JP2002087975A - 一酸化窒素産生抑制剤及び、その一酸化窒素産生抑制剤を配合した皮膚外用剤、化粧料、医薬部外品 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 生体内での過剰な一酸化窒素の産生を抑制す
るための一酸化窒素産生抑制剤、及びその一酸化窒素産
生抑制剤を配合した皮膚外用剤、化粧料、医薬部外品に
関し、紫外線や炎症反応に起因する皮膚障害を改善する
効果を有するとともに、安全性及び使用感に優れた皮膚
外用剤、化粧料、医薬部外品として使用される一酸化窒
素産生抑制剤を提供することを課題とする。 【解決手段】 ローズマリー抽出液、カルノソール、カ
ルノシン酸、コーヒー豆の抽出液、サクラダソウ抽出
液、オウレン抽出液、オウバク抽出液、カンゾウ抽出
液、イヌノイバラの抽出液、センキュウ抽出液、トウニ
ン抽出液、シャクヤク抽出液、ヨクイニン抽出液、及び
アカブドウ抽出液の少なくとも１種を含有させたことで
ある。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、生体内での過剰な
一酸化窒素の産生を抑制するための一酸化窒素産生抑制
剤、及びその一酸化窒素産生抑制剤を配合した皮膚外用
剤、化粧料、医薬部外品に関する。

【０００２】

【従来の技術】周知のように、一酸化窒素は、大気汚染
や酸性雨等の要因となる窒素酸化物であるが、近年、生
体内で産生され生理的に重要な物質であることが見い出
されている。

【０００３】1980年、Furchgott 等によってプロスタサ
イクリンに代わる血管弛緩物質としての機能を有する内
皮由来血管拡張因子（ＥＤＲＦ）が発見され、これが一
酸化窒素と同一であることが、1987年にMoncada 等によ
って証明された。

【０００４】それ以来、循環器系以外の分野でも、神経
系さらに免疫系等の生体内の多くの生理機能における情
報伝達物質としての一酸化窒素の役割が次々と明らかに
されている。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】しかし、一酸化窒素が
大量に生合成されると、生体にとって決して無毒ではな
く、たとえば大量に生合成された一酸化窒素が血管平滑
筋の弛緩と過剰な透過性の増大をもたらし、著しい血圧
の低下によってエンドトキシン・ショックを引き起こす
ことも知られている。

【０００６】また、長期、短期の炎症、さらにはＩ型糖
尿病等の多くの自己免疫疾患についても、大量の一酸化
窒素の産生がその原因の１つと考えられている。

【０００７】本発明者等は、このような点に鑑み、鋭意
研究を重ねた結果、ローズマリー抽出液、カルノソー
ル、カルノシン酸、コーヒー豆の抽出液、サクラダソウ
抽出液、オウレン抽出液、オウバク抽出液、カンゾウ抽
出液、イヌノイバラの抽出液、センキュウ抽出液、トウ
ニン抽出液、シャクヤク抽出液、ヨクイニン抽出液、及
びアカブドウ抽出液から選ばれる少なくとも１種の成分
が、紫外線照射や炎症反応によって生じる一酸化窒素を
特異的に抑制し、それに起因する皮膚障害を改善するこ
とを見出し、本発明を完成するに至った。

【０００８】本発明は、紫外線や炎症反応に起因する皮
膚障害を改善する効果を有するとともに、安全性及び使
用感に優れた皮膚外用剤、化粧料、医薬部外品として使
用される一酸化窒素産生抑制剤を提供することを課題と
するものである。

【０００９】

【課題を解決するための手段】本発明は、このような課
題を解決せんとするもので、その課題を解決するための
手段は、一酸化窒素産生抑制剤に、ローズマリー抽出
液、カルノソール、カルノシン酸、コーヒー豆の抽出
液、サクラダソウ抽出液、オウレン抽出液、オウバク抽
出液、カンゾウ抽出液、イヌノイバラの抽出液、センキ
ュウ抽出液、トウニン抽出液、シャクヤク抽出液、ヨク
イニン抽出液、及びアカブドウ抽出液の少なくとも１種
を含有させたことである。

【００１０】ローズマリー抽出液、カルノソール、カル
ノシン酸、コーヒー豆の抽出液、サクラダソウ抽出液、
オウレン抽出液、オウバク抽出液、カンゾウ抽出液、イ
ヌノイバラの抽出液、センキュウ抽出液、トウニン抽出
液、シャクヤク抽出液、ヨクイニン抽出液、アカブドウ
抽出液の皮膚外用剤、化粧料、医薬部外品への配合量
は、特に限定されるものではないが、乾燥固形物量で、
総量を基準として0.0005重量％〜5.0 重量％であること
が望ましい。

【００１１】これらの配合量が0.0005重量％未満では、
本発明の目的とする効果がそれほど十分ではなく、一方
これらの配合量が5.0 重量％を超えても、その増量分に
見合った効果の向上は認められない。

【００１２】本発明の一酸化窒素産生抑制剤を配合する
皮膚外用剤、化粧料、医薬部外品は、ローション類、乳
液類、クリーム類、パック類、軟膏類などの剤型にする
ことが可能である。

【００１３】本発明の皮膚外用剤、化粧料、医薬部外品
には、色素、防腐剤、界面活性剤、香料、顔料等を適宜
配合することができる。

【００１４】

【実施例】以下、本発明の実施例について説明する。

【００１５】（実施例１）本実施例は、一酸化窒素産生
抑制剤の一実施例であり、一酸化窒素産生抑制剤として
ローズマリー抽出液を用いて、マウス培養マクロファー
ジ細胞からの一酸化窒素産生抑制試験を行った。

【００１６】〔マウスマクロファージ細胞の増殖〕マウ
スマクロファージ細胞（ＲＡＷ264.7 細胞；大日本製薬
製）は、次のような常法に従って増殖させた。

【００１７】ＲＡＷ細胞の培養には、10％牛胎児血清
（シグマ製）、及びペニシリン・ストレプトマイシン50
0unit/ml・ 500μg/ml（シグマ製）を添加したDulbecc
o'sＭＥＭ（シグマ製）培地を用いた。

【００１８】ＲＡＷ細胞は、３日又は４日ごとに新しい
培地に交換して継代を行った。

【００１９】ＲＡＷ細胞を1.0 ×10⁵cells/ml となるよ
うに培地に懸濁し、これを24wellプレートに１mlずつ分
注して24時間培養した。

【００２０】〔ローズマリー抽出液の調製〕一方、ロー
ズマリー抽出液（丸善製薬製）は、培地で希釈して1.0v
ol/vol％溶液を調製してろ過滅菌した。

【００２１】これを希釈して0.5 、0.3 、0.1vol/vol％
とした。

【００２２】〔素材添加及び細胞刺激〕ＲＡＷ細胞をリ
ポポリサッカライド（以下、ＬＰＳという；シグマ製）
で刺激して一酸化窒素の産生を誘導し、一定時間後の培
養上清中の一酸化窒素濃度を測定した。

