JP2002517998A - ｐ２７（ＫＩＰ１）のＦＫＢＰ−１２との相互作用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、改変された、改良酵母ツーハイブリッドアッセイ系を使用して同定された、ｐ２７（Ｋｉｐ１）とＦＫＢＰ−１２との間の相互作用、およびｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体、またはその誘導体、フラグメント、アナログおよびホモログの形成を開示する。種々の疾患および障害、特に、癌、神経変性疾患、自己免疫疾患などを含むがこれらに限定されない、過剰増殖障害の処置および／または予防における効力について、これらの上述の複合体をスクリーニングする方法論もまた、本明細書中に開示される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 （助成金支援） 本発明は、米国標準技術研究所によって授与された助成金番号７０ＮＡＮＢ５
Ｈ１０６６の下で米国政府の支援によりなされた。従って、米国政府は、本発明
において特定の権利を有する。

【０００２】 （発明の分野） 本発明は、ｐ２７（Ｋｉｐｌ）およびＦＫＢＰ−１２タンパク質の複合体に関
する。さらに、本発明は、上記のタンパク質複合体に対する抗体の産生、ならび
にその使用、とりわけ、スクリーニング、診断、予後、および治療におけるその
使用に関する。

【０００３】 （発明の背景） 細胞増殖の制御の喪失により、重篤な疾患および障害（例えば、新生物）が導
かれ得る。従って、細胞周期の複雑さの解明、および発癌の間のその調節解除は
、癌およびその他の増殖関連疾患の予防、診断、および治療管理において新たな
機会を提供する。細胞周期のより良い理解は、そのレベルおよび生物学的活性が
細胞周期によって調節される、種々のタンパク質複合体の相互作用の解明によっ
て達成され得る。これらのタンパク質複合体の同定および分類は、種々の病理学
的プロセス（過剰増殖障害（例えば、腫瘍形成および腫瘍進行）ならびに他の関
連する遺伝的障害を含むが、これらに限定されない）の処置モダリティーおよび
アッセイの開発において有用である。

【０００４】 本明細書における参考文献の引用は、それらが本発明に対して先行技術となる
ことを認めることであると解釈されるべきではないことに留意すべきである。

【０００５】 （ｐ２７（ＫＩＰ１）） （真核生物細胞周期におけるｐ２７（Ｋｉｐ１）の役割） 真核生物細胞周期の進行は、タンパク質複合体の高度に保存されたファミリー
の活性化および不活性化によって制御される。そのタンパク質複合体は、最小に
、キナーゼ活性（サイクリン依存性キナーゼすなわちＣＤＫ）および調節サブユ
ニット（サイクリン）を有する触媒サブユニットからなる。細胞周期の各期は、
このようなサイクリンＣＤＫ複合体の独特のプロフィールの発現によって特徴づ
けられる。例えば、細胞周期のＤＮＡ合成（Ｓ）期に進入するという細胞の方向
付け（ｃｏｍｍｉｔｍｅｎｔ）は、細胞周期の第１のギャップ（Ｇ１）期の後期
の制限（Ｒ）点で生じる。この第１のギャップ期を介しての進行は、Ｄ型のサイ
クリンおよびサイクリンＥ（これらは、ＣＤＫ４およびＣＤＫ６とそれぞれ結合
する）の活性によって調節される。Ｓｈｅｒｒ ＆ Ｒｏｂｅｒｔｓ，１９９５
，Ｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ｄｅｖ．９：１１４９−１１６３。

【０００６】 ＣＤＫインヒビターは、サイクリンＣＤＫ複合体に結合し、そしてそれらの触
媒活性を阻害するネガティブ調節タンパク質である。Ｓｈｅｒｒ ＆ Ｒｏｂｅ
ｒｔｓ、１９９５、Ｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ｄｅｖ．９：１１４９−１１６３。Ｃ
ＤＫインヒビターである低分子量タンパク質の２つのファミリーは、タンパク質
のＩｎｋ４ファミリーおよびＣｉｐ１／Ｋｉｐ１ファミリーである。ｐ２１（Ｃ
ｉｐ１）、ｐ２７（Ｋｉｐ１）、およびｐ５７（Ｋｉｐ２）を含むタンパク質の
Ｃｉｐ１／Ｋｉｐ１ファミリーは、広範な特異性を有し、ほとんどのサイクリン
ＣＤＫ複合体の活性を強力に阻害する。Ｃｉｐ１／Ｋｉｐ１タンパク質は、種々
の抗マイトジェンシグナルに応答して細胞周期の進行を停止させることによって
、細胞増殖を調節するようである。これらのサイクリンインヒビタータンパク質
の重要性は、癌の発生および／または進行が、細胞***周期を制御する分子機構
の変更に厳密に連結しているという事実によって明らかにされる。

【０００７】 ヒトｐ２７（Ｋｉｐ１）（２７ｋＤａキナーゼインヒビタータンパク質）は、
１９８アミノ酸の２２ｋＤａのタンパク質をコードし、そして増殖細胞および静
止細胞の両方において、類似のｐ２７（Ｋｉｐ１）コードｍＲＮＡレベルで、ヒ
ト組織において広範に発現される。Ｐｏｌｙａｋら、１９９４、Ｃｅｌｌ ７８
：５９−６６；ＴｏｙｏｓｈｉｍａおよびＨｕｎｔｅｒ、１９９４，Ｃｅｌｌ
７８：６７−７４；米国特許第５，６８８，６６５号。ヌクレオチド配列は、ア
クセッション番号Ｕ１０９０６の下でＧｅｎＢａｎｋにおいて入手可能である。
ｐ２７（Ｋｉｐ１）は、主に、細胞外抗増殖性の合図（ｃｕｅ）に応答して、サ
イクリンＣＤＫ複合体関連キナーゼ活性（例えば、サイクリンＤ−ＣＤＫ４、サ
イクリンＥ−ＣＤＫ２、およびサイクリンＡ−ＣＤＫ２）を阻害することによっ
てＣＤＫ活性の調節を担うようであり、それにより細胞周期を停止させ、そして
増殖を阻害する。Ｎｏｍｕｒａら、１９９７ Ｇｅｎｅ １９１：２１１−２１
８。細胞増殖のネガティブ調節におけるｐ２７（Ｋｉｐ１）の関与は、それがま
た、腫瘍抑制遺伝子として機能することを示唆する。インヒビターとしてのその
役割に加えて、ｐ２７（Ｋｉｐ１）は、特定の機能を有する特定のＣＤＫ／サイ
クリン複合体のアセンブリを促進するためのアダプタータンパク質として機能し
得る。ＬａＢａｅｒら、１９９７、Ｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ｄｅｖ．１１：８４７
−８６２。

【０００８】 （ｐ２７（Ｋｉｐ１）の機能的ドメイン） ｐ２７（Ｋｉｐ１）のいくつかの機能的ドメインが同定されている。１つのこ
のようなドメインは、サイクリン／ＣＤＫ複合体結合および阻害に不可欠であり
、かつ十分である６０アミノ酸のアミノ末端ドメインである。このドメイン内で
、サイクリン−ＣＤＫ関連キナーゼ活性の阻害を担う最小の阻害領域は、アミノ
酸残基２８−７９を含む。Ｐｏｌａｋら、１９９４、Ｃｅｌｌ ７８：５９−６
６；ＴｏｙｏｓｈｉｍａおよびＨｕｎｔｅｒ，１９９４，Ｃｅｌｌ ７８：６７
−７４；Ｋｗｏｎら、１９９６，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃ
ｏｍｍ．２２０：７０３−７０９。

【０００９】 ｐ２７（Ｋｉｐ１）のアミノ末端領域の別のドメインは、サイクリン結合モチ
ーフである。サイクリン結合モチーフはまた、他のＣＤＫインヒビターにおいて
見出され、そしてまた、網膜芽細胞腫遺伝子ファミリーメンバーｐ２０７および
ｐ１３０、ならびに転写因子Ｅ２Ｆ−１、Ｅ２Ｆ−２、およびＥ２Ｆ−３を含む
他のタンパク質においても見出される。

【００１０】 ｐ２７（Ｋｉｐ１）のカルボキシ末端ドメインは、サイクリンＤ１にインビト
ロで結合し得、これは、ｐ２７（Ｋｉｐ１）が、ＣＤＫ４とは独立して、Ｄ型サ
イクリンと結合することを示唆する。さらに、ＣＤＣ２キナーゼ活性は、ｐ２７
（Ｋｉｐ１）のカルボキシ末端領域によってダウンレギュレートされることが実
証されている。また、ｐ２７（Ｋｉｐ１）のカルボキシ末端ドメインに位置する
アミノ酸残基Ｔｈｒ１８７は、サイクリンＣＤＫリン酸化についての潜在的な基
質部位である。Ｖｌａｃｈら、１９９７，ＥＭＢＯ Ｊ．１６：５３３４−５３
４４。

【００１１】 発癌性アデノウイルスタンパク質Ｅ１Ａがｐ２７（Ｋｉｐ１）に結合すること
が実証されているが、ｐ２７（Ｋｉｐ１）中の相互作用ドメインは、同定されて
いない。Ｍａｌ １９９６，Ｎａｔｕｒｅ ３８０：２６２−２６５。

【００１２】 （ｐ２７（Ｋｉｐ１）発現の調節） 通常の細胞において、ｐ２７（Ｋｉｐ１）の発現は、静止または非分割状態へ
の進入の間に増大し、そして特定の成長因子での刺激後の細胞周期への再進入に
際して迅速に減少する。ｐ２７（Ｋｉｐ１）タンパク質の豊富さは、主に、翻訳
および翻訳後制御機構により調節されると考えられるが、いくらかの調節が、転
写レベルで観察される。

【００１３】 （ｉ）転写調節 ｐ２７（Ｋｉｐ１）遺伝子の転写調節は、細胞分化に関与し得る。これは、ｐ
２７（Ｋｉｐ１）ｍＲＮＡが１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３（ビタミンＤ
３）によってダウンレギュレートされるという事実によって示される。ビタミン
Ｄ３は、その同族の核レセプター（ビタミンＤ３レセプター）を介して、骨髄性
白血病細胞株を単球／マクロファージへと末期的に分化するように誘導するよう
に作用する；ｐ２７（Ｋｉｐ１）の過剰発現は、これらの骨髄性細胞における末
期的分化プログラムを直接導く。Ｌｉｕ，１９９６，Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ １０
：１４２−１５３；Ｗａｎｇら、１９９７，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ ５７：２８
５１−２８５５。さらに、マイトジェンインターロイキン−２はまた、ｐ２７（
Ｋｉｐ１）遺伝子プロモーターの機能に影響を及ぼし、これは効果的にｐ２７（
Ｋｉｐ１）の転写ダウンレギュレーションをもたらし、これはｐ２７（Ｋｉｐ１
）タンパク質の有意な減少をもたらし、こうして、その細胞は、刺激されて、細
胞周期を通して進行する。Ｋｗｏｎら、１９９７，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５８
：５６４２−５６４８。それにも関わらず、ｐ２７（Ｋｉｐ１）のｍＲＮＡレベ
ルは、下垂体腺種および癌腫において比較的一定であり、これは、ｐ２７（Ｋｉ
ｐ１）タンパク質レベルが、主に、翻訳および翻訳後機構によって調節されるこ
とを示唆する。

【００１４】 （ｉｉ）翻訳および翻訳後 ｐ２７（Ｋｉｐ１）は、肝細胞癌細胞、マクロファージ、線維芽細胞、Ｔリン
パ球、大膠細胞、およびメサンギウム（ｍｅｓａｎｇｌｉａｌ）細胞において高
レベルで発現され、そしてこの高レベルの発現は、インスリン（Ｍａｎｎら、１
９９７，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １４：１７５９−１７６６）、コロニー刺激因子１
（Ａｎｔｏｎｏｖら、１９９７，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９９：２８６７
−２８７６）、血清（Ｄｉｅｔｒｉｃｈら、１９９７ Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １５
：２７４３−２７４７）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）（Ｄｕｍｏｎｔ，
１９９６，Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．５８：３７３−３９５）、インターロイキン−４
（ＩＬ−４）（Ｌｉｕら、１９９７，Ｊ．Ｉｍｍ．１５９：８１２−８１９）、
および血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）（Ｓｈａｎｋｌａｎｄ，１９９７，Ｋｉ
ｄｎｅｙ Ｉｎｔ．５１：１０８８−１０９９）に応答して減少する。

【００１５】 ｐ２７（Ｋｉｐ１）発現を調節するその他の事象には、マイトジェン枯渇、細
胞間接触、およびトランスホーミング増殖因子（ＴＧＦ）−βまたはｐ５３のｐ
２７（Ｋｉｐ１）発現細胞への添加が含まれる。マイトジェンによるｐ２７（Ｋ
ｉｐ１）のダウンレギュレーションは、主に、ユビキチン依存性翻訳後分解経路
を介して生じる。Ｐａｇａｎｏら、１９９５，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２６９：６８２
−６８５；Ｅｓｐｏｓｉｔｏら、１９９７ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５７：３３
８１−３３８５。また、アミノ酸残基１８７−１９０（ＴＰＫＫ）のカルボキシ
末端ＣＤＫ標的部位でのｐ２７（Ｋｉｐ１）のＣＤＫ２によるリン酸化は、この
翻訳後分解に本質的である。

【００１６】 Ｔ細胞が、ＩＬ−２で刺激されると、サイクリンＥ−ＣＤＫ２複合体は、活性
化され、そしてｐ２７（Ｋｉｐ１）をリン酸化する。リン酸化されたｐ２７（Ｋ
ｉｐ１）は、ユビキチン依存性経路を介して排除され、そしてその細胞周期が進
行する。ｐ２７（Ｋｉｐ１）の分解による細胞周期のこの活性化は、免疫抑制薬
物ラパマイシンによって妨げられ得、これは、サイクリンＥ−ＣＤＫ２の酵素活
性を阻害し、そしてラパマイシン処理細胞において異常に高レベルのｐ２７（Ｋ
ｉｐ１）の存在を生じる。この機構と一致して、ｐ２７（Ｋｉｐ１）遺伝子の標
的化破壊を伴う線維芽細胞およびＴリンパ球は、ラパマイシンに対する障害性の
増殖阻害応答を示す。Ｌｕｏら、１９９６，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１６
：６７４４−６７５１。ラパマイシンの抗増殖性効果は、間接的に、そしてラパ
マイシンのそのレセプターＦＫＢＰ−１２への結合の後にのみ媒介される（以下
を参照のこと）。

【００１７】 ラパマイシンによるｐ２７（Ｋｉｐ１）の調節と類似して、トランスホーミン
グ増殖因子β（ＴＧＦ−β）は、正常および新生物細胞機能を調節することによ
って、そしてｐ２７（Ｋｉｐ１）を含む種々のタンパク質の発現を調節すること
によって、細胞周期を制御し得る。Ｊｉｎ，１９９７，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈ．１
５１：５０９−５１９；Ｐｏｌｙａｋら、１９９４，Ｇｅｎｅｓ Ｄｅｖ ８：
９−２２。ＴＧＦ−βは、細胞周期におけるＧ１からＳ期への移行を、いくつか
の機構を通して同調させるシグナル伝達経路を破壊し、これらの機構には、サイ
クリンＤ−ＣＤＫ４複合体活性の活性化の阻害およびサイクリンＥ−ＣＤＫ２複
合体活性の阻害をもたらすｐ２７（Ｋｉｐ１）のアップレギュレーションが含ま
れ、これが、Ｒｂタンパク質の低リン酸化をもたらす。ＴＧＦ−β阻害は、腫瘍
アデノウイルスタンパク質Ｅ１Ａによって逆行され得、Ｅ１Ａは、細胞が細胞周
期を通して進行し得るように、ｐ２７（Ｋｉｐ１）に結合し、それによりｐ２７
（Ｋｉｐ１）の活性を阻害する。Ｍａｌら、１９９６，Ｎａｔｕｒｅ ３８０：
２６２−２６５；Ｎｏｍｕｒａら、１９９７，Ｇｅｎｅ １９９１：２１１−２
１８；Ｃａｒｎｅｉｒｏら、１９９８，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １６（１１）：１４
５５−１４６５；Ｍｕｌｌｅｒら、１９９７，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ １５（２１）
：２５６１−２５７６。

【００１８】 ＨｅｎｇｓｔおよびＲｅｅｄ，１９９６，Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７１：１８６１
−１８６４は、ｐ２７（Ｋｉｐ１）タンパク質レベルが、細胞周期にわたって変
化すること；しかし、ｐ２７（Ｋｉｐ１）をコードするメッセンジャーＲＮＡの
レベルは、細胞周期を通して一定であることを示し、そしてｐ２７（Ｋｉｐ１）
の翻訳制御が、ｐ２７（Ｋｉｐ１）タンパク質レベルの制御にとって重要な機構
であると結論づけた。

【００１９】 まとめて、ｐ２７（Ｋｉｐ１）の転写、翻訳、および翻訳後調節は、マイトジ
ェンシグナルと細胞周期進行との間の重要な機構的リンクを提供する。

【００２０】 （腫瘍形成および腫瘍抑制におけるｐ２７（Ｋｉｐ１）の役割） 細胞周期制御におけるそれらの役割を通して、ｐ２７（Ｋｉｐ１）のようなＣ
ＤＫインヒビターは、癌の発生および／または進行、ニューロン分化、およびア
ポトーシスのような種々の生物学的現象において顕著な役割を果たす。癌発生お
よび／または進行は、細胞***周期を制御する分子機構の変更に厳密にリンクし
ている。ｐ２７（Ｋｉｐ１）は、細胞周期のＧ１期を通して、およびＧ１／Ｓ期
の移行において進行を調節する。従って、ｐ２７（Ｋｉｐ１）は、白血病、リン
パ腫、乳癌、膵癌、結腸直腸癌、および肺癌を含む多数の癌に関係する。

【００２１】 ｐ２７（Ｋｉｐ１）を欠損するマウス（本明細書中で、「ｐ２７（Ｋｉｐ１）
（−／−）」という）は、コントロール動物よりも大きく、胸腺、下垂体および
副腎、ならびに性腺器官は、著しい肥大化を示す。これは、全ての組織および器
官にける細胞数の増大の結果であり、そして細胞増殖の制御におけるｐ２７（Ｋ
ｉｐ１）の重要性を確認する。網膜芽細胞腫（Ｒｂ）遺伝子変異を有するマウス
と類似して、ｐ２７（Ｋｉｐ１）（−／−）マウスは、しばしば、下垂体腫瘍を
自発的に発症する。これは、ｐ２７（Ｋｉｐ１）が、腫瘍形成の阻害において重
要な役割を果たすこと、およびｐ２７（Ｋｉｐ１）が、種々の細胞の増殖調節因
子として作用することを明らかに示す。

【００２２】 ｐ２７（Ｋｉｐ１）（−／−）マウスにおける腫瘍の発生にもかかわらず、ｐ
２７（Ｋｉｐ１）遺伝子は、ヒト腫瘍において不活化されたものを観察されてお
らず、そしてｐ２７（Ｋｉｐ１）における変異は、原発性の成体Ｔ細胞白血病、
非ホジキンリンパ腫、およびヒト乳癌の稀なケースにおいてのみ検出されている
。Ｈａｔｔａら，１９９７，Ｌｅｕｋｅｍｉａ １１：９８４−９８９；Ｆｅｒ
ｒａｎｄｏ，１９９６，Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，９７：９１−９４。さ
らに、ｐ２７（Ｋｉｐ１）の減少したレベルは、乳癌、結腸直腸癌、および膵癌
の患者の生存が不良であることを予測する。Ｆｒｅｄｅｒｓｄｏｒｆら、１９９
７，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９４：６３８０−６３８５
；Ｇｒｏｓｈｏｎｇら，１９９７，Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．１１：１５
９３−１６０７；Ｙａｓｕｉら，１９９７，Ｊａｐａｎｅｓｅ Ｊ．Ｃａｎｃｅ
ｒ Ｒｅｓ．８８：６２５−６２９；Ｋａｗａら、１９９７，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａ
ｎｃｅｒ ７２：９０６−９１１。ｐ２７（Ｋｉｐ１）発現レベルは、癌進行と
相関する。なぜなら、ｐ２７（Ｋｉｐ１）発現レベルの減少が、進行した段階、
腫瘍侵襲の深さ、およびリンパ節転移と有意に相関するからである。従って、ｐ
２７（Ｋｉｐ１）は、ヒト癌と直接関係し、そしてｐ２７（Ｋｉｐ１）発現レベ
ルは、癌における有用な予後マーカーとして働き得る。

【００２３】 （分化におけるｐ２７（Ｋｉｐ１）の役割） ｐ２７（Ｋｉｐ１）は、多数の細胞型の分化に関与することが観察されている
。例えば、ｐ２７（Ｋｉｐ１）の神経細胞、造血細胞、および筋肉前駆体細胞へ
の導入は、それらの分化を加速する。Ｋｒａｎｅｎｂｕｒｇら、１９９５，Ｊ．
Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．８７：１２２５−１２３５；Ｌｉｕら、１９９６，Ｇｅｎ
ｅｓ ａｎｄ Ｄｅｖ．１０：１４２−１５３；Ｇｕｏら、１９９５，Ｍｏｌ．
Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１５：３８２３−３８２９。さらに、ｐ２７（Ｋｉｐ１）
は、発生中の胸腺細胞のサブセットにおいて、ダウンレギュレートされることが
見出され（Ｈｏｆｆｍａｎら、１９９６ Ｇｅｎｅ ａｎｄ Ｄｅｖ．９：９４
８−９６２）、そして高レベルのｐ２７（Ｋｉｐ１）が、マウスの神経発生の間
に皮質有糸***後ニューロンにおいて蓄積する一方、低レベルがそれらの前駆体
神経芽細胞において見出された。また、見せかけの（ｓｔａｇｅｄ）胎児脳抽出
物における上昇したレベルのｐ２７（Ｋｉｐ１）は、ｐ２７（Ｋｉｐ１）のＣＤ
Ｋ２への結合と相関する。Ｌｅｅら、１９９６，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．
Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９３：３２５９−３２６３。ｐ２７（Ｋｉｐ１）は、中枢神経
系の発生の間における稀突起膠前駆体細胞（０−２Ａ）の細胞周期からの脱退を
媒介し、そしてこれらの前駆体細胞におけるｐ２７（Ｋｉｐ１）の蓄積は、稀突
起膠細胞の分化と相関する。Ｃａｓａｃｃｉａ−Ｂｏｎｎｅｆｉｌら、１９９７
，Ｇｅｎｅｓ ａｎｄ Ｄｅｖ．１１：２３３５−２３４６。

【００２４】 （アポトーシスにおけるｐ２７（Ｋｉｐ１）の役割） ホルモン誘導アポトーシスの間に、ｐ２７（Ｋｉｐ１）の発現は増大し、そし
てその結果として、細胞周期のＧ２／Ｍ期移行が遮断される。Ｆｕｒｕｙａら，
１９９７，Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１７：２０８９−２０９３。同様に
、抗ＩｇＭ誘導Ｂ細胞リンパ腫における増殖停止は、ｐ２７（Ｋｉｐ１）の合成
の増大に依存する。一般に、ｐ２７（Ｋｉｐ１）のレベルの増大は、網膜芽細胞
腫遺伝子産物の減少したリン酸化と相関し、これは、細胞周期停止および引き続
くアポトーシスを導く。Ｓｃｏｔｔら、１９９７，Ｃｕｒｒ．Ｔｏｐ．Ｍｉｃｒ
ｏｂｉｏｌ．Ｉｍｕｎｏｌ．２２４：１０３−１１２；Ｅｙｈｅｖｅｓｋｙら、
１９９６，Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｃｅｌｌ．７：５５３−５６４。これは、ｐ２７
（Ｋｉｐ１）レベルが有意に減少された腫瘍増殖において観察されたことと対照
的である。

【００２５】 （アテローム性動脈硬化症におけるｐ２７（Ｋｉｐ１）の役割） アテローム性動脈硬化症および再狭窄の間、血管平滑筋細胞（ＶＳＭＣ）の異
常な増殖は、内膜過形成に寄与する。これらの細胞におけるＣＤＫ２活性のダウ
ンレギュレーションは、ＣＤＫ２−ｐ２７（Ｋｉｐ１）複合体によって媒介され
る。Ｃｈｅｎら、１９９７，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９９：２３３４−２
３４１。米国特許第５，６７２，５０８号もまた参照のこと。さらに、単球由来
のマクロファージの蓄積（この蓄積はまた、プラーク形成にも寄与する）は、ア
テローム硬化型のプラークに存在するマクロファージコロニー刺激因子（ＭＣＳ
Ｆ）によって駆動される。興味深いことに、ＭＣＳＦは、細胞周期前のｐ２７（
Ｋｉｐ１）の首尾良いダウンレギュレーションに必要とされる。Ａｎｔｏｎｏｖ
ら、１９９７，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９９：２８６７−２８７６。

【００２６】 （膜性腎症におけるｐ２７（Ｋｉｐ１）の役割） 進行性糸球体腎炎において、糸球体間質（ｇｌｏｍｅｒｕｌａｒ ｍｅｓａｎ
ｇｌｉａｌ）細胞の肥厚化は、サイクリンキナーゼインヒビターｐ２７（Ｋｉｐ
１）およびｐ２１（Ｃｉｐ１）の発現における顕著なアップレギュレーションと
関連する。Ｓｈａｎｋｌａｎｄら、１９９７，Ｋｉｎｄｎｅｙ Ｉｎｔ．５２：
４０１−４１３。これらのキナーゼインヒビターの発現のこのようなアップレギ
ュレーションは、細胞周期停止を導き、そして細胞増殖の減少、糸球体機能の低
下、およびその結果としての腎不全をもたらす。

【００２７】 まとめて、ｐ２７（Ｋｉｐ１）は、細胞周期進行の制御と関係し、従って、腫
瘍形成、腫瘍進行および伝播、神経分化、アポトーシス、アテローム性動脈硬化
症、ならびに腎症において役割を有する。

【００２８】 （ＦＫＢＰ−１２） 低分子量（１１．８ｋＤａ）の細胞質ゾル薬物結合タンパク質ＦＫＢＰ−２は
、短い合成ペプチドにおけるＸａａプロリンペプチド結合の遅いシスからトラン
スへの異性化を触媒する。Ｓｉｅｈｋｉｃｒｋａら、１９８９、Ｎａｔｕｒｅ
３４１：７５５−７５７；Ｇａｌａｔ，１９９３，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ
．２１６：６８９−７０７。従って、それは、ペプチジルプロリルシストランス
イソメラーゼ（ＰＰＩａｓｅ）として分類されている。このクラスの他のタンパ
ク質は、シクロスポリンＡ結合タンパク質またはサイクロフィリンである。ＦＫ
ＢＰ−１２およびサイクロフィリンの類似の酵素活性は、免疫抑制剤のレセプタ
ーとして働くそれらの能力とともに、これらのタンパク質についての「イムノフ
ィリン」の一般的な名称（ｄｅｎｏｍｉｎａｔｉｏｎ）を正当化した。Ｍａｒｋ
ｓ，１９９６，Ｐｈｙｓ．Ｒｅｖｉｅｗｓ ７６：６３１−６４９。

【００２９】 ＦＫＢＰ−１２は、免疫抑制剤ＦＫ５０６に結合し、従って、そのＦＫ５０６
−結合タンパク質という名前がある。また、ＦＫＢＰ−１２は、別の強力かつ臨
床的に有用な免疫抑制剤ラパマイシンに、等価な親和性を有して選択的に結合し
、そしておそらくラパマイシン依存性免疫抑制を媒介する。ＦＫ５０６およびラ
パマイシンの両方は、臓器移植および自己免疫疾患の処置後の移植片拒絶の予防
における実現されたか、または潜在的な臨床的適用を有する。

【００３０】 ＦＫＢＰ−１２は、仔ウシ胸腺、ヒト脾臓（Ｈａｒｄｉｎｇら、１９８９，Ｎ
ａｔｕｒｅ ３４１：７６１−７６３）、およびＴリンパ球（Ｓｉｅｋｉｅｒｋ
ａら、１９８９，Ｎａｔｕｒｅ ３４１：７５５−７５７）から単離されており
、そして最初にＳｔａｎｄａｅｒｔら、１９９０，Ｎａｔｕｒｅ ３４６：６４
１−６７４およびＭａｋｉら、１９９０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ
８７：５４４０−５４４３によってクローニングされた。ＦＫＢＰ−１２のヌク
レオチド配列は、アクセッション番号Ｘ５５７４１のもとにＧｅｎＢａｎｋにお
いて利用可能である。

【００３１】 Ｘ線結晶解析研究は、ＦＫＢＰ−１２がコンパクトな球状の構造を有し、短い
αへリックス（アミノ酸残基５８−６４）のまわりを巻く５つの反平行なβシー
トを含むことを明らかにしている。免疫抑制薬物ラパマイシンまたはＦＫ５０６
は、βシート３と４とへリックスの間の卵形の深い疎水性ポケット（Ｔｙｒ２６
、Ｐｈｅ４６、Ｐｈｅ９９、Ｖａｌ５５、Ｉｌｅ５６、Ｔｒｐ５９を含む）に結
合し、そして疎水性相互作用および分子間水素結合を介してタンパク質と接触し
、それにより、単一のエフェクター分子複合体を形成する。ＦＫＢＰ−１２・Ｆ
Ｋ５０６複合体がＣａ²⁺依存性セリンスレオニンホスファターゼ（カルシニュー
リン）と相互作用し、そしてそれを阻害する一方、ＦＫＢＰ−１２・ラパマイシ
ン複合体は、サイトカイン媒介シグナル伝達の単一の生化学的プロセスに影響を
及ぼし、そして細胞周期におけるＧ１からＳ期への移行を遮断する。

