JP2003012530A - Promoter for vascular endothelial growth factor production - Google Patents

Abstract

PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a promoter for vascular endothelial growth factor(VEGF) production having excellent neovascularization inducing effects. SOLUTION: This promoter for the VEGF production is obtained by including one or more kinds selected from an extract from Paeonia lactiflora Pall. and its allied species, an extract from a plant belonging to the genus Tilia, respective extracts from Equisetum arvense L., Mentha arvensis L. var. piperascens Malin., Mentha piperita L. and Mentha viridis L. and an extract from a leaf of a plant belonging to the genus Citrus in a base or a carrier.

Description

【発明の詳細な説明】 【０００１】 【発明の属する技術分野】本発明は、血管内皮細胞増殖
因子（ＶＥＧＦ）の産生を促進し得る血管内皮細胞増殖
因子産生促進剤に関する。本発明に係るＶＥＧＦ産生促
進剤は、特に、創傷治癒促進剤，育毛・養毛剤等として
応用され得るものである。 【０００２】 【従来の技術】従来より、創傷の治癒促進剤や育毛，養
毛剤においては、血行を促進したり、皮膚の新陳代謝を
活性化したりする作用を有する成分が用いられてきた。
かかる血行促進剤としては、センブリ抽出物（スウェル
チノーゲン），セファランティン，ビタミンＥ及びその
誘導体，γ-オリザノール等が挙げられ、皮膚の新陳代
謝を促進する物質としては、ワサビ抽出物（特開昭６２
−２１５１１６），炭素数１８〜２２の不飽和結合を２
以上含有する脂肪酸又はその塩等（特開平７−１９６４
６５），ヒドロキシサリチル酸又はそのエステルの配糖
体（特開平８−２６８８７０）などが開示されている。 【０００３】また、創傷治癒促進効果を有する物質とし
ては、アスコルビン酸，アラントイン，アズレン化合
物，パントテン酸又はその塩，ビタミンＢ群化合物など
が知られており、その他、単球走化性活性化因子（特開
平７−８２１６９），ヒオウギ抽出物（特開平７−１３
８１７９），フラボノイド配糖体（特開平７−１８８０
３１），アデノシン-3',5'-環状リン酸誘導体（特開平
９−１９４３７９，同９−１９４３８０）などが開示さ
れている。 【０００４】しかしながら、上記した成分等は、必ずし
も創傷部位や毛包において特異的に作用するとは限ら
ず、期待した作用効果が十分得られなかったり、好まし
くない副作用の生じるものがあるという問題があった。 【０００５】ところで、創傷治癒過程や毛包周囲におい
て血管新生が誘導され、その結果、創傷治癒や毛包の成
長期への移行が促進される可能性が示唆されている。近
年、かかる血管新生を誘導する因子として、ＶＥＧＦが
見いだされている。 【０００６】 【発明が解決しようとする課題】そこで、本発明におい
ては、創傷治癒剤や育毛・養毛剤に特に有効に応用し得
るような、創傷部位或いは毛包周辺の血管新生誘導効果
に優れるＶＥＧＦ産生促進剤を得ることを目的とした。 【０００７】 【課題を解決するための手段】上記課題を解決するべく
種々検討した結果、シャクヤク（Paeonia lactifloraPa
ll.）及びその近縁植物の抽出物、シナノキ（Tilia）属
に属する植物の抽出物、スギナ（Equisetum arvense
L.），ハッカ（Mentha arvensis L. var. piperascens
Malin.），セイヨウハッカ（Mentha piperita L.），ミ
ドリハッカ（Mentha viridis L.）の各抽出物、及びミ
カン（Citrus）属に属する植物の葉の抽出物に優れたＶ
ＥＧＦ産生促進作用を見いだし、本発明を完成するに至
った。 【０００８】 【発明の実施の形態】本発明において用いるシャクヤク
（Paeonia lactiflora Pall.）及びその近縁植物は、ボ
タン科（Paeoniaceae）に属する多年草で、生薬「シャ
クヤク（Paeoniae Radix）」の基原植物である。近縁植
物としては、クサシャクヤク（Paeonia obovata Maxi
m.），センセキシャク（Paeonia veitchii Lynch.）が
挙げられる。これらの葉，茎，花，根等各部位を用いる
ことができるが、根を用いることが好ましい。 【０００９】本発明において用いるシナノキ（Tilia）
