JP2002521364A - Amino-aldehyde solid support, linker therefor, method for producing the same and use thereof - Google Patents
Amino-aldehyde solid support, linker therefor, method for producing the same and use thereofInfo
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Abstract
(57)【要約】 本発明は、環状または直鎖状アミノアルデヒドが固相支持体との結合を介して誘導体化され、生物学的に重要なペプチド、ペプチド誘導体、ペプチド模倣化合物およびそれらの類似体を製造する際に使用される、固相ペプチド合成のための新規方法を提供する。コンビナトリアル化学用を含む、結合およびペプチド合成の方法が開示される。 (57) [Summary] The present invention relates to the production of biologically important peptides, peptide derivatives, peptidomimetic compounds and their analogs, in which cyclic or linear aminoaldehydes are derivatized via attachment to a solid support. It provides a novel method for solid phase peptide synthesis to be used. Disclosed are methods of conjugation and peptide synthesis, including for combinatorial chemistry.
Description
【０００１】発明の背景 1. 発明の分野 本発明は、環状または直鎖状アミノアルデヒドが固相支持体との結合を介して
誘導体化され、生物学的に重要なペプチド、ペプチジルアルデヒド並びにそれら
の誘導体および類似体を製造する際に使用される、固相ペプチド合成のための新
規方法を提供する。[0001] BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field 1. invention is directed, is derivatized via binding to cyclic or linear amino aldehyde solid support, biologically important peptides, peptidyl aldehydes as well as their A novel method is provided for solid phase peptide synthesis used in making derivatives and analogs.
【０００２】2. 背景 プロテアーゼ阻害の分野では、数多くのペプチドおよびペプチド類似体阻害剤
が、それらの合成方法と同様に開発されている（既知のプロテアーゼ阻害剤並び
にそれらの合成方法および用途を開示するために参照として全て本明細書に組み
入れられている、米国特許第5,283,293号、同第5,367,072号、同第5,371,072号
、同第5,492,895号、同第5,514,777号、同第5,597,804号、同第5,637,599号、同
第5,646,165号、同第5,656,600号、同第5,656,645号、同第5,681,844号、同第5,
696,231号、同第5,703,208号、同第5,714,580号、同第5,731,413号、同第5,739,
112号を参照）。従って、プロテアーゼ阻害剤の分野には重要な開発および数多
くのクラスのプロテアーゼ阻害剤の構造-活性プロフィールの開発がなされてい
る。 2. Background In the field of protease inhibition, a number of peptide and peptide analog inhibitors have been developed as well as their synthetic methods (disclose known protease inhibitors and their synthetic methods and uses). U.S. Patent Nos. 5,283,293, 5,367,072, 5,371,072, 5,492,895, 5,514,777, 5,597,804, 5,637,599; No. 5,646,165, No. 5,656,600, No. 5,656,645, No. 5,681,844, No. 5,
No. 696,231, No. 5,703,208, No. 5,714,580, No. 5,731,413, No. 5,739,
No. 112). Thus, significant developments have been made in the field of protease inhibitors and the development of structure-activity profiles of numerous classes of protease inhibitors.
【０００３】 アルギニンアルデヒドは溶液中4つの主要な平衡状態の1つで存在することが認
識されている（オープンアルギニンアルデヒドとして、アルギニンアルデヒド水
和物および2つのアミノサイクロール形態、すなわち環状アルデヒド誘導体とし
て、参照として本明細書に組み入れられている米国特許第5,703,208号、カラム9
および参照として本明細書に組み入れられているBajusz, S.ら、J. Med. Chem.,
33: 1729,1990を参照）。米国特許第5,514,777号および米国特許第5,731,413号
には、ペプチドアルギニナール（argininal）を含むペプチジルアルデヒドの合
成方法が開示されている。その開示によると、エチルグリコレートを含むリンカ
ーが、アルギニナールサイクロールを固相支持体に固定するために使用された。
従って、その開示によると、メチレン（-CH2-）を含むリンカーが開示されてい
る。本発明は、リンカーが約1〜15、好ましくは約5メチレン単位およびその変異
体を含む改良されたリンカーとそれを合成するための方法とを提供する。また、
本発明は、この結合を達成および切断するための改良された方法を提供する。さ
らに、本発明の開示は、ペプチド、ペプチド類似体およびペプチド模倣化合物を
合成するための直鎖状および環状アルデヒドの固相支持体への結合に本発明の技
術を適用している。[0003] Arginine aldehyde has been recognized to exist in one of four major equilibrium states in solution (as open arginine aldehyde, as arginine aldehyde hydrate and in two aminocyclol forms, ie as cyclic aldehyde derivatives) U.S. Pat.No. 5,703,208, column 9 incorporated herein by reference.
And Bajusz, S. et al., J. Med.Chem., Incorporated herein by reference.
33: 1729, 1990). U.S. Patent Nos. 5,514,777 and 5,731,413 disclose methods for the synthesis of peptidyl aldehydes, including the peptide argininal. According to that disclosure, a linker comprising ethyl glycolate was used to immobilize argininal cyclol on a solid support.
Thus, according to the disclosure include methylene (-CH 2 -) linker containing is disclosed. The present invention provides improved linkers wherein the linker comprises about 1 to 15, preferably about 5 methylene units and variants thereof, and methods for synthesizing the same. Also,
The present invention provides an improved method for achieving and breaking this bond. Further, the present disclosure applies the techniques of the present invention to coupling linear and cyclic aldehydes to solid supports to synthesize peptides, peptide analogs and peptidomimetic compounds.
【０００４】 効率がさらに高い合成方法を開発することはプロテアーゼ阻害剤の分野におい
て特に重要である。従って、新規樹脂の分野には、プロテアーゼ阻害剤の固相製
造のための誘導体化の方法およびそれらの用途の必要性が絶えず存在している。
本発明は既存の固相合成方法および樹脂の重要な改良を提供する。[0004] Developing even more efficient synthetic methods is of particular importance in the field of protease inhibitors. Thus, there is a continuing need in the field of novel resins for derivatization methods and their use for the solid phase production of protease inhibitors.
The present invention provides a significant improvement over existing solid phase synthesis methods and resins.
【０００５】発明の概要 本発明は、環状または直鎖状アミノアルデヒドが固相支持体との結合を介して
誘導体化され、生物学的に重要なペプチド、ペプチジルアルデヒド並びにそれら
の誘導体および類似体を製造する際に使用される、固相ペプチド合成のための新
規方法を提供する。SUMMARY OF THE INVENTION [0005] The present invention provides a method for derivatizing cyclic or linear amino aldehydes through attachment to a solid support to produce biologically important peptides, peptidyl aldehydes and their derivatives and analogs. A novel method for solid phase peptide synthesis used in manufacturing is provided.
【０００６】 一局面において、本発明は、式（I）： （I） R1-O-X-(CH2)n-Y-CO-NH-SS （式中、 （a）R1は、カルボキシル末端に環状アミノアルデヒドまたはその誘導体を有し
、任意に、1箇所以上の位置に保護基を含む部分であるR1'から誘導され、 （b）nは約1〜約15の整数であるが、ただしXおよびYが共に結合である場合には
、nは少なくとも2で、好ましくは約5であり、 （c）SSは固相支持体であり、 （d）XおよびYは、独立に、結合または-[Z]p-であり、pは1〜5の整数であるが、
ただし、X、Yおよび-(CH2)n-の組み合わせが炭素原子数約2〜15、好ましくは約5
の直鎖に長さが等価な鎖を示し、Zは-CH2CH2O-または-C(A)(B)-であり、Aおよび
BはZが存在する場合には各々異なってもよく、独立に、水素、炭素原子数1〜約6
のアルキル、炭素原子数約3〜約10のアルケニル、炭素原子数約6〜約10のアリー
ルからなる群より選択され、AおよびBは、組み合わせたとき、5〜7員環を形成し
てもよい） を有する固相支持体を製造するための方法（方法1）であって、 （a）（i）R1'を、式OH-X-(CH2)n-Y-CO2-R2（式中、R2は、リンカーが最初に固
相支持体と反応する場合には、-NH-SSで、またはH、炭素原子数1〜約6の低級ア
ルキル、炭素原子数約3〜約10のアルケニル、炭素原子数約6〜約10のアリールお
よび炭素原子数約6〜約15のアラルキルからなる群より選択される）のリンカー
と、R1'のカルボニルまたは発生期カルボニルとリンカーのヒドロキシとの反応
を可能にする酸性触媒条件下において接触させて、R1-O-X-(CH2)n-Y-CO2-R2を形
成する段階と、 （ii）R1-O-X-(CH2)n-Y-CO2-R2を回収し、R2が-NH-SSまたは-Hでない場合には、
R2基を加水分解して、式 R1-O-X-(CH2)n-Y-CO-OH のカルボン酸を形成する段階と、 （iii）リンカーが先に固相支持体と反応しない場合にはR1-O-X-(CH2)n-Y-CO-OH
とNH2-SSとを、カルボン酸の脱水およびカルボン酸とNH2-SSとの間のアミド結合
形成を可能にする条件下において接触させて、R1-O-X-(CH2)n-Y-CO-NH-SSを形成
する段階と、 （iv）このように形成されたR1-O-X-(CH2)n-Y-CO-NH-SS固相支持体を回収する段
階とを含む方法である。In one aspect, the present invention provides a compound of formula (I): (I) R1-OX- (CH 2 ) n -Y-CO-NH-SS wherein (a) R1 is (B) n is an integer from about 1 to about 15, wherein X is an integer from about 1 to about 15, having an aminoaldehyde or derivative thereof, and optionally containing a protecting group at one or more positions. If Y are both bonds, then n is at least 2, preferably about 5, (c) SS is a solid support, and (d) X and Y are independently a bond or-[ Z] p -where p is an integer from 1 to 5,
However, X, Y and - (CH 2) n - combination of about 2 to 15 carbon atoms, preferably about 5
Z is -CH 2 CH 2 O- or -C (A) (B)-, A and
B may each be different when Z is present, independently of hydrogen, 1 to about 6 carbon atoms
Selected from the group consisting of alkyl, alkenyl having about 3 to about 10 carbon atoms, and aryl having about 6 to about 10 carbon atoms, and A and B, when combined, may form a 5- to 7-membered ring. (Method 1) for producing a solid support having the formula: (a) (i) R1 ′ is a compound represented by the formula OH—X— (CH 2 ) n —Y—CO 2 —R2 ( Wherein R is -NH-SS or H, lower alkyl of 1 to about 6 carbon atoms, about 3 to about 10 carbon atoms when the linker first reacts with the solid support. An alkenyl, an aryl having about 6 to about 10 carbon atoms and an aralkyl having about 6 to about 15 carbon atoms), and a carbonyl or nascent carbonyl of R 1 ′ and a hydroxy of the linker. by contacting the acidic catalyst under conditions that allow, R1-OX- (CH 2) forming an n -Y-CO 2 -R2, ( ii) R1-OX- (CH 2) n -Y- Capture CO 2 -R2 , When R2 is not -NH-SS or -H,
The R2 group is hydrolyzed forming the formula R1-OX- (CH 2) a carboxylic acid of the n -Y-CO-OH, if it does not react with the solid support previously (iii) the linker R1-OX- (CH 2 ) n -Y-CO-OH
And the NH 2 -SS, is contacted under conditions that allow amide bond formation between the dehydration of carboxylic acids and carboxylic acid and NH 2 -SS, R1-OX- ( CH 2) n -Y- Forming a CO-NH-SS, and (iv) recovering the R1-OX- (CH 2 ) n -Y-CO-NH-SS solid support thus formed. is there.
【０００７】 本発明のさらに別の局面において、本発明は、式（II）： R3[-O-X-(CH2)m-Y-CO-NH-SS]2 （II） （式中、 （a）R3は、カルボキシル末端に直鎖状アミノアルデヒドまたはその誘導体を有
し、任意に、1箇所以上の位置に保護基を含む部分であるR3'から誘導された部分
であり、 （b）mは約1〜約15の整数であるが、ただしXおよびYが共に結合である場合には
、mは少なくとも2で、好ましくは約5であり、 （c）SSは固相支持体であり、 （d）XおよびYは、独立に、結合または-[Z]p-であり、pは1〜5の整数であるが、
ただし、X、Yおよび-(CH2)m-の組み合わせが炭素原子数1〜15、好ましくは炭素
原子数約5の直鎖に長さが等価な鎖を示し、Zは-CH2CH2O-または-C(A)(B)-であり
、AおよびBはZが存在する場合には各々異なってもよく、独立に、水素、炭素原
子数1〜約6のアルキル、炭素原子数約3〜約10のアルケニル、炭素原子数約6〜約
10のアリールからなる群より選択され、AおよびBは、組み合わせたとき、5〜7員
環を形成してもよい） を有する固相支持体を製造するための方法（方法II）であって、 （i）R3'アルデヒドを、式： OH-X-(CH2)m-Y-CO2-R2 （式中、R2は、リンカーが先に固相支持体と反応する場合には、-NH-SSで、また
はH、炭素原子数1〜約6のアルキル、炭素原子数約3〜約10のアルケニル、炭素原
子数約6〜約10のアリールおよび炭素原子数約6〜約15のアラルキルからなる群よ
り選択される）のリンカーの、R3と比較したとき、少なくとも2モル過剰量と、R
3'のカルボニルとリンカーのヒドロキシとの反応を可能にする酸性触媒条件下に
おいて接触させて、 R3[-O-X-(CH2)m-Y-CO2-R2]2 を形成する段階と、 （ii）（i）の生成物を回収し、R2が-NH-SSまたは-Hでない場合には、R2を加水
分解して、カルボン酸を提供する段階と、 （iii）リンカーが先に固相支持体と反応しない場合には（ii）のカルボン酸とN
H2-SSとを、カルボン酸の脱水およびカルボン酸とNH2-SSとのアミド結合形成を
可能にする条件下において接触させて、式： R3[-O-X-(CH2)m-Y-CO-NH-SS]2(II) の固相支持体を形成する段階と、 （iv）このように形成された固相支持体を回収する段階 とを含む方法である。In another aspect of the present invention, the present invention provides a compound of the formula (II): R3 [-OX- (CH 2 ) m -Y-CO-NH-SS] 2 (II) R) is a moiety derived from R3 ′, which has a linear aminoaldehyde or a derivative thereof at the carboxyl terminus and optionally contains a protecting group at one or more positions, and (b) m is An integer from about 1 to about 15 with the proviso that when X and Y are both a bond, m is at least 2, preferably about 5, and (c) SS is a solid support, d) X and Y are independently a bond or-[Z] p- , where p is an integer from 1 to 5,
However, X, Y and - (CH 2) m - in combination 1 to 15 carbon atoms, preferably an is equivalent chain length linear about 5 carbon atoms, Z is -CH 2 CH 2 O- or -C (A) (B)-, wherein A and B may each be different if Z is present, independently hydrogen, alkyl of 1 to about 6 carbon atoms, carbon number of About 3 to about 10 alkenyl, about 6 to about carbon atoms
Selected from the group consisting of 10 aryls, wherein A and B may combine to form a 5- to 7-membered ring) (Method II) the (i) R3 'aldehyde, wherein: in OH-X- (CH 2) m -Y-CO 2 -R2 ( wherein, R2, when the linker is reacted with a solid support previously, - NH-SS or H, alkyl having 1 to about 6 carbons, alkenyl having about 3 to about 10 carbons, aryl having about 6 to about 10 carbons and aralkyl having about 6 to about 15 carbons At least a 2 molar excess of the linker when compared to R3;
3 The reaction is contacted in an acidic catalyst under conditions that allow the hydroxy carbonyl linker of ', forming a R3 [-OX- (CH 2) m -Y-CO 2 -R2] 2, ( ii) recovering the product of (i) and, if R2 is not -NH-SS or -H, hydrolyzing R2 to provide a carboxylic acid; In the case of not reacting with the support, the carboxylic acid of (ii) and N
And H 2 -SS, is contacted under conditions that allow amide bond formation with the dehydration of carboxylic acids and carboxylic acid and NH 2 -SS, wherein: R3 [-OX- (CH 2) m -Y- A method comprising the steps of: forming a solid support of [CO-NH-SS] 2 (II); and (iv) recovering the solid support thus formed.
【０００８】 従って、本発明の一目的は、アルデヒドを固相支持体に結合するための新規方
法を提供することである。[0008] Accordingly, one object of the present invention is to provide a novel method for attaching an aldehyde to a solid support.
【０００９】 本発明のさらに別の目的は、環状アミノアルデヒドを誘導体化するための方法
を提供することである。Yet another object of the present invention is to provide a method for derivatizing a cyclic amino aldehyde.
【００１０】 本発明のさらに別の目的は固相ペプチド合成のための新規樹脂を提供すること
である。[0010] Yet another object of the present invention is to provide a novel resin for solid phase peptide synthesis.
【００１１】 本発明のさらに別の目的および利点は完全な開示および添付の特許請求の範囲
を参照することにより明らかになると思われる。[0011] Still other objects and advantages of the present invention will become apparent by reference to the full disclosure and the appended claims.
【００１２】好ましい態様の詳細な説明 1. 定義 本発明の開示内容に使用される以下の用語は、提供される文脈において特に別
途記載しない限り、以下の定義を有するものとする。DETAILED DESCRIPTION OF THE PREFERRED EMBODIMENTS 1. Definitions The following terms used in the disclosure of the present invention shall have the following definitions, unless otherwise indicated in the context provided.
【００１３】 Allocはアリロキシカルボニルであり、 Alloc-Clはアリルクロロホルメートであり、 A.M.樹脂はアミノメチル化ポリスチレン樹脂であり、 Bocはtert-ブトキシカルボニルであり、 Bomはベンジロキシメチルであり、 BOPはベンゾトリアゾール-イル-オキシ-トリス-(ジメチルアミノ)ホスホニウ
ムヘキサフルオロホスフェートであり、 Cbzはベンジロキシカルボニルまたはカルボキシベンジロキシであり、 2-ClZは2-クロロベンジロキシカルボニルであり、 DCMはジクロロメタンであり、 DIEAはN,N-ジイソプロピルエチルアミンであり、 DMFはN,N-ジメチルホルムアミドであり、 DMSOはジメチルスルホキシドであり、 EDCは1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩であり、 Fmocは9-フルオレニルメチロキシカルボニルであり、 HFはフッ化水素であり、 HOBTまたはHOBtは1-ヒドロキシベンゾトリアゾール一水和物であり、 HPLCは高圧液体クロマトグラフィー；高速液体クロマトグラフィーであり、 LAHは水素化リチウムアルミニウムであり、 MSは質量分析法であり、 Mtsはメシチレン-2-スルフォニルであり、 NMMはN-メチルモルホリン（4-メチルモルホリンとも呼ばれる）であり、 NMRは核磁気共鳴分光法であり、 PGは保護基であり、 PMCは2,2,5,7,8-ペンタメチルクロロマン-6-スルホニルであり、 PyBOPはベンゾトリアゾール-イル-オキシ-トリス-ピロリジノ-ホスホニウムヘ
キサフルオロホスフェートであり、 (Ph3P)4Pd：テトラキス-(トリフェニルホスフィン)パラジウム(0)であり、 r.t.またはRTは室温であり、 TBTUはテトラフルオロホウ酸2-(1H-ベンゾトリアゾール-1-イル)-1,1,3,3-テ
トラメチルロニウムであり、 TeOCはMe3Si(CH2)OCOであり、 TFAはトリフルオロ酢酸であり、 THFはテトラヒドロフランであり、 TLCまたはtlcは薄層クロマトグラフィーであり、 TFMSAはトリフルオロメチルスルホン酸であり、これは一般に「triflic acid
」とも呼ばれ、 TMSOTfはトリメチルシリルトリフルオロメタンスルホネートであり、 Tosはp-トルエンスルホンリーであり、TosylまたはTsとも呼ばれ、 Trocはトリクロロエトキシカルボニル（亜鉛で除去可能なアミン保護基）であ
る。Alloc is allyloxycarbonyl, Alloc-Cl is allyl chloroformate, AM resin is aminomethylated polystyrene resin, Boc is tert-butoxycarbonyl, Bom is benzyloxymethyl, BOP is benzotriazol-yl-oxy-tris- (dimethylamino) phosphonium hexafluorophosphate, Cbz is benzyloxycarbonyl or carboxybenzyloxy, 2-ClZ is 2-chlorobenzyloxycarbonyl, DCM is dichloromethane DIEA is N, N-diisopropylethylamine, DMF is N, N-dimethylformamide, DMSO is dimethylsulfoxide, EDC is 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride Where Fmoc is 9-fluorenylmethyloxycarbonyl and HF is fluorinated water HOBT or HOBt is 1-hydroxybenzotriazole monohydrate, HPLC is high pressure liquid chromatography; high performance liquid chromatography, LAH is lithium aluminum hydride, MS is mass spectrometry, Mts is mesitylene-2-sulfonyl; NMM is N-methylmorpholine (also called 4-methylmorpholine); NMR is nuclear magnetic resonance spectroscopy; PG is a protecting group; PMC is 2,2, 5,7,8-pentamethylchloroman-6-sulfonyl; PyBOP is benzotriazol-yl-oxy-tris-pyrrolidino-phosphonium hexafluorophosphate; (Ph 3 P) 4 Pd: tetrakis- (triphenyl (Phosphine) palladium (0), rt or RT is room temperature, TBTU is 2- (1H-benzotriazol-1-yl) -1,1,3,3-tetramethylronium tetrafluoroborate Yes, TeOC is Me 3 Si (CH 2 ) OCO, TFA is trifluoroacetic acid, THF is tetrahydrofuran, TLC or tlc is thin layer chromatography, TFMSA is trifluoromethyl sulfonic acid, This is generally "triflic acid
TMSOTf is trimethylsilyl trifluoromethanesulfonate, Tos is p-toluenesulfone, also called Tosyl or Ts, and Troc is trichloroethoxycarbonyl (an amine protecting group removable with zinc).
【００１４】 NMRの命名： sは一重項であり、 dは二重項であり、 mは多重項であり、 brは幅広いピーク（broad peak）であり、 tは三重項であり、 qは四重項である。NMR nomenclature: s is a singlet, d is a doublet, m is a multiplet, br is a broad peak, t is a triplet, and q is a quartet. It is a multiplet.
【００１５】 SSとは酸、塩基および／または他の試薬の存在下で安定なポリマー固体支持体
のことであり、「固体支持体」とは、このような合成を溶液中で行う場合に一般
に経験されるペプチド収量の減少というリスクを伴わずに、成長する合成ペプチ
ド鎖を合成操作に用いうるようにする「手がかり（handle）」を提供するために
、ペプチド合成の技術分野で一般に用いられる任意の形態のビーズまたは樹脂の
ことであり、「固体支持体」および「樹脂」という用語は互換的に用いられる。
「固体支持体」「SS」または「支持体」という用語は、本発明のリンカー部分が
結合し、ペプチドまたはペプチド類似体がそこから合成されうる固体粒状不溶性
材料のことを指す。ペプチドおよびペプチド類似体の合成に用いられる支持体は
、実質的に不活性であってペプチドおよびペプチド類似体の合成に用いられる試
薬とは反応しないことが典型的であり、本発明の方法に従ってアルデヒドとの初
期結合がいったん確立すれば（すなわち、P1位が確立すれば）特にそうである。
固体支持体は、ポリスチレンなどの架橋樹脂であることが好ましい。[0015] SS refers to a polymeric solid support that is stable in the presence of acids, bases and / or other reagents, and a "solid support" is generally used when such synthesis is performed in solution. Any commonly used in the art of peptide synthesis to provide a "handle" that allows growing synthetic peptide chains to be used in synthetic procedures without the risk of reduced peptide yield experienced And the terms "solid support" and "resin" are used interchangeably.
The term "solid support", "SS" or "support" refers to a solid particulate insoluble material to which a linker moiety of the invention can be attached and from which a peptide or peptide analog can be synthesized. The support used for the synthesis of the peptides and peptide analogs is typically substantially inert and does not react with the reagents used for the synthesis of the peptides and peptide analogs, and according to the method of the present invention the aldehyde This is especially so once the initial binding to has been established (ie, once the P1 position has been established).
The solid support is preferably a crosslinked resin such as polystyrene.
【００１６】 NH2-SSとは、アミド（ペプチド）結合の形成が可能な機能性アミノ基を少なく
とも1つ含むSSのことである。[0016] NH 2 -SS is an SS containing at least one functional amino group capable of forming an amide (peptide) bond.
【００１７】 環状アルデヒドは、ヘミアミナール（アルギニン）、ヘミアセタール（Asp/ho
moSer）およびチオヘミアセタール（homoCys）などの環状α-アミノアルデヒド
であり、アルデヒド部分を有するまたは発生期アルデヒド部分を有する環状構造
を有する分子であって、この種の分子の原型的な例は、溶液中4つの主要な平衡
状態：オープンアルギニンアルデヒド、アルギニンアルデヒド水和物および2つ
のアミノサイクロール形態（すなわち、環状アルデヒド誘導体として；参照とし
て本明細書に組み入れられている米国特許第5,703,208号、カラム9および参照と
して本明細書に組み入れられているBajusz, S.ら、J. Med. Chem., 33: 1729,19
90を参照）の1つとして存在することが認識されているアルギニンアルデヒドま
たはペプチジルアルギニンアルデヒドである。Cyclic aldehydes include hemiaminal (arginine), hemiacetal (Asp / ho
moSer) and thiohemiacetals (homoCys), which are cyclic α-aminoaldehydes and have a cyclic structure with an aldehyde moiety or with a nascent aldehyde moiety; archetypes of such molecules are: Four major equilibrium states in solution: open arginine aldehyde, arginine aldehyde hydrate and two aminocyclol forms (ie, as cyclic aldehyde derivatives; US Pat. No. 5,703,208, column incorporated herein by reference) 9 and Bajusz, S. et al., J. Med. Chem., 33: 1729, 19, which is incorporated herein by reference.
Arginine aldehyde or peptidyl arginine aldehyde, which is recognized as being present as one of the arginine aldehydes.
【００１８】 環状アルデヒド誘導体は任意の環状アルデヒド誘導体で、好ましくは、本発明
の目的のためには、ブロック基で誘導体化される環状アルデヒドである。The cyclic aldehyde derivative is any cyclic aldehyde derivative, preferably, for the purposes of the present invention, a cyclic aldehyde that is derivatized with a blocking group.
【００１９】 直鎖状アルデヒドは、アルデヒド部分、-CHOが環状でない任意の分子である。A linear aldehyde is any molecule in which the aldehyde moiety, -CHO, is not cyclic.
【００２０】 「アミノ酸」という用語は、DおよびL立体異性体（それらの構造がこのような
立体異性体を許容する場合）の形態にある、天然アミノ酸または非天然アミノ酸
およびアミノ酸類似体のことを指す。天然アミノ酸には、アラニン（Ala）、ア
ルギニン（Arg）、アスパラギン（Asn）、アスパラギン酸（Asp）、システイン
（Cys）、グルタミン（Gln）、グルタミン酸（Glu）、グリシン（Gly）、ヒスチ
ジン（His）、イソロイシン（Ile）、ロイシン（Leu）、リジン（Lys）、メチオ
ニン（Met）、フェニルアラニン（Phe）、プロリン（Pro）、セリン（Ser）、ト
レオニン（Thr）、トリプトファン（Trp）、チロシン（Tyr）およびバリン（Val
）が含まれる。非天然アミノ酸には、アゼチジンカルボン酸、2-アミノアジピン
酸、3-アミノアジピン酸、β-アラニン、アミノプロピオン酸、2-アミノ酪酸、4
-アミノ酪酸、6-アミノカプロン酸、2-アミノヘプタン酸、2-アミノイソ酪酸、3
-アミノイソ酪酸、2-アミノピメリン酸、2,4-ジアミノイソ酪酸、デスモシン、2
,2'-ジアミノピメリン酸、2,3-ジアミノプロピオン酸、n-エチルグリシン、N-エ
チルアスパラギン、ヒドロキシリジン、アロヒドロキシリジン、3-ヒドロキシプ
ロリン、4-ヒドロキシプロリン、イソデスモシン、アロイソロイシン、N-メチル
グリシン、N-メチルイソロイシン、N-メチルバリン、ノルバリン、ノルロイシン
、オルニチンおよびピペコリン酸が非制限的に含まれる。アミノ酸類似体には、
N末端アミノ基もしくは側鎖基が可逆的もしくは不可逆的な化学的ブロックを受
けた、または修飾を受けた天然および非天然アミノ酸、例えば、メチオニンスル
ホキシド、メチオニンスルホン、S-(カルボキシメチル)-システイン、5-(カルボ
キシメチル)-システインスルホキシドおよびS-(カルボキシメチル)-システイン
スルホン、アスパラギン酸-(βメチルエステル)、N-エチルグリシン、アラニン
カルボキサミドが非制限的に含まれる。The term “amino acid” refers to natural or unnatural amino acids and amino acid analogs in the form of D and L stereoisomers (where their structure allows such stereoisomers). Point. Natural amino acids include alanine (Ala), arginine (Arg), asparagine (Asn), aspartic acid (Asp), cysteine (Cys), glutamine (Gln), glutamic acid (Glu), glycine (Gly), and histidine (His). , Isoleucine (Ile), leucine (Leu), lysine (Lys), methionine (Met), phenylalanine (Phe), proline (Pro), serine (Ser), threonine (Thr), tryptophan (Trp), tyrosine (Tyr) And valine (Val
) Is included. Unnatural amino acids include azetidine carboxylic acid, 2-aminoadipic acid, 3-aminoadipic acid, β-alanine, aminopropionic acid, 2-aminobutyric acid, 4
-Aminobutyric acid, 6-aminocaproic acid, 2-aminoheptanoic acid, 2-aminoisobutyric acid, 3
-Aminoisobutyric acid, 2-aminopimelic acid, 2,4-diaminoisobutyric acid, desmosin, 2
, 2'-Diaminopimelic acid, 2,3-diaminopropionic acid, n-ethylglycine, N-ethylasparagine, hydroxylysine, allohydroxylysine, 3-hydroxyproline, 4-hydroxyproline, isodesmosin, alloisoleucine, N-methyl Glycine, N-methylisoleucine, N-methylvaline, norvaline, norleucine, ornithine and pipecolic acid are included without limitation. Amino acid analogs include:
Natural and unnatural amino acids in which the N-terminal amino group or side group has undergone a reversible or irreversible chemical block or has been modified, such as methionine sulfoxide, methionine sulfone, S- (carboxymethyl) -cysteine, 5- (carboxymethyl) -cysteine sulfoxide and S- (carboxymethyl) -cysteine sulfone, aspartic acid- (β-methyl ester), N-ethylglycine, alaninecarboxamide are included without limitation.
【００２１】 「アミノ酸残基」という用語は、（1）-NH-RC(O)（式中、Rは典型的には-CH（
R*）-であり、ここでR*はH、または置換基を含む炭素である）；または（2）The term “amino acid residue” refers to (1) —NH—RC (O), wherein R is typically —CH (
R * )-, wherein R * is H or a carbon containing a substituent); or (2)
【化１】 （式中、pは1、2または3であり、それぞれアゼチジンカルボン酸、プロリンまた
はピペコリン酸残基を表す） の構造を有する基のことを指す。Embedded image (Wherein p is 1, 2 or 3 and represents an azetidine carboxylic acid, proline or pipecolic acid residue, respectively).
【００２２】 ペプチドまたはペプチド類似体とは、ペプチド（アミド）結合によって結合し
た少なくとも2つのアミノ酸またはアミノ酸類似体を含む分子のことである。A peptide or peptide analog is a molecule comprising at least two amino acids or amino acid analogs joined by peptide (amide) bonds.
【００２３】 ペプチド模倣化合物とは、天然のペプチジル配列との構造的な類似性または模
倣性のある任意の化合物、およびこのような残基を含む化合物；アミノ酸を全く
含まないまたはアミノ酸類似体を含むという意味で天然ペプチドではないものの
既知のペプチジル化合物の生物活性を呈する化合物のことである。A peptidomimetic compound is any compound that is structurally similar or mimics a natural peptidyl sequence, and a compound containing such a residue; contains no amino acids or includes amino acid analogs In this sense, it is a compound that is not a natural peptide but exhibits the biological activity of a known peptidyl compound.
【００２４】 「優れた脱離基」または「脱離基」という用語は、本明細書において、化学合
成を行うために用いた場合に所定の合成条件下で不安定であって所定の条件下で
合成生成物から容易に分離されるという望ましい特性を示す分子置換基を定義す
るために用いられる。このような脱離基の例には、水素、水酸基、ハロゲン原子
、p-ニトロフェノキシド、水、メチル基などが非制限的に含まれる。The term “excellent leaving group” or “leaving group” is used herein to refer to a compound that is unstable under certain synthetic conditions and used under certain conditions when used to perform a chemical synthesis. Is used to define molecular substituents that exhibit the desired property of being easily separated from the synthesis product. Examples of such leaving groups include, but are not limited to, hydrogen, hydroxyl, halogen, p-nitrophenoxide, water, methyl and the like.
【００２５】 「保護基」という用語は、本明細書において、化学修飾を受ける分子上の特定
の化学修飾による影響を受けないことを意図した部位での特定の化学反応を妨げ
るという望ましい特性を有すると同時に、修飾された分子内の他の部位に有害な
影響を及ぼさない条件下でその分子から容易に除去されるような、公知の部分（
moiety）を指すために用いられる。当業者は、保護しようとする化学部位の性質
に応じて選択されるさまざまな既知の保護基を手にしている。参考文献には例え
ば、「有機合成における保護基（Protective Groups in Organic Synthesis）」
、グリーン（T. Greene）（John Wiley & Sons, Inc.、1991）、ならびに「固相
ペプチド合成（Solid Phase Peptide Synthesis）」、スチュワート（Stewart）
およびヤング（Young）（Pierce Chemical Co.、1984）があり、これらはこの目
的および他の目的で参照として本明細書に組み入れられる。当技術分野で知られ
た保護基の例には、Cbz、Boc、Alloc、Fmoc、Troc、Teoc（Me3Si(CH2)2OCO）、P
MCなど、および本明細書で開示される他のものが非制限的に含まれる。The term “protecting group” as used herein has the desirable property of preventing a specific chemical reaction at a site intended to be unaffected by a particular chemical modification on the molecule to be chemically modified. And at the same time, a known moiety (e.g., which is easily removed from the modified molecule under conditions that do not deleteriously affect other sites within the molecule (e.g.,
moiety). One skilled in the art has a variety of known protecting groups that are selected depending on the nature of the chemical moiety to be protected. References include, for example, “Protective Groups in Organic Synthesis”
, T. Greene (John Wiley & Sons, Inc., 1991), and "Solid Phase Peptide Synthesis", Stewart
And Young (Pierce Chemical Co., 1984), which are hereby incorporated by reference for this and other purposes. Examples of protecting groups known in the art include Cbz, Boc, Alloc, Fmoc, Troc, Teoc (Me 3 Si (CH 2 ) 2 OCO), P
Includes, without limitation, MC and the like, and others disclosed herein.
【００２６】 「アルキル」という用語は、直鎖、分枝鎖および環状基を含む、飽和脂肪族基
のことを指す。The term “alkyl” refers to a saturated aliphatic group, including straight chain, branched and cyclic groups.
【００２７】 「アルケニル」という用語は、二重結合を少なくとも1つ有する飽和脂肪族基
のことを指す。The term “alkenyl” refers to a saturated aliphatic group having at least one double bond.
【００２８】 「アリール」という用語は、共役π電子系を有する環を少なくとも1つ有する
芳香族基のことを指し、これには炭素環式アリール、複素環式アリールおよびビ
アリール基が含まれ、これらはすべて選択的には、炭素原子数が1〜10の低級ア
ルキル；アルケニル；ニトロ；シアノ；ハロ；-S(O)q-（式中、qは定義上0、1ま
たは2である）；カルボン酸またはカルボン酸誘導体、エステルアミドなどから
非制限的に選択される置換基によって置換されうる。The term “aryl” refers to an aromatic group having at least one ring having a conjugated π-electron system, including carbocyclic aryl, heterocyclic aryl, and biaryl groups. Are all optionally lower alkyl having 1 to 10 carbon atoms; alkenyl; nitro; cyano; halo; -S (O) q-wherein q is 0, 1 or 2 by definition; It can be substituted by a substituent selected without limitation from carboxylic acids or carboxylic acid derivatives, ester amides and the like.
【００２９】 「アラルキル」という用語は、アリール基によって置換されたアルキル基のこ
とを指す。アラルキル基の例にはベンジル、ピコリルなどが非制限的に含まれ、
これらはすべて選択的には、炭素原子数が1〜10の低級アルキル；アルケニル；
ニトロ；シアノ；ハロ；-S(O)q-（式中、qは定義上0、1または2である）；カル
ボン酸またはカルボン酸誘導体、エステルアミドなどから非制限的に選択される
置換基によって置換されうる。The term “aralkyl” refers to an alkyl group substituted by an aryl group. Examples of aralkyl groups include, but are not limited to, benzyl, picolyl, and the like.
All of which are optionally lower alkyl having 1 to 10 carbon atoms; alkenyl;
Nitro; cyano; halo; -S (O) q- (where q is 0, 1 or 2 by definition); Can be replaced by
【００３０】 「シクロアルキル」という用語は、分子の少なくとも一部が閉鎖環構造をもつ
アルキルのことを指す。シクロアルキル基の例には、シクロヘキシル、シクロプ
ロピル、シクロペンチルおよびシクロヘプチルが非制限的に含まれる。The term “cycloalkyl” refers to an alkyl in which at least a portion of the molecule has a closed ring structure. Examples of cycloalkyl groups include, but are not limited to, cyclohexyl, cyclopropyl, cyclopentyl, and cycloheptyl.
【００３１】 「複素環式」という用語は、その原子の少なくとも1つが炭素原子以外の原子
であるような閉鎖環構造を有する任意の化合物のことを指す。例えば、窒素、酸
素または硫黄原子を環状構造内部に含む環状アルキル、環状アリール、環状アラ
ルキル化合物は、複素環式である。The term “heterocyclic” refers to any compound having a closed ring structure in which at least one of the atoms is an atom other than a carbon atom. For example, cyclic alkyl, cyclic aryl, and cyclic aralkyl compounds containing a nitrogen, oxygen or sulfur atom inside the cyclic structure are heterocyclic.
【００３２】 「ハロ」または「ハロゲン」という用語は、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素
のことを指す。The terms “halo” or “halogen” refer to fluorine, chlorine, bromine and iodine.
【００３３】 「有害でない条件」という用語は、ペプチド類似体の骨格および／またはその
アミノ酸（および／またはアミノ酸類似体）成分に実質的に有害な影響を及ぼさ
ない、反応または合成の条件を述べている。当業者は、これらの基準を満たす官
能性、カップリング手順、脱保護手順および切断条件を容易に特定することがで
きる。The term “non-harmful conditions” describes conditions of a reaction or synthesis that do not substantially adversely affect the backbone of the peptide analog and / or its amino acid (and / or amino acid analog) components. I have. One skilled in the art can readily identify functionalities, coupling procedures, deprotection procedures and cleavage conditions that meet these criteria.
【００３４】2. 本発明の方法の詳細な開示 以下の開示において、「樹脂」および「固相支持体」という用語は、「誘導体
化された樹脂」および「誘導体化された固相支持体」という用語と同様に、互換
可能に用いられる。また、ペプチド、ペプチド類似体またはペプチド模倣化合物
の合成が記載されている任意の所与の文脈において、これらの種の1つだけが詳
細に記載されている場合には、他の種の合成も意図されている。 2. Detailed Disclosure of the Method of the Invention In the following disclosure, the terms “resin” and “solid support” refer to “derivatized resin” and “derivatized solid support”. It is used interchangeably, as with the term. Also, in any given context in which the synthesis of a peptide, peptidomimetic or peptidomimetic is described, if only one of these species is described in detail, then the synthesis of the other species is also Is intended.
【００３５】 本発明の開示によると、本発明者らは、炭素原子数約5の直鎖からなるスペー
サー（図1では、ペンタンスペーサーが示されている）または実質的に同じ空間
的影響を有するその変異体は、置換されている場合でも置換されていない場合で
も、本明細書に記載する他の増強物とともに提供されると、本明細書に記載する
全体的な化学的過程の効率を増大することができることを見出した。「炭素原子
数約5の直鎖」という用語は、2、3、4、5、6または7の炭素原子またはそれらの
変種が直鎖に結合しているリンカーを含むことが本発明の開示に基づいて当業者
には理解されると思われる。2より短いリンカーまたは約7より長いリンカーは効
率が低く、合成過程の収率を低下させることが見出されている。According to the disclosure of the present invention, we have a spacer consisting of a straight chain of about 5 carbon atoms (in FIG. 1 pentane spacers are shown) or have substantially the same spatial effect The variant, whether substituted or unsubstituted, increases the efficiency of the overall chemical process described herein when provided with the other enhancers described herein. I found that I can do it. The term "straight chain of about 5 carbon atoms" is intended to include in the disclosure of the present invention that it includes a linker in which 2, 3, 4, 5, 6 or 7 carbon atoms or variants thereof are attached in a straight chain. It will be understood by those skilled in the art based on this. Linkers shorter than 2 or longer than about 7 have been found to be less efficient and reduce the yield of the synthesis process.
【００３６】 1. 環状アミノアルデヒド誘導体を用いて固相支持体を製造する方法 本発明は図面を参照すると最もよく理解することができる。図1には、本発明
の一局面による反応順序が記載されており、本明細書の以下に提供する具体的な
実例の支持体に言及している（反応略図の種々の段階の「Ex」および関連する実
施例の番号として示す種々の実施例番号を参照）。この略図によると、Bocがα-
アミノ基を保護している環状アルデヒド100（反応略図ではN-α-t-ブトキシカル
ボニル-Ngニトロ-アルギニナールを例示；当業者は、溶媒、保護基または反応条
件の変更を本明細書に規定される手順から逸脱することなく加えることができる
ことを認識していると思われる）を酸性触媒の存在下において（6-エチルヒドロ
キシヘキサノエートで示す）本発明の好ましいリンカーと接触させる。反応後、
無水酢酸およびピリジン等と反応させることによって過剰のリンカーを捕獲して
、望ましい生成物の精製を容易にする。結果として、環状アルデヒドがリンカー
に結合した中間体110が提供される。中間体120への還元（例えば、パラジウム触
媒による水素添加による）により環状アルデヒドがN-ωAlloc保護され、以降の
段階におけるアルキル基（例えば、図1ではエチル）の加水分解により、中間体1
30を含有する遊離のカルボン酸が形成される。130と少なくとも1つの反応性アミ
ノ基を有する樹脂とを接触させることにより、リンカーと樹脂との間にアミド結
合が形成され、化合物140が形成される。アミノ基の酸性触媒によるBoc脱保護に
よって、標準的な固相ペプチド化学がペプチド、ペプチド誘導体または類似体15
0を製造するように行われる。脱保護および樹脂からの最終的な切断により、遊
離のカルボキシル末端アルデヒド官能基を有するペプチド、ペプチド誘導体また
はその類似体160が放出される。次いで、このように合成された化合物160を直接
使用することができる。または、アルデヒド官能基を標準的な化学的手段によっ
てカルボン酸または他の望ましい官能基に変換することができる。1. Method for Producing a Solid Support Using a Cyclic Amino Aldehyde Derivative The present invention can best be understood with reference to the drawings. FIG. 1 describes a reaction sequence according to one aspect of the invention and refers to specific illustrative supports provided herein below (“Ex” at various stages of the reaction scheme). And the various example numbers shown as the numbers of the related examples). According to this diagram, Boc is α-
Cyclic aldehyde 100 protecting the amino group (N-α-t-butoxycarbonyl-N g nitro-argininal is illustrated in the reaction scheme; those skilled in the art will define changes in solvents, protecting groups, or reaction conditions herein. (It will be appreciated that they can be added without departing from the procedure described)) is contacted with a preferred linker of the invention (indicated by 6-ethylhydroxyhexanoate) in the presence of an acidic catalyst. After the reaction,
The excess linker is captured by reacting with acetic anhydride and pyridine and the like to facilitate purification of the desired product. The result is an intermediate 110 with the cyclic aldehyde attached to the linker. Reduction of the intermediate 120 (eg, by hydrogenation with a palladium catalyst) results in N-ωAlloc protection of the cyclic aldehyde, and subsequent hydrolysis of the alkyl group (eg, ethyl in FIG. 1) results in intermediate 1
A free carboxylic acid containing 30 is formed. By contacting 130 with a resin having at least one reactive amino group, an amide bond is formed between the linker and the resin, and compound 140 is formed. Acid-catalyzed Boc deprotection of amino groups allows standard solid-phase peptide chemistry to reduce peptide, peptide derivative or analog
Done to produce 0. Deprotection and eventual cleavage from the resin releases a peptide, peptide derivative or analog 160 having a free carboxyl-terminal aldehyde function. The compound 160 thus synthesized can then be used directly. Alternatively, the aldehyde functionality can be converted to a carboxylic acid or other desired functionality by standard chemical means.
【００３７】 同様に、図2を参照すると、本発明による関連する方法において、適当なω-基
保護によって（例えば、PMC）、親カルボン酸200からアルギニンアルデヒドが得
られる。α-アミノ基のAlloc等による保護およびO,N-ジメチルヒドロキシルアミ
ン等の試薬を用いた処理によるN-メトキシ-N'-メチルアミドへの変換（すなわち
、カルボン酸部分からのWeinrebアミド形成）により、化合物210が形成される。
アルデヒドへの還元、リンカーとの反応（好適な溶媒中で無水酢酸等の無水物お
よびピリジンの存在下におけるエチル-6-ヒドロキシヘキサノエートにより例示
されている）および精製により化合物220が提供される。加水分解により遊離酸2
30が形成される。230と少なくとも1つの反応性アミノ基を有する樹脂とを接触さ
せることにより、リンカーと樹脂との間にアミド結合が形成され、Alloc脱保護
により、化合物240が形成される。標準的な固相ペプチド化学が240に実施され、
ペプチド、ペプチド誘導体または類似体250が形成される。同時に実施される酸
性触媒による脱保護および樹脂からの切断により、遊離のカルボキシル末端アル
デヒド官能基を有するペプチド、そのペプチド誘導体または類似体260が放出さ
れる。次いで、このように合成された化合物260を直接使用することができる。
または、アルデヒド官能基を標準的な化学的手段によってカルボン酸または他の
望ましい官能基に変換することができる。Similarly, referring to FIG. 2, in a related method according to the invention, arginine aldehyde is obtained from the parent carboxylic acid 200 by appropriate ω-group protection (eg, PMC). By protection of the α-amino group with Alloc and the like and conversion to N-methoxy-N′-methylamide by treatment with a reagent such as O, N-dimethylhydroxylamine (ie, Weinreb amide formation from the carboxylic acid moiety), Compound 210 is formed.
Reduction to an aldehyde, reaction with a linker (exemplified by ethyl-6-hydroxyhexanoate in the presence of an anhydride such as acetic anhydride and pyridine in a suitable solvent) and purification provides compound 220 . Free acid 2 due to hydrolysis
30 are formed. By contacting 230 with a resin having at least one reactive amino group, an amide bond is formed between the linker and the resin, and Compound 240 is formed by Alloc deprotection. Standard solid phase peptide chemistry was performed at 240,
A peptide, peptide derivative or analog 250 is formed. Simultaneous acid-catalyzed deprotection and cleavage from the resin releases a peptide having a free carboxyl-terminal aldehyde function, its peptide derivative or analog 260. The compound 260 thus synthesized can then be used directly.
Alternatively, the aldehyde functionality can be converted to a carboxylic acid or other desired functionality by standard chemical means.
【００３８】 本発明の方法のさらに別の態様において、図3を参照すると、トリメチルシリ
ル（TMS）等で保護したリンカーを示す出発物質300を直接アミノ樹脂に結合し、
脱保護して、遊離の反応性ヒドロキシル基を示す誘導体化された樹脂310を形成
する反応略図が示されている。この誘導体化された樹脂に発生期の環状アルデヒ
ド320（例えば、図2の化合物210をLAH/THF、THF-78℃で処理することによって調
製される）を接触させることによって、固定された環状アルデヒド330が生成さ
れる。アルデヒドを脱保護することによって反応性種340が形成され、ペプチド
、ペプチド様プロテアーゼ阻害剤の製造および異なるモノマー、オリゴマーまた
はポリマーと生成物340との縮合を使用した、複数の異なる反応槽におけるコン
ビナトリアル化学変法による化合物ライブラリーの製造を含むが、それらに限定
されない固相ペプチド化学をこれを用いて実施することができる。In yet another embodiment of the method of the present invention, referring to FIG. 3, a starting material 300, which shows a linker protected by trimethylsilyl (TMS) or the like, is directly attached to an amino resin,
A schematic representation of the deprotection to form a derivatized resin 310 exhibiting free reactive hydroxyl groups is shown. The derivatized resin is contacted with a nascent cyclic aldehyde 320 (eg, prepared by treating compound 210 of FIG. 2 at LAH / THF, THF-78 ° C.) to form an immobilized cyclic aldehyde. 330 is generated. The reactive species 340 is formed by deprotecting the aldehyde, and combinatorial chemistry in multiple different reactors using the production of peptides, peptide-like protease inhibitors and condensation of different monomers, oligomers or polymers with the product 340 Solid phase peptide chemistry, including but not limited to the production of compound libraries by a variant, can be performed using this.
【００３９】 上記の図の考察を参照すると、一局面において本発明は、式（I）： （I） R1-O-X-(CH2)n-Y-CO-NH-SS （式中、 （a）R1は、カルボキシル末端に環状アミノアルデヒドまたはその誘導体を有し
、任意に、1箇所以上の位置に保護基を含む部分であるR1'から誘導され、 （b）nは約1〜約15の整数であるが、ただしXおよびYが共に結合である場合には
、nは少なくとも2で、好ましくは約5であり、 （c）SSは固相支持体であり、 （d）XおよびYは、独立に、結合または-[Z]p-であり、pは1〜5の整数であるが、
ただし、X、Yおよび-(CH2)n-の組み合わせが炭素原子数約2〜15、好ましくは約5
の直鎖に長さが等価な鎖を示し、Zは-CH2CH2O-または-C(A)(B)-であり、Aおよび
BはZが存在する場合には各々異なってもよく、独立に、水素、炭素原子数1〜約6
のアルキル、炭素原子数約3〜約10のアルケニル、炭素原子数約6〜約10のアリー
ルからなる群より選択され、AおよびBは、組み合わせたとき、5〜7員環を形成し
てもよい） を有する固相支持体を製造するための方法（方法1）であって、 （a）（i）R1'を、式OH-X-(CH2)n-Y-CO2-R2（式中、R2は、リンカーが最初に固
相支持体と反応する場合には、-NH-SSで、またはH、炭素原子数1〜約6の低級ア
ルキル、炭素原子数約3〜約10のアルケニル、炭素原子数約6〜約10のアリールお
よび炭素原子数約6〜約15のアラルキルからなる群より選択される）のリンカー
と、R1'のカルボニルまたは発生期カルボニルとリンカーのヒドロキシとの反応
を可能にする酸性触媒条件下において接触させて、R1-O-X-(CH2)n-Y-CO2-R2を形
成する段階と、 （ii）R1-O-X-(CH2)n-Y-CO2-R2を回収し、R2が-NH-SSまたは-Hでない場合には、
R2基を加水分解して、式 R1-O-X-(CH2)n-Y-CO-OH のカルボン酸を形成する段階と、 （iii）リンカーが先に固相支持体と反応しない場合にはR1-O-X-(CH2)n-Y-CO-OH
とNH2-SSとを、カルボン酸の脱水およびカルボン酸とNH2-SSとの間のアミド結合
形成を可能にする条件下において接触させて、R1-O-X-(CH2)n-Y-CO-NH-SSを形成
する段階と、 （iv）このように形成されたR1-O-X-(CH2)n-Y-CO-NH-SS固相支持体を回収する段
階とを含む方法であるであることが理解される。Referring to the discussion of the above figures, in one aspect, the present invention provides a compound of formula (I): (I) R1-OX- (CH 2 ) n -Y-CO-NH-SS wherein (a R) has a cyclic amino aldehyde or derivative thereof at the carboxyl terminus and is optionally derived from R 1 ′, which is a moiety containing a protecting group at one or more positions, (b) n is from about 1 to about 15 N is an integer, provided that when X and Y are both bonds, then n is at least 2, preferably about 5, (c) SS is a solid support, and (d) X and Y are , Independently, is a bond or-[Z] p- , where p is an integer from 1 to 5,
However, X, Y and - (CH 2) n - combination of about 2 to 15 carbon atoms, preferably about 5
Z is -CH 2 CH 2 O- or -C (A) (B)-, A and
B may each be different when Z is present, independently of hydrogen, 1 to about 6 carbon atoms
Selected from the group consisting of alkyl, alkenyl having about 3 to about 10 carbon atoms, and aryl having about 6 to about 10 carbon atoms, and A and B, when combined, may form a 5- to 7-membered ring. (Method 1) for producing a solid support having the formula: (a) (i) R1 ′ is a compound represented by the formula OH—X— (CH 2 ) n —Y—CO 2 —R2 ( Wherein R is -NH-SS or H, lower alkyl of 1 to about 6 carbon atoms, about 3 to about 10 carbon atoms when the linker first reacts with the solid support. An alkenyl, an aryl having about 6 to about 10 carbon atoms and an aralkyl having about 6 to about 15 carbon atoms), and a carbonyl or nascent carbonyl of R 1 ′ and a hydroxy of the linker. by contacting the acidic catalyst under conditions that allow, R1-OX- (CH 2) forming an n -Y-CO 2 -R2, ( ii) R1-OX- (CH 2) n -Y- Capture CO 2 -R2 , When R2 is not -NH-SS or -H,
The R2 group is hydrolyzed forming the formula R1-OX- (CH 2) a carboxylic acid of the n -Y-CO-OH, if it does not react with the solid support previously (iii) the linker R1-OX- (CH 2 ) n -Y-CO-OH
And the NH 2 -SS, is contacted under conditions that allow amide bond formation between the dehydration of carboxylic acids and carboxylic acid and NH 2 -SS, R1-OX- ( CH 2) n -Y- Forming a CO-NH-SS, and (iv) recovering the R1-OX- (CH 2 ) n -Y-CO-NH-SS solid support thus formed. It is understood that there is.
【００４０】 上記の開示を参照すると、反応段階の順序は変更しうることが理解されると思
われる。従って例えば、図1および2に示す反応略図では、上記に示す順に行われ
る。しかし、図3に図示する反応略図では、リンカーは最初に固相支持体と反応
させ、誘導体化された樹脂が形成され、次いでアルデヒドと接触させられる。こ
れらの変更は本質的に本発明の範囲内であり、上記の段階の順では、リンカーが
すでに反応している固相支持体であるR2部分が適応されている。With reference to the above disclosure, it will be appreciated that the order of the reaction steps may be varied. Thus, for example, the reaction schemes shown in FIGS. 1 and 2 are performed in the order shown above. However, in the reaction scheme illustrated in FIG. 3, the linker is first reacted with the solid support to form a derivatized resin and then contacted with the aldehyde. These modifications are essentially within the scope of the present invention, and in the order of the steps described above, the R2 moiety, the solid support to which the linker has already reacted, has been adapted.
【００４１】 本発明の方法によって製造された固相支持体は、セリンプロテアーゼ、アスパ
ルチルプロテアーゼおよびシステインプロテアーゼを含むが、それらに限定され
ないプロテアーゼの既知および新規阻害剤を合成する際に利点を得るために使用
することができる。血液凝固経路に関連する酵素の阻害に重要なペプチド、ペプ
チド類似体およびペプチド模倣化合物を、本明細書に開示される方法によって利
点を得るために製造することができる。従って、本発明の方法によって製造され
る固相支持体を使用して、新規および既知のセリンプロテアーゼ阻害剤、アスパ
ラギン酸プロテアーゼ阻害剤およびシステインプロテアーゼ阻害剤を製造するこ
とができる。従って、生物的および医学的に関連のある多種多様の蛋白質分解酵
素の阻害剤が本発明の方法により製造される。このようなプロテアーゼ阻害剤は
、トロンビン阻害剤、ウロキナーゼ阻害剤、第Xa因子阻害剤、エラスターゼ阻害
剤、C型肝炎酵素阻害剤、キマーゼ阻害剤、トリプシン阻害剤およびトリプター
ゼ阻害剤から選択されるが、それらに限定されない。The solid support produced by the method of the present invention may be used to obtain advantages in synthesizing known and novel inhibitors of proteases, including but not limited to serine, aspartyl and cysteine proteases. Can be used for Peptides, peptide analogs and peptidomimetic compounds that are important for the inhibition of enzymes involved in the blood coagulation pathway can be produced to advantage by the methods disclosed herein. Thus, the solid supports produced by the method of the present invention can be used to produce new and known serine protease inhibitors, aspartic protease inhibitors and cysteine protease inhibitors. Accordingly, a wide variety of biologically and medically relevant inhibitors of proteolytic enzymes are produced by the methods of the present invention. Such protease inhibitors are selected from thrombin inhibitors, urokinase inhibitors, factor Xa inhibitors, elastase inhibitors, hepatitis C enzyme inhibitors, chymase inhibitors, trypsin inhibitors and tryptase inhibitors, Not limited to them.
【００４２】 上記のように、R1はカルボキシル末端に環状アミノアルデヒドまたはその誘導
体を有する部分である。好適なR1部分は、一環式アミノアルデヒドおよびその誘
導体並びに鎖のカルボキシル末端に環状アミノアルデヒドまたはその誘導体を有
する2つ以上の原子のペプチドまたはペプチド模倣側鎖を含む。As described above, R1 is a moiety having a cyclic aminoaldehyde or a derivative thereof at the carboxyl terminus. Preferred R1 moieties include monoamino aldehydes and derivatives thereof as well as peptides or peptidomimetic side chains of two or more atoms having a cyclic amino aldehyde or derivative thereof at the carboxyl terminus of the chain.
【００４３】 本発明の方法の好ましい態様において、R1はアルギニンアルデヒド、アスパラ
ギン酸アルデヒド、ホモセリンアルデヒドまたはホモシステインアルデヒドおよ
びその誘導体である。このようなアミノアルデヒドの共通の誘導体は、Boc、All
oc、PMC、FmocまたはTeocなどの保護基（PG）で保護されたω-側鎖を有するもの
である。本明細書に開示されるか、または当技術分野で公知の他の保護基を適宜
使用してもよい。In a preferred embodiment of the method of the present invention, R1 is arginine aldehyde, aspartic aldehyde, homoserine aldehyde or homocystein aldehyde and derivatives thereof. Common derivatives of such amino aldehydes are Boc, All
It has an ω-side chain protected by a protecting group (PG) such as oc, PMC, Fmoc or Teoc. Other protecting groups disclosed herein or known in the art may be used as appropriate.
【００４４】 本発明のさらに別の態様において、R1のαおよびωヘテロ原子は、段階（i）
の前に、それぞれ、PG1およびPG2でブロックされる（実施例13〜16および図2を
参照）。別の局面において、R1のα窒素は段階（i）の前にPG1でブロクされ、R1
のω窒素は段階（ii）の後でPG2でブロックされる（実施例1〜5および図1参照）
。In yet another embodiment of the present invention, wherein the α and ω heteroatoms of R 1 are in step (i)
Before PG1 and PG2, respectively (see Examples 13-16 and FIG. 2). In another aspect, the alpha nitrogen of R1 is blocked with PG1 prior to step (i),
Ω nitrogen is blocked with PG2 after step (ii) (see Examples 1-5 and FIG. 1)
.
【００４５】 PG1およびPG2は直行するように選択する保護基である。すなわち、PG1およびP
G2の選択は、PG1またはPG2を選択的に脱離させることができるように、固相支持
体の意図された用途を考慮した後に実施される。1つのPG基の脱離によりその後
の反応に脱保護されたヘテロ原子が利用されるが、保護されている窒素は望まし
くない反応には利用されない。実施例8および19はα窒素からのPGの脱離を記載
するが、ω窒素はその後の反応中保護された状態が維持される（実施10および20
参照）。PG1およびPG2の好ましい組み合わせには以降のPGが含まれ、どちらがPG
1またはPG2であってもよい；BocとFmoc、AllocまたはTrocの組み合わせ；Fmocと
Alloc、TeocまたはPMCの組み合わせ；AllocとTeocまたはPMCの組み合わせ。PG1 and PG2 are protecting groups selected to be orthogonal. That is, PG1 and P
The choice of G2 is made after considering the intended use of the solid support so that PG1 or PG2 can be selectively eliminated. Removal of one PG group makes use of the deprotected heteroatom in subsequent reactions, but the protected nitrogen is not used in undesired reactions. Examples 8 and 19 describe the elimination of PG from the α nitrogen, while the ω nitrogen remains protected during subsequent reactions (Examples 10 and 20).
reference). Preferred combinations of PG1 and PG2 include the following PGs,
1 or PG2; a combination of Boc and Fmoc, Alloc or Troc;
Combination of Alloc, Teoc or PMC; Combination of Alloc and Teoc or PMC.
【００４６】 好ましいNH2-SSは、アミノメチル化ポリスチレン樹脂、ベンズヒドリルアミン
樹脂および4-メチルベンズヒドリルアミン樹脂などの官能性アミン基を有する樹
脂である。少なくとも1つの官能性アミン基を有する当技術分野で公知の他の樹
脂を本明細書に開示する方法により使用することができる。Preferred NH 2 -SS are resins having functional amine groups, such as aminomethylated polystyrene resins, benzhydrylamine resins and 4-methylbenzhydrylamine resins. Other resins known in the art having at least one functional amine group can be used according to the methods disclosed herein.
【００４７】 上記の詳細な開示を参照すると、上記の段階（i）は、図1および2、実施例3〜
5、実施例16および本発明の開示内容の別の箇所に開示されるもの並びに当技術
分野で公知の方法によるものなどの酸性触媒条件下で進行することが理解される
。段階（ii）は、実施例6、実施例17において反映されるものなどの条件下、お
よびこの種の化学変換について当技術分野で公知の方法により実施される加水分
解を含む。段階（iii）は、実施例7、実施例18に開示されるものおよびこの種の
化学変換について当技術分野で公知の条件などの脱水条件を含む。Referring to the above detailed disclosure, the above step (i) is performed in accordance with FIGS.
It is understood that it proceeds under acidic catalytic conditions such as those disclosed in Example 16, and elsewhere in the disclosure of the present invention, as well as by methods known in the art. Step (ii) includes hydrolysis performed under conditions such as those reflected in Example 6, Example 17, and by methods known in the art for this type of chemical transformation. Step (iii) includes dehydration conditions such as those disclosed in Example 7, Example 18 and conditions known in the art for this type of chemical transformation.
【００４８】 本発明に係る好ましい態様において、リンカーOH-(CH2)n-CO2-R2はn=4〜10で
、好ましくはn=5である。好ましいR2基は、低級（炭素原子数約1〜10）、アルキ
ル、アルケニルおよびアラルキルを含むが、それらに限定されない。特に好まし
いR2基はエチルである。特に好ましいリンカーはOH-(CH2)5-CO2-エチルである。In a preferred embodiment according to the present invention, the linker OH— (CH 2 ) n —CO 2 —R 2 is n = 4-10, preferably n = 5. Preferred R2 groups include, but are not limited to, lower (about 1-10 carbon atoms), alkyl, alkenyl, and aralkyl. A particularly preferred R2 group is ethyl. Particularly preferred linkers are OH- (CH 2) 5 -CO 2 - ethyl.
【００４９】 XおよびYが結合でない場合には、どちらかまたは両方の部分はアルキルまたは
置換アルキル基であってもよいが、ただし、置換される場合には、標準的なペプ
チド合成方法を妨害する可能性のある反応性部分は好ましくない。また、一部を
形成するXおよびYのリンカーによってアルデヒドが固相支持体に結合する結果形
成されるエーテル結合を望ましいように不安定化させると思われる官能基をXま
たはYに導入しないことが重要である。好ましくは、X、Yおよび反復メチレン単
位が組み合わされて、不活性で、炭素原子数約5のアルキルスペーサーが提供す
ると思われるものと同様の鎖長を提供するスペーサーを形成する。When X and Y are not bonds, either or both moieties may be alkyl or substituted alkyl groups, but if substituted, would interfere with standard peptide synthesis methods. Potentially reactive moieties are not preferred. It is also possible to avoid introducing functional groups into X or Y that would desirably destabilize the ether bond formed as a result of the binding of the aldehyde to the solid support by the X and Y linkers forming a part. is important. Preferably, X, Y and the repeating methylene unit combine to form a spacer which is inert and provides a chain length similar to that which would be provided by an alkyl spacer of about 5 carbon atoms.
【００５０】 II. 直鎖状側鎖を有するアミノアルデヒド及びその誘導体を伴う固相支持体の
製造方法 本発明の他の局面においては下記の（II）に記載の式を有する固相支持体の製
造方法（方法II）が提供される。 R3[-O-X-(CH2)m-Y-CO-NH-SS]2 (II) 式中、 （a）R3は、カルボキシル末端に直鎖状アミノアルデヒドまたはその誘導体を有
し、任意に一つまたは複数の位置に保護基を含む部分であるR3'から誘導され；
（b）mは約1から15の間の整数であって、ただしXおよびYが共に結合である場合
には、mは少なくとも2であり； （c）SSは固相支持体であり；ならびに （d）XおよびYが個々に、結合または-[Z]p-であり、ただしpは1から5の間の整数
であり、X、Yおよび-(CH2)m-の組み合わせが炭素原子1〜約15個、好ましくは炭
素原子約5つからなる長さの直鎖に相当する鎖を示し、Zは-CH2-CH2O-またはC(A)
(B)-であり、A及びBはZが存在する場合には個々に変化する可能性があり、水素
、炭素原子1〜約6個のアルキル、炭素原子約3〜約10個のアルケニル、炭素原子
約6〜約10個のアリールから成る群より個々に選択され、A及びBは組み合わされ
て5〜7員環を形成する。 該方法は下記の段階を有する。 （i）R3と比較し、少なくとも2モル過剰の下記の式で表されるリンカーをR3'ア
ルデヒドと接触させる段階： OH-X-(CH2)m-Y-CO2-R2 式中、R2は、リンカーが固相支持体あるいは-Hと前もって反応した場合には、
R3'のカルボニルとリンカーのヒドロキシルとの反応を可能にする酸に触媒され
る条件下で、-NH-SS、または-H、及び炭素原子1〜約6個のアルキル、炭素原子約
3〜約10個のアルケニル、炭素原子約6〜約10個のアリール、及び炭素原子約6〜
約15個のアラルキルから成る群より選択され、 R3[-O-X-(CH2)m-Y-CO2-R2]2 を形成する。 （ii）（i）からの生成物を回収する段階であり、かつR2が-NH-SSまたは-Hでは
ない場合に、R2を加水分解し、カルボン酸を形成する段階。 （iii）本リンカーがあらかじめ固相支持体と反応していない場合に、カルボン
酸の脱水及びカルボン酸とNH2-SSとの間のアミド結合の形成を可能にする条件下
において、（ii）のカルボン酸と-NH2-SSを接触させて、以下の式： R3[-O-X-(CH2)m-Y-CO2-NH-SS]2 で表される固相支持体を形成させる段階。及び （iv）このように形成された固相支持体を回収する段階。II. Method for Producing Solid Support with Aminoaldehyde Having Linear Side Chain and Derivatives Thereof In another aspect of the present invention, a solid support having the formula described in the following (II) is provided. A manufacturing method (method II) is provided. R3 in [-OX- (CH 2) m -Y -CO-NH-SS] 2 (II) formula, (a) R3 has a linear amino aldehyde or its derivative at the carboxyl terminus, optionally one Derived from R3 ', a moiety that contains a protecting group at one or more positions;
(B) m is an integer between about 1 and 15, with the proviso that when X and Y are both a bond, m is at least 2; (c) SS is a solid support; (D) X and Y are each independently a bond or-[Z] p- , where p is an integer between 1 and 5, and the combination of X, Y and-(CH 2 ) m- is a carbon atom 1 to about 15, preferably represents a chain corresponding to the linear length consisting of one to about 5 carbon atoms, Z is -CH 2 -CH 2 O- or C (a)
(B)-, wherein A and B are individually variable when Z is present; hydrogen, alkyl of 1 to about 6 carbon atoms, alkenyl of about 3 to about 10 carbon atoms, A and B are individually selected from the group consisting of aryl of about 6 to about 10 carbon atoms, wherein A and B combine to form a 5-7 membered ring. The method comprises the following steps. (I) compared to R3, step contacting the linker R3 'aldehyde represented by at least two molar excess of the following formula: OH-X- (CH 2) m -Y-CO 2 during -R2 formula, R2 If the linker has previously reacted with the solid support or -H,
Under acid-catalyzed conditions that allow the reaction of the carbonyl of R3 'with the hydroxyl of the linker, -NH-SS, or -H, and alkyl of 1 to about 6 carbon atoms,
3 to about 10 alkenyl, about 6 to about 10 aryl carbons, and about 6 to about 10 carbon atoms.
Is selected from the group consisting of about 15 amino aralkyl, to form the R3 [-OX- (CH 2) m -Y-CO 2 -R2] 2. (Ii) recovering the product from (i) and, if R2 is not -NH-SS or -H, hydrolyzing R2 to form a carboxylic acid. In (iii) where the present linker is not reacted with the previously solid support, under conditions that allow the formation of an amide bond between the dehydration of carboxylic acid and carboxylic acid and NH 2 -SS, (ii) contacting the carboxylic acid with -NH 2 -SS, the following formula: to form the R3 solid support represented by [-OX- (CH 2) m -Y -CO 2 -NH-SS] 2 Stage. And (iv) recovering the solid support thus formed.
【００５１】 本発明に係る好ましい態様においては、リンカーのOH-(CH2)m-CO2-R2はm=4〜1
0であり、好ましくはm=5である。好ましいR2基は低級（炭素原子約1から10個）
アルキル、アルケニル、及びアラルキルを含むが、これらに限定されることはな
い。特に好ましいR2基はエチルである。特に好ましいリンカーはOH-(CH2)5-CO2-
エチルである。In a preferred embodiment according to the present invention, the linker OH— (CH 2 ) m —CO 2 —R 2 has m = 4 to 1
0, preferably m = 5. Preferred R2 groups are lower (about 1 to 10 carbon atoms)
Including, but not limited to, alkyl, alkenyl, and aralkyl. A particularly preferred R2 group is ethyl. Particularly preferred linkers are OH- (CH 2) 5 -CO 2 -
Ethyl.
【００５２】 XおよびYが結合でない場合は、一方または両方の部分はアルキル、または置換
した場合には置換したアルキル基であることができ、標準的なペプチド合成レジ
メにおいて相互干渉するような反応性部分は好ましくない。また、XおよびYが一
部を形成するリンカーを使用することによって、アルデヒドを固相支持体に連結
させることに基づいて形成されたエーテル結合を好ましくなく脱安定化させる可
能性のある、XまたはYへの官能性の導入は行わないことが重要である。好ましく
は、X、Y及び反復メチレン単位の組み合わせで結合し、不活性でかつ炭素原子約
5個のアルキルスペーサーが提供する長さに類似の長さを提供するスペーサーを
形成する。When X and Y are not bonds, one or both moieties can be alkyl, or, if substituted, a substituted alkyl group, with reactivity that interferes with each other in standard peptide synthesis regimes. Parts are not preferred. Also, by using a linker where X and Y form a part, X or Y, which may undesirably destabilize the ether bond formed based on linking the aldehyde to the solid support, It is important that no functionality is introduced into Y. Preferably, they are linked by a combination of X, Y and repeating methylene units, are inert and have about
Form a spacer that provides a length similar to that provided by the five alkyl spacers.
【００５３】 既知の、および新規なプロテアーゼ阻害剤の合成を効果的に行うために、本発
明の方法に従い調製された固相支持体を使用することができる。これらのプロテ
アーゼには血液凝固経路に重要なプロテアーゼが含まれるが、これらに限定され
ることはない。従って、新規な、および既知のトロンビン阻害剤、Xa因子阻害剤
、ウロキナーゼ阻害剤、C型肝炎酵素、カイメース、前立腺特異的抗体（SPA）、
VIIa因子、エラスターゼ、トリプシン等を、本発明の方法に従って作成した固相
支持体を用いて調製することができる。To effect the synthesis of known and novel protease inhibitors, solid supports prepared according to the methods of the present invention can be used. These proteases include, but are not limited to, proteases important in the blood coagulation pathway. Thus, novel and known thrombin inhibitors, factor Xa inhibitors, urokinase inhibitors, hepatitis C enzymes, caymes, prostate specific antibodies (SPA),
Factor VIIa, elastase, trypsin and the like can be prepared using the solid support prepared according to the method of the present invention.
【００５４】 III. 保護基 特にペプチド、ペプチド類似体、及びペプチド模倣化合物の合成において、反
応性部分が存在する場合、またはその反応性部分での反応が好ましくない場合に
は、反応性アミノ酸側鎖においては、このような部位を保護する方法は周知であ
ることが理解されると思われる。従って、反応性ヘテロ原子がアミノ酸側鎖内に
存在する場合、またはアミノ酸またはアミノ酸類似体におけるアミノ末端の窒素
での反応が避けられるべきである場合、下記のガイドライン及び方法が適応され
ると考えられる。しかしながら、側鎖が反応性ではない場合、当業者は保護は必
要ないことを理解すると思われる（例えばメチルシステインがすでに効果的に保
護され、フェニルアラニン側鎖は比較的非反応性である）。特に、側鎖がグアニ
ジノ基（アルギニン側鎖は-(CH2)3-NH-(C=NH2 +)-NH2であり、式中-NH-(C=NH2 +)-
NH2部分はグアニジノ官能性を示す）を有する場合、アルギニナール部分につい
ては、複数の好ましくない側鎖反応を生成することなく、例えばアミノ末端の窒
素のような、他の部位での望ましい反応を達成するために、単一または二重の側
鎖保護が好ましいか、または不可欠である。アルギニナール部分が種々の互変異
性体（tautomer）の形態で溶液中に存在する一方、適切な側鎖保護が行われ、側
鎖を直鎖状形態に保つことも理解されると思われる。III. Protecting Groups Particularly in the synthesis of peptides, peptide analogs, and peptidomimetic compounds, when a reactive moiety is present or when reaction at the reactive moiety is not preferred, a reactive amino acid side chain It will be understood that methods for protecting such sites are well known. Thus, if a reactive heteroatom is present in the amino acid side chain, or if a reaction at the amino-terminal nitrogen in an amino acid or amino acid analog should be avoided, the following guidelines and methods will apply. . However, if the side chain is not reactive, one skilled in the art will understand that protection is not necessary (eg methyl cysteine is already effectively protected and the phenylalanine side chain is relatively unreactive). In particular, the side chain guanidino group (arginine side chain - (CH 2) a 3 -NH- (C = NH 2 + ) -NH 2, -NH- wherein (C = NH 2 +) -
If having a NH showing the 2 parts guanidino functionalities), For Arugininaru part, without generating a plurality of undesirable side chain reactions, such as nitrogen at the amino terminus, achieve the desired reaction at another site To protect, single or double side chain protection is preferred or essential. It will also be appreciated that while the argininal moiety is present in solution in various tautomeric forms, appropriate side chain protection is provided to keep the side chains in linear form.
【００５５】 本発明の方法の実施では、αアミノ保護基、ω側鎖保護基、及びカルボキシ保
護基の選択において次の点が考慮される。本発明の化合物の合成の間に使用され
る適切なαアミノ保護基（PG1）の選択においては、αアミノ保護基は、 （i）共役反応において実施される条件下でαアミノ官能基を不活性化し、 （ii）側鎖またはカルボキシル末端保護基を除去しない条件下で、共役反応後に
容易に除去することができ、および （iii）共役反応前の活性化においてラセミ化の可能性を排除する。In the practice of the method of the present invention, the following points are considered in the selection of the α-amino protecting group, the ω side-chain protecting group, and the carboxy protecting group. In the selection of a suitable α-amino protecting group (PG1) to be used during the synthesis of the compounds of the present invention, the α-amino protecting group must (i) be free of the α-amino function under the conditions performed in the conjugation reaction. (Ii) can be easily removed after a conjugation reaction under conditions that do not remove side chains or carboxyl terminal protecting groups, and (iii) eliminate the possibility of racemization in activation before the conjugation reaction .
【００５６】 適切なアミノ酸保護基は酸不安定αアミノ保護基から成る群より選択してもよ
く（〔〕またはテキスト内に開裂条件を示す）、 （a）非常に弱い酸性条件下〔1%TFA〕で、トリフェニルメチル（トリチル）基が
開裂され； （b）以下の保護基、tert-ブチルオキシ-カルボニル（Boc）、t-アミルオキシカ
ルボニル、アダマンチルオキシカルボニル、4-メトキシベンジルオキシカルボニ
ルは、除去にトリフルオロ酢酸、塩酸、または酢酸中フッ化ホウ素等の中程度の
強酸を必要とし、 （c）ベンジルオキシカルボニル（CBz）、2-クロロベンジルオキシカルボニル（
2-ClZ）、シクロアルキルオキシカルボニル、及びイソプロピルオキシカルボニ
ルは、除去にフッ化水素、臭化水素、またはトリフルオロ酢酸中のトリフルオロ
酢酸ホウ素等の強酸を必要とする。CBz及び2-ClZ基は、メタノール中炭素上のパ
ラジウムでの水素添加により、より簡便に開裂することができる。また、適切な
αアミノ保護基は、塩基不安定αアミノ保護基から成る群より選択することがで
きる。例えば、フルオレニルメチルオキシカルボニル（Fmoc）は20%ピペリジン/
DMFまたはTHF中の過剰なジエチルアミンを用いて開裂させることができる。モル
ホリン、ジメドン、トリブチル水素化スズ、及びN-メチルアニリン等の受容体求
核試薬へのアリル基のpd（0）触媒移動によりアリルオキシカルボニル（Alloc）
を開裂することができる。好ましいαアミノ保護基（PG）にはBoc、Fmoc、Alloc
及びCbzが含まれる。Suitable amino acid protecting groups may be selected from the group consisting of acid labile α-amino protecting groups ([] or indicate cleavage conditions in the text), (a) under very weak acidic conditions [1% (FA), the triphenylmethyl (trityl) group is cleaved; (b) the following protecting groups, tert-butyloxy-carbonyl (Boc), t-amyloxycarbonyl, adamantyloxycarbonyl, 4-methoxybenzyloxycarbonyl are Requires moderately strong acids such as trifluoroacetic acid, hydrochloric acid, or boron fluoride in acetic acid for removal; (c) benzyloxycarbonyl (CBz), 2-chlorobenzyloxycarbonyl (
2-ClZ), cycloalkyloxycarbonyl, and isopropyloxycarbonyl require hydrogen fluoride, hydrogen bromide, or a strong acid such as boron trifluoroacetate in trifluoroacetic acid for removal. The CBz and 2-ClZ groups can be more easily cleaved by hydrogenation with palladium on carbon in methanol. Also, suitable α-amino protecting groups can be selected from the group consisting of base-labile α-amino protecting groups. For example, fluorenylmethyloxycarbonyl (Fmoc) is 20% piperidine /
Cleavage can be performed with an excess of diethylamine in DMF or THF. Allyloxycarbonyl (Alloc) by pd (0) -catalyzed transfer of allyl groups to acceptor nucleophiles such as morpholine, dimedone, tributyltin hydride, and N-methylaniline
Can be cleaved. Preferred α-amino protecting groups (PG) include Boc, Fmoc, Alloc
And Cbz.
【００５７】 アミノ酸側鎖保護基は、 （i）共役反応に用いられる条件下で、保護された側鎖官能基を不活性にさせ、
（ii）αアミノまたはカルボキシル末端保護基の除去に用いられる条件下におい
て安定であり、 （iii）ペプチド鎖の構造を変化させない反応条件下で、所望のペプチドの完成
において容易に除去されるべきである。適切なアミノ酸側鎖保護基は、下記から
成る群より選択することができる（これらの保護基の開裂方法を[]内に示す）。
（a）リジンアミノ基の保護のためには、αアミノ酸保護基の保護のために上記
の基の任意の基が適当である。 （b）アルギニングアニジノ基の保護のためには、好ましい保護基にはニトロ[H2
/Pd/C、HF]、ベンジルオキシカルボニル（CBz）[HF、TFMSA、TMSOTf、H2/Pd/C]
、tert-ブチルオキシカルボニル（Boc）[TFA]、2,2,5,7,8-ペンタメチルクロマ
ン-6-スルホニル（Pmc）[TFA]、2,3,6-トリメチル-4-メトキシフェニルスルホニ
ル（Mtr）[TFA]、p-トルエンスルホニル（Tos）[HF、TFMSA]、メシチレン-2-ス
ルホニル（Mts）[HF、TFMSA]、アリルオキシカルボニル（Alloc）[Pd(0)、モル
ホリンまたはジメドン]が含まれる。 （c）セリン及びトレオニン水酸基の保護のための保護基には、トリチル[1%TFA]
、tert-ブチル[TFA]、ベンジル、及び類似の方法[HF、TFMSA、H2/Pd/C]により開
裂される置換ベンジル基（例えば、4-メトキシベンジル、4-クロロベンジル、2-
クロロベンジル、及び2, 6-ジクロロベンジル等）が含まれる。 （d）チロシンフェノール基の保護のための保護基には、tert-ブチル[TFA]、ト
リチル[1%TFA]、ベンジル、2-ブロモベンジル、及び2,6-ジクロロベンジル等の
、同様の試薬[HF、TFMSA、H2/Pd/C]により全て開裂された保護基が適切に使用さ
れる。 （e）アスパラギン酸及びグルタミン酸側鎖カルボキシ基の保護のための保護基
には、メチル[OH-、H+]、エチル[OH-、H+]、t-ブチル[TFA]、アリル[Pd(0）、モ
ルホリン]、シクロヘキシル[HF、TMSOTf]、またはベンジル[HF、TFMSA、TMSOTf
、H2/Pd/C]基が含まれる。 （f）アスパラギン及びグルタミン側鎖保護のための保護基には、トリチル[TFA]
及びキサンチル[TFA]が含まれる。 （g）ヒスチジンイミダゾール基保護のための適切な保護基には、2,4-ジニトロ
フェニル（Dnp）[チオフェノール]、トリチル[TFA]、ベンジルオキシメチル（Bo
m）[HF、TFMSA、TMSOTf、H2/Pd/C]、p-トルエンスルホニル（Tos） [HF、TFMSA]
、及びベンジルオキシカルボニル（Cbz）[HF、H2/Pd/C]が含まれる。 （h）システインスルフヒドリル基保護のための適切な保護基には、トリチル[TF
A]、4-メチルベンジル（pMeBzl）[HF、TFMSA]、4-メトキシベンジル（pMeOBzl）
[HF、TFMSA]、アセトアミドメチル（Acm）[I2、Hg2+]、tert-ブチル（tBu）[Hg2
+]が含まれる。 （i）トリプトファンインドール基の保護のための適切な保護基には、ホルミル[
DMF中10%ピペリジン、その後HF]、及びtert-ブチルオキシカルボニル（Boc）[TF
A]が含まれる。The amino acid side chain protecting group comprises: (i) inactivating the protected side chain functional group under the conditions used for the conjugation reaction;
(Ii) be stable under the conditions used to remove the α-amino or carboxyl terminal protecting groups, and (iii) should be easily removed in the completion of the desired peptide under reaction conditions that do not alter the structure of the peptide chain. is there. Suitable amino acid side chain protecting groups can be selected from the group consisting of (methods for cleavage of these protecting groups are shown in []).
(A) For protection of the lysine amino group, any of the above groups is suitable for protection of the α-amino acid protecting group. (B) For protection of the argining anidino group, a preferred protecting group is nitro [H2
/ Pd / C, HF], benzyloxycarbonyl (CBz) [HF, TFMSA, TMSOTf, H2 / Pd / C]
, Tert-butyloxycarbonyl (Boc) [TFA], 2,2,5,7,8-pentamethylchroman-6-sulfonyl (Pmc) [TFA], 2,3,6-trimethyl-4-methoxyphenylsulfonyl (Mtr) [TFA], p-toluenesulfonyl (Tos) [HF, TFMSA], mesitylene-2-sulfonyl (Mts) [HF, TFMSA], allyloxycarbonyl (Alloc) [Pd (0), morpholine or dimedone] Is included. (C) Protecting groups for protecting serine and threonine hydroxyl groups include trityl [1% TFA]
Tert-butyl [TFA], benzyl, and substituted benzyl groups cleaved by analogous methods [HF, TFMSA, H2 / Pd / C] (eg, 4-methoxybenzyl, 4-chlorobenzyl, 2-chlorobenzyl,
Chlorobenzyl, and 2,6-dichlorobenzyl, etc.). (D) Protecting groups for protecting tyrosine phenol groups include similar reagents such as tert-butyl [TFA], trityl [1% TFA], benzyl, 2-bromobenzyl, and 2,6-dichlorobenzyl. Protecting groups that are all cleaved by [HF, TFMSA, H2 / Pd / C] are used appropriately. (E) The protecting groups for protecting the side chain carboxy group of aspartic acid and glutamic acid include methyl [OH-, H +], ethyl [OH-, H +], t-butyl [TFA], allyl [Pd (0) , Morpholine], cyclohexyl [HF, TMSOTf] or benzyl [HF, TFMSA, TMSOTf
, H2 / Pd / C] groups. (F) Trityl [TFA] is a protecting group for protecting asparagine and glutamine side chains.
And xanthyl [TFA]. (G) Suitable protecting groups for protection of the histidine imidazole group include 2,4-dinitrophenyl (Dnp) [thiophenol], trityl [TFA], benzyloxymethyl (Bo
m) [HF, TFMSA, TMSOTf, H2 / Pd / C], p-toluenesulfonyl (Tos) [HF, TFMSA]
, And benzyloxycarbonyl (Cbz) [HF, H2 / Pd / C]. (H) Suitable protecting groups for the protection of cysteine sulfhydryl groups include trityl [TF
A], 4-methylbenzyl (pMeBzl) [HF, TFMSA], 4-methoxybenzyl (pMeOBzl)
[HF, TFMSA], acetamidomethyl (Acm) [I2, Hg2 +], tert-butyl (tBu) [Hg2
+] Is included. (I) Suitable protecting groups for protection of the tryptophan indole group include formyl [
10% piperidine in DMF, followed by HF], and tert-butyloxycarbonyl (Boc) [TF
A] is included.
【００５８】 カルボキシル末端保護基は、 （i）共役反応に用いられる条件下で保護された官能基を不活性化させ、 （ii）αアミノ基または側鎖保護基の除去に用いられる条件下において安定であ
り、ならびに （iii）ペプチド鎖の構造を変化させない反応条件下で所望のペプチドの完成に
基づき容易に除去されるべきである。カルボキシル末端のアミノ酸の保護のため
の適切な保護基には、エステルメチル[OH-、H+]、エチル[OH-、H+]、tert-ブチ
ル[TFA]、ベンジル[OH-、H2/Pd/C]、及びアリル[Pd（0）、モルホリン]基が含ま
れる。The carboxyl terminal protecting group (i) inactivates the protected functional group under the conditions used for the conjugation reaction, and (ii) under the conditions used for removing the α-amino group or the side chain protecting group. It should be stable and (iii) easily removed based on the completion of the desired peptide under reaction conditions that do not alter the structure of the peptide chain. Suitable protecting groups for protection of carboxyl terminal amino acids include ester methyl [OH-, H +], ethyl [OH-, H +], tert-butyl [TFA], benzyl [OH-, H2 / Pd / C ], And allyl [Pd (0), morpholine] groups.
【００５９】3. 固相支持体の使用方法 (A)固相ペプチド合成 固相ペプチド合成は任意の化合物を比較的少量製造する場合に有用である。固
相ペプチド合成はまた、一つまたは複数の変数において個々に異なる化合物のラ
イブラリーの合成に有用である。従来の固相ペプチド合成と同様、ペプチドアル
ギニナールを含むペプチドアルデヒドの固相ペプチド合成のためのリアクターは
、溶媒及び溶解した試薬が透過できるが、しかし選択したメッシュサイズの合成
樹脂は透過できない少なくとも一つの表面を有する反応容器から成る。このよう
なリアクターは、焼結ガラスフリットを有するガラス固相反応容器、フリットを
有するポリエチレンチューブもしくはカラム、または当技術分野で周知のもしく
は購入可能な類似の反応容器等を含む。選択されたリアクターの種類は、必要な
固相樹脂の量により、異なる種類のリアクターが合成の異なる段階で使用される
こともある。 3. Method of Using Solid Support (A) Solid Phase Peptide Synthesis Solid phase peptide synthesis is useful when producing a relatively small amount of any compound. Solid phase peptide synthesis is also useful for the synthesis of libraries of compounds that differ individually in one or more variables. As with conventional solid phase peptide synthesis, reactors for solid phase peptide synthesis of peptide aldehydes, including peptide argininals, are permeable to solvents and dissolved reagents, but are impermeable to synthetic resins of the selected mesh size. It consists of a reaction vessel with one surface. Such reactors include glass solid phase reaction vessels with sintered glass frit, polyethylene tubes or columns with frit, or similar reaction vessels known or available in the art. Depending on the type of reactor selected, different types of reactors may be used at different stages of the synthesis, depending on the amount of solid phase resin required.
【００６０】 本発明によれば、方法I及び方法IIに従い調製されるリンカー及び固相支持体
（集合的に「発明された固相支持体」と呼ぶ）は、ペプチドまたはペプチドアル
デヒドの成分を合成するために使用することができる。好ましい使用には、一つ
または複数のセリンプロテアーゼのペプチドまたはペプチドアルデヒド阻害剤の
合成のための使用が含まれる。発明された固相支持体の特に好ましい使用は、ト
ロンビン阻害剤、Xa因子阻害剤、及びウロキナーゼ阻害剤の合成のための使用で
ある（本発明の固相支持体及び、本明細書に開示されたその調製方法を用いた、
トロンビン阻害剤の調製には実施例12を、Xa因子阻害剤の調製には実施例21を、
ウロキナーゼ阻害剤の調製には実施例9を参照のこと）。According to the present invention, the linkers and solid supports prepared according to Method I and Method II (collectively referred to as “invented solid supports”) synthesize components of a peptide or peptide aldehyde. Can be used to Preferred uses include those for the synthesis of a peptide or peptide aldehyde inhibitor of one or more serine proteases. A particularly preferred use of the invented solid supports is for the synthesis of thrombin inhibitors, factor Xa inhibitors, and urokinase inhibitors (the solid supports of the invention and those disclosed herein). Using its preparation method,
Example 12 for the preparation of a thrombin inhibitor, Example 21 for the preparation of a factor Xa inhibitor,
See Example 9 for preparation of urokinase inhibitors).
【００６１】 式（I）または式（II）のリンカーはエーテル結合を有するため、固相化学を
行うための本発明の方法の使用において、化学的特徴と反応性を心に留めておく
ことが重要である。一般的に結合の開裂が避けられるべきである場合、比較的弱
い酸性を保持し、特に酸性の存在下で、求核試薬との接触を最小にすることが重
要である。試薬と溶媒を乾燥させておくことが（すなわち低含水量）重要である
。ペプチドアルデヒドの製造に本発明の方法を使用する場合、例えばアミノ酸の
単量体の連続した付加に必要とされる条件と同様に（すなわち、例えばBoc保護
基の除去の条件はエーテル結合が不安定になる条件と類似している）、エーテル
結合の酸性条件への感受性のために、予備形成したオリゴマーペプチドユニット
の連結が好ましい。従って、弱酸性条件下での比較的短いペプチドの合成または
予備形成したペプチドブロックの結合が好ましい。Since the linker of formula (I) or (II) has an ether linkage, it is important to keep in mind the chemical characteristics and reactivity in using the method of the present invention to perform solid phase chemistry. is important. In general, where cleavage of the bond is to be avoided, it is important to maintain relatively weak acidity and minimize contact with the nucleophile, especially in the presence of acidity. It is important to keep the reagents and solvent dry (ie, low water content). When using the method of the invention for the production of peptide aldehydes, for example, the conditions required for the continuous addition of amino acid monomers (ie, for example, the conditions for removal of the Boc protecting group may be such that the ether linkage is unstable). Ligation of preformed oligomeric peptide units is preferred because of the sensitivity of the ether linkage to acidic conditions. Therefore, the synthesis of relatively short peptides or the coupling of preformed peptide blocks under weakly acidic conditions is preferred.
【００６２】 従って本発明のさらなる局面は、カルボキシル末端に環状アルデヒドまたは未
完成アルデヒドR1及びR3を有するアミノ酸またはアミノ酸誘導体のペプチドまた
はペプチド模倣体を形成するための、R1及びR3基への一つまたは複数のアミノ酸
、アミノ酸類似体、ペプチド、又はペプチド類似体の結合による誘導体樹脂の調
製である。本発明の本局面を実施した結果として下記の式（III）又は式（IV）
に示される生成物が製造される。 （III）(res)t-RI-O-X-(CH2)n-Y-CO-NH-SS、 （IV）(res)t-R3[-O-X-(CH2)m-Y-CO-NH-SS]2 ここで、(res)t-部分は「t」残基を有するぺプチド又はペプチド類似体を示し、
「t」は約1〜50の間の整数である。好ましくは「t」は約1〜10の間の整数である
。Accordingly, a further aspect of the present invention provides a method for forming a peptide or peptidomimetic of an amino acid or amino acid derivative having a cyclic aldehyde or an unfinished aldehyde R1 and R3 at the carboxyl terminus, wherein Preparation of a derivative resin by combining a plurality of amino acids, amino acid analogs, peptides, or peptide analogs. As a result of implementing this aspect of the present invention, the following formula (III) or formula (IV)
Are produced. (III) (res) t -RI-OX- (CH2) n -Y-CO-NH-SS, (IV) (res) t -R3 [-OX- (CH2) m -Y-CO-NH-SS 2 wherein the (res) t -moiety indicates a peptide or peptide analog having a “t” residue,
"T" is an integer between about 1 and 50. Preferably, "t" is an integer between about 1 and 10.
【００６３】 従って、下記のいずれかから選択された生成物を本発明の方法のこの局面に従
い製造することができる。 N-α-ブトキシカルボニル-Ng-ニトロ-アルギニナール(6-ヘキサン酸エチルエス
テル)サイクロール； N-α-t-ブトキシカルボニル-アルギニナール(6-ヘキサン酸エチルエステル)サイ
クロール、酢酸塩； N-α-t-ブトキシカルボニル-N-オメガ-アリルオキシカルボニル-アルギナル(6-
ヘキサン酸エチルエステル)サイクロール； N-α-t-ブトキシカルボニル-N-δ-Alloc-N-α-t-ブトキシカルボニル-N-オメガ-
アリルオキシカルボニル-アルギナル(6-ヘキサン酸)サイクロール； N-α-t-ブトキシカルボニル-N-オメガ-アリルオキシカルボニル-アルギナル(6-
ヘキサノイル-アミノメチル化ポリスチレン樹脂)サイクロール； Nδ-Alloc-アルギニルシクロ-O-6-ヒドロキシルヘキサノイル-アミノメチル化ポ
リスチレン； N-オメガ-アリルオキシカルボニル-アルギニナール(6-ヘキサノイル-アミノメチ
ル化ポリスチレン樹脂)シクロール； N-α-Fmoc-アラニル-N-オメガ-アリルオキシカルボニル-アルギニナール-(6-ヘ
キサノイル-アミノメチル化ポリスチレン樹脂)サイクロール； アラニル-N-オメガ-アリルオキシカルボニル-アルギナル(6-ヘキサノイル-アミ
ノメチル化ポリスチレン樹脂)サイクロール； N-α- Fmoc -D-セリル(O-t-ブチル)-アラニル-N-オメガ-アリルオキシカルボニ
ル-アルギニナール(6-ヘキサノイル-アミノメチル化ポリスチレン樹脂)サイクロ
ール； D-セリル(O-t-ブチル)-アラニル-N-オメガ-アリルオキシカルボニル-アルギニナ
ール(6-ヘキサノイル-アミノメチル化ポリスチレン樹脂)サイクロール； D-セリル(O-t-ブチル)-アラニル-N-オメガ-アリルオキシカルボニル-アルギニナ
ール(6-ヘキサノイル-アミノメチル化ポリスチレン樹脂)サイクロールのカルバ
メート類似体； イソブチルオキシカルボニル-D-セリル(O-t-ブチル)-アラニル-N-d-アリルオキ
シカルボニル-アルギニナール(6-ヘキサノイル-アミノメチル化ポリスチレン樹
脂)サイクロール； D-セリル(O-t-ブチル)-アラニル-アルギニナール(6-ヘキサノイル-アミノメチル
化ポリスチレン樹脂)サイクロールのカルバメート類似体； ベンジルスルホンアミド-7Lactam-Gly-Nδ-Alloc-アルギニルシクロ-O-6-ヒドロ
キシヘキサノイル-アミノメチル化ポリスチレン； ベンジルスルホンアミド-7Lactam-Gly-アルギニルシクロ-O-6-ヒドロキシルヘキ
サノイル-アミノメチル化ポリスチレン； N-α-Alloc- Nδ-PMC-アルギニルシクロ-O-エチル-6-ヒドロキシルヘキサノエー
ト； N-α-Alloc- Nδ-PMC-アルギニルシクロ-O-6-ヒドロキシルヘキサノエート； N-α-Alloc- Nδ-PMC-アルギニルシクロ-O-6-ヒドロキシルヘキサノイル-アミノ
メチル化ポリスチレン樹脂； Nd-PMC-アルギニルシクロ-O-6-ヒドロキシヘキサノイル-アミノメチル化ポリス
チレン樹脂；及び ベンジルスルホンアミド-dArg(NO2)-サルコシン-Gly- Nδ-PMC-アルギニルシク
ロ-O-6-ヒドロキシヘキサノイルアミノメチル化ポリスチレン樹脂。Thus, a product selected from any of the following can be produced according to this aspect of the method of the present invention. N-α-butoxycarbonyl-N g -nitro-argininal (6-hexanoic acid ethyl ester) cyclol; N-α-t-butoxycarbonyl-argininal (6-hexanoic acid ethyl ester) cyclol, acetate; N- α-t-butoxycarbonyl-N-omega-allyloxycarbonyl-arginal (6-
Hexanoic acid ethyl ester) cyclol; N-α-t-butoxycarbonyl-N-δ-Alloc-N-α-t-butoxycarbonyl-N-omega-
Allyloxycarbonyl-arginal (6-hexanoic acid) cyclol; N-α-t-butoxycarbonyl-N-omega-allyloxycarbonyl-arginal (6-
Hexanoyl-aminomethylated polystyrene resin) cyclol; N δ -Alloc-arginylcyclo-O-6-hydroxyhexanoyl-aminomethylated polystyrene; N-omega-allyloxycarbonyl-argininal (6-hexanoyl-aminomethylated polystyrene resin) ) Cyclol; N-α-Fmoc-alanyl-N-omega-allyloxycarbonyl-argininal- (6-hexanoyl-aminomethylated polystyrene resin) cyclol; alanyl-N-omega-allyloxycarbonyl-arginal (6-hexanoyl N-α-Fmoc-D-seryl (Ot-butyl) -alanyl-N-omega-allyloxycarbonyl-argininal (6-hexanoyl-aminomethylated polystyrene resin) cyclol; D-seryl (Ot-butyl) -alanyl-N-omega-allyloxycarbonyl- Argininal (6-hexanoyl-aminomethylated polystyrene resin) cyclol; carbamate of D-seryl (Ot-butyl) -alanyl-N-omega-allyloxycarbonyl-argininal (6-hexanoyl-aminomethylated polystyrene resin) cyclol Analogs; isobutyloxycarbonyl-D-seryl (Ot-butyl) -alanyl-Nd-allyloxycarbonyl-argininal (6-hexanoyl-aminomethylated polystyrene resin) cyclol; D-seryl (Ot-butyl) -alanyl- Arugininaru (6-hexanoyl - aminomethylated polystyrene resin) carbamate analogs of recrawling; benzylsulfonamide -7Lactam-Gly-N δ -Alloc- Aruginirushikuro -O-6-hydroxy-hexanoyl - aminomethylated polystyrene; benzyl sulfonamide -7Lactam-Gly-arginylcyclo-O-6-hydroxy Hexanoyl - aminomethylated polystyrene; N-α-Alloc- N δ -PMC- Aruginirushikuro -O- ethyl-6-hydroxy hexanoate; N-α-Alloc- N δ -PMC- Aruginirushikuro -O-6- hydroxyl hexa Noeto; N-α-Alloc- N δ -PMC- Aruginirushikuro -O-6- hydroxy-hexanoyl - aminomethylated polystyrene resin; N d -PMC- Aruginirushikuro -O-6- hydroxy-hexanoyl - aminomethylated polystyrene resin ; and benzyl sulfonamide -dArg (NO 2) - sarcosine -Gly- N δ -PMC- Aruginirushikuro -O-6- hydroxy-hexanoyl aminomethylated polystyrene resin.
【００６４】（B）コンビナトリアル化学 本発明の固相支持体及びリンカーはコンビナトリアル化学の分野及びケミカル
ライブラリーの開発に有用である。次の開示を参照し、本発明の範囲内での好ま
しい方法が次のP1、特にアルギニナールの位置にアルデヒド有するコンビナトリ
アルライブラリーの開発に結びつくことが理解されると思われる。 P4-P3-P2-P1 (B) Combinatorial Chemistry The solid supports and linkers of the present invention are useful in the field of combinatorial chemistry and in the development of chemical libraries. With reference to the following disclosure, it will be appreciated that the preferred method within the scope of the present invention will lead to the development of a combinatorial library having an aldehyde at the next P 1 , especially at the argininal position. P 4 -P 3 -P 2 -P 1
【００６５】 当業者は四つの残基を有する分子が示される一方で、必要な回数のカップリン
グ段階を繰り返すこの本方法に従い、所望の長さのペプチドまたはペプチド類似
体を調製できることを認識すると思われる。本発明の局面に従えば、P4、P3及び
P2残基が変化し、例えばペプチド及びペプチド模倣体P1アルデヒドに取り込まれ
る一方、P1残基が一定であるライブラリ−が設計される。本発明の新規な樹脂を
用い、平行して複数の反応が行われる。本明細書に開示されるように、リンカー
を有する樹脂上にまずP1部位を取込み、P4、P3及びP2残基の変化させ、これによ
りプロテアーゼ阻害剤アッセイ法を含む、多くのインビトロまたはインビボアッ
セイ系のいずれかでの構造-活性解析に使用できるペプチドまたはペプチド模倣
化合物のライブラリーが形成される。One skilled in the art will recognize that while a molecule having four residues is shown, a peptide or peptide analog of a desired length can be prepared according to this method of repeating the required number of coupling steps. It is. According to aspects of the present invention, P 4 , P 3 and
P 2 residues is changed, for example, one incorporated into peptides and peptidomimetics P 1 aldehyde, a is the library the P 1 residue is constant - it is designed. Multiple reactions are performed in parallel using the novel resin of the present invention. As disclosed herein, the first P 1 sites on the resin with a linker uptake, changing of P 4, P 3 and P 2 residues, thereby containing protease inhibitor assay, many in vitro Alternatively, a library of peptides or peptidomimetic compounds is formed that can be used for structure-activity analysis in either in vivo assay systems.
【００６６】 当業者に理解されるように、ライブラリーの作製及び平行的合成のこの工程は
、多くの既知の形式で実行できる。一つの態様においては、合成をワットマンミ
ニカラム（Whatman mini column）等の中で行い、当技術分野で周知の標準的な
ペプチド合成方法を用いてペプチド鎖を伸張し、付加されたそれぞれの残基のカ
ルボキシル末端で、個々に結果として得られるカップリングが達成される。合成
後、複数のペプチド変異体を樹脂から開裂し、単離し、生物学的活性を試験する
。同様に、本発明において誘導された樹脂を用いて、ペプチドまたはペプチド類
似体のライブラリーの自動合成を市販のペプチド合成機により行うこともできる
。As will be appreciated by those skilled in the art, this step of library generation and parallel synthesis can be performed in many known formats. In one embodiment, the synthesis is performed in a Whatman mini column or the like, the peptide chain is extended using standard peptide synthesis methods well known in the art, and each added residue is At the carboxyl terminus, individually the resulting coupling is achieved. After synthesis, multiple peptide variants are cleaved from the resin, isolated and tested for biological activity. Similarly, using the resin derived in the present invention, automatic synthesis of a library of peptides or peptide analogs can be performed by a commercially available peptide synthesizer.
【００６７】 従って、本発明のこの局面は以下の段階を有するペプチドまたはペプチド類似
体のライブラリーの製造方法を示す： （a）本明細書に開示するように、それぞれの一連の個々の容器または反応容器
内で、アルデヒドをリンカーの遊離ヒドロキシルに酸性状況下で接触させる段階
； （b）段階（a）の生成物を加水分解し、リンカーの末端に遊離カルボン酸基を形
成する段階； （c）段階（b）の生成物を少なとも一つの官能性アミノ基を有する樹脂と接触さ
せ、アミド結合を形成させ、それによりリンカーでこの樹脂と結合したP1残基と
してアルデヒドを固定する段階； （d）それぞれの一連の個々の容器または反応容器内で、それぞれの一連の個々
の容器または反応容器内で、同じまたは異なる一連のP2残基を製造することがで
きるようにペプチド結合の形成を可能にする状況下で、異なったアミノ酸残基ま
たはアミノ酸類似体残基を固定化されたアルデヒドに接触させる段階；ならびに
（e）成長するペプチド鎖またはペプチド類似体鎖に存在する反応基の保護およ
び脱保護の適切な中間的段階を伴う、所望の数の残基のペプチドまたはペプチド
類似体を製造するために、段階（d）を必要な回数反復する段階。Thus, this aspect of the invention provides a method of producing a library of peptides or peptide analogs having the following steps: (a) as disclosed herein, each series of individual containers or Contacting the aldehyde with the free hydroxyl of the linker in the reaction vessel under acidic conditions; (b) hydrolyzing the product of step (a) to form a free carboxylic acid group at the end of the linker; (c ) step into contact with the step (b) a resin having a small with one functional amino group of the product, to form an amide bond, thereby fixing the aldehyde as the P 1 residue bound to the resin with linker; (d) at each of a series of individual vessels or reaction vessel, each of a series of individual vessels or reaction vessel, it is possible to produce the same or a different set of P 2 residues Contacting the different amino acid residues or amino acid analog residues with the immobilized aldehyde under conditions that allow for the formation of peptide bonds; and (e) adding the growing peptide or peptide analog chains Repeating step (d) as many times as necessary to produce a peptide or peptide analog of the desired number of residues, with appropriate intermediate steps of protection and deprotection of the reactive groups present.
【００６８】 標準的なペプチド合成方法を本工程に使用し、アルデヒド-リンカー-樹脂結合
の最初の形成が可能である。その後樹脂から開裂させ、P1残基として最初のアル
デヒドを有するペプチドまたはペプチド類似体の合成ライブラリーを精製し、そ
の生物学的活性を試験することが可能である。Using the standard peptide synthesis method for this step, the initial formation of the aldehyde-linker-resin bond is possible. Was then cleaved from the resin, purified synthetic library of peptides or peptide analogs with first aldehyde as the P 1 residue, it is possible to test the biological activity.
【００６９】C. 開裂条件 本発明の方法に従い調製されたペプチドアルデヒドまたはペプチドアルデヒド
類似体の標準的な開裂方法は好ましくない。例えばHF；TFA；TFA：H2O（例えば9
：1）；TFA：DCM：H2O（例えば5：4：1）での処理を含む標準的な開裂条件は使
用可能である一方、環状アルギニナール互変異性体の分子結合的環状脱水付加物
への変換等の、アルデヒド部分の脱水により、最適収量よりも低くなる結果とな
る。セリン残基の脱水も標準的な開裂条件で起る可能性があり、これも望ましく
ない。従って本発明者らは、予期せず、約6：3：1のTFA：DCM：H2Oの混合物での
2時間の処理を含むように開裂条件を最適化し、最適収量を得た。時間やTFA、DC
MもしくはH2Oの比、または類似の特性を有する溶媒や酸の使用におけるマイナー
な変化等の、これらの条件の変化は、本発明のこの局面の範囲内である。 C. Cleavage Conditions Standard methods for cleavage of peptide aldehydes or peptide aldehyde analogs prepared according to the methods of the invention are not preferred. For example, HF; TFA; TFA: H 2 O (eg, 9
Standard cleavage conditions including treatment with TFA: DCM: H 2 O (eg, 5: 4: 1) can be used, while molecularly bound cyclic dehydration adducts of cyclic argininal tautomers are available. Dehydration of the aldehyde moiety, such as conversion to, results in lower than optimal yields. Dehydration of serine residues can also occur under standard cleavage conditions, which is also undesirable. Thus, we unexpectedly found that about 6: 3: 1 of a mixture of TFA: DCM: H 2 O
The cleavage conditions were optimized to include a 2 hour treatment to obtain the optimal yield. Time, TFA, DC
Changes in these conditions, such as the ratio of M or H 2 O, or minor changes in the use of solvents or acids with similar properties, are within the scope of this aspect of the invention.
【００７０】4. 特定の例示的な支持体 好ましい態様に関して本発明を一般的に記述しながら、次に特定の例示的な開
示を提供する。 4. Specific Exemplary Supports While describing the invention generally with respect to preferred embodiments, certain exemplary disclosures are now provided.
【００７１】 特に記述のない限り、次の実施例で使用した全ての材料は容易に市販元から購
入することができる。Unless otherwise stated, all materials used in the following examples can be readily purchased from commercial sources.
【００７２】実施例1 N-α-t-ブトキシカルボニル-Ng-ニトロアルギニニル-N-メトキシ-N-メチルアミ
ドの調製 Example 1 N-α-t-butoxycarbonyl-N g -nitroargininyl-N-methoxy-N-methylamido
Preparation of
【化２】 4-メチルモルホリン（41.2 g、407 mmol、1.3当量）を無水アセトニトリル（5
23 ml）を溶媒とするN-α-t-ブトキシカルボニル-Ng-ニトロアルギニン（100g、
313 mmol）、塩酸N,O-ジメチルヒドロキシルアミン（61.2g、626 mmol、2当量）
、EDC（77.9 g、407 mmol、1.3当量）、及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（
55.1 g、407 mmol、1.3当量）の溶液に添加した。反応液を室温で16時間攪拌し
、真空で溶媒を除去した。残渣は酢酸エチル及び水により分離させた。水相を酢
酸エチル（2X）で再度抽出した。合わせた有機相は1Nの塩酸（1X）、水（1X）、
飽和重炭酸ナトリウム（1X）、水（1X）で洗浄し、その後乾燥させ（硫酸マグネ
シウム）、濾過し、真空で濃縮した。表記の化合物を白色の発泡体として78％質
量回収率で得、それ以上精製することなしに使用した。生成物のTLCは充分な純
度であった。Rf=0.21（10%メタノール/ジクロロメタン）。 Embedded image 4-Methylmorpholine (41.2 g, 407 mmol, 1.3 equivalents) was added to anhydrous acetonitrile (5
N-α-t-butoxycarbonyl-N g -nitroarginine (100 g,
313 mmol), N, O-dimethylhydroxylamine hydrochloride (61.2 g, 626 mmol, 2 equivalents)
, EDC (77.9 g, 407 mmol, 1.3 equivalents), and 1-hydroxybenzotriazole (
55.1 g, 407 mmol, 1.3 eq.). The reaction was stirred at room temperature for 16 hours and the solvent was removed in vacuo. The residue was separated with ethyl acetate and water. The aqueous phase was extracted again with ethyl acetate (2X). The combined organic phases are 1N hydrochloric acid (1X), water (1X),
Washed with saturated sodium bicarbonate (1 ×), water (1 ×), then dried (magnesium sulfate), filtered and concentrated in vacuo. The title compound was obtained as a white foam at 78% mass recovery and used without further purification. The TLC of the product was of sufficient purity. Rf = 0.21 (10% methanol / dichloromethane).
【００７３】実施例2 N-α-t-ブトキシカルボニル-Ng-ニトロ-アルギニナールの調製 Example 2 Preparation of N-α-t-butoxycarbonyl-N g -nitro-argininal
【化３】 1リットル三つ口丸底フラスコ内の無水テトラヒドロフラン（300ml）を溶媒と
する実施例1の化合物（25 g、68.9 mmol、1当量）の溶液に、1M水素化リチウム
アルミニウム/テトラヒドロフラン（100ml、1.45 equv.）をマイナス78度で30分
間窒素雰囲気下で滴下しながら添加した。反応液をマイナス78度で1時間攪拌し
ながら放置し、その後室温で20〜30分攪拌した。濃厚な泥状物が観察された。Embedded image To a solution of the compound of Example 1 (25 g, 68.9 mmol, 1 equivalent) in anhydrous 1-liter three-neck round bottom flask using anhydrous tetrahydrofuran (300 ml) as a solvent, 1M lithium aluminum hydride / tetrahydrofuran (100 ml, 1.45 equv) .) Was added dropwise at -78 degrees under a nitrogen atmosphere for 30 minutes. The reaction was allowed to stir at −78 ° C. for 1 hour and then at room temperature for 20-30 minutes. Thick mud was observed.
【００７４】 反応混合液をマイナス78度で再度冷却し、2Mの重硫酸カリウム（100 mL）でゆ
っくりと反応を停止した。沈澱物を濾過しテトラヒドロフラン（200 mL）で洗浄
した。混合濾過物を真空で凝縮させた。粗残渣を酢酸エチル及び水で分離させた
。有機相を0.5 Nの塩酸、飽和重炭酸ナトリウム及び食塩水で洗浄した。残渣を
硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過した。濾過物を蒸留させ、白色の固体として
15.9gの生成物（収率76％）を得た。Rf=0.13（50%ヘキサン/酢酸エチル）。所望
の生成物はTLCにより純粋であると判定された。 The reaction mixture was cooled again at −78 ° C. and quenched slowly with 2M potassium bisulfate (100 mL). The precipitate was filtered and washed with tetrahydrofuran (200 mL). The combined filtrate was condensed in vacuo. The crude residue was separated with ethyl acetate and water. The organic phase was washed with 0.5N hydrochloric acid, saturated sodium bicarbonate and brine. The residue was dried over magnesium sulfate and filtered. Distill the filtrate to a white solid
15.9 g of product (76% yield) was obtained. Rf = 0.13 (50% hexane / ethyl acetate). The desired product was determined to be pure by TLC.
【００７５】 または、表記の化合物は先の米国特許第 5,731,413号の実施例2の方法に従い
調製することもできる。Alternatively, the title compound can be prepared according to the method of Example 2 of the aforementioned US Pat. No. 5,731,413.
【００７６】実施例3 N-α-t-ブトキシカルボニル-Ng-ニトロ-アルギニナール（6-ヘキサン酸エチルエ
ステル）サイクロール調製 Example 3 N-α-t-butoxycarbonyl-N g -nitro-argininal (ethyl 6-hexanoate
Stele) cyclol preparation
【化４】 アセトニトリル（20 ml）を溶媒とする実施例2の化合物（32.7 g、107.9 mmol
、1当量）及びエチル-6-ヒドロキシルヘキサノエート（86.5 g、539.6 mmol、5
当量）の攪拌した溶液に3Nの塩酸（260μl）を添加した。15分間室温で保持する
と、全ての反応物は溶液となった。24時間混合液を撹拌し、少量のアリコートを
TLC及びマススペクトロメトリーにかけ、反応の進展を確認した。その後無水酢
酸（55.1 g、539.6 mmol、5 当量）及びピリジン（42.7 g、539.6 mmol、5 当量
）を反応液に加え、過剰なヒドロキシエステル-リンカーをキャップした。反応
を一晩行った。残渣を蒸発させた。残渣を酢酸エチル中に取り出し、1Nの塩酸（
1X）、水（1X）、飽和重炭酸ナトリウム（1X）、水（1X）で洗浄、乾燥 (硫酸マ
グネシウム)、濾過、および濃縮した。残渣をシリカゲルのフラッシュクロマト
グラフィーで、25〜33%ヘキサン/酢酸エチル勾配を用いて精製し、強粘性油とし
て45g（収率93.7％）の生成物を得た。Rf=0.24（50%ヘキサン/酢酸エチル）。 Embedded image Compound of Example 2 using acetonitrile (20 ml) as a solvent (32.7 g, 107.9 mmol)
, 1 equivalent) and ethyl-6-hydroxyhexanoate (86.5 g, 539.6 mmol, 5
3N hydrochloric acid (260 μl) was added to the stirred solution. After holding at room temperature for 15 minutes, all reactants went into solution. Stir the mixture for 24 hours and remove small aliquots
The progress of the reaction was confirmed by TLC and mass spectrometry. Then acetic anhydride (55.1 g, 539.6 mmol, 5 eq) and pyridine (42.7 g, 539.6 mmol, 5 eq) were added to the reaction and excess hydroxyester-linker was capped. The reaction was performed overnight. The residue was evaporated. The residue is taken up in ethyl acetate and 1N hydrochloric acid (
1 ×), water (1 ×), saturated sodium bicarbonate (1 ×), water (1 ×), dried (magnesium sulfate), filtered, and concentrated. The residue was purified by flash chromatography on silica gel using a 25-33% hexane / ethyl acetate gradient to give 45 g (93.7% yield) of the product as a viscous oil. Rf = 0.24 (50% hexane / ethyl acetate).
【００７７】実施例4 N-α-t-ブトキシカルボニル-アルギニナール（6-ヘキサン酸エチルエステル）サ
イクロール酢酸塩の調製 Example 4 N-α-t-butoxycarbonyl-argininal (6-hexanoic acid ethyl ester)
Preparation of icrol acetate
【化５】 エタノール/水/酢酸（4：1：1）（200 mL）を溶媒とする実施例3の化合物（45
.8 g、103.0 mmol、1当量）の溶液に炭素上の10%パラジウム（9.2g、20%重量）
を添加した。混合液を16時間40psiで水素化した。反応液を濾過し、濾過物を真
空で蒸発させた。残渣を水中で回収し、エタノール（3X）で洗浄した。有機相を
水（1X）で再抽出した。水相を合わせて、凍結乾燥させ、44.7 gの生成物を得た
（収率94.4%）。Rf=0.18（ジクロロメタン/メタノール/濃縮水酸化アンモニウム
; 25：5：1）。 Embedded image Compound (45) of Example 3 using ethanol / water / acetic acid (4: 1: 1) (200 mL) as a solvent.
.8 g, 103.0 mmol, 1 equivalent) in a solution of 10% palladium on carbon (9.2 g, 20% weight)
Was added. The mixture was hydrogenated at 40 psi for 16 hours. The reaction was filtered and the filtrate was evaporated in vacuo. The residue was collected in water and washed with ethanol (3X). The organic phase was re-extracted with water (1X). The aqueous phases were combined and lyophilized to give 44.7 g of the product (94.4% yield). Rf = 0.18 (dichloromethane / methanol / concentrated ammonium hydroxide
25: 5: 1).
【００７８】実施例5 N-α-t-ブトキシカルボニル-N-オメガ-アリルオキシカルボニル-アルギニナール
（6-ヘキサン酸エチルエステル）サイクロールの調製 Example 5 N-α-t-butoxycarbonyl-N-omega-allyloxycarbonyl-argininal
Preparation of (6-hexanoic acid ethyl ester) cyclol
【化６】 0℃のジクロロメタン（292 mL）中に懸濁した実施例3の化合物（44.7 g、97.3
mmol、1当量）に1Nの水酸化ナトリウム溶液（291.9 mL、291.9 mmol、3当量）
を数回に分けて加え、pH11〜13に保った。アリルクロロホルメート（15.3 g、12
6.5 ml、1.3当量）を反応液に3回に分けて添加した。TCL及びMSで反応を1時間モ
ニターした後、混合液をジクロロメタン（3X）で抽出し、乾燥（硫酸マグネシウ
ム）、濾過、および蒸発させた。粗残渣は、シリカゲルのフラッシュクロマトグ
ラフィーで、溶媒としてヘキサン及び酢酸エチルを用い直ちに精製した。強粘性
油として、41.5 g（収率88.0%）の生成物を得た。Rf=0.30（50%ヘキサン/酢酸エ
チル）。 Embedded image Compound of Example 3 (44.7 g, 97.3) suspended in dichloromethane (292 mL) at 0 ° C.
mmol, 1 eq) in 1N sodium hydroxide solution (291.9 mL, 291.9 mmol, 3 eq)
Was added in several portions and kept at pH 11-13. Allyl chloroformate (15.3 g, 12
6.5 ml, 1.3 equivalents) was added to the reaction in three portions. After monitoring the reaction for 1 hour with TCL and MS, the mixture was extracted with dichloromethane (3X), dried (magnesium sulfate), filtered and evaporated. The crude residue was purified immediately by flash chromatography on silica gel using hexane and ethyl acetate as solvents. 41.5 g (88.0% yield) of the product was obtained as a highly viscous oil. Rf = 0.30 (50% hexane / ethyl acetate).
【００７９】実施例6 N-α-t-ブトキシカルボニル-N-δ-Alloc-N-α-t-ブトキシカルボニル-N-オメガ-
アリルオキシカルボニル-アルギニナール（6-ヘキサン酸）サイクロールの調製 Example 6 N-α-t-butoxycarbonyl-N-δ-Alloc-N-α-t-butoxycarbonyl-N-omega-
Preparation of allyloxycarbonyl-argininal (6-hexanoic acid) cyclol
【化７】 エタノール（83.2 ml）を溶媒とする実施例5の化合物（40.3 g、83.2 mmol）
の溶液に3Nの水酸化リチウム（55.5 ml、166.4 mmol、2当量）を添加した。反応
液を室温で2時間半撹拌し、真空で濃縮した。残渣を水に溶解しエーテル（3X）
で洗浄した。水相を1Nの塩酸でpH2〜3に酸性化させ、ジクロロメタンを用いて抽
出した。溶液を乾燥（硫酸マグネシウム）、濾過、および蒸発させ、白色のガラ
ス状の発泡物として31.5 g（収率83.0%）の生成物を得た。Rf=0.33（酢酸エチル
）。 Embedded image Compound of Example 5 using ethanol (83.2 ml) as a solvent (40.3 g, 83.2 mmol)
To the solution of was added 3N lithium hydroxide (55.5 ml, 166.4 mmol, 2 equiv). The reaction was stirred at room temperature for 2.5 hours and concentrated in vacuo. Dissolve the residue in water and ether (3X)
And washed. The aqueous phase was acidified to pH 2-3 with 1N hydrochloric acid and extracted with dichloromethane. The solution was dried (magnesium sulfate), filtered, and evaporated to give 31.5 g (83.0% yield) of the product as a white glassy foam. Rf = 0.33 (ethyl acetate).
【００８０】実施例7 N-α-t-ブトキシカルボニル-N-オメガ-アリルオキシカルボニル-アルギニナール
（6-ヘキサノイル-アミノメチル化ポリスチレン樹脂）サイクロールの調製 Example 7 N-α-t-butoxycarbonyl-N-omega-allyloxycarbonyl-argininal
Preparation of (6-hexanoyl-aminomethylated polystyrene resin) cyclol
【化８】 アミノメチル化ポリスチレン樹脂（22.6 g、26.2 mmol、1当量）に、室温でジ
メチルホルムアミド（214 mL）を溶媒とする実施例6の化合物（15.5 g、34.0 mm
ol、1.3当量）及びPyBOP（17.7 g、34.0 mmol、1.3当量）を添加し、続いてジイ
ソプロピルエチルアミン（4.4 g、34.0 mmol、1.3当量）を添加した。混合液を
ゆっくりと丸底フラスコ内で一晩撹拌した。大量のジクロロメタン及びメタノー
ルで樹脂を洗浄した。樹脂を真空で乾燥させ（3 mgの乾燥樹脂のサンプルをKais
er試験用に取り出した）、ジメチルホルムアミド/無水酢酸/トリエチルアミン（
8：1：1）を用い室温で30分間アセチル化した。再度樹脂を有機溶媒（ジクロロ
メタン及びメタノール）で連続して洗浄し、真空下で乾燥し、40.8 g（収率92.0
%重量）の生成物を得た。Kaiser試験（O.D. 99%共役）、樹脂置換（約0.75 mmol
/g）。Embedded image A compound of Example 6 (15.5 g, 34.0 mm) in dimethylformamide (214 mL) as a solvent was added to an aminomethylated polystyrene resin (22.6 g, 26.2 mmol, 1 equivalent) at room temperature.
ol, 1.3 eq) and PyBOP (17.7 g, 34.0 mmol, 1.3 eq) were added, followed by diisopropylethylamine (4.4 g, 34.0 mmol, 1.3 eq). The mixture was slowly stirred overnight in a round bottom flask. The resin was washed with copious amounts of dichloromethane and methanol. Dry the resin in vacuo (sample a 3 mg dry resin
er), dimethylformamide / acetic anhydride / triethylamine (
8: 1: 1) for 30 minutes at room temperature. The resin is again washed successively with organic solvents (dichloromethane and methanol), dried under vacuum and 40.8 g (yield 92.0 g).
% Product). Kaiser test (OD 99% conjugate), resin substitution (about 0.75 mmol)
/ g).
【００８１】実施例8 Nδ-Alloc-アルギニルシクロ-O-6-ヒドロキシルヘキサノイル-アミノメチル化ポ
リスチレンの調製 Example 8 N δ -Alloc-arginylcyclo-O-6-hydroxyhexanoyl-aminomethylated
Preparation of polystyrene
【化９】 DCM/TFA/チオアニソール（6：3：1）（5 mL）溶液を実施例7の樹脂（200 g、0
.15 mmol、1当量）に添加した。混合物を室温で25分間、丸底フラスコ内で気体
窒素の気泡と共にゆっくりと撹拌した。反応物を樹脂から排水させ、脱保護した
樹脂をDCM（2X）、DCM/DIEA（2X）、DCM（2X） で連続的に洗浄し、または有機
溶媒（塩化メチレン及びメタノール）で洗浄した。その結果得られた表記の樹脂
を真空乾燥させた。Kaiser試験（溶液及びビーズ；濃紺）、樹脂置換（0.81 mmo
l/g）Embedded image A solution of DCM / TFA / thioanisole (6: 3: 1) (5 mL) was added to the resin of Example 7 (200 g, 0 g).
.15 mmol, 1 equivalent). The mixture was slowly stirred at room temperature for 25 minutes in a round bottom flask with gaseous nitrogen bubbles. The reaction was drained from the resin and the deprotected resin was washed successively with DCM (2X), DCM / DIEA (2X), DCM (2X) or with organic solvents (methylene chloride and methanol). The resulting resin indicated was vacuum dried. Kaiser test (solution and beads; dark blue), resin substitution (0.81 mmo)
l / g)
【００８２】実施例9 イソブチルオキシカルボニル-D-セリル-L-アラニル-アルギニナール（化合物1）
の固相合成 本実施例は、実施例7の樹脂を使用し、ウロキナーゼ阻害剤活性を有するアル
ギニンアルデヒドの固相合成の一般的な方法を示す。本実施例の方法を用い、各
々のメンバーがアルギニンアルデヒドを有するが、それぞれ一つまたは複数の置
換基が異なる、化合物のライブラリーを合成するためにも使用された。 Example 9 Isobutyloxycarbonyl-D-seryl-L-alanyl-argininal (Compound 1)
Solid Phase Synthesis embodiment of uses resin of Example 7 shows a general method solid phase synthesis of arginine aldehydes having urokinase inhibitory activity. Using the method of this example, it was also used to synthesize a library of compounds, each member having arginine aldehyde but each differing in one or more substituents.
【００８３】段階1：N-オメガ-アリルオキシカルボニル-アルギニナール（6-ヘキサノイル-ア
ミノメチル化ポリスチレン樹脂）シクロールの調製 2.0 gの実施例7の化合物（0.6〜0.7meq/g 置換）とジクロメタン（12mL）、ト
リフルオロ酢酸（6 mL）及びチオアニソール（2 mL）の混合液とを60 mL固相反
応容器に添加した。気体窒素を15分間通気させた。反応物を樹脂から排水させ、
ジクロロメタン（2X20 mL）、ジイソプロピルエチレンアミン（20 mL）、ジクロ
ロメタン（2X20 mL）、ジイソプロピルエチレンアミン（20 mL）、ジクロロメタ
ン（2X20 mL）、及びヂエチルエーテル（2X20 mL）で遂次洗浄した。表記の化合
物を真空下で貯蔵した。樹脂のニンヒドリン試験を行ったところ、t-ブトキシカ
ルボニル基の除去により生成した遊離アミンの特徴である濃紺色を示した。 Step 1: N-omega-allyloxycarbonyl-argininal (6-hexanoyl-a
Preparation of minomethylated polystyrene resin) cyclol 2.0 g of the compound of Example 7 (0.6-0.7 meq / g substitution) was mixed with a mixture of dichloromethane (12 mL), trifluoroacetic acid (6 mL) and thioanisole (2 mL). It was added to a 60 mL solid phase reaction vessel. Gaseous nitrogen was bubbled in for 15 minutes. Allow the reactants to drain from the resin,
It was successively washed with dichloromethane (2X20 mL), diisopropylethyleneamine (20 mL), dichloromethane (2X20 mL), diisopropylethyleneamine (20 mL), dichloromethane (2X20 mL), and ethyl ether (2X20 mL). The title compound was stored under vacuum. A ninhydrin test of the resin showed a dark blue color which was characteristic of the free amine formed by removal of the t-butoxycarbonyl group.
【００８４】段階2：N-α-Fmoc-アラニル-N-オメガ-アリルオキシカルボニル-アルギニナール
（6-ヘキサノイル-アミノメチル化ポリスチレン樹脂）サイクロールの調製 ジメチルホルムアミド（15〜20mL）を溶媒として、Fmocアラニン（1 g、3.2 m
mol）、1-ヒドロキシベンゾトリアゾール（0.5 g、3.2 mmol）、TBTU（1.024 g
、3.2 mmol）及びジイソプロピルエチルアミン（600 μl、3.4 mmol）を添加し
た固相反応容器に、段階1の化合物（2.1 g）を加えた。室温で2時間リアクター
内に気体窒素を通気させた。試薬を樹脂から排水させ、樹脂をジメチルホルムア
ミド（2X20 mL）、ジクロロメタン（2X20 mL）、ジメチルホルムアミド（2X 20
mL）、ジクロロメタン（2X20 mL）、及びジエチルエーテル（2X20 mL）で遂次洗
浄した。樹脂を真空乾燥させ、その少量のアリコートを用いてニンヒドリン色素
分析を行ったところ、表記の化合物の生産において99.5%の共役効率を示した。 Step 2: N-α-Fmoc-alanyl-N-omega-allyloxycarbonyl-argininal
(6-Hexanoyl-aminomethylated polystyrene resin) Preparation of cyclol Using dimethylformamide (15 to 20 mL) as a solvent, Fmoc alanine (1 g, 3.2 m
mol), 1-hydroxybenzotriazole (0.5 g, 3.2 mmol), TBTU (1.024 g
, 3.2 mmol) and diisopropylethylamine (600 μl, 3.4 mmol) were added to the solid phase reaction vessel with the compound of Step 1 (2.1 g). Gaseous nitrogen was bubbled through the reactor at room temperature for 2 hours. The reagent is drained from the resin and the resin is washed with dimethylformamide (2X20 mL), dichloromethane (2X20 mL), dimethylformamide (2X20 mL).
mL), dichloromethane (2X20 mL), and diethyl ether (2X20 mL). The resin was dried in vacuo and a small aliquot was used for ninhydrin dye analysis which showed a conjugation efficiency of 99.5% in producing the title compound.
【００８５】段階3：アラニル-N-オメガ-アリルオキシカルボニル-アルギニナール（6-ヘキサ
ノイル-アミノメチル化ポリスチレン樹脂）サイクロールの調製 ジメチルホルムアミド中（20 mL）50%ピペリジンで段階2の化合物を30分間室
温で気体窒素で撹拌しながら処理した。樹脂を上記のように洗浄し、真空乾燥を
行い、表記の化合物を得た。その少量のアリコートを用いてニンヒドリン色素分
析を行ったところ、濃紺の樹脂及び溶液が得られ、高収率の脱保護が示された。 Step 3: Alanyl-N-omega-allyloxycarbonyl-argininal (6-hexa
Preparation of Noyl-Aminomethylated Polystyrene Resin) Cyclel The compound of Step 2 was treated with 50% piperidine in dimethylformamide (20 mL) for 30 minutes at room temperature with stirring with gaseous nitrogen. The resin was washed as above and vacuum dried to give the title compound. Ninhydrin dye analysis was performed using the small aliquots and resulted in a dark blue resin and solution, demonstrating high yield deprotection.
【００８６】段階4： N-α-Fmoc-D-セリル（O-t-ブチル）-アラニル-N-オメガ-アリルオキシ
カルボニル-アルギニナール（6-ヘキサノイル-アミノメチル化ポリスチレン樹脂
）サイクロール 段階3の化合物（100mg）をKan（登録商標）反応容器（IRORI、San Diego、CA
）等の反応容器内に加えた。反応容器は、ジメチルホルムアミド（4 mL）、N-α
-Fmoc-D-セリン（O-t-ブチル）（184 mg、0.48 mmol）、1-ヒドロキシベンゾト
リアゾール（73 mg、0.48 mmol）、TBTU（154 mg、0.48 mmol）及びジイソプロ
ピルエチルアミン（84 μl、0.48 mmol）を含む20mLバイアル内に置いた。反応
容器を震盪テーブル上で3時間撹拌した。反応容器を排水させ、ジメチルホルム
アミド（2X3 mL）、ジクロロメタン（2X3 mL）、ジメチルホルムアミド（2X3 mL
）、ジクロロメタン（2X3 mL）、イソプロパノール（2X3 mL）、ジクロロメタン
（2X3 mL）、イソプロパノール（2X3 mL）、及びジエチルエーテル（2X3 mL）で
連続的に洗浄した。樹脂を真空乾燥させ表記の化合物を得た。 Step 4: N-α-Fmoc-D-seryl (Ot-butyl) -alanyl-N-omega-allyloxy
Carbonyl-argininal (6-hexanoyl-aminomethylated polystyrene resin
) Cyclol step 3 compound (100 mg) was added to a Kan® reaction vessel (IRORI, San Diego, CA).
) And the like. The reaction vessel is dimethylformamide (4 mL), N-α
-Fmoc-D-serine (Ot-butyl) (184 mg, 0.48 mmol), 1-hydroxybenzotriazole (73 mg, 0.48 mmol), TBTU (154 mg, 0.48 mmol) and diisopropylethylamine (84 μl, 0.48 mmol) Was placed in a 20 mL vial containing The reaction vessel was stirred on a shaking table for 3 hours. Drain the reaction vessel, dimethylformamide (2X3 mL), dichloromethane (2X3 mL), dimethylformamide (2X3 mL
), Dichloromethane (2X3 mL), isopropanol (2X3 mL), dichloromethane (2X3 mL), isopropanol (2X3 mL), and diethyl ether (2X3 mL). The resin was dried in vacuo to give the title compound.
【００８７】段階5： D-セリル（O-t-ブチル）-アラニル-N-オメガ-アリルオキシカルボニル-
アルギニナール（6-ヘキサノイル-アミノメチル化ポリスチレン樹脂）サイクロ
ール 段階4の化合物を含む反応容器を、震盪テーブル上で撹拌しながら室温で45分
間、20 mLバイアル中でジメチルホルムアミド（5ml）を溶媒とする50%ピペリジ
ンで処理した。樹脂を上記の通り洗浄し真空乾燥させ、段階5の化合物を得た。
その少量のアリコートを用いてニンヒドリンアッセイ法を行ったところ、濃紺の
樹脂及び溶液が得られ、高収率の脱保護が示された。 Step 5: D-seryl (Ot-butyl) -alanyl-N-omega-allyloxycarbonyl-
Argininal (6-hexanoyl-aminomethylated polystyrene resin) cyclo
The reaction vessel containing the compound of Step 4 was treated with 50% piperidine in dimethylformamide (5 ml) in a 20 mL vial at room temperature for 45 minutes with stirring on a shaking table. The resin was washed and dried in vacuo as described above to give the compound of Step 5.
The ninhydrin assay was performed using the small aliquots and resulted in a dark blue resin and solution, demonstrating high yield deprotection.
【００８８】段階6： D-セリル（O-t-ブチル）-アラニル-N-オメガ-アリルオキシカルボニル-
アルギニナール（6-ヘキサノイル-アミノメチル化ポリスチレン樹脂）サイクロ
ールのカルバメート類似体 段階5の化合物を含む反応容器を、ジメチルホルムアミド中（5〜10 mL）0.12M
イソブチルクロロホルメートを含む20 mLのバイアル内に置いた。ジイソプロピ
ルエチレンアミン（105〜210 μl、0.6〜1.2 mmol）を添加し、バイアルを2.5時
間震盪した。反応容器を排水し、ジメチルホルムアミド（2X3 mL）、ジクロロメ
タン（2X3 mL）、ジメチルホルムアミド（2X3 mL）、ジクロロメタン（2X3 mL）
、イソプロパノール（2X3 mL）、ジクロロメタン（2X3 mL）、イソプロパノール
（2X3 mL）、及びジエチルエーテル（2X3 mL）で連続的に洗浄した。イソブチル
オキシカルボニル-D-セリル（O-t-ブチル）-アラニル-N-d-アリルオキシカルボ
ニル-アルギニナール（6-ヘキサノイル-アミノメチル化ポリスチレン樹脂）サイ
クロールを含む反応容器を真空乾燥させた。 Step 6: D-seryl (Ot-butyl) -alanyl-N-omega-allyloxycarbonyl-
Argininal (6-hexanoyl-aminomethylated polystyrene resin) cyclo
The reaction vessel containing the carbamate analog Step 5 compound in 0.15 M dimethylformamide (5-10 mL)
Placed in a 20 mL vial containing isobutyl chloroformate. Diisopropylethyleneamine (105-210 μl, 0.6-1.2 mmol) was added and the vial was shaken for 2.5 hours. Drain the reaction vessel, dimethylformamide (2X3 mL), dichloromethane (2X3 mL), dimethylformamide (2X3 mL), dichloromethane (2X3 mL)
, Isopropanol (2X3 mL), dichloromethane (2X3 mL), isopropanol (2X3 mL), and diethyl ether (2X3 mL). The reaction vessel containing isobutyloxycarbonyl-D-seryl (Ot-butyl) -alanyl-Nd-allyloxycarbonyl-argininal (6-hexanoyl-aminomethylated polystyrene resin) cyclol was vacuum dried.
【００８９】 実施例9の方法を用いて関連する類似体のライブラリーを作製した際、関連す
る樹脂結合類似体を含む反応容器を、添加された様々な個々のクロロホルメート
を含む段階6の20mLのバイアルと組み合わせ、かつ次の段階7および段階8用に平
行して処理した。When a library of related analogs was made using the method of Example 9, the reaction vessel containing the relevant resin-bound analog was replaced with the various individual chloroformates added in step 6 Combined with 20 mL vials and processed in parallel for the next steps 7 and 8.
【００９０】段階7： D-セリル（O-t-ブチル）-アラニル-アルギニナール（6-ヘキサノイル-
アミノメチル化ポリスチレン樹脂）サイクロールのカルバメート類似体 関心対象の反応物液を含む、38の反応容器の回収物を250mLのポリプロピレン
瓶に入れ、メチルスルホキシド（10mL）、テトラヒドロフラン（10mL）、1Nの塩
酸（2.5mL）及びモルホリン（25mL）の混合液を添加し、段階5の生成物からアリ
ルオキシ保護基を除去した。テトラキストリフェニルホスフィンパラジウム（0.
87 g）を添加し、瓶を室温で4時間震盪した。イソブチルオキシカルボニル- D-
セリル（O-t-ブチル）-アラニル-アルギニナール（6-ヘキサノイル-アミノメチ
ル化ポリスチレン樹脂）サイクロールを含む反応容器を排水し、ジメチルホルム
アミド（2X3 mL）、ジクロロメタン（2X3 mL）、ジメチルホルムアミド（2X3 mL
）、ジクロロメタン（2X3 mL）、イソプロパノール（2X3 mL）、ジクロロメタン
（2X3 mL）、イソプロパノール（2X3 mL）、及びジエチルエーテル（2X3 mL）で
連続的に洗浄し、真空乾燥させて、表記の化合物を得た。 Step 7: D-seryl (Ot-butyl) -alanyl-argininal (6-hexanoyl-
Aminomethylated polystyrene resin) a carbamate analog of cyclol. Recover 38 reaction vessels containing the reactant liquid of interest in a 250 mL polypropylene bottle, add methylsulfoxide (10 mL), tetrahydrofuran (10 mL), 1N hydrochloric acid. (2.5 mL) and morpholine (25 mL) were added to remove the allyloxy protecting group from the product of Step 5. Tetrakistriphenylphosphine palladium (0.
87 g) was added and the bottle was shaken at room temperature for 4 hours. Isobutyloxycarbonyl-D-
Drain the reaction vessel containing ceryl (Ot-butyl) -alanyl-argininal (6-hexanoyl-aminomethylated polystyrene resin) cyclol, dimethylformamide (2X3 mL), dichloromethane (2X3 mL), dimethylformamide (2X3 mL
), Dichloromethane (2X3 mL), isopropanol (2X3 mL), dichloromethane (2X3 mL), isopropanol (2X3 mL), and diethyl ether (2X3 mL), and dried in vacuo to obtain the title compound. Was.
【００９１】段階8：イソブチルオキシカルボニル-D-セリル-アラニル-アルギニナール イソブチルオキシカルボニル- D-セリル（O-t-ブチル）-アラニル-アルギニナ
ール（6-ヘキサノイル-アミノメチル化ポリスチレン樹脂）サイクロールを含む
反応容器を、トリフルオロ酢酸/ジクロロメタン/水（6：3：1の混合液を1.5 mL
）を含むワットマンポリプロピレンミニカラムに移した。カラムを4時間室温で
震盪した。反応溶液を試験管へ排水し、樹脂をジクロロメタン及び水で洗浄した
。洗浄混合液及び反応混合液を同一の試験管に回収し、混合液を撹拌し、二相に
分離した。水相を除き、濾過した。表記の化合物を半分取逆相HPLCで精製し、凍
結乾燥させ、秤量し、HPLC及びマススペクトロメトリーで分析した。表記の化合
物はインビトロアッセイ法においてウロキナーゼ阻害活性を有することが示され
た。Step 8: Reaction vessel containing isobutyloxycarbonyl-D-seryl-alanyl- argininal isobutyloxycarbonyl-D-seryl (Ot-butyl) -alanyl-argininal (6-hexanoyl-aminomethylated polystyrene resin) cyclol To 1.5 mL of trifluoroacetic acid / dichloromethane / water (6: 3: 1 mixture)
) Was transferred to a Whatman polypropylene mini-column. The column was shaken for 4 hours at room temperature. The reaction solution was drained to a test tube, and the resin was washed with dichloromethane and water. The washing mixture and the reaction mixture were collected in the same test tube, and the mixture was stirred and separated into two phases. The aqueous phase was removed and filtered. The title compound was purified by semi-preparative reverse phase HPLC, lyophilized, weighed and analyzed by HPLC and mass spectrometry. The indicated compounds were shown to have urokinase inhibitory activity in in vitro assays.
【００９２】実施例10 ベンジルスルホンアミド-7Lactam-Gly-Nδ-Alloc-アルギニルシクロ-O-6-ヒドロ
キシヘキサノイル-アミノメチル化ポリスチレンの調製 [0092] Example 10 Benzyl sulfonamide -7Lactam-Gly-N δ -Alloc- Aruginirushikuro -O-6- hydro
Preparation of xyhexanoyl-aminomethylated polystyrene
【化１０】 DMF（2 mL）中において、実施例8の樹脂（180 mg、0.15 mmol、1当量）、ベン
ジルスルホンアミド-7Lactam-Gly-OH（65 mg、0.19 mmol、1.3当量；合成には米
国特許第5,703,208号の実施例27-31を参照）及びBOP（84.0 mg、0.19 mmol、1.3
当量）の混合物にDIEA（24.6 mg、0.19 mmol、1.3当量）を添加した。混合物を
室温で一晩、ワットマンポリプロピレンミニカラム内で撹拌した。樹脂を有機溶
媒（塩化メチレン及びメタノール）で洗浄し乾燥させた。 Kaiser試験（O.D. 99
.9%;溶液及びビーズ：透明）。理論上の収量（230mg）に基づいた樹脂置換（約0
.636 mmol/g）。Embedded image In DMF (2 mL), the resin of Example 8 (180 mg, 0.15 mmol, 1 eq.), Benzylsulfonamide-7Lactam-Gly-OH (65 mg, 0.19 mmol, 1.3 eq .; US Pat. No. 5,703,208 for synthesis) No. 27-31) and BOP (84.0 mg, 0.19 mmol, 1.3
DIEA (24.6 mg, 0.19 mmol, 1.3 eq) was added to the mixture. The mixture was stirred in a Whatman polypropylene mini column at room temperature overnight. The resin was washed with organic solvents (methylene chloride and methanol) and dried. Kaiser test (OD 99
.9%; solution and beads: clear). Resin displacement (about 0 mg) based on theoretical yield (230 mg)
.636 mmol / g).
【００９３】実施例11 ベンジルスルホンアミド-7Lactam-Gly-アルギニルシクロ-O-6-ヒドロキシヘキサ
ノイル-アミノメチル化ポリスチレンの調製 Example 11 Benzylsulfonamide-7 Lactam-Gly-arginylcyclo-O-6-hydroxyhexa
Preparation of Noyl-Aminomethylated Polystyrene
【化１１】 THF/DMSO/.5Nの塩酸/モルホリン（2：2：1：5）（1.5ml）の溶液へ実施例10の
樹脂（30 mg、0.019 mmol、1当量）及び（Ph3P)4Pd（10.2 mg、重量比34％）を
添加した。混合物をワットマンポリプロピレンミニカラム内で室温で3時間震盪
した。樹脂を有機溶媒（塩化メチレン及びメタノール）で洗浄し乾燥させた。論
理上の収量（28.3 mg）に基づいた、樹脂置換は0.672 mmol/g。Embedded image To a solution of THF / DMSO / 0.5N hydrochloric acid / morpholine (2: 2: 1: 5) (1.5 ml) to the resin of Example 10 (30 mg, 0.019 mmol, 1 eq) and (Ph 3 P) 4 Pd ( 10.2 mg, 34% by weight). The mixture was shaken in a Whatman polypropylene mini column at room temperature for 3 hours. The resin was washed with organic solvents (methylene chloride and methanol) and dried. Resin displacement 0.672 mmol / g based on theoretical yield (28.3 mg).
【００９４】実施例12 ベンジルスルホンアミド-7Lactam-Gly-アルギナルの調製 Example 12 Preparation of Benzylsulfonamide-7 Lactam-Gly-Arginal
【化１２】 TFA/水/DCM（5：1：4）（1.5 ml）の溶液を、ワットマンポリプロピレンミニ
カラム内で実施例11の樹脂（20 mg、0.013 mmol、1当量）に添加した。混合物を
室温にて2時間震盪機で震盪した。濾過物をSepakカラムで、水、0.1%アセトニト
リル、10,0から9,1勾配を用いて精製し、白色の粉末（綿毛状）として2.6g（収
率42.0％）の表記の生成物を得た。MS（M+H）=481.0、計算分子量=479.2Embedded image A solution of TFA / water / DCM (5: 1: 4) (1.5 ml) was added to the resin of Example 11 (20 mg, 0.013 mmol, 1 eq) in a Whatman polypropylene mini column. The mixture was shaken on a shaker at room temperature for 2 hours. The filtrate is purified on a Sepak column using water, 0.1% acetonitrile, gradient from 10.0 to 9.1 to give 2.6 g (42.0% yield) of the title product as a white powder (fluffy). Was. MS (M + H) = 481.0, calculated molecular weight = 479.2
【００９５】 HPLC保持、13.1、13.7及び14.0分（アルギナル誘導体の2サイクロール及び水
和物形態）；C185〜50%MeCN25分間、1.0mL/分。表記の化合物はインビトロアッ
セイ法においてトロンビン阻害活性を有することが示された。[0095] HPLC retention, (2 recrawled and hydrate forms of Aruginaru derivative) 13.1,13.7 and 14.0 min; C 18 5~50% MeCN25 min, 1.0 mL / min. The indicated compounds were shown to have thrombin inhibitory activity in in vitro assays.
【００９６】実施例13 N-α-Alloc-Nδ-PMC-アルギニンの調製 Example 13 Preparation of N-α-Alloc-N δ -PMC-arginine
【化１３】 0度のテトラヒドロフラン（250 ml）中に懸濁したNd-PMC-アルギニン（25.0 g
、56.7 mmol）へ1Nの水酸化ナトリウム（62.4 mL、62.4 mmol、1.1当量）を数回
に分けて加え、pH8〜9に保持した。アリルクロロホルメート（7.52 g、62.4 mmo
l、1.1当量）を10分間かけてゆっくりと加えた。添加終了後、反応液を室温で2
時間半撹拌した。溶媒を真空で除去した。残渣を酢酸エチル（100 mL）及び水（
150 mL）の間で分離した。水相は1Nの塩酸でpH=2〜3に酸性化し、酢酸エチル（2
X150 mL）で抽出した。合わせた抽出物を1Nの塩酸（1X200 mL）、水（1X200 mL
）で洗浄し無水硫化マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空下、一晩濃縮し、白
色の発泡体として、29.7 gの生成物（収率100%）を得た。TLC（シリカ；27、MC/
3M/1A）で純度を測定したところRf=0.3であった。 Embedded image 0 ° tetrahydrofuran (250 ml) N d -PMC- arginine suspended in (25.0 g
, 56.7 mmol) with 1N sodium hydroxide (62.4 mL, 62.4 mmol, 1.1 eq.) In several portions and maintained at pH 8-9. Allyl chloroformate (7.52 g, 62.4 mmo
l, 1.1 equivalents) was added slowly over 10 minutes. After the addition is complete, allow the reaction to
Stirred for half an hour. Solvent was removed in vacuo. The residue was washed with ethyl acetate (100 mL) and water (
150 mL). The aqueous phase was acidified with 1N hydrochloric acid to pH = 2-3, and ethyl acetate (2
X150 mL). Combine the extracts with 1N hydrochloric acid (1X200 mL), water (1X200 mL)
), Dried over anhydrous magnesium sulfide, filtered, and concentrated in vacuo overnight to give 29.7 g of the product (100% yield) as a white foam. TLC (silica; 27, MC /
When the purity was measured at 3M / 1A), Rf was 0.3.
【００９７】実施例14 N-α-Alloc-Nδ-PMC-アルギニン-N-メトキシ-N-メチルアミドの調製 [0097] Preparation Example 14 N-α-Alloc-N δ -PMC- arginine -N- methoxy -N- methylamide
【化１４】 アセトニトリル（150 mL）を溶媒とする実施例13の化合物（29.7 g、56.7 mmo
l）、塩酸N,O-ジメチルヒドロキシルアミン（11.1 g、113.4 mmmol、2.0当量）
、EDC（14.1 g、73.7 mmmol、1.3当量）及びHOBT（10.0 g、73.7 mmmol、1.3当
量）の溶液にN-メチルモルホリン（8.6 g、9.4 mL、85.1 mmol、1.5 当量）を添
加した。反応液を室温で18時間撹拌した。溶媒を真空で蒸発させた。残渣を酢酸
エチル（150mL）及び水（250mL）で分離した。水相を酢酸エチル（2X150 mL）で
再抽出した。合わせた有機相を1Nの塩酸（1X200 mL）、水（1X200 mL）、飽和炭
酸水素ナトリウム（1X200 mL）及び水（1X200 mL）で洗浄した。生成物を硫酸マ
グネシウムで乾燥させ、濾過した。濾過物を蒸発させ、発泡体として32.1g（収
率100%）の生成物を得た。TLC（シリカ；9塩化メチレン/1エタノール）Rf=0.53
であった。 Embedded image Compound of Example 13 using acetonitrile (150 mL) as a solvent (29.7 g, 56.7 mmol
l), N, O-dimethylhydroxylamine hydrochloride (11.1 g, 113.4 mmol, 2.0 equivalents)
N-methylmorpholine (8.6 g, 9.4 mL, 85.1 mmol, 1.5 equiv) was added to a solution of EDC, EDC (14.1 g, 73.7 mmol, 1.3 equiv) and HOBT (10.0 g, 73.7 mmol, 1.3 equiv). The reaction was stirred at room temperature for 18 hours. The solvent was evaporated in vacuum. The residue was separated between ethyl acetate (150mL) and water (250mL). The aqueous phase was re-extracted with ethyl acetate (2X150 mL). The combined organic phases were washed with 1N hydrochloric acid (1 × 200 mL), water (1 × 200 mL), saturated sodium bicarbonate (1 × 200 mL) and water (1 × 200 mL). The product was dried over magnesium sulfate and filtered. The filtrate was evaporated to give 32.1 g (100% yield) of the product as a foam. TLC (silica; 9 methylene chloride / 1 ethanol) Rf = 0.53
Met.
【００９８】実施例15 N-α-Alloc-Nδ-PMC-アルギン-アルの調製 Example 15 Preparation of N-α-Alloc-N δ -PMC-Algin-Al
【化１５】 無水テトラヒドロフラン（500 mL）を溶媒とする実施例14の化合物（32.0 g、
56.4 mmol）の溶液を2リットルの三つ口丸底フラスコに窒素雰囲気下加え、1Nの
LAH/THF（85.0 ml、85.0 mmol、1.5当量）を1時間滴下しながら添加した。反応
液をマイナス78度で2時間撹拌し、その後0度で30分間保温した。濃厚な泥状物が
観察された。反応混合物を2Mの硫化水素カリウム（100 mL）でマイナス78度でゆ
っくりと冷却した。沈澱物を濾過し、テトラヒドロフラン（200 mL）で洗浄した
。混合濾過物を真空下で濃縮した。粗残渣を酢酸エチル（200 mL）及び水（200
mL）の間で分離した。有機相を飽和炭酸水素ナトリウム（2 X 200 mL）、及び食
塩水（1 X 200 mL）で洗浄した。生成物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し
た。濾過物を蒸発させ、白色の発泡体として28.7 g（収率100%）の生成物を得た
。TLC（シリカ；1ヘキサン/1酢酸エチル）Rf=1。 Embedded image Compound of Example 14 using anhydrous tetrahydrofuran (500 mL) as a solvent (32.0 g,
56.4 mmol) was added to a two-liter three-necked round-bottomed flask under a nitrogen atmosphere.
LAH / THF (85.0 ml, 85.0 mmol, 1.5 equiv) was added dropwise over 1 hour. The reaction was stirred at −78 ° C. for 2 hours and then kept at 0 ° C. for 30 minutes. Thick mud was observed. The reaction mixture was slowly cooled at −78 ° C. with 2M potassium hydrogen sulfide (100 mL). The precipitate was filtered and washed with tetrahydrofuran (200 mL). The combined filtrate was concentrated under vacuum. The crude residue was washed with ethyl acetate (200 mL) and water (200 mL).
mL). The organic phase was washed with saturated sodium bicarbonate (2 × 200 mL) and brine (1 × 200 mL). The product was dried over magnesium sulfate and filtered. The filtrate was evaporated to give 28.7 g (100% yield) of the product as a white foam. TLC (silica; 1 hexane / 1 ethyl acetate) Rf = 1.
【００９９】実施例16 N-α-Alloc-Nδ-PMC-アルギニルシクロ-O-エチル-6-ヒドロキシルヘキサノエー
トの調製 Example 16 N-α-Alloc-N δ -PMC-arginylcyclo-O-ethyl-6-hydroxyhexanoe
Preparation of
【化１６】 アセトニトリル（200 mL）を溶媒とする、実施例15の化合物（28.7 g、56.5 m
mol）及びエチル-6-ヒドキシヘキサノエート（45.3 g、283 mmmol、5当量）の溶
液を撹拌し、そこへ3Nの塩酸（130 μl）を添加した。室温で15分間置き、全て
の反応物を溶液にした。24時間混合物を撹拌し（40 μlのアリコートを反応の測
定のためのTLC及びマススペクトロメトリー用に分取した）、無水酢酸（22.4 g
、283 mmol、5当量）及びピリジン（22.4 g、283 mmmol、5当量）を反応混合液
に添加し、過剰なヒドロキシ-リンカーをキャップした。反応を一晩継続させた
。溶液を蒸発させた。粗生成物を酢酸エチル中に取り出し、1Nの塩酸（1 X）、
水（1 X）、飽和炭酸水素ナトリウム（1 X）及び水（1 X）で洗浄し、硫酸マグ
ネシウムで乾燥させ、濾過し、濃縮した。残渣をヘキサン及び酢酸エチルを用い
てシリカゲル上でのフラッシュクロマトグラフィー（4,1〜2,1の勾配）で精製し
、強粘度の油として22.2 g（収率61%）の生成物を得た。 TLC（シリカ；ヘキサ
ン、酢酸エチル：1、1）Rf=0.13。 Embedded image Using acetonitrile (200 mL) as a solvent, the compound of Example 15 (28.7 g, 56.5 m
mol) and ethyl-6-hydroxyhexanoate (45.3 g, 283 mmmol, 5 equiv.) were stirred and 3N hydrochloric acid (130 μl) was added thereto. Leave at room temperature for 15 minutes to bring all reactions into solution. The mixture was stirred for 24 hours (40 μl aliquots were taken for TLC and mass spectrometry for measurement of the reaction) and acetic anhydride (22.4 g
, 283 mmol, 5 equiv) and pyridine (22.4 g, 283 mmol, 5 equiv) were added to the reaction mixture and the excess hydroxy-linker was capped. The reaction was continued overnight. The solution was evaporated. The crude product is taken up in ethyl acetate and 1N hydrochloric acid (1X),
Washed with water (1 ×), saturated sodium bicarbonate (1 ×) and water (1 ×), dried over magnesium sulfate, filtered and concentrated. The residue was purified by flash chromatography on silica gel with hexane and ethyl acetate (gradient from 4.1 to 2.1) to give 22.2 g (61% yield) of the product as a viscous oil. . TLC (silica; hexane, ethyl acetate: 1, 1) Rf = 0.13.
【０１００】実施例17 N-α-Alloc-Nδ-PMC-アルギニルシクロ-O-6-ヒドロキシルヘキサン酸の調製 Example 17 Preparation of N-α-Alloc-N δ -PMC-arginylcyclo-O-6-hydroxyhexanoic acid
【化１７】 エタノール（34.2 ml）を溶媒とする実施例16の化合物（22.2 g、34.2 mmol、
1当量）の溶液に3Nの水酸化リチウム（68.4 mmol 、22.8 ml、2当量）を添加し
た。反応液を室温で4時間撹拌し真空下で濃縮した。残渣を水（50 mL）に溶解し
、エタノール（2X50 mL）で洗浄した。水相を1Nの塩酸でpH=2〜3に酸性化し、塩
化メチレン（3X100 mL）で抽出した。溶液を硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過
、蒸発させ、白色の発泡体として16.73 gの生成物（収率79％）を得た。TLC（シ
リカ； 酢酸エチル）Rf=0.49。 Embedded image Compound of Example 16 using ethanol (34.2 ml) as a solvent (22.2 g, 34.2 mmol,
3N lithium hydroxide (68.4 mmol, 22.8 ml, 2 eq) was added to the solution of 1 eq). The reaction was stirred at room temperature for 4 hours and concentrated under vacuum. The residue was dissolved in water (50 mL) and washed with ethanol (2X50 mL). The aqueous phase was acidified with 1N hydrochloric acid to pH = 2-3 and extracted with methylene chloride (3 × 100 mL). The solution was dried over magnesium sulfate, filtered and evaporated to give 16.73 g product (79% yield) as a white foam. TLC (silica; ethyl acetate) Rf = 0.49.
【０１０１】実施例18 N-α-Alloc-Nδ-PMC-アルギニルシクロ-O-6-ヒドロキシヘキサノイル-アミノメ
チル化ポリスチレン樹脂の調製 Example 18 N-α-Alloc-N δ -PMC-arginylcyclo-O-6-hydroxyhexanoyl-aminomethyl
Preparation of chilled polystyrene resin
【化１８】 室温のDMF（193 mL）中のメチル化ポリスチレン樹脂（16.0 g、18.6 mmol、1
当量）、実施例17の化合物（15.0 g、24.1 mmol、1.3当量）、PyBOP（12.5 g、2
4.1 mmol、1.3当量）にDIEA（3.1 g、24.1 mmol、1.3当量）を添加した。混合物
を丸底フラスコ内でゆっくりと一晩撹拌した。樹脂を塩化メチレイン及びメタノ
ールで交互に連続的に洗浄した。樹脂を真空下で乾燥させ（このうち2 mgの樹脂
をKeiser試験に取っておいた。）、DMF/無水酢酸/Et3N（8：1：1）を用い室温で
30分間アセチル化した。再び樹脂を有機溶媒（塩化メチレン及びメタノール）で
洗浄し、真空下で乾燥させ、26.9 gの生成物（収率98.5％）を得た。Keiser試験
（O. D；97.7％共役）、樹脂置換（0.67 mmol/g）。Embedded image Methylated polystyrene resin in DMF (193 mL) at room temperature (16.0 g, 18.6 mmol, 1
Eq), the compound of Example 17 (15.0 g, 24.1 mmol, 1.3 eq), PyBOP (12.5 g, 2
To 4.1 mmol, 1.3 eq) was added DIEA (3.1 g, 24.1 mmol, 1.3 eq). The mixture was slowly stirred overnight in a round bottom flask. The resin was washed successively with alternating methylene chloride and methanol. The resin was dried under vacuum (of which 2 mg of the resin was reserved for the Keiser test), and was added at room temperature using DMF / acetic anhydride / Et 3 N (8: 1: 1).
Acetylated for 30 minutes. The resin was washed again with an organic solvent (methylene chloride and methanol) and dried under vacuum to obtain 26.9 g of a product (yield 98.5%). Keiser test (OD; 97.7% conjugate), resin displacement (0.67 mmol / g).
【０１０２】実施例19 Nd-PMC-アルギニルシクロ-O-6-ヒドロキシヘキサノイル-アミノメチル化ポリス
チレン樹脂の調製 Example 19 N d -PMC-arginylcyclo-O-6-hydroxyhexanoyl-aminomethylated police
Preparation of Tylene resin
【化１９】 実施例18の樹脂（50 mg、0.03 mmol、1当量）及び（Ph3P)4Pd（26 mg、0.02 m
mol、0.65当量）へ、THF/DMSO/0.5Nの塩酸/モルホリン（2：2：1：5）（1.5mL）
の溶液を添加した。混合物をワットマンポリプロピレンミニカラム内で室温で2
時間震盪した。その後、脱保護された樹脂を有機溶媒（塩化メチレン及びメタノ
ール）で洗浄し、乾燥させた。Keiser試験（溶液及びビーズ；濃紺）、樹脂置換
（0.71 mmol/g）。Embedded image The resin of Example 18 (50 mg, 0.03 mmol, 1 equivalent) and (Ph 3 P) 4 Pd (26 mg, 0.02 m
mol, 0.65 equivalents), THF / DMSO / 0.5N hydrochloric acid / morpholine (2: 2: 1: 5) (1.5 mL)
Was added. Mix the mixture in a Whatman polypropylene minicolumn at room temperature for 2 hours.
Shake for hours. Thereafter, the deprotected resin was washed with an organic solvent (methylene chloride and methanol) and dried. Keiser test (solution and beads; dark blue), resin displacement (0.71 mmol / g).
【０１０３】実施例20 ベンジルスルホンアミド-dArg（NO2）-サルコシン-Gly-Nδ-PMC-アルギニルシク
ロ-O-6-ヒドロキシヘキサノイル-アミノメチル化ポリスチレン樹脂の調製 Example 20 Benzylsulfonamide-dArg (NO 2 ) -sarcosine-Gly-N δ -PMC-arginylcycl
Preparation of b-O-6-hydroxyhexanoyl-aminomethylated polystyrene resin
【化２０】 DMF（0.60 mL）を溶媒とする実施例19の樹脂（35 mg、0.025 mmol、1当量）、
ベンジルスルホンアミド-dArg（NO2）-サルコシン-Gly-OH（45 mg、0.10 mmol、
4当量；米国特許第5,696,231号の実施例11-13の調製方法を参照）及びPyBOP（53
mg、10 mmol、4当量）の混合液へ、DIEA（13 mg、0.1 mmol、4当量）を添加し
た。混合物をワットマンミニカラム内で一晩震盪した。樹脂を有機溶媒（塩化メ
チレン及びメタノール）で洗浄し、乾燥させた。Keiser試験（溶液及びビーズ；
透明）、理論上の収量（45.9mg）の基づく樹脂置換（0.545 mmol/g）。Embedded image The resin of Example 19 using DMF (0.60 mL) as a solvent (35 mg, 0.025 mmol, 1 equivalent),
Benzylsulfonamide-dArg (NO 2 ) -sarcosine-Gly-OH (45 mg, 0.10 mmol,
4 equivalents; see the method of preparation of Examples 11-13 of US Pat. No. 5,696,231) and PyBOP (53
(mg, 10 mmol, 4 eq) DIEA (13 mg, 0.1 mmol, 4 eq) was added. The mixture was shaken overnight in a Whatman mini column. The resin was washed with organic solvents (methylene chloride and methanol) and dried. Keiser test (solution and beads;
Clear), resin displacement (0.545 mmol / g) based on theoretical yield (45.9 mg).
【０１０４】実施例21 ベンジルスルホンホアミド-dArg（NO2）-サルコシン-Gly-アルギナルの調製 Example 21 Preparation of benzylsulfonamide-dArg (NO 2 ) -sarcosine-Gly-arginal
【化２１】 ワットマンミニカラムチューブ内の実施例20の樹脂（45.9 mg、0.025 mmol）
へ、TFA/水/DCM（5：1：4）の溶液を添加した。混合物を4時間室温で機械を用い
て震盪させた。濾過物をSepakカラムで精製し、画分を回収し、凍結乾燥させ、H
PLC及びマススペクトロメトリーで解析し、白色の粉末として0.8 mg（収率5.5％
）の表記の生成物を得た。 MS（M + H）=585.0、計算分子量は584.2であった。H
PLC保持、7.3分；C18,5-20%CH3CN、25分間、1.0mL/分。インビトロアッセイ法に
おいて表記の化合物はXa因子の阻害活性を有することが示された。Embedded image Resin of Example 20 in Whatman mini column tube (45.9 mg, 0.025 mmol)
To this was added a solution of TFA / water / DCM (5: 1: 4). The mixture was mechanically shaken for 4 hours at room temperature. The filtrate is purified on a Sepak column, the fractions are collected, lyophilized and
Analysis by PLC and mass spectrometry revealed 0.8 mg of white powder (5.5% yield).
)). MS (M + H) = 585.0, calculated molecular weight 584.2. H
PLC retention, 7.3 min; C 18, 5-20% CH 3 CN, 25 min, 1.0 mL / min. The indicated compounds were shown to have factor Xa inhibitory activity in in vitro assays.
【図１】 実施例2〜7の手順による環状アルデヒドの固相支持体への結合お
よび実施例8〜12の手順による成長を続けるペプチド鎖の合成を示すフローチャ
ートである。FIG. 1 is a flow chart showing the attachment of a cyclic aldehyde to a solid support according to the procedures of Examples 2-7 and the synthesis of a growing peptide chain according to the procedures of Examples 8-12.
【図２】 実施例13〜19の手順による環状アルデヒドの固相支持体への結合
および実施例8〜12の手順による成長を続けるペプチド鎖の合成を示すフローチ
ャートである。FIG. 2 is a flow chart showing the attachment of a cyclic aldehyde to a solid support according to the procedures of Examples 13 to 19 and the synthesis of a growing peptide chain according to the procedures of Examples 8 to 12.
【図３】 本発明の方法によりリンカーとすでに反応している固相支持体へ
の環状アルデヒドの結合を示すフローチャートである。FIG. 3 is a flow chart showing the attachment of a cyclic aldehyde to a solid support that has already reacted with a linker according to the method of the present invention.
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ０７Ｄ 211/56 Ｃ０７Ｋ 5/062 Ｃ０７Ｋ 1/04 Ｃ０８Ｆ 8/00 5/062 Ｃ１２Ｎ 9/99 Ｃ０８Ｆ 8/00 Ａ６１Ｋ 37/02 // Ｃ１２Ｎ 9/99 37/64 (72)発明者 センプル ジェイ． エドワード アメリカ合衆国 カリフォルニア州 サン ディエゴ カミニト パドリーガル 9711 (72)発明者 ロバーツ クリストファー エー． アメリカ合衆国 カリフォルニア州 サン マルコス ハニーサックル ドライブ 984 Ｆターム(参考） 4C054 AA02 CC09 DD25 EE30 FF01 4C084 AA06 BA01 BA14 CA59 DC32 ZC202 4H006 AA02 AC53 BU32 BV20 4H045 AA20 BA11 BA56 DA56 FA33 FA41 FA57 4J100 AB07P BA02H BA14H BA15 BA16H BA29H BA29P BA34H BA35H BA46H CA01 CA31 HA61 HC27 HC43 HC50 HC63──────────────────────────────────────────────────続 き Continued on the front page (51) Int.Cl. 7 Identification symbol FI Theme coat ゛ (Reference) C07D 211/56 C07K 5/062 C07K 1/04 C08F 8/00 5/062 C12N 9/99 C08F 8/00 A61K 37/02 // C12N 9/99 37/64 (72) Inventor Simplple Jay. Edward USA United States San Diego Caminito Padrigal 9711 (72) Roberts Christopher A. Inventor. United States California San Marcos Honeysuckle Drive 984 F-term (reference) 4C054 AA02 CC09 DD25 EE30 FF01 4C084 AA06 BA01 BA14 CA59 DC32 ZC202 4H006 AA02 AC53 BU32 BV20 4H045 AA20 BA11 BA56 DA56 FA33 FA41 FA57 4BA100 BA07H BAH BAH CA01 CA31 HA61 HC27 HC43 HC50 HC63
Claims (44)
、任意に、1箇所以上の位置に保護基を含む部分であるR1'から誘導され、 （b）nは約1〜約15の整数であるが、ただしXおよびYが共に結合である場合には
、nは少なくとも2であり、 （c）SSは固相支持体であり、 （d）XおよびYは、独立に、結合または-[Z]p-であり、pは1〜5の整数であるが、
ただし、X、Yおよび-(CH2)n-の組み合わせが炭素原子数1〜約15の直鎖に長さが
等価な鎖を示し、Zは-CH2CH2O-または-C(A)(B)-であり、AおよびBはZが存在する
場合には各々異なってもよく、独立に、水素、炭素原子数1〜約6のアルキル、炭
素原子数約3〜約10のアルケニル、炭素原子数約6〜約10のアリールからなる群よ
り選択され、AおよびBは、組み合わせたとき、5〜7員環を形成してもよい） によって表される誘導体化された固相支持体を製造するための方法であって、 （a）（i）R1'を、式OH-X-(CH2)n-Y-CO2-R2（式中、R2は、リンカーが最初に固
相支持体と反応する場合には、-NH-SSで、またはH、炭素原子数1〜約6の低級ア
ルキル、炭素原子数約3〜約10のアルケニル、炭素原子数約6〜約10のアリールお
よび炭素原子数約6〜約15のアラルキルからなる群より選択される）のリンカー
と、R1'のカルボニルまたは発生期カルボニルとリンカーのヒドロキシとの反応
を可能にする酸性触媒条件下において接触させて、R1-O-X-(CH2)n-Y-CO2-R2を形
成する段階と、 （ii）R1-O-X-(CH2)n-Y-CO2-R2を回収し、R2が-NH-SSまたは-Hでない場合には、
R2基を加水分解して、式R1-O-X-(CH2)n-Y-CO-OHのカルボン酸を形成する段階と
、 （iii）リンカーが先に固相支持体と反応しない場合にはR1-O-X-(CH2)n-Y-CO-OH
とNH2-SSとを、カルボン酸の脱水およびカルボン酸とNH2-SSとの間のアミド結合
形成を可能にする条件下において接触させて、R1-O-X-(CH2)n-Y-CO-NH-SSを形成
する段階と、 （iv）このように形成されたR1-O-X-(CH2)n-Y-CO-NH-SS固相支持体を回収する段
階とを含む方法。(1) Formula (I): (I) R1-OX- (CH 2 ) n -Y-CO-NH-SS (where (a) R1 represents a cyclic aminoaldehyde or a derivative thereof at a carboxyl terminal. (B) n is an integer from about 1 to about 15, provided that X and Y are both bonds Wherein n is at least 2; (c) SS is a solid support; (d) X and Y are independently a bond or-[Z] p-; Is an integer, but
However, X, Y and - (CH 2) n - combinations indicates that equivalent chain length linear from 1 to about 15 carbon atoms, Z is -CH 2 CH 2 O- or -C (A A) and B may be different when Z is present, independently of hydrogen, alkyl of 1 to about 6 carbons, alkenyl of about 3 to about 10 carbons Selected from the group consisting of aryls having about 6 to about 10 carbon atoms, wherein A and B may combine to form a 5- to 7-membered ring. a method for manufacturing a body, the (a) (i) R1 ' , wherein OH-X- (CH 2) n -Y-CO 2 -R2 ( wherein, R2 is initially solid linker When reacting with a phase support, at -NH-SS or H, lower alkyl having 1 to about 6 carbon atoms, alkenyl having about 3 to about 10 carbon atoms, about 6 to about 10 carbon atoms. A group consisting of aryl and aralkyl having about 6 to about 15 carbon atoms Linker selected are), by contacting the acidic catalyst under conditions which allow the reaction with the carbonyl or nascent carbonyl linker of hydroxy R1 ', R1-OX- (CH 2) n -Y-CO 2 forming a -R2, recovered (ii) R1-OX- (CH 2) n -Y-CO 2 -R2, if R2 is not an -NH-SS or -H is
The R2 group is hydrolyzed forming the formula R1-OX- (CH 2) a carboxylic acid of the n -Y-CO-OH, if it does not react with the solid support previously (iii) the linker R1-OX- (CH 2 ) n -Y-CO-OH
And the NH 2 -SS, is contacted under conditions that allow amide bond formation between the dehydration of carboxylic acids and carboxylic acid and NH 2 -SS, R1-OX- ( CH 2) n -Y- the method comprising the steps of forming a CO-NH-SS, and (iv) recovering the thus R1-OX formed (CH 2) n -Y-CO -NH-SS solid support.
長さが等価である鎖を示す請求項1記載の方法。4. The method of claim 1, wherein the combination of X, Y and — (CH 2 ) n — represents a chain equivalent in length to a straight chain having about 5 carbon atoms.
またはアスパラギン酸、ホモセリンもしくはホモシステインの誘導体である、請
求項1記載の方法。6. The method according to claim 1, wherein R1 ′ is arginine aldehyde, an arginine aldehyde derivative or a derivative of aspartic acid, homoserine or homocysteine.
法。7. The method of claim 6, wherein R1 ′ is incorporated into the peptidyl composition.
護基で保護されている、請求項6記載の方法。8. The method according to claim 6, wherein the ω-side chain of the cyclic aminoaldehyde or a derivative thereof is protected with a protecting group.
択される、請求項8記載の方法。9. The method of claim 8, wherein said protecting group is selected from the group consisting of Boc, Alloc, PMC and Fmoc.
れ、第1もしくは第2の保護基PG1およびPG2でブロックされるか、またはR1のα窒
素が、段階（i）の前にPG1でブロックされ、R1のω窒素が段階（ii）の後にPG2
でブロックされる、請求項1記載の方法。10. The α or ω heteroatom of R1 ′ is blocked with a first or second protecting group PG1 and PG2, respectively, before step (i), or the α nitrogen of R1 is Blocked by PG1 before (i) and the ω nitrogen of R1 is reduced by PG2 after step (ii)
2. The method of claim 1, wherein the method is blocked.
、請求項10記載の方法。11. The method of claim 10, wherein PG1 and PG2 are protecting groups selected to be orthogonal.
llocまたはTeoc；FmocとAlloc、TeocまたはPMC；およびAllocとTeocまたはPMCか
ら選択される、請求項11記載の方法。12. PG1 and PG2 are a combination of the following protecting groups: Boc and Fmoc, A
12. The method of claim 11, wherein the method is selected from lloc or Teoc; Fmoc and Alloc, Teoc or PMC; and Alloc and Teoc or PMC.
ドリルアミン樹脂および4-メチルベンズヒドリルアミン樹脂からなる群より選択
される、請求項1記載の方法。13. The method of claim 1, wherein said NH 2 -SS is selected from the group consisting of an aminomethylated polystyrene resin, a benzhydrylamine resin and a 4-methylbenzhydrylamine resin.
ドリルアミン樹脂、および4-メチルベンズヒドリルアミン樹脂からなる群より選
択され、nが約5である、請求項1記載の方法。14. The method of claim 1, wherein said NH 2 -SS is selected from the group consisting of an aminomethylated polystyrene resin, a benzhydrylamine resin, and a 4-methylbenzhydrylamine resin, wherein n is about 5. .
メチル化ポリスチレン樹脂である、請求項14記載の方法。15. The method of claim 14, wherein the linker is HO- (CH 2 ) 5 —CO 2 -ethyl and NH 2 -SS is an aminomethylated polystyrene resin.
り選択される、請求項1記載の方法。16. The method of claim 1, wherein R2 is selected from the group consisting of alkyl, alkenyl, and aralkyl.
載の方法。18. The method of claim 1, wherein said linker is OH- (CH 2 ) 5 —CO 2 -ethyl.
ド類似体の1つ以上を結合して、カルボキシル末端に環状アルデヒドまたは発生
期アルデヒドR1を含むアミノ酸もしくはアミノ酸誘導体のペプチドまたはペプチ
ド模倣鎖を形成して、式（III）： （iii） （res）t-R1-O-X-(CH2)n-Y-CO-NH-SS （式中、（res）t-部分は「t」残基を含むペプチドまたはペプチド類似体を示し
、「t」は約1〜50の整数である） によって表される生成物を形成する段階を含む、固相ペプチド合成のための請求
項1記載の方法。19. A peptide or peptidomimetic chain of an amino acid or amino acid derivative containing a cyclic aldehyde or a nascent aldehyde R1 at the carboxyl terminus by binding one or more amino acids, amino acid analogs, peptides or peptide analogs to the R1 group. To form a compound of the formula (III): (iii) (res) t -R1-OX- (CH 2 ) n -Y-CO-NH-SS (wherein the (res) t -moiety is a residue of "t" A peptide or peptide analog comprising a group, wherein "t" is an integer from about 1 to 50). .
。21. The method of claim 20, for synthesizing a protease inhibitor.
テアーゼ阻害剤である、請求項21記載の方法。22. The method of claim 21, wherein said inhibitor is a serine, cysteine or aspartyl protease inhibitor.
をさらに含む、請求項19記載の方法。23. The method of claim 19, further comprising cleaving the moiety (res) t -R1 from the derivatized resin.
された樹脂を6:3:1の比のTFA:DCM:H2O混合物で処理する段階を含み、該切断が約
2時間で実施される、請求項23記載の方法。24. The step of cleaving comprises treating the derivatized resin represented by formula (III) with a 6: 3: 1 ratio of a TFA: DCM: H 2 O mixture, wherein the cleaving comprises: about
24. The method of claim 23, which is performed in 2 hours.
し、任意に、1箇所以上の位置に保護基を含む部分であるR3'から誘導される分子
であり、 （b）mは約1〜約15の整数であるが、ただしXおよびYが共に結合である場合には
、mは少なくとも2であり、 （c）SSは固相支持体であり、 （d）XおよびYは、独立に、結合または-[Z]p-であり、pは1〜5の整数であるが、
ただし、X、Yおよび-(CH2)m-の組み合わせが炭素原子数約2〜15、好ましくは炭
素原子数約5の直鎖に長さが等価な鎖を示し、Zは-CH2CH2O-または-C(A)(B)-であ
り、AおよびBはZが存在する場合には各々異なってもよく、独立に、水素、炭素
原子数1〜約6のアルキル、炭素原子数約3〜約10のアルケニル、炭素原子数約6〜
約10のアリールからなる群より選択され、AおよびBは、組み合わせたとき、5〜7
員環を形成してもよい） によって表される固相支持体を製造するための方法であって、 （i）R3'アルデヒドを、式： OH-X-(CH2)m-Y-CO2-R2 （式中、R2は、リンカーが先に固相支持体と反応する場合には、-NH-SSで、また
はH、炭素原子数1〜約6のアルキル、炭素原子数約3〜約10のアルケニル、炭素原
子数約6〜約10のアリール、および炭素原子数約6〜約15のアラルキルからなる群
より選択される）のリンカーの、R3と比較したとき、少なくとも2モル過剰量と
、R3'のカルボニルとリンカーのヒドロキシとの反応を可能にする酸性触媒条件
下において接触させて、 R3[-O-X-(CH2)m-Y-CO2-R2]2 を形成する段階と、 （ii）（i）の生成物を回収し、R2が-NH-SSまたは-Hでない場合には、R2を加水
分解して、カルボン酸を形成する段階と、 （iii）リンカーが先に固相支持体と反応しない場合には（ii）のカルボン酸とN
H2-SSとを、カルボン酸の脱水およびカルボン酸とNH2-SSとの間のアミド結合形
成を可能にする条件下において接触させて、式： R3[-O-X-(CH2)m-Y-CO-NH-SS]2 (II) の固相支持体を形成する段階と、 （iv）このように形成された固相支持体を回収する段階とを含む方法。25. A compound represented by the formula: R3 [-OX- (CH 2 ) m -Y-CO-NH-SS] 2 (II) (wherein (a) R3 represents a linear aminoaldehyde or (B) m is an integer from about 1 to about 15, wherein X and X are a group having a derivative and optionally a moiety containing a protecting group at one or more positions. M is at least 2 if Y are both bonds; (c) SS is a solid support; (d) X and Y are independently a bond or-[Z] p- . , P is an integer from 1 to 5,
However, X, Y and - (CH 2) m - combination of about 2 to 15 carbon atoms, preferably an is equivalent chain length linear about 5 carbon atoms, Z is -CH 2 CH 2 O- or -C (A) (B)-, wherein A and B may each be different when Z is present, independently hydrogen, alkyl having 1 to about 6 carbon atoms, carbon atom About 3 to about 10 alkenyl, about 6 to about 10 carbon atoms
Selected from the group consisting of about 10 aryls, wherein A and B, when combined, are 5-7
A method for manufacturing a solid-phase support which is represented by membered ring may be formed), a (i) R3 'aldehyde of the formula: OH-X- (CH 2) m -Y-CO 2 -R2 where R2 is -NH-SS or H, alkyl having 1 to about 6 carbon atoms, about 3 to 3 carbon atoms, when the linker first reacts with the solid support. A linker selected from the group consisting of about 10 alkenyl, about 6 to about 10 aryl, and about 6 to about 15 aralkyl), as compared to R3, at least a 2 molar excess When the steps of contacting the acidic catalyst under conditions which allow the reaction of the hydroxy carbonyl linker of R3 ', to form the R3 [-OX- (CH 2) m -Y-CO 2 -R2] 2 (Ii) recovering the product of (i) and, if R2 is not -NH-SS or -H, hydrolyzing R2 to form a carboxylic acid; and (iii) the linker first Solid phase support When it does not react with the body, the carboxylic acid of (ii) and N
And H 2 -SS, is contacted under conditions that allow amide bond formation between the dehydration of carboxylic acids and carboxylic acid and NH 2 -SS, wherein: R3 [-OX- (CH 2) m - A method comprising the steps of: forming a solid support of [Y-CO-NH-SS] 2 (II); and (iv) recovering the solid support thus formed.
と長さが等価である鎖を示す、請求項25記載の方法。28. The method of claim 25, wherein the combination of X, Y and-(CH 2 ) m- represents a chain equivalent in length to a straight chain having about 5 carbon atoms.
ド類似体の1つ以上を結合して、カルボキシル末端に環状アルデヒドまたは発生
期アルデヒドR1を含むアミノ酸またはアミノ酸誘導体のペプチドまたはペプチド
模倣鎖を形成して、式（IV）： (IV) （res）t-R3(-O-X-(CH2)m-Y-CO-NH-SS)2 （式中、（res）t-部分は「t」残基を含むペプチドまたはペプチド類似体を示し
、「t」は約1〜50の整数である） によって表される生成物を形成する段階を含む、固相ペプチド合成のための請求
項25記載の方法。30. A peptide or peptidomimetic chain of an amino acid or amino acid derivative containing a cyclic aldehyde or a nascent aldehyde R1 at the carboxyl terminus by binding one or more amino acids, amino acid analogs, peptides or peptide analogs to the R3 group. To form a compound of formula (IV): (IV) (res) t -R3 (-OX- (CH 2 ) m -Y-CO-NH-SS) 2 (where the (res) t -moiety is " 25) wherein the peptide or peptide analog comprises a "t" residue, wherein "t" is an integer from about 1 to 50). The described method.
。32. The method of claim 31, for synthesizing a protease inhibitor.
テアーゼ阻害剤である請求項32記載の方法。33. The method of claim 32, wherein said inhibitor is a serine, cysteine or aspartyl protease inhibitor.
、それぞれ、第1もしくは第2の保護基PG1およびPG2でブロックされるか、または
R3のα窒素が、段階（i）の前にPG1でブロックされ、R3の反応性側鎖ヘテロ原子
が段階（ii）の後にPG2でブロックされる、請求項30記載の方法。34. The α or reactive side chain heteroatom of R3 is blocked with a first or second protecting group PG1 and PG2, respectively, prior to step (i), or
31. The method of claim 30, wherein the alpha nitrogen of R3 is blocked with PG1 before step (i) and the reactive side chain heteroatom of R3 is blocked with PG2 after step (ii).
、請求項34記載の方法。35. The method of claim 34, wherein PG1 and PG2 are protecting groups selected to be orthogonal.
llocまたはTeoc；FmocとAlloc、TeocまたはPMC；およびAllocとTeocまたはPMCか
ら選択される、請求項35記載の方法。36. PG1 and PG2 are a combination of the following protecting groups: Boc and Fmoc, A
36. The method of claim 35, wherein the method is selected from lloc or Teoc; Fmoc and Alloc, Teoc or PMC; and Alloc and Teoc or PMC.
をさらに含む、請求項30記載の方法。37. The method of claim 30, further comprising the step of cleaving the (res) t -R3 moiety from the derivatized resin.
れた樹脂を6:3:1の比のTFA:DCM:H2O混合物で処理する段階を含み、該切断が約2
時間で実施される、請求項37記載の方法。38. The step of cleaving comprises treating the derivatized resin represented by formula (IV) with a 6: 3: 1 ratio of a TFA: DCM: H 2 O mixture, wherein the cleaving comprises: About 2
38. The method of claim 37, wherein the method is performed in time.
ドリルアミン樹脂および4-メチルベンズヒドリルアミン樹脂からなる群より選択
される、請求項25記載の方法。39. The method of claim 25, wherein said NH 2 -SS is selected from the group consisting of an aminomethylated polystyrene resin, a benzhydrylamine resin and a 4-methylbenzhydrylamine resin.
り選択される、請求項25記載の方法。40. The method of claim 25, wherein R2 is selected from the group consisting of alkyl, alkenyl, and aralkyl.
載の方法。42. The method of claim 25, wherein said linker is OH- (CH 2 ) 5 —CO 2 -ethyl.
（I）： R1-O-X(CH2)n-Y-CO-NH-SS（式中、R1部分はP1残基を示す） によって表される固相支持体に異なるアミノ酸残基またはアミノ酸類似体残基を
、ペプチド結合の形成を可能にする条件下において接触させて、前記一連の別個
の容器または反応槽の各々において同じまたは異なる一連のP2残基を製造する段
階と、 （b）望ましい数の残基のペプチドまたはペプチド類似体を形成するのに必要
な数だけ段階（a）を繰り返す段階と、成長中のペプチドまたはペプチド類似体
の鎖に存在する反応性基を保護および脱保護する適当な中間の段階とを含む、固
相支持体に結合したアルデヒドカルボキシ-末端残基を含むコンビナトリアルペ
プチドライブラリーを製造するための請求項1記載の方法。43. (a) In each of a series of separate vessels or reaction vessels, a compound of formula (I): R1-OX (CH 2 ) n -Y-CO-NH-SS wherein R1 is the residue of P1 A different amino acid residue or amino acid analog residue under conditions that allow for the formation of peptide bonds in the series of separate vessels or reaction vessels. a method of manufacturing the same or different set of P 2 residues in each, the steps of repeating as many step (a) needed to form a peptide or peptide analog of (b) the desired number of residues, growth A combinatorial peptide library comprising aldehyde carboxy-terminal residues attached to a solid support, comprising an appropriate intermediate step of protecting and deprotecting the reactive groups present on the chains of the peptide or peptide analog therein. Claim 1 for manufacturing The method described.
（II）： R3[-O-X(CH2)m-Y-CO-NH-SS]2（式中、R3部分はP1残基を示す）
によって表される固相支持体に異なるアミノ酸残基またはアミノ酸類似体残基を
、ペプチド結合の形成を可能にする条件下において接触させて、前記一連の別個
の容器または反応槽の各々において同じまたは異なる一連のP2残基を製造する段
階と、 （b）望ましい数の残基のペプチドまたはペプチド類似体を
形成するのに必要な数だけ段階（a）を繰り返す段階と、成長中のペプチドまた
はペプチド類似体の鎖に存在する反応性基を保護および脱保護する適当な中間の
段階とを含む、固相支持体に結合したアルデヒドカルボキシ-末端残基を含むコ
ンビナトリアルペプチドライブラリーを製造するための請求項25記載の方法。44. (a) In each of a series of separate vessels or reaction vessels, a compound of formula (II): R3 [-OX (CH 2 ) m -Y-CO-NH-SS] 2 wherein the R3 moiety Indicates the P1 residue)
A different amino acid residue or amino acid analog residue is contacted with a solid support represented by under conditions that allow for the formation of peptide bonds, and the same or the same in each of the series of separate vessels or reaction vessels. a method of producing a different set of P 2 residues, comprising the steps of repeating as many step (a) needed to form a peptide or peptide analog of (b) the desired number of residues, the growing peptide or A combinatorial peptide library comprising aldehyde carboxy-terminal residues attached to a solid support, comprising an appropriate intermediate step of protecting and deprotecting the reactive groups present in the chains of the peptide analog. 26. The method of claim 25.
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