【００３２】 ＦＫＢＰ−１２はまた、筋小胞体および小胞体からのカルシウム流出を制御す
るリアノジンおよびイノシトールトリホスフェートレセプターに対する効果を介
して細胞内Ｃａ²⁺調節に重要である。ＦＫＢＰ−１２は、骨格筋および心筋の筋
小胞体の主要なＣａ²⁺放出チャネル／リアノジンレセプターの機能に物理的に関
連し、そしてそれを調節する。ＦＫＢＰ−１２・ＦＫ５０６複合体は、カルシニ
ューリン（Ｔ細胞抗原レセプターの結合に応答してのインターロイキン−２遺伝
子の転写活性化に必要とされるＣａ²⁺およびカルモジュリン結合シグナル伝達タ
ンパク質）に特異的に結合し、そして阻害する。Ａｂｒａｈａｍ ＆ Ｗｉｅｄ
ｅｒｒｅｃｈｔ，１９９６，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍ．１４：４８３−５１０。
ＦＫＢＰ−１２はまた、細胞内カルシウム放出チャネル複合体の内在性成分であ
ることが見出され、そしてチャネルの開閉をすることによってこれらのチャネル
の機能を調節し得る。Ｂｒｉｌｌａｎｔｅｓら、１９９４，Ｃｅｌｌ ７７：５
１３−３２３。

【００３３】 ＦＫＢＰ−１２はまた、形質転換成長因子β（ＴＧＦ−βＲＩ）のＩ型レセプ
ターと相互作用し、そのシグナル伝達機能を阻害する。Ｗａｎｇら、１９９６，
Ｃｅｌｌ ８６：４３５−４４４。ＴＧＦ−βレセプターへのＦＫＢＰ−１２結
合は、ＴＧＦ−βレセプターＩ中のＦＫＢＰ−１２のラパマイシン／Ｌｅｕ−Ｐ
ｒｏ結合ポケットおよび活性化リン酸化部位の隣に位置するＬｅｕ−Ｐｒｏ配列
を含む。この相互作用は、過剰のＦＫ５０６によって競合的に阻害される；同様
に、ラパマイシンは、ＦＫＢＰ−１２のＴＧＦ−βレセプターへの結合と競合す
る。Ｃｈｅｎら、１９９７，ＥＭＢＯ Ｊ １６：３８６６−３８７６。ＦＫＢ
Ｐ−１２結合は、ＴＧＦ−βファミリーリガンドのシグナル伝達経路に対して阻
害性であると考えられている。

【００３４】 最後に、ラパマイシンの異なる機能は、リガンド活性化免疫抑制および細胞増
殖の阻害におけるＦＫＢＰ−１２の関与である。ラパマイシンのその細胞質ゾル
レセプターＦＫＢＰ−１２への結合の間に、細胞中で、いくつかの生化学的変更
が媒介される。ラパマイシンの強力な抗増殖性活性は、ＦＫＢＰ−１２への結合
およびラパマイシンの標的との引き続く相互作用に関与し、結果としてｐ７０Ｓ
６が阻害される。しかし、ｐ７０Ｓ６キナーゼ阻害も、ｐ２７（Ｋｉｐ１）誘導
型サイクリンＥ−ＣＤＫ２阻害もいずれも、ＦＫＢＰ−ラパマイシン複合体によ
って直接媒介される。そのかわり、この複合体が、ホスファチジルイノシトール
キナーゼの触媒ドメインに対して配列相同性を有するｍＴＯＲタンパク質と物理
的に相互作用する。ＤｕｍｏｎｔおよびＳｕ、１９９６，Ｌｉｆｅ Ｓｃｉ．５
８：３７３−３９５。線形経路（ｌｉｎｅａｒ ｐａｔｈｗａｙ）仮説に従って
、ｍＴＯＲは、ｐ２７（Ｋｉｐ１）レベルおよびＧ１期ＣＤＫに、ｐ７０Ｓ６キ
ナーゼのタンパク質合成または特定の転写事象に対する活性を調節することによ
って、影響を及ぼす。

【００３５】 まとめて、ＦＫＢＰ−１２は、腫瘍形成ならびに腫瘍進行および伝播のような
種々の生物学的現象における細胞周期進行の制御に関係する。さらに、ＦＫＢＰ
−１２は、免疫抑制に関与し、そして臓器移植および自己免疫疾患において有意
な役割を有し得る。また、ＦＫＢＰ−１２は、心筋および骨格筋におけるカルシ
ウム流出の調節に関与する。さらに、ＦＫＢＰ−１２は、サイトカイン媒介シグ
ナル伝達において役割を果たす。

【００３６】 上記で概説したように、ｐ２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１２は、類似の
プロセスに関与することが記載されている。しかし、ｐ２７（Ｋｉｐ１）のＦＫ
ＢＰ−１２との直接的な結合および相互作用は、本発明以前に記載されていない
。

【００３７】 本出願のいかなる参考文献の引用または特定も、そのような参考文献が本発明
の先行技術として利用可能であることを認めることであると解釈されるべきでは
ない。

【００３８】 （発明の要旨） 本発明は、部分的に、ｐ２７（Ｋｉｐ１）が、ｐ２７（Ｋｉｐ１）結合タンパ
ク質（例えば、ＦＫＢＰ−１２）と結合し、そしてそれと複合体を形成するとい
う本発明者らの発見に基づく。従って、本発明は、本明細書中に、ｐ２７（Ｋｉ
ｐ１）タンパク質およびこのｐ２７（Ｋｉｐ１）タンパク質と相互作用（すなわ
ち、結合）するタンパク質から構成されるタンパク質複合体の産生のための組成
物および方法を開示する。詳細には、本発明は、ｐ２７（Ｋｉｐ１）またはその
誘導体、フラグメントもしくはアナログの、ＦＫＢＰ−１２またはその誘導体、
アナログもしくはフラグメントとの複合体に関する。ｐ２７（Ｋｉｐ１）および
ＦＫＢＰ−１２の複合体は、本明細書中で「ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１
２」と命名される。本発明はさらに、ｐ２７（Ｋｉｐ１）と相互作用するか、ま
たはｐ２７（Ｋｉｐ１）の誘導体、フラグメント、もしくはアナログと相互作用
するタンパク質のスクリーニングの方法に関する。好ましくは、スクリーニング
のための方法は、マトリックス接合（ｍａｔｒｉｘ ｍａｔｉｎｇ）試験または
その改変である。特定の実施例（以下）を参照のこと。

【００３９】 本発明はまた、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体またはこの複合体
の形成の活性を調節するため（すなわち、阻害または増強するため）の方法に関
する。ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体のタンパク質成分は、生理学
的プロセス（例えば、細胞周期進行、細胞分化、およびアポトーシスの制御、細
胞内シグナル伝達、神経形成、ウイルス感染に対する応答）、および病理学的プ
ロセス（腫瘍形成および腫瘍伝播のような過剰増殖性障害、神経変性疾患および
自己免疫疾患のような変性性障害、臓器移植と関連する障害、炎症性およびアレ
ルギー性障害、アテローム性動脈硬化症、腎症、ならびに心疾患および筋肉疾患
を含む）を含むが、これらに限定されない種々の細胞機能に結びつけられてきた
。

【００４０】 例えば、組換え手段による、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体、な
らびにこのタンパク質およびタンパク質複合体の誘導体およびアナログの産生の
方法が本明細書に開示される。本発明はさらに、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ
−１２複合体の活性を調節する（すなわち、阻害または増強する）ための方法を
提供する。従って、本発明は、細胞機能（特に、ｐ２７（Ｋｉｐ１）タンパク質
が、関係する細胞機能（上記の細胞プロセスおよび生理学的プロセスを含む））
を調節または変更する能力についての、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複
合体、ならびにその誘導体、フラグメント、およびアナログのスクリーニングの
ための方法を提供する。

【００４１】 ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体の活性の種々の調節因子（すなわ
ち、アゴニスト、アンタゴニスト、およびインヒビター）についてのスクリーニ
ングの動物モデルおよび方法もまた、本明細書に開示される。

【００４２】 本発明はさらに、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体（およびその複
合体に参加する個々のタンパク質構成要素をコードする核酸）に基づく、治療お
よび予防、ならびに診断、予後、およびスクリーニングの方法および薬学的組成
物に関する。本発明の治療化合物には、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複
合体、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体（ここで、その複合体の１つ
または両方のメンバーは、ｐ２７（Ｋｉｐ１）またはＦＫＢＰ−１２の誘導体、
フラグメント、またはアナログである）；その複合体に特異的な抗体、その複合
体の上記の成分をコードする核酸、および種々のタンパク質複合体成分をコード
するヌクレオチド配列に相補的なアンチセンス核酸が含まれるが、これらに限定
されない。診断、予後、およびスクリーニングのためのキットもまた、提供され
る。

【００４３】 ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体の形成／合成を阻害、あるいは増
大する分子の同定のための方法もまた、本発明によって提供される。

【００４４】 （発明の詳細な説明） 本発明は、一部は、酵母マトリックス接合試験の改変型を用いる、ｐ２７（Ｋ
ｉｐ１）と相互作用するタンパク質の同定に基く。ＦＫＢＰ−１２の少なくとも
アミノ酸３４〜１０７は、生理的条件下で、ｐ２７（Ｋｉｐ１）の少なくともア
ミノ酸４３〜１９８と複合体を形成することが見出された（ＦＫＢＰ−１２とｐ
２７（Ｋｉｐ１）の複合体は、本明細書において「ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢ
Ｐ−１２」と示される）。ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体は、相互
作用のおかげで、ｐ２７（Ｋｉｐ１）およびその結合パートナーの機能的活性の
調節に関与する。このような機能的活性としては、以下が挙げられるがこれらに
限定されない：細胞周期進行の制御のような生理学的プロセス、細胞の分化およ
びアポトーシス、細胞内シグナル伝達、神経発生、ウイルス感染への応答、なら
びに、過剰増殖障害（例えば、腫瘍形成および腫瘍伝播）、変性性障害（例えば
、神経変性疾患）、自己免疫疾患、器官移植に関連する障害、炎症性疾患および
アレルギー性疾患、アテローム性動脈硬化症、腎障害、ならびに心臓の疾患およ
び筋疾患を含む病理学的プロセス。

【００４５】 本発明はまた、相互作用するタンパク質についてのスクリーニングの方法（例
えば、ｐ２７（Ｋｉｐ１）への結合）に関する。本発明はさらに、特にＦＫＢＰ
−１２タンパク質またはその誘導体、アナログもしくはフラグメントとの、ｐ２
７（Ｋｉｐ１）タンパク質またはその誘導体、アナログもしくはフラグメントの
複合体を開示する。好ましい実施態様では、このような複合体は、抗−ｐ２７（
Ｋｉｐ１）抗体、抗−ＦＫＢＰ−１２抗体、および／または抗−ｐ２７（Ｋｉｐ
１）・ＦＫＢＰ−１２複合体抗体と結合する。本発明の別の特定の実施態様では
、ヒトｐ２７（Ｋｉｐ１）とヒトＦＫＢＰ−１２の複合体が提供される。

【００４６】 本発明はまた、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体の産生および／ま
たは単離のための方法論を提供する。特定の実施態様において、本発明は、ｐ２
７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１２の両方（または、その複合体の１つもしく
は両方のメンバーの誘導体、フラグメントもしくはアナログ）を発現するための
組換えＤＮＡ技術を用いる方法論を提供する。ここで、両方の結合パートナーは
、１つの異種プロモーター（すなわち、特定の複合体成分をコードする遺伝子に
天然には関連しないプロモーター）の制御下であるか、またはそれぞれが別の異
種プロモーターの制御下である。

【００４７】 ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体の異常なレベルに関連する疾患お
よび障害について、診断、予想およびスクリーニングする方法が開示される。本
発明はまた、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体、またはｐ２７（Ｋｉ
ｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体の活性もしくは複合体形成の調節因子（例えば、
ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体に結合する抗体）、または非複合体
化ｐ２７（Ｋｉｐ１）もしくはその結合パートナーまたはそれらのフラグメント
の投与による、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体の異常なレベル、ま
たはこの複合体の１つ以上の成分の活性の異常なレベルに関連する疾患または障
害の処置または予防のための方法論を提供する。好ましくは、前述のフラグメン
トは、以下を含む：（ｉ）複合体形成に直接関するｐ２７（Ｋｉｐ１）またはＦ
ＫＢＰ−１２の一部；（ｉｉ）結合親和性を調節するｐ２７（Ｋｉｐ１）または
ＦＫＢＰ−１２の変異体；（ｉｉｉ）複合体形成の小分子のインヒビターまたは
エンハンサー；あるいは（ｉｖ）複合体を安定化するか、または中和するかのい
ずれかである抗体、など。

【００４８】 治療剤または診断剤として、生物学的活性についてｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫ
ＢＰ−１２複合体をアッセイする方法論、ならびにｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢ
Ｐ−１２複合体またはその調節因子（すなわち、アゴニストおよびアンタゴニス
ト）をスクリーニングするための方法論がまた、本明細書において開示される。

【００４９】 開示の清明さのため、そして制限する目的でななく、本発明の詳細な説明を以
下の小節に分割する。

【００５０】 （１）ｐ２７（Ｋｉｐ１）タンパク質、ＦＫＢＰ−１２タンパク質およびｐ２
７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体 本発明は、ｐ２７（Ｋｉｐ１）とＦＫＢＰ−１２複合体との複合体（ｐ２７（
Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体）を開示する。好ましい実施態様では、ｐ２
７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体は、ヒトタンパク質の複合体である。本
発明はまた、以下に関する：（ｉ）ｐ２７（Ｋｉｐ１）とＦＫＢＰ−１２の誘導
体、フラグメントおよびアナログの複合体；（ｉｉ）ｐ２７（Ｋｉｐ１）とＦＫ
ＢＰ−１２の誘導体、フラグメントおよびアナログとの複合体、ならびに（ｉｉ
ｉ）ｐ２７（Ｋｉｐ１）の誘導体、フラグメントおよびアナログとＦＫＢＰ−１
２との複合体。本明細書において用いる場合、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−
１２複合体のフラグメント、誘導体またはアナログとは、複合体（ここで複合体
の１つまたは両方のメンバーは、野生型ｐ２７（Ｋｉｐ１）タンパク質または野
生型ＦＫＢＰ−１２タンパク質のフラグメント、誘導体またはアナログである）
を含むことに注意すべきである。

【００５１】 本明細書において提供される誘導体、フラグメントおよびアナログは、少なく
とも６つの（連続する）核酸または少なくとも４つの（連続する）アミノ酸の配
列（それぞれ、核酸の場合は、特異的ハイブリダイゼーションを可能にするのに
十分な長さ、アミノ酸の場合は、１つのエピトープの特異的な認識を可能にする
長さ）として規定される。フラグメントは、野生型全長配列よりも、多くとも１
核酸少ないかまたは１アミノ酸少ない。誘導体およびアナログは、下記のように
、この誘導体およびアナログが改変された核酸またはアミノ酸を含む場合、全長
であってもまたは全長でなくともよい。ｐ２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１
２の誘導体またはアナログとしては、種々の実施態様において、（同一のサイズ
のアミノ酸配列にわたってか、または当該分野で公知のコンピューター相同性プ
ログラムにより行われると比較した場合少なくとも約３０％、５０％、７０％、
８０％または９５％同一（好ましくは８０〜９５％の同一性）で、ｐ２７（Ｋｉ
ｐ１）またはＦＫＢＰ−１２に実質的に相同である領域を含む分子、あるいはス
トリンジェント（好ましい実施態様）、中度にストリンジェントもしくは低度に
ストリンジェントな条件下で、ｐ２７（Ｋｉｐ１）またはＦＫＢＰ−１２をコー
ドする配列の相補体（例えば逆向き相補体）にハイブリダイズし得る核酸をコー
ドするｐ２７（Ｋｉｐ１）またはＦＫＢＰ−１２に実質的に相同である領域を含
む分子、が挙げられるがこれらに限定されない。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら、Ｃ
ＵＲＲＥＮＴ ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ ＩＮ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＢＩＯＬＯＧ
Ｙ，Ｊｏｈｎ ＷｉｌｅｙおよびＳｏｎｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ，１９９３
、ならびに前出を参照のこと。

【００５２】 好ましくは、本発明により開示されるように、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ
−１２複合体の１つまたは両方のメンバーが、野生型タンパク質のフラグメント
、誘導体またはアナログである、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体は
、機能的に活性なｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体である。特定の局
面では、ｐ２７（Ｋｉｐ１）および／またはＦＫＢＰ−１２の天然のタンパク質
、誘導体またはアナログは、動物（例えば、マウス、ラット、ブタ、ウシ、イヌ
、サル、カエル）、昆虫（例えば、ハエ）、植物、または最も好ましくはヒトの
ものである。本明細書で用いられる場合、用語「機能的に活性なｐ２７（Ｋｉｐ
１）・ＦＫＢＰ−１２複合体」は、全長ＦＫＢＰ−１２と複合体化された全長ｐ
２７（Ｋｉｐ１）の１つ以上の公知の機能的性状を提示する種をいう。この機能
には、排他的ではないが以下が挙げられる：細胞周期進行の制御、細胞分化およ
びアポトーシス、細胞内シグナル伝達、神経発生、ウイルス感染に対する応答、
過剰増殖障害（例えば、腫瘍形成および腫瘍伝播）、変性性障害（例えば、神経
変性疾患）、自己免疫疾患、器官移植に関連する障害、炎症性疾患および／また
はアレルギー性疾患、アテローム性動脈硬化症、腎障害、心臓疾患、筋疾患など
。

【００５３】 本発明の特定の実施態様は、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体の１
つまたは両方のタンパク質種のフラグメントを含むｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢ
Ｐ−１２フラグメントを開示する。好ましい実施態様では、これらの前述のフラ
グメントは、本発明において、改良され改変された酵母ツーハイブリッドアッセ
イにおいてｐ２７（Ｋｉｐ１）と相互作用するとして同定されたＦＫＢＰ−１２
のフラグメント（すなわち、図２［配列番号４］に示されるＦＫＢＰ−１２のア
ミノ酸３４〜１０７）からなり得るがこれに限定されない。さらに、複合体のい
ずれかのメンバーの前述の領域のいくつかまたは全てを欠失し得る、フラグメン
ト（またはフラグメントを含むタンパク質）、および前述のタンパク質をコード
する核酸がまた、本明細書において開示される。

【００５４】 ヒトｐ２７（Ｋｉｐ１）およびヒトＦＫＢＰ−１２をコードするヌクレオチド
配列は公知である（それぞれ、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｕ１０９０６およびＧｅ
ｎＢａｎｋ登録番号Ｘ５５７４１）、そしてそれぞれ図１および２、配列番号１
および３に開示される。核酸は、当該分野で公知の任意の方法（例えば、配列の
３’末端および５’末端にハイブリダイズ可能な合成プライマーを用いるＰＣＲ
増幅により、および／または所定の遺伝子配列に特異的なオリゴヌクレオチド配
列を用いるｃＤＮＡライブラリーもしくはゲノムライブラリーからのクローニン
グなど）により獲得され得る。

【００５５】 相同体（すなわち、ヒト以外の種に由来する前述のタンパク質をコードする核
酸）または他の関連する配列（例えば、パラログ（ｐａｒａｌｏｇ））はまた、
核酸ハイブリダイゼーションおよびクローニングについて当該分野で周知の方法
を用いる、プローブとして特定のヒト配列のすべて、もしくは一部を用いる低ス
トリンジェンシー、中ストリンジェンシー、または高ストリンジェンシーなハイ
ブリダイゼーションにより、獲得され得る。

【００５６】 最も好ましい実施態様では、ｐ２７（Ｋｉｐ１）および／またはＦＫＢＰ−１
２をコードする核酸配列に、高ストリンジェンシーな条件下でハイブリダイズ可
能である核酸配列（またはそれの相補体）、またはこれらの誘導体が提供される
。例示の目的であり、制限しないが、高ストリンジェンシーのこのような条件を
用いる手順は、以下のようである：工程１：ＤＮＡを含有するフィルターを、６
×ＳＳＣ、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、１ｍＭ ＥＤＴＡ、０
．０２％ＰＶＰ、０．０２％Ｆｉｃｏｌｌ、０．０２％ＢＳＡ、および５００μ
ｇ／ｍｌ変性サケ***ＤＮＡからなる緩衝液中で６５℃で８時間から１晩、前処
置する。工程２：フィルターを、上記のプレハイブリダイゼーション混合物（１
００μｇ／ｍｌの変性サケ***ＤＮＡおよび５〜２０×１０⁶ｃｐｍの³²Ｐ標識
プローブを添加する）中で６５℃で４８時間ハイブリダイズする。工程３：フィ
ルターを、２×ＳＳＣ、０．０１％ＰＶＰ、０．０１％Ｆｉｃｏｌｌおよび０．
０１％ＢＳＡを含有する溶液において３７℃で１時間洗浄する。その後、これを
０．１×ＳＳＣ中で５０℃で４５分間洗浄する。工程４：フィルターをオートラ
ジオグラフする。用いられ得る高ストリンジェンシーの他の条件は、当該分野で
周知である。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら（編）１９９３、ＣＵＲＲＥＮＴ ＰＲ
ＯＲＯＣＯＬＳ ＩＮ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＢＩＯＬＯＧＹ、Ｊｏｈｎ Ｗｉ
ｌｅｙおよびＳｏｎｓ，ＮＹ、およびＫｒｉｅｇｌｅｒ、１９９０、ＧＥＮＥ
ＴＲＡＮＳＦＥＲ ＡＮＤ ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ，Ａ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ
ＭＡＮＵＡＬ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ．を参照のこと。

【００５７】 第２の実施態様において、中度ストリンジェンシーの条件下で、ｐ２７（Ｋｉ
ｐ１）および／またはＦＫＢＰ−１２をコードする核酸配列にハイブリダイズし
得る核酸配列（または前出の相補体）またはいずれかの誘導体が提供される。例
示の目的であって、限定はしないが、中度ストリンジェンシーのこのような条件
を用いる手順は、以下のようである：工程１：ＤＮＡを含有するフィルターを、
６×ＳＳＣ、５×デンハート溶液、０．５％ＳＤＳおよび１００μｇ／ｍｌ変性
サケ***ＤＮＡを含有する溶液中で５５℃で６時間、前処置する。工程２：フィ
ルターを、５〜２０×１０⁶ｃｐｍの³²Ｐ標識プローブを添加した同じ溶液中で
、５５℃で１８〜２０時間ハイブリダイズする。工程３：フィルターを、２×Ｓ
ＳＣ、０．１％ＳＤＳを含有する溶液中で３７℃で１時間洗浄し、次いで１×Ｓ
ＳＣおよび０．１％ＳＤＳを含有する溶液中で６０℃で３０分間、２回洗浄する
。工程４：フィルターをブロット乾燥し、そしてオートラジオグラフに曝露する
。用いられ得る中ストリンジェンシーの他の条件は、当該分野で周知である。例
えば、Ａｕｓｕｂｅｌら（編）１９９３、ＣＵＲＲＥＮＴ ＰＲＯＲＯＣＯＬＳ
ＩＮ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＢＩＯＬＯＧＹ、Ｊｏｈｎ ＷｉｌｅｙおよびＳ
ｏｎｓ，ＮＹ、およびＫｒｉｅｇｌｅｒ、１９９０、ＧＥＮＥ ＴＲＡＮＳＦＥ
Ｒ ＡＮＤ ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ，Ａ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ
，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ．を参照のこと。

【００５８】 第３の実施態様において、低度ストリンジェンシーの条件下で、ｐ２７（Ｋｉ
ｐ１）および／またはＦＫＢ１２核酸配列、ｐ２７（Ｋｉｐ１）および／または
ＦＫＢＰ−１２誘導体をコードする核酸配列（または前出の相補体）にハイブリ
ダイズし得る核酸配列が提供される。例示の目的であって、限定はしないが、低
度ストリンジェンシーのこのような条件を用いる手順は、以下のようである（Ｓ
ｈｉｌｏおよびＷｅｉｂｅｒｇ、１９８１Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．ＵＳＡ ７８：６７８９〜６７９２も参照のこと）：工程１：ＤＮＡを含有
するフィルターを、３５％ホルムアミド、５×ＳＳＣ、５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−Ｈ
Ｃｌ（ｐＨ７．５）、５ｍＭ ＥＤＴＡ、０．１％ＰＶＰ、０．１％Ｆｉｃｏｌ
ｌ、１％ＢＳＡおよび５００μｇ／ｍｌ変性サケ***ＤＮＡを含有する溶液中で
４０℃で６時間、前処置する。工程２：フィルターを、０．０２％ＰＶＰ、０，
０２％Ｆｉｃｏｌｌ、０．２％ＢＳＡ、１００μｇ／ｍｌのサケ***ＤＮＡ、１
０％（ｗｔ／ｖｏｌ）の硫酸デキストランおよび５〜２０×１０⁶ｃｐｍの³²Ｐ
標識プローブを添加した同じ溶液中で、４０℃で１８〜２０時間ハイブリダイズ
する。工程３：フィルターを、２×ＳＳＣ、２５ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ
７．４）、５ｍＭ ＥＤＴＡおよび０．１％ＳＤＳを含有する溶液中で５５℃で
１．５時間洗浄する。洗浄溶液を新鮮な溶液と交換し、そしてさらに１．５時間
６０℃でインキュベートする。工程４：フィルターをブロット乾燥し、そしてオ
ートラジオグラフに曝露する。必要であれば、フィルターを６５〜６８℃で３回
洗浄し、そしてフィルムに再度暴露する。用いられ得る低度ストリンジェンシー
の他の条件は、当該分野で周知である（例えば、種交差ハイブリダイゼーション
について用いられるように）。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら（編）１９９３、ＣＵ
ＲＲＥＮＴ ＰＲＯＲＯＣＯＬＳ ＩＮ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＢＩＯＬＯＧＹ
、Ｊｏｈｎ ＷｉｌｅｙおよびＳｏｎｓ，ＮＹ、およびＫｒｉｅｇｌｅｒ、１９
９０、ＧＥＮＥ ＴＲＡＮＳＦＥＲ ＡＮＤ ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ，Ａ ＬＡ
ＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ．を参
照のこと。

【００５９】 本発明はまた、前述の配列にハイブリダイズし得るかまたは相補的な核酸に関
連する。詳細には、本発明は、前述の配列にハイブリダイズし得る核酸に対する
逆向き相補体を提供する（すなわち、核酸鎖の逆向き相補体は、逆向き相補体が
核酸鎖に対してミスマッチがほとんどないかまたは全くなく、ハイブリダイズす
るように、その鎖の逆方向につながる相補的配列を有する）。特定の局面では、
ｐ２７（Ｋｉｐ１）および／またはＦＫＢＰ−１２の遺伝子の領域をコードする
少なくとも約１０、２５、５０、１００もしくは２００ヌクレオチドまたは全体
に相補的な（詳細には、逆向き相補的である）配列を含む核酸分子が提供される
。ｐ２７（Ｋｉｐ１）および／もしくはＦＫＢＰ−１２の誘導体およびアナログ
をコードする核酸分子（前出）、またはそれらに対するアンチセンス核酸（例え
ば、前出を参照のこと）がさらに提供される。

【００６０】 本発明において、改変酵母ツーハイブリッドアッセイを介してｐ２７（Ｋｉｐ
）反応体として同定されたヌクレオチド配列内で、潜在的なオープンリーディン
グフレームが、公的に利用可能なＮＣＢＩ ＢＬＡＳＴプログラムＯＲＦ Ｆｉ
ｎｄｅｒを用いて同定され得る。すべての公知のタンパク質翻訳産物は、少なく
とも６０アミノ酸以上である（Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，１９９２，ＰＲＯＴＥＩＮ
Ｓ，第２版．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）
ので、６０アミノ酸以上のタンパク質を可能性としてコードするＯＲＦのみが考
慮される。開始メチオニンコドン（ＡＴＧ）および翻訳終止コドン（ＴＧＡ、Ｔ
ＡＡ、またはＴＡＧ）が同定されれば、タンパク質の境界が規定される。他の可
能性のあるタンパク質は、ヌクレオチド配列の５’末端に伸長する任意のオープ
ンリーディングフレームを含む。この場合、このオープンリーディングフレーム
は、より長いタンパク質のＣ末端またはコア部分を予測する。同様に、ヌクレオ
チド配列の３’末端に伸長する任意のオープンリーディングフレームは、より長
いタンパク質のＮ末端部分を予測する。

【００６１】 （複合体またはｐ２７（Ｋｉｐ１）もしくはＦＫＢＰ−１２を得るための組換
え技術） ｐ２７（Ｋｉｐ１）タンパク質およびＦＫＢＰ−１２タンパク質（単独でか、
または複合体中で）は、タンパク質精製および組換えタンパク質発現のための当
該分野で周知の方法により獲得され得る。１つ以上のタンパク質の組換え発現の
ため、このタンパク質をコードするヌクレオチド配列のすべてまたは一部を含む
核酸が、適切な発現ベクター（すなわち、組み込まれたタンパク質コード配列の
転写および翻訳に必須のエレメントを含むベクター）に挿入され得る。好ましい
実施態様では、調節エレメントは異種性である（すなわち、ネイティブな遺伝子
プロモーターではない）。あるいは、必須の転写シグナルおよび翻訳シグナルは
また、ｐ２７（Ｋｉｐ１）のためのネイティブなプロモーターまたは任意のＦＫ
ＢＰ−１２遺伝子および／またはその隣接する領域により供給され得る。

