JP2003194775A - タンパク質の電気泳動法 - Google Patents
タンパク質の電気泳動法Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】本発明は、熱変性の前処理工程を行わずにネイ
ティブな状態でタンパク質を迅速に解析することがで
き、なおかつより高感度な電気泳動法を提供すること。 【解決手段】タンパク質を熱変性処理することなくサイ
ズ分離の電気泳動に供することを特徴とする電気泳動
法。
ティブな状態でタンパク質を迅速に解析することがで
き、なおかつより高感度な電気泳動法を提供すること。 【解決手段】タンパク質を熱変性処理することなくサイ
ズ分離の電気泳動に供することを特徴とする電気泳動
法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、タンパク質の高
速、かつ高感度な電気泳動法に関する。
速、かつ高感度な電気泳動法に関する。
【０００２】
【従来の技術】タンパク質は、一般にはＳＤＳ−ＰＡＧ
Ｅ（ポリアクリルアミドゲル電気泳動）法に基づき、サ
イズ分離され、検出される。これをキャピラリー電気泳
動に応用したものがＳＤＳ−ＣＧＥ（キャピラリーゲル
電気泳動）であり、これをさらにマイクロチップ型電気
泳動に応用した方法として、Ｐｒｏｔｅｉｎ ２００キ
ットを用いたＡｇｉｌｅｎｔ ２１００ Ｂｉｏａｎａ
ｌｙｚｅｒ（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅ
ｓ社製）での解析が挙げられる。タンパク質は、ネイテ
ィブな状態では種々の電荷を有しており、正に荷電した
タンパク質は正電場では移動がおこらないことが考えら
れる。そのため、前記従来法では、通常、全ての被検タ
ンパク質が負電荷を有するように、前処理としてタンパ
ク質の熱変性処理を行う必要がある。熱変性処理は通
常、界面活性剤ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）溶液
と２−メルカプトエタノールまたはジチオスレイトール
などの還元剤中でタンパク質を９５〜１００℃で数分間
加熱することにより達成される。２−メルカプトエタノ
ールまたはジチオスレイトールはＳ−Ｓ結合の切断のた
めに、また、ＳＤＳは全てのタンパク質の電荷を負電荷
にするために用いられる。
Ｅ（ポリアクリルアミドゲル電気泳動）法に基づき、サ
イズ分離され、検出される。これをキャピラリー電気泳
動に応用したものがＳＤＳ−ＣＧＥ（キャピラリーゲル
電気泳動）であり、これをさらにマイクロチップ型電気
泳動に応用した方法として、Ｐｒｏｔｅｉｎ ２００キ
ットを用いたＡｇｉｌｅｎｔ ２１００ Ｂｉｏａｎａ
ｌｙｚｅｒ（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅ
ｓ社製）での解析が挙げられる。タンパク質は、ネイテ
ィブな状態では種々の電荷を有しており、正に荷電した
タンパク質は正電場では移動がおこらないことが考えら
れる。そのため、前記従来法では、通常、全ての被検タ
ンパク質が負電荷を有するように、前処理としてタンパ
ク質の熱変性処理を行う必要がある。熱変性処理は通
常、界面活性剤ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）溶液
と２−メルカプトエタノールまたはジチオスレイトール
などの還元剤中でタンパク質を９５〜１００℃で数分間
加熱することにより達成される。２−メルカプトエタノ
ールまたはジチオスレイトールはＳ−Ｓ結合の切断のた
めに、また、ＳＤＳは全てのタンパク質の電荷を負電荷
にするために用いられる。
【０００３】それ故、マイクロチップ型電気泳動により
分析工程が高速化されたとしても、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ法
やＳＤＳ−ＣＧＥ法などの従来法ではこの前処理工程の
時間は短縮されず、操作が煩雑であるという欠点を有し
ている。そのため、より迅速なタンパク質の電気泳動法
が望まれている。さらに、生体試料を解析する場合、試
料中の極めて微量のタンパク質を解析する必要があり、
より高感度な電気泳動法が望まれている。
分析工程が高速化されたとしても、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ法
やＳＤＳ−ＣＧＥ法などの従来法ではこの前処理工程の
時間は短縮されず、操作が煩雑であるという欠点を有し
ている。そのため、より迅速なタンパク質の電気泳動法
が望まれている。さらに、生体試料を解析する場合、試
料中の極めて微量のタンパク質を解析する必要があり、
より高感度な電気泳動法が望まれている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、熱変性の前
処理工程を行わずにネイティブな状態でタンパク質を迅
速に解析することができ、なおかつより高感度な電気泳
動法を提供することを目的とする。
処理工程を行わずにネイティブな状態でタンパク質を迅
速に解析することができ、なおかつより高感度な電気泳
動法を提供することを目的とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】即ち、本発明の要旨は、
［１］ タンパク質を熱変性処理することなくサイズ分
離の電気泳動に供することを特徴とする電気泳動法、
［２］ 水溶解させたタンパク質を電気泳動に供するこ
とを特徴とする前記［１］記載の電気泳動法、［３］
２つまたはそれ以上の分子量マーカーをタンパク質と共
に電気泳動に供し、該マーカーの少なくとも１つを標準
濃度と比較して低濃度とすることを特徴とする前記
［１］または［２］記載の電気泳動法、［４］ ２つま
たはそれ以上の分子量マーカーをタンパク質と共に電気
泳動に供し、該マーカーの１つを被検タンパク質の濃度
の１／１０〜１０倍の濃度にすることを特徴とする前記
［１］〜［３］いずれか記載の電気泳動法、［５］ 電
気泳動の形態が、キャピラリー電気泳動法、マイクロチ
ップ型電気泳動法およびナノチャンネル型電気泳動法か
らなる群より選択されたものである前記［１］〜［４］
いずれか記載の電気泳動法、に関する。
［１］ タンパク質を熱変性処理することなくサイズ分
離の電気泳動に供することを特徴とする電気泳動法、
［２］ 水溶解させたタンパク質を電気泳動に供するこ
とを特徴とする前記［１］記載の電気泳動法、［３］
２つまたはそれ以上の分子量マーカーをタンパク質と共
に電気泳動に供し、該マーカーの少なくとも１つを標準
濃度と比較して低濃度とすることを特徴とする前記
［１］または［２］記載の電気泳動法、［４］ ２つま
たはそれ以上の分子量マーカーをタンパク質と共に電気
泳動に供し、該マーカーの１つを被検タンパク質の濃度
の１／１０〜１０倍の濃度にすることを特徴とする前記
［１］〜［３］いずれか記載の電気泳動法、［５］ 電
気泳動の形態が、キャピラリー電気泳動法、マイクロチ
ップ型電気泳動法およびナノチャンネル型電気泳動法か
らなる群より選択されたものである前記［１］〜［４］
いずれか記載の電気泳動法、に関する。
【０００６】
【発明の実施の形態】本発明のタンパク質の電気泳動法
は、タンパク質を熱変性処理することなくサイズ分離を
目的とした電気泳動に供することを１つの大きな特徴と
する。本発明の電気泳動法は、熱変性処理を行わないこ
とにより、電気泳動の分析時間を短縮化することがで
き、操作を簡便化することができるという利点を有す
る。
は、タンパク質を熱変性処理することなくサイズ分離を
目的とした電気泳動に供することを１つの大きな特徴と
する。本発明の電気泳動法は、熱変性処理を行わないこ
とにより、電気泳動の分析時間を短縮化することがで
き、操作を簡便化することができるという利点を有す
る。
【０００７】本明細書において、タンパク質とは、複数
のアミノ酸がペプチド結合により連結された化合物をい
い、天然由来物、合成物、および短鎖のペプチドをも含
むことを意味する。
のアミノ酸がペプチド結合により連結された化合物をい
い、天然由来物、合成物、および短鎖のペプチドをも含
むことを意味する。
【０００８】本発明の電気泳動法において解析されうる
タンパク質としては、特に限定されることなく、天然由
来物、合成物およびアミノ酸以外の構成成分を含む核タ
ンパク質、糖タンパク質、リポタンパク質等を解析する
ことができるが水溶性タンパク質に特に好適に使用され
る。測定可能な分子サイズは、マーカーを適宜設定する
ことによりあらゆるサイズのタンパク質が解析可能とな
るが、特に６ｋＤａ〜２１０ｋＤａのタンパク質が好適
に解析されうる。なお、膜結合したタンパク質等は可溶
化後に本発明の電気泳動法に適用されるのが好ましい。
そのための可溶化処理は塩溶液やＥＤＴＡなどのキレー
ト剤で超音波等の機械的処理、または界面活性剤での処
理等により達成される。
タンパク質としては、特に限定されることなく、天然由
来物、合成物およびアミノ酸以外の構成成分を含む核タ
ンパク質、糖タンパク質、リポタンパク質等を解析する
ことができるが水溶性タンパク質に特に好適に使用され
る。測定可能な分子サイズは、マーカーを適宜設定する
ことによりあらゆるサイズのタンパク質が解析可能とな
