JP2001516334A

JP2001516334A - セレクチン結合の阻害

Info

Publication number: JP2001516334A
Application number: JP53120797A
Authority: JP
Inventors: アール．スペバック，ウェイン; ダスグプタ，ファルグニ; バートジー，キャロライン; オー．ナジー，ジョン
Original assignee: ザリージェンツオブザユニバーシティオブカリフォルニア
Priority date: 1996-03-01
Filing date: 1997-02-28
Publication date: 2001-09-25
Also published as: EP0902681B1; US20010046970A1; DE69712754T2; WO1997031625A1; CA2247115C; US6299897B1; CA2247115A1; US5962422A; EP0902681A1; ATE217788T1; AU718317B2; US5985852A; AU2195097A; DE69712754D1

Abstract

(57)【要約】本発明は、２つの細胞（一方は表面上にＰまたはＬセレクチンを発現し、そして他方は対応するリガンドを発現する）の間の結合を阻害するための系を提供する。別々の脂質上にサッカライドおよび酸性基を有する、共有的に架橋した脂質組成物が調製される。次いで、組成物は、結合を阻害するように、細胞間に挿入される。阻害は、遊離サッカライドの濃度よりも10⁶倍も低い、有効オリゴサッカライド濃度で達成され得る。セレクチンは、傷害部位に細胞を補充するのに関与するので、この系を用いて特定の炎症状態および免疫学的状態を軽減し得る。

Description

【発明の詳細な説明】セレクチン結合の阻害関連出願の相互参照本出願は、その全体を参考として本明細書中で援用される、係属中の、1996年３月１日に出願された米国仮出願番号第60/012,894号の先願の利点を請求する。技術分野本発明は、一般に、炭水化物リガンドと細胞表面上のそれらのレセプターとの結合を干渉するように設計された治療化合物の分野に関する。さらに詳細には、本発明は、ポリマー化糖リポソームを使用して、P-およびL-セレクチンを介する細胞の移動および活性化を阻害する生成物および方法を提供する。発明の背景内皮細胞への循環している好中球の接着は、炎症のプロセスにおいて生じる重要な事象の１つである。組織への好中球の補充は、接着カスケードによって開始される。このプロセスを通じて、細胞が運ばれ、そして最終的に内皮に堅く接着する。この相互作用の高い結合強度に寄与する因子は、完全には理解されていない。しかし、１つの細胞上のセレクチンと別の細胞上の炭水化物リガンドとの相互作用が関係すると考えられている。これらの成分の間の結合を妨げることによって、細胞の移動に関連する病理学的な後遺症に対抗することが可能であり得る。多数の接着分子が、好中球および他の白血球の内皮への相互作用を媒介する。中でも、ICAM、VCAM、CDI11、CD18、インテグリンα4β1、およびセレクチンとして集合的に現在公知であるいくつかのレセプターが存在する。これらの各分子は、リガンドレセプター対の一部であり、それらの１つは、２つの相互作用する細胞のそれぞれの上で発現される。一般的な概説については、読者は、Bevilacq ua（Annu．Rev．Immunol．11:767，1993）を参照する。種々の組合せにおいて、これらおよび他の分子は、脈管壁および血管外遊出物への白血球の接着を支持し、そしてまた、細胞エフェクター機能の活性化に関係し得る。多くのこれらの分子の発現は、サイトカインのような可溶性因子によってアップレギュレートされ、それにより、罹患した領域への白血球の補充を増大するように作用する。記載されている多数の接着分子の中でも、３つが、セレクチンとして公知のカテゴリーにともに集められる。１つめの分子は、ELAM-1として以前から公知であり、そしてこれは、サイトカイン活性化内皮細胞に対する阻害性モノクローナル抗体を使用して同定された。別の分子は、PADGEM、GMP-140、またはCD61と以前に称された。これは、元々、血小板上で同定され、そして現在はP-セレクチンとして公知である。リンパ球上で同定された３つめの分子は、mLHR，Leu8、TQ-1、 gp90^MEL、Lam-1、またはLecam-1と以前に称され、そして現在はL-セレクチンとして公知である。セレクチンは、それらの結合特異性が知られるかなり前に、構造的類似性に基づいてともにグループ化された。全ては、Ｎ末端付近に炭水化物結合ドメイン、EGF反復、およびそれぞれが相補的な結合タンパク質と相同性を共有する約60アミノ酸の２〜９の間のいずれかのモジュールを有する単鎖ポリペプチドである。一般的な概説については、読者は、Lasky（Annu．Rev．Biochem ．64:113，1995）およびKansas（Blood 88:3259，1996）を参照する。３つのセレクチンは、多数の重要な局面において互いに異なる。図２に示すように、セレクチンは、接着プロセスにおいて異なるリガンド相対物（counterpar t）を有する。各セレクチンは別々に調節され、そして炎症または免疫のプロセスにおいて異なる様式で関与している。セレクチン間のリガンド結合要件における差異についての認識がまた、増大している。 E-セレクチンは、炎症におけるその役割に帰因して、有意な量の最近の研究の関心を集めている。炎症部位への炎症性メディエーター細胞の移動は、血管内皮細胞への細胞の接着によって部分的に媒介されると考えられる。インビトロの研究は、E-セレクチンが好中球の接着だけではなく、好酸球、単球、およびメモリーＴ細胞の亜集団（subpopulation）の、内部毒素、IL-1、またはTNFによって活性化されている内皮への接着にもまた関係していることを示唆している。内皮単層によるE-セレクチンの発現は、約10倍まで増大し、そして、IL-1での刺激の約４時間後にピークに到達し、24時間以内に基底レベル付近まで降下する。E-セレクチンの生物学的な役割は、20分から１時間の時間経過にわたる（特に、局部的な炎症の経過中の）、適切なE-セレクチンリガンドを有する細胞の強力な結合であると考えられる。 Phillipsら（Science 250:1130，1990）は、E-セレクチンの結合標的を、オリゴサッカライドシアリルLewis X（sLe^x）（NeuAcα2,3Galβ1,4(fucα1,3)GlcNa c-）として最初に同定した。これは、好中球の細胞表面糖タンパク質に見出される末端構造である。これは、セレクチンのクラスについての原型の炭水化物リガンドとなる。このオリゴサッカライドおよび関連のオリゴサッカライドは、米国特許第5,576,305号およびPCT出願第WO 92/07572号の対象である。 sLe^xユニットは、セレクチンに対するその弱い結合を改善するための試みにおいて、種々のポリマー構造に組み立てられている。例えば、米国特許第5,470,84 3号およびDeFreesら（J．Am．Chem．Soc．117:66，1995）は、二価のシアリルＸサッカライドを開示する。米国特許第5,470,843号は、10〜20のsLe^x、sLe^a、または二官能性スペーサーを介して連結されたGlcNacを含む合成のポリマー骨格を有する、炭水化物含有ポリマーを開示する。 DeFreesら（J．Am．Chem．Soc．118:6101，1996）は、従来のリン脂質リポソーム技術を使用して生成されたsLe^x調製物を記載する。このリポソームは、ホスファチジルコリン、コレステロール、メトキシポリエチレングリコールと結合したリン脂質、およびポリエチレングリコールスペーサーを通じてsLe^xと結合したリン脂質を含む。この組成物が、細胞へのE-セレクチンの結合の阻害において、 sLe^xモノマーよりも5×10³倍さらに有能であることを示すデータが、提示されている。Muroharaら（Cardiovasc．Res．30:965，1995）は、心筋の再灌流モデルにおいてsLe^xホスホリポソームを試験し、そして400μg/kg体重の用量が危険性および壊死の領域の比例的なサイズを減少させることを見出した。 P-セレクチンは、約140kDaの膜貫通糖タンパク質であり、E-セレクチンよりも実質的に大きい。P-セレクチンが、血小板についてα顆粒および濃密顆粒（dens e-granule）において見出され得ることが、最初に記載された。メディエーター様トロンビンでの血小板の活性化の際に、P-セレクチンは、細胞表面に迅速に再分配される。内皮細胞において、P-セレクチンは、Weibel-Palade体として公知の顆粒中に見出され、ヒスタミンでの活性化の際に、そこから表面に再分配される。顆粒の貯蔵のためのP-セレクチンの輸送は、細胞質ドメインに存在するシグナルを分類することによって媒介されるようであり、そしてE-セレクチンとの比較において明らかに独特である。従って、P-セレクチンは、新たな合成に必要とされるよりも、貯蔵顆粒から迅速に発現され得る点で、E-セレクチンとは異なる。P-セレクチンは、好中球、単球、およびメモリーＴ細胞上に存在する炭水化物リガンドに結合する。予め形成された状態のP-セレクチンだけではなく、その発現は、炎症性細胞の顆粒中で順番に予め形成され、そして貯蔵される、ヒスタミンのようなメディエーターによって刺激される。内皮細胞上のE-セレクチンよりも、P-セレクチンに対する白血球の接着が、おそらく、損傷部位に対するこれらの細胞の補充のために生じる最初の事象である。P-セレクチン結合の干渉は、白血球の移動を制限することが所望される場合、特に重要であり得る。血小板上のP-セレクチンの存在は、他のセレクチンと比較される、さらなる独特の生物学的役割を示唆する。１つの仮説において、組織損傷の部位は、短作用性（short-acting）血小板アクチベーターで実際に富化され得、そしてP-セレクチンを発現する活性な血小板は、他の白血球を直接補充し得る。別の仮説において、炎症部位における好中球または単球が、順番に、血餅の形成またはさらなるメディエーターの放出を導き得るP-セレクチンによって血小板を捕獲し得る。実験的な血栓モデルにおいて、血小板が損傷部位にまず蓄積し、続いて、白血球が接着し、そしてフィブリンが蓄積することが観察されている。後ろの２つの工程の両方は、P-セレクチンに対する抗体によって阻害された（Palabricaら、Natur e 359:848，1992）。 L-セレクチンは、他の公知のセレクチンとは異なる多数の特徴を有する。第１に、組織分布パターンが、P-およびE-セレクチンとは反対である-L-セレクチンは、内皮よりもむしろ白血球の表面で発現される；一方、L-セレクチンが結合するリガンドは、白血球よりもむしろ内皮上にある。第２に、L-セレクチンは、炎症中にアップレギュレートされるよりもむしろ構成的に発現され、そして実際、続く活性化を生じる。このことは、放出されるべき細胞を結合後に活性化することを可能にするように作用し得るか、または、細胞の活性化におけるL-セレクチンの役割を示し得る。第３に、L-セレクチンは、好中球および単球上だけではなく、ほとんどのリンパ球上にもまた存在する；一方、リガンド相対物は、内皮上だけではなく、またリンパ節HEV上にも存在する。L-セレクチンは、リンパ節への回帰において重要な役割を果たすようである（Shimizuら、Immunol．Today 13 :106，1992;Pickerら、Annu．Rev．Immunol．10:561，1992）。免疫系を含む病理学的状態において、最も中心的な役割を担うものはL-セレクチンであり得る。米国特許第5,489,578号は、L-セレクチンのための硫酸化したリガンド、および炎症を処置する方法を記載する。このリガンドは、天然のL-セレクチンリガンドGlyCAM-1上に存在する炭水化物構造に基づくスルホオリゴサッカライドである。米国特許第5,486,536号は、抗炎症性化合物としてのスルファチドの使用を記載する。結合活性は、ガラクトースのピラノース環の３位の重要なスルフェート基に帰する。１つの実験において、スルファチドはタンパク質含有緩衝液中で超音波処理されて微小滴（microdroplet）を産生する。この調製物が、急性の肺の損傷および炎症についての２つの動物モデルにおいて保護効果を有することが明らかにされた。各セレクチンは、結合のための炭水化物の要件に関して細密な特異性を示す。全てのこれらのセレクチンは、シアル酸化フコオリゴサッカライドに結合し、その中の原型は、テトラサッカライドシアリルLewis^x（sLe^x）である。合成の炭水化物と単離されたセレクチンとの間の直接的な結合実験は、結合要件のさらに詳細な考察を可能にしている（例えば、Brandleyら、Glycobiology 3:633，1993）。E-およびL-セレクチンは、sLe^x中のシアル酸についてα2-3結合を必要とするが、P-セレクチンは、α2-6結合におけるシアル酸を認識し得る。P-セレクチンはまた、フコースの2-および4-位の水酸基を必要としない。P-およびL-セレクチンは、硫酸化した構造様のスルホ-Le^x-(Glc)-セル（sulpho-Le^x-(Glc)-cer）およびスルファチドに、二価のカチオンの明らかに無関係な様式で結合するが、E- セレクチンの結合は、カチオンの存在に正確に感受性である。硫酸化された炭水化物へのP-およびL-セレクチンの結合は、他の硫酸化された炭水化物によってのみ阻害可能であるが、E-セレクチンはこの要件を有さない。生物学的反応におけるセレクチンの特異性が、リガンドの炭水化物成分によってさらにより媒介されることを強調することが、重要である。例えば、P-および L-セレクチン（E-セレクチンではない）は、スルファチド（Aruffoら、Cell 67: 35，1991）およびヘパリンの特定の亜種（Norgard-Sumnichtら、Science 261:48 0，1993）のような、シアル酸およびフコースを欠如する硫酸化された分子に結合する。セレクチンによって認識される種々の炭水化物の一般的な概説については、Varkiら（Proc．Natl．Acad．Sci．USA 91:7390，1994）を参照のこと。各セレクチンは、妨害する細胞の表面上の天然のリガンドの異なるファミリーを有する（McEverら、270:11025，1995を参照のこと）。E-セレクチンは、ESL-1 と称されるリガンドに強く結合する。対照的に、抗体のブロッキングの研究は、白血球上のP-セレクチンのための不可欠な全ての結合部位が、PSGL-1（P-セレクチン糖タンパク質リガンド１）と称されるO-グリコシル化タンパク質に帰することを示す（Mooreら、J．Cell．Biol．128:661，1995）。L-セレクチンについて同定された天然のリガンドはこれらのいずれでもないが、名称GlyCAM-1、CD34、およびMAdCAM-1を有する他の糖タンパク質を含む。結合特異性は、３つのセレクチンのうち少なくとも２つが、sLe^x構造の範囲を超えてリガンド成分を認識しなければならないことを示す。オリゴサッカライドに加えて、P-セレクチンが、ESL-1、およびCD34のような他のムチン様O-グルコシル化タンパク質とは異なる特徴を有してPSGL-1上の部位に結合しなければならない。天然のリガンドの高親和性結合のための第２のリガンド要件が、P-およびL-セレクチンの両方について同定されている。第２のリガンド要件は、E-セレクチン結合には明らかに必要とされず、そして有効な阻害化合物の開発に密接な関係を有するスルフェート残基である。 Imaiら（Nature 361:555，1993）は、リンパ節HEV上のリガンドに対するL-セレクチンの結合についての要件を試験した。放射活性無機スルフェートは、塩化ナトリウムによって阻害可能な様式で、50kDaおよび90kDaの糖タンパク質中に取り込まれる。低硫酸化（undersulfated）糖タンパク質は、沈澱分析においてL- セレクチンキメラとはもはや相互作用しなかった。阻害実験は、炭水化物またはタンパク質骨格のために必要とされるスルフェート基の位置を正確に指摘しない。いずれによっても、スルフェートの要件は、L-セレクチンの結合特異性をE-セレクチンの特異性と区別する。