JP2003262636A - Detection implement for low-molecular weight substance - Google Patents

Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a detecting implement for a low-molecular weight substance, using immunochromatography which takes into consideration the problem accompanied by the immunochromatography and which increases the intensity of coloring operation in a detection part according to a concentration of an environmental contaminant, such as dioxins or the like, as a target substance in a test substance and to detect the environmental contaminant simply and with high sensitivity. <P>SOLUTION: The detecting implement for the low-molecular weight substance is provided so as to contain (1) a test-sample application part used to bring a test sample into contact; (2) a labeling-body reaction part, in which a labeling body as a part of an antibody capable of being bonded to the target substance, is contained in the test sample in a nonbonded state; (3) an unreacted labeling- body capturing part, in which an element capable of capturing a free labeling body not bonded to the target substance is contained in a bonded state; and (4) a detection part containing a detecting element generating visual changes, when coming into contact with the target substance with the bonded labeling body, and the target substance is a low-molecular artificial substance which exists in living environment as a trace amount component. <P>COPYRIGHT: (C)2003,JPO

Description

【発明の詳細な説明】Detailed Description of the Invention

【０００１】[0001]

【発明の属する技術分野】本発明は、特定物質の検出器
具に関する発明である。TECHNICAL FIELD The present invention relates to an instrument for detecting a specific substance.

【０００２】[0002]

【従来の技術】近年、ダイオキシン類、ＰＣＢ類、その
他の環境汚染物質による、環境汚染が深刻化し、人体お
よび生体への影響が懸念されている。これまで、ダイオ
キシン類等の環境汚染物質の検出方法としては、ガス・
クロマトグラフ質量分析法（ＧＣ−ＭＳ法）を中心とし
た分析法が用いられてきた。ＧＣ−ＭＳ法は、公定分析
法として用いられており、その感度、精度共、非常に優
れた方法であるが、特殊な装置を必要とするために、分
析コストが高く、分析の手順自体も煩雑である等の問題
点が認められる。2. Description of the Related Art In recent years, environmental pollution due to dioxins, PCBs, and other environmental pollutants has become serious, and there is concern about the effects on human bodies and living bodies. Up to now, gas, as a detection method of environmental pollutants such as dioxins,
Analysis methods centered on chromatographic mass spectrometry (GC-MS method) have been used. The GC-MS method is used as an official analytical method and is an extremely excellent method in terms of both sensitivity and accuracy, but it requires a special device, so the analysis cost is high, and the analytical procedure itself is also high. Problems such as complexity are recognized.

【０００３】[0003]

【発明が解決しようとする課題】ダイオキシン類等の環
境汚染物質を、一般的には、ＧＣ−ＭＳ法よりも簡便
な、これらの化学物質に対する抗体を用いるＥＬＩＳＡ
法により、検出を行うことは、上記の問題点の解決手段
の一つとして認められている。ELISA using environmental pollutants such as dioxins, which is generally simpler than the GC-MS method, using antibodies against these chemical substances.
The detection by the method is recognized as one of the means for solving the above problems.

【０００４】すなわち、ＥＬＩＳＡ法は、定量性に優れ
高感度であるが、通常、サンプルの検出に特殊な機器を
必要とするか、必要としない場合でも、検出するまでの
時間が１時間以上かかる等の欠点を有している。これら
の欠点を補うため、操作が単純で、高感度であり、検出
時間が短い最も簡便な手法として、免疫クロマトグラフ
ィーが注目されている。That is, although the ELISA method is excellent in quantification and has high sensitivity, it usually takes one hour or more to detect a sample even if it requires a special instrument for detecting it or does not require it. It has drawbacks such as In order to compensate for these drawbacks, immunochromatography has been attracting attention as the simplest method that is simple in operation, highly sensitive, and has a short detection time.

【０００５】免疫クロマトグラフィーにおいて最も広く
利用されているＥＬＩＳＡ法の態様としては、被験物質
である高分子物質（それ自身で抗原性を有する物質）の
異なる部位に結合する２種類の抗体を利用したサンドイ
ッチ法が挙げられる。このサンドイッチ法を利用した検
出器具では、標的物質となっている高分子物質の濃度に
比例した強度の着色を生じ、被験物質の検出が容易であ
ることから、病院での臨床検査、家庭での妊娠検査等に
おいて、広く普及している。As the most widely used embodiment of the ELISA method in immunochromatography, two kinds of antibodies that bind to different sites of a high-molecular substance (substance having antigenicity by itself) as a test substance are used. The sandwich method can be mentioned. With a detection instrument using this sandwich method, coloring occurs with an intensity that is proportional to the concentration of the high-molecular substance that is the target substance, and it is easy to detect the test substance. It is widely used in pregnancy tests.

【０００６】しかしながら、被験物質が、ダイオキシン
類やＰＣＢ類のように、低分子化合物である場合は、低
分子化合物と抗体との分子量の差が著しいため、サンド
イッチ法を適用することは困難である。このため、低分
子化合物を免疫クロマトグラフィーで検出する際には、
標的となる低分子化合物と、低分子化合物もしくは低分
子化合物に対する類似化合物を、抗体に対する結合にお
いて競合させて、標的低分子化合物を検出する、競合法
が用いられている。However, when the test substance is a low molecular weight compound such as dioxins and PCBs, it is difficult to apply the sandwich method because the difference in molecular weight between the low molecular weight compound and the antibody is remarkable. . Therefore, when detecting low molecular compounds by immunochromatography,
A competitive method has been used in which a target low-molecular weight compound and a low-molecular weight compound or a similar compound to the low-molecular weight compound are competed in binding to an antibody to detect the target low-molecular weight compound.

【０００７】ただし、競合法を用いた場合は、低分子化
合物の濃度に反比例した強度の着色を指標にせざるを得
ないため、標的物質の濃度に比例した強度の着色を指標
とするサンドイッチ法に比較し、被験物質の判定が煩雑
となる。このため、競合法を用いた免疫クロマトグラフ
ィーは、広く普及するに至っておらず、ダイオキシンや
ＰＣＢ等の低分子の環境汚染物質の検出に用いることは
困難である。[0007] However, when the competitive method is used, the intensity of coloring which is inversely proportional to the concentration of the low molecular weight compound must be used as an index. Therefore, the sandwich method which uses the intensity of coloring proportional to the concentration of the target substance as an index. By comparison, determination of the test substance becomes complicated. Therefore, immunochromatography using the competitive method has not been widely spread, and it is difficult to use it for detecting low molecular environmental pollutants such as dioxin and PCB.

【０００８】そこで、本発明は、このような低分子化合
物検出用の従来型免疫クロマトグラフィーが有する問題
点を考慮し、被験物質中の標的物質であるダイオキシン
類等の環境汚染物質の濃度の上昇に応じて、検出部位に
おける着色の強度が増加する、免疫クロマトグラフィー
を用いた低分子物質の検出器具を提供し、簡便、かつ、
鋭敏に、環境汚染物質の検出を行う途を与えることを目
的とする。Therefore, the present invention considers the problems of the conventional immunochromatography for detecting such low molecular weight compounds, and increases the concentration of environmental pollutants such as dioxins which are the target substances in the test substance. According to the above, the intensity of coloring at the detection site is increased, and a device for detecting a low-molecular substance using immunochromatography is provided, which is simple and
The purpose is to provide a sensitive way to detect environmental pollutants.

【０００９】[0009]

【課題を解決するための手段】本発明者は、これらの課
題の解決に向けて鋭意検討を重ねた結果、以下の低分子
物質検出器具を提供することにより、この課題を解決し
得ることを見出した。Means for Solving the Problems As a result of extensive studies aimed at solving these problems, the present inventor has found that this problem can be solved by providing the following low molecular weight substance detection instrument. I found it.

【００１０】すなわち、本発明は、被験試料を接触さ
せるための、被験試料適用部位、被験試料中の標的物
質に結合し得る抗体を一部とする標識体を非結合状態で
含む、標識体反応部位、標的物質に結合していないフ
リーの標識体を捕捉することが可能な要素を結合状態で
含む、未反応標識体捕捉部位、および、標識体が結合
した標的物質と接触すると視覚的な変化を生じる検出要
素を含む、検出部位、を含み、かつ、標的物質が、微量
成分として生活環境に存在する低分子人工化学物質であ
る、低分子物質検出器具（以下、本検出器具ともいう）
を提供する発明である。[0010] That is, the present invention provides a labeled substance reaction, which comprises, in an unbound state, a labeled sample which is a site for application of a test sample for contacting a test sample and an antibody capable of binding to a target substance in the test sample. The site, the unreacted label capturing site containing the element capable of capturing the free label that is not bound to the target substance in a bound state, and the visual change when the label is bound to the target substance Low molecular substance detection instrument (hereinafter also referred to as the present detection instrument), which includes a detection site that includes a detection element that causes
Is an invention that provides.

【００１１】[0011]

【発明の実施の形態】以下、本発明の実施の形態を説明
する。第１図は、本検出器具の一実施態様を示した図面
（上面図）であり、第２図は、第１図の本検出器具１０
を、実線Ｉ−Ｉ’に沿って横断して示した横断面図であ
る。BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION Embodiments of the present invention will be described below. FIG. 1 is a drawing (top view) showing one embodiment of the present detection instrument, and FIG. 2 is the present detection instrument 10 of FIG.
FIG. 3 is a transverse cross-sectional view showing a cross section along a solid line II ′.

【００１２】本検出器具１０において、被験試料適用部
位１、標識体反応部位２、メンブレン６、および、吸収
部位５は、各々、細長形状の薄膜７の上面に全部または
一部が、接着している。また、未反応標識体捕捉部位３
と検出部位４は、メンブレン６上に、各々、設けられて
いる。より詳細には、まず、薄膜７の一端に、被験試料
適用部位１の一端側が接着されている。これに対して、
被験試料適用部位１の他端側は、その一端が被験試料適
用部位１の薄膜７との接着部分（被験試料適用部位１の
一端側）と隣合って、薄膜７に接着されている標識体反
応部位２の、一端側の上面に被さって、標識体反応部位
２と接触している。また、標識体反応部位２の他端側
は、その一端が標識体反応部位２の薄膜７との接着部分
（標識体反応部位２の一端側）と隣合って、その全面が
薄膜７に接着されているメンブレン６の一端側の上面に
被さって、メンブレン６と接触している。薄膜７の他端
には、吸収部位５の一端側が接着されている。これに対
して、吸収部位５の他端側は、メンブレン６の他端側の
上面に被さって、メンブレン６と接触している。In the detection instrument 10, the test sample application site 1, the labeled substance reaction site 2, the membrane 6 and the absorption site 5 are all or partially adhered to the upper surface of the elongated thin film 7. There is. In addition, the unreacted labeled substance capturing site 3
The detection site 4 and the detection site 4 are provided on the membrane 6, respectively. More specifically, first, one end of the test sample application site 1 is bonded to one end of the thin film 7. On the contrary,
The other end side of the test sample application site 1 is adjacent to one end of the test sample application site 1 where the thin film 7 is adhered (one end side of the test sample application site 1) and is attached to the thin film 7. The reaction site 2 covers the upper surface on one end side and is in contact with the label reaction site 2. Further, one end of the other end of the labeled substance reaction site 2 is adjacent to an adhesive portion of the labeled substance reaction site 2 with the thin film 7 (one end side of the labeled substance reaction site 2), and the entire surface thereof is bonded to the thin film 7. The upper surface of the one end of the membrane 6 is covered and is in contact with the membrane 6. One end of the absorption site 5 is bonded to the other end of the thin film 7. On the other hand, the other end side of the absorption site 5 covers the upper surface of the other end side of the membrane 6 and is in contact with the membrane 6.

