JP2003511393A

JP2003511393A - アンチセンス組成物および癌処置法

Info

Publication number: JP2003511393A
Application number: JP2001528575A
Authority: JP
Inventors: スティーブンエイチ．バーテルメズ，; パトリックエル．イバーセン，
Original assignee: エイブイアイバイオファーマ，インコーポレイテッド
Priority date: 1999-10-07
Filing date: 2000-10-06
Publication date: 2003-03-25
Also published as: KR20020064793A; WO2001025422A2; EP1228202B1; AU7866800A; KR100695677B1; ATE356204T1; AU784358B2; DE60033840D1; WO2001025422A3; EP1228202A2; CA2385220A1

Abstract

(57)【要約】本発明において、幹細胞にて優先的に発現されるｍＲＮＡを指向されるアンチセンスオリゴマーを含む組成物が記載される。本発明においてまた、このような組成物で幹細胞を処置して、系統を方向付けられた前駆細胞およびそれらの子孫の数を増加するための方法、および／または癌細胞の増殖を遅らせるための方法も記載される。本発明において、このような組成物およびアンチセンスオリゴヌクレオチド処理した幹細胞の医薬としてもまた記載される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】（発明の分野）本発明は、造血幹細胞の分化を促進するアンチセンスオリゴヌクレオチド組成
物、およびこのような組成物で幹細胞を処理して、系統（ｌｉｎｅａｇｅ）を方
向付けられた前駆細胞およびそれらの子孫の数を増加するため、および／または
癌細胞の増殖を遅らせるための方法に関する。このような組成物およびアンチセ
ンスオリゴヌクレオチド処理した幹細胞の医薬としての使用もまた記載される。

【０００２】（参考文献）

【０００３】

【化１】（発明の背景）造血幹細胞（ＨＳＣ）は、多能性前駆細胞であり、これは、移植可能であり、
自己複製し得、そして多系統の可能性を有する細胞として特徴付けられた。ＨＳ
Ｃの分化は、このような多系統の可能性の喪失、および対応する系統の方向付け
を生じる。移植研究によって示されるように、ＨＳＣはインビボでの自己再生を
生じ、ここで、単一のＨＳＣは、免疫不全マウスの骨髄を再増殖（ｒｅｐｏｐｕ
ｌａｔｅ）したことが示された（ＫｅｌｌｅｒおよびＳｎｏｄｇｒａｓｓ、１９
９０）（Ｓｍｉｔｈら、１９９１；Ｏｓａｗａら、１９９６もまた参照のこと）
。造血幹細胞は、組換えレトロウイルスで感染され得、かつ遺伝子治療について
の細胞性標的として働き得ることもまた、示された（また、Ｓｃｈｍｉｄｔ−Ｗ
ｏｌｆ，Ｉ．Ｇら、１９９１）。

【０００４】骨髄増殖性疾患、血球増殖性疾患、および自己免疫疾患を含むがこれに限らな
い、様々な細胞に基づく疾患に罹患した患者は、しばしば特定の系統の細胞の数
において不均衡を有する。さらに、化学療法または放射線治療を受けている患者
は、しばしば造血欠損を有する。

【０００５】上記の病理学的状態のいずれかに罹患している患者における造血細胞のプロセ
スの調節は、多くの医療的有用性を有し、そしてこのような細胞は、遺伝子操作
ベースの治療についての標的であるということになる（Ｗｉｌｓｏｎ，Ｊ．Ｄ．
ら、１９９１）。

【０００６】細胞の発生に関する遺伝子の発現の阻害は、阻害された遺伝子の発現に依存し
ない方向に向けて発生プロセスを改変するために使用された。細胞の発生に関す
る遺伝子の阻害は、アンチセンス技術を使用して達成された。

【０００７】アンチセンスオリゴヌクレオチドは、目的の標的タンパク質の合成に特異的に
干渉するように設計され得ることが示された（Ｍｏｆｆａｔ，１９９１）。１５
〜２０塩基のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、通常、哺乳動物ゲノムにおけ
る１つの相補的配列を有するに十分な長さである。さらに、これらのアンチセン
スオリゴヌクレオチドは、それらの標的ｍＲＮＡとよくハイブリダイズする（Ｃ
ｏｈｅｎら、１９９１）。

【０００８】これらの疎水性に起因して、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、リン脂質膜
とよく相互作用し（Ａｋｈｔａｒ，Ｓら、１９９１）、そして細胞の原形質膜と
の相互作用に続いて、オリゴヌクレオチドは、生存細胞内に能動輸送されること
が示唆された（Ｌｏｋｅ，Ｓ．Ｌ．ら、１９８９；Ｙａｋｕｂｏｖ，Ｌ．Ａ．ら
、１９８９；Ａｎｄｅｒｓｏｎ，Ｃ．Ｍ．ら、１９９９）。

【０００９】細胞の発生に関する遺伝子の阻害は、アンチセンス技術を使用して達成された
が、天然に存在するオリゴヌクレオチドは、ヌクレアーゼ感受性ホスホジエステ
ル骨格を有する。

【００１０】このような天然に存在するオリゴヌクレオチドは、ヌクレアーゼによる分解に
対して耐性にするように改変（例えば、ホスホジエステル結合の代わりに、メチ
ルホスホジエステル結合、ホスホロチオエート結合またはホスホアミデート結合
）され得る（ＳｐｉｔｚｅｒおよびＥｃｋｓｔｅｉｎ，１９８８；Ｂａｋｅｒら
、１９９０；Ｈｕｄｚｉａｋ，１９９６）。

【００１１】非イオン性メチルホスホネートアナログは、増加した細胞性取り込みを示すこ
とが予期された（Ｂｌａｋｅら、１９８５）。しかし、アンチセンスメチルホス
ホネートは、インビトロでＮ−ｒａｓ発現を阻害し得ないことが示された（Ｔｉ
ｄｄら、１９８８）。一方、いくつかの癌遺伝子ｍＲＮＡのインビトロでの翻訳
は、ホスホジエステルアンチセンスオリゴヌクレオチドおよび／またはホスホロ
チオエートアンチセンスオリゴヌクレオチドによって首尾よくブロックされた。
例えば、ＭｃＭａｎａｗａｙら、１９９０およびＷａｔｓｏｎら、１９９１（阻
害）；Ｒｅｅｄら、１９９０（ｂｃｌ−２阻害）；Ｃａｌａｂｒｅｔｔら、１９
９１（ｍｙｂ阻害）；Ｓｚｃｚｙｌｉｋら、１９９１（ｂｃｒ−ａｂｌ阻害）を
参照のこと。

【００１２】モルホリノ（ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏ）オリゴヌクレオチドは、ＲＮＡ標的に対
する高結合親和性を示し、荷電していない骨格は細胞への取り込みを支持し、そ
して非特異的結合相互作用を減少することが示された（例えば、Ｓｕｍｍｅｒｔ
ｏｎら、１９９７を参照のこと）。

【００１３】治療目的について、造血幹細胞に特異的に作用する薬剤を使用して造血幹細胞
分化を調節する手段を提供することが所望される。

【００１４】（発明の要旨）本発明は、幹細胞の分化を促進するための方法および組成物を提供する。好ま
しい局面において、本発明は、幹細胞に翻訳優先的に発現されるｍＲＮＡに指向
されるアンチセンスオリゴマーを含む組成物を提供する。

【００１５】本発明のアンチセンスオリゴマーは、典型的には以下の１つ以上によって特徴
付けられる：（１）約１２から２５塩基長；（２）実質的に荷電していない骨格
；（３）５０℃より高いＴｍで、標的ＲＮＡの相補的配列と高い親和性でハイブ
リダイズする能力；（４）ヌクレアーゼ耐性；（５）細胞内への能動輸送能力ま
たは促進（ｆａｃｉｌｉｔａｔｅｄ）輸送能力；および（６）図２Ａ−Ａから２
Ｅ−Ｅで示された構造からなる群から選択される構造。

【００１６】別の好ましい局面において、アンチセンスオリゴマーは、配列番号１、配列番
号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、および配列番号７、
配列番号１０、配列番号１１および配列番号１２として示された群より選択され
る配列を有する。ここで、これらの化合物は、それぞれＥＶＩ−１ジンクフィン
ガー遺伝子、血清除去応答（ｓｅｒｕｍｄｅｐｒｉｖａｔｉｏｎｒｅｓｐｏ
ｎｓｅ）（ＳＤＲ）遺伝子、マルチメリン（ｍｕｌｔｉｍｅｒｉｎ）遺伝子、組
織トランスグルタミナーゼ遺伝子、Ｆｅ６５遺伝子、ＲＡＢ２７遺伝子、ヒトＪ
ａｇｇｅｄ２遺伝子、ヒトＮｏｔｃｈ１（Ｔａｎ−１）遺伝子、ヒトＮｏｔｃｈ
２遺伝子、ヒトＮｏｔｃｈ３遺伝子およびマウスＮｏｔｃｈ１遺伝子によって転
写されるｍＲＮＡに対して標的化される。

【００１７】１つの好ましい実施形態において、アンチセンスオリゴマーは、配列番号１に
示される配列を有する。

【００１８】本発明はさらに、被験体由来の濃縮された幹細胞含有細胞集団を得、このアン
チセンスオリゴマー処理の前に存在する系統を方向付けられた前駆細胞およびそ
れらの子孫の数と比較して、系統を方向付けられた前駆細胞およびそれらの子孫
の集団の数を少なくとも２倍、４倍、８倍または８倍より多く増加するために有
効な条件下で、これらの細胞をエキソビボで上記のアンチセンスオリゴマーの１
つ以上に暴露するプロセスによって調製された、アンチセンスオリゴマー処理し
た幹細胞組成物を提供する。このような系統を方向付けられた前駆細胞およびそ
れらの子孫は、代表的には、好中球、血小板、リンパ球、赤血球または単球であ
る。

【００１９】本方法の１つの適用において、幹細胞は、多能性造血幹細胞であり、そして本
発明のアンチセンスオリゴマー組成物によるＨＳＣの処理は、静止期からのこの
ようなＨＳＣの転移を促進し、より分化した細胞（例えば、単球、顆粒球、血小
板、リンパ球および赤血球細胞）の数の増加、ならびに好ましくは好中球および
／または血小板における増加を生じる。

【００２０】いくつかの場合において、被験体は、癌患者であり、本発明の１つ以上のアン
チセンスオリゴマーでの処理は、癌細胞の総数または細胞集団における腫瘍の総
負荷を減少するために効果的である。

【００２１】本発明はさらに、被験体において癌を処置する際の医薬としての使用、および
被験体において癌を処置するための医薬を製造する際のこのような組成物の使用
のための、上記のような細胞組成物を提供する。

【００２２】本発明のこれらおよび他の、目的および特徴は、以下の詳細な説明が添付の図
面および実施例と組合わせて読まれる場合に、より十分に明白となる。

【００２３】（発明の詳細な説明）（Ｉ．定義）下記の用語は、本明細書中で使用される場合、他に示さなければ以下の意味を
有する。

【００２４】本明細書中で使用される場合、用語「造血幹細胞を濃縮した細胞集団」とは、
本明細書中で記載されるポジティブおよびネガティブ選択技術を用いて得られた
細胞集団をいう。ここで造血幹細胞は、ＬＴＲ−ＨＳＣまたはＳＴＲ−ＨＳＣで
あり得る。

【００２５】本明細書中で使用される場合、用語「長期再増殖造血幹細胞」および「ＬＴＲ
−ＨＳＣ」とは、移植可能であり、そして分化の際、完全に免疫抑制されたレシ
ピエントに移植された場合に、不確定の期間造血細胞の全ての系統に寄与する造
血幹細胞をいう。ＬＴＲ−ＨＳＣはクローン死滅をしない。

【００２６】本明細書中で使用される場合、用語「短期再増殖造血幹細胞」または「ＳＴＲ
−ＨＳＣ」とは、移植可能であり、そして免疫抑制されたレシピエントに移植さ
れた場合に、約１週間から６ヶ月間造血細胞の全ての系統に寄与し、次いでクロ
ーン死滅をするマウス造血幹細胞をいう。

【００２７】用語「クローン死滅」とは、本明細書中で使用される場合、単一の造血幹細胞
およびその細胞のクローン増殖によって産生された全ての子孫の最終分化をいい
、その結果、もはや最初のクローンから娘細胞が産生されない。