スルフェート成分は、P-セレクチンリガンドPSGL-1の構造においてさらに詳細にマップされている。P-セレクチンにおける要件は、グリコシル化部位とは異なる、ポリペプチド骨格のＮ末端付近の１つ以上の硫酸化チロシンによって提供される。 Wilkinsら（J．Biol．Chem．270:22677，1995）は、ヒトHL-60細胞中で合成されたPSGL-1が［³⁵S］スルフェートで代謝的に標識され得ることを示した。ほとんどの³⁵S標識が、チロシンスルフェートの形態でポリペプチドに取り込まれ得たことが示された。細菌のアリールスルファターゼでのPSGL-1の処理は、チロシンからスルフェートを放出し、そしてP-セレクチンへの結合において一致する減少を生じる。 Pouyaniら（Cell 83:333，1995）は、硫酸化の選択的なインヒビターが、E-セレクチンではなく可溶性のP-セレクチンへのHL-60細胞の結合を傷つけることを示した。sLe^xまたはポリペプチドの細胞表面発現は、処理によっては傷つけられなかった。単離されたPSGL-1構築物の欠失分析は、残基20〜40に結合成分を局在化した。セグメントは、３つのチロシン残基を含み、そしてこれらがフェニルアラニンに変換される場合、P-セレクチン結合活性が完全に破壊された。さらに、 20アミノ酸のセグメントが異なるタンパク質上に融合される場合、それは生合成の間に再び硫酸化され、そしてP-セレクチンについて結合活性を有した。これらの著者は、硫酸化したチロシンが、P-セレクチンの炭水化物結合ドメインを介してではなく、膜貫通ドメインのタンパク質配列に密接して配置されるEGF様ドメインを介してP-セレクチンと相互作用することを示唆した。 Sakoら（Cell 83:323，1995）は、融合タンパク質として発現される、PSGL-1 の細胞外ドメインを使用して別の一連の結合実験を行った。このアッセイは、タンパク質のフコシル化およびアッセイ培地中のカチオンを必要とし、これは、炭水化物様sLe^xについての依存性と一致する。推定のN-結合グリコシル化部位の変異は、セレクチン結合に効果を有さず、このことは、炭水化物の要件がO-結合であったことを示唆する。しかし、３つのチロシンのフェニルアラニンへの変異は、P-セレクチンの結合活性を廃止する。PSGL-1がまたリガンドとして作用し得る E-セレクチンの結合は、硫酸化部位の除去によって影響されなかった。 sLe^xに対するP-およびL-セレクチンの結合親和性は、mMの範囲である（Nelson ら、J.Clin Invest．91:1157，1993）。対照的に、天然のリガンドに対するP-セレクチンの親和性は、nMの範囲であり（Mooreら、J．Cell Biol．112:491，1991 ）、約10⁶倍の能力の差異である。複数のsLe^xユニットを含む合成オリゴサッカライドは、部分的に差異を形成し、そのような効果は、リガンドの結合価のみにはよらない。格差はまた、PSGL-1上のスルホチロシンのような、強力なアニオン決定基についてP-およびL-セレクチンの要件に寄与し得る。PSGL-1と同じ濃度範囲において有効な化合物は、類似の効果的な決定基の組合せを供給し得るはずである。セレクチン−リガンド相互作用を干渉し得る新規の治療組成物の開発の必要性が存在する。なぜなら、細胞性の接着は、多数の炎症性の現象および免疫学的現象における初期の事象であるからである。全身的な投与のために、組成物は、ナノモルの範囲で有効であるはずであり、その結果、有効量は、実施可能な用量で提供され得る。推定の組成物が天然の相互作用の要件を適切に提示する系において試験されるはずであることを強調することが重要である。１成分の相互作用を効果的にブロックする１成分インヒビターは、代表的には、２成分の相互作用をブロックすることにおいて有効ではない。この開示は、リガンド結合について適切な細胞生物アッセイにおいて試験した場合、ナノモル濃度でP-またはL-セレクチンを阻害するために必要な全ての特徴を示す、ポリマー化脂質組成物を記載する。ポリマー化リポソームおよび脂質のシートは、他の状況において提案されている（Spevakら、Adv．Mater 7:85，199 5;Reichertら、J．Am．Chem Soc．117:829，1995;Charychら、Science 261:585 ，1993;Charychら、Chem．Biol．3:113，1996）。しかし、本発明は、ポリマー化糖リポソームが２つの真核生物細胞の相互作用を含む生物学的系において有効であることが示されている場合の、最初の事例である。本発明はまた、ポリマー化糖リポソームが多数の別々の決定基を有する結合系について効果的なリガンドであることが示されている場合の、最初の事例である。発明の要旨本発明の脂質組成物は、安定な足場を提供し、これによりリガンド結合のために必要とされる複数の特徴を提供する。ＰおよびＬセレクチンインヒビターは、活性に必須である、負に荷電した脂質の頭部基が散在した炭水化物の多価アセンブリを含む。これらの組成物は、セレクチンにより媒介される生物学的現象（好中球および単球の粘着性および溢出、ならびに血管、リンパ管、および疾患を罹った組織を通してのリンパ球の輸送を含む）を阻害する際の使用のために提案される。従って、本発明の特定の実施態様は、ＰまたはＬセレクチンを有する第１の細胞と、セレクチンについてのリガンドを有する第２の細胞との間の結合を阻害する方法に関する。この方法は、脂質組成物を第１の細胞と相互作用させる工程を含み；ここで、脂質組成物は、脂質のシートを含み、ここで、脂質の一部は共有的に架橋しており、脂質の一部は結合したサッカライドを有し、そして結合したサッカライドを有さない脂質の一部は中性pHで負に荷電する酸性基を有する。結合したサッカライドまたは酸性基を有する脂質の一部は、シートにおいて他の脂質に共有的に架橋し得、そして一部は他の脂質に共有的に架橋しないかもしれない。これは、脂質シートにおける脂質の一部が第１の結合したサッカライドを有し、そして脂質シートにおける脂質の異なる一部が第１とは異なる第２の結合したサッカライドを有する実施態様を含む。組成物は、好ましくは、モノマーsLe^Xの 50％阻害濃度（IC₅₀）よりも10²倍または10⁴倍低い50％阻害濃度を有する。本発明はまた、白血球の付着または移動を阻害する方法；白血球の粘着性またはフィブリン沈着を阻害するための方法；白血球の付着または移動を阻害する方法、リンパ球付着およびセレクチンにより媒介される細胞相互作用の他のタイプの介入を阻害する方法を実施し、これは、既に概説したように、ＰまたはＬセレクチンを有する第１の細胞と、セレクチンについてのリガンドを有する第２の細胞との間の結合を阻害する工程を含む。本発明の別の実施態様は、ＰまたはＬセレクチンと、セレクチンについてのリガンドとの間の結合を阻害する方法である。この方法は、セレクチンがリガンドと接触する環境において脂質組成物をセレクチンと相互作用させる工程を含み；ここで、脂質組成物は脂質のシートを含み、ここで、該脂質の一部は共有的に架橋しており、脂質の一部は結合したサッカライドを有し、そして結合したサッカライドを有さない脂質の一部は中性pHで負に荷電した酸性基を有する。この実施態様は、細胞表面上とは限らないセレクチン−リガンド対の間の阻害プロセスに関する。また、セレクチン結合活性を有するポリマー化糖リポソームを選択する方法を実施する。この方法は、共有的に架橋した脂質を有する糖リポソーム、および共有的に架橋した脂質の一部に結合したサッカライドを提供する工程；糖リポソームを、セレクチンおよびセレクチンリガンドを有する細胞を含む環境に導入する工程；ならびに相対阻害濃度がモノマーsLe^xの相対阻害濃度よりも低い場合、糖リポソームを選択する工程を含む。また、血管内皮、血小板、またはリンパ組織への白血球またはガン細胞の粘着性における局所的変更により特徴付けられる疾患；特に炎症性または免疫学的病因の疾患を処置する際に使用するための医薬品の製造におけるポリマー化脂質組成物の使用を実施する。ここで、ポリマー化脂質組成物は、脂質のシートを含み、ここで、脂質の一部は共有的に架橋しており、脂質の一部は結合したサッカライドを有し、そして結合したサッカライドを有さない脂質の一部は、中性pHで負に荷電する酸性基を有する。また、血管内皮、血小板、またはリンパ組織への白血球またはガン細胞の粘着性における局所的変更により特徴付けられる疾患を処置するための方法を実施する。この方法は、脂質のシートを含むポリマー化脂質組成物の有効量を投与する工程を含み、ここで脂質の一部は共有的に架橋しており、脂質の一部は結合したサッカライドを有し、そして結合したサッカライドを有さない脂質の一部は、中性pHで負に荷電する酸性基を有する。目的の疾患は、心臓病（例えば、虚血再灌流傷害、心筋梗塞、心筋炎、再狭窄、および深部静脈血栓）、出血性ショック、関節炎、喘息、および転移性ガンを含むがこれらに限定されない。また、上記の方法のいずれかに記載され得るかまたは以下に記載されるように、ＰおよびＬセレクチン阻害活性を有する組成物およびそれから調製される薬学的組成物を実施する。図面の簡単な説明図１は、化学構造の拡大した詳細を示している、２つのポリマー化糖リポソームの図である。構造「Ａ」は、２nM未満のオリゴサッカライド濃度でHL-60細胞へのＰセレクチンの結合を阻害し得るが、一方構造「Ｂ」は、本質的に活性を有さない。小胞は、単層であり、UV光を用いて架橋されたジイン基を有する単鎖脂質からなる。約５％の脂質に結合しているのはsLe^xオリゴサッカライドのアナログである。調製物は、隣接する脂質により呈示される、外面に面している決定因子に関して異なる。構造「Ａ」において、隣接する脂質は、中性pHで負の荷電を有するカルボン酸基を提供する。構造「Ｂ」において、隣接する脂質は中性である。負に荷電した脂質は、ちょうどスルホチロシンが天然のリガンドにおいてsL e^xと相乗的に作用するように、sLe^xアナログと相乗的に作用してＰセレクチン結合活性を供給する。ＰおよびＬセレクチンは、結合における負に荷電した決定因子についての必要条件がＥセレクチンとは異なる。図２は、セレクチン結合のいくつかの局面を示している漫画である。囲んだパネルは、Ｌ、Ｐ、およびＥセレクチンについて公知のレセプターリガンド対を示す。これらは、便宜上、同じ細胞上に示すが、細胞の付着および移動に対して異なる方法で関与する。下は、Ｐセレクチンについての二重結合部位モデルを示している詳細図である。リガンドPSGL-1において、負の基は３つのスルホチロシン残基に対応する。対照的に、Ｅセレクチンについての異なる陰イオン結合部位についての証拠はない。図３は、本発明の糖リポソーム中へのアセンブリのために選択され得る特定の成分の図である。図４は、糖リポソームによるHL-60細胞へのＰセレクチン結合の阻害についての滴定曲線である。有効性が減少する順番で（左から右）、組成物は以下からなる：sLe^xアナログおよび酸性脂質；ラクトースおよび酸性脂質；マルトースおよび酸性脂質；ならびにsLe^xアナログおよび中性脂質。図５は、種々の糖リポソーム調製物の50％阻害濃度を示している棒グラフである。図６は、実施例３において結合について試験したポリマー化リポソームの詳細図である。試験した成分の中でも、スルホLe^xアナログは、最良の炭水化物であり、そして異なる負に荷電した基についての必要条件を最も満たす硫酸基を有する脂質であることが見出された。図７および８は、ポリマー化糖リポソームに含まれるためのさらなる例示的な炭水化物決定因子の図面である。図９は、sLe^x構造と、架橋したマトリックスにおいて隣接している脂質上にシアル酸およびフコース残基を含む新規な糖リポソームを有する、sLe^xに係留した（tethred）アナログとを比較する図である。詳細な説明本発明の目的は、特に２つの細胞間の相互作用の間の、ＰおよびＬセレクチンのそれらの対応するリガンドへの結合の阻害のための系を提供することである。ポリマー化脂質組成物は、相互作用している細胞の１つと接触するか、または細胞が相互作用すると予測される環境に導入される。この型の介入は、細胞の粘着性、移動、または活性化がセレクチンにより媒介され、そして宿主の健康に有害である任意の状況における治療目的である。本発明における使用のためのポリマー化糖脂質組成物は、最少でも以下の３つの要素を含む：１．脂質の一部の間で共有的に架橋することにより安定化した脂質シートからなる安定なプラットフォーム。２．セレクチンの炭水化物結合の必要条件を満たす脂質シートにおける脂質に結合した、サッカライドまたは類似の構造体。代表的には、糖脂質は、この構造体における架橋した脂質の１つであるが、代わりに、架橋した足場を形成する他の脂質の間に捕獲され得る。３．ＰおよびＬセレクチンの陰イオン結合の必要条件を満たす、負に荷電したまたは電気的に陰性の基（通常、カルボン酸または酸素酸）。陰イオン結合の必要条件が満たされる限り、この基が、PSGL-1のスルホチロシンと正確に同一の役割を果たさなければならないという必要条件はない。例示的な組成物が調製され、そして細胞バイオアッセイにおいて阻害活性について試験された場合、この技術により提供される改良を強調する多くの重要な観察がなされた。・ポリマー化リポソームは、複数成分の結合の阻害について以前に試験されていない。サッカライドと負に荷電した基との相対的な位置決めは、偶然のランダムなポリマー化であり、低分子の段階的化学合成におけるような制御された構造ではない。有効な方向がもたらされるとは予測され得ないが、活性な組成物が困難性なく再現的に生成されることが見出された。新たな決定因子の組み合わせは、容易にアセンブルされ、そして活性について試験される。・中性リガンドPSGL-1の負に荷電した基はスルホチロシンであり、そしてリポソームにおける陰イオン結合の必要条件を満たすために必要とされる性質は未知であった。陰イオン結合の必要条件は、陰イオンがタンパク質または炭水化物成分上にあることを必要としないが、脂質シートの一部となる脂質に直接結合し得ることが見出された。驚くべきことに、陰イオン性成分は、硫酸基である必要はないが、脂質上の単純なカルボン酸頭部基として提供され得る。・隣接している脂質上での酸性基の存在は、オリゴサッカライドの必要条件の厳密性を予想外に減少させた。中性のジサッカライド（例えば、ラクトースおよびマルトース）は、何らかのセレクチン結合活性を有するとは以前に示されておらず、そして最初の実験において「ネガティブコントロール」として含まれていた。予想外に、これらの糖および陰イオン脂質を含有する組成物は、強力なセレクチンインヒビターであった。これは、重要な商業目的となる。なぜなら、ラクトースのような糖類を含有する組成物の製造は、さらに複雑な糖類（例えば、sL e^x）を含有する組成物よりも容易でかつ廉価であるからである。・阻害活性は、著しく高かった。細胞バイオアッセイにおいて、sLe^xアナログー陰イオン脂質の組み合わせは、２nMという低いIC₅₀を有した。これは、sLe^xモノマーよりも10⁶倍も低い。ラクトース陰イオン脂質の組み合わせは、15nM で有効であった。これは、有効治療用量がより低いコストで調製され、そして先行技術の組成物よりも小さな容量で投与され得ることを意味する。図１は、本発明の例示的な脂質組成物を示す。ここで、sLe^xのアナログは、ポリマー化単層リポソームの表面上に提示される。第一の構造のみがバイオアッセイにおいてＰセレクチン結合についての阻害活性を実証し、組成物における陰イオン成分の重要性を強調した。炭水化物および陰イオン性決定因子は、ポリマー化脂質組成物の別々の脂質上に存在するので、本明細書に記載したアプローチの別の利益は、成分が、別々にスクリーニングされ、そして力価決定され洗練された結合特徴を有する改良された組成物を生成し得ることである。ポリマー化脂質組成物の調製図１の図面および実施例２に提供するデータから、本発明の実施が組成物の化学的な詳細にそれほど依存しないことが容易に認識される。上記の３つの必要条件の拘束内で、当業者は、多くの異なるアプローチに従って組成物を自由にアセンブルする。ポリマー化化学および決定因子の結合の変化は、本発明の範囲において可能とされ、そしてこの内に含まれる。炭水化物と脂質との間の特定の結合を設計することは、充分に当業者の技術範囲内である。組成物の最適化は、日常的な調整により、そして当該分野で確立された多くのアッセイの１つにおけるセレクチン結合への調整の影響に従って達成され得る。以下の節は、読者の便宜のために可能なアプローチの例示を提供するにすぎない。