JP2003337124A

JP2003337124A - 液体クロマトグラフ装置及び液体クロマトグラフ用カラム液体クロマト測定方法

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Publication number: JP2003337124A
Application number: JP2002144650A
Authority: JP
Inventors: Kazuyuki Oishi; 和之大石; Yuji Setoguchi; 雄二瀬戸口; Kazuhiko Shimada; 一彦嶋田; Toshiki Kawabe; 俊樹川辺
Original assignee: Sekisui Chemical Co Ltd
Current assignee: Sekisui Chemical Co Ltd
Priority date: 2002-05-20
Filing date: 2002-05-20
Publication date: 2003-11-28

Abstract

(57)【要約】【課題】新たなカラムを使用開始時の補正を確実に行
うことができ、カラムのばらつきや測定装置のばらつき
による測定ばらつきを低減することができ、測定を高精
度に行うことを可能とする液体クロマトグラフ装置を提
供する。【解決手段】クロマトグラフ測定装置１のカラム７の
保持力Ｔを入力する入力装置３を有し、記憶装置４に保
持力Ｔ１，Ｔ２，…Ｔｎに対応した溶離条件Ｅ１，Ｅ
２，…Ｅｎが予め記憶されており、入力装置３から与え
られたカラム７の保持力Ｔに応じた溶離条件Ｅが制御装
置２において記憶装置４に記憶されているデータに基づ
いて選択され、制御装置２により、選択された溶離条件
Ｅに基づいてクロマトグラフ測定装置１による測定が行
われる、液体クロマトグラフ装置。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、液体クロマトグラ
フ装置及び該装置を用いた測定方法に関し、より詳細に
は、カラムに応じた最適な溶離条件を用いて測定を行う
ことを可能とする構成を備えた液体クロマトグラフ装置
及び測定方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】液体クロマトグラフによる測定法は、機
器分析手法として広く用いられている。最近では、臨床
検査のような迅速な測定が要求される分野においても、
自動化された液体クロマトグラフ装置が用いられてい
る。

【０００３】液体クロマトグラフィーでは、測定対象成
分の測定値は、ピーク面積値などで表現される。この測
定値は、様々なパラメータにより影響を受ける。測定を
高精度に行うには、これらのパラメータ、例えば測定対
象ピークの保持時間、キャパシティー比、分離度、圧力
などが安定な状態で測定を行う必要がある。

【０００４】しかしながら、これらのパラメータは様々
な変動要因により容易に変化する。例えば、多数の成分
を含有する試料を測定する場合や、短時間の測定が要求
される場合には、測定対象ピークに隣接するピークが存
在することが多い。測定対象ピークと隣接ピークとのわ
ずかな分離状態の変化がクロマトグラムに影響を及ぼ
し、測定値がばらつくことがあった。

【０００５】上記パラメータに影響を及ぼす変動要因と
しては、カラム間の差、溶離条件の変動、機器間の差な
どが挙げられる。また、カラムを長期間使用している場
合、長期使用によるカラムの劣化によってもパラメータ
が変化する。

【０００６】上記のようなパラメータの変動に対して何
らかの補正を行うことにより、測定値の精度を高めるこ
とができる。例えば、特開平５−５７３０号公報には、
劣化したカラムのパラメータをフィードバックし、所定
の保持時間となるように溶離条件を変更する方法が開示
されている。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、上記先
行技術に記載の方法では、ある段階で溶離条件の変更が
突然行われる。従って、測定値の連続性がなくなり、特
に、条件の変更前後における測定値の信頼性が低下する
という問題があった。

【０００８】また、少なくとも１度は測定を行ない、そ
の測定結果の検証を行った後、溶離条件の変更の有無が
判断されるため、カラム使用開示時において発生してい
るパラメータの変動に対しては効果がない。また、パラ
メータ変更後には、変更前に測定した試料に対して再測
定を行う必要があった。

【０００９】すなわち、上記先行技術に記載の方法は、
カラム劣化時に対応した補正方法であるが、新たなカラ
ムを使用開始する際の補正方法は示されていない。測定
者にとって、カラム使用開始時において、カラムに応じ
た補正が行われれば、測定試料を無駄にせず、測定時間
及びコストを節減することができる。しかしながら、現
在まで、カラム使用開始時の補正技術は提案されていな
い。

