ｓｅｐｈａｒｏｓｅ／酵素結合体を、粗い溶融
ガラスフィルターで単離し、１０００ｍＬの１００ｍＭ ＴＲＩＳ水溶液（ｐＨ
＝７．４５）中で１５分間攪拌した。この懸濁液を濾過し、他の１０００ｍＬの
１００ｍＭ ＴＲＩＳ水性緩衝液（ｐＨ＝７．４５）とともに４℃で終夜インキ
ュベーションした。翌朝固定化酵素を濾過し、水で洗浄後、２０００ｍＬ三口丸
底フラスコに入れた。４３ｇのオリゴペプチド３８−Ｄｏｘ治療薬のメチルスク
シニルＮキャップ形態を加え、固形物を８００ｍＬ脱イオン水中に懸濁した。フ
ラスコにオーバーヘッドスターラーおよびｐＨ安定器を付け、シリンジポンプの
調節により反応混合物のｐＨを５．９〜６．２に保った。シリンジポンプには、
０．１Ｍ炭酸水素ナトリウムが充填されていた。反応の進行をＨＰＬＣによりモ
ニターした。６日後、固定化酵素を濾過し、液相を凍結乾燥した。乾燥固形物を
約１ｌの乾燥ＴＨＦ中に懸濁し、濾過した。４２．６６ｇ、物理的収率９８．３
４％、方法ＢによるＨＰＬＣ純度９３．４３％（２５４ｎｍ）、９４．４３％（
４８０ｎｍ）。 実施例２８ オリゴペプチド３８−治療薬の乳酸塩の合成［βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅ
ｕ−Ｄｏｘ乳酸塩］ ピペリジン（２６ｍＬ、２６４ｍｍｏｌ）を、オリゴペプチド３８−Ｄｏｘ治
療薬のＦｍｏｃ形態（６．００ｇ、５．３ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２６５ｍＬ）に
溶かした溶液に加えた。室温で５分攪拌の後、反応混合物を氷塩浴中におき、予
備冷却した（４℃）ｐＨ３の１０％乳酸緩衝液（６００ｍＬ）を直ちに加えた。
水溶液をＤＣＭ（３×５００ｍＬ）で抽出し、過剰な塩を固相抽出により除いた
。Ｃ１８ ＯＤＳ−Ａシリカゲル（１２０ｇ）をガラスフリット中で調整し（５
００ｍＬメタノール、２×５００ｍＬ水）、粗生成物乳酸塩の水溶液を充填した
。水で洗浄し（２×５００ｍＬ）乾燥した後、フィルターケーキをメタノールに
溶解した。メタノールを蒸発させ、残渣を水に溶解した。得られた溶液を凍結乾
燥すると、オリゴペプチド３８−Ｄｏｘ治療薬の乳酸塩３．５４ｇ（収率６７％
、ＨＰＬＣ純度方法Ｂ：８９％）が得られた。
【００８７】
実施例２９
オリゴペプチド３８−Ｄｏｘ治療薬の乳酸塩［βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅ
ｕ−Ｄｏｘ乳酸塩］から出発するオリゴペプチド３８−Ｄｏｘ治療薬のスクシニ
ルＮキャップ形態［スクシニル−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘ］
の合成 ＤＩＥＡ（４１７μＬ、２．４０ｍｍｏｌ）を、オリゴペプチド３８−Ｄｏｘ
治療薬の乳酸塩（１．２００ｇ、１．２０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（３５ｍＬ）に溶
かした溶液に加えた。室温で１５分攪拌後、無水コハク酸９７％（２）（０．１
４４ｇ、１．４４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２時間攪拌し、ＤＭＦをロータ
リーエバポレーターで除いた。残渣を、ＣＨＣｌ3／ＣＨ3ＯＨ ４／１（６ｍＬ
）の混合物に溶解し、Ｅｔ2Ｏ／ヘキサン １／１の混合物２００ｍＬを加えた
。混合物を３０分間攪拌した後、沈殿を定量紙（Ｗｈａｔｍａｎ ４２）で濾過
し、洗浄し（Ｅｔ2Ｏ／ヘキサン １／１）、風乾した。フィルターケーキを水
（１５０ｍＬ）に懸濁し、１Ｍ ＮａＯＨ（±１．２当量、１．５ｍＬ）を完全
な溶解まで滴下した（ｐＨ＝７．２）。溶液を凍結乾燥すると、１．２１８ｇの
オリゴペプチド３８−Ｄｏｘ治療薬のスクシニルＮキャップ形態が得られた（９
７％収率；ＨＰＬＣ純度方法Ｂ：８０．２％）。 実施例３０ オリゴペプチド３８−Ｄｏｘ治療薬のＦｍｏｃ形態［Ｆｍｏｃ−βＡｌａ−Ｌｅ
ｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘ］から出発するオリゴペプチド３８−Ｄｏｘ治療薬
のスクシニルＮキャップ形態［スクシニル−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ
−Ｄｏｘ］の合成 ピペリジン（２１８０μＬ、２２．０６ｍｍｏｌ）を、Ｆｍｏｃ形態のオリゴ
ペプチド３８−Ｄｏｘ治療薬（０．５０ｇ、０．４４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２１
．５ｍＬ）に溶かした溶液に加えた。室温で５分攪拌後、反応混合物を−５℃に
急速に冷却し、コハク酸無水物（２．２５ｇ、２２．５１ｍｍｏｌ）を直ちに加
えた。色が変わると同時に冷却浴を取り除き、混合物を室温で１０分間攪拌した
。ＤＭＦをロータリーエバポレーターで除き、残渣をクロロホルム（１２．５ｍ
Ｌ）に溶解した。ジエチルエーテル（３６０ｍＬ）を素早く加えた。すぐに沈殿
が生じた。沈殿をＷｈａｔｍａｎ４２濾紙で濾過し、Ｅｔ2Ｏで洗浄した。固形
物を水（１２０ｍＬ；ｐＨ＝４．１）に懸濁し、０．０２５ＭのＮａＯＨ（２０
ｍＬ、０．５３ｍｍｏｌ）を完全な溶解まで滴下した（ｐＨ＝７．４）。この溶
液を凍結乾燥すると、オリゴペプチド３８−Ｄｏｘ治療薬のスクシニルＮキャッ
プ形態が収率８９％、方法ＤによるＨＰＬＣ純度９１％で得られた。
ｕ−Ｄｏｘ乳酸塩］から出発するオリゴペプチド３８−Ｄｏｘ治療薬のスクシニ
ルＮキャップ形態［スクシニル−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘ］
の合成 ＤＩＥＡ（４１７μＬ、２．４０ｍｍｏｌ）を、オリゴペプチド３８−Ｄｏｘ
治療薬の乳酸塩（１．２００ｇ、１．２０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（３５ｍＬ）に溶
かした溶液に加えた。室温で１５分攪拌後、無水コハク酸９７％（２）（０．１
４４ｇ、１．４４ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を２時間攪拌し、ＤＭＦをロータ
リーエバポレーターで除いた。残渣を、ＣＨＣｌ3／ＣＨ3ＯＨ ４／１（６ｍＬ
）の混合物に溶解し、Ｅｔ2Ｏ／ヘキサン １／１の混合物２００ｍＬを加えた
。混合物を３０分間攪拌した後、沈殿を定量紙（Ｗｈａｔｍａｎ ４２）で濾過
し、洗浄し（Ｅｔ2Ｏ／ヘキサン １／１）、風乾した。フィルターケーキを水
（１５０ｍＬ）に懸濁し、１Ｍ ＮａＯＨ（±１．２当量、１．５ｍＬ）を完全
な溶解まで滴下した（ｐＨ＝７．２）。溶液を凍結乾燥すると、１．２１８ｇの
オリゴペプチド３８−Ｄｏｘ治療薬のスクシニルＮキャップ形態が得られた（９
７％収率；ＨＰＬＣ純度方法Ｂ：８０．２％）。 実施例３０ オリゴペプチド３８−Ｄｏｘ治療薬のＦｍｏｃ形態［Ｆｍｏｃ−βＡｌａ−Ｌｅ
ｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘ］から出発するオリゴペプチド３８−Ｄｏｘ治療薬
のスクシニルＮキャップ形態［スクシニル−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ
−Ｄｏｘ］の合成 ピペリジン（２１８０μＬ、２２．０６ｍｍｏｌ）を、Ｆｍｏｃ形態のオリゴ
ペプチド３８−Ｄｏｘ治療薬（０．５０ｇ、０．４４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（２１
．５ｍＬ）に溶かした溶液に加えた。室温で５分攪拌後、反応混合物を−５℃に
急速に冷却し、コハク酸無水物（２．２５ｇ、２２．５１ｍｍｏｌ）を直ちに加
えた。色が変わると同時に冷却浴を取り除き、混合物を室温で１０分間攪拌した
。ＤＭＦをロータリーエバポレーターで除き、残渣をクロロホルム（１２．５ｍ
Ｌ）に溶解した。ジエチルエーテル（３６０ｍＬ）を素早く加えた。すぐに沈殿
が生じた。沈殿をＷｈａｔｍａｎ４２濾紙で濾過し、Ｅｔ2Ｏで洗浄した。固形
物を水（１２０ｍＬ；ｐＨ＝４．１）に懸濁し、０．０２５ＭのＮａＯＨ（２０
ｍＬ、０．５３ｍｍｏｌ）を完全な溶解まで滴下した（ｐＨ＝７．４）。この溶
液を凍結乾燥すると、オリゴペプチド３８−Ｄｏｘ治療薬のスクシニルＮキャッ
プ形態が収率８９％、方法ＤによるＨＰＬＣ純度９１％で得られた。
【００８８】
したがって、本発明は、
（１）標的細胞中に入ることのできる治療薬
（２）（ＡＡ）n−ＡＡ4−ＡＡ3−ＡＡ2−ＡＡ1の式を有するオリゴペプチドで
あって、 上式において ＡＡはそれぞれ独立に遺伝学的にコードされたアミノ酸を表し、 ｎは０から１２の整数であり、 ＡＡ4は、遺伝学的にコードされていないアミノ酸であり、 ＡＡ3は、いかなるアミノ酸でもよく、 ＡＡ2は、いかなるアミノ酸でもよく、 ＡＡ1は、いかなるアミノ酸でもよく、 （３）全血中に存在する酵素による前記オリゴペプチドの切断を阻害する安定化
基 （４）任意にトロアーゼにより切断されない連結基 を含んでなる化合物であって、 オリゴペプチドの第一の結合部位でオリゴペプチドが直接安定化基に結合してお
り、オリゴペプチドのＡＡ1がオリゴペプチドの第二の結合部位で直接治療薬に
結合するかまたは連結基を介して間接的に治療薬に結合しており、 前記化合物が標的細胞に関連する酵素により選択的に切断されるようなプロドラ
ッグ化合物を含む。
あって、 上式において ＡＡはそれぞれ独立に遺伝学的にコードされたアミノ酸を表し、 ｎは０から１２の整数であり、 ＡＡ4は、遺伝学的にコードされていないアミノ酸であり、 ＡＡ3は、いかなるアミノ酸でもよく、 ＡＡ2は、いかなるアミノ酸でもよく、 ＡＡ1は、いかなるアミノ酸でもよく、 （３）全血中に存在する酵素による前記オリゴペプチドの切断を阻害する安定化
基 （４）任意にトロアーゼにより切断されない連結基 を含んでなる化合物であって、 オリゴペプチドの第一の結合部位でオリゴペプチドが直接安定化基に結合してお
り、オリゴペプチドのＡＡ1がオリゴペプチドの第二の結合部位で直接治療薬に
結合するかまたは連結基を介して間接的に治療薬に結合しており、 前記化合物が標的細胞に関連する酵素により選択的に切断されるようなプロドラ
ッグ化合物を含む。
【００８９】
さらに、治療薬が患者への投与用である治療薬の毒性を低減する方法であって
、 トロアーゼにより切断可能なオリゴペプチドをオリゴペプチドの第一の結合部位
で安定化基に結合し、オリゴペプチドの第二の結合部位で直接または間接的に治
療薬を結合することによる、共有結合的なプロドラッグ形成を含んでなる方法で
あって、前記プロドラッグがトロアーゼにより選択的に切断されそれによりプロ
ドラッグが患者に投与される時治療薬の毒性を低減する方法。
、 トロアーゼにより切断可能なオリゴペプチドをオリゴペプチドの第一の結合部位
で安定化基に結合し、オリゴペプチドの第二の結合部位で直接または間接的に治
