JP2003325194A - Method for producing cyanocarboxylic acid by microorganism - Google Patents

Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a method for producing a cyanocarboxylic acid by reacting microorganisms with a polynitrile compound of a raw material to provide a reaction mixture of the microorganisms containing the cyanocarboxylic acid of a product, and efficiently separating and purifying the cyanocarboxylic acid by an aqueous system without using an organic solvent by using solid-liquid separation under a mild condition. <P>SOLUTION: The method for producing the cyanocarboxylic acid by reacting the microorganisms with the polynitrile compound comprises (1) a step for carrying out the solid-liquid separation of the cyanocarboxylic acid in a solubilized state in the reaction liquid, and (2) a step for carrying out the solid- liquid separation of the cyanocarboxylic acid in an insolubilized state in the reaction liquid to separate and purify the product. <P>COPYRIGHT: (C)2004,JPO

Description

【発明の詳細な説明】Detailed Description of the Invention

【０００１】[0001]

【発明の属する技術分野】原料ポリニトリル化合物に微
生物を作用させ、生成物シアノカルボン酸を得る微生物
反応液から、有機溶媒を使用せず水系でマイルドな条件
下で固液分離を用いて効率的に分離精製するシアノカル
ボン酸の製造方法に関する。TECHNICAL FIELD The present invention relates to a raw material polynitrile compound, which is allowed to react with a microorganism to obtain a product cyanocarboxylic acid, from a microbial reaction solution which is efficiently used by solid-liquid separation under mild conditions in an aqueous system without using an organic solvent. The present invention relates to a method for producing a cyanocarboxylic acid which is separated and purified.

【０００２】本発明により得られるシアノカルボン酸
は、医薬、農薬、染料、その他化学品の合成原料として
有用である。The cyanocarboxylic acid obtained by the present invention is useful as a raw material for the synthesis of medicines, agricultural chemicals, dyes and other chemicals.

【０００３】[0003]

【従来の技術】近年における環境問題意識の高まり、省
エネルギー化の流れの中で、一般に化合物の生産におけ
る溶媒を考えた場合、有機溶媒を使用する系は、有機溶
媒の分離回収処理、含有機溶媒廃液処理、高温高圧処理
などが必要となり、水系と比べると安全面、環境面、コ
スト面において不利な系と言える。この傾向はシアノカ
ルボン酸の製造においても例外ではない。2. Description of the Related Art In recent years, with the increasing awareness of environmental problems and the trend toward energy saving, when considering a solvent in the production of a compound, a system using an organic solvent is a separation / recovery treatment of an organic solvent, a solvent containing a solvent. It requires waste liquid treatment, high-temperature and high-pressure treatment, etc., and is a disadvantageous system in terms of safety, environment, and cost compared to water-based systems. This tendency is no exception in the production of cyanocarboxylic acids.

【０００４】通常、水系下での有機合成反応によるシア
ノカルボン酸を得る方法としては、ポリニトリル化合物
を原料として金属触媒存在下、シアノ基を高温かつ強ア
ルカリで加水分解する方法等が行われている。しかしな
がらこれらの方法は、激しいｐＨ条件、温度条件である
ことによる危険性、反応の過程で生ずる廃棄物の処理、
高生成する副反応物の除去が困難であり、精製が多段に
及ぶ等の課題があり、決して安全面、環境面、コスト面
に優れてと言えるものではなかった。[0004] Usually, as a method for obtaining a cyanocarboxylic acid by an organic synthesis reaction in an aqueous system, a method of hydrolyzing a cyano group at a high temperature and a strong alkali in the presence of a metal catalyst using a polynitrile compound as a raw material is used. . However, these methods are dangerous due to violent pH and temperature conditions, treatment of waste generated in the course of the reaction,
It is difficult to remove the highly-reacted side reaction product, and there are problems such as purification in multiple stages, and it cannot be said that it is excellent in terms of safety, environment, and cost.

【０００５】また、最近の水系下の有機合成反応ではシ
アノベンズアミド化合物として亜硝酸塩存在下、強酸性
水単独系（特開２０００−８８６６９号公報）で行われ
高純度品を得ている。しかしながら反応液には無機プロ
トン酸が溶媒を兼ねて７０質量％以上の濃度に条件で使
用されているため、水系とは言え反応器その後の分離精
製設備における材質の耐酸性対策の必要性等、安全上の
問題を抱えている状況である。Further, in the recent organic synthesis reaction in an aqueous system, a highly pure product is obtained by being carried out in the presence of nitrite as a cyanobenzamide compound in a strongly acidic water alone system (JP-A 2000-88669). However, since the inorganic protonic acid is used as the solvent in the reaction solution at a concentration of 70% by mass or more under conditions, it is necessary to take acid resistance measures for the material in the separation and purification equipment after the reactor though it is an aqueous system. It is a situation where there are safety issues.

【０００６】以上のように、有機合成反応ではにおい
て、水系でかつマイルドな条件下でのシアノカルボン酸
の取得方法は見いだされておらず、反応から分離精製に
至るプロセスを組んだ場合、安全性、環境調和性を十分
満たすことができないのが現状である。As described above, in the organic synthesis reaction, a method for obtaining a cyanocarboxylic acid in an aqueous system under mild conditions has not been found, and it is safe when a process from reaction to separation and purification is set up. However, the current situation is that environmental friendliness cannot be fully satisfied.

【０００７】一方、有機合成反応によらず、水系でなお
かつマイルドな条件下で行う反応としては、微生物の持
つ選択的シアノ基加水分解能を利用したカルボニル化合
物の製法が知られている。しかしながら微生物反応液中
には、菌体、未反応原料などの固形不純物、培地由来、
誘導基質由来などの溶解不純物が含まれており、これら
不純物を水系でなおかつマイルドな条件下で効率的に分
離し高純度のシアノカルボン酸を取得することができ
る、安全性、環境調和性に優れたプロセスは、実用に供
されるには至っていない。On the other hand, as a reaction which is carried out in an aqueous system under mild conditions without depending on the organic synthesis reaction, a method for producing a carbonyl compound utilizing the selective cyano group hydrolysis of microorganisms is known. However, in the microbial reaction liquid, cells, solid impurities such as unreacted raw materials, medium-derived,
Dissolved impurities such as those derived from derived substrates are included, and these impurities can be efficiently separated in water and under mild conditions to obtain high-purity cyanocarboxylic acid, which is excellent in safety and environmental friendliness. The process has not been put to practical use.

【０００８】[0008]

【発明が解決しようとする課題】本発明は、上記状況に
鑑みてなされたものであり、生成物としてシアノカルボ
ン酸を得る微生物反応液から、有機溶媒を使用しない水
系でありかつマイルドなｐＨ条件下で効率的に高純度な
シアノカルボン類を取得できる分離精製プロセスを確立
することにより、反応から分離精製に至る全工程にわた
り安全性と環境調和性に優れた製造方法を提供すること
を課題とする。DISCLOSURE OF THE INVENTION The present invention has been made in view of the above circumstances, and it is an aqueous system that does not use an organic solvent and has a mild pH condition from a microbial reaction liquid to obtain cyanocarboxylic acid as a product. By establishing a separation and purification process that can efficiently obtain high-purity cyanocarboxylic acids under the following conditions, it is an object to provide a manufacturing method excellent in safety and environmental friendliness in all steps from reaction to separation and purification. To do.

【０００９】[0009]

【課題を解決するための手段】本発明者らは上記課題を
解決すべく鋭意検討を重ねた。特に、反応液中の成分の
水系下での溶解性に着目し、有機溶媒を使用しない水系
でありかつマイルドなｐＨ条件下において、微生物反応
液中からの生成物シアノカルボン酸の効率的な分離精製
を検討した結果、特に生成物回収工程で、反応液中のシ
アノカルボン類を可溶化状態で固液分離（工程（１））
することにより、菌体はもとより未反応原料を一段で除
去することだけでなく回収菌体再利用できることを見い
だした。Means for Solving the Problems The present inventors have made extensive studies to solve the above problems. In particular, paying attention to the solubility of the components in the reaction solution under water, and efficiently separating the product cyanocarboxylic acid from the microbial reaction solution under mild pH conditions without using an organic solvent. As a result of studying purification, solid-liquid separation in a solubilized state of cyanocarboxylic acids in the reaction solution, particularly in the product recovery step (step (1))
By doing so, it was found that not only the cells but also the unreacted raw material can be removed in one step, and the recovered cells can be reused.

【００１０】さらに、生成物精製工程では、回収溶解液
のpHを下げることにより生成物シアノカルボン酸を析出
させ、析出沈殿物は固液分離（工程（２））によりリン
スの後回収することにより、高純度のシアノカルボン酸
を得ることを見いだし、本発明を完成するに至った。Further, in the product refining step, the product cyanocarboxylic acid is precipitated by lowering the pH of the recovered solution, and the precipitated precipitate is rinsed by solid-liquid separation (step (2)) and then recovered. It was found that high-purity cyanocarboxylic acid was obtained, and the present invention was completed.

【００１１】すなわち本発明は、以下の事項に関する。 ［１］ポリニトリル化合物に微生物を作用させ、シアノ
カルボン酸を得る方法において、反応液中のシアノカル
ボン酸を可溶化状態で固液分離する工程（１）及び反応
液中のシアノカルボン酸を不溶化状態で固液分離する工
程（２）を含むことにより生成物を分離精製することを
特徴とするシアノカルボン酸の製法。 ［２］工程（１）において、反応液中の固形分である菌
体および残存ポリニトリル化合物を除去し、液側に生成
物シアノカルボン酸を回収することを特徴とする上記
［１］に記載のシアノカルボン酸の製法。That is, the present invention relates to the following items. [1] In the method for obtaining a cyanocarboxylic acid by allowing a microorganism to act on a polynitrile compound, a step (1) of solid-liquid separation of a cyanocarboxylic acid in a reaction solution in a solubilized state and an insolubilized state of the cyanocarboxylic acid in the reaction solution A process for producing a cyanocarboxylic acid, which comprises separating and purifying the product by including the step (2) of solid-liquid separation with. [2] In the step (1), the microbial cells and the remaining polynitrile compound which are solids in the reaction solution are removed, and the product cyanocarboxylic acid is recovered on the liquid side. Manufacturing method of cyanocarboxylic acid.

【００１２】［３］工程（１）の反応液のｐＨを５〜９
に調整することを特徴とする上記［２］に記載のシアノ
カルボン酸の製法。 ［４］工程（２）において、固形分として生成するシア
ノカルボン酸を回収することを特徴とする上記［１］な
いし［３］のいずれかに記載のシアノカルボン酸の製
法。 ［５］工程（２）の反応液のｐＨを５以下に調整するこ
とを特徴とする上記［４］に記載のシアノカルボン酸の
製法。[3] The pH of the reaction liquid in the step (1) is adjusted to 5 to 9
The method for producing a cyanocarboxylic acid according to the above [2], characterized in that [4] The method for producing a cyanocarboxylic acid according to any one of the above [1] to [3], wherein the cyanocarboxylic acid produced as a solid content is recovered in the step (2). [5] The method for producing a cyanocarboxylic acid according to the above [4], wherein the pH of the reaction liquid in the step (2) is adjusted to 5 or less.

【００１３】［６］工程（１）、ついで工程（２）の順
に実施することを特徴とする上記［１］ないし［５］の
いずれかに記載のシアノカルボン酸の製法。 ［７］反応から分離精製に至る工程を、水系で実施する
ことを特徴とする上記［１］ないし［６］のいずれかに
記載のシアノカルボン酸の製法。 ［８］Rhodococcus属微生物を用いることを特徴とす
る、上記［１］ないし［７］のいずれかに記載のシアノ
カルボン酸の製法。[6] The method for producing a cyanocarboxylic acid according to any one of the above [1] to [5], which is carried out in the order of step (1) and then step (2). [7] The process for producing a cyanocarboxylic acid according to any one of the above [1] to [6], wherein the steps from the reaction to the separation and purification are carried out in an aqueous system. [8] The method for producing a cyanocarboxylic acid according to any one of [1] to [7] above, which comprises using a microorganism of the genus Rhodococcus .

【００１４】［９］工程（１）に、膜濾過または遠心分
離を用いることを特徴とする上記［１］ないし［８］の
いずれかに記載のシアノカルボン酸の製法。 ［１０］膜濾過を用い、濾過膜に限外濾過膜及び／また
は精密濾過膜を用いることを特徴とする上記［９］に記
載のシアノカルボン酸の製法。 ［１１］膜の分画サイズが０．５μm以下であることを
特徴とする上記［９］または［１０］に記載のシアノカ
ルボン酸の製法。[9] The process for producing a cyanocarboxylic acid according to any one of the above [1] to [8], characterized in that membrane filtration or centrifugation is used in the step (1). [10] The method for producing a cyanocarboxylic acid according to the above [9], which uses membrane filtration and uses an ultrafiltration membrane and / or a microfiltration membrane as the filtration membrane. [11] The method for producing a cyanocarboxylic acid according to the above [9] or [10], wherein the fraction size of the membrane is 0.5 μm or less.