【００６２】 種々の宿主ベクター系が、タンパク質コード配列を発現するために利用され得
る。これらとしては、（ｉ）ワクシニアウイルス、アデノウイルスなどで感染さ
れた哺乳動物細胞系；（ｉｉ）バキュロウイルスなどで感染された昆虫細胞系；
（ｉｉｉ）酵母ベクターを含有する酵母、または（ｉｖ）バクテリオファージ、
ＤＮＡ、プラスミドＤＮＡ、もしくはコスミドＤＮＡで形質転換された細菌、が
挙げられるがこれらに限定されない。利用される宿主ベクター系に依存して、多
数の適切な転写エレメントおよび翻訳エレメントの任意の１つが用いられ得る。

【００６３】 好ましい実施態様において、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体は、
同じプロモーターまたは２つの別のプロモーターのいずれかの制御下で、同じ細
胞内にｐ２７（Ｋｉｐ１）コード配列全体およびＦＫＢＰ−１２コード配列全体
を発現することにより得られる。別の実施態様において、ｐ２７（Ｋｉｐ１）の
誘導体、フラグメントもしくは相同体、および／またはＦＫＢＰ−１２の誘導体
、フラグメントもしくは相同体が組換え的に発現される。好ましくは、ｐ２７（
Ｋｉｐ１）および／またはＦＫＢＰ−１２タンパク質の誘導体、フラグメントま
たは相同体は、結合アッセイ（例えば、改変酵母ツーハイブリッド系アッセイ）
により同定された結合パートナーと複合体を形成し、そしてより好ましくは、抗
ｐ２７（Ｋｉｐ１）抗体、抗ＦＫＢＰ−１２抗体および／または抗ｐ２７（Ｋｉ
ｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体抗体に結合する複合体を形成する。

【００６４】 ベクターへの核酸複合体の挿入に関して、関連する先行技術において公知の任
意の方法論が利用され、適切な転写／翻訳制御シグナルおよびタンパク質コード
配列からなる、キメラ遺伝子を含む発現ベクターを構築し得る。これらの方法論
としては、インビトロ組換えＤＮＡおよび合成技術、ならびにインビボ組換え技
術（例えば、遺伝子組換え）が挙げられる得るがこれらに限定されない。２７（
Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１２のタンパク質、またはその誘導体、フラグメン
ト、アナログもしくは相同体をコードする核酸配列の発現は、それらの遺伝子ま
たはフラグメントが、目的の組換えＤＮＡ分子で同時形質転換されている宿主で
発現するように、第２の核酸配列により調節され得る。特定のタンパク質の発現
は、当該分野で公知の任意のプロモーター／エンハンサーにより制御され得る。
これには、以下が挙げられるがこれらに限定されない：（ｉ）ＳＶ４０初期プロ
モーター（例えば、ＢｅｒｎｏｉｓｔおよびＣｈａｍｂｏｎ，１９８１．Ｎａｔ
ｕｒｅ ２９０：３０４〜３１０を参照のこと）；（ｉｉ）ラウス肉腫ウイルス
の３’末端の長末端反復に含まれるプロモーター（例えば、Ｙａｍａｍｏｔｏら
、１９８０．Ｃｅｌｌ ２２：７８７〜７９７を参照のこと）；（ｉｉｉ）ヘル
ペスウイルスチミジンキナーゼプロモーター（例えば、Ｗａｇｎｅｒら、１９８
１．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ７８：１４４１〜１４４５
を参照のこと）；（ｉｖ）メタロチオネイン遺伝子の調節配列（例えば、Ｂｒｉ
ｎｓｔｅｒら、１９８２．Ｎａｔｕｒｅ ２９６：３９〜４２を参照のこと）；
（ｖ）βラクタマーゼプロモーターのような原核生物発現ベクター（例えば、Ｖ
ｉｌｌａ−Ｋａｍａｒｏｆｆら、１９７８．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉ．ＵＳＡ ７５：３７２７〜３７３１を参照のこと）；（ｖｉ）ｔａｃプロ
モーター（例えば、ＤｅＢｏｅｒら、１９８３．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ
．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８０：２１〜２５を参照のこと）。

【００６５】 さらに、植物発現ベクター内の植物のプロモーター／エンハンサー配列がまた
、利用され得る。これには以下が挙げられるがこれらに限定されない：（ｉ）ノ
パリンシンセターゼプロモーター（例えば、Ｈｅｒｒａｒ−Ｅｓｔｒｅｌｌａら
、１９８４．Ｎａｔｕｒｅ ３０３：２０９〜２１３を参照のこと）；（ｉｉ）
カリフラワーモザイクウイルス３５Ｓ ＲＮＡプロモーター（例えば、Ｇａｒｄ
ｅｒら、１９８１．Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．９：２８７１を参照のこと）
および（ｉｉｉ）光合成酵素リブロース二リン酸カルボキシラーゼのプロモータ
ー（例えば、Ｈｅｒｒｅｒａ−Ｅｓｔｒｅｌｌａら、１９８４．Ｎａｔｕｒｅ３
１０：１１５〜１２０を参照のこと）。

【００６６】 酵母および他の真菌由来のプロモーター／エンハンサーエレメント（例えば、
Ｇａｌ４プロモーター、アルコールデヒドロゲナーゼプロモーター、ホスホグリ
セロールキナーゼプロモーター、アルカリホスファターゼプロモーター）、なら
びに動物の転写制御領域（例えば、組織特異性を有し、そしてトランスジェニッ
ク動物において用いられているもの）由来のプロモーター／エンハンサーエレメ
ントが、本発明のタンパク質の産生に利用され得る。動物由来の転写制御配列と
しては、以下が挙げられるがこれらに限定されない：（ｉ）膵臓β細胞内で活性
なインスリン遺伝子制御領域（例えば、Ｈａｎａｈａｎら、１９８５．Ｎａｔｕ
ｒｅ ３１５：１１５〜１２２を参照のこと）；（ｉｉ）リンパ細胞内で活性な
免疫グロブリン遺伝子制御領域（例えば、Ｇｒｏｓｓｃｈｅｄｌら、１９８４．
Ｃｅｌｌ ３８：６４７〜６５８を参照のこと）；（ｉｉｉ）肝臓内で活性なア
ルブミン遺伝子制御領域（例えば、Ｐｉｎｃｋｅｒｔら、１９８７．Ｇｅｎｅｓ
ａｎｄ Ｄｅｖｅｌ．１：２６８〜２７６を参照のこと）；（ｉｖ）脳稀突起
神経膠細胞内で活性なミエリン塩基性タンパク質遺伝子制御領域（例えば、Ｒｅ
ａｄｈｅａｄら、１９８７．Ｃｅｌｌ ４８：７０３〜７１２）；ならびに（ｖ
）視床下部内で活性な性腺刺激ホルモン（ゴナドトロピン）放出ホルモン遺伝子
制御領域（例えば、Ｍａｓｏｎら、１９８６．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３４：１３７
２〜１３７８を参照のこと）、など。

【００６７】 本発明の特定の実施態様において、ｐ２７（Ｋｉｐ１）および／またはＦＫＢ
Ｐ−１２またはそれらのフラグメント、誘導体、もしくは相同体をコードする核
酸配列に作動可能に連結するプロモーター、１つ以上の複製起点、そして必要に
応じて１つ以上の選択マーカー（例えば、抗生物質耐性遺伝子）を含むベクター
が利用される。好ましい実施態様では、ｐ２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１
２の両方をコードする核酸配列に作動可能に連結されたプロモーター、１つ以上
の複製起点、および必要に応じて１つ以上の選択マーカーからなるベクターが利
用される。

【００６８】 別の特定の実施態様では、発現ベクターは、ｐ２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢ
Ｐ−１２のコード配列（またはその部分）を一緒にか、または別々に含む。発現
ベクターは、前述の遺伝子配列を３つの利用可能なｐＧＥＸベクター（グルタチ
オンＳ−トランスフェラーゼ発現ベクター；例えば、ＳｍｉｔｈおよびＪｏｈｎ
ｓｏｎ、１９８８ Ｇｅｎｅ７：３１〜４０を参照のこと）のそれぞれのＥｃｏ
ＲＩ制限部位にサブクローニングすること（従って、これは適切なリーディング
フレームにおいて産物の発現を可能にする）により生成され得る。

【００６９】 目的の配列を含む発現ベクターは、以下の３つの一般的アプローチにより同定
され得る：（ｉ）核酸ハイブリダイゼーション、（ｉｉ）「マーカー」遺伝子機
能の存在もしくは非存在、および／または（ｉｉｉ）挿入された配列の発現。最
初のアプローチにおいて、ｐ２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１２は、目的の
挿入された配列に対する相同配列および相補配列を含むプローブを用いる核酸ハ
イブリダイゼーションにより検出され得る。第２のアプローチにおいて、組換え
ベクター／宿主系は、ベクターへの目的の配列の挿入によって生じる、特定の「
マーカー」機能（例えば、ｐ２７（Ｋｉｐ１）、ＦＫＢＰ−１２、またはｐ２７
（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体に特異的な抗体への結合、抗生物質への耐
性、バキュロウイルスにおける封入体形成、など）の存在または非存在に基いて
同定および選択され得る。第３のアプローチでは、組換え発現ベクターは、組換
えベクターによるＦＫＢＰ−１２の発現と同時のｐ２７（Ｋｉｐ１）の発現につ
いてのアッセイにより同定され得る。

【００７０】 一旦、組換えｐ２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１２分子が同定され、そし
て複合体または個々のタンパク質が単離され、そして適切な宿主系および増殖条
件が樹立されれば、組換え発現ベクターは、増殖され、そして量的に増幅され得
る。以前に考察したように、用いられ得る発現ベクターまたはその誘導体として
は、以下が挙げられるがこれらに限定されない：ヒトまたは動物のウイルス（例
えば、ワクシニアウイルスまたはアデノウイルス）；昆虫ウイルス（たとえば、
バキュロウイルス）；酵母ベクター；バクテリオファージベクター（例えば、λ
ファージ）；プラスミドベクターおよびコスミドベクター。

【００７１】 目的の挿入された配列の発現を調節するか、または所望される特定の様式にお
いてこの配列によりコードされる発現タンパク質を改変もしくは処理する宿主細
胞株が、選択され得る。さらに、特定のプロモーターからの発現は、選択された
宿主株における特定のインデューサーの存在下で増強され得る；従って、遺伝子
操作されたｐ２７（Ｋｉｐ１）および／またはＦＫＢＰ−１２の発現の制御を容
易にする。さらに、種々の宿主細胞は、発現されたタンパク質の翻訳および翻訳
後のプロセシングおよび修飾（例えば、グリコシル化、リン酸化など）のために
特徴および特定の機構を保有する。従って、適切な細胞株または宿主系は、外来
タンパク質の所望の修飾およびプロセシングが得られることを確実にするように
選択され得る。例えば、細菌系内のタンパク質発現は、非グリコシル化コアタン
パク質を産生するために用いられ得；一方、哺乳動物細胞内の発現は、異種タン
パク質の「ネイティブな」グリコシル化を保証する。

【００７２】 他の特定の実施態様では、ｐ２７（Ｋｉｐ１）および／またはＦＫＢＰ−１２
（またはそれらの誘導体、フラグメント、アナログおよび相同体）は、異なる他
の異種タンパク質配列の異種タンパク質配列に対するペプチド結合を介して結合
されたタンパク質を含む融合タンパク質産物またはキメラタンパク質産物として
発現され得る。このようなキメラ産物は、所望のアミノ酸をコードする適切な核
酸配列を一緒に連結することにより生成され得る。この連結は、適切なコードフ
レームを保持し、続いて、当該分野で周知の方法により適切な宿主においてキメ
ラ産物を発現する。あるいは、このようなキメラ産物は、タンパク質合成技術に
より（例えば、ペプチドシンセサイザーの使用により）作成され得る。

【００７３】 本発明の特定の実施態様は、ｐ２７（Ｋｉｐ１）および／またはＦＫＢＰ−１
２のフラグメントを含むキメラタンパク質を開示する。別の特定の実施態様では
、ｐ２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１２の相互作用するドメイン（このドメ
インは、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体の直接形成に関する）を含
み、そして、必要に応じて，前述の２つのタンパク質への結合、およびｐ２７（
Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１２結合ドメインの相互作用の促進の両方に働く異
種官能性試薬（例えば、ペプチドリンカー）を有する、融合タンパク質が提供さ
れる。これらの融合タンパク質は、例えば、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１
２複合体に特異的な抗体の産生において、相互作用の安定性（すなわち、分子内
反応として複合体の形成に起因する安定性）が所望される場合、特に有用であり
得る。

【００７４】 本発明の特定の実施態様において、タンパク質をコードする核酸およびｐ２７
（Ｋｉｐ１）またはＦＫＢＰ−１２のフラグメント（最小で、ｐ２７（Ｋｉｐ１
）および／またはＦＫＢＰ−１２の６つ連続するアミノ酸残基からなる）からな
るか、またはそれらを含むタンパク質が、本明細書において提供される。別の実
施態様では、前述のタンパク質のフラグメントは、ｐ２７（Ｋｉｐ１）またはＦ
ＫＢＰ−１２の少なくとも１０、２０、３０、４０、または５０アミノ酸残基（
そして好ましくは、３５、１００、または２００アミノ酸残基以下）からなる。
ｐ２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１２の誘導体またはアナログとしては、以
下の場合：（ｉ）同一のサイズのアミノ酸と比較して；（ｉｉ）当該分野で公知
のコンピューター相同性プログラムにより行われる整列である整列した配列と比
較した場合に、種々の実施態様において、ｐ２７（Ｋｉｐ１）またはＦＫＢＰ−
１２に対して、少なくとも約３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％
、９０％または好ましくは９５％アミノ酸同一の実質的の相同体である領域を含
む分子；あるいは（ｉｉｉ）ストリンジェント（好ましい）、中度にストリンジ
ェント、もしくは非ストリンジェントな条件下（例えば、前出を参照のこと）で
ｐ２７（Ｋｉｐ１）またはＦＫＢＰ−１２をコードする配列にハイブリダイズし
得るコード核酸、が挙げられるがこれらに限定されない。

【００７５】 ｐ２７（Ｋｉｐ１）および／またはＦＫＢＰ−１２の誘導体は、機能的に等価
な分子を生じる置換、付加または欠失によるその配列の変化により生成され得る
。本発明の特定の実施態様において、ヌクレオチドコード配列の縮重は、ｐ２７
（Ｋｉｐ１）またはＦＫＢＰ−１２遺伝子と実質的に同じアミノ酸配列をコード
する他のＤＮＡ配列の使用を可能にする。別の実施態様において、目的の配列内
の１つ以上のアミノ酸残基は、類似する極性および正味の荷電の別のアミノ酸に
より置換され得、従ってこれはサイレントな変換を生じる。配列内のアミノ酸の
置換は、アミノ酸が属するクラスの他のメンバーから選択され得る。例えば、非
極性の（疎水性の）アミノ酸としては、アラニン、ロイシン、イソロイシン、バ
リン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファンおよびメチオニンが挙げら
れる。中性の極性のアミノ酸としては、グリシン、セリン、トレオニン、システ
イン、チロシン、アスパラギンおよびグルタミンが挙げられる。陽性に荷電した
（塩基性の）アミノ酸としては、アルギニン、リジンおよびヒスチジンが挙げら
れる。陰性に荷電した（酸性の）アミノ酸としては、アスパラギン酸およびグル
タミン酸が挙げられる。

【００７６】 本発明のｐ２７（Ｋｉｐ１）またはＦＫＢＰ−１２の誘導体およびアナログは
、当該分野で公知の種々の方法論により生成され得る。例えば、クローニングさ
れたｐ２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１２の遺伝子配列は、当該分野で公知
の任意の多数の方法により改変され得る。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９９
０．Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎ
ｕａｌ，第２版（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒ
ｙ Ｐｒｅｓｓ；Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹを参照のこと）
。これらの配列は、制限エンドヌクレアーゼを用いて適切な部位で消化され、続
いてさらに酵素的改変をされ得、そして所望の場合、得られたフラグメントはイ
ンビトロで単離され、そして連結され得る。さらに、ｐ２７（Ｋｉｐ１）コード
核酸、またはＦＫＢＰ−１２コード核酸は、さらなるインビトロ改変を促進する
ために、以下：（ｉ）コーディング領域における変化を作成するため；（ｉｉ）
翻訳配列、開始配列および／もしくは終止配列を作成および／もしくは破壊する
ため；ならびに／または（ｉｉｉ）新しい制限エンドヌクレアーゼ部位を形成す
るかまたはすでに存在するものを破壊するために、インビトロまたはインビボで
変異され得る。当該分野で公知の変異誘発のための任意の技術が用いられ得る。
これには化学的変異誘発およびインビトロ部位特異的変異誘発（例えば、Ｈｕｔ
ｃｈｉｎｓｏｎら、１９７８．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ ２５３：６５５１〜６
５５８を参照のこと）；ＴＡＢＪ^TMリンカー（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）の使用、な
らびに他の類似の方法論が挙げられるがこれらに限定されない。

【００７７】 （遺伝子産物または複合体の単離および分析） 一旦、ｐ２７（Ｋｉｐ１）および／またはＦＫＢＰ−１２、あるいはそのフラ
グメントまたは誘導体を発現する組換え細胞が同定されると、個々の遺伝子産物
または複合体が、単離され、分析され得る。これは、そのタンパク質または複合
体の物理的特性および／または機能的特性に基づくアッセイによって、達成され
る。このアッセイには、産物の放射性標識化およびそれに続くゲル電気泳動によ
る分析、免疫アッセイ、マーカー標識された産物への架橋などが挙げられるが、
これらに限定されない。ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体は、当該分
野において公知の標準的な方法によって、（天然の供給源、またはそのタンパク
質／タンパク質複合体を発現する組換え宿主細胞のいずれかから）単離および精
製され得る。この方法には、カラムクロマトグラフィー（例えば、イオン交換ク
ロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、ゲル排除クロマトグラ
フィー、逆相クロマトグラフィー、高圧クロマトグラフィー、高速タンパク質液
体クロマトグラフィーなど）、分画遠心分離、溶解度差（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉ
ａｌ ｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙ）、またはタンパク質の精製のために使用される他
の方法論が挙げられるが、これらに限定されない。あるいは、一旦、ｐ２７（Ｋ
ｉｐ１）またはＦＫＢＰ−１２あるいはその誘導体が同定されると、そのタンパ
ク質のアミノ酸配列が、キメラ遺伝子（これから、そのタンパク質がコードされ
た）の核酸配列から、推定され得る。従って、そのタンパク質またはその誘導体
は、当該分野において公知の標準的な化学的方法論によって、合成され得る。例
えば、Ｈｕｎｋａｐｉｌｌｅｒら、１９８４．Ｎａｔｕｒｅ ３１０：１０５〜
１１１を参照のこと。

【００７８】 特定の実施態様においては、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体（組
換えＤＮＡ技術、化学合成法、または天然供給源からの精製のいずれから生成さ
れたものであれ）は、タンパク質、それらのフラグメント、アナログおよび誘導
体の、実質的に図１および図２に示すような配列をそれらの一次アミノ酸として
含むもの、ならびにそれに相同性のタンパク質から構成される。

【００７９】 （ｐ２７（ＫＩＰ１）および／またはＦＫＢＰ−１２配列の操作） ｐ２７（Ｋｉｐ１）および／またはＦＫＢＰ−１２配列の操作は、タンパク質
レベルでなされ得る。本発明の範囲内には、ｐ２７（Ｋｉｐ１）またはＦＫＢＰ
−１２のフラグメントの複合体、誘導体、翻訳中または翻訳後に異なって修飾さ
れた（例えば、グリコシル化、アセチル化、リン酸化、アミド化、公知の保護基
／ブロック基による誘導体化、タンパク分解性開裂、抗体分子または他の細胞リ
ガンドへの結合などにより）フラグメントまたはアナログが含まれる。当該分野
において公知の多数の化学的修飾方法論の任意のものが使用され得る。この方法
論には、臭化シアン、トリプシン、キモトリプシン、パパイン、Ｖ８プロテアー
ゼ、ＮａＢＨ₄による特異的な化学的開裂、アセチル化、ホルミル化、酸化、還
元、ツニカマイシンの存在下での代謝合成などが挙げられるが、これらに限定さ
れない。特定の実施態様においては、ｐ２７（Ｋｉｐ１）および／またはＦＫＢ
Ｐ−１２の配列は、蛍光標識を含むよう修飾される。別の特定の実施態様におい
ては、ｐ２７（Ｋｉｐ１）および／またはＦＫＢＰ−１２は、異種官能性（ｈｅ
ｔｅｒｏｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ）試薬の取り込みによって修飾され、ここで、こ
のような異種官能性試剤は、その複合体のメンバーを架橋するために使用され得
る。

【００８０】 （化学合成） ｐ２７（Ｋｉｐ１）および／またはＦＫＢＰ−１２のアナログならびに誘導体
の複合体は、化学的に合成され得る。例えば、所望のドメインを含むかまたはイ
ンビトロにおいて所望の活性（例えば、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複
合体の形成）を媒介する、ｐ２７（Ｋｉｐ１）および／またはＦＫＢＰ−１２の
部分に対応するペプチドは、ペプチド合成機の使用によって合成され得る。天然
の産物が、変異体である疑いがあるか、または新たな種から単離されたものであ
る場合には、その天然の供給源から単離されたｐ２７（Ｋｉｐ１）および／また
はＦＫＢＰ−１２、ならびにインビトロで発現したもの、あるいはインビボもし
くはインビトロで合成された発現ベクターに由来のもののアミノ酸配列は、ＤＮ
Ａ配列の分析から、あるいは、その単離したタンパク質の直接の配列決定により
、決定され得る。ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体はまた、親水性の
分析（これは、タンパク質の疎水性領域および親水性領域を同定するために使用
され得、従って、結合実験、抗体合成などにおける、実験的操作のための基質の
設計を補助する）によっても分析され得る（例えば、ＨｏｐｐおよびＷｏｏｄｓ
、１９８１．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７８：３８２４
〜３８２８を参照のこと）。二次構造の分析もまた、ｐ２７（Ｋｉｐ１）および
／またはＦＫＢＰ−１２の特異的構造モチーフを呈する領域を同定するために、
実施され得る。例えば、ＣｈｏｕおよびＦａｓｍａｎ、１９７４．Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ．１３：２２２〜２２３を参照のこと。操作、翻訳、二次構造の予測、親水性
プロファイルおよび疎水性プロファイル、オープンリーディングフレームの予測
およびプロット、ならびに配列相同性の決定が、当該分野において利用可能なコ
ンピュータソフトウェアプログラムを使用して、なされ得る。構造分析の他の方
法（Ｘ線結晶学（例えば、Ｅｎｇｓｔｒｏｍ、１９７４．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｅｘ
ｐ．Ｂｉｏｌ．１１：７〜１３を参照のこと）；質量分析およびガスクロマトグ
ラフィー（例えば、ＭＥＴＨＯＤＳ ＩＮ ＰＲＯＴＥＩＮ ＳＣＩＥＮＣＥ、
１９９７、Ｊ．Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹを参照
のこと）およびコンピュータモデリング（例えば、ＣＵＲＲＥＮＴ ＣＯＭＭＵ
ＮＩＣＡＴＩＯＮＳ ＩＮ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＢＩＯＬＯＧＹ、Ｃｏｌｄ
Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、Ｃｏｌｄ
Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹの、ＦｌｅｔｔｅｒｉｃｋおよびＺｏｌｌｅ
ｒ編、１９８６．Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒａｐｈｉｃｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕ
ｌａｒ Ｍｏｄｅｌｉｎｇを参照のこと）が挙げられるが、これらに限定されな
い）もまた、使用され得る。

【００８１】 （スクリーニングの方法論） 本発明は、ｐ２７（Ｋｉｐ１）、ＦＫＢＰ−１２および／またはｐ２７（Ｋｉ
ｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体、ならびにこれらの誘導体、フラグメントおよび
アナログの、細胞の機能（特に、ｐ２７（Ｋｉｐ１）および／またはＦＫＢＰ−
１２が関与する機能）を変化および／または調節する能力についてのスクリーニ
ングのための、方法論を提供する。これらの機能には、細胞周期の進行の制御；
転写の調節；細胞内信号導入の制御；および病理学的プロセス、ならびに他の様
々な生物学的活性（例えば、抗ｐ２７（Ｋｉｐ１）抗体、抗ＦＫＢＰ−１２抗体
、および／または抗ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体抗体などへの結
合）が挙げられるが、これらに限定されない。所望の免疫原性および／または抗
原性を有する、誘導体、フラグメントあるいはアナログは、免疫アッセイにおい
て、免疫のため、ｐ２７（Ｋｉｐ１）の活性、ＦＫＢＰ−１２の活性、および／
またはｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体の活性の阻害のためなどに、
使用され得る。例えば、問題の所与の特性（例えば、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫ
ＢＰ−１２複合体への関与）を保持するか、あるいはそれを欠くかまたは阻害す
る、誘導体、フラグメント、またはアナログは、このような特性およびその生理
学的相関の、誘発因子、あるいはインヒビターとして、それぞれ使用され得る。
特定の実施態様においては、所与のｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体
に含まれた場合に、抗ｐ２７（Ｋｉｐ１）抗体および／または抗ＦＫＢＰ−１２
抗体、あるいはｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体に対して特異的な抗
体に結合し得る、ｐ２７（Ｋｉｐ１）のフラグメントおよび／またはＦＫＢＰ−
１２のフラグメントの、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体である。ｐ
２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体の誘導体、フラグメントおよびアナロ
グは、所望の活性（単数または複数）に関して、当該分野において公知の手順に
よって、分析され得る。

【００８２】 （２）ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体に対する抗体の生成 本明細書中で本発明によって開示されるように、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢ
Ｐ−１２複合体、あるいはその誘導体、フラグメント、アナログまたはホモログ
は、これらのタンパク質成分に免疫特異的に結合する抗体の生成における免疫原
として、利用され得る。このような抗体には、ポリクローナル、モノクローナル
、キメラ、単鎖、Ｆ_abフラグメントおよびＦ_ab発現ライブラリーが挙げられるが
、これらに限定されない。特定の実施態様においては、ヒトｐ２７（Ｋｉｐ１）
とヒトＦＫＢＰ−１２との複合体に対する抗体が開示される。別の特定の実施態
様においては、ｐ２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１２のフラグメントから形
成される複合体であって；ここで、これらのフラグメントは、この複合体の他方
のメンバーと相互作用するタンパク質ドメインを含み、そして抗体生成のための
免疫原として使用される。当該分野において公知の様々な手順が、ｐ２７（Ｋｉ
ｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体、あるいはその誘導体、フラグメント、アナログ
またはホモログに対する、ポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体の生成
のために、使用され得る。

【００８３】 ポリクローナル抗体の生成のために、様々な宿主動物が、ネイティブのｐ２７
（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体、またはその合成改変体、あるいは前出の
ものの誘導体（例えば、架橋したｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２）の注射
によって、免疫化され得る。様々なアジュバントが、免疫学的応答を増大させる
ために使用され得、これらには、フロイントアジュバント（完全または不完全）
、鉱物ゲル（例えば、水酸化アルミニウム）、界面活性物質（例えば、リゾレシ
チン、プルロニックポリオール、ポリアニオン、ペプチド、オイルエマルジョン
、ジニトロフェノールなど）、ならびにＢａｃｉｌｌｅ Ｃａｌｍｅｔｔｅ−Ｇ
ｕｅｒｉｎおよびＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｐａｒｖｕｍのようなヒト
アジュバントが挙げられるが、これらに限定されない。

【００８４】 ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体、あるいはその誘導体、フラグメ
ント、アナログまたはホモログに指向された、モノクローナル抗体の調製のため
に、連続細胞株培養による抗体分子の生成を提供する、任意の技術が利用され得
る。このような技術には、ハイブリドーマ技術（ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔ
ｅｉｎ、１９７５．Ｎａｔｕｒｅ ２５６：４９５〜４９７を参照のこと）；ト
リオーマ（ｔｒｉｏｍａ）技術；ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術（Ｋｏｚｂｏｒ
ら、１９８３．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ ４：７２を参照のこと）およびヒ
トモノクローナル抗体の生成のためのＥＢＶハイブリドーマ技術（Ｃｏｌｅら、
１９８５．Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅ
ｒ Ｔｈｅｒａｐｙ、Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ、Ｉｎｃ．、７７〜９６頁を参照
のこと）が挙げられるが、これらに限定されない。ヒトモノクローナル抗体は、
本発明の実施において使用され得、そしてヒトハイブリドーマの使用によって（
Ｃｏｔｅら、１９８３．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８０
：２０２６〜２０３０を参照のこと）またはヒトＢ細胞をエプスタイン−バーウ
イルスによってインビトロで形質転換することによって（Ｃｏｌｅら、１９８５
．Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ａｎｄ Ｃａｎｃｅｒ Ｔｈ
ｅｒａｐｙ（Ａｌａｎ Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．、７７〜９６頁）を参照のこと
）生成され得る。