【００１３】未反応標識体捕捉部位３と検出部位４は、
両者共、これらの部位を構成する化学成分を、メンブレ
ン６に固定することにより、メンブレン６において設け
られている。The unreacted label capturing part 3 and the detecting part 4 are
Both of them are provided in the membrane 6 by fixing the chemical components constituting these parts to the membrane 6.

【００１４】本検出器具１０において、被験試料は、こ
れを接触させる被験試料適用部位１から吸収部位５に向
けて、毛細管現象により移動して、被験試料中の低分子
物質の検出が行われる（以下、本検出器具の被験試料適
用部位側を「上流」、同吸収部位側を「下流」ともい
う）。第１図および第２図において、上流から下流への
被験試料の移動方向は、矢印７により示される。In the detection instrument 10, the test sample moves by capillary action from the test sample application site 1 with which the test sample is brought into contact to the absorption site 5, and the low molecular weight substance in the test sample is detected ( Hereinafter, the test sample application site side of the detection instrument is also referred to as “upstream”, and the absorption site side is also referred to as “downstream”). In FIGS. 1 and 2, the direction of movement of the test sample from upstream to downstream is indicated by arrow 7.

【００１５】本検出器具１０における被験試料中の標的
物質は、微量成分として生活環境に存在する低分子人工
化学物質（以下、これらの物質を、「環境汚染物質」と
総称することもある）である。環境汚染物質としては、
特に、いわゆる「環境ホルモン」として、内分泌攪乱作
用が疑われる物質が、好適な対象として挙げられる。具
体的には、ダイオキシン類、ポリ塩化ビフェニール（Ｐ
ＣＢ）類、ポリ臭化ビフェニール（ＰＢＢ）類、ヘキサ
クロロベンゼン（ＨＣＢ）、ペンタクロロフェノール
（ＰＣＰ）、2,4,5-トリクロロフェノキシ酢酸、2,4-ジ
クロロフェノキシ酢酸、アミトロール、アトラジン、ア
ラクロール、ＣＡＴ（シマジン）、ヘキサクロロシクロ
ヘキサン、エチルパラチオン、ＮＡＣ（カルバリル）、
クロルデン、オキシクロルデン、trans-ノナクロル、1,
2-ジブロモ-3- クロロプロパン、ＤＤＴ（ジクロロジフ
ェニルトリクロロエタン）、ＤＤＥ（ジクロロジフェニ
ルトリクロロエチレン）、ＤＤＤ（ジクロロジフェニル
ジクロロエタン）、ケルセン、アルドリン、エンドリ
ン、ディルドリン、エンドスルファン（ベンゾエピ
ン）、ヘプタクロル、ヘプタクロルエポキサイド、マラ
チオン、メソミル、メトキシクロル、マイレックス、ニ
トロフェン、トキサフェン、トリブチルスズ、トリフェ
ニルスズ、トリフルラリン、アルキルフェノール（Ｃ５
〜Ｃ９）ノニルフェノール、オクチルフェノール、ビス
フェノールＡ、フタル酸ジ-2- エチルヘキシル、フタル
酸ブチルベンジル、フタル酸ジ- ｎ- ブチル、フタル酸
ジシクロヘキシル、フタル酸ジエチル、ベンゾ（ａ）ピ
レン、2,4 ー ジクロロフェノール、アジピン酸ジ-2- エ
チルヘキシル、ベンゾフェノン、4-ニトロトルエン、ア
ルディカーブ、ベノミル、キーポン（クロルデコン）、
マンゼブ（マンコゼブ）、マンネブ、メチラム、メトリ
ブジン、シペルメトリン、エスフェンバレレート、フェ
ンバレレート、ペルメトリン、ビンクロゾリン、ジネ
ブ、ジラム、フタル酸ジペンチル、フタル酸ジヘキシ
ル、フタル酸ジプロピル等が挙げられる。The target substance in the test sample in the detection instrument 10 is a low-molecular artificial chemical substance existing in the living environment as a trace component (hereinafter, these substances may be collectively referred to as "environmental pollutants"). is there. As environmental pollutants,
In particular, as a so-called “environmental hormone”, a substance suspected of having an endocrine disrupting action is mentioned as a suitable target. Specifically, dioxins, polychlorinated biphenyls (P
CB) s, polybrominated biphenyls (PBBs), hexachlorobenzene (HCB), pentachlorophenol (PCP), 2,4,5-trichlorophenoxyacetic acid, 2,4-dichlorophenoxyacetic acid, amitrole, atrazine, alachlor , CAT (simazine), hexachlorocyclohexane, ethyl parathion, NAC (carbaryl),
Chlordane, oxychlordane, trans-nonachlor, 1,
2-dibromo-3-chloropropane, DDT (dichlorodiphenyltrichloroethane), DDE (dichlorodiphenyltrichloroethylene), DDD (dichlorodiphenyldichloroethane), quelsen, aldrin, endrin, dieldrin, endosulfan (benzoepine), heptachlor, heptachlorepoxide, malathion, mesomil. , Methoxychlor, Milex, nitrophen, toxaphene, tributyltin, triphenyltin, trifluralin, alkylphenol (C5
To C9) nonylphenol, octylphenol, bisphenol A, di-2-ethylhexyl phthalate, butylbenzyl phthalate, di-n-butyl phthalate, dicyclohexyl phthalate, diethyl phthalate, benzo (a) pyrene, 2,4-dichloro Phenol, di-2-ethylhexyl adipate, benzophenone, 4-nitrotoluene, aldicarb, benomyl, keepon (chlordecone),
Examples include manzeb (mancozeb), manneb, methylam, metribuzin, cypermethrin, esfenvalerate, fenvalerate, permethrin, vinclozolin, zineb, diram, dipentyl phthalate, dihexyl phthalate, dipropyl phthalate and the like.

【００１６】上に列挙した環境汚染物質の中でも、最も
典型的には、ダイオキシン類やＰＣＢ類が挙げらる。ダ
イオキシン類としては、例えば、ダイオキシン類特別措
置法で指定されている２９種類のダイオキシン類を挙げ
ることができる。すなわち、2,3,7,8-Ｔ₄ ＣＤＤ、1,2,
3,7,8-Ｐ₅ ＣＤＤ、1,2,3,4,7,8-Ｈ₆ ＣＤＤ、1,2,3,6,
7,8-Ｈ₆ ＣＤＤ、1,2,3,7,8,9-Ｈ₆ ＣＤＤ、1,2,3,4,6,
7,8-Ｈ₇ ＣＤＤ、1,2,3,4,6,7,8,9-Ｏ₈ ＣＤＤ等のジベ
ンゾダイオキシン類；3,4,4',5- Ｔ₄ ＣＢ、3,3',4,4'-
Ｔ₄ ＣＢ、3,3',4,4',5-Ｐ₅ ＣＢ、3,3',4,4',5,5'- Ｈ
₆ ＣＢ、2,3,3',4,4'-Ｐ₅ ＣＢ、2,3,4,4',5- Ｐ₅ Ｃ
Ｂ、2,3',4,4',5-Ｐ₅ ＣＢ、2',3,4,4',5-Ｐ₅ ＣＢ、2,
3,3',4,4',5-Ｈ₆ ＣＢ、2,3,3',4,4',5'- Ｈ₆ ＣＢ、2,
3',4,4',5,5'- Ｈ₆ ＣＢ、2,3,3',4,4',5,5'- Ｈ₇ ＣＢ
等のコプラナーＰＣＢ類；2,3,7,8-Ｔ₄ ＣＤＦ、1,2,3,
7,8-Ｐ₅ ＣＤＦ、2,3,4,7,8-Ｐ₅ ＣＤＦ、1,2,3,4,7,8-
Ｈ₆ＣＤＦ、1,2,3,6,7,8-Ｈ₆ ＣＤＦ、1,2,3,7,8,9-Ｈ
₆ ＣＤＦ、2,3,4,6,7,8-Ｈ₆ＣＤＦ、1,2,3,4,6,7,8-Ｈ
₇ ＣＤＦ、1,2,3,4,7,8,9-Ｈ₇ ＣＤＦ、1,2,3,4,6,7,8,
9-Ｏ₈ ＣＤＦ等のジベンゾフラン類等が挙げられる。Among the environmental pollutants listed above, the most typical examples are dioxins and PCBs. Examples of dioxins include 29 types of dioxins specified by the Act on Special Measures for Dioxins. That is, 2,3,7,8-T ₄ CDD, 1,2,
3,7,8-P ₅ CDD, 1,2,3,4,7,8-H ₆ CDD, 1,2,3,6,
7,8-H ₆ CDD, 1,2,3,7,8,9-H ₆ CDD, 1,2,3,4,6,
Dibenzodioxins such as 7,8-H ₇ CDD, 1,2,3,4,6,7,8,9-O ₈ CDD; 3,4,4 ′, 5-T ₄ CB, 3,3 ′ , 4,4'-
T ₄ CB, 3,3 ', 4,4', 5-P ₅ CB, 3,3 ', 4,4', 5,5'-H
₆ CB, 2,3,3 ', 4,4'-P ₅ CB, 2,3,4,4', 5-P ₅ C
B, 2,3 ', 4,4', 5-P ₅ CB, 2 ', 3,4,4', 5-P ₅ CB, 2,
3,3 ', 4,4', 5- H 6 CB, 2,3,3 ', 4,4', 5'- H 6 CB, 2,
3 ', 4,4', 5,5'- H 6 CB, 2,3,3 ', 4,4', 5,5'- H 7 CB
Coplanar PCBs such as: 2,3,7,8-T ₄ CDF, 1,2,3,
7,8-P ₅ CDF, 2,3,4,7,8-P ₅ CDF, 1,2,3,4,7,8-
H ₆ CDF, 1,2,3,6,7,8-H ₆ CDF, 1,2,3,7,8,9-H
₆ CDF, 2,3,4,6,7,8-H ₆ CDF, 1,2,3,4,6,7,8-H
₇ CDF, 1,2,3,4,7,8,9-H ₇ CDF, 1,2,3,4,6,7,8,
Examples include dibenzofurans such as 9-O ₈ CDF.

