JP2002212187A - Isoquinocycline antibiotic - Google Patents

Abstract

PROBLEM TO BE SOLVED: To obtain an isoquinocycline antibiotic useful as an antimicrobial agent and/or an antitumor agent. SOLUTION: This compound is represented by the formula and produced by a microorganism of an actinomyces of the genus Micromonospora and an aglycon thereof. The medicinal use of the compound or its stereoisomer is provided.

Description

【発明の詳細な説明】DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

【０００１】[0001]

【発明の属する技術分野】本発明は、新規なイソキノサ
イクリン系化合物ならびに該化合物またはそれらのエピ
マーの用途及び製造方法に関する。[0001] The present invention relates to a novel isoquinocycline-based compound, and a use and a production method of the compound or an epimer thereof.

【０００２】[0002]

【発明の背景】ペニシリンの発見以来、現在でも、有用
な生物活性を有する化合物の生産菌が自然界から分離さ
れている。本発明者らも、有用な化合物を生産しうる微
生物の探索を行ってきた。その結果、放線菌ミクロモノ
スポーラ属（Micromonospora）に属する微生物が、スト
レプトミセス オーレオファシエンス（Streptomyces a
ureofaciens）の１菌株（ＡＴＣＣ Ｎｏ．１１９２
６）が生産し、特有の化学構造を有するイソキノサイク
リンＡ及びＢと極めて類似するが、それらより有意に優
れた抗腫瘍活性及び抗菌活性を有する化合物を生産する
ことを見出した。イソキノサイクリンＡ及びＢは、キノ
サイクリン複合体（quinocycline complex）と称される
一群の両性抗生物質類から単離され、構造決定された化
合物である（W.Celmer．et．al.，Antibiotics Annua
l．p.４８４−４９２，１９５７−１９５８；A．Tulins
ky，J．Amer．Chem．Soc．８６：５３６８−５３６９，
１９６４；U．Matern et．al.，Eur．J．Biochem．２
９：１−４，１９７２）。これらの化合物はグラム陽性
菌及び抗酸細菌に対して抗菌活性を示すことも確認され
ている（上記、W．Celmer et al．参照）。BACKGROUND OF THE INVENTION Since the discovery of penicillin, bacteria producing compounds having useful biological activity have been isolated from nature. The present inventors have also searched for microorganisms that can produce useful compounds. As a result, a microorganism belonging to the actinomycetes micro mono-polar species (Micromonospora) is, Streptomyces aureofaciens (Streptomyces a
ureofaciens ) (ATCC No. 1192 )
6) was found to produce compounds that are very similar to isoquinocyclines A and B, which have unique chemical structures, but have significantly better antitumor and antimicrobial activities. Isoquinocyclines A and B are compounds that have been isolated and structurally determined from a group of amphoteric antibiotics called quinocycline complexes (W. Celmer. Et. Al., Antibiotics Annua).
l. p. 484-492, 1957-1958; Tulins
ky, J. Amer. Chem. Soc. 86: 5368-5369,
1964; Matern et. al., Eur. J. Biochem. 2
9: 1-4, 1972). These compounds have also been confirmed to exhibit antibacterial activity against Gram-positive bacteria and acid-fast bacteria (see W. Celmer et al., Supra).

【０００３】本発明に従えば、ミクロモノスポーラ属に
属する微生物が生産する化合物は、上述のとおり、イソ
キノサイクリンＡ及びＢより優れた抗菌活性を示すが、
特定条件下でエピマー化して、イソキノサイクリンＡ及
びＢに変換することが確認された。さらに、イソキノサ
イクリンＡ及びＢ、ならびに本発明に従う化合物は、抗
菌活性のみならず、培養腫瘍細胞に対して増殖阻害作用
をも有することを見出した。According to the present invention, compounds produced by microorganisms belonging to the genus Micromonospora exhibit, as described above, better antibacterial activity than isoquinocyclines A and B,
It was confirmed that it epimerized under specific conditions and converted into isoquinocyclines A and B. Furthermore, it has been found that isoquinocyclines A and B and the compound according to the present invention have not only an antibacterial activity but also a growth inhibitory effect on cultured tumor cells.

【０００４】本発明は、以上の如き知見に基づくもので
ある。[0004] The present invention is based on the above findings.

【０００５】[0005]

【発明の構成】したがって、本発明によれば、下記一般
式（Ｉ）で表される化合物を有効成分とする抗腫瘍剤が
提供される。Therefore, according to the present invention, there is provided an antitumor agent comprising a compound represented by the following general formula (I) as an active ingredient.

【０００６】[0006]

【化１０】 Embedded image

【０００７】上式中、Ｘは水素原子または式In the above formula, X is a hydrogen atom or a formula

【０００８】[0008]

【化１１】 Embedded image

【０００９】で表される糖残基であり、＊−Ｙ−＊＊
は、式A sugar residue represented by * -Y-**
Is the expression

【００１０】[0010]

【化１２】 Embedded image

【００１１】で表される部分であり、各Ｍｅはメチル基
であり、そして＊および＊＊は、それぞれ対応する記号
の箇所で相互に結合することを意味する。一般式（Ｉ）
で表される化合物のうち、Ｙが（ａ）で表される部分で
ある化合物、一般式（Ｉ−ａ）で表され、具体的には式Wherein each Me is a methyl group, and * and ** mean that they bond to each other at the corresponding symbol. General formula (I)
In the compounds represented by the formula (Ia), a compound wherein Y is a moiety represented by the formula (a) is represented by the general formula (Ia).

【００１２】[0012]

【化１３】 Embedded image

【００１３】式Expression

【００１４】[0014]

【化１４】 Embedded image

【００１５】で表される化合物は、本発明者らが知る限
り、従来技術文献未載の新規化合物である。したがっ
て、本発明によれば、このような新規化合物及びそれら
の製薬学的に許容される酸付加塩も提供される。The compounds represented by the formula (1) are, to the best of the present inventors' knowledge, novel compounds not described in the prior art literature. Therefore, according to the present invention, such novel compounds and their pharmaceutically acceptable acid addition salts are also provided.

【００１６】上記ＴＰＵ−００２５Ａ物質及びＴＰＵ−
００２５ＡＧ物質は、それぞれ対応するイソキノサイク
リンＡ及びＢ（本明細書では、それぞれＴＰＵ−００２
５Ｂ物質及びＴＰＵ−００２５ＢＧ物質ともいう）に比
べて遙かに高い抗菌活性を示す。The above TPU-0025A substance and TPU-
[0025] The 0025AG substances are the respective isoquinocyclines A and B (herein each TPU-002
5B substance and TPU-0025BG substance).

【００１７】[0017]

【化１５】 Embedded image

【００１８】[0018]

【化１６】 Embedded image

【００１９】驚くべきことに、アグリコンのみからなる
ＴＰＵ−００２５ＡＧ物質ですら、既知の配糖体ＴＰＵ
−００２５Ｂ物質より高い抗菌活性を示すことである。
したがって、本発明によれば、ＴＰＵ−００２５Ａ物質
またはＴＰＵ−００２５ＡＧ物質を有効成分とする抗菌
剤も提供される。Surprisingly, even the TPU-0025AG substance consisting solely of aglycones has a known glycoside TPU.
-0025B has a higher antibacterial activity than the substance.
Therefore, according to the present invention, there is also provided an antibacterial agent containing a TPU-0025A substance or a TPU-0025AG substance as an active ingredient.

