JP2002281991A - 転移体の副生を抑制した（ｒ）−２−ヒドロキシ−１−フェノキシプロパン誘導体の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 医薬品の中間体として極めて有用な、高品質
の（Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−フェノキシプロパン誘
導体を効率よく製造する方法を提供する。 【解決手段】 安価原料であるフェノキシアセトン誘導
体を微生物由来の酵素あるいは該酵素の産生能を有する
微生物の培養物あるいは該処理物を用いてＲ選択的に還
元する反応において、反応ｐＨ、温度条件等を制御する
ことにより、（Ｒ）−１−ヒドロキシ−２−フェノキシ
プロパン誘導体の副生量を抑制し、高品質の（Ｒ）−２
−ヒドロキシ−１−フェノキシプロパン誘導体を製造す
る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、医薬品中間体とし
て有用な（Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−フェノキシプロ
パン誘導体、とりわけ、合成抗菌剤の中間体として有用
な２，３−ジフルオロ−６−ニトロ−［［（Ｒ）−（２
−ヒドロキシプロピル）］オキシ］ベンゼンの製造法に
関する。

【０００２】

【従来の技術】従来、フェノキシアセトン誘導体を微生
物等を用いて（Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−フェノキシ
プロパン誘導体に還元する方法としては、以下の方法等
が知られている。

【０００３】１）糸状菌類を用いて、２，３−ジフルオ
ロ−６−ニトロ−［［（Ｒ）−（２−ヒドロキシプロピ
ル）］オキシ］ベンゼンを製造する方法（特開平３−１
８３４８９）。 ２）コリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉ
ｕｍ）属に属する微生物を用いて、２，３−ジフルオロ
−６−ニトロ−［［（Ｒ）−（２−ヒドロキシプロピ
ル）］オキシ］ベンゼンを製造する方法（特開平５−６
８５７７）。 ３）キャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属由来のカルボニ
ル還元酵素を用いて、（Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−フ
ェノキシプロパン誘導体を製造する方法（ＷＯ００／３
７６６６）。

【０００４】しかしながら、上記１）及び２）の方法で
は、得られる（Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−フェノキシ
プロパン誘導体の光学純度が低い、または反応の際の基
質濃度が極めて低い等、実用上問題があった。一方、我
々は、上記３）に示した方法により、１０％以上の基質
濃度で反応ができ、目的物を光学純度９９％ｅ．ｅ．以
上で得ることができる効率的な製造法を既に報告してい
る。一般に、１，２−ジオール類の１位アシル基が塩基
性条件にて２位に転移しやすいことは良く知られている
が（Ａｕｓｔ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．（１９９８），５１
（６），４５５）、置換基を有してもよいフェニル基が
１位から２位に転移することは知られていなかった。

【０００５】ところが、（Ｒ）−１−ヒドロキシ−２−
フェノキシプロパン誘導体と転移体である（Ｒ）−１−
ヒドロキシ−２−フェノキシプロパン誘導体を分離でき
る精密な分析方法を確立し上記還元反応を詳細に検討し
た結果、還元反応条件下にて、置換基を有してもよいフ
ェニル基の転移反応が進行し、（Ｒ）−１−ヒドロキシ
−２−フェノキシプロパン誘導体が副生していることが
確認された。（Ｒ）−１−ヒドロキシ−２−フェノキシ
プロパン誘導体は、その構造が（Ｒ）−２−ヒドロキシ
−１−フェノキシプロパン誘導体と類似しているため物
理的な手法による除去精製は非常に困難であり、医薬品
中間体として望まれる高品質の（Ｒ）−２−ヒドロキシ
−１−フェノキシプロパン誘導体を製造する上での新た
な課題となっていた。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、医薬品の中
間体として有用な（Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−フェノ
キシプロパン誘導体、とりわけ、合成抗菌剤の中間体と
して有用な２，３−ジフルオロ−６−ニトロ−
［［（Ｒ）−（２−ヒドロキシプロピル）］オキシ］ベ
ンゼンを、安価原料であるフェノキシアセトン誘導体を
微生物由来の酵素あるいは該酵素の産生能を有する微生
物の培養物あるいは該処理物を用いてＲ選択的に還元し
て製造する方法において、フェニル基の転移による
（Ｒ）−１−ヒドロキシ−２−フェノキシプロパン誘導
体の副生を抑制し、効率的に高品質の（Ｒ）−２−ヒド
ロキシ−１−フェノキシプロパン誘導体を製造する方法
を提供することにある。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明者らは上記に鑑
み、鋭意検討した結果、還元反応時のｐＨ及び温度条件
等を制御することにより、転移反応が抑制できることを
見いだし、本発明を完成するに至った。