【００２８】用語「多能性造血幹細胞」とは、全ての可能性のある細胞系統へ分化し得る造
血幹細胞をいう。

【００２９】本明細書中で使用される場合、用語「高増殖能コロニー形成細胞」または「Ｈ
ＰＰ−ＣＦＣ」とは、造血幹細胞に関して本明細書中で使用される場合、ラット
ｒＳＣＦ、マウスｒＩＬ−３およびヒトｒＩＬ−６に応答して増殖するマウス細
胞をいう。この細胞は、寒天またはメチルセルロースのような半固体培地で、あ
るいは単一の細胞として液体培養液中で増殖し、そして１ｍｍより大きな直径を
有し、一般的には密集した多中心を備えて１クローンあたり１００，０００個よ
り多くの細胞を有するマクロクローン（ｍａｃｒｏｃｌｏｎｅｓ）を形成する。
この集団は全てのマウスＨＳＣを含むが、全てのＨＰＰ−ＣＦＣがＨＳＣである
わけではなく、ＨＰＰ−ＣＦＣアッセイはＬＴＲ−ＨＳＣの特異的アッセイでは
ない。対照的に、低増殖能（ＬＰＰ）クローンは、１クローンあたり２から１０
０，０００の細胞を含む。

【００３０】本明細書中で使用される場合、「系統を方向付けられた造血幹細胞」は、全て
の細胞系統ではなく、１つ以上の特定の細胞系統に方向付けられるために十分に
分化した造血幹細胞である。

【００３１】本明細書中で使用される場合、用語「ｌｉｎ−」または「系統枯渇（ｌｉｎｅ
ａｇｅ−ｄｅｐｌｅｔｅｄ）」とは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、好中球、単球および赤血
球に特異的な細胞表面抗原を発現せず、そして「ＹＷ２５．１２．７」抗体によ
って認識される抗原を発現しない細胞集団をいう（例えばＢｅｒｔｏｎｃｅｌｌ
ｏＩら、１９９１を参照のこと）。

【００３２】本明細書中で使用される場合、用語「発生」、「分化」および「成熟」とは交
換可能に使用され、そして複数の細胞系統へ分化する可能性を有する段階から、
１つ以上の規定された系統へ方向付けられた、より分化した細胞になる、細胞の
発達をいう。

【００３３】本明細書中で使用される場合、用語「精製された」とは、造血幹細胞に関して
、それらが天然に特定の組織（例えば骨髄または末梢血）において共に通常見い
出される、他の型の細胞のいくつかまたは全てと比較して濃縮（単離または精製
）されたＨＳＣをいう。一般的に、ＨＳＣの「精製された」集団は、Ｈｏｅｃｈ
ｓｔ３３３４２とローダミン１２３の両方を用いた低レベル染色に加えて、濃度
勾配分画、系統枯渇、およびｃ−ｋｉｔおよびＳｃａ−１発現のポジティブ選択
に供されている。

【００３４】本明細書中で使用される場合、用語「アンチセンスオリゴヌクレオチド」およ
び「アンチセンスオリゴマー」とは交換可能に使用され、そしてヌクレオチド塩
基の配列および、アンチセンスオリゴマーがＲＮＡ中の標的配列とワトソン−ク
リック塩基対形成によってハイブリダイズし、標的配列内でＲＮＡ：オリゴマー
へテロ二重鎖を形成する（代表的には、ｍＲＮＡと）ことを可能にする、サブユ
ニット−サブユニット骨格をいう。このオリゴマーは、標的配列と正確な配列相
補性または近い相補性を有し得る。そのようなアンチセンスオリゴマーは、標的
配列を含むｍＲＮＡの翻訳をブロックまたは阻害し得、および／または（１）そ
のｍＲＮＡのスプライシング改変体を生成するようにｍＲＮＡのプロセッシング
を改変し得る。アンチセンスオリゴマーは遺伝子の転写を阻害し得、二本鎖配列
または一本鎖配列に結合し得、そしてそれがハイブリダイズする配列に「指向さ
れた」と言われ得る。

【００３５】本発明で使用するアンチセンスオリゴヌクレオチドの例示的な構造は、図１Ａ
〜Ｅで示したβモルホリノサブユニット型を含む。ポリマーは１つ以上の結合型
を含み得ることが認められる。

【００３６】図１のサブユニットＡは、図２のＡ−Ａで示す５原子反復ユニット骨格を形成
する、１原子のリン含有結合を含む。ここでモルホリノ環は、１原子ホスホンア
ミド結合によって結合する。

【００３７】図１のサブユニットＢは、図２のＢ−Ｂで示すような、６原子反復ユニット骨
格のために設計される。構造Ｂにおいて、５’モルホリノ炭素をリン基に結合し
ている原子Ｙは、硫黄、窒素、炭素、または好ましくは酸素であり得る。リンか
らぶら下がるＸ部分は、以下のいずれかであり得る：フッ素；アルキルまたは置
換アルキル；アルコキシまたは置換アルコキシ；チオアルコキシまたは置換チオ
アルコキシ；または環状構造を含む、非置換窒素、モノ置換窒素、またはジ置換
窒素。

【００３８】図１のサブユニットＣ〜Ｅは、図２のＣ−ＣからＥ−Ｅで示すような、７原子
ユニット長骨格のために設計される。構造Ｃにおいて、Ｘ部分は構造Ｂと同様で
あり、そして部分Ｙは、メチレン、硫黄、または好ましくは酸素であり得る。構
造Ｄにおいて、ＸおよびＹの部分は、構造Ｂと同様である。構造Ｅにおいて、Ｘ
は構造Ｂと同様であり、そしてＹはＯ、Ｓ、またはＮＲである。図１Ａ−Ｅで示
した全てのサブユニットにおいて、ＺはＯまたはＳであり、そしてＰ_iまたはＰ_j はアデニン、シトシン、グアニンまたはウラシルである。

【００３９】本明細書中で使用される場合、「モルホリノオリゴマー」は、典型的なポリヌ
クレオチドと水素結合し得る塩基を支持する骨格を有するポリマー分子を指す。
ここでポリマーは五炭糖骨格部分、そしてより具体的にはヌクレオチドおよびヌ
クレオシドに典型的なホスホジエステル結合によって結合したリボース骨格を欠
くが、その代わりに環の窒素を含みその環の窒素により結合する。好ましい「モ
ルホリノ」オリゴヌクレオチドは、図２Ｂで示す形式のモルホリノサブユニット
構造から構成される。ここで（ｉ）その構造は、１から３原子長のリンを含む結
合によって結合され、１つのサブユニットのモルホリノ窒素を隣接するサブユニ
ットの５’環外炭素に結合して、そして（ｉｉ）Ｐ_iおよびＰ_jは、塩基特異的水
素結合によって、ポリヌクレオチドの塩基と結合するのに有効な、プリンまたは
ピリミジンの塩基対形成部分である。

【００４０】本発明のこの好ましい局面を、図２Ｂに示す。それはホスホロジアミデート結
合で結合した２つのそのようなサブユニットを示す。モルホリノリゴヌクレオチ
ド（アンチセンスオリゴマーを含む）は、例えば共有に係る米国特許第５，６９
８，６８５号、同第５，２１７，８６６号、同第５，１４２，０４７号、同第５
，０３４，５０６号、同第５，１６６，３１５号、同第５，１８５，４４４号、
同第５，５２１，０６３号、および同第５，５０６，３３７号において詳述され
ている。

【００４１】本明細書中で使用される場合、「ヌクレアーゼ耐性」オリゴマー分子（オリゴ
マー）は、その骨格がホスホジエステル結合のヌクレアーゼ切断に感受性でない
ものである。例示的なヌクレアーゼ耐性アンチセンスオリゴマーは、ホスホロチ
オエートおよびホスフェート−アミンＤＮＡ（ｐｎＤＮＡ）（両方とも荷電した
骨格を有する）、ならびにメチルホスホネート、モルホリノ、およびペプチド核
酸（ＰＮＡ）オリゴヌクレオチド（これらは全て荷電していない骨格を有し得る
）のような、オリゴヌクレオチドアナログである。

【００４２】本明細書中で使用される場合、オリゴヌクレオチドまたはアンチセンスオリゴ
マーは、オリゴマーが標的に実質的に３７℃より高い、好ましくは少なくとも５
０℃、そして典型的には６０℃−８０℃またはそれより高いＴｍで、生理的条件
下でハイブリダイズする場合、標的ポリヌクレオチドに「特異的にハイブリダイ
ズする」。そのようなハイブリダイゼーションは、好ましくは、規定されたイオ
ン強度およびｐＨで特定の配列に関する熱融解温度（Ｔ_[m]）より約１０℃、そ
して好ましくは約５℃低く選択される、ストリンジェントなハイブリダイゼーシ
ョン条件に対応する。所定のイオン強度およびｐＨで、Ｔ_[m]は、標的配列の５
０％が相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズする温度である。

【００４３】２つの一本鎖ポリヌクレオチド間で逆平行の配置でハイブリダイゼーションが
起こる場合、ポリヌクレオチドは、お互いに「相補的である」と記載される。二
本鎖ポリヌクレオチドが、別のポリヌクレオチドと「相補的」であり得るのは、
第１のポリヌクレオチドの鎖の一本と第２ポリヌクレオチドの鎖の一本との間に
ハイブリダイゼーションが起こる場合である。相補性（１つのポリヌクレオチド
が別のものと相補的である度合い）は、一般的に受け入れられた塩基対形成のル
ールによって、お互いに水素結合を形成することが期待される、向かい合う鎖に
おける塩基の割合に関して定量可能である。

【００４４】本明細書中で使用される場合、用語「アナログ」とは、オリゴマーに関して、
参照オリゴマーのものと同様の構造的性質と化学的性質の両方を有する物質を意
味する。

【００４５】本明細書中で使用される場合、配列が第１の配列であるポリヌクレオチドが、
生理的条件下で第２のポリヌクレオチド配列に特異的に結合するか、または特異
的にハイブリダイズする場合、第１の配列は第２の配列に関して「アンチセンス
配列」である。

【００４６】本明細書中で使用される場合、「標的ＲＮＡを含む塩基特異的細胞内結合事象
」とは、細胞内における標的ＲＮＡ配列へのオリゴマーの配列特異的結合をいう
。例えば、一本鎖ポリヌクレオチドは、配列が相補的な一本鎖ポリヌクレオチド
に特異的に結合し得る。

【００４７】本明細書中で使用される場合、「ヌクレアーゼ耐性ヘテロ二重鎖」とは、遍在
性の細胞内ヌクレアーゼおよび細胞外ヌクレアーゼによるインビボ分解に耐性で
ある、その相補的標的へのアンチセンスオリゴマーの結合によって形成されたヘ
テロ二重鎖を指す。

【００４８】本明細書中で使用される場合、ｍＲＮＡまたは他の核酸配列に関する用語「標
的」は、造血幹細胞に優先的に発現されるｍＲＮＡまたは他の核酸配列をいう。
優先的に発現されるとは、より分化した細胞において同一の遺伝子が発現される
よりも高い程度、造血幹細胞において標的ＲＮＡが発現される遺伝子由来である
こと、または造血幹細胞に対して特異的でありそしてより分化した細胞において
検出可能ではない発現を意味する。

【００４９】本明細書中で使用される場合、用語「発現の調節」とは、オリゴヌクレオチド
に関して、アンチセンスオリゴヌクレオチド（オリゴマー）が、発現またはＲＮ
Ａの翻訳に干渉することよって、所定のタンパク質の発現を増強または抑制する
能力をいう。増強されたタンパク質発現の場合、アンチセンスオリゴマーはサプ
レッサー遺伝子（例えば腫瘍抑制遺伝子）の発現をブロックし得る。減少された
タンパク質発現の場合、アンチセンスオリゴマーは、所定の遺伝子の発現を直接
ブロックし得るか、またはその遺伝子から転写されたＲＮＡの加速された分解に
寄与し得る。

【００５０】本明細書中で使用される場合、用語「腫瘍」および「癌」とは、増殖制御の喪
失を示し、そして異常に大きな細胞クローンを形成する、細胞をいう。腫瘍また
は癌の細胞は一般的に、接触阻止を喪失し、そして侵襲性であり得、そして／ま
たは転移する能力を有し得る。

【００５１】本明細書中で使用される場合、アンチセンスオリゴマーに関して「有効な量」
とは、単回投与または一連の投与の一部のいずれかとして哺乳動物被験体に投与
される、選択された標的核酸配列の発現を阻害するのに有効な、アンチセンスオ
リゴマーの量をいう。本明細書中で使用される場合、個体または細胞の「処理」
は、個体または細胞の天然の経過を変える試みで使用される、あらゆる型の介入
である。処置は、例えば薬学的組成物の投与を含むがこれに限らず、そして予防
的にか、または病理的な事象の開始または病院因子との接触に続いてかのいずれ
かで行われ得る。