療薬を結合することによる、共有結合的なプロドラッグ形成を含んでなる方法で
あって、前記プロドラッグがトロアーゼにより選択的に切断されそれによりプロ
ドラッグが患者に投与される時治療薬の毒性を低減する方法。
【００９０】
本発明は、以下の工程を含んでなるプロドラッグ化合物薬剤を作る方法を含む
： （１）Ｆｍｏｃに保護されたオリゴペプチドを、治療薬の存在下で活性化剤によ
り活性化し、Ｆｍｏｃに保護されたオリゴペプチド治療薬結合体を作る工程、 （２）Ｆｍｏｃに保護されたオリゴペプチド治療薬に塩基を接触させて脱保護す
る工程、 （３）オリゴペプチド治療薬を安定化基と反応させる工程、 （４）安定化基−オリゴペプチド治療薬結合体を、製薬上許容できる塩で中和す
る工程。
： （１）Ｆｍｏｃに保護されたオリゴペプチドを、治療薬の存在下で活性化剤によ
り活性化し、Ｆｍｏｃに保護されたオリゴペプチド治療薬結合体を作る工程、 （２）Ｆｍｏｃに保護されたオリゴペプチド治療薬に塩基を接触させて脱保護す
る工程、 （３）オリゴペプチド治療薬を安定化基と反応させる工程、 （４）安定化基−オリゴペプチド治療薬結合体を、製薬上許容できる塩で中和す
る工程。
【００９１】
本発明は、以下の工程を含んでなるプロドラッグ化合物の製造を含む：
（１）アルキルエステルに保護された安定化基オリゴペプチドを、治療薬の存在
下において活性化剤で活性化し、アルキルエステルに保護された安定化基オリゴ
ペプチド治療薬結合体を作る工程、 （２）アルキルエステルに保護された安定化基オリゴペプチド治療薬を脱保護す
る工程、 （３）安定化基オリゴペプチド治療薬を製薬上許容できる塩で中和する工程。
下において活性化剤で活性化し、アルキルエステルに保護された安定化基オリゴ
ペプチド治療薬結合体を作る工程、 （２）アルキルエステルに保護された安定化基オリゴペプチド治療薬を脱保護す
る工程、 （３）安定化基オリゴペプチド治療薬を製薬上許容できる塩で中和する工程。
【００９２】
本発明の他の態様は、以下の工程を含んでなるプロドラッグ化合物の製造方法
である： （１）トリルに保護されたオリゴペプチドを治療薬の存在下で、活性化剤で活性
化し、トリルに保護されたオリゴペプチド治療薬結合体を作る工程、 （２）トリルに保護されたオリゴペプチド治療薬結合体を、酸性条件下で、０〜
２５℃で３０〜１２０分、脱保護する工程、 （３）オリゴペプチド治療薬を安定化基と反応させる工程、 （４）安定化基−オリゴペプチド−治療薬を、製薬上許容できる塩で中和する工
程。
である： （１）トリルに保護されたオリゴペプチドを治療薬の存在下で、活性化剤で活性
化し、トリルに保護されたオリゴペプチド治療薬結合体を作る工程、 （２）トリルに保護されたオリゴペプチド治療薬結合体を、酸性条件下で、０〜
２５℃で３０〜１２０分、脱保護する工程、 （３）オリゴペプチド治療薬を安定化基と反応させる工程、 （４）安定化基−オリゴペプチド−治療薬を、製薬上許容できる塩で中和する工
程。
【００９３】
本発明の化合物は、上記の方法全てにより作られるプロドラッグを含む。
本明細書で言及された全ての出版物および特許出願書は、各出版物または特許
出願書が参照により組み込まれるよう詳細かつ個別に指示されたかのように、参
照により同じ程度に本願に組み込まれる。 本発明は完全に記載されたので、追記された特許請求の精神または範囲から逸
脱することなく、多くの変更または修正を本発明に加えられることが、当業者に
は明らかであろう。
出願書が参照により組み込まれるよう詳細かつ個別に指示されたかのように、参
照により同じ程度に本願に組み込まれる。 本発明は完全に記載されたので、追記された特許請求の精神または範囲から逸
脱することなく、多くの変更または修正を本発明に加えられることが、当業者に
は明らかであろう。
【配列表】
【図１Ａ】
略語、名前および構造の表である。
【図１Ｂ】
略語、名前および構造の表である。
【図１Ｃ】
略語、名前および構造の表である。
【図１Ｄ】
略語、名前および構造の表である。
【図２】
標的細胞の細胞外近傍のおける本発明のプロドラッグの切断の典型的な図式で
ある。
ある。
【図３】
本発明の典型的な中間体であるＦｍｏｃ−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ
の合成を表す。
の合成を表す。
【図４】
本発明の典型的な中間体であるメチル−スクシニルβＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ
−Ｌｅｕの「Ｆｍｏｃ経路」合成を表す。
−Ｌｅｕの「Ｆｍｏｃ経路」合成を表す。
【図５】
本発明の典型的な中間体であるＳｕｃ−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−
Ｄｏｘの塩の形態の「Ｆｍｏｃ経路」合成を表す。
Ｄｏｘの塩の形態の「Ｆｍｏｃ経路」合成を表す。
【図６】
本発明の典型的な中間体であるＳｕｃ−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−
Ｄｏｘの塩の形態の「コハク酸エステル経路」合成を表す。
Ｄｏｘの塩の形態の「コハク酸エステル経路」合成を表す。
【図７】
本発明の典型的な中間体である、保護基のついたβＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−
Ｌｅｕ−Ｄｏｘの合成を表す。
Ｌｅｕ−Ｄｏｘの合成を表す。
【図８】
本発明の典型的な中間体であるＳｕｃ−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−
Ｄｏｘの塩の形態の「アリルエステル経路」合成を表す。
Ｄｏｘの塩の形態の「アリルエステル経路」合成を表す。
【図９】
本発明の典型的な中間体であるＳｕｃ−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−
Ｄｏｘの「樹脂経路」合成を表す。
Ｄｏｘの「樹脂経路」合成を表す。
【図１０Ａ】
本発明のプロドラッグに有用なオリゴペプチドの表である。
【図１０Ｂ】
本発明のプロドラッグに有用なオリゴペプチドの表である。
【図１０Ｃ】
本発明のプロドラッグに有用なオリゴペプチドの表である。
【図１１】
薬剤を含む賦形剤または薬剤を含まない賦形剤を与えられた動物のマウスゼノ
グラフモデルの生存のグラフである。
グラフモデルの生存のグラフである。
【図１２】
ドキソルビシンプロドラッグおよびドキソルビシンを比較する、マウスゼノグ
ラフモデルの生存のグラフである。
ラフモデルの生存のグラフである。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考）
Ａ６１Ｋ 31/407 Ａ６１Ｋ 31/407
31/437 31/437
31/4745 31/4745
31/513 31/513
31/519 31/519
31/52 31/52
31/5517 31/5517
31/555 31/555
31/7004 31/7004
31/7028 31/7028
31/7048 31/7048
31/7064 31/7064
31/7068 31/7068
33/24 33/24
47/42 47/42
Ａ６１Ｐ 29/00 Ａ６１Ｐ 29/00
35/00 35/00
Ｃ０７Ｋ 5/10 ＺＮＡ Ｃ０７Ｋ 5/10 ＺＮＡ
7/00 7/00
(81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，
ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ
Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ
，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，
ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ
Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ
)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，
ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，
ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ
Ｒ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ
，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，
ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，Ｋ
Ｚ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ
，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，
ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，Ｓ
Ｌ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ
，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ
(72)発明者 フェルナンド，アンヌ−マリー
ベルギー国，ベー1050 ブリュッセル，ア
ブニュドゥ ラ クーロンヌ １ウー
(72)発明者 ガングウォー，サンジーブ
アメリカ合衆国，カリフォルニア 94501，
アラメダ，サード ストリート 1354，ア
パートメント 102
(72)発明者 ルイス，エバン
アメリカ合衆国，カリフォルニア 94015，
ダリー シティ，パリサデス ドライブ
166
(72)発明者 ニーダー，マシュー エイチ．
アメリカ合衆国，カリフォルニア 94010，
バーリンゲーム，エッジヒル ドライブ
1107
(72)発明者 トルエ，アンドレ
ベルギー国，ベー3009 ヘラン，プレディ
クエランセル ＃29
(72)発明者 ビスキー，ピーター
アメリカ合衆国，カリフォルニア 94002，
ベルモント，コンチネンタルズ ウェイ
1016，アパートメント 207
(72)発明者 ヤーラントン，ジョフリー ティー．
アメリカ合衆国，カリフォルニア 94010，
バーリンゲーム，バルボア アベニュ
1148
Ｆターム(参考） 4C076 AA95 BB11 CC04 CC27 CC42
EE41 FF63 FF68
4C086 AA01 AA02 BA14 CB03 CB07
CB09 CB22 EA04 EA10 EA11
MA01 MA05 MA66 NA10 NA13
NA15 ZB11 ZB26
4C206 AA01 AA02 FA23 FA53 GA02
