JP2003501412A - アミノオキシ基を有する結合価プラットホーム分子 - Google Patents
アミノオキシ基を有する結合価プラットホーム分子Info
- Publication number
- JP2003501412A JP2003501412A JP2001501586A JP2001501586A JP2003501412A JP 2003501412 A JP2003501412 A JP 2003501412A JP 2001501586 A JP2001501586 A JP 2001501586A JP 2001501586 A JP2001501586 A JP 2001501586A JP 2003501412 A JP2003501412 A JP 2003501412A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- molecule
- group
- compound
- valency platform
- platform molecule
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Withdrawn
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D295/00—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms
- C07D295/16—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms acylated on ring nitrogen atoms
- C07D295/18—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms acylated on ring nitrogen atoms by radicals derived from carboxylic acids, or sulfur or nitrogen analogues thereof
- C07D295/182—Radicals derived from carboxylic acids
- C07D295/185—Radicals derived from carboxylic acids from aliphatic carboxylic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
- A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C251/00—Compounds containing nitrogen atoms doubly-bound to a carbon skeleton
- C07C251/32—Oximes
- C07C251/50—Oximes having oxygen atoms of oxyimino groups bound to carbon atoms of substituted hydrocarbon radicals
- C07C251/60—Oximes having oxygen atoms of oxyimino groups bound to carbon atoms of substituted hydrocarbon radicals of hydrocarbon radicals substituted by carboxyl groups
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C271/00—Derivatives of carbamic acids, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atom not being part of nitro or nitroso groups
- C07C271/06—Esters of carbamic acids
- C07C271/08—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms
- C07C271/10—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms with the nitrogen atoms of the carbamate groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
- C07C271/16—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms with the nitrogen atoms of the carbamate groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms to carbon atoms of hydrocarbon radicals substituted by singly-bound oxygen atoms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C271/00—Derivatives of carbamic acids, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atom not being part of nitro or nitroso groups
- C07C271/06—Esters of carbamic acids
- C07C271/08—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms
- C07C271/10—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms with the nitrogen atoms of the carbamate groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
- C07C271/20—Esters of carbamic acids having oxygen atoms of carbamate groups bound to acyclic carbon atoms with the nitrogen atoms of the carbamate groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms to carbon atoms of hydrocarbon radicals substituted by nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
- C07C323/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups
- C07C323/50—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
- C07C323/51—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
- C07C323/60—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton with the carbon atom of at least one of the carboxyl groups bound to nitrogen atoms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D295/00—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms
- C07D295/16—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms acylated on ring nitrogen atoms
- C07D295/20—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms acylated on ring nitrogen atoms by radicals derived from carbonic acid, or sulfur or nitrogen analogues thereof
- C07D295/205—Radicals derived from carbonic acid
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/775—Apolipopeptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/0006—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid
- C08B37/0009—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid alpha-D-Glucans, e.g. polydextrose, alternan, glycogen; (alpha-1,4)(alpha-1,6)-D-Glucans; (alpha-1,3)(alpha-1,4)-D-Glucans, e.g. isolichenan or nigeran; (alpha-1,4)-D-Glucans; (alpha-1,3)-D-Glucans, e.g. pseudonigeran; Derivatives thereof
- C08B37/0012—Cyclodextrin [CD], e.g. cycle with 6 units (alpha), with 7 units (beta) and with 8 units (gamma), large-ring cyclodextrin or cycloamylose with 9 units or more; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
- C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
- C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
- C08G65/32—Polymers modified by chemical after-treatment
- C08G65/329—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
- C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
- C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
- C08G65/32—Polymers modified by chemical after-treatment
- C08G65/329—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds
- C08G65/333—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds containing nitrogen
- C08G65/33396—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds containing nitrogen having oxygen in addition to nitrogen
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
- C08G83/00—Macromolecular compounds not provided for in groups C08G2/00 - C08G81/00
- C08G83/002—Dendritic macromolecules
- C08G83/003—Dendrimers
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Polyethers (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
(57)【要約】
アミノオキシ基を含む分子(アミノオキシ基は、他の分子の共有結合のための結合部位を提供する)が提供される。1つの実施形態において、ポリ(アミノ酸)を含む広範な種々の生物学的に活性な分子に結合体化され得る場合、ポリオキシエチレン分子は、アミノオキシ基を含む。別の実施形態において、アミノオキシ基を含む結合価プラットホーム分子が提供される。アミノオキシ基は、ポリ(アミノ酸)のような生物学的分子との共有結合を形成するために用いられ得る。アミノオキシ基は、例えば、カルボニル基(例えば、グリオキシル基)を含むように改変されたポリ(アミノ酸)と反応し、オキシム結合を介して、結合価プラットホーム分子および生物学的に活性な分子の結合体を形成し得る。アミノオキシ基を含む結合価プラットホーム分子は、結合体の形成に有利に反応性であり、そしてまた、容易に合成され、非常に低い多分散性の組成物を形成し得る。
Description
【0001】
(関連出願の引用)
本出願は、1999年6月8日提出の米国仮出願番号60/138,260に
対して優先権を主張し、この開示はその全体が本明細書中で参考として援用され
る。
対して優先権を主張し、この開示はその全体が本明細書中で参考として援用され
る。
【0002】
(技術分野)
本出願は、他の分子に共有結合し得るアミノオキシ基を含む分子に関する。特
に、本出願は、1以上の分子(例えば、生物学的に活性な分子)が結合して結合
体を形成し得るアミノオキシ基を含む結合価プラットホーム分子(原子価プラッ
トホーム分子)に関する。
に、本出願は、1以上の分子(例えば、生物学的に活性な分子)が結合して結合
体を形成し得るアミノオキシ基を含む結合価プラットホーム分子(原子価プラッ
トホーム分子)に関する。
【0003】
(背景技術)
「結合価プラットホーム」は、1つ以上の(および必要に応じて複数の)結合
部位(これは、通常の骨格に目的の生物学的に活性な分子を共有結合するために
使用され得る)を有する分子である。通常の骨格への生物学的に活性な分子の結
合は、多価結合体を提供し、ここで、生物学的に活性な分子の複数のコピーが、
同じプラットホームに共有結合する。「規定された」または「化学的に規定され
た」結合価プラットホームは、規定された構造(従って、規定された数の結合点
および規定された結合価)を有するプラットホームである。規定された結合価プ
ラットホーム結合体は、規定された構造を有する結合体であり、そして規定され
た数の結合した生物学的に活性な化合物を有する。生物学的に活性な分子の例と
しては、オリゴヌクレオチド、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、抗体、糖
類、多糖類、エピトープ、ミモトープ(mimotope)、薬物などが挙げら
れる。例えば、生物学的に活性な化合物は、タンパク質レセプターと特異的に相
互作用し得る。
部位(これは、通常の骨格に目的の生物学的に活性な分子を共有結合するために
使用され得る)を有する分子である。通常の骨格への生物学的に活性な分子の結
合は、多価結合体を提供し、ここで、生物学的に活性な分子の複数のコピーが、
同じプラットホームに共有結合する。「規定された」または「化学的に規定され
た」結合価プラットホームは、規定された構造(従って、規定された数の結合点
および規定された結合価)を有するプラットホームである。規定された結合価プ
ラットホーム結合体は、規定された構造を有する結合体であり、そして規定され
た数の結合した生物学的に活性な化合物を有する。生物学的に活性な分子の例と
しては、オリゴヌクレオチド、ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、抗体、糖
類、多糖類、エピトープ、ミモトープ(mimotope)、薬物などが挙げら
れる。例えば、生物学的に活性な化合物は、タンパク質レセプターと特異的に相
互作用し得る。
【0004】
特定のクラスの化学的に規定された結合価プラットホーム、その調製のための
方法、これらを含む結合体、およびこのような結合体の調製のための方法は、米
国特許第5,162,515号;同第5,391,785号;同第5,276,
013号;同第5,786,512号;同第5,726,329号;同第5,2
68,454号;同第5,552,39号1;同第5,606,047号;およ
び同第5,663,395号に記載されている。そしてカルバメート結合を含む
結合価プラットホーム分子は、米国仮特許出願番号60/111,641;およ
び1999年12月8日提出の米国出願番号09/457,607に記載される
。
方法、これらを含む結合体、およびこのような結合体の調製のための方法は、米
国特許第5,162,515号;同第5,391,785号;同第5,276,
013号;同第5,786,512号;同第5,726,329号;同第5,2
68,454号;同第5,552,39号1;同第5,606,047号;およ
び同第5,663,395号に記載されている。そしてカルバメート結合を含む
結合価プラットホーム分子は、米国仮特許出願番号60/111,641;およ
び1999年12月8日提出の米国出願番号09/457,607に記載される
。
【0005】
(発明の開示)
アミノオキシ基を含む分子、ならびに他の分子(例えば、生物学的に活性な分
子)を有するその結合体、およびその合成のための方法が提供される。アミノオ
キシ基は、他の分子の共有結合のための結合部位を提供する。
子)を有するその結合体、およびその合成のための方法が提供される。アミノオ
キシ基は、他の分子の共有結合のための結合部位を提供する。
【0006】
1つの実施形態において、アミノオキシ基を含むポリエチレンオキシド分子、
またはより詳細にはポリエチレングリコール分子が提供され、これはポリ(アミ
ノ酸)を含む広範な種々の生物学的に活性な分子と結合体化し得る。別の実施形
態において、アミノオキシ基を含む結合価プラットホーム分子が提供される。ア
ミノオキシ基は、生物学的な分子(例えば、ポリ(アミノ酸))と共有結合を形
成するために使用され得る。このアミノオキシ基は、例えば、カルボニル基(例
えば、グリオキシル基)を含むように改変されたポリ(アミノ酸)と反応して、
オキシム結合を介して結合価プラットホーム分子と生物学的に活性な分子との結
合体を形成し得る。アミノオキシ基を含む結合価プラットホーム分子は、結合体
の形成において有利に反応し、そしてこれらはまた、容易に合成されて非常に低
い多分散の組成物を形成し得る。
またはより詳細にはポリエチレングリコール分子が提供され、これはポリ(アミ
ノ酸)を含む広範な種々の生物学的に活性な分子と結合体化し得る。別の実施形
態において、アミノオキシ基を含む結合価プラットホーム分子が提供される。ア
ミノオキシ基は、生物学的な分子(例えば、ポリ(アミノ酸))と共有結合を形
成するために使用され得る。このアミノオキシ基は、例えば、カルボニル基(例
えば、グリオキシル基)を含むように改変されたポリ(アミノ酸)と反応して、
オキシム結合を介して結合価プラットホーム分子と生物学的に活性な分子との結
合体を形成し得る。アミノオキシ基を含む結合価プラットホーム分子は、結合体
の形成において有利に反応し、そしてこれらはまた、容易に合成されて非常に低
い多分散の組成物を形成し得る。
【0007】
アミノオキシ基、好ましくは3つ以上のアミノオキシ基を含む分子(例えば、
アミノオキシ基を含む結合価プラットホーム分子)は、1つ以上(または、例え
ば3つ以上)の生物学的に活性な分子(例えば、オリゴヌクレオチド、ペプチド
、ポリペプチド、タンパク質、抗体、糖類、多糖類、エピトープ、ミモトープま
たは薬物が挙げられる)と共有結合し得る。
アミノオキシ基を含む結合価プラットホーム分子)は、1つ以上(または、例え
ば3つ以上)の生物学的に活性な分子(例えば、オリゴヌクレオチド、ペプチド
、ポリペプチド、タンパク質、抗体、糖類、多糖類、エピトープ、ミモトープま
たは薬物が挙げられる)と共有結合し得る。
【0008】
1つの実施形態において、アミノオキシ基を含む分子が提供され、ここで、こ
の分子はオキシアルキレン基(例えば、オキシエチレン基またはポリオキシエチ
レン基)を含む。この分子は、例えば、少なくとも3つのアミノオキシ基、ある
いは4つ、5つ以上のアミノオキシ基を含み得る。
の分子はオキシアルキレン基(例えば、オキシエチレン基またはポリオキシエチ
レン基)を含む。この分子は、例えば、少なくとも3つのアミノオキシ基、ある
いは4つ、5つ以上のアミノオキシ基を含み得る。
【0009】
本明細書中で使用される場合、「オキシエチレン、オキシプロピレンおよびオ
キシアルキレン」は、「エチレンオキシド、プロピレンオキシドおよびアルキレ
ンオキシド」と交換可能に使用される。
キシアルキレン」は、「エチレンオキシド、プロピレンオキシドおよびアルキレ
ンオキシド」と交換可能に使用される。
【0010】
別の実施形態において、アミノオキシ基を含む結合価プラットホーム分子が提
供される。1つの好ましい実施形態において、この結合価プラットホーム分子は
、少なくとも3つのアミノオキシ基を含む。この結合価プラットホーム分子は、
オキシアルキレン基(例えば、オキシエチレン基またはポリオキシエチレン基(
例えば−(CH2CH2O)n−、ここで、nは200〜500である))をさら
に含み得る。
供される。1つの好ましい実施形態において、この結合価プラットホーム分子は
、少なくとも3つのアミノオキシ基を含む。この結合価プラットホーム分子は、
オキシアルキレン基(例えば、オキシエチレン基またはポリオキシエチレン基(
例えば−(CH2CH2O)n−、ここで、nは200〜500である))をさら
に含み得る。
【0011】
結合価プラットホーム分子(例えば、本明細書中に開示される結合価プラット
ホーム分子)のような、アミノオキシ基を含みかつ1.2未満の多分散(例えば
、1.1未満または1.07未満)を有する分子を含む組成物もまた、提供され
る。
ホーム分子)のような、アミノオキシ基を含みかつ1.2未満の多分散(例えば
、1.1未満または1.07未満)を有する分子を含む組成物もまた、提供され
る。
【0012】
1つの実施形態において、以下の式を有する結合価プラットホーム分子が提供
される: R−(ONH2)m 式1 ここで、1つの実施形態において: mは1〜50またはそれ以上(例えば、3〜50)であり;そして Rは、H、C、N、O、P、SiおよびS原子からなる群から選択さ
れる、1〜1000、または10,000原子あるいはそれ以上を含む有機部分
である。
される: R−(ONH2)m 式1 ここで、1つの実施形態において: mは1〜50またはそれ以上(例えば、3〜50)であり;そして Rは、H、C、N、O、P、SiおよびS原子からなる群から選択さ
れる、1〜1000、または10,000原子あるいはそれ以上を含む有機部分
である。
【0013】
別の実施形態において、以下の式を有する結合価プラットホーム分子が提供さ
れる: RC[G1(ONH2)n]y; 式2 ここで、1つの実施形態において: yは1〜16であり; nは1〜32であり; ここで、1つの実施形態において、y×nの積(y掛けるn)は少な
くとも3であり;そして Rcおよび各G1は、独立して有機部分である。
れる: RC[G1(ONH2)n]y; 式2 ここで、1つの実施形態において: yは1〜16であり; nは1〜32であり; ここで、1つの実施形態において、y×nの積(y掛けるn)は少な
くとも3であり;そして Rcおよび各G1は、独立して有機部分である。
【0014】
1つの実施形態において、Rcおよび各G1は独立して、H、C、N、O、P、
SiおよびS原子からなる群から選択される原子を含む有機部分であり、そして
必要に応じてオキシアルキレン基を含む。この分子は、1.2未満の多分散を有
する組成物において提供され得る。
SiおよびS原子からなる群から選択される原子を含む有機部分であり、そして
必要に応じてオキシアルキレン基を含む。この分子は、1.2未満の多分散を有
する組成物において提供され得る。
【0015】
別の実施形態において、以下:
Rc[O−C(=O)−NR1−G2−(ONH2)n]y
式3;
Rc[C(=O)−NR1−G2−(ONH2)n]y
式4;
Rc[NR1−C(=O)−G2−(ONH2)n]y
式5;
Rc[NR1−C(=O)−O−G2−(ONH2)n]y
式6;
Rc[R1C=N−O−G2−(ONH2)n]y
式7;および
Rc[S−G2(ONH2)n]y
式8;
からなる群から選択される式を有する結合価プラットホーム分子が提供され、
ここで、例えば:
yは1〜16であり;
nは1〜32であり;
ここで、1つの実施形態において、y×nの積(y掛けるn)は
、少なくとも3であり; R1は、H、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリールまた
はG2−(ONH2)nであり;そして Rcおよび各G2は独立して、H、C、N、O、P、SiおよびS原子の群
から選択される原子を含む有機部分である。
、少なくとも3であり; R1は、H、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリールまた
はG2−(ONH2)nであり;そして Rcおよび各G2は独立して、H、C、N、O、P、SiおよびS原子の群
から選択される原子を含む有機部分である。
【0016】
1つの実施形態において、Rcおよび各G2は独立して、以下からなる群から選
択される: HおよびC原子のみからなり、かつ1〜200個の炭素原子を有するヒドロカ
ルビル基; 炭素、酸素、および水素原子のみからなり、かつ1〜200個の炭素原子を有
する、有機基; 炭素、酸素、窒素、および水素原子のみからなり、かつ1〜200個の炭素原
子を有する、有機基; 炭素、酸素、硫黄、および水素原子のみからなり、かつ1〜200個の炭素原
子を有する、有機基; 炭素、酸素、硫黄、窒素、および水素原子のみからなり、かつ1〜200個の
炭素原子を有する、有機基。
択される: HおよびC原子のみからなり、かつ1〜200個の炭素原子を有するヒドロカ
ルビル基; 炭素、酸素、および水素原子のみからなり、かつ1〜200個の炭素原子を有
する、有機基; 炭素、酸素、窒素、および水素原子のみからなり、かつ1〜200個の炭素原
子を有する、有機基; 炭素、酸素、硫黄、および水素原子のみからなり、かつ1〜200個の炭素原
子を有する、有機基; 炭素、酸素、硫黄、窒素、および水素原子のみからなり、かつ1〜200個の
炭素原子を有する、有機基。
【0017】
結合価プラットホーム分子の1つの実施形態において、Rcは、C1〜200
炭化水素部分;C1〜200アルコキシ部分;および芳香族基を含むC1〜20
0炭化水素部分、からなる群から選択される。
炭化水素部分;C1〜200アルコキシ部分;および芳香族基を含むC1〜20
0炭化水素部分、からなる群から選択される。
【0018】
必要に応じて、Rcは、オキシアルキレン部分(例えば、オキシエチレン部分
(−CH2CH2O−))を含み得る。1つの実施形態において、Rcは、オキシ
エチレン単位: −(CH2CH2O)n−; を含み、ここで、nは1〜500(例えば、200〜500、1〜200、1〜
100または1〜20)である。
(−CH2CH2O−))を含み得る。1つの実施形態において、Rcは、オキシ
エチレン単位: −(CH2CH2O)n−; を含み、ここで、nは1〜500(例えば、200〜500、1〜200、1〜
100または1〜20)である。
【0019】
1つの実施形態において、各G2は独立して、アルキル、ヘテロアルキル、ア
リール、およびヘテロアリールからなる群から選択される官能基を含む。
リール、およびヘテロアリールからなる群から選択される官能基を含む。
【0020】
別の実施形態において、各G2は独立して、C1〜200炭化水素部分;C1
〜200アルコキシ部分;および芳香族基を含むC1〜200炭化水素部分から
なる群から選択される官能基を含む。
〜200アルコキシ部分;および芳香族基を含むC1〜200炭化水素部分から
なる群から選択される官能基を含む。
【0021】
各G2は独立して、オキシアルキレン部分(例えば、オキシエチレン部分(−
CH2CH2O−))を含み得る。1つの実施形態において、各G2は独立して、
オキシエチレン単位: −(CH2CH2O)n−; を含み、ここでnは1〜500(例えば、1〜200、200〜500、1〜1
00または1〜20)である。
CH2CH2O−))を含み得る。1つの実施形態において、各G2は独立して、
オキシエチレン単位: −(CH2CH2O)n−; を含み、ここでnは1〜500(例えば、1〜200、200〜500、1〜1
00または1〜20)である。
【0022】
結合価プラットホーム分子の1つの実施形態において、各G2は独立して、以
下からなる群から選択される官能基を含む:アミン;アミド;エステル;エーテ
ル;ケトン;アルデヒド;カルバメート;チオエーテル;ピペラジニル;ピペリ
ジニル;アルコール;ポリアミン;ポリエーテル;ヒドラジド;ヒドラジン;カ
ルボン酸;無水物;ハロ;スルホニル;スルホネート;スルホン;シアネート;
イソシアネート;イソチオシアネート;ホルメート;カルボジイミド;チオール
;オキシム;イミン;アミノオキシ;およびマレイミド。
下からなる群から選択される官能基を含む:アミン;アミド;エステル;エーテ
ル;ケトン;アルデヒド;カルバメート;チオエーテル;ピペラジニル;ピペリ
ジニル;アルコール;ポリアミン;ポリエーテル;ヒドラジド;ヒドラジン;カ
ルボン酸;無水物;ハロ;スルホニル;スルホネート;スルホン;シアネート;
イソシアネート;イソチオシアネート;ホルメート;カルボジイミド;チオール
;オキシム;イミン;アミノオキシ;およびマレイミド。
【0023】
1つの実施形態において、結合価プラットホーム分子における各G2−ONH2
は独立して、図17に示される部分から選択される。
【0024】
別の実施形態において、結合価プラットホーム分子は、一端にアミノオキシま
たは保護されたアミノオキシ基を含むリンカーを使用して合成される。もう一方
の端は、以下を含み得る:アミン(実施例3および17の化合物11および10
0ならびに図3および25に示されるように);酸性炭酸エステル(化合物18
および28、ならびに実施例4および6、ならびに図4および7に示されるよう
に);チオール(化合物22aおよび22b、実施例5aおよび5b、ならびに
図5および6に示されるように);アミノオキシ(化合物37、実施例8および
図9に示されるように)、あるいはカルボン酸または活性化誘導体(化合物10
5および106、実施例16および20、ならびに図24および28に示される
ように)。
たは保護されたアミノオキシ基を含むリンカーを使用して合成される。もう一方
の端は、以下を含み得る:アミン(実施例3および17の化合物11および10
0ならびに図3および25に示されるように);酸性炭酸エステル(化合物18
および28、ならびに実施例4および6、ならびに図4および7に示されるよう
に);チオール(化合物22aおよび22b、実施例5aおよび5b、ならびに
図5および6に示されるように);アミノオキシ(化合物37、実施例8および
図9に示されるように)、あるいはカルボン酸または活性化誘導体(化合物10
5および106、実施例16および20、ならびに図24および28に示される
ように)。
【0025】
別の実施形態において、図19において示される式9〜13の化合物が提供さ
れる。式9〜13における1つの実施形態において、RcおよびG2は、上記で規
定された通りであり、そしてnは約1〜500(例えば、200〜500、1〜
200、1〜100または1〜50)である。
れる。式9〜13における1つの実施形態において、RcおよびG2は、上記で規
定された通りであり、そしてnは約1〜500(例えば、200〜500、1〜
200、1〜100または1〜50)である。
【0026】
さらなる実施形態において、以下の構造を有する結合価プラットホーム分子が
提供される:
提供される:
【0027】
【化6】
【0028】
ここで、nは約503であるか、または例えば、約500より大きい、約60
0より大きい、あるいは約700より大きいかまたは800以上である;
0より大きい、あるいは約700より大きいかまたは800以上である;
【0029】
【化7】
【0030】
ここで、nは約112であるか、または例えば、約500より大きい、約60
0より大きい、あるいは約700より大きいかまたは800以上である; あるいは、以下の構造:
0より大きい、あるいは約700より大きいかまたは800以上である; あるいは、以下の構造:
【0031】
【化8】
【0032】
ここで、nは約481であるか、または例えば、約500より大きい、約60
0より大きい、あるいは約700より大きいかまたは800以上である。
0より大きい、あるいは約700より大きいかまたは800以上である。
【0033】
アミノオキシ基(例えば、本明細書中に開示される任意の結合価プラットホー
ム分子)を含む分子、および生物学的に活性な分子の結合体もまた提供される。
生物学的に活性な分子としては、例えば、ポリ(糖類)、ポリ(アミノ酸)、核
酸、脂質および薬物、ならびにこれらの組合わせが挙げられ得る。結合体は、オ
キシム結合体またはその改変形態(例えば、還元生成物(例えば、アミノオキシ
))、およびアルキル化形態を含む。
ム分子)を含む分子、および生物学的に活性な分子の結合体もまた提供される。
生物学的に活性な分子としては、例えば、ポリ(糖類)、ポリ(アミノ酸)、核
酸、脂質および薬物、ならびにこれらの組合わせが挙げられ得る。結合体は、オ
キシム結合体またはその改変形態(例えば、還元生成物(例えば、アミノオキシ
))、およびアルキル化形態を含む。
【0034】
アミノオキシ基(例えば、本明細書中に開示される任意の結合価プラットホー
ム分子)を含む分子、および生物学的に活性な分子の結合体を作製する方法もま
た提供され、ここで、この方法は、アミノオキシ基(例えば、結合価プラットホ
ーム分子)を含む分子上のアミノオキシ基を、生物学的に活性な分子上のカルボ
ニルよのうな反応性官能基(例えば、アルデヒドまたはケトン基)と反応させて
、オキシム結合体を形成する工程を包含する。この生物学的に活性な分子がポリ
(アミノ酸)である実施形態において、この方法は、結合体化の前に末端アルデ
ヒド基を含むために、ポリ(アミノ酸)を改変する工程をさらに包含し得る。
ム分子)を含む分子、および生物学的に活性な分子の結合体を作製する方法もま
た提供され、ここで、この方法は、アミノオキシ基(例えば、結合価プラットホ
ーム分子)を含む分子上のアミノオキシ基を、生物学的に活性な分子上のカルボ
ニルよのうな反応性官能基(例えば、アルデヒドまたはケトン基)と反応させて
、オキシム結合体を形成する工程を包含する。この生物学的に活性な分子がポリ
(アミノ酸)である実施形態において、この方法は、結合体化の前に末端アルデ
ヒド基を含むために、ポリ(アミノ酸)を改変する工程をさらに包含し得る。
【0035】
必要に応じて、薬学的に受容可能なキャリア中に本明細書中で開示される結合
体を含む薬学的に受容可能な組成物もまた提供される。
体を含む薬学的に受容可能な組成物もまた提供される。
【0036】
(発明を実施するための形態)
アミノオキシ基を含む分子が提供される。このアミノオキシ基は、ポリマーの
ような分子上に(例えば、末端位に)提供され得、他の分子(例えば、生物学的
に活性な分子)の共有結合のための結合部位を提供する。例えば、ポリ(アルキ
レンオキシド)ポリマー(例えば、ポリ(エチレンオキシド)ポリマーを含む)
のような広範な種々のポリマー(特に、ポリエチレングリコール)は、アミノオ
キシ基を含むように改変され得る。このアミノオキシ基は有利である。なぜなら
、この基を用いて、容易かつ高収率で、反応性基(好ましくは、アルデヒド基ま
たはケトン基)を含む他の分子と反応させ、この他の分子と共有結合を形成し得
るからである。アミノオキシ基は、他の窒素含有官能基(例えば、アミン、ヒド
ラジド、カルバジドおよびセミカルバジド)と比較して、アルデヒドまたはケト
ンとの反応における改善された結果を提供して、C=N結合の形成において安定
な結合体を形成する。このアミノオキシ基は、反応時間の減少および生成物の収
率の増加の両方を可能にする。
ような分子上に(例えば、末端位に)提供され得、他の分子(例えば、生物学的
に活性な分子)の共有結合のための結合部位を提供する。例えば、ポリ(アルキ
レンオキシド)ポリマー(例えば、ポリ(エチレンオキシド)ポリマーを含む)
のような広範な種々のポリマー(特に、ポリエチレングリコール)は、アミノオ
キシ基を含むように改変され得る。このアミノオキシ基は有利である。なぜなら
、この基を用いて、容易かつ高収率で、反応性基(好ましくは、アルデヒド基ま
たはケトン基)を含む他の分子と反応させ、この他の分子と共有結合を形成し得
るからである。アミノオキシ基は、他の窒素含有官能基(例えば、アミン、ヒド
ラジド、カルバジドおよびセミカルバジド)と比較して、アルデヒドまたはケト
ンとの反応における改善された結果を提供して、C=N結合の形成において安定
な結合体を形成する。このアミノオキシ基は、反応時間の減少および生成物の収
率の増加の両方を可能にする。
【0037】
アミノオキシ基を含むように改変され得る他の分子は、分枝状、直鎖状、ブロ
ックおよび星状のポリマーおよびコポリマー(例えば、ポリオキシエチレン分子
のようなポリオキシアルキレン部分を含むもの、特にポリエチレングリコール)
を含む。ポリエチレングリコールは、好ましくは約10,000ダルトン未満の
分子量を有する。1つの実施形態において、低い多分散を有するポリマーが使用
され得る。例えば、ポリオキシプロピレンおよびポリオキシエチレンポリマーお
よびコポリマー(ポリエチレングリコールを含む)は、アミノオキシ基を含むよ
うに改変され得、ここで、このポリマーは低い多分散(例えば、1.5未満また
は1.2未満、あるいは必要に応じて1.1または1.07未満)を有する。好
ましくは、このポリマーは、少なくとも3つのアミノオキシ基、または少なくと
も4、5、6、7、8以上のアミノオキシ基を含む。
ックおよび星状のポリマーおよびコポリマー(例えば、ポリオキシエチレン分子
のようなポリオキシアルキレン部分を含むもの、特にポリエチレングリコール)
を含む。ポリエチレングリコールは、好ましくは約10,000ダルトン未満の
分子量を有する。1つの実施形態において、低い多分散を有するポリマーが使用
され得る。例えば、ポリオキシプロピレンおよびポリオキシエチレンポリマーお
よびコポリマー(ポリエチレングリコールを含む)は、アミノオキシ基を含むよ
うに改変され得、ここで、このポリマーは低い多分散(例えば、1.5未満また
は1.2未満、あるいは必要に応じて1.1または1.07未満)を有する。好
ましくは、このポリマーは、少なくとも3つのアミノオキシ基、または少なくと
も4、5、6、7、8以上のアミノオキシ基を含む。
【0038】
非ポリマー性分子もまた、本明細書中で開示されるようなアミノオキシ基を含
むように改変され得る。例えば、化学的に規定された非ポリマー性結合価プラッ
トホーム分子(例えば、米国特許第5,552,391に記載されるもの)は、
アミノオキシ基を含むように改変され得る。
むように改変され得る。例えば、化学的に規定された非ポリマー性結合価プラッ
トホーム分子(例えば、米国特許第5,552,391に記載されるもの)は、
アミノオキシ基を含むように改変され得る。
【0039】
例えば、薬学的に受容可能な形態において、例えば、薬学的に受容可能なキャ
リアにおいてこのような分子および結合体を含む組成物もまた提供される。投与
の異なる経路(経口、静脈内、およびエアロゾル投与を含む)についてのキャリ
アは、当該分野において記載される(例えば、「Remington:The
Science and Practice of Pharmacy」,Ma
ck Publishing Company,Pennsylvania,1
995、この開示は、本明細書中に参考として援用される)。キャリアとしては
、例えば、水、糖類、多糖類、緩衝液、賦形剤、および生分解性ポリマー(例え
ば、ポリエステル、ポリ無水物、ポリアミノ酸およびリポソーム)が挙げられ得
る。
リアにおいてこのような分子および結合体を含む組成物もまた提供される。投与
の異なる経路(経口、静脈内、およびエアロゾル投与を含む)についてのキャリ
アは、当該分野において記載される(例えば、「Remington:The
Science and Practice of Pharmacy」,Ma
ck Publishing Company,Pennsylvania,1
995、この開示は、本明細書中に参考として援用される)。キャリアとしては
、例えば、水、糖類、多糖類、緩衝液、賦形剤、および生分解性ポリマー(例え
ば、ポリエステル、ポリ無水物、ポリアミノ酸およびリポソーム)が挙げられ得
る。
【0040】
薬学的に受容可能な組成物は、個体への投与に適切な形態の組成物であり、例
えば、滅菌した非経口溶液または懸濁液、滅菌した非腸管外溶液または経口溶液
あるいは懸濁液、水中油型または油中水型のエマルジョンなどの、単位剤形にお
ける個体への全身的または局所的投与である。
えば、滅菌した非経口溶液または懸濁液、滅菌した非腸管外溶液または経口溶液
あるいは懸濁液、水中油型または油中水型のエマルジョンなどの、単位剤形にお
ける個体への全身的または局所的投与である。
【0041】
(結合価プラットホーム)
1つの局面においては、アミノオキシ基を含む結合価プラットホーム分子、生
物学的に活性な分子のような分子とのその結合体、ならびにこのようなプラット
ホームおよび結合体の調製方法が提供される。
物学的に活性な分子のような分子とのその結合体、ならびにこのようなプラット
ホームおよび結合体の調製方法が提供される。
【0042】
種々の結合価プラットホーム分子が、当該分野において公知である。化学的に
規定された結合価プラットホーム分子が好ましい。結合価プラットホーム分子を
作成するための方法は、例えば、以下に記載される:米国特許第5,162,5
15号;同第5,391,785号;同第5,276,013号;同第5,78
6,512号;同第5,726,329号;同第5,268,454号;同第5
,552,391号;同第5,606,047号;同第5,663,395号;
および同第5,874,409号、ならびに米国特許出願第60/111,64
1号およびPCT US97/10075。一般的に、これらのプラットホーム
は、コア基または分枝状コア基を含み、これらは、ヒドロキシル基、カルボキシ
ル基、アミノ基、アルデヒド基、ケトン、またはアルキルハライドで終結する。
これらの基は、さらに改変されて所望の反応性基を与え得、そして好ましくは、
少なくとも3つのアミノオキシ基を含む結合価プラットホーム分子を得る。
規定された結合価プラットホーム分子が好ましい。結合価プラットホーム分子を
作成するための方法は、例えば、以下に記載される:米国特許第5,162,5
15号;同第5,391,785号;同第5,276,013号;同第5,78
6,512号;同第5,726,329号;同第5,268,454号;同第5
,552,391号;同第5,606,047号;同第5,663,395号;
および同第5,874,409号、ならびに米国特許出願第60/111,64
1号およびPCT US97/10075。一般的に、これらのプラットホーム
は、コア基または分枝状コア基を含み、これらは、ヒドロキシル基、カルボキシ
ル基、アミノ基、アルデヒド基、ケトン、またはアルキルハライドで終結する。
これらの基は、さらに改変されて所望の反応性基を与え得、そして好ましくは、
少なくとも3つのアミノオキシ基を含む結合価プラットホーム分子を得る。
【0043】
結合価プラットホームは、所望の結合価を含むコア基から調製される。鎖は、
その鎖がどのように終結しているかに依存して、1価または2価の結合価を提供
し得る。分枝した鎖は、分枝または側鎖の数に依存して、3価以上の結合価を提
供し得る。例えば、トリエチレングリコールは2価の結合価を有し、エタノール
は1価の結合価を有し、ペンタエリスリトールは4価の結合価を有する。これら
は、さらに修飾されて所望の反応性基を提供し得るヒドロキシル基で終結する鎖
である。鎖はまた、他の基(例えば、アミン、チオール、アルキルハライド、カ
ルボキシル基、アルデヒド、ケトンまたはさらに修飾され得る他の基)で終結し
得る。
その鎖がどのように終結しているかに依存して、1価または2価の結合価を提供
し得る。分枝した鎖は、分枝または側鎖の数に依存して、3価以上の結合価を提
供し得る。例えば、トリエチレングリコールは2価の結合価を有し、エタノール
は1価の結合価を有し、ペンタエリスリトールは4価の結合価を有する。これら
は、さらに修飾されて所望の反応性基を提供し得るヒドロキシル基で終結する鎖
である。鎖はまた、他の基(例えば、アミン、チオール、アルキルハライド、カ
ルボキシル基、アルデヒド、ケトンまたはさらに修飾され得る他の基)で終結し
得る。
【0044】
これらの鎖は、コア基として役立ち得る。コア基の結合価は、分枝部分を有す
る末端官能基(functionality)を誘導体化することによって増加
し得る。例えば、トリエチレングリコール(2価の結合価を有する)は、トリエ
チレングリコールをビスクロロホルメート誘導体に変換することによって、4価
の原子価を有するプラットホームに変換し得る。ビスクロロホルメートと適切に
置換されたジエチレントリアミン誘導体との反応は、実施例6に示されるように