るが、特に６ｋＤａ〜２１０ｋＤａのタンパク質が好適
に解析されうる。なお、膜結合したタンパク質等は可溶
化後に本発明の電気泳動法に適用されるのが好ましい。
そのための可溶化処理は塩溶液やＥＤＴＡなどのキレー
ト剤で超音波等の機械的処理、または界面活性剤での処
理等により達成される。
【０００９】本発明の電気泳動法に使用する分離用担体
としては、特に限定されるものではなく、通常のキャピ
ラリーゲル電気泳動またはマイクロチップ型ゲル電気泳
動等においてタンパク質の分子サイズ分離分析用として
使用される、ポリアクリルアミド、ポリアクリルアミド
ゲル、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシメチ
ルプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、
メチルセルロース、β−シクロデキストリン、α−シク
ロデキストリン、γ−シクロデキストリン等の分離用担
体が挙げられ、また、ＰＣＴ／ＪＰ０１／０４５１０記
載のβ−１，３グルカン構造を含むカードラン、ラミナ
ランや海藻抽出物等にも適用可能である。分離用担体の
添加剤としては、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、
Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、ε−アミノカプロン酸、３
−〔（３−コラミドプロピル）−ジメチルアミノ〕−１
−プロパン、ＣＨＡＰＳ、６〜８Ｍ尿素、テトラメチル
エチレンジアミン（ＴＥＭＥＤ）、ヘキシルトリメチル
アンモニウムブロマイド（ＨＴＡＢ）、ドデシルトリメ
チルアンモニウムブロマイド（ＤＴＡＢ）等が挙げられ
る。
としては、特に限定されるものではなく、通常のキャピ
ラリーゲル電気泳動またはマイクロチップ型ゲル電気泳
動等においてタンパク質の分子サイズ分離分析用として
使用される、ポリアクリルアミド、ポリアクリルアミド
ゲル、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシメチ
ルプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、
メチルセルロース、β−シクロデキストリン、α−シク
ロデキストリン、γ−シクロデキストリン等の分離用担
体が挙げられ、また、ＰＣＴ／ＪＰ０１／０４５１０記
載のβ−１，３グルカン構造を含むカードラン、ラミナ
ランや海藻抽出物等にも適用可能である。分離用担体の
添加剤としては、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、
Ｔｒｉｔｏｎ Ｘ−１００、ε−アミノカプロン酸、３
−〔（３−コラミドプロピル）−ジメチルアミノ〕−１
−プロパン、ＣＨＡＰＳ、６〜８Ｍ尿素、テトラメチル
エチレンジアミン（ＴＥＭＥＤ）、ヘキシルトリメチル
アンモニウムブロマイド（ＨＴＡＢ）、ドデシルトリメ
チルアンモニウムブロマイド（ＤＴＡＢ）等が挙げられ
る。
【００１０】泳動用緩衝液としては、例えば、トリス−
グリシンバッファー、トリス−ホウ酸バッファー、トリ
ス−塩酸バッファー、トリス−トリシンバッファー、ト
リス−リン酸二水素ナトリウムバッファー等や、一般に
タンパク質の電気泳動用緩衝液として使用される緩衝液
が挙げられ、市販のタンパク質電気泳動用キット中に提
供されている緩衝液等も使用することができる。前記泳
動用緩衝液は、一般にタンパク質の電気泳動用緩衝液と
して使用される濃度で使用することができる。
グリシンバッファー、トリス−ホウ酸バッファー、トリ
ス−塩酸バッファー、トリス−トリシンバッファー、ト
リス−リン酸二水素ナトリウムバッファー等や、一般に
タンパク質の電気泳動用緩衝液として使用される緩衝液
が挙げられ、市販のタンパク質電気泳動用キット中に提
供されている緩衝液等も使用することができる。前記泳
動用緩衝液は、一般にタンパク質の電気泳動用緩衝液と
して使用される濃度で使用することができる。
【００１１】泳動用緩衝液は、前記分離用担体を含有し
ていてもよい。分離用担体を泳動用緩衝液に添加して用
いることにより、操作を簡便にすることができ、解析を
より高速で行うことができる。
ていてもよい。分離用担体を泳動用緩衝液に添加して用
いることにより、操作を簡便にすることができ、解析を
より高速で行うことができる。
【００１２】泳動用緩衝液のｐＨは、適切な電気浸透流
およびタンパク質の好適な電気泳動の観点から、２．０
〜９．０が好ましく、６．８〜８．６がより好ましい。
およびタンパク質の好適な電気泳動の観点から、２．０
〜９．０が好ましく、６．８〜８．６がより好ましい。
【００１３】試料調製用溶液としては、水、ＳＤＳ溶
液、またはＳＤＳ−トリスホウ酸溶液等に２−メルカプ
トエタノールまたはジチオスレイトールを添加したもの
等を使用することができる。ピーク強度の向上、ピーク
分離度の向上、検出限界の向上、測定精度の向上の観点
から、水が特に好ましい。
液、またはＳＤＳ−トリスホウ酸溶液等に２−メルカプ
トエタノールまたはジチオスレイトールを添加したもの
等を使用することができる。ピーク強度の向上、ピーク
分離度の向上、検出限界の向上、測定精度の向上の観点
から、水が特に好ましい。
【００１４】水としては、超純水、脱イオン水、Ｍｉｌ
ｌｉＱ水等、タンパク質の電気泳動に通常使用される水
が使用されうるが、ＭｉｌｌｉＱ水が特に好ましい。
ｌｉＱ水等、タンパク質の電気泳動に通常使用される水
が使用されうるが、ＭｉｌｌｉＱ水が特に好ましい。
【００１５】また、水を試料調製用溶液として使用する
場合、ピーク強度の増強、検出限界の向上の観点から、
タンパク質を水溶解させることが好ましい。
場合、ピーク強度の増強、検出限界の向上の観点から、
タンパク質を水溶解させることが好ましい。
【００１６】試料溶液中のタンパク質の濃度としては、
測定精度の観点から、０．０５〜２０００ｎｇ／μｌが
好ましく、０．１〜２０００ｎｇ／μｌがより好まし
く、０．５〜２００ｎｇ／μｌが特に好ましい。
測定精度の観点から、０．０５〜２０００ｎｇ／μｌが
好ましく、０．１〜２０００ｎｇ／μｌがより好まし
く、０．５〜２００ｎｇ／μｌが特に好ましい。
【００１７】本発明の電気泳動法が使用されうる好まし
い形態としては、キャピラリー電気泳動、マイクロチッ
プ型電気泳動、およびナノチャネル型電気泳動が挙げら
れる。
い形態としては、キャピラリー電気泳動、マイクロチッ
プ型電気泳動、およびナノチャネル型電気泳動が挙げら
れる。
【００１８】キャピラリー電気泳動は、通常、内径が１
００μｍ以下のキャピラリー内に泳動用緩衝液を充填
し、一端側に試料を導入した後、両端間に高電圧を印加
して被検タンパク質をキャピラリー内で展開させるもの
である。キャピラリーとしては、フューヌドシリカキャ
ピラリーが通常用いられ、その内壁がコーティングされ
ていないもの、内壁がコーティングされているもの（５
０％フェニルメチルポリシロキサン、ポリエチレングリ
コール、ポリアミン等）が用いられる。また、コーティ
ングなしのものにＰＥＯ（ポリエチレンオキサイド）等
で処理したものも用いられる。
００μｍ以下のキャピラリー内に泳動用緩衝液を充填
し、一端側に試料を導入した後、両端間に高電圧を印加
して被検タンパク質をキャピラリー内で展開させるもの
である。キャピラリーとしては、フューヌドシリカキャ
ピラリーが通常用いられ、その内壁がコーティングされ
ていないもの、内壁がコーティングされているもの（５
０％フェニルメチルポリシロキサン、ポリエチレングリ
コール、ポリアミン等）が用いられる。また、コーティ
ングなしのものにＰＥＯ（ポリエチレンオキサイド）等
で処理したものも用いられる。
【００１９】キャピラリー電気泳動の形態では、本発明
の電気泳動法は、具体的には、タンパク質を含む試料を
熱変性させることなく、試料をキャピラリーにインジェ
クトし、タンパク質の分離が可能な泳動電場下にタンパ
ク質を移動させる工程、および泳動電場によりタンパク
質を泳動させる工程を含むプロセスにより行なわれる。
の電気泳動法は、具体的には、タンパク質を含む試料を
熱変性させることなく、試料をキャピラリーにインジェ
クトし、タンパク質の分離が可能な泳動電場下にタンパ
ク質を移動させる工程、および泳動電場によりタンパク
質を泳動させる工程を含むプロセスにより行なわれる。
【００２０】試料をキャピラリーにインジェクトし、タ
ンパク質の分離が可能な泳動電場下にタンパク質を移動
させる工程は、より具体的には、電圧法、加圧法、落差
法により行われるが、装置の種類や、キャピラリーの太
さ（内径）や長さ等により、電圧や加える圧力の大きさ
およびそれらに供する時間が適宜決められる。さらに、
ＰＣＴ／ＪＰ０１／０４５１０記載の方法も適用可能で
ある。
ンパク質の分離が可能な泳動電場下にタンパク質を移動
させる工程は、より具体的には、電圧法、加圧法、落差
法により行われるが、装置の種類や、キャピラリーの太
さ（内径）や長さ等により、電圧や加える圧力の大きさ
およびそれらに供する時間が適宜決められる。さらに、
ＰＣＴ／ＪＰ０１／０４５１０記載の方法も適用可能で
ある。
【００２１】キャピラリー電気泳動に使用されるキャピ
ラリーにおいて、内径、外径、全長、有効長は、特に限