【００２３】ＬＰＳは培地に溶解して１mg/ml としてろ
過滅菌した。

【００２４】具体的には、先ず、培養上清をアスピレー
トして除去した後、各濃度の溶液450 μl を入れ、続い
て１mg/ml ＬＰＳを添加して細胞を刺激した。

【００２５】培養上清を細胞刺激の24時間後にサンプリ
ングした。培養上清中に遊離した一酸化窒素の測定はグ
リース試薬を用いて行った。

【００２６】尚、一酸化窒素は、培養上清中に遊離する
が、不安定で直ちに二酸化窒素に酸化される。従って、
実際には一酸化窒素の遊離量を直接測定することは困難
であるので、二酸化窒素の量を測定することで、各試料
における一酸化窒素の遊離量を対比した。

【００２７】一酸化窒素は、単に二酸化窒素に酸化され
るだけであるため、このような二酸化窒素の量を対比す
ることで、各試料における一酸化窒素の遊離量の対比も
客観的に行えると推定できる。

【００２８】試験結果を図１に示す。

【００２９】図１において、ＬＰＳは、ＬＰＳのみが添
加され、ローズマリー抽出液が入っていないものを意味
する。また、Ｎ．Ｔ．は、ＬＰＳが添加されていないも
のを意味する。

【００３０】図１に示すように、ＬＰＳのみ添加したマ
ウスマクロファージ細胞では、二酸化窒素の遊離量は1
9.66 nmol/ml であったが、ＬＰＳとともにローズマリ
ー抽出液を0.3 ％添加したマウスマクロファージ細胞で
は、二酸化窒素の遊離量は16.24nmol/mlと減少し、培養
上清中への一酸化窒素の遊離がやや抑制されたと推定さ
れる。

【００３１】また、ＬＰＳとともにローズマリー抽出液
を0.5 ％添加したマウスマクロファージ細胞では、二酸
化窒素の遊離量は約13.45nmol/mlとかなり減少し、さら
にＬＰＳとともにローズマリー抽出液を1.0 ％添加した
マウスマクロファージ細胞では、二酸化窒素の遊離量は
約8.55nmol/ml と著しい減少が認められた。

【００３２】従って、ローズマリー抽出液の量が増える
ほど、培養上清中への一酸化窒素の遊離が抑制されるも
のと認められる。

【００３３】（実施例２）本実施例は、一酸化窒素産生
抑制剤の他の実施例であり、一酸化窒素産生抑制剤とし
てカルノソールを用いて、マウス培養マクロファージ細
胞からの一酸化窒素産生抑制試験を行った。

【００３４】マウスマクロファージ細胞の増殖は、実施
例１と同様に行った。

【００３５】〔カルノソール溶液の調製〕カルノソール
溶液は、10mg/ml ＤＭＳＯ溶液を培地で希釈して100 μ
Ｍ（μmol/l)としてろ過滅菌した。

【００３６】これを希釈して40、20、10、１μＭとし
た。

【００３７】ＬＰＳによって細胞刺激を行い、それによ
って一酸化窒素の産生を誘導すること、及び一酸化窒素
濃度の測定は、実施例１と同様に行った。

【００３８】本実施例では、ＬＰＳの他に、インターフ
ェロンγ（以下、ＩＦＮ−γという；Biosource 製品）
を用いて細胞刺激を行い、一酸化窒素濃度を測定するこ
とをも行った。

【００３９】ＩＦＮ−γは、培地に溶解して1000unit/m
l とし、ろ過滅菌したものを用いた。

【００４０】ＩＦＮ−γの場合に用いるカルノソール溶
液の濃度は、それぞれ40、20、10、１μＭとした。

【００４１】ＬＰＳによる試験結果を図２に示し、ＩＦ
Ｎ−γによる試験結果を図３に示す。

【００４２】図２からも明らかなように、ＬＰＳのみ添
加したマウスマクロファージ細胞では、二酸化窒素の遊
離量は19.18nmol/mlであったが、カルノソール溶液を10
μＭ添加したマウスマクロファージ細胞では、二酸化窒
素の遊離量は17.02nmol/mlと減少し、培養上清中への一
酸化窒素の遊離がやや抑制されたと推定される。

【００４３】また、カルノソール溶液を20μＭ添加した
マウスマクロファージ細胞では、二酸化窒素の遊離量は
約12.56nmol/mlとかなり減少し、さらにカルノソール溶
液を40μＭ添加したマウスマクロファージ細胞では、二
酸化窒素の遊離量は約８.81nmol/mlと著しい減少が認め
られた。

【００４４】従って、カルノソール溶液の量が増えるほ
ど、培養上清中への一酸化窒素の遊離が抑制されるもの
と認められる。

【００４５】また、図３において、ＩＦＮ（−）とは、
ＩＦＮ−γが添加されていないものを意味し、０とはＩ
ＦＮ−γが添加されてはいるが、カルノソール溶液が入
っていないものを意味する。

【００４６】図３からも明らかなように、ＩＦＮ−γの
み添加したマウスマクロファージ細胞では、二酸化窒素
の遊離量は39.85nmol/mlであったが、ＩＦＮ−γととも
にカルノソール溶液を１μＭ添加したマウスマクロファ
ージ細胞では、二酸化窒素の遊離量は33.91nmol/mlに減
少し、またＩＦＮ−γとともに10μＭ添加したマウスマ
クロファージ細胞では、二酸化窒素の遊離量は22.46nmo
l/mlに減少した。

【００４７】また、ＩＦＮ−γとともにカルノソール溶
液を20μＭ添加したマウスマクロファージ細胞では、二
酸化窒素の遊離量は10.67nmol/mlとかなり減少し、さら
にＩＦＮ−γとともにカルノソール溶液を40μＭ添加し
たマウスマクロファージ細胞では、二酸化窒素の遊離量
は5.61nmol/ml と著しい減少が認められた。

【００４８】従って、カルノソール溶液の量が増えるほ
ど、培養上清中への一酸化窒素の遊離が抑制されるもの
と認められる。

【００４９】（実施例３）本実施例は、一酸化窒素産生
抑制剤の他の実施例であり、一酸化窒素産生抑制剤とし
てカルノシン酸を用いて、マウス培養マクロファージ細
胞からの一酸化窒素産生抑制試験を行った。

【００５０】マウスマクロファージ細胞の増殖は、実施
例１、実施例２と同様に行った。

【００５１】また、カルノシン酸溶液の調製は、実施例
２のカルノソール溶液の調製と同様に行った。

【００５２】ただし、ＩＦＮ−γの場合に用いるカルノ
シン酸溶液の濃度は、それぞれ10、５、２、１μＭとし
た。

【００５３】さらに、ＬＰＳ又はＩＦＮ−γによる細胞
刺激による一酸化窒素の産生の誘導、及び一酸化窒素濃
度の測定は、実施例１、実施例２と同様に行った。

【００５４】ＬＰＳによる試験結果を図４に示し、ＩＦ
Ｎ−γによる試験結果を図５に示す。

【００５５】図４からも明らかなように、ＬＰＳのみ添
加したマウスマクロファージ細胞では、二酸化窒素の遊
離量は21.13nmol/mlであったが、ＬＰＳとともにカルノ
シン酸溶液を10μＭ添加したマウスマクロファージ細胞
では、二酸化窒素の遊離量は13.75nmol/mlと減少し、培
養上清中への一酸化窒素の遊離がやや抑制されたと推定
される。

【００５６】また、ＬＰＳとともにカルノシン酸溶液を
20μＭ添加したマウスマクロファージ細胞では、二酸化
窒素の遊離量は8.36nmol/ml 、ＬＰＳとともにカルノシ
ン酸溶液を40μＭ添加したマウスマクロファージ細胞で
は、二酸化窒素の遊離量は4.27nmol/ml と、ともに著し
い減少が認められた。

