JP2002281991A - 転移体の副生を抑制した(r)−2−ヒドロキシ−1−フェノキシプロパン誘導体の製造法 - Google Patents
転移体の副生を抑制した(r)−2−ヒドロキシ−1−フェノキシプロパン誘導体の製造法Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 医薬品の中間体として極めて有用な、高品質
の(R)−2−ヒドロキシ−1−フェノキシプロパン誘
導体を効率よく製造する方法を提供する。 【解決手段】 安価原料であるフェノキシアセトン誘導
体を微生物由来の酵素あるいは該酵素の産生能を有する
微生物の培養物あるいは該処理物を用いてR選択的に還
元する反応において、反応pH、温度条件等を制御する
ことにより、(R)−1−ヒドロキシ−2−フェノキシ
プロパン誘導体の副生量を抑制し、高品質の(R)−2
−ヒドロキシ−1−フェノキシプロパン誘導体を製造す
る。
の(R)−2−ヒドロキシ−1−フェノキシプロパン誘
導体を効率よく製造する方法を提供する。 【解決手段】 安価原料であるフェノキシアセトン誘導
体を微生物由来の酵素あるいは該酵素の産生能を有する
微生物の培養物あるいは該処理物を用いてR選択的に還
元する反応において、反応pH、温度条件等を制御する
ことにより、(R)−1−ヒドロキシ−2−フェノキシ
プロパン誘導体の副生量を抑制し、高品質の(R)−2
−ヒドロキシ−1−フェノキシプロパン誘導体を製造す
る。
Description
【0001】
【発明の属する技術分野】本発明は、医薬品中間体とし
て有用な(R)−2−ヒドロキシ−1−フェノキシプロ
パン誘導体、とりわけ、合成抗菌剤の中間体として有用
な2,3−ジフルオロ−6−ニトロ−[[(R)−(2
−ヒドロキシプロピル)]オキシ]ベンゼンの製造法に
関する。
て有用な(R)−2−ヒドロキシ−1−フェノキシプロ
パン誘導体、とりわけ、合成抗菌剤の中間体として有用
な2,3−ジフルオロ−6−ニトロ−[[(R)−(2
−ヒドロキシプロピル)]オキシ]ベンゼンの製造法に
関する。
【0002】
【従来の技術】従来、フェノキシアセトン誘導体を微生
物等を用いて(R)−2−ヒドロキシ−1−フェノキシ
プロパン誘導体に還元する方法としては、以下の方法等
が知られている。
物等を用いて(R)−2−ヒドロキシ−1−フェノキシ
プロパン誘導体に還元する方法としては、以下の方法等
が知られている。
【0003】1)糸状菌類を用いて、2,3−ジフルオ
ロ−6−ニトロ−[[(R)−(2−ヒドロキシプロピ
ル)]オキシ]ベンゼンを製造する方法(特開平3−1
83489)。 2)コリネバクテリウム(Corynebacteri
um)属に属する微生物を用いて、2,3−ジフルオロ
−6−ニトロ−[[(R)−(2−ヒドロキシプロピ
ル)]オキシ]ベンゼンを製造する方法(特開平5−6
8577)。 3)キャンディダ(Candida)属由来のカルボニ
ル還元酵素を用いて、(R)−2−ヒドロキシ−1−フ
ェノキシプロパン誘導体を製造する方法(WO00/3
7666)。
ロ−6−ニトロ−[[(R)−(2−ヒドロキシプロピ
ル)]オキシ]ベンゼンを製造する方法(特開平3−1
83489)。 2)コリネバクテリウム(Corynebacteri
um)属に属する微生物を用いて、2,3−ジフルオロ
−6−ニトロ−[[(R)−(2−ヒドロキシプロピ
ル)]オキシ]ベンゼンを製造する方法(特開平5−6
8577)。 3)キャンディダ(Candida)属由来のカルボニ
ル還元酵素を用いて、(R)−2−ヒドロキシ−1−フ
ェノキシプロパン誘導体を製造する方法(WO00/3
7666)。
【0004】しかしながら、上記1)及び2)の方法で
は、得られる(R)−2−ヒドロキシ−1−フェノキシ
プロパン誘導体の光学純度が低い、または反応の際の基
質濃度が極めて低い等、実用上問題があった。一方、我
々は、上記3)に示した方法により、10%以上の基質
濃度で反応ができ、目的物を光学純度99%e.e.以
上で得ることができる効率的な製造法を既に報告してい
る。一般に、1,2−ジオール類の1位アシル基が塩基
性条件にて2位に転移しやすいことは良く知られている
が(Aust.J.Chem.(1998),51
(6),455)、置換基を有してもよいフェニル基が
1位から2位に転移することは知られていなかった。
は、得られる(R)−2−ヒドロキシ−1−フェノキシ
プロパン誘導体の光学純度が低い、または反応の際の基
質濃度が極めて低い等、実用上問題があった。一方、我
々は、上記3)に示した方法により、10%以上の基質
濃度で反応ができ、目的物を光学純度99%e.e.以
上で得ることができる効率的な製造法を既に報告してい
る。一般に、1,2−ジオール類の1位アシル基が塩基
性条件にて2位に転移しやすいことは良く知られている
が(Aust.J.Chem.(1998),51
(6),455)、置換基を有してもよいフェニル基が
1位から2位に転移することは知られていなかった。
【0005】ところが、(R)−1−ヒドロキシ−2−
フェノキシプロパン誘導体と転移体である(R)−1−
ヒドロキシ−2−フェノキシプロパン誘導体を分離でき
る精密な分析方法を確立し上記還元反応を詳細に検討し
た結果、還元反応条件下にて、置換基を有してもよいフ
ェニル基の転移反応が進行し、(R)−1−ヒドロキシ
−2−フェノキシプロパン誘導体が副生していることが
確認された。(R)−1−ヒドロキシ−2−フェノキシ
プロパン誘導体は、その構造が(R)−2−ヒドロキシ
−1−フェノキシプロパン誘導体と類似しているため物
理的な手法による除去精製は非常に困難であり、医薬品
中間体として望まれる高品質の(R)−2−ヒドロキシ
−1−フェノキシプロパン誘導体を製造する上での新た
な課題となっていた。
フェノキシプロパン誘導体と転移体である(R)−1−
ヒドロキシ−2−フェノキシプロパン誘導体を分離でき
る精密な分析方法を確立し上記還元反応を詳細に検討し
た結果、還元反応条件下にて、置換基を有してもよいフ
ェニル基の転移反応が進行し、(R)−1−ヒドロキシ