【０００８】即ち、本発明は、一般式（１）；

【０００９】

【化４】 （式中、Ｒは置換基を有してもよいフェニル基を表す）
で示されるフェノキシアセトン誘導体のカルボニル基を
Ｒ選択的に還元する能力を有する微生物由来の酵素ある
いは該酵素の産生能を有する微生物の培養物あるいは該
処理物を用いて、前記式（１）で表されるフェノキシア
セトン誘導体をＲ選択的に還元することにより、一般式
（２）；

【００１０】

【化５】 （式中、Ｒは前記と同じ基を表す）で示される（Ｒ）−
２−ヒドロキシ−１−フェノキシプロパン誘導体を製造
する方法において、一般式（３）；

【００１１】

【化６】 （式中、 Ｒは前記と同じ基を表す ）で示される（Ｒ）
−１−ヒドロキシ−２−フェノキシプロパン誘導体の副
生量が生成物中の比率として２％以下であることを特徴
とする（Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−フェノキシプロパ
ン誘導体の製造法である。

【００１２】以下に本発明を詳細に説明する。

【００１３】前記式（１）、（２）および（３）におい
て、Ｒは置換基を有してもよいフェニル基を表す。置換
基としては、例えば、フッ素原子、塩素原子、臭素原
子、ヨウ素原子等のハロゲン、ニトロ基、ニトロソ基、
シアノ基、アミノ基、ヒドロキシアミノ基、炭素数１〜
１０のアルキルアミノ基、炭素数１〜１０のジアルキル
アミノ基、Ｎ−保護アミノ基、アジド基、トリフルオロ
メチル基、カルボキシル基、ホルミル基、アセチル基、
ベンゾイル基、ヒドロキシル基、炭素数１〜１０のアル
キルオキシ基、炭素数１〜１０のアシルオキシ基、炭素
数１〜１０のアルキルチオ基等が挙げられる。

【００１４】上記の置換基として、好ましくはフッ素原
子、ニトロ基等であり、置換基の数は０〜３個が挙げら
れ、好ましくは３個である。

【００１５】従って、置換基を有しても良いフェニル基
としては、例えば、フェニル基、２−シアノフェニル
基、２−ニトロフェニル基、４−ニトロフェニル基、
２，３−ジフルオロ−６−ニトロフェニル基等が挙げら
れ、好ましくは２，３−ジフルオロ−６−ニトロフェニ
ル基等が挙げられる。

【００１６】本発明の原料である一般式（１）で表され
るフェノキシアセトン誘導体、例えば、２−アセトニル
オキシ−３，４−ジフルオロニトロベンゼンの場合、
２，３−ジフルオロ−６−ニトロフェノールを、強塩基
存在下、クロロアセトンと反応させることにより、容易
に合成できる事が知られている（特開昭６１−２４６１
５１）。

【００１７】また、転移反応により副生する一般式
（３）で表される（Ｒ）−１−ヒドロキシ−２−フェノ
キシプロパン誘導体は、例えば、２，３−ジフルオロ−
６−ニトロ−［［（Ｒ）−（１−ヒドロキシイソプロピ
ル）］オキシ］ベンゼンの場合、２，３，４−トリフル
オロニトロベンゼンを、塩基条件下で、（Ｒ）−１，２
−プロパンジオールと反応させることにより合成が可能
である事が知られている（特開平２−１７８２８７）。