GA30 JB16 KA01 KA06 MA01
MA05 MA86 NA10 NA13 NA15
ZB11 ZB26
4H045 AA10 AA20 AA30 BA13 BA14
BA15 BA16 BA17 BA51 BA53
EA20 FA33
Claims (67)
- 【請求項１】 （１）標的細胞中に入ることのできる治療薬 （２）（ＡＡ）n−ＡＡ4−ＡＡ3−ＡＡ2−ＡＡ1の式を有するオリゴペプチドで
あって、 上式において ＡＡはそれぞれ独立に遺伝学的にコードされたアミノ酸を表し、 ｎは０から１２の整数であり、 ＡＡ4は、遺伝学的にコードされていないアミノ酸であり、 ＡＡ3は、いかなるアミノ酸でもよく、 ＡＡ2は、いかなるアミノ酸でもよく、 ＡＡ1は、いかなるアミノ酸でもよく、 （３）全血中に存在する酵素による前記オリゴペプチドの切断を阻害する安定化
基 （４）任意にトロアーゼにより切断されない連結基 を含んでなる化合物であって、 オリゴペプチドの第一の結合部位でオリゴペプチドが直接安定化基に結合してお
り、オリゴペプチドのＡＡ1がオリゴペプチドの第二の結合部位で直接治療薬に
結合するかまたは連結基を介して間接的に治療薬に結合しており、 前記化合物が標的細胞に関連する酵素により選択的に切断される、前記化合物。 - 【請求項２】 ｎが０から８の整数である、請求項１に記載の化合物。
- 【請求項３】 標的細胞が腫瘍または炎症性細胞である、請求項１に記載の
化合物。 - 【請求項４】 標的細胞に関連する酵素がトロアーゼである、請求項１に記
載の化合物。 - 【請求項５】 トロアーゼが、治療薬のために標的細胞の細胞外近傍に存在
する、請求項４に記載の化合物。 - 【請求項６】 トロアーゼが、オリゴペプチドのＡＡ3とＡＡ2の間の結合を
切断する、請求項４に記載の化合物。 - 【請求項７】 プロドラッグの活性部分が、トロアーゼによる切断前よりも
トロアーゼによる切断後では標的細胞に浸透しやすく、活性部分が少なくとも治
療薬を含んでいる、活性部分を有するプロドラッグである請求項４に記載の化合
物。 - 【請求項８】 プロドラッグの活性部分が治療薬からなる、請求項７に記載
の化合物。 - 【請求項９】 プロドラッグの活性部分が、治療薬および少なくとも連結基
を含む、請求項７に記載の化合物。 - 【請求項１０】 プロドラッグの活性部分が治療薬およびオリゴペプチドの
ＡＡ1を含む、請求項７に記載の化合物。 - 【請求項１１】 ＡＡ1に結合したオリゴペプチドのＡＡ2をさらに含んでな
る、請求項９に記載の化合物。 - 【請求項１２】 オリゴペプチドが、以下のものから選択される、請求項１
に記載の化合物：Ｄ−ＡｌａＴｈｉβＡｌａβＡｌａＬｅｕＡｌａＬｅｕ（ＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：１）、ＴｈｉβＡｌａβＡｌａＬｅｕＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：２）、βＡｌａβＡｌａＬｅｕＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ
：３）、βＡｌａＡｌａＡｌａＩｌｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）、βＡｌａＡ
ｌａＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５）、βＡｌａＰｈｅＴｙｒＬｅｕ（
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６）、βＡｌａＰｈｅＴｈｒＰｈｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ
：７）、βＡｌａＰｈｅＧｌｙＩｌｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８）、βＡｌａＰ
ｈｅＧｌｙＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９）、βＡｌａＰｈｅＰｈｅＰｈｅ（
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）、βＡｌａＰｈｅＰｈｅＩｌｅ（ＳＥＱ ＩＤ Ｎ
Ｏ：１１）、βＡｌａＰｈｅＰｈｅＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２）、βＡ
ｌａＰｈｅＡｌａＩｌｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１３）、βＡｌａＰｈｅＡｌａ
Ｌｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１４）、ＴｈｉＧｌｙＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ Ｉ
Ｄ ＮＯ：１５）、ＮａｌＧｌｙＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１６）、
βＡｌａＬｅｕＴｙｒＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１７）、βＡｌａＬｅｕＴ
ｈｉＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１８）、βＡｌａＬｅｕＴｈｒＰｈｅ（ＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：１９）、βＡｌａＬｅｕＴｈｒＩｌｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
２０）、βＡｌａＬｅｕＴｈｒＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２１）、βＡｌａ
ＬｅｕＳｅｒＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２２）、βＡｌａＬｅｕＰｙｒＬｅ
ｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２３）、βＡｌａＬｅｕＬｅｕＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：２４）、βＡｌａＬｅｕＧｌｙＰｈｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２５）、
βＡｌａＬｅｕＧｌｙＩｌｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２６）、ＴｈｉＬｅｕＧｌ
ｙＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２７）、βＡｌａＬｅｕＧｌｙＬｅｕ（ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：２８）、ＡｉｂＬｅｕＧｌｙＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２９
）、βＡｌａＬｅｕＰｈｅＩｌｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０）、βＡｌａＬｅ
ｕＰｈｅＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３１）、βＡｌａＬｅｕＡｉｂＬｅｕ（
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３２）、βＡｌａＬｅｕＡｌａＡｌａ（ＳＥＱ ＩＤ Ｎ
Ｏ：３３）、βＡｌａＬｅｕＡｌａβＡｌａ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３４）、β
ＡｌａＬｅｕＡｌａＰｈｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３５）、βＡｌａＬｅｕＡｌ
ａＧｌｙ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３６）、βＡｌａＬｅｕＡｌａＩｌｅ（ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：３７）、βＡｌａＬｅｕＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３
８）、ＴｉｃＬｅｕＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３９）、ＴｈｚＬｅｕ
ＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４０）、ＴｈｉＬｅｕＡｌａＬｅｕ（ＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：４１）、ＮａｌＬｅｕＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４
２）、ＮＡＡＬｅｕＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４３）、Ｄ−ＬｅｕＬ
ｅｕＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４４）、Ｄ−ＡｌａＬｅｕＡｌａＬｅ
ｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４５）、Ｄ−ＭｅｔＬｅｕＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ Ｉ
Ｄ ＮＯ：４６）、ＡＰＰＬｅｕＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４７）、
ＡｍｂＬｅｕＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４８）、βＡｌａＬｅｕＡｌ
ａＮａｌ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４９）、βＡｌａＬｅｕＡｌａＳｅｒ（ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：５０）、βＡｌａＬｅｕＡｌａＴｙｒ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５
１）、βＡｌａＭｅｔＴｙｒＰｈｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５２）、βＡｌａＭ
ｅｔＴｙｒＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５３）、βＡｌａＭｅｔＧｌｙＩｌｅ
