JP2002515889A

JP2002515889A - 改良された診断／治療用薬剤

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Publication number: JP2002515889A
Application number: JP52018898A
Authority: JP
Inventors: クラヴェーネス，ユー; ロングヴェド，ポール; ヘーグセト，アンダース; トーレスハウグ，ヘルジェ; ゴダール，アスラーク; レーヴハウグ，ダーグフィン; スールバーケン，マグネ; カスバートソン，アラン
Original assignee: ニユコメド・イメージング・アクシエセルカペト
Priority date: 1996-10-28
Filing date: 1997-10-28
Publication date: 2002-05-28
Also published as: AU4786797A

Abstract

(57)【要約】非蛋白質、非ペプチドおよび非多糖類ベクターの一つまたはそれ以上にコンジュゲートされている、気体含有物質または気体発生物質を含むレポーターの水性担体液体中の懸濁液からなる標的設定診断用および／または治療活性を有する薬剤例えば超音波造影剤。

Description

【発明の詳細な説明】改良された診断／治療用薬剤本発明は、診断用の、および／または、治療活性を有する薬剤、特に身体内の特定の位置の診断用造影および／または治療が強化される、身体の内部の部位および／または構造と相互作用を示すか、これに対する親和性を有する部分を配合している、診断用の、および／または治療活性を有する薬剤に関する。特に関連するものは超音波造影において使用される診断剤であり、これを本明細書では標的設定超音波造影剤と称する。超音波造影は、例えば特に心臓撮影における血管系、および組織微小血管構造の研究において潜在的に価値ある診断手段である。このようにして得られる音響像を増強するものとして種々の造影剤が提案されており、これらには固体粒子の懸濁液、乳化液滴、気泡およびカプセル化された気体または液体が包含される。容易に圧縮できる低密度の造影剤はそれらが発生する音響後方散乱の点で特に効率的であることが一般的に知られており、このため、気体含有および気体発生の系の製造が多くの注目を集めている。気体含有造影媒体はまた磁気共鳴(MR)造影において、例えば、MR信号密度を低下させる作用を有する感受性造影剤として有効であることが知られている。酸素含有造影媒体もまた潜在的に有用な常磁性のMR造影剤である。更に、Ｘ線造影の分野では二酸化炭素のような気体がネガ型の経口造影剤または血管内造影剤として使用できることが判っている。放射性気体、例えばキセノンのような不活性ガスの放射性同位体の使用もまた、例えば血液プール造影のためのシンチグラフィーにおいて提案されている。標的設定超音波造影剤は(ｉ)超音波の照射と相互作用を示し検出可能な信号を発生することのできるレポーター部分；(ii)身体内部の特定の標的部位および／または構造に対する、例えば、特定の細胞または患部領域に対する親和性を有するベクター１つ以上；および(iii)レポーターとベクターが直接連結していない場合はこれらを連結するリンカー１つ以上を有するものと考えられる。薬剤を結合させる分子および／または構造は、今後本明細書では標的と称する。身体内の選択された領域／構造において特定の造影を行なうかまたは治療効果を得るためには、標的はその領域／構造中に存在し、使用可能でなければならない。理想的には関連する領域にのみ発現するものであるが、通常は身体内の他の位置にも存在し、バックグラウンドの問題を生じさせる場合がある。標的は確定した分子種(即ち標的分子)または未知の分子またはより複雑な構造(即ち標的構造)のいずれかであってよく、これは、造影および／または治療すべき領域に存在し、特定のベクター分子に特異的または選択的に結合することができる。ベクターはレポーター部分を造影および／または治療すべき領域および／または構造に結合させるためにこれら領域に結合または連結する。ベクターは選択された標的に特異的に結合するか、または、結合が選択的であるだけで、限定された数の他の分子／構造に対しても親和性を有し、やはりバックグラウンドの問題を生じさせる場合がある。標的設定超音波造影剤に関する従来技術には限界があった。即ち、例えば、US -A-5531980号はレポーターが薄膜状または層状の形態で少なくとも部分的に存在する膜形成界面活性剤１種以上で安定化された空気または気体の微小気泡の水性懸濁液を含有し、この界面活性剤が「特定の標的設定目的のために設計された生物活性種」を有するベクター１種以上に結合する系に関する。これによれば、微小気泡は界面活性剤物質で直接カプセル化されているのではなく、微小気泡を安定化させる液体充填リポソーム内に取り込まれているとされている。このようなリポソーム中に存在するリン脂質のような薄膜状または層状の界面活性剤物質は親油性テール部を「バックトゥーバック」に、そして親水性ヘッド部を内側と外側の両方に有する脂質二重層の１個以上の形態として存在せざるを得ない(例えばSchneider，M.の「 Liposomes as drug carriers：10 years of research」，Drug Targeting，Nyon ，Switzerland，1984年10月3-5日、Buri，P．and Gummma，A．(Ed)，Elservier ，Amsterdam 1984参照)。 EP-A-0727225は被験者の体温で一部気化するような十分な蒸気圧を有する物質をレポーターが含有する標的設定超音波造影剤を記載している。この物質は界面活性剤またはアルブミンの担体を伴っており、これにはベクターとしての蛋白系、ペプチド系または炭水化物系の細胞付着分子リガンドが含まれる。このような造影剤のレポーター部分はWO-A-9416739に記載されているフェイズシフトコロイド系に相当し、現在ではこのようなフェイズシフトコロイドの投与は、恐らくは、例えば心筋血管構造および脳の潜在的に危険な塞栓を起こす程度まで制御不可能に成長する微小気泡の発生を起こすと考えられている(例えばSchwarz，Advanc es in Echo-Contrast[1994(3)]，pp48-49参照)。 WO-A-9320802は組織特異的超音波像増強が抗体、ペプチド、レクチン等のような組織特異的リガンドにコンジュゲートされた音響反射オリゴ薄膜リポソームを用いて達成されることを記載している。リポソームは気体を含まないように慎重に選択されるため、気体系超音波造影剤の好都合なエコー源生特性を有しない。この技術に関する詳細、例えばフィブリン、血栓およびアテローム性動脈硬化部分に対する標的設定については、Alkanonyuksel，H等の出版物(J．Pharm．Sci． (1996)85(5)，486-490;J．Am．Coll．Cardiol.(1996)27(2)Suppl A，298A;およびCirculation,68 Sci．Sessions，Anaheim，1995年11月13-16日)に記載されている。有意な実際の詳細を示さずに、ベクターとしてのモノクローナル抗体の使用の可能性および／または細網内皮系により取り込まれ、それにより肝臓のような臓器の像増強を可能にする物質を含有するレポーターに副次的に言及している多くの超音波造影剤関連文献があり、例えばWO-A-9300933，WO-A -9401140，WO-A-9408627，WO-A-9428874，US-A-5088499，US-A-5348016およびUS -A-5469854等である。本発明は、非蛋白質、非ペプチドおよび非多糖類のベクターでコンジュゲートされた、ガスを含有しまたガスを発生する診断用のおよび／または治療用の薬剤が、それらの試験管内および生体内の双方で高度に安定性であるために特に有用な標的設定剤であるという知見に基づく。ベクターが天然の源泉からではなくて合成的に得られるこのような生成物では、ウィルス汚染のような問題が回避されまた、ベクター分子を明確に規定することができ、それによって生成物の均一性が増大しまた生成物の情報記録が容易であるという点でこのような生成物は有利である。本明細書で用いる場合、「非多糖類」という用語は200単位より少ない、望ましくは50単位より少ない糖の鎖であって二つまたはそれ以上の異なる糖を含むものを意味する。さらに好ましいものは、アミノ糖を有する少なくとも一つの置換基を含む糖鎖でありまたさらに好ましいものは分子量が5000より小さい分枝した糖鎖である。本発明の有利な１つの実施態様は、標的への限られた場所への付着が診断用および／または治療活性のある薬剤の極めて有用な性質であり、この性質は標的への固定的な付着よりはむしろ一時的な保持を与えるベクターを用いて達成されるという更に別の知見に基づいている。即ち、このような薬剤は、特定の部位に固定的に保持されている場合よりも、例えば、その内皮細胞との一過性の相互作用により血管内皮に沿った遅延血流の形態を効果的に示す。即ちこのような薬剤は、血管壁上で濃縮され、超音波造影剤の場合には、解剖学的特徴のない血流全体と比較してそのエコー源生能を強化する。従ってこれにより、微細血管構造を含む毛管系の造影が増強され、これらは、例えば心臓における正常な組織と潅流の不十分な組織との間の識別を容易にし、また、クプファー細胞、血栓およびアテローム性動脈硬化患部のような構造を可視化する際に、または、血管新生領域および炎症を有する組織の領域を可視化するために有用である。本発明は特に、組織壊死領域に位置する正常な血管内で起こる変化を造影するのに適している。本発明の一局面に従うと、ガスを含有するまたはガスを発生する物質を含み、一つまたはそれ以上のベクターとコンジュゲートされたレポーターの水性担持液体中の、例えば注入可能な担持液体中の懸濁液からなる標的設定可能な診断剤および／または治療剤例えば超音波造影剤が提供され、この場合、上記のベクターは非ポリマー性の合成ベクターまたは半合成ベクターおよびオリゴヌクレオチド／ポリヌクレオチドから選択されることを特徴とする。本発明で使用されるベクターは人体にとって外因性のものであるのが好ましい。合成ベクターまたは半合成ベクターに関してここで用いる「非ポリマー性」という用語はオリゴマーを排除することを意図するものではない。本発明で使用するヌクレオチドは例えば10〜500の基本単位を含みうる。オリゴヌクレオチドは例えば20〜50の単位を含んでよいが、一方ポリヌクレオチドは例えば50〜500の単位を含みうる。本発明の更に別の実施態様によれば、ベクター１つ以上を、ベクターが標的または標的受容体に容易に曝露されないような方法でレポーターに結合するか、あるいはその内部に取り込ませる。従って、ベクターを曝露する別の方法例えばベクターを含有する部分の拡散性を調節するために投与後の薬剤を外部超音波に曝露することにより、組織特異性の向上を達成してよい。任意の生体適合性気体も本発明の造影剤のレポーター中に存在してよく、本明細書では「気体」という用語は37℃のヒト正常体温で実質的または完全に気体（蒸気を含む）の形態である任意の物質(混合物を含む)を包含するものとする。即ち気体は例えば空気；窒素；酸素；二酸化炭素；水素；不活性ガス、例えばヘリウム、アルゴン、キセノンまたはクリプトン；フッ化イオウ例えば六フッ化イオウ、十フッ化二イオウまたは五フッ化トリフルオロメチルイオウ；六フッ化セレン；場合によりハロゲン化されたシラン、例えばメチルシランまたはジメチルシラン：低分子量炭化水素(例えば炭素原子７個までを含むもの) 、例えばアルカン、例えばメタン、エタン、プロパン、ブタンまたはペンタン、シクロアルカン、例えばシクロプロパン、シクロブタンまたはシクロペンタン、アルケン例えばエチレン、プロペン、プロパジエンまたはブテン、またはアルキンン例えばアセチレンまたはプロピン；エーテル例えばジメチルエーテル；ケトン；エステル；ハロゲン化低分子量炭化水素(例えば炭素原子７個までを含むもの)；またはこれらの混合物を包含する。好都合にはハロゲン化気体中のハロゲン原子の少なくとも幾つかは弗素原子である：即ち、生体適合性のあるハロゲン化炭化水素気体は例えば、ブロモクロロジフルオロメタン、クロロジフルオロメタン、ジクロロジフルオロメタン、ブロモトリフルオロメタン、クロロトリフルオロメタン、クロロペンタフルオロエタン、ジクロロテトラフルオロエタン、クロロトリフルオロエチレン、フルオロエチレン、エチルフロリド、1,1−ジフルオロエタンおよびパーフルオロカーボン、例えばパーフルオロアルカン、例えばパーフルオロメタン、パーフルオロエタン、パーフルオロプロパン、パーフルオロブタン（例えば場合によりパーフルオロ−ｉ−ブタンのような他の異性体との混合物中のパーフルオロ−ｎ−ブタン）、パーフルオロペンタン、パーフルオロヘキサンおよびパーフルオロヘプタン；パーフルオロアルケン、例えばパーフルオロプロペン、パーフルオロブテン（例えばパーフルオロブト−２−エン）およびパーフルオロブタジエン；パーフルオロアルキン、例えばパーフルオロブト− ２−イン；およびパーフルオロシクロアルカン、例えばパーフルオロシクロブタン、パーフルオロメチルシクロブタン、パーフルオロジメチルシクロブタン、パーフルオロトリメチルシクロブタン、パーフルオロシクロペンタン、パーフルオロメチルシクロペンタン、パーフルオロジメチルシクロペンタン、パーフルオロシクロヘキサン、パーフルオロメチルシクロヘキサンおよびパーフルオロシクロヘプタンから選択することができる。他のハロゲン化気体としては、塩化メチル、フッ化(例えば過フッ化)ケトン、例えばパーフルオロアセトンおよびフッ化(例えば過フッ化)エーテル、例えばパーフルオロジエチルエーテルが挙げられる。過フッ化気体、例えば六フッ化イオウおよびパーフルオロカーボン、例えば、パーフルオロプロパン、パーフルオロブタンおよびパーフルオロペンタンの使用はこのような気体を含有する微小気泡の血流中の安定性が高いことが解っているため、特に好都合である。レポーターは都合の良い任意の形、例えばガスを含有するまたはガスを発生する適当な任意の超音波造影剤処方物でありうる。このような処方物の代表例には、合体抵抗性の表面膜（例としては、WO-A-8002365に記載されているような例えばゼラチンによって安定化された(例えば少なくとも部分的にカプセル化された) 、膜形成蛋白質(例としては、例えばUS-A-4718433、US-A-4774958、US-A-484488 2、EP-A-6359246、WO-A-9112823、WO-A-9205806、WO-A-9217213、WO-A-9406477 またはWO-A-9501187に記載されたヒト血清アルブミンのごときアルブミン)、ポリマー物質(例としては、EP-A-0398935に記載された合成的な生分解性ポリマー、EP-A-0458745に記載された弾性のある接触面合成ポリマー膜、EP-A-0441468に記載のような微細粒子状の生分解性ポリアルデヒド、EP-A-0458079に記載のポリアミノ酸−ポリ環式イミドの微細粒子状のＮ−ジカルボン酸誘導体またはWO-A-9 317718もしくはWO-A-9607434に記載の生分解性ポリマー)、非重合体のそして非重合性の壁形成性材料（例としてはWO-A-9607434に記載されたもの）、または界面活性剤（例としては、Pluronicのようなポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロックコポリマーであるWO-A-9506518に記載のようなポリマー界面活性剤、あるいは例えばWO-A-9211873、WO-A-9217212、 WO-A-9222247、WO-A-9428780またはWO-A-9503835に記載のリン脂質のような膜形成性界面活性剤）がある。別に有用なガス含有造影剤処方物には、ガスを含有する固体系例えば、ガスを内部に包含して有するあるいは別な形で同伴する（例としては、例えばEP-A-012 2624、EP-A-0123235、EP-A-0365467、WO-A-9221382、WO-A-9300930、WO-A-93138 02、WO-A-9313808またはWO-A-9313809に記載のようなガスが表面に吸着されたそして／あるいは中にある空孔、凹所または細孔の内部に含まれる）微小粒子（特に、微細粒子の集合体）がある。このような微細粒子状の造影剤のエコー発生能は包含される／同伴されるガスからそして／あるいは固体物質から放出される（例えば微小粒子構造の分解に際して）ガス（例えば微小気泡）から直接に得られてよい。ガスを含有する造影剤処方物に関する上記したすべての文献の開示は参照によって本記載に加入される。ガスの微細泡および他のガス含有物質例えば微細粒子は、例えば静脈内注射による投与の後肺系を通って自由に流通することができるように10μmを越えない（例えば７μmまたはそれ以下の）初期の平均寸法を有するのが好ましい。本発明に従ってリン脂質含有組成物が例えばリン脂質で安定化されたガスの微細泡の形で使用される場合、有用なリン脂質の代表例には、レシチン(即ちホスファチジルコリン)、例えば天然レシチン、例えば卵黄レシチンまたは大豆レシチンおよび合成または半合成のレシチン、例えばジミリストイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリンまたはジステアロイルホスファチジルコリン；ホスファチジン酸；ホスファチジルエタノールアミン；ホスファチジルセリン；ホスファチジルグリセロール；ホスファチジルイノシトール；カルジオリピン；スフィンゴミエリン；上記物質の任意のフッ化類縁体；上記物質の任意の混合物およびコレステロールのような他の脂質との混合物が包含される。例えば、天然産の（例えば大豆からまたは卵黄から誘導される）、半合成的な（例えば部分的または完全に水素化された）そして合成的なホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジック酸および／またはカルジオリピンにおけるように、正味の全体的電荷、例えば負の電荷を個々に有する分子から主として（例えば少なくとも75％）なるリン脂質を使用するのが特に有利であろう。気体含有造影剤を調製するために使用してよい更に別の脂質の例には、脂肪酸、ステアリン酸、パルミチン酸、２−ｎ−ヘキサデシルステアリン酸、オレイン酸および他の酸含有脂質構造が包含される。このような脂質構造をアミド結合形成によりアミノ基１個以上を有するアミノ酸にカップリングさせ；得られた脂質修飾アミノ酸(例えばジパルミトイルリジンまたはジステアロイル−2,3−ジアミノプロピオン酸)はベクター分子１個以上のコンジュゲーションのためのカップリング部位を有する官能化されたスペーサー要素の連結のための有用な前駆体となる。その他の有用な安定化剤にはベクター分子１個以上へのカップリングのために適当に官能化されたペプチドリンカー部分に結合した脂質を有するリポペプチドが包含される。特に好ましいものとしては、負荷電リン脂質または他の界面活性剤膜により安定化されたレポーター微小気泡と静電相互作用を介して契合できる正荷電ペプチドリンカー要素が包含される。本発明の別の実施態様は細胞表面に位置する受容体分子との非特異的な反応のための反応の基１つ以上を有する官能化された微小気泡を包含する。例えばチオール部分を有する微小気泡はジスルフィド交換反応を介して細胞表面受容体に結合することができる。このような反応が可逆的であることは、微小気泡の流れが酸化還元の条件を変えることにより制御できることを意味する。同様にＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルのような活性化エステルを有する膜を持った官能化された微小気泡を複数の細胞表面分子上に存在するアミノ基と反応させるために用いてよい。本発明で有用でありうるガス含有微細粒子状の物質の代表例には、炭水化物（例えばブドウ糖、果糖またはガラクトースのような六炭糖；蔗糖、乳糖または麦芽糖のような二糖類：アラビノース、キシロースまたはリボースのような五炭糖；α−，β−およびγ−シクロデキストリン；澱粉、ヒドロキシエチル澱粉、アミロース、アミロペクチン、グリコーゲン、イヌリン、プルラン、デキストラン、カルボキシメチルデキストラン、デキストランホスフェート、ケトデキストラン、アミノエチルデキストラン、アルギネート、キチン、キトサン、ヒアルロン酸またはヘパリンのような多糖類；およびマンニトールまたはソルビトールのようなアルジトールを含む糖アルコール）、無機塩（例えば塩化ナトリウム）、有機塩（例えばクエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウムまたは酒石酸ナトリウム）、Ｘ線造影剤（例えば、メトリゾイック酸、ジアトリゾイック酸、イオタラミック酸、イオキサガリック酸、イオヘキソール、イオペントール、イオパミドール、イオジキサノール、イオプロミド、メトリザミド、イオジパミド、メグルミン、イオジパミド、メグルミンアセトリゾエートおよびメグルミンジアトリゾエートにおけるように、カルボキシル、カルバモイル、Ｎ−アルキルカルバモイル、Ｎ −ヒドロキシアルキルカルバモイル、アシルアミノ、Ｎ−アルキルアシルアミノまたはアシルアミノエチルのような置換基を３位置および／または５位置に有する少なくとも一つの2,4,6−トリヨードフェニル基を典型的に含有する市販されていて入手できる任意のカルボン酸および非イオン性アミド造影剤）、そしてポリペプチドおよび蛋白質（例えばゼラチンまたはヒト血清アルブミンのようなアルブミン）がある。