JP2003514850A

JP2003514850A - Use of indirubin derivatives to prepare drugs

Info

Publication number: JP2003514850A
Application number: JP2001539434A
Authority: JP
Inventors: アイゼンブラント、ゲルハルト; メージェ、ローラン; ホエセル、ラルフ; トメ、アンドレア
Original assignee: Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Current assignee: Centre National de la Recherche Scientifique CNRS
Priority date: 1999-11-23
Filing date: 2000-11-23
Publication date: 2003-04-22
Also published as: FR2801216A1; WO2001037819A3; WO2001037819A2; CA2387591A1; EP1231916A2; AU2177001A

Abstract

(57)【要約】本発明はＧＳＫ−３βを阻害する薬剤を調製するためのインジルビン誘導体の使用に関し、ＧＳＫ−３βおよびＣＤＫ５が関与する病理を治療するために使用することができる。 (57) [Summary] The present invention relates to the use of indirubin derivatives for preparing a medicament for inhibiting GSK-3β, which can be used to treat pathologies involving GSK-3β and CDK5.

Description

【発明の詳細な説明】Detailed Description of the Invention

【０００１】（技術分野）本発明は治療でのインジルビン誘導体の新規使用に関する。[0001] (Technical field) The present invention relates to a novel use of indirubin derivatives in therapy.

【０００２】（背景技術）インジルビンはインジゴイド群に属する。インジゴイドとの用語はインジゴ群
の染料の一般名として使用されている。これらはビス−インドールであり、様々
な天然源から発酵、酸化および光の存在下での二量化により誘導される。BACKGROUND ART Indirubin belongs to the indigoid group. The term indigoid is used as a generic name for dyes in the indigo group. These are bis-indoles, which are derived from various natural sources by fermentation, oxidation and dimerization in the presence of light.

【０００３】インジルビン（またはイソインジゴチン）は式Ａで示される：[0003] Indirubin (or isoindigotine) has the formula A:

【０００４】[0004]

【化２】 [Chemical 2]

【０００５】ＤａｎｇｇｕｉＬｏｎｇｈｕｉＷａｎの活性成分は伝統的な漢方薬で、白
血病などの慢性疾患の治療で使用されている。The active ingredient of Danggui Longhui Wan is a traditional Chinese medicine, which is used in the treatment of chronic diseases such as leukemia.

【０００６】出願の複数の発明者が共同発明者である出願ＥＰ９８１０９８５４．２号に、
インジルビンおよびその誘導体を含むインジゴイド誘導体は、５０から２００ｎ
ＭのＩＣ₅₀値（５０％の阻害濃度）を伴うサイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫｓ
）の強力な阻害剤であることが記載されている（Ｈｏｅｓｓｅｌ他，Ｎａｔｕｒ
ｅＣｅｌｌＢｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１，Ｎｏ．１，１９９９年５月も参照
）。これらのキナーゼは細胞周期の鍵調節剤である。In the application EP98109854.2 in which the inventors of the application are joint inventors,
Indigoid derivatives, including indirubin and its derivatives, range from 50 to 200 n
Cyclin-dependent kinases (CDKs) with M IC ₅₀ values (50% inhibitory concentration)
) Have been described (Hoessel et al., Nature.
e Cell Biology, Vol. 1, No. 1, see also May 1999). These kinases are key regulators of the cell cycle.

【０００７】この阻害剤はＡＴＰと競合して、キナーゼの触媒的サブユニットに結合する。[0007] This inhibitor competes with ATP to bind to the catalytic subunit of the kinase.

【０００８】細胞周期の停止をもたらすこれらのＣＤＫ阻害特性により、これらのインジゴ
イド誘導体はガン、乾癬、循環器疾患、感染症、腎臓病、神経変性疾患およびウ
イルス感染などの増殖の制御損失に関連する疾患を治療するために興味深いもの
となっている。Due to their CDK inhibitory properties leading to cell cycle arrest, these indigoid derivatives are associated with loss of control of growth such as cancer, psoriasis, cardiovascular disease, infections, kidney disease, neurodegenerative diseases and viral infections. It has been of interest for treating diseases.

【０００９】意外にも本発明はここで、これらのインジゴイド誘導体のうちで、インジルビ
ンの誘導体のみが付加的に、他の標的酵素、グリコーゲン合成キナーゼ−３β（
ＧＳＫ−３βと略記）に対して阻害効果を及ぼすことを記載した。Surprisingly, the present invention now contemplates, among these indigoid derivatives, only the derivative of indirubin, in addition, another target enzyme, glycogen synthase kinase-3β (
It has been described that it exerts an inhibitory effect on GSK-3β.

【００１０】このキナーゼはＷＮＴシグナル経路の必須要素の１つである。これは数多くの
生理的プロセスに関している：サイクリンＤ１およびβ−カテニンのレベルを制
御することによる細胞周期の制御、発生の間での背腹形成、グリコーゲン合成で
のインスリンの作用、軸索突出、ＨＩＶ−１のｔａｔ−仲介神経毒性など。This kinase is one of the essential elements of the WNT signaling pathway. It is associated with a number of physiological processes: regulation of the cell cycle by controlling the levels of cyclin D1 and β-catenin, dorsoventricular formation during development, the action of insulin on glycogen synthesis, axonal projections, HIV. -1 tat-mediated neurotoxicity and the like.

【００１１】さらにアルツハイマー病でのペアらせんフィラメントで観察されるように、微
小管結合タウタンパク質の異常な高リン酸化はＧＳＫ−３βおよびＣＤＫ５に起
因する。Furthermore, as observed in paired helical filaments in Alzheimer's disease, aberrant hyperphosphorylation of microtubule-associated tau protein is due to GSK-3β and CDK5.

【００１２】細胞***を促進する、ＧＳＫ−３β活性を抑制する誘導体の利点も評価されて
いる。The benefits of derivatives that suppress GSK-3β activity, which promote cell division, have also been evaluated.

【００１３】今日知られているＧＳＫ−３βの抑制剤はリチウムのみであり、特定のプリン
誘導体である。The only known inhibitor of GSK-3β today is lithium, a specific purine derivative.

【００１４】リチウムの選択性は報告されていないが、この生成物の原子特性から考慮して
、非常に低いと思われる。さらにリチウムはかなりの用量（約１０ｍＭのＩＣ₅₀ ）でのみ活性である。Although the selectivity of lithium has not been reported, it seems to be very low considering the atomic properties of this product. Furthermore, lithium is only active at significant doses (IC _{50 of} about 10 mM).

【００１５】同じことが、出願ＷＯ９８／１６５２８に記載されているプリン誘導体にも該
当し、これは非常に低い選択性および約１０μＭのＩＣ₅₀値を有する。The same applies to the purine derivatives described in application WO 98/16528, which have a very low selectivity and an IC ₅₀ value of about 10 μM.

【００１６】（発明の開示）本発明はＧＳＫ−３βの阻害剤である薬剤を製造するために、１０μＭ未満、
より一般的には５から５０ｎＭ程度のＩＣ₅₀値を伴う高い有効度のインジルビン
を使用して、これらの問題に対する解決を提供する。DISCLOSURE OF THE INVENTION The present invention provides less than 10 μM to produce a drug that is an inhibitor of GSK-3β.
More commonly, high-efficiency indirubin with IC ₅₀ values on the order of 5 to 50 nM is used to provide a solution to these problems.

【００１７】本発明では前記の薬剤を調製するために、一般式Ｉ：[0017] In order to prepare the above-mentioned medicaments according to the invention, the general formula I:

【００１８】[0018]

【化３】 [Chemical 3]

【００１９】［式中、同じか異なってよいＲ¹およびＲ⁶は水素原子；ハロゲン原子；ヒドロキ
シ基；メチレンヒドロキシ基；直鎖または分枝鎖のＣ₁〜Ｃ₁₈−アルキルまたは
アルコキシまたはメチレンアルコキシ基；必要に応じて１個または複数のへテロ
原子を含む、３から７個−炭素原子を有するシクロアルキル基；必要に応じて１
個または複数のヘテロ原子を有する置換または非置換のアリール、アラルキルま
たはアリールオキシ基；それぞれ互いに独立に、直鎖または分枝鎖のアルキル基
中に１から６個の炭素原子を有するモノ−、ジ−またはトリアルキルシリル基；
それぞれ互いに独立に置換または非置換アリール基を有するモノ−、ジ−または
トリアリールシリル基；トリフルオロメチル基；−ＣＯＭ；−ＣＯＯＭ；あるい
は−ＣＨ₂ＣＯＯＭ基（ここでＭは水素原子、必要ならばヒドロキシおよび／ま
たはアミノ基１個または複数で置換された直鎖または分枝鎖のＣ₁〜Ｃ₁₈−アル
キル基、または必要ならば１個または複数のヘテロ原子を有し、１個または複数
のハロゲン原子、アルキル基またはアルコキシ基で置換されていてよいアリール
基を表す）；−ＮＲ¹¹Ｒ¹²基（ここで同じか異なってよいＲ¹¹およびＲ¹²は水素
原子、必要ならば付加的に１個または複数のヒドロキシおよび／またはアミノ基
で置換されているＣ₁〜Ｃ₁₈直鎖または分枝鎖アルキル基、置換または非置換で
、必要ならば１個または複数のヘテロ原子を含むアリール基を表す）；アシル基
；−ＣＨ₂−ＮＲ¹¹Ｒ¹²メチレンアミノ基（ここでＲ¹¹およびＲ¹²は前記の意味
を有する）；ベンゼン環が必要ならば１個または複数のへテロ原子を有するベン
ジル基；必要ならば１個または複数のヘテロ原子を有する、炭素原子３から７個
を有するメチレンシクロアルキル基；アミドとしての、窒素原子に結合した生理
的アミノ酸基；グリコシドが単糖または二糖から選択されるＯ−グリコシドまた
はＮ−グリコシド；あるいはメチレンスルホネート基を表し；同じか異なってよ
いＲ²、Ｒ³、Ｒ⁴、Ｒ⁵、Ｒ⁷、Ｒ⁸、Ｒ⁹およびＲ¹⁰は水素原子；ハロゲン原子；
ヒドロキシ基；ニトロソ基；ニトロ基；アルコキシ基；必要ならば１個または複
数のヒドロキシおよび／またはアミノ基で置換されている直鎖または分枝鎖のＣ ₁ 〜Ｃ₁₈アルキル基；必要ならば１個または複数のヘテロ原子を有する置換また
は非置換のアリール基；必要ならば１個または複数のヘテロ原子を有する置換ま
たは非置換アラルキル基；必要ならば１個または複数のヘテロ原子を有する置換
または非置換アリールオキシ基；必要ならば１個または複数のヘテロ原子を有す
る置換または非置換メチレンアリールオキシ基；必要ならば１個または複数のヘ
テロ原子を含む、３から７個の炭素原子を有するシクロアルキル基；必要ならば
１個または複数のヘテロ原子を含む、３から７個の炭素原子を有するメチレンシ
クロアルキル基；トリフルオロメチル基；−ＣＯＭ；−ＣＯＯＭ；またはＣＨ₂
ＣＯＯＭ基（ここでＭは水素原子、必要ならばヒドロキシおよび／またはアミノ
基１個または複数で付加的に置換された直鎖または分枝鎖のＣ₁〜Ｃ₁₈−アルキ
ル基、または必要ならば１個または複数のヘテロ原子を有し、１個または複数の
ハロゲン原子、アルキル基またはアルコキシ基で置換されていてよいアリール基
を表す）；−ＮＲ¹¹Ｒ¹²基（ここで同じか異なってよいＲ¹¹およびＲ¹²は水素原
子、必要ならば付加的に１個または複数のヒドロキシおよび／またはアミノ基で
置換されている直鎖または分枝鎖Ｃ₁〜Ｃ₁₈アルキル基、置換または非置換で、
必要ならば１個または複数のヘテロ原子を含むアリール基、アシル基を表すか、
窒素原子が、必要ならば１個または複数のヘテロ原子を含む、炭素原子３から７
個を有するシクロアルキルの一部を形成する）；−ＣＯＮＲ¹¹Ｒ¹²基（ここでＲ ¹¹ およびＲ¹²は前記の意味を有する）；ヒドロキシルアミノ基；ホスフェート基
；ホスホネート基；スルフェート基；スルホネート基；スルホンアミド基；−Ｓ
Ｏ₂ＮＲ¹¹Ｒ¹²基（ここでＲ¹¹およびＲ¹²は前記の意味を有する）；−Ｎ＝Ｎ−
Ｒ¹³アゾ基（ここでＲ¹³は必要ならば１個または複数のカルボキシル、ホスホリ
ルまたはスルホネート基で置換された芳香族基あるいはグリコシドが単糖または
二糖から選択されているＯ−グリコシドまたはＮ−グリコシド基を表す）を表す
か；Ｒ¹およびＲ⁵ならびにＲ⁶およびＲ¹⁰はそれぞれ一緒になって、互いに独立
に必要ならば置換された１から４個のＣＨ₂基を有する環を形成し；同じか異な
ってよいＸおよびＹは酸素；イオウ；セレン；テルルの原子；ＮＲ¹⁴基（ここで
Ｒ¹⁴は水素原子、必要ならば１個または複数のカルボキシル、ホスホリルまたは
スルホネート基で置換された直鎖または分枝鎖Ｃ₁〜Ｃ₁₈アルキル基、必要なら
ば１個または複数のヘテロ原子を含む置換または非置換のアリール基、アラルキ
ル基またはスルホネート基を表す）；あるいは−ＮＯＲ¹⁴（ここでＲ¹⁴基は前記
の意味を有する）を表す］で示されるインジルビン誘導体およびこれらの誘導体
の生理的に許容される塩を使用する。[0019] [Wherein R may be the same or different¹And R⁶Is hydrogen atom; halogen atom; hydroxy
Si group; methylene hydroxy group; straight or branched chain C₁~ C₁₈-Alkyl or
An alkoxy or methylenealkoxy group; optionally one or more hetero groups
Cycloalkyl groups having from 3 to 7 carbon atoms, including atoms; optionally 1
A substituted or unsubstituted aryl, aralkyl or aralkyl having one or more heteroatoms.
Or aryloxy groups; each independently of the other, straight-chain or branched-chain alkyl groups
A mono-, di- or trialkylsilyl group having 1 to 6 carbon atoms therein;
Mono-, di-, or mono-, di- or each having a substituted or unsubstituted aryl group independently of each other
Triarylsilyl group; trifluoromethyl group; -COM; -COOM; or
Is -CH₂A COOM group (where M is a hydrogen atom, hydroxy and / or
Or a straight-chain or branched C substituted with one or more amino groups₁~ C₁₈-Al
Kill group, or optionally one or more heteroatoms, one or more
Optionally substituted with a halogen atom, an alkyl group or an alkoxy group of
Represents a group); -NR¹¹R¹²Groups (wherein R may be the same or different)¹¹And R¹²Is hydrogen
Atoms, and optionally one or more hydroxy and / or amino groups
C replaced by₁~ C₁₈A straight or branched chain alkyl group, substituted or unsubstituted
, Represents an aryl group containing one or more heteroatoms if necessary);
; -CH₂-NR¹¹R¹²Methyleneamino group (where R¹¹And R¹²Means the above
A benzene ring, if necessary, having one or more heteroatoms.
Zyl group; 3 to 7 carbon atoms, optionally with one or more heteroatoms
A methylenecycloalkyl group having a physiology attached to a nitrogen atom as an amide
Amino acid groups; O-glycosides whose glycosides are selected from mono- or disaccharides
Represents an N-glycoside; or a methylene sulfonate group; same or different
R², R³, R^Four, R^Five, R⁷, R⁸, R⁹And R^TenIs a hydrogen atom; a halogen atom;
Hydroxy group; Nitroso group; Nitro group; Alkoxy group; One or more if necessary
Straight or branched chain C substituted with a number of hydroxy and / or amino groups ₁ ~ C₁₈Alkyl groups; optionally substituted with one or more heteroatoms
Is an unsubstituted aryl group; optionally substituted with one or more heteroatoms.
Or an unsubstituted aralkyl group; optionally substituted with one or more heteroatoms
Or an unsubstituted aryloxy group; optionally containing one or more heteroatoms
A substituted or unsubstituted methylenearyloxy group; one or more
Cycloalkyl groups having from 3 to 7 carbon atoms, including terror atoms; if necessary
Methylene group having 3 to 7 carbon atoms, including one or more heteroatoms
Chloroalkyl group; trifluoromethyl group; -COM; -COOM; or CH₂
COOM group (where M is a hydrogen atom, if necessary hydroxy and / or amino)
Linear or branched C additionally substituted with one or more groups₁~ C₁₈-Archi
Radical, or optionally one or more heteroatoms, containing one or more
Aryl group which may be substituted with halogen atom, alkyl group or alkoxy group
Represents); -NR¹¹R¹²Groups (wherein R may be the same or different)¹¹And R¹²Is hydrogen
A child, optionally with one or more hydroxy and / or amino groups
Substituted straight or branched chain C₁~ C₁₈An alkyl group, substituted or unsubstituted,
Represents an aryl group containing one or more heteroatoms, an acyl group if necessary, or
Nitrogen atoms, optionally containing one or more heteroatoms, carbon atoms 3 to 7
Forming part of a cycloalkyl having 4);¹¹R¹²Group (where R ¹¹ And R¹²Has the above meaning); hydroxylamino group; phosphate group
A phosphonate group; a sulfate group; a sulfonate group; a sulfonamide group;
O₂NR¹¹R¹²Group (where R¹¹And R¹²Has the above meaning); -N = N-
R¹³Azo group (where R¹³Is one or more carboxyl, phosphor
Aromatic group or glycoside substituted with a phenyl or sulfonate group is a monosaccharide or
Represents an O-glycoside or N-glycoside group selected from disaccharides)
R;¹And R^FiveAnd R⁶And R^TenAre together and independent of each other
1 to 4 CH substituted if necessary for₂Forming a ring with groups; same or different
X and Y which may be oxygen are oxygen; sulfur; selenium; an atom of tellurium; NR¹⁴Group (here
R¹⁴Is a hydrogen atom, if desired one or more carboxyl, phosphoryl or
Straight or branched chain C substituted with a sulfonate group₁~ C₁₈An alkyl group, if necessary
Substituted or unsubstituted aryl groups containing one or more heteroatoms, aralkyl
Group or sulfonate group); or -NOR¹⁴(Where R¹⁴The group is as described above
Which have the meaning of
The physiologically acceptable salt of is used.

【００２０】（発明を実施するための最良の形態）本発明の一実施形態では、１個または複数のベンゼン環の１個または複数の原
子が窒素原子で置換されている。BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION In one embodiment of the present invention, one or more atoms of one or more benzene rings are substituted with nitrogen atoms.

【００２１】別の実施形態では、必要ならば互いに独立に１個または複数のヘテロ原子を含
む１個または複数の芳香族または非芳香族環系がインジルビン系に縮合している
。In another embodiment, one or more aromatic or non-aromatic ring system containing one or more heteroatoms, optionally independently of each other, is fused to an indirubin system.

【００２２】さらに別の実施形態では、式（Ｉ）のインジルビン誘導体はポリエチレングリ
コールエステルまたはポリエチレングリコールエーテルにそれぞれエステルまた
はエーテル結合により結合している。In yet another embodiment, the indirubin derivative of formula (I) is attached to the polyethylene glycol ester or polyethylene glycol ether by an ester or ether bond, respectively.

【００２３】本発明はさらに特には、ＧＳＫ−３βに対して１０μＭ未満、好ましくは１μ
Ｍ未満のＩＣ₅₀値を有するインジルビン誘導体、特には５０ｎＭ未満のＩＣ₅₀を
有するものに関する。The invention more particularly relates to GSK-3β of less than 10 μM, preferably 1 μM.
It relates to indirubin derivatives having an IC ₅₀ value of less than M, especially those having an IC ₅₀ of less than 50 nM.

【００２４】好ましくは前記の誘導体中、同じかまたは異なってよいＸおよびＹは＝Ｏまた
は＝ＮＯＨ基を表す。Preferably in the above derivatives X and Y, which may be the same or different, represent a ═O or a ═NOH group.

【００２５】対応する群では、置換基Ｒ¹、Ｒ³、Ｒ⁴およびＲ⁸がそれぞれ次の意味を有する
：Ｒ³：水素原子、ハロゲン原子、アルキル基、−ＳＯ₃Ｈ、−ＳＯ₂ＮＨ₂、−Ｓ
Ｏ₂−Ｎ−（ＣＨ₃）₂、−ＳＯ₂−Ｎ−Ｃ₂Ｈ₅−ＯＨ、−ＳＯ₂−Ｎ−（Ｃ₂Ｈ₅−
ＯＨ）₂、−ＳＯ₂−ＮＨ−ＣＨ₃基、Ｒ⁴およびＲ⁸：互いに独立に水素またはハロゲン原子、Ｒ¹：アルキルまたはアリール基（式（Ｉ）中に示された他の置換基は水素原
子を表す）。In the corresponding group, the substituents R ¹ , R ³ , R ⁴ and R ⁸ each have the following meanings: R ³ : hydrogen atom, halogen atom, alkyl group, —SO ₃ H, —SO ₂ NH ₂ , -S
_{_{_{O 2 -N- (CH 3) 2}}} , -SO 2 -N-C 2 H 5 -OH, -SO 2 -N- (C 2 H 5 -
OH) ₂ , —SO ₂ —NH—CH ₃ group, R ⁴ and R ⁸ : independently of each other, a hydrogen atom or a halogen atom, R ¹ : an alkyl or aryl group (other substituents shown in formula (I) are Represents a hydrogen atom).

【００２６】本発明の好ましい群では、Ｘ＝Ｙであり、これら２つの置換基は＝Ｏを表す。[0026] In a preferred group of the invention, X = Y and these two substituents represent = 0.

【００２７】５μＭ未満、より一般的には１μＭ未満またはさらに５０ｎＭ未満のＩＣ₅₀値
を有する高い効力のＧＳＫ−３β阻害剤を構成するこの群の誘導体は有利には次
の意味：Ｒ¹：アルキル、特にメチルおよびフェニル、Ｒ³：水素、ハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、ＮＯ₂、−ＳＯ₃Ｈ、−ＳＯ₂Ｎ
Ｈ₂、−ＳＯ₂−Ｎ（ＣＨ₃）₂、−ＳＯ₂−Ｎ−Ｃ₂Ｈ₅−ＯＨ、−ＳＯ₂−Ｎ−（Ｃ ₂ Ｈ₅−ＯＨ）₂、−ＳＯ₂−ＮＨＣＨ₃、Ｒ⁴およびＲ⁸：ハロゲン、特にＩまたはＢｒ（式（Ｉ）中で示された他の置換基は水素原子を表す）を有する置換基Ｒ¹、Ｒ³、Ｒ⁴およびＲ⁸を含む。[0027]   IC less than 5 μM, more commonly less than 1 μM or even less than 50 nM₅₀value
Derivatives of this group which constitute high potency GSK-3β inhibitors having
Meaning of:   R¹: Alkyl, especially methyl and phenyl,   R³: Hydrogen, halogen (F, Cl, Br, I), NO₂, -SO₃H, -SO₂N
H₂, -SO₂-N (CH₃)₂, -SO₂-NC₂H_Five-OH, -SO₂-N- (C ₂ H_Five-OH)₂, -SO₂-NHCH₃,   R^FourAnd R⁸: Halogen, especially I or Br (Other substituents shown in formula (I) represent a hydrogen atom) A substituent R having¹, R³, R^FourAnd R⁸including.

【００２８】特に好ましい誘導体はインジルビン、５−ヨード−インジルビン、５−ブロモ
−インジルビン、５−クロロ−インジルビン、５−フルオロ−インジルビン、５
−メチル−インジルビン、５−ニトロ−インジルビン、５−ＳＯ₃Ｈ−インジル
ビン、５’−ブロモ−インジルビン、５−５’−ジブロモ−インジルビンまたは
５’−ブロモ−インジルビン５−スルホン酸から選択される。Particularly preferred derivatives are indirubin, 5-iodo-indirubin, 5-bromo-indirubin, 5-chloro-indirubin, 5-fluoro-indirubin, 5
- methyl - indirubin, 5-nitro - indirubin, 5-SO ₃ H- indirubin, 5'-bromo - indirubin, 5-5'- dibromo - is selected from indirubin 5-sulfonic acid - indirubin or 5'-bromo.

【００２９】本発明の他の好ましい群はＸが＝ＮＯＨ基を表し、Ｙが＝Ｏ基を表す。[0029] Another preferred group of the invention, X represents a = NOH group and Y represents a = O group.

【００３０】このファミリーの好ましい群では、Ｒ³はハロゲン原子、特にＩまたは−ＳＯ₃ Ｎａ基を表す。In a preferred group of this family, R ³ represents a halogen atom, in particular I or a —SO ₃ Na group.

【００３１】対応する誘導体は有利に、ＧＳＫ−３βに対して１００ｎＭ未満のＩＣ₅₀を有
し、このうちのいくつかではさらに５０ｎＭ未満のＩＣ₅₀を有する。The corresponding derivatives advantageously have an IC ₅₀ against GSK-3β of less than 100 nM, some of which additionally have an IC ₅₀ of less than ₅₀ nM.

【００３２】この群の好ましい誘導体はインジルビン−３’−モノオキシム、５−ヨード−
インジルビン−３’−モノオキシムおよび５−ＳＯ₃Ｎａ−インジルビン−３’
−モノオキシムから選択される。Preferred derivatives of this group are indirubin-3′-monooxime, 5-iodo-
Indirubin-3′-monooxime and 5-SO ₃ Na-indirubin-3 ′
Selected from monooximes.

【００３３】予め述べたように、前記のように定義された誘導体は既に、例えばインジゴま
たはイソインジゴから誘導される他のインジゴイドと同様にＣＤＫの阻害剤とし
て記載されている。ここで意外にも、インジルビン誘導体のみが付加的に、ＧＳ
Ｋ−３βに阻害効果を及ぼす。As mentioned previously, the derivatives as defined above have already been described as inhibitors of CDK as well as other indigoids derived from eg indigo or isoindigo. Surprisingly here, only the indirubin derivative additionally
It exerts an inhibitory effect on K-3β.