脂質組成物の成分の調製：本発明は、セレクチン結合を阻害するために必要とされる決定因子を有するため、および脂質のアセンブリを形成するための成分の両方として、脂質を使用する。本発明に使用され得る脂質の例は、好ましくは約８〜30個の炭素原子を飽和、単不飽和、または多数不飽和の形態で含有する、脂肪酸；ポリアミノ、ポリヒドロキシ、または混合アミノヒドロキシ化合物のアシル化誘導体；グリコシルアシルグリセロール；リン脂質；ホスホグリセリド；スフィンゴ脂質（スフィンゴミエリンおよび糖スフィンゴ脂質を含む）；コレステロールのようなステロイド；テルペン；プロスタグランジン；および鹸化不能脂質（non-saponifiable lipid）である。組成物の負に荷電した基は、代表的には、脂質シートの外部表面から接近可能な酸である。所定の実施態様では、この酸は、有機酸、特にカルボン酸である。他の実施態様では、この酸は形態(XO_n)(O^--)_pの酸素酸であり、ここでn＋p>2である。この場合には、脂質は、代表的には、形態R_m(XO_n)(O^--)_pであり、ここで各Ｒは脂肪族炭化水素（これらは同じである必要はない）を含み、ｍは１または２であり、(XO_n)(O^--)_pは酸素酸であり、そしてn＋p>2である。好ましい酸素酸は、スルフェート、SO₃ ^-、およびホスフェートである。ホスフェートは、その酸素の１つまたは２つを介して脂肪酸炭化水素に結合し得る。組成物の任意の負に荷電した成分について、任意のさらなる特徴が、酸と脂肪族または膜固着基との間に存在し得る。これらは、ポリエチレングリコールおよび他のヘテロ原子含有炭化水素のようなスペーサーを含む。酸基はまた、アミノ酸、糖、または偽糖のような置換基上に存在し得、これは、リン酸化または硫酸化形態のシクロヘキシジン、特にヘキサホスファチジルイノシトールおよびヘキサスルファチジルイノシトールを含む。負に荷電した基は、脂質にすでに存在し得るか、または合成によって導入され得る。負に荷電した頭部を有する脂質の例は、脂肪酸それ自身（ここで、負の電荷はカルボキシレートの基によって提供される）、カルジオリピン（リン酸基）、ジオレオイルホスファチジン酸（リン酸基）、および硫酸コハク酸の1,4-ジヘキサデシルエステル（硫酸基）を含む。市販されていない負に荷電した脂質は、標準的な技術によって合成され得る。２、３の非限定的な説明が続く。１つのアプローチにおいて、脂肪酸は、塩化メチレン中のN-ヒドロキシサクシンイミド（NHS）および1-(3-ジメチルアミノプロピル)-3-エチルカルボジイミド（EDC）で活性化される。脱離基N-ヒドロキシサクシンイミドは、広範な範囲の求核試薬で置換され得る。１つの例では、グリシンが、負に荷電した頭部を有する脂肪酸-アミノ酸結合体を産生するために用いられる。グルタミン酸は、活性化脂肪酸に結合して、その頭部に２つの荷電を有する脂肪酸-アミノ酸結合体を産生し得る。別の合成アプローチでは、2,3-ビス( (1-オキソテトラデシル)オキシ)-ブタンジオール酸が、トルエン中のミリストイルクロライドをd1-酒石酸のピリジン溶液に添加することにより調製される。清澄溶液が濃縮されて、産物を産生し、これはヘキサンから再結晶化される（Kuni takeら、Bull.Chem.Soc.Japan，51:1877,1978）。硫酸化脂質、スルホコハク酸の1,4-ジヘキサデシルエステルが、以下のように調製される：２、３滴の濃縮されたスルホン酸を有するトルエン中の無水マレイン酸およびヘキサデシルアルコールの混合物が、３時間、水の共沸除去とともに加熱される。ジヘキサデシルマレイン酸が再結晶化され、次いで100℃で２〜３時間水中で等モル量のNaHSO₃とともに加熱される。水を蒸発させ、そして脂質をメタノール中に抽出することによって産物が回収される（Kunitakeら、前出）。アルキルスルホネートが以下のように合成され得る。脂質アルコールがSigmaから入手されるか、または脂肪酸の酸基が、エーテル中のリチウムアルミニウム水和物と反応して、カルボキシレートをアルコールに変換することによって還元される。このアルコールは、塩化メチレン中でのトリフェニルホスフィンおよび四臭化炭素との反応によって臭化物に変換され得る。次いで、臭化物は、亜硫酸水素イオンと反応してアルキルスルホネートを産生する。スルフェートは、活性化脂肪酸とスルホネート含有アミンとを反応させることにより調製され得る。例えば、10,12-ペンタコサジノン酸のN-ヒドロキシサクシンイミドエステルは、タウリンと反応してN-10,12-ペンタコサジイノイルタウリンを産生する。スルフェートはまた、アルコール（例えば、ラウリルアルコール）を無水ジメチルホルムアミド中の三酸化硫黄-トリメチルアミン複合体と2.5時間反応させることによって調製され得る（Bertozziら、Biochemistry 34:14271，1995）。市販されていないリン酸含有脂質もまた容易に合成される。例えば、ジアルキルホスフェート化合物を調製するために、ホスホリルクロライドを対応するアルコールと反応させる。ジヘキサデシルホスフェートを作製するために、ホスホリルクロライドが20時間ベンゼン中で３当量のヘキサデシルアルコールを用いて還流され、続いて産物が再結晶化される（Kunitakeら、前出）。モノアルキルホスフェートは、例えば、10,12-ヘキサコサジイン-1-オール（１当量）とホスホリルクロライド（1.5当量）とを乾燥CCl₄中で室温にて約12時間反応させ、次いで６時間還流下で煮沸することによって調製され得る。溶媒の除去、および残渣を水で１時間加熱することにより、所望の10，12-ヘキサコサジイン-1-ホスフェートが産生される（Hupferら、Chem.Phys.Lipids 33:355，1983）。あるいは、NHS で活性化された脂肪酸は、2-アミノエチルホスフェートと反応して、アミノエチルホスフェートのアクリル化誘導体を産生し得る。本発明での使用に適切な炭水化物成分は、ポリマー化脂質シートに取り込まれた場合にセレクチン結合活性を有する、任意のモノサッカライド、ジサッカライド、およびより大きなオリゴサッカライドを含む。単純なジサッカライド（例えば、ラクトースおよびマルトース）は、モノマーのようなセレクチン結合活性を有さない。しかし、ポリマー化リポソームに取り込まれた場合、実質的な活性を獲得する。従って、適切な炭水化物の範囲は、他のセレクチンインヒビターにおいて用いられるものをかなり越えて広がる。いくつかの実施態様において、炭水化物は、非抱合型のモノマーとして検出不可能な結合を有するジサッカライドまたは中性のサッカライドである。他の実施態様において、炭水化物は、モノマー形態で実質的な結合を有し、そして必要に応じて、マルチマーのオリゴサッカライドとして合成される。しかし、これは、代表的には必要とされない。好ましいオリゴサッカライドは、シアル酸化フコオリゴサッカライド、特にsLe^xおよびsLe^a、シアル酸化フコオリゴサッカライド、硫酸化フコオリゴサッカライド、特にスルホLe^x、および硫酸化フコオリゴサッカライドのアナログである。ジサッカライドおよびより大きなオリゴサッカライドは、必要に応じて、サッカライド単位間の非炭水化物特性の他の特徴またはスペーサー基を含み得る。「シアル酸化フコオリゴサッカライドアナログ」は、sLe^xのそれと空間的に類似した配向性でセレクチン結合に関与するsLe^xの最小の構造的成分を含むサッカライドである。これらの成分は、フコースサブユニットの3-ヒドロキシ基および sLe^Xのノイラミン酸サブユニットの負の基である。L-セレクチン結合の前後関係において、好ましいアナログは、フコースサブユニットの2-、3-、および4-ヒドロキシ基およびノイラミン酸サブユニットの負に荷電した基を含む。フコースおよびシアル酸成分は、ジサッカライドスペーサーを介して結合され得る。なぜなら、それらは炭化水素リンカー（以下に例示される鎖アナログにおけるように）を介して、または環状基または芳香族基のような随意の特徴を含有する適切な長さの合成スペーサーを介してsLe^x内に存在するからである。後者のタイプの例は、Searsらによる総説に列挙されている（Proc.Natl.Acad.Sci．USA 93:12086，1 996）−特に図７を参照のこと。特定の目的の所定のアナログおよび他のオリゴサッカライドは以下を含む：１．鎖ジサッカライドであって、２つの糖間のスペーサーを含有し、特にシアル酸またはその硫酸化形態およびフコース、ここで、スペーサーは、直鎖または分枝したアルキル基（図９）であるか、または混合した炭化水素である（Hanessian ら、J.Syn.Lett．868，1994）。２．水酸化環状構造によって結合されたシアル酸のフコース残基およびカルボン酸基を含むアナログ（Linら、Biorganic Med． Chem．Lett 6:2755，1996）。３．１つ以上の位置で硫酸化されたラクトース（B ertozziら、Biochemmistry 34，14271，1995）。４．カルボン酸基へのエーテル結合を有する中性ジサッカライド（Hirumaら、J.Am.Chem.Soc．118:9265,1996）。５．カルボン酸基への複数の5-または6-員環構造を介して結合したモノサッカライド（フコースである必要はない）であって、少なくとも１つの環状構造はフェニル基である（Dupreら、Bioorg.Med.Chem.Lett.，6:569,1996）。７．カルボン酸への多数のペプチド結合によって結合したフコースまたは類似のモノサッカライドを含有する、糖ペプチド（Cappiら、Angew.Chem.Int．Engl.編、1996;Wan gら、Tetrahedron Lett．37:5427，1996）。８．多数のサルフェート基を有するトリ-およびテトラサッカライド（Nelsonら、Blood 82:3253，1993）。９．リン酸化または水酸化シクロヘキサン、特にヘキサホスファチジルイノシトールおよびヘキササルファチジルイノシトール（Cacconiら、J.Biol.Chem．269:15060，1 994）。多くのモノおよびジサッカライドが市販されている。セレクチン結合のためのより複雑な炭水化物構造は、文献に広範に記載されており、そして本明細書中で精巧に考案される必要はない。読者への目的の学術文献は、Tonneら（Tetrahedr on 45:5365，1989）;Drueckhammerら（Synthesis 499，1989）;Hindsgaul（Se m.Cell Biol．2:319，1991）;Lookら（Anal.Biochem．202:215，1992）;Itoら（ Pure Appl.Chem．65:753，1993）;およびDeFreesら（J.Am.Chem.Soc．117:66，1 995）を含む。脂質への炭水化物の結合は、必要に応じて結合の間炭水化物を適切に保護する、任意の確立されているか、または発明された合成ストラテジーによって行われ得る。１つの方法は、N-ヒドロキシサクシンイミドによって活性化された炭水化物とグルコサミンまたはガラクトサミンのようなアミノ糖とを反応させることである。オリゴサッカライド-脂質結合が所望される場合、オリゴサッカライドは、最初にサブユニットの１つとしてアミノ糖を利用することによって合成され得る。次いで、アミノ糖のアミノ基は、活性化脂肪酸によってアシル化され、脂質 -オリゴサッカライド結合体を産生する。オリゴサッカライドにおいて、アミノ糖-脂肪酸結合体が、所望の標的との結合に立体的に干渉し得ることは留意されるべきである。従って、アミノ糖-脂質結合体とリガンドとしてのサッカライド作用部分との間の他の糖サブユニットの挿入によってオリゴサッカライドを伸長することが望ましくあり得る。例えば、sLe^xに対して、アミノ糖がsLe^xの結合部分に接近し過ぎる場合、アミノ糖-脂肪酸結合体は結合の立体妨害を導入し得る。従って、sLe^xは、結合の立体妨害を回避するために、GlcNacサブユニットをアミノ糖で置換する代わりに、O-グルコシド結合を介してsLe^xのGlcNAcサブユニットにアミノ糖を結合させることによって拡張されるべきである。アミノ糖のアミノ基を利用する別の方法は、アミノ基にヨードアセチル基を導入し、それに続くさらなる誘導体化のためのさらなる官能基を含有するチオール含有化合物（例えば、シスタミンまたはシステイン）とのアミノ基の反応である。 O-グリコシドは、グルコースまたはマンノースのようなモノサッカライドでのアルコールの酸触媒濃縮によって容易に形成される。N-Fmoc-エタノールアミンは、グルコースの還元末端に付加され得、引き続いて、ピペリジンでアミノ基が脱保護される。次いで、化合物の遊離アミノ基は、活性化された脂肪酸でアシル化されて、炭水化物-脂質結合体を形成し得る。あるいは、グリコシルハライド（糖とHClのようなハロ酸とを反応させることによって形成される）が利用され得る。ここで、アルコールによるハライドの求核置換はO-グリコシドを形成する。別の方法は、アミンと還元糖とを反応させることによるN-グリコシドの形成に関する。この反応は、糖（例えば、グルコース）とアミン（例えば、デシルアミン）とを室温で約48時間反応させることによって容易に達成される。あるいは、糖をアミン(例えば、ステアリルアミン)(2〜3モル過剰)とともに80℃でエタノール/水溶液中で加熱することは、N-ステアリルグリコシドを形成するに十分である（Lockhoff，Angew.Chem.Int.Eng.編、30:1161，1991）。N-グリコシドの安定性を増大させるために、産物は、０℃で60％ピリジン/40％無水酢酸中で撹拌することによってペルアセチル化される。次いで、ペルアセチル化産物は、無水メタノールに溶解され、pHを約10に調製するために1Mメトキシドナトリウムが添加され、そしてこの混合物は、N-アセチル-N-グリコシドを産生するために室温で３時間撹拌される。 N-グリコシドを介してさらなる機能性を導入する本方法の拡張は、糖への多機能性アミンの添加に関する。例えば、N-アリルアミンは、遊離還元末端を有するサッカライドに付加され、脂肪酸のための付着の適切な点を提供するためのアリル基の反応が続く。当業者は、図３に示される糖結合体が、N-アリルアミンとsL e^xアナログとを反応させること、そして引き続くN-グリコシドのペルアセチル化によって作製されることを認識する。水酸基は、触媒量のメトキシドナトリウムで脱保護され得、N-アセチル化N-アリルグリコシドを生じ得る。あるいは、N-アリルグリコシドのアミノ基は、酸クロライドで直接アセチル化され得る（Lockho ff，Angew.Chem.Int.Eng.編、30:1161，1991）。次いで、シスタミンのようなメルカプトアミンは、UV光での照射によってN-アリルグリコシドに付加され得（Ro yら、J.Chem.Soc.Chem.Comm．1059，1988）、これは遊離アミノ基を有するN-グリコシドを生じる。次いで、遊離アミノ基は、10,12-ペンタコサジン酸のN-ヒドロキシサクシンイミドエステルのような活性化脂肪酸と容易に結合し得、結合した糖を産生する。炭水化物に脂肪酸または他の脂質を結合する他の方法は、適切なチオグリコシドまたはC-グリコシドを形成することによって達成され得る。次いで、これらの化合物は、N-グリコシドのために用いられる方法に類似の様式でさらに誘導体化され得る。ノイラミン酸のC-アリルグリコシドは、例えば、N-アセチルノイラミン酸を産生するための触媒としてのNeuAcアルドラーゼの存在下でのN-アセチルマンノースアミンとピルビン酸ナトリウムとの反応によって容易に形成される。エタノール中のHClガスでの粗反応混合物の処理は、エチルエステルを産生し、これはグリコシルクロライドを産生するアセチルクロライドとの反応に続けられる（この工程はまた、水酸基のアセチル化を生じる）。UV照射（Pyrexフィルターを備えた450ワットHanovlaランプ）下でのアリルトリブチルチンおよび触媒量のビス(トリブチルチン)とのこのグリコシルクロライドの反応は、C-アリルグリコシドを産生し；次いでアセチル基は、エタノール中のエトキシドナトリウムを有する水酸基から除去される。これは、ノイラミン酸のC-アリルグリコシドのエチルエステルを産生する（Nagy，J.O.ら、Tetrahedron Letters 32:3953 1991）。 