レポーターは便利な任意の方法によって、例えばガスを含有するまたはガスを発生する処方物をつくることによって製造されてよい。代表的な例には、WO 911 5244に記載されているように界面活性剤をガスと接触させそして水性担体の存在でこれらを混合することによる；あるいはEP512693A1に記載されているように中空の微細カプセルを得るように、壁を形成する物質の溶液または分散液をガスの存在で霧化することによるガスの微小気泡の懸濁液の製造； US5648095に記載されているような二重乳濁液法による固体の微小球の製造；またはEP681843A2に記載のような噴霧乾燥により中空の微小カプセルをつくるための方法またはUS5469854に記載のような脂質を含む水溶液をガスの存在で振盪することによりガスで充填されたリポソームを製造することがある。レポーターに所望のベクターを結合するのに好適な方法は、レポーターおよびベクターの双方の表面上で反応性基を用いることにより、予め作ったレポーターを好適なリンカーによって表面変性することからなる。ベクターを含有する物質にレポーター物質を工程の任意の段階で物理的に混合することが特に有利であろう。このような方法では、レポーターへのベクターの取り込みまたは結合が生まれよう。場合によって行なわれる工程のガスを含有する粒子を洗浄し続いて例えば浮遊により分離することにより、レポーターに結合していない過剰のベクターが除去されうる。好ましい一つの局面は、ガスを含有する薬剤を生成する前に他のレポーター分子と所望なら予備的に混合することのできるチオール、マレイミドビオチン等のような官能基を含むリポペプチド構造を用いることである。ベクター分子の結合は下記に示すリンカー反応剤を使用することにより実施されてよい。所望のベクターへのレポーター単位の結合は、レポーターおよび／またはベクター上にある一つまたはそれ以上の官能基との相互干渉を通常伴いながら、共有結合的または非共有結合的手段によって達成されうる。このために使用してよい化学的反応性を有する官能基の例には、アミノ、ヒロドキシル、スルフィドリル、カルボキシルおよびカルボニル基、並びに炭水化物基、ビシナルジオール、チオエーテル、２−アミノアルコール、２ −アミノチオール、グアニジニル、イミダゾリルおよびフェノール性の基が包含される。従って、レポーターとベクターの共有結合カップリングはこのような官能基と反応できる反応性の部分を有する連結剤を用いて行なってよい。スルフィドリル基と反応できる反応性部分の例にはX-CH2CO-型（式中Ｘ＝Br，ClまたはＩ)のα −ハロアセチル化合物が包含され、これはスルフィドリル基に対して特別の反応性を示すが、Grud，F.R.N.がMethods Enzymol．（1967）11，532に記載のとおりイミダゾリル、チオエーテル、フェノールおよびアミノ基を修飾するために使用することもできる。Ｎ−マレイミド誘導体もまたスルフィドリル基に対して選択性を有すると考えられているが、特定の条件下ではアミノ基へのカップリングにおいても有用である。Ｎ−マレイミドはKitagawa，T.等がChem．Pharm．Bull．( 1981)29，1130に記載のとおりレポーター−ベクターコンジュゲーションのための結合系に組み込んでよく、また、Kovacic，P.等がJ．Am．Chem．Soc．(1959) ，81，1887に記載のとおり、気泡安定化のための重合体交叉結合剤として用いてよい。結合がジスルフィド架橋の形成をとおして起こる場合は、アミノ基の変換によってチオール基を導入する、例えばTraut，R.等がBiochemistry（1973）12 ，3266に記載の２−アミノチオランのような試薬がスルフィドリル試薬と考えられる。即ち、レポーターまたはベクターの何れかに反応性のジスルフィド結合を導入する試薬が有用であるのは、結合がベクターとレポーターの間のジスルフィド交換によりもたらされるためであり：このような試薬の例にはEllman試薬(DTN B)、4,4'−ジチオジピリジン、メチル−３−ニトロ−２−ピリジルジスルフィドおよびメチル−２−ピリジルジスルフィド（Kimura，T.等，Analyt．Biochem．( 1982)122,271）が包含される。アミノ基との反応が可能な反応性の部分の例にはアルキル化およびアシル化剤が包含される。代表的なアルキル化剤を以下に示す。ｉ）反応性チオール基の非存在下でアミノ基に対して特異性を示し、X-CH₂CO- （式中Ｘ＝Cl，BrまたはＩ）の型のα−ハロアセチル化合物、例えば、Wong，Y- H．H.がBiochemistry（1979）24，5337に記載のもの； ii）マイケル型反応を介して、または、Smyth，D.G.等がJ．Am．Chem．Soc．( 1960)82，4600およびBiochem．J．(1964)91，589に記載の環状カルボニル基への付加によるアシル化を介して、アミノ基と反応するＮ−マレイミド誘導体； iii）反応性のニトロハロ芳香族化合物のようなアリールハライド； iv）McKenzie，J．A.等がJ．Protein Chem.(1988)7，581に記載のアルキルハライド；ｖ）アミノ基とのシッフ塩基形成が可能なアルデヒドおよびケトンであり、形成した付加物は通常還元により安定化されて安定なアミンとなるもの； vi）アミノ、スルフィドリルまたはフェノール性ヒドロキシル基と反応するエピクロロヒドリンおよびビスオキシランのようなエポキシド誘導体； vii）アミノ、スルフィドリルまたはヒドロキシル基のような親核物質に対して高い反応性を有するs-トリアジンの塩素含有誘導体； viii）開環によりアミノ基のような親核物質と反応する、例えばRoss，W.C.J. のAdv．Cancer Res．(1954)2，1に記載されているもののような、上記したｓ− トリアジン化合物系のアジリジン； ix）Tietze，L.F.のChem．Ber.(1991)124，1215に記載のスクワリック(squari c)酸ジエチルエステル；およびｘ）例えばBenneche，T.等がEur．J．Med．Chem（1993）28，463に記載したもののような、エーテル酸素原子により誘発された活性化のためにノルマルアルキルハライドよりも反応性の高いアルキル化剤であるα−ハロアルキルエーテル。代表的なアミノ反応性アシル化剤の例には以下のものが包含される。ｉ）Schick，A.F.等がJ．Biol．Chem.(1961)236，2477に記載したもののような、安定な尿素およびチオ尿素誘導体をそれぞれ形成し、蛋白交叉結合のために使用されているイソシアネートおよびイソチオシアネート、特に芳香族誘導体； ii）Herzig．D.J.等がBiopolymers（1964）2，349に記載した、そして、リンカーへの蛍光レポーター基の導入のために有用であるスルホニルクロリド； iii）酸ハロゲン化物； iv）ニトロフェニルエステルまたはＮ−ヒドロキシスクシンイミジルエステルのような活性エステル；ｖ）混合無水物、対象無水物またはN-カルボキシ無水物のような酸無水物； vi）Bodansky，M.等がPrinciples of Peptide Synthesis（1984）Springer-Ve rlagに記載したようなアミド結合形成のための他の有用な試薬； vii）例えばWetz，K.等がAnal．Biochem．(1974)58，347に記載したような、アジド基が亜硝酸ナトリウムを用いて予め形成されたヒドラジド誘導体から形成されるアシルアジド； viii）例えばRasmussen，J.K.がReactive Polymers（1991）16，199に記載したような、ビスアクリルアミドのような重合体に結合したアズラクトン；および、 ix）例えばHunter，M.J.とLudwig，M.L.がJ．Am．Chem．Soc.(1962)84，3491 に記載したようなアミノ基との反応により安定なアミジンを形成するイミドエステル。アルデヒド官能基のようなカルボニル基は弱塩基と反応させてよい。弱塩基には、例えばRatner，S.等がJ．Am．Chem．Soc．(1937)59，200に記載のようなアルデヒド基を有する安定な５員チアゾリジン環を選択的に形成するＮ−末端システイン残基中に認められるような1,2−アミノチオールが包含される。フェニルヒドラゾンのような他の弱塩基も、例えばHeitzman，H.等がProc.N atl.Acad．Sci．USA（1974）71，3537に記載のとおり、使用してよい。アルデヒドおよびケトンはまたアミンと反応させてシッフ塩基を形成してよく、これは還元的アミノ化により好都合に安定化してよい。アルコキシルアミノ部分は例えばWebb，R.等がBioconjugate Chem．(1990)1，96に記載のとおり、ケトンおよびアルデヒドと容易に反応して安定なアルコキシアミンを生成する。カルボキシル基との反応が可能な反応性の部分の例には、ジアゾアセテートエステルおよびジアゾアセトアミドのようなジアゾ化合物が包含され、これらは、例えばHerriot R.M.がAdv．Protein Chem．(1947)3，169に記載のとおり、高い選択性で反応してエステル基を生成する。Ｏ−アシル尿素形成、次いでアミド結合形成を介して反応するカルボジイミドのようなカルボン酸修飾試薬もまた有用に使用され：連結はアミンの添加を通じて促進してよく、あるいは、直接ベクター−受容体カップリングを行なってよい。有用な水溶性カルボジイミドには例えばZot，H.G.およびPuett，D．がJ．Biol．Chem．(1989)264，15552に記載のとおり、1-シクロヘキシル−３−(２−モルホリニル−４−エチル)カルボジイミド(C MC)および１−エチル−３−(３−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド(EDC) が包含される。他の有用なカルボン酸修飾試薬にはイソキサゾリウム誘導体、例えばWoodwards試薬Ｋ;クロロホルメート、例えばp-ニトロフェニルクロロホルメート；カルボニルジイミダゾール、例えば1,1'−カルボニルジイミダゾール；およびＮ−カルボアルコキシジヒドロキノリン、例えばＮ−（エトキシカルボニル）−２−エトキシ−1,2−ジヒドロキノリンが包含される。他の潜在的に有用な反応性の部分には、例えばWagner等がNucleic acid Res． (1978)5，4065に記載のとおりグアニジニル基と反応させるために用いてよいｐ −フェニレンジグリオキサルのようなビシナルジオン；および、例えばIshizaka ，K.およびIshizaka T.がJ.Immunol．(1960)85，163に記載のとおり、親電子置換反応を起こすジアゾニウム塩が包含される。ビスジアゾニウム化合物は酸性溶液中亜硝酸ナトリウムでアリールジアミンを処理することにより容易に調製される。レポーターおよび／またはベクター中の官能基は、当然ながら、例えば別の反応性または選択性を与えるために、所望により他の官能基に変換した後に反応させてよい。このために有用な方法の例には、無水ジカルボン酸のような試薬を用いたアミンからカルボン酸への変換；Ｎ−アセチルホモシステインチオラクトン、無水Ｓ−アセチルメルカプトコハク酸、２−イミノチオランまたはチオール含有スクシンイミジル誘導体のような試薬を用いたアミンからチオールへの変換；α−ハロアセテートのような試薬を用いたチオールからカルボン酸への変換；エチレンイミンまたは２−ブロモエチルアミンのような試薬を用いたチオールからアミンへの変換；カルボジイミド次いでジアミンのような試薬を用いたカルボン酸からアミンへの変換；およびトシルクロリドのような試薬を用い、次いでチオアセテートとのエステル交換および酢酸ナトリウムを用いたチオールへの加水分解によるアルコールからチオールへの変換が包含される。ベクター−レポーターカップリングはまた長さゼロ−レングスの架橋剤として酵素を用いて行ってもよく；即ち、例えば、トランスグルタミナーゼ、パーオキシダーゼおよびキサンチンオキシダーゼを用いて架橋産物を得てもよい。逆蛋白分解もまたアミド結合の形成を介した架橋のために用いてよい。非共有結合ベクター−レポーターカップリングは例えば安定な金属複合体の形態のキレート形成を介して、または、アビジン／ビオチン結合のような高親和性結合相互作用を介して、ポリリジニル−官能化されたレポーターとポリグルタミル官能化されたベクターとの間の静電電荷相互作用により行なってよい。あるいは、ベクターはリン脂質に結合することが判っている蛋白にカップリングさせてよい。多くの場合、リン脂質の単一の分子をトランスロカーゼのような蛋白に結合させ、他の蛋白は主にリン脂質のヘッド基よりなる表面に結合してよく、このことを用いてベクターをリン脂質ミクロスフェアに結合させてよく；そのような蛋白の一例はβ２−糖蛋白Ｉである(Chonn，A.，Semple，S.C.およびCu llis，P.R.，Journal of Biological Chemistry（1995）270，25845-25849)。ホスファチジルセリン結合蛋白は例えばIgarashi，K.等によりJournal of Biologi cal Chemistry 270(49)，29075-29078に記載されている。アネキシンは一群のリン脂質結合蛋白質でありその多くはホスファチジルセリンに特に強く結合している(Raynal，P.およびH.B．Pollardの「Annexins，the problem of assessing the biological role for a gene family of multifunctional calcium-and phosph olipid-binding proteinsl Biochim．Biophys．Acta 1197，63〜93ページ中で論評されている)。従ってこのようなホスファチジルセリン結合蛋白質とのベクターのコンジュゲートがベクターをホスファチジルセリン−カプセル化微小気泡に結合するために使用されうる。結合蛋白のアミノ酸配列が既知の場合は、リン脂質結合蛋白を合成するか、または、単離して、ベクターとのコンジュゲーションに用い、これにより分子の別の場所に位置する可能性のある生物学的活性を回避することができる。分子ライブラリを直接スクリーニングしてミクロスフェア結合分子を探すことによりミクロスフェアの表面に(または「膜」内に)特異的に結合する分子を得ることもできる。例えば、小さい固体ミクロスフェア（約0.02〜２μm、望ましくは約0.05〜0.25μm）の表面上にある小さな分子を掲げる、コンビナトリアルケミストリーによるライブラリーがこのような選択のために使用できるであろう。選択は、ガス充填微小気泡とコンビナトリアルライブラリーとを単に混合しそして小さい固体ミクロスフェアを溶離することにより行なうことができる。あるいは、コンビナトリアルライブラリーは固体表面つまりマイクロ−タイターウエルの底部上に生成されることができよう。所望により「生理学的条件」下（例えば血中）および／または剪断条件下で選択を行なってよい。この種の選択方法の利点は、未損傷の浮遊ミクロスフェアに結合した結合分子だけが表面まで上昇するため、ミクロスフェアの安定性を損なわない結合分子のみを選択すればよい。安定性を損なう結合分子を選択しないように選択操作の間ある種の「ストレス」(例えば圧力)を導入することも可能である。このようにして生体中にある剪断条件に耐えることのできるバインダーを選択することが可能であろう。別な利点は、もし生体中での永久的結合を回避せねばならないならば、親和性の限定された結合部位を選ぶという選択肢があることである。このようにして同定される結合部位はベクター分子への化学的コンジュゲーションによって結合されてよく、これは任意のベクター分子を微小泡に結合するための一般的手段をなす。膜挿入を媒介することのできる要素を含むペプチド、リポ−オリゴ糖またはリポペプチドリンカーと結合するベクターもまた有用である。１つの例は、Leenho uts，J.M.等のFebs Letters（1995）370(3)，189-192に記載されている。既知の膜挿入係留部／信号群よりなる非生物活性分子もまた特定の用途のためのベクターとして使用してよく、その例はXie，Y.およびMorimoto，T.がJ．Biol．Chem． (1995)270(20)，11985-11991に記載のNa，K-ATPaseα−サブユニット由来のＨ１疎水性セグメントである。係留基は脂肪酸またはコレステロールであってよい。カップリングはまたアビジンまたはストレプトアビジンを用いて行なってよく、これらはビオチンに対する高親和性結合部位４個を有している。従ってアビジンは、ベクターとレポーターが共にビオチニル化されている場合にベクターをレポーターにコンジュゲートするために使用される。その例は Bayer，E.A.およびWilchek，M.のMethods Biochem．Anal．(1980)26，1に記載されている。この方法を拡張して、気泡の結合を向上させ、結果としてエコー源生能を増大させる方法である、レポーターとポーターの連結も意図してよい。あるいは、アビジンまたはストレプトアビジンをレポーター微細粒子の表面に直接結合させてもよい。非共有結合カップリングもまた二重特異性免疫グロブリンの二官能性の性質を利用してよい。これらの分子は２個の抗原に特異的に結合できるため、これらを連結できる。例えば、二重特異性のIgGまたは化学的に構築された２特異性のF(a b)'2フラグメントのいずれかを連結剤として用いて用いてよい。ヘテロ二官能性二重特異性抗体もまた、例えばBode，C.等，J．Biol．Chem.(1989)264，944およびStaerz，U.D.等，Proc．Natl.Acad．Sic．USA（1986）83，1453に記載のとおり、２種の異なる抗体に連結することが報告されている。同様に、２種以上の抗原決定基を有するレポーターおよび／またはベクター(Chen，Aa等，Am．J．Path ol．（1988）130，216等)を抗体分子と交叉結合させ、エコー源生能の向上した多気泡交叉結合構造体を形成してもよい。本発明で使用される連結剤は一般的にある程度の特異性でベクターからレポーターまたはレポーターからレポーターへの連結をもたらすものであり、１種以上の治療活性薬剤を結合するためにも用いてよい。場合により、PEGがスペーサーとして機能しない同分子内のレポーターに対し、ベクターと組合わせて、あるいは直接、安定化剤としてPEG成分を含むことが好都合である。本発明の内容においては、レポーター単位は通常はベクターに連結して残存する。「前標的設定」と称される別な種類の標的設定過程においては、ベクター（例えば、単糖類またはオリゴ糖類で誘導体化されてよい）のみを投与し；その後、レポーターを投与し、ベクター分子に特異的に結合することのできる部分にカップリングする（ベクターが糖を含有する場合は、レポーターはレシチンのような炭水化物結合分子にカップリングされてよい）。この操作法の利点は、時間の経過により標的に結合しないベクター分子の排除がおこなわれ、過剰なレポーター−ベクターコンジュゲートの存在に伴うバックグラウンドの問題を実質的に小さくする点である。本発明の内容においては、前標的設定では１種の特異的なベクターを用い、その後、他のベクターおよび第１のベクターに結合する部分にカップリングするレポーター単位を想定している。本発明の内容においては、ある場合にはそして特に、規定された領域、例えば心筋における血液の灌流を評価するために、標的に結合した超音波造影剤が標的から転位するかまたは遊離する速度を測定することに興味がある。これはベクターのみを投与し、あるいは標的から超音波造影剤を転位させまたは遊離させることのできる別な薬剤を投与することにより制御下で実施することができる。本発明で用いる超音波造影法は、２次元および３次元の造影方法、例えばＢモード造影（例えば発せられた超音波パルスの基礎周波数から、その下調波または高調波から、または、発せられたパルスおよび上記調波に由来の合算周波数または異なる周波数から発生される信号エンベロープの時間変動増幅を用いる等、基礎周波数またはその第２調和波から発生する像が好ましい）、カラードプラー造影およびドプラー増幅造影および後者２者と上記方式（技術）のいずれかとの組合わせを包含する。意外にも、本発明に従って使用する場合、標的設定単層微細球からの第２調波信号が優れていることが判った。移動の影響を低減するために、心臓または腎臓のような組織の連続像を適当な同調方法（例えばECGへのゲート開放または対象の呼吸運動）を用いて収集する。微小気泡の停止または遅延に伴う共鳴周波数または周波数吸収の変化の測定もまた造影剤の検出のために有用に用いられる。