【００５７】従って、カルノシン酸溶液の量が増えるほ
ど、培養上清中への一酸化窒素の遊離が抑制されるもの
と認められる。

【００５８】また、図５からも明らかなように、ＩＦＮ
−γのみ添加したマウスマクロファージ細胞では、二酸
化窒素の遊離量は39.55nmol/mlであったが、ＩＦＮ−γ
とともにカルノシン酸溶液を５μＭ添加したマウスマク
ロファージ細胞では、二酸化窒素の遊離量は32.16nmol/
mlに減少し、またＩＦＮ−γ10μＭ添加したマウスマク
ロファージ細胞では、二酸化窒素の遊離量は12.85nmol/
mlと著しく減少した。

【００５９】従って、カルノシン酸溶液の量が増えるほ
ど、培養上清中への一酸化窒素の遊離が抑制されるもの
と認められる。

【００６０】（実施例４）本実施例は、一酸化窒素産生
抑制剤の他の実施例であり、一酸化窒素産生抑制剤とし
て、コーヒー豆の抽出液であるコーヒーリキッドＢ（一
丸ファルコス製）を用いて、マウス培養マクロファージ
細胞からの一酸化窒素産生抑制試験を行った。

【００６１】マウスマクロファージ細胞の増殖は、実施
例１乃至実施例３と同様に行った。

【００６２】コーヒーリキッドＢは、コーヒー豆の抽出
液であって、30重量％の1,3 −ブチレングリコールと、
0.3 重量％のクロロゲン酸を含有するものである。

【００６３】このコーヒーリキッドＢを、培地で希釈し
て1.0vol/vol％溶液を調製してろ過滅菌し、さらにこれ
を希釈して0.1 、0.01、0.001vol/vol％とした。

【００６４】さらに、ＬＰＳによる細胞刺激による一酸
化窒素の産生の誘導、及び一酸化窒素濃度の測定は、実
施例１乃至実施例３と同様に行った。

【００６５】ＬＰＳによる試験結果を図６に示す。

【００６６】図６からも明らかなように、ＬＰＳのみ添
加したマウスマクロファージ細胞では、二酸化窒素の遊
離量は23.83nmol/mlであったが、ＬＰＳとともにコーヒ
ーリキッドＢ溶液を0.1 ％添加したマウスマクロファー
ジ細胞では、二酸化窒素の遊離量は約16.57nmol/mlと減
少し、培養上清中への一酸化窒素の遊離がやや抑制され
たと推定される。

【００６７】また、ＬＰＳとともにコーヒーリキッドＢ
溶液を1.0 ％添加したマウスマクロファージ細胞では、
二酸化窒素の遊離量は約2.87nmol/ml と著しい減少が認
められた。

【００６８】従って、コーヒーリキッドＢ溶液の量が増
えるほど、培養上清中への一酸化窒素の遊離が抑制され
るものと認められる。

【００６９】（実施例５）本実施例は、一酸化窒素産生
抑制剤の他の実施例であり、一酸化窒素産生抑制剤とし
て、サクラダソウ抽出液を用いて、マウス培養マクロフ
ァージ細胞からの一酸化窒素産生抑制試験を行った。

【００７０】マウスマクロファージ細胞の増殖は、実施
例１乃至実施例４と同様に行った。

【００７１】サクラダソウ抽出液は、サクラダソウ（Pr
atia nummularia)の茎、葉を50％エタノールに浸漬して
得られた抽出液である。サクラダソウ（Pratia nummula
ria)は、キキョウ科Pratia属の植物であり、本実施例で
は、台湾製のPratia nummularia を用いた。

【００７２】このサクラダソウ抽出液を、培地で希釈し
て1.0vol/vol％溶液を調製してろ過滅菌し、さらにこれ
を希釈して0.5 、0.1 、0.05vol/vol ％とした。

【００７３】さらに、ＬＰＳによる細胞刺激による一酸
化窒素の産生の誘導、及び一酸化窒素濃度の測定は、実
施例１乃至実施例４と同様に行った。

【００７４】ＬＰＳによる試験結果を図７に示す。

【００７５】図７からも明らかなように、ＬＰＳのみ添
加したマウスマクロファージ細胞では、二酸化窒素の遊
離量は19.68nmol/mlであったが、ＬＰＳとともにサクラ
ダソウ抽出液を0.05％添加したマウスマクロファージ細
胞では、二酸化窒素の遊離量は約17.45nmol/mlと減少
し、ＬＰＳとともにサクラダソウ抽出液を0.1 ％添加し
たマウスマクロファージ細胞では、二酸化窒素の遊離量
は約15.37nmol/mlと減少し、ＬＰＳとともにサクラダソ
ウ抽出液を0.5 ％添加したマウスマクロファージ細胞で
は、二酸化窒素の遊離量は約12.66nmol/mlと減少し、Ｌ
ＰＳとともにサクラダソウ抽出液を1.0 ％添加したマウ
スマクロファージ細胞では、二酸化窒素の遊離量は約1
0.0nmol/ml と減少した。

【００７６】従って、サクラダソウ抽出液の量が増える
ほど、培養上清中への一酸化窒素の遊離が抑制されるも
のと認められる。

【００７７】（実施例６）本実施例は、一酸化窒素産生
抑制剤の他の実施例であり、一酸化窒素産生抑制剤とし
て、オウレン抽出液を用いて、マウス角化細胞からの一
酸化窒素産生抑制試験を行った。

【００７８】〔マウス角化細胞の増殖〕マウスは、１週
齢ＢＡＬＢ／ｃマウス（日本ＳＬＣより購入）を使用し
た。このマウスから採取した皮膚を70％エタノール溶液
中に30秒間浸漬した後、5mm ×15mm程度の短冊形に切
り、皮膚片とした。

【００７９】皮膚片を0.25％トリプシン溶液（Clonetic
s 製）に浸漬し、37℃で３〜４時間インキュベートした
後、皮膚片から表皮部分を分離し、表皮部分をＫＧＭ培
地（Clonetics 製）に移してピペッティングすることに
よって、角化細胞を分散させた。

【００８０】このＫＧＭ培地は、種々のアミノ酸、ビタ
ミン、無機塩、グルコース等からなるＫＢＭ培地（クロ
ネティックス社製）を基礎培地とし、これにインスリ
ン、ｈＥＧＦ（ヒトのＥＧＦ）、ＢＰＥ（牛の脳の抽出
物）、ハイドロコーチゾン、ゲンタマイシン（ＧＡ100
0）等を混合したものである。

【００８１】分散した液をセルストレーナー（Falcon
製）で濾過し、その濾過後に、マウス角化細胞が1.5 ×
10⁴cells/ml となるように濾液を調整し、これを24well
プレートに１mlずつ分注して72時間培養した。

【００８２】〔オウレン抽出液の調製〕一方、オウレン
抽出液（丸善製薬製）は、培地で希釈して1.0vol/vol％
溶液を調製してろ過滅菌した。

【００８３】これを希釈して0.1 、0.01vol/vol ％とし
た。

【００８４】〔素材添加及び細胞刺激〕マウス角化細胞
をインターフェロンγ（以下、ＩＦＮ−γという；Bios
ource製）で刺激して一酸化窒素の産生を誘導し、一定
時間後の培養上清中の一酸化窒素濃度を測定した。

