JP2003204794A - Polypeptide composition and its use - Google Patents

Polypeptide composition and its use

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JP2003204794A
JP2003204794A JP2002006607A JP2002006607A JP2003204794A JP 2003204794 A JP2003204794 A JP 2003204794A JP 2002006607 A JP2002006607 A JP 2002006607A JP 2002006607 A JP2002006607 A JP 2002006607A JP 2003204794 A JP2003204794 A JP 2003204794A
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polypeptide
seq
amino acid
plant
lys
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JP2002006607A
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Japanese (ja)
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Takashi Shimamura
隆 嶋村
Takao Imaeda
孝夫 今枝
Nobuhiko Muramoto
伸彦 村本
Masakata Hirai
正名 平井
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Original Assignee
Toyota Central R&D Labs Inc
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Abstract

<P>PROBLEM TO BE SOLVED: To solve the characteristic problems of anti-microbial polypeptides whose anti-microbial activities are low against specific fungi or which are liable to be degraded with proteases in plants. <P>SOLUTION: When pests are controlled, (a) one or more polypeptides having α-helix structures, respectively, and (b) one or more thionine compounds are applied to an environment or organism in which the pests can live. The specific polypeptide composition exhibits effective anti-microbial activities against the pests including fungi. <P>COPYRIGHT: (C)2003,JPO

Description

【発明の詳細な説明】Detailed Description of the Invention

【０００１】[0001]

【発明の属する技術分野】この発明は、α−ヘリックス
構造を有するポリペプチドとチオニンとを含有する抗菌
性ポリペプチド組成物に関し、特に、真菌あるいは植物
病害性菌などの病害生物に対して有効性の高いポリペプ
チド組成物および植物病害の防除技術や栽培植物の生産
技術に関する。TECHNICAL FIELD The present invention relates to an antibacterial polypeptide composition containing a polypeptide having an α-helix structure and thionine, and is particularly effective against pests such as fungi or plant pathogenic fungi. The present invention relates to a high polypeptide composition, a plant disease control technique, and a cultivated plant production technique.

【０００２】[0002]

【従来の技術】細菌、真菌、線虫等の植物病害生物によ
る植物被害は、農業及び園芸産業に重要な課題となって
いる。植物病害生物に対する対策としては、従来、
（A）有機系化学農薬、(B)微生物農薬、（C）病害抵抗
性植物、を用いる方法が開発されてきている。上記
（A）の技術は、多種多様であるが、例えば、イネいも
ち病に対するカスガマイシン塩酸塩の利用、イネ紋枯病
等に対するバリンダマイシンAやフルトラニル等の利用
を例示することができる。上記（Ｂ）の技術として、例
えば、シュードモナス属細菌の使用によるイネ苗立枯病
の防除（特開平4-104783号公報）や、同様な方法による
ナス科植物の青枯病の防除（特開平6-9325号公報）等を
例示することができる。2. Description of the Related Art Plant damage caused by plant pests such as bacteria, fungi and nematodes has become an important issue in the agricultural and horticultural industries. As measures against plant pests,
Methods using (A) organic chemical pesticides, (B) microbial pesticides, and (C) disease-resistant plants have been developed. The technique of (A) above is diverse, and examples thereof include the use of kasugamycin hydrochloride for rice blast and the use of valindamycin A and flutolanil for rice blight and the like. As the technique (B), for example, control of seedling wilting of rice by using Pseudomonas bacteria (Japanese Patent Laid-Open No. 104783/1992) and control of bacterial wilt of Solanaceae plants by a similar method (Japanese Laid-Open Patent Publication No. Hei 10 (1998) -104732) 6-9325) and the like.

【０００３】上記（C）の技術として、抗菌性蛋白質又
は抗菌性ポリペプチド遺伝子を植物に導入し、植物病原
生物に対して抵抗性を付与したトランスジェニック植物
が開発されている。使用する抗菌性蛋白質又は抗菌性ポ
リペプチドは多種多様であるが、例えば、センチニクバ
エに由来の抗菌性蛋白質ザルコトキシンIA遺伝子を導入
したトランスジェニックタバコ（特開平７−２５０６８
５号公報）、アサガオ成熟種子由来の抗菌性ペプチドPn
-AMPを導入したトランスジェニックタバコ（特開２００
０−２４５４８３号公報）、エンバク葉由来のチオニン
遺伝子を導入したイネ苗立枯細菌病に対して病害抵抗性
を持たせたイネ（特開平11-075594号公報）等を例示す
ることができる。また、α−ヘリックス構造を形成する
ポリペプチドを植物に導入した例として、マガイニン２
遺伝子を導入したタバコ（Li Q et al.,Planta,212(4):
635-639, 2001）、セクロピン遺伝子を導入した腐敗病
抵抗性レタス（特開平11-313680号公報）、セクロピンA
−メリチンハイブリッドペプチド遺伝子を導入したジャ
ガイモ（Osusky M et al.,Nat Biotechnol., 18(11):11
62-1166.,2000）等を例示することができる。その他、
α―ヘリックス構造を形成する抗菌性ポリペプチドとし
てCAP18(Cationic antimicrobial protein of 18kD
a)、PGLa (Soravia, E. et al., FEBS Letters, 228,33
7-340 ,1988)、Melittin（Blondelle SE et al.,Bioche
mistry, 30(19):4671-4678,1991）、Indolicidin（Sels
ted ME et al., J Biol Chem., 267(7):4292-4295.,199
2）、Dermaseptin（Mor A et al., Biochemistry, 30
(36):8824-8830, 1991）、PGQ（Moore KS et al., J. B
iol. Chem. , 266(29), 19851-19857, 1991）等を例示
することができるが、これらのペプチドは抗生剤等の医
薬用途に開発が集中している。また、その用途は、抗細
菌性に着目したものとなっている。As the technique (C), a transgenic plant has been developed in which an antibacterial protein or an antibacterial polypeptide gene is introduced into a plant to impart resistance to a plant pathogenic organism. There are various types of antibacterial proteins or antibacterial polypeptides to be used.
5), an antibacterial peptide Pn derived from mature morning glory seeds
-Transgenic tobacco introduced with AMP
No. 0-245483), and rice having resistance to disease caused by bacterial seedling wilting disease introduced with a thionine gene derived from oat leaves (Japanese Patent Laid-Open No. 11-075594). In addition, as an example of introducing a polypeptide forming an α-helix structure into a plant, magainin 2
Transgenic tobacco (Li Q et al., Planta, 212 (4):
635-639, 2001), rot-resistant lettuce (Japanese Patent Laid-Open No. 11-313680) into which the cecropin gene has been introduced, cecropin A
-Potatoes introduced with the melittin hybrid peptide gene (Osusky M et al., Nat Biotechnol., 18 (11): 11).
62-1166., 2000) and the like. Other,
CAP18 (Cationic antimicrobial protein of 18kD) as an antibacterial polypeptide forming α-helix structure
a), PGLa (Soravia, E. et al., FEBS Letters, 228,33
7-340, 1988), Melittin (Blondelle SE et al., Bioche
mistry, 30 (19): 4671-4678,1991), Indolicidin (Sels
ted ME et al., J Biol Chem., 267 (7): 4292-4295., 199
2), Dermaseptin (Mor A et al., Biochemistry, 30
(36): 8824-8830, 1991), PGQ (Moore KS et al., J. B.
iol. Chem., 266 (29), 19851-19857, 1991) and the like can be exemplified, but these peptides have been intensively developed for pharmaceutical use such as antibiotics. In addition, its use is focused on antibacterial properties.

【０００４】上記(A)の方法では、有機系化学農薬の過
剰な使用により農薬の食品への残留や水質汚濁等の環境
汚染を招来したり、抵抗性病原体の出現又は優占化を促
したりすることが懸念される。上記（B）の方法では、
拮抗微生物の使用方法、施用時期、土壌条件等によって
効果が一定しない場合が多い。又、微生物を一定の区域
内にのみ維持させておくことは困難である。上記（C）
の方法で、α−ヘリックス構造を形成するポリペプチド
の遺伝子を植物に導入した場合、α−ヘリックス構造を
形成するポリペプチドは特定の真菌に対して抗真菌活性
が低い、あるいは上記ポリペプチドは植物内プロテアー
ゼにより分解されやすいため、植物体内での上記ポリペ
プチドの発現レベルが抗真菌活性を発揮する閾値レベル
に到達できず、事実上、抵抗性を付与した植物体が得ら
れないことが多い。In the above method (A), excessive use of organic chemical pesticides causes environmental pollution such as residue of pesticides in foods and water pollution, and promotes emergence or predominance of resistant pathogens. I am afraid to do so. In the method of (B) above,
The effect is often inconsistent depending on the method of use of antagonistic microorganisms, the time of application, soil conditions, etc. Also, it is difficult to keep microorganisms only within a certain area. Above (C)
When a gene for a polypeptide forming an α-helix structure is introduced into a plant by the method described above, the polypeptide forming an α-helix structure has low antifungal activity against a specific fungus, or the polypeptide is a plant. Since it is easily degraded by an internal protease, the expression level of the above-mentioned polypeptide in the plant cannot reach the threshold level at which the antifungal activity is exerted, and in fact, a plant to which resistance is imparted cannot be obtained in many cases.

【０００５】すなわち、現在までのところ、抵抗性病原
体の出現、使用条件の制約などの問題が解消されておら
ず、また、特定の真菌に対して抗菌活性が低い、および
／または、植物内プロテアーゼにより分解されやすいと
いった抗菌性ポリペプチド特有の問題が解決されていな
かった。そこで、本発明では、このような従来の問題点
を解決できるポリペプチド組成物およびこの組成物に関
連する微生物の防除技術あるいは栽培植物の生産技術を
提供することを目的とする。[0005] That is, to date, problems such as the emergence of resistant pathogens and restrictions on use conditions have not been solved, and the antibacterial activity against specific fungi is low and / or proteases in plants are used. The problem peculiar to the antibacterial polypeptide, such as being easily decomposed by, has not been solved. Therefore, it is an object of the present invention to provide a polypeptide composition capable of solving such conventional problems, and a technique for controlling microorganisms related to this composition or a technique for producing cultivated plants.

【０００６】[0006]

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記した
従来の問題点に鑑み、α−ヘリックス構造を形成するポ
リペプチドに着目して、このポリペプチドの抗菌活性の
向上について研究した。その結果、α−ヘリックス構造
を有するポリペプチドにある種のポリペプチドとを組み
合わせることにより、抗菌活性が向上することを見出
し、かかる知見により、上記した課題を解決できること
を見出した。すなわち、本発明によれば、以下の手段が
提供される。In view of the above-mentioned conventional problems, the present inventors have paid attention to a polypeptide forming an α-helix structure and studied the improvement of the antibacterial activity of this polypeptide. As a result, they have found that the antibacterial activity is improved by combining a polypeptide having an α-helix structure with a certain type of polypeptide, and it has been found that the above problems can be solved by such knowledge. That is, according to the present invention, the following means are provided.

【０００７】（１）ポリペプチド組成物であって、以下
のポリペプチド： （ａ）α−へリックス構造を有するポリペプチドの１種
あるいは２種以上、及び（ｂ）チオニンの１種あるいは
２種以上、を有効成分として含有する、組成物。 （２）ポリペプチド組成物であって、以下のポリペプチ
ド： （ａ）α−へリックス構造を有するポリペプチドの１種
あるいは２種以上、及び（ｂ）チオニンの１種あるいは
２種以上、を病害生物に対して供給するための組成物で
あり、前記（ａ）のポリペプチドおよび／または前記
（ｂ）のポリペプチドを有効成分として含有する、組成
物。 （３）前記（ａ）のポリペプチドは、配列番号：１〜６
のいずれかに示すアミノ酸配列からなる、又は、配列番
号：１〜６のいずれかに記載のアミノ酸配列において１
個もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および
／または付加されたアミノ酸配列からなる、（１）又は
（２）記載の組成物。 （４）前記（ｂ）のポリペプチドは、配列番号：７〜１
８、３３および３４のいずれかに記載されるアミノ酸配
列からなる、又は、配列番号：７〜１８、３３および３
４のいずれかに記載のアミノ酸配列において１個もしく
は数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／または
付加されたアミノ酸配列からなる、（１）〜（３）のい
ずれかに記載の組成物。 （５）核酸構築物を含有する組成物であって、前記核酸
構築物は、植物組織に導入されて、以下のポリペプチ
ド： （ａ）α−へリックス構造を有するポリペプチドの１種
あるいは２種以上、及び（ｂ）チオニンの１種あるいは
２種以上、を産生させるための核酸構築物であり、前記
（ａ）のポリペプチドのアミノ酸配列および／または前
記（ｂ）のポリペプチドのアミノ酸配列をコードするポ
リヌクレオチドを有する１種あるいは２種以上の核酸構
築物を含有する、組成物。 （６）前記核酸構築物の少なくとも１種は、配列番号：
１９〜２４のいずれかに記載の塩基配列を有するポリヌ
クレオチドを有する、（４）記載の組成物。 （７）前記核酸構築物の少なくとも１種は、配列番号：
２５〜３２、３５および３６のいずれかに記載の塩基配
列を有する、（５）又は（６）に記載の組成物。 （８）１種以上の核酸構築物が導入されて形質転換さ
れ、以下のポリペプチド： （ａ）α−へリックス構造を有するポリペプチドの１種
あるいは２種以上、及び（ｂ）チオニンの１種あるいは
２種以上、を産生する形質転換植物組織。 （９）１種以上の核酸構築物が導入されて形質転換さ
れ、以下のポリペプチド： （ａ）α−へリックス構造を有するポリペプチドの１種
あるいは２種以上、及び（ｂ）チオニンの１種あるいは
２種以上、を産生する、形質転換細胞。 （１０）病害生物の防除方法であって、病害生物の生存
しうる環境あるいは生物体において、以下のポリペプチ
ド： （ａ）α−へリックス構造を有するポリペプチドの１種
あるいは２種以上、及び（ｂ）チオニンの１種あるいは
２種以上、を存在させる、方法。 （１１）（１）〜（４）のいずれかに記載の組成物を、
前記環境あるいは生物体の外部から供給する工程を有す
る、（１０）記載の防除方法。 （１２）前記環境において、（８）記載の形質転換植物
組織である植物体を栽培する工程を有する、（１０）記
載の防除方法。 （１３）植物病害生物の防除方法であって、以下のポリ
ペプチド： （ａ）α−へリックス構造を有するポリペプチドの１種
あるいは２種以上、及び（ｂ）チオニンの１種あるいは
２種以上、を産生する植物体を栽培する工程を有する、
方法。 （１４）栽培植物の生産方法であって、以下のポリペプ
チド： （ａ）α−へリックス構造を有するポリペプチドの１種
あるいは２種以上、及び（ｂ）チオニンの１種あるいは
２種以上、を産生する植物体を栽培する工程を有する、
方法。(1) A polypeptide composition comprising the following polypeptides: (a) one or more kinds of polypeptides having an α-helix structure, and (b) one or two kinds of thionine. A composition containing the above as an active ingredient. (2) A polypeptide composition comprising the following polypeptides: (a) one or more polypeptides having an α-helix structure, and (b) one or more thionines. A composition for supplying to a pest, which comprises the polypeptide (a) and / or the polypeptide (b) as an active ingredient. (3) The polypeptide of (a) above has SEQ ID NOs: 1 to 6.
Of the amino acid sequence shown in any of 1 to 6, or 1 in the amino acid sequence of any of SEQ ID NOs: 1 to 6.
The composition according to (1) or (2), which consists of an amino acid sequence in which one or several amino acids are substituted, deleted, inserted, and / or added. (4) The polypeptide of (b) above has SEQ ID NOs: 7-1.
Consisting of the amino acid sequence described in any of 8, 33 and 34, or SEQ ID NOs: 7-18, 33 and 3
The composition according to any one of (1) to (3), which comprises an amino acid sequence in which one or several amino acids are substituted, deleted, inserted, and / or added in the amino acid sequence according to any one of 4 above. object. (5) A composition containing a nucleic acid construct, wherein the nucleic acid construct is introduced into a plant tissue to produce the following polypeptide: (a) one or more polypeptides having an α-helix structure And (b) a nucleic acid construct for producing one or more thionines, which encodes the amino acid sequence of the polypeptide of (a) and / or the amino acid sequence of the polypeptide of (b). A composition comprising one or more nucleic acid constructs having a polynucleotide. (6) At least one of the nucleic acid constructs has a SEQ ID NO:
The composition according to (4), which comprises the polynucleotide having the base sequence according to any one of 19 to 24. (7) At least one of the nucleic acid constructs has a SEQ ID NO:
The composition according to (5) or (6), which has the base sequence according to any of 25 to 32, 35, and 36. (8) One or more nucleic acid constructs are introduced and transformed, and the following polypeptides: (a) one or more polypeptides having an α-helix structure and (b) one thionine. Alternatively, a transformed plant tissue that produces two or more species. (9) One or more nucleic acid constructs are introduced and transformed, and the following polypeptides: (a) one or more polypeptides having an α-helix structure, and (b) one thionine. Alternatively, a transformed cell that produces two or more species. (10) A method for controlling a pest, comprising the following polypeptide in the environment or organism in which the pest can survive: (a) one or more polypeptides having an α-helix structure, and (B) A method in which one or more kinds of thionine are present. (11) The composition according to any one of (1) to (4),
The control method according to (10), comprising a step of supplying from the environment or the outside of an organism. (12) The control method according to (10), which has a step of cultivating a plant that is the transformed plant tissue according to (8) in the environment. (13) A method for controlling plant pests, which comprises the following polypeptides: (a) one or more polypeptides having an α-helix structure, and (b) one or more thionines. Having a step of cultivating a plant that produces,
Method. (14) A method for producing a cultivated plant, which comprises the following polypeptides: (a) one or two or more polypeptides having an α-helix structure, and (b) one or two or more thionines; Having a step of cultivating a plant that produces
Method.

【０００８】これらの手段によれば、α−ヘリックス構
造を有するポリペプチドとチオニンとを、真菌あるいは
細菌などの病害生物に対して作用させることにより、そ
れぞれ単独のポリペプチドの抗菌活性よりも高い抗病害
生物活性を発現させることができる。したがって、それ
ぞれ単独で用いるよりも、有効に病害生物を防除するこ
とができる。本発明によれば、病害生物に対して当該特
定の組み合わせのポリペプチドを作用させることにより
病害生物を防除（予防および／または駆除）する技術お
よび病害生物に侵される可能性のある植物組織に対して
抵抗性を付与する技術が提供される。さらに、当該組み
合わせのポリペプチドを作用させて、栽培植物を生産す
る技術および収穫された植物組織の貯蔵技術が提供され
る。According to these means, a polypeptide having an α-helix structure and thionine are allowed to act on a pest such as a fungus or a bacterium, so that the antibacterial activity of each polypeptide is higher than that of a single polypeptide. A pest activity can be expressed. Therefore, the pests can be effectively controlled as compared with the case where they are used alone. According to the present invention, a technique for controlling (preventing and / or exterminating) a pest by causing a particular combination of polypeptides to act on the pest, and a plant tissue that may be affected by the pest A technique for imparting resistance is provided. Further, a technique for producing a cultivated plant and a technique for storing harvested plant tissue by providing an action of the combination of polypeptides are provided.

【０００９】[0009]

【発明の実施の形態】以下、本発明の実施の形態につい
て詳細に説明する。本発明における特定の組み合わせの
ポリペプチドとは、α−ヘリックス構造を有するポリペ
プチドの１種あるいは２種以上（以下、第１のポリペプ
チドという。）、およびチオニンの１種あるいは２種以
上（以下、第２のポリペプチドという。）である。これ
らの第１のポリペプチドおよび／または第２のポリペプ
チドにより、本発明の抗菌性組成物、あるいはこれらを
用いる、病害生物の防除方法、病害生物に対する抵抗性
の付与方法、植物体の生産方法、貯蔵方法などが提供さ
れる。本発明により提供される特定の組み合わせのポリ
ペプチドは、真菌、細菌（グラム陰性および陽性）、お
よび各種植物病害菌（真菌および細菌を含む）のいずれ
かに対する細胞障害性、すなわち、抗菌性を有してい
る。好ましくは、少なくとも真菌に対する抗菌性を有
し、より好ましくは、糸状菌に対して抗菌性を有する。
また、好ましくは、植物病害真菌（典型的には、糸状
菌）に対して抗菌性を有している。また、好ましくは、
グラム陽性菌及びグラム陰性菌を含む細菌に対して抗菌
性を有し、なかでも、グラム陰性菌に対して抗菌性を有
している。また、好ましくは、植物病害細菌（典型的に
は、グラム陰性菌）に対して抗菌性を有している。BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION Embodiments of the present invention will be described in detail below. The specific combination of polypeptides in the present invention means one or more kinds of polypeptides having an α-helix structure (hereinafter referred to as the first polypeptide), and one or more kinds of thionine (hereinafter referred to as “first polypeptide”). , A second polypeptide). An antibacterial composition of the present invention, or a method for controlling a diseased organism, a method for imparting resistance to a diseased organism, a method for producing a plant, using the first polypeptide and / or the second polypeptide Storage methods are provided. Certain combinations of polypeptides provided by the present invention have cytotoxic, ie, antibacterial, properties against any of fungi, bacteria (gram negative and positive), and various plant pathogens (including fungi and bacteria). is doing. Preferably, it has antibacterial properties against at least fungi, and more preferably it has antibacterial properties against filamentous fungi.
In addition, it preferably has antibacterial activity against plant disease fungi (typically, filamentous fungi). Also, preferably,
It has antibacterial properties against bacteria including Gram-positive bacteria and Gram-negative bacteria, and above all, has antibacterial properties against Gram-negative bacteria. Further, it preferably has antibacterial properties against plant disease bacteria (typically, gram-negative bacteria).

【００１０】抗菌性を発揮する真菌としては、特に限定
しない。例えば、一般的なcandidaalbicansなどのcandi
da属菌の他、植物（特に栽培植物）における病害性菌と
して知られる糸状菌類を例示することができる。糸状菌
としては、サツマイモの黒斑病菌であるCeratocyctis f
imbriataなどのCeratocyctis属菌、イネいもち病菌であ
るPyrucularia oryzae raceなどのPyrucularia属菌を挙
げることができる。また、サツマイモ軟腐病菌（Rhizop
us stolonifer）などのRhizopus属菌を挙げることもで
きる。特に、サツマイモ黒斑病菌とサツマイモ軟腐病菌
とは、サツマイモの栽培において問題の大きい病害生物
であり、サツマイモの栽培においては、これらの真菌に
抗菌性を発揮することが好ましい。また、抗菌性を発揮
するグラム陰性菌としても特に限定しない。大腸菌 Ech
richia coliなどのEchrichia属菌や、サルモネラ菌 Sal
monella typhimuriumなどのSalmonella属菌などの細菌
の他、ダイズ斑点細菌病菌であるPseudomonas syringae
などのPseudomonas属菌を例示できる。また、グラム陽
性菌としては、特に限定しない。黄色ブドウ球菌 Strep
tococcus pyrogenesなどのStreptococcus属菌を例示で
きる。The fungus exhibiting antibacterial properties is not particularly limited. For example, candi such as common candida albicans
Other than the genus Da, filamentous fungi known as disease-causing fungi in plants (especially cultivated plants) can be exemplified. As a filamentous fungus, Ceratocyctis f, which is a black spot fungus of sweet potato
Examples include Ceratocyctis spp. such as imbriata and Pyrucularia spp. such as Pyrucularia oryzae race which is a rice blast fungus. In addition, sweet potato rot (Rhizop
Us stolonifer) and other Rhizopus spp. In particular, the sweetpotato black spot fungus and the sweetpotato soft rot fungus are pests causing serious problems in the cultivation of sweet potatoes, and it is preferable to exert antibacterial activity against these fungi in the cultivation of sweet potatoes. In addition, the gram-negative bacteria exhibiting antibacterial properties are not particularly limited. E. coli Ech
Echrichia spp. such as richia coli and Salmonella Sal
Pseudomonas syringae which is a soybean spot bacterial disease in addition to bacteria such as Salmonella spp. such as monella typhimurium
Examples of Pseudomonas spp. The Gram-positive bacterium is not particularly limited. Staphylococcus aureus Strep
Examples include Streptococcus spp. such as tococcus pyrogenes.

