JP2003135052A - Method for hydrolyzing cellulose raw material - Google Patents

Abstract

PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a method for efficiently and inexpensively hydrolyzing or saccharifying a cellulose raw material. SOLUTION: This method for hydrolyzing a cellulose raw material comprises hydrolyzing or saccharifying a cellulose raw material with Acremonium cellulolyticus C1 strain (FERM P-18508) or cellulose produced by the strain.

Description

【発明の詳細な説明】Detailed Description of the Invention

【０００１】[0001]

【発明の属する技術分野】本発明は、極めてセルラーゼ
生産能の高い新規なアクレモニウム属に属する微生物を
用いたセルロース原料の分解方法および糖化方法、セル
ラーゼの製造方法、並びにこれら方法に用いる新規なア
クレモニウム・セルロリティカス（Acremonium cellulo
lyticus）Ｃ１株（ＦＥＲＭ Ｐ−１８５０８）自体に
関するものである。TECHNICAL FIELD The present invention relates to a method for decomposing and saccharifying a cellulosic material using a novel microorganism belonging to the genus Acremonium, which has an extremely high cellulase-producing ability, a method for producing cellulase, and a novel accretin used in these methods. Acremonium cellulo
lyticus) C1 strain (FERM P-18508) itself.

【０００２】[0002]

【従来の技術】セルラーゼは、セルロースを、グルコー
ス、セロビオースやセロオリゴトースに加水分解する酵
素反応系を触媒する酵素群の総称であり、その作用様式
により、Ｃ_１酵素（アビセラーゼ、セロビオヒドラー
ゼ、ＦＰアーゼ、エキソ−βーグルカナーゼ等とも呼称
されている。）、Ｃｘ酵素（ＣＭＣアーゼ、エンド−β
−グルカナーゼともいう。）およびβ−グルコシダーゼ
（セロビアーゼともいう。）など種々の名称で呼ばれる
酵素が存在する。セルラーゼはこれら酵素の相互作用に
より、セルロースを最終的にはグルコースまで分解す
る。近年、このセルラーゼは、バイオマス資源の有効利
用の観点から注目され、さかんに研究されている。特
に、オフィスで使用された古紙や段ボール古紙等の古紙
類を加水分解してグルコースや還元糖を得るための研究
が注目されている。しかしながら、従来からセルラーゼ
生産菌として、よく研究されてきたトリコデルマ・レー
ゼイ（Trechoderuma reesei）、トリコデルマ・ビリデ
（T. viride）やアスペルギルス（Aspergillus）属、ペ
ニシリウム（Penicillium）属等に属する微生物のセル
ラーゼ生産能は必ずしも十分でなかった。また、セルラ
ーゼ自体の分解力も十分でないため、セルロースを完全
にグルコースまで分解することができず、セロビオース
やセロオリゴ糖を多量に生成残存する等の問題があっ
た。Cellulase is a general term for a group of enzymes that catalyze an enzymatic reaction system that hydrolyzes cellulose into glucose, cellobiose, and cellooligotose. Depending on its mode of action, C ₁ enzyme (avicellase, cellobiohydrolase, It is also called FPase, exo-β-glucanase, etc.), Cx enzyme (CMCase, endo-β).
-Also called glucanase. ) And β-glucosidase (also referred to as cellobiase), there are enzymes called by various names. Cellulase eventually decomposes cellulose into glucose by the interaction of these enzymes. In recent years, this cellulase has attracted attention from the viewpoint of effective utilization of biomass resources and has been extensively studied. In particular, research for hydrolyzing used paper such as used paper and used paper in the office to obtain glucose and reducing sugar has attracted attention. However, as a cellulase-producing bacterium, the cellulase-producing ability of microorganisms belonging to the genus Trichoderuma reesei, Trichoderma viride (T. viride), Aspergillus, Penicillium, etc., which have been well-studied so far. Was not always enough. Further, since the degrading power of cellulase itself is not sufficient, cellulose cannot be completely decomposed into glucose, and there is a problem that a large amount of cellobiose or cellooligosaccharide is produced and remains.

【０００３】かかる問題を解決するため、セルラーゼ生
産能が高く、かつ生産するセルラーゼ自体の分解力も高
い微生物を、広く自然界から検索する試みがなされてき
ており、その結果、土穣から分離したアクレモニウム・
セルロリティカス（Acremonium cellulolyticus）に属
する微生物が産生するセルラーゼは、セルロースをほと
んど完全にグルコースにまで分解できることが見いださ
れている。さらに、この微生物の突然変異株であるアク
レモニウム・セルロリティカス（Acremonium celluloly
ticus）ＴＮ株（ＦＥＲＭ ＢＰ−６８５）が、セルラ
ーゼ生産能をさらに顕著に増大していることも見出され
ているが（特公平２−３８号公報）、このＴＮ株の生産
するセルラーゼは、ＦＰアーゼ、セロビアーゼ活性にお
いて満足できるものではなく、このＴＮ株においては、
セルロース原料を加水分解してグルコースや還元糖に変
換する実際の能力なそれほど高くはない。さらに、従来
の微生物が生産するセルラーゼは、上記ＣＭＣアーゼ
（Ｃｘ酵素）の活性が必ずしも十分でないため、酸やア
ルカリを用いた薬剤処理や機械的破砕等の前処理を行わ
なければ、繊維が裁断され難く、流動性が良くならず、
このためセルロース原料を高基質濃度で用いる場合、こ
れら薬剤の使用あるいは攪拌動力の削減が困難であると
いう問題を有していた。In order to solve such a problem, attempts have been made to search widely from nature for microorganisms which have a high cellulase-producing ability and a high decomposing ability of the cellulase itself to be produced, and as a result, acremonium separated from soil is obtained.・
It has been found that cellulase produced by a microorganism belonging to Acermonium cellulolyticus can decompose cellulose almost completely into glucose. In addition, a mutant strain of this organism, Acremonium cellulolycus
ticus) TN strain (FERM BP-685) is further found to have a significantly increased cellulase-producing ability (Japanese Patent Publication No. 2-38), but the cellulase produced by this TN strain is The FPase and cellobiase activities were not satisfactory, and in this TN strain,
The actual ability to hydrolyze cellulosic raw materials into glucose and reducing sugars is not very high. Further, since the activity of the above CMCase (Cx enzyme) is not always sufficient in cellulase produced by conventional microorganisms, the fiber will be cut unless pretreatment such as chemical treatment using acid or alkali or mechanical crushing is performed. It is difficult to be done, the fluidity does not improve,
Therefore, when the cellulose raw material is used at a high substrate concentration, it is difficult to use these chemicals or reduce the stirring power.

【０００４】[0004]

【発明が解決しようとする課題】本発明の課題は、上記
従来技術の問題点を解消しようとするものであり、具体
的にはセルラーゼの生産能が高いとともに、生産するセ
ルラーゼ自体活性が高く、かつセルロース原料の加水分
解に際して上記酸アルカリ等の薬剤処理を必要とせず、
また攪拌動力を削減しうるセルラーゼ生産菌を見いだ
し、セルロース原料を効率的かつ安価にグルコースや還
元糖に分解し得る手段を提供しようとするものである。The object of the present invention is to solve the above-mentioned problems of the prior art. Specifically, the cellulase-producing ability is high, and the cellulase itself produced is high in activity. And without the need for chemical treatment such as the above-mentioned acid-alkali in the hydrolysis of the cellulose raw material,
Another object of the present invention is to find a cellulase-producing bacterium capable of reducing the stirring power, and to provide a means capable of efficiently and inexpensively decomposing a cellulose raw material into glucose and reducing sugar.