【００３４】この効果は往々にして、ＣＤＫおよびＧＳＫ−３βに関して同程度の規模であ
る。This effect is often of comparable magnitude for CDK and GSK-3β.

【００３５】前記で定義されたインジルビン誘導体を使用して本発明に従い調製された薬剤
はＧＳＫ−３βが関連する疾患の治療に使用することができる。The medicament prepared according to the present invention using the indirubin derivative defined above can be used for the treatment of diseases associated with GSK-3β.

【００３６】これは例えば、ＧＳＫ−３β阻害剤をインスリン様作用薬として使用すること
ができる糖尿病を伴うケースである。インスリンはＧＳＫ−３βの阻害をもたら
す生化学的事象により作用し、この阻害にインスリンに対する細胞の応答が起因
することが想起される。This is the case, for example, with diabetes where GSK-3β inhibitors can be used as insulin-mimetic agents. It is recalled that insulin acts by a biochemical event that results in inhibition of GSK-3β, which inhibition is due to the cellular response to insulin.

【００３７】さらにこれらの薬剤は神経変性疾患の治療にかなり重要である。実施例に示す
ように、ＣＤＫ５およびＧＳＫ−３βにより惹起されるタウタンパク質の高リン
酸化は事実、インジルビン誘導体により阻害されうる。本発明により調製された
薬剤を投与すると、ＣＤＫ５およびＧＳＫ−３βの両方に対するその阻害効果に
より、アルツハイマー病でのタウタンパク質の高リン酸化を阻止し、神経変性を
中和することができる。Furthermore, these agents are of considerable importance in the treatment of neurodegenerative diseases. As shown in the examples, hyperphosphorylation of tau protein caused by CDK5 and GSK-3β can indeed be inhibited by indirubin derivatives. Administration of the agents prepared according to the invention can block hyperphosphorylation of tau protein in Alzheimer's disease and neutralize neurodegeneration due to its inhibitory effect on both CDK5 and GSK-3β.

【００３８】これらの薬剤は躁鬱病の治療にもかなり重要である。[0038] These drugs are also of great importance in the treatment of manic depression.

【００３９】ガンの治療でのこれらの使用も言及することができ、その際、腫瘍細胞のアポ
トーシスにトランスレートされるＧＳＫ−３βおよびＣＤＫ５の両方に対するそ
の阻害効果を有利には使用することができる。Their use in the treatment of cancer may also be mentioned, with its inhibitory effect advantageously on both GSK-3β and CDK5 being translated into apoptosis of tumor cells. .

【００４０】これらの薬剤はマラリア、トリパノソーマ、リーシュマニア、トキソプラズマ
、ニューモシスティスなどの単細胞寄生体あるいはカビおよびぜん虫などの多細
胞寄生体により惹起される疾患の治療にも有効であることが証明されている。It has been proved that these agents are also effective in treating diseases caused by single cell parasites such as malaria, trypanosomes, leishmania, toxoplasma, pneumocystis or multicellular parasites such as mold and helminths. Has been done.

【００４１】薬剤の生産の間に、治療的に有効な量で使用される活性成分を、投与の選択さ
れた方法に製剤的に許容される付形剤と混合する。During production of the drug, the active ingredient used in a therapeutically effective amount is mixed with a excipient that is pharmaceutically acceptable for the selected method of administration.

【００４２】したがって、経口投与のためには薬剤をゼラチンカプセル、錠剤、ロゼンジま
たはカプセル、丸剤、滴剤などの形で調製する。このような薬剤は１単位当たり
活性成分１から１００ｍｇを含有してよい。Therefore, for oral administration, the drug is prepared in the form of gelatin capsules, tablets, lozenges or capsules, pills, drops and the like. Such agents may contain from 1 to 100 mg of active ingredient per unit.

【００４３】注射による投与のためには（静脈内、皮下、筋肉内）、薬剤を無菌または滅菌
溶液の形で供給する。１単位当たりの用量は活性成分１から５０ｍｇで変動して
よい。治療される患者の血液中インジルビン誘導体最高１００μＭの最終濃度が
得られるように、１日用量を選択する。For administration by injection (intravenous, subcutaneous, intramuscular), the drug is supplied in the form of a sterile or sterile solution. The dose per unit may vary from 1 to 50 mg of active ingredient. The daily dose is chosen to give a final concentration of up to 100 μM indirubin derivative in the blood of the patient to be treated.

【００４４】（実施例）本発明を詳述する目的で、ただしその範囲を限定することなく、他の特徴およ
び利点を次の実施例に記載する。EXAMPLES For the purpose of detailing the invention but without limiting its scope, other features and advantages are described in the following examples.

【００４５】これらの実施例中で図１から３を参照するが、これらはそれぞれ、図１Ａから１ＣはＧＳＫ−３β、ＣＤＫ５／ｐ２５およびＣＤＫ１／サイクリン
Ｂに関する、本発明に従い使用されるインジルビンの阻害効果を示し、図２はＧＳＫ−３βに固定するためのＡＴＰとの競合剤としての効果を示し、図３はＧＳＫ−３βによるタウのリン酸化に対して、ｉｎｖｉｔｒｏでインジ
ルビンによって示される阻害効果を示す。In these examples, reference is made to FIGS. 1 to 3, which are respectively FIGS. 1A to 1C for GSK-3β, CDK5 / p25 and CDK1 / cyclin B, inhibition of indirubin used according to the invention. 2 shows the effect as a competitor with ATP for fixing to GSK-3β, and FIG. 3 shows the inhibitory effect of indirubin in vitro on the phosphorylation of tau by GSK-3β. Indicates.

【００４６】インジルビンの特徴元素分析をＣＨＮの元素分析のためにＰｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ２４００装置
を使用して実施した。ＮＭＲ−¹Ｈスペクトルを４００ＭＨｚで、ＮＭＲ−¹³Ｃ
スペクトルを１００ＭＨｚでＢｒｕｋｅｒＡＭＸ４００機器で、内部規準とし
てテトラメチルシランを用いて記録した。ｓは１重項を、ｄは２重項を、ｍは多
重項を示す。質量分析を正イオンモードで、電子衝撃（ＥＩ７０）下に、Ｆｉｎ
ｉｎｇａｎＭＡＴ９０機器を用いて記録した。 Characteristic elemental analysis of indirubin was performed using a Perkin-Elmer 2400 instrument for elemental analysis of CHN. ^NMR-1 and H spectrum at 400MHz, NMR- ¹³ C
Spectra were recorded at 100 MHz on a Bruker AMX400 instrument with tetramethylsilane as internal standard. s indicates a singlet, d indicates a doublet, and m indicates a multiplet. Mass analysis in positive ion mode under electron impact (EI70)
Recorded using an ingan MAT 90 instrument.

【００４７】インジルビンの合成例インジルビンインジルビンをＲｕｓｓｅｌｌ他，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，１９６９
，９１，３８５１−３８５９（変更法）に従い、イサチン１．７６ｇ（１２．０
ミリモル）および酢酸インドキシル２．００ｇ（１１．４ミリモル）を使用して
調製する。ろ過の後に、ろ液が中性になるまで、残留物をメタノールで２回、冷
水で数回洗浄した。生成物をＫＯＨ上で乾燥させる。暗紫色の結晶２．４２ｇ（
８１．０％）が得られる；Ｒ_f＝０．６４（酢酸エチル／ヘキサン１／１、ｖ
／ｖ）；融点３４１〜３４３℃：¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ６．９１（ｄ
，Ｊ＝８．１，Ｃ７Ｈ）、７．０２（ｍ，Ｃ５ＨおよびＣ５’Ｈ）、７．２６（
ｍ，Ｃ６Ｈ）、７．４２（ｄ，Ｊ＝８．１，Ｃ７’Ｈ）、７．５８（ｍＣ６’
Ｈ）、７．６６（ｄ，Ｊ＝Ｃ４’Ｈ）、８．７７（ｄ，Ｊ＝７．７，Ｃ４Ｈ）、
１１．０１（ｓ）および１０．８８（ｓ）（Ｎ１ＨおよびＮ１’Ｈ）；¹³Ｃ−Ｎ
ＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆，９０℃）δ１０６．９７（ｓ，Ｃ３）、１０９．５７（
ｄ，Ｊ＝１６２．２，Ｃ７）、１１３．１５（ｄ，Ｊ＝１６８．７，Ｃ７’）、
１１９．３７（ｓ，Ｃ３ａ’）、１２１．２１（ｄ，Ｊ＝１６２．１，Ｈｚ）お
よび１２１．１９（ｄ，Ｊ＝１６２．１Ｈｚ）（Ｃ５およびＣ５’）、１２１．
５８（ｓ，Ｃ３ａ）、１２４．６２（ｄ，Ｊ＝１６４．６，Ｈｚ）および１２４
．２０（ｄ，Ｊ＝１６３．８，Ｈｚ）（Ｃ６およびＣ４’）、１２９．１５（ｄ
，Ｊ＝１５９．８，Ｃ４）、１３６．８５（ｄ，Ｊ＝１６１．４，Ｃ６’）、１
３８．４８（ｓ，Ｃ７ａ）、１４１．０７（ｓ，Ｃ７ａ’）、１５２．３５（ｓ
，Ｃ２’）、１７１．１１（ｓ，Ｃ２）、１８８．２７（ｓ，Ｃ３’）；ＭＳ
ｍ／ｅ２６２（Ｍ⁺，１００）、２３４（４３）、２０５（２５）、１３１（
４）。分析値（Ｃ₁₆Ｈ₁₀Ｎ₂Ｏ₂）Ｃ，Ｈ，Ｎ。[0047] Synthesis Example of indirubin indirubin indirubin the Russell other, J. Am. Chem. Soc. , 1969
, 91, 3851-3859 (modified method), 1.76 g (12.0 g) of isatin.
Mmol) and 2.00 g (11.4 mmol) indoxyl acetate. After filtration, the residue was washed twice with methanol and several times with cold water until the filtrate was neutral. The product is dried over KOH. 2.42 g of dark purple crystals (
81.0%) is obtained; R _f = 0.64 (ethyl acetate / hexane 1/1, v
/ V); melting point 341-343 ° C .: ¹ H-NMR (DMSO-d ₆ ) δ6.91 (d
, J = 8.1, C7H), 7.02 (m, C5H and C5′H), 7.26 (
m, C6H), 7.42 (d, J = 8.1, C7'H), 7.58 (m C6 '
H), 7.66 (d, J = C4'H), 8.77 (d, J = 7.7, C4H),
11.01 (s) and 10.88 (s) (N1H and N1'H); ¹³ C-N
_{MR (DMSO-d 6, 90} ℃) δ106.97 (s, C3), 109.57 (
d, J = 162.2, C7), 113.15 (d, J = 168.7, C7 '),
119.37 (s, C3a '), 121.21 (d, J = 162.1, Hz) and 121.19 (d, J = 162.1 Hz) (C5 and C5'), 121.
58 (s, C3a), 124.62 (d, J = 164.6 Hz) and 124
． 20 (d, J = 163.8, Hz) (C6 and C4 '), 129.15 (d
, J = 159.8, C4), 136.85 (d, J = 161.4, C6 ′), 1
38.48 (s, C7a), 141.07 (s, C7a '), 152.35 (s
, C2 '), 171.11 (s, C2), 188.27 (s, C3'); MS
m / e 262 (M ⁺ , 100), 234 (43), 205 (25), 131 (
4). Analytical values (C ₁₆ H ₁₀ N ₂ O ₂ ) C, H, N.

【００４８】５−ヨードインジルビンインジルビンに関して記載した方法に従う。５−ヨードイサチン６５５ｍｇ（
２．４０ミリモル）および酢酸インドキシル３９９ｍｇ（２．２８ミリモル）か
ら出発すると、反応により粗製生成物７２０ｇがもたらされる。エタノールから
再結晶化させると、暗紫色の結晶５８ｍｇ（６．２％）が得られる。；Ｒ_f＝０
．６８（酢酸エチル／ヘキサン１／１、ｖ／ｖ）；融点３３４〜３３５℃：¹
Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ６．７５（ｄ，Ｊ＝８．１，Ｃ７Ｈ）、７．０
４；１Ｈ（ｍ，Ｃ５’Ｈ）、７．４２（ｄ，Ｊ＝８．１，Ｃ７’Ｈ）、７．５７
（ｍ，Ｃ６ＨおよびＣ６’Ｈ），７．６５（ｄ，Ｊ＝７．５，Ｃ４’Ｈ）、９．
１１（ｓ，Ｃ４Ｈ）、１１．００（ｓ）および１１．０９（ｓ）（Ｎ１Ｈおよび
Ｎ１’Ｈ）；¹³Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）、９０℃）δ８３．７３（ｄ，Ｊ
＝１６．９，Ｃ５）、１０５．１８（ｓ，Ｃ３）、１１１．８５（ｄ，Ｊ＝１６
４．６，Ｃ７）、１１３．４３（ｄ，Ｊ＝１６７．２，Ｃ７’）、１１９．２７
（ｓ，Ｃ３ａ’）、１２１．６５（ｄ，Ｊ＝１６３．６，Ｃ５’）、１２４．０
３（ｓ，Ｃ３ａ）、１２４．４４（ｄ，Ｊ＝１６３．９，Ｈｚ，Ｃ４’）、１３
２．４９（ｄ，Ｊ＝１７１．２，Ｃ６）、１３７．００（ｄ，Ｊ＝１６６．９，
Ｈｚ）および１３７．１５（ｄ，Ｊ＝１６０．１Ｈｚ）（Ｃ４およびＣ６’）、
１３９．２６（ｓ，Ｃ７ａ’）、１４０．４４（ｓ，Ｃ７ａ）、１５２．４１（
ｓ，Ｃ２’）、１７０．４８（ｓ，Ｃ２）、１８８．５４（ｓ，Ｃ３’）；ＭＳ
ｍ／ｅ３８８（Ｍ⁺，１００）、３６０（３）、２６１（６）、２３３（１
６）、２０５（１６）。分析値（Ｃ₁₆Ｈ₉ＩＮ₂Ｏ₂）Ｃ，Ｈ，Ｎ。 5-Iodoindirubin Follow the method described for indirubin. 5-iodoisatin 655 mg (
Starting from 2.40 mmol) and 399 mg (2.28 mmol) of indoxyl acetate, the reaction gives 720 g of crude product. Recrystallisation from ethanol gives 58 mg (6.2%) of dark purple crystals. R _f = 0
． 68 (ethyl acetate / hexane 1/1, v / v); melting point 334-335 ° C .: ¹
_{H-NMR (DMSO-d 6} ) δ6.75 (d, J = 8.1, C7H), 7.0
4; 1H (m, C5'H), 7.42 (d, J = 8.1, C7'H), 7.57
(M, C6H and C6′H), 7.65 (d, J = 7.5, C4′H), 9.
11 (s, C4H), 11.00 (s) and 11.09 (s) (N1H and N1′H); ¹³ C-NMR (DMSO-d ₆ ), 90 ° C.) δ83.73 (d, J
= 16.9, C5), 105.18 (s, C3), 111.85 (d, J = 16)
4.6, C7), 113.43 (d, J = 167.2, C7 '), 119.27
(S, C3a '), 121.65 (d, J = 163.6, C5'), 124.0
3 (s, C3a), 124.44 (d, J = 163.9, Hz, C4 '), 13
2.49 (d, J = 171.2, C6), 137.00 (d, J = 166.9,
Hz) and 137.15 (d, J = 160.1 Hz) (C4 and C6 '),
139.26 (s, C7a '), 140.44 (s, C7a), 152.41 (
s, C2 '), 170.48 (s, C2), 188.54 (s, C3'); MS
m / e 388 (M ⁺ , 100), 360 (3), 261 (6), 233 (1
6), 205 (16). Analytical value (C ₁₆ H ₉ IN ₂ O ₂ ) C, H, N.

【００４９】５−ブロモインジルビンインジルビンに関して記載した方法に従う。５−ブロモイサチン１．３０ｇ（
５．７５ミリモル）および酢酸インドキシル１．００ｇ（５．７１ミリモル）か
ら出発し、粗製生成物をピリジンから再結晶化させると、紫の色相を伴う黒色の
結晶１．１６ｇ（５９．３％）が得られる。；Ｒ_f＝０．４９（酢酸エチル／ヘ
キサン１／１、ｖ／ｖ）；¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ６．８６（ｄ，Ｊ
＝８．４，Ｃ７Ｈ）、７．０５（ｐｔ，Ｃ５’Ｈ）、７．４１〜７．３１（ｍ，
Ｃ６ＨおよびＣ７’Ｈ）、７．５９（ｍ，Ｃ６’Ｈ）、７．６６（ｄ，Ｊ＝７．
５，Ｃ４’Ｈ）、８．９４（ｓ，Ｃ４Ｈ）、１１．１０（ｓ）および１１．００
（ｓ）（Ｎ１ＨおよびＮ１’Ｈ）；¹³Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆，９０℃）δ
１０４．９２（ｓ，Ｃ３）、１１１．２４（ｄ，Ｊ＝１６５．１，Ｃ７）、１１
２．８９（ｓ，Ｃ５）、１１３．５３（ｄ，Ｊ＝１６７．８，Ｃ７’）、１１８
．９２（ｓ，Ｃ３ａ’）、１２１．６４（ｄ，Ｊ＝１６４．４，Ｃ５’）、１２
３．４１（ｓ，Ｃ３ａ）、１２４．４９（ｄ，Ｊ＝１６４．０，Ｃ４’）、１２
６．６０（ｄ，Ｊ＝１７１．３，Ｃ６）、１３１．０３（ｄ，１６７．１，Ｃ４
）、１３７．２９（ｄ，Ｊ＝１６０．９，Ｃ６’）、１３９．１６（ｓ，Ｃ７ａ
’）、１３９．７４（ｓ，Ｃ７ａ）、１５２．４２（ｓ，Ｃ２’）、１７０．５
０（ｓ，Ｃ２）、１８８．７７（ｓ，Ｃ３’）；ＭＳｍ／ｅ３４２（Ｍ⁺，
１００）、３４０（Ｍ⁺，１００）３１４（１８）、３１２（１８）、２６１（
７）。分析値（Ｃ₁₆Ｈ₉ＢｒＮ₂Ｏ₂）Ｃ，Ｈ，Ｎ。 5-Bromoindirubin Follow the method described for indirubin. 5-bromoisatin 1.30 g (
Starting from 5.75 mmol) and 1.00 g (5.71 mmol) of indoxyl acetate, the crude product was recrystallized from pyridine to give 1.16 g (59.3%) of black crystals with a purple hue. ) Is obtained. R _f = 0.49 (ethyl acetate / hexane 1/1, v / v); ¹ H-NMR (DMSO-d ₆ ) δ6.86 (d, J
= 8.4, C7H), 7.05 (pt, C5'H), 7.41 to 7.31 (m,
C6H and C7′H), 7.59 (m, C6′H), 7.66 (d, J = 7.
5, C4'H), 8.94 (s, C4H), 11.10 (s) and 11.00
(S) (N1H and N1′H); ¹³ C-NMR (DMSO-d ₆ , 90 ° C.) δ
104.92 (s, C3), 111.24 (d, J = 165.1, C7), 11
2.89 (s, C5), 113.53 (d, J = 167.8, C7 '), 118
． 92 (s, C3a '), 121.64 (d, J = 164.4, C5'), 12
3.41 (s, C3a), 124.49 (d, J = 164.0, C4 '), 12
6.60 (d, J = 171.3, C6), 131.03 (d, 167.1, C4)
), 137.29 (d, J = 160.9, C6 ′), 139.16 (s, C7a)
'), 139.74 (s, C7a), 152.42 (s, C2'), 170.5
0 (s, C2), 188.77 (s, C3 '); MS m / e 342 (M ⁺ ,
100), 340 (M ⁺ , 100) 314 (18), 312 (18), 261 (
7). Analysis _{_{_{(C 16 H 9 BrN 2 O}}} 2) C, H, N.

【００５０】５−クロロインジルビンインジルビンに関して記載された方法に従う。５−クロロイサチン５００ｍｇ
（２．７５ミリモル）および酢酸インドキシル４８０ｍｇ（２．７３ミリモル）
から出発して、紫色の粉末７６６ｍｇ（９４．６％）が得られる；Ｒ_f＝０．６
０（酢酸エチル／ヘキサン１／１、ｖ／ｖ）；¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）
δ６．８９（ｄ，Ｊ＝８．３，Ｃ７Ｈ）、７．０４（ｍ，Ｃ５’Ｈ）、７．２７
（ｄ，Ｊ＝８．３，Ｃ６’Ｈ）、７．４２（ｄ，Ｊ＝７．８，Ｃ７’Ｈ）、７．
５８（ｍ，Ｃ６’Ｈ）、７．６５（ｄ，Ｊ＝７．６，Ｃ４’Ｈ）、８．７８（ｓ
，Ｃ４Ｈ）、１０．９９（ｓ）および１１．０９（ｓ）（Ｎ１ＨおよびＮ１’Ｈ
）；¹³Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆ δ１０４．９５（ｓ，Ｃ３）、１１０．６
１（ｄ，Ｊ＝１６４．６，Ｃ７）、１１３．５０（ｄ，Ｊ＝１６８．６，Ｃ７’
）、１１８．８５（ｓ，Ｃ３ａ’）、１２１．５４（ｄ，Ｊ＝１６５．４，Ｃ５
’）、１２２．８５（ｓ，Ｃ３ａ）、１２３．７６（ｄ，Ｊ＝１７０．２Ｈｚ
）および１２４．４１（ｄ，Ｊ＝１６３．８Ｈｚ）（Ｃ６およびＣ４’）、１
２５．００（ｓ，Ｃ５）、１２８．１６（ｄ，Ｊ＝１６７．０，Ｃ４）、１３７
．２１（ｄ，Ｊ＝１５９．８，Ｃ６’）、１３９．１０（ｓ）および１３９．３
１（ｓ）（Ｃ７ａおよびＣ７ａ’）、１５２．３９（ｓ，Ｃ２’）、１７０．５
２（ｓ，Ｃ２）、１８８．７２（ｓ，Ｃ３’）；ＭＳｍ／ｅ２９６（Ｍ⁺，
１００）、２６８（３９）、２３３（３５）、２０５（５０）。分析値（Ｃ₁₆Ｈ ₉ ＣＩＮ₂Ｏ₂）Ｃ，Ｈ，Ｎ。[0050] 5-chloroindirubin Follow the method described for indirubin. 5-chloroisatin 500mg
(2.75 mmol) and indoxyl acetate 480 mg (2.73 mmol)
Starting from, 766 mg (94.6%) of purple powder are obtained; R_f= 0.6
0 (ethyl acetate / hexane 1/1, v / v);¹1 H-NMR (DMSO-d₆)
δ 6.89 (d, J = 8.3, C7H), 7.04 (m, C5′H), 7.27
(D, J = 8.3, C6'H), 7.42 (d, J = 7.8, C7'H), 7.
58 (m, C6'H), 7.65 (d, J = 7.6, C4'H), 8.78 (s
, C4H), 10.99 (s) and 11.09 (s) (N1H and N1'H
);¹³C-NMR (DMSO-d₆ δ 104.95 (s, C3), 110.6
1 (d, J = 164.6, C7), 113.50 (d, J = 168.6, C7 ')
), 118.85 (s, C3a '), 121.54 (d, J = 165.4, C5)
'), 122.85 (s, C3a), 123.76 (d, J = 170.2 Hz
) And 124.41 (d, J = 163.8 Hz) (C6 and C4 '), 1
25.00 (s, C5), 128.16 (d, J = 167.0, C4), 137
． 21 (d, J = 159.8, C6 '), 139.10 (s) and 139.3.
1 (s) (C7a and C7a '), 152.39 (s, C2'), 170.5
2 (s, C2), 188.72 (s, C3 '); MS m / e 296 (M⁺，
100), 268 (39), 233 (35), 205 (50). Analytical value (C₁₆H ₉ CIN₂O₂) C, H, N.

【００５１】５−フルオロインジルビンインジルビンに関して記載された方法に従う。５−フルオロイサチン５００ｍ
ｇ（３．０３ミリモル）および酢酸インドキシル５３０ｍｇ（３．００ミリモル
）から出発して、紫色の粉末７７６ｍｇ（９２．４％）が得られる；Ｒ_f＝０．
３２（酢酸エチル／ヘキサン１／２、ｖ／ｖ）；１Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ ₆ ）δ６．８７（ｄｄ，Ｊ_H,H＝８．３，Ｊ_H,H＝４．７Ｃ７Ｈ）、７．１０〜
７．０１（ｍ，Ｃ６ＨおよびＣ５’Ｈ）、７．４２（ｄ，Ｊ＝８．２，Ｃ７’Ｈ
）、７．５８（ｐｔ，Ｃ６’Ｈ）、７．６５（ｄ，Ｊ＝７．４，Ｃ４’Ｈ）、８
．５６（ｄ，Ｊ_F,H＝１０．６，Ｃ４Ｈ）、１１．００（ｂ，Ｎ１ＨおよびＮ１
’Ｈ）；¹³Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ１０５．９３（ｓ，Ｃ３）、１１０
．１３（ｄｄ，Ｊ_C,H＝１６３．５，Ｊ_C,F＝８．７，Ｃ７）、１１１．３４（ｄ
ｄ，Ｊ_C,H＝１６９．３，Ｊ_C,F＝２７．６，Ｃ６）、１１３．５７（ｄ，Ｊ＝１
６２．０，Ｃ７’）、１１５．２４（ｄｄ，Ｊ_C,H＝１８８．９，Ｊ_C,F＝２４．
７，Ｃ４）１１８．９８（ｓ，Ｃ３ａ’）、１２１．６４（ｄ，Ｊ＝１６４．２
，Ｃ５’）、１２２．４１（ｄ，Ｊ_C,F＝１０．８，Ｃ３ａ）、１２４．５６（
ｄ，Ｊ＝１６３．５，Ｃ４’）、１３７．３１（ｓ，Ｃ７ａ）１３７．３６（ｄ
，Ｊ＝１６２．８，Ｃ６’）、１３９．１２（ｓ，Ｃ７ａ’）１５２．６０（ｓ
，Ｃ２’）、１５７．４０（ｄ，Ｊ_C,F＝２３３．２，Ｃ５）、１７１．０２（
ｓ，Ｃ２）、１８８．９６（ｓ，Ｃ３’）；ＭＳｍ／ｅ２８０（Ｍ⁺，１０
０）、２５２（７３）、２２３（３２）。分析値（Ｃ₁₆Ｈ₉ＦＮ₂Ｏ₂）Ｃ，Ｈ，
Ｎ。[0051] 5-fluoroindirubin Follow the method described for indirubin. 5-fluoroisatin 500m
g (3.03 mmol) and indoxyl acetate 530 mg (3.00 mmol
), 776 mg (92.4%) of purple powder are obtained; R_f= 0.
32 (ethyl acetate / hexane 1/2, v / v); 1H-NMR (DMSO-d ₆ ) Δ 6.87 (dd, J_{H, H}= 8.3, J_{H, H}= 4.7 C7H), 7.10
7.01 (m, C6H and C5'H), 7.42 (d, J = 8.2, C7'H
), 7.58 (pt, C6'H), 7.65 (d, J = 7.4, C4'H), 8
． 56 (d, J_{F, H}= 10.6, C4H), 11.00 (b, N1H and N1
’H);¹³C-NMR (DMSO-d₆) Δ 105.93 (s, C3), 110
． 13 (dd, J_{C, H}= 163.5, J_{C, F}= 8.7, C7), 111.34 (d
d, J_{C, H}= 169.3, J_{C, F}= 27.6, C6), 113.57 (d, J = 1)
62.0, C7 '), 115.24 (dd, J_{C, H}= 188.9, J_{C, F}= 24.
7, C4) 118.98 (s, C3a '), 121.64 (d, J = 164.2)
, C5 '), 122.41 (d, J_{C, F}= 10.8, C3a), 124.56 (
d, J = 163.5, C4 '), 137.31 (s, C7a) 137.36 (d
, J = 162.8, C6 '), 139.12 (s, C7a') 152.60 (s
, C2 '), 157.40 (d, J_{C, F}= 233.2, C5), 171.02 (
s, C2), 188.96 (s, C3 '); MS m / e 280 (M⁺, 10
0), 252 (73), 223 (32). Analytical value (C₁₆H₉FN₂O₂) C, H,
N.