N-アリルグリコシドについて上記の反応スキームに類似の様式で、糖のC-アリルグリコシドが、シスタミンと反応し得、アリル基へのチオール基の付加、それに続くアミノ基と活性化脂肪酸との反応を生じる。アミド結合を介した脂質への炭水化物の結合は、その炭水化物が遊離カルボキシル基を有する場合に達成され得る。炭水化物と2-(2-(2-(2-アジドエトキシ)エトキシ)エトキシ)-エタンアミンとを混合することおよび塩化メチレン中で1-(3- ジメチルアミノプロピル)-3-エチルカルボジイミド(EDC)および1-ヒドロキシベンゾトリアゾール(HOBt)を用いることによって、カルキシル基を活性化すること、それに続くエタノール/水/ジオキサン/酢酸(2:1:2:1)中のH₂/Pd(OH)₂/Cでの、アミノ酸へのアジド基の還元は、種々の活性化ケミストリーによって次いで脂肪酸に連結され得るアミン誘導体化炭水化物を産生する（Linら、Bioorg.& Med.Ch em.Lett．6:2755，1996）。炭水化物はまた、酵素的方法を用いて脂質に結合され得る。糖は、ホスホリパーゼＤの存在下でジアシルホスファチジルコリンと糖とを反応させることによってトランスホスファチジル化され得、ジアシルホスファチジル-糖を生じる（Wan gら、J.Am.Chem.Soc．115:10487，1993）。脂質組成物のアセンブリ：適切に誘導体化された脂質は組み合わされ、適切な組成物に形成され、そして架橋される。適切である場合、組み合わせ工程は、セレクチン結合に必要とされる炭水化物を有する脂質とアニオン性要求を有する脂質とを混合することを含む。さらなる脂質がまた、種々の目的のために含まれ得る。さらなる脂質は異なる炭水化物を有し得るか、またはそれらは架橋に関与するが、結合決定基を有さない骨格脂質であり得るか、またはそれらは架橋基を有さないフィルター脂質であり得る。非架橋脂質は、炭水化物決定基、またはアニオン性決定基のいずれか、あるいは両方を有し得、そして他の架橋脂質間での包括によって組成物中で安定になる。次いで、脂質は、脂質組成物に形成される。脂質組成物は、最も典型的にはリポソームであるが、任意の他の配列が、それが作用の意図される部位に送達可能であり、そしてセレクチン結合に必要とされる決定基を示すことを提供するために用いられ得る。関与する脂質は、脂質シートの架橋メンバーであるが、脂質シートは、脂質二重層の一部である必要はない。ミセルおよび微小液滴は、結合決定基を示すのに適切な代替的粒子性形態の例である。単一の脂質シートはまた、適切な脂肪族化合物の疎水性中心の周辺に形成され得る。脂質はまた、タンパク質複合体のような別の中心物質の周辺の単一シートまたは二重層として植え付けられ得る。リポソームに言及する本開示のいかなる記載もまた、他に必要とされない限り、他の型の脂質組成物に適用する。リポソームは、その製造の容易さからより通常の形態の組成物である。多数の方法が、リポソームを調製するために当該分野で利用可能である。読者は、Greg oriadis(編):「Liposome technology第２版、第１巻、Liposome preparation an d related techniques」、CRC Press，Boca Raton，1993;Watweら、(Curr.Sci． 68:715，1995)、Vemuriら、(Pharm.Acta Hellvetiae 70:95 1995)、および米国特許第4,737,323号；同5,008,050号；および同5,252,348号を参照のこと。頻繁に用いられる技術は、脂質フィルムの水和、注入、超音波処理および界面活性剤透析を含む。架橋のためにジインケミストリーおよび単鎖脂肪酸を用いる場合、好ましい方法は、本来の文献（Hubら、Angew.Chem.Int.Ed.Engl．19:938，1980 ）の１つに記載されるような超音波処理である。この方法は、使用するのが容易であり、そして小さくそして均一のサイズの単層の球状小胞を産生する。簡潔には、脂質の薄膜が、水で90℃以上に加熱され、次いで約４℃に冷却される。これは、T_c(Lopezら、Biochim.Biophys.Acta 693:437，1982)よりも低く、脂質に「固体類似」状態を形成させる。次いで、この混合物は、数分間超音波処理され、より長い時間（約15分）で典型的により均一な小胞を産生する。形成の後、小胞は、所望であれば、凍結融解サイクルまたは次第に小さくなる細孔サイズのフィルターを押し出すことによって、サイズを減少され得る。任意の直径の小胞が、本発明の範囲内に含まれるが、それらは好ましくは約400nm未満の中央直径であり、そしてより好ましくは約200nm未満の直径である。より小さなサイズの小胞が、濾過滅菌され得、そして食細胞による取り込みに対して感受性がより低い。任意のこれらの組成物に用いられる脂質は、一旦脂質シートが形成されると共有結合的に架橋され得る官能基を用いて調製されている。共有結合的に架橋する脂質に関して、いくつかのアプローチが当該分野で公知である。ポリマー化は、紫外線の照射によって、あるいは適切な水素またはベンゾイルペルオキシドのような化合物での脂質ジイン、スチレン含有脂質、アクリル含有脂質、および脂質ジインのラジカル開始；遊離（無防備）のアミノおよびカルボキシル基を含む脂質のポリマー化(アミド結合を形成させることによる); およびチオール含有脂質（ここで、各々の脂質は架橋されるための少なくとも２つのチオール基を有さねばならない）のポリマー化（チオール基の酸化による）によって達成され得る。アジド、エポキシド、イソシアネートおよびイソチオシアネート、ならびにベンゾフェノンもまた、脂質を架橋する方法を提供する（Wo ng，S.S.，Chemistry of Protein Conjugation and Cross-Linking，Boston:CRC Press，1993;Hermanson，G.T.，Bioconjugate Techniques，San Diego:Academi c Press，1996）。アミド結合を形成させることによる脂質のポリマー化の例は、カルボジイミドによるN-ε-パルミトイル-L-リジン-N-β-(2-アセチルアミノ-2-デオキシ-β-グルコピラノシル)-L-アスパラギンのポリマー化である。炭水化物、脂質-修飾ジペプチドは、市販のN-α-Fmoc-N-β-(3,4,6-トリ-0-アセチル-2-(アセチルアミノ)-2-デオキシ-β-グルコピラノシル)-L-アスパラギン（Novabiochem由来）およびN-α-Fmoc-N-ε-パルミトイル-L-リジン（これは、N-ヒドロキシスクシンイミドで活性化されたパルミチン酸を市販のN-α-Fmoc-L-リジンの遊離ε-アミノにカップリングすることによって容易に合成される）を用いて標準的な固相ペプチド合成法によって容易に構築される。固相樹脂からの修飾ジペプチドの除去および官能基の脱保護は、標準的な方法によって実行される。炭水化物、脂質修飾ジペプチドは、その表面に炭水化物を有する基および負に荷電した基の両方を有するリポソームを提供するために、第２のジペプチド、N-ε-パルミトイル-L-リジン-L-アスパラギン酸と共ポリマー化され得る。チオール基の酸化による脂質のポリマー化の例は以下のようである：10-ウンデセン酸（10-ウンデシレン酸）は、二重結合を横切るMarkonikov付加によるHBr の付加によってブロム化され、10-ブロモウンデカン酸を生じる（Streitweiser ら、Introduction to Organic Chemistry，New York:Macmillan，1976，pp.278- 285）。10-チオウンデカン酸は、エタノール中のチオウレアでの10-ブロモウンデカン酸の処理、および続く水性NaOHによる加水分解によって調製される。（st reitweiserら、Introduction to Organic Chemistry，New York:Macmillan，197 6，pp.242-243）。次いで、チオールは、氷酢酸中のトリフェニルメタノールおよびボロントリフルオライドエーテレート（etherate）基とともに加熱することによってトリチル基で保護され、引き続いてエタノール、水、および粉末酢酸ナトリウムで検査される（Bodanszkyら、The Practice of Peptide Synthesis，Ne w York:Springer-Verlag，1984，p.83）。次いで、保護されたチオール脂肪酸は、N-ヒドロキシスクシンイミドで活性化され、そしてS-トリチル-L-システイン（Novabiochem）と反応される。次いで、脂肪酸-アミノ酸結合体は、トリフルオロ酢酸で処理され、トリチル基を除去され、N-(10'-チオウンデカノイル)-システインを生じる。次いで、ジチオールは、酸素分子での酸化によってポリマー化され得る。架橋され得る脂質のさらなる例は、Ringsdorfら、Angew.Chemie Int.Ed.Eng. ，27:113-158(1988)、およびその中の引用文献、およびJohonston，D.S.ら、「P olymerized Liposomes and Vesicles,」Liposome Tchnology，第１巻の９章（G. Gregoriadis,編），BocaRaton，Florida:CRC Press，1984，pp．123-129およびその中の引用文献に総説される。脂質をポリマー化する好ましい方法は、紫外線によって脂質ジイン（例えば、 10,12-ペンタコサジイン酸(Farchan Laboratories，Gainesville，FL)）のポリマー化による。ジアセチレン化合物のポリマー化反応は、広範に研究されており、そしてポリマー化リポソーム、ミセル、および他の超分子構築の形成において利用されている（Frankelら、J.Am.Chem.Soc．113:7436,1991;Furhopら、J.Am.C hem.Soc．113:7437-7439，1991;Spevakら、Advanced Materials 7:85，1995）。ジインは、紫外光を用いて容易にポリマー化され、ラジカル発動因子の必要性を除去するので、好都合である。さらに、ポリマー化脂質は呈色し、そしてポリマー化の程度が容易にモニターされ得る。架橋可能ジアシル脂質、1,2,3-トリアミノ-(ビス-N1,N3-ペンタコサ-10,12-ジイノイル)プロパンの調製の例は、以下のようである。t-ブチルオキシカルボニル(Boc)基は、2-アミノ-1,3-プロパンジオールのアミノ基を保護するのに用いられる。ジオールは、塩化メシルを用いてジーメシレートに変換され、そしてDMF 中のテトラブチルアンモニウムアジドとの即時反応が続く。アジド基は、PtO₂/H₂ との反応によってアミンに変換される。次いでこの化合物は、10,12-ペンタコサジイン酸のN-ヒドロキシサクシンイミド誘導体と反応される。最後に、Boc基は、トリフルオロ酢酸で除去されて、1N,3N-ビス(10,12-ペンタコサジイノイル) -1,2,3-トリアミノプロパンを産生する。この組成物の脂質は、用いられるポリマー化学の型に適切である活性化によって架橋される。ジイン脂質は、最初に記載（Hubら、前出）されたように、U.V. 照射によって架橋され、反応（通常20〜60分で完了する）の経過を追跡するために可視吸収をモニターされる。遊離ラジカル発動因子は、用いられる場合、透析のような適切な技術によるポリマー化の後に調製物から除去される。ポリマー化脂質組成物の特徴架橋組成物の利点の１つは、異なる置換基がセレクチン結合についてスクリーニングされそして滴定され得る容易さである。特定の炭水化物決定基の至適な比率および特定の陰イオン性決定基が、組成物に各置換基を滴定するおよび適切なセレクチン活性アッセイを行うことによって経験的に決定される。このアプローチは、実施例２および３にさらに説明される。 sLe^x様複合体オリゴサッカライドを生じる脂質の比率は、好ましくは、約１％と25％との間、好ましくは約２％〜10％、至適には約５％である。低い値は、おそらく十分な結合価を提供せず、一方、より高い値は、ポリマー化および結合接触性の両方のために立体的問題を創出すると考えられる。電気陰性決定基を産生する脂質の比率は、決定基の強度に依存する。多くの適用に関して、シート中の脂質のバランスのために水酸化脂質またはカルボキシル脂質を用いることに害はない。しかし、より強い酸は、より注意を必要とし得る。スルフェートまたはホスフェートの過剰な比率は、組成物に他の生物学的反応（特に、ヘパリンのような高度に荷電した分子により天然に阻害される反応）に対する阻害活性を与え得る。これが問題である場合、このような酸の比率は、適切に、約１％〜50％、または１％〜10％、または0.5％〜２％の範囲に滴定され得る。脂質シート中の脂質間のポリマー化の程度は、架橋可能置換基を有する脂質の比率の因子およびポリマー化反応の完全さの因子である。当業者は、架橋に関与しない調製物中に脂質を含ませることによってポリマー化の量を制限し得る。理論により制限されることを意図しないが、炭水化物と陰イオン性成分との間の相乗作用が、ポリマー化脂質構造の硬性によって部分的に付与されることが本開示の仮説である。シート中の少なくとも25％、好ましくは50％、より好ましくは75 ％、さらにより好ましくは90％、さらにより好ましくは95％、そしてなおさらにより好ましくはほとんど100％の脂質が架橋することが推奨される。完全なシートが１つのユニット、あるいは分離したパッチまたはタイルにポリマー化される。非反応性脂質の比率は、架橋の程度を減少するフィルターとして含まれる場合、炭水化物決定基および陰イオン性決定基は、代表的には、フィルター脂質よりむしろ架橋脂質上にある。しかし、フィルター脂質が隣接する架橋によって包括される限り、反対の配列が可能である。従って、本発明の所定の実施態様において、炭水化物決定基またはセレクチン結合のための陰イオン性決定基のいずれか、あるいは両方が、架橋する他の脂質を含む脂質シート中に存在する非架橋脂質によって提供される。このアプローチは、炭水化物決定基を満足させるスフィンゴ糖脂質を用いる場合に特に適切である。このタイプの好ましい脂質は、スルホグルクロニルスフィンゴ糖脂質である（Needhmら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:1359 ，1993）。炭水化物基および電気陰性基は両方とも、必要に応じて、スペーサー基を介して脂質に結合される。上記の合成方法からすでに理解されるように、約２炭素長の炭化水素スペーサーは、結合のための簡便なアプローチを提供する。所定の実施態様において、スペーサー基は、細網内皮性細胞による取り込みからリポソームが隠れることを改善するポリエチレングリコールである。陰イオン性基および炭水化物基は協同して働かねばならないので、スペーサーアームの長さが一致すべきである。ポリマー化脂質組成物の作用強度は、構造的硬性に部分的に由来すると考えられ、そして多くの実施態様は最小の長さのスペーサーを有する。本発明の特定の実施態様において、脂質シートにおける一定の割合の脂質は第１の結合したサッカライドを有し、そして別の割合の脂質は第１のサッカライドとは異なる第２の結合したサッカライドを有する。２つのサッカライド脂質は、好ましくは架橋構造の一部である。多くの複数の異なる別々に結合したサッカライドが存在する実施態様が、包含される。セレクチン炭水化物結合要件を満たす、この仕組みにおける脂質の任意の組合せが適切である。１つの例において、第１の結合した炭水化物は、シアル酸または類似のサッカライドのような酸性モノサッカライドであり、そして第２の炭水化物はフコースまたは類似のサッカライドである。異なるモノサッカライドもしくはジサッカライドまたはそれらのアナログに結合した脂質の組合せは、その合成が容易なので商業的な目的である。本発明のポリマー化リポソームは、当該分野に公知の種々の試験アッセイにおけるその力価に基づいて分類され得る。例えば、PSGL-1のようなセレクチンリガンドを発現する細胞への結合の単離セレクチンの阻害について試験される場合、リポソームは、好ましくは、オリゴサッカライド等価物の濃度が約10μM未満、好ましくは約１μM未満、なおより好ましくは約100nM未満、そしてさらにより好ましくは約10nM未満で、最大阻害50％(IC₅₀)に達する様式において結合を阻害し得る。この型の好ましい結合アッセイはHL-60細胞を用い、そして実施例２に例示される。