【００８５】ＩＦＮ−γは、培地に溶解して1000unit/m
l とし、ろ過滅菌したものを用いた。

【００８６】具体的には、先ず、培養上清をアスピレー
トして除去した後、各濃度の溶液450 μl を入れ、続い
て1000unit/ml のＩＦＮ−γ50μl を添加して細胞を刺
激した。

【００８７】培養上清を細胞刺激の24時間後にサンプリ
ングした。培養上清中に遊離した一酸化窒素の測定はグ
リース試薬を用いて行った。

【００８８】試験結果を図８に示す。

【００８９】図８に示すように、ＩＦＮ−γのみ添加し
たマウス角化細胞では、二酸化窒素の遊離量は17.04nmo
l/mlであったが、ＩＦＮ−γとともにオウレン抽出液を
0.01vol/vol ％添加したマウス角化細胞では、二酸化窒
素の遊離量は14.13nmol/mlに減少した。

【００９０】また、ＩＦＮ−γとともにオウレン抽出液
を0.1vol/vol％添加したマウス角化細胞では、二酸化窒
素の遊離量は10.3nmol/ml と減少し、ＩＦＮ−γととも
にオウレン抽出液を１vol/vol ％添加したマウス角化細
胞では、二酸化窒素の遊離量は9.18nmol/ml と減少し
た。

【００９１】従って、オウレン抽出液の量が増えるほ
ど、培養上清中への一酸化窒素の遊離が抑制されるもの
と認められる。

【００９２】（実施例８）本実施例は、一酸化窒素産生
抑制剤の他の実施例であり、一酸化窒素産生抑制剤とし
て、オウバク抽出液を用いて、マウス角化細胞からの一
酸化窒素産生抑制試験を行った。

【００９３】マウス角化細胞の増殖は、実施例６と同様
に行った。

【００９４】また、オウバク抽出液（オウバク抽出液−
Ｊ；丸善製薬製）の調製は、実施例６のオウレン抽出液
の調製と同様に行った。

【００９５】さらに、ＩＦＮ−γによる細胞刺激による
一酸化窒素の産生の誘導、及び一酸化窒素濃度の測定
は、実施例６と同様に行った。

【００９６】試験結果を図９に示す。

【００９７】図９に示すように、ＩＦＮ−γのみ添加し
たマウス角化細胞では、二酸化窒素の遊離量は約17.15n
mol/mlであったが、ＩＦＮ−γとともにオウバク抽出液
を0.01vol/vol ％添加したマウス角化細胞では、二酸化
窒素の遊離量は約13.86nmol/mlに減少した。

【００９８】また、ＩＦＮ−γとともにオウバク抽出液
を0.1vol/vol％添加したマウス角化細胞では、二酸化窒
素の遊離量は約8.12nmol/ml と減少し、ＩＦＮ−γとと
もにオウバク抽出液を１vol/vol ％添加したマウス角化
細胞では、二酸化窒素の遊離量は約11.2nmol/ml であっ
た。

【００９９】従って、オウバク抽出液の量が増えるほ
ど、培養上清中への一酸化窒素の遊離が抑制されるもの
と認められるが、オウバク抽出液を１vol/vol ％添加し
た場合には、0.1vol/vol％添加した場合よりも少し増加
した。

【０１００】（実施例８）本実施例は、一酸化窒素産生
抑制剤の他の実施例であり、一酸化窒素産生抑制剤とし
て、カンゾウ抽出液を用いて、マウス角化細胞からの一
酸化窒素産生抑制試験を行った。

【０１０１】マウス角化細胞の増殖は、実施例６、実施
例７と同様に行った。

【０１０２】また、カンゾウ抽出液（カンゾウ抽出液−
ＢＧ；丸善製薬）の調製は、実施例６のオウレン抽出液
や実施例７のオウバク抽出液の調製と同様に行った。

【０１０３】さらに、ＩＦＮ−γによる細胞刺激による
一酸化窒素の産生の誘導、及び一酸化窒素濃度の測定
も、実施例６、実施例７と同様に行った。

【０１０４】試験結果を図10に示す。

【０１０５】図10に示すように、ＩＦＮ−γのみ添加し
たマウス角化細胞では、二酸化窒素の遊離量は約14.97n
moL/mLであったが、ＩＦＮ−γとともにカンゾウ抽出液
を1.0 vol/vol ％添加したマウス角化細胞では、二酸化
窒素の遊離量は約11.82nmol/mlに減少した。

【０１０６】（実施例９）本実施例は、一酸化窒素産生
抑制剤の他の実施例であり、一酸化窒素産生抑制剤とし
て、イヌノイバラの抽出液であるファルコレックスノバ
ラＥ（一丸ファルコス製）を用いて、マウス角化細胞か
らの一酸化窒素産生抑制試験を行った。

【０１０７】マウス角化細胞の増殖は、実施例６乃至実
施例８と同様に行った。

【０１０８】また、ファルコレックスノバラＥの調製
は、実施例６のオウレン抽出液、実施例７のオウバク抽
出液、及び実施例８のカンゾウ抽出液と同様に行った。

【０１０９】さらに、ＩＦＮ−γによる細胞刺激による
一酸化窒素の産生の誘導、及び一酸化窒素濃度の測定
も、実施例６乃至実施例８と同様に行った。

【０１１０】試験結果を図11に示す。

【０１１１】図11に示すように、ＩＦＮ−γのみ添加し
たマウス角化細胞では、二酸化窒素の遊離量は13.05nmo
l/mlであったが、ＩＦＮ−γとともにファルコレックス
ノバラＥを1.0 vol/vol ％添加したマウス角化細胞で
は、二酸化窒素の遊離量は約5.71nmol/ml に減少した。

【０１１２】（実施例10）本実施例は、一酸化窒素産生
抑制剤の一実施例であり、一酸化窒素産生抑制剤として
センキュウ抽出液を用いて、ヒトマクロファージ細胞か
らの一酸化窒素産生抑制試験を行った。

【０１１３】〔ヒトマクロファージ細胞の増殖〕ヒトマ
クロファージ細胞としては、単球であるＴＨＰ−１（大
日本製薬）を常法に従って培養し、増殖させたものを用
いた。

【０１１４】ＴＨＰ−１細胞の培養には、10％牛胎児血
清（シグマ製）、及びペニシリン・ストレプトマイシン
500unit/ml・ 500μg/ml（シグマ製）を添加したDulbec
co'sＭＥＭ（シグマ製）培地を用いた。

【０１１５】ＴＨＰ−１細胞は、３日又は４日ごとに新
しい培地に交換して継代を行った。

【０１１６】ＴＨＰ−１細胞を1.0 ×10⁵cells/ml とな
るように培地に懸濁して100nＭのＰＭＡ（ホルボール−
1,2 −ミリステート−1,3 −アセテート、Gibco 製）溶
液を添加し、これを24wellプレートに１mlずつ分注して
72時間培養した。

【０１１７】〔センキュウ抽出液の調製〕一方、センキ
ュウ抽出液（丸善製薬製）は、培地で希釈して1.0vol/v
ol％溶液を調製してろ過滅菌した。

【０１１８】これを希釈して0.1 、0.01vol/vol ％とし
た。

【０１１９】〔素材添加及び細胞刺激〕ＴＨＰ−１細胞
をリポポリサッカライド（以下、ＬＰＳという；シグマ
製）で刺激して一酸化窒素の産生を誘導し、一定時間後
の培養上清中の一酸化窒素濃度を測定した。

