JP2003514024A

JP2003514024A - 細胞増殖性疾患の治療のためのウイルス

Info

Publication number: JP2003514024A
Application number: JP2001537962A
Authority: JP
Inventors: マシュー・シー・コフィー; ブラッドリー・ジー・トンプソン
Original assignee: オンコリティクスバイオテク，インコーポレーテッド
Priority date: 1999-11-12
Filing date: 2000-11-08
Publication date: 2003-04-15
Also published as: US20080031886A1; US6596268B1; ZA200203041B; CA2388807A1; US8080241B2; US7799329B2; US20020028195A1; US20080019981A1; US7731951B2; AU782020B2; EP1227828A1; CA2388807C; US20100203147A1; US20120156168A1; US8491886B2; BR0015491A; NZ518454A; US7252817B2; EP1955703A1; US20080019980A1

Abstract

(57)【要約】増殖細胞の実質的な崩壊を引き起こす条件下で、改変アデノウイルス、改変HSV、改変ワクシニアウイルス、および改変パラポックスウイルスorfウイルスからなる群から選択される一つ以上のウイルスの有効量を、Ras活性化経路を有する哺乳動物における増殖細胞に投与することを含む、哺乳動物におけるRas介在性細胞増殖性疾患を治療する方法が提供される。改変アデノウイルス、改変HSV、改変ワクシニアウイルス、および改変パラポックスウイルスorfウイルスからなる群から選択される少なくとも一つのウイルスと、免疫保護化改変アデノウイルス、改変HSV、改変ワクシニアウイルス、および改変パラポックスウイルスorfウイルスからなる群から選択される少なくとも一つの免疫保護化ウイルスとを含む製薬組成物も提供される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】

関連出願に対する相互参照この出願は、1999年11月12日に出願された米国仮出願出願番号60/164,878の利
益を主張し、前記出願は参考として完全に取り込まれる。

【０００２】本発明は、ミュータントウイルスを使用するRas活性化によって介在される、
哺乳動物における細胞増殖性疾患を治療するための方法に関する。

【０００３】以下の文献、特許出願、および特許が、本出願において引用される：

【参考文献】

【０００４】全ての上述の文献、特許出願、および特許は、各個々の文献、特許出願、また
は特許が参考して完全に特物に且つ個々的に指摘された範囲で、ここに参考とし
て完全に取り込まれる。

【０００５】

【従来の技術】

正常な細胞増殖は、増殖促進性ガン原遺伝子と増殖抑制性腫瘍抑制遺伝子の間
のバランスによって調節される。腫瘍形成は、ガン原遺伝子の活性の増強または
腫瘍抑制の不活性化のような、細胞シグナルの伝達を支配する細胞エレメントの
ミューテーションを引き起こすゲノムに対する遺伝的変異によって引き起こされ
得る。これらのシグナルの伝達は、細胞の増殖と分化に最終的に影響し、これら
のシグナルの間違った伝達は、新生物増殖（新形成）を引き起こし得ると解され
る。

【０００６】ガン原遺伝子Rasの遺伝的変異は、全てのヒトの腫瘍の約30%に寄与するものと
解されている^18,19。Rasがヒトの腫瘍の病因において果たす役割は、腫瘍のタイ
プに特異的である。Ras自体の活性化ミューテーションは、ヒト悪性腫瘍のほと
んどのタイプで見出され、膵臓ガン(80%)、散発性大腸ガン(40-50%)、ヒト肺腺
ガン(15-24%)、甲状腺ガン(50%)、および骨髄性白血病(30%)において高く表され
る^20,21,22。Rasの活性化はまた、上流マイトジェン性シグナリングエレメント
、特にチロシンレセプターキナーゼ(RTK)によっても表される。これらの上流エ
レメントは、もし増幅または過剰発現されたなら、Rasのシグナル伝達活性によ
って、最終的に上昇したRas活性を導く。この例は、特定の形態のグリア芽細胞
腫におけるPDGFR、並びに乳ガンにおけるc-erbB-2/nueの過剰発現を含む^22,23,2 ⁴ 。

【０００７】プロテインキナーゼR(「PKR」)は、インターフェロンの存在下で誘導されるセ
リン／トレオニンキナーゼである^7,9,17。このキナーゼの主な細胞基質は、セリ
ン5での翻訳開始因子eIF-2のαサブユニットである^14,15,17。eIF-2のリン酸化
は、翻訳開始のさらなる周におけるその関与を妨げることによって、タンパク質
合成の迅速な阻害を引き起こす。

【０００８】 PKRは通常は不活性であるが、ウイルス感染の結果としてしばしば生産される
、大規模な二次構造を示す二本鎖RNA(dsRNA)またはRNA類の存在下で迅速に活性
化する。PKRのアミノ末端は、dsRNAと相互作用が可能である二本鎖RNA結合ドメ
イン(dsRBD)を含む。PKRのdsRNAエレメントへの結合は、自己リン酸化、後にeIF
-2のリン酸化を容易にする構造的変化をPKRにもたらす⁴。さらに、PKRに対するd
sRNAの付加が、2:1のタンパク質：dsRNA比において見出されるdsRNA/PKR活性化
複合体を引き起こすため、一つのdsRNA分子への二つのPKR分子の協調的結合は、
活性化を達成するために必要なようである。

【０００９】二本鎖RNA(dsRNA)ウイルスは、その存在に応答してPKRを阻害するように、多
くの異なるストラテジーを進化させているため、宿主細胞PKRに完全に感受性で
あるわけではない： (1)アデノウイルスの場合、ウイルス産物、VAI RNAが大量に合成される。これら
のVAI RNAエレメントは、大規模な二次構造と短い長さを有し、全長ウイルスdsR
NAの競合的インヒビターとして機能することによってPKRに完全を不活性化する⁸ 。VAI RNAエレメントの短い長さは、PKRを活性化する最小の長さのdsRNAが存在
するために重要である。VAI RNAに結合したPKRは活性化されない； (2)ワクシニアウイルスは、異なるメカニズムでPKRを下流調節する二つの遺伝子
産物、K3LとE3Lをコードする。K3L遺伝子産物は、eIF-2αのN末端と制限された
ホモロジーを有し、PKRに対する偽基質として作用するであろう^1,5。E3L遺伝子
産物は、dsRNA結合タンパク質であり、アクチベーターdsRNAを隔離することによ
って機能するようである^3,6； (3)単純ヘルペスウイルス(HSV)遺伝子_γ134.5は、PKRによって発揮される抗ウイ
ルス効果を妨げることができる遺伝子産物感染細胞タンパク質34.5(ICP34.5)を
コードする；並びに (4)パラポックスウイルスorfウイルスは、PLR活性のブロックに関与する遺伝子O
V20.0Lをコードする³⁰。

【００１０】 Rasトランスフォーム化細胞においては、PKRのdsRNA介在性の活性化が、自己
リン酸化のレベルでブロックされることが示されている¹⁶。

【００１１】 PKRは、インターフェロン(「IFN」)の存在下で誘導される多くの細胞タンパク
質の一つである。正常細胞においては、PKRはIFNの存在下で通常誘導され活性化
される。しかしながら、Ras介在性腫瘍細胞においては、PKRはIFNの存在下で誘
導されるが、PKRの活性化は可逆化または阻害される。従って、Ras介在性腫瘍は
、PKR応答を活性化できない。

【００１２】 PKRの転写と翻訳を誘導するようにIFNでの細胞の事前処理は、レオウイルス感
染を妨げることが観察されている。PKRは、IFNで事前処理された細胞において活
性化され、これは「量的効果」が存在することを示唆する。細胞がIFNで事前処
理されなかった場合、十分にPKRを合成するのに必要な時間が存在しないように
、レオウイルスは迅速に複製できた。さらに、細胞中にすでに存在するPKRは、
活性化されなかった。この観察は、PKRがIFN応答の一つのエレメントに過ぎず、
細胞が事前処理されたならばPKRは正常に機能するようであるため、細胞が本質
的にIFN応答において欠陥を有さないことを示唆する。

【００１３】新形成に対する現在の治療方法は、手術、化学療法、および放射線療法を含む
。手術は、ガンの早期の段階での主な治療として典型的に使用されている；しか
しながら、多くの腫瘍が、外科的手段によって完全に除去することはできない。
さらに、新生物の転移的増殖は、手術によるガンの完全な治癒を妨げるであろう
。化学療法は、アルキル化剤、代謝拮抗剤、および抗腫瘍性抗生物質のような抗
腫瘍活性を有する化合物の投与を含む。化学療法の効力は、吐き気と嘔吐、骨髄
の機能低下、腎臓の損傷、および中枢神経系の機能低下を含む重篤な副作用によ
ってしばしば制限される。放射線療法は、新形成性細胞と比較して、放射線での
治療の後に自分自身を修復する正常細胞のより優れた能力に依存する。しかしな
がら、腫瘍の周辺の組織の感受性のため、放射線療法は多くの新生物を治療する
ためには使用できない。さらに、特定の腫瘍は放射線療法に対して耐性を示し、
それは細胞の原ガン遺伝子または抗原ガン遺伝子状態に依存するであろう^25,26, ²⁷ 。Martuza等, EP 0 514 603³²は、新形成性細胞における複製が可能である一
方で、周辺の正常組織では静止する、改変されたウイルスを利用する新形成性細
胞の選択的殺傷の方法を一般的に記載する。

【００１４】

【発明が解決しようとする課題】

従って、PKR活性化を妨げる特定のメカニズムを進化させているウイルスが、
これらの同様のメカニズムを妨げるまたはミューテートする場合に、複製不能に
なるようであることが見出されている。PKRと拮抗することに関与する遺伝子の
ミューテーションまたは欠失は、PKR活性が正常である細胞（即ち正常細胞）に
おけるウイルス複製を妨げるはずである。しかしながら、感染細胞が、PKRを通
じて介在される抗ウイルス応答を達成できないのであれば（即ちRas介在性腫瘍
細胞）、これらのミューテートしたウイルスは、無視して複製して細胞死を引き
起こすはずである。それ故、これらのミュータントウイルスは、PKRが機能でき
ないことが測定されているRasトランスフォーム化細胞において選択的に複製で
きる。

【００１５】新生物増殖を治療するための現在の手段と関連する欠点の観点から、ほとんど
のタイプのガンの治療のための改良された方法に対する必要性が未だ存在する。

【００１６】

【課題を解決するための手段】

本発明は、増殖細胞の実質的な崩壊を引き起こす条件下で、改変アデノウイル
ス、改変HSV、改変ワクシニアウイルス、および改変パラポックスウイルスorfウ
イルスからなる群から選択される一つ以上のウイルスの有効量を、Ras活性化経
路を有する哺乳動物における増殖細胞に投与することを含む、哺乳細胞における
Ras介在性細胞増殖性疾患を治療する方法に関する。