−2−フェノキシプロパン誘導体が副生していることが
確認された。(R)−1−ヒドロキシ−2−フェノキシ
プロパン誘導体は、その構造が(R)−2−ヒドロキシ
−1−フェノキシプロパン誘導体と類似しているため物
理的な手法による除去精製は非常に困難であり、医薬品
中間体として望まれる高品質の(R)−2−ヒドロキシ
−1−フェノキシプロパン誘導体を製造する上での新た
な課題となっていた。
【0006】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、医薬品の中
間体として有用な(R)−2−ヒドロキシ−1−フェノ
キシプロパン誘導体、とりわけ、合成抗菌剤の中間体と
して有用な2,3−ジフルオロ−6−ニトロ−
[[(R)−(2−ヒドロキシプロピル)]オキシ]ベ
ンゼンを、安価原料であるフェノキシアセトン誘導体を
微生物由来の酵素あるいは該酵素の産生能を有する微生
物の培養物あるいは該処理物を用いてR選択的に還元し
て製造する方法において、フェニル基の転移による
(R)−1−ヒドロキシ−2−フェノキシプロパン誘導
体の副生を抑制し、効率的に高品質の(R)−2−ヒド
ロキシ−1−フェノキシプロパン誘導体を製造する方法
を提供することにある。
間体として有用な(R)−2−ヒドロキシ−1−フェノ
キシプロパン誘導体、とりわけ、合成抗菌剤の中間体と
して有用な2,3−ジフルオロ−6−ニトロ−
[[(R)−(2−ヒドロキシプロピル)]オキシ]ベ
ンゼンを、安価原料であるフェノキシアセトン誘導体を
微生物由来の酵素あるいは該酵素の産生能を有する微生
物の培養物あるいは該処理物を用いてR選択的に還元し
て製造する方法において、フェニル基の転移による
(R)−1−ヒドロキシ−2−フェノキシプロパン誘導
体の副生を抑制し、効率的に高品質の(R)−2−ヒド
ロキシ−1−フェノキシプロパン誘導体を製造する方法
を提供することにある。
【0007】
【課題を解決するための手段】本発明者らは上記に鑑
み、鋭意検討した結果、還元反応時のpH及び温度条件
等を制御することにより、転移反応が抑制できることを
見いだし、本発明を完成するに至った。
み、鋭意検討した結果、還元反応時のpH及び温度条件
等を制御することにより、転移反応が抑制できることを
見いだし、本発明を完成するに至った。
【0008】即ち、本発明は、一般式(1);
【0009】
【化4】 (式中、Rは置換基を有してもよいフェニル基を表す)
で示されるフェノキシアセトン誘導体のカルボニル基を
R選択的に還元する能力を有する微生物由来の酵素ある
いは該酵素の産生能を有する微生物の培養物あるいは該
処理物を用いて、前記式(1)で表されるフェノキシア
セトン誘導体をR選択的に還元することにより、一般式
(2);
で示されるフェノキシアセトン誘導体のカルボニル基を
R選択的に還元する能力を有する微生物由来の酵素ある
いは該酵素の産生能を有する微生物の培養物あるいは該
処理物を用いて、前記式(1)で表されるフェノキシア
セトン誘導体をR選択的に還元することにより、一般式
(2);
【0010】
【化5】 (式中、Rは前記と同じ基を表す)で示される(R)−
2−ヒドロキシ−1−フェノキシプロパン誘導体を製造
する方法において、一般式(3);
2−ヒドロキシ−1−フェノキシプロパン誘導体を製造
する方法において、一般式(3);
【0011】
【化6】 (式中、 Rは前記と同じ基を表す )で示される(R)
−1−ヒドロキシ−2−フェノキシプロパン誘導体の副
生量が生成物中の比率として2%以下であることを特徴
とする(R)−2−ヒドロキシ−1−フェノキシプロパ
ン誘導体の製造法である。
−1−ヒドロキシ−2−フェノキシプロパン誘導体の副
生量が生成物中の比率として2%以下であることを特徴
とする(R)−2−ヒドロキシ−1−フェノキシプロパ
ン誘導体の製造法である。
【0012】以下に本発明を詳細に説明する。
【0013】前記式(1)、(2)および(3)におい
て、Rは置換基を有してもよいフェニル基を表す。置換
基としては、例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原
子、ヨウ素原子等のハロゲン、ニトロ基、ニトロソ基、
シアノ基、アミノ基、ヒドロキシアミノ基、炭素数1〜
10のアルキルアミノ基、炭素数1〜10のジアルキル
アミノ基、N−保護アミノ基、アジド基、トリフルオロ
メチル基、カルボキシル基、ホルミル基、アセチル基、
ベンゾイル基、ヒドロキシル基、炭素数1〜10のアル
キルオキシ基、炭素数1〜10のアシルオキシ基、炭素
数1〜10のアルキルチオ基等が挙げられる。
て、Rは置換基を有してもよいフェニル基を表す。置換
基としては、例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原
子、ヨウ素原子等のハロゲン、ニトロ基、ニトロソ基、
シアノ基、アミノ基、ヒドロキシアミノ基、炭素数1〜
10のアルキルアミノ基、炭素数1〜10のジアルキル
アミノ基、N−保護アミノ基、アジド基、トリフルオロ
メチル基、カルボキシル基、ホルミル基、アセチル基、
ベンゾイル基、ヒドロキシル基、炭素数1〜10のアル
キルオキシ基、炭素数1〜10のアシルオキシ基、炭素
数1〜10のアルキルチオ基等が挙げられる。
【0014】上記の置換基として、好ましくはフッ素原
子、ニトロ基等であり、置換基の数は0〜3個が挙げら
れ、好ましくは3個である。
子、ニトロ基等であり、置換基の数は0〜3個が挙げら
れ、好ましくは3個である。
【0015】従って、置換基を有しても良いフェニル基
としては、例えば、フェニル基、2−シアノフェニル
基、2−ニトロフェニル基、4−ニトロフェニル基、
2,3−ジフルオロ−6−ニトロフェニル基等が挙げら
れ、好ましくは2,3−ジフルオロ−6−ニトロフェニ
ル基等が挙げられる。
としては、例えば、フェニル基、2−シアノフェニル
基、2−ニトロフェニル基、4−ニトロフェニル基、
2,3−ジフルオロ−6−ニトロフェニル基等が挙げら
