JP2001514191A - 癌の治療方法 - Google Patents

癌の治療方法

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Abstract

(57)【要約】 本発明は、Ｈ−ＲａｓおよびＫ４Ｂ−Ｒａｓタンパクの細胞プロセッシングの阻害剤であるプレニルタンパクトランスフェラーゼ阻害剤を哺乳動物に投与することを含んでなる、プレニルタンパクトランスフェラーゼを阻害し、癌を治療する方法を提供する。本発明は、特に、これらのプレニルタンパクトランスフェラーゼの両方の二重阻害剤である化合物を投与することにより、プレニルタンパクトランスフェラーゼおよびゲラニルゲラニルタンパクトランスフェラーゼＩ型を阻害する方法を提供する。本発明は、読み取りがＲａｓ−タンパクの生物学的活性またはその活性の阻害の結果であり、それによりＨ−ＲａｓおよびＫ４Ｂ−Ｒａｓタンパクの細胞プロセッシングを阻害する化合物の都合の良い特定を提供する、そのような化合物を特定する方法も提供する。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 （技術分野） 本発明は、Ｈ−ＲａｓタンパクおよびＫ４Ｂ−Ｒａｓタンパクの両方の細胞プ
ロセッシングを阻害するプレニルタンパクトランスフェラーゼを利用するプレニ
ルタンパクトランスフェラーゼを阻害する方法および癌を治療する方法に関する
。本発明はそのような化合物を特定する方法にも関する。
【０００２】 （背景技術） イソプレノイド生合成経路の中間体によるタンパクのプレニル化は１群の翻訳
後修飾を表す（Ｇｌｏｍｓｅｔ，Ｊ．Ａ．、Ｇｅｌｂ，Ｍ．Ｈ．およびＦａｒｎ
ｓｗｏｒｔｈ，Ｃ．Ｃ．（１９９０年）著、Ｔｒｅｎｄｓ Ｂｉｏｃｈｅｍ．
Ｓｃｉ．，第１５巻，１３９〜１４２頁；Ｍａｌｔｅｓｅ，Ｗ．Ａ．（１９９０
年）著、ＦＡＳＥＢ Ｊ．４，３３１９〜３３２８頁）。この修飾は、典型的に
、これらのタンパクの膜局在化および機能のために必要である。プレニル化タン
パクは、ＣＡＡＸ（Ｃ，Ｃｙｓ；Ａ，脂肪族アミノ酸；Ｘ，もう１つのアミノ酸
）、ＸＸＣＣまたはＸＣＸＣを含む特徴的Ｃ−末端配列を共有する。Ｃ−末端Ｃ
ＡＡＸ配列を有するタンパクについて３つの翻訳後プロセッシング工程が記載さ
れている：Ｃｙｓ残基への１５炭素（ファルネシル）または２０炭素（ゲラニル
ゲラニル）イソプレノイドの付加、最終３アミノ酸のタンパク分解的分割、およ
び新しいＣ−末端カルボキシレートのメチル化（Ｃｏｘ、Ａ．Ｄ．およびＤｅｒ
、Ｃ．Ｊ．（１９９２ａ）著、Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖ．Ｏｎｃｏｇｅｎｅｓ
ｉｓ第３巻：３６５〜４００頁；Ｎｅｗｍａｎ，Ｃ．Ｍ．Ｈ．およびＭａｇｅｅ
，Ａ．Ｉ．（１９９３年）著，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ第１
１５５巻：７９〜９６頁）。一部のタンパクは、第４の修飾を有してもよい：１
または２つのＣｙｓ残基Ｎ−末端のファルネシル化Ｃｙｓへのパルミトイル化。
ＸＣＸＣを末端とする一部の哺乳動物細胞タンパクはカルボキシメチル化されて
いるが、ＸＸＣＣモチーフを末端とするタンパクのプレニル化に続いてカルボキ
シメチル化が起こるかどうか明らかでない（Ｃｌａｒｋｅ，Ｓ．（１９９２年）
著、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．第６１巻：３５５〜３８６頁）。プレ
ニル化タンパクの全てについて、イソプレノイドの付加は第１工程であり、次の
工程のために必要である（Ｃｏｘ、Ａ．Ｄ．およびＤｅｒ、Ｃ．Ｊ．（１９９２
ａ）著、Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖ． Ｏｎｃｏｇｅｎｅｓｉｓ 第３巻：３６
５〜４００頁；Ｃｏｘ，Ａ．Ｄ．およびＤｅｒ、Ｃ．Ｊ．（１９９２ｂ）著、Ｃ
ｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．第４巻：１００８〜１０
１６頁）。
【０００３】 タンパクのプレニル化を触媒する３つの酵素が記載されている：ファルネシル
タンパクトランスフェラーゼ（ＦＰＴａｓｅ）、ゲラニルゲラニルタンパクトラ
ンスフェラーゼＩ型（ＧＧＰＴａｓｅ−Ｉ）およびゲラニルゲラニルタンパクト
ランスフェラーゼＩＩ型（ＧＧＰＴａｓｅ−ＩＩ、Ｒａｂ ＧＧＰＴａｓｅとも
呼ばれる）。これらの酵素は、酵母および哺乳動物細胞の両方において見つかる
（Ｃｌａｒｋｅ，１９９２年；Ｓｃｈａｆｅｒ，Ｗ．Ｒ．およびＲｉｎｅ，Ｊ．
（１９９２年）著，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｇｅｎｅｔ．第３０巻：２０９〜２３７
頁）。これらの酵素の各々はファルネシル二リン酸またはゲラニルゲラニル二リ
ン酸を選択的にイソプレノイド供与体として使用し、タンパク基質を選択的に特
定する。ＦＰＴａｓｅは、Ｓｅｒ、Ｍｅｔ、Ｃｙｓ、ＧｌｎまたはＡｌａを末端
とするＣＡＡＸ含有タンパクをファルネシル化する。ＦＰＴａｓｅのために、Ｃ
ＡＡＸテトラペプチドは、タンパク基質と酵素との相互作用に必要な最少領域を
含む。これら３つの酵素を酵素学的に特徴付けることにより、１つのものを、他
のものに阻害効果を殆ど及ぼすことなく選択的に阻害し得ることが示された（Ｍ
ｏｏｒｅｓ，Ｓ．Ｌ．、Ｓｃｈａｂｅｒ，Ｍ．Ｄ．、Ｍｏｓｓｅｒ，Ｓ．Ｄ．、
Ｒａｎｄｓ，Ｅ．、Ｏ’Ｈａｒａ，Ｍ．Ｂ．、Ｇａｒｓｋｙ，Ｖ．Ｍ．、Ｍａｒ
ｓｈａｌｌ，Ｍ．Ｓ．、Ｐｏｍｐｌｉａｎｏ，Ｄ．Ｌ．およびＧｉｂｂｓ，Ｊ．
Ｂ．著、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、第２６６巻：１７４３８頁（１９９１年）
、米国特許第５，４７０，８３２号）。
【０００４】 プレニル化反応は、種々のタンパクの機能に遺伝学的に必須であることが示さ
れた（Ｃｌａｒｋｅ，１９９２年；ＣｏｘおよびＤｅｒ，１９９２ａ；Ｇｉｂｂ
ｓ，Ｊ．Ｂ．（１９９１年），ＣＥｌｌ；第６５巻：１頁〜４頁；Ｎｅｗｍａｎ
およびＭａｇｅｅ、１９９３年；ＳｃｈａｆｅｒおよびＲｉｎｅ，１９９２年）
。この必要性は、タンパクがもはやプレニル化され得ないようにＣＡＡＸ Ｃｙ
ｓ受容体を変異させることにより示されることが多い。得られたタンパクは、中
心的生物学的活性を欠く。これらの研究は、プレニル化されたタンパクにより調
節される生理学的反応をプレニル化阻害剤が変化させ得ることを示す遺伝学的「
原理の証拠」を提供する。
【０００５】 Ｒａｓタンパクは、細胞増殖を開始させる核シグナルに細胞表面成長因子受容
体を結合させるシグナル送信経路の一部である。Ｒａｓ作用の生物学的および生
化学的研究は、Ｒａｓ機能がＧ−調節タンパクに適することを示している。不活
性状態において、ＲａｓはＧＤＰに結合される。成長因子受容体の活性化時に、
Ｒａｓは、ＧＴＰをＧＤＰに置き換え立体構造を変えるように誘発される。ＧＴ
Ｐ結合したＲａｓは、Ｒａｓの固有ＧＴＰａｓｅ活性によりシグナルが停止され
タンパクがその不活性ＧＤＰ結合状態に戻されるまで、成長刺激シグナルを増殖
させる（Ｄ．Ｒ．ＬｏｗｙおよびＤ．Ｍ．Ｗｉｌｌｕｍｓｅｎ著、Ａｎｎ．Ｒｅ
ｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．第６２巻：８５１頁〜８９１頁（１９９３年））。Ｒａｓ
を活性化すると、ＭＡＰ Ｋｉｎａｓｅ経路およびＲｈｏ／Ｒａｃ経路を含む複
数の細胞内シグナルトランスダクション経路の活性化につながる（Ｊｏｎｅｓｏ
ｎら著、Ｓｃｉｅｎｃｅ第２７１巻：８１０頁〜８１２頁）。ＭＡＰキナーゼ経
路の活性化の１つの結果は、転写因子、例えばＥｌｋ−１の活性化、および特定
タンパクの転写である（Ｒ．Ｔｒｅｉｓｍａｎ，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏ
ｎ ｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ（１９９４年）
第４巻：９６〜１０１頁およびそこでの参照文献）。
【０００６】 変異したｒａｓ遺伝子は、結腸直腸癌、膵臓外分泌腺癌および骨髄性白血病を