【０００５】[0005]

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記目的
を達成するため鋭意研究した結果、上記アクレモニウム
・セルロリティカス（Acremonium cellulolyticus）Ｔ
Ｎ株の突然変異株が、該ＴＮ株に比べ特にＦＰアーゼお
よびセロビアーゼ活性が２倍以上で、極めて高いセルラ
ーゼ活性および該生産能を有することを見いだすととも
に、この突然変異株を使用することにより、極めて効率
的かつ安価にセルロース原料をグルコースや還元糖に分
解し得るとの知見を待て本発明を完成させたものであ
る。すなわち、本発明は以下の（１）〜（８）からなる
ものである。 （１）セルロース原料をアクレモニウム・セルロリティ
カス（Acremonium cellulolyticus）Ｃ１株（ＦＥＲＭ
Ｐ−１８５０８）または該菌株が生産するセルラーゼ
を用いて分解することを特徴とする、セルロース原料の
分解方法。 （２）セルロース原料をアクレモニウム・セルロリティ
カス（Acremonium cellulolyticus）Ｃ１株（ＦＥＲＭ
Ｐ−１８５０８）または該菌株が生産するセルラーゼ
を用いて糖化することを特徴とする、糖類の製造方法。 （３）セルロース原料が、古紙類である（１）または
（２）に記載の方法。 （４）古紙類が、シュレッデイング処理または解離処理
からなる前処理を施されたものである（３）に記載の方
法。 （５）古紙類が、乾燥物基準で、有機物比率が９０％以
上、リグニン含有率が２０％以下、へミセルロース含有
量が２０％以下のものである（３）又は（４）に記載の
方法。 （６）古紙類がオフィス古紙又は段ボール古紙である請
求項３〜５のいずれか一項に記載の方法。 （７）セルラーゼ生産能が高く、かつセロビオースを炭
素源として良好な生育を示す、アクレモニウム・セルロ
リティカス（Acremonium cellulolyticus）Ｃ１株（Ｆ
ＥＲＭ Ｐ−１８５０８）。 （８）アクレモニウム・セルロリティカス（Acremonium
cellulolyticus）Ｃ１株（ＦＥＲＭ Ｐ−１８５０
８）を培地に培養し、培養物からセルラーゼを採取する
ことを特徴とするセルラーゼの製造方法。Means for Solving the Problems As a result of intensive studies to achieve the above object, the present inventors have found that the above-mentioned Acremonium cellulolyticus T
It was found that the mutant strain of N strain has an extremely high cellulase activity and the above-mentioned productivity, in particular, the FPase and cellobiase activities are two times or more that of the TN strain, and by using this mutant strain, The present invention has been completed in light of the finding that the cellulose raw material can be decomposed into glucose and reducing sugar extremely efficiently and inexpensively. That is, the present invention comprises the following (1) to (8). (1) Cellulose raw material is made from Acremonium cellulolyticus C1 strain (FERM
P-18508) or a cellulase produced by the strain, for decomposing the cellulose raw material. (2) Cellulose raw material is Acremonium cellulolyticus (Acremonium cellulolyticus) C1 strain (FERM
P-18508) or a cellulase produced by the strain for saccharification, which is a method for producing a saccharide. (3) The method according to (1) or (2), wherein the cellulose raw material is waste paper. (4) The method according to (3), wherein the waste paper is pretreated by shredding treatment or dissociation treatment. (5) The waste papers are those having an organic matter ratio of 90% or more, a lignin content of 20% or less, and a hemicellulose content of 20% or less on the dry matter basis (3) or (4) Method. (6) The method according to any one of claims 3 to 5, wherein the used paper is office used paper or cardboard used paper. (7) Acremonium cellulolyticus C1 strain (F having high cellulase-producing ability and showing good growth using cellobiose as a carbon source
ERM P-18508). (8) Acremonium cellulolyticus
cellulolyticus) C1 strain (FERM P-1850
A method for producing cellulase, which comprises culturing 8) in a medium and collecting cellulase from the culture.

【０００６】[0006]

【発明の実施の形態】本発明において用いるセルロース
原料としては、紙類のほか、バガズ、イネワラ、もみが
ら等の植物繊維質等が挙げられ、セルロースを含むもの
であればその種類を問わないが、本発明の有用性が最も
効果的に発揮されるのは、オフィス等で使用された古紙
あるいは段ボール古紙、古新聞紙等の古紙類である。ま
た、本発明において使用する微生物は、アクレモニウム
・セルロリティカス（Acremonium cellulolyticus）Ｔ
Ｎ株（ＦＥＲＭ ＢＰ−６８５）に対しＵＶ照射、ＮＴ
Ｇ処理を行って得たものであり、結晶セルロース５０ｇ
／Ｌ、硫酸アンモニウム５ｇ／Ｌを主成分とする培地で
７日間培養した培養液のセルラーゼ活性が同じ条件で培
養したアクレモニウム・セルロリティカス（Acremonium
cellulolyticus）ＴＮ株（ＦＥＲＭ ＢＰ−６８５）
と比較して、ＦＰアーゼ活性及びセロビアーゼ活性が２
倍以上である。以下に、本発明の使用微生物について詳
述する。BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION Cellulose raw materials used in the present invention include, in addition to papers, vegetable fibers such as bagasse, rice straw and rice husk, and the like, as long as they contain cellulose. The usefulness of the present invention is most effectively exerted on waste paper such as waste paper or corrugated waste paper and waste newspaper used in offices and the like. The microorganism used in the present invention is Acremonium cellulolyticus T.
UV irradiation, NT for N strain (FERM BP-685)
Obtained after G treatment, crystalline cellulose 50 g
/ L, 5 g / L ammonium sulphate as the main component, Acremonium cellulolyticus (Acremonium cellulolyticus) was cultured for 7 days in a medium containing the same cellulase activity.
cellulolyticus) TN strain (FERM BP-685)
FPase activity and cellobiase activity are 2
More than double. The microorganism used in the present invention is described in detail below.