れ、好ましくは2,3−ジフルオロ−6−ニトロフェニ
ル基等が挙げられる。
【0016】本発明の原料である一般式(1)で表され
るフェノキシアセトン誘導体、例えば、2−アセトニル
オキシ−3,4−ジフルオロニトロベンゼンの場合、
2,3−ジフルオロ−6−ニトロフェノールを、強塩基
存在下、クロロアセトンと反応させることにより、容易
に合成できる事が知られている(特開昭61−2461
51)。
るフェノキシアセトン誘導体、例えば、2−アセトニル
オキシ−3,4−ジフルオロニトロベンゼンの場合、
2,3−ジフルオロ−6−ニトロフェノールを、強塩基
存在下、クロロアセトンと反応させることにより、容易
に合成できる事が知られている(特開昭61−2461
51)。
【0017】また、転移反応により副生する一般式
(3)で表される(R)−1−ヒドロキシ−2−フェノ
キシプロパン誘導体は、例えば、2,3−ジフルオロ−
6−ニトロ−[[(R)−(1−ヒドロキシイソプロピ
ル)]オキシ]ベンゼンの場合、2,3,4−トリフル
オロニトロベンゼンを、塩基条件下で、(R)−1,2
−プロパンジオールと反応させることにより合成が可能
である事が知られている(特開平2−178287)。
(3)で表される(R)−1−ヒドロキシ−2−フェノ
キシプロパン誘導体は、例えば、2,3−ジフルオロ−
6−ニトロ−[[(R)−(1−ヒドロキシイソプロピ
ル)]オキシ]ベンゼンの場合、2,3,4−トリフル
オロニトロベンゼンを、塩基条件下で、(R)−1,2
−プロパンジオールと反応させることにより合成が可能
である事が知られている(特開平2−178287)。
【0018】本発明に用いる上記カルボニル基をR選択
的に還元する能力を有する微生物由来の酵素としては、
キャンディダ属(Candida)に属する微生物由
来、好ましくはキャンディダ・マリス(Candida
maris)由来、さらに好ましくはキャンディダ・
マリス(Candida maris IFO1000
3)由来の酵素が挙げられる。また上記酵素の産生能を
有する微生物としては、野生株または変異株のいずれで
もあり得る。あるいは細胞融合または遺伝子操作等の遺
伝学的手法により誘導される微生物も用いられ得る。遺
伝子操作された上記酵素の産生能を有する微生物は、例
えば、これらの酵素を単離及び/または精製して酵素の
アミノ酸配列の一部または全部を決定する工程、このア
ミノ酸配列に基づいて酵素をコードするDNA配列を得
る工程、このDNAを他の微生物に導入して組み換え微
生物を得る工程、及びこの組み換え微生物を培養して、
本酵素を得る工程を含有する方法により得ることができ
る(WO01/05996)。
的に還元する能力を有する微生物由来の酵素としては、
キャンディダ属(Candida)に属する微生物由
来、好ましくはキャンディダ・マリス(Candida
maris)由来、さらに好ましくはキャンディダ・
マリス(Candida maris IFO1000
3)由来の酵素が挙げられる。また上記酵素の産生能を
有する微生物としては、野生株または変異株のいずれで
もあり得る。あるいは細胞融合または遺伝子操作等の遺
伝学的手法により誘導される微生物も用いられ得る。遺
伝子操作された上記酵素の産生能を有する微生物は、例
えば、これらの酵素を単離及び/または精製して酵素の
アミノ酸配列の一部または全部を決定する工程、このア
ミノ酸配列に基づいて酵素をコードするDNA配列を得
る工程、このDNAを他の微生物に導入して組み換え微
生物を得る工程、及びこの組み換え微生物を培養して、
本酵素を得る工程を含有する方法により得ることができ
る(WO01/05996)。
【0019】例えば、上記酵素をコードするDNA、及
び該酵素が依存する補酵素を再生する能力を有する酵素
をコードするDNAを有するプラスミドで形質転換され
た形質転換細胞が挙げられ、好ましくは前記補酵素を再
生する能力を有する酵素がグルコース脱水素酵素である
上記形質転換細胞、前記グルコース脱水素酵素が、バシ
ラス・メガテリウム(Bacillus megate
rium)由来である上記形質転換細胞、前記プラスミ
ドがpNTFPGである上記形質転換細胞、形質転換細
胞が大腸菌である上記形質転換細胞等が挙げられ、より
好ましくは、Escherichia coli HB
101(pNTFPG)受託番号FERM BP−71
17が挙げられる。
び該酵素が依存する補酵素を再生する能力を有する酵素
をコードするDNAを有するプラスミドで形質転換され
た形質転換細胞が挙げられ、好ましくは前記補酵素を再
生する能力を有する酵素がグルコース脱水素酵素である
上記形質転換細胞、前記グルコース脱水素酵素が、バシ
ラス・メガテリウム(Bacillus megate
rium)由来である上記形質転換細胞、前記プラスミ
ドがpNTFPGである上記形質転換細胞、形質転換細
胞が大腸菌である上記形質転換細胞等が挙げられ、より
好ましくは、Escherichia coli HB
101(pNTFPG)受託番号FERM BP−71
17が挙げられる。
【0020】本発明において、上記酵素の産生能を有す
る微生物の為の培養培地は、その微生物が増殖し得るも
のである限り特に限定されない。例えば、炭素源とし
て、グルコース、シュークロース等の糖質、エタノー
ル、グリセロール等のアルコール類、オレイン酸、ステ
アリン酸等の脂肪酸及びそのエステル類、菜種油、大豆
油等の油類、窒素源として、硫酸アンモニウム、硝酸ナ
トリウム、ペプトン、カザミノ酸、コーンスティープリ
カー、ふすま、酵母エキスなど、無機塩類として、硫酸
マグネシウム、塩化ナトリウム、炭酸カルシウム、燐酸
一水素カリウム、燐酸二水素カリウムなど、他の栄養源
として、麦芽エキス、肉エキス等を含有する通常の液体
培地が使用できる。培養は好気的に行い、通常、培養時
間1〜5日間程度、培地のpH3〜9、培養温度10〜
50℃で行い得る。
る微生物の為の培養培地は、その微生物が増殖し得るも
のである限り特に限定されない。例えば、炭素源とし
て、グルコース、シュークロース等の糖質、エタノー