【００８５】 本発明によれば、複数の技術が、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体
に特異的な単鎖抗体の生成に適合され得る（例えば、米国特許第４，９４６，７
７８号を参照のこと）。さらに、複数の方法論が、Ｆ_ab発現ライブラリーの構築
に適合され得（例えば、Ｈｕｓｅら、１９８９．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４６：１２
７５〜１２８１を参照のこと）、これによって、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ
−１２あるいはその誘導体、フラグメント、アナログまたはホモログに対する所
望の特異性を有する、モノクローナルＦ_abフラグメントの、迅速かつ効果的な同
定が可能となる。非ヒト抗体が、当該分野において周知の技術によって、「ヒト
化」され得る。例えば、米国特許第５，２２５，５３９号を参照のこと。ｐ２７
（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体のイディオタイプを含む抗体フラグメント
が、当該分野において公知の技術によって生成され得、このフラグメントには、
以下が含まれるが、それらに限定されない：（ｉ）抗体分子のペプシン消化によ
り生成する、Ｆ_(ab')2フラグメント；（ｉｉ）Ｆ_(ab')2フラグメントのジスルフ
ィド架橋の還元により生成する、Ｆ_abフラグメント；（ｉｉｉ）パパインおよび
還元剤を用いた抗体分子の処置により生成する、Ｆ_abフラグメント；ならびに（
ｉｖ）Ｆ_vフラグメント。

【００８６】 １つの実施態様において、所望の特異性を有する抗体のスクリーニングのため
の方法論には、酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）および当該分
野において公知の他の免疫学的に媒介される技術が挙げられるが、これらに限定
されない。特定の実施態様においては、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複
合体の特定のドメインに対して特異的な抗体の選択が、そのようなドメインを有
するｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体のフラグメントに結合するハイ
ブリドーマの生成によって、容易にされる。別の特定の実施態様における、ｐ２
７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体には特異的に結合するがｐ２７（Ｋｉｐ
１）・ＦＫＢＰ−１２の個々のタンパク質には特異的には結合しない抗体（個々
のｐ２７（Ｋｉｐ１）タンパク質およびＦＫＢＰ−１２タンパク質への結合を付
随して欠く、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体への正の結合（ｐｏｓ
ｉｔｉｖｅ−ｂｉｎｄｉｎｇ）に基づいて、抗体を選択することにより同定され
る）の選択のための方法論は、本発明の範囲内である。従って、ｐ２７（Ｋｉｐ
１）・ＦＫＢＰ−１２複合体、あるいはその誘導体、フラグメント、アナログま
たはホモログのドメインに対して特異的な抗体もまた、本明細書中において提供
される。

【００８７】 上述の抗体は、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体の局在化および／
または定量に関する分野で公知の方法において使用され得ることが、注目される
べきである（例えば、適切な生理学的試料中のタンパク質のレベルの測定におけ
る使用のため、診断用方法における使用のため、タンパク質の画像化における使
用のためなど）。所与の実施態様において、抗ｐ２７（Ｋｉｐ１）抗体、抗ＦＫ
ＢＰ−１２抗体、および／または抗ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体
抗体、あるいはそれらの誘導体、フラグメント、アナログまたはホモログの、抗
体から誘導された結合ドメインを含むものが、薬理学的に活性な化合物として利
用される［本明細書中以下で「治療剤」］。

【００８８】 （３）診断、予後およびスクリーニングにおける、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫ
ＢＰ−１２複合体の使用 ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体は、ｐ２７（Ｋｉｐ１）およびＦ
ＫＢＰ−１２が関与することが既知である生理学的プロセスの破壊を含む特定の
疾患状態のための、「マーカー」として作用し得る。例えば、（発明の背景）を
参照のこと。これらの生理学的プロセスには、以下のものが挙げられるが、それ
らに限定されない：（ｉ）細胞周期の進行、細胞の分化およびアポトーシスの制
御、（ｉｉ）細胞内シグナル伝達、（ｉｉｉ）神経発生、（ｉｖ）ウイルス感染
に対する応答；ならびに（ｖ）以下を含むがそれらに限定されない、病態生理学
的プロセス：過剰増殖障害（腫瘍発生および腫瘍拡散など）、変性障害（神経変
性障害など）、自己免疫疾患、器官移植関連障害、炎症性疾患およびアレルギー
性疾患、アテローム性動脈硬化、腎症および心筋疾患など。従って、ｐ２７（Ｋ
ｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体は、診断上の有用性を有することが予測される
。従って、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体の上昇または欠乏を有す
る患者の、特定の群の区別および分類は、疾患の新たな疾病分類学的分類をもた
らし得、これによって、診断的能力が顕著に進歩する。

【００８９】 ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体のレベルまたはｐ２７（Ｋｉｐ１
）および／もしくはＦＫＢＰ−１２タンパク質のレベルの検出、あるいはｐ２７
（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体の成分をコードするｍＲＮＡのレベルの検
出は、様々な疾患の分析において利用され得、そして以下を含む様々な医療プロ
セスにおいて、重要な情報を提供し得る：診断、予後、疾患状態の同定、疾患の
経過の追跡、投与した治療剤の効力の追跡、治療応答の追跡など。同様に、核酸
配列（およびそれに相同的な配列）、ならびにｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−
１２複合体および／またはｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２を形成し得るそ
の個々の成分に対して特異的な抗体の両方が、診断において使用され得る。

【００９０】 上記の分子は、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体の異常レベルによ
って特徴付けられる、様々な状態、疾患、および障害を、検出、予後、診断、ま
たはモニターするため、あるいはこれらの処置をモニターするための、アッセイ
（例えば、免疫アッセイ）において、利用され得る。「異常レベル」とは、冒さ
れていない身体の部分に由来の、または障害を有さない被験体に由来の、類似の
試料において存在するレベルに対して、試料中で増加または減少したレベルを意
味する。上述の免疫アッセイは、患者に由来の試料を、抗ｐ２７（Ｋｉｐ１）抗
体、抗ＦＫＢＰ−１２抗体、および／または抗ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−
１２複合体抗体と、免疫特異的結合が生じ得る条件下にて接触させる工程、なら
びに続いて、その抗体による任意の免疫特異的結合を検出またはその結合の量を
測定する工程を包含する、方法論によって、実施され得る。特定の実施態様にお
いては、ｐ２７（Ｋｉｐ１）、ＦＫＢＰ−１２、および／またはｐ２７（Ｋｉｐ
１）・ＦＫＢＰ−１２複合体に特異的な抗体が使用されて、患者に由来の組織ま
たは血清試料を、複合体形成していないかまたは複合体形成したｐ２７（Ｋｉｐ
１）・ＦＫＢＰ−１２の存在について、分析し得る；ここで、ｐ２７（Ｋｉｐ１
）、ＫＢＰ−１２、および／またはｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体
の異常レベルが、疾患状態の指標となる。使用され得る免疫アッセイには、ウエ
スタンブロット、放射免疫測定（ＲＩＡ）、酵素結合イムノソルベントアッセイ
（ＥＬＩＳＡ）、「サンドイッチ」免疫アッセイ、免疫沈降アッセイ、沈降反応
、ゲル拡散沈降反応、免疫拡散アッセイ、凝集アッセイ、補体結合アッセイ、イ
ムノラジオメトリックアッセイ、蛍光免疫アッセイ、およびプロテインＡ免疫ア
ッセイなどの技術を使用する、競合的および非競合的アッセイシステムが挙げら
れるが、これらに限定されない。

【００９１】 ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体の会合したタンパク質成分をコー
ドする、本発明の核酸種、ならびに関連するヌクレオチド配列およびサブ配列も
また、ハイブリダイゼーションアッセイにおいて使用され得る。ｐ２７（Ｋｉｐ
１）およびＦＫＢＰ−１２のヌクレオチド配列、または少なくとも６つのヌクレ
オチドを含むそのサブ配列が、ハイブリダイゼーションプローブとして使用され
得る。ハイブリダイゼーションアッセイは、上述のように、ｐ２７（Ｋｉｐ１）
・ＦＫＢＰ−１２複合体の成分をコードするｍＲＮＡの異常レベルに関連した、
状態、障害、または疾患状態を、検出、予後、診断、またはモニターするために
、使用され得る。本発明の特定の実施態様においては、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・Ｆ
ＫＢＰ−１２複合体の異常レベルが関与するかまたはそれによって特徴付けられ
る、疾患および障害、あるいはこのような障害の発達の素因が、ｐ２７（Ｋｉｐ
１）・ＦＫＢＰ−１２複合体、あるいは複合体形成していないｐ２７（Ｋｉｐ１
）タンパク質および／またはＦＫＢＰ−１２タンパク質あるいは機能的活性につ
いての核酸の、異常レベルの検出によって、診断され得る。この上述の機能的活
性には、以下が挙げられ得るが、それらに制限されない：（ｉ）相互作用パート
ナー（例えば、ｐ２７（Ｋｉｐ１）、ＦＫＢＰ−１２）への結合、あるいは（ｉ
ｉ）ｐ２７（Ｋｉｐ１）、ＦＫＢＰ−１２またはｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ
−１２複合体の発現または活性を増加または減少させ得る、ｐ２７（Ｋｉｐ１）
および／またはＦＫＢＰ−１２ ＲＮＡ、ＤＮＡまたはタンパク質における、変
異（例えば、野生型ｐ２７（Ｋｉｐ１）および／またはＦＫＢＰ−１２に関する
ヌクレオチドまたはアミノ酸配列における、転座、短縮、変化）の検出。

【００９２】 当該分野において周知の方法論（例えば、免疫アッセイ、核酸ハイブリダイゼ
ーションアッセイ、生物学的活性アッセイなど）が、１種以上の特定のｐ２７（
Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体が、特定の疾患もしくは障害を患っているか
、またはこのような疾患もしくは障害を発達させる素因を有する、患者に由来の
試料内において、このような疾患もしくは障害あるいはそれらの素因を有さない
被験体に由来の試料におけるレベルと比較して増加したレベルまたは減少したレ
ベルのいずれかにおいて存在するか、存在しないかを決定するために、使用され
得る。さらに、これらのアッセイは、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合
体の、問題の複合体における複合体形成していない成分（すなわち、ｐ２７（Ｋ
ｉｐ１）および／またはＦＫＢＰ−１２）に対する比率が、特定の疾患もしくは
障害を患っているか、またはこのような疾患もしくは障害を発達させる素因を有
する患者に由来の試料において、このような疾患もしくは障害またはそれらの素
因を有さない被験体に由来の試料における比率と比較して、増加しているか減少
しているかを決定するために、使用され得る。

【００９３】 従って、本発明の特定の実施態様においては、１種以上のｐ２７（Ｋｉｐ１）
・ＦＫＢＰ−１２複合体のレベルの増加／減少を含む疾患および障害が診断され
得るか、あるいはこれらの推定される存在がスクリーニングされ得るか、あるい
はこのような疾患および障害の発達の素因が検出され得る。これらは、以下のも
ののレベルの増加／減少を定量的に確認することにより、なされる：（ｉ）１種
以上のｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体；（ｉｉ）上記複合体の両方
のタンパク質メンバーをコードする、ｍＲＮＡ；（ｉｉｉ）複合体の機能的活性
、あるいは（ｉｖ）ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体の形成を強化／
阻害または安定化／不安定化する、ｐ２７（Ｋｉｐ１）またはＦＫＢＰ−１２に
おける変異（例えば、野生型ｐ２７（Ｋｉｐ１）もしくはＦＫＢＰ−１２に対す
る核酸における転座、遺伝子もしくはタンパク質における短縮、ヌクレオチドま
たはアミノ酸配列における変化）。

【００９４】 本発明の実施において、検出技術（特にｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２
複合体に対して指向された抗体を含むもの）の使用は、問題の複合体形成してい
ないかまたは複合体形成したタンパク質（例えば、ｐ２７（Ｋｉｐ１）および／
またはＦＫＢＰ−１２）を発現させる特定の細胞の検出のための方法を提供する
。このようなアッセイの使用によって、特定の細胞タイプ（ここで、ｐ２７（Ｋ
ｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体の１種以上の特定の成分が発現する）が、定量
的に特徴付けられ得、そして複合体形成していないかまたは複合体形成したタン
パク質の存在が、当該分野において周知の技術（例えば、蛍光活性化細胞選別）
によって、細胞の生存性と相関され得る。本明細書中では、特定のｐ２７（Ｋｉ
ｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体またはその誘導体を発現するインビトロの細胞培
養モデルにおいて、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体の特徴付けおよ
び／または単離を目的として、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体を検
出することに関する方法論もまた、実施される。これらの検出技術には、原核生
物の細胞選別（例えば、ＤａｖｅｙおよびＫｅｌｌ、１９９６．Ｍｉｃｒｏｂｉ
ｏｌ．Ｒｅｖ．６０：６４１〜６９６を参照のこと）；真核生物（ヒトのような
哺乳動物種を含む）に由来の初代培養物および組織標本（例えば、Ｓｔｅｅｌｅ
ら、１９９６．Ｃｌｉｎ．Ｏｂｓｔｅｔ．Ｇｙｎｅｃｏｌ．３９：８０１〜８１
３を参照のこと）；および連続細胞培養物（例えば、ＯｒｆａｏおよびＲｕｉｚ
−Ａｒｇｕｅｌｌｅｓ、１９９６．Ｃｌｉｎ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２９：５〜９を
参照のこと）が挙げられるが、これらに限定されない。

【００９５】 本発明は、さらに、診断用の使用のためのキットを提供し、このキットは、抗
ｐ２７（Ｋｉｐ１）抗体、抗ＦＫＢＰ−１２抗体、および／または抗ｐ２７（Ｋ
ｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体抗体、ならびに必要に応じて、上記抗体の標識
化された結合パートナーを収容する、１つ以上の容器を含む。抗ｐ２７（Ｋｉｐ
１）・ＦＫＢＰ−１２複合体抗体に取り込まれる標識には、化学発光部分、酵素
部分、蛍光部分、比色部分または放射性部分が挙げられるが、これらに限定され
ない。別の特定の実施態様においては、ｐ２７（Ｋｉｐ１）、ＦＫＢＰ−１２、
および／またはｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体をコードするか、も
しくはこれらに相補的である、改変または非改変の核酸、ならびに必要に応じて
、上記核酸の標識化された結合パートナーを収容する、１つ以上の容器を含む、
診断用の使用のためのキットもまた提供される。代替の特定の実施態様において
は、このキットは、以下のものを含み得る：１つ以上の容器、および一対のオリ
ゴヌクレオチドプライマー（例えば、それぞれが６〜３０ヌクレオチドの長さで
あって、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ；例えば、Ｉｎｎｉｓら、１９９０．Ｐ
ＣＲ ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｉｎｃ．、Ｓａｎ
Ｄｉｅｇｏ、ＣＡを参照のこと）、リガーゼ連鎖反応、サイクル式プローブ反
応などの増幅プライマーとして、または当該分野において公知の他の方法で、作
用し得るもの）。このキットは、診断、標準、または上記アッセイにおけるコン
トロールとして使用するための、所定の量の精製されたｐ２７（Ｋｉｐ１）、Ｆ
ＫＢＰ−１２またはｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体、あるいはそれ
らの核酸を、必要に応じてさらに含み得る。

【００９６】 （４）ｐ２７（Ｋｉｐ１）タンパク質およびＦＫＢＰ−１２タンパク質、なら
びにｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体の治療的使用 本発明は、様々な疾患および障害を、生物学的に活性な治療用化合物（本明細
書中以下で「治療剤」）を投与することによって処置または予防するための方法
を提供する。このような「治療剤」には、以下が挙げられるが、それらに限定さ
れない：（ｉ）ｐ２７（Ｋｉｐ１）、ＦＫＢＰ−１２、およびｐ２７（Ｋｉｐ１
）・ＦＫＢＰ−１２複合体、ならびにその誘導体、フラグメント、アナログまた
はホモログ；（ｉｉ）上記タンパク質およびそのタンパク質複合体に対して指向
された、抗体；（ｉｉｉ）ｐ２７（Ｋｉｐ１）および／またはＦＫＢＰ−１２、
ならびにその誘導体、フラグメント、アナログまたはホモログをコードする、核
酸；（ｉｖ）ｐ２７（Ｋｉｐ１）タンパク質およびＦＫＢＰ−１２タンパク質を
コードする配列に対する、アンチセンス核酸；ならびに（ｖ）ｐ２７（Ｋｉｐ１
）・ＦＫＢＰ−１２複合体およびその調節因子（すなわち、インヒビター、アゴ
ニストおよびアンタゴニスト）。

【００９７】 上述のように、ｐ２７（Ｋｉｐ１）およびその結合パートナーであるＦＫＢＰ
−１２は、細胞周期進行および細胞分化の障害（癌ならびに腫瘍形成および腫瘍
進行を含む）に、顕著に関わる。変化した細胞アポトーシス、分化、およびＤＮ
Ａ修復に起因する神経変性の障害にも同様に、これらの同じタンパク質が関与す
る。生理学的プロセス（例えば、細胞周期進行の制御、細胞分化およびアポトー
シス、細胞内シグナル伝達、神経発生、ウイルス感染に対する応答）、ならびに
病態生理学的プロセスによって影響される、広範な細胞疾患（過剰増殖障害（例
えば、腫瘍形成および腫瘍拡散）、変性障害（例えば、神経変性障害）、組織移
植関連障害、炎症性およびアレルギー性疾患、自己免疫疾患、アテローム性動脈
硬化、腎症、ならびに心臓および筋肉の疾患が挙げられるが、これらに限定され
ない）は、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体の活性または形成を調節
（すなわち、拮抗または促進）する「治療剤」の投与によって、処置または予防
される。

【００９８】 ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体の異常レベル、またはｐ２７（Ｋ
ｉｐ１）の活性レベルもしくは異常レベルに関連する、疾患または障害は、ｐ２
７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体の形成または活性を調節する「治療剤」
の投与によって、処置され得る。特定の実施態様においては、ｐ２７（Ｋｉｐ１
）の活性またはレベルが、ＦＫＢＰ−１２の投与によって調節される。別の特定
の実施態様においては、ＦＫＢＰ−１２の活性またはレベルが、ｐ２７（Ｋｉｐ
１）の投与によって調節される。

【００９９】 （ｐ２７（Ｋｉｐ１）およびｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体の増
加したレベルによる障害） 疾患および障害の、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２のレベルまたは生物
学的活性の増加（そのような疾患または障害を患っていない被験体と比較して）
により特徴付けられるものは、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体の形
成または活性を拮抗（すなわち、減少または阻害）する「治療剤」を用いて、処
置され得る。ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体の形成または活性を拮
抗する「治療剤」は、治療的または予防的な様式で投与され得る。利用され得る
「治療剤」には、以下が挙げられるが、それらに限定されない：ｐ２７（Ｋｉｐ
１）またはＦＫＢＰ−１２、あるいはそのアナログ、誘導体、フラグメントまた
はホモログ；（ｉｉ）抗ｐ２７（Ｋｉｐ１）抗体、抗ＦＫＢＰ−１２抗体、およ
び／または抗ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体抗体；（ｉｉｉ）ｐ２
７（Ｋｉｐ１）またはＦＫＢＰ−１２をコードする、核酸；（ｉｖ）ｐ２７（Ｋ
ｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１２アンチセンス核酸、ならびに「機能不全」（すな
わち、ｐ２７（Ｋｉｐ１）のコード配列およびＦＫＢＰ−１２コード配列内への
、異種［非ｐ２７（Ｋｉｐ１）および非ＦＫＢＰ−１２］挿入に起因する）であ
るｐ２７（Ｋｉｐ１）および／またはＦＫＢＰ−１２核酸の同時投与は、内因性
ｐ２７（Ｋｉｐ１）および／またはＦＫＢＰ−１２機能を、相同組換えによって
「ノックアウト」するために、利用される（例えば、Ｃａｐｅｃｃｈｉ、１９８
９．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４４：１２８８〜１２９２を参照のこと）。本発明のさ
らなる実施態様においては、ｐ２７（Ｋｉｐ１）に対する親和性が野生型第一Ｆ
ＫＢＰ−１２より大きい第一ＦＫＢＰ−１２の変異体または誘導体が、第二ＦＫ
ＢＰ−１２のｐ２７（Ｋｉｐ１）に対する結合に競合するために、投与され得、
これによって、ｐ２７（Ｋｉｐ１）と第二ＦＫＢＰ−１２との間の複合体のレベ
ルが減少する。

【０１００】 ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体の増加したレベルは、以下のこと
によって容易に検出され得る：タンパク質および／またはＲＮＡを定量すること
、患者の組織試料を（例えば、生検組織から）得、それをインビトロで、ＲＮＡ
またはタンパク質レベル、発現したｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体
（またはｐ２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１２ ｍＲＮＡ）の構造および／
または活性について、アッセイすること。当該分野において周知の方法には、ｐ
２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体を検出するための免疫アッセイ（例え
ば、ウェスタンブロット分析、免疫沈降に続いてドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤ
Ｓ）ポリアクリルアミドゲル電気泳動、免疫細胞学などによる）および／または
ｐ２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１２ｍＲＮＡの同時発現を検出するための
ハイブリダイゼーションアッセイ（例えば、ノーザンアッセイ、ドットブロット
、インサイチュハイブリダイゼーションなど）が挙げられるが、これらに限定さ
れない。

【０１０１】 （ｐ２７（Ｋｉｐ１）およびｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体発現
の減少） 本発明の特定の実施態様は、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体発現
（すなわち、この複合体の２つのタンパク質成分の発現および／またはこの複合
体の形成）を、これらタンパク質成分を発現するｍＲＮＡを標的にすることによ
り減少する方法を開示する。ＲＮＡ「治療剤」は、３つのクラス：（ｉ）アンチ
センス種；（ｉｉ）リボザイムまたは（ｉｉｉ）ＲＮＡアプタマーに区別される
。Ｇｏｏｄら、１９９７．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ４：４５〜５４を参照の
こと。アンチセンスオリゴヌクレオチドが最も広く利用され、そして以下で論議
される。リボザイム治療は、特定のＲＮＡを切断、結合またはそうでなければ不
活性化する酵素的能力を有し、それ故特定のタンパク質の発現を低減またはなく
する小ＲＮＡ分子の投与（すなわち誘導された発現）を含む。例えば、Ｇｒａｓ
ｓｉ＆Ｍａｒｉｎｉ、１９９６．Ａｎｎ．Ｍｅｄ．２８：４９９〜５１０を参照
のこと。現在のところ、「ヘアピン」および／または「ハンマーヘッド」ＲＮＡ
リボザイムの設計が、特定ｍＲＮＡ（例えば、ｐ２７（Ｋｉｐ１）ｍＲＮＡ）を
特異的に標的するために必要である。ＲＮＡアプタマーは、タンパク質の翻訳を
特異的に阻害し得るＴａｔおよびＲｅｖＲＮＡのようなこれらタンパク質の特異
的ＲＮＡリガンドである（例えば、Ｇｏｏｄら、１９９７．Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ
ａｐｙ ４：４５〜５４を参照のこと）。

【０１０２】 本発明の好適な実施態様では、ｐ２７（Ｋｉｐ１）の活性またはレベルは、Ｆ
ＫＢＰ−１２、ＦＫＢＰ−１２をコードする核酸またはＦＫＢＰ−１２に免疫特
異的に結合する抗体（またはその結合ドメインを所有する抗体の誘導体またはフ
ラグメント）の投与により低減され得る。同様に、ＦＫＢＰ−１２のレベルまた
は活性は、ｐ２７（Ｋｉｐ１）、ｐ２７（Ｋｉｐ１）をコードする核酸またはｐ
２７（Ｋｉｐ１）を免疫特異的に結合する抗体（またはその結合ドメインを所有
する抗体の誘導体またはフラグメント）の投与により低減され得る。本発明の別
の実施態様では、増加したレベルのｐ２７（Ｋｉｐ１）またはＦＫＢＰ−１２を
ともなう疾患または障害が、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体形成を
増加する「治療剤」の投与により（この複合体形成が、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・Ｆ
ＫＢＰ−１２複合体形成を経由して、ｐ２７（Ｋｉｐ１）または特定のＦＫＢＰ
−１２を減少または不活性化するように作用する場合）処置または予防され得る
。このような疾患または障害は：（ｉ）ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複
合体の１つのメンバー（ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体の他のメン
バーに対して増加した複合体形成を引き起こすように、増加した親和性を所有す
るこれらタンパク質の１つまたは両方の変異体を含む）の投与または（ｉｉ）ｐ
２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体を安定化するために供する抗体または
その他の分子の投与などにより処置または予防され得る。

【０１０３】 （（５）「治療剤」の生物学的効果の決定） 本発明の好適な実施態様では、適切なインビトロまたはインビボでのアッセイ
を利用して、特異の「治療剤」の効果、およびその投与が、影響された組織の処
置のために適応されるからどうかを決定する。

【０１０４】 種々の特定の実施態様において、インビトロアッセイを、患者の障害に関与す
る代表的な細胞型を用いて実施し、与えられた「治療剤」がこの細胞型の対して
所望の効果を奏するかどうかを決定し得る。治療における使用のための化合物は
、ヒト被験体における試験の前に、ラット、マウス、ニワトリ、ウシ、サル、ウ
サギ、などを含むがこれらに限定されない適切な動物モデル系で試験され得る。
同様に、インビボ試験には、当該分野で公知の任意の動物モデル系を、ヒト被験
体への投与の前に用い得る。

【０１０５】 （悪性腫瘍） ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２は複合体は、細胞増殖の調節に関与して
いる。従って、本発明の「治療剤」は、細胞過剰増殖および／または細胞増殖の
制御の損失（例えば、癌、悪性腫瘍および腫瘍）にともなう疾患または障害の治
療処置または予防処置に有用であり得る。このような過剰増殖障害のレビューに
は、例えば、Ｆｉｓｈｍａｎら、１９８５、ＭＥＤＩＣＩＮＥ、第２版、Ｊ．Ｂ
．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｃｏ．、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡを参照のこ
と。

【０１０６】 本発明の「治療剤」は、悪性腫瘍および関連障害を処置または予防することに
おける効力のための当該分野で公知の任意の方法によりアッセイされ得る。この
ようなアッセイは、患者の腫瘍に由来する形質転換細胞または細胞を利用するイ
ンビトロアッセイ、および癌または悪性腫瘍の動物モデルを用いるインビボアッ
セイを含むがこれらに限定されない。潜在的に有効な「治療剤」は、例えば、コ
ントロールに対して、培養中の腫瘍由来細胞または形質転換細胞を阻害するか、
または動物モデル中の腫瘍の後退を引き起こすようなものである。

【０１０７】 本発明の実施には、一旦悪性腫瘍または癌が、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ
−１２複合体活性を調整する（すなわち、阻害、アンタゴナイズまたはアゴナイ
ズする）ことにより処置を受け易いことが示されると、次いでこの癌または悪性
腫瘍は、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体および／またはこのタンパ
ク質複合体の個々の結合パートナー（すなわち、ｐ２７（Ｋｉｐ１）および／ま
たはＦＫＢＰ−１２）を供給することを含む、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−
１２複合体形成および機能を調整するために供される「治療剤」の投与により処
置または予防され得る。

【０１０８】 （前悪性腫瘍状態） 癌または悪性腫瘍の治療処置または予防処置に有効である本発明の「治療剤」
はまた、前悪性腫瘍状態の処置のために、および／または前悪性腫瘍の新生物ま
たは悪性状態への進行を防ぐために投与され得る。このような予防使用または治
療使用は、新生物または癌への先立つ進行であることが知られるかまたは疑われ
る状態、特に、過形成（ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ）、異形成（ｍｅｔａｐｌａｓ
ｉａ）、または最も特に形成異常（ｄｙｓｐｌａｓｉａ）からなる非新生物性細
胞増殖が生じた状態に適応される。このような異常細胞増殖のレビューには、例
えば、Ｒｏｂｂｉｎｓ ＆ Ａｎｇｅｌｌ、１９７６．ＢＡＳＩＣ ＰＡＴＨＯ
ＬＯＧＹ、第２版、Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ Ｃｏ．、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈ
ｉａ、ＰＡを参照のこと。

【０１０９】 過形成は、組織または器官中の構造または機能における有意な改変なしに、そ
の中の細胞数の増加を含む制御された細胞増殖の形態である。例えば、子宮内膜
過形成は、しばしば、子宮内膜癌に先立つことが示されている。異形成は、１つ
の型の成熟細胞または完全に分化した細胞が、他の型の成熟細胞を置換する、制
御された細胞増殖の形態である。異形成は、上皮組織細胞または連結組織細胞中
で生じ得る。形成異常は、一般に、癌の前駆体と考えられ、そして主に上皮中に
見出される。形成異常は、非新生物性細胞増殖の最も無秩序な形態であり、そし
て個々の細胞の均一性および細胞の構築配向の損失を含む。形成異常は、炎症の
慢性の刺激作用が存在する場合に特徴的に生じ、そしてしばしば頚部、呼吸通路
、口腔、および胆嚢に見出される。