【００１５】［１２］クロスフロー型の限外濾過膜及び
／または精密濾過膜を用いることを特徴とする上記
［９］ないし［１１］のいずれかに記載のシアノカルボ
ン酸の製法。 ［１３］工程（１）に、遠心分離を用いることを特徴と
する上記［１］ないし［８］のいずれかに記載のシアノ
カルボン酸の製法。 ［１４］ポリニトリル化合物を反応液中に固形で供する
ことを特徴とする上記［１］ないし［１３］のいずれか
に記載のシアノカルボン酸の製法。[12] The method for producing a cyanocarboxylic acid according to any of the above [9] to [11], which comprises using a cross-flow type ultrafiltration membrane and / or a microfiltration membrane. [13] The method for producing a cyanocarboxylic acid according to any one of the above [1] to [8], wherein centrifugation is used in the step (1). [14] The method for producing a cyanocarboxylic acid according to any one of the above [1] to [13], wherein the polynitrile compound is provided as a solid in the reaction solution.

【００１６】［１５］ポリニトリル化合物が、粒径３０
０μm以下の粉体であることを特徴とする上記［１４］
に記載のシアノカルボン酸の製法。 ［１６］工程（２）に、遠心濾過、フィルタープレス濾
過および／または精密濾過を用いることを特徴とする上
記［１］ないし［１５］のいずれかに記載のシアノカル
ボン酸の製法。 ［１７］工程（２）において、得られた固形分に、水と
酸性水を供給し不純物を除去することを特徴とする上記
［１］ないし［１６］のいずれかに記載のシアノカルボ
ン酸の製法。[15] The polynitrile compound has a particle size of 30
The above [14] characterized by being a powder of 0 μm or less
The method for producing a cyanocarboxylic acid according to 1. [16] The method for producing a cyanocarboxylic acid according to any one of the above [1] to [15], wherein centrifugal filtration, filter press filtration and / or microfiltration are used in the step (2). [17] The cyanocarboxylic acid according to any one of the above [1] to [16], characterized in that in the step (2), water and acidic water are supplied to the obtained solid content to remove impurities. Manufacturing method.

【００１７】［１８］工程（２）の後、再度固液分離を
行い、不純物を除去することを特徴とする上記［１］な
いし［１７］のいずれかに記載のシアノカルボン酸の製
法。 ［１９］工程（２）により回収したシアノ安息香酸の含
水ケーキを、振動乾燥機および／または撹拌乾燥機を用
い、乾燥と粉砕を行うことを特徴とする上記［１］ない
し［１８］のいずれかに記載のシアノカルボン酸の製
法。 ［２０］シアノカルボン酸の含水率が１．０質量％以下
であり、粒度が５００μｍ以下であることを特徴とする
上記［１９］に記載のシアノカルボン酸の製法。[18] The method for producing a cyanocarboxylic acid according to any one of the above [1] to [17], wherein solid-liquid separation is performed again after the step (2) to remove impurities. [19] Any of the above-mentioned [1] to [18], wherein the water-containing cake of cyanobenzoic acid recovered in the step (2) is dried and pulverized by using a vibration dryer and / or a stirring dryer. The method for producing a cyanocarboxylic acid according to claim 1. [20] The method for producing a cyanocarboxylic acid according to the above [19], wherein the water content of the cyanocarboxylic acid is 1.0% by mass or less and the particle size is 500 μm or less.

【００１８】［２１］工程（１）により回収した反応液
中の微生物菌体を再使用することを特徴とする上記
［１］ないし［２０］のいずれかに記載のシアノカルボ
ン酸の製法。 ［２２］工程（１）により回収した反応液中の残存する
ポリニトリル化合物を再使用することを特徴とする上記
［１］ないし［２１］のいずれかに記載のシアノカルボ
ン酸の製法。[21] The method for producing a cyanocarboxylic acid according to any one of the above [1] to [20], wherein the microbial cells in the reaction solution recovered in step (1) are reused. [22] The method for producing a cyanocarboxylic acid according to any one of [1] to [21] above, wherein the remaining polynitrile compound in the reaction solution recovered in step (1) is reused.

【００１９】［２３］反応液の一部を、連続または断続
的に工程（１）に供することにより濾液側に生成物を回
収するとともに、濾過残分を再希釈し、反応と生成物の
回収を、並行または交互に実施することを特徴とする上
記［１］ないし［２２］のいずれかに記載のシアノカル
ボン酸の製法。[23] A part of the reaction solution is continuously or intermittently subjected to the step (1) to collect the product on the filtrate side, and the filter residue is rediluted to collect the reaction and the product. The method for producing a cyanocarboxylic acid according to any one of [1] to [22] above, which is carried out in parallel or alternately.

【００２０】［２４］ポリニトリル化合物が、化学式
（Ｉ）[24] The polynitrile compound has the chemical formula (I)

【００２１】[0021]

【化３】 [Chemical 3]

【００２２】[式中、Ｒは２価の、炭素数１〜８のアル
キル基、アリール基、アラルキル基（一方の結合手はア
ラルキル基のアリール環に結合手を有していてもよ
い。）または複素環基を表し、これらは１個ないし複数
のハロゲン、水酸基、アミノ基、シアノ基、または炭素
数１〜８のアルキル基で置換されていてもよい。]に示
す化合物であり、シアノカルボン酸が、対応する化学式
（ＩＩ）[In the formula, R is a divalent alkyl group having 1 to 8 carbon atoms, an aryl group, or an aralkyl group (one bond may have a bond on the aryl ring of the aralkyl group). Alternatively, it represents a heterocyclic group, which may be substituted with one or more halogen, a hydroxyl group, an amino group, a cyano group, or an alkyl group having 1 to 8 carbon atoms. ], A cyanocarboxylic acid having a corresponding chemical formula (II)

【００２３】[0023]

【化４】 [Chemical 4]

【００２４】（式中、Ｒは、上記Ｒと同じ意味を表
す。）に示す化合物であることを特徴とする上記［１］
ないし［２３］のいずれかに記載のシアノカルボン酸の
製法。[Wherein, R represents the same meaning as R above], and the above-mentioned [1].
To the method for producing a cyanocarboxylic acid according to any one of [23].

【００２５】［２５］分離精製して得られるシアノカル
ボン酸の純度が９９．０質量％以上であることを特徴と
する上記［１］ないし［２４］のいずれかに記載のシア
ノカルボン酸の製法。[25] The process for producing a cyanocarboxylic acid according to any one of the above [1] to [24], wherein the purity of the cyanocarboxylic acid obtained by separation and purification is 99.0% by mass or more. .

【００２６】[0026]

【発明の実施の形態】以下、本発明を詳細に説明する。BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION The present invention will be described in detail below.

【００２７】本発明は、微生物反応液から、有機溶媒を
使用しない全工程水系で、かつ耐酸性材質を必要としな
い範囲のマイルドなｐＨ条件下で実施可能な、安全性と
環境調和性に優れた分離精製方法を提供するものであ
り、効率的に高純度のシアノカルボン酸を取得すること
ができるものである。INDUSTRIAL APPLICABILITY The present invention can be carried out from a microbial reaction liquid in an entire process water system without using an organic solvent and under mild pH conditions in a range not requiring an acid resistant material, and is excellent in safety and environmental friendliness. And a method for separating and purifying the cyanocarboxylic acid, which is capable of efficiently obtaining high-purity cyanocarboxylic acid.

【００２８】本発明のシアノカルボン酸の製法におい
て、反応から分離精製に至る全工程とは、１）培養工
程、２）反応工程、３）生成物回収工程、４）生成物精
製工程および５）乾燥製品化工程を含むものである。In the cyanocarboxylic acid production method of the present invention, all steps from reaction to separation and purification include 1) culture step, 2) reaction step, 3) product recovery step, 4) product purification step and 5) It includes a dry product manufacturing process.

【００２９】培養工程とは微生物を増殖する工程であ
り、反応工程は生成物を取得する工程である。生成物回
収工程は、反応液中の固形分である菌体および未反応原
料ポリニトリル化合物を分離し、溶解生成物シアノカル
ボン酸を回収する固液分離工程（工程（１））からな
る。The culturing step is a step of growing a microorganism, and the reaction step is a step of obtaining a product. The product recovery step comprises a solid-liquid separation step (step (1)) of separating the bacterial cells and the unreacted raw material polynitrile compound, which are solids in the reaction solution, and recovering the dissolved product cyanocarboxylic acid.

【００３０】生成物精製工程は、溶解している生成物シ
アノカルボン酸を酸沈殿する結晶化と、析出した生成物
シアノカルボン酸の付着不純物除去と生成物シアノカル
ボン酸の含水ケーキを回収する固液分離工程（工程
（２））からなる。In the product refining step, crystallization for acid precipitation of the dissolved product cyanocarboxylic acid, removal of adhering impurities of the precipitated product cyanocarboxylic acid, and recovery of the water cake of product cyanocarboxylic acid are carried out. It comprises a liquid separation step (step (2)).

【００３１】通常、含水ケーキとは、水分を含むシアノ
カルボン酸の結晶を意味し、好ましくは含水率が５０〜
７０％のものであるが、特にこの数値に限定されるもの
ではない。Usually, the water-containing cake means crystals of water-containing cyanocarboxylic acid, and preferably has a water content of 50 to 50.
Although it is 70%, it is not particularly limited to this value.

【００３２】乾燥製品化工程は、生成物シアノカルボン
酸の含水ケーキを乾燥、粉砕する工程からなる。本発明
の製法において、培養工程は定法であれば特に限定はな
い。The dry product forming step comprises a step of drying and crushing a water-containing cake of the product cyanocarboxylic acid. In the production method of the present invention, the culture step is not particularly limited as long as it is a standard method.

【００３３】本発明において具体的に用いられる微生物
としては、ニトリル化合物のシアノ基を加水分解する能
力を持つ種々の微生物、例えば、ロドコッカス(Rhodoco
ccus)、ロドトルラ(Rhodotorulla)、フザリウム(Fusari
um)、シュードモナス(Pseudomonas)、アシネトバクター
(Acinetobacter)、バチルス(Bacillus)、ブレビバクテ
リウム(Brevibacterium) 、クレブシエラ(Klebsiell
a)、ミクロコッカス(Micrococcus)、バークホルデリア
(Burkholderia)、コリネバクテリウム(Corynebacteriu
m)、ノカルディア(Nocardia)、アエロモナス(Aeromona
s)、アグロバクテリウム(Agrobacterium)、アクロモバ
クター(Achromobacter)、アスペルギルス(Aspergillu
s)、リゾビウム(Rhizobium) 等の各属に属する微生物が
挙げられる。The microorganisms specifically used in the present invention include various microorganisms capable of hydrolyzing the cyano group of the nitrile compound, for example, Rhodococcus (Rhodococcus) .
ccus ), Rhodotorulla , Fusari
um ), Pseudomonas ( Pseudomonas ), Acinetobacter
(Acinetobacter), Bacillus (Bacillus), Brevibacterium (Brevibacterium), Klebsiella (Klebsiell
a ), Micrococcus , Burkholderia
( Burkholderia ), Corynebacteriu
m ), Nocardia , Aeromona
s ), Agrobacterium , Achromobacter , Aspergillu
s), include microorganisms belonging to the genus such as Rhizobium (Rhizobium).

【００３４】またこれらの微生物は、野生株または変異
株のいずれでも良いし細胞融合もしくは遺伝子操作など
の遺伝子的手法により誘導される組み替え株等も用いる
ことができる。These microorganisms may be wild strains or mutant strains, and recombinant strains derived by genetic techniques such as cell fusion or gene manipulation can also be used.

【００３５】これら微生物の中でも、特に触媒活性およ
び反応選択性が高いことから、ロドコッカス(Rhodococc
us)属微生物が好ましく用いられる。Among these microorganisms, Rhodococc ( Rhodococc) has a particularly high catalytic activity and reaction selectivity.
Us ) microorganisms are preferably used.