ル、グリセロール等のアルコール類、オレイン酸、ステ
アリン酸等の脂肪酸及びそのエステル類、菜種油、大豆
油等の油類、窒素源として、硫酸アンモニウム、硝酸ナ
トリウム、ペプトン、カザミノ酸、コーンスティープリ
カー、ふすま、酵母エキスなど、無機塩類として、硫酸
マグネシウム、塩化ナトリウム、炭酸カルシウム、燐酸
一水素カリウム、燐酸二水素カリウムなど、他の栄養源
として、麦芽エキス、肉エキス等を含有する通常の液体
培地が使用できる。培養は好気的に行い、通常、培養時
間1〜5日間程度、培地のpH3〜9、培養温度10〜
50℃で行い得る。
【0021】本発明の還元反応については、適当な溶媒
中に基質であるフェノキシアセトン誘導体、補酵素NA
D及び上記微生物の培養物またはその処理物等を添加
し、pH調整下攪拌することにより行い得る。ここで、
「微生物の培養物」とは、菌体を含む培養液あるいは培
養菌体を意味し、「その処理物」とは、例えば、粗抽出
液、凍結乾燥微生物体、アセトン乾燥微生物体、または
それら菌体の破砕物等を意味する。さらにそれらは、酵
素自体あるいは菌体のまま公知の手段で固定化されて用
いられ得る。固定化は、当業者に周知の方法(例えば架
橋法、物理的吸着法、包括法等)で行い得る。
中に基質であるフェノキシアセトン誘導体、補酵素NA
D及び上記微生物の培養物またはその処理物等を添加
し、pH調整下攪拌することにより行い得る。ここで、
「微生物の培養物」とは、菌体を含む培養液あるいは培
養菌体を意味し、「その処理物」とは、例えば、粗抽出
液、凍結乾燥微生物体、アセトン乾燥微生物体、または
それら菌体の破砕物等を意味する。さらにそれらは、酵
素自体あるいは菌体のまま公知の手段で固定化されて用
いられ得る。固定化は、当業者に周知の方法(例えば架
橋法、物理的吸着法、包括法等)で行い得る。
【0022】上記還元反応においては、置換基を有して
もよいフェニル基の転移反応が非常に起こり易い為、
(R)−1−ヒドロキシ−2−フェノキシプロパン誘導
体が副生する傾向にある。(R)−1−ヒドロキシ−2
−フェノキシプロパン誘導体は目的物である(R)−2
−ヒドロキシ−1−フェノキシプロパン誘導体と構造が
非常に類似している為、除去精製が困難な化合物であ
る。よって、医薬品中間体として望まれる高品質の
(R)−2−ヒドロキシ−1−フェノキシプロパン誘導
体を取得する為には、転移体である(R)−1−ヒドロ
キシ−2−フェノキシプロパン誘導体の副生を最小限に
抑制する必要がある。例えば、(R)−1−ヒドロキシ
−2−フェノキシプロパン誘導体の副生量として許容で
きる量としては、生成物中の比率、即ち、転移体生成量
/(目的物生成量+転移体生成量)×100 (%)と
して、2%以下、好ましくは1%以下、より好ましくは
0.5%以下である(ここで、転移体とは(R)−1−
ヒドロキシ−2−フェノキシプロパン誘導体を表し、目
的物とは(R)−2−ヒドロキシ−1−フェノキシプロ
パン誘導体を表す)。
もよいフェニル基の転移反応が非常に起こり易い為、
(R)−1−ヒドロキシ−2−フェノキシプロパン誘導
体が副生する傾向にある。(R)−1−ヒドロキシ−2
−フェノキシプロパン誘導体は目的物である(R)−2
−ヒドロキシ−1−フェノキシプロパン誘導体と構造が
非常に類似している為、除去精製が困難な化合物であ
る。よって、医薬品中間体として望まれる高品質の
(R)−2−ヒドロキシ−1−フェノキシプロパン誘導
体を取得する為には、転移体である(R)−1−ヒドロ
キシ−2−フェノキシプロパン誘導体の副生を最小限に
抑制する必要がある。例えば、(R)−1−ヒドロキシ
−2−フェノキシプロパン誘導体の副生量として許容で
きる量としては、生成物中の比率、即ち、転移体生成量
/(目的物生成量+転移体生成量)×100 (%)と
して、2%以下、好ましくは1%以下、より好ましくは
0.5%以下である(ここで、転移体とは(R)−1−
ヒドロキシ−2−フェノキシプロパン誘導体を表し、目
的物とは(R)−2−ヒドロキシ−1−フェノキシプロ
パン誘導体を表す)。
【0023】上記副生物を抑制する為の反応条件として
は、できるだけ塩基との接触を避ける為、pHを弱塩基
を用いて酸性から中性付近に調整しながら、比較的低い
温度にて反応することが望ましい。また、基質濃度をで
きるだけ高く、反応時間をできるだけ短くして行うこと
が望ましい。
は、できるだけ塩基との接触を避ける為、pHを弱塩基
を用いて酸性から中性付近に調整しながら、比較的低い
温度にて反応することが望ましい。また、基質濃度をで
きるだけ高く、反応時間をできるだけ短くして行うこと
が望ましい。
【0024】例えば、本反応のpHとしては2〜8、好
ましくは2〜7、より好ましくは2〜6.5である。p
H調整を行うために添加する塩基としては、アンモニ
ア、炭酸アンモニウム、炭酸ナトリウム、炭酸カルシウ
ム等の炭酸塩、または燐酸二カリウム、燐酸二ナトリウ
ム等の燐酸塩などの弱塩基が用いられ、好ましくは炭酸
アンモニウムが用いられる。本反応の温度としては、1
0〜36℃、好ましくは15〜27℃である。本反応の
基質濃度としては、反応開始時に使用する溶媒量に対し
て、1%(w/v)以上、好ましくは5%(w/v)以
上の基質を一括、または連続的に添加し得る。反応時間
としては、用いる酵素、微生物またはその処理物、基質
の種類や濃度によって異なるが、1〜96時間、好まし
くは1〜48時間、より好ましくは1〜24時間で行い
得る。
ましくは2〜7、より好ましくは2〜6.5である。p
H調整を行うために添加する塩基としては、アンモニ
ア、炭酸アンモニウム、炭酸ナトリウム、炭酸カルシウ
ム等の炭酸塩、または燐酸二カリウム、燐酸二ナトリウ
ム等の燐酸塩などの弱塩基が用いられ、好ましくは炭酸
アンモニウムが用いられる。本反応の温度としては、1
0〜36℃、好ましくは15〜27℃である。本反応の
基質濃度としては、反応開始時に使用する溶媒量に対し
て、1%(w/v)以上、好ましくは5%(w/v)以
上の基質を一括、または連続的に添加し得る。反応時間
としては、用いる酵素、微生物またはその処理物、基質