【０１１０】 あるいは、または過形成、異形成、または形成異常として特徴付けられる異常
細胞増殖の存在に加えて、患者由来の細胞試料内に、インビボまたはインビトロ
のいずれかで提示される、形質転換または悪性表現型の１つ以上の特徴の存在が
、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体活性を調整する能力を所有する「
治療剤」の予防的／治療的投与の所望度の指標である。形質転換された表現型の
特徴は：（ｉ）形態学的変化；（ｉｉ）よりゆるい基層の付着；（ｉｉｉ）細胞
−細胞接触阻害の損失；（ｉｖ）係留依存性の損失；（ｖ）プロテアーゼ放出；
（ｖｉ）増加した糖輸送；（ｖｉｉ）減少した血清要求；（ｖｉｉｉ）胎児抗原
の発現、（ｉｘ）２５０ｋＤａ細胞表面タンパク質の消失などを含むがこれらに
限定されない。例えば、Ｒｉｃｈａｒｄら，１９８６．ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ Ｐ
ＡＴＨＯＬＯＧＹ、Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ Ｃｏ．、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈ
ｉａ、ＰＡを参照のこと。

【０１１１】 本発明の特定の実施態様において、悪性腫瘍の以下の素因の１つ以上を示す患
者は、有効量の「治療剤」の投与により処置される：（ｉ）悪性腫瘍をともなう
染色体転座（例えば、慢性骨髄性白血病のフィラデルフィア染色体（ｂｃｒ／ａ
ｂｌ））および濾胞性リンパ腫のｔ（１４；１８）など）；（ｉｉ）家族性ポリ
ープ症またはガードナー症候群（結腸癌の潜在的な前兆）；（ｉｉｉ）未確認の
重要な単クローン性高ガンマグロブリン血症（多発骨髄腫の潜在的な前駆体）お
よび（ｉｖ）メンデル（遺伝的）遺伝パターンを示す癌または前癌性疾患（例え
ば、結腸の家族性ポリープ症，ガードナー症候群、遺伝性外骨症、多発性内分泌
腺腫症、ポイツ−ジェガーズ症候群、フォン・レックリングハウゼンの神経線維
腫症、アミロイド産生および褐色細胞腫をともなう髄様甲状腺癌、網膜芽腫、頚
動脈小体腫瘍，皮膚黒色癌、眼内黒色癌、色素性乾皮症状、毛細管拡張性運動失
調、チェディアック−東症候群、白皮症、ファンコーニ形成不全貧血およびブル
ーム症候群）を有するヒトと一親等。

【０１１２】 別の好適な実施態様において、本発明の「治療剤」は、ヒト患者に投与されて
乳癌、結腸癌、肺癌、膵臓癌、または子宮癌、あるいは黒色腫または肉腫を防ぐ
。

【０１１３】 （過剰増殖障害および増殖異常障害） 本発明の好適な実施態様において、「治療剤」は、過剰増殖障害または良性増
殖異常障害の治療処置または予防処置において投与される。本発明の「治療剤」
の過剰増殖または障害を処置または防ぐことにおける効力は、当該分野で公知の
任意の方法によりアッセイされ得る。このようなアッセイは、インビトロ増殖ア
ッセイ、過剰増殖疾患または障害の動物モデルを用いるインビトロまたはインビ
ボアッセイなどを含む。例えば、潜在的に有効な「治療剤」は、コントロールに
比較して、培養中の細胞増殖を促進するか、または動物モデルにおいて成長また
は細胞増殖を引き起こす。

【０１１４】 一旦過剰増殖障害が、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体活性の調整
による処置を受け易いことが示されたなら、一致して、過剰増殖疾患または障害
は、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体形成を調整する「治療剤」の投
与（ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体を供給すること、および／また
はｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体の個々の結合パートナーを供給す
ることを含む）により処置または予防され得る。

【０１１５】 本発明の特定の実施態様は、肝臓の肝硬変（瘢痕形成が正常な肝臓再生プロセ
スを追い越した症状）；瘢痕プロセスが正常な再生を妨害する皮膚の傷跡を引き
起こすケロイド（肥厚性瘢痕）の処置；乾癬（皮膚の過剰増殖および適正な細胞
運命決定の遅れにより特徴付けられる一般的な皮膚状態）；良性腫瘍；線維嚢胞
状態および組織肥大（例えば、良性前立腺肥大）の処置または予防に関する。

【０１１６】 （神経変性障害） ｐ２７（Ｋｉｐ１）およびその結合パートナーＦＫＢＰ−１２は、細胞成熟の
脱調節およびアポトーシス（両方とも神経変性疾患の特徴である）に関与する。
従って、本発明の「治療剤」（特にｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体
活性を調節（または供給する）する「治療剤」であるが、これに制限されるわけ
ではない）は、神経変性疾患を処置または予防することにおいて有効であり得る
。神経変性障害に関与するｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体活性を調
整する本発明の「治療剤」は、このような神経変性疾患および障害を処置または
予防することにおける効力のための当該分野で公知の任意の方法によりアッセイ
され得る。このようなアッセイは、調節された細胞成熟またはアポトーシスの阻
害に対するインビトロアッセイ、あるいは神経変性疾患または障害の動物モデル
を用いるインビボアッセイ、あるいは後述する任意のアッセイを含む。潜在的に
有効な「治療剤」は、例えば、制限するものではなく、コントロールに比較して
、調節された細胞成熟を促進し、および培養中の細胞アポトーシスを予防し、ま
たは動物モデル中の神経変性を減少する。

【０１１７】 一旦、神経変性疾患または障害が、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合
体活性の調整による処置を受け易いことが示されると、この神経変性疾患または
障害は、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体形成または活性を調整する
「治療剤」の投与（ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体または非結合体
化パートナー、例えば、ｐ２７（Ｋｉｐ１）および／またはＦＫＢＰ−１２を供
給することを含む）により処置または予防され得る。このような疾患は、加齢に
関与するすべての変性疾患、特に、変形性関節症および神経変性障害を含む。

【０１１８】 （器官移植に関連する障害） ＦＫＢＰ−１２は、器官移植に関連する障害、特に、限定されないが器官拒絶
に関与している。本発明の「治療剤」（特に、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−
１２複合体活性を調整（または供給）する「治療剤」）は、器官移植に関連する
疾患または障害を処置または予防することにおいて有効であり得る。本発明の「
治療剤」（特に、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体のレベルまたは活
性を調整する「治療剤」）は、器官移植に関連するような疾患および障害を処置
または予防することにおける効力のための当該分野で公知の任意の方法によりア
ッセイされ得る。このようなアッセイは、後述に記載のような細胞培養モデルを
用いるためのインビトロアッセイ、または器官移植に関する疾患および障害の動
物モデルを用いるインビボアッセイを含む。例えば、後述を参照のこと。潜在的
に有効な「治療剤」は、例えば、制限するものではなく、コントロールに比較し
て動物モデル中で免疫拒絶応答を低減する。

【０１１９】 従って、一旦器官移植に関連する疾患および障害が、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・Ｆ
ＫＢＰ−１２複合体活性または形成の調整による処置を受け易いことが示される
と、このような疾患または障害は、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体
活性または形成を調整する「治療剤」の投与（ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−
１２複合体または個々のｐ２７（Ｋｉｐ１）および／またはＦＫＢＰ−１２タン
パク質を供給することを含む）により処置または予防され得る。

【０１２０】 （心臓血管疾患） ｐ２７（Ｋｉｐ１）は、アテローム硬化性斑形成に含まれる、心臓血管障害に
関与する。脳血栓症または脳出血，虚血心疾患または虚血腎疾患、末梢血管疾患
、または他の主要血管の血栓症を含む心臓血管疾患のような疾患、ならびに糖尿
病、高血圧、甲状腺低下症、コレステロールエステル貯蔵病、全身性エリテマト
ーデス、ホモシステイン血症、および家族性タンパク質または脂質プロセッシン
グ疾患などを含む他の疾患は、アテローム硬化症に直接的または間接的いずれか
で関連する。従って、本発明の「治療剤」（特に、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢ
Ｐ−１２複合体の活性または形成を調整（または供給）する「治療剤」）は、ア
テローム硬化症に関連する疾患または障害を処置または予防することにおいて有
効であり得る「治療剤」である。本発明の「治療剤」（特に、ｐ２７（Ｋｉｐ１
）・ＦＫＢＰ−１２複合体のレベルまたは活性を調整する「治療剤」）は、この
ような疾患および障害を処置または予防することにおける効力のための、後述に
記載のアッセイを含む、当該分野で公知の任意の方法によりアッセイされ得る。

【０１２１】 アテローム硬化症に関与するプロセスについて、非常に多くの動物および細胞
培養モデルが存在する。動物モデルの限られたかつ非排他的なリストは、未成熟
アテローム硬化症のためのノックアウトマウス（Ｋｕｒａｂａｙａｓｈｉおよび
Ｙａｚａｋｉ、１９９６、Ｉｎｔ．Ａｎｇｉｏｌ．１５：１８７〜１９４）、ア
テローム硬化症のトランスジェニックマウスモデル（Ｋａｐｐｅｌら、１９９４
、ＦＡＳＥＢ Ｊ．８：５８３〜５９２）、動物モデルのアンチセンスオリゴヌ
クレオチド処置（Ｃａｌｌｏｗ、１９９５、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃａｒｄｉｏ
．１０：５６９〜５７６）、アテローム硬化症のトランスジェニックウサギモデ
ル（Ｔａｙｌｏｒ、１９９７、Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ８１１：１
４６〜１５２）、高コレステロール血症動物モデル（Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄ、１９
９６、Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｒｅｓ．Ｃｌｉｎ．Ｐｒａｃｔ．３０補遣：１〜１１
）、高脂血症マウス（Ｐａｉｇｅｎら、１９９４、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｌｉｐ
ｉｄｏｌ．５：２５８〜２６４）、および動物におけるリポキシゲナーゼの阻害
（Ｓｉｇａｌら、１９９４、Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．７１４：２１
１〜２２４）を含む。さらに、インビトロ細胞モデルは、低密度リポタンパク質
に曝された単球（Ｆｒｏｓｔｅｇａｒｄら、１９９６、Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒ
ｏｓｉｓ １２１：９３〜１０３）、クローン化血管平滑筋細胞（Ｓｕｔｔｌｅ
ｓら、１９９５、Ｅｘｐ．Ｃｅｌｌ Ｒｅｓ．２１８：３３１〜３３８）、内皮
細胞由来化学誘引剤に曝されたＴ細胞（Ｋａｔｚら、１９９４、Ｊ．Ｌｅｕｋｏ
ｃ．Ｂｉｏｌ．５５：５６７〜５７３）、培養ヒト大動脈内皮細胞（Ｆａｒｂｅ
ｒら、１９９２、Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２６２：Ｈ１０８８〜１０８５）
、および泡沫細胞培養（Ｌｉｂｂｙら、１９９６、Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｌｉｐ
ｉｄｏｌ ７：３３０〜３３５）を含むがこれらに限定されない。潜在的に有効
な「治療剤」は、例えば、制限されないで、コントロールに比較して、細胞培養
モデル中の泡沫細胞形成を低減するか、またはアテローム硬化症の高コレステロ
ール血症マウスモデルにおけるアテローム硬化症斑形成を低減する。

【０１２２】 従って、一旦アテローム硬化症に関連する疾患および障害が、ｐ２７（Ｋｉｐ
１）・ＦＫＢＰ−１２複合体活性または形成の調整による処置を受け易いことが
示されると、その疾患または障害は、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合
体活性または形成を調整する「治療剤」の投与（ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ
−１２複合体または個々の非複合体化ｐ２７（Ｋｉｐ１）および／またはＦＫＢ
Ｐ−１２タンパク質を供給することを含む）により処置または予防され得る。

【０１２３】 （（６）遺伝子治療） 本発明の特定の実施態様では、ｐ２７（Ｋｉｐ１）および／またはＦＫＢＰ−
１２、またはその機能的誘導体をコードする配列を含む核酸は、遺伝子治療の目
的で、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体機能を調整するために投与さ
れる。より詳細な実施態様では、ｐ２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１２の両
方、またはその機能的誘導体をコードする核酸（単数または複数）は、遺伝子治
療の目的で投与される。遺伝子治療とは、被験体への特定の核酸の投与により実
施される治療をいう。本発明のこの実施態様では、この核酸は、そのコードされ
タンパク質を産生し、これは、次いで、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複
合体機能を調整することにより治療効果を奏するように供される。当該分野で利
用可能な遺伝子治療に関連する任意の方法論を用いて本発明を実施し得る。例え
ば、Ｇｏｌｄｓｐｉｅｌら、１９９３、Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍ．１２：４８８〜
５０５を参照のこと。

【０１２４】 好適な実施態様では、この「治療剤」は、ｐ２７（Ｋｉｐ１）および／または
ＦＫＢＰ−１２核酸を含み、これは、適切な宿主内で、前記のタンパク質の両方
、またはそれらのフラグメントもしくはキメラタンパク質を発現する発現ベクタ
ーの一部分である。特定の実施態様では、このような核酸は、ｐ２７（Ｋｉｐ１
）およびＦＫＢＰ−１２のコード領域に作動可能に連結されるプロモーター、ま
たはそれほど好適ではないが、別々のｐ２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１２
コード領域に連結される２つの別々のプロモーターを所有する。上記プロモータ
ーは、誘導性または構成的であり、そして、必要に応じて組織特異的である。別
の特定の実施態様では、ｐ２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１２コードの配列
（および任意のその他の所望の配列）に、ゲノム内の所望の部位で相同的組換え
を促進する領域が隣接し、それ故ｐ２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１２の核
酸の染色体内発現を提供する核酸分子が用いられる。例えば、Ｋｏｌｌｅｒおよ
びＳｍｉｔｈｉｅｓ、１９８９、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳ
Ａ ８６：８９３２〜８９３５を参照のこと。

【０１２５】 「治療剤」核酸の患者中への送達は、直接的（すなわち患者は核酸または核酸
含有ベクターに直接曝される）か、または間接的（すなわち細胞は最初にインビ
トロで核酸により形質転換され、次いで患者に移植される）のいずれかであり得
る。これら２つのアプローチは、それぞれ、インビボまたはエクソビボ遺伝子治
療として知られる。本発明の特定の実施態様では、核酸はインビボで直接投与さ
れ、そこでそれは発現されてコードされた産物を生成する。これは、当該分野で
公知の多くの方法のいずれかによって達成され得、これには、適切な核酸発現ベ
クターの一部として上記核酸を構築すること、およびこれをそれが細胞内になる
ような様式で投与すること（例えば、欠陥レトロウイルスもしくは弱毒レトロウ
イルスまたはその他のウイルスベクターを用いる感染による；米国特許第４，９
８０，２８６号を参照のこと）；裸のＤＮＡを直接注入すること；微粒子衝撃を
用いること（例えば、「Ｇｅｎｅ Ｇｕｎ（登録商標）；Ｂｉｏｌｉｓｔｉｃ、
Ｄｕｐｏｎｔ」）；脂質で上記核酸をコーティングすること；関連細胞表面レセ
プター／トランスフェクティング剤を用いること；リポソーム、微粒子、または
マイクロカプセル中にカプセル化すること；それを、核に侵入することが知られ
るペプチドに連結して投与すること；またはそれを、レセプター媒介エンドサイ
トーシス（例えば、ＷｕおよびＷｕ、１９８７．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６
２：４４２９〜４４３２を参照のこと、これは、目的のレセプターを特異的に発
現する細胞型を「標的化する」ために用いられ得る）の素因となるリガンドに連
結して投与することによる、などが含まれるがこれらに限定されるわけではない
。

【０１２６】 本発明の別の特定の実施態様では、リガンドが、エンドソームを破壊しそれ故
核酸に後続のリソソーム分解を避けさせるように設計されたフゾ誘発（ｆｕｓｏ
ｇｅｎｉｃ）ウイルスペプチドを含む、核酸−リガンド複合体が産生され得る。
なお別の特定の実施態様では、この核酸は、特定のレセプターを標的することに
より、細胞特異的エンドサイトーシスおよび発現のためにインビボで標的化され
得る。例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ９２／０６１８０；ＷＯ９３／１４１８８および
ＷＯ９３／２０２２１を参照のこと。あるいは、この核酸は、細胞内に導入され
、そして相同的組換えによる発現のために宿主細胞ゲノム内に取り込まれる。例
えば、Ｚｉｊｌｓｔｒａら、１９８９．Ｎａｔｕｒｅ ３４２：４３５〜４３８
を参照のこと。

【０１２７】 なお別の特定の実施態様では、ｐ２７（Ｋｉｐ１）および／またはＦＫＢＰ−
１２核酸を含むウイルスベクターが利用される。例えば、その次の宿主細胞ＤＮ
Ａ中への組込みとともに、ウイルスゲノムのパッケージングに必要ではないレト
ロウイルス特異的配列を欠失するように改変されたレトロウイルスベクターが採
用され得る（例えば、Ｍｉｌｌｅｒら、１９９３．Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．
２１７：５８１〜５９９）。ｐ２７（Ｋｉｐ１）および／またはＦＫＢＰ−１２
（好ましくは両方）の核酸は、患者中に遺伝子の送達を容易にするベクター中に
クローン化され得る（例えば、Ｂｏｅｓｅｎら、１９９４．Ｂｉｏｔｈｅｒａｐ
ｙ ６：２９１〜３０２；Ｋｉｅｍら、１９９４．Ｂｌｏｏｄ ８３：１４６７
〜１４７３を参照のこと）。さらに、アデノウイルスは、呼吸上皮への遺伝子送
達のための特に有効な「ビヒクル」として用いられ得る。アデノウイルスを基礎
にした送達系のその他の標的は、肝臓、中枢神経系、内皮細胞、および筋肉であ
る。アデノウイルスはまた、非***細胞を感染する有利な能力を所有する。レビ
ューには、例えば、ＫｏｚａｒｓｋｙおよびＷｉｌｓｏｎ、１９９３．Ｃｕｒｒ
．Ｏｐｉｎ．Ｇｅｎ．Ｄｅｖｅｌｏｐ．３：４９９〜５０３を参照のこと。アデ
ノウイルス随伴ウイルス（ＡＡＶ）もまた、遺伝子治療における使用のために提
案されている。例えば、Ｗａｌｓｈら、１９９３．Ｐｒｏｃ．Ｓｏｃ．Ｅｘｐ．
Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．２０４：２８９〜３００を参照のこと。

【０１２８】 本発明の実施における遺伝子治療へのさらなるアプローチは、エレクトロポー
レーション、リポフェクション、リン酸カルシウム媒介トランスフェクション、
ウイルス感染などのような方法により、インビトロ組織培養中の細胞中に遺伝子
を移入することを含む。一般に、移入の方法論は、細胞への選択マーカーの同時
移入を含む。次いで細胞は、移入遺伝子を取り込み、そして発現しているような
細胞の単離を容易にするような選択圧力（例えば、抗生物質耐性）下に配置され
る。次いで、これらの細胞を患者に送達する。特定の実施態様では、得られる組
換え細胞のインビボ投与の前に、核酸は、制限されないで以下を含む、当該分野
で公知の任意の方法により細胞中に導入される：トランスフェクション、エレク
トロポーレーション，マイクロインジェクション、目的の核酸配列を含むウイル
スまたは細菌ファージベクター、細胞融合、染色体媒介遺伝子移入、微小細胞媒
介遺伝子移入、スフェロプラスト融合、およびレシピエント細胞の必要な発生機
能および生理学的機能が移入により破壊されないことを確実にする類似の方法。
例えば、ＬｏｅｆｆｌｅｒおよびＢｅｈｒ、１９９３．Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏ
ｌ．２１７：５９９〜６１８を参照のこと。選択された技法は、核酸が細胞によ
り発現され得るように、細胞への核酸の安定な移入を提供する。好ましくは、上
記移入される核酸は、遺伝性であり、そしてこの細胞の子孫により発現され得る
。

【０１２９】 本発明の好適な実施態様では、得られる組換え細胞は、制限されないで以下を
含む、当該分野で公知の種々の方法により患者に送達され得る：上皮細胞の注入
（例えば、皮下）、患者への皮膚移植片として組換え皮膚細胞の付与、および組
換え血液細胞の静脈内注入（例えば、造血幹細胞または先祖細胞）。使用のため
に想定される細胞の総数は、所望の効果、患者の状態などに依存し、そして当業
者により決定され得る。

【０１３０】 遺伝子治療の目的に核酸が導入され得る細胞は、任意の所望の利用可能な細胞
型を包含し、そして外因性、異種遺伝子型、同系、自家であり得る。細胞型は、
制限されないで、上皮細胞、内皮細胞、ケラチノサイト、線維芽細胞、筋肉細胞
，肝細胞および血液細胞のような分化した細胞、または種々の幹細胞もしくは先
祖細胞、特に、胎児心筋細胞、肝臓幹細胞（国際特許公開ＷＯ９４／０８５９８
）、神経幹細胞（ＳｔｅｍｐｌｅおよびＡｎｄｅｒｓｏｎ、１９９２、Ｃｅｌｌ
７１：９７３〜９８５）、例えば、骨髄、臍帯血、末梢血、胎児肝臓などから
得られるような、造血幹細胞または先祖細胞を含む。好適な実施態様では、遺伝
子治療に利用される細胞は、患者に対して自系である。

【０１３１】 組換え細胞が遺伝子治療に用いられる特定の実施態様では、単離され、そして
インビトロで維持され得る幹細胞または先祖細胞が利用され得る。このような幹
細胞は、制限されないで、造血幹細胞（ＨＳＣ）、上皮組織の幹細胞、および神
経幹細胞を含む（例えば、ＳｔｅｍｐｌｅおよびＡｎｄｅｒｓｏｎ、１９９２．
Ｃｅｌｌ ７１：９７３〜９８５）。ＨＳＣについて、ＨＳＣのインビトロの単
離、増殖、および維持のために提供される任意の技法が、本発明の特定の実施態
様で用いられ得る。先に論議されたように、遺伝子治療に利用されるＨＳＣは、
好ましくは、患者にとって自系である。非自系のＨＳＣが用いられる場合、好ま
しくは、将来の宿主／患者の移植免疫反応を抑制する方法と組み合わせて利用さ
れる。例えば、Ｋｏｄｏら、１９８４．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．７３：１
３７７〜１３８４を参照のこと。本発明の別の好適な実施態様では、ＨＳＣは、
患者への投与の前に、当該分野で公知の任意の技法により高度に濃縮され得る。
例えば、Ｗｉｔｌｏｃｋ ＆ Ｗｉｔｔｅ、１９８２．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７９：３６０８〜３６１２を参照のこと。

【０１３２】 （７）アンチセンスオリゴヌクレオチドの利用 本発明の特定の実施態様では、ｐ２７（Ｋｉｐ１）、ＦＫＢＰ−１２、および
／またはｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体形成および機能は、ｐ２７
（Ｋｉｐ１）もしくはＦＫＢＰ−１２、または最も好ましくは、ｐ２７（Ｋｉｐ
１）およびＦＫＢＰ−１２に対するアンチセンス核酸の使用により阻害され得る
。さらに、本発明は、ｐ２７（Ｋｉｐ１）および／またはＦＫＢＰ−１２をコー
ドするゲノム配列（遺伝子）またはｃＤＮＡに対するアンチセンス、またはその
部分である（長さが少なくとも６ヌクレオチドの）核酸の治療的使用または予防
的使用を開示する。このようなアンチセンス核酸は、ｐ２７（Ｋｉｐ１）、ＦＫ
ＢＰ−１２、および／またはｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体形成ま
たは活性を阻害する「治療剤」として有用性を有し、そして治療的様式または予
防的様式で利用され得る。

【０１３３】 本発明の別の特定の実施態様は、細胞に、ｐ２７（Ｋｉｐ１）および／または
ＦＫＢＰ−１２のアンチセンス核酸、またはその誘導体の治療的に有効な量を提
供することのような、原核生物細胞または真核生物細胞内でｐ２７（Ｋｉｐ１）
およびＦＫＢＰ−１２核酸配列の発現の阻害のための方法を開示する。

【０１３４】 本発明のこのアンチセンス核酸は、細胞に直接投与され得るか、または外因性
の導入された配列の転写によりインビボで産生され得るかのいずれかであるオリ
ゴヌクレオチドであり得る。さらに、このアンチセンス核酸は、ｐ２７（Ｋｉｐ
１）またはＦＫＢＰ−１２ｍＲＮＡのコード領域（すなわちエキソン性）および
／または非コード領域（すなわちイントロン性）のいずれかに相補的であり得る
。ｐ２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１２アンチセンス核酸は、長さが、少な
くとも６ヌクレオチドであり、そして好ましくは、長さが６〜２００ヌクレオチ
ドの範囲のオリゴヌクレオチドである。特定の実施態様では、このアンチセンス
オリゴヌクレオチドは、少なくとも１０ヌクレオチド、少なくとも１５ヌクレオ
チド、少なくとも１００ヌクレオチド、または少なくとも２００ヌクレオチドで
ある。このアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＤＮＡまたはＲＮＡ（またはそ
のキメラ混合物、誘導体または改変型）であり得、一本鎖または二本鎖のいずれ
かであり得、そして塩基、糖または骨格部分で改変され得る。

【０１３５】 さらに、このアンチセンスオリゴヌクレオチドは、他の関連する官能基（例え
ば、ペプチド、そのオリゴヌクレオチドの細胞膜を横切る輸送を容易にする部分
、ハイブリダイゼーションが引き起こす架橋因子、ハイブリダイゼーションが引
き起こす開裂因子など）を含み得る。例えば、Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒら、１９８９
．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８６：６５５３−６５
５６；ＰＣＴ公開番号ＷＯ ８８／０９８１０を参照のこと。特定の実施態様に
おいて、ｐ２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１２のアンチセンスオリゴヌクレ
オチドは、触媒性ＲＮＡすなわちリボザイムを含む。例えば、Ｓａｒｖｅｒら、
１９９０．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４７：１２２２−１２２５を参照のこと。

【０１３６】 本発明のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、当該分野内で公知の標準的な方
法論によって合成され得る。このような方法としては、以下が含まれるがそれら
に限定されない：（ｉ）自動ホスホロチオエート媒介性オリゴヌクレオチド合成
（例えば、Ｓｔｅｉｎら、１９８８．Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．１６：３２０９を参照のこと）、または（ｉｉ）制御された孔のガラス
ポリマー支持体の使用によって調製されたメチルホスホネートオリゴヌクレオチ
ド（例えば、Ｓａｒｉｎら．、１９８８．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５：７４４８−７４５１を参照のこと）。

【０１３７】 別の実施態様において、ｐ２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１２のアンチセ
ンス核酸は、外来性配列の転写によって細胞内で生成される。例えば、所望の遺
伝子の逆の相補体に機能的に連結したプロモーターを含むベクターなどが生成さ
れ得、これは、（細胞に取り込まれる際に）インビボで転写され、従って、アン
チセンス核酸（ＲＮＡ）種を生成する。上記のベクターは、それが、所望のアン
チセンスＲＮＡを生成するように転写され得る限り、エピソーム性のままであり
得るか、または染色体に組み込まれ得るかのいずれかであり得る。利用されるベ
クターの起源は、細菌、ウイルス、酵母または哺乳動物細胞中の複製および発現
に利用されることが当該分野で公知の他の供給源由来であり得る。ｐ２７（Ｋｉ
ｐ１）およびＦＫＢＰ−１２のアンチセンスＲＮＡをコードする配列の発現は、
当該分野で哺乳動物、好ましくはヒト細胞において機能することが公知の任意の
プロモーターによって容易にされ得る。このようなプロモーターは、誘導性また
は構成性であり得、そしてこれらには以下が挙げられるがそれらに限定されない
：（ｉ）ＳＶ４０初期プロモーター領域；（ｉｉ）ラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ
）の３’末端の長末端反復において含まれるプロモーター；（ｉｉｉ）ヘルペス
ウイルスチミジンキナーゼプロモーター、ならびに（ｉｖ）メタロチオネイン遺
伝子の調節配列。

【０１３８】 ｐ２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１２のアンチセンス核酸は、ｐ２７（Ｋ
ｉｐ１）、ＦＫＢＰ−１２、および／またはｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１
２複合体を発現（または好ましくは、過剰発現）する細胞型の障害の処置または
予防において、予防的にまたは治療的に、利用され得る。ｐ２７（Ｋｉｐ１）お
よびＦＫＢＰ−１２のＲＮＡを発現または過剰発現する細胞型は、当該分野で公
知の種々の方法によって同定され得る。そのような方法としては以下が挙げられ
るがそれらに限定されない：ｐ２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１２に特異的
な核酸とのハイブリダイゼーション（例えば、ノーザンハイブリダイゼーション
、ドットブロットハイブリダイゼーション、インサイチュハイブリダイゼーショ
ンによる）または特定の細胞型からのＲＮＡがインビトロでｐ２７（Ｋｉｐ１）
および／またはＦＫＢＰ−１２に翻訳される能力を免疫化学により観察すること
による。好ましい局面において、患者からの初代組織が、実際の処置の前に、（
Ｋｉｐ１）および／またはＦＫＢＰ−１２の発現について、例えば、免疫細胞化
学もしくはインサイチュハイブリダイゼーションによってアッセイされ得る。

【０１３９】 本発明の薬学的組成物（薬学的に受容可能なキャリア内に含まれる有効量のｐ
２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１２アンチセンス核酸を含む）は、ｐ２７（
Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体の改変された発現、またはこの複合体の個々
の成分のＲＮＡもしくはタンパク質の改変された発現を含む型の疾患もしくは障
害を有する患者に投与され得る。特定の障害もしくは状態の処置において有効で
あるｐ２７（Ｋｉｐ１）および／またはＦＫＢＰ−１２アンチセンス核酸の量は
、その障害もしくは状態の性質に依存し、そして標準的な臨床的技術によって決
定され得る。可能であれば、ヒトにおける試験および使用の前に、インビトロ系
において、および有用な動物モデルにおいてアンチセンス細胞傷害性を決定する
ことが所望される。特定の実施態様において、ｐ２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢ
Ｐ−１２アンチセンス核酸を含む薬学的組成物は、リポソーム、微粒子またはマ
イクロカプセルなどを介して投与され得る。例えば、前出およびＬｅｏｎｅｔｔ
ｉら、１９９０．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８７：
２４４８−２４５１を参照のこと。

【０１４０】 （８）ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体アッセイ ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体（およびその誘導体、フラグメン
ト、アナログ、およびホモログ）の機能的活性は、当該分野で公知の多数の方法
によってアッセイされ得る。例えば、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ｐ２７（Ｋｉｐ１）
複合体活性の推定される調節因子（例えば、インヒビター、アゴニストおよびア
ンタゴニスト）（例えば、抗ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体抗体、
およびｐ２７（Ｋｉｐ１）もしくはＦＫＢＰ−１２アンチセンス核酸）は、ｐ２
７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体形成および／または活性を調節するその
能力についてアッセイされ得る。

【０１４１】 （免疫アッセイ） 特定の実施態様において、免疫ベースの方法論が提供される。ここで、ある方
法は、以下についてアッセイする：（ｉ）野生型のｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢ
Ｐ−１２複合体またはＦＫＢＰ−１２に結合もしくは競合する能力、または（ｉ
ｉ）抗ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体抗体に結合する能力。これら
の免疫アッセイとしては、以下が含まれるがそれらに限定されない：放射免疫ア
ッセイ、酵素連結免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、「サンドイッチ」免疫アッ
セイ、免疫放射測定アッセイ、ゲル拡散沈降素反応、免疫拡散アッセイ、インサ
イチュ免疫アッセイ（例えば、コロイド金、酵素もしくは放射性同位体標識を用
いる）、補体結合アッセイ、ウェスタンブロット、ノースウェスタンブロット、
沈降反応、凝集アッセイ（例えば、ゲル凝集アッセイ、血球凝集アッセイ）、免
疫蛍光アッセイ、プロテインＡアッセイおよび免疫電気泳動アッセイなどのよう
な技術を利用した競合的アッセイ系および非競合的アッセイ系。１つの特定の実
施態様において、抗体結合は、一次抗体上の標識についてアッセイすることによ
って直接検出される。別の特定の実施態様において、一次抗体の結合は、その一
時抗体に特異的な二次抗体（または試薬）の検出によって確認される。さらなる
実施態様において、その二次抗体は標識される。

【０１４２】 （遺伝子発現アッセイ） ｐ２７（Ｋｉｐ１）またはＦＫＢＰ−１２の遺伝子（内因性遺伝子由来および
組み込まれた組換えＤＮＡ由来の両方）は、当該分野で公知の技術を用いて検出
され得る。このような技術としては、以下が挙げられるがそれらに限定されない
：サザンハイブリダイゼーション；ノーザンハイブリダイゼーション、制限エン
ドヌクレアーゼマッピング、ＤＮＡ配列分析およびポリメラーゼ連鎖反応増幅（
ＰＣＲ）に続き、種々の細胞型におけるｐ２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１
２遺伝子に特異的なプローブを用いたサザンハイブリダイゼーションもしくはＲ
Ｎアーゼ保護（例えば、ＣＵＲＲＥＮＴ ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ ＩＮ ＭＯＬＥ
ＣＵＬＡＲ ＢＩＯＬＯＧＹ １９９７、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ａｎｄ Ｓｏ
ｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、ＮＹを参照のこと）。

【０１４３】 本発明の１つの特定の実施態様において、サザンハイブリダイゼーションを使
用して、ｐ２７（Ｋｉｐ１）および／またはＦＫＢＰ−１２遺伝子変異と、生理
状態または病理状態との遺伝的連鎖を検出し得る。種々の発生段階の多くの細胞
型が、そのｐ２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１２発現（特に、同じ細胞内の
ｐ２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１２の同時発現）について特徴付けられ得
る。ノーザンブロット分析またはサザンブロット分析についてのハイブリダイゼ
ーション条件のストリンジェンシーを操作して、使用される特定のプローブに対
する関連性の所望の程度を用いて核酸の検出を確実にし得る。例えば、前出を参
照のこと。これら上記の方法の改変、および当該分野において周知の他の方法が
、本発明の実施において利用され得る。

【０１４４】 （結合アッセイ） ＦＫＢＰ−１２の誘導体、フラグメント、アナログおよびホモログは、ｐ２７
（Ｋｉｐ１）に対する結合について、当該分野で公知の任意の方法によってアッ
セイされ得る。これらの方法としては、以下が挙げられるがそれらに限定されな
い：（ｉ）改変された酵母ツーハイブリッドアッセイ系；（ｉｉ）複合体内のｐ
２７（Ｋｉｐ１）に結合する抗体との免疫沈降、続いて、免疫沈降したタンパク
質のサイズ分画による分析（例えば、変性もしくは非変性性のポリアクリルアミ
ドゲル電気泳動）；（ｉｉｉ）ウェスタン分析；（ｖ）非変性ゲル電気泳動など
。あるいは、上記の技術を改変して、逆の分析（ここで、ｐ２７（Ｋｉｐ１）化
合物がＦＫＢＰ−１２に結合する）を可能にし得る。

【０１４５】 （生物学的活性についてのアッセイ） 本発明の特定の実施態様は、ｐ２７（Ｋｉｐ１）の誘導体、フラグメント、ア
ナログまたはホモログを、生物学的活性についてスクリーニングするための方法
論を提供する。この方法論は、ｐ２７（Ｋｉｐ１）のこの誘導体、フラグメント
、アナログまたはホモログを、ＦＫＢＰ−１２と接触させる工程、およびこのｐ
２７（Ｋｉｐ１）のその誘導体、フラグメント、アナログまたはホモログとＦＫ
ＢＰ−１２との間の複合体形成を検出する工程を包含する。ここで、この複合体
の形成の検出は、そのｐ２７（Ｋｉｐ１）の誘導体、フラグメント、アナログま
たはホモログが生物学的活性（例えば、結合）を有することを示す。同様に、さ
らなる実施態様は、ＦＫＢＰ−１２の誘導体、フラグメント、アナログまたはホ
モログを、生物学的活性についてスクリーニングするための方法論を開示する。
この方法論は、そのタンパク質の誘導体、フラグメント、アナログまたはホモロ
グを、ｐ２７（Ｋｉｐ１）と接触させる工程；およびＦＫＢＰ−１２のこの誘導
体、フラグメント、アナログまたはホモログとｐ２７（Ｋｉｐ１）との間の複合
体形成を検出する工程を包含する。ここで、その複合体の形成を検出することは
、そのＦＫＢＰ−１２の誘導体、フラグメント、アナログまたはホモログが生物
学的活性を有することを示す。

【０１４６】 （ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体活性の調節） 本発明は、ｐ２７（Ｋｉｐ１）ＦＫＢＰ−１２複合体に関与する能力を有する
タンパク質部分のレベルまたは活性を調節することに関連する方法論を提供する
。この方法論は、そのタンパク質（または、その誘導体、フラグメント、アナロ
グまたはホモログ）の結合パートナーの投与を介する。ｐ２７（Ｋｉｐ１）（な
らびにその誘導体、フラグメント、アナログおよびホモログ）は、ＦＫＢＰ−１
２の活性またはレベルを調節する能力について、ｐ２７（Ｋｉｐ１）タンパク質
と細胞を接触させるか、またはＦＫＢＰ−１２遺伝子を発現する動物にｐ２７（
Ｋｉｐ１）タンパク質を投与することによるか、あるいは、ｐ２７（Ｋｉｐ１）
をコードする核酸またはｐ２７（Ｋｉｐ１）または抗体結合ドメインを含むその
誘導体、フラグメント、アナログもしくはホモログを免疫特異的に結合する抗体
を投与すること、ならびにＦＫＢＰ−１２のレベルもしくは活性のその変化を測
定することによってアッセイされ得る。ここで、ＦＫＢＰ−１２のレベルまたは
活性の変化は、そのｐ２７（Ｋｉｐ１）がＦＫＢＰ−１２レベルまたは活性を調
節する能力を有することを示す。別の実施態様において、ＦＫＢＰ−１２（なら
びにその誘導体、フラグメント、アナログおよびホモログ）は、類似の様式にお
いてｐ２７（Ｋｉｐ１）のレベルまたは活性を調節する能力についてアッセイさ
れ得る。

【０１４７】 （ｐ２７（Ｋｉｐ１）関連処置アッセイ） （腫瘍形成） ｐ２７（Ｋｉｐ１）は、細胞増殖、ならびにそれゆえ細胞形質転換および腫瘍
形成の制御において役割を果たす。本発明は、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−
１２複合体（ならびにその誘導体、フラグメント、アナログおよびホモログ）を
、細胞増殖、細胞形質転換および／または腫瘍形成をインビトロおよびインビボ
で変化させる能力について、スクリーニングするための方法論を開示する。例え
ば、（これは、決して限定しない）、細胞増殖は、３Ｈチミジン取り込みを測定
することによって、直接の細胞計数によって、プロトオンコジーン（例えば、ｃ
−ｆｏｓ、ｃ−ｍｙｃ）、細胞周期マーカーなどのような公知の遺伝子の転写活
性の変化を検出することによって、アッセイされ得る。

【０１４８】 ｐ２７（Ｋｉｐ１）、ＦＫＢＰ−１２、および／またはｐ２７（Ｋｉｐ１）・
ＦＫＢＰ−１２複合体（ならびにその誘導体、フラグメント、アナログおよびホ
モログ）はまた、インビトロで、細胞形質転換（または悪性表現型への進行）を
誘導または阻害するにおける活性についてスクリーニングされ得る。本発明のタ
ンパク質およびタンパク質複合体は、正常表現型を有する細胞（細胞形質転換に
ついてアッセイするために）または形質転換された表現型を有する細胞（細胞形
質転換の阻害をアッセイするために）のいずれかと、本発明の複合体化されてい
ないかまたは複合体化されたタンパク質と接触させること、およびその細胞を、
形質転換された表現型（例えば、インビボでの腫瘍形成能に関連する１セットの
インビトロ特徴付け）に伴う特質の獲得もしくは喪失について試験することによ
って、スクリーニングされ得る。この表現型には、軟寒天におけるコロニー形成
、より丸くなった細胞形態、より緩い基材への付着、接触阻害の喪失、固定依存
性の喪失、プラスミノゲンアクチベーターのようなプロテアーゼの放出、糖輸送
の増加、血清要求性の減少、胎児抗原の発現、２５０ｋＤａの細胞表面タンパク
質の消失などが挙げられる。例えば、Ｌｕｒｉａら、１９７８．ＧＥＮＥＲＡＬ
ＶＩＲＯＬＯＧＹ、第３版．（Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ
、ＮＹ）を参照のこと。

【０１４９】 ｐ２７（Ｋｉｐ１）、ＦＫＢＰ−１２、および／またはｐ２７（Ｋｉｐ１）・
ＦＫＢＰ−１２複合体（ならびにその誘導体、フラグメント、アナログおよびホ
モログ）はまた、非ヒト試験動物におけるインビボでの腫瘍形成を促進または阻
害する能力についてスクリーニングされ得る。膨大な数の過剰増殖障害（例えば
、腫瘍形成および転移性拡散）の動物モデルが当該分野において公知である。例
えば、Ｌｏｖｅｊｏｙら、１９９７．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１８１：１３０−１３
５を参照のこと。本発明の特定の実施態様において、本発明の複合体化されてい
ない、または複合体化されたタンパク質は、非ヒト試験動物（好ましくは、ある
腫瘍の型を発生する素因のある試験動物）に投与され得る。ここで、続いて、非
ヒト試験動物において、個々のタンパク質も本発明のタンパク質複合体も投与さ
れなかったコントロール動物との比較において、腫瘍形成の発生の増加について
試験される。あるいは、個々のタンパク質および／またはこのタンパク質複合体
は、腫瘍を有する非ヒト試験動物（例えば、腫瘍が悪性細胞、新生物細胞もしく
は形質転換された細胞の誘導によるか、または発ガン物質の投与によって誘発さ
れた動物）に投与され得、そして続いて、コントロールに比較した腫瘍の減縮に
ついてその試験動物内の腫瘍が試験され得る。従って、一旦過剰増殖疾患または
障害が、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体活性の調節による処置を受
け入れることが示されると、その疾患または障害は、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫ
ＢＰ−１２複合体形成を調節する「治療剤」の投与によって、処置もしくは予防
され得る。

【０１５０】 （神経変性） 同様に、一旦、神経変性疾患または障害が、ｐ２７（Ｋｉｐ１）、ＦＫＢＰ−
１２，および／またはｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体の活性または
形成の調節による処置に受け入れられることが示されると、その疾患または障害
は、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体の活性もしくは形成を調節する
「治療剤」の投与によって処置もしくは予防され得る。この投与には，ｐ２７（
Ｋｉｐ１）、ＦＫＢＰ−１２、および／またはｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−
１２複合体を供給することが含まれる。特定の実施態様において、ｐ２７（Ｋｉ
ｐ１）、ＦＫＢＰ−１２、および／またはｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２
複合体は、神経変性疾患または障害を処置または予防するために投与される。ｐ
２７（Ｋｉｐ１）は、中枢神経系を含む全ての器官の発生および退化と関連付け
られている。Ｃａｓａｃｃｉａ−Ｂｏｎｎｅｆｉｌら、１９９７、Ｇｅｎｅｓお
よびＤｅｖ．１１：２３３５−２３４６。従って、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢ
Ｐ−１２複合体またはその誘導体、ホモログ、アナログもしくはフラグメント、
ｐ２７（Ｋｉｐ１）もしくはＦＫＢＰ−１２をコードする核酸分子、抗ｐ２７（
Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体抗体、ならびにｐ２７（Ｋｉｐ１）、ＦＫＢ
Ｐ−１２、および／もしくはｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体活性も
しくは形成の他の調節因子が、インビトロおよびインビボのアッセイにおいて神
経変性疾患を処置もしくは予防するにおける活性について試験され得る。

【０１５１】 １つの実施態様において、本発明の「治療剤」は、神経変性疾患を処置または
予防するにおける活性についてアッセイされ得る。このアッセイは、インビトロ
で神経変性疾患の指標を示す培養された細胞と、その「治療剤」とを接触させる
工程、およびその「治療剤」とそのように接触された細胞におけるその指標のレ
ベルを、そのように接触されていない細胞におけるその指標のそのレベルと比較
する工程により、ここで、その接触された細胞におけるより低いレベルは、その
「治療剤」が、神経変性疾患の処置または予防における活性を有することを示す
。神経変性疾患についてのそのような培養されたモデルの特定の例としては、以
下が挙げられるがそれらに限定されない：影響を受けた個体および影響を受けて
いない個体からの培養ラット内皮細胞（Ｍａｎｅｉｒｏら、１９９７、Ｍｅｔｈ
ｏｄｓ Ｆｉｎｄ．Ｅｘｐ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９：５−１２）
；Ｐ１９マウス胚ガン腫細胞（Ｈｕｎｇら、１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９：９４３９−９４４３）；ならびにマイナートの
基底核からのコリン作動性ニューロンの解離した細胞培養物（Ｎａｋａｊｉｍａ
ら、１９８５、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８２：６３２
５−６３２９）。

【０１５２】 別の実施態様において、本発明の「治療剤」は、神経変性疾患の症状を発生す
る素因のある試験動物にその「治療剤」を投与すること、およびその「治療剤」
の投与後のその症状における変化を測定することによって、神経変性疾患を処置
または予防するにおける活性についてアッセイされ得る。ここで、神経変性疾患
の症状の重篤度の減少または神経変性疾患の症状の予防は、その「治療剤」がそ
の疾患状態を処置または予防するにおける活性を有することを示す。そのような
試験動物は、神経変性疾患について当該分野で公知の多数の動物モデルのいずれ
か１つであり得る。これらのモデル（アルツハイマー病およびトリソミー２１の
精神遅延についてのモデルを含む）は、天然のヒト神経変性疾患を正確に模倣す
る。Ｆａｒｉｎｅ、１９９７、Ｔｏｘｉｃｏｌ．１１９：２９−３５。特定のモ
デルの例としては以下が挙げられるがそれらに限定されない：部分的トリソミー
１６マウス（Ｈｏｌｔｚｍａｎら、１９９６、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．
Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９３：１３３３３−１３３３８）；両側基底核大型細胞損傷ラ
ット（Ｐｏｐｏｖｉｃら、１９９６、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．８６：２
８１−２９９）；加齢ラット（Ｍｕｉｒ、１９９７、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｂｉ
ｏｃｈｅｍ．Ｂｅｈａｖ．５６：６８７−６９６）；アルツハイマー病のＰＤＡ
ＰＰトランスジェニックマウスモデル（Ｊｏｈｎｓｏｎ−Ｗｏｏｄら、１９９７
、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９４：１５５０−１５５５
）；および実験的自己免疫性痴呆（Ｏｒｏｎら、１９９７、Ｊ．Ｎｅｕｒａｌ
Ｔｒａｎｓｍ．Ｓｕｐｐｌ．４９：７７−８４）。

【０１５３】 （自己免疫疾患） ｐ２７（Ｋｉｐ１）結合パートナーＦＫＢＰ−１２は、自己免疫疾患と関連付
けられている。従って、ｐ２７（Ｋｉｐ１）、ＦＫＢＰ−１２、および／または
ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体またはその誘導体、アナログ、もし
くはフラグメント、ｐ２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１２タンパク質または
その誘導体、アナログもしくはフラグメントをコードする核酸、または抗ｐ２７
（Ｋｉｐ１）抗体、抗ＦＫＢＰ−１２抗体、および／または抗ｐ２７（Ｋｉｐ１
）・ＦＫＢＰ−１２複合体抗体、あるいはｐ２７（Ｋｉｐ１）、ＦＫＢＰ−１２
、および／またはｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体活性もしくは形成
の他の調節因子は、インビトロおよびインビボのアッセイにおいて、自己免疫疾
患を処置または予防するにおける活性について試験され得る。

【０１５４】 本発明の１つの実施態様において、本発明の「治療剤」は、自己免疫疾患を処
置または予防するにおける活性についてアッセイされ得る。このアッセイは、イ
ンビトロで自己免疫反応の指標を示す培養細胞を、その「治療剤」と接触させる
工程、およびそのように接触された細胞におけるその指標のレベルを、そのよう
に接触されていない細胞におけるその指標のレベルと比較する工程により、ここ
で、その接触された細胞におけるより低いレベルは、その「治療剤」が、自己免
疫疾患を処置または予防するにおいて活性を有することを示す。そのようなアッ
セイについて使用され得る細胞モデルとしては以下が挙げられるがそれらに限定
されない：炎症を媒介するケモカインを分泌する白血球および滑膜細胞（Ｋｕｎ
ｋｅｌら、１９９６、Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．５９：６−１２）；多発性
硬化症の動物モデルからの脳脊髄液細胞（Ｎｏｒｇａら、１９９５、Ｉｎｆｌａ
ｍｍ．Ｒｅｓ．４４：５２９−５３４）；ギヤン‐バレー疾患のモデルである実
験的自己免疫神経炎におけるマクロファージ（Ｂａｉら、１９９７、Ｊ．Ｎｅｕ
ｒｏｉｍｍｕｎｏｌ．７６：１７７−１８４）；単球におけるＣＤ４０／ＣＤ４
０Ｌアッセイ（Ｌａｍａｎら、１９９６、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．
１６：５９−１０８）；ｌｐｒマウスについてのリンパ球培養物（Ｎａｇａｔａ
、１９９６、Ｐｒｏｇ．Ｍｏｌ．Ｓｕｂｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１６：８７−１０
３）；ならびに突発性マウス自己免疫甲状腺炎における培養甲状腺細胞（Ｇｒｅ
ｅｎら、１９９６，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ １３７：２８２３−３２）。

【０１５５】 別の実施態様において、本発明の「治療剤」は、自己免疫疾患を処置または予
防するにおける活性についてアッセイされ得る。このアッセイは、その「治療剤
」を、自己免疫反応を示すか、あるいは、続いて自己免疫反応を示さないが、自
己免疫反応を誘発する因子を用いてチャレンジを受ける試験動物に投与する工程
、およびその「治療剤」の投与後のその免疫反応における変化を測定する工程に
よる。ここで、その自己免疫反応における低減、またはその自己免疫反応の予防
は、その「治療剤」が自己免疫疾患を処置または予防するにおいて活性を有する
ことを示す。

【０１５６】 多数の自己免疫疾患の動物モデルが当該分野で公知である。これらのモデル（
これには、関節炎、全身性エリテマトーデス、糖尿病、甲状腺炎、脳炎などにつ
いてのモデルが含まれる）は、天然のヒト自己免疫疾患を正確に模倣する。Ｆａ
ｒｉｎｅ、１９９７、Ｔｏｘｉｃｏｌ．１１９：２９−３５。特定のモデルの例
としては以下が挙げられるがそれらに限定されない：多発性硬化症についての実
験的アレルギー性脳脊髄炎（Ｂｒａｂｂら、１９９７、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１
５９：４９７−５０７）；チログロブリン誘導性実験性甲状腺炎（Ｂｈａｔｉａ
ら、１９９６ Ｐｒｏｃ Ｓｏｃ Ｅｘｐ Ｂｉｏｌ Ｍｅｄ．２１３：２９４
−３００）；多器官に配置される自己免疫疾患、例えば、腎膜（ｃａｐｓｕｌｅ
）の下で、ラット胸腺移植物を受けるＢＡＬＢ／ｃ ｎｕ／ｎｕマウスにおける
甲状腺炎および腸炎（ＴａｇｕｃｈｉおよびＴａｋａｈａｓｈｉ、１９９６、Ｉ
ｍｍｕｎｏｌ ８９：１３−１９）；ウイルス誘発性自己免疫疾患（例えば、イ
ンスリン依存性糖尿病（Ｏｌｄｓｔｏｎｅ およびｖｏｎ Ｈｅｒｒａｔｈ、１
９９６ ＡＰＭＩＳ．１０４ ：６８９−９７．概説）、実験的自己免疫脳脊髄
炎（Ｅｎｃｉｎａｓら、１９９６、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｒｅｓ．４５：６５
５−６６９）；実験的自己免疫迷路炎（ｌａｂｙｒｉｎｔｈｉｔｉｓ）；フロイ
ントのアジュバント誘発性慢性関節リウマチならびに全身性エリテマトーデス、
慢性関節リウマチ、宿主対移植片疾患および糖尿病を発症する近交系マウス系統
（Ｈｕｍｐｈｒｙｅｓ−Ｂｅｈｅｒ、１９９６、Ａｄｖ．Ｄｅｎｔ．Ｒｅｓ．１
０：７３−７５）；ならびに自己免疫肝炎（Ｍｅｙｅｒ ｚｕｍ Ｂｕｓｃｈｅ
ｎｆｅｌｄｅ およびＤｉｅｎｅｓ，１９９６、Ｖｉｒｃｈｏｗｓ Ａｒｃｈ．
４２９：１−１２）。

【０１５７】 同様に、一旦器官移植疾患または障害が、ｐ２７（Ｋｉｐ１）、ＦＫＢＰ−１
２、および／またはｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体の活性または形
成の調節による処置を受け入れることが示されると、その疾患または障害は、そ
のｐ２７（Ｋｉｐ１）、ＦＫＢＰ−１２、および／またはｐ２７（Ｋｉｐ１）・
ＦＫＢＰ−１２複合体の活性または形成を調節する「治療剤」の投与によって処
置または予防され得る。特定の実施態様において、ｐ２７（Ｋｉｐ１）、ＦＫＢ
Ｐ−１２、および／またはｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体は、器官
移植に関連する疾患または障害を処置または予防するために投与される。

【０１５８】 （アテローム硬化症） ｐ２７（Ｋｉｐ１）は、アテローム硬化症にもまた関連付けられている。主要
なマクロファージコロニー刺激因子（ＭＣＳＦ）（これは、アテローム硬化症斑
に存在する）は、細胞周期が回る前にｐ２７（Ｋｉｐ１）の首尾よいダウンレギ
ュレーションを必要とする。Ａｎｔｏｎｏｖら、１９９７、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎ
ｖｅｓｔ．９９：２８６７−２８７６。ｐ２７（Ｋｉｐ１）タンパク質、ＦＫＢ
Ｐ−１２タンパク質、および／またはｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合
体またはその誘導体、アナログもしくはフラグメント、ｐ２７（Ｋｉｐ１）もし
くはＦＫＢＰ−１２のタンパク質またはその誘導体、アナログもしくはフラグメ
ントをコードする核酸、抗ｐ２７（Ｋｉｐ１）抗体、抗ＦＫＢＰ−１２抗体およ
び／または抗ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体抗体、あるいはそのｐ
２７（Ｋｉｐ１）、ＦＫＢＰ−１２、および／もしくはｐ２７（Ｋｉｐ１）・Ｆ
ＫＢＰ−１２複合体活性もしくは形成の他の調節因子が、インビトロおよびイン
ビボのアッセイでのアテローム硬化症を処置または予防する活性について試験さ
れ得る。従って、本明細書における「治療剤」は、特に、ｐ２７（Ｋｉｐ１）、
ＦＫＢＰ−１２、および／またはｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体の
活性または形成を調節（または供給）する治療剤であり、これは、アテローム硬
化症関連疾患もしくは障害を処置または予防するにおいて有効であり得る。本発
明の「治療剤」は、そのような疾患および障害を処置または予防するにおける効
力について当該分野において公知の任意の方法によってアッセイされ得る。

【０１５９】 １つの実施態様において、本発明の「治療剤」は、アテローム硬化症および関
連疾患を処置または予防するにおける活性についてアッセイされ得る。このアッ
セイは、インビトロでアテローム硬化症関連疾患の指標を示す培養細胞とその「
治療剤」とを接触させる工程、およびそのように接触された細胞におけるその指
標のレベルと、そのように接触されていない細胞におけるその指標のレベルとを
比較する工程により、ここで、そのように接触された細胞におけるより低いレベ
ルは、この「治療剤」がアテローム硬化症関連疾患を処置または予防するにおい
て活性を有することを示す。アテローム硬化症および関連疾患についてこのよう
な培養されたモデルの特定の例としては以下が挙げられるがそれらに限定されな
い：低密度リポタンパク質に曝露された単球（Ｆｒｏｓｔｅｇａｒｄら、１９９
６、Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ １２１：９３−１０３）、クローニング
された血管平滑筋細胞（Ｓｕｔｔｌｅｓら、１９９５、Ｅｘｐ．Ｃｅｌｌ Ｒｅ
ｓ．２１８：３３１−３３８）、内皮細胞由来化学遊走因子に曝露されたＴ細胞
（Ｋａｔｚら、１９９４、Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．５５：５６７−５７３
）、培養されたヒト動脈内皮細胞（Ｆａｒｂｅｒら、１９９２、Ａｍ．Ｊ．Ｐｈ
ｙｓｉｏｌ．２６２：Ｈ１０８８−１０８５）、および泡沫細胞培養物（Ｌｉｂ
ｂｙら、１９９６、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｌｉｐｉｄｏｌ．７：３３０−３３５
）。

【０１６０】 別の実施例において、本発明の「治療剤」は、アテローム硬化症関連疾患を処
置または予防するに置ける活性についてアッセイされ得る。このアッセイは、そ
の「治療剤」を、アテローム硬化症関連疾患の症状を示すか、またはその疾患の
症状を発症する素因のある試験動物に投与する工程、およびその「治療剤」の投
与後のアテローム硬化症関連疾患の症状における変化を測定する工程による。こ
こで、そのアテローム硬化症関連疾患の症状の重篤度における低減、またはアテ
ローム硬化症関連疾患の症状の予防は、その「治療剤」が自己免疫疾患を処置ま
たは予防するにおいて活性を有することを示す。このような試験動物は、アテロ
ーム硬化症関連疾患について当該分野で公知の多数の動物モデルのいずれか１つ
であり得る。動物モデルの限定されるが排他的ではないリストとしては、以下が
挙げられる：未熟なアテローム硬化症についてのノックアウトマウス（Ｋｕｒａ
ｂａｙａｓｈｉ およびＹａｚａｋｉ、１９９６、Ｉｎｔ．Ａｎｇｉｏｌ．１５
：１８７−１９４）、アテローム硬化症のトランスジェニックマウス（Ｋａｐｐ
ｅｌら、１９９４、ＦＡＳＥＢ Ｊ．８：５８３−５９２）、動物モデルのアン
チセンスオリゴヌクレオチド処置（Ｃａｌｌｏｗ、１９９５、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉ
ｎ．Ｃａｒｄｉｏｌ．１０：５６９−５７６）、アテローム硬化症についてのト
ランスジェニックウサギモデル（Ｔａｙｌｏｒ、１９９７、Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ ８１１：１４６−１５２）、高コレステロール血症動物モデル
（Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄ、１９９６、Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｒｅｓ．Ｃｌｉｎ．Ｐｒ
ａｃｔ．３０ 補遺：ｌ−１１）、高脂血症マウス（Ｐａｉｇｅｎら、１９９４
、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｌｉｐｉｄｏｌ．５：２５８−２６４）、および動物に
おけるリポキシゲナーゼの阻害（Ｓｉｇａｌら、１９９４、Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ．７１４：２１１−２２４）。

【０１６１】 （膜性腎症） ｐ２７（Ｋｉｐ１）は、膜性腎症と関連付けられている。膜性腎症のモデル（
これは、内臓の糸球体上皮細胞の異常発現を示す）は、ｐ２７（Ｋｉｐ１）の顕
著なアップレギュレーションを実証する。例えば、Ｓｈａｎｋｌａｎｄら、１９
９７、Ｋｉｄｎｅｙ Ｉｎｔｌ ５２：４０４−４１３を参照のこと。ｐ２７（
Ｋｉｐ１）またはＦＫＢＰ−１２のタンパク質、および／またはｐ２７（Ｋｉｐ
１）・ＦＫＢＰ−１２複合体、あるいはその誘導体、アナログまたはフラグメン
ト、あるいはｐ２７（Ｋｉｐ１）もしくはＦＫＢＰ−１２のタンパク質またはそ
の誘導体、アナログまたはフラグメントをコードする核酸、あるいは、抗ｐ２７
（Ｋｉｐ１）抗体、抗ＦＫＢＰ−１２抗体、および／または抗ｐ２７（Ｋｉｐ
ｌ）・ＦＫＢＰ−１２複合体抗体、あるいはｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１
２複合体の活性または形成の他の調節因子は、上記のインビトロおよびインビボ
でのアッセイにおける腎症を処置または予防するにおける活性について試験され
得る。

【０１６２】 （タンパク質間の相互作用アッセイ） 本発明は、ｐ２７（Ｋｉｐ１）への結合についてＦＫＢＰ−１２の誘導体、フ
ラグメント、アナログおよびホモログをアッセイおよびスクリーニングするため
の方法論を開示する。ｐ２７（Ｋｉｐ１）と相互作用するＦＫＢＰ−１２の誘導
体、フラグメント、アナログおよびホモログは、酵母ツーハイブリッドアッセイ
系（例えば，ＦｉｅｌｄｓおよびＳｏｎｇ、１９８９．Ｎａｔｕｒｅ ３４０：
２４５−２４６を参照のこと）、または；好ましくは、その改変および改良（米
国特許出願番号第０８／６６３，８２４号（１９９６年６月１４日出願）および
同第０８／８７４，８２５号（１９９７年６月１３日出願）（Ｎａｎｄａｂａｌ
ａｎら）（これらは、本明細書において参考としてその全体が援用される）によ
って同定され得る。

【０１６３】 改良された酵母ツーハイブリッド系による相互作用するタンパク質の同定は、
レポーター遺伝子（本明細書以後「レポーター遺伝子」という）の発現の検出に
基づく。この遺伝子の転写は、２つのタンパク質の相互作用による転写調節因子
の再構成に依存する。これら２つのタンパク質はそれぞれ、転写調節因子の片半
分と融合されている。ベイト（ｂａｉｔ）のｐ２７（Ｋｉｐ１）（またはその誘
導体、フラグメント、アナログもしくはホモログ）およびプレイ（ｐｒｅｙ）タ
ンパク質（そのベイトタンパク質と相互作用する能力について試験されるべきタ
ンパク質）を、それぞれ、ＤＮＡ結合ドメインとの、および転写調節因子ドメイ
ンとの（またはその逆）融合タンパク質として発現させる。本発明の特定の実施
態様において、このプレイ集団は、ＦＫＢＰ−１２の変異体をコードする１つ以
上の核酸であり得る（例えば、部位特異的変異誘発によってまたはヌクレオチド
配列における変異を生成する別の方法によって生成されるようなもの）。このプ
レイ集団は、ＤＮＡ（例えば、ｃＤＮＡ，ゲノムＤＮＡまたは合成生成されたＤ
ＮＡ）によってコードされるタンパク質である。このＤＮＡは、特定の選択され
た遺伝子由来であるか、または目的の細胞型から得られたｃＤＮＡライブラリー
由来のいずれかである。例えば、その集団は、哺乳動物ＲＮＡからのｃＤＮＡの
集団の特徴付けられていないサンプルに由来するｃＤＮＡ配列を含むキメラ遺伝
子から発現され得る。別の特定の実施態様において、ランダムなペプチドを発現
する組換え生物学的ライブラリーが、プレイ核酸の供給源として使用され得る。

【０１６４】 本発明は、ＦＫＢＰ−１２のインヒビターについてスクリーニングするための
方法を開示する。手短には、タンパク質間の相互作用アッセイが、１つ以上の候
補分子の存在下で行われることを除いて、本明細書中上記のように行われ得る。
「レポーター遺伝子」活性に生じた増加または減少（１つ以上の候補分子が存在
しない場合に存在する活性と比較して）は、その候補分子がこの相互作用対に効
果を発揮することを示す。好ましい実施態様において、タンパク質相互作用の阻
害は、酵母細胞が生存するに必要である（例えば、減弱化されていないタンパク
質相互作用がＵＲＡ３遺伝子の活性化を生じ、化学的５−フルオロオロチン酸を
含む培地中でのその酵母の死を生じさせる場合）。例えば、Ｒｏｔｈｓｔｅｉｎ
，１９８３．Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１０１：１６７−１８０を参照のこと
。

【０１６５】 一般に、ベイトおよびプレイの集団を含むタンパク質は、融合（キメラ）タン
パク質として、好ましくは、各タンパク質を、予め選択した配列に連続的に含む
キメラをコードする配列の組換え発現により提供される。１つの集団について、
予め選択した配列は、ＤＮＡ結合ドメインである。このＤＮＡ結合ドメインは、
その結合ドメインがプロモーター内のＤＮＡ配列を特異的に認識する限り、任意
のＤＮＡ結合ドメインであり得る（例えば、転写活性化因子またはインヒビター
）。他の集団について、予め選択した配列は、それぞれ、転写活性化因子または
インヒビターの活性化またはインヒビターのドメインである。調節ドメイン単独
（タンパク質配列に対する融合物としてではない）およびＤＮＡ結合ドメイン単
独（タンパク質配列に対する融合物としてではない）は、そのアッセイにおいて
擬陽性を回避するために、好ましくは、検出可能に相互作用しない。そのアッセ
イ系はさらに、転写活性化因子（またはインヒビター）のＤＮＡ結合ドメインに
ついての結合部位を含むプロモーターに作動可能に連結したレポーター遺伝子を
含む。従って、本発明の実施において、ｐ２７（Ｋｉｐ１）融合タンパク質のプ
レイ融合タンパク質への結合は、転写活性化因子（またはインヒビター）の再構
成をもたらし、これは、同時に、「レセプター遺伝子」の発現を活性化（または
阻害）する。

【０１６６】 特定の実施態様において、本発明は、１つ以上のタンパク質間の相互作用を検
出するための方法論を開示する。この方法は、以下の工程を包含する：（ｉ）ｐ
２７（Ｋｉｐ１）（またはその誘導体、フラグメント、アナログもしくはホモロ
グ）を、第一の接合型で、そしてｐ２７（Ｋｉｐ１）の配列およびＤＮＡ結合ド
メインを含む第一の融合タンパク質を有する酵母細胞の第一の集団において組換
え発現する工程であって、ここで、その酵母細胞の第一の集団は、プロモーター
（このプロモーターは、そのＤＮＡ結合ドメインによって認識される１つ以上の
ＤＮＡ結合部位によって「駆動」され、その結果、その第一の融合タンパク質と
第二の融合タンパク質（これは、転写活性化ドメインを含む）との相互作用が、
その第一のヌクレオチド配列の転写の増加を生じる）に作動可能に連結された第
一のヌクレオチド配列を含む；（ｉｉ）その第一のヌクレオチド配列の転写の増
加が、その第二の融合タンパク質の非存在下で生じる、その第一の集団における
それらの酵母細胞を除去するようにネガティブに選択する工程；（ｉｉｉ）その
第一の接合型とは異なる第二の接合型の酵母細胞の第二の集団において、複数の
その第二の融合タンパク質を組換え発現する工程であって、ここでその第二の融
合タンパク質がＦＫＢＰ−１２の誘導体、フラグメント、アナログまたはホモロ
グの配列および転写活性化因子の活性化ドメインから構成され、ここで、その活
性化ドメインは、その第二の融合タンパク質の各々において同じである、工程；
（ｉｖ）その酵母細胞の第一の集団を、その酵母細胞の第二の集団と接合させて
、二倍体の酵母細胞の第三の集団を形成する工程であって、この二倍体酵母細胞
の第三の集団が、そのＤＮＡ結合ドメインにより認識されるＤＮＡ結合部位によ
って「駆動される」プロモーターに作動可能に連結された第二のヌクレオチド配
列を含み、その結果、第一の融合タンパク質と第二の融合タンパク質との相互作
用がその第二のヌクレオチド配列の転写の増加をもたらし、ここで、その第一の
ヌクレオチド配列および第二のヌクレオチド配列は、同じであり得るかまたは異
なり得る、工程；ならびに（ｖ）その第一のヌクレオチド配列および／またはそ
の第二のヌクレオチド配列の転写のその増加を検出し、それによって、第一の融
合タンパク質と第二の融合タンパク質との間の相互作用を検出する工程。

【０１６７】 好ましい実施態様において、ベイト（ｐ２７（Ｋｉｐ１）配列）およびプレイ
（キメラ遺伝子のライブラリー）を、およそ６〜８時間の期間、固体培地上でそ
の２つの酵母株を接合させることによって合わせる。より少なく好ましい実施態
様において、この接合は、液体培地において行われる。得られた二倍体は、キメ
ラ遺伝子の両方の型を含む（すなわち、ＤＮＡ結合ドメイン融合物および活性化
ドメイン融合物）。相互作用性の集団が得られた後、相互作用性のタンパク質の
対をコードするＤＮＡ配列を、ＤＮＡ結合ドメインハイブリッドまたは活性化ド
メインハイブリッドのいずれかが別々の反応において増幅される方法により単離
する。好ましくは、その増幅を、ＤＮＡ結合ドメインハイブリットまたは活性化
ドメインハイブリッドのいずれかに対して特異的なオリゴヌクレオチドプライマ
ーの対を利用したポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ；例えば、Ｉｎｎｉｓら、１９
９０．ＰＣＲ ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｉｎｃ．
，Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡを参照のこと）によって行う。このＰＣＲ増幅反応
はまた、相互作用するタンパク質対を発現する細胞のプールに対して、好ましく
は、相互作用物のプールされたアレイに対して行われ得る。当該分野で公知の他
の増幅方法もまた使用され得る。これには、以下が挙げられるがそれらに限定さ
れない：リガーゼ連鎖反応；Ｑβレプリカーゼなど。例えば、Ｋｒｉｃｋａら、
１９９５．ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＰＲＯＢＩＮＧ、ＢＬＯＴＴＩＮＧ、およびＳ
ＥＱＵＥＮＣＩＮＧ、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ＮＹ
を参照のこと。

【０１６８】 本発明のさらなる実施態様において、ＤＮＡ結合ドメインハイブリッドおよび
活性化ドメインハイブリッドタンパク質をコードするプラスミドもまた、当該分
野で周知の任意の方法によって、単離され得、そしてクローニングされ得る。例
えば、制限的ではないが、シャトル（酵母からＥ．ｃｏｌｉへ）ベクターを使用
して、その融合タンパク質を発現し、続いて、その遺伝子を、酵母ＤＮＡのＥ．
ｃｏｌｉへの形質転換およびその細菌からのそのプラスミドの回収によって回収
し得る。例えば、Ｈｏｆｆｍａｎら、１９８７．Ｇｅｎｅ ５７：２６７−２７
２を参照のこと。

【０１６９】 （薬学的組成物） 本発明は、薬学的に有効な量の本発明の「治療剤」の被験体への投与による処
置方法および予防方法を提供する。好ましい実施態様において、「治療剤」は、
実質的に精製されており、そしてその被験体は哺乳動物であり、そして最も好ま
しくはヒトである。

【０１７０】 「治療剤」が核酸を含む場合に使用され得る処方物および投与の方法を以下に
記載する。種々の送達系が公知であり、そして本発明の「治療剤」を投与するた
めに使用され得、以下が挙げられるがそれらに限定されない：（ｉ）リポソーム
、微粒子、マイクロカプセル中へのカプセル化；（ｉｉ）「治療剤」を発現し得
る組換え細胞；（ｉｉｉ）レセプター媒介性エンドサイトーシス（例えば、Ｗｕ
およびＷｕ、１９８７．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６２：４４２９−４４３２
を参照のこと）；（ｉｖ）レトロウイルスベクターまたは他のベクターの部分と
しての「治療剤」核酸の構築など。

【０１７１】 投与方法としては、以下が挙げられるがそれらに限定されない：皮内、筋肉内
、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外および経口経路。本発明の「治療剤」
は、任意の簡便な経路により投与され得（例えば、注入またはボーラス注射によ
る、上皮裏打ちまたは粘膜皮膚裏打ち（例えば、経口粘膜、直腸粘膜および腸粘
膜など）による九州）、そして他の生物学的に活性な薬剤と共に投与され得る。
投与は、全身性または局所的であり得る。さらに、任意の適切な経路（これには
、脳室内注射および髄腔内注射が含まれる）によって中枢神経系に「治療剤」を
投与することが利点であり得る。脳室内注射は、リザーバ（例えば、Ｏｍｍａｙ
ａリザーバ）に装着された脳室内のカテーテルによって容易にされ得る。肺投与
もまた、吸入器もしくは噴霧器およびエアゾール化剤を用いた処方物の使用によ
って使用され得る。処置を必要とする領域に「治療剤」を局所的に投与すること
もまた所望され得る。これは、例えば（しかし、これは限定しない）、手術中の
局所的注入により、局所適用により、注射により、カテーテルにより、坐剤によ
り、またはインプラントによって、達成され得る。特定の実施態様において、投
与は、悪性腫瘍もしくは新生物または前新形成組織の部位（または形成因子（ｆ
ｏｒｍｅｒ）部位）への直接注射によってであり得る。

【０１７２】 本発明の別の実施態様において、「治療剤」は、ベシクル中、特にリポソーム
中で送達され得る。例えば、Ｌａｎｇｅｒ，１９９０．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４９
：１５２７−１５３３を参照のこと。さらに別の実施態様において、「治療剤」
は、徐放系において送達され得る。徐放系としては以下が挙げられるがそれらに
限定されない：送達ポンプ（例えば、Ｓａｕｄｅｋら、１９８９．Ｎｅｗ Ｅｎ
ｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２１：５７４を参照のこと）および半透過性のポリマー材
料（例えば、Ｈｏｗａｒｄら、１９８９．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ．７１：１０
５を参照のこと）。さらに、徐放系は、治療標的（例えば、脳）の近位に配置さ
れ得、従って、全身投与のほんの一部のみを必要とする。例えば、Ｇｏｏｄｓｏ
ｎ、Ｉｎ：ＭＥＤＩＣＡＬ ＡＰＰＬＩＣＡＴＩＯＮＳ ＯＦ ＣＯＮＴＲＯＬ
ＬＥＤ ＲＥＬＥＡＳＥ、ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃｃａ Ｒａｔｏｎ、ＦＬ
（１９８４）を参照のこと。

【０１７３】 「治療剤」がタンパク質をコードする核酸である特定の実施態様において、適
切な核酸発現ベクターの部分としてその核酸を構築し、そしてその核酸が細胞内
となるように投与（例えば、レトロウイルスベクター、直接注射、微粒子ボンバ
ードメントの使用、脂質もしくは細胞表面レセプターでのコーティング、または
トランスフェクト剤による）か、あるいはその核酸を、核に進入することが公知
のホメオボックス様ペプチドに連結させて投与することなどによって、その「治
療剤」核酸をインビボで投与して、そのコードされたタンパク質の発現を促進し
得る（例えば、Ｊｏｌｉｏｔら、１９９１．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉ．ＵＳＡ ８８：１８６４−１８６８などを参照のこと）。あるいは、核酸
「治療剤」は、細胞内に導入され得、そして発現のための宿主細胞ＤＮＡに組み
込まれ得る（例えば、相同組換えによる）。

【０１７４】 本発明はまた、薬学的組成物を提供する。そのような組成物は、治療的に有効
な量の「治療剤」および薬学的に受容可能なキャリアを含む。本明細書において
利用される用語「薬学的に受容可能な」とは、連邦政府または州政府の規制局に
よって承認されることか、または米国薬局方もしくは他の一般に認められた薬局
方に、動物（より詳細にはヒト）における使用について掲載されたことを意味す
る。用語「キャリア」とは、その治療剤が一緒に投与される希釈剤、アジュバン
ト、賦形剤またはビヒクルをいい、そして、滅菌液体（例えば、水および油）が
挙げられるがそれらに限定されない。

【０１７５】 特定の障害もしくは状態の処置において有効である、本発明の「治療剤」の量
は、その障害または状態の性質に依存し、そして標準的な臨床的技術によって、
当業者によって決定され得る。さらに、インビトロアッセイが必要に応じて使用
されて、最適な投薬量範囲を同定するのに役立て得る。処方物において使用され
る正確な用量はまた、投与経路およびその疾患もしくは障害の全体の重篤度に依
存し、そして実施者の判断および各患者の状況に従って決定されるべきである。
しかし、本明細書における「治療剤」の静脈投与について適切な投薬量の範囲は
、一般に、１キログラム（ｋｇ）の体重あたり、約２０〜５００マイクログラム
（μｇ）の活性化合物である。経鼻投与についての適切な投薬量範囲は、一般に
、約０．０１ピコグラム（ｐｇ）／ｋｇ体重〜１ミリグラム（ｍｇ）／ｋｇ体重
である。有効用量は、インビトロもしくは動物モデルの試験系から誘導された用
量応答曲線から外挿され得る。坐剤は、一般に、０．５重量％から１０重量％の
範囲内の活性成分を含む：経口処方物は、好ましくは、１０％〜９５％の活性成
分を含む。

【０１７６】 本発明はまた、薬学的パックまたはキットを提供する。これらのパックまたは
キットは、本発明の薬学的組成物および「治療剤」のうち１つ以上の成分を充填
した１つ以上の容器を備える。必要に応じてそのような容器には、医薬品または
生物学的製品の製造、使用または販売を規制する政府の当局によって指定された
形態の注意書きが伴われ得、この注意書きは、ヒトへの投与についての製造、使
用または販売の当局による承認を反映する。

【０１７７】 （特定の実施例） （ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２の同定および特異性） 改変され、改良された酵母ツーハイブリッド系を使用して、細胞周期タンパク
質であるサイクリン依存性キナーゼ（ＣＤＫ２）についてのタンパク質相互作用
を同定した。酵母は真核生物であり、そしてそれゆえ、この系において検出され
た任意の細胞間タンパク質相互作用は、おそらく、哺乳動物において生理的条件
下で生じる。Ｃｈｉｅｎら、１９９１、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ
．ＵＳＡ ８８：９５７８−９５８１。同定された単離物の一つ（プレイ）は、
公知のｐ２７（Ｋｉｐ１）核酸配列（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｕ １０９０６）
の、塩基１２７〜始まり、塩基５９７までのものであった（図１、配列番号１お
よび配列番号２）。ＣＤＫ２とｐ２７（Ｋｉｐ１）との間の相互作用は、以前に
記載されている。Ｋｗｏｎら、１９９６ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒ
ｅｓ．Ｃｏｍｍ．２２０：７０３−７０９。ｐ２７（Ｋｉｐ１）の核酸配列およ
び対応するアミノ酸配列を図１に示す。

【０１７８】 （ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２相互作用の同定および特異性） マトリクス接合アッセイにおいて、ｐ２７（Ｋｉｐ１）、ＣＤＫ２、ＦＫＢＰ
−１２、および他のタンパク質を、相補（ａおよびα）接合型の酵母中に、当該
分野で公知の方法を用いて挿入した。接合を行って、同じ酵母細胞内で両方のベ
クター構築物を発現し、従って、相互作用を生じさせた。これらのドメインの間
の相互作用は、Ｇａｌ４についてのシス結合エレメントを含むレポーター遺伝子
の転写活性化をもたらした。指標タンパク質であるβガラクトシダーゼをコード
するレポーター遺伝子ならびにウラシルおよびヒスチジンの栄養要求性について
の代謝マーカーを、接合において使用した一方または他方の酵母株に特定の様式
で含ませた。このようにして、酵母を首尾よい接合、両方の融合構築物の発現、
およびｐ２７（Ｋｉｐ１）相互作用タンパク質の発現ならびに両方の融合タンパ
ク質の相互作用について選択した。

【０１７９】 ｐ２７（Ｋｉｐ１）ｃＤＮＡを、３．５×１０⁶の独立した単離物の商用の胎
児脳ｃＤＮＡライブラリー（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ ＃ＨＬ４０２９ＡＨ、Ｐａｌｏ
Ａｌｔｏ、ＣＡ）から入手した。このライブラリーを、ｐＡＣＴ２（これは、
ロイシン生合成選択酵母欠損ののためのＬＥＵ２遺伝子を含む酵母Ｇａｌ４活性
化ドメインクローニングベクターである）に指向的にクローニングされたＸｈｏ
１−ｄＴ１５でプライム刺激した胎児脳ｍＲＮＡ（５匹の雄性／雌性の１９−２
２週齢の胎児）から合成した。

【０１８０】 ＦＫＢＰ−１２を、Ｃｌｏｎｔｅｃｈ ｐＡＣＴ２ライブラリーから、標準的
な技術によって以下のプライマーを用いてＰＣＲによって増幅した；順方向プラ
イマー：

【０１８１】

【化１】 ［配列番号５］および逆方向プライマー：

【０１８２】

【化２】 ［配列番号６］（ボールド（下線付き）で示したヌクレオチドは、ＦＫＢＰ−１
２配列ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｘ５５７４１を示す）。このフラグメントを、Ｓ
ｆｉＩ含有ポリリンカーをベクターｐＡＳ２−１（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、Ｐａｌｏ
Ａｌｔｏ、ＣＡ）に導入することによって構築したベクターｐＡＳのＳｆｉＩ
部位にクローニングした。このベクターは、トリプトファン生合成欠損酵母株に
おける選択のためのＴＲＰＩ遺伝子を含む酵母ＤＮＡ結合ドメインクローニング
ベクターである。このＦＫＢＰ−１２配列を、核酸配列決定を行ってＰＣＲ増幅
物が、ＦＫＢＰ−１２配列の正確なコピーを再現していることを確認することに
よって、確認した。この試験は、推定されるように、この配列が、ヒトＦＫＢＰ
−１２と同一である相互作用するドメインをコードすることを決定した。

【０１８３】 （ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２相互作用の特異性についての試験） ｐ２７（Ｋｉｐ１）を、酢酸リチウム／ポリエチレングリコール形質転換によ
って酵母株Ｎ１０６^r（接合型ａ、ｕｒａ３、ｈｉｓ３、ａｄｅ２、ｔｒｐｌ、
ｌｅｕ２、ｇａｌ４，ｇａｌ８０、ｃｙｈ^r、Ｌｙｓ２：：ＧＡＬ１_UAS−ＨＩＳ
３_TATA−ＨＩＳ３、ｕｒａ ３：：ＧＡＬ１_UAS−ＧＡＬ_TATA−ｌａｃＺ）中に
形質転換した（Ｉｔｏら、１９８３、Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．１５３：１６３
−１６８）。他方、ＦＫＢＰ−１２のコード配列を、酵母株ＹＵＬＨ（接合型α
、ｕｒａ３、ｈｉｓ３、ｌｙｓ２、ｔｒｐｌ、ｌｅｕ２、ｇａｌ４、ｇａｌ８０
、ＧＡＬＩ−ＵＲＡ３）中に形質転換した。次いで、この２つの形質転換した集
団を、当該分野で標準的な方法を用いて接合した。Ｓｈｅｒｍａｎら編、１９９
１、ＧＥＴＴＩＮＧ ＳＴＡＲＴＥＤ ＷＩＴＨ ＹＥＡＳＴ、Ｖｏｌ．１９４
、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ。手短には、細胞を、適切
なプラスミドの存在について選択された培地上で中期から後期の対数期まで増殖
させた。次いで、この２つの接合株αおよびａを、ＹＡＰＤ培地中に希釈し、ニ
トロセルロースメンブレン上で濾過し、そして３０℃で６〜８時間インキュベー
トした。次いで、この細胞を、所望の二倍体（すなわち、βガラクトシダーゼ、
ウラシル栄養要求性、およびヒスチジン栄養要求性についてのレポーター遺伝子
を有する酵母）ならびにベイトおよびプレイをコードするベクターの発現のため
の選択的な培地に移した。この接合産物を、アデニンおよびリジン（首尾よい接
合について選択するために）、ロイシンおよびトリプトファン（両方のプラスミ
ドによってコードされる遺伝子の発現の選択のために）ならびにウラシルおよび
ヒスチジン（タンパク質相互作用を選択するために）を欠くＳＣ（合成完全）培
地上でプレートした（Ｓａｍｂｒｏｏｋ ら，１９８９、Ａ ＬＡＢＯＲＡＴＯ
ＲＹ ＭＡＮＵＡＬ、第２版．、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒ
ｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）。本明細書において、この培地を、ＳＣ選択培地と
してＳＣＳ培地と呼ぶ。

【０１８４】 選択されたクローンを、βガラクトシダーゼの発現について試験して、ｐ２７
（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体の形成を確認した。フィルターリフトβガ
ラクトシダーゼアッセイを、ＢｒｅｅｄｅｎおよびＮａｓｍｙｔｈ、１９８５、
Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｑｕａｎｔ．ＢｉｏＬ ５０：６４３
−６５０のプロトコルからの改変として実施した。コロニーを、ＳＣＳプレート
上にパッチし、一晩増殖させ、そしてレプリカをニトロセルロースフィルター上
にプレートした。次いで、このフィルターを、Ｂｒｅｅｄｅｎ およびＮａｓｍ
ｙｔｈ、１９８５、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｑｕａｎｔ．Ｂｉ
ｏｌ．５０：６４３−６５０のとおりにβガラクトシダーゼ活性についてアッセ
イした。ポジティブであったコロニーは、可視性の青色になった。

【０１８５】 ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２相互作用の特異性について試験するため
に、２つの一般試験をまず行った。第一の場合に、ＦＫＢＰ−１２を発現するＹ
ＵＬＨ細胞を作製し、そしてＳＣ（合成完全）−Ｕｒａプレート上にプレートし
、１〜２日間増殖させ、そして増殖について試験した。ＦＫＢＰ−１２について
は増殖は見出されず、このことは、ＦＫＢＰ−１２が「自己活性化」タンパク質
ではなく、つまり、ＦＫＢＰ−１２が機能的な活性化複合体のためには第二のタ
ンパク質ドメインとの相互作用を必要とすることを確認する。第二の場合におい
て、ｐ２７（Ｋｉｐ１）挿入物を含むプラスミドを、株Ｎ１０６^r（接合型α）
中に形質転換し、そしてＣＤＫ２、ＦＫＢＰ−１２または特定の他のタンパク質
のいずれかを発現する酵母株ＹＵＬＨ（接合型ａ）と接合した。混乱性結合剤（
すなわち、非特異的な様式で多くの他のタンパク質と結合し得る挿入産物）は、
非ＣＤＫ−２ドメインと非特異的に相互作用し、そして非特異的相互作用物とし
て捨てる。ｐ２７（Ｋｉｐ１）は、ＦＫＢＰ−１２と特異的に複合体化したが、
ｔｒｋオンコジーン（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｘ０３５４１）とも、シクロフィ
リンＢ（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｍ６０８５７）とも、ベクターコントロールと
も特異的に複合体化しなかった。図３に例示されるように、ｐ２７（Ｋｉｐ１）
行とＦＫＢＰ−１２列との交叉点は、増殖（すなわち、ポジティブ相互作用）を
示す。対照的に、ｐ２７（Ｋｉｐ１）行とｔｒｋオンコジーン（ｔｒｋ）、シク
ロフィリンＢ（ＣＹＣ−Ｂ）およびベクターコントロールの列との交叉点は、増
殖なし（すなわち、タンパク質相互作用なし）を示す。ｐ２７（Ｋｉｐ１）とＣ
ＤＫ２との間の公知の相互作用を、図３に示すように確認した（行１列１の交叉
点）。

【０１８６】 本発明は、本明細書において記載される特定の実施態様によって範囲が限定さ
れるべきではない。実際、本明細書に記載されたものに加えて、本発明の種々の
改変は、上記の説明および添付の図面から当業者に明白になる。そのような改変
は、添付の特許請求の範囲の範囲内に入ることが意図される。

【０１８７】 種々の刊行物が、本明細書において引用されているが、その開示は、本明細書
においてその全体が参考として援用される。

【０１８８】 （等価物） 本発明の特定の実施態様の上記の詳細な説明から、ｐ２７（Ｋｉｐ）、ＦＫＢ
Ｐ−１２、およびｐ２７（Ｋｉｐ）・ＦＫＢＰ−１２複合体のための独特の組成
物および使用方法が記載されていることが明白であるべきである。特定の実施態
様が本明細書において詳細に記載されているが、これは、例示のみの目的のため
に、例としてなされており、そして上記の添付の特許請求の範囲の範囲に関して
限定することは意図しない。特に、種々の置換、変更および改変が、特許請求の
範囲によって規定される本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく本発明に
対してなされ得ることが本発明者によって意図される。例えば、ｐ２７（Ｋｉｐ
）、ＦＫＢＰ−１２、およびｐ２７（Ｋｉｐ）・ＦＫＢＰ−１２複合体が、種々
の疾患および障害の診断、スクリーニングおよび処置を通じて利用性を提供する
疾患状態の選択は、本明細書に記載される実施態様の知識をもって、当業者には
慣用的事項であると考えられる。

【配列表】

【図面の簡単な説明】

【図１】 ｐ２７（Ｋｉｐ１）のヌクレオチド配列（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｕ１０９０
６）［配列番号１（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１］および推定アミノ酸配列［配列番
号２（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２）］。塩基１２７（アミノ酸４３）（矢印で示さ
れる）で開始し、そして塩基５９７（アミノ酸１９８）で終了するコード配列は
、前出の実施例中に記載されたアッセイ中のベイト（餌）（ｂａｉｔ）として用
いられる。

【図２】 ヒトＦＫＢＰ−１２のヌクレオチド配列（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｘ５５７４
１）［配列番号３（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３］および推定アミノ酸配列［配列番
号４（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４）］。塩基１０９（アミノ酸３４）（矢印で示さ
れる）から塩基３３４の終止コドンまでのコード配列は、プレイ（捕獲）（ｐｒ
ｅｙ）配列を同定する。

【図３】 ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２相互作用の特異性の実証。ベイトとして
ｐ２７（Ｋｉｐ１）およびタンパク質Ａ１およびＢ２を用いるマトリックス接合
試験の結果は、上のカラムに示され、そしてこのプレイタンパク質ＣＤＫ２（陽
性コントロール）、ＦＫＢＰ−１２、ＴｒｋＡ、ＣＹＣ−Ｂ（サイクロフィリン
Ｂ）およびベクター（ベクターコントロール；陰性コントロール）は、左の列に
示される。ベイトタンパク質とプレイタンパク質との間の陽性の相互作用は、「
＋」として、相互作用の欠如は、「−」として示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 39/395 Ａ６１Ｐ 13/12 45/00 25/00 Ａ６１Ｐ 13/12 31/12 25/00 35/00 31/12 37/02 35/00 43/00 １１１ 37/02 Ｃ０７Ｋ 14/47 43/00 １１１ 16/18 Ｃ０７Ｋ 14/47 Ｃ１２Ｎ 9/12 16/18 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ Ｃ１２Ｎ 9/12 Ｃ１２Ｑ 1/02 Ｃ１２Ｐ 21/02 1/68 Ａ Ｃ１２Ｑ 1/02 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ 1/68 33/50 Ｚ Ｇ０１Ｎ 33/15 33/53 Ｄ 33/50 33/68 33/53 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ 33/68 Ａ６１Ｋ 37/02 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，Ｅ Ａ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ， ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，Ｇ Ｅ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ， ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，Ｍ Ｗ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ， ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，Ｚ Ｗ

Claims (65)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ｐ２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１２の精製複合体。
2. 【請求項２】 前記タンパク質がヒトタンパク質である、請求項１に記載の
   精製複合体。
3. 【請求項３】 ｐ２７（Ｋｉｐ１）の誘導体およびＦＫＢＰ−１２の複合体
   、ｐ２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１２の誘導体の複合体、ならびにｐ２７
   （Ｋｉｐ１）の誘導体およびＦＫＢＰ−１２の誘導体の複合体からなる群より選
   択される、精製複合体であって；ここで、該ｐ２７（Ｋｉｐ１）の誘導体は、野
   生型ＦＫＢＰ−１２と複合体を形成し得、そして該ＦＫＢＰ−１２の誘導体は、
   野生型ｐ２７（Ｋｉｐ１）と複合体を形成し得る、精製複合体。
4. 【請求項４】 前記ｐ２７（Ｋｉｐ１）の誘導体またはＦＫＢＰ−１２の誘
   導体が蛍光標識される、請求項３に記載の精製複合体。
5. 【請求項５】 少なくとも６アミノ酸からなるＦＫＢＰ−１２のフラグメン
   トに共有結合を介して融合された、少なくとも６アミノ酸からなるｐ２７（Ｋｉ
   ｐ１）のフラグメントを含む、キメラタンパク質。
6. 【請求項６】 前記ｐ２７（Ｋｉｐ１）のフラグメントがＦＫＢＰ−１２に
   結合し得るフラグメントであり、そして前記ＦＫＢＰ−１２のフラグメントがｐ
   ２７（Ｋｉｐ１）に結合し得るフラグメントである、請求項５に記載のキメラタ
   ンパク質。
7. 【請求項７】 前記ｐ２７（Ｋｉｐ１）のフラグメントおよび前記ＦＫＢＰ
   −１２のフラグメントが、ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体を形成す
   る、請求項６に記載のキメラタンパク質。
8. 【請求項８】 請求項１に記載の複合体に免疫特異的に結合する抗体、ある
   いはその結合ドメインを含有する該抗体のフラグメントまたは誘導体。
9. 【請求項９】 ｐ２７（Ｋｉｐ１）・ＦＫＢＰ−１２複合体の一部でないｐ
   ２７（Ｋｉｐ１）またはＦＫＢＰ−１２に免疫特異的に結合しない、請求項８に
   記載の抗体。
10. 【請求項１０】 ｐ２７（Ｋｉｐ１）をコードするヌクレオチド配列および
    ＦＫＢＰ−１２をコードするヌクレオチド配列を含む、単離された核酸または単
    離された核酸の組み合わせ。
11. 【請求項１１】 核酸ベクターである、請求項１０に記載の単離された核酸
    または単離された核酸の組み合わせ。
12. 【請求項１２】 前記ｐ２７（Ｋｉｐ１）コード配列および前記ＦＫＢＰ−
    １２コード配列が、プロモーターに作動可能に連結される、請求項１１に記載の
    単離された核酸または単離された核酸の組み合わせ。
13. 【請求項１３】 請求項７に記載のキメラタンパク質をコードするヌクレオ
    チド配列を含む、単離された核酸。
14. 【請求項１４】 核酸が組換え型である、請求項１０に記載の核酸を含む細
    胞。
15. 【請求項１５】 核酸が組換え型である、請求項１２に記載の核酸を含む細
    胞。
16. 【請求項１６】 核酸が組換え型である、請求項１５に記載の核酸を含む組
    換え細胞。
17. 【請求項１７】 治療有効量または予防有効量の請求項１に記載の複合体；
    および薬学的に受容可能なキャリアを含む薬学的組成物。
18. 【請求項１８】 前記タンパク質がヒトタンパク質である、請求項１７に記
    載の薬学的組成物。
19. 【請求項１９】 治療有効量または予防有効量の請求項３に記載の複合体；
    および薬学的に受容可能なキャリアを含む薬学的組成物。
20. 【請求項２０】 治療有効量または予防有効量の請求項５に記載のキメラタ
    ンパク質；および薬学的に受容可能なキャリアを含む薬学的組成物。
21. 【請求項２１】 治療有効量または予防有効量の請求項６に記載のキメラタ
    ンパク質；および薬学的に受容可能なキャリアを含む薬学的組成物。
22. 【請求項２２】 治療有効量または予防有効量の請求項８に記載の抗体、あ
    るいはその結合ドメインを含有する該抗体のフラグメントまたは誘導体；および
    薬学的に受容可能なキャリアを含む薬学的組成物。
23. 【請求項２３】 治療有効量または予防有効量の請求項９に記載の抗体、あ
    るいはその結合ドメインを含有する該抗体のフラグメントまたは誘導体；および
    薬学的に受容可能なキャリアを含む薬学的組成物。
24. 【請求項２４】 治療有効量または予防有効量の請求項１０に記載の核酸ま
    たは核酸の組み合わせ；および薬学的に受容可能なキャリアを含む薬学的組成物
    。
25. 【請求項２５】 治療有効量または予防有効量の請求項１３に記載の単離さ
    れた核酸；および薬学的に受容可能なキャリアを含む薬学的組成物。
26. 【請求項２６】 治療有効量または予防有効量の請求項１４に記載の組換え
    細胞；および薬学的に受容可能なキャリアを含む薬学的組成物。
27. 【請求項２７】 治療有効量または予防有効量の請求項１５に記載のタンパ
    ク質；および薬学的に受容可能なキャリアを含む薬学的組成物。
28. 【請求項２８】 ｐ２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１２の複合体を産生
    する方法であって、請求項１０に記載の核酸を含む組換え細胞を増殖させ、その
    結果、コードされたｐ２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１２タンパク質が発現
    され、そして互いに結合する工程、ならびにｐ２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ
    −１２の該発現された複合体を回収する工程を包含する、方法。
29. 【請求項２９】 被験体において、異常なレベルのｐ２７（Ｋｉｐ１）およ
    びＦＫＢＰ−１２の複合体によって特徴付けられる疾患または障害の存在あるい
    は発生の素因について、診断またはスクリーニングする方法であって、該方法は
    、該被験体由来のサンプル中の該複合体、ｐ２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−
    １２をコードするＲＮＡ、または該複合体の機能活性のレベルを測定する工程を
    包含し、ここで、該サンプル中の該複合体、ｐ２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ
    −１２をコードする該ＲＮＡ、または該複合体の機能活性のレベルにおける、該
    疾患または障害あるいは該疾患または障害の発生の素因を有さない類似のサンプ
    ル中に見出される、該複合体、ｐ２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１２をコー
    ドする該ＲＮＡ、または該複合体の機能活性のレベルと比較した増加または減少
    が、該疾患または障害の存在あるいは該疾患または障害の素因を示す、方法。
30. 【請求項３０】 １以上の容器に、ｐ２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１
    ２の複合体、該複合体に対する抗体、ｐ２７（Ｋｉｐ１）のＲＮＡおよびＦＫＢ
    Ｐ−１２のＲＮＡにハイブリダイズし得る核酸プローブ、またはｐ２７（Ｋｉｐ
    １）遺伝子およびＦＫＢＰ−１２遺伝子の少なくとも一部の増幅をプライムし得
    る核酸プライマー対からなる群より選択される物質を含むキット。
31. 【請求項３１】 被験体において、ｐ２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１
    ２の複合体の異常なレベルに関連する疾患または障害を処置または予防する方法
    であって、そのような処置または予防が所望される被験体に、該複合体の機能を
    調節する治療有効量の分子（単数または複数）を投与する工程を包含する、方法
    。
32. 【請求項３２】 請求項３１に記載の方法であって、ここで、前記疾患また
    は障害が前記複合体のレベルの減少に関連し、そして前記分子（単数または複数
    ）がｐ２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１２の該複合体の機能を促進し、かつ
    ｐ２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１２の複合体；野生型複合体より安定また
    はより活性なｐ２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１２の複合体の、誘導体また
    はアナログ；ｐ２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１２タンパク質をコードする
    核酸；ならびに野生型複合体より安定またはより活性な複合体を形成する、ｐ２
    ７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１２の誘導体またはアナログをコードする核酸
    からなる群より選択される、方法。
33. 【請求項３３】 請求項３１に記載の方法であって、ここで、前記疾患また
    は障害が前記複合体のレベルの増加に関連し、そして前記分子（単数または複数
    ）が該複合体の機能を阻害し、かつ該複合体に対する抗体、あるいはその結合領
    域を含む該抗体のフラグメントまたは誘導体；ｐ２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢ
    Ｐ−１２のアンチセンス核酸；ならびに異種ヌクレオチド配列がｐ２７（Ｋｉｐ
    １）遺伝子およびＦＫＢＰ−１２遺伝子の少なくとも一部の生物学的活性を不活
    性化するように、該異種ヌクレオチド配列が挿入されている該ｐ２７（Ｋｉｐ１
    ）遺伝子およびＦＫＢＰ−１２遺伝子の少なくとも一部を含む核酸であって、こ
    こで、該ｐ２７（Ｋｉｐ１）遺伝子およびＦＫＢＰ−１２遺伝子の部分が、ゲノ
    ムのｐ２７（Ｋｉｐ１）遺伝子およびＦＫＢＰ−１２遺伝子との相同組換えを促
    進するように該異種配列に隣接する、核酸からなる群より選択される、方法。
34. 【請求項３４】 被験体において、ＦＫＢＰ−１２の異常なレベルに関連す
    る疾患または障害を処置または予防する方法であって、そのような処置または予
    防が所望される被験体に、ＦＫＢＰ−１２の機能を調節する治療有効量の分子を
    投与する工程を包含する、方法。
35. 【請求項３５】 請求項３４に記載の方法であって、ここで、前記疾患また
    は障害がＦＫＢＰ−１２のレベルの減少に関連し、そして前記分子がＦＫＢＰ−
    １２の機能を促進し、かつＦＫＢＰ−１２タンパク質、ｐ２７（Ｋｉｐ１）への
    結合に活性なＦＫＢＰ−１２の誘導体またはアナログ、ＦＫＢＰ−１２をコード
    する核酸、およびｐ２７（Ｋｉｐ１）への結合に活性なＦＫＢＰ−１２の誘導体
    またはアナログをコードする核酸からなる群より選択される、方法。
36. 【請求項３６】 請求項３４に記載の方法であって、ここで、前記疾患また
    は障害がＦＫＢＰ−１２のレベルの増加に関連し、そして前記分子がＦＫＢＰ−
    １２の機能を阻害し、かつ抗ＦＫＢＰ−１２抗体、あるいはその結合領域を含む
    該抗体のフラグメントまたは誘導体、ＦＫＢＰ−１２アンチセンス核酸、ならび
    に異種ヌクレオチド配列がＦＫＢＰ−１２遺伝子の少なくとも一部の生物学的活
    性を不活性化するように、該異種ヌクレオチド配列が挿入されている該ＦＫＢＰ
    −１２遺伝子の少なくとも一部を含む核酸であって、ここで、該ＦＫＢＰ−１２
    遺伝子の部分が、ゲノムのＦＫＢＰ−１２遺伝子との相同組換えを促進するよう
    に該異種配列に隣接する、核酸からなる群より選択される、方法。
37. 【請求項３７】 被験体において、ｐ２７（Ｋｉｐ１）の異常なレベルに関
    連する疾患または障害を処置または予防する方法であって、そのような処置また
    は予防が所望される被験体に、ｐ２７（Ｋｉｐ１）の機能を調節する治療有効量
    の分子を投与する工程を包含する、方法。
38. 【請求項３８】 請求項３７に記載の方法であって、ここで、前記疾患また
    は障害がｐ２７（Ｋｉｐ１）のレベルの減少に関連し、そして前記分子がｐ２７
    （Ｋｉｐ１）の機能を促進し、かつｐ２７（Ｋｉｐ１）タンパク質、ＦＫＢＰ−
    １２への結合に活性なｐ２７（Ｋｉｐ１）の誘導体またはアナログ、ｐ２７（Ｋ
    ｉｐ１）をコードする核酸、およびＦＫＢＰ−１２への結合に活性なｐ２７（Ｋ
    ｉｐ１）の誘導体またはアナログをコードする核酸からなる群より選択される、
    方法。
39. 【請求項３９】 請求項３７に記載の方法であって、ここで、前記疾患また
    は障害がｐ２７（Ｋｉｐ１）のレベルの増加に関連し、そして前記分子がｐ２７
    （Ｋｉｐ１）の機能を阻害し、かつ抗ｐ２７（Ｋｉｐ１）抗体、あるいはその結
    合領域を含む該抗体のフラグメントまたは誘導体、ｐ２７（Ｋｉｐ１）アンチセ
    ンス核酸、ならびに異種ヌクレオチド配列がｐ２７（Ｋｉｐ１）遺伝子の少なく
    とも一部の生物学的活性を不活性化するように、該異種ヌクレオチド配列が挿入
    されている該ｐ２７（Ｋｉｐ１）遺伝子の少なくとも一部を含む核酸であって、
    ここで、該ｐ２７（Ｋｉｐ１）遺伝子の部分が、ゲノムのｐ２７（Ｋｉｐ１）遺
    伝子との相同組換えを促進するように該異種配列に隣接する、核酸からなる群よ
    り選択される、方法。
40. 【請求項４０】 アテローム性動脈硬化症の処置または予防における活性に
    ついて、ｐ２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１２の精製複合体、または該複合
    体の誘導体、または該複合体の活性のモジュレーターをスクリーニングする方法
    であって、アテローム性動脈硬化症の指標を示す培養細胞に、該複合体、誘導体
    またはモジュレーターをインビトロで接触させる工程；および該複合体、誘導体
    、またはモジュレーターを接触させた該細胞中の該指標のレベルを、そのように
    接触させない細胞における該指標のレベルとを比較する工程を包含し、ここで、
    該接触させた細胞におけるより低いレベルは、該複合体、誘導体またはモジュレ
    ーターがアテローム性動脈硬化症の処置または予防において活性を有することを
    示す、方法。
41. 【請求項４１】 自己免疫障害の処置または予防における活性について、ｐ
    ２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１２の精製複合体、または該複合体の誘導体
    、または該複合体の活性のモジュレーターをスクリーニングする方法であって、
    自己免疫障害の指標を示す培養細胞に、該複合体、誘導体またはモジュレーター
    をインビトロで接触させる工程；および該複合体、誘導体、またはモジュレータ
    ーを接触させた該細胞中の該指標のレベルを、そのように接触させない細胞にお
    ける該指標のレベルとを比較する工程を包含し、ここで、該接触させた細胞にお
    けるより低いレベルは、該複合体、誘導体またはモジュレーターが自己免疫障害
    の処置または予防において活性を有することを示す、方法。
42. 【請求項４２】 神経変性疾患の処置または予防における活性について、ｐ
    ２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１２の精製複合体、または該複合体の誘導体
    、または該複合体の活性のモジュレーターをスクリーニングする方法であって、
    神経変性疾患の指標を示す培養細胞に、該複合体、誘導体またはモジュレーター
    をインビトロで接触させる工程；および該複合体、誘導体、またはモジュレータ
    ーを接触させた該細胞中の該指標のレベルを、そのように接触させない細胞にお
    ける該指標のレベルとを比較する工程を包含し、ここで、該接触させた細胞にお
    けるより低いレベルは、該複合体、誘導体またはモジュレーターが神経変性疾患
    の処置または予防において活性を有することを示す、方法。
43. 【請求項４３】 抗癌活性について、ｐ２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−
    １２の精製複合体、または該複合体の誘導体、または該複合体の活性のモジュレ
    ーターをスクリーニングする方法であって、悪性障害由来または悪性障害に関連
    する特徴を提示する細胞株由来の細胞に、該複合体、誘導体、またはモジュレー
    ターを接触させて、該細胞の生存または増殖を測定する工程；および該複合体、
    誘導体またはモジュレーターを接触させた該細胞の生存または増殖を、そのよう
    に接触させない細胞における該生存または増殖と比較する工程を包含し、ここで
    、該接触させた細胞におけるより低いレベルは、該複合体、誘導体またはモジュ
    レーターが抗腫瘍活性を有することを示す、方法。
44. 【請求項４４】 抗癌活性について、ｐ２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−
    １２の精製複合体、または該複合体の誘導体、または該複合体の活性のモジュレ
    ーターをスクリーニングする方法であって、該方法は、腫瘍を有する試験動物、
    あるいは腫瘍を有さず、かつ引き続き腫瘍細胞または腫瘍形成薬剤でチャレンジ
    される試験動物に、該複合体、誘導体、またはモジュレーターを投与する工程；
    および該試験動物における腫瘍の増殖または後退を測定する工程を包含し、ここ
    で、該複合体、誘導体、またはモジュレーターを投与された試験動物における、
    そのように投与されない試験動物と比べた、腫瘍増殖の減少あるいは腫瘍の後退
    または予防の増加は、該複合体、誘導体、またはモジュレーターが抗癌活性を示
    す、方法。
45. 【請求項４５】 膜性腎症障害の処置または予防における活性について、ｐ
    ２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１２の精製複合体、または該複合体の誘導体
    、または該複合体の活性のモジュレーターをスクリーニングする方法であって、
    膜性腎症障害の指標を示す培養細胞に、該複合体、誘導体またはモジュレーター
    をインビトロで接触させる工程；および該複合体、誘導体、またはモジュレータ
    ーを接触させた該細胞中の該指標のレベルを、そのように接触させない細胞にお
    ける該指標のレベルとを比較する工程を包含し、ここで、該接触させた細胞にお
    けるより低いレベルは、該複合体、誘導体またはモジュレーターが膜性腎症障害
    の処置または予防において活性を有することを示す、方法。
46. 【請求項４６】 ウイルス感染および関連疾患の処置または予防における活
    性について、ｐ２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１２の精製複合体、または該
    複合体の誘導体、または該複合体の活性のモジュレーターをスクリーニングする
    方法であって、ウイルス感染の症状を示す試験動物またはウイルス感染の症状を
    発生する素因を有する試験動物に、該複合体、誘導体またはモジュレーターを投
    与する工程；および該複合体、誘導体、またはモジュレーターの投与後の該ウイ
    ルス感染の該症状における変化を測定する工程を包含し、ここで、該ウイルス感
    染の症状の重篤度の減少または該ウイルス感染の症状の予防は、該複合体、誘導
    体またはモジュレーターがウイルス感染の処置または予防において活性を有する
    ことを示す、方法。
47. 【請求項４７】 ｐ２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１２の複合体の形成
    を直接的または間接的に調節する分子についてスクリーニングする方法であって
    、該複合体の形成を助長する条件下の該分子の存在下でｐ２７（Ｋｉｐ１）およ
    びＦＫＢＰ−１２タンパク質から形成される該複合体のレベルを測定する工程；
    および該複合体の該レベルを、該分子の非存在下で形成される該複合体のレベル
    と比較する工程を包含し、ここで、該分子の存在下の該複合体のより低いか、ま
    たはより高いレベルは、該分子が該複合体の形成を調節することを示す、方法。
48. 【請求項４８】 組換え非ヒト動物であって、内因性ｐ２７（Ｋｉｐ１）遺
    伝子および内因性ＦＫＢＰ−１２の両方が、該動物またはその祖先の相同組換え
    または挿入性変異誘発によって、欠失または不活性化されている、組換え非ヒト
    動物。
49. 【請求項４９】 ｐ２７（Ｋｉｐ１）遺伝子およびＦＫＢＰ−１２遺伝子の
    両方を含む組換え非ヒト動物であって、該ｐ２７（Ｋｉｐ１）遺伝子が、天然の
    ｐ２７（Ｋｉｐ１）遺伝子プロモーターではないプロモーターの制御下にあり、
    そして該ＦＫＢＰ−１２遺伝子が、天然のＦＫＢＰ−１２遺伝子プロモーターで
    はないプロモーターの制御下にある、組換え非ヒト動物。
50. 【請求項５０】 請求項７に記載のキメラタンパク質をコードする核酸配列
    を含む導入遺伝子を含む、組換え非ヒト動物。
51. 【請求項５１】 ｐ２７（Ｋｉｐ１）の活性またはレベルを調節する方法で
    あって、該方法は、ＦＫＢＰ−１２タンパク質、または該タンパク質をコードす
    る核酸、あるいは該タンパク質に免疫特異的に結合する抗体またはその結合ドメ
    インを含む該抗体のフラグメントもしくは誘導体を、細胞に接触させるか、また
    はｐ２７（Ｋｉｐ１）遺伝子を発現する動物に投与することによる、方法。
52. 【請求項５２】 ＦＫＢＰ−１２の活性またはレベルを調節する方法であっ
    て、該方法は、ｐ２７（Ｋｉｐ１）、またはｐ２７（Ｋｉｐ１）をコードする核
    酸、あるいはｐ２７（Ｋｉｐ１）に免疫特異的に結合する抗体またはその結合ド
    メインを含む該抗体のフラグメントもしくは誘導体を、細胞に接触させるか、ま
    たはＦＫＢＰ−１２タンパク質をコードする遺伝子を発現する動物に投与するこ
    とによる、方法。
53. 【請求項５３】 ｐ２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１２の複合体の活性
    またはレベルを調節する方法であって、該方法は、該複合体の形成を調節する分
    子を、細胞に接触させるか、または該複合体を発現および形成する動物に投与す
    ることによる、方法。
54. 【請求項５４】 ｐ２７（Ｋｉｐ１）またはＦＫＢＰ−１２あるいはｐ２７
    （Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１２の複合体の活性を調節する分子を同定する方
    法であって、１以上の候補分子をＦＫＢＰ−１２の存在下でｐ２７（Ｋｉｐ１）
    に接触させる工程；およびｐ２７（Ｋｉｐ１）とＦＫＢＰ−１２との間で形成す
    る複合体の量を測定する工程を包含し；ここで、該形成する複合体の量における
    、該候補分子の非存在下で形成する量と比較した増加または減少は、該分子が、
    ｐ２７（Ｋｉｐ１）またはＦＫＢＰ−１２あるいはｐ２７（Ｋｉｐ１）およびＦ
    ＫＢＰ−１２の該複合体の活性を調節することを示す、方法。
55. 【請求項５５】 前記接触工程が、前記候補分子を請求項４９に記載の組換
    え非ヒト動物に投与することにより行われる、請求項５４に記載の方法。
56. 【請求項５６】 前記接触工程が、インビトロで行われ；かつｐ２７（Ｋｉ
    ｐ１）、ＦＫＢＰ−１２、および該候補分子が精製される、請求項５５に記載の
    方法。
57. 【請求項５７】 生物学的活性について、ｐ２７（Ｋｉｐ１）の誘導体また
    はアナログをスクリーニングする方法であって、ｐ２７（Ｋｉｐ１）の該誘導体
    またはアナログにＦＫＢＰ−１２を接触させる工程；およびｐ２７（Ｋｉｐ１）
    の該誘導体またはアナログとＦＫＢＰ−１２との間の複合体の形成を検出する工
    程を包含し；ここで、該複合体の形成の検出は、ｐ２７（Ｋｉｐ１）の該誘導体
    またはアナログが生物学的活性を有することを示す、方法。
58. 【請求項５８】 生物学的活性について、ＦＫＢＰ−１２の誘導体またはア
    ナログをスクリーニングする方法であって、ＦＫＢＰ−１２の該誘導体またはア
    ナログにｐ２７（Ｋｉｐ１）を接触させる工程；およびＦＫＢＰ−１２の該誘導
    体またはアナログとｐ２７（Ｋｉｐ１）との間の複合体の形成を検出する工程を
    包含し；ここで、該複合体の形成の検出は、ＦＫＢＰ−１２の該誘導体またはア
    ナログが生物学的活性を有することを示す、方法。
59. 【請求項５９】 ｐ２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１２の複合体の異常
    なレベルによって特徴付けられる疾患または障害の処置を投与された被験体にお
    いて、該疾患または障害の該処置の効力をモニターする方法であって、該被験体
    由来のサンプル中の該複合体、ｐ２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１２をコー
    ドするＲＮＡ、または該複合体の機能活性のレベルを測定する工程であって、こ
    こで、該サンプルは、該処置の投与後の該被験体から採取され、そして（ａ）該
    処置の投与前の該被験体から採取されたサンプル中の該レベルまたは（ｂ）該疾
    患または障害の処置前段階に関連する標準レベルに対して比較される、工程を包
    含し、ここで、該処置の投与後に採取された該サンプル中の該複合体、ｐ２７（
    Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１２をコードする該ＲＮＡ、または該複合体の機能
    活性の該レベルにおける、該処置の投与前に採取された該サンプル中の該複合体
    、ｐ２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１２をコードする該ＲＮＡ、または該複
    合体の機能活性の該レベルあるいは該標準レベルと比較した、変化または変化の
    欠如は、該投与が該疾患または障害の処置に効果的であるか否かを示す、方法。
60. 【請求項６０】 被験体においてアテローム性動脈硬化症を処置または予防
    する方法であって、このような処置または予防が所望される被験体に、ｐ２７（
    Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１２の複合体の機能を調節する治療有効量の分子を
    投与する工程を包含する、方法。
61. 【請求項６１】 被験体における自己免疫疾患を処置または予防する方法で
    あって、このような処置または予防が所望される被験体に、ｐ２７（Ｋｉｐ１）
    およびＦＫＢＰ−１２の複合体の機能を調節する治療有効量の分子を投与する工
    程を包含する、方法。
62. 【請求項６２】 被験体における神経変性疾患を処置または予防する方法で
    あって、このような処置または予防が所望される被験体に、ｐ２７（Ｋｉｐ１）
    およびＦＫＢＰ−１２の複合体の機能を調節する治療有効量の分子を投与する工
    程を包含する、方法。
63. 【請求項６３】 被験体における癌または過剰増殖障害を処置または予防す
    る方法であって、このような処置または予防が所望される被験体に、ｐ２７（Ｋ
    ｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１２の複合体の機能を調節する治療有効量の分子を投
    与する工程を包含する、方法。
64. 【請求項６４】 被験体における膜性腎症または関連する疾患を処置または
    予防する方法であって、このような処置または予防が所望される被験体に、ｐ２
    ７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１２の複合体の機能を調節する治療有効量の分
    子を投与する工程を包含する、方法。
65. 【請求項６５】 被験体におけるウイルス感染または関連する疾患を処置ま
    たは予防する方法であって、このような処置または予防が所望される被験体に、
    ｐ２７（Ｋｉｐ１）およびＦＫＢＰ−１２の複合体の機能を調節する治療有効量
    の分子を投与する工程を包含する、方法。