【００５２】本明細書中で使用される場合、用語「改善された治療結果」とは、癌患者に関
して、癌細胞または固形腫瘍の増殖の遅延または縮小、または癌細胞の全細胞数
または全腫瘍負荷量の減少をいう。

【００５３】（ＩＩ．アンチセンスオリゴヌクレオチド）本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチド因子は、標的ｍＲＮＡ配列とのハイ
ブリダイゼーションのためのヌクレオチド塩基を提示するヌクレオチド間骨格結
合によって連結されるヌクレオチドサブユニットを含む。これらの因子の塩基配
列は、造血幹細胞において優先的に発現されるｍＲＮＡの一部に相補的（アンチ
センス）である。優先的に発現されるとは、より分化した細胞において同一の遺
伝子が発現されるよりも高い程度、造血幹細胞において標的ＲＮＡが発現される
遺伝子由来であること、または造血幹細胞に対して特異的でありそしてより分化
した細胞において検出可能ではない発現を意味する。

【００５４】（Ａ．アンチセンスオリゴヌクレオチドの型）１５−２０塩基のアンチセンスオリゴヌクレオチドが、通常哺乳動物ゲノムに
おいて１つの相補的配列を有するのに十分な長さである。それに加えて、少なく
とも１７ヌクレオチド長の長さを有するアンチセンス化合物が、その標的ｍＲＮ
Ａによくハイブリダイズすることが示された（Ｃｏｈｅｎら、１９９１）。

【００５５】アンチセンスオリゴヌクレオチドによる発現の阻害を説明する２つの一般的な
メカニズムが提案された（例えばＡｇｒａｗａｌら、１９９０；Ｂｏｎｈａｍら
、１９９５；およびＢｏｕｄｖｉｌｌａｉｎら、１９９７を参照のこと）。

【００５６】第１に、オリゴヌクレオチドとｍＲＮＡとの間に形成されたヘテロ二重鎖は、
ＲＮアーゼＨ（ｍＲＮＡの切断を導く）の基質である。この種類に属するか、ま
たは属すると提案されたオリゴヌクレオチドは、ホスホロチオエート、ホスホト
リエステル、およびホスホジエステル（未修飾「天然」オリゴヌクレオチド）を
含む。そのような化合物は一般的に高い活性を示し、そしてホスホロチオエート
は現在、アンチセンス適用において最も広く採用されているオリゴヌクレオチド
である。しかし、これらの化合物は、細胞タンパク質に対する非特異的結合（Ｇ
ｅｅら、１９９８）、および非標的ＲＮＡヘテロ二重鎖の不適当なＲＮアーゼ切
断（Ｇｉｌｅｓら、１９９３）による望ましくない副作用を産生しがちである。

【００５７】「立体ブロッカー」またはあるいは「ＲＮアーゼＨ不活性」または「ＲＮアー
ゼＨ耐性」と呼ばれる、２番目の種類のオリゴヌクレオチドアナログは、ＲＮア
ーゼＨの基質として作用することが観察されておらず、そして標的ＲＮＡの形成
、核細胞質輸送、または翻訳を立体的に阻害することによって作用すると考えら
れる。この種類は、メチルホスホネート（Ｔｏｕｌｍｅら、１９９６）、モルホ
リノリゴヌクレオチド、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、２’−Ｏ−アリル修飾オリゴ
ヌクレオチドまたは２’−Ｏ−アルキル修飾オリゴヌクレオチド（Ｂｏｎｈａｍ
、１９９５）、およびＮ３’Ｐ５’ホスホロアミデート（Ｇｅｅ、１９９８）を
含む。

【００５８】天然に存在するオリゴヌクレオチドは、ヌクレアーゼによる分解に感受性のホ
スホジエステル骨格を有するが、この骨格の特定の修飾は、そのような分解に対
する天然オリゴヌクレオチドの耐性を増加させる（例えばＳｐｉｔｚｅｒおよび
Ｅｃｋｓｔｅｉｎ、１９８８を参照のこと）。

【００５９】候補アンチセンスオリゴマーを、それぞれ³Ｈ−ロイシンおよび³Ｈ−チミジン
の取り込みによって測定される、タンパク質およびＤＮＡ合成に対する影響のよ
うな、急性および慢性の細胞毒性に関して、周知の方法によって評価する。それ
に加えて、様々なコントロールオリゴヌクレオチド、例えばセンス、ナンセンス
、またはスクランブルアンチセンス配列、またはミスマッチ塩基を含む配列を、
候補アンチセンスオリゴマーの結合特異性を確認するために。そのような試験の
結果は、遺伝子発現の特異的なアンチセンス阻害効果を無差別の抑制から見分け
るために重要である（例えばＢｅｎｎｅｔｔら、１９９５を参照のこと）。よっ
て、アンチセンスオリゴマーの非標的配列への非特異的結合を制限するために、
配列を必要なだけ修飾し得る。

【００６０】標的ＲＮＡとのヘテロ二重鎖の形成における、所定のアンチセンスオリゴマー
分子の有効性を、当該分野で公知のスクリーニング法によって決定し得る。例え
ば、オリゴマーを、を発現する細胞培養とインキュベートし、そして標的ＲＮＡ
に対する効果を、（１）当業者に公知の手順を用いて、標的配列および非標的配
列とのヘテロ二重鎖形成の存在または非存在をモニターするか、（２）ＲＴ−Ｐ
ＣＲまたはノーザンブロットのような標準的な技術によって決定される標的ｍＲ
ＮＡの量をモニターするか、または（３）ＥＬＩＳＡまたはウェスタンブロッテ
ィングのような標準的な技術によって決定される標的タンパク質の量をモニター
することによって評価する。（例えばＰａｒｉら、１９９５；Ａｎｄｅｒｓｏｎ
ら、１９９６を参照のこと）本発明の方法で使用する典型的なアンチセンスオリゴマーは、モルホリノオリ
ゴマー（図２Ａ−Ｄ）、ペプチド核酸およびメチルホスホネートオリゴマーを含
む。

【００６１】（１．モルホリノアンチセンスオリゴヌクレオチド）好ましいアンチセンスオリゴヌクレオチドは、実質的に荷電していない骨格を
有するヌクレアーゼ耐性オリゴマーであり、そして特に選択されたｍＲＮＡ標的
配列の領域に相補的な塩基配列に加えて、オリゴマーのヌクレオチドサブユニッ
トと、標的ＲＮＡとオリゴマーとの相補的塩基間のワトソン−クリック塩基対形
成によってオリゴマーが標的ＲＮＡ配列に結合し得るような、それらの間の結合
とによって規定されるオリゴマー骨格を有するモルホリノオリゴマーである。

【００６２】モルホリノオリゴマーの合成、構造および結合の特徴は、米国特許第５，６９
８，６８５号、同第５，２１７，８６６号、同第５，１４２，０４７号、同第５
，０３４，５０６号、同第５，１６６，３１５号、同第５，５２１，０６３号お
よび同第５，５０６，３３７号に詳述されている。

【００６３】好ましいオリゴマーは、上記で引用した特許で示された形式のモルホリノサブ
ユニットから構成され、ここで（ｉ）モルホリノ基は、１から３原子長の、１つ
のサブユニットのモルホリノ窒素を隣接するサブユニットの５’環外炭素に連結
している、実質的に荷電していない結合によって結合しており、そして（ｉｉ）
モルホリノ基に結合している塩基は、塩基特異的水素結合によってポリヌクレオ
チドの塩基に結合するのに有効な、プリンまたはピリミジン塩基対形成部分であ
る。プリンまたはピリミジン塩基対形成部分は、典型的にはアデニン、シトシン
、グアニン、ウラシルまたはチミンである。そのようなオリゴマーの調製は、米
国特許第５，１８５，４４４号（ＳｕｍｍｅｒｔｏｎおよびＷｅｌｌｅｒ、１９
９３）に詳しく記載されている。様々な型の非イオン性結合を、モルホリノ骨格
を構築するために使用し得る。モルホリノオリゴマーは、非特異的アンチセンス
活性を示さないかまたはほとんど示さず、良好な水溶性を与え、ヌクレアーゼに
反応を示さず、そして低い製造コストを有するように設計される（Ｓｕｍｍｅｒ
ｔｏｎおよびＷｅｌｌｅｒ、１９９７ｂ）。

【００６４】（２．ペプチド核酸（ＰＮＡ））天然に存在するオリゴヌクレオチドに見られるホスホジエステル骨格は、強力
な構造ＤＮＡ模倣物に必須ではなく、そして２重らせん構造に必要でさえないこ
と、そしてペプチド核酸またはタンパク質核酸（ＰＮＡ）が有効なＤＮＡ模倣物
として機能し得ることが示された（Ｎｉｅｌｓｅｎ、１９９５）。

【００６５】ＰＮＡは、骨格が構造的にデオキシリボース骨格と類似形のＤＮＡアナログで
ある。それは、Ｎ−（２−アミノエチル）グリシンユニットからなり、それにピ
リミジンまたはプリン塩基が結合している。天然ピリミジンおよびプリン塩基を
含むＰＮＡは、ワトソン−クリック塩基対形成ルールに従って、相補的なオリゴ
ヌクレオチドにハイブリダイズし、そして塩基対認識に関してＤＮＡを模倣する
（Ｅｇｈｏｌｍら、１９９３）。ＰＮＡの骨格は、ホスホジエステル結合ではな
くペプチド結合で形成され、それらをアンチセンス適用にふさわしくする。その
骨格は荷電しておらず、通常より高い熱安定性を示すＰＮＡ／ＤＮＡ二重鎖また
はＰＮＡ／ＲＮＡ二重鎖を生じる。ＰＮＡは、ヌクレアーゼまたはプロテアーゼ
によって認識されない。しかし、ＰＮＡアンチセンス薬剤は、おそらく細胞への
取り込み（輸送）のために、細胞培養において遅い膜通過を示すことが観察され
た（例えばＡｒｄｈａｍｍａｒＭら、１９９９を参照のこと）。

【００６６】（３．メチルホスホネートオリゴヌクレオチド）メチルホスホネートオリゴヌクレオチドは、荷電しておらず、そして従って荷
電したオリゴヌクレオチドに比べて増強された細胞取り込みを示すことが予測さ
れる（Ｂｌａｋｅら、１９８５）。しかし、メチルホスホネートアンチセンスオ
リゴマーは、インビトロでＮ−ｒａｓの発現を阻害できないことが示された（Ｔ
ｉｄｄら、１９８８）。対照的に、いくつかの癌遺伝子ｍＲＮＡのインビトロに
おける翻訳は、ホスホジエステルアンチセンスオリゴヌクレオチドおよび／また
はホスホロチオエートアンチセンスオリゴヌクレオチドによって首尾良くブロッ
クされることが示された（：ＭｃＭａｎａｗａｙら、１９９０；Ｗａｔｓｏｎら
、１９９１；ｂｃｌ−２：Ｒｅｅｄら、１９９０；ｍｙｂ：Ｃａｌａｂｒｅｔｔ
ら、１９９１；ｂｃｒ−ａｂ：Ｓｚｃｚｙｌｉｋら、１９９１）。メチルホスホ
ネートオリゴマーの合成は複数の工程を必要とし、それは臨床適用においてその
ような構造を使用する、実用的な有用性を制限し得る。

【００６７】（４．好ましいアンチセンスオリゴマー）目的の遺伝子の関連する領域から転写されるｍＲＮＡが、一般的にアンチセン
スオリゴヌクレオチドの標的となるが、いくつかの場合には、二重鎖ＤＮＡの主
溝部位への配列特異的結合のために設計された非イオン性プローブを用いて、二
本鎖ＤＮＡが標的となり得る。そのような型のプローブは、米国特許第５，１６
６，３１５号（ＳｕｍｍｅｒｔｏｎおよびＷｅｌｌｅｒ、１９９２）に記載され
ており、そして一般的に本明細書中で、標的遺伝子の発現を阻害する能力に関し
て、アンチセンスオリゴマーと呼ばれる。