の種類や濃度によって異なるが、1〜96時間、好まし
くは1〜48時間、より好ましくは1〜24時間で行い
得る。
【0025】また、反応は、一般に用いられるNADH
再生系を組み合わせて用いる事により、高価な補酵素の
使用量を大幅に減少させ得る。代表的なNADH再生系
としては、例えば、グルコース脱水素酵素及びグルコー
スを用いる方法が挙げられる。
再生系を組み合わせて用いる事により、高価な補酵素の
使用量を大幅に減少させ得る。代表的なNADH再生系
としては、例えば、グルコース脱水素酵素及びグルコー
スを用いる方法が挙げられる。
【0026】カルボニル還元酵素遺伝子及びこの酵素が
依存する補酵素を再生する能力を有する酵素(例えばグ
ルコース脱水素酵素)の遺伝子を同一宿主微生物内に導
入した形質転換微生物の培養物またはその処理物等を用
いて上記同様の反応を行えば、別途に補酵素の再生に必
要な酵素源を調製する必要がないため、より低コストで
(R)−2−ヒドロキシ−1−フェノキシプロパン誘導
体が製造され得る。
依存する補酵素を再生する能力を有する酵素(例えばグ
ルコース脱水素酵素)の遺伝子を同一宿主微生物内に導
入した形質転換微生物の培養物またはその処理物等を用
いて上記同様の反応を行えば、別途に補酵素の再生に必
要な酵素源を調製する必要がないため、より低コストで
(R)−2−ヒドロキシ−1−フェノキシプロパン誘導
体が製造され得る。
【0027】反応により生じた(R)−2−ヒドロキシ
−1−フェノキシプロパン誘導体は、常法により精製さ
れ得る。例えば、(R)−2−ヒドロキシ−1−フェノ
キシプロパン誘導体は、微生物等を用いた場合には必要
に応じ遠心分離、濾過等の処理を施して菌体等の懸濁物
を除去し、次いで酢酸エチル、トルエン等の有機溶媒で
抽出し、有機溶媒を減圧下で除去し、そして減圧蒸留ま
たはクロマトグラフィー等の処理を行うことにより、精
製され得る。
−1−フェノキシプロパン誘導体は、常法により精製さ
れ得る。例えば、(R)−2−ヒドロキシ−1−フェノ
キシプロパン誘導体は、微生物等を用いた場合には必要
に応じ遠心分離、濾過等の処理を施して菌体等の懸濁物
を除去し、次いで酢酸エチル、トルエン等の有機溶媒で
抽出し、有機溶媒を減圧下で除去し、そして減圧蒸留ま
たはクロマトグラフィー等の処理を行うことにより、精
製され得る。
【0028】以下に実施例を挙げ、本発明を更に具体的
に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるもの
ではない。
に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるもの
ではない。
【0029】
【実施例】(実施例1)Escherichia co
li HB101(pNTFPG)受託番号FERM
BP−7117を、500ml容坂口フラスコ中で滅菌
した100mlの培地(トリプトン 16g、イースト
エキス 10g、塩化ナトリウム 5g、水 1l、滅
菌前pH7.0)に接種し、37℃で13時間振とう培
養した。得られた培養液 100mlを遠心分離操作に
かけ、上清を除いた菌体を50mM燐酸カリウム緩衝液
(pH6.5) 5mlにけん濁した後、超音波破砕す
ることにより無細胞抽出液を調製した。この無細胞抽出
液 0.1mlに各種pHに調整した0.5M燐酸カリ
ウム緩衝液(pH5.5、6.0、6.5、7.0、
7.5または8.0) 1.9ml、グルコース 23
mg、NAD 0.11mg及び2−アセトニルオキシ
−3,4−ジフルオロニトロベンゼン 20mgを添加
し、1M K2HPO4水溶液でpHを調整しつつ、30
℃で攪拌下、67時間反応を行った。反応開始より5時
間目、30時間目及び反応終了時に反応液の一部を分取
し、酢酸エチルで抽出、減圧濃縮した。得られた濃縮物
をHPLCにより分析し(カラム:COSMOSIL
5C8−MS(ナカライテスク社製、0.46×25c
m)2本連結、カラム温度:40℃、溶離液:アセトニ
トリル/0.1%燐酸水溶液=25/75、流速:1m
l/分、検出波長:210nm、溶出時間:2−アセト
ニルオキシ−3,4−ジフルオロニトロベンゼン64
分、2,3−ジフルオロ−6−ニトロ−[[(R)−
(2−ヒドロキシプロピル)]オキシ]ベンゼン 52
分、2,3−ジフルオロ−6−ニトロ−[[(R)−
(1−ヒドロキシイソプロピル)]オキシ]ベンゼン
56分)、変換率及び転移体2,3−ジフルオロ−6−
ニトロ−[[(R)−(1−ヒドロキシイソプロピ
ル)]オキシ]ベンゼンの副生量を、下記式に従い算出
した。結果を表1に示す。 変換率(%)=(Ap+Abp)/(As+Ap+ Ab
p )×100 転移体副生量(%)=Abp/(Ap+Abp)×10
0 As:2−アセトニルオキシ−3,4−ジフルオロニト
ロベンゼンのピーク面積Ap:2,3−ジフルオロ−6
−ニトロ−[[(R)−(2−ヒドロキシプロピル)]
オキシ]ベンゼンのピーク面積 Abp:2,3−ジフルオロ−6−ニトロ−[[(R)
−(1−ヒドロキシイソプロピル)]オキシ]ベンゼン
のピーク面積
li HB101(pNTFPG)受託番号FERM
BP−7117を、500ml容坂口フラスコ中で滅菌
した100mlの培地(トリプトン 16g、イースト
エキス 10g、塩化ナトリウム 5g、水 1l、滅
菌前pH7.0)に接種し、37℃で13時間振とう培
養した。得られた培養液 100mlを遠心分離操作に
かけ、上清を除いた菌体を50mM燐酸カリウム緩衝液
(pH6.5) 5mlにけん濁した後、超音波破砕す
ることにより無細胞抽出液を調製した。この無細胞抽出
液 0.1mlに各種pHに調整した0.5M燐酸カリ
ウム緩衝液(pH5.5、6.0、6.5、7.0、
7.5または8.0) 1.9ml、グルコース 23
mg、NAD 0.11mg及び2−アセトニルオキシ
−3,4−ジフルオロニトロベンゼン 20mgを添加
し、1M K2HPO4水溶液でpHを調整しつつ、30
℃で攪拌下、67時間反応を行った。反応開始より5時