属に属する植物としては、アメリカシナノキ（Tilia am
ericana L.），フユボダイジュ（Tilia cordata Mil
l.），セイヨウシナノキ（Tilia europaea L.），シナ
ノキ（Tilia japonica Simonk.），ヘラノキ（Tilia ki
usiana Makino et Shiras.），オオバボダイジュ（Tili
a maximowicziana Shiras.），ボダイジュ（Tilia miqu
eliana Maxim.），ナツボダイジュ（Tilia platyphyllo
s Scop.）等が挙げられる。これらはシナノキ科（Tilia
ceae）に属する落葉の高木で、花，葉及び樹皮が好まし
く用いられる。 【００１０】本発明において用いるスギナ（Equisetum
arvense L.）は、スギナ科（Equisetaceae）に属する多
年生シダ植物で、民間薬「モンケイ」の基原植物であ
る。地下茎，胞子茎，栄養茎のいずれも用いることがで
きるが、栄養茎を用いることが好ましい。 【００１１】本発明において用いるハッカ（Mentha arv
ensis L. var. piperascens Malin.）は、生薬「ハッカ
（Menthae Herba）」の基原植物である。セイヨウハッ
カ（Mentha piperita L.）及びミドリハッカ（Mentha v
iridis L.）はその同類植物である。これらはシソ科（L
abiatae）に属する多年草で、葉，茎，花等各部位を用
いることができるが、地上部の全体を用いることが好ま
しい。 【００１２】本発明において用いるミカン（Citrus）属
に属する植物としては、ライム（Citrus aurantifolia
Swingle），ダイダイ（Citrus aurantium L.），ベルガ
モット（Citrus bergamia Risso et Poit.），ブンタン
（Citrus grandis Osbeck），ハッサク（Citrus hassak
u Hort. ex Tanaka），イヨカン（Citrus iyo Hort.ex
Tanaka），ユズ（Citrus junos Sieb. ex Tanaka），キ
シュウミカン（Citrus kinokuni Hort. ex Tanaka），
レモン（Citrus limon Burm.），シトロン（C itrus med
ica L.），ブシュカン（Citrus medica L. var. sarcod
actylis Swingle），ナツミカン（Citrus natsudaidai
Hayata），グレープフルーツ（Citrusparadisi Mac
f.），ポンカン（Citrus reticulata Blanco），スイー
トオレンジ（Citrus sinensis Osbeck），ネーブルオレ
ンジ（Citrus sinensis Osbeck var. brasiliensis Tan
aka），カボス（Citrus sphaerocarpa Hort. ex Tanak
a），スダチ（Citrus sudachi Hort. ex Tanaka），サ
ンポウカン（Citrus sulcata Hort. ex Takahashi），
タチバナ（Citrus tachibana Tanaka），ウンシュウミ
カン（Citrus unshiu Marcovitch）等が挙げられる。こ
れらはミカン科（Rutaceae）に属する常緑の低木又は高
木で、本発明においては、これらの葉を用いる。 【００１３】上記植物は、生のまま抽出に供してもよい
が、抽出効率を考えると、細切，乾燥，粉砕等の処理を
行った後に抽出を行うことが好ましい。抽出は、抽出溶
媒に浸漬して行う。抽出効率を上げるため撹拌を行った
り、抽出溶媒中でホモジナイズしてもよい。抽出温度と
しては、５℃程度から抽出溶媒の沸点以下の温度とする
のが適切である。抽出時間は抽出溶媒の種類や抽出温度
によっても異なるが、４時間〜１４日間程度とするのが
適切である。 【００１４】抽出溶媒としては、水の他、メタノール，
エタノール，プロパノール，イソプロパノール等の低級
アルコール、1,3-ブチレングリコール，プロピレングリ
コール，ジプロピレングリコール，グリセリン等の多価
アルコール、エチルエーテル，プロピルエーテル等のエ
ーテル類、酢酸エチル，酢酸ブチル等のエステル類、ア
セトン，エチルメチルケトン等のケトン類などの極性有
機溶媒を用いることができ、これらより１種又は２種以
上を選択して用いる。また、生理食塩水，リン酸緩衝
液，リン酸緩衝生理食塩水等を用いてもよい。 【００１５】上述した植物の上記溶媒による抽出物は、
そのままでも本発明に係るＶＥＧＦ産生促進剤に含有さ
せることができるが、濃縮，乾固したものを水や極性溶
媒に再度溶解したり、或いはこれらの生理作用を損なわ
ない範囲で脱色，脱臭，脱塩等の精製処理を行ったり、
カラムクロマトグラフィー等による分画処理を行った後
に用いてもよい。また、リポソーム等のベシクルやマイ
クロカプセル等に内包させて用いることもできる。 【００１６】本発明においては、上記各植物の抽出物よ
り１種又は２種以上を選択して用いる。これら抽出物は
そのままでもＶＥＧＦ産生促進剤として用いることがで