【００１０】また、カラム使用開始時の補正は、カラム
製造者にとっても有益である。すなわち、カラムの使用
開始時の補正が行われる場合には、供給するカラムにお
ける性能のばらつきに対する要求が緩和され、歩留りを
高めることができ、カラムのコストを低減することがで
きる。

【００１１】本発明の目的は、従来技術の現状に鑑み、
カラム使用開始時の補正機構を備えた液体クロマトグラ
フ装置、並びにカラム使用開始時の補正方法を有する液
体クロマトグラフ測定方法を提供することにある。

【００１２】本発明の他の目的は、カラム使用開始時の
補正機構を有する本発明の液体クロマトグラフ装置に用
いられるのに適したカラムを提供することにある。

【００１３】

【課題を解決するための手段】本発明に係る液体クロマ
トグラフ装置は、試料を溶離液に注入して分離カラムに
流し、試料中の成分の測定が行われる液体クロマトグラ
フ装置であって、溶離液送液手段、試料注入部、分離カ
ラム及び検出部を有するクロマトグラフ測定手段と、分
離カラムの保持力Ｔを入力する入力手段と、前記分離カ
ラムの保持力Ｔに対応した溶離条件Ｅが予め記憶された
記憶手段と、前記入力手段からカラム保持力Ｔが与えら
れた際に、該保持力Ｔに応じた溶離条件Ｅを前記記憶手
段に記憶されているデータから選択し、選択された溶離
条件Ｅによりクロマトグラフ測定手段により測定を行わ
せる制御手段とを備えることを特徴とする。

【００１４】本発明に係る液体クロマトグラフ装置のあ
る特定の局面では、前記カラムに該カラムの保持力Ｔを
示す表示が設けられており、前記入力手段が、前記カラ
ムの表示を検出する検出手段を有する表示が形成されて
いる。従って、新たに使用されるカラムが液体クロマト
グラフ装置にセットされた際に、該カラムに設けられた
表示が検出手段により検出され、該カラムの保持力が自
動的に入力される。

【００１５】本発明に係るカラムは、本発明に従って構
成された上記液体クロマトグラフ装置に用いられるカラ
ムであり、該カラムの保持力Ｔを示す表示を有すること
を特徴とする。従って、液体クロマトグラフ装置が該表
示を読み取る検出手段を有する場合、カラムの使用開始
時に該カラムの保持力を自動的に本発明の液体クロマト
グラフ装置に入力することができる。

【００１６】本発明に係る液体クロマトグラフ測定方法
は、本発明に従って構成された液体クロマトグラフ装置
を用いた測定方法であって、入力手段により使用するカ
ラムの保持力Ｔを入力する工程と、入力されたカラム保
持力Ｔに応じた溶離条件Ｅが選択される工程と、選択さ
れた溶離条件Ｅに基づいてクロマトグラフ測定が行われ
る工程とを備える。

【００１７】

【発明の実施の形態】以下、図面を参照しつつ、本発明
に係る液体クロマトグラフ装置、液体クロマトグラフ測
定方法及びカラムの詳細を説明する。

【００１８】図１は、本発明に係る液体クロマトグラフ
装置の一実施形態の概略ブロック図である。液体クロマ
トグラフ装置は、クロマトグラフ測定手段としての測定
装置１と、制御装置２と、入力装置３と、記憶装置４と
を備える。

【００１９】測定装置１は、従来より公知の液体クロマ
トグラフ装置と同様に、試料の分離を行うためのカラム
７を有する。カラム７には、測定に際して溶離液が流さ
れる。測定装置１では、複数の溶離液Ｙ１〜Ｙｎが用意
されており、溶離液Ｙ１〜Ｙｎがバルブ５に接続されて
いる。バルブ５を切り替えることにより、いずれかの溶
離液あるいはいずれかの２種以上の溶離液が溶離液送液
手段としてのポンプＰを介してカラム７に供給される。
カラム７に溶離液を流している状態において、試料注入
部６から試料が注入され、カラム７により分離が行われ
る。カラム７の後段において検出部８が設けられてい
る。