【００１７】改変アデノウイルスは、VAI RNAをコードするミュータント遺伝子を含み、改
変HSVは、遺伝子_γ134.5のミューテーションを含み、改変ワクシニアウイルスは
、E3LおよびK3Lからなる群から選択されるミュータント遺伝子を含み、並びに改
変パラポックスウイルスorfウイルスは、OV20.0L遺伝子のミューテーションを含
むように、ウイルスは減弱または改変される。

【００１８】ビリオンがリポソームまたはミセルに実装され、あるいは外側キャプシドのタ
ンパク質がミューテートされるように、ウイルスが改変されても良い。ウイルス
は、単一の投与または複数の投与で投与できる。細胞増殖性疾患は、新生物であ
っても良い。固体および造血性の新生物の両者が標的化できる。

【００１９】新形成性細胞の実質的な腫瘍崩壊を引き起こすために、改変アデノウイルス、
改変HSV、改変ワクシニアウイルス、および改変パラポックスウイルスorfウイル
スからなる群から選択されるウイルスの有効量を新生物に投与することを含む、
ヒトにおける活性化Ras経路を有する新生物を治療する方法もまた提供される。

【００２０】ウイルスは、固体の新生物の内部またはその近傍に注射により投与されても良
い。

【００２１】新生物の実質的な崩壊を引き起こすのに十分な量で、改変アデノウイルス、改
変HSV、改変ワクシニアウイルス、および改変パラポックスウイルスorfウイルス
からなる群から選択されるウイルスを、哺乳動物における新形成性細胞に投与す
ることを含む、哺乳動物における活性化Ras経路を有する新生物の転移を阻害す
る方法もまた提供される。

【００２２】実質的に全ての新生物の外科的除去と、いずれかの残余の新生物の実質的な腫
瘍崩壊を引き起こすのに十分な量で手術部位への、改変アデノウイルス、改変HS
V、改変ワクシニアウイルス、および改変パラポックスウイルスorfウイルスから
なる群から選択されるウイルスの投与を含む、哺乳動物における活性化Ras経路
を有する疑いのある新生物を治療する方法もまた提供される。

【００２３】改変アデノウイルス、改変HSV、改変ワクシニアウイルス、および改変パラポ
ックスウイルスorfウイルスからなる群から選択されるウイルス、化学療法試薬
、および製薬学的に許容可能な賦形剤を含む製薬組成物もまた提供される。

【００２４】改変アデノウイルス、改変HSV、改変ワクシニアウイルス、および改変パラポ
ックスウイルスorfウイルスからなる群から選択されるウイルスと、製薬学的に
許容可能な賦形剤とを含む製薬組成物もまた提供される。

【００２５】さらに本発明は、改変アデノウイルス、改変HSV、改変ワクシニアウイルス、
および改変パラポックスウイルスorfウイルスからなる群から選択されるウイル
スと、化学療法試薬とを含む製薬組成物を含むキットを含む。

【００２６】さらに本発明は、改変アデノウイルス、改変HSV、改変ワクシニアウイルス、
および改変パラポックスウイルスorfウイルスからなる群から選択されるウイル
スと、抗抗ウイルス抗体とを含む製薬組成物を含むキットを提供する。

【００２７】新生物の実質的な崩壊を引き起こすのに十分な量で、改変アデノウイルス、改
変HSV、改変ワクシニアウイルス、および改変パラポックスウイルスorfウイルス
からなる群から選択されるウイルスを、in vitroで細胞の集団に投与することを
含む、in vitroで活性化Ras経路を有する疑いのある新生物を含む細胞の集団を
治療する方法もまた提供される。

【００２８】本発明はまた、哺乳動物の免疫欠損を免疫抑制、免疫阻害、またはさもなけれ
ば減少し、同時にまたは引き続いて、新生物の実質的な崩壊を引き起こすのに十
分な量で、改変アデノウイルス、改変HSV、改変ワクシニアウイルス、および改
変パラポックスウイルスorfウイルスからなる群から選択されるウイルスを投与
することによって、哺乳動物におけるRas介在性増殖性疾患を治療する方法に関
する。特に本発明は、(a)以下の工程： i)免疫抑制剤の有効量を哺乳動物における増殖性細胞に投与する工程； ii)哺乳動物からB細胞またはT細胞を除去する工程； iii)哺乳動物から抗ウイルス抗体を除去する工程； iv)哺乳動物から抗体を除去する工程； v)哺乳動物に抗抗ウイルス抗体を投与する工程；並びに vi)哺乳動物の免疫系を抑制する工程からなる群から選択される工程を実施し、(b)増殖細胞の実質的な崩壊を引き起
こす条件下で、改変アデノウイルス、改変HSV、改変ワクシニアウイルス、およ
び改変パラポックスウイルスorfウイルスからなる群から選択される一つ以上の
ウイルスの有効量を、哺乳動物における増殖細胞に投与することによる、哺乳細
胞におけるRas介在性細胞増殖性疾患を治療する方法に関する。

【００２９】本発明の方法および製薬組成物は、他の形態のガンの治療と関連する副作用を
有さずに、活性化Ras経路を有する新生物を治療するための有効な手段を提供す
る。

【００３０】本発明の前述および他の目的、特徴および利点は、添付された図面に説明され
るように、本発明の好ましい実施態様の以下のより特定の記載から明らかであろ
う。

【００３１】

【発明の実施の形態】

本発明は、増殖細胞に、改変アデノウイルス、改変HSV、改変ワクシニアウイ
ルス、および改変パラポックスウイルスからなる群から選択されるウイルスを投
与することによって、哺乳動物におけるRas介在性増殖性疾患を治療する方法に
関する。

【００３２】定義ここで使用される以下の用語は、以下のように定義される：

【００３３】「アデノウイルス」は、約3.6キロベースの二本鎖DNAウイルスである。ヒトに
おいてアデノウイルスは複製でき、眼および呼吸管、胃腸管、および尿管におい
て疾患を引き起こす。47の周知のヒト血清型の約３分の１が、ほとんどの場合の
ヒトアデノウイルス疾患に関与している²⁸。アデノウイルスは、抗ウイルス性の
宿主防御メカニズムに対抗するいくつかの遺伝子産物をコードする。アデノウイ
ルスのウイルス会合RNA(VAI RNAまたはVA RNA₁)は、アデノウイルス感染の後の
遅延した時間で細胞質に高濃度で蓄積する小さな構造的RNAである。これらのVAI
RNAは、PKRの二本鎖RNA(dsRNA)結合モチーフに結合し、自己リン酸化によってP
KRのdsRNA依存性活性化をブロックする。かくしてPKRは機能不可能となり、ウイ
ルスは細胞内で複製できる。ビリオンの過剰生産は、最終的に細胞死を導く。減
弱または改変アデノウイルスは、活性化Ras経路を有しない細胞では複製できな
い。しかしながら、減弱または改変アデノウイルスは、活性化Ras経路を有する
細胞においては複製できる。

【００３４】用語、「減弱アデノウイルス」または「改変アデノウイルス」は、PKR活性化
がブロックされないように、PKRの活性化を妨げる遺伝子産物または産物類を欠
いている、阻害されているまたはミューテートされていることを意味する。その
ような減弱または改変アデノウイルスは、活性化Ras経路を有さない正常細胞に
おいては複製しないが、活性化Ras経路を有する細胞に感染し複製できるであろ
う。

【００３５】「単純ヘルペスウイルス」(HSV)は、単純ヘルペスウイルス-1(HSV-1)または単
純ヘルペスウイルス-2(HSV-2)を指す。HSV遺伝子_γ134.5は、PKRによって発揮さ
れる抗ウイルス効果を妨げることのできる遺伝子産物感染細胞タンパク質34.5(I
CP34.5)をコードする。ICP34.5は、プロテインホスファターゼ1と相互作用し、
それをeIF-2αを脱リン酸化する活性にし向け直すことによってPKR活性を妨げる
独特のメカニズムを有する²⁹。野生型または_γ134.5遺伝子を欠失する遺伝学的
に操作されたウイルスで感染された細胞において、eIF-2αは脱リン酸化され、
タンパク質合成は、_γ134.5マイナスウイルスで感染された細胞で停止する。_γ1 34.5マイナスウイルスは、ICP34.5の活性が豊富である活性化Ras経路を有する細
胞においては、複製可能であると予測されるであろう。HSVは、活性化Ras活性を
有さない細胞においては複製できない。かくしてHSVは、活性化Ras経路を有する
細胞において複製できる。

【００３６】用語、「減弱HSV」または「改変HSV」は、PKR活性化がブロックされないよう
に、PKRの活性化を妨げる遺伝子産物または産物類を欠いている、阻害されてい
るまたはミューテートされていることを意味する。そのような減弱または改変HS
Vは、活性化Ras経路を有さない正常細胞においては複製しないが、活性化Ras経
路を有する細胞に感染し複製できるであろう。

【００３７】「パラポックスウイルスorfウイルス」は、ポックスウイルスである。それは
、ヒトを含む各種の哺乳動物種において急性皮膚病変を誘導するウイルスである
。パラポックスウイルスorfウイルスは、破壊または損傷した皮膚を通じてヒツ
ジ、ヤギおよびヒトに天然で感染し、再生した上皮細胞中で複製し、かさぶたと
なる膿疱性病変を誘導する³⁰。パラポックスウイルスorfウイルスは、PKR活性の
ブロックに関与する遺伝子OV20.0Lをコードする³⁰。パラポックスウイルスorfウ
イルスは、活性化Ras経路を有さない細胞では複製できない。かくしてパラポッ
クスウイルスorfウイルスは、活性化Ras経路を有する細胞において複製する。

【００３８】用語、「減弱パラポックスウイルスorfウイルス」または「改変パラポックス
ウイルスorfウイルス」は、PKR活性化がブロックされないように、PKRの活性化
を妨げる遺伝子産物または産物類を欠いている、阻害されているまたはミューテ
ートされていることを意味する。好ましくは、遺伝子OV20.0Lは転写されない。
そのような減弱または改変パラポックスウイルスorfウイルスは、活性化Ras経路
を有さない正常細胞においては複製しないが、活性化Ras経路を有する細胞に感
染し複製できるであろう。

【００３９】「ワクシニアウイルス」は、ヒトに感染し、局所的病変を生産するオルトポッ
クスウイルス属のウイルスを指す²⁸。ワクシニアウイルスは、二つの全く異なる
メカニズムを通じてPKRを下流調節する役割を果たす二つの遺伝子をコードする
。E3L遺伝子は、感染の早期で発現され、PKR活性を阻害可能なdsRNA結合活性を
有する20および25kDaの二つのタンパク質をコードする。E3L遺伝子の欠失または
破壊は、活性化Ras経路を有する細胞においてウイルス複製を可能にする。ワク
シニアウイルスのK3L遺伝子は、PKRの偽基質であるpK3をコードする。