【００２０】限定されるものでないが、以上の既知物を
含む、ＴＰＵ−００２５群化合物は、放線菌ミクロモノ
スポーラ属（Micromonospora）に属する微生物の培養に
よって、さらに必要により生産物のエピマー化及び／ま
たは加水分解により生産することができる。The TPU-0025 group compounds, including but not limited to the above-mentioned known compounds, can be produced by culturing microorganisms belonging to the genus Micromonospora of Actinomycetes, and further, if necessary, epimerizing the product and / or Alternatively, it can be produced by hydrolysis.

【００２１】このような微生物の代表的なものとして
は、限定されるものでないが、本発明者らが、１９９５
年１２月富山県滑川市の沖合２,６００ｍ、深度３２１
ｍの海底から採取した日本海固有水（深層水）より分離
したＴＰ−Ａ０４６８株を挙げることができる。本菌株
は形態的並びに細胞化学分類学的な特徴からミクロモノ
スポーラ エスピー（Micromonospora sp.）と同定され
た。本菌株は日本国茨城県つくば市東１丁目１番３号の
通商産業省工業技術院生命工学工業技術研究所特許微生
物寄託センターに、微生物寄託の国際的承認におけるブ
タペスト条約下、２０００年１２月２５日にミクロモノ
スポーラ エスピー（Micromonospora sp.）ＴＰ−Ａ０
４６８（受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−７４１１）として寄
託されている。Representative examples of such microorganisms include, but are not limited to, those of 1995
December, offshore of Namerikawa city, Toyama prefecture, 2,600m, depth 321
TP-A0468 strain isolated from the Japan Sea endemic water (deep water) collected from the sea floor of m. This strain was identified as Micromonospora sp. Based on its morphological and cytochemical taxonomic characteristics. This strain was submitted to the Patented Microorganisms Depositary Center of the Institute of Biotechnology and Industrial Technology of the Ministry of International Trade and Industry, 1-3-1 Higashi, Tsukuba City, Ibaraki Prefecture, Japan under the Budapest Treaty of International Approval of Microbial Deposits, December 25, 2000. Daily Micromonospora sp. (TP-A0)
468 (Accession No. FERM BP-7411).

【００２２】ＴＰ−Ａ０４６８株の分類 生産菌ＴＰ−Ａ０４６８株の培養性状及び生理学的性状
観察には、インターナショナル ストレプトミセス プ
ロジェクト（International Streptomyces Project：IS
P）が推奨したシャーリングとゴットリーブの方法［メ
ソード フォーキャラクタリゼーション ストレプトマ
イセス スピィシース（Method for characterization
of Streptomyces species“Intern J．Syst．Bact.”，
１９６６，１６：３１０〜３４０］に準じ、培地類とし
ては上記ＩＳＰ培地、ワックスマン「ワックスマン著、
ザ アクチノミセテス（Waksman，S．A.（Ed.）：“The
Actinomycetes”、２；３２８〜３３４，１９６１，The
Williams & Wilkins Co. 発行」及び新井［新井ら著、
カルチャー メディア フォー アクチノミセテス（Ar
ai T．(Ed)：“Culture media for Actinomycetes”，
１９７５），TheSociety for Actinomycetes 発行］に
記載されたものを使った。２〜４週間３２℃で培養後の
培養性状及び生理学的性状を観察した。表１中の色名及
び色番号はザ マニュアル オブ カラーネームズ［ジ
ャパン カラーエンタープライズ社（The manual of co
lor names，１９８７）］に従った。Classification of TP-A0468 strain The culture and physiological properties of the bacterium TP-A0468 were observed by using the International Streptomyces Project (IS).
P) recommended method of shearing and Gottlieb [Method for characterization Streptomyces spicy sheath (Method for characterization
of Streptomyces species “Intern J. Syst. Bact.”,
1966, 16: 310-340], the medium is the above-mentioned ISP medium, Waxman “Waxman,
The Actinomycetes (Waksman, SA (Ed.): “The
Actinomycetes ", 2; 328-334, 1961, The
Published by Williams & Wilkins Co. ”and Arai [Arai et al.,
Culture Media for Actinomycetes (Ar
ai T. (Ed): “Culture media for Actinomycetes”,
1975), published by TheSociety for Actinomycetes]. The culture properties and physiological properties after culturing at 32 ° C. for 2 to 4 weeks were observed. The color names and color numbers in Table 1 are based on The Manual of Color Names [The manual of co
lor names, 1987)].

【００２３】形態的特徴 ＴＰ−Ａ０４６８株は合成寒天培地上よりも天然寒天培
地上で良く生育する。天然寒天培地上で、ＴＰ−Ａ０４
６８株の集落は盛り上がり、基底菌糸は寒天培地中に伸
長するが、分断したり、胞子形成はしない。この短く分
岐した基底菌糸先端には、表面がイボ状な球形の胞子
（０.８×１.２μｍ）を１個形成する。本菌株は気中菌
糸、遊走胞子の形成を認めない。可溶性色素は形成され
ない。Morphological characteristics The strain TP-A0468 grows better on a natural agar medium than on a synthetic agar medium. On a natural agar medium, TP-A04
The colonies of the 68 strains swell, and the basal hypha extends into the agar medium, but does not break or sporulate. One spherical spore (0.8 × 1.2 μm) having a warped surface is formed at the tip of this short-branched basal hypha. This strain does not show formation of aerial hyphae or migratory spores. No soluble dye is formed.

【００２４】培養性状 各種培養基上の生育状態は下記表１にまとめた。本菌株
は各種培養基上で良く生育し、基底菌糸の色調は浅いだ
いだい（６６）を呈し、成熟するとオリーブ灰色（４１
１）の胞子を形成する。Cultural properties The growth conditions on various culture media are summarized in Table 1 below. This strain grows well on various culture media, and the color of the basal hypha becomes shallow (66).
Form spores of 1).

【００２５】[0025]

【表１】 [Table 1]

【００２６】生理学的性質 下記表２に示す如く、デンプンの加水分解能、ミルクの
凝固・水解能は陽性である。スターチ・酵母エキス寒天
培地を用い、温度勾配培養器（アドバンテック社、ＴＮ
−２１４）で培養した結果、生育温度範囲は１３〜４１
℃で、生育至適温度は２５〜３９℃であった。また、Ｉ
ＳＰ−２培地に食塩を加えた培地で、本菌株は４％食塩
では生育するが、６％食塩では生育しない。Physiological properties As shown in Table 2 below, starch hydrolytic ability and milk coagulation / water dissolving ability are positive. Using a starch / yeast extract agar medium, a temperature gradient incubator (Advantech, TN
-214), the growth temperature range was 13-41.
In ° C, the optimal growth temperature was 25-39 ° C. Also, I
In a medium obtained by adding salt to the SP-2 medium, this strain grows with 4% salt but does not grow with 6% salt.

【００２７】[0027]

【表２】 [Table 2]

【００２８】プリーダムとゴットリーブの基礎培地（Ｉ
ＳＰ−９培地）を用いた炭素源の利用能試験で、本菌株
はＤ−グルコース、スクロース、マルトース、ラムノー
ス、Ｄ−マンノース、Ｄ−フルクトース、Ｌ−アラビノ
ース、Ｄ−ガラクトースを利用したが、イノシトール、
Ｄ−マンニトール、ラフィノース、Ｄ−キシロースは利
用できなかった（表３参照）。[0028] The basic medium (I
SP-9 medium), the strain used D-glucose, sucrose, maltose, rhamnose, D-mannose, D-fructose, L-arabinose, and D-galactose. ,
D-mannitol, raffinose and D-xylose were not available (see Table 3).