本発明は所望の部位への生成物のベクター媒介方向設定と組合わせた医療薬デリバリーのための手段を提供する。「治療」または「薬」という用語はヒトまたは非ヒトの生体における特定の疾患に対する有益な作用を有する薬剤を指す。薬物と超音波造影剤の組合わせは例えばWO-A-9428873号およびWO-A-9507072号において提案されているが、これらの生成物は特定の部位に対する親和性を有するベクターを欠いており、このため、薬剤放出の前またはその間の所望の部位における特異的保持が比較的乏しくなる。本発明で用いる治療化合物は微細泡／微細粒子の内部にカプセル化するか、または、その構造に結合しあるいは構造内に取り込ませることができる。即ち、治療化合物は例えば共有結合またはイオン結合を介して壁または基質の一部に連結するか、または、特に薬物がこの物質と同様の極性または溶解度を有する場合は、カプセル化物質または基質物質に物理的に混入し、これにより、体内で作用する前に生成物が漏出することを防止する。薬剤の放出は投与後の血液との湿潤接触のみにより開始されるか、または、他の内的または外的な影響、例えば、酵素による触媒された溶解過程または超音波の使用の結果として開始される。外的超音波を用いた気体含有微細粒子の崩壊は例えばWO-A-9325241号に記載のとおり、超音波造影剤に関する良く知られた現象であり；薬物の放出速度はトランスデューサーから生じる超音波エネルギーの特定の量を用いて、治療用途の種類に応じて変化させられる。治療薬は例えば本明細書に記載する適当な連結剤を用いて膜または基質の表面に共有結合させてよい。即ち例えば、まずリン脂質またはリポペプチドの誘導体を調製し、これに生体分解正の結合またはリンカーを介して薬物を結合させ、次にこの誘導体を前述のとおり、レポーターを調製するために使用する物質に配合する。別法として、生成物が治療薬なしでまず調製され、次いで使用に先立って微小気泡または微小粒子にカップリングされあるいはコートされてもよい。従って、例えば、微小気泡または微小粒子に治療薬を結合または付着するために、これらの水性媒体中の懸濁液に治療薬を添加することができよう。本発明の薬物デリバリー組成物中で用いるのに適する代表的な治療薬には、酸化条件下でチオール含有微小気泡にカップリングしてジスルフィド基を形成するチオール基を有する知られた治療薬またはその活性類縁体が包含される。ベクターとの組合せにより、このような薬物／ベクター修飾微小気泡は標的組織に蓄積され；次に還元グルタチオンのような還元剤を投与することにより、薬物の分子を標的細胞近隣の標的設定微小気泡から遊離させ、これにより薬物の局所濃度を増大させ、その治療効果を強化させる。あるいは、組成物をまず治療薬を用いずに調製し、その後治療薬を使用直前の微小気泡上にカップリングまたはコーティングしてよく；即ち、例えば、治療薬を水性媒体中の微小気泡の懸濁液に添加し、そして治療薬を微小気泡に結合または付着させるために振とうしてよい。他の薬物デリバリーシステムには標的設定ベクターと組合わせてポリ−Ｌ−リジンまたはポリ−Ｄ−リジン鎖を有するリポペプチド構造でドープされたベクター修飾リン脂質膜が包含される。特にレセプター媒介薬物デリバリーによる遺伝子治療／アンチセンス技術に合わせて、微小気泡担体をカチオン性ポリリジンとの静電相互作用によりDNAまたはRNAと縮合させる。この方法の利点は、標的設定デリバリーに用いるベクターがポリリジン担体部分に直接結合していない点にある。ポリリジン鎖はまた脂質鎖の存在によりより堅固に微小気泡膜に契合される。デリバリーの効果を高める超音波の使用もまた有用でる。あるいは、遊離のポリリジン鎖をまず薬物またはベクター分子で修飾し、その後、標的設定微小気泡の負荷電表面に縮合させる。本発明において有用な薬物の代表的な例（これらに限定されるものではない）には、抗新生物剤、例えばビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、ブスルファン、クロラムブシル、スピロプラチン、シスプラチン、カルボプラチン、メトトレキセート、アドリアマイシン、ミトマイシン、ブレオマイシン、シトシンアラビノシド、アラビノシルアデニン、メルカプトプリン、マイトテン、プロカルバジン、ダクチノマイシン（アンチノマイシンＤ）、ダウノルビシン、塩酸ドキソルビシン、タキソール、プリカマイシン、アミノグルテシミド、エストラムスチン、フルタミド、ロイプロリド、酢酸メゲストロール、タモキシフェン、テストラクトン、トリロスタン、アムサクリン(m-AMSA)、アスパラギナーゼ（Ｌ−アスパラギナーゼ）、エトポシド、インターフェロンａ−２ａおよび２ｂ、血液製剤例えばヘマトポルフィリンまたはその誘導体；生物学的応答調節剤、例えばムラミルペプチド；抗カビ剤例えばケトコナゾール、ニスタチン、グリセオフルビン、フルシトシン、ミコナゾールまたはアンホテリシンＢ；ホルモンまたはホルモン類縁体、例えば成長ホルモン、メラノサイト刺激ホルモン、エストラジオール、ベクロメタゾンジプロピオネート、ベタメタゾン、酢酸コーチゾン、デキサメタゾン、フルニソリド、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、酢酸パラメタゾン、プレドニゾロン、プレドニゾン、トリアムシノロンまたは酢酸フルドロコルチゾン；ビタミン、例えばシアノコバラミンまたはレチノイド；酵素、例えばアルカリホスファターゼまたはマンガンスーパーオキシドジスムターゼ；抗アレルギー剤、例えばアメレキサノクス；組織因子抑制剤、例えばモノクローナル抗体およびそのFabフラグメント、合成ペプチド、非ペプチドおよび組織因子発現をダウンレギュレーションする(downregulating)化合物；血小板抑制剤、例えばGPIa，GPIbおよびGPIIb-IIIa，ADP受容体、トロンビン受容体、vonWillbrand因子、プロスタグランジン、アスピリン、チクロピジン、クロピゴグレルおよびレオプロ；凝固蛋白標的抑制剤、例えば、FIIa、FVa、FVIIa 、FVIIIA、FIXa、組織因子、ヘパリン、ヒルジン、ヒルログ、アルガトロバン、 DEGR-rFVIIaおよびアネキシンＶ：フィブリン形成抑制剤およびフィブリノリシス促進剤、例えばｔ−PA、ウロキナーゼ、プラスミン、ストレプトキナーゼ、rt−プラスミノーゲン活性化剤およびｒスタフィロキナーゼ；抗血管新生促進因子、例えばメドロキシプロゲステロン、五硫酸ペントサン、スラミン、タキソール、タリドミド、アンジオスタチン、インターフェロン−アルファ、メタロプロテイナーゼ阻害剤、血小板因子４、ソマトスタチン、トロンボスポンジン；循環系薬物、例えばプロプラノロール；代謝強化剤、例えばグルタチオン；抗結核剤例えばｐ−アミノサリチル酸、イソニアジド、硫酸カプレオマイシン、シクロセキシン、エタンブトール、エチオナミド、ピラジナミド、リファンピンまたは硫酸ストレプトマイシン；抗ウイルス剤、例えばアシクロビル、アマンタジン、アジドチミジン、リバビリン、またはビダラビン；血管拡張剤、例えばジルチアゼム、ニフェジピン、ベラパミル、四硝酸エリスリトール、二硝酸イソソルビド、ニトログリセリンまたは四硝酸ペンタエリスリトール／抗生物質、例えばダプソン、クロラムフェニコール、ネオマイシン、セファクロル、セファドロキシル、セファレキシン、セファラジン、エリスロマイシン、クリンダマイシン、リンコマイシン、アモキシリン、アンピシリン、バカンピシリン、カルベニシリン、ジクロキサシリン、シクラシリン、ピクロキサシリン、ヘタシリン、メチシリン、ナフシリン、ペニシリン、ポリミキシンまたはテトラサイクリン；抗炎症剤、例えばジフルニサル、イブプロフェン、インドメタシン、メクレフェナメート、メフェナミック酸、ナプロキセン、フェニルブタゾン、ピロキシカム、トルメチン、アスピリンまたはサリシレート；抗原生動物剤、例えばクロロキン、メトロニダゾール、キニンまたはアンチモン酸メグルミン；抗リューマチ剤、例えばペニシラミン；麻酔剤、例えばパレゴリック；アヘン剤、例えばコデイン、モルヒネまたはアヘン；強心配糖体、例えばデスラネシド、ジギトキシン、ジゴキシン、ジギタリンまたはジギタリス；神経筋ブロッカー、例えばアトラクリウムメシレート、ガラミントリエチオジド、ヘキサフルオレニウムブロミド、ヨウ化メトクリン、臭化パンクロニウム、塩化スクシニルコリン、塩化ツボクラリンまたは臭化ベクロニウム；沈静剤、例えばアモバルビタール、アモバルビタールナトリウム、アプロプバルビタール、ブタバルビタールナトリウム、抱水クロラール、エトクロルビノール、エチナメート、塩酸フルラゼパム、グルテシミド、塩酸メトトリメプラジン、メチプリロン、塩酸ミダゾラム、パラアルデヒド、ペントバルビタール、セコバルビタールナトリウム、タルブタール、テマゼパムまたはトリアゾラム；局所麻酔剤、例えばブピバカイン、クロロプロカイン、エチドカイン、リドカイン、メピバカイン、プロカインまたはテトラカイン；全身麻酔剤、例えばドロペリドール、エトミデート、クエン酸フェンタニル＋ドロペリドール、塩酸ケタミン、メトヘキシタールナトリウムまたはチオペンタールおよび医薬的に許容しうる塩(例えば酸付加塩例えば塩酸塩または臭化水素酸塩、または塩基塩例えばナトリウム、カルシウムまたはマグネシウム塩)またはその誘導体(例えば酢酸塩)が包含される。治療薬の他の例には遺伝子物質、例えば、核酸、RNA、および天然または合成のDNA、例えば組み換え RNAおよびDNAが包含される。特定の蛋白質をコードするDNAは種々の疾患の治療で使用される。例えば、腫瘍壊死因子またはインターロイキン−２遺伝子を用いて進行ガンを治療してよく；チミジンキナーゼ遺伝子を用いて卵巣ガンまたは脳腫瘍を治療してよく；インターロイキン−２遺伝子を用いて、神経芽腫、悪性黒色腫または腎臓ガンを治療してよく；そしてインターロイキン−４遺伝子を用いてガンを治療してよい。疎水相互作用により微小気泡膜に結合している薬物の親油性の誘導体は例えば超音波を使用することにより微小気泡の一部として、または微小気泡から放出された後に治療効果を示す。薬物が所望の物理的特性を有しない場合は、親油性の基を導入して薬物を膜に係留してよい。好ましくは、親油性の基は分子のin viv oの力価に影響しないような状態で導入することが必要であり、あるいは、親油性の基が分解されて活性薬物を放出するようにしてもよい。親油性の基は薬物分子中で使用可能な官能基により異なる種々の化学的方法で導入してよい。共有結合カップリングは適切に官能基化された親油性化合物と反応できる薬物分子中の官能基を用いて行なってよい。親油性部分の例には、分枝鎖または非分枝鎖のアルキル鎖、環状化合物、芳香族残基および縮合した芳香族および非芳香族の環系が包含される。場合により、親油性部分は適当に官能化されたステロイド、例えばコレステロールまたは関連化合物よりなる。誘導体化に特に適する官能基の例はアミノ、ヒドロキシおよびスルフィドリル基のような親核性の基である。カプトプリルのようなスルフィドリル基を有する任意の薬物の親油性誘導体化のための適当な方法には、直接アルキル化、例えば塩基性条件下のアルキルハライドとの反応、および、活性カルボン酸との反応によるチオールエステル形成が包含される。カルボキシル官能基を有する任意の薬物、例えばアテノロールまたはクロランブシルの誘導体化の代表的な例には、適切な物理的特性を有するアミンおよびアルコールそれぞれとのカップリングによるアミドおよびエステルの形成が包含される。好ましい実施態様は分解性エステル結合を形成することによる治療化合物へのコレステロールの結合が包含される。本発明の好ましい適用は血管新生に関するものであり、これは既存血管からの分枝による新しい血管の形成を意味する。この過程のための第１の刺激は組織中の細胞への栄養および酸素の不十分な供給(低酸素)である。細胞は血管新生促進因子分泌により応答するが、そのような因子は数多く存在し、その１つの例は、血管内皮生育因子である。これらの因子は基底膜の蛋白を分解する蛋白分解酵素、並びに、このような潜在的に有害な酵素の作用を制限する阻害剤の分泌を開始させる。結合の消失と血管新生促進因子に対する受容体から発生される信号との複合作用は、内皮細胞を移動させ、複製させ、そしてそれらを再配置させ、最終的に新しい血管の周囲の基底膜を合成する。腫瘍はその生育速度を維持するためにはミリメートルの大きさに達した段階で血管新生を開始させなければならない。血管新生には内皮細胞とその環境の特徴的な変化が伴い、この工程は治療介入の有望な標的となる。この目的にとって役立つ非ペプチド化合物は最近開示されているものの多くに記載されている。血管新生を伴う形質変換はまた診断にとって極めて有望なものであり、そのよい例は悪性疾患であるが、この原理は炎症および種々の炎症関連疾患においても大変有用である。これらの因子はまた、短時間で狭窄が開放される際に起こる心筋の梗塞部における再血管形成に関与している。血管新生に関係する多くの知られた受容体／標的を後に示す表中に記載する。本明細書に記載した標的設定原理を用いて、医療で使用されている造影技術の大部分により血管新生を検知してよい。造影剤増強超音波は更に別の利点も有しており、造影媒体は血管の内部に留められるミクロスフェアである。標的抗原が多くの種類の細胞上にみとめられる場合でも、ミクロスフェアは内皮細胞に限定的に結合する。いわゆるプロドラッグもまた本発明の薬剤で使用してよい。即ち、物理化学的性質を変化させ、レポーター中に含有するのに適するように薬物を誘導体化してよく；このように誘導体化された薬物をプロドラッグとみなし、通常は誘導体化のための基の切断により薬物の活性型が生じるまで不活性である。プロドラッグ活性化酵素を含有するる気体充填微小気泡を患部に向けて標的設定することにより、酵素の標的設定を造影してよく、微小気泡が患部領域に適切に標的設定され、同時に非標的領域から消失している場合に、可視化することができる。この方法により患者個体へのプロドラッグの注入の至適時間を決定できる。別の方法はプロドラッグ、プロドラッグー活性化酵素およびベクターを、プロドラッグのみが同じ外来性刺激の後に活性化される系の同じ微小気泡に取り込む方法である。このような刺激は、例えば、上記した腫瘍特異的プロテアーゼ、または、所望の標的設定が達成された後の外部からの超音波による微小気泡の破裂であってよい。治療薬は、心臓、全身血管を含めて患部領域または壊死領域に、そして肝臓、脾臓、腎臓および他の領域、例えば、リンパ系、体腔または胃腸系に対し、本発明に従って、容易にデリバリーすることができる。本発明の生成物はin vivoまたはin vitroの何れかの標的設定治療薬デリバリーのために使用してよい。後者の場合は、プロドラッグは種々の疾患の診断または血液または組織の試料中の種々の成分の同定のためのキットのようなin vitro の系において有用である。本発明の薬剤中のレポーター単位の低い密度を利用して浮遊および反復洗浄により気体含有物質の分離を行ないながら、特定の血液成分または細胞をin vitro の重合体粒子（例えば単分散磁性粒子）に結合させて試料から分離させる際に用いる方法と同様の方法を本発明で使用してよい。別の連結剤の導入を行なうことなく２種の反応性の化学基の直接共有結合をもたらすいわゆるゼロ−レングスの連結剤（例えばカルボジイミドを用いた、あるいは酵素によるアミド結合の形成の場合等）は、所望により、非共有結合レポーター−ベクター連結をもたらすビオチン／アビジン系のような薬剤および疎水性または静電気的相互作用をもたらす薬剤と同様、本発明に従って使用してよい。しかしながら、最も一般的には、連結剤はスペーサー要素により連結された、例えば上記したような２種以上の反応性の部分を有する。このようなスペーサーの存在により、二官能性のリンカーは分子内または２種の異なる分子間の特定の官能基と反応することができ、これにより、これら２成分間の結合が起こり、レポーター−ベクターコンジュゲート内に外来性のリンカー由来物質が導入される。連結剤中の反応性の部分は同じ（ホモ二官能性物質）かまたは異なって（ヘテロ二官能性物質または数種の異なる反応性の部分が存在する場合はヘテロ多官能性物質）いてよく、これにより分子内または分子間の何れの化学種の間も共有結合できる多様な試薬が得られる。連結剤により導入される外来性物質の性質は、標的設定能力および最終生成物の全般的安定性に対し、重要な関連性を有している。即ち、生物分解性または化学的に感受性が高いか、または、酵素切断部位を有するスペーサーを例えば用いることにより不安定な連結を導入することが望ましい。あるいは、スペーサーは、例えば界面活性剤として機能し、気泡安定性を向上させるために重合体成分を含んでもよい。スペーサーはまた、表面の交叉結合を増強させるために例えば上記したような反応性の部分を含んでいてもよく、または、蛍光プローブ、スピンラベルまたは放射性物質のようなトレーサー要素を含んでいてもよい。従って、Ｘ線造影剤、光造影プローブ、スピンラベルまたは放射性単位のような造影要素をレポーターユニットに容易に配合または結合できるため、本発明の造影剤は全ての造影方法において有用である。スペーサー要素は典型的には、距離５〜30Åでリンカーの反応部分を効果的に分ける脂肪族鎖よりなる。これは、ポリ（エチレングリコール）のような巨大分子構造であってもよい。以下にPEGと称するこのようなポリマー構造は生物工学および生物医学の用途において大きく注目されている単純な中性のポリエステルである。(例えばMilton Harris，J．(ed)，“Poly(ethylene glycol)chemistry, biotechnical and biomedical applications”，Plenum Press，New York,1992 参照)。PEGは水などのほとんどの溶媒中に可溶であり、２または３個の水分子が各エチレングリコールセグメントに結合しながら水性条件で高度に水和しており；これは他の重合体または蛋白のPEG修飾表面への吸着を阻止する作用を有する。PEGは非毒性であり活性蛋白または細胞に対して無害であることが判っており、また、共有結合PEGは非免疫原性および非抗原性であることが判っている。PEGは更に、その化学特性に殆ど影響するこなく容易に修飾し他分子に結合することができる。その好都合な溶解性と生物学特性はPEGおよびPEG−ポリウレタンおよびPED− ポリプロピレンのようなブロック共重合体を含むその共重合体の用途が広いことから明らかである。本発明で使用するPEGスペーサーの適切な分子量は例えば120ダルトン〜20kダルトンである。網内系(RES)細胞による粒子の取り込みの主要な機序は血中の血漿蛋白によるオプソニン作用であり；これらがマークした外来性粒子が次いでRESに取り込まれる。本発明で使用するPEGスペーサー要素の生物学的性質はPEG化されたリポソームで観察されるものと同様の造影剤循環時間を延長させることである(例えばK libanov，A.L.等，FEBS Leters（1990）268，235-237およびBlume，G．およびCe vc，G．Biocim．Biophys．Acta（1990）1029，91-97参照)。対象となる領域へのカップリング効率の増強はまたPEGスペーサーの末端に結合した抗体を用いて行なってよい(例えばMaruyama．K．等，Biochim．Biophys．Acta（1995）1234，74 -80およびHansen，C.B.等，Biochim．Biophys．Acta（1995）1239，133-144参照 )。場合により、PEGがスペーサーとして機能しない同分子内のレポーターに対し、ベクターと組合わせて、あるいは直接、安定化剤としてPEG成分を含むことが好都合である。他の代表的なスペーサー要素には、構造型多糖類、例えばポリガラクツロン酸、グリコサミノグリカン、ヘパリノイド、セルロースおよび水産多糖類、例えばアルギネート、キトサンおよびカラギーナン；保存型多糖類、例えば澱粉、グリコーゲン、デキストランおよびアミノデキストラン；リジン、グルタミン酸およびアスパラギン酸のホモおよびコポリマーの場合のように、ポリアミノ酸およびそのメチルおよびエチルエステル；および酵素切断部位を有するかまたは有しないポリペプチド、およびオリゴ糖が包含される。一般的にスペーサー要素はビシナルグリコール、アゾ、スルホン、エステル、チオエステルまたはジスルフィド基のような切断可能な基を有する。下記式： -(Z)_m.Y.X.C(R¹R²)X.Y.(Z)_n- ［式中、ＸおよびＺは-O-，-S-および-NR-(Ｒは水素または有機性の基)から選択され：Ｙは各々カルボニル、チオカルボニル、スルホニル、ホスホリルまたは同様の酸形成基であり；ｍおよびｎは各々０または１であり；そしてR¹およびR²は各々、水素、有機性の基または基-X.Y.(Z)_m-であるか一緒になって２価の有機性の基を形成する］の生物分解性メチレンジエステルまたはジアミド基含有のスペーサーも有用であり；例えばWO-A-9217436に記載のとおり、このような基は例えばin vivoでエステラーゼの存在下容易に生物分解されるが、このような酵素の非存在下では安定である。従ってこれらは、好都合に治療薬と結合させてその放出を遅延させることができる。