【０００７】（１）本菌株の取得方法 親株として、アクレモニウム・セルロリティカス（Acre
monium cellulolyticus）ＴＮ株（ＦＥＲＭ ＢＰ−６
８５）を用い、これをセルロースパウダー４０ｇ／Ｌ、
バクトペプトン１０ｇ／Ｌ、硝酸カリウム６ｇ／Ｌ、尿
素２ｇ／Ｌ、塩化カリウム１．６ｇ／Ｌ、硫酸マグネシ
ウム１．２ｇ／Ｌ、リン酸２水素カリウム１２ｇ／Ｌを
含む培地（ｐＨ４．０）に接種し、３０℃で１０日間好
気的に培養した後、生理食塩水で１×１０^−３〜１×１
０^−４に希釈し、紫外線照射（東芝殺菌ランプ、距離３
０ｃｍ、３０分間）した。処理した菌株をセロビオース
１０ｇ／Ｌ、バクトヘプトン１０ｇ／Ｌ、硝酸カリウム
６ｇ／Ｌ、尿素２ｇ／Ｌ、塩化カリウム１．６ｇ／Ｌ、
硫酸マグネシウム１．２ｇ／Ｌ、リン酸２水素カリウム
１２ｇ／Ｌ、Ｌ−（−）ソルボース１０ｇ／Ｌ、寒天２
０ｇ／Ｌを含む平板培地（選択培地Ａとする）に塗布
し、３０℃でインキュベートした。５〜１０日間培養
後、生育したコロニーから、以下の性質を有する本菌株
をスクリーニングした。(1) Method for obtaining this strain As a parent strain, Acremonium cellulolyticus (Acre
monium cellulolyticus) TN strain (FERM BP-6
85), and 40 g / L of cellulose powder,
Inoculate a medium (pH 4.0) containing 10 g / L bactopeptone, 6 g / L potassium nitrate, 2 g / L urea, 1.6 g / L potassium chloride, 1.2 g / L magnesium sulfate, and 12 g / L potassium dihydrogen phosphate. And aerobically cultivated at 30 ° C. for 10 days, and then 1 × 10 ⁻³ to 1 × 1 with physiological saline.
0 diluted ^-4 ultraviolet radiation (Toshiba bactericidal lamp, distance 3
0 cm, 30 minutes). The treated strain was cellobiose 10 g / L, bacto hepton 10 g / L, potassium nitrate 6 g / L, urea 2 g / L, potassium chloride 1.6 g / L,
Magnesium sulfate 1.2 g / L, potassium dihydrogen phosphate 12 g / L, L-(-) sorbose 10 g / L, agar 2
It was applied to a plate medium (selective medium A) containing 0 g / L and incubated at 30 ° C. After culturing for 5 to 10 days, this strain having the following properties was screened from the grown colonies.

【０００８】（２）培養的・形態的性質 選択培地Ａを含む３種類の培地を用いて、本菌株とＴＮ
株を培養し、その形態を観察した。結果を以下に示す。 選択培地Ａにより培養した場合 選択培地Ａにおける目視での観測では、ＴＮ株、本菌株
のコロニーともに、やや赤みを帯びた茶褐色でゆるく盛
り上がり羊毛状を呈しているが、本菌株のコロニーはセ
ロビオースを炭素源とした当培地での生育がＴＮ株より
速く、良好で、また、中心部に孔のあるドーナツ状に盛
り上がる点で異なっている。すなわち、本菌株のコロニ
ーは三角形に近く、寒天培地への浸潤がＴＮ株より深
い。また、盛り上がりも本菌株の方が高く、２ｍｍ程の
盛り上がりを示す。径はコロニーによって差があるが、
ＴＮ株、本菌株とも、７〜１４日の培養で５〜１０ｍｍ
になる。裏面からコロニーを観察するとＴＮ株、本菌株
とも赤褐色であるが、本菌株は周辺部がより深く浸潤す
る。(2) Culture and Morphological Properties The strain of the present invention and TN were prepared by using three kinds of media including selection medium A.
The strain was cultivated and its morphology was observed. The results are shown below. In the case of culturing in the selective medium A, by visual observation in the selective medium A, both the TN strain and the colony of the present strain have a slightly reddish brown color and are loosely raised and have a wool-like appearance, but the colonies of the present strain show cellobiose. It differs from the TN strain in that the growth on this medium using a carbon source is faster and better than the TN strain, and that it rises like a donut with a hole in the center. That is, the colony of this strain is close to a triangle, and the infiltration into the agar medium is deeper than that of the TN strain. Moreover, the swelling of this strain was also higher, and the swelling was about 2 mm. The diameter varies depending on the colony,
Both TN strain and this strain are 5 to 10 mm after 7 to 14 days of culture.
become. When colonies are observed from the back side, both the TN strain and the present strain are reddish brown, but the peripheral portion of the present strain invades deeper.

【０００９】選択塔地Ｂを用いた場合 以下の選択培地Ｂで３０℃、７〜１４日間培養した。そ
のときのコロニー形態は、ＴＮ株が表面に放射線状のく
ぼみを呈し、選択培地Ａの場合と類似した形態を呈する
のに対し、本菌株ではくぼみは見られず、白い羊毛状の
菌糸が発達する。選択培地Ｂ；選択培地Ａの窒素源から
バクトペプトン、硝酸カリウム、尿素を除き、代わりに
コーンステイープリカー５ｇ／Ｌ、硫酸アンモニウム５
ｇ／Ｌを添加し、さらにセロビオース１０ｇ／Ｌをセル
ロースパウダーｌ０ｇ／Ｌに替えた培地。When the selective tower B was used, it was cultured in the following selective medium B at 30 ° C. for 7 to 14 days. As for the colony morphology at that time, the TN strain exhibited a radial depression on the surface and exhibited a morphology similar to that of the selective medium A, whereas no depression was observed in this strain, and white wooly hyphae were developed. To do. Selective medium B; Bactopeptone, potassium nitrate, and urea were removed from the nitrogen source of selective medium A, and instead, corn stay liquor 5 g / L, ammonium sulfate 5
A medium in which g / L was added, and 10 g / L of cellobiose was replaced with 10 g / L of cellulose powder.

【００１０】ポテトデキストロース寒天培地を用いた
場合 ＴＮ株のコロニーは平坦のまま広がり、集落は最初白色
で後にやや黄色みをおびるのに対し、本菌株の場合は盛
り上がりが大きく、培地下部への浸潤も大きい。しか
し、広がりはＴＮ株より小きい。また、本菌株は、１０
〜２０日で赤褐色集落上に白色の菌糸束を形成する。When the potato dextrose agar medium was used, the colonies of the TN strain spread flat and the colony was initially white and then slightly yellowish, whereas this strain had a large swelling and infiltration to the bottom of the medium. Is also big. However, the spread is smaller than the TN stock. In addition, this strain is 10
White fungal bundles are formed on reddish brown colonies in about 20 days.

【００１１】（３）菌糸及び分生糸の形態 菌糸の形態は、ＴＮ株と類似しており、菌糸の直径は
０．５〜２．５μｍ、無色で菌糸には隔壁が認められ
る。また、菌糸表面は滑面である。本菌株は分生糸形成
能がＴＮ株よりやや安定しているものの、本菌株の分生
糸はツアペツク寒天およびポテトデキストロース寒天培
地による総体培養により消滅しやすい。分生子の形態は
ＴＮ株と類似しており、分生子柄は気生菌糸側面より突
出し、無色である。また、形は亜球形［（２．５〜５μ
ｍ）×（２〜４．５μｍ）］で滑面、無色で連鎖は非常
にゆるく分散しやすい。 （４）生理学的性質 本菌株の生育ｐＨ範囲は、ＴＮ株と同様、３．５〜６．
０で、最適ｐＨ４付近である。生育温度範囲は１５℃〜
４３℃で、最適生育温度は３０℃付近である。(3) Morphology of hyphae and conidial hyphae The morphology of hyphae is similar to that of the TN strain, the hyphae have a diameter of 0.5 to 2.5 μm and are colorless, and hyphae have septa. In addition, the surface of mycelium is smooth. Although this strain has a slightly more stable ability to form conidial filaments than the TN strain, congenital filaments of this strain tend to disappear by whole culture in Tuapetsk agar and potato dextrose agar medium. The form of conidia is similar to that of the TN strain, and the conidia stalk protrudes from the side surface of aerial hyphae and is colorless. Also, the shape is a subsphere [(2.5-5μ
m) × (2-4.5 μm)], the surface is smooth and colorless, and the chains are very loose and easily dispersed. (4) Physiological properties The growth pH range of this strain is 3.5 to 6.
At 0, the optimum pH is around 4. Growth temperature range is 15 ℃
At 43 ° C, the optimum growth temperature is around 30 ° C.