【００５２】５−メチルインジルビンインジルビンに関して記載された方法に従う。５−メチルイサチン５００ｍｇ
（３．１０ミリモル）および酢酸インドキシル５４０ｍｇ（３．０７ミリモル）
から出発して、紫色の粉末７８１ｍｇ（９２．０％）が得られる；Ｒ_f＝０．４
４（酢酸エチル／ヘキサン１／２、ｖ／ｖ）；¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）
δ２．３３（ｓ，ＣＨ₃）、７．０８〜７．０（ｍ，Ｃ６ＨおよびＣ５’Ｈ）、
６．７９（ｄ，Ｊ＝７．９，Ｃ７Ｈ）、７．４２（ｄ，Ｊ＝７．９，Ｃ７’Ｈ）
、７．５８（ｐｔ，Ｃ６’Ｈ）、７．６４（ｄ，Ｊ＝７．６，Ｃ４’Ｈ）、８．
６３（ｓ，Ｃ４Ｈ）、１０．７９（ｓ）および１１．００（ｓ）（Ｎ１Ｈおよび
Ｎ１’Ｈ）；¹³Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ２０．９９（ｑ，Ｊ＝１２６．
５，ＣＨ３）、１０６．７９（ｓ，Ｃ３）、１０９．１７（ｄ，Ｊ＝１６１．３
，Ｃ７，）、１１３．３３（ｄ，Ｊ＝１６８．５，Ｃ７’）、１１９．９４（ｓ
，Ｃ３ａ’）、１２１．０９（ｄ，Ｊ＝１６４．４Ｃ５’）１２１．４５（ｓ
，Ｃ３ａ）、１２４．１９（ｄ，Ｊ＝１６３．７，Ｃ４’）、１２５．１１（ｄ
，Ｊ＝１６４．４，Ｃ６）、１２９．７２（ｄ，Ｊ＝１５７．４，Ｃ４）、１２
９．７２（ｓ，Ｃ５）１３６．９６（ｄ，Ｊ＝１６１．６，Ｃ６’）、１３８．
０８（ｓ）および１３８．６５（ｓ）（Ｃ７ａおよびＣ７ａ’）、１５２．３８
（ｓ，Ｃ２’）、１７１．９３（ｓ，Ｃ２）、１８８．４９（ｓ，Ｃ３’）；Ｍ
Ｓｍ／ｅ２７６（Ｍ⁺，１００）、２６１（１０）、２４８（４７）、２４
７（５３）。分析値（Ｃ₁₇Ｈ₁₂Ｎ₂Ｏ₂）Ｃ，Ｈ，Ｎ。 5-Methylindirubin Follow the method described for indirubin. 5-methylisatin 500mg
(3.10 mmol) and 540 mg (3.07 mmol) of indoxyl acetate.
Starting from, 781 mg (92.0%) of purple powder are obtained; R _f = 0.4.
4 (ethyl acetate / hexane 1/2, v / v); ¹ H-NMR (DMSO-d ₆ ).
δ 2.33 (s, CH ₃ ), 7.08 to 7.0 (m, C6H and C5′H),
6.79 (d, J = 7.9, C7H), 7.42 (d, J = 7.9, C7'H)
, 7.58 (pt, C6′H), 7.64 (d, J = 7.6, C4′H), 8.
63 (s, C4H), 10.79 (s) and 11.00 (s) (N1H and N1′H); ¹³ C-NMR (DMSO-d ₆ ) δ20.99 (q, J = 126.
5, CH3), 106.79 (s, C3), 109.17 (d, J = 161.3)
, C7,), 113.33 (d, J = 168.5, C7 ′), 119.94 (s
, C3a ′), 121.09 (d, J = 164.4 C5 ′) 121.45 (s
, C3a), 124.19 (d, J = 163.7, C4 ′), 125.11 (d
, J = 164.4, C6), 129.72 (d, J = 157.4, C4), 12
9.72 (s, C5) 136.96 (d, J = 161.6, C6 '), 138.
08 (s) and 138.65 (s) (C7a and C7a '), 152.38
(S, C2 '), 171.93 (s, C2), 188.49 (s, C3'); M
S m / e 276 (M ⁺ , 100), 261 (10), 248 (47), 24
7 (53). Analytical value (C ₁₇ H ₁₂ N ₂ O ₂ ) C, H, N.

【００５３】５−ニトロインジルビンインジルビンに関して記載された方法に従う。５−ニトロイサチン１．００ｇ
（５．２０ミリモル）および酢酸インドキシル９００ｍｇ（５．１４ミリモル）
から出発して、紫色の粉末１．３９ｇ（８８．２％）が得られる；Ｒ_f＝０．１
６（酢酸エチル／ヘキサン１／２、ｖ／ｖ）；¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）
δ７．０１（ｄ，Ｊ＝８．７，Ｃ７Ｈ）、７．０５（ｐｔ，Ｃ５’Ｈ）、７．４
０（ｄ，Ｊ＝８．１，Ｃ７’）、７．５８（ｐｔ，Ｃ６’Ｈ）、７．６４（ｄ，
Ｊ＝７．５，Ｃ４’Ｈ）、８．１３（ｄ，Ｊ＝８．７，Ｃ６Ｈ）、９．６０（ｓ
，Ｃ４Ｈ）、１１．１５（ｓ）および１１．４９（ｓ）（Ｎ１ＨおよびＮ１’Ｈ
）；¹³Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆ δ１０３．５１（ｓ，Ｃ３）、１０９．２
７（ｄ，Ｊ＝１６７．８，Ｃ７）、１１３．６８（ｄ，Ｊ＝１６７．８，Ｃ７’
）、１１８．８３（ｓ，Ｃ３ａ’）、１１９．４８（ｄ，Ｊ＝１６７．８Ｃ６
）１２１．５９（ｓ，Ｃ３ａ）、１２１．９７（ｄ，Ｊ＝１６３．０，Ｃ５’）
、１２４．６０（ｄ）および１２４．６９（ｄ）（Ｃ４およびＣ４’）、１３７
．３７（ｄ，Ｊ＝１６１．６，Ｃ６’）、１３９．９７（ｓ，Ｃ５）１３６．９
６（ｄ，Ｊ＝１６１．６，Ｃ６’）、１３８、（ｓ）および１３８．６５（ｓ，
Ｃ７ａ’）、１４１．６３（ｓ，Ｃ５）、１４５．７１（ｓ，Ｃ７ａ）、１５２
．３８（ｓ，Ｃ２’）、１７０．９３（ｓ，Ｃ２）、１８８．７８（ｓ，Ｃ３’
）；ＭＳｍ／ｅ３０７（Ｍ⁺，１００）、２７６（１０）、２６２（１００
）、２３４（２３）。分析値（Ｃ₁₆Ｈ₉Ｎ₃Ｏ₄）Ｃ，Ｈ，Ｎ。 5-Nitroindirubin Follow the method described for indirubin. 5-nitroisatin 1.00g
(5.20 mmol) and 900 mg (5.14 mmol) of indoxyl acetate.
1.39 g (88.2%) of purple powder are obtained starting from R _f = 0.1.
6 (ethyl acetate / hexane 1/2, v / v); ¹ H-NMR (DMSO-d ₆ ).
δ 7.01 (d, J = 8.7, C7H), 7.05 (pt, C5′H), 7.4
0 (d, J = 8.1, C7 '), 7.58 (pt, C6'H), 7.64 (d,
J = 7.5, C4′H), 8.13 (d, J = 8.7, C6H), 9.60 (s
, C4H), 11.15 (s) and 11.49 (s) (N1H and N1′H
); ¹³ C-NMR (DMSO-d ₆ δ103.51 (s, C3), 109.2.
7 (d, J = 167.8, C7), 113.68 (d, J = 167.8, C7 ′)
), 118.83 (s, C3a ′), 119.48 (d, J = 167.8 C6)
) 121.59 (s, C3a), 121.97 (d, J = 163.0, C5 ')
, 124.60 (d) and 124.69 (d) (C4 and C4 '), 137.
． 37 (d, J = 161.6, C6 '), 139.97 (s, C5) 136.9
6 (d, J = 161.6, C6 ′), 138, (s) and 138.65 (s,
C7a '), 141.63 (s, C5), 145.71 (s, C7a), 152
． 38 (s, C2 '), 170.93 (s, C2), 188.78 (s, C3')
); MS m / e 307 (M ⁺ , 100), 276 (10), 262 (100
), 234 (23). Analytical value (C ₁₆ H ₉ N ₃ O ₄ ) C, H, N.

【００５４】インジルビン−５−スルホン酸（ナトリウム塩）インジルビンに関して記載された方法に従う。イサチン−５−スルホン酸のナ
トリウム塩（二水和物）２５０ｍｇ（１．００ミリモル）および酢酸インドキシ
ル１７０ｍｇ（０．９７１ミリモル）から出発して、紫色の固体２５８ｍｇ（７
０．８％）が得られる；Ｒ_f＝０．７３（エタノール）；¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ
−ｄ₆）δ６．８４（ｄ，Ｊ＝８．０，Ｃ７Ｈ）、７．０４（ｍ，Ｃ５’Ｈ）、
７．４３（ｄ，Ｊ＝８．０，Ｃ７’Ｈ）、７．５４〜７．６１（ｍ，Ｃ４’Ｈお
よびＣ６’Ｈ）、７．６７（ｄ，Ｊ＝７．４，Ｃ６Ｈ）、９．１３（ｓ，Ｃ４Ｈ
）、１０．９９（ｓ）および１１．０５（ｓ）（Ｎ１ＨおよびＮ１’Ｈ）；¹³Ｃ
−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ１０６．２５（ｓ，Ｃ３）、１０８．２０（ｄ，
Ｊ＝１６３．３，Ｃ７）、１１３．３９（ｄ，Ｊ＝１６８．６，Ｃ７’）、１２
０．５０（ｓ）および１１８．９８（ｓ）（Ｃ３ａおよびＣ３ａ’）、１２１．
２８（ｄ，Ｊ＝１５７．９Ｃ５’）１２２．５７（ｄ，Ｊ＝１６９．４，Ｃ６
）、１２４．２７（ｄ，Ｊ＝１６５．６，Ｃ４’）、１２６．８３（ｄ，Ｊ＝１
６３．３，Ｃ４）、１３７．０２（ｄ，Ｊ＝１６１．０，Ｃ６’）、１３８．４
５（ｓ，Ｃ５）、１４０．８９（ｓ）および１４１．６４（ｓ）（Ｃ７ａおよび
Ｃ７ａ’）、１５２．３９（ｓ，Ｃ２’）、１７１．１４（ｓ，Ｃ２）、１８８
．３３（ｓ，Ｃ３’）。分析値（Ｃ₁₆Ｈ₉Ｎ₂ＮａＯ₅Ｓ１．５Ｈ₂Ｏ）Ｃ，Ｈ
，Ｎ。 Indirubin-5-sulfonic acid (sodium salt) Follow the method described for indirubin. Starting from 250 mg (1.00 mmol) of the sodium salt of isatin-5-sulfonic acid (dihydrate) and 170 mg (0.971 mmol) of indoxyl acetate, 258 mg (7
0.8%) is obtained; R _f = 0.73 (ethanol); ¹ H-NMR (DMSO
−d ₆ ) δ6.84 (d, J = 8.0, C7H), 7.04 (m, C5′H),
7.43 (d, J = 8.0, C7′H), 7.54 to 7.61 (m, C4′H and C6′H), 7.67 (d, J = 7.4, C6H) , 9.13 (s, C4H
), 10.99 (s) and 11.05 (s) (N1H and N1'H); ¹³ C
_{-NMR (DMSO-d 6) δ106.25} (s, C3), 108.20 (d,
J = 163.3, C7), 113.39 (d, J = 168.6, C7 '), 12
0.50 (s) and 118.98 (s) (C3a and C3a '), 121.
28 (d, J = 157.9 C5 ′) 122.57 (d, J = 169.4, C6)
), 124.27 (d, J = 165.6, C4 ′), 126.83 (d, J = 1)
63.3, C4), 137.02 (d, J = 161.0, C6 '), 138.4
5 (s, C5), 140.89 (s) and 141.64 (s) (C7a and C7a '), 152.39 (s, C2'), 171.14 (s, C2), 188
． 33 (s, C3 '). Analytical value (C ₁₆ H ₉ N ₂ NaO ₅ S 1.5 H ₂ O) C, H
, N.

【００５５】５’−ブロモインジルビンインジルビンに関して記載された方法に従う。イサチン５９ｍｇ（０．４０ミ
リモル）および酢酸５−ブロモ−インドキシル１００ｍｇ（０．３９４ミリモル
）から出発して、紫色の粉末１２３ｍｇ（９２．６％）が得られる；Ｒ_f＝０．
５９（酢酸エチル／ヘキサン１／１、ｖ／ｖ）；¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆ ）δ６．８９（ｄ，Ｊ＝７．８，Ｃ７Ｈ）、７．０２（ｐｔ，Ｃ５Ｈ）、７．２
６（ｐｔ，Ｃ６Ｈ）、７．３９（ｄ，Ｊ＝８．５，Ｃ７’Ｈ）、７．７１（ｄ，
Ｊ＝８．５，Ｃ６’Ｈ）、７．７６（ｓ，Ｃ４’Ｈ）、８．７３（ｄ，Ｊ＝７．
８，Ｃ４Ｈ）、１０．８９（ｓ）および１１．０８（ｓ）（Ｎ１ＨおよびＮ１’
Ｈ）；¹³Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ１０７．４３（ｓ，Ｃ３）、１０９．
５４（ｄ，Ｊ＝１６１．４，Ｃ７）、１１２．６３（ｓ，Ｃ５’）、１１５．４
９（ｄ，Ｊ＝１６９．４，Ｃ７’）、１２０．６４（ｓ）および１２１．２０（
ｓ）（Ｃ３ａおよびＣ３ａ’）、１２１．２０（ｄ，Ｊ＝１６０．０Ｃ５）１
２４．６９（ｄ，Ｊ＝１５４．５，Ｃ６）、１２６．３１（ｄ，Ｊ＝１６３．０
，Ｃ４’）、１２９．５６（ｄ，Ｊ＝１５９．０，Ｃ４）、１３７．６９（ｓ，
Ｃ７ａ’）、１３８．８７（ｄ，Ｊ＝１６６．１，Ｃ６’）、１４１．０５（ｓ
，Ｃ７ａ）、１５１．２３（ｓ，Ｃ２’）、１７０．６４（ｓ，Ｃ２）、１８７
．１５（ｓ，Ｃ３’）；ＭＳｍ／ｅ３４２（Ｍ⁺，１００）、３４０（Ｍ⁺，
１００）、３１４（１６）、３１２（１６）、２６１（１）、２３３（４４）。
分析値（Ｃ₁₆Ｈ₉ＢｒＮ₂Ｏ₂）Ｈ，Ｎ，Ｃ：計算値５６．３；実測値５５．７。 5′-Bromoindirubin Follow the method described for indirubin. Starting from 59 mg (0.40 mmol) isatin and 100 mg (0.394 mmol) 5-bromo-indoxyl acetate, 123 mg (92.6%) of purple powder are obtained; R _f = 0.
59 (ethyl acetate / hexane 1/1, v / v); ¹ H-NMR (DMSO-d ₆ ) δ 6.89 (d, J = 7.8, C7H), 7.02 (pt, C5H), 7 .2
6 (pt, C6H), 7.39 (d, J = 8.5, C7′H), 7.71 (d,
J = 8.5, C6′H), 7.76 (s, C4′H), 8.73 (d, J = 7.
8, C4H), 10.89 (s) and 11.08 (s) (N1H and N1 '
H); ¹³ C-NMR (DMSO-d ₆ ) δ 107.43 (s, C3), 109.
54 (d, J = 161.4, C7), 112.63 (s, C5 '), 115.4
9 (d, J = 169.4, C7 ′), 120.64 (s) and 121.20 (
s) (C3a and C3a '), 121.20 (d, J = 160.0 C5) 1
24.69 (d, J = 154.5, C6), 126.31 (d, J = 163.0)
, C4 ′), 129.56 (d, J = 159.0, C4), 137.69 (s,
C7a '), 138.87 (d, J = 166.1, C6'), 141.05 (s
, C7a), 151.23 (s, C2 ′), 170.64 (s, C2), 187
． 15 (s, C3 ′); MS m / e 342 (M ⁺ , 100), 340 (M ⁺ ,
100), 314 (16), 312 (16), 261 (1), 233 (44).
Analysis _{_{_{(C 16 H 9 BrN 2 O}}} 2) H, N, C: calc 56.3; found 55.7.

【００５６】５，５’−ジブロモインジルビンインジルビンに関して記載された方法に従う。５−ブロモイサチン８９ｍｇ（
０．３９ミリモル）および酢酸５−ブロモ−インドキシル１００ｍｇ（０．３９
４ミリモル）から出発して、紫色の粉末１５４ｍｇ（９４．０％）が得られる； ¹ Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ６．８４（ｄ，Ｊ＝８．１，Ｃ７Ｈ）、７．４
２〜７．３６（ｍ，Ｃ６ＨおよびＣ７’Ｈ）、７．７１（ｄ，Ｊ＝８．５，Ｃ６
’Ｈ）、７．７６（ｓ，Ｃ４’Ｈ）、８．８８（ｓ，Ｃ４Ｈ）、１１．０１（ｓ
）および１１．１６（ｓ）（Ｎ１ＨおよびＮ１’Ｈ）；ＭＳｍ／ｅ４２２（
Ｍ⁺，４７）、４２０（Ｍ⁺，１００）、４１８（Ｍ⁺，４８）、３９４（３）、
３９２（７）、３９０（３）、３４２（２５）、３４０（２５）、３１３（１５
）、３１１（１５）。分析値（Ｃ₁₆Ｈ₈Ｂｒ₂Ｎ₂Ｏ₂）Ｃ，Ｈ，Ｎ。[0056] 5,5'-dibromoindirubin Follow the method described for indirubin. 89 mg of 5-bromoisatin (
0.39 mmol) and 5-bromo-indoxyl acetate 100 mg (0.39
Starting from 4 mmol) 154 mg (94.0%) of a purple powder are obtained; ¹ 1 H-NMR (DMSO-d₆) Δ 6.84 (d, J = 8.1, C7H), 7.4
2 to 7.36 (m, C6H and C7'H), 7.71 (d, J = 8.5, C6
'H), 7.76 (s, C4'H), 8.88 (s, C4H), 11.01 (s
) And 11.16 (s) (N1H and N1'H); MS m / e 422 (
M⁺, 47), 420 (M⁺, 100), 418 (M⁺, 48), 394 (3),
392 (7), 390 (3), 342 (25), 340 (25), 313 (15
) 311 (15). Analytical value (C₁₆H₈Br₂N₂O₂) C, H, N.

【００５７】５’−ブロモインジルビン−５−スルホン酸（ナトリウム塩）インジルビンに関して記載された方法に従う。イサチン−５−スルホン酸のナ
トリウム塩（二水和物）２２４ｍｇ（０．７８７ミリモル）および酢酸５−ブロ
モ−インドキシル１９０ｍｇ（０．７４８ミリモル）から出発して、紫色の粉末
２０４ｍｇ（５６．９％）が得られる；¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ６．８
２（ｄ，Ｊ＝８．０，Ｃ７Ｈ）、７．４０（ｄ，Ｊ＝８．５，Ｃ７’Ｈ）、７．
５５（ｄ，Ｊ＝８．０，Ｃ６Ｈ）、７．７３（ｄ，Ｊ＝８．５，Ｃ６’Ｈ）、７
．７９（ｓ，Ｃ４’Ｈ）、９．０９（ｓ，Ｃ４Ｈ）、１１．１１（ｂ，Ｎ１Ｈお
よびＮ１’Ｈ）。分析値（Ｃ₁₆Ｈ₈ＢＲ₂Ｎ₂ＮａＯ₅Ｓ₂Ｈ₂Ｏ）Ｈ，Ｎ，Ｃ：計算
値４０．１；実測値３９．６。Follow the method described for 5′-bromoindirubin-5-sulfonic acid (sodium salt) indirubin. Starting from 224 mg (0.787 mmol) of the sodium salt of isatin-5-sulfonic acid (dihydrate) and 190 mg (0.748 mmol) of 5-bromo-indoxyl acetate, 204 mg (56.9) of purple powder. %) Is obtained; ¹ H-NMR (DMSO-d ₆ ) δ 6.8.
2 (d, J = 8.0, C7H), 7.40 (d, J = 8.5, C7′H), 7.
55 (d, J = 8.0, C6H), 7.73 (d, J = 8.5, C6′H), 7
． 79 (s, C4'H), 9.09 (s, C4H), 11.11 (b, N1H and N1'H). Analysis _{_{_{(C 16 H 8 BR 2 N}}} 2 NaO 5 S 2 H 2 O) H, N, C: calc 40.1; found 39.6.

【００５８】インジルビン−３’−モノオキシムこの化合物をＦａｒｂｗｅｒｋｅｖｏｒｍ．ＭｅｉｓｔｅｒＬｕｃｉｕｓ
＆ＢｒｕeｎｉｎｇによりＨｏｅｃｈｓｔａ．Ｍ．Ｖｅｒｆａｈｒｅｎｚ
ｕｒＨｅｒｓｔｅｌｌｕｎｇｖｏｎＤｅｒｉｖａｔｅｎｄｅｒＩｎｄ
ｉｒｕｂｉｎｅ．ＤＲＰ２８３７２６に記載されているように調製する。粗製
生成物をエタノール／水（７／２、ｖ／ｖ）から再結晶化させる。所望の化合物
が暗赤色結晶の形で得られる；Ｒ_f＝０．５５（酢酸エチル／ヘキサン、１／１
、ｖ／ｖ）；¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ６．９０（ｄ，Ｊ＝７．９，Ｃ７
Ｈ）、７．４２（ｄ，Ｊ＝７．９，Ｃ７’Ｈ）、７．５８（ｐｔ，Ｃ６’Ｈ）、
７．６４（ｄ，Ｊ＝７．６，Ｃ７Ｈ）、６．９５（ｍ，Ｃ５Ｈ）、７．０３（ｍ
，Ｃ５’Ｈ）、７．１３（ｍ，Ｃ６Ｈ）、７．４１（ｍ，Ｃ６’ＨおよびＣ７’
Ｈ）、８．２４（ｄ，Ｊ＝７．２，Ｃ４Ｈ）、８．６５（ｄ，Ｊ＝７．２，Ｃ４
Ｈ）、１０．７２（ｓ）および１１．７３（ｓ）（Ｎ１ＨおよびＮ１’Ｈ）、１
３．４８（ｓ，ＮＯＨ）；¹³Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ９８．８８（ｓ，
Ｃ３）、１０８．９１（ｄ，Ｊ＝１６２．３，Ｃ７）、１１１．５２（ｄ，Ｊ＝
１６５．８，Ｃ７’）、１１６．５４（ｓ，Ｃ３ａ’）、１２０．４３（ｄ，１
６０．２，Ｃ５’）、１２１．４９（ｄ，Ｊ＝１６１．６Ｃ５）１２２．６６
（ｓ，Ｃ３ａ）、１２３．０９（ｄ，Ｊ＝１６５．１，Ｃ６）、１２５．９２（
ｄ，Ｊ＝１５４．０，Ｃ４）、１２７．９５（ｄ，Ｊ＝１６４．４，Ｃ４’）、
１３２．０２（ｄ，Ｊ＝１５９．５，Ｃ６’）、１３８．３４（ｓ，Ｃ７ａ）、
１４４．８３（ｓ，Ｃ７ａ’）、１４５．３２（ｓ，Ｃ２’）、１５１．２２（
ｓ，Ｃ３’）、１７０．９５（ｓ，Ｃ２）；ＭＳｍ／ｅ２７７（Ｍ⁺，１０
０％）、２６０（８７％）、２４７（２４％）、２２０（１４％）、２０５（１
１）。分析値（Ｃ₁₆Ｈ₁₁Ｎ₃Ｏ₂ ０．２５Ｈ₂Ｏ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。 Indirubin-3'-monooxime This compound was prepared according to the method of Farbwerke vorm. Meister Lucius
& Brüning by Hoechst a. M. Verfahren z
ur Herstellung von Deriveden der Ind
irubine. Prepare as described in DRP 283726. The crude product is recrystallized from ethanol / water (7/2, v / v). The desired compound is obtained in the form of dark red crystals; R _f = 0.55 (ethyl acetate / hexane, 1/1
, V / v); ¹ H-NMR (DMSO-d ₆ ) δ6.90 (d, J = 7.9, C7)
H), 7.42 (d, J = 7.9, C7′H), 7.58 (pt, C6′H),
7.64 (d, J = 7.6, C7H), 6.95 (m, C5H), 7.03 (m
, C5'H), 7.13 (m, C6H), 7.41 (m, C6'H and C7 '
H), 8.24 (d, J = 7.2, C4H), 8.65 (d, J = 7.2, C4)
H), 10.72 (s) and 11.73 (s) (N1H and N1'H), 1
3.48 (s, NOH); ¹³ C-NMR (DMSO-d ₆ ) δ98.88 (s,
C3), 108.91 (d, J = 162.3, C7), 111.52 (d, J =
165.8, C7 '), 116.54 (s, C3a'), 120.43 (d, 1)
60.2, C5 '), 121.49 (d, J = 161.6 C5) 122.66.
(S, C3a), 123.09 (d, J = 165.1, C6), 125.92 (
d, J = 154.0, C4), 127.95 (d, J = 164.4, C4 '),
132.02 (d, J = 159.5, C6 '), 138.34 (s, C7a),
144.83 (s, C7a '), 145.32 (s, C2'), 151.22 (
s, C3 '), 170.95 (s, C2); MS m / e 277 (M ⁺ , 10
0%), 260 (87%), 247 (24%), 220 (14%), 205 (1
1). Analytical value (C ₁₆ H ₁₁ N ₃ O ₂ 0.25 H ₂ O) C, H, N.