【００２９】[0029]

【表３】 [Table 3]

【００３０】菌体の化学分類学的性質 放線菌ＴＰ−Ａ０４６８株はグルコース１％、酵母エキ
ス１％（ｐＨ７.２）の液体培地で、３０℃、４日間振
盪培養した。得られた菌体は十分水洗し、凍結乾燥し
た。Actinomycetes TP-A0468 strain was cultured in a liquid medium containing 1% glucose and 1% yeast extract (pH 7.2) at 30 ° C with shaking for 4 days. The obtained cells were sufficiently washed with water and freeze-dried.

【００３１】得られた乾燥全菌体はルシェバリエらの方
法［ア クリティカル エバルエーション ジェネラ
オブ エァーロビック アクチノマイセェーテス、ザ
アクチノミセターレス、エッチ プラウザー著、（Lech
evalier，H．A．and M．P．Lechevalier，“A Critical
evaluation of the genera of aerobic actinomycete
s”，In The actinomyceteales，H．Prauser,（E
d））、p.３９３〜４０５，Jena，Gustav，Fischer Ver
lag，１９７０］及びスタネックらの方法［シンプリフ
ァイド アプローチ ツーアイデンティフィケーション
オブ エァーロビックアクチノマイセェーテス（Stan
eck，J．L．and G．D．Roberts，“Simplifiedapproach
to identification of aerobic actinomycetes by thi
n-layer chromatography”，Appl．Microbil.），２
８：２２６〜２３１，１９７４］により、全菌体中の酸
加水分解を分析した結果、meso 型のジアミノピメリン
酸とグリシンが認められた。また、全菌体中の糖類とし
てはガラクトース、キシローズ、アラビノーズ、グルコ
ースが検出された。The obtained dried whole cells were prepared according to the method of Luchevarier et al. [Acritical Evaluation Genera
Of Aerobics, Actino Mycetes, The
Actinomycetales, by Etch Browser, (Lech
evalier, H .; A. and M. P. Lechevalier, “A Critical
evaluation of the genera of aerobic actinomycete
s ", In The actinomyceteales, H. Prauser, (E
d)), p.393-405, Jena, Gustav, Fischer Ver
lag, 1970] and the method of Stanek et al. [Simplified Approach to Identification of Aerobic Actinomycetes (Stan).
eck, J .; L. and G. D. Roberts, “Simplifiedapproach
to identification of aerobic actinomycetes by thi
n-layer chromatography ”, Appl. Microbil.), 2
8: 226-231, 1974], analysis of acid hydrolysis in all cells showed meso- type diaminopimelic acid and glycine. In addition, galactose, xylose, arabinose, and glucose were detected as saccharides in all the cells.

【００３２】以上に示した如くＴＰ−Ａ０４６８株は、
分岐した基底菌糸の先端に１個宛の胞子を形成し、気中
菌糸並びに鞭毛胞子を形成しない形態的特徴を呈し、全
菌体中のアミノ酸と糖類はＩＩＤ型を示したことより、
本菌株はミクロモノスポラ属の一菌株であることが明ら
かとなった。従って、本菌株をミクロモノスポラ エス
ピー（Micromonospora sp.）ＴＰ−Ａ０４６８と同定し
た。As shown above, the TP-A0468 strain is
Forming a spore for one at the tip of the branched basal hypha, exhibiting morphological characteristics that do not form aerial hypha and flagella spores, and showing that the amino acids and saccharides in all cells showed IID type,
This strain was found to be a strain of the genus Micromonospora. Therefore, this strain was identified as Micromonospora sp. ( Micromonospora sp.) TP-A0468.

【００３３】本発明の新規抗生物質産生には、上記菌株
に限定されるものではなく新規抗生物質ＴＰＵ−００２
５物質産生能を有する上記菌株の変種もしくは突然変異
株などのミクロモノスポラ属の各種のＴＰＵ−００２５
生産菌を適当な培地で培養し、次に、得られる培養液か
らＴＰＵ−００２５物質を単離・精製することにより製
造することが出来る。The production of the novel antibiotic of the present invention is not limited to the above-mentioned strains, but includes the novel antibiotic TPU-002.
5 types of TPU-0025 of the genus Micromonospora such as variants or mutants of the above strains having the ability to produce 5 substances
The bacterium can be produced by culturing a production bacterium in an appropriate medium and then isolating and purifying the TPU-0025 substance from the obtained culture solution.

【００３４】ＴＰＵ−００２５物質の生産は、通常の放
線菌の培養条件に準じて行われるが、好適な液体培地の
通気攪拌培養が好ましい。The production of the TPU-0025 substance is carried out according to the usual cultivation conditions of actinomycetes, but aeration and agitation culture of a suitable liquid medium is preferred.

【００３５】望ましい炭素源は、グルコース、グリセロ
ール、フルクトース、サッカロース、ラクトース、マン
ノース、デキストリン、デンプン、糖蜜、油脂類及び他
の炭化水素であり、好ましい窒素源としては、大豆粕、
綿実粕、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、魚粉、トウ
モロコシ浸漬液、カゼイン、アミノ酸、尿素などの有機
窒素、哨酸ナトリウム、硫酸アンモニュウムなどの無機
窒素類を単独又は複数組合せたものが用いられる。さら
に、この液体培地にはナトリウム塩、カリウム塩、マグ
ネシュウム塩、リン酸塩、その他の金属塩などが必要に
応じて適宜添加される。好ましい液体培地の一つは実施
例１に記載されたものであり、炭素源としてラクトー
ス、グリセロール及びデンプンを０.５〜６％組合せ、
窒素源としては綿実粕（ファーアマメデア）、酵母エキ
スを０.１〜２％添加し、さらに多孔性ポリマー樹脂ダ
イアイオンＨＰ−２０［三菱化成（株）］を加えてい
る。Desirable carbon sources are glucose, glycerol, fructose, saccharose, lactose, mannose, dextrin, starch, molasses, oils and other hydrocarbons. Preferred nitrogen sources include soybean meal,
Cottonseed meal, peptone, meat extract, yeast extract, fish meal, corn steeping liquid, organic nitrogen such as casein, amino acid, urea, etc., and inorganic nitrogen such as sodium tamponate and ammonium sulfate are used alone or in combination. Further, a sodium salt, a potassium salt, a magnesium salt, a phosphate, other metal salts, and the like are appropriately added to the liquid medium as needed. One of the preferred liquid media is that described in Example 1, which combines lactose, glycerol and starch as carbon sources in an amount of 0.5-6%,
As a nitrogen source, 0.1-2% of cottonseed meal (far-ammedea) and yeast extract were added, and further, a porous polymer resin DIAION HP-20 [Mitsubishi Chemical Corporation] was added.