【００２０】上記バルブ５、ポンプＰ、試料注入部６及
び検出部８は、従来より公知の液体クロマトグラフ装置
で用いられている適宜のバルブやポンプ、試料注入部及
び検出部により構成される。

【００２１】他方、本実施形態では、上記カラム７の保
持力をＴとしたときに、該保持力Ｔを入力する入力手段
としての入力装置３が備えられている。入力装置３とし
ては、使用されるカラム７の保持力Ｔを入力する機構で
あれば特に限定されない。例えば、キーボードなどによ
り入力装置が構成されてもよい。好ましくは、カラム７
に該カラム７の保持力Ｔが表示されており、該表示を読
み取る検出手段により入力装置３が構成されていてもよ
い。この場合には、新たなカラム７をセットした段階
で、入力装置３を構成する検出手段によりカラム７の保
持力Ｔが検出され、カラム７の保持力Ｔの入力の自動化
を図ることができる。

【００２２】上記カラム７に設けられる表示についても
特に限定されないが、好ましくは、入力装置３による検
出及び後述する制御装置２による制御を容易とするに
は、デジタル化されたコードで表示が形成されているこ
とが望ましい。

【００２３】入力装置３は、制御装置２に電気的に接続
されており、入力装置３からカラム７の保持力Ｔが制御
装置２に与えられる。制御装置２は、測定装置１及び記
憶手段としての記憶装置４にも電気的に接続されてい
る。記憶装置４には、予め、カラムの保持力Ｔに応じた
溶離条件Ｅが記憶されている。すなわち、記憶装置４に
は、様々な保持力Ｔ、例えばＴ１，Ｔ２，…Ｔｎの値に
応じた様々な溶離条件Ｅ、例えばＥ１，Ｅ２，…Ｅｎが
記憶されている。言い換えれば、ある保持力Ｔに対応し
たある溶離条件Ｅで測定を行った場合に、常に一定の測
定条件が得られるように、保持力Ｔと対応の溶離条件Ｅ
の組み合わせが記憶されている。

【００２４】制御装置２は、記憶装置４に記憶されてい
る上記データに応じて、入力された保持力Ｔに応じた溶
離条件Ｅを記憶装置４から選択する。そして、制御装置
２は、選択された溶離条件Ｅに基づいて測定装置１によ
る測定を行わせる。

【００２５】ここで、カラムの保持力Ｔ及び溶離条件Ｅ
の詳細を説明する。本発明におけるカラムの保持力Ｔと
は、ある一定の測定条件下における、測定対象成分の保
持時間、または特定の保持時間に対応した記号もしくは
番号などの表記により表わすことができる。保持力Ｔ
は、測定対象成分を含有する標準試料について、ある特
定の溶離条件下（標準溶離条件Ｅ０）にて測定を行な
い、保持時間を求めることにより得られるものである。
以下、保持力を調べる工程を検査工程と言うものとす
る。

【００２６】上記検査工程は、カラムが、測定対象成分
の測定を目的として行われる通常の測定業務に提供され
る前に予め行われているものである。すなわち、測定者
が測定対象成分の測定を開始する時点において、カラム
保持力Ｔの情報は、カラムと共に測定者に与えられる。

【００２７】上記標準溶離条件Ｅ０は、必ずしも通常の
測定業務に用いられる測定条件と同一である必要はない
が、同一であることが望ましい。検査工程は、実際に
は、例えばカラム提供業者において行われ、それによっ
てカラム本体とカラムの保持力が測定者に与えられるこ
とになる。

【００２８】検査工程で得られた保持力Ｔの値は、同一
条件下で製造された複数のカラムにおいてもばらつくの
が普通である。すなわち、製造された多数のカラムで
は、カラム間において保持力の差が存在することが多
い。これは、充填剤のロット間の差、充填作業の差、空
カラムの差などの様々な要因が複合して起きると思われ
る。従って、製造された多数のカラムについて、上記保
持力Ｔが検査工程で求められる。このようにして得られ
た複数のカラムの保持力を、Ｔ１，Ｔ２…Ｔｎとする。