、4結合価プラットホームを提供する。同様に、トリエチレングリコールビスク
ロロホルメートとイミノジ酢酸との反応は、実施例7に示されるように、カルボ
キシル基で終結する4結合価プラットホームを提供し得る。
る末端官能基(functionality)を誘導体化することによって増加
し得る。例えば、トリエチレングリコール(2価の結合価を有する)は、トリエ
チレングリコールをビスクロロホルメート誘導体に変換することによって、4価
の原子価を有するプラットホームに変換し得る。ビスクロロホルメートと適切に
置換されたジエチレントリアミン誘導体との反応は、実施例6に示されるように
、4結合価プラットホームを提供する。同様に、トリエチレングリコールビスク
ロロホルメートとイミノジ酢酸との反応は、実施例7に示されるように、カルボ
キシル基で終結する4結合価プラットホームを提供し得る。
【0045】
結合価プラットホーム分子を作成するための当該分野において公知の方法とし
ては、例えば、伝達(propagation)方法またはセグメント化アプロ
ーチが挙げられる。このような方法は、適切な試薬を用いて改変されて、得られ
る分子上にアミノオキシ基を提供し得る。例えば、反応性基(例えば、ハライド
基、ヒドロキシ基、アミノ基、アルデヒド、ケトン、またはカルボキシル基)は
反応して、必要に応じて保護されたアミノオキシ基を含む分子(例えば、リンカ
ー)を結合し得る。例示的な方法は、本明細書中の実施例において実証される。
ては、例えば、伝達(propagation)方法またはセグメント化アプロ
ーチが挙げられる。このような方法は、適切な試薬を用いて改変されて、得られ
る分子上にアミノオキシ基を提供し得る。例えば、反応性基(例えば、ハライド
基、ヒドロキシ基、アミノ基、アルデヒド、ケトン、またはカルボキシル基)は
反応して、必要に応じて保護されたアミノオキシ基を含む分子(例えば、リンカ
ー)を結合し得る。例示的な方法は、本明細書中の実施例において実証される。
【0046】
結合価プラットホーム分子の使用の利点としては、合成の容易さ、例えば、異
なるアルキレンオキシ基またはジアルコールアミン基を用いることによって、結
合価プラットホームの「アーム」の長さおよび水溶性を調節する能力、ならびに
コア基の選択によって結合価プラットホームの特性をさらに弱める能力、が挙げ
られる。
なるアルキレンオキシ基またはジアルコールアミン基を用いることによって、結
合価プラットホームの「アーム」の長さおよび水溶性を調節する能力、ならびに
コア基の選択によって結合価プラットホームの特性をさらに弱める能力、が挙げ
られる。
【0047】
1つの局面においては、実質的に単分散である結合価プラットホーム分子が提
供される。アミノオキシ結合価プラットホーム分子は、狭い分子量分布を有利に
有する。アミノオキシ結合価プラットホーム分子のサンプルの分子量分布の幅の
尺度は、サンプルの多分散性である。多分散性は、ポリマーサンプルの分子量均
一性または非均一性の尺度として使用される。多分散性は、質量平均分子量(M
w)を数平均分子量(Mn)で割ることによって計算される。Mw/Mnの値は
、完全な単分散ポリマーについては単一である。多分散性(Mw/Mn)は、当
該分野において利用可能な方法(例えば、ゲル透過クロマトグラフィー)によっ
て測定される。アミノオキシ結合価プラットホーム分子のサンプルの多分散性(
Mw/Mn)は、好ましくは2未満、より好ましくは1.5未満、または1.2
未満、1.07未満、1.02未満、または例えば、約1.05〜1.5もしく
は約1.05〜1.2である。代表的なポリマーは、一般的に2〜5、またはい
くつかの場合20以上の多分散性を有する。結合価プラットホーム分子の低い多
分散性の利点としては、向上した生物適合性およびバイオアベイラビリティーが
挙げられる。なぜなら、この分子は実質的に均一な大きさであり、そして分子量
の多様性により、生物学的活性の変動が最小化されるからである。従って、低い
多分散性の分子は、薬学的に最適に処方され、そして分析が容易である。さらに
、サンプル中の分子の集団の制御された結合価が存在する。
供される。アミノオキシ結合価プラットホーム分子は、狭い分子量分布を有利に
有する。アミノオキシ結合価プラットホーム分子のサンプルの分子量分布の幅の
尺度は、サンプルの多分散性である。多分散性は、ポリマーサンプルの分子量均
一性または非均一性の尺度として使用される。多分散性は、質量平均分子量(M
w)を数平均分子量(Mn)で割ることによって計算される。Mw/Mnの値は
、完全な単分散ポリマーについては単一である。多分散性(Mw/Mn)は、当
該分野において利用可能な方法(例えば、ゲル透過クロマトグラフィー)によっ
て測定される。アミノオキシ結合価プラットホーム分子のサンプルの多分散性(
Mw/Mn)は、好ましくは2未満、より好ましくは1.5未満、または1.2
未満、1.07未満、1.02未満、または例えば、約1.05〜1.5もしく
は約1.05〜1.2である。代表的なポリマーは、一般的に2〜5、またはい
くつかの場合20以上の多分散性を有する。結合価プラットホーム分子の低い多
分散性の利点としては、向上した生物適合性およびバイオアベイラビリティーが
挙げられる。なぜなら、この分子は実質的に均一な大きさであり、そして分子量
の多様性により、生物学的活性の変動が最小化されるからである。従って、低い
多分散性の分子は、薬学的に最適に処方され、そして分析が容易である。さらに
、サンプル中の分子の集団の制御された結合価が存在する。
【0048】
いくつかの実施形態においては、結合価プラットホーム分子は、段階的な分岐
点の存在のために「樹状(dendritic)」と記載され得る。樹状結合価
プラットホーム分子は、複数の末端(代表的には、4以上の末端(例えば、8末
端または16末端))を保有する。
点の存在のために「樹状(dendritic)」と記載され得る。樹状結合価
プラットホーム分子は、複数の末端(代表的には、4以上の末端(例えば、8末
端または16末端))を保有する。
【0049】
1つの実施形態においては、アミノオキシ基を含む化学的に規定された結合価
プラットホーム分子、およびカルバメート以外の官能基を含む化学的に規定され
た結合価プラットホーム分子が提供される。
プラットホーム分子、およびカルバメート以外の官能基を含む化学的に規定され
た結合価プラットホーム分子が提供される。
【0050】
本明細書中に開示される式は、「対称」および「非対称」結合価プラットホー
ムの両方を包含することが意図される。1つの実施形態においては、結合価プラ
ットホームは対称である。別の実施形態においては、結合価プラットホームは非
対称である。
ムの両方を包含することが意図される。1つの実施形態においては、結合価プラ
ットホームは対称である。別の実施形態においては、結合価プラットホームは非
対称である。
【0051】
(一般式)
1つの実施形態においては、末端アミノオキシ基(例えば、1〜100(例え
ば、1〜50、2〜16、4〜16、または例えば、2、3、4、8、16、3
2以上のアミノオキシ基)を含む結合価プラットホーム分子が提供される。1つ
の実施形態においては、少なくとも3または4アミノオキシ基、および必要に応
じてオキシアルキレン基(例えば、オキシエチレン基またはそのポリマー)をさ
らに含む結合価プラットホーム分子が提供される。
ば、1〜50、2〜16、4〜16、または例えば、2、3、4、8、16、3
2以上のアミノオキシ基)を含む結合価プラットホーム分子が提供される。1つ
の実施形態においては、少なくとも3または4アミノオキシ基、および必要に応
じてオキシアルキレン基(例えば、オキシエチレン基またはそのポリマー)をさ
らに含む結合価プラットホーム分子が提供される。
【0052】
1つの実施形態においては、以下の式:
R−(ONH2)m
式1
を有する結合価プラットホーム分子が提供され、
ここで:
mは、1〜100(例えば、1〜50、1〜16、2〜16、または例えば、
2、4、8、16、32以上)であり、そして1つの実施形態においては、少な
くとも3(例えば、3〜50)であり;そして Rは、原子、例えば、1〜10,000原子、1〜1000原子、または例え
ば、1〜100原子(例えば、H原子、C原子、N原子、O原子、P原子、Si
原子およびS原子、ならびにハロゲン原子を含む)を含む有機部分である。例え
ば、Rは、1〜1000の間、または例えば、1〜100のC原子、H原子、N
原子およびO原子を含未得る。
2、4、8、16、32以上)であり、そして1つの実施形態においては、少な
くとも3(例えば、3〜50)であり;そして Rは、原子、例えば、1〜10,000原子、1〜1000原子、または例え
ば、1〜100原子(例えば、H原子、C原子、N原子、O原子、P原子、Si
原子およびS原子、ならびにハロゲン原子を含む)を含む有機部分である。例え
ば、Rは、1〜1000の間、または例えば、1〜100のC原子、H原子、N
原子およびO原子を含未得る。
【0053】
別の実施形態においては、結合価プラットホーム分子は、式:
Rc[G1(ONH2)n]y;
式2
を有し、
ここで:
yは、例えば、1〜100(例えば、1〜50、1〜32、1〜16、2〜1
6、4〜16、または例えば、1、2、3、4、8、16、32以上)であり; nは、例えば、1〜100(例えば、1〜50、1〜32、1〜16、2〜1
6、4〜16、または例えば、2、3、4、8、16、32以上)であり; ここで、1つの実施形態においては、y×nの積(yはnで乗算される)は
少なくとも3であり;そして Rcおよび各G1は、独立して、例えばH原子、C原子、N原子、O原子、P原子
、Si原子およびS原子の群から選択される原子(例えば、1000原子未満、
1,000〜10,000以上)を含む有機部分である。
6、4〜16、または例えば、1、2、3、4、8、16、32以上)であり; nは、例えば、1〜100(例えば、1〜50、1〜32、1〜16、2〜1
6、4〜16、または例えば、2、3、4、8、16、32以上)であり; ここで、1つの実施形態においては、y×nの積(yはnで乗算される)は
少なくとも3であり;そして Rcおよび各G1は、独立して、例えばH原子、C原子、N原子、O原子、P原子
、Si原子およびS原子の群から選択される原子(例えば、1000原子未満、
1,000〜10,000以上)を含む有機部分である。
【0054】
1つの実施形態においては、Rcは以下で定義されるとおりであり、そしてG1
は以下に定義されるG2のとおりである。1つの実施形態においては、式2の分
子はオキシアルキレン基を含む。
子はオキシアルキレン基を含む。
【0055】
別の実施形態においては、図18にも示される以下の式:
Rc[O−C(=O)−NR1−G2−(ONH2)n]y
式3;
Rc[C(=O)−NR1−G2−(ONH2)n]y
式4;
Rc[NR1−C(=O)−G2−(ONH2)n]y
式5;
Rc[NR1−C(=O)−O−G2−(ONH2)n]y
式6;
Rc[R1C=N−O−G2−(ONH2)n]y
式7;または
Rc[S−G2(ONH2)n]y
式8;
のうちの1つを有する結合価プラットホーム分子が提供され、
ここで、1つの実施形態においては:
yは、1〜100(例えば、1〜50、1〜32、1〜16、2〜16、4〜
16、または例えば、1、2、3、4、6、8、16、32、64以上)であり
; nは、1〜100(例えば、1〜50、1〜32、1〜16、2〜16、4〜
16、または例えば、2、3、4、6、8、16、32、64以上)であり; ここで、1つの実施形態においては、y×nの積(yはnで乗算される)は
、少なくとも3であり; R1は、存在する場合、例えば、H、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、
ヘテロアリールであるか、または必要に応じて、本明細書中に規定されるような
G2(ONH2)nであり;そして Rcおよび各G2は、独立して、H原子、C原子、N原子、O原子、P原子、S
i原子およびS原子、または必要に応じてハロゲン原子の群から選択される原子
(例えば、1〜10,000、1〜1000原子、または1〜100原子)を含
む有機部分である。
16、または例えば、1、2、3、4、6、8、16、32、64以上)であり
; nは、1〜100(例えば、1〜50、1〜32、1〜16、2〜16、4〜
16、または例えば、2、3、4、6、8、16、32、64以上)であり; ここで、1つの実施形態においては、y×nの積(yはnで乗算される)は
、少なくとも3であり; R1は、存在する場合、例えば、H、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、
ヘテロアリールであるか、または必要に応じて、本明細書中に規定されるような
G2(ONH2)nであり;そして Rcおよび各G2は、独立して、H原子、C原子、N原子、O原子、P原子、S
i原子およびS原子、または必要に応じてハロゲン原子の群から選択される原子
(例えば、1〜10,000、1〜1000原子、または1〜100原子)を含
む有機部分である。
【0056】
従って、1つの実施形態においては、R1は、炭素およびハロゲン基を含む任
意のアルキル部分(例えば、メチル、エチルまたはプロピル)または直鎖、分枝
状もしくは環式構造を含む他の炭化水素(これは飽和であっても不飽和であって
もよい)であり得るか、あるいは例えばO原子、S原子もしくはN原子をさらに
含むヘテロアルキル基であり得るか、またはアリール基もしくはヘテロアリール
基であり得る。
意のアルキル部分(例えば、メチル、エチルまたはプロピル)または直鎖、分枝
状もしくは環式構造を含む他の炭化水素(これは飽和であっても不飽和であって
もよい)であり得るか、あるいは例えばO原子、S原子もしくはN原子をさらに
含むヘテロアルキル基であり得るか、またはアリール基もしくはヘテロアリール
基であり得る。
【0057】
1つの実施形態においては、Rcおよび各G2は、独立して、例えば、直鎖、分
枝状または環式構造を構成し、そして独立して以下からなる群から選択される: H原子およびC原子のみからなり、かつ1〜5,000、1〜500、1〜2
00、1〜100、または例えば、1〜20炭素原子を有するヒドロカルビル基
; 炭素原子、酸素原子および水素原子のみからなり、かつ1〜5,000、1〜
500、1〜200、1〜100、または例えば、1〜20炭素原子を有する有
機基; 炭素原子、酸素原子、窒素原子および水素原子のみからなり、かつ1〜5,0
00、1〜500、1〜200、1〜100、または例えば、1〜20炭素原子
を有する有機基; 炭素原子、酸素原子、硫黄原子および水素原子のみからなり、かつ1〜5,0
00、1〜500、1〜200、1〜100、または例えば、1〜20炭素原子
を有する有機基;あるいは 炭素原子、酸素原子、硫黄原子、窒素原子および水素原子のみからなり、かつ
1〜5000、1〜500、1〜200、1〜100、または例えば、1〜20
炭素原子を有する有機基。
枝状または環式構造を構成し、そして独立して以下からなる群から選択される: H原子およびC原子のみからなり、かつ1〜5,000、1〜500、1〜2
00、1〜100、または例えば、1〜20炭素原子を有するヒドロカルビル基
; 炭素原子、酸素原子および水素原子のみからなり、かつ1〜5,000、1〜
500、1〜200、1〜100、または例えば、1〜20炭素原子を有する有
機基; 炭素原子、酸素原子、窒素原子および水素原子のみからなり、かつ1〜5,0
00、1〜500、1〜200、1〜100、または例えば、1〜20炭素原子
を有する有機基; 炭素原子、酸素原子、硫黄原子および水素原子のみからなり、かつ1〜5,0
00、1〜500、1〜200、1〜100、または例えば、1〜20炭素原子
を有する有機基;あるいは 炭素原子、酸素原子、硫黄原子、窒素原子および水素原子のみからなり、かつ
1〜5000、1〜500、1〜200、1〜100、または例えば、1〜20
炭素原子を有する有機基。
【0058】
式中、Rcは「コア基」、すなわち結合価プラットホームのコアを形成し、そ
して1以上の有機基が結合している有機基を意味する。1つの実施形態において
は、コア基の結合価はyに対応する。yが1の場合、Rcは1価であり;yが2
の場合、Rcは2価であり;yが3の場合、Rcは3価であり;yが4の場合、R c は4価である、など。
して1以上の有機基が結合している有機基を意味する。1つの実施形態において
は、コア基の結合価はyに対応する。yが1の場合、Rcは1価であり;yが2
の場合、Rcは2価であり;yが3の場合、Rcは3価であり;yが4の場合、R c は4価である、など。
【0059】
Rcは、例えば、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリールであ
り得、そして例えば、直鎖状、分枝状、または環式であり得る。
り得、そして例えば、直鎖状、分枝状、または環式であり得る。
【0060】
1つの実施形態においては、Rcは、1〜2000、または1〜200炭素原
子(例えば、1〜100炭素原子、または1〜50炭素原子)を有するヒドロカ
ルビル基(すなわち、炭素および水素のみからなる)である。Rcは、例えば、
直鎖状または分枝状であり得るか、または環式構造を含み得る。1つの実施形態
においては、Rcは環式である。Rcは、飽和であり得るか、または完全にもしく
は部分的に不飽和であり得る。Rcは、芳香族構造を含むかまたは芳香族構造で
あり得る。1つの実施形態においては、Rcは、芳香族基(例えば、1と6との
間の結合価を有するベンジル基)である。Rcは、例えば、−CH2−;−CH2
CH2−;−CH2CH2CH2−;またはC(CH2−)4であり得る。Rcはさら
に、例えば、−(CH2)n−であり得、ここでnは、1〜20である。
子(例えば、1〜100炭素原子、または1〜50炭素原子)を有するヒドロカ
ルビル基(すなわち、炭素および水素のみからなる)である。Rcは、例えば、
直鎖状または分枝状であり得るか、または環式構造を含み得る。1つの実施形態
においては、Rcは環式である。Rcは、飽和であり得るか、または完全にもしく
は部分的に不飽和であり得る。Rcは、芳香族構造を含むかまたは芳香族構造で
あり得る。1つの実施形態においては、Rcは、芳香族基(例えば、1と6との
間の結合価を有するベンジル基)である。Rcは、例えば、−CH2−;−CH2
CH2−;−CH2CH2CH2−;またはC(CH2−)4であり得る。Rcはさら
に、例えば、−(CH2)n−であり得、ここでnは、1〜20である。
【0061】
1つの実施形態においては、Rcは、炭素原子、酸素原子および水素原子のみ
からなり、かつ例えば、1〜5,000、1〜500、1〜200、1〜50、
もしくは1〜20炭素原子、または例えば、1〜10炭素原子、または1〜6炭
素原子を有する有機基である。Rcは、アルコキシ基であり得るかまたはアルコ
キシ基を含み得る。1つの実施形態においては、Rcは、ポリオキシアルキレン
基(例えば、ポリオキシエチレン基またはポリオキシプロピレン基)を含むかま
たはポリオキシアルキレン基から誘導される。Rcは、2価ポリオキシアルキレ
ン基(例えば、2価ポリオキシエチレン基またはポリオキシプロピレン基)であ
り得るかまたは2価ポリオキシアルキレン基を含み得る。1つの実施形態におい
ては、Rcは、例えば、約1〜5,000、1〜500、1〜200、1〜10
0または1〜50オキシプロピレンユニット、あるいは例えば、1〜20、1〜
10、または1、2、3、4、もしくは5オキシプロピレンユニットを含む、2
価ポリオキシプロピレン基であるかまたはこのような2価ポリオキシプロピレン
基を含む。別の実施形態においては、Rcは、例えば、約1〜5,000、1〜
500、1〜200、1〜100または1〜50オキシエチレンユニット、ある
いは例えば、1〜20、1〜10、または1、2、3、4、もしくは5オキシエ
チレンユニットを含む、2価ポリオキシエチレン基であるかまたはこのような2
価ポリオキシエチレン基を含む。
からなり、かつ例えば、1〜5,000、1〜500、1〜200、1〜50、
もしくは1〜20炭素原子、または例えば、1〜10炭素原子、または1〜6炭
素原子を有する有機基である。Rcは、アルコキシ基であり得るかまたはアルコ
キシ基を含み得る。1つの実施形態においては、Rcは、ポリオキシアルキレン
基(例えば、ポリオキシエチレン基またはポリオキシプロピレン基)を含むかま
たはポリオキシアルキレン基から誘導される。Rcは、2価ポリオキシアルキレ
ン基(例えば、2価ポリオキシエチレン基またはポリオキシプロピレン基)であ
り得るかまたは2価ポリオキシアルキレン基を含み得る。1つの実施形態におい
ては、Rcは、例えば、約1〜5,000、1〜500、1〜200、1〜10
0または1〜50オキシプロピレンユニット、あるいは例えば、1〜20、1〜
10、または1、2、3、4、もしくは5オキシプロピレンユニットを含む、2
価ポリオキシプロピレン基であるかまたはこのような2価ポリオキシプロピレン
基を含む。別の実施形態においては、Rcは、例えば、約1〜5,000、1〜
500、1〜200、1〜100または1〜50オキシエチレンユニット、ある
いは例えば、1〜20、1〜10、または1、2、3、4、もしくは5オキシエ
チレンユニットを含む、2価ポリオキシエチレン基であるかまたはこのような2
価ポリオキシエチレン基を含む。
【0062】
1つの実施形態においては、Rcは:
【0063】
【化9】
【0064】
であり、
ここで、pは、2〜約500(例えば、2〜200(例えば、2〜約50、2
〜約20、2〜約10、または2〜約6)の正の整数である。1つの実施形態に
おいては、pは2、3、4、5または6である。
〜約20、2〜約10、または2〜約6)の正の整数である。1つの実施形態に
おいては、pは2、3、4、5または6である。
【0065】
1つの実施形態においては、Rcは、炭素原子、酸素原子、窒素原子および水
素原子のみからなり、かつ1〜5,000、1〜500(例えば、1〜200ま
たは1〜20炭素原子(例えば、1〜10炭素原子、または1〜6炭素原子))
を有する有機基である。このようなコア基の例としては、炭素原子、酸素原子、
窒素原子および水素原子のみからなるコア基が挙げられるが、これらに限定され
ない。
素原子のみからなり、かつ1〜5,000、1〜500(例えば、1〜200ま
たは1〜20炭素原子(例えば、1〜10炭素原子、または1〜6炭素原子))
を有する有機基である。このようなコア基の例としては、炭素原子、酸素原子、
窒素原子および水素原子のみからなるコア基が挙げられるが、これらに限定され
ない。
【0066】
1つの実施形態においては、Rcは、炭素原子、酸素原子、硫黄原子および水
素原子のみからなり、かつ1〜5,000、1〜500、または1〜200炭素
原子(例えば、1〜100炭素原子、または1〜10炭素原子)を有する有機基
である。
素原子のみからなり、かつ1〜5,000、1〜500、または1〜200炭素
原子(例えば、1〜100炭素原子、または1〜10炭素原子)を有する有機基
である。
【0067】
Rcは、例えば、C1〜200炭化水素部分;C1〜200アルコキシ部分;
または芳香族基を含むC1〜200炭化水素部分であり得る。
または芳香族基を含むC1〜200炭化水素部分であり得る。
【0068】
Rcは、2つのヒドロキシル基を有するコア化合物を含むアルコール(例えば
、エチレングリコール、ジエチレングリコール(DEGともいう)、トリエチレ
ングリコール(TEGともいう)、テトラエチレングリコール、ペンタエチレン
グリコール、ヘキサエチレングリコール、ポリエチレングリコール(PEGとも
いう)(ここでnは、代表的に1〜約200である)、および1,4−ジヒドロ
キシメチルベンゼン)であるか、またはこのようなアルコールを含む。3つのヒ
ドロキシル基を有するコア化合物を含むアルコールの例としては、フロログルシ
ノール(phluoroglucinol)(1,3,5−トリヒドロキシベン
ゼンとしても知られる)、1,3,5−トリヒドロキシメチルベンゼン、および
1,3,5−トリヒドロキシシクロヘキサンが挙げられる。4つのヒドロキシル
基を有するコア化合物を含むアルコールの例としては、ペンタエリスリトールが
挙げられる。
、エチレングリコール、ジエチレングリコール(DEGともいう)、トリエチレ
ングリコール(TEGともいう)、テトラエチレングリコール、ペンタエチレン
グリコール、ヘキサエチレングリコール、ポリエチレングリコール(PEGとも
いう)(ここでnは、代表的に1〜約200である)、および1,4−ジヒドロ
キシメチルベンゼン)であるか、またはこのようなアルコールを含む。3つのヒ
ドロキシル基を有するコア化合物を含むアルコールの例としては、フロログルシ
ノール(phluoroglucinol)(1,3,5−トリヒドロキシベン
ゼンとしても知られる)、1,3,5−トリヒドロキシメチルベンゼン、および
1,3,5−トリヒドロキシシクロヘキサンが挙げられる。4つのヒドロキシル
基を有するコア化合物を含むアルコールの例としては、ペンタエリスリトールが
挙げられる。
【0069】
式中、G2は、有機「リンカー基」を意味し得る。1つの実施形態においては
、G2は、有機基(例えば、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、またはヘテ
ロアリール)であるかまたはこのような有機基を含み、そして例えば、直鎖状、
分枝状もしくは環式構造であり得るか、または直鎖状、分枝状もしくは環式構造
を含み得る。G2は、例えば、ヒドロカルビル基、エチレンオキシ基、ポリエチ
レンオキシ基、プロピレンオキシ基もしくはポリプロピレンオキシ基、またはそ
れらの組み合わせを含み得る。G2は、必要に応じて他のヘテロ原子(Sおよび
Nを含む)を含み得る。
、G2は、有機基(例えば、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、またはヘテ
ロアリール)であるかまたはこのような有機基を含み、そして例えば、直鎖状、
分枝状もしくは環式構造であり得るか、または直鎖状、分枝状もしくは環式構造
を含み得る。G2は、例えば、ヒドロカルビル基、エチレンオキシ基、ポリエチ
レンオキシ基、プロピレンオキシ基もしくはポリプロピレンオキシ基、またはそ
れらの組み合わせを含み得る。G2は、必要に応じて他のヘテロ原子(Sおよび
Nを含む)を含み得る。
【0070】
G2はまた、アミン、アミド、エステル、エーテル、ケトン、アルデヒド、カ
ルバメートおよびチオエーテルのような官能基を含み得る。G2はまた、第1級
、第2級および第3級、飽和または不飽和アルキルアミン基(例えば、ピペラジ
ニル基またはピペリジニル基)のような官能基を含み得る。G2はまた、ポリア
ルコール、ポリアミン;ポリエーテル;ヒドラジド;ヒドラジン;カルボン酸;
無水物;ハロ;スルホニル;スルホネート;スルホン;イミデート;シアネート
;イソシアネート;イソチオシアネート;ホルメート;チオール;アルコール;
オキシム;イミン;アミノオキシ;およびマレイミドを含む官能基を含み得る。
ルバメートおよびチオエーテルのような官能基を含み得る。G2はまた、第1級
、第2級および第3級、飽和または不飽和アルキルアミン基(例えば、ピペラジ
ニル基またはピペリジニル基)のような官能基を含み得る。G2はまた、ポリア
ルコール、ポリアミン;ポリエーテル;ヒドラジド;ヒドラジン;カルボン酸;
無水物;ハロ;スルホニル;スルホネート;スルホン;イミデート;シアネート
;イソシアネート;イソチオシアネート;ホルメート;チオール;アルコール;
オキシム;イミン;アミノオキシ;およびマレイミドを含む官能基を含み得る。
【0071】
1つの実施形態においては、G2は、1〜5,000、1〜約500または1
〜約200炭素原子(例えば、1〜100炭素原子、または1〜10炭素原子を
含むヒドロカルビル基(すなわち、炭素および水素のみからなる)である。1つ
の実施形態においては、G2は、アルキル基(例えば、−(CH2)q−(ここで
、qは、1〜20である)であるか、またはこのようなアルキル基を含む。1つ
の実施形態においては、G2は、直鎖状、分枝状、もしくは環式構造であるか、
または直鎖状、分枝状、もしくは環式構造を含む。G2は、完全にまたは部分的
に不飽和または飽和であり得る。1つの実施形態においては、G2は、芳香族構
造を含む。1つの実施形態においては、G2は、芳香族である。1つの実施形態
においては、G2は、2価である。1つの実施形態においては、G2は、−(CH 2 )q−(ここで、qは、1〜約20(例えば、1〜約10、または1〜約6、ま
たは1〜約4)である)であるか、またはこれを含む。1つの実施形態において
は、G1は、−CH2−である。1つの実施形態においては、G2は、−CH2CH 2 −であるか、またはこれを含む。1つの実施形態においては、G2は、−CH2
CH2CH2−であるか、またはこれを含む。
〜約200炭素原子(例えば、1〜100炭素原子、または1〜10炭素原子を
含むヒドロカルビル基(すなわち、炭素および水素のみからなる)である。1つ
の実施形態においては、G2は、アルキル基(例えば、−(CH2)q−(ここで
、qは、1〜20である)であるか、またはこのようなアルキル基を含む。1つ
の実施形態においては、G2は、直鎖状、分枝状、もしくは環式構造であるか、
または直鎖状、分枝状、もしくは環式構造を含む。G2は、完全にまたは部分的
に不飽和または飽和であり得る。1つの実施形態においては、G2は、芳香族構
造を含む。1つの実施形態においては、G2は、芳香族である。1つの実施形態
においては、G2は、2価である。1つの実施形態においては、G2は、−(CH 2 )q−(ここで、qは、1〜約20(例えば、1〜約10、または1〜約6、ま
たは1〜約4)である)であるか、またはこれを含む。1つの実施形態において
は、G1は、−CH2−である。1つの実施形態においては、G2は、−CH2CH 2 −であるか、またはこれを含む。1つの実施形態においては、G2は、−CH2
CH2CH2−であるか、またはこれを含む。
【0072】
1つの実施形態においては、G2は、炭素原子、酸素原子および水素原子のみ
からなり、かつ1〜5,000、1〜500、1〜200、1〜50、例えば、
1〜20炭素原子、または例えば、1〜10炭素原子、または1〜6炭素原子を
有する有機基である。1つの実施形態においては、G2は、ポリオキシアルキレ
ン基から誘導される。1つの実施形態においては、G2は、2価ポリオキシアル
キレン基であるか、または2価ポリオキシアルキレン基を含む。1つの実施形態
においては、G2は、2価ポリオキシエチレン基であるか、または2価ポリオキ
シエチレン基を含む。1つの実施形態においては、G2は、2価ポリオキシプロ
ピレン基である。1つの実施形態においては、G2は、以下:
からなり、かつ1〜5,000、1〜500、1〜200、1〜50、例えば、
1〜20炭素原子、または例えば、1〜10炭素原子、または1〜6炭素原子を
有する有機基である。1つの実施形態においては、G2は、ポリオキシアルキレ
ン基から誘導される。1つの実施形態においては、G2は、2価ポリオキシアル
キレン基であるか、または2価ポリオキシアルキレン基を含む。1つの実施形態
においては、G2は、2価ポリオキシエチレン基であるか、または2価ポリオキ
シエチレン基を含む。1つの実施形態においては、G2は、2価ポリオキシプロ
ピレン基である。1つの実施形態においては、G2は、以下:
【0073】
【化10】
【0074】
であるか、またはこれを含み、
ここで、pは、2〜約200または500(例えば、2〜約50、または2〜
約20、または2〜約10、または2〜約6)である。1つの実施形態において
は、pは、2、3、4、5または6である。
約20、または2〜約10、または2〜約6)である。1つの実施形態において
は、pは、2、3、4、5または6である。
【0075】
1つの実施形態においては、G2は、炭素原子、酸素原子、窒素原子、および
水素原子のみからなり、かつ1〜5,000、1〜500、例えば、1〜200
炭素原子、例えば、1〜100炭素原子、または1〜10炭素原子を有する有機
基である。
水素原子のみからなり、かつ1〜5,000、1〜500、例えば、1〜200
炭素原子、例えば、1〜100炭素原子、または1〜10炭素原子を有する有機
基である。
【0076】
G2は、例えば、C1〜200炭化水素部分;C1〜200アルコキシ部分;
または芳香族基を含むC1〜200炭化水素部分であり得る。
または芳香族基を含むC1〜200炭化水素部分であり得る。
【0077】
1つの実施形態においては、結合価プラットホーム分子は、図19に示される
式9〜13のうちの任意の1つを有する。式9〜13中、1つの実施形態におい
ては、RcおよびG2は上記で定義されるとおりであり、そしてnは、約1〜50
0、例えば、1〜200、1〜100、または1〜50、例えば、1〜20、1
〜10、または例えば、1、2、3、4もしくは5である。1つの実施形態にお
いては、G2−ONH2は、図17で示される任意の構造を有する。
式9〜13のうちの任意の1つを有する。式9〜13中、1つの実施形態におい
ては、RcおよびG2は上記で定義されるとおりであり、そしてnは、約1〜50
0、例えば、1〜200、1〜100、または1〜50、例えば、1〜20、1
〜10、または例えば、1、2、3、4もしくは5である。1つの実施形態にお
いては、G2−ONH2は、図17で示される任意の構造を有する。
【0078】
さらなる実施形態においては、結合価プラットホーム分子は、図20、21お
よび22に示される任意の構造を有する。
よび22に示される任意の構造を有する。
【0079】
本明細書中で開示される各々の化合物および式の1つの好ましい実施形態にお
いては、結合価プラットホーム分子は、アミノオキシアルキル基(例えば、−C
H2CH2ONH2)であるアミノオキシ基を含む。
いては、結合価プラットホーム分子は、アミノオキシアルキル基(例えば、−C
H2CH2ONH2)であるアミノオキシ基を含む。
【0080】
(アミノオキシ基を含む分子の調製)
種々の分子は、本明細書中に開示されるような反応性アミノオキシ基を含むよ
うに修飾され得る。例えば、広範な種々のポリマー(例えば、ポリ(アルキレン
オキシド)ポリマー(ポリ(エチレンオキシド)ポリマーを含む)および特に、
例えば10,000ダルトン未満の分子量を有するポリエチレングリコール)は
、アミノオキシ基を含むように修飾され得る。
うに修飾され得る。例えば、広範な種々のポリマー(例えば、ポリ(アルキレン
オキシド)ポリマー(ポリ(エチレンオキシド)ポリマーを含む)および特に、
例えば10,000ダルトン未満の分子量を有するポリエチレングリコール)は
、アミノオキシ基を含むように修飾され得る。
【0081】
アミノオキシ基を含むように修飾され得る他の分子としては、分枝状、直鎖状
、ブロック、および星状ポリマーおよびコポリマー(例えば、ポリ(エチレンオ
キシド)分子のようなポリ(アルキレンオキシド)部分を含む分子)が挙げられ
る。好ましい実施形態においては、少なくとも3つのアミノオキシ基を有し、必
要に応じて約10,000未満の分子量を有するポリエチレングリコール分子が
提供される。
、ブロック、および星状ポリマーおよびコポリマー(例えば、ポリ(エチレンオ
キシド)分子のようなポリ(アルキレンオキシド)部分を含む分子)が挙げられ
る。好ましい実施形態においては、少なくとも3つのアミノオキシ基を有し、必
要に応じて約10,000未満の分子量を有するポリエチレングリコール分子が
提供される。
【0082】
1つの局面においては、結合価プラットホーム分子は、アミノオキシ基を含む
ように修飾され得る。結合価プラットホーム分子を作製する方法は、例えば、以
下に記載される:米国特許第5,162,515号;同第5,391,785号
;同第5,276,013号;同第5,786,512号;同第5,726,3
29号;同第5,268,454号;同第5,552,391号;同第5,60
6,047号;同第5,663,395号および同第5,874,409号、な
らびに米国特許出願第60/111,641号およびPCT US97/100
75。
ように修飾され得る。結合価プラットホーム分子を作製する方法は、例えば、以
下に記載される:米国特許第5,162,515号;同第5,391,785号
;同第5,276,013号;同第5,786,512号;同第5,726,3
29号;同第5,268,454号;同第5,552,391号;同第5,60
6,047号;同第5,663,395号および同第5,874,409号、な
らびに米国特許出願第60/111,641号およびPCT US97/100
75。
【0083】
結合価プラットホーム分子を作製するための当該分野において公知の方法とし
ては、伝達方法またはセグメントアプローチが挙げられる。このような方法は、
適切な試薬を用いて改変され得、得られる分子上にアミノオキシ基を提供する。
例えば、反応性基(例えば、ハライド基またはヒドロキシ基)は、反応して、必
要に応じて保護されているアミノオキシ基を含むリンカーのような分子に結合し
得る。例示的な方法は、本明細書中の実施例において実証される。
ては、伝達方法またはセグメントアプローチが挙げられる。このような方法は、
適切な試薬を用いて改変され得、得られる分子上にアミノオキシ基を提供する。
例えば、反応性基(例えば、ハライド基またはヒドロキシ基)は、反応して、必
要に応じて保護されているアミノオキシ基を含むリンカーのような分子に結合し
得る。例示的な方法は、本明細書中の実施例において実証される。
【0084】
結合価プラットホームはセグメントアプローチから調製され得、ここでセグメ
ントは独立して合成され、続いてコア基に結合される。セグメントアプローチの
代替は、樹状構造を生成するために使用され得る反復プロセスである、コア伝達
プロセスである。
ントは独立して合成され、続いてコア基に結合される。セグメントアプローチの
代替は、樹状構造を生成するために使用され得る反復プロセスである、コア伝達
プロセスである。
【0085】
コア化合物の例としては、以下のアルコールを含むアルコール含有コア化合物
が挙げられる:メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、な
らびにメトキシポリエチレングリコール、モノ−ヒドロキシルアミン、エチレン
グリコール、ジエチレングリコール、トリエチレングリコール、テトラエチレン
グリコール、ペンタエチレングリコール、ヘキサエチレングリコール、1,4−
ビス−(ヒドロキシメチル)ベンゼンおよびポリエチレングリコールHO(CH 2 CHO)nH(ここで、例えば、nは、約1〜500または1〜200、例えば
、1〜10または1〜5である)、または2つのヒドロキシル基を有する第1級
もしくは第2級アミン。
が挙げられる:メタノール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、な
らびにメトキシポリエチレングリコール、モノ−ヒドロキシルアミン、エチレン
グリコール、ジエチレングリコール、トリエチレングリコール、テトラエチレン
グリコール、ペンタエチレングリコール、ヘキサエチレングリコール、1,4−
ビス−(ヒドロキシメチル)ベンゼンおよびポリエチレングリコールHO(CH 2 CHO)nH(ここで、例えば、nは、約1〜500または1〜200、例えば
、1〜10または1〜5である)、または2つのヒドロキシル基を有する第1級
もしくは第2級アミン。
【0086】
アミノオキシプラットホームは、例えば4価の結合価を提供するように調製さ
れ得る。式2の結合価プラットホーム分子は、実施例(例えば、実施例9)に記
載されるように調製され得る。この分子は、アミノオキシ基に変換され得る末端
基を有する4価の結合価プラットホーム分子から調製され得る。一般的に、保護
ヒドロキシルアミン誘導体の酸素原子と置換し得る良好な脱離基(例えば、ハラ
イドまたはスルホネート)が使用され得る。また、ヒドロキシル基は、オキサジ
リジン型試薬またはMitsunobu化学を用いてアミノオキシ基に変換され
得る。この例においては、テトラアルキルハライドプラットホームが調製され、
そしてハライドは、N−(tert−ブチルオキシカルボニル)ヒドロキシルア
ミンの酸素原子で置換される。Boc(N−(tert−ブチルオキシカルボニ
ル))保護基の除去により、アミノオキシプラットホームを与える。
れ得る。式2の結合価プラットホーム分子は、実施例(例えば、実施例9)に記
載されるように調製され得る。この分子は、アミノオキシ基に変換され得る末端
基を有する4価の結合価プラットホーム分子から調製され得る。一般的に、保護
ヒドロキシルアミン誘導体の酸素原子と置換し得る良好な脱離基(例えば、ハラ
イドまたはスルホネート)が使用され得る。また、ヒドロキシル基は、オキサジ
リジン型試薬またはMitsunobu化学を用いてアミノオキシ基に変換され
得る。この例においては、テトラアルキルハライドプラットホームが調製され、
そしてハライドは、N−(tert−ブチルオキシカルボニル)ヒドロキシルア
ミンの酸素原子で置換される。Boc(N−(tert−ブチルオキシカルボニ
ル))保護基の除去により、アミノオキシプラットホームを与える。
【0087】
他の例は、プラットホームの末端基に結合された、適切に保護されたアルコキ
シアミン2官能性リンカーの調製を含む。式3の結合価プラットホーム分子は、
末端がヒドロキシル基である結合価プラットホーム分子から、実施例に記載され
る方法(例えば、実施例3に記載されるような)によって調製され得る。ヒドロ
キシル基は、活性カルボネートに変換される。遊離アミノ基および保護アミノオ
キシ基を有する2結合価リンカーを調製する。このリンカーは、遊離アミノ基と
炭酸エステルとの反応によってプラットホームに結合され、カルバメート結合を
形成し、そして保護基はアミノオキシ基から除去されて、アミノオキシプラット
ホームを遊離させる。
シアミン2官能性リンカーの調製を含む。式3の結合価プラットホーム分子は、
末端がヒドロキシル基である結合価プラットホーム分子から、実施例に記載され
る方法(例えば、実施例3に記載されるような)によって調製され得る。ヒドロ
キシル基は、活性カルボネートに変換される。遊離アミノ基および保護アミノオ
キシ基を有する2結合価リンカーを調製する。このリンカーは、遊離アミノ基と
炭酸エステルとの反応によってプラットホームに結合され、カルバメート結合を
形成し、そして保護基はアミノオキシ基から除去されて、アミノオキシプラット
ホームを遊離させる。
【0088】
式4の結合価プラットホーム分子は、例えば、実施例(例えば、実施例7)に
詳細に記載される方法を介して、カルボキシル基で終結する結合価プラットホー
ム分子から作製され得る。遊離アミノ基および保護アミノオキシ基を有する2結
合価リンカーが調製される。カルボキシル基は活性化され、そしてリンカーは、
遊離アミノ基と活性化カルボキシル基との反応によってプラットホームに結合し
、アミド結合を形成する。保護基はアミノオキシ基から除去され、アミノオキシ
プラットホームを遊離させる。
詳細に記載される方法を介して、カルボキシル基で終結する結合価プラットホー
ム分子から作製され得る。遊離アミノ基および保護アミノオキシ基を有する2結
合価リンカーが調製される。カルボキシル基は活性化され、そしてリンカーは、
遊離アミノ基と活性化カルボキシル基との反応によってプラットホームに結合し
、アミド結合を形成する。保護基はアミノオキシ基から除去され、アミノオキシ
プラットホームを遊離させる。
【0089】
式5の結合価プラットホーム分子は、例えば、実施例(例えば、実施例2)に
詳細に記載される方法を介して、アミノ基で終結する結合価プラットホーム分子
から作製され得る。活性化カルボキシル基および保護アミノオキシ基を有する2
結合価リンカーが調製される。プラットホーム上のアミノ基は、リンカー上の活
性化カルボキシル基と反応して、アミド結合を形成する。保護基はアミノオキシ
基から除去されて、アミノオキシプラットホームを遊離させる。
詳細に記載される方法を介して、アミノ基で終結する結合価プラットホーム分子
から作製され得る。活性化カルボキシル基および保護アミノオキシ基を有する2
結合価リンカーが調製される。プラットホーム上のアミノ基は、リンカー上の活
性化カルボキシル基と反応して、アミド結合を形成する。保護基はアミノオキシ
基から除去されて、アミノオキシプラットホームを遊離させる。
【0090】
式6の結合価プラットホーム分子は、例えば、実施例(例えば、実施例4およ
び6)に詳細に記載される方法を介して、アミノ基で終結する結合価プラットホ
ーム分子から作製され得る。活性化カルボネート基および保護アミノオキシ基を
有する2結合価リンカーが調製される。プラットホーム上のアミノ基は、リンカ
ー上の活性化カルボネートと反応して、カルバメート結合を形成する。保護基は
、アミノオキシ基から除去されて、アミノオキシプラットホームを遊離させる。
び6)に詳細に記載される方法を介して、アミノ基で終結する結合価プラットホ
ーム分子から作製され得る。活性化カルボネート基および保護アミノオキシ基を
有する2結合価リンカーが調製される。プラットホーム上のアミノ基は、リンカ
ー上の活性化カルボネートと反応して、カルバメート結合を形成する。保護基は
、アミノオキシ基から除去されて、アミノオキシプラットホームを遊離させる。
【0091】
式7の結合価プラットホーム分子は、例えば、アルデヒド基またはケトン基で
終結する結合価プラットホーム分子から、実施例(例えば、実施例8に記載のよ
うに)に詳述した方法を介して作製され得る。2つの遊離アミノオキシ基を有す
る二価リンカーが調製される。プラットホーム上のアルデヒド基またはケトン基
(実施例8ではケトン)は、過剰な二価ビスアミノオキシリンカーと反応して、
アミノオキシプラットホームを提供する。
終結する結合価プラットホーム分子から、実施例(例えば、実施例8に記載のよ
うに)に詳述した方法を介して作製され得る。2つの遊離アミノオキシ基を有す
る二価リンカーが調製される。プラットホーム上のアルデヒド基またはケトン基
(実施例8ではケトン)は、過剰な二価ビスアミノオキシリンカーと反応して、
アミノオキシプラットホームを提供する。
【0092】