【００１１】本発明により提供されるポリペプチドは、
これらの真菌および／または細菌などに対して細胞障害
性を示すが、抗菌活性としては、対象菌に対する最少殺
菌濃度が、約１００μｇ／ｍｌ以下であることが好まし
い。より好ましくは、約３０μｇ／ｍｌ以下である。特
に、当該ポリペプチドを植物細胞あるいは組織内で発現
させるなどにより導入する場合には、最少殺菌濃度が約
１０μｇ／ｍｌ以下であることが好ましい。本発明のポ
リペプチドは、好ましくは、真菌（典型的には、サツマ
イモ黒斑病菌などの糸状菌）及び細菌（典型的には大腸
菌などのグラム陰性細菌や黄色ブドウ球菌などのグラム
陽性菌）に対して、それぞれ３０μｇ／ｍｌ以下の最少
殺菌濃度を有し、より好ましくは、それぞれに対して１
０μｇ／ｍｌ以下の最少殺菌濃度を有する。最少殺菌濃
度は、当業者であれば、容易に求めることができる。ま
た、本発明により提供されるポリペプチドを、植物細胞
あるいは組織内で発現させるには、植物内での安定性の
指標となる植物細胞間液（例えば、サツマイモ細胞間液
および／またはシロイヌナズナの細胞間）液中の５時間
後の残存率％（温度：約２０〜約３０℃）が、植物由来
の抗菌性ペプチド（典型的にはチオニン）と、おおよそ
同等であることが好ましい。また、特に、ヒトなどの哺
乳類への安全性を確保するには、ヒトに対する安全性の
指標となるＣＨＬ細胞などに対する５０％死滅濃度が１
００μｇ／ｍｌ以上であることが好ましい。ＣＨＬ細胞
に対する５０％死滅濃度は、後述する実施例に記載する
方法の他、当業者に周知の方法によって測定することが
できる。The polypeptide provided by the present invention is
Although it exhibits cytotoxicity against these fungi and / or bacteria, it is preferable that the minimum bactericidal concentration of the target bacterium is about 100 μg / ml or less as the antibacterial activity. More preferably, it is about 30 μg / ml or less. In particular, when the polypeptide is introduced by expressing it in plant cells or tissues, the minimum bactericidal concentration is preferably about 10 μg / ml or less. The polypeptides of the present invention are preferably fungal (typically filamentous fungi such as sweet potato black spot fungi) and bacteria (typically Gram-negative bacteria such as E. coli and Gram-positive bacteria such as Staphylococcus aureus). On the other hand, each has a minimum bactericidal concentration of 30 μg / ml or less, and more preferably 1 for each.
It has a minimum bactericidal concentration of 0 μg / ml or less. Those skilled in the art can easily determine the minimum bactericidal concentration. In addition, in order to express the polypeptide provided by the present invention in plant cells or tissues, plant intercellular fluid (eg, sweet potato intercellular fluid and / or Arabidopsis cells) that serves as an indicator of stability in the plant. It is preferable that the residual ratio (temperature: about 20 to about 30 ° C.) after 5 hours in the liquid is about the same as that of the plant-derived antibacterial peptide (typically, thionine). Further, in particular, in order to ensure safety for mammals such as humans, 50% dead concentration for CHL cells, which is an index of human safety, is 1
It is preferably at least 00 μg / ml. The 50% dead concentration for CHL cells can be measured by a method well known to those skilled in the art in addition to the method described in the examples below.

【００１２】かかる特定の組み合わせのポリペプチドを
真菌などに供給すると、それぞれの単独の抗菌活性の合
計よりもさらに増加した抗菌活性を発揮する。例えば、
いずれかのポリペプチドが単独では有効に発育阻止をほ
とんど達成できない濃度範囲にあっても、このポリペプ
チドに他方のポリペプチドを適量を供給することによ
り、予定される両者の抗菌活性の総和を超えて高い発育
阻止率を達成することができる。したがって、それぞれ
の濃度としても全体の濃度としても低い濃度域で高い発
育阻止率を達成することができる。When such a specific combination of polypeptides is supplied to fungi or the like, the antibacterial activity is increased more than the sum of the antibacterial activities of each of them alone. For example,
Even if one of the polypeptides is in a concentration range where growth inhibition cannot be effectively achieved by itself, by supplying an appropriate amount of the other polypeptide to this polypeptide, the expected total antibacterial activity of both will be exceeded. And a high stunting rate can be achieved. Therefore, a high growth inhibitory rate can be achieved in a low concentration range for both the respective concentrations and the total concentration.

【００１３】さらに、単独ではいずれのポリペプチドも
病害生物の発育を有効に阻止できない濃度範囲（両者を
併せたとしても有効に病害生物の発育を阻止できないと
推測される濃度範囲）であっても、両者を組み合わせる
ことによって、高い発育阻止率を達成することができる
ようになる。結果として、それぞれの濃度としても全体
の濃度として低い濃度域で、有効な発育阻止を達成する
ことができる。特定の組み合わせのポリペプチドによる
このような相乗効果の発現は、低濃度のポリペプチド濃
度で有効な抗菌活性を発揮させることができる点から、
（１）当該ポリペプチドを散布などによって供給する場
合の作業性、（２）環境に対する影響、（３）他の生物
への影響、（４）形質転換によって生物体内で発現され
る場合の抗菌性の確保などのメリットを備えている。ま
た、当該組み合わせのポリペプチドによれば、その組み
合わせ、および／または、低濃度域での抗菌活性の発現
により、広い範囲の病害微生物、特に広範囲の真菌の防
除に有効な抗菌性組成物を提供することができる。Furthermore, even in the concentration range in which none of the polypeptides can effectively inhibit the growth of the diseased organisms alone (the concentration range in which it is presumed that the growth of the diseased organisms cannot be inhibited effectively even when the two are combined). , By combining both, it becomes possible to achieve a high stunting rate. As a result, effective growth inhibition can be achieved in the low concentration range of each concentration as a whole. The expression of such a synergistic effect due to a specific combination of polypeptides can exert effective antibacterial activity at a low polypeptide concentration,
(1) Workability when the polypeptide is supplied by spraying, (2) Environmental impact, (3) Impact on other organisms, (4) Antibacterial activity when expressed in organisms by transformation It has advantages such as securing of. Further, according to the polypeptide of the combination, the combination and / or the expression of the antibacterial activity in a low concentration range provides an antibacterial composition effective for controlling a wide range of disease microorganisms, particularly a wide range of fungi. can do.

【００１４】（第１のポリペプチド）第１のポリペプチ
ドは、α−ヘリックス構造を有するポリペプチドである
が、より好ましくα−ヘリックス構造を形成する、すな
わち、第１のポリペプチドの全体あるいは大部分がα−
ヘリックス構造を構成するポリペプチドである。α−ヘ
リックス構造を有するあるいは当該構造を形成するポリ
ペプチドは各種存在している。かかるポリペプチドとし
ては、各種のものが単離されており、また、公知のアミ
ノ酸配列や当該アミノ酸配列をコードする公知の塩基配
列に基づいて、当業者に公知の方法を用いて種々の動物
あるいは植物から単離することもできるし、化学合成あ
るいは遺伝子工学的手法によって取得することもでき
る。これらのいずれのポリペプチドも第１のポリペプチ
ドに含めることができる。(First Polypeptide) The first polypeptide is a polypeptide having an α-helix structure, but more preferably forms an α-helix structure, that is, the whole or large size of the first polypeptide. The part is α-
It is a polypeptide that constitutes a helix structure. There are various polypeptides having an α-helix structure or forming the structure. As such a polypeptide, various ones have been isolated, and based on a known amino acid sequence or a known base sequence encoding the amino acid sequence, various animals or various animals using a method known to those skilled in the art. It can be isolated from plants or can be obtained by chemical synthesis or genetic engineering techniques. Any of these polypeptides can be included in the first polypeptide.

【００１５】かかるポリペプチドとしては、Bombinin、
Bomolitin、BPL、Cecropin、Ceratotoxin、Clavnin、Ma
gainin、Melittin、Misgurin、PGLa、Pleueocidin等を
例示することができる。また、第１のポリペプチドは、
ヒトを始めとする哺乳類に対する安全性を考慮する観点
から、脊椎動物由来のポリペプチドであることが好まし
い。由来する脊椎動物としては、ヒト、ウサギ、ラッ
ト、ウシ、ブタ、モルモット等であり、これらに限定さ
れないが、好ましくは哺乳類である。具体的には、ヒ
ト、ウサギ、ブタであり、好ましくはウサギ、ヒトであ
る。脊椎動物においては、このようなポリペプチドの一
部は、ＣＡＰ１８ファミリーとして知られており、顆粒
球、好中球などに含まれている。Such polypeptides include Bombinin,
Bomolitin, BPL, Cecropin, Ceratotoxin, Clavnin, Ma
Gainin, Melittin, Misgurin, PGLa, Pleueocidin, etc. can be illustrated. Also, the first polypeptide is
From the viewpoint of safety for mammals including human beings, the polypeptide is preferably a vertebrate-derived polypeptide. The vertebrate derived from is human, rabbit, rat, cow, pig, guinea pig, etc., but is not limited thereto, but is preferably a mammal. Specifically, human, rabbit and pig are preferable, and rabbit and human are preferable. In vertebrates, some of such polypeptides are known as the CAP18 family and are contained in granulocytes, neutrophils and the like.

【００１６】したがって、第１のポリペプチドとして
は、ＣＡＰ１８に代表されるカチオン性ポリペプチドの
全体あるいは一部であることが好ましい。かかるポリペ
プチドは、例えば、ヒト由来あるいはウサギ由来のＣＡ
Ｐ１８のＣ末端側フラグメントとして知られている。Therefore, the first polypeptide is preferably the whole or a part of the cationic polypeptide represented by CAP18. Such a polypeptide is, for example, CA derived from human or rabbit.
It is known as the C-terminal fragment of P18.

【００１７】好ましい第１のポリペプチドは、ＣＡＰ１
８のＣ末端側の反応性窒素阻害ペプチド（ＲＮＩＰ）フ
ラグメントを含むポリペプチドである。例えば、ヒトあ
るいはウサギ由来のＣＡＰ１８のＲＮＩＰフラグメント
である。当該フラグメントは、α−ヘリックス構造を形
成することができる。ヒト由来のＣＡＰ１８のＣ末端側
フラグメントにおいては、アミノ酸数で１７個〜３７個
であることが好ましく、より好ましくは、２０個〜３０
個である。また、ウサギ由来のＣＡＰ１８のＣ末端側フ
ラグメントにあっては、アミノ酸の数としては、１７個
以上３２個以下であることが好ましいが、より好ましく
は、２０個以上２７個以下であり、さらに好ましくは２
０個以上２４個以下である。A preferred first polypeptide is CAP1.
8 is a polypeptide containing a reactive nitrogen-inhibiting peptide (RNIP) fragment on the C-terminal side of 8. For example, an RNIP fragment of CAP18 derived from human or rabbit. The fragment can form an α-helix structure. In the C-terminal fragment of human-derived CAP18, the number of amino acids is preferably 17 to 37, more preferably 20 to 30.
It is an individual. Further, in the C-terminal fragment of rabbit-derived CAP18, the number of amino acids is preferably 17 or more and 32 or less, more preferably 20 or more and 27 or less, and further preferably Is 2
It is 0 or more and 24 or less.

【００１８】例えば、配列番号：１にヒト由来のＣＡＰ
１８のＣ末端側フラグメントのアミノ酸配列（アミノ酸
３２個）の一例を示す。配列番号：１に記載されるアミ
ノ酸配列を有する、あるいはかかるアミノ酸配列からな
るポリペプチドが本発明の好ましいポリペプチドであ
る。また、配列番号：３８に示すヒト由来ＣＡＰ１８の
公知のアミノ酸配列の第１３４位以降のフラグメントの
全体あるいはその一部であって、例えば、少なくとも第
１３４位〜第１６５位のアミノ酸配列を有するあるいは
からなるポリペプチドを第１のポリペプチドとして使用
することができる。好ましくは、第１３４位〜第１５７
位のフラグメントを第１のポリペプチドとして使用する
ことができる。For example, human-derived CAP shown in SEQ ID NO: 1
An example of the amino acid sequence (32 amino acids) of the C-terminal fragment of 18 is shown. A polypeptide having the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 1 or consisting of such an amino acid sequence is a preferred polypeptide of the present invention. In addition, it is the whole or a part of the fragment of the known amino acid sequence of human-derived CAP18 shown in SEQ ID NO: 38, which is at or after position 134, and has, for example, at least the amino acid sequence of positions 134 to 165. Can be used as the first polypeptide. Preferably, the 134th to 157th positions
The position fragment can be used as the first polypeptide.

【００１９】また、配列番号：３７にウサギ由来のＣＡ
Ｐ１８のアミノ酸配列（アミノ酸数１４２個）を示す。
このアミノ酸配列において特定されるポリペプチドにお
いて、第１のポリペプチドとして好ましいものは、その
Ｃ末端側フラグメントであり、好ましくは、１００位以
降、さらに好ましくは、１０６位以降のフラグメントの
全体あるいはその一部である。好ましいＣ末端側フラグ
メントの終末は、１３７位までであることが好ましい。
したがって、好ましいＣ末端側フラグメントとしては、
配列番号：３７のアミノ酸配列において、第１０６位〜
第１２５位のアミノ酸配列からなるポリペプチドか、あ
るいは、少なくとも第１０６位〜第１２５位のアミノ酸
配列を有し、さらに、第１２６位〜第１３７位に至る位
置のアミノ酸を終末とするアミノ酸配列からなるポリペ
プチドである。なお、ポリペプチドのＣ末端側の終末
は、好ましくは、第１３２位であり、さらに好ましく
は、１２５位から１２９位の間を末端とする。In addition, a rabbit-derived CA is shown in SEQ ID NO: 37.
The amino acid sequence of P18 (the number of amino acids is 142) is shown.
In the polypeptide specified by this amino acid sequence, the first polypeptide is preferably the C-terminal side fragment thereof, and preferably the entire fragment at position 100 or higher, more preferably at position 106 or higher, or one of them. It is a department. The end of the preferred C-terminal fragment is preferably up to position 137.
Therefore, a preferred C-terminal fragment is
From the 106th position to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 37.
From a polypeptide consisting of the amino acid sequence at the 125th position, or an amino acid sequence having an amino acid sequence at least at the 106th to 125th positions and terminating at the amino acids at positions 126 to 137 Is a polypeptide. The C-terminal end of the polypeptide is preferably the 132nd position, more preferably the 125th to 129th positions.

【００２０】このような第１のポリペプチドとしては、
例えば、配列番号：３７のアミノ酸配列の第１０６位〜
第１３７位（アミノ酸の数：３２）（配列番号：２に示
すアミノ酸配列である）、１０６位〜１３２位（アミノ
酸の数：２７）、１０６位〜１２９位（アミノ酸の数：
２４）（配列番号：４に示すアミノ酸配列である）、１
０６位〜１２７位（アミノ酸の数：２２）、および１０
６位〜１２５位（アミノ酸の数：２０）（配列番号；６
に示すアミノ酸配列である。）の各アミノ酸配列からな
るポリペプチドなどである。また、配列番号：３および
５に示すアミノ酸配列からなる各ポリペプチドも、第１
のポリペプチドの好ましい態様である。As such a first polypeptide,
For example, from the 106th position of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 37
137th position (number of amino acids: 32) (which is the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2), 106th to 132nd positions (number of amino acids: 27), 106th to 129th positions (number of amino acids:
24) (which is the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 4), 1
Positions 06 to 127 (number of amino acids: 22), and 10
Positions 6 to 125 (number of amino acids: 20) (SEQ ID NO: 6)
Is the amino acid sequence shown in. ) Polypeptide consisting of each amino acid sequence. In addition, each polypeptide consisting of the amino acid sequences shown in SEQ ID NOs: 3 and 5 has
Is a preferred embodiment of the polypeptide of

【００２１】第１のポリペプチドの好ましい態様は、既
に例示した第１のポリペプチドのホモログである。ポリ
ペプチドのホモログは、もとのポリペプチドのアミノ酸
配列において１個以上数個（好ましくは、１０個以下で
ある）のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／または
付加したアミノ酸配列を有するかあるいは当該アミノ酸
配列からなる。あるいは、既に例示した第１のポリペプ
チドの公知のアミノ酸配列と７０％以上（好ましくは８
０％以上、より好ましくは９０％以上、さらに好ましく
は、９５％以上）の相同性を有するアミノ酸配列からな
るポリペプチドも第２のポリペプチドのホモログに含め
ることができる。このホモログは、もとのポリペプチド
の有するα−ヘリックス構造を維持していることが好ま
しい。また、第２のポリペプチドと組み合わさって作用
することにより、抗菌活性を発揮し、あるいは全体とし
て抗菌活性が向上する特性を有する。なお、抗真菌活
性、抗細菌活性あるいは抗植物病害性菌活性を有するか
否かは、後述する実施例に記載の方法の他、当業者に周
知の各種方法を用いることができる。A preferred embodiment of the first polypeptide is a homologue of the first polypeptide exemplified above. Does the homologue of a polypeptide have an amino acid sequence in which one or more (preferably 10 or less) amino acids are substituted, deleted, inserted, and / or added in the amino acid sequence of the original polypeptide? Alternatively, it consists of the amino acid sequence. Alternatively, 70% or more (preferably 8%) of the known amino acid sequence of the first polypeptide already exemplified may be used.
A polypeptide consisting of an amino acid sequence having a homology of 0% or more, more preferably 90% or more, further preferably 95% or more) can be included in the homologue of the second polypeptide. This homolog preferably maintains the α-helix structure of the original polypeptide. Further, it has the property of exhibiting antibacterial activity or improving antibacterial activity as a whole by acting in combination with the second polypeptide. Whether or not it has antifungal activity, antibacterial activity or antiphytopathogenic fungal activity can be determined by various methods well known to those skilled in the art, in addition to the methods described in the examples below.

【００２２】ポリペプチドのホモログは、前記第１のポ
リペプチドのいずれかのアミノ酸配列に、部位特異的変
位導入法（Current Protocols I Molecular Biology ed
it.Ausubel et al., (1987) Publish . John Wily & So
ns Sectoin 8.1-8.5）等を用いて、適宜、置換、欠失、
挿入、および／または付加変異を導入することにより得
ることができる。このようなポリペプチドは、人工的に
変異を導入し、あるいは合成したものに限られず、人工
的な変異処理に基づいて、あるいは、限られず、自然界
におけるアミノ酸の変異によっても生じたものも包含さ
れる。例えば、配列番号：１、２、４及び６のいずれか
に示されるアミノ酸配列に対して当該操作を行うことな
どにより、第１のポリペプチドに包含されるホモログを
得ることができる。A homologue of a polypeptide is a method for introducing a site-specific mutation into any of the amino acid sequences of the first polypeptide (Current Protocols I Molecular Biology ed).
it.Ausubel et al., (1987) Publish .John Wily & So
ns Sectoin 8.1-8.5) etc.
It can be obtained by inserting and / or introducing an additional mutation. Such polypeptides are not limited to those artificially introduced with mutations or synthesized, and also include those produced by artificial mutation treatment, or not limited to, and also caused by amino acid mutations in nature. It For example, a homologue included in the first polypeptide can be obtained by performing the operation on the amino acid sequence shown in any of SEQ ID NOs: 1, 2, 4 and 6.

【００２３】第１のポリペプチドにおけるアミノ酸の変
異数や変異部位は、α−ヘリックス構造が保持される限
り制限はないが、変異数は１０個以下であることが好ま
しい。また、全体のアミノ酸配列の長さは、２０個〜２
４個の範囲であることが好ましい。The number of amino acid mutations and mutation sites in the first polypeptide are not limited as long as the α-helix structure is retained, but the number of mutations is preferably 10 or less. The length of the entire amino acid sequence is 20 to 2
It is preferably in the range of 4.

【００２４】特に、第１のポリペプチドの好ましい態様
として、α−ヘリックス構造を形成するポリペプチドか
らなるフラグメントと、このＣ末端側にペプチド結合に
より結合されたある種のアミノ酸配列とを備えるポリペ
プチドを挙げることができる。このようなアミノ酸配列
としては、プロテアーゼなどの分解に対して抵抗性を向
上させる、あるいは、細胞間液中などの生体環境あるい
はそれに近似した環境における安定性を向上させるアミ
ノ酸配列であることが好ましい。例えば、プロテアーゼ
に対する抵抗性あるいは各種細胞間液（例えば、植物細
胞間液や動物細胞間液など）における安定性が向上され
るアミノ酸配列（以下、抵抗性配列ともいう。）は、２
個あるいは３個以上のアミノ酸を有している。本発明者
らの研究によれば、このようなアミノ酸配列は、２個の
アミノ酸からなる最小単位を有することができる。最小
単位は、抵抗性配列の最もＣ末端側に位置される配列で
ある。ここに、アミノ酸を、その側鎖Ｒ基により分類す
ると、疎水性アミノ酸、親水性アミノ酸、生理的ｐＨで
正電荷を有するアミノ酸（以下、正電荷アミノ酸）、生
理的ｐＨで負電荷を有するアミノ酸（以下、負電荷アミ
ノ酸）の４種類に分類することができる。かかる分類に
基づけば、当該最小単位は、Ｎ末端側からＣ末端側の方
向において（以下、本明細書において、全てこの方向性
に従って記載する。）、正電荷アミノ酸−負電荷アミノ
酸という配列を有することができる。正電荷アミノ酸と
しては、リシン（lys、K）、アルギニン（Arg、R）など
があり、また、負電荷アミノ酸としては、アスパラギン
酸（Asp、D）、グルタミン酸（Glu、E）などがある。し
たがって、抵抗性配列の最小単位として、lys-Asp（K-
D）、Lys-Glu（K-E）、Arg-Asp（R-D）、Arg-Glu（R-
E）を例示することができる。In particular, as a preferred embodiment of the first polypeptide, a polypeptide comprising a fragment consisting of a polypeptide forming an α-helix structure and a certain amino acid sequence linked to the C-terminal side by a peptide bond Can be mentioned. Such an amino acid sequence is preferably an amino acid sequence that improves resistance to decomposition of protease or the like, or improves stability in a biological environment such as intercellular fluid or an environment similar thereto. For example, an amino acid sequence (hereinafter, also referred to as a resistance sequence) whose resistance to protease or stability in various intercellular fluids (for example, plant intercellular fluid and animal intercellular fluid) is improved is 2
Or 3 or more amino acids. According to the studies of the present inventors, such an amino acid sequence can have a minimum unit of 2 amino acids. The smallest unit is the sequence located most C-terminal of the resistive sequence. When amino acids are classified according to their side chain R groups, hydrophobic amino acids, hydrophilic amino acids, amino acids having a positive charge at physiological pH (hereinafter, positively charged amino acids), and amino acids having a negative charge at physiological pH ( Hereinafter, they can be classified into four types (negatively charged amino acids). Based on this classification, the minimum unit has a sequence of positively charged amino acids-negatively charged amino acids in the direction from the N-terminal side to the C-terminal side (hereinafter, all described in this specification according to this directionality). be able to. Positively charged amino acids include lysine (lys, K) and arginine (Arg, R), and negatively charged amino acids include aspartic acid (Asp, D) and glutamic acid (Glu, E). Therefore, lys-Asp (K-
D), Lys-Glu (KE), Arg-Asp (RD), Arg-Glu (R-
E) can be illustrated.

