JP2002322149A - Pkb-3384 substance having action suppressing apotosis - Google Patents

Abstract

PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a new compound having an action suppressing apotosis or the like. SOLUTION: The PKB-3384 substance is a compound represented by formula (1). [wherein, R<1> is a hydroxy group, -CH2 -O-CO-R<3> (wherein, R<3> is an alkyl group, an aryl group or an alkylamino group), -CH2 -O-R<4> (wherein, R<4> is H, an alkyl group or an alkenyl group), -CH2 =N-O-R<5> (R<5> is H or an alkyl group) or -CH2 =CH-R<6> (R<6> is an alkyloxycarbonyl group, a formyl group or an alkyloxycarbonylalkenyl group); R<2> represents H, and R<1> and R<2> may combine with each other to represent an oxo group].

Description

【発明の詳細な説明】DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

【０００１】[0001]

【発明の属する技術分野】本発明は、アポトーシス抑制
剤などの医薬の有効成分として有用な新規化合物に関す
るものである。[0001] The present invention relates to a novel compound useful as an active ingredient of a medicament such as an apoptosis inhibitor.

【０００２】[0002]

【従来の技術】1970年代に提案された細胞死の一形態で
あるアポトーシスは、ネクローシスとは異なり、ある特
定の細胞内情報伝達系を介して誘導される細胞死である
〔セル(Cell), 88, 355-365 (1997)〕。アポトーシスは
多くの疾患において病態に関与しており、アポトーシス
を制御することがそれらの治療法の進歩に寄与する可能
性が高い。例えば、正常のアポトーシス制御機構が逸脱
して細胞死が亢進することにより、関節リウマチ、Ｂ型
肝炎およびＣ型肝炎等のウイルス感染に伴う肝炎、劇症
肝炎、糖尿病、心筋梗塞、潰瘍性大腸炎、慢性腎炎、脱
毛症、アルツハイマー病およびパーキンソン氏病などの
神経変性疾患、虚血性脳障害、後天性免疫不全症候群、
拡張性心筋症などを惹起すると考えられている〔サイエ
ンス(Science), 267, 1456-1462 (1995)〕。BACKGROUND ART Apoptosis, a form of cell death proposed in the 1970's, is a cell death induced through a specific intracellular signaling system, unlike necrosis [Cell, 88, 355-365 (1997)]. Apoptosis has been implicated in the pathology of many diseases, and controlling apoptosis is likely to contribute to their therapeutic progress. For example, a normal apoptosis control mechanism is deviated and cell death is enhanced, so that hepatitis, fulminant hepatitis, diabetes, myocardial infarction, ulcerative colitis associated with viral infections such as rheumatoid arthritis, hepatitis B and hepatitis C, etc. Neurodegenerative diseases such as chronic nephritis, alopecia, Alzheimer's disease and Parkinson's disease, ischemic encephalopathy, acquired immunodeficiency syndrome,
It is thought to cause dilated cardiomyopathy and the like (Science, 267, 1456-1462 (1995)).

【０００３】アポトーシスを誘導する生理的な刺激とし
ては、Fas/Apo-1/CD95のリガンドや、Fas抗体、TNF(腫
瘍壊死因子)などが挙げられる〔セル(Cell), 88, 355-3
65 (1997)〕。アポトーシスを抑制する化合物として
は、システインプロテアーゼ阻害剤として各種ペプチド
性カスパーゼ阻害剤などが知られているがペプチドであ
るが故の不安定性、活性の強さの点で問題を抱えてい
る。[0003] Physiological stimuli for inducing apoptosis include Fas / Apo-1 / CD95 ligand, Fas antibody, TNF (tumor necrosis factor) and the like (Cell, 88, 355-3).
65 (1997)]. As a compound that suppresses apoptosis, various peptidic caspase inhibitors and the like are known as cysteine protease inhibitors, but they have problems in terms of instability and activity due to being a peptide.

【０００４】一方、現在、臨床的に使用されている抗癌
剤は、その殺細胞効果により一時的に癌の退縮や消失を
達成できるものの、正常細胞にも作用して重篤な副作用
を引き起こすため、その使用には大きな制約がある。ま
た、胃癌、大腸癌、膵臓癌などには抗癌剤がほとんど無
効な自然耐性癌も多く、あるいは最初は奏効した抗癌剤
が効かない獲得耐性癌細胞が出現するという深刻な問題
がある。On the other hand, anticancer drugs currently used clinically can temporarily achieve regression or disappearance of cancer due to their cell killing effect, but also act on normal cells to cause serious side effects. Its use has significant limitations. In addition, gastric cancer, colorectal cancer, pancreatic cancer and the like have a serious problem in that many naturally resistant cancers in which an anticancer drug is almost ineffective, or acquired resistant cancer cells in which an initially effective anticancer drug does not work appear.

【０００５】近年、固形癌がある一定以上より大きくな
るためのメカニズムとして、癌細胞に栄養や酸素を供給
するためのいわゆる腫瘍血管新生が注目されている。こ
の腫瘍血管新生を阻害することにより癌の増殖を押さえ
る「腫瘍血管新生阻害療法」という概念が確立しつつあ
る[ヨロピアン ジャーナル オブ キャンサー(Eur. J. C
ancer), 32A, 2534-2539 (1996)]。すでに多数の化合物
が抗腫瘍剤として実用化されているが、血管新生阻害剤
は従来の抗癌剤にない利点をもっているため、臨床での
１日も早い使用が待ち望まれている。現在、いくつかの
血管新生阻害剤が開発研究されてはいるが、リード化合
物となりうる新しい化合物は不断の希求と考えられる。[0005] In recent years, so-called tumor angiogenesis for supplying nutrients and oxygen to cancer cells has attracted attention as a mechanism for increasing the size of a solid cancer beyond a certain level. The concept of "tumor angiogenesis inhibitory therapy" that suppresses tumor growth by inhibiting tumor angiogenesis is being established [European Journal of Cancer (Eur. J. C.)
ancer), 32A, 2534-2539 (1996)]. Although many compounds have already been put into practical use as antitumor agents, angiogenesis inhibitors have advantages not found in conventional anticancer agents, and thus their use in clinical applications as soon as possible is expected. At present, several angiogenesis inhibitors are being developed and studied, but new compounds that can be lead compounds are considered to be a constant need.

【０００６】また、血管内皮細胞の癌組織へのリクルー
ト機構は、白血球などが炎症部位にリクルートされる機
構に似ている点が多いことから、血管内皮細胞の走化性
を阻害する薬剤は、血管新生阻害剤としてだけではな
く、抗炎症剤としての可能性も期待される[イミュニテ
ィー(Immunity), 12, 121-127 (2000)]。[0006] The mechanism of recruitment of vascular endothelial cells to cancerous tissue is often similar to the mechanism by which leukocytes and the like are recruited to sites of inflammation. It is expected to have potential as an anti-inflammatory agent as well as an angiogenesis inhibitor [Immunity, 12, 121-127 (2000)].