式8の結合価プラットホーム分子は、例えば、アルキルハライド基で終結する
結合価プラットホーム分子から、実施例(例えば、実施例5aおよび5bに記載
のように)に詳述した方法を介して作製され得る。提供された実施例では、反応
性ハロアセチル基が使用される。遊離チオール基および保護アミノオキシ基を有
する二価リンカーが調製される。プラットホーム上のハライド(または他の適切
な脱離基)は、リンカー上の遊離チオール基と反応して、チオエーテル結合を形
成する。保護基は、アミノオキシ基から除去され、アミノオキシプラットホーム
を遊離する。
結合価プラットホーム分子から、実施例(例えば、実施例5aおよび5bに記載
のように)に詳述した方法を介して作製され得る。提供された実施例では、反応
性ハロアセチル基が使用される。遊離チオール基および保護アミノオキシ基を有
する二価リンカーが調製される。プラットホーム上のハライド(または他の適切
な脱離基)は、リンカー上の遊離チオール基と反応して、チオエーテル結合を形
成する。保護基は、アミノオキシ基から除去され、アミノオキシプラットホーム
を遊離する。
【0093】
図34に示されるように、1つの実施形態のbPEGの8マープラットホーム
では、Mは、テトラマーPNP炭酸エステル(化合物50a)が化合物133と
反応して、化合物Kの形成を生じるプロセスによって合成される。Boc保護基
が化合物Kから除去され、そして得られたオクタアミンが化合物106で処理さ
れ、化合物Lの形成を生じる。化合物MからのBoc保護基の除去は、化合物M
の形成を生じる。
では、Mは、テトラマーPNP炭酸エステル(化合物50a)が化合物133と
反応して、化合物Kの形成を生じるプロセスによって合成される。Boc保護基
が化合物Kから除去され、そして得られたオクタアミンが化合物106で処理さ
れ、化合物Lの形成を生じる。化合物MからのBoc保護基の除去は、化合物M
の形成を生じる。
【0094】
別の実施形態では、2つのPEG鎖が付着された四価アミノオキシプラットホ
ームが、2つのPEG鎖が付着された中間体122から、図35に示すように合
成される。したがって、化合物122は、NHSエステルO(Shearwat
er Polymers)と反応して、プラットホームPを形成する。「PEG
」または「ポリエチレングリコール」または「ポリエチレンオキシド」は、エチ
レンオキシドのポリマーをいうために、本明細書中で交換可能に用いられる。
ームが、2つのPEG鎖が付着された中間体122から、図35に示すように合
成される。したがって、化合物122は、NHSエステルO(Shearwat
er Polymers)と反応して、プラットホームPを形成する。「PEG
」または「ポリエチレングリコール」または「ポリエチレンオキシド」は、エチ
レンオキシドのポリマーをいうために、本明細書中で交換可能に用いられる。
【0095】
(結合体、調製方法、およびそれらの使用)
ポリオキシエチレンポリマーおよび種々の結合価プラットホーム分子のような
分子上のアミノオキシ基は、結合体を形成するように、1つ以上の分子(例えば
、生物学的に活性な分子)が共有結合でつながれてる反応基を提供する。
分子上のアミノオキシ基は、結合体を形成するように、1つ以上の分子(例えば
、生物学的に活性な分子)が共有結合でつながれてる反応基を提供する。
【0096】
用語「生物学的に活性な分子」は、(好ましくは、インビボで)生物学的活性
を有する分子をいうために、本明細書中で使用される。1つの実施形態では、生
物学的に活性な分子は、レセプタータンパク質と特異的に相互作用する分子であ
る。生物学的に活性な分子は、例えば、ポリペプチドまたは核酸であり得る。プ
ラットホームの原子価に依存して、プラットホーム分子結合体は、1、2、3、
4、5、6、7、8、9、10、11、12、またはそれより多くの生物学的に
活性な分子、あるいは例えば16、18、32、36、またはそれより多くを含
み得る。
を有する分子をいうために、本明細書中で使用される。1つの実施形態では、生
物学的に活性な分子は、レセプタータンパク質と特異的に相互作用する分子であ
る。生物学的に活性な分子は、例えば、ポリペプチドまたは核酸であり得る。プ
ラットホームの原子価に依存して、プラットホーム分子結合体は、1、2、3、
4、5、6、7、8、9、10、11、12、またはそれより多くの生物学的に
活性な分子、あるいは例えば16、18、32、36、またはそれより多くを含
み得る。
【0097】
結合体は、このような処置を必要とする個体において、抗体媒介疾患または他
の状態を処置するための方法において使用され得る。この方法は、有効量の結合
体を個体に投与する工程を包含する。結合体はまた、個体において免疫原に対す
る特異的B細胞アネルギーを誘導する方法において使用され得る。この方法は、
有効量の結合体を個体に投与する工程を包含する。結合体はまた、所望されない
抗体が免疫原に応答して産生される抗体媒介病理学のために個体を処置する方法
において使用され得る。この方法は、有効量の結合体を個体に投与する工程を包
含する。
の状態を処置するための方法において使用され得る。この方法は、有効量の結合
体を個体に投与する工程を包含する。結合体はまた、個体において免疫原に対す
る特異的B細胞アネルギーを誘導する方法において使用され得る。この方法は、
有効量の結合体を個体に投与する工程を包含する。結合体はまた、所望されない
抗体が免疫原に応答して産生される抗体媒介病理学のために個体を処置する方法
において使用され得る。この方法は、有効量の結合体を個体に投与する工程を包
含する。
【0098】
1つの実施形態では、例えば、結合体が機能的寛容原(toleragen)
として有効であるために、結合体の全分子量は、せいぜい約200,000ダル
トンであることが好ましい。
として有効であるために、結合体の全分子量は、せいぜい約200,000ダル
トンであることが好ましい。
【0099】
1つの実施形態では、生物学的に活性な分子は、例えば、米国出願第60/1
03,088号;米国出願第09/328,199号(1999年6月8日出願
);およびPCT US99/13194(1999年12月16日公開)(こ
れらの開示は本明細書中に援用される)に記載のような、β2GPIのドメイン
1ポリペプチドである。ドメイン1結合体は、安定な抗原−抗体複合体の形成を
可能にする条件下で、サンプル中の抗体を、結合体と接触させる工程;および存
在する場合、形成された安定な複合体を検出する工程により、サンプル中のβ2
GPI依存性抗リン脂質抗体(またはドメイン1β2GPIポリペプチドに特異
的に結合する抗体)の検出のための方法において使用され得る。結合体はまた、
個体において寛容原を誘導する方法において使用され得、この方法は、有効量の
結合体(特に、T細胞エピトープを欠損するドメイン1β2GPIポリペプチド
を含む結合体)を個体に投与する工程を包含し、ここで有効量は寛容を誘導する
のに十分な量である。
03,088号;米国出願第09/328,199号(1999年6月8日出願
);およびPCT US99/13194(1999年12月16日公開)(こ
れらの開示は本明細書中に援用される)に記載のような、β2GPIのドメイン
1ポリペプチドである。ドメイン1結合体は、安定な抗原−抗体複合体の形成を
可能にする条件下で、サンプル中の抗体を、結合体と接触させる工程;および存
在する場合、形成された安定な複合体を検出する工程により、サンプル中のβ2
GPI依存性抗リン脂質抗体(またはドメイン1β2GPIポリペプチドに特異
的に結合する抗体)の検出のための方法において使用され得る。結合体はまた、
個体において寛容原を誘導する方法において使用され得、この方法は、有効量の
結合体(特に、T細胞エピトープを欠損するドメイン1β2GPIポリペプチド
を含む結合体)を個体に投与する工程を包含し、ここで有効量は寛容を誘導する
のに十分な量である。
【0100】
別の実施形態では、結合価プラットホーム分子と少なくとも1つのαGalエ
ピトープまたはそのアナログ(これは、抗αGal抗体に特異的に結合する)と
の結合体が提供される。別の局面では、個体中の循環レベルの抗αGal抗体を
減少させる方法が提供され、この方法は、有効量の結合体を個体に投与する工程
を包含し、ここで有効量は、抗αGal抗体の循環レベルを減少させるか、また
は抗αGal抗体の循環レベルを中和するに十分な量である。別の局面では、免
疫学的寛容(一般に、異物移植抗原に対する、より詳細には、αGalに対する
)を誘導する方法が提供され、この方法は、αGalエピトープまたはそのアナ
ログを含む有効量の結合体を投与する工程を包含する。結合体はまた、生物学的
サンプル中の抗αGal抗体の存在および/または量を検出するために使用され
得る。個体において異物移植を実施する方法もまた提供され、この方法は、結合
体を個体に投与する工程;および個体に対する異種組織を導入する工程を包含す
る。別の局面では、移植された組織の拒絶を抑制する方法が提供され、これは、
拒絶を抑制するのに十分な量で結合体を個体に投与する工程を包含する。これら
の方法は、PCT US99/29338において一般に記載される。
ピトープまたはそのアナログ(これは、抗αGal抗体に特異的に結合する)と
の結合体が提供される。別の局面では、個体中の循環レベルの抗αGal抗体を
減少させる方法が提供され、この方法は、有効量の結合体を個体に投与する工程
を包含し、ここで有効量は、抗αGal抗体の循環レベルを減少させるか、また
は抗αGal抗体の循環レベルを中和するに十分な量である。別の局面では、免
疫学的寛容(一般に、異物移植抗原に対する、より詳細には、αGalに対する
)を誘導する方法が提供され、この方法は、αGalエピトープまたはそのアナ
ログを含む有効量の結合体を投与する工程を包含する。結合体はまた、生物学的
サンプル中の抗αGal抗体の存在および/または量を検出するために使用され
得る。個体において異物移植を実施する方法もまた提供され、この方法は、結合
体を個体に投与する工程;および個体に対する異種組織を導入する工程を包含す
る。別の局面では、移植された組織の拒絶を抑制する方法が提供され、これは、
拒絶を抑制するのに十分な量で結合体を個体に投与する工程を包含する。これら
の方法は、PCT US99/29338において一般に記載される。
【0101】
結合体はまた、狼瘡の免疫寛容処置(必要に応じて、個体由来の抗体(例えば
、狼瘡に関連する抗体、つまり、抗二本鎖DNA抗体)の初期親和性の評価に基
づく)に使用され得、そして処置する個体を選択するための基礎として、または
抗体親和性の評価に基づく処置に適切(または非適切)な個体を同定する方法に
おいて使用され得る。個体における全身性エリテマトーデス(SLE)を処置す
る方法は、その個体に結合体を投与する工程を包含し、この結合体は、(a)非
免疫原性結合価プラットホーム分子および(b)二本鎖DNAに特異的に結合す
るその個体由来の抗体に特異的に結合する2以上のポリヌクレオチドを含む。こ
れらの方法は、PCT US99/29336に一般的に記載される。
、狼瘡に関連する抗体、つまり、抗二本鎖DNA抗体)の初期親和性の評価に基
づく)に使用され得、そして処置する個体を選択するための基礎として、または
抗体親和性の評価に基づく処置に適切(または非適切)な個体を同定する方法に
おいて使用され得る。個体における全身性エリテマトーデス(SLE)を処置す
る方法は、その個体に結合体を投与する工程を包含し、この結合体は、(a)非
免疫原性結合価プラットホーム分子および(b)二本鎖DNAに特異的に結合す
るその個体由来の抗体に特異的に結合する2以上のポリヌクレオチドを含む。こ
れらの方法は、PCT US99/29336に一般的に記載される。
【0102】
従って、この原子価プラットホームは、共有結合的に連結されて、以下を含む
1以上の生物学的に活性な分子と結合体を形成し得る;オリゴヌクレオチド、ペ
プチド、ポリペプチド、タンパク質、抗体、サッカリド、ポリサッカリド、エピ
トープ、ミモトープ、酵素、ホルモンおよび薬物、脂質、脂肪酸、または結合体
を形成するそれらの混合物。
1以上の生物学的に活性な分子と結合体を形成し得る;オリゴヌクレオチド、ペ
プチド、ポリペプチド、タンパク質、抗体、サッカリド、ポリサッカリド、エピ
トープ、ミモトープ、酵素、ホルモンおよび薬物、脂質、脂肪酸、または結合体
を形成するそれらの混合物。
【0103】
用語「タンパク質」、「ポリペプチド」および「ペプチド」は、本明細書中で
交換可能に使用され、任意の長さのアミノ酸のポリマーをいう。ポリマーは、直
鎖であっても、分枝状であってもよく、改変されたアミノ酸を含んでもよく、そ
して非アミノ酸によって中断されてもよい。ポリマーはまた、天然で改変されて
もよく、または介入(例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、ミリスト
イル化、アセチル化、アルキル化、リン酸化または脱リン酸化)によって改変さ
れてもよい。アミノ酸の1以上のアナログ(例えば、非天然のアミノ酸を含む)
ならびに当該分野で公知の他の改変を含むポリペプチドもまた、この定義に含ま
れる。
交換可能に使用され、任意の長さのアミノ酸のポリマーをいう。ポリマーは、直
鎖であっても、分枝状であってもよく、改変されたアミノ酸を含んでもよく、そ
して非アミノ酸によって中断されてもよい。ポリマーはまた、天然で改変されて
もよく、または介入(例えば、ジスルフィド結合形成、グリコシル化、ミリスト
イル化、アセチル化、アルキル化、リン酸化または脱リン酸化)によって改変さ
れてもよい。アミノ酸の1以上のアナログ(例えば、非天然のアミノ酸を含む)
ならびに当該分野で公知の他の改変を含むポリペプチドもまた、この定義に含ま
れる。
【0104】
原子価プラットホームおよびアミノオキシ基を含む他の分子の結合体の1つの
利点は、係留されている生物学的に活性な分子のその結合パートナーに対する増
大した親和性を導入する能力である(例えば、その結合パートナーがクラスター
で会合される場合)。結合価プラットホーム分子に対する複数の生物学的分子の
共有結合は、これらが、例えば、そのプラットホーム分子上に一緒に会合される
場合に、これらの生体分子の増大した局所的濃縮を提供する。この原子価プラッ
トホームの別の利点は、B細胞寛容に有用であるような、複数のリガンドの結合
を容易にする能力である。例えば、結合体は、多価エピトープを提示してB細胞
の表面上にクラスター形成を誘導する寛容原として使用され得る。この原子価プ
ラットホームの別の利点は、「コア」上に官能性を含む能力であり、この「コア
」は、独立して改変されて、特定の目的に合わせ得る結合体の調製を可能にし得
る。
利点は、係留されている生物学的に活性な分子のその結合パートナーに対する増
大した親和性を導入する能力である(例えば、その結合パートナーがクラスター
で会合される場合)。結合価プラットホーム分子に対する複数の生物学的分子の
共有結合は、これらが、例えば、そのプラットホーム分子上に一緒に会合される
場合に、これらの生体分子の増大した局所的濃縮を提供する。この原子価プラッ
トホームの別の利点は、B細胞寛容に有用であるような、複数のリガンドの結合
を容易にする能力である。例えば、結合体は、多価エピトープを提示してB細胞
の表面上にクラスター形成を誘導する寛容原として使用され得る。この原子価プ
ラットホームの別の利点は、「コア」上に官能性を含む能力であり、この「コア
」は、独立して改変されて、特定の目的に合わせ得る結合体の調製を可能にし得
る。
【0105】
一般に、アミノオキシ基を含む分子は、カルボニル基を含む第2の分子(例え
ば、アルデヒドまたはケトン)と反応されて、オキシム結合体を形成する。この
第2の分子は、反応性のアルデヒドまたはケトンを含むように改変され得る。こ
のオキシム結合は、さらに改変され得る。例えば、これは、公知の方法による還
元または求核試薬での反応を介してアミノオキシ結合に変換され得、アミノオキ
シ結合体を形成する。
ば、アルデヒドまたはケトン)と反応されて、オキシム結合体を形成する。この
第2の分子は、反応性のアルデヒドまたはケトンを含むように改変され得る。こ
のオキシム結合は、さらに改変され得る。例えば、これは、公知の方法による還
元または求核試薬での反応を介してアミノオキシ結合に変換され得、アミノオキ
シ結合体を形成する。
【0106】
1つの実施形態において、アミノオキシ基を含む多価の、好ましくは非免疫原
性結合価プラットホーム分子との、ネイティブポリペプチドまたはタンパク質の
化学的に規定された多価結合体を調製する方法が、提供される。ここで、必要な
場合、このポリペプチドは、このポリペプチドの特定の位置にアルデヒドまたは
ケトン部分を生成するように選択的に改変される。次いで、このポリペプチドは
、アミノオキシ基を含む多価結合価プラットホーム分子と反応され、このプラッ
トホームとポリペプチドとの間に1以上のオキシム連結を形成する。
性結合価プラットホーム分子との、ネイティブポリペプチドまたはタンパク質の
化学的に規定された多価結合体を調製する方法が、提供される。ここで、必要な
場合、このポリペプチドは、このポリペプチドの特定の位置にアルデヒドまたは
ケトン部分を生成するように選択的に改変される。次いで、このポリペプチドは
、アミノオキシ基を含む多価結合価プラットホーム分子と反応され、このプラッ
トホームとポリペプチドとの間に1以上のオキシム連結を形成する。
【0107】
実質的に任意のポリペプチドまたは他の分子のアミン(例えば、N末端の)は
、アミノ基転移反応として当該分野で公知の反応によって、アルデヒドまたはケ
トンに変換され得る。本質的に、アミノ基転移反応は、炭素−窒素単結合を、炭
素−酸素二重結合に変換する。例えば、N末端のグリシンは、反応して、図1に
示されるように、グリオキシル基(アルデヒド)を形成し得る。多くの他のアミ
ノ酸は、そのアミノ酸側鎖によってケトンを形成するように反応する。
、アミノ基転移反応として当該分野で公知の反応によって、アルデヒドまたはケ
トンに変換され得る。本質的に、アミノ基転移反応は、炭素−窒素単結合を、炭
素−酸素二重結合に変換する。例えば、N末端のグリシンは、反応して、図1に
示されるように、グリオキシル基(アルデヒド)を形成し得る。多くの他のアミ
ノ酸は、そのアミノ酸側鎖によってケトンを形成するように反応する。
【0108】
N末端にグリオキシル基を形成する別の方法は、過ヨウ素酸ナトリウムでのN
末端セリンまたはトレオニンの酸化である。この酸化は、N末端セリンまたはト
レオニンのヒドロキシル基とアミノ基との間の炭素−炭素結合を切断し、グリオ
キシル基を提供する。従って、1つの実施形態において、ポリペプチドは、N末
端にケトンまたはアルデヒドを形成することによって部位特異的に改変され得る
。合成のポリペプチドおよび他の薬物または生物学的に活性な分子は、オキシム
連結を形成するために使用され得るアルデヒドまたはケトンを含むように同様に
改変され得る。
末端セリンまたはトレオニンの酸化である。この酸化は、N末端セリンまたはト
レオニンのヒドロキシル基とアミノ基との間の炭素−炭素結合を切断し、グリオ
キシル基を提供する。従って、1つの実施形態において、ポリペプチドは、N末
端にケトンまたはアルデヒドを形成することによって部位特異的に改変され得る
。合成のポリペプチドおよび他の薬物または生物学的に活性な分子は、オキシム
連結を形成するために使用され得るアルデヒドまたはケトンを含むように同様に
改変され得る。
【0109】
アミノオキシ反応性基を含む多価プラットホームは、このプラットホームへの
、選択的に改変されたポリペプチドの共有結合を可能にする。結合価プラットホ
ーム分子は、例えば、アミノオキシアセチル基またはアミノオキシアルキル基を
含み得る。
、選択的に改変されたポリペプチドの共有結合を可能にする。結合価プラットホ
ーム分子は、例えば、アミノオキシアセチル基またはアミノオキシアルキル基を
含み得る。
【0110】
本明細書中で使用される場合、「アミノオキシアセチル基」とは、αカルボニ
ルを含むアミノオキシ基(例えば、−COCH2−ONH2)をいい、一方、「ア
ミノオキシアルキル基」とは、第1炭素上のアミノオキシ基をいい、ここで、こ
の第1炭素は、好ましくは、カルボニル基の一部である第2炭素のような、電子
吸引基に直接的に結合されない。1つの好ましいアミノオキシアルキル基は、−
CH2−CH2−ONH2である。アミノオキシアルキル基の他の実施形態として
は、−CH(OH)CH2ONH2および−CH2CH(CH3)ONH2が挙げら
れらる。
ルを含むアミノオキシ基(例えば、−COCH2−ONH2)をいい、一方、「ア
ミノオキシアルキル基」とは、第1炭素上のアミノオキシ基をいい、ここで、こ
の第1炭素は、好ましくは、カルボニル基の一部である第2炭素のような、電子
吸引基に直接的に結合されない。1つの好ましいアミノオキシアルキル基は、−
CH2−CH2−ONH2である。アミノオキシアルキル基の他の実施形態として
は、−CH(OH)CH2ONH2および−CH2CH(CH3)ONH2が挙げら
れらる。
【0111】
アミノオキシアセチル(AOA)基は、N保護化アミノオキシアセチル基での
アシル化、その後の保護基の除去によって、アミン基含有多価プラットホームに
結合され得る。アミノオキシアセチル基とのグリオキシルポリペプチドの反応は
、緩やかに進行し、このポリペプチドとアミノオキシ官能化プラットホームとの
間のオキシム連結を形成する。この反応に必要な長い反応時間は、競合する副反
応を生じ得る。グリシン以外のN末端アミノ酸のアミノ基転移で形成される、N
末端α−ケト−アミドは、多価結合体を作製するために、さらにより緩やかに反
応するか、全く反応しない。
アシル化、その後の保護基の除去によって、アミン基含有多価プラットホームに
結合され得る。アミノオキシアセチル基とのグリオキシルポリペプチドの反応は
、緩やかに進行し、このポリペプチドとアミノオキシ官能化プラットホームとの
間のオキシム連結を形成する。この反応に必要な長い反応時間は、競合する副反
応を生じ得る。グリシン以外のN末端アミノ酸のアミノ基転移で形成される、N
末端α−ケト−アミドは、多価結合体を作製するために、さらにより緩やかに反
応するか、全く反応しない。
【0112】
アミノオキシアルキル基(AOアルキル基)は、好ましく、かつアミノオキシ
アセチル基よりも容易にケトンおよびアルデヒドと反応して、オキシムを形成す
る。例えば、アルキル鎖(例えば、トリエチレングリコール鎖)上のアミノオキ
シ基は、オキシム形成において、類似のアミノオキシアセチル基よりも10倍以
上より反応性である。アミノオキシアセチル基は、一般に、カルボニルに隣接し
ていない他のアミノオキシ基(アミノオキシアルキル基)よりも反応性は低い。
アミノオキシアセチル基のカルボニルは、電子吸引効果に起因して反応性を低下
すると考えられる。
アセチル基よりも容易にケトンおよびアルデヒドと反応して、オキシムを形成す
る。例えば、アルキル鎖(例えば、トリエチレングリコール鎖)上のアミノオキ
シ基は、オキシム形成において、類似のアミノオキシアセチル基よりも10倍以
上より反応性である。アミノオキシアセチル基は、一般に、カルボニルに隣接し
ていない他のアミノオキシ基(アミノオキシアルキル基)よりも反応性は低い。
アミノオキシアセチル基のカルボニルは、電子吸引効果に起因して反応性を低下
すると考えられる。
【0113】
1実施形態において、オキシムを形成するために反応性を増強するように設計
された、プラットホーム上でグリオキシルポリペプチドと反応し得る末端アミノ
オキシアルキル基が提供される。1実施形態において、アミノオキシ基は、トリ
エチレン基またはヘキシル鎖上に提供される;しかし、任意の他の鎖としては、
炭素、酸素、窒素または硫黄原子を含む、鎖が挙げられる。1つの好ましい実施
形態において、プラットホーム分子中のアミノオキシ基は、アミノオキシアルキ
ル基(例えば、−CH2CH2ONH2)である。
された、プラットホーム上でグリオキシルポリペプチドと反応し得る末端アミノ
オキシアルキル基が提供される。1実施形態において、アミノオキシ基は、トリ
エチレン基またはヘキシル鎖上に提供される;しかし、任意の他の鎖としては、
炭素、酸素、窒素または硫黄原子を含む、鎖が挙げられる。1つの好ましい実施
形態において、プラットホーム分子中のアミノオキシ基は、アミノオキシアルキ
ル基(例えば、−CH2CH2ONH2)である。
【0114】
アルデヒドまたはケトン官能基を有する生体高分子を、オキシム結合形成を介
してアミノオキシプラットホームに結合させる例を、実施例において提供する。
実施例10および11は、アミノ転移されたポリペプチド、あるいはその他にア
ルデヒドまたはケトン基で改変したポリペプチドが、アミノオキシプラットホー
ムとどのように反応するかを記載する。この場合において、酸性水溶液中におい
てプラットホームをグリオキシル−ポリペプチドで処理することによって、アミ
ノ転移されたドメイン1が4価のプラットホームに結合される。好ましい酸性条
件は、pH4.6の酢酸ナトリウム(100mM)である。4価のドメイン1結
合体を生成する場合において、4当量より過剰(例えば、6当量)のアミノ転移
されたドメイン1が使用される。アミノオキシアルキル反応基は、アミノオキシ
アセチル基よりも反応性であり、この反応性は、副生成物が生成するより低い可
能性で、この反応がより容易に開始することを可能にする。実施例10は、アミ
ノオキシアセチルプラットホームを含む結合体の形成を記載する。実施例11は
、アミノオキシアルキルプラットホームを有する結合体の形成を記載する。
してアミノオキシプラットホームに結合させる例を、実施例において提供する。
実施例10および11は、アミノ転移されたポリペプチド、あるいはその他にア
ルデヒドまたはケトン基で改変したポリペプチドが、アミノオキシプラットホー
ムとどのように反応するかを記載する。この場合において、酸性水溶液中におい
てプラットホームをグリオキシル−ポリペプチドで処理することによって、アミ
ノ転移されたドメイン1が4価のプラットホームに結合される。好ましい酸性条
件は、pH4.6の酢酸ナトリウム(100mM)である。4価のドメイン1結
合体を生成する場合において、4当量より過剰(例えば、6当量)のアミノ転移
されたドメイン1が使用される。アミノオキシアルキル反応基は、アミノオキシ
アセチル基よりも反応性であり、この反応性は、副生成物が生成するより低い可
能性で、この反応がより容易に開始することを可能にする。実施例10は、アミ
ノオキシアセチルプラットホームを含む結合体の形成を記載する。実施例11は
、アミノオキシアルキルプラットホームを有する結合体の形成を記載する。
【0115】
4価のドメイン1結合体を調製する2つの代替の方法を、実施例13および1
4において示す。これらの実施例の両方は、リンカーを、オキシム結合を介して
アミノ転移されたドメイン1に結合させ、次いで適切な反応基をプラットホーム
に結合させるリンカーを使用する工程を包含する。このリンカーをアミノ転移さ
せたドメイン1に結合させる利点は、第1に、過剰のリンカーが、オキシム形成
反応を完了へと駆動するために添加され得ることである。
4において示す。これらの実施例の両方は、リンカーを、オキシム結合を介して
アミノ転移されたドメイン1に結合させ、次いで適切な反応基をプラットホーム
に結合させるリンカーを使用する工程を包含する。このリンカーをアミノ転移さ
せたドメイン1に結合させる利点は、第1に、過剰のリンカーが、オキシム形成
反応を完了へと駆動するために添加され得ることである。
【0116】
実施例13は、どのように、ビスアミノオキシリンカーが第1にドメイン1に
最初に結合され、次いで結合されるアミノオキシリンカーを有するポリペプチド
がケトン誘導体化プラットホームと反応して、所望の4価の結合体を提供するか
を記載する。
最初に結合され、次いで結合されるアミノオキシリンカーを有するポリペプチド
がケトン誘導体化プラットホームと反応して、所望の4価の結合体を提供するか
を記載する。
【0117】
実施例14は、どのようにして、ヘテロ二官能性リンカーを使用して、チオー
ルリンカーをオキシム結合を介してドメイン1に結合させ得るかを記載する。次
いで、結合されたチオールリンカーを有するドメイン1は、反応性アルキルハラ
イドプラットホームと反応して、4価の結合体を提供する。
ルリンカーをオキシム結合を介してドメイン1に結合させ得るかを記載する。次
いで、結合されたチオールリンカーを有するドメイン1は、反応性アルキルハラ
イドプラットホームと反応して、4価の結合体を提供する。
【0118】
実施例13および14において形成される結合体は、リンカーが第1にプラッ
トホームに結合され、アミノ転移されたドメイン1を有する結合体を生じる場合
に形成される結合体と同一の結合体であることが明らかである。
トホームに結合され、アミノ転移されたドメイン1を有する結合体を生じる場合
に形成される結合体と同一の結合体であることが明らかである。
【0119】
本明細書において、同一の引用例として引用されている、全ての刊行物、特許
、特許出願、および公開された特許出願の開示は、本明細書において、その全体
が参考として援用される。
、特許出願、および公開された特許出願の開示は、本明細書において、その全体
が参考として援用される。
【0120】
本発明は、以下の非制限的実施例によってさらに理解される。
【0121】
(実施例)
以下の実施例において、以下の略語が使用される:DCC(1,3−ジクロロ
ヘキシルカルボジイミド);DIC(1,3−ジイソプロピルカルボジイミド)
;DBU(1,8−ジアザビシクロ[5.4.0]ウンデカ−7−エン);NH
S(N−ヒドロキシスクシンイミド);HOBt(1−ヒドロキシベンゾトリア
ゾール);DMF(ジメチルホルムアミド)。
ヘキシルカルボジイミド);DIC(1,3−ジイソプロピルカルボジイミド)
;DBU(1,8−ジアザビシクロ[5.4.0]ウンデカ−7−エン);NH
S(N−ヒドロキシスクシンイミド);HOBt(1−ヒドロキシベンゾトリア
ゾール);DMF(ジメチルホルムアミド)。
【0122】
(実施例1−ドメイン1のアミノ転移)
(アミノ転移されたドメイン1(TA/D1)の合成):水および酢酸ナトリ
ウム緩衝液を、使用の前にヘリウムで分散させた。β2GPIのドメイン1ポリ
ペプチドを使用した。このことは、1998年10月5日に出願された米国出願
第60/103,088号;1999年6月8日に出願された米国出願第09/
328,199号;およびPCT US99/13194に記載される。これら
の開示は、本明細書中で援用される。図1に例示されるようにドメイン1ポリペ
プチドは、N−末端グリシンを有する。ドメイン1(10.55mg,1.49
μmol)を、ポリプロピレンチューブ中のH2O(0.5mL)に溶解し、そ
して2MのpH5.5のNaAOc緩衝液(4.0mL)を添加した。3.73
mg(14.9μmol)のCuSO4のH2O(0.5mL)中の溶液を、この
混合物に添加し、続いて、2.75mg(29.9μmol)のグリオキサル酸
の2MのpH5.5NaOAc緩衝溶液(0.5mL)を添加した。この混合物
を、窒素雰囲下において保持し、そしてゆっくり18時間かけて攪拌した。28
0nmで検出する、4.6mm×250mm,300Å,5μm,ジフェニルカ
ラム(Vydac,Hesperia,CA)を使用する分析用HPLC(1m
L/分;勾配25%〜45%B,0〜20分,A=0.1%のTFA/H2O,
B=0.1%のTFA/CH3CN)によると、反応は18時間で完了するよう
であった。保持時間は、ほぼ以下の通りである:D1,13.2分;TA/D1
,13.7分;酸化TA/D1,13.4分)。この混合物を、0.1%のTF
A/H2Oで20mLの体積まで希釈し、濾過し、そしてHPLC(22.4m
m×250mm,300Å,10μm,ジフェニルカラム(Vydac)(12
mL/分;勾配25%〜40%B,0〜40分,A=0.1%のTFA/H2O
,B=0.1%のTFA/CH3CN)によって精製した。分析用HPLCによ
って明らかとされた純粋なTA/D1を含むフラクションを所蔵させそして凍結
乾燥させて、5.0mg(48%)のTA/D1を得した。この反応スキームを
図1に示す。
ウム緩衝液を、使用の前にヘリウムで分散させた。β2GPIのドメイン1ポリ
ペプチドを使用した。このことは、1998年10月5日に出願された米国出願
第60/103,088号;1999年6月8日に出願された米国出願第09/
328,199号;およびPCT US99/13194に記載される。これら
の開示は、本明細書中で援用される。図1に例示されるようにドメイン1ポリペ
プチドは、N−末端グリシンを有する。ドメイン1(10.55mg,1.49
μmol)を、ポリプロピレンチューブ中のH2O(0.5mL)に溶解し、そ
して2MのpH5.5のNaAOc緩衝液(4.0mL)を添加した。3.73
mg(14.9μmol)のCuSO4のH2O(0.5mL)中の溶液を、この
混合物に添加し、続いて、2.75mg(29.9μmol)のグリオキサル酸
の2MのpH5.5NaOAc緩衝溶液(0.5mL)を添加した。この混合物
を、窒素雰囲下において保持し、そしてゆっくり18時間かけて攪拌した。28
0nmで検出する、4.6mm×250mm,300Å,5μm,ジフェニルカ
ラム(Vydac,Hesperia,CA)を使用する分析用HPLC(1m
L/分;勾配25%〜45%B,0〜20分,A=0.1%のTFA/H2O,
B=0.1%のTFA/CH3CN)によると、反応は18時間で完了するよう
であった。保持時間は、ほぼ以下の通りである:D1,13.2分;TA/D1
,13.7分;酸化TA/D1,13.4分)。この混合物を、0.1%のTF
A/H2Oで20mLの体積まで希釈し、濾過し、そしてHPLC(22.4m
m×250mm,300Å,10μm,ジフェニルカラム(Vydac)(12
mL/分;勾配25%〜40%B,0〜40分,A=0.1%のTFA/H2O
,B=0.1%のTFA/CH3CN)によって精製した。分析用HPLCによ
って明らかとされた純粋なTA/D1を含むフラクションを所蔵させそして凍結
乾燥させて、5.0mg(48%)のTA/D1を得した。この反応スキームを
図1に示す。
【0123】
(実施例2−アミノオキシアセチル/PITGプラットホームの合成)
この合成スキームを、図2に示す。
【0124】
(N−(tert−ブチルオキシカルボニル)アミノオキシ酢酸4−ニトロフ
ェニル,2):1.5g(7.85mmol)のN−(tert−ブチルオキシ
カルボニル)アミノオキシ酢酸(Aldrich Chemical Co.,
St.Louis,MO)化合物1の0℃で攪拌させた無水THF溶液(35m
L)に、1.09g(7.85mmol)の4−ニトロフェノールを添加し、続
いて1.62g(7.85mmol)のDCCを添加した。この混合物を、窒素
雰囲気下で0.5時間0℃で攪拌し、そして室温で18時間攪拌した。この混合
物を濾過し、ジシクロヘキシルウレアを除去し、そして濾液を濃縮て、そしてシ
リカゲルクロマトグラフィー(95/5のCHCl3/イソプロピルアルコール
)で精製して、2.30g(94%)の化合物2を白色の固体として得た。1H
NMR(CDCl3)δ1.51(s,9H),4.73(s,2H),7.
36(d,2H),7.73(s,1H),8.32(d,2H)。
ェニル,2):1.5g(7.85mmol)のN−(tert−ブチルオキシ
カルボニル)アミノオキシ酢酸(Aldrich Chemical Co.,
St.Louis,MO)化合物1の0℃で攪拌させた無水THF溶液(35m
L)に、1.09g(7.85mmol)の4−ニトロフェノールを添加し、続
いて1.62g(7.85mmol)のDCCを添加した。この混合物を、窒素
雰囲気下で0.5時間0℃で攪拌し、そして室温で18時間攪拌した。この混合
物を濾過し、ジシクロヘキシルウレアを除去し、そして濾液を濃縮て、そしてシ
リカゲルクロマトグラフィー(95/5のCHCl3/イソプロピルアルコール
)で精製して、2.30g(94%)の化合物2を白色の固体として得た。1H
NMR(CDCl3)δ1.51(s,9H),4.73(s,2H),7.
36(d,2H),7.73(s,1H),8.32(d,2H)。
【0125】
(Boc保護アミノオキシアセチル/PITGプラットホーム4の合成):化
合物3(300mg,0.235mmol)(PCT/US97/10075に
記載されるように調製した)を、30%のHBr酢酸溶液(1.5mL)で30
分かけて沈殿した。得られたテトラアミンのHBr塩を、ジエチルエーテルの添
加により調製した。この混合物を遠心分離し、そして上清を除去および処分した
。得られた固体を、エーテルで洗浄し、減圧下で乾燥し、そしてDMF(9mL
)に溶解した。得られた混合物に、294μL(1.69mmol)のジイソプ
ロピルエチルアミンを添加し、続いて410mg(13.1mmol)の化合物
2のDMF(3mL)溶液を添加した。この混合物を窒素雰囲気下で4時間かけ
て攪拌し、15/1のCHCl3/MeOHとブラインとの間で分配した。この
水層を、15/1のCHCl3/MeOHで2回洗浄し、そして合わせた有機層
を乾燥(Na2SO4)し、そして濃縮して680mgの油状物を得た。シリカゲ
ルクロマトグラフィー(段階勾配95/5〜75/25のCHCl3/MeOH
)による精製により、215mg(65%)の化合物4を白色の固体として得た
。1H NMR(CDCl3)δ1.49(s,36H),3.40〜3.73(
m,40H),4.24(m,12H),4.59(重なり合った1重線,8H
),8.21(s,2H),8.32(s,2H)。
合物3(300mg,0.235mmol)(PCT/US97/10075に
記載されるように調製した)を、30%のHBr酢酸溶液(1.5mL)で30
分かけて沈殿した。得られたテトラアミンのHBr塩を、ジエチルエーテルの添
加により調製した。この混合物を遠心分離し、そして上清を除去および処分した
。得られた固体を、エーテルで洗浄し、減圧下で乾燥し、そしてDMF(9mL
)に溶解した。得られた混合物に、294μL(1.69mmol)のジイソプ
ロピルエチルアミンを添加し、続いて410mg(13.1mmol)の化合物
2のDMF(3mL)溶液を添加した。この混合物を窒素雰囲気下で4時間かけ
て攪拌し、15/1のCHCl3/MeOHとブラインとの間で分配した。この
水層を、15/1のCHCl3/MeOHで2回洗浄し、そして合わせた有機層
を乾燥(Na2SO4)し、そして濃縮して680mgの油状物を得た。シリカゲ
ルクロマトグラフィー(段階勾配95/5〜75/25のCHCl3/MeOH
)による精製により、215mg(65%)の化合物4を白色の固体として得た
。1H NMR(CDCl3)δ1.49(s,36H),3.40〜3.73(
m,40H),4.24(m,12H),4.59(重なり合った1重線,8H
),8.21(s,2H),8.32(s,2H)。
【0126】
(アミノオキシアセチル/PITGプラットホーム、化合物5:)HClガス
を、15分間、10/1/1のEtOAc/CHCl3/MeOH中の67mg
(0.047mmol)の化合物4の攪拌溶液に通してバブリングし、そしてこ
の混合物をさらに15分間攪拌した。この混合物を減圧下で濃縮し、16時間減
圧下で維持して、43mg(78%)の化合物5を白色固体として得た:1H
NMR(DMSO)δ3.33−3.67(m、40H)、4.08(m、4H
)、4.18(s、8H)、4.90(s、8H);質量スペクトル(ES)m
/z、C40H69N14O18(M+H)に対する計算値:1033。実測値:103
3。
を、15分間、10/1/1のEtOAc/CHCl3/MeOH中の67mg
(0.047mmol)の化合物4の攪拌溶液に通してバブリングし、そしてこ
の混合物をさらに15分間攪拌した。この混合物を減圧下で濃縮し、16時間減
圧下で維持して、43mg(78%)の化合物5を白色固体として得た:1H
NMR(DMSO)δ3.33−3.67(m、40H)、4.08(m、4H
)、4.18(s、8H)、4.90(s、8H);質量スペクトル(ES)m
/z、C40H69N14O18(M+H)に対する計算値:1033。実測値:103
3。
【0127】
(実施例3−AOTEG/DEA/DEGプラットホームの合成)
合成スキームを図3に示す。
【0128】
2−[2−(2−ヨードエトキシ)エトキシ]エタノール、7:2−[2−(
2−クロロエトキシ)エトキシ]エタノール(Aldrich Chemica
l Co.)(12.66g、75.1mmol)およびヨウ化ナトリウム(3
3.77g、225.3mmol)を、250mLのアセトンに溶解した。還流
冷却器をフラスコに取り付け、そしてこの混合物を18時間加熱還流させた。冷
却して、この混合物を濃縮し、そして残渣を400mLのCH2Cl2ならびに3
00mLの水および100mLの飽和亜硫酸水素ナトリウム水溶液の混合物で振
盪した。水相を二回、400mLのCH2Cl2で二回洗浄し、そして合わせたC
H2Cl2層を、乾燥(MgSO4)し、濾過し、そして濃縮して、18.3g(
94%)の7を淡黄色油状物として得、これを、さらなる精製なしで次の工程に
使用した:1H NMR(CDCl3)δ2.43(brd s、1H)、3.2
8(t、2H)、3.61(m、2H)、3.68(s、4H)、3.78(m
、4H);質量スペクトル(ES)m/z C6H13O3INaに対する計算値(
M+Na):283.0。実測値:283.0。
2−クロロエトキシ)エトキシ]エタノール(Aldrich Chemica
l Co.)(12.66g、75.1mmol)およびヨウ化ナトリウム(3
3.77g、225.3mmol)を、250mLのアセトンに溶解した。還流
冷却器をフラスコに取り付け、そしてこの混合物を18時間加熱還流させた。冷
却して、この混合物を濃縮し、そして残渣を400mLのCH2Cl2ならびに3
00mLの水および100mLの飽和亜硫酸水素ナトリウム水溶液の混合物で振
盪した。水相を二回、400mLのCH2Cl2で二回洗浄し、そして合わせたC
H2Cl2層を、乾燥(MgSO4)し、濾過し、そして濃縮して、18.3g(
94%)の7を淡黄色油状物として得、これを、さらなる精製なしで次の工程に
使用した:1H NMR(CDCl3)δ2.43(brd s、1H)、3.2
8(t、2H)、3.61(m、2H)、3.68(s、4H)、3.78(m
、4H);質量スペクトル(ES)m/z C6H13O3INaに対する計算値(
M+Na):283.0。実測値:283.0。
【0129】
2−[2−(2−N−(tert−ブチルオキシカルボニル)アミノオキシエ
トキシ)エトキシ]エタノール、8:5.85g(1.50mmol)の2−[
2−(2−ヨードエトキシ)エトキシ]エタノール、化合物7に、2.00g(
1.00mmol)のN−(tert−ブチルオキシカルボニル)ヒドロキシル
アミン(Aldrich Chemical Co.)および3.36mL(3
.42g、1.50mmol)のDBUを加えた。この混合物を攪拌し、触ると
熱くなる粘稠な液体を得、そして55℃の油浴に18時間置くと、白い沈澱の形
成を生じ、これは混合物を固体にする。この混合物を20mLのCH2Cl2に溶
解し、500mLの攪拌EtOAcに加えると、沈澱の形成を生じ、これを濾過
により除去し、濾液を濃縮して褐色−黄色油状物を得た。フラッシュクロマトグ
ラフィー(50%アセトン/ヘキサン)による精製によって、2.61g(67
%)の8を油状物として得た:1H NMR(CDCl3)δ1.50(s、9H
)、3.65(t、2H)、3.70(brd s、4H)、3.76(m、4
H)、4.06(t、2H)、7.83(brd s、1H);13C NMR(
CDCl3)δ28.0、61.3、68.9、70.1、70.3、72.5
、72.6、75.1、81.2、157.1。
トキシ)エトキシ]エタノール、8:5.85g(1.50mmol)の2−[
2−(2−ヨードエトキシ)エトキシ]エタノール、化合物7に、2.00g(
1.00mmol)のN−(tert−ブチルオキシカルボニル)ヒドロキシル
アミン(Aldrich Chemical Co.)および3.36mL(3
.42g、1.50mmol)のDBUを加えた。この混合物を攪拌し、触ると
熱くなる粘稠な液体を得、そして55℃の油浴に18時間置くと、白い沈澱の形
成を生じ、これは混合物を固体にする。この混合物を20mLのCH2Cl2に溶
解し、500mLの攪拌EtOAcに加えると、沈澱の形成を生じ、これを濾過
により除去し、濾液を濃縮して褐色−黄色油状物を得た。フラッシュクロマトグ
ラフィー(50%アセトン/ヘキサン)による精製によって、2.61g(67
%)の8を油状物として得た:1H NMR(CDCl3)δ1.50(s、9H
)、3.65(t、2H)、3.70(brd s、4H)、3.76(m、4
H)、4.06(t、2H)、7.83(brd s、1H);13C NMR(
CDCl3)δ28.0、61.3、68.9、70.1、70.3、72.5
、72.6、75.1、81.2、157.1。
【0130】
2−[2−(2−N−(tert−ブチルオキシカルボニル)アミノオキシエ
トキシ)エトキシ]エチルブロミド、化合物9:臭素(約0.283mmol)
を、橙色が持続するまで、2mLのCH2Cl2中の50mg(0.188mmo
l)の化合物8、74mg(0.283mmol)のトリフェニルホスフィン、
および31μL(30mg、0.377mmol)のピリジンの溶液に滴下した
。この混合物を室温で0.5時間攪拌し、そして1mLの亜硫酸水素ナトリウム
の飽和溶液を、過剰の臭素をクエンチするために加えた。次いで、この混合物を
、10mLのH2Oと2×15mLのEtOAcとの間で分配した。合わせた有
機層をブラインで洗浄し、乾燥(Na2SO4)し、濾過し、そして濃縮した。シ
リカゲルクロマトグラフィー(35/65のアセトン/ヘキサン)による残渣の
精製によって、54mgの化合物9を油状物として得た:1H NMR(CDC
l3)δ1.49(s、9H)、3.48(t、2H)、3.68(s、4H)
、3.73(m、2H)、3.84(t、2H)、4.03(t、2H)、7.