定されるものではなく、通常使用されるサイズのものが
使用されうる。有効長に関して、高速での解析を可能に
する観点から、短い有効長のキャピラリーを用いること
ができる。ここで、キャピラリーの有効長とは、試料注
入口から検出部までの距離をいう。
ラリーにおいて、内径、外径、全長、有効長は、特に限
定されるものではなく、通常使用されるサイズのものが
使用されうる。有効長に関して、高速での解析を可能に
する観点から、短い有効長のキャピラリーを用いること
ができる。ここで、キャピラリーの有効長とは、試料注
入口から検出部までの距離をいう。
【００２２】キャピラリー電気泳動における泳動電場
は、良好な分離能を得、移動時間を短縮する観点から、
好ましくは、２０Ｖ／ｃｍ〜１０ｋＶ／ｃｍであり、よ
り好ましくは、５０Ｖ／ｃｍ〜５ｋＶ／ｃｍであり、特
に好ましくは１００Ｖ／ｃｍ〜１ｋＶ／ｃｍであること
が望ましい。
は、良好な分離能を得、移動時間を短縮する観点から、
好ましくは、２０Ｖ／ｃｍ〜１０ｋＶ／ｃｍであり、よ
り好ましくは、５０Ｖ／ｃｍ〜５ｋＶ／ｃｍであり、特
に好ましくは１００Ｖ／ｃｍ〜１ｋＶ／ｃｍであること
が望ましい。
【００２３】マイクロチップ型電気泳動においては、ロ
ーディングチャネルと、該ローディングチャネルに交差
する分離用チャネルとを備え、かつ該ローディングチャ
ネルの一端に試料リザーバーが配置され、該ローディン
グチャネルの他端にアウトレットが配置されたマイクロ
チップが用いられる。
ーディングチャネルと、該ローディングチャネルに交差
する分離用チャネルとを備え、かつ該ローディングチャ
ネルの一端に試料リザーバーが配置され、該ローディン
グチャネルの他端にアウトレットが配置されたマイクロ
チップが用いられる。
【００２４】マイクロチップ型電気泳動の形態では、本
発明の電気泳動法は、具体的には、タンパク質を含む試
料を熱変性させることなく、試料リザーバーに試料を供
する工程、該試料リザーバー中の試料を分離用チャネル
に導入する工程、および分離用チャネルにおいて試料を
泳動させる工程を含むプロセスにより行なわれる。
発明の電気泳動法は、具体的には、タンパク質を含む試
料を熱変性させることなく、試料リザーバーに試料を供
する工程、該試料リザーバー中の試料を分離用チャネル
に導入する工程、および分離用チャネルにおいて試料を
泳動させる工程を含むプロセスにより行なわれる。
【００２５】試料リザーバーに試料を供する工程は、よ
り具体的には、ローディングチャネルの一端の試料リザ
ーバーと他端のアウトレットに電圧をかけることにより
達成される。電圧の強さは装置により異なるが、ＳＶ１
１００（日立電子社製）の場合、５０〜８００Ｖ、通常
３００Ｖの電圧がかけられる。これにより試料がローデ
ィングチャネルと分離用チャネルの交差部に供される。
一方、ＰＣＴ／ＪＰ０１／０４５１０記載の方法も適用
可能である。
り具体的には、ローディングチャネルの一端の試料リザ
ーバーと他端のアウトレットに電圧をかけることにより
達成される。電圧の強さは装置により異なるが、ＳＶ１
１００（日立電子社製）の場合、５０〜８００Ｖ、通常
３００Ｖの電圧がかけられる。これにより試料がローデ
ィングチャネルと分離用チャネルの交差部に供される。
一方、ＰＣＴ／ＪＰ０１／０４５１０記載の方法も適用
可能である。
【００２６】試料リザーバー中の試料を分離用チャネル
に導入する工程は、より具体的には、ローディングチャ
ネルの一端の試料リザーバーとその他端のアウトレット
にスクイージング電圧をかけ、余分な試料を試料リザー
バーとその他端のアウトレット側に排出する工程および
分離用チャネルのアウトレット側と、その反対側に分離
電圧をかける工程が同時に達成される。電圧の強さは装
置により適宜選択されるが、ＳＶ１１００（日立電子社
製）の場合、前者は１３０Ｖ前後、後者は７００〜９０
０Ｖで達成される。一方、ＰＣＴ／ＪＰ０１／０４５１
０記載の方法も適用可能である。
に導入する工程は、より具体的には、ローディングチャ
ネルの一端の試料リザーバーとその他端のアウトレット
にスクイージング電圧をかけ、余分な試料を試料リザー
バーとその他端のアウトレット側に排出する工程および
分離用チャネルのアウトレット側と、その反対側に分離
電圧をかける工程が同時に達成される。電圧の強さは装
置により適宜選択されるが、ＳＶ１１００（日立電子社
製）の場合、前者は１３０Ｖ前後、後者は７００〜９０
０Ｖで達成される。一方、ＰＣＴ／ＪＰ０１／０４５１
０記載の方法も適用可能である。
【００２７】マイクロチップの材質としては、例えば、
石英ガラス、ホウケイ酸ガラス、ソーダガラス、ポリメ
チルメタクリレート、ポリカーボネート、ジメチルシロ
キサンなどが挙げられる。なかでも、試料の吸着が少な
く、チップ加工が容易である観点から、ガラス、または
ポリメチルメタクリレートが望ましい。また、キャピラ
リーと同様に内壁を加工処理したものも用いられる。
石英ガラス、ホウケイ酸ガラス、ソーダガラス、ポリメ
チルメタクリレート、ポリカーボネート、ジメチルシロ
キサンなどが挙げられる。なかでも、試料の吸着が少な
く、チップ加工が容易である観点から、ガラス、または
ポリメチルメタクリレートが望ましい。また、キャピラ
リーと同様に内壁を加工処理したものも用いられる。
【００２８】マイクロチップ型電気泳動においては、マ
イクロチップの大きさは、例えば、縦１０〜１２０ｍ
ｍ、横１０〜１２０ｍｍ、厚さ５００〜５０００μｍで
ある。
イクロチップの大きさは、例えば、縦１０〜１２０ｍ
ｍ、横１０〜１２０ｍｍ、厚さ５００〜５０００μｍで
ある。
【００２９】マイクロチップにおけるローディングチャ
ネルおよび分離用チャネルのそれぞれの形状は特に限定
されるものではない。なお、前記チャネルが一枚のチッ
プ上に３〜９６本設置された、同時に多チャネルを解析
することができるチップを使用することもできる。多チ
ャネルの並べ方は、並行、放射線状、円形状等がある
が、その形状は特に限定されるものではない。
ネルおよび分離用チャネルのそれぞれの形状は特に限定
されるものではない。なお、前記チャネルが一枚のチッ
プ上に３〜９６本設置された、同時に多チャネルを解析
することができるチップを使用することもできる。多チ
ャネルの並べ方は、並行、放射線状、円形状等がある
が、その形状は特に限定されるものではない。
【００３０】前記チャネルの幅は、マイクロチップの大
きさ、使用目的などにより適宜設定されうる。具体的に
は、チャネルの幅は、十分な解析感度を得る観点から、
０．１μｍ以上、好ましくは１０μｍ以上であり、十分
な解析精度を得る観点から、１００μｍ以下、好ましく
は５０μｍ以下であることが望ましい。また、前記チャ
ネルの深さは、マイクロチップの大きさ、使用目的など
により適宜設定されうる。具体的には、十分な解析感度
を得る観点から、０．１μｍ以上、好ましくは１０μｍ
以上であり、十分な解析精度を得る観点から、１００μ
ｍ以下、好ましくは５０μｍ以下であることが望まし
い。さらに、前記分離用チャネルの長さは、マイクロチ
ップの大きさ、解析対象の化合物に応じて適宜選択する
ことができるが、有効長を、より長くすることが望まし
い。有効長は、チャネル交差部から、高分子化合物の検
出点（分離用チャネル上に配置）までの距離をいう。十
分な分離能を得る観点から、０．１ｍｍ以上、好ましく
は１０ｍｍ以上であり、高速分離の観点から、１００ｍ
ｍ以下、好ましくは５０ｍｍ以下であることが望まし
い。
きさ、使用目的などにより適宜設定されうる。具体的に
は、チャネルの幅は、十分な解析感度を得る観点から、
０．１μｍ以上、好ましくは１０μｍ以上であり、十分
な解析精度を得る観点から、１００μｍ以下、好ましく
は５０μｍ以下であることが望ましい。また、前記チャ
ネルの深さは、マイクロチップの大きさ、使用目的など
により適宜設定されうる。具体的には、十分な解析感度
を得る観点から、０．１μｍ以上、好ましくは１０μｍ
以上であり、十分な解析精度を得る観点から、１００μ
ｍ以下、好ましくは５０μｍ以下であることが望まし
い。さらに、前記分離用チャネルの長さは、マイクロチ
ップの大きさ、解析対象の化合物に応じて適宜選択する
ことができるが、有効長を、より長くすることが望まし
い。有効長は、チャネル交差部から、高分子化合物の検
出点（分離用チャネル上に配置）までの距離をいう。十
分な分離能を得る観点から、０．１ｍｍ以上、好ましく
は１０ｍｍ以上であり、高速分離の観点から、１００ｍ
ｍ以下、好ましくは５０ｍｍ以下であることが望まし
い。
【００３１】また、前記リザーバーの大きさは、試料の
容量に応じて適宜設定することができる。具体的には、
試料導入のハンドリングおよび電極の太さの観点から、
直径０．０５ｍｍ以上、好ましくは３ｍｍ以下であるこ
とが望ましい。
容量に応じて適宜設定することができる。具体的には、
試料導入のハンドリングおよび電極の太さの観点から、
直径０．０５ｍｍ以上、好ましくは３ｍｍ以下であるこ
とが望ましい。
【００３２】マイクロチップ型電気泳動における泳動電
場は、良好な分離能を得、移動時間を短縮する観点か
ら、２０Ｖ／ｃｍ〜５０ｋＶ／ｃｍであり、好ましく
は、５０Ｖ／ｃｍ〜２０ｋＶ／ｃｍであり、より好まし
くは１００Ｖ／ｃｍ〜１０ｋＶ／ｃｍであることが望ま
しい。