【００６８】本発明の方法において、アンチセンスオリゴマーは、３７℃より実質的に高い
、例えば少なくとも５０℃および好ましくは６０℃−８０℃のＴｍで、生理的条
件下で幹細胞（例えば、ＨＳＣ）において優先的に発現されるＲＮＡ配列の領域
にハイブリダイズするように設計される。このオリゴマーは、核酸に対して高い
結合親和性を有するように設計され、そして標的配列に１００％相補的であり得
るか、またはオリゴマーと標的配列との間に形成されるヘテロ二重鎖が、細胞か
ら体液への移行の間に、細胞ヌクレアーゼの作用および他の方式の分解に耐える
のに十分安定である限り、例えば対立遺伝子変異体を適応させるように、ミスマ
ッチを含み得る。ミスマッチは、もし存在するなら、ハイブリッド二重鎖の中心
よりも末端領域に向かってより不安定ではない。許されるミスマッチの数は、二
重鎖安定性のよく理解された原則に従って、オリゴマーの長さ、二本鎖中でのＧ
：Ｃ塩基対の割合、および二重鎖におけるミスマッチの位置に依存する。

【００６９】そのようなアンチセンスオリゴマーは、標的配列に１００％相補的である必要
はないが、その標的の発現が調節されるように、標的配列に安定におよび特異的
に結合することが有効である。良好な特異性とあわせて安定で有効な結合を可能
にするオリゴマーの適当な長さは、約８−４０ヌクレオチド塩基ユニット、およ
び好ましくは約１２−２５ヌクレオチドである。標的との塩基対特異性は維持さ
れると仮定して、標的塩基との縮重塩基対形成を可能にするオリゴマー塩基も企
図される。

【００７０】一般的に、本発明のアンチセンス法を用いた遺伝子発現の調節のための標的は
、幹細胞において優先的に発現されるｍＲＮＡを含む。しかし、いくつかの場合
には、１つ以上のイニシエーターまたはプロモーター部位、イントロンまたはエ
キソン連結部位、３’非翻訳領域、および５’非翻訳領域を含む、そのｍＲＮＡ
の他の領域が標的となり得る。それに加えて、スプライシングされたおよびされ
ていないＲＮＡがどちらも、本発明の方法で使用するアンチセンスオリゴマーを
設計するための鋳型となり得る。

【００７１】要約すると、上記のように本発明のアンチセンスオリゴマーは、一般に、幹細
胞において優先的に発現されるｍＲＮＡの開始コドンにまたがる配列を有し、こ
のことは、この化合物が、ＡＵＧｍＲＮＡ開始部位ならびに隣接５’塩基およ
び隣接３’塩基を含む標的ＲＮＡの領域に対して相補的な配列を含むことを意味
する。この化合物が指向されるｍＲＮＡの領域はまた、標的配列として本明細書
中でいわれる。アンチセンスが結合するｍＲＮＡは、プロセシング前（スプライ
シング前）のｍＲＮＡであり得、この場合、アンチセンス化合物は正確なスプラ
イシングに干渉するように働き、翻訳されたタンパク質の短縮型形態を導き得る
か、またはプロセシングされたｍＲＮＡに結合して翻訳の阻害を導き得る。

【００７２】本発明の方法で使用する好ましいアンチセンスオリゴマーは、好ましくは以下
のものを含む１つ以上の性質を有する：（１）実質的に荷電していない骨格（例
えばＵｈｌｍａｎｎら、１９９０）、（２）標的ＲＮＡの相補的配列と高い親和
性で、すなわち３７℃より実質的に高い、好ましくは少なくとも５０℃、そして
典型的には６０℃−８０℃またはそれより高いＴｍでハイブリダイズする能力、
（３）少なくとも８塩基、一般的には約８−４０塩基、好ましくは１２−２５塩
基のサブユニットの長さ、（４）ヌクレアーゼ耐性（Ｈｕｄｚｉａｋら、１９９
６）および（５）（ｉ）ホスホロチオエートアンチセンスオリゴマーとの競合的
結合、および／または（ｉｉ）検出可能なリポーターを細胞内へ輸送する能力に
よって示されるような、能動輸送能力または促進輸送能力。

【００７３】好ましい局面では、アンチセンスオリゴマーは、以下にさらに示されるように
、配列番号１〜配列番号７、および配列番号１０〜配列番号１２からなる群より
選択される配列を含む。

【００７４】（ＩＩＩ．造血幹細胞組成物）（Ａ．造血幹細胞を得る方法）成体において、多能性造血幹細胞の大多数が骨髄中で見られる。しかしながら
、少数だが、かなりの数のこのような細胞が末梢循環、肝臓、および脾臓におい
て見出され得る。

【００７５】本発明の方法に使用する造血幹細胞はヒト骨髄、ヒト新生児臍帯血、胎児肝臓
、または適切な動員後の成人ヒト末梢血由来でありうる。

【００７６】サイトカインを含む特定の化合物で被験体を処理することにより、造血幹細胞
の頻度が劇的に増加し得る。主に、移植がより迅速に行うことができるので、そ
のような動員された処理末梢血造血幹細胞は、移植手順において骨髄由来造血幹
細胞に対する重要な代替物となっている。（Ｔａｎａｋａ，ら、１９９９を参照
すること。）例えば、一つ以上の顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、幹細
胞因子（ＳＣＦ）、トロンボポエチン（ＴＰＯ）および化学療法薬剤（つまり、
シクロホスファミド）を使用してそのような動員を達成し得る。

【００７７】造血幹細胞単離に関する多くの方法が当該分野で既知であり、これには、一般
に、骨髄、新生児臍帯血、胎児肝臓または成人ヒト末梢血からの造血幹細胞獲得
が含まれる。一旦獲得したら、密度勾配分離、または、パンニング法、ＦＡＣＳ
および磁気ビーズ分離などのような技術によるポジティブまたはネガティブ選択
を用いた免疫アフィニティー精製の一つ以上を行い、造血幹細胞集団を濃縮する
。そのような濃縮するステップに続いて、その細胞集団を表現型に関して、およ
び機能面に関してさらに特徴付ける。

【００７８】密度勾配で濃縮した、系統の枯渇した骨髄細胞の画分を選択すること、および
更に、ＤＮＡ結合色素（Ｈｏｅｃｈｓｔ３３３４２）に低レベルで結合し、ミト
コンドリア結合色素（Ｒｈｏｄａｍｉｎｅ１２３）（Ｗｏｌｆら、１９９３）に
低レベルで結合する細胞に対する１ステップ蛍光表示式細胞分取器（ＦＡＣＳ）
分画化に基づいた細胞集団を選択することにより、高増殖能コロニー形成細胞（
ＨＰＰ−ＣＦＣ，インビトロ）の特徴を持つ始原的造血細胞を単離し得るという
ことが先行研究により示されている。最近、ＨＰＰ−ＣＦＣの規定された部分集
団が移植可能であり、ＨＰＰ−ＣＦＣを生じる細胞の部分集団が、エキソビボで
複製し得るＬＴＲ−ＨＳＣであることが示されている（例えば、Ｙａｇｉら、１
９９９を参照のこと）。

【００７９】（Ｂ．造血幹細胞組成物の特徴付け）造血幹細胞は、歴史的に、自己再生可能であり、そして任意の造血系統の娘細
胞を生じる能力を保持し得る、移植可能細胞として定義されてきた。系統を方向
付けられた前駆細胞は、造血幹細胞由来のより分化した細胞として定義される。

【００８０】造血幹細胞を特徴付ける表現型マーカーが、広範な議論および多くの刊行物に
おける主題であった。今までのところ、どのマーカーがマウスまたはヒトの造血
幹細胞に対して決定的なものであるかということに関して意見の一致がみられて
いない。

【００８１】本明細書中で、ＣＤ３４抗原発現についてネガティブであり、ＣＤ１１７（ｃ
−ｋｉｔ）抗原発現についてポジティブであり、ＤＮＡ結合色素Ｈｏｅｃｈｓｔ
３３３４２（Ｈｏ−３３３４２）およびミトコンドリア結合色素であるＲｈｏｄ
ａｍｉｎｅ１２３（Ｒｈ−１２３）（Ｗｏｌｆら、１９９３）との低レベル結合
性を示す、密度勾配により濃縮された系統枯渇された骨髄細胞の蛍光表示式細胞
分取器（ＦＡＣＳ）による選択を行い、ＬＴＲ−ＨＳＣをマウスから単離し、特
徴付けしている。この単離細胞集団が移植可能であり、非分画化骨髄細胞と共に
移植した場合、致死的放射線照射したレシピエントでの再増殖が可能であること
が示されている。

【００８２】ＳＴＲ−ＨＳＣ集団を、ＦＡＣＳ分取により選択し得、系統のマーカーを発現
せず（ｌｉｎ−）、ｃ−ｋｉｔ（ＣＤ１１７）、ＳｃａｌおよびＣＤ３４に関し
てポジティブで、ＤＮＡ結合色素Ｈｏｅｃｈｓｔ３３３４２（Ｈｏ−３３３４２
）に対して低レベル結合性を示し、ミトコンドリア結合色素であるＲｈｏｄａｍ
ｉｎｅ１２３（Ｒｈ−１２３）に対して高レベル結合性を示す、軽密度勾配濃縮
された骨髄細胞として、本明細書中で、表現型の面で定義する。

【００８３】造血幹細胞を検出および特徴付けするために使用する機能的読み出しには、細
胞培養における（インビトロ）特定のアッセイ条件下でコロニーを形成する能力
が含まれる。典型的な圧制には、長期間培養開始細胞（ＬＴＣＩＣ）アッセイ（
ＰｅｔｔｅｎｇｅｌｌＲら、１９９４）および、高増殖能コロニー形成細胞（
ＨＰＰ−ＣＦＣ）アッセイが含まれる。（例えば、Ｙａｇｉら、１９９９を参照
すること。）。上記のように、さらなる機能的特徴付けには、長期再増殖造血幹
細胞（ＬＴＲ−ＨＳＣ）および短期再増殖造血幹細胞（ＳＴＲ−ＨＳＣ）につい
てのインビボアッセイが含まれる。

【００８４】造血幹細胞は、しばしば、上記で定義したように、高増殖能コロニー形成細胞
（ＨＰＰ−ＣＦＣ）圧制における活性により機能的に特徴付けられる。

【００８５】ＨＰＰ−ＣＦＣは以下により特徴付けされる：（１）インビボでの、細胞毒性
を持つ薬剤である５−フルオロウラシル処理に対する相対的耐性、（２）致死的
放射線照射されたマウスの骨髄を再増殖可能な細胞との高い相関性、（３）適切
な条件下でマクロファージ、顆粒球、巨核球および赤血球系統の細胞を生じる能
力、および（４）多因子反応性（例えば、ＭｃＮｉｅｃｅ，１９９０を参照する
こと）。

【００８６】本発明の方法に使用する造血幹細胞は、実施例１で記載するように、濃縮され
る。実施例２でさらに記載するように、それらの細胞は、また、ＨＰＰ−ＣＦＣ
アッセイ（インビトロ）およびＬＴＲ−ＨＳＣｓ（インビボ）についてのアッセ
イにおいても機能的に特徴付けされた。

【００８７】造血幹細胞培養に対する好適なサイトカインには、一つ以上のインターロイキ
ン３（ＩＬ−３）、インターロイキン（ＩＬ−６）、インターロイキンー１１（
ＩＬ−１１）、インターロイキンー１２（ＩＬ−１２）、幹細胞因子（ＳＦＣ）
、例えばＷＯ９１／０５７９５で記載されている初期作用性造血因子（ｅａｒｌ
ｙａｃｔｉｎｇｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｆａｃｔｏｒ）、およびトロ
ンボポエチン（ＴＰＯ）が含まれる。

【００８８】完全な免疫抑制後のマウスＬＴＲ−ＨＳＣを用いた長期再形成（ｒｅｃｏｎｓ
ｔｉｔｕｔｅ）には、これにより長期再増殖細胞が宿主を再増殖するのに十分に
分化するまで完全に免疫抑制された宿主を生存させることを可能にする最初の（
持続しないが）移植を提供するために、あまり分化していない長期再増殖細胞と
ともに非分画化骨髄細胞を移植することが必要であることが示された（例えば、
Ｊｏｎｅｓら、１９９０を参照すること）。ＬＴＲ−ＨＳＣは完全免疫抑制後の
宿主の造血系を効果的に再増殖するために数ヶ月を要し得る。

【００８９】モノクローナル抗体をドナー細胞とレシピエント細胞との区別を行うために使
用し得るような、つまりＦＡＣＳ解析および／またはＦＡＣＳ分取によって区別
し得るようなＣＤ４５遺伝子座で類似遺伝子的である、ＣＤ４５．１として定義
されるドナー造血幹細胞およびＣＤ４５．２として定義されるレシピエント造血
幹細胞を用いることにより、マウス造血再形成研究においてドナーおよびレシピ
エントの細胞を区別するためにいくつかの方法を開発してきた。そのような検出
方法において、ＣＤ４５．１ドナー細胞分化がレシピエントの造血系再増殖に十
分な程度生じるまでマウスの生存を維持させるために、レシピエントマウスに十
分なＣＤ４５．２ポジティブ骨髄細胞を注入する。ＳＴＲ−ＨＳＣからのＬＴＲ
−ＨＳＣを区別するため、およびレシピエント細胞からドナー細胞を区別するた
めに、そのような方法を使用し得る。

【００９０】一旦、造血幹細胞集団を得たら、その細胞をすぐに使用し得るか、または、そ
の細胞を後に凍結融解し例えば患者への投与に使用し得るように、標準的な条件
下で液体窒素により凍結し長期間保存し得る。その細胞は通常、１０％ＤＭＳＯ
、５０％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）、および４０％細胞培養培地中で保存する。

【００９１】（ＩＶ．核酸標的）本発明は、一般に、細胞の発生または分化に関するヒト遺伝子に対して指向さ
れる合成アンチセンスオリゴヌクレオチド、およびこれらを使用する方法に関す
る。特に、本発明は、幹細胞（好ましくは、造血幹細胞（ＨＳＣ））の分化に関
するヒト遺伝子から転写されたｍＲＮＡに対して指向されるアンチセンスオリゴ
ヌクレオチドに関する。

【００９２】より発達した細胞においてよりも幹細胞において高度に発現される例示的な遺
伝子は、実施例１にさらに記載されるような当業者によって慣用的に使用される
技術を使用して、表示的（ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎａｌ）差示的分析（Ｒ
ＤＡ）および遺伝子発現フィンガープリンティング（ＧＥＦ）によって同定され
た（例えば、ＭａｔｚＭＶおよびＬｕｋｙａｎｏｖＳＡ、Ｎｕｃｌｅｉｃ
ＡｃｉｄｓＲｅｓ２６（２４）：５５３７−４３，１９９８を参照のこと）
。

【００９３】本発明を実施するために好ましいアンチセンス標的は、幹細胞に優先的に発現
される転写物（例えば、ＥＶＩ−１ジンクフィンガー遺伝子、血清除去応答遺伝
子、マルチメリン遺伝子、組織トランスグルタミナーゼ遺伝子、ＦＥ６５遺伝子
、ＲＡＢ２７遺伝子、Ｊａｇｇｅｄ２遺伝子、Ｎｏｔｃｈ１遺伝子、Ｎｏｔｃｈ
２遺伝子、およびＮｏｔｃｈ３遺伝子）を含む。特に興味深いものは、ヒト造血
幹細胞において優先的に発現されるこれらの配列である。

【００９４】一般に、本発明のアンチセンスオリゴマーを使用する遺伝子発現の調節につい
ての標的は、目的の所定の遺伝子についてのｍＲＮＡ翻訳開始コドンにわたる配
列を含む。しかし、いくつかの場合において、イニシエータ部位またはプロモー
ター部位、イントロンまたはエクソン連結部位、３’−非翻訳領域ならびに５’
−非翻訳領域の１つ以上を含むｍＲＮＡの他の領域が、標的化され得る。さらに
、スプライシングされたＲＮＡおよびスプライシングされなかったＲＮＡの両方
は、本明細書中に記載されるアンチセンスオリゴマーに対する標的として働き得
る。

【００９５】ジンクフィンガータンパク質コード遺伝子は、細胞の増殖および分化の制御に
関与し、したがって候補癌遺伝子であることが示された。ジンクフィンガー遺伝
子（例えば、ＥＶＩ−１）は、種々の腫瘍型（マウスおよびヒトの骨髄性白血病
を含む）に関連した（Ｍｏｒｉｓｈｉｔａら、１９９８；Ｆｉｃｈｅｌｓｏｎら
、１９９２）。造血細胞の終末分化はまた、ジンクフィンガー遺伝子発現のダウ
ンレギュレーションに関与した。ＥＶＩ−１遺伝子は、本来異所性のウイルス挿
入部位として検出され、そして核ジンクフィンガーＤＮＡ結合タンパク質をコー
ドする。ＥＶＩ−１遺伝子は、いくつかの白血病およびリンパ腫を含む造血悪性
疾患において過剰発現される（Ｏｈｙａｓｈｉｋｉら、１９９４；Ｔｏｙａｍａ
ら、１９９６）。さらに、ＥＶＩ−１ＲＮＡ発現またはタンパク質発現は、以
下において検出された：腎細胞株；子宮内膜癌細胞株；正常マウス卵母細胞；腎
細胞；急性骨髄性白血病（ＡＬＭ）および脊髄形成異常のサブセット；卵巣腫瘍
、正常卵巣および卵巣の細胞株；一般的遺伝疾患であるユーイング肉腫；および
種々の他の非造血性の癌（例えば、Ｂｒｏｏｋｓら、１９９６）。ＥＶＩ−１は
、その過剰発現、構成的発現または構造変化がヒト白血病の発達において役割を
担い得る、関連する癌遺伝子であることが示唆されている（Ｏｇａｗａら、１９
９６）。

【００９６】本発明の実施における使用のためのＥＶＩ−１に対する例示的オリゴマーアン
チセンスは、配列番号１として示され、そしてＧｅｎＢａｎｋアクセッション番
号Ｓ６９００２（ヒト、ヌクレオチド２６５０−２６７０）およびＭＭＥＶＩ１
Ａ（マウス、ヌクレオチド２５６−２７６）で見出される配列に基づいて設計さ
れた。

【００９７】ホスファチジルセリン結合タンパク質をコードするヒト血清除去応答遺伝子（
ＳＤＲ）は、クローニングされ、そしてヒトゲノムにおいて２ｑ３２〜ｑ３３に
マップされた（Ｇｕｓｔｉｎｃｉｃｈら、１９９９）。マウス系に類似して、イ
ンビトロでのＳＤＲｍＲＮＡ発現は、血清枯渇したヒト線維芽細胞において増
加され、そして同調性の細胞周期再エントリーの間にダウンレギュレートされる
。ＳＤＲは、心臓および肺において見出される最大レベルを有して、広範な種々
のヒト組織において発現される。

【００９８】本発明の実施における使用のためのＳＤＲに対する例示的オリゴマーアンチセ
ンスは、配列番号２として示され、そしてＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｓ
６７３８６（マウス、ヌクレオチド１０９−１２８）で見出される配列に基づい
て設計された。

【００９９】マルチメリンは、独特のｃＤＮＡ配列を有する高分子量タンパク質である。こ
れは、血小板、巨核球および内皮細胞中に蓄えられ、そして接着性タンパク質ま
たは細胞外マトリクスタンパク質として機能するようである。マルチメリンは、
生合成の間に広範囲のＮグリコシル化、蛋白質分解プロセシングおよび重合を受
け、そして大きな、変動性のサイズのホモマルチマーを形成する鎖間（ｉｎｔｅ
ｒｃｈａｉｎ）ジスルフィド結合によって連結されるサブユニットからなる（Ｈ
ａｙｗａｒｄおよびＫｅｌｔｏｎ，１９９５；Ｈａｙｗａｒｄ１９９７）。

【０１００】本発明の実施における使用のためのマルチメリンに対する例示的オリゴマーア
ンチセンスは、配列番号３として示され、そしてＧｅｎＢａｎｋアクセッション
番号Ｕ２７１０９（ヒト、ヌクレオチド６０−８０）で見出される配列に基づい
て設計された。

【０１０１】組織トランスグルタミナーゼは、アポトーシスの間に誘導されそして活性化さ
れる酵素である。これは、潜伏性のＴＧＦ−βを活性型に変換することが示され
（Ｎｕｎｅｓら、１９９７）、そして細胞内タンパク質のＣａ（２＋）依存性架
橋に関連し、細胞内にＳＤＳ不溶性タンパク質足場（ｓｃａｆｆｏｌｄ）の形成
を導き、プログラム化された細胞死を起こす。抗体を使用してオートクラインで
ＨＳＣの表面に発現したＴＧＦ−βをブロックした場合、細胞は、増殖因子の非
存在下で生存することが見出された。アンチセンスの方向にある、組織トランス
グルタミナーゼについてのｃＤＮＡでのヒト細胞のトランスフェクションは、自
然なおよび誘導されたアポトーシスの減少を生じることが示されている（Ａｕｔ
ｕｏｒｉら、１９９８）。

【０１０２】本発明の実施における使用のためのトランスグルタミナーゼに対する例示的オ
リゴマーアンチセンスは、配列番号４として示され、そしてＧｅｎＢａｎｋアク
セッション番号Ｓ８１７３４（ヒト、ヌクレオチド１２３−１４２）で見出され
る配列に基づいて設計された。

【０１０３】ＦＥ６５は、アルツハイマーβアミロイドタンパク質前駆体（ＡＰＰ）に結合
する脳に豊富なタンパク質であり、これは、蛋白質分解プロセッシング後に、ア
ルツハイマーのアミロイド斑の主要な成分であるＡβに変換される。ＦＥ６５と
ＡＰＰとの相互作用を阻害する因子は、アミロイド斑形成を阻止または遅延しえ
ることが示唆された（Ｓａｂｏ，１９９９；Ｒｕｓｓｏ，１９９８）。

【０１０４】本発明の実施における使用のためのＦＥ６５に対する例示的オリゴマーアンチ
センスは、配列番号５として示され、そしてＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号
Ｌ７７８６４（ヒト、ヌクレオチド９２−１１１）で見出される配列に基づいて
設計された。

【０１０５】ＲＡＢ２７遺伝子は、Ｒａｍ（Ｒａｂ２７とも呼ばれる）として同定された細
胞質のタンパク質をコードする。これは、膜アンカーおよび特定のタンパク質−
タンパク質相互作用の決定基として働く、ＧＴＰ結合タンパク質のファミリーの
プレニル化されたメンバーである（Ｎａｇａｔａ，１９８９）。これらは、血小
板、メラノサイト、および特定の他の組織における分泌経路およびエンドサイト
ーシス経路での小胞輸送を調節することが示され、そしてコロイデレミアにおけ
る網膜の分解に関連することが見い出された（Ｓｅａｂｒａら、１９９５）。

【０１０６】本発明の実施における使用のためのＲＡＢ２７に対する例示的オリゴマーアン
チセンスは、配列番号６として示され、そしてＧｅｎＢａｎｋアクセッション番
号ＡＦ１２５３９３（ヒト、ヌクレオチド２２７−２４６）で見出される配列に
基づいて設計された。

【０１０７】Ｎｏｔｃｈシグナル伝達経路は、線虫からヒトまでの範囲にわたる動物におけ
る細胞の分化の制御に関係した。研究は、Ｊａｇｇｅｄ２遺伝子が、Ｎｏｔｃｈ
１と相互作用する膜結合型レセプターをコードし、そして前駆細胞（ｐｒｏｇｅ
ｎｉｔｏｒｃｅｌｌ）の分化を同調するようにインビボで機能し得ることを示
した（Ｌｕｏら、１９９７）。ヒトにおいて、ｎｏｔｃｈシグナリングはまた、
白血病ならびにＡｌａｇｉｌｌｅおよびＣＡＤＡＳＩＬとして公知の２つの遺伝
性症候群において関係した。Ｎｏｔｃｈリガンド（ヒトＪａｇｇｅｄ２（ＨＪ２
））を含む）は、特定の新生物性組織においてアップレギュレートされることが
見出された（Ｇｒａｙら、１９９９）。

【０１０８】本発明の実施における使用のためのＪａｇｇｅｄ２に対する例示的オリゴマー
アンチセンスは、配列番号７として示され、そしてＧｅｎＢａｎｋアクセッショ
ン番号ＡＦ００３５２１（ヒト、ヌクレオチド２２−４１）で見出される配列に
基づいて設計された。

【０１０９】Ｎｏｔｃｈ遺伝子ファミリーのメンバーは、多くの系において多能性前駆体に
よって細胞の運命決定を媒介することが示された。ＴＡＮ−１（Ｎｏｔｃｈ１）
はＣＤ３４＋造血前駆体に発現されることが示された（例えば、Ｍｉｌｎｅｒ
ＬＡら、１９９４、ならびにＭｉｌｎｅｒＬＡおよびＢｉｇａｓＡ，１９９
９を参照のこと）。

【０１１０】Ｎｏｔｃｈ２、Ｎｏｔｃｈ３およびＮｏｔｃｈ１にアンチセンスな例示的オリ
ゴマーは、それぞれ配列番号１０、配列番号１１および配列番号１２であり、本
発明の実施における使用のために、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｘ８０１
１５およびＸ７９４３９（ヒト：ヌクレオチド２１５−２３５およびヌクレオチ
ド１−２０）ならびにＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＡＪ２３８０２９（マ
ウス：ヌクレオチド２３１−２５０）で認められる配列に基づいて設計された。
本発明の実施における使用のための例示的なヒトＮｏｔｃｈ１オリゴマーは、Ｇ
ｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｍ７３９８０で認められる配列に基づいて設計
され得る。

【０１１１】（Ｖ．本発明の方法および組成物）本発明は、高いＴｍ、細胞へ能動的に容易に輸送され得るか、または細胞への
輸送が促進され得る、高アフィニティーで相補的または相補的に近い、核酸配列
と結合可能であるという特徴を持つ、安定で、実質的に電荷を持たないアンチセ
ンスオリゴマーを幹細胞へ適用可能であり、また、インビトロまたはインビボの
いずれかで被験者において、その細胞での標的核酸の発現が調節され、その結果
細胞発生が調節されるという発見に基づいたものである。１つの好ましい手法に
おいて、標的は、幹細胞（好ましくは、ＨＳＣ）に優先的に発現されるｍＲＮＡ
に対するｍＲＮＡ翻訳開始コドンにわたる配列である。

【０１１２】多くの癌治療レジメンにより、患者の免疫抑制が引き起こされ、患者は感染に
対して防御不可能な状態となる。免疫抑制に対する補助的な治療には、患者が感
染因子にさらされないように患者を保護的に隔離すること、例えば抗ウイルス剤
および抗真菌剤などの抗生物質投与、および／または貧血、血小板減少症（低血
小板数）、または好中球減少症（低好中球数）を治療するための断続的な輸血が
含まれ得る。

【０１１３】多数の形の癌を含む様々な障害の処置に対して、化学療法および／または放射
線療法と組み合わせて、末梢血および／または骨髄由来の造血幹細胞移植が益々
使用される。

【０１１４】造血幹細胞を濃縮した細胞集団を用いる現在の移植手順および／または骨髄移
植はまた、特に好中球および血小板不足をしばしば起こす患者において、患者の
造血系が、移植した後、再構築されるまでに過剰な時間を要するという問題を抱
えている。

【０１１５】好中球は、感染に対する宿主の保護に関連するものである。しばしば、化学療
法または放射線治療後に、およそ３−４週間の間、またはそれ以上の期間にわた
って患者は好中球数が不足し、その結果、易感染状態になる。

【０１１６】傷害を受けた部位での効果的な血液凝固のために血小板が必要である。しばし
ば、化学療法、放射線療法、造血幹細胞含有率を高めた細胞集団の移植、または
骨髄移植の後、およそ４−６週間の間、またはそれ以上の期間にわたって患者の
血小板数が不十分になり、その結果、患者は打撲傷が残りやすく、過剰な出血が
起こりやすくなる。

【０１１７】本方法の好ましい適用において、被験体はヒト被験体である。被験体は、癌患
者、特に造血悪性疾患（特に、多能性造血幹細胞の拡張または機能不全（例えば
、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、真性赤血球増加（ＰＶ）、原発性（ｐｒｉｍａ
ｒｙ）骨髄線維症（ＭＥ）、再生不良性貧血、本態性血小板血症（ＥＴ）および
種々の他の型の白血病）によって特徴付けられる悪性疾患）を有するとして診断
された患者であり得る。本発明は、被験体由来の濃縮された幹細胞含有細胞集団
を得、系統を方向付けられた前駆細胞およびそれらの子孫の集団を増加する、お
よび／またはこの細胞集団における癌細胞の総数または腫瘍の総負荷を減少する
ために効果的な条件下で、これらの細胞をエキソビボで上記のアンチセンスオリ
ゴマーの１つ以上に暴露するプロセスによって調製された、アンチセンスオリゴ
マー処理した幹細胞組成物を提供する。

【０１１８】さらに、本発明は、任意の条件の処置（ここで、幹細胞の分化促進が、処置中
の被験体に改善された治療上の成果を生じるために効果的である）に適用可能で
ある。

【０１１９】（Ａ．本発明のアンチセンスオリゴマーでの細胞の処置）造血幹細胞は、本明細書中に記載された方法を使用して移植が必要な患者（例
えば、癌患者）から得られ得、濃縮され得、インビトロ（エキソビボ）で処理さ
れ得、そしてその患者に戻され得る。一般に、このような造血幹細胞移植は、代
表的な治療レジメン（すなわち、放射線治療および／または化学療法）と組合わ
せて実施される。

【０１２０】本方法の実践において、造血幹細胞を、インビトロ（エキソビボ）で、幹細胞
に優先的に発現される核酸配列に対してアンチセンスである１以上のオリゴヌク
レオチドにて処理し、その後、対象者に対して投与し得る。この被験体は、幹細
胞を採取した同じ個人（自己移植）または、異なる個人（同種移植）であり得る
。同種移植において、他方に対するドナーおよびレシピエント細胞両方の免疫反
応を最小限にするために、ドナーおよびレシピエントは、ＨＬＡ抗原の類似性に
基づいて適合させられる。

【０１２１】ある局面において、本発明は、ＨＳＣの集団を得て、それらをエキソビボにお
いて、幹細胞に優先的に発現する相補的またはほぼ相補的な核酸配列に対して高
親和性を有する、１以上のヌクレアーゼ耐性アンチセンスオリゴマーに曝露する
ことによって、造血幹細胞の発生を調節する方法に関する。

【０１２２】本発明の方法は、より成熟な表現型へと幹細胞の分化を促進するために適切な
条件下で、本明細書中に記載されたアンチセンスオリゴマーの１つ以上に対して
造血幹細胞に暴露することによって、より分化した細胞（すなわち系統を方向付
けられた前駆細胞およびそれらの子孫）（例えば、単球、顆粒球、血小板、リン
パ球および赤血球）を産生するために効果的である。このようなアンチセンスオ
リゴヌクレオチド処理した幹細胞は、医薬としての有用性、特に被験体において
癌を処置する際の医薬としての使用を認める。

【０１２３】関連した局面において、本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドを使用して
、引き続く患者へのインビボ投与のための、インビトロ（エキソビボ）での特定
の系統の生存可能な細胞数の増加を得うる。一般に、幹細胞は、１以上の本発明
のアンチセンスオリゴヌクレオチドを標的細胞集団の増殖および分化を促進する
ために効果的な１以上の増殖因子とともに含む培地中で培養される。

【０１２４】１つの好ましい実施形態において、エキソビボアンチセンスオリゴマー（例え
ば、ＥＶＩ−１処理した造血幹細胞）を、被験体における癌の処置の際の医薬と
して使用する。本発明はさらに、被験体における癌を処置するための医薬の製造
でのこのような組成物の使用を（例えば、化学療法または放射線治療に引き続く
、患者の循環における好中球および血小板の両方の数を迅速に増加するための手
段として）提供する。

【０１２５】１つの局面において、一旦抽出されそして濃縮されたら、幹細胞（例えば、Ｈ
ＳＣ）は、１以上のサイトカインおよび１以上の本明細書中に記載されるアンチ
センスオリゴマーの存在下でエキソビボで培養され得る。このようなアンチセン
スオリゴマー処理した造血幹細胞組成物は、以下を含むがこれらに限定されない
種々の適用における有用性を認める：特定の系統を方向付けられた前駆細胞およ
びそれらの子孫の集団（すなわち、数）をエキソビボで拡大または増加し、引き
続く被験体へインビボ投与すること、ならびに、癌細胞の増殖を阻害または停止
すること（ここで、癌は造血幹細胞集団に関連する）。

【０１２６】このようなエキソビボ培養について好ましいサイトカインとしては、ＩＬ−３
、ＩＬ−６、ＳＣＦおよびＴＰＯが挙げられる。本発明の方法における使用につ
いての造血幹細胞集団は、好ましくはヒトおよび同種の両方、または自己である
。

【０１２７】幹細胞は、造血幹細胞移植が必要な患者または同種ドナーから得られ得る。

【０１２８】１つの手法において、本発明の方法は、生存可能な分化細胞（例えば、単球、
顆粒球、血小板、リンパ球および赤血球細胞）の数における、アンチセンスオリ
ゴマーに暴露する前に存在する造血幹細胞の数より少なくとも２倍多い増加を生
じる。例示的なアンチセンスオリゴマーは、ＥＶＩ−１ジンクフィンガー遺伝子
、血清除去応答（ＳＤＲ）遺伝子、マルチメリン遺伝子、組織トランスグルタミ
ナーゼ遺伝子、ＦＥ６５遺伝子、ＲＡＢ２７遺伝子、Ｊａｇｇｅｄ２遺伝子、Ｎ
ｏｔｃｈ１遺伝子、Ｎｏｔｃｈ２遺伝子、およびＮｏｔｃｈ３の１つ以上を標的
化する。

【０１２９】好ましくは、本明細書中に記載される方法を使用して、造血肝細胞を１以上の
本発明のアンチセンスオリゴマーに暴露することによって、アンチセンスオリゴ
マーへの暴露の前に存在する系統を方向付けられた前駆細胞およびそれらの子孫
の数と比較して少なくとも４倍〜８倍、そして好ましくは、８倍またはそれ以上
に増加した、分化した細胞集団を生じる。

【０１３０】この実施形態の好ましい局面において、１以上の本発明のアンチセンスオリゴ
マーを伴うＨＳＣの処置によって、アンチセンスオリゴマーへの暴露の前に存在
する特定の系統の細胞数と比較して少なくとも４倍〜８倍、そして好ましくは、
８倍またはそれ以上である特定の系統の細胞数の増加を生じる。

【０１３１】分化されかつ方向付けられた前駆細胞（例えば、単球、顆粒球、血小板、リン
パ球および赤血球）の数の少なくとも２倍、４倍、８倍、または８倍より多い増
加を得、引き続き（本明細書中に記載されるように）１以上のアンチセンスオリ
ゴヌクレオチドに暴露するために必要とされる培養時間は、因子の数に依存して
変動する。産生された細胞の数および品質に影響し得る例示的な因子は、細胞供
給源（組織供給源および細胞が採取される被験体の健康を含む）、培養条件、開
始集団における幹細胞の割合などを含む。

【０１３２】明らかなように、種々の細胞系統の細胞における増加は、造血肝細胞の分化よ
り生じる。特に、多数の好中球および血小板は、本発明の方法を使用して得られ
得る。

【０１３３】一旦、大多数の細胞（すなわち、特定の系統の細胞）を得たら、その細胞をす
ぐに使用し得るか、または、その細胞を後に凍結融解し例えば患者への投与に使
用し得るように、標準的な条件下で液体窒素により凍結し長期間保存し得る。細
胞は通常、１０％ＤＭＳＯ、５０％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）、および４０％細胞
培養液中で保存する。

【０１３４】（Ｂ．インビボでのアンチセンスオリゴマーの投与）別の局面において、本発明は、治療的に有効量のアンチセンスオリゴヌクレオ
チド含有組成物を患者（好ましくは、癌患者）に投与することにより、インビボ
でこの患者における幹細胞の発生を調節する方法に関する。ここで、アンチセン
スオリゴマーは、幹細胞に優先的に発現される遺伝子産物の発現を調節する。

【０１３５】このようなインビボでのアンチセンスオリゴマーの投与はまた、癌細胞もしく
は固形腫瘍の増殖の遅延もしくは減衰、または癌細胞の総数もしくは腫瘍の総負
荷の減少をもたらすことによって、および／あるいは被験体の末梢循環における
系統を方向付けられた前駆細胞およびそれらの子孫の数を増加することによって
、被験体の治療効果を改善するために効果的であり得る。

【０１３６】１つの実施形態において、被験体は、癌と診断された。この実施形態において
、造血幹細胞において優先的に発現される核酸配列に相補的な１つ以上のアンチ
センスオリゴマーは、被験体における癌細胞の総数もしくは腫瘍の総負荷の減少
を生じるために効果的な様式で被験体に投与される。

【０１３７】別の実施形態において、被験体は、増加した数の分化した造血幹細胞（例えば
、好中球および／または血小板）を必要とする（例えば、化学療法または放射線
治療後）。

【０１３８】この実施形態において、造血幹細胞において優先的に発現される核酸配列に相
補的な１つ以上のアンチセンスオリゴマーは、被験体の末梢循環における好中球
および血小板の両方の数の増加を生じるために効果的な様式で被験体に投与され
る。

【０１３９】好ましい手法において、アンチセンスオリゴヌクレオチド組成物は、患者の末
梢血液における系統を方向付けられた前駆細胞およびそれらの子孫の数を、アン
チセンスオリゴヌクレオチド組成物の投与の前に患者の末梢血液において存在す
る系統を方向付けられた前駆細胞およびそれらの子孫の数と比較して少なくとも
２倍、好ましくは４倍、より好ましくは８倍または８倍より高く増加するために
十分な濃度でおよび期間にわたって投与される。このような増加は、系統を方向
付けられた前駆細胞およびそれらの子孫の総数または系統を方向付けられた前駆
細胞およびそれらの子孫の特定の型（例えば、好中球および／または血小板）の
数においてであり得る。

【０１４０】本発明の方法を使用したこのようなアンチセンスオリゴマーの被験体へのイン
ビボ投与は、（１）アンチセンス投与の持続時間、用量および頻度、（２）処置
において使用された１つ以上のアンチセンスオリゴマー、および（３）被験体の
全身状態、に依存して、被験体の末梢循環における系統を方向付けられた前駆細
胞およびそれらの子孫の集団を増加する手段を提供し得る、および／または癌細
胞もしくは固形腫瘍の増殖の遅延または減衰をもたらし得るか、あるいは、癌細
胞の総数または腫瘍の総負荷における減少をもたらし得ることが理解される。

【０１４１】（１．患者の処置）核酸標的へのアンチセンスオリゴマーの効果的な送達は、本発明の方法の重要
な局面である。本発明に従う、このような経路のアンチセンスオリゴマー送達は
、経口経路および非経口経路（例えば、静脈内、皮下的、腹腔内および筋肉内、
ならびに吸入および経皮的送達）を含む種々の全身性経路を含むがこれらに限定
されない。

【０１４２】造血幹細胞にオリゴマーを送達するため、または血流中に薬物を導入するため
に効果的な任意の方法もまた意図されることは明らかである。

【０１４３】アンチセンスオリゴマーの経皮的送達は、例えば局所投与に適応される薬学的
に受容可能なキャリアの使用によって達成され得る。モルホリノオリゴマー送達
の１例は、ＰＣＴ特許出願ＷＯ９７／４０８５４に記載される。

【０１４４】１つの好ましい実施形態において、オリゴマーは、薬学的に受容可能なキャリ
アに含まれ、経口的に送達されるモルホリノオリゴマーである。この実施形態の
さらなる局面において、モルホリノアンチセンスオリゴヌクレオチドは、短期間
にわたる規則的な間隔で（例えば、毎日、２週間以下にわたって）投与される。
しかし、いくつかの場合において、アンチセンスオリゴマーは、長期間にわたっ
て断続的に投与される。

【０１４５】代表的には、アンチセンスオリゴマーの１以上の用量は、一般には、約１週間
または２週間の期間にわたる規則的な間隔で投与される。経口投与についての好
ましい用量は、（成人体重７０ｋｇに基づいて）患者当たり約１ｍｇオリゴマー
〜患者当たり約２５ｍｇオリゴマーである。いくつかの場合において、患者当た
り２５ｍｇオリゴマーより多くの用量が必要であり得る。ＩＶ投与について、好
ましい用量は、患者当たり約０．５ｍｇオリゴマーから患者当たり約１０ｍｇオ
リゴマー（体重７０ｋｇの成人を基にしている）である。

【０１４６】少なくとも２００−４００ｎＭのアンチセンスオリゴマーのピーク血中濃度を
引き起こすのに十分な量のアンチセンス化合物を通常投与する。

【０１４７】通常、本方法には、適切な薬学的担体、目的の核酸標的配列の発現阻害に効果
的なアンチセンス薬剤量での被験者への投与が含まれる。

【０１４８】続いて、生理学的に許容可能な任意の便宜的なビヒクルにおいて本発明のアン
チセンスオリゴヌクレオチド組成を投与し得る。そのようなオリゴヌクレオチド
組成物には、当業者により採用される任意の様々な標準的で生理学的に許容可能
な担体が含まれ得る。そのような薬学的担体の例には、生理食塩水、リン酸緩衝
化生理食塩水（ＰＢＳ）、水、エタノール水溶液、油／水乳濁液のような乳濁液
、トリグリセリド乳濁剤、加湿剤、錠剤およびカプセルが含まれるがこれに限ら
ない。適切な生理学的許容可能な担体の選択が、選択した投与形態に依存して様
々であるということが理解される。

【０１４９】ある例において、細胞へのアンチセンスオリゴヌクレオチド取り込みを促進す
るためにリポソームを使用し得る（例えば、Ｗｉｌｌｉａｍｓ，１９９６；Ｌａ
ｐｐａｌａｉｎｅｎら、１９９４；Ｕｈｌｍａｎｎら、１９９０；Ｇｒｅｇｏｒ
ｉａｄｉｓ，１９７９）を参照のこと）。例えば、ＷＯ９３／０１２８６で記述
されているように、アンチセンスオリゴマー投与のためのビヒクルとしてヒドロ
ゲルをも使用し得る。あるいは、ミクロスフェアまたは微粒子にてオリゴヌクレ
オチドを投与し得る。（例えば、ＷｕおよびＷｕ、（１９８７）を参照すること
）。

【０１５０】この適用の範囲内で、持続的放出組成もまた考慮される。これらには、フィル
ムまたはマイクロカプセルなどのような成形加工品の形を取る半浸透可能なポリ
マー性マトリックスが含まれ得る。

【０１５１】本発明の方法のアンチセンスオリゴヌクレオチドの効果的なインビボ処置レジ
メンが、処置下の被験体の状態ならびに投与頻度および経路に従って様々である
ということが理解される。従って、そのようなインビボ治療は、一般に、治療成
果を最善にするために、処置する状態に適切な試験によってモニターすることお
よび用量または治療レジメンにおける対応する調節が必要である。

【０１５２】本発明は、造血幹細胞をより成熟した表現型への分化を促進するために適切な
条件下で造血幹細胞を本明細書中で記述したアンチセンスオリゴマーに曝露する
ことにより、造血幹細胞（例えば、単球、顆粒球、血小板、リンパ球および赤血
球）からより分化した細胞を産生する方法を提供する。

【０１５３】本発明はさらに、停止期またはＧ₀期由来のＨＳＣを細胞周期に向けて開放す
る手段を提供する。

【０１５４】治療レジメンには、アンチセンスオリゴマー処理した幹細胞の投与、および／
または被験体への本明細書中に記載のアンチセンスオリゴマーの１つ以上の直接
投与が含まれ得る。そのような投与を同時または連続的に行いうる。ある場合に
おいて、同じまたは類似した状態によって診断された個人を処置するために、一
つ以上の化学療法、放射線療法および当業者が代表的に使用する他の薬剤で患者
をさらに処置し得る。そのようなさらなる処置は、被験体へのアンチセンスオリ
ゴの直接投与および／またはアンチセンスオリゴマー処理した幹細胞の投与に関
して同時、連続的または交互であり得る。

【０１５５】（２．処置のモニタリング）例えば、処置下の被験体の循環系における細胞表現型に対する従来のＦＡＣＳ
アッセイによって、このような処置に応じて被験体の末梢循環における様々な系
統（例えば、系統を方向付けられた前駆細胞およびそれらの子孫）の細胞数変化
をモニターするために、本明細書中に記載される方法を含む所与の治療レジメン
の効力をモニターし得る。

【０１５６】表現型分析は、一般に分析されるべき細胞型（例えば、好中球、血小板、リン
パ球、赤血球（ｅｒｔｈｒｙｒｏｃｙｔｅ）または単球）に特異的なモノクロー
ナル抗体を用いて実施される。そのような表現型分析におけるモノクローナル抗
体の使用を、細胞分析を目的として当業者は慣用的に使用する。特定の細胞型に
特異的なモノクローナル抗体は、市販される。

【０１５７】造血幹細胞は、上記で詳述したような表現型における特徴を持つ。そのような
表現型分析は通常、例えば、（１）造血幹細胞（ＬＴＣＩＣ，敷石（ｃｏｂｂｌ
ｅｓｔｏｎｅ）形成アッセイおよびＨＰＰ−ＣＦＣｓに対するアッセイ）、（２
）顆粒球または好中球（培養液がＧ−ＣＳＦまたはＧＭ−ＣＳＦを含む、クロー
ンアガーまたはメチルセルロースアッセイ）、（３）巨核球（培養液がＴＰＯ、
ＩＬ−３、ＩＬ−６およびＩＬ−１１を含む、クローナルアガーまたはメチルセ
ルロースアッセイ）、および（４）赤血球系細胞（ＥＰＯおよびＳＣＦまたは、
ＥＰＯ，ＳＣＦおよびＩＬ−３）を含む培養液中でのクローンアガーまたはメチ
ルセルロースアッセイ）など、それぞれ特定の関心ある細胞型に対して生物学的
アッセイと組み合わせて行われる。

【０１５８】そのような表現型および生物学的アッセイの正確な性質が、処置を行う状態お
よびその処置が造血幹細胞の集団またはあるいくつかの特定系統の細胞の集団を
促進するように向けられるかどうかに依存して様々であることが理解される。

【０１５９】被験体が特定の型の癌を有するとして診断されている場合、癌の状態はまた、
癌細胞または固形腫瘍の増殖の遅延または減衰が生じるか否かを決定するためか
、または、癌細胞の総数もしくは固形腫瘍の総負荷の減少が検出できるかを決定
するために、処置下の癌の型に適切な診断技術を用いてモニターされる。癌治療
の分野における専門家（ｐｒａｃｔｉｔｉｏｎｅｒ）によって慣用的に使用され
る技術は、１以上の生検、超音波、Ｘ線、磁気共鳴画像化（ＭＲＩ）、分析また
は骨髄吸引などを含む。

【０１６０】示されるように、上記の表現型および生物学的アッセイの結果に基づいて、ア
ンチセンスオリゴマー処置レジメンを調整し得る（用量、頻度、経路など）。

【０１６１】（Ｃ．本発明の組成物）本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドおよびこれらを含む薬学的組成物は
、異常な細胞増殖の阻害および癌細胞の増殖の遅延または停止に有用である。

【０１６２】本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、特定の癌を有する患者の処置に
おいて、癌細胞または固形腫瘍の増殖の遅延もしくは減衰、または癌細胞の数も
しくは腫瘍の総負荷における減少によって明示されるような、癌細胞の増殖を遅
延するかまたは停止するための細胞***および／または癌細胞の分化特性の調節
について有用であり得る。換言すると、癌細胞は、このような癌細胞を取り囲む
非癌細胞の正常な増殖または発達に対して有害な効果がほとんどないかまたは全
くなく、減数されるかまたは除去される。

【０１６３】本発明の実施に好ましいアンチセンスオリゴヌクレオチドは、標的配列を含む
ｍＲＮＡの翻訳をブロックするかまたは阻害する；そして／またはｍＲＮＡのス
プライシングされた改変体を産生するためにｍＲＮＡのプロセシングを改変する
。

【０１６４】本発明に従う例示的な好ましいアンチセンスオリゴヌクレオチドは、造血幹細
胞に優先的に発現されるがより成熟した細胞には発現されない配列のＡＵＧ開始
コドンにわたる配列に相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチドを含み、以下に
よって例示される：（１）配列番号１として示される配列によって例示される、
ヒトＥＶＩ−１ジンクフィンガー遺伝子のＡＵＧ開始コドンにわたる配列に相補
的なアンチセンスオリゴヌクレオチド；（２）配列番号２として示される配列に
よって例示される、ヒト血清除去応答遺伝子のＡＵＧ開始コドンにわたる配列に
相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチド；（３）配列番号３として示される配
列によって例示される、ヒトマルチメリン遺伝子のＡＵＧ開始コドンにわたる配
列に相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチド；（４）配列番号４として示され
る配列によって例示される、ヒト組織トランスグルタミナーゼ遺伝子のＡＵＧ開
始コドンにわたる配列に相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチド；（５）配列
番号５として示される配列によって例示される、ヒトＦＥ６５のＡＵＧ開始コド
ンにわたる配列に相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチド；（６）配列番号６
として示される配列によって例示される、ヒトＲＡＢ２７遺伝子のＡＵＧ開始コ
ドンにわたる配列に相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチド；（７）配列番号
７として示される配列によって例示される、ヒトＪａｇｇｅｄ２遺伝子のＡＵＧ
開始コドンにわたる配列に相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチド；ヒトＮｏ
ｔｃｈ１（Ｔａｎ−１）遺伝子のＡＵＧ開始コドンにわたる配列に相補的なアン
チセンスオリゴヌクレオチド；ならびに、それぞれ配列番号１２、１０および１
１として示される配列によって例示される、マウスＮｏｔｃｈ１遺伝子、ヒトＮ
ｏｔｃｈ２遺伝子およびＮｏｔｃｈ３遺伝子のＡＵＧ開始コドンにわたる配列に
相補的なアンチセンスオリゴヌクレオチド。