【００３６】また、培養中の発砲の著しい時は、大豆
油、アデカノール、シリコン化合物などの消泡剤を適宜
使用できる。培地のｐＨは中性付近、ｐＨ６〜８程度に
保持するのが望ましい。培養温度は生産菌が良好に生育
する温度、２５〜４０℃、特に２８〜３７℃に保つのが
好ましい。培養時間は、液体振盪培養及び通気撹拌培養
のいずれでも、３〜１０日間程度である。When the firing during the cultivation is remarkable, an antifoaming agent such as soybean oil, decanol, and a silicon compound can be used as appropriate. It is desirable that the pH of the medium is maintained near neutral, about pH 6 to 8. The culture temperature is preferably maintained at a temperature at which the producing bacteria grow well, at 25 to 40 ° C, and particularly preferably at 28 to 37 ° C. The culturing time is about 3 to 10 days for both liquid shaking culture and aeration stirring culture.

【００３７】ＴＰＵ−００２５物質の生産は常法によ
り、例えば薄層クロマトグラフィー、可視吸光度、ＨＰ
ＬＣ或いは抗グラム陽性菌活性により、一連の発酵過程
を容易にモニター出来る。The production of the TPU-0025 substance is carried out by a conventional method, for example, thin-layer chromatography, visible absorbance, HP
A series of fermentation processes can be easily monitored by LC or anti-gram positive bacterial activity.

【００３８】粗物質ＴＰＵ−００２５物質の分離 培養終了後の発酵液からのＴＰＵ−００２５物質の単離
の為には、微生物により産生される生理活性物質を単離
・精製するために通常使用される方法が使用され得る。
ＴＰＵ−００２５物質は塩基性物質であり、発酵液及び
菌体中に生産されるので、有機溶媒抽出、イオン交換樹
脂、分別クロマトグラフィー等を単独或いは組合せる方
法で、より有利に単離・精製に使える。より詳しくは、
以下の方法を用いることができる。Separation of Crude TPU-0025 Substance In order to isolate the TPU-0025 substance from the fermentation broth after completion of the culture, it is usually used to isolate and purify a physiologically active substance produced by a microorganism. Can be used.
The TPU-0025 substance is a basic substance and is produced in fermentation broths and cells, so that it can be more advantageously isolated and purified by a method combining organic solvent extraction, ion exchange resin, fractionation chromatography or the like, alone or in combination. Can be used for More specifically,
The following method can be used.

【００３９】例えば、ＴＰＵ−００２５物質は発酵液及
び菌体中に生産されるので、常法に従い遠心分離等によ
り、培養液と菌体固形分とを分離する。菌体固形分中の
ＴＰＵ−００２５物質はメタノール、アセトン等の溶媒
を用いて抽出を行う。次いで、減圧下に溶媒を留去すれ
ばＴＰＵ−００２５物質を含む粗濃縮液を得ることが出
来る。この粗濃縮液に酢酸エチル或いはｎ−ブタノール
等の疏水性の有機溶媒を加えて、ＴＰＵ−００２５物質
を有機溶媒層に抽出し、得られた溶媒層に芒硝を加えて
脱水した後、溶媒を減圧下に留去すれば、ＴＰＵ−００
２５物質を含む粗物質を得ることが出来る。For example, since the TPU-0025 substance is produced in the fermentation broth and the cells, the culture solution and the solids of the cells are separated by a conventional method such as centrifugation. The TPU-0025 substance in the solid bacterial cells is extracted using a solvent such as methanol or acetone. Then, the solvent is distilled off under reduced pressure to obtain a crude concentrate containing the TPU-0025 substance. A hydrophobic organic solvent such as ethyl acetate or n-butanol is added to the crude concentrated solution to extract the TPU-0025 substance into the organic solvent layer, and after adding Glauber's salt to the obtained solvent layer and dehydrating, the solvent is removed. If distilled under reduced pressure, TPU-00
A crude substance containing 25 substances can be obtained.

【００４０】ＴＰＵ−００２５Ａ物質とＴＰＵ−００２
５Ｂ物質の単離・精製 上記粗物質からＴＰＵ−００２５Ａ物質とＴＰＵ−００
２５Ｂ物質を単離・精製する為には、通常の脂溶性低分
子、例えば、シリカゲル、アルミナ、マクロポーラス非
イオン系吸着樹脂等の吸着剤による種々の吸着クロマト
グラフィー又はＯＤＳ−結合形シリカゲル等を用いた逆
相クロマトグラフィー等が使用出来る。これらの内、ア
セトニトリルリン酸緩衝液（ｐＨ３.５）の混合溶媒系
を用いる逆相クロマトグラフィーが特に好ましい。かく
して、単離されたＴＰＵ−００２５Ａ物質とＴＰＵ−０
０２５Ｂ物質を含む分画中のアセトニトリルを減圧濃縮
により留去し、得られた水層を炭酸水素ナトリウム水溶
液でｐＨ７.０に調整後、酢酸エチルにより抽出した。
次に酢酸エチル層を０.００１Ｎ ＨＣｌ水溶液により
抽出し、水層を凍結乾燥し、ＴＰＵ−００２５Ａ物質塩
酸塩（１）とＴＰＵ−００２５Ｂ物質塩酸塩（２）を得
ることが出来た。TPU-0025A substance and TPU-002
Isolation and purification of 5B substance TPU-0025A substance and TPU-00
In order to isolate and purify the 25B substance, ordinary fat-soluble small molecules, for example, various adsorption chromatography using an adsorbent such as silica gel, alumina, macroporous nonionic adsorption resin or ODS-bonded silica gel, etc. The used reversed phase chromatography and the like can be used. Of these, reverse phase chromatography using a mixed solvent system of acetonitrile phosphate buffer (pH 3.5) is particularly preferred. Thus, the isolated TPU-0025A material and TPU-0
Acetonitrile in the fraction containing the 025B substance was distilled off by concentration under reduced pressure, and the resulting aqueous layer was adjusted to pH 7.0 with an aqueous sodium hydrogen carbonate solution, and then extracted with ethyl acetate.
Next, the ethyl acetate layer was extracted with a 0.001N aqueous HCl solution, and the aqueous layer was freeze-dried to obtain TPU-0025A substance hydrochloride (1) and TPU-0025B substance hydrochloride (2).

【００４１】なお、精製工程中の物質のＴＰＵ−００２
５の確認は、バチルス サチリス（Bacillus subtili
s）ＡＴＣＣ６６３３に対する抗菌活性或いは高速液体
クロマトグラフィー等を用いた検出方法との併用が良
い。The substance TPU-002 in the purification step was used.
5 was confirmed as Bacillus subtili
s ) Combination with antibacterial activity against ATCC 6633 or a detection method using high performance liquid chromatography or the like is preferable.