【００５９】５−ヨードインジルビン−３’−オキシムインジルビン−３’−モノオキシムに関して記載された方法に従う。ピリジン
７．５ｍｌ中のインジルビン−３’−モノオキシム２５０ｍｇ（０．６４４ミリ
モル）および塩酸ヒドロキシルアミン１７５ｍｇ（２．５２ミリモル）から出発
して、沈殿物が得られる。粗製生成物を水で洗浄し、エタノールから再結晶化さ
せる。赤色の結晶１１９ｍｇ（４５．９％）が得られる；Ｒ_f＝８．５０（酢酸
エチル／ヘキサン、１／１、ｖ／ｖ）：¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）６．７３
（ｄ，Ｊ＝６．７，Ｃ７Ｈ）、７．０９〜７．０１（ｍ，Ｃ５’Ｈ）、７．４４
〜７．４０（ｍ，Ｃ６，Ｃ６’Ｈ，およびＣ７’Ｈ）、８．２６（ｄ，Ｊ＝７．
６，Ｃ４’Ｈ）、８．９０（ｓ，Ｃ４Ｈ）、１０．７９（ｓ）および１１．８８
（ｓ）（Ｎ１ＨおよびＮ１’Ｈ）、１３．６８（ｓ，ＮＯＨ）；¹³Ｃ−ＮＭＲ（
ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ８３．６９（ｓ，Ｃ５）、９６．５９（ｓ，Ｃ３）、１１０
．８９（ｄ，Ｃ７）、１１１．５１ｄ，Ｃ７’）、１１６．４４（ｓ，Ｃ３ａ
’）、１２１．７７（ｄ，Ｃ５’）、１２５．４０（ｓ，Ｃ３ａ）、１２７．４
２（ｄ，Ｃ４’）、１３０．００（ｄ，Ｃ６）、１３１．５２（ｄ，Ｃ６’）、
１３３．４０（ｄ，Ｃ４）、１３７．２０（ｓ，Ｃ７ａ）、１４４．０１（ｓ，
Ｃ７ａ’）、１４６．６８（ｓ，Ｃ２’）、１５１．５２（ｓ，Ｃ３’）、１７
０．２５（ｓ，Ｃ２）；ＭＳｍ／ｅ４０３（Ｍ⁺，１００）、３８７（９）
、３７３（１０）、２７６（５）、２６０（４６）。分析値（Ｃ₁₇Ｈ₁₂Ｎ₂Ｏ₂）
Ｃ，Ｈ，Ｎ。 5-Iodoindirubin-3′-oxime Follow the method described for indirubin-3′-monooxime. A precipitate is obtained starting from 250 mg (0.644 mmol) indirubin-3′-monooxime and 175 mg (2.52 mmol) hydroxylamine hydrochloride in 7.5 ml pyridine. The crude product is washed with water and recrystallized from ethanol. 119 mg (45.9%) of red crystals are obtained; R _f = 8.50 (ethyl acetate / hexane, 1/1, v / v): ¹ H-NMR (DMSO-d ₆ ) 6.73.
(D, J = 6.7, C7H), 7.09 to 7.01 (m, C5′H), 7.44
˜7.40 (m, C6, C6′H, and C7′H), 8.26 (d, J = 7.
6, C4'H), 8.90 (s, C4H), 10.79 (s) and 11.88.
(S) (N1H and N1′H), 13.68 (s, NOH); ¹³ C-NMR (
DMSO-d ₆ ) δ83.69 (s, C5), 96.59 (s, C3), 110
． 89 (d, C7), 111.51 d, C7 '), 116.44 (s, C3a
'), 121.77 (d, C5'), 125.40 (s, C3a), 127.4
2 (d, C4 '), 130.00 (d, C6), 131.52 (d, C6'),
133.40 (d, C4), 137.20 (s, C7a), 144.01 (s,
C7a '), 146.68 (s, C2'), 151.52 (s, C3 '), 17
0.25 (s, C2); MS m / e 403 (M ⁺ , 100), 387 (9).
, 373 (10), 276 (5), 260 (46). Analytical value (C ₁₇ H ₁₂ N ₂ O ₂ )
C, H, N.

【００６０】６−ヨードインジルビンインジルビンに関して記載された方法に従う。６−ヨードイサチン２５０ｍｇ
（０．９２ミリモル）および酢酸インドキシル１２０ｍｇ（０．６９ミリモル）
から出発して、紫色の粉末１８２ｍｇ（６８．０％）が得られる；Ｒ_f＝０．４
７（酢酸エチル／ヘキサン、１／１、ｖ／ｖ）；¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）
δ７．０１（ｐｔ，Ｊ＝７．５，Ｃ５’Ｈ）、７．１９（ｓ，Ｃ７Ｈ）、７．３
８（ｍ，Ｃ５ＨおよびＣ７’Ｈ）、７．５６（ｐｔ，Ｊ＝７．３，Ｃ６’Ｈ）、
７．６２（ｄ，Ｊ＝７．６，Ｃ４’Ｈ）、８．４９（ｄ，Ｊ＝８．３，Ｃ４Ｈ）
、１０．９３（ｓ）および１１．０３（ｓ）（Ｎ１ＨおよびＮ１’Ｈ）；¹³Ｃ−
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ９４．６０（ｄ，Ｊ＝１０．４，Ｃ６）、１０５．
５７（ｓ，Ｃ３）、１１３．７１（ｄ，Ｊ＝１６９．５，Ｃ７’）、１１８．０
５（ｄ，Ｊ＝１６７．１，Ｃ４’）、１１９．１７（ｓ，Ｃ３ａ’）、１２１．
２４（ｓ，Ｃ３ａ）、１２１．６５（ｄ，Ｊ＝１６３．４，Ｃ７）、１２４．５
６（ｄ，Ｊ＝１６３．４，Ｃ５’）、１２６．１７（ｄ，Ｊ＝１６７．１，Ｃ４
）、１２９．９９（ｄ，Ｊ＝１６７．５，Ｃ５）、１３７．２９（ｄ，Ｊ＝１６
１．０，Ｃ６’）、１３９．０７（ｓ，Ｃ７ａ’）、１４２．１２（ｓ，Ｃ７ａ
）、１５２．５６（ｓ，Ｃ２’）、１７０．７０（ｓ，Ｃ２）、１８８．８３（
ｓ，Ｃ３’）；ＭＳｍ／ｅ３８８（Ｍ⁺，１００）、３６０（９）、２６１
（１５）、２３３（５３）、２０５（５３）、１２７（２）。分析値（Ｃ₁₆Ｈ₉
ＩＮ₂Ｏ₂）Ｈ，Ｎ，Ｃ：計算値４９．５％；実測値４８．５％。 6-Iodoindirubin Follow the method described for indirubin. 250 mg of 6-iodoisatin
(0.92 mmol) and indoxyl acetate 120 mg (0.69 mmol)
182 mg (68.0%) of purple powder are obtained starting from R _f = 0.4.
7 (ethyl acetate / hexane, 1/1, v / v); ¹ H-NMR (DMSO-d ₆ ).
δ 7.01 (pt, J = 7.5, C5′H), 7.19 (s, C7H), 7.3
8 (m, C5H and C7′H), 7.56 (pt, J = 7.3, C6′H),
7.62 (d, J = 7.6, C4'H), 8.49 (d, J = 8.3, C4H)
, 10.93 (s) and 11.03 (s) (N1H and N1'H); ¹³ C-
_{NMR (DMSO-d 6) δ94.60} (d, J = 10.4, C6), 105.
57 (s, C3), 113.71 (d, J = 169.5, C7 '), 118.0
5 (d, J = 167.1, C4 '), 119.17 (s, C3a'), 121.
24 (s, C3a), 121.65 (d, J = 163.4, C7), 124.5
6 (d, J = 163.4, C5 ′), 126.17 (d, J = 167.1, C4)
), 129.99 (d, J = 167.5, C5), 137.29 (d, J = 16)
1.0, C6 '), 139.07 (s, C7a'), 142.12 (s, C7a)
), 152.56 (s, C2 ′), 170.70 (s, C2), 188.83 (
s, C3 '); MS m / e 388 (M ⁺ , 100), 360 (9), 261.
(15), 233 (53), 205 (53), 127 (2). Analytical value (C ₁₆ H ₉
IN ₂ O ₂ ) H, N, C: calculated 49.5%; found 48.5%.

【００６１】１−メチルインジルビンインジルビンに関して記載された方法に従う。１−メチルイサチン２００ｍｇ
（１．２４ミリモル）および酢酸インドキシル２１７ｍｇ（１．２４ミリモル）
から出発して、粗製生成物をピリジンから再結晶化させ、昇華させて（１４０℃
、真空下）、淡紫色の透明なビーズ状物１９５ｍｇ（５６．９％）が得られる；
Ｒ_f＝０．８８（酢酸エチル／ヘキサン、３／２、ｖ／ｖ）；¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭ
ＳＯ−ｄ₆）．δ３．２９（ｓ，ＣＨ₃）、７．０２〜７．１２（ｍ，Ｃ５Ｈ，Ｃ
７Ｈ，およびＣ５’Ｈ）、７．３５（ｐｔ，Ｃ６Ｈ）、７．４３（ｄ，Ｊ＝８．
３，Ｃ７’Ｈ）、７．５９（ｐｔ，Ｃ６’Ｈ）、７．６７（ｄ，Ｊ＝７．６，Ｃ
４’Ｈ）、８．８１（ｄ，Ｊ＝７．３，Ｃ４Ｈ）、１１．０７（ｓ，Ｎ１’Ｈ）
；ＭＳｍ／ｅ２７６（Ｍ⁺，１００）、２４８（２５）、２４７（５４）。
分析値（Ｃ₁₇Ｈ₁₂Ｎ₂Ｏ₂）Ｃ，Ｈ，Ｎ。 1-Methylindirubin Follow the method described for indirubin. 1-methylisatin 200mg
(1.24 mmol) and 217 mg (1.24 mmol) of indoxyl acetate.
Starting from, the crude product was recrystallized from pyridine and sublimed (140 ° C.
, Under vacuum), 195 mg (56.9%) of pale purple transparent beads are obtained;
R _f = 0.88 (ethyl acetate / hexane, 3/2, v / v); ¹ H-NMR (DM
SO-d _6). δ 3.29 (s, CH ₃ ), 7.02 to 7.12 (m, C5H, C
7H, and C5'H), 7.35 (pt, C6H), 7.43 (d, J = 8.
3, C7′H), 7.59 (pt, C6′H), 7.67 (d, J = 7.6, C
4'H), 8.81 (d, J = 7.3, C4H), 11.07 (s, N1'H)
MS m / e 276 (M ⁺ , 100), 248 (25), 247 (54).
Analytical value (C ₁₇ H ₁₂ N ₂ O ₂ ) C, H, N.

【００６２】１−フェニルインジルビンインジルビンに関して記載された方法に従う。１−フェニルイサチン５００ｍ
ｇ（２．２４ミリモル）および酢酸インドキシル３３４ｍｇ（１．９０ミリモル
）から出発して、紫色の粉末５９７ｍｇ（９２．６％）が得られる；Ｒ_f＝０．
９２（酢酸エチル／ヘキサン、１／１、ｖ／ｖ）；¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆ ）δ６．８３（ｐｔ，Ｊ＝７．３，Ｃ７Ｈ）、７．０５（ｐｔ，Ｃ５’Ｈ），７
．１６（ｐｔ，Ｃ５Ｈ）、７．２９（ｐｔ，Ｃ６Ｈ）、７．４２（ｄ，Ｊ＝８．
０，Ｃ７’Ｈ）、７．５３〜７．４８（ｍ）および７．６４〜７．５８（ｍ）（
Ｃ６’ｈおよび５フェニル−Ｈ；７．６９（ｄ，Ｊ＝７．３，Ｃ４’Ｈ）、８．
９２（ｄ，Ｊ＝７．６，Ｃ４Ｈ），１１．１７（ｓ，Ｎ１’Ｈ）；¹³Ｃ−ＮＭＲ
（ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ１０４．９６（ｓ，Ｃ３），１０８．７１（ｓ，Ｃ７）、
１１３．４８（ｓ，Ｃ７’）、１１８．９６（ｓ，Ｃ３ａ’）、１２０．８０（
ｓ，Ｃ３ａ）、１２１．５０（ｄ，Ｊ＝１５９．１，Ｈｚ）、および１２２．３
４（ｄ，Ｊ_C,H＝１６０．８，Ｈｚ）、（Ｃ５およびＣ５’）、１２４．４４（
ｄ）および１２４．５６（ｄ）（Ｃ６およびＣ４’）、１２６．７５（ｄ，Ｊ＝
１６１．５，Ｃ３”およびＣ５”）、１２７．９３（ｄ，Ｊ＝１６１．５，Ｈｚ
）および１２８．９９（ｄ，Ｊ＝１６０．８Ｈｚ）（Ｃ４およびＣ４”）、１２
９．４６（ｄ，Ｊ＝１６１．５，Ｃ２”およびＣ６”）、１３７．１８（ｄ，Ｊ
＝１６１．６，Ｃ６’）、１３９．１１（ｓ）および１３３．９７（ｓ）（Ｃ７
ａ’およびＣ１”）、１４１．３４（ｓ，Ｃ７ａ）、１５２．３２（ｓ，Ｃ２’
）、１６８．３６（ｓ，Ｃ２）、１８８．４４（ｓ，Ｃ３’）；ＭＳｍ／ｅ
３８８（Ｍ⁺，１００）、３１１（１３）、３１０（５８）、３０９（３９）。
分析値（Ｃ₂₂Ｈ₁₄Ｎ₂Ｏ₂）Ｃ，Ｈ，Ｎ。 1-Phenylindirubin Follow the method described for indirubin. 1-phenyl isatin 500m
Starting from g (2.24 mmol) and indoxyl acetate 334 mg (1.90 mmol), 597 mg (92.6%) of a purple powder are obtained; R _f = 0.
92 (ethyl acetate / hexane, 1/1, v / v); ¹ H-NMR (DMSO-d ₆ ) δ6.83 (pt, J = 7.3, C7H), 7.05 (pt, C5′H). ), 7
． 16 (pt, C5H), 7.29 (pt, C6H), 7.42 (d, J = 8.
0, C7'H), 7.53 to 7.48 (m) and 7.64 to 7.58 (m) (
C6′h and 5 phenyl-H; 7.69 (d, J = 7.3, C4′H), 8.
92 (d, J = 7.6, C4H), 11.17 (s, N1′H); ¹³ C-NMR.
(DMSO-d ₆ ) δ 104.96 (s, C3), 108.71 (s, C7),
113.48 (s, C7 '), 118.96 (s, C3a'), 120.80 (
s, C3a), 121.50 (d, J = 159.1, Hz), and 122.3.
4 (d, J _{C, H} = 160.8, Hz), (C5 and C5 ′), 124.44 (
d) and 124.56 (d) (C6 and C4 '), 126.75 (d, J =
161.5, C3 "and C5"), 127.93 (d, J = 161.5, Hz
) And 128.99 (d, J = 160.8 Hz) (C4 and C4 ″), 12
9.46 (d, J = 161.5, C2 ″ and C6 ″), 137.18 (d, J
= 161.6, C6 '), 139.11 (s) and 133.97 (s) (C7
a ′ and C1 ″), 141.34 (s, C7a), 152.32 (s, C2 ′)
) 168.36 (s, C2), 188.44 (s, C3 '); MS m / e
388 (M ⁺ , 100), 311 (13), 310 (58), 309 (39).
Analysis _{_{_{(C 22 H 14 N 2 O}}} 2) C, H, N.

【００６３】３’−ヒドロキシイミノインジルビン−５−スルホン酸（ナトリウム塩）Ｌｕｃｉｕｓ他による前記の方法（変更法）に従い、ピリジン１５ｍｌ中のイ
ンジルビン−５−スルホン酸ナトリウム塩５００ｍｇ（０．６４４ミリモル）お
よび塩酸ヒドロキシルアミン４００ｍｇ（５．７６ミリモル）を用いる。塩酸１
００ｍｌおよび塩酸ナトリウム飽和水溶液２０ｍＬを反応混合物に加えて生じた
沈殿物を、塩化ナトリウム飽和水溶液１５ｍｌを添加すると生じるろ液から得ら
れた沈殿物と合わせる。この粗製生成物を水から再結晶化させる。赤色色相を伴
う黒色のフレーク様薄片１７０ｍｇ（３４．０％）が得られる；Ｒ_f＝０．７６
（エタノール）：¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ６．８２（ｄ，Ｊ＝８．１，
Ｃ７Ｈ）、７．１０〜６．９７（ｍ，Ｃ５’Ｈ）、７．４１〜７．３９（ｍ，Ｃ
６’およびＣ７’）、７．４８（ｄ，Ｊ＝７．９，Ｃ６Ｈ）、８．２６（ｄ，Ｊ
＝７．７，Ｃ４’Ｈ）、８．９２（ｓ，Ｃ４Ｈ）、１０．８２（ｓ）および１１
．８０（ｓ）（Ｎ１ＨおよびＮ１’Ｈ）、１３．７９（ｓ，ＮＯＨ）；¹³Ｃ−Ｎ
ＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ９８．６４（ｓ，Ｃ３）、１０７．３２（ｄ，Ｊ＝１
６２．３，Ｃ７）、１１１．３６（ｄ，Ｊ＝１６５．８，Ｃ７’）、１１６．５
９（ｓ，Ｃ３ａ’）、１２０．５５（ｄ，Ｊ＝１６７．２，Ｃ５’）、１２１．
４２（ｄ，Ｊ＝１５９．５，Ｃ６）、１２１．６５（ｓ，Ｃ３ａ）、１２３．７
４（ｄ，Ｊ＝１６３．０，Ｃ４）、１２８．０２（ｄ，Ｊ＝１６７．８，Ｃ４’
）、１３１．８４（ｄ，Ｊ＝１５８．８，Ｃ６’）、１３８．２１（ｓ，Ｃ５）
、１４０．８７（ｓ，Ｃ７ａ）、１４４．５３（ｓ，Ｃ７ａ’）、１４５．５２
（ｓ，Ｃ２’）、１５１．３２（ｓ，Ｃ３’）、１７１．１７（ｓ，Ｃ２）。分
析値（Ｃ₁₆Ｈ₁₀Ｎ₃ＮａＯ₂Ｓ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。 3′-Hydroxyiminoindirubin-5-sulphonic acid (sodium salt) 500 mg (0.644 mmol) of indirubin-5-sulphonic acid sodium salt in 15 ml of pyridine according to the method described above (modified) by Lucius et al. And 400 mg (5.76 mmol) of hydroxylamine hydrochloride are used. Hydrochloric acid 1
The precipitate formed by the addition of 00 ml and 20 ml of a saturated aqueous solution of sodium chloride to the reaction mixture is combined with the precipitate obtained from the filtrate formed by the addition of 15 ml of a saturated aqueous solution of sodium chloride. The crude product is recrystallized from water. 170 mg (34.0%) of black flake-like flakes with a red hue are obtained; R _f = 0.76
(Ethanol): ¹ H-NMR (DMSO-d ₆ ) δ6.82 (d, J = 8.1)
C7H), 7.10 to 6.97 (m, C5'H), 7.41 to 7.39 (m, C
6'and C7 '), 7.48 (d, J = 7.9, C6H), 8.26 (d, J
= 7.7, C4'H), 8.92 (s, C4H), 10.82 (s) and 11
． 80 (s) (N1H and N1'H), 13.79 (s, NOH); ¹³ C-N
MR (DMSO-d ₆ ) δ98.64 (s, C3), 107.32 (d, J = 1)
62.3, C7), 111.36 (d, J = 165.8, C7 '), 116.5.
9 (s, C3a '), 120.55 (d, J = 167.2, C5'), 121.
42 (d, J = 159.5, C6), 121.65 (s, C3a), 123.7
4 (d, J = 163.0, C4), 128.02 (d, J = 167.8, C4 ′)
), 131.84 (d, J = 158.8, C6 ′), 138.21 (s, C5)
, 140.87 (s, C7a), 144.53 (s, C7a '), 145.52
(S, C2 '), 151.32 (s, C3'), 171.17 (s, C2). Analytical value (C ₁₆ H ₁₀ N ₃ NaO ₂ S) C, H, N.

【００６４】インジルビン−５−スルホンアミドインジルビンに関して記載された方法に従う。イサチン−５−スルホンアミド
１２０ｍｇ（０．５３０ミリモル）および酢酸インドキシル７９ｍｇ（０．０４
５ミリモル）から出発して、黒色の粉末の形で５−メチルインジルビン７９ｍｇ
（９２．０％）が得られ、これはインジゴ８重量％（このインジゴはＤＣおよび ¹ Ｈ−ＮＭＲで同定された）を含む；Ｒ_f＝０．７９（酢酸エチル）：¹Ｈ−ＮＭ
Ｒ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ７．０４〜７．０８（ｍ，Ｃ７ＨおよびＣ５’Ｈ）、７
．２３（ｓ，ＮＨ₂）、７．４４（ｄ，Ｊ＝７．９，Ｃ７’Ｈ）、７．６０（ｐ
ｔ，Ｃ６’Ｈ）、７．６９（ｄ，Ｊ＝７．４，Ｃ６Ｈ）、７．７４（ｄ，Ｊ＝８
．１，Ｃ４’Ｈ），９．３１（ｓ，Ｃ４Ｈ）１１．１５（ｓ）および１１．２５
（ｓ）（Ｎ１ＨおよびＮ１’Ｈ）；¹³Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ１０４．
９２（ｓ，Ｃ３）、１１３．５６（ｄ，Ｊ＝１５９．９，Ｃ７’）、１１９．０
１（ｓ，Ｃ３ａ’）、１２１．１３（ｓ，Ｃ３ａ）、１２１．７２（ｄ，Ｊ＝１
６５．２，Ｃ５’）、１２２．２７（ｄ，Ｊ＝１６９．８，Ｃ６）、１２４．４
４（ｄ，Ｊ＝１６４．５，Ｃ４’）、１２６．９８（ｄ，Ｊ＝１５９．２，Ｃ４
）、１０９．２２（ｄ，Ｊ＝１６５．２，Ｃ７）、１３７．２４（ｓ，Ｃ５）、
１３７．２４（ｄ，Ｊ＝１６０．５，Ｃ６’）、１３９．３２（ｓ，Ｃ７ａ’）
、１４２．９９（Ｓ，Ｃ７ａ）、１５２．４５（ｓ，Ｃ２’）、１７０．９８（
ｓ，Ｃ２）、１８８．５２（ｓ，Ｃ３’）。[0064] Indirubin-5-sulfonamide Follow the method described for indirubin. Isatin-5-sulfonamide
120 mg (0.530 mmol) and indoxyl acetate 79 mg (0.04
Starting from 5 mmol) 79 mg of 5-methylindirubin in the form of a black powder.
(92.0%) was obtained, which was 8% by weight of indigo (this indigo was DC and ¹ H-NMR identified); R_f= 0.79 (ethyl acetate):¹H-NM
R (DMSO-d₆) Δ 7.04 to 7.08 (m, C7H and C5'H), 7
． 23 (s, NH₂), 7.44 (d, J = 7.9, C7'H), 7.60 (p
t, C6'H), 7.69 (d, J = 7.4, C6H), 7.74 (d, J = 8)
． 1, C4'H), 9.31 (s, C4H) 11.15 (s) and 11.25
(S) (N1H and N1'H);¹³C-NMR (DMSO-d₆) Δ 104.
92 (s, C3), 113.56 (d, J = 159.9, C7 '), 119.0
1 (s, C3a '), 121.13 (s, C3a), 121.72 (d, J = 1)
65.2, C5 '), 122.27 (d, J = 169.8, C6), 124.4
4 (d, J = 164.5, C4 '), 126.98 (d, J = 159.2, C4)
), 109.22 (d, J = 165.2, C7), 137.24 (s, C5),
137.24 (d, J = 160.5, C6 '), 139.32 (s, C7a')
, 142.99 (S, C7a), 152.45 (s, C2 '), 170.98 (
s, C2), 188.52 (s, C3 ').