含む多くのヒトの癌において見られる。これらの遺伝子のタンパク産物は、ＧＴ
Ｐａｓｅ活性が欠けており、成長刺激シグナルを本質的に伝達する。
【０００７】 Ｒａｓタンパクは、翻訳後修飾を行うことが知られている幾つかのタンパクの
１つである。ファルネシルタンパクトランスフェラーゼは、ファルネシルピロリ
ン酸を利用して、ファルネシル基でＲａｓＣＡＡＸボックスのＣｙｓチオール基
を共有結合的に修飾する（Ｒｅｉｓｓら著、Ｃｅｌｌ、第６２巻：８１頁〜８８
頁（１９９０年）；Ｓｃｈａｂｅｒら著、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、第２６５
巻：１４７０１頁〜１４７０４頁（１９９０年）；Ｓｃｈａｆｅｒら著、Ｓｃｉ
ｅｎｃｅ、第２４９巻：１１３３頁〜１１３９頁（１９９０年）；Ｍａｎｎｅら
著、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ ＵＳＡ、第８７巻：７５４１頁〜
７５４５頁（１９９０年））。
【０００８】 Ｒａｓは、正常機能と癌遺伝子機能の両方のために血漿膜に局在化しなければ
ならない。少なくとも３つの翻訳後修飾がＲａｓの膜局在化に関連し、３つの全
ての修飾はＲａｓのＣ−末端において生じる。ＲａｓＣ−末端は、「ＣＡＡＸ」
または「Ｃｙｓ−Ａｓｓ−Ａａａ―Ｘａａ」ボックスと呼ばれる配列モチーフを
含む（Ｗｉｌｌｕｍｓｅｎら著、Ｎａｔｕｒｅ第３１０巻：５８３頁〜５８６頁
（１９８４年））。このモチーフは、特定の配列に依存して、それぞれＣ１５ま
たはＣ２０イソプレノイドでのＣＡＡＸモチーフのシステイン残基のアルキル化
を触媒する酵素ファルネシルタンパクトランスフェラーゼまたはゲラニルゲラニ
ルタンパクトランスフェラーゼのためのシグナル配列として役立つ（Ｓ．Ｃｌａ
ｒｋｅ．、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．第６１巻：３５５頁〜３８６頁（
１９９２年））；Ｗ．Ｒ．ＳｃｈａｆｅｒおよびＪ．Ｒｉｎｅ、Ａｎｎ．Ｒｅｖ
．Ｇｅｎｅｔｉｃｓ第３０巻：２０９頁〜２３７頁（１９９２年））。
【０００９】 他のファルネシル化タンパクは、ＲｈｏＢ、真菌交配因子、核ラミン、および
トランスデューシンのγサブユニットのようなＲａｓ関連ＧＴＰ結合タンパクを
含む。Ｊａｍｅｓら著、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．第２６９巻：１４１８２頁（
１９９４年）は、同様にファルネシル化されているペルオキシソーム関連タンパ
クＰｘｆを確認した。Ｊａｍｅｓらは、先に列挙したものに加えて、未知の構造
および機能を有するファルネシル化タンパクがあることも示唆した。
【００１０】 ファルネシルタンパクトランスフェラーゼ（ＦＰＴａｓｅ）の阻害剤が、２つ
の一般的クラスにおいて記載されている。第１のクラスは、ファルネシル二リン
酸（ＦＰＰ）の類似体を含み、一方、第２のクラスは酵素のためのタンパク基質
（例えばＲａｓ）に関する。記載されたペプチド誘導阻害剤は、一般的に、タン
パクプレニル化のためのシグナルであるＣＡＡＸモチーフに関するシステイン含
有分子である（Ｓｃｈａｂｅｒら著、同書；Ｒｅｉｓｓら著、同書；Ｒｅｉｓｓ
ら著、ＰＮＡＳ、第８８巻：７３２頁〜７３６頁（１９９１年）。そのような阻
害剤は、タンパクプレニル化を阻害すると共にファルネシルタンパクトランスフ
ェラーゼ酵素のための別の基質として役立つ、または純粋に拮抗阻害剤であり得
る（米国特許５，１４１，８５１、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｔｅｘａｓ；
Ｎ．Ｅ．Ｋｏｈｌら著、Ｓｃｉｅｎｃｅ、第２６０巻：１９３４頁〜１９３７頁
（１９９３年）；Ｇｒａｈａｍら著、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、第３７巻：７２
５頁（１９９４年））。
【００１１】 哺乳動物細胞は４つのタイプのＲａｓタンパク（Ｈ−、Ｎ−、Ｋ４Ａ−および
Ｋ４Ｂ−Ｒａｓ）を発現し、そのうちＫ４Ｂ−Ｒａｓが、ヒトの癌におけるＲａ
ｓの最も頻繁に変異される形態である。これらのタンパクをコード化する遺伝子
は、それぞれ、Ｈ−ｒａｓ、Ｎ−ｒａｓ、Ｋ４Ａ−ｒａｓおよびＫ４Ｂ−Ｒａｓ
と省略される。Ｈ−ｒａｓは、Ｈａｒｖｅｙ−ｒａｓの略号である。Ｋ４Ａ−ｒ
ａｓおよびＫ４Ｂ−ｒａｓは、それぞれ４Ａおよび４Ｂエクソンを含むｒａｓの
Ｋｉｒｓｔｅｎスプライス変異種の略号である。ファルネシルタンパクトランス
フェラーゼの阻害は、軟寒天におけるＨ−ｒａｓ−形質転換細胞の成長を阻害し
、その形質転換表現型の他の局面を修飾することが示された。ファルネシルタン
パクトランスフェラーゼの特定の阻害剤が、Ｈ−ｒａｓ腫瘍性タンパクのプロセ
ッシングを細胞内で選択的に阻害することも示された（Ｎ．Ｅ．Ｋｏｈｌら著、
Ｓｃｉｅｎｃｅ、第２６０巻：１９３４頁〜１９３７頁（１９９３年）およびＧ
．Ｌ．Ｊａｍｅｓら著、Ｓｃｉｅｎｃｅ、第２６０巻：１９３７頁〜１９４２頁
（１９９３年））。近年、ファルネシルタンパクトランスフェラーゼの阻害剤が
ヌードマウスにおけるＨ−ｒａｓ−依存性腫瘍の成長を阻害し（Ｎ．Ｅ．Ｋｏｈ
ｌら著、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ Ｕ．Ｓ．Ａ．、第９１巻：９
１４１頁〜９１４５頁（１９９４年））、Ｈ−ｒａｓトランスジェニックマウス
において乳腺および唾液腺癌の退行を誘発する（Ｎ．Ｅ．Ｋｏｈｌら著、Ｎａｔ
ｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、第１巻：７９２頁〜７９７頁（１９９５年））こと
が示された。
【００１２】 生体内でのファルネシルタンパクトランスフェラーゼの間接阻害が、ロバスタ
チン（ニュージャージー州ローウェイ在Ｍｅｒｃｋ ＆ Ｃｏ．製）およびコン
パクチン（Ｈａｎｃｏｃｋら著、同書；Ｃａｓｅｙら著、同書；Ｓｃｈａｆｅｒ
ら著、Ｓｃｉｅｎｃｅ 第２４５巻：３７９頁（１９８９年））を用いて示され
た。これらの薬剤はＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼを阻害し、ポリイソプレノイド
の生成のための速度制限酵素は、ファルネシルピロリン酸を含む。ＨＭＧ−Ｃｏ
Ａレダクターゼの阻害によるファルネシルピロリン酸生合成の阻害は、培養細胞
中でのＲａｓ膜局在化を阻害する。
【００１３】 Ｋ４Ｂ−ＲａｓのＣ−末端のリシン富含領域および末端ＣＶＩＭ配列が、特定
の選択的ＦＰＴａｓｅ阻害剤によるそのタンパクの細胞プロセッシングの阻害に
抵抗を与えることが開示されている（Ｊａｍｅｓら著、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ
．第２７０巻：６２２１頁（１９９５年））。これらのＦＰＴａｓｅ阻害剤は、
Ｈ−Ｒａｓタンパクのプロセッシングの阻害において効果的である。Ｊａｍｅｓ
らは、ＧＧＴａｓｅによるＫ４Ｂ−Ｒａｓタンパクのプレニル化が、選択的ＦＰ
Ｔａｓｅ阻害剤への抵抗に貢献することを示唆した（Ｚｈａｎｇら著、Ｊ．Ｂｉ
ｏｌ．Ｃｈｅｍ．第２７２巻：１０２３２頁〜２３９頁（１９９７年）；Ｒｏｗ
ｅｌｌら著、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．第２７２巻：１４０９３頁〜１４０９７
頁（１９９７年）；Ｗｈｙｔｅら著、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．第２７２巻：１
４４５９頁〜１４４６４頁（１９９７年））。
【００１４】 幾つかの科学者のグループが、最近、非選択的ＦＰＴａｓｅ／ＧＧＴａｓｅ阻
害剤である化合物を開示した（Ｎａｇａｓｕら著、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒ
ｃｈ、第５５巻：５３１０頁〜５３１４頁（１９９５年）；ＰＣＴ出願ＷＯ ９
５／２５０８６）。
【００１５】 最近、Ｋ４Ｂ−Ｒａｓタンパクの全てまたは一部を組み込むＦＰＴａｓｅの阻