【００１７】ＰＣＢ類としては、例えば、2-Monochloro
biphenyl、3-Monochlorobiphenyl、4-Monochlorobiphen
yl；Examples of PCBs include 2-Monochloro.
biphenyl, 3-Monochlorobiphenyl, 4-Monochlorobiphen
yl ；

【００１８】2,2'-Dichlorobiphenyl 、2,3-Dichlorobi
phenyl、2,3'-Dichlorobiphenyl 、2,4-Dichlorobiphen
yl、2,4'-Dichlorobiphenyl 、2,5-Dichlorobiphenyl、
2,6-Dichlorobiphenyl、3,3'-Dichlorobiphenyl 、3,4-
Dichlorobiphenyl、3,4'-Dichlorobiphenyl 、3,5-Dich
lorobiphenyl、4,4'-Dichlorobiphenyl ；2,2',3-Trich
lorobiphenyl、2,2',4-Trichlorobiphenyl、2,2',5-Tri
chlorobiphenyl、2,2',6-Trichlorobiphenyl、2,3,3'-T
richlorobiphenyl、2,3,4-Trichlorobiphenyl 、2,3,4'
-Trichlorobiphenyl、2,3,5-Trichlorobiphenyl 、2,3,
6-Trichlorobiphenyl 、2,3',4-Trichlorobiphenyl、2,
3',5-Trichlorobiphenyl、2,3',6-Trichlorobiphenyl、
2,4,4'-Trichlorobiphenyl、2,4,5-Trichlorobiphenyl
、2,4,6-Trichlorobiphenyl 、2,4',5-Trichlorobiphe
nyl、2,4',6-Trichlorobiphenyl、2',3,4-Trichlorobip
henyl、2',3,5-Trichlorobiphenyl、3,3',4-Trichlorob
iphenyl、3,3',5-Trichlorobiphenyl、3,4,4'-Trichlor
obiphenyl、3,4,5-Trichlorobiphenyl 、3,4',5-Trichl
orobiphenyl；2,2'-Dichlorobiphenyl, 2,3-Dichlorobi
phenyl, 2,3'-Dichlorobiphenyl, 2,4-Dichlorobiphen
yl, 2,4'-Dichlorobiphenyl, 2,5-Dichlorobiphenyl,
2,6-Dichlorobiphenyl, 3,3'-Dichlorobiphenyl, 3,4-
Dichlorobiphenyl, 3,4'-Dichlorobiphenyl, 3,5-Dich
lorobiphenyl, 4,4'-Dichlorobiphenyl ； 2,2 ', 3-Trich
lorobiphenyl, 2,2 ', 4-Trichlorobiphenyl, 2,2', 5-Tri
chlorobiphenyl, 2,2 ', 6-Trichlorobiphenyl, 2,3,3'-T
richlorobiphenyl, 2,3,4-Trichlorobiphenyl, 2,3,4 '
-Trichlorobiphenyl, 2,3,5-Trichlorobiphenyl, 2,3,
6-Trichlorobiphenyl, 2,3 ', 4-Trichlorobiphenyl, 2,
3 ', 5-Trichlorobiphenyl, 2,3', 6-Trichlorobiphenyl,
2,4,4'-Trichlorobiphenyl, 2,4,5-Trichlorobiphenyl
, 2,4,6-Trichlorobiphenyl, 2,4 ', 5-Trichlorobiphe
nyl, 2,4 ', 6-Trichlorobiphenyl, 2', 3,4-Trichlorobip
henyl, 2 ', 3,5-Trichlorobiphenyl, 3,3', 4-Trichlorob
iphenyl, 3,3 ', 5-Trichlorobiphenyl, 3,4,4'-Trichlor
obiphenyl, 3,4,5-Trichlorobiphenyl, 3,4 ', 5-Trichl
orobiphenyl ；

【００１９】2,2',3,3'-Tetrachlorobiphenyl 、2,2',
3,4-Tetrachlorobiphenyl、2,2',3,4'-Tetrachlorobiph
enyl 、2,2',3,5-Tetrachlorobiphenyl、2,2',3,5'-Tet
rachlorobiphenyl 、2,2',3,6-Tetrachlorobiphenyl、
2,2',3,6'-Tetrachlorobiphenyl 、2,2',4,4'-Tetrachl
orobiphenyl 、2,2',4,5-Tetrachlorobiphenyl、2,2',
4,5'-Tetrachlorobiphenyl 、2,2',4,6-Tetrachlorobip
henyl、2,2',4,6'-Tetrachlorobiphenyl 、2,2',5,5'-T
etrachlorobiphenyl 、2,2',5,6'-Tetrachlorobiphenyl
、2,2',6,6'-Tetrachlorobiphenyl 、2,3,3',4-Tetrac
hlorobiphenyl、2,3,3',4'-Tetrachlorobiphenyl 、2,
3,3',5-Tetrachlorobiphenyl、2,3,3',5'-Tetrachlorob
iphenyl 、2,3,3',6-Tetrachlorobiphenyl、2,3,4,4'-T
etrachlorobiphenyl、2,3,4,5-Tetrachlorobiphenyl 、
2,3,4,6-Tetrachlorobiphenyl 、2,3,4',5-Tetrachloro
biphenyl、2,3,4',6-Tetrachlorobiphenyl、2,3,5,6-Te
trachlorobiphenyl 、2,3',4,4'-Tetrachlorobiphenyl
、2,3',4,5-Tetrachlorobiphenyl、2,3',4,5'-Tetrach
lorobiphenyl 、2,3',4,6-Tetrachlorobiphenyl、2,3',
4',5-Tetrachlorobiphenyl 、2,3',4',6-Tetrachlorobi
phenyl 、2,3',5,5'-Tetrachlorobiphenyl 、2,3',5',6
-Tetrachlorobiphenyl 、2,4,4',5-Tetrachlorobipheny
l、2,4,4',6-Tetrachlorobiphenyl、2',3,4,5-Tetrachl
orobiphenyl、3,3',4,4'-Tetrachlorobiphenyl 、3,3',
4,5-Tetrachlorobiphenyl、3,3',4,5'-Tetrachlorobiph
enyl 、3,3',5,5'-Tetrachlorobiphenyl 、3,4,4',5-Te
trachlorobiphenyl；2,2 ', 3,3'-Tetrachlorobiphenyl, 2,2',
3,4-Tetrachlorobiphenyl, 2,2 ', 3,4'-Tetrachlorobiph
enyl, 2,2 ', 3,5-Tetrachlorobiphenyl, 2,2', 3,5'-Tet
rachlorobiphenyl, 2,2 ', 3,6-Tetrachlorobiphenyl,
2,2 ', 3,6'-Tetrachlorobiphenyl, 2,2', 4,4'-Tetrachl
orobiphenyl, 2,2 ', 4,5-Tetrachlorobiphenyl, 2,2',
4,5'-Tetrachlorobiphenyl, 2,2 ', 4,6-Tetrachlorobip
henyl, 2,2 ', 4,6'-Tetrachlorobiphenyl, 2,2', 5,5'-T
etrachlorobiphenyl, 2,2 ', 5,6'-Tetrachlorobiphenyl
, 2,2 ', 6,6'-Tetrachlorobiphenyl, 2,3,3', 4-Tetrac
hlorobiphenyl, 2,3,3 ', 4'-Tetrachlorobiphenyl, 2,
3,3 ', 5-Tetrachlorobiphenyl, 2,3,3', 5'-Tetrachlorob
iphenyl, 2,3,3 ', 6-Tetrachlorobiphenyl, 2,3,4,4'-T
etrachlorobiphenyl, 2,3,4,5-Tetrachlorobiphenyl,
2,3,4,6-Tetrachlorobiphenyl, 2,3,4 ', 5-Tetrachloro
biphenyl, 2,3,4 ', 6-Tetrachlorobiphenyl, 2,3,5,6-Te
trachlorobiphenyl, 2,3 ', 4,4'-Tetrachlorobiphenyl
, 2,3 ', 4,5-Tetrachlorobiphenyl, 2,3', 4,5'-Tetrach
lorobiphenyl, 2,3 ', 4,6-Tetrachlorobiphenyl, 2,3',
4 ', 5-Tetrachlorobiphenyl, 2,3', 4 ', 6-Tetrachlorobi
phenyl, 2,3 ', 5,5'-Tetrachlorobiphenyl, 2,3', 5 ', 6
-Tetrachlorobiphenyl, 2,4,4 ', 5-Tetrachlorobipheny
l, 2,4,4 ', 6-Tetrachlorobiphenyl, 2', 3,4,5-Tetrachl
orobiphenyl, 3,3 ', 4,4'-Tetrachlorobiphenyl, 3,3',
4,5-Tetrachlorobiphenyl, 3,3 ', 4,5'-Tetrachlorobiph
enyl, 3,3 ', 5,5'-Tetrachlorobiphenyl, 3,4,4', 5-Te
trachlorobiphenyl ；

【００２０】2,2',3,3',4-Pentachlorobiphenyl 、2,
2',3,3',5-Pentachlorobiphenyl 、2,2',3,3',6-Pentac
hlorobiphenyl 、2,2',3,4,4'-Pentachlorobiphenyl 、
2,2',3,4,5-Pentachlorobiphenyl、2,2',3,4,5'-Pentac
hlorobiphenyl 、2,2',3,4,6-Pentachlorobiphenyl、2,
2',3,4,6'-Pentachlorobiphenyl 、2,2',3,4',5-Pentac
hlorobiphenyl 、2,2',3,4',6-Pentachlorobiphenyl 、
2,2',3,5,5'-Pentachlorobiphenyl 、2,2',3,5,6-Penta
chlorobiphenyl、2,2',3,5,6'-Pentachlorobiphenyl 、
2,2',3,5',6-Pentachlorobiphenyl 、2,2',3,6,6'-Pent
achlorobiphenyl、2,2',3',4,5-Pentachlorobiphenyl
、2,2',3',4,6-Pentachlorobiphenyl 、2,2',4,4',5-P
entachlorobiphenyl 、2,2',4,4',6-Pentachlorobiphen
yl 、2,2',4,5,5'-Pentachlorobiphenyl 、2,2',4,5,6'
-Pentachlorobiphenyl 、2,2',4,5',6-Pentachlorobiph
enyl 、2,2',4,6,6'-Pentachlorobiphenyl 、2,3,3',4,
4'-Pentachlorobiphenyl 、2,3,3',4,5-Pentachlorobip
henyl、2,3,3',4',5-Pentachlorobiphenyl 、2,3,3',4,
5'-Pentachlorobiphenyl 、2,3,3',4,6-Pentachlorobip
henyl、2,3,3',4',6-Pentachlorobiphenyl 、2,3,3',5,
5'-Pentachlorobiphenyl 、2,3,3',5,6-Pentachlorobip
henyl、2,3,3',5',6-Pentachlorobiphenyl 、2,3,4,4',
5-Pentachlorobiphenyl、2,3,4,4',6-Pentachlorobiphe
nyl、2,3,4,5,6-Pentachlorobiphenyl 、2,3,4',5,6-Pe
ntachlorobiphenyl、2,3',4,4',5-Pentachlorobiphenyl
、2,3',4,4',6-Pentachlorobiphenyl 、2,3',4,5,5'-P
entachlorobiphenyl 、2,3',4,5',6-Pentachlorobiphen
yl 、2',3,3',4,5-Pentachlorobiphenyl 、2',3,4,4',5
-Pentachlorobiphenyl 、2',3,4,5,5'-Pentachlorobiph
enyl 、2',3,4,5,6'-Pentachlorobiphenyl 、3,3',4,
4',5-Pentachlorobiphenyl 、3,3',4,5,5'-Pentachloro
biphenyl ；2,2 ', 3,3', 4-Pentachlorobiphenyl, 2,
2 ', 3,3', 5-Pentachlorobiphenyl, 2,2 ', 3,3', 6-Pentac
hlorobiphenyl, 2,2 ', 3,4,4'-Pentachlorobiphenyl,
2,2 ', 3,4,5-Pentachlorobiphenyl, 2,2', 3,4,5'-Pentac
hlorobiphenyl, 2,2 ', 3,4,6-Pentachlorobiphenyl, 2,
2 ', 3,4,6'-Pentachlorobiphenyl, 2,2', 3,4 ', 5-Pentac
hlorobiphenyl, 2,2 ', 3,4', 6-Pentachlorobiphenyl,
2,2 ', 3,5,5'-Pentachlorobiphenyl, 2,2', 3,5,6-Penta
chlorobiphenyl, 2,2 ', 3,5,6'-Pentachlorobiphenyl,
2,2 ', 3,5', 6-Pentachlorobiphenyl, 2,2 ', 3,6,6'-Pent
achlorobiphenyl, 2,2 ', 3', 4,5-Pentachlorobiphenyl
, 2,2 ', 3', 4,6-Pentachlorobiphenyl, 2,2 ', 4,4', 5-P
entachlorobiphenyl, 2,2 ', 4,4', 6-Pentachlorobiphen
yl, 2,2 ', 4,5,5'-Pentachlorobiphenyl, 2,2', 4,5,6 '
-Pentachlorobiphenyl, 2,2 ', 4,5', 6-Pentachlorobiph
enyl, 2,2 ', 4,6,6'-Pentachlorobiphenyl, 2,3,3', 4,
4'-Pentachlorobiphenyl, 2,3,3 ', 4,5-Pentachlorobip
henyl, 2,3,3 ', 4', 5-Pentachlorobiphenyl, 2,3,3 ', 4,
5'-Pentachlorobiphenyl, 2,3,3 ', 4,6-Pentachlorobip
henyl, 2,3,3 ', 4', 6-Pentachlorobiphenyl, 2,3,3 ', 5,
5'-Pentachlorobiphenyl, 2,3,3 ', 5,6-Pentachlorobip
henyl, 2,3,3 ', 5', 6-Pentachlorobiphenyl, 2,3,4,4 ',
5-Pentachlorobiphenyl, 2,3,4,4 ', 6-Pentachlorobiphe
nyl, 2,3,4,5,6-Pentachlorobiphenyl, 2,3,4 ', 5,6-Pe
ntachlorobiphenyl, 2,3 ', 4,4', 5-Pentachlorobiphenyl
, 2,3 ', 4,4', 6-Pentachlorobiphenyl, 2,3 ', 4,5,5'-P
entachlorobiphenyl, 2,3 ', 4,5', 6-Pentachlorobiphen
yl, 2 ', 3,3', 4,5-Pentachlorobiphenyl, 2 ', 3,4,4', 5
-Pentachlorobiphenyl, 2 ', 3,4,5,5'-Pentachlorobiph
enyl, 2 ', 3,4,5,6'-Pentachlorobiphenyl, 3,3', 4,
4 ', 5-Pentachlorobiphenyl, 3,3', 4,5,5'-Pentachloro
biphenyl ；