【００３６】微生物を培養するための培地炭素源として
は、グルコースやシュークロース、フルクトース、廃糖
蜜等の糖類；エタノールや酢酸、クエン酸、コハク酸、
乳酸、安息香酸、脂肪酸などの有機物又はこれらのアル
カリ金属塩；ｎ−パラフィンなどの脂肪族炭化水素類；
芳香族炭化水素類；また例えばペプトン、肉エキス、魚
エキス、大豆粉、ふすま等の天然有機物を、単独、ある
いはこれらの組み合わせにより、通常０．０１ｗ／ｖ％
〜３０ｗ／ｖ％、望ましくは０．１ｗ／ｖ％〜１０ｗ／
ｖ％程度の濃度で用いることができる。Medium carbon sources for culturing microorganisms include sugars such as glucose, sucrose, fructose and molasses; ethanol, acetic acid, citric acid, succinic acid,
Organic substances such as lactic acid, benzoic acid, and fatty acids or their alkali metal salts; Aliphatic hydrocarbons such as n-paraffins;
Aromatic hydrocarbons; and natural organic substances such as peptone, meat extract, fish extract, soybean flour, and bran, alone or in combination, usually at 0.01 w / v%
-30 w / v%, desirably 0.1 w / v% -10 w /
It can be used at a concentration of about v%.

【００３７】微生物を培養するための培地窒素源として
は、例えば硫酸アンモニウム、リン酸アンモニウム、硝
酸ナトリウム、硝酸カリウムなどの無機窒素化合物；ま
た尿素、尿酸などの含窒素有機物；ペプトン、肉エキ
ス、魚エキス、大豆粉、等の天然有機物を単独、あるい
はこれらの組み合わせにより、通常０．０１ｗ／ｖ％〜
３０ｗ／ｖ％、望ましくは０．１ｗ／ｖ％〜１０ｗ／ｖ
％程度の濃度で用いることができる。Examples of medium nitrogen sources for culturing microorganisms include inorganic nitrogen compounds such as ammonium sulfate, ammonium phosphate, sodium nitrate and potassium nitrate; nitrogen-containing organic substances such as urea and uric acid; peptone, meat extract, fish extract, Natural organic substances such as soybean flour and the like are used alone or in combination, and usually 0.01 w / v% to
30 w / v%, desirably 0.1 w / v% to 10 w / v
It can be used at a concentration of about%.

【００３８】これら菌株によりシアノ基が加水分解を受
けカルボン酸類となるような反応原料は、培養中にあら
かじめ添加しておくことにより、反応の進行と共に加水
分解により遊離するアンモニウムイオンが微生物の窒素
源となることから有用である。The reaction raw materials whose cyano groups are hydrolyzed by these strains to form carboxylic acids are added in advance during the culture so that ammonium ions liberated by hydrolysis as the reaction progresses are nitrogen sources of the microorganism. Therefore, it is useful.

【００３９】さらに必要に応じて、リン酸２水素カリウ
ム等のリン酸塩、硫酸マグネシウム、硫酸第一鉄、酢酸
カルシウム、塩化マンガン、硫酸銅、硫酸亜鉛、硫酸コ
バルト、硫酸ニッケルなどの金属塩が菌の生育改善のた
めに添加される。添加濃度は培養条件により異なるが、
通常、リン酸塩に関しては０．０１ｗ／ｖ％〜５ｗ／ｖ
％、マグネシウム塩においては１０ｐｐｍ〜１ｗ／ｖ
％、他の化合物では０．１ｐｐｍ〜１０００ｐｐｍ程度
である。Further, if necessary, a phosphate such as potassium dihydrogen phosphate, a metal salt such as magnesium sulfate, ferrous sulfate, calcium acetate, manganese chloride, copper sulfate, zinc sulfate, cobalt sulfate and nickel sulfate may be added. It is added to improve the growth of bacteria. The concentration of addition depends on the culture conditions,
Usually 0.01 w / v% to 5 w / v for phosphate
%, 10 ppm to 1 w / v in magnesium salt
%, For other compounds, it is about 0.1 ppm to 1000 ppm.

【００４０】また、選択する培地により、ビタミン類、
アミノ酸、核酸などの供給源として例えば酵母エキス、
カザミノ酸、酵母核酸等を１ｐｐｍ〜１００ｐｐｍ程度
添加することにより、菌の生育を改善することができ
る。Depending on the medium selected, vitamins,
As a source of amino acids, nucleic acids, etc., for example, yeast extract,
The growth of the bacterium can be improved by adding about 1 ppm to 100 ppm of casamino acid, yeast nucleic acid and the like.

【００４１】また、菌のシアノ基に対する反応性を向上
するために、シアノ基加水分解酵素の誘導源として、培
養中にニトリル化合物、例えばベンゾニトリルなどを１
０ｐｐｍ〜１ ｗ／ｖ％添加することは有用である。さ
らに、誘導源をかねて、反応原料となるニトリル化合物
を、培養開始時点から添加しておくことも有用である。Further, in order to improve the reactivity of the bacterium to the cyano group, a nitrile compound such as benzonitrile is used as an inducer of the cyano group hydrolase during the culture.
It is useful to add 0 ppm to 1 w / v%. Furthermore, it is also useful to add a nitrile compound, which serves as a reaction raw material, also as an induction source, from the start of culture.

【００４２】いずれの成分を用いた場合も培地のｐＨ
は、５〜９、好ましくは６〜８に調整されることが望ま
しい。The pH of the medium is the same regardless of which component is used.
Is preferably adjusted to 5-9, preferably 6-8.

【００４３】反応工程は、前記微生物を用い、通常のシ
アノ基加水分解活性を持つ微生物によるカルボン酸生成
反応と同様の、一般的な微生物を用いた変換反応として
実施することができる。The reaction step can be carried out as a conversion reaction using a general microorganism, which is similar to the reaction for producing a carboxylic acid by a microorganism having an ordinary cyano group-hydrolyzing activity, using the above-mentioned microorganism.

【００４４】例えば、１％ペプトンなどの栄養培地で、
２０℃〜４０℃、好ましくは２５℃〜３０℃の温度で２
４時間程度培養し、得られた培養液に、ニトリル化合物
を１ｐｐｍ〜５０％、好ましくは１０ｐｐｍ〜１０％添
加し、引き続き同様の温度で１時間〜２００時間程度撹
拌し続けることにより達せられる。For example, in a nutrient medium such as 1% peptone,
2 at a temperature of 20 ° C to 40 ° C, preferably 25 ° C to 30 ° C
It can be achieved by culturing for about 4 hours, adding 1 ppm to 50%, preferably 10 ppm to 10% of a nitrile compound to the obtained culture solution, and continuing stirring at the same temperature for about 1 hour to 200 hours.

【００４５】さらに反応液中での分散性を改善するよう
な界面活性剤等を添加することもできる。また反応の進
行によるポリニトリル化合物の消費に応じて、連続的あ
るいは間欠的にニトリル化合物を添加してもよく、この
場合のニトリル化合物の反応液中濃度は前記の限りでは
ない。Further, a surfactant or the like which improves the dispersibility in the reaction solution may be added. Further, the nitrile compound may be added continuously or intermittently depending on the consumption of the polynitrile compound as the reaction proceeds. In this case, the concentration of the nitrile compound in the reaction solution is not limited to the above.

【００４６】本発明のシアノカルボン酸の製法におい
て、培養液に添加する原料ポリニトリル化合物は通常難
水溶性であるが、反応液中では全量が溶解している必要
はなく、分散状態で存在していればよい。したがって、
添加するポリニトリル化合物の投入方法は、溶液に事前
に懸濁して添加することも、固形のまま直接反応液中に
添加することもできるが、製造工数低減の観点から固形
で投入することが好ましい。In the method for producing a cyanocarboxylic acid of the present invention, the raw material polynitrile compound added to the culture solution is usually poorly water-soluble, but it is not necessary that the entire amount is dissolved in the reaction solution, and it exists in a dispersed state. Just do it. Therefore,
Regarding the method of adding the polynitrile compound to be added, it can be added by suspending it in a solution in advance or directly adding it to the reaction solution as it is in a solid state, but it is preferable to add it in a solid state from the viewpoint of reducing the number of manufacturing steps.

【００４７】また固形ポリニトリル化合物に前処理とし
て粉砕を施すと、反応液中での分散性が増し反応効率が
向上する。特に生成物回収工程における固液分離に膜濾
過を行う場合は、膜モジュール内での固形分による目詰
まり防止の効果も併せて得ることができる。ニトリル化
合物の粒径は３００μｍ以下、好ましくは１００μm以
下まで粉砕すると目詰まり防止に効果的である。When the solid polynitrile compound is pulverized as a pretreatment, the dispersibility in the reaction solution is increased and the reaction efficiency is improved. Particularly, when membrane filtration is performed for solid-liquid separation in the product recovery step, it is possible to obtain the effect of preventing clogging due to the solid content in the membrane module. It is effective to prevent clogging by pulverizing the nitrile compound to a particle size of 300 μm or less, preferably 100 μm or less.

【００４８】本発明のシアノカルボン酸の製法におい
て、反応工程において用いる槽は、反応液中の菌体と反
応原料ポリニトリル化合物が分散混合できる機能があれ
ば特に限定はない。従って反応は培養に用いた発酵槽を
引き続き用いて行うこともできるし、生成物回収工程に
おける固液分離（工程（１））に膜濾過を行う場合は膜
の循環槽を用いて反応と濾過膜を同一槽で連続的に行う
こともできる。In the method for producing a cyanocarboxylic acid of the present invention, the tank used in the reaction step is not particularly limited as long as it has the function of dispersing and mixing the bacterial cells in the reaction solution and the polynitrile compound as the starting material for the reaction. Therefore, the reaction can be carried out by continuing to use the fermentation tank used for the culture, and when the solid-liquid separation (step (1)) in the product recovery step is performed by the membrane filtration, the reaction and the filtration are performed by using the membrane circulation tank. Membranes can also be run continuously in the same bath.

【００４９】反応生成物の性質によっては、反応液中に
生成物が蓄積することにより、反応速度が低下する場合
がある。このような場合は、生成物の濃度に応じて反応
液中に、水、生理食塩水、培養液のpHと同様に調整され
たリン酸、酢酸、ホウ酸、トリス（ヒドロキシメチル）
アミノメタンなどとこれらの塩よりなる緩衝液（以下
「反応緩衝液」と言う。）を追加し連続的に希釈してい
く方法や、反応初期からあらかじめ反応液を水、生理食
塩水、反応緩衝液で希釈する方法は好適である。Depending on the nature of the reaction product, the reaction rate may decrease due to the accumulation of the product in the reaction solution. In such a case, phosphoric acid, acetic acid, boric acid, tris (hydroxymethyl), which has been adjusted in the same manner as the pH of water, physiological saline, and culture solution, depending on the concentration of the product, is used.
A method of continuously diluting by adding a buffer solution (hereinafter referred to as "reaction buffer solution") consisting of aminomethane and these salts, or by preliminarily reacting the reaction solution with water, physiological saline, or reaction buffer from the beginning of the reaction. A method of diluting with a liquid is suitable.

【００５０】また反応速度が低下した時点で菌を分取
し、上清を生産物溶液として回収し、分取した菌は再度
反応原料を含む溶液あるいは懸濁液に戻すことにより、
反応速度を回復することができる。これらの方法は、微
生物のニトリル加水分解活性が維持される範囲におい
て、何回でも繰り返すことができる。When the reaction rate decreases, the bacteria are collected, the supernatant is recovered as a product solution, and the collected bacteria are returned to the solution or suspension containing the reaction raw material again.
The reaction rate can be restored. These methods can be repeated as many times as long as the nitrile hydrolysis activity of the microorganism is maintained.

【００５１】本発明における、製法の特長の一つは、反
応の前後すなわち原料ポリニトリルと生成物カルボン酸
の間で、ｐＨに対する挙動が大幅に変化することを活用
する点にある。例えば、フタロニトリルの加水分解反応
で得られるシアノ安息香酸は、ｐＨ５以上の条件では解
離し易溶である一方、原料フタロニトリルはどのｐＨ領
域においても水にほとんど溶けないOne of the features of the production method in the present invention is to utilize the fact that the behavior with respect to pH changes significantly before and after the reaction, that is, between the starting polynitrile and the product carboxylic acid. For example, cyanobenzoic acid obtained by the hydrolysis reaction of phthalonitrile is dissociated and easily dissolved under the condition of pH 5 or higher, while the raw material phthalonitrile is hardly soluble in water in any pH range.

【００５２】したがって生成物回収工程においては、反
応後のｐＨ５〜９、望ましくは６〜８の状態で固液分離
（工程（１））を行うことにより液側に生成物シアノカ
ルボン酸を回収することができ、反応液中の菌体だけだ
けでなく未反応原料ポリニトリル化合物も同時に効率的
に除去することができる。この場合の固液分離方法に特
に限定はなく、例えば遠心分離、遠心濾過、フィルター
プレス濾過、膜濾過などの方法で実施可能である。ただ
し遠心分離、遠心濾過、フィルタープレス濾過等を用い
る場合には、固形分のリークの可能性がある。Therefore, in the product recovery step, the product cyanocarboxylic acid is recovered on the liquid side by performing solid-liquid separation (step (1)) in the state of pH 5-9, preferably 6-8 after the reaction. Thus, not only the cells in the reaction solution but also the unreacted raw material polynitrile compound can be efficiently removed at the same time. The solid-liquid separation method in this case is not particularly limited, and for example, centrifugation, centrifugal filtration, filter press filtration, membrane filtration or the like can be performed. However, when centrifugal separation, centrifugal filtration, filter press filtration or the like is used, there is a possibility of leakage of solid content.