【００１８】本発明に用いる上記カルボニル基をＲ選択
的に還元する能力を有する微生物由来の酵素としては、
キャンディダ属（Ｃａｎｄｉｄａ）に属する微生物由
来、好ましくはキャンディダ・マリス（Ｃａｎｄｉｄａ
ｍａｒｉｓ）由来、さらに好ましくはキャンディダ・
マリス（Ｃａｎｄｉｄａ ｍａｒｉｓ ＩＦＯ１０００
３）由来の酵素が挙げられる。また上記酵素の産生能を
有する微生物としては、野生株または変異株のいずれで
もあり得る。あるいは細胞融合または遺伝子操作等の遺
伝学的手法により誘導される微生物も用いられ得る。遺
伝子操作された上記酵素の産生能を有する微生物は、例
えば、これらの酵素を単離及び／または精製して酵素の
アミノ酸配列の一部または全部を決定する工程、このア
ミノ酸配列に基づいて酵素をコードするＤＮＡ配列を得
る工程、このＤＮＡを他の微生物に導入して組み換え微
生物を得る工程、及びこの組み換え微生物を培養して、
本酵素を得る工程を含有する方法により得ることができ
る（ＷＯ０１／０５９９６）。

【００１９】例えば、上記酵素をコードするＤＮＡ、及
び該酵素が依存する補酵素を再生する能力を有する酵素
をコードするＤＮＡを有するプラスミドで形質転換され
た形質転換細胞が挙げられ、好ましくは前記補酵素を再
生する能力を有する酵素がグルコース脱水素酵素である
上記形質転換細胞、前記グルコース脱水素酵素が、バシ
ラス・メガテリウム（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｍｅｇａｔｅ
ｒｉｕｍ）由来である上記形質転換細胞、前記プラスミ
ドがｐＮＴＦＰＧである上記形質転換細胞、形質転換細
胞が大腸菌である上記形質転換細胞等が挙げられ、より
好ましくは、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ ＨＢ
１０１（ｐＮＴＦＰＧ）受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−７１
１７が挙げられる。

【００２０】本発明において、上記酵素の産生能を有す
る微生物の為の培養培地は、その微生物が増殖し得るも
のである限り特に限定されない。例えば、炭素源とし
て、グルコース、シュークロース等の糖質、エタノー
ル、グリセロール等のアルコール類、オレイン酸、ステ
アリン酸等の脂肪酸及びそのエステル類、菜種油、大豆
油等の油類、窒素源として、硫酸アンモニウム、硝酸ナ
トリウム、ペプトン、カザミノ酸、コーンスティープリ
カー、ふすま、酵母エキスなど、無機塩類として、硫酸
マグネシウム、塩化ナトリウム、炭酸カルシウム、燐酸
一水素カリウム、燐酸二水素カリウムなど、他の栄養源
として、麦芽エキス、肉エキス等を含有する通常の液体
培地が使用できる。培養は好気的に行い、通常、培養時
間１〜５日間程度、培地のｐＨ３〜９、培養温度１０〜
５０℃で行い得る。

【００２１】本発明の還元反応については、適当な溶媒
中に基質であるフェノキシアセトン誘導体、補酵素ＮＡ
Ｄ及び上記微生物の培養物またはその処理物等を添加
し、ｐＨ調整下攪拌することにより行い得る。ここで、
「微生物の培養物」とは、菌体を含む培養液あるいは培
養菌体を意味し、「その処理物」とは、例えば、粗抽出
液、凍結乾燥微生物体、アセトン乾燥微生物体、または
それら菌体の破砕物等を意味する。さらにそれらは、酵
素自体あるいは菌体のまま公知の手段で固定化されて用
いられ得る。固定化は、当業者に周知の方法（例えば架
橋法、物理的吸着法、包括法等）で行い得る。