【００２１】2,2',3,3',4,4'-Hexachlorobiphenyl 、2,
2',3,3',4,5-Hexachlorobiphenyl、2,2',3,3',4,5'-Hex
achlorobiphenyl 、2,2',3,3',4,6-Hexachlorobipheny
l、2,2',3,3',4,6'-Hexachlorobiphenyl 、2,2',3,3',
5,5'-Hexachlorobiphenyl 、2,2',3,3',5,6-Hexachloro
biphenyl、2,2',3,3',5,6'-Hexachlorobiphenyl 、2,
2',3,3',6,6'-Hexachlorobiphenyl 、2,2',3,4',4,5-He
xachlorobiphenyl、2,2',3,4,4',5'-Hexachlorobipheny
l 、2,2',3,4,4',6-Hexachlorobiphenyl、2,2',3,4,4',
6'-Hexachlorobiphenyl 、2,2',3,4,4,5'-Hexachlorobi
phenyl、2,2',3,4,5,6-Hexachlorobiphenyl 、2,2',3,
4,5,6'-Hexachlorobiphenyl、2,2',3,4,5',6-Hexachlor
obiphenyl、2,2',3,4,6,6'-Hexachlorobiphenyl、2,2',
3,4',5,5'-Hexachlorobiphenyl 、2,2',3,4',5,6-Hexac
hlorobiphenyl、2,2',3,4',5,6'-Hexachlorobiphenyl
、2,2',3,4',5',6-Hexachlorobiphenyl 、2,2',3,4',
6,6'-Hexachlorobiphenyl 、2,2',3,5,5',6-Hexachloro
biphenyl、2,2',3,5,6,6'-Hexachlorobiphenyl、2,2',
4,4',5,5'-Hexachlorobiphenyl 、2,2',4,4',5,6'-Hexa
chlorobiphenyl 、2,2',4,4',6,6'-Hexachlorobiphenyl
、2,3,3',4,4',5-Hexachlorobiphenyl、2,3,3',4,4',
5'-Hexachlorobiphenyl 、2,3,3',4,4',6-Hexachlorobi
phenyl、2,3,3',4,5,5'-Hexachlorobiphenyl、2,3,3',
4,5,6-Hexachlorobiphenyl 、2,3,3',4,5',6-Hexachlor
obiphenyl、2,3,3',4',5,5'-Hexachlorobiphenyl、2,3,
3',4',5,6-Hexachlorobiphenyl、2,3,3',4',5',6-Hexac
hlorobiphenyl 、2,3,3',5,5',6-Hexachlorobiphenyl、
2,3,4,4',5,6-Hexachlorobiphenyl 、2,3',4,4',5,5'-H
exachlorobiphenyl 、2,3',4,4',5',6-Hexachlorobiphe
nyl 、3,3',4,4',5,5'-Hexachlorobiphenyl ；2,2 ', 3,3', 4,4'-Hexachlorobiphenyl, 2,
2 ', 3,3', 4,5-Hexachlorobiphenyl, 2,2 ', 3,3', 4,5'-Hex
achlorobiphenyl, 2,2 ', 3,3', 4,6-Hexachlorobipheny
l, 2,2 ', 3,3', 4,6'-Hexachlorobiphenyl, 2,2 ', 3,3',
5,5'-Hexachlorobiphenyl, 2,2 ', 3,3', 5,6-Hexachloro
biphenyl, 2,2 ', 3,3', 5,6'-Hexachlorobiphenyl, 2,
2 ', 3,3', 6,6'-Hexachlorobiphenyl, 2,2 ', 3,4', 4,5-He
xachlorobiphenyl, 2,2 ', 3,4,4', 5'-Hexachlorobipheny
l, 2,2 ', 3,4,4', 6-Hexachlorobiphenyl, 2,2 ', 3,4,4',
6'-Hexachlorobiphenyl, 2,2 ', 3,4,4,5'-Hexachlorobi
phenyl, 2,2 ', 3,4,5,6-Hexachlorobiphenyl, 2,2', 3,
4,5,6'-Hexachlorobiphenyl, 2,2 ', 3,4,5', 6-Hexachlor
obiphenyl, 2,2 ', 3,4,6,6'-Hexachlorobiphenyl, 2,2',
3,4 ', 5,5'-Hexachlorobiphenyl, 2,2', 3,4 ', 5,6-Hexac
hlorobiphenyl, 2,2 ', 3,4', 5,6'-Hexachlorobiphenyl
, 2,2 ', 3,4', 5 ', 6-Hexachlorobiphenyl, 2,2', 3,4 ',
6,6'-Hexachlorobiphenyl, 2,2 ', 3,5,5', 6-Hexachloro
biphenyl, 2,2 ', 3,5,6,6'-Hexachlorobiphenyl, 2,2',
4,4 ', 5,5'-Hexachlorobiphenyl, 2,2', 4,4 ', 5,6'-Hexa
chlorobiphenyl, 2,2 ', 4,4', 6,6'-Hexachlorobiphenyl
, 2,3,3 ', 4,4', 5-Hexachlorobiphenyl, 2,3,3 ', 4,4',
5'-Hexachlorobiphenyl, 2,3,3 ', 4,4', 6-Hexachlorobibi
phenyl, 2,3,3 ', 4,5,5'-Hexachlorobiphenyl, 2,3,3',
4,5,6-Hexachlorobiphenyl, 2,3,3 ', 4,5', 6-Hexachlor
obiphenyl, 2,3,3 ', 4', 5,5'-Hexachlorobiphenyl, 2,3,
3 ', 4', 5,6-Hexachlorobiphenyl, 2,3,3 ', 4', 5 ', 6-Hexac
hlorobiphenyl, 2,3,3 ', 5,5', 6-Hexachlorobiphenyl,
2,3,4,4 ', 5,6-Hexachlorobiphenyl, 2,3', 4,4 ', 5,5'-H
exachlorobiphenyl, 2,3 ', 4,4', 5 ', 6-Hexachlorobiphe
nyl, 3,3 ', 4,4', 5,5'-Hexachlorobiphenyl;

【００２２】2,2',3,3',4,4',5-Heptachlorobiphenyl、
2,2',3,3',4,4',6-Heptachlorobiphenyl、2,2',3,3',4,
5,5'-Heptachlorobiphenyl、2,2',3,3',4,5,6-Heptachl
orobiphenyl 、2,2',3,3',4,5,6'-Heptachlorobipheny
l、2,2',3,3',4,5',6-Heptachlorobiphenyl、2,2',3,
3',4,6,6'-Heptachlorobiphenyl、2,2',3,3',4',5,6'-H
eptachlorobiphenyl 、2,2',3,3',5,5',6-Heptachlorob
iphenyl、2,2',3,3',5,5,6'-Heptachlorobiphenyl、2,
2',3,4,4',5,5'-Heptachlorobiphenyl、2,2',3,4,4',5,
6-Heptachlorobiphenyl 、2,2',3,4,4',5,6'-Heptachlo
robiphenyl、2,2',3,4,4',5',6-Heptachlorobiphenyl、
2,2',3,4,4',6,6'-Heptachlorobiphenyl、2,2',3,4,5,
5',6-Heptachlorobiphenyl 、2,2',3,4,5,6,6'-Heptach
lorobiphenyl、2,2',3,4',5,5',6-Heptachlorobipheny
l、2,2',3,4',5,6,6'-Heptachlorobiphenyl、2,2',3',
4,4',5,5'-Heptachlorobiphenyl 、2,2',3',4,4',5,6-H
eptachlorobiphenyl、2,2',3',4,4',5',6-Heptachlorob
iphenyl 、2,2',3',4,5,5',6-Heptachlorobiphenyl、2,
2',3',4',5,5',6-Heptachlorobiphenyl ；2,2 ', 3,3', 4,4 ', 5-Heptachlorobiphenyl,
2,2 ', 3,3', 4,4 ', 6-Heptachlorobiphenyl, 2,2', 3,3 ', 4,
5,5'-Heptachlorobiphenyl, 2,2 ', 3,3', 4,5,6-Heptachl
orobiphenyl, 2,2 ', 3,3', 4,5,6'-Heptachlorobipheny
l, 2,2 ', 3,3', 4,5 ', 6-Heptachlorobiphenyl, 2,2', 3,
3 ', 4,6,6'-Heptachlorobiphenyl, 2,2', 3,3 ', 4', 5,6'-H
eptachlorobiphenyl, 2,2 ', 3,3', 5,5 ', 6-Heptachlorob
iphenyl, 2,2 ', 3,3', 5,5,6'-Heptachlorobiphenyl, 2,
2 ', 3,4,4', 5,5'-Heptachlorobiphenyl, 2,2 ', 3,4,4', 5,
6-Heptachlorobiphenyl, 2,2 ', 3,4,4', 5,6'-Heptachlo
robiphenyl, 2,2 ', 3,4,4', 5 ', 6-Heptachlorobiphenyl,
2,2 ', 3,4,4', 6,6'-Heptachlorobiphenyl, 2,2 ', 3,4,5,
5 ', 6-Heptachlorobiphenyl, 2,2', 3,4,5,6,6'-Heptach
lorobiphenyl, 2,2 ', 3,4', 5,5 ', 6-Heptachlorobipheny
l, 2,2 ', 3,4', 5,6,6'-Heptachlorobiphenyl, 2,2 ', 3',
4,4 ', 5,5'-Heptachlorobiphenyl, 2,2', 3 ', 4,4', 5,6-H
eptachlorobiphenyl, 2,2 ', 3', 4,4 ', 5', 6-Heptachlorob
iphenyl, 2,2 ', 3', 4,5,5 ', 6-Heptachlorobiphenyl, 2,
2 ', 3', 4 ', 5,5', 6-Heptachlorobiphenyl;