きるが、各種基剤又は担体に含有させて、ＶＥＧＦ産生
促進剤としてもよい。ＶＥＧＦ産生促進剤全量に対する
添加量としては、用いる植物の種類，抽出溶媒及び抽出
条件，抽出後の処理などにより異なるが、植物を粉砕処
理後抽出溶媒に浸漬して抽出して得られる上清の状態
で、０．０１〜５．０重量％程度とするのが適切であ
る。 【００１７】本発明に係るＶＥＧＦ産生促進剤は、液
剤，乳剤，ゲル剤，クリーム剤，軟膏剤，粉剤，顆粒
剤，丸剤等、種々の剤型で提供することができる。ま
た、本発明に係るＶＥＧＦ産生促進剤には、ＶＥＧＦ産
生促進作用を損なわない範囲で、油性成分，界面活性
剤，保湿剤，賦形剤，紫外線吸収剤，抗酸化剤，香料，
防菌防黴剤等の一般的な医薬品及び化粧料用添加剤を含
有させることができる。 【００１８】 【実施例】さらに本発明の特徴について、実施例により
詳細に説明する。 【００１９】［実施例１〜実施例５］シャクヤク（Paeo
nia lactiflora Pall.）の根，シナノキ（Tilia japoni
ca Simonk.）の花，スギナ（Equisetum arvense L.）の
栄養茎，ハッカ（Mentha arvensis L. var. piperascen
s Malin.）の地上部，スイートオレンジ（Citrus sinen
sis Osbeck）の葉各１００ｇをミルで粉砕し、それぞれ
５０容量％エタノール水溶液１リットル中に室温にて７
日間浸漬して抽出した。各抽出物をろ過してろ液を回収
し、それぞれ実施例１〜実施例５とした。 【００２０】上記実施例１〜実施例５について、ＶＥＧ
Ｆ産生促進効果を評価した。ＶＥＧＦ産生促進効果の評
価は、間葉系細胞であるヒト線維芽細胞を用いて行っ
た。すなわち、５容量％の牛胎仔血清を含有するダルベ
ッコ修正基礎培地（ＤＭＥＭ）にて維持した正常ヒト線
維芽細胞を、９６穴プレートに２．０×１０^４個／ウェ
ルとなるように播種し、各実施例をそれぞれ２００μｇ
／ｍｌ含有する０．５容量％の牛胎仔血清を含有するＤ
ＭＥＭにて、３７℃で２４時間培養した後、培養上清中
のＶＥＧＦ量をEnzyme-linked immunosorbent assay
（ＥＬＩＳＡ）により定量した。その際、試料を添加し
ない０．５容量％牛胎仔血清含有ＤＭＥＭにて培養した
系を対照とした。ＶＥＧＦの定量と同時に細胞数を測定
して１細胞当たりのＶＥＧＦ量を算出し、対照における
１細胞当たりのＶＥＧＦ量を１００とした場合のＶＥＧ
Ｆ量を求め、ＶＥＧＦ産生促進率（％）として、表１に
示した。 【００２１】 【表１】 【００２２】表１より明らかなように、本発明の実施例
１〜実施例５を添加した系においては、ＶＥＧＦの産生
は対照の約１．２倍〜２．７倍と、有意に増加してい
た。特に、実施例１及び実施例３については、高いＶＥ
ＧＦ産生促進効果が認められていた。 【００２３】続いて、本発明の他の実施例について示
す。 【００２４】［実施例６］ 粉末状ＶＥＧＦ産生促進剤 シャクヤク（Paeonia lactiflora Pall.）の根２５０ｇ
を乾燥，粉砕し、５０容量％エタノール水溶液１．５リ
ットル中に入れ、２０℃にて１０日間撹拌しながら抽出
した。抽出物をろ過してろ液を回収し、減圧下に濃縮乾
固した後凍結乾燥し、標記実施例とした。 【００２５】［実施例７］ 液状ＶＥＧＦ産生促進剤 フユボダイジュ（Tilia cordata Mill.）の葉及び花計
３００ｇを乾燥，粉砕し、５０容量％エタノール水溶液
２リットル中に入れ、１５℃にて１４日間撹拌しながら
抽出した。抽出物をろ過してろ液を回収し、減圧下に濃
縮乾固した後凍結乾燥した。凍結乾燥物１ｇを次の液状
基剤に溶解して１００ｍｌとし、標記実施例とした。 【００２６】 ［液状基剤］ （１）エタノール ２０．０（重量％） （２）ポリオキシエチレン(60E.O.)硬化ヒマシ油 １．０ （３）ジプロピレングリコール ５．０ （４）1,3-ブチレングリコール １０．０ （５）パラオキシ安息香酸メチル ０．１ （６）精製水 ６３．９ 製法：(1)〜(5)を(6)に順次添加して溶解する。 【００２７】［実施例８］ 乳剤状ＶＥＧＦ産生促進剤 スギナ（Equisetum arvense L.）の栄養茎２５０ｇを乾
燥，粉砕し、1,3-ブチレングリコール１．５リットル中
に浸漬して、２０℃で１０日間抽出した。抽出物をろ過
してろ液を回収し、次に示す処方により乳剤を調製し
て、標記実施例とした。 【００２８】 （１）セタノール １．０（重量％） （２）ミツロウ ０．５ （３）ワセリン ２．０ （４）スクワラン ６．０ （５）ジメチルポリシロキサン ２．０ （６）ポリオキシエチレン(20E.O.)ソルビタン １．０ モノステアリン酸エステル （７）グリセリルモノステアリン酸エステル １．０ （８）グリセリン ４．０ （９）1,3-ブチレングリコール ４．０ （10）パラオキシ安息香酸メチル ０．１ （11）精製水 ６５．４ （12）カルボキシビニルポリマー １０．０ （１．０重量％水溶液） （13）水酸化カリウム（１０．０重量％水溶液） １．０ （14）上記スギナ抽出物 ２．０ 製法：(1)〜(7)の油相成分を混合し、加熱溶解して７５
℃とする。一方、(8)〜(11)の水相成分を混合，溶解し