【００４２】ＴＰＵ−００２５Ａ物質とＴＰＵ−００２
５Ｂ物質混合物の酸分解 ＴＰＵ−００２５Ａ物質とＴＰＵ−００２５Ｂ物質混合
物（１２ｍｇ）を０.４Ｎ ＨＣｌメタノール溶液（１２
ｍｌ）に溶解し、３２℃で３時間放置することによりア
グリコンと糖に分解した。その後、過剰の氷水で希釈
し、酢酸エチルで抽出した。有機層は無水硫酸ナトリウ
ムで乾燥後、減圧濃縮することにより、糖部分をメチル
グリコシドとして得た。水層は炭酸水素ナトリウム水溶
液によりｐＨ７.０に調整し、酢酸エチルで抽出した。
この有機層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、減圧濃縮
した後、ＴＰＵ−００２５Ａ物質のアグリコン（ＴＰＵ
−００２５ＡＧ）とＴＰＵ−００２５Ｂ物質のアグリコ
ン（ＴＰＵ−００２５ＢＧ）の混合物を得た。これを前
述の逆相中圧カラムクロマトグラフィーにより精製し、
ＴＰＵ−００２５ＡＧ物質塩酸塩を４ｍｇ、ＴＰＵ−０
０２５ＢＧ物質塩酸塩を２ｍｇを純品として得た。TPU-0025A substance and TPU-002
Acid Decomposition of 5B Substance Mixture A mixture of TPU-0025A substance and TPU-0025B substance (12 mg) in a 0.4N HCl methanol solution (12 mg) was prepared.
ml) and left at 32 ° C. for 3 hours to decompose into aglycone and sugar. Thereafter, the mixture was diluted with excess ice water and extracted with ethyl acetate. The organic layer was dried over anhydrous sodium sulfate and concentrated under reduced pressure to obtain a sugar moiety as methyl glycoside. The aqueous layer was adjusted to pH 7.0 with an aqueous sodium hydrogen carbonate solution, and extracted with ethyl acetate.
The organic layer was dried over anhydrous sodium sulfate, concentrated under reduced pressure, and then aglycone (TPU-0025A)
-0025AG) and an aglycone of the TPU-0025B substance (TPU-0025BG). This was purified by the aforementioned reversed-phase medium pressure column chromatography,
4 mg of TPU-0025AG substance hydrochloride, TPU-0
2 mg of 025BG substance hydrochloride was obtained as a pure product.

【００４３】ＴＰＵ−００２５Ａ物質（１）、ＴＰＵ−
００２５Ｂ物質（２）、ＴＰＵ−００２５ＡＧ塩酸塩物
質（３）とＴＰＵ−００２５ＢＧ塩酸塩物質（４）の物
理化学的性質 （１）〜（４）すべてについてＦＡＢマス測定（Magic
buret をマトリクスに用いた）を行った。配糖体である
（１）及び（２）の分子イオンピーク［Ｍ＋Ｈ］⁺はい
ずれもｍ／ｚ６１７に、アグリコン（３）及び（４）の
［Ｍ＋Ｈ]⁺はｍ／ｚ４４５に観測された。更に、（１）
と（３）について高分解能ＦＡＢマス測定を行った。そ
の結果、１についてはＣ₃₃Ｈ₃₃Ｏ₁₀Ｎ₂（［Ｍ＋Ｈ]⁺，
△＋１.３ｍｍｕ）、３についてはＣ₂₅Ｈ₂₁Ｏ₆Ｎ
₂（［Ｍ＋Ｈ]⁺，△−０.７ｍｍｕ）という値が得られ、
分子式をそれぞれＣ₃₃Ｈ₃₂Ｏ₁₀Ｎ₂、Ｃ₂₅Ｈ₂₀Ｏ₆Ｎ₂と
確定した（表４、５）。TPU-0025A substance (1), TPU-
Physicochemical properties of 0025B substance (2), TPU-0025AG hydrochloride substance (3) and TPU-0025BG hydrochloride substance (4) FAB mass measurement (Magic) for all (1) to (4)
buret was used for the matrix). The molecular ion peaks [M + H] ⁺ of glycosides (1) and (2) were observed at m / z 617, and [M + H] ⁺ of aglycones (3) and (4) were observed at m / z 445. Furthermore, (1)
And (3) were subjected to high-resolution FAB mass measurement. As a result, for 1, C ₃₃ H ₃₃ O ₁₀ N ₂ ([M + H] ⁺ ,
△ + 1.3mmu), about 3 C ₂₅ H ₂₁ O ₆ N
₂ ([M + H] ⁺ , △ −0.7 mmu)
C ₃₃ H ₃₂ O ₁₀ N ₂ molecular formula, _{respectively, C 25 H 20 O 6 N} 2 and was determined (Tables 4 and 5).

【００４４】[0044]

【表４】 [Table 4]

【００４５】[0045]

【表５】 [Table 5]

【００４６】化合物の安定性 ＴＰＵ−００２５Ａ（１）は、分配試験の結果、塩基性
残基、アミノ基を有することが判明した。そこで抽出時
のｐＨを操作することにより、塩酸塩またはアミンとし
ての単離を行った。（１）の塩酸塩をＤＭＳＯ−ｄ₆ま
たはメタノール−ｄ₄中で室温付近でＮＭＲ測定する
と、経時でＴＰＵ−００２５Ｂ物質（２）に異性化する
とともに、糖が加溶媒分解されてアグリコンＴＰＵ−０
０２５ＡＧ物質（３）を与えた。（１）のアミン体につ
いては、糖の加溶媒分解はほとんど見られなかったが、
３への異性化は起こった。ＴＰＵ−００２５ＡＧ物質
（３）もまた経時でＴＰＵ−００２５ＢＧ物質（４）に
異性化する。（１）から（３）、また、（２）から
（４）への異性化は、粉体として−２０℃で保存してい
る時にも緩やかに起こることが認められた。正確な時間
変化はまだ確認していないが、ＮＭＲ測定溶媒中での異
性化は、およそ２〜３日で２０〜３０％であった。Compound stability TPU-0025A (1) was found to have a basic residue and an amino group as a result of a distribution test. Therefore, by controlling the pH at the time of extraction, isolation as a hydrochloride or an amine was performed. (1) the hydrochloride salt of when NMR measurements at around room temperature in DMSO-d ₆ or methanol -d _4, as well as isomerization over time with TPU-0025B substance (2), aglycone sugar is solvolysis TPU- 0
025AG material (3) was provided. For the amine compound of (1), solvolysis of sugar was hardly observed,
Isomerization to 3 occurred. TPU-0025AG material (3) also isomerizes to TPU-0025BG material (4) over time. It was recognized that the isomerization from (1) to (3) and (2) to (4) occurred slowly even when stored as a powder at -20 ° C. Although the exact time change has not yet been confirmed, the isomerization in the solvent for NMR measurement was 20 to 30% in about 2 to 3 days.

【００４７】ＴＰＵ−００２５Ａ物質（１）、ＴＰＵ−
００２５Ｂ物質（２）、ＴＰＵ−００２５ＡＧ物質
（３）とＴＰＵ−００２５ＢＧ物質（４）の化学構造 既に述べた物理化学的な諸性質からＴＰＵ−００２５Ａ
物質、ＴＰＵ−００２５Ｂ物質、ＴＰＵ−００２５ＡＧ
物質とＴＰＵ−００２５ＢＧ物質の化学構造式は上記の
如く決定された。TPU-0025A substance (1), TPU-
Chemical structure of 0025B substance (2), TPU-0025AG substance (3) and TPU-0025BG substance (4) From the physicochemical properties described above, TPU-0025A
Substance, TPU-0025B substance, TPU-0025AG
The chemical structural formulas of the substance and TPU-0025BG substance were determined as described above.