【００４０】 E3を破壊する残基の欠失は、dsRNA結合を阻害するように機能する。さらに、E
3タンパク質のアミノ末端領域は、PKRのカルボキシ末端領域ドメインと相互作用
するため、このドメインの欠失またはポイントミューテーションは、抗PKR機能
を妨げる。Chang等, PNAS 89: 4825-4829 (1992); Chang等, Virol. 194: 537-5
47 (1993); Chang等, J. Virol. 69: 6605-6608 (1995); Sharp等, Virol. 250:
302-315 (1998);およびRomano等, Molecular and Cellular Bio., 18(12): 730
4-7316 (1998)。ワクシニアウイルスのK3L遺伝子は、PKRの偽基質であるpK3をコ
ードする。K3L内に機能喪失ミューテーションが存在する。K3Lタンパク質のC末
端部分内での切り詰めまたはポイントミューテーションの配置のいずれかにより
、eIF-2αにおける79から83残基に対するホモローグは、PKR阻害活性を破壊する ³¹ 。

【００４１】用語、「減弱ワクシニアウイルス」または「改変ワクシニアウイルス」は、PK
R活性化がブロックされないように、PKRの活性化を妨げる遺伝子産物または産物
類を欠いている、阻害されているまたはミューテートされていることを意味する
。好ましくは、E3L遺伝子および／またはK3L遺伝子は転写されない。そのような
減弱または改変ワクシニアウイルスは、活性化Ras経路を有さない正常細胞にお
いては複製しないが、活性化Ras経路を有する細胞に感染し複製できるであろう
。

【００４２】「増殖性疾患」は、細胞が正常な組織増殖より迅速に増殖するいずれかの細胞
性疾患である。かくして「増殖細胞」は、正常細胞より迅速に増殖する細胞であ
る。増殖性疾患は、新生物を制限することなく含む。「新生物」は、正常な組織
増殖よりも迅速な細胞増殖によって増殖する、一般的に別個の塊を形成する異常
な組織増殖である。新生物は、正常組織との構造的機構および機能的協調の部分
的または全体的な欠如を示す。これらは大まかに３つの主要なタイプに分類でき
る。上皮構造から生ずる悪性新生物はカルシノーマと称され、筋肉、軟骨、脂肪
または骨のような結合組織から由来する悪性新生物はサルコーマと称され、免疫
系の構成成分を含む造血構造（血液細胞の形成を維持する構造）に影響する悪性
腫瘍は白血病およびリンパ腫と称される。腫瘍は、疾患ガンの新形成性増殖であ
る。ここで使用される、「腫瘍」とも称される新生物は、造血性新生物、並びに
固体の新生物を包含するように企図される。他の増殖性疾患は、神経線維腫症を
制限することなく含む。

【００４３】「増殖細胞または新生物に対する投与」は、増殖細胞または新生物の細胞（こ
こで「新形成性細胞」とも称される）を含むような態様で、ウイルスを投与する
ことを示す。

【００４４】「増殖性疾患を有する疑いのある哺乳動物」は、哺乳動物が、増殖性疾患若し
くは腫瘍を有するかもしれない、または増殖性疾患若しくは腫瘍を有すると診断
されている、または増殖性疾患若しくは腫瘍を有すると以前に診断されているこ
とを意味し、腫瘍若しくは腫瘍の実質的に全てが外科的に除去されており、哺乳
動物はある程度の残余の腫瘍細胞を有すると疑われる。

【００４５】ここで使用される「ウイルス感染」または「ウイルス感染」は、アデノウイル
ス、HSV、パラポックスウイルスorfウイルス、またはワクシニアウイルスの一つ
以上による感染を指す。

【００４６】ウイルス感染に対する細胞の「耐性」は、ウイルスでの細胞の感染が、有意な
ウイルス生産または収率を引き起こさないことを示す。いずれかの理論に制限さ
れるものではないが、ウイルス感染に対する耐性は、早期の転写よりもむしろ遺
伝子翻訳のレベルで見出されると解される。ウイルス転写物が生産される一方で
、ウイルスタンパク質は発現されない。耐性細胞における遺伝子転写は、二本鎖
RNA活性化タンパク質キナーゼ(PKR)と決定されている、約65kDa細胞タンパク質
のリン酸化と相関し、それはトランスフォーム化細胞では観察されないと解され
る。PKRのリン酸化は翻訳の阻害を導く。

【００４７】用語、「実質的な崩壊」は、増殖細胞の少なくとも１０％、より好ましくは少
なくとも５０％、最も好ましくは少なくとも７５％が崩壊することを意味する。
崩壊のパーセンテージは、哺乳動物における腫瘍のサイズの減少、またはin vit
roでの腫瘍細胞の崩壊を測定することによって腫瘍細胞について測定できる。

【００４８】「抗ウイルス抗体」は、特定のウイルスに結合する抗体を指す。例えば抗ウイ
ルス抗体は、抗アデノウイルス抗体、抗HSV抗体、抗ワクシニアウイルス抗体、
または抗パラポックスウイルスorfウイルス抗体であっても良い。本発明の方法
における使用のために選択された特定の抗ウイルス抗体は、患者に投与されるウ
イルスに対応するであろう。例えば、抗HSV抗体は、改変HSVが投与される方法に
おいて使用されるであろう。

【００４９】「抗抗ウイルス抗体」は、抗ウイルス抗体に対して向けられた抗体である。本
発明において使用される抗抗ウイルス抗体は、抗抗アデノウイルス抗体、抗抗HS
V抗体、抗抗ワクシニアウイルス抗体、および抗抗パラポックスウイルスorfウイ
ルス抗体から選択される。そのような抗体は、当該技術分野で周知の方法によっ
て作成できる。例えば、"Antibodies: A laboratory manual" E. HarlowおよびD
. Lane, Cold Spring Harbor Laboratory (1988)参照。

【００５０】「IgG抗体」は、イムノグロブリンG抗体を指す。最も豊富な抗体のタイプであ
るIgGは、細菌毒素を中和し、微生物に結合し、その食作用を促進する主要な任
務を有する。

【００５１】「ヒト化抗体」は、抗体がヒト抗体に非常に類似し、未だ元々の結合能力を維
持するように、非抗原結合領域におけるアミノ酸配列が改変されている抗体分子
を指す。

【００５２】用語、「免疫抑制剤」または「免疫抑制試薬」は、従来の免疫抑制剤、免疫イ
ンヒビター、抗体、および免疫系の緩和を引き起こす放射線療法またはHIV感染
のような条件を含む。

【００５３】「B細胞」はBリンパ球を指す。Bリンパ球には、B-1とB-2細胞の二つの主要な
サブ集団が存在する。B-1細胞は自己新生しており、しばしば比較的低アフィニ
ティーを有する範囲の抗原（多特異性）に結合する高レベルの抗体を分泌する。
B細胞の大部分であるB-2細胞は、骨髄において前駆体から直接生産され、非常に
特異的な抗体を分泌する。

【００５４】「T細胞」はTリンパ球を指す。T細胞は胸腺で分化し、細胞内器官を有する細
胞に対して作用するように特異化する。T細胞は、抗原が体細胞の表面に存在す
る場合のみ抗原を認識する。

【００５５】ウイルスは、PKRを下流調節し、かくして再生産するために宿主細胞のRas経路
マシネリーを使用すると解される。図１は、アデノウイルスによる宿主細胞Ras
シグナリング経路の奪取を表す。図１に示されるように、非トランスフォーム化
細胞とRas活性化細胞の両者において、野生型アデノウイルス（＋で示される）
およびVAI欠損アデノウイルス（白丸）は、両者とも通常の方式で結合して内在
化し、早期の転写を受ける。

【００５６】転写の間で、野生からアデノウイルス（パネル＃１）は、PKRを活性化せずにP
KRに結合できるVAI RNAを転写できる。PKRは、これらの短い二本鎖RNA(dsRNA)を
置換できないため、PKRは後の長い転写物と相互作用できず、自己リン酸化でき
ない。かくしてウイルスは病原性ウイルスを複製して生産できる。

【００５７】非トランスフォーム化細胞において複製を試みる場合（パネル＃２）、改変ア
デノウイルスは、PKRに結合するVAI RNAを生産できない。かくしてPKRは、自己
リン酸化を引き起こすことができ、PKRを活性化するより長いウイルス転写物と
相互作用できる。次いで活性化PKRは、翻訳開始因子eIF-2をリン酸化し、ウイル
スの複製不能を導くウイルス遺伝子の翻訳をブロックできる。

【００５８】パネル＃３は、結論がパネル＃１と＃２に記載された結論とは異なる、Ras活
性化ガン細胞に感染する改変アデノウイルスを示す。Rasトランスフォーム化細
胞においては、PKRはリン酸化を受けることができず、活性化Ras経路のエレメン
トによりリン酸化は迅速に可逆化されることが観察されている。Ras活性化細胞
における結果は、アデノウイルスの改変形態が、ウイルス遺伝子を翻訳し、VAI
RNAを転写することなく複製を完成できることである。これらの細胞における驚
くべき結果が、腫瘍崩壊である。

【００５９】当該技術分野で周知のように、SCIDマウス内へのヒト腫瘍細胞の移植は、ヒト
における各種の抗腫瘍剤の有効性を試験するための周知のモデルシステムとして
認識されている。SCIDマウス内に移植されたヒト腫瘍に対して有効な医薬は、ヒ
トにおける同様の腫瘍に対するその有効性が予測できることが以前に示されてい
る。

【００６０】これらの発見に基づいて、本出願人は、細胞が活性化Ras経路を有する哺乳動
物における細胞増殖性疾患の治療方法を開発した。代表的な哺乳動物は、イヌ、
ネコ、ヒツジ、ヤギ、ウシ、ウマ、ブタ、非ヒト霊長類、およびヒトを含む。好
ましい実施態様では、哺乳動物はヒトである。

【００６１】本発明の方法本発明の方法では、ここの哺乳動物において活性化Ras経路を有する増殖細胞
に、改変ウイルスを投与する。改変ウイルスの代表的なタイプは、ヒトに感染す
るアデノウイルス、HSV、パラポックスウイルスorfウイルス、またはワクシニア
ウイルスを含む。好ましい実施態様として、改変アデノウイルスが使用される。

【００６２】ウイルスは、異なる抗原決定基を含み、それによってウイルスサブタイプに以
前にさらされ哺乳動物による免疫応答を減少または防止するように、異なる病原
性表現型を有する二つ以上のタイプのウイルスから由来する組換えウイルスであ
っても良い。そのような組換えウイルスは、生成したリソーティングを有する異
なるサブタイプのウイルスで哺乳動物細胞を共感染し、生成したビリオンキャプ
シド内に異なるサブタイプのコートタンパク質を取り込ませることによって生産
できる。

【００６３】ウイルスは、ビリオン外側キャプシド内にミューテートされたコートタンパク
質を取り込ませることによって改変されても良い。前記タンパク質は、置換、挿
入または欠失によってミューテートされても良い。「置換」は、天然のアミノ酸
の代わりに異なるアミノ酸の挿入を含む。「挿入」は、一つ以上の位置での前記
タンパク質内へのさらなるアミノ酸残基の挿入を含む。「欠失」は、前記タンパ
ク質の一つ以上のアミノ酸残基の欠失を含む。そのようなミューテーションは、
当該技術分野で周知の方法によって生産されても良い。例えば、コートタンパク
質の一つをコードする遺伝子のオリゴヌクレオチド部位特異的ミュータジェネシ
スは、所望のミュータントコートタンパク質の生産を引き起こすであろう。COS1
細胞のようなin vitroでのウイルス感染哺乳動物細胞におけるミューテートされ
たタンパク質の発現は、ウイルスビリオン粒子内へのミューテートされたタンパ
ク質を取り込みを生ずるであろう。

【００６４】ウイルスは好ましくは、ウイルスに対する免疫応答を減少または除去するよう
に改変されたウイルスである。そのような改変ウイルスは、「免疫保護化ウイル
ス」と称される。そのような改変は、哺乳動物免疫系からウイルスを保護するよ
うに、リポソーム、ミセル、または他のビヒクルへのウイルスのパッケージング
を含むことができる。

【００６５】増殖性疾患の細胞の少なくともあるものは、Ras遺伝子（またはRasシグナリン
グ経路のエレメント）が、直接（例えばRasにおける活性化ミューテーションに
よって）または間接（例えばRas経路における上流エレメントの活性化によって
）活性化されるミューテーションを有する。Ras経路における上流エレメントの
活性化は、例えば上皮増殖因子レセプター(EGFR)またはSosでのトランスフォー
メーションを含む。Ras、Rasの上流エレメント、またはRasシグナリング経路の
エレメントの活性化により、少なくとも部分的に引き起こされる増殖性疾患は、
ここで「Ras介在性増殖性疾患」と称される。

【００６６】膵臓ガンと関連するRas介在性新生物の罹患率のため、本発明の方法による治
療に特に感受性である一つの新生物は膵臓ガンである。本発明の方法による治療
に特に感受性である多の新生物は、乳ガン、中枢神経系ガン（例えば神経芽細胞
腫およびグリア芽細胞腫）、末梢神経系ガン、肺ガン、前立腺ガン、大腸ガン、
甲状腺ガン、腎臓ガン、副腎ガン、肝臓ガン、リンパ細胞腫、および白血病を含
む。本発明の方法による治療に特に感受性である一つの増殖性疾患は、Ras経路
の活性化のため、神経線維芽細胞腫１を含む。

【００６７】ウイルスは、増殖性細胞、または新生物の細胞、または新形成性細胞と接触す
るような態様で、増殖性細胞または新生物に投与される。ウイルスを投与する経
路、並びに処方、キャリアーまたはビヒクルは、新生物の位置並びにタイプに依
存するであろう。広い各種の投与経路が使用できる。例えば、接近可能である固
体の新生物については、ウイルスは新生物に対する直接的な注射によって投与で
きる。造血性新生物については、例えばウイルスは、静脈内または脈管内で投与
できる。転移物または脳腫瘍のような身体内で容易に接近できない新生物につい
ては、ウイルスは哺乳動物の身体を通じて全身性で輸送でき、それによって新生
物に到達するような態様で投与される（例えば、鞘内、静脈内または筋肉内）。

【００６８】別法として、単一の固体の新生物が、身体を通じて全身的に転移物に運ばれる
場合、ウイルスは単一の固体の新生物に直接投与できる。ウイルスはまた、皮下
、腹膜内、局所的（例えばメラノーマについて）、経口的（例えば口内または食
道新生物について）、直腸内（例えば大腸新生物について）、膣内（例えば子宮
頚または膣新生物について）、鼻腔内、または吸入スプレー（例えば肺新生物に
ついて）によって投与できる。

【００６９】ウイルスは、免疫寛容された、またはウイルスエピトープに対して免疫性を形
成していない哺乳動物に全身性で投与できる。そのような場合、全身性、即ち静
脈注射によって投与されるウイルスは、細胞の崩壊を引き起こす増殖性細胞と接
触するであろう。

【００７０】改変アデノウイルス、改変HSV、改変ワクシニアウイルス、および改変パラポ
ックスウイルスorfウイルスのような特定のウイルスに事前にさらされた免疫寛
容哺乳動物は、当該ウイルスに対する体液性および／または細胞性の免疫を形成
しているであろう。言うまでもなく、免疫寛容哺乳動物における固体の腫瘍内へ
のウイルスの直接的注射は、新形成性細胞の崩壊を引き起こすであろうと予測さ
れる。

【００７１】ウイルスが免疫寛容哺乳動物に全身性で投与される場合、哺乳動物はウイルス
に対する免疫応答を生産するであろう。もしウイルスが、哺乳動物が免疫性を形
成していないサブタイプを有するのであれば、またはウイルスが、例えば外側キ
ャプシドのプロテアーゼ切断若しくはミセルへのパッケージングによって免疫保
護されているように、ここに前述されているように改変されているのであれば、
そのような免疫応答は避けられるであろう。

【００７２】ウイルスは、抗抗ウイルス抗体の投与と結びつけて、ウイルスに対して免疫化
された免疫寛容哺乳動物に投与されても良いことが企図される。そのような抗抗
ウイルス抗体は、ウイルスの投与の前、同時または直後に投与されてもよい。好
ましくは有効量の抗抗ウイルス抗体が、投与されたウイルスに対する哺乳動物の
免疫応答を減少または除去するのに十分な時間で投与される。

【００７３】別法として、ウイルスに対する哺乳動物の免疫能力が、一般的に免疫系を抑制
することが当該技術分野で周知の医薬の事前または共投与によって(Cuff等, "En
teric reovirus infection as a probe to study immunotoxicity of the gastr
ointestinal tract" Toxicological Science 42(2): 99-108 (1998))、または別
法として、抗抗ウイルス抗体のような免疫インヒビターの投与によってのいずれ
かで抑制されても良いことが企図される。

【００７４】ウイルスに対する哺乳動物の体液性免疫もまた、抗ウイルス抗体を除去するた
めに哺乳動物の血液の血漿搬出によって一時的に減少または抑制されても良い。
この方法によって除去された抗ウイルス抗体は、患者に投与するために選択され
たウイルスに対応する。例えば、もし改変パラポックスorfウイルスが投与のた
めに選択されたならば、抗パラポックスorfウイルス抗体が除去されるであろう
。ウイルスに対する哺乳動物の体液性免疫はさらに、哺乳動物に対する非特異的
イムノグロブリンの静脈内投与によって一時的に減少または抑制されても良い。

【００７５】他の薬剤も、同様に免疫抑制特性について周知である（例えば、Goodmanおよ
びGilman, 第７版, 1242頁参照、この開示は参考としてここに取り込まれる）。
そのような免疫インヒビターは、抗ウイルス抗体に対して向けられた抗体である
抗抗ウイルス抗体をも含む。本発明において使用される抗抗ウイルス抗体は、抗
抗アデノウイルス抗体、抗抗HSV抗体、抗抗ワクシニアウイルス抗体、および抗
抗パラポックスウイルスorfウイルス抗体から選択される。そのような抗体は、
当該技術分野で周知の方法によって作成できる。例えば、"Antibodies: A labor
atory manual" E. HarlowおよびD. Lane, Cold Spring Harbor Laboratory (198
8)参照。

【００７６】そのような抗抗ウイルス抗体は、ウイルスの投与の前、同時または直後に投与
されても良い。好ましくは有効量の抗抗ウイルス抗体が、投与されるウイルスに
対する哺乳動物による免疫応答を減少または除去するのに十分な時間で投与され
る。

【００７７】本発明のまた別の方法では、改変アデノウイルス、改変HSV、改変ワクシニア
ウイルス、および改変パラポックスorfウイルスから選択されるウイルスが、個
々の哺乳動物におけるRas介在性増殖性細胞に投与される。本発明では一つの実
施態様では、この治療の過程が一度以上投与される。このウイルス治療の第一の
投与に引き続き、その後のウイルスの投与を妨げるであろう特定の免疫構成成分
が、患者から除去される。これらの免疫構成成分は、B細胞、T細胞、抗体等を含
む。

【００７８】 B細胞またはT細胞集団のそれぞれの除去は、いくつかの方法によって達成でき
る。一つの方法では、血液を濾過し、ヘム透析を実施しても良い。別の方法は、
細胞集団を除去できる体外化合物、例えば除去される細胞集団に対する特異的レ
セプターを認識する固定化抗体を結合した血液濾過である。細胞集団の除去のた
めのさらに別の方法は、免疫抑制によるものである。これは、第一の放射線治療
またはシクロスポリンのような環状ステロイドによって実施できる。

【００７９】抗ウイルス抗体の選択的除去はまた、患者の免疫系が治療用途的に投与された
ウイルスを除去することを妨げることができる。投与されたウイルスとの抗体の
相互作用を妨げることはまた、全身性の治療ストラテジーを補助できるであろう
。抗体は、ヘム透析と血液の固定化ウイルスの通過（選択的抗体除去）；ヘム透
析と血液の固定化プロテインA(PROSORBA, Cypress Bioscience, San Diego, CA
として商業的に入手可能)の透過による全てのIgG抗体の除去；イディオタイプが
投与されたウイルス（例えば、改変アデノウイルス、改変HSV。改変ワクシニア
ウイルス、および改変パラポックスウイルスorfウイルス）に対するものである
ヒト化抗イディオタイプ抗体の投与を含むいくつかの方法によって除去できる。

【００８０】本発明の別の方法は、ウイルスの免疫認識をマスクまたは損傷することによっ
て正常な免疫機能を損なうことなくウイルスを全身性で機能させることである。
患者の免疫システムが投与されるウイルスを認識することを妨げるために、ウイ
ルスを、抗体のFab部分で被覆するように非ウイルス毒性ヒト化抗体で被覆して
も良いし、ミセルで被覆しても良い。

【００８１】さらに、感染性サブウイルス粒子(ISVP)を生産するために、ウイルスをキモト
リプシンで処理しても良い。患者の免疫系によって事前に妨げられていない貧弱
にしか認識しない薬剤を提供するために、ISVPを単独で使用しても良いし、ウイ
ルス全体と組み合わせて使用しても良い。

【００８２】本発明の別の実施態様は、投与に引き続いて患者からウイルスを除去すること
を含む。この方法は、免疫抑制または免疫不能にされた患者で使用されても良い
ため、治療の過程に引き続いて血流からウイルスを除去することは重要であろう
。ウイルスは、ヘム透析と関連する体外抗ウイルス抗体、Ｂ細胞増殖性薬剤、ま
たはＵＶ不活性化ウイルス若しくはフロイントアジュバントのようなウイルスに
対して免疫応答を刺激するためのアジュバントを使用して、アフィニティークロ
マトグラフィーにより除去されても良い。

【００８３】製薬組成物本発明はまた、活性成分として、「製薬学的に許容可能なキャリーまたは賦形
剤」と会合した一つ以上のウイルスを含む製薬組成物を含む。本発明はまた、活
性成分として、一つ以上の免疫抑制剤または免疫インヒビターと、「製薬学的に
許容可能なキャリアーまたは賦形剤」と会合した一つ以上のウイルスとを含む製
薬組成物を含む。

【００８４】本発明の組成物を調製する際、活性成分、例えばウイルスおよび／または免疫
抑制剤若しくは免疫インヒビターは、通常賦形剤と混合され、賦形剤によって希
釈され、またはカプセル、サシェ剤、ペーパー、若しくは他の容器の形態で存在
できるそのようなキャリアー内に閉ざされても良い。

【００８５】製薬学的に許容可能な賦形剤が希釈液として機能する場合、それは固体、半固
体または液体物質であることができ、ビヒクル、キャリアー、または活性成分の
ための媒体として機能する。かくして前記組成物は、錠剤、丸薬、パウダー、ロ
ゼンジ、サシェ剤、エリキシル剤、懸濁物、乳化物、溶液、シロップ、エアゾー
ル（固体としてまたは液体媒体中で）、例えば１０重量％までの活性化合物を含
む軟膏、柔らかいおよび硬いゼラチンカプセル、坐薬、滅菌注射溶液、および滅
菌パッケージパウダーの形態で存在できる。

【００８６】適切な賦形剤のいくつかの例は、ラクトース、デキストロース、スクロース、
ソルビトール、ケイ酸カルシウム、マイクロクリスタリンセルロース、ポリビニ
ルピロリドン、セルロース、滅菌水、シロップ、およびメチルセルロースを含む
。製剤はさらに以下のものを含むことができる：タルク、ステアリン酸マグネシ
ウム、および鉱油のような潤滑剤；湿潤剤、乳化剤および懸濁剤；メチルおよび
プロピルヒドロキシベンゾアートのような防腐剤；甘味剤；および香味剤。本発
明の組成物は、当該技術分野で周知の方法を使用することにより患者に投与され
た後、活性成分の迅速な、持続的な、または遅延した放出を提供するように製剤
化できる。

【００８７】錠剤のような固体の組成物を調製するため、本発明の化合物の均一な混合物を
含む固体の事前製剤化組成物を形成するために、主な活性成分／ウイルスを、製
薬学的賦形剤と混合する。これらの事前製剤化組成物を均一であるという場合、
それは組成物が、錠剤、丸薬およびカプセルのような均等に有効な単位投与量形
態に容易に分割されるように、組成物全体を通じて分散されていることを意味す
る。

【００８８】本発明の錠剤または丸薬を、長期的作用の利点を提供する投与量形態を提供す
るように被覆、さもなければ合成しても良い。例えば錠剤または丸薬は、内部投
与量と外部投与量構成成分を含むことができ、後者は前者に対するエンベロープ
の形態で存在する。二つの構成成分は、胃の中での崩壊を補助し、内部構成成分
が十二指腸内に完全なまま通過して放出を遅延するように機能する腸溶性層によ
って分離できる。各種の物質がそのような腸溶性層またはコーティングのために
使用でき、そのような材料は、数多くのポリマー状酸、およびポリマー状酸とセ
ラック、セチルアルコール、および酢酸セルロースのような材料との混合物を含
む。

【００８９】本発明の新規な組成物を、経口または注射による投与のために取り込んだ液体
形態は、水性溶液、適切に香味化されたシロップ、水性若しくは油生懸濁物、お
よびコーン油、綿実油、ゴマ油、ココナッツ油、若しくはピーナッツ油のような
食用油、並びにエリキリル剤、および同様な製薬ビヒクルでの香味エマルション
を含む。

【００９０】吸入または通気のための組成物は、製薬学的に許容可能な水性若しくは有機溶
媒、またはそれらの混合物中の溶液および懸濁物、並びにパウダーを含む。液体
または固体組成物は、ここに記載される適切な製薬学的に許容可能な賦形剤を含
んでも良い。好ましくは前記組成物は、局所的または全身的な効果のための経口
または鼻腔呼吸経路によって投与される。好ましくは製薬学的に許容可能な溶媒
中の組成物は、不活性ガスの使用によって霧状にされても良い。霧状化溶液は、
ネブライザー装置から直接吸入されても良く、またはネブライザー装置をフェイ
スマスクテント、若しくは中間的加圧呼吸器に装着しても良い。溶液、懸濁物、
またはパウダー組成物は、適切な態様で製剤を輸送する装置から、経口的または
鼻腔的に投与されても良い。

【００９１】本発明の方法で使用される別の好ましい処方は、経皮的輸送装置（「パッチ」
）を使用する。そのような経皮的パッチは、制御された量で本発明のウイルスの
連続的または不連続的な注入を提供するために使用されても良い。製薬学的薬剤
の輸送のための経皮的パッチの構成および使用は、当該技術分野で周知である。
例えば米国特許第5,023,252号参照、これは参考としてここに取り込まれる。そ
のようなパッチは、製薬学的薬剤の連続的な、博動的な、または必要に応じた輸
送のために構成されても良い。

【００９２】本発明における使用のための他の適切な処方は、Remington's Pharmaceutical
Sciencesに見出すことができる。

【００９３】パーツのキットウイルスまたはウイルスを含む製薬組成物は、適切な容器内に実装された必要
な材料を提供する簡便なキット中に実装されても良い。キットは、化学療法試薬
および／または抗抗ウイルス抗体をも含んでも良い。

【００９４】免疫抑制剤若しくは免疫インヒビターおよびウイルス、または免疫抑制剤若し
くは免疫インヒビターおよびウイルスを含む製薬組成物は、適切な容器内に実装
された必要な材料を提供する簡便なキットに実装されても良い。キットは化学療
法試薬を含んでも良いことが企図される。

【００９５】ウイルスの投与ウイルスは、増殖性疾患を治療するために十分な量（例えば「有効量」）で投
与される。増殖細胞に対するウイルスの投与が、増殖細胞の崩壊を導く場合に、
増殖性疾患は「治療」される。これは、新生物のサイズの減少、または新生物の
完全な除去を導いても良い。新生物のサイズの減少、または新生物の除去は一般
的に、ウイルスによる新形成性細胞の崩壊（「腫瘍崩壊」）によって引き起こさ
れる。

【００９６】好ましくは有効量は、腫瘍細胞増殖を阻害可能な量である。好ましくは有効量
は、約1.0pfu/体重のkgから約10¹⁵pfu/体重のkg、より好ましくは約10²pfu/体重
のkgから約10¹³pfu/体重のkgである。例えばヒトの治療のために、存在する腫瘍
のタイプ、サイズ、および数に依存して、約10²から10¹⁷プラーク形成単位(PFU)
のウイルスが使用できる。有効量は、個々の基準で決定され、少なくとも部分的
に、ウイルスのタイプの考慮；選択された投与経路；患者のサイズ、年齢、性別
；患者の症状のひどさ；新生物のサイズおよび他の特徴等に基づいても良い。治
療の過程は、数日から数ヶ月、または疾患の減少が達成されるまで継続しても良
い。

【００９７】ウイルスは、単一投与、または複数投与（即ち一より多い投与）で投与できる
。複数投与は、同時的または連続的（例えば数日または数週間の期間で）に投与
できる。ウイルスは、同じ患者の一より多い新生物に投与できる。

【００９８】前記組成物は好ましくは、単位投与量形態で製剤化され、各投与量は約10²pfu
から約10¹³pfuのウイルスを含む。用語、「単位投与量形態」は、ヒト患者およ
び他の哺乳動物に対する単一の投与量として適切な物理的に分離された単位を指
し、各単位は、適切な製薬学的賦形剤と組み合わせた、所望の治療効果を生ずる
ために計算された所定量のウイルスを含む。

【００９９】ウイルスは、免疫能力のある哺乳動物における固体の新生物の治療に有効であ
ることが見出されている。新生物に対する直接的な非改変ウイルスの投与は、新
形成性細胞の腫瘍崩壊と腫瘍のサイズの減少を引き起こす。

【０１００】ウイルスは新生物の手術または除去と組み合わせて投与されても良いことが企
図される。それ故、新生物の外科的除去と、新生物の部位でまたはその近傍での
ウイルスの投与とを含む、固体の新生物の治療のための方法がここで提供される
。

【０１０１】ウイルスは、放射線治療と組み合わせてまたはそれに加えて投与されても良い
ことが企図される。

【０１０２】本発明のウイルスは、周知の抗ガン化合物または化学療法試薬と組み合わせて
、またはそれらに加えて投与されても良いことがさらに企図される。化学療法試
薬は、腫瘍の増殖を阻害できる化合物である。そのような試薬は、5-フルオロウ
ラシル、マイトマイシンC、メトトレキセート、ヒドロキシウレア、シクロホス
ファミド、ダカルバジン、ミトキサントロン、アントラサイクリン（エピルビシ
ンおよびドクスルビシン）、ヘルセプチンのようなレセプターに対する抗体、エ
トプシド、プレグナゾン、カルボプラチンおよびシスプラチンのような白金化合
物、タクソールおよびタクソテレのようなタキサン、タモキシフェンおよび抗エ
ストロゲンのようなホルモン治療薬、インターフェロン、アロマターゼインヒビ
ター、プロゲステロン試薬、並びにLHRH類似体を制限することなく含む。本発明
の一つの実施態様として、哺乳動物に有効量のウイルスを投与することを含む、
哺乳動物における転移性腫瘍の増殖を減少する方法が提供される。

【０１０３】免疫抑制剤または免疫インヒビターとのウイルスの投与免疫抑制剤または免疫インヒビターを、哺乳動物の免疫系の免疫抑制または免
疫阻害を引き起こすのに十分な投与の適切なスケジュールを使用して、適切な量
で投与する。そのような方法およびスケジュールは、当業者に周知である。

【０１０４】免疫抑制剤または免疫インヒビターおよびウイルスは、単一投与または複数投
与（即ち一より多い投与）で投与できる。複数投与は、同時的にまたは連続的に
（例えば数日または数週間の期間で）投与できる。ウイルスはまた、同じ患者に
おける一つより多い新生物に投与できる。

【０１０５】前記組成物は好ましくは、単位投与量形態で製剤化され、各投与量は、適切な
量の免疫抑制剤または免疫インヒビターと、約10²pfuから約10¹³pfuのウイルス
とを含む。用語、「単位投与量形態」は、ヒト患者および他の哺乳動物に対する
単一の投与量として適切な物理的に分離された単位を指し、各単位は、適切な製
薬学的賦形剤と組み合わせた、所望の治療効果を生ずるために計算された所定量
のウイルスを含む。

【０１０６】前述のように、ウイルスは免疫能力のある哺乳動物における固体の新生物の治
療に有効であることが見出されている。新生物に対する直接的な非改変ウイルス
の投与は、新形成性細胞の腫瘍崩壊と腫瘍のサイズの減少を引き起こす。動物が
ある方法で免疫抑制化または免疫欠損化された場合、ウイルスの全身性の投与は
、腫瘍崩壊の生産により有効であろう。

【０１０７】ウイルスは、哺乳動物を免疫抑制化する放射線治療の組み合わせて、またはそ
れに加えて投与されても良い。ウイルスおよび免疫抑制剤または免疫インヒビタ
ーは、周知の抗ガン化合物または化学療法試薬と組み合わせて、またはそれらに
加えて投与されても良いことがさらに企図される。化学療法試薬は、腫瘍の増殖
を阻害できる化合物である。そのような試薬は、5-フルオロウラシル、マイトマ
イシンC、メトトレキセート、ヒドロキシウレア、シクロホスファミド、ダカル
バジン、ミトキサントロン、アントラサイクリン（エピルビシンおよびドクスル
ビシン）、ヘルセプチンのようなレセプターに対する抗体、エトプシド、プレグ
ナゾン、カルボプラチンおよびシスプラチンのような白金化合物、タクソールお
よびタクソテレのようなタキサン、タモキシフェンおよび抗エストロゲンのよう
なホルモン治療薬、インターフェロン、アロマターゼインヒビター、プロゲステ
ロン試薬、並びにLHRH類似体を制限することなく含む。

【０１０８】本発明のウイルスおよび免疫抑制剤は、転移性である腫瘍の増殖を減少するこ
とが企図される。本発明の実施態様では、免疫抑制化哺乳動物に有効量のウイル
スを投与することを含む、哺乳動物における転移性腫瘍の増殖を減少するための
方法が提供される。

【０１０９】選択されたウイルスは、免疫抑制剤および／または免疫インヒビターの投与と
組み合わせて、選択されたウイルスで免疫化された免疫能力のある哺乳動物に投
与されても良いことが企図される。例えば、もし改変ワクシニアウイルスが選択
されたならば、免疫能力のある哺乳動物はワクシニアウイルスで免疫化される。
そのような免疫抑制剤および免疫インヒビターは当業者に周知であり、シクロス
ポリン、ラパマイシン、タクロリムス、ミコ石炭酸、アザチオプリン、およびそ
れらの類似体等のような試薬を含む。

【０１１０】有用性本発明のウイルスは、各種の目的のために使用されても良い。それらは、哺乳
動物におけるRas介在性増殖性疾患を治療する方法において使用されても良い。
ウイルスは、新生物を減少または除去するために使用されても良い。それらは、
転移を治療するための方法において使用されても良い。それらは、手術、化学療
法、および放射線を含むガンの周知の治療と組み合わせて使用されても良い。

【０１１１】本発明およびその利点をさらに説明するために、以下の特異的な実施例が提供
されるが、いかなる態様でも特許請求の範囲を制限することを意味しない。

【０１１２】

【実施例】

以下の実施例では、全ての温度はセ氏で与えられ（他に記載するところがなけ
れば）、全てのパーセンテージは重量パーセンテージである（これも他に記載す
るところがなければ）。

【０１１３】以下に実施例では、以下の略称は、以下の意味を有する。略称が定義されてい
なければ、それは一般的に受け入れられている意味を有する： μＭ＝マイクロモルｍＭ＝ミリモルＭ＝モルｍｌ＝ミリリットル μｌ＝マイクロリットルｍｇ＝ミリグラム μｇ＝マイクログラムＤＮＡ＝デオキシリボ核酸ＲＮＡ＝リボ核酸ＰＡＧＥ＝ポリアクリルアミドゲル電気泳動ｒｐｍ＝分当たりの回転ＦＢＳ＝胎児ウシ血清ＤＴＴ＝ジチオスレイトールＳＤＳ＝ドデシル硫酸ナトリウムＰＢＳ＝リン酸緩衝生理食塩水ＤＭＥＭ＝ダルベッコ修飾イーグル培地 α−ＭＥＭ＝α−修飾イーグル培地 β−ＭＥ＝β−メルカプトエタノールＭＯＩ＝感染の多重度ＰＦＵ＝プラーク形成単位ＭＡＰＫ＝ＭＡＰキナーゼホスホ−ＭＡＰＫ＝リン酸化−ＭＡＰキナーゼＨＲＰ＝セイヨウワサビペルオキシダーゼＰＫＲ＝二本鎖DNA活性化タンパク質キナーゼＲＴ−ＰＣＲ＝逆転写酵素−ポリメラーゼ連鎖反応ＧＡＰＤＨ＝グリセルアルデヒド-3-リン酸デヒドロゲナーゼＥＧＦＲ＝上皮増殖因子レセプターＭＥＫキナーゼ＝マイトジェン活性化細胞外シグナル調節化キナー
ゼＤＮＳＯ＝ジメチルスルホキシドＳＣＩＤ＝重篤な合併症免疫欠損

【０１１４】一般的方法細胞およびウイルス 293細胞（ヒト胚腎(HEK)細胞(ACTTから入手可能))を、10%新生ウシ血清(NC)を
補ったダルベッコ修飾イーグル培地(DMEM, GIBCO Laboratories)で単一層として
増殖させ、5% NCFを補った最小必須培地(SMEM, GIBCO Laboratories)で懸濁培養
物として増殖させる。

【０１１５】 VAIミュータントアデノウイルスを、同じ培地で維持された293細胞の懸濁培養
物で増殖させる。プラークアッセイを、0.7%アガロース、2% NCS、2mM L-グルタ
ミン、MEM非必須酸(GIBCO Laboratories)、および25mM MgCl₂を含むDMEMEでHeLa
および293単一層で、プラークアッセイを実施する。

【０１１６】実施例１ヒト乳ガン由来細胞系に対するアデノウイルスのin vivo腫瘍崩壊能力 SCIDマウスモデルにおけるヒト乳カルシノーマ細胞を使用して、in vivo実験
を実施する。メスSCIDマウスを、後脇腹に亘る二つの皮下部位に、1×10⁶のヒト
乳カルシノーマMDA-MB468細胞で注射する。触診可能な腫瘍が、注射後約２から
４週で明らかである。希釈しないアデノウイルスを、1.0×10⁷PFU/mlの濃度で20
μlの容量で、右側の腫瘍の塊に注射する。

【０１１７】実施例２アデノウイルス腫瘍崩壊に対するさらなるヒト腫瘍の感受性細胞およびウイルス全ての細胞系を、10%胎児ウシ血清(FBS)を含むダルベッコ修飾イーグル培地(D
MEM)で生育させる。

【０１１８】これらの実験で使用されるアデノウイルスを、L細胞の懸濁培地で増殖させ、
上述のように精製する。

【０１１９】細胞に対するアデノウイルスの細胞変性効果細胞の凝集した単一層を、約40の細胞当たりのプラーク形成単位(PFU)の感染
の多重度(MOI)でアデノウイルスを使用して感染させる。アデノウイルス感染細
胞と偽感染細胞の両者について、感染の36時間後に写真を撮る。

【０１２０】アデノウイルス感染の免疫蛍光分析免疫蛍光実験のため、カバースリップ上で細胞を生育させ、前述のように〜10
PFU/細胞の感染の多重度(MOI)または偽感染でアデノウイルスを感染させる。感
染後の各種の時点で、細胞を５分間エタノール／酢酸(20/1)混合物で固定し、75
%、50%および25%エタノールでの連続的洗浄で脱水し、引き続きリン酸緩衝生理
食塩水(PBS)で４回洗浄する。次いで固定化して脱水した細胞を、室温で２時間
一次抗体（PBSで1/100に希釈したウサギポリクローナル抗アデノウイルス血清）
にさらす。PBSでの３回の洗浄に引き続き、細胞を室温で１時間二次抗体[10%ヤ
ギ血清と0.05%Evan's Blueカウンター染色を含むPBSで1/100に希釈したヤギ抗ウ
サギIgG（分子全体）フルオレセインイソチオシアネート(FITC)接合物]にさらす
。最後に固定化して処理した細胞を、PBSでさらに３回洗浄し、二重蒸留水で１
回洗浄し、乾燥して0.1%フェニレンジアミンを含む90%グリセロール中でスライ
ドに乗せ、Carl Zeissカメラを備えたZeiss Axiophot顕微鏡で視覚化する（全て
の写真に対する倍率は200×であった）。

【０１２１】細胞の感染とウイルスの定量 24穴プレートで生育した細胞の凝集単一層を、10PFU/細胞の見積もった多重度
でアデノウイルスで感染させる。37℃で１時間のインキュベーション後、単一層
を暖かいDMEM-10%FBSで洗浄し、同じ培地でインキュベーションする。感染後の
各種の時点で、NP-40とデオキシコール酸ナトリウムの混合物を、それぞれ1%と0
.5%の最終濃度に感染単一層で培地に直接加える。溶解物を回収し、ウイルス収
量をL-929細胞でのプラーク滴定によって測定する。

【０１２２】アデノウイルス感染細胞のラジオラベリングと溶解物の調製細胞の凝集単一層を、アデノウイルス(MOI〜10PFU/細胞)で感染する。感染後
の各種の時点で、10%透析PBSと0.1mCi/ml[³⁵S]メチオニンを含むメチオニンフリ
ーDMEMで培地を置換する。37℃で1時間のさらなるインキュベーションの後、細
胞をリン酸緩衝生理食塩水で洗浄し、1%Triton X-100、0.5%デオキシコール酸ナ
トリウムおよび1mM EDTAを含む同じバッファーで溶解する。次いで核を低速遠心
分離で取り出し、上清を使用まで70℃で貯蔵する。

【０１２３】免疫沈降とSDS-PAGE分析アデノウイルス血清を使用して[³⁵S]ラベル化アデノウイルス感染細胞溶解物
の標準的な免疫沈降を実施する。免疫沈降物を、Laemmli (Laemmli, U.K., (197
0) Nature, 227: 680-685)のプロトコールに従って不連続SDS-PAGEによって分析
する。

【０１２４】乳ガン c-erbB-2/neu遺伝子は、乳ガンを有する患者の20-30%で過剰発現するEGFRに対
する過度のホモロジーを有する膜貫通タンパク質をコードする(Yu, D.等 (1996)
Oncogene 13: 1359)。ポイントミューテーションまたはRasの上流の増大したシ
グナ林富カスケードエレメント（EGFRのホモローグであるc-erbB-2/neuを含む）
のそれぞれを通じたRasの活性化は、ウイルス複製のための快適な環境を最終的
に作製し、ヒト乳ガンから由来する細胞系のアレーをアデノウイルス感受性につ
いてアッセイする。細胞系は、MDA-MD-435SD(ATCC寄託HTB-129)、MCF-7(ATCC寄
託HTB-22)、T-27-D(ATCC寄託HTB-133)、BT-20(ATCC寄託HTB-19)、HBL-100(ATCC
寄託HTB-124)、MDA-MB-468(ATCC寄託HTB-132)およびSKBR-3(ATCC寄託HTB-30)を
含んだ。

【０１２５】前述のような放射性活性代謝ラベリングおよび免疫蛍光によって測定される細
胞変性効果の誘導とウイルスタンパク質合成の誘導に基づいて、感染の感受性を
測定できる。

【０１２６】脳グリア芽細胞腫ヒト脳グリア芽細胞腫細胞系A-172、U-118、U-178、U-563、U-251、U-87およ
びU-373（これらの細胞は、Dr. Wee Yong, University of Calgaryから贈呈され
た遺伝的ギフトである）を、アデノウイルス感染に対する感受性を測定するため
に試験する。

【０１２７】アデノウイルスに対するこれらの細胞の感受性を評価するために、細胞を80%
の凝集に生育し、10の感染の多重度(MOI)でアデノウイルスをチャレンジする。4
8時間以内で、広範な細胞変性効果が見られるであろう。これらの細胞の崩壊が
アデノウイルスの複製によるものであることをさらに決定するために、感染後の
各種の時点で３時間の間隔で[³⁵S]メチオニンでパルスラベルし、前述のように
ドデシル硫酸ナトリウム−ポリアクリルアミドゲル電気泳動(SDS-PAGE)によって
タンパク質を分析する。

【０１２８】 U-87細胞を、10のSCIDマウスの後脇腹内にヒト腫瘍異種移植片として導入する
。U-87細胞を、前述のように10%胎児ウシ血清を含むダルベッコ修飾イーグル培
地で生育させる。細胞を回収し、洗浄し、滅菌PBSの100μl中に2.0×10⁶細胞で
再懸濁し、5から8週齢のオスSCIDマウス(Charles River, Canada)の後脇腹に亘
る部位で皮下に注射する。腫瘍増殖を、4週間の期間で毎週二回測定する。

【０１２９】腫瘍の大きさを越えてウイルスの広がりが存在するかを測定するために、全体
のアデノウイルスタンパク質に対して向けられた抗体を使用して、腫瘍と隣接組
織のパラフィン切片に対して前述のように免疫蛍光顕微鏡を実施する。

【０１３０】ほとんどの腫瘍は非常に血管形成するため、ある程度のウイルスは血流に侵入
し、感染腫瘍細胞の崩壊を導くであろう。ウイルスの全身性の広がりが存在する
かを測定するために、血液と処理動物とコントロール動物から回収し、後のプラ
ーク滴定のため連続的に希釈し、血液中の感染性ウイルスの濃度を測定する。

【０１３１】全身性の広がりを結びついた高度のウイルスの腫瘍特性は、アデノウイルスが
最初に感染した腫瘍から離れたグリア芽細胞腫瘍において複製できることを示唆
する。動物の各後脇腹に亘る部位で、U-87ヒト腫瘍異種移植片を使用して、SCID
マウスに片側だけ移植する。これらの腫瘍を、0.5×0.5cmまで生育させる。左側
の腫瘍に、処理動物(n=5)において単一投与量(1×10⁷pfu)のアデノウイルスで注
射する；コントロール動物(n=7)は、UV不活性化ウイルスで偽感染する。腫瘍を
４週間の期間で毎週二回測定する。

【０１３２】膵臓カルシノーマ膵臓ガンから由来する細胞系を、前述の方法を使用してアデノウイルス感染に
対する感受性について調べる。細胞系は、Capan-1(ATCC寄託HTB-79)、BxPC3(ATC
C寄託CRL-1687)、MIAPACA-2(ATCC寄託CRL-1420)、PANC-1(ATCC寄託CRL-1469)、A
cPC-1(ATCC寄託CRL-1682)およびHs766T(ATCC寄託HTB-134)を含む。

【０１３３】前述のアッセイは、HSV、ワクシニアウイルス、およびパラポックスorfウイル
スのような他のタイプのウイルスに対する細胞の感受性を試験するために、当業
者によって改変されても良い。

【０１３４】本発明は、その好ましい実施態様を参照して特に示され記載されているが、添
付された特許請求の範囲によって規定された本発明の精神および範囲から離れる
ことなく、各種の形態および詳細の変化が本発明において可能であることは当業
者に理解されるであろう。

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は、VAI欠損アデノウイルス腫瘍崩壊の分子的基礎の説明
図である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｋ 39/00 Ａ６１Ｋ 39/395 Ｄ 39/395 45/00 45/00 Ａ６１Ｐ 35/00 Ａ６１Ｐ 35/00 43/00 １０５ 43/00 １０５Ａ６１Ｋ 37/02 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＢＺ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者ブラッドリー・ジー・トンプソンカナダ・アルバータ・Ｔ２Ｎ・０Ｚ５・カルガリー・セヴンス・アヴェニュ・ノース・ウエスト・1775 Ｆターム(参考） 4C084 AA16 DA11 MA02 MA13 MA17 MA22 MA23 MA31 MA35 MA37 MA43 MA63 MA65 NA05 ZB212 ZB262 4C085 AA13 CC22 GG01 GG08 4C086 AA01 AA02 BA06 CB07 CB22 MA02 MA04 MA05 MA13 MA17 MA22 MA23 MA31 MA35 MA37 MA43 MA52 MA63 MA65 NA05 ZB21 ZB26 4C087 AA01 AA02 BC83 MA02 MA13 MA17 MA22 MA23 MA31 MA35 MA37 MA52 MA55 MA63 NA14 ZB21 ZB26

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】増殖細胞の実質的な崩壊を引き起こす条件下で、改変アデノ
ウイルス、改変HSV、改変ワクシニアウイルス、および改変パラポックスウイル
スorfウイルスからなる群から選択される一つ以上のウイルスの有効量を、Ras活
性化経路を有する哺乳動物における増殖細胞に投与することを含む、哺乳動物に
おけるRas介在性細胞増殖性疾患を治療する方法。
【請求項２】改変アデノウイルスが、VAI RNAをコードする遺伝子を欠い
ている、請求項１記載の方法。
【請求項３】改変HSVが、_γ134.5遺伝子中にミューテーションを有するHS
Vを含む、請求項１記載の方法。
【請求項４】改変ワクシニアウイルスが、E3LおよびK3Lからなる群から選
択されるミュータント遺伝子を含む、請求項１記載の方法。
【請求項５】前記ミュータント遺伝子がE3Lである、請求項４記載の方法
。
【請求項６】前記ミュータント遺伝子がK3Lである、請求項４記載の方法
。
【請求項７】パラポックスorfウイルスが、OV20.0L遺伝子中にミューテー
ションを有するパラポックスウイルスorfウイルスを含む、請求項１記載の方法
。
【請求項８】一つより多いタイプのウイルスが投与される、請求項１記載
の方法。
【請求項９】二つより多い株のウイルスが投与される、請求項１記載の方
法。
【請求項１０】前記Ras介在性増殖性疾患が新生物である、請求項１記載
の方法。
【請求項１１】前記Ras介在性増殖性疾患が神経線維腫症である、請求項
１記載の方法。
【請求項１２】前記新生物が固体の新生物である、請求項１０記載の方法
。
【請求項１３】前記新生物が、肺ガン、前立腺ガン、大腸ガン、甲状腺ガ
ン、腎臓ガン、副腎ガン、肝臓ガン、膵臓ガン、乳ガン、並びに中枢および末梢
神経系のガンからなる群から選択される、請求項１０記載の方法。
【請求項１４】前記新生物が中枢神経系のガンである、請求項１３記載の
方法。
【請求項１５】前記新生物が乳ガンである、請求項１３記載の方法。
【請求項１６】前記新生物が造血性新生物である、請求項１２記載の方法
。
【請求項１７】前記ウイルスが、固体の新生物内またはその近傍で注射に
より投与される、請求項１２記載の方法。
【請求項１８】前記ウイルスが、哺乳動物内に静脈内で投与される、請求
項１記載の方法。
【請求項１９】前記ウイルスが、哺乳動物内に腹膜内で投与される、請求
項１記載の方法。
【請求項２０】前記哺乳動物が免疫能力を有する、請求項１記載の方法。
【請求項２１】前記ウイルスが免疫保護化されている、請求項２０記載の
方法。
【請求項２２】前記ウイルスがミセルにカプセル化されている、請求項２
１記載の方法。
【請求項２３】前記ウイルスが、有効量の抗抗ウイルス抗体と共に投与さ
れる、請求項２０記載の方法。
【請求項２４】前記哺乳動物がヒトである、請求項１記載の方法。
【請求項２５】約1から10¹⁵のウイルスのプラーク形成単位／体重のkgが
投与される、請求項１記載の方法。
【請求項２６】前記ウイルスが単一の投与で投与される、請求項１記載の
方法。
【請求項２７】前記ウイルスが一より多い投与で投与される、請求項１記
載の方法。
【請求項２８】前記新生物が転移性である、請求項１０記載の方法。
【請求項２９】さらに有効量の化学療法試薬の投与を含む、請求項１記載
の方法。
【請求項３０】前記ウイルスが、投与の前にプロテアーゼで処理される、
請求項１０記載の方法。
【請求項３１】新生物の実質的な腫瘍崩壊を引き起こすために、改変アデ
ノウイルス、改変HSV、改変ワクシニアウイルス、および改変パラポックスウイ
ルスorfウイルスからなる群から選択されるウイルスの有効量を、新生物に投与
することを含む、ヒトにおける活性化Ras経路を有する新生物を治療する方法。
【請求項３２】前記新生物が固体の新生物であり、前記ウイルスが新生物
内またはその近傍で注射により投与される、請求項３１記載の方法。
【請求項３３】前記固体の新生物が膵臓ガンである、請求項３２記載の方
法。
【請求項３４】新生物の実質的な崩壊を引き起こすのに十分な量で、改変
アデノウイルス、改変HSV、改変ワクシニアウイルス、および改変パラポックス
ウイルスorfウイルスからなる群から選択されるウイルスを、哺乳動物における
新形成性細胞に投与することを含む、哺乳動物における活性化Ras経路を有する
新生物の転移を阻害する方法。
【請求項３５】前記哺乳動物が、イヌ、ネコ、ヒツジ、ヤギ、ウシ、ウマ
、ブタ、ヒト、および非ヒト霊長類からなる群から選択される、請求項３４記載
の方法。
【請求項３６】実質的に全ての新生物の外科的な除去と、残余の新生物の
実質的な腫瘍崩壊を引き起こすのに十分な量で前記手術部位への、改変アデノウ
イルス、改変HSV、改変ワクシニアウイルス、および改変パラポックスウイルスo
rfウイルスからなる群から選択されるウイルスの投与とを含む、哺乳動物におけ
る活性化Ras経路を有する疑いのある新生物を治療する方法。
【請求項３７】改変アデノウイルス、改変HSV、改変ワクシニアウイルス
、および改変パラポックスウイルスorfウイルスからなる群から選択されるウイ
ルス、化学療法試薬、および製薬学的に許容可能な賦形剤を含む製薬組成物。
【請求項３８】改変アデノウイルス、改変HSV、改変ワクシニアウイルス
、および改変パラポックスウイルスorfウイルスからなる群から選択されるウイ
ルス、および製薬学的に許容可能な賦形剤を含む製薬組成物。
【請求項３９】さらに免疫保護化ウイルスを含む、請求項３８記載の製薬
組成物。
【請求項４０】改変アデノウイルス、改変HSV、改変ワクシニアウイルス
、および改変パラポックスウイルスorfウイルスからなる群から選択されるウイ
ルス、および化学療法試薬を含む製薬組成物を含むキット。
【請求項４１】改変アデノウイルス、改変HSV、改変ワクシニアウイルス
、および改変パラポックスウイルスorfウイルスからなる群から選択されるウイ
ルス、および抗抗ウイルス抗体を含む製薬組成物を含むキット。
【請求項４２】新生物の実質的な崩壊を引き起こすのに十分な量で、改変
アデノウイルス、改変HSV、改変ワクシニアウイルス、および改変パラポックス
ウイルスorfウイルスからなる群から選択されるウイルスを、in vitroで細胞の
集団に投与することを含む、in vitroで活性化Ras経路を有する疑いのある新生
物を含む細胞の集団を治療する方法。
【請求項４３】 (a)i)免疫抑制剤の有効量を哺乳動物における増殖性細胞
に投与する工程； ii)哺乳動物からB細胞またはT細胞を除去する工程； iii)哺乳動物から抗ウイルス抗体を除去する工程； iv)哺乳動物から抗体を除去する工程； v)哺乳動物に抗抗ウイルス抗体を投与する工程；並びに vi)哺乳動物の免疫系を抑制する工程からなる群から選択される工程を実施し、 (b)増殖細胞の実質的な崩壊を引き起こす条件下で、改変アデノウイルス、改変H
SV、改変ワクシニアウイルス、および改変パラポックスウイルスorfウイルスか
らなる群から選択される一つ以上のウイルスの有効量を、哺乳動物における増殖
細胞に投与する工程を含み、前記抗ウイルス抗体が、抗アデノウイルス抗体、抗HSV抗体、抗ワクシニアウイ
ルス抗体、および抗パラポックスウイルスorfウイルス抗体からなる群から選択
され、前記抗抗ウイルス抗体が、抗抗アデノウイルス抗体、抗抗HSV抗体、抗抗
ワクシニアウイルス抗体、および抗抗パラポックスウイルスorfウイルス抗体か
らなる群から選択される、哺乳細胞におけるRas介在性細胞増殖性疾患を治療す
る方法。
【請求項４４】前記Ras介在性増殖性疾患が新生物である、請求項４３記
載の方法。
【請求項４５】前記Ras介在性増殖性疾患が神経線維腫症である、請求項
４３載の方法。
【請求項４６】前記新生物が固体の新生物である、請求項４４記載の方法
。
【請求項４７】前記新生物が、肺ガン、前立腺ガン、大腸ガン、甲状腺ガ
ン、腎臓ガン、副腎ガン、肝臓ガン、膵臓ガン、乳ガン、並びに中枢および末梢
神経系のガンからなる群から選択される、請求項４４記載の方法。
【請求項４８】前記新生物が中枢神経系のガンである、請求項４７記載の
方法。
【請求項４９】前記新生物が乳ガンである、請求項４７記載の方法。
【請求項５０】前記新生物が造血性新生物である、請求項４４記載の方法
。
【請求項５１】前記ウイルスが、固体の新生物内またはその近傍で注射に
より投与される、請求項４６記載の方法。
【請求項５２】前記ウイルスが、哺乳動物内に静脈内で投与される、請求
項４３記載の方法。
【請求項５３】前記ウイルスが、哺乳動物内に腹膜内で投与される、請求
項４３記載の方法。
【請求項５４】前記哺乳動物が免疫能力を有する、請求項４３記載の方法
。
【請求項５５】前記ウイルスが免疫保護化されている、請求項５４記載の
方法。
【請求項５６】前記ウイルスがミセルにカプセル化されている、請求項４
３記載の方法。
【請求項５７】工程(a)の前に、増殖細胞の実質的な崩壊を引き起こす条
件下で、有効量の一つ以上のウイルスを投与する、請求項４３記載の方法。
【請求項５８】前記哺乳動物がヒトである、請求項４３記載の方法。
【請求項５９】約1から10¹⁵のウイルスのプラーク形成単位／体重のkgが
投与される、請求項４３記載の方法。
【請求項６０】前記ウイルスが単一の投与で投与される、請求項４３記載
の方法。
【請求項６１】前記ウイルスが一より多い投与で投与される、請求項４３
記載の方法。
【請求項６２】前記新生物が転移性である、請求項４４記載の方法。
【請求項６３】さらに有効量の化学療法試薬の投与を含む、請求項４３記
載の方法。
【請求項６４】前記ウイルスが、投与の前にプロテアーゼで処理される、
請求項４３記載の方法。
【請求項６５】前記新生物が膵臓ガンである、請求項４４記載の方法。
【請求項６６】実質的に全ての新生物の外科的な除去と、残余の新生物細
胞の実質的な腫瘍崩壊を引き起こすのに十分な量で前記手術部位への、ウイルス
の投与とをさらに含む、請求項４４記載の方法。
【請求項６７】工程a)が、有効量の免疫抑制剤を哺乳動物における増殖細
胞に投与することである、請求項４３記載の方法。
【請求項６８】前記免疫抑制剤が、ウイルスと同時に投与される、請求項
６７記載の方法。
【請求項６９】前記免疫抑制剤が、ウイルスの前に投与される、請求項６
７記載の方法。
【請求項７０】前記免疫抑制剤が、シクロスポリン、ラパマイシン、タク
ロリムス、ミコ石炭酸、アザチオプリン、前記薬剤の類似体、放射線、HIV感染
、および抗抗ウイルス抗体からなる群から選択される、請求項６７記載の方法。
【請求項７１】免疫抑制剤、ウイルス、および製薬学的に許容可能な賦形
剤とを含む製薬組成物。
【請求項７２】さらに化学療法試薬を含む、請求項７１記載の製薬組成物
。
【請求項７３】改変アデノウイルス、改変HSV、改変ワクシニアウイルス
、および改変パラポックスウイルスorfウイルスからなる群から選択される少な
くとも一つのウイルスと、免疫保護化改変アデノウイルス、改変HSV、改変ワク
シニアウイルス、および改変パラポックスウイルスorfウイルスからなる群から
選択される少なくとも一つの免疫保護化ウイルスとを含む、請求項７１記載の製
薬組成物。
【請求項７４】免疫抑制試薬と、改変アデノウイルス、改変HSV、改変ワ
クシニアウイルス、および改変パラポックスウイルスorfウイルスからなる群か
ら選択されるウイルスとを含む製薬組成物を含むキット。
【請求項７５】さらに化学療法試薬を含む、請求項７４記載のキット。
【請求項７６】工程a)が哺乳動物からB細胞またはT細胞を除去することで
ある、請求項４３記載の方法。
【請求項７７】前記B細胞またはT細胞が濾過およびヘム透析によって除去
される、請求項７６記載の方法。
【請求項７８】前記濾過がアフィニティークロマトグラフィーで実施され
、前記アフィニティークロマトグラフィーが固体の支持体に固定化された抗体を
含む、請求項７７記載の方法。
【請求項７９】前記抗体が抗T細胞または抗B細胞抗体である、請求項７８
記載の方法。
【請求項８０】前記B細胞およびT細胞が放射線治療により除去される、請
求項７６記載の方法。
【請求項８１】前記B細胞およびT細胞が環状ステロイドの使用によって除
去される、請求項７６記載の方法。
【請求項８２】前記環状ステロイドがシクロスポリンである、請求項８１
記載の方法。
【請求項８３】 a)哺乳動物からB細胞またはT細胞を除去する手段；および
b)改変アデノウイルス、改変HSV、改変ワクシニアウイルス、および改変パラポ
ックスウイルスorfウイルスからなる群から選択されるウイルスを含む製薬組成
物を含むキット。
【請求項８４】さらに化学療法試薬を含む、請求項８３記載のキット。
【請求項８５】工程a)が哺乳動物からの抗ウイルス抗体を除去することで
ある、請求項４３記載の方法。
【請求項８６】前記抗ウイルス抗体が、ヘム透析と、固定化ウイルスに対
する血液の透過によって除去される、請求項８５記載の方法。
【請求項８７】前記ウイルスが固体の支持体に固定化されている、請求項
８６記載の方法。
【請求項８８】 a)哺乳動物から抗ウイルス抗体を除去する手段；および b)ウイルスを含む製薬組成物；を含むキットであって、前記抗ウイルス抗体が、抗アデノウイルス抗体、抗HSV
抗体、抗ワクシニアウイルス抗体、および抗パラポックスウイルスorfウイルス
抗体から選択され、前記ウイルスが、改変アデノウイルス、改変HSV、改変ワク
シニアウイルス、および改変パラポックスウイルスorfウイルスからなる群から
選択されるキット。
【請求項８９】さらに化学療法試薬を含む、請求項８８記載のキット。
【請求項９０】工程a)が哺乳動物から抗体を除去することである、請求項
４３記載の方法。
【請求項９１】前記抗体がIgG抗体である、請求項９０記載の方法。
【請求項９２】前記抗体が、ヘム透析と、固定化プロテインAに対する血
液の透過によって除去される、請求項９０記載の方法。
【請求項９３】工程a)が哺乳動物に抗抗ウイルス抗体を投与することであ
る、請求項４３記載の方法。
【請求項９４】前記抗抗ウイルス抗体が静脈内で投与される、請求項９３
記載の方法。
【請求項９５】前記抗抗ウイルス抗体がヒト化抗体である、請求項９３記
載の方法。
【請求項９６】抗抗ウイルス抗体、ウイルス、および製薬学的に許容可能
な賦形剤を含む製薬組成物であって、前記抗抗ウイルス抗体が、抗抗アデノウイ
ルス抗体、抗抗HSV抗体、抗抗ワクシニアウイルス抗体、および抗抗パラポック
スウイルスorfウイルス抗体からなる群から選択され、前記ウイルスが、改変ア
デノウイルス、改変HSV、改変ワクシニアウイルス、および改変パラポックスウ
イルスorfウイルスからなる群から選択される製薬組成物。
【請求項９７】さらに化学療法試薬を含む、請求項９６記載の製薬組成物
。
【請求項９８】ウイルスと免疫保護化ウイルスからなる群から選択される
少なくとも一つを含む、請求項９６記載の製薬組成物。
【請求項９９】抗抗ウイルス抗体、およびウイルスを含む製薬組成物を含
むキットであって、前記抗抗ウイルス抗体が、抗抗アデノウイルス抗体、抗抗HS
V抗体、抗抗ワクシニアウイルス抗体、および抗抗パラポックスウイルスorfウイ
ルス抗体からなる群から選択され、前記ウイルスが、改変アデノウイルス、改変
HSV、改変ワクシニアウイルス、および改変パラポックスウイルスorfウイルスか
らなる群から選択されるキット。
【請求項１００】さらに化学療法試薬を含む、請求項９９記載のキット。
【請求項１０１】工程a)が哺乳動物の免疫系を抑制することである、請求
項４３記載の方法。
【請求項１０２】前記免疫系が放射線療法によって抑制される、請求項１
０１記載の方法。
【請求項１０３】前記免疫系が環状ステロイドによって抑制される、請求
項１０１記載の方法。
【請求項１０４】前記環状ステロイドがシクロスポリンである、請求項１
０３記載の方法。