【００１２】上記菌学的性質について、パージーズ・マ
ニュアル・オブ・ディタミネイティブ・バクテリオロジ
ー（Bergey’s mannua of Determinative Bacteriolog
y）第８版を参照、比較したところ、本菌株は、アクレ
モニウム・セルロリティカス（Acremonium cellulolyti
cus）に属すると認められる。そして、最も類縁の菌株
として、アクレモニウム・セルロリティカスＴＮ株が挙
げられる。しかしながら、本菌株は、以下に示すよう
に、セルラーゼ生産能がＴＮ株の２倍以上であること、
セロビオースを炭素源とした培地での生育がＴＮ株より
良好であること、及び上記〜の３種類の培地で培養
したときのコロニー形態が上記のように異なることか
ら、本菌株は新菌株に属するものであり、アクレモニウ
ム・セルロリティカスＣ１と命名して、産業技術総合研
究所生命工学工業技術研究所の特許微生物寄託センター
に寄託した（ＦＥＲＭ Ｐ−１８５０８）。Regarding the above-mentioned mycological properties, Bergey's mannua of Determinative Bacteriolog
y) As a result of reference and comparison with the 8th edition, the strain was found to be Acremonium cellulolyti.
cus)). The most closely related strain is the Acremonium cellulolyticus TN strain. However, as shown below, this strain has a cellulase-producing ability that is at least twice that of the TN strain.
This strain belongs to a new strain because it grows better in a medium containing cellobiose as a carbon source than in the TN strain, and because the colony morphology when cultured in the above three types of medium is different as described above. It was named Acremonium cellulolyticus C1 and was deposited at the Patent Microorganism Depositary Center of the Institute of Biotechnology, National Institute of Advanced Industrial Science and Technology (FERM P-18508).

【００１３】本菌株は、ＦＰアーゼ、ＣＭＣアーゼ、セ
ロビアーゼ等のセルラーゼ生産能が極めて高い。本発明
のアクレモニウム・セルロリティカスＣ１株は、培地に
該菌株を接種し、常法に従って培養することができる。
培地は、炭素源として結晶性セルロース５０ｇ／Ｌ、窒
素源として硫酸アンモニウム５ｇ／Ｌを含有しているこ
とが好ましく、他の資化し得る炭素源及び窒素源を適当
量含有せしめておくことが好ましい。本発明において、
セルロース原料を分解あるいは糖化するためには、上記
培養して得た菌体または培養物をセルロース原料含有培
地に加えて培養してもよく、また、培養液、下記粗酵素
液あるいは精製したセルラーゼ等を、セルロース原料に
加えいわゆる酵素法により分解、糖化を行ってもよい。This strain has an extremely high ability to produce cellulases such as FPase, CMCase and cellobiase. The Acremonium cellulolyticus C1 strain of the present invention can be cultivated according to a conventional method after inoculating the culture medium with the strain.
The medium preferably contains 50 g / L of crystalline cellulose as a carbon source and 5 g / L of ammonium sulfate as a nitrogen source, and it is preferable that other mediums of assimilable carbon source and nitrogen source are contained in appropriate amounts. In the present invention,
In order to decompose or saccharify the cellulose raw material, cells or a culture obtained by the above culture may be added to the cellulosic material-containing medium for culturing, and a culture solution, the following crude enzyme solution or purified cellulase, etc. May be added to the cellulose raw material to be decomposed and saccharified by a so-called enzymatic method.

【００１４】本発明におけるセルラーゼは、上記アクレ
モニウム・セルロリティカスＣ１株を上記のように培養
して得られた培養物中から一般の酵素の採取法及び精製
手段を使用して得ることができる。すなわち、遠心分離
又はろ過等の通常の固液分離手段により、菌体を培養液
から除去し、粗酵素液を得る。この粗酵素液は、セルロ
ース原料の分解あるいは糖化にそのまま使用することも
できるが、さらに、塩折法、沈殿法、限外ろ過法等の分
離手段により粗酵素を得、公知の方法により精製結晶化
してセルラーゼを得る。The cellulase in the present invention can be obtained by using a general enzyme collection method and purification means from the culture obtained by culturing the above-mentioned Acremonium cellulolyticus C1 strain as described above. . That is, bacterial cells are removed from the culture solution by an ordinary solid-liquid separation means such as centrifugation or filtration to obtain a crude enzyme solution. This crude enzyme solution can be used as it is for decomposing or saccharifying a cellulose raw material, but further, a crude enzyme is obtained by a separation means such as a salt folding method, a precipitation method, an ultrafiltration method, and purified crystals are obtained by a known method. To obtain cellulase.

【００１５】本発明のセルラーゼは、ＦＰアーゼ、ＣＭ
Ｃアーゼおよびセロビアーゼ等からなる複合酵素系を形
成しており、これらの酵素学的性質を以下に示す。 Ａ．ＦＰアーゼ （１）作用 濾紙、セルロース末、アビセル、脱胎線など結晶性の高
い不溶性セルロースに作用してグルコース、セロビオー
ス等の還元糖を生成する。 （２）作用ｐＨ範囲及び最適作用ｐＨ 本酵素の作用ｐＨ範囲は２〜８、最適作用ｐＨは約４．
５である。 （３）安定ｐＨ クエン酸−リン酸塩緩衝液の下で４５℃で２０時間放置
したときの安定ｐＨ範囲は約３．５〜約８である。 （４）作用温度範囲及び最適作用温度 本酵素は約９０℃までの高温で作用するが、１％アビセ
ル、０．０５Ｍクエン酸緩衝液ｐＨ４．８）の下で１０
分間反応させたときの最適作用温度は約６５℃である。 （５）熱安定性 ０．０５Ｍクエン酸緩衝液（ＰＨ４．８）中、温度を種
々変えて１０分間処理した結果、本酵素は約６０℃まで
の温度ではほとんど失活せず、６５℃、１０分間の加熱
で約５０％、７０℃、１０分間の加熱で約８０％それぞ
れ失活する。 （６）阻害剤 各種重金属イオンのうちで１ｍＭ以上の水銀イオンおよ
び銅イオンにより強く阻害される。The cellulase of the present invention includes FPase and CM.
It forms a complex enzyme system consisting of Case and cellobiase, and the enzymatic properties of these are shown below. A. FPase (1) Action It acts on highly crystalline insoluble cellulose such as filter paper, cellulose powder, Avicel, and ectocortex to produce reducing sugars such as glucose and cellobiose. (2) Working pH range and optimum working pH The working pH range of this enzyme is 2 to 8, and the optimum working pH is about 4.
It is 5. (3) Stable pH The stable pH range is about 3.5 to about 8 when left at 45 ° C. for 20 hours under a citric acid-phosphate buffer solution. (4) Working temperature range and optimum working temperature This enzyme works at a high temperature up to about 90 ° C., but under 10% under 1% Avicel, 0.05M citrate buffer pH 4.8).
The optimum working temperature when reacting for minutes is about 65 ° C. (5) Thermal stability As a result of treatment in 0.05 M citrate buffer (PH 4.8) for 10 minutes at various temperatures, the enzyme showed almost no inactivation at temperatures up to about 60 ° C, and 65 ° C. It is deactivated by about 50% by heating for 10 minutes and about 80% by heating at 70 ° C. for 10 minutes. (6) Inhibitor Among various heavy metal ions, it is strongly inhibited by 1 mM or more of mercury ion and copper ion.