【００２９】他方、測定対象成分の測定値が最も高精度
に測定される場合の保持力、すなわち、補正の目標値と
しての保持力をＴ０とする。Ｔ０としては、上記検査工
程で得られた保持力の各値、Ｔ１，Ｔ２，…Ｔｎの中か
ら最も好ましい測定値が得られる場合の保持力を選択す
ればよい。もっとも、Ｔ１，Ｔ２，…Ｔｎ以外の保持力
をＴ０としてもよい。

【００３０】通常は、測定値の精度が補償されている保
持時間、すなわち保持時間に関する製品規格の中心値
を、補正目標値としての保持時間Ｔ０とすればよい。Ｔ
０と異なる保持力を有するカラムでは、本発明の液体ク
ロマトグラフ装置に該カラムの保持力Ｔを入力すること
により、後述の最適な溶離条件Ｅにより保持力ＴがＴ０
となるように補正されることになる。

【００３１】溶離条件Ｅは、公知の液体クロマトグラフ
を用いた装置法における溶離条件において、保持力Ｔを
変動させ得る条件の全てを含むものとする。このような
条件としては、例えば、溶離液の選択、温度（特にカラ
ム温度）、溶離液の流速、溶離液の通液時間などが挙げ
られる。これらの各条件を個別条件と言うものとする。

【００３２】上述した記憶装置４には、多数の溶離条件
Ｅが記憶されている。この記憶されている溶離条件を、
溶離条件Ｅ１，Ｅ２，…Ｅｎとする。各溶離条件Ｅ１，
Ｅ２，…Ｅｎは、原則として、標準溶離条件Ｅ０の上記
個別条件のうち、少なくとも１つが異なる溶離条件であ
る。但し、標準溶離条件Ｅ０と同じ溶離条件が溶離条件
Ｅ１〜Ｅｎに含まれていてもよい。

【００３３】また、各溶離条件Ｅ１，Ｅ２，…Ｅｎ間に
おいては、１種の個別条件のみが変更されていてもよ
く、複数の個別条件が変更されていてもよい。各溶離条
件Ｅ１，Ｅ２，…Ｅｎが、カラムの保持力Ｔ１，Ｔ２，
…Ｔｎに対応している。この対応は、１対１の対応であ
ってもよく、１対複数の対応であってもよい。

【００３４】さらに、各溶離条件Ｅ１，Ｅ２，…Ｅｎの
各保持力Ｔ１，Ｔ２，…Ｔｎに対する対応は、装置によ
り異なっていてもよい。同一の構成に基づく装置におい
て、同一のカラム及び同一測定条件下で測定を行った場
合、装置に起因するばらつきにより、同一の保持時間を
示さない場合がある。この場合には、保持力差を考慮し
て、上記対応をシステム毎に変更すればよく、それによ
ってシステム間のばらつきを低減することができる。

【００３５】各カラム７が有する各保持力Ｔに対応する
溶離条件Ｅは、標準溶離条件Ｅ０下における測定により
予め求められる。以下、この溶離条件Ｅの設定工程を較
正工程と言うものとする。

【００３６】較正工程は、上述した検査工程において保
持力の値Ｔ１，Ｔ２，…Ｔｎが得られた各カラムを標準
溶離条件Ｅ０の個別条件を変更した測定条件下で測定
し、その結果得られる保持時間がＴ０と一致し、かつ目
的とする正しい測定値が得られる溶離条件を見出す工程
である。最終的に設定された各溶離条件が、当該カラム
を補正するための溶離条件Ｅとして設定され、かつ記憶
装置２において各保持力Ｔ１，Ｔ２，…Ｔｎに対応した
溶離条件Ｅ１，Ｅ２，…Ｅｎが記憶される。すなわち、
上記較正工程は以下のように行われることが望ましい。