【００２３】2,2',3,3',4,4',5,5'-Octachlorobipheny
l、2,2',3,3',4,4',5,6-Octachlorobiphenyl 、2,2',3,
3',4,4',5',6-Octachlorobiphenyl、2,2',3,3',4,4',6,
6'-Octachlorobiphenyl、2,2',3,3',4,5,5',6-Octachlo
robiphenyl 、2,2',3,3',4,5,6,6'-Octachlorobiphenyl
、2,2',3,3',4,5',6,6'-Octachlorobiphenyl、2,2',3,
3',4',5,5',6-Octachlorobiphenyl、2,2',3,3',5,5',6,
6'-Octachlorobiphenyl、2,2',3,4,4',5,5',6-Octachlo
robiphenyl 、2,2',3,4,4',5,6,6'-Octachlorobiphenyl
、2,3,3',4,4',5,5',6-Octachlorobiphenyl ；2,2 ', 3,3', 4,4 ', 5,5'-Octachlorobipheny
l, 2,2 ', 3,3', 4,4 ', 5,6-Octachlorobiphenyl, 2,2', 3,
3 ', 4,4', 5 ', 6-Octachlorobiphenyl, 2,2', 3,3 ', 4,4', 6,
6'-Octachlorobiphenyl, 2,2 ', 3,3', 4,5,5 ', 6-Octachlo
robiphenyl, 2,2 ', 3,3', 4,5,6,6'-Octachlorobiphenyl
, 2,2 ', 3,3', 4,5 ', 6,6'-Octachlorobiphenyl, 2,2', 3,
3 ', 4', 5,5 ', 6-Octachlorobiphenyl, 2,2', 3,3 ', 5,5', 6,
6'-Octachlorobiphenyl, 2,2 ', 3,4,4', 5,5 ', 6-Octachlo
robiphenyl, 2,2 ', 3,4,4', 5,6,6'-Octachlorobiphenyl
, 2,3,3 ', 4,4', 5,5 ', 6-Octachlorobiphenyl;

【００２４】2,2',3,3',4,4',5,5',6-Nonachlorobiphen
yl、2,2',3,3',4,4',5,6,6'-Nonachlorobiphenyl、2,
2',3,3',4,5,5',6,6'-Nonachlorobiphenyl；Decachloro
biphenyl等が挙げられる。2,2 ', 3,3', 4,4 ', 5,5', 6-Nonachlorobiphen
yl, 2,2 ', 3,3', 4,4 ', 5,6,6'-Nonachlorobiphenyl, 2,
2 ', 3,3', 4,5,5 ', 6,6'-Nonachlorobiphenyl ； Decachloro
biphenyl and the like.

【００２５】なお、上述したような、本検出器具におい
て用いるべき、ダイオキシン類やＰＣＢ類に対する抗体
を調製する場合の指針は、被験試料におけるダイオキシ
ン類やＰＣＢ類の毒性を推定する場合と、これらの環境
汚染物質の総量を推定する場合とでは、ターゲットとし
て好適な異性体が異なる。例えば、被験試料のダイオキ
シン類による毒性を推定する場合は、被験物質中のダイ
オキシン類の全毒性に占める割合が高い、1,2,3,7,8-Ｐ
₅ ＣＣＤ、2,3,4,7,8-Ｐ₅ ＣＤＦ、または、3,3',4,4',
5-Ｐ₅ ＣＢＤＤ等をターゲットとするのが好適である。
また、被験試料におけるダイオキシン類の総量を推定す
る場合には、ダイオキシン類として被験試料中に含まれ
る濃度が高い傾向が強い、1,2,3,4,6,7,8,9-Ｏ₈ ＣＤ
Ｄ、1,2,3,4,6,7,8,9-Ｏ₈ ＣＤＦ、または、2,3',4,4',
5-Ｐ₅ ＣＢ等をターゲットとすることが好適である。The guidelines for preparing an antibody against dioxins and PCBs, which should be used in the present detection instrument as described above, are to estimate the toxicity of dioxins and PCBs in a test sample, and The isomers suitable as targets are different from those for estimating the total amount of environmental pollutants. For example, when estimating the toxicity of a test sample due to dioxins, 1,2,3,7,8-P, which accounts for a high percentage of the total toxicity of dioxins in the test substance, is used.
₅ CCD, 2,3,4,7,8-P ₅ CDF, or 3,3 ', 4,4',
It is preferable to target 5-P ₅ CBDD or the like.
Further, when estimating the total amount of dioxins in a test sample, the concentration of dioxins contained in the test sample tends to be high, and 1,2,3,4,6,7,8,9-O ₈ CD
D, 1,2,3,4,6,7,8,9-O ₈ CDF or 2,3 ′, 4,4 ′,
It is preferable to target 5-P ₅ CB or the like.

【００２６】被験試料は、ダイオキシン類やＰＣＢ類等
の、環境関連低分子物質であれば限定されず、例えば、
大気、土壌、湖水や海水等の水試料等が挙げられる。被
験試料は、その性質に応じて、様々の前処理、例えば、
希釈処理、濾過処理、濃縮処理等を行って、これを被験
試料として、本検出器具１０を適用することもできる。The test sample is not limited as long as it is an environment-related low-molecular substance such as dioxins and PCBs.
Examples include air, soil, and water samples such as lake water and seawater. The test sample may be subjected to various pretreatments, such as
It is also possible to apply the present detection instrument 10 by performing a dilution treatment, a filtration treatment, a concentration treatment, etc., and using this as a test sample.

【００２７】被験試料適用部位１の材質は、この被験試
料適用部位１に接触させた被験試料が、毛細管現象によ
って下流の標識体反応部位２に移動可能な材質であれば
特に限定されない。例えば、濾紙等の紙類、起毛素材等
の布類、コットン、グラスファイバー等を挙げることが
できる。The material of the test sample application site 1 is not particularly limited as long as the test sample brought into contact with the test sample application site 1 can move to the downstream labeled substance reaction site 2 by a capillary phenomenon. For example, paper such as filter paper, cloth such as raised material, cotton, glass fiber and the like can be mentioned.

【００２８】被験試料を、本検出器具１０の被験試料適
用部位１に接触させて、標識体反応部位２と接触してい
る部分に到達すると、さらに、毛細管現象により、被験
試料は、標識体反応部位２に移行する。When the test sample is brought into contact with the test sample application site 1 of the detection instrument 10 and reaches the portion in contact with the label reaction site 2, the test sample is further subjected to the label reaction by capillary action. Move to site 2.

【００２９】標識体反応部位２は、被験試料中の標的物
質に結合し得る抗体を一部とする標識体を非結合状態で
含む部位である。この標識体反応部位２において用いる
抗体は、検出の対象とする環境汚染物質を選んで、これ
を免疫抗原（必要に応じて、目的とする環境汚染物質を
ターゲットとしたハプテンとキャリア蛋白との免疫抗原
とすることも可能である）として、常法により製造して
用いることができる。The labeled body reaction site 2 is a site containing a labeled body, which is part of an antibody capable of binding to a target substance in a test sample, in an unbound state. The antibody used in the labeled body reaction site 2 is selected as an environmental pollutant to be detected, and is used as an immunizing antigen (if necessary, immunization with a hapten and a carrier protein targeting the environmental pollutant of interest). It can also be used as an antigen) and can be produced by a conventional method and used.

【００３０】すなわち、上記抗体がポリクローナル抗体
の場合には、目的とするダイオキシン類やＰＣＢ類等を
免疫抗原として免疫した動物に由来する免疫血清から製
造することが可能であり、同じくモノクローナル抗体の
場合には、ポリクローナル抗体と同様の方法で、免疫し
た動物の免疫細胞と動物の骨髄腫細胞とのハイブリドー
マを作出し、これにより目的とするダイオキシン類やＰ
ＣＢ類等を認識する抗体を産生するクローンを選択し、
このクローンを培養することにより製造することができ
る。That is, when the above-mentioned antibody is a polyclonal antibody, it can be produced from immune sera derived from an animal immunized with the target dioxins or PCBs as an immunizing antigen. In the same manner as in the case of the polyclonal antibody, a hybridoma of the immune cells of the immunized animal and the myeloma cells of the animal was produced, and the desired dioxin or P
Select a clone that produces an antibody that recognizes CBs,
It can be produced by culturing this clone.

【００３１】免疫される動物も特に限定されるものでは
なく、マウス，ラット等を広く用いることができるが、
モノクローナル抗体を製造する場合には、細胞融合に用
いる骨髄腫細胞との適合性を考慮して選択することが望
ましい。The animal to be immunized is not particularly limited, and mice, rats and the like can be widely used.
When producing a monoclonal antibody, it is desirable to select it in consideration of compatibility with myeloma cells used for cell fusion.

【００３２】免疫は一般的方法により、例えば上記免疫
抗原を免疫の対象とする動物に静脈内，皮内，皮下，腹
腔内注射等で投与することにより行うことができる。よ
り具体的には、上記免疫抗原を所望により通常のアジュ
バントと併用して、免疫の対象とする動物に２〜４週間
毎に上記手段により数回投与し、ポリクローナル抗体製
造のための免疫血清又はモノクローナル抗体製造のため
の免疫細胞、例えば免疫後の脾臓細胞を得ることができ
る。Immunization can be carried out by a general method, for example, by intravenously, intracutaneously, subcutaneously or intraperitoneally administering the above immunizing antigen to an animal to be immunized. More specifically, the above-mentioned immunizing antigen is optionally used in combination with an ordinary adjuvant, and is administered several times to the animal to be immunized by the above-mentioned means every 2 to 4 weeks to obtain an immune serum for producing a polyclonal antibody or Immune cells for producing a monoclonal antibody, for example, spleen cells after immunization can be obtained.

【００３３】モノクローナル抗体を製造する場合、この
免疫細胞と細胞融合する他方の親細胞としての骨髄腫細
胞としては、既に公知のもの、例えばＳＰ２／０−Ａｇ
１４，Ｐ３−ＮＳ１−１−Ａｇ４−１，ＭＰＣ11−４
５，６．ＴＧ１．７（以上、マウス由来）；２１０．Ｒ
ＣＹ．Ａｇ１．２．３（ラット由来）；ＳＫＯ−００
７，ＧＭ１５００６ＴＧ−Ａ１２（以上、ヒト由来）等
を用いることができる。When a monoclonal antibody is produced, a myeloma cell as the other parent cell that cell-fuses with this immune cell is already known, for example, SP2 / 0-Ag.
14, P3-NS1-1-Ag4-1, MPC11-4
5,6. TG1.7 (above, derived from mouse); 210. R
CY. Ag1.2.3 (rat origin); SKO-00
7, GM 15006TG-A12 (above, human origin) and the like can be used.