（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５４）、ＴｈｉＭｅｔＧｌｙＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ Ｎ
Ｏ：５５）、βＡｌａＭｅｔＰｈｅＰｈｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５６）、βＡ
ｌａＭｅｔＰｈｅＩｌｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５７）、ＴｉｃＭｅｔＡｌａＬ
ｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５８）、ＮａｌＭｅｔＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：５９）、ＮＡＡＭｅｔＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６０）、β
ＡｌａＭｅｔＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６１）、ＡＰＰＭｅｔＡｌａ
Ｌｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６２）、βＡｌａＮｌｅＴｙｒＩｌｅ（ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：６３）、βＡｌａＮｌｅＴｙｒＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６４
）、βＡｌａＮｌｅＴｈｒＩｌｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６５）、βＡｌａＮｌ
ｅＴｈｒＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６６）、βＡｌａＮｌｅＧｌｙＰｈｅ（
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６７）、βＡｌａＮｌｅＧｌｙＩｌｅ（ＳＥＱ ＩＤ Ｎ
Ｏ：６８）、βＡｌａＮｌｅＧｌｙＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６９）、βＡ
ｌａＮｌｅＰｈｅＩｌｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７０）、βＡｌａＮｌｅＡｌａ
Ｉｌｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７１）、βＡｌａＮｌｅＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：７２）、βＡｌａＮｌｅＡｌａＰｈｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７３
）、βＡｌａＮｖａＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７４）、βＡｌａＰｈ
ｅＴｙｒＩｌｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７５）、ＴｈｉＰｒｏＧｌｙＬｅｕ（Ｓ
ＥＱ ＩＤ ＮＯ：７６）、ＴｈｉＰｒｏＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
７７）、ＮａｌＰｒｏＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７８）、βＡｌａＰ
ｒｏＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：７９）、βＡｌａＰｈｅ（Ｃｌ）Ａｌ
ａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８０）、βＡｌａＰｈｅ（ＮＯ2）ＡｌａＩｌ
ｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８１）、βＡｌａＰｈｅ（ＮＯ2）ＡｌａＬｅｕ（Ｓ
ＥＱ ＩＤ ＮＯ：８２）、βＡｌａＰｈｇＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ
：８３）、βＡｌａＰｙｒＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８４）、Ｔｉｃ
ＴｈｒＧｌｙＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８５）、βＡｌａＴｈｉＧｌｙＩｌ
ｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８６）、βＡｌａＴｈｉＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：８７）、βＡｌａＴｉｃＡｌａＩｌｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８８）、
βＡｌａＴｉｃＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８９）、βＡｌａＶａｌＡ
ｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９０）、βＡｌａＴｒｐＡｌａＬｅｕ（ＳＥ
Ｑ ＩＤ ＮＯ：９１）、βＡｌａＴｙｒＴｙｒＰｈｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
９２）、βＡｌａＴｙｒＴｙｒＩｌｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９３）、βＡｌａ
ＴｙｒＴｙｒＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９４）、βＡｌａＴｙｒＴｈｒＬｅ
ｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９５）、βＡｌａＴｙｒＰｈｅＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：９６）、βＡｌａＴｙｒＧｌｙＩｌｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９７）、
ＴｈｉＴｙｒＧｌｙＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９８）、βＡｌａＴｙｒＧｌ
ｙＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９９）、βＡｌａＴｙｒＰｈｅＩｌｅ（ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：１００）、βＡｌａＴｙｒＡｌａＩｌｅ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：
１０１）、ＴｈｉＴｙｒＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０２）およびβ
ＡｌａＴｙｒＡｌａＬｅｕ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０３）。 - 【請求項１３】 オリゴペプチドのＡＡ1が、フェニルアラニン、イソロイ
シン、アラニン、グリシン、チロシン、２−ナフチルアラニン、セリンおよびβ
アラニンから選択される、請求項１に記載の化合物。 - 【請求項１４】 オリゴペプチドのＡＡ2が、ロイシン、チロシン、グリシ
ン、セリン、３−ピリジルアラニン、２−チエニルアラニン、アミノイソ酪酸、
スレオニンおよびフェニルアラニンから選択される、請求項１に記載の化合物。 - 【請求項１５】 オリゴペプチドのＡＡ3が、ロイシン、チロシン、フェニ
ルアラニン、ｐ−Ｃｌ−フェニルアラニン、ｐ−ニトロフェニルアラニン、バリ
ン、ノルロイシン、ノルバリン、フェニルグリシン、トリプトファン、テトラヒ
ドロイソキノリン−３−カルボン酸、３−ピリジルアラニン、アラニン、グリシ
ン、チエニルアラニン、メチオニン、バリンおよびプロリンから選択される、請
求項１に記載の化合物。 - 【請求項１６】 オリゴペプチドのＡＡ4が、βアラニン、チアゾリジン−
４−カルボン酸、２−チエニルアラニン、２−ナフチルアラニン、Ｄ−アラニン
、Ｄ−ロイシン、Ｄ−メチオニン、Ｄ−フェニルアラニン、３−アミノ−３−フ
ェニルプロピオン酸、γ−アミノ酪酸、３−アミノ−４，４−ジフェニル酪酸、
テトラヒドロイソキノリン−３−カルボン酸、４−アミノメチル安息香酸および
アミノイソ酪酸から選択される、請求項１に記載の化合物。 - 【請求項１７】 安定化基が、ジカルボン酸または高次のカルボン酸である
、請求項１に記載の化合物。 - 【請求項１８】 安定化基が、コハク酸、ジグリコール酸、マレイン酸、ポ
リエチレングリコール、ピログルタミン酸およびグルタル酸から選択される、請
求項１に記載の化合物。 - 【請求項１９】 安定化基が炭素数４以上の遺伝学的にコードされていない
アミノ酸である、請求項１に記載の化合物。 - 【請求項２０】 安定化基が、アスパラギン酸のβカルボキシ基でオリゴペ
プチドに結合しているアスパラギン酸またはグルタミン酸のγカルボキシ基でオ
リゴペプチドに結合しているグルタミン酸である、請求項１に記載の化合物。 - 【請求項２１】 治療上有効な投与量の治療薬を患者に投与すると、患者の
体内で治療薬の凝集が起こる場合、安定化基が負に帯電または中性である、請求
項１に記載の化合物。 - 【請求項２２】 治療上有効な投与量で患者の静脈中に投与されると治療薬
が凝集する場合、安定化基が負に帯電または中性である、請求項２１に記載の化
合物。 - 【請求項２３】 患者に投与される時、安定化基が、化合物と血管中に並ぶ
内皮細胞との間の相互作用を低減する、請求項１に記載の化合物。 - 【請求項２４】 治療薬が、アルキル化剤、増殖抑制薬、チュービュリン結
合剤、ビンカアルカロイド、エネジイン、ポドフィロトキシンまたはポドフィロ
トキシン誘導体、プテリジン族の薬剤、タキサン、アントラサイクリン、ドラス
タチン、トポイソメラーゼインヒビター、シスプラチンから選択される、請求項
１に記載の化合物。 - 【請求項２５】 治療薬が、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ビンブラス
チン、ビンクリスチン、カリケアマイシン、エトポシド、エトポシドホスフェー
ト、ＣＣ−１０６５、デュオカマイシン、ＫＷ−２１８９、メトトレキセート、
メトプテリン、アミノプテリン、ジクロロメトトレキセート、ドセタキセル、パ
クリタキセル、エピチオロン、コンブレタスタチン、コンブレタスタチンＡ4ホ
スフェート、ドラスタチン１０、ドラスタチン１１、ドラスタチン１５、トポテ
カン、キャンプトテカン、マイトマイシンＣ、ポルフィロマイシン、５−フルオ