【０１６５】（ＶＩ．有用性）本明細書中に記載されるような１以上のアンチセンスオリゴヌクレオチドで処
理した造血幹細胞（例えば、ＨＳＣ）は、様々な適用において有用性が認められ
る。例えば、幹細胞は、未成熟な細胞（例えば、特定の疾患状態（例えば、癌）
に関連する造血幹細胞）の分化を促進するために使用され得る。さらに、幹細胞
は、これらの細胞の成熟および分化を提供することによって、種々の造血幹細胞
系統での被験体の再生（ｒｅｐｏｐｕｌａｔｉｎｇ）のための細胞の供給源とし
て使用され得る。

【０１６６】本発明のアンチセンスオリゴマーは、細胞の成熟および分化を促進するために
効果的である。例えば、エキソビボでアンチセンスオリゴマー処理した幹細胞は
、系統を方向付けられた前駆細胞およびそれらの子孫の拡大した集団を生成する
ために使用されるべく働き得る。例えば、本発明は、造血肝細胞から、より分化
した細胞（例えば、単球、顆粒球、血小板、リンパ球および赤血球）を産生する
手段を提供する。

【０１６７】本明細書中に記載される１以上のアンチセンスオリゴヌクレオチドでのＨＳＣ
の処理は、休止期（静止期）またはＧ₀期から細胞周期へとＨＳＣを開放するた
めの手段をさらに提供する。従って、これに関する造血機能不全についての処置
をさらに提供する。

【０１６８】このようなエキソビボでの拡大した細胞集団は、患者に再投与される場合、自
己および同種の造血移植（ｅｎｇｒａｆｔｍｅｎｔ）の両方において有用性を認
める。

【０１６９】このような方法は、新生物形成疾患の処置において使用され得、そして処置下
の患者における癌細胞または固形腫瘍の増殖の遅延もしくは減衰、または癌細胞
の総数もしくは腫瘍の総負荷の減少、および／あるいは放射線または化学療法に
続く機能的造血系のより迅速な回復（例えば、好中球および血小板細胞集団のよ
り迅速な回復）を生じるために効果的であり得る。

【０１７０】癌患者の処置のための例示的な治療レジメンは、化学療法、放射線治療、また
は被験体の癌を処置するために当該分野において公知の他の処置法とともに、本
明細書中に記載されるアンチセンスオリゴヌクレオチドで造血肝細胞をエキソビ
ボにて処置することを含む。

【０１７１】次の実施例は説明するものであるが、どのようにも本発明を限定することを意
図するものではない。

【０１７２】（実施例１：分化関連ｍＲＮＡの同定）ｃＤＮＡライブラリーを、休止期の動物（ｑｕｉｅｓｃｅｎｔａｎｉｍａｌ
）由来のＬＴＲ−造血幹細胞およびわずかに分化した細胞（ＳＴＲ−ＨＳＣ）か
ら作製し、そしてｍＲＮＡ発現プロファイルを比較した。ＬＴＲ−造血幹細胞に
おいて優先的に発現される遺伝子を、遺伝子発現フィンガープリンティング（Ｇ
ＥＦ）およびレプリゼンテーショナル差示的分析（ＲＤＡ）を使用して検出した
。

【０１７３】ｍＲＮＡ発現パターンを、ＧＥＦおよびＲＤＡを使用して、分画されていない
骨髄（ｕｎｆＢＭ）、系統特異的モノクローナル抗体と結合したＤｙｎａｌ
Ｂｅａｄｓを使用して系統を方向付けられた細胞を除去することによって選択さ
れた細胞の集団、および、短期（ｓｈｏｒｔｔｅｒｍ）再生（ｒｅｐｏｐｕｌ
ａｔｉｎｇ）ＨＳＣ（ＳＴＲ−ＨＳＣ）または長期（ｌｏｎｇｔｅｒｍ）再生
ＨＳＣ（ＬＴＲ−ＨＳＣ）として特徴付けられた造血幹細胞について比較した。

【０１７４】ＬＴＲ−ＨＳＣに優先的に発現される７つのｍＲＮＡを同定し、そしてさらに
以下に特徴付けた：表１に示されるような、ＥＶＩ−１ジンクフィンガー遺伝子
、血清除去応答遺伝子、マルチメリン遺伝子、組織トランスグルタミナーゼ遺伝
子、ＦＥ６５遺伝子、ＲＡＢ２７遺伝子およびヒトＪａｇｇｅｄ２遺伝子。

【０１７５】

【表１】（実施例２：造血幹細胞の単離およびアンチセンスオリゴヌクレオチドでの処
置）マウス造血幹細胞を、１．０８０ｇ／ｍｌＮｙｃｏｄｅｎｚ分離培地（Ｎｙ
ｃｏｍｅｄＰｈａｒｍａＡＳＯＳＬＯ，Ｎｏｒｗａｙ）を使用する密度分
離、次いで、系統特異的モノクローナル抗体を使用するＤｙｎａｌＢｅａｄ除
去を用いるｌｉｎ−細胞集団の単離、次いで、以下での染色を実施して、分画さ
れていない骨髄を開始材料とする骨髄から得た：（１）ｃ−ｋｉｔおよびＳｃａ
１に対する抗体；（２）ヨー化プロピジウム（ｐｒｏｐｉｄｉｕｍｉｏｄｉｄ
ｅ）（ＰＩ）；および（３）色素（Ｈｏｅｓｃｈｔ３３３４２、Ｒｈｏｄａｍ
ｉｎｅ１２３）。細胞をＦＡＣＳに供し、そして２つの集団を以下の表現型マ
ーカーに基づいて選択した：（Ａ）Ｓｃａ１＋、ｃ−ｋｉｔ＋、ｌｉｎ−、低い
Ｈｏｅｓｃｈｔ３３３４２（Ｈｏ^low）、低いＲｈｏｄａｍｉｎｅ１２３（
Ｒｈ^low）、およびＰＩネガティブの細胞（ＬＴＲ−ＨＳＣ）、または（Ｂ）Ｓ
ｃａ１＋、ｃ−ｋｉｔ＋、ｌｉｎ−細胞（ＳＴＲ−ＨＳＣ）。

【０１７６】上記のように特徴付けられたＬＴＲ−ＨＳＣについて濃縮された２５の細胞を
、インターロイキン−６（ＩＬ−６）および幹細胞因子（ＳＣＦ）を含みアンチ
センスオリゴマーを伴うかまたは伴わない培地に直接ソートし、そして５日後に
ＨＰＰ−ＣＦＣ形成についてアッセイした。

【０１７７】

【表２】このアッセイの結果は、ＥＶＩ−１に対するアンチセンスへの細胞の暴露によ
って１μＭほどの低い濃度でＨＰＰ−ＣＦＣの減少が生じることを示す。このこ
とは、（平均±ＳＥＭとして報告された結果を用いて）表２および図３に詳細さ
れるように造血肝細胞の分化または成熟を示す。

【０１７８】本明細書中に示される結果は、特徴的造血幹細胞表現型から造血幹細胞の分化
を促進する際の、幹細胞において優先的に発現される配列に相補的なアンチセン
スオリゴマーの有用性を示す。

【０１７９】

【化２】

【配列表】

【図面の簡単な説明】

【図１】図１Ａ〜Ｅは、ポリマーを形成するために適切な５原子（Ａ）、６原子（Ｂ）
、および７原子（Ｃ〜Ｅ）結合基を有する、いくつかの好ましいモルホリノサブ
ユニットを示す。

【図２】図２Ａ−Ａから２Ｅ−Ｅは、それぞれ図１のサブユニットＡ〜Ｅを用いて構築
した、例示的なモルホリノリゴヌクレオチドの反復サブユニット部分を示す。

【図３】図３は、インビトロアッセイにおけるＨＳＣ分化についての結果を示す。ここ
で、５日目における、クローン原性細胞（中空バー）およびＨＰＰ−ＣＦＣ（斜
線バー）の数に対する種々の濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドの効果を示
す。ここで、クローン原性細胞を、所定のセットの培養条件下で増殖しかつクロ
ーンを形成する細胞として規定する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ｃ１２Ｎ 5/10 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 15/09 ＺＮＡ 5/00 Ｂ (72)発明者イバーセン，パトリックエル．アメリカ合衆国オレゴン 97330，コーバリス，エヌ．ダブリュー．フェアオークスプレイス 5902 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 CA02 CA12 DA02 HA17 4B065 AA91X AB01 CA44 4C084 AA13 NA14 ZA51 ZB26 4C086 AA01 AA02 EA16 MA02 MA05 NA14 ZA51 ZB26 4C087 AA01 AA02 BB44 BB63 ZA51 ZB26

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】実質的に荷電していない骨格によって特徴付けられるアンチ
センスオリゴマーを含む組成物であって、該オリゴマーは、幹細胞にて優先的に
発現される遺伝子のｍＲＮＡ翻訳開始コドンにまたがる配列に指向される、組成
物。
【請求項２】アンチセンスオリゴマー処理した幹細胞組成物であって、以
下のプロセス：（ａ）被験体から幹細胞含有細胞集団を得る工程；（ｂ）造血幹細胞について該細胞集団を濃縮するために効果的な様式で該細胞
集団を処理する工程；および（ｃ）該濃縮された幹細胞集団を、実質的に荷電していない骨格によって特徴
付けられる１以上のアンチセンスオリゴマーに、系統を方向付けられた前駆細胞
およびそれらの子孫の集団を少なくとも２倍増加するために効果的な条件下にて
、エキソビボで暴露する工程であって、該１以上のアンチセンスオリゴマーは幹
細胞にて優先的に発現されるｍＲＮＡに指向される、工程、によって調製される、組成物。
【請求項３】請求項２に記載の組成物であって、１以上のアンチセンスオ
リゴマーでの前記処理が、該アンチセンスオリゴマー処理の前に存在する系統を
方向付けられた前駆細胞およびそれらの子孫の数と比較して、系統を方向付けら
れた前駆細胞およびそれらの子孫の集団の数を少なくとも８倍増加するために十
分な濃度および時間で実施される、組成物。
【請求項４】請求項２または３に記載のアンチセンスオリゴマー処理した
幹細胞組成物であって、ここで、前記被験体が癌患者であって、前記１以上のア
ンチセンスオリゴマーでの処理が、前記細胞集団における癌細胞の総数または総
腫瘍荷重を減少するために効果的である、組成物。
【請求項５】請求項２または３に記載の組成物であって、前記系統を方向
付けられた前駆細胞およびそれらの子孫が、好中球、血小板、リンパ球、赤血球
および単球からなる群より選択される、組成物。
【請求項６】請求項５に記載の組成物であって、前記系統を方向付けられ
た前駆細胞およびそれらの子孫が、好中球および血小板である、組成物。
【請求項７】請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物であって、前記
アンチセンスオリゴマーが、以下：（ａ）５０℃より高いＴｍを有し高親和性で標的ＲＮＡの相補的配列とハイブ
リダイズする能力；（ｂ）ヌクレアーゼ耐性；および（ｃ）細胞への能動輸送または促進輸送についての能力、によって特徴付けられる、組成物。
【請求項８】請求項１〜７のいずれか１項に記載の組成物であって、前記
アンチセンスオリゴマーが約１２〜２５塩基の長さを有する、組成物。
【請求項９】請求項１〜８のいずれか１項に記載の組成物であって、前記
アンチセンスオリゴマー骨格が図２Ａ−Ａ〜図２Ｅ−Ｅに示される構造からなる
群より選択される構造を有する、組成物。
【請求項１０】請求項１〜９のいずれか１項に記載の組成物であって、前
記アンチセンスオリゴマーが、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号
４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号１０、配列番号１１および
配列番号１２からなる群より選択される配列を有する、組成物。
【請求項１１】請求項１０に記載の組成物であって、前記アンチセンスオ
リゴマーが配列番号１として示される配列を有する、組成物。
【請求項１２】被験体における癌を処置する際の医薬として使用するため
の、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項１３】被験体における癌を処置するための医薬の製造のための、
請求項１〜１２のいずれか１項に記載の組成物の使用。