て７５℃とする。これに前記油相を加えて予備乳化した
後、(12)を添加してホモミキサーにて均一に乳化し、次
いで(13)を加えて増粘させた後冷却し、４０℃で(14)を
添加，混合する。 【００２９】［実施例９］ ゲル状ＶＥＧＦ産生促進剤 セイヨウハッカ（Mentha piperita L.）の地上部２６０
ｇを乾燥，粉砕し、グリセリン１．５リットル中に入
れ、１５℃で１４日間撹拌抽出した。抽出物をろ過して
ろ液を回収し、次の処方によりゲル剤を調製して、標記
実施例とした。 【００３０】 （１）ジプロピレングリコール １０．０（重量％） （２）カルボキシビニルポリマー ０．５ （３）水酸化カリウム（１０．０重量％水溶液） １．０ （４）パラオキシ安息香酸メチル ０．１ （５）上記セイヨウハッカ抽出物 ２．５ （６）精製水 ８５．９ 製法：(6)に(2)を均一に溶解した後、(1)に(4)，(5)を
溶解して添加し、次いで(3)を加えて増粘させる。 【００３１】［実施例１０］ 水中油型クリーム状ＶＥ
ＧＦ産生促進剤 ダイダイ（Citrus aurantium L.）の葉３００ｇを乾
燥，粉砕し、1,2-ペンチレングリコール２リットル中に
浸漬して２５℃で７日間抽出した。抽出物をろ過してろ
液を回収し、次の処方により水中油型クリーム剤を調製
して、標記実施例とした。 【００３２】 （１）ミツロウ ６．０（重量％） （２）セタノール ５．０ （３）還元ラノリン ８．０ （４）スクワラン ２７．５ （５）グリセリル脂肪酸エステル ４．０ （６）親油型グリセリルモノステアリン酸エステル ２．０ （７）ポリオキシエチレン(20E.O.)ソルビタン ５．０ モノラウリン酸エステル （８）プロピレングリコール ５．０ （９）パラオキシ安息香酸メチル ０．１ （10）上記ダイダイ抽出物 ２．５ （11）精製水 ３４．９ 製法：(1)〜(7)の油相成分を混合，溶解して７５℃とす
る。一方、(8)〜(11)を混合，溶解し、７５℃に加熱す
る。次いで、この水相成分に前記油相成分を添加して予
備乳化した後ホモミキサーにて均一に乳化し、冷却す
る。 【００３３】上記実施例６〜実施例１０について、モル
モットの創傷部位における血管新生促進効果を評価し
た。その際、スウェルチノーゲンを比較例１とし、また
実施例７〜実施例１０において、用いた各植物の抽出物
の替わりに、センブリ（Swertia japonica Makino）の
全草を同量用いて同様に調製して得た抽出物を含有させ
たものをそれぞれ比較例２〜比較例５として、同時に評
価を行った。血管新生促進効果は、背部を剃毛し、人工
的に創傷を形成したモルモット５匹を１群とし、各群の
創傷部位に実施例及び比較例のそれぞれを０．２ｇずつ
１日２回塗布し、３日後の組織切片を作成して、血管新
生のようすを観察して評価した。なお、実施例６及び比
較例１は、５０容量％エタノール水溶液に１．０(w/v)
％となるように溶解して塗布した。また、５０容量％エ
タノール水溶液を塗布した群を対照とした。結果は、明
確な血管新生を認めたモルモット数にて表２に示した。 【００３４】 【表２】 【００３５】表２より明らかなように、本発明の実施例
６〜実施例１０塗布群では、４例以上のモルモットにて
明確な血管新生を認めていた。これに対し比較例塗布群
では、明確な血管新生を認めたモルモットは２例以下
で、対照群と比べて有意な差は認められなかった。 【００３６】なお、本発明の実施例１〜実施例１０につ
いて上記評価を行った際、細胞毒性や、モルモット皮膚
に対する皮膚刺激性反応等は、全く認められなかった。
また、これらを２５℃で６カ月間保存した後において、
問題となるＶＥＧＦ産生促進効果の低下や状態の変化は
見られなかった。 【００３７】 【発明の効果】以上詳述したように、本発明により、安
定性及び安全性が良好で、血管新生誘導効果に優れるＶ
ＥＧＦ産生促進剤を得ることができた。Description: TECHNICAL FIELD [0001] The present invention relates to a vascular endothelial cell growth factor production promoter capable of promoting the production of vascular endothelial cell growth factor (VEGF). The VEGF production promoter according to the present invention can be applied, in particular, as a wound healing promoter, a hair growth / hair restoration agent, and the like. 2. Description of the Related Art Hitherto, components having a function of promoting blood circulation and activating skin metabolism have been used in wound healing promoters, hair growth and hair growth agents.