【００４８】抗微生物活性 ＴＰＵ−００２５Ａ物質（１）、ＴＰＵ−００２５Ｂ物
質（２）、ＴＰＵ−００２５ＡＧ物質（３）とＴＰＵ−
００２５ＢＧ物質（４）の抗微生物活性を液体希釈法で
以下の如く評価した。ＴＰＵ−００２５Ａ物質（１）、
ＴＰＵ−００２５Ｂ物質（２）、ＴＰＵ−００２５ＡＧ
物質（３）とＴＰＵ−００２５ＢＧ物質（４）を各々ジ
メチルスルホキシドに溶解（１ｍｇ／ｍｌ）後、適当な
濃度になるように液体培地で二段階希釈系列を作製し
た。そして、各種被検菌（約１０⁵細胞／ｍｌ）に対す
る抗微生物活性を細菌類は３７℃、１８時間後、酵母類
は３０℃、１８時間後の最小発育阻止濃度（ＭＩＣ，μ
ｇ／ｍｌ）で表示した。其の結果は表６に示す。なお、
使用した液体培地は細菌類用にはハート インヒュージ
ョン ブロス（栄研化学）を、酵母類にはイースト ナ
イトロジェン ブロス（Difco）を用いた。Antimicrobial activity TPU-0025A substance (1), TPU-0025B substance (2), TPU-0025AG substance (3) and TPU-0025A
The antimicrobial activity of the 0025BG substance (4) was evaluated by the liquid dilution method as follows. TPU-0025A substance (1),
TPU-0025B substance (2), TPU-0025AG
After dissolving the substance (3) and the TPU-0025BG substance (4) in dimethyl sulfoxide (1 mg / ml), a two-step dilution series was prepared with a liquid medium so as to obtain an appropriate concentration. The antimicrobial activity against various test bacteria (approximately 10 ⁵ cells / ml) was measured for the minimum growth inhibitory concentration (MIC, μ) of bacteria at 37 ° C. for 18 hours and yeast at 30 ° C. for 18 hours.
g / ml). The results are shown in Table 6. In addition,
The liquid medium used was Heart Infusion Broth (Eiken Chemical) for bacteria and yeast nitrogen broth (Difco) for yeasts.

【００４９】ＴＰＵ−００２５Ａは特にグラム陽性菌に
対して強い生育阻害活性を示し、ＴＰＵ−００２５Ｂ物
質（２）、ＴＰＵ−００２５ＡＧ物質（３）とＴＰＵ−
００２５ＢＧ物質（４）の順に活性は低下する。TPU-0025A has a particularly strong growth inhibitory activity against gram-positive bacteria, and TPU-0025B substance (2), TPU-0025AG substance (3) and TPU-0025A
The activity decreases in the order of the 0025BG substance (4).

【００５０】[0050]

【表６】 [Table 6]

【００５１】腫瘍細胞増殖阻害活性 ヒトリンパ腫由来Ｕ９３７細胞に対する増殖阻害活性の
５０％増殖阻害濃度（ＩＣ₅₀μｇ／ｍｌ）以下の如く測
定した。１０％子牛血清を添加したアール ピー エム
アイ１６４０培地（ＲＰＭＩ １６４０培地、日水製
薬社製）を使い、Ｕ９３７細胞を５％炭酸ガスインキュ
ベーター中３７℃で培養し、５×１０⁴細胞／ｍｌを調
製した。次いで、ＴＰＵ−００２５Ａ（１）、ＴＰＵ−
００２５Ｂ（２）、ＴＰＵ−００２５ＡＧ（３）とＴＰ
Ｕ−００２５ＢＧ（４）を各々ジメチルスルホキシド
（Dimetylsulfoxide）に溶解後、適当な濃度になるよう
に培地５０μｌと共に９６穴マイクロタイターウエル１
穴当たりに二段階希釈系列を作り、細胞懸濁液５０μｌ
と共に２日間培養した。培養終了後、各ウエル毎にＭＴ
Ｔ溶液２５μｌを加え、４時間反応後、培養上清を捨
て、アシッドプロパノール（Acid propanol）１００μ
ｌを加え、５９０ｎｍの吸光度をマイクロプレートリー
ダー（Microplate reader）で計測し、薬剤無処理群と
の比較によりＩＣ_{5 0}値を求め、表７に示した。Tumor cell growth inhibitory activity The growth inhibitory activity against U937 cells derived from human lymphoma was measured at 50% growth inhibitory concentration (IC ₅₀ μg / ml) or less. U937 cells were cultured at 37 ° C. in a 5% carbon dioxide incubator using an RMI 1640 medium (RPMI 1640 medium, manufactured by Nissui Pharmaceutical Co., Ltd.) supplemented with 10% calf serum, and 5 × 10 ⁴ cells / ml Was prepared. Then, TPU-0025A (1), TPU-
0025B (2), TPU-0025AG (3) and TP
After dissolving U-0025BG (4) in dimethylsulfoxide, the 96-well microtiter well 1 together with 50 μl of the medium was adjusted to an appropriate concentration.
Make a two-step dilution series per well and add 50 μl of cell suspension
For 2 days. After the culture is completed, MT is added to each well.
After adding 25 μl of T solution and reacting for 4 hours, the culture supernatant was discarded and 100 μl of acid propanol was added.
l was added to measure the absorbance of 590nm in a microplate reader (Microplate reader), determine the IC _{5 0} value by comparing the drug untreated group, it is shown in Table 7.

【００５２】ＴＰＵ−００２５Ａ物質はアクラシノマイ
シンＡと同程度の活性を示し、次いで、ＴＰＵ−００２
５ＡＧ物質、ＴＰＵ−００２５Ｂ物質、ＴＰＵ−００２
５ＢＧ物質の順に活性は低下する。The TPU-0025A substance shows comparable activity to achracinomycin A, followed by TPU-002
5AG substance, TPU-0025B substance, TPU-002
The activity decreases in the order of 5BG substances.

【００５３】[0053]

【表７】 [Table 7]

【００５４】上記ＴＰＵ−００２５群物質は、塩基性物
質であり、有機酸または無機酸の酸付加塩としても提供
できる。かような酸付加塩は、それ自体既知の造塩反応
に従って製造できる。造塩反応において、有機酸及び無
機酸は、特に、製薬学的に許容される酸を使用するのが
好ましい。限定されるものでないが、かような酸として
は、塩酸、硫酸、亜硫酸、炭酸、リン酸、酒石酸、クエ
ン酸、コハク酸を挙げることができる。The TPU-0025 group substance is a basic substance and can be provided as an acid addition salt of an organic acid or an inorganic acid. Such an acid addition salt can be produced according to a salt formation reaction known per se. In the salt formation reaction, it is particularly preferable to use a pharmaceutically acceptable acid as the organic acid and the inorganic acid. Such acids include, but are not limited to, hydrochloric acid, sulfuric acid, sulfurous acid, carbonic acid, phosphoric acid, tartaric acid, citric acid, succinic acid.

【００５５】以上のＴＰＵ−００２５群物質は単独また
は組み合わせて、抗腫瘍剤および抗菌剤の有効成分とし
て使用できる。他方、これらの医薬製剤は、必要によ
り、当該技術分野で常用されている賦形剤または希釈
剤、増量剤もしくは可溶化剤等を用いて調製することが
できる。The above TPU-0025 group substances can be used alone or in combination as active ingredients of antitumor agents and antibacterial agents. On the other hand, these pharmaceutical preparations can be prepared, if necessary, using excipients or diluents, extenders or solubilizers commonly used in the art.