【００２２】上記還元反応においては、置換基を有して
もよいフェニル基の転移反応が非常に起こり易い為、
（Ｒ）−１−ヒドロキシ−２−フェノキシプロパン誘導
体が副生する傾向にある。（Ｒ）−１−ヒドロキシ−２
−フェノキシプロパン誘導体は目的物である（Ｒ）−２
−ヒドロキシ−１−フェノキシプロパン誘導体と構造が
非常に類似している為、除去精製が困難な化合物であ
る。よって、医薬品中間体として望まれる高品質の
（Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−フェノキシプロパン誘導
体を取得する為には、転移体である（Ｒ）−１−ヒドロ
キシ−２−フェノキシプロパン誘導体の副生を最小限に
抑制する必要がある。例えば、（Ｒ）−１−ヒドロキシ
−２−フェノキシプロパン誘導体の副生量として許容で
きる量としては、生成物中の比率、即ち、転移体生成量
／（目的物生成量＋転移体生成量）×１００ （％）と
して、２％以下、好ましくは１％以下、より好ましくは
０．５％以下である（ここで、転移体とは（Ｒ）−１−
ヒドロキシ−２−フェノキシプロパン誘導体を表し、目
的物とは（Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−フェノキシプロ
パン誘導体を表す）。

【００２３】上記副生物を抑制する為の反応条件として
は、できるだけ塩基との接触を避ける為、ｐＨを弱塩基
を用いて酸性から中性付近に調整しながら、比較的低い
温度にて反応することが望ましい。また、基質濃度をで
きるだけ高く、反応時間をできるだけ短くして行うこと
が望ましい。

【００２４】例えば、本反応のｐＨとしては２〜８、好
ましくは２〜７、より好ましくは２〜６．５である。ｐ
Ｈ調整を行うために添加する塩基としては、アンモニ
ア、炭酸アンモニウム、炭酸ナトリウム、炭酸カルシウ
ム等の炭酸塩、または燐酸二カリウム、燐酸二ナトリウ
ム等の燐酸塩などの弱塩基が用いられ、好ましくは炭酸
アンモニウムが用いられる。本反応の温度としては、１
０〜３６℃、好ましくは１５〜２７℃である。本反応の
基質濃度としては、反応開始時に使用する溶媒量に対し
て、１％（ｗ／ｖ）以上、好ましくは５％（ｗ／ｖ）以
上の基質を一括、または連続的に添加し得る。反応時間
としては、用いる酵素、微生物またはその処理物、基質
の種類や濃度によって異なるが、１〜９６時間、好まし
くは１〜４８時間、より好ましくは１〜２４時間で行い
得る。

【００２５】また、反応は、一般に用いられるＮＡＤＨ
再生系を組み合わせて用いる事により、高価な補酵素の
使用量を大幅に減少させ得る。代表的なＮＡＤＨ再生系
としては、例えば、グルコース脱水素酵素及びグルコー
スを用いる方法が挙げられる。

【００２６】カルボニル還元酵素遺伝子及びこの酵素が
依存する補酵素を再生する能力を有する酵素（例えばグ
ルコース脱水素酵素）の遺伝子を同一宿主微生物内に導
入した形質転換微生物の培養物またはその処理物等を用
いて上記同様の反応を行えば、別途に補酵素の再生に必
要な酵素源を調製する必要がないため、より低コストで
（Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−フェノキシプロパン誘導
体が製造され得る。

【００２７】反応により生じた（Ｒ）−２−ヒドロキシ
−１−フェノキシプロパン誘導体は、常法により精製さ
れ得る。例えば、（Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−フェノ
キシプロパン誘導体は、微生物等を用いた場合には必要
に応じ遠心分離、濾過等の処理を施して菌体等の懸濁物
を除去し、次いで酢酸エチル、トルエン等の有機溶媒で
抽出し、有機溶媒を減圧下で除去し、そして減圧蒸留ま
たはクロマトグラフィー等の処理を行うことにより、精
製され得る。

【００２８】以下に実施例を挙げ、本発明を更に具体的
に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるもの
ではない。