場は、良好な分離能を得、移動時間を短縮する観点か
ら、２０Ｖ／ｃｍ〜５０ｋＶ／ｃｍであり、好ましく
は、５０Ｖ／ｃｍ〜２０ｋＶ／ｃｍであり、より好まし
くは１００Ｖ／ｃｍ〜１０ｋＶ／ｃｍであることが望ま
しい。
【００３３】ナノチャネル型電気泳動とは、ナノメータ
ーサイズ、１ｎｍ〜１μｍ、好ましくは１０〜５００ｎ
ｍ、より好ましくは５０〜１００ｎｍのチャネル幅から
なる流路が形成されたチップを用いて行なわれる電気泳
動をいう。これには上記記載のナノサイズの構造体がマ
イクロメーターサイズのチャネルに形成されているもの
を含む。ナノサイズの構造体の形状は、特に限定される
ことなく、例えば、四角、丸、三角等のものが使用され
得、構造体の設置間隔も特に限定されない。これらが形
成されたナノチャネルチップが用いられる。キャピラリ
ー電気泳動の場合と同様に同時に多チャネル解析可能な
チップも含まれる。
ーサイズ、１ｎｍ〜１μｍ、好ましくは１０〜５００ｎ
ｍ、より好ましくは５０〜１００ｎｍのチャネル幅から
なる流路が形成されたチップを用いて行なわれる電気泳
動をいう。これには上記記載のナノサイズの構造体がマ
イクロメーターサイズのチャネルに形成されているもの
を含む。ナノサイズの構造体の形状は、特に限定される
ことなく、例えば、四角、丸、三角等のものが使用され
得、構造体の設置間隔も特に限定されない。これらが形
成されたナノチャネルチップが用いられる。キャピラリ
ー電気泳動の場合と同様に同時に多チャネル解析可能な
チップも含まれる。
【００３４】ナノチャネル型電気泳動におけるチャネル
は、サイズがナノメーターという特徴をもつチャネルの
形状が曲率を曲げたもの、蛇行状、ジグザグ状またはそ
れらの組み合わせ等、様々な設計が可能である。このこ
とにより、微小スケール内に多くのチャネルを形成でき
る。また、このことにより一度に多数のサンプルを処理
することができ、ハイスループット化が可能である。ま
たナノサイズの構造体がマイクロメーターサイズのチャ
ネルに形成される場合、その形状を自在に変えることが
でき、その設置間隔も自在に変えられるという利点をも
つ。同時に多チャネルの測定が可能である。
は、サイズがナノメーターという特徴をもつチャネルの
形状が曲率を曲げたもの、蛇行状、ジグザグ状またはそ
れらの組み合わせ等、様々な設計が可能である。このこ
とにより、微小スケール内に多くのチャネルを形成でき
る。また、このことにより一度に多数のサンプルを処理
することができ、ハイスループット化が可能である。ま
たナノサイズの構造体がマイクロメーターサイズのチャ
ネルに形成される場合、その形状を自在に変えることが
でき、その設置間隔も自在に変えられるという利点をも
つ。同時に多チャネルの測定が可能である。
【００３５】ナノチャネル型電気泳動においてもマイク
ロチップ型電気泳動と同様にローディングチャネル、該
ローディングチャネルに交差する分離用チャネル、該ロ
ーディングチャネルの一端に試料リザーバー、該ローデ
ィングチャネルの他端にアウトレットが配置されたもの
を含むが、形状は特に限定されるものではない。
ロチップ型電気泳動と同様にローディングチャネル、該
ローディングチャネルに交差する分離用チャネル、該ロ
ーディングチャネルの一端に試料リザーバー、該ローデ
ィングチャネルの他端にアウトレットが配置されたもの
を含むが、形状は特に限定されるものではない。
【００３６】ナノチャネル型電気泳動に用いられるナノ
チャネルチップの材質としては、マイクロチップと同様
のものが用いられる。例えば、石英ガラス、ホウケイ酸
ガラス、ソーダガラス、ポリメチルメタクリレート、ポ
リカーボネート、ジメチルシロキサンなどが挙げられ
る。
チャネルチップの材質としては、マイクロチップと同様
のものが用いられる。例えば、石英ガラス、ホウケイ酸
ガラス、ソーダガラス、ポリメチルメタクリレート、ポ
リカーボネート、ジメチルシロキサンなどが挙げられ
る。
【００３７】ナノチャネル型電気泳動におけるナノチャ
ネルチップの大きさはマイクロチップと同様のものが適
用される。例えば縦１０〜１２０ｍｍ、横１０〜１２０
ｍｍ、厚さ５００〜５０００μｍである。ナノチャネル
チップのチャネルの深さ、チャネルの長さ、リザーバー
の大きさ等はマイクロチップに準ずる。
ネルチップの大きさはマイクロチップと同様のものが適
用される。例えば縦１０〜１２０ｍｍ、横１０〜１２０
ｍｍ、厚さ５００〜５０００μｍである。ナノチャネル
チップのチャネルの深さ、チャネルの長さ、リザーバー
の大きさ等はマイクロチップに準ずる。
【００３８】本発明のタンパク質の電気泳動法において
は、分子量マーカーをタンパク質試料と共に電気泳動に
供することができる。分子量マーカーとしては、Ａｇｉ
ｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｎｏ．５０６５
−４４３０の分子サイズ６ｋＤａ、分子サイズ２１０ｋ
ＤａのＭｙｏｓｉｎ、ＨＭＷ、ＬＭＷマーカーキット
（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅ
ｃｈ社）等のタンパク質の電気泳動に通常使用される市
販の分子量マーカーや、市販の分子量および濃度既知の
標準試料のタンパク質や生体試料から精製および／また
は定量したタンパク質を含む分子量マーカーを用いるこ
とができる。これらの分子量マーカーは組み合わせて使
用することもできる。
は、分子量マーカーをタンパク質試料と共に電気泳動に
供することができる。分子量マーカーとしては、Ａｇｉ
ｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｎｏ．５０６５
−４４３０の分子サイズ６ｋＤａ、分子サイズ２１０ｋ
ＤａのＭｙｏｓｉｎ、ＨＭＷ、ＬＭＷマーカーキット
（Ａｍｅｒｓｈａｍ Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅ
ｃｈ社）等のタンパク質の電気泳動に通常使用される市
販の分子量マーカーや、市販の分子量および濃度既知の
標準試料のタンパク質や生体試料から精製および／また
は定量したタンパク質を含む分子量マーカーを用いるこ
とができる。これらの分子量マーカーは組み合わせて使
用することもできる。
【００３９】本発明のタンパク質の電気泳動法では、分
子量マーカーとして、被検タンパク質に対して測定可能
な範囲内で低分子量側および高分子量側になるような２
つの分子量マーカーを用いることもできる。これによ
り、より良好な移動時間の調整と定量が達成されうる。
本明細書中では、低分子量側の分子量マーカーを「Ｌｏ
ｗｅｒマーカー」とよび、高分子量側の分子量マーカー
を「Ｕｐｐｅｒマーカー」とよぶ。
子量マーカーとして、被検タンパク質に対して測定可能
な範囲内で低分子量側および高分子量側になるような２
つの分子量マーカーを用いることもできる。これによ
り、より良好な移動時間の調整と定量が達成されうる。
本明細書中では、低分子量側の分子量マーカーを「Ｌｏ
ｗｅｒマーカー」とよび、高分子量側の分子量マーカー
を「Ｕｐｐｅｒマーカー」とよぶ。
【００４０】Ｌｏｗｅｒマーカーとしては、例えば、分
子サイズ６ｋＤａのＡｇｉｌｅｎｔＴｅｃｈｎｏｌｏｇ
ｉｅｓ Ｎｏ．５０６５−４４３０が挙げられる。Ｕｐ
ｐｅｒマーカーとしては、例えば、分子サイズ２１０ｋ
ＤａのＭｙｏｓｉｎが挙げられる。
子サイズ６ｋＤａのＡｇｉｌｅｎｔＴｅｃｈｎｏｌｏｇ
ｉｅｓ Ｎｏ．５０６５−４４３０が挙げられる。Ｕｐ
ｐｅｒマーカーとしては、例えば、分子サイズ２１０ｋ
ＤａのＭｙｏｓｉｎが挙げられる。
【００４１】本発明のタンパク質の電気泳動法では、Ｌ
ｏｗｅｒマーカーおよびＵｐｐｅｒマーカーに他の分子
量マーカーを組み合わせて使用することもできる。
ｏｗｅｒマーカーおよびＵｐｐｅｒマーカーに他の分子
量マーカーを組み合わせて使用することもできる。
【００４２】分子量マーカーの使用量としては、タンパ
ク質の電気泳動で一般に使用される量で使用されうる。
装置の種類、その装置における検出限界、検出感度、測
定精度等に応じて製造業者または一般的なプロトコルに
より推奨される試料溶液中の分子量マーカーの濃度を本
明細書中ではタンパク質の電気泳動に通常使用される濃
度として、「標準濃度」とよぶ。例えば、Ａｇｉｌｅｎ
ｔ２１００ Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ（Ａｇｉｌｅｎｔ
Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製）においては、被検濃
度、検出感度、測定精度の観点から、試料溶液中７４ｎ
ｇ／ｍｌ前後が特に好ましく、この濃度が標準濃度とな
る。
ク質の電気泳動で一般に使用される量で使用されうる。
装置の種類、その装置における検出限界、検出感度、測
定精度等に応じて製造業者または一般的なプロトコルに
より推奨される試料溶液中の分子量マーカーの濃度を本
明細書中ではタンパク質の電気泳動に通常使用される濃
度として、「標準濃度」とよぶ。例えば、Ａｇｉｌｅｎ
ｔ２１００ Ｂｉｏａｎａｌｙｚｅｒ（Ａｇｉｌｅｎｔ
Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製）においては、被検濃
度、検出感度、測定精度の観点から、試料溶液中７４ｎ