害剤の特定に有用なアッセイが開示された（ＰＣＴ出願ＷＯ９６／３４１１３）
。
【００１６】 本発明の目的は、プレニルタンパクトランスフェラーゼ阻害剤であってＨ−Ｒ
ａｓおよびＫ４Ｂ−Ｒａｓタンパクの細胞プロセッシングを阻害する化合物を利
用する、プレニルタンパクトランスフェラーゼを阻害する方法を提供することに
ある。
【００１７】 そのような阻害剤化合物を含む組成物も、癌を治療するために本発明で用いら
れる。
【００１８】 Ｈ−ＲａｓおよびＫ４Ｂ−Ｒａｓタンパクの細胞プロセッシングの阻害剤であ
るプレニルタンパクトランスフェラーゼ阻害剤を特定する方法を提供することも
本発明の目的である。
【００１９】 （発明の開示） 本発明は、Ｈ−ＲａｓおよびＫ４Ｂ−Ｒａｓタンパクの細胞プロセッシングの
阻害剤であるプレニルタンパクトランスフェラーゼ阻害剤を哺乳動物に投与する
ことを含んでなる、プレニルタンパクトランスフェラーゼを阻害し、癌を治療す
る方法を提供する。本発明は、特に、これらのプレニルタンパクトランスフェラ
ーゼの両方の二重阻害剤である化合物を投与することにより、プレニルタンパク
トランスフェラーゼおよびゲラニルゲラニルタンパクトランスフェラーゼＩ型を
阻害する方法を提供する。本発明は、読み取りがＲａｓ−タンパクの生物学的活
性またはその活性の阻害の結果であり、それによりＨ−ＲａｓおよびＫ４Ｂ−Ｒ
ａｓタンパクの細胞プロセッシングを阻害する化合物の都合の良い特定を提供す
る、そのような化合物を特定する方法も提供する。
【００２０】 （本発明の詳細な説明） 本発明は、癌細胞の成長の阻害剤としての生体内効果を示す特定の特徴を有す
る化合物の薬学的有効量をそれを必要としている哺乳動物に投与することを含ん
でなる、プレニルタンパクトランスフェラーゼを阻害する方法に関する。特に化
合物は： ａ）細胞中でのＭＡＰキナーゼのＫ４Ｂ−Ｒａｓ依存性活性化に対して１２μ
Ｍより低い阻害活性（ＩＣ５０） を特徴とする。
【００２１】 好ましくは、本方法で利用される化合物は、 ａ）細胞中でのＭＡＰキナーゼのＫ４Ｂ−Ｒａｓ依存性活性化に対して５μＭ
より低い阻害活性（ＩＣ５０） を特徴とする。
【００２２】 この化合物は以下の１または２以上の特徴によりさらに特徴付けられる： ｂ）細胞中でのＭＡＰキナーゼのＭｙｒ−Ｒａｓ依存性活性化に対する阻害活
性（ＩＣ５０）よりも５倍以上低い細胞中でのＭＡＰキナーゼのＫ４Ｂ−Ｒａｓ
依存性活性化に対する阻害活性（ＩＣ５０）； ｃ）細胞中でのＭＡＰキナーゼのＭｙｒ−Ｒａｓ依存性活性化に対する阻害活
性（ＩＣ５０）よりも５倍以上低い細胞中でのＭＡＰキナーゼのＨ−ｒａｓ−Ｃ
ＶＬＬ依存性活性化に対する阻害活性（ＩＣ５０）； ｄ）細胞中でのＭＰＡキナーゼのＨ−ｒａｓ−ＣＶＬＬ（配列番号：１）依存
性活性化に対する阻害活性（ＩＣ５０）よりも２倍以上低いが２００００倍以下
低い細胞中でのＭＡＰキナーゼのＨ−Ｒａｓ依存性活性化に対する阻害活性（Ｉ
Ｃ５０）； ｄ）構成的にＳＥＡＰタンパクを発現するｐＣＭＶ−ＳＥＡＰプラスミドを形
質移入した細胞中でのＳＥＡＰタンパクの発現に対する阻害活性（ＩＣ５０）よ
りも５倍以上低い細胞中でのＭＡＰキナーゼのＨ−ｒａｓ−ＣＶＬＬ依存性活性
化に対する阻害活性（ＩＣ５０）；および ｅ）構成的にＳＥＡＰタンパクを発現するｐＣＭＶ−ＳＥＡＰプラスミドを形
質移入した細胞中でのＳＥＡＰタンパクの発現に対する阻害活性（ＩＣ５０）よ
りも５倍以上低い細胞中でのＭＡＰキナーゼのＫ４Ｂ−Ｒａｓ依存性活性化に対
する阻害活性（ＩＣ５０）。
【００２３】 好ましくは、この化合物は、さらに、 ｃ）細胞中でのＭＡＰキナーゼのＨ−Ｒａｓ依存性活性化に対して１０ｎＭよ
り低い阻害活性（ＩＣ５０） を特徴とする。
【００２４】 好ましくは、本方法により阻害されるプレニルタンパクトランスフェラーゼは
、ファルネシルタンパクトランスフェラーゼとゲラニルゲラニルタンパクトラン
スフェラーゼＩ型の両方である。好ましくは、投与される化合物は、ファルネシ
ルタンパクトランスフェラーゼおよびゲラニルゲラニルタンパクトランスフェラ
ーゼＩ型の二重阻害剤である。
【００２５】 驚くべきことに、そのような効果的二重阻害剤は、機構系毒性を引き起こさな
い阻害剤濃度で、癌細胞、特に変異したＫ４Ｂ−Ｒａｓタンパクにより特徴付け
られる癌の成長の生体内阻害剤として特に有用であることが発見された。ファル
ネシルタンパクトランスフェラーゼの機構系毒性は、迅速増殖組織、例えば、骨
髄において予想することができる。
【００２６】 本発明は、さらに、癌細胞成長の阻害剤として生体内で効果的なプレニルタン
パクトランスフェラーゼ阻害剤を特定する方法に関する。本方法は、読み出しが
、Ｒａｓタンパク（タンパクが加工されていてもいなくても）の物理的状態の決
定ではなくＲａｓタンパクの生物学的活性（またはその阻害）の結果である新規
生体外アッセイ（以下に詳細に説明する）を含む。このアッセイは、細胞内にお
けるＲａｓプロセッシングの阻害の程度を測定する先に開示されたアッセイとは
異なる。何故なら、プロセッシングの程度の決定は、高スループット蛍光計を用
いて行うことができ、ポリアクリルアミドゲル電気泳動の時間がかかる使用に依
存しないからである。Ｒａｓタンパクのプロセッシングを阻害するがその生物学
的活性は阻害しない化合物は、タンパクが加工される程度を単に測定する先に開
示された細胞中のＲａｓプロセッシングのアッセイにより不適当に特定される場
合がある。
【００２７】 本発明のプレニルタンパクトランスフェラーゼ阻害剤の特定において有用な本
アッセイは ａ）ｒａｓ遺伝子のための発現プラスミドおよびリポーター遺伝子の産物をコ
ード化するリポーター構造物のための発現プラスミドを細胞に共形質移入する工
程、 ｂ）試験化合物の存在下に細胞をインキュベートする工程、および ｃ）リポーター遺伝子の産物の存在についてアッセイ媒体または細胞の溶解産
物を分析する工程 を含む。
【００２８】 好ましくは、リポーター遺伝子の産物は分泌されたアルカリホスファターゼで
ある。分泌されたアルカリホスファターゼがリポーターとして用いられる場合、
アッセイはＳＥＡＰアッセイと呼ばれる。以下に記載の方法において、ＳＥＡＰ
アッセイの使用が説明される。しかしながら、当業者は、限定されることなくル
シフェラーゼ、β−ガラクトシダーゼ、クロルアンフェニコールアセチルトラン
スフェラーゼおよびβ−グルクロニダーゼを含む他のリポーター系を利用するこ
とができることが容易にわかる。
【００２９】 好ましくは、リポーター遺伝子の発現は、ＭＡＰキナーゼにより活性化される
転写因子により制御される。ＭＡＰキナーゼという用語は、ＥＲＫ−１（細胞外
制御タンパクキナーゼ）、ＥＲＫ−２、ＳＡＰＫ／ＪＮＫ（ストレス活性化タン
パクキナーゼ／Ｃ−ｊｕｎ Ｎ−末端キナーゼ）およびｐ３８を含むが、これら
に限定されない。
【００３０】 ＳＥＡＰリポーター構造物を組み込むタンパクは、Ｄ．Ｄｅｆｅｏ−Ｊｏｎｅ
ｓら著、（Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．第１１巻：２３０７頁〜２３１０頁（
１９９１年））、Ｒ．Ｅ．Ｊｏｎｅｓら著、（Ｏｎｃｏｇｅｎｅ．第６巻：７４
５頁〜７５１頁（１９９１年））およびＪ．Ｂｅｒｇｅｒら著、（Ｊ．Ｂｉｏｌ
．Ｃｈｅｍ．第２６３巻：１００１６頁〜１００２１頁（１９８８年））により
開示されたものを含むが、これらに限定されない。以下の実施例１５に記載され
ているＳＥＡＰリポータープラスミドｐＤＳＥ１００およびｐＤＳＥ１０１も本
発明のアッセイにおいて有用である。ＳＥＡＰリポータープラスミドｐＣＭＶも
、本発明の方法において、試験化合物の非機構系毒性を特定するための対照プラ
スミドとして有用である。
【００３１】 ｒａｓ遺伝子という用語はＨ−ｒａｓ、Ｎ−ｒａｓ、Ｋ４Ｂ−ｒａｓ、Ｍｙｒ
−ｒａｓおよびＨ−ｒａｓ−ＣＶＬＬ遺伝子を含む。
【００３２】 本発明のｒａｓ遺伝子のための発現プラスミドは、ｐＺＩＰ−ｒａｓＨ、ｐＺ
ＩＰ−ｒａｓＮ、ｐＺＩＰ−ｒａｓＫ４Ｂ、ｐＳＭＳ６００、ｐＳＭＳ６０１、
ｐＳＭＳ６２０、ｐＳＭＳ６２１、ｐＳＭＳ６２２、ｐＳＭＳ６３０、ｐＳＭＳ
６４０、ｐＳＭＳ６５０、ｐＢＷ１４２３（Ｂ．Ｗ．Ｗｉｌｌｉａｍｓｅｍら著