【００２９】

【実施例】（実施例１）Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏ
ｌｉ ＨＢ１０１（ｐＮＴＦＰＧ）受託番号ＦＥＲＭ
ＢＰ−７１１７を、５００ｍｌ容坂口フラスコ中で滅菌
した１００ｍｌの培地（トリプトン １６ｇ、イースト
エキス １０ｇ、塩化ナトリウム ５ｇ、水 １ｌ、滅
菌前ｐＨ７．０）に接種し、３７℃で１３時間振とう培
養した。得られた培養液 １００ｍｌを遠心分離操作に
かけ、上清を除いた菌体を５０ｍＭ燐酸カリウム緩衝液
（ｐＨ６．５） ５ｍｌにけん濁した後、超音波破砕す
ることにより無細胞抽出液を調製した。この無細胞抽出
液 ０．１ｍｌに各種ｐＨに調整した０．５Ｍ燐酸カリ
ウム緩衝液(ｐＨ５．５、６．０、６．５、７．０、
７．５または８．０) １．９ｍｌ、グルコース ２３
ｍｇ、ＮＡＤ ０．１１ｍｇ及び２−アセトニルオキシ
−３，４−ジフルオロニトロベンゼン ２０ｍｇを添加
し、１Ｍ Ｋ₂ＨＰＯ₄水溶液でｐＨを調整しつつ、３０
℃で攪拌下、６７時間反応を行った。反応開始より５時
間目、３０時間目及び反応終了時に反応液の一部を分取
し、酢酸エチルで抽出、減圧濃縮した。得られた濃縮物
をＨＰＬＣにより分析し（カラム：ＣＯＳＭＯＳＩＬ
５Ｃ８−ＭＳ（ナカライテスク社製、０．４６×２５ｃ
ｍ）２本連結、カラム温度：４０℃、溶離液：アセトニ
トリル／０．１％燐酸水溶液＝２５／７５、流速：１ｍ
ｌ／分、検出波長：２１０ｎｍ、溶出時間：２−アセト
ニルオキシ−３，４−ジフルオロニトロベンゼン６４
分、２，３−ジフルオロ−６−ニトロ−［［（Ｒ）−
（２−ヒドロキシプロピル）］オキシ］ベンゼン ５２
分、２，３−ジフルオロ−６−ニトロ−［［（Ｒ）−
（１−ヒドロキシイソプロピル）］オキシ］ベンゼン
５６分）、変換率及び転移体２，３−ジフルオロ−６−
ニトロ−［［（Ｒ）−（１−ヒドロキシイソプロピ
ル）］オキシ］ベンゼンの副生量を、下記式に従い算出
した。結果を表１に示す。 変換率（％）＝（Ａｐ＋Ａｂｐ）/（Ａｓ＋Ａｐ＋ Ａｂ
ｐ ）×１００ 転移体副生量（％）＝Ａｂｐ/（Ａｐ＋Ａｂｐ）×１０
０ Ａｓ：２−アセトニルオキシ−３，４−ジフルオロニト
ロベンゼンのピーク面積Ａｐ：２，３−ジフルオロ−６
−ニトロ−［［（Ｒ）−（２−ヒドロキシプロピル）］
オキシ］ベンゼンのピーク面積 Ａｂｐ：２，３−ジフルオロ−６−ニトロ−［［（Ｒ）
−（１−ヒドロキシイソプロピル）］オキシ］ベンゼン
のピーク面積

【００３０】

【表１】

【００３１】（実施例２）実施例１で用いた無細胞抽出
液 ０．１ｍｌに０．５Ｍ燐酸カリウム緩衝液（ｐＨ
６．５） １．９ｍｌ、グルコース ２３ｍｇ、ＮＡＤ
０．１１ｍｇ及び２−アセトニルオキシ−３，４−ジ
フルオロニトロベンゼン ２０ｍｇを添加し、１Ｍ Ｋ
₂ＨＰＯ₄水溶液でｐＨを６．５に調整しつつ２７、３
０、３３、３６または４０℃にて攪拌下、６７時間反応
を行った。反応開始より５時間目、３０時間目及び反応
終了時に反応液の一部を分取し、酢酸エチルで抽出、減
圧濃縮した。得られた濃縮物を、実施例１と同様の方法
で分析し、変換率及び転移体２，３−ジフルオロ−６−
ニトロ−［［（Ｒ）−（１−ヒドロキシイソプロピ
ル）］オキシ］ベンゼンの副生量を算出した。結果を表
２に示す。