【００５６】このような賦形剤等としては、例えば、注
射剤を調製する場合には、乳糖、アスコルビン酸、Ｌ−
システイン、グリシン、界面活性剤等を用い、経口剤と
して、錠剤、顆粒剤、散剤を調製する場合には、乳糖、
デンプン、タルク、ステアリン酸マグネシウム等、医薬
品の製剤化に際して常用されている担体および希釈剤等
の賦形剤、補助剤を適宜混合して用いることができる。Examples of such excipients include lactose, ascorbic acid, L-
When preparing tablets, granules, and powders as oral preparations using cysteine, glycine, a surfactant, etc., lactose,
Excipients and adjuvants such as starch, talc, magnesium stearate, and other carriers and diluents commonly used in the preparation of pharmaceuticals can be used as appropriate.

【００５７】有効成分の投与量は、抗腫瘍剤として用い
るか、或は抗菌剤として用いるか、さらには患者の状
態、症状の軽量によって、最適用量が変動するので特定
できないが、感染症の治療剤として使用する場合には、
通常、０.１〜１００ｍｇ、好ましくは５〜５０ｍｇで
あり、抗腫瘍剤として使用する場合には、１〜５００ｍ
ｇ、好ましくは２０〜２００ｍｇである。いずれにして
も、専門医の判断を待つのがよい。The dosage of the active ingredient can not be specified because it is used as an antitumor agent or as an antibacterial agent, and the optimum dose varies depending on the condition of the patient and the lightness of the symptoms. When used as an agent,
Usually 0.1 to 100 mg, preferably 5 to 50 mg, when used as an antitumor agent, 1 to 500 m
g, preferably 20-200 mg. In any case, it is better to wait for the judgment of a specialist.

【００５８】[0058]

【実施例】以下にＴＰＵ−００２５物質の培養、単離・
精製を実施例を挙げて説明するが、本発明はこれらの実
施例によって限定されるものではない。EXAMPLES The following describes the culture, isolation and cultivation of TPU-0025 substance.
The purification will be described with reference to examples, but the present invention is not limited to these examples.

【００５９】実施例１ 培養 スラント上のＴＰ−Ａ０４６８株を、可溶性デンプン
１.０％、グルコース０.５％、ＮＺケース０.３％、酵
母エキス０.２％、トリプトン０.５％、リン酸水素二カ
リウム０.１％、硫酸マグネシウム０.０５％、炭酸カル
シウム０.３％よりなる種母培地（ｐＨ７.０）１００ｍ
ｌを分注した５００ｍｌ容Ｋ型フラスコに白金耳でＴＰ
−Ａ０４６８株を接種し、３０℃で４日間、回転振盪培
養した（毎分２００回転）。Example 1 Culture The TP-A0468 strain on a slant was prepared by dissolving 1.0% of soluble starch, 0.5% of glucose, 0.3% of NZ case, 0.2% of yeast extract, 0.5% of tryptone and 0.5% of phosphorus. Seed medium consisting of 0.1% dipotassium hydrogen oxyate, 0.05% magnesium sulfate and 0.3% calcium carbonate (pH 7.0) 100m
TP with a platinum loop into a 500 ml K-type flask into which
The A0468 strain was inoculated and cultured at 30 ° C. for 4 days with rotary shaking (200 rotations per minute).

【００６０】次に、ラクトース４.０％、ファーマメデ
ィア（サーザン コットン オイル社）２.０％、ＨＰ
−２０ １.０％よりなる生産培地（ｐＨ無調整）１００
ｍｌを含む５００ｍｌ容Ｋ型フラスコに、上記の種母菌
を３％（ｖ／ｖ）加え、３０℃で振盪培養した（毎分２
００回転）。ＴＰＵ−００２５物質の生産は菌体の増殖
が最高に達した頃から認められ、生産は培養４日目、５
日目に最高に達した。Next, 4.0% lactose, 2.0% PharmaMedia (Southern Cotton Oil Co.), HP
-20 Production medium consisting of 1.0% (without pH adjustment) 100
3% (v / v) of the inoculum described above was added to a 500 ml K-type flask containing 500 ml, and cultured with shaking at 30 ° C. (2 min / min).
00 rotation). The production of the TPU-0025 substance was observed from the time when the growth of the cells reached the maximum, and the production was started on the fourth day of culture.
The day reached the highest.

【００６１】実施例２ 単離・精製 培養液３ＬをｐＨ８.０に調整後、遠心分離（６,０００
回転、１０分）により、上清と菌体を分離した。菌体に
アセトン３Ｌを加え、３０分撹拌した後、セライト上濾
過した。菌体は再びアセトン３Ｌに懸濁し、３０分撹拌
した後、セライト上濾過した。濾液を合わせて、エバポ
レーターにより減圧濃縮し、水層を得た。この水層を菌
体上清と合わせ、酢酸エチル３Ｌで３回抽出を行った。
酢酸エチル層を合わせて、エバポレーターにより減圧濃
縮し、褐色の粗抽出物を３.４７ｇ得た。これをメタノ
ール１００ｍｌに溶解し、１００ｍｌのヘキサンで８回
分配抽出することにより脱脂し、抽出物１.７５ｇを得
た。これを逆相中圧カラムクロマトグラフィー［担体：
ＹＭＣ社製ＯＤＳ−ＡＭ、カラム：４０ｍｍφ×２００
ｍｍ、展開溶媒：２０〜４０％アセトニトリル０.１５
％ＫＨ₂ＰＯ₄バッファー（ｐＨ３.５）］により繰り返
し精製した。活性物質を含むフラクションを減圧濃縮に
よりアセトニトリルを留去し、得られた水層を炭酸水素
ナトリウム水溶液でｐＨ７.０に調整後、酢酸エチルに
より抽出した。次に酢酸エチル層を０.００１Ｎ ＨＣｌ
水溶液により抽出し、水層を凍結乾燥し、ＴＰＵ−００
２５Ａ物質塩酸塩（１）を６０ｍｇ、ＴＰＵ−００２５
Ｂ物質塩酸塩（２）を１８ｍｇ得た。Example 2 Isolation and Purification 3 L of the culture was adjusted to pH 8.0 and then centrifuged (6,000).
(Rotation, 10 minutes) to separate the supernatant from the cells. 3 L of acetone was added to the cells, and the mixture was stirred for 30 minutes, and then filtered on Celite. The cells were suspended again in 3 L of acetone, stirred for 30 minutes, and then filtered on Celite. The filtrates were combined and concentrated under reduced pressure by an evaporator to obtain an aqueous layer. This aqueous layer was combined with the cell supernatant, and extracted three times with 3 L of ethyl acetate.
The ethyl acetate layers were combined and concentrated under reduced pressure by an evaporator to obtain 3.47 g of a brown crude extract. This was dissolved in 100 ml of methanol, and delipidated by distributing and extracting eight times with 100 ml of hexane to obtain 1.75 g of an extract. This was subjected to reverse phase medium pressure column chromatography [carrier:
ODS-AM manufactured by YMC, column: 40 mmφ × 200
mm, developing solvent: 20-40% acetonitrile 0.15
% KH ₂ PO ₄ buffer (pH 3.5)]. The fraction containing the active substance was concentrated under reduced pressure to remove acetonitrile, and the resulting aqueous layer was adjusted to pH 7.0 with an aqueous sodium hydrogen carbonate solution and extracted with ethyl acetate. Next, the ethyl acetate layer was added to 0.001N HCl.
Extract with aqueous solution, freeze-dry the aqueous layer,
60 mg of 25A substance hydrochloride (1), TPU-0025
18 mg of substance B hydrochloride (2) was obtained.