【００３７】まず、上記検査工程において保持力が求め
られたカラムの保持力を例えばＴ１とする。このカラム
を用いて標準溶離条件Ｅ０のうちの個別条件の１つまた
は複数を変更し、該カラムの保持時間がＴ０となる溶離
条件を見出す。その際に、該カラムを見出された溶離条
件で測定して得られた測定値（例えばピーク面積値）
が、保持力Ｔ０のカラムを標準溶離条件Ｅで測定した場
合の基準測定値と同等であることを確認する。保持力Ｔ
１のカラムの保持力が補正される溶離条件において、測
定値が基準測定値と異なる場合には、変更する個別条件
を別の条件として再度較正工程を行う。保持力Ｔ１のカ
ラムが、標準溶離条件Ｅ０下における保持力Ｔ０のカラ
ムと同等の（あるいは測定値において許容し得る範囲）
保持時間を示した場合の溶離条件を溶離条件Ｅ１として
設定する。

【００３８】同様に、保持力Ｔ２，Ｔ３，…Ｔｎを示す
カラムの保持時間が、標準条件Ｅ０下におけるＴ０と一
致する溶離条件を調べることにより各保持力Ｔ１，Ｔ
２，…Ｔｎに対応した各溶離条件Ｅ１，Ｅ２，…Ｅｎが
決定される。このようにして決定された対応関係及び各
溶離条件Ｅ１，Ｅ２，…Ｅｎが、記憶装置４に予め記憶
されている。

【００３９】次に、本実施形態の液体クロマトグラフ装
置を用いた測定方法を説明する。図２は、本測定方法の
一実施形態のフローチャートを示す図である。まず、ス
テップＳ１において、測定が開始される。この場合、制
御装置２により、測定装置１が駆動される。ステップＳ
２において、まずカラム７の保持力Ｔが入力装置３によ
り入力される。この入力は、前述したようにキーボード
などで行われてもよく、あるいはカラム７に備えられて
いる保持力Ｔを示す表示を入力装置３を構成する検出手
段により読み取ることによって行われてもよい。入力装
置３は、使用するカラム７の保持力Ｔを示す信号を制御
装置２に与える。

【００４０】次に、ステップＳ３において、制御装置２
は、与えられた保持力Ｔを基に、記憶装置４に予め記憶
されている保持力Ｔに対応した溶離条件Ｅを選択する。
すなわち、前述した各保持力Ｔ１，Ｔ２，Ｔ３，…Ｔｎ
に対応した溶離条件Ｅ１，Ｅ２，…Ｅｎの中から入力さ
れた保持力に対応した溶離条件Ｅが選択される。

【００４１】次に、ステップＳ４において、選択された
溶離条件Ｅに基づいて、制御装置２は、測定装置１を駆
動し、測定を行う。すなわち、上記溶離条件Ｅを実現す
るように、バルブ５が切替られ、溶離液Ｙ１，Ｙ２，…
Ｙｎのうち１種または２種以上の溶離液がポンプＰによ
りカラム７に送液される。この場合、制御装置２からの
信号によりバルブ５の切替状態、ポンプＰによる送液速
度及びカラム７の温度を調節する機構などが制御され、
溶離条件Ｅに基づいた測定が行われる。

【００４２】測定に際しては、溶離液がカラム７に送液
されている状態において、試料注入部６から、試料を注
入し、カラム７で試料中の成分の分離を行う。そして、
検出部８において分離結果が読み取られ、クロマトグラ
ムデータが制御装置２に与えられる。制御装置２は、図
示しない表示検出装置にその結果を表示する。あるい
は、測定装置において、検出部８に直接クロマトグラム
データを表示する表示装置が接続されていてもよい。

【００４３】上記のように、本実施形態の液体クロマト
グラフ測定方法では、使用するカラム７の保持力Ｔに応
じた最適な溶離条件Ｅが選択されて測定が行われる。従
って、カラム使用開始時において、該カラムの保持力Ｔ
に応じた補正が確実に行われ、カラムを変更した場合に
おいても、安定にかつ高精度に測定を行うことができ
る。

【００４４】なお、カラムの保持力Ｔの具体的な値は、
測定者がカラムを使用する前に製造者から通知される。
この方法は特に限定されず、カラムに添付された書類、
カラム包装、カラム本体及びカラムのラベルなどに記載
されていることが望ましい。上記入力装置３において、
測定者は通知された保持力Ｔを入力するが、好ましくは
前述したように、カラム７に保持力Ｔを示す表示が予め
設けられていることが望ましく、その場合には、入力装
置３として該表示を読み取る検出手段を設けることによ
り、保持力Ｔの入力の自動化を図ることができる。