【００５３】また遠心濾過およびフィルタープレス濾過
のような濾布による濾過機では濾過性改善のため、珪藻
土等の濾過助剤を添加する必要がありそれが菌体の反応
系への再利用の効率を妨げることもある。従って濾液側
への固形分のリークが皆無である膜濾過を用いることが
好ましい。Further, in a filter using a filter cloth such as centrifugal filtration and filter press filtration, it is necessary to add a filter aid such as diatomaceous earth in order to improve filterability, which is the efficiency of reuse of bacterial cells in the reaction system. May interfere with. Therefore, it is preferable to use membrane filtration in which there is no leakage of solids to the filtrate side.

【００５４】固液分離（工程（１））に用いる膜濾過装
置において、膜の種類としては、精密濾過及び／または
限外濾過等を使用することができる。膜の材質は、特に
限定はなく、例えばポリオレフィン、ポリスルフォン、
ポリアクリロニトリル、ポリビニリデンジフルオライド
およびテフロン（Dupont社登録商標）等の有機膜でも、
セラミック等の無機材質の膜でも使用可能である。In the membrane filtration device used for solid-liquid separation (step (1)), as the type of membrane, microfiltration and / or ultrafiltration can be used. The material of the film is not particularly limited, for example, polyolefin, polysulfone,
Organic films such as polyacrylonitrile, polyvinylidene difluoride and Teflon (registered trademark of Dupont)
It is also possible to use a film made of an inorganic material such as ceramics.

【００５５】膜型式についてもクロスフロー型、平膜型
どちらでも使用可能である。ただし膜の分画サイズは、
０．５μｍ以上では菌体成分がリークする可能性がある
ため０．５μｍ以下が好ましい。As for the membrane type, either a cross flow type or a flat membrane type can be used. However, the fraction size of the membrane is
If it is 0.5 μm or more, the bacterial cell component may leak, so 0.5 μm or less is preferable.

【００５６】また処理能力を考慮した場合、膜の種類は
透過流束が格段に大きい精密濾過膜の方が限外濾過膜よ
り好ましい。さらに濾過面耐閉塞性を考慮すると、膜型
式は閉塞しにくく処理液の濃縮限界が高いクロスフロー
型の方が非常に有利である。特に処理能力と耐菌体リー
ク性を考慮した場合には、分画サイズは０．１０〜０．
２５μmの精密濾過膜がより好ましい。In consideration of the treatment capacity, the type of membrane is preferably a microfiltration membrane having a remarkably large permeation flux rather than an ultrafiltration membrane. Further, in consideration of the clogging resistance of the filtration surface, the cross-flow type, which is difficult to clog the membrane type and has a high concentration limit of the treatment liquid, is very advantageous. In particular, when considering the processing capacity and the bacterial cell leak resistance, the fraction size is 0.10 to 0.
A 25 μm microfiltration membrane is more preferred.

【００５７】固液分離（工程（１））として行う膜濾過
の処理液条件に関しては下記の通りである。The processing liquid conditions for the membrane filtration performed as the solid-liquid separation (step (1)) are as follows.

【００５８】処理液ｐＨが５を下回る場合、生成物シア
ノカルボン酸が析出し濃縮側に残ることになり、回収率
低下を招く結果となる。このため膜処理開始から終了ま
での間のｐＨは、５以上、好ましくは６〜８に保たれる
ことが望ましく、水酸化ナトリウム、アンモニアなどを
用い適宜調整してもかまわない。また、処理液温度は酵
素の反応速度の維持および菌体の溶菌防止の観点から、
１５〜４０℃の範囲で制御するのが好ましい。When the pH of the treatment liquid is lower than 5, the product cyanocarboxylic acid is deposited and remains on the concentration side, resulting in a decrease in recovery rate. Therefore, the pH from the start to the end of the membrane treatment is preferably kept at 5 or higher, preferably 6 to 8, and may be adjusted appropriately using sodium hydroxide, ammonia or the like. In addition, the temperature of the treatment solution is from the viewpoint of maintaining the reaction rate of the enzyme and preventing lysis of bacterial cells,
It is preferable to control in the range of 15 to 40 ° C.

【００５９】固液分離（工程（１））として行う膜濾過
運転条件を以下に示す。精密濾過膜は限外濾過膜より分
画サイズが大きいため、空孔への固形分の付着閉塞が起
こりやすく、透過流束が低減しやすい傾向にある。Membrane filtration operation conditions for solid-liquid separation (step (1)) are shown below. Since the microfiltration membrane has a larger fraction size than the ultrafiltration membrane, the solid content is likely to be clogged and blocked in the pores, and the permeation flux tends to be reduced.

【００６０】この傾向を解消するため、精密濾過膜では
限外濾過膜より濾過膜面に水平方向の線速度を上げ、濾
過膜面に垂直方向の運転圧力を下げた条件を設定する。In order to eliminate this tendency, in the microfiltration membrane, conditions are set such that the linear velocity in the horizontal direction is increased over the ultrafiltration membrane and the operating pressure in the vertical direction is reduced over the filtration membrane surface.

【００６１】精密濾過膜では、例えば孔経０．１μｍ、
有効膜面積２．９ｍ²、中空糸膜内径１．９ｍｍ、モジ
ュール長１１２６ｍｍ、モジュール経８９ｍｍの膜モジ
ュール（商品名：マイクローザＰＳＶ３１３、旭化成工
業株式会社製）を用いる場合、運転圧力は入口／出口＝
０．１０〜０．２０Ｐａ／０．０２〜０．０５Ｐａ、線
速度は１〜２ｍ／ｓで行うことが好ましい。In the microfiltration membrane, for example, the pore size is 0.1 μm,
When using a membrane module (trade name: Microza PSV313, manufactured by Asahi Kasei Co., Ltd.) having an effective membrane area of 2.9 m ² , a hollow fiber membrane inner diameter of 1.9 mm, a module length of 1126 mm, and a module length of 89 mm, the operating pressure is an inlet / outlet. =
It is preferable that the pressure is 0.10 to 0.20 Pa / 0.02 to 0.05 Pa and the linear velocity is 1 to 2 m / s.

【００６２】また限外濾過膜では、例えば分画分子量１
００００、有効膜面積４．５ｍ²、中空糸膜内径１．４
ｍｍ、モジュール長１１２９ｍｍ、モジュール経８９ｍ
ｍの膜モジュール（商品名：マイクローザＳＬＰ３０５
３、旭化成工業株式会社製）を用いる場合、運転圧力は
入口／出口＝０．０２〜０．０５Ｐａ／０．０１〜０．
０４Ｐａ、線速度０．５〜１．５ｍ／ｓで行うことが好
ましい。In the case of an ultrafiltration membrane, for example, a molecular weight cutoff of 1
0000, effective membrane area 4.5 m ² , hollow fiber membrane inner diameter 1.4
mm, module length 1129 mm, module length 89 m
Membrane module (trade name: Microsa SLP305
3, Asahi Kasei Kogyo Co., Ltd.), the operating pressure is 0.02 / 0.05 Pa / 0.01-0.
It is preferable to perform it at 04 Pa and a linear velocity of 0.5 to 1.5 m / s.

【００６３】また逆洗条件は、圧力を循環側平均圧力よ
り０．０５Ｐａ高くし、サイクルをＯＦＦ／ＯＮ＝５〜
１０分／５〜１０秒とすることが好ましい。逆洗サイク
ルは透過流束の傾向をみて、閉塞傾向になった場合は添
加の頻度を随時上げるように調整するのがよい。As for the backwashing condition, the pressure is set to 0.05 Pa higher than the average pressure on the circulation side, and the cycle is turned OFF / ON = 5 to 5.
It is preferably 10 minutes / 5 to 10 seconds. In the backwash cycle, it is preferable to adjust the frequency of addition as needed when the tendency of the permeation flux tends to be observed and the tendency of blockage tends to occur.

【００６４】固液分離（工程（１））での回収率向上の
ための処理条件として、固形分側に溶液添加を行い、固
形分側に残存する生成物シアノカルボン酸を液側に回収
することができる。As processing conditions for improving the recovery rate in the solid-liquid separation (step (1)), a solution is added to the solid content side, and the product cyanocarboxylic acid remaining on the solid content side is recovered to the liquid side. be able to.

【００６５】溶液は水、生理食塩水、反応緩衝液など、
添加後のｐＨが５以上を維持できる溶液を用いることが
できる。また溶液添加の方法としては、反応液固形分の
分離が完全もしくは大部分完了した時点で実施すること
が好ましい。The solution is water, physiological saline, reaction buffer, etc.
A solution that can maintain the pH after addition of 5 or more can be used. As a method of adding a solution, it is preferable to carry out the method when the solid content of the reaction solution is completely or almost completely separated.

【００６６】生成物シアノカルボン酸の回収率は固形分
の濃縮率と加水量の調整により決まるが、本発明におい
ては、９５％以上の回収率を得ることができる。例えば
精密濾過においては、生成物シアノカルボン酸の膜透過
率が１００％であり、濃縮限界時の濃縮液の湿体固形分
が２０質量％であるので、濃縮限界付近まで濃縮した
後、適当量加水を連続または回分で行えば、生成物シア
ノカルボン酸の効率的回収をすることができる。The recovery rate of the product cyanocarboxylic acid is determined by adjusting the solid content concentration rate and the amount of water added, but in the present invention, a recovery rate of 95% or more can be obtained. For example, in microfiltration, the product cyanocarboxylic acid has a membrane permeability of 100%, and the wet solid content of the concentrate at the concentration limit is 20% by mass. If the water is added continuously or batchwise, the product cyanocarboxylic acid can be efficiently recovered.

【００６７】膜濾過でのより効率的な回収の達成には、
固形分負荷低減による濃縮限界向上、中空糸内目詰まり
抑制の観点から、反応液中の残存原料ポリニトリル量を
低く抑制することが効果的である。To achieve more efficient recovery in membrane filtration,
From the viewpoint of improving the concentration limit by reducing the solid content load and suppressing the clogging in the hollow fiber, it is effective to suppress the amount of the residual raw material polynitrile in the reaction liquid to a low level.

【００６８】固液分離（工程（１））で得られる菌体と
未反応原料ポリニトリル化合物を含む固形分は、反応原
料であるニトリル化合物を含む水、生理食塩水、反応緩
衝液に再度懸濁し、反応に再利用することが出来る。反
応中のpHは、十分な濃度の反応緩衝液を用いる場合にお
いては通常維持されうるが、反応の進行により上記pHを
逸脱する場合においては、水酸化ナトリウム、アンモニ
アなどのｐH調整剤を用い適宜調整することが望まし
い。The solid content containing the microbial cells and the unreacted raw material polynitrile compound obtained in the solid-liquid separation (step (1)) was resuspended in water containing the reaction raw material, the physiological saline, and the reaction buffer. , Can be reused in reactions. The pH during the reaction can be usually maintained when a reaction buffer having a sufficient concentration is used, but when the pH deviates from the above due to the progress of the reaction, a pH adjusting agent such as sodium hydroxide or ammonia is used as appropriate. It is desirable to adjust.

【００６９】本発明において、反応に用いる槽は、反応
液中の菌体と反応原料ポリニトリル化合物が分散混合で
きる機能があれば特に限定はない。例えば膜装置の循環
タンクはポンプで液が循環できるので好ましく用いるこ
とができる。In the present invention, the tank used for the reaction is not particularly limited as long as it has a function of dispersing and mixing the bacterial cells in the reaction solution and the polynitrile compound as the reaction raw material. For example, the circulation tank of the membrane device can be preferably used because the liquid can be circulated by a pump.

【００７０】膜濾過の場合、固形分が分散した状態で存
在している濃縮液を膜装置循環槽内で直接希釈した後、
ポンプの液循環により直ちに再反応を開始することがで
きる。In the case of membrane filtration, the concentrated liquid existing in the state where the solid content is dispersed is directly diluted in the membrane device circulation tank,
The re-reaction can be started immediately by the liquid circulation of the pump.