【図面の簡単な説明】[Brief description of the drawings]

【図１】ＴＰＵ−００２５Ａ物質のメタノールでのＵＶ
吸収スペクトルFIG. 1: UV of TPU-0025A substance in methanol
Absorption spectrum

【図２】ＴＰＵ−００２５ＡＧ物質のメタノールでのＵ
Ｖ吸収スペクトルFIG. 2. U in methanol of TPU-0025AG material
V absorption spectrum

【図３】ＴＰＵ−００２５Ａ物質のＫＢｒでの赤外吸収
スペクトルFIG. 3 is an infrared absorption spectrum of TPU-0025A substance in KBr.

【図４】ＴＰＵ−００２５ＡＧ物質のＫＢｒでの赤外吸
収スペクトルFIG. 4 is an infrared absorption spectrum of TPU-0025AG substance in KBr.

【図５】ＴＰＵ−００２５Ａ物質の重メタノールでの¹
Ｈ ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ）FIG. 5. ¹ of TPU-0025A substance in heavy methanol
1 H NMR spectrum (400 MHz)

【図６】ＴＰＵ−００２５ＡＧ物質の重ジメチルスルフ
ォキサイドでの¹Ｈ ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ）FIG. 6 ¹ H NMR spectrum (400 MHz) of TPU-0025AG substance with heavy dimethyl sulfoxide.

【図７】ＴＰＵ−００２５Ａ物質の重メタノールでの¹³
Ｃ ＮＭＲスペクトル（１００ＭＨｚ）FIG. 7. ¹³ of TPU-0025A substance in heavy methanol
C NMR spectrum (100MHz)

【図８】ＴＰＵ−００２５ＡＧ物質の重ジメチルスルフ
ォキサイドでの¹³Ｃ ＮＭＲスペクトル（１００ＭＨ
ｚ）FIG. 8 ¹³ C NMR spectrum of TPU-0025AG substance with heavy dimethyl sulfoxide (100 MH)
z)

─────────────────────────────────────────────────────
────────────────────────────────────────────────── ───

【手続補正書】[Procedure amendment]

【提出日】平成１３年２月６日（２００１．２．６）[Submission date] February 6, 2001 (2001.2.6)

【手続補正１】[Procedure amendment 1]

【補正対象書類名】明細書[Document name to be amended] Statement

【補正対象項目名】００４５[Correction target item name] 0045

【補正方法】変更[Correction method] Change

【補正内容】[Correction contents]

【００４５】[0045]

【表５】 [Table 5]

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ０７Ｈ 17/00 Ｃ０７Ｈ 17/00 Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｎ 1/20 Ａ Ｃ１２Ｐ 17/18 Ｃ１２Ｐ 17/18 Ｃ 19/56 19/56 //(Ｃ１２Ｎ 1/20 (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ａ Ｃ１２Ｒ 1:29） Ｃ１２Ｒ 1:29） (Ｃ１２Ｐ 17/18 (Ｃ１２Ｐ 17/18 Ｃ Ｃ１２Ｒ 1:29） Ｃ１２Ｒ 1:29） (Ｃ１２Ｐ 19/56 (Ｃ１２Ｐ 19/56 Ｃ１２Ｒ 1:29） Ｃ１２Ｒ 1:29） Ｆターム(参考） 4B064 AE58 AF49 BA05 BA07 BG02 BG09 BH02 BH04 BH05 BH06 BH07 CA02 DA02 DA05 4B065 AA35X AC14 BA22 CA18 CA19 CA44 4C050 AA04 AA07 BB04 CC04 DD07 EE02 FF02 GG03 HH01 4C057 AA01 BB02 KK30 4C086 CB22 EA10 GA17 MA01 NA14 ZB26 ZB35 ──────────────────────────────────────────────────続 き Continued on the front page (51) Int.Cl. ⁷ Identification code FI Theme coat ゛ (Reference) C07H 17/00 C07H 17/00 C12N 1/20 C12N 1/20 A C12P 17/18 C12P 17/18 C 19 / 56 19/56 // (C12N 1/20 (C12N 1/20 A C12R 1:29) C12R 1:29) (C12P 17/18 (C12P 17/18 C C12R 1:29) C12R 1:29) ( C12P 19/56 (C12P 19/56 C12R 1:29) C12R 1:29) F term (reference) 4B064 AE58 AF49 BA05 BA07 BG02 BG09 BH02 BH04 BH05 BH06 BH07 CA02 DA02 DA05 4B065 AA35X AC14 BA22 CA18 CA19 CA44 4C050 AA04A CC04 DD07 EE02 FF02 GG03 HH01 4C057 AA01 BB02 KK30 4C086 CB22 EA10 GA17 MA17 NA14 ZB26 ZB35

Claims (4)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項１】 一般式（Ｉ） 【化１】 （上式中、Ｘは水素原子または式 【化２】 で表される糖残基であり、＊−Ｙ−＊＊は、式 【化３】 で表される部分であり、各Ｍｅはメチル基であり、そし
て＊および＊＊は、それぞれ対応する記号の箇所で相互
に結合することを意味する。）で表される化合物を有効
成分とする抗腫瘍剤。1. A compound of the general formula (I) (In the above formula, X is a hydrogen atom or a formula Wherein * -Y-** is a saccharide residue represented by the formula: Wherein each Me is a methyl group, and * and ** mean that they bind to each other at the corresponding symbol. An antitumor agent comprising a compound represented by the formula (1) as an active ingredient. 【請求項２】 一般式 【化４】 （上式中、Ｘは水素原子または式 【化５】 で表される糖残基であり、そして＊−Ｙ−＊＊は、式 【化６】 で表される部分であり、各Ｍｅはメチル基であり、或は
製薬学的に許容されうる酸付加塩。＊及び＊＊は、それ
ぞれ対応する記号の箇所で相互に結合することを意味す
る。）で表される化合物。2. A compound of the general formula (Wherein X is a hydrogen atom or a formula And * -Y-** has the formula: Wherein each Me is a methyl group, or a pharmaceutically acceptable acid addition salt. * And ** mean binding to each other at the corresponding symbol. ). 【請求項３】 請求項２記載の化合物を有効成分とする
抗菌剤。3. An antibacterial agent comprising the compound according to claim 2 as an active ingredient. 【請求項４】 請求項２記載の化合物を生産することの
できるミクロモノスポーラ属（Micromonospora）に属す
る微生物を栄養培地で培養し、必要により生産された該
化合物をエピマー化または加水分解し、目的の化合物を
回収することを特徴とする一般式（Ｉ） 【化７】 （上式中、Ｘは水素原子または式 【化８】 で表される糖残基であり、＊−Ｙ−＊＊は、式 【化９】 で表される部分であり、各Ｍｅはメチル基であり、そし
て＊および＊＊は、それぞれ対応する記号の箇所で相互
に結合することを意味する。）で表される化合物の製造
方法。4. A microorganism belonging to the genus Micromonospora capable of producing the compound according to claim 2 is cultured in a nutrient medium, and the produced compound is epimerized or hydrolyzed as required. Recovering the compound of the general formula (I): (In the above formula, X is a hydrogen atom or a formula Wherein * -Y-** is a sugar residue represented by the formula: Wherein each Me is a methyl group, and * and ** mean that they bind to each other at the corresponding symbol. )).