Examples of such a blood circulation promoting agent include assembly extract (swelltinogen), cepharanthin, vitamin E and its derivatives, γ-oryzanol, and the like. Showa 62
-215116), the unsaturated bond having 18 to 22 carbon atoms is
Fatty acids or salts thereof contained above (Japanese Unexamined Patent Publication No. 7-1964)
65), glycosides of hydroxysalicylic acid or its ester (JP-A-8-268870) and the like. [0003] Further, as substances having a wound healing promoting effect, ascorbic acid, allantoin, azulene compounds, pantothenic acid or salts thereof, vitamin B group compounds and the like are known, and other monocyte chemotactic activating factors. (Japanese Unexamined Patent Application Publication No. 7-82169), a hyster extract
8179), flavonoid glycosides (JP-A-7-1880)
31), adenosine-3 ', 5'-cyclic phosphate derivatives (JP-A-9-194379 and JP-A-9-194380) and the like are disclosed. [0004] However, the above-mentioned components and the like do not always act specifically at a wound site or a hair follicle, and there is a problem that an expected action and effect are not sufficiently obtained or some of them cause undesirable side effects. Was. [0005] By the way, it has been suggested that angiogenesis is induced in the wound healing process and around the hair follicle, and as a result, the wound healing and the transition of the hair follicle to the anagen phase may be promoted. In recent years, VEGF has been found as a factor inducing such angiogenesis. [0006] Therefore, in the present invention, VEGF having an excellent angiogenesis-inducing effect around a wound site or around a hair follicle, which can be particularly effectively applied to a wound healing agent and a hair growth / hair restoration agent. The aim was to obtain a production promoter. [0007] As a result of various studies to solve the above-mentioned problems, Paeonia lactiflora Pa
ll.) and its related plants, extracts of plants belonging to the genus Tilia , horsetail ( Equisetum arvense)
L.), Mentha ( Mentha arvensis L. var. Piperascens
Malin.), Mentha piperita L., Green peppermint ( Mentha viridis L.), and leaf extract of plants belonging to the genus Citrus.
The present inventors have found the effect of promoting EGF production and have completed the present invention. BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION The peony ( Paeonia lactiflora Pall.) And its closely related plants used in the present invention are perennials belonging to the family Peloniaceae ( Paeoniaceae ), and are the base plants of the herbal medicine " Paeoniae Radix ". It is. Closely related plants include Paeonia obovata Maxi
m.) and Paeonia veitchii Lynch. Each of these parts such as leaves, stems, flowers, and roots can be used, but roots are preferably used. Tilia used in the present invention
As plants belonging to the genus, linden ( Tilia am
ericana L.), Tyu cordai ( Tilia cordata Mil)
l.), Tilia europaea L., Tilia japonica Simonk., Hera ( Tilia ki )
usiana Makino et Shiras.), Oba linden (Tili
a maximowicziana Shiras.), Bodaiju ( Tilia miqu )
eliana Maxim.), Natsubodaiju ( Tilia platyphyllo)
s Scop.). These are Tilia
ceae ), deciduous trees, flowers, leaves and bark are preferably used. The horsetail ( Equisetum) used in the present invention
arvense L.) is a perennial fern belonging to the family Equisetaceae , and is a base plant of the folk medicine "Monkey". Any of the rhizomes, spore stems, and vegetative stems can be used, but vegetative stems are preferably used. The mint ( Mentha arv) used in the present invention is used.
ensis L. var. piperascens Malin.) is a MotoHara plant of herbal "mint (Menthae Herba)". Mentha piperita L. and Green peppermint ( Mentha v
iridis L.) is its congener. These are Lamiaceae ( L
abiatae ), and various parts such as leaves, stems, and flowers can be used, but it is preferable to use the entire above-ground part. The plant belonging to the genus Citrus used in the present invention includes lime ( Citrus aurantifolia).