間目、30時間目及び反応終了時に反応液の一部を分取
し、酢酸エチルで抽出、減圧濃縮した。得られた濃縮物
をHPLCにより分析し(カラム:COSMOSIL
5C8−MS(ナカライテスク社製、0.46×25c
m)2本連結、カラム温度:40℃、溶離液:アセトニ
トリル/0.1%燐酸水溶液=25/75、流速:1m
l/分、検出波長:210nm、溶出時間:2−アセト
ニルオキシ−3,4−ジフルオロニトロベンゼン64
分、2,3−ジフルオロ−6−ニトロ−[[(R)−
(2−ヒドロキシプロピル)]オキシ]ベンゼン 52
分、2,3−ジフルオロ−6−ニトロ−[[(R)−
(1−ヒドロキシイソプロピル)]オキシ]ベンゼン
56分)、変換率及び転移体2,3−ジフルオロ−6−
ニトロ−[[(R)−(1−ヒドロキシイソプロピ
ル)]オキシ]ベンゼンの副生量を、下記式に従い算出
した。結果を表1に示す。 変換率(%)=(Ap+Abp)/(As+Ap+ Ab
p )×100 転移体副生量(%)=Abp/(Ap+Abp)×10
0 As:2−アセトニルオキシ−3,4−ジフルオロニト
ロベンゼンのピーク面積Ap:2,3−ジフルオロ−6
−ニトロ−[[(R)−(2−ヒドロキシプロピル)]
オキシ]ベンゼンのピーク面積 Abp:2,3−ジフルオロ−6−ニトロ−[[(R)
−(1−ヒドロキシイソプロピル)]オキシ]ベンゼン
のピーク面積
【0030】
【表1】
【0031】(実施例2)実施例1で用いた無細胞抽出
液 0.1mlに0.5M燐酸カリウム緩衝液(pH
6.5) 1.9ml、グルコース 23mg、NAD
0.11mg及び2−アセトニルオキシ−3,4−ジ
フルオロニトロベンゼン 20mgを添加し、1M K
2HPO4水溶液でpHを6.5に調整しつつ27、3
0、33、36または40℃にて攪拌下、67時間反応
を行った。反応開始より5時間目、30時間目及び反応
終了時に反応液の一部を分取し、酢酸エチルで抽出、減
圧濃縮した。得られた濃縮物を、実施例1と同様の方法
で分析し、変換率及び転移体2,3−ジフルオロ−6−
ニトロ−[[(R)−(1−ヒドロキシイソプロピ
ル)]オキシ]ベンゼンの副生量を算出した。結果を表
2に示す。
液 0.1mlに0.5M燐酸カリウム緩衝液(pH
6.5) 1.9ml、グルコース 23mg、NAD
0.11mg及び2−アセトニルオキシ−3,4−ジ
フルオロニトロベンゼン 20mgを添加し、1M K
2HPO4水溶液でpHを6.5に調整しつつ27、3
0、33、36または40℃にて攪拌下、67時間反応
を行った。反応開始より5時間目、30時間目及び反応
終了時に反応液の一部を分取し、酢酸エチルで抽出、減
圧濃縮した。得られた濃縮物を、実施例1と同様の方法
で分析し、変換率及び転移体2,3−ジフルオロ−6−
ニトロ−[[(R)−(1−ヒドロキシイソプロピ
ル)]オキシ]ベンゼンの副生量を算出した。結果を表
2に示す。
【0032】
【表2】
【0033】(実施例3)実施例1で用いた無細胞抽出
液 0.5mlに脱イオン水 49.5ml、グルコー
ス 5.9g、NAD 5.6mg、2−アセトニルオ
キシ−3,4−ジフルオロニトロベンゼン 5gを添加
し、30%(w/v)水酸化ナトリウム水溶液でpHを
6.5に調整しつつ30℃で攪拌下、32時間反応を行
った。反応開始から6時間目及び20時間目にそれぞれ
NAD 5.6mgを添加した。反応終了後、反応液を
トルエンで抽出、減圧濃縮し、黄色油状の2,3−ジフ
ルオロ−6−ニトロ−[[(R)−(2−ヒドロキシプ
ロピル)]オキシ]ベンゼン濃縮物を得た。この濃縮物
を、実施例1と同様の方法により分析したところ、変換
率は99.9%以上、転移体2,3−ジフルオロ−6−
ニトロ−[[(R)−(1−ヒドロキシイソプロピ
ル)]オキシ]ベンゼンの副生量は1.29%であっ
た。また、上記濃縮物の一部をカラムクロマトグラフィ
ーにより精製し、ジニトロベンゾイル化した後、HPL
C分析(カラム:Chiralcel OD−H(ダイ
セル化学社製、0.46×25cm )、溶離液:ヘキ
サン/イソプロパノール=50/50、流速:1ml/
分、温度:40℃、検出波長:254nm、溶出時間:
R体エナンチオマー 34分、S体エナンチオマー 2
7分)を行ったところ、光学純度は99.9%e.e.以上
であった。
液 0.5mlに脱イオン水 49.5ml、グルコー
ス 5.9g、NAD 5.6mg、2−アセトニルオ
キシ−3,4−ジフルオロニトロベンゼン 5gを添加
し、30%(w/v)水酸化ナトリウム水溶液でpHを
6.5に調整しつつ30℃で攪拌下、32時間反応を行
った。反応開始から6時間目及び20時間目にそれぞれ
NAD 5.6mgを添加した。反応終了後、反応液を
トルエンで抽出、減圧濃縮し、黄色油状の2,3−ジフ
ルオロ−6−ニトロ−[[(R)−(2−ヒドロキシプ
ロピル)]オキシ]ベンゼン濃縮物を得た。この濃縮物
を、実施例1と同様の方法により分析したところ、変換
率は99.9%以上、転移体2,3−ジフルオロ−6−
ニトロ−[[(R)−(1−ヒドロキシイソプロピ
ル)]オキシ]ベンゼンの副生量は1.29%であっ
た。また、上記濃縮物の一部をカラムクロマトグラフィ
ーにより精製し、ジニトロベンゾイル化した後、HPL
C分析(カラム:Chiralcel OD−H(ダイ
セル化学社製、0.46×25cm )、溶離液:ヘキ
サン/イソプロパノール=50/50、流速:1ml/
分、温度:40℃、検出波長:254nm、溶出時間:
R体エナンチオマー 34分、S体エナンチオマー 2
7分)を行ったところ、光学純度は99.9%e.e.以上
であった。
【0034】(実施例4)実施例1で用いた無細胞抽出
液 0.5mlに脱イオン水 49.5ml、グルコー
ス 5.9g、NAD 5.6mg、2−アセトニルオ
キシ−3,4−ジフルオロニトロベンゼン 5gを添加
し、20%(w/v)炭酸アンモニウム水溶液でpHを
6.5に調整しつつ30℃で攪拌下、32時間反応を行
った。反応開始から6時間目及び20時間目にそれぞれ