【００１６】Ｂ．ＣＭＣアーゼ （１）作用 カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）等の可溶性セル
ロース誘導体に作用し、これをグルコース及びセロビオ
ース等に分解する作用を有するが、本発明のＣＭＣアー
ゼにおいては、ＣＭＣアーゼＩ、II、IIIおよびIVが混
在する。なお、ＣＭＣアーゼＩおよびIIは、カルボキシ
メチルセルロース（ＣＭＣ）等の可溶性セルロース誘導
体をグルコース及びセロビオース等に分解する作用を有
し、ＣＭＣアーゼIIIおよびIVは、グルコースを極くわ
ずかしか生成せずセロビオース以上のオリゴ糖に分解す
る作用を有する。 （２）作用ｐＨ範囲及び最適作用ｐＨ ＣＭＣアーゼ複合体の作用ｐＨ範囲は、約２〜８にわた
り、最適作用ｐＨは約４．５である。 （３）安定ｐＨ クエン酸−リン酸塩緩衝液中において２０時間放置した
ときのＣＭＣアーゼ複合体の安定ｐＨ範囲は約３．５〜
６である。 （４）作用温度範囲及び最適作用温度 このＣＭＣアーゼ複合体は約９０℃までの高温で作用す
るが、１％ＣＭＣ、０．０５Ｍクエン酸緩衝液（ｐＨ
４．８）中において１０分間反応させたときの最適作用
温度は約６５℃である。 （５）熱安定性 ０．０５Ｍクエン酸緩衝液（ｐＨ４．８）中、温度を種
々変えて１０分間加熱処理した結果、約６０℃までの温
度ではほとんど失活せず、８５℃、１０分間の加熱で約
４０％、７０℃、１０分間の加熱で約７０％それぞれ失
活する。 （６）阻害剤 各種金属イオンのうちで１ｍＭ以上の水銀イオンおよび
銅イオンにより強く阻害される。B. CMCase (1) Action It acts on a soluble cellulose derivative such as carboxymethylcellulose (CMC) and has the action of degrading this into glucose and cellobiose. In the CMCase of the present invention, CMCase I, II, III and IV is mixed. CMCases I and II have the action of degrading soluble cellulose derivatives such as carboxymethyl cellulose (CMC) into glucose and cellobiose, and CMCases III and IV produce very little glucose and produce more than cellobiose. Has the action of decomposing into oligosaccharides. (2) Working pH range and optimum working pH The working pH range of the CMCase complex extends from about 2 to 8, and the optimum working pH is about 4.5. (3) Stable pH The stable pH range of the CMCase complex when left in the citric acid-phosphate buffer solution for 20 hours is about 3.5-.
It is 6. (4) Working temperature range and optimum working temperature This CMCase complex acts at a high temperature up to about 90 ° C, but 1% CMC, 0.05M citrate buffer solution (pH
The optimum working temperature when reacted in 4.8) for 10 minutes is about 65 ° C. (5) Thermal stability As a result of heat treatment in 0.05 M citrate buffer (pH 4.8) for 10 minutes at various temperatures, almost no inactivation was achieved at temperatures up to about 60 ° C, and 85 ° C for 10 minutes. About 40% by heating at 70 ° C. and about 70% by heating at 70 ° C. for 10 minutes. (6) Inhibitor Among various metal ions, it is strongly inhibited by 1 mM or more of mercury ion and copper ion.

【００１７】Ｃ．セロビアーゼ （１）作用 サリシン、セロビオース、セロトリオース、セロテトラ
オース、セロペンタオース、セロヘキサオースのような
セロオリゴ糖に作用して、グルコースに分解する。ま
た、本酵素はアビセルのような高分子セルロースにも作
用するが、ＣＭＣやＨＥＣ（ヒドロキシエチルセルロー
ス）にはほとんど作用しない。 （２）作用ｐＨ範囲及び最適作用ｐＨ 本酵素の作用ｐＨ範囲は２〜８、最適作用ｐＨは約４．
５である。 （３）安定ｐＨ クエン酸−リン酸緩衝液中で４５℃で２０時間放置した
ときの安定ｐＨ範囲は約３．５〜５である。 （４）作用温度範囲及び最適作用温度 本酵素は約９０℃までの高温に作用するが、１％セロビ
オース、０．０５Ｍクエン酸緩衝液（ｐＨ４．８）中に
おいて１０分間反応させたときの最適作用温度は約８５
℃である。 （５）熱安定性 ０．０５Ｍクエン酸緩衝液（ｐＨ４．８）中において、
温度を種々変えて１０分間加熱処理した結果、本酵素は
約６０℃までの温度ではほとんど失活せず、７０℃、１
０分間の加熱で約４０％、８０℃、１０分間の加熱で９
０％以上それぞれ失活する。 （６）阻害剤 各種重金属イオンのうちで１ｍＭ以上の水銀イオン及び
銅イオンにより強く阻害される。C. Cellobiase (1) action It acts on cellooligosaccharides such as salicin, cellobiose, cellotriose, cellotetraose, cellopentaose and cellohexaose to decompose them into glucose. Moreover, this enzyme acts on high molecular weight cellulose such as Avicel, but hardly acts on CMC and HEC (hydroxyethyl cellulose). (2) Working pH range and optimum working pH The working pH range of this enzyme is 2 to 8, and the optimum working pH is about 4.
It is 5. (3) Stable pH The stable pH range when left to stand in a citric acid-phosphate buffer solution at 45 ° C. for 20 hours is about 3.5 to 5. (4) Action temperature range and optimum action temperature This enzyme acts at a high temperature up to about 90 ° C, but is optimal when reacted for 10 minutes in 1% cellobiose, 0.05M citrate buffer (pH 4.8). Working temperature is about 85
℃. (5) In a thermostable 0.05M citrate buffer (pH 4.8),
As a result of heat treatment at various temperatures for 10 minutes, the enzyme was hardly inactivated at temperatures up to about 60 ° C,
About 40% by heating for 0 minutes, 9 by heating at 80 ° C for 10 minutes
Deactivate by 0% or more. (6) Inhibitor Among various heavy metal ions, it is strongly inhibited by 1 mM or more of mercury ion and copper ion.