【００７１】すなわち、膜濾過では固液分離（工程
（１））と反応を並行および／または交互に連続的且つ
効率的に実施できるというメリットを有する。これらの
方法は、微生物のニトリル加水分解活性が維持される範
囲において、何回でも繰り返すことができる。再反応さ
せることは反応液中の夾雑物を低減し、後の生成物の分
取を簡便にするために有用である。That is, the membrane filtration has an advantage that the solid-liquid separation (step (1)) and the reaction can be carried out in parallel and / or alternately continuously and efficiently. These methods can be repeated as many times as long as the nitrile hydrolysis activity of the microorganism is maintained. Re-reacting is useful for reducing impurities in the reaction solution and simplifying the subsequent fractionation of the product.

【００７２】生成物精製工程における酸晶析では、まず
固液分離（工程（１））で回収された生成物シアノカル
ボン酸溶液を、酸を添加することによりｐＨを低下さ
せ、生成物シアノカルボン酸を析出させる。用いる酸と
しては、硝酸、硫酸、塩酸、リン酸等の無機酸または酢
酸、ギ酸等の有機酸等が挙げられる。酸の添加方法は均
一に混合できるものであればよく、特に限定されるもの
ではない。In acid crystallization in the product purification step, first, the pH of the product cyanocarboxylic acid solution recovered in the solid-liquid separation (step (1)) is lowered by adding an acid to obtain the product cyanocarboxylic acid. Precipitate the acid. Examples of the acid used include inorganic acids such as nitric acid, sulfuric acid, hydrochloric acid and phosphoric acid, and organic acids such as acetic acid and formic acid. The method for adding the acid is not particularly limited as long as it can be uniformly mixed.

【００７３】溶液のｐＨは５以下への調整が必要であ
り、好ましくは２〜３に調整するのがよい。これによ
り、生成物シアノカルボン酸の未結晶分を低減させるこ
と、次工程である固液分離（工程（２））においてより
良好な分離性が得られるフロックを形成することが可能
になる。また同様の理由により、溶液の生成物シアノカ
ルボン酸濃度は０．１〜１０質量％、好ましくは１．０
〜３．０質量％が好ましい。The pH of the solution needs to be adjusted to 5 or less, preferably 2-3. As a result, it becomes possible to reduce the uncrystallized content of the product cyanocarboxylic acid and to form flocs capable of obtaining better separability in the next step of solid-liquid separation (step (2)). For the same reason, the concentration of the product cyanocarboxylic acid in the solution is 0.1 to 10% by mass, preferably 1.0.
〜3.0 mass% is preferred.

【００７４】固液分離（工程（２））においては、酸晶
析したシアノカルボン酸含有酸性析出液を固液分離し、
結晶に付着している不純物をリンスにより除去した後、
含水ケーキとして回収することができる。In the solid-liquid separation (step (2)), the acid-crystallized cyanocarboxylic acid-containing acidic precipitation liquid is subjected to solid-liquid separation,
After removing impurities adhering to the crystals by rinsing,
It can be collected as a water-containing cake.

【００７５】酸性条件下での固液分離（工程（２））の
方法は、遠心分離、遠心濾過、フィルタープレス濾過、
膜濾過などの方法が使用可能である。生成物シアノカル
ボン酸の回収効率、付着不純物の除去効率の優位性およ
び回収シアノカルボン酸の含水率の抑制等を考慮する
と、濾布型固液分離が有利であり、特にフィルタープレ
スおよび／または遠心濾過の使用が好ましい。The solid-liquid separation (step (2)) under acidic conditions includes centrifugation, centrifugal filtration, filter press filtration,
A method such as membrane filtration can be used. In consideration of the recovery efficiency of the product cyanocarboxylic acid, the superiority of the removal efficiency of adhering impurities and the suppression of the water content of the recovered cyanocarboxylic acid, the filter cloth type solid-liquid separation is advantageous, and particularly filter press and / or centrifugation The use of filtration is preferred.

【００７６】固液分離（工程（２））では、酸性析出液
をフィルタープレスおよび／または遠心濾過に供し結晶
を濾過面に回収後、水と酸性水を交互に供給して結晶に
付着している不純物を除去する。生成物シアノカルボン
酸の結晶はアニオン性であるためアンモニウムイオンな
どのカチオン性不純物は、結晶に吸着し水供給では除去
効率が低い。In the solid-liquid separation (step (2)), the acidic precipitation liquid is subjected to filter press and / or centrifugal filtration to collect crystals on the filtration surface, and then water and acidic water are alternately supplied to adhere to the crystals. Remove impurities. Since crystals of the product cyanocarboxylic acid are anionic, cationic impurities such as ammonium ions are adsorbed on the crystals and removal efficiency is low when water is supplied.

【００７７】酸性水を供給することにより、カチオン性
不純物の結晶への吸着を解除し効果的な除去を行うこと
ができる。酸性水には硝酸、硫酸、塩酸、リン酸等の無
機酸または酢酸、ギ酸等の有機酸を用いる。また酸の濃
度は、酸を濾過面上の結晶に十分に効率的に浸透させる
ためには低い方が好ましく、０．００５〜０．０２０規
定が好ましい。By supplying the acidic water, adsorption of the cationic impurities to the crystals can be released and effective removal can be performed. As the acidic water, an inorganic acid such as nitric acid, sulfuric acid, hydrochloric acid or phosphoric acid or an organic acid such as acetic acid or formic acid is used. The concentration of the acid is preferably low in order to allow the acid to permeate the crystals on the filtration surface sufficiently efficiently, and is preferably 0.005 to 0.020 N.

【００７８】用いる酸の量は、結晶中に付着しているカ
チオン性不純物のｍｏｌ数に対して１〜５倍のｍｏｌ量
を使用するのがよい。水と酸性水の供給は、交互に何度
繰り返してもよいが、少なくとも最後の供給は、結晶中
の酸を除去するため水で行うことが必要である。水の供
給量は濾液中の不純物の種類や量、所望の精製度や回収
率等に合わせて適宜調整する。The amount of the acid used is preferably 1 to 5 times the molar amount of the cationic impurities attached to the crystal. The supply of water and acidic water may be repeated alternately many times, but at least the last supply needs to be performed with water to remove the acid in the crystals. The amount of water supplied is appropriately adjusted according to the type and amount of impurities in the filtrate, the desired degree of purification, the recovery rate, and the like.

【００７９】固液分離（工程（２））において、結晶に
付着している不純物の除去が目標の濃度以下に低減しな
い場合は、回収した生成物シアノカルボン酸の含水ケー
キを、水で再懸濁した後再び固液分離を行うことによ
り、付着している不純物を除去してもよい。In the solid-liquid separation (step (2)), if the removal of impurities adhering to the crystals does not decrease below the target concentration, the recovered water cake of cyanocarboxylic acid is resuspended with water. The impurities adhering may be removed by performing solid-liquid separation again after becoming turbid.

【００８０】この場合、懸濁に使用する水の量は固液分
離に支障をきたさない限りにおいて任意でかまわない。
また固液分離時の処理は必要に応じて、ケーキの回収の
みで行っても、水および／または酸性水供給による洗浄
を加えて行ってもよい。また、再懸濁と再固液分離の操
作の回数は一回に限定されるものでもない。In this case, the amount of water used for suspension may be arbitrary as long as it does not hinder solid-liquid separation.
Further, the treatment at the time of solid-liquid separation may be performed only by recovering the cake or may be performed by adding washing with water and / or acidic water as needed. Further, the number of operations of resuspension and resolidification-liquid separation is not limited to one.

【００８１】生成物シアノカルボン酸の含水ケーキは、
乾燥と粉砕を行い、乾燥粉砕製品とする。この場合の
（水分）乾燥および粉砕方法は、生成物シアノカルボン
酸が変質せず、不純物が混入しない範囲において実施さ
れるものであれば限定されるものではないが、特に乾燥
と粉砕を同時に一段で行う効率的方法として、振動乾燥
機および／または撹拌乾燥機を用いることは有効であ
る。A water-containing cake of the product cyanocarboxylic acid is
It is dried and crushed to obtain a dry crushed product. The (moisture) drying and pulverizing method in this case is not limited as long as it is carried out within a range in which the product cyanocarboxylic acid is not deteriorated and impurities are not mixed in, but in particular, drying and pulverizing can be carried out simultaneously in one step. It is effective to use a vibration dryer and / or a stirring dryer as an efficient method for carrying out the method.

【００８２】振動乾燥機および／または撹拌乾燥機での
処理は、処理時間低減、生成物シアノ安息香酸の品質維
持の観点から圧力５０ｔｏｒｒ以下、温度５０〜１００
℃で行うことが好ましい。The treatment with the vibration dryer and / or the stirring dryer is carried out at a pressure of 50 torr or less and a temperature of 50 to 100 from the viewpoint of reducing the treatment time and maintaining the quality of the product cyanobenzoate.
It is preferable to carry out at ℃.

【００８３】以上のように、１）培養工程、２）反応工
程、３）生成物回収工程、４）生成物精製工程および
５）乾燥製品化工程を含む全工程を行うことにより、シ
アノカルボン酸の高純度の乾燥粉砕製品を得ることがで
きる。As described above, all steps including 1) culturing step, 2) reaction step, 3) product recovery step, 4) product purification step and 5) dry product step are carried out to obtain cyanocarboxylic acid. It is possible to obtain a high-purity dry-ground product.

【００８４】本発明の原料として用いるポリニトリル化
合物は、化学式（Ｉ）The polynitrile compound used as the raw material of the present invention has the chemical formula (I)

【００８５】[0085]

【化５】 [Chemical 5]

【００８６】[式中、Ｒは２価の、炭素数１〜８のアル
キル基、アリール基、アラルキル基（一方の結合手はア
ラルキル基のアリール環に結合手を有していてもよ
い。）または複素環基を表し、これらは１個ないし複数
のハロゲン、水酸基、アミノ基、シアノ基、または炭素
数１〜８のアルキル基で置換されていてもよい。]に示
す化合物であり、シアノカルボン酸として、対応する化
学式（ＩＩ）[In the formula, R is a divalent alkyl group having 1 to 8 carbon atoms, an aryl group, or an aralkyl group (one of the bonds may have a bond on the aryl ring of the aralkyl group). Alternatively, it represents a heterocyclic group, which may be substituted with one or more halogen, a hydroxyl group, an amino group, a cyano group, or an alkyl group having 1 to 8 carbon atoms. ] As a cyanocarboxylic acid, and the corresponding chemical formula (II)

【００８７】[0087]

【化６】 [Chemical 6]

【００８８】（式中、Ｒは、上記Ｒと同じ意味を表
す。）に示す化合物を取得することができる。The compound shown in the formula (wherein R has the same meaning as R above) can be obtained.

【００８９】本発明において用いるポリニトリル化合物
としては、例えば、脂肪族ニトリルであるマロノニトリ
ル、サクシノニトリル、アジポニトリル、グルコノニト
リル等；また芳香族ニトリルであるオルトフタロニトリ
ル、テレフタロニトリル、イソフタロニトリル；及びこ
れら芳香族ニトリル化合物の置換体、例えば塩素化物、
フッ素化物、ニトロ化物、アミノ化物等を挙げることが
できる。Examples of the polynitrile compound used in the present invention include aliphatic nitriles such as malononitrile, succinonitrile, adiponitrile and glucononitrile; and aromatic nitriles such as orthophthalonitrile, terephthalonitrile and isophthalonitrile. And substituted products of these aromatic nitrile compounds, for example, chlorinated compounds,
Fluorides, nitrites, aminations and the like can be mentioned.

【００９０】[0090]

【実施例】以下、実施例により本発明をさらに詳細に説
明するが、本発明はこれら実施例により何ら限定される
ものではない。The present invention will be described in more detail with reference to the following examples, but the present invention is not limited to these examples.

【００９１】［実施例１］ｐ−シアノ安息香酸の製造
（１） 使用微生物に、ロドコッカスｓｐ．ＳＤ８２６（ＦＥＲ
Ｍ Ｐ−１７５９８）株、反応原料にテレフタロニトリ
ルを用い、ｐ−シアノ安息香酸の試作を実施した。[Example 1] Production of p-cyanobenzoic acid (1) The microorganism used was Rhodococcus sp. SD826 (FER
Mp-17598) strain, terephthalonitrile was used as a reaction raw material, and trial production of p-cyanobenzoic acid was carried out.

【００９２】（１）培養工程 菌株をＬ寒天培地に画線し、３０℃恒温槽中で２４時間
培養した。生じたコロニーより１白金耳培養掻き取り、
液体培地１００ｍＬに接種の後、３０℃の振とう培養器
にて２４時間培養した。培養終了時のｐＨは８．６、６
６０ｎｍ吸光度は６．１であった。(1) Culture step The strain was streaked on L agar medium and cultured in a 30 ° C. constant temperature bath for 24 hours. Scraping 1 platinum loop culture from the resulting colony,
After inoculating 100 mL of liquid medium, it was cultured in a shaking incubator at 30 ° C. for 24 hours. PH at the end of culture is 8.6, 6
The 60 nm absorbance was 6.1.