NAD 5.6mgを添加した。反応終了後、反応液を
トルエンで抽出、減圧濃縮し、黄色油状の2,3−ジフ
ルオロ−6−ニトロ−[[(R)−(2−ヒドロキシプ
ロピル)]オキシ]ベンゼン濃縮物を得た。この濃縮物
を、実施例1と同様の方法により分析したところ、変換
率は99.9%以上、転移体2,3−ジフルオロ−6−
ニトロ−[[(R)−(1−ヒドロキシイソプロピ
ル)]オキシ]ベンゼンの副生量は0.38%であっ
た。また、上記濃縮物の一部をカラムクロマトグラフィ
ーにより精製し、ジニトロベンゾイル化した後、HPL
C分析(実施例3と同様)を行ったところ、光学純度は
99.9%e.e.以上であった。
液 0.5mlに脱イオン水 49.5ml、グルコー
ス 5.9g、NAD 5.6mg、2−アセトニルオ
キシ−3,4−ジフルオロニトロベンゼン 5gを添加
し、20%(w/v)炭酸アンモニウム水溶液でpHを
6.5に調整しつつ30℃で攪拌下、32時間反応を行
った。反応開始から6時間目及び20時間目にそれぞれ
NAD 5.6mgを添加した。反応終了後、反応液を
トルエンで抽出、減圧濃縮し、黄色油状の2,3−ジフ
ルオロ−6−ニトロ−[[(R)−(2−ヒドロキシプ
ロピル)]オキシ]ベンゼン濃縮物を得た。この濃縮物
を、実施例1と同様の方法により分析したところ、変換
率は99.9%以上、転移体2,3−ジフルオロ−6−
ニトロ−[[(R)−(1−ヒドロキシイソプロピ
ル)]オキシ]ベンゼンの副生量は0.38%であっ
た。また、上記濃縮物の一部をカラムクロマトグラフィ
ーにより精製し、ジニトロベンゾイル化した後、HPL
C分析(実施例3と同様)を行ったところ、光学純度は
99.9%e.e.以上であった。
【0035】(実施例5)実施例1で用いた無細胞抽出
1.25ml、脱イオン水 23.75ml、グルコー
ス 14.6g、NAD 2.8mgに対し、2−アセ
トニルオキシ−3,4−ジフルオロニトロベンゼン0.
25g(基質濃度1%(w/v))、1.25g(基質
濃度5%(w/v))、2.5g(基質濃度10%(w
/v))、5.0g(基質濃度20%(w/v))また
は12.5g(基質濃度50%(w/v))を添加し、
20%(w/v)炭酸アンモニウム水溶液でpHを6.
5に調整しつつ、30℃にて攪拌下、30時間反応を行
った。反応開始から6時間目及び20時間目にそれぞれ
NAD 2.8mgを添加した。反応終了後、反応液を
トルエンで抽出、減圧濃縮し、黄色油状の2,3−ジフ
ルオロ−6−ニトロ−[[(R)−(2−ヒドロキシプ
ロピル)]オキシ]ベンゼン濃縮物を得た。この濃縮物
を、実施例1と同様の方法により分析し、変換率及び転
移体2,3−ジフルオロ−6−ニトロ−[[(R)−
(1−ヒドロキシイソプロピル)]オキシ]ベンゼンの
副生量を算出した。また、上記濃縮物の一部をカラムカ
ラムクロマトグラフィーにより精製し、ジニトロベンゾ
イル化した後、HPLC分析(実施例3と同様)を行っ
たところ、光学純度はいずれも99.9%e.e.以上であ
った。結果を表3に示す。
1.25ml、脱イオン水 23.75ml、グルコー
ス 14.6g、NAD 2.8mgに対し、2−アセ
トニルオキシ−3,4−ジフルオロニトロベンゼン0.
25g(基質濃度1%(w/v))、1.25g(基質
濃度5%(w/v))、2.5g(基質濃度10%(w
/v))、5.0g(基質濃度20%(w/v))また
は12.5g(基質濃度50%(w/v))を添加し、
20%(w/v)炭酸アンモニウム水溶液でpHを6.
5に調整しつつ、30℃にて攪拌下、30時間反応を行
った。反応開始から6時間目及び20時間目にそれぞれ
NAD 2.8mgを添加した。反応終了後、反応液を
トルエンで抽出、減圧濃縮し、黄色油状の2,3−ジフ
ルオロ−6−ニトロ−[[(R)−(2−ヒドロキシプ
ロピル)]オキシ]ベンゼン濃縮物を得た。この濃縮物
を、実施例1と同様の方法により分析し、変換率及び転
移体2,3−ジフルオロ−6−ニトロ−[[(R)−
(1−ヒドロキシイソプロピル)]オキシ]ベンゼンの
副生量を算出した。また、上記濃縮物の一部をカラムカ
ラムクロマトグラフィーにより精製し、ジニトロベンゾ
イル化した後、HPLC分析(実施例3と同様)を行っ
たところ、光学純度はいずれも99.9%e.e.以上であ
った。結果を表3に示す。
【0036】
【表3】
【0037】(実施例6)実施例1で用いた無細胞抽出
2.5mlに脱イオン水 20.2ml、グルコース
25.3g、NAD 7.3mg及び2−アセトニルオ
キシ−3,4−ジフルオロニトロベンゼン 25gを添
加し、20%(w/v)炭酸アンモニウム水溶液でpH
6.5に調整しつつ27℃で攪拌下、21時間反応を行
った。反応開始から6時間目及び19時間目にそれぞれ
NAD 7.2mgを添加した。反応終了後、反応液を
トルエンで抽出、減圧濃縮し、黄色油状の2,3−ジフ
ルオロ−6−ニトロ−[[(R)−(2−ヒドロキシプ
ロピル)]オキシ]ベンゼン濃縮物を得た。この濃縮物
を実施例1と同様の方法により分析したところ、変換率
は99.9%以上、転移体2,3−ジフルオロ−6−ニ
トロ−[[(R)−(1−ヒドロキシイソプロピル)]
オキシ]ベンゼンの副生量は0.04%であった。ま
た、上記濃縮物の一部をカラムカラムクロマトグラフィ
ーにより精製し、ジニトロベンゾイル化した後、HPL
C分析(実施例3と同様)を行ったところ、光学純度は
99.9%e.e.以上であった。
2.5mlに脱イオン水 20.2ml、グルコース
25.3g、NAD 7.3mg及び2−アセトニルオ
キシ−3,4−ジフルオロニトロベンゼン 25gを添
加し、20%(w/v)炭酸アンモニウム水溶液でpH
6.5に調整しつつ27℃で攪拌下、21時間反応を行
った。反応開始から6時間目及び19時間目にそれぞれ
NAD 7.2mgを添加した。反応終了後、反応液を
トルエンで抽出、減圧濃縮し、黄色油状の2,3−ジフ
ルオロ−6−ニトロ−[[(R)−(2−ヒドロキシプ
ロピル)]オキシ]ベンゼン濃縮物を得た。この濃縮物
を実施例1と同様の方法により分析したところ、変換率