、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．第１１巻：６０２６頁〜６０３３頁（１９９１
年））、ｐＲｃＣＭＶ−Ｈ−ｒａｓ−Ｖ１２およびｐＲｃＣＭＶ−Ｈ−ｒａｓ−
ｖ１２、Ｌ１８９（Ｇ．Ｌ．Ｊａｍｅｓら著．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．第２６
９巻：２７７０５頁〜２７７１４頁（１９９４年））を含むが、これらに限定さ
れない。
【００３３】 ｒａｓ遺伝子のための発現プラスミドを形成するために利用することができる
別の発現ベクターは、ｐＣｌ、ｐＳＩ、ｐＳｐｏｒｔ（Ｐｒｏｍｅｇａ製）、ｐ
ＢＫ−ＣＭＶ、ｐＢＫ−ＲＳＶ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ製）、ｐＥＵＫ−Ｃ１（
Ｃｌｏｎｅｔｅｃｈ）、ｐＣＭＶ−Ｌ１Ｃ（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ製）およびｐ
ｃＤＮＡ１．１／Ａｍｐ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ製）を含むが、これらに限定さ
れない。
【００３４】 本アッセイで用いられるアッセイ媒体は、一時的に形質移入された細胞を維持
するのに有用な媒体から選択される。好ましくは、媒体は、フェノールレッドを
欠き、血清が少ない。好ましくは、アッセイ媒体はフェノールレッド非含有ＤＭ
ＥＭ、２％哺乳動物血清、Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ、グルタミンおよび非必須アミノ
酸（ＮＥＡＡ）を含む。
【００３５】 低血清成長媒体に捕捉される一般的に用いられる形質移入性宿主細胞の実質的
に任意のものを、本アッセイとの関連で用いることができると考えられる。その
例は、Ｃ３３ａ（ＡＴＣＣ：ＨＴＢ−３１）、Ｒａｔ１および３Ｔ３細胞系のよ
うな真核生物発現のために典型的に用いられる。本アッセイで用いるための好ま
しい系は、ヒト細胞系Ｃ３３ａであるとわかった。
【００３６】 好ましくは、癌細胞は、発現プラスミドが共形質移入された後に単離される。
【００３７】 本発明の第１の実施形態において、プレニルタンパクトランスフェラーゼ阻害
剤を特定する方法は： ａ）ｒａｓ遺伝子がＫ−ｒａｓである本アッセイにおいて試験化合物を評価す
る工程； ｂ）ｒａｓ遺伝子がＭｙｒ−ｒａｓである本アッセイにおいて試験化合物を評
価する工程；および ｃ）本アッセイにおけるＭＡＰキナーゼのＭｙｒ−Ｒａｓ依存性活性化に対す
る試験化合物の活性を、本アッセイにおけるＭＡＰキナーゼのＫ−Ｒａｓ依存性
活性化に対する試験化合物の活性と比較する工程 を含む。
【００３８】 好ましくは、本方法で利用されるＫ−ｒａｓ遺伝子はＫ４Ｂ−ｒａｓ遺伝子で
あるが、Ｋ４Ａ−ｒａｓ遺伝子も利用可能と考えられる。
【００３９】 好ましくは、本発明の方法の第１の実施形態は、以下のさらなる工程の一方ま
たは両方を含む： ｄ）ｒａｓ遺伝子がＨ−ｒａｓである本アッセイにおいて試験化合物を評価す
る工程；および ｅ）ｒａｓ遺伝子がＨ−ｒａｓ−ＣＶＬＬである本アッセイにおいて試験化合
物を評価する工程。
【００４０】 本発明の第２の実施形態において、プレニルタンパクトランスフェラーゼ阻害
剤を特定する方法は： ａ）ｒａｓ遺伝子がＨ−Ｒａｓである本アッセイにおいて試験化合物を評価す
る工程； ｂ）ｒａｓ遺伝子がＨ−ｒａｓ−ＣＶＬＬである本アッセイにおいて試験化合
物を評価する工程； ｃ）ｒａｓ遺伝子がＭｙｒ−ｒａｓである本アッセイにおいて試験化合物を評
価する工程；および ｄ）本アッセイにおけるＭＡＰキナーゼのＭｙｒ−Ｒａｓ依存性活性化に対す
る試験化合物の活性を、本アッセイにおけるＭＡＰキナーゼのＨ−Ｒａｓ依存性
活性化および本アッセイにおけるＭＡＰキナーゼのＨ−ｒａｓ−ＣＶＬＬ依存性
活性化に対する試験化合物の活性と比較する工程 を含む。
【００４１】 本発明の第３の実施形態において、プレニルタンパクトランスフェラーゼ阻害
剤を特定する方法は： ａ）Ｒａｓ遺伝子がＮ−Ｒａｓである本アッセイにおいて試験化合物を評価す
る工程； ｂ）Ｒａｓ遺伝子がＭｙｒ−ｒａｓである本アッセイにおいて試験化合物を評
価する工程；および ｃ）本アッセイにおけるＭＡＰキナーゼのＭｙｒ−Ｒａｓ依存性活性化に対す
る試験化合物の活性を、本アッセイにおけるＭＡＰキナーゼのＮ−Ｒａｓ依存性
活性化に対する試験化合物の活性と比較する工程 を含む。
【００４２】 本発明の第４の実施形態において、プレニルタンパクトランスフェラーゼ阻害
剤を特定する方法は： ａ）ｒａｓ遺伝子がＨ−Ｒａｓである本アッセイにおいて試験化合物を評価す
る工程； ｂ）ｒａｓ遺伝子がＨ−ｒａｓ−ＣＶＬＬである本アッセイにおいて試験化合
物を評価する工程； ｃ）ｒａｓ遺伝子の形質移入の不存在下に細胞にｐＣＭＶ−ＳＥＡＰプラスミ
ドが形質移入された本アッセイにおいて試験化合物を評価する工程；および ｄ）本アッセイにおけるＭＡＰキナーゼのＨ−Ｒａｓ−ＣＶＬＬ依存性活性化
に対する試験化合物の活性を、本アッセイにおけるＭＡＰキナーゼのＨ−Ｒａｓ
依存性活性化に対する試験化合物の活性および本方法の工程ｃ）のＳＥＡＰ発現
に対する試験化合物の活性と比較する工程 を含む。
【００４３】 好ましくは、阻害剤を特定する前記方法において利用されるアッセイはＳＥＡ
Ｐアッセイである。
【００４４】 好ましくは、本アッセイで用いられるｐＣＭＶ−ＳＥＡＰプラスミドはｐＣＭ
Ｖ−ＳＥＡＰ−Ａプラスミドである。
【００４５】 本方法により特定される阻害剤化合物は、それを必要としている哺乳動物にお
いて、プレニルタンパクトランスフェラーゼの阻害、および癌および他の増殖性
疾患の治療において有用である。プレニルタンパクトランスフェラーゼ阻害剤ま
たはファルネシルタンパクトランスフェラーゼおよびゲラニルゲラニルタンパク
トランスフェラーゼＩ型の二重阻害剤である単一の化合物を特定する上記方法は
、選択的ファルネシルタンパクトランスフェラーゼ阻害剤と選択的ゲラニルゲラ
ニルタンパクトランスフェラーゼＩ型阻害剤との組み合わせ中の活性成分の最適
比率を特定するために用いることもできる。
【００４６】 好ましくは、本発明の化合物は、ＳＥＡＰアッセイにおける細胞中でのＭＡＰ
キナーゼのＨ−Ｒａｓ依存性活性化に対して１００ｎＭより低い阻害濃度（ＩＣ ５０ ）を有する。より好ましくは、本発明の化合物は、ＳＥＡＰアッセイにおけ
る細胞中でのＭＡＰキナーゼのＨ−Ｒａｓ依存性活性化に対して１０ｎＭより低
い阻害濃度（ＩＣ５０）を有する。好ましくは、Ｋ−Ｒａｓ４Ｂ依存性活性化に
対する阻害活性（ＩＣ５０）と、Ｈ−Ｒａｓ依存性活性化に対する阻害活性との
比は２０００より低い。
【００４７】 好ましくは、本発明の化合物は、ＳＥＡＰアッセイにおける細胞中でのＭＡＰ
キナーゼのＨ−Ｒａｓ−ＣＶＬＬ依存性活性化に対して１０μＭより低い阻害濃
度（ＩＣ５０）を有する。より好ましくは、本発明の化合物は、ＳＥＡＰアッセ
イにおける細胞中でのＭＡＰキナーゼのＨ−Ｒａｓ−ＣＶＬＬ依存性活性化に対
して１μＭより低い阻害濃度（ＩＣ５０）を有する。好ましくは、Ｈ−Ｒａｓ−
ＣＶＬＬ依存性活性化に対する阻害活性（ＩＣ５０）と、Ｈ−Ｒａｓ依存性活性
化に対する阻害活性との比は約２〜約２００００である。より好ましくは、Ｈ−
Ｒａｓ−ＣＶＬＬ依存性活性化に対する阻害活性（ＩＣ５０）と、Ｈ−Ｒａｓ依
存性活性化に対する阻害活性（ＩＣ５０）との比は約２０〜約２０００である。
【００４８】 好ましくは、本発明の化合物は、ＳＥＡＰアッセイにおけるＭＡＰキナーゼの
細胞Ｎ−Ｒａｓ依存性活性化に対して５μＭより低い阻害濃度（ＩＣ５０）を有
する。より好ましくは、本発明の化合物は、ＳＥＡＰアッセイにおけるＭＡＰキ
ナーゼの細胞Ｎ−Ｒａｓ依存性活性化に対して１μＭより低い阻害濃度（ＩＣ５ ０ ）を有する。
【００４９】 本発明の化合物は、Ｒａｓタンパクのプロセッシングを選択的に阻害し、従っ
て、ｒａｓ腫瘍遺伝子により形質転換された細胞の成長を阻害する。プレニルタ
ンパクトランスフェラーゼ阻害剤を特定する本方法において、Ｍｙｒ−ｒａｓと
表される変異したｒａｓ遺伝子からＳＥＡＰプラスミドが選択される本アッセイ
において試験化合物の活性を評価する工程は、試験化合物が、Ｒａｓプレニル化