ポリマー化リポソームはまた、適切な標準に比較した相対的なIC₅₀に基づいて、任意のアッセイにおいて分類され得る。標準は、リポソームに複合体化されずに存在する、またはモノマー形態（例えば、sLe^XまたはsLe^Xアナログ）のオリゴ糖であり得る。標準はまた、オリゴサッカライドを有さないが同じ脂質組成物を有するリポソームであるか、または100％カルボキシ末端化またはヒドロキシ末端化脂質から作製されたリポソームであり得る。特定の実施態様において、ポリマー化リポソームは、標準のIC₅₀よりも好ましくは10²倍低い、より好ましくは約10³倍低い、より好ましくは10⁴倍低い、さらにより好ましくは10⁵倍低い、そしてさらにより好ましくは10⁶倍低いIC₅₀を有する。本発明はまた、E-セレクチンに比較してP-およびL-セレクチンについて選択的であるか、または他の２つのセレクチンに比較してP-またはL-セレクチンについて選択的である実施態様を含む。ポリマー化リポソームは、所定のセレクチンを阻害するアッセイにおいて、別のセレクチンを阻害するアッセイにおけるそのIC₅₀ よりも高いIC₅₀を有する場合に選択的である。好ましくは、特定のセレクチンが唯一の変量であることを可能にするアッセイが、この測定のために使用され得る。実施例１に概説したHL-60セレクチン結合アッセイは、同じ細胞とスイッチキメラとを用いるP-およびE-セレクチン阻害を比較するために使用され得る。同様な様式で、実施例３に記載のELISAにおけるプレートされたムチンは、３つのセレクチンのいずれかのキメラを結合し、そして３つ全てのセレクチンに対する特定の組成物の阻害能力を比較するために使用され得る。選択的インヒビターは、好ましくは、標的セレクチンについて別のセレクチンと比較して、約５倍高い；より好ましくは25倍高い；なおより好ましくは100倍高いIC₅₀を有する。 P-および／またはL-セレクチンについて選択的であるインヒビターga、特に目的である。なぜなら、最近の観察では、E-セレクチンアンタゴニストが白血球接着欠損症(LAD-2)を連想させる症状に導き得るからである。白血球接着欠損症において、好中球は内皮組織に正常に接着せず、そして肺、皮膚、および歯肉組織の細菌感染の再発が普通である。実施例３は、選択的ポリマー化リポソームの例示を提供する。sLe^Xのような非硫酸化サッカライドおよび中性ジサッカライドラクトースおよびマルトースは、カルボキシ末端化脂質の環境に存在する場合に、 L-およびP-セレクチンについて選択的である。sLe^Xはまた、ヒドロキシ末端化脂質の環境において選択的である。スルホLe^Xか、またはsLe^Xと組み合わせた脂質のいずれかの上に硫酸基を有するリポソームは、選択的ではなかった。複数のセレクチンへの結合を最適化するように設計された実施態様も、また含まれる。これらの組成物は、複数の異なる炭水化物、および別々の脂質上の複数の異なるアニオン性基または電気的陰性基を有し得る。ポリマー化脂質組成物の試験組成物のインビトロ試験および最適化：ポリマー化脂質組成物のセレクチンリガンドを表示する能力を決定するためのアッセイは、直接結合アッセイかまたは阻害アッセイかのいずれかに分類され得る。直接結合アッセイは、組成物をセレクチンかまたはセレクチンを発現する細胞かのいずれかに直接相互作用させることにより行われる。種々の試験セレクチン結合決定因子を含む脂質シートは、顕微鏡スライド上で直接ポリマー化され(Spe vakら、Adv．Mater．7:85，1995)、そしてセレクチンで力価決定され得るか、または逆にセレクチンがマイクロタイタープレートウェル上にコートされそして標識されたポリマー化脂質粒子で力価決定され得る。ポリマー化粒子はまた、セレクチンリガンド発現細胞（例えば、HL-60細胞）への直接的結合について試験され得る。本発明に従うポリマー化リポソームのほとんどの適用が、セレクチンリガンド -レセプター対の間の結合の阻害に関するので、阻害アッセイにおいて組成物を開発かつ試験することはより通常である。阻害能力は、セレクチンリガンド-レセプター対の１つのメンバーが固体表面に結合され、そして第２のメンバーが潜在的インヒビターの存在下で結合について提示される、無細胞アッセイにおいて試験され得る。洗浄後、結合した第２のメンバーの量が、標識系と予め結合するかまたは後で結合する方法により定量される。この型のアッセイは、多数の異なる脂質組成物の比較スクリーニング（例えば、異なる炭水化物およびアニオン性決定因子を表示する）のために便利である。最近の無細胞セレクチンアッセイ系の多くは、セレクチンキメラを使用する。セレクチンキメラにおいて、結合ドメインを含むセレクチンのN末端部分が、標識系のための結合手段として使用され得る第２のタンパク質フラグメントに融合される。頻繁に使用される第２のフラグメントはIgG Fc領域であり、これは、次いで、プロテインＡまたは抗Fcで作製された接合体を用いて検出され得る。キメラの構築および関連するアッセイは、Watsonら(J．Cell Biol．115:235，1992) 、Aruffoら(Cell 67:35，1991)、およびFoxallら(J．Cell Biol．117:895，1992 )により記載される。便利な無細胞アッセイの１つの例は、Bertozziら(Biochemistry 34:14275，19 95)に記載されたL-セレクチンELISAである。簡潔には、GIyCAM-1の粗調製物がマウス血清から得られる。マイクロタイタープレートはムチンのペプチド骨格に特異的なポリクローナル抗体でコートされ、ムチンでオーバーレイされ、次いで洗浄される。Fcに融合されたL-セレクチンのキメラがビオチン化F(ab')₂抗Fcと複合体化され、これは、順番にストレプトアビジンアルカリホスホターゼ接合体に複合体化される。合わせた接合体は、潜在的インヒビターと30分間プレインキュベートされ、次いでマイクロタイタープレートウェルに移される。室温で30分後に、ウェルは洗浄され、そして酵素基質で現像される。この型のアッセイの変形において、プレート上に直接コートされ得るスルファチドのようなセレクチンリガンド置換物が使用される。別の変形において、固形基質もまた、ポリマー化脂質(Spevakら、Adv．Mater．7:85，1995)であり、セレクチン結合について、インヒビターとして試験されるべき組成物と少なくとも同じ程度の強力な決定因子を発現する。最初のスクリーニング段階の後、生物学的系における阻害のより代表的なものとしての組成物の開発の間において、好ましくは１または２細胞バイオアッセイが使用される。 P-セレクチンインヒビターのための便利な１細胞アッセイは、ATCCから入手可能なHL-60細胞を使用する。HL-60細胞は、１細胞当たり約36,000の部位でPSGL-1 抗原を天然に発現する(Ushiyamaら、J．Biol．Chem．268:15229，1993)。このアッセイは、Brandleyら(Glycobiol，3:633,1993)に記載される。簡潔には、EまたはP-セレクチンキメラは、ビオチン化ヤギF(ab')、抗ヒトIgGFc、およびアルカリホスファターゼ-ストレプトアビジン接合体と30分間インキュベートされる。次いで、この複合体は、潜在的インヒビターと37℃で約45分間インキュベートされる。50μLの混合物が事前にBSAでブロックされた丸底マイクロタイタープレートの各ウェルに添加される。等容量のHL-60細胞懸濁液が添加され、そしてプレートは４℃で45分間インキュベートされる。細胞は遠心分離によってウェル底にペレット化され、洗浄され、そしてp-ニトロフェニルホスフェートを用いて現像される。他の１細胞アッセイは、細胞株ではなく細胞単離体を用いて行われる。プラスティックウェル上に固定化された精製P-セレクチンへの好中球接着を阻害する能力は、Gengら(Nature343:757，1990)により記載されたアッセイを用いて決定され得る。簡潔には、ヒト好中球は、ヘパリン化全血からMono-Poly^TM溶解培地(Fl ow Laboratories)上での密度勾配遠心分離により単離され、そしてCa⁺⁺、Mg⁺⁺、およびヒト血清アルブミン(HBSS/HSA)を含むハンク平衡塩溶液に懸濁される。P- セレクチンは、組換え発現により得られるか、または古いヒト血小板ライセートから、抗体S12-Sepharose^TM上での免疫アフィニティクロマトグラフィーおよびM ono-Q^TMカラム上でのイオン交換クロマトグラフィーにより単離される（米国特許第5,464,935号）。P-セレクチンは、５μg/mLでマイクロタイタープレートウェル上にコートされる。細胞は、１ウェル当たり約２×10⁵で添加され、22℃で2 0分間インキュベートされる。次いで、ウェルはHBSS/HSAで充たされ、アセテートテープでふさがれ、そして遠心分離される。非接着細胞および上清を捨てた後、各ウェルの内容物はリン酸緩衝液中の0.5％ヘクサデシルトリメチルアンモニウム臭化物で可溶化され、そしてミエロペルオキシダーゼ活性についてアッセイされる(Leyら、Blood 73:1324，1989)。２細胞接着アッセイは、セレクチンを有する１つの細胞と、セレクチンのリガンドを有する別の細胞との接着を妨害する組成物の能力を試験することにより行われる。１つの例は、適切なセレクチンを発現するためにトランスフェクトされたCOS細胞を用いる（一般にはAruffoら、Proc．Natl．Acad．Sci．USA 84:8573 ，1987を参照のこと）。トランスフェクト細胞クローンは、HL-60細胞接着を支持するその能力について選択される。次いで、クローンは、小ウェル培養プレートにおいてアッセイのための基質として拡大され、そして増殖される。別の適切な基質細胞は、Cell Systems，Incから入手可能なヒト請静脈内皮細胞(HUVEC)であり、そして100U/mL IL-1βで４時間刺激される(Martensら、J．Biol．Chem．270 :21129，1995)。HL-60細胞は、１μCi/mL[³H]チミジンまたは10μg/mLカルセインの取り込みにより標識される。推定上のインヒビターは標識HL-60細胞とプレインキュベートされ、基質細胞に提示され、次いでウェルは洗浄されそして計数される。リンパ球接着は、Stamperら(J．Exp．Med．144:828，1976)により最初に記載され、以後Stoolmanら(J．Cell Biol．96:722，1988)、Arbonesら(Immunity 1:2 47，1994)、およびBrandleyら（前出）により改変された凍結切片アッセイを用いて決定され得る。簡潔には、マウス腸間膜リンパ節または牌細胞由来のリンパ球はCMFDAで蛍光的に標識され、そして試験インヒビターと０℃で約30分間インキュベートされる。次いで、リンパ球懸濁液は10μm腸間膜または末梢リンパ節（約３×10⁴細胞／切片）の凍結切片上にオーバーレイされ、そして氷上でローテータで30分間インキュベートされる。懸濁液はスライドから緩やかに流され、そして切片は３％グルタルアルデヒドで固定され、そしてアクリジンオレンジで対比染色される。フコイダンが阻害のポジティブコントロールとして使用され得る。このアッセイにおいて観察された接着は、L-セレクチン結合に起因し得る。白血球フロー（ローリング細胞）アッセイもまた、Martensら（前出）に記載される。好中球は、デキストラン沈降およびFicoll-Hypaque^TM遠心分離により静脈血から単離される。HUVEC単層はコラゲナーゼ処理によって採取され、0.1％ゼラチンコートフラスコ上にプレートされ、そして培養される。HUVEC単層は、フローチャンバーにマウントされ、そしてカルシウムおよびグルコースを含む緩衝液で２分間灌流される。単離された好中球は、同じ緩衝液中で試験インヒビターとプレインキュベートされる。次いで、好中球懸濁液は、約1.85ダイン/cm²の壁ずり応力でHUVEC単層に通過される。相互作用は位相差顕微鏡を用いて約10〜20 分間ビデオ撮影され、そして画像処理ソフトウエアプログラムを使用していくつかの異なる視野において、単層上で回転している(rolling)好中球の平均数を決定する。インビボ試験：炎症性または免疫学的病因を有する種々の疾患についての動物モデルは当該分野において公知であり、そして有望なセレクチン阻害活性を示す任意の組成物の試験に使用され得る。再灌流損傷のような超急性疾患のモデルにおいて、代表的には、組成物は臨床的設定を刺激する誘発事象の数分または数時間以内に投与される。慢性疾患のモデルにおいて、代表的には、組成物は進行相の間に１週間またはそれ以上の定期的な期間で投与される。動物は、組成物の症状を緩解する能力について、細胞的および臨床的判断基準により評価される。セレクチンインヒビターの試験に適切なモデルには、以下が挙げられる：Weyr ichら(J．Clin．Invest．91:2620，1993)、Muroharaら(Cardiovasc．Res．30:96 5，1995)、Maら(Circulation 88:649，1993)、Tojoら(Glycobiology 6:463，199 6)およびGarcia-Criadoら(J．Am．Coll．Surg．181:327，1995)の心虚血再灌流モデル；Silverら(Circculation 92:492，1995)の心梗塞モデル；Steinbergら(J .Heart Lung Transplant 13:306，1994)およびKapelanskiら(J．Heart Lung Tra nsplant 12:294，1993)の肺虚血再灌流モデル;米国特許第5,486,536号のコブラ毒液急性肺損傷モデルおよび免疫複合体肺炎症モデル；Kushimotoら(Thrombosis Res．82:97，1996)の出血性(hemmhoragic)ショックモデル；WO 96/35418の腹膜浸出性およびエンドトキシン誘導性ブドウ膜炎モデル；Shararら(J．Immunol．1 51:4982，1993)の細菌性腹膜炎モデル；Tangら(J．Clin．Invest．97:2485,1996 )の髄膜炎モデル；Meenanら(Scand．J．Gastroenterol．31:786，1996)の大腸炎モデル；Palabricaら(Nature 359:848，1992)のDacron移植片実験血栓モデル；W O 96/34609の腫瘍転移モデル；WO 96/35418のアレルギー性喘息モデル；Gundel ら(Am．Rev．Respir．Dis．146:369，1992)のアレルゲン媒介性肺過敏症モデル；Martinら(J．Autoimmunity 9:637，1996)およびYangら(Proc．Natl．Acad．Sc i．USA 90:10494，1993)の糖尿病モデル；Mulliganら(J．Clin．Invest．88:139 3，1991)による免疫複合性肺胞体および真皮脈管炎モデル；Hickeら(J．Clin．I nvest．98:2688,1996)のリンパ球輸送モデル；Wadaら(J．Med．Chem．39:2055， 1996)のIgE媒介性皮膚反応モデル；ならびにZeidlerら(Autoimmunity 21:245,19 95)のコラーゲン誘導性関節炎および遅延型皮膚過敏症モデル。以上に列記した動物モデルの記載の全ては、本明細書中にそれらの全体が参照として引用される。ポリマー化リポソームの使用研究使用：本発明のポリマー化脂質組成物は、推定リガンド-レセプター結合細胞の間の結合の性質を特徴付けるために使用され得る。例えば、本発明のリポソームにより阻害可能な様式で単離好中球またはHL-60細胞に結合する、新たに単離されたタンパク質レセプターはセレクチンとして考えられる。本発明のリポソームにより阻害可能な様式でHUVECまたはセレクチンでトランスフェクトされた細胞に結合する、新たに単離されたムチンはセレクチンリガンドであると考えられる。本発明のリポソームにより阻害可能な様式での別の細胞による所定の細胞の接着または活性化は、セレクチン-リガンド結合により媒介されていると考えられる。診断使用：ポリマー化脂質組成物はまた、セレクチンのリガンドが欠損しているかもしれないヒト疾患の検出のために使用され得る。このような疾患は、白血球移動またはリンパ球活性における異常を伴う感染に対して増大した感受性を有する患者において最も見られるようである。