Swingle), orange (Citrus aurantium L.), bergamot (Citrus bergamia Risso et Poit.) , Pummelo (Citrus grandis Osbeck), Hassaku (Citrus hassak
u Hort. ex Tanaka), Iyokan ( Citrus iyo Hort.ex)
Tanaka), Yuzu ( Citrus junos Sieb. Ex Tanaka), Kishumitsukan ( Citrus kinokuni Hort. Ex Tanaka),
Lemon ( Citrus limon Burm.), Citron ( C itrus med)
ica L.), Bushkan ( Citrus medica L. var. sarcod
actylis Swingle), Natsumikan ( Citrus natsudaidai )
Hayata), grapefruit ( Citrusparadisi Mac)
f.), ponkan ( Citrus reticulata Blanco), sweet orange ( Citrus sinensis Osbeck), navel orange ( Citrus sinensis Osbeck var. brasiliensis Tan)
aka), Kabosu ( Citrus sphaerocarpa Hort. ex Tanak)
a), Sudachi ( Citrus sudachi Hort. ex Tanaka), Sanpokan ( Citrus sulcata Hort. ex Takahashi),
Tachibana ( Citrus tachibana Tanaka), Unshuu mandarin ( Citrus unshiu Marcovitch) and the like. These are evergreen shrubs or trees that belong to the Rutaceae family ( Rutaceae ). In the present invention, these leaves are used. The above-mentioned plant may be subjected to extraction as it is, but in consideration of the extraction efficiency, it is preferable to perform extraction after performing processing such as shredding, drying, and pulverization. The extraction is performed by immersion in an extraction solvent. Stirring may be performed to increase the extraction efficiency, or homogenization may be performed in an extraction solvent. It is appropriate to set the extraction temperature at a temperature of about 5 ° C. to the boiling point of the extraction solvent or lower. Although the extraction time varies depending on the type of the extraction solvent and the extraction temperature, it is appropriate to be about 4 hours to 14 days. As an extraction solvent, in addition to water, methanol,
Lower alcohols such as ethanol, propanol and isopropanol; polyhydric alcohols such as 1,3-butylene glycol, propylene glycol, dipropylene glycol and glycerin; ethers such as ethyl ether and propyl ether; esters such as ethyl acetate and butyl acetate And polar organic solvents such as ketones such as acetone and ethyl methyl ketone, and one or more of them can be selected and used. Further, physiological saline, phosphate buffer, phosphate buffered saline, or the like may be used. The extract of the above-mentioned plant with the above-mentioned solvent is
The VEGF production promoter according to the present invention can be contained as it is, but it can be concentrated and dried to redissolve it in water or a polar solvent, or decolorize, deodorize, or deodorize as long as the physiological action is not impaired. Purification of salt etc.
It may be used after performing fractionation treatment by column chromatography or the like. It can also be used by being encapsulated in vesicles such as liposomes or microcapsules. In the present invention, one or more of the above plant extracts are selected and used. These extracts can be used as such as a VEGF production promoter, but may be contained in various bases or carriers to provide a VEGF production promoter. The amount of the VEGF production promoter added to the total amount depends on the type of plant used, the extraction solvent and the extraction conditions, the treatment after extraction, and the like. In the state, it is appropriate that the content is about 0.01 to 5.0% by weight. The VEGF production promoter according to the present invention can be provided in various forms such as a liquid, an emulsion, a gel, a cream, an ointment, a powder, a granule and a pill. In addition, the VEGF production promoter according to the present invention includes an oily component, a surfactant, a humectant, an excipient, an ultraviolet absorber, an antioxidant, a fragrance, as long as the VEGF production promotion action is not impaired.
General pharmaceutical and cosmetic additives such as antibacterial and fungicides can be contained. EXAMPLES The features of the present invention will be described in more detail with reference to examples. [Embodiments 1 to 5] Peony ( Paeo)
nia lactiflora Pall. root, linden ( Tilia japoni)
ca Simonk.), vegetative stem of horsetail ( Equisetum arvense L.), mint ( Mentha arvensis L. var. piperascen)
s Malin.), sweet orange ( Citrus sinen)
sis Osbeck) 100 g of each leaf was milled in a mill, and each was crushed at room temperature in 1 liter of 50% by volume ethanol aqueous solution.
Extracted by soaking for days. Each extract was filtered to collect a filtrate, which was referred to as Example 1 to Example 5, respectively. In the first to fifth embodiments, VEG
The F production promoting effect was evaluated. Evaluation of the effect of promoting VEGF production was performed using human fibroblasts, which are mesenchymal cells. That is, normal human fibroblasts maintained in Dulbecco's modified basal medium (DMEM) containing 5% by volume of fetal calf serum were seeded in a 96-well plate at 2.0 × 10 ⁴ cells / well, 200 μg for each example
Containing 0.5% by volume of fetal calf serum / ml
After culturing in MEM at 37 ° C. for 24 hours, the amount of VEGF in the culture supernatant was measured by Enzyme-linked immunosorbent assay.
(ELISA). At that time, a system cultured in DMEM containing 0.5% by volume of fetal calf serum to which no sample was added was used as a control. The number of cells was measured simultaneously with the quantification of VEGF, the amount of VEGF per cell was calculated, and VEG when the amount of VEGF per cell in the control was 100.