の阻害から独立したシグナル導入を阻害するかどうか評価する。何故なら、変異
したＭｙｒ−ｒａｓ遺伝子は、タンパクが細胞活性のためのプレニル化の要求を
回避できるようにする（Ｊ．Ｅ．Ｂｕｓｓら著．Ｓｃｉｅｎｃｅ．第２４３巻：
１６００頁〜１６０３頁（１９８９年））。本アッセイにおけるＭＡＰキナーゼ
の細胞Ｍｙｒ−Ｒａｓ依存性活性化に対する試験化合物のＩＣ５０が、同じアッ
セイにおけるＭＰＡキナーゼのＫ４Ｂ−Ｒａｓ依存性活性化に対する試験化合物
のＩＣ５０に近い場合、Ｒａｓプレニル化の阻害における試験化合物の真の効果
を決めることが困難である。そのような阻害は、Ｒａｓプレニル化の選択的阻害
よりも非特異的細胞毒性を示す。
【００５０】 また、試験化合物の非特異的細胞毒性は、ｐＣＭＶ−ＳＥＡＰプラスミドを形
質移入した細胞をインキュベートし、ＳＥＡＰタンパクの存在についてアッセイ
媒体を分析することにより評価することができる。
【００５１】 従って、本発明の１つの実施形態において、ＳＥＡＰアッセイにおけるＭＡＰ
キナーゼの細胞Ｍｙｒ−Ｒａｓ依存性活性化に対する試験化合物の活性（ＩＣ５ ０ として）と、ＳＥＡＰアッセイにおけるＭＡＰキナーゼのＫ４Ｂ−Ｒａｓ依存
性活性化に対する試験化合物の活性（ＩＣ５０として）との比が１より大きいこ
とが好ましい。より好ましくは、（ＳＥＡＰアッセイにいて測定される）ＭＡＰ
キナーゼのＭｙｒ−Ｒａｓ依存性活性化に対する阻害活性（ＩＣ５０）と、ＭＡ
ＰキナーゼのＫ４Ｂ−Ｒａｓ依存性活性化に対する阻害活性（ＩＣ５０）との比
が５より大きい。
【００５２】 「細胞中でのＭＡＰキナーゼのＭｙｒ−Ｒａｓ依存性活性化に対する阻害活性
（ＩＣ５０）よりも５倍以上低い細胞中でのＭＡＰキナーゼのＫ４Ｂ−Ｒａｓ依
存性活性化に対する阻害活性（ＩＣ５０）」という分節（および他の比較物に対
する同様の文節）は、「（ＳＥＡＰアッセイで測定される）ＭＡＰキナーゼのＭ
ｙｒ−Ｒａｓ依存性活性化に対する阻害活性（ＩＣ５０）と、ＭＡＰキナーゼの
Ｋ４Ｂ−Ｒａｓ依存性活性化に対する阻害活性（ＩＣ５０）との比が５より大き
い」という分節（および他の同様の分節）と同じ意味を有すると解される。
【００５３】 ＳＥＡＰアッセイにおけるＭＡＰキナーゼの細胞Ｍｙｒ−Ｒａｓ依存性活性化
に対する試験化合物の活性（ＩＣ５０として）と、ＳＥＡＰアッセイにおけるＭ
ＡＰキナーゼのＨ−Ｒａｓ−ＣＶＬＬ依存性活性化に対する試験化合物の活性（
ＩＣ５０として）との比が１より大きいことも好ましい。より好ましくは、（Ｓ
ＥＡＰアッセイで測定される）ＭＡＰキナーゼのＭｙｒ−Ｒａｓ依存性活性化に
対する阻害活性と、ＭＡＰキナーゼのＨ−Ｒａｓ−ＣＶＬＬ依存性活性化に対す
る阻害活性との比が５より大きい。
【００５４】 さらに好ましくは、ＳＥＡＰアッセイにおけるＭＡＰキナーゼの細胞Ｍｙｒ−
Ｒａｓ依存性活性化に対する試験化合物の活性（ＩＣ５０として）と、ＳＥＡＰ
アッセイにおけるＭＡＰキナーゼのＮ−Ｒａｓ依存性活性化に対する試験化合物
の活性（ＩＣ５０として）との比が５より大きい。最も好ましくは、（ＳＥＡＰ
アッセイで測定される）ＭＡＰキナーゼのＭｙｒ−Ｒａｓ依存性活性化に対する
阻害活性と、ＭＡＰキナーゼのＮ−Ｒａｓ依存性活性化に対する阻害活性との比
が２０より大きい。
【００５５】 本発明のもう１つの実施形態において、ｐＣＭＶ−ＳＥＡＰプラスミドを形質
移入した細胞中のＳＥＡＰタンパクの発現に対する試験化合物の活性（ＩＣ５０ として）と、ＳＥＡＰアッセイにおけるＭＡＰキナーゼのＨ−Ｒａｓ−ＣＶＬＬ
依存性活性化に対する試験化合物の活性（ＩＣ５０として）との比が１より大き
いことが好ましい。最も好ましくは、ｐＣＭＶ−ＳＥＡＰプラスミドを形質移入
した細胞中のＳＥＡＰタンパクの発現に対する阻害活性と、ＳＥＡＰアッセイに
おけるＭＡＰキナーゼのＨ−Ｒａｓ−ＣＶＬＬ依存性活性化に対する試験化合物
の活性（ＩＣ５０として）との比が５より大きい。
【００５６】 ここで「Ｋ４Ｂ−Ｒａｓ」、「Ｎ−Ｒａｓ」、「Ｈ−ｒａｓ」等のような用語
で特定のＲａｓタンパクを呼ぶとき、そのような用語は、対応する野生型ｒａｓ
遺伝子の発現から生じるタンパクと、種々の点変異を含むｒａｓ遺伝子の発現か
ら生じる種々のタンパクとの両方を表す。ここで「Ｋ４Ｂ−Ｒａｓ」、「Ｎ−Ｒ
ａｓ」、「Ｈ−ｒａｓ」等のような用語で特定のｒａｓタンパクを呼ぶとき、そ
のような用語は、野生型ｒａｓ遺伝子と種々の点変異を含むｒａｓ遺伝子との両
方を表す。
【００５７】 プレニルタンパクトランスフェラーゼ阻害化合物という用語は、ファルネシル
タンパクトランスフェラーゼおよびゲラニルゲラニルタンパクトランスフェラー
ゼＩ型をコードする遺伝子、またはそれに反応して生成されるタンパクの活性に
拮抗、阻害または反作用する化合物を意味する。
【００５８】 ここで用いられる選択的という用語は、１つの生物学的活性（プレニルタンパ
クトランスフェラーゼの阻害のような）に対する特定化合物の阻害活性を、もう
１つの生物学的活性に対する化合物の阻害活性と比較して表す。プレニルタンパ
クトランスフェラーゼ阻害剤の選択性が高くなると、そのような化合物は記載の
処理方法により好ましくなると解される。
【００５９】 例えば、ゲラニルゲラニルタンパクトランスフェラーゼＩ型の選択的阻害剤と
ファルネシルタンパクトランスフェラーゼの選択的阻害剤との組み合わせ物を説
明するとき、実施例１１に記載のアッセイにより評価されたその生体外活性が実
施例１０に記載のアッセイにおけるファルネシルタンパクトランスフェラーゼに
対する同じ化合物の生体外活性よりも少なくとも１０倍大きい場合、化合物はゲ
ラニルゲラニルタンパクトランスフェラーゼＩ型の選択的阻害剤と考えられる。
化合物は、例えば、実施例１０に記載のアッセイにより評価されたその生体外フ
ァルネシルタンパクトランスフェラーゼ阻害活性が実施例１１に記載のアッセイ
におけるゲラニルゲラニルタンパクトランスフェラーゼＩ型に対する同じ化合物
の生体外活性よりも少なくとも１０倍大きい場合、ファルネシルタンパクトラン
スフェラーゼの選択的阻害剤と考えられる。好ましくは、選択的化合物は、ゲラ
ニルゲラニルタンパクトランスフェラーゼＩ型阻害剤とファルネシルタンパクト
ランスフェラーゼ阻害剤とを比べると、酵素活性の１つに対して少なくとも２０
倍大きな活性を示す。より好ましくは、選択率は少なくとも１００倍以上である
。ゲラニルゲラニルタンパクトランスフェラーゼＩ型阻害剤またはファルネシル
タンパクトランスフェラーゼ阻害剤の選択率が大きいほど、そのような化合物は
そのような組み合わせ物においてより好ましくなると解される。
【００６０】 本組成物により提供される好ましい治療効果は、癌の治療、および特に、癌性
腫瘍の成長の阻害および／または癌性腫瘍の退行である。ここに記載の本発明に
より治療することのできる癌は、脳、胸、結腸、尿生殖路、前立腺、皮膚、リン
パ系、膵臓、直腸、胃、咽頭、肝臓および肺の癌を含む。より詳しくは、そのよ
うな癌は、組織球性リンパ腫、肺腺癌、膵臓癌、結腸直腸癌、小細胞肺癌、膀胱
癌、頭部および頚部癌、急性および慢性白血病、メラノーマ、および神経腫瘍を
含む。
【００６１】 本発明の組成物は、良性および悪性の両方の他の増殖性疾患の阻害にも有用で
あり、他の遺伝子における癌性変異の結果としてＲａｓタンパクが異常に活性化
され（すなわち、ｒａｓ遺伝子そのものは癌状態への突然変化により活性化され
ない）、阻害は、そのような治療を必要としている哺乳動物に本組成物の有効量
を投与することにより達成される。例えば、この組成物は、良性増殖性疾患であ
る神経線維腫症の治療において有用である。
【００６２】 本発明の組成物は、内膜性新生物形成を阻害することにより経皮経腔的冠状動
脈形成後の再狭窄を予防するのにも有用である（Ｃ．Ｉｎｄｏｌｆｉら著、Ｎａ
ｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、第１巻：５４１頁〜５４５頁（１９９５年）。
【００６３】 本組成物は、多嚢胞腎臓病の治療および予防においても有効であり得る（Ｄ．
Ｌ．Ｓｃｈａｆｆｎｅｒら著、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐａ
ｔｈｏｌｏｇｙ、第１４２巻：１０５１頁〜１０６０頁（１９９３年）およびＢ
．Ｃｏｗｌｅｙ，Ｊｒら著、ＦＡＳＥＢ Ｊｏｕｒｎａｌ、第２巻：Ａ３１６０
頁（１９８８年））。
【００６４】 本化合物は、腫瘍脈管形成を阻害し、それにより腫瘍の成長に影響を与えるこ
ともできる（Ｊ．Ｒａｋら著、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ、第５５巻：４
５７５頁〜４５８０頁（１９９５年））。本発明の化合物のそのような抗脈管形
成特性は、網膜血管新生に係わる特定の形態の視力欠損の治療においても有用で
あり得る。
【００６５】 本発明の化合物は、特定のウイルス感染の治療、特に、デルタ型肝炎および関
連ウイルスの治療においても有用である（Ｊ．Ｓ．Ｇｌｅｎｎら著、Ｓｃｉｅｎ
ｃｅ、第２５６巻：１３３１頁〜１３３３頁（１９９２年））。
【００６６】 本発明の化合物は、血管平滑筋細胞の増殖の阻害においても有用で、従って、
前方硬化症および糖尿病性血管障害の予防及び治療においても有用であり得る。
【００６７】 本発明の化合物は、標準的薬剤実施に従って、単独でまたは、好ましくは、薬
剤組成物中において薬学的に許容できるキャリア、賦形剤または希釈剤と組み合
わせて、哺乳動物、好ましくはヒトに投与することができる。この化合物は、経
口的に、または静脈内、筋肉内、腹腔内、皮下、直腸および局所投与経路を含む
非経口的に投与することができる。
【００６８】 活性成分を含む薬剤組成物は、経口使用に適した形状、例えば、錠剤、トロー
チ、ロゼンジ、水性または油性懸濁液、分散性粉末または顆粒、乳濁液、硬質ま
たは軟質カプセル、あるいはシロップまたはエリキシルであってよい。経口用の
組成物は、薬剤組成物の製造のために当該分野で知れらているいかなる方法によ
っても調製することができ、そのような組成物は、薬学的に上品で美味な製剤を
提供するために、甘味料、風味量、着色剤および防腐剤からなる群より選択され
る１種または２種以上の試薬を含むことができる。錠剤は、錠剤の製造に適して
いる非毒性の薬学的に許容できる賦形剤と混合して活性成分を含む。これらの賦
形剤は、例えば、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム、ラクトース、リン酸カルシ
ウムまたはリン酸ナトリウムのような不活性希釈剤；顆粒化および崩壊剤、例え
ば、微結晶性セルロース、ナトリウムクロスカルメロース（ｃｒｏｓｓｃａｒｍ
ｅｌｌｏｓｅ）、コーンスターチまたはアルギン酸；結合剤、例えば、デンプン
、ゼラチン、ポリビニルピロリドンまたはアラビアゴム、および潤滑剤、例えば
、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクであってよい。錠剤は
被覆しない、または薬剤の不快な味を遮断するもしくは胃腸管における崩壊およ
び吸収を遅延させる既知の技術によって被覆してもよく、それにより長期間の維
持作用が提供される。例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロースまたはヒド
ロキシプロピルセルロースのような水溶性味遮断材料、あるいはエチルセルロー
ス、酢酸酪酸セルロースのような時間遅延化合物を用いて良い。
【００６９】 経口使用のための製剤は、活性成分が不活性固体希釈剤、例えば、炭酸カルシ
ウム、リン酸カルシウムもしくはカオリンと混合される硬質ゼラチンカプセル、
または活性成分が、ポリエチレングリコールのような水溶性キャリアまたは油媒
体、例えばピーナッツ油、液状パラフィンもしくはオリーブ油と混合される軟質
ゼラチンカプセルとして存在してもよい。
【００７０】 水性懸濁液は、水性懸濁液の製造に適した賦形剤と混合して活性材料を含む。
そのような賦形剤は、懸濁剤、例えば、ナトリウムカルボキシメチルセルロース
、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリ
ウム、ピリビニルピロリドン、トラガカントゴムおよびアラビアゴムであり；分
散または湿潤剤は天然産ホスファチド、例えばレシチン、またはアルキレンオキ
シド脂肪酸との縮合生成物、例えば、ステアリン酸ポリオキシエチレン、または
エチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合生成物、例えば、ヘプタデカ
エチレン−オキシセタノール、またはポリオキシエチレンソルビトールモノオレ
エートのような脂肪酸とヘキシトールとから誘導される部分エステルとエチレン
オキシドとの縮合生成物、脂肪酸とヘキシトール無水物とから誘導される部分エ
ステルとエチレンオキシドとの縮合生成物、例えば、ポリエチレンソルビタンモ
ノオレエートであってよい。水性懸濁液は、１種または２種以上の防腐剤、例え
ば、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エチルまたはｎ−プロピル、１種または２種以上の
着色剤、１種または２種以上の風味料、およびスクロース、サッカリンまたはア
スパルテームのような１種または２種以上の甘味料を含んでもよい。
【００７１】 油性懸濁液は、活性成分を植物油、例えば落花生油、オリーブ油、ゴマ油また
はヤシ油中に、または液状パラフィンのような鉱物油中に懸濁させることにより
調製することができる。油性懸濁液は、増粘剤、例えば密ロウ、硬質パラフィン
またはセチルアルコールを含んでよい。先に列挙したような甘味料、および風味
料を添加して美味経口製剤を提供することができる。これらの組成物は、ブチル
化ヒドロキシアニソールまたはα−トコフェロールのような酸化防止剤を添加す
ることにより保存することができる。
【００７２】 水の添加により水性懸濁液を調製するのに適した分散性粉末および顆粒は、分
散または湿潤剤、懸濁剤および１種または２種以上の防腐剤と混合して活性成分
を提供する。適当な分散または湿潤剤および懸濁剤は、既に前述したものが例示
される。さらなる賦形剤、例えば、甘味料、風味料および着色剤も存在してよい
。これらの組成物は、アスコルビン酸のような酸化防止剤の添加により保存する
ことができる。
【００７３】 本発明の薬剤組成物は、水中油懸濁液の状態であってもよい。油相は植物油、
例えばオリーブ油または落花生油、または鉱物油、例えば液状パラフィンもしく
はそれらの混合物であってよい。適当な乳化剤は天然産ホスファチド、例えば大
豆レシチン、および脂肪酸とヘキシトール無水物とから誘導されるエステルまた
は部分エステル、例えば、ソルビタンモノオレエート、および前記部分エステル
とエチレンオキシドとの縮合生成物、例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモ
ノオレエートであってよい。乳濁液は、甘味料、風味料、防腐剤および酸化防止
剤も含んでよい。
【００７４】 シロップおよびエリキシルは、甘味料、例えば、グルセロール、プロピレング
リコール、ソルビトールまたはスクロースを用いて調製することができる。その
ような製剤は粘滑剤、防腐剤、風味料および着色剤ならびに酸化防止剤も含んで
よい。
【００７５】 薬剤組成物は、滅菌注射性水溶液の状態であってよい。用いることのできる許
容できるビヒクルおよび溶媒には、水、リンガー液および等張塩化ナトリウム溶
液がある。
【００７６】 滅菌注射性製剤は、活性成分が油相に溶解されている滅菌注射性水中油微細乳
濁液でもよい。例えば、活性成分を、まず大豆油とレシチンとの混合物に溶解す
ることができる。次に、油溶液を水とグリセロールとの混合物に導入し、加工し
て微細乳濁液を形成する。
【００７７】 注射性溶液または微細乳濁液は、局所的ボーラス注射により患者の血流に導入
することができる。また、本化合物の一定循環濃度を維持するような方法で溶液
または微細乳濁液を投与することが有利な場合がある。そのような一定濃度を維
持するために、連続的静脈内配達装置を利用することができる。そのような装置
の例は、Ｄｅｌｔｅｃ ＣＡＤＤ−ＰＬＵＳＴＭモデル５４００静脈内ポンプで
ある。
【００７８】 薬剤組成物は、筋肉内および皮下投与のために滅菌注射性水性または油性懸濁
液の状態であってよい。この懸濁液は、前述した適当な分散または湿潤剤および