【００４５】なお、上記のようにカラム７に直接保持力
Ｔを示す表示を設ける場合、その表示を設ける部分は特
に限定されない。本発明に係る液体クロマトグラフ装
置、液体クロマトグラフ測定方法及びカラムは、液体ク
ロマトグラフィーを利用した様々な測定に用いられ、測
定される試料や成分は特に限定されるものではない。も
っとも、特に多数の成分を含む試料を分析する臨床検査
分野などの生化学分析において、好適に用いられ、例え
ばヘモグロビンＡ１ｃなどのヘモグロビン類の測定に効
果的に用いられ得る。

【００４６】（実施例）以下、本発明の具体的な実施例
を説明する。以下の実施例１，２においては、下記の
（１）〜（６）に従って、材料及び装置を構成した。

【００４７】（１）カラムの作製：テトラエチレングリ
コールジメタクリレート（新中村化学社製）４５０ｇ及
び２−ヒドロキシ−１，３ジメタクリロキシプロパン
（和光純薬社製）５０ｇの混合物に過酸化ベンゾイル
（和光純薬社製）２ｇを溶解した。これを４重量％ポリ
ビニルアルコール（日本合成化学社製）水溶液２５００
ｍｌに分散させ、攪拌しながら窒素雰囲気下で８０℃に
昇温し、１．５時間重合した。次いで、反応系を３５℃
に冷却した後、２−アクリルアミド−２メチルプロパン
スルホン酸（東京化成社製）の５０重量％水溶液４００
ｇ及びメタノール４００ｍｌを添加し１時間攪拌しなが
ら再び８０℃に昇温し１．３時間重合した。重合後、洗
浄し乾燥した後、分級し、平均粒径６．５μｍの充填剤
を得た。得られた充填剤０．７ｇを湿式充填にてステン
レス製の空カラム（内径４．６×３５ｍｍ）に充填し、
カラムを得た。

【００４８】（２）溶離液：下記の溶離液Ａ及びＢを用
いた。溶離液Ａ：４５ｍＭ硝酸ナトリウムを含む５０ｍＭリン
酸緩衝液（ｐＨ５．３）溶離液Ｂ：２００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ８．２）

【００４９】（３）測定システム：測定システムは、以
下に示した各装置を接続して構築し、以下の評価を行っ
た。・送液ポンプ：ＬＣ−９Ａ（島津製作所社製）・オートサンプラ：ＳＩＬ６Ｂ（島津製作所社製）・システムコントローラ：ＳＣＬ−６Ｂ（島津製作所社製）・検出器：ＳＰＤ−６ＡＶ（島津製作所社製）・カラムオーブン：ＣＴＯ−６Ａ（島津製作所社製）

【００５０】（４）測定条件：・流速：１．５ｍｌ／ｍｉｎ・カラムオーブン温度：４０℃ ・検出波長：４１５ｎｍ・試料注入量：１０μＬ・標準送液条件Ｅ０：・０〜１００秒：溶離液Ａ・１００秒〜１１０秒：溶離液Ｂ・１１０秒〜１３４秒：溶離液Ａ

【００５１】（５）測定試料：健常人の全血を採取し、
抗凝固作用を示すアングロット／Ｇ（（株）アズウェル
社製）を全血１ｍｌに対して１滴の割合で添加し、泡立
てないように混和した。これに、２００倍容量の溶血試
薬（界面活性剤として０．１重量％ポリエチレングリコ
ールモノ−４−オクチルフェニルエーテル（トリトンＸ
−１００、東京化成社製）のリン酸緩衝液（ｐＨ７））
を添加して溶血させ、測定試料とした。

【００５２】［実施例１］：（１）保持力Ｔの測定（検査工程）：上記（１）の方法
で充填されたカラムを、上記（３）のシステムに接続
し、上記（４）の標準送液条件Ｅ０にて測定試料を測定
した。