【００３４】上記免疫細胞とこの骨髄腫細胞との細胞融
合は、通常公知の方法、例えばケーラーとミルシュタイ
ンの方法（Kohler,G. and Milstein,C.,Nature,256,495
(1975)）等に準じて行うことができる。The cell fusion between the above-mentioned immune cells and this myeloma cell is a generally known method, for example, the method of Kohler and Milstein (Kohler, G. and Milstein, C., Nature , 256 , 495).
(1975)) and the like.

【００３５】より具体的には、この細胞融合は、通常公
知の融合促進剤、例えばポリエチレングリコール（ＰＥ
Ｇ），センダイウイルス（ＨＶＪ）等の存在下におい
て、融合効率を向上させるためにジメチルスルホキシド
等の補助剤を必要に応じて添加した通常の培養培地中で
行い、ハイブリドーマを調製する。More specifically, this cell fusion is carried out by a fusion accelerator which is generally known, such as polyethylene glycol (PE).
G), in the presence of Sendai virus (HVJ) and the like, a hybridoma is prepared by carrying out in a usual culture medium to which an auxiliary agent such as dimethylsulfoxide is added as needed in order to improve the fusion efficiency.

【００３６】所望のハイブリドーマの分離は、通常の選
別用培地、例えばＨＡＴ（ヒポキサンチン，アミノプテ
リン及びチミジン）培地で培養することにより行うこと
ができる。すなわち、この選別用培地において目的とす
るハイブリドーマ以外の細胞が死滅するのに十分な時間
をかけて培養することによりハイブリドーマの分離を行
うことができる。このようにして得られるハイブリドー
マは、通常の限界希釈法により目的とするモノクローナ
ル抗体の検索及び単一クローン化に供することができ
る。The desired hybridoma can be isolated by culturing in a usual selection medium, for example, HAT (hypoxanthine, aminopterin and thymidine) medium. That is, the hybridomas can be separated by culturing in this selection medium for a time sufficient to kill cells other than the target hybridomas. The hybridoma thus obtained can be subjected to a search for a desired monoclonal antibody and a monocloning by an ordinary limiting dilution method.

【００３７】目的とするモノクローナル抗体産生株の検
索は、例えばＥＬＩＳＡ法，プラーク法，スポット法，
凝集反応法，オクタロニー法，ＲＩＡ法等の一般的な検
索法に従い行うことができる。The desired monoclonal antibody producing strain can be searched by, for example, the ELISA method, the plaque method, the spot method,
It can be carried out according to a general search method such as an agglutination reaction method, an Ouchterlony method, or an RIA method.

【００３８】このようにして得られる環境汚染物質を認
識するモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ
は、通常の培地で継代培養することが可能であり、さら
に液体窒素中で長時間保存することもできる。The hybridoma producing a monoclonal antibody recognizing the environmental pollutant thus obtained can be subcultured in a usual medium and can be stored in liquid nitrogen for a long time.

【００３９】このハイブリドーマからの目的とするモノ
クローナル抗体の採取は、ハイブリドーマを常法に従っ
て培養して、その培養上清として得る方法や、ハイブリ
ドーマを、このハイブリドーマに対して適合性が認めら
れる動物に投与して増殖させ、その腹水として得る方法
等を用いることができる。The desired monoclonal antibody can be collected from this hybridoma by culturing the hybridoma according to a conventional method to obtain a culture supernatant thereof, or by administering the hybridoma to an animal found to have compatibility with this hybridoma. It is possible to use a method in which the cells are proliferated and obtained as ascites.

【００４０】このようにして得られるポリクローナル抗
体及びモノクローナル抗体は、更に塩析，ゲル濾過法，
アフィニティクロマトグラフィー等の通常の手段により
精製することができる。The polyclonal and monoclonal antibodies thus obtained are further subjected to salting out, gel filtration,
It can be purified by a usual means such as affinity chromatography.

【００４１】標識体反応部位２において用いる標識体
は、通常、上記のような環境汚染物質に対する抗体を標
識した標識抗体であることが好適である。かかる標識と
しては、例えば、金コロイド粒子等の金属コロイド粒
子、ラテックス粒子、西洋ワサビペルオキシダーゼ等の
発色機能を有する酵素等を用いることができる。すなわ
ち、これらの標識と抗体を、常法により結合させて、標
識体反応部位２において用いることができる。It is usually preferable that the label used in the labeled reaction site 2 is a labeled antibody obtained by labeling an antibody against the above environmental pollutants. As such a label, for example, metal colloid particles such as gold colloid particles, latex particles, an enzyme having a coloring function such as horseradish peroxidase, and the like can be used. That is, these labels and antibodies can be combined in a conventional manner and used in the labeled body reaction site 2.

【００４２】標識体反応部位２では、被験試料が、被験
試料適用部位１から移動したきて、その中の標的物質の
存在如何にかかわらず、被験試料と共に、毛細管現象に
よって、さらに下流の未反応標識体捕捉部位３に向けて
移動可能となるように、上記の標識体は、標識体反応部
位２の素材とは、非結合状態で存在していることが必要
である。よって、上記の標識体は、標識体反応部位の素
材に単純に染み込ませて定着させる等に止めることが好
適である。また、標識体反応部位２の素材としては、こ
のような単純な定着と溶離を実現しやすい素材が好適で
ある。具体的には、濾紙等の紙類、起毛素材等の布類、
コットン、グラスファイバー等を挙げることができる。At the labeled substance reaction site 2, the test sample moves from the test sample application site 1, and regardless of the presence of the target substance therein, the test sample and the test sample are unreacted further downstream by the capillary phenomenon. The above-mentioned labeled substance needs to exist in a non-bonded state with the material of the labeled substance reaction site 2 so that it can be moved toward the labeled substance capturing site 3. Therefore, it is preferable that the above-mentioned labeled substance is simply impregnated into the material of the labeled substance reaction site and fixed. Further, as a material of the labeled substance reaction site 2, a material that easily realizes such simple fixing and elution is suitable. Specifically, paper such as filter paper, cloth such as raised material,
Examples thereof include cotton and glass fiber.

【００４３】被験試料中に、標的物質が存在する場合に
は、標識体と標的物質が結合した標識複合体と、フリー
の標識体が、下流に向けて移動し、標的物質が存在しな
い場合には、フリーの標識体のみが、下流に向けて移動
する。When the target substance is present in the test sample, when the labeled complex bound to the labeled substance and the target substance and the free labeled substance migrate toward the downstream side and the target substance does not exist, , Only the free label moves downstream.

【００４４】本検出器具１０においては、メンブレン
（毛細管現象により、液相の移動が可能な素材、例え
ば、多孔性のクロマトメンブレン、ニトロセルロースメ
ンブレン等が好適である。特に、多孔性のクロマトメン
ブレンは、多孔性故、西洋ワサビペルオキシダーゼ等の
蛋白質や、金コロイド粒子等の金属コロイド粒子、ラテ
ックス粒子等の標識がメンブレン中を容易に移動可能で
あり、好適である。）上に、未反応標識体捕捉部位３と
検出部位４が、上流から下流に向けて設けられている。In the present detection instrument 10, a membrane (a material capable of moving a liquid phase by a capillary phenomenon, for example, a porous chromatographic membrane, a nitrocellulose membrane, or the like is suitable. In particular, a porous chromatographic membrane is Since, because of its porosity, proteins such as horseradish peroxidase, labels such as metal colloid particles such as gold colloid particles, and latex particles can easily move in the membrane, it is preferable.) The capture site 3 and the detection site 4 are provided from upstream to downstream.

【００４５】毛細管現象により、上流から移動してき
た、標識複合体および／またはフリーの標識体は、ま
ず、未反応標識体捕捉部位３に接触する。未反応標識体
捕捉部位には、文字通り、未反応のフリーの標識体のみ
を捕捉することができる機能が付与されている。かかる
機能の態様としては、標識体の一部を構成する標的物質
に対する抗体が反応して結合することが可能な物質、具
体的には、標的物質そのもの、または、このような結合
反応が認められる標的物質の類似物質を挙げることがで
きる。未反応標識体捕捉部位３では、これらの標的物質
等が、液相の移動に伴って、移動することのないよう、
結合状態であることが必要である。標的物質は、低分子
物質であるため、所望の結合状態とするためには、例え
ば、ＢＳＡ等のキャリア蛋白に、標的物質等を結合さ
せ、この蛋白結合させた標的物質等を、蛋白固定の常法
により、未反応標識体捕捉部位３に、結合状態で定着さ
せることが好適である。The labeling complex and / or free labeling substance that has moved from the upstream due to the capillary phenomenon first comes into contact with the unreacted labeling substance capturing site 3. The unreacted label capturing site is literally provided with a function of capturing only unreacted free label. As a mode of such a function, a substance capable of reacting with and binding to an antibody against a target substance which constitutes a part of the labeled substance, specifically, the target substance itself, or such a binding reaction is recognized. A substance similar to the target substance can be mentioned. At the unreacted label capturing part 3, these target substances and the like are prevented from moving with the movement of the liquid phase.
Must be in a bound state. Since the target substance is a low molecular weight substance, in order to obtain a desired binding state, for example, the target substance or the like is bound to a carrier protein such as BSA, and the protein-bound target substance or the like is immobilized on the protein. It is preferable to fix the unreacted labeled substance-capturing site 3 in a bound state by a conventional method.

【００４６】このように、未反応標識体捕捉部位３に
は、未反応のフリーの標識体のみを捕捉することができ
る機能が備わっており、被験試料中に標的物質が存在す
る場合には、上流より移動してきた標識複合体およびフ
リーの標識体のうち、フリーの標識体のみが捕捉され、
標識複合体のみが、下流に移動する。また、被験試料中
に標的物質が存在しない場合には、移動してくるのは、
フリーの標識体のみであるので、標識体は、全て、未反
応標識体捕捉部位３において捕捉され、下流に移動する
のは、標識体を含まない液相のみとなる。As described above, the unreacted labeled substance capturing site 3 has a function of capturing only unreacted free labeled substance, and when the target substance is present in the test sample, Of the labeled complex and free labeled substance that have moved from the upstream, only the free labeled substance is captured,
Only the labeled complex moves downstream. If the target substance is not present in the test sample,
Since only the labeled substance is free, all of the labeled substance is captured at the unreacted labeled substance capturing site 3, and only the liquid phase containing no labeled substance moves downstream.

【００４７】次いで、未反応標識体捕捉部位３を通過し
た液相は、その下流に設けられている、検出部位４に接
触する。検出部位４では、標識体において用いた標識を
顕在化させる、標識顕在化機能が備わっている。かかる
標識顕在化機能は、用いた標識に対応する顕在化機能で
ある。顕在化機能としては、例えば、標識複合体が、当
初から目視可能な標識（例えば、金コロイド粒子等）で
ある場合には、標識複合体を凝縮した形態で捕捉可能な
検出要素、例えば、用いた環境汚染物質に特異的な抗体
に対して特異的な抗体、すなわち、抗イムノグロブリン
を用いることが好適である。この抗イムノグロブリン抗
体は、用いた環境汚染物質に特異的な抗体のパラトープ
（抗原結合部位）以外の箇所に対して結合する抗体（例
えば、抗Ｆｃ抗体等）を用いることが好適である。Next, the liquid phase that has passed through the unreacted labeled substance-capturing site 3 comes into contact with the detection site 4 provided downstream thereof. The detection site 4 has a label revealing function for revealing the label used in the labeled body. The label revealing function is a revealing function corresponding to the used label. As the manifestation function, for example, when the labeled complex is a label that is visible from the beginning (for example, gold colloid particles), a detection element that can capture the labeled complex in a condensed form, for example, It is preferable to use an antibody specific to the antibody specific to the environmental pollutant, that is, an anti-immunoglobulin. As the anti-immunoglobulin antibody, it is preferable to use an antibody (for example, an anti-Fc antibody) that binds to a site other than the paratope (antigen-binding site) of the antibody specific to the used environmental pollutant.