50(s、1H);13C NMR(CDCl3)δ28.3、30.4、69.
4、70.6(二つのシグナル)、71.3、75.5、81.7、156.9
。
トキシ)エトキシ]エチルブロミド、化合物9:臭素(約0.283mmol)
を、橙色が持続するまで、2mLのCH2Cl2中の50mg(0.188mmo
l)の化合物8、74mg(0.283mmol)のトリフェニルホスフィン、
および31μL(30mg、0.377mmol)のピリジンの溶液に滴下した
。この混合物を室温で0.5時間攪拌し、そして1mLの亜硫酸水素ナトリウム
の飽和溶液を、過剰の臭素をクエンチするために加えた。次いで、この混合物を
、10mLのH2Oと2×15mLのEtOAcとの間で分配した。合わせた有
機層をブラインで洗浄し、乾燥(Na2SO4)し、濾過し、そして濃縮した。シ
リカゲルクロマトグラフィー(35/65のアセトン/ヘキサン)による残渣の
精製によって、54mgの化合物9を油状物として得た:1H NMR(CDC
l3)δ1.49(s、9H)、3.48(t、2H)、3.68(s、4H)
、3.73(m、2H)、3.84(t、2H)、4.03(t、2H)、7.
50(s、1H);13C NMR(CDCl3)δ28.3、30.4、69.
4、70.6(二つのシグナル)、71.3、75.5、81.7、156.9
。
【0131】
2−[2−(2−N−(tert−ブチルオキシカルボニル)アミノオキシエ
トキシ)エトキシ]エチルアジド、10: (化合物9からの合成):0.25mLの無水DMF中の100mg(0.3
05mmol)の化合物9の溶液を、0.5mLの無水DMF中の159mg(
2.44mmol)のアジ化ナトリウムの溶液に加えた。さらに0.25mLの
DMFを使用して残渣9を反応混合物に洗い入れ、そして混合物を115℃で3
時間加熱した。冷却して、混合物を3mLのH2Oと4×3mLのCH2Cl2と
の間で分配した。合わせた有機層を、10mLのH2Oで洗浄し、乾燥(Na2S
O4)し、濾過し、そして濃縮して、黄色油状物を得た。シリカゲルクロマトグ
ラフィー(35/65のアセトン/ヘキサン)による精製によって、67mg(
76%)の10を油状物として得た:1H NMR(CDCl3)δ1.47(s
、9H)、3.41(t、2H)、3.69(brd s、4H)、3.73(
m、4H)、4.03(t、2H)、7.50(s、1H);13C NMR(C
DCl3)δ28.1、50.5、69.1、70.1、70.4(二つのシグ
ナル)、75.2、81.3、156.7。
トキシ)エトキシ]エチルアジド、10: (化合物9からの合成):0.25mLの無水DMF中の100mg(0.3
05mmol)の化合物9の溶液を、0.5mLの無水DMF中の159mg(
2.44mmol)のアジ化ナトリウムの溶液に加えた。さらに0.25mLの
DMFを使用して残渣9を反応混合物に洗い入れ、そして混合物を115℃で3
時間加熱した。冷却して、混合物を3mLのH2Oと4×3mLのCH2Cl2と
の間で分配した。合わせた有機層を、10mLのH2Oで洗浄し、乾燥(Na2S
O4)し、濾過し、そして濃縮して、黄色油状物を得た。シリカゲルクロマトグ
ラフィー(35/65のアセトン/ヘキサン)による精製によって、67mg(
76%)の10を油状物として得た:1H NMR(CDCl3)δ1.47(s
、9H)、3.41(t、2H)、3.69(brd s、4H)、3.73(
m、4H)、4.03(t、2H)、7.50(s、1H);13C NMR(C
DCl3)δ28.1、50.5、69.1、70.1、70.4(二つのシグ
ナル)、75.2、81.3、156.7。
【0132】
(化合物13からの10の合成):窒素雰囲気下で、5mLのDMF中の25
8mg(0.69mmol)の化合物13の溶液に、358mg(5.50mm
ol)のアジ化ナトリウムを加えた。この混合物を、室温で18時間攪拌し、1
00mLの水を加え、この混合物を3×50mLのEtOAcで抽出した。Et
OAc層を合わせ、50mLの水で洗浄し、乾燥(Na2SO4)し、濾過し、そ
して濃縮して、294mgの無色の油状物を得た。シリカゲルクロマトグラフィ
ー(30/70のアセトン/ヘキサン)による精製によって、無色油状物として
化合物10を得た。
8mg(0.69mmol)の化合物13の溶液に、358mg(5.50mm
ol)のアジ化ナトリウムを加えた。この混合物を、室温で18時間攪拌し、1
00mLの水を加え、この混合物を3×50mLのEtOAcで抽出した。Et
OAc層を合わせ、50mLの水で洗浄し、乾燥(Na2SO4)し、濾過し、そ
して濃縮して、294mgの無色の油状物を得た。シリカゲルクロマトグラフィ
ー(30/70のアセトン/ヘキサン)による精製によって、無色油状物として
化合物10を得た。
【0133】
(化合物11):化合物10(1.36g、4.70mmol)およびトリフ
ェニルホスフィン(1.48g、5.64mmol)を、24mLのTHFおよ
び8mLのH2Oに溶解し、そして得られた溶液を室温で2時間攪拌した。約1
60μL(8滴)の1N NaOHを加え、そしてこの混合物を18時間攪拌し
た。この混合物を減圧下で濃縮し、そして濃縮物をシリカゲルクロマトグラフィ
ー(80/8/2のCH3CN/H2O/濃縮NH4OH)によって精製し、1.
16g(94%)の11を黄色油状物を得た:1H NMR(CDCl3)δ1.
50(s、9H)、1.90(brd、2H)、2.88(t、2H)、3.5
6(t、2H)、3.65(m、4H)、3.71(m、2H)、4.01(m
、2H)。
ェニルホスフィン(1.48g、5.64mmol)を、24mLのTHFおよ
び8mLのH2Oに溶解し、そして得られた溶液を室温で2時間攪拌した。約1
60μL(8滴)の1N NaOHを加え、そしてこの混合物を18時間攪拌し
た。この混合物を減圧下で濃縮し、そして濃縮物をシリカゲルクロマトグラフィ
ー(80/8/2のCH3CN/H2O/濃縮NH4OH)によって精製し、1.
16g(94%)の11を黄色油状物を得た:1H NMR(CDCl3)δ1.
50(s、9H)、1.90(brd、2H)、2.88(t、2H)、3.5
6(t、2H)、3.65(m、4H)、3.71(m、2H)、4.01(m
、2H)。
【0134】
(1,2−ビス(2−ヨードエトキシ)エタン、化合物12):110mLの
アセトン中の10.0g(5.3mmol)の1,2−ビス(2−クロロエトキ
シ)エタン(Aldrich Chemical Co.)および16.0g(
107mmol)のヨウ化ナトリウムの溶液を、18時間加熱還流した。この混
合物を濃縮し、そして残渣をCHCl3で粉砕し、塩を溶解させないまま、生成
物を溶解させた。この混合物を濾過し、そして濾液を濃縮し、橙色の油状物を得
た。シリカゲルクロマトグラフィー(段階的勾配、10/90のEtOAc/ヘ
キサン〜15/85のEtOAc/ヘキサン)による精製によって、17.8g
(90%)の橙色油状物を得た:1H NMR(CDCl3)δ3.28(t、4
H)、3.67(s、4H)、3.78(t、4H);13C NMR(CDCl 3 )δ3.6、70.5、72.2。
アセトン中の10.0g(5.3mmol)の1,2−ビス(2−クロロエトキ
シ)エタン(Aldrich Chemical Co.)および16.0g(
107mmol)のヨウ化ナトリウムの溶液を、18時間加熱還流した。この混
合物を濃縮し、そして残渣をCHCl3で粉砕し、塩を溶解させないまま、生成
物を溶解させた。この混合物を濾過し、そして濾液を濃縮し、橙色の油状物を得
た。シリカゲルクロマトグラフィー(段階的勾配、10/90のEtOAc/ヘ
キサン〜15/85のEtOAc/ヘキサン)による精製によって、17.8g
(90%)の橙色油状物を得た:1H NMR(CDCl3)δ3.28(t、4
H)、3.67(s、4H)、3.78(t、4H);13C NMR(CDCl 3 )δ3.6、70.5、72.2。
【0135】
(化合物13:)DBU(284μL、290mg、1.9mol)を、26
6mg(2.0mmol)のN−(tert−ブチルオキシカルボニル)ヒドロ
キシアミン(Aldrich Chemical Co.)および2.96g(
8.0mmol)の化合物12の混合物に添加し、そしてこの混合物に蓋をし、
そして均一になるまで振盪した。15分後、この混合物は固化し、そして45分
間放置した。この混合物に、5mLのCH2Cl2を添加し、そしてこの混合物を
再び振盪し、固体を溶解させた。生じた溶液を200mLのEtOAcに添加し
た。さらなる50mLのEtOAcを添加し、そしてこの混合物を濾過して固体
を除去した。濾液を濃縮し油状物を得、これを100mLのEtOAcと3×5
0mLの1N HCl溶液との間に分配した。EtOAc層を2×50mLの1
N NaOHで洗浄し、続いて、2×50mLの5%の亜硫酸水素ナトリウム溶
液で洗浄し、そして濃縮して2.6gの黄色の油状物を得た。シリカゲルクロマ
トグラフィー(段階勾配、20/80〜45/55のEtOAc/ヘキサン)に
よる精製により、515mg(69%)の化合物13を黄色の油状物として得た
。
6mg(2.0mmol)のN−(tert−ブチルオキシカルボニル)ヒドロ
キシアミン(Aldrich Chemical Co.)および2.96g(
8.0mmol)の化合物12の混合物に添加し、そしてこの混合物に蓋をし、
そして均一になるまで振盪した。15分後、この混合物は固化し、そして45分
間放置した。この混合物に、5mLのCH2Cl2を添加し、そしてこの混合物を
再び振盪し、固体を溶解させた。生じた溶液を200mLのEtOAcに添加し
た。さらなる50mLのEtOAcを添加し、そしてこの混合物を濾過して固体
を除去した。濾液を濃縮し油状物を得、これを100mLのEtOAcと3×5
0mLの1N HCl溶液との間に分配した。EtOAc層を2×50mLの1
N NaOHで洗浄し、続いて、2×50mLの5%の亜硫酸水素ナトリウム溶
液で洗浄し、そして濃縮して2.6gの黄色の油状物を得た。シリカゲルクロマ
トグラフィー(段階勾配、20/80〜45/55のEtOAc/ヘキサン)に
よる精製により、515mg(69%)の化合物13を黄色の油状物として得た
。
【0136】
【化11】
【0137】
(ジエチレングリコール ビス−4−ニトロフェニルカーボネート(化合物6
0):)ピリジン(30.5mL、377mmol)を、5.0g(47.11
mmol)のジエチレングリコールおよび23.74g(118mmol)の4
−ニトロフェニルクロロホルメートのTHF溶液(500mL)の0℃の溶液に
ゆっくりと添加した。冷却浴を除去し、そして混合物を室温にて18時間撹拌し
た。この混合物を0℃まで冷却し、6N HClで酸性化し、そして400mL
の1N HClと2×400mLのCH2Cl2の間に分配した。合わせた有機層
を乾燥(MgSO4)し、濾過し、そして濃縮して24.3gの白色固体を得た
。ヘキサン/EtOAcからの再結晶により、16.0g(78%)の化合物6
0を白色粉末として得た。
0):)ピリジン(30.5mL、377mmol)を、5.0g(47.11
mmol)のジエチレングリコールおよび23.74g(118mmol)の4
−ニトロフェニルクロロホルメートのTHF溶液(500mL)の0℃の溶液に
ゆっくりと添加した。冷却浴を除去し、そして混合物を室温にて18時間撹拌し
た。この混合物を0℃まで冷却し、6N HClで酸性化し、そして400mL
の1N HClと2×400mLのCH2Cl2の間に分配した。合わせた有機層
を乾燥(MgSO4)し、濾過し、そして濃縮して24.3gの白色固体を得た
。ヘキサン/EtOAcからの再結晶により、16.0g(78%)の化合物6
0を白色粉末として得た。
【0138】
【化12】
【0139】
(化合物61:)2.5g(5.73mol)の化合物60の17mLのピリ
ジン溶液を、1.8g(17.2mol)のジエタノールアミンの3mLのピリ
ジン溶液(0℃)中に添加した。冷却浴を除去し、そしてこの混合物を室温にて
5時間撹拌して、化合物61を得、これを単離せずに、次の工程で使用した。
ジン溶液を、1.8g(17.2mol)のジエタノールアミンの3mLのピリ
ジン溶液(0℃)中に添加した。冷却浴を除去し、そしてこの混合物を室温にて
5時間撹拌して、化合物61を得、これを単離せずに、次の工程で使用した。
【0140】
(化合物14:)前記工程からの混合物を0℃まで冷却し、40mLのCH2
Cl2を添加し、続いて11.55g(57.3mmol)の4−ニトロフェニ
ルクロロホルメートの60mLのCH2Cl2溶液を添加し、そしてこの混合物を
室温で20時間撹拌した。この混合物を0℃まで冷却し、1N HClで酸性化
し、そして300mLの1N HClと2×200mLのCH2Cl2の間に分配
した。合わせた有機層を乾燥(MgSO4)し、濾過し、そして濃縮して13.
6gの黄色の固体を得た。シリカゲルクロマトグラフィー(CH2Cl2/MeO
HおよびEtOAc/ヘキサン)による精製により、4.91g(83%)の化
合物14を粘着性のアモルファス固体として得た。
Cl2を添加し、続いて11.55g(57.3mmol)の4−ニトロフェニ
ルクロロホルメートの60mLのCH2Cl2溶液を添加し、そしてこの混合物を
室温で20時間撹拌した。この混合物を0℃まで冷却し、1N HClで酸性化
し、そして300mLの1N HClと2×200mLのCH2Cl2の間に分配
した。合わせた有機層を乾燥(MgSO4)し、濾過し、そして濃縮して13.
6gの黄色の固体を得た。シリカゲルクロマトグラフィー(CH2Cl2/MeO
HおよびEtOAc/ヘキサン)による精製により、4.91g(83%)の化
合物14を粘着性のアモルファス固体として得た。
【0141】
【化13】
【0142】
【化14】
【0143】
(BOC−保護AOTEG/DEA/DEGプラットホーム(化合物15):
)トリエチルアミン(157μL、114mg、1.13mmol)を、193
mg(0.188mmol)の化合物14(上記および米国出願番号60/11
1,641(1998年12月9日出願)に記載の通りに調製される)の撹拌溶
液に添加し、続いて、298mg(1.13mmol)の化合物11を添加した
。この混合物を室温まで冷却して、そして一晩撹拌した。この混合物を0℃まで
冷却し、1N HClで酸性化し、そして20mLの1N HClと4×20m
LのCH2Cl2との間に分配した。合わせた有機層を、飽和NaHCO3溶液で
洗浄し、乾燥し(MgSO4)、濾過し、そして濃縮して、279mgの黄色油
状物を得た。シリカゲルクロマトグラフィー(97/3のCH2Cl2/MeOH
)による精製により、138mg(48%)の15を油状物として得た。
)トリエチルアミン(157μL、114mg、1.13mmol)を、193
mg(0.188mmol)の化合物14(上記および米国出願番号60/11
1,641(1998年12月9日出願)に記載の通りに調製される)の撹拌溶
液に添加し、続いて、298mg(1.13mmol)の化合物11を添加した
。この混合物を室温まで冷却して、そして一晩撹拌した。この混合物を0℃まで
冷却し、1N HClで酸性化し、そして20mLの1N HClと4×20m
LのCH2Cl2との間に分配した。合わせた有機層を、飽和NaHCO3溶液で
洗浄し、乾燥し(MgSO4)、濾過し、そして濃縮して、279mgの黄色油
状物を得た。シリカゲルクロマトグラフィー(97/3のCH2Cl2/MeOH
)による精製により、138mg(48%)の15を油状物として得た。
【0144】
【化15】
【0145】
(化合物16:)化合物15(60mg、39.2μmol)を、10mLの
1/9のトリフルオロ酢酸/CH2Cl2中に溶解し、そしてこの混合物を、室温
にて3時間保った。窒素の穏やかな流れを使用して、溶媒をエバポレートし、そ
して残渣を最小量のクロマトグラフィー溶媒(5/7.5/87.5の濃NH4
OH/H2O/CH3CN)中に溶解し、この溶媒を使用してこの混合物をシリカ
ゲルカラム上にロードした。シリカゲルクロマトグラフィー(段階勾配、5/7
.5/87.5〜5/10/85の濃NH4OH/H2O/CH3CN)による精
製により、36mg(82%)の16を無色の油状物として得た。
1/9のトリフルオロ酢酸/CH2Cl2中に溶解し、そしてこの混合物を、室温
にて3時間保った。窒素の穏やかな流れを使用して、溶媒をエバポレートし、そ
して残渣を最小量のクロマトグラフィー溶媒(5/7.5/87.5の濃NH4
OH/H2O/CH3CN)中に溶解し、この溶媒を使用してこの混合物をシリカ
ゲルカラム上にロードした。シリカゲルクロマトグラフィー(段階勾配、5/7
.5/87.5〜5/10/85の濃NH4OH/H2O/CH3CN)による精
製により、36mg(82%)の16を無色の油状物として得た。
【0146】
【化16】
【0147】
分析用HPLCによって純度を検査する目的のために、テトラアセトンオキシ
ムを以下のように調製した。化合物16(0.38mg、0.34μmol)を
、HPCLサンプルバイアル中の240μLの0.1M NaOAc緩衝液中に
溶解した。この溶液に、49μLのアセトンの2.0mLの0.1MのNaOA
c緩衝液溶液の10μLを添加した。この混合物を1時間放置し、そしてアリコ
ートをHPLCによって分析した(4.6mm C18カラム、1mL/分、21
0nm検出、勾配:10〜60%B、20分間、A=0.1% TFA/H2O
、B=0.1% TFA/CH3CN、tR=19分);収集した溶出物の質量ス
ペクトル(ES)m/z:計算値C54H101N10O25(M+H):1289;実
測値:1289。
ムを以下のように調製した。化合物16(0.38mg、0.34μmol)を
、HPCLサンプルバイアル中の240μLの0.1M NaOAc緩衝液中に
溶解した。この溶液に、49μLのアセトンの2.0mLの0.1MのNaOA
c緩衝液溶液の10μLを添加した。この混合物を1時間放置し、そしてアリコ
ートをHPLCによって分析した(4.6mm C18カラム、1mL/分、21
0nm検出、勾配:10〜60%B、20分間、A=0.1% TFA/H2O
、B=0.1% TFA/CH3CN、tR=19分);収集した溶出物の質量ス
ペクトル(ES)m/z:計算値C54H101N10O25(M+H):1289;実
測値:1289。
【0148】
(実施例4−AOTEG/PIZ/DEA/DEGプラットホームの合成)
合成スキームを、図4中に示す。
【0149】
(化合物17:)ピリジン(610μL、596mg、7.54mmol)を
、500mg(1.88mmol)の化合物8および760mg(3.77mm
ol)のp−ニトロフェニルクロロホルメートの14mLのCH2Cl2溶液の撹
拌溶液にゆっくりと添加し、そして混合物を室温にて18時間撹拌した。混合物
を0℃まで冷却し、そして1N HCl水溶液で酸性化した。生じた混合物を、
100mLの1N HCl水溶液と3×100mLのCH2Cl2との間に分配し
た。合わせた有機層を、乾燥し(MgSO4)、濾過し、そして濃縮して、1.
05gの粘着性固体を得た。シリカゲルクロマトグラフィー(6/4のヘキサン
/EtOAc)による精製により、505mg(62%)の化合物17をわずか
に黄色の油状物として得た。
、500mg(1.88mmol)の化合物8および760mg(3.77mm
ol)のp−ニトロフェニルクロロホルメートの14mLのCH2Cl2溶液の撹
拌溶液にゆっくりと添加し、そして混合物を室温にて18時間撹拌した。混合物
を0℃まで冷却し、そして1N HCl水溶液で酸性化した。生じた混合物を、
100mLの1N HCl水溶液と3×100mLのCH2Cl2との間に分配し
た。合わせた有機層を、乾燥し(MgSO4)、濾過し、そして濃縮して、1.
05gの粘着性固体を得た。シリカゲルクロマトグラフィー(6/4のヘキサン
/EtOAc)による精製により、505mg(62%)の化合物17をわずか
に黄色の油状物として得た。
【0150】
【化17】
【0151】
(Boc−保護AOTEG/PIZ/DEA/DEGプラットホーム(化合物
19:)化合物18(米国出願番号第60/111,641号(1998年12
月9日出願)に記載される通りに調製する)の炭酸水素ナトリウム水溶液および
ジオキサンとの混合物に、ジオキサン中の4当量の化合物17の溶液を添加した
。反応の完了の際に、この混合物を水とCH2Cl2との間に分配した。CH2C
l2層を濃縮し、乾燥し、そしてシリカゲルクロマトグラフィーにて精製し、化
合物19を得た。
19:)化合物18(米国出願番号第60/111,641号(1998年12
月9日出願)に記載される通りに調製する)の炭酸水素ナトリウム水溶液および
ジオキサンとの混合物に、ジオキサン中の4当量の化合物17の溶液を添加した
。反応の完了の際に、この混合物を水とCH2Cl2との間に分配した。CH2C
l2層を濃縮し、乾燥し、そしてシリカゲルクロマトグラフィーにて精製し、化
合物19を得た。
【0152】
(AOTEG/PIZ/DEA/DEGプラットホーム(化合物20):)B
oc−保護基を、化合物16の調製に記載された様式と本質的に類似の様式で、
化合物19から除去し、化合物20を得る。
oc−保護基を、化合物16の調製に記載された様式と本質的に類似の様式で、
化合物19から除去し、化合物20を得る。
【0153】
(実施例5a−AOTEG/SA/AHAB/TEGプラットホームの合成)
合成スキームを、図5中に示す。
【0154】
(S−アセチル−2−[2−(2−N−tert−ブチルオキシカルボニルア
ミノオキシエトキシ)エトキシ]−エチルメルカプタン(化合物21a):)3
0mLのアセトン中の500mg(1.52mmol)の化合物9aの溶液に、
191mg(1.68mmol)のチオ酢酸カリウム(Aldrich Che
mical Co.)を添加した。この混合物を室温にて18時間撹拌し、そし
て生じた沈殿物を濾過により除去した。濾液を濃縮し、そして300mLのEt
OAcと2×80mLのブラインとの間に分配した。EtOAc層を乾燥(Na
SO4)し、濾過しそして濃縮して、460mg(93%)の化合物21aを淡
褐色の油状物として得た。
ミノオキシエトキシ)エトキシ]−エチルメルカプタン(化合物21a):)3
0mLのアセトン中の500mg(1.52mmol)の化合物9aの溶液に、
191mg(1.68mmol)のチオ酢酸カリウム(Aldrich Che
mical Co.)を添加した。この混合物を室温にて18時間撹拌し、そし
て生じた沈殿物を濾過により除去した。濾液を濃縮し、そして300mLのEt
OAcと2×80mLのブラインとの間に分配した。EtOAc層を乾燥(Na
SO4)し、濾過しそして濃縮して、460mg(93%)の化合物21aを淡
褐色の油状物として得た。
【0155】
【化18】
【0156】
(2−[2−(2−N−tert−ブチルオキシカルボニルアミノオキシエト
キシ)エトキシ]エチルメルカプタン(化合物22a):)化合物21aを、窒
素雰囲気下での4/1の6N NH4OH/CH3CNの窒素散布溶液で室温にて
1時間処理する。この混合物を減圧下で濃縮し、化合物22aを得、これをさら
なる精製なしで使用し得る。
キシ)エトキシ]エチルメルカプタン(化合物22a):)化合物21aを、窒
素雰囲気下での4/1の6N NH4OH/CH3CNの窒素散布溶液で室温にて
1時間処理する。この混合物を減圧下で濃縮し、化合物22aを得、これをさら
なる精製なしで使用し得る。
【0157】
(Boc−保護AOTEG/SA/AHAB/TEGプラットホーム、24a
:)化合物23(Joneら、J.Med.Chem.1995,38,213
8−2144に記載される通りに調製される)を、窒素散布した10/90のH 2 O/CH3CN中の4当量の化合物22aの溶液に添加する。生じた溶液に、4
当量のジイソプロピルエチルアミンを添加する。反応の完了の際に、この混合物
を水とCH2Cl2との間に分配する。CH2Cl2層を、濃縮し、乾燥し、そして
シリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、化合物24aを得る。
:)化合物23(Joneら、J.Med.Chem.1995,38,213
8−2144に記載される通りに調製される)を、窒素散布した10/90のH 2 O/CH3CN中の4当量の化合物22aの溶液に添加する。生じた溶液に、4
当量のジイソプロピルエチルアミンを添加する。反応の完了の際に、この混合物
を水とCH2Cl2との間に分配する。CH2Cl2層を、濃縮し、乾燥し、そして
シリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、化合物24aを得る。
【0158】
(AOTEG/SA/AHAB/TEGプラットホーム(25a):)Boc
保護基を、化合物16の調製について記載された様式と本質的に類似の様式で化
合物24aから除去し、化合物25aを得る。
保護基を、化合物16の調製について記載された様式と本質的に類似の様式で化
合物24aから除去し、化合物25aを得る。
【0159】
(実施例5b−AOHEX/SA/AHAB/TEGプラットホームの合成)
この合成スキームを、図6中に示す。
【0160】
(1−ヨード−6−(N−tert−ブチルオキシカルボニル)アミノオキシ
ヘキサン(化合物9b):)140mg(1.05mmol)のN−(tert
−ブトキシカルボニル)ヒドロキシルアミン(Aldrich Chemica
l Co.)および658μL(1.35mg、4.0mmol)の化合物12
の均一な混合物に、149μL(152mg、1.0mmol)のDBUを添加
した。この混合物を室温にて30秒撹拌し、この時、反応混合物は、固化した。
この固体塊を、一晩放置し、そして50mLのCH2Cl2中に溶解した。この溶
液を、2×25mLの1N NaOHおよび3×25mLの1N HClで洗浄
した。合わせた塩基性水層を、25mLのCH2Cl2で抽出し、そして合わせた
酸性水層を、25mLのCH2Cl2で抽出した。合わせたCH2Cl2層を、乾燥
(Na2SO4)し、濾過し、そして濃縮して黄色の油状物を得た。シリカゲルク
ロマトグラフィー(段階勾配;1/99/0.1〜15/85/0.1のEtO
Ac/ヘキサン/MeOH)による精製により、216mg(68%)の9bを
黄色の油状物として得た。
ヘキサン(化合物9b):)140mg(1.05mmol)のN−(tert
−ブトキシカルボニル)ヒドロキシルアミン(Aldrich Chemica
l Co.)および658μL(1.35mg、4.0mmol)の化合物12
の均一な混合物に、149μL(152mg、1.0mmol)のDBUを添加
した。この混合物を室温にて30秒撹拌し、この時、反応混合物は、固化した。
この固体塊を、一晩放置し、そして50mLのCH2Cl2中に溶解した。この溶
液を、2×25mLの1N NaOHおよび3×25mLの1N HClで洗浄
した。合わせた塩基性水層を、25mLのCH2Cl2で抽出し、そして合わせた
酸性水層を、25mLのCH2Cl2で抽出した。合わせたCH2Cl2層を、乾燥
(Na2SO4)し、濾過し、そして濃縮して黄色の油状物を得た。シリカゲルク
ロマトグラフィー(段階勾配;1/99/0.1〜15/85/0.1のEtO
Ac/ヘキサン/MeOH)による精製により、216mg(68%)の9bを
黄色の油状物として得た。
【0161】
【化19】
【0162】
(S−アセチル−6−(N−tert−ブチルオキシカルボニル)アミノオキ
シヘキサン−1−チオール(化合物21b):)化合物9b(209mg、0.
61mmol)を、15mLのアセトン中のチオ酢酸カリウムの溶液に添加し、
そしてこの混合物を室温にて18時間撹拌した。アセトンを減圧下で除去し、そ
して残渣を、50mLのCH2Cl2と3×25mLの1N NaOHとの間で分
配した。CH2Cl2層を、乾燥し(Na2SO4)、濾過し、そして濃縮して茶色
の油状物を得た。シリカゲルクロマトグラフィー(15/85のEtOAc/ヘ
キサン)による精製により、166mg(94%)の化合物21bを無色の油状
物として得た。
シヘキサン−1−チオール(化合物21b):)化合物9b(209mg、0.
61mmol)を、15mLのアセトン中のチオ酢酸カリウムの溶液に添加し、
そしてこの混合物を室温にて18時間撹拌した。アセトンを減圧下で除去し、そ
して残渣を、50mLのCH2Cl2と3×25mLの1N NaOHとの間で分
配した。CH2Cl2層を、乾燥し(Na2SO4)、濾過し、そして濃縮して茶色
の油状物を得た。シリカゲルクロマトグラフィー(15/85のEtOAc/ヘ
キサン)による精製により、166mg(94%)の化合物21bを無色の油状
物として得た。
【0163】
【化20】
【0164】
(6−(N−tert−ブチルオキシカルボニル)アミノオキシヘキサン−1
−チオール(化合物22b):)22bの精製したサンプルを、以下の通りに調
製した。化合物21b(50mg、172μmol)および22μL(17.4
mg、85.8μmol)のトリ−n−ブチルホスフィンを、窒素下に置き、そ
して窒素を散布した1MのNaOHのMeOH溶液(2mL)を、この混合物中
に添加した。この混合物を室温にて18時間撹拌し、そして172μL(180
mg、3mmol)のトリフルオロ酢酸を添加した。この混合物を、25mLの
EtOAcと3×25mLの1N HClとの間に分配した。合わせた水層を、
25mLのEtOAcで抽出し、乾燥し(Na2SO4)、濾過し、そして濃縮し
て油状物を得た。シリカゲルクロマトグラフィー(15/85/0.1のEtO
Ac/ヘキサン/MeOH)による精製により、28mgの22bを無色の油状
物として得た。
−チオール(化合物22b):)22bの精製したサンプルを、以下の通りに調
製した。化合物21b(50mg、172μmol)および22μL(17.4
mg、85.8μmol)のトリ−n−ブチルホスフィンを、窒素下に置き、そ
して窒素を散布した1MのNaOHのMeOH溶液(2mL)を、この混合物中
に添加した。この混合物を室温にて18時間撹拌し、そして172μL(180
mg、3mmol)のトリフルオロ酢酸を添加した。この混合物を、25mLの
EtOAcと3×25mLの1N HClとの間に分配した。合わせた水層を、
25mLのEtOAcで抽出し、乾燥し(Na2SO4)、濾過し、そして濃縮し
て油状物を得た。シリカゲルクロマトグラフィー(15/85/0.1のEtO
Ac/ヘキサン/MeOH)による精製により、28mgの22bを無色の油状
物として得た。
【0165】
【化21】
【0166】
(Boc保護AOHEX/SA/AHAB/TEGプラットホーム(24b)
:)化合物21b(13mg、45μmol)および6μL(4.5mg、22
.3μmol)のトリ−n−ブチルホスフィンを、窒素下に置き、そして3mL
の窒素を散布した4/1の6N NH4OH/CH3CNの溶液を、この混合物に
添加した。この混合物を、室温にて1時間撹拌し、そして減圧下で濃縮した。残
渣を10/90の水/CH3CNの窒素散布溶液(3mL)中に溶解した。生じ
た溶液(窒素雰囲気下で保存される)に、10mg(7.44μmol)の化合
物23、続いて、8μL(5.77mg、44.6μmol)のジイソプロピル
エチルアミンを添加した。この混合物を、18時間撹拌し、そして減圧下にて濃
縮した。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー(多段階勾配、1/99〜5/
95〜7.5/92.5〜10/90〜15/85のMeOH/CH2Cl2)に
よって精製し、14mg(93%)の24bを無色の油状物として得た:TLC
(10/90のMeOH/CH2Cl2)、Rf=0.3;質量スペクトル(ES
)m/z計算値C92H174N14O26S4(M+2H)/2:1010。実測値:1
010。
:)化合物21b(13mg、45μmol)および6μL(4.5mg、22
.3μmol)のトリ−n−ブチルホスフィンを、窒素下に置き、そして3mL
の窒素を散布した4/1の6N NH4OH/CH3CNの溶液を、この混合物に
添加した。この混合物を、室温にて1時間撹拌し、そして減圧下で濃縮した。残
渣を10/90の水/CH3CNの窒素散布溶液(3mL)中に溶解した。生じ
た溶液(窒素雰囲気下で保存される)に、10mg(7.44μmol)の化合
物23、続いて、8μL(5.77mg、44.6μmol)のジイソプロピル
エチルアミンを添加した。この混合物を、18時間撹拌し、そして減圧下にて濃
縮した。残渣を、シリカゲルクロマトグラフィー(多段階勾配、1/99〜5/
95〜7.5/92.5〜10/90〜15/85のMeOH/CH2Cl2)に
よって精製し、14mg(93%)の24bを無色の油状物として得た:TLC
(10/90のMeOH/CH2Cl2)、Rf=0.3;質量スペクトル(ES
)m/z計算値C92H174N14O26S4(M+2H)/2:1010。実測値:1
010。
【0167】
(AOHEX/SA/AHAB/TEGプラットホーム(25b):)Boc
保護基を、化合物16の調製について記載された様式と本質的に類似の様式で化
合物24bから除去する。
保護基を、化合物16の調製について記載された様式と本質的に類似の様式で化
合物24bから除去する。
【0168】
(実施例6−AOHOC/DT/TEGプラットホームの合成)
この合成スキームを、図7中に示す。
【0169】
(6−(tert−ブチルオキシカルボニルアミノオキシ)ヘキサン−1−オ
ール(27):)1mLのCH2Cl2中の179μL(183mg、1.2mm
ol)のDBUの溶液を、133mg(1.0mmol)のN−(tert−ブ
チルオキシカルボニル)ヒドロキシルアミン(Aldrich Cheminc
al Co.)および157μL(217mg、1.2mmol)の6−ブロモ
ヘキサン−1−オール(Aldrich Chemical Co.)を添加し
、そしてこの混合物を、室温にて18時間撹拌した。混合物を濃縮して、黄色の
油状物を得た。シリカゲルクロマトグラフィー(35/5/65のEtOAc/
MeOH/ヘキサン)による精製により、180mg(77%)の化合物27を
無色の油状物として得た。
ール(27):)1mLのCH2Cl2中の179μL(183mg、1.2mm
ol)のDBUの溶液を、133mg(1.0mmol)のN−(tert−ブ
チルオキシカルボニル)ヒドロキシルアミン(Aldrich Cheminc
al Co.)および157μL(217mg、1.2mmol)の6−ブロモ
ヘキサン−1−オール(Aldrich Chemical Co.)を添加し
、そしてこの混合物を、室温にて18時間撹拌した。混合物を濃縮して、黄色の
油状物を得た。シリカゲルクロマトグラフィー(35/5/65のEtOAc/
MeOH/ヘキサン)による精製により、180mg(77%)の化合物27を
無色の油状物として得た。
【0170】
【化22】
【0171】
(化合物28:)2mLのCH2Cl2中の100mg(0.428mmol)
の化合物27の0℃の溶液に、90μL(88.1mg、1.11mol)のピ
リジン、続いて、113mg(0.557mg)のp−ニトロフェニルクロロホ
ルメート(Aldrich Chemical Co.)を添加した。この混合
物を、室温にて4時間撹拌し、0℃まで冷却し、1N HClで酸性化し、そし
て20mLの1N HClと3×20mLのCH2Cl2との間で分配した。合わ
せたCH2Cl2層を、NaHCO3の飽和溶液で洗浄し、乾燥し(MgSO4)、
濾過し、そして濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィーによる精製により、化
合物28を得た。
の化合物27の0℃の溶液に、90μL(88.1mg、1.11mol)のピ
リジン、続いて、113mg(0.557mg)のp−ニトロフェニルクロロホ
ルメート(Aldrich Chemical Co.)を添加した。この混合
物を、室温にて4時間撹拌し、0℃まで冷却し、1N HClで酸性化し、そし
て20mLの1N HClと3×20mLのCH2Cl2との間で分配した。合わ
せたCH2Cl2層を、NaHCO3の飽和溶液で洗浄し、乾燥し(MgSO4)、
濾過し、そして濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィーによる精製により、化
合物28を得た。
【0172】
(化合物29:)EtOAc中のジエチレントリアミンの溶液に、2当量のジ
イソプロピルエチルアミンを添加し、続いて、2当量の化合物28を添加する。
この混合物を、反応が完了するまで撹拌する。溶媒を、除去し、そして生成物(
化合物29)を、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製する。
イソプロピルエチルアミンを添加し、続いて、2当量の化合物28を添加する。
この混合物を、反応が完了するまで撹拌する。溶媒を、除去し、そして生成物(
化合物29)を、シリカゲルクロマトグラフィーによって精製する。
【0173】
Boc−保護AOHOC/DT/TEGプラットホーム(30):)ピリジン
中のトリエチレングリコールビスクロロホルメート(Aldrich Chem
ical Co.)の溶液に、2当量の化合物29を添加する。この混合物を、
反応が完了するまで撹拌し、そして1N HClとCH2Cl2とのに分配する。
CH2Cl2層を、乾燥および濃縮し、そして生成物を、シリカゲルクロマトグラ
フィーによって精製して化合物30を得る。
中のトリエチレングリコールビスクロロホルメート(Aldrich Chem
ical Co.)の溶液に、2当量の化合物29を添加する。この混合物を、
反応が完了するまで撹拌し、そして1N HClとCH2Cl2とのに分配する。
CH2Cl2層を、乾燥および濃縮し、そして生成物を、シリカゲルクロマトグラ
フィーによって精製して化合物30を得る。
【0174】
(AOHOC/DT/TEGプラットホーム(31):)Boc保護基を、化
合物16の調製について記載される様式と本質的に類似の様式で化合物30から
除去する。
合物16の調製について記載される様式と本質的に類似の様式で化合物30から
除去する。
【0175】
(実施例7−AOTEG/IDA/TEGプラットホームの合成)
合成スキームを、図8中に示す。
【0176】
(化合物32:)ピリジン中のトリエチレングリコールビスクロロホルメート
(Aldrich Chemical Co.)の溶液に、2当量のイミノ二酢
酸(Aldrich Chemical Co.)を添加する。この混合物を、
反応が完了するまで撹拌し、そして1N HClとCH2Cl2との間に分配する
。CH2Cl2層を、乾燥および濃縮し、そして生成物を、シリカゲルクロマトグ
ラフィーによって精製し、化合物32を得る。
(Aldrich Chemical Co.)の溶液に、2当量のイミノ二酢
酸(Aldrich Chemical Co.)を添加する。この混合物を、
反応が完了するまで撹拌し、そして1N HClとCH2Cl2との間に分配する
。CH2Cl2層を、乾燥および濃縮し、そして生成物を、シリカゲルクロマトグ
ラフィーによって精製し、化合物32を得る。
【0177】
(化合物33:)THF中の化合物32の溶液を、6当量のNHSおよび6当
量のDCCで1時間処理する。この混合物に、4当量の化合物11を添加し、そ
してこの混合物を、反応が完了するまで撹拌する。酢酸を、過剰DCCをクエン
チするために添加し、そして生じた固体を、濾過により除去する。濾液を濃縮し
、そしてシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、化合物33を得る。
量のDCCで1時間処理する。この混合物に、4当量の化合物11を添加し、そ
してこの混合物を、反応が完了するまで撹拌する。酢酸を、過剰DCCをクエン
チするために添加し、そして生じた固体を、濾過により除去する。濾液を濃縮し
、そしてシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、化合物33を得る。
【0178】
(化合物34:)Boc保護基を、化合物16の調製について記載された様式
と本質的に類似の様式で化合物33から除去する。
と本質的に類似の様式で化合物33から除去する。
【0179】
(実施例8−AOTEGO/LEV/PITGプラットホームの合成)
この合成スキームを、図9中に示す。
【0180】
(p−ニトロフェニル−レブリネート(35):)4.25mLのピリジン中
の800mg(6.89mmol)のレブリン酸(Aldrich Chemi
cal Co.)の溶液に、1.78g(7.58mmol)の4−ニトロフェ
ニルトリフルオロアセテート(Aldrich Chemical Co.)を
添加した。生じた溶液を15分間撹拌し、そして28mLの水と2×28mLの
CH2Cl2との間に分配した。合わせたCH2Cl2層を、乾燥し(MgSO4)
、濾過し、そして濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィー(段階勾配、25/
75〜30/70のEtOAc/ヘキサン)による濃縮物の精製により、1.0
6g(74%)の化合物35を得た。
の800mg(6.89mmol)のレブリン酸(Aldrich Chemi
cal Co.)の溶液に、1.78g(7.58mmol)の4−ニトロフェ
ニルトリフルオロアセテート(Aldrich Chemical Co.)を
添加した。生じた溶液を15分間撹拌し、そして28mLの水と2×28mLの
CH2Cl2との間に分配した。合わせたCH2Cl2層を、乾燥し(MgSO4)
、濾過し、そして濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィー(段階勾配、25/
75〜30/70のEtOAc/ヘキサン)による濃縮物の精製により、1.0
6g(74%)の化合物35を得た。
【0181】
【化23】
【0182】
(1,2−ビス(2−(tert−ブチルオキシカルボニル)アミノオキシエ
トキシ)エタン(化合物36):)243mg(0.66mmol)の化合物1
2に、219mg(1.64mmol)のN−(tert−ブトキシカルボニル
)ヒドロキシルアミン(Aldrich Chemical Co.)を添加し
、続いて、246μL(250mg、1.64mmol)のDBUを添加した。
混合物を、室温にてこの混合物が固化するまで(約1時間)撹拌した。さらに1
時間放置した後、混合物を2mLのCH2Cl2中に溶解し、そして生じた溶液を
、100mLのEtOAcに添加し、DBUのヨウ化水素塩を沈殿させた。さら
なる50mLのEtOAcを添加し、そして混合物を濾過した。濾液を、2×5
0mLの1N HCl、2×50mLの5%の亜硫酸水素ナトリウム溶液および
25mLのブラインで洗浄した。EtOAc層を、乾燥し(Na2SO4)、濾過
し、そして濃縮して油状物を得た。シリカゲルクロマトグラフィー(段階勾配、
40/60〜50/50〜80/20のEtOAc/ヘキサン)による精製によ
り、164mg(65%)の化合物36を無色の油状物として得た。
トキシ)エタン(化合物36):)243mg(0.66mmol)の化合物1
2に、219mg(1.64mmol)のN−(tert−ブトキシカルボニル
)ヒドロキシルアミン(Aldrich Chemical Co.)を添加し
、続いて、246μL(250mg、1.64mmol)のDBUを添加した。
混合物を、室温にてこの混合物が固化するまで(約1時間)撹拌した。さらに1
時間放置した後、混合物を2mLのCH2Cl2中に溶解し、そして生じた溶液を
、100mLのEtOAcに添加し、DBUのヨウ化水素塩を沈殿させた。さら
なる50mLのEtOAcを添加し、そして混合物を濾過した。濾液を、2×5
0mLの1N HCl、2×50mLの5%の亜硫酸水素ナトリウム溶液および
25mLのブラインで洗浄した。EtOAc層を、乾燥し(Na2SO4)、濾過
し、そして濃縮して油状物を得た。シリカゲルクロマトグラフィー(段階勾配、
40/60〜50/50〜80/20のEtOAc/ヘキサン)による精製によ
り、164mg(65%)の化合物36を無色の油状物として得た。
【0183】
【化24】
【0184】
(1,2−ビス(2−アミノオキシエトキシ)エタン(化合物37):)化合
物36(559mmol、147mmol)を、15mLのEtOAc中に溶解
し、そしてHClガスを、溶液を通して30分間バブリングした。混合物を減圧
下で濃縮し、72mg(90%)の化合物37をHCl塩として粘着性残渣とし
て得た。
物36(559mmol、147mmol)を、15mLのEtOAc中に溶解
し、そしてHClガスを、溶液を通して30分間バブリングした。混合物を減圧
下で濃縮し、72mg(90%)の化合物37をHCl塩として粘着性残渣とし
て得た。
【0185】
【化25】
【0186】
(化合物38:)化合物3を、酢酸中の30%のHBr溶液で処理してCBZ
保護基を除去し、そしてテトラアミン臭素化水素塩を得る。テトラアミンを、水
およびジオキサン中の炭酸水素ナトリウムの溶液中に溶解し、そして生じた溶液
に、4当量の化合物35を添加する。反応の完了の際に、混合物を水とCH2C
l2との間に分配する。CH2Cl2層を、濃縮し、乾燥し、そしてシリカゲルク
ロマトグラフィーにより精製して、化合物38を得る。
保護基を除去し、そしてテトラアミン臭素化水素塩を得る。テトラアミンを、水
およびジオキサン中の炭酸水素ナトリウムの溶液中に溶解し、そして生じた溶液
に、4当量の化合物35を添加する。反応の完了の際に、混合物を水とCH2C
l2との間に分配する。CH2Cl2層を、濃縮し、乾燥し、そしてシリカゲルク
ロマトグラフィーにより精製して、化合物38を得る。
【0187】
(AOTEGO/LEV/PITGプラットホーム(化合物39):)0.1
Mの酢酸ナトリウム緩衝液(pH4.6)中の化合物38の溶液に、20当量の
化合物37を添加する。反応の完了の際に、混合物を、水とCH2Cl2との間に
分配する。CH2Cl2層を、濃縮し、乾燥し、そしてシリカゲルクロマトグラフ
ィーにより精製して、化合物39を得る。
Mの酢酸ナトリウム緩衝液(pH4.6)中の化合物38の溶液に、20当量の
化合物37を添加する。反応の完了の際に、混合物を、水とCH2Cl2との間に
分配する。CH2Cl2層を、濃縮し、乾燥し、そしてシリカゲルクロマトグラフ
ィーにより精製して、化合物39を得る。
【0188】
(実施例9−AO/DEGA/DEGプラットホームの合成)
合成スキームを、図10中に示す。
【0189】
(化合物41:)臭素(およそ6当量)を、化合物40の溶液、6当量のトリ
フェニルホスフィン、および8当量のピリジンのCH2Cl2溶液に、オレンジ色
が持続するまで滴下する。この混合物を、室温にて0.5時間かまたは反応が完
了するまで撹拌し、そして亜硫酸水素ナトリウムの飽和溶液を添加して、過剰の
臭素を破壊する。次いで、この混合物をH2OとEtOAcとの間に分配する。
合わせた有機層を、ブラインで洗浄し、乾燥し(Na2SO4)、濾過し、濃縮し
、そしてシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、化合物41を得る。
フェニルホスフィン、および8当量のピリジンのCH2Cl2溶液に、オレンジ色
が持続するまで滴下する。この混合物を、室温にて0.5時間かまたは反応が完
了するまで撹拌し、そして亜硫酸水素ナトリウムの飽和溶液を添加して、過剰の
臭素を破壊する。次いで、この混合物をH2OとEtOAcとの間に分配する。
合わせた有機層を、ブラインで洗浄し、乾燥し(Na2SO4)、濾過し、濃縮し
、そしてシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して、化合物41を得る。
【0190】
(化合物42:)化合物41に、6当量のN−(tert−ブチルオキシカル
ボニル)ヒドロキシルアミン(Aldrich Chemical Co.)お
よび6当量のDBUを添加する。この混合物を、反応が完了するために必要な十
分な時間加熱する。冷却する場合、混合物を、CH2Cl2中に溶解し、そして生
じた溶液を、EtOAcに添加すると、沈殿物の形成が生じ、これを濾過により
除去し、そして濾液を濃縮する。フラッシュクロマトグラフィーによる精製によ
り、42を得る。
ボニル)ヒドロキシルアミン(Aldrich Chemical Co.)お
よび6当量のDBUを添加する。この混合物を、反応が完了するために必要な十
分な時間加熱する。冷却する場合、混合物を、CH2Cl2中に溶解し、そして生
じた溶液を、EtOAcに添加すると、沈殿物の形成が生じ、これを濾過により
除去し、そして濾液を濃縮する。フラッシュクロマトグラフィーによる精製によ
り、42を得る。
【0191】
(化合物43:)Boc保護基を、化合物16の調製について記載の様式と本
質的に類似の様式で化合物42から除去する。
質的に類似の様式で化合物42から除去する。
【0192】
(実施例10−4価D1結合体の合成)
合成スキームを、図11中に示す。
【0193】
(4価D1結合体(化合物44)の合成:)TA/D1(実施例1に記載の通
りに調製される)(0.90mg、1.28×10-7mol)を、ポリプロピレ
ンチューブ中の0.1Mの酢酸ナトリウム緩衝液(pH4.60、250μL)
中に溶解した。混合物に、0.1Mの酢酸緩衝液(pH4.6)中のAOA/P
ITGプラットホーム(化合物5)の16.6μL(18.9μg、1.60×
10-8mol)の0.97μmol/mL溶液を添加した。混合物を窒素下で6
日間穏やかに撹拌し、この時、反応は、分析用HPLC(4.6mm×250m
m、300Å、5μm、ジフェニルカラム(Vydac)を用いる)(検出:2
80nm(1mL/分;勾配25%〜45%のB、0〜20分、A=0.1%の
TFA/H2O、B=0.1%のTFA/CH3CN))によって完了したように
思われた。適切な保持時間は、以下の通りである:TA/D1、13.7分;化
合物44、17.2分)。混合物を、95/5の水/アセトニトリルで1mLの
容量まで希釈し、そしてHPLC(10mm×250mm、300Å、5μm、
ジフェニルカラム(Vydac)(3mL/分;勾配25%〜45%B、0〜4
0分、A=0.1%のTFA/H2O、B=0.1%のTFA/CH2CN)によ
り精製した。純粋な44(分析用HPLCによって実証される)を含有する画分
をプールし、そして凍結乾燥して0.4mg(25%)の44を得た:質量スペ
クトル(ES、平均m/z)計算値C1320H2032N338O370S20:29,198
。実測値:29,218。
りに調製される)(0.90mg、1.28×10-7mol)を、ポリプロピレ
ンチューブ中の0.1Mの酢酸ナトリウム緩衝液(pH4.60、250μL)
中に溶解した。混合物に、0.1Mの酢酸緩衝液(pH4.6)中のAOA/P
ITGプラットホーム(化合物5)の16.6μL(18.9μg、1.60×
10-8mol)の0.97μmol/mL溶液を添加した。混合物を窒素下で6
日間穏やかに撹拌し、この時、反応は、分析用HPLC(4.6mm×250m
m、300Å、5μm、ジフェニルカラム(Vydac)を用いる)(検出:2
80nm(1mL/分;勾配25%〜45%のB、0〜20分、A=0.1%の
TFA/H2O、B=0.1%のTFA/CH3CN))によって完了したように
思われた。適切な保持時間は、以下の通りである:TA/D1、13.7分;化
合物44、17.2分)。混合物を、95/5の水/アセトニトリルで1mLの
容量まで希釈し、そしてHPLC(10mm×250mm、300Å、5μm、
ジフェニルカラム(Vydac)(3mL/分;勾配25%〜45%B、0〜4
0分、A=0.1%のTFA/H2O、B=0.1%のTFA/CH2CN)によ
り精製した。純粋な44(分析用HPLCによって実証される)を含有する画分
をプールし、そして凍結乾燥して0.4mg(25%)の44を得た:質量スペ
クトル(ES、平均m/z)計算値C1320H2032N338O370S20:29,198
。実測値:29,218。
【0194】
(実施例11−4価D1結合体の合成)
合成スキームを、図12に示す。
【0195】
(4価D1結合体、化合物45の合成:実施例1に記載のように調製したTA
/D1(5.20mg,7.37×10-7モル)を、ポリプロピレンチューブ中
の2.0mLのHe散布0.1M酢酸ナトリウムpH4.60緩衝液に溶解した
。この混合物に、化合物16であるAOTEG/DEA/DEGプラットホーム
の8.147μmol/mL溶液(0.1M酢酸ナトリウムpH4.60の緩衝
液中)の15.07μL(139μg、1.23×10-7モル)を添加した。こ
の混合物を23時間、窒素下で穏やかに撹拌した。この時点で、4.6mm×2
50mm、300Å、5μm、ジフェニルカラム(Vydac)を用いて280
nmで検出する分析用HPLC(1mL/分;勾配25%〜45% B,0〜2
0分、A=0.1%TFA/H2O,B=0.1%TFA/CH3CN)により、
この反応は完了したと思われた。およその保持時間は以下の通りである:TA/
D1,13.7分;45,17.2分)。水でこの混合物を稀釈して5mLの容
積にし、そしてHPLCによって精製した(10mm×250mm,300Å,
5μm,ジフェニルカラム(Vydac)(3mL/分;勾配25%〜45%
B,0〜40分、A=0.1%TFA/H2O,B=0.1%TFA/CH3CN
)。分析用HPLCで証明される場合、純粋な45を含有する画分を、プールし
、凍結乾燥して、1.73mg(48%)の45を得た:質量分析(ES、平均
m/z)C1322H2048N334O377S20についての計算値:29,294。実測値
:29,294。
/D1(5.20mg,7.37×10-7モル)を、ポリプロピレンチューブ中
の2.0mLのHe散布0.1M酢酸ナトリウムpH4.60緩衝液に溶解した
。この混合物に、化合物16であるAOTEG/DEA/DEGプラットホーム
の8.147μmol/mL溶液(0.1M酢酸ナトリウムpH4.60の緩衝
液中)の15.07μL(139μg、1.23×10-7モル)を添加した。こ
の混合物を23時間、窒素下で穏やかに撹拌した。この時点で、4.6mm×2
50mm、300Å、5μm、ジフェニルカラム(Vydac)を用いて280
nmで検出する分析用HPLC(1mL/分;勾配25%〜45% B,0〜2
0分、A=0.1%TFA/H2O,B=0.1%TFA/CH3CN)により、
この反応は完了したと思われた。およその保持時間は以下の通りである:TA/
D1,13.7分;45,17.2分)。水でこの混合物を稀釈して5mLの容
積にし、そしてHPLCによって精製した(10mm×250mm,300Å,
5μm,ジフェニルカラム(Vydac)(3mL/分;勾配25%〜45%
B,0〜40分、A=0.1%TFA/H2O,B=0.1%TFA/CH3CN
)。分析用HPLCで証明される場合、純粋な45を含有する画分を、プールし
、凍結乾燥して、1.73mg(48%)の45を得た:質量分析(ES、平均
m/z)C1322H2048N334O377S20についての計算値:29,294。実測値
:29,294。
【0196】
(実施例12−モデルアミノオキシ化合物の調製およびグリオキシル−ペプチ
ドとの反応性の比較) 合成スキームを、図14に示す。
ドとの反応性の比較) 合成スキームを、図14に示す。
【0197】
化合物47、グリオキシル−ペプチドの合成:N−Fmoc保護アミノ酸を用
いた、Wang樹脂上の標準的固相合成により、化合物46(配列番号1)を調
製した。3当量のN−Fmoc−保護アミノ酸、3当量のDIC、および3当量
のHOBtを含有したDMFを用いてカップリングを行った。20%ピリジン含
有DMFを用いて脱保護を行った。このペプチドを樹脂から切断し、そして逆相
HPLC(C18、勾配10%〜30% B,0〜40分、A=0.1%TFA/
H2O,B=0.1%TFA/CH3CN)で精製した。分析用HPLC(4.6
×250mm C18、1mL/分、勾配10%〜60% B,0〜20分、A=
0.1%TFA/H2O,B=0.1%TFA/CH3CN、Tr=10.3分)
で証明される場合、純粋な画分を凍結乾燥して、フワフワした白色固体として化
合物46を得た:質量分析(ES)(M+H)C41H67N12O11についての計算
値:903.5。実測値:903.5。
いた、Wang樹脂上の標準的固相合成により、化合物46(配列番号1)を調
製した。3当量のN−Fmoc−保護アミノ酸、3当量のDIC、および3当量
のHOBtを含有したDMFを用いてカップリングを行った。20%ピリジン含
有DMFを用いて脱保護を行った。このペプチドを樹脂から切断し、そして逆相
HPLC(C18、勾配10%〜30% B,0〜40分、A=0.1%TFA/
H2O,B=0.1%TFA/CH3CN)で精製した。分析用HPLC(4.6
×250mm C18、1mL/分、勾配10%〜60% B,0〜20分、A=
0.1%TFA/H2O,B=0.1%TFA/CH3CN、Tr=10.3分)
で証明される場合、純粋な画分を凍結乾燥して、フワフワした白色固体として化
合物46を得た:質量分析(ES)(M+H)C41H67N12O11についての計算
値:903.5。実測値:903.5。
【0198】
163mg(0.18mmol)の化合物46を含有する3.67mLのCH 3
CNおよび19mLの10mMリン酸ナトリウムpH7.0緩衝液の溶液に、
77.2mg(0.361mmol)の過ヨウ素酸ナトリウムを含有する5.4
mLの水溶液を添加した。この混合物を室温で30分間撹拌し、そして100μ
Lの酢酸を添加した。この混合物を濾過し、そして濾過物をHPLC(C18、勾
配15%〜30% B,0〜40分、A=0.1%TFA/H2O,B=0.1
%TFA/CH3CN)によって精製した。分析用HPLC(4.6×250m
m、C18、1mL/分、勾配10%〜35% B,0〜20分、A=0.1%T
FA/H2O,B=0.1%TFA/CH3CN、Tr=17.6分)によって証
明される場合、純粋な画分を凍結乾燥して、凍結乾燥後の白色固体として124
mg(79%)の化合物47(配列番号2)を得た:質量分析(ES)(M+H
)C40H62N11O11についての計算値:872.5。実測値:872.5。
77.2mg(0.361mmol)の過ヨウ素酸ナトリウムを含有する5.4
mLの水溶液を添加した。この混合物を室温で30分間撹拌し、そして100μ
Lの酢酸を添加した。この混合物を濾過し、そして濾過物をHPLC(C18、勾
配15%〜30% B,0〜40分、A=0.1%TFA/H2O,B=0.1
%TFA/CH3CN)によって精製した。分析用HPLC(4.6×250m
m、C18、1mL/分、勾配10%〜35% B,0〜20分、A=0.1%T
FA/H2O,B=0.1%TFA/CH3CN、Tr=17.6分)によって証
明される場合、純粋な画分を凍結乾燥して、凍結乾燥後の白色固体として124
mg(79%)の化合物47(配列番号2)を得た:質量分析(ES)(M+H
)C40H62N11O11についての計算値:872.5。実測値:872.5。
【0199】
(化合物49の合成):化合物2の250mg(0.801mmol)を含有
する5mLのCH2Cl2溶液に、158μL(166mg、1.58mmol)
のアミノジエチレングリコール(Aldrich Chemical Co.)
を添加した。得られた溶液に、298μL(221mg、1.71mmol)の
ジイソプロピルエチルアミンを添加し、そしてこの混合物を、室温、窒素雰囲気
下で1.5時間撹拌した。この混合物を100mLのCH2Cl2と20mLの飽
和Na2CO3溶液との間で分配し、CH2Cl2層を20mLずつの飽和Na2C
O3溶液で2回、20mLずつの1N HClで2回、および20mLのブライ
ンで連続して洗浄した。水性HCl層を、50mLずつのCH2Cl2で5回抽出
し;水性Na2CO3層を、50mLずつのCH2Cl2で2回で抽出した。合わせ
た有機層を乾燥(MgSO4)し、濾過し、そして濃縮して、黄色油状物を得た
。シリカゲルクロマトグラフィー(70/30 EtOAc/ヘキサン)により
精製して、粘り気のある無色油状物として、164mg(73%)の、化合物4
9のBoc−保護前駆体を得た:1H NMR(CDCl3)δ1.48(s,9
H),3.52(m,2H),3.62(m,4H),3.77(m,2H),
4.35(s,2H),7.64(s,1H),8.33(brds,1H)。
する5mLのCH2Cl2溶液に、158μL(166mg、1.58mmol)
のアミノジエチレングリコール(Aldrich Chemical Co.)
を添加した。得られた溶液に、298μL(221mg、1.71mmol)の
ジイソプロピルエチルアミンを添加し、そしてこの混合物を、室温、窒素雰囲気
下で1.5時間撹拌した。この混合物を100mLのCH2Cl2と20mLの飽
和Na2CO3溶液との間で分配し、CH2Cl2層を20mLずつの飽和Na2C
O3溶液で2回、20mLずつの1N HClで2回、および20mLのブライ
ンで連続して洗浄した。水性HCl層を、50mLずつのCH2Cl2で5回抽出
し;水性Na2CO3層を、50mLずつのCH2Cl2で2回で抽出した。合わせ
た有機層を乾燥(MgSO4)し、濾過し、そして濃縮して、黄色油状物を得た
。シリカゲルクロマトグラフィー(70/30 EtOAc/ヘキサン)により
精製して、粘り気のある無色油状物として、164mg(73%)の、化合物4
9のBoc−保護前駆体を得た:1H NMR(CDCl3)δ1.48(s,9
H),3.52(m,2H),3.62(m,4H),3.77(m,2H),
4.35(s,2H),7.64(s,1H),8.33(brds,1H)。
【0200】
Boc保護基を以下のように除去した。Boc保護前駆体(164mg、0.
59mmol)を5mLの50/50トリフルオロ酢酸/CH2Cl2中に溶解し
、この混合物を室温で2時間撹拌した。この混合物を穏やかな窒素流中でエバポ
レートし、そして残留物をCH2Cl2中に再溶解した。この溶液を真空下で濃縮
し、179mg(理論値の104%、余分はTFAであると思われる)の化合物
49のトリフルオロ酢酸を、無色油状物として得た:質量分析(ES)(M+H
)C6H15N2O4についての計算値:179.2。実測値:179.1. (化合物50の合成):化合物47の5.0mg(5.62μmol)を含有
する7.6mLの0.1M pH4.6酢酸ナトリウム緩衝液の溶液に、3.2
9mgの化合物49(推定純度96%、1.70mg、5.82μmol)を含
有する10mLの0.1M pH4.6酢酸ナトリウム緩衝液の溶液の582μ
Lを添加し、そしてこの混合物を6日間撹拌した。この混合物をHPLC(C18 ;勾配25%〜45%B,0〜40分、A=水性pH7.0トリエチルアンモニ
ウムホスフェート(pH7.0にするために、500mLの0.1%H3PO4と
約500mLの0.3%Et3Nとを混合することにより調製)、B=CH3CN
)により直接精製した。生成物を含む画分を凍結乾燥して、0.3mgの化合物
50を得た:質量分析(ES)(M+H)C46H74N13O14:についての計算値
:1032.5。実測値:1032.6. (化合物51の合成):化合物8(100mg、0.38mmol)を25m
Lの1/9トリフルオロ酢酸/CH2Cl2中に溶解し、この混合物を室温で2時
間静置した。この混合物を穏やかな窒素流中でエバポレートし、そして残留物を
CH2Cl2中に再溶解した。この溶液を真空下で濃縮し、152mg(理論値の
145%、余りはTFAであると思われる)の化合物51のトリフルオロ酢酸を
、無色の油状物として得た:(M+H)C6H16NO4について算出した質量分析
(ES):165.1。実測値:165.1. (化合物52の合成):化合物47の5.0mg(5.62μmol)を含有
する7.6mLの0.1M pH4.6酢酸ナトリウム緩衝液の溶液に、3.2
9mgの化合物51(推定純度69%、1.63mg、5.82μmol)を含
有する10mLの0.1M pH4.6酢酸ナトリウム緩衝液の溶液845μL
を添加し、そしてこの混合物を21時間撹拌した。この混合物をHPLC(C18 ;勾配25%〜45%B,0〜40分、A=水性pH7.0トリエチルアンモニ
ウムホスフェート(pH7.0にするために、500mLの0.1%H3PO4と
約500mLの0.3%Et3Nとを混合することにより調製)、B=CH3CN
)により直接、精製した。生成物を含む画分を凍結乾燥して、3mgの化合物5
2を得た:(M+H)C46H75N12O14について算出した質量分析(ES):1
019.5。実測値:1019.5。
59mmol)を5mLの50/50トリフルオロ酢酸/CH2Cl2中に溶解し
、この混合物を室温で2時間撹拌した。この混合物を穏やかな窒素流中でエバポ
レートし、そして残留物をCH2Cl2中に再溶解した。この溶液を真空下で濃縮
し、179mg(理論値の104%、余分はTFAであると思われる)の化合物
49のトリフルオロ酢酸を、無色油状物として得た:質量分析(ES)(M+H
)C6H15N2O4についての計算値:179.2。実測値:179.1. (化合物50の合成):化合物47の5.0mg(5.62μmol)を含有
する7.6mLの0.1M pH4.6酢酸ナトリウム緩衝液の溶液に、3.2
9mgの化合物49(推定純度96%、1.70mg、5.82μmol)を含
有する10mLの0.1M pH4.6酢酸ナトリウム緩衝液の溶液の582μ
Lを添加し、そしてこの混合物を6日間撹拌した。この混合物をHPLC(C18 ;勾配25%〜45%B,0〜40分、A=水性pH7.0トリエチルアンモニ
ウムホスフェート(pH7.0にするために、500mLの0.1%H3PO4と
約500mLの0.3%Et3Nとを混合することにより調製)、B=CH3CN
)により直接精製した。生成物を含む画分を凍結乾燥して、0.3mgの化合物
50を得た:質量分析(ES)(M+H)C46H74N13O14:についての計算値
:1032.5。実測値:1032.6. (化合物51の合成):化合物8(100mg、0.38mmol)を25m
Lの1/9トリフルオロ酢酸/CH2Cl2中に溶解し、この混合物を室温で2時
間静置した。この混合物を穏やかな窒素流中でエバポレートし、そして残留物を
CH2Cl2中に再溶解した。この溶液を真空下で濃縮し、152mg(理論値の
145%、余りはTFAであると思われる)の化合物51のトリフルオロ酢酸を
、無色の油状物として得た:(M+H)C6H16NO4について算出した質量分析
(ES):165.1。実測値:165.1. (化合物52の合成):化合物47の5.0mg(5.62μmol)を含有
する7.6mLの0.1M pH4.6酢酸ナトリウム緩衝液の溶液に、3.2
9mgの化合物51(推定純度69%、1.63mg、5.82μmol)を含
有する10mLの0.1M pH4.6酢酸ナトリウム緩衝液の溶液845μL
を添加し、そしてこの混合物を21時間撹拌した。この混合物をHPLC(C18 ;勾配25%〜45%B,0〜40分、A=水性pH7.0トリエチルアンモニ
ウムホスフェート(pH7.0にするために、500mLの0.1%H3PO4と
約500mLの0.3%Et3Nとを混合することにより調製)、B=CH3CN
)により直接、精製した。生成物を含む画分を凍結乾燥して、3mgの化合物5
2を得た:(M+H)C46H75N12O14について算出した質量分析(ES):1
019.5。実測値:1019.5。
【0201】
(化合物49から50への転化速度および化合物51から52への転化速度の
比較):49(AOA−ADEG−OH、アミノオキシアセチル基を含む)の生
成物50への転化の速度、および51(AO−TEG−OH、アミノオキシアセ
チル基を含む)の52への転化の速度を、種々の時点での分析HPLC(C18;
勾配10%〜60%B,0〜40分、A=0.1%TFA/H2O、B=0.1
%TFA/CH3CN)に反応混合物のアリコートを注入すること、および分析
HPLCにより、その時点での生成物の量を測定することにより、測定した。図
13に例示するように、アミノオキシアルキル基を含む結合価プラットホーム分
子は、モデルペプチドとのオキシム結合体をより迅速に形成した。
比較):49(AOA−ADEG−OH、アミノオキシアセチル基を含む)の生
成物50への転化の速度、および51(AO−TEG−OH、アミノオキシアセ
チル基を含む)の52への転化の速度を、種々の時点での分析HPLC(C18;
勾配10%〜60%B,0〜40分、A=0.1%TFA/H2O、B=0.1
%TFA/CH3CN)に反応混合物のアリコートを注入すること、および分析
HPLCにより、その時点での生成物の量を測定することにより、測定した。図
13に例示するように、アミノオキシアルキル基を含む結合価プラットホーム分
子は、モデルペプチドとのオキシム結合体をより迅速に形成した。
【0202】
(実施例13−二官能性リンカーとして化合物37を用いる4価結合体調製の
別方法) アミノ基転移ドメイン1β2GPIポリペプチドまたは任意の他のグリオキシ
ル化ポリペプチドを、4価アミノオキシプラットホームと直接反応させる代わり
に、アミノ基転移ポリペプチドを、過剰の化合物37を含有するpH4.6 1
00mM酢酸ナトリウム緩衝液と反応させて、アミノオキシリンカーがオキシム
結合を介してポリペプチド(ここでは、ドメイン1ポリペプチド)に結合してい
る化合物53を提供し得る。合成スキームを図15に示す。化合物53を過剰の
リンカーから分離し、4当量の化合物53を、プラットホーム38を含有するp
H4.6 100mM酢酸ナトリウム緩衝液と反応させて、第2セットのオキシ
ム結合を形成し、4価結合体である化合物54を得た。
別方法) アミノ基転移ドメイン1β2GPIポリペプチドまたは任意の他のグリオキシ
ル化ポリペプチドを、4価アミノオキシプラットホームと直接反応させる代わり
に、アミノ基転移ポリペプチドを、過剰の化合物37を含有するpH4.6 1
00mM酢酸ナトリウム緩衝液と反応させて、アミノオキシリンカーがオキシム
結合を介してポリペプチド(ここでは、ドメイン1ポリペプチド)に結合してい
る化合物53を提供し得る。合成スキームを図15に示す。化合物53を過剰の
リンカーから分離し、4当量の化合物53を、プラットホーム38を含有するp
H4.6 100mM酢酸ナトリウム緩衝液と反応させて、第2セットのオキシ
ム結合を形成し、4価結合体である化合物54を得た。
【0203】
(実施例14−二官能性リンカーへの前駆体として化合物21を用いる、4価
結合体調製の別方法) 水酸化アンモニウムで化合物21を処理し、アセチルイオウ保護基を除去し、
ついでトリフリオロ酢酸で処理して、Boc保護基を除去して、リンカー55を
得た。この場合、グリオキシ含有ポリペプチド(TA/D1)を、化合物55と
反応させて、化合物56(オキシム結合を介して結合したスルフヒドリルリンカ
ーを有するドメイン1)を得た。4当量の化合物56を、プラットホーム23と
反応させ、4価ドメイン1ポリペプチド結合体である化合物57を得た。合成ス
キームを図16に示す。
結合体調製の別方法) 水酸化アンモニウムで化合物21を処理し、アセチルイオウ保護基を除去し、
ついでトリフリオロ酢酸で処理して、Boc保護基を除去して、リンカー55を
得た。この場合、グリオキシ含有ポリペプチド(TA/D1)を、化合物55と
反応させて、化合物56(オキシム結合を介して結合したスルフヒドリルリンカ
ーを有するドメイン1)を得た。4当量の化合物56を、プラットホーム23と
反応させ、4価ドメイン1ポリペプチド結合体である化合物57を得た。合成ス
キームを図16に示す。
【0204】
(実施例15−化合物85の合成、図21)
アミノオキシプラットホーム(化合物85)の合成を、化合物20の合成と本
質的に同じ様式(図4に示す)で達成した;ただし、化合物17の代わりに化合
物28を用いた。化合物18を、図23に示すように、化合物28と反応させ、
Boc保護プラットホーム99を得た。
質的に同じ様式(図4に示す)で達成した;ただし、化合物17の代わりに化合
物28を用いた。化合物18を、図23に示すように、化合物28と反応させ、
Boc保護プラットホーム99を得た。
【0205】
Boc保護基を、化合物16の調製について記載したのと実質的に同様の様式
で、化合物99から除去し、化合物85を得る。
で、化合物99から除去し、化合物85を得る。
【0206】
(実施例16−化合物86の合成、図21)
化合物86の調製は、Boc保護アミノオキシヘキサン酸である化合物105
を調製する工程、およびこれを用いて図24のスキームBに示されるように、テ
トラ−アミノプラットホームである化合物108をアシル化する工程を包含する
。
を調製する工程、およびこれを用いて図24のスキームBに示されるように、テ
トラ−アミノプラットホームである化合物108をアシル化する工程を包含する
。
【0207】
(エチル6−(N−tert−ブチルオキシカルボニル)アミノオキシヘキサ
ノエート、化合物104); 500mg(3.76mmol)のN−(tert−ブチルオキシカルボニル
)ヒドロキシルアミン(Aldrich Chemical Co.)および2
67μL(335mg、1.50mmol)の6−ブロモヘキサン酸エチルのマ
グネチックスターラーにより撹拌される混合物に、約1分の時間にわたって、1
.12mL(1.14g、7.51mmol)のDBUを添加した。この混合物
を24時間撹拌させ、このときこの混合物は部分的に凝固した。この混合物を1
00mLのCH2Cl2に溶解し、得られた溶液を25mLずつの1N HClと
共に4回および25mLのブラインと共に分液漏斗中で振盪した。水相を廃棄し
、そしてCH2Cl2層を乾燥(MgSO4)し、濾過し、そして濃縮した。得ら
れた黄色油状物をシリカゲルクロマトグラフィー(3/7 EtOAc/ヘキサ
ン)により精製し、285mgの化合物104を得た:1H NMR(CDCl3 )(δ)1.25(t,3H),1.42(m,2H),1.50(s,9H)
,1.65(m,4H),2.30(t,2H),3.83(t,2H),4.
12(q,2H),7.28(s,1H);13C NMR(CDCl3)(δ)
14.4,24.9,25.6,27.8,28.4,34.3,60.4,7
6.6,81.7,157.1,173.8;(M+Na)C13H25NaNO5
について算出した、HRMS(MALDI−FTMS):298.1630。実
測値:298.1631。
ノエート、化合物104); 500mg(3.76mmol)のN−(tert−ブチルオキシカルボニル
)ヒドロキシルアミン(Aldrich Chemical Co.)および2
67μL(335mg、1.50mmol)の6−ブロモヘキサン酸エチルのマ
グネチックスターラーにより撹拌される混合物に、約1分の時間にわたって、1
.12mL(1.14g、7.51mmol)のDBUを添加した。この混合物
を24時間撹拌させ、このときこの混合物は部分的に凝固した。この混合物を1
00mLのCH2Cl2に溶解し、得られた溶液を25mLずつの1N HClと
共に4回および25mLのブラインと共に分液漏斗中で振盪した。水相を廃棄し
、そしてCH2Cl2層を乾燥(MgSO4)し、濾過し、そして濃縮した。得ら
れた黄色油状物をシリカゲルクロマトグラフィー(3/7 EtOAc/ヘキサ
ン)により精製し、285mgの化合物104を得た:1H NMR(CDCl3 )(δ)1.25(t,3H),1.42(m,2H),1.50(s,9H)
,1.65(m,4H),2.30(t,2H),3.83(t,2H),4.
12(q,2H),7.28(s,1H);13C NMR(CDCl3)(δ)
14.4,24.9,25.6,27.8,28.4,34.3,60.4,7
6.6,81.7,157.1,173.8;(M+Na)C13H25NaNO5
について算出した、HRMS(MALDI−FTMS):298.1630。実
測値:298.1631。
【0208】
(6−(N−tert−ブチルオキシカルボニル)アミノオキシヘキサン酸、
化合物105); 1.50g(5.44mmol)の化合物104を含有する20mLのEtO
OHの溶液に、5.44mL(54.4mmol)の10N NaOHを添加し
、そしてこの混合物を18時間撹拌した。この混合物を100mLの1N HC
lと100mLずつのCH2Cl2との間で4回分配した。CH2Cl2層を合わせ
て、乾燥(MgSO4)し、濾過し、そして黄色油状物に濃縮した。シリカゲル
クロマトグラフィー(50/50/1 ヘキサン/EtOAc/HOAc)によ
り精製し、無色油状物として、1.22g(90%)の化合物105を得た:1
H NMR(CDCl3)(δ)1.45(m,2H),1.48(s,9H)
,1.66(m,4H),2.37(t,2H),3.85(t,2H),7.
21(s,1H);13C NMR CDCl3(δ)24.6,25.5,27
.8,28.4,34.0,76.6,82.0,157.5,179.3。
化合物105); 1.50g(5.44mmol)の化合物104を含有する20mLのEtO
OHの溶液に、5.44mL(54.4mmol)の10N NaOHを添加し
、そしてこの混合物を18時間撹拌した。この混合物を100mLの1N HC
lと100mLずつのCH2Cl2との間で4回分配した。CH2Cl2層を合わせ
て、乾燥(MgSO4)し、濾過し、そして黄色油状物に濃縮した。シリカゲル
クロマトグラフィー(50/50/1 ヘキサン/EtOAc/HOAc)によ
り精製し、無色油状物として、1.22g(90%)の化合物105を得た:1
H NMR(CDCl3)(δ)1.45(m,2H),1.48(s,9H)
,1.66(m,4H),2.37(t,2H),3.85(t,2H),7.
21(s,1H);13C NMR CDCl3(δ)24.6,25.5,27
.8,28.4,34.0,76.6,82.0,157.5,179.3。
【0209】
(N−ヒドロキシスクシンイミジル6−(N−tert−ブチルオキシカルボ
ニル)アミノオキシヘキサノエート、化合物106):1.07g(4.32m
mol)の化合物105および497mg(4.32mmol)のN−ヒドロキ
シスクシンイミドを含有する20mLのCH2Cl2の溶液に、818mg(1・
01mL,6.48mmol)のジイソプロピルカルボジイミドを添加した。こ
の反応物を室温で18時間撹拌し、そして1mLのHOAcを添加した。この混
合物をさらに3時間撹拌して、真空下で濃縮した。残留物を75% EtOAc
/ヘキサンに溶解し、そして不溶性物質を濾過により除去した。この濾液を濃縮
し、得られた黄色油状物を、シリカゲルクロマトグラフィー(50/50/ E
tOAc/ヘキサン)により精製し、無色油状物として、1.31g(88%)
の化合物106を得た:1H NMR(CDCl3)(δ)1.50(s,9H)
,1.52(m,2H),1.69(m,2H),1.80(m,2H),2.
63(t,2H),2.84(s,4H),3.88(t,2H),7.25(
s,1H);13C NMR CDCl3(δ)24.4,25.1,25.6,
27.5,28.2,30.8,76.1,81.5,157.3,168.6
,169.4。
ニル)アミノオキシヘキサノエート、化合物106):1.07g(4.32m
mol)の化合物105および497mg(4.32mmol)のN−ヒドロキ
シスクシンイミドを含有する20mLのCH2Cl2の溶液に、818mg(1・
01mL,6.48mmol)のジイソプロピルカルボジイミドを添加した。こ
の反応物を室温で18時間撹拌し、そして1mLのHOAcを添加した。この混
合物をさらに3時間撹拌して、真空下で濃縮した。残留物を75% EtOAc
/ヘキサンに溶解し、そして不溶性物質を濾過により除去した。この濾液を濃縮
し、得られた黄色油状物を、シリカゲルクロマトグラフィー(50/50/ E
tOAc/ヘキサン)により精製し、無色油状物として、1.31g(88%)
の化合物106を得た:1H NMR(CDCl3)(δ)1.50(s,9H)
,1.52(m,2H),1.69(m,2H),1.80(m,2H),2.
63(t,2H),2.84(s,4H),3.88(t,2H),7.25(
s,1H);13C NMR CDCl3(δ)24.4,25.1,25.6,
27.5,28.2,30.8,76.1,81.5,157.3,168.6
,169.4。
【0210】
(Boc−保護アミノオキシヘキサノイル/AHAB/TEGプラットホーム
、化合物109の合成):化合物107を得て、以前に記載されたように(米国
特許第5,633,395号、反応スキーム4)、化合物108に転化した。5
0mg(0.058mmol)の化合物108を含有する1mLのTHFの溶液
に、38μL(37mg、0.464mmol)のピリジン、続いて、120m
g(0.348mmol)の化合物106を含有する1mLのTHFの溶液を添
加した。この混合物を18時間撹拌し、1N HClで酸性化し、そして15m
Lの1N HClと15mLずつのCH2Cl2との間で3回分配した。合わせた
CH2Cl2層を乾燥(MgSO4)し、濾過し、そして濃縮した。得られた油状
物を、シリカゲルクロマトグラフィー(段階勾配;95/5 CH2Cl2/Me
OH〜90/10 CH2Cl2/MeOH〜80/20 CH2Cl2/MeOH
)により精製して、粘性物質として、25mg(24%)の化合物109を得た
:1H NMR(CDCl3)(δ)1.32(M,18H),1.47(s,9
H),1.65(m,18H),2.20(t,16H),1.80(m,2H
),3.21(m,8H),3.40(brd s,16H),3.68(m,
8H),3.82(t,8H),6.52(t,2H),6.60(t,2H)
,7.13(t,2H),7.21(t,2H),7.88(s,1H);C84 H157N14O26で計算した質量分析(ESI)(M+H):1777。実測値1
778。
、化合物109の合成):化合物107を得て、以前に記載されたように(米国
特許第5,633,395号、反応スキーム4)、化合物108に転化した。5
0mg(0.058mmol)の化合物108を含有する1mLのTHFの溶液
に、38μL(37mg、0.464mmol)のピリジン、続いて、120m
g(0.348mmol)の化合物106を含有する1mLのTHFの溶液を添
加した。この混合物を18時間撹拌し、1N HClで酸性化し、そして15m
Lの1N HClと15mLずつのCH2Cl2との間で3回分配した。合わせた
CH2Cl2層を乾燥(MgSO4)し、濾過し、そして濃縮した。得られた油状
物を、シリカゲルクロマトグラフィー(段階勾配;95/5 CH2Cl2/Me
OH〜90/10 CH2Cl2/MeOH〜80/20 CH2Cl2/MeOH
)により精製して、粘性物質として、25mg(24%)の化合物109を得た
:1H NMR(CDCl3)(δ)1.32(M,18H),1.47(s,9
H),1.65(m,18H),2.20(t,16H),1.80(m,2H
),3.21(m,8H),3.40(brd s,16H),3.68(m,
8H),3.82(t,8H),6.52(t,2H),6.60(t,2H)
,7.13(t,2H),7.21(t,2H),7.88(s,1H);C84 H157N14O26で計算した質量分析(ESI)(M+H):1777。実測値1
778。
【0211】
(アミノオキシヘキサノイル/AHAB/TEGプラットホーム,86):化
合物16の調製について記載されたのと本質的に同じ様式で、化合物109から
Boc保護基を取り除いて86を得る。
合物16の調製について記載されたのと本質的に同じ様式で、化合物109から
Boc保護基を取り除いて86を得る。
【0212】
(実施例17(化合物91の合成、図22))
1−アジド−6−(N−tert−ブチルオキシカルボニル)アミノオキシヘ
キサン(化合物99)の合成: 300mg(0.874mmol)の1−ヨード−6−(N−tert−ブチ
ルオキシカルボニル)アミノオキシヘキサン(Jonesら、Tectrahe
dron Letters 2000,41,1531〜1533に記載される
ように調製された化合物98)および455mg(7.00mmol)のアジ化
ナトリウムを含有する4mLのDMFの溶液を、窒素下で72時間撹拌した。こ
の混合物を50mLのEtOAcと25mLずつのH2Oとの間で3回分配した
。EtOAc層を乾燥(MgSO4)し、濾過し、そして濃縮した。シリカゲル
クロマトグラフィー(15/85 EtOAc/ヘキサン)により精製し、無色
油状物として、219mg(97%)の化合物99を得た:1H NMR(CD
Cl3)(δ)1.41(m,4H),1.49(s,9H),1.63(m,
4H),3.28(t,2H),3.83(t,2H),7.22(s,1H)
;13C NMR(CDCl3)(δ)25.7,26.7,28.0,28.4
,28.9,51.5,76.7,81.7,157.1。
キサン(化合物99)の合成: 300mg(0.874mmol)の1−ヨード−6−(N−tert−ブチ
ルオキシカルボニル)アミノオキシヘキサン(Jonesら、Tectrahe
dron Letters 2000,41,1531〜1533に記載される
ように調製された化合物98)および455mg(7.00mmol)のアジ化
ナトリウムを含有する4mLのDMFの溶液を、窒素下で72時間撹拌した。こ
の混合物を50mLのEtOAcと25mLずつのH2Oとの間で3回分配した
。EtOAc層を乾燥(MgSO4)し、濾過し、そして濃縮した。シリカゲル
クロマトグラフィー(15/85 EtOAc/ヘキサン)により精製し、無色
油状物として、219mg(97%)の化合物99を得た:1H NMR(CD
Cl3)(δ)1.41(m,4H),1.49(s,9H),1.63(m,
4H),3.28(t,2H),3.83(t,2H),7.22(s,1H)
;13C NMR(CDCl3)(δ)25.7,26.7,28.0,28.4
,28.9,51.5,76.7,81.7,157.1。
【0213】
(化合物96の合成):ドライアイス冷却器を装備した反応容器中で、液体ア
ンモニアを化合物22a(6.6〜8.8mmol)に添加し、そして得られた
混合物を5分間撹拌する。ペル−6−デオキシ−6−ヨード−シクロデキストリ
ン(1mmol,Ashtonら、J.Org.Chem.1996,61,9
03;GadelleおよびDefaye,Angew.Chem.Int.E
d.Engl.1991,30,78)を添加する。6時間の撹拌後、アンモニ
アを蒸発させ、そして残留物を真空下でさらに乾燥させ、そしてフラッシュカラ
ムクロマトグラフィーにより精製して化合物96を得る。
ンモニアを化合物22a(6.6〜8.8mmol)に添加し、そして得られた
混合物を5分間撹拌する。ペル−6−デオキシ−6−ヨード−シクロデキストリ
ン(1mmol,Ashtonら、J.Org.Chem.1996,61,9
03;GadelleおよびDefaye,Angew.Chem.Int.E
d.Engl.1991,30,78)を添加する。6時間の撹拌後、アンモニ
アを蒸発させ、そして残留物を真空下でさらに乾燥させ、そしてフラッシュカラ
ムクロマトグラフィーにより精製して化合物96を得る。
【0214】
(1−アミノ−6−(N−tert−ブチルオキシカルボニル)アミノオキシ
ヘキサン(化合物100)の合成): 180mg(0.697mmol)の化合物99および219mg(0.83
6mmol)のトリフェニルホスフィンを含有する4mLのTHFおよび1mL
のH2Oの溶液を、室温で18時間撹拌した。TLCにより証明されるとおり、
まだ出発物質が残留していたので、さらに55mg(0.209mmol)のト
リフェニルホスフィンを添加し、そして混合物を7時間撹拌した。混合物を濃縮
し、そしてシリカゲルクロマトグラフィー(段階勾配;2/5/93〜2/10
/88 濃NH4OH/H2O/CH3CN)により精製し、無色油状物として、
151mgの化合物100を得た:1H NMR(CDCl3)(δ)1.35(
m,4H),1.49(s,9H),1.61(m,4H),2.69(t,2
H),3.82(t,2H);13C NMR CDCl3(δ)25.8,26
.7,28.1,28.3,33.2,41.9,76.7,81.3,157
.1。
ヘキサン(化合物100)の合成): 180mg(0.697mmol)の化合物99および219mg(0.83
6mmol)のトリフェニルホスフィンを含有する4mLのTHFおよび1mL
のH2Oの溶液を、室温で18時間撹拌した。TLCにより証明されるとおり、
まだ出発物質が残留していたので、さらに55mg(0.209mmol)のト
リフェニルホスフィンを添加し、そして混合物を7時間撹拌した。混合物を濃縮
し、そしてシリカゲルクロマトグラフィー(段階勾配;2/5/93〜2/10
/88 濃NH4OH/H2O/CH3CN)により精製し、無色油状物として、
151mgの化合物100を得た:1H NMR(CDCl3)(δ)1.35(
m,4H),1.49(s,9H),1.61(m,4H),2.69(t,2
H),3.82(t,2H);13C NMR CDCl3(δ)25.8,26
.7,28.1,28.3,33.2,41.9,76.7,81.3,157
.1。
【0215】
(化合物101の合成):84mg(81.8μmol)の化合物14を含有
する1mLのCH2Cl2溶液に、114mg(491μmol)の化合物100
を含有する0.5mLのCH2Cl2溶液、続いて86μL(63mg,491μ
mol)のジイソプロピルエチルアミンを添加した。この混合物を室温で18時
間撹拌し、38μL(39mg,654μmol)の酢酸でクエンチし、そして
油状物に濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィー(段階勾配;2/98〜7.
5/92.5 MeOH/CH2Cl2)により精製し、油状物として、115m
g(100%)の化合物101を得た:1H NMR(CDCl3)(δ)1.3
8(m,16H),1.47(s,36H),1.59(m,16H),3.1
3(m,8H),3.50(m,8H),3.69(t,4H),3.82(t
,8H),4.18(m,4H),4.22(m,8H),5.42(m,2H
),5.56(m,2H);C62H116NaN10O25で計算した質量分析(ES
I)(M+H):1423。実測値1423。
する1mLのCH2Cl2溶液に、114mg(491μmol)の化合物100
を含有する0.5mLのCH2Cl2溶液、続いて86μL(63mg,491μ
mol)のジイソプロピルエチルアミンを添加した。この混合物を室温で18時
間撹拌し、38μL(39mg,654μmol)の酢酸でクエンチし、そして
油状物に濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィー(段階勾配;2/98〜7.
5/92.5 MeOH/CH2Cl2)により精製し、油状物として、115m
g(100%)の化合物101を得た:1H NMR(CDCl3)(δ)1.3
8(m,16H),1.47(s,36H),1.59(m,16H),3.1
3(m,8H),3.50(m,8H),3.69(t,4H),3.82(t
,8H),4.18(m,4H),4.22(m,8H),5.42(m,2H
),5.56(m,2H);C62H116NaN10O25で計算した質量分析(ES
I)(M+H):1423。実測値1423。
【0216】
(化合物91:)化合物16の調製について記載されたのと本質的に類似の様
式で、化合物101からBoc保護基を除去して、91を得る。反応スキームを
図25に示す。
式で、化合物101からBoc保護基を除去して、91を得る。反応スキームを
図25に示す。
【0217】
(実施例18(化合物92の合成,図22)
図26に記載のように、化合物92を調製した。テトラN−Boc−アミノプ
ラットホーム39b’をPCT US99/29338に記載のように調製した
。本質的にジエチレングリコールをpara−ニトロフェニルクロロホルメート
と反応させ、ジ−para−ニトロフェニルカーボネート化合物を生成した。次
いでこの化合物をジエタノールアミンと反応させ、テトラヒドロキシ化合物を形
成した。テトラヒドロキシ化合物を次にpara−ニトロフェニルクロロホルメ
ートと反応させ、テトラpara−ニトロフェニルカーボネート化合物を生成し
た。この化合物を次にtert−ブチルN−(2−アミノエチル)カルバメート
と反応させ、化合物39b’を生成した。化合物39b’をトリフルオロ酢酸で
脱保護し、テトラ−アミンである化合物102を得た。
ラットホーム39b’をPCT US99/29338に記載のように調製した
。本質的にジエチレングリコールをpara−ニトロフェニルクロロホルメート
と反応させ、ジ−para−ニトロフェニルカーボネート化合物を生成した。次
いでこの化合物をジエタノールアミンと反応させ、テトラヒドロキシ化合物を形
成した。テトラヒドロキシ化合物を次にpara−ニトロフェニルクロロホルメ
ートと反応させ、テトラpara−ニトロフェニルカーボネート化合物を生成し
た。この化合物を次にtert−ブチルN−(2−アミノエチル)カルバメート
と反応させ、化合物39b’を生成した。化合物39b’をトリフルオロ酢酸で
脱保護し、テトラ−アミンである化合物102を得た。
【0218】
(化合物103):20mg(0.023mmol)の化合物102を含有す
る0.5mLの飽和炭酸水素ナトリウムの溶液に60mg(0.140mmol
)の化合物17を含有する0.5mLのジオキサンの溶液を添加した。混合物を
、室温で5時間撹拌し、0℃に冷却し、そして1N HClの滴下により酸性化
した。この混合物を、7mLのH2Oと10mLずつのCH2Cl2との間で4回
分配した。合わせたCH2Cl2層を、飽和炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄し、乾
燥(MgSO4)し、濾過し、そして濃縮した。分取HPLC(C18,勾配,
30%B〜50%B、40分にわたる、A=0.1%TFA/H2O,B=0.
1%TFA/CH3CN)により精製して、粘り気のある油状物として、12m
g(27%)の化合物103を得た:1H NMR(CDCl3)δ1.48(s
,36H),3.26(m,16H),3.51(m,8H),3.68(m,
44H),4.02(m,8H),4.21(m,12H),6.12(brd
m,8H)8.09(bed s,4H);C79H136NaN14O41について
算出した質量分析(ESI)(M+Na):1900。実測値:1900。
る0.5mLの飽和炭酸水素ナトリウムの溶液に60mg(0.140mmol
)の化合物17を含有する0.5mLのジオキサンの溶液を添加した。混合物を
、室温で5時間撹拌し、0℃に冷却し、そして1N HClの滴下により酸性化
した。この混合物を、7mLのH2Oと10mLずつのCH2Cl2との間で4回
分配した。合わせたCH2Cl2層を、飽和炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄し、乾
燥(MgSO4)し、濾過し、そして濃縮した。分取HPLC(C18,勾配,
30%B〜50%B、40分にわたる、A=0.1%TFA/H2O,B=0.
1%TFA/CH3CN)により精製して、粘り気のある油状物として、12m
g(27%)の化合物103を得た:1H NMR(CDCl3)δ1.48(s
,36H),3.26(m,16H),3.51(m,8H),3.68(m,
44H),4.02(m,8H),4.21(m,12H),6.12(brd
m,8H)8.09(bed s,4H);C79H136NaN14O41について
算出した質量分析(ESI)(M+Na):1900。実測値:1900。
【0219】
(化合物92):
化合物16の調製について記載されたのと本質的に類似の様式で、化合物103
からBoc保護基を除去して、化合物92を得る。反応スキームを図26に示す
。
からBoc保護基を除去して、化合物92を得る。反応スキームを図26に示す
。
【0220】
(実施例19(八量体プラットホーム113の合成))
0.50g(1.71mmol)の化合物21bを含有する8mLのMeOH
中の0℃の窒素噴霧溶液に、NaOMe(2.57mmol)を含有するMeO
Hの25%溶液を537μL添加し、この混合物を0℃で2時間撹拌し、5.1
4mL(5.14mmol)の窒素噴霧1M KHCO3溶液を加え、そして混
合物を窒素下で15分間0℃で撹拌した。この混合物に283mg(0.14m
mol)の化合物111(Xeno特許に記載されたように調製した)を含有す
る10mLの2/1 MeOH/水の溶液を滴下した。反応混合物を濃縮して、
MeOHを除き、そして濃縮物をアセトニトリルに再溶解した。次いで反応混合
物を窒素下、室温で3日間撹拌し、濃縮し、40mLのEtOAcと20mLの
水との間で分配した。EtOAc層を濃縮し、そして生成物をAmberchr
om(登録商標)でのクロマトグラフィー(70/30 アセトニトリル/H2
O)により精製して、白色粉末として100mgの化合物112を得た:1H
NMR(CD3OD)δ1.36(m,48H),1.42(s,72H),1
.57(m,64H),2.14(m,8H),2.55(m,16H),3.
11(m,36H),3.24(m,8H),3.30(brd s,16H)
,3.71(t,16H),4.2(m,4H);13C NMR(CD3OD)
:δ 24.31,25.58,26.73,27.77,28.82,29.
16,29.73,29.78,30.17,30.24,30.35,33.
21,33.69,36.35,36.53,37.17,38.87,39.
09,40.43,40.53,54.95,66.07,70.50,71.
65,77.44,82.00,158.25,159.20,172.63,
172.28,173.97,176.28;C168H312Na2N26O46S8で計
算した質量分析(ESI)(M+2Na)/2:1866。実測値1866。
中の0℃の窒素噴霧溶液に、NaOMe(2.57mmol)を含有するMeO
Hの25%溶液を537μL添加し、この混合物を0℃で2時間撹拌し、5.1
4mL(5.14mmol)の窒素噴霧1M KHCO3溶液を加え、そして混
合物を窒素下で15分間0℃で撹拌した。この混合物に283mg(0.14m
mol)の化合物111(Xeno特許に記載されたように調製した)を含有す
る10mLの2/1 MeOH/水の溶液を滴下した。反応混合物を濃縮して、
MeOHを除き、そして濃縮物をアセトニトリルに再溶解した。次いで反応混合
物を窒素下、室温で3日間撹拌し、濃縮し、40mLのEtOAcと20mLの
水との間で分配した。EtOAc層を濃縮し、そして生成物をAmberchr
om(登録商標)でのクロマトグラフィー(70/30 アセトニトリル/H2
O)により精製して、白色粉末として100mgの化合物112を得た:1H
NMR(CD3OD)δ1.36(m,48H),1.42(s,72H),1
.57(m,64H),2.14(m,8H),2.55(m,16H),3.
11(m,36H),3.24(m,8H),3.30(brd s,16H)
,3.71(t,16H),4.2(m,4H);13C NMR(CD3OD)
:δ 24.31,25.58,26.73,27.77,28.82,29.
16,29.73,29.78,30.17,30.24,30.35,33.
21,33.69,36.35,36.53,37.17,38.87,39.
09,40.43,40.53,54.95,66.07,70.50,71.
65,77.44,82.00,158.25,159.20,172.63,
172.28,173.97,176.28;C168H312Na2N26O46S8で計
算した質量分析(ESI)(M+2Na)/2:1866。実測値1866。
【0221】
(化合物113):化合物16の調製について記載されたのと本質的に類似の
様式で、化合物112からBoc保護基を除去して113を得る。反応スキーム
を図27に示す。
様式で、化合物112からBoc保護基を除去して113を得る。反応スキーム
を図27に示す。
【0222】
(実施例20(化合物125の合成))
(化合物115):8.00g(13.4mmol)の化合物114(米国特
許第5,552,391号に記載のように調製)を含有する80mLの無水DM
Fの溶液に、4.00g(16.1mmol)のN−(ベンジルオキシカルボニ
ルオキシ)スクシンイミド(Aldrich Chemical Co.)を添
加した。この混合物を室温で窒素下、2時間撹拌し、この時点で、この混合物を
600mLの氷水に注ぎ、100mLずつのCH2Cl2で4回抽出した。合わせ
たCH2Cl2を100mLのH2Oで洗浄し、乾燥(Na2SO4)し、濾過し、
そして濃縮した。ヘプタンからの濃縮により粗生成物の凝固を補助した。EtO
Acからの再結晶化により白色固体として化合物115を得た:1H NMR(
CDCl3)δ1.26(m,4H),1.43−1.62(m,8H),2.
05(m,4H),3.16(q,4H),3.40(brd s,8H),4
.98(s,2H)(5.08(s,4H)および5.11(s,2H)と重複
),6.31(s,1H),6.44(s,1H),7.26−7.38(m,
15H)。
許第5,552,391号に記載のように調製)を含有する80mLの無水DM
Fの溶液に、4.00g(16.1mmol)のN−(ベンジルオキシカルボニ
ルオキシ)スクシンイミド(Aldrich Chemical Co.)を添
加した。この混合物を室温で窒素下、2時間撹拌し、この時点で、この混合物を
600mLの氷水に注ぎ、100mLずつのCH2Cl2で4回抽出した。合わせ
たCH2Cl2を100mLのH2Oで洗浄し、乾燥(Na2SO4)し、濾過し、
そして濃縮した。ヘプタンからの濃縮により粗生成物の凝固を補助した。EtO
Acからの再結晶化により白色固体として化合物115を得た:1H NMR(
CDCl3)δ1.26(m,4H),1.43−1.62(m,8H),2.
05(m,4H),3.16(q,4H),3.40(brd s,8H),4
.98(s,2H)(5.08(s,4H)および5.11(s,2H)と重複
),6.31(s,1H),6.44(s,1H),7.26−7.38(m,
15H)。
【0223】
(トリアミン(化合物116)の合成):9.0g(12.3mmol)の化
合物115を含有する18mLのシクロヘキサンおよび36mLの無水エタノー
ルの溶液を、N2ガスを通気することにより脱酸素化した。この溶液に、1.8
0gの10%Pd/Cを添加し、そして混合物を3時間、加熱還流した。冷却の
とき、この混合物を、リンスするために、MeOHを用いてCelite(登録
商標)を通して濾過した。この濾液を濃縮し、濃縮物をCH2Cl2から濃縮して
、灰白色固体として、4.20g(87%)の化合物116を得た。
合物115を含有する18mLのシクロヘキサンおよび36mLの無水エタノー
ルの溶液を、N2ガスを通気することにより脱酸素化した。この溶液に、1.8
0gの10%Pd/Cを添加し、そして混合物を3時間、加熱還流した。冷却の
とき、この混合物を、リンスするために、MeOHを用いてCelite(登録
商標)を通して濾過した。この濾液を濃縮し、濃縮物をCH2Cl2から濃縮して
、灰白色固体として、4.20g(87%)の化合物116を得た。
【0224】
(化合物117の合成):5.39g(21.8mmol)の化合物105を
含有する10mLの無水アセトニトリルの溶液に、3.02g(23.9mmo
l)のCDI(カルボニルジイミダゾール)を添加し、そして混合物を窒素雰囲
気下で1.5時間撹拌した。得られた溶液を、4.20g(10.7mmol)
の化合物116を含有する15mLの無水DMFの溶液に添加し、そしてこの混
合物を2時間撹拌して、500mLの氷水中に注いだ。得られた混合物を100
mLずつのCH2Cl2用いて4回抽出した。合わせたCH2Cl2層を、100m
LのH2Oで洗浄し、乾燥(Na2SO4)し、濾過し、そして濃縮した。得られ
た半固体残留物を10%イソプロピルアルコール/EtOAcから結晶化し、白
色固体として、4.0g(44%)の化合物117を得た。:1H NMR(C
DCl3)δ1.35(m,4H),1.42(m,4H),1.49(s,1
8H),1.63(m,16H),2.01(brd s,1H),2.20(
t,4H),3.23(m,4H),3.34(m,4H),3.85(t,4
H),6.34(t,2H),6.70(t,2H),7.98(brd s,
1H)。
含有する10mLの無水アセトニトリルの溶液に、3.02g(23.9mmo
l)のCDI(カルボニルジイミダゾール)を添加し、そして混合物を窒素雰囲
気下で1.5時間撹拌した。得られた溶液を、4.20g(10.7mmol)
の化合物116を含有する15mLの無水DMFの溶液に添加し、そしてこの混
合物を2時間撹拌して、500mLの氷水中に注いだ。得られた混合物を100
mLずつのCH2Cl2用いて4回抽出した。合わせたCH2Cl2層を、100m
LのH2Oで洗浄し、乾燥(Na2SO4)し、濾過し、そして濃縮した。得られ
た半固体残留物を10%イソプロピルアルコール/EtOAcから結晶化し、白
色固体として、4.0g(44%)の化合物117を得た。:1H NMR(C
DCl3)δ1.35(m,4H),1.42(m,4H),1.49(s,1
8H),1.63(m,16H),2.01(brd s,1H),2.20(
t,4H),3.23(m,4H),3.34(m,4H),3.85(t,4
H),6.34(t,2H),6.70(t,2H),7.98(brd s,
1H)。
【0225】
(化合物119):3.65g(14.11mmol)の9−フルオレニルメ
チルクロロホルメート(Fmoc−C1)を含有する15mLのジオキサンの溶
液に、3.00g(15.5mmol)の化合物118(Bondunovら、
J.Org.Chem.1995,第60巻、第6097頁〜6102頁)を含
有する15mLのジオキサンの溶液、続いて、1.95g(14.11mmol
)の炭酸カリウムを含有する30mLのH2Oの溶液を添加した。この混合物を
室温で18時間撹拌し、そして濃縮した。得られた油状物を50mLの1N N
aOH溶液と150mLずつのCH2Cl2との間で3回分配した。合わせたCH 2 Cl2層を乾燥(MgSO4)し、濾過し、そして黄色油状物に濃縮した。シリ
カゲルクロマトグラフィー(段階勾配;90/10 EtOAc/AcOH〜9
0/10/1 EtOHc/AcOH/MeOH)により精製して、粘性の油状
物として3.85g(66%)の化合物119を得た:1H NMR(CDCl3 )(δ)3.26(m,4H),3.39(m,2H),3.49(m,2H)
,3.59(m,2H),3.65(m,4H),3.69(m,2H),4.
25(t,1H),4.60(d,2H),7.35(t,2H),7.41(
t,2H),7.59(d,2H),7.78(d,2H)。
チルクロロホルメート(Fmoc−C1)を含有する15mLのジオキサンの溶
液に、3.00g(15.5mmol)の化合物118(Bondunovら、
J.Org.Chem.1995,第60巻、第6097頁〜6102頁)を含
有する15mLのジオキサンの溶液、続いて、1.95g(14.11mmol
)の炭酸カリウムを含有する30mLのH2Oの溶液を添加した。この混合物を
室温で18時間撹拌し、そして濃縮した。得られた油状物を50mLの1N N
aOH溶液と150mLずつのCH2Cl2との間で3回分配した。合わせたCH 2 Cl2層を乾燥(MgSO4)し、濾過し、そして黄色油状物に濃縮した。シリ
カゲルクロマトグラフィー(段階勾配;90/10 EtOAc/AcOH〜9
0/10/1 EtOHc/AcOH/MeOH)により精製して、粘性の油状
物として3.85g(66%)の化合物119を得た:1H NMR(CDCl3 )(δ)3.26(m,4H),3.39(m,2H),3.49(m,2H)
,3.59(m,2H),3.65(m,4H),3.69(m,2H),4.
25(t,1H),4.60(d,2H),7.35(t,2H),7.41(
t,2H),7.59(d,2H),7.78(d,2H)。
【0226】
(化合物120):3.77g(9.08mmol)の化合物119および7
.32g(36.3mmol)の4−ニトロフェニルクロロホルメートを含有す
る50mLのCH2Cl2溶液(0℃)に、5.88mL(5.75g,72.6
mmol)のピリミジンを添加した。この混合物を、窒素雰囲気下、室温で72
時間撹拌し、そしてこの混合物を200mLのCH2Cl2と100mLずつの1
0%炭酸水素ナトリウム水溶液(4回)との間で分配した。このCH2Cl2層を
、100mLのH2O、100mLの1N HCl、次いで100mLのブライ
ンで連続して洗浄した。この溶液を、乾燥(MgSO4)し、濾過し、そして濃
縮してオレンジ色の油状物を得た。シリカゲルクロマトグラフィー(15/50
/35/1 EtOAc/CH2Cl2/ヘキサン/AcOH)により精製して、
黄色粘性物質として、2.67g(39%)の化合物120を得た:1H NM
R(CDCl3)δ3.32(m,4H),3.52(m,2H),3.60(
m,4H),3.74(m,2H),4.23(t,1H),4.38(m,2
H),4.41(m,2H),4.57(d,2H),7.37(m,8H),
7.59(d,2H),7.78(d,2H),8.26(重複する d,4H
);C37H36N3O14について算出した質量分析(ESI)(M+H):746
。実測値:746。
.32g(36.3mmol)の4−ニトロフェニルクロロホルメートを含有す
る50mLのCH2Cl2溶液(0℃)に、5.88mL(5.75g,72.6
mmol)のピリミジンを添加した。この混合物を、窒素雰囲気下、室温で72
時間撹拌し、そしてこの混合物を200mLのCH2Cl2と100mLずつの1
0%炭酸水素ナトリウム水溶液(4回)との間で分配した。このCH2Cl2層を
、100mLのH2O、100mLの1N HCl、次いで100mLのブライ
ンで連続して洗浄した。この溶液を、乾燥(MgSO4)し、濾過し、そして濃
縮してオレンジ色の油状物を得た。シリカゲルクロマトグラフィー(15/50
/35/1 EtOAc/CH2Cl2/ヘキサン/AcOH)により精製して、
黄色粘性物質として、2.67g(39%)の化合物120を得た:1H NM
R(CDCl3)δ3.32(m,4H),3.52(m,2H),3.60(
m,4H),3.74(m,2H),4.23(t,1H),4.38(m,2
H),4.41(m,2H),4.57(d,2H),7.37(m,8H),
7.59(d,2H),7.78(d,2H),8.26(重複する d,4H
);C37H36N3O14について算出した質量分析(ESI)(M+H):746
。実測値:746。
【0227】
(化合物121):482mg(0.612mmol)の化合物117を含有
する5mLのCH2Cl2溶液に、182mg(0.245mmol)の化合物1
20、続いて171μL(124mg,1.22mmol)のEt3Nおよび2
6mg(0.490mmol)のHOBtを添加した。この混合物を、TLC(
1/9 MeOH/CH2Cl2)により判定して、反応が終了するまで室温で撹
拌した。この混合物を300mLのCH2Cl2と各50mLの1N HCl(3
回)との間で分配した。CH2Cl2層をブラインで洗浄し、乾燥(MgSO4)
し、濾過し、そして濃縮して、黄色の油状物を得た。シリカゲルクロマトグラフ
ィー(複数段階勾配;5/1/94〜10/1/89〜15/1/84〜20/
1/79 MeOH/HOAc/CH2Cl2)により精製して、粘り気のある白
色固体として317mg(63%)の化合物121を得た:1H NMR(CD3 OD)δ1.34(m,16H),1.43(m,8H),1.48(s,36
H),1.64(m,24H),2.20(m,16H),3.19(m,12
H),3.25〜3.52(m,18H),3.55(m,2H),3.79(
t,8H),4.16(m,4H),4.28(t,1H),4.59(d,2
H),7.33(t,2H),7.41(t,2H),7.60(d,2H),
7.84(d,2H);13C NMR(CD3OD)δ14.6,23.8,2
6.7,26.7,26.9,27.7,28.8,28.9,30.3,37
.1,38.8,39.1,40.3,65.8,66.0,68.1,70.
2,70.3,77.3,82.0,121.2,126.0,128.4,1
29.0,142.9,145.6,157.9,158.2,159.2,1
76.1,176.3;C101H171Na2N15O28について算出した、質量分析
(ESI)(M+2Na)/2:1044。実測値:1044。
する5mLのCH2Cl2溶液に、182mg(0.245mmol)の化合物1
20、続いて171μL(124mg,1.22mmol)のEt3Nおよび2
6mg(0.490mmol)のHOBtを添加した。この混合物を、TLC(
1/9 MeOH/CH2Cl2)により判定して、反応が終了するまで室温で撹
拌した。この混合物を300mLのCH2Cl2と各50mLの1N HCl(3
回)との間で分配した。CH2Cl2層をブラインで洗浄し、乾燥(MgSO4)
し、濾過し、そして濃縮して、黄色の油状物を得た。シリカゲルクロマトグラフ
ィー(複数段階勾配;5/1/94〜10/1/89〜15/1/84〜20/
1/79 MeOH/HOAc/CH2Cl2)により精製して、粘り気のある白
色固体として317mg(63%)の化合物121を得た:1H NMR(CD3 OD)δ1.34(m,16H),1.43(m,8H),1.48(s,36
H),1.64(m,24H),2.20(m,16H),3.19(m,12
H),3.25〜3.52(m,18H),3.55(m,2H),3.79(
t,8H),4.16(m,4H),4.28(t,1H),4.59(d,2
H),7.33(t,2H),7.41(t,2H),7.60(d,2H),
7.84(d,2H);13C NMR(CD3OD)δ14.6,23.8,2
6.7,26.7,26.9,27.7,28.8,28.9,30.3,37
.1,38.8,39.1,40.3,65.8,66.0,68.1,70.
2,70.3,77.3,82.0,121.2,126.0,128.4,1
29.0,142.9,145.6,157.9,158.2,159.2,1
76.1,176.3;C101H171Na2N15O28について算出した、質量分析
(ESI)(M+2Na)/2:1044。実測値:1044。
【0228】
(化合物12):163mg(79.8mmol)の化合物121を含有する
2.4mLのDMF溶液に、600μLのジエチルアミンを添加した。この混合
物を3時間撹拌し、そして濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィー(複数段階
勾配;10/1/89〜12.5/6/86.5〜15/1/84 MeOH/
濃NH4OH/CH2Cl2)により精製して、ガラス状の粘性物質として127
mg(81%)の化合物122を得た:1H NMR(CD3OD)δ1.38(
m,16H),1.48(m,44H),1.65(m,24H),2.20(
t,16H),2.83(t,4H),3.17(t,8H),3.38(m,
16H),3.63(t,4H),3.69(t,4H),3.78(t,4H
),4.21(m,4H);13C NMR(CD3OD)δ 26.7,27.
0,28.8,28.9,30.3,37.1,38.8,39.1,40.3
,49.9,66.0,70.4,70.9,77.3,82.0,158.2
,159.2,176.1,176.3;C86H162N15O26で計算した質量分
析(ESI)(M+H):1821。実測値1821。
2.4mLのDMF溶液に、600μLのジエチルアミンを添加した。この混合
物を3時間撹拌し、そして濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィー(複数段階
勾配;10/1/89〜12.5/6/86.5〜15/1/84 MeOH/
濃NH4OH/CH2Cl2)により精製して、ガラス状の粘性物質として127
mg(81%)の化合物122を得た:1H NMR(CD3OD)δ1.38(
m,16H),1.48(m,44H),1.65(m,24H),2.20(
t,16H),2.83(t,4H),3.17(t,8H),3.38(m,
16H),3.63(t,4H),3.69(t,4H),3.78(t,4H
),4.21(m,4H);13C NMR(CD3OD)δ 26.7,27.
0,28.8,28.9,30.3,37.1,38.8,39.1,40.3
,49.9,66.0,70.4,70.9,77.3,82.0,158.2
,159.2,176.1,176.3;C86H162N15O26で計算した質量分
析(ESI)(M+H):1821。実測値1821。
【0229】
(化合物124b):20mg(11.0μmol)の化合物122を含有す
る5mLのDMF溶液に、103mg(8.8μmol)のメトキシポリエチレ
ングリコールベンゾトリアゾリルカーボネート(分子量11,690g/mol
)(mPEG12K−BTC,化合物123b,Shearwater Poly
mers)、続いて、5μL(3.6mg,35.9μmol)のEt3Nを添
加した。この混合物を18時間室温で撹拌し、そして濃縮した。残留物をシリカ
ゲルクロマトグラフィー(複数段階勾配;5/95〜15/85〜20/80
MeOH/CH2Cl2)により精製し、蝋状灰色固体として、109mgの化合
物124bを得た:1H NMR(CDCl3)δ1.37(m,16H),1.
49(m,44H),1.65(m,24H),2.20(t,16H),3.
20(q,8H),3.36(m,16H),3.61(m,4H),3.68
(m,約1056H),3.84(t、8H),3.91(m,4H),4.2
3(m,4H)。
る5mLのDMF溶液に、103mg(8.8μmol)のメトキシポリエチレ
ングリコールベンゾトリアゾリルカーボネート(分子量11,690g/mol
)(mPEG12K−BTC,化合物123b,Shearwater Poly
mers)、続いて、5μL(3.6mg,35.9μmol)のEt3Nを添
加した。この混合物を18時間室温で撹拌し、そして濃縮した。残留物をシリカ
ゲルクロマトグラフィー(複数段階勾配;5/95〜15/85〜20/80
MeOH/CH2Cl2)により精製し、蝋状灰色固体として、109mgの化合
物124bを得た:1H NMR(CDCl3)δ1.37(m,16H),1.
49(m,44H),1.65(m,24H),2.20(t,16H),3.
20(q,8H),3.36(m,16H),3.61(m,4H),3.68
(m,約1056H),3.84(t、8H),3.91(m,4H),4.2
3(m,4H)。
【0230】
化合物124a;この化合物を、化合物124bの調製物について用いたのと
本質的に同じ手順を用いて調製した;ただし、分子量5,215g/molのメ
トキシポリエチレングリコールベンゾトリアゾリルカーボネート(mPEG5K−
BTC、化合物123a,Shearwater Polymers)を用いた
。1H NMR(4:1 CDCl3/CD3OD)δ 1.37(m,16H)
,1.49(m,44H),1.65(m,24H),2.20(t,16H)
,3.20(q,8H),3.36(m,16H),3.61(m,4H),3
.68(m、約468H),3.84(t,8H),3.91(m,4H),4
.23(m,4H)。
本質的に同じ手順を用いて調製した;ただし、分子量5,215g/molのメ
トキシポリエチレングリコールベンゾトリアゾリルカーボネート(mPEG5K−
BTC、化合物123a,Shearwater Polymers)を用いた
。1H NMR(4:1 CDCl3/CD3OD)δ 1.37(m,16H)
,1.49(m,44H),1.65(m,24H),2.20(t,16H)
,3.20(q,8H),3.36(m,16H),3.61(m,4H),3
.68(m、約468H),3.84(t,8H),3.91(m,4H),4
.23(m,4H)。
【0231】
(化合物124c):この化合物を、化合物124bの調製物について用いた
のと本質的に同じ手順を用いて調製した;ただし、分子量22,334g/mo
lのメトキシポリエチレングリコールベンゾトリアゾリルカーボネート(mPE
G20K−BTC、化合物123c,Shearwater Polymers)
を用いた:1H NMR(5:1 CDCl3/CD3OD)δ 1.37(m,
16H),1.49(m,44H),1.65(m,24H),2.20(t,
16H),3.20(q,8H),3.36(m,16H),3.61(m,4
H),3.68(m、約2024H),3.84(t,8H),3.91(m,
4H),4.23(m,4H)。
のと本質的に同じ手順を用いて調製した;ただし、分子量22,334g/mo
lのメトキシポリエチレングリコールベンゾトリアゾリルカーボネート(mPE
G20K−BTC、化合物123c,Shearwater Polymers)
を用いた:1H NMR(5:1 CDCl3/CD3OD)δ 1.37(m,
16H),1.49(m,44H),1.65(m,24H),2.20(t,
16H),3.20(q,8H),3.36(m,16H),3.61(m,4
H),3.68(m、約2024H),3.84(t,8H),3.91(m,
4H),4.23(m,4H)。
【0232】
(化合物125b:)化合物16の調製物について記載されたのと本質的に類
似の様式で、化合物124a−cからBoc保護基を除去し、化合物125a〜
cを得る。
似の様式で、化合物124a−cからBoc保護基を除去し、化合物125a〜
cを得る。
【0233】
反応スキームを図28に示す。
【0234】
(実施例21(化合物129の合成))
(化合物126):14mg(18.6μmol)の化合物120および29
mg(186.3μmol)のHOBTを含有する5mLの無水DMF溶液に、
56μL(38mg,373μmol)のEt3Nを添加した。この混合物を1
時間撹拌し、そして85mg(46.6μmol)の化合物122を含有する1
mLのDMF溶液を添加した。この混合物を、室温で5時間撹拌し、そして15
0mLのCH2Cl2と50mLの1N HClとの間で分配した。CH2Cl2層
を、ブラインで洗浄し、乾燥(MgSO4)し、濾過し、そして濃縮した。シリ
カゲルクロマトグラフィーで精製して、蝋状の白色固体として、34mg(44
%)の化合物126を得た:1H NMR(CD3OD)δ1.37(m,32H
),1.49(1.48でsを重複するm,88H)1.62(m,48H),
2.20(t,32H),3.18(t,16H),3.36(m,32H),
3.50(m,12H),3.64(m,24H),3.79(t,16H),
4.17(m,12H),4.29(t,1H),4.60(d,2H),7.
37(t,2H),7.43(t,2H),7.65(d,2H),7.84(
d,2H);C197H347Na3N31O60について算出した質量分析(ESI)(
M+3Na)/3:1393。実測値:1393。
mg(186.3μmol)のHOBTを含有する5mLの無水DMF溶液に、
56μL(38mg,373μmol)のEt3Nを添加した。この混合物を1
時間撹拌し、そして85mg(46.6μmol)の化合物122を含有する1
mLのDMF溶液を添加した。この混合物を、室温で5時間撹拌し、そして15
0mLのCH2Cl2と50mLの1N HClとの間で分配した。CH2Cl2層
を、ブラインで洗浄し、乾燥(MgSO4)し、濾過し、そして濃縮した。シリ
カゲルクロマトグラフィーで精製して、蝋状の白色固体として、34mg(44
%)の化合物126を得た:1H NMR(CD3OD)δ1.37(m,32H
),1.49(1.48でsを重複するm,88H)1.62(m,48H),
2.20(t,32H),3.18(t,16H),3.36(m,32H),
3.50(m,12H),3.64(m,24H),3.79(t,16H),
4.17(m,12H),4.29(t,1H),4.60(d,2H),7.
37(t,2H),7.43(t,2H),7.65(d,2H),7.84(
d,2H);C197H347Na3N31O60について算出した質量分析(ESI)(
M+3Na)/3:1393。実測値:1393。
【0235】
(化合物127):34mg(8.27μmol)の化合物126を含有する
1.6mLのDMF溶液に、400μLのジエチルアミンを添加した。この混合
物を4時間室温で撹拌し、そして濃縮した。濃縮物をシリカゲルクロマトグラフ
ィー(1/10/89濃NH4OH/MeOH/CH2Cl2)により精製し、1
3mg(40%)の化合物127を得た:1H NMR(CD3OD)δ1.35
(m,32H),1.49(1.48でsを重複するm,88H),1.63(
m,48H),2.19(t,32H),3.08(brd t,4H)3.1
7(t、16H),3.38(m,36H),3.52(m,8H),3.63
(t,8H),3.70(m,12H),3.78(t,16H),4.21(
m,12H);C182H337Na3N31O58について算出した質量分析(ESI)
(M+Na)/3:1319.実測値1319。
1.6mLのDMF溶液に、400μLのジエチルアミンを添加した。この混合
物を4時間室温で撹拌し、そして濃縮した。濃縮物をシリカゲルクロマトグラフ
ィー(1/10/89濃NH4OH/MeOH/CH2Cl2)により精製し、1
3mg(40%)の化合物127を得た:1H NMR(CD3OD)δ1.35
(m,32H),1.49(1.48でsを重複するm,88H),1.63(
m,48H),2.19(t,32H),3.08(brd t,4H)3.1
7(t、16H),3.38(m,36H),3.52(m,8H),3.63
(t,8H),3.70(m,12H),3.78(t,16H),4.21(
m,12H);C182H337Na3N31O58について算出した質量分析(ESI)
(M+Na)/3:1319.実測値1319。
【0236】
(化合物128):13mg(3.34μmol)の化合物127を含有する
5mLのピリジン溶液に、60mg(2.68μmol)の分子量22,334
g/molのメトキシポリエチレングリコールベンゾトリアゾリルカーボネート
(mPEG20K−BTC,Shearwater Polymers)、続いて
、5μL(3.6mg,35.9μmol)のEt3Nを添加した。この混合物
を18時間室温で撹拌し、そして濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフ
ィー(複数段階勾配;10/90〜15/85〜20/80 MeOH/CH2
Cl2)により精製し、蝋状固体として、45mgの化合物128を得た:1H
NMR(CDCl3)δ1.30(m,32H),1.50(1.48,88 (化合物128):13mg(3.34μmol)の化合物127を含有する
5mLのピリジン溶液に、60mg(2.68μmol)の分子量22,334
g/molのメトキシポリエチレングリコールベンゾトリアゾリルカーボネート
(mPEG20K−BTC,Shearwater Polymers)、続いて
、5μL(3.6mg,35.9μmol)のEt3Nを添加した。この混合物
を18時間室温で撹拌し、そして濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフ
ィー(複数段階勾配;10/90〜15/85〜20/80 MeOH/CH2
Cl2)により精製し、蝋状固体として、45mgの化合物128を得た:1H
NMR(CDCl3)δ1.30(m,32H),1.50(1.48でsを重
複するm,88H),1.67(m,48H),2.24(t,32H),3.
23(m,16H),3.41(m,32H),3.65(m,約2024H)
,3.70(t、24H),3.89(m,16H),4.21(m,12H)
。
5mLのピリジン溶液に、60mg(2.68μmol)の分子量22,334
g/molのメトキシポリエチレングリコールベンゾトリアゾリルカーボネート
(mPEG20K−BTC,Shearwater Polymers)、続いて
、5μL(3.6mg,35.9μmol)のEt3Nを添加した。この混合物
を18時間室温で撹拌し、そして濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフ
ィー(複数段階勾配;10/90〜15/85〜20/80 MeOH/CH2
Cl2)により精製し、蝋状固体として、45mgの化合物128を得た:1H
NMR(CDCl3)δ1.30(m,32H),1.50(1.48,88 (化合物128):13mg(3.34μmol)の化合物127を含有する
5mLのピリジン溶液に、60mg(2.68μmol)の分子量22,334
g/molのメトキシポリエチレングリコールベンゾトリアゾリルカーボネート
(mPEG20K−BTC,Shearwater Polymers)、続いて
、5μL(3.6mg,35.9μmol)のEt3Nを添加した。この混合物
を18時間室温で撹拌し、そして濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフ
ィー(複数段階勾配;10/90〜15/85〜20/80 MeOH/CH2
Cl2)により精製し、蝋状固体として、45mgの化合物128を得た:1H
NMR(CDCl3)δ1.30(m,32H),1.50(1.48でsを重
複するm,88H),1.67(m,48H),2.24(t,32H),3.
23(m,16H),3.41(m,32H),3.65(m,約2024H)
,3.70(t、24H),3.89(m,16H),4.21(m,12H)
。
【0237】
(化合物129):図29に示されるように、化合物16の調製物について記
載されたのと本質的に類似の様式で、化合物128からBoc保護基を除去し、
化合物129を得る。
載されたのと本質的に類似の様式で、化合物128からBoc保護基を除去し、
化合物129を得る。
【0238】
(実施例22(化合物132の合成))
(化合物131):22mg(27.3μmol)の化合物117を含有する
5mLのピリジン溶液に、236mg(10.9μmol)の分子量21,52
9g/molのポリエチレングリコール ビス−ベンゾトリアゾリルカーボネー
ト(PEG20K−bis−BTC,化合物130,Shearwater Po
lymers)、続いて、8μL(5.8mg,57.4μmol)のEt3N
を添加した。この混合物を18時間室温で撹拌し、そして濃縮した。残留物をシ
リカゲルクロマトグラフィー(複数段階勾配;5/95〜10/90〜15/8
5〜20/80 MeOH/CH2Cl2)により精製し、白色固体として、24
2mg(96%)の化合物131を得た:1H NMR(CDCl3)δ1.35
(m,16H),1.48(m,44H),1.61(m,24H),2.20
(m,16H),3.22(m,8H),3.52〜3.96(m,約2000
H),4.23(m,4H)。
5mLのピリジン溶液に、236mg(10.9μmol)の分子量21,52
9g/molのポリエチレングリコール ビス−ベンゾトリアゾリルカーボネー
ト(PEG20K−bis−BTC,化合物130,Shearwater Po
lymers)、続いて、8μL(5.8mg,57.4μmol)のEt3N
を添加した。この混合物を18時間室温で撹拌し、そして濃縮した。残留物をシ
リカゲルクロマトグラフィー(複数段階勾配;5/95〜10/90〜15/8
5〜20/80 MeOH/CH2Cl2)により精製し、白色固体として、24
2mg(96%)の化合物131を得た:1H NMR(CDCl3)δ1.35
(m,16H),1.48(m,44H),1.61(m,24H),2.20
(m,16H),3.22(m,8H),3.52〜3.96(m,約2000
H),4.23(m,4H)。
【0239】
(化合物132):化合物16の調製物について記載されたのと本質的に類似
の様式で、化合物131からBoc保護基を除去し、化合物132を得る。
の様式で、化合物131からBoc保護基を除去し、化合物132を得る。
【0240】
反応スキームを図30に示す。
【0241】
(実施例23(化合物136の合成))
(化合物134):3.87mg(4.85μmol)のペンタエリトリトー
ルテトラキス−(4−ニトロフェニルカーボネートエステル)(ペンタエチトリ
トールとpara−ニトロフェニルクロロホルメートとの反応により調製し、テ
トラpara−ニトロフェニルカーボネート化合物を得た)を含有する5mLの
ピリジン溶液に、124mg(24.2μmol)の分子量5094g/mol
のモノ−Boc−保護ジアミノポリエチレングリコール(化合物133,Boc
NH−PEG(5K)−NH2)、および5μL(3.63mg,35.9μmol
)のEt3Nを添加した。この混合物を、18時間撹拌し、そして濃縮した。残
留物をシリカゲルクロマトグラフィー(段階勾配;5/95〜15/85 Me
OH/CH2Cl2)で精製して、白色固体として、77mg(77%)の化合物
134を得た:1H NMR(CDCl3)δ1.48(s,36H),3.32
(m,16H),3.52〜3.96(m,約1818H),4.10(m,8
H)。
ルテトラキス−(4−ニトロフェニルカーボネートエステル)(ペンタエチトリ
トールとpara−ニトロフェニルクロロホルメートとの反応により調製し、テ
トラpara−ニトロフェニルカーボネート化合物を得た)を含有する5mLの
ピリジン溶液に、124mg(24.2μmol)の分子量5094g/mol
のモノ−Boc−保護ジアミノポリエチレングリコール(化合物133,Boc
NH−PEG(5K)−NH2)、および5μL(3.63mg,35.9μmol
)のEt3Nを添加した。この混合物を、18時間撹拌し、そして濃縮した。残
留物をシリカゲルクロマトグラフィー(段階勾配;5/95〜15/85 Me
OH/CH2Cl2)で精製して、白色固体として、77mg(77%)の化合物
134を得た:1H NMR(CDCl3)δ1.48(s,36H),3.32
(m,16H),3.52〜3.96(m,約1818H),4.10(m,8
H)。
【0242】
(化合物135):化合物134(77mg,3.73μmol)を5mLの
トリフルオロ酢酸に溶解し、そして混合物を3時間静置させた。TFAをN2の
流下で除去し、そして残留物を5mLのCH2Cl2に溶解した。得られた溶液に
、7.72mg(22.4μmol)の化合物106を含有する5mLのCH2
Cl2、続いて、35μL(25.4mg,251μmol)のEt3Nを添加し
た。(注:混合物のpHをチエックし、Et3Nを用いて調節して、塩基性であ
ることを確認すべきである)。この混合物を窒素下で18時間撹拌した。この混
合物を50mLのCH2Cl2と25mLずつの1N HCl(3回)との間で分
配した。CH2Cl2層をブラインで洗浄し、乾燥(MgSO4)し、濾過し、そ
して濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィー(段階勾配;5/95〜10/9
0 MeOH/CH2Cl2)により精製して、蝋状固体として42mg(53%
)の化合物135を得た:1H NMR(CDCl3)δ1.40(m,8H),
1.48(s,36H),1.66(m,16H),2.18(t,8H),3
.32(m,16H),3.38〜3.89(m,約1818H),4.10(
m,8H),4.97(t,4H),6.43(t,4H),7.47(s,4
H)。
トリフルオロ酢酸に溶解し、そして混合物を3時間静置させた。TFAをN2の
流下で除去し、そして残留物を5mLのCH2Cl2に溶解した。得られた溶液に
、7.72mg(22.4μmol)の化合物106を含有する5mLのCH2
Cl2、続いて、35μL(25.4mg,251μmol)のEt3Nを添加し
た。(注:混合物のpHをチエックし、Et3Nを用いて調節して、塩基性であ
ることを確認すべきである)。この混合物を窒素下で18時間撹拌した。この混
合物を50mLのCH2Cl2と25mLずつの1N HCl(3回)との間で分
配した。CH2Cl2層をブラインで洗浄し、乾燥(MgSO4)し、濾過し、そ
して濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィー(段階勾配;5/95〜10/9
0 MeOH/CH2Cl2)により精製して、蝋状固体として42mg(53%
)の化合物135を得た:1H NMR(CDCl3)δ1.40(m,8H),
1.48(s,36H),1.66(m,16H),2.18(t,8H),3
.32(m,16H),3.38〜3.89(m,約1818H),4.10(
m,8H),4.97(t,4H),6.43(t,4H),7.47(s,4
H)。
【0243】
(化合物136):化合物16の調製物について記載されたのと本質的に類似
の様式で、化合物135からBoc保護基を除去して、図31に示されるように
、化合物136を得る。
の様式で、化合物135からBoc保護基を除去して、図31に示されるように
、化合物136を得る。
【0244】
(実施例24(化合物143の合成))
(化合物137):200mg(1.11mmol)のエチル3,5−ジアミ
ノベンゾエートを含有する5mLのCH2Cl2溶液に、窒素雰囲気下で、928
μL(674mg,6.66mmol)のEt3Nを添加した。この混合物に5
10μL(710mg,3.33mmol)の6−ブロモヘキサノイルクロリド
を含有する5mLのCH2Cl2溶液を滴下した。この混合物を、室温で1.5時
間撹拌し、そして50mLの1N HClと50mLずつのCH2Cl2(2回)
との間で分配した。CH2Cl2層を、飽和炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄し、乾
燥(MgSO4)し、濾過し、そして濃縮した。生成物をシリカゲルクロマトグ
ラフィー(6/4ヘキサン/EtOAc)で精製して、油状物として、554m
g(93%)の化合物137を得た:1H NMR(CDCl3)δ1.39(t
,3H),1.52(m,4H),1.75(m,4H),1.90(m,4H
),2.40(t,4H),3.42(t,4H),4.36(q,2H),7
.60(s,2H),7.88(s,2H),8.17(s,1H)。
ノベンゾエートを含有する5mLのCH2Cl2溶液に、窒素雰囲気下で、928
μL(674mg,6.66mmol)のEt3Nを添加した。この混合物に5
10μL(710mg,3.33mmol)の6−ブロモヘキサノイルクロリド
を含有する5mLのCH2Cl2溶液を滴下した。この混合物を、室温で1.5時
間撹拌し、そして50mLの1N HClと50mLずつのCH2Cl2(2回)
との間で分配した。CH2Cl2層を、飽和炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄し、乾
燥(MgSO4)し、濾過し、そして濃縮した。生成物をシリカゲルクロマトグ
ラフィー(6/4ヘキサン/EtOAc)で精製して、油状物として、554m
g(93%)の化合物137を得た:1H NMR(CDCl3)δ1.39(t
,3H),1.52(m,4H),1.75(m,4H),1.90(m,4H
),2.40(t,4H),3.42(t,4H),4.36(q,2H),7
.60(s,2H),7.88(s,2H),8.17(s,1H)。
【0245】
(化合物138):DBU(612μL,623mg,4.01mmol)を
、547mg(1.02mmol)の化合物137および272mg(2.05
mmol)のN−(tert−ブチルオキシカルボニル)ヒドロキシルアミン(
Aldrich Chemical Co.)の溶液に添加した。この混合物を
室温で18時間撹拌し、そして50mLの1N HClと50mLずつのCH2
Cl2(3回)との間で分配した。合わせたCH2Cl2層を、乾燥(MgSO4)
し、濾過し、そして濃縮した。生成物をシリカゲルクロマトグラフィー(1/1
ヘキサン/EtOAc)で精製して、白色固体として、216mg(33%)
の化合物138を得た:mp55〜60℃;1H NMR(CDCl3)δ1.3
8(t,3H),1.48(s,18H;埋没 m,4H),1.60(m,4
H),1.73(m,4H),2.40(m,4H),3.86(t,4H),
4.36(q,2H),7.41(s,2H),7.90(s,2H),8.0
6(s,2H),8.11(s,1H);C31H50NaN4O10について算出し
た質量分析(ESI)(M+Na):661。実測値:661。
、547mg(1.02mmol)の化合物137および272mg(2.05
mmol)のN−(tert−ブチルオキシカルボニル)ヒドロキシルアミン(
Aldrich Chemical Co.)の溶液に添加した。この混合物を
室温で18時間撹拌し、そして50mLの1N HClと50mLずつのCH2
Cl2(3回)との間で分配した。合わせたCH2Cl2層を、乾燥(MgSO4)
し、濾過し、そして濃縮した。生成物をシリカゲルクロマトグラフィー(1/1
ヘキサン/EtOAc)で精製して、白色固体として、216mg(33%)
の化合物138を得た:mp55〜60℃;1H NMR(CDCl3)δ1.3
8(t,3H),1.48(s,18H;埋没 m,4H),1.60(m,4
H),1.73(m,4H),2.40(m,4H),3.86(t,4H),
4.36(q,2H),7.41(s,2H),7.90(s,2H),8.0
6(s,2H),8.11(s,1H);C31H50NaN4O10について算出し
た質量分析(ESI)(M+Na):661。実測値:661。
【0246】
(化合物139):105mg(0.32mmol)の化合物138を含有す
る1/1アセトン/EtOH溶液に、256μL(2.56mmol)の10N
NaOHを添加し、そしてこの混合物を、60℃にて4時間加熱した。冷却の
際、この混合物を50mLの1N HClと50mLずつの4/1 CH2Cl2 /MeOH(4回)との間で分配した。合わせた有機層を乾燥(MgSO4)し
、濾過し、そして濃縮した。生成物を、シリカゲルクロマトグラフィー(3/9
7/1 MeOH/CH2Cl2/HOAc)により精製して、粘り気のある油状
物として、184mg(94%)の化合物139を得た:1H NMR(CDC
l3)δ1.38(m,4H),1.42(s,18H),1.60(m,4H
),1.70(m,4H),2.38(m,4H),3.80(t,4H),7
.77(s,2H),8.00(s,2H),8.11(s,1H),8.91
(s,2H);C29H46NaN4O10について算出した質量分析(ESI)(M
+Na):633。実測値:633。
る1/1アセトン/EtOH溶液に、256μL(2.56mmol)の10N
NaOHを添加し、そしてこの混合物を、60℃にて4時間加熱した。冷却の
際、この混合物を50mLの1N HClと50mLずつの4/1 CH2Cl2 /MeOH(4回)との間で分配した。合わせた有機層を乾燥(MgSO4)し
、濾過し、そして濃縮した。生成物を、シリカゲルクロマトグラフィー(3/9
7/1 MeOH/CH2Cl2/HOAc)により精製して、粘り気のある油状
物として、184mg(94%)の化合物139を得た:1H NMR(CDC
l3)δ1.38(m,4H),1.42(s,18H),1.60(m,4H
),1.70(m,4H),2.38(m,4H),3.80(t,4H),7
.77(s,2H),8.00(s,2H),8.11(s,1H),8.91
(s,2H);C29H46NaN4O10について算出した質量分析(ESI)(M
+Na):633。実測値:633。
【0247】
(化合物140):164mg(0.268mmol)の化合物139を含有
する2.0mLの乾燥THF溶液(0℃)に、31mg(0.268mmol)
のN−ヒドロキシスクシンイミド、続いて、83mg(0.403mmol)の
DCCを添加した。この混合物を室温に冷却し、そして窒素雰囲気下で18時間
撹拌し、そして200μLのHOAcを添加した。この混合物をさらに1時間撹
拌し、約5mLのEtOAcで稀釈し、そして1時間静置させた。得られた沈殿
物を濾過により除去し、そして濾液を濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィー
(3/97/ MeOH/CH2Cl2)により精製し、白色固体として129m
g(68%)の化合物140を得た:1H NMR(CDCl3)δ1.40(m
,4H),1.43(s,18H),1.65(m,4H),1.80(m,4
H),2.34(m,4H),2.93(s,4H),3.85(t,4H),
7.68(s,2H),7.87(s,2H),8.36(s,1H),8.6
1(s、2H)。
する2.0mLの乾燥THF溶液(0℃)に、31mg(0.268mmol)
のN−ヒドロキシスクシンイミド、続いて、83mg(0.403mmol)の
DCCを添加した。この混合物を室温に冷却し、そして窒素雰囲気下で18時間
撹拌し、そして200μLのHOAcを添加した。この混合物をさらに1時間撹
拌し、約5mLのEtOAcで稀釈し、そして1時間静置させた。得られた沈殿
物を濾過により除去し、そして濾液を濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィー
(3/97/ MeOH/CH2Cl2)により精製し、白色固体として129m
g(68%)の化合物140を得た:1H NMR(CDCl3)δ1.40(m
,4H),1.43(s,18H),1.65(m,4H),1.80(m,4
H),2.34(m,4H),2.93(s,4H),3.85(t,4H),
7.68(s,2H),7.87(s,2H),8.36(s,1H),8.6
1(s、2H)。
【0248】
(化合物142):60mg(0.85mmol)の化合物140を含有する
0.5mLのCH2Cl2溶液に、14μL(13.3mg,0.168mmol
)ピリジンを添加した。この混合物を0℃まで冷却し、そして71mg(0.0
21mmol)のジアミノ−PEG(化合物141)溶液を含有する0.5mL
のCH2Cl2溶液に添加した。この混合物を窒素雰囲気下、室温で18時間撹拌
し、そして10mLの1N HClと10mLずつのCH2Cl2(3回)との間
で分配した。合わせたCH2Cl2層を、乾燥(MgSO4)し、濾過し、そして
濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィー(段階勾配5/95 MeOH/CH 2 Cl2〜10/90 MeOH/CH2Cl2)により精製し、粘性の油状物とし
て、66mg(69%)の化合物142を得た:1H NMR(CDCl3)δ1
.45(s,36H),1.60〜1.80(m,24H),2.39(t,8
H),3.39(m,8H),3.50〜3.80(brd s,約318H)
,3.87(t,8H),4.22(t,4H),7.50(brd s,2H
),7.63(s,4H),7.77(s,2H),8.08(s,2H),8
.60(s,2H);C207H389N12O93で計算した質量分析(MALDI)(
M+H):4535。約4324で分布中心を見出した。
0.5mLのCH2Cl2溶液に、14μL(13.3mg,0.168mmol
)ピリジンを添加した。この混合物を0℃まで冷却し、そして71mg(0.0
21mmol)のジアミノ−PEG(化合物141)溶液を含有する0.5mL
のCH2Cl2溶液に添加した。この混合物を窒素雰囲気下、室温で18時間撹拌
し、そして10mLの1N HClと10mLずつのCH2Cl2(3回)との間
で分配した。合わせたCH2Cl2層を、乾燥(MgSO4)し、濾過し、そして
濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィー(段階勾配5/95 MeOH/CH 2 Cl2〜10/90 MeOH/CH2Cl2)により精製し、粘性の油状物とし
て、66mg(69%)の化合物142を得た:1H NMR(CDCl3)δ1
.45(s,36H),1.60〜1.80(m,24H),2.39(t,8
H),3.39(m,8H),3.50〜3.80(brd s,約318H)
,3.87(t,8H),4.22(t,4H),7.50(brd s,2H
),7.63(s,4H),7.77(s,2H),8.08(s,2H),8
.60(s,2H);C207H389N12O93で計算した質量分析(MALDI)(
M+H):4535。約4324で分布中心を見出した。
【0249】
(化合物143):図32に示すように、化合物16の調製について記載され
たのと本質的に同じ様式で、化合物142からBoc保護基を取り除き、化合物
143を得る。
たのと本質的に同じ様式で、化合物142からBoc保護基を取り除き、化合物
143を得る。
【0250】
(実施例25−結合体の調製方法)
結合体200、201、202、203、204および205(図33)を以
下のように調製した。
下のように調製した。
【0251】
(化合物200):68.8mg(9.74μmol、6当量)のTA/D1
を含有する10mLのヘリウム噴霧0.1M,pH4.6酢酸ナトリウム緩衝液
に、36.8mg(1.62μmol)の化合物125cを含有する6.15m
Lの1/1アセトニトリル/0.1M,pH8.0 トリス酢酸緩衝液を添加し
た。18時間の室温での撹拌の間、この混合物を注意深く、窒素雰囲気下に保っ
た。反応が終了したとき、PolyLC Inc.により製造されたPolyC
at A WCXカラムを用いる陽イオン交換クロマトグラフィー(勾配10%
B〜25%B,A=10mMリン酸ナトリウム(pH7)を含有する1/9のア
セトニトリル/H2O)により直接精製して、57mg(40%)の化合物20
0を得た。
を含有する10mLのヘリウム噴霧0.1M,pH4.6酢酸ナトリウム緩衝液
に、36.8mg(1.62μmol)の化合物125cを含有する6.15m
Lの1/1アセトニトリル/0.1M,pH8.0 トリス酢酸緩衝液を添加し
た。18時間の室温での撹拌の間、この混合物を注意深く、窒素雰囲気下に保っ
た。反応が終了したとき、PolyLC Inc.により製造されたPolyC
at A WCXカラムを用いる陽イオン交換クロマトグラフィー(勾配10%
B〜25%B,A=10mMリン酸ナトリウム(pH7)を含有する1/9のア
セトニトリル/H2O)により直接精製して、57mg(40%)の化合物20
0を得た。
【0252】
(化合物201):本質的に化合物200と類似の様式で、化合物201を調
製した。従って、約1mM溶液の6当量のTA/D1を含有するヘリウム噴霧0
.1M,pH4.6酢酸ナトリウム緩衝液に、1当量の化合物125aを0.2
5〜10mM溶液として含有する1/1のアセトニトリル/0.1M,pH8.
0トリス酢酸緩衝液を添加した。18時間の室温での撹拌の間、この混合物を注
意深く、窒素雰囲気下に保った。反応が終了したとき、陽イオン交換クロマトグ
ラフィーにより直接精製して、化合物201を得た。
製した。従って、約1mM溶液の6当量のTA/D1を含有するヘリウム噴霧0
.1M,pH4.6酢酸ナトリウム緩衝液に、1当量の化合物125aを0.2
5〜10mM溶液として含有する1/1のアセトニトリル/0.1M,pH8.
0トリス酢酸緩衝液を添加した。18時間の室温での撹拌の間、この混合物を注
意深く、窒素雰囲気下に保った。反応が終了したとき、陽イオン交換クロマトグ
ラフィーにより直接精製して、化合物201を得た。
【0253】
(化合物202):本質的に化合物200と類似の様式で、化合物202を調
製した。従って、約1mM溶液の6当量のTA/D1を含有するヘリウム噴霧0
.1M,pH4.6酢酸ナトリウム緩衝液に、1当量の化合物132を0.25
〜10mM溶液として含有する1/1アセトニトリル/0.1M,pH8.0ト
リス酢酸緩衝液を添加した。18時間の室温での撹拌の間、この混合物を注意深
く、窒素雰囲気下に保った。反応が終了したとき、陽イオン交換クロマトグラフ
ィーにより直接精製して、化合物202を得た。
製した。従って、約1mM溶液の6当量のTA/D1を含有するヘリウム噴霧0
.1M,pH4.6酢酸ナトリウム緩衝液に、1当量の化合物132を0.25
〜10mM溶液として含有する1/1アセトニトリル/0.1M,pH8.0ト
リス酢酸緩衝液を添加した。18時間の室温での撹拌の間、この混合物を注意深
く、窒素雰囲気下に保った。反応が終了したとき、陽イオン交換クロマトグラフ
ィーにより直接精製して、化合物202を得た。
【0254】
(化合物203):本質的に化合物200と類似の様式で、化合物203を調
製した。従って、約1mM溶液の6当量のTA/D1を含有するヘリウム噴霧0
.1M,pH4.6酢酸ナトリウム緩衝液に、1当量の化合物136を0.25
〜10mM溶液として含有する1/1アセトニトリル/0.1M,pH8.0ト
リス酢酸緩衝液を添加した。18時間の室温での撹拌の間、この混合物を注意深
く、窒素雰囲気下に保った。反応が終了したとき、陽イオン交換クロマトグラフ
ィーにより直接精製して、化合物203を得た。
製した。従って、約1mM溶液の6当量のTA/D1を含有するヘリウム噴霧0
.1M,pH4.6酢酸ナトリウム緩衝液に、1当量の化合物136を0.25
〜10mM溶液として含有する1/1アセトニトリル/0.1M,pH8.0ト
リス酢酸緩衝液を添加した。18時間の室温での撹拌の間、この混合物を注意深
く、窒素雰囲気下に保った。反応が終了したとき、陽イオン交換クロマトグラフ
ィーにより直接精製して、化合物203を得た。
【0255】
(化合物204):本質的に化合物200と類似の様式で、化合物204を調
製した。従って、約1mM溶液の6当量のTA/D1を含有するヘリウム噴霧0
.1M,pH4.6酢酸ナトリウム緩衝液に、1当量の化合物143を0.25
〜10mM溶液として含有する1/1アセトニトリル/0.1M,pH8.0ト
リス酢酸緩衝液を添加した。18時間の室温での撹拌の間、この混合物を注意深
く、窒素雰囲気下に保った。反応が終了したとき、陽イオン交換クロマトグラフ
ィーにより直接精製して、化合物204を得た。
製した。従って、約1mM溶液の6当量のTA/D1を含有するヘリウム噴霧0
.1M,pH4.6酢酸ナトリウム緩衝液に、1当量の化合物143を0.25
〜10mM溶液として含有する1/1アセトニトリル/0.1M,pH8.0ト
リス酢酸緩衝液を添加した。18時間の室温での撹拌の間、この混合物を注意深
く、窒素雰囲気下に保った。反応が終了したとき、陽イオン交換クロマトグラフ
ィーにより直接精製して、化合物204を得た。
【0256】
(化合物205):本質的に化合物200と類似の様式で、化合物205を調
製した。従って、約1mM溶液の6当量のTA/D1を含有するヘリウム噴霧0
.1M,pH4.6酢酸ナトリウム緩衝液に、1当量の化合物125bを0.2
5〜10mM溶液として含有する1/1アセトニトリル/0.1M,pH8.0
トリス酢酸緩衝液を添加した。18時間の室温での撹拌の間、この混合物を注意
深く、窒素雰囲気下に保った。反応が終了したとき、陽イオン交換クロマトグラ
フィーにより直接精製して、化合物205を得た。
製した。従って、約1mM溶液の6当量のTA/D1を含有するヘリウム噴霧0
.1M,pH4.6酢酸ナトリウム緩衝液に、1当量の化合物125bを0.2
5〜10mM溶液として含有する1/1アセトニトリル/0.1M,pH8.0
トリス酢酸緩衝液を添加した。18時間の室温での撹拌の間、この混合物を注意
深く、窒素雰囲気下に保った。反応が終了したとき、陽イオン交換クロマトグラ
フィーにより直接精製して、化合物205を得た。
【0257】
(実施例26:トレラゲンの効率および血清半減期の評価)
ドメイン1−キーホールリンペットヘモシアニン結合体(D1−KLH)を動
物免疫での使用のために調製した。バキュロウイルス発現ベクター系を用いて、
昆虫細胞におけるグルタチオン混合ジスルフィドとして、5つのシステインを有
する組換えドメイン1を発現させた。この構造は、ネイティブなヒトβ2−糖タ
ンパク質Iに存在する最初の66のアミノ末端のアミノ酸、それに続く、C末端
leu−(his)5発現タグから構成される。C末端でのポリヒスチジン発現
タグは、ニッケルアフィニティークロマトグラフィーによる精製手順の基礎であ
る。Iversonら(1998)Proc.Nat’l.Acad.Sci.
95:15542〜15546。
物免疫での使用のために調製した。バキュロウイルス発現ベクター系を用いて、
昆虫細胞におけるグルタチオン混合ジスルフィドとして、5つのシステインを有
する組換えドメイン1を発現させた。この構造は、ネイティブなヒトβ2−糖タ
ンパク質Iに存在する最初の66のアミノ末端のアミノ酸、それに続く、C末端
leu−(his)5発現タグから構成される。C末端でのポリヒスチジン発現
タグは、ニッケルアフィニティークロマトグラフィーによる精製手順の基礎であ
る。Iversonら(1998)Proc.Nat’l.Acad.Sci.