ロウラシル、６−メルカプトプリン、フルダラビン、タモキシフェン、シトシン
アラビノシッド、アデノシンアラビノシッド、コルヒチン、カルボプラチン、マ
イトマイシンＣ、ブレオマイシン、メルファランあるいはこれらの誘導体または
類似体から選択される、請求項１に記載の化合物。 - 【請求項２６】 治療薬が、細胞内活性部位を有する、請求項１に記載の化
合物。 - 【請求項２７】 オリゴペプチドのＡＡ1が治療薬に直接結合している、請
求項１に記載の化合物。 - 【請求項２８】 オリゴペプチド配列のＡＡ1が連結基を介してオリゴペプ
チドの第二の結合部位で治療薬に間接的に結合し、連結基がアミノカプロン酸、
ヒドラジド基、エステル基、エーテル基およびメルカプト基から選択される、請
求項１に記載の化合物。 - 【請求項２９】 （１）（ａ）標的細胞に入ることのできる治療薬、 （ｂ）（ＡＡ）n−ＡＡ4−ＡＡ3−ＡＡ2−ＡＡ1の式を有するオリゴペプチドで
あって、 上式において ＡＡはそれぞれ独立に遺伝学的にコードされたアミノ酸を表し、 ｎは０から１２の整数であり、 ＡＡ4は、遺伝学的にコードされていないアミノ酸であり、 ＡＡ3は、いかなるアミノ酸でもよく、 ＡＡ2は、いかなるアミノ酸でもよく、 ＡＡ1は、いかなるアミノ酸でもよく、 （ｃ）全血中に存在する酵素による前記オリゴペプチドの切断を阻害する安定化
基 （ｄ）任意にトロアーゼにより切断されない連結基 を含んでなる化合物であって、 オリゴペプチドの第一の結合部位でオリゴペプチドが直接安定化基に結合してお
り、オリゴペプチドのＡＡ1がオリゴペプチドの第二の結合部位で直接治療薬に
結合するかまたは連結基を介して間接的に治療薬に結合しており、 前記化合物が標的細胞に関連する酵素により選択的に切断される化合物および （２）製薬上許容できるキャリアーを含んでなる薬剤組成物。 - 【請求項３０】 治療薬が患者への投与用である治療薬の毒性を低減する方
法であって、トロアーゼにより切断可能なオリゴペプチドをオリゴペプチドの第
一の結合部位で安定化基に結合し、オリゴペプチドの第二の結合部位で直接また
は間接的に治療薬を結合することによる、共有結合的なプロドラッグ形成を含ん
でなる方法であって、前記プロドラッグがトロアーゼにより選択的に切断されそ
れによりプロドラッグが患者に投与される時治療薬の毒性を低減する方法。 - 【請求項３１】 プロドラッグが、プロドラッグ結合のない治療薬の投与量
に比べて、より多い投与量の治療薬を患者に投与することを可能とする、請求項
３０に記載の方法。 - 【請求項３２】 請求項３０の方法により形成されたプロドラッグ。
- 【請求項３３】 （１）Ｆｍｏｃに保護されたオリゴペプチドを、治療薬の
存在下で活性化剤により活性化し、Ｆｍｏｃに保護されたオリゴペプチド治療薬
結合体を作る工程、 （２）Ｆｍｏｃに保護されたオリゴペプチド治療薬に塩基を接触させて脱保護す
る工程、 （３）オリゴペプチド治療薬を安定化基と反応させる工程、 （４）安定化基−オリゴペプチド治療薬結合体を、製薬上許容できる塩で中和す
る工程を含んでなるプロドラッグ化合物薬剤の製造方法。 - 【請求項３４】 オリゴペプチドがβＡｌａＬｅｕＡｌａＬｅｕのＦｍｏｃ
形態である、請求項３３に記載の方法。 - 【請求項３５】 治療薬がアントラサイクリンである、請求項３３に記載の
方法。 - 【請求項３６】 Ｆｍｏｃに保護されたオリゴペプチドを活性化剤により活
性化させる工程が、活性化剤をＨＡＴＵ、ＨＢＴＵ、ＤＣＣ、ＤＩＣ、ＤＣＣ＋
ＨＯＢｔ、ＥＤＣ、ＯＳｕおよびＰｙＢＯＰから選択することをさらに含んでな
る、請求項３３に記載の方法。 - 【請求項３７】 Ｆｍｏｃに保護されたオリゴペプチドを活性化する工程が
、ＨＡＴＵまたはＨＢＴＵ活性化剤を用いる、請求項３３に記載の方法。 - 【請求項３８】 Ｆｍｏｃに保護されたオリゴペプチド治療薬を脱保護する
工程が、ピペリジン、ＤＢＵ、ＤＢＮ、ＤＢＯ、トリエチルアミンまたはＮａＯ
Ｈから選択することをさらに含んでなる、請求項３３に記載の方法。 - 【請求項３９】 オリゴペプチドを治療薬に活性化する工程が、カオトロピ
ック試薬で飽和した溶媒を用いることをさらに含んでなる、請求項３３に記載の
方法。 - 【請求項４０】 オリゴペプチドを治療薬にカップリングする工程が、カオ
トロピック試薬、尿素で飽和した溶媒ＤＭＦを使用することをさらに含んでなる
、請求項３３に記載の方法。 - 【請求項４１】 オリゴペプチド治療薬を安定化基と反応させる工程が、安
定化基の無水物または活性化エステルを用いる、請求項３３に記載の方法。 - 【請求項４２】 請求項３３の方法により作られた組成物。
- 【請求項４３】 （１）アルキルエステルに保護された安定化基オリゴペプ
チドを、治療薬の存在下において活性化剤で活性化し、アルキルエステルに保護
された安定化基オリゴペプチド治療薬結合体を作る工程、 （２）アルキルエステルに保護された安定化基オリゴペプチド治療薬を脱保護す
る工程、 （３）安定化基オリゴペプチド治療薬を製薬上許容できる塩で中和する工程を含
んでなるプロドラッグ化合物の製造方法。 - 【請求項４４】 アルキルエステルで保護された安定化基オリゴペプチドが
、メチルまたはエチルエステル基で保護されている、請求項４３に記載の方法。 - 【請求項４５】 オリゴペプチドがメチルスクシニルで保護されたβＡｌａ
ＬｅｕＡｌａＬｅｕである、請求項４３に記載の方法。 - 【請求項４６】 治療薬がアントラサイクリンである、請求項４３に記載の
方法。 - 【請求項４７】 アルキルエステルに保護された安定化基オリゴペプチドを
活性化剤により活性化させる工程が、ＨＡＴＵ、ＨＢＴＵ、ＤＣＣ、ＤＩＣ、Ｄ
ＣＣ＋ＨＯＢｔ、ＥＤＣ、ＯＳｕおよびＰｙＢＯＰから選択することを含んでな
る、請求項４３に記載の方法。 - 【請求項４８】 アルキルエステルで保護された安定化基オリゴペプチド治
療薬結合体を脱保護する工程が、エステラーゼ、ＣＨＩＲＯ ＣＬＥＣ−ＰＣ（
商標）、ブタ肝臓エステラーゼ、Ｃａｎｄｉｄａ Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ Ｂリ
パーゼおよびＳｅｐｈａｒｏｓｅ固定化Ｃａｎｄｉｄａ Ａｎｔａｒｃｔｉｃａ
Ｂリパーゼから選択された酵素で脱保護することをさらに含んでなる、請求項
４３に記載の方法。 - 【請求項４９】 アルキルエステルで保護された安定化基オリゴペプチドを
活性化させる工程が、カオトロピック試薬で飽和した溶媒を用いることをさらに
含んでなる、請求項４３に記載の方法。 - 【請求項５０】 オリゴペプチドを治療薬に活性化する工程が、カオトロピ
ック試薬、尿素で飽和した溶媒ＤＭＦを使用することをさらに含んでなる、請求
項４３に記載の方法。 - 【請求項５１】 アルキルエステルで保護された安定化基オリゴペプチド治
療薬の濃度が、結合溶媒および脱保護溶媒中で１〜２５％である、請求項４３に
記載の方法。 - 【請求項５２】 アルキルエステル保護基がアルキルヘミスクシニルエステ
ルである、請求項４３に記載の方法。 - 【請求項５３】 アルキルエステルで保護された安定化基オリゴペプチド治
療薬を脱保護する工程が、Ｐｄ（Ｐ（Ｐｈ3）4）を用いて脱保護することをさら
に含んでなる、請求項４３に記載の方法。 - 【請求項５４】 請求項４３に記載の方法により作られた組成物。
- 【請求項５５】 （１）トリルに保護されたオリゴペプチドを治療薬の存在
下で、活性化剤で活性化し、トリルに保護されたオリゴペプチド治療薬結合体を
作る工程、 （２）トリルに保護されたオリゴペプチド治療薬結合体を、酸性条件下で、０〜
２５℃で３０〜１２０分、脱保護する工程、 （３）オリゴペプチド治療薬を安定化基と反応させる工程、 （４）安定化基−オリゴペプチド−治療薬を、製薬上許容できる塩で中和する工
程を含んでなるプロドラッグ化合物の製造方法。 - 【請求項５６】 オリゴペプチドがトリル形態のβＡｌａＬｅｕＡｌａＬｅ
ｕである、請求項５５に記載の方法。 - 【請求項５７】 治療薬がアントラサイクリンである、請求項５５に記載の
方法。 - 【請求項５８】 トリルに保護されたオリゴペプチドを活性化剤により活性
化させる工程が、活性化剤をＨＡＴＵ、ＨＢＴＵ、ＤＣＣ、ＤＩＣ、ＤＣＣ＋Ｈ
ＯＢｔ、ＥＤＣ、ＯＳｕおよびＰｙＢＯＰから選択することをさらに含んでなる
、請求項５５に記載の方法。 - 【請求項５９】 オリゴペプチドを治療薬に活性化する工程が、カオトロピ
ック試薬で飽和した溶媒を使用することをさらに含んでなる、請求項５５に記載
の方法。 - 【請求項６０】 活性化の工程が、カオトロピック試薬としての尿素で飽和
した溶媒ＤＭＦをさらに含んでなる、請求項５９に記載の方法。 - 【請求項６１】 オリゴペプチド治療薬を安定化基と反応させる工程が、安
定化基の無水物または活性化エステルの使用をさらに含んでなる、請求項５５に
記載の方法。 - 【請求項６２】 オリゴペプチド治療薬を安定化基と反応させる工程が、安
定化基としてコハク酸無水物またはグルタル酸無水物あるいはコハク酸またはグ
ルタル酸のそれぞれのメチルヘミエステルを使用することをさらに含んでなる、
請求項６１に記載の方法。 - 【請求項６３】 安定化基−オリゴペプチド−治療薬を中和する工程が、製
薬上許容できる塩として炭酸水素ナトリウム結合体を使用することをさらに含ん
でなる、請求項５５に記載の方法。 - 【請求項６４】 トリルに保護されたオリゴペプチド治療薬結合体の濃度が
、結合溶媒中で１〜２５％である、請求項５５に記載の方法。 - 【請求項６５】 請求項５５の方法により製造された組成物。
- 【請求項６６】 Ｓｕｃ−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘ、Ｓ
ｕｃ−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｎｒおよびグルタリル−βＡｌａ
−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘから選択される化合物。 - 【請求項６７】 βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘ、トリチル−
βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘ、ジフェニルメチル−βＡｌａ−Ｌ
ｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘ、ベンジロキシカルボニル−βＡｌａ−Ｌｅｕ−
Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘ、Ｆｍｏｃ−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ＯＢ
ｎ、βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ＯＢｎ、メチル−スクシニル−βＡｌ
ａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ＯＢｎ、メチル−スクシニル−βＡｌａ−Ｌｅｕ
−Ａｌａ−Ｌｅｕ、Ｆｍｏｃ−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ、Ｆｍｏｃ−
Ｔｈｉ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ、Ｆｍｏｃ−βＡＬａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅ
ｕ−Ｄｎｒ、Ｆｍｏｃ−Ｔｈｉ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｄｎｒ、Ｓｕｃ−Ｔ
ｈｉ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｄｎｒ、Ｇｌ−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌ
ｅｕ−Ｄｏｘ、βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘ乳酸エステル、アリ
ル−スクシニル−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘ、Ｓｕｃ−βＡｌ
ａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ、Ｓｕｃ−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕのメ
チルエステル、Ｆｍｏｃ−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘ、メチル
−スクシニル−βＡｌａ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｄｏｘおよびアリルヘミス
クシネートから選択された化合物。
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US11179398P | 1998-12-11 | 1998-12-11 | |
| US60/111,793 | 1998-12-11 | ||
| US11931299P | 1999-02-08 | 1999-02-08 | |
| US60/119,312 | 1999-02-08 | ||
| PCT/US1999/030393 WO2000033888A2 (en) | 1998-12-11 | 1999-12-10 | Prodrug compounds and process for preparation thereof |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2003518000A true JP2003518000A (ja) | 2003-06-03 |
Family
ID=26809248
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000586378A Pending JP2003518000A (ja) | 1998-12-11 | 1999-12-10 | プロドラッグ化合物およびその調製方法 |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP1144011B1 (ja) |
| JP (1) | JP2003518000A (ja) |
| AT (1) | ATE460180T1 (ja) |
| AU (1) | AU773420B2 (ja) |
| CA (1) | CA2354766A1 (ja) |
| CY (1) | CY1111094T1 (ja) |
| DE (1) | DE69942128D1 (ja) |
| DK (1) | DK1144011T3 (ja) |
| ES (1) | ES2342637T3 (ja) |
| HK (1) | HK1039272A1 (ja) |
| IL (2) | IL143666A0 (ja) |
| NZ (1) | NZ512171A (ja) |
| PT (1) | PT1144011E (ja) |
| WO (1) | WO2000033888A2 (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2004510703A (ja) * | 2000-06-14 | 2004-04-08 | メダレックス，インコーポレイティド | 酵素−分解性プロドラッグ化合物 |
| JP2016509586A (ja) * | 2012-12-28 | 2016-03-31 | ライフ サイエンシーズ リサーチ パートナーズ ヴェーゼットウェーＬｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐａｒｔｎｅｒｓ Ｖｚｗ | 最小毒性プロドラッグ |
| US9913822B2 (en) | 2012-04-04 | 2018-03-13 | Halozyme, Inc. | Combination therapy with an anti-hyaluronan agent and therapeutic agent |
Families Citing this family (45)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DK1045897T3 (da) | 1998-01-23 | 2002-05-13 | Newbiotics Inc | Enzymatisk katalyserede, terapeutiske midler |
| US7462605B2 (en) | 1998-01-23 | 2008-12-09 | Celmed Oncology (Usa), Inc. | Phosphoramidate compounds and methods of use |
| BR9912053A (pt) | 1998-07-13 | 2001-04-03 | Univ Texas | Processos de tratamento de câncer utilizando conjugados terapêuticos que se ligam a aminofosfolipìdios |
| US6818213B1 (en) | 1998-07-13 | 2004-11-16 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Cancer treatment compositions comprising therapeutic conjugates that bind to aminophospholipids |
| US7425541B2 (en) | 1998-12-11 | 2008-09-16 | Medarex, Inc. | Enzyme-cleavable prodrug compounds |
| JP2002544242A (ja) | 1999-05-14 | 2002-12-24 | ベーリンガー インゲルハイム ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド | 酵素活性化抗腫瘍プロドラッグ化合物 |
| US6613879B1 (en) | 1999-05-14 | 2003-09-02 | Boehringer Ingelheim Pharma Kg | FAP-activated anti-tumour compounds |
| WO2001007087A2 (en) * | 1999-07-22 | 2001-02-01 | Newbiotics, Inc. | Enzyme catalyzed anti-infective therapeutic agents |
| US6683061B1 (en) | 1999-07-22 | 2004-01-27 | Newbiotics, Inc. | Enzyme catalyzed therapeutic activation |
| WO2001007088A2 (en) * | 1999-07-22 | 2001-02-01 | Newbiotics, Inc. | Methods for treating therapy-resistant tumors |
| DE10018617A1 (de) * | 2000-01-13 | 2001-10-31 | Joerg G Moser | Cyclodextrin-Dimere mit Peptid-Spacerstrukturen zur Entgiftung von pharmazeutischen Wirkstoffen hohen Nebenwirkungspotentials |
| EP1263473A2 (en) | 2000-03-15 | 2002-12-11 | Bristol-Myers Squibb Pharma Company | Peptidase-cleavable, targeted antineoplastic drugs and their therapeutic use |
| JP2004510702A (ja) * | 2000-06-14 | 2004-04-08 | メダレックス，インコーポレイティド | イソロイシンを有するプロドラッグ化合物 |
| CA2411545A1 (en) * | 2000-06-14 | 2002-01-03 | Medarex, Inc. | Tripeptide prodrug compounds |
| US7402556B2 (en) | 2000-08-24 | 2008-07-22 | Medarex, Inc. | Prodrugs activated by plasmin and their use in cancer chemotherapy |
| YU29803A (sh) * | 2000-10-27 | 2006-05-25 | Aventis Pharma S.A. | Kombinacija kamptotekina i derivata stilbena za lečenje raka |
| JP2006516948A (ja) * | 2000-11-14 | 2006-07-13 | ニュー リバー ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド | 硫酸アバカビルを含有する新規な薬剤化合物および同化合物の製造ならびに使用方法 |
| WO2002060488A1 (en) * | 2001-01-30 | 2002-08-08 | Universite Catholique De Louvain | Anti-tumor compounds |