【００２５】抵抗性配列は、かかる最小単位に対してさ
らにＮ末端側にアミノ酸を有することができる。例え
ば、Ｎ末端側に、さらに１個の疎水性アミノ酸を有する
３個のアミノ酸配列（疎水性アミノ酸−正電荷アミノ酸
−負電荷アミノ酸）とすることができる。かかる疎水性
アミノ酸としては、例えば、バリン（Val、V）、イソロ
イシン（Ile、I）を挙げることができる。好ましくは、
イソロイシンである。また、最小単位のＮ末端側に１個
あるいは２個の疎水性アミノ酸配列を有することもでき
る。例えば、ロイシン（Leu）−バリン（Val）を前記最
小単位に付加することができる。このような抵抗性配列
をポリペプチドフラグメントのＣ末端側への付加するこ
とによるプロテアーゼに対する抵抗性は、後述する実施
例において示されるようにすでに本発明者らより確認さ
れている。The resistive sequence may have amino acids further N-terminal to such a minimal unit. For example, it can be a three amino acid sequence having one hydrophobic amino acid on the N-terminal side (hydrophobic amino acid-positively charged amino acid-negatively charged amino acid). Examples of such hydrophobic amino acids include valine (Val, V) and isoleucine (Ile, I). Preferably,
Isoleucine. It is also possible to have one or two hydrophobic amino acid sequences on the N-terminal side of the smallest unit. For example, leucine-Valin can be added to the smallest unit. The resistance to proteases by adding such a resistance sequence to the C-terminal side of the polypeptide fragment has already been confirmed by the present inventors as will be shown in Examples described later.

【００２６】抵抗性配列は、前記最小単位を２個以上タ
ンデムで含有することもできる。最小単位は、直接連結
されることもできるが、適数個のアミノ酸を介して連結
されていることもできる。介在されるアミノ酸は、好ま
しくは１個あるいは２個以上の疎水性アミノ酸である。
この場合の疎水性アミノ酸としては、イソロイシン、ロ
イシン、およびバリンのうちいずれか１個以上である。
例えば、leu-Valを介在配列とする。かかる介在配列と
前記最小単位の組み合わせによれば、抵抗性配列が存在
していてもポリペプチドのαヘリックス構造性が低減さ
れにくい。The resistive array may also contain more than one of the smallest units in tandem. Minimal units can be linked directly, but can also be linked via a suitable number of amino acids. The intervening amino acids are preferably one or more than one hydrophobic amino acid.
In this case, the hydrophobic amino acid is at least one of isoleucine, leucine and valine.
For example, leu-Val is used as the intervening sequence. With such a combination of the intervening sequence and the minimum unit, the α-helix structural property of the polypeptide is difficult to be reduced even if the resistance sequence is present.

【００２７】抵抗性配列は、ポリペプチドのＣ末端側に
備えられているが、なかでも、生理活性ペプチド領域に
隣接するＣ末端側に備えられていることが好ましい。こ
の態様によれば、活性領域が確実にプロテアーゼ作用な
どからブロックされる。また、抵抗性配列は、α−ヘリ
ックス構造領域に直接連結された状態で備えられていて
もよいし、また、適数個のアミノ酸を介して備えられて
いてもよい。さらに、α−ヘリックス構造領域の重大な
構造性低下を引き起こさない程度に当該領域のＣ末端側
に一部含まれる形で備えられていてもよい。いずれの場
合においても、α−ヘリックス構造領域に必要とされる
１次構造や２次以上の高次構造性を低下させないように
抵抗性配列が備えられていることが好ましい。例えば、
lys-Asp（K-D）、Lys-Glu（K-E）、Arg-Asp（R-D）、Ar
g-Glu（R-E）の存在は、αヘリックス構造の維持に好ま
しい。また、Ile-lys-Asp（I-K-D）、Ile-Lys-Glu（I-K
-E）、Ile-Arg-Asp（I-R-D）、Ile-Arg-Glu（I-R-E）、
lys-Asp- leu-Val-lys-Aspの存在も、αヘリックス構造
の維持に好ましい。The resistance sequence is provided on the C-terminal side of the polypeptide, but is preferably provided on the C-terminal side adjacent to the physiologically active peptide region. According to this aspect, the active region is surely blocked from protease action and the like. The resistance sequence may be provided in a state of being directly linked to the α-helix structure region, or may be provided via a suitable number of amino acids. Further, the α-helix structure region may be provided so as to be partially contained in the C-terminal side of the region to the extent that the structure is not significantly reduced in structure. In any case, it is preferable that the resistance array is provided so as not to reduce the primary structure required for the α-helix structure region and the higher-order structural properties of secondary or higher order. For example,
lys-Asp (KD), Lys-Glu (KE), Arg-Asp (RD), Ar
The presence of g-Glu (RE) is preferable for maintaining the α-helix structure. In addition, Ile-lys-Asp (IKD), Ile-Lys-Glu (IK
-E), Ile-Arg-Asp (IRD), Ile-Arg-Glu (IRE),
The presence of lys-Asp-leu-Val-lys-Asp is also preferable for maintaining the α-helix structure.

【００２８】抵抗性配列は、ポリペプチドのＣ末端に露
出されて備えられていると、抵抗性配列を有するポリペ
プチド自体がプロテアーゼに対する抵抗性あるいは感受
性を保持することになる点において好ましい。しかし、
かならずしも抵抗性配列がＣ末端に露出されていること
を要しない。抵抗性配列よりもＣ末端側に、適数個のア
ミノ酸配列を有していてもよい。例えば、かかる抵抗性
配列をマスクするようなアミノ酸配列を含んでいてもよ
い。例えば、適度な抵抗性あるいは感受性を有するよう
なアミノ酸を備えるようにして、プロテアーゼの作用を
遅延し、又は、ポリペプチド中のα−へリックス構造領
域による活性発現を調節するようにすることもできる。
かかる配列としては、例えば、ＦＬＲＮＬＶ、ＰＲＴＥ
Ｓ等を挙げることができる（いずれもアミノ酸１文字コ
ードで表記してある）。The resistance sequence is preferably provided so as to be exposed at the C-terminal of the polypeptide, since the polypeptide having the resistance sequence itself retains resistance or sensitivity to protease. But,
It is not necessary that the resistance sequence be exposed at the C-terminus. It may have an appropriate number of amino acid sequences on the C-terminal side of the resistance sequence. For example, it may contain an amino acid sequence that masks such a resistance sequence. For example, an amino acid having appropriate resistance or sensitivity may be provided to delay the action of protease or regulate the expression of activity by the α-helix structural region in the polypeptide. .
Examples of such sequences include FLRNLV and PRTE.
S, etc. can be mentioned (all are represented by the one-letter amino acid code).

【００２９】抵抗性配列は、プロテアーゼ、特に、植物
細胞間液に存在するプロテアーゼに対する抵抗性を有し
ており、ポリペプチドのＣ末端側からの分解が当該配列
部位において抑制される。したがって、当該アミノ酸配
列をＣ末端側に有するポリペプチドは、プロテアーゼの
存在下で当該配列を有しないポリペプチドよりも安定で
あり、この結果、α−ヘリックス構造を安定して維持す
ることができる。なお、推測であって理論的に本発明を
拘束するものではないが、当該抵抗性配列自体が、α−
ヘリックス構造の維持に寄与していることが考えられ
る。なお、このような抵抗性配列をＣ末端側に有するポ
リペプチドは、天然に存在する場合もあり、それ自体第
１のポリペプチドでもありうるし、また、第１のポリペ
プチドあるいはそのホモログのＣ末端側に当該付加アミ
ノ酸配列を備えるポリペプチドを合成によりあるいは遺
伝子工学的手法により人工的に取得した第１のポリペプ
チドでもありうる。なお、上記に例示される第１のポリ
ペプチドのＣ末端側にこのような抵抗性配列が導入され
たポリペプチドは、第１のポリペプチドのホモログとい
うことができる。このような抵抗性配列などのアミノ酸
をＣ末端側に導入することは、当業者であれば、容易に
実施することができるものである。The resistance sequence has resistance to a protease, particularly a protease present in plant intercellular fluid, and the degradation from the C-terminal side of the polypeptide is suppressed at the sequence site. Therefore, the polypeptide having the amino acid sequence at the C-terminal side is more stable than the polypeptide having no such sequence in the presence of protease, and as a result, the α-helix structure can be stably maintained. It should be noted that, although it is a guess and does not theoretically restrain the present invention, the resistive array itself is α-
It is considered that it contributes to the maintenance of the helix structure. In addition, the polypeptide having such a resistance sequence at the C-terminal side may be naturally present, and may itself be the first polypeptide, or the C-terminal of the first polypeptide or a homolog thereof. It may also be the first polypeptide artificially obtained by synthesis or by a genetic engineering method, a polypeptide having the additional amino acid sequence on its side. The polypeptide having such a resistant sequence introduced at the C-terminal side of the first polypeptide exemplified above can be referred to as a homologue of the first polypeptide. A person skilled in the art can easily introduce an amino acid such as such a resistance sequence into the C-terminal side.

【００３０】例えば、配列番号：３に記載されるアミノ
酸配列は、配列番号：４に示されるアミノ酸配列のＣ末
端にLys-Asp(K-D)配列を有している。すなわち、配列番
号：３に示されるアミノ酸配列は、ウサギ由来のＣＡＰ
１８のＣ末端側配列（第１０６位のアミノ酸から第１２
９位までのアミノ酸からなるアミノ酸配列）であるＣＡ
Ｐ１８106−129のＣ末端に当該付加アミノ酸配列（K-
D）を備えている。また、配列番号：５に示されるアミ
ノ酸配列は、ウサギ由来のＣＡＰ１８のＣ末端側配列
（第１０６位〜第１２７位のアミノ酸からなるアミノ酸
配列）のＣ末端に、Lys-Asp(K-D)を有している。For example, the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 3 has a Lys-Asp (KD) sequence at the C-terminus of the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 4. That is, the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 3 is a rabbit-derived CAP.
18 C-terminal sequences (from the 106th amino acid to the 12th amino acid)
CA which is an amino acid sequence consisting of amino acids up to the 9th position)
At the C-terminal of P18106-129, the additional amino acid sequence (K-
D). The amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 5 has Lys-Asp (KD) at the C-terminal of the C-terminal sequence of CAP18 from rabbit (amino acid sequence consisting of amino acids 106 to 127). is doing.

【００３１】なお、第１のポリペプチドのホモログは、
既に例示する第１のポリペプチドのアミノ酸配列をコー
ドする塩基配列に基づいて、当業者に周知のハイブリダ
イゼーション技術あるいは遺伝子増幅技術などによって
も得ることができる。すなわち、第１のポリペプチドを
コードするポリヌクレオチドのホモログによってコード
されるポリペプチドは、第１のポリペプチドのホモログ
を構成する。The homologue of the first polypeptide is
It can also be obtained by a hybridization technique or a gene amplification technique well known to those skilled in the art, based on the nucleotide sequence encoding the amino acid sequence of the first polypeptide already exemplified. That is, the polypeptide encoded by the homologue of the polynucleotide encoding the first polypeptide constitutes the homologue of the first polypeptide.

【００３２】（第２のポリペプチド）第２のポリペプチ
ドであるチオニンは、一般的には、植物（たとえば、コ
ムギ、オオムギ、ライムギ、オートムギやエンバクな
ど）由来であって、ある種の生理活性を有するタンパク
質として知られている。チオニンとしては、各種のもの
が単離されており、また、公知のアミノ酸配列や各種チ
オニンをコードする公知の塩基配列に基づいて、当業者
に公知の方法を用いて種々の植物から単離することもで
きるし、化学合成あるいは遺伝子工学的手法によって取
得することもできる。これらのいずれのチオニンも第２
のポリペプチドに含めることができる。例えば、２１種
類のチオニンがHolger B, Klaus A, Annu. Rev. Plant
Physiol. Plant Mol. Biol.,42, 227-240(1991)に記載
されている。また、DATTA, S.K.,MUTHUKRISSHNAN, S.,
PATHOGENESIS-RELATED PROTEINS IN PLANTS, P207-212,
CRC PRESSには、３３種類のチオニンが記載されてい
る。したがって、これらのアミノ酸配列に基づいて、自
然界からあるいは人工的に第２のポリペプチドを得るこ
とができる。(Second Polypeptide) The second polypeptide, thionine, is generally derived from plants (for example, wheat, barley, rye, oats, oats, etc.) and has a certain physiological activity. Is known as a protein having Various thionins have been isolated, and they are isolated from various plants using methods known to those skilled in the art based on known amino acid sequences and known nucleotide sequences encoding various thionines. It can also be obtained by chemical synthesis or genetic engineering techniques. Any of these thionines are second
Can be included in the polypeptide. For example, 21 kinds of thionine are Holger B, Klaus A, Annu. Rev. Plant
Physiol. Plant Mol. Biol., 42, 227-240 (1991). Also, DATTA, SK, MUTHUKRISSHNAN, S.,
PATHOGENESIS-RELATED PROTEINS IN PLANTS, P207-212,
CRC PRESS describes 33 types of thionine. Therefore, based on these amino acid sequences, the second polypeptide can be obtained from the natural world or artificially.

【００３３】第２のポリペプチドの好ましい形態とし
て、配列番号：７〜１８、３３および３４に記載される
アミノ酸配列のいずれかを有する、あるいはこれらのい
ずれかの配列からなるポリペプチドを例示できる。なか
でも、配列番号：７及び１０に記載されるアミノ酸配列
のいずれかを有する、あるいこれらのアミノ酸配列から
なるポリペプチドが好ましい。As a preferred form of the second polypeptide, a polypeptide having any of the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 7 to 18, 33 and 34 or consisting of any of these sequences can be exemplified. Among them, a polypeptide having any of the amino acid sequences shown in SEQ ID NOs: 7 and 10 or consisting of these amino acid sequences is preferable.

【００３４】第２のポリペプチドの好ましい態様は、既
に例示した第２のポリペプチドのホモログである。第２
のポリペプチドのホモログについて、第１のポリペプチ
ドについて説明したのと同様、もとのポリペプチドのア
ミノ酸配列において１個以上数個（好ましくは、１０個
以下である）のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／
または付加したアミノ酸配列を有するかあるいは当該ア
ミノ酸配列からなる。あるいは、既に例示した第２のポ
リペプチドのアミノ酸配列と７０％以上の相同性を有す
るアミノ酸配列からなるポリペプチドも第２のポリペプ
チドのホモログに含めることができる。A preferred embodiment of the second polypeptide is a homologue of the second polypeptide already exemplified. Second
As for the homologue of the polypeptide of 1. , Insert, and /
It also has or consists of the added amino acid sequence. Alternatively, a polypeptide consisting of an amino acid sequence having 70% or more homology with the amino acid sequence of the second polypeptide already exemplified can also be included in the homologue of the second polypeptide.

【００３５】このホモログは、もとのポリペプチドの有
する立体構造を維持していることが好ましい。また、第
１のポリペプチドと組み合わさって作用することによ
り、抗菌活性を発揮し、あるいは全体として抗菌活性が
向上する特性を有することが好ましい。なお、抗真菌活
性、抗細菌活性あるいは抗植物病害性菌活性を有するか
否かは、後述する実施例に記載の方法の他、当業者に周
知の各種方法を用いることができる。なお、このホモロ
グは、前記第１のポリペプチドのホモログについて記載
したのと同様の手法により取得することができる。ま
た、第２のポリペプチドのホモログには、人工的に変異
を導入し、あるいは合成したものに限られず、人工的な
変異処理に基づいて、あるいは、自然界におけるアミノ
酸の変異によっても生じたものも包含される。例えば、
配列番号：７〜１８、３３および３４のいずれかに示さ
れるアミノ酸配列に対して当該操作を行うことなどによ
り、本発明の第２のポリペプチドに包含されるホモログ
を得ることができる。This homolog preferably maintains the three-dimensional structure of the original polypeptide. Further, it is preferable that it has a property of exerting antibacterial activity or improving antibacterial activity as a whole by acting in combination with the first polypeptide. Whether or not it has antifungal activity, antibacterial activity or antiphytopathogenic fungal activity can be determined by various methods well known to those skilled in the art, in addition to the methods described in the examples below. The homologue can be obtained by the same method as described for the homologue of the first polypeptide. Further, the homologue of the second polypeptide is not limited to the one in which a mutation is artificially introduced or synthesized, but may be one caused by an artificial mutation treatment or by a mutation of an amino acid in nature. Included. For example,
By subjecting the amino acid sequences shown in any one of SEQ ID NOs: 7 to 18, 33 and 34 to the operation, etc., a homolog included in the second polypeptide of the present invention can be obtained.

【００３６】第２のポリペプチドにおけるアミノ酸の変
異数や変異部位は、α−ヘリックス構造が保持される限
り制限はないが、変異数は１０個以下であることが好ま
しい。また、全体のアミノ酸配列の長さは、２０個〜４
５個の範囲であることが好ましい。The number of amino acid mutations and mutation sites in the second polypeptide are not limited as long as the α-helix structure is retained, but the number of mutations is preferably 10 or less. The length of the entire amino acid sequence is 20 to 4
It is preferably in the range of 5.

【００３７】なお、第１及び第２のポリペプチドあるい
はそのホモログは、また、本発明のポリヌクレオチドの
塩基配列に基づいて、当業者に周知のハイブリダイゼー
ション技術あるいは遺伝子増幅技術などによっても得る
ことができる。すなわち、本発明のポリヌクレオチドあ
るいはそのホモログによってコードされるポリペプチド
は、本発明のポリペプチドあるいはそのホモログを構成
する。The first and second polypeptides or homologues thereof can also be obtained by the hybridization technique or gene amplification technique well known to those skilled in the art based on the nucleotide sequence of the polynucleotide of the present invention. it can. That is, the polypeptide encoded by the polynucleotide of the present invention or its homolog constitutes the polypeptide of the present invention or its homolog.

【００３８】本発明の抗菌性ポリペプチド組成物は、第
１のポリペプチドの１種あるいは２種以上および／また
は第２のポリペプチドの１種あるいは２種以上を含有し
ている。最終的に、病害生物に対して第１のポリペプチ
ドと第２のポリペプチドとを供給して作用可能であれば
よいからである。いずれかのポリペプチドを含有する
か、あるいは双方のポリペプチドを含有するかは、適用
対象とする生物体や環境中に生存する生物体などが有す
るペプチド生産特性によって選択することができる。こ
れらの生物体が、第１のポリペプチドあるいは第２のポ
リペプチドの本発明における有効量を生産する能力を本
来的に有するかあるいは人工的な工程（遺伝子工学的工
程あるいは交配工程）を経ることによって取得した場合
には、有効量に至らない方のポリペプチドを含有する組
成とすることができる。また、いずれのポリペプチドを
生産しないかあるいは有効量を有しない場合には、双方
のポリペプチドを含有する組成とすることができる。本
発明の特定の組み合わせのポリペプチドの効果を発現さ
せるには、本ポリペプチド組成物は、好ましくは、第１
のポリペプチドおよび第２のポリペプチドの双方を含有
する。The antibacterial polypeptide composition of the present invention contains one or more kinds of the first polypeptide and / or one or more kinds of the second polypeptide. This is because it suffices that the first polypeptide and the second polypeptide are finally supplied to the diseased organism to act thereon. Whether to contain either polypeptide or both polypeptides can be selected depending on the peptide production characteristics of the organism to be applied or the organism that survives in the environment. These organisms inherently have the ability to produce an effective amount of the first polypeptide or the second polypeptide of the present invention, or undergo an artificial process (genetic engineering process or mating process). When obtained by the method described above, a composition containing a polypeptide that does not reach an effective amount can be obtained. Further, when neither polypeptide is produced or when it does not have an effective amount, a composition containing both polypeptides can be prepared. In order to exert the effects of the particular combination of polypeptides of the invention, the polypeptide composition preferably comprises a first
Containing both the second polypeptide and the second polypeptide.

【００３９】本ポリペプチド組成物において、「含有す
る」とは、特に、双方のポリペプチドを含有する場合、
双方のポリペプチドを適当なリンカーで連結した融合ポ
リペプチド（生物体あるいは環境において当該連結部位
において開裂し、第１のポリペプチドと第２のポリペプ
チドとを産生するように形成されている。）を含有する
形態も含んでいる。すなわち、活性形態の前駆体あるい
はプロドラッグとしての融合ペプチドの形態で含まれて
いてもよい。適用する環境あるいは生物体に存在しうる
酵素などによって容易な分解が予定される部位をリンカ
ー内に有することで、環境あるいは生物体において、実
質的に第１のポリペプチドと第２のポリペプチドとを作
用させることができる。分解予定部位としては、プロテ
アーゼによる分解を受けやすいアミノ酸配列を採用する
ことができる。当該アミノ酸配列としては、例えば、Ｋ
ＥＸ２プロテアーゼにより分解を受けるアミノ酸配列 L
ys-Arg-X、Arg-Arg-Xなどを挙げることができる。[0039] In the present polypeptide composition, the term "comprising" means that when both polypeptides are contained,
A fusion polypeptide in which both polypeptides are linked by a suitable linker (formed so as to be cleaved at the linking site in an organism or environment to produce a first polypeptide and a second polypeptide). The form containing is also included. That is, it may be contained in the form of a fusion peptide as a precursor or a prodrug of the active form. By having a site in the linker that is easily decomposed by an enzyme or the like that can exist in the environment or organism to which it is applied, in the environment or organism, the first polypeptide and the second polypeptide are substantially Can be operated. As the site to be degraded, an amino acid sequence that is susceptible to degradation by protease can be used. The amino acid sequence is, for example, K
Amino acid sequence undergoing degradation by EX2 protease L
Examples include ys-Arg-X and Arg-Arg-X.

【００４０】本発明の別の態様は、第１のポリペプチド
あるいはそのホモログをコードするポリヌクレオチド
（第１のポリヌクレオチド）と、第２のポリペプチドあ
るいはそのホモログをコードするポリヌクレオチド（第
２のポリヌクレオチド）との組み合わせに基づくことも
できる。第１のポリヌクレオチドおよび／または第２の
ポリヌクレオチドを用いることにより、適用対象たる生
物体において第１のポリペプチドおよび／または第２の
ポリペプチドを産生させ、最終的に病害生物に対して第
１のポリペプチドと第２のポリペプチドとを供給し、作
用させることができる。したがって、このポリヌクレオ
チドによって、本発明の核酸構築物組成物や形質転換
体、あるいはこれらを用いる、病害生物の防除方法、病
害生物に対する抵抗性の付与方法、植物体の生産方法、
貯蔵方法などが提供される。Another aspect of the present invention is a polynucleotide encoding the first polypeptide or a homolog thereof (first polynucleotide) and a polynucleotide encoding the second polypeptide or a homolog thereof (second polynucleotide). Polynucleotide). By using the first polynucleotide and / or the second polynucleotide, the first polypeptide and / or the second polypeptide is produced in the organism to which the application is applied, and finally the first organism and / or the second organism is applied to the pest. A first polypeptide and a second polypeptide can be supplied and act. Therefore, by this polynucleotide, the nucleic acid construct composition or transformant of the present invention, or using these, a method for controlling a diseased organism, a method for imparting resistance to a diseased organism, a method for producing a plant,
A storage method and the like are provided.

【００４１】第１のポリヌクレオチドは、上記した各種
の第１のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドで
あり、好ましくは、上記第１のポリペプチドをコードす
るポリヌクレオチドである。第１のポリヌクレオチドと
しては、例えば、配列番号：１〜６のいずれかに記載の
アミノ酸配列を有するあるいはからなるポリペプチドを
コードするポリヌクレオチドである。かかるポリヌクレ
オチドとして、例えば、配列番号：１９〜２４のいずれ
かに記載の塩基配列を有するポリヌクレオチドを挙げる
ことができる。The first polynucleotide is a polynucleotide encoding the above-mentioned various first polypeptides, and preferably a polynucleotide encoding the above-mentioned first polypeptide. The first polynucleotide is, for example, a polynucleotide encoding a polypeptide having or consisting of the amino acid sequence set forth in any one of SEQ ID NOs: 1 to 6. As such a polynucleotide, for example, a polynucleotide having the nucleotide sequence of any of SEQ ID NOs: 19 to 24 can be mentioned.

【００４２】第１のポリヌクレオチドには、上記特定配
列のポリヌクレオチドのホモログも包含している。当該
ホモログとしては、配列番号：１〜６のいずれかに記載
されるアミノ酸配列において、１個もしくは数個のアミ
ノ酸が置換、欠失、挿入、および／または付加されたア
ミノ酸配列を含み、かつ、第１のポリペプチドのα−ヘ
リックス構造および／または生物学的活性を有するポリ
ペプチドをコードするポリヌクレオチドを含んでいる。
このようなホモログは、本発明のポリペプチドホモログ
のアミノ酸配列に対応する塩基配列を有するポリヌクレ
オチドを合成によりあるいは遺伝子工学的手法により得
ることができる。また、このようなポリヌクレオチドホ
モログは、当業者においては、配列番号：１９〜２４の
いずれかに示すポリヌクレオチド（ＤＮＡ）に、部位特
異的変異導入法などを用いて、適宜、置換、欠失、挿入
および／または付加変異を導入することにより得ること
ができる。このような変異は、自然界における突然変異
によって生じることもある。The first polynucleotide also includes a homologue of the polynucleotide having the above specific sequence. The homologue includes an amino acid sequence in which one or several amino acids are substituted, deleted, inserted, and / or added in the amino acid sequence described in any of SEQ ID NOs: 1 to 6, and It comprises a polynucleotide encoding a polypeptide having an α-helical structure and / or biological activity of the first polypeptide.
Such a homolog can be obtained by synthesizing a polynucleotide having a base sequence corresponding to the amino acid sequence of the polypeptide homolog of the present invention or by a genetic engineering technique. In addition, such a polynucleotide homolog can be appropriately substituted or deleted by those skilled in the art by using the site-directed mutagenesis method or the like to the polynucleotide (DNA) shown in any of SEQ ID NOs: 19 to 24. , And can be obtained by introducing insertion and / or additional mutations. Such mutations may be caused by mutations in nature.

【００４３】さらに、本発明のポリヌクレオチドのホモ
ログは、配列番号：１９〜２４に示される塩基配列から
なるＤＮＡとストリンジェントな条件でハイブリダイズ
でき、かつ、α−ヘリックス構造を有するポリペプチド
をコードするポリヌクレオチドである。ストリンジェン
トな条件でハイブリダイズするポリヌクレオチドとは、
配列番号：１９〜２４のいずれかに示される塩基配列の
任意の少なくとも２０個、好ましくは２５個、より好ま
しくは少なくとも３０個の連続した配列を一つあるいは
複数個選択したＤＮＡをプローブＤＮＡとして、当業者
の周知のハイブリダイセーション技術（Current Protoc
ols I Molecular Biology edit. Ausubel et al., (198
7) Publish . John Wily & Sons Sectoin 6.3-6.4）な
どを用いて、ハイブリダイズするポリヌクレオチドであ
る。ハイブリダイズは、より詳しくは、１本鎖のポリヌ
クレオチドが、配列番号：１９〜２４のいずれかに記載
の塩基配列のＤＮＡ鎖あるいはこれに相補的なＤＮＡ鎖
にハイブリダイズすることを意味する。ハイブリダイゼ
ーションにおけるストリンジェントな条件としては、通
常、４２℃であり、より厳しい条件としては、６５℃で
あり、さらに厳しい条件としては、７０℃である。Further, the homologue of the polynucleotide of the present invention encodes a polypeptide which can hybridize with a DNA consisting of the nucleotide sequences shown in SEQ ID NOs: 19 to 24 under stringent conditions and has an α-helix structure. Is a polynucleotide. A polynucleotide that hybridizes under stringent conditions is
As a probe DNA, a DNA in which one or a plurality of continuous sequences of any at least 20, preferably 25, and more preferably at least 30 of the nucleotide sequences shown in any of SEQ ID NOs: 19 to 24 is selected, Hybridization technology (Current Protoc
ols I Molecular Biology edit. Ausubel et al., (198
7) A polynucleotide that hybridizes using Publish. John Wily & Sons Sectoin 6.3-6.4) and the like. More specifically, hybridizing means that a single-stranded polynucleotide hybridizes with a DNA chain having the nucleotide sequence of any of SEQ ID NOs: 19 to 24 or a DNA chain complementary thereto. The stringent condition in the hybridization is usually 42 ° C, the more severe condition is 65 ° C, and the more stringent condition is 70 ° C.

【００４４】配列番号：１９〜２４に記載の塩基配列
は、ヒト及びウサギのＣＡＰ１８由来であるが、これら
の塩基配列等に基づいて、他の脊椎動物からハイブリダ
イゼーションによりホモログを取得することができる。
すなわち、他の脊椎動物由来α−へリックス構造を有す
るカチオン性のポリペプチド、典型的には顆粒球由来の
ポリペプチド（具体的にはＣＡＰ１８）であって、配列
番号：１９〜２４のいずれかに示されるＤＮＡ鎖あるい
はこれに相補的なＤＮＡ鎖にハイブリダイズし、α−ヘ
リックス構造を有するポリペプチドをコードするポリヌ
クレオチドは本発明のポリヌクレオチドのホモログであ
る。The nucleotide sequences shown in SEQ ID NOs: 19 to 24 are derived from human and rabbit CAP18, and homologues can be obtained from other vertebrates by hybridization based on these nucleotide sequences. .
That is, a cationic polypeptide having an α-helix structure derived from other vertebrates, typically a polypeptide derived from granulocytes (specifically CAP18), which is any of SEQ ID NOs: 19 to 24. The polynucleotide that hybridizes to the DNA chain shown in 1 or a DNA chain complementary thereto and encodes a polypeptide having an α-helix structure is a homologue of the polynucleotide of the present invention.

【００４５】また、第１のポリヌクレオチドのホモログ
は、配列番号：１９〜２４のいずれかに記載のポリペプ
チドの一部に基づいて設計したプライマーを設計し、こ
のプライマーを利用して遺伝子増幅技術（ＰＣＲ）（Cu
rrent Protocols I Molecular Biology edit. Ausubel
et al., (1987) Publish . John Wily & Sons Sectoin
6.1-6.4）により、配列番号１９〜２４と相同性の高い
ホモログを得ることもできる。与えられた塩基配列に基
づいて、その配列やそのホモログを増幅できるディジェ
ネレイティブプライマーを設計することは、当業者が日
常的に行っていることである。For the homologue of the first polynucleotide, a primer designed based on a part of the polypeptide described in any one of SEQ ID NOs: 19 to 24 is designed, and this primer is used for gene amplification technology. (PCR) (Cu
rrent Protocols I Molecular Biology edit. Ausubel
et al., (1987) Publish .John Wily & Sons Sectoin
According to 6.1-6.4), homologues highly homologous to SEQ ID NOs: 19 to 24 can be obtained. It is routine for a person skilled in the art to design a degenerative primer capable of amplifying a given nucleotide sequence or its homolog based on the given nucleotide sequence.

【００４６】さらに、本発明のポリヌクレオチドのホモ
ログは、配列番号：１〜６のいずれかに示されるアミノ
酸配列と少なくとも７０％、好ましくは少なくとも８０
％または９０％、より好ましくは９５％以上のホモロジ
ーを有するポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
を包含している。ポリペプチドのホモロジー検索は、Ｂ
ＬＡＳＴ検索アルゴリズムなどを用いて行うことができ
る。Furthermore, the homologue of the polynucleotide of the present invention has at least 70%, preferably at least 80% of the amino acid sequence shown in any of SEQ ID NOs: 1 to 6.
% Or 90%, more preferably 95% or more of the homology to a polypeptide encoding a polynucleotide. The homology search for polypeptides is B
It can be performed using the LAST search algorithm or the like.

【００４７】第２のポリヌクレオチドは、上記した各種
の第２のポリペプチドをコードするポリヌクレオチドで
あり、好ましくは、上記第２のポリペプチドをコードす
る塩基配列を有するポリヌクレオチドである。第２のポ
リヌクレオチドとしては、例えば、配列番号：７〜１
８、３３、及び３４のいずれかに記載のアミノ酸配列を
有するあるいはからなるポリペプチドをコードするポリ
ヌクレオチドである。かかるポリヌクレオチドとして、
例えば、配列番号：２５〜３２、３５、及び３６のいず
れかに記載の塩基配列を有するポリヌクレオチドを挙げ
ることができる。The second polynucleotide is a polynucleotide encoding the above-mentioned various second polypeptides, and preferably a polynucleotide having a base sequence encoding the above-mentioned second polypeptide. Examples of the second polynucleotide include, for example, SEQ ID NOs: 7-1.
A polynucleotide encoding a polypeptide having or consisting of the amino acid sequence of any of 8, 33, and 34. As such a polynucleotide,
For example, a polynucleotide having the base sequence described in any of SEQ ID NOs: 25 to 32, 35, and 36 can be mentioned.

【００４８】第２のポリヌクレオチドには、上記第１の
ポリヌクレオチドが特定塩基配列のホモログを包含する
のと同様に、上記特定配列のポリヌクレオチドのホモロ
グも包含している。当該ホモログとしては、配列番号：
７〜１８、３３、及び３４のいずれかに記載されるアミ
ノ酸配列において、１個もしくは数個のアミノ酸が置
換、欠失、挿入、および／または付加されたアミノ酸配
列を含み、かつ、もとの第２のポリペプチドの構造およ
び／または生理活性を有するポリペプチドをコードする
ポリヌクレオチドを含んでいる。さらに、本発明のポリ
ヌクレオチドのホモログは、配列番号：２５〜３２、３
５、及び３６のいずれかに記載の塩基配列を有するＤＮ
Ａとストリンジェントな条件でハイブリダイズでき、か
つ、α−ヘリックス構造を有するポリペプチドをコード
するポリヌクレオチドでもあり、これらの配列番号に記
載の塩基配列の一部に基づいて設計したプライマーを利
用してＰＣＲにより得られるポリヌクレオチドでもあ
り、配列番号：７〜１８、３３、及び３４のいずれかに
記載されるアミノ酸配列と少なくとも７０％、好ましく
は少なくとも８０％または９０％、より好ましくは９５
％以上のホモロジーを有するポリペプチドをコードする
ポリヌクレオチドを包含している。このようなホモログ
は、いずれも上記第１のポリヌクレオチドのホモログを
取得するのと同様な手法によって取得することができ
る。The second polynucleotide includes a homologue of the polynucleotide having the specific sequence, in the same manner as the first polynucleotide includes a homologue of the specific base sequence. The homologue is SEQ ID NO:
In the amino acid sequence described in any of 7 to 18, 33, and 34, one or several amino acids include a substituted, deleted, inserted, and / or added amino acid sequence, and It comprises a polynucleotide encoding a polypeptide having the structure and / or physiological activity of a second polypeptide. Furthermore, the homologues of the polynucleotide of the present invention have SEQ ID NOs: 25-32, 3 and 3.
DN having the nucleotide sequence according to any one of 5 and 36
It is also a polynucleotide that can hybridize with A under stringent conditions and that encodes a polypeptide having an α-helix structure, and uses a primer designed based on a part of the base sequence described in these SEQ ID NOs. Is also a polynucleotide obtained by PCR, and is at least 70%, preferably at least 80% or 90%, and more preferably 95% with the amino acid sequence set forth in any of SEQ ID NOs: 7-18, 33, and 34.
It includes a polynucleotide encoding a polypeptide having a homology of not less than%. All such homologues can be obtained by the same method as that for obtaining the homologue of the first polynucleotide.

【００４９】なお、アミノ酸をコードするコドンは、単
一でなく、縮重により複数のコドンが対応していること
は周知の事実である。したがって、配列番号：１〜６、
配列番号：７〜１８、３３及び３４に記載されるアミノ
酸配列を有するポリペプチドを始めとして各種の第１及
び第２のポリペプチドをコードする塩基配列には、それ
ぞれ、配列番号：１９〜２４、配列番号：２５〜３２、
３５及び３６に示す塩基配列のみならず、異なるコドン
に基づくあらゆる塩基配列を包含することになる。な
お、本発明におけるポリヌクレオチドは、ＤＮＡ、ＲＮ
Ａであることができ、１本鎖でも、その相補鎖を有する
２本鎖であってもよい。また、天然のあるいは人工のヌ
クレオチド誘導体で構成されていてもよい。さらに、ゲ
ノム、ｃＤＮＡの他、人工的に合成されたポリヌクレオ
チドも包含している。It is a well known fact that the codon encoding an amino acid is not a single codon, but a plurality of codons correspond to each other due to degeneracy. Therefore, SEQ ID NOs: 1 to 6,
The nucleotide sequences encoding various first and second polypeptides, including the polypeptides having the amino acid sequences set forth in SEQ ID NOs: 7-18, 33, and 34, are SEQ ID NOs: 19-24, respectively. SEQ ID NOs: 25-32,
Not only the nucleotide sequences shown in 35 and 36 but also all nucleotide sequences based on different codons are included. The polynucleotide in the present invention is DNA, RN.
It may be A and may be single-stranded or double-stranded with its complement. Further, it may be composed of a natural or artificial nucleotide derivative. Furthermore, in addition to the genome and cDNA, artificially synthesized polynucleotides are also included.

【００５０】以上のようにして取得した第１のポリヌク
レオチドおよび／または第２のポリヌクレオチドによ
り、本発明の核酸構築物組成物（以下、単に、核酸組成
物をいう。）を得ることができる。本核酸組成物は、第
１のポリヌクレオチドの１種あるいは２種以上および／
または第２のポリヌクレオチドの１種あるいは２種以上
を含有している。いずれかのポリヌクレオチドを含有す
るか、あるいは双方のポリヌクレオチドを含有するか
は、前記した本ポリペプチド組成物の場合と同様に、適
用対象とする生物体などの本来的に有するペプチド生産
特性によって選択することができる。The nucleic acid construct composition of the present invention (hereinafter simply referred to as a nucleic acid composition) can be obtained from the first polynucleotide and / or the second polynucleotide obtained as described above. The nucleic acid composition comprises one or more of the first polynucleotide and / or
Alternatively, it contains one or more of the second polynucleotides. Whether to contain either polynucleotide or both polynucleotides depends on the peptide production characteristics inherently possessed by the organism to be applied, as in the case of the present polypeptide composition described above. You can choose.

【００５１】２種以上のポリヌクレオチドをそれぞれ発
現させ、ポリペプチドを産生させるための核酸構築物の
構成は、各種態様を採ることができる。それぞれのポリ
ヌクレオチドを発現可能に保持する核酸構築物をそれぞ
れ構築し、２種以上の核酸構築物としてもよい。また、
それぞれのポリヌクレオチドを発現可能に保持する一つ
の核酸構築物を構築してもよい。また、第１のポリペプ
チドと第２のポリペプチドとを連結した融合ポリペプチ
ドに対応するポリヌクレオチド配列を発現可能に保持す
る核酸構築物を構成してもよい。The construction of the nucleic acid construct for expressing two or more kinds of polynucleotides respectively to produce a polypeptide can take various modes. Nucleic acid constructs that retain the respective polynucleotides in an expressible manner may be constructed into two or more types of nucleic acid constructs. Also,
One nucleic acid construct may be constructed that retains each polynucleotide expressibly. In addition, a nucleic acid construct that retains the polynucleotide sequence corresponding to the fusion polypeptide in which the first polypeptide and the second polypeptide are linked in an expressible manner may be constructed.

【００５２】本発明のポリヌクレオチド（第１のポリヌ
クレオチドおよび／または第２のポリヌクレオチドを意
味する）を公知の発現ベクターに挿入することにより、
本発明の核酸構築物（典型的には、ベクターである）を
容易に得ることができる。核酸構築物には、本ポリヌク
レオチドの領域に加えて、ホスト細胞の種類に応じた分
泌シグナル遺伝子を備えていてもよい。分泌シグナル遺
伝子を備えていることにより、ポリペプチドが細胞外や
細胞間隙へ移送されやすく、細胞表面上にポリペプチド
を局在化、あるいは細胞外へポリペプチドを分泌させる
ことが容易となる。By inserting the polynucleotide of the present invention (meaning the first polynucleotide and / or the second polynucleotide) into a known expression vector,
The nucleic acid construct of the present invention (typically a vector) can be easily obtained. The nucleic acid construct may be provided with a secretory signal gene depending on the type of host cell, in addition to the region of the present polynucleotide. The provision of the secretory signal gene facilitates the transport of the polypeptide to the outside of the cell or the intercellular space and facilitates the localization of the polypeptide on the cell surface or the secretion of the polypeptide outside the cell.

【００５３】核酸構築物には、本ポリペプチドをコード
するＤＮＡを発現させるためのＤＮＡ配列を同時に備え
ることもできる。具体的には、ポリペプチドをコードす
る配列の上流に配置されるプロモーター配列、コード配
列の下流に配置されるターミネション配列、ポリアデニ
レーションシグナルなどである。プロモーター配列とし
ては、特に限定しないで、ホスト細胞で当該コード配列
を発現可能なものを使用すればよいが、必要に応じて各
種プロモーター配列を使用しうる。さらに、エンハンサ
ーも含めることもできる。さらに、核酸構築物には、本
ポリヌクレオチドを保有する細胞を選択するためのマー
カー遺伝子も同時に備えていることが好ましい。The nucleic acid construct can also be provided with a DNA sequence for expressing the DNA encoding the present polypeptide. Specifically, it includes a promoter sequence located upstream of the sequence encoding the polypeptide, a termination sequence located downstream of the coding sequence, a polyadenylation signal and the like. The promoter sequence is not particularly limited, and those capable of expressing the coding sequence in the host cell may be used, but various promoter sequences may be used as necessary. In addition, enhancers can be included. Furthermore, it is preferable that the nucleic acid construct also comprises a marker gene for selecting cells carrying the present polynucleotide.

【００５４】ベクターなどの核酸構築物は、ホスト細胞
や遺伝子導入法の種類に応じて適切なものが選択され
る。一般的には、各種プラスミドベクター、ウイルス性
ベクター、ＹＡＣ、ＢＡＣ、ＰＡＣ、ＭＡＣ等を使用で
きる。好ましい原核細胞性ベクター、真核細胞性ベクタ
ー、動物細胞性ベクター、植物細胞性ベクターは当該分
野において周知である。A nucleic acid construct such as a vector is appropriately selected depending on the host cell and the type of gene transfer method. Generally, various plasmid vectors, viral vectors, YAC, BAC, PAC, MAC and the like can be used. Preferred prokaryotic vectors, eukaryotic vectors, animal cellular vectors, plant cellular vectors are well known in the art.

【００５５】一旦、核酸構築物あるいはそれを含むベク
ターが構築されたら、適当なホスト細胞に、トランスフ
ォーメーションや、トランスフェクション、接合、プロ
トプラスト融合、エレクトロポレーション、パーティク
ルガン、リン酸カルシウム沈殿法、アグロバクテリウム
法、直接マイクロインジェクション法等の各種の適切な
手段のいずれかにより、これを導入することができる。
核酸構築物の導入方法は、導入しようとするホスト細胞
の種類などによって適宜選択することができる。核酸構
築物あるいはベクター等の導入後、その受容細胞は、選
択培地で培養される。Once the nucleic acid construct or the vector containing it has been constructed, transformation, transfection, conjugation, protoplast fusion, electroporation, particle gun, calcium phosphate precipitation method, Agrobacterium method is carried out in an appropriate host cell. This can be introduced by any of various suitable means, such as direct microinjection.
The method of introducing the nucleic acid construct can be appropriately selected depending on the type of host cell to be introduced. After the introduction of the nucleic acid construct, the vector, etc., the recipient cells are cultured in a selective medium.

【００５６】なお、本明細書における形質転換体を得る
ためのホスト細胞としては、特に限定しないで全ての種
類、形態の細胞を包含し、細菌等の各種原核細胞、及び
真菌、酵母、動植物細胞等の真核細胞の他、動植物個
体、その動植物個体を構成しうる真核細胞、およびその
一部である組織や器官を含む。また、ウイルス粒子も包
含する。また植物個体の一部であるその繁殖媒体（種
子、根茎、果実、切穂等）も包含する。The host cells for obtaining transformants in the present specification include, without limitation, cells of all types and morphologies, and various prokaryotic cells such as bacteria, and fungal, yeast, animal and plant cells. In addition to eukaryotic cells such as, animal and plant individuals, eukaryotic cells that can make up the animal and plant individuals, and tissues and organs that are a part thereof. It also includes viral particles. It also includes the propagation medium (seed, rhizome, fruit, cuttings, etc.) that is a part of the plant individual.

【００５７】ポリペプチドをコードするＤＮＡなどを含
む核酸構築物が導入された細胞を適当な方法で選択する
ことにより、ポリペプチドを産生する形質転換細胞を得
ることができる。形質転換細胞における導入遺伝子は、
染色体内あるいは染色体外で保持されていてもよく、ま
た、形質の発現は、一時的であっても安定的であっても
よいが、安定的に発現されていることが好ましい。形質
転換細胞を、適切な培養条件下で培養し、増殖させるこ
とにより、形質転換細胞は、細胞内、細胞表面、あるい
は細胞外にポリペプチドを産出する。適当な方法でこの
ポリペプチドを回収、精製することができる。By selecting a cell into which a nucleic acid construct containing a DNA encoding a polypeptide is introduced by an appropriate method, a transformed cell producing the polypeptide can be obtained. The transgene in transformed cells is
It may be retained in the chromosome or outside the chromosome, and the expression of the trait may be transient or stable, but it is preferable that the expression is stable. By culturing and growing the transformed cells under appropriate culture conditions, the transformed cells produce the polypeptide intracellularly, on the cell surface, or extracellularly. This polypeptide can be recovered and purified by an appropriate method.

【００５８】なお、植物の形質転換細胞を得るために、
本ポリペプチドをコードする配列を含む核酸構築物ある
いはベクターが導入される細胞としては、植物体に再生
可能なあるいはそうでない、あらゆる種類の形態の植物
細胞が含まれる。植物体に再生可能な細胞としては、例
えば、培養細胞、プロトプラスト、苗条原基、多芽体、
毛状根、カルス等であるが、これらに限定されない。所
定の植物形質転換細胞に対して再生過程を実施すること
により、形質転換植物体に変換することができる。再生
の方法は、植物の種類によって異なるが、各種公知の方
法を使用できる。なお、形質転換される植物種として
は、特に、限定しないが、栽培作物であることが好まし
く、農作物であることがより好ましい。例えば、イネ、
オオムギ、コムギ、ライムギ、トウモロコシ、サトウキ
ビなどの穀類、じゃがいも、さつまいもなどの根茎又は
塊根を形成する作物、ダイズ、インゲンマメ、ソラマ
メ、エンドウなどのマメ科植物、ピーナッツ、ごま、ナ
タネ、綿実、ヒマワリ、サフラワーなどの種子作物、リ
ンゴ、メロン、ブドウなどの果実を有する作物、トマ
ト、ナスなどの作物であることが好ましい。花卉などの
園芸植物に適用することができる。特に、糸状菌などの
真菌に対して侵され易いサツマイモなどの根茎あるいは
塊根を形成する作物を適用対象とすることが好ましい。In order to obtain transformed cells of plants,
The cells into which the nucleic acid construct or vector containing the sequence encoding the polypeptide of the present invention is introduced include all types of plant cells that can be regenerated into a plant or not. Examples of cells that can be regenerated in a plant include, for example, cultured cells, protoplasts, shoot primordia, multiple shoots,
Hairy roots, callus, etc., but not limited to these. By carrying out a regeneration process on a predetermined plant transformed cell, it can be transformed into a transformed plant. The method of regeneration varies depending on the type of plant, but various known methods can be used. In addition, the plant species to be transformed is not particularly limited, but it is preferably a cultivated crop, and more preferably an agricultural crop. For example, rice,
Cereals such as barley, wheat, rye, corn, sugar cane, crops that form rhizomes or tubers such as potatoes, sweet potatoes, soybeans, kidney beans, fava beans, legumes such as pea, peanuts, sesame, rapeseed, cottonseed, sunflowers, Preferred are seed crops such as safflower, crops having fruits such as apples, melons and grapes, and crops such as tomatoes and eggplants. It can be applied to garden plants such as flowers. In particular, it is preferable to apply crops that form rhizomes or tubers, such as sweet potatoes, which are susceptible to fungi such as filamentous fungi.

【００５９】本発明のポリペプチドあるいはそのホモロ
グを発現するように形質転換された細胞、特に、植物組
織（植物細胞、組織、器官、再生された植物個体または
その一部（根茎や塊根、茎葉など）、繁殖媒体を含む）
は有用である。外部から防除剤などを供給することな
く、病害生物を防除し抵抗性を付与することができる。
特に、前記抵抗性配列を備えるポリペプチドであれば、
プロテアーゼに対して抵抗性を有するため、病原生物感
染初期において十分に抗菌性を発揮して、その後の連鎖
的障害を効果的に防止できる。Cells transformed so as to express the polypeptide of the present invention or a homologue thereof, particularly plant tissues (plant cells, tissues, organs, regenerated plant individuals or parts thereof (rhizomes, tuberous roots, foliage, etc.) ), Including breeding medium)
Is useful. It is possible to control pests and impart resistance thereto without supplying a control agent or the like from the outside.
In particular, if the polypeptide having the resistance sequence,
Since it is resistant to proteases, it exhibits sufficient antibacterial properties in the early stages of infection with pathogenic organisms, and can effectively prevent subsequent chain damage.

【００６０】本発明は、第１のポリペプチドおよび第２
のポリペプチドを、病害生物に作用させるようにするこ
とにより、これらの病害生物を防除する方法、あるいは
これらの病害生物に侵される生物体に抵抗性を付与する
方法という態様を採ることができる。これらの態様を、
特に、栽培植物などの植物体の生育域（栽培域）に適用
すれば、好ましい植物体の生産方法を提供することがで
き、また、収穫物（植物体の全体あるいはその一部であ
り、典型的には、根茎、塊根、種子、茎葉など）に適用
することにより、貯蔵安定性（特に病害抵抗性）の良い
収穫物やその貯蔵方法を提供できる。The present invention includes a first polypeptide and a second polypeptide.
By allowing the above-mentioned polypeptide to act on a diseased organism, a method for controlling these diseased organisms or a method for imparting resistance to an organism invaded by these diseased organisms can be employed. These aspects are
In particular, when applied to a growth region (cultivation region) of a plant such as a cultivated plant, a preferable method for producing a plant can be provided, and a harvested product (the whole plant or a part thereof, typically, Specifically, by applying it to rhizomes, tubers, seeds, foliage, etc., it is possible to provide a harvested product having good storage stability (particularly disease resistance) and a storage method thereof.

【００６１】第１のポリペプチド及び第２のポリペプチ
ドを病害生物に供給し作用させるには、病害生物が存在
する環境（土壌、用水、肥料など）あるいは生物体（動
物体、植物体など）に、第１のポリペプチドおよび／ま
たは第２のポリペプチドを外部から供給するか、あるい
は生物体内において産生させるようにすることができ
る。In order to supply and act the first and second polypeptides to a pest, the environment in which the pest exists (soil, water, fertilizer, etc.) or organism (animal, plant, etc.) In addition, the first polypeptide and / or the second polypeptide can be externally supplied or produced in the organism.

【００６２】第１のポリペプチドと第２のポリペプチド
とを病害生物に作用させるための一つの形態は、第１の
ポリペプチドおよび／または第２のポリペプチドを病害
生物の存在するあるいは存在する可能性のある環境ある
いは生物体に対して、散布、噴霧、塗布、浸漬、浸透な
どの手法によって外部供給する形態である。外部供給す
るポリペプチドは、適用対象（生物体あるいは環境）に
おいていずれかのポリペプチドを有しているか否かなど
によって選択される。たとえば、チオニン（第２のポリ
ペプチド）を産生するコムギに対しては、第１のポリペ
プチドのみを外部供給するようにすることができる。こ
のような外部供給形態によれば、所望の環境あるいは生
物体に対して簡易にポリペプチドを供給でき、その効果
を発現させることができる。また、環境あるいは植物体
などの生物体の特定部位に対する選択的な供給及び効果
発現も容易に行うことができる。また、特定時期に集中
して防除などを実施することが容易に行うことができ
る。One mode for acting the first polypeptide and the second polypeptide on the pest is one in which the first polypeptide and / or the second polypeptide is present or present in the pest. It is a form that is externally supplied to a possible environment or organism by a method such as spraying, spraying, coating, dipping, or penetrating. The polypeptide to be supplied externally is selected depending on whether or not it has any polypeptide in the application target (organism or environment). For example, for wheat that produces thionine (the second polypeptide), only the first polypeptide can be externally supplied. According to such an external supply form, the polypeptide can be easily supplied to a desired environment or organism, and its effect can be exhibited. In addition, selective supply and effect expression to specific parts of the environment or organisms such as plants can be easily performed. Further, it is possible to easily carry out the pest control and the like at a specific time.

【００６３】第１のポリペプチドと第２のポリペプチド
とを病害生物に作用させるための他の形態は、適用対象
たる生物体に、第１のポリヌクレオチドおよび／または
第２のポリヌクレオチドを導入して形質転換することに
より、結果として第１のポリペプチドおよび第２のポリ
ペプチドを産生する形質転換体とする形態である。具体
的には、いずれか一方のポリペプチドを産生する生物体
に、他方のポリペプチドをコードするポリヌクレオチド
を含有する１種以上の核酸構築物を導入して形質転換し
て、結果として双方のポリペプチドを産生する形質転換
体とする他、第１のポリヌクレオチドおよび第２のポリ
ヌクレオチドを含有する１種あるいは２種以上の核酸構
築物を導入して形質転換して、双方のポリペプチドを産
生する形質転換体とする。さらに、別の方法は、第１の
植物体などの生物体を第１のヌクレオチドを含有する核
酸構築物を導入して形質転換し、第２の植物体などの生
物体を第２のポリヌクレオチドを含有する核酸構築物に
より形質転換し、第１の生物体と第２の生物体とを交雑
などして双方のポリペプチドを産生する交雑体とする形
態がある。Another mode for acting the first polypeptide and the second polypeptide on the pest is to introduce the first polynucleotide and / or the second polynucleotide into the organism to which it is applied. The resulting transformant is a transformant that produces the first polypeptide and the second polypeptide as a result. Specifically, one or more nucleic acid constructs containing a polynucleotide encoding the other polypeptide are introduced into an organism that produces one of the polypeptides and transformed, and as a result, both of the polypeptides are transformed. In addition to a transformant that produces peptides, one or more nucleic acid constructs containing the first polynucleotide and the second polynucleotide are introduced and transformed to produce both polypeptides. Use as a transformant. Further, another method is to transform an organism such as a first plant by introducing a nucleic acid construct containing the first nucleotide, and transform an organism such as a second plant with a second polynucleotide. There is a form in which the nucleic acid construct is transformed into a hybrid which produces a polypeptide of both by crossing the first organism and the second organism.

【００６４】このような形質転換体は、それ自体、病害
生物の防除性、抵抗性、貯蔵安定性などが付与されてい
る。したがって、防除剤などの散布などの作業が省略さ
れる。また、この形質転換体が植物性である場合には、
当該形質転換体あるいはこれに由来する植物体を栽培す
ることによって、当該栽培域において、病害生物の防除
性、抵抗性などを発揮させることができる。また、植物
体を栽培して得られる収穫物（これも形質転換体であ
る）自体にも良好な貯蔵安定性を付与することができ
る。Such a transformant itself is endowed with pest control, resistance, storage stability and the like. Therefore, the work of spraying the pesticide and the like is omitted. Also, when this transformant is plant-based,
By cultivating the transformant or a plant derived from the transformant, it is possible to exert the control property, the resistance, etc. of the pest in the cultivation region. Also, good storage stability can be imparted to the harvested product (also a transformant) obtained by cultivating the plant.

【００６５】さらに、第１のポリペプチドと第２のポリ
ペプチドとを病害生物に作用させるためのさらに他の形
態としては、いずれか一方のポリペプチドを産生するよ
うに対応するポリヌクレオチドを含有する少なくとも１
種類の核酸構築物を用いて形質転換した植物体などの生
物体に対して、他方のポリペプチドを外部から供給する
形態がある。この方法によれば、外部から供給するポリ
ペプチドの適用部位や適用時期を選択することにより、
特定部位及び特定時期に高い抗菌性を発現させることが
できる。Still another mode for acting the first polypeptide and the second polypeptide on the pest is to include a polynucleotide corresponding to produce either one of the polypeptides. At least 1
There is a form in which the other polypeptide is externally supplied to an organism such as a plant transformed with one of the nucleic acid constructs. According to this method, by selecting the application site and application time of the polypeptide supplied from the outside,
A high antibacterial property can be expressed at a specific site and at a specific time.

【００６６】第１のポリペプチドおよび／または第２の
ポリペプチドとを含有するポリペプチド組成物は、高い
抗真菌活性の他、抗細菌活性、抗植物病害菌性を備えて
いる。したがって、各種態様、すなわち、抗真菌剤、抗
細菌剤、および抗植物病害菌剤のうち１種としてあるい
は同時に２種類以上の薬剤として使用することができ
る。抗真菌剤および／または抗細菌剤としては、ヒトを
含む脊椎動物を対象とすることができる。また、植物病
害性真菌や細菌を対象とする植物防除剤として使用する
ことができる。本組成物に対しては、従来公知の各種の
製剤形態を採用することができる。製剤形態に応じて、
当業者は、適当な担体とともに本ポリペプチドを含有す
る製剤組成物を調製することができる。The polypeptide composition containing the first polypeptide and / or the second polypeptide has high antifungal activity, antibacterial activity, and anti-phytopathogenic activity. Therefore, it can be used as one kind of various embodiments, that is, an antifungal agent, an antibacterial agent, and an anti-plant disease fungus agent, or simultaneously as two or more kinds of agents. As the antifungal agent and / or antibacterial agent, vertebrates including humans can be targeted. It can also be used as a plant control agent for plant pathogenic fungi and bacteria. For the present composition, various conventionally known formulation forms can be adopted. Depending on the formulation form,
One of ordinary skill in the art can prepare a pharmaceutical composition containing the present polypeptide together with a suitable carrier.

【００６７】なお、ヒトを含むほ乳動物などに対する真
菌あるいは細菌に対する予防あるいは治療用の薬剤の有
効成分として本ポリペプチドあるいはそのホモログを薬
学上有効量含有する製剤においては、各種公知の経口あ
るいは非経口の製剤形態を採用することができる。その
場合には、採用した製剤形態に応じた、薬学的に許容さ
れる担体を含めることができる。本発明のポリペプチド
あるいはそのホモログの有効成分として含有形態は、特
に限定しないが、本ポリペプチドあるいはそのホモログ
を発現可能に操作された形質転換体（植物個体、あるい
は植物細胞、植物組織（根茎あるいは塊根を含む）、器
官、及び繁殖媒体などの植物個体の一部）そのものとす
ることもできる。なお、ヒトを含むほ乳動物に対する薬
剤として使用する場合、その製剤形態、投与形態、投与
量などに応じて、適切な薬剤組成物中における有効な含
有量を設定することができる。In the preparation containing a pharmaceutically effective amount of the present polypeptide or its homolog as an active ingredient of a drug for preventing or treating fungi or bacteria against mammals including humans, various known oral or parenteral preparations can be used. The formulation form of can be adopted. In that case, a pharmaceutically acceptable carrier can be included depending on the adopted formulation form. The form of containing the polypeptide of the present invention or its homolog as an active ingredient is not particularly limited, but a transformant (plant individual, or plant cell, plant tissue (rhizome or rhizome or (Including tuberous roots), organs, and parts of plant individuals such as breeding media) themselves. When used as a drug for mammals including humans, an effective content in a suitable pharmaceutical composition can be set according to the formulation form, dosage form, dose and the like.

【００６８】[0068]

【実施例】以下に、本発明の具体例を記載するが、本発
明は以下の具体例に限定する趣旨ではない。 （実施例１）サツマイモ黒斑病菌（Ceratosystis fimbr
iata）をポテトデキストロース寒天培地［DIFCO社］で2
6℃、14日間培養したのち、寒天培地（2.5cm角）を切出
し、0.01％Tween20溶液10mlで懸濁した。この懸濁液を
滅菌ガーゼで濾過し、濾液を遠心（1000rpm、10分、R.
T.）した。菌体を60% Potato Dextrose Broth(以下、PD
B)［DIFCO社］5mlで懸濁し、血球計算盤で分生胞子数を
求め、分生胞子懸濁液1.5×105spores/mlを調製した。9
6穴マイクロプレート［NUNC社］に配列番号：1に記載の
アミノ酸配列からなるポリペプチド（以下、当該ポリペ
プチドを、単に、配列番号：１と略す。異なる配列番号
についても同様に省略することとする。）の水溶液(0又
は0.3〜300μg/ml)10μlと配列番号：７の水溶液(0又は
40μg/ml)10μl、200mM 2-(N-モルホリノ)エタンスルホ
ン酸Na緩衝液（pH6）10μl、サツマイモ黒斑病菌の胞子
懸濁液（1.5×105spores/ml）70μlを入れた培養試験液
を2反復で調製し、25℃で培養した。30分後の吸光度Aと
同72時間後の吸光度Bを測定した。対照として、配列番
号：１の水溶液と配列番号：７の水溶液を入れなかった
培養試験液についても同様に30分後の吸光度Cと同72時
間後の吸光度Dを測定し、下記の式(1)により発育阻害率
を求め、平均値をプロットしたところ、図１に示す用量
曲線が得られた。配列番号：１と配列番号：７との相加
作用による場合の予想される曲線を点線で示したが、こ
の曲線よりも配列番号：７を添加した曲線が左上にシフ
トしていることがわかる。100 ％の発育阻害率を示す最
少濃度（以下、MIC）で抗真菌活性を比較すると、最終
濃度4μg/mlの配列番号：７を添加することにより配列
番号：1の抗真菌活性は10倍に向上することがわかる。
また、繰り返しのある二元配置で分散分析を行い、交互
作用（相乗効果）を調べたところ、表１に示すように危
険率（P-値）が1%以内において交互作用の分散比19.0が
F境界値2.8よりも高いことから、配列番号：1に配列番
号：７を添加すると、相乗効果により抗真菌活性が向上
することがわかる。EXAMPLES Specific examples of the present invention will be described below, but the present invention is not limited to the following specific examples. (Example 1) Sweet potato black spot fungus (Ceratosystis fimbr)
iata) with potato dextrose agar [DIFCO] 2
After culturing at 6 ° C. for 14 days, the agar medium (2.5 cm square) was cut out and suspended in 10 ml of 0.01% Tween 20 solution. The suspension was filtered through sterile gauze and the filtrate was centrifuged (1000 rpm, 10 minutes, R.
T.) Bacteria were added to 60% Potato Dextrose Broth (hereinafter PD
B) [DIFCO] was suspended in 5 ml, the number of conidia was determined with a hemocytometer, and a conidial suspension of 1.5 × 10 5 spores / ml was prepared. 9
A polypeptide consisting of the amino acid sequence set forth in SEQ ID NO: 1 on a 6-well microplate (NUNC) (hereinafter, the polypeptide is simply abbreviated as SEQ ID NO: 1. The same applies to different sequence numbers. Solution (0 or 0.3-300 μg / ml) of SEQ ID NO: 7 (0 or 0.3-300 μg / ml)
40 μg / ml) 10 μl, 200 mM 2- (N-morpholino) ethanesulfonic acid Na buffer (pH 6) 10 μl, culture test liquid containing 70 μl of spore suspension of sweet potato black spot fungus (1.5 × 10 5 spores / ml) Were prepared in duplicate and incubated at 25 ° C. The absorbance A after 30 minutes and the absorbance B after 72 hours were measured. As a control, the absorbance C after 30 minutes and the absorbance D after 72 hours were similarly measured for the culture test solution in which the aqueous solution of SEQ ID NO: 1 and the aqueous solution of SEQ ID NO: 7 were not added, and the following formula (1 The growth inhibition rate was obtained by () and the average value was plotted, and the dose curve shown in FIG. 1 was obtained. A curve expected by the additive action of SEQ ID NO: 1 and SEQ ID NO: 7 is shown by a dotted line. It can be seen that the curve to which SEQ ID NO: 7 is added is shifted to the upper left from this curve. . Comparing the antifungal activity at the lowest concentration (MIC) showing 100% growth inhibition, the addition of 4 μg / ml of the final concentration of SEQ ID NO: 7 increased the antifungal activity of SEQ ID NO: 1 by 10 times. You can see that it will improve.
In addition, when the interaction (synergistic effect) was examined by performing an analysis of variance in a repeated two-way arrangement, as shown in Table 1, when the risk rate (P-value) was within 1%, the variance ratio of interaction was 19.0.
Since it is higher than the F boundary value of 2.8, it can be seen that the addition of SEQ ID NO: 7 to SEQ ID NO: 1 improves the antifungal activity due to a synergistic effect.

【表１】 [Table 1]

【００６９】（実施例２）サツマイモ黒斑病菌（Cerato
systis fimbriata）をポテトデキストロース寒天培地
［DIFCO社］で26℃、14日間培養したのち、実施例１と
同様のプロセスにより分生胞子懸濁液1.5×105spores/m
lを調製した。96穴マイクロプレート［NUNC社］に配列
番号：３の水溶液(0又は0.3〜1000μg/ml)10μlと配列
番号：７の水溶液(0又は40μg/ml)10μl、200mM 2-(N-
モルホリノ)エタンスルホン酸Na緩衝液（pH6）10μl、
サツマイモ黒斑病菌の胞子懸濁液（1.5×105spores/m
l）70μlを入れた培養試験液を2反復で調製し、25℃で
培養した。その後は、実施例１と同様のプロセスにより
発育阻害率を求め、平均値をプロットしたところ、図２
に示す用量曲線が得られた。配列番号：３と配列番号：
７の相加作用による場合に予想される曲線を点線で示し
たが、この曲線よりも配列番号：7を添加した曲線が左
上にシフトしていることがわかる。MICで抗真菌活性を
比較すると、最終濃度4μg/mlの配列番号７を添加する
ことにより配列番号：３の抗真菌活性は10倍に向上する
ことがわかる。また、繰り返しのある二元配置で分散分
析を行い、交互作用（相乗効果）を調べたところ、表２
に示すように危険率（P-値）が1%以内において交互作用
の分散比207.6がF境界値2.7よりも高いことから、配列
番号：３に配列番号：７を添加すると、相乗効果により
抗真菌活性が向上することがわかる。Example 2 Sweet potato black spot fungus (Cerato)
systis fimbriata) was cultured on a potato dextrose agar medium [DIFCO] at 26 ° C. for 14 days, and then a conidia suspension of 1.5 × 10 5 spores / m was prepared by the same process as in Example 1.
l was prepared. In a 96-well microplate [NUNC], 10 μl of the aqueous solution of SEQ ID NO: 3 (0 or 0.3 to 1000 μg / ml) and 10 μl of the aqueous solution of SEQ ID NO: 7 (0 or 40 μg / ml), 200 mM 2- (N-
Morpholino) ethanesulfonic acid sodium buffer (pH 6) 10 μl,
Spore suspension of sweetpotato black spot fungus (1.5 × 10 5 spores / m
l) A culture test solution containing 70 μl was prepared in duplicate and cultured at 25 ° C. After that, the growth inhibition rate was obtained by the same process as in Example 1, and the average value was plotted.
The dose curve shown in was obtained. SEQ ID NO: 3 and SEQ ID NO:
The curve expected in the case of the additive action of 7 is shown by a dotted line, but it can be seen that the curve to which SEQ ID NO: 7 is added is shifted to the upper left from this curve. Comparing the antifungal activity by MIC, it can be seen that the antifungal activity of SEQ ID NO: 3 is improved 10-fold by adding SEQ ID NO: 7 at a final concentration of 4 μg / ml. In addition, when the analysis of variance (synergistic effect) was carried out by performing an analysis of variance in a repeated two-way arrangement, Table 2
As shown in Fig. 5, the dispersion ratio 207.6 of the interaction is higher than the F boundary value 2.7 when the risk rate (P-value) is within 1%. Therefore, when SEQ ID NO: 7 is added to SEQ ID NO: 3, the synergistic effect is observed. It can be seen that the fungal activity is improved.

【表２】 [Table 2]

【００７０】（実施例３）サツマイモ黒斑病菌（Cerato
systis fimbriata）をポテトデキストロース寒天培地
［DIFCO社］で26℃、14日間培養したのち、実施例１と
同様のプロセスにより分生胞子懸濁液1.5×105spores/m
lを調製した。96穴マイクロプレート［NUNC社］に配列
番号：４の水溶液(0又は0.3〜1000μg/ml)10μlと配列
番号：７の水溶液(0又は40μg/ml)10μl、200mM 2-(N-
モルホリノ)エタンスルホン酸Na緩衝液（pH6）10μl、
サツマイモ黒斑病菌の胞子懸濁液（1.5×105spores/m
l）70μlを入れた培養試験液を2反復で調製し、25℃で
培養した。その後は、実施例１と同様のプロセスにより
発育阻害率を求め、平均値をプロットしたところ、図３
に示す用量曲線が得られた。配列番号：４と配列番号：
7の相加作用による場合に予想される曲線を点線で示し
たが、この曲線よりも配列番号：7を添加した曲線が左
上にシフトしていることがわかる。MICで抗真菌活性を
比較すると、最終濃度4μg/mlの配列番号：７を添加す
ることにより配列番号：４の抗真菌活性は10倍に向上す
ることがわかる。また、繰り返しのある二元配置で分散
分析を行い、交互作用（相乗効果）を調べたところ、表
３に示すように危険率（P-値）が1%以内において交互作
用の分散比25.3がF境界値2.7よりも高いことから、配列
番号：4に配列番号：７を添加すると、相乗効果により
抗真菌活性が向上することがわかる。Example 3 Sweetpotato Black Spot Fungus (Cerato)
systis fimbriata) was cultured on a potato dextrose agar medium [DIFCO] at 26 ° C. for 14 days, and then a conidia suspension of 1.5 × 10 5 spores / m was prepared by the same process as in Example 1.
l was prepared. A 96-well microplate [NUNC], 10 μl of the aqueous solution of SEQ ID NO: 4 (0 or 0.3 to 1000 μg / ml) and 10 μl of the aqueous solution of SEQ ID NO: 7 (0 or 40 μg / ml), 200 mM 2- (N-
Morpholino) ethanesulfonic acid sodium buffer (pH 6) 10 μl,
Spore suspension of sweetpotato black spot fungus (1.5 × 10 5 spores / m
l) A culture test solution containing 70 μl was prepared in duplicate and cultured at 25 ° C. After that, the growth inhibition rate was obtained by the same process as in Example 1, and the average value was plotted.
The dose curve shown in was obtained. SEQ ID NO: 4 and SEQ ID NO:
The curve expected in the case of the additive action of 7 is shown by a dotted line, but it can be seen that the curve to which SEQ ID NO: 7 is added is shifted to the upper left than this curve. Comparing the antifungal activity by MIC, it can be seen that the antifungal activity of SEQ ID NO: 4 is improved 10-fold by adding SEQ ID NO: 7 at a final concentration of 4 μg / ml. In addition, when the analysis of variance (synergistic effect) was carried out by performing an analysis of variance in a repeated two-way arrangement, as shown in Table 3, when the risk rate (P-value) was within 1%, the variance ratio of the interaction was 25.3. Since the F boundary value is higher than 2.7, it can be seen that the addition of SEQ ID NO: 7 to SEQ ID NO: 4 improves the antifungal activity due to a synergistic effect.

【表３】 [Table 3]

【００７１】（実施例４）サツマイモ黒斑病菌（Cerato
systis fimbriata）をポテトデキストロース寒天培地
［DIFCO社］で26℃、14日間培養したのち、実施例１と
同様のプロセスにより分生胞子懸濁液1.5×105spores/m
lを調製した。96穴マイクロプレート［NUNC社］に配列
番号：5の水溶液(0又は0.3〜1000μg/ml)10μlと配列番
号：７の水溶液(0又は40μg/ml)10μl、200mM 2-(N-モ
ルホリノ)エタンスルホン酸Na緩衝液（pH6）10μl、サ
ツマイモ黒斑病菌の胞子懸濁液（1.5×105spores/ml）7
0μlを入れた培養試験液を2反復で調製し、25℃で培養
した。その後は、実施例１と同様のプロセスにより発育
阻害率を求め、平均値をプロットしたところ、図４に示
す用量曲線が得られた。配列番号：５と配列番号：7の
相加作用による場合に予想される曲線を点線で示した
が、この曲線よりも配列番号：7を添加した曲線が左上
にシフトしていることがわかる。MICで抗真菌活性を比
較すると、最終濃度4μg/mlの配列番号：７を添加する
ことにより配列番号：５の抗真菌活性は10倍に向上する
ことがわかる。また、繰り返しのある二元配置で分散分
析を行い、交互作用（相乗効果）を調べたところ、表４
に示すように危険率（P-値）が1%以内において交互作用
の分散比81.7がF境界値2.7よりも高いことから、配列番
号：５に配列番号：７を添加すると、相乗効果により抗
真菌活性が向上することがわかる。Example 4 Sweet potato black spot fungus (Cerato)
systis fimbriata) was cultured on a potato dextrose agar medium [DIFCO] at 26 ° C. for 14 days, and then a conidia suspension of 1.5 × 10 5 spores / m was prepared by the same process as in Example 1.
l was prepared. A 96-well microplate [NUNC] with 10 μl of an aqueous solution of SEQ ID NO: 5 (0 or 0.3 to 1000 μg / ml) and 10 μl of an aqueous solution of SEQ ID NO: 7 (0 or 40 μg / ml), 200 mM 2- (N-morpholino) ethane 10 μl of sodium sulfonate buffer (pH 6), spore suspension of sweetpotato black spot fungus (1.5 × 10 5 spores / ml) 7
A culture test solution containing 0 μl was prepared in duplicate and cultured at 25 ° C. After that, the growth inhibition rate was obtained by the same process as in Example 1, and the average value was plotted. As a result, the dose curve shown in FIG. 4 was obtained. A curve expected by the additive action of SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 7 is shown by a dotted line, and it can be seen that the curve to which SEQ ID NO: 7 is added is shifted to the upper left from this curve. Comparing the antifungal activity by MIC, it can be seen that the antifungal activity of SEQ ID NO: 5 is improved 10-fold by adding SEQ ID NO: 7 at a final concentration of 4 μg / ml. In addition, the analysis of variance (synergistic effect) was carried out in a repeated two-way arrangement, and Table 4
As shown in Fig. 6, the dispersion ratio 81.7 of the interaction is higher than the F boundary value 2.7 when the risk rate (P-value) is within 1%. It can be seen that the fungal activity is improved.

【表４】 [Table 4]

【００７２】（実施例５）サツマイモ軟腐病菌（Rhizop
us stolonifer）をポテトデキストロース寒天培地［DIF
CO社］で26℃、14日間培養したのち、実施例１と同様の
プロセスにより、分生胞子懸濁液1.4×106spores/mlを
調製した。96穴マイクロプレート［NUNC社］に配列番
号：１(0又は3〜103μg/ml)10μlと配列番号：７(0又は
400μg/ml)10μl、200mM 2-(N-モルホリノ)エタンスル
ホン酸Na緩衝液（pH6）10μl、サツマイモ軟腐病菌の胞
子懸濁液（1.4×106spores/ml）70μlを入れた培養試験
液を調製し、25℃で培養した。その後は、実施例１と同
様のプロセスにより発育阻害率を求め、平均値をプロッ
トしたところ、図５に示す用量曲線が得られた。配列番
号：1と配列番号：７の相加作用による場合に予想され
る曲線を点線で示したが、この曲線よりも配列番号：７
を添加した曲線が左上にシフトしていることがわかる。
配列番号：１単独の場合、100μg/mlの添加でも抗真菌
活性を示さないが、最終濃度40μg/mlの配列番号：７を
添加することにより、100μg/mlで抗真菌活性を示すよ
うになることがわかる。また、繰り返しのある二元配置
で分散分析を行い、交互作用（相乗効果）を調べたとこ
ろ、表５に示すように危険率（P-値）が1%以内において
交互作用の分散比598.8がF境界値3.1よりも高いことか
ら、配列番号：１に配列番号：７を添加すると、相乗効
果により抗真菌活性が向上することがわかる。Example 5 Sweetpotato Soft Rot Fungus (Rhizop
us stolonifer) on potato dextrose agar [DIF
After culturing at 26 ° C. for 14 days in Co., Ltd., 1.4 × 10 6 spores / ml of conidia suspension was prepared by the same process as in Example 1. SEQ ID NO: 1 (0 or 3 to 10 3 μg / ml) 10 μl and SEQ ID NO: 7 (0 or 0 in a 96-well microplate [NUNC]]
400 μg / ml) 10 μl, 200 mM 2- (N-morpholino) ethanesulfonic acid Na buffer (pH 6) 10 μl, culture test liquid containing sweet potato soft rot spore suspension (1.4 × 10 6 spores / ml) 70 μl It was prepared and cultured at 25 ° C. After that, the growth inhibition rate was obtained by the same process as in Example 1, and the average value was plotted. As a result, the dose curve shown in FIG. 5 was obtained. A curve expected by the additive action of SEQ ID NO: 1 and SEQ ID NO: 7 is shown by a dotted line.
It can be seen that the curve added with is shifted to the upper left.
When SEQ ID NO: 1 alone does not show antifungal activity even when 100 μg / ml is added, it shows antifungal activity at 100 μg / ml by adding SEQ ID NO: 7 at a final concentration of 40 μg / ml I understand. In addition, when the analysis of variance (synergistic effect) was carried out by performing an analysis of variance in a repeated two-way arrangement, as shown in Table 5, when the risk rate (P-value) was within 1%, the variance ratio of interaction was 598.8. Since the F boundary value is higher than 3.1, it can be seen that the addition of SEQ ID NO: 7 to SEQ ID NO: 1 improves antifungal activity due to a synergistic effect.

【表５】 [Table 5]

【００７３】（実施例６）サツマイモ軟腐病菌（Rhizop
us stolonifer）をポテトデキストロース寒天培地［DIF
CO社］で26℃、14日間培養したのち、実施例１と同様の
プロセスにより、分生胞子懸濁液1.4×106spores/mlを
調製した。96穴マイクロプレート［NUNC社］に配列番
号：２(0又は3〜103μg/ml)10μlと配列番号：７(0又は
400μg/ml)10μl、200mM 2-(N-モルホリノ)エタンスル
ホン酸Na緩衝液（pH6）10μl、サツマイモ軟腐病菌の胞
子懸濁液（1.4×106spores/ml）70μlを入れた培養試験
液を調製し、25℃で培養した。その後は、実施例１と同
様のプロセスにより発育阻害率を求め、平均値をプロッ
トしたところ、図６に示す用量曲線が得られた。配列番
号：２と配列番号：７の相加作用による場合に予想され
る曲線を点線で示したが、この曲線よりも配列番号７を
添加した曲線が左上にシフトしていることがわかる。配
列番号：２単独の場合、100μg/mlの添加でも抗真菌活
性を示さないが、最終濃度40μg/mlの配列番号：７を添
加することにより、配列番号：２のMICは３０μg/mlに
なることがわかる。また、繰り返しのある二元配置で分
散分析を行い、交互作用（相乗効果）を調べたところ、
表６に示すように危険率（P-値）が1%以内において交互
作用の分散比741.8がF境界値3.1よりも高いことから、
配列番号：２に配列番号：７を添加すると、相乗効果に
より抗真菌活性が向上することがわかる。Example 6 Sweetpotato Soft Rot Fungus (Rhizop
us stolonifer) on potato dextrose agar [DIF
After culturing at 26 ° C. for 14 days in Co., Ltd., 1.4 × 10 6 spores / ml of conidia suspension was prepared by the same process as in Example 1. SEQ ID NO: 2 (0 or 3 to 10 3 μg / ml) 10 μl and SEQ ID NO: 7 (0 or 0 in a 96-well microplate [NUNC]]
400 μg / ml) 10 μl, 200 mM 2- (N-morpholino) ethanesulfonic acid Na buffer (pH 6) 10 μl, culture test liquid containing sweet potato soft rot spore suspension (1.4 × 10 6 spores / ml) 70 μl It was prepared and cultured at 25 ° C. After that, the growth inhibition rate was obtained by the same process as in Example 1, and the average value was plotted. As a result, the dose curve shown in FIG. 6 was obtained. A curve expected by the additive action of SEQ ID NO: 2 and SEQ ID NO: 7 is shown by a dotted line, and it can be seen that the curve to which SEQ ID NO: 7 is added is shifted to the upper left from this curve. When SEQ ID NO: 2 alone does not show antifungal activity even when 100 μg / ml is added, the MIC of SEQ ID NO: 2 becomes 30 μg / ml by adding SEQ ID NO: 7 at the final concentration of 40 μg / ml I understand. In addition, when the analysis of variance (synergistic effect) was performed by performing an analysis of variance in a repeated two-way arrangement,
As shown in Table 6, when the risk ratio (P-value) is within 1%, the interaction dispersion ratio 741.8 is higher than the F boundary value 3.1,
It can be seen that the addition of SEQ ID NO: 7 to SEQ ID NO: 2 improves the antifungal activity due to a synergistic effect.

【表６】 [Table 6]

【００７４】（実施例７）サツマイモ軟腐病菌（Rhizop
us stolonifer）をポテトデキストロース寒天培地［DIF
CO社］で26℃、14日間培養したのち、実施例１と同様の
プロセスにより、分生胞子懸濁液1.4×106spores/mlを
調製した。96穴マイクロプレート［NUNC社］に配列番
号：６(0又は3〜103μg/ml)10μlと配列番号：７(0又は
400μg/ml)10μl、200mM 2-(N-モルホリノ)エタンスル
ホン酸Na緩衝液（pH6）10μl、サツマイモ軟腐病菌の胞
子懸濁液（1.4×106spores/ml）70μlを入れた培養試験
液を調製し、25℃で培養した。その後は、実施例１と同
様のプロセスにより発育阻害率を求め、平均値をプロッ
トしたところ、図７に示す用量曲線が得られた。配列番
号：６と配列番号：７の相加作用による場合に予想され
る曲線を点線で示したが、この曲線よりも配列番号：７
を添加した曲線が左上にシフトしていることがわかる。
MICで抗真菌活性を比較すると、最終濃度４０μg/mlの
配列番号７を添加することにより配列番号６の抗真菌活
性は３倍に向上することがわかる。また、繰り返しのあ
る二元配置で分散分析を行い、交互作用（相乗効果）を
調べたところ、表７に示すように危険率（P-値）が1%以
内において交互作用の分散比54.2がF境界値3.1よりも高
いことから、配列番号：６に配列番号：７を添加する
と、相乗効果により抗真菌活性が向上することがわか
る。Example 7 Sweetpotato Soft Rot Fungus (Rhizop
us stolonifer) on potato dextrose agar [DIF
After culturing at 26 ° C. for 14 days in Co., Ltd., 1.4 × 10 6 spores / ml of conidia suspension was prepared by the same process as in Example 1. 96-well microplate [NUNC Co.] in SEQ ID NO: 6 (0 or 3~10 3 μg / ml) 10μl and SEQ ID NO: 7 (0 or
400 μg / ml) 10 μl, 200 mM 2- (N-morpholino) ethanesulfonic acid Na buffer (pH 6) 10 μl, culture test liquid containing sweet potato soft rot spore suspension (1.4 × 10 6 spores / ml) 70 μl It was prepared and cultured at 25 ° C. After that, the growth inhibition rate was obtained by the same process as in Example 1, and the average value was plotted. As a result, the dose curve shown in FIG. 7 was obtained. A curve expected by the additive action of SEQ ID NO: 6 and SEQ ID NO: 7 is shown by a dotted line.
It can be seen that the curve added with is shifted to the upper left.
Comparing the antifungal activity by MIC, it can be seen that the antifungal activity of SEQ ID NO: 6 is improved three-fold by adding SEQ ID NO: 7 at a final concentration of 40 μg / ml. In addition, when the interaction (synergistic effect) was examined by performing an analysis of variance in a repeated two-way arrangement, as shown in Table 7, when the risk rate (P-value) was within 1%, the variance ratio of interaction was 54.2. Since the F boundary value is higher than 3.1, it can be seen that the addition of SEQ ID NO: 7 to SEQ ID NO: 6 improves the antifungal activity due to a synergistic effect.

【表７】 [Table 7]

【００７５】（実施例８）サツマイモ黒斑病菌（Cerato
systis fimbriata）をポテトデキストロース寒天培地
［DIFCO社］で26℃、14日間培養したのち、実施例１と
同様のプロセスにより分生胞子懸濁液1.5×105spores/m
lを調製した。96穴マイクロプレート［NUNC社］に配列
番号：７(0〜10μg/ml)10μlと配列番号：２(0又は30μ
g/ml)10μl、200mM 2-(N-モルホリノ)エタンスルホン酸
Na緩衝液（pH6）10μl、サツマイモ黒斑病菌の胞子懸濁
液（1.5×105spores/ml）70μlを入れた培養試験液を調
製し、25℃で培養した。その後は、実施例１と同様のプ
ロセスにより発育阻害率を求め、平均値をプロットした
ところ、図８に示す用量曲線が得られた。配列番号：７
と配列番号：２の相加作用による予想される曲線を点線
で示したが、この曲線よりも配列番号：２を添加した曲
線が左上にシフトしていることがわかる。MICで抗真菌
活性を比較すると、最終濃度３μg/mlの配列番号：２を
添加することにより配列番号：７の抗真菌活性は１．５
倍に向上することがわかる。また、繰り返しのある二元
配置で分散分析を行い、交互作用（相乗効果）を調べた
ところ、表８に示すように危険率（P-値）が1%以内にお
いて交互作用の分散比377.2がF境界値3.1よりも高いこ
とから、配列番号：７に配列番号：２を添加すると、相
乗効果により抗真菌活性が向上することがわかる。Example 8 Sweet potato black spot fungus (Cerato)
systis fimbriata) was cultured on a potato dextrose agar medium [DIFCO] at 26 ° C. for 14 days, and then a conidia suspension of 1.5 × 10 5 spores / m was prepared by the same process as in Example 1.
l was prepared. SEQ ID NO: 7 (0-10 μg / ml) 10 μl and SEQ ID NO: 2 (0 or 30 μ on 96-well microplate [NUNC])
g / ml) 10 μl, 200 mM 2- (N-morpholino) ethanesulfonic acid
A culture test solution containing 10 μl of a Na buffer (pH 6) and 70 μl of a spore suspension of sweetpotato black spot fungus (1.5 × 10 5 spores / ml) was prepared and cultured at 25 ° C. After that, the growth inhibition rate was obtained by the same process as in Example 1, and the average value was plotted. As a result, the dose curve shown in FIG. 8 was obtained. SEQ ID NO: 7
And a curve expected by the additive action of SEQ ID NO: 2 is shown by a dotted line, and it can be seen that the curve to which SEQ ID NO: 2 is added is shifted to the upper left from this curve. Comparing the antifungal activity by MIC, the antifungal activity of SEQ ID NO: 7 was 1.5 by adding SEQ ID NO: 2 at the final concentration of 3 μg / ml.
It can be seen that it is doubled. In addition, when the analysis of the interaction (synergistic effect) was carried out by performing an analysis of variance in a repeated two-way arrangement, as shown in Table 8, when the risk rate (P-value) was within 1%, the dispersion ratio 377.2 of the interaction was Since the F boundary value is higher than 3.1, it can be seen that the addition of SEQ ID NO: 2 to SEQ ID NO: 7 improves the antifungal activity due to a synergistic effect.

【表８】 [Table 8]

【００７６】（実施例９）サツマイモ黒斑病菌（Cerato
systis fimbriata）をポテトデキストロース寒天培地
［DIFCO社］で26℃、14日間培養したのち、実施例１と
同様のプロセスにより分生胞子懸濁液1.5×105spores/m
lを調製した。96穴マイクロプレート［NUNC社］に配列
番号：5の水溶液(0又は0.3〜1000μg/ml)10μlと配列番
号：１０の水溶液(0又は40μg/ml)10μl、200mM 2-(N-
モルホリノ)エタンスルホン酸Na緩衝液（pH6）10μl、
サツマイモ黒斑病菌の胞子懸濁液（1.5×105spores/m
l）70μlを入れた培養試験液を2反復で調製し、25℃で
培養した。その後は、実施例１と同様のプロセスにより
発育阻害率を求め、平均値をプロットしたところ、図９
に示す用量曲線が得られた。配列番号：５と配列番号：
１０の相加作用による場合に予想される曲線を点線で示
したが、この曲線よりも配列番号：１０を添加した曲線
が左上にシフトしていることがわかる。MICで抗真菌活
性を比較すると、最終濃度4μg/mlの配列番号１０を添
加することにより配列番号：５の抗真菌活性は10倍に向
上することがわかる。また、繰り返しのある二元配置で
分散分析を行い、交互作用（相乗効果）を調べたとこ
ろ、表９に示すように危険率（P-値）が1%以内において
交互作用の分散比140.2がF境界値2.7よりも高いことか
ら、配列番号：５に配列番号：１０を添加すると、相乗
効果により抗真菌活性が向上することがわかる。Example 9 Sweet potato black spot fungus (Cerato)
systis fimbriata) was cultured on a potato dextrose agar medium [DIFCO] at 26 ° C. for 14 days, and then a conidia suspension of 1.5 × 10 5 spores / m was prepared by the same process as in Example 1.
l was prepared. A 96-well microplate [NUNC], 10 μl of an aqueous solution of SEQ ID NO: 5 (0 or 0.3 to 1000 μg / ml) and 10 μl of an aqueous solution of SEQ ID NO: 10 (0 or 40 μg / ml), 200 mM 2- (N-
Morpholino) ethanesulfonic acid sodium buffer (pH 6) 10 μl,
Spore suspension of sweetpotato black spot fungus (1.5 × 10 5 spores / m
l) A culture test solution containing 70 μl was prepared in duplicate and cultured at 25 ° C. After that, the growth inhibition rate was obtained by the same process as in Example 1, and the average value was plotted.
The dose curve shown in was obtained. SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO:
The curve expected in the case of the additive action of 10 is shown by a dotted line, but it can be seen that the curve to which SEQ ID NO: 10 is added is shifted to the upper left from this curve. Comparing the antifungal activity by MIC, it can be seen that the antifungal activity of SEQ ID NO: 5 is improved 10-fold by adding SEQ ID NO: 10 at a final concentration of 4 μg / ml. In addition, when the analysis of variance (synergistic effect) was carried out by repeated analysis of two-way arrangement, as shown in Table 9, when the risk rate (P-value) was within 1%, the variance ratio of interaction was 140.2. Since it is higher than the F boundary value of 2.7, it is understood that the addition of SEQ ID NO: 10 to SEQ ID NO: 5 improves the antifungal activity due to a synergistic effect.

【表９】 [Table 9]

【００７７】（実施例１０）サツマイモ（高系14号）の
成葉を約5mm角にメスで切断し、洗浄液（10mM KH2PO4,
pH 6.0）で洗浄した。洗浄した葉切片を抽出液（50mM M
gCl2）に浸し、真空ポンプを用いて10分間減圧処理し
た。減圧処理後の葉を遠心管に装着した5mlシリンジに
入れ、4500ｇで10分間遠心した。シリンジ外に溶出した
液をサツマイモ細胞間液（ICF:Inter Cellular Fluid）
とした。100μl の12.5％サツマイモICF（細胞間液）中
に配列番号：３の水溶液を加え、28℃で5時間反応させ
た。反応前のポリペプチドを逆相クロマトグラフィーで
分画した時のピークの面積値を100%とし、サツマイモIC
Fと反応後のポリペプチドのピーク面積値から、ポリペ
プチドの５時間後の残存率を算出した。なお、逆相クロ
マトグラフィーのカラムにはSource 15RPC ST 4.6/100
（Amasharm Pharmacia Biotech社製）を用いた。開始バ
ッファーには溶液A（5％アセトニトリル、0.1％TFA）を
用いて、溶液A100％から溶液B（70％アセトニトリル、
0.1％TFA）100％へのグラジエントをかけることにより
溶出した。その結果、配列番号：３のサツマイモICF中
での５時間後の残存率は69.0％であった。上記配列番
号：３の水溶液の替わりに、配列番号：４の水溶液を用
いて、同様のプロセスにより残存率を調べたところ、3
7.8％であり、上記配列番号：３の水溶液の替わりに、
配列番号：７の水溶液を用いて、同様のプロセスにより
残存率を調べたところ、70.0％であった。この結果よ
り、配列番号：４にKD配列を付加した配列番号：３及び
配列番号：７はサツマイモ内プロテアーゼにより分解さ
れにくいことがわかるよって、配列番号：３をコードす
るポリヌクレオチド（配列番号：２１）と配列番号：７
をコードするポリヌクレオチド（配列番号：２５）を同
時にサツマイモに導入すれば、特定の真菌に対して抗真
菌活性が低いことなく、および／または、植物内プロテ
アーゼにより分解されにくい、抵抗性を付与したサツマ
イモを提供することができる。(Example 10) Adult leaves of sweet potato (Taka system No. 14) were cut into about 5 mm square with a scalpel, and a washing solution (10 mM KH 2 PO 4 ,
It was washed with pH 6.0). The washed leaf slices were extracted (50 mM M
gCl 2 ) and vacuum-treated for 10 minutes using a vacuum pump. The leaves after decompression treatment were put into a 5 ml syringe attached to a centrifuge tube, and centrifuged at 4500 g for 10 minutes. Liquid eluted outside the syringe is the sweet potato intercellular fluid (ICF)
And The aqueous solution of SEQ ID NO: 3 was added to 100 μl of 12.5% sweet potato ICF (intercellular fluid) and reacted at 28 ° C. for 5 hours. The area value of the peak when the pre-reaction polypeptide was fractionated by reverse phase chromatography was set to 100%, and the sweet potato IC
The residual rate of the polypeptide after 5 hours was calculated from the peak area value of the polypeptide after the reaction with F. Source 15RPC ST 4.6 / 100 was used for the reversed-phase chromatography column.
(Amasharm Pharmacia Biotech) was used. Solution A (5% acetonitrile, 0.1% TFA) was used as the starting buffer, and from solution A 100% to solution B (70% acetonitrile,
Elution was done by applying a gradient to 0.1% TFA) 100%. As a result, the survival rate after 5 hours in the sweet potato ICF of SEQ ID NO: 3 was 69.0%. Using the aqueous solution of SEQ ID NO: 4 instead of the aqueous solution of SEQ ID NO: 3, the residual rate was examined by the same process.
7.8%, instead of the aqueous solution of SEQ ID NO: 3 above,
When the residual ratio was examined by the same process using the aqueous solution of SEQ ID NO: 7, it was 70.0%. From this result, it can be seen that SEQ ID NO: 3 and SEQ ID NO: 7, which are obtained by adding a KD sequence to SEQ ID NO: 4, are difficult to be decomposed by a protease in sweet potato. Therefore, the polynucleotide encoding SEQ ID NO: 3 (SEQ ID NO: 21) ) And SEQ ID NO: 7
When the polynucleotide (SEQ ID NO: 25) encoding the gene was introduced into sweet potato at the same time, the antifungal activity against a specific fungus was not low and / or resistance was imparted, which was difficult to be decomposed by plant protease. Sweet potatoes can be provided.

【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> KABUSHIKIKAISHA TOYOTA CHUO KENKYUSHO <120> Compositions For Disease inducible organisms and Use Thereof <130> 010735(010-03500) <140> <141> <160> 38 <170> PatentIn Ver. 2.1 <210> 1 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Leu Leu Gly Asp Phe Phe Arg Lys Ser Lys Glu Lys Ile Gly Lys Glu 1 5 10 15 Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Lys Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val 20 25 30 <210> 2 <211> 32 <212> PRT <213> RABBIT <400> 2 Gly Leu Arg Lys Arg Leu Arg Lys Phe Arg Asn Lys Ile Lys Glu Lys 1 5 10 15 Leu Lys Lys Ile Gly Gln Lys Ile Gln Gly Leu Leu Pro Lys Leu Ala 20 25 30 <210> 3 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:DESIGNED POLYPEPTIDE BASED ON THE SEQUENSE OF CAP18 OF RABBIT <400> 3 Gly Leu Arg Lys Arg Leu Arg Lys Phe Arg Asn Lys Ile Lys Glu Lys 1 5 10 15 Leu Lys Lys Ile Gly Gln Lys Ile Lys Asp 20 25 <210> 4 <211> 24 <212> PRT <213> RABBIT <400> 4 Gly Leu Arg Lys Arg Leu Arg Lys Phe Arg Asn Lys Ile Lys Glu Lys 1 5 10 15 Leu Lys Lys Ile Gly Gln Lys Ile 20 <210> 5 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:DESIGNED POLYPEPTIDE BASED ON THE SEQUENCE OF CAP18 OF RABBIT <400> 5 Gly Leu Arg Lys Arg Leu Arg Lys Phe Arg Asn Lys Ile Lys Glu Lys 1 5 10 15 Leu Lys Lys Ile Gly Gln Lys Asp 20 <210> 6 <211> 20 <212> PRT <213> RABBIT <400> 6 Gly Leu Arg Lys Arg Leu Arg Lys Phe Arg Asn Lys Ile Lys Glu Lys 1 5 10 15 Leu Lys Lys Ile 20 <210> 7 <211> 45 <212> PRT <213> PLANT <400> 7 Lys Ser Cys Cys Arg Thr Thr Leu Gly Arg Asn Cys Tyr Asn Leu Cys 1 5 10 15 Arg Ser Arg Gly Ala Gln Lys Leu Cys Ser Thr Val Cys Arg Cys Lys 20 25 30 Leu Thr Ser Gly Leu Ser Cys Pro Lys Gly Phe Pro Lys 35 40 45 <210> 8 <211> 45 <212> PRT <213> PLANT <400> 8 Lys Ser Cys Cys Arg Ser Thr Leu Gly Arg Asn Cys Tyr Asn Leu Cys 1 5 10 15 Arg Ala Arg Gly Ala Gln Lys Leu Cys Ala Gly Val Cys Arg Cys Lys 20 25 30 Ile Ser Ser Gly Leu Ser Cys Pro Lys Gly Phe Pro Lys 35 40 45 <210> 9 <211> 45 <212> PRT <213> PLANT <400> 9 Lys Ser Cys Cys Lys Ser Thr Leu Gly Arg Asn Cys Tyr Asn Leu Cys 1 5 10 15 Arg Ala Arg Gly Ala Gln Lys Leu Cys Ala Asn Val Cys Arg Cys Lys 20 25 30 Leu Thr Ser Gly Leu Ser Cys Pro Lys Asp Phe Pro Lys 35 40 45 <210> 10 <211> 45 <212> PRT <213> PLANT <400> 10 Lys Ser Cys Cys Arg Ser Thr Leu Gly Arg Asn Cys Tyr Asn Leu Cys 1 5 10 15 Arg Val Arg Gly Ala Gln Lys Leu Cys Ala Gly Val Cys Arg Cys Lys 20 25 30 Leu Thr Ser Ser Gly Lys Cys Pro Thr Gly Phe Pro Lys 35 40 45 <210> 11 <211> 45 <212> PRT <213> PLANT <400> 11 Lys Ser Cys Cys Arg Ser Thr Leu Gly Arg Asn Cys Tyr Asn Leu Cys 1 5 10 15 Arg Val Arg Gly Ala Gln Lys Leu Cys Ala Asn Ala Cys Arg Cys Lys 20 25 30 Leu Thr Ser Gly Leu Lys Cys Pro Ser Ser Phe Pro Lys 35 40 45 <210> 12 <211> 46 <212> PRT <213> PLANT <400> 12 Lys Ser Cys Cys Lys Asp Thr Leu Ala Arg Asn Cys Tyr Asn Thr Cys 1 5 10 15 His Phe Ala Gly Gly Ser Arg Pro Val Cys Ala Gly Ala Cys Arg Cys 20 25 30 Lys Ile Ile Ser Gly Pro Lys Cys Pro Ser Asp Tyr Pro Lys 35 40 45 <210> 13 <211> 46 <212> PRT <213> PLANT <400> 13 Lys Ser Cys Cys Lys Asn Thr Thr Gly Arg Asn Cys Tyr Asn Ala Cys 1 5 10 15 Arg Phe Ala Gly Gly Ser Arg Pro Val Cys Ala Thr Ala Cys Gly Cys 20 25 30 Lys Ile Ile Ser Gly Pro Thr Cys Pro Arg Asp Tyr Pro Lys 35 40 45 <210> 14 <211> 46 <212> PRT <213> PLANT <400> 14 Lys Ser Cys Cys Lys Asp Thr Leu Ala Arg Asn Cys Tyr Asn Thr Cys 1 5 10 15 Arg Phe Ala Gly Gly Ser Arg Pro Val Cys Ala Gly Ala Cys Arg Cys 20 25 30 Lys Ile Ile Ser Gly Pro Lys Cys Pro Ser Asp Tyr Pro Lys 35 40 45 <210> 15 <211> 46 <212> PRT <213> PLANT <400> 15 Lys Ser Cys Cys Pro Asx Thr Thr Gly Arg Asx Ile Tyr Asx Thr Cys 1 5 10 15 Arg Phe Gly Gly Gly Ser Arg Glx Val Cys Ala Arg Ile Ser Gly Cys 20 25 30 Lys Ile Ile Ser Ala Ser Thr Cys Pro Ser Tyr Pro Asx Lys 35 40 45 <210> 16 <211> 46 <212> PRT <213> PLANT <400> 16 Lys Ser Cys Cys Pro Asn Thr Thr Gly Arg Asn Ile Tyr Asn Thr Cys 1 5 10 15 Arg Phe Gly Gly Gly Ser Arg Glu Val Cys Ala Ser Leu Ser Gly Cys 20 25 30 Lys Ile Ile Ser Ala Ser Thr Cys Pro Ser Tyr Pro Asp Lys 35 40 45 <210> 17 <211> 46 <212> PRT <213> PLANT <400> 17 Lys Ser Cys Cys Pro Asn Thr Thr Gly Arg Asn Ile Tyr Asn Ala Cys 1 5 10 15 Arg Leu Thr Gly Ala Pro Arg Pro Thr Cys Ala Lys Leu Ser Gly Cys 20 25 30 Lys Ile Ile Ser Gly Ser Thr Cys Pro Ser Asp Tyr Pro Lys 35 40 45 <210> 18 <211> 46 <212> PRT <213> PLANT <400> 18 Thr Thr Cys Cys Pro Ser Ile Val Ala Arg Ser Asn Phe Asn Val Cys 1 5 10 15 Arg Leu Pro Gly Thr Ser Glu Ala Ile Cys Ala Thr Tyr Thr Gly Cys 20 25 30 Ile Ile Ile Pro Gly Ala Thr Cys Pro Gly Asp Tyr Ala Asn 35 40 45 <210> 19 <211> 111 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 19 ctgctgggtg atttcttccg gaaatctaaa gagaagattg gcaaagagtt taaaagaatt 60 gtccagagaa tcaaggattt tttgcggaat cttgtaccca ggacagagtc c 111 <210> 20 <211> 96 <212> DNA <213> RABBIT <400> 20 gggctgcgca agcgcttacg aaaatttaga aacaagatta aagaaaagct taaaaaaatt 60 ggtcagaaaa tccagggttt gctgccgaaa cttgca 96 <210> 21 <211> 78 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: artificialy synthsized polynucleotide <400> 21 gggctgcgca agcgcttacg aaaatttaga aacaagatta aagaaaagct taaaaaaatt 60 ggtcagaaaa tcaargay 78 <210> 22 <211> 72 <212> DNA <213> rabbit <400> 22 gggctgcgca agcgcttacg aaaatttaga aacaagatta aagaaaagct taaaaaaatt 60 ggtcagaaaa tc 72 <210> 23 <211> 72 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: artificialy synthesized polynucleotide <400> 23 gggctgcgca agcgcttacg aaaatttaga aacaagatta aagaaaagct taaaaaaatt 60 ggtcagaaag ay 72 <210> 24 <211> 60 <212> DNA <213> rabbit <400> 24 gggctgcgca agcgcttacg aaaatttaga aacaagatta aagaaaagct taaaaaaatt 60 <210> 25 <211> 135 <212> DNA <213> plant <400> 25 aagagttgct gcaggaccac cctgggaaga aactgctaca acctttgccg ctcccgtggt 60 gctcagaagt tatgctcaac cgtctgtagg tgtaaactca caagtggcct aagctgcccc 120 aaaggtttcc ctaaa 135 <210> 26 <211> 135 <212> DNA <213> plant <400> 26 aagagctgct gcaggagcac cctgggaaga aactgctaca acctttgccg cgcccgtggt 60 gctcagaagt tatgcgcagg cgtctgtagg tgtaaaatct caagtggcct aagctgccct 120 aaaggcttcc ctaaa 135 <210> 27 <211> 135 <212> DNA <213> plant <400> 27 aagagttgct gcaagagcac cctaggaaga aactgctaca acctttgccg cgcccgtggt 60 gctcagaagt tatgcgcaaa cgtttgcagg tgtaaactca caagtggcct aagctgccct 120 aaggacttcc ctaaa 135 <210> 28 <211> 135 <212> DNA <213> plant <400> 28 aagagttgct gcaggagcac cctaggaaga aactgctaca acctttgccg cgtccgtggt 60 gctcagaagt tatgcgcagg cgtctgtagg tgtaaactca caagtagcgg aaaatgccct 120 acaggcttcc ccaaa 135 <210> 29 <211> 135 <212> DNA <213> plant <400> 29 aagagttgct gcaggagcac cctaggaaga aattgctaca acctttgccg cgtccgtggt 60 gctcagaagt tatgcgcaaa cgcgtgtagg tgtaaactca caagtggcct aaaatgccct 120 tcaagcttcc caaaa 135 <210> 30 <211> 138 <212> DNA <213> plant <400> 30 aaaagttgct gcaaggacac gttagctaga aactgctaca acacttgcca tttcgcgggt 60 ggttcccgtc cagtctgcgc aggtgcttgt cgttgtaaaa tcataagtgg tccaaaatgc 120 cctagtgact atcctaaa 138 <210> 31 <211> 138 <212> DNA <213> plant <400> 31 aagagttgct gcaagaacac gacgggcaga aactgctaca acgcctgccg tttcgctggt 60 ggttcccgac cagtctgcgc aactgcttgt ggttgtaaaa tcataagcgg cccaacatgt 120 cctagggact atcctaag 138 <210> 32 <211> 138 <212> DNA <213> plant <400> 32 aaaagttgct gcaaggacac gttagctaga aactgctaca acacttgccg tttcgcgggt 60 ggttcccgtc cagtctgcgc aggtgcttgt cgttgtaaaa tcataagtgg tccaaaatgc 120 cctagtgact atcctaaa 138 <210> 33 <211> 46 <212> PRT <213> plant <400> 33 Lys Ser Cys Cys Pro Ser Thr Ala Ala Arg Asn Cys Tyr Asn Val Cys 1 5 10 15 Arg Phe Pro Gly Thr Pro Arg Pro Val Cys Ala Ala Thr Cys Gly Cys 20 25 30 Lys Ile Ile Thr Gly Thr Lys Cys Pro Pro Asp Tyr Pro Lys 35 40 45 <210> 34 <211> 45 <212> PRT <213> plant <400> 34 Lys Ser Cys Cys Lys Ser Thr Leu Gly Arg Asn Cys Tyr Asn Leu Cys 1 5 10 15 Arg Thr Arg Gly Ala Gln Lys Leu Cys Ala Asn Phe Cys Arg Cys Lys 20 25 30 Leu Ile Ser Ser Thr Ser Cys Pro Lys Glu Phe Pro Lys 35 40 45 <210> 35 <211> 138 <212> DNA <213> PLANT <400> 35 aagagttgtt gcccatccac cgctgcgaga aattgctata acgtttgtcg tttcccgggt 60 acgccccggc cggtttgtgc ggcaacttgt ggttgtaaaa ttattactgg taccaagtgt 120 cctcctgact accccaag 138 <210> 36 <211> 135 <212> DNA <213> PLANT <400> 36 aagagttgct gcaagagcac cctaggaaga aactgctaca acctttgccg tacccgtggt 60 gctcagaagt tatgcgcaaa cttctgtcgg tgtaaactca taagtagcac aagctgccct 120 aaagaattcc ctaaa 135 <210> 37 <211> 142 <212> PRT <213> RABBIT <400> 37 Gln Asp Leu Thr Tyr Arg Glu Ala Val Leu Arg Ala Val Asp Ala Phe 1 5 10 15 Asn Gln Gln Ser Ser Glu Ala Asn Leu Tyr Arg Leu Leu Ser Met Asp 20 25 30 Pro Gln Gln Leu Glu Asp Ala Lys Pro Tyr Thr Pro Gln Pro Val Ser 35 40 45 Phe Thr Val Lys Glu Thr Glu Cys Pro Arg Thr Thr Trp Lys Leu Pro 50 55 60 Glu Gln Cys Asp Phe Lys Glu Asp Gly Leu Val Lys Arg Cys Val Gly 65 70 75 80 Thr Val Thr Arg Tyr Gln Ala Trp Asp Ser Phe Asp Ile Arg Cys Asn 85 90 95 Arg Ala Gln Glu Ser Pro Glu Pro Thr Gly Leu Arg Lys Arg Leu Arg 100 105 110 Lys Phe Arg Asn Lys Ile Lys Glu Lys Leu Lys Lys Ile Gly Gln Lys 115 120 125 Ile Gln Gly Leu Leu Pro Lys Leu Ala Pro Arg Thr Asp Tyr 130 135 140 <210> 38 <211> 170 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 38 Met Lys Thr Gln Arg Asp Gly His Ser Leu Gly Arg Trp Ser Leu Val 1 5 10 15 Leu Leu Leu Leu Gly Leu Val Met Pro Leu Ala Ile Ile Ala Gln Val 20 25 30 Leu Ser Tyr Lys Glu Ala Val Leu Arg Ala Ile Asp Gly Ile Asn Gln 35 40 45 Arg Ser Ser Asp Ala Asn Leu Tyr Arg Leu Leu Asp Leu Asp Pro Arg 50 55 60 Pro Thr Met Asp Gly Asp Pro Asp Thr Pro Lys Pro Val Ser Phe Thr 65 70 75 80 Val Lys Glu Thr Val Cys Pro Arg Thr Thr Gln Gln Ser Pro Glu Asp 85 90 95 Cys Asp Phe Lys Lys Asp Gly Leu Val Lys Arg Cys Met Gly Thr Val 100 105 110 Thr Leu Asn Gln Ala Arg Gly Ser Phe Asp Ile Ser Cys Asp Lys Asp 115 120 125 Asn Lys Arg Phe Ala Leu Leu Gly Asp Phe Phe Arg Lys Ser Lys Glu 130 135 140 Lys Ile Gly Lys Glu Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Lys Asp Phe 145 150 155 160 Leu Arg Asn Leu Val Pro Arg Thr Glu Ser 165 170[Sequence list]                                SEQUENCE LISTING <110> KABUSHIKIKAISHA TOYOTA CHUO KENKYUSHO <120> Compositions For Disease inducible organisms and Use       Thereof <130> 010735 (010-03500) <140> <141> <160> 38 <170> PatentIn Ver. 2.1 <210> 1 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Leu Leu Gly Asp Phe Phe Arg Lys Ser Lys Glu Lys Ile Gly Lys Glu   1 5 10 15 Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Lys Asp Phe Leu Arg Asn Leu Val              20 25 30 <210> 2 <211> 32 <212> PRT <213> RABBIT <400> 2 Gly Leu Arg Lys Arg Leu Arg Lys Phe Arg Asn Lys Ile Lys Glu Lys   1 5 10 15 Leu Lys Lys Ile Gly Gln Lys Ile Gln Gly Leu Leu Pro Lys Leu Ala              20 25 30 <210> 3 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: DESIGNED       POLYPEPTIDE BASED ON THE SEQUENSE OF CAP18 OF       RABBIT <400> 3 Gly Leu Arg Lys Arg Leu Arg Lys Phe Arg Asn Lys Ile Lys Glu Lys   1 5 10 15 Leu Lys Lys Ile Gly Gln Lys Ile Lys Asp              20 25 <210> 4 <211> 24 <212> PRT <213> RABBIT <400> 4 Gly Leu Arg Lys Arg Leu Arg Lys Phe Arg Asn Lys Ile Lys Glu Lys   1 5 10 15 Leu Lys Lys Ile Gly Gln Lys Ile              20 <210> 5 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: DESIGNED       POLYPEPTIDE BASED ON THE SEQUENCE OF CAP18 OF       RABBIT <400> 5 Gly Leu Arg Lys Arg Leu Arg Lys Phe Arg Asn Lys Ile Lys Glu Lys   1 5 10 15 Leu Lys Lys Ile Gly Gln Lys Asp              20 <210> 6 <211> 20 <212> PRT <213> RABBIT <400> 6 Gly Leu Arg Lys Arg Leu Arg Lys Phe Arg Asn Lys Ile Lys Glu Lys   1 5 10 15 Leu Lys Lys Ile              20 <210> 7 <211> 45 <212> PRT <213> PLANT <400> 7 Lys Ser Cys Cys Arg Thr Thr Leu Gly Arg Asn Cys Tyr Asn Leu Cys   1 5 10 15 Arg Ser Arg Gly Ala Gln Lys Leu Cys Ser Thr Val Cys Arg Cys Lys              20 25 30 Leu Thr Ser Gly Leu Ser Cys Pro Lys Gly Phe Pro Lys          35 40 45 <210> 8 <211> 45 <212> PRT <213> PLANT <400> 8 Lys Ser Cys Cys Arg Ser Thr Leu Gly Arg Asn Cys Tyr Asn Leu Cys   1 5 10 15 Arg Ala Arg Gly Ala Gln Lys Leu Cys Ala Gly Val Cys Arg Cys Lys              20 25 30 Ile Ser Ser Gly Leu Ser Cys Pro Lys Gly Phe Pro Lys          35 40 45 <210> 9 <211> 45 <212> PRT <213> PLANT <400> 9 Lys Ser Cys Cys Lys Ser Thr Leu Gly Arg Asn Cys Tyr Asn Leu Cys   1 5 10 15 Arg Ala Arg Gly Ala Gln Lys Leu Cys Ala Asn Val Cys Arg Cys Lys              20 25 30 Leu Thr Ser Gly Leu Ser Cys Pro Lys Asp Phe Pro Lys          35 40 45 <210> 10 <211> 45 <212> PRT <213> PLANT <400> 10 Lys Ser Cys Cys Arg Ser Thr Leu Gly Arg Asn Cys Tyr Asn Leu Cys   1 5 10 15 Arg Val Arg Gly Ala Gln Lys Leu Cys Ala Gly Val Cys Arg Cys Lys              20 25 30 Leu Thr Ser Ser Gly Lys Cys Pro Thr Gly Phe Pro Lys          35 40 45 <210> 11 <211> 45 <212> PRT <213> PLANT <400> 11 Lys Ser Cys Cys Arg Ser Thr Leu Gly Arg Asn Cys Tyr Asn Leu Cys   1 5 10 15 Arg Val Arg Gly Ala Gln Lys Leu Cys Ala Asn Ala Cys Arg Cys Lys              20 25 30 Leu Thr Ser Gly Leu Lys Cys Pro Ser Ser Phe Pro Lys          35 40 45 <210> 12 <211> 46 <212> PRT <213> PLANT <400> 12 Lys Ser Cys Cys Lys Asp Thr Leu Ala Arg Asn Cys Tyr Asn Thr Cys   1 5 10 15 His Phe Ala Gly Gly Ser Arg Pro Val Cys Ala Gly Ala Cys Arg Cys              20 25 30 Lys Ile Ile Ser Gly Pro Lys Cys Pro Ser Asp Tyr Pro Lys          35 40 45 <210> 13 <211> 46 <212> PRT <213> PLANT <400> 13 Lys Ser Cys Cys Lys Asn Thr Thr Gly Arg Asn Cys Tyr Asn Ala Cys   1 5 10 15 Arg Phe Ala Gly Gly Ser Arg Pro Val Cys Ala Thr Ala Cys Gly Cys              20 25 30 Lys Ile Ile Ser Gly Pro Thr Cys Pro Arg Asp Tyr Pro Lys          35 40 45 <210> 14 <211> 46 <212> PRT <213> PLANT <400> 14 Lys Ser Cys Cys Lys Asp Thr Leu Ala Arg Asn Cys Tyr Asn Thr Cys   1 5 10 15 Arg Phe Ala Gly Gly Ser Arg Pro Val Cys Ala Gly Ala Cys Arg Cys              20 25 30 Lys Ile Ile Ser Gly Pro Lys Cys Pro Ser Asp Tyr Pro Lys          35 40 45 <210> 15 <211> 46 <212> PRT <213> PLANT <400> 15 Lys Ser Cys Cys Pro Asx Thr Thr Gly Arg Asx Ile Tyr Asx Thr Cys   1 5 10 15 Arg Phe Gly Gly Gly Ser Arg Glx Val Cys Ala Arg Ile Ser Gly Cys              20 25 30 Lys Ile Ile Ser Ala Ser Thr Cys Pro Ser Tyr Pro Asx Lys          35 40 45 <210> 16 <211> 46 <212> PRT <213> PLANT <400> 16 Lys Ser Cys Cys Pro Asn Thr Thr Gly Arg Asn Ile Tyr Asn Thr Cys   1 5 10 15 Arg Phe Gly Gly Gly Ser Arg Glu Val Cys Ala Ser Leu Ser Gly Cys              20 25 30 Lys Ile Ile Ser Ala Ser Thr Cys Pro Ser Tyr Pro Asp Lys          35 40 45 <210> 17 <211> 46 <212> PRT <213> PLANT <400> 17 Lys Ser Cys Cys Pro Asn Thr Thr Gly Arg Asn Ile Tyr Asn Ala Cys   1 5 10 15 Arg Leu Thr Gly Ala Pro Arg Pro Thr Cys Ala Lys Leu Ser Gly Cys              20 25 30 Lys Ile Ile Ser Gly Ser Thr Cys Pro Ser Asp Tyr Pro Lys          35 40 45 <210> 18 <211> 46 <212> PRT <213> PLANT <400> 18 Thr Thr Cys Cys Pro Ser Ile Val Ala Arg Ser Asn Phe Asn Val Cys   1 5 10 15 Arg Leu Pro Gly Thr Ser Glu Ala Ile Cys Ala Thr Tyr Thr Gly Cys              20 25 30 Ile Ile Ile Pro Gly Ala Thr Cys Pro Gly Asp Tyr Ala Asn          35 40 45 <210> 19 <211> 111 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 19 ctgctgggtg atttcttccg gaaatctaaa gagaagattg gcaaagagtt taaaagaatt 60 gtccagagaa tcaaggattt tttgcggaat cttgtaccca ggacagagtc c 111 <210> 20 <211> 96 <212> DNA <213> RABBIT <400> 20 gggctgcgca agcgcttacg aaaatttaga aacaagatta aagaaaagct taaaaaaatt 60 ggtcagaaaa tccagggttt gctgccgaaa cttgca 96 <210> 21 <211> 78 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: artificialy       synthsized polynucleotide <400> 21 gggctgcgca agcgcttacg aaaatttaga aacaagatta aagaaaagct taaaaaaatt 60 ggtcagaaaa tcaargay 78 <210> 22 <211> 72 <212> DNA <213> rabbit <400> 22 gggctgcgca agcgcttacg aaaatttaga aacaagatta aagaaaagct taaaaaaatt 60 ggtcagaaaa tc 72 <210> 23 <211> 72 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: artificialy       synthesized polynucleotide <400> 23 gggctgcgca agcgcttacg aaaatttaga aacaagatta aagaaaagct taaaaaaatt 60 ggtcagaaag ay 72 <210> 24 <211> 60 <212> DNA <213> rabbit <400> 24 gggctgcgca agcgcttacg aaaatttaga aacaagatta aagaaaagct taaaaaaatt 60 <210> 25 <211> 135 <212> DNA <213> plant <400> 25 aagagttgct gcaggaccac cctgggaaga aactgctaca acctttgccg ctcccgtggt 60 gctcagaagt tatgctcaac cgtctgtagg tgtaaactca caagtggcct aagctgcccc 120 aaaggtttcc ctaaa 135 <210> 26 <211> 135 <212> DNA <213> plant <400> 26 aagagctgct gcaggagcac cctgggaaga aactgctaca acctttgccg cgcccgtggt 60 gctcagaagt tatgcgcagg cgtctgtagg tgtaaaatct caagtggcct aagctgccct 120 aaaggcttcc ctaaa 135 <210> 27 <211> 135 <212> DNA <213> plant <400> 27 aagagttgct gcaagagcac cctaggaaga aactgctaca acctttgccg cgcccgtggt 60 gctcagaagt tatgcgcaaa cgtttgcagg tgtaaactca caagtggcct aagctgccct 120 aaggacttcc ctaaa 135 <210> 28 <211> 135 <212> DNA <213> plant <400> 28 aagagttgct gcaggagcac cctaggaaga aactgctaca acctttgccg cgtccgtggt 60 gctcagaagt tatgcgcagg cgtctgtagg tgtaaactca caagtagcgg aaaatgccct 120 acaggcttcc ccaaa 135 <210> 29 <211> 135 <212> DNA <213> plant <400> 29 aagagttgct gcaggagcac cctaggaaga aattgctaca acctttgccg cgtccgtggt 60 gctcagaagt tatgcgcaaa cgcgtgtagg tgtaaactca caagtggcct aaaatgccct 120 tcaagcttcc caaaa 135 <210> 30 <211> 138 <212> DNA <213> plant <400> 30 aaaagttgct gcaaggacac gttagctaga aactgctaca acacttgcca tttcgcgggt 60 ggttcccgtc cagtctgcgc aggtgcttgt cgttgtaaaa tcataagtgg tccaaaatgc 120 cctagtgact atcctaaa 138 <210> 31 <211> 138 <212> DNA <213> plant <400> 31 aagagttgct gcaagaacac gacgggcaga aactgctaca acgcctgccg tttcgctggt 60 ggttcccgac cagtctgcgc aactgcttgt ggttgtaaaa tcataagcgg cccaacatgt 120 cctagggact atcctaag 138 <210> 32 <211> 138 <212> DNA <213> plant <400> 32 aaaagttgct gcaaggacac gttagctaga aactgctaca acacttgccg tttcgcgggt 60 ggttcccgtc cagtctgcgc aggtgcttgt cgttgtaaaa tcataagtgg tccaaaatgc 120 cctagtgact atcctaaa 138 <210> 33 <211> 46 <212> PRT <213> plant <400> 33 Lys Ser Cys Cys Pro Ser Thr Ala Ala Arg Asn Cys Tyr Asn Val Cys   1 5 10 15 Arg Phe Pro Gly Thr Pro Arg Pro Val Cys Ala Ala Thr Cys Gly Cys              20 25 30 Lys Ile Ile Thr Gly Thr Lys Cys Pro Pro Asp Tyr Pro Lys          35 40 45 <210> 34 <211> 45 <212> PRT <213> plant <400> 34 Lys Ser Cys Cys Lys Ser Thr Leu Gly Arg Asn Cys Tyr Asn Leu Cys   1 5 10 15 Arg Thr Arg Gly Ala Gln Lys Leu Cys Ala Asn Phe Cys Arg Cys Lys              20 25 30 Leu Ile Ser Ser Thr Ser Cys Pro Lys Glu Phe Pro Lys          35 40 45 <210> 35 <211> 138 <212> DNA <213> PLANT <400> 35 aagagttgtt gcccatccac cgctgcgaga aattgctata acgtttgtcg tttcccgggt 60 acgccccggc cggtttgtgc ggcaacttgt ggttgtaaaa ttattactgg taccaagtgt 120 cctcctgact accccaag 138 <210> 36 <211> 135 <212> DNA <213> PLANT <400> 36 aagagttgct gcaagagcac cctaggaaga aactgctaca acctttgccg tacccgtggt 60 gctcagaagt tatgcgcaaa cttctgtcgg tgtaaactca taagtagcac aagctgccct 120 aaagaattcc ctaaa 135 <210> 37 <211> 142 <212> PRT <213> RABBIT <400> 37 Gln Asp Leu Thr Tyr Arg Glu Ala Val Leu Arg Ala Val Asp Ala Phe   1 5 10 15 Asn Gln Gln Ser Ser Glu Ala Asn Leu Tyr Arg Leu Leu Ser Met Asp              20 25 30 Pro Gln Gln Leu Glu Asp Ala Lys Pro Tyr Thr Pro Gln Pro Val Ser          35 40 45 Phe Thr Val Lys Glu Thr Glu Cys Pro Arg Thr Thr Trp Lys Leu Pro      50 55 60 Glu Gln Cys Asp Phe Lys Glu Asp Gly Leu Val Lys Arg Cys Val Gly  65 70 75 80 Thr Val Thr Arg Tyr Gln Ala Trp Asp Ser Phe Asp Ile Arg Cys Asn                  85 90 95 Arg Ala Gln Glu Ser Pro Glu Pro Thr Gly Leu Arg Lys Arg Leu Arg             100 105 110 Lys Phe Arg Asn Lys Ile Lys Glu Lys Leu Lys Lys Ile Gly Gln Lys         115 120 125 Ile Gln Gly Leu Leu Pro Lys Leu Ala Pro Arg Thr Asp Tyr     130 135 140 <210> 38 <211> 170 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 38 Met Lys Thr Gln Arg Asp Gly His Ser Leu Gly Arg Trp Ser Leu Val   1 5 10 15 Leu Leu Leu Leu Gly Leu Val Met Pro Leu Ala Ile Ile Ala Gln Val              20 25 30 Leu Ser Tyr Lys Glu Ala Val Leu Arg Ala Ile Asp Gly Ile Asn Gln          35 40 45 Arg Ser Ser Asp Ala Asn Leu Tyr Arg Leu Leu Asp Leu Asp Pro Arg      50 55 60 Pro Thr Met Asp Gly Asp Pro Asp Thr Pro Lys Pro Val Ser Phe Thr  65 70 75 80 Val Lys Glu Thr Val Cys Pro Arg Thr Thr Gln Gln Ser Pro Glu Asp                  85 90 95 Cys Asp Phe Lys Lys Asp Gly Leu Val Lys Arg Cys Met Gly Thr Val             100 105 110 Thr Leu Asn Gln Ala Arg Gly Ser Phe Asp Ile Ser Cys Asp Lys Asp         115 120 125 Asn Lys Arg Phe Ala Leu Leu Gly Asp Phe Phe Arg Lys Ser Lys Glu     130 135 140 Lys Ile Gly Lys Glu Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile Lys Asp Phe 145 150 155 160 Leu Arg Asn Leu Val Pro Arg Thr Glu Ser                 165 170