The F amount was determined and is shown in Table 1 as the VEGF production promotion rate (%). [Table 1] As is apparent from Table 1, in the system to which Examples 1 to 5 of the present invention were added, the production of VEGF was significantly increased to about 1.2 to 2.7 times that of the control. I was In particular, in Examples 1 and 3, high VE
The GF production promoting effect was recognized. Next, another embodiment of the present invention will be described. Example 6 Powdery VEGF Production Promoter Root of Peony ( Paeonia lactiflora Pall.) 250 g
Was dried and pulverized, put into 1.5 liter of 50% by volume aqueous ethanol solution, and extracted at 20 ° C. with stirring for 10 days. The extract was filtered to collect the filtrate, which was concentrated to dryness under reduced pressure, and then lyophilized to give the title example. [Example 7] A liquid VEGF production promoter, Fugidaiju ( Tilia cordata Mill.), 300 g of leaves and flowers were dried and pulverized, and placed in 2 liters of a 50% by volume aqueous ethanol solution at 15 ° C for 14 days. Extracted with stirring. The extract was filtered to collect the filtrate, concentrated to dryness under reduced pressure, and then freeze-dried. 1 g of the lyophilized product was dissolved in the following liquid base to make up to 100 ml, which was used as the title example. [Liquid base] (1) Ethanol 20.0 (% by weight) (2) Polyoxyethylene (60E.O.) hydrogenated castor oil 1.0 (3) Dipropylene glycol 5.0 (4) 1 , 3-butylene glycol 10.0 (5) Methyl paraoxybenzoate 0.1 (6) Purified water 63.9 Production method: (1) to (5) are sequentially added to (6) and dissolved. [Example 8] 250 g of vegetative stem of a horseshoe ( Equisetum arvense L.) emulsified VEGF production promoter was dried and pulverized, immersed in 1.5 liter of 1,3-butylene glycol, and heated at 20 ° C. Extracted for 10 days. The extract was filtered to collect the filtrate, and an emulsion was prepared according to the following formulation, which was used as the title example. (1) Cetanol 1.0 (% by weight) (2) Beeswax 0.5 (3) Vaseline 2.0 (4) Squalane 6.0 (5) Dimethylpolysiloxane 2.0 (6) Polyoxyethylene (20E.O.) Sorbitan 1.0 monostearate (7) glyceryl monostearate 1.0 (8) glycerin 4.0 (9) 1,3-butylene glycol 4.0 (10) paraoxybenzoic acid Methyl 0.1 (11) Purified water 65.4 (12) Carboxyvinyl polymer 10.0 (1.0% by weight aqueous solution) (13) Potassium hydroxide (10.0% by weight aqueous solution) 1.0 (14) The above Horsetail extract 2.0 Manufacturing method: The oil phase components of (1) to (7) are mixed and dissolved by heating to 75
° C. On the other hand, the aqueous phase components (8) to (11) are mixed and dissolved to 75 ° C. After the oil phase was added thereto and preliminarily emulsified, (12) was added and homogenized uniformly with a homomixer, and then (13) was added to increase the viscosity, followed by cooling, and at 40 ° C. (14) Add and mix. Example 9 Aerial part 260 of Mentha piperita L., a gel VEGF production promoter
g was dried and pulverized, placed in 1.5 liter of glycerin, and extracted with stirring at 15 ° C. for 14 days. The extract was filtered to collect the filtrate, and a gel was prepared according to the following formulation, which was used as the title example. (1) Dipropylene glycol 10.0 (% by weight) (2) Carboxyvinyl polymer 0.5 (3) Potassium hydroxide (10.0% by weight aqueous solution) 1.0 (4) Methyl paraoxybenzoate 0 1.1 (5) Mentha extract 2.5 above (6) Purified water 85.9 Production method: After (2) is uniformly dissolved in (6), (4) and (5) are dissolved in (1) And then add (3) to thicken. Example 10 Oil-in-water creamy VE
300 g of leaves of a GF production promoter, Daidai ( Citrus aurantium L.) were dried, pulverized, immersed in 2 liters of 1,2-pentylene glycol and extracted at 25 ° C. for 7 days. The extract was filtered to collect the filtrate, and an oil-in-water cream was prepared according to the following formulation, and was used as the title example. (1) Beeswax 6.0 (% by weight) (2) Cetanol 5.0 (3) Reduced lanolin 8.0 (4) Squalane 27.5 (5) Glyceryl fatty acid ester 4.0 (6) Lipophilic oil Type glyceryl monostearate 2.0 (7) Polyoxyethylene (20E.O.) sorbitan 5.0 Monolaurate (8) Propylene glycol 5.0 (9) Methyl parahydroxybenzoate 0.1 (10) Above Daidai extract 2.5 (11) Purified water 34.9 Production method: Mix and dissolve oil phase components (1) to (7) to 75 ° C. On the other hand, (8) to (11) are mixed and dissolved, and heated to 75 ° C. Next, the oil phase component is added to the aqueous phase component, preliminarily emulsified, then uniformly emulsified by a homomixer, and cooled. With respect to Examples 6 to 10, the effect of promoting angiogenesis at the wound site of guinea pigs was evaluated. At that time, swertinogen was used as Comparative Example 1, and in Examples 7 to 10, the whole plant of Swertia japonica Makino was prepared in the same manner in place of the extract of each plant used. The samples containing the extract obtained as described above were simultaneously evaluated as Comparative Examples 2 to 5, respectively. The angiogenesis-promoting effect was determined by shaving the back and artificially forming a wound in five guinea pigs as one group, and applying 0.2 g of each of Examples and Comparative Examples twice a day to the wound site of each group. Then, a tissue section was prepared three days later, and the state of angiogenesis was observed and evaluated. In Example 6 and Comparative Example 1, 1.0 (w / v) was added to a 50% by volume aqueous solution of ethanol.