95:15542〜15546。
【0258】
得られたドメイン1(フリーのスルフヒドリル(D1−SH)を有する)をマ
レイミジルーKLHでアルキル化した。マレイミジル活性化KLH(Pierc
e Chemical CO.;Rockford,IL)を、製造業者の指示
に従って、水中に10mg/mLで溶解した。直ぐに、1mgのD1−SHあた
り、1.27mgの比で、KLHをD1−SHに添加した。KLHおよびD1を
含有する試験管を2h×RTでの回転により混合した。インキュベーションの終
わりに、未結合のD1を除去するために、>25,000MWカットオフメンブ
レンを用いて、4℃で冷PBSに対して、内容物を透析した。透析サンプルのア
リコートを取り出し、そして、患者由来のアフィニティー精製した抗リン脂質抗
体(aPL)を用いたELISAにより、免疫反応性D1の存在について試験し
た。
レイミジルーKLHでアルキル化した。マレイミジル活性化KLH(Pierc
e Chemical CO.;Rockford,IL)を、製造業者の指示
に従って、水中に10mg/mLで溶解した。直ぐに、1mgのD1−SHあた
り、1.27mgの比で、KLHをD1−SHに添加した。KLHおよびD1を
含有する試験管を2h×RTでの回転により混合した。インキュベーションの終
わりに、未結合のD1を除去するために、>25,000MWカットオフメンブ
レンを用いて、4℃で冷PBSに対して、内容物を透析した。透析サンプルのア
リコートを取り出し、そして、患者由来のアフィニティー精製した抗リン脂質抗
体(aPL)を用いたELISAにより、免疫反応性D1の存在について試験し
た。
【0259】
免疫したラットモデルを、トレラゲン効率を測定するために用いた。Lewi
sラット(Harlan Sprague Dawley,Indianapo
lis,IN)を10μgのD1−KLHを含有する硫酸アルミニウム(百日咳
アジュバントとともに)でi.p.(腹腔内)免疫した。プライミングの3週間
後、4つの動物群を、トレラゲンまたはPBSコントロールでi.v.処置した
。5日後、処置動物を10μg D1−KLHでi.p.(腹腔内)ブーストし
、そして血清サンプルをブーストの7日後に収集した。
sラット(Harlan Sprague Dawley,Indianapo
lis,IN)を10μgのD1−KLHを含有する硫酸アルミニウム(百日咳
アジュバントとともに)でi.p.(腹腔内)免疫した。プライミングの3週間
後、4つの動物群を、トレラゲンまたはPBSコントロールでi.v.処置した
。5日後、処置動物を10μg D1−KLHでi.p.(腹腔内)ブーストし
、そして血清サンプルをブーストの7日後に収集した。
【0260】
ラット血清における抗−ドメイン1抗体の検出のためにELISAを用いた。
Nunc Maxisorp Immunoplates(Nalge Nun
c International,Rochester,NY)を5μg/ml
の組換えヒトβ2−GPIを含有する炭酸塩緩衝液(Sigma,St.Lou
is,MO)pH9.6の50μlを用いて4℃で一晩コーティングした。引き
続く工程を室温で実行した。プレートをリン酸緩衝化生理食塩水(PBS)で3
回洗浄し、次いで2%脱脂粉乳(Carnation,Solon,OH)を含
有するPBSの250μlを用いて1時間ブロックした。洗浄後、ウェルを各血
清サンプルのPBS中での階段稀釈50μlを用いて三連で1時間インキュベー
トした。非免疫血清をコントロールとして用い、そして免疫した動物由来の血清
のプールを用いて標準曲線を作成した。洗浄後、このウェルを、アルカリホスフ
ァターゼ−結合体化ヤギ抗ラットIgG(Jackson ImmunoRes
earch,West Grove,PA)含有、PBS/0.1%BSA(1
:2000稀釈)の50μlを用いて1時間インキュベートした。ウェルをdI
H2Oで3回洗浄し、そしてPPMP溶液((10gmフェノールフタレイン一
リン酸(Sigma,St.Louis MO),97.4ml 2−アミノ−
2−メチル−1−プロパノール(Sigma),9.62ml dIH2O,2
1ml HCl))で20分発色した。発色を50μl 0.2M Na2HP
O4で停止し、そしてOD550をBio−Tek Instruments Po
wer Wave 340 Microplate Sepectrophot
ometer(Winooski,VT)で読み取った。公称の抗体単位を標準
プールに割当て、そして試験血清中の抗ドメイン1抗体の濃度(単位/ml)を
、標準曲線から誘導した。結合体200、201、202および203処理を用
いる、多価のプラットホーム結合体による抗ドメイン1抗体の抑制パーセントを
、PBS処理コントロールに比較して算出した。この結果を以下の表1に示す。
Nunc Maxisorp Immunoplates(Nalge Nun
c International,Rochester,NY)を5μg/ml
の組換えヒトβ2−GPIを含有する炭酸塩緩衝液(Sigma,St.Lou
is,MO)pH9.6の50μlを用いて4℃で一晩コーティングした。引き
続く工程を室温で実行した。プレートをリン酸緩衝化生理食塩水(PBS)で3
回洗浄し、次いで2%脱脂粉乳(Carnation,Solon,OH)を含
有するPBSの250μlを用いて1時間ブロックした。洗浄後、ウェルを各血
清サンプルのPBS中での階段稀釈50μlを用いて三連で1時間インキュベー
トした。非免疫血清をコントロールとして用い、そして免疫した動物由来の血清
のプールを用いて標準曲線を作成した。洗浄後、このウェルを、アルカリホスフ
ァターゼ−結合体化ヤギ抗ラットIgG(Jackson ImmunoRes
earch,West Grove,PA)含有、PBS/0.1%BSA(1
:2000稀釈)の50μlを用いて1時間インキュベートした。ウェルをdI
H2Oで3回洗浄し、そしてPPMP溶液((10gmフェノールフタレイン一
リン酸(Sigma,St.Louis MO),97.4ml 2−アミノ−
2−メチル−1−プロパノール(Sigma),9.62ml dIH2O,2
1ml HCl))で20分発色した。発色を50μl 0.2M Na2HP
O4で停止し、そしてOD550をBio−Tek Instruments Po
wer Wave 340 Microplate Sepectrophot
ometer(Winooski,VT)で読み取った。公称の抗体単位を標準
プールに割当て、そして試験血清中の抗ドメイン1抗体の濃度(単位/ml)を
、標準曲線から誘導した。結合体200、201、202および203処理を用
いる、多価のプラットホーム結合体による抗ドメイン1抗体の抑制パーセントを
、PBS処理コントロールに比較して算出した。この結果を以下の表1に示す。
【0261】
【表1】
【0262】
ラット血漿注の化合物の半減期をまた決定した。ヨウ素一塩化物方法を用いて
化合物を125Iで放射線標識した。Contrerasら、1983,Meth
ods in Enzymology 92:277〜292。標識下化合物を
i.v.(静脈)注射し、そして血漿サンプルを24時間にわたって定期的に収
集した。Packard Instruments Model Cobra
Gamma Counter(Downers Grove,IL)を用いて、
血漿中の薬物の量を検出した。WinNonLinソフトウェア(Pharsi
ght Corp.,Mountain View,CA)を用いて薬物動態学
的パラメーターを算出し、式:t1/2=0.693(MRT)を用いて血漿半減
期を決定した。結果を以下の表2に示す。
化合物を125Iで放射線標識した。Contrerasら、1983,Meth
ods in Enzymology 92:277〜292。標識下化合物を
i.v.(静脈)注射し、そして血漿サンプルを24時間にわたって定期的に収
集した。Packard Instruments Model Cobra
Gamma Counter(Downers Grove,IL)を用いて、
血漿中の薬物の量を検出した。WinNonLinソフトウェア(Pharsi
ght Corp.,Mountain View,CA)を用いて薬物動態学
的パラメーターを算出し、式:t1/2=0.693(MRT)を用いて血漿半減
期を決定した。結果を以下の表2に示す。
【0263】
【表2】
【図1】
図1は、トランスアミノ化ポリペプチドの合成を示すスキームである。
【図2】
図2は、アミノオキシアセチル結合価プラットホーム分子の合成を示すスキー
ムである。
ムである。
【図3】
図3は、アルキルアミノオキシ結合価プラットホーム分子の合成を示すスキー
ムである。
ムである。
【図4】
図4は、アルキルアミノオキシ結合価プラットホーム分子の合成の別の実施形
態を示すスキームである。
態を示すスキームである。
【図5】
図5は、チオエーテル官能基を含むアルキルアミノオキシ結合価プラットホー
ム分子の合成を示すスキームである。
ム分子の合成を示すスキームである。
【図6】
図6は、チオエーテル官能基を含むアルキルアミノオキシ結合価プラットホー
ム分子の合成を示すスキームである。
ム分子の合成を示すスキームである。
【図7】
図7は、アルキルアミノオキシ結合価プラットホーム分子の合成の別の実施形
態を示すスキームである。
態を示すスキームである。
【図8】
図8は、アルキルアミノオキシ結合価プラットホーム分子の合成の別の実施形
態を示すスキームである。
態を示すスキームである。
【図9】
図9は、ピペラジン部分およびオキシム結合を含むアルキルアミノオキシ結合
価プラットホーム分子の合成を示すスキームである。
価プラットホーム分子の合成を示すスキームである。
【図10】
図10は、アルキルアミノオキシ結合価プラットホーム分子の合成を示すスキ
ームである。
ームである。
【図11】
図11は、ピペラジン部分を含むアミノオキシアセチル結合価プラットホーム
分子およびポリペプチドの結合体の合成を示すスキームである。
分子およびポリペプチドの結合体の合成を示すスキームである。
【図12】
図12は、アルキルアミノオキシ結合価プラットホーム分子およびポリペプチ
ドの結合体の合成を示すスキームである。
ドの結合体の合成を示すスキームである。
【図13】
図13は、アルキルアミノオキシ化合物モデルおよびアミノオキシアセチル化
合物モデルの結合体形成の速度を比較するグラフである。
合物モデルの結合体形成の速度を比較するグラフである。
【図14】
図14は、アルキルアミノオキシ化合物モデルおよびアミノオキシアセチル化
合物モデルの合成、ならびにこれらのグリオキシル化ポリペプチドとの反応を示
すスキームである。
合物モデルの合成、ならびにこれらのグリオキシル化ポリペプチドとの反応を示
すスキームである。
【図15】
図15は、アルキルアミノオキシ結合価プラットホーム分子およびポリ(アミ
ノ酸)の結合体の合成の別の実施形態を示すスキームである。
ノ酸)の結合体の合成の別の実施形態を示すスキームである。
【図16】
図16は、アミノオキシリンカーおよびハロアセチルプラットホームを含むチ
オールを使用する、ポリペプチドの調製の代替方法を示すスキームである。
オールを使用する、ポリペプチドの調製の代替方法を示すスキームである。
【図17】
図17は、結合価プラットホーム分子上の例示的なG2−ONH2基を示す。
【図18】
図18は、アミノオキシ基を含む結合価プラットホーム分子のいくつかの例示
的な式を示す。
的な式を示す。
【図19】
図19は、アミノオキシ基を含む結合価プラットホーム分子の式の別の実施形
態を示す。
態を示す。
【図20】
図20は、アミノオキシ基を含む結合価プラットホーム分子の実施形態を示す
。
。
【図21】
図21は、アミノオキシ基を含むさらなる結合価プラットホーム分子の実施形
態を示す。
態を示す。
【図22】
図22は、アミノオキシ基を含む結合価プラットホーム分子のさらなる実施形
態を示す。
態を示す。
【図23】
図23は、化合物85の合成のスキームを示す。
【図24】
図24は、化合物86の合成のスキームを示す。
【図25】
図25は、化合物91の合成のスキームを示す。
【図26】
図26は、化合物92の合成のスキームを示す。
【図27】
図27は、化合物113の合成のスキームを示す。
【図28】
図28は、種々の分子量のポリエチレンオキシド基を含む多価プラットホーム
分子の合成のスキームを示す。
分子の合成のスキームを示す。
【図29】
図29は、ポリエチレンオキシド基および分枝基を含む多価プラットホーム分
子の合成のスキームを示す。
子の合成のスキームを示す。
【図30】
図30は、ポリエチレンオキシド基および分枝基を含む多価プラットホーム分
子の合成のスキームを示す。
子の合成のスキームを示す。
【図31】
図31は、ポリエチレングリコール基を含む多価プラットホーム分子の合成の
スキームを示す。
スキームを示す。
【図32】
図32は、ポリエチレングリコール基を含む多価分子の合成のスキームを示す
。
。
【図33】
図33は、結合価プラットホーム分子および生物学的に活性な分子のいくつか
の例示的な結合体の構造を示す。
の例示的な結合体の構造を示す。
【図34】
図34は、ポリエチレンオキシド含む八量体プラットホーム(ここで、nは、
例えば112である)の合成を示す。
例えば112である)の合成を示す。
【図35】
図35は、2つのポリエチレンオキシド基を含む結合価プラットホーム分子(
ここで、nは、例えば500以上である)の合成を示す。
ここで、nは、例えば500以上である)の合成を示す。
─────────────────────────────────────────────────────
フロントページの続き
(81)指定国 EP(AT,BE,CH,CY,
DE,DK,ES,FI,FR,GB,GR,IE,I
T,LU,MC,NL,PT,SE),OA(BF,BJ
,CF,CG,CI,CM,GA,GN,GW,ML,
MR,NE,SN,TD,TG),AP(GH,GM,K
E,LS,MW,MZ,SD,SL,SZ,TZ,UG
,ZW),EA(AM,AZ,BY,KG,KZ,MD,
RU,TJ,TM),AE,AG,AL,AM,AT,
AU,AZ,BA,BB,BG,BR,BY,CA,C
H,CN,CR,CU,CZ,DE,DK,DM,DZ
,EE,ES,FI,GB,GD,GE,GH,GM,
HR,HU,ID,IL,IN,IS,JP,KE,K
G,KP,KR,KZ,LC,LK,LR,LS,LT
,LU,LV,MA,MD,MG,MK,MN,MW,
MX,MZ,NO,NZ,PL,PT,RO,RU,S
D,SE,SG,SI,SK,SL,TJ,TM,TR
,TT,TZ,UA,UG,US,UZ,VN,YU,
ZA,ZW
(72)発明者 トン−ヌ, ホン−ツ
アメリカ合衆国 カリフォルニア 92131,
サン ディエゴ, ペッパービュー テ
ラス 11258
(72)発明者 シェ, ファン
アメリカ合衆国 カリフォルニア 92130,
サン ディエゴ, カーメル キャニオ
ン ロード 12527
(72)発明者 タオ, アンピン
アメリカ合衆国 カリフォルニア 92111,
サン ディエゴ, アパートメント
24, メサ カレッジ ドライブ 7366
(72)発明者 シュ, トン
アメリカ合衆国 カリフォルニア 92131
−2901, サン ディエゴ, ハートウッ
ド コウブ 11405
(72)発明者 ハマカー, ジェフリー ロバート
アメリカ合衆国 カリフォルニア 92129,
サン ディエゴ, キカ コート ナン
バー4012 9940
Fターム(参考) 4H006 AA01 AB20 RA12 RA14 TA04
TB32 TB36
Claims (53)
- 【請求項1】 少なくとも3つのアミノオキシ基を含む分子であって、該分
子はオキシアルキレン基を含む、分子。 - 【請求項2】 オキシエチレン基を含む、請求項1に記載の分子。
- 【請求項3】 ポリオキシエチレン基をさらに含む、請求項1に記載の分子
。 - 【請求項4】 前記分子が約1.2未満の多分散性を有する、請求項1に記
載の分子を含む組成物。 - 【請求項5】 少なくとも3つのアミノオキシ基を含む結合価プラットホー
ム分子。 - 【請求項6】 オキシアルキレン基をさらに含む、請求項5に記載の分子。
- 【請求項7】 オキシエチレン基を含む、請求項6に記載の分子。
- 【請求項8】 ポリオキシエチレン基を含む、請求項6に記載の分子。
- 【請求項9】 請求項5に記載の結合価プラットホーム分子を含む組成物で
あって、該結合価プラットホーム分子は、約1.2未満の多分散性を有する、組
成物。 - 【請求項10】 約1.07未満の多分散性を有する結合価プラットホーム
分子を含む、請求項9に記載の組成物。 - 【請求項11】 結合価プラットホーム分子であって、以下の式: R−(ONH2)m 式1 を有し、ここで: mは、3〜50であり、そして Rは、H、C、N、O、P、SiおよびS原子からなる群より選択される1〜
10,000原子を含む有機部分である、結合価プラットホーム分子。 - 【請求項12】 結合価プラットホーム分子であって、以下の式: Rc[G1(ONH2)n]y; 式2 を有し、ここで: yは、1〜16であり; nは、1〜32であり; y*nは、少なくとも3であり、そして Rcおよび各G1は、独立した1つの有機部分である、結合価プラットホーム分
子。 - 【請求項13】 請求項11に記載の分子であって、ここで、Rcおよび各
G1は、H、C、N、O、P、SiおよびS原子からなる群より選択される原子
を含む独立した1つの有機部分である、分子。 - 【請求項14】 オキシアルキレン基を含む、請求項11に記載の分子。
- 【請求項15】 請求項12に記載の結合価プラットホーム分子を含む組成
物であって、ここで該結合価プラットホーム分子は、約1.2未満の多分散性を
有する、組成物。 - 【請求項16】 結合価プラットホーム分子であって、以下: Rc[O−C(=O)−NR1−G2−(ONH2)n]y 式3; Rc[C(=O)−NR1−G2−(ONH2)n]y 式4; Rc[NR1−C(=O)−G2−(ONH2)n]y 式5; Rc[NR1−C(=O)−O−G2−(ONH2)n]y 式6; Rc[R1C=N−O−G2−(ONH2)n]y 式7;および Rc[S−G2(ONH2)n]y 式8; からなる群より選択される式を有し、ここで: yは、1〜16であり; nは、1〜32であり; y*nは、少なくとも3であり、 R1は、H、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、ヘテロアリールまたはG2 −(ONH2)nであり;そして Rcおよび各G2は、H、C、N、O、P、SiおよびS原子からなる群より選
択される原子を含む独立した有機部分である、結合価プラットホーム分子。 - 【請求項17】 請求項16に記載の結合価プラットホーム分子であって、
ここでRcおよび各G2は、以下: H原子およびC原子のみからなり、そして1〜200の炭素原子を有する炭化
水素基; 炭素原子、酸素原子、および水素原子のみからなり、そして1〜200の炭素
原子を有する、有機基; 炭素原子、酸素原子、窒素原子、および水素原子のみからなり、そして1〜2
00の炭素原子を有する、有機基; 炭素原子、酸素原子、イオウ原子、および水素原子のみからなり、そして1〜
200の炭素原子を有する、有機基; 炭素原子、酸素原子、イオウ原子、窒素原子、および水素原子のみからなり、
そして1〜200の炭素原子を有する、有機基; 、からなる群より独立して選択される、結合価プラットホーム分子。 - 【請求項18】 請求項16に記載の結合価プラットホーム分子であって、
ここでRcは、以下: C1〜200の炭化水素部分;C1〜200のアルコキシ部分;および芳香族基
を含むC1〜200の炭化水素部分、からなる群より選択される、結合価プラッ
トホーム分子。 - 【請求項19】 請求項16に記載の結合価プラットホーム分子であって、
ここでRcは、オキシアルキレン部分を含む、結合価プラットホーム分子。 - 【請求項20】 請求項19に記載の結合価プラットホーム分子であって、
ここでRcは、オキシエチレン部分を含む、結合価プラットホーム分子。 - 【請求項21】 請求項16に記載の結合価プラットホーム分子であって、
ここでRcは、以下のオキシエチレン単位: −(CH2CH2O)n−; を含み、ここでnは、1〜100である、結合価プラットホーム分子。 - 【請求項22】 請求項16に記載の結合価プラットホーム分子であって、
ここでG2は、以下:アルキル、ヘテロアルキル、アリールおよびヘテロアリー
ルからなる群より選択される、官能基を含む、結合価プラットホーム分子。 - 【請求項23】 請求項16に記載の結合価プラットホーム分子であって、
ここでG2は、以下:C1〜200の炭化水素部分;C1〜200のアルコキシ
部分;および芳香族基を含むC1〜200の炭化水素部分、からなる群より選択
される官能基を含む、結合価プラットホーム分子。 - 【請求項24】 請求項16に記載の結合価プラットホーム分子であって、
ここでG2は、オキシアルキレン部分を含む、結合価プラットホーム分子。 - 【請求項25】 請求項16に記載の結合価プラットホーム分子であって、
ここでG2は、オキシエチレン部分を含む、結合価プラットホーム分子。 - 【請求項26】 請求項16に記載の結合価プラットホーム分子であって、
ここでG2は、以下のオキシエチレン単位: −(CH2CH2O)n−; を含み、ここでnは、1〜100である、結合価プラットホーム分子。 - 【請求項27】 請求項16に記載の結合価プラットホーム分子であって、
ここで各G2は、独立して、以下:アミン;アミド;エステル;エーテル;ケト
ン;アルデヒド;カルバメート;チオエーテル;ピペラジニル;ピペリジニル;
アルコール;ポリアミン;ポリエーテル;ヒドラジド;ヒドラジン;カルボン酸
;無水物;ハロ;スルホニル;スルホネート;スルホン;イミデート;シアネー
ト;イソシアネート;イソチオシアネート;ホルマート;カルボジイミド;チオ
ール;オキシム;イミン;アミノオキシ;およびマレイミドからなる群より選択
される、官能基を含む、結合価プラットホーム分子。 - 【請求項28】 請求項16に記載の結合価プラットホーム分子であって、
以下の式: Rc[O−C(=O)−NR1−G2−(ONH2)n]y 式3、 を有する、結合価プラットホーム分子。 - 【請求項29】 請求項16に記載の結合価プラットホーム分子であって、
以下の式: Rc[C(=O)−NR1−G2−(ONH2)n]y 式4、 を有する、結合価プラットホーム分子。 - 【請求項30】 請求項16に記載の結合価プラットホーム分子であって、
以下の式: Rc[NR1−C(=O)−G2−(ONH2)n]y 式5、 を有する、結合価プラットホーム分子。 - 【請求項31】 請求項16に記載の結合価プラットホーム分子であって、
以下の式: Rc[NR1−C(=O)−O−G2−(ONH2)n]y 式6、 を有する、結合価プラットホーム分子。 - 【請求項32】 請求項16に記載の結合価プラットホーム分子であって、
以下の式: Rc[R1C=N−O−G2−(ONH2)n]y 式7、 を有する、結合価プラットホーム分子。 - 【請求項33】 請求項16に記載の結合価プラットホーム分子であって、
以下の式: Rc[S−G2(ONH2)n]y 式8、 を有する、結合価プラットホーム分子。 - 【請求項34】 請求項16に記載の結合価プラットホーム分子を含む組成
物であって、ここで該結合価プラットホーム分子は、約1.2未満の多分散性を
有する、組成物。 - 【請求項35】 請求項16に記載の結合価プラットホーム分子であって、
ここで各G2−ONH2は、以下: 【化1】 からなる群より選択される、結合価プラットホーム分子。 - 【請求項36】 請求項16に記載の結合価プラットホーム分子であって、
以下: 【化2】 からなる群より選択される式を有し、ここでnは、1〜100である、結合価プ
ラットホーム分子。 - 【請求項37】 G2が、オキシエチレン基を含む、請求項36に記載の結
合価プラットホーム分子。 - 【請求項38】 以下の構造: 【化3】 125c,ここでnは約503である;または 【化4】 132,ここでnは、約481である、 を有する、結合価プラットホーム分子。
- 【請求項39】 以下の構造: 【化5】 136,ここでnは約112である、 を有する、結合価プラットホーム分子。
- 【請求項40】 請求項1に記載の分子および少なくとも1つの生物学的に
活性な分子の、結合体。 - 【請求項41】 請求項1に記載の分子および少なくとも3つの生物学的に
活性な分子の、結合体。 - 【請求項42】 前記結合体が、オキシム結合体またはその改変形態である
、請求項40に記載の結合体。 - 【請求項43】 請求項12に記載の分子および生物学的に活性な分子の、
結合体。 - 【請求項44】 請求項16に記載の分子および生物学的に活性な分子の、
結合体。 - 【請求項45】 請求項36に記載の分子および生物学的に活性な分子の、
結合体。 - 【請求項46】 請求項38に記載の分子および生物学的に活性な分子の、
結合体。 - 【請求項47】 請求項39に記載の分子および生物学的に活性な分子の、
結合体。 - 【請求項48】 請求項40に記載の結合体であって、ここで前記生物学的
に活性な分子が、ポリ(サッカライド)、ポリ(アミノ酸)、核酸および脂質か
らなる群より選択される、結合体。 - 【請求項49】 請求項43に記載の結合体であって、ここで前記生物学的
に活性な分子が、ポリ(サッカライド)、ポリ(アミノ酸)、核酸および脂質か
らなる群より選択される、結合体。 - 【請求項50】 請求項40に記載の結合体を作成するための方法であって
、該方法は、前記結合価プラットホーム分子上のアミノオキシ基を、前記生物学
的に活性な分子上のアルデヒドまたはケトンと反応させて、オキシム結合体を形
成する工程を包含する、方法。 - 【請求項51】 請求項50に記載の方法であって、前記生物学的に活性な
分子が、ポリ(アミノ酸)であり、ここで、該方法は、結合体化の前に、末端ア
ルデヒド基を含むようにポリ(アミノ酸)を改変する工程を包含する、方法。 - 【請求項52】 前記結合体が、約1.2未満の多分散性を有する、請求項
40に記載の結合体を含む、組成物。 - 【請求項53】 請求項40に記載の結合体および薬学的に受容可能なキャ
リアを含む、薬学的に受容可能な組成物。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US13826099P | 1999-06-08 | 1999-06-08 | |
US60/138,260 | 1999-06-08 | ||
PCT/US2000/015968 WO2000075105A1 (en) | 1999-06-08 | 2000-06-08 | Valency platform molecules comprising aminooxy groups |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2003501412A true JP2003501412A (ja) | 2003-01-14 |
Family
ID=22481220
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2001501586A Withdrawn JP2003501412A (ja) | 1999-06-08 | 2000-06-08 | アミノオキシ基を有する結合価プラットホーム分子 |
Country Status (10)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US20040224366A1 (ja) |
EP (1) | EP1183230A1 (ja) |
JP (1) | JP2003501412A (ja) |
KR (1) | KR20020022691A (ja) |
CN (2) | CN1358171A (ja) |
AU (1) | AU779887B2 (ja) |
CA (1) | CA2376057A1 (ja) |
HK (1) | HK1042287A1 (ja) |
NO (1) | NO20016006L (ja) |
WO (1) | WO2000075105A1 (ja) |
Cited By (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2009510253A (ja) * | 2005-10-04 | 2009-03-12 | エンゾン ファーマスーティカルズ インコーポレイテッド | 保護されたアミン塩を用いて、末端アミン基を有するポリマーを調製する方法 |
JP2014516050A (ja) * | 2011-05-27 | 2014-07-07 | アンブルックス,インコーポレイテッド | 非天然アミノ酸結合ドラスタチン誘導体を含有する組成物、それを用いた方法、およびその使用 |
JP2014516987A (ja) * | 2011-05-27 | 2014-07-17 | アンブルックス,インコーポレイテッド | 非天然アミノ酸結合ドラスタチン誘導体を含有する組成物、それを用いた方法、およびその使用 |
JP2018109194A (ja) * | 2007-01-18 | 2018-07-12 | ジェンザイム・コーポレーション | アミノオキシ基を含むオリゴ糖およびその複合体 |
Families Citing this family (22)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6858210B1 (en) | 1998-06-09 | 2005-02-22 | La Jolla Pharmaceutical Co. | Therapeutic and diagnostic domain 1 β2GPI polypeptides and methods of using same |
KR20020059808A (ko) * | 1999-11-28 | 2002-07-13 | 와이즈먼 앤드루 | 항체 친화도에 기초한 루프스 치료방법 및 그것의 사용을위한 스크리닝 방법과 조성물 |
CN1434726A (zh) * | 2000-06-08 | 2003-08-06 | 拉卓拉药物公司 | 包含高分子量聚环氧乙烷的多价平台分子 |
US6951947B2 (en) | 2000-07-13 | 2005-10-04 | The Scripps Research Institute | Labeled peptides, proteins and antibodies and processes and intermediates useful for their preparation |
US7176037B2 (en) | 2000-07-13 | 2007-02-13 | The Scripps Research Institute | Labeled peptides, proteins and antibodies and processes and intermediates useful for their preparation |
US7351797B1 (en) | 2000-09-29 | 2008-04-01 | The Scripps Research Institute | Labeled peptides, and processes and intermediates useful for their preparation |
EP2423335B1 (en) | 2001-06-21 | 2014-05-14 | Dynavax Technologies Corporation | Chimeric immunomodulatory compounds and methods of using the same |
US20030114405A1 (en) * | 2001-08-13 | 2003-06-19 | Linnik Matthew D. | Methods of treating systemic lupus erythematosus in individuals having significantly impaired renal function |
KR20050052467A (ko) | 2002-08-12 | 2005-06-02 | 다이나박스 테크놀로지 코퍼레이션 | 면역조절 조성물, 이의 제조방법 및 이의 이용방법 |
WO2004060320A2 (en) * | 2002-12-27 | 2004-07-22 | La Jolla Pharmaceutical Company | Methods of improving health-related quality of life in individuals with systemic lupus erythematosus |
WO2004089422A2 (en) * | 2003-03-30 | 2004-10-21 | La Jolla Pharmaceutical Co. | Methods of treating and monitoring systemic lupus erythematosus in individuals |
TR201907313T4 (tr) | 2003-05-23 | 2019-06-21 | Nektar Therapeutics | İki PEG zinciri içeren PEG türevleri. |
US7947261B2 (en) | 2003-05-23 | 2011-05-24 | Nektar Therapeutics | Conjugates formed from polymer derivatives having particular atom arrangements |
NZ553581A (en) | 2004-09-01 | 2011-04-29 | Dynavax Tech Corp | Methods and compositions for inhibition of innate immune responses and autoimmunity using immunoregulatory polynucleotides with a TGC sequence |
EP1688150A1 (en) * | 2005-02-08 | 2006-08-09 | Novo Nordisk A/S | Process for the preparation of alkoxyamine functionalised poly ethylene glycols |
WO2008013735A2 (en) * | 2006-07-21 | 2008-01-31 | The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services | Methods for conjugation of oligosaccharides or polysaccharides to protein carriers through oxime linkages via 3-deoxy-d-manno-octulsonic acid |
JP5749492B2 (ja) | 2007-10-26 | 2015-07-15 | ダイナバックス テクノロジーズ コーポレイション | 免疫応答と自己免疫を阻害する方法及び組成物 |
RU2744370C2 (ru) * | 2009-07-27 | 2021-03-05 | Баксалта Инкорпорейтед | Конъюгаты белков свертывания крови |
BR112012032240A2 (pt) | 2010-06-16 | 2019-09-24 | Dynavax Technologies Corporation | método de tratamento utilizando inibidores tlr7 e/ou tlr9 |
WO2011163572A2 (en) * | 2010-06-24 | 2011-12-29 | University Of Kansas | Bifunctional conjugate compositions and associated methods |
HUE049352T2 (hu) * | 2010-12-22 | 2020-09-28 | Baxalta GmbH | Anyagok és módszerek egy vízoldható zsírsavszármazéknak egy fehérjéhez való konjugálására |
US9228184B2 (en) | 2012-09-29 | 2016-01-05 | Dynavax Technologies Corporation | Human toll-like receptor inhibitors and methods of use thereof |
Family Cites Families (78)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4234563A (en) * | 1978-06-02 | 1980-11-18 | American Hospital Supply Corporation | Insolubilized deoxyribonucleic acid (DNA) |
DE3108534A1 (de) * | 1981-03-06 | 1982-09-23 | Agfa-Gevaert Ag, 5090 Leverkusen | Verfahren zur verarbeitung eines belichteten photographischen materiales und verarbeitungsband zur durchfuehrung des verfahrens |
US4558120A (en) * | 1983-01-07 | 1985-12-10 | The Dow Chemical Company | Dense star polymer |
US4568737A (en) * | 1983-01-07 | 1986-02-04 | The Dow Chemical Company | Dense star polymers and dendrimers |
US6022544A (en) * | 1983-01-24 | 2000-02-08 | The John Hopkins University | Therapeutic suppression of specific immune responses by administration of oligomeric forms of antigen of controlled chemistry |
US5126131A (en) * | 1983-01-24 | 1992-06-30 | The Johns Hopkins University | Therapeutic suppression of specific immune responses by administration of antigen-competitive conjugates. |
US5370871A (en) * | 1983-01-24 | 1994-12-06 | The Johns Hopkins University | Therapeutic suppression of specific immune responses by administration of oligomeric forms of antigen of controlled chemistry |
US5447722A (en) * | 1983-12-12 | 1995-09-05 | University Of Manitoba | Method for the suppression of an immune response with antigen-MPEG conjugates in nonsensitized individuals |
US4734363A (en) * | 1984-11-27 | 1988-03-29 | Molecular Diagnostics, Inc. | Large scale production of DNA probes |
US5206344A (en) * | 1985-06-26 | 1993-04-27 | Cetus Oncology Corporation | Interleukin-2 muteins and polymer conjugation thereof |
US5527524A (en) * | 1986-08-18 | 1996-06-18 | The Dow Chemical Company | Dense star polymer conjugates |
US5338532A (en) * | 1986-08-18 | 1994-08-16 | The Dow Chemical Company | Starburst conjugates |
US6312679B1 (en) * | 1986-08-18 | 2001-11-06 | The Dow Chemical Company | Dense star polymer conjugates as dyes |
US5135737A (en) * | 1986-11-10 | 1992-08-04 | The State Of Oregon Acting By And Through The State Board Of Higher Education On Behalf Of The University Of Oregon | Amplifier molecules for enhancement of diagnosis and therapy |
US4822594A (en) * | 1987-01-27 | 1989-04-18 | Gibby Wendell A | Contrast enhancing agents for magnetic resonance images |
US5674911A (en) * | 1987-02-20 | 1997-10-07 | Cytrx Corporation | Antiinfective polyoxypropylene/polyoxyethylene copolymers and methods of use |
US5229490A (en) * | 1987-05-06 | 1993-07-20 | The Rockefeller University | Multiple antigen peptide system |
EP0440740B1 (en) * | 1988-10-12 | 1993-09-22 | Centocor, Inc. | Radiotherapeutic immunoconjugates labeled with iodine-125 |
US5252720A (en) * | 1989-03-06 | 1993-10-12 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Metal complexes of water soluble texaphyrins |
US5324844A (en) * | 1989-04-19 | 1994-06-28 | Enzon, Inc. | Active carbonates of polyalkylene oxides for modification of polypeptides |
CA2044142A1 (en) * | 1989-10-19 | 1991-04-20 | Eiji Matsuura | Carrier for binding of anti-phospholipid antibodies, an immunoassay method using the same and a kit therefor |
US5391785A (en) * | 1990-01-16 | 1995-02-21 | La Jolla Pharmaceutial Company | Intermediates for providing functional groups on the 5' end of oligonucleotides |
US5162515A (en) * | 1990-01-16 | 1992-11-10 | La Jolla Pharmaceutical Company | Conjugates of biologically stable polymers and polynucleotides for treating systemic lupus erythematosus |
US5268454A (en) * | 1991-02-08 | 1993-12-07 | La Jolla Pharmaceutical Company | Composition for inducing humoral anergy to an immunogen comprising a t cell epitope-deficient analog of the immunogen conjugated to a nonimmunogenic carrier |
US5552391A (en) * | 1990-01-16 | 1996-09-03 | La Jolla Pharmaceutical Company | Chemically-defined non-polymeric valency platform molecules and conjugates thereof |
JPH04218000A (ja) * | 1990-02-13 | 1992-08-07 | Kirin Amgen Inc | 修飾ポリペプチド |
US5171264A (en) * | 1990-02-28 | 1992-12-15 | Massachusetts Institute Of Technology | Immobilized polyethylene oxide star molecules for bioapplications |
US5238940A (en) * | 1990-03-22 | 1993-08-24 | Quadra Logic Technologies Inc. | Compositions for photodynamic therapy |
US5185433A (en) * | 1990-04-09 | 1993-02-09 | Centocor, Inc. | Cross-linking protein compositions having two or more identical binding sites |
US5219564A (en) * | 1990-07-06 | 1993-06-15 | Enzon, Inc. | Poly(alkylene oxide) amino acid copolymers and drug carriers and charged copolymers based thereon |
US6011020A (en) * | 1990-06-11 | 2000-01-04 | Nexstar Pharmaceuticals, Inc. | Nucleic acid ligand complexes |
FR2664274B1 (fr) * | 1990-07-09 | 1992-09-11 | Rhone Poulenc Sante | Procede de preparation de sulfates cycliques. |
US5229366A (en) * | 1990-10-23 | 1993-07-20 | Fuji Photo Film Co., Ltd. | Peptide-containing polyethylene glycol derivatives and application thereof |
US5386020A (en) * | 1991-01-10 | 1995-01-31 | New York University | Multiply connected, three-dimensional nucleic acid structures |
CA2106474C (en) * | 1991-03-19 | 2004-02-10 | R. Martin Emanuele | Polyoxypropylene/polyoxyethylene copolymers with improved biological activity |
US5495006A (en) * | 1991-09-27 | 1996-02-27 | Allelix Biopharmaceuticals, Inc. | Antiviral polynucleotide conjugates |
US5278051A (en) * | 1991-12-12 | 1994-01-11 | New York University | Construction of geometrical objects from polynucleotides |
WO1993012145A1 (en) * | 1991-12-19 | 1993-06-24 | Baylor College Of Medicine | Pva or peg conjugates of peptides for epitope-specific immunosuppression |
US5747244A (en) * | 1991-12-23 | 1998-05-05 | Chiron Corporation | Nucleic acid probes immobilized on polystyrene surfaces |
WO1993024476A1 (en) * | 1992-06-04 | 1993-12-09 | Clover Consolidated, Limited | Water-soluble polymeric carriers for drug delivery |
US5321095A (en) * | 1993-02-02 | 1994-06-14 | Enzon, Inc. | Azlactone activated polyalkylene oxides |
FR2701263B1 (fr) * | 1993-02-09 | 1995-04-21 | Elie Stefas | Procédé d'obtention d'une composition aqueuse protéinique, composition correspondante, glycoprotéine contenue et son utilisation pour la stabilisation de l'albumine et la détection ou le dosage d'anticorps. |
US5359030A (en) * | 1993-05-10 | 1994-10-25 | Protein Delivery, Inc. | Conjugation-stabilized polypeptide compositions, therapeutic delivery and diagnostic formulations comprising same, and method of making and using the same |
US5681811A (en) * | 1993-05-10 | 1997-10-28 | Protein Delivery, Inc. | Conjugation-stabilized therapeutic agent compositions, delivery and diagnostic formulations comprising same, and method of making and using the same |
KR100361933B1 (ko) * | 1993-09-08 | 2003-02-14 | 라 졸라 파마슈티칼 컴파니 | 화학적으로정의된비중합성결합가플랫폼분자및그것의콘주게이트 |
DE69334133T2 (de) * | 1993-09-08 | 2007-12-27 | La Jolla Pharmaceutical Co., San Diego | Chemisch definierten nicht-polymer wertigen Plattformmolokülen und ihren Konjugaten |
US5880131A (en) * | 1993-10-20 | 1999-03-09 | Enzon, Inc. | High molecular weight polymer-based prodrugs |
US5965566A (en) * | 1993-10-20 | 1999-10-12 | Enzon, Inc. | High molecular weight polymer-based prodrugs |
US5840900A (en) * | 1993-10-20 | 1998-11-24 | Enzon, Inc. | High molecular weight polymer-based prodrugs |
US5919455A (en) * | 1993-10-27 | 1999-07-06 | Enzon, Inc. | Non-antigenic branched polymer conjugates |
US5618528A (en) * | 1994-02-28 | 1997-04-08 | Sterling Winthrop Inc. | Biologically compatible linear block copolymers of polyalkylene oxide and peptide units |
US5730990A (en) * | 1994-06-24 | 1998-03-24 | Enzon, Inc. | Non-antigenic amine derived polymers and polymer conjugates |
US5650234A (en) * | 1994-09-09 | 1997-07-22 | Surface Engineering Technologies, Division Of Innerdyne, Inc. | Electrophilic polyethylene oxides for the modification of polysaccharides, polypeptides (proteins) and surfaces |
US5932462A (en) * | 1995-01-10 | 1999-08-03 | Shearwater Polymers, Inc. | Multiarmed, monofunctional, polymer for coupling to molecules and surfaces |
US5874409A (en) * | 1995-06-07 | 1999-02-23 | La Jolla Pharmaceutical Company | APL immunoreactive peptides, conjugates thereof and methods of treatment for APL antibody-mediated pathologies |
US5672662A (en) * | 1995-07-07 | 1997-09-30 | Shearwater Polymers, Inc. | Poly(ethylene glycol) and related polymers monosubstituted with propionic or butanoic acids and functional derivatives thereof for biotechnical applications |
DE19541404A1 (de) * | 1995-11-07 | 1997-05-15 | Degussa | Verfahren zur selektiven Synthese von Silylalkyldisulfiden |
JP4193917B2 (ja) * | 1995-12-18 | 2008-12-10 | アンジオデバイス インターナショナル ゲーエムベーハー | 架橋ポリマー組成物およびその使用方法 |
US6106828A (en) * | 1996-02-15 | 2000-08-22 | Novo Nordisk A/S | Conjugation of polypeptides |
US5780319A (en) * | 1996-04-19 | 1998-07-14 | Pasteur Sanofi Diagnostics | Immunoassays to detect antiphospholipid antibodies |
US6214966B1 (en) * | 1996-09-26 | 2001-04-10 | Shearwater Corporation | Soluble, degradable poly(ethylene glycol) derivatives for controllable release of bound molecules into solution |
US6258351B1 (en) * | 1996-11-06 | 2001-07-10 | Shearwater Corporation | Delivery of poly(ethylene glycol)-modified molecules from degradable hydrogels |
US5990237A (en) * | 1997-05-21 | 1999-11-23 | Shearwater Polymers, Inc. | Poly(ethylene glycol) aldehyde hydrates and related polymers and applications in modifying amines |
US6284246B1 (en) * | 1997-07-30 | 2001-09-04 | The Procter & Gamble Co. | Modified polypeptides with high activity and reduced allergenicity |
US6368612B1 (en) * | 1997-12-12 | 2002-04-09 | Biohybrid Technologies Llc | Devices for cloaking transplanted cells |
US5985263A (en) * | 1997-12-19 | 1999-11-16 | Enzon, Inc. | Substantially pure histidine-linked protein polymer conjugates |
US5965119A (en) * | 1997-12-30 | 1999-10-12 | Enzon, Inc. | Trialkyl-lock-facilitated polymeric prodrugs of amino-containing bioactive agents |
WO1999045964A1 (en) * | 1998-03-12 | 1999-09-16 | Shearwater Polymers, Incorporated | Poly(ethylene glycol) derivatives with proximal reactive groups |
US6153655A (en) * | 1998-04-17 | 2000-11-28 | Enzon, Inc. | Terminally-branched polymeric linkers and polymeric conjugates containing the same |
US6251382B1 (en) * | 1998-04-17 | 2001-06-26 | Enzon, Inc. | Biodegradable high molecular weight polymeric linkers and their conjugates |
US6858210B1 (en) * | 1998-06-09 | 2005-02-22 | La Jolla Pharmaceutical Co. | Therapeutic and diagnostic domain 1 β2GPI polypeptides and methods of using same |
CA2283597C (en) * | 1998-10-02 | 2008-02-05 | Ortho-Clinical Diagnostics, Inc. | Reduced cortisol conjugates |
US6458953B1 (en) * | 1998-12-09 | 2002-10-01 | La Jolla Pharmaceutical Company | Valency platform molecules comprising carbamate linkages |
US6399578B1 (en) * | 1998-12-09 | 2002-06-04 | La Jolla Pharmaceutical Company | Conjugates comprising galactose α1,3 galactosyl epitopes and methods of using same |
US6365173B1 (en) * | 1999-01-14 | 2002-04-02 | Efrat Biopolymers Ltd. | Stereocomplex polymeric carriers for drug delivery |
MXPA02006215A (es) * | 1999-12-22 | 2003-10-15 | Nektar Therapeutics Al Corp | Metodo para preparar esteres de 1-benzotriazolil carbonato de poli(etilenglicol). |
CN1434726A (zh) * | 2000-06-08 | 2003-08-06 | 拉卓拉药物公司 | 包含高分子量聚环氧乙烷的多价平台分子 |
WO2004060320A2 (en) * | 2002-12-27 | 2004-07-22 | La Jolla Pharmaceutical Company | Methods of improving health-related quality of life in individuals with systemic lupus erythematosus |
-
2000
- 2000-06-08 AU AU54796/00A patent/AU779887B2/en not_active Ceased
- 2000-06-08 CN CN00808613A patent/CN1358171A/zh active Pending
- 2000-06-08 CN CNA2005101161177A patent/CN1762990A/zh active Pending
- 2000-06-08 KR KR1020017015842A patent/KR20020022691A/ko not_active Application Discontinuation
- 2000-06-08 WO PCT/US2000/015968 patent/WO2000075105A1/en not_active Application Discontinuation
- 2000-06-08 JP JP2001501586A patent/JP2003501412A/ja not_active Withdrawn
- 2000-06-08 EP EP00939762A patent/EP1183230A1/en not_active Withdrawn
- 2000-06-08 CA CA002376057A patent/CA2376057A1/en not_active Abandoned
-
2001
- 2001-12-07 NO NO20016006A patent/NO20016006L/no not_active Application Discontinuation
-
2002
- 2002-03-26 HK HK02102270.5A patent/HK1042287A1/zh unknown
-
2004
- 2004-06-14 US US10/867,874 patent/US20040224366A1/en not_active Abandoned
-
2005
- 2005-12-16 US US11/303,591 patent/US20060141597A1/en not_active Abandoned
-
2007
- 2007-03-26 US US11/728,853 patent/US20070191263A1/en not_active Abandoned
Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2009510253A (ja) * | 2005-10-04 | 2009-03-12 | エンゾン ファーマスーティカルズ インコーポレイテッド | 保護されたアミン塩を用いて、末端アミン基を有するポリマーを調製する方法 |
JP2018109194A (ja) * | 2007-01-18 | 2018-07-12 | ジェンザイム・コーポレーション | アミノオキシ基を含むオリゴ糖およびその複合体 |
US10907142B2 (en) | 2007-01-18 | 2021-02-02 | Genzyme Corporation | Oligosaccharides comprising an aminooxy group and conjugates thereof |
JP2014516050A (ja) * | 2011-05-27 | 2014-07-07 | アンブルックス,インコーポレイテッド | 非天然アミノ酸結合ドラスタチン誘導体を含有する組成物、それを用いた方法、およびその使用 |
JP2014516987A (ja) * | 2011-05-27 | 2014-07-17 | アンブルックス,インコーポレイテッド | 非天然アミノ酸結合ドラスタチン誘導体を含有する組成物、それを用いた方法、およびその使用 |
US11420999B2 (en) | 2011-05-27 | 2022-08-23 | Ambrx, Inc. | Compositions containing, methods involving, and uses of non-natural amino acid linked dolastatin derivatives |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
EP1183230A1 (en) | 2002-03-06 |
US20070191263A1 (en) | 2007-08-16 |
HK1042287A1 (zh) | 2002-08-09 |
US20060141597A1 (en) | 2006-06-29 |
AU779887B2 (en) | 2005-02-17 |
CN1762990A (zh) | 2006-04-26 |
US20040224366A1 (en) | 2004-11-11 |
KR20020022691A (ko) | 2002-03-27 |
CN1358171A (zh) | 2002-07-10 |
AU5479600A (en) | 2000-12-28 |
WO2000075105A1 (en) | 2000-12-14 |
CA2376057A1 (en) | 2000-12-14 |
NO20016006L (no) | 2002-01-22 |
NO20016006D0 (no) | 2001-12-07 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP2003501412A (ja) | アミノオキシ基を有する結合価プラットホーム分子 | |
US6951939B2 (en) | Multivalent platform molecules comprising high molecular weight polyethylene oxide | |
JPWO2006088248A1 (ja) | ポリオキシアルキレン誘導体 | |
US6933352B2 (en) | Amphiphilic compounds having a dendritic branch structure | |
EP0590038B1 (en) | Amino acid derivative and bromoacetyl modified peptides | |
US20060199812A1 (en) | Method of conjugating aminothiol containing molecules to vehicles | |
AU772167B2 (en) | Polypeptide dendrimers as unimolecular carriers of diagnostic imaging contrast agents, bioactive substances and drugs | |
CN111936550B (zh) | 分解性聚乙二醇衍生物 | |
Inman et al. | Synthesis of N. alpha.-(tert-butoxycarbonyl)-N. epsilon.-[N-(bromoacetyl)-. beta.-alanyl]-L-lysine: Its use in peptide synthesis for placing a bromoacetyl cross-linking function at any desired sequence position | |
JP7411188B2 (ja) | 分岐型分解性ポリエチレングリコール誘導体 | |
KR20220069994A (ko) | 비대칭 분기형 분해성 폴리에틸렌글리콜 유도체 | |
WO2021060441A1 (ja) | マルチアーム型分解性ポリエチレングリコール誘導体 | |
Inman et al. | Nu-(tert-Butoxycarbonyl)-N-[N-(bromoacetyl)-@-alanyl]-L-lysine: Its Use in Peptide Synthesis for Placing Cross-Linking Function at Any Desired Sequence Position zyxwvutsrqponmlkjihgfedcbaZYXWVUTSRQPON | |
Inman et al. | Synthesis of zyxwvutsrqpon Nu-(tert-Butoxycarbonyl)-N-[N-(bromoacetyl)-@-alanyl]-L-lysine: Its Use in Peptide Synthesis for Placing Cross-Linking Function at Any Desired Sequence Position |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A300 | Application deemed to be withdrawn because no request for examination was validly filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A300 Effective date: 20070904 |