ポリ[Ｎ−(２−ヒドロキシエチル)メタクリルアミド]は細胞および組織との相互作用の程度が低いため潜在的に有用なスペーサー物質である（例えばVolfova ，I.，Rihova，B.およびV.R.およびVetvicka，P.，J．Bioact．Comp．Polymers （1992）7，175-190参照）。主として密接に関連する２−ヒドロキシプロピル誘導体よりなる類似の重合体に関する研究によれば、更に低い程度までのみ単核食細胞系によるエンドサイト−シスは低い程度にしか起こらないことが判っている (Goddard，P.，Williamson，I.，Bron，J.，Hutchkinson，L.E.，Nicholls，J. およびPetrak，K.，J． Bioct.Compat．Polym．(1991)6，4-24参照)。他の潜在的に有用な重合体スペーサー物質には以下のものが包含される。ｉ）メチルメタクリレートとメタクリル酸の共重合体、即ち浸潤崩壊可能であり(Lee，P.I.，Pharm．Res．(1993)10，980参照)、カルボキシレート置換基は中性の重合体と比較してより高い水準の膨潤を起こすもの； ii）ポリメタクリレートと生物分解性ポリエステルのブロック共重合体（例えばSanRoman，J.およびGuillen-Garcia，P.，Biomaterials（1991）12，236-241 参照）； iii）シアノアクリレート、即ち、２−シアノアクリル酸のエステルの重合体で、生物分解性であり、選択的薬物デリバリーのためにナノ粒子の形態で使用されているもの(Forestier，F.，Gerrier，P.，Chaumard，C.，Quero，A.M.，Couv reur，P.およびLabarre，C.，J.Antimicrob.Chemoter．（1992）30，173-179参照)； iv）水溶性で一般的に生体適合性であると考えられているポリビニルアルコール（例えばLanger，R.，J．Control．Release（1991）16，53-60参照)；ｖ）生物浸潤崩壊性であるとされているビニルメチルエーテルと無水マレイン酸との共重合体(Finne，U.，Hannus，M．およびUrtti，A.，Int．J．Pharma．(1 992)78，237-241参照)； vi）腎臓で急速に濾過される例えば分子量約25,000未満のポリビニルピロリドン（Hespe，W.，Meier，A.M.およびBlankwater，Y.M.，Arzeim．-Forsch.／Drug Res．(1977)27，1158-1162参照)； vii）グリコール酸、乳酸、酪酸、吉草酸およびカプロン酸のような短鎖脂肪族ヒドロキシ酸の重合体および共重合体(例えばCarli，F.，Chim．Ind．(Milan) （1993）75，494-9参照)、例えば分解速度を高めるために芳香族ヒドロキシ酸を配合した共重合体(Imasaki，K.，Yoshida，M.， Fukuzaki，H.，Asano，M.，Kumakura，M.，Mashimo，T.，Yamanaka，HおよびNag ai．T．のInt．J．Pharm．(1992)81，31-38参照)； viii）非分解性であるが生体適合性の高いDacron Rのようなエチレングリコールとテレフタル酸の交互単位よりなるポリエステル； ix）脂肪族ヒドロキシ酸重合体の生物分解性セグメントを有するブロック共重合体(例えばYounes，H.，Nataf，P.R.，Cohn，D.，Appelbaum，Y.J.，Pizov，G. およびUretzky，G.，Biomater．Artif．Cells Artif．Organs（1988）16，705-7 19参照)、例えばポリウレタンと組合わせたもの(Kobayashi，H.，Hyon，S.H.およびIkada，Y.，“Water-curable and biodegradable prepolymers”-J．Biomed ．Mater．Res．(1991)25，1481-1494参照)。ｘ）移植片中で許容性の高いことが判っており、例えばポリ(テトラメチレングリコール)、ポリ(プロピレングリコール)またはポリ(エチレングリコール)を含有する可撓性の「ソフト」セグメントおよび例えば4,4'−メチレンビス(フェニレンイソシアネート)を含有する芳香族「ハード」セグメントと組合わせてよいポリウレタン(例えばRatner，B.D.，Johnston，A.B．およびLenk，T.J.，J．Bio med.Mater．Res:Applied Biomaterials（1987）21，59-90;Sa Da Costa，V.等， J．Coll．Interface Sci.(1981)80，445-452およびAffrossman，S.等，Clinical Materials（1991）8，25-31参照)； xi）加水分解性エステル結合のために生物分解性エステルであると考えられており(例えばSong，C.X.，Cui，X.M.およびSchindler，A.，Med．Biol．Eng．Com put．(1993)31，S147-150参照)、吸収性を向上させるためにグリコリド単位を含んでいてよい(Bezwada，R.S.，Shalaby，S.W．およびNewman，H.D.J.，Agricult ural and synthetic polymers：Biodegradability and utilization（1990）(ed Glass，J.E.およびSwift，G.)，167-174-ACS symposium Series，＃433，Washi ngton D.C.， USA-American Chemical Society)ポリ(1,4−ジオキサン−２−オン)； xii）ウサギ(Brem，H.，Kader，A.，Epstein，J.I.，Tamargo，R.J.，Domb，A .，Langer，R.およびLeong，K.W.，Sel．Cancer Ther．(1989)5，55-65参照）およびラット(Tamargo，R.J.，Epstein，J.I.，Reinhard，C.S.，Chasin，M.およびBrem，H.，J．Biomed．Mater．Res．(1989)23，253-266)における試験で明らかな毒性作用を伴うことなく薬物の脳内制御放出に有用であることが判っているセバシン酸(オクタンジ酸)とビス(４−カルボキシ−フェノキシ)プロパンの共重合体のようなポリ無水物；ｘiii）in vivoの制御放出のために用いられているオルトエステル基を有する生物分解性重合体(Maa，Y.F.およびHeller，J.，J．Control．Release（1990）1 4，21-28)；および、ｘiv）交互に存在するリンおよび窒素原子よりなる無機重合体であるポリホスファゼン(Crommen，J.H.，Vandorpe，J.およびSchacht，E.H.，J．Control．Rel ease（1993）24，167-180参照)。以下の表は本発明の標的設定薬剤を調製する際に有用な連結剤と蛋白修飾のための薬剤を挙げたものである。ヘテロ二官能性連結剤注記：(1)＝ヨウ素化可能； (2)＝蛍光ホモ二官能性連結剤注記：(1)＝ヨウ素化可能ビオチニル化剤注記：DPPE＝ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン； LC＝長鎖蛋白修飾のための薬剤脱グリコシド化は肝臓、脾臓、マクロファージ等による取込を低下させる場合が多いが、蛋白の新しいグリコシル化は肝臓およびマクロファージによる取込を増大させる場合が多いので、他の潜在的に有用な蛋白修飾の例には、グリコシターゼノイラミニダーゼ、エンドグリコシダーゼまたは過ヨウ素酸塩による部分的または完全な脱グリコシド化；大きさの減少と循環における半減期の短縮をもたらす蛋白分解的切断による末端切断形態の調製；および、例えばKumagi等.，J． Biol．Chem．(1987)262，15214-15219;Triguero等.，Proc．Natl．Acad．Sci．U SA（1989）86，4761-4765;Pardridge等.，J．Pharmacol．Exp．Therap．(1989)2 51，821-826およびPardridgeおよびBoado，Febs Lett．(1991)288，30-32に記載のカチオン化が包含される。本発明の標的設定薬剤中で有用に使用されるベクターには以下のものが包含される。ただし、必要な場合には非生物活性の類似体の形でありうる。ｉ）細胞付着分子、サイトカイン、成長因子およびペプチドホルモンに対する受容体の非ペプチドアゴニスト／拮抗剤またはバインダー。この範疇はアゴニストでも拮抗剤でもないがなお価値ある標的設定能力を示す非生物活性ベクターを包含する。 ii）ワトソン−クリックまたは他の型の塩基対を介してDNAまたはRNAに結合するオリゴヌクレオチドおよび修飾オリゴヌクレオチド。DNAが細胞外の空間に存在するのは通常は細胞の損傷の結果としてのみであるため、通常は非生物活性である上記オリゴヌクレオチドは例えば、多くの種類の病的状態に伴う壊死領域を標的設定するために有用である。ノリゴヌクレオチドはまた特定のDNA−またはR NA−結合蛋白、例えば、腫瘍細胞または活性化免疫または内皮細胞で過剰発現するかまたは活性化されることの多い転写因子に結合するように設計してよい。コンビナトリアルライブラリを用いて何れかの可能な標的分子に特異的に結合し（蛋白の実施例からカフェインの実施例まで）、そのために標的設定のためのベクターとして使用してよいオリゴヌクレオチドを選択してよい。 iii）DNA−結合薬物はオリゴヌクレオチドと同様の挙動を示す場合があるが、細胞に取り込まれた場合には生物活性および／または毒性作用を示す場合がある。 iv）プロテアーゼ基質／阻害剤。プロテアーゼは多くの病的状態に関与しており、またこのようなプロテアーゼの基質／阻害剤はしばしば非ペプチドである。低分子量のいくつかのプロテアーゼの基質および阻害剤は非生物活性であることが知られている。ｖ）非ペプチドベクター分子、例えばアプタマー(核酸分子)は、領域／構造に結合している、造影されるべき分子を機能的に選ぶ（インビトロ、エクスビボまたはインビボ）ことにより、分子標的を必ずしも正確に知る必要なく、コンビナトリアルライブラリーから作成されてよい。標的構造は糖、脂質、ペプチド、蛋白または核酸であってよい。 vi）種々の生物学的受容体に結合することが判っている生物活性化合物を包含する種々の小型分子。このようなベクターまたはその標的を用いて同じ標的に結合する非生物活性化合物を発生させてよい。以下の表は特定の種類の標的に標的設定してよい種々のベクターおよびそのようなベクターを含む本発明の標的設定可能な診断薬および／または治療剤の使用を意図する領域を示す。必要な場合にはこのようなベクターの非生物活性類縁体を使用すべきことが理解されるであろう。サイトカイン／成長因子／ペプチドホルモン／細胞付着分子のための受容体の非ペプチドアゴニスト／拮抗剤または非生物活性バインダーを含むベクターオリゴヌクレオチドベクター修飾オリゴヌクレオチドベクター（in vivoの安定性を増大するための修飾）ヌクレオシドおよびヌクレオチドベクター DNA 結合薬を含有する受容体プロテアーゼ基質を含有する受容体プロテアーゼ阻害剤を含有する受容体抗血管新生因子を含むベクター血管新生因子を含むベクターコンビナトリアルライブラリ由来のベクター非ポリマー炭水化物ベクター小型分子ベクター以下の非限定的な実施例は本発明を説明するものである。生成物の微細粒子の性質の確認はWO-A-9607434に記載の顕微鏡観察により行なう。超音波伝達測定は、広帯域の変換器を用いて、標準物質と比較して増大した音波減衰を与える微小気泡懸濁液を示すことにより行なってよい。生成物のフローサイトメトリーによる分析を用いて巨大分子の結合を確認することができる。標的を発現する細胞に特異的に結合する標的設定微小気泡の能力は、顕微鏡観察および／または固定化細胞を有するフローチャンバーを用いて、例えば標的構造を発現する細胞集団および標的を発現しない細胞集団を用いながら、検討してよい。放射、蛍光または酵素標識ストレプトアビジン／アビジンを用いてビオチン結合を分析してよい。実施例１ホスファチジルセリン、ホスファチジルコリンおよびビオチンアミドカプロエート−PEG₃₄₀₀-Ala−コレステロールでカプセル化された気体充填微小気泡ａ）Z-Ala−コレステロール(３−Ｏ−(カルボベンジルオキシ−Ｌ−アラニル)コレステロール)の合成コレステロール(４ミリモル)、Ｚ−アラニン(５ミリモル)およびジメチルアミノピリジン(４ミリモル)をジメチルホルムアミド／テトラヒドロフラン(20ml＋５ml)に溶解し、ジシクロヘキシルカルボジイミドを添加した。反応混合物を周囲温度で一夜攪拌した。ジシクロヘキシル尿素を濾去し、溶媒をロータリーエバポレーターで蒸発させた。残存物をクロロホルムに溶解し、未溶解のジシクロヘキシル尿素を濾去し、溶媒をロータリーエバポレーターで除去した。残存物をシリカゲルカラム上に置き、Z-Ala−コレステロールをトルエン／石油エーテル(20 ：２)次いでトルエン／ジエチルエーテル(20：２)で溶離した。標題化合物を含有する画分を合わせ、溶媒をロータリーエバポレーターで除去した。生成物の構造はNMRで確認した。ｂ）Ala−コレステロール（３−Ｏ−(Ｌ−アラニル)コレステロール）の合成 Z-Ala−コレステロール(0.48ミリモル)をテトラヒドロフラン(20ml)および氷酢酸(３ml)中に入れ、２時間５％Pd／Cの存在下水素添加する。反応混合物を濾過し、真空下に濃縮する。ｃ）Boc-NH-PEG₃₄₀₀-Ala−コレステロールの合成 Ala−コレステロールをクロロホルム中のBoc-NH-PEG₃₄₀₀-SC(ｔ−ブチルカーバメートポリ(エチレングリコール)スクシンイミジルカーボネート)(shearwater )の溶液に添加し、次いでトリエチルアミンを添加する。懸濁液を10分間41℃で攪拌する。粗生成物をクロマトグラフィーで精製する。ｄ）H₂N-PEG₃₄₀₀-Ala−コレステロールの合成 Boc-NH-PEG₃₄₀₀-Ala−コレステロールを周囲温度で2.5時間ジオキサン中４Ｍ塩酸中で攪拌する。溶媒をロータリーエバポレーターで除去し、残存物をクロロホルムに溶解し、水で洗浄する。有機層をロータリーエバポレーターで蒸発乾固させる。粗生成物はクロマトグラフィーで精製してよい。ｅ）ビオチンアミドカプロエート−PEG₃₄₀₀-Ala−コレステロールの合成テトラヒドロフラン中のビオチンアミドカプロエートＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルの溶液をテトラヒドロフランおよびpH7.5の0.1Ｍリン酸ナトリウム緩衝液(２ml)に溶解したH₂N-PEG₃₄₀₀-Ala−コレステロールに添加する。反応混合物を30℃に加熱し、反応をTLCで完了が確認できるまで継続し、その後溶媒を蒸発させる。ｆ）ホスファチジルセリン、ホスファチジルコリンおよびビオチンアミドカプロエート−PEG₃₄₀₀-Ala−コレステロールでカプセル化された気体充填微小気泡の調製ホスファチジルセリンおよびホスファチジルコリン（合計90〜99.9モル％）およびビオチンアミドカプロエート−PEG₃₄₀₀-Ala−コレステロール（10−0 .1モル％）の混合物に、水中５％プロピレングリコールーグリセロール(１ml)を添加する。分散液を５分間80℃以下で加熱し、次に周囲温度に冷却した。次に分散液(0.8ml)をバイアル(１ml)に移し、ヘッドスペースをパーフルオロブタンでフラッシュする。バイアルを45秒間キャップミキサー中で振とうし、その後、試料をローラーテーブル上に乗せる。遠心分離後、下部清澄液を水と交換し、洗浄操作を反復する。ｇ）ホスファチジルセリン、ホスファチジルコリンおよびビオチンアミドカプロエート−PEG₃₄₀₀-Ala−コレステロールでカプセル化された気体充填微小気泡の調製の別法ホスファチジルセリンおよびホスファチジルコリンの混合物(５mg)を水中５％プロピレングリコール−グリセロール(１ml)に添加する。分散液を５分間80℃以下に加熱し、次いで周囲温度に冷却する。次に分散液(0.8ml)をバイアル(１ml) に移し、ヘッドスペースをパーフルオロブタンでフラッシュする。バイアルを45 秒間キャップミキサー中で振とうし、その後、試料をローラーテーブル上に乗せる。遠心分離後、下部清澄液を水と交換する。水に溶解したビオチンアミドカプロエート−PEG₃₄₀₀-Ala−コレステロールを洗浄した微小気泡に添加し、これを数時間ローラーテーブル上に置く。微小気泡膜内にビオチンアミドカプロエート −PEG₃₄₀₀-Ala−コレステロールを取り込んだ後、洗浄操作を反復する。実施例２ホスファチジルセリン、ホスファチジルコリン、ビオチンアミドカプロエート− PEG₃₄₀₀-Ala−コレステロールおよび薬物−コレステロールを含有する気体含有微小気泡ａ）薬物−コレステロールの合成コレステロール(４ミリモル)、酸基を有する薬物（コレステロールから誘導された薬物の一覧表については実施例４(ｂ)を参照）およびジメチルアミノピリジン(４ミリモル)をジメチルホルムアミド／テトラヒドロフラン(20m l＋５ml)に溶解し、ジシクロヘキシルカルボジイミドを添加する。反応混合物を周囲温度で一夜攪拌する。ジシクロヘキシル尿素を濾去し、溶媒をロータリーエバポレーターで蒸発させる。標題化合物をクロマトグラフィーで精製する。ｂ）ホスファチジルセリン、ホスファチジルコリン、ビオチンアミドカプロエート−PEG₃₄₀₀-Ala−コレステロールおよび薬物−コレステロールを含有する気体充填微小気泡の調製ホスファチジルセリンおよびホスファチジルコリン(合計90〜99.9モル％)およびビオチンアミドカプロエート−PEG₃₄₀₀-Ala−コレステロール（実施例１のとおり調製）および薬物−コレステロール(合計10〜0.1モル％)の混合物(５mg)に、水中５％プロピレングリコール−グリセロール(１ml)を添加する。分散液を５分間80℃以下で加熱し、次に周囲温度に冷却する。分散液(0.8ml)をバイアル(１ ml)に移し、ヘッドスペースをパーフルオロブタンでフラッシュする。バイアルを45秒間キャップミキサー中で振とうし、その後、試料をローラーテーブル上に乗せる。遠心分離後、下部清澄液を水と交換し、洗浄操作を反復する。実施例３気泡充填微小気泡に結合したビオチンビオチンは種々の方法、例えばCorley，P.およびLoughrey，H.C.，(1994)，Bi ochim．Biophys．Acta 1195，149-156に記載の方法と同様にして、微小気泡に結合してよい。形成した泡は例えばビオチンの気泡への結合を検出するため蛍光ストレプトアビジンを用いてフローサイトメトリーにより分析する。あるいは、放射標識または酵素標識ストレプトアビジン／アビジンを用いてビオチンの結合を分析する。実施例４ 1,2−ジスアロイル−sn−グリセロ−３−〔ホスホ−Ｌ−セリン〕およびビオチン−DPPEでカプセル化されたガス充填微小気泡 1,2−ジスアロイル−sn−グリセロ−３−〔ホスホ−Ｌ−セリン〕およびビオチン−DPPE 1,2−ジスアロイル−sn−グリセロ−３−〔ホスホ−Ｌ−セリン〕(Avantiのロット番号180PS-12、22.6mg)を水中４％のプロピレングリコール−グリセロール( ４ml)に添加した。分散液を80℃以下に５分間加熱し、次いで周囲温度に冷却した。４％のプロピレングリコール−グリセロールI(１ml)中のビオチン−DPPE(Pi erceのロット番号96092472、1.5mg)の水性分散液を添加しそして試料を１〜２時間ローラーテーブル上に置いた。懸濁液をバイアルに充填し、ヘッドスペースをパーフルオロブタンでフラッシュした。バイアルを45秒間振とうし、その後、ローラーテーブル上に置いた。７分間遠心分離後、下部清澄液を水と交換し、洗浄操作を２回反復した。蒸発光分散検出器を用いた正相HPLCによれば、微小気泡の膜は４モル％のビオチン−DPPEを含有していることが確認された。微小気泡の平均粒径はクールターカウンター(Coulter Counter)で測定したところ４μmであった。3.5mHz広帯域変換器を用いて測定した超音波伝導によれば＜２mg／mlの粒子の分散が５dB／cmより高度な音波の減衰を示した。実施例５ホスファチジルセリンおよびストレプトアビジン−Succ-PEG-DSPEに非共有結合したビオチニル化抗体によりカプセル化された気体充填微小気泡ａ）Succ-PEG₃₄₀₀-DSPEの合成 NH₂-PEG₃₄₀₀-DSPE(実施例１に記載のとおり調製)を例えばNayer，R.およびSch roit，A.J.，Biochemistry（1985）24，5967-71に記載の方法と同様にして無水コハク酸を用いてカルボキシル化する。ｂ）ホスファチジルセリンおよびSucc-PEG₃₄₀₀-DSPEでカプセル化された気体充填微小気泡の調製ホスファチジルセリン(90〜99.9モル％)およびSucc-PEG₃₄₀₀-DSPE(10〜 0.1モル％)の混合物(５mg)に水中５％プロピレングリコール−グリセロール(１m l)を添加する。分散液を５分間80℃以下で加熱し、次に周囲温度に冷却する。