【００１８】次に、本発明によるセルロース原料の糖化
工程について説明する。本発明においては、セルロース
原料の面倒な前処理を特に必要としない。例えば、古紙
類の糖化は、以下のようにして行うことができる。予
め、古紙類を前処理しておくが、一般的には、古紙類の
前処理には、繊維を切断しない簡単な前処理と、形態を
変えたり、繊維を短くするような前処理の２種類があ
る。前者には、水を加えて単にミキシングし、繊維をほ
ぐすだけの離解や、裁断のみを行うシュレッデイング等
があり、また、後者には、酸、アルカリ等による薬剤処
理法、叩解（リフアイニング）法、凍結粉砕、ボールミ
ルやロールミル等による機械的破砕法等がある。本発明
においては、かかるシュレツデイング処理又は解離処理
しておくだけで、効率的に古紙類を加水分解、糖化する
ことができる。本発明においては、後者の前処理を行っ
てもよいが、薬剤、設備、消費電力等に係るコスト増や
処理の煩雑さに比して、得られる効果は、上記簡単な前
処理法を採用する場合と比べ格別優れるわけではない。
このため、本発明において行う前処理は、シュレッデイ
ング処理又は離解処理等の簡単な前処理である方がより
有利である。Next, the saccharification step of the cellulose raw material according to the present invention will be described. In the present invention, a troublesome pretreatment of the cellulose raw material is not particularly required. For example, saccharification of waste paper can be performed as follows. The used paper is pre-processed in advance. Generally, the used paper is pre-processed without cutting the fiber and with pre-processing to change the shape or shorten the fiber. There are types. The former includes disintegration in which water is simply mixed and the fibers are loosened, and shredding is performed in which only the cutting is performed.The latter is treated with a chemical agent such as acid or alkali, and a beating (refining) method. , Freeze pulverization, mechanical crushing methods such as ball mills and roll mills. In the present invention, waste papers can be efficiently hydrolyzed and saccharified only by performing such shredding treatment or dissociation treatment. In the present invention, the latter pretreatment may be carried out, but the effect obtained is that the above-mentioned simple pretreatment method is adopted in comparison with the cost increase related to chemicals, equipment, power consumption and the complexity of treatment. It's not that much better than doing it.
Therefore, it is more advantageous that the pretreatment performed in the present invention is a simple pretreatment such as shredding treatment or disaggregation treatment.

【００１９】上記のように前処理された古紙類は、窒素
源および補助栄養源を加えた培養槽、あるいは糖化槽に
供給し、見かけの粘度を適宜調整した後、培養槽に本発
明のアクレモニウム・セルロリティカスＣ１株の菌体あ
るいはその培養物を加えて培養するか、あるいは糖化槽
に該培養液、粗酵素液またはセルラーゼを酵素源として
加えて、古紙類の分解、糖化を行う。培養によるとき
は、培地のｐＨは３．５〜６．０、特にｐＨ４付近、温
度は１５℃〜４３℃で、特に３０℃付近に調整するのが
よく、酵素法によるときは、緩衝剤として、例えば酢酸
ナトリウムと酢酸の混合溶液を０．１ｍｏｌ／Ｌを加え
てｐＨ３〜７、温度範囲は３０℃〜９０℃、特に４０〜
８０℃に調整するのが好ましい。前処理をした古紙類に
対するセルラーゼの使用量は、２〜３０ＦＰＵ／ｇ（古
紙）が好ましく、５〜１０ＦＰＵ／ｇ（古紙）がさらに
好ましい。The waste paper pretreated as described above is supplied to a culture tank containing a nitrogen source and a supplemental nutrient source, or a saccharification tank, and the apparent viscosity is adjusted appropriately, and then the acre of the present invention is added to the culture tank. The fungus body of Monium cellulolyticus C1 strain or a culture thereof is added and cultivated, or the culture solution, crude enzyme solution or cellulase is added as an enzyme source to a saccharification tank to decompose and saccharify waste paper. When culturing, the pH of the medium is adjusted to 3.5 to 6.0, especially around pH 4, and the temperature is preferably 15 to 43 ° C., especially around 30 ° C. , For example, 0.1 mol / L of a mixed solution of sodium acetate and acetic acid is added to have a pH of 3 to 7, and a temperature range is 30 to 90 ° C., particularly 40 to
It is preferable to adjust the temperature to 80 ° C. The amount of cellulase used for the pretreated waste paper is preferably 2 to 30 FPU / g (waste paper), and more preferably 5 to 10 FPU / g (waste paper).

【００２０】本発明においては、前処理した古紙類とセ
ルラーゼを間欠的に供給する方法（流加式）、前処理し
た古紙類とセルラーゼを大量に一括して供給し、反応さ
せる方法（一括法）のいずれでもよい。流加式を採用す
る場合、前処理した古紙類とセルラーゼを供給する時期
として、見かけの粘度状態に応じて供給する方法、見か
けの粘度状態にかかわらず、一定時間毎に供給する方法
のいずれを採用してもよい。培養法による場合も、原料
あるいは菌体、培養物の添加手段には特に制限はない。In the present invention, a method of intermittently supplying pretreated waste paper and cellulase (fed-batch type), a method of supplying a large amount of pretreated waste paper and cellulase in batch and reacting them (collective method) ) Either. When the fed-batch method is adopted, either the method of supplying pretreated waste paper and cellulase according to the apparent viscosity state or the method of supplying it at regular intervals regardless of the apparent viscosity state is used. May be adopted. Also in the case of the culturing method, there are no particular restrictions on the means for adding the raw materials, the cells, or the culture.

【００２１】本発明において、セルロース原料として古
紙類を用いる場合、乾燥重量基準で、有機物比率が９０
％以上、リグニン含有量が２０％以下、ヘミセルロース
含有量が２０％以下である場合に、特に効果的である。
すなわち、リグニン含有量が２０％以下、ヘミセルロー
ス含有量が２０％以下であると、セルロース成分が多く
なるため、前処理として、薬剤処理や機械的破砕処理等
を行わなくとも、本発明により、古紙類を十分に分解、
糖化することができる。このような組成を有する古紙類
の具体例としては、例えばオフィス古紙や段ボール古紙
等が挙げられる。また、セルロース原料として、上記の
条件を満たすものは、古紙類に限らず極めて効果的に分
解、糖化できる。In the present invention, when used paper is used as the cellulose raw material, the organic matter ratio is 90 on a dry weight basis.
% Or more, the lignin content is 20% or less, and the hemicellulose content is 20% or less, it is particularly effective.
That is, when the lignin content is 20% or less and the hemicellulose content is 20% or less, the cellulose component is large, and therefore, according to the present invention, the waste paper can be used without pretreatment such as chemical treatment or mechanical crushing treatment. Fully decomposes
It can be saccharified. Specific examples of waste papers having such a composition include waste office paper and waste corrugated paper. Further, as the cellulose raw material, those satisfying the above conditions can be decomposed and saccharified extremely effectively, not limited to waste paper.