| KR20030033007A (ko) | 2001-05-31 | 2003-04-26 | 코울터 파머수티컬, 인코포레이티드 | 세포독소, 약물전구체, 링커 및 이에 유용한 안정화제 |
| CA2450316A1 (en) * | 2001-06-11 | 2002-12-19 | Medarex, Inc. | Cd10-activated prodrug compounds |
| FR2825928B1 (fr) * | 2001-06-18 | 2004-04-02 | Ecole Norm Superieure Cachan | Composition pharmaceutique pour le diagnostic, la prevention ou le traitement d'une pathologie tumorale, comprenant un agent modulateur de l'etat polymerisation de l'actine |
| WO2003094972A2 (en) * | 2002-05-10 | 2003-11-20 | Boehringer Ingelheim Pharma Gmbh & Co Kg | Fap-activated anti-tumor prodrugs |
| US7384909B2 (en) | 2002-07-15 | 2008-06-10 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Anti-viral treatment methods using phosphatidylethanolamine-binding peptides linked to anti-viral agents |
| US7678386B2 (en) | 2002-07-15 | 2010-03-16 | Board Of Regents The University Of Texas | Liposomes coated with selected antibodies that bind to aminophospholipids |
| US7511124B2 (en) | 2002-07-15 | 2009-03-31 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Compositions comprising phosphatidylethanolamine-binding peptides linked to anti-viral agents |
| US7378386B2 (en) | 2002-07-15 | 2008-05-27 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Anti-viral treatment methods using phosphatidylethanolamine-binding peptide derivatives |
| US7879801B2 (en) * | 2002-07-15 | 2011-02-01 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Compositions comprising cell-impermeant duramycin derivatives |
| ATE430593T1 (de) | 2003-10-28 | 2009-05-15 | Medtronic Inc | Verfahren zur herstellung von vernetzten materialien und bioprothetischen vorrichtungen |
| EP3075247B1 (en) | 2004-02-02 | 2022-10-12 | BioSight Ltd. | Conjugates for cancer therapy and diagnosis |
| WO2006095345A2 (en) | 2005-03-08 | 2006-09-14 | Ramot At Tel-Aviv University Ltd. | Targeted drug-carrying bacteriophages |
| JP2009529522A (ja) * | 2006-03-10 | 2009-08-20 | ディアト | 酵素で切断可能なリンカーを介して抗体に複合された抗癌剤 |
| BRPI0717902A2 (pt) | 2006-12-01 | 2013-10-29 | Medarex Inc | "anticorpo monoclonal humano isolado, composição, conjugado anticorpo-molécula parceria, imunoconjugado, molécula de ácido nucléico isolada, vetor de expressão, célula hospedeira, método para prepar um anticorpo anti-cd22, método para inibir o desenvolvimento de uma célula tumoral que expressa cd22 e método para tratar uma doença inflamatória ou autoimuneem um indivíduo" |
| CL2007003622A1 (es) | 2006-12-13 | 2009-08-07 | Medarex Inc | Anticuerpo monoclonal humano anti-cd19; composicion que lo comprende; y metodo de inhibicion del crecimiento de celulas tumorales. |
| MX2009006277A (es) | 2006-12-14 | 2009-07-24 | Medarex Inc | Anticuerpos humanos que se enlazan a cd70 y usos de los mismos. |
| TWI412367B (zh) | 2006-12-28 | 2013-10-21 | Medarex Llc | 化學鏈接劑與可裂解基質以及其之綴合物 |
| TW200900059A (en) | 2007-02-21 | 2009-01-01 | Medarex Inc | Chemical linkers with single amino acids and conjugates thereof |
| EP1977765A1 (en) * | 2007-04-03 | 2008-10-08 | Diatos | Peptide prodrugs |
| US10087221B2 (en) | 2013-03-21 | 2018-10-02 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Synthesis of hydantoin containing peptide products |
| AU2014234314B2 (en) | 2013-03-21 | 2018-02-15 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Synthesis of cyclic imide containing peptide products |
| WO2014197816A1 (en) * | 2013-06-06 | 2014-12-11 | Massachusetts Institute Of Technology | Stimulus responsive nanocomplexes and methods of use thereof |
| CN108431017B (zh) | 2015-12-03 | 2021-12-21 | 拜欧赛特有限公司 | 用于癌症疗法的缀合物的盐 |
| BR112018011177A2 (pt) | 2015-12-03 | 2018-11-21 | Biosight Ltd | conjugados de citarabina para terapia de câncer |
| CN109021065B (zh) * | 2017-06-08 | 2021-10-01 | 复旦大学 | 一种制备海兔毒素Dolastatin10的方法 |
| CA3203072A1 (en) | 2020-12-22 | 2022-06-30 | Andrea CASAZZA | Compounds comprising a tetrapeptidic moiety |
| WO2022167664A1 (en) | 2021-02-07 | 2022-08-11 | Cobiores Nv | Compounds comprising a tetrapeptidic moiety |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH10508291A (ja) * | 1994-08-19 | 1998-08-18 | ラ レフィオン バロンネ | 化合物、製剤用組成物及びこれらを含む診断装置とこれらの利用 |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0037388B1 (fr) * | 1980-03-31 | 1984-12-12 | Institut International De Pathologie Cellulaire Et Moleculaire | Formes pharmaceutiques, leur préparation et les compositions qui les contiennent |
| US5155210A (en) * | 1990-09-11 | 1992-10-13 | Brunswick Corporation | Methods of conjugating actinomycin d |
| DE69425464T2 (de) * | 1993-02-26 | 2001-05-23 | Drug Delivery System Inst Ltd | Polysaccharidderivat und wirkstoffträger |
| CA2265476A1 (en) * | 1996-09-12 | 1998-03-19 | Merck & Co., Inc. | Conjugates useful in the treatment of prostate cancer |
| HRP970566A2 (en) * | 1996-10-30 | 1998-08-31 | Jones Deborah Defeo | Conjugates useful in the treatment of prostate canser |