【０１２０】ＬＰＳは培地に溶解して１mg/ml としてろ
過滅菌した。

【０１２１】具体的には、先ず、培養上清をアスピレー
トして除去した後、各濃度の溶液450 μl を入れ、続い
て１mg/ml ＬＰＳを添加して細胞を刺激した。

【０１２２】培養上清を細胞刺激の24時間後にサンプリ
ングした。培養上清中に遊離した一酸化窒素の測定はグ
リース試薬を用いて行った。

【０１２３】試験結果を図12に示す。

【０１２４】図12に示すように、ＬＰＳのみ添加したヒ
トマクロファージ細胞では、二酸化窒素の遊離量は約7.
46nmol/ml であったが、ＬＰＳとともにセンキュウ抽出
液を0.01％添加したヒトマクロファージ細胞では、二酸
化窒素の遊離量は約7.2nmol/mlとわずかに減少し、ＬＰ
Ｓとともにセンキュウ抽出液を0.1 ％添加したヒトマク
ロファージ細胞では、二酸化窒素の遊離量は約6.6nmol/
mlとわずかに減少し、さらにＬＰＳとともにセンキュウ
抽出液を1.0 ％添加したヒトマクロファージ細胞では、
二酸化窒素の遊離量は約6.0nmol/mlとわずかに減少し
た。

【０１２５】従って、センキュウ抽出液の量が増えるほ
ど、二酸化窒素の遊離量が徐々に減少していることか
ら、センキュウ抽出液の量の増加に伴って培養上清中へ
の一酸化窒素の遊離が抑制されるものと認められる。

【０１２６】（実施例11）本実施例は、一酸化窒素産生
抑制剤の一実施例であり、一酸化窒素産生抑制剤として
トウニン抽出液を用いて、ヒトマクロファージ細胞から
の一酸化窒素産生抑制試験を行った。

【０１２７】ヒトマクロファージ細胞の増殖は、実施例
10と同様にＴＨＰ−１を用いて行った。

【０１２８】また、トウニン抽出液の調製は、実施例10
のセンキュウ抽出液の調製と同様に行った。

【０１２９】さらに、ＬＰＳによる細胞刺激による一酸
化窒素の産生の誘導、及び一酸化窒素濃度の測定は、実
施例10と同様に行った。

【０１３０】試験結果を図13に示す。

【０１３１】図13に示すように、ＬＰＳのみ添加したヒ
トマクロファージ細胞では、二酸化窒素の遊離量は7.96
nmol/ml であったが、ＬＰＳとともにトウニン抽出液を
0.01％添加したヒトマクロファージ細胞では、二酸化窒
素の遊離量は約6.14nmol/mlと減少し、ＬＰＳとともに
トウニン抽出液を0.1 ％添加したヒトマクロファージ細
胞では、二酸化窒素の遊離量は約6.78nmol/ml であった
が、ＬＰＳとともにトウニン抽出液を1.0 ％添加したヒ
トマクロファージ細胞では、二酸化窒素の遊離量は約6.
13nmol/ml と減少した。

【０１３２】（実施例12）本実施例は、一酸化窒素産生
抑制剤の一実施例であり、一酸化窒素産生抑制剤として
シャクヤク抽出液を用いて、ヒトマクロファージ細胞か
らの一酸化窒素産生抑制試験を行った。

【０１３３】ヒトマクロファージ細胞の増殖は、実施例
10、実施例11と同様に行った。

【０１３４】また、シャクヤク抽出液の調製は、実施例
10のセンキュウ抽出液、実施例11のトウニン抽出液の調
製と同様に行った。

【０１３５】さらに、ＬＰＳによる細胞刺激による一酸
化窒素の産生の誘導、及び一酸化窒素濃度の測定も、実
施例10、実施例11と同様に行った。

【０１３６】試験結果を図14に示す。

【０１３７】図14に示すように、ＬＰＳのみ添加したヒ
トマクロファージ細胞では、二酸化窒素の遊離量は8.15
nmol/ml であったが、ＬＰＳとともにシャクヤク抽出液
を0.01％添加したヒトマクロファージ細胞では、二酸化
窒素の遊離量は7.03nmol/mlとわずかに減少し、ＬＰＳ
とともにシャクヤク抽出液を0.1 ％添加したヒトマクロ
ファージ細胞では、二酸化窒素の遊離量は約6.45nmol/m
l とわずかに減少し、ＬＰＳとともにシャクヤク抽出液
を1.0 ％添加したヒトマクロファージ細胞では、二酸化
窒素の遊離量は約6.18nmol/ml とわずかに減少した。

【０１３８】従って、シャクヤク抽出液の量が増えるほ
ど、二酸化窒素の遊離量が徐々に減少していることか
ら、シャクヤク抽出液の量の増加に伴って培養上清中へ
の一酸化窒素の遊離が抑制されるものと認められる。

【０１３９】（実施例13）本実施例は、一酸化窒素産生
抑制剤の一実施例であり、一酸化窒素産生抑制剤として
ヨクイニン抽出液を用いて、ヒトマクロファージ細胞か
らの一酸化窒素産生抑制試験を行った。

【０１４０】ヒトマクロファージ細胞の増殖は、実施例
10乃至実施例12と同様に行った。

【０１４１】また、ヨクイニン抽出液（丸善製薬）の調
製は、実施例10のセンキュウ抽出液、実施例11のトウニ
ン抽出液、及び実施例12のシャクヤク抽出液の調製と同
様に行った。

【０１４２】さらに、ＬＰＳによる細胞刺激による一酸
化窒素の産生の誘導、及び一酸化窒素濃度の測定も、実
施例10乃至実施例12と同様に行った。

【０１４３】試験結果を図15に示す。

【０１４４】図15に示すように、ＬＰＳのみ添加したヒ
トマクロファージ細胞では、二酸化窒素の遊離量は約8.
19nmol/ml であったが、ＬＰＳとともにヨクイニン抽出
液を0.01％添加したヒトマクロファージ細胞では、二酸
化窒素の遊離量は約7.3nmol/mlとわずかに減少し、ＬＰ
Ｓとともにヨクイニン抽出液を0.1 ％添加したヒトマク
ロファージ細胞では、二酸化窒素の遊離量は約6.73nmol
/ml とわずかに減少したが、ＬＰＳとともにヨクイニン
抽出液を1.0 ％添加したヒトマクロファージ細胞では、
二酸化窒素の遊離量は約7.01nmol/ml であった。

【０１４５】（実施例14）本実施例は、一酸化窒素産生
抑制剤の一実施例であり、一酸化窒素産生抑制剤として
アカブドウ抽出液を用いて、ヒトマクロファージ細胞か
らの一酸化窒素産生抑制試験を行った。

【０１４６】ヒトマクロファージ細胞の増殖は、実施例
10乃至実施例13と同様に行った。

【０１４７】また、アカブドウ抽出液（アカブドウ抽出
液−ＢＧ；丸善製薬）の調製は、実施例10のセンキュウ
抽出液、実施例11のトウニン抽出液、実施例12のシャク
ヤク抽出液、及び実施例13のヨクイニン抽出液の調製と
同様に行った。