【０００７】[0007]

【発明が解決しようとする課題】本発明の課題は、医薬
の有効成分として有用な新規化合物を提供することにあ
る。より具体的には、血管新生を阻害することにより、
又は細胞周期を阻害することにより抗腫瘍効果を発揮す
る化合物を提供することが本発明の課題である。また、
本発明の別の課題は、アポトーシス抑制作用を有し、関
節リウマチ、Ｂ型肝炎およびＣ型肝炎等のウイルス感染
に伴う肝炎などの疾患の予防及び／又は治療に有用な化
合物を提供することにある。An object of the present invention is to provide a novel compound which is useful as an active ingredient of a medicine. More specifically, by inhibiting angiogenesis,
Alternatively, it is an object of the present invention to provide a compound that exhibits an antitumor effect by inhibiting the cell cycle. Also,
Another object of the present invention is to provide a compound having an apoptosis-suppressing action and useful for the prevention and / or treatment of diseases such as hepatitis associated with viral infections such as rheumatoid arthritis, hepatitis B and hepatitis C. is there.

【０００８】[0008]

【課題を解決するための手段】本発明者らは上記の課題
を解決すべく鋭意研究を行った結果、新たに採取した微
生物BAUA3384株の培養液に含まれる新規化合物が血管新
生抑制活性、アポトーシス抑制活性、及び細胞周期阻害
活性を有しており、医薬の有効成分として有用であるこ
とを見出した。本発明は上記の知見を基にして完成され
たものである。Means for Solving the Problems The present inventors have conducted intensive studies to solve the above-mentioned problems, and as a result, a novel compound contained in a culture of a newly collected microorganism BAUA3384 strain has angiogenesis inhibitory activity and apoptosis. It has inhibitory activity and cell cycle inhibitory activity, and has been found to be useful as an active ingredient of a medicine. The present invention has been completed based on the above findings.

【０００９】すなわち、本発明は、以下の式（Ｉ）：That is, the present invention provides the following formula (I):

【化４】 〔式中、R¹はヒドロキシ基、- CH₂-O-CO-R³(式中、R³は
アルキル基、アリール基、又はアルキルアミノ基を示
す)、-CH₂-O-R⁴(式中、R⁴は水素原子、アルキル基、又
はアルケニル基を示す)、-CH₂=N-O-R⁵(R⁵は水素原子又
はアルキル基を示す)、又は-CH₂=CH-R⁶(R⁶はアルキルオ
キシカルボニル基、ホルミル基、又はアルキルオキシカ
ルボニルアルケニル基を示す)を示し、R²は水素原子を
示すが、R¹及びR²が一緒になってオキソ基となってもよ
い〕で表される化合物を提供するものである。Embedded image (In the formula, R ¹ is a hydroxy group, -CH ₂ -O-CO-R ³ (wherein, R ³ represents an alkyl group, an aryl group, or an alkylamino group), -CH ₂ -OR ⁴ (wherein , R ⁴ represents a hydrogen atom, an alkyl group, or an alkenyl group), -CH ₂ = NOR ⁵ (R ⁵ represents a hydrogen atom or an alkyl group), or -CH ₂ = CH-R ⁶ (R ⁶ is an alkyl Represents an oxycarbonyl group, a formyl group, or an alkyloxycarbonylalkenyl group), and R ² represents a hydrogen atom, but R ¹ and R ² may be combined to form an oxo group). It provides a compound.

【００１０】この発明の好ましい態様により、下記の式
（II）：According to a preferred embodiment of the present invention, the following formula (II):

【化５】 で表される化合物、及び下記の式（III）：Embedded image And a compound represented by the following formula (III):

【化６】 で表される化合物が提供される。Embedded image Is provided.

【００１１】さらに別の観点からは、上記の式（Ｉ）な
いし式（III）で表される化合物を有効成分として含む
医薬が本発明により提供される。この医薬は血管新生阻
害剤、アポトーシス抑制剤、又は細胞周期阻害剤として
有用であり、抗腫瘍剤又はアポトーシスの異常亢進が関
与する疾患の予防及び／又は治療のための医薬として用
いることができる。より具体的には、本発明の医薬は、
例えば、抗腫瘍剤のほか、関節リウマチ、Ｂ型肝炎およ
びＣ型肝炎等のウイルス感染に伴う肝炎、劇症肝炎、糖
尿病およびその合併症、心筋梗塞、潰瘍性大腸炎、慢性
腎炎、脱毛症、アルツハイマー病およびパーキンソン氏
病などの神経変性疾患、虚血性脳障害、後天性免疫不全
症候群、拡張性心筋症などの疾患の予防及び／又は治療
のための医薬として有用である。From a further aspect, the present invention provides a medicament comprising a compound represented by the above formulas (I) to (III) as an active ingredient. This medicament is useful as an angiogenesis inhibitor, an apoptosis inhibitor, or a cell cycle inhibitor, and can be used as an antitumor agent or a medicament for preventing and / or treating a disease associated with abnormally enhanced apoptosis. More specifically, the medicament of the present invention
For example, in addition to antitumor agents, rheumatoid arthritis, hepatitis associated with viral infections such as hepatitis B and hepatitis C, fulminant hepatitis, diabetes and its complications, myocardial infarction, ulcerative colitis, chronic nephritis, alopecia, It is useful as a pharmaceutical for preventing and / or treating neurodegenerative diseases such as Alzheimer's disease and Parkinson's disease, ischemic encephalopathy, acquired immunodeficiency syndrome, and dilated cardiomyopathy.

【００１２】さらに別の観点からは、上記の医薬の製造
のための上記の式（Ｉ）ないし式（III）で表される化
合物の使用；血管新生の阻害方法であって、上記の式
（Ｉ）ないし式（III）で表される化合物の有効量をヒ
トを含む哺乳類動物に投与する工程を含む方法；アポト
ーシスの調節方法、好ましくはアポトーシスの抑制方法
であって、上記の式（Ｉ）ないし式（III）で表される
化合物の有効量をヒトを含む哺乳類動物に投与する工程
を含む方法；悪性腫瘍の治療方法であって、上記の式
（Ｉ）ないし式（III）で表される化合物の有効量をヒ
トを含む哺乳類動物に投与する工程を含む方法が提供さ
れる。From a further aspect, there is provided a use of a compound represented by the above formula (I) or (III) for the manufacture of the above medicament; a method for inhibiting angiogenesis, A method comprising the step of administering an effective amount of a compound represented by formula (I) to formula (III) to mammals including humans; a method for regulating apoptosis, preferably a method for suppressing apoptosis, wherein the method comprises formula (I) A method comprising the step of administering an effective amount of a compound represented by the formula (III) to a mammal including a human; a method for treating a malignant tumor, which is represented by the above formula (I) to the formula (III) Administering an effective amount of a compound to mammals, including humans.

【００１３】また、本発明により、アポトーシスの異常
亢進が関与する疾患の予防及び／又は治療方法であっ
て、上記の式（Ｉ）ないし式（III）で表される化合物
の有効量をヒトを含む哺乳類動物に投与する工程を含む
方法；過度の炎症の治療方法であって、上記の式（Ｉ）
ないし一般式（III）で表される化合物の有効量をヒト
を含む哺乳類動物に投与する工程を含む方法；血管内皮
細胞の走化性の調節方法であって、上記の式（Ｉ）ない
し式（III）で表される化合物の有効量をヒトを含む哺
乳類動物に投与する工程を含む方法；及び細胞周期進行
の調節方法であって、上記の式（Ｉ）又は式（III）で
表される化合物の有効量を細胞に接触させる行程を含む
方法が提供される。Further, according to the present invention, there is provided a method for preventing and / or treating a disease associated with abnormally enhanced apoptosis, wherein an effective amount of the compound represented by the above formulas (I) to (III) is used for humans. A method of treating excessive inflammation, the method comprising administering to a mammal comprising:
A method comprising the step of administering an effective amount of the compound represented by the general formula (III) to mammals including humans; a method for regulating the chemotaxis of vascular endothelial cells, wherein A method comprising the step of administering an effective amount of the compound represented by (III) to mammals including humans; and a method for regulating cell cycle progression, which is represented by the above formula (I) or (III). A method comprising contacting a cell with an effective amount of a compound.

【００１４】[0014]

【発明の実施の形態】本明細書において、「アルキル
基」は直鎖状、分枝鎖状、環状、又はそれらの組み合わ
せのいずれでもよい。アルキル基としては、例えば、炭
素数１ないし６個のアルキル基、好ましくは直鎖状又は
分枝鎖状の炭素数１ないし６個のアルキル基を用いるこ
とができる。より具体的には、メチル基、エチル基、ｎ
−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブ
チル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ｎ−
ペンチル基、ｎ−ヘキシル基などを用いることができ
る。アルキル部分を有する他の置換基（例えばアルキル
オキシカルボニル基、アルキルアミノ基など）のアルキ
ル部分についても同様である。BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION In the present specification, an “alkyl group” may be linear, branched, cyclic, or a combination thereof. As the alkyl group, for example, an alkyl group having 1 to 6 carbon atoms, preferably a linear or branched alkyl group having 1 to 6 carbon atoms can be used. More specifically, a methyl group, an ethyl group, n
-Propyl group, isopropyl group, n-butyl group, isobutyl group, sec-butyl group, tert-butyl group, n-
A pentyl group, an n-hexyl group and the like can be used. The same applies to the alkyl portion of another substituent having an alkyl portion (eg, an alkyloxycarbonyl group, an alkylamino group, etc.).

【００１５】アリール基は単環又は縮合環のいずれでも
よく、例えばフェニル基、ナフチル基などを挙げること
ができる。アルケニル基に含まれる二重結合の数は特に
限定されないが、例えば１ないし３個程度であり、好ま
しくは１個又は２個である。アルケニル部分を含むアル
キルオキシカルボニルアルケニル基のアルケニル部分に
ついても同様である。アルキルアミノ基はモノアルキル
アミノ基又はジアルキルアミノ基のいずれでもよく、ジ
アルキルアミノ基に存在する２つのアルキル基は同一で
も異なっていてもよい。The aryl group may be a single ring or a condensed ring, and examples thereof include a phenyl group and a naphthyl group. The number of double bonds contained in the alkenyl group is not particularly limited, but is, for example, about 1 to 3, and preferably 1 or 2. The same applies to the alkenyl moiety of the alkyloxycarbonylalkenyl group containing the alkenyl moiety. The alkylamino group may be either a monoalkylamino group or a dialkylamino group, and the two alkyl groups present in the dialkylamino group may be the same or different.

【００１６】アルキル基、アリール基、アルキルアミノ
基、-CH₂-O-R⁴で表される基、-CH₂=N-O-R⁵で表される
基、又は-CH₂=CH-R⁶で表される基は１個又は２個以上の
置換基を有していてもよい。これらの基に存在する置換
基の個数、存在位置、種類は特に限定されない。置換基
としては、例えば、ハロゲン原子、アルキル基、アルコ
キシ基、アリール基、アミノ基、ヒドロキシ基、オキソ
基などを例示することができる。R¹はヒドロキシメチル
基であることが好ましい。また、R¹及びR²が一緒になっ
てオキソ基を示す場合も好ましい。An alkyl group, an aryl group, an alkylamino group, a group represented by —CH ₂ —OR ⁴ , a group represented by —CH ₂ NNOR ⁵ , or a group represented by —CH ₂ CHCH—R ⁶ The groups may have one or more substituents. The number, location, and type of substituents present on these groups are not particularly limited. Examples of the substituent include a halogen atom, an alkyl group, an alkoxy group, an aryl group, an amino group, a hydroxy group, and an oxo group. Preferably, R ¹ is a hydroxymethyl group. It is also preferred that R ¹ and R ² together represent an oxo group.

【００１７】式（Ｉ）ないし式（III）で表される化合
物は少なくとも１個の不斉炭素を有しており、置換基の
種類により２個以上の不斉炭素を有する場合がある。こ
（れら）の不斉炭素に基づく光学異性体又はジアステレ
オマーなどの立体異性体が存在するが、本発明の範囲に
は純粋な形態の立体異性体のほか、任意の立体異性体の
混合物又はラセミ体などが包含される。また、本発明の
化合物は５個のオレフィン性二重結合を有しており、さ
らに二重結合を有する場合もある。それぞれの二重結合
に基く幾何異性体が存在するが、純粋な形態の幾何異性
体のほか、任意の幾何異性体の混合物も本発明の範囲に
包含される。さらに、本発明の化合物は互変異性体とし
て存在する可能性もあるが、任意の互変異性体又はそれ
らの混合物も本発明の範囲に包含される。本発明の化合
物は任意の結晶形として存在することができ、水和物又
は溶媒和物として存在する場合もある。これらの物質が
いずれも本発明の範囲に包含されることは言うまでもな
い。The compounds represented by the formulas (I) to (III) have at least one asymmetric carbon, and may have two or more asymmetric carbons depending on the type of the substituent. Although stereoisomers such as optical isomers or diastereomers based on these asymmetric carbons exist, the scope of the present invention includes not only stereoisomers in pure form but also any stereoisomers. Mixtures or racemates are included. Further, the compound of the present invention has five olefinic double bonds, and may further have a double bond. Although there are geometric isomers based on each double bond, pure geometrical isomers as well as mixtures of arbitrary geometric isomers are included in the scope of the present invention. Further, although the compounds of the present invention may exist as tautomers, any tautomers or mixtures thereof are included in the scope of the present invention. The compounds of the present invention can exist in any crystalline form, and may exist as hydrates or solvates. It goes without saying that all of these substances are included in the scope of the present invention.

【００１８】式（Ｉ）で表される化合物のうち、好まし
い化合物は上記の式（II）および式(III)で示される化
合物である。本明細書において、式（II）で表される化
合物を「RKB-3384A」、式（III）で表される化合物を
「RKB-3384B」と呼ぶ場合がある。なお、この化合物は
立体異性体（又は幾何異性体）が一部平衡状態にあり、
上記の式（II）および(III)はその立体異性体の主要な
１つを特定したものである。Among the compounds represented by the formula (I), preferred compounds are the compounds represented by the above formulas (II) and (III). In this specification, the compound represented by the formula (II) may be referred to as “RKB-3384A”, and the compound represented by the formula (III) may be referred to as “RKB-3384B”. In this compound, stereoisomers (or geometric isomers) are partially in equilibrium,
Formulas (II) and (III) above identify one of the major stereoisomers.

【００１９】本発明の式（Ｉ）ないし式（III）で表さ
れる化合物は微生物の培養物から分離・採取することが
でき、あるいは微生物の培養物から分離・採取された本
発明の化合物を出発原料として化学的修飾を施す方法に
より製造することができる。本発明の化合物を産生しう
る微生物としてはアスペルギルス属に属するBAUA-3384
株を例示することができる。この微生物を通常用いられ
る培地組成及び培養条件で培養し、培養物に含まれる本
発明の化合物を分離・採取することができる。本菌株は
工業技術院生命工学工業技術研究所（日本国茨城県つく
ば市東一丁目１番３号）に受託番号FERM P-18283として
寄託されている。The compounds of the present invention represented by the formulas (I) to (III) can be separated and collected from a culture of a microorganism, or the compound of the present invention separated and collected from a culture of a microorganism. It can be produced by a method of chemically modifying a starting material. As a microorganism capable of producing the compound of the present invention, BAUA-3384 belonging to the genus Aspergillus
A strain can be exemplified. This microorganism is cultured under a commonly used medium composition and culture conditions, and the compound of the present invention contained in the culture can be separated and collected. This strain has been deposited with the National Institute of Advanced Industrial Science and Technology (1-3-3 Higashi, Tsukuba, Ibaraki, Japan) under the accession number FERM P-18283.

【００２０】本発明の化合物の製造用培地としては、炭
素源、窒素源、および無機塩を適当に含有するものであ
れば合成培地または天然培地のいずれでも好適に用いる
ことができる。必要に応じて、ビタミン類またはその他
栄養物質を適宜加えてもよい。炭素源としては、例え
ば、グルコース、マルトース、フラクトース、シューク
ロース、デンプン等の糖類、グリセロール、マンニトー
ル等のアルコール類、グリシン、アラニン、アスパラギ
ン等のアミノ酸類、大豆油、オリーブ油等の油脂類等の
一般的な炭素源より微生物の資化性を考慮して１種また
は２種以上を適宜選択して用いればよい。窒素源として
は、大豆粉、コーンスチープリカー、ビーフエキス、ペ
プトン、酵母エキス、アミノ酸混合物、魚粉等の有機含
窒素化合物またはアンモニウム塩、硝酸塩等の無機窒素
化合物が挙げられ、微生物の資化性を考慮して１種また
は２種以上を適宜選択して用いればよい。無機塩として
は、例えば炭酸カルシウム、塩化ナトリウム、塩化カリ
ウム、硫酸マグネシウム、硫酸銅、塩化マンガン、硫酸
亜鉛、塩化コバルト、各種リン酸塩を必要に応じて添加
すればよい。また、消泡剤、例えば植物脂、ポリプロピ
レンアルコール等を必要に応じて添加することができ
る。As a medium for producing the compound of the present invention, any synthetic medium or natural medium can be suitably used as long as it contains a carbon source, a nitrogen source, and an inorganic salt appropriately. If necessary, vitamins or other nutrients may be added as appropriate. Examples of the carbon source include sugars such as glucose, maltose, fructose, sucrose and starch; alcohols such as glycerol and mannitol; amino acids such as glycine, alanine and asparagine; and oils and fats such as soybean oil and olive oil. One or two or more species may be appropriately selected and used from natural carbon sources in consideration of the assimilation of microorganisms. Examples of the nitrogen source include organic nitrogen-containing compounds such as soybean flour, corn steep liquor, beef extract, peptone, yeast extract, amino acid mixture, fish meal and the like, and inorganic nitrogen compounds such as ammonium salts and nitrates. One or two or more types may be appropriately selected and used. As the inorganic salt, for example, calcium carbonate, sodium chloride, potassium chloride, magnesium sulfate, copper sulfate, manganese chloride, zinc sulfate, cobalt chloride, and various phosphates may be added as needed. Further, an antifoaming agent, for example, vegetable fat, polypropylene alcohol or the like can be added as needed.

【００２１】培養温度は、微生物が成育し、かつ本発明
の化合物が効率的に産生される範囲で適宜変更できる
が、好ましくは10ないし32℃であり、さらに好ましくは
20ないし25℃である。培養開始時のpHは6ないし8付近が
望ましく、培養時間は通常日〜数週間程度である。一般
的には、本発明の化合物の生産量が採取可能な量に達し
たとき、好ましくは最高に達したときに培養を終了すれ
ばよい。培養法としては、固層培養、通常攪拌培養等の
通常用いられる方法をいずれも好適に用いうる。The cultivation temperature can be appropriately changed within a range in which the microorganism grows and the compound of the present invention is efficiently produced, but is preferably 10 to 32 ° C, more preferably
20-25 ° C. The pH at the start of the culture is desirably around 6 to 8, and the culture time is usually about a day to several weeks. Generally, the cultivation may be terminated when the production of the compound of the present invention reaches a retrievable amount, preferably when it reaches the maximum. As the culture method, any of the commonly used methods such as solid phase culture and ordinary stirring culture can be suitably used.

【００２２】培養終了後、培養液から本発明の化合物を
分離・採取するには、一般に微生物代謝産物を採取する
のに通常用いられる手段を適宜利用して行うことができ
る。例えば、各種イオン交換樹脂、非イオン性吸着樹脂
などを用いた分離方法、ゲル濾過クロマトグラフィー、
活性炭、アルミナ若しくはシリカゲル等の吸着剤による
クロマトグラフィー、又は高速液体クロマトグラフィー
などのクロマトグラフィーを用いた分離方法、あるいは
結晶化、減圧濃縮、又は凍結乾燥の手段を単独でまたは
適宜組み合わせて、あるいは反復して用いることが可能
である。After the completion of the culture, the compound of the present invention can be separated and collected from the culture solution by appropriately using a method generally used for collecting a metabolite of a microorganism. For example, various ion exchange resins, a separation method using a nonionic adsorption resin, gel filtration chromatography,
Separation methods using chromatography such as activated carbon, an adsorbent such as alumina or silica gel, or chromatography such as high performance liquid chromatography, or crystallization, concentration under reduced pressure, or lyophilization means alone or as appropriate in combination, or repeated It is possible to use it.

【００２３】培養液から分離・採取された本発明の化合
物（例えばRKB-3384A又はRKB-3384Bなど）を出発原料と
して用い、当業者に周知の官能基変換を施すことによっ
て、R¹が-CH₂-O-CO-R³(R³は上記のとおりである)、-CH₂
-O-R⁴(R⁴はアルキル基又はアルケニル基である)、-CH₂=
N-O-R⁵(R⁵は上記のとおりである)、又は-CH₂=CH-R⁶(R⁶
は上記のとおりである)である化合物を製造することが
できる。By using a compound of the present invention (for example, RKB-3384A or RKB-3384B) separated and collected from a culture solution as a starting material and subjecting it to a functional group conversion well known to those skilled in the art, R ¹ can be -CH. ₂ -O-CO-R ³ (R ³ is as described above), -CH ₂
-OR ⁴ (R ⁴ is an alkyl group or an alkenyl group), -CH ₂ =
NOR ⁵ (R ⁵ is as described above), or -CH ₂ = CH-R ⁶ (R ⁶
Is as described above).

【００２４】例えば、R¹が-CH₂-O-CO-R³である化合物は
R¹がヒドロキシメチル基である化合物からアシル化剤
（アセチルクロリドなど）などを用いた通常のエステル
化反応を行うことにより製造できる。R¹が-CH₂-O-R⁴(R⁴
はアルキル基又はアルケニル基である)である化合物はR
¹がヒドロキシメチル基である化合物からハロゲン化ア
ルキル（ヨウ化メチルなど）又はハロゲン化アリール
（臭化プロパルギルなど）通常のアルキル化又はアルケ
ニル化反応を行うことにより製造できる。R¹が-CH₂=N-O
-R⁵(R⁵は上記のとおりである)である化合物は、R¹がヒ
ドロキシメチル基である化合物を通常の酸化反応に付し
てR¹がホルミル基である化合物を製造した後、ヒドロキ
シルアミンなどを反応させることにより製造できる。ま
た、R¹が-CH₂=CH-R⁶(R⁶は上記のとおりである)である化
合物は、R¹がヒドロキシメチル基である化合物を通常の
酸化反応に付してR¹がホルミル基である化合物を製造し
た後、通常のWittig反応に付することにより製造するこ
とができる。上記の反応において、反応条件、反応試薬
などは当業者が適宜選択可能である。For example, a compound in which R ¹ is —CH ₂ —O—CO—R ³
It can be produced from a compound in which R ¹ is a hydroxymethyl group by performing a usual esterification reaction using an acylating agent (such as acetyl chloride). R ¹ is -CH ₂ -OR ⁴ (R ⁴
Is an alkyl group or an alkenyl group).
^It can be produced from a compound in which ¹ is a hydroxymethyl group by subjecting an alkyl halide (such as methyl iodide) or an aryl halide (such as propargyl bromide) to a usual alkylation or alkenylation reaction. R ¹ is -CH ₂ = NO
-R ⁵ (R ⁵ is as described above), a compound wherein R ¹ is a hydroxymethyl group is subjected to a normal oxidation reaction to produce a compound wherein R ¹ is a formyl group, It can be produced by reacting an amine or the like. Further, a compound in which R ¹ is —CH ₂ CHCH—R ⁶ (R ⁶ is as described above) is obtained by subjecting a compound in which R ¹ is a hydroxymethyl group to a normal oxidation reaction to obtain a compound in which R ¹ is formyl. The compound can be produced by subjecting the compound as a group to the usual Wittig reaction. In the above reaction, reaction conditions, reaction reagents, and the like can be appropriately selected by those skilled in the art.

【００２５】本発明の化合物は、後述の試験例に示すよ
うに血管新生抑制活性、アポトーシス抑制活性、及び細
胞周期阻害活性を有しており、抗腫瘍剤のほか、アポト
ーシスの異常亢進が関与する疾患の予防及び／又は治療
のための医薬、又は過度の血管新生に関連する疾患の予
防及び／又は治療のための医薬として有用である。正常
のアポトーシス制御機構が逸脱して細胞死が亢進してい
る疾患として、例えば、関節リウマチ、Ｂ型肝炎および
Ｃ型肝炎等のウイルス感染に伴う肝炎、劇症肝炎、糖尿
病、心筋梗塞、潰瘍性大腸炎、慢性腎炎、脱毛症、アル
ツハイマー病およびパーキンソン氏病などの神経変性疾
患、虚血性脳障害、後天性免疫不全症候群、拡張性心筋
症などを例示することができる。また、過度の血管新生
に関連する疾患としては、悪性腫瘍のほか、糖尿病血管
合併症（例えば糖尿病性網膜症）などを例示することが
できる。The compounds of the present invention have angiogenesis inhibitory activity, apoptosis inhibitory activity, and cell cycle inhibitory activity, as shown in the test examples described below, and are involved in abnormal apoptosis in addition to antitumor agents. It is useful as a medicament for preventing and / or treating a disease, or for preventing and / or treating a disease associated with excessive angiogenesis. Diseases in which the normal apoptotic control mechanism is deviated and cell death is increased include, for example, hepatitis associated with viral infections such as rheumatoid arthritis, hepatitis B and hepatitis C, fulminant hepatitis, diabetes, myocardial infarction, ulcer Examples include colitis, chronic nephritis, alopecia, neurodegenerative diseases such as Alzheimer's disease and Parkinson's disease, ischemic encephalopathy, acquired immunodeficiency syndrome, dilated cardiomyopathy, and the like. Examples of the disease associated with excessive angiogenesis include malignant tumors and diabetic vascular complications (eg, diabetic retinopathy).

【００２６】本発明の医薬は、使用目的にあわせて投与
方法、剤型、又は投与量を適宜決定することが可能であ
る。本発明の医薬の投与形態は、経口投与でも非経口投
与でもよい。本発明の医薬の形態は特に限定されない
が、例えば、錠剤、粉剤、カプセル剤、顆粒剤、エキス
剤、シロップ剤等の経口投与剤、又は注射剤、点滴剤、
若しくは坐剤等の非経口投与剤を挙げることができる。
これらの製剤は、賦形剤、結合剤等の製薬上許容される
添加剤を用いて既知の方法で医薬組成物として調製する
ことができる。本発明の化合物を有効成分として含む医
薬の投与量は、患者の年齢、体重、感受性、症状の程度
などにより異なるが、通常、効果的な量は成人１日あた
り0.1 mg〜1 g程度であり、１日一回又は数回にわけて
投与することも可能である。また、必要により上記範囲
外の量を用いることができる。The administration method, dosage form, or dosage of the medicament of the present invention can be appropriately determined according to the purpose of use. The dosage form of the medicament of the present invention may be oral or parenteral. The form of the medicament of the present invention is not particularly limited. For example, tablets, powders, capsules, granules, extracts, syrups and the like, orally administered drugs, injections, drops,
Or parenteral administration agents such as suppositories can be mentioned.
These preparations can be prepared as a pharmaceutical composition by a known method using pharmaceutically acceptable additives such as excipients and binders. The dose of the medicament containing the compound of the present invention as an active ingredient varies depending on the patient's age, body weight, sensitivity, degree of symptoms and the like, but the effective amount is usually about 0.1 mg to 1 g per adult per day. It is also possible to administer once or several times a day. If necessary, an amount outside the above range can be used.

【００２７】上記式（Ｉ）ないし式（III）で表される
本発明の化合物の用途は上記の医薬としての用途に限定
されることはない。例えば、本発明の化合物を試薬とし
て使用する場合には、有機溶剤又は含水有機溶剤に溶解
して用いることができる。例えば、各種培養細胞系へ直
接投与すると細胞成長を抑制することができる。使用可
能な有機溶剤としては、例えばメタノール、エタノー
ル、又はジメチルスルホキシド等を挙げることができ
る。試薬の形態は特に限定されないが、例えば、粉末な
どの固形剤、又は有機溶剤若しくは含水有機溶剤に溶解
した液体剤などを挙げることができる。通常、上記の化
合物を試薬として用いて細胞成長抑制作用を発揮させる
ための効果的な使用量は、0.1〜100 μg/mlであるが、
適切な使用量は培養細胞系の種類や使用目的により異な
り、当業者が適宜選択可能である。また、必要により上
記範囲外の量を用いることができる。The use of the compounds of the present invention represented by the above formulas (I) to (III) is not limited to the above-mentioned use as a medicine. For example, when the compound of the present invention is used as a reagent, it can be used by dissolving it in an organic solvent or a water-containing organic solvent. For example, direct growth into various cultured cell lines can inhibit cell growth. Examples of usable organic solvents include methanol, ethanol, and dimethyl sulfoxide. The form of the reagent is not particularly limited, and examples thereof include a solid agent such as a powder, and a liquid agent dissolved in an organic solvent or a water-containing organic solvent. Usually, the effective use amount for exerting the cell growth inhibitory action using the above compound as a reagent is 0.1 to 100 μg / ml,
The appropriate amount to be used depends on the type of the cultured cell line and the purpose of use, and can be appropriately selected by those skilled in the art. If necessary, an amount outside the above range can be used.

【００２８】[0028]

【実施例】以下、実施例により本発明をさらに具体的に
説明するが、本発明の範囲は下記の実施例に限定される
ことはない。 実施例１ グルコース 1.0%、可溶性デンプン 2.0%、大豆粉 1.5
%、麦芽抽出液 0.5%、野菜抽出液10%、リン酸第２カリ
ウム 0.05%、ポテトデキストロース 2.6%、硫酸マグネ
シウム 0.05%からなる組成の培地に、アスペルギルス属
に属するBAUA-3384株を接種して28℃で48時間振盪培養
を行った。この培養液140 mlを同組成の培地15リットル
に接種し、28℃で96時間振盪培養を行った。EXAMPLES The present invention will be described more specifically with reference to the following examples, but the scope of the present invention is not limited to the following examples. Example 1 1.0% glucose, 2.0% soluble starch, 1.5 soy flour
%, Malt extract 0.5%, vegetable extract 10%, dipotassium phosphate 0.05%, potato dextrose 2.6%, magnesium sulfate 0.05%, and inoculated with BAUA-3384 strain belonging to the genus Aspergillus. Shaking culture was performed at 28 ° C for 48 hours. 140 ml of this culture solution was inoculated into 15 liters of a medium having the same composition, and cultured at 28 ° C. for 96 hours with shaking.

【００２９】上記培養液を遠心分離器で菌体と上清に分
離し、上清をpH6.8に調整し、15リットルの酢酸エチル
で抽出した。抽出後、すべての酢酸エチルを合わせて減
圧濃縮し、褐色のシロップ10 gを得た。このシロップを
クロロホルム10 mlに溶解し、クロロホルムで充填した
シリカゲルカラム（直径4 cm、長さ60 cm）に浸潤させ
た。最初に、クロロホルム500mlで溶出した後、割合配
合を順次変えたクロロホルム-メタノール溶液（100:1,
50:1, 20:1, 10:1, 5:1, 1:1）各500 mlずつで溶出し
た。The culture broth was separated into cells and supernatant using a centrifuge, and the supernatant was adjusted to pH 6.8 and extracted with 15 liters of ethyl acetate. After extraction, all the ethyl acetates were combined and concentrated under reduced pressure to obtain 10 g of a brown syrup. This syrup was dissolved in 10 ml of chloroform and infiltrated into a silica gel column (4 cm in diameter, 60 cm in length) filled with chloroform. First, after elution with 500 ml of chloroform, a chloroform-methanol solution (100: 1,
50: 1, 20: 1, 10: 1, 5: 1, 1: 1).

【００３０】本発明の化合物RKB-3384Aは、クロロホル
ム-メタノール溶液(100:1)の画分に溶出した。この分画
を減圧濃縮することにより、0.95 gの褐色シロップを得
た。次に、この褐色シロップ0.95 gをメタノール1.9 ml
に溶解し、数回に分けて逆相ODSカラム（直径2 cm、長
さ 25 cm、PEGASIL ODS、株式会社センシュー科学製）
を用いて、高速液体クロマトグラフィーによる分取（ア
セトニトリル:水＝2:8→アセトニトリル:水＝10:0；直
線的グラジエント、流速9.0 ml/分）を行い純粋な淡黄
色アモルファス状物質RKB-3384A(20 mg)を得た。The compound RKB-3384A of the present invention eluted in a fraction of a chloroform-methanol solution (100: 1). The fraction was concentrated under reduced pressure to obtain 0.95 g of a brown syrup. Next, 0.95 g of this brown syrup was added to 1.9 ml of methanol.
And ODS column (2 cm diameter, 25 cm length, PEGASIL ODS, manufactured by Senshu Scientific Co., Ltd.)
, Separation by high performance liquid chromatography (acetonitrile: water = 2: 8 → acetonitrile: water = 10: 0; linear gradient, flow rate 9.0 ml / min) to give pure pale yellow amorphous substance RKB-3384A (20 mg) was obtained.

【００３１】本発明の化合物RKB-3384Bは、クロロホル
ム-メタノール溶液(10:1)の画分に溶出した。この分画
を減圧濃縮することにより、3.2 gの褐色シロップを得
た。次に、この褐色シロップ3.2 gをメタノール3.2 ml
に溶解し、数回に分けて逆相ODSカラム（直径2 cm、長
さ 25 cm、PEGASIL ODS、株式会社センシュー科学製）
を用いて、高速液体クロマトグラフィーによる分取（ア
セトニトリル:水＝4.5:5.5→アセトニトリル:水＝6.5:
3.5；直線的グラジエント、流速9.0 ml/分）を行い純粋
な淡黄色アモルファス状物質RKB-3384B(50 mg)を得た。The compound RKB-3384B of the present invention eluted in a fraction of a chloroform-methanol solution (10: 1). The fraction was concentrated under reduced pressure to obtain 3.2 g of a brown syrup. Next, 3.2 g of this brown syrup was added to 3.2 ml of methanol.
And ODS column (2 cm diameter, 25 cm length, PEGASIL ODS, manufactured by Senshu Scientific Co., Ltd.)
Using high performance liquid chromatography (acetonitrile: water = 4.5: 5.5 → acetonitrile: water = 6.5:
3.5; linear gradient, flow rate 9.0 ml / min) to obtain pure light yellow amorphous substance RKB-3384B (50 mg).

【００３２】RKB-3384A NMRデータを表１に示す（溶媒：重クロロホルム、δpp
m、内部標準: TMS、¹³C：100 MHz、¹H：400 MHz）。 性状：淡黄色アモルファス状 分子式：C₂₀H₂₃NO₅ 比旋光度：-14.0 (c=0.2, メタノール, 30℃) 高分解能質量分析 (HR-EIMS) ： (M+) 実験値 (m/z)： 357.1555 理論値 (m/z)：357.1576 UV λmax nm (メタノール) (ε)：360 (20350) IR λmax (neat) cm^-1：3275, 1720, 1700, 1650, 158
0, 1460, 1250, 1180 Rf値（シリカゲル60 F₂₅₄、メルク社製）:0.61 (溶媒;
CHCl₃:メタノール=10:1) 呈色反応（陽性）：10%硫酸、ヨウ素The RKB-3384A NMR data is shown in Table 1 (solvent: deuterated chloroform, δpp
m, internal standard: TMS, ¹³ C: 100 MHz, ¹ H: 400 MHz). Properties: pale yellow amorphous Molecular formula: C ₂₀ H ₂₃ NO ₅ Specific rotation: -14.0 (c = 0.2, methanol, 30 ° C) High-resolution mass spectrometry (HR-EIMS): (M +) Experimental value (m / z) : 357.1555 Theoretical value (m / z): 357.1576 UV λmax nm (methanol) (ε): 360 (20350) IR λmax (neat) cm ^-1 : 3275, 1720, 1700, 1650, 158
0, 1460, 1250, 1180 Rf value (silica gel 60 F ₂₅₄ , manufactured by Merck): 0.61 (solvent;
CHCl ₃ : methanol = 10: 1) Color reaction (positive): 10% sulfuric acid, iodine