【００４８】このような、抗イムノグロブリン抗体を、
検出要素として、稠密的に検出部位４において固定化す
ることにより、液相と共に移動してきた標識を濃縮・顕
在化することが可能となる。Such an anti-immunoglobulin antibody is
By immobilizing densely at the detection site 4 as a detection element, it becomes possible to concentrate and visualize the label that has moved together with the liquid phase.

【００４９】また、例えば、用いた標識が、西洋ワサビ
ペルオキシダーゼ等の発色機能を有する酵素のように、
検出部位４において、酵素基質の接触による発色等を行
うことが必要な場合には、検出部位４における検出要素
は、単に、抗イムノグロブリン抗体ではなく、用いた標
識を顕在化させる試薬等が結合した態様であることが好
適である。このような場合に、検出要素として、単に、
発色機能を有する上記酵素等を用いる場合は、後で、改
めて発色反応等を行わなければならず、取扱いが煩雑に
なってしまう。Further, for example, when the label used is an enzyme having a coloring function such as horseradish peroxidase,
When it is necessary to perform color development or the like by contact with an enzyme substrate at the detection site 4, the detection element at the detection site 4 is not simply an anti-immunoglobulin antibody, but a reagent or the like for eliciting the label used. The preferred embodiment is In such a case, the detection element is simply
When the above-mentioned enzyme or the like having a coloring function is used, the coloring reaction or the like has to be performed again later, which makes the handling complicated.

【００５０】なお、いずれの例においても、抗イムノグ
ロブリン抗体等の検出要素は、毛細管現象により、液相
と共に検出部位４から移動しない、結合状態で含まれる
ことが、標識を顕在化させる上で好適である。この結合
状態の態様は、結果として、検出要素が、液相の移動と
共に、検出部位４から移動しない状態が提供されれば特
に限定されず、例えば、検出要素として、検出対象とな
る環境汚染物質に特異的な抗体のパラトープ以外の箇所
に対して結合する抗体である場合は、その抗体の溶液
を、検出部位４に該当する部分に滴下することにより、
所望する結合状態が提供される。In any of the examples, the detection element such as the anti-immunoglobulin antibody is contained in a bound state in which it does not move from the detection site 4 together with the liquid phase due to the capillary phenomenon in order to make the label manifest. It is suitable. As a result, the form of this binding state is not particularly limited as long as the detection element is provided with a state in which it does not move from the detection site 4 with the movement of the liquid phase. For example, as the detection element, an environmental pollutant to be detected is used. In the case of an antibody that binds to a site other than the paratope of the antibody specific to, by dropping the solution of the antibody to the portion corresponding to the detection site 4,
The desired binding state is provided.

【００５１】また、吸収部位５は、毛細管現象により、
上流から下流に移動したきた液相を、最終的に吸収する
部位である。この吸収部位５は、本検出器具において
は、選択的要素であるが、被験試料を、さらに容易にメ
ンブレンを移動させるために、設けることが好適であ
る。Further, the absorption site 5 is
This is the part that finally absorbs the liquid phase that has moved from upstream to downstream. This absorption site 5 is a selective element in the present detection instrument, but it is preferable to provide the test sample in order to move the test sample more easily through the membrane.

【００５２】以上、記載したように、本検出器具１０に
おいては、被験試料中に標的物質が含まれている場合に
は、標的物質は、標識体反応部位２で、低分子化合物で
ある標的物質と特異的に反応する標識体と、標識複合体
を形成する。かかる標識複合体は、さらにメンブレン６
上を移動するが、未反応標識体捕捉部位３では捕捉され
ず、検出部位４に達する。検出部位４では、標識複合体
を顕在化する物質が固定化されているため、標識複合体
は、検出部位４で濃縮され、目視可能なバンドとして検
出される。As described above, in the present detection instrument 10, when the test sample contains the target substance, the target substance is the target substance which is the low molecular weight compound at the labeled substance reaction site 2. A labeled complex is formed with a labeled substance that specifically reacts with. Such a labeled complex further comprises a membrane 6
Although it moves upward, it is not captured by the unreacted labeled substance capture site 3 and reaches the detection site 4. At the detection site 4, since the substance that reveals the labeled complex is immobilized, the labeled complex is concentrated at the detection site 4 and detected as a visible band.

【００５３】一方、被験試料中に、標的物質が含まれて
いない場合は、標識体反応部位２で、上記の標識複合体
は形成されず、フリーの標識体が、液相と共に移動す
る。このフリーの標識体は、全て、未反応標識体捕捉部
位３で捕捉され、検出部位４には、標識体は到達せず、
その結果、標識体のバンドは検出部位４においては検出
されない。On the other hand, when the target substance is not contained in the test sample, the above-mentioned labeled complex is not formed at the labeled substance reaction site 2, and the free labeled substance moves together with the liquid phase. This free label is all captured at the unreacted label capturing site 3, and the label does not reach the detection site 4,
As a result, the labeled band is not detected at the detection site 4.

【００５４】このように、本発明によって、従来は困難
だった、環境汚染物質を、ポジティブな指標により検出
する手段が提供される。As described above, the present invention provides a means for detecting environmental pollutants with a positive index, which has been difficult in the past.

【００５５】[0055]

【実施例】以下、実施例により、本発明をさらに具体的
に説明する。 １．Ｃｏ−ＰＣＢ＃１２６モノクローナル抗体作製のた
めの免疫抗原の調製 Ｃｏ−ＰＣＢ＃１２６をターゲットとしたハプテン、6-
[3,3,4,5-Tetrachlorobiphenyl-4-yl]oxy] hexanoic ac
id (低分子化合物126)は、 既に報告されている、Ya-Wen
Chiu ら(Analytical Chemistry,1995,67,3829) におけ
る6-[(3,3,4-Trichlorobiphenyl-4-yl)oxy] hexanoic a
cid の合成法に若干の改善を加え、 合成を行った。EXAMPLES The present invention will be described in more detail below with reference to examples. 1. Preparation of Co-PCB # 126 monoclonal antibody
Preparation of immuno-antigen for hapten targeting Co-PCB # 126, 6-
[3,3,4,5-Tetrachlorobiphenyl-4-yl] oxy] hexanoic ac
id (low molecular weight compound 126) has already been reported, Ya-Wen
6-[(3,3,4-Trichlorobiphenyl-4-yl) oxy] hexanoic a in Chiu et al. (Analytical Chemistry, 1995,67,3829)
The synthesis was carried out with some improvements made to the method of synthesizing cid.

【００５６】すなわち、2-chloroanisole と3,4,5-tric
hloroanilineとのcadogan カップリング反応により、3,
3',4',5'-tetrachloro-4-methoxybiphenylを合成し（収
率１２％）、三臭化ホウ素による脱メチル反応により、
3,3',4',5'-tetrachloro-4-hydroxybiphenylを得（収率
９０％）、これに、ethyl-6-bromohexanoateを反応さ
せ、6-[(3,3',4',5'-tetrachloro-4-yl)oxy]hexanoate
を得（収率９０％）、これをアルカリ加水分解すること
で、6-[(3,3',4',5'-tetrachloro-4-yl)oxy]hexanoic a
cid （収率９５％）を合成した。That is, 2-chloroanisole and 3,4,5-tric
By cadogan coupling reaction with hloroaniline, 3,
By synthesizing 3 ', 4', 5'-tetrachloro-4-methoxybiphenyl (yield 12%), by demethylation reaction with boron tribromide,
3,3 ', 4', 5'-Tetrachloro-4-hydroxybiphenyl was obtained (yield 90%), which was reacted with ethyl-6-bromohexanoate to give 6-[(3,3 ', 4', 5 '-tetrachloro-4-yl) oxy] hexanoate
Was obtained (yield 90%), and this was subjected to alkaline hydrolysis to give 6-[(3,3 ', 4', 5'-tetrachloro-4-yl) oxy] hexanoic a
cid (95% yield) was synthesized.

【００５７】得られたハプテンは、N-hydroxysuccinimi
deを用いたNHS エステル法(P.Schneiderand B.D.Hammock,Jo
urnal of Agricultural and Food Chemistry,1992,2,8
5)により、カブトガニへモシアニン（ＫＬＨ）と結合さ
せ、Ｃｏ−ＰＣＢ＃１２６モノクローナル抗体作製のた
めの抗原として利用した。The hapten obtained is N- hydroxysuccinimi
NHS ester method using de (P. Schneider and BD Hammock, Jo
urnal of Agricultural and Food Chemistry, 1992,2,8
According to 5), it was bound to horseshoe crab hemocyanin (KLH) and used as an antigen for producing Co-PCB # 126 monoclonal antibody.

【００５８】すなわち、得られたハプテンを、1-ethyl-
3-[3-(dimethylamino)propyl]carbodiimide とN-hydrox
ysuccinimideを用いて、活性エステルとした後、ＫＬＨ
のアミノ基とのアミド結合を形成させ、ハプテン−ＫＬ
Ｈ−コンジュゲートを得た。That is, the obtained hapten was converted into 1-ethyl-
3- [3- (dimethylamino) propyl] carbodiimide and N- hydrox
After using ysuccinimide to make an active ester, KLH
Forming an amide bond with the amino group of hapten-KL
The H-conjugate was obtained.

【００５９】２．Ｃｏ−ＰＣＢ＃１２６モノクローナル
抗体作製 上記方法により作製、精製したＣｏ−ＰＣＢ＃１２６低
分子化合物−ＫＬＨコンジュゲートを、ｂａｌｂ／ｃマ
ウスにRibi Adjuvant System（Ｃｏｒｉｘａ社製）とと
もに、２週間おきに最大８回の免疫を行い、尾静脈に追
加免疫を行った後、通常法により、脾臓中の抗体産生細
胞とミエローマ細胞との細胞融合を行った。得られたハ
イプリドーマは、培養上清をＣｏ−ＰＣＢ＃１２６低分
子化合物蛋白コンジュゲートを固相化したプレートを用
いてスクリーニングを行い、Ｃｏ−ＰＣＢ＃１２６に特
異的に反応する抗体を産生するハイブリドーマを選択し
た。2. Co-PCB # 126 Monoclonal
Antibody Production The Co-PCB # 126 low-molecular compound-KLH conjugate produced and purified by the above method was immunized with balb / c mice together with Ribi Adjuvant System (Corixa) up to 8 times every 2 weeks, After boosting the tail vein, cell fusion of antibody-producing cells in the spleen and myeloma cells was performed by a conventional method. The obtained hybridoma is screened with the culture supernatant using a plate on which Co-PCB # 126 low molecular weight compound protein conjugate is immobilized to produce an antibody that specifically reacts with Co-PCB # 126. Hybridomas were selected.

【００６０】本実験に使用する抗体は、得られたハイブ
リドーマをプリスタン処理したマウス腹腔に投与し、通
常法により腹水を採取後、陰イオン交換クロマトグラフ
ィーで精製したものを利用した。The antibody used in this experiment was obtained by administering the obtained hybridoma to the abdominal cavity of a mouse treated with pristane, collecting ascites by a conventional method, and then purifying by anion exchange chromatography.