【図面の簡単な説明】[Brief description of drawings]

【図１】実施例１における、ポリペプチド濃度と発育阻
害率との用量曲線を示すグラフ図である。FIG. 1 is a graph showing a dose curve of polypeptide concentration and growth inhibition rate in Example 1.

【図２】実施例２における、ポリペプチド濃度と発育阻
害率との用量曲線を示すグラフ図である。FIG. 2 is a graph showing a dose curve of polypeptide concentration and growth inhibition rate in Example 2.

【図３】実施例３における、ポリペプチド濃度と発育阻
害率との用量曲線を示すグラフ図である。FIG. 3 is a graph showing a dose curve of polypeptide concentration and growth inhibition rate in Example 3.

【図４】実施例４における、ポリペプチド濃度と発育阻
害率との用量曲線を示すグラフ図である。FIG. 4 is a graph showing a dose curve of polypeptide concentration and growth inhibition rate in Example 4.

【図５】実施例５における、ポリペプチド濃度と発育阻
害率との用量曲線を示すグラフ図である。FIG. 5 is a graph showing a dose curve of polypeptide concentration and growth inhibition rate in Example 5.

【図６】実施例６における、ポリペプチド濃度と発育阻
害率との用量曲線を示すグラフ図である。FIG. 6 is a graph showing a dose curve of polypeptide concentration and growth inhibition rate in Example 6.

【図７】実施例７における、ポリペプチド濃度と発育阻
害率との用量曲線を示すグラフ図である。FIG. 7 is a graph showing a dose curve of polypeptide concentration and growth inhibition rate in Example 7.

【図８】実施例８における、ポリペプチド濃度と発育阻
害率との用量曲線を示すグラフ図である。FIG. 8 is a graph showing a dose curve of polypeptide concentration and growth inhibition rate in Example 8.

【図９】実施例９における、ポリペプチド濃度と発育阻
害率との用量曲線を示すグラフ図である。FIG. 9 is a graph showing a dose curve of polypeptide concentration and growth inhibition rate in Example 9.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ０７Ｋ 14/415 5/10 14/47 // Ｃ０７Ｋ 14/415 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 14/47 5/00 Ｃ (72)発明者 村本 伸彦 愛知県愛知郡長久手町大字長湫字横道41番 地の１ 株式会社豊田中央研究所内 (72)発明者 平井 正名 愛知県愛知郡長久手町大字長湫字横道41番 地の１ 株式会社豊田中央研究所内 Ｆターム(参考） 2B030 AA02 AB03 AD05 CA06 CA17 CA19 CB03 CD03 CD10 4B024 AA07 CA04 CA05 4B065 AB01 BA01 CA24 CA47 4H011 AA01 AA03 BC19 DH11 4H045 AA10 AA30 BA10 CA32 CA40 EA06 ─────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of front page (51) Int.Cl. 7 Identification code FI theme code (reference) C12N 1/21 C07K 14/415 5/10 14/47 // C07K 14/415 C12N 15/00 ZNAA 14 / 47 5/00 C (72) Inventor Nobuhiko Muramoto, Nagakute-cho, Aichi-gun, Aichi Nagalete 1 1 of 41 Yokochi, Toyota Central Research Institute Co., Ltd. (72) Masami Hirai Nagakute, Aichi-gun, Nagakute-cho 1st at Yokomichi 41 F-term inside Toyota Central Research Institute Co., Ltd. (reference) 2B030 AA02 AB03 AD05 CA06 CA17 CA19 CB03 CD03 CD10 4B024 AA07 CA04 CA05 4B065 AB01 BA01 CA24 CA47 4H011 AA01 AA03 BC19 DH11 4H045 AA10 AA30 BA06 CA32 CA40 CA32 CA40 CA32 CA40 CA32 CA40 CA40

Claims (14)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項１】ポリペプチド組成物であって、 以下のポリペプチド： （ａ）α−へリックス構造を有するポリペプチドの１種
あるいは２種以上、及び（ｂ）チオニンの１種あるいは
２種以上、を有効成分として含有する、組成物。1. A polypeptide composition comprising the following polypeptides: (a) one or more species of a polypeptide having an α-helix structure, and (b) one or more species of thionine. A composition containing, as an active ingredient. 【請求項２】ポリペプチド組成物であって、 以下のポリペプチド： （ａ）α−へリックス構造を有するポリペプチドの１種
あるいは２種以上、及び（ｂ）チオニンの１種あるいは
２種以上、を病害生物に対して供給するための組成物で
あり、 前記（ａ）のポリペプチドおよび／または前記（ｂ）の
ポリペプチドを有効成分として含有する、組成物。2. A polypeptide composition comprising the following polypeptides: (a) one or more kinds of polypeptides having an α-helix structure, and (b) one or more kinds of thionine Is a composition for supplying a pest to a pest, and contains the polypeptide of (a) and / or the polypeptide of (b) as an active ingredient. 【請求項３】前記（ａ）のポリペプチドは、配列番号：
１〜６のいずれかに示すアミノ酸配列からなる、又は、
配列番号：１〜６のいずれかに記載のアミノ酸配列にお
いて１個もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、
および／または付加されたアミノ酸配列からなる、請求
項１又は２記載の組成物。3. The polypeptide of (a) above has a SEQ ID NO:
Consisting of the amino acid sequence shown in any of 1 to 6, or
In the amino acid sequence of any of SEQ ID NOs: 1 to 6, one or several amino acids are substituted, deleted, inserted,
The composition according to claim 1 or 2, which consists of an amino acid sequence and / or an added amino acid sequence. 【請求項４】前記（ｂ）のポリペプチドは、配列番号：
７〜１８、３３および３４のいずれかに記載されるアミ
ノ酸配列からなる、又は、配列番号：７〜１８、３３お
よび３４のいずれかに記載のアミノ酸配列において１個
もしくは数個のアミノ酸が置換、欠失、挿入、および／
または付加されたアミノ酸配列からなる、請求項１〜３
のいずれかに記載の組成物。4. The polypeptide of (b) above has a SEQ ID NO:
Consisting of the amino acid sequence described in any of 7 to 18, 33 and 34, or one or several amino acids substituted in the amino acid sequence described in any of SEQ ID NOs: 7 to 18, 33 and 34, Deletions, insertions, and / or
Or consisting of an added amino acid sequence.
The composition according to any one of 1. 【請求項５】核酸構築物を含有する組成物であって、 前記核酸構築物は、植物組織に導入されて、以下のポリ
ペプチド： （ａ）α−へリックス構造を有するポリペプチドの１種
あるいは２種以上、及び（ｂ）チオニンの１種あるいは
２種以上、を産生させるための核酸構築物であり、 前記（ａ）のポリペプチドのアミノ酸配列および／また
は前記（ｂ）のポリペプチドのアミノ酸配列をコードす
るポリヌクレオチドを有する１種あるいは２種以上の核
酸構築物を含有する、組成物。5. A composition containing a nucleic acid construct, wherein the nucleic acid construct is introduced into a plant tissue and has the following polypeptide: (a) one or two of the polypeptides having an α-helix structure. A nucleic acid construct for producing at least one species, and (b) one or more species of thionine, comprising the amino acid sequence of the polypeptide of (a) and / or the amino acid sequence of the polypeptide of (b). A composition comprising one or more nucleic acid constructs having an encoding polynucleotide. 【請求項６】前記核酸構築物の少なくとも１種は、配列
番号：１９〜２４のいずれかに記載の塩基配列を有する
ポリヌクレオチドを有する、請求項５記載の組成物。6. The composition according to claim 5, wherein at least one kind of the nucleic acid construct has a polynucleotide having the nucleotide sequence of any of SEQ ID NOs: 19 to 24. 【請求項７】前記核酸構築物の少なくとも１種は、配列
番号：２５〜３２、３５および３６のいずれかに記載の
塩基配列を有する、請求項５又は６に記載の組成物。7. The composition according to claim 5 or 6, wherein at least one of the nucleic acid constructs has the nucleotide sequence of any of SEQ ID NOs: 25 to 32, 35 and 36. 【請求項８】１種以上の核酸構築物が導入されて形質転
換され、以下のポリペプチド： （ａ）α−へリックス構造を有するポリペプチドの１種
あるいは２種以上、及び（ｂ）チオニンの１種あるいは
２種以上、を産生する形質転換植物組織。8. One or more nucleic acid constructs are introduced and transformed to obtain the following polypeptides: (a) one or more polypeptides having an α-helix structure, and (b) thionine. A transformed plant tissue producing one or more species. 【請求項９】１種以上の核酸構築物が導入されて形質転
換され、以下のポリペプチド： （ａ）α−へリックス構造を有するポリペプチドの１種
あるいは２種以上、及び（ｂ）チオニンの１種あるいは
２種以上、を産生する形質転換細胞。9. One or more nucleic acid constructs are introduced and transformed to obtain the following polypeptides: (a) one or more polypeptides having an α-helix structure, and (b) thionine. A transformed cell that produces one or more species. 【請求項１０】病害生物の防除方法であって、病害生物
の生存しうる環境あるいは生物体において、以下のポリ
ペプチド： （ａ）α−へリックス構造を有するポリペプチドの１種
あるいは２種以上、及び（ｂ）チオニンの１種あるいは
２種以上、を存在させる、方法。10. A method for controlling a pest, comprising the following polypeptide in the environment or organism in which the pest can survive: (a) one or more polypeptides having an α-helix structure. And (b) one or more of thionine are present. 【請求項１１】請求項１〜４のいずれかに記載の組成物
を、前記環境あるいは生物体の外部から供給する工程を
有する、請求項１０記載の防除方法。11. A method for controlling a pest according to claim 10, comprising a step of supplying the composition according to any one of claims 1 to 4 from the outside of the environment or an organism. 【請求項１２】前記環境において、請求項８記載の形質
転換植物組織である植物体を栽培する工程を有する、請
求項１０記載の防除方法。12. The control method according to claim 10, which comprises a step of cultivating a plant which is the transformed plant tissue according to claim 8 in the environment. 【請求項１３】植物病害生物の防除方法であって、以下
のポリペプチド： （ａ）α−へリックス構造を有するポリペプチドの１種
あるいは２種以上、及び（ｂ）チオニンの１種あるいは
２種以上、を産生する植物体を栽培する工程を有する、
方法。13. A method for controlling plant pests, which comprises the following polypeptides: (a) one or more polypeptides having an α-helix structure, and (b) one or two thionines. Seed or more, having a step of cultivating a plant that produces,
Method. 【請求項１４】栽培植物の生産方法であって、以下のポ
リペプチド： （ａ）α−へリックス構造を有するポリペプチドの１種
あるいは２種以上、及び（ｂ）チオニンの１種あるいは
２種以上、を産生する植物体を栽培する工程を有する、
方法。14. A method for producing a cultivated plant, which comprises the following polypeptides: (a) one or more species of a polypeptide having an α-helix structure, and (b) one or two species of thionine. The above has a step of cultivating a plant that produces
Method.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107815437A (en) * 2017-09-14 2018-03-20 江苏徐淮地区徐州农业科学研究所(江苏徐州甘薯研究中心) A kind of method of sweet potato black rot pathogen rapid, high volume production spore

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CN107815437A (en) * 2017-09-14 2018-03-20 江苏徐淮地区徐州农业科学研究所(江苏徐州甘薯研究中心) A kind of method of sweet potato black rot pathogen rapid, high volume production spore

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