インビトロ診断手順について、試験されるべき細胞は血液から収集され、Fico ll-Hypaque^TM遠心分離により分離され、次いでセレクチン結合活性を有するポリマー化リポソームに結合する能力について試験される。リポソームは、放射性同位体または蛍光マーカーで標識され得、またはジイン(diyne)化学に基づいた場合、その内因性色の方法によりモニターされ得る。細胞への組成物の直接結合は、細胞表面上のセレクチンの測定を提供し得る。１つの例において、Ｔ細胞または腫瘍生検から分散された細胞は単離され、そして組成物はセレクチンの密度を測定するために使用される。別の例において、組成物は、混合白血球集団においてセレクチンを発現する細胞の数を計数するために使用される。インビボ診断手順について、脂質組成物は適切な試薬との結合またはカプセル化により標識される。¹¹¹Inまた^99mTcのような放射性同位体はシンチグラフィーのための標識として使用され得るか、または非放射活性密度原子はＸ線対比を増強するために使用され得る。組成物は、末梢部位でまたは局所挿管を介して静脈内投与される。特定部位での異常局在化は、臨床的意味を有する異常な細胞輸送または活性化を反映し得る。治療使用：セレクチンは白血球接着、炎症および凝血に関連するいくつかの機能を有するので、P-セレクチンまたはL-セレクチンとの結合を妨害する化合物は、これらの事象の病理学的結果を調節するために使用され得る。炎症性応答は、抑制されない場合宿主にダメージを与え得る。なぜなら、白血球は正常組織を損傷し得る多くの毒性分子を放出するからである。これらの分子は、タンパク質分解酵素および遊離ラジカルを含む。白血球が組織ダメージを与え得る病理学的状況の例は、虚血および再灌流による損傷、細菌性敗血症および播種性血管内凝固、成人性呼吸困難症候群、慢性関節リウマチ、およびアテローム性動脈硬化症が挙げられる。再灌流損傷は、臨床心臓病学における大きな問題である。虚血心筋における白血球接着を減少させる治療薬は、血栓溶解薬の治療効果を有意に増強し得る。組織プラスミノーゲンアクチベーターまたはストレプトキナーゼのような薬剤を用いる血栓溶解治療は、重度の心筋虚血を有する多数の患者において、不可逆的な心筋細胞死の前に冠動脈閉塞を軽減し得る。しかし、このような患者の多くは、血流の回復にもかかわらずなお心筋壊死を被っている。再灌流損傷は、おそらく一部は血小板ならびに内皮を白血球に接着性にするトロンビンおよびサイトカインによる活性化のために、虚血性領域における血管内皮への白血球の接着に関連することが知られている(Romsonら、Circulation 67:1016，1983)。接着白血球は、内皮を通って移動し、そして血流の回復によってレスキューされている最中に虚血性心筋を破壊し得る。虚血は、心筋梗塞によって、または深部静脈血栓のような外科的手術の合併症の結果として生じ得る。心臓病に関連する別の炎症性症状は、再狭窄である。白血球の血管表面への接着により媒介される、虚血および再灌流が組織損傷を生じる多数の他の一般的な臨床的疾患（脳卒中；腸間膜血管障害および末梢血管障害；組織移植；および循環器ショックに続く多発性器官不全が挙げられる）が存在する。細菌性敗血症および播種性血管内凝固は、しばしば臨床的に病気の患者において同時に存在する。これらの症状は、トロンビン、サイトカイン、および他の炎症性メディエータの生成、血小板および内皮の活性化、ならびに白血球の接着および血管系全体の血小板の凝集に関連する。白血球依存性器官損傷は、これらの症状の重要な特徴である。成人性呼吸困難症候群は、敗血症を有するまたは外傷後の患者に生じる、肺循環における白血球の広範な接着および凝集に関連する、荒廃的な肺疾患である。これは大量の血漿の肺への溢血および肺組織の破壊（両方とも、大部分が白血球産物により媒介される）をもたらす。多数の悪性腫瘍（癌腫、リンパ腫、肉腫を含む）由来の腫瘍細胞は、血管を通って離れた部位へ転移する。腫瘍細胞の内皮への接着およびその引き続く移動の機構は良く理解されていないが、少なくともいくつかの場合においては白血球の機構と類似であろう。転移性腫瘍細胞と血小板との関連は良く記載されており、いくつかの癌の拡散における血小板の役割を示唆している。P-セレクチンがヒト癌腫組織切片における腫瘍細胞および癌腫由来の細胞株に結合することが報告されている(Aruggoら、Proc．Natl．Acad．Sci．USA 89:2292，1992)。さらに、特定の腫瘍はそれ自体がセレクチンまたはセレクチンリガンドを発現し得、これは転移細胞の新たな部位での内皮細胞またはHEVへの接着に関与し得る。 P-セレクチンのアンタゴニストは、血栓発生のような血小板-白血球相互作用をブロックするために有益であり得る(Welpyら、Biochem．Biophys．Acta 117:2 15，1994)。ヒヒにおいて、抗P-セレクチンの投与は、移植片への血小板の蓄積を減少させずに、Dacron移植片へのフィブリンの沈着を減少させた(Palabricaら、Nature 359:848，1992)。この結果は、血小板との相互作用を介して白血球を捕捉することが、フィブリンの沈着に寄与し得ることを示唆する。P-セレクチンのブロックはこの相互作用を妨害し、そして抗血栓形成治療として価値を有する。急性同種移植片または異種移植片拒絶反応の開始が炎症性または免疫メディエータ細胞のセレクチン媒介性補充を含む範囲まで、セレクチンアンタゴニストが移植の数日後内に使用され得る。 P-およびL-セレクチンのアンタゴニストはまた、自己免疫疾患の緩解においても興味がある。これらの疾患における接着分子の役割の概説について、Murray(S emin．Artheritis Rheum．25:215，1996)を参照されたい。慢性関節リウマチは、滑膜の張った関節の対称的、多関節の炎症により特徴付けられ、そして関節外組織（例えば、心膜、肺、および血管）を含み得る。接着分子が重要な役割を果たしているようである(Postigoら、Autoimmunity 16:69， 1993)。可溶性セレクチンが発症した患者の滑液および血液に存在し、高いESRおよび滑液PMN計数に相関する(Carson CWら、J．Rheumatol．21:605，1994)。従来の抗リウマチ治療は、白血球接着を変化させることにより滑膜炎症を改変し得る。副腎皮質ステロイド、金化合物、およびコルヒチンは、セレクチンの内皮発現を下方調節する(Corkillら、J．Rheumatol．18:1453，1991;Moladら、Arthritis Rheum．35:S35，1992)。全身性エリマトーデスは、抗核抗体の形成ならびに皮膚上および身体全体の炎症病変の出現によって特徴付けられる。セレクチン発現は、増大した疾患重篤度を有する患者の真皮血管内皮壁において増大される(Belmontら、Arthritis Rheu m．37:376，1994)。シェーグレン(Sjoren)症候群、自己免疫甲状腺疾患、多発性硬化症、および糖尿病は、変化した接着タンパク質（例えば、ICAM-1、LFA-1とL FA-3、VCAM-1、およびセレクチン）に密接な関連を有する他の症状であり(Murra y、前出)、そしてセレクチンインヒビターを用いる治療が受け入れられ得る。喘息は、気道閉塞、炎症および種々の刺激への応答性の増大、咳、呼吸困難、および喘鳴の発症の出現により特徴付けられる。慢性気道炎症において提唱される段階は、メディエータの放出を引き起こす炎症性刺激、続いて内皮への白血球接着を生じる白血球-内皮接着カスケードの活性化を含む。関連する接着分子は、アレルゲンチャレンジに続いて上方調節され得るセレクチン、VCAM-1、および ICAM-1を含む(Pilewskiら、Am．Rev．Respir．Dis 148:S31，1993)。処置の時期および対象：有効量のポリマー化脂質組成物は、病因がセレクチンにより部分的に媒介される、変化した細胞輸送または活性を含む症状について個体を処置するために使用され得る。本発明の方法により処置される「個体」は、脊椎動物であり、特に哺乳動物（家畜動物、スポーツ動物、およびぺットを含む）、そして代表的にはヒトである。「処置」は、処置されている個体の自然の経過を改変する試みにおける臨床的介入をいい、そして予防のためにまたは臨床的症状の経過の間にのいずれかで行われ得る。所望される効果は、疾患の発生または再発の防止、症状の軽減、疾患の直接的または間接的のいずれかの病理学的な結果（例えば、応答性亢進、炎症または壊死）の減少、転移の防止、疾患進行の速度の低下、疾患状態の回復または緩和、および緩解または予後の改善を含む。疾患症状に関連する「病理学」は、健康(well-being)、正常生理学または発症した個体の生活の質を損なうすべてのものである。処置は、本発明のポリマー化脂質組成物の有効量の投与により行われる。「有効量」は、有利なまたは所望の臨床的結果を与えるのに十分な量であり、そして１回より多い用量で投与され得る。本発明において意図される処置の様式は以下を含むが、これらに制限されない：１．血管内皮細胞と、好中球、単球、好酸球、およびメモリーＴ細胞であると考えられる、P-セレクチンリガンドを保有するリンパ球からなる群から選択された白血球との間の結合を阻害するように、P-セレクチンインヒビターを投与する工程を含む、白血球接着または移動の阻害。阻害は、相互作用細胞が、特に発症部位の近くで接触する環境中にインヒビターを導入するか、またはリガンドを保有する細胞の不存在下でセレクチンを保有する細胞をインヒビターと接触させるかのいずれかにより行われ得る。２．血小板を含むかまたは血小板蓄積しやすい環境に、P-セレクチンインヒビターを投与することによる、血小板凝集またはフィブリン沈着の阻害。３．リンパ球、好中球もしくは単球と、内皮細胞またはリンパ組織（特にHEV 細胞）との間の結合を阻害するように、L-セレクチンインヒビターを投与する工程を含む、白血球接着または移動の阻害。４．L-セレクチンインヒビターをリンパ球に投与する工程を含む、白血球接着、移動、または活性化の阻害。５．セレクチンのインヒビターを腫瘍または循環に投与することによる、セレクチンリガンドまたはレセプターを発現すると考えられる腫瘍の転移の阻害。本発明の脂質組成物を用いる治療的モダリティーへの応答を評価するための基準は、特定の症状により指示される。例えば、心筋梗塞の拡大を防止するための処置は、心筋壊死のマーカー酵素の連続的決定により、ならびにEKG、生存徴候、および臨床的応答によりモニターされ得る。急性呼吸困難症候群の処置は、動脈酸素レベルを追跡すること、肺浸潤の回復、および呼吸困難および頻呼吸症の減少により測定される臨床的改善によりモニターされ得る。本発明の方法を用いて処置される他の症状は、この症状に適切な標準的医療手順に従って測定される。薬学的調製物および投与：本発明に従う使用のために調製される組成物は、薬学的組成物の調製のための一般に受容される手順に従って、それを必要とする個体（特にヒト）に投与するために調製され得る。本明細書中に記載のリポソームを調製する好ましい方法は、５mLから数μリットル以上のバッチサイズが再現可能かつ滅菌条件において調製され得るように、十分にフレキシブルである。薬学的組成物を調製するための一般的な手順は、Remington's Pharmaceutical Sciences，E.W．Martin編、Mack Publishig Co.，PAにおいて記載される。液体の薬学的に投与可能な組成物は、例えば、リポソームを液体賦形剤（例えば、水、生理食塩水、水性デキストロース、またはグリセロール）に分散させることにより調製され得る。リポソーム懸濁液は、貯蔵時の遊離ラジカルおよび脂質過酸化によるダメージに対して脂質を保護するための脂質保護剤を含み得る。αトコフェロールのような親油性遊離ラジカル失活剤、およびフェリオキシアミンのような水溶性鉄特異的キレート剤が使用され得る。本発明のポリマー化脂質組成物の利点の１つは、貯蔵に際して蓄積する多くの通常の分解効果に対して安定である。本組成物はまた、必要に応じて他の医薬品、薬学的試薬、およびキャリアを含み得る。注入用組成物は、液体溶液もしくは懸濁液として、または注入前に液体に溶解または懸濁されるに適した固体形態として供給され得る。気管または気管支上皮への投与について、好ましい組成物は、適切なエアロゾル化装置を用いて使用される場合に固体または液体エアロゾルのいずれかを提供する組成物である。必要ではないが、薬学的組成物はいくつかの場合において、正確な量の投与のために適切な単位用量形態で供給される。薬学的組成物の投与経路は、とりわけ意図される標的部位、臨床的症状、および処置される症状の性質に依存する。静脈内もしくはリンパ内投与または発症部位への直接注入が、最も通常の経路である。エアロゾルによる肺投与が噴霧器を用いて行われる。エアロゾルを形成するための装置および方法はKirk-Othmer，「Encyclopedia of Chemical Technology」第４版、第１巻、Wiley NY，670-685 頁、1991において記載される。用量のサイズは、意図される作用部位に到達する前の組成物の分布の予測される量を考慮し、次いで適切な細胞バイオアッセイにおいて測定されるIC₅₀濃度を満たすまたはこれを越える（代表的には約２〜20倍IC₅₀濃度）のに十分なインヒビター（nMの糖等価物において）を提供して選択される。用量を計画する際、全てのセレクチンレセプターを完全にブロックする必要がなくても良い。通常の治癒の場合、少なくともいくつかの白血球が患部に移動することが必要であり得る。インヒビターの量は、それに合うように調節される。個々の患者に対する臨床的特徴の評価および適切な治療的措置の設計は、最終的には処方する医者の責任である。上記記載は、とりわけ、どのようにしてポリマー化脂質組成物がセレクチン結合により媒介される細胞事象を阻害するために用いられるかの詳細な説明を提供する。本発明の趣旨から離脱することなく、組成物の構造またはその実行に関して改変がなされ得ることが理解される。前出および後出の両方の、本明細書中で言及される全ての特許、特許出願、論文および出版物は、その全体が本明細書中に参照として援用される。以下に提示される実施例は、当業者へのさらなる指針として提供され、いかなる方法によっても制限されることを意味しない。実施例実施例１：二成分糖リポソームの開発糖リポソームを、ポリマー化可能な脂質に炭水化物成分を結合し、極性頭部を有する第二のポリマー化可能な脂質と混合し、リポソームを形成させ、次いで脂質をポリマー化させることによって形成した。図３は、シアリルLewis^X（sLe^X）テトラサッカライド（構造１）をリポソームに組み立てられる成分と比較して示す。２a（sLe^Xアナログ）、３a（ラクトース）、および４a（マルトース）として標識した炭水化物を、ポリマー化可能な糖脂質を合成するために用いた。以下、それぞれ２b、３b、および４bと称する。前駆体のポリマー化可能な脂質は、10,12-ペンタコサジイノン酸（10,12-pentac osadiynoic acid）（PDA）であった。これを標準的な技術によって炭水化物に結合させた。リポソーム形成の間に使用した第二のポリマー化可能な脂質は、化合物５（PDA）（負に荷電した頭部を含む）または化合物６（極性であるが非荷電の頭部を含む）のいずれかであった。図１は、化合物２bおよび５(A)または２bおよび６(B)のいずれかを含む、ポリマー化糖リポソームの拡大図を示す。ポリマー化糖リポソームを、以下のように形成した：糖脂質の割合を0.5〜50％の範囲で変化させながら、総脂質において１mMの溶液になるように、種々のモル割合の脂質を調製した。糖脂質を、プローブ超音波処理法（R.R.C．New，33〜104頁、"Liposomes:a practical approach" ，Oxford U．Press 1990）によってリポソームに形成した。脂質は、Langmuir等温曲線の分析（G.L．Gaines,"Insoluble monolayers at liquid-gas interfaces "，Wiley:NY 1966）に基けば混和可能であるようであった。リポソームのポリマー化を、254nmの紫外光にこの水溶液を曝露することによって行った（Hubら、Angew．Chem．Int．Ed．Engl．19:938，1980;Spevakら、J ．Amer．Chem．Soc．115:1146，1993）。