【００９３】得られた培養液は１００ｍＬ全量を、３０
Ｌ発酵槽に、表１の条件で調整した液体培地（以後「無
機塩培地」と言う。）１５Ｌに接種の後、培養温度３０
℃、撹拌３００ｒｐｍ、通気量７．５ＮＬ／ｍｉｎ、槽
圧０．０６Ｐａの条件で２４時間培養した。培養終了時
のｐＨは６．９、６６０ｎｍ吸光度は２１．４であっ
た。The total volume of 100 mL of the obtained culture solution was 30 mL.
After inoculating 15 L of a liquid medium (hereinafter referred to as "inorganic salt medium") prepared under the conditions shown in Table 1 into an L fermenter, the culture temperature was 30.
Culturing was carried out for 24 hours under conditions of a temperature of 300 ° C., agitation of 300 rpm, an aeration rate of 7.5 NL / min, and a tank pressure of 0.06 Pa. The pH at the end of the culture was 6.9 and the absorbance at 660 nm was 21.4.

【００９４】[0094]

【表１】 [Table 1]

【００９５】得られた培養液は１５Ｌ全量を、１ｋＬ発
酵槽に調整した無機塩培地７００Ｌに接種の後、培養温
度３０℃、撹拌４００ｒｐｍ、通気量３００ＮＬ／ｍｉ
ｎ、槽圧０．０６Ｐａの条件で２２時間培養した。培養
終了時のｐＨは７．２、６６０ｎｍ吸光度は３０．３で
あった。The total amount of 15 L of the obtained culture solution was inoculated into 700 L of an inorganic salt medium prepared in a 1 kL fermentor, and then the culture temperature was 30 ° C., the stirring was 400 rpm, and the aeration rate was 300 NL / mi.
The culture was performed for 22 hours under the conditions of n and tank pressure of 0.06 Pa. The pH at the end of the culture was 7.2 and the absorbance at 660 nm was 30.3.

【００９６】（２）反応工程 培養が終了したらただちに、１ｋＬ発酵槽に５０ｍＭリ
ン酸ナトリウム／カリウム緩衝液（ｐＨ７）を加えて９
２０Ｌまで希釈した後、粒径３００μｍ以下に粉砕した
原料テレフタロニトリルを４．０ｗ／ｖ％相当および誘
導基質ベンゾニトリルを０．１ｗ／ｖ％相当添加し、反
応温度３０℃、撹拌４００ｒｐｍの条件で３０時間反応
した。(2) Reaction step Immediately after the completion of the culture, 50 mM sodium / potassium phosphate buffer (pH 7) was added to the 1 kL fermentor for 9
After being diluted to 20 L, 4.0 w / v% of the starting material terephthalonitrile and 0.1 w / v% of the derivatized substrate benzonitrile pulverized to a particle size of 300 μm or less were added, and the reaction temperature was 30 ° C. and the stirring was 400 rpm. And reacted for 30 hours.

【００９７】反応液の上清を逆相ＨＰＬＣ（カラム：Ｓ
ｈｏｄｅｘ（昭和電工株式会社登録商標） ＤＳ−６１
３、溶離液：５０％アセトニトリル／５ｍＭリン酸カリ
ウム緩衝液ｐＨ３．０、流速１ｍＬ／ｍｉｎ、検出：Ｕ
Ｖ ２４０ｎｍ、カラムオーブン：４０℃）により分析
した。The supernatant of the reaction solution was subjected to reverse phase HPLC (column: S
hodex (registered trademark of Showa Denko KK) DS-61
3, eluent: 50% acetonitrile / 5 mM potassium phosphate buffer pH 3.0, flow rate 1 mL / min, detection: U
V 240 nm, column oven: 40 ° C.).

【００９８】反応液中に主成分としてｐ−シアノ安息香
酸標品と保持時間が一致するピークを認めた。反応終了
時、生産したｐ−シアノ安息香酸は濃度３．６％、質量
３３．１ｋｇ、残存テレフタロニトリルは濃度０．７８
％、質量７．２ｋｇ、反応選択率は１００％、反応変換
率は８０．１％となった。In the reaction solution, a peak whose retention time coincided with that of the p-cyanobenzoic acid standard sample was recognized as the main component. At the end of the reaction, the produced p-cyanobenzoic acid had a concentration of 3.6%, a mass of 33.1 kg, and the residual terephthalonitrile had a concentration of 0.78.
%, The mass was 7.2 kg, the reaction selectivity was 100%, and the reaction conversion rate was 80.1%.

【００９９】（３）生成物回収工程 得られた反応液は、精密濾過膜を用いて中性条件下での
固液分離（工程（１））を行った。すなわち、５０ｍＭ
リン酸ナトリウム／カリウム緩衝液（ｐＨ７）により２
倍に希釈した後、膜装置の循環槽タンクに張り込み、ポ
ンプ循環して圧力をかけ濾液を回収しながら希釈反応液
を９分の１容量まで精密濾過膜（商品名：マイクローザ
ＰＳＶ３１３、旭化成工業株式会社製）を用いて濃縮し
た（＝一次濃縮）。(3) Product Recovery Step The obtained reaction solution was subjected to solid-liquid separation (step (1)) under neutral conditions using a microfiltration membrane. That is, 50 mM
2 with sodium / potassium phosphate buffer (pH 7)
After doubling the dilution, it is placed in a circulation tank tank of the membrane device, and is circulated by a pump to apply pressure and collect the filtrate while diluting the reaction solution to a volume of 1/9. Microfiltration membrane (trade name: Microsa PSV313, Asahi Kasei Corporation (Manufactured by Co., Ltd.) was used for concentration (= primary concentration).

【０１００】さらに濃縮液は、５０ｍＭリン酸ナトリウ
ム／カリウム緩衝液（ｐＨ７）により３倍に希釈したの
ち、濾液を回収しながら３分の１容量まで濃縮した（＝
希釈濃縮）。膜濃縮中は膜の目詰まり防止のために定期
的に濾液側から逆洗を行った。Further, the concentrated solution was diluted 3-fold with 50 mM sodium / potassium phosphate buffer (pH 7), and then concentrated to one-third volume while collecting the filtrate (=
Dilution concentration). During the membrane concentration, backwashing was regularly performed from the filtrate side to prevent the membrane from being clogged.

【０１０１】運転条件は、圧力を入口／出口＝０．２０
Ｐａ／０．０４Ｐａ、線速度を２ｍ／ｓとした。逆洗条
件は、圧力を０．１７Ｐａとし、サイクルをＯＦＦ／Ｏ
Ｎ＝１０分／５秒とした。The operating condition is that the pressure is inlet / outlet = 0.20.
Pa / 0.04 Pa and linear velocity of 2 m / s. The backwash condition is that the pressure is 0.17 Pa and the cycle is OFF / O.
N = 10 minutes / 5 seconds.

【０１０２】運転の結果、平均透過流束６３．１Ｌ／Ｈ
ｒ・ｍ²、透過率１００％で、濾液側にｐ−シアノ安息
香酸を３１．５ｋｇ、９５．２％回収した。濾液中には
固形成分はなく、反応液から、菌体は１００％除去で
き、テレフタロニトリルは非溶解分の９８％を除去する
ことができた。As a result of the operation, the average permeation flux was 63.1 L / H.
With r · m ² and a transmittance of 100%, 31.5 kg of p-cyanobenzoic acid (95.2%) was recovered on the filtrate side. There was no solid component in the filtrate, 100% of the bacterial cells could be removed from the reaction solution, and 98% of the non-dissolved terephthalonitrile could be removed.

【０１０３】（４）生成物精製工程 回収した濾液は、遠心濾過機を用いて酸性条件下での固
液分離（工程（２））を行った。撹拌を行いながら４Ｎ
硝酸を添加、ｐＨ２に調整しｐ−シアノ安息香酸を酸晶
析させた。(4) Product Purification Step The recovered filtrate was subjected to solid-liquid separation under acidic conditions (step (2)) using a centrifugal filter. 4N while stirring
The pH was adjusted to 2 with nitric acid and p-cyanobenzoic acid was acid-crystallized.

【０１０４】酸性析出液は５分割して、遠心濾過機（上
部排出型遠心分離機Ｈ−１３０Ｉ、株式会社コクサン
製）に結晶がオーバーフローしないように給液し、濾液
を回収し固液分離した後、給液した酸性析出液と等倍量
の水、５分の１量の０．０１Ｎ硝酸、等倍量の水を順次
遠心ロ過機に給液して濾布上の結晶を洗浄した。遠心濾
過機は、給液終了後濾液が出なくなるまで運転を継続し
た後停止し結晶を回収した。The acidic precipitation liquid was divided into 5 parts and fed to a centrifugal filter (upper discharge type centrifugal separator H-130I, manufactured by Kokusan Co., Ltd.) so that crystals would not overflow, and the filtrate was recovered and solid-liquid separated. Then, the same amount of water as the fed acidic precipitation liquid, one-fifth amount of 0.01N nitric acid, and the same amount of water were sequentially fed to the centrifugal filter to wash the crystals on the filter cloth. . The centrifugal filter continued to operate until the filtrate was not discharged after the liquid supply was completed, and then stopped to collect crystals.

【０１０５】回収した結晶は、水で酸性析出液と等量に
なるように再懸濁し、再度懸濁液を５分割して、遠心濾
過機へ給液し固液分離した後、懸濁液と等量の水を供給
して結晶を洗浄した。給液後濾液が出なくなった時点で
遠心濾過機の運転を停止し結晶を回収した。The recovered crystals were resuspended in water so as to have the same amount as the acidic precipitation liquid, the suspension was again divided into 5 parts, and the liquid was fed to a centrifugal filter for solid-liquid separation. An equal amount of water was supplied to wash the crystals. After the liquid was supplied, the operation of the centrifugal filter was stopped at the time when the filtrate was no longer present, and the crystals were collected.

【０１０６】遠心濾過機の運転条件は、回転数を１４０
０ｒｐｍ、遠心力を７２０Ｇ、濾布種類を綿２６号とし
た。The operating condition of the centrifugal filter is 140 rpm.
0 rpm, centrifugal force 720G, and filter cloth type cotton 26.

【０１０７】運転の結果、含水率６５％の結晶を８２．
９ｋｇ、ｐ−シアノ安息香酸として２９．０ｋｇを得、
本工程での回収率は９２．１％となった。この精製処理
により、ｐ−シアノ安息香酸乾燥固形分当たりの主要不
純物は、培地および反応由来のアンモニウムイオンが１
１．２ｗ／ｗ％から１ｐｐｍ未満まで、誘導基質由来の
安息香酸は２．０ｗ／ｗ％から０．７％まで、反応原料
由来のテレフタロニトリルは０．２９％から３００ｐｐ
ｍまで、その他培地由来のアニオン性およびカチオン性
不純物は１ｐｐｍ未満まで低減できた。As a result of the operation, crystals having a water content of 65% were found to be 82.
9 kg, 29.0 kg of p-cyanobenzoic acid were obtained,
The recovery rate in this step was 92.1%. As a result of this purification treatment, the main impurities per dry solid of p-cyanobenzoic acid were ammonium ions derived from the medium and the reaction.
1.2 w / w% to less than 1 ppm, benzoic acid derived from the derivative substrate was 2.0 w / w% to 0.7%, and terephthalonitrile derived from the reaction raw material was 0.29% to 300 pp.
m, and anionic and cationic impurities derived from other media could be reduced to less than 1 ppm.

【０１０８】（５）乾燥製品化工程 回収した結晶は、ナイロンコーティングボールミル３０
Ｌを投入した振動乾燥機（ＶＨＳ−５０型、全容積１６
８Ｌ、中央化工機株式会社製）に全量一括して投入し乾
燥粉砕処理を行った。運転条件は、温度８０℃、圧力３
０ｔｏｒｒ、時間４Ｈｒで実施した。(5) Dry product manufacturing step The recovered crystals were nylon coated ball mill 30.
Vibration dryer with L (VHS-50 type, total volume 16
8 L, manufactured by Chuo Kakoki Co., Ltd.) were all put in a batch and dried and pulverized. Operating conditions are temperature 80 ℃, pressure 3
It was carried out at 0 torr for 4 hours.

【０１０９】運転の結果、粒径２００μｍ以下、含水率
０．５％、純度９９．３％のｐ−シアノ安息香酸を回収
率９８．０％、２８．５ｋｇ得た。生成物回収工程から
乾燥製品化工程に至る分離精製工程の総回収率は８５．
９％となった。As a result of operation, p-cyanobenzoic acid having a particle size of 200 μm or less, a water content of 0.5% and a purity of 99.3% was obtained with a recovery rate of 98.0% and 28.5 kg. The total recovery rate in the separation and purification process from the product recovery process to the dry product process is 85.
It was 9%.