懸濁剤を用いて既知の技術により調製することができる。滅菌注射性製剤は、非
毒性非経口受容性希釈剤または溶媒中の滅菌注射性溶液または懸濁液、例えば、
１，３−ブタンジオール中の溶液であってもよい。さらに、滅菌固定油が従来よ
り溶媒または懸濁媒体として用いられている。この目的のために、合成モノまた
はジグリセリドを含む任意の等級の固定油を用いることができる。さらに、オレ
イン酸のような脂肪酸が、注射性製剤の調製に用いられる。
【００７９】 式Ａの化合物は、薬剤の直腸投与のために座剤の状態で投与することもできる
。これらの組成物は、薬剤と、常温で固体であるが直腸温度で液体であり、従っ
て直腸で溶融して薬剤を放出するような適当な非刺激性賦形剤とを混合すること
により調製することができる。そのような材料は、ココアバター、グリセリン化
ゼラチン、水素化植物油、種々の分子量のポリエチレングリコールの混合物およ
びポリエチレングリコールの脂肪酸エステルを含む。
【００８０】 局所的使用のために、式Ａの化合物を含むクリーム、軟膏、ゼリー、溶液また
は懸濁液等が用いられる。（この適用の目的には、局所適用は口内洗浄およびう
がいを含む。） 本発明のための化合物は、適当な鼻腔内ビヒクルおよび配達装置の局所的使用
により鼻腔内に投与、または経皮経路により、当業者に良く知られている経皮皮
膚パッチの状態のものを用いて投与することができる。経皮配達系の状態で投与
するために、投与は、もちろん投与法全体において間欠的であるよりも連続的で
ある。
【００８１】 ここで用いられる「組成物」という用語は、特定量の特定成分を含む生成物、
および、特定量の特定成分の組み合わせから直接または間接的に生じる任意の生
成物を包含することを意図する。
【００８２】 本方法により特定される化合物は、治療される症状に対する特別の有用性のた
めに選択される、他の良く知られている治療薬と一緒に投与することもできる。
例えば、本化合物は、既知の抗癌および細胞毒性薬と組み合わせて有用となり得
る。同様に、本化合物は、神経線維腫症、再狭窄、多嚢胞腎臓病、デルタ型肝炎
の感染および関連するウイルスおよび真菌の感染の治療および予防において効果
的な薬剤と組み合わせて有用となり得る。本化合物は、細胞表面成長因子受容体
を核シグナル開始細胞増殖につなぐシグナル経路の一部の他の阻害剤と組み合わ
せても有用となり得る。
【００８３】 本化合物は、ファルネシルタンパクトランスフェラーゼの活性のファルネシル
ピロリン酸拮抗阻害剤と組み合わせて、またはＲａｆ拮抗薬活性を有する化合物
と組み合わせて利用することができる。本化合物は、ゲラニルゲラニルタンパク
トランスフェラーゼの選択的阻害剤またはファルネシルタンパクトランスフェラ
ーゼの選択的阻害剤である化合物と一緒に投与することもできる。
【００８４】 本発明の化合物は、治療される症状に対する特別の有用性のために選択される
、他の良く知られている癌治療薬と一緒に投与することもできる。治療薬のその
ような組み合わせには、本プレニルタンパクトランスフェラーゼ阻害剤と抗腫瘍
性薬との組み合わせが含まれる。抗腫瘍薬とプレニルタンパクトランスフェラー
ゼの阻害剤との本組み合わせを、放射線治療および手術を含む他の癌および／ま
たは腫瘍治療方法を組み合わせて用い得ることも理解される。
【００８５】 固定投与量として調製される場合、そのような組み合わせ産物は、以下に記載
の投与量範囲の本発明の組み合わせ、およびその認可された投与量範囲内の他の
薬学的活性剤を用いる。本発明の組み合わせは、複合組み合わせ製剤が不適当な
場合、既知の薬学的に許容できる薬剤と順次組み合わせることもできる。
【００８６】 外部的に適用される光線からまたは小さな放射線源の移植により配達されるＸ
線またはγ線を含む放射線治療を、癌の治療のために、プレニルタンパクトラン
スフェラーゼのみの阻害剤と組み合わせて用いることもできる。
【００８７】 さらに、本発明の化合物は、１９９７年１０月２３日に公開され、ここに参考
として取り込まれるＷＯ９７／３８６９７に記載のように、放射線増感剤として
も有用であり得る。
【００８８】 本化合物は、細胞表面成長因子受容体を核シグナル開始細胞増殖につなぐシグ
ナル経路の一部の他の阻害剤と組み合わせても有用となり得る。すなわち、本化
合物は、ファルネシルタンパクトランスフェラーゼの活性のファルネシルピロリ
ン酸拮抗阻害剤と組み合わせて、またはＲａｆ拮抗薬活性を有する化合物と組み
合わせて利用することができる。
【００８９】 本化合物は、１９９８年４月６日に出願され、ここに参考として取り込まれる
米国特許Ｎｏ．０９／０５５，４８７に記載のように、癌の治療のためにインテ
グリン拮抗薬と組み合わせても有用であり得る。
【００９０】 ここで用いられる「インテグリン拮抗薬」という用語は、脈管形成の制御また
は腫瘍細胞の成長および侵襲に含まれるインテグリンへの生理学的リガンドの結
合を選択的に拮抗、阻害または反作用する化合物を意味する。特に、この用語は
、αｖβ３インテグリンへの生理学的リガンドの結合を選択的に拮抗、阻害また
は反作用する、αｖβ５インテグリンへの生理学的リガンドの結合を選択的に拮
抗、阻害または反作用する、αｖβ３インテグリンとαｖβ５インテグリンの両
方への生理学的リガンドの結合を拮抗、阻害または反作用する、または毛細管内
皮細胞上に発現される特定のインテグリンの活性を拮抗、阻害または反作用する
化合物を意味する。この用語は、αｖβ６、αｖβ８、α１β１、α２β１、α
５β１、α６β１およびα６β４インテグリンの拮抗薬も意味する。この用語は
、αｖβ３、αｖβ５、αｖβ６、αｖβ８、α１β１、α２β１、α５β１、
α６β１およびα６β４インテグリンの任意の組み合わせの拮抗薬も意味する。
本化合物は、脈管形成を阻害し、それによりアンギオスタチンおよびエンドスタ
チンを非限定的に含む腫瘍細胞の成長および侵襲を阻害する他の薬剤と組み合わ
せても有用となり得る。
【００９１】 本発明の組成物がヒト対象に投与される場合、１日投与量は、通常、処方箋を
書く医者により決められるが、投与量は、一般的に年齢、体重、および個々の患
者の反応、および患者の症状の重さにより変わる。
【００９２】 １つの適用例において、適当な量のプレニルタンパクトランスフェラーゼ阻害
剤が、癌の治療を受けている哺乳動物に投与される。投与は、１日当り体重１ｋ
ｇあたり約０．１ｍｇ〜約６０ｍｇ、好ましくは１日当り体重１ｋｇあたり約０
．５ｍｇ〜約４０ｍｇの各阻害剤の量で行われる。本組成物を含む特別の治療投
与量は、約０．０１ｍｇ〜約１０００ｍｇのプレニルタンパクトランスフェラー
ゼ阻害剤を含む。好ましくは、投与量はプレニルタンパクトランスフェラーゼの
約１ｍｇ〜約１０００ｍｇを含む。
【００９３】 抗腫瘍剤の例は、通常、微小管安定化剤（パクリタクセル（Ｔａｘｏｌ（登録
商標）としても知られる）、ドセタクセル（Ｔａｘｏｔｅｒｅ（登録商標）とし
ても知られる）、またはそれらの誘導体）；アルキル化剤、抗代謝剤；エピドフ
ィロトキシン；抗腫瘍酵素；トポイソメラーゼ阻害剤；プロカルバジン；ミトキ
サントロン；白金配位複合体；生物学的反応修飾剤および成長阻害剤；ホルモン
性／抗ホルモン性治療薬および造血成長因子を含む。
【００９４】 抗腫瘍薬の例は、例えば、アントラサイクリン科薬、ビンカ剤、マイトマイシ
ン、ブレオマイシン、細胞毒性ヌクレシド、タキサン、エポチロン、ジスコデル
モリド、プテリジン科薬、ダイネンおよびポドフィロトキシンを含む。これらの
特に有用なものは、例えば、ドキソルビシン、カルミノマイシン、ダウノルビシ
ン、アミノプテリン、メトトレキセート、メトプテリン、ジクロロメトトレキセ
ート、マイトマイシンＣ、ポルフィロマイシン、５−フルオロウラシン、６−メ
ルカプトプリン、ゲムシタビン、シトシンアラビノシド、ポドフィロトキシンま
たはエトポシド、エトポシドリン酸もしくはテニポシドのようなポドフィロトキ
シン誘導体、メルファラン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ロイロシジン、
ビンデシン、ロイロシンおよびパクリタクセル等を含む。他の有用な抗腫瘍薬は
、エストラムスチン、シスプラチン、カルボプラチン、シクロホスファミド、ブ
レオマイシン、ゲムシチビン、イフォサミド、メルファラン、ヘキサメチルメラ