【００３３】[0033]

【化７】 Embedded image

【００３４】[0034]

【表１】 [Table 1]

【００３５】RKB-3384B NMRデータを表２に示す（溶媒：重クロロホルム、δpp
m、内部標準: TMS、¹³C：125 MHz、¹H：500 MHz）。 性状：淡黄色アモルファス状 分子式：C₂₁H₂₇NO₅ 比旋光度：+20.0 (c=0.40, メタノール, 21℃) 高分解能質量分析 (HR-FAB, pos.) ： (M+H)+ 実験値 (m/z)：374.1946 理論値 (m/z)：374.1967 UV λmax nm (メタノール) (ε)：272 (7270), 360 (56
930) IR λmax (neat) cm^-1：3475, 1715, 1700, 1680, 165
0, 1650, 1585, 1260 Rf値（シリカゲル60 F₂₅₄、メルク社製）:0.42 (溶媒;
CHCl₃:メタノール=10:1) 呈色反応（陽性）：10%硫酸、ヨウ素RKB-3384B NMR data is shown in Table 2 (solvent: deuterated chloroform, δpp
m, internal standard: TMS, ¹³ C: 125 MHz, ¹ H: 500 MHz). Properties: pale yellow amorphous Molecular formula: C ₂₁ H ₂₇ NO ₅ Specific rotation: +20.0 (c = 0.40, methanol, 21 ° C) High-resolution mass spectrometry (HR-FAB, pos.): (M + H) + experiment Value (m / z): 374.1946 theoretical value (m / z): 374.1967 UV λmax nm (methanol) (ε): 272 (7270), 360 (56
930) IR λmax (neat) cm ^-1 : 3475, 1715, 1700, 1680, 165
0, 1650, 1585, 1260 Rf value (silica gel 60 F ₂₅₄ , manufactured by Merck): 0.42 (solvent;
CHCl ₃ : methanol = 10: 1) Color reaction (positive): 10% sulfuric acid, iodine

【００３６】[0036]

【化８】 Embedded image

【００３７】[0037]

【表２】 [Table 2]

【００３８】試験例１：RKB-3384AおよびRKB-3384Bによ
る血管内皮細胞の走化性の阻害 HuMedia-EG2 (KURABO)培地を用いて培養維持されたHUVE
C細胞（正常ヒトさい帯静脈血管内皮細胞）をケモタキ
セルチャンバーを用いた３次元培養の上層にまいた。下
層に内皮細胞増殖因子(VEGF)を含むHuMedia-EG2を充填
させることでHUVEC細胞の走化性を誘導した。RKB-3384A
及びRKB-3384Bは、それぞれ10〜30 μg/mlの濃度でVEGF
によって誘導されるHUVEC細胞の走化性を抑制した。こ
の結果は、本発明の上記化合物が抗VEGF作用を有してお
り、血管新生阻害剤、抗腫瘍剤、及び抗炎症剤などの医
薬として有効であることを示している。Test Example 1: Inhibition of chemotaxis of vascular endothelial cells by RKB-3384A and RKB-3384B HUVE cultured and maintained using HuMedia-EG2 (KURABO) medium
C cells (normal human umbilical vein endothelial cells) were seeded on the upper layer of three-dimensional culture using a chemotaxel chamber. HUVEC cell chemotaxis was induced by filling the lower layer with HuMedia-EG2 containing endothelial cell growth factor (VEGF). RKB-3384A
And RKB-3384B are VEGF at a concentration of 10-30 μg / ml, respectively.
Induced chemotactic activity of HUVEC cells. This result indicates that the above compound of the present invention has an anti-VEGF activity and is effective as a drug such as an angiogenesis inhibitor, an antitumor agent, and an anti-inflammatory agent.

【００３９】試験例２：RKB-3384AおよびRKB-3384Bによ
るFas抗体誘導アポトーシスの抑制活性 Fasを発現している成人T細胞白血病細胞株Jurkat細胞を
Fas抗体感受性細胞として用いた。Jurkat細胞は、10%子
牛血清を含むRPMI培地にて5%炭酸ガスと水蒸気を飽和さ
せた培養器内で培養した。対数増殖期にあるJurkat細胞
に一連の希釈系列のRKB-3384A又はRKB-3384Bを添加し、
Fas抗体CH-11(株式会社医学生物学研究所製, 100 ng/m
l)存在下で6時間培養し、細胞の生存率をMTT法により検
定した。生存率は以下の式に従い算出した。 生存率(%)=[[(抗Fas抗体および化合物の存在下における
吸光度)−(抗Fas抗体存在下および化合物の非存在下に
おける吸光度)]/[( 抗Fas抗体および化合物の非存在下
における吸光度)−(抗Fas抗体存在下および化合物の非
存在下における吸光度)]]×100Test Example 2 Inhibitory Activity of RKB-3384A and RKB-3384B on Fas Antibody-Induced Apoptosis Adult T-cell leukemia cell line Jurkat cells expressing Fas were
The cells were used as Fas antibody-sensitive cells. Jurkat cells were cultured in RPMI medium containing 10% calf serum in an incubator saturated with 5% carbon dioxide and water vapor. A series of dilution series of RKB-3384A or RKB-3384B was added to Jurkat cells in logarithmic growth phase,
Fas antibody CH-11 (Medical Biology Laboratories, Inc., 100 ng / m
l) The cells were cultured in the presence for 6 hours, and the cell viability was assayed by the MTT method. The survival rate was calculated according to the following equation. Viability (%) = [[(absorbance in the presence of anti-Fas antibody and compound) − (absorbance in presence of anti-Fas antibody and absence of compound)] / [(in the absence of anti-Fas antibody and compound) Absorbance)-(absorbance in the presence of anti-Fas antibody and in the absence of compound)]] × 100

【００４０】Fas抗体により誘導されるアポトーシスを5
0%阻害する濃度は、RKB-3384A及びRKB-3384Bともに1〜1
0 μg/mlであった。この結果は、本発明の上記化合物が
抗アポトーシス作用を有しており、アポトーシスの異常
亢進が関与する炎症性疾患の予防及び／又は治療薬とし
て有効であることを示している。Apoptosis induced by the Fas antibody was reduced by 5
The concentration that inhibits 0% is 1 to 1 for both RKB-3384A and RKB-3384B.
It was 0 μg / ml. This result indicates that the compound of the present invention has an anti-apoptotic effect and is effective as a prophylactic and / or therapeutic agent for an inflammatory disease associated with abnormally enhanced apoptosis.