脂質ジアセチレンのポリマー化には、固体類似状態（solid analogus state）をとるために、モノマーが必要である。本明細書に報告される炭水化物の割合は、リポソーム表面の内側および外側の両方に現れる糖鎖の推定量である。糖脂質成分の割合が約40％を超えると、ポリマー化は実質的に阻害された。これは、近位のジアセチレンがポリマー化することを妨げる、隣接する炭水化物頭部の立体的密集によって合理的に説明される。透過型電子顕微鏡観察（TEM）によるポリマー化糖リポソームの特徴付けは、その調製物が直径20〜100nmの間の球体からなることを示した。実施例２：セレクチン阻害活性についてのバイオアッセイ実施例１で調製した組成物がセレクチン結合を阻害する能力を、標準的なバイオアッセイにおいて試験した。HL-60細胞に対するP-セレクチン結合を測定するアッセイを、Brandleyらの記載から得た（Glycobiol．3:633，1993）。簡単に述べれば、P-セレクチンキメラを、ビオチン化ヤギF(ab')抗ヒトIgGFcおよびアルカリホスファターゼストレプトアビジンと複合体を形成させ、そしてインヒビターとともに予めインキュベートした後、HL-60細胞と混合する。細胞を遠心分離によってペレット化し、そしてTBSで洗浄した。色原体（chromagen）を添加し、そして発色した色を405nmのODとして読んだ。全てのアッセイを４連で行った。図４は、５％の炭水化物結合脂質を含む種々のポリマー化糖リポソーム調製物についての阻害滴定曲線を示す。白三角：sLe^Xアナログ結合体＋酸性脂質。白丸：sLe^Xアナログ結合体＋中性脂質。黒丸：ラクトース結合体＋酸性脂質。四角：マルトース結合体＋酸性脂質。試験したもののうちで最も効果的な炭水化物結合体（sLe^Xアナログ）が用いられる場合でさえ、酸性脂質の存在が測定可能な阻害に重要であるということがこのアッセイの結果から明白である。中性ジサッカライドである、ラクトースおよびマルトースもまた、酸性脂質と平行して用いる場合、セレクチン阻害活性を有する。サッカライドおよび負に荷電した脂質を有する全ての組成物は、用量依存様式でP-セレクチン結合を阻害した。図５は、種々のポリマー化糖脂質組成物についての50％阻害濃度（IC₅₀）を示す。IC₅₀値は、糖脂質の全濃度に基づく。リポソームの内部層への取り込みに起因して接近不可能であり得るいずれのグリコシドについても減少しなかった。従って、これらのIC₅₀値は、結合に利用可能な実際のグリコシドの上限を示す。図５の左パネルは、組成物中の全脂質に対する炭水化物脂質の至適比率の滴定分析である。この実験は、sLe^Xアナログ脂質結合体を用いて行われた。組成物のバランスは炭酸頭部を有する脂質であった。至適比率は約５％であるが、少なくとも50％までの組成物は阻害活性を含み、そして約20％までの組成物はnM範囲で阻害活性を有することが明らかである。高割合での阻害活性の減少は、これらの組成物をポリマー化することの困難さの増大と相関し、これは炭水化物による立体障害に起因する。５％組成物についての２nM IC₅₀は、sLe^Xモノマーについてのこのアッセイにおいて得られる値と約１〜５×10⁶ほど異なる。図５の右パネルは、異なる炭水化物構成要素を有する種々の組成物についての IC₅₀の比較である。ラクトースおよびマルトースの両方は、酸性脂質に提供される場合、有意な阻害活性を提供する（それぞれ、15nMおよび200nM）。特に、ラクトースの値は、sLe^X組成物の値に好ましく匹敵する。最後の２つの棒は、酸性または中性脂質単独で作製されたポリマー化リポソームによる検出可能な阻害の欠損を示す。従って、適切な炭水化物および別の負に荷電した脂質の両方が、セレクチン阻害活性を提供するために、これらの調製物に必要とされる。後から考えてみると、本発明者らは、他の阻害化合物（例えば、特定の型のヘパリン、イノシトールヘキサキスリン酸、スルホグルカロニル糖脂質（sulphogluconyl glycolipid）、フコイダン（fucoidan）、スルファチド、およびsLe^X-RGD結合体）の結合は、炭水化物または炭水化物様分子と別々に配置された複数の酸性基との組合せとして説明され得ることを推測する。細胞へのリポソームの挿入の可能性（これにより、P-セレクチンに結合する能力を生じる）にもまた取り組んだ。細胞をリポソームで前処理し、そして洗浄し、P-セレクチンキメラの添加前にリポソームを除去した。これは、細胞へのセレクチンの結合に、全く減少を生じなかった。阻害は、試薬およびインヒビターをマイクロタイタープレートに同時に添加する実験において、影響されなかった。比較のために、このアッセイにおいてIC₅₀に達するに必要とされる、モノマーとして与えられるsLe^XまたはsLe^Xアナログのレベルは、約１〜５mmである。ポリマー化リポソームへの取り込みによって与えられる相対的な改良は、約10⁶倍である。実施例３：負に荷電した脂質の必要性のさらなる確認さらなるポリマー化糖リポソーム組成物を、別のアッセイ系において試験するために調製した。アッセイはELISAであり、ここで、ポリマー化リポソームが、単離されたGlyCA M-1に対するセレクチンキメラの結合を阻害する能力について試験される。完全な説明は、Bertozziら（Biochemistry 34:14275，1995）に提供される。簡単に述べれば、GlyCAM-1の粗調製物を、２：１クロロホルム／メタノール抽出、水相の回収、および濃縮によってマウス血清から得る。このムチンは、このアッセイにおいて、３つのセレクチンのうち任意のもののリガンドとして作用する。マイクロタイタープレートを、ムチンのペプチド骨格に特異的なポリクローナル抗体でコートし、ムチンを重層し、次いで洗浄する。一方では、化合物は、a）ヒトI gG重鎖のFc領域に融合したそれぞれのセレクチンのキメラ；b）ビオチン化F(ab' )₂抗Fc；c）ストレプトアビジン-アルカリホスファターゼ結合体の間で形成される。この溶液（70μl）を70μlのインヒビターと合わせ、30分間インキュベートする。次いで、マイクロタイタープレートのウェルに移動させる。室温で30分後にウェルを洗浄し、そして酵素基質p-ニトロフェニルホスフェートで発色させる。図６は、試験のために調製したポリマー化リポソームを示す。５つの異なる群を調製し、これらはオリゴサッカライド（群１）を有さないか、または５％のモル濃度比で脂質に結合した、４つの異なるオリゴサッカライドのうちの１つを有するかのいずれかであった（群２〜５）。各群の内、オリゴサッカライドと結合していない脂質の置換基（「Ｘ」として図に示す）は、以下のように様々であった：・中性pHで正の電荷を有するアミン・中性だが電気陰性である水酸基・中性pHで負の電荷を有するカルボン酸；または・５％または50％の脂質を含む、オキシ酸であるスルフェートとの混合物であって、そのバランスはヒドロキシル頭部を有する脂質である。これらの組成物は、セレクチン阻害活性アッセイにおいて以下の結果を与えた； IC₅₀値は、群１を除き、全てリポソームに結合した炭水化物の全量に基づく。群Iでは、IC₅₀値は、マトリクス頭部の全量から計算する。結果は、以下の結論を支持する。第１に、硫酸化炭水化物スルホLe^Xアナログは、酸性または極性脂質（しかし正に荷電した脂質ではない）の状況において、 L-、E-、またはP-セレクチンについて非常に低いIC₅₀（高い阻害能力）を有する。サッカライドが非硫酸化sLe^Xアナログである場合、隣接する酸性脂質が完全な阻害活性のために必要とされ、これはL-およびP-セレクチンに関して選択性である。硫酸脂質は、50％の相対比率でさえ、カルボン酸脂質より良好にsLe^X結合を支持する。上記の実施例のように、酸性脂質の存在は、ラクトースおよびマルトースの様な無効な中性ジサッカライドを有効なインヒビターに変化させる。この効果は、L-およびP-セレクチンについてのみ生じた。なぜなら、いずれの中性ジサッカライド組成物もE-セレクチン結合を阻害しなかったからである。L-およびP-セレクチンの結合に対して寄与する酸性基の効果は、脂質酸性基が、スルホチロシンまたは生物学的リガンドにおける等価物によって提供されるものと等価なセレクチン結合要件を満たすという作業仮説と一致する。単純なプレート結合アッセイと組合せられたこの混合構築物アプローチは、異なるセレクチン-リガンド対の結合を選択的に阻害し得る炭水化物と酸性基との組合せを同定する迅速な方法を提供する。実施例４：細胞活性アッセイは糖リポソームの生物学的効力を確認する５％のスルホLe^Xアナログおよび95％のヒドロキシル末端化脂質を含む糖リポソームを、フロー接着アッセイ（Alonら、Nature 374:539，1995）において試験した。簡単に述べれば、P-セレクチンキメラを、フローチャンバーに固定し、そしてこの基質についてのHL-60細胞の親和性を、表面上に沿ってゆっくり回転するこれらの能力について明らかにする。この相互作用は、HL-60細胞上のPSGL-1 ムチンドメイン、および静止条件下でなく生理学的フロー条件下で細胞接着をブロックするインヒビターの能力に特異的である。１μMの糖脂質濃度で、この糖リポソーム製剤は、P-セレクチン表面上でのHL-60細胞の回転を完全に阻害し得た。コントロールリポソーム（炭水化物を含有しない）は、効果を有さなかった。同様のリポソーム製剤を、Stamper-Woodruffリンパ球ホーミングアッセイ（st amperら、J．Exp．Med．144:828，1976）において試験した。このアッセイは、L -セレクチンによって媒介されることが知られているプロセスである、高内皮細静脈（HEV）を通ってリンパ節に帰巣するリンパ球の能力を測定する。胸管リンパ球（TDC）を、リポソームの存在下でHEVの固定切片上で計数した。５％の糖リポソームは、１μMの濃度で、TDCがHEVに結合するのを完全に阻害した。コントロールのリポソームは効果を有さなかった。実施例５：他のサッカライド成分ポリマー化リポソームの炭水化物成分のさらなる精製を、いくつかの先行技術に沿って行う。ある実験系において、プロトタイプのオリゴサッカライドsLe^XおよびスルホLe^X を、種々の置換基について分析し、独立した組成物において試験する。図７は、目的のいくつかのモノサッカライドおよびジサッカライドの脂質結合体を示す。目的の他のサッカライドは、ラクトサミン、３’シアリルラクトサミン、および３’シアリルラクトースである。活性な亜成分サッカライドの同定は、２つの目的を有する。１つの目的は、各セレクチンに対する結合要件をさらに明らかにすることであり、次いで、増強された結合またはセレクチン特異性を有する安価なアナログ構造を開発するために用いられ得る。別の目的は、以下に説明されるように、混合したサッカライドリポソームにおいて使用し得るモノサッカライドおよびジサッカライドを同定することである。別の実験系において、モノマーのようなプロトタイプに等しいかまたはより良好な活性を有すると考えられている他のオリゴサッカライドを、リポソーム組成物において試験し、活性がさらに増強され得るかどうかを決定する。目的の結合体を図８に示す。目的の他の結合体は、種々のsLe^Xアナログおよび本開示中の他に列挙される他の構造である。結合体を、上記の実施例と同様に形成する：過アセチル化β-NAc-アリルグリコシドを形成し、U.V.光の下でシスタミンハイドロクロライドと結合させ、次いで、PDAの活性化酸と直接カップリングさせた。混合したサッカライドリポソームは、組成物中に異なる脂質に結合した異なるサッカライドを有する。異なるサッカライドは、ポリマー化脂質シートにおけるアニオン性結合要件を満たす他の脂質において提供される場合、セレクチン結合の炭水化物要求性を供給することと共同して作用し得ることが提案される。シアリル酸とフコースの組合せは特に興味深い。なぜなら、これらは、セレクチン結合を担う、sLe^X中の残基であると考えられているからである。シアリル酸結合体を、Spevakら、J．Amer．Chem．Soc．（1993）115，1146に記載の標準的な方法によって調製する。フコース結合体を以下のように調製する。まず、過ベンゾイル化した、フコースの塩化グリコシルを、トリメチルアリルシランおよびトリメチルシリルトリフラートによってC-アリル化し（Hosomiら、 Tetrahedron Lett．2383，1984）、C-グリコシドを生じる。この化合物をナトリウム／アンモニアによって脱保護化する。フコースの過ベンゾイル化C-グリコシドをt-ブタノールに溶解させ、湿気から保護された還流中の無水アンモニアに添加する。次いで、固体ナトリウム金属を、青色が少なくとも20分間持続するまで添加する。次いで、反応を塩化アンモニウムでクエンチし、アンモニアをエバポレートする。固体残渣を水に溶解し、濃HClでおよそpH2にし、そして酢酸エチルで数回抽出する。合わせた有機溶液を、硫酸マグネシウムで乾燥させ、そして濾過する。エバポレーション後、C-グリコシド産物をフラッシュクロマトグラフィーによって精製する。このC-グリコシドを脱気水中にシスタミン-ハイドロクロライド(３eq.)とともに溶解させ、１モルの糖溶液を生じる。この溶液を定常的な一面の窒素下で維持し、UV光（254nm）で照射する。12時間後、この溶液を固体の重炭酸ナトリウムで中和し、濃縮し、そしてフラッシュクロマトグラフィーにかけ、アミンを得る。これを最小量のメタノールに溶解させ、NHS-PDAのこの溶液（1.2eq.）に添加し、そして12時間撹拌する。この反応物をクロロホルムで希釈し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄し、次いで硫酸マグネシウムで乾燥させ、そして濾過する。エバポレーション後、粗製糖脂質残渣をフラッシュクロマトグラフィーによって精製する。シアリル酸結合体およびフコース結合体を１：１の比で混合し、次いで全脂質のモル％として５〜10％の糖結合体のPDAと合わせる。ベシクル形成および脂質ポリマー化は正常に進行し、図９に示す表面構造を有する混合糖リポソームを形成する。この実施例に記載のポリマー化脂質組成物を、実施例３に記載のアッセイによって試験する。実施例６：動物モデルにおける治療試験セレクチン結合アッセイにおいて良好な阻害活性を有するポリマー化リポソーム組成物を、疾患モデルにおけるそれらの効力についてさらに試験する。全ての試行を、適切なAnimal Use Committeeの承認に基づいて行う。心筋虚血および再灌流傷害を、Weyrichら（J．Clin．Invest．91:2620，1993 ）、Muroharaら（Cardiovascular Res．30:965，1995）、およびMaら（Circulat ion 88:649，1993）と同様のプロトコルに従ってモデル化する。簡単に述べれば、高等種の成体哺乳動物（代表的には、イヌ、ネコ、またはヒツジ）を麻酔し、そして胸骨体開胸術を実施する。絹の結紮糸を起点から８〜10mmの左前下行冠状動脈の周りに結ぶ。EKGおよびMABPを継続してモニターする。動物を安定化し、次いで心筋虚血（MI）を、結紮糸を締めることによって誘導し、閉塞を完成する。試験治療薬を、80分後にボーラスで静脈内に与える。90分の時点で結紮糸をほどき、そして心筋に270分間灌流させる。結紮糸を再び締め、そして危険領域（aria）を、Evansブルーを注射することによって同定する。切開後、心臓の不可逆的に損傷した部分を、解剖および0.1 ％のニトロブルーテトラゾリウムを用いる染色により同定し、そしてその器官の質量の割合として計算する。影響した領域の割合を、成功した処置に基づいて減少させる。Mullaneら（J．Pharmacol．Meth．14:157，1985）に従って決定した、虚血心筋におけるミエロペルオキシダーゼ活性もまた、好ましく減少させる。虚血再灌流冠状動脈内皮もまた、単離した自己PMNの接着性について測定され得、そして処置した動物において好ましく減少させる。動物を３つの群において試験する：MI誘導しインヒビター処置した群；MI誘導しコントロール処置した群；および偽MI群（手術するが血管閉塞はしない）。上記の研究で処置した動物は、リン酸脂質リポソームとして提供された400μg /kgのsLe^X、または１mg/kgの抗L-セレクチンモノクローナル抗体DREG-200に応答した。本実験において、ポリマー化リポソームを、１kg体重あたり約10〜400μg の範囲の炭水化物当量において試験する。