ｇ／ｍｌ前後が特に好ましく、この濃度が標準濃度とな
る。
【００４３】本発明のタンパク質の電気泳動法では、２
以上の分子量マーカーを使用する場合、少なくとも１つ
の分子量マーカーを標準濃度と比べて低濃度、好ましく
は標準濃度の１／３０〜１／２、より好ましくは１／１
５〜１／３、特に好ましくは１／１０〜２／７の濃度で
使用することにより、分析対象のタンパク質の検出感度
を向上することができる。これは、低濃度領域の目盛り
を拡大することにより、検出感度が検出精度を上回るた
めである。さらに希釈マーカーを用いることにより既製
マーカー溶液中のイオンを希釈することができる。一
方、泳動中のイオン強度が低いほど感度は高いため、最
終的に感度を上昇させることができる。
以上の分子量マーカーを使用する場合、少なくとも１つ
の分子量マーカーを標準濃度と比べて低濃度、好ましく
は標準濃度の１／３０〜１／２、より好ましくは１／１
５〜１／３、特に好ましくは１／１０〜２／７の濃度で
使用することにより、分析対象のタンパク質の検出感度
を向上することができる。これは、低濃度領域の目盛り
を拡大することにより、検出感度が検出精度を上回るた
めである。さらに希釈マーカーを用いることにより既製
マーカー溶液中のイオンを希釈することができる。一
方、泳動中のイオン強度が低いほど感度は高いため、最
終的に感度を上昇させることができる。
【００４４】前記態様において、Ｌｏｗｅｒマーカーお
よび／またはＵｐｐｅｒマーカー標準濃度と比べて低濃
度にして使用することもできる。Ｌｏｗｅｒマーカーを
標準濃度と比べて低濃度で使用する場合には、好ましく
は標準濃度の１／３０〜１／２の濃度、より好ましくは
１／１５〜１／３の濃度、特に好ましくは１／１０〜２
／７の濃度で、一方、Ｕｐｐｅｒマーカーを標準濃度と
比べて低濃度で使用する場合には、好ましくは標準濃度
の１／２０〜２／３の濃度、より好ましくは１／１５〜
１／３の濃度、特に好ましくは１／１０〜２／７の濃度
で使用することにより、分析対象のタンパク質の検出感
度を向上することができる。また、Ｌｏｗｅｒマーカー
および／またはＵｐｐｅｒマーカーをそれぞれの標準濃
度よりも低濃度で使用し、さらに他のマーカーを組み合
わせて使用することもできる。
よび／またはＵｐｐｅｒマーカー標準濃度と比べて低濃
度にして使用することもできる。Ｌｏｗｅｒマーカーを
標準濃度と比べて低濃度で使用する場合には、好ましく
は標準濃度の１／３０〜１／２の濃度、より好ましくは
１／１５〜１／３の濃度、特に好ましくは１／１０〜２
／７の濃度で、一方、Ｕｐｐｅｒマーカーを標準濃度と
比べて低濃度で使用する場合には、好ましくは標準濃度
の１／２０〜２／３の濃度、より好ましくは１／１５〜
１／３の濃度、特に好ましくは１／１０〜２／７の濃度
で使用することにより、分析対象のタンパク質の検出感
度を向上することができる。また、Ｌｏｗｅｒマーカー
および／またはＵｐｐｅｒマーカーをそれぞれの標準濃
度よりも低濃度で使用し、さらに他のマーカーを組み合
わせて使用することもできる。
【００４５】また、本発明のタンパク質の電気泳動法で
は、２以上のマーカーを使用する場合、その内の１つ
を、測定試料における被検タンパク質の濃度と実質的に
同等もしくは近似した濃度にすることにより、被検タン
パク質の検出感度を向上することができる。これは、被
検タンパク質と実質的に同等もしくは近似した濃度に分
子量マーカーの濃度が設定されること、およびマーカー
の目盛に近い位置で測定が行なわれることにより、精度
よく測定することができるためである。被検タンパク質
の濃度と実質的に同等もしくは近似した濃度とは、具体
的には、測定試料における被検タンパク質の濃度の、好
ましくは１／１０〜１０倍、より好ましくは１／５〜５
倍、特に好ましくは１／２〜２倍である。
は、２以上のマーカーを使用する場合、その内の１つ
を、測定試料における被検タンパク質の濃度と実質的に
同等もしくは近似した濃度にすることにより、被検タン
パク質の検出感度を向上することができる。これは、被
検タンパク質と実質的に同等もしくは近似した濃度に分
子量マーカーの濃度が設定されること、およびマーカー
の目盛に近い位置で測定が行なわれることにより、精度
よく測定することができるためである。被検タンパク質
の濃度と実質的に同等もしくは近似した濃度とは、具体
的には、測定試料における被検タンパク質の濃度の、好
ましくは１／１０〜１０倍、より好ましくは１／５〜５
倍、特に好ましくは１／２〜２倍である。
【００４６】前記態様において、Ｌｏｗｅｒマーカーま
たはＵｐｐｅｒマーカーをさらに組み合わせて使用する
こともできる。また、ＬｏｗｅｒマーカーまたはＵｐｐ
ｅｒマーカーを被検タンパク質の濃度と同等もしくは近
似した濃度にして使用することもできる。また、被検タ
ンパク質と同等もしくは近似した濃度でＬｏｗｅｒマー
カーまたはＵｐｐｅｒマーカーを使用し、さらに他の分
子量マーカーを組み合わせて使用することもできる。
たはＵｐｐｅｒマーカーをさらに組み合わせて使用する
こともできる。また、ＬｏｗｅｒマーカーまたはＵｐｐ
ｅｒマーカーを被検タンパク質の濃度と同等もしくは近
似した濃度にして使用することもできる。また、被検タ
ンパク質と同等もしくは近似した濃度でＬｏｗｅｒマー
カーまたはＵｐｐｅｒマーカーを使用し、さらに他の分
子量マーカーを組み合わせて使用することもできる。
【００４７】電気泳動に供したタンパク質の検出法とし
ては、例えば、ＵＶ波長光による吸収、蛍光、レーザ
ー、ランプ、ＬＥＤなどによる検出、電気化学的検出、
化学発光検出などが挙げられる。具体的には、タンパク
質またはペプチドの場合、２００ｎｍにおける吸収を測
定すること；ＳＹＰＲＯ Ｏｒａｎｇｅとタンパク質ま
たはペプチドとを反応させ、４６０〜５５０ｎｍで励起
させ、５５０〜６５０ｎｍで蛍光を測定すること、ある
いはタンパク質と蛍光マーカー（ＡｇｉｌｅｎｔＴｅｃ
ｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｎｏ．５０６５−４４３０）と反
応させ、６３０〜６５０ｎｍで励起させ、６７０〜７０
０ｎｍで蛍光を測定すること、および電気化学的測定、
化学発光測定などにより、タンパク質またはペプチドを
検出することができる。
ては、例えば、ＵＶ波長光による吸収、蛍光、レーザ
ー、ランプ、ＬＥＤなどによる検出、電気化学的検出、
化学発光検出などが挙げられる。具体的には、タンパク
質またはペプチドの場合、２００ｎｍにおける吸収を測
定すること；ＳＹＰＲＯ Ｏｒａｎｇｅとタンパク質ま
たはペプチドとを反応させ、４６０〜５５０ｎｍで励起
させ、５５０〜６５０ｎｍで蛍光を測定すること、ある
いはタンパク質と蛍光マーカー（ＡｇｉｌｅｎｔＴｅｃ
ｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｎｏ．５０６５−４４３０）と反
応させ、６３０〜６５０ｎｍで励起させ、６７０〜７０
０ｎｍで蛍光を測定すること、および電気化学的測定、
化学発光測定などにより、タンパク質またはペプチドを
検出することができる。
【００４８】キャピラリー電気泳動においては、例え
ば、キャピラリーのアウトレットに、ＵＶ波長光を発し
うる装置と該ＵＶ波長光の検出器とを設置してもよく、
あるいは蛍光波長を発しうる装置と該蛍光波長を検出可
能な検出器とを設置してもよい。
ば、キャピラリーのアウトレットに、ＵＶ波長光を発し
うる装置と該ＵＶ波長光の検出器とを設置してもよく、
あるいは蛍光波長を発しうる装置と該蛍光波長を検出可
能な検出器とを設置してもよい。
【００４９】マイクロチップ型電気泳動においては、例
えば、分離用チャネル上に配置された検出点にＵＶ波長
光の検出器を設置してもよく、あるいは、蛍光波長を発
しうる装置と該蛍光波長を検出可能な検出器とを設置し
てもよい。また同時に多チャネルを検出可能である。
えば、分離用チャネル上に配置された検出点にＵＶ波長
光の検出器を設置してもよく、あるいは、蛍光波長を発
しうる装置と該蛍光波長を検出可能な検出器とを設置し
てもよい。また同時に多チャネルを検出可能である。
【００５０】ナノチャネル型電気泳動においては、マイ
クロチップ型電気泳動の場合と同じ検出器、検出方法が
適用される。さらにナノチャネル型電気泳動において
は、同時多チャネル検出の際、マイクロチップ型電気泳
動の場合よりも多数のサンプルを同時に検出可能であ
る。
クロチップ型電気泳動の場合と同じ検出器、検出方法が
適用される。さらにナノチャネル型電気泳動において
は、同時多チャネル検出の際、マイクロチップ型電気泳
動の場合よりも多数のサンプルを同時に検出可能であ
る。
【００５１】検出の際、タンパク質、ペプチド、アミノ
酸などの同定を行う場合には、ＵＶ吸収、分子量マーカ
ー、標品との移動時間の比較、マススペクトルの解析な
どにより行うことができる。
酸などの同定を行う場合には、ＵＶ吸収、分子量マーカ
ー、標品との移動時間の比較、マススペクトルの解析な
どにより行うことができる。
【００５２】
【実施例】実施例中、タンパク質の電気泳動は全てＡｇ
ｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社のマイクロチ
ップ型電気泳動装置Ａｇｉｌｅｎｔ２１００ Ｂｉｏａ