【００３２】

【表２】

【００３３】（実施例３）実施例１で用いた無細胞抽出
液 ０．５ｍｌに脱イオン水 ４９．５ｍｌ、グルコー
ス ５．９ｇ、ＮＡＤ ５．６ｍｇ、２−アセトニルオ
キシ−３，４−ジフルオロニトロベンゼン ５ｇを添加
し、３０％（ｗ／ｖ）水酸化ナトリウム水溶液でｐＨを
６．５に調整しつつ３０℃で攪拌下、３２時間反応を行
った。反応開始から６時間目及び２０時間目にそれぞれ
ＮＡＤ ５．６ｍｇを添加した。反応終了後、反応液を
トルエンで抽出、減圧濃縮し、黄色油状の２，３−ジフ
ルオロ−６−ニトロ−［［（Ｒ）−（２−ヒドロキシプ
ロピル）］オキシ］ベンゼン濃縮物を得た。この濃縮物
を、実施例１と同様の方法により分析したところ、変換
率は９９．９％以上、転移体２，３−ジフルオロ−６−
ニトロ−［［（Ｒ）−（１−ヒドロキシイソプロピ
ル）］オキシ］ベンゼンの副生量は１．２９％であっ
た。また、上記濃縮物の一部をカラムクロマトグラフィ
ーにより精製し、ジニトロベンゾイル化した後、ＨＰＬ
Ｃ分析（カラム：Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ ＯＤ−Ｈ（ダイ
セル化学社製、０．４６×２５ｃｍ ）、溶離液：ヘキ
サン／イソプロパノール＝５０／５０、流速：１ｍｌ／
分、温度：４０℃、検出波長：２５４ｎｍ、溶出時間：
Ｒ体エナンチオマー ３４分、Ｓ体エナンチオマー ２
７分）を行ったところ、光学純度は９９．９％e.e.以上
であった。

【００３４】（実施例４）実施例１で用いた無細胞抽出
液 ０．５ｍｌに脱イオン水 ４９．５ｍｌ、グルコー
ス ５．９ｇ、ＮＡＤ ５．６ｍｇ、２−アセトニルオ
キシ−３，４−ジフルオロニトロベンゼン ５ｇを添加
し、２０％（ｗ／ｖ）炭酸アンモニウム水溶液でｐＨを
６．５に調整しつつ３０℃で攪拌下、３２時間反応を行
った。反応開始から６時間目及び２０時間目にそれぞれ
ＮＡＤ ５．６ｍｇを添加した。反応終了後、反応液を
トルエンで抽出、減圧濃縮し、黄色油状の２，３−ジフ
ルオロ−６−ニトロ−［［（Ｒ）−（２−ヒドロキシプ
ロピル）］オキシ］ベンゼン濃縮物を得た。この濃縮物
を、実施例１と同様の方法により分析したところ、変換
率は９９．９％以上、転移体２，３−ジフルオロ−６−
ニトロ−［［（Ｒ）−（１−ヒドロキシイソプロピ
ル）］オキシ］ベンゼンの副生量は０．３８％であっ
た。また、上記濃縮物の一部をカラムクロマトグラフィ
ーにより精製し、ジニトロベンゾイル化した後、ＨＰＬ
Ｃ分析（実施例３と同様）を行ったところ、光学純度は
９９．９％e.e.以上であった。