【０１１０】［実施例２］ｐ−シアノ安息香酸の製造
（２） 使用微生物に、ロドコッカスｓｐ．ＳＤ８２６（ＦＥＲ
Ｍ Ｐ−１７５９８）株、反応原料にテレフタロニトリ
ルを用い、ｐ−シアノ安息香酸の試作を実施した。[Example 2] Production of p-cyanobenzoic acid (2) The microorganism used was Rhodococcus sp. SD826 (FER
Mp-17598) strain, terephthalonitrile was used as a reaction raw material, and trial production of p-cyanobenzoic acid was carried out.

【０１１１】（１）培養工程 菌株を実施例２と同様に培養した。１ｋＬ発酵槽での培
養終了時のｐＨは６．７、６６０ｎｍ吸光度は１６．２
であった。(1) Culture step The strain was cultured in the same manner as in Example 2. The pH at the end of the culture in the 1 kL fermenter was 6.7, and the absorbance at 660 nm was 16.2.
Met.

【０１１２】（２）反応工程（一回目） 培養が終了したらただちに、膜装置の循環タンクに送液
し５０ｍＭリン酸ナトリウム／カリウム緩衝液（ｐＨ
７）を加えて９００Ｌまで希釈した後、粒径３００μｍ
以下に粉砕した原料テレフタロニトリルを１．０ｗ／ｖ
％相当および誘導基質ベンゾニトリルを０．１ｗ／ｖ％
相当添加し、反応温度３０℃、撹拌１００ｒｐｍ、膜ポ
ンプ循環線速度２ｍ／ｓの条件、１５時間反応した。(2) Reaction step (first time) Immediately after the completion of the culture, the solution was transferred to the circulation tank of the membrane device and the 50 mM sodium / potassium phosphate buffer solution (pH) was added.
7) was added and diluted to 900 L, then the particle size was 300 μm
Raw material terephthalonitrile crushed below is 1.0 w / v
% And derived substrate benzonitrile 0.1 w / v%
Corresponding amounts were added, and the reaction was carried out for 15 hours under the conditions of a reaction temperature of 30 ° C., stirring of 100 rpm, and a membrane pump circulation linear velocity of 2 m / s.

【０１１３】反応液の上清を実施例１と同様の方法によ
り分析した。反応液中に主成分としてｐ−シアノ安息香
酸標品と保持時間が一致するピークを認めた。反応終了
時のｐ−シアノ安息香酸は濃度０．８％、質量７．２ｋ
ｇとなった。The supernatant of the reaction solution was analyzed by the same method as in Example 1. In the reaction solution, a peak whose retention time was the same as that of the p-cyanobenzoic acid standard sample was recognized as the main component. At the end of the reaction, p-cyanobenzoic acid had a concentration of 0.8% and a mass of 7.2 k.
It became g.

【０１１４】（３）生成物回収工程（一回目） 得られた反応液は、精密濾過膜を用いて中性条件下での
固液分離（工程（１））を行った。すなわち、ポンプ循
環して圧力をかけ濾液を回収しながら希釈反応液を３分
の１容量まで精密濾過膜（商品名：マイクローザＰＳＶ
３１３、旭化成工業株式会社製）を用いて実施例１と同
様の運転条件および逆洗条件で濃縮した。(3) Product recovery step (first time) The obtained reaction solution was subjected to solid-liquid separation (step (1)) under neutral conditions using a microfiltration membrane. That is, while circulating the pump and applying pressure to collect the filtrate, the diluted reaction solution is up to one-third volume of the microfiltration membrane (trade name: Micro-USA PSV
313, manufactured by Asahi Kasei Kogyo Co., Ltd.) under the same operating conditions and backwashing conditions as in Example 1.

【０１１５】運転の結果、平均透過流束８５．０Ｌ／Ｈ
ｒ・ｍ²、透過率１００％で、濾液側にｐ−シアノ安息
香酸を４．８ｋｇ、６６．７％回収した。濃縮液は側に
は菌体全量、ｐ−シアノ安息香酸を２．４ｋｇ、残存テ
レフタロニトリル３．０ｋｇが残存した。As a result of the operation, the average permeation flux was 85.0 L / H.
With r · m ² and a transmittance of 100%, 4.8 kg of p-cyanobenzoic acid was recovered on the filtrate side, 66.7%. On the side of the concentrated liquid, the total amount of bacterial cells, 2.4 kg of p-cyanobenzoic acid, and 3.0 kg of residual terephthalonitrile remained.

【０１１６】（２）反応工程（二回目） 膜濃縮が終了したらただちに、５０ｍＭリン酸ナトリウ
ム／カリウム緩衝液（ｐＨ７）を加えて９００Ｌまで希
釈した後、粒径３００μｍ以下に粉砕した原料テレフタ
ロニトリルを０．６７ｗ／ｖ％相当を添加し、反応温度
３０℃、撹拌１００ｒｐｍ、膜ポンプ循環線速度２ｍ／
ｓの条件、８時間反応した。反応終了時のｐ−シアノ安
息香酸は濃度１．２％、質量１０．８ｋｇとなった。(2) Reaction step (second time) Immediately after the membrane concentration was completed, 50 mM sodium / potassium phosphate buffer (pH 7) was added to dilute the solution to 900 L, and the raw material terephthalonitrile was crushed to a particle size of 300 μm or less. Of 0.67 w / v% was added, the reaction temperature was 30 ° C., the stirring was 100 rpm, the membrane pump circulation linear velocity was 2 m /
The reaction was performed for 8 hours under the condition of s. At the end of the reaction, p-cyanobenzoic acid had a concentration of 1.2% and a mass of 10.8 kg.

【０１１７】（３）生成物回収工程（二回目） 得られた反応液は、ポンプ循環して圧力をかけ濾液を回
収しながら希釈反応液を３分の１容量まで精密濾過膜
（商品名：マイクローザＰＳＶ３１３、旭化成工業株式
会社製）を用いて実施例１と同様の運転条件および逆洗
条件で濃縮した。(3) Product recovery step (second time) The obtained reaction solution is subjected to pressure by circulating a pump to recover the filtrate, and the diluted reaction solution is reduced to a third volume by a microfiltration membrane (trade name: Microza PSV313, manufactured by Asahi Kasei Kogyo Co., Ltd.) was used and concentrated under the same operating conditions and backwashing conditions as in Example 1.

【０１１８】運転の結果、平均透過流束８４．０Ｌ／Ｈ
ｒ・ｍ²、透過率１００％で、濾液側にｐ−シアノ安息
香酸を７．２ｋｇ、６６．７％回収した。濃縮液は側に
は菌体全量、ｐ−シアノ安息香酸を３．６ｋｇ、残存テ
レフタロニトリル３．７ｋｇが残存した。As a result of the operation, the average permeation flux was 84.0 L / H.
With r · m ² and a transmittance of 100%, 7.2 kg, 66.7% of p-cyanobenzoic acid was recovered on the filtrate side. On the side of the concentrated liquid, the total amount of cells, 3.6 kg of p-cyanobenzoic acid, and 3.7 kg of residual terephthalonitrile remained.

【０１１９】（２）反応工程（三回目） 膜濃縮が終了したらただちに、５０ｍＭリン酸ナトリウ
ム／カリウム緩衝液（ｐＨ７）を加えて９００Ｌまで希
釈した後、粒径３００μｍ以下に粉砕した原料テレフタ
ロニトリルを１．１ｗ／ｖ％相当を添加し、反応温度３
０℃、撹拌１００ｒｐｍ、膜ポンプ循環線速度２ｍ／ｓ
の条件、２０時間反応した。反応終了時のｐ−シアノ安
息香酸は濃度１．７％、質量１５．３ｋｇとなった。(2) Reaction step (third time) Immediately after the membrane concentration was completed, 50 mM sodium / potassium phosphate buffer (pH 7) was added to dilute the solution to 900 L, and the raw material terephthalonitrile was crushed to a particle size of 300 μm or less. 1.1 w / v% equivalent was added, and the reaction temperature was 3
0 ° C, stirring 100 rpm, membrane pump circulation linear velocity 2 m / s
The reaction was performed for 20 hours under the conditions described above. At the end of the reaction, p-cyanobenzoic acid had a concentration of 1.7% and a mass of 15.3 kg.

【０１２０】（３）生成物回収工程（三回目） 得られた反応液は、ポンプ循環して圧力をかけ濾液を回
収しながら希釈反応液を３分の１容量まで精密濾過膜
（商品名：マイクローザＰＳＶ３１３、旭化成工業株式
会社製）を用いて実施例１と同様の運転条件および逆洗
条件で一次濃縮した。(3) Product Recovery Step (Third Time) The obtained reaction solution was circulated by a pump to collect the filtrate while collecting the filtrate, and the diluted reaction solution was made up to 1/3 volume by a microfiltration membrane (trade name: Using Microsa PSV313, manufactured by Asahi Kasei Kogyo Co., Ltd., primary concentration was carried out under the same operating conditions and backwashing conditions as in Example 1.

【０１２１】濃縮液は５０ｍＭリン酸ナトリウム／カリ
ウム緩衝液（ｐＨ７）による３倍量の希釈濃縮を２回繰
り返して濾液を回収した。運転の結果、平均透過流束８
５．０Ｌ／Ｈｒ・ｍ²、透過率１００％で、濾液側にｐ
−シアノ安息香酸を１４．７ｋｇ、９６．２％回収し
た。濃縮液は側には菌体全量、ｐ−シアノ安息香酸を
０．６ｋｇ、残存テレフタロニトリル０．３７ｋｇが残
存した。The concentrate was diluted with a 50 mM sodium / potassium phosphate buffer (pH 7) in a 3-fold amount and concentrated twice to collect the filtrate. As a result of operation, average permeation flux 8
5.0 L / Hr · m ² , 100% transmittance, p on the filtrate side
-14.7 kg of cyanobenzoic acid, 96.2% recovered. On the side of the concentrated liquid, the total amount of bacterial cells, 0.6 kg of p-cyanobenzoic acid, and 0.37 kg of residual terephthalonitrile remained.

【０１２２】３回の反応工程では、テレフタロニトリル
は合計２５．０ｋｇ投入し、選択率１００％、変換率９
５．０％の反応を合計４３時間かけて、ｐ−シアノ安息
香酸を合計２７．３ｋｇ生成した。また３回の膜濃縮で
は２６．７ｋｇのｐ−シアノ安息香酸を回収し、回収率
は９７．８％となった。濾液中には固形成分はなく、反
応液から、菌体は１００％除去でき、テレフタロニトリ
ルは非溶解分の９８％を除去することができた。In the three reaction steps, a total of 25.0 kg of terephthalonitrile was charged, and the selectivity was 100% and the conversion rate was 9%.
The 5.0% reaction took a total of 43 hours to produce a total of 27.3 kg of p-cyanobenzoic acid. Moreover, 26.7 kg of p-cyanobenzoic acid was recovered by the membrane concentration three times, and the recovery rate was 97.8%. There was no solid component in the filtrate, 100% of the bacterial cells could be removed from the reaction solution, and 98% of the non-dissolved terephthalonitrile could be removed.

【０１２３】（４）生成物精製工程 回収した濾液は、実施例１と同様の方法、条件で酸晶析
および固液分離（工程（２））を行った。(4) Product Purification Step The recovered filtrate was subjected to acid crystallization and solid-liquid separation (step (2)) under the same method and conditions as in Example 1.

【０１２４】運転の結果、含水率６５％の結晶を７０．
０ｋｇ、ｐ−シアノ安息香酸として２４．５ｋｇを得、
本工程での回収率は９１．８％となった。この精製処理
により、ｐ−シアノ安息香酸乾燥固形分当たりの主要不
純物は、培地および反応由来のアンモニウムイオンが１
１．２ｗ／ｗ％から１ｐｐｍ未満まで、誘導基質由来の
安息香酸は２．０ｗ／ｗ％から０．６％まで、反応原料
由来のテレフタロニトリルは０．２９％から３００ｐｐ
ｍまで、その他培地由来のアニオン性およびカチオン性
不純物は１ｐｐｍ未満まで低減できた。As a result of the operation, 70% of crystals having a water content of 65% were obtained.
0 kg, 24.5 kg as p-cyanobenzoic acid,
The recovery rate in this step was 91.8%. As a result of this purification treatment, the main impurities per dry solid of p-cyanobenzoic acid were ammonium ions derived from the medium and the reaction.
1.2 w / w% to less than 1 ppm, benzoic acid derived from the derivative substrate was 2.0 w / w% to 0.6%, and terephthalonitrile derived from the reaction raw material was 0.29% to 300 pp.
m, and anionic and cationic impurities derived from other media could be reduced to less than 1 ppm.