100％中性脂質から作製される同数のポリマー化リポソームを、ビヒクルコントロールとして等しい用量（リポソームあたりで）で与える。他の型の急性心臓炎症事象（例えば、心筋炎、再狭窄、および深静脈血栓症）によって誘導される壊死が、同様の機構によって媒介される限りは、心臓再灌流モデルにおいて確立された有効量はまた、これらの状態についても考慮され得る。肺再灌流傷害を、Steinbergら（J．Heart Lung Transplant 13:306，1994）およびKapelanskiら（J．Heart Lung Transplant 12:294，1993）と同様のプロトコルに従ってモデル化する。簡単に述べれば、全身麻酔を誘導し、そして左の肺を隣接する助骨、助間筋、および神経血管組織の切除によって曝露させる。30分間の回復期間の後、200mm Hg以上の動脈内酸素圧および45mg Hg以下の二酸化炭素圧を有する動物を選択して継続する。全身性ヘパリン化の後、左肺の虚血を、左主肺動脈の閉塞によって開始する。虚血の期間は約３時間であり、その後すぐに肺を通気し、そして再灌流させる。再灌流の10分前に、動物は、試験治療化合物のボーラスな静脈内注入を受ける。再灌流開始の10分後に、右肺動脈を結紮し、そして気管内チューブの先端を、気管気管支開口部を越えて進め、そして右主気管支を呼気終末時にクランプする。生理学的パラメーターを、６時間記録する。動物を、生存データおよび以下のうちのいくつかに基づいて比較する：肺活量（gravimetric lung water）、酸素および二酸化炭素の分圧、不活性ガスシャント、肺血管抵抗、ならびに循環WBC、好中球、およびリンパ球数。模擬動物は手術するが、肺動脈は結紮しない−両方の肺を３時間通気し、次いで試験動物と同様に準備する。上記の最初の研究おいて、虚血性動物は１mg/kgの、L-およびE-セレクチンに特異的なモノクローナル抗体EL-246に応答した。本実験において、ポリマー化リポソームを、体重１kgあたり約10〜400μgの範囲の炭水化物等量において試験する。100％中性脂質から作製された、同数のポリマー化リポソームを、ビヒクルコントロールとして等用量（リポソームあたり）で与える。出血性ショックによって誘導される肺血管傷害は、Kushimotoら（Thrombosis Res．82:97，1996）と同様のプロトコルに従ってモデル化する。簡単に述べれば、成体ラットをペントバルビタールで麻酔し、右頸動脈に、血圧をモニターするためにカニューレを挿入し、そして左大腿動脈に、採血および液の投与用にカニューレを挿入する。シリンジポンプを用いて15分間にわたって25mL血液／kgを徐々に引き抜くことによって放血を誘導する。平均動脈圧を約30〜40mm Hgの間に30分間維持し、次いでラットを、75mL/kgの乳酸化Ringer溶液を30分間にわたって注入して蘇生させる。生理学的体温を、この手順の間、熱ランプを用いて維持した。模擬動物に、同じ様式でカニューレを挿入するが、放血しない。白血球の肺蓄積（ミエロペルオキシダーゼ活性として測定）およびウシ血清アルブミン（BSA）に対する肺血管透過性は、６時間でピークになる。出血性ショックは回復可能である。なぜなら、最初の６時間生存し、そして開腹させた動物は、少なくともさらに５日間生存するからである。大腿動脈カニューレを通して、危険期間（液体蘇生後0.2および４時間）にわたって一定の間隔で試験化合物をボーラスで投与することによって治療化合物を、試験する。¹²⁵I BSAを、６時間の時点での屠殺の30分前に注射する。正中線開腹を行い、血液を腹部大動脈から引き抜き、そして肺血管構造を右心室穿刺を介して生理食塩水で灌流する。肺血管透過性を肺対血漿におけるcpm比として計算し、そしてこれは肺血管損傷の指標である。肺サンプルをホモジナイズし、そしてWarrenら（J．Clin．Invest．84:1873，1989）に従って、肺の好中球の数の指標として、ミエロペルオキシダーゼ活性についてアッセイする。ビヒクルコントロールと比較した、試験組成物によるミエロペルオキシダーゼ活性および／または透過性の減少は、効力の指標である。上記の研究において、出血動物は、1mg/kgのモノクローナル抗体PB1.3に応答した。本実験において、ポリマー化リポソームを１投与につき１kg体重あたり約 10〜400μgの範囲の炭水化物当量において試験する。腫瘍転移を、PCT出願WO96/34609に記載のものとと同様のプロトコルに従ってモデル化する。このモデルは、B16黒色腫細胞株の高転移性BL6クローン（Dr．Je an Starkey，Montana Stane U.，Bozeman MT）、または摘出した黒色腫または悪性腫瘍から標準的な技術によって樹立およびクローン化された同様の株に基づく。転移細胞の懸濁物を懸濁し、そして37℃で５〜10分間、種々の濃度の治療試験化合物、またはビヒクルコントロールとともにインキュベートする。インキュベーションに続いて、200μLの容量中の約２〜５×10⁴細胞を、８週齢の同系マウスの尾静脈に注射する。約３週間後、動物を屠殺する。肺および肝臓を摘出し、そして10％ホルムアルデヒドで固定し、そして腫瘍細胞コロニーを解剖顕微鏡下で計測する。１mmより大きい直径を有するコロニーを、より小さいコロニーとは別に計測する。ポジティブな結果は、コロニーの総数または大きなコロニーの割合の実質的な減少によって示される。ポリマー化リポソーム調製物を、細胞インキュベーション混合物中の５nM〜10μMの範囲の最終濃度の炭水化物当量において試験する。アレルギー性喘息を、PCT出願WO96/35418に記載のものと同様のプロトコルに従ってモデル化した。簡単に述べれば、成体ヒツジを、吸入したAscaris suum抗原に対する確立された早期および後期気管支応答を有することに基づいて選択する。動物を拘束し、そして鼻道をリドカイン（lidocane）で局所的に麻酔する。動物に、カフの付いた気管内チューブを、反対の外鼻孔を通じて、ガイドとしてフレキシブルな光ファイバー気管支鏡とともに挿管する。胸腔内圧を、食道バルーンカテーテルで推定する。側圧を、気管内チューブを介して前進させ、そしてその先端から遠位に位置する側孔カテーテル（内径2.5mm）で測定する。気管圧および胸腔内圧カテーテルを、経肺圧を測定するために差圧トランスデューサーに接続する。気流を、気管内チューブの近位末端を呼吸気流計に接続することによって測定する。肺流抵抗は、５呼吸にわたって平均した、（経肺圧の変化）／（呼吸量中期での流量の変化）として計算する。胸部ガス容量を、定容量体プレチスモグラフにおいて測定し、肺比抵抗（SR_L）を得る。試験治療懸濁物のエアロゾルを、ネブライザーを用いて発生させる。このネブライザーは、約３μmの空力学直径中央値を提供する。ネブライザーを、ソレノイドバルブおよび圧縮空気の供給源からなる線量計システムに接続する。ソレノイドバルブを、人工呼吸器の吸気サイクルの開始時に１秒間活性化する。エアロゾルを、500mLの換気容量で１分あたり20呼吸の速度で送達する。試験治療化合物を、ネブライザーを介して投与する。気管支の応答性を評価するために、累積濃度応答曲線を、緩衝液の吸入直後、およびカルバコールの漸増濃度（約0.25％〜約４％(wt/vol)の範囲）の連続10呼吸のそれぞれの直後に、SR_Lを測定することにより決定する。SR_Lが初期値の400％を超えるか、または最大用量に達すると、試験を中止する。気管支の応答性を、SR_Lが400％に達する点を決定することにより評価する。ポリマー化リポソーム調製物を、エアロゾル溶液中の５nM〜10μ M の範囲の最終濃度の炭水化物当量において試験する。関節炎を、Zeidlerら（Autoimmunity 21:245，1995）のコラーゲンII型誘導関節炎モデルに従ってモデル化した。簡単に述べれば、年齢が適合したDBA/1マウスの群を、完全Freundアジュバント中で乳化した100μgのウシ軟骨由来のコラーゲンII型で皮内に免疫し、続いて18日後に不完全Freundアジュバント中の50μg で免疫する。試験治療組成物を、最初のコラーゲン注射後、およそ４週目からおよそ８週目まで毎週投与する。疾患を、紅斑および１箇所以上の関節の腫脹の視覚的徴候によって毎日評価する。自己免疫の免疫学的徴候を、標準的なイムノアッセイによって、コラーゲンII型、コラーゲンI型およびプロテオグリカンに対する血清抗体についてモニターする。自己抗体の力価の減少、または関節炎の視覚的徴候の出現の遅延が、効力の指標である。ポリマー化リポソームを、１kg体重あたり約10〜400μgの範囲の炭水化物当量において試験する。本実験において、ポリマー化リポソームを、１投与につき１kg体重あたり約10〜400μgの範囲の炭水化物当量、または同数のコントロールリポソームにおいて試験する。他の確立した動物モデルが、目的とするさらなる臨床的状態の処置についてのポリマー化リポソームの試験に手段を提供する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 29/00 １０１Ａ６１Ｐ 35/04 35/04 43/00 １１１ 43/00 １１１Ａ６１Ｋ 37/20 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者ダスグプタ，ファルグニインド国 110020，ニューデリー，オクハラインダストリアルエリア，エイ２フェイズ１，エヌディーディーアールランバキシーリサーチラボラトリー内 (72)発明者バートジー，キャロラインアメリカ合衆国カリフォルニア 94706, アルバニー，タルボットアベニュー 937 (72)発明者ナジー，ジョンオー. アメリカ合衆国カリフォルニア 94572, ロデオ，ボニータコート 120

Claims

【特許請求の範囲】１．ＰまたはＬセレクチンを有する第１の細胞と、該セレクチンについてのリガンドを有する第２の細胞との間の結合を阻害する方法であって、脂質組成物を該第１の細胞と相互作用させる工程を包含し；ここで、該脂質組成物は、脂質のシートを含み、ここで、該脂質の一部は共有的に架橋しており、該脂質の一部は結合したサッカライドを有しており、そして結合したサッカライドを有さない該脂質の一部は中性pHで負に荷電する酸性基を有する、方法。２．前記サッカライドがシアリル化フコオリゴサッカライドまたはそのアナログである、請求項１に記載の方法。３．前記サッカライドが硫酸化フコオリゴサッカライドである、請求項１に記載の方法。４．前記サッカライドが中性サッカライドである、請求項１に記載の方法。５．前記サッカライドが、ラクトースおよびマルトースからなる群より選択される、請求項４に記載の方法。６．前記サッカライドがジサッカライドである、請求項１に記載の方法。７．前記サッカライドが、ラクトースおよびマルトースからなる群より選択される、請求項６に記載の方法。８．結合したサッカライドを有する前記脂質の一部が、前記シートにおいて他の脂質と共有的に架橋している、請求項１に記載の方法。９．結合したサッカライドを有する脂質の一部が、前記シートにおいて他の脂質と共有的に架橋していない、請求項１に記載の方法。１０．前記脂質シートにおける前記脂質の一部が第１の結合したサッカライドを有し、そして該脂質シートにおける該脂質の異なる一部が、第１とは異なる第２の結合したサッカライドを有する、請求項１に記載の方法。１１．前記第１の結合したサッカライドがフコースであり、そして前記第２の結合したサッカライドが硫酸化モノサッカライドまたは酸性のモノサッカライドである、請求項１０に記載の方法。１２．前記酸性基がカルボン酸である、請求項１に記載の方法。１３．前記酸性基が負に荷電した硫酸基またはリン酸基である、請求項１に記載の方法。１４．前記脂質シートがリポソームの脂質二重層において構成される、請求項１に記載の方法。１５．前記脂質が、各々、単一の脂肪族炭化水素を含む、請求項１に記載の方法。１６．前記組成物が、前記セレクチンへの前記リガンドの結合を阻害する、請求項１に記載の方法。１７．前記組成物が、モノマーsLe^Xの50％阻害濃度（IC₅₀）よりも10²倍低い50 ％阻害濃度を有する、請求項１〜１６のいずれかに記載の方法。１８．前記組成物が、モノマーsLe^Xの50％阻害濃度（IC₅₀）よりも10⁴倍低い50 ％阻害濃度を有する、請求項１〜１７のいずれかに記載の方法。１９．前記組成物が、セレクチン対細胞結合アッセイにおいて100nM未満のIC₅₀ を有する、請求項１〜１８のいずれかに記載の方法。２０．前記セレクチンがＰセレクチンである、請求項１〜１９のいずれかに記載の方法。２１．前記セレクチンがＬセレクチンである、請求項１〜２０のいずれかに記載の方法。２２．白血球の付着または移動を阻害する方法であって、請求項１〜１７のいずれかに記載の方法により結合を阻害する工程を包含し、ここで、前記第１の細胞は、血管内皮細胞であり、前記セレクチンはＰセレクチンであり、そして前記第２の細胞は、好中球、単球、好酸球、およびメモリーＴリンパ球からなる群より選択される白血球である、方法。２３．白血球の粘着性またはフィブリン沈着を阻害するための方法であって、請求項１〜１７のいずれかに記載の方法によって結合を阻害する工程を包含し、ここで、前記第１の細胞は血小板であり、そして前記セレクチンはＰセレクチンである、方法。２４．白血球の付着または移動を阻害する方法であって、請求項１〜１７のいずれかに記載の方法によって結合を阻害する工程を包含し、ここで、前記第１の細胞は、リンパ球、好中球、および単球からなる群より選択される白血球であり、前記セレクチンはＬセレクチンであり、そして前記第２の細胞は、血管内皮細胞またはリンパ細胞である、方法。２５．リンパ球の付着、移動、または活性化を阻害する方法であって、請求項１〜１７のいずれかに記載の方法によって結合を阻害する工程を包含し、ここで、前記第１の細胞はリンパ球であり、そして前記セレクチンはＬセレクチンである、方法。２６．前記環境が、微小血管系またはリンパ組織である、請求項１〜２５のいずれかに記載の方法。２７．ＰまたはＬセレクチンと、該セレクチンについてのリガンドとの間の結合を阻害する方法であって、該セレクチンが該リガンドと接触する環境において脂質組成物を該セレクチンと相互作用させる工程を包含し；ここで、該脂質組成物は脂質のシートを含み、該脂質の一部は共有的に架橋し、該脂質の一部は結合したサッカライドを有し、そして結合したサッカライドを有さない該脂質の一部は中性pHで負に荷電した酸性基を有する、方法。２８．セレクチン結合活性を有するポリマー化糖リポソームを選択する方法であって、以下の工程：共有的に架橋した脂質を有する糖リポソーム、および該共有的に架橋した脂質の一部に結合したサッカライドを提供する工程；該糖リポソームを、セレクチンおよびセレクチンリガンドを有する細胞を含む環境に導入する工程；および IC₅₀がモノマーsLe^xのIC₅₀よりも10²倍低い場合、該糖リポソームを選択する工程、を包含する、方法。２９．血管内皮、血小板、またはリンパ組織への白血球またはガン細胞の粘着性における局所的変更により特徴付けられる疾患を処置する際に使用するための医薬品の製造における、ポリマー化脂質組成物の使用であって；ここで、該ポリマー化脂質組成物は、脂質のシートを含み、ここで、該脂質の一部は共有的に架橋しており、該脂質の一部は結合したサッカライドを有し、そして結合したサッカライドを有さない該脂質の一部は、中性pHで負に荷電する酸性基を有する、使用。３０．前記疾患が炎症性病因を有する、請求項２９に記載のポリマー化脂質組成物の使用。３１．前記疾患が免疫学的病因を有する、請求項２９に記載のポリマー化脂質組成物の使用。３２．前記疾患が、心臓病、出血性ショック、関節炎、喘息、および転移性ガンからなる群より選択される、請求項２９に記載のポリマー化脂質組成物の使用。３３．前記疾患が、虚血再灌流傷害、心筋梗塞、心筋炎、再狭窄、および深部静脈血栓からなる群より選択される心臓病である、請求項３２に記載のポリマー化脂質組成物の使用。３４．前記疾患が、虚血再灌流傷害または心筋梗塞である、請求項３３に記載のポリマー化脂質組成物の使用。３５．前記疾患が、出血性ショックである、請求項３２に記載のポリマー化脂質組成物の使用。３６．前記疾患が、慢性関節リウマチである、請求項３２に記載のポリマー化脂質組成物の使用。３７．前記疾患が喘息である、請求項３２に記載のポリマー化脂質組成物の使用。３８．前記疾患が転移性ガンである、請求項３２に記載のポリマー化脂質組成物の使用。