【００３５】(実施例５)実施例１で用いた無細胞抽出
１．２５ｍｌ、脱イオン水 ２３．７５ｍｌ、グルコー
ス １４．６ｇ、ＮＡＤ ２．８ｍｇに対し、２−アセ
トニルオキシ−３，４−ジフルオロニトロベンゼン０．
２５ｇ（基質濃度１％（ｗ／ｖ））、１．２５ｇ（基質
濃度５％（ｗ／ｖ））、２．５ｇ（基質濃度１０％（ｗ
／ｖ））、５．０ｇ（基質濃度２０％（ｗ／ｖ））また
は１２．５ｇ（基質濃度５０％（ｗ／ｖ））を添加し、
２０％（ｗ／ｖ）炭酸アンモニウム水溶液でｐＨを６．
５に調整しつつ、３０℃にて攪拌下、３０時間反応を行
った。反応開始から６時間目及び２０時間目にそれぞれ
ＮＡＤ ２．８ｍｇを添加した。反応終了後、反応液を
トルエンで抽出、減圧濃縮し、黄色油状の２，３−ジフ
ルオロ−６−ニトロ−［［（Ｒ）−（２−ヒドロキシプ
ロピル）］オキシ］ベンゼン濃縮物を得た。この濃縮物
を、実施例１と同様の方法により分析し、変換率及び転
移体２，３−ジフルオロ−６−ニトロ−［［（Ｒ）−
（１−ヒドロキシイソプロピル）］オキシ］ベンゼンの
副生量を算出した。また、上記濃縮物の一部をカラムカ
ラムクロマトグラフィーにより精製し、ジニトロベンゾ
イル化した後、ＨＰＬＣ分析（実施例３と同様）を行っ
たところ、光学純度はいずれも９９．９％e.e.以上であ
った。結果を表３に示す。

【００３６】

【表３】

【００３７】(実施例６)実施例１で用いた無細胞抽出
２．５ｍｌに脱イオン水 ２０．２ｍｌ、グルコース
２５．３ｇ、ＮＡＤ ７．３ｍｇ及び２−アセトニルオ
キシ−３，４−ジフルオロニトロベンゼン ２５ｇを添
加し、２０％（ｗ／ｖ）炭酸アンモニウム水溶液でｐＨ
６．５に調整しつつ２７℃で攪拌下、２１時間反応を行
った。反応開始から６時間目及び１９時間目にそれぞれ
ＮＡＤ ７．２ｍｇを添加した。反応終了後、反応液を
トルエンで抽出、減圧濃縮し、黄色油状の２，３−ジフ
ルオロ−６−ニトロ−［［（Ｒ）−（２−ヒドロキシプ
ロピル）］オキシ］ベンゼン濃縮物を得た。この濃縮物
を実施例１と同様の方法により分析したところ、変換率
は９９．９％以上、転移体２，３−ジフルオロ−６−ニ
トロ−［［（Ｒ）−（１−ヒドロキシイソプロピル）］
オキシ］ベンゼンの副生量は０．０４％であった。ま
た、上記濃縮物の一部をカラムカラムクロマトグラフィ
ーにより精製し、ジニトロベンゾイル化した後、ＨＰＬ
Ｃ分析（実施例３と同様）を行ったところ、光学純度は
９９．９％e.e.以上であった。

【００３８】（比較例）Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏ
ｌｉ ＨＢ１０１（ｐＮＴＳ１Ｇ）受託番号ＦＥＲＭ
ＢＰ−５８３５を、５００ｍｌ容坂口フラスコ中で滅
菌した１００ｍｌの培地（トリプトン １６ｇ、イース
トエキス １０ｇ、塩化ナトリウム ５ｇ、水 １ｌ、
滅菌前ｐＨ７．０）に接種し、３７℃で２０時間振とう
培養した。得られた培養液 ５０ｍｌに２−アセトニル
オキシ−３，４−ジフルオロニトロベンゼン ２．５
ｇ、グルコース ２．９７ｇ、ＮＡＤＰ ２．９ｍｇを
添加し、５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ６．５に調
整しつつ３０℃で攪拌下、２３時間反応を行った。反応
終了後、反応液をトルエンで抽出、減圧濃縮し、黄色油
状の２，３−ジフルオロ−６−ニトロ−［［（Ｒ）−
（２−ヒドロキシプロピル）］オキシ］ベンゼン濃縮物
を得た。この濃縮物を実施例１と同様の方法により分析
したところ、変換率は８０％、転移体２，３−ジフルオ
ロ−６−ニトロ−［［（Ｒ）−（１−ヒドロキシイソプ
ロピル）］オキシ］ベンゼンの副生量は２．２８％であ
った。また、上記濃縮物の一部をカラムカラムクロマト
グラフィーにより精製し、ジニトロベンゾイル化した
後、ＨＰＬＣ分析（実施例３と同様）を行ったところ、
光学純度は９９．０％e.e.であった。