【０１４８】さらに、ＬＰＳによる細胞刺激による一酸
化窒素の産生の誘導、及び一酸化窒素濃度の測定も、実
施例10乃至実施例13と同様に行った。

【０１４９】 試験結果を図16
に示す。

【０１５０】図16に示すように、ＬＰＳのみ添加したヒ
トマクロファージ細胞では、二酸化窒素の遊離量は約6.
18nmol/ml であったが、ＬＰＳとともにアカブドウ抽出
液を0.01％添加したヒトマクロファージ細胞、及び0.1
％添加したヒトマクロファージ細胞では、二酸化窒素の
遊離量は約4.08nmol/ml とかなり減少し、ＬＰＳととも
にアカブドウ抽出液を1.0 ％添加したヒトマクロファー
ジ細胞では、二酸化窒素の遊離量は約3.46nmol/ml とさ
らに減少した。

【０１５１】従って、アカブドウ抽出液の量が増えるほ
ど、二酸化窒素の遊離量が徐々に減少していることか
ら、アカブドウ抽出液の量の増加に伴って培養上清中へ
の一酸化窒素の遊離が抑制されるものと認められる。

【０１５２】（実施例15）本実施例では、ＲＴ−ＰＣＲ
によって誘導型一酸化窒素合成酵素に対するｍＲＮＡの
測定を行った。

【０１５３】〔ＲＮＡの抽出〕培養上清をサンプリング
した細胞を、ＰＢＳ（大日本製薬製）１mlで２回洗浄
し、ＳＶTotaL ＲＮＡ Isolation System （プロメガ
製）に従って細胞中のＲＮＡを抽出した。

【０１５４】〔ＲＴ−ＰＣＲ〕ＲＴ−ＰＣＲは、TaKaRa
RNA PCR Kit(AMV) Ver.2.1 （宝酒造製）に従って行っ
た。

【０１５５】抽出したＲＮＡを逆転写することで得られ
たｃＤＮＡをＲＴ−ＰＣＲで増やした。

【０１５６】ＰＣＲは、変性温度94℃、アニーリング温
度65℃、伸長反応温度72℃として30サイクルの条件で行
った。

【０１５７】〔アガロースゲル電気泳動〕ＰＣＲ反応液
50μl に、ローディングバッファー（ニッポンジーン
製）10μlを加えて混和した。

【０１５８】この液15μl を1.2 ％アガロースゲルで電
気泳動した。

【０１５９】泳動終了後、0.5 μg/mlエチジウムブロミ
ド溶液に、アガロースゲルを30分間浸して染色した。

【０１６０】トランスイルミネーターを用いて紫外線を
照射して写真撮影した。

【０１６１】〔蛍光バンドの数値化〕各バンドの蛍光強
度の数値化は、ＡＴＴＯLane＆Spot Analyzer （アトー
株式会社製）を用いた。

【０１６２】これらの蛍光強度から、一酸化窒素を産生
する酵素であるｉＮＯＳに対するｍＲＮＡの量と、細胞
の解糖系中の酵素であるＧＡＰＤＨに対するｍＲＮＡの
量との比（ｉＮＯＳ／ＧＡＰＤＨ）を求めた。

【０１６３】ＧＡＰＤＨは常に発現している酵素であ
り、従ってこの酵素に対するｍＲＮＡの量は一定である
ので、ｉＮＯＳ／ＧＡＰＤＨを求めることで、ｉＮＯＳ
酵素の発現の抑制の程度、ひいては一酸化窒素の遊離の
抑制の程度を推測することができる。

【０１６４】その結果を図17に示す。

【０１６５】図17において、ＬＰＳは、ＬＰＳのみが添
加されたもの、Non Treat.はＬＰＳが添加されていない
ものを意味する。

【０１６６】また、Her.A は、抗生物質であるハービマ
イシンＡを添加したものを意味する。

【０１６７】図17に示すように、ＬＰＳのみ添加した細
胞では、ｉＮＯＳ／ＧＡＰＤＨの値が1.344 であったの
に対し、ＬＰＳとともにハービマイシンＡを添加した細
胞ではｉＮＯＳ／ＧＡＰＤＨの値は0.586 と低くなり、
さらに、ＬＰＳとともにローズマリー抽出液を添加した
細胞では、ｉＮＯＳ／ＧＡＰＤＨの値は0.125 とさらに
低くなり、ＬＰＳとともにカルノソール溶液を添加した
細胞では、ｉＮＯＳ／ＧＡＰＤＨの値は約0.146 と同様
に低くなり、ＬＰＳとともにカルノシン酸溶液を添加し
た細胞では、ｉＮＯＳ／ＧＡＰＤＨの値は０であった。

【０１６８】従って、ローズマリー抽出液、カルノソー
ル溶液、カルノシン酸溶液を添加した系では、ｉＮＯＳ
酵素の発現を抑制することにより、一酸化窒素の遊離を
抑制していることが推測できる。

【０１６９】（実施例16〜18及び比較例１〜３）本実施
例では、上記一酸化窒素産生抑制剤の１つであるローズ
マリー抽出液の炎症に対する改善効果を試験した。

【０１７０】ローズマリー抽出液の総量に対する濃度が
0.01、0.5 、及び1.0 重量％となるように軟膏基材剤プ
ラスチベース（大正製薬）に良く混合し、これを実施例
16、実施例17、及び実施例18とした。

【０１７１】一方、インドメタシンを総量に対する濃度
が１重量％となるようにプラスティベースに良く混合
し、これを陽性対象（比較例１）とした。

【０１７２】また、基剤のみを塗布する場合を比較例２
とし、さらに無塗布の場合を比較例３とした。

【０１７３】これらの実施例16〜18の一酸化窒素産生抑
制剤と、比較例１〜３について次のような炎症に対する
改善効果の試験を行った。

【０１７４】（試験方法）ウイスター系モルモット背部
に上記実施例16乃至18及び比較例１乃至３の試料を３日
間連用し、紫外線を照射した。紫外線照射部位の皮膚色
を色差計を用いて測定した。皮膚紅斑は、基剤を塗布し
ていない比較例３の場合を100 として比較算出したａ＊
値で示した。

【０１７５】その結果を、それぞれ表１に示す。

【０１７６】

【表１】

【０１７７】表１からも明らかなように、陽性対象であ
るインドメタシン配合の比較例１では、紅斑が抑制され
ていたが、基剤のみの比較例２では良好な結果は示さな
かった。

【０１７８】これに対して、実施例16〜18の軟膏は、陽
性対象である比較例１ほどではないが、全般的に良好な
結果を示した。特に、ローズマリー抽出液が1.0 重量％
の実施例18では、一般に優れた皮膚紅斑抑制作用を有す
るインドメタシンと比べて遜色のない効果が得られた。

【０１７９】（実施例19〜21及び比較例４）本実施例
は、上記一酸化窒素産生抑制剤の１つであるローズマリ
ー抽出液を、化粧料の一例としてのクリームに配合した
場合の処方例であり、そのクリームの美白試験を行っ
た。

【０１８０】クリームの調製は次のようにして行った。

【０１８１】スクワレン、セチルイソオクタノエート、
及びマイクロクリスタリンワックスを加熱溶解後、粘土
鉱物、ＰＯＥグリセロールトリイソステアリン酸エステ
ル（界面活性剤）を加え、70℃に調整し、均一に分散・
溶解して油性ゲルを得た。