ｎａｌｙｚｅｒおよび同社のＰｒｏｔｅｉｎ２００ Ｋ
ｉｔを用いて行なった。従来法は、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔ
ｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ推奨のプロトコールにより行な
った。具体的には以下の１〜７の工程を含む。 １．３μｌのＵｐｐｅｒマーカーに９０μｌの変成処理
用緩衝液と３μｌの１００ｍＭのジチオスレイトールを
加え、ボルテックスにより５秒間混合する。 ２．Ｌｏｗｅｒマーカー１５μｌの原液をとり、１．０
ｍｌのｍｉｌｌｉＱ水と混合する。 ３．３μｌのラダー液およびそれと別に上記１．で作成
した変成処理用緩衝液の混合物２μｌと４μｌの被検タ
ンパク質サンプルを入れてボルテックスで混合し、１０
００×ｇで５秒間遠心する。 ４．上記３のサンプルを１００℃で５分間加熱する。 ５．加熱終了後１〜２分間放冷する。 ６．加熱・放冷処理後のラダー液および被検タンパク質
液に上記２．で調製したＬｏｗｅｒマーカー液を８４μ
ｌずつ加えて混合する。 ７．上記６の調製物を各６μｌずつ被検サンプルとして
電気泳動に供する。
ｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社のマイクロチ
ップ型電気泳動装置Ａｇｉｌｅｎｔ２１００ Ｂｉｏａ
ｎａｌｙｚｅｒおよび同社のＰｒｏｔｅｉｎ２００ Ｋ
ｉｔを用いて行なった。従来法は、Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔ
ｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ推奨のプロトコールにより行な
った。具体的には以下の１〜７の工程を含む。 １．３μｌのＵｐｐｅｒマーカーに９０μｌの変成処理
用緩衝液と３μｌの１００ｍＭのジチオスレイトールを
加え、ボルテックスにより５秒間混合する。 ２．Ｌｏｗｅｒマーカー１５μｌの原液をとり、１．０
ｍｌのｍｉｌｌｉＱ水と混合する。 ３．３μｌのラダー液およびそれと別に上記１．で作成
した変成処理用緩衝液の混合物２μｌと４μｌの被検タ
ンパク質サンプルを入れてボルテックスで混合し、１０
００×ｇで５秒間遠心する。 ４．上記３のサンプルを１００℃で５分間加熱する。 ５．加熱終了後１〜２分間放冷する。 ６．加熱・放冷処理後のラダー液および被検タンパク質
液に上記２．で調製したＬｏｗｅｒマーカー液を８４μ
ｌずつ加えて混合する。 ７．上記６の調製物を各６μｌずつ被検サンプルとして
電気泳動に供する。
【００５３】なお、本発明のタンパク質の電気泳動法で
は、従来法との比較のために、上記Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔ
ｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ推奨のプロトコールを基にし
て、各実施例に記載の変更点を加えてタンパク質の電気
泳動を行った。
は、従来法との比較のために、上記Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔ
ｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ推奨のプロトコールを基にし
て、各実施例に記載の変更点を加えてタンパク質の電気
泳動を行った。
【００５４】Ｌｏｗｅｒマーカーとして、分子サイズ６
ｋＤａのＡｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ
Ｎｏ．５０６５−４４３０を使用し、Ｕｐｐｅｒマーカ
ーとして、分子サイズ２１０ｋＤａのミオシンを使用し
た。
ｋＤａのＡｇｉｌｅｎｔ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ
Ｎｏ．５０６５−４４３０を使用し、Ｕｐｐｅｒマーカ
ーとして、分子サイズ２１０ｋＤａのミオシンを使用し
た。
【００５５】なお、ラダー液とは、分子サイズの決定を
行なうための分子量既知の標準サンプルであり、以下の
ものが各々７４ｎｇ／ｍｌで含まれる：リゾチーム（１
４．３ｋＤａ）、β−ラクトグロブリン（１８．４ｋＤ
ａ）、ｃａｒｂｏｎｉｃ ａｎｈｙｄｒａｓｅ（２９．
０ｋＤａ）、オボアルブミン（４３．０ｋＤａ）、血清
アルブミン（６８．０ｋＤａ）、ホスホリラーゼＢ（９
７．４ｋＤａ）、ミオシン（２１０ｋＤａ）。
行なうための分子量既知の標準サンプルであり、以下の
ものが各々７４ｎｇ／ｍｌで含まれる：リゾチーム（１
４．３ｋＤａ）、β−ラクトグロブリン（１８．４ｋＤ
ａ）、ｃａｒｂｏｎｉｃ ａｎｈｙｄｒａｓｅ（２９．
０ｋＤａ）、オボアルブミン（４３．０ｋＤａ）、血清
アルブミン（６８．０ｋＤａ）、ホスホリラーゼＢ（９
７．４ｋＤａ）、ミオシン（２１０ｋＤａ）。
【００５６】実施例１
図１Ａ〜Ｄは、従来法におけるタンパク質の前処理（熱
変性処理）を行なった後にマイクロチップ型電気泳動を
行なった場合のエレクトロフェログラムであり、図１Ｅ
〜Ｍは熱変性処理を行なわない場合である。タンパク質
として１μｇ／μｌのウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）
（ＳＩＧＭＡ）を用いた。
変性処理）を行なった後にマイクロチップ型電気泳動を
行なった場合のエレクトロフェログラムであり、図１Ｅ
〜Ｍは熱変性処理を行なわない場合である。タンパク質
として１μｇ／μｌのウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）
（ＳＩＧＭＡ）を用いた。
【００５７】移動時間２０ｓ前後の２本のピークはＬｏ
ｗｅｒマーカー由来のもの、４０ｓ付近の１本のピーク
はＵｐｐｅｒマーカー由来のものである。ＢＳＡのピー
クは２５ｓ〜３０ｓのものである。
ｗｅｒマーカー由来のもの、４０ｓ付近の１本のピーク
はＵｐｐｅｒマーカー由来のものである。ＢＳＡのピー
クは２５ｓ〜３０ｓのものである。
【００５８】従来法：通常の方法（Ａｇｉｌｅｎｔ Ｔ
ｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ推奨の方法）による結果を図１
Ａに示す。これに対し、図１Ｂは熱変性処理の際、ジチ
オスレイトールを添加しないものである。また図１Ｃは
熱変性処理の際、サンプルバッファー（Ａｇｉｌｅｎｔ
Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓのキット内のもの、ＳＤＳ
含有の緩衝液と考えられる）の代わりにＳＤＳなしの脱
イオン水（ＩＣＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．
社製）を用いたものであり、図１Ｄは、脱イオン水を用
い、ジチオスレイトールを添加しない系である。
ｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ推奨の方法）による結果を図１
Ａに示す。これに対し、図１Ｂは熱変性処理の際、ジチ
オスレイトールを添加しないものである。また図１Ｃは
熱変性処理の際、サンプルバッファー（Ａｇｉｌｅｎｔ
Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓのキット内のもの、ＳＤＳ
含有の緩衝液と考えられる）の代わりにＳＤＳなしの脱
イオン水（ＩＣＮ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．
社製）を用いたものであり、図１Ｄは、脱イオン水を用
い、ジチオスレイトールを添加しない系である。
【００５９】その結果、脱イオン水を用いることによ
り、強度低下が認められた。これに対し、熱変性処理な
しの場合で規定のサンプルバッファーとジチオスレイト
ールを添加したものは、強度が図１より向上した（図１
Ｅ）。これはジチオスレイトールに因らなかった（図１
Ｆ）。
り、強度低下が認められた。これに対し、熱変性処理な
しの場合で規定のサンプルバッファーとジチオスレイト
ールを添加したものは、強度が図１より向上した（図１
Ｅ）。これはジチオスレイトールに因らなかった（図１
Ｆ）。
【００６０】一方、熱変性処理なしでサンプルバッファ
ーの代わりに脱イオン水にタンパク質を溶解させ、ジチ
オスレイトールを添加したものは劇的な強度増加を示し
た（図１Ｇ）。これはジチオスレイトールなしでも同様
であった（図１Ｈ）。これらは、Ｕｐｐｅｒマーカーを
２倍濃度にして用いた場合も、全く同様であった（図１
Ｌ）。また、熱変性処理なしで脱イオン水を用いた系の
強度の再現性は良好であった（図１Ｍ）。
ーの代わりに脱イオン水にタンパク質を溶解させ、ジチ
オスレイトールを添加したものは劇的な強度増加を示し
た（図１Ｇ）。これはジチオスレイトールなしでも同様
であった（図１Ｈ）。これらは、Ｕｐｐｅｒマーカーを
２倍濃度にして用いた場合も、全く同様であった（図１
Ｌ）。また、熱変性処理なしで脱イオン水を用いた系の
強度の再現性は良好であった（図１Ｍ）。
【００６１】これらの結果より、熱変性処理を行なわ
ず、タンパク質をバッファーではなく水溶解した場合、
スペクトル強度を８〜１０倍向上することができた。
ず、タンパク質をバッファーではなく水溶解した場合、
スペクトル強度を８〜１０倍向上することができた。
【００６２】実施例２
図２はスペクトル強度の濃度変化を熱変性処理あり（従
来法）となし （実施例１Ｅ記載）で比較したものであ
る。図２Ａ〜Ｊは熱変性処理ありのもの、図２Ｋ〜Ｓは
熱変性処理なしで、実施例１記載の水を用い、ジチオス
レイトールなしのものである。被検タンパク質であるＢ
ＳＡの濃度は、図２Ａ、Ｋ：５μｇ／μｌ，Ｂ，Ｌ：２
μｇ／μｌ，Ｃ，Ｍ：１μｇ／μｌ，Ｄ，Ｎ：０．５μ
ｇ／μｌ，Ｅ：０．２μｇ／μｌ，Ｆ，Ｏ：０．１μｇ
／μｌ，Ｇ，Ｐ：０．０５μｇ／μｌ，Ｈ，Ｑ：０．０
２μｇ／μｌ，Ｉ，Ｒ：０．０１μｇ／μｌ，Ｊ，Ｓ：
０．００５μｇ／μｌである。
来法）となし （実施例１Ｅ記載）で比較したものであ
る。図２Ａ〜Ｊは熱変性処理ありのもの、図２Ｋ〜Ｓは
熱変性処理なしで、実施例１記載の水を用い、ジチオス
レイトールなしのものである。被検タンパク質であるＢ
ＳＡの濃度は、図２Ａ、Ｋ：５μｇ／μｌ，Ｂ，Ｌ：２
μｇ／μｌ，Ｃ，Ｍ：１μｇ／μｌ，Ｄ，Ｎ：０．５μ
ｇ／μｌ，Ｅ：０．２μｇ／μｌ，Ｆ，Ｏ：０．１μｇ
／μｌ，Ｇ，Ｐ：０．０５μｇ／μｌ，Ｈ，Ｑ：０．０
２μｇ／μｌ，Ｉ，Ｒ：０．０１μｇ／μｌ，Ｊ，Ｓ：
０．００５μｇ／μｌである。
【００６３】これらの結果より、従来法（反応あり）の
系では検出限界が０．０５μｇ／μｌであるのに対し、
本発明の方法（反応なし）は０．００５μｇ／μｌあ
り、１０倍の感度上昇が認められた。
系では検出限界が０．０５μｇ／μｌであるのに対し、
本発明の方法（反応なし）は０．００５μｇ／μｌあ
り、１０倍の感度上昇が認められた。
【００６４】実施例３
図３は実施例２のスペクトル強度の濃度変化を熱変性処
理あり（従来法）の再現性を調べたものである。被検タ
ンパク質であるＢＳＡの濃度は、図３Ａ〜Ａ’’’は５
μｇ／μｌ，Ｂ〜Ｂ’’’：２μｇ／μｌ，Ｃ〜
Ｃ’’’：１μｇ／μｌ，Ｄ〜Ｄ’’’：０．５μｇ／
μｌ，Ｅ〜Ｅ’’’：０．２μｇ／μｌ，Ｆ〜
Ｆ’’’：０．１μｇ／μｌ，Ｇ〜Ｇ’’’：０．０５
μｇ／μｌ，Ｈ〜Ｈ’’’：０．０２μｇ／μｌ，Ｉ〜
Ｉ’’’：０．０１μｇ／μｌ，Ｊ〜Ｊ’’’：０．０
０５μｇ／μｌである。
理あり（従来法）の再現性を調べたものである。被検タ
ンパク質であるＢＳＡの濃度は、図３Ａ〜Ａ’’’は５
μｇ／μｌ，Ｂ〜Ｂ’’’：２μｇ／μｌ，Ｃ〜
Ｃ’’’：１μｇ／μｌ，Ｄ〜Ｄ’’’：０．５μｇ／
μｌ，Ｅ〜Ｅ’’’：０．２μｇ／μｌ，Ｆ〜
Ｆ’’’：０．１μｇ／μｌ，Ｇ〜Ｇ’’’：０．０５
μｇ／μｌ，Ｈ〜Ｈ’’’：０．０２μｇ／μｌ，Ｉ〜
Ｉ’’’：０．０１μｇ／μｌ，Ｊ〜Ｊ’’’：０．０
０５μｇ／μｌである。
【００６５】これらの結果より、従来法（反応あり）の
系の再現性は高く、検出限界が０．０５〜０．０２μｇ
／μｌであることがわかった。
系の再現性は高く、検出限界が０．０５〜０．０２μｇ
／μｌであることがわかった。
【００６６】実施例４
図４は実施例２のスペクトル強度の濃度変化を熱変性処
理なし（実施例１Ｅ記載の水を用い、ジチオスレイトー
ルなしのもの）の再現性を調べたものである。図４Ａ〜
Ａ’’’はＢＳＡ５μｇ／μｌ，Ｂ〜Ｂ’’’：２μｇ
／μｌ，Ｃ〜Ｃ’’’：１μｇ／μｌ，Ｄ〜Ｄ’’’：
０．５μｇ／μｌ，Ｆ〜Ｆ’’’：０．１μｇ／μｌ，
Ｇ〜Ｇ’’’：０．０５μｇ／μｌ，Ｈ〜Ｈ’’’：
０．０２μｇ／μｌ，Ｉ，Ｉ’，Ｉ’’：０．０１μｇ
／μｌ，Ｊ〜Ｊ’’’：０．００５μｇ／μｌである。
理なし（実施例１Ｅ記載の水を用い、ジチオスレイトー
ルなしのもの）の再現性を調べたものである。図４Ａ〜
Ａ’’’はＢＳＡ５μｇ／μｌ，Ｂ〜Ｂ’’’：２μｇ
／μｌ，Ｃ〜Ｃ’’’：１μｇ／μｌ，Ｄ〜Ｄ’’’：
０．５μｇ／μｌ，Ｆ〜Ｆ’’’：０．１μｇ／μｌ，
Ｇ〜Ｇ’’’：０．０５μｇ／μｌ，Ｈ〜Ｈ’’’：
０．０２μｇ／μｌ，Ｉ，Ｉ’，Ｉ’’：０．０１μｇ
／μｌ，Ｊ〜Ｊ’’’：０．００５μｇ／μｌである。
【００６７】これらの結果より、熱変性処理なしの系で
は再現性が高く、検出限界が０．０１〜０．００５μｇ
／μｌであることがわかった。
は再現性が高く、検出限界が０．０１〜０．００５μｇ
／μｌであることがわかった。
【００６８】実施例５
図５は低濃度での検出を示す。図５Ａ−Ｃは、実施例１
記載の本発明の方法の水を用い、ジチオスレイトールな
しのものにさらに、ＬｏｗｅｒマーカーまたはＵｐｐｅ
ｒマーカーのいずれか一方のマーカーを標準濃度と比べ
て低濃度で用いた方法である。図５Ａは０．０１μｇ／
μｌ ＢＳＡで通常のＬｏｗｅｒマーカー濃度Ｂ：０．
００５μｇ／μｌ ＢＳＡでＬｏｗｅｒマーカー濃度を
従来の１／２で用いたもの、Ｃ：０．００１μｇ／μｌ
ＢＳＡで、Ｌｏｗｅｒマーカー濃度１／２にさらにＵ
ｐｐｅｒマーカー濃度を従来の１／１０で用いたもので
ある。
記載の本発明の方法の水を用い、ジチオスレイトールな
しのものにさらに、ＬｏｗｅｒマーカーまたはＵｐｐｅ
ｒマーカーのいずれか一方のマーカーを標準濃度と比べ
て低濃度で用いた方法である。図５Ａは０．０１μｇ／
μｌ ＢＳＡで通常のＬｏｗｅｒマーカー濃度Ｂ：０．
００５μｇ／μｌ ＢＳＡでＬｏｗｅｒマーカー濃度を
従来の１／２で用いたもの、Ｃ：０．００１μｇ／μｌ
ＢＳＡで、Ｌｏｗｅｒマーカー濃度１／２にさらにＵ
ｐｐｅｒマーカー濃度を従来の１／１０で用いたもので
ある。
【００６９】図５Ｄ−Ｊは、Ｌｏｗｅｒマーカーが規定
の１／４に対し、被検タンパク質と同濃度のインシュリ
ン（ウシ膵臓由来，ＳＩＧＭＡ）をＬｏｗｅｒマーカー
としてさらに加えたものである。Ｄ：０．５μｇ／μ
ｌ，Ｅ：０．０５μｇ／μｌ，Ｆ：０．０１μｇ／μ
ｌ，Ｇ：０．００５μｇ／μｌ，Ｈ：０．００１μｇ／
μｌ，Ｉ：０．０００５μｇ／μｌ，Ｊ：０．０００１
μｇ／μｌである。この方法により、ＢＳＡの検出限界
が０．０００５μｇ／μｌまで可能となった。
の１／４に対し、被検タンパク質と同濃度のインシュリ
ン（ウシ膵臓由来，ＳＩＧＭＡ）をＬｏｗｅｒマーカー
としてさらに加えたものである。Ｄ：０．５μｇ／μ
ｌ，Ｅ：０．０５μｇ／μｌ，Ｆ：０．０１μｇ／μ
ｌ，Ｇ：０．００５μｇ／μｌ，Ｈ：０．００１μｇ／
μｌ，Ｉ：０．０００５μｇ／μｌ，Ｊ：０．０００１
μｇ／μｌである。この方法により、ＢＳＡの検出限界
が０．０００５μｇ／μｌまで可能となった。
【００７０】実施例６
他のタンパク質についての検出限界を実施例５と同様に
調べた。図６Ａ−Ｊは従来法（熱変性処理あり）による
ミオグロビン（ウマ骨格筋由来，ＳＩＧＭＡ）である。
図６Ｂ’、Ｅ’、Ｈ’、Ｉ’は同様の再現性をみたもの
である。図６Ｋ−Ｏは従来法によるトリプシン（Ｉ型、
ウシ膵臓由来，ＳＩＧＭＡ）である。それぞれの濃度は
Ａ，Ｋ：５μｇ／μｌ，Ｂ，Ｂ’：２μｇ／μｌ，Ｃ：
１μｇ／μｌ，Ｄ，Ｌ：０．５μｇ／μｌ，Ｅ，Ｅ’：
０．２μｇ／μｌ，Ｆ：０．１μｇ／μｌ，Ｍ：０．０
５μｇ／μｌ，Ｈ，Ｈ’，Ｎ：０．０２μｇ／μｌ，
Ｉ，Ｉ’，Ｏ：０．０１μｇ／μｌ，Ｊ：０．００５μ
ｇ／μｌである。この方法により、ミオグロビン、トリ
プシンの検出限界はいずれも０．０５〜０．０２μｇ／
μｌである。これは、ＢＳＡの場合と一致した。
調べた。図６Ａ−Ｊは従来法（熱変性処理あり）による
ミオグロビン（ウマ骨格筋由来，ＳＩＧＭＡ）である。
図６Ｂ’、Ｅ’、Ｈ’、Ｉ’は同様の再現性をみたもの
である。図６Ｋ−Ｏは従来法によるトリプシン（Ｉ型、
ウシ膵臓由来，ＳＩＧＭＡ）である。それぞれの濃度は
Ａ，Ｋ：５μｇ／μｌ，Ｂ，Ｂ’：２μｇ／μｌ，Ｃ：
１μｇ／μｌ，Ｄ，Ｌ：０．５μｇ／μｌ，Ｅ，Ｅ’：
０．２μｇ／μｌ，Ｆ：０．１μｇ／μｌ，Ｍ：０．０
５μｇ／μｌ，Ｈ，Ｈ’，Ｎ：０．０２μｇ／μｌ，
Ｉ，Ｉ’，Ｏ：０．０１μｇ／μｌ，Ｊ：０．００５μ
ｇ／μｌである。この方法により、ミオグロビン、トリ
プシンの検出限界はいずれも０．０５〜０．０２μｇ／
μｌである。これは、ＢＳＡの場合と一致した。
【００７１】実施例７
ミオグロビンおよびＢＳＡについて、熱変性処理ありの
系における従来法と、Ｌｏｗｅｒマーカーとして、被検
タンパク質と実質的に同等もしくは近似した量のマーカ
ー（ここでは便宜上、可変濃度マーカーとよぶ）を用い
たものとの比較を行なった。
系における従来法と、Ｌｏｗｅｒマーカーとして、被検
タンパク質と実質的に同等もしくは近似した量のマーカ
ー（ここでは便宜上、可変濃度マーカーとよぶ）を用い
たものとの比較を行なった。
【００７２】図７Ａ〜Ｉは従来法（熱変性処理あり）に
よるミオグロビンである。図７Ａ’〜Ｉ’は熱変性処理
ありであるが可変濃度マーカーを用いている。図７Ｊ−
Ｒは従来法（熱変性処理あり）によるＢＳＡである。図
７Ｊ’−Ｒ’は熱変性処理ありであるが可変濃度マーカ
ーを用いている。それぞれ、可変濃度マーカーとしてイ
ンスリンを用いた。それぞれの可変マーカーの濃度は
Ａ，Ａ’，Ｊ，Ｊ’：２μｇ／μｌ，Ｂ，Ｂ，Ｋ：１μ
ｇ／μｌ，Ｃ，Ｃ’，Ｌ，Ｌ’：０．５μｇ／μｌ，
Ｄ，Ｄ’，Ｍ，Ｍ’：０．２μｇ／μｌ，Ｅ，Ｅ’，
Ｎ：０．１μｇ／μｌ，Ｆ，Ｆ’，Ｏ，Ｏ’：０．０５
μｇ／μｌ，Ｇ，Ｇ’，Ｐ，Ｐ’：０．０２μｇ／μ
ｌ，Ｈ，Ｈ’，Ｑ，Ｑ’：０．０１μｇ／μｌ，Ｉ，