は99.9%以上、転移体2,3−ジフルオロ−6−ニ
トロ−[[(R)−(1−ヒドロキシイソプロピル)]
オキシ]ベンゼンの副生量は0.04%であった。ま
た、上記濃縮物の一部をカラムカラムクロマトグラフィ
ーにより精製し、ジニトロベンゾイル化した後、HPL
C分析(実施例3と同様)を行ったところ、光学純度は
99.9%e.e.以上であった。
【0038】(比較例)Escherichia co
li HB101(pNTS1G)受託番号FERM
BP−5835を、500ml容坂口フラスコ中で滅
菌した100mlの培地(トリプトン 16g、イース
トエキス 10g、塩化ナトリウム 5g、水 1l、
滅菌前pH7.0)に接種し、37℃で20時間振とう
培養した。得られた培養液 50mlに2−アセトニル
オキシ−3,4−ジフルオロニトロベンゼン 2.5
g、グルコース 2.97g、NADP 2.9mgを
添加し、5N水酸化ナトリウム水溶液でpH6.5に調
整しつつ30℃で攪拌下、23時間反応を行った。反応
終了後、反応液をトルエンで抽出、減圧濃縮し、黄色油
状の2,3−ジフルオロ−6−ニトロ−[[(R)−
(2−ヒドロキシプロピル)]オキシ]ベンゼン濃縮物
を得た。この濃縮物を実施例1と同様の方法により分析
したところ、変換率は80%、転移体2,3−ジフルオ
ロ−6−ニトロ−[[(R)−(1−ヒドロキシイソプ
ロピル)]オキシ]ベンゼンの副生量は2.28%であ
った。また、上記濃縮物の一部をカラムカラムクロマト
グラフィーにより精製し、ジニトロベンゾイル化した
後、HPLC分析(実施例3と同様)を行ったところ、
光学純度は99.0%e.e.であった。
li HB101(pNTS1G)受託番号FERM
BP−5835を、500ml容坂口フラスコ中で滅
菌した100mlの培地(トリプトン 16g、イース
トエキス 10g、塩化ナトリウム 5g、水 1l、
滅菌前pH7.0)に接種し、37℃で20時間振とう
培養した。得られた培養液 50mlに2−アセトニル
オキシ−3,4−ジフルオロニトロベンゼン 2.5
g、グルコース 2.97g、NADP 2.9mgを
添加し、5N水酸化ナトリウム水溶液でpH6.5に調
整しつつ30℃で攪拌下、23時間反応を行った。反応
終了後、反応液をトルエンで抽出、減圧濃縮し、黄色油
状の2,3−ジフルオロ−6−ニトロ−[[(R)−
(2−ヒドロキシプロピル)]オキシ]ベンゼン濃縮物
を得た。この濃縮物を実施例1と同様の方法により分析
したところ、変換率は80%、転移体2,3−ジフルオ
ロ−6−ニトロ−[[(R)−(1−ヒドロキシイソプ
ロピル)]オキシ]ベンゼンの副生量は2.28%であ
った。また、上記濃縮物の一部をカラムカラムクロマト
グラフィーにより精製し、ジニトロベンゾイル化した
後、HPLC分析(実施例3と同様)を行ったところ、
光学純度は99.0%e.e.であった。
【0039】
【発明の効果】本発明の方法により、医薬品中間体とし
て極めて有用な、高品質の(R)−2−ヒドロキシ−1
−フェノキシプロパン誘導体を安価な原料から効率よく
製造する事ができる。
て極めて有用な、高品質の(R)−2−ヒドロキシ−1
−フェノキシプロパン誘導体を安価な原料から効率よく
製造する事ができる。
Claims (14)
- 【請求項1】 一般式(1); 【化1】 (式中、Rは置換基を有してもよいフェニル基を表す)
で示されるフェノキシアセトン誘導体のカルボニル基を
R選択的に還元する能力を有する微生物由来の酵素ある
いは該酵素の産生能を有する微生物の培養物あるいは該
処理物を用いて、前記式(1)で表されるフェノキシア
セトン誘導体をR選択的に還元することにより、一般式
(2); 【化2】 (式中、Rは前記と同じ基を表す)で示される(R)−
2−ヒドロキシ−1−フェノキシプロパン誘導体を製造
する方法において、一般式(3); 【化3】 (式中、 Rは前記と同じ基を表す )で示される(R)
−1−ヒドロキシ−2−フェノキシプロパン誘導体の副
生量が生成物中の比率として2%以下であることを特徴
とする(R)−2−ヒドロキシ−1−フェノキシプロパ
ン誘導体の製造法。 - 【請求項2】 (R)−1−ヒドロキシ−2−フェノキ
シプロパン誘導体の副生量が生成物中の比率として1%
以下である請求項1に記載の製造法。 - 【請求項3】 (R)−1−ヒドロキシ−2−フェノキ
シプロパン誘導体の副生量が生成物中の比率として0.
5%以下である請求項1に記載の製造法。 - 【請求項4】 前記Rが2,3−ジフルオロ−6−ニト
ロフェニル基であることを特徴とする請求項1〜3のい
ずれかに記載の製造法。 - 【請求項5】 還元をpH2〜7の条件下で行う請求項
1〜4に記載の製造法。 - 【請求項6】 還元をpH2〜6.5の条件下で行う請
求項1〜4に記載の製造法。 - 【請求項7】 弱塩基を用いてpHを調整する請求項1
〜6に記載の製造法。 - 【請求項8】 弱塩基が、アンモニア、炭酸塩または燐
酸塩であることを特徴とする請求項7記載の製造法。 - 【請求項9】 弱塩基が、炭酸アンモニウム、炭酸ナト
リウム、炭酸カルシウム、燐酸水素二ナトリウム、また
は、燐酸水素二カリウムである請求項7記載の製造法。 - 【請求項10】 還元を10〜36℃の条件下で行う請
求項1〜9に記載の製造法。 - 【請求項11】 基質濃度が5%(w/v)以上である
ことを特徴とする請求項1〜10に記載の製造法。 - 【請求項12】 前記酵素が、キャンディダ・マリス
(Candida maris)由来である請求項1〜
11に記載の製造法。 - 【請求項13】 前記酵素が、キャンディダ・マリス
( Candida maris IFO10003)由
来である請求項1〜11に記載の製造法。 - 【請求項14】 前記酵素の産生能を有する微生物がE
scherichiacoli HB101(pNTF
PG)受託番号FERM BP−7117である請求項
1〜13に記載の製造法。
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