% And applied. The group to which a 50% by volume aqueous ethanol solution was applied was used as a control. The results are shown in Table 2 in terms of the number of guinea pigs in which clear angiogenesis was observed. [Table 2] As is clear from Table 2, in the application groups of Examples 6 to 10 of the present invention, clear angiogenesis was recognized in four or more guinea pigs. On the other hand, in the group to which the comparative example was applied, no more than two guinea pigs showed clear angiogenesis, and no significant difference was observed as compared with the control group. When the above evaluations were performed on Examples 1 to 10 of the present invention, no cytotoxicity, no skin irritating reaction to guinea pig skin, and the like were found at all.
After storing these at 25 ° C. for 6 months,
No problematic decrease in VEGF production promoting effect or change in state was observed. As described in detail above, according to the present invention, V is excellent in stability and safety and excellent in inducing angiogenesis.
An EGF production promoter could be obtained.

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 7/00 Ａ６１Ｋ 7/00 Ｗ 7/06 7/06 7/48 7/48 Ａ６１Ｐ 9/00 Ａ６１Ｐ 9/00 17/02 17/02 17/14 17/14 43/00 １０７ 43/00 １０７ (72)発明者 岡野 由利 兵庫県神戸市中央区港島中町６丁目13−１ 株式会社ノエビア神戸研究所内 Ｆターム(参考） 4C083 AA082 AA111 AA112 AB032 AC012 AC072 AC102 AC122 AC422 AC432 AC442 AC482 AD092 AD152 AD512 CC04 CC05 CC37 DD23 DD31 DD32 DD41 EE07 EE12 EE13 EE22 FF01 4C088 AA18 AB12 AB38 AB58 AB62 AC02 AC03 AC05 AC06 AC10 AC11 BA08 BA11 CA03 MA07 MA63 ZA36 ZA89 ZA92 ZB22 ZC03 Continued on the front page (51) Int.Cl. ⁷ Identification symbol FI Theme coat II (reference) A61K 7/00 A61K 7/00 W 7/06 7/06 7/48 7/48 A61P 9/00 A61P 9/00 17 / 02 17/02 17/14 17/14 43/00 107 43/00 107 (72) Inventor Yuri Okano 6-13-1, Minatojima-Nakamachi, Chuo-ku, Kobe-shi, Hyogo F-term in Noevir Kobe Research Institute Co., Ltd. (Reference) 4C083 AA082 AA111 AA112 AB032 AC012 AC072 AC102 AC122 AC422 AC432 AC442 AC482 AD092 AD152 AD512 CC04 CC05 CC37 DD23 DD31 DD32 DD41 EE07 EE12 EE13 EE22 FF01 4C088 AA18 AB12 AB38 AB58 AB62 AC02 AC03 AC07 AC08 MA03 Z08

Claims (1)

【特許請求の範囲】 【請求項１】 シャクヤク（Paeonia lactiflora Pal
l.）及びその近縁植物の抽出物、シナノキ（Tilia）属
に属する植物の抽出物、スギナ（Equisetum arvense
L.），ハッカ（Mentha arvensis L. var. piperascens
Malin.），セイヨウハッカ（Mentha piperita L.），ミ
ドリハッカ（Mentha viridis L.）の各抽出物、及びミ
カン（Citrus）属に属する植物の葉の抽出物より選択し
た１種又は２種以上を含有して成る、血管内皮細胞増殖
因子産生促進剤。[Claim 1] Peony ( Paeonia lactiflora Pal)
l.) and its related plants, plant extracts belonging to the genus Tilia , and horsetail ( Equisetum arvense)
L.), Mentha ( Mentha arvensis L. var. Piperascens
Malin., Mentha piperita L., Green peppermint ( Mentha viridis L.), and one or more selected from leaf extracts of plants belonging to the genus Citrus A vascular endothelial cell growth factor production promoter comprising: