JP2002525027A

JP2002525027A - Ｃｈｌａｍｙｄｉａ抗原および対応するＤＮＡフラグメントならびにそれらの使用

Info

Publication number: JP2002525027A
Application number: JP2000562523A
Authority: JP
Inventors: アンドリューディー．マーディン，; レイモンドピー．オーメン，; パメラエル．ダン，
Original assignee: コナートラボラトリーズリミテッド
Priority date: 1998-07-27
Filing date: 1999-07-27
Publication date: 2002-08-13
Also published as: EP1100919A1; AU4793199A; MXPA01001091A; CA2337493A1; WO2000006741A1

Abstract

(57)【要約】本開示を要約すると、本発明は、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ株（特に、Ｃｈｌａｍｙｄｉａｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の感染により引き起こされる疾患に対して、Ｃｈｌａｍｙｄｉａｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ株のｍｉｐタンパク質をコードするヌクレオチド配列および宿主においてｍｉｐ遺伝子の発現をもたらすプロモーターを含むベクターを用いて、宿主（ヒトを含む）を核酸（ＤＮＡを含む）免疫する方法を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】（関連の米国出願）本特許出願は、米国仮特許出願第６０／０９４，１９２号（１９９８年７月２
７日出願）および米国仮特許出願第６０／１２２，０４４号（１９９９年３月１
日出願）に対する優先権を主張する。

【０００２】（発明の分野）本発明は、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ抗原および対応するＤＮＡ分子に関し、これら
は、哺乳動物（例えば、ヒト）におけるＣｈｌａｍｙｄｉａ感染により引き起こ
される疾患を予防および処置するための方法において使用され得る。

【０００３】（発明の背景）Ｃｈｌａｍｙｄｉａは、原核生物である。それらは、三層外膜を含むグラム陰
性細菌と形態学的類似性および構造的類似性を示す。この三層外膜は、リポポリ
サッカライドおよびいくつかの膜タンパク質を含む。Ｃｈｌａｍｙｄｉａは、そ
れらの形態学により、そして固有の発生サイクルにより、他の細菌とは区別され
る。それらは、代謝的に不活性であるが感染性である細胞外段階および複製可能
であるが非感染性の細胞内段階からなる固有の二相性生活環を有する偏性細胞内
寄生性生物である。この生活環の複製段階は、感染した宿主細胞の細胞質から細
菌を隔離する、膜結合された封入体内で生じる。

【０００４】Ｃｈｌａｍｙｄｉａは、小さく、かつ感受性の細胞内でのみ複製するので、そ
れらは、長い間ウイルスであると考えられていた。しかし、それらは他の細菌と
共通する以下の多くの特徴を有する：（１）それらは、ＤＮＡおよびＲＮＡの両
方を含む、（２）それらは、二***により***する、（３）それらの細胞エンベ
ロープは、他のグラム陰性細菌の細胞エンベロープと似ている、（４）それらは
、他の細菌のリボソームと類似のリボゾームを含む、そして（５）それらは、種
々の抗生物質に感受性である。Ｃｈｌａｍｙｄｉａは、光学顕微鏡で見られ得、
そしてそのゲノムは、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉゲノムのサイズの約１
／３である。

【０００５】Ｃｈｌａｍｙｄｉａの多くの異なる株が、トリ、ヒト、および他の哺乳動物か
ら単離されており、そしてこれらの株は、宿主範囲、ビルレンス、病原性、およ
び抗原性組成を基礎として区別され得る。各種内のＤＮＡには高い相同性がある
が、驚くべきことに、種間にはほとんど相同性がない。このことは、長期間にわ
たって確立された進化的な分離を示唆する。

【０００６】Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓは高い程度の宿主特異性を有するが、その特異性
はほぼ完全にヒトに限定されている；広範に変化する重篤度の眼の感染症および
尿生殖器感染症を引き起こす。対称的に、Ｃ．ｐｓｉｔｔａｃｉ株は、ヒトでは
稀でああるが、広範囲のトリにおいて見出され、そして野生動物、家畜、および
実験動物においてもまた見出される。ここで、それらは、多くの器官の細胞中で
複製する。

【０００７】Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅは、一般的なヒトの病原体であり、元来は、Ｃ．ｐ
ｓｉｔｔａｃｉのＴＷＡＲ株と記載されていたが、その後、新たな種であると認
識された。Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅは、抗原的に、遺伝的に、および形態学的
に他のＣｈｌａｍｙｄｉａ種（Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、Ｃ．ｐｅｃｏｒｕ
ｍおよびＣ．ｐｓｉｔｔａｃｉ）とは異なっている。Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉ
ｓまたはＣ．ｐｓｉｔｔａｃｉのいずれかと、１０％以下のＤＮＡ配列の相同性
が見られ、そして今までのところ単一株ＴＷＡＲのみからなるようである。

【０００８】Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅは、市中肺炎の一般的な原因であるが、Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｃｏｃｃｕｓｐｎｅｕｍｏｎｉａｅおよびＭｙｃｏｐｌａｓｍａｐｎｅ
ｕｍｏｎｉａｅのみよりは頻度が低い。Ｇｒａｙｓｔｏｎら、Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ
．Ｄｉｓ．１６８：１２３１（１９９５）；Ｃａｍｐｏｓら、Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏ
ｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．３６：１４７７（１９９５）（各々、本
明細書中に参考として援用される）。それはまた、気管支炎および副鼻腔炎を含
む上部気道の症状および疾患を引き起こし得る。例えば、Ｇｒａｙｓｔｏｎら、
Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１６８：１２３１（１９９５）；Ｃａｍｐｏｓら、
Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．３６：１４７７（１９
９５）；Ｇｒａｙｓｔｏｎら、Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１６１：６１８（１
９９０）；Ｍａｒｒｉｅ、Ｃｌｉｎ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１８：５０１（１
９９３）を参照のこと。成人人口の大部分（６０％超）は、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎ
ｉａｅに対する抗体を有する（Ｗａｎｇら、ＣｈｌａｍｙｄｉａｌＩｎｆｅｃ
ｔｉｏｎｓ、ＣａｍｂｒｉｄｇｅＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＰｒｅｓｓ、Ｃａｍ
ｂｒｉｄｇｅ、第３２９頁（１９８６））。このことは、過去の感染が認識され
なかったか、または無症状であったことを示す。

【０００９】Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ感染は、通常、急性呼吸器疾患（すなわち、咳、咽
頭炎、嗄声、および発熱；聴診の際の異常な胸部音）として示される。大部分の
患者については、咳が２〜６週間持続し、そして回復が遅い。これらの症例のう
ち約１０％において、上部気道感染の後、気管支炎または肺炎が生じる。さらに
、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ流行の間の、引き続く肺炎球菌との同時感染は、こ
れらの肺炎患者（特に虚弱な患者または年配の患者）の約半数で認められた。上
記のように、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ感染はまた、呼吸器感染以外の疾患に関
連するという、ますます多くの証拠がある。

【００１０】生物の感染の貯蔵庫（ｒｅｓｅｒｖｏｉｒｆｏｒｏｒｇａｎｉｓｍ）は、
おそらく人である。Ｃ．ｐｓｉｔｔａｃｉ感染とは対照的に、既知のトリまたは
動物の感染の貯蔵庫は存在しない。伝播は明らかにされていない。これは、分泌
物との直接接触、ｆｏｒｍｉｔｅｓから、または空気伝播から生じうる。長期の
潜伏期間が存在し、これは数ヶ月にわたり持続しうる。流行の分析に基づき、Ｃ
．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅは、集団中にゆっくりと伝播するようである（症例間の
間隔は、平均して３０日である）。なぜなら、感染した患者は、生物についての
効率の悪い媒介者（ｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒ）であるからである。Ｃ．ｐｎｅｕ
ｍｏｎｉａｅに対する感受性は、普遍的である。最初に子供の頃に感染した後で
も、再感染は、成人で生じる。Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅは、注目すべきは、２
〜３年間持続して発生率が増加する（流行）間隔が重なっている、全世界的な流
行性疾患であるようである。Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ感染は、Ｃ．ｐｎｅｕ
ｍｏｎｉａｅとの交叉免疫を付与しない。感染は経口抗生物質（テトラサイクリ
ンまたはエリスロマイシン（２ｇ／日、少なくとも１０〜１４日間））で容易に
処置される。最近開発された薬物であるアジスロマイシンは、クラミジア感染に
対して単回用量治療としては非常に有効である。

【００１１】ほとんどの場合、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ感染は、軽度であり、合併症を伴
うことはない。そして感染の９０％までが亜急性であるか、または認識されない
。先進国の子供の間では、５歳齢までの感染は稀であると考えられているが、最
近の研究では、この年齢群の多くの子供が、血清ネガティブであるにも拘わらず
、ＰＣＲで感染の証拠を示し、そして２〜４歳齢では、１７〜１９％の有病率が
予測されることが報告されている。Ｎｏｒｍａｎｎら、Ａｃｔａ．Ｐａｅｄｉａ
ｔｒｉｃａ、８７：２３−２７（１９９８）を参照のこと。発展途上国では、若
年齢児の間のＣ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ抗体の血清保有率（ｓｅｒｏｐｒｅｂａ
ｌｅｎｃｅ）が上昇し、そしてＣ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅが急性の下部気道疾患
ならびに世界の熱帯地方での乳児および児童の死亡率の重大な原因であり得るこ
とが疑われる。

【００１２】血清保有率の研究および局所的流行の研究から、最初のＣ．ｐｎｅｕｍｏｎｉ
ａｅ感染は、通常、５歳〜２０歳の間に生じる。例えば、米国の場合、毎年３０
，０００症例の子供の肺炎がＣ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅにより引き起こされると
予測される。感染は、子供または青少年の群（例えば、学童または徴集兵）の間
で集中発生し得る。

【００１３】Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅは、市中下部気道感染の１０〜２５％の原因である
（スウェーデン、イタリア、フィンランドおよび米国から報告されている）。流
行している間に、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ感染は、５０〜６０％の肺炎の原因
になりうる。これらの期間はまた、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅとの混合感染のよ
り多くの症状の発現が報告されている。

【００１４】成人の間の再感染は、一般的である；臨床的提示は、より軽度であるようであ
る。集団血清保有率研究に基づいて、年齢とともに発覚が増加する傾向にあり、
これは、人の間で特に顕著である。何人かの研究者により、持続性の無症状性Ｃ
．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ感染状態が一般的であると推測された。

【００１５】中年層または老年層の成人においては、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ感染は、慢
性気管支炎および副鼻腔炎に進行しうる。米国での研究により、６０歳未満の個
人におけるＣ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅにより引き起こされる肺炎の発生率は、１
年あたり１０００人につき１症例であるが、６０歳以上の個人においては、この
疾患の発生率は、３倍増加したことが明らかにされた。既に病気にある患者を除
いて、滅多にＣ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ感染により入院することはない。

【００１６】相当に重要であることは、アテローム硬化症とＣ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ感染
との関連である。Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅならびに心臓発作、冠状動脈および
頸動脈の疾患と、以前の感染との相関を示す、いくつかの疫学的研究がある。Ｓ
ａｉｋｋｕら、Ｌａｎｃｅｔ２：９８３（１９８８）；Ｔｈｏｍら、ＪＡＭＡ
２６８：６８（１９９２）；Ｌｉｎｎａｎｍａｋｉら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏ
ｎ８７：１０３０（１９９３）；Ｓａｉｋｋｕら、ＡｎｎａｌｓＩｎｔ．Ｍ
ｅｄ．１１６：２７３（１９９２）；Ｍｅｌｎｉｃｋら、Ａｍ．Ｊ．Ｍｅｄ．９
５：４９９（１９９３）を参照のこと。さらに、冠状、頸、および末梢性の動脈
および大動脈のアテロームおよび脂肪線条においてこの生物が検出された。Ｓｈ
ｏｒら、ＳｏｕｔｈＡｆｒｉｃａｎＭｅｄ．Ｊ．８２：１５８（１９９２）
；Ｋｕｏら、Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１６７：８４１（１９９３）；Ｋｕｏ
ら、ＡｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓａｎｄＴｈｒｏｍｂｏｓｉｓ１３
：１５００（１９９３）；Ｃａｍｐｂｅｌｌら、Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１
７２：５８５（１９９５）；Ｃｈｉｕら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ９６：２１
４４−２１４８（１９９７）を参照のこと。生きたＣ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅが
冠状動脈および頸動脈から回収された。Ｒａｍｉｒｅｚら、ＡｎｎａｌｓＩｎ
ｔ．Ｍｅｄ．１２５：９７９（１９９６）；Ｊａｃｋｓｏｎら、Ａｂｓｔ．Ｋ１
２１、第２７２頁、３６ｔｈＩＣＡＡＣ、ＮｅｗＯｒｌｅａｎｓ（１９９６
）。さらに、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅはウサギモデルにおいてアテローム硬化
症の変化を誘導しうることが示された。Ｆｏｎｇら、（１９９７）Ｊｏｕｒｎａ
ｌｏｆＣｌｉｎｉｃａｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ３５：４８を参照の
こと。まとめると、これらの結果により、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅがヒトにお
いてアテローム硬化症を引き起こしうるが、クラミジア性のアテローム硬化症の
疫学的重要性は、実証すべきことがまだ残っている可能性が高いことが示される
。

【００１７】最近の研究の多くはまた、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ感染と喘息との間の関連
を示した。感染は、喘鳴、喘息性気管支炎、成人発症喘息および成人における喘
息の急性憎悪と関連づけられ、そして小規模の研究により、長期の抗生物質処置
が、いくらかの個体においては疾患の重篤度を大きく低減させるにおいて有効で
あったことが示された。Ｈａｈｎら、ＡｎｎＡｌｌｅｒｇｙＡｓｔｈｍａ
Ｉｍｍｕｎｏｌ．８０：４５−４９（１９９８）；Ｈａｈｎら、Ｅｐｉｄｅｍｉ
ｏｌＩｎｆｅｃｔ．１１７：５１３−５１７（１９９６）；Ｂｊｏｒｎｓｓｏ
ｎら、ＳｃａｎｄＪＩｎｆｅｃｔＤｉｓ．２８：６３−６９（１９９６）
；Ｈａｈｎ，Ｊ．Ｆａｍ．Ｐｒａｃｔ．４１：３４５−３５１（１９９５）；Ａ
ｌｌｅｇｒａら、Ｅｕｒ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｊ．７：２１６５−２１６８（１９９
４）；Ｈａｈｎら、ＪＡＭＡ２６６：２２５−２３０（１９９１）。

【００１８】これらの結果を鑑みて、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ感染により引き起こされる
疾患に対する防御ワクチンは、非常に重要である。ヒトのＣ．ｐｎｅｕｍｏｎｉ
ａｅ感染に対する有効なワクチンは未だ存在しない。それにも拘わらず、Ｃ．ｔ
ｒａｃｈｏｍａｔｉｓおよびＣ．ｐｓｉｔｔａｃｉの研究は、これが到達できる
目標であることを示している。例えば、Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓでの肺感染
から回復したマウスは、引き続く膣チャレンジにより誘導される不妊症から防御
される。Ｐａｌら、ＩｎｆｅｃｔｉｏｎａｎｄＩｍｍｕｎｉｔｙ６４：５
３４１（１９９６）。同様に、不活化Ｃ．ｐｓｉｔｔａｃｉで免疫したヒツジは
、引き続くクラミジア誘導性の流産および死産から防御された。Ｊｏｎｅｓら、
Ｖａｃｃｉｎｅ１３：７１５（１９９５）。クラミジア感染からの防御は、Ｔ
ｈ１免疫応答、特にＩＮＦγ生成ＣＤ４＋Ｔ細胞の生成と関連している。Ｉｇｉ
ｅｔｓｅｍｅｓら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ５：３１７（１９９３）。ＣＤ４＋
細胞株またはＣＤ４＋クローンを、ヌードマウスまたはＳＣＩＤマウスに養子移
入することにより、チャレンジからの防御を付与されたか、または慢性疾患を一
掃され（Ｉｇｉｅｔｓｅｍｅら、ＲｅｇｉｏｎａｌＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙ５
：３１７（１９９３）；Ｍａｇｅｅら、ＲｅｇｉｏｎａｌＩｍｍｕｎｏｌｏｇ
ｙ５：３０５（１９９３））、そしてインビボでのＣＤ４＋Ｔ細胞の枯渇によ
りチャレンジ後の疾患が悪化した（Ｌａｎｄｅｒｓら、Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ＆Ｉ
ｍｍｕｎｉｔｙ５９：３７７４（１９９１）；Ｍａｇｅｅら、Ｉｎｆｅｃｔｉ
ｏｎ＆Ｉｍｍｕｎｉｔｙ６３：５１６（１９９５））。しかし、粘膜表面に十
分高力価の中和抗体が存在することによっても、防御効果が発揮されうる。Ｃｏ
ｔｔｅｒら、ＩｎｆｅｃｔｉｏｎａｎｄＩｍｍｕｎｉｔｙ６３：４７０４
（１９９５）。

【００１９】種Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ内の抗原性バリエーションの程度は、十分に特徴
づけられていない。Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓの血液型亜型は、主要外膜タン
パク質（ＭＯＭＰ）における抗原性バリエーションに基づいて規定されるが、公
開されたＣ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅＭＯＭＰ遺伝子配列は、この生物のいくつ
かの異なる単離株の間にバリエーションがないことを示す。Ｃａｍｐｂｅｌｌら
、ＩｎｆｅｃｔｉｏｎａｎｄＩｍｍｕｎｉｔｙ５８：９３（１９９０）；
ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、ＩｎｆｅｃｔｉｏｎａｎｄＩｍｍｕｎｉｔｙ６
３：２３８７−９（１９９５）；Ｋｎｕｄｓｅｎら、ＴｈｉｒｄＭｅｅｔｉｎ
ｇｏｆＥｕｒｏｐｅａｎＳｏｃｉｅｔｙｆｏｒＣｈｌａｍｙｄｉａ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ、Ｖｉｅｎｎａ（１９９６）を参照のこと。他のクラミジアＭ
ＯＭＰにおいて保存されていることが公知であるタンパク質の領域は、Ｃ．ｐｎ
ｅｕｍｏｎｉａｅにおいて保存されている。Ｃａｍｐｂｅｌｌら、Ｉｎｆｅｃｔ
ｉｏｎａｎｄＩｍｍｕｎｉｔｙ５８：９３（１９９０）；ＭｃＣａｆｆｅ
ｒｔｙら、ＩｎｆｅｃｔｉｏｎａｎｄＩｍｍｕｎｉｔｙ６３：２３８７−
９（１９９５）を参照のこと。１つの研究は、通常の分子量より大きなＭＯＭＰ
を有するが、その遺伝子が配列決定されていないＣ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの１
つの株を記載した。Ｇｒａｙｓｔｏｎら、Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１６８：
１２３１（１９９５）。９つの異なる単離株由来の外膜タンパク質２の部分的配
列がまた、不変であることが分かった。Ｒａｍｉｒｅｚら、ＡｎｎａｌｓＩｎ
ｔ．Ｍｅｄ．１２５：９７９（１９９６）。ＨＳＰ６０およびＨＳＰ７０の遺伝
子は、予測されるように、他のクラミジア種とはほとんど変わらないことを示す
。７６ｋＤａ抗原をコードする遺伝子は、単一のＣ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ株か
らクローニングされた。この遺伝子は、他の公知のクラミジア遺伝子とは有意な
類似性を有さない。Ｍａｒｒｉｅ、Ｃｌｉｎ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１８：５
０１（１９９３）。

【００２０】Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅに対する免疫血清により認識される多くの抗原は、
全てのクラミジアにわたって保存されている。しかし、９８ｋＤａ、７６ｋＤａ
および５４ｋＤａのタンパク質は、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ特異的であり得る
。Ｃａｍｐｏｓら、Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．３
６：１４７７（１９９５）；Ｍａｒｒｉｅ、Ｃｌｉｎ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．
１８：５０１（１９９３）；Ｗｉｅｄｍａｎｎ−Ａｌ−Ａｈｍａｄら、Ｃｌｉｎ
．Ｄｉａｇｎ．Ｌａｂ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４：７００〜７０４（１９９７）。単
離株の、患者由来の血清を用いたイムノブロッティングは、単離株間のブロッテ
ィングパターンのバリエーションを確かに示す。このことは、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏ
ｎｉａｅ血清型が存在し得ることを示す。Ｇｒａｙｓｔｏｎら、Ｊ．Ｉｎｆｅｃ
ｔ．Ｄｉｓ．１６８：１２３１（１９９５）；Ｒａｍｉｒｅｚら、Ａｎｎａｌｓ
Ｉｎｔ．Ｍｅｄ．１２５：９７９（１９９６）。しかし、この結果は、患者の
感染状態により混同される可能性がある。なぜなら、患者血清の免疫ブロットプ
ロファイルは感染後の時間とともに変化するからである。任意の血清型の数およ
び相対的頻度、ならびに規定する抗原の評価は、未だ可能ではない。

【００２１】従って、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ感染を予防、処置、および診断するための有効な
組成物がなお必要である。

【００２２】（発明の要旨）１つの局面において、本発明は、外膜タンパク質（ｍｉｐ）またはＣＰＮ１０
０５０１（配列番号１−全長配列および配列番号３−成熟ポリペプチドについて
のコード配列）と指定されたＣｈｌａｍｙｄｉａポリペプチドをコードする、精
製されそして単離されたＤＮＡ分子を提供する。この用語ｍｉｐおよびＣＰＮ１
００５０１は本出願において交換可能に使用される。このコードされたポリペプ
チドは、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ感染を予防、処置、および診断するための方法にお
いて使用され得、そしてこれらのポリペプチドとしては、配列番号２および配列
番号４に示されるアミノ酸配列を有するポリペプチドが挙げられる。当業者は、
本発明がまた、このようなポリペプチドの変異体、改変体、および誘導体をコー
ドするＤＮＡ分子を含むことを理解する。これは、本明細書中に記載の非必須ア
ミノ酸の付加、欠失または置換から生じる。本発明はまた、本発明のＤＮＡ分子
に対応するＲＮＡ分子を含む。

【００２３】ＤＮＡ分子およびＲＮＡ分子に加えて、本発明は、対応するポリペプチド、お
よびこのようなポリペプチドに特異的に結合するモノ特異的な抗体を含む。

【００２４】本発明は、広範な適用を有し、そして発現カセット、ベクター、および本発明
のポリヌクレオチドで形質転換またはトランスフェクトされた細胞を含む。従っ
て、本発明は、以下を提供する：（ｉ）組換え宿主系において本発明のポリペプ
チドを生成するための方法、ならびに関連する発現カセット、ベクター、および
形質転換されたか、またはトランスフェクトされた細胞；（ｉｉ）例えば、ウイ
ルス生ワクチンベクターまたは細菌生ワクチンベクターのような生ワクチンベク
ター（これらは、本発明のポリヌクレオチドを含む、ポックスウイルス、アルフ
ァウイルス、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、またはＶｉｂｒ
ｉｏｃｈｏｌｅｒａｅベクターを含み、このようなワクチンベクターは、例え
ば、希釈剤またはキャリアならびに関連する薬学的組成物、ならびに関連する治
療および／または予防方法との組み合わせでＣｈｌａｍｙｄｉａ感染を予防およ
び処置するために有用である）；（ｉｉｉ）本発明のＲＮＡまたはＤＮＡ分子（
裸の形態か、または送達ビヒクル、ポリペプチドまたはポリペプチドの組み合わ
せ、または本発明のモノ特異的抗体、ならびに関連する薬学的組成物とともに処
方されるかのいずれか）を投与することを包含する、治療および／または予防方
法；（ｉｖ）生物学的サンプル中のＣｈｌａｍｙｄｉａの存在を診断する方法（
これは、本発明のＤＮＡまたはＲＮＡ分子、モノ特異的抗体、またはポリペプチ
ドの使用を包含し得る）；ならびに（ｖ）抗体ベースのアフィニティークロマト
グラフィーにより、本発明のポリペプチドを精製するための方法。

【００２５】（発明の詳細な説明）Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅゲノムにおいて、クラミジアポリペプチドをコード
するオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）が同定された。これらのポリペプ
チドは、細菌の膜構造において不変的に見られるポリペプチド（細菌の膜の外側
近傍に存在するポリペプチド）を含み、封入体膜構造において不変的に見られる
ポリペプチド（封入体膜の外側近傍に存在するポリペプチド）を含み、そして感
染細胞の細胞質に放出されるポリペプチドを含む。これらのポリペプチドは、Ｃ
ｈｌａｍｙｄｉａ感染を予防および処置するためのワクチン接種方法において使
用されうる。

【００２６】本発明の第１の局面に従って、Ｃｈｌａｍｙｄｉａポリペプチドの前駆体およ
び成熟形態をコードする単離されたポリヌクレオチドが提供される。

【００２７】本発明の単離されたポリヌクレオチドは、Ｃｈｌａｍｙｄｉａアミノ酸配列に
相同であるアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードする。このＣｈｌａｍｙ
ｄｉａアミノ酸配列は、配列番号２または４に示されるアミノ酸配列からなる群
より選択される。

【００２８】用語「単離されたポリヌクレオチド」は、それが天然に存在する環境から取り
出されたポリヌクレオチドとして定義される。例えば、細菌のゲノム中に存在す
る、天然に存在するＤＮＡ分子は、単離されていないが、例えば、クローニング
事象（増幅）の結果として細菌のゲノムの残りの部分から分離された同じ分子は
、単離されている。代表的には、単離されたＤＮＡ分子は、天然に存在するゲノ
ム中５’および３’末端においてすぐ隣接するＤＮＡ領域（例えば、コード領域
）を含まない。このような単離されたポリヌクレオチドは、ベクターまたは組成
物の一部分であり得、そしてなお、このようなベクターまたは組成物がその天然
の環境の一部ではない点でなお単離されている。

【００２９】本発明のポリヌクレオチドは、ＲＮＡまたはＤＮＡ（例えば、ｃＤＮＡ、ゲノ
ムＤＮＡ、または合成ＤＮＡ）の形態またはその改変もしくは組み合わせであり
得る。このＤＮＡは、二本鎖または一本鎖であり得、そして一本鎖の場合には、
コード鎖または非コード鎖（アンチセンス）であり得る。配列番号２および配列
番号４において示される本発明のポリペプチドをコードする配列は、（ａ）配列
番号１または３に示されるコード配列；（ｂ）（ａ）の転写により誘導されるリ
ボヌクレオチド配列；または（ｃ）異なるコード配列；この後者は、遺伝コード
の縮退または縮重の結果として、ＤＮＡ分子（このヌクレオチド配列は、配列番
号１および３に記載される）と同じポリペプチドをコードする。

【００３０】「相同なアミノ酸配列」により、そのポリペプチドの特定の抗原性を破壊しな
い位置に配置されている、１つ以上の保存的アミノ酸配列によってのみ、または
１つ以上の非保存的アミノ酸置換、欠失、もしくは付加によってのみ、配列番号
２または４に示されるアミノ酸配列とは異なるアミノ酸配列が意味される。

【００３１】好ましくは、このような配列は、配列番号２または４に示されるアミノ酸配列
に対して、少なくとも７５％、より好ましくは８０％、そして最も好ましくは９
０％同一である。

【００３２】相同なアミノ酸配列は、配列番号２および４に示されるアミノ酸配列に同一、
または実質的に同一である配列を含む。「実質的に同一のアミノ酸配列」により
、参照のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、好ましくは９５％、より好ま
しくは９７％、そして最も好ましくは、９９％同一であり、そして好ましくは（
あったとしても）大部分の保存的アミノ酸置換により参照の配列とは異なる配列
が意味される。

【００３３】保存的アミノ酸置換は、代表的には、同じクラスのアミノ酸のなかでの置換を
含む。これらのクラスとしては、例えば、以下が挙げられる：（ａ）荷電してい
ない極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、アスパラギン、グルタミン、セリン、
スレオニン、およびチロシン）；（ｂ）塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えば、
リジン、アルギニン、およびヒスチジン）；（ｃ）酸性側鎖を有するアミノ酸（
例えば、アスパラギン酸またはグルタミン酸）；ならびに（ｄ）非極性側鎖を有
するアミノ酸（例えば、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン
、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン、トリプトファン、およびシステイ
ン）。

【００３４】相同性は、代表的には、配列分析ソフトウェア（例えば、Ｓｅｑｕｅｎｃｅ
ＡｎａｌｙｓｉｓＳｏｆｔｗａｒｅＰａｃｋａｇｅｏｆｔｈｅＧｅｎ
ｅｔｉｃｓＣｏｍｐｕｔｅｒＧｒｏｕｐ，ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＷ
ｉｓｃｏｎｓｉｎＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＣｅｎｔｅｒ，１７１０Ｕ
ｎｉｖｅｒｓｉｔｙＡｖｅｎｕｅ、Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ５３７０５）を用
いて測定される。類似のアミノ酸配列は、最大の程度の相同性（すなわち、同一
性）を得るために整列される。この目的のために、配列にギャップを導入するこ
とが必要であり得る。一旦最適な配列が設定されると、相同性の程度（すなわち
、同一性）が、位置の総数に対して、両方の配列のアミノ酸が同一である位置の
全てを記録することにより確立される。

【００３５】あるいは、相同性は、例えば、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ
．４８：４４３（１９７０）に記載の動的プログラミングアルゴリズムおよびＡ
ｌｉｇｎＰｒｏｇｒａｍ（ＤＮＡｓｔａｒ，Ｉｎｃ．により製造される市販の
ソフトウェアパッケージ）（これらの教示は、本明細書中に参考として援用され
る）のような整列ツールを用いて候補配列および参照配列を整列することにより
決定され得る。最初の整列がなされた後、関連タンパク質のファミリーの複数配
列整列に対する比較により正確にされうる。一旦候補配列と参照配列との間で整
列がなされ、そして正確にされると、相同性パーセントスコアが計算される。各
配列の個々のアミノ酸は、それらの互いの類似性に従って連続的に比較される。

【００３６】類似性因子としては、類似のサイズ、形状および電荷が挙げられる。アミノ酸
類似性を決定する、１つの特に好ましい方法は、Ｄａｙｈｏｆｆら、５Ａｔｌ
ａｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎＳｅｑｕｅｎｃｅＡｎｄＳｔｒｕｃｔｕｒｅ
３４５−３５２（１９７８および増補）（これは、本明細書中に参考として援
用される）に記載されるＰＡＭ２５０マトリクスである。まず、類似性スコアが
、整列された対のアミノ酸類似性スコアの合計として計算される。挿入および欠
失は、相同性パーセントおよび同一性パーセントの目的については無視される。
従って、ギャップペナルティーは、この計算には使用されない。次いで、未処理
スコアが、候補化合物と参照配列のスコアの幾何平均によってそれを除すること
により正規化される。この幾何平均は、これらのスコアの産物の平方根である。
この正規化された未処理スコアは、相同性パーセントである。

【００３７】好ましくは、相同な配列は、（ｉ）配列番号１のコード配列、または（ｉｉ）
配列番号３のコード配列に対して少なくとも４５％、より好ましくは６０％、そ
して最も好ましくは８５％同一である配列である。

【００３８】配列番号２および４に示される配列の１つに相同な配列を有するポリペプチド
は、天然に存在する対立遺伝子改変体ならびに変異体および改変体、または配列
番号２または４に示される配列を有するポリペプチドに対して抗原性の点で類似
する、任意の他の天然に存在しない改変体を含む。

【００３９】対立遺伝子改変体は、そのポリペプチドの生物学的機能を実質的に変更しない
、１以上のアミノ酸の置換、欠失、または付加を有すると特徴付けられる、ポリ
ペプチドの代替形態である。「生物学的機能」によって、たとえその機能が細胞
の増殖または生存にとって必須でなくとも、そのポリペプチドが天然で存在する
細胞におけるポリペプチドの機能が意味される。例えば、ポーリンの生物学的機
能は、細胞への、細胞外媒体中に存在する化合物の進入を可能にすることである
。この生物学的機能は、抗原性機能とは区別される。ポリペプチドは、１より多
くの生物学的機能を有し得る。

【００４０】対立遺伝子改変体は、天然で非常に普通である。例えば、細菌種（例えば、Ｃ
．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）は、通常、重要でない対立遺伝子の変化によって互い
に異なる種々の株によって表される。実際、異なる株において同じ生物学的機能
を満たすポリペプチドは、株の各々において同一ではないアミノ酸配列を有し得
る。このような対立遺伝子の変化は、ポリヌクレオチドレベルで等しく反映され
得る。

【００４１】ポリペプチド抗原の対立遺伝子改変体の使用のための支持は、例えば、Ｃｈｌ
ａｍｙｄｉａｌＭＯＭＰ抗原の研究から生ずる。株間抗体結合および感染性の
中和が生じたとしても、ＭＯＭＰのアミノ酸配列は株毎に異なり、このことは、
ＭＯＭＰが免疫原として用いられる場合、アミノ酸の変化に寛容であることを示
す。

【００４２】対立遺伝子改変体をコードするポリヌクレオチド、例えばＤＮＡ分子は、従来
法によって抽出された細菌ゲノムＤＮＡのポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）増幅
によって容易に回収され得る。このことは、コードドメインの５’末端および３
’末端の上流および下流にマッチする合成オリゴヌクレオチドプライマーの使用
を含む。適切なプライマーは、配列番号１および３に提供されるヌクレオチド配
列情報に従って設計され得る。代表的には、プライマーは、１０〜４０、好まし
くは１５〜２５ヌクレオチドからなり得る。効率的なハイブリダイゼーションを
確実にするに十分な比率のＣヌクレオチドおよびＧヌクレオチド（例えば、総ヌ
クレオチド量の少なくとも４０％、好ましくは５０％のＣヌクレオチドおよびＧ
ヌクレオチドの量）を含むプライマーを選択することもまた有利であり得る。

【００４３】天然に存在しない有用なホモログは、アミノ酸配列の変化および／または欠失
に寛容であるようである抗原領域を同定するための公知の方法を用いて設計され
得る。例えば、異なる種由来の抗原配列は、保存された配列を同定するために比
較され得る。

【００４４】本発明のポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチド誘導体としては
、例えば、フラグメント、全長ポリペプチドに由来する大きな内部欠失を有する
ポリペプチドおよび融合タンパク質が挙げられる。

【００４５】本発明のポリペプチドフラグメントは、このフラグメントが、親ポリペプチド
の所望の実質的抗原性（特異的抗原性）を保持する程度までの、配列番号１およ
び３に示されるいずれかの配列に相同な配列を有するポリペプチドに由来し得る
。ポリペプチド誘導体はまた、親ポリペプチドのかなりの部分を除去するが、所
望の特異的抗原性を保持する、大きな内部欠失によって構築され得る。一般に、
ポリペプチド誘導体は、抗原性を保持するために、少なくとも約１２アミノ酸の
長さであるべきである。有利には、ポリペプチド誘導体は、少なくとも２０アミ
ノ酸、好ましくは少なくとも５０アミノ酸、より好ましくは少なくとも７５アミ
ノ酸、そして最も好ましくは少なくとも１００アミノ酸の長さであり得る。

【００４６】有用なポリペプチド誘導体（例えば、ポリペプチドフラグメント）は、表面に
露出される抗原性領域としての可能性を有する、タンパク質抗原中の部位を同定
するためにアミノ酸配列のコンピューター援用分析を用いて設計され得る。Ｈｕ
ｇｈｅｓら，Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６０：３４９７（１９９２）。

【００４７】ポリペプチドフラグメントおよび大きな内部欠失を有するポリペプチドは、そ
うでなければ親ポリペプチド中に覆われ、そして例えば、防御Ｔ細胞依存性免疫
応答を誘導するために重要であり得るエピトープを示すために用いられ得る。欠
失はまた、株間で高変異性の免疫優性領域を除去し得る。

【００４８】タンパク質免疫原のフラグメントおよび改変体をワクチンおよび免疫原として
使用することは、免疫学の分野において受け入れられた実施である。なぜなら、
これらのことは全て、小さな（例えば、８〜１０アミノ酸の）領域のタンパク質
であり得るタンパク質に対する免疫応答を誘導するために必要とされるからであ
る。このことは、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ以外の病原体に対する多数のワクチンに関
して行われている。例えば、マウス乳癌ウイルスの１１アミノ酸を含むペプチド
（Ｄｉｏｎら，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ１７９：４７４−４７７（１９９０））；セ
ムリキ森林ウイルスの１６アミノ酸を含むペプチド（Ｓｎｉｊｄｅｒｓら，Ｊ．
Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．７２：５５７−５６５（１９９１））；およびイヌパルボ
ウイルスの、各々１５アミノ酸を含む、２つの重複するペプチド（Ｌａｎｇｅｖ
ｅｌｄら，Ｖａｃｃｉｎｅ１２：１４７３−１４８０（１９９４）））のよう
な病原体の表面に露出された抗原に対応する短い合成ペプチドは、それらのそれ
ぞれの病原体に対して有効なワクチン抗原であることが示されている。

【００４９】ポリペプチドフラグメントおよび大きな内部欠失を有するポリペプチドをコー
ドするポリヌクレオチドは、標準的方法（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら，ＣＵＲＲ
ＥＮＴＰＲＯＴＯＣＯＬＳＩＮＭＯＬＥＣＵＬＡＲＢＩＯＬＯＧＹ，Ｊ
ｏｈｎＷｉｌｅｙ＆ＳｏｎｓＩｎｃ．（１９９４）を参照のこと；例え
ば、逆ＰＣＲを含むＰＣＲによる、クローン化ＤＮＡ分子の制限酵素処理による
、またはＫｕｎｋｅｌら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８
２：４４８（１９８５））の方法による；Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅで利用可能な生
物学的材料）を用いて構築され得る。

【００５０】ポリペプチド誘導体はまた、任意のタンパク質ポリペプチドに対して、例えば
、Ｎ末端またはＣ末端で融合された本発明のポリペプチドまたはポリペプチド誘
導体を含む融合ポリペプチドとして生成され得る。ハイブリッド融合タンパク質
に対応するアミノ酸配列をコードするＤＮＡの構築のために、ＣＰＮ１００２０
２ヌクレオチド配列（配列番号１または３）の一部に対応するアミノ酸配列をコ
ードする第１のＤＮＡは、例えば、本明細書中に参考として援用される米国特許
第５，８４４，０９５号に記載される方法を用いて第２のＤＮＡに連結される。
次いで、産物は、遺伝子融合物の翻訳によって容易に入手され得る。融合ポリペ
プチドを発現するためのベクターは、市販され、例えば、融合ペプチドがマルト
ース結合タンパク質であるＮｅｗＥｎｇｌａｎｄＢｉｏｌａｂｓのｐＭａｌ
−ｃ２またはｐＭａｌ−ｐ２系、Ｐｈａｒｍａｃｉａのグルタチオン−Ｓ−トラ
ンスフェラーゼ系、またはＮｏｖａｇｅｎから入手可能なＨｉｓ−Ｔａｇ系であ
る。これらおよび他の発現系は、本発明のポリペプチドおよび誘導体のさらなる
精製のための便利な手段を提供する。

【００５１】本発明に含まれる融合ポリペプチドの別の特定の例としては、アジュバント活
性を有するポリペプチド（例えば、コレラ毒素またはＥ．ｃｏｌｉ熱不安定性毒
素のいずれかのサブユニットＢ）に融合された本発明のポリペプチドまたはポリ
ペプチド誘導体が挙げられる。いくつかの可能性が、融合を達成するために用い
られ得る。第１に、本発明のポリペプチドは、アジュバント活性を有するポリペ
プチドのＮ末端または好ましくはＣ末端に融合され得る。第２に、本発明のポリ
ペプチドフラグメントは、アジュバント活性を有するポリペプチドのアミノ酸配
列内に融合され得る。

【００５２】上記のように、本発明のポリヌクレオチドは、前駆体形態または成熟形態のＣ
ｈｌａｍｙｄｉａポリペプチドをコードする。これらはまた、本発明ののポリペ
プチドへと成熟し得る、異種シグナルペプチドを含むハイブリッド前駆体をコー
ドし得る。「異種シグナルペプチド」によって、本発明のポリペプチドの天然に
存在する前駆体中に見出されないシグナルペプチドが意味される。

【００５３】相同なコード配列を有する本発明のポリヌクレオチドは、好ましくはストリン
ジェントな条件下で、配列番号１および３に示される配列を有するポリヌクレオ
チドにハイブリダイズする。ハイブリダイゼーション手順は、例えば、各々本明
細書中に参考として援用される、Ａｕｓｕｂｅｌら，ＣＵＲＲＥＮＴＰＲＯＴ
ＯＣＯＬＳＩＮＭＯＬＥＣＵＬＡＲＢＩＯＬＯＧＹ，ＪｏｈｎＷｉｌｅ
ｙ＆ＳｏｎｓＩｎｃ．（１９９４）；Ｓｉｌｈａｖｙら，ＥＸＰＥＲＩＭ
ＥＮＴＳＷＩＴＨＧＥＮＥＦＵＳＩＯＮＳ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨ
ａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ（１９８４）；Ｄａｖｉｓら，
ＡＭＡＮＵＡＬＦＯＲＧＥＮＥＴＩＣＥＮＧＩＮＥＥＲＩＮＧ：ＡＤＶ
ＡＮＣＥＤＢＡＣＴＥＲＩＡＬＧＥＮＥＴＩＣＳ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇ
ＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ（１９８０）に記載される
。ハイブリダイゼーション条件を最適化するために考慮され得る重要なパラメー
ターは、それより上では２つの相補的ＤＮＡ鎖が互いに離れる臨界値である融解
温度の算出を可能にする式に反映される。ＣａｓｅｙおよびＤａｖｉｄｓｏｎ，
Ｎｕｃｌ．ＡｃｉｄＲｅｓ．４：１５３９（１９７７）。この式は以下の通り
である：Ｔｍ＝８１．５＋０．５×（％Ｇ＋Ｃ）＋１．６ｌｏｇ（陽イオン濃度）−０
．６×（％ホルムアミド）適切なストリンジェンシー条件下では、ハイブリダイゼーション温度（Ｔｈ）
は、算出されたＴｍよりも低く、約２０〜４０℃、２０〜２５℃、または好まし
くは３０〜４０℃である。当業者は、最適な温度および塩条件が、従来の手順を
用いる予備実験において経験的に容易に決定され得ることを理解する。

【００５４】例えば、ストリンジェントな条件は、プレハイブリダイズするインキュベーシ
ョンおよびハイブリダイズするインキュベーションの両方について、以下におい
て達成され得る：（ｉ）５０％ホルムアミドを含む６×ＳＳＣ中で４２℃にて４
〜１６時間、または（ｉｉ）６×ＳＳＣ水溶液（１ＭＮａＣｌ、０．１Ｍクエ
ン酸ナトリウム（ｐＨ７．０）中で６５℃にて４〜１６時間）。

【００５５】３０〜６００ヌクレオチドを含むポリヌクレオチドに関して、上記の式が用い
られ、次いで（６００／塩基対におけるポリヌクレオチドサイズ）を差し引くこ
とによって補正される。ストリンジェンシー条件は、Ｔｍよりも５〜１０℃低い
Ｔｈによって規定される。

【００５６】２０〜３０塩基よりも短いオリゴヌクレオチドについてのハイブリダイゼーシ
ョン条件は、上記の法則に正確には従わない。このような場合、Ｔｍを算出する
ための式は以下の通りである：Ｔｍ＝４×（Ｇ＋Ｃ）＋２（Ａ＋Ｔ）例えば、５０％Ｇ＋Ｃの１８ヌクレオチドフラグメントは、５４℃のおよその
Ｔｍを有する。

【００５７】本発明のポリヌクレオチド分子（ＲＮＡ、ＤＮＡ、またはそれらの改変体もし
くは組み合わせを含む）は、種々の適用を有し得る。例えば、ＤＮＡ分子は、以
下において用いられ得る：（ｉ）コードされるポリペプチドを組換え宿主系にお
いて生成するためのプロセス、（ｉｉ）Ｃｈｌａｍｙｄｉａ感染を予防および／
または処置するための方法および組成物においてさらに使用される、ポックスウ
イルスのようなワクチンベクターの構築、（ｉｉｉ）裸の形態または送達ビヒク
ルで処方されるワクチン剤（ならびにＲＮＡ分子）、ならびに（ｉｖ）本発明の
ポリヌクレオチドを過剰発現し得るかまたは適切な場合はそれを改変された変異
形態（例えば、非毒性形態）で発現し得る、弱毒Ｃｈｌａｍｙｄｉａ株の構築。
Ｃｈｌａｍｙｄｉａによって引き起こされる疾患に対する防御のための本発明の
タンパク質およびペプチドおよびコードヌクレオチドのワクチン組成物および使
用に関しては、タンパク質またはペプチドをコードする裸のＤＮＡを使用するこ
とおよびこれらのヌクレオチドを鼻内または筋肉内に投与することは好ましくな
い。これらのタンパク質に関しては、コード核酸を他の経路（例えば、皮内に）
によって投与することおよび／または免疫応答を改善するようにコード核酸（ま
たはアジュバント）を処方することが好ましい。免疫剤として用いられるための
組換え生ベクター（例えば、ウイルスベクターまたは細菌ベクター）の一部とし
てコード核酸を含ませることもまた好ましい。本発明のタンパク質またはペプチ
ド自体を含むワクチン処方物で免疫することもまた好ましい。これらのワクチン
処方物は、アジュバントの使用を含み得る。

【００５８】本発明の第２の局面によれば、それゆえ、以下が提供される：（ｉ）発現に必
要とされるエレメントの制御下（特に、適切なプロモーターの制御下）に配置さ
れた本発明のＤＮＡ分子を含む発現カセット；（ｉｉ）本発明の発現カセットを
含む発現ベクター；（ｉｉｉ）本発明の発現カセットおよび／またはベクターで
形質転換またはトランスフェクトされた原核生物細胞または真核生物細胞、なら
びに（ｉｖ）本発明の発現カセットおよび／またはベクターで形質転換またはト
ランスフェクトされた原核生物細胞または真核生物細胞を、本発明のＤＮＡ分子
の発現を可能にする条件下で培養する工程、ならびにこの細胞培養物からコード
されるポリペプチドまたはポリペプチド誘導体を回収する工程を含む、本発明の
ポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドまたはポリペプチド誘導体
を生成するためのプロセス。

【００５９】組換え発現系は、原核生物宿主および真核生物宿主から選択され得る。真核生
物宿主としては、酵母細胞（例えば、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖ
ｉｓｉａｅまたはＰｉｃｈｉａｐａｓｔｏｒｉｓ）、哺乳動物細胞（例えば、
ＣＯＳ１細胞、ＮＩＨ３Ｔ３細胞またはＪＥＧ３細胞）、節足動物細胞（例えば
、Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ（ＳＦ９）細胞）および植物細
胞が挙げられる。好ましくは、原核生物宿主（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ）が用いら
れる。細菌細胞および真核生物細胞は、当業者に対する多数の異なる供給源（例
えば、ＡｍｅｒｉｃａｎＴｙｐｅＣｕｌｔｕｒｅＣｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（
ＡＴＣＣ；Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ））から入手可能である。

【００６０】発現系の選択は、発現されるポリペプチドについて所望される特徴に依存する
。例えば、本発明のポリペプチドを特定の脂質化形態または任意の他の形態で生
成することが有用であり得る。

【００６１】発現カセットの選択は、選択される宿主系ならびに発現されるポリペプチドに
ついて所望される特徴に依存する。代表的に、発現カセットは、選択される宿主
系において機能的であり、そして構成的または誘導性であり得るプロモーター；
リボソーム結合部位；開始コドン（ＡＴＧ）、必要であれば、シグナルペプチド
をコードする領域（例えば、脂質化シグナルペプチド）；本発明のＤＮＡ分子；
終止コドン；および必要に応じて３’末端領域（翻訳ターミネーターおよび／ま
たは転写ターミネーター）を含む。シグナルペプチドをコードする領域は、本発
明のポリヌクレオチドに隣接し、そして適切なリーディングフレームに配置され
る。このシグナルペプチドをコードする領域は、成熟ポリペプチドをコードする
ＤＮＡ分子に対して同種または異種であり得、そして発現のために用いられる宿
主の分泌装置に対して特異的であり得る。本発明のＤＮＡ分子によって構築され
るオープンリーディングフレームは、単独で、またはシグナルペプチドとともに
、転写および翻訳が宿主系において生じるように、プロモーターの制御下に配置
される。プロモーター、シグナルペプチドをコードする領域は、当業者に広範に
公知でかつ入手可能であり、そして例えば、アラビノースによって誘導性であり
、Ｅ．ｃｏｌｉのようなグラム陰性細菌において機能的であるＳａｌｍｏｎｅｌ
ｌａｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍのプロモーター（および誘導体）（プロモーター
ａｒａＢ）（米国特許第５，０２８，５３０号およびＣａｇｎｏｎ（Ｃａｇｎｏ
ｎら，ＰｒｏｔｅｉｎＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ４：８４３（１９９１））に
記載される通り）；Ｔ７ポリメラーゼを発現する多数のＥ．ｃｏｌｉ株において
機能的であるＲＮＡポリメラーゼをコードするバクテリオファージＴ７の遺伝子
のプロモーター（米国特許第４，９５２，４９６号に記載される）；ＯｓｐＡ脂
質化シグナルペプチド；ならびにＲｌｐＢ脂質化シグナルペプチド（Ｔａｋａｓ
ｅら，Ｊ．Ｂａｃｔ．１６９：５６９２（１９８７））を含む。

【００６２】発現カセットは代表的に、発現ベクターの一部であり、発現ベクターは、選択
された発現系において複製する能力について選択される。発現ベクター（例えば
、プラスミドまたはウイルスベクター）は、Ｐｏｕｗｅｌｓら（ＣＬＯＮＩＮＧ
ＶＥＣＴＯＲＳ：ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹＭＡＮＵＡＬ，８５，補遺１９８７
）に記載される発現ベクターから選択され得る。これらは、種々の商業的供給源
から購入され得る。

【００６３】発現ベクターで宿主細胞を形質転換／トランスフェクトするための方法は、Ａ
ｕｓｕｂｅｌら，ＣＵＲＲＥＮＴＰＲＯＴＯＣＯＬＳＩＮＭＯＬＥＣＵＬ
ＡＲＢＩＯＬＯＧＹ，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆ＳｏｎｓＩｎｃ．（１９
９４）に記載されるように選択される宿主系に依存する。

【００６４】発現によって、本発明の組換えポリペプチド（またはポリペプチド誘導体）は
、生成され、そして細胞内区画中に残存するか、細胞外培地もしくはペリプラズ
ム空間中に分泌／排出されるか、または細胞膜中に包埋される。次いで、このポ
リペプチドは、実質的に純粋な形態で細胞抽出物からまたは上清から、組換え細
胞培養物の遠心分離後に回収され得る。代表的には、組換えポリペプチドは、抗
体に基づく親和性精製によって、または小さな親和性結合ドメインへの遺伝子融
合物によるような、当業者により容易に適用され得る任意の他の方法によって精
製され得る。抗体に基づく親和性精製方法はまた、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ株から抽
出された本発明のポリペプチドを精製するために利用可能である。免疫親和性に
よって本発明のポリペプチドを精製するために有用な抗体は、以下に記載の通り
に入手され得る。

【００６５】本発明のポリヌクレオチドはまた、ワクチンの分野で、例えばＤＮＡワクチン
接種を達成するために有用であり得る。ウイルスまたは細菌宿主を遺伝子送達ビ
ヒクル（生ワクチンベクター）として用いるかまたは遺伝子を遊離の形態で（例
えば、プラスミド中に挿入して）投与するかのいずれかの２つの主な可能性が存
在する。本発明のポリヌクレオチドの治療的または予防的効力は、以下に記載さ
れる通りに評価され得る。

【００６６】従って、本発明の第３の局面では、以下が提供される：（ｉ）ポックスウイル
スのような、発現に要求されるエレメントの制御下に配置された本発明のＤＮＡ
分子を含むワクチンベクター；（ｉｉ）希釈剤またはキャリアとともに、本発明
のワクチンベクターを含む組成物；具体的に（ｉｉｉ）治療的有効量または予防
的有効量の本発明のワクチンベクターを含む薬学的組成物；（ｉｖ）免疫学的に
有効な量の本発明のワクチンベクターを哺乳動物に投与して、免疫応答（例えば
、Ｃｈｌａｍｙｄｉａに対する防御免疫応答または治療免疫応答）を誘発する工
程を含む、哺乳動物（例えば、ヒト）においてＣｈｌａｍｙｄｉａに対する免疫
応答を誘導するための方法（あるいはこの方法は、動物（例えば、ネコまたは鳥
）のＣｈｌａｍｙｄｉａ感染を処置または予防するための獣医学的適用において
使用され得る）；ならびに具体的に（ｖ）予防的または治療的量の本発明のワク
チンベクターを、必要性がある個体に投与する工程を含む、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ
（例えば、Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、Ｃ．ｐｓｉｔｔａｃｉ、Ｃ．ｐｎｅｕ
ｍｏｎｉａ、Ｃ．ｐｅｃｏｒｕｍ）感染を予防および／または処置するための方
法。さらに、本発明の第３の局面は、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ感染を予防および／ま
たは処置するための医薬品の調製における本発明のワクチンベクターの使用を含
む。

【００６７】本発明のワクチンベクターは、１またはいくつかの本発明のポリペプチドまた
は誘導体、ならびに少なくとも１つのさらなるＣｈｌａｍｙｄｉａ抗原、そのフ
ラグメント、ホモログ、変異体または誘導体を発現し得る。さらに、本発明のワ
クチンベクターは、免疫応答を増強する（アジュバント効果）、サイトカイン（
例えば、インターロイキン−２（ＩＬ−２）またはインターロイキン−１２（Ｉ
Ｌ−２１））を発現し得る。従って、ワクチンベクターは、哺乳動物細胞におけ
る発現のために要求されるエレメントの制御下に配置された、例えば、クラミジ
ア抗原またはサイトカインをコードするさらなるＤＮＡ配列を含み得る。

【００６８】あるいは、本発明の組成物は、いくつかのワクチンベクターを含み得、このワ
クチンベクターの各々は、本発明のポリペプチドまたは誘導体を発現し得る。組
成物はまた、さらなるＣｈｌａｍｙｄｉａ抗原、またはそのサブユニット、フラ
グメント、ホモログ、変異体もしくは誘導体；あるいはＩＬ−２またはＩＬ−１
２のようなサイトカインを発現し得るワクチンベクターを含み得る。

【００６９】哺乳動物における感染を処置または予防するためのワクチン接種方法において
は、本発明のワクチンベクターは、ワクチンの分野において使用される任意の従
来の経路によって、特に、粘膜（例えば、眼、鼻内、経口、胃、肺、腸、直腸、
膣または尿路）表面に対して、または非経口（皮下、皮内、筋内、静脈内または
腹腔内）経路を介して投与され得る。好ましい経路は、ワクチンベクターの選択
に依存する。この投与は、単回用量でまたは間隔をおいて反復して達成され得る
。適切な投薬量は、当業者によって理解される種々のパラメーター（例えば、ワ
クチンベクター自体、投与経路またはワクチン接種されるべき哺乳動物の状態（
体重、年齢など））に依存する。

【００７０】当該分野で入手可能な生ワクチンベクターとしては、ウイルスベクター（例え
ば、アデノウイルス、アルファウイルスおよびポックスウイルス）ならびに細菌
ベクター（例えば、Ｓｈｉｇｅｌｌａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、Ｖｉｂｒｉｏ
ｃｈｏｌｅｒａｅ、Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ、Ｂａｃｉｌｌｅｂｉｌｉｅ
ｄｅＣａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒｉｎ（ＢＣＧ）およびＳｔｒｅｐｔｏｃｏ
ｃｃｕｓ）が挙げられる。

【００７１】アデノウイルスベクターの例、ならびに本発明のＤＮＡ分子を発現し得るアデ
ノウイルスベクターを構築するための方法は、米国特許第４，９２０，２０９号
に記載される。用いられ得るポックスウイルスベクターとしては、例えば、それ
ぞれ、米国特許第４，７２２，８４８号および米国特許第５，３６４，７７３号
に記載されるワクシニアおよびカナリア痘ウイルスが挙げられる（例えば、ワク
シニアウイルスベクターの説明についてはＴａｒｔａｇｌｉａら，Ｖｉｒｏｌｏ
ｇｙ１８８：２１７（１９９２）を；およびカナリア痘の言及についてはＴａ
ｙｌｏｒら，Ｖａｃｃｉｎｅ１３：５３９（１９９５）もまた参照のこと）。
本発明のポリヌクレオチドを発現し得るポックスウイルスベクターは、本発明の
ポリヌクレオチドが哺乳動物細胞における発現のために適切な条件下でウイルス
ゲノム中に挿入されるように、Ｋｉｅｎｙら，Ｎａｔｕｒｅ３１２：１６３（
１９８４）に記載されるような相同組換えによって入手され得る。一般に、治療
的または予防的使用のためのワクチンウイルスベクターの用量は、１キログラム
あたり約１×１０⁴〜約１×１０¹¹、有利には約１×１０⁷〜約１×１０¹⁰、好ま
しくは約１×１０⁷〜約１×１０⁹のプラーク形成単位の量であり得る。好ましく
は、ウイルスベクターは、非経口的に投与される；例えば、３用量で、４週間離
れて。当業者は、化学的アジュバントを、ウイルスベクターを含む本発明の組成
物中に添加することを回避し、それによってウイルスベクター自体に対する免疫
応答を最小にすることが好ましいことを認識する。

【００７２】生経口ワクチンとして有用である非毒素産生性Ｖｉｂｒｉｏｃｈｏｌｅｒａ
ｅ変異株は、Ｍｅｋａｌａｎｏｓら，Ｎａｔｕｒｅ３０６：５５１（１９８３
）および米国特許第４，８８２，２７８号（２つのｃｔｘＡ対立遺伝子の各々の
実質的な量のコード配列が、機能的コレラ毒素が産生されないように欠失されて
いる株）；ＷＯ９２／１１３５４（ｉｒｇＡ遺伝子座が変異によって不活化さ
れている株；この変異は、ｃｔｘＡ変異を有する単一株において組み合わされ得
る）；およびＷＯ９４／１５３３（機能的ｃｔｘＡおよびａｔｔＲＳ１ＤＮ
Ａ配列を欠く欠失変異体）に記載される。これらの株は、ＷＯ９４／１９４８
２に記載されるように、異種抗原を発現するように遺伝子操作され得る。本発明
のＤＮＡ分子によってコードされるポリペプチドまたはポリペプチド誘導体を発
現し得る、Ｖｉｂｒｉｏｃｈｏｌｅｒａｅ株の有効ワクチン用量は、例えば、
約１×１０⁵〜約１×１０⁹、好ましくは約１×１０⁶〜約１×１０⁸の生細菌を、
選択された投与経路について適切な容量において含み得る。好ましい投与経路と
しては、全ての粘膜経路が挙げられ；最も好ましくはこれらのベクターは、鼻内
にまたは経口で投与される。

【００７３】異種抗原の組換え発現のために遺伝子操作されたかまたはそうではない、弱毒
化Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ株、ならびにそれらの経口ワ
クチンとしての使用は、Ｎａｋａｙａｍａら，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
６：６９３（１９８８）およびＷＯ９２／１１３６１に記載される。好ましい
投与経路としては、全ての粘膜経路が挙げられ；最も好ましくはこれらのベクタ
ーは、鼻内にまたは経口で投与される。

【００７４】ワクチンベクターとして有用な他の細菌株は、Ｈｉｇｈら，ＥＭＢＯ１１：
１９９１（１９９２）；Ｓｉｚｅｍｏｒｅら，Ｓｃｉｅｎｃｅ２７０：２９９
（１９９５）（Ｓｈｉｇｅｌｌａｆｌｅｘｎｅｒｉ）；Ｍｅｄａｇｌｉｎｉら
，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９２：６８６８（１９９５
）（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｇｏｒｄｏｎｉｉ）；およびＦｌｙｎｎ，Ｃ
ｅｌｌ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４０：３１（１９９４）、ＷＯ８８／６６２６、
ＷＯ９０／０５９４、ＷＯ９１／１３１５７、ＷＯ９２／１７９６、およ
びＷＯ９２／２１３７６（ＢａｃｉｌｌｅＣａｌｍｅｔｔｅＧｕｅｒｉｎ
）に記載される。

【００７５】細菌ベクターでは、本発明のポリヌクレオチドは、細菌ゲノムに挿入され得る
か、またはプラスミド上に保有されて遊離の状態に保持され得る。

【００７６】アジュバントはまた、ワクチン細菌ベクターを含む組成物中に添加され得る。
多数のアジュバントが当業者に公知である。好ましいアジュバントは、以下に提
供されるリストから選択され得る。

【００７７】本発明の第４の局面によれば、以下もまた提供される：（ｉ）本発明のポリヌ
クレオチドを、希釈剤またはキャリアとともに含む組成物；（ｉｉ）治療的また
は予防的に有効な量の本発明のポリヌクレオチドを含む薬学的組成物；（ｉｉｉ
）免疫学的に有効な量の本発明のポリヌクレオチドを哺乳動物に投与して、免疫
応答（例えば、Ｃｈｌａｍｙｄｉａに対する防御免疫応答）を誘発することによ
って、哺乳動物においてＣｈｌａｍｙｄｉａに対する免疫応答を誘導するための
方法、および具体的には（ｉｖ）予防的または治療的量の本発明のポリヌクレオ
チドを、必要性がある個体に投与することによって、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ（例え
ば、Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、Ｃ．ｐｓｉｔｔａｃｉ、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎ
ｉａｅ、またはＣ．ｐｅｃｏｒｕｍ）感染を予防および／または処置するための
方法。さらに、本発明の第４の局面は、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ感染を予防および／
または処置するための医薬品の調製における本発明のポリヌクレオチドの使用を
含む。本発明の第４の局面は、好ましくは、哺乳動物細胞における発現のための
条件下、例えば、哺乳動物細胞において複製できずかつ哺乳動物ゲノムに実質的
に組み込まれることもできないプラスミドに配置されるＤＮＡ分子の使用を含む
。

【００７８】本発明のポリヌクレオチド（ＤＮＡまたはＲＮＡ）はまた、例えば、治療また
は予防の目的で、ワクチンのために哺乳動物にそれ自体投与され得る。本発明の
ＤＮＡ分子が使用される場合、これは、哺乳動物細胞中では複製できず、かつ哺
乳動物ゲノム中に組み込まれることもできないプラスミドの形態であり得る。代
表的には、ＤＮＡ分子は、哺乳動物細胞における発現に適切なプロモーターの制
御下に置かれる。このプロモーターは、普遍的にまたは組織特異的に機能し得る
。非組織特異的プロモーターの例としては、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）初
期プロモーター（米国特許第４，１６８，０６２号に記載される）およびラウス
肉腫ウイルスプロモーター（ＮｏｒｔｏｎおよびＣｏｆｆｉｎ，Ｍｏｌｅｃ．Ｃ
ｅｌｌＢｉｏｌ．５：２８１（１９８５）に記載される）が挙げられる。デス
ミンプロモーター（Ｌｉら，Ｇｅｎｅ７８：２４３（１９８９），Ｌｉおよび
Ｐａｕｌｉｎ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６６：６５６２（１９９１）ならび
にＬｉおよびＰａｕｌｉｎ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８：１０４０３（１
９９３））は、組織特異的であり、筋細胞における発現を駆動する。より一般的
には、有用なベクターは、特に、ＷＯ９４／２１７９７およびＨａｒｔｉｋｋ
ａら，ＨｕｍａｎＧｅｎｅＴｈｅｒａｐｙ７：１２０５（１９９６）に記
載される。

【００７９】ＤＮＡ／ＲＮＡワクチン接種に関して、本発明のポリヌクレオチドは、前駆体
形態または成熟形態をコードし得る。本発明のポリヌクレオチドが前駆体形態を
コードする場合、その前駆体形態は、同種または異種であり得る。後者の場合、
真核生物（ｅｕｋａｒｙｏｔｅｕｉｃ）リーダー配列（例えば、組織型プラスミ
ノゲン因子（ｔＰＡ）のリーダー配列）が用いられ得る。

【００８０】本発明の組成物は、１つまたはいくつかの本発明のポリヌクレオチドを含み得
る。本発明の組成物はまた、別のＣｈｌａｍｙｄｉａ抗原またはそのフラグメン
ト、誘導体、変異体もしくはアナログをコードする少なくとも１つのさらなるポ
リヌクレオチドを含み得る。サイトカイン（例えば、インターロイキン−２（Ｉ
Ｌ−２）またはインターロイキン−１２（ＩＬ−１２））をコードするポリヌク
レオチドもまた、免疫応答が増強されるように、この組成物中に添加され得る。
これらのさらなるポリヌクレオチドは、発現に適切な制御下に配置される。有利
に、同じ組成物中に含まれる本発明のＤＮＡ分子および／またはさらなるＤＮＡ
分子は、同じプラスミド中に保有され得る。

【００８１】ポリヌクレオチドを調製および精製するための分子生物学の標準的技術は、本
発明のポリヌクレオチド治療剤の調製において用いられ得る。ワクチンとしての
使用に関しては、本発明のポリヌクレオチドは、種々の方法に従って処方され得
る。

【００８２】第１に、ポリヌクレオチドは、裸の形態で、いずれの送達ビヒクル（例えば、
アニオン性リポソーム、カチオン性脂質、微粒子（例えば、金微粒子）、沈澱剤
（例えば、リン酸カルシウム）、またはいずれの他のトランスフェクション促進
剤）も含まずに用いられ得る。この場合、このポリヌクレオチドは、キャリアを
含むかまたは含まない、生理学的に受容可能な溶液（例えば、滅菌生理食塩水ま
たは滅菌緩衝化生理食塩水）中に単に希釈され得る。存在する場合、キャリアは
好ましくは、等張性、低張性、または弱高張性であり、そして例えば、スクロー
ス溶液（例えば、２０％スクロースを含む溶液）によって提供されるような比較
的低いイオン強度を有する。

【００８３】あるいは、ポリヌクレオチドは、細胞の取り込みを助ける薬剤と会合され得る
。これは、特に以下であり得る：（ｉ）細胞の透過性を改変する化学的薬剤（例
えば、ブピバカイン）で補完され得るか（例えば、ＷＯ９４／１６７３７を参
照のこと）、（ｉｉ）リポソーム中にカプセル化され得るか、または（ｉｉｉ）
カチオン性脂質またはシリカ、金もしくはタングステンの微粒子と会合され得る
。

【００８４】アニオン性リポソームおよび中性リポソームは、当該分野で周知であり（例え
ば、リポソームを作製する方法の詳細な説明については、ＬＩＰＯＳＯＭＥＳ：
ＡＰＲＡＣＴＩＣＡＬＡＰＰＲＯＡＣＨ，ＲＰＣＮｅｗＥｄ，ＩＲＬ
ｐｒｅｓｓ（１９９０）を参照のこと）、そして広範囲の生成物（ポリヌクレオ
チドを含む）を送達するために有用である。

【００８５】カチオン性脂質はまた当該分野で公知であり、そして遺伝子送達のために通常
用いられる。このような脂質としては、ＤＯＴＭＡ（Ｎ−［１−（２，３−ジオ
レイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ，−トリメチルアンモニウムクロリド）
としても公知のＬｉｐｏｆｅｃｔｉｎ^TM、ＤＯＴＡＰ（１，２−ビス（オレイル
オキシ）−３−（トリメチルアンモニオ）プロパン）、ＤＤＡＢ（ジメチルジオ
クダデシルアンモニウムブロミド）、ＤＯＧＳ（ジオクダデシルアミドログリシ
ルスペルミン）（ｄｉｏｃｔａｄｅｃｙｌａｍｉｄｏｌｏｇｌｙｃｙｌｓｐｅ
ｒｍｉｎｅ）およびコレステロール誘導体（ＤＣ−Ｃｈｏｌ（３β−（Ｎ−（Ｎ
’，Ｎ’−ジメチルアミノメタン）−カルバモイル）コレステロール））が挙げ
られる。これらのカチオン性脂質の説明は、ＥＰ１８７，７０２、ＷＯ９０
／１１０９２、米国特許第５，２８３，１８５号、ＷＯ９１／１５５０１、Ｗ
Ｏ９５／２６３５６、および米国特許第５，５２７，９２８号に見出され得る
。遺伝子送達のためのカチオン性脂質は、好ましくは、例えば、ＷＯ９０／１
１０９２に記載されるＤＯＰＥ（ジオレイルホスファチジルエタノールアミン）
のような中性脂質と関連して用いられる。

【００８６】他のトランスフェクション促進化合物は、カチオン性リポソームを含む処方物
に添加され得る。多数のトランスフェクション促進化合物が、例えば、ＷＯ９
３／１８７５９、ＷＯ９３／１９７６８、ＷＯ９４／２５６０８およびＷＯ
９５／２３９７に記載される。これらには、特に、核膜を通してのＤＮＡの輸
送を促進するために有用なスペルミン誘導体（例えば、ＷＯ９３／１８７５９
を参照のこと）および膜透過化化合物（例えば、ＧＡＬＡ、グラミシジンＳおよ
びカチオン性胆汁酸塩（例えば、ＷＯ９３／１９７６８を参照のこと））が挙
げられる。

【００８７】金微粒子またはタングステン微粒子もまた、ＷＯ９１／３５９、ＷＯ９３／
１７７０６、およびＴａｎｇら（Ｎａｔｕｒｅ３５６：１５２（１９９２））
に記載されるように遺伝子送達のために用いられ得る。この場合、ポリヌクレオ
チドでコーティングされた微粒子は、針を伴わない注射デバイス（「遺伝子銃」
）（例えば、米国特許第４，９４５，０５０号、米国特許第５，０１５，５８０
号およびＷＯ９４／２４２６３号に記載される注射デバイス）を用いる皮内経
路または表皮内経路を介して注射され得る。

【００８８】ワクチンレシピエントにおいて用いられるべきＤＮＡの量は、例えば、ＤＮＡ
構築物において用いられるプロモーターの強さ、発現される遺伝子産物の免疫原
性、投与が意図される哺乳動物の状態（例えば、その哺乳動物の体重、年齢およ
び全般的健康状態）、投与様式、ならびに処方物の型に依存する。一般に、約１
μｇ〜約１ｍｇ、好ましくは約１０μｇ〜約８００μｇ、そしてより好ましくは
約２５μｇ〜約２５０μｇの治療的または予防的な有効用量は、ヒトの成体に投
与され得る。投与は、単回用量でまたは間隔をおいて反復して達成され得る。

【００８９】投与経路は、ワクチンの分野において用いられる任意の従来の経路であり得る
。一般的ガイダンスとして、本発明のポリヌクレオチドは、粘膜表面に（例えば
、眼、鼻内、肺、経口、腸、直腸、膣および尿路の表面に）；または非経口経路
（例えば、静脈内、皮下、腹腔内、皮内、表皮内、または筋内の経路）を介して
投与され得る。投与経路の選択は、例えば、選択される処方物に依存する。ブピ
バカインに付随して処方されるポリヌクレオチドは、筋肉へと有利に投与される
。中性もしくはアニオン性のリポソームまたはカチオン性脂質（例えば、ＤＯＴ
ＭＡまたはＤＣ−Ｃｈｏｌ）が用いられる場合、この処方物は、静脈内、鼻内（
エアロゾル適用）、筋肉内、皮内、および皮下の経路を介して有利に注射され得
る。裸の形態のポリヌクレオチドは、筋肉内、皮内または皮下の経路を介して有
利に投与され得る。

【００９０】絶対的に要求されるわけではないが、このような組成物はまた、アジュバント
を含み得る。このような場合、アジュバント効果を表すために同時投与を必要と
するわけでない全身性アジュバント（例えば、米国特許第５，０５７，５４６号
に記載されるＱＳ２１）が好ましい。

【００９１】本出願において提供される配列情報は、診断において有用であり得る特異的ヌ
クレオチドプローブおよびプライマーの設計を可能にする。従って、本発明の第
５の局面では、配列番号１および３に示される配列に見出されるかまたは遺伝コ
ードの縮重によってこの配列から誘導される配列を有するヌクレオチドプローブ
またはプライマーが提供される。

【００９２】本出願において用いられる用語「プローブ」は、上記の通りのストリンジェン
トな条件下で、配列番号１および３に示される配列に相同な配列を有する核酸分
子に対して、または相補的配列もしくはアンチセンス配列に対してハイブリダイ
ズするＤＮＡ分子（好ましくは、一本鎖）またはＲＮＡ分子（またはそれらの改
変体もしくは組み合わせ）をいう。一般に、プローブは、配列番号１および３に
示される全長配列よりも有意に短い；例えば、これらは、約５〜約１００、好ま
しくは約１０〜約８０ヌクレオチドを含み得る。特に、プローブは、配列番号１
および３に示される配列の一部に対して少なくとも７５％、好ましくは少なくと
も８５％、より好ましくは９５％相同である配列、またはこのような配列に相補
的である配列を有する。プローブは、改変された塩基（例えば、イノシン、メチ
ル−５−デオキシシチジン、デオキシウリジン、ジメチルアミノ−５−デオキシ
ウリジン、またはジアミノ−２，６−プリン）を含み得る。糖またはリン酸残基
もまた、改変または置換され得る。例えば、デオキシリボース残基は、ポリアミ
ドによって置換され得（Ｎｉｅｌｓｅｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ２５４：１４９７
（１９９１））、そしてリン酸残基は、エステル基（例えば、ジホスフェートエ
ステル、アルキルエステル、アリールホスホネートエステルおよびホスホロチオ
エートエステル）によって置換され得る。さらに、リボヌクレオチド上の２’−
ヒドロキシル基は、例えば、アルキル基を含むことによって改変され得る。

【００９３】本発明のプローブは、診断試験において、捕捉プローブまたは検出プローブと
して使用され得る。このような捕捉プローブは、固体支持体上に、直接的にかま
たは間接的に、共有結合的手段かまたは受動的吸着によって、従来のように固定
され得る。検出プローブは、以下から選択される検出マーカーにより標識され得
る：放射活性同位体；酵素（例えば、ペルオキシダーゼ、アルカリホスファター
ゼ、および色素原性基質、蛍光原性基質、または発光基質を加水分解し得る酵素
）；色素原性、蛍光原性、または発光性である化合物；ヌクレオチド塩基アナロ
グ：およびビオチン。

【００９４】本発明のプローブは、以下のような従来の任意のハイブリダイゼーション技術
において使用され得る：ドットブロット（Ｍａｎｉａｔｉｓら、ＭＯＬＥＣＵＬ
ＡＲＣＬＯＮＩＮＧ：ＡＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹＭＡＮＵＡＬ（１９８２）
ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ、
ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒ、ＮｅｗＹｏｒｋ）、サザンブロット
（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．９８：５０３（１９７５））、ノ
ーザンブロット（サザンブロットと同一であるが、ただし、ＲＮＡは標的として
使用されることを除く）またはサンドイッチ技術（Ｄｕｎｎら、Ｃｅｌｌ１２
：２３（１９７７））。後者の技術は、少なくとも部分的に互いに異なるヌクレ
オチド配列を有する特定の捕捉プローブおよび／または特定の検出プローブの使
用を伴う。

【００９５】プライマーは、通常は、約１０〜約４０ヌクレオチドのプローブであり、この
プローブが使用されて、増幅プロセス（例えば、ＰＣＲ）、伸長プロセス、また
は逆転写法におけるＤＮＡの酵素的重合化が開始される。ＰＣＲを含む診断法に
おいて、プライマーは標識され得る。

【００９６】従って、本発明はまた、以下を包含する：（ｉ）生物学的材料におけるＣｈｌ
ａｍｙｄｉａの存在を検出および／または同定するための本発明のプローブを含
む試薬；（ｉｉ）生物学的材料におけるＣｈｌａｍｙｄｉａの存在を検出および
／または同定するための方法であって、この方法において、（ａ）サンプルがこ
の生物学的材料から回収されるかまたはこれに由来し、（ｂ）ＤＮＡまたはＲＮ
Ａがこの材料から抽出され、そして変性され、そして（ｃ）本発明のプローブ（
例えば、捕捉プローブまたは検出プローブ、あるいはその両方）にストリンジェ
ントなハイブリダイゼーション条件下で曝露されて、その結果ハイブリダイゼー
ションが検出される；そして（ｉｉｉ）生物学的材料におけるＣｈｌａｍｙｄｉ
ａの存在を検出および／または同定するための方法であって、この方法において
、（ａ）サンプルがこの生物学的材料から回収されるかまたはこれに由来し、（
ｂ）ＤＮＡがこの材料から抽出され、（ｃ）抽出されたＤＮＡが、少なくとも１
つ、そして好ましくは２つの、本発明のプライマーでプライムされ、そしてポリ
メラーゼ連鎖反応により増幅され、そして（ｄ）増幅したＤＮＡフラグメントが
生成される。

【００９７】前述のように、新規に同定されたオープンリーディングフレームの発現に際し
て生成され得るポリペプチドは、ワクチン薬剤として有用である。

【００９８】従って、本発明の第６の局面は、本発明のポリヌクレオチドによりコードされ
るアミノ酸配列を有する、実質的に精製されたポリペプチドまたはポリペプチド
誘導体を特徴とする。

【００９９】「実質的に精製されたポリペプチド」とは、そのポリペプチドが天然に存在す
る環境から分離されたポリペプチド、および／またはそのポリペプチドが合成さ
れた環境に存在するポリペプチドの大多数を含まないポリペプチドとして規定さ
れる。例えば、実質的に精製されたポリペプチドは、細胞質のポリペプチドを含
まない。当業者は、本発明のポリペプチドが、天然の供給源（すなわち、Ｃｈｌ
ａｍｙｄｉａ株）から精製され得るか、または組換え手段により生成され得るこ
とを理解する。

【０１００】本発明のポリヌクレオチドによりコードされる相同性ポリペプチドまたはポリ
ペプチド誘導体は、配列番号２および４に示されるようなアミノ酸配列を有する
参照のポリペプチドに対して惹起された抗血清との交差反応性を試験することに
よって、特異的抗原性についてスクリーニングされ得る。簡単に述べると、モノ
特異的超免疫抗血清が、精製された参照ポリペプチドそれ自体に対して惹起され
得るか、または融合ポリペプチド（例えば、ＭＢＰ、ＧＳＴまたはＨｉｓタグ系
の発現生成物、または抗原性であると予測される合成ペプチド）として精製され
た参照ポリペプチドに対して惹起され得る。特異的抗原性についてスクリーニン
グされた相同性ポリペプチドまたはポリペプチド誘導体は、それ自体が生成され
得るか、または融合ポリペプチドとして生成され得る。この後者の場合でかつこ
の抗血清がまた融合ポリペプチドに対しても惹起される場合、２つの異なる融合
系が使用される。特異的抗原性が、多数の方法（ウェスタンブロット（Ｔｏｗｂ
ｉｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ７６：４３５０（１
９７９））、ドットブロット、およびＥＬＩＳＡを含む）に従って、下記のよう
に決定され得る。

【０１０１】ウェスタンブロットアッセイにおいて、スクリーニングされるべき生成物（精
製された調製物または総Ｅ．ｃｏｌｉ抽出物のいずれかとして）が、Ｌａｅｍｍ
ｌｉ、Ｎａｔｕｒｅ２２７：６８０（１９７０）により記載されるように、Ｓ
ＤＳ−Ｐａｇｅ電気泳動に供される。ニトロセルロース膜へのトランファーの後
、この材料（ニトロセルロース膜）は、約１:５〜約１：５０００、好ましくは
約１：１００〜約１：５００の希釈範囲で希釈されたモノ特異的超免疫抗血清と
ともにさらにインキュベートされる。特異的抗原性は、一旦この生成物に対応す
るバンドが上記の範囲の希釈物のいずれかで反応性を示すと、示される。

【０１０２】ＥＬＩＳＡアッセイにおいて、スクリーニングされるべき生成物は、好ましく
は、コーティング抗原として使用される。精製された調製物が好ましいが、全細
胞抽出物もまた使用され得る。簡略には、約１０μｇタンパク質／ｍｌの調製物
約１００μｌが、９６ウェルのポリカーボネートＥＬＩＳＡプレートのウェル中
に分配される。このプレートが、３７℃で２時間、次いで４℃で一晩インキュベ
ートされる。このプレートは、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含むリン酸緩衝化
生理食塩水（ＰＢＳ）（ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ緩衝液）で洗浄される。このウェル
は、１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含む２５０μｌのＰＢＳで飽和されて
、非特異的抗体結合を妨げる。３７℃で１時間のインキュベーション後、このプ
レートは、ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ緩衝液で洗浄される。抗血清は、０．５％ＢＳＡ
を含むＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ緩衝液に連続希釈される。１つのウェルあたり１００
μｌの希釈物が添加される。このプレートは、３７℃で９０分間インキュベート
され、洗浄され、そして標準的手順に従って評価される。例えば、特異的抗体が
ウサギにおいて惹起された場合、ヤギ抗ウサギペルオキシダーゼ結合体がこのウ
ェルに添加される。インキュベーションは、３７℃にて９０分間行われ、そして
このプレートは洗浄される。この反応は、適切な基質を用いて発色され、そして
この反応は、比色定量（吸光度が分光光度計により測定される）により測定され
る。上記の実験条件下で、陽性反応が、非免疫コントロール血清よりも大きいＯ
．Ｄ．値により示される。

【０１０３】ドットブロットアッセイにおいて、精製された生成物が好ましいが、全細胞抽
出物もまた使用され得る。簡略には、約１００μｇ／ｍｌの生成物の溶液が、５
０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）に連続して２倍希釈される。各希釈物
１００μｌが、９６ウェルのドットブロット装置（Ｂｉｏｒａｄ）にセットされ
た０．４５μｍニトロセルロース膜に適用される。この緩衝液は、真空をこのシ
ステムに適用することによって取り除かれる。ウェルが、５０ｍＭＴｒｉｓ−
ＨＣｌ（ｐＨ７．５）の添加により洗浄され、そしてこの膜は風乾される。この
膜は、ブロッキング緩衝液（５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、０．
１５ＭＮａＣｌ、１０ｇ／Ｌ脱脂粉乳）で飽和され、そして約１：５０〜約１
：５０００、好ましくは約１：５００の抗血清希釈物とともにインキュベートさ
れる。この反応は、標準的手順に従って、示される。例えば、ウサギ抗体が使用
される場合は、ヤギ抗ウサギぺルオキシダーゼ結合体がウェルに添加される。イ
ンキュベーションが３７℃で９０分間実行され、そしてこのブロットは洗浄され
る。この反応は、適切な基質を用いて発色され、そして停止される。この反応は
、着色したスポットの出現により、例えば、比色定量によって視覚的に測定され
る。上記の実験条件下では、陽性反応は、一旦、着色されるスポットが少なくと
も約１：５、好ましくは少なくとも約１：５００の希釈物と結合すると、示され
る。

【０１０４】本発明のポリペプチドまたは誘導体の治療効力または予防効力が、下記のよう
に評価され得る。

【０１０５】本発明の第７の局面に従って、以下が提供される：（ｉ）本発明のポリペプチ
ドを希釈剤またはキャリアとともに含む、組成物；特に、（ｉｉ）治療的有効量
または予防的有効量の本発明のポリペプチドを含む、薬学的組成物；（ｉｉｉ）
哺乳動物においてＣｈｌａｍｙｄｉａに対する免疫応答を誘導する方法であって
、この方法は、この哺乳動物に、免疫学的に有効量の本発明のポリペプチドを投
与して免疫応答（例えば、Ｃｈｌａｍｙｄｉａに対する防御免疫応答）を惹起す
ることによる；そして特に、（ｉｖ）Ｃｈｌａｍｙｄｉａ（例えば、Ｃ．ｔｒａ
ｃｈｏｍａｔｉｓ、Ｃ．ｐｓｉｔｔａｃｉ、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅまたはＣ
．ｐｅｃｏｒｕｍ）感染を予防および／または処置するための方法であって、こ
の方法は、予防的な量または治療的な量の本発明のポリペプチドを必要な個体に
対して投与することによる。さらに、本発明の第７の局面は、Ｃｈｌａｍｙｄｉ
ａ感染を予防および／または処置するための医薬の調製における本発明のポリペ
プチドの使用を包含する。

【０１０６】本発明の免疫原性組成物は、ワクチンの分野での使用における従来の任意の経
路、特に、粘膜（例えば、眼、鼻内、肺、口、胃、腸、直腸、膣、または尿路）
表面へか、または非経口（例えば、皮下、皮内、筋肉内、静脈内、または腹腔内
）経路を介して、投与され得る。投与経路の選択は、多数のパラメーター（例え
ば、そのポリペプチドと結合したアジュバント）に依存する。例えば、粘膜アジ
ュバントが使用される場合、鼻内経路または経口経路が好ましく、そして脂質処
方物またはアルミニウム化合物が使用される場合、非経口経路が好ましい。後者
の場合、皮下経路または筋肉内経路が最も好ましい。この選択もまた、そのワク
チン薬剤の性質に依存し得る。例えば、ＣＴＢまたはＬＴＢに融合された本発明
のポリペプチドは、粘膜表面に最も良好に投与される。

【０１０７】本発明の組成物は、１つまたはいくつかの、本発明のポリペプチドまたは誘導
体を含み得る。この組成物はまた、少なくとも１つのさらなるＣｈｌａｍｙｄｉ
ａ抗原、あるいはそのサブユニット、フラグメント、ホモログ、変異体、または
誘導体を含み得る。

【０１０８】本発明の組成物における使用のために、ポリペプチドまたはその誘導体は、リ
ポソーム（好ましくは、中性のリポソームまたはアニオン性リポソーム）、ミク
ロスフェア、ＩＳＣＯＭＳ、またはウイルス様粒子（ＶＬＰ）中にか、あるいは
これらを用いて処方されて、送達を容易にし得るか、そして／またはその免疫応
答を増強し得る。これらの化合物は、当業者に容易に利用可能である；例えば、
ＬＩＰＯＳＯＭＥＳ：ＡＰＲＡＣＴＩＣＡＬＡＰＰＲＯＡＣＨ（前出）を参
照のこと。

【０１０９】リポソームなど以外のアジュバントもまた使用され得、そして当該分野で公知
である。適切な選択が、例えば、下記に提供される一覧から、当業者により従来
のように行われ得る。

【０１１０】投与は、一用量で達成され得るか、または必要ならば、当業者により決定され
得る間隔で反復され得る。例えば、開始用量に、１週間または１ヶ月間隔で３回
のブースト用量が続き得る。適切な用量は、当業者により決定され得るように、
種々のパラメーター（レシピエント（例えば、成人かまたは乳児か）、特定のワ
クチン抗原、投与の経路および投与の頻度、アジュバントの存在／非存在または
型、ならびに所望の効果（例えば、防御および／または処置）を含む）に依存す
る。一般的に、本発明のワクチン抗原は、粘膜経路によって、約１０μｇ〜約５
００ｍｇ、好ましくは約１ｍｇ〜約２００ｍｇの量で投与され得る。非経口経路
の投与のためには、その用量は、通常、約１ｍｇ、好ましくは１００μｇを超え
るべきではない。

【０１１１】ワクチン薬剤として使用される場合、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペ
プチドは、多工程の免疫プロセスの一部として連続して使用され得る。例えば、
哺乳動物は、ポックスウイルスのような本発明のワクチンベクターを用いて、例
えば、非経口経路を介して、最初にプライムされ得、次いで、このワクチンベク
ターによりコードされるポリペプチドを用いて、例えば、粘膜経路を介して、２
回ブーストされ得る。別の例において、本発明のポリペプチドまたは誘導体と結
合したリポソームもまたプライムのために使用され得、本発明の可溶性ポリペプ
チドまたは誘導体を粘膜アジュバント（例えば、ＬＴ）と組合せて使用して粘膜
的にブーストが実行される。

【０１１２】本発明のポリペプチド誘導体はまた、抗Ｃｈｌａｍｙｄｉａ抗体の存在を、例
えば、血液サンプルにおいて、検出するための診断試薬として有用である。この
ようなポリペプチドは、約５〜約８０アミノ酸長、好ましくは約１０〜約５０ア
ミノ酸長であり、そして標識され得るし、または非標識であり得る。これは、そ
の診断法に依存する。このような試薬を伴う診断法が下記に記載される。

【０１１３】本発明のＤＮＡ分子の発現の際に、ポリペプチドまたはポリペプチド誘導体が
生成され、そして公知の研究室技術を使用して精製され得る。例えば、ポリペプ
チドまたはポリペプチド誘導体は、精製を容易にする融合テールを含む融合タン
パク質として生成され得る。この融合生成物は、小型哺乳動物（例えば、マウス
またはウサギ）を免疫して、このポリペプチドまたはポリペプチド誘導体に対す
る抗体（モノ特異的抗体）を惹起するために使用され得る。本発明の第８の局面
は、このように、本発明のポリペプチドまたはポリペプチド誘導体に結合するモ
ノ特異的抗体を提供する。

【０１１４】「モノ特異的抗体」とは、天然に存在する独特のＣｈｌａｍｙｄｉａポリペプ
チドと反応し得る抗体を意味する。本発明の抗体は、ポリクローナルであり得る
し、またはモノクローナルであり得る。モノ特異的抗体は、組換えであり得、例
えば、キメラ（例えば、ヒト定常領域と結合したマウス起源の可変領域により構
成される）、ヒト化（動物（例えば、マウス）起源の超可変領域を伴うヒトイム
ノグロブリンの定常骨格）、および／または単鎖であり得る。ポリクローナル抗
体とモノ特異的抗体の両方はまた、イムノグロブリンフラグメント（例えば、Ｆ
（ａｂ）’２フラグメントまたはＦａｂフラグメント）の形態であり得る。本発
明の抗体は、任意のアイソタイプ（例えば、ＩｇＧまたはＩｇＡ）であり得、そ
してポリクローナル抗体は、単一のアイソタイプであり得るし、またはアイソタ
イプの混合物を含み得る。

【０１１５】本発明の抗体（これは、本発明のポリペプチドまたはポリペプチド誘導体に対
して惹起される）が生成され得、そして標準的免疫学的アッセイ（例えば、ウェ
スタンブロット分析、ドットブロットアッセイ、またはＥＬＩＳＡ（例えば、Ｃ
ｏｌｉｇａｎら、ＣＵＲＲＥＮＴＰＲＯＴＯＣＯＬＳＩＮＩＭＭＵＮＯＬ
ＯＧＹ（１９９４）ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．、ＮｅｗＹｏ
ｒｋ、ＮＹを参照のこと）を使用して同定され得る。この抗体が診断法において
使用されて、サンプル（例えば、生物学的サンプル）におけるＣｈｌａｍｙｄｉ
ａ抗原の存在が検出され得る。この抗体はまた、本発明のポリペプチドまたはポ
リペプチド誘導体を精製するためのアフィニティークロマトグラフィー方法にお
いて使用され得る。下記でさらに考察されるように、このような抗体は、予防的
受動免疫方法および治療的受動免疫方法において使用され得る。

【０１１６】従って、本発明の第９の局面において、以下が提供される：（ｉ）本発明の抗
体、ポリペプチド、またはポリペプチド誘導体を含む生物学的サンプルにおいて
Ｃｈｌａｍｙｄｉａの存在を検出するための試薬；ならびに（ｉｉ）生物学的サ
ンプルにおいてＣｈｌａｍｙｄｉａの存在を検出するための診断法であって、こ
の方法は、この生物学的サンプルを本発明の抗体、ポリペプチドまたはポリペプ
チド誘導体と接触させて、その結果、免疫複合体が形成される工程、およびこの
ような複合体を検出して、そのサンプル中のＣｈｌａｍｙｄｉａの存在を示すか
またはそのサンプルが由来する生物中のＣｈｌａｍｉｄｉａの存在を示す工程に
よる。

【０１１７】当業者は、この免疫複合体が、そのサンプルの成分と、本発明の抗体、ポリペ
プチドまたはポリペプチド誘導体（どれが使用されても）との間に形成されるこ
と、ならびにいかなる非結合材料も、この複合体を検出する前に除去され得るこ
とを、理解する。容易に理解され得るように、ポリペプチド試薬は、サンプル（
例えば、血液サンプル）中の抗Ｃｈｌａｍｙｄｉａ抗体の存在を検出するために
有用であるが、本発明の抗体は、サンプル（例えば、胃抽出物または生検）をＣ
ｈｌａｍｙｄｉａポリペプチドの存在についてスクリーニングするために使用さ
れ得る。

【０１１８】診断適用における使用のために、この試薬（すなわち、本発明の抗体、ポリペ
プチド、またはポリペプチド誘導体）は、遊離状態であり得るし、または固体支
持体（例えば、チューブ、ビーズ、または当該分野で使用される従来の他の任意
の支持体）上に固定され得る。固定は、直接的手段または間接的手段を使用して
達成され得る。直接的手段は、その支持体とその試薬との間の受動的吸着（非共
有結合）または共有結合を含む。「間接的手段」とは、試薬と相互作用する抗試
薬化合物が最初にその固相支持体に付着されることを意味する。例えば、ポリペ
プチド試薬が使用される場合、この試薬に結合する抗体が抗試薬として作用し得
るが、ただし、この試薬は、生物学的サンプル中の抗体の認識に関与しないエピ
トープに結合する。間接的手段はまた、リガンド−レセプター系も使用し得、例
えば、ビタミンのような分子がこのポリペプチド試薬上に融合され得、そして対
応するレセプターが、この固相上に固定され得る。これは、ビオチン−ストレプ
トアビジン系により例示される。あるいは、間接的手段は、例えば、化学的また
は遺伝子操作によってこの試薬にペプチドテールを付加すること、そして融合（
ｇｒａｆｔｅｄまたはｆｕｓｕｅｄ）された生成物を、このペプチドテールの受
動的吸着または共有結合により固定することによって、使用され得る。

【０１１９】本発明の第１０の局面に従って、生物学的サンプルから、本発明のポリペプチ
ドまたはポリペプチド誘導体を精製するプロセスが提供される。このプロセスは
、この生物学的サンプルを用いて抗体ベースのアフィニティークロマトグラフィ
ーを実行する工程を包含し、ここで、この抗体は、本発明のモノ特異的抗体であ
る。

【０１２０】本発明の精製プロセスにおける使用のために、この抗体は、ポリクローナルま
たはモノ特異的であり得、そして好ましくは、ＩｇＧ型である。精製されたＩｇ
Ｇは、標準的方法を使用して抗血清から調製され得る（例えば、Ｃｏｌｉｇａｎ
ら、前出を参照のこと）。従来のクロマトグラフィー支持体、ならびに抗体を融
合するための標準的方法は、例えば、ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ：ＡＬＡＢＯＲＡ
ＴＯＲＹＭＡＮＵＡＬ、Ｄ．Ｌａｎｅ、Ｅ．Ｈａｒｌｏｗ編（１９８８）に開
示されている。

【０１２１】簡略には、生物学的サンプル（例えば、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ抽出物）で
あって好ましくは緩衝溶液中にあるものが、クロマトグラフィー材料（好ましく
は、この生物学的サンプルを希釈するために使用される緩衝液で平衡化されてい
る）に適用され、その結果、本発明のポリペプチドまたはポリペプチド誘導体（
すなわち、抗原）がこの材料上に吸着するようにされる。このクロマトグラフィ
ー材料（例えば、本発明の抗体に結合したゲルまたは樹脂）は、バッチ形態であ
り得るか、またはカラム中に存在し得る。非結合成分は洗浄除去され、次いで、
この抗原は、適切な溶出緩衝液（例えば、グリシン緩衝液またはカオトロピック
剤（例えば、塩酸グアニジン）もしくは高塩濃度（例えば、３ＭＭｇＣｌ₂）
を含む緩衝液）を用いて溶出される。溶出した画分が回収され、そしてこの抗原
の存在が、例えば、２８０ｎｍの吸光度を測定することによって、検出される。

【０１２２】本発明の抗体は、以下のように記載されるような治療効力についてスクリーニ
ングされ得る。本発明の第１１の局面に従って、以下が提供される：（ｉ）本発
明のモノ特異的抗体を、希釈剤またはキャリアを伴って含む、組成物；（ｉｉ）
治療有効量または予防有効量の本発明のモノ特異的抗体を含む、薬学的組成物、
および（ｉｉｉ）Ｃｈｌａｍｙｄｉａ（例えば、Ｃ．ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ、
Ｃ．ｐｓｉｔｔａｃｉ、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅまたはＣ．ｐｅｃｏｒｕｍ）
感染を処置または予防するための方法であって、この方法は、治療的な量または
予防的な量の本発明のモノ特異的抗体を、必要な個体に投与することによる。あ
るいは、本発明の第１１の局面は、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ感染を処置または予防す
るための医薬の調製における本発明のモノ特異的抗体の使用を包含する。

【０１２３】この目的のために、このモノ特異的抗体は、ポリクローナルまたはモノクロー
ナルであり得、好ましくはＩｇＡアイソタイプ（優先的に）である。受動免疫に
おいて、この抗体は、哺乳動物の粘膜表面（例えば、胃粘膜）に、例えば、経口
的または胃内に、有利なことには、重炭酸緩衝液の存在下で投与され得る。ある
いは、重炭酸緩衝液を必要としない、全身投与が実行され得る。本発明のモノ特
異的抗体は、単一の活性成分としてか、または異なるＣｈｌａｍｙｄｉａポリペ
プチドに特異的な少なくとも１つのモノ特異的抗体との混合物として投与され得
る。使用される抗体の量および特定のレジメンは、当業者により容易に決定され
得る。例えば、毎日約１００〜１，０００ｍｇの抗体の１週間にわたる投与、ま
たは１日あたり３用量の約１００〜１，０００ｍｇの抗体の２〜３日にわたる投
与が、ほとんどの目的のために有効なレジメンであり得る。

【０１２４】治療効力または予防効力は、当該分野で標準的方法を使用して、例えば、粘膜
免疫応答の誘導または予防免疫および／もしくは治療免疫の誘導を、例えば、Ｃ
．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅマウスモデルを使用して測定することによって、評価さ
れ得る。当業者は、このモデルのＣ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ株が、別のＣｈｌａ
ｍｙｄｉａ株で置換され得ることを理解する。例えば、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａ
ｅ由来のＤＮＡ分子およびポリペプチドの効力は、好ましくは、Ｃ．ｐｎｅｕｍ
ｏｎｉａｅ株を使用するマウスモデルにおいて評価される。防御は、Ｃｈｌａｍ
ｙｄｉａ感染の程度をコントロール群の程度と比較することにより決定され得る
。防御は、このコントロール群と比較して感染が減少した場合に、示される。こ
のような評価は、本発明のポリヌクレオチド、ワクチンベクター、ポリペプチド
およびその誘導体、ならびに抗体について、なされ得る。

【０１２５】上記のいずれかのワクチン組成物において有用なアジュバントは、以下の通り
である。

【０１２６】非経口投与のためのアジュバントとしては、アルミニウム化合物（例えば、水
酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム、およびアルミニウムヒドロキシホスフ
ェート）が挙げられる。この抗原は、標準的プロトコールに従って、このアルミ
ニウム化合物とともに沈殿され得るか、またはこのアルミニウム化合物上に吸着
され得る。他のアジュバント（例えば、ＲＩＢＩ（ＩｍｍｕｎｏＣｈｅｍ、Ｈａ
ｍｉｌｔｏｎ、ＭＴ）が、非経口投与において使用され得る。

【０１２７】粘膜投与のためのアジュバントとしては、細菌毒素（例えば、コレラ毒素（Ｃ
Ｔ）、Ｅ．ｃｏｌｉ熱不安定性（ｈｅａｔ−ｌａｂｉｌｅ）毒素（ＬＴ）、Ｃｌ
ｏｓｔｒｉｄｉｕｍｄｉｆｆｉｃｉｌｅ毒素Ａ、およびｐｅｒｔｕｓｓｉｓ毒
素（ＰＴ）、あるいはこれらの組合せ、サブユニット、トキソイドまたは変異体
）が挙げられれる。例えば、天然のコレラ毒素Ｂサブユニット（ＣＴＢ）の精製
された調製物が有用であり得る。これら毒素のいずれかのフラグメント、ホモロ
グ、誘導体、および融合物もまた適切であるが、ただし、これらはアジュバント
活性を保持する。好ましくは、減少した毒性を有する変異体が使用される。適切
な変異体は、例えば、ＷＯ９５／１７２１１（Ａｒｇ−７−ＬｙｓＣＴ変異
体）、ＷＯ９６／６６２７（Ａｒｇ−１９２−ＧｌｙＬＴ変異体）、および
ＷＯ９５／３４３２３（Ａｒｇ−９−ＬｙｓかつＧｌｕ−１２９−ＧｌｙＰ
Ｔ変異体）において記載される。本発明の方法および組成物において使用され得
るさらなるＬＴ変異体としては、例えば、Ｓｅｒ−６３−Ｌｙｓ変異体、Ａｌａ
−６９−Ｇｌｙ変異体、Ｇｌｕ−１１０−Ａｓｐ変異体、およびＧｌｕ−１１２
−Ａｓｐ変異体が挙げられる。他のアジュバント（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉ、Ｓａ
ｌｍｏｎｅｌｌａｍｉｎｎｅｓｏｔａ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａｔｙｐｈｉｍ
ｕｒｉｕｍ、またはＳｈｉｇｅｌｌａｆｌｅｘｎｅｒｉの細菌モノホスホリル
脂質Ａ（ＭＰＬＡ）；サポニン、またはポリラクチドグリコリド（ｇｌｙｃｏｌ
ｉｄｅ）（ＰＬＧＡ）ミクロスフェア）もまた、粘膜投与において使用され得る
。

【０１２８】粘膜投与および非経口投与の両方に有用なアジュバントとしては、ポリホスフ
ァゼン（ｐｏｌｙｐｈｏｓｐｈａｚｅｎｅ）（ＷＯ９５／２４１５）、ＤＣ−
ｃｈｏｌ（３ｂ−（Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノメタン）−カルバモイル
）コレステロール）（米国特許第５，２８３，１８５号およびＷＯ９６／１４
８３１）ならびにＱＳ−２１（ＷＯ８８／９３３６）が挙げられる。

【０１２９】本発明のいずれの薬学的組成物（本発明のポリヌクレオチド、ポリペプチド、
ポリペプチド誘導体、または抗体を含む）も、従来の様式で製造され得る。詳細
には、本発明の薬学的組成物は、薬学的に受容可能な希釈剤またはキャリア（例
えば、水、またはリン酸緩衝化生理食塩水のような生理食塩水溶液）とともに処
方され得る。一般的には、希釈剤またはキャリアは、投与の様式および経路、な
らびに標準的薬学的実施に基いて選択され得る。適切な薬学的キャリアまたは希
釈剤、ならびに薬学的処方物におけるそれらの使用のための薬学的な必需品は、
Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅ、こ
の分野における標準的参考文書、およびＵＳＰ／ＮＦに記載されている。

【０１３０】本発明はまた、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ感染が、本発明のＣｈｌａｍｙｄｉａポリ
ペプチドおよび粘膜アジュバントを、抗生物質、制酸薬、スクラルファート、ま
たはこれらの組合せと共に経口投与することによって処置される方法を含む。こ
のワクチン抗原およびこのアジュバントとともに投与され得るこのような化合物
の例は、例えば、マクロライド、テトラサイクリン、およびこれらの誘導体を含
む抗生物質である（使用され得る抗生物質の特定の例は、アジスロマイシンまた
はドキシサイクリン、あるいは免疫調節剤（例えば、サイトカインまたはステロ
イド）を含む）。さらに、上記に列挙した成分のうちの１つより多くを結合して
含む化合物が、使用され得る。本発明はまた、これらの方法を実行するための組
成物（すなわち、本発明のＣｈｌａｍｙｄｉａ抗原、アジュバントおよび上記に
列挙した化合物のうち１つ以上を、薬学的に受容可能なキャリアかまたは希釈剤
中に含む組成物）を含む。

【０１３１】本発明の方法および組成物において使用される上記に列挙した化合物の量は、
当業者により容易に決定され得る。さらに、当業者は、処置スケジュール／免疫
スケジュールを容易に設計し得る。例えば、非ワクチン成分が、１〜１４日目に
投与され得、そしてこのワクチン抗原＋アジュバントが、７、１４、２１、およ
び２８日目に投与され得る。

【０１３２】上記の開示は、一般的に本発明を記載している。より完全な理解が、以下の特
定の実施例を参照することにより得られ得る。これらの実施例は、例示目的のた
めのみ記載され、そして本発明の範囲を制限することは意図されない。形態の変
化および等価物の置換が、状況が好都合であることを示唆し得るかまたは好都合
にするような場合に、意図される。特定の用語が本明細書中で使用されているが
、このような用語は、記述上の意味で意図され、そして制限の目的には意図され
ない。

【０１３３】（実施例１ｍｉｐ遺伝子を含むプラスミドベクターｐＣＡＩ５０１の調製）本実施例は、ｍｉｐ遺伝子を含むプラスミドベクターｐＣＡＩ５０１の調製を
例示する。

【０１３４】ｍｉｐ遺伝子を、ＣｈｌａｍｙｄｉａｐｎｅｕｍｏｎｉａｅのゲノムＤＮＡ
から、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって増幅した。このＰＣＲにおいて
、以下の５’プライマー：

【０１３５】

【化１】

【０１３６】（配列番号５）（ＮｏｔＩ制限部位、リボソーム結合部位、開始コドン、およ
びｍｉｐのＮ末端配列をコードする配列を含む）、ならびに以下の３’プライマ
ー：

【０１３７】

【化２】

【０１３８】（配列番号６）（ｍｉｐのＣ末端配列をコードする配列およびＢａｍＨＩ制限
部位を含む）を使用した。停止コドンを除去し、そして付加的ヌクレオチドを挿
入して、ヒスチジンタグを備えるインフレームのＣ末端融合物を得た。

【０１３９】増幅後、このＰＣＲフラグメントを、ＱＩＡｑｕｉｃｋ^TMＰＣＲ精製キット（
Ｑｉａｇｅｎ）を使用して精製し、次いで、ＮｏｔＩおよびＢａｍＨＩで消
化し、そして実施例２（図３）に記載のｐＣＡ−Ｍｙｃ−Ｈｉｓ真核生物発現ベ
クターにクローニングした。このベクターは、ヒトＣＭＶプロモーターの制御下
で転写する。

【０１４０】（実施例２真核生物発現ベクターｐＣＡ／Ｍｙｃ−Ｈｉｓの調製）本実施例は、真核生物発現ベクターｐＣＡ／Ｍｙｃ−Ｈｉｓの調製を例示する
。

【０１４１】プラスミドｐｃＤＮＡ３．１（−）Ｍｙｃ−ＨｉｓＣ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅ
ｎ）をＳｐｅＩおよびＢａｍＨＩで制限処理して、そのＣＭＶプロモーター
を除去し、そして残りのベクターフラグメントを単離した。プラスミドＶＲ−１
０１２（Ｖｉｃａｌ）から、ＣＭＶプロモーターおよびイントロンＡをＳｐｅ
Ｉ／ＢａｍＨＩフラグメント上に単離した。これらのフラグメントをともに連
結して、プラスミドｐＣＡ／Ｍｙｃ−Ｈｉｓを生成した。ｍｉｐ遺伝子を含むＮ
ｏｔＩ／ＢａｍＨＩ制限処理したＰＣＲフラグメントを、ＮｏｔＩおよび
ＢａｍＨＩで制限したプラスミドｐＣＡ／Ｍｙｃ−Ｈｉｓに連結して、プラス
ミドｐＣＡＩ５０１（図３）を生成した。

【０１４２】生じたプラスミドｐＣＡＩ５０１をＥ．ｃｏｌｉＸＬ−１ｂｌｕｅ（Ｓｔ
ｒａｔａｇｅｎｅ）にエレクトロポレーションによって移入し、このＥ．ｃｏｌ
ｉをカルベニシリン５０μｇ／ｍｌを含むＬＢブロスにて増殖させた。このプラ
スミドを、ＥｎｄｏＦｒｅｅＰｌａｓｍｉｄＧｉｇａＫｉｔ^TM（Ｑｉａ
ｇｅｎ）大スケールＤＮＡ精製系により単離した。ＤＮＡ濃度を２６０ｎｍの吸
光度により決定し、そしてこのプラスミドを、ゲル電気泳動および臭化エチジウ
ム染色および分子量スタンダードとの比較後に確認した。この遺伝子の５’末端
および３’末端を、ＬｉＣｏｒモデル４０００ＬＤＮＡシーケンサーおよび
ＩＲＤ−８００標識プライマーを使用する配列決定によって確認した。

【０１４３】（実施例３鼻内Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅに対する防御）本実施例は、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの鼻内チャレンジに対する防御を達成
するためのマウスの免疫を例示する。

【０１４４】マウスが、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの異なる単離株での鼻内感染に感受性で
あることが、以前に示されている。Ｙａｎｇら、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６
１：２０３７〜２０４０（１９９３）。ＡＲ−３９株（Ｇｒａｙｓｔｏｎ、１９
８９）を、チャレンジ感染モデルとしてのＢａｌｂ／ｃマウスにおいて使用して
、裸のＤＮＡとして送達されたクラミジア属の遺伝子生成物が致死下のＣ．ｐｎ
ｅｕｍｏｎｉａｅ肺感染に対する防御応答を惹起する能力を試験した。防御免疫
は、肺感染のクリアランスの促進として規定される。

【０１４５】７〜９週齢の雄性Ｂａｌｂ／ｃマウスの群（１群あたり５〜９匹）を、実施例
１および２に記載されるＣ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅｍｉｐのコード配列を含む
プラスミドＤＮＡで、筋肉内（ｉ．ｍ．）および鼻内（ｉ．ｎ．）免疫した。生
理食塩水、または挿入されたクラミジア属の遺伝子を欠くプラスミドベクターを
、コントロール動物の群に与えた。

【０１４６】筋肉内免疫のために、左四頭筋および右四頭筋交互に、ＰＢＳ５０μｌ中のＤ
ＮＡ１００μｇを、０、３、および６週間目に３回、注射した。鼻内免疫のため
に、麻酔したマウスに、５０μｇのＤＮＡを含む５０μｌのＰＢＳを、０、３、
および６週間目に３回吸引させた。８週間目に、免疫したマウスに、１００μｌ
のＳＰＧ緩衝液中５×１０⁵ＩＦＵのＣ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅＡＲ３９株を
鼻内接種して、これらのマウスが致死下のＣ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅチャレンジ
の増殖を制限する能力を試験した。

【０１４７】肺をチャレンジ後９日目にマウスから取り出し、そしてすぐにＳＰＧ緩衝液（
７．５％ショ糖、５ｍＭグルタミン酸塩、１２．５リン酸塩、ｐＨ７．５）にホ
モジネートした。このホモジネートを、アッセイまで−７０℃で凍結して保存し
た。このホモジネートの希釈物を、感染性クラミジア属の存在下で、感受性細胞
の単層上への接種によりアッセイした。この接種物を、この細胞上に３０００ｒ
ｐｍで１時間遠心分離し、次いで、この細胞を、１μｇ／ｍｌのシクロへキシミ
ドの存在下で３５℃で３日間インキュベーした。インキュベーション後、この単
層をホルマリンおよびメタノールで固定し、次いで、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ封入体
の存在について、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅに感染したウサギ由来の回復期血清
、ならびにペルオキシダーゼ基質として金属増強したＤＡＢを使用して、イムノ
ペルオキシダーゼ染色した。

【０１４８】図４は、ｐＣＡＩ５０１で鼻内および筋肉内免疫したマウスが、５つの症例の
うち３つにおいて４６００未満のクラミジア属肺力価を有したが、コントロール
マウスについての値の範囲は、生理食塩水での偽免疫したものまたは非改変ベク
ターで免疫したものについて、それぞれ、１８００〜２３１００ＩＦＵ／肺（平
均１１８１１）および１６６００〜２６１００ＩＦＵ／肺（平均２２１００）で
あったことを例示する（表１）。非改変ベクターでの防御の欠如は、ＤＮＡそれ
自体は、観察される防御効果の能力を担わないことを確認する。これは、１つの
さらなるプラスミドＤＮＡ構築物ｐｄａｇＡについて得られた結果（ｐｄａｇＡ
は防御せず、そして平均肺力価は生理食塩水免疫したコントロールマウスについ
て得られた平均肺力価と同様であった）によりさらに支持される。この構築物ｐ
ｄａｇＡは、ｐＣＡＩ５０１と同一であるが、ただし、ｍｉｐをコードするヌク
レオチド配列が、タンパク質ｄａｇＡをコードするＣ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅヌ
クレオチド配列で置換されていることを除く。

【０１４９】

【表１】

【０１５０】（等価物）本発明の特定の実施態様の前述の詳細な説明から、独特のＣｈｌａｍｙｄｉａ
抗原が記載されていることが明らかであるはずである。特定の実施態様が本明細
書中で詳細に開示されているが、これは、例示目的のためだけになされており、
そして上記に添付される特許請求の範囲の範囲について制限することを意図しな
い。特に、本発明に対する種々の置換、変更、および改変が、特許請求の範囲に
よって規定される本発明の精神および範囲から逸脱することなくなされ得ること
が、本発明者によって意図される。

【図面の簡単な説明】

本発明は、図面に関する以下の記載からさらに理解される。

【図１】図１は、Ｃｈｌａｍｙｄｉａｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来のｍｉｐ遺伝子のヌ
クレオチド配列（上部の配列）およびｍｉｐタンパク質の推定アミノ酸配列（全
長タンパク質−中央の配列；短縮型タンパク質−下の配列）を示す。

【図２Ａ】図２Ａは、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅｍｉｐ遺伝子をコードする遺伝子の制
限酵素分析を示す。

【図２Ｂ】図２Ｂは、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅｍｉｐ遺伝子をコードする遺伝子の制
限酵素分析を示す。

【図２Ｃ】図２Ｃは、Ｃ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅｍｉｐ遺伝子をコードする遺伝子の制
限酵素分析を示す。

【図３】図３は、プラスミドｐＣＡＩ５０１の構築およびエレメントを示す。

【図４】図４は、ＤＮＡ免疫後のｐＣＡＩ５０１によるＣ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ感染
に対する防御を示す。ここで、個々のデータ点（白菱形）を、各動物について示
し、ならびに平均（黒四角）および標準偏差を各群について示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ｃ０７Ｋ 16/12 Ｃ０７Ｋ 19/00 ４Ｃ０８５ 19/00 Ｃ１２Ｎ 1/15 ４Ｈ０４５Ｃ１２Ｎ 1/15 1/19 1/19 1/21 1/21 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 5/10 21/08 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ 21/08 Ｇ０１Ｎ 33/566 Ｃ１２Ｑ 1/68 33/569 ＦＧ０１Ｎ 33/566 33/577 Ｂ 33/569 33/15 Ｚ 33/577 33/50 Ｚ // Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 33/50 5/00 Ａ (31)優先権主張番号０９／３６１，４４０ (32)優先日平成11年７月26日(1999．7．26) (33)優先権主張国米国（ＵＳ） (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者ダン，パメラエル．カナダ国エル５エイ４ビー８オンタリオ，ミッシソーガ，カネフサークル 3700，アパートメント 703 Ｆターム(参考） 2G045 AA25 AA40 FB02 FB03 4B024 AA01 AA13 BA31 BA43 CA07 FA18 GA11 HA15 4B063 QA19 QQ02 QQ43 QQ79 QQ96 QR32 QR48 QS33 QS34 QX01 4B064 AG27 AG31 CA19 CC24 DA01 DA15 4B065 AA01Y AA93X AB01 AC14 AC15 BA02 CA24 CA25 CA45 CA46 4C085 AA03 BA45 CC21 DD61 EE01 EE03 EE06 FF13 4H045 AA11 BA41 CA11 DA86 EA29 EA52 FA74 GA26

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】単離されたポリヌクレオチドであって、（ａ）ヌクレオチド配列の配列番号１を含む配列を有するポリヌクレオチド、
およびその機能的フラグメント；（ｂ）配列番号２に少なくとも７５％相同である配列を有するポリペプチドを
コードするポリヌクレオチド、およびその機能的フラグメント；ならびに（ｃ）ヌクレオチド配列の配列番号１を含む配列を有するポリヌクレオチドに
ストリンジェントな条件下でハイブリダイズし得るポリヌクレオチド、およびそ
の機能的フラグメント、からなる群より選択される、単離されたポリヌクレオチド。
【請求項２】融合ポリペプチドをコードする第２のヌクレオチド配列に連
結されている、請求項１に記載のポリヌクレオチド。
【請求項３】前記融合ポリペプチドが異種シグナルペプチドである、請求
項２に記載のヌクレオチド。
【請求項４】前記ポリヌクレオチドが、配列番号２を有するポリペプチド
の機能的フラグメントをコードする、請求項２に記載のヌクレオチド。
【請求項５】配列番号４に少なくとも７５％相同である配列を有する、単
離されたポリペプチド、およびその機能的フラグメント。
【請求項６】前記ポリペプチドが、配列番号２の配列またはその機能的フ
ラグメントを有する、請求項５に記載のポリペプチド。
【請求項７】融合ポリペプチドに連結されている請求項５に記載のポリペ
プチドを含む、ポリペプチド。
【請求項８】前記融合ポリペプチドがシグナルペプチドである、請求項７
に記載のポリペプチド。
【請求項９】前記融合ポリペプチドが、アジュバント活性を有する異種ポ
リペプチドを含む、請求項７に記載のポリペプチド。
【請求項１０】プロモーターに作動可能に連結されている請求項１に記載
のポリヌクレオチドを含む、発現カセット。
【請求項１１】請求項１０に記載の発現カセットを含む、発現ベクター。
【請求項１２】請求項１０に記載の発現カセットを含む、宿主細胞。
【請求項１３】前記宿主細胞が原核生物細胞である、請求項１２に記載の
宿主細胞。
【請求項１４】前記宿主細胞が真核生物細胞である、請求項１２に記載の
宿主細胞。
【請求項１５】組換えＣＰＮ１００５０１ポリペプチドを生成するための
方法であって、該方法は、（ａ）請求項１２に記載の宿主細胞を、該ポリペプチドの発現を可能にする条
件下で培養する工程；および（ｂ）該組換えポリペプチドを回収する工程、を包含する、方法。
【請求項１６】請求項１０に記載の発現カセットを含む、ワクチンベクタ
ー。
【請求項１７】前記宿主哺乳動物がヒトである、請求項１６に記載のワク
チンベクター。
【請求項１８】薬学的に受容可能な賦形剤中に存在する、請求項１６に記
載のワクチンベクター。
【請求項１９】請求項１６に記載のワクチンベクターの免疫学的に有効な
量を含む、薬学的組成物。
【請求項２０】哺乳動物における免疫応答を誘導するための方法であって
、請求項１６に記載のワクチンベクターの免疫学的に有効な量を、該哺乳動物に
投与する工程であって、ここで、該投与により免疫応答が誘導される、工程を包
含する、方法。
【請求項２１】請求項５に記載のポリペプチドの免疫学的に有効な量およ
び薬学的に受容可能な希釈剤を含む、薬学的組成物。
【請求項２２】アジュバントをさらに含有する、請求項２１に記載の薬学
的組成物。
【請求項２３】１つ以上の公知のＣｈｌａｍｙｄｉａ抗原をさらに含有す
る、請求項２１に記載の薬学的組成物。
【請求項２４】哺乳動物における免疫応答を誘導するための方法であって
、請求項２１に記載の薬学的組成物の免疫学的に有効な量を、該哺乳動物に投与
する工程であって、ここで、該投与により免疫応答が誘導される、工程を包含す
る、方法。
【請求項２５】生物学的材料中のＣｈｌａｍｙｄｉａの存在を検出し得る
ポリヌクレオチドプローブ試薬であって、該試薬は、ストリンジェントな条件下
で請求項１に記載のポリヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレオチドを
含む、ポリヌクレオチドプローブ試薬。
【請求項２６】前記試薬がＤＮＡプライマーである、請求項２５に記載の
ポリヌクレオチドプローブ試薬。
【請求項２７】サンプル中のＣｈｌａｍｙｄｉａの存在を検出するための
ハイブリダイゼーション方法であって、該方法は、（ａ）該サンプルからポリヌクレオチドを得る工程；（ｂ）該得られたポリヌクレオチドと、請求項２１に記載のポリヌクレオチド
プローブ試薬とを、該プローブと該サンプルとのハイブリダイゼーションを可能
にする条件下でハイブリダイズさせる工程；および（ｃ）該検出試薬の、該サンプル中のポリヌクレオチドとの該ハイブリダイゼ
ーションを検出する工程、を包含する、方法。
【請求項２８】サンプル中のＣｈｌａｍｙｄｉａの存在を検出するための
増幅方法であって、該方法は、（ａ）該サンプルからポリヌクレオチドを得る工程；（ｂ）該得られたポリヌクレオチドを、請求項２５に記載の１つ以上のポリヌ
クレオチドプローブ試薬を用いて、増幅する工程；および（ｃ）該増幅されたポリペプチドを検出する工程、を包含する、方法。
【請求項２９】サンプル中のＣｈｌａｍｙｄｉａの存在を検出するための
方法であって、該方法は、（ａ）該サンプルと、ＣＰＮ１００５０１ポリペプチドに結合する検出試薬と
を接触させて、複合体を形成する工程；および（ｂ）該形成された複合体を検出する工程、を包含する、方法。
【請求項３０】前記検出試薬が抗体である、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項３０に記載
の方法。
【請求項３２】前記抗体がポリクローナル抗体である、請求項３０に記載
の方法。
【請求項３３】ＣＰＮ１００５０１ポリペプチドを実質的に精製するため
のアフィニティークロマトグラフィー法であって、該方法は、（ａ）ＣＰＮ１００５０１ポリペプチドを含むサンプルと、ＣＰＮ１００５０
１ポリペプチドに結合する検出試薬とを接触させて、複合体を形成する工程；（ｂ）該形成された複合体を単離する工程；（ｃ）該形成された複合体を解離させる工程；および（ｄ）該解離されたＣＰＮ１００５０１ポリペプチドを単離する工程、を包含する、方法。
【請求項３４】前記検出試薬が抗体である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項３４に記載
の方法。
【請求項３６】前記抗体がポリクローナル抗体である、請求項３４に記載
の方法。
【請求項３７】請求項５に記載のポリペプチドに免疫特異的に結合する抗
体、またはその結合ドメインを含む該抗体のフラグメントもしくは誘導体。