分散液(0.8ml)をバイアル(１ml)に移し、ヘッドスペースをパーフルオロブタンでフラッシュする。バイアルを45秒間キャップミキサー中で振とうし、その後、試料をローラーテーブル上に乗せる。遠心分離後、下部清澄液を水と交換し、洗浄操作を反復する。あるいは、微小気泡は実施例１(f)に記載のとおり調製してもよい。ｃ）ホスファチジルセリンおよびSucc-PEG₃₄₀₀-DSPEでカプセル化された気体充填微小気泡へのストレプトアビジンのカップリング水溶性カルボジイミドを用いた標準カップリング法により膜内のSucc-PEG₃₄₀₀ -DSPEにストレプトアビジンを共有結合させる。反応中は試料をローラーテーブル上に置く。遠心分離後、下部清澄液を水と交換し、洗浄操作を反復する。結合したストレプトアビジンの官能基は例えば蛍光標識ビオチン、ビオチニル化抗体 (蛍光標識二次抗体で検出)またはビオチニル化され蛍光標識または放射標識されたオリゴヌクレオチドに結合させることにより分析する。分析は蛍光顕微鏡観察またはシンチレーション計数により行なう。ｄ）ホスファチジルセリンおよびストレプトアビジン−Succ-PEG-DSPEに非共有結合したビオチンによりカプセル化された気体充填微小気泡の調製上記(c)の微小気泡をビオチニル化ベクター、例えばビオチニル化薬物、炭水化物、修飾されたオリゴ、阻害剤等を含有する溶液中でインキュベートする。ベクターコーティング微小気泡を上記したとおり洗浄する。実施例６ホスファチジルセリンおよびストレプトアビジン−Succ-PEG-DSPEに非共有結合したビオチニル化オリゴヌクレオチドによりカプセル化された気体充填微小気泡ａ）Succ-PEG₃₄₀₀-DSPEの合成 NH₂-PEG₃₄₀₀-DSPE(実施例１に記載のとおり調製)を例えばNayer，R.およびSch roit，A.J.，Biochemistry（1985）24，5967-71に記載の方法と同様にして無水コハク酸を用いてカルボキシル化する。ｂ）ホスファチジルセリンおよびSucc-PEG₃₄₀₀-DSPEでカプセル化された気体充填微小気泡の調製ホスファチジルセリン(90〜99.9モル％)およびSucc-PEG₃₄₀₀-DSPE(10〜0.1モル％)の混合物(５mg)に水中５％プロピレングリコール−グリセロール(１ml)を添加する。分散液を５分間80℃以下で加熱し、次に周囲温度に冷却する。分散液 (0.8ml)をバイアル(１ml)に移し、ヘッドスペースをパーフルオロブタンでフラッシュする。バイアルを45秒間キャップミキサー中で振とうし、その後、試料をローラーテーブル上に乗せる。遠心分離後、下部清澄液を水と交換し、洗浄を反復する。あるいは、微小気泡は実施例１(f)に記載のとおり調製してもよい。ｃ）ホスファチジルセリンおよびSucc-PEG₃₄₀₀-DSPEでカプセル化された気体充填微小気泡へのストレプトアビジンのカップリング水溶性カルボジイミドを用いた標準カップリング法により微小気泡内のSucc-P EG₃₄₀₀-DSPEにストレプトアビジンを共有結合させる。反応中は試料をローラーテーブル上に置く。遠心分離後、下部清澄液を水と交換し、洗浄を反復する。結合したストレプトアビジンの官能基は例えば蛍光標識ビオチン、ビオチニル化抗体(蛍光標識二次抗体で検出)またはビオチニル化され蛍光標識または放射標識されたオリゴヌクレオチドに結合させることにより分析する。分析は蛍光顕微鏡観察またはシンチレーション計数により行なう。ｄ）ホスファチジルセリンおよびストレプトアビジン−Succ-PEG-DSPEに非共有結合したビオチニル化オリゴヌクレオチドによりカプセル化された気体充填微小気泡の調製上記(c)の微小気泡をビオチニル化オリゴヌクレオチドを含有する溶液中でインキュベートする。オリゴヌクレオチドコーティング気泡を上記のとおり洗浄する。気泡へのオリゴヌクレオチドの結合は例えば気泡への結合のための蛍光標識オリゴヌクレオチドを用いるか、結合したオリゴヌクレオチドを標識された(蛍光または放射性)相補オリゴヌクレオチドにハイブリダイズするかして検出する。オリゴヌクレオチド担持微小気泡の官能基は、例えば結合したオリゴヌクレオチドに対して相補的な配列を含む固定化DNAで気泡をハイブリダイズすることにより、分析する。例えば(一倍性ゲノムあたりのコピーが多数存在する)リボソームDNAに相補的なオリゴヌクレオチドおよび(rasの一倍性ゲノムあたりのコピーが多数存在する)オリコジーンに相補的なオリゴヌクレオチドを使用してよい。実施例７ホスファチジルセリンおよび葉酸(folate)-PEG-Succ-DSPEでカプセル化された気体充填微小気泡ａ）葉酸(folate)-PEG-Succ-DSPEの合成葉酸(folate)-PEG-Succ-DSPEはLee，R.J.およびLow，P.S.，(1995)Biochimica ．Biophysica．Acta 1233，134-144に記載のとおり合成する。ｂ）ホスファチジルセリンおよび葉酸(folate)-PEG-Succ-DSPEでカプセル化された気体充填微小気泡の調製ホスファチジルセリン(90〜99.9モル％)および葉酸(folate)-PEG-Succ-DSPE(1 0〜0.1モル％)の混合物(５mg)に水中５％プロピレングリコール−グリセロール( １ml)を添加する。分散液を５分間80℃以下で加熱し、次に周囲温度に冷却する。分散液(0.8ml)をバイアル(１ml)に移し、ヘッドスペースをパーフルオロブタンでフラッシュする。バイアルを45秒間キャップミキサー中で振とうし、その後、試料をローラーテーブル上に乗せる。遠心分離後、下部清澄液を水と交換し、洗浄を反復する。あるいは、微小気泡は実施例１(e)または(f)に記載のとおり調製する。葉酸の結合の分析は例えば種々の濃度で葉酸受容体を発現する細胞への葉酸含有微小気泡の結合を顕微鏡観察することにより行なってよい。実施例８エチリデンビス(16−ヒドロキシヘキサデカノエート)およびアシポイルクロライドからのポリマーとこのポリマーに共有結合的に結合しているビオチン−アミドカプロエート−Alaとを含むガス含有微細粒子ａ）Z-Ala−ポリマー(３−Ｏ−(カルボベンジルオキシ−Ｌ−アラニル)−ポリマー)の合成このポリマーはエチリデンビス（16−ヒドロキシヘキサデカノエート）とアジポイルクロライドとからWO-A-9607434に記載のように製造し、また分子量が1000 0であるポリマー画分をゲル浸透クロマトグラフィーを用いて精製した。この物質10ｇ(OH基１ミリモルに相当する)、Ｚ−アラニン(５ミリモル)およびジメチルアミノピリジン(４ミリモル)を乾燥ジメチルホルムアミド／テトラヒドロフラン中に溶解し、次いでジシクロヘキシルカルボジイミドを添加した。反応混合物を周囲温度で一晩撹拌した。ジシクロヘキシル尿素を濾過して除去しそして回転乾燥を用いて溶媒を除去した。クロマトグラフィーにより生成物を精製し、標題の化合物を含有する画分を一緒にしそして回転蒸発器を用いて溶媒を除去した。生成物の構造をNMRにより確認した。ｂ）Ala−ポリマー(３−Ｏ−(Ｌ−アラニル)−ポリマー)の合成 Z-Ala−ポリマー(0.1ミリモル)をトルエン／テトラヒドロフランおよび氷酢酸（全容積の15％）中で撹拌しそして木炭上の５％パラジウムの存在で２時間水素化した。反応混合物を濾過しそして真空濃縮した。ｃ）ビオチンアミドカプロエート−Ala−ポリマーの合成テトラヒドロフラン中のビオチンアミドカプロエートＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルの溶液を、テトラヒドロフランとジメチルホルムアミドとの混合物およびpHが7.5である0.1Ｍの燐酸ナトリウムの中に溶解したH₂N-Ala−ポリマーに添加した。反応混合物を30℃に加熱しそして激しく撹拌した。TLCによって反応の完結を追跡した。溶媒を蒸発しそして粗生成物をさらに精製しないで使用した。ｄ）ビオチンアミドカプロエート−Ala−ポリマーとPEG 10000メチルエーテル16 −ヘキサデカノイルオキシヘキサデカノエートとを含むガス含有粒子 60℃に保たれた(−)−カンフェン中のビオチン−アミドカプロエート−Ala− ポリマーの５重量／重量％溶液10mlを、同じ温度のPEG 10000メチルエーテル16 −ヘキサデカノイルオキシヘキサデカノエート（WO-A-9607434中に記載のように製造した）の１重量／重量％の水溶液30mlに添加した。し、その後、乾燥した氷／メタノールの浴中で凍結しそして48時間凍結乾燥し、標題の生成物を白色粉末として得た。ｅ）生成物の音響的特性および検鏡 WO-A-9607434に記載のように、光学顕微鏡を使用して、生成物の微細粒子的性質の確認を行った。3.5MHzの広域変換器を使用して超音波透過測定をすると、２ mg／mlより少ない粒子懸濁液が少なくとも５dB／cmの音波ビーム減衰が得られた。実施例９ホスファチジルセリン、ホスファチジルコリンおよび３β−〔Ｎ−(N',N'−ジメチルアミノエタン)カルバモイル〕コレステロールでカプセル化されたガス充填微小気泡パーフルオロブタンを含有する単層−カプセル化微小気泡を10％のホスファチジルセリン、50〜80％のホスファチジルコリン(PC)および10〜40％の３β−〔Ｎ −(N',N'−ジメチルアミノエタン)−カルバモイル〕コレステロール(DC-chol)の混合物から作った。(Farhood，H.，Gao，X，Barsoum，JおよびHuang，L.，Anal ．Biochem．225，89〜93ページ(1995 年))。実施例 10 ガス充填アルブミンミクロスフェア(GAM)のビオチンによる官能性付与すべての操作を室温で実施して、５mg／mlのアルブミン中のGAMの均質な懸濁液（６×10⁸粒子／ml）を使用した。二つの10mlの一部分量を遠心分離して(170 ｇ、５分)、ミクロスフェアの浮遊を促進しそして下にある８mlの下部清澄部を注意深く吸引することにより除去しそして等容量の空気で飽和され燐酸塩で緩衝された塩水でおきかえ、調製物を15〜20分回転してミクロスフェアを再び懸濁した。この操作を２度反復したが、その後はほんの無視可能な量でしか遊離のミクロスフェアを同伴しないアルブミンは残留しないと考えられた。一部分量の一つにNHS−ビオチン（ジメチルスルホキシド中の10mM）を50μl添加した(最終的な濃度は50μl)。他の(対照用の)一部分量には50μlのジメチルスルホキシドを入れた。試料の入ったいくつかの管を１時間回転し、その後、50％のグルタルアルデヒド水溶液の20μlの部分をそれぞれの管に添加してミクロスフェアを架橋した。さらに１時間回転した後、管を垂直にして一晩放置してミクロスフェアを浮遊させた。次の日、懸濁液を１mlあたり１mgのヒト血清アルブミンを含有する燐酸塩で緩衝された塩水(PBS／HSA)で２回洗浄しそして最後の遠心分離の後、PBS／HSA中で再び懸濁した。ミクロスフェアに同伴するビオチンの存在を知るために、西洋ワサビペルオキシダーゼにコンジュゲートされたストレプタビジン(strep-HRP)を両方の懸濁液に添加しそして反応させるために管を１時間回転した。次にミクロスフェアを３回洗浄し、0.1mg／mlのフェニレンジアミンジハイドロクロライドと0.01％の過酸化水素を含有する100mlのくえん酸塩−燐酸塩緩衝液(pH５)中に再び懸濁し、そして10分間回転した。黄緑色の発現は酵素の存在を示した。以下の結果を得た。試料発色ビオチニル化されたミクロスフェア＋strp-HRP 2＋対照ミクロスフェア＋strp-HRP ＋以上によりGAMがビオチニル化されたことが確認された。実施例 11 診断治療的応用のための、カプトプリル含有分子を含むジステアロイルホスファチジルセリンでカプセルにつめたガス充填微小気泡ａ）カプトプリルで官能性を付与されたリポペプチドの合成上記構造は0.125ミリモルスケール上Fmoc保護Rink Amide MBHA樹脂(Novabioch em)を出発物質としマニュアルの窒素バブラー法を用いて合成した。アミノ酸はすべてNovabiochemから、またパルミチン酸はFlukaから購入した。標準的なTBTU ／HOBt／DIEA法を用いてカップリングを行った。ブロモ酢酸をDIC予備活性化を用いて対象無水物としてLysの側鎖を介してカップリングさせた。DMFに溶解したカプトプリルを塩基としてDBUを用いながら固相上に導入した。樹脂からのペプチドの除去および側鎖保護基の脱保護は、２時間５％EDT、５％水および５％エチルメチルスルフィドを含有するTFA中で同時に行った。粗生成物の内10mgを、流量10ml／分で60分間にわたり70〜100％Ｂ(Ａ＝0.1％TFA／水およびＢ＝0.1％T FA／アセトニトリル)の勾配による調製用HPLCで精製した。凍結乾燥の後、純粋な物質２mg を得た(分析用HPLC、勾配70〜100％Ｂ，20分間、Ａ＝0.1％TFA／水、Ｂ＝0.1％ TFA／アセトニトリル、流量１ml／分、検出−UV214nm−保持時間26分)。更に同定するためにMALDI質量スペクトル分析を行ったところ、M+Hの理論値1265が得られた。ｂ）カプトプリルを含有する化合物を含むジステアロイル−ホスファチジルーセリンのガス含有微小気泡の調製ジステアロイル−ホスファチジル−セリン(Avanti，4.5mg)とa)の生成物(0.5m g)とのバイアル中の混合物に1.4％プロピレングリコール／2.4％グリセロールの溶液(1.0ml)を添加した。混合物を５分間超音波処理し次いで５分間80℃に温めた(加温中にバイアルを振盪した)。バイアルを冷却しそしてヘッドスペースをパーフルオロブタンガスでフラッシュした。バイアルをキャップミキサー内で45秒間振盪し、続いて蒸溜水で十分に洗浄した。MALDI質量分析法によると、最終的な洗浄溶液中のa)の化合物の水準が検出不能であることが示された。カプトプリル含有リポペプチドが気泡内に含まれていることは以下のようにしてMALDI質量分析法によって確認した。約100μlの90％メタノールの入ったバイアルに約50μlの微小気泡を移し入れた。混合物を30秒間超音波処理しそしてMAL DI質量分析法を行ない、a)のリポペプチドに相当するM+Hピークを得た。実施例 12 診断および治療に応用するための、アドレナリン作動性受容体との親和性のあるベクターを含むホスファチジル−セリンでカプセル化されたガス充填微小気泡ａ）固相カップリングに適する保護アテノロール誘導体の合成ｉ）メチル４−[(2,3−エポキシ)プロポキシ]−フェニルアセテートの合成メチル４−ヒドロキシフェニルアセテート(4.98ｇ，0.030モル)、エピクロロヒドリン(23.5ml，0.30モル)およびピリジン(121μl，1.5ミリモル)の混合物を２時間85℃で攪拌した。反応混合物を冷却し、過剰のエピクロロヒドリンを留去した(ロタベーパー(rotavapor))。残存物を酢酸エチルに溶解し、塩水で洗浄し、乾燥(Na₂SO₄)した。溶液を濾過し、濃縮した。暗色の残存物をクロマトグラフィー（シリカ、ヘキサン／酢酸エチル７：３）に付し、無色油状物2.25ｇ(34％) を得た。¹H(300MHz)および¹³CNMR(75MHz)のスペクトルは構造と合致していた。 ii）メチル４−［２−ヒドロキシ−３−[(１−メチルエチル)アミノ]プロポキシ］フェニルアセテートの合成メチル４−[(2,3−エポキシ)プロポキシ]フェニルアセテート(2.00ｇ，9.00ミリモル)、イソプロピルアミン(23ml，0.27モル)および水(1.35ml，74.7ミリモル )の混合物を一夜室温で攪拌した。反応混合物を濃縮(ロタベーパー)し油状の残存物をクロロホルムに溶解し、乾燥(Na₂SO₄)した。濾過し、濃縮して定量的に得られた黄色油状物を更に精製することなく次段階で使用した。構造は¹Hおよび¹³ CNMR分析で確認された。 iii）４−[２−ヒドロキシ−３−[(１−メチルエチル)アミノ]プロポキシ]フェニル酢酸塩酸塩の合成メチル４−[２−ヒドロキシ−３−[(１−メチルエチル)アミノ]プロポキシ]フェニルアセテート(563mg，2.00ミリモル)の６Ｍ塩酸(15ml)中の溶液を４時間100 ℃で加熱した。反応混合物を濃縮(ロタベーパー)し、残存物を水に溶解し、凍結乾燥した。¹Hおよび¹³C NMRのスペクトルは構造と合致しており、MALDI質量スペクトル分析によりれば理論値どおりM+H 268であった。 iv）N-Boc−４−[２−ヒドロキシ−３−[(１−メチルエチル)アミノ]プロポキシ］フェニル酢酸の合成水(２ml)中４−[２−ヒドロキシ−３−[(１−メチルエチル)アミノ]プロポキシ]フェニル酢酸塩酸塩(2.0ミリモル)の溶液を水／ジオキサン(２：１，1 5ml)中の重炭酸ナトリウム(0.60g，7.2ミリモル)の溶液に添加した。ジオキサン (５ml)中のジ−ｔ−ブチルジカーボネート(0.48ｇ，2.2ミリモル)の溶液を添加した。TLC分析(シリカ、CHCl₃／MeOH／AcOH 85：10：５)により反応の進行をモニターし、変換が終了するまでジ−ｔ−ブチルジカーボネートを少しづつ添加した。反応混合物を硫酸水素カリウムで飽和した水上に注ぎこみ、有機物を酢酸エチルに抽出した。有機相を水および塩水で洗浄し、乾燥(Na₂SO₄)し、濾過し、粗製物質0.6ｇを得た。生成物をクロマトグラフィー(シリカ、CHCl₃／MeOH／AcOH 85：10：５)で精製した。溶液を濃縮し、残存物を氷酢酸に溶解し、凍結乾燥した。収量415mg(56％)、白色固体。構造は¹Hおよび¹³CNMR分析で確認した。ｂ）アテノロールで官能性付与されたリポペプチドの合成上記構造はマニュアルのバブラー法によりFmoc−保護RinkアミドMBHA樹脂(Nov abiochem)を出発物質として、0.125ミリモルスケール上で、Novabiochemのアミノ酸、Flukaのパルミチン酸および段階(a)の化合物を用いて合成した。標準的な TBTU／HOBt／DIEA法を用いてカップリングを行った。樹脂からのペプチドの除去と側鎖保護基の脱保護は、５％EDTおよび５％水を含有するTFA中で２時間同時に行なった。粗製物質をエーテルから沈殿させ、流量10ml／分で60分間にわたり70 〜100％Ｂ(Ａ＝0.1％TFA／水およびＢ＝0.1％ THF／アセトニトリル)の勾配による調製用液体クロマトグラフィー(Vydac 218TP1022カラム)で精製した。凍結乾燥の後、純粋な物質38mgを得た(分析用HPLC、20分間にわたり70〜100％Ｂの勾配、Ａ＝0.1％ TFA／水、Ｂ＝0.1％ THF／アセトニトリル、流量１ml／分、検出UV21 4nm、保持時間25分)。更に同定するためにMALDI質量スペクトル分析(ACHマトリックス)を行ったところ、理論値1257のところ実測値はM+H1258であった。ｃ）DSPSおよびアテノロール含有リポペプチドを含むジステアロイル−ホスファチジル−セリンの気体含有微小気泡の調製 1.4％プロピレングリコール／2.4％グリセロールの溶液(1.0ml)をバイアル中のDSPS(4.5mg)および段階(b)の生成物(0.5mg)の混合物に添加した。混合物を５分間音波処理し、５分間80℃に加熱し（加温中はバイアルを振とう）、次に冷却した。ヘッドスペースをパーフルオロブタンガスでフラッシュし、バイアルを45 秒間キャップミキサー中で振とうし、その後、内容物を脱イオン水で十分洗浄した。MALDI質量スペクトル分析によれば、最終洗液には段階(b)の化合物は検出可能な濃度では存在しなかった。 MALDI-MSにより微小気泡へのアテノロール含有リポペプチドの取込を確認するために、約50μlの微小気泡を90％メタノール約100μlの入った新しいバイアルに入れた。混合物を30秒間音波処理し、MALDI-MS(ACH−マトリックス)で分析したところ、段階(b)のリポペプチドに相当する1259のM+Hピークがみとめられた。ｄ）アテノールを含有するリポペプチドで「ドープされた」ジステアロイル−ホスファチジル−セリンのガス含有微小気泡のインビトロ研究正常な臍帯から得たヒト内皮細胞系ECV304(ATCC CRL-1998)を、260mlのNunc培養フラスコ内で、Ｌ−グルタミン(200mM)、ペニシリン／ストレプトマイシン(10 ,000Ｕ／mlおよび10,000mcg／ml)および10％ウシ胎児血清(Hycloneロット番号AF E 5183)を添加したRPMI 1640培地(Bio Whittaker)中で培養した。集密状態に達する時のスプリット比を１：５〜１：７として細胞を継代培養した。直径22ミリのカバーガラスを滅菌し、そして12ウエルの培養プレート(Costar)の底部に置いた後、血清を加えた完全培地0.5ml中の細胞をプレート上に添加した。細胞が集密状態に達した時、特注でつくったフローチャンバー内にカバースリップを入れた。このチャンバーはそれにつくりこまれたガラス板に切り込まれた溝を有する。細胞の付いたカバースリップを、細胞が溝に向かいあうようにこの板の上におき、これによって流路を形づくった。上記のc)からの微小気泡を37℃に保ったリザーバーからフローチャンバーに通しそして蠕動ポンプを経てリザーバーに戻した。流量は生理学的に妥当な任意の剪断速度を模擬するように調節可能であった。フローチャンバーを顕微鏡下においたので、ミクロスフェアと細胞との相互作用を直接視認できた。顕微鏡に取付けたカメラをカラービデオプリンターおよびモニターに接続した。細胞への微小気泡の蓄積が流速に依存しつつ徐々に起きた。流速を増加すると、細胞がカバースリップから離脱しはじめたが、微小気泡は依然として細胞に結合していた。ベクターを担持していない対照の気泡は内皮細胞に付着せず、また最少流量の条件下で細胞から消失した。実施例 13 診断および／または治療に応用するための、アドレナリン作動受容体に対する親和性を有するアテノロールの親油性誘導体を含むホスファチジルセリンでカプセル化されたガス充填微小気泡ａ）Ｎ−ヘキサデシル−４−[２−ヒドロキシ−３−[(１−メチルエチル)アミノ ]プロポキシ]フェニルアセトアミドの合成 DMF(５ml)中のN-Boc−４−[２−ヒドロキシ−３−[(１−メチルエチル)アミノ ]プロポキシ]フェニル酢酸(実施例12で調製したもの)(92mg，0.25ミリモル)およびヘキサデシルアミン(60mg，0.25ミリモル)の溶液を０℃に冷却した。HOBt(39m g，0.25ミリモル)およびＮ−(３−ジメチルアミノプロピル)−N'−エチルカルボジイミド塩酸塩(水溶性カルボジイミド)(48mg，0.25ミリモル)を添加した。反応混合物を１時間０℃で、次いで一夜室温で攪拌した。反応混合物を炭酸ナトリウム(2.5ｇ)および塩化ナトリウム(4. 0ｇ)を含有する水(25ml)に注ぎこんだ。沈殿した物質を濾過し、水で洗浄、クロロホルムに溶解した。クロロホルム相を５％炭酸ナトリウムおよび水で洗浄し、乾燥(Na₂SO₄)した。溶液を濾過し、濃縮して黄白色の粗製物質150mgを得た。生成物をカラムクロマトグラフィー(シリカ、クロロホルム／メタノール95：５)で精製し、白色物質118mg(80％）を得た。構造は¹H(500MHz)および¹³C(125MHz)NMR で確認した。この生成物をMALDI質量スペクトルで更に同定したところM+Naのピークが理論値の614でみとめられた。 vi）Ｎ−ヘキサデシル−４−[２−ヒドロキシ−３−[(１−メチルエチル)アミノ ]プロポキシ]フェニルアセトアミドの合成ジクロロメタン(９ml)中のN'-Boc−Ｎ−ヘキサデシル−４−[２−ヒドロキシ −３−[(１−メチルエチル)アミノ]プロポキシ]フェニルアセトアミド(10mg)の溶液に、トリフルオロ酢酸(１ml)を添加した。反応混合物を２時間室温で攪拌した。TLC(シリカ、クロロホルム／メタノール95：５)によれば、出発物質の完全な変換がみとめられた。溶媒を蒸発させて除去し、残存物を水／アセトニトリルに溶解し、凍結乾燥して定量的な収量で白色固体を得た。構造は¹H(500MHz)および¹³C(125MHz)のNMR分析で確認し、更にMALDI質量スペクトルで同定したところ理論値どおりM+Hが492、M+Naが514にみとめられた。ｂ）診断治療用途のためのDSPSおよびＮ−ヘキサデシル−４−［２−ヒドロキシ −３−[(１−メチルエチル)アミノ]プロポキシ］フェニルアセトアミドを含有する気体充填微小気泡の調製 1.4％プロピレングリコール／2.4％グリセロールの溶液(1.0ml)をバイアル中のDSPS(4.5mg)およびＮ−ヘキサデシル−４−[２−ヒドロキシ−３−[(１−メチルエチル)アミノ]プロポキシ]フェニルアセトアミド(0.5mg)の混合物に添加した。混合物を５分間音波処理し、次に５分間80℃に加熱した(加温中はバイアルを振とう)。溶液を濾過し、冷却した。ヘッドスペースをパーフルオロブタンガスでフラッシュし、バイアルを45秒間キャップミキサー中で振とうし、その後、内容物を脱イオン水で十分洗浄した。 MALDI-MSにより微小気泡への段階(a)の化合物の取込を確認するために、約50 μlの微小気泡を90％メタノール約100μlの入った新しいバイアルに入れた。混合物を30秒間音波処理し、MALDI-MSで分析したところ、Ｎ−ヘキサデシル−４− ［２−ヒドロキシ−３−[(１−メチルエチル)アミノ]プロポキシ］フェニルアセトアミドに相当する492にM+Hのピークがみとめられた。実施例 14 診断用途のための、ホスファチジル−セリンおよび葉酸含有化合物でカプセル化された気体充填微小気泡ａ）葉酸を含有するリポペプチドの合成上記構造はマニュアルのバブラー法によりFmoc−保護RinkアミドMBHA樹脂（No vabiochem）を出発物質として、0.125ミリモルスケールで、Novabiochemのアミノ酸、Flukaのパルミチン酸およびAcrosの葉酸を用いて合成した。標準的なTBTU ／HOBt／DIEA法を用いてカップリングを行った。樹脂からのペプチドの除去と側鎖保護基の脱保護は、５％EDTおよび５％水を含有するTFA中で２時間同時に行なった。粗製物質をエーテルから沈殿させ、MALDI質量スペクトル分析をおこなったところ理論値1430に対し1435に構造に相当するM+Hピークがみとめられた。物質を更に分析用HPLC で20分間にわたり70〜100％Ｂ勾配、Ａ＝0.1％ TFA／水およびＢ＝0.1％ TFA／アセトニトリル、流量1.0ml／分の条件で同定したところ、UV368nmで検出される保持時間27分の生成物のピークがみとめられた。ｂ）葉酸含有リポペプチドを含むジステアロイル−ホスファチジル−セリンの気体含有微小気泡の調製 1.4％プロピレングリコール／2.4％グリセロールの溶液(1.0ml)をバイアル中のDSPS(4.5mg)および段階(a)の生成物(0.5mg)の混合物に添加した。希アンモニア(pH８まで)およびDMSO(40μl)を添加し、混合物を５分間音波処理し、次に５分間80℃に加熱した(加温中はバイアルを振とう)。溶液を濾過し、冷却した。ヘッドスペースをパーフルオロブタンガスでフラッシュし、バイアルを45秒間キャップミキサー中で振とうし、その後、内容物を脱イオン水で十分洗浄した。MALD I-MSにより微小気泡への段階(a)の構造の取込を確認するために、約50μlの微小気泡を90％メタノール約100μlの入った新しいバイアルに入れた。混合物を30秒間音波処理し、MALDI-MS(ACH−マトリックス)で分析したところ、段階(a)の構造に相当する1238にM+Hのピークがみとめられた。ｃ）葉酸含有リポペプチドで「ドープ」されたジステアロイル−ホスファチジル −セリンのガス含有微小気泡のインビトロ研究ヒト内皮細胞系ECV 304を実施例12に記載したように増殖させた。直径22ミリのカバーガラスを滅菌し、そして12ウエルの培養プレート(Costar)の底部に置いた後、血清を加えた完全培地0.5ml中の細胞をプレート上に添加した。細胞が集密状態に達した時、特注でつくったフローチャンバー内にカバースリップを入れた。このチャンバーはそれにつくりこまれたガラス板に切り込まれた溝を有する。細胞の付いたカバースリップを、細胞が溝に向かいあうようにこの板の上におき、これによって流路を形づくった。上記のb)からの微小気泡を37℃に保ったリザーバーからフローチャンバーを通しそして蠕動ポンプを経てリザーバーに戻した。流量は生理学的に妥当な任意の剪断速度を模擬するように調節可能であった。フローチャンバーを顕微鏡下においたので、ミクロスフェアと細胞との相互作用を直接視認できた。顕微鏡に取付けたカメラをカラービデオプリンターおよびモニターに接続した。細胞への微小気泡の蓄積が流速に依存しつつ徐々に起きた。流速を増加すると、細胞がカバースリップから離脱しはじめたが、微小気泡は依然として細胞に結合していた。ベクターを担持していない対照の気泡は内皮細胞に付着せず、また最少流量の条件下で細胞から消失した。実施例 15 診断および／または治療に応用するための、クロラムブシルのコレステアリルエステルを含有するジステアロイル−ホスファチジル−セリンのガス充填微小気泡ａ）コレステリル４−［４−[ビス(２−クロロエチル)アミノ]フェニル］ブタノエートの合成 DIC(170μ，1.10ミリモル)を乾燥ジクロロメタン(15ml)中のクロラムブシル(6 69mg，2.20ミリモル)の溶液に添加した。混合物を室温で0.5時間攪拌し、ジクロロメタン(10ml)中のコレステロール（387mg，1.00ミリモル）およびDMAP(122mg ，1.00ミリモル)の溶液に添加した。反応混合物を一夜攪拌し、次に５％重炭酸ナトリウムに注ぎ込んだ。相を分離させ、有機相を塩水で洗浄し、乾燥(MgSO₄) した。溶液を濾過し、濃縮し、生成物をカラムクロマトグラフィー(シリカ、クロロホルム)で精製し、無色油状物560mg(83％)を得た。生成物をMALDI質量スペクトルで同定し、理論値どおり674にM+Hがみとめられた。¹H(500MHz)および¹³C( 125NHz)のNMRで更に同定したところ、構造に応じたスペクトルが得られた。ｂ）診断および／または治療に応用するための、クロラムブシルのコレステリルエステルを含むジステアロイル−ホスファチジル−セリンのガス含有微小気泡の調製 1.4％プロピレングリコール／2.4％グリセロールの溶液(1.0ml)をバイアル中のジステアロイル−ホスファチジル−セリン(Avanti，4.5mg)および段階(a)の生成物(0.5mg)の混合物に添加した。混合物を５分間音波処理し、次に５分間80℃ に加熱し（加温中はバイアルを振とう）、冷却した。ヘッドスペースをパーフルオロブタンガスでフラッシュし、バイアルを45秒間キャップミキサー中で振とうし、その後、内容物を脱イオン水で十分洗浄した。MALDI質量スペクトルによれば最終洗液中には段階(a)の化合物は検出可能な濃度では存在しなかった。 MALDI-MSにより微小気泡へのクロラムブシルコレステリルエステルの取込を確認するために、約50μlの微小気泡を90％メタノール約100μlの入った新しいバイアルに入れた。混合物を30秒間音波処理し、MALDI-MSで分析したところ、段階 (a)の構造に相当する668にM+Hのピークがみとめられた。実施例 16 診断および治療に応用するための、アテノロールを含有するリポペプチドとクロラムブシルのコレステロール誘導体を含むホスファチジル−セリンでカプセルにつめられたガス充填微小気泡本例は標的設定のための非ペプチドベクターに加えて治療用の部分を含む微小気泡を提供することに関する。アテノロールで官能性付与されたリポペプチドを実施例12のように合成しそしてクロラムブシルのコレステロールエステルを実施例15におけるように合成した。ａ）アテノロールを含有するリポペプチドとクロラムブシルのコレステリルエステルを含むホスファチジル−セリンでカプセルにつめられた微小気泡の調製 1.4％プロピレングリコール／2.4％グリセロールの溶液(1.0ml)を、バイアル中のジステアロイル−ホスファチジル−セリン(Avanti，5.0mg)、アテノロールで官能性付与されたリポペプチド(0.5mg)およびクロラムブシルコレステリルエステル(0.5mg)の混合物に添加した。混合物を５分間超音波処理し次いで80℃に５分間温めた(加温中バイアルを振盪した)。溶液を濾過しそして冷却した。ヘッドスペースをパーフルオロブタンガスでフラッシュしそしてバイアルをキャップミキサー中で45秒間振盪し、続いて蒸溜水で十分に洗浄した。アテノロールを含有するリポペプチドとクロラムブシルコレステリルの気泡への取り込みは以下のようにMALDI質量分析法によって確認した。約50μlの微小気泡を、約100μlの90％メタノールの入った清浄なバイアルに移し入れた。混合物を30秒間超音波処理しそしてACH−基質を用いてMALDI質量分析法によって分析した。ｂ）診断および治療に応用するための、アテノロールを含有するリポペプチドとクロラムブシルのコレステロール誘導体を含むホスファチジル−セリンでカプセルにつめられたガス含有微小気泡のin vitro分析ヒト内皮細胞系ECV 304を実施例12に記載したように増殖した。直径22ミリのカバーガラスを滅菌し、そして12ウエルの培養プレート(Costar)の底部に置いた後、血清を加えた完全培地0.5ml中の細胞をプレート上に添加した。細胞が集密状態に達した時、特注でつくったフローチャンバー内にカバースリップを入れた。このチャンバーはそれにつくりこまれたガラス板に切り込まれた溝を有する。細胞の付いたカバースリップを、細胞が溝に向かいあうようにこの板の上におき、これによって流路を形づくった。上記のa)からの微小気泡を37℃に保ったリザーバーからフローチャンバーに通しそして蠕動ポンプを経てリザーバーに戻した。流量は生理学的に妥当な任意の剪断速度を模擬するように調節可能であった。フローチャンバーを顕微鏡下においたので、ミクロスフェアと細胞との相互作用を直接視認できた。顕微鏡に取付けたカメラをカラービデオプリンターおよびモニターに接続した。流速に依存しつつ微小気泡が細胞に徐々に蓄積した。流速を増加すると、細胞がカバースリップから離脱しはじめたが、微小気泡は依然として細胞に結合していた。ベクターを担持していない対照の気泡は内皮細胞に付着せず、また最少流量の条件下で細胞から消失した。実施例 17 診断および治療に応用するための、アテノロールのコレステロール誘導体を含むホスファチジル−セリンでカプセルにつめられたガス充填微小気泡ａ）コレステリルN-Boc−β−アラニネートの合成 DIC(510μl)を不活性雰囲気下ジクロロメタン(15ml)中のBoc-β-Ala-OH（1.25 ｇ，6.60ミリモル）の溶液に添加した。反応混合物を30分間攪拌し、次にジクロロメタン（15ml）中のコレステロール(1.16ｇ，3.00ミリモル)およびDMAP(367mg ，3.00ミリモル)の溶液の入ったフラスコに移した。反応混合物を２時間攪拌し、次に硫酸水素カリウムの水溶液に注ぎこんだ。相を分離させた後、水相をクロロホルムで抽出した。合わせた有機相を硫酸水素カリウム水溶液および水で洗浄し、乾燥(MgSO₄)した。濾過および蒸発させた後、粗生成物をクロマトグラフィー(シリカ、クロロホルム／メタノール99：１)に付し、白色固体1.63ｇ(97％)を得た。構造は¹H NMR(500MHz)で確認した。ｂ）コレステリルβ−アラニネート塩酸塩の合成 1,4−ジオキサン中１Ｍ塩酸(５ml)中の段階(a)の化合物(279mg，0.500ミリモル)の溶液を４時間室温で攪拌した。反応混合物を濃縮し、定量的な収率でコレステリルβ−アラニネート塩酸塩を得た。構造は¹H NMR(500MHz)分析で確認し、 MALDI質量スペクトルによれば理論値481のところ 482にM+Naのピークが得られた。ｃ）コレステリルN-Boc−４−〔２−ヒドロキシ−３−〔(１−メチルエチル)アミノ〕プロポキシ〕フェニルアセチル−β−アラニネートの合成 DMF(５ml)中のN-Boc−４−〔２−ヒドロキシ−３−〔(１−メチルエチル)アミノ〕プロポキシ〕フェニル酢酸(55mg，0.15ミリモル)(実施例12で合成したもの) とコレステリル−β−アラニネート塩酸塩(74mg，0.15ミリモル)の溶液にDIEA(2 6ml、0.15ミリモル)を添加した。HOBt(23mg，0.15ミリモル）と水溶性カルボジイミド(WSC)(29mg，0.15ミリモル)を添加した。反応混合物を室温で一晩撹拌し次いで炭酸ナトリウム(2.5ｇ)と塩化ナトリウム(4.0ｇ)とを含有する水(25ml)に注入した。沈澱した物質をクロロホルム中に抽出した。有機相を水洗しそして乾燥した(MgSO₄)。濾過および濃縮の後、粗生成物をカラムクロマトグラフィー（シリカ、クロロホルム／メタノール／酢酸、95：４：１）によって精製した。プールした画分を濃縮し、氷酢酸中に取り込みそして凍結乾燥した。黄白色の固体の収量は83mg(69％)であった。¹H NMR分析により構造を確認した。ｄ）コレステリル４−〔２−ヒドロキシ−３−〔(１−メチルエチル)アミノ〕プロポキシ〕フェニルアセチル−β−アラニネートトリフルオロアセテートの合成乾燥ジクロロメタン(４ml)中のN-Boc−４−〔２−ヒドロキシ−３−〔(１−メチルエチル)アミノ〕プロポキシ〕フェニルアセチル−β−アラニネート(40mg， 0.05ミリモル)の溶液にトリフルオロ酢酸(２ml)を添加した。反応混合物を２時間撹拌し次いで濃縮した。アセトニトリル／水から生成物を凍結乾燥して白黄色物質を定量的収量で得た。生成物をMALDI質量分析により特性把握すると、予想通りに708にM+Hピークを得た。ｅ）診断および治療に応用するための、アテノロールのコレステロール誘導体を含有するホスファチジル−セリンでカプセル化したガス含有微小気泡の調製 1.4％プロピレングリコール／2.4％グリセロールの溶液(1.0ml)を、バイアル中のジステアロイル−ホスファチジル−セリン(Avanti，4.5mg)とd)の生成物(0. 5mg)の混合物に添加した。混合物を５分間音波処理し次いで80℃で５分間加熱し (加温中バイアルを振とうして)、そして冷却した。ヘッドスペースをパーフルオロブタンガスでフラッシュしそしてバイアルをキャップミキサー内で45秒間振盪し、続いて蒸溜水で十分に洗浄した。MALDI質量分析法によると、最終的な洗浄溶液中のb)の化合物が検出可能な水準にあることが示された。 d)の化合物の気泡への取り込みはMALDI質量分析法によって確認した。ｊ）アテノロールを含有するリポペプチドでドープしたジステアロイル−ホスファチジル−セリンのガス含有微小気泡のインビトロ研究ヒト内皮細胞系ECV 304を実施例12に記載したように増殖させた。直径22ミリのカバーガラスを滅菌し、そして12ウエルの培養プレート(Costar)の底部に置いた後、血清を加えた完全培地0.5ml中の細胞をプレート上に添加した。細胞が集密状態に達した時、特注でつくったフローチャンバー内にカバースリップを入れた。このチャンバーはそれにつくりこまれたガラス板に切り込まれた溝を有する。細胞の付いたカバースリップを、細胞が溝に向かいあうようにこの板の上におき、これによって流路を形づくった。上記のd)からの超音波微小気泡を37℃に保ったリザーバーからフローチャンバーに通しそして蠕動ポンプを経てリザーバーに戻した。流量は生理学的に妥当な任意の剪断速度を模擬するように調節可能であった。フローチャンバーを顕微鏡下においたので、ミクロスフェアと細胞との相互作用を直接視認できた。顕微鏡に取付けたカメラをカラービデオプリンターおよびモニターに接続した。細胞への微小気泡の蓄積が流速に依存しつつ徐々に起きた。流速を増加すると、細胞がカバースリップから離脱しはじめたが、微小気泡は依然として細胞に結合していた。ベクターを担持していない対照の気泡は内皮細胞に付着せず、また最少流量の条件下で細胞から消失した。実施例 18 診断および治療に応用するための、アテノロール含有リポペプチドとカフトプリルの親油性誘導体とを含むホスファチジル−セリンのガス充填微小気泡ａ）アテノロールで官能性付与されたリポペプチドの合成上記の構造は実施例12に記載した手作業によるバブラー法によって作成した。ｂ）Ｎ−〔(Ｓ)−３−ヘキサデシルチオ−２−メチルプロピオニル〕プロリンの合成 DIEA(188μl，1.10ミリモル)をテトラヒドロフラン(５ml)中の１−ヨードヘキサデカン(176mg，0.500ミリモル)、カプトプリル(120mg，0.550ミリモル)および DBU(165μl，1.10ミリモル)の溶液に添加した。混合物を２時間70℃で加熱した後、濃縮した。残存物を硫酸水素カリウムで飽和した水に注ぎこみ、有機相をクロロホルムに抽出した。有機相を水で洗浄し、乾燥(MgSO₄)した。生成物をクロマトグラフィー(シリカ、CHCl₃／MeOH／AcOH 85：10：５)により精製し、凍結乾燥して白色固体105mg(48％)を得た。構造を¹H NMR(500MHz)および¹³C(125MHz)の NMR分析で確認し、さらにMALDI質量スペクトルで同定したところ、理論値どおり m／z 440に負モードのM-Hが認められた。ｃ）診断および治療に応用するための、アテノロール含有ペプチドとカプトプリルの親油性誘導体を含むホスファチジル−セリンでカプセル化したガス含有微小気泡の調製 1.4％プロピレングリコール／2.4％グリセロールの溶液(1.0ml)をバイアル中のジステアロイル−ホスファチジル−セリン(Avanti，4.5mg)および段階(a)(0.5 mg)および(b)の生成物(0.5mg)の混合物に添加した。混合物を５分間音波処理し、次に５分間80℃に加熱し（加温中はバイアルを振とう）、冷却した。ヘッドスペースをパーフルオロブタンガスでフラッシュし、バイアルを45秒間キャップミキサー内で振とうし、その後、内容物を脱イオン水で十分洗浄した。MALDI質量スペクトルによれば、最終洗液中に段階(a)または(b)の化合物は検出可能な濃度では存在しなかった。MALDI-MSにより微小気泡への化合物(b)および(c)の取込みを確認するために、約50μlの微小気泡を90％メタノール約100μlの入った新しいバイアルに入れた。混合物を30秒間超音波処理し、MALDI-MS(ACH−マトリックス)で分析したところ、構造(a)および(b)に相当するM+Hのピークが認められた。ｄ）診断および治療に応用するための、アテノロール含有リポペプチドとカプトプリルの親油性誘導体を含むホスファチジル−セリンのガス含有微小気泡のインビトロ研究ヒト内皮細胞系ECV 304を実施例12に記載したように増殖させた。直径22ミリのカバーガラスを滅菌し、そして12ウエルの培養プレート(Costar)の底部に置いた後、血清を加えた完全培地0.5ml中の細胞をプレート上に添加した。細胞が集密状態に達した時、特注でつくったフローチャンバー内にカバースリップを入れた。このチャンバーはそれにつくりこまれたガラス板に切り込まれた溝を有する。細胞の付いたカバースリップを、細胞が溝に向かいあうようにこの板の上におき、これによって流路を形づくった。上記のc)からの微小気泡を37℃に保ったリザーバーからフローチャンバーに通しそして蠕動ポンプを経てリザーバーに戻した。流量は生理学的に妥当な任意の剪断速度を模擬するように調節可能であった。フローチャンバーを顕微鏡下においたので、ミクロスフェアと細胞との相互作用を直接視認できた。顕微鏡に取付けたカメラをカラービデオプリンターおよびモニターに接続した。細胞への微小気泡の蓄積が流速に依存しつつ徐々に起きた。流速を増加すると、細胞がカバースリップから離脱しはじめたが、微小気泡は依然として細胞に結合していた。ベクターを担持していない対照の気泡は内皮細胞に付着せず、また最少流量の条件下で細胞から消失した。実施例 19 診断および治療に応用するための、クロラムブシル含有リポペプチドを含むジステアロイル−ホスファチジル−セリンでカプセルにつめられたガス充填微小気泡ａ）クロラムブシル含有リポペプチドの合成上記構造はマニュアルのバブラー法によりFmoc−保護RinkアミドMBHA樹脂(Nov abiochem)を出発物質として、0.125ミリモルスケール上で合成した。標準的なアミノ酸はNovabiochemからそしてパルミチン酸はFlukaから購入した。標準的なTB TU／HOBt／DIEA法を用いてカップリングを行った。クロラムブシルはDIC予備活性化を用いて対掌無水物としてLys側鎖を介してカップリングした。樹脂からのペプチドの除去と側鎖保護基の脱保護は、５％EDT、５％水および５％エチルメチルスルフィドを含有するTFA中で２時間同時に行なった。粗製物質の内10mgを、流量10ml／分で60分間にわたり70〜10 0％Ｂ(Ａ＝0.1％ TFA／水およびＢ＝0.1％TFA／アセトニトリル)の勾配による調製用液体クロマトグラフィーで精製した。凍結乾燥の後、純粋な物質30mgを得た（分析用HPLC、20分間にわたり70〜100％Ｂの勾配、Ａ＝0.1％ TFA／水、Ｂ＝0 .1％ TFA／アセトニトリル、流量１ml／分、検出UV214nm、保持時間26.5分）。更に同定するためにMALDI質量スペクトル分析を行ったところ、理論値1294のところ実測値はM+H1295であった。ｂ）診断および治療に応用するための、クロラムブシル含有ポリペプチドを含むガス充填微小気泡の調製 1.4％プロピレングリコール／2.4％グリセロールの溶液(1.0ml)をバイアル中のジステアロイル−ホスファチジル−セリン(Avanti，4.5mg)および段階(a)の生成物(0.5mg)の混合物に添加した。混合物を５分間音波処理し、次に５分間80℃ に加熱し（加温中はバイアルを振とう）、冷却した。ヘッドスペースをパーフルオロブタンガスでフラッシュし、バイアルを45秒間キャップミキサー中で振とうし、その後内容物を脱イオン水で十分洗浄した。MALDI質量スペクトルによれば、最終洗液中に段階(a)の化合物は検出可能な濃度では存在しなかった。MALDI-M Sにより気泡へのクロラムブシル含有リポペプチドの取込を確認するために、約5 0μlの微小気泡を90％メタノール約100μlの入った新しいバイアルに入れた。混合物を30秒間音波処理し、MALDI-MS(ACH−マトリックス)で分析したところ、理論値1294のところ1300のM+Hのピーク、理論値1317のところ1324にM+Naのピークがみとめられた。ｃ）診断および治療に応用するための、クロラムブシル含有リポペプチドでドープされたジステアロイル−ホスファチジル−セリンのガス充填微小気泡のインビトロ研究ヒト内皮細胞系ECV 304を実施例12に記載したように増殖した。直径22ミリのカバーガラスを滅菌し、そして12ウエルの培養プレート(Costar)の底部に置いた後、血清を加えた完全培地0.5ml中の細胞をプレート上に添加した。細胞が集密状態に達した時、特注でつくったフローチャンバー内にカバースリップを入れた。このチャンバーはそれにつくりこまれたガラス板に切り込まれた溝を有する。細胞の付いたカバースリップを、細胞が溝に向かいあうようにこの板の上におき、これによって流路を形づくった。上記のb)からの微小気泡を37℃に保ったリザーバーからフローチャンバーに通しそして蠕動ポンプを経てリザーバーに戻した。流量は生理学的に妥当な任意の剪断速度を模擬するように調節可能であった。フローチャンバーを顕微鏡下においたので、ミクロスフェアと細胞との相互作用を直接視認できた。顕微鏡に取付けたカメラをカラービデオプリンターおよびモニターに接続した。細胞への微小気泡の蓄積が流速に依存しつつ徐々に起きた。流速を増加すると、細胞がカバースリップから離脱しはじめたが、微小気泡は依然として細胞に結合していた。ベクターを担持していない対照の気泡は内皮細胞に付着せず、また最少流量の条件下で細胞から消失した。実施例 20 診断および治療に応用するための、ビオチンアミド−PEG−β−Ala−コレステロールとクロラムブシルのコレステリルエステルを含むホスファチジルセリンでカプセルにつめられたガス充填微小気泡ａ）コレステリルβ−アラニネートの合成実施例17におけるようにコレステリルβ−アラニネート塩酸塩を合成した。ｂ）ビオチン−PEG₃₄₀₀−β−Ala−コレステロールクロロホルム／湿メタソール(2.6：１、３ml)中のコレステリルβ−アラニネート塩酸塩(15mg，0.03ミリモル)の溶液にトリエチルアミン(42μl，0.30ミリモル)を添加した。混合物を室温で10分間撹拌しそして1,4−ジオキサン(１ml)中のビオチン−PEG3400-NHS(100mg，0.03ミリモル)の溶液を滴下して添加した。室温で３時間撹拌した後、混合物を蒸発乾固しそして残存物をフラッシュクロマトグラフィーによって精製して白色結晶を得た。収量は102mgであった(89％)。構造はMALDI-MSおよびNMR分析により確かめた。ｃ）コレステリル４−〔４−〔ビス(２−クロロエチル)アミノ〕フェニル〕ブタノエートの合成乾燥ジクロロメタン(15ml)中のクロラムブシル(Sigma，669mg，2.20ミリモル) の溶液にDIC(170μl，1.10ミリモル)を添加した。混合物を室温で0.5時間撹拌しそしてジクロロメタン(10ml)中のコレステロール(Aldrich，387mg，1.00ミリモル)とDMAP(122mg，1.00ミリモル)の溶液に添加した。反応混合物を一晩撹拌し次いで５％重炭酸ナトリウム中に注入した。相分離を行ないそして有機相を塩水で洗浄しそして乾燥した(MgSO₄)。溶液を濾過しそして濃縮しそしてカラムクロマトグラフィー(シリカ、クロロホルム)によって生成物を精製して無色油状物を収量560mg(83％）で得た。生成物をMALDI質量分析法によって特性把握し、予想通りに674にM+Hピークを得た。¹H(500MHz)NMR分析および¹³C(125MHz)NMR分析を用いてさらに特性把握を行ない構造に合致するスペクトルを得た。ｄ）ガス充填微小気泡の調製 1.4％プロピレングリコール／2.4％グリセロールの溶液(1.0ml)をバイアル中のジステアロイル−ホスファチジル−セリン(Avanti，５mg)とb)の生成物(0.5mg )およびc)の生成物(0.5mg)の混合物中に添加した。混合物を５分間超音波処理し次いで80℃で５分間加熱し（加温中バイアルを振盪した）そして冷却した。ヘッドスペースをパーフルオロブタンガスでフラッシュしそしてバイアルをキャップミキサー内で45秒間振盪し、続いて蒸溜水で十分に洗浄した。MALDI質量分析法によると、最終的な洗浄溶液中のb)およびc)の化合物が検出可能な水準にあることが示された。 b)およびc)の化合物の気泡への取り込みはMALDI-MSにより以下のように確認した。約50μlの微小気泡を90％メタノールが100μlの入った清浄なバイアルに移し入れた。混合物を30秒間超音波処理しそしてMALDI-MS(ACH−基質)によって分析した。実施例 21 超音波造影のためのチオールで官能性付与されたガス充填微小気泡の調製本例は複数の細胞標的への結合を行なう二硫化物交換反応を主として利用することによる、非特異的結合のための反応性基を表面上に有する微小気泡の調製に関する。ａ）チオールで官能性付与された脂質分子：ジパルミトイル−Lys-Lys-Lys−６ −アミノ−カプロン酸−Cysの調製１ミリモルアミノ酸カートリッジを用いて0.25ミリモルスケール上にFmoc-Cys (Trt)-Wang樹脂(Novabiochem)を出発物質としてABI 433A自動ペプチド合成装置上で脂質構造を合成した。全アミノ酸およびパルミチン酸はHBTUカップリング化学操作を用いて予備活性化させた。樹脂からのペプチドの除去と側鎖保護基の脱保護は、５％EDTおよび５％水を含有するTFA中で２時間同時に行ない、250mgの収量で粗生成物を得た。粗生成物の内40mgを、流量９ml／分で50分間にわたり90 〜100％Ｂ(Ａ＝0.1％TFA／水およびＢ＝MeOH)の勾配による調製用HPLC(Hydac 21 8TP1022カラム)で精製した。凍結乾燥の後、純粋な物質24mgを得た(分析用肝LC 、70〜100％Ｂの勾配、Ｂ＝0.1％ TFA／アセトニトリル、Ａ＝0.01％TFA／水：カラム− Vydac 218TP54：検出−UV214nm−生成物の保持時間＝23分)。更に生成物を同定するためにMALDI質量スペクトル分析を行った。M+H理論値1096、実測値1099。ｂ）チオールで官能性付与されたガス充填微小気泡の調製ジステアロイル−ホスファチジル−セリン(Avanti，5.0mg)と実施例15のa)のチオールを含む脂質構造物(1.0mg)を秤量して清浄なバイアルに入れそして1.4％プロピレングリコール／2.4％グリセロールを水中に含有する溶液0.8mlを添加した。混合物を80℃に５分間温め(加温中バイアルを振盪した)そしてまだ温かいうちに40ミクロンのフィルターを通して濾過した。試料を室温に冷却しそしてヘッドスペースをパーフルオロブタンガスでフラッシュした。バイアルを45秒間キャップミキサー中で振とうし、一夜ローラーテーブル上に置いた。得られた微小気泡を脱イオン水で数回洗浄し、Ellmans試薬を用いてチオール基の取込を分析した。実施例 22 プラスミドpBR322からのフルオレセインで標識したDNA断片に複合体化されたポリ−Ｌ−リジンでコートされた微小気泡の調製本例は遺伝子治療／アンチーセンスに応用するための微小気泡の調製に関する。特異的標的設定は、実施例１に記載したベクター変性脂質構造物で微小気泡膜をさらにドープすることにより達成できると考えた。ａ）ホスファチジル−セリンでカプセルにつめられたガス含有微小気泡の調製ジステアロイル−ホスファチジル−セリン(Avanti，4.5mg)を清浄なバイアル中に秤量して入れた。1.4％プロピレングリコール／2.4％グリセロールの溶液を 1.0ml添加しそして混合物を２分間超音波処理し、次いで80℃に５分間加温した。加温の直後に溶液を４ミクロンのフィルターを通じて濾過した。試料を室温に冷却しそしてヘッドスペースをパーフルオロブタンガスでフラッシュした。バイアルをキャップミキサー内で45秒間振とうした。次に気泡を蒸溜水で１回洗浄しそして下部清澄液を廃棄した。次いで微小気泡を0.5mlの水中に再び懸濁した。ｂ）ポリ−Ｌ−リジン／DNA複合体の調製およびホスファチジル−セリン微小気泡への装荷清浄なバイアル中の１mgのポリ−Ｌ−リジン(70〜150kD)に、TE緩衝液（10mM トリス−HCl、pH８）中に溶解したプラスミドpBR322(Biorad)のフルオレセインで標識した消化物を0.1ml添加した。水を添加することにより溶液を全体で0.6ml にしそしてpHを８に調整した。複合体を１時間進行させ次いで0.05mlのポリリジン−DNA溶液を上記のa)の微小気泡懸濁液に添加した。１時間後、顕微鏡観察を行なうと、気泡が蛍光性であることが示され、DNAの存在を確認した。実施例 23 細胞の標的設定のためのアテノロールを含有するリポペプチドと治療用のカプトプリルの親油性チオールエステルを含むホスファチジル−セリンのガス充填微小気泡ａ）カプトプリルのコラン酸チオールエステルの合成ジクロロメタン(５ml)中の５−β−コラン酸(Sigma，361mg，1.00ミリモル)と DIC(77μl，0.50ミリモル)との混合物を10分間撹拌し、次いでジクロロメタン(1 0ml)中のカプトプリル(Sigma，130mg，0.600ミリモル)とDBU(180μl，1.20ミリモル)の溶液に添加した。反応混合物を一晩撹拌し、次いで稀塩酸中に注入した。クロロホルム(30ml)を添加した。相分離を行ないそして有機相を水および塩水で洗浄しそして乾燥(MgSO₄)した。濾過および濃縮の後、粗製物質をクロマトグラフィー(シリカ、クロロホルム／メタノール／酢酸95：４：１)にかけた。アセトニトリル／水／エタノール混合物から生成物を凍結乾燥した。純白ではない固体の収量は137mg(49％)であった。¹H(500MHz)および¹³C(125MHz)のNMRスペクトル分析法によって構造を確かめた。MALDI質量分析を用いてさらに特性把握を行ない、 m／z 584に正モードのM+Naピークを得た。ｂ）細胞標的設定のためのアテノロール含有リポペプチドと治療用のカプトプリルの親油性チオールエステルを含むホスファチジル−セリンのガス充填微小気泡の調製 1.4％プロピレングリコール／2.4％グリセロール(1.0ml)を、バイアル中のジステアロイル−ホスファチジル−セリン(Avantic，5.0mg)とa)の生成物(0.5mg) と実施例12のアテノロール含有リポペプチド(0.5mg)の混合物に添加した。混合物を５分間超音波処理し次いで80℃で５分間加熱し（加温中バイアルを振盪した）そして冷却した。ヘッドスペースをパーフルオロブタンガスでフラッシュしそしてバイアルをキャップミキサー中で45秒間振盪し、続いて蒸溜水で十分に洗浄した。MALDI質量分析法によると、最終的な洗浄溶液中のb)およびc)の化合物が検出不能な水準にあることが示された。 a)の化合物とアテノロール含有リポペプチドとの気泡への取り込みをMALDI-MS によって確認した。ｃ）アテノロール含有リポペプチドで「ドープ」されたホスファチジルーセリンのガス含有微小気泡のインビトロ研究ヒト内皮細胞系ECV 304を実施例12に記載したように増殖した。直径22ミリのカバーガラスを滅菌し、そして12ウエルの培養プレート(Costar)の底部に置いた後、血清を加えた完全培地0.5ml中の細胞をプレート上に添加した。細胞が集密状態に達した時、特注でつくったフローチャンバー内にカバースリップを入れた。このチャンバーはそれにつくりこまれたガラス板に切り込まれた溝を有する。細胞の付いたカバースリップを、細胞が溝に向かいあうようにこの板の上におき、これによって流路を形づくった。上記のb)からの微小気泡を37℃に保ったリザーバーからフローチャンバーに通しそして蠕動ポンプを経てリザーバーに戻した。流量は生理学的に妥当な任意の剪断速度を模擬するように調節可能であった。フローチャンバーを顕微鏡下においたので、ミクロスフェアと細胞との相互作用を直接視認できた。顕微鏡に取付けたカメラをカラービデオプリンターおよびモニターに接続した。細胞への微小気泡の蓄積が流速に依存しつつ徐々に起きた。流速を増加すると、細胞がカバースリップから離脱しはじめたが、微小気泡は依然として細胞に結合していた。ベクターを担持していない対照の気泡は内皮細胞に付着せず、また最少流量の条件下で細胞から消失した。実施例 24 診断および治療に応用するための、ベスタチンの誘導体を含有するリポペプチドを含むホスファチジル−セリンでカプセルにつめられたガス充填微小気泡ａ）ベスタチンの誘導体を含有するリポペプチドの合成上記構造はマニュアルのバブラー法によりFmoc−保護RinkアミドMBHA樹脂（No vabiochem）を出発物質として、0.125ミリモルスケール上で、Novabiochemのアミノ酸およびFlukaのパルミチン酸を用いて合成した。標準的なTBTU／HOBt／DIE A法を用いてカップリングを行なった。樹脂からのペプチドの除去と側鎖保護基の脱保護は、５％EDTおよび５％水を含有するTFA中で２時間同時に行なった。粗製物をエーテルから沈殿させ、流量10ml／分で60分間にわたり70〜100％Ｂ(Ａ＝ 0.1％TFA／水およびＢ＝0.1％ TFA／アセトニトリル)の勾配による調製用液体クロマトグラフィー（Vydac 218TP1022カラム）で精製した。凍結乾燥の後、純粋な物質12mgを得た(分析用HPLC、20分間にわたり70〜100％Ｂの勾配、Ａ＝0.1％ TFA／水、Ｂ＝0.1％ TFA／アセトニトリル、流量１ml／分、検出UV214nm、保持時間25分)。更に同定するためにMALDI質量スペクトル分析(ACHマトリックス)を行なったところ、理論値1314のところ実測値はM+H 1315であった。ｂ）診断および治療に応用するためのベスタチンの誘導体を含有するリポペプチドを含むガス充填微小気泡の調製 1.4％プロピレングリコール／2.4％グリセロールの溶液(1.0ml)をバイアル中のジステアロイル−ホスファチジル−セリン(Avanti，4.5mg)および段階(a)の生成物(0.5mg)の混合物に添加した。混合物を５分間音波処理し、次に５分間80℃ に加熱し（加温中はバイアルを振とう）、冷却した。ヘッドスペースをパーフルオロブタンガスでフラッシュし、バイアルを45秒間キャップミキサー中で振とうし、内容物を脱イオン水で十分洗浄した。MALDI質量スペクトルによれば、最終洗液中に段階(b)の化合物は検出可能な濃度では存在しなかった。 MALDI-MSにより微小気泡へのアテノロール含有リポペプチドの取込を確認するために、約50μlの微小気泡を90％メタノール約100μlの入った新しいバイアルに入れた。混合物を30秒超音波処理し、MALDI-MS(ACH−マトリックス)で分析したところ、段階(a)のリポペプチドに相当する理論値1314のM+Hピークが1320にみとめられた。ｃ）診断および治療に応用するための、ベスタチンの誘導体を含有するリポペプチドでドープされたジステアロイル−ホスファチジル−セリンのガス充填微小気泡のインビトロ研究ヒト内皮細胞系ECV 304を実施例12に記載したように増殖した。直径22ミリのカバーガラスを滅菌し、そして12ウエルの培養プレート(Costar)の底部に置いた後、血清を加えた完全培地0.5ml中の細胞をプレート上に添加した。細胞が集密状態に達した時、特注でつくったフローチャンバー内にカバースリップを入れた。このチャンバーはそれにつくりこまれたガラス板に切り込まれた溝を有する。細胞の付いたカバースリップを、細胞が溝に向かいあうようにこの板の上におき、これによって流路を形づくった。上記のb)からの微小気泡を37℃に保ったリザーバーからフローチャンバーに通しそして蠕動ポンプを経てリザーバーに戻した。流量は生理学的に妥当な任意の剪断速度を模擬するように調節可能であった。フローチャンバーを顕微鏡下においたので、ミクロスフェアと細胞との相互作用を直接視認できた。顕微鏡に取付けたカメラをカラービデオプリンターおよびモニターに接続した。細胞への微小気泡の蓄積が流速に依存しつつ徐々に起きた。流速を増加すると、細胞がカバースリップから離脱しはじめたが、微小気泡は依然として細胞に結合していた。ベクターを担持していない対照の気泡は内皮細胞に付着せず、また最少流量の条件下で細胞から消失した。実施例 25 標的設定超音波造影のためのエンドセリン受容体に対する親和性のあるベクターを含有するリポペプチドを含むジステアロイル−ホスファチジル−セリンのガス充填微小気泡ａ）4'−〔(3,4−ジメチル−５−イソキサゾリル)−スルファモイル〕スクシンアニリン酸の合成 DMF(10ml)中のスルフィソキサゾール(267mg，1.00ミリモル)の溶液に無水コハク酸(1.00g，10.0ミリモル)と４−ジメチルアミノピリジン(122mg，1.00ミリモル)を添加した。反応混合物を80℃で２時間撹拌しそして濃縮した。残存物を重炭酸ナトリウムの５％水溶液中に取り込みそしてエチルアセテートで抽出した。水溶液を稀塩酸で酸性化しそして有機物質をエチルアセテート中に抽出した。有機相を稀塩酸、水および塩水で洗浄し、活性炭で処理しそして乾燥(MgSO₄)した。溶液を濾過しそして濃縮して白色固体を280mg(76％)得た。¹H(300MHz)および¹³C(75MHz)のNMRスペクトル分析法によって構造を確かめた。MALDI質量分析法(ACH基質)を用いてさらに特性把握し、予想通りにm／z 390にM+Naピークをまたm／z 406にM+Kピークを得た。ｂ）スルフィソキサゾールで官能性付与されたリポペプチドの合成上記構造はマニュアルの窒素バブラー装置上でFmoc−保護RinkアミドBMHA樹脂を出発物質として、0.125ミリモルスケール上で、適切なアミノ酸、パルミチン酸および段階(a)の化合物を用いて合成した。標準的なTBTU／HOBt／DIEA法を用いてカップリングを行った。樹脂からのペプチドの除去と側鎖保護基の脱保護は、５％EDTおよび５％水を含有するTFA中で２時間同時に行なった。粗製物質をエーテルから沈殿させた。生成物は分析用HPLCにより、20分間にわたり70〜100％Ｂの勾配、Ａ＝0.1％ TFA／水、Ｂ＝0.1％ TFA／アセトニトリル、流量１ml／分、検出UV214nm、保持時間27分の条件で分析した。更に同定するためにMALDI質量スペクトル分析を行ったところ、理論値1356のところ実測値M+Hはm/z 1359であった。ｃ）(b)の化合物を含むガス充填微小気泡の調製 1.4％プロピレングリコール／2.4％グリセロールの溶液(1.0ml)をバイアル中のDSPS(4.5mg)および段階(b)の生成物(0.5mg)の混合物に添加した。混合物を５分間超音波処理し、次に５分間80℃に加熱し（加温中はバイアルを振とう）、冷却した。ヘッドスペースをパーフルオロブタンガスでフラッシュし、バイアルを 45秒間キャップミキサー中で振とうし、その後、脱イオン水で十分洗浄した。MA LDI質量スペクトル分析によれば、最終洗液には段階(b)の化合物は検出可能な濃度では存在しなかった。MALDI-MSにより微小気泡へのイソキサゾール含有リポペプチドの取込を確認するために、約50μ lの微小気泡を90％メタノール約100μlの入った新しいバイアルに移した。混合物を30秒間超音波処理し、MALDI-MS(ACH−マトリックス)で分析したところ、段階(b)のリポペプチドに相当するm/z 1359にm+Hのピークがみとめられた。

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項【提出日】平成１１年１月２１日（１９９９．１．２１）【補正内容】本発明で使用されるベクターは人体にとって外因性のものであるのが好ましい。合成ベクターまたは半合成ベクターに関してここで用いる「非ポリマー性」という用語はオリゴマーを排除することを意図するものではない。本発明で使用するヌクレオチドは例えば10〜500の基本単位を含みうる。オリゴヌクレオチドは例えば20〜50の単位を含んでよいが、一方ポリヌクレオチドは例えば50〜500の単位を含みうる。本発明の更に別の実施態様によれば、ベクター１つ以上を、ベクターが標的または標的受容体に容易に曝露されないような方法でレポーターに結合するか、あるいはその内部に包含させる。従って、ベクターを曝露する別の方法例えばベクターを含有する部分の拡散性を調節するために投与後の薬剤を外部超音波に曝露することにより、組織特異性の向上を達成してよい。任意の生体適合性気体も本発明の造影剤のレポーター中に存在してよく、本明細書では「気体」という用語は37℃のヒト正常体温で実質的または完全に気体（蒸気を含む）の形態である任意の物質(混合物を含む)を包含するものとする。即ち気体は例えば空気；窒素；酸素；二酸化炭素；水素；不活性ガス、例えばヘリウム、アルゴン、キセノンまたはクリプトン；フッ化イオウ例えば六フッ化イオウ、十フッ化二イオウまたは五フッ化トリフルオロメチルイオウ；六フッ化セレン；場合によりハロゲン化されたシラン、例えばメチルシランまたはジメチルシラン；低分子量炭化水素(例えば炭素原子７個までを含むもの)、例えばアルカン、例えばメタン、エタン、プロパン、ブタンまたはペンタン、シクロアルカン、例えばシクロプロパン、シクロブタンまたはシクロペンタン、アルケン例えばエチレン、プロペン、プロパジエンまたはブテン、またはアルキンン例えばアセチレンまたはプロピン；エーテル例えばジメチルエーテル；ケトン；エステル；ハロゲン化低分子量炭化水素(例えば炭素原子７個までを含むもの)；またはこれらの混合物を包含する。修飾オリゴヌクレオチドベクター（in vivoの安定性を増大するための修飾）請求の範囲１．気体含有または気体発生物質からなり、一つまたはそれ以上の非蛋白質、非ペプチドおよび非多糖類のベクターにコンジュゲートされているレポーターの水性担担体液体中の懸濁液からなる標的設定診断用および／または治療活性を有する薬剤。２．気体が空気、窒素、酸素、二酸化炭素、水素、不活性気体、フッ化イオウ、六フッ化セレン、低分子量炭化水素、ケトン、エステル、ハロゲン化低分子量炭化水素またはこれらの混合物を包含する請求項１記載の薬剤。３．気体が過フッ化ケトン、過フッ化エーテルまたはパーフルオロカーボンである請求項２記載の薬剤。４．気体が六フッ化イオウ、パーフルオロプロパン、パーフルオロブタンまたはパーフルオロペンタンを含有する請求項２記載の薬剤。５．耐癒着性表面膜、膜形成性蛋白質、重合体物質、非重合体および非重合性の壁形成性物質または界面活性剤によって安定化されている微小気泡を含む上記請求項のいずれかに記載の薬剤。６．界面活性剤が少なくとも一つのリン脂質からなる請求項５記載の薬剤。７．界面活性剤物質の少なくとも75％が、正味の全電荷を個々に有するリン脂質分子からなる請求項６記載の薬剤。８．膜形成性界面活性剤物質の少なくとも75％がホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジック酸およびカルジオリピンから選択される一つまたはそれ以上のリン脂質である請求項７記載の薬剤。９．リン脂質の少なくとも80％がホスファチジルセリンである請求項８記載の薬剤。 10．ベクターが非重合性で合成または半合成のものである上記請求項のいずれかに記載の薬剤。 11．ベクターが人体にとって外因性のものである請求項10記載の薬剤。 12．ベクターがオリゴヌクレオチドおよびポリヌクレオチドから選択される請求項１〜９のいずれかに記載の薬剤。 13．ベクターが非ペプチドアゴニスト／拮抗剤そして細胞接着分子のための受容体のバインダー、サイトカイン、成長因子およびペプチドホルモン；オリゴヌクレオチドおよび修飾されたオリゴヌクレオチド；DNA−結合薬；プロテアーゼ基質／阻害剤；コンビナトリアルライブラリーから得られた非ペプチド分子；および小型生物活性分子から選択される、請求項１〜９のいずれかに記載の薬剤。 14．ベクターが、薬剤が標的に対する相互作用を示すがこれと固定的に結合しない程度の上記標的に対する親和性を有する上記請求項のいずれかに記載の薬剤。 15．ベクターが、細胞接着蛋白質のための非蛋白、非ペプチドおよび非多糖類リガンドから選択される請求項14記載の薬剤。 16．ベクターが標的に容易に曝露されないように位置づけられている上記請求項のいずれかに記載の薬剤。 17．ベクターがレポーターに共有結合的または非共有結合的にカップリングまたは結合されている上記請求項のいずれかに記載の薬剤。 18．ベクターが静電気的電荷相互作用によってレポーターにカップリングまたは結合されている請求項１から16のいずれかに記載の薬剤。 19．ベクターがアビジン−ビオチンおよび／またはストレプトアビジン−ビオチン相互作用によりレポーターにカップリングまたは結合されている請求項１〜16 のいずれかに記載の薬剤。 20．放射性の、または、Ｘ線造影剤、光造影プローブまたはスピン標識として有効な部分を更に含んでいる前記請求項のいずれかに記載の薬剤。 21．治療化合物を更に含有する前記請求項のいずれかに記載の薬剤。 22．治療化合物が抗新生物薬、血液製剤、生物学的応答調節剤、抗カビ剤、ホルモンまたはホルモン類縁体、ビタミン、酵素、抗アレルギー剤、組織因子抑制剤、血小板抑制剤、凝固蛋白標的抑制剤、フィブリン形成抑制剤、フィブリン溶解促進剤、抗血管新生剤、循環薬、代謝強化剤、抗結核剤、抗ウイルス剤、血管拡張剤、抗生物質、抗炎症剤、抗原虫剤、抗リューマチ剤、麻酔剤、アヘン剤、強心配糖体、神経筋ブロッカー、鎮静剤、局所麻酔薬、全身麻酔薬または遺伝子物質である請求項21記載の薬剤。 23．上記治療化合物がジスルフィド基を介してレポーターに共有結合的にカップリングまたは結合している請求項21または22に記載の薬剤。 24．親油性であるかまたは親油性になるように誘導化された治療化合物が疎水性相互作用を介してレポーターに結合された請求項21または22に記載の薬剤。 25．下記成分：ｉ）選択された標的に対する親和性を有する前標的設定ベクターを有する第１の投与可能な組成物；および ii）前記請求項のいずれかに記載の薬剤を含有し、その薬剤が上記前標的設定ベクターに対する親和性を有するベクターからなる第２の投与可能な組成物を含有する複合製剤。 26．前標的設定ベクターが誘導された単糖類またはオリゴ糖類からなる請求項25 記載の複合製剤。 27．下記成分：ｉ）請求項１〜24のいずれか１項に記載の薬剤を含む投与可能な第１の組成物、 ii）薬剤をその標的から置き換えまたは放出させることのできる物質を含有する投与可能な第２の組成物を含有する複合製剤。 28．下記成分：ｉ）請求項23に記載の薬剤を含む投与可能な第１の組成物、 II）この投与可能な第１の組成物の薬剤中の治療用化合物とレポーターとをカップリングまたは結合するジスフィド基を還元的に切断することのできる還元剤を含む投与可能な第２の組成物を含有する複合製剤。 29．少なくとも一つの非蛋白質、非ペプチドおよび非多糖類のベクターを気体含有または気体発生物質からなるレポーターにカップリングまたは結合することからなる、請求項１記載の標的設定診断用および／または治療活性を有する薬剤を調製するための方法。 30．治療化合物もまたレポーターと配合させる請求項29記載の方法。 31．標的設定超音波造影剤としての請求項１〜24のいずれかに記載の薬剤の使用。 32．請求項１〜24のいずれかに記載の薬剤をヒトまたはヒト以外の動物の身体に投与し、そして、上記身体の少なくとも一部の、超音波、磁気共鳴、Ｘ線、放射線または光による像を発生させることからなる上記身体の増強された像を発生させる方法。 33．下記工程：ｉ）選択された標的に対する親和性を有する前標的設定ベクターを上記身体に投与すること；および、その後、 ii）上記前標的設定ベクターに対する親和性を有するベクターを含有する請求項１〜24のいずれかに記載の薬剤を投与することからなる請求項32記載の方法。 34．前標的設定ベクターが誘導された単糖類またはオリゴ糖類を包含する請求項 33記載の方法。 35．下記工程：ｉ）請求項１〜24のいずれかに記載の薬剤を上記身体に投与し、そしてその後、 ii）上記薬剤をその標的から置き換えまたは放出させることのできる物質を投与することからなる請求項32記載の方法。 36．薬剤が更に治療化合物を含有する請求項32〜35のいずれかに記載の方法。 37．上記治療化合物がジスルフィド基を介してレポーターに共有結合的にカップリングまたは結合されており、上記ジスルフィド基を還元的に切断することのできる還元剤を含有する組成物を後に投与する請求項36記載の方法。 38．標的を発現する細胞がフローチャンバー内に固定的に位置付けられており、担体液体中の薬剤の懸濁液が上記チャンバーを通過し、上記薬剤の上記細胞への結合を測定する請求項１〜24のいずれかに記載の薬剤による標的設定のin vitro 検査のための方法。 39．担体液体の流量を制御してin vivoで生じるせん断速度を擬似的に具現化する請求項38記載の方法。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｋ 47/14 Ａ６１Ｋ 47/14 47/20 47/20 47/24 47/24 47/42 47/42 49/00 49/00 Ｃ (31)優先権主張番号９６２２３６７．２ (32)優先日平成８年10月28日(1996．10．28) (33)優先権主張国イギリス（ＧＢ） (31)優先権主張番号９７００６９９．３ (32)優先日平成９年１月15日(1997．1．15) (33)優先権主張国イギリス（ＧＢ） (31)優先権主張番号９７０８２６５．５ (32)優先日平成９年４月24日(1997．4．24) (33)優先権主張国イギリス（ＧＢ） (31)優先権主張番号９７１１８４２．６ (32)優先日平成９年６月６日(1997．6．6) (33)優先権主張国イギリス（ＧＢ） (31)優先権主張番号９７１１８４５．９ (32)優先日平成９年６月６日(1997．6．6) (33)優先権主張国イギリス（ＧＢ） (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者ロングヴェド，ポールノールウエー国エン―0401 オスロ．ピー・オー・ボツクス 4220トルシヨヴ．ニユコヴエイエン２．ニユコメド・イメージング・アクシエセルカペト (72)発明者ヘーグセト，アンダースノールウエー国エン―0681 オスロ．トレシェヴン32アー (72)発明者トーレスハウグ，ヘルジェノールウエー国エン―0401 オスロ．ピー・オー・ボツクス 4220トルシヨヴ．ニユコヴエイエン２．ニユコメド・イメージング・アクシエセルカペト (72)発明者ゴダール，アスラークノールウエー国エン―0365 オスロ．ネードレシルケストロー 16 (72)発明者レーヴハウグ，ダーグフィンノールウエー国エン―0401 オスロ．ピー・オー・ボツクス 4220トルシヨヴ．ニユコヴエイエン２．ニユコメド・イメージング・アクシエセルカペト (72)発明者スールバーケン，マグネノールウエー国エン―0401 オスロ．ピー・オー・ボツクス 4220トルシヨヴ．ニユコヴエイエン２．ニユコメド・イメージング・アクシエセルカペト (72)発明者カスバートソン，アランノールウエー国エン―0401 オスロ．ピー・オー・ボツクス 4220トルシヨヴ．ニユコヴエイエン２．ニユコメド・イメージング・アクシエセルカペト

Claims

【特許請求の範囲】１．気体含有または気体発生物質からなり、一つまたはそれ以上の非蛋白質、非ペプチドおよび非多糖類のベクターにコンジュゲートされているレポーターの水性担担体液体中の懸濁液からなる標的設定診断用および／または治療活性を有する薬剤。２．気体が空気、窒素、酸素、二酸化炭素、水素、不活性気体、フッ化イオウ、六フッ化セレン、低分子量炭化水素、ケトン、エステル、ハロゲン化低分子量炭化水素またはこれらの混合物を包含する請求項１記載の薬剤。３．気体が過フッ化ケトン、過フッ化エーテルまたはパーフルオロカーボンである請求項２記載の薬剤。４．気体が六フッ化イオウ、パーフルオロプロパン、パーフルオロブタンまたはパーフルオロペンタンを含有する請求項２記載の薬剤。５．耐癒着性表面膜、膜形成性蛋白質、重合体物質、非重合体および非重合性の壁形成性物質または界面活性剤によって安定化されている微小気泡を含む上記請求項のいずれかに記載の薬剤。６．界面活性剤が少なくとも一つのリン脂質からなる請求項５記載の薬剤。７．界面活性剤物質の少なくとも75％が、正味の全電荷を個々に有するリン脂質分子からなる請求項６記載の薬剤。８．膜形成性界面活性剤物質の少なくとも75％がホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジック酸およびカルジオリピンから選択される一つまたはそれ以上のリン脂質である請求項７記載の薬剤。９．リン脂質の少なくとも80％がホスファチジルセリンである請求項８記載の薬剤。 10．ベクターが非重合性で合成または半合成のものである上記請求項のいずれかに記載の薬剤。 11．ベクターが人体にとって外因性のものである請求項10記載の薬剤。 12．ベクターがオリゴヌクレオチドおよびポリヌクレオチドから選択される請求項１〜９のいずれかに記載の薬剤。 13．ベクターが非ペプチドアゴニスト／拮抗剤そして細胞接着分子のための受容体のバインダー、サイトカイン、成長因子およびペプチドホルモン；オリゴヌクレオチドおよび修飾されたオリゴヌクレオチド；DNA−結合薬；プロテアーゼ基質／阻害剤；コンビナトリアルライブラリーから得られた非ペプチド分子；および小型生物活性分子から選択される、請求項１〜９のいずれかに記載の薬剤。 14．ベクターが、薬剤が標的に対する相互作用を示すがこれと固定的に結合しない程度の上記標的に対する親和性を有する上記請求項のいずれかに記載の薬剤。 15．ベクターが、細胞接着蛋白質のためのリガンドおよび内皮細胞表面上に相当するリガンドを有する細胞接着蛋白質からまたは細胞接着蛋白質のための非ペプチドリガンドから選択される請求項14記載の薬剤。 16．ベクターが標的に容易に曝露されないように位置づけられている上記請求項のいずれかに記載の薬剤。 17．ベクターがレポーターに共有結合的または非共有結合的にカップリングまたは結合されている上記請求項のいずれかに記載の薬剤。 18．ベクターが静電気的電荷相互作用によってレポーターにカップリングまたは結合されている請求項１から16のいずれかに記載の薬剤。 19．ベクターがアビジン−ビオチンおよび／またはストレプトアビジン−ビオチン相互作用によりレポーターにカップリングまたは結合されている請求項１〜16 のいずれかに記載の薬剤。 20．放射性の、または、Ｘ線造影剤、光造影プローブまたはスピン標識として有効な部分を更に含んでいる前記請求項のいずれかに記載の薬剤。 21．治療化合物を更に含有する前記請求項のいずれかに記載の薬剤。 22．治療化合物が抗新生物薬、血液製剤、生物学的応答調節剤、抗カビ剤、ホルモンまたはホルモン類縁体、ビタミン、酵素、抗アレルギー剤、組織因子抑制剤、血小板抑制剤、凝固蛋白標的抑制剤、フィブリン形成抑制剤、フィブリン溶解促進剤、抗血管新生剤、循環薬、代謝強化剤、抗結核剤、抗ウイルス剤、血管拡張剤、抗生物質、抗炎症剤、抗原虫剤、抗リューマチ剤、麻酔剤、アヘン剤、強心配糖体、神経筋ブロッカー、鎮静剤、局所麻酔薬、全身麻酔薬または遺伝子物質である請求項21記載の薬剤。 23．上記治療化合物がジスルフィド基を介してレポーターに共有結合的にカップリングまたは結合している請求項21または22に記載の薬剤。 24．親油性であるかまたは親油性になるように誘導化された治療化合物が疎水性相互作用を介してレポーターに結合された請求項21または22に記載の薬剤。 25．下記成分：ｉ）選択された標的に対する親和性を有する前標的設定ベクターを有する第１の投与可能な組成物；および ii）前記請求項のいずれかに記載の薬剤を含有し、その薬剤が上記前標的設定ベクターに対する親和性を有するベクターからなる第２の投与可能な組成物を含有する複合製剤。 26．前標的設定ベクターが誘導された単糖類またはオリゴ糖類からなる請求項25 記載の複合製剤。 27．下記成分：ｉ）請求項１〜24のいずれか１項に記載の薬剤を含む投与可能な第１の組成物、 ii）薬剤をその標的から置き換えまたは放出させることのできる物質を含有する投与可能な第２の組成物を含有する複合製剤。 28．下記成分：ｉ）請求項23に記載の薬剤を含む投与可能な第１の組成物、 ii）この投与可能な第１の組成物の薬剤中の治療用化合物とレポーターとをカップリングまたは結合するジスフィド基を還元的に切断することのできる還元剤を含む投与可能な第２の組成物を含有する複合製剤。 29．少なくとも一つの非蛋白質、非ペプチドおよび非多糖類のベクターを気体含有または気体発生物質からなるレポーターにカップリングまたは結合することからなる、請求項１記載の標的設定診断用および／または治療活性を有する薬剤を調製するための方法。 30．治療化合物もまたレポーターと配合させる請求項29記載の方法。 31．標的設定超音波造影剤としての請求項１〜24のいずれかに記載の薬剤の使用。 32．請求項１〜24のいずれかに記載の薬剤をヒトまたはヒト以外の動物の身体に投与し、そして、上記身体の少なくとも一部の、超音波、磁気共鳴、Ｘ線、放射線または光による像を発生させることからなる上記身体の増強された像を発生させる方法。 33．下記工程：ｉ）選択された標的に対する親和性を有する前標的設定ベクターを上記身体に投与すること；および、その後、 ii）上記前標的設定ベクターに対する親和性を有するベクターを含有する請求項１〜24のいずれかに記載の薬剤を投与することからなる請求項32記載の方法。 34．前標的設定ベクターが誘導された単糖類またはオリゴ糖類を包含する請求項 33記載の方法。 35．下記工程：ｉ）請求項１〜24のいずれかに記載の薬剤を上記身体に投与し、そしてその後、 ii）上記薬剤をその標的から置き換えまたは放出させることのできる物質を投与することからなる請求項32記載の方法。 36．薬剤が更に治療化合物を含有する請求項32〜35のいずれかに記載の方法。 37．上記治療化合物がジスルフィド基を介してレポーターに共有結合的にカップリングまたは結合されており、上記ジスルフィド基を還元的に切断することのできる還元剤を含有する組成物を後に投与する請求項36記載の方法。 38．標的を発現する細胞がフローチャンバー内に固定的に位置付けられており、担体液体中の薬剤の懸濁液が上記チャンバーを通過し、上記薬剤の上記細胞への結合を測定する請求項１〜24のいずれかに記載の薬剤による標的設定のin vitro 検査のための方法。 39．担体液体の流量を制御してin vivoで生じるせん断速度を擬似的に具現化する請求項38記載の方法。