【００３９】

【発明の効果】本発明の方法により、医薬品中間体とし
て極めて有用な、高品質の（Ｒ）−２−ヒドロキシ−１
−フェノキシプロパン誘導体を安価な原料から効率よく
製造する事ができる。

Claims (14)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 一般式（１）； 【化１】 （式中、Ｒは置換基を有してもよいフェニル基を表す）
   で示されるフェノキシアセトン誘導体のカルボニル基を
   Ｒ選択的に還元する能力を有する微生物由来の酵素ある
   いは該酵素の産生能を有する微生物の培養物あるいは該
   処理物を用いて、前記式（１）で表されるフェノキシア
   セトン誘導体をＲ選択的に還元することにより、一般式
   （２）； 【化２】 （式中、Ｒは前記と同じ基を表す）で示される（Ｒ）−
   ２−ヒドロキシ−１−フェノキシプロパン誘導体を製造
   する方法において、一般式（３）； 【化３】 （式中、 Ｒは前記と同じ基を表す ）で示される（Ｒ）
   −１−ヒドロキシ−２−フェノキシプロパン誘導体の副
   生量が生成物中の比率として２％以下であることを特徴
   とする（Ｒ）−２−ヒドロキシ−１−フェノキシプロパ
   ン誘導体の製造法。
2. 【請求項２】 （Ｒ）−１−ヒドロキシ−２−フェノキ
   シプロパン誘導体の副生量が生成物中の比率として１％
   以下である請求項１に記載の製造法。
3. 【請求項３】 （Ｒ）−１−ヒドロキシ−２−フェノキ
   シプロパン誘導体の副生量が生成物中の比率として０．
   ５％以下である請求項１に記載の製造法。
4. 【請求項４】 前記Ｒが２，３−ジフルオロ−６−ニト
   ロフェニル基であることを特徴とする請求項１〜３のい
   ずれかに記載の製造法。
5. 【請求項５】 還元をｐＨ２〜７の条件下で行う請求項
   １〜４に記載の製造法。
6. 【請求項６】 還元をｐＨ２〜６．５の条件下で行う請
   求項１〜４に記載の製造法。
7. 【請求項７】 弱塩基を用いてｐＨを調整する請求項１
   〜６に記載の製造法。
8. 【請求項８】 弱塩基が、アンモニア、炭酸塩または燐
   酸塩であることを特徴とする請求項７記載の製造法。
9. 【請求項９】 弱塩基が、炭酸アンモニウム、炭酸ナト
   リウム、炭酸カルシウム、燐酸水素二ナトリウム、また
   は、燐酸水素二カリウムである請求項７記載の製造法。
10. 【請求項１０】 還元を１０〜３６℃の条件下で行う請
    求項１〜９に記載の製造法。
11. 【請求項１１】 基質濃度が５％（ｗ／ｖ）以上である
    ことを特徴とする請求項１〜１０に記載の製造法。
12. 【請求項１２】 前記酵素が、キャンディダ・マリス
    （Ｃａｎｄｉｄａ ｍａｒｉｓ）由来である請求項１〜
    １１に記載の製造法。
13. 【請求項１３】 前記酵素が、キャンディダ・マリス
    （ Ｃａｎｄｉｄａ ｍａｒｉｓ ＩＦＯ１０００３）由
    来である請求項１〜１１に記載の製造法。
14. 【請求項１４】 前記酵素の産生能を有する微生物がＥ
    ｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ ＨＢ１０１（ｐＮＴＦ
    ＰＧ）受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−７１１７である請求項
    １〜１３に記載の製造法。