【００６５】インジルビン−５−スルホン酸のジメチルアミドインジルビンに関して記載された方法に従う。イサチン５−スルホン酸のジメ
チルアミド３９７ｍｇ（１．５６ミリモル）および酢酸インドキシル２４６ｍｇ
（１．４０ミリモル）から出発して、紫色の粉末の形で所望の酸２４０ｍｇ（４
６．５％）が得られる；Ｒ_f＝０．３９（酢酸エチル／ヘキサン、３／２、ｖ／
ｖ）：¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ２．６５（ｓ，２ＣＨ₃）、７．０２
〜７．１３（ｍ，Ｃ７ＨおよびＣ５’Ｈ）、７．４４（ｄ，Ｊ＝８．１，Ｃ７’
Ｈ）、７．５７〜７．７２（ｍ，Ｃ６Ｈ，Ｃ４’Ｈ，およびＣ６’Ｈ）、９．２
１（ｓ，Ｃ４Ｈ）、１１．１８（ｓ）および１１．３３（ｓ）（Ｎ１ＨおよびＮ
１’Ｈ）；¹³Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ３７．２０（ｑ，Ｊ＝１３９．４
，ＣＨ３）、１０４．１６（ｓ，Ｃ３）、１０９．１１（ｄ，Ｊ＝１６５．８，
Ｃ７）、１１３．２２（ｄ，Ｊ＝１６７．２，Ｃ７’）、１１８．７１（ｓ，Ｃ
３ａ’）、１２１．３６（ｄ，Ｊ＝１６５．１，Ｃ５’）、１２１．４８（ｓ，
Ｃ３ａ）、１２３．１８（ｄ，Ｊ＝１７２．０，Ｃ６）、１２４．２２（ｄ，Ｊ
＝１６３．７，Ｃ４’）、１２７．６４（ｓ，Ｃ５）、１２８．０６（ｄ，Ｊ＝
１６６．５，Ｃ４９，１３６．９３（ｄ，Ｊ＝１６４．４，Ｃ６’）、１３９．
３４（ｓ，Ｃ７ａ’）、１４３．５３（ｓ，Ｃ７ａ）、１５２．１０（ｓ，Ｃ２
’）、１７０．５１（ｓ，Ｃ２）、１８８．３７（ｓ，Ｃ３’）；ＭＳｍ／ｅ
３６９（Ｍ⁺，８３）、３２６（６）、２６２（８４）、２６１（１００）。
分析値（Ｃ₁₈Ｈ₁₅Ｎ₃Ｏ₄Ｓ）Ｈ，Ｎ，Ｃ：計算値５８．５％；実測値５７．８％
。 Indirubin-5-sulfonic acid dimethylamide Follow the procedure described for indirubin . Isatin 5-sulfonic acid dimethylamide 397 mg (1.56 mmol) and indoxyl acetate 246 mg
Starting from (1.40 mmol) 240 mg of the desired acid in the form of a purple powder (4
6.5%) is obtained; R _f = 0.39 (ethyl acetate / hexane, 3/2, v /
v): ¹ H-NMR (DMSO-d ₆ ) δ2.65 (s, 2 CH ₃ ), 7.02
˜7.13 (m, C7H and C5′H), 7.44 (d, J = 8.1, C7 ′)
H), 7.57 to 7.72 (m, C6H, C4'H, and C6'H), 9.2.
1 (s, C4H), 11.18 (s) and 11.33 (s) (N1H and N
1'H); ¹³ C-NMR (DMSO-d ₆ ) δ37.20 (q, J = 139.4).
, CH3), 104.16 (s, C3), 109.11 (d, J = 165.8,
C7), 113.22 (d, J = 167.2, C7 '), 118.71 (s, C
3a '), 121.36 (d, J = 165.1, C5'), 121.48 (s,
C3a), 123.18 (d, J = 172.0, C6), 124.22 (d, J
= 163.7, C4 ′), 127.64 (s, C5), 128.06 (d, J =
166.5, C49, 136.93 (d, J = 164.4, C6 '), 139.
34 (s, C7a '), 143.53 (s, C7a), 152.10 (s, C2
'), 170.51 (s, C2), 188.37 (s, C3'); MS m / e
369 (M ⁺ , 83), 326 (6), 262 (84), 261 (100).
Analytical value (C ₁₈ H ₁₅ N ₃ O ₄ S) H, N, C: calculated value 58.5%; measured value 57.8%
.

【００６６】インジルビン−５−スルホン酸の（２−ヒドロキシエチル）−アミドインジルビンに関して記載された方法に従う。イサチン−５−スルホン酸の（
２−ヒドロキシエチル）のアミド１５０ｍｇ（０．６３０ミリモル）および酢酸
インドキシル８３ｍｇ（０．４７ミリモル）から出発して、紫色の粉末の形で所
望の化合物１４３ｍｇ（７８．９％）が得られる；Ｒ_f＝０．６２（メタノ−ル
／酢酸エチル、１／２０、ｖ／ｖ）：¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ２．８４
（ｔ，Ｊ｛ＣＨ２，ＣＨ２１｝＝６．５，添加時に目に見えるＤ₂Ｏ，−Ｎ−Ｃ
Ｈ₂−）、３．４０（ｍ，−ＣＨ₂−Ｏ）、４．６７（ｔ，Ｊ＝４．６，ＯＨ）、
７．０７（ｍ，Ｃ７ＨおよびＣ５’Ｈ）、７．４３〜７．４６（ｍ，Ｃ７’Ｈお
よびＳＯ₂−ＮＨ−；添加時Ｄ₂Ｏ：７．４４，ｄ，Ｊ＝８．１，Ｃ７’Ｈ）、７
．６１（ｐｔ，Ｃ６，Ｈ）、７．６９〜７．７１（ｍ，Ｃ６ＨおよびＣ４’）、
９．２７（ｓ，Ｃ４Ｈ）、１１．１８（ｓ）および１１．２９（ｓ）（Ｎ１Ｈお
よびＮ１’Ｈ）；¹³Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ４５．００（ｔ，Ｊ＝１３
８．０，−ＮＨ−ＣＨ₂），５９．８５（ｔ，Ｊ＝１４１．１，−ＣＨ₂−ＯＨ）
、１０４．５２（ｓ，Ｃ３）、１０９．４４（ｄ，Ｊ＝１６５．９，Ｃ７）、１
１３．６０（ｄ，Ｊ＝１６８．５，Ｃ７’）、１１８．９２（ｓ，Ｃ３ａ’）、
１２１．３６（ｓ，Ｃ３ａ）、１２１．７４（ｄ，Ｊ＝１６４．０，Ｃ５’）、
１２２．９５（ｄ，Ｊ＝１６２．４，Ｃ６）、１２４．５２（ｄ，Ｊ＝１５９．
６，Ｃ４’）、１２７．５３（ｄ，¹Ｊ_C,H＝１６５．９，Ｃ４）、１３３．２０
（ｓ，Ｃ５）、１３７．２９（ｄ，Ｊ＝１６３．４，Ｃ６’）、１３９．４４（
ｓ，Ｃ７ａ’）、１４３．３２（ｓ，Ｃ７ａ）、１５２．４６（ｓ，Ｃ２’）、
１７０．８７（ｓ，Ｃ２）、１８８．７０（ｓ，Ｃ３’）、ＭＳｍ／ｅ３８
５（Ｍ⁺，４０）、３５５（４８）、３２５（２９）、２６２（３５）、２６１
（１００）。分析値（Ｃ₁₈Ｈ₁₅Ｎ₃Ｏ₅Ｓ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。 Indirubin-5-sulfonic acid (2-hydroxyethyl) -amido Follow the method described for indirubin . Of isatin-5-sulfonic acid (
Starting from 150 mg (0.630 mmol) of the amide of 2-hydroxyethyl) and 83 mg (0.47 mmol) of indoxyl acetate, 143 mg (78.9%) of the desired compound are obtained in the form of a purple powder; R _f = 0.62 (methanol / ethyl acetate, 1/20, v / v): ¹ H-NMR (DMSO-d ₆ ) δ2.84
(T, J {CH2, CH21} = 6.5, visible D ₂ O, -NC when added)
_{H 2 -), 3.40 (m} , -CH 2 -O), 4.67 (t, J = 4.6, OH),
7.07 (m, C7H and C5′H), 7.43 to 7.46 (m, C7′H and SO ₂ —NH—; D ₂ O when added: 7.44, d, J = 8.1 , C7′H), 7
． 61 (pt, C6, H), 7.69 to 7.71 (m, C6H and C4 '),
9.27 (s, C4H), 11.18 (s) and 11.29 (s) (N1H and N1′H); ¹³ C-NMR (DMSO-d ₆ ) δ45.00 (t, J = 13).
_{8.0, -NH-CH 2),} 59.85 (t, J = 141.1, -CH 2 -OH)
104.52 (s, C3), 109.44 (d, J = 165.9, C7), 1
13.60 (d, J = 168.5, C7 '), 118.92 (s, C3a'),
121.36 (s, C3a), 121.74 (d, J = 164.0, C5 '),
122.95 (d, J = 162.4, C6), 124.52 (d, J = 159.
6, C4 ′), 127.53 (d, ¹ J _{C, H} = 165.9, C4), 133.20
(S, C5), 137.29 (d, J = 163.4, C6 '), 139.44 (
s, C7a '), 143.32 (s, C7a), 152.46 (s, C2'),
170.87 (s, C2), 188.70 (s, C3 '), MS m / e 38
5 (M ⁺ , 40), 355 (48), 325 (29), 262 (35), 261
(100). Analysis _{_{_{(C 18 H 15 N 3 O}}} 5 S) C, H, N.

【００６７】インジルビン−５−スルホン酸のビス−（２−ヒドロキシエチル）−アミドインジルビンに関して記載された方法に従う。イサチン−５−スルホン酸のビ
ス−（２−ヒドロキシエチル）アミド４００ｍｇ（１．２７ミリモル）および酢
酸インドキシル１６７ｍｇ（０．９５３ミリモル）から出発して、紫色の粉末の
形で前記のアミド３５５ｍｇ（８６．７％）が得られる；Ｒ_f＝０．５１（メタ
ノ−ル／酢酸エチル、１／２０、ｖ／ｖ）：¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ３
．２０（ｔ，Ｊ＝６．５，２−Ｎ−ＣＨ₂）、３．５６（ｍ，２−ＣＨ₂Ｏ−）、
４．８４（ｔ，Ｊ＝５．５，２−ＯＨ）、７．０９〜７．０５（ｍ，Ｃ７Ｈおよ
びＣ５’Ｈ）、７．７２〜７．６８（ｍ，Ｃ６ＨおよびＣ４’）、７．４５（ｄ
，Ｊ＝８．０，Ｃ７’Ｈ）、７．６１（ｍ，Ｃ６’）、９．２６（ｓ，Ｃ４Ｈ）
、１１．１８（ｓ）および１１．３２（ｓ）（Ｎ１ＨおよびＮ１’Ｈ）；¹³Ｃ−
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ５１．３２（ｔ，Ｊ＝１３５．０，２−ＮＨ−ＣＨ₂ ）、６０．０１（ｔ，Ｊ＝１４１．０，２−ＣＨ₂−ＯＨ）、１０４．３１（ｓ
，Ｃ３）、１０９．４８（ｄ，Ｊ＝１６５．３，Ｃ７）、１１３．６２（ｄ，Ｊ
＝１６８．５，Ｃ７’）、１１８．９１（ｓ，Ｃ３ａ’）、１２１．６９（ｓ，
Ｃ３ａ）、１２１．７９（ｄ，Ｊ＝１６４．０，Ｃ５’）、１２２．８８（ｄ，
Ｊ＝１６２．４，Ｃ６）、１２４．６４（ｄ，Ｊ＝１６２．７，Ｃ４’）、１２
７．９８（ｄ，Ｊ＝１６５．２，Ｃ４）、１３１．５１（ｓ，Ｃ５）、１３７．
３２（ｄ，Ｊ＝１６０．１Ｈｚ，Ｃ６’）、１３９．６１（ｓ，Ｃ７ａ’）、１
４３．５９（ｓ，Ｃ７ａ）、１５２．４８（ｓ，Ｃ２’）、１７０．８１（ｓ，
Ｃ２）、１８８．８７（ｓ，Ｃ３’）；ＭＳｍ／ｅ４２９（Ｍ⁺，９）、３
６９（２２）、３６５（２２）、３５５（６３）、２６１（３１）、４３（１０
０）。分析値（Ｃ₂₀Ｈ₁₉Ｎ₃Ｏ₆Ｓ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。 Indirubin-5-sulfonic acid bis- (2-hydroxyethyl) -amide Follow the procedure described for indirubin . Starting from 400 mg (1.27 mmol) of bis- (2-hydroxyethyl) amide of isatin-5-sulfonic acid and 167 mg (0.953 mmol) of indoxyl acetate, 355 mg of the above amide in the form of a purple powder ( R _f = 0.51 (methanol / ethyl acetate, 1/20, v / v): ¹ H-NMR (DMSO-d ₆ ) δ3.
． 20 (t, J = 6.5,2- N-CH 2), 3.56 (m, 2-CH 2 O-),
4.84 (t, J = 5.5, 2-OH), 7.09 to 7.05 (m, C7H and C5'H), 7.72 to 7.68 (m, C6H and C4 '), 7.45 (d
, J = 8.0, C7′H), 7.61 (m, C6 ′), 9.26 (s, C4H)
, 11.18 (s) and 11.32 (s) (N1H and N1'H); ¹³ C-
_{NMR (DMSO-d 6) δ51.32} (t, J = 135.0,2-NH-CH 2), 60.01 (t, J = 141.0,2-CH 2 -OH), 104.31 (S
, C3), 109.48 (d, J = 165.3, C7), 113.62 (d, J
= 168.5, C7 '), 118.91 (s, C3a'), 121.69 (s,
C3a), 121.79 (d, J = 164.0, C5 '), 122.88 (d,
J = 162.4, C6), 124.64 (d, J = 162.7, C4 '), 12
7.98 (d, J = 165.2, C4), 131.51 (s, C5), 137.
32 (d, J = 160.1 Hz, C6 '), 139.61 (s, C7a'), 1
43.59 (s, C7a), 152.48 (s, C2 '), 170.81 (s,
C2), 188.87 (s, C3 '); MS m / e 429 (M ⁺ , 9), 3
69 (22), 365 (22), 355 (63), 261 (31), 43 (10)
0). Analysis _{_{_{(C 20 H 19 N 3 O}}} 6 S) C, H, N.

【００６８】インジルビン−５−スルホン酸のメチルアミドインジルビンに関して記載された方法に従う。イサチン−５−スルホン酸のメ
チルアミド３８０ｍｇ（１．５８ミリモル）および酢酸インドキシル２２７ｍｇ
（１．３０ミリモル）から出発して、紫色の粉末の形で前記のアミド３７０ｍｇ
（８０．１％）が得られる；Ｒ_f＝０．７２（酢酸エチル）：¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭ
ＳＯ−ｄ₆）δ２．４６（ｄ，Ｊ＝５．０，ＣＨ₃）、７．０５〜７．０９（ｍ，
Ｃ７ＨおよびＣ５’Ｈ）、７．３２（ｑ，ＮＨ−ＣＨ₃）、７．４５（ｄ，Ｊ＝
８．３，Ｃ７’Ｈ）、７．６１（ｍ，Ｃ６’Ｈ）、７．６７〜７．７１（ｍ，Ｃ
６ＨおよびＣ４’）、９．２７（ｓ，Ｃ４Ｈ）、１１．１８（ｓ）および１１．
３０（ｓ）（Ｎ１ＨおよびＮ１’Ｈ）；¹³Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ２８
．６５（ｑ，Ｊ＝１３８．７，ＣＨ３）、１０４．４８（ｓ，Ｃ３）、１０９．
４１（ｄ，Ｊ＝１６５．７，Ｃ７）、１１３．５８（ｄ，Ｊ＝１６５．７，Ｃ７
’）、１１８．９０（ｓ，Ｃ３ａ’）、１２１．４２（ｓ，Ｃ３ａ）、１２１．
７３（ｄ，Ｊ＝１７１．０，Ｃ５’）、１２３．１３（ｄ，Ｊ＝１６４．５，Ｃ
６），１２４．５０（ｄ，Ｊ＝１５９．８，Ｃ４’）、１２７．６１（ｄ，Ｊ＝
１６５．７，Ｃ４）、１３１．９３（ｓ，Ｃ５）、１３７．２８（ｄ，Ｊ＝１６
０．６，Ｃ６’）、１３９．４３（ｓ，Ｃ７ａ’）、１４３．３６（ｓ，Ｃ７ａ
）、１５２．４５（ｓ，Ｃ２’）、１７０．８５（ｓ，Ｃ２）、１８８．６８（
ｓ，Ｃ３’）；ＭＳｍ／ｅ２５５（Ｍ⁺，１５）、２６３（１８），２６２
（１００）、２６１（７）。分析値（Ｃ₁₇Ｈ₁₃Ｎ₃Ｏ₄Ｓ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。 Indirubin-5-sulfonic acid methylamide Follow the procedure described for indirubin . 380 mg (1.58 mmol) of methyl amide of isatin-5-sulfonic acid and 227 mg of indoxyl acetate.
370 mg of the above amide in the form of a purple powder starting from (1.30 mmol)
(80.1%) is obtained; R _f = 0.72 (ethyl acetate): ¹ H-NMR (DM
_{SO-d 6) δ2.46 (d} , J = 5.0, CH 3), 7.05~7.09 (m,
C7H and C5′H), 7.32 (q, NH—CH ₃ ), 7.45 (d, J =
8.3, C7'H), 7.61 (m, C6'H), 7.67 to 7.71 (m, C
6H and C4 '), 9.27 (s, C4H), 11.18 (s) and 11.
30 (s) (N1H and N1′H); ¹³ C-NMR (DMSO-d ₆ ) δ28.
． 65 (q, J = 138.7, CH3), 104.48 (s, C3), 109.
41 (d, J = 165.7, C7), 113.58 (d, J = 165.7, C7)
'), 118.90 (s, C3a'), 121.42 (s, C3a), 121.
73 (d, J = 171.0, C5 ′), 123.13 (d, J = 164.5, C
6), 124.50 (d, J = 159.8, C4 ′), 127.61 (d, J =
165.7, C4), 131.93 (s, C5), 137.28 (d, J = 16)
0.6, C6 '), 139.43 (s, C7a'), 143.36 (s, C7a)
), 152.45 (s, C2 ′), 170.85 (s, C2), 188.68 (
s, C3 '); MS m / e 255 (M ⁺ , 15), 263 (18), 262.
(100), 261 (7). Analytical value (C ₁₇ H ₁₃ N ₃ O ₄ S) C, H, N.

【００６９】５−ヨードイサチンＲｏｅｄｉｇ，ＭｕｅｌｌｅｒＥ．（Ｈｒｓｇ．），Ｍｅｔｈｏｄｅｎｄ
ｅｒｏｒｇａｎｉｓｃｈｅｎＣｈｅｍｉｅ（Ｈｏｕｂｅｙｎ−Ｗｅｙｌ），
Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ，ＧｅｏｒｇＴｈｉｅｍｅＶｅｒｌａｇ１９６０，５
／４，５８６およびＢｏｒｓｃｈｅ他Ｃｈｅｍ．Ｂｅｒ．１９２４，１７
７０−１７７５により記載された方法に従った；Ｒ_f＝０．６０（アセトン／石
油エーテル４０〜７０、１／１、ｖ／ｖ）；融点２６２℃：¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭ
ＳＯ−ｄ₆）δ６．７５（ｄ，Ｊ＝８．３，Ｃ７Ｈ）、７．７５（ｓ，Ｃ４Ｈ）
、７．７８（ｄ，Ｊ＝８．２，Ｃ６Ｈ）、１１．０９（ｂ，Ｎ１Ｈ）；¹³Ｃ−Ｎ
ＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ８５．３９（ｓ，Ｃ５）、１１４．５９（ｄ，Ｊ＝１
６７，１，Ｃ７）、１１９．８９（ｄ，Ｊ＝７．２，Ｃ３ａ）、１３２．３８（
ｄ，Ｊ＝１７０．３，Ｃ４）、１４５．７６（ｄ，Ｊ＝１６７．１，Ｃ６）、１
４５．７６（ｄ，Ｊ＝１６７．１，Ｃ６）、１４９．９５（ｂ，Ｃ７ａ）、１５
８．６６（ｓ，Ｃ２）、１８３．０６（ｓ，Ｃ３）；ＭＳｍ／ｅ２６２（Ｍ ⁺ ，１００）、２３４（４３）。[0069] 5-iodoisatin Roedig, Mueller E. (Hrsg.), Methoden d
er organischen Chemie (Houbeyn-Weyl),
Stuttgart, Georg Thieme Verlag 1960, 5
/ 4,586 and Borsche et al Chem. Ber. 1924, 17
70-1775 according to the method described by R;_f= 0.60 (acetone / stone
Oil ether 40-70, 1/1, v / v); melting point 262 ° C .:¹H-NMR (DM
SO-d₆) Δ 6.75 (d, J = 8.3, C7H), 7.75 (s, C4H)
, 7.78 (d, J = 8.2, C6H), 11.09 (b, N1H);¹³C-N
MR (DMSO-d₆) Δ85.39 (s, C5), 114.59 (d, J = 1)
67,1, C7), 119.89 (d, J = 7.2, C3a), 132.38 (
d, J = 170.3, C4), 145.76 (d, J = 167.1, C6), 1
45.76 (d, J = 167.1, C6), 149.95 (b, C7a), 15
8.66 (s, C2), 183.06 (s, C3); MS m / e 262 (M ⁺ , 100), 234 (43).

【００７０】イサチン−５−スルホン酸のジメチルアミドＨａｌｌｅｒ、ＤＥ特許７１５７６０号、１９３８により記載された方法に従
う；Ｒ_f＝０．１８（酢酸エチル／ヘキサン、１／１、ｖ／ｖ）；¹Ｈ−ＮＭＲ（
ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ２．６２（ｓ，２ＣＨ₃）、７．１２（ｄ，Ｊ８．２，Ｃ
７Ｈ）、７．７１（ｓ，Ｃ４Ｈ）、７．９４（ｄ，Ｊ＝８．２，Ｃ６Ｈ）、１１
．４７（ｓ，Ｎ１Ｈ）；¹³Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ１８２．８９（ｓ，
Ｃ３）、１５９．３７（ｓ，Ｃ２）、１５３．６０（ｓ，Ｃ７ａ）、１３６．９
８（ｄ，Ｊ＝１６７．３２，Ｃ６）、１２８．６２（ｓ，Ｃ５）、１２３．２７
（ｄ，Ｊ＝１６９．２，Ｃ４）、１１８．０５（ｓ，Ｃ３ａ）、１１２．６８（
ｄ，Ｊ＝１６９．２，Ｃ７）、３７．４８（ｑ，Ｊ＝１４０．１，２ＣＨ₃）
。分析値（Ｃ₁₀Ｈ₁₀Ｎ₂Ｏ₄Ｓ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。According to the method described by Isatin-5-sulphonic acid dimethylamide Haller, DE patent 715760, 1938; R _f = 0.18 (ethyl acetate / hexane, 1/1, v / v); ¹ H -NMR (
DMSO-d ₆ ) δ 2.62 (s, 2 CH ₃ ), 7.12 (d, J 8.2, C
7H), 7.71 (s, C4H), 7.94 (d, J = 8.2, C6H), 11
． 47 (s, N1H); ¹³ C-NMR (DMSO-d ₆ ) δ182.89 (s,
C3), 159.37 (s, C2), 153.60 (s, C7a), 136.9
8 (d, J = 167.32, C6), 128.62 (s, C5), 123.27.
(D, J = 169.2, C4), 118.05 (s, C3a), 112.68 (
d, J = 169.2, C7), 37.48 (q, J = 140.1, 2 CH ₃ ).
. Analysis _{_{_{(C 10 H 10 N 2 O}}} 4 S) C, H, N.

【００７１】イサチン−５−スルホン酸のビス−（２−ヒドロキシエチル）−アミド前記のＨａｌｌｅｒにより記載された方法に従い、ビス−（２−ヒドロキシエ
チル）−アミン５２６ｍｇ（５．００ミリモル）および３，３−ジクロロ−２−
オキソ−２，３−ジヒドロインドール−５−スルホニル１．００ｇ（３．３４ミ
リモル）（前記Ｈａｌｌｅｒ参照）から出発する。生じる沈殿物は油状で、粘稠
である。上澄みをデカンテーションし、次いで沈殿物および上澄みを水５ｍｌと
混合する。これを２時間還流する。冷却すると、赤色結晶の沈殿物が得られる。
収量：４７６ｍｇ（４５．３％）、Ｒ_f＝０．５１（メタノール／酢酸エチル、
１／２０、ｖ／ｖ）：¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ２．７８（ｔ，Ｊ＝６．
２，２−Ｎ−ＣＨ₂−）、３．３８（ｔ，Ｊ＝６．２，２−ＣＨ₂−Ｏ−）、７．
０８（ｄ，Ｊ＝８．２，Ｃ７，７．７８（ｓ，Ｃ４）、７．９６（ｄ，Ｊ＝８．
２，Ｃ６）、１１．４３（ｓ，Ｎ１Ｈ）；¹³Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ５
０．７３（ｔ，Ｊ＝１３８．８，２−Ｎ−ＣＨ₂−）、５９．６４（ｔ，Ｊ＝１
４１．７，２−ＣＨ₂ＯＨ−）、１１２．５７（ｄ，Ｊ＝１６８．６，Ｃ７）、
１１７．９１（ｓ，Ｃ３ａ）、１２２．７８（ｄ，Ｊ＝１６９．３，Ｃ４）、１
３３．２９（ｓ，Ｃ５）、１３６．４４（ｄ，Ｊ＝１６６．４，Ｃ６）、１５３
．２８（ｓ，Ｃ７ａ）、１５９．３７（ｓ，Ｃ２）、１８２．９５（ｓ，Ｃ３）
。分析値（Ｃ₁₂Ｈ₁₄Ｎ₂Ｏ₆Ｓ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。Bis- ( 2-hydroxyethyl) -amide of isatin-5-sulphonic acid According to the method described by Haller, supra, 526 mg (5.00 mmol) of bis- (2-hydroxyethyl) -amine and 3, 3-dichloro-2-
Starting from 1.00 g (3.34 mmol) of oxo-2,3-dihydroindole-5-sulfonyl (see Haller above). The resulting precipitate is oily and viscous. The supernatant is decanted, then the precipitate and the supernatant are mixed with 5 ml of water. This is refluxed for 2 hours. On cooling, a precipitate of red crystals is obtained.
Yield: 476 mg (45.3%), R _f = 0.51 (methanol / ethyl acetate,
1/20, v / v): ¹ H-NMR (DMSO-d ₆ ) δ2.78 (t, J = 6.
_{2,2-N-CH 2 -)} , 3.38 (t, J = 6.2,2-CH 2 -O -), 7.
08 (d, J = 8.2, C7, 7.78 (s, C4), 7.96 (d, J = 8.
2, C6), 11.43 (s, N1H); ¹³ C-NMR (DMSO-d ₆ ) δ5.
0.73 (t, J = 138.8, ₂ -N-CH2-), 59.64 (t, J = 1)
_{41.7,2-CH 2 OH -),} 112.57 (d, J = 168.6, C7),
117.91 (s, C3a), 122.78 (d, J = 169.3, C4), 1
33.29 (s, C5), 136.44 (d, J = 166.4, C6), 153
． 28 (s, C7a), 159.37 (s, C2), 182.95 (s, C3)
. Analytical value (C ₁₂ H ₁₄ N ₂ O ₆ S) C, H, N.