【０１８２】次に、ローズマリー抽出液を所定濃度精製
水に溶解し、70℃に調整した後、油性ゲルの中へ十分に
攪拌しながらゆっくりと添加した。

【０１８３】ホモミキサーで均一に混合した後、脱気、
濾過後、30℃まで冷却し、クリームを得た。

【０１８４】得られた実施例19〜21のクリームの組成及
び配合比は次のとおりである。

【０１８５】 （実施例19） 組成 配合比（重量％） スクワレン 20％ セチルイソオクタノエート 8.5％ マイクロクリスタリンワックス 1％ 粘土鉱物 1.3％ ＰＯＥグリセロール トリイソステアリン酸エステル 0.2％ ローズマリー抽出液 0.001％ 水 残量

【０１８６】 （実施例20） 組成 配合比（重量％） スクワレン 20％ セチルイソオクタノエート 8.5％ マイクロクリスタリンワックス 1％ 粘土鉱物 1.3％ ＰＯＥグリセロール トリイソステアリン酸エステル 0.2％ ローズマリー抽出液 0.1％ 水 残量

【０１８７】 （実施例21） 組成 配合比（重量％） スクワレン 20％ セチルイソオクタノエート 8.5％ マイクロクリスタリンワックス 1％ 粘土鉱物 1.3％ ＰＯＥグリセロール トリイソステアリン酸エステル 0.2％ ローズマリー抽出液 1％ 水 残量

【０１８８】このように調製した実施例19〜21のクリー
ムを用いて美白試験を行った。

【０１８９】試験方法は次のとおりである。

【０１９０】実施例19〜21のクリームを、それぞれ女子
被験者（25歳〜45歳）25人を対象にして、１日２回３ケ
月間連用塗布した。

【０１９１】評価は、肌が白くなったと回答した人数で
示した。

【０１９２】一方、クリーム基剤の組成は上記実施例19
〜21と同じであってローズマリー抽出液の配合されてい
ないクリームを、比較例４として同様の試験を行った。

【０１９３】試験結果を表２に示す。

【０１９４】

【表２】

【０１９５】表２から明らかなように、実施例19〜21
は、美白の改善の程度が良好であったと回答した人数は
比較例４に比べて約２倍若しくはそれ以上に多かった。

【０１９６】（実施例22〜24及び比較例５）本実施例
は、上記ローズマリー抽出液を、化粧料の一例としての
化粧水に配合した場合の処方例であり、その化粧水の美
白試験を行った。

【０１９７】化粧水の調製は次のようにして行った。

【０１９８】界面活性剤ＰＯＥ(20)オレイルアルコール
エーテル、増粘剤メチルセルロース及びクインスシー
ド、エタノールを含有する化粧水基剤を調製し、所定濃
度のローズマリー抽出液を添加した。

【０１９９】得られた実施例22〜24の化粧水の組成及び
配合比は次のとおりである。

【０２００】 （実施例22） 組成 配合比（重量％） ＰＯＥ(20)オレイルアルコール エーテル 0.5％ メチルセルロース 0.2％ クインスシード 0.1％ エタノール 10％ ローズマリー抽出液 0.001％ 水 残量

【０２０１】 （実施例23） 組成 配合比（重量％） ＰＯＥ(20)オレイルアルコール エーテル 0.5％ メチルセルロース 0.2％ クインスシード 0.1％ エタノール 10％ ローズマリー抽出液 0.1％ 水 残量

【０２０２】 （実施例24） 組成 配合比（重量％） ＰＯＥ(20)オレイルアルコール エーテル 0.5％ メチルセルロース 0.2％ クインスシード 0.1％ エタノール 10％ ローズマリー抽出液 1％ 水 残量

【０２０３】このように調製した実施例22〜24の化粧水
を用いて美白試験を行った。

【０２０４】試験方法は次のとおりである。

【０２０５】実施例22〜24の化粧水を、それぞれ女子被
験者（25歳〜45歳）25人を対象にして、１日２回３ケ月
間連用塗布した。

【０２０６】評価は、肌が白くなったと回答した人数で
示した。

【０２０７】一方、化粧水基剤の組成は上記実施例22〜
24と同じであってローズマリー抽出液の配合されていな
い化粧水を、比較例５として同様の試験を行った。

【０２０８】試験結果を表３に示す。

【０２０９】

【表３】

【０２１０】表３から明らかなように、実施例22〜24で
は、肌が白くなったと回答した人数は比較例５に比べて
約1.5 倍〜２倍程度に多かった。

【０２１１】〔実施例25及び26、比較例６及び７〕 官
能試験（使用感）

【０２１２】本実施例は、ローズマリー抽出液を配合し
た化粧料（クリーム及び化粧水）の使用感に関する試験
である（官能試験）。

【０２１３】実施例25は、実施例21の試料、比較例６は
比較例４の試料、実施例26は実施例24の試料、比較例７
は比較例５の試料をそれぞれ使用して、被験者20名が試
料を１週間使用した後の試料の特性を評価した。

【０２１４】評価は、アンケートの「肌へのなじみがよ
い」と回答した人数で示した。

【０２１５】試験結果を表４に示す。

【０２１６】

【表４】

【０２１７】表４に示すように、実施例25及び26では、
比較例６及び７に比べて「肌へのなじみがよい」と回答
した人が約２倍であった。

【０２１８】（実施例27〜29及び比較例４）本実施例
は、上記一酸化窒素産生抑制剤の１つであるサクラダソ
ウ抽出液を、化粧料の一例としてのクリームに配合した
場合の処方例であり、そのクリームの美白試験を行っ
た。

【０２１９】クリームの調製は実施例19〜21と同様に行
った。

【０２２０】実施例27〜29のクリームの組成及び配合比
は次のとおりである。

【０２２１】 （実施例27） 組成 配合比（重量％） スクワレン 20％ セチルイソオクタノエート 8.5％ マイクロクリスタリンワックス 1％ 粘土鉱物 1.3％ ＰＯＥグリセロール トリイソステアリン酸エステル 0.2％ サクラダソウ抽出液 0.01 ％ 水 残量

【０２２２】 （実施例28） 組成 配合比（重量％） スクワレン 20％ セチルイソオクタノエート 8.5％ マイクロクリスタリンワックス 1％ 粘土鉱物 1.3％ ＰＯＥグリセロール トリイソステアリン酸エステル 0.2％ サクラダソウ抽出液 0.1％ 水 残量

【０２２３】 （実施例29） 組成 配合比（重量％） スクワレン 20％ セチルイソオクタノエート 8.5％ マイクロクリスタリンワックス 1％ 粘土鉱物 1.3％ ＰＯＥグリセロール トリイソステアリン酸エステル 0.2％ サクラダソウ抽出液 1％ 水 残量

【０２２４】この実施例27〜29のクリームを用いて美白
試験を行った。

【０２２５】試験方法は、女子被験者（25歳〜45歳）25
人を対象にして、上記実施例19〜21の場合と同様に行っ
た。

【０２２６】一方、上記比較例４のクリームを用いて、
実施例27〜29と同じ女子被験者を対象にして同様の試験
を行った。

【０２２７】試験結果を表５に示す。

【０２２８】

【表５】

【０２２９】表５から明らかなように、実施例27〜29
は、美白の改善の程度が良好であったと回答した人数は
比較例４に比べて約1.5 倍〜2.5 倍程度に多かった。