【００６１】３．クロマトメンブレンの未反応標識体反
応部位に固相化するための低分子化合物−蛋白質コンジ
ュゲート調製 上記方法１において合成した低分子化合物１２６を、上
記方法１と同様の手法でウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）
と結合させ、透析により精製を行った後、クロマトメン
ブレンの未反応標識体捕捉部位に固定化するための低分
子化合物−蛋白質コンジュゲートとして利用した。3. Unreacted labeled material on the chromatographic membrane
Low-molecular-weight compound-protein conjugate for immobilization at reaction site
Preparation of the low molecular weight compound 126 synthesized in the above method 1 was carried out in the same manner as in the above method 1 using bovine serum albumin (BSA).
It was used as a low-molecular compound-protein conjugate for immobilizing it on the unreacted labeled substance-capturing site of the chromatographic membrane, after being purified by dialysis.

【００６２】４．クロマトメンブレンの調整 ハイフロープラスメンブレン：ＨＦ９０（２５mm×３０
cm、ミリポア社）の下端から５mmの位置に未反応標識体
捕捉部位として、上記方法３にて合成した低分子化合物
１２６・ＢＳＡコンジュゲートを塗布し、また、下端か
ら１５mmの位置に検出部位として、抗マウスＩｇＧウサ
ギ抗体（Ｚｙｍｅｄ）を塗布した。これら溶液は、ＸＹ
Ｚハンドリングシステム（ＢｉｏＤｏｔ社）を用いてラ
イン状に塗布した。塗布後、メンブレンは室温で１晩放
置により乾燥させ、クロマトメンブレンとして用いた。4. Chromatography Membrane Adjustment High Flow Plus Membrane: HF90 (25 mm x 30
cm, Millipore Co., Ltd.), the low molecular weight compound 126.BSA conjugate synthesized by the above method 3 was applied at a position 5 mm from the lower end as the unreacted label capturing site, and as a detection site at a position 15 mm from the lower end , Anti-mouse IgG rabbit antibody (Zymed) was applied. These solutions are XY
It was applied in a line using a Z handling system (BioDot). After coating, the membrane was left standing overnight at room temperature to dry and used as a chromatographic membrane.

【００６３】５．金コロイド粒子標識抗Ｃｏ−ＰＣＢモ
ノクローナル抗体の作製 金コロイド粒子（平均粒子径約４０nm、 ＢＢＩｎｔｅ
ｒｅｎｅｔｉｏｎａｌ）への抗Ｃｏ−ＰＣＢモノクロー
ナル抗体の結合は、ＢＢＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌの
プロトコールに従い行った。得られた金コロイド標識抗
Ｃｏ−ＰＣＢモノクローナル抗体溶液は、ＯＤ５２０の
値が５〜６になるよう調整し、使用まで冷蔵保存を行っ
た。5. Gold colloid particle labeling anti-Co-PCB model
Preparation of noclonal antibody Gold colloidal particles (average particle size of about 40 nm, BBInte
The binding of the anti-Co-PCB monoclonal antibody to the recombinant was carried out according to the protocol of BB International. The obtained gold colloid-labeled anti-Co-PCB monoclonal antibody solution was adjusted to have an OD520 value of 5 to 6, and was stored refrigerated until use.

【００６４】６．金コロイドパッド（標識体反応部位）
の作製 グラスファイバー製のコンジュゲートパッド（１０mm×
３０cm、ミリポア社製）に、上記方法により得られた金
コロイド標識抗体液（最終濃度：１６％）に浸し、真空
乾燥機で十分乾燥させたものを金コロイドパッドとして
使用した。6. Gold colloid pad (reactive site of labeled substance)
Fabrication of glass fiber conjugate pad (10mm x
30 cm, manufactured by Millipore) was immersed in the gold colloid-labeled antibody solution (final concentration: 16%) obtained by the above method and sufficiently dried with a vacuum dryer to be used as a gold colloid pad.

【００６５】７．サンプルパッド（被験試料質適用部
位）の調整 サンプルパッド（２０ｍｍ Ｘ ３０ｃｍ、ミリポア）
を２％サッカロース、１％ＢＳＡ、１％ＴｒｉｔｏｎＸ
−１００、 ＰＢＳ溶液に浸し、真空乾燥機で十分乾燥
させたものをサンプルパッドとして使用した。7. Sample pad (Test sample application section
Adjustment) Sample pad (20mm X 30cm, Millipore)
2% sucrose, 1% BSA, 1% TritonX
-100, which was soaked in PBS solution and sufficiently dried by a vacuum dryer was used as a sample pad.

【００６６】８．本検出器具の組み立て 上記方法により作製した、サンプルパッド、金コロイド
パッドおよびクロマトメンブレンを、ラミネートカード
（ミリポア）に、第１図および第２図に示したように装
着した。さらに吸収パッド（１７mm×３０cm、ミリポア
社製）を装着後、ギロチン型カッター（ＢｉｏＤｏｔ
社）を用いて、ラミネートカードを、幅５mmに切断し、
本検出器具として用いた。8. Assembling of the Detection Instrument The sample pad, the colloidal gold pad and the chromatographic membrane produced by the above method were mounted on a laminated card (Millipore) as shown in FIGS. 1 and 2. After attaching an absorption pad (17 mm x 30 cm, Millipore), a guillotine type cutter (BioDot)
Company), cut the laminated card into a width of 5 mm,
It was used as this detection instrument.

【００６７】９．Ｃｏ−ＰＣＢ＃１２６の測定 Ｃｏ−ＰＣＢ＃１２６を、２５％ＤＭＳＯ、ＴＢＳ溶液
で１０ppm 、５ppm 、２．５ppm 、１．２５ppm 、１pp
m 、０．１ppm に希釈した。これらの希釈Ｃｏ−ＰＣＢ
＃１２６、１５０μＬをサンプルとして、８で組み立て
た、本検出器具の、被験試料適用部位に滴下し、一定時
間後（第１表参照）に検出部位の着色度合いを目視によ
り判定した。その結果を、第１表に示す。9. Measurement of Co-PCB # 126 Co-PCB # 126 was added with 25% DMSO and TBS solution at 10 ppm, 5 ppm, 2.5 ppm, 1.25 ppm, 1 pp.
m, diluted to 0.1 ppm. These diluted Co-PCB
Samples of # 126 and 150 μL were dropped on the test sample application site of the present detection instrument assembled in 8, and after a certain time (see Table 1), the degree of coloring of the detection site was visually determined. The results are shown in Table 1.

【００６８】[0068]

【表１】 第 １ 表 ──────────────────────────────────── Co-PCB126濃度 検出部位の着色度合い (ppm) ３分後 ５分後 １０分後 ２０分後 ──────────────────────────────────── １０ − − ＋ ＋＋ ５ − ＋ ＋＋ ＋＋ ２．５ ＋ ＋ ＋＋ ＋＋ １．２５ ＋ ＋ ＋＋ ＋＋ １ − − ＋ ＋ ０．１ − − − − ０ − − − − ──────────────────────────────────── 〔判定基準〕 ＋＋：強い着色 ＋：弱い着色 −：着色無し[Table 1]                               Table 1 ────────────────────────────────────  Co-PCB126 concentration Degree of coloration at the detection site     (ppm) 3 minutes later 5 minutes later 10 minutes later 20 minutes later ────────────────────────────────────     10 − − + ++       5-+++++       2.5 + + + + + +       1.25 ++ ++ ++       1 --- + +       0.1 − − − −       0 − − − − ────────────────────────────────────   [Criteria] ++: Strong coloring +: Weak coloring −: No coloring

【００６９】１０．結果 サンプル滴下１０分後、目視判定により、サンプル中の
Ｃｏ−ＰＣＢ濃度が１ppm 以上の場合、陽性と判断可能
であることが分かった。10. Results After 10 minutes from the dropping of the sample, it was found by visual inspection that when the Co-PCB concentration in the sample was 1 ppm or more, it could be determined to be positive.

【００７０】[0070]

【発明の効果】本発明により、被験物質中の標的物質で
ある環境汚染物質の濃度の上昇に応じて、検出部位にお
ける着色の強度が増加する、免疫クロマトグラフィーを
用いた低分子物質の検出器具が提供され、簡便、かつ、
鋭敏に、環境汚染物質の検出を行う途を与えられる。INDUSTRIAL APPLICABILITY According to the present invention, a device for detecting a low-molecular substance using immunochromatography, in which the intensity of coloring at the detection site increases in accordance with the increase in the concentration of the environmental pollutant which is the target substance in the test substance Is provided, is simple, and
You will be provided with a sensitive way to detect environmental pollutants.

【図面の簡単な説明】[Brief description of drawings]

【図１】本検出器具の一実施態様を示した図面（上面
図）である。FIG. 1 is a drawing (top view) showing an embodiment of the present detection instrument.

【図２】本検出器具の一実施態様を示した図面（横断面
図）である。FIG. 2 is a drawing (transverse sectional view) showing an embodiment of the present detection instrument.

Claims (6)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項１】被験試料を接触させるための、被験試料
適用部位、被験試料中の標的物質に結合し得る抗体を
一部とする標識体を非結合状態で含む、標識体反応部
位、標的物質に結合していないフリーの標識体を捕捉
することが可能な要素を結合状態で含む、未反応標識体
捕捉部位、および、標識体が結合した標的物質と接触
すると視覚的な変化を生じる検出要素を含む、検出部
位、を含み、かつ、標的物質が、微量成分として生活環
境に存在する低分子人工化学物質である、低分子物質検
出器具。1. A labeled substance reaction site and a target substance, which include, in an unbound state, a test sample application site for contacting the test sample, and a labeled product which is part of an antibody capable of binding to the target substance in the test sample. An unreacted label capturing site, which contains, in a bound state, an element capable of capturing a free label that is not bound to the label, and a detection element that causes a visual change upon contact with a target substance to which the label is bound. And a detection site, and the target substance is a low-molecular-weight artificial chemical substance that is present in the living environment as a trace component, and is a low-molecular-weight substance detection instrument. 【請求項２】検出部位における検出要素が、金属コロイ
ド粒子である、請求項１記載の低分子物質検出器具。2. The low molecular weight substance detection instrument according to claim 1, wherein the detection element at the detection site is a metal colloid particle. 【請求項３】検出部位における検出要素が、結合状態で
含まれる、請求項１または２記載の低分子物質検出器
具。3. The low-molecular-weight substance detection instrument according to claim 1, wherein the detection element at the detection site is contained in a bound state. 【請求項４】未反応標識体捕捉部位における、標的物質
に結合していないフリーの標識体を捕捉することが可能
な要素が、標的物質、または、標的物質の類似物質であ
る、請求項１〜３のいずれかに記載の低分子物質検出器
具。4. The element capable of capturing a free label that is not bound to the target substance at the unreacted label capturing site is a target substance or a substance similar to the target substance. The low molecular weight substance detection instrument according to any one of 1 to 3. 【請求項５】未反応標識体捕捉部位、および、検出部位
が、多孔性のクロマトグラフィー用メンブレンに固定化
された担体を基材とする、請求項１〜４のいずれかに記
載の低分子物質検出器具。5. The low molecule according to claim 1, wherein the unreacted labeled substance-capturing site and the detection site are based on a carrier immobilized on a porous chromatographic membrane. Material detection equipment. 【請求項６】標的物質が、ダイオキシン類、および／ま
たは、ＰＣＢ類である、請求項１〜５のいずれかに記載
の低分子物質検出器具。6. The low molecular weight substance detection instrument according to claim 1, wherein the target substance is dioxins and / or PCBs.