【００７２】６−ヨードイサチンＭａｒｖｅｌ他，ＯｒｇａｎｉｃＳｙｎｔｈｅｓｅｓ，Ｃｏｌｌ．Ｖｏｌ．
１，２ｎｄｅｄ．；Ｇｉｌｍａｎ，Ｈ．Ｅｄ．；Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅ
ｗＹｏｒｋ，１９４１，３２７−３３０により記載されている方法に従い、２
−ヒドロキシイミノ−Ｎ−（３−ヨードフェニル）アセトアミド１．５０ｇ（
５．１７ミリモル）および濃硫酸３．９ｍｌを使用する。ろ過の後に、４−およ
び６−ヨードイサチンならびに副産物からなる粗製生成物をＳａｄｌｅｒ，Ｊ．
Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．１９５６，２１，１６９−１７０およびＨｏｌｔ他、Ｐｒｏ
ｃ．Ｒ．Ｓｏｃ．ＬｏｎｄｏｎＢ１９５８，１４８，４８１−４９４に従い
精製する。橙色の結晶２１６ｍｇ（１５．０％）；融点２５５〜２５８℃；Ｒ_f
＝０．７６（酢酸エチル／ヘキサン、１／１、ｖ／ｖ）が得られる。¹Ｈ−ＮＭ
Ｒ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ７．２５（ｍ，Ｃ４ＨおよびＣ７Ｈ）、７．４５（ｄ，
Ｊ＝７．６，Ｃ５Ｈ）、１１．０７（ｓ，Ｎ１Ｈ）；１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ
−ｄ₆）δ１０７．２８（ｄ，Ｊ＝１０．４，Ｃ６）、１１７．４１（ｓ，Ｃ３
ａ）、１２０．８３（ｄ，Ｊ＝１７０．３，Ｃ７）、１２５．８４（ｄ，Ｊ＝１
７３．７，Ｃ４）、１３１．８２（ｄ，Ｊ＝１６７．９，Ｃ５），１５１．３０
（ｓ，Ｃ７ａ）、１５９．３５（ｓ，Ｃ２）、１８３．７９（ｓ，Ｃ３）。分析
値（Ｃ₈Ｈ₄ＩＮＯ₂）Ｃ，Ｈ，Ｎ。 6-Iodoisatin Marvel et al., Organic Syntheses, Coll. Vol.
1, 2nd ed. Gilman, H .; Ed. ; Wiley & Sons, Ne
2 according to the method described by York, 1941, 327-330.
-Hydroxyimino-N- (3-iodophenyl) acetamide 1.50 g (
5.17 mmol) and 3.9 ml concentrated sulfuric acid are used. After filtration, the crude product consisting of 4- and 6-iodoisatin and by-products was purified by Sadler, J. et al.
Org. Chem. 1956, 21, 169-170 and Holt et al., Pro.
c. R. Soc. Purify according to London B 1958, 148, 481-494. 216 mg (15.0%) of orange crystals; melting point 255-258 ° C; R _f
= 0.76 (ethyl acetate / hexane, 1/1, v / v) is obtained. ¹ H-NM
_{R (DMSO-d 6) δ7.25} (m, C4H and C7H), 7.45 (d,
J = 7.6, C5H), 11.07 (s, N1H); 13C-NMR (DMSO
-D ₆ ) δ 107.28 (d, J = 10.4, C6), 117.41 (s, C3)
a), 120.83 (d, J = 170.3, C7), 125.84 (d, J = 1)
73.7, C4), 131.82 (d, J = 167.9, C5), 151.30.
(S, C7a), 159.35 (s, C2), 183.79 (s, C3). Analysis _{_{_{(C 8 H 4 INO 2)}}} C, H, N.

【００７３】イソインジゴＷａｈｌ他，Ｃｏｍｐｔｅｒｅｎｄｕｓｈｅｂｄｏｍａｄａｉｒｅｓｄ
ｅｓｓｅａｎｃｅｓｄｅｌ’ａｃａｄｅｍｉｅｄｅｓｓｃｉｅｎｃｅ
ｓ，１９０９，７１６−１９および４（５），１０３９−４３により記載さ
れた方法に従う；Ｒ_f＝０．６７（酢酸エチル／ヘキサン１／１、ｖ／ｖ）；¹ Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ６．８５（ｄ，Ｊ＝７．７，Ｃ７ＨおよびＣ７
’Ｈ）、６．９７（ｐｔ，Ｃ５’ＨおよびＣ５’Ｈ）、７．３４（ｐｔ，Ｃ６Ｈ
およびＣ６’Ｈ）、９．０７（ｄ，Ｊ＝８．０，Ｃ４ＨおよびＣ４’Ｈ）、１０
．９０（ｓ，Ｎ１ＨおよびＮ１’Ｈ）；¹³Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）１０９
．４２（ｄ，Ｊ＝１６２．５，Ｃ７およびＣ７’）、１２１．０４（ｄ，Ｊ＝１
６１．２，Ｃ５およびＣ５’）、１２１．５８（ｓ，Ｃ３ａおよびＣ３ａ’）、
１２９．２１（ｄ，Ｊ＝１６６．５，Ｃ６およびＣ６’）、１３２．５２（ｄ，
Ｊ＝１５９．９，Ｃ４およびＣ４’）、１３３．２４（ｓ，Ｃ３およびＣ３’）
、１４３．９８（ｓ，Ｃ７ａおよびＣ７ａ’），１６８．８８（ｓ，Ｃ２および
Ｃ２’）；ＭＳｍ／ｅ２６２（Ｍ⁺，１００）、２３４（８５）、２０５（
１８）。分析値（Ｃ₁₆Ｈ₁₂Ｎ₂Ｏ₂）Ｃ，Ｈ，Ｎ。 Isoindigo Wahl et al., Compte rendus hebdomadaires d
es seans de l'academie des science
s, 1909,716-19 and 4 (5), 1039-43; _Rf = 0.67 (ethyl acetate / hexane 1/1, v / v); < ¹ > H-NMR (DMSO- d ₆ ) δ6.85 (d, J = 7.7, C7H and C7
'H), 6.97 (pt, C5'H and C5'H), 7.34 (pt, C6H
And C6′H), 9.07 (d, J = 8.0, C4H and C4′H), 10
． 90 (s, N1H and N1′H); ¹³ C-NMR (DMSO-d ₆ ) 109.
． 42 (d, J = 162.5, C7 and C7 ′), 121.04 (d, J = 1
61.2, C5 and C5 '), 121.58 (s, C3a and C3a'),
129.21 (d, J = 166.5, C6 and C6 ′), 132.52 (d,
J = 159.9, C4 and C4 '), 133.24 (s, C3 and C3')
, 143.98 (s, C7a and C7a '), 168.88 (s, C2 and C2'); MS m / e 262 (M ⁺ , 100), 234 (85), 205 (
18). Analytical value (C ₁₆ H ₁₂ N ₂ O ₂ ) C, H, N.

【００７４】２，２’−ビスインドールＢｅｒｇｍａｎ他，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ１９９５，５１（１９），５６
３−４２により記載された方法に従う；Ｒ_f＝０．８２（ＵＶ、酢酸エチル／ヘ
キサン１／１）：ＧＣ／ＭＳＲ_t＝１４．１分，ｍ／ｅ２３２（Ｍ⁺，１０
０）；λ_max，（エタノール）２２１（４．７８）、２７１（４．００）、３３
３（４．８０）、３５１（４．７９）。分析値（Ｃ₁₆Ｈ₁₂Ｎ₂）Ｃ，Ｈ，Ｎ。 2,2′- Bisindole Bergman et al., Tetrahedron 1995, 51 (19), 56.
According to the method described by 3-42; _Rf = 0.82 (UV, ethyl acetate / hexane 1/1): GC / MS _Rt = 14.1 min, m / e 232 (M ⁺ , 10).
0); λ _max , (ethanol) 221 (4.78), 271 (4.00), 33.
3 (4.80), 351 (4.79). Analytical value (C ₁₆ H ₁₂ N ₂ ) C, H, N.

【００７５】３，３’−ジフェニル−２，２’−ビスインドールＦｕeｒｓｔｎｅｒ他，ＡｎｇｅｗａｎｄｔｅＣｈｅｍｉｅ，１９９５，１
０７（６），７２５−８に記載の方法に従う。酢酸エチル／石油エーテル（４０
〜７０）１１５、ｖ／ｖから再結晶化すると、無色の結晶（５５．８％）がもた
らされる；Ｒ_f＝０．５０（ＵＶ、酢酸エチル／石油エーテル（４０〜７０）１
１５、ｖ／ｖ）；ＧＣ／ＭＳＲ_t＝１９．０分、ｍ／ｅ３８４（Ｍ⁺、１００）
。 3,3′-Diphenyl-2,2′-bisindole Fuerstner et al., Angewandte Chemie, 1995, 1
07 (6), 725-8. Ethyl acetate / petroleum ether (40
~ 70) 115, recrystallisation from v / v gives colorless crystals (55.8%); _Rf = 0.50 (UV, ethyl acetate / petroleum ether (40-70) 1.
15, v / v); GC / MS R _t = 19.0 min, m / e 384 (M ⁺ , 100).
.

【００７６】イサチン−５−スルホンアミド２５％アンモニア水溶液（５．０ｍｌ）を初めに０〜５℃に冷却し、その後、
塩化３，３−ジクロロ−２−オキソ−２，３−ジヒドロインドール−５−スルホ
ニルの試料０．５０ｇ（前記のＨａｌｌｅｒ参照）（１．７ミリモル）を滴加
し、攪拌し、再び冷却する。２時間後、混合物が酸反応を開始するまで、少量の
砕いた氷および２０％塩酸を添加する。真空下に溶剤を除去し、橙色の残留物を
ＫＯＨ上で乾燥させる。得られた黄色の粉末をアセトン３５ｍｌで３回抽出する
。真空下にアセトンを除去すると、橙色の粉末１４０ｍｇ（３６．４％）が得ら
れる；Ｒ_f＝０．７３（酢酸エチル）：¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ７．０
５（ｄ，Ｊ＝８．２，Ｃ７）、７．４１（ｓ，ＮＨ₂）、７．８５（ｓ，Ｃ４）
、７．９８（ｄ，Ｊ＝８．２，Ｃ６）、１１．３９（ｓ，Ｎ１Ｈ）；¹³Ｃ−ＮＭ
Ｒ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ１１２．１２（ｄ，Ｊ＝１６８．３，Ｃ７）、１１７．
７３（ｓ，Ｃ３ａ）、１２１．６７（ｄ，Ｊ＝１６６．８，Ｃ４）、１３４．９
７（ｄ，Ｊ＝１６５．４，Ｃ６）、１３８．３６（ｓ，Ｃ５）、１５２．５６（
ｓ，Ｃ７ａ）、１５９．５０（ｓ，Ｃ２）、１８４．２２（ｓ，Ｃ３）；ＭＳ
ｍ／ｅ２２６（Ｍ⁺，２８）、１９８（１００）。 Isatin-5-sulfonamide 25% aqueous ammonia solution (5.0 ml) was first cooled to 0-5 ° C. and then
A 0.50 g sample of 3,3-dichloro-2-oxo-2,3-dihydroindole-5-sulfonyl chloride (see Haller above) (1.7 mmol) is added dropwise, stirred and cooled again. After 2 hours, a small amount of crushed ice and 20% hydrochloric acid are added until the mixture has started the acid reaction. The solvent is removed under vacuum and the orange residue is dried over KOH. The yellow powder obtained is extracted 3 times with 35 ml of acetone. Removal of acetone under vacuum gives 140 mg (36.4%) of an orange powder; R _f = 0.73 (ethyl acetate): ¹ H-NMR (DMSO-d ₆ ) δ7.0.
5 (d, J = 8.2, C7), 7.41 (s, NH 2), 7.85 (s, C4)
, 7.98 (d, J = 8.2, C6), 11.39 (s, N1H); ¹³ C-NM
_{R (DMSO-d 6) δ112.12} (d, J = 168.3, C7), 117.
73 (s, C3a), 121.67 (d, J = 166.8, C4), 134.9
7 (d, J = 165.4, C6), 138.36 (s, C5), 152.56 (
s, C7a), 159.50 (s, C2), 184.22 (s, C3); MS
m / e 226 (M ⁺ , 28), 198 (100).

【００７７】イサチン−５−スルホン酸の（２−ヒドロキシ−エチル）−アミドＨａｌｌｅｒによる方法に従い、２−アミノエタノール２９５ｍｇ（４．８３
ミリモル、０．３００ｍｌ）、エタノール５．１ｍｌおよび塩化３，３−ジクロ
ロ−２−オキソ−２，３−ジヒドロインドール−５−スルホニル（Ｈａｌｌｅｒ
）０．９００ｍｇ（３．０１ミリモル）から出発する。３０分間攪拌した後に、
２−アミノエタノール０．１００ｍｌを再び添加し、１５分後、砕いた氷２０ｇ
および２０％塩酸０．９００ｍｌを添加する。室温まで再加熱すると、油状の物
体が得られ、これは容器の底部に沈殿する。上澄みをデカンテーションし、残っ
た溶剤を真空下に除去する。得られた黄色の油状物を水中で２時間還流する。橙
色の溶液を冷却すると、黄色の結晶３７４ｍｇ（４５．８％）の沈殿物が得られ
る；Ｒ_f＝０．５２（メタノール／酢酸エチル１／２０、ｖ／ｖ）：¹Ｈ−ＮＭ
Ｒ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ２．７３〜２．８２（ｍ，Ｎ−ＣＨ₂−）、３．３８（ｔ
，Ｊ＝６．１Ｈｚ，−ＣＨ₂−Ｏ−）、７．０７（ｄ，Ｊ＝７．６，Ｃ７）、７
．６６（ｔ，Ｊ＝５．７Ｈｚ，−ＳＯ₂−ＮＨ−）、７．８１（ｓ，Ｃ４）、７
．９６（ｄ，Ｊ＝８．４，Ｃ６）、１１．４２（ｓ，Ｎ１Ｈ）。 Isamino-5-sulfonic acid (2-hydroxy-ethyl) -amide According to the method by Haller, 295 mg of 2-aminoethanol (4.83)
Mmol, 0.300 ml), 5.1 ml of ethanol and 3,3-dichloro-2-oxo-2,3-dihydroindole-5-sulfonyl chloride (Haller).
) Starting from 0.900 mg (3.01 mmol). After stirring for 30 minutes,
2-aminoethanol 0.100 ml was added again, and after 15 minutes, crushed ice 20 g
And 0.900 ml of 20% hydrochloric acid are added. Reheating to room temperature gives an oily mass which precipitates on the bottom of the container. The supernatant is decanted and the residual solvent is removed under vacuum. The yellow oil obtained is refluxed in water for 2 hours. Cooling of the orange solution gives a precipitate of 374 mg (45.8%) of yellow crystals; R _f = 0.52 (methanol / ethyl acetate 1/20, v / v): ¹ H-NM.
_{R (DMSO-d 6) δ2.73~2.82} (m, N-CH 2 -), 3.38 (t
_{, J = 6.1Hz, -CH 2 -O} -), 7.07 (d, J = 7.6, C7), 7
． 66 (t, J = 5.7Hz, -SO 2 -NH -), 7.81 (s, C4), 7
． 96 (d, J = 8.4, C6), 11.42 (s, N1H).

【００７８】イサチン−５−スルホン酸のメチルアミド前記のＨａｌｌｅｒによる方法に従い、メチルアミンの４０％水溶液０．５７
２ｍｌ（６．６２ミリモル）、エタノール５．６ｍｌおよび塩化３，３−ジクロ
ロ−２−オキソ−２，３−ジヒドロインドール−５−スルホニル（Ｈａｌｌｅｒ
）１．００ｇ（３．３４ミリモル）から出発する。生じた沈殿物をろ過により分
離し、水中で２時間還流する。冷却すると、溶液から沈殿物が生じる（黄色の結
晶）。収量：４２０ｍｇ（５２．３％）、Ｒ_f＝０．２９（酢酸エチル／ヘキサ
ン２／１、ｖ／ｖ）：¹Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ２．４１（ｄ，Ｊ＝５
．０，ＣＨ３）、７．０８（ｄ，Ｊ＝８．３，Ｃ７）、７．４８（ｑ，Ｊ＝５．
０，ＮＨ２）、７．７７（ｓ，Ｃ４）、７．９５（ｄ，Ｊ＝８．３，Ｃ６）、１
１．４２（ｓ，Ｎ１Ｈ）；¹³Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ２８．５２（ｑ，
Ｊ＝１３９．２，ＣＨ₃）、１１２．４０（ｄ，Ｊ＝１６８．９，Ｃ７）、１１
８．０４（ｓ，Ｃ３ａ），１２２．４８（ｄ，Ｊ＝１６９．２，Ｃ４）、１３３
．１３（ｓ，Ｃ５），１３６．１５（ｄ，Ｊ＝１６６．０，Ｃ６）、１５３．４
４（ｓ，Ｃ７ａ）、１５９．４４（ｓ，Ｃ２）、１８３．０４（ｓ，Ｃ３）。 Isatin-5-sulphonic acid methylamide 0.57 in 40% aqueous solution of methylamine according to the method of Haller, supra.
2 ml (6.62 mmol), ethanol 5.6 ml and 3,3-dichloro-2-oxo-2,3-dihydroindole-5-sulfonyl chloride (Haller
) Starting from 1.00 g (3.34 mmol). The precipitate formed is separated by filtration and refluxed in water for 2 hours. On cooling, a precipitate forms from the solution (yellow crystals). Yield: 420 mg (52.3%), R _f = 0.29 (ethyl acetate / hexane 2/1, v / v): ¹ H-NMR (DMSO-d ₆ ) δ2.41 (d, J = 5).
． 0, CH3), 7.08 (d, J = 8.3, C7), 7.48 (q, J = 5.
0, NH2), 7.77 (s, C4), 7.95 (d, J = 8.3, C6), 1
1.42 (s, N1H); ¹³ C-NMR (DMSO-d ₆ ) δ 28.52 (q,
_{J = 139.2, CH 3),} 112.40 (d, J = 168.9, C7), 11
8.04 (s, C3a), 122.48 (d, J = 169.2, C4), 133
． 13 (s, C5), 136.15 (d, J = 166.0, C6), 153.4
4 (s, C7a), 159.44 (s, C2), 183.04 (s, C3).

【００７９】２−ヒドロキシイミノ−Ｎ−（３−ヨードフェニル）−アセトアミド前記のＭａｒｖｅｌおよびＨｉｅｒｓにより記載された方法に従い、得られた
生成物を前記のＨｏｌｔおよびＳａｄｌｅｒの方法に従い精製する；融点１５２
〜１５４℃；Ｒ_f＝０．２９（酢酸エチル／ヘキサン１／１、ｖ／ｖ）：¹Ｈ−
ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ７．１２（ｐｔ，Ｊ＝８．１，Ｃ５’Ｈ）、７．４
４（ｐｔ，Ｊ＝７．９，Ｃ４’ＨまたはＣ６’Ｈ）、７．６３（ｓ，Ｃ２Ｈ）、
７．６５（ｐｔ，Ｊ＝８．２，Ｃ４’ＨまたはＣ６’Ｈ）、８．１６（Ｐｔ，Ｊ
＝１．７，Ｃ２’Ｈ）、１０．２７（ｓ，ＮＨ）、１２．２７（ｓ，Ｃ２ＮＯＨ
）；¹³Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ₆）δ９４．６９（ｄ，Ｊ＝１１．７，Ｃ３’
）、１１９．３２（ｄ，Ｊ＝１６５．７，Ｃ６’）、１２８．２２（ｄ，Ｊ＝１
６８．０，Ｃ２’）、１３０．９５（ｄ，Ｊ＝１６２．８，Ｃ５）、１３２．５
７（ｄ，Ｊ＝１６８．１，Ｃ４’）、１４０．０６（ｓ，Ｃ１’）、１４４．０
５（ｄ，Ｊ＝１７１．５，Ｃ２）、１６０．６７（ｓ，Ｃ１）。 2-Hydroxyimino-N- (3-iodophenyl) -acetamide Purify the resulting product according to the method described by Marvel and Hiers above, according to the method of Holt and Sadler above; melting point 152
˜154 ° C .; R _f = 0.29 (ethyl acetate / hexane 1/1, v / v): ¹ H-
NMR (DMSO-d ₆ ) δ 7.12 (pt, J = 8.1, C5′H), 7.4
4 (pt, J = 7.9, C4′H or C6′H), 7.63 (s, C2H),
7.65 (pt, J = 8.2, C4′H or C6′H), 8.16 (Pt, J
= 1.7, C2'H), 10.27 (s, NH), 12.27 (s, C2NOH
); ¹³ C-NMR (DMSO-d ₆ ) δ94.69 (d, J = 11.7, C3 ′)
), 119.32 (d, J = 165.7, C6 ′), 128.22 (d, J = 1)
68.0, C2 '), 130.95 (d, J = 162.8, C5), 132.5
7 (d, J = 168.1, C4 '), 140.06 (s, C1'), 144.0
5 (d, J = 171.5, C2), 160.67 (s, C1).

【００８０】緩衝液使用緩衝液は次の組成を有する：均質化緩衝液：β−グリセロホスフェート６０ｍＭ、ｐ−ニトロフェニルホス
フェート１５ｍＭ、ＭＯＰＳ２５ｍＭ（ｐＨ７．２）、ＥＧＴＡ１５ｍＭ、Ｍｇ
Ｃｌ₂１５ｍＭ、ＤＴＴ１ｍＭ、バナジン酸ナトリウム１ｍＭ、ＮａＦ１ｍＭ、
リン酸フェニル１ｍＭ、ロイペプチン１０μｇ／ｍｌ、アプロチニン１０μｇ／
ｍｌ、ソーヤトリプシン阻害剤１０μｇ／ｍｌおよびベンザミジン１００μＭ。 Buffer The buffer used has the following composition: Homogenization buffer : β-glycerophosphate 60 mM, p-nitrophenyl phosphate 15 mM, MOPS 25 mM (pH 7.2), EGTA 15 mM, Mg.
Cl ₂ 15 mM, DTT 1 mM, sodium vanadate 1 mM, NaF 1 mM,
Phenyl phosphate 1 mM, leupeptin 10 μg / ml, aprotinin 10 μg /
ml, 10 μg / ml soyatrypsin inhibitor and 100 μM benzamidine.

【００８１】緩衝液Ａ：ＭｇＣｌ₂１０ｍＭ、ＥＧＴＡ１ｍＭ、ＤＴＴ１ｍＭ、トリス−Ｈ
ＣｌｐＨ７．５２５ｍＭ、ヘパリン５０μｇ／ｍｌ。 Buffer A : MgCl ₂ 10 mM, EGTA ₁ mM, DTT ₁ mM, Tris-H
Cl pH 7.5 25 mM, heparin 50 μg / ml.

【００８２】緩衝液Ｃ：均質化緩衝液、ただしＥＧＴＡ５ｍＭを含み、ＮａＦおよびプロテ
アーゼ阻害剤を含まない。 Buffer C : Homogenization buffer, but with 5 mM EGTA, without NaF and protease inhibitors.

【００８３】Ｔｗｅｅｎ−２０（ＴＢＳＴ）のトリス−生理食塩緩衝液：ＴｒｉｓｐＨ７
．４５０ｍＭ、ＮａＣｌ１５０ｍＭ、Ｔｗｅｅｎ−２０（登録商標）０．１％
。 Tween-20 (TBST) Tris-saline buffer : Tris pH7
． 450 mM, NaCl 150 mM, Tween-20 (registered trademark) 0.1%
.

【００８４】低張性溶解緩衝液（ＨＬＢ）：Ｔｒｉｓ−ＨＣｌｐＨ７．４５０ｍＭ、Ｎ
ａＣｌ１２０ｍＭ、グリセリン１０％、Ｎｏｎｉｄｅｔ−Ｐ４０１％、ＤＴＴ
５ｍＭ、ＥＧＴＡ１ｍＭ、ＮａＦ２０ｍＭ、オルトバナデート１ｍＭ、ミクロシ
スチン５μＭ、次の生成物それぞれ１００μｇ／ｍｌ：ロイペプチン、アプロチ
ニン、ペプスタチン。 Hypotonic lysis buffer (HLB) : Tris-HCl pH 7.4 50 mM, N
aCl 120 mM, glycerin 10%, Nonidet-P40 1%, DTT
5 mM, EGTA 1 mM, NaF 20 mM, orthovanadate 1 mM, microcystin 5 μM, 100 μg / ml each of the following products: leupeptin, aprotinin, pepstatin.