【０２３０】（実施例30〜32及び比較例５）本実施例
は、上記サクラダソウ抽出液を、化粧料の一例としての
化粧水に配合した場合の処方例であり、その化粧水の美
白試験を行った。

【０２３１】化粧水の調製は実施例22〜24と同様に行っ
た。

【０２３２】実施例30〜32の化粧水の組成及び配合比は
次のとおりである。

【０２３３】得られた実施例30〜32の化粧水の組成及び
配合比は次のとおりである。

【０２３４】 （実施例30） 組成 配合比（重量％） ＰＯＥ(20)オレイルアルコール エーテル 0.5％ メチルセルロース 0.2％ クインスシード 0.1％ エタノール 10％ サクラダソウ抽出液 0.01 ％ 水 残量

【０２３５】 （実施例31） 組成 配合比（重量％） ＰＯＥ(20)オレイルアルコール エーテル 0.5％ メチルセルロース 0.2％ クインスシード 0.1％ エタノール 10％ サクラダソウ抽出液 0.1％ 水 残量

【０２３６】 （実施例32） 組成 配合比（重量％） ＰＯＥ(20)オレイルアルコール エーテル 0.5％ メチルセルロース 0.2％ クインスシード 0.1％ エタノール 10％ サクラダソウ抽出液 1％ 水 残量

【０２３７】この実施例30〜32の化粧水を用いて美白試
験を行った。

【０２３８】試験方法は、女子被験者（25歳〜45歳）25
人を対象にして、上記実施例22〜24の場合と同様に行っ
た。

【０２３９】一方、上記比較例５の化粧水を用いて、実
施例30〜32と同じ女子被験者を対象にして同様の試験を
行った。

【０２４０】試験結果を表６に示す。

【０２４１】

【表６】

【０２４２】表６から明らかなように、実施例30〜32で
は、肌が白くなったと回答した人数は比較例５に比べて
約1.3 倍〜２.3倍程度に多かった。

【０２４３】〔実施例33及び34、比較例６及び７〕 官
能試験（使用感）

【０２４４】本実施例は、サクラダソウ抽出液を配合し
た化粧料（クリーム及び化粧水）の使用感に関する試験
である（官能試験）。

【０２４５】実施例33は、実施例29の試料、比較例６は
比較例４の試料、実施例34は実施例32の試料、比較例７
は比較例５の試料をそれぞれ使用して、被験者20名が試
料を１週間使用した後の試料の特性を評価した。

【０２４６】評価は、実施例25,26 と同様に、アンケー
トの「肌へのなじみがよい」と回答した人数で示した。

【０２４７】試験結果を表７に示す。

【０２４８】

【表７】

【０２４９】表７に示すように、実施例33及び34では、
比較例６及び７に比べて「肌へのなじみがよい」と回答
した人が約２倍であった。

【０２５０】

【発明の効果】叙上のように、本発明においては、優れ
た一酸化窒素産生抑制効果を有する一酸化窒素産生抑制
剤を提供することができた。

【０２５１】この結果、このような一酸化窒素産生抑制
剤を配合することで、紫外線や炎症反応に起因する皮膚
障害を改善する効果を有するとともに、安全性及び使用
感に優れた皮膚化粧料、医薬部外品、或いは皮膚外用剤
を提供することができた。

【図面の簡単な説明】

【図１】ＬＰＳに添加するローズマリー抽出液の濃度と
二酸化窒素の遊離量との相関関係を示すグラフ

【図２】ＬＰＳに添加するカルノソールの濃度と二酸化
窒素の遊離量との相関関係を示すグラフ

【図３】ＩＦＮ−γに添加するカルノソールの濃度と二
酸化窒素の遊離量との相関関係を示すグラフ

【図４】ＬＰＳに添加するカルノシン酸の濃度と二酸化
窒素の遊離量との相関関係を示すグラフ

【図５】ＩＦＮ−γに添加するカルノシン酸の濃度と二
酸化窒素の遊離量との相関関係を示すグラフ

【図６】ＬＰＳに添加するコーヒーリキッドの濃度と二
酸化窒素の遊離量との相関関係を示すグラフ

【図７】ＬＰＳに添加するサクラダソウ抽出液の濃度と
二酸化窒素の遊離量との相関関係を示すグラフ

【図８】ＩＦＮ−γに添加するオウレン抽出液の濃度と
二酸化窒素の遊離量との相関関係を示すグラフ

【図９】ＩＦＮ−γに添加するオウバク抽出液の濃度と
二酸化窒素の遊離量との相関関係を示すグラフ

【図１０】ＩＦＮ−γに添加するカンゾウ抽出液の濃度
と二酸化窒素の遊離量との相関関係を示すグラフ

【図１１】ＩＦＮ−γに添加するファルコレックスノバ
ラＥの濃度と二酸化窒素の遊離量との相関関係を示すグ
ラフ

【図１２】ＬＰＳに添加するセンキュウ抽出液の濃度と
二酸化窒素の遊離量との相関関係を示すグラフ

【図１３】ＬＰＳに添加するトウニン抽出液の濃度と二
酸化窒素の遊離量との相関関係を示すグラフ

【図１４】ＬＰＳに添加するシャクヤク抽出液の濃度と
二酸化窒素の遊離量との相関関係を示すグラフ

【図１５】ＬＰＳに添加するヨクイニン抽出液の濃度と
二酸化窒素の遊離量との相関関係を示すグラフ

【図１６】ＬＰＳに添加するアカブドウ抽出液の濃度と
二酸化窒素の遊離量との相関関係を示すグラフ

【図１７】ＲＴ−ＰＣＲによる誘導型一酸化窒素合成酵
素に対するｍＲＮＡの測定結果を示すグラフ

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 35/78 Ａ６１Ｋ 35/78 Ｎ Ｑ Ｕ 7/00 7/00 Ｋ Ｎ Ｍ Ｘ 7/48 7/48 Ａ６１Ｐ 17/00 Ａ６１Ｐ 17/00 17/16 17/16 43/00 １１１ 43/00 １１１ (72)発明者 濱田 和彦 京都市北区上賀茂豊田町64−５ Ｆターム(参考） 4C083 AA111 AA112 AB442 AC012 AC102 AC182 AC352 AC422 AC851 AC852 AD262 AD352 CC04 CC05 CC19 DD31 EE12 EE13 EE16 EE17 4C088 AB12 AB14 AB30 AB32 AB38 AB40 AB51 AB52 AB56 AB60 AB62 AB77 AC01 BA08 MA17 MA28 MA63 NA14 ZA89 ZC20

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ローズマリー抽出液、カルノソール、カ
   ルノシン酸、コーヒー豆の抽出液、サクラダソウ抽出
   液、オウレン抽出液、オウバク抽出液、カンゾウ抽出
   液、イヌノイバラの抽出液、センキュウ抽出液、トウニ
   ン抽出液、シャクヤク抽出液、ヨクイニン抽出液、及び
   アカブドウ抽出液の少なくとも１種を含有することを特
   徴とする一酸化窒素産生抑制剤。
2. 【請求項２】 請求項１記載の一酸化窒素産生抑制剤を
   配合したことを特徴とする皮膚外用剤。
3. 【請求項３】 請求項１記載の一酸化窒素産生抑制剤を
   配合したことを特徴とする化粧料。
4. 【請求項４】 請求項１記載の一酸化窒素産生抑制剤を
   配合したことを特徴とする医薬部外品。