ミン、チオテパ、シタラビン、イダトレキセート、トリメトトレキセート、ダカ
ルバジン、Ｌ−アスパラギナーゼ、カンプトテシン、ＣＰＴ−１１、トポテカン
、シトシンアラビノシド、ビカルタミド、フルタミド、ロイプロリド、ピリドベ
ンゾインドール誘導体、インターフェロンおよびインターロイキンを含む。
【００９５】 先に記載した特性により特定される本発明の化合物は以下のものを含む： （ａ）下記式Ｉで示される化合物：
【００９６】
【化１】 式中 Ｒ１ａは水素またはＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され； Ｒ１ｂは独立して下記ａ）〜ｃ）から選択され： ａ）水素 ｂ）アリール、ヘテロ環、シクロアルキル、Ｒ１０Ｏ−、−Ｎ（Ｒ１０）２ またはＣ２〜Ｃ６アルケニル、 ｃ）アリール、ヘテロ環、シクロアルキル、アルケニル、Ｒ１０Ｏ−または
−Ｎ（Ｒ１０）２により置換されたまたは置換されていないＣ１〜Ｃ６アルキル
； Ｒ３およびＲ４はＨおよびＣＨ３から選択され； Ｒ２は、Ｈ；非置換または置換アリール、非置換または置換ヘテロアリール、
【００９７】
【化２】 または、非分岐または分岐し非置換または下記１）〜５）の１種または２種以上
で置換されたＣ１〜５アルキルから選択され： １）アリール ２）ヘテロ環 ３）ＯＲ６ ４）ＳＲ６ａ、ＳＯ２Ｒ６ａ、または ５）
【００９８】
【化３】 および、Ｒ２およびＲ３は任意に同じ炭素原子に付加し； Ｒ６およびＲ７は独立して：Ｈ；下記ａ）〜ｄ）で置換されたまたは置換され
ていないＣ１〜４アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキル、アリール、ヘテロ環から
選択され： ａ）Ｃ１〜４アルコキシ、 ｂ）ハロゲン、 ｃ）パーフルオロ−Ｃ１〜４アルキル、または ｄ）アリールまたはヘテロ環； Ｒ６ａは、下記ａ）〜ｃ）で置換されたまたは置換されていないＣ１〜４アル
キルまたはＣ３〜６シクロアルキルから選択され： ａ）Ｃ１〜４アルコキシ、 ｂ）ハロゲン、または ｃ）アリールまたはヘテロ環； Ｒ８は、独立して下記ａ）〜ｃ）から選択され： ａ）水素、 ｂ）Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ１〜 ６ パーフルオロアルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｒ１０Ｏ−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０−、
ＣＮ、ＮＯ２、（Ｒ１０）２Ｎ−Ｃ（ＮＲ１０）−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（
Ｒ１０）２またはＲ１１ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１０−、および ｃ）Ｃ１〜６パーフルオロアルキル、Ｒ１０Ｏ−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０ −、（Ｒ１０）２Ｎ−Ｃ（ＮＲ１０）−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ１０）２ またはＲ１１ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１０−により置換されているＣ１〜６アルキル； Ｒ９ａは水素またはメチルを表し； Ｒ１０は、独立して水素、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６パーフルオロアルキル
、２，２，２−トリフルオロエチル、ベンジルおよびアリールから選択され； Ｒ１１は、独立してＣ１〜６アルキルおよびアリールから選択され； Ａ１およびＡ２は、独立して：結合、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ≡Ｃ−、−Ｃ（Ｏ
）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０−、Ｏ、−Ｎ（Ｒ１０）−、またはＳ（Ｏ）ｍから選
択され； Ｖは、下記ａ）〜ｅ）から選択され： ａ）水素、 ｂ）ピロリジニル、イミダゾリル、ピリジニル、チアゾリル、ピリドニル、
２−オキソピペリジニル、インドリル、キノリニル、イソキノリニルおよびチエ
ニルから選択されるヘテロ環、 ｃ）アリール、 ｄ）０〜４の炭素原子がＯ、ＳおよびＮから選択されるヘテロ原子で置換さ
れているＣ１〜Ｃ２０アルキル、および ｅ）Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、 但し、Ａ１がＳ（Ｏ）ｍの場合はＶは水素でなく、Ａ１が結合の場合はＶは水素
でなく、ｎは０、およびＡ２はＳ（Ｏ）ｍであり； Ｘは−ＣＨ２−または−Ｃ（＝Ｏ）−を表し； Ｚは、下記１）、２）から選択される： １）アリール、ヘテロアリール、アリ−ルメチル、ヘテロアリールメチル、ア
リールスルホニル、ヘテロアリールスルホニルから選択される非置換または置換
された基であり、ここで置換された基は下記ａ）〜ｋ）の１種または２種以上で
置換されている： ａ）Ｃ１〜４アルコキシ、ＮＲ６Ｒ７、Ｃ３〜６シクロアルキル、非置換ま
たは置換アリール、ヘテロ環、ＨＯ、−Ｓ（Ｏ）ｍＲ６ａまたは−Ｃ（Ｏ）ＮＲ ６ Ｒ７で置換されたまたは置換されていないＣ１〜４アルキル、 ｂ）アリールまたはヘテロ環、 ｃ）ハロゲン、 ｄ）ＯＲ６、 ｅ）ＮＲ６Ｒ７、 ｆ）ＣＮ、 ｇ）ＮＯ２、 ｈ）ＣＦ３、 ｉ）−Ｓ（Ｏ）ｍＲ６ａ、 ｊ）−Ｃ（Ｏ）ＮＲ６Ｒ７、または ｋ）Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル；または ２）非置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、非置換Ｃ３〜Ｃ６ シクロアルキルまたは置換Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、ここで置換Ｃ１〜Ｃ６ア
ルキルおよび置換Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキルは、下記ａ）〜ｈ）の１種または２
種以上で置換されている： ａ）Ｃ１〜４アルコキシ、 ｂ）ＮＲ６Ｒ７、 ｃ）Ｃ３〜６シクロアルキル、 ｄ）−ＮＲ６Ｃ（Ｏ）Ｒ７、 ｅ）ＨＯ、 ｆ）−Ｓ（Ｏ）ｍＲ６ａ、 ｇ）ハロゲン、または ｈ）パーフルオロアルキル； ｍは、０、１または２を表し； ｎは、０、１、２、３または４を表し； ｐは、０、１、２、３または４を表し；および ｒは、０〜５を表し、但しＶが水素の場合はｒは０を表す； 但し、置換基（Ｒ８）ｒ−Ｖ−Ａ１（ＣＲ１ａ ２）ｎＡ２（ＣＲ１ａ ２）ｎ−は
Ｈではない； （ｂ）下記式ＩＩで示されるファルネシルタンパクトランスフェラーゼの阻害剤
：
【００９９】
【化４】 式中 Ｒ１ａは、水素またはＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され； Ｒ１ｂは、独立して下記ａ）〜ｃ）から選択され： ａ）水素 ｂ）アリール、ヘテロ環、シクロアルキル、Ｒ１０Ｏ−、−Ｎ（Ｒ１０）２ またはＣ２〜Ｃ６アルケニル、 ｃ）非置換または置換アリール、ヘテロ環、シクロアルキル、アルケニル、
Ｒ１０Ｏ−または−Ｎ（Ｒ１０）２により置換されたまたは置換されていないＣ １ 〜Ｃ６アルキル； Ｒ１ｃは、下記ａ）〜ｃ）から選択され： ａ）水素、 ｂ）非置換または置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ここで置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル
上の置換基は、非置換または置換アリール、ヘテロ環、Ｃ３〜Ｃ１０シクロアル
キル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、Ｒ１０Ｏ−、Ｒ１１Ｓ（
Ｏ）ｍ−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０−、（Ｒ１０）２Ｎ−Ｃ（Ｏ）−、ＣＮ、（
Ｒ１０）２Ｎ−