【００４１】試験例３：RKB-3384A及びRKB-3384Bの細胞
周期阻害活性 癌抑制遺伝子p53を欠損しているヒト肺癌細胞H1299細胞
におけるRKB-3384A及びRKB-3384Bの細胞周期阻害活性を
測定した。H1299細胞は10%子牛血清を含むDMEM(ダルベ
ッコ変法イーグル培地)培地にて5%炭酸ガスと水蒸気を
飽和させた培養器内で培養した。対数増殖期にあるH129
9細胞に一連の希釈系列のRKB-3384A 又はRKB-3384Bを
添加し24時間後にフローサイトメーターによりH1299細
胞の細胞周期の進行を解析した。RKB-3384A及びRKB-338
4Bはともに約30 μg/mlの濃度でG1期に細胞周期を停止
させた。この結果は、本発明の上記化合物が細胞周期を
阻害する作用を有しており、抗腫瘍剤として有効である
ことを示している。Test Example 3: Cell cycle inhibitory activity of RKB-3384A and RKB-3384B The cell cycle inhibitory activity of RKB-3384A and RKB-3384B in human lung cancer cell H1299 cells deficient in the tumor suppressor gene p53 was measured. H1299 cells were cultured in a DMEM (Dulbecco's modified Eagle medium) medium containing 10% calf serum in an incubator saturated with 5% carbon dioxide and water vapor. H129 in logarithmic growth phase
A series of dilution series of RKB-3384A or RKB-3384B was added to 9 cells, and 24 hours later, the progress of the cell cycle of H1299 cells was analyzed by a flow cytometer. RKB-3384A and RKB-338
4B both arrested the cell cycle in the G1 phase at a concentration of about 30 μg / ml. This result indicates that the compound of the present invention has a cell cycle inhibitory effect and is effective as an antitumor agent.

【００４２】製剤例１：注射・点滴剤 RKB-3384A又はRKB-3384B 10 mgを含有するように、粉末
ブドウ糖5 gを加えてバイアルに無菌的に分配して密封
し、窒素又はヘリウムなどの不活性ガスを封入して冷暗
所に保存する。使用前にエタノールに溶解し、0.85%生
理的食塩水100 mlを添加して静脈内投与用製剤とし、一
日あたり10〜100 mlを症状に応じて静脈内注射又は点滴
で投与する。Formulation Example 1: Injection / Drip Injection 5 g of powdered glucose is added so as to contain 10 mg of RKB-3384A or RKB-3384B, and the mixture is aseptically distributed and sealed in a vial. Activated gas is sealed and stored in a cool, dark place. Before use, it is dissolved in ethanol, and 100 ml of 0.85% physiological saline is added to prepare a preparation for intravenous administration, and 10 to 100 ml per day is administered by intravenous injection or infusion according to symptoms.

【００４３】製剤例２：顆粒剤 RKB-3384A又はRKB-3384B 1 g、乳糖98 g、及びヒドロキ
シプロピルセルロース1gをよく混和した後、定法にした
がって粒状に成形する。得られた造粒物をよく乾燥し
て、瓶やヒートシール包装などに適した顆粒剤を製造す
る。この顆粒剤は、一日あたり100〜1000 mgを症状に応
じて経口投与できる。Formulation Example 2: Granules After 1 g of RKB-3384A or RKB-3384B, 98 g of lactose and 1 g of hydroxypropylcellulose are mixed well, they are formed into granules according to a standard method. The obtained granules are dried well to produce granules suitable for bottles, heat seal packaging and the like. This granule can be orally administered at a dose of 100 to 1000 mg per day depending on the condition.

【００４４】[0044]

【発明の効果】本発明の化合物は、アポトーシス抑制活
性などを有しており、抗腫瘍剤又はアポトーシスの異常
亢進が関与する疾患の予防及び／又は治療のための医薬
の有効成分として有用である。The compound of the present invention has apoptosis inhibitory activity and the like, and is useful as an active ingredient of an antitumor agent or a drug for preventing and / or treating a disease associated with abnormally enhanced apoptosis. .

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 31/20 Ａ６１Ｐ 31/20 35/00 35/00 37/06 37/06 Ｃ０７Ｄ 207/40 Ｃ０７Ｄ 207/40 (72)発明者 掛谷 秀昭 埼玉県和光市広沢２番１号 理化学研究所 内 (72)発明者 今野 宏 秋田県大曲市大花町11−20−５ (72)発明者 金澤 進 神奈川県横浜市青葉区榎が丘６−１−Ａ− 307 Ｆターム(参考） 4C069 AB15 AC31 4C086 AA01 AA03 BC08 MA01 MA04 NA14 ZA36 ZA96 ZB08 ZB15 ZB26 ZB33 ──────────────────────────────────────────────────続 き Continued on the front page (51) Int.Cl. ⁷ Identification symbol FI Theme coat ゛ (Reference) A61P 31/20 A61P 31/20 35/00 35/00 37/06 37/06 C07D 207/40 C07D 207 / 40 (72) Inventor Hideaki Kakeya 2-1 Hirosawa, Wako-shi, Saitama Pref., RIKEN (72) Inventor Hiroshi Konno 11-20-5 Ohanacho, Omagari-shi, Akita (72) Inventor Susumu Kanazawa, Kanagawa 6-A-307, Enokaoka, Aoba-ku, Yokohama-shi F term (reference) 4C069 AB15 AC31 4C086 AA01 AA03 BC08 MA01 MA04 NA14 ZA36 ZA96 ZB08 ZB15 ZB26 ZB33

Claims (9)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項１】 以下の式（Ｉ）： 【化１】 〔式中、R¹はヒドロキシ基、-CH₂-O-CO-R³(式中、R³は
アルキル基、アリール基、又はアルキルアミノ基を示
す)、-CH₂-O-R⁴(式中、R⁴は水素原子、アルキル基、又
はアルケニル基を示す)、-CH₂=N-O-R⁵(R⁵は水素原子又
はアルキル基を示す)、又は-CH₂=CH-R⁶(R⁶はアルキルオ
キシカルボニル基、ホルミル基、又はアルキルオキシカ
ルボニルアルケニル基を示す)を示し、R²は水素原子を
示すが、R¹及びR²が一緒になってオキソ基となってもよ
い〕で表される化合物。1. The following formula (I): Wherein R ¹ is a hydroxy group, -CH ₂ -O-CO-R ³ (wherein R ³ represents an alkyl group, an aryl group, or an alkylamino group), -CH ₂ -OR ⁴ (wherein , R ⁴ represents a hydrogen atom, an alkyl group, or an alkenyl group), -CH ₂ = NOR ⁵ (R ⁵ represents a hydrogen atom or an alkyl group), or -CH ₂ = CH-R ⁶ (R ⁶ is an alkyl Represents an oxycarbonyl group, a formyl group, or an alkyloxycarbonylalkenyl group), and R ² represents a hydrogen atom, but R ¹ and R ² may be combined to form an oxo group). Compound. 【請求項２】 下記の式（II）： 【化２】 で表される化合物。2. The following formula (II): A compound represented by the formula: 【請求項３】 下記の式（III）： 【化３】 で表される化合物。3. The following formula (III): A compound represented by the formula: 【請求項４】 請求項１から３のいずれか１項に記載の
化合物を有効成分として含む医薬。4. A medicament comprising the compound according to any one of claims 1 to 3 as an active ingredient. 【請求項５】 血管新生阻害剤である請求項４に記載の
医薬。5. The medicament according to claim 4, which is an angiogenesis inhibitor. 【請求項６】 アポトーシス抑制剤である請求項４に記
載の医薬。6. The medicament according to claim 4, which is an apoptosis inhibitor. 【請求項７】 細胞周期阻害剤である請求項４に記載の
医薬。7. The medicament according to claim 4, which is a cell cycle inhibitor. 【請求項８】 抗腫瘍剤である請求項４に記載の医薬。8. The medicament according to claim 4, which is an antitumor agent. 【請求項９】 アポトーシスの異常亢進が関与する疾患
の予防及び／又は治療のための請求項４に記載の医薬。9. The medicament according to claim 4, for preventing and / or treating a disease associated with abnormally enhanced apoptosis.