【０１２５】（５）乾燥製品化工程 回収した結晶は、実施例１と同様の方法、条件で乾燥粉
砕処理を行った。運転の結果、粒径２００μｍ以下、含
水率０．５％、純度９９．４％のｐ−シアノ安息香酸を
回収率９８．０％、２４．０ｋｇ得た。生成物回収工程
から乾燥製品化工程に至る分離精製工程の総回収率は８
７．９％となった。(5) Dry-Producting Step The collected crystals were dried and pulverized under the same method and conditions as in Example 1. As a result of operation, p-cyanobenzoic acid having a particle size of 200 μm or less, a water content of 0.5% and a purity of 99.4% was obtained with a recovery rate of 98.0% and 24.0 kg. The total recovery rate in the separation and purification process from the product recovery process to the dry product process is 8
It became 7.9%.

【０１２６】[0126]

【発明の効果】本発明によれば、原料ポリニトリル化合
物より生成物シアノカルボン酸を得る方法において、微
生物反応液から、有機溶媒を使用せず水系下のみでマイ
ルドな条件下で固液分離を用いて効率的に分離精製する
ことにより、特に様々な産業分野で有用なシアノカルボ
ン酸を、有機溶媒を使用しない全系水系で、マイルドで
安全且つ環境負荷の低い条件で効率よく得ることができ
る。本発明は、医薬、農薬、染料などの幅広い分野に有
用である。EFFECTS OF THE INVENTION According to the present invention, in a method for obtaining a product cyanocarboxylic acid from a raw material polynitrile compound, solid-liquid separation is used from a microbial reaction liquid without using an organic solvent under mild conditions only under an aqueous system. By efficiently separating and purifying the cyanocarboxylic acid, a cyanocarboxylic acid which is particularly useful in various industrial fields can be efficiently obtained in a mild aqueous system that does not use an organic solvent under mild, safe and low environmental load. INDUSTRIAL APPLICABILITY The present invention is useful in a wide range of fields such as medicine, agricultural chemicals and dyes.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 和田 紘一 神奈川県川崎市川崎区大川町５−１ 昭和 電工株式会社生産技術センター内 Ｆターム(参考） 4B064 AE01 CA03 CC03 CC06 CC07 CC12 CD02 CD09 CD12 CD21 CE03 CE06 CE10 CE15 CE16 DA01 DA11    ─────────────────────────────────────────────────── ─── Continued front page    (72) Inventor Koichi Wada             Showa 5-1 Okawa-cho, Kawasaki-ku, Kawasaki-shi, Kanagawa             Electric Engineering Co., Ltd. Production Technology Center F-term (reference) 4B064 AE01 CA03 CC03 CC06 CC07                       CC12 CD02 CD09 CD12 CD21                       CE03 CE06 CE10 CE15 CE16                       DA01 DA11

Claims (25)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項１】ポリニトリル化合物に微生物を作用させ、
シアノカルボン酸を得る方法において、反応液中のシア
ノカルボン酸を可溶化状態で固液分離する工程（１）及
び反応液中のシアノカルボン酸を不溶化状態で固液分離
する工程（２）を含むことにより生成物を分離精製する
ことを特徴とするシアノカルボン酸の製法。1. A microorganism is allowed to act on a polynitrile compound,
A method for obtaining a cyanocarboxylic acid includes a step (1) of solid-liquid separation of a cyanocarboxylic acid in a reaction solution in a solubilized state and a step (2) of solid-liquid separation of a cyanocarboxylic acid in a reaction solution in an insolubilized state A process for producing a cyanocarboxylic acid, characterized in that the product is separated and purified thereby. 【請求項２】工程（１）において、反応液中の固形分で
ある菌体および残存ポリニトリル化合物を除去し、液側
に生成物シアノカルボン酸を回収することを特徴とする
請求項１に記載のシアノカルボン酸の製法。2. The step (1), wherein the bacterial cells and the remaining polynitrile compound which are solids in the reaction solution are removed, and the product cyanocarboxylic acid is recovered on the liquid side. Of cyanocarboxylic acid. 【請求項３】工程（１）の反応液のｐＨを５〜９に調整
することを特徴とする請求項２に記載のシアノカルボン
酸の製法。3. The method for producing a cyanocarboxylic acid according to claim 2, wherein the pH of the reaction liquid in the step (1) is adjusted to 5-9. 【請求項４】工程（２）において、固形分として生成す
るシアノカルボン酸を回収することを特徴とする請求項
１ないし３のいずれかに記載のシアノカルボン酸の製
法。4. The process for producing a cyanocarboxylic acid according to claim 1, wherein the cyanocarboxylic acid produced as a solid content is recovered in the step (2). 【請求項５】工程（２）の反応液のｐＨを５以下に調整
することを特徴とする請求項４に記載のシアノカルボン
酸の製法。5. The method for producing a cyanocarboxylic acid according to claim 4, wherein the pH of the reaction liquid in step (2) is adjusted to 5 or less. 【請求項６】工程（１）、ついで工程（２）の順に実施
することを特徴とする請求項１ないし５のいずれかに記
載のシアノカルボン酸の製法。6. The method for producing a cyanocarboxylic acid according to claim 1, wherein the step (1) and then the step (2) are carried out in this order. 【請求項７】反応から分離精製に至る工程を、水系で実
施することを特徴とする請求項１ないし６のいずれかに
記載のシアノカルボン酸の製法。7. The method for producing a cyanocarboxylic acid according to claim 1, wherein the steps from the reaction to the separation and purification are carried out in an aqueous system. 【請求項８】Rhodococcus属微生物を用いることを特徴
とする、請求項１ないし７のいずれかに記載のシアノカ
ルボン酸の製法。8. The method for producing a cyanocarboxylic acid according to claim 1, wherein a Rhodococcus genus microorganism is used. 【請求項９】工程（１）に、膜濾過または遠心分離を用
いることを特徴とする請求項１ないし８のいずれかに記
載のシアノカルボン酸の製法。9. The method for producing a cyanocarboxylic acid according to claim 1, wherein membrane filtration or centrifugation is used in step (1). 【請求項１０】膜濾過を用い、濾過膜に限外濾過膜及び
／または精密濾過膜を用いることを特徴とする請求項９
に記載のシアノカルボン酸の製法。10. A membrane filtration is used, and an ultrafiltration membrane and / or a microfiltration membrane is used as the filtration membrane.
The method for producing a cyanocarboxylic acid according to 1. 【請求項１１】膜の分画サイズが０．５μm以下である
ことを特徴とする請求項９または１０に記載のシアノカ
ルボン酸の製法。11. The method for producing a cyanocarboxylic acid according to claim 9, wherein the fraction size of the membrane is 0.5 μm or less. 【請求項１２】クロスフロー型の限外濾過膜及び／また
は精密濾過膜を用いることを特徴とする請求項９ないし
１１のいずれかに記載のシアノカルボン酸の製法。12. The method for producing a cyanocarboxylic acid according to claim 9, wherein a cross-flow type ultrafiltration membrane and / or a microfiltration membrane is used. 【請求項１３】工程（１）に、遠心分離を用いることを
特徴とする請求項１ないし８のいずれかに記載のシアノ
カルボン酸の製法。13. The method for producing a cyanocarboxylic acid according to claim 1, wherein centrifugation is used in step (1). 【請求項１４】ポリニトリル化合物を反応液中に固形で
供することを特徴とする請求項１ないし１３のいずれか
に記載のシアノカルボン酸の製法。14. The method for producing a cyanocarboxylic acid according to claim 1, wherein the polynitrile compound is provided as a solid in the reaction solution. 【請求項１５】ポリニトリル化合物が、粒径３００μm
以下の粉体であることを特徴とする請求項１４に記載の
シアノカルボン酸の製法。15. The polynitrile compound has a particle size of 300 μm.
The method for producing a cyanocarboxylic acid according to claim 14, wherein the following powder is used. 【請求項１６】工程（２）に、遠心濾過、フィルタープ
レス濾過および／または精密濾過を用いることを特徴と
する請求項１ないし１５のいずれかに記載のシアノカル
ボン酸の製法。16. The process for producing a cyanocarboxylic acid according to claim 1, wherein centrifugal filtration, filter press filtration and / or microfiltration are used in the step (2). 【請求項１７】工程（２）において、得られた固形分
に、水と酸性水を供給し不純物を除去することを特徴と
する請求項１ないし１６のいずれかに記載のシアノカル
ボン酸の製法。17. The method for producing a cyanocarboxylic acid according to claim 1, wherein in the step (2), water and acidic water are supplied to the obtained solid content to remove impurities. . 【請求項１８】工程（２）の後、再度固液分離を行い、
不純物を除去することを特徴とする請求項１ないし１７
のいずれかに記載のシアノカルボン酸の製法。18. A solid-liquid separation is performed again after the step (2),
18. Impurities are removed to remove impurities.
The method for producing a cyanocarboxylic acid according to any one of 1. 【請求項１９】工程（２）により回収したシアノ安息香
酸の含水ケーキを、振動乾燥機および／または撹拌乾燥
機を用い、乾燥と粉砕を行うことを特徴とする請求項１
ないし１８のいずれかに記載のシアノカルボン酸の製
法。19. The water-containing cake of cyanobenzoic acid recovered in step (2) is dried and pulverized by using a vibration dryer and / or a stirring dryer.
19. The method for producing a cyanocarboxylic acid according to any one of 18 to 18. 【請求項２０】シアノカルボン酸の含水率が１．０質量
％以下であり、粒度が５００μｍ以下であることを特徴
とする請求項１９に記載のシアノカルボン酸の製法。20. The process for producing a cyanocarboxylic acid according to claim 19, wherein the water content of the cyanocarboxylic acid is 1.0% by mass or less and the particle size is 500 μm or less. 【請求項２１】工程（１）により回収した反応液中の微
生物菌体を再使用することを特徴とする請求項１ないし
２０のいずれかに記載のシアノカルボン酸の製法。21. The method for producing a cyanocarboxylic acid according to any one of claims 1 to 20, wherein the microbial cells in the reaction solution recovered in step (1) are reused. 【請求項２２】工程（１）により回収した反応液中の残
存するポリニトリル化合物を再使用することを特徴とす
る請求項１ないし２１のいずれかに記載のシアノカルボ
ン酸の製法。22. The process for producing a cyanocarboxylic acid according to claim 1, wherein the polynitrile compound remaining in the reaction solution recovered in step (1) is reused. 【請求項２３】反応液の一部を、連続または断続的に工
程（１）に供することにより濾液側に生成物を回収する
とともに、濾過残分を再希釈し、反応と生成物の回収
を、並行または交互に実施することを特徴とする請求項
１ないし２２のいずれかに記載のシアノカルボン酸の製
法。23. A product is recovered on the filtrate side by subjecting a part of the reaction solution to the step (1) continuously or intermittently, and the filtration residue is rediluted to recover the reaction and the product. The method for producing a cyanocarboxylic acid according to any one of claims 1 to 22, wherein the method is carried out in parallel or alternately. 【請求項２４】ポリニトリル化合物が、化学式（Ｉ） 【化１】 [式中、Ｒは２価の、炭素数１〜８のアルキル基、アリ
ール基、アラルキル基（一方はアラルキル基のアリール
環に結合手を有していてもよい。）または複素環基を表
し、これらは１個ないし複数のハロゲン、水酸基、アミ
ノ基、シアノ基、または炭素数１〜８のアルキル基で置
換されていてもよい。]に示す化合物であり、シアノカ
ルボン酸が、対応する化学式（ＩＩ） 【化２】 （式中、Ｒは、上記Ｒと同じ意味を表す。）に示す化合
物であることを特徴とする請求項１ないし２３のいずれ
かに記載のシアノカルボン酸の製法。24. The polynitrile compound has the formula (I): [In the formula, R represents a divalent alkyl group having 1 to 8 carbon atoms, an aryl group, an aralkyl group (one of which may have a bond on the aryl ring of the aralkyl group) or a heterocyclic group. These may be substituted with one or more halogen, a hydroxyl group, an amino group, a cyano group, or an alkyl group having 1 to 8 carbon atoms. ], Wherein the cyanocarboxylic acid has the corresponding chemical formula (II): The method for producing a cyanocarboxylic acid according to any one of claims 1 to 23, which is a compound represented by the formula (wherein R represents the same meaning as R above). 【請求項２５】分離精製して得られるシアノカルボン酸
の純度が９９．０質量％以上であることを特徴とする請
求項１ないし２４のいずれかに記載のシアノカルボン酸
の製法。25. The process for producing a cyanocarboxylic acid according to any one of claims 1 to 24, wherein the purity of the cyanocarboxylic acid obtained by separation and purification is 99.0% by mass or more.