【００８５】キナーゼの調製および活性の測定キナーゼの活性を緩衝液ＡまたはＣ中（特に記載のない限り）、３０℃で、最
終ＡＴＰ濃度１５μＭで測定した。空試験からの値を引いて、活性を１０分間イ
ンキュベーションするために導入されたリン酸塩のピコモルで算出した。活性値
は通常、最大活性、即ち阻害剤の不在下に対するパーセンテージとして表す。 Kinase Preparation and Activity Measurement Kinase activity was measured in buffer A or C (unless stated otherwise) at 30 ° C. at a final ATP concentration of 15 μM. Values from blank tests were subtracted and activity was calculated in picomoles of phosphate introduced for a 10 minute incubation. Activity values are usually expressed as maximum activity, ie the percentage relative to the absence of inhibitor.

【００８６】対照試験を、Ｍｅ₂ＳＯの適切な稀釈を使用して実施した。下記に記載のいく
つかのケースでは、基質のリン酸化をＳＤＳ−ＰＡＧＥ後のオートラジオグラフ
ィにより測定した。Control tests were carried out using appropriate dilutions of Me ₂ SO. In some cases described below, substrate phosphorylation was measured by autoradiography after SDS-PAGE.

【００８７】使用ＧＳＫ−３βはウサギ筋から精製された酵素であるか、Ｓｆ９昆虫細胞か
ら発現および精製された酵素である（Ｈｕｇｈｅｓ他，１９９２、Ｅｕｒ．Ｊ．
Ｂｉｏｃｈｅｍ．，２０３：３０５，３１１）。測定をＤＴＴ１０ｍＭのＢＳＡ
１ｍｇ／ｍｌ中での１／１００希釈で、ＧＳ−１４０μＭ５μｌを基質とし
て用い、緩衝液Ａ中、［γ³²Ｐ］ＡＴＰ（３０００Ｃｉ／モル；１ｍＣｉ／ｍｌ
）の存在下に、最終容量３０μｌで行った。３０℃でのインキュベーション３０
分間の後に、上澄みのアリコット２５μｌをＷｈａｔｍａｎＰ８１ホスホセル
ロース紙の２．５×３センチストリップに施与し、２０秒後に水１リットル中リ
ン酸１０ｍｌの溶液中でろ紙（filters）を５回洗浄した（各回、少なくとも５
分）。カウントを湿ったろ紙上で、ＡＣＳシンチレーション液（Ａｍｅｒｓｈａ
ｍ）１ｍｌの存在下に行った。The GSK-3β used is an enzyme purified from rabbit muscle or an enzyme expressed and purified from Sf9 insect cells (Hughes et al., 1992, Eur. J. et al.
Biochem. , 203: 305, 311). Measure DTT 10 mM BSA
[Γ ³² P] ATP (3000 Ci / mol; 1 mCi / ml in buffer A using 1 μl dilution in 1 mg / ml, 5 μl GS-1 40 μM as substrate
) In a final volume of 30 μl. Incubation at 30 ° C 30
After a period of 25 minutes 25 μl of an aliquot of the supernatant was applied to a 2.5 × 3 cm strip of Whatman P81 phosphocellulose paper and after 20 seconds the filters were washed 5 times in a solution of 10 ml phosphoric acid in 1 liter of water. (At least 5 each time
Minutes). Count the ACS scintillation fluid (Amersha) on a damp filter paper.
m) Performed in the presence of 1 ml.

【００８８】使用ＣＤＫ１／サイクリンＢをヒトデの卵母細胞から均質化緩衝液を使用して
抽出し、ｐ９^cKShsl−セファロースビーズ上でアフィニティ−クロマトグラフィ
ーにより精製し、これから、Ｍｅｉｊｅｒ他，１９９７（Ｍｅｔｈｏｄｓｉｎ
Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２８３：１１３−１２８）およびＢｏｒｇｎ
ｅ他，１９９９，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４：１１９７７−１１９８６に
記載されているように遊離ｐ９^cKShslを用いて生成物を溶離した。The CDK1 / Cyclin B used was extracted from starfish oocytes using homogenization buffer and purified by affinity chromatography on ^{p9 cKShsl} -Sepharose beads, from which Meijer et al., 1997 (Methods in).
Enzymology, Vol. 283: 113-128) and Borgn.
e et al., 1999, J. Am. Biol. Chem. 274: 11977-11986 to elute the product with free p9 ^CKShsl as described.

【００８９】キナーゼ活性を緩衝液Ｃ中、ヒストンＨ１１ｍｇ／ｍｌ、［γ³²Ｐ］ＡＴＰ
（３０００Ｃｉ／ミリモル；１ｍＣｉ／ｍｌ）１５μＭの存在下に、最終容量３
０μｌで測定した。Kinase activity in buffer C histone H1 1 mg / ml, [γ ³² P] ATP
(3000 Ci / mmol; 1 mCi / ml) in the presence of 15 μM final volume 3
It was measured in 0 μl.

【００９０】３０℃で１０分間インキュベーションした後に、上澄みのアリコット２５μｌ
をＰ８１ホスホセルロース紙上に施与し、前記のように処理した。After incubation for 10 minutes at 30 ° C., 25 μl aliquots of the supernatant
Was applied to P81 phosphocellulose paper and processed as described above.

【００９１】ＣＤＫ５／ｐ２５を当量のＣＤＫ５および組換え哺乳類ｐ２５を混合すること
により再構成し、Ｅ．ｃｏｌｉ中でＧＳＴ（グルタチオン−Ｓ−トランスフェラ
ーゼ）融合タンパク質の形で発現させ、グルタチオン上でアフィニティクロマト
グラフィーにより精製した。アガロースｐ２５はｐ３５の切断型バージョン、３
５ｋＤａのＣＤＫ５の活性体である。その活性をＣＤＫ１／サイクリンＢに関し
て記載されたように、緩衝液Ｃ中で測定した。 CDK5 / p25 was reconstituted by mixing equal amounts of CDK5 and recombinant mammalian p25 and transformed into E. It was expressed in E. coli as a GST (glutathione-S-transferase) fusion protein and purified by affinity chromatography on glutathione. Agarose p25 is a truncated version of p35, 3
It is an activator of 5 kDa CDK5. The activity was measured in buffer C as described for CDK1 / Cyclin B.

【００９２】ｉｎｖｉｔｒｏおよびｉｎｖｉｖｏでのタウのリン酸化細胞およびウイルス：Ｓｆ９細胞（ＩｎＶｉｔｒｏｇｅｎ、ＳａｎＤｉｅｇ
ｏ、ＣＡ）を２７℃で、ウシ胎児血清１０％およびゲンタマイシン５０μｇ／ｍ
ｌおよびアムホテリシン２．５μｇ／ｍｌを補足されたＧｒａｃｅ単層培地（Ｇ
ｉｂｃｏＢＲＬ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ，ＭＤ）中で培養した。Ｂａｃｕ
ｌｏＧｏｌｄはＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ（ＳａｎＤｉｅｇｏ、ＣＡ）から、ｐＶ
Ｌ１３９２はＩｎＶｉｔｒｏｇｅｎから入手した。 Phosphorylated cells and viruses of tau in vitro and in vivo : Sf9 cells (InVitrogen, San Diego.
o, CA) at 27 ° C., fetal bovine serum 10% and gentamicin 50 μg / m
1 and Grace monolayer medium supplemented with 2.5 μg / ml amphotericin (G
ibco BRL, Gaithersburg, MD). Bacu
loGold is pV from PharMingen (San Diego, CA)
L1392 was obtained from InVitrogen.

【００９３】タウのトランスフェクション：ＸｂａＩおよびＢａｍＨＩを有する最も短いヒ
トタウアイソホームを細菌発現ベクターｐＮＧ２（Ｂｉｅｒｎａｔ他，１９９３
、Ｎｅｕｒｏｎ，１１：１５３−１６３）およびｈｔａｕ２３をコードする遺伝
子から切断した。遺伝子を、同じエンドヌクレアーゼを用いて切断したバキュロ
ウイルストランスファーベクターｐＶＬ１３９２に挿入した。ＢａｃｕｌｏＧｏ
ｌｄシステムをタウバキュロウイルスを含むベクターを構成するために使用した
。ＢａｃｕｌｏＧｏｌｄのＤＮＡは致死欠失を含むバキュロウイルスの変性型の
１つである。 Transfection of tau : The shortest human tau isoform with XbaI and BamHI was transformed into the bacterial expression vector pNG2 (Biernat et al., 1993).
, Neuron, 11: 153-163) and htau23. The gene was inserted into the baculovirus transfer vector pVL1392 cut with the same endonuclease. BaculoGo
The Id system was used to construct a vector containing Taubaculovirus. BaculoGold DNA is one of the degenerate forms of baculovirus containing a lethal deletion.

【００９４】相補バキュロウイルストランスファーベクターとのＢａｃｕｌｏＧｏｌｄのＤ
ＮＡの同時トランスフェクションにより、このウイルスＤＮＡの致死欠失を回復
して、ｈｔａｕ２３をコードする配列を有する生育可能なウイルス粒子を再構成
することができる。BaculoGold D with Complementary Baculovirus Transfer Vector
Co-transfection of NA can restore the lethal deletion of this viral DNA and reconstitute a viable viral particle with a sequence encoding htau23.

【００９５】トランスフェクションのために使用するプラスミドＤＮＡをＱＩＡＧＥＮカー
トリッジ（Ｈｉｌｄｅｎ、ドイツ）を使用して精製した。The plasmid DNA used for transfection was purified using a QIAGEN cartridge (Hilden, Germany).

【００９６】単層で培養したＳｆ９細胞（６０ｍｍ細胞培養容器１個あたり細胞２×１０⁶
個）にバキュロウイルスＤＮＡ（ＢａｃｕｌｏＧｏｌｄからのＤＮＡ０．５μｇ
）およびｐＶＬ１３９２誘導体（２μｇ）を、リン酸カルシウム共沈法を使用し
て同時トランスフェクションした。感染細胞を感染の５日後に、ＳＤＳ−ＰＡＧ
Ｅおよびウェスタンブロットにより組換えタンパク質の存在に関して試験した。Sf9 cells cultured in a monolayer (2 × 10 ⁶ cells per 60 mm cell culture vessel)
Baculovirus DNA (0.5 μg of DNA from BaculoGold)
) And pVL1392 derivative (2 μg) were co-transfected using the calcium phosphate co-precipitation method. Infected cells were treated with SDS-PAG 5 days after infection.
Tested for the presence of recombinant protein by E and Western blot.

【００９７】Ｓｆ９細胞中でのタウのリン酸化タウのリン酸化に対するキナーゼ阻害剤の効果を測定するために、ｈｔａｕ２
３を発現するバキュロウイルスに感染したＳｆ９細胞を感染の３６時間後に、イ
ンジルビン−３’−モノオキシム５０μＭで５時間処理し、その後、収穫した。
リン酸化の増加を伴う対照タウ試料を得るために、ｈｔａｕ２３を発現するＳｆ
９細胞を収穫前に、オカダ酸０．２μＭを用いて５時間処理した。 Phosphorylation of tau in Sf9 cells To determine the effect of kinase inhibitors on the phosphorylation of tau, htau2
Sf9 cells infected with baculovirus expressing 3 were treated with indirubin-3′-monooxime 50 μM for 5 hours 36 hours post-infection and then harvested.
To obtain a control tau sample with increased phosphorylation, Sf expressing htau23
Nine cells were treated with 0.2 μM okadaic acid for 5 hours before harvesting.

【００９８】タウのウェスタンブロット：Ｓｆ９細胞にＭＯＩ１〜５で、組換えウイルスを感染させた。 Western Blot of Tau : Sf9 cells were infected with recombinant virus at MOI 1-5.

【００９９】細胞溶解産物を低張性溶解緩衝液（ＨＬＢ）中で調製した。[0099] Cell lysates were prepared in hypotonic lysis buffer (HLB).

【０１００】１６０００ｇで１５分間遠心分離した後に、上澄みを回収し、そのＮａＣｌ濃
度を５００ｍＭまで高めた。次いで上澄みを１０分間煮沸し、再び１６０００ｇ
で１５分間遠心分離した。タンパク質（３μｇ）をＳＤＳ−ＰＡＧＥにより分析
し、ＰＶＤＦ膜に移し、次の抗体を用いるウェスタンブロットにより調べた：Ａ
Ｔ−８（１：２０００）、ＡＴ−１８０（１：１０００）、ＡＴ−１００（１：
５００）、ＰＨＦ−１（１：６００）および抗タウポリクローナル抗体Ｋ９ＪＡ
。After centrifugation at 16000 g for 15 minutes, the supernatant was recovered and its NaCl concentration was raised to 500 mM. Then the supernatant is boiled for 10 minutes and again 16000g
It was centrifuged for 15 minutes. Proteins (3 μg) were analyzed by SDS-PAGE, transferred to PVDF membrane and examined by Western blot with the following antibodies: A
T-8 (1: 2000), AT-180 (1: 1000), AT-100 (1 :)
500), PHF-1 (1: 600) and anti-tau polyclonal antibody K9JA
.

【０１０１】ｉｎｖｉｔｒｏでのタウのリン酸化を、基質として精製ＧＳＫ−３βおよび
ヒト組換えタウ−３２タンパク質を使用して行った。前記のＧＳＫ−３βの調査
のための条件で、様々な濃度のインジルビン−３’−モノオキシムの存在下に３
０分間インキュベーションした後に、Ｌａｅｍｍｌｉ緩衝液を添加することによ
りキナーゼの反応を止めた。タウタンパク質をＳＤＳ−ＰＡＧＥで１０％で分析
し、そのリン酸化度をオートラジオグラフィにより可視化した。 Phosphorylation of tau in vitro was performed using purified GSK-3β and human recombinant tau-32 protein as substrates. In the presence of various concentrations of indirubin-3'-monooxime under the above conditions for GSK-3β investigation.
After a 0 minute incubation, the kinase reaction was stopped by adding Laemmli buffer. Tau protein was analyzed by SDS-PAGE at 10% and its phosphorylation degree was visualized by autoradiography.

【０１０２】実施例１：インジルビンによるＧＳＫ−３Ｂ、ＣＤＫ５／ｐ２５およびＣＤＫ１／サイクリンＢの阻害の調査適切な基質（ＧＳＫ−３β：ＧＳ１ペプチド；ＣＤＫ：ヒストンＨ１）を用い
て、ＡＴＰ１５μＭの存在下に、試験される誘導体の濃度を上昇させながらキナ
ーゼ活性を測定した。 Example 1: Investigation of the inhibition of GSK-3B, CDK5 / p25 and CDK1 / cyclin B by indirubin Using the appropriate substrate (GSK-3β: GS1 peptide; CDK: histone H1) in the presence of 15 μM ATP. In addition, the kinase activity was measured while increasing the concentration of the derivative tested.

【０１０３】ＩＣ₅₀値を用量／応答曲線から算出し、表１に示す。IC ₅₀ values were calculated from dose / response curves and are shown in Table 1.

【０１０４】[0104]

【表１】 [Table 1]

【０１０５】イサチンまたはインジゴの誘導体のような他のインジゴイドと比較する目的で
行われた測定により、表２に示す結果が得られた。The measurements made for the purpose of comparison with other indigoids such as isatin or derivatives of indigo gave the results shown in Table 2.

【０１０６】[0106]

【表２】 [Table 2]

【０１０７】これら２つの表の試験は、インジゴイドのうちでインジルビンの誘導体のみが
ＧＳＫ−３βおよびＣＤＫに対して同時に阻害効果を及ぼすことを示している。
事実、これらの結果からイサチン、インジゴまたはその誘導体はこれら３つのキ
ナーゼのいずれにも著しい効果を及ぼさないことは明らかである。The tests in these two tables show that among the indigoids, only the derivatives of indirubin exert an inhibitory effect on GSK-3β and CDK simultaneously.
In fact, from these results it is clear that Isatin, Indigo or its derivatives have no significant effect on any of these three kinases.

【０１０８】図１Ａから１Ｄは５−ヨード−インジルビン−３’−モノオキシム（Ａ）、５
，５’−ジブロモインジルビン（Ｂ）、５−スルホン酸インジルビン−３’−モ
ノオキシム（Ｃ）およびインジルビン−３’−モノオキシム（Ｄ）での用量−応
答曲線を示している。ＧＳＫ−３βおよびＣＤＫの阻害は前記のように測定した
。1A to 1D show 5-iodo-indirubin-3′-monooxime (A), 5
, 5'-dibromoindirubin (B), indirubin-3'-monooxime 5-sulfonate (C) and indirubin-3'-monooxime (D) show dose-response curves. Inhibition of GSK-3β and CDK was measured as described above.

【０１０９】活性を最大活性（阻害剤を含まない）に対する百分率として表した。[0109] The activity was expressed as a percentage of the maximum activity (without inhibitor).

【０１１０】実施例２：インジルビンの活性のメカニズムの調査この目的のために、ＡＴＰレベルおよびインジルビン−３’−モノオキシムの
濃度の両方を変動させて、動態検査を行う。 Example 2: Investigation of the mechanism of indirubin activity For this purpose, kinetic studies are carried out, varying both the ATP level and the concentration of indirubin-3'-monooxime.

【０１１１】得られた結果を図２に示す（１／ＡＴＰの関数としての１／Ｖ）。[0111] The results obtained are shown in Figure 2 (1 / V as a function of 1 / ATP).

【０１１２】反応混合物中のＡＴＰ濃度を０から２μＭまで変動させ、ＧＳ−１の濃度を６
．７μＭに一定に保つ。The concentration of ATP in the reaction mixture was varied from 0 to 2 μM and the concentration of GS-1 was adjusted to 6
． Keep constant at 7 μM.

【０１１３】インジルビン−３’−モノオキシムは固定のためのＡＴＰに競合して作用する
ことがわかる。It can be seen that indirubin-3′-monooxime acts in competition with ATP for immobilization.

【０１１４】ダイアグラムでの傾斜の直線性は阻害剤が一次であることを示している。[0114] The linearity of the slope in the diagram indicates that the inhibitor is first order.

【０１１５】明らかな阻害定数Ｋ_iは５０ｎＭである。The apparent inhibition constant K _i is 50 nM.

【０１１６】実施例３：ｉｎｖｉｔｒｏおよびｉｎｖｉｖｏでのインジルビンによるＧＳＫ−３βによるタウのリン酸化の阻害の調査微小管結合タウタンパク質からなる生理的基質のリン酸化に対してインジルビ
ン−３’−モノオキシムで得られた結果を示す。 Example 3: Investigation of inhibition of tau phosphorylation by GSK -3β by indirubin in vitro and in vivo Indirubin-3'- versus phosphorylation of physiological substrates consisting of microtubule-bound tau protein. The results obtained with the monooxime are shown.

【０１１７】細菌で発現させたヒト組換えタウタンパク質を使用する。タンパク質をｉｎ
ｖｉｔｒｏで、濃度が上昇していくインジルビン−３’−モノオキシムの存在下
にＧＳＫ−３βでリン酸化する。これをＳＤＳ−ＰＡＧＥ、次いでオートラジオ
グラフィによる分析と共に行う。Human recombinant tau protein expressed in bacteria is used. Protein in
In vitro, it is phosphorylated by GSK-3β in the presence of increasing concentrations of indirubin-3′-monooxime. This is done with SDS-PAGE followed by analysis by autoradiography.

【０１１８】図３Ａは得られた結果を表しており、リン酸化は用量に依存してインジルビン
−３’−モノオキシムにより阻害され、その際、ＩＣ₅₀は約１００ｎＭである。
これらの結果を図３Ｂで定量化したが、これはインジルビン−３’−モノオキシ
ムの濃度（ｎＭ）の関数としてタウのリン酸化百分率を示している。FIG. 3A represents the results obtained, where phosphorylation is dose-dependently inhibited by indirubin-3′-monooxime, with an IC ₅₀ of approximately 100 nM.
These results were quantified in Figure 3B, which shows the percentage phosphorylation of tau as a function of the concentration of indirubin-3'-monooxime (nM).

【０１１９】ｉｎｖｉｖｏでの研究も実施した。結果を図３Ｃに示す。[0119] Studies in vivo were also conducted. The results are shown in Figure 3C.

【０１２０】ｈｔａｕ２３を発現するＳｆ９細胞を処置しないか（−）、オカダ酸（ＯＡ）
０．２μＭに、またはインジルビン−３’−モノオキシム５０μＭに、またはＮ
Ｇ−９７に５時間さらした。Sf9 cells expressing htau23 are not treated (-) or okadaic acid (OA)
0.2 μM, or indirubin-3′-monooxime 50 μM, or N
Exposed to G-97 for 5 hours.

【０１２１】細胞溶解産物（ｈｔａｕ２３３μｇ）をＳＤＳ−ＰＡＧＥで解析し、クーマ
シーブルーで染色するか、様々な抗体と反応させた。Ｋ９ＪＡ（汎−タウ抗体）
はタウを含む全てのプレパラートを認識する。ＡＴ８、ＡＴ１８０およびＰＨＦ
１は異なるＳＰまたはＴＰリン酸化ユニット、即ちそれぞれＳｅｒ２０２；Ｔｈ
ｒ２０５、Ｔｈｒ２３１；Ｓｅｒ２３５およびＳｅｒ３９６；Ｓｅｒ４０４（ヒ
トタウタンパク質の最も長いアイソホームに対応するｈｔａｕ４０でのナンバリ
ング）に特異的である。ＡＴ１００はＴ２１２およびＳ２１４でリン酸化された
タウタンパク質を認識する（アルツハイマー病でタウタンパク質の非常に特異的
な反応。ただしこれは、２つの部位がリン酸化される場合Ｓｆ９細胞でも生じる
）。Cell lysates (3 μg htau23) were analyzed by SDS-PAGE and stained with Coomassie blue or reacted with various antibodies. K9JA (pan-tau antibody)
Recognizes all preparations, including tau. AT8, AT180 and PHF
1 is a different SP or TP phosphorylation unit, ie Ser202; Th respectively
It is specific for r205, Thr231; Ser235 and Ser396; Ser404 (numbering at htau40 corresponding to the longest isoform of human tau protein). AT100 recognizes tau protein phosphorylated at T212 and S214 (a highly specific reaction of tau protein in Alzheimer's disease, but this also occurs in Sf9 cells when two sites are phosphorylated).

【０１２２】インジルビン−３’−モノオキシムでの処理後のＡＴ１００シグナルの消失は
、この誘導体がＳｆ９細胞でのＧＳＫ−３β活性をかなり阻害することを示して
いる。Loss of AT100 signal after treatment with indirubin-3′-monooxime indicates that this derivative significantly inhibits GSK-3β activity in Sf9 cells.

【０１２３】図３Ｄはタウアイソホーム、抗体により認識されたエピトープおよびリン酸化
の好ましい部位：（ａ）ｈｔａｕ２３、（ｂ）ｈｔａｕ４０（アセンブリの交換
（３５２および４４１基）により生じたアイソホームの最も短いおよび最も長い
もの）の図を示す。ｈｔａｕ２３タンパク質はＮ−末端インサートおよび第２反
復を有さない。反復は暗灰色で示し、隣接領域は濃く示している。いくつかのエ
ピトープが見られる。FIG. 3D shows tau isoforms, epitopes recognized by antibodies and preferred sites of phosphorylation: (a) htau23, (b) htau40 (shortest isoform generated by exchange of assemblies (352 and 441 groups)). And the longest one). The htau23 protein has no N-terminal insert and second repeat. Repeats are shown in dark grey, adjacent regions are shown in dark. Several epitopes are found.

【０１２４】実施例４：ｉｎｖｉｔｒｏおよびｉｎｖｉｖｏでのインジルビンによる、ＣＤＫ５／ｐ２５でのＤＡＲＰＰ−３２のリン酸化の阻害の調査神経タンパク質ＤＡＲＰＰ−３２をＣＤＫ５／ｐ２５の生理的基質として同定
した。ＤＡＲＰＰ−３２は、Ｔｈｒ７５でＣＤＫ５／ｐ２５によりリン酸化され
るとｃＡＭＰ−依存性キナーゼ（ＰＫＡ）の阻害剤となる。 Example 4 Investigation of Inhibition of DARPP-32 Phosphorylation on CDK5 / p25 by Indirubin In Vitro and In Vivo The neuronal protein DARPP-32 was identified as a physiological substrate for CDK5 / p25. DARPP-32 becomes an inhibitor of cAMP-dependent kinase (PKA) when phosphorylated by CDK5 / p25 on Thr75.

【０１２５】このタンパク質を、ＣＤＫ５／ｐ２５によるｉｎｖｉｔｒｏリン酸化のため
の基質として使用した。This protein was used as a substrate for in vitro phosphorylation by CDK5 / p25.

【０１２６】生体マウス線条体の断片を通常の方法で調製する。継続的なエアレーション（
Ｏ₂９５％／ＣＯ₂５％）により酸化させたクレブス重炭酸緩衝液中で均衡化した
後に、断片を様々な濃度のインジルビン−３’−モノオキシムで、またはロスコ
ビチン（ｒｏｓｃｏｖｉｔｉｎ）１０μｍで６０分間処理するか、同じ時間、ク
レブス重炭酸緩衝液中に放置する。Live mouse striatal fragments are prepared by conventional methods. Continuous aeration (
Fragments were treated with various concentrations of indirubin-3′-monooxime or roscovittin 10 μm for 60 minutes after equilibration in Krebs bicarbonate buffer oxidised with 95% O ₂ /5% CO _2. Or leave in Krebs bicarbonate buffer for the same time.

【０１２７】ＳＤＳ１％およびＮａＦ５０ｍＭ中、沸点で音波処理することにより断片を均
質化する。タンパク質の濃度を通常のＢＳＡ曲線を使用してＢＣＡ法により決定
する。当量のタンパク質（８０μｇ）を１５％アクリルアミドゲルを使用してＳ
ＤＳ−ＰＡＧＥにかけ、セルロース膜上への電気泳動での移動、次いでＴｈｒ７
５上でリン酸化したＤＡＲＰＰ−３２を特異的に検出しうるリン酸化状況の特異
的抗体で免疫痕跡を続ける。Homogenize the fragments by sonication at boiling point in 1% SDS and 50 mM NaF. The protein concentration is determined by the BCA method using a regular BSA curve. Equivalent amount of protein (80 μg) was S using a 15% acrylamide gel.
DS-PAGE, electrophoretic transfer onto cellulose membrane, then Thr7
The immunotrace is continued with a specific antibody in the phosphorylation status, which is capable of specifically detecting DARPP-32 phosphorylated on 5.