Ｉ’，Ｒ’：０．００５μｇ／μｌである。
よるミオグロビンである。図７Ａ’〜Ｉ’は熱変性処理
ありであるが可変濃度マーカーを用いている。図７Ｊ−
Ｒは従来法（熱変性処理あり）によるＢＳＡである。図
７Ｊ’−Ｒ’は熱変性処理ありであるが可変濃度マーカ
ーを用いている。それぞれ、可変濃度マーカーとしてイ
ンスリンを用いた。それぞれの可変マーカーの濃度は
Ａ，Ａ’，Ｊ，Ｊ’：２μｇ／μｌ，Ｂ，Ｂ，Ｋ：１μ
ｇ／μｌ，Ｃ，Ｃ’，Ｌ，Ｌ’：０．５μｇ／μｌ，
Ｄ，Ｄ’，Ｍ，Ｍ’：０．２μｇ／μｌ，Ｅ，Ｅ’，
Ｎ：０．１μｇ／μｌ，Ｆ，Ｆ’，Ｏ，Ｏ’：０．０５
μｇ／μｌ，Ｇ，Ｇ’，Ｐ，Ｐ’：０．０２μｇ／μ
ｌ，Ｈ，Ｈ’，Ｑ，Ｑ’：０．０１μｇ／μｌ，Ｉ，
Ｉ’，Ｒ’：０．００５μｇ／μｌである。
【００７３】従来法でミオグロビン、ＢＳＡは検出限界
０．０５μｇ／μｌであるのに対し、可変濃度マーカー
を用いた場合には０．０２μｇ／μｌとなったが、反応
なしの実施例６の系と比べて劇的な向上ではなかった。
しかしながら、反応ありの場合でも可変濃度マーカーの
効果があることがわかった。
０．０５μｇ／μｌであるのに対し、可変濃度マーカー
を用いた場合には０．０２μｇ／μｌとなったが、反応
なしの実施例６の系と比べて劇的な向上ではなかった。
しかしながら、反応ありの場合でも可変濃度マーカーの
効果があることがわかった。
【００７４】
【発明の効果】本発明によれば、熱変性の前処理工程を
行わずにネイティブな状態でタンパク質を迅速に解析す
ることができ、なおかつより高感度な電気泳動法が提供
される。
行わずにネイティブな状態でタンパク質を迅速に解析す
ることができ、なおかつより高感度な電気泳動法が提供
される。
【図１】図１は、マイクロチップ型電気泳動において、
泳動条件を検討した結果を示す図である。
泳動条件を検討した結果を示す図である。
【図２】図２は、マイクロチップ型電気泳動において、
泳動条件を検討した結果を示す図である。
泳動条件を検討した結果を示す図である。
【図３】図３は、マイクロチップ型電気泳動において、
泳動条件を検討した結果を示す図である。
泳動条件を検討した結果を示す図である。
【図４】図２は、マイクロチップ型電気泳動において、
泳動条件を検討した結果を示す図である。
泳動条件を検討した結果を示す図である。
【図５】図５は、マイクロチップ型電気泳動において、
泳動条件を検討した結果を示す図である。
泳動条件を検討した結果を示す図である。
【図６】図６は、マイクロチップ型電気泳動において、
泳動条件を検討した結果を示す図である。
泳動条件を検討した結果を示す図である。
【図７】図７は、マイクロチップ型電気泳動において、
泳動条件を検討した結果を示す図である。
泳動条件を検討した結果を示す図である。
フロントページの続き
(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考）
Ｇ０１Ｎ 27/26 ３２５Ａ
３３１Ｋ
Claims (5)
- 【請求項１】 タンパク質を熱変性処理することなくサ
イズ分離の電気泳動に供することを特徴とする電気泳動
法。 - 【請求項２】 水溶解させたタンパク質を電気泳動に供
することを特徴とする請求項１記載の電気泳動法。 - 【請求項３】 ２つまたはそれ以上の分子量マーカーを
タンパク質と共に電気泳動に供し、該マーカーの少なく
とも１つを標準濃度と比較して低濃度とすることを特徴
とする請求項１または２記載の電気泳動法。 - 【請求項４】 ２つまたはそれ以上の分子量マーカーを
タンパク質と共に電気泳動に供し、該マーカーの１つを
被検タンパク質の濃度の１／１０〜１０倍の濃度にする
ことを特徴とする請求項１〜３いずれか記載の電気泳動
法。 - 【請求項５】 電気泳動の形態が、キャピラリー電気泳
動法、マイクロチップ型電気泳動法およびナノチャンネ
ル型電気泳動法からなる群より選択されたものである請
求項１〜４いずれか記載の電気泳動法。
Priority Applications (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001400640A JP2003194775A (ja) | 2001-12-28 | 2001-12-28 | タンパク質の電気泳動法 |
| US10/500,075 US7708870B2 (en) | 2001-12-28 | 2002-12-25 | Method of electrophoresing protein |
| CNB028262697A CN100392390C (zh) | 2001-12-28 | 2002-12-25 | 蛋白质的电泳方法 |
| PCT/JP2002/013491 WO2003058229A1 (fr) | 2001-12-28 | 2002-12-25 | Procede d'electrophorese de proteines |
| CA2471026A CA2471026C (en) | 2001-12-28 | 2002-12-25 | Method of electrophoresing protein |
| KR1020047010231A KR100647054B1 (ko) | 2001-12-28 | 2002-12-25 | 단백질의 전기영동법 |
| EP02791981A EP1460419A1 (en) | 2001-12-28 | 2002-12-25 | Method of electrophoresing protein |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001400640A JP2003194775A (ja) | 2001-12-28 | 2001-12-28 | タンパク質の電気泳動法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2003194775A true JP2003194775A (ja) | 2003-07-09 |
Family
ID=19189644
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2001400640A Pending JP2003194775A (ja) | 2001-12-28 | 2001-12-28 | タンパク質の電気泳動法 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7708870B2 (ja) |
| EP (1) | EP1460419A1 (ja) |
| JP (1) | JP2003194775A (ja) |
| KR (1) | KR100647054B1 (ja) |
| CN (1) | CN100392390C (ja) |
| CA (1) | CA2471026C (ja) |
| WO (1) | WO2003058229A1 (ja) |
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|---|---|---|---|---|
| JP2005326407A (ja) * | 2004-05-10 | 2005-11-24 | Sebia | キャピラリー電気泳動によりタンパク質を分離する改良方法とキャピラリー電気泳動用バッファー組成物 |
| JP2007500343A (ja) * | 2003-07-29 | 2007-01-11 | ゾルファイ ファーマスーティカルズ ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング | パンクレアチン及び比較可能な組成物のための分析法 |
| CN101477079A (zh) * | 2009-01-06 | 2009-07-08 | 中国农业大学 | 乳清蛋白的活性凝胶电泳方法 |
| JP2010523976A (ja) * | 2007-04-04 | 2010-07-15 | ネットワーク・バイオシステムズ・インコーポレーテッド | プラスチック製マイクロ流体分離および検出プラットフォーム |
| JP2011515699A (ja) * | 2008-03-26 | 2011-05-19 | 和光純薬工業株式会社 | チャンネルへ適用するための水溶液及び適用方法 |
| JP2018523115A (ja) * | 2015-07-01 | 2018-08-16 | ジーイー・ヘルスケア・バイオサイエンス・アクチボラグ | 生体分子のサイズを決定するための方法 |
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|---|---|---|---|---|
| CN101339159B (zh) * | 2008-08-28 | 2012-05-02 | 内蒙古蒙牛乳业（集团）股份有限公司 | 一种乳中α-酪蛋白含量的检测方法 |
| CN101339158B (zh) * | 2008-08-28 | 2012-05-02 | 内蒙古蒙牛乳业（集团）股份有限公司 | 一种乳中β-酪蛋白含量的检测方法 |
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