【００５３】測定結果のうち、安定型ヘモグロビンＡ１
ｃ（以下、ｓ−Ａ１ｃと記す）の保持時間（以下、ＲＴ
と記す）の異なるカラム１０本の結果を表１に示す。

【００５４】

【表１】

【００５５】ＲＴの中心値はＲＴ＝６４秒（カラムＮ
ｏ．５）であった。ＲＴの最も早いカラム（カラムＮ
ｏ．１）及び遅いカラム（カラムＮｏ．１０）では、Ｒ
Ｔが９秒も異なり、測定値、つまりｓ−Ａ１ｃピークの
面積比（全ピークの合計面積値に対する％）のばらつき
の幅は、最大１．０％となり、測定上問題となるレベル
であった。

【００５６】（２）保持力Ｔに対応する溶離条件Ｅの設
定（較正工程）：ＲＴの最も早いカラム（カラムＮｏ．
１）及び遅いカラム（カラムＮｏ．１０）を用いて、補
正のための溶離条件Ｅの設定を行った。

【００５７】補正手段は、溶離液の送液条件；すなわち
上記（４）に記載の標準送液条件Ｅ０における、溶離液
Ａの送液時間を変更することにより行った。下記ａ）及
びｂ）を一定にし、溶離液Ｂの前に流す溶離液Ａの送液
時間（Ａ１とする）及び溶離液Ｂの後に流す溶離液Ａの
送液時間（Ａ２とする）を表２のように変更した。

【００５８】ａ）総送液時間（測定時間）＝１３４秒ｂ）溶離液Ｂの送液時間＝１０秒

【００５９】

【表２】

【００６０】その結果、ＲＴの最も早いカラム（カラム
Ｎｏ．１）では、Ａ２を基本送液条件の２４秒から、３
２秒に長くすることで、ＲＴは６１秒から６４秒とな
り、中心値カラムのＲＴと同等になった。また測定値も
同等となった。

【００６１】一方、ＲＴの最も遅いカラム（カラムＮ
ｏ．１０）では、Ａ２を１８秒と短くすることにより、
ＲＴを６４秒、測定値を４．８％と中心値カラムと同等
とすることができた。

【００６２】従って上記の関係から、保持力Ｔに対する
溶離条件Ｅは、表３のように決定した。なお上記検査工
程で中心値（保持力Ｔ＝Ｔ０＝Ｔ５）を示したカラムＮ
ｏ．５の溶離条件は、Ｅ５（Ｅ０と同等）とした。

【００６３】

【表３】

【００６４】（３）補正（カラム保持力Ｔの入力と溶離
条件Ｅの選択）後の測定上記溶離条件Ｅを上記（３）の液体クロマトグラフに記
憶させた。本システム中のシステムコントローラ内の分
析ファイルにＥ１〜Ｅ１０を入力して記憶させた。本装
置を用いて上記表１のカラム１０本を再測定した。例え
ばカラムＮｏ．２を測定する際には、該カラムの保持力
Ｔ２を入力；これにより溶離条件Ｅ２が選択されて測定
が行われた。その結果を表４に示す。

【００６５】

【表４】

【００６６】各カラムにおけるＲＴ及び測定値のばらつ
きは、ともにＣＶが１％以内と再現性よく測定できた。

【００６７】［実施例２］上記（３）に用いたシステム
と同一装置、同一構成のシステムをさらに２つ設定した
（上記（３）のシステムをシステムＡ、新たに設定した
２台をシステムＢ及びＣとする）。

【００６８】上記実施例１の（１）の検査工程に用いた
カラム１０本（カラムＮｏ．１〜１０）を用い、システ
ムＢ及びＣにて、上記（４）の測定条件（標準送液条件
Ｅ０）にて測定を行った。得られた結果をシステムＡの
結果（再掲）と共に表５に示す。

【００６９】

【表５】

【００７０】表５より、同一カラムを測定した場合、シ
ステムＢではシステムＡよりＲＴが２秒早く、システム
Ｃでは２秒遅いことがわかった。上記システム間差を考
慮した上で、保持力Ｔに対応する溶離条件Ｅを表６のよ
うに設定した。該対応は、例えば、実施例１における中
心値カラムＮｏ．５では、システムＡにおいて溶離条件
Ｅ５（＝Ｅ０）を対応させたが、システムＢではＥ３；
システムＣではＥ７を対応させた。