【０１２８】結果を図４に示す。[0128] The results are shown in Fig. 4.

【０１２９】インジルビン−３’−モノオキシムはこのリン酸化の濃度依存性抑制を約１０
０ｎＭのＩＣ₅₀でもたらすことが分かる。Indirubin-3′-monooxime reduced this phosphorylation concentration-dependently by about 10 min.
It can be seen that an IC ₅₀ of 0 nM results.

【０１３０】ＣＤＫ５／ｐ２５によるＤＡＲＰＰ−３２のリン酸化はＤＡＲＰＰ−３２ホス
ホ−Ｔｈｒ７５に対するホスホ特異性抗体で制御することができる。Phosphorylation of DARPP-32 by CDK5 / p25 can be regulated with phosphospecific antibodies against DARPP-32 phospho-Thr75.

【０１３１】リン酸化はｉｎｖｉｖｏでは、ｐ３５^-／^-組織中でのこの部位では観察され
ない。インジルビン−３’−モノオキシムによる阻害が存在することが分かるが
、これはインジルビンがｉｎｖｉｖｏでＣＤＫ５を阻害しうることを示してい
る。Phosphorylation is not observed in vivo at this site in p35 ⁻ / ⁻ tissues. It can be seen that there is an inhibition by indirubin-3'-monooxime, indicating that indirubin can inhibit CDK5 in vivo.

【図面の簡単な説明】[Brief description of drawings]

【図１】本発明に従い使用される各種インジルビンの濃度とキナ−ゼ活性の関係を示す
もので、Ａは５−ヨ−ドインジルビン−３'−モノオキシムの、Ｂは５，５'−ジ
ブロモインジルビンの、Ｃは５−ＳＯ₃Ｎａ−インジルビン−３'−モノオキシム
の、Ｄはインジルビン−３'−モノオキシムの各用量−応答曲線を示す。1 shows the relationship between the concentration of various indirubins used according to the present invention and kinase activity, where A is 5-iodoindirubin-3′-monooxime and B is 5,5′-dibromoindirubin. C shows the dose-response curve of 5-SO ₃ Na-indirubin-3′-monooxime and D shows the dose-response curve of indirubin-3′-monooxime.

【図２】ＧＳＫ−３βに固定するためのＡＴＰレベルおよびインジルビン−３'−モノ
オキシムの濃度との関係を、１／ＡＴＰの関数としての１／Ｖで示す。FIG. 2 shows the relationship between ATP levels for fixation to GSK-3β and the concentration of indirubin-3′-monooxime as 1 / V as a function of 1 / ATP.

【図３】ＧＳＫ−３βによるタウのリン酸化に対してｉｎｖｉｔｒｏでインジルビン
によって示される阻害効果を示し、Ａは得られた結果を表し、Ｂはインジルビン
−３'−モノオキシムの濃度の関数としてタウのリン酸化％を示し、Ｃはｉｎ
ｖｉｖｏでの実施結果を示し、Ｄはタウアイソホ−ム、抗体により認識されたエ
ピト−プおよびリン酸化の好ましい部位（ｈｔａｕ２３及びｈｔａｕ４０）を示
す。FIG. 3 shows the in vitro inhibitory effect of indirubin on the phosphorylation of tau by GSK-3β, A representing the results obtained, B representing tau as a function of the concentration of indirubin-3′-monooxime. Is the phosphorylation% of
The results obtained in vivo are shown, and D indicates the tau isoform, the epitope recognized by the antibody, and the preferred sites for phosphorylation (htau23 and htau40).

【図４】ｉｎｖｉｔｒｏおよびｉｎｖｉｖｏでのインジルビンによる、ＣＤＫ５／
ｐ２５でのＤＡＲＰＰ−３２のリン酸化の阻害の調査結果を示す。FIG. 4. CDK5 / by indirubin in vitro and in vivo.
5 shows the results of a study on inhibition of DARPP-32 phosphorylation at p25.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 31/04 Ａ６１Ｐ 31/04 31/12 31/12 35/00 35/00 43/00 １１１ 43/00 １１１Ｃ０７Ｄ 209/34 Ｃ０７Ｄ 209/34 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (71)出願人アイゼンブラント、ゲルハルトＥＩＳＥＮＢＲＡＮＤ，Ｇｅｒｈａｒｄドイツ連邦共和国 69126 ハイデルベルクグスタフ−キルヒホッフ−シュトラーセ３ (72)発明者アイゼンブラント、ゲルハルトドイツ連邦共和国 69126 ハイデルベルクグスタフ−キルヒホッフ−シュトラーセ３ (72)発明者メージェ、ローランフランス国エフ−29680 ロスコフルドビルアケイム 16 (72)発明者ホエセル、ラルフドイツ連邦共和国 67659 カイゼルスラウテルンエルレンバッハーシュトラーセ 128 (72)発明者トメ、アンドレアフランス国エフ−29682 ロスコフベペ 74 スタションビオロジクセ．エム．エール．エス．Ｆターム(参考） 4C086 AA01 AA02 BC13 MA01 MA04 NA14 ZA15 ZA36 ZA81 ZA89 ZB26 ZB33 ZB35 ZC20 4C204 CB03 DB29 EB02 FB01 GB01─────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of front page (51) Int.Cl. ⁷ Identification code FI theme code (reference) A61P 31/04 A61P 31/04 31/12 31/12 35/00 35/00 43/00 111 43/00 111 C07D 209/34 C07D 209/34 (81) Designated countries EP (AT, BE, CH, CY, DE, DK, ES, FI, FR, GB, GR, IE, IT, LU, MC, NL, PT , SE, TR), OA (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, GW, ML, MR, NE, SN, TD, TG), AP (GH, GM, KE, LS, MW, MZ, SD, SL, SZ, TZ, UG, ZW), EA (AM, AZ, BY, KG, KZ, MD, RU, TJ, TM), AE, AG, AL, AM, AT, AU, AZ BA, BB, BG, BR, BY, CA, CH, CN, CR, CU, CZ, DE, DK, DM, DZ, EE, ES, FI, GB, GD, GE, GH, GM, HR, HU , ID, IL, IN, IS, JP, KE, KG, KP, KR, KZ, LC, LK, LR, LS, LT, LU, LV, MA, MD, MG, MK, MN, MW, MX, NO, NZ, PL, PT, RO, RU, SD, SE, SG, SI, SK, SL, TJ, TM, TR, TT, TZ, UA, UG, US, UZ, VN, YU, ZA, ZW (71) Applicant Eisenbrand, Gerhard EISENBRAND, Gerhard 69126 Heidelberg Gustav-Kirchhoff-Strasse 3 (72) Inventor Eisenbrand, Gerhard 69126 Heide, Germany Berg Gustav-Kirchhoff-Strasse 3 (72) Inventor Mage, Laurent France F-29680 Roscofrdville Akaim 16 (72) Inventor Hoesel, Ralph Germany 67659 Kaiserslautern Erlenbacher Strasse 128 (72) Invention Tomé, Andrea France F-29682 Roscoff Bepe 74 Station Biologice. M. Ale. S. F-term (reference) 4C086 AA01 AA02 BC13 MA01 MA04 NA14 ZA15 ZA36 ZA81 ZA89 ZB26 ZB33 ZB35 ZC20 4C204 CB03 DB29 EB02 FB01 GB01

Claims

【特許請求の範囲】[Claims]

【請求項１】ＧＳＫ−３β阻害薬剤を調整するための一般式Ｉ：【化１】［式中、同じか異なってよいＲ¹およびＲ⁶は水素原子；ハロゲン原子；ヒドロキ
シ基；メチレンヒドロキシ基；直鎖または分枝鎖のＣ₁〜Ｃ₁₈−アルキルまたは
アルコキシまたはメチレンアルコキシ基；必要に応じて１個または複数のへテロ
原子を含む、３から７個−炭素原子を有するシクロアルキル基；必要に応じて１
個または複数のヘテロ原子を有する置換または非置換のアリール、アラルキルま
たはアリールオキシ基；それぞれ互いに独立に、直鎖または分枝鎖のアルキル基
中に１から６個の炭素原子を有するモノ−、ジ−またはトリアルキルシリル基；
それぞれ互いに独立に置換または非置換アリール基を有するモノ−、ジ−または
トリアリールシリル基；トリフルオロメチル基；−ＣＯＭ；−ＣＯＯＭ；あるい
は−ＣＨ₂ＣＯＯＭ基（ここでＭは水素原子、必要ならばヒドロキシおよび／ま
たはアミノ基１個または複数で置換された直鎖または分枝鎖のＣ₁〜Ｃ₁₈−アル
キル基、または必要ならば１個または複数のヘテロ原子を有し、１個または複数
のハロゲン原子、アルキル基またはアルコキシ基で置換されていてよいアリール
基を表す）；−ＮＲ¹¹Ｒ¹²基（ここで同じか異なってよいＲ¹¹およびＲ¹²は水素
原子、必要ならば付加的に１個または複数のヒドロキシおよび／またはアミノ基
で置換されているＣ₁〜Ｃ₁₈直鎖または分枝鎖アルキル基、置換または非置換で
、必要ならば１個または複数のヘテロ原子を含むアリール基を表す）；アシル基
；−ＣＨ₂−ＮＲ¹¹Ｒ¹²メチレンアミノ基（ここでＲ¹¹およびＲ¹²は前記の意味
を有する）；ベンゼン環が必要ならば１個または複数のへテロ原子を有するベン
ジル基；必要ならば１個または複数のヘテロ原子を有する、炭素原子３から７個
を有するメチレンシクロアルキル基；アミドとしての、窒素原子に結合した生理
的アミノ酸基；グリコシドが単糖または二糖から選択されるＯ−グリコシドまた
はＮ−グリコシド；あるいはメチレンスルホネート基を表し；同じか異なってよ
いＲ²、Ｒ³、Ｒ⁴、Ｒ⁵、Ｒ⁷、Ｒ⁸、Ｒ⁹およびＲ¹⁰は水素原子；ハロゲン原子；
ヒドロキシ基；ニトロソ基；ニトロ基；アルコキシ基；必要ならば１個または複
数のヒドロキシおよび／またはアミノ基で置換されている直鎖または分枝鎖のＣ ₁ 〜Ｃ₁₈アルキル基；必要ならば１個または複数のヘテロ原子を有する置換また
は非置換のアリール基；必要ならば１個または複数のヘテロ原子を有する置換ま
たは非置換アラルキル基；必要ならば１個または複数のヘテロ原子を有する置換
または非置換アリールオキシ基；必要ならば１個または複数のヘテロ原子を有す
る置換または非置換メチレンアリールオキシ基；必要ならば１個または複数のヘ
テロ原子を含む、３から７個の炭素原子を有するシクロアルキル基；必要ならば
１個または複数のヘテロ原子を含む、３から７個の炭素原子を有するメチレンシ
クロアルキル基；トリフルオロメチル基；−ＣＯＭ；−ＣＯＯＭ；またはＣＨ₂
ＣＯＯＭ基（ここでＭは水素原子、必要ならばヒドロキシおよび／またはアミノ
基１個または複数で付加的に置換された直鎖または分枝鎖のＣ₁〜Ｃ₁₈−アルキ
ル基、または必要ならば１個または複数のヘテロ原子を有し、１個または複数の
ハロゲン原子、アルキル基またはアルコキシ基で置換されていてよいアリール基
を表す）；−ＮＲ¹¹Ｒ¹²基（ここで同じか異なってよいＲ¹¹およびＲ¹²は水素原
子、必要ならば付加的に１個または複数のヒドロキシおよび／またはアミノ基で
置換されている直鎖または分枝鎖Ｃ₁〜Ｃ₁₈アルキル基、置換または非置換で、
必要ならば１個または複数のヘテロ原子を含むアリール基、アシル基を表すか、
窒素原子が、必要ならば１個または複数のヘテロ原子を含む、炭素原子３から７
個を有するシクロアルキルの一部を形成する）；−ＣＯＮＲ¹¹Ｒ¹²基（ここでＲ ¹¹ およびＲ¹²は前記の意味を有する）；ヒドロキシルアミノ基；ホスフェート基
；ホスホネート基；スルフェート基；スルホネート基；スルホンアミド基；−Ｓ
Ｏ₂ＮＲ¹¹Ｒ¹²基（ここでＲ¹¹およびＲ¹²は前記の意味を有する）；−Ｎ＝Ｎ−
Ｒ¹³アゾ基（ここでＲ¹³は必要ならば１個または複数のカルボキシル、ホスホリ
ルまたはスルホネート基で置換された芳香族基あるいはグリコシドが単糖または
二糖から選択されているＯ−グリコシドまたはＮ−グリコシド基を表す）を表す
か；Ｒ¹およびＲ⁵ならびにＲ⁶およびＲ¹⁰はそれぞれ一緒になって、互いに独立
に必要ならば置換された１から４個のＣＨ₂基を有する環を形成し；同じか異な
ってよいＸおよびＹは酸素；イオウ；セレン；テルルの原子；ＮＲ¹⁴基（ここで
Ｒ¹⁴は水素原子、必要ならば１個または複数のカルボキシル、ホスホリルまたは
スルホネート基で置換された直鎖または分枝鎖Ｃ₁〜Ｃ₁₈アルキル基、必要なら
ば１個または複数のヘテロ原子を含む置換または非置換のアリール基、アラルキ
ル基またはスルホネート基を表す）；あるいは−ＮＯＲ¹⁴（ここでＲ¹⁴基は前記
の意味を有する）を表す］で示されるインジルビン誘導体およびこれらの誘導体の生理的に許容される塩の
使用。1. A general formula I for preparing a GSK-3β inhibitor: [Chemical 1] [Wherein R may be the same or different¹And R⁶Is hydrogen atom; halogen atom; hydroxy
Si group; methylene hydroxy group; straight or branched chain C₁~ C₁₈-Alkyl or
An alkoxy or methylenealkoxy group; optionally one or more hetero groups
Cycloalkyl groups having from 3 to 7 carbon atoms, including atoms; optionally 1
A substituted or unsubstituted aryl, aralkyl or aralkyl having one or more heteroatoms.
Or aryloxy groups; each independently of the other, straight-chain or branched-chain alkyl groups
A mono-, di- or trialkylsilyl group having 1 to 6 carbon atoms therein;
Mono-, di-, or mono-, di- or each having a substituted or unsubstituted aryl group independently of each other
Triarylsilyl group; trifluoromethyl group; -COM; -COOM; or
Is -CH₂A COOM group (where M is a hydrogen atom, hydroxy and / or
Or a straight-chain or branched C substituted with one or more amino groups₁~ C₁₈-Al
Kill group, or optionally one or more heteroatoms, one or more
Optionally substituted with a halogen atom, an alkyl group or an alkoxy group of
Represents a group); -NR¹¹R¹²Groups (wherein R may be the same or different)¹¹And R¹²Is hydrogen
Atoms, and optionally one or more hydroxy and / or amino groups
C replaced by₁~ C₁₈A straight or branched chain alkyl group, substituted or unsubstituted
, Represents an aryl group containing one or more heteroatoms if necessary);
; -CH₂-NR¹¹R¹²Methyleneamino group (where R¹¹And R¹²Means the above
A benzene ring, if necessary, having one or more heteroatoms.
Zyl group; 3 to 7 carbon atoms, optionally with one or more heteroatoms
A methylenecycloalkyl group having a physiology attached to a nitrogen atom as an amide
Amino acid groups; O-glycosides whose glycosides are selected from mono- or disaccharides
Represents an N-glycoside; or a methylene sulfonate group; same or different
R², R³, R^Four, R^Five, R⁷, R⁸, R⁹And R^TenIs a hydrogen atom; a halogen atom;
Hydroxy group; Nitroso group; Nitro group; Alkoxy group; One or more if necessary
Straight or branched chain C substituted with a number of hydroxy and / or amino groups ₁ ~ C₁₈Alkyl groups; optionally substituted with one or more heteroatoms
Is an unsubstituted aryl group; optionally substituted with one or more heteroatoms.
Or an unsubstituted aralkyl group; optionally substituted with one or more heteroatoms
Or an unsubstituted aryloxy group; optionally containing one or more heteroatoms
A substituted or unsubstituted methylenearyloxy group; one or more
Cycloalkyl groups having from 3 to 7 carbon atoms, including terror atoms; if necessary
Methylene group having 3 to 7 carbon atoms, including one or more heteroatoms
Chloroalkyl group; trifluoromethyl group; -COM; -COOM; or CH₂
COOM group (where M is a hydrogen atom, if necessary hydroxy and / or amino)
Linear or branched C additionally substituted with one or more groups₁~ C₁₈-Archi
Radical, or optionally one or more heteroatoms, containing one or more
Aryl group which may be substituted with halogen atom, alkyl group or alkoxy group
Represents); -NR¹¹R¹²Groups (wherein R may be the same or different)¹¹And R¹²Is hydrogen
A child, optionally with one or more hydroxy and / or amino groups
Substituted straight or branched chain C₁~ C₁₈An alkyl group, substituted or unsubstituted,
Represents an aryl group containing one or more heteroatoms, an acyl group if necessary, or
Nitrogen atoms, optionally containing one or more heteroatoms, carbon atoms 3 to 7
Forming part of a cycloalkyl having 4);¹¹R¹²Group (where R ¹¹ And R¹²Has the above meaning); hydroxylamino group; phosphate group
A phosphonate group; a sulfate group; a sulfonate group; a sulfonamide group;
O₂NR¹¹R¹²Group (where R¹¹And R¹²Has the above meaning); -N = N-
R¹³Azo group (where R¹³Is one or more carboxyl, phosphor
Aromatic group or glycoside substituted with a phenyl or sulfonate group is a monosaccharide or
Represents an O-glycoside or N-glycoside group selected from disaccharides)
R;¹And R^FiveAnd R⁶And R^TenAre together and independent of each other
1 to 4 CH substituted if necessary for₂Forming a ring with groups; same or different
X and Y which may be oxygen are oxygen; sulfur; selenium; an atom of tellurium; NR¹⁴Group (here
R¹⁴Is a hydrogen atom, if desired one or more carboxyl, phosphoryl or
Straight or branched chain C substituted with a sulfonate group₁~ C₁₈An alkyl group, if necessary
Substituted or unsubstituted aryl groups containing one or more heteroatoms, aralkyl
Group or sulfonate group); or -NOR¹⁴(Where R¹⁴The group is as described above
Has the meaning of Of indirubin derivatives and physiologically acceptable salts of these derivatives
use.

【請求項２】インジルビンの前記誘導体中で、１個または複数のベンゼン
環の１個または複数の原子が窒素原子で置換されていることを特徴とする請求項
１に記載の使用。2. Use according to claim 1, characterized in that in the derivative of indirubin one or more atoms of one or more benzene rings is replaced by a nitrogen atom.

【請求項３】インジルビンの前記誘導体中で、必要ならば互いに独立に１
個または複数のヘテロ原子を含む１個または複数の芳香族または非芳香族環系が
インジルビン系と縮合していることを特徴とする請求項１または２に記載の使用
。3. In said derivative of indirubin, 1 independently of each other, if necessary.
Use according to claim 1 or 2, characterized in that one or more aromatic or non-aromatic ring systems containing one or more heteroatoms are fused with the indirubin system.

【請求項４】インジルビン誘導体がポリエチレングリコールエステルまた
はポリエチレングリコールエーテルにそれぞれエステルまたはエーテル結合によ
り結合していることを特徴とする請求項１から３のいずれか一項に記載の使用。4. Use according to any one of claims 1 to 3, characterized in that the indirubin derivative is linked to the polyethylene glycol ester or polyethylene glycol ether by an ester or ether bond, respectively.

【請求項５】インジルビンの前記の誘導体中、同じかまたは異なってよい
ＸおよびＹが＝Ｏまたは＝ＮＯＨ基を表すことを特徴とする請求項１から４のい
ずれか一項に記載の使用。5. Use according to any one of claims 1 to 4, characterized in that, in said derivative of indirubin, X and Y, which may be the same or different, represent a = 0 or = NOH group.

【請求項６】前記のインジルビン誘導体の置換基Ｒ¹、Ｒ³、Ｒ⁴およびＲ⁸ が次の意味：Ｒ³：水素原子、ハロゲン原子、アルキル基、−ＳＯ₃Ｈ、−ＳＯ₂ＮＨ₂、−Ｓ
Ｏ₂−Ｎ−（ＣＨ₃）₂、−ＳＯ₂−Ｎ−Ｃ₂Ｈ₅−ＯＨ、−ＳＯ₂−Ｎ−（Ｃ₂Ｈ₅−
ＯＨ）₂、−ＳＯ₂−ＮＨ−ＣＨ₃基、Ｒ⁴およびＲ⁸：互いに独立に水素またはハロゲン原子、Ｒ¹：アルキルまたはアリール基（式（Ｉ）中に示された他の置換基は水素原
子を表す）を有することを特徴とする請求項５に記載の使用。6. The substituents R ¹ , R ³ , R ⁴ and R ⁸ of the indirubin derivative have the following meanings: R ³ : hydrogen atom, halogen atom, alkyl group, —SO ₃ H, —SO ₂ NH ₂ , -S
_{_{_{O 2 -N- (CH 3) 2}}} , -SO 2 -N-C 2 H 5 -OH, -SO 2 -N- (C 2 H 5 -
OH) ₂ , —SO ₂ —NH—CH ₃ group, R ⁴ and R ⁸ : independently of each other hydrogen or a halogen atom, R ¹ : an alkyl or aryl group (other substituents shown in formula (I) are Use according to claim 5, characterized in that it represents a hydrogen atom.

【請求項７】前記のインジルビン誘導体中、Ｘ＝Ｙであり、これら２つの
置換基が＝Ｏを表すことを特徴とする請求項１から４のいずれか一項に記載の使
用。7. Use according to any one of claims 1 to 4, characterized in that in said indirubin derivative X = Y and these two substituents represent = O.

【請求項８】前記のインジルビン誘導体中の置換基Ｒ¹、Ｒ³、Ｒ⁴および
Ｒ⁸が次の意味：Ｒ¹：アルキル、特にメチルおよびフェニル、Ｒ³：水素、ハロゲン（Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ）、ＮＯ₂、−ＳＯ₃Ｈ、−ＳＯ₂Ｎ
Ｈ₂、−ＳＯ₂−Ｎ（ＣＨ₃）₂、−ＳＯ₂−Ｎ−Ｃ₂Ｈ₅−ＯＨ、−ＳＯ₂−Ｎ−（Ｃ ₂ Ｈ₅−ＯＨ）₂、−ＳＯ₂−ＮＨＣＨ₃、Ｒ⁴およびＲ⁸：ハロゲン、特にＩまたはＢｒ（式（Ｉ）中で示された他の置換基は水素原子を表す）を有することを特徴とする請求項７に記載の使用。8. The substituent R in the indirubin derivative described above.¹, R³, R^Fourand
R⁸Has the following meanings: R¹: Alkyl, especially methyl and phenyl, R³: Hydrogen, halogen (F, Cl, Br, I), NO₂, -SO₃H, -SO₂N
H₂, -SO₂-N (CH₃)₂, -SO₂-NC₂H_Five-OH, -SO₂-N- (C ₂ H_Five-OH)₂, -SO₂-NHCH₃, R^FourAnd R⁸: Halogen, especially I or Br (Other substituents shown in formula (I) represent a hydrogen atom) Use according to claim 7, characterized in that

【請求項９】前記の誘導体をインジルビン、５−ヨード−インジルビン、
５−ブロモ−インジルビン、５−クロロ−インジルビン、５−フルオロ−インジ
ルビン、５−メチル−インジルビン、５−ニトロ−インジルビン、５−ＳＯ₃Ｈ
−インジルビン、５’−ブロモ−インジルビン、５−５’−ジブロモ−インジル
ビンまたは５’−ブロモ−インジルビン５−スルホン酸から選択する請求項８に
記載の使用。9. The derivative is indirubin, 5-iodo-indirubin,
5-bromo - indirubin, 5-chloro - indirubin, 5-fluoro - indirubin, 5-methyl - indirubin, 5-nitro - indirubin, 5-SO ₃ H
Use according to claim 8 selected from -indirubin, 5'-bromo-indirubin, 5-5'-dibromo-indirubin or 5'-bromo-indirubin 5-sulphonic acid.

【請求項１０】前記のインジルビン誘導体中、Ｘが＝ＮＯＨ基を表し、Ｙ
が＝Ｏ基を表すことを特徴とする請求項１から４のいずれか一項に記載の使用。10. In the indirubin derivative, X represents a ═NOH group, and Y
Use according to any one of claims 1 to 4, characterized in that represents an = 0 group.

【請求項１１】Ｒ³がハロゲン原子、特にＩまたは−ＳＯ₃Ｎａ基を表す請
求項１０に記載の使用。11. Use according to claim 10, wherein R ³ represents a halogen atom, in particular I or a —SO ₃ Na group.

【請求項１２】前記の誘導体をインジルビン−３’−モノオキシム、５−
ヨード−インジルビン−３’−モノオキシムおよび５−ＳＯ₃Ｎａ−インジルビ
ン−３’−モノオキシムから選択することを特徴とする請求項１１に記載の使用
。12. The derivative of indirubin-3′-monooxime, 5-
Iodo - Use according to claim 11, characterized by selecting from indirubin-3'-monooxime and 5-SO ₃ Na-indirubin-3'-monooxime.

【請求項１３】薬剤を経口投与のために、ゼラチンカプセル、錠剤、ロゼ
ンジまたはカプセルの形で調製することを特徴とする請求項１から１２のいずれ
か一項に記載の使用。13. Use according to any one of claims 1 to 12, characterized in that the medicament is prepared for oral administration in the form of gelatin capsules, tablets, lozenges or capsules.

【請求項１４】薬剤を注射による投与のために、溶液の形で調製すること
を特徴とする請求項１から１２のいずれか一項に記載の使用。14. Use according to any one of claims 1 to 12, characterized in that the medicament is prepared in the form of a solution for administration by injection.

【請求項１５】ＧＳＫ−３ベータおよびＣＤＫ５が関与する疾患を治療す
るための、請求項１から１４のいずれか一項に記載の使用。15. The use according to any one of claims 1 to 14 for treating diseases associated with GSK-3beta and CDK5.