| US6265540B1 (en) * | 1997-05-19 | 2001-07-24 | The Johns Hopkins University School Of Medicine | Tissue specific prodrug |
| WO1999002175A1 (en) * | 1997-07-10 | 1999-01-21 | Merck & Co., Inc. | Conjugates useful in the treatment of prostate cancer |
| EP1036093A1 (en) * | 1997-12-02 | 2000-09-20 | Merck & Co., Inc. | Conjugates useful in the treatment of prostate cancer |
-
1999
- 1999-12-10 AU AU23733/00A patent/AU773420B2/en not_active Ceased
- 1999-12-10 WO PCT/US1999/030393 patent/WO2000033888A2/en active IP Right Grant
- 1999-12-10 ES ES99967462T patent/ES2342637T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1999-12-10 CA CA002354766A patent/CA2354766A1/en not_active Abandoned
- 1999-12-10 JP JP2000586378A patent/JP2003518000A/ja active Pending
- 1999-12-10 DE DE69942128T patent/DE69942128D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1999-12-10 EP EP99967462A patent/EP1144011B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1999-12-10 NZ NZ512171A patent/NZ512171A/en not_active IP Right Cessation
- 1999-12-10 DK DK99967462.5T patent/DK1144011T3/da active
- 1999-12-10 IL IL14366699A patent/IL143666A0/xx active IP Right Grant
- 1999-12-10 PT PT99967462T patent/PT1144011E/pt unknown
- 1999-12-10 AT AT99967462T patent/ATE460180T1/de active
-
2001
- 2001-06-10 IL IL143666A patent/IL143666A/en not_active IP Right Cessation
- 2001-12-06 HK HK01108566.6A patent/HK1039272A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2010
- 2010-06-10 CY CY20101100510T patent/CY1111094T1/el unknown
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH10508291A (ja) * | 1994-08-19 | 1998-08-18 | ラ レフィオン バロンネ | 化合物、製剤用組成物及びこれらを含む診断装置とこれらの利用 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| JPN6010032051, ＭＡＳＱＵＥＬＩＥＲ， Ｍ． ｅｔ ａｌ．, Ｒｅｃｅｎｔ Ａｄｖ． Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．， Ｐｒｏｃ． Ｉｎｔ． Ｃｏｎｇｒ． Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．， １４ｔｈ， Ｖｏｌｕｍｅ Ａｎｔｉｃｎａｃｅｒ Ｓｅｃｔ． １, 1985, ｐ．３１１−３１２ * |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2004510703A (ja) * | 2000-06-14 | 2004-04-08 | メダレックス，インコーポレイティド | 酵素−分解性プロドラッグ化合物 |
| US9913822B2 (en) | 2012-04-04 | 2018-03-13 | Halozyme, Inc. | Combination therapy with an anti-hyaluronan agent and therapeutic agent |
| US10137104B2 (en) | 2012-04-04 | 2018-11-27 | Halozyme, Inc. | Combination therapy with an anti-hyaluronan agent and therapeutic agent |
| JP2016509586A (ja) * | 2012-12-28 | 2016-03-31 | ライフ サイエンシーズ リサーチ パートナーズ ヴェーゼットウェーＬｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｐａｒｔｎｅｒｓ Ｖｚｗ | 最小毒性プロドラッグ |
| US10076576B2 (en) | 2012-12-28 | 2018-09-18 | Life Sciences Research Partners Vzw | Minimally toxic prodrugs |
| JP2019055966A (ja) * | 2012-12-28 | 2019-04-11 | コビオレス エヌヴイＣｏｂｉｏｒｅｓ Ｎｖ | 最小毒性プロドラッグ |
| US10583194B2 (en) | 2012-12-28 | 2020-03-10 | Cobiores Nv | Minimally toxic prodrugs |
| JP2021073242A (ja) * | 2012-12-28 | 2021-05-13 | コビオレス エヌヴイＣｏｂｉｏｒｅｓ Ｎｖ | 最小毒性プロドラッグ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU773420B2 (en) | 2004-05-27 |
| NZ512171A (en) | 2004-07-30 |
| PT1144011E (pt) | 2010-06-16 |
| WO2000033888A9 (en) | 2001-05-10 |
| IL143666A0 (en) | 2002-04-21 |
| EP1144011B1 (en) | 2010-03-10 |
| IL143666A (en) | 2009-02-11 |
| DK1144011T3 (da) | 2010-07-05 |
| CA2354766A1 (en) | 2000-06-15 |
| CY1111094T1 (el) | 2015-10-07 |
| WO2000033888A2 (en) | 2000-06-15 |
| DE69942128D1 (de) | 2010-04-22 |
| EP1144011A2 (en) | 2001-10-17 |
| ES2342637T3 (es) | 2010-07-09 |
| HK1039272A1 (en) | 2002-04-19 |
| ATE460180T1 (de) | 2010-03-15 |
| AU2373300A (en) | 2000-06-26 |
| WO2000033888A3 (en) | 2001-11-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2003518000A (ja) | プロドラッグ化合物およびその調製方法 | |
| AU2001266853B2 (en) | Prodrug compounds with an oligopeptide having an isoleucine residue | |
| US8034787B2 (en) | Enzyme-cleavable prodrug compounds | |
| US7214663B2 (en) | Tripeptide prodrug compounds | |
| AU2002316539C1 (en) | CD10-activated prodrug compounds | |
| AU2001266853A1 (en) | Prodrug compounds with an oligopeptide having an isoleucine residue | |
| KR101759261B1 (ko) | 유도형질로 활성화되는 다기능성 항암제 전구체, 이의 제조방법 및 이의 용도 | |
| AU2001275525A1 (en) | Tripeptide prodrug compounds | |
| JP2003526683A (ja) | ペプチダーゼ切断可能な標的抗新生物薬およびそれらの治療への使用 | |
| AU2001271301B2 (en) | Prodrug compounds cleavable by thimet oligopeptidase | |
| AU2001271301A1 (en) | Prodrug compounds cleavable by thimet oligopeptidase | |
| KR102436012B1 (ko) | 항암제 프로드러그 컨쥬게이트의 새로운 용도 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20061121 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20100615 |
|
| A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20100914 |
|
| A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20100922 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20101001 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20101026 |