【００７１】表６から明らかなように、上記実施例１と
同様に再測定を行ったところ、表６に示す結果が得られ
た各カラムとも補正が良好に行われたことがわかる。

【００７２】

【表６】

【００７３】なお、上記実施例１における較正工程によ
り得られた溶離条件Ｅ０〜Ｅ１０は、ＲＴが６０〜６９
秒のカラムに対応する条件であったため、システムＢに
おけるカラムＮｏ．１及び２；システムＣにおけるカラ
ムＮｏ．９及び１０を補正する溶離条件Ｅは設定されて
いない。但し、上記較正工程において、より広範囲の保
持力について較正（対応する溶離条件の検討）すること
が可能であるため、再度較正工程を行うことにより上記
カラムに対応する溶離条件Ｅを設定することは可能であ
る。

【００７４】

【発明の効果】以上のように、本発明の液体クロマトグ
ラフ装置では、新たなカラムを使用開始する際に、該カ
ラムの保持力Ｔに対応した溶離条件が選択される。従っ
て、新たなカラムを使用する際に測定値を確実に補正す
ることが可能となる。よって、新たなカラムを使用した
直後から、高精度に測定を行うことができる。また、カ
ラムの製造ばらつきや液体クロマトグラフ装置の装置間
のばらつきによる影響を低減することができるので、カ
ラムや液体クロマトグラフ装置の製造に際しての歩留り
を高めることも可能となり、カラムや液体クロマトグラ
フ装置のコストの低減を果たすこともできる。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明の一実施形態に係る液体クロマトグラフ
装置の概略ブロック図。

【図２】本発明の一実施形態における液体クロマトグラ
フ測定方法を説明するためのフローチャートを示す図。

【符号の説明】１…測定装置２…制御装置３…入力装置４…記憶装置５…バルブ６…試料注入部７…カラム８…検出部

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ｇ０１Ｎ 30/86 Ｇ０１Ｎ 30/86 ＤＧＱＴ 30/88 30/88 Ｊ 33/50 33/50 Ｕ 33/72 33/72 Ａ // Ｇ０１Ｎ 30/48 30/48 ＧＳ 30/56 30/56 Ａ 30/74 30/74 Ｅ (72)発明者川辺俊樹大阪市北区西天満２−４−４積水化学工業株式会社内Ｆターム(参考） 2G045 AA13 BA01 BB03 CA25 DA48 FB06 JA07

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】試料を溶離液に注入して分離カラムに流
し、試料中の成分の測定が行われる液体クロマトグラフ
装置であって、溶離液送液手段、試料注入部、分離カラム及び検出部を
有するクロマトグラフ測定手段と、分離カラムの保持力Ｔを入力する入力手段と、前記分離カラムの保持力Ｔに対応した溶離条件Ｅが予め
記憶された記憶手段と、前記入力手段からカラム保持力Ｔが与えられた際に、該
保持力Ｔに応じた溶離条件Ｅを前記記憶手段に記憶され
ているデータから選択し、選択された溶離条件Ｅにより
クロマトグラフ測定手段により測定を行わせる制御手段
とを備えることを特徴とする、液体クロマトグラフ装
置。
【請求項２】前記カラムに該カラムの保持力Ｔを示す
表示が設けられており、前記入力手段が、前記カラムの表示を検出する検出手段
を有する、請求項１に記載の液体クロマトグラフ装置。
【請求項３】請求項１に記載の液体クロマトグラフ装
置に用いられるカラムであって、カラムの保持力Ｔを示す表示を有することを特徴とす
る、液体クロマトグラフ用カラム。
【請求項４】請求項１または２に記載の液体クロマト
グラフ装置を用いた液体クロマトグラフ測定方法であっ
て、入力手段により使用するカラムの保持力Ｔを入力する工
程と、入力されたカラム保持力Ｔに応じた溶離条件Ｅが選択さ
れる工程と、選択された溶離条件Ｅに基づいてクロマトグラフ測定が
行われる工程とを備える、液体クロマトグラフ測定方
法。
【請求項５】前記試料中の成分がヘモグロビン類であ
る、請求項４に記載の液体クロマトグラフ測定方法。