【００２２】実施例１ 本発明のアクレモニウム・セルロリティカス（Acremoni
um cellulolyticus）Ｃ１株とその親株であるアクレモ
ニウム・セルロリティカス（Acremonium cellulolyticu
s）ＴＮ株とのセルラーゼ活性を比較した。結晶性セル
ロース５０ｇ／Ｌ、コーンステイープリカー１０ｇ／
Ｌ、硫酸アンモニウム５ｇ／Ｌ、尿素３ｇ／Ｌ、硫酸マ
グネシウム１．２ｇ／Ｌ、リン酸２水素カリウム１２ｇ
／Ｌ、硫酸亜鉛１０ｍｇ／Ｌ、硫酸マンガン１０ｍｇ／
Ｌ、硫酸銅１０ｍｇ／Ｌからなる培地（ｐＨ４．０）を
定法により殺菌後、本菌株またはその親株であるＴＮ株
を接種し、３０℃で７日間好気的に培養した。培養後、
遠心分離して得た上澄み液について、生産されたセルラ
ーゼのＦＰＵ活性（ＦＰアーゼ活性）を測定した。本菌
株のＦＰＵは１７Ｕ／ｍＬであるのに対して、ＴＮ株の
ＦＰＵは８Ｕ／ｍＬであり、本菌株のセルラーゼ生産能
は、親株に比べ、ＦＰＵが約２．１倍に増大していた。Example 1 Acremonium cellulolyticus (Acremoni) of the present invention
um cellulolyticus) C1 strain and its parent strain, Acremonium cellulolyticu
s) Cellulase activity was compared with that of the TN strain. Crystalline cellulose 50g / L, corn stay liquor 10g /
L, ammonium sulfate 5 g / L, urea 3 g / L, magnesium sulfate 1.2 g / L, potassium dihydrogen phosphate 12 g
/ L, zinc sulfate 10 mg / L, manganese sulfate 10 mg /
After sterilizing a medium (pH 4.0) consisting of L and copper sulfate 10 mg / L by a standard method, this strain or its parent strain TN strain was inoculated and cultured aerobically at 30 ° C for 7 days. After culturing,
The FPU activity (FPase activity) of the produced cellulase was measured for the supernatant obtained by centrifugation. The FPU of this strain was 17 U / mL, whereas the FPU of the TN strain was 8 U / mL, and the cellulase-producing ability of this strain was about 2.1 times as high as that of the parent strain. .

【００２３】なお、上記酵素活性の測定法は、以下のと
おりである。 ［セルラーゼ活性測定法］濾紙洩紙（ワットマンＮｏ．
１）５０ｍｇを基質とし、これに酵素液０．５ｍＬとク
エン酸緩衝液（ｐＨ４．８、０．０５Ｍ）１．０ｍＬを
加え、５０℃で１．０時間酵素反応を行った後、ジニト
ロサリチル酸試薬３．０ｍＬを加え、１００℃で５分間
加熱し発色させる。冷却後、これにイオン交換水または
蒸留水２０ｍＬを加え、５４０ｎｍの波長で比色定量す
る。１分間に１μｍｏｌのゲルコースに相当する還元糖
を生成する酵素基を１ユニット（ＦＰＵ）とした。The method for measuring the enzyme activity is as follows. [Cellulase activity measurement method] Filter paper leak paper (Whatman No.
1) 50 mg as a substrate, 0.5 mL of enzyme solution and 1.0 mL of citrate buffer solution (pH 4.8, 0.05 M) were added to this, and the enzyme reaction was carried out at 50 ° C. for 1.0 hour, followed by dinitrosalicylic acid. Add 3.0 mL of reagent and heat at 100 ° C. for 5 minutes to develop color. After cooling, 20 mL of ion-exchanged water or distilled water is added to this, and colorimetric determination is performed at a wavelength of 540 nm. One unit (FPU) was defined as an enzyme group that produced a reducing sugar corresponding to 1 μmol of gel course per minute.

【００２４】実施例２ 基質として、乾式粉砕機（大阪ケミカル社製）で離解し
たオフィス古紙（乾燥重量でセルロース６５％以上、リ
グニン１５％以下）を用いた。該オフィス古紙２．５ｇ
に対して、本菌株の５日間培養液を１０ＦＰＵ／ｇ（古
紙）相当、及び０．２Ｎ酢酸緩衝液を入れて合計５０ｍ
Ｌとし、４５℃で１００ｒｐｍで振とう反応させた。比
較例１として、本菌株の代わりに、トリコデルマ・リー
セイＲＵＴＣ−３０の培養液を１０ＦＰＵ／ｇ（古紙）
相当使用し、他は実施例１と同様に処理した。反応開始
から１時間後、４時間後、２４時間後、４８時間後に得
られた還元糖及びグルコースの濃度測定した。実施例２
および比較例１の結果を図１に示す。使用した酵素単位
量（ＦＰＵ）は同量であったが、実施例２の方が、比較
例１よりも還元糖の生成速度が遠く、反応開始４時間後
の還元糖生成量が、実施例２は比較例１の約１．５倍で
あった。また、最終的なグルコース生成量は、実施例２
が比較例１の約１．４倍であった。Example 2 As a substrate, used office waste paper (65% or more by dry weight of cellulose and 15% or less by lignin) disaggregated by a dry grinder (Osaka Chemical Co., Ltd.) was used. 2.5g of the office waste paper
On the other hand, a total of 50 m of the culture solution of this strain for 5 days containing 10 FPU / g (waste paper) and 0.2 N acetate buffer.
It was set to L and the reaction was carried out by shaking at 45 ° C. and 100 rpm. As Comparative Example 1, instead of this strain, a culture solution of Trichoderma reesei RUTC-30 was used at 10 FPU / g (waste paper).
Correspondingly, the same treatment as in Example 1 was carried out. The concentrations of reducing sugars and glucose obtained 1 hour, 4 hours, 24 hours, and 48 hours after the start of the reaction were measured. Example 2
The results of Comparative Example 1 are shown in FIG. The amount of enzyme unit (FPU) used was the same, but in Example 2, the reducing sugar production rate was higher than in Comparative Example 1, and the reducing sugar production amount 4 hours after the start of the reaction was 2 was about 1.5 times that of Comparative Example 1. In addition, the final glucose production amount is the same as in Example 2.
Was about 1.4 times that of Comparative Example 1.

【００２５】[0025]

【発明の効果】本発明のアクレモニウム・セルロリティ
カスＣ１株は、セルラーゼ産生能が高く、また得られる
セルラーゼは、グルコースや還元糖に分解する活性が非
常に高い。したがって、本発明によれば、セルロース原
料、特に古紙類から、効率均かつ安価にグルコースや還
元糖を得ることができる。また、本発明のセルロース原
料、特に古紙類の分解、糖化に際しては、前処理がシュ
レッディング処理又は離解処理を施すだけでよく、薬剤
処理あるいはより高度な破砕処理等を省略することが可
能であり、より効率的、経済的である。EFFECTS OF THE INVENTION The Acremonium cellulolyticus C1 strain of the present invention has a high cellulase-producing ability, and the obtained cellulase has a very high activity of decomposing into glucose and reducing sugars. Therefore, according to the present invention, glucose and reducing sugar can be efficiently and inexpensively obtained from a cellulose raw material, particularly waste paper. Further, in the decomposition and saccharification of the cellulose raw material of the present invention, in particular, waste paper, the pretreatment may be only shredding treatment or disaggregation treatment, and it is possible to omit chemical treatment or higher crushing treatment. , More efficient and economical.

【図面の簡単な説明】[Brief description of drawings]

【図１】本菌株とトリコデルマ・リーセイＲＶＴＣ−３
０を用いた場合の反応時間と糖化率との関係を示す図で
ある。FIG. 1 This strain and Trichoderma reesei RVTC-3
It is a figure which shows the relationship between reaction time and the saccharification rate when 0 is used.

─────────────────────────────────────────────────────
─────────────────────────────────────────────────── ───

【手続補正書】[Procedure amendment]

【提出日】平成１３年１２月５日（２００１．１２．
５）[Submission date] December 5, 2001 (2001.12.
5)

【手続補正１】[Procedure Amendment 1]

【補正対象書類名】明細書[Document name to be amended] Statement

【補正対象項目名】００１２[Correction target item name] 0012

【補正方法】変更[Correction method] Change

【補正内容】[Correction content]

【００１２】上記菌学的性質について、W. Gams の「Ce
phalosporiumartige Schimmelpilge」P84、G. Fisher
（1971年）及びC. H. Dickinson、Mycol. Papers 115 P
10 （1968年）を参照した結果、本菌株は、アクレモニ
ウム（Acremonium）に属すると認められる。そして、最
も類縁の菌株として、アクレモニウム・セルロリティカ
ス（Acremonium cellulolyticus）ＴＮ株が挙げられる
（特公昭６１−１７４７６号公報）。しかしながら、本
菌株は、以下に示すように、セルラーゼ生産能がＴＮ株
の２倍以上であること、セロビオースを炭素源とした培
地での生育がＴＮ株より良好であること、及び上記〜
の３種類の培地で培養したときのコロニー形態が上記
のように異なることから、本菌株は新菌株に属するもの
であり、アクレモニウム・セルロリティカスＣ１と命名
して、産業技術総合研究所生命工学工業技術研究所の特
許微生物寄託センターに寄託した（ＦＥＲＭ Ｐ−１８
５０８）。Regarding the above-mentioned mycological properties, W. Gams, "Ce
phalosporiumartige Schimmelpilge "P84, G. Fisher
(1971) and CH Dickinson, Mycol. Papers 115 P.
10 (1968) see the results, this strain is found to belong to the Acremonium (Acremonium). The most closely related strain is the Acremonium cellulolyticus TN strain.
(Japanese Patent Publication No. 61-17476) . However, as shown below, this strain has a cellulase-producing ability that is at least twice that of the TN strain, that it grows better in a medium containing cellobiose as a carbon source than the TN strain, and
Since the morphology of the colonies when cultured in the three types of media described above was different as described above, this strain belongs to a new strain, and is named Acremonium cellulolyticus C1. Deposited at the Patent Microorganism Depositary Center of the Institute of Engineering and Technology (FERM P-18
508).

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 奥田 直之 東京都中央区佃２−17−15 月島機械株式 会社内 (72)発明者 大内 健二 東京都中央区佃２−17−15 月島機械株式 会社内 (72)発明者 鈴木 一晴 東京都三鷹市新川６−27−13−602 Ｆターム(参考） 4B050 CC01 DD03 EE02 LL02 LL05 LL10 4B064 AF02 AF03 AF04 AF12 CA05 CA21 CB07 CD19 CD24 DA10 DA11 DA16 4B065 AA58X AC14 AC15 BB03 BB18 BB26 BC02 BC03 BC05 CA31 CA41 CA43 CA55 CA60   ─────────────────────────────────────────────────── ─── Continued front page    (72) Inventor Naoyuki Okuda             Tsukishima Machinery Co., Ltd. 2-17-15 Tsukuda, Chuo-ku, Tokyo             In the company (72) Inventor Kenji Ouchi             Tsukishima Machinery Co., Ltd. 2-17-15 Tsukuda, Chuo-ku, Tokyo             In the company (72) Inventor Kazuharu Suzuki             6-27-13-602 Shinkawa, Mitaka City, Tokyo F-term (reference) 4B050 CC01 DD03 EE02 LL02 LL05                       LL10                 4B064 AF02 AF03 AF04 AF12 CA05                       CA21 CB07 CD19 CD24 DA10                       DA11 DA16                 4B065 AA58X AC14 AC15 BB03                       BB18 BB26 BC02 BC03 BC05                       CA31 CA41 CA43 CA55 CA60

Claims (8)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項１】 セルロース原料をアクレモニウム・セル
ロリティカス（Acremonium cellulolyticus）Ｃ１株
（ＦＥＲＭ Ｐ−１８５０８）または該菌株が生産する
セルラーゼを用いて分解することを特徴とする、セルロ
ース原料の分解方法。1. A method for decomposing a cellulose raw material, which comprises decomposing a cellulose raw material using Acremonium cellulolyticus C1 strain (FERM P-18508) or cellulase produced by the strain. 【請求項２】 セルロース原料をアクレモニウム・セル
ロリティカス（Acremonium cellulolyticus）Ｃ１株
（ＦＥＲＭ Ｐ−１８５０８）または該菌株が生産する
セルラーゼを用いて糖化することを特徴とする、糖類の
製造方法。2. A method for producing a saccharide, which comprises saccharifying a cellulosic raw material using Acremonium cellulolyticus C1 strain (FERM P-18508) or cellulase produced by the strain. 【請求項３】 セルロース原料が、古紙類である請求項
１または２に記載の方法。3. The method according to claim 1, wherein the cellulose raw material is waste paper. 【請求項４】 古紙類が、シュレッデイング処理または
解離処理からなる前処理を施されたものである請求項３
に記載の方法。4. The used paper is pretreated by shredding treatment or dissociation treatment.
The method described in. 【請求項５】 古紙類が、乾燥物基準で、有機物比率が
９０％以上、リグニン含有率が２０％以下、ヘミセルロ
ース含有量が２０％以下のものである請求項３又は４に
記載の方法。5. The method according to claim 3, wherein the waste paper has an organic matter ratio of 90% or more, a lignin content of 20% or less, and a hemicellulose content of 20% or less on a dry matter basis. 【請求項６】 古紙類がオフィス古紙又は段ボール古紙
である請求項３〜５のいずれか一項に記載の方法。6. The method according to claim 3, wherein the used paper is office used paper or corrugated cardboard used paper. 【請求項７】 セルラーゼ生産能が高く、かつセロビオ
ースを炭素源として良好な生育を示す、アクレモニウム
・セルロリティカス（Acremonium cellulolyticus）Ｃ
１株（ＦＥＲＭ Ｐ−１８５０８）。7. Acremonium cellulolyticus C, which has a high cellulase-producing ability and shows good growth using cellobiose as a carbon source.
One strain (FERM P-18508). 【請求項８】 アクレモニウム・セルロリティカス（Ac
remonium cellulolyticus）Ｃ１株（ＦＥＲＭ Ｐ−１
８５０８）を培地に培養し、培養物からセルラーゼを採
取することを特徴とするセルラーゼの製造方法。8. Acremonium cellulolyticus (Ac
remonium cellulolyticus) C1 strain (FERM P-1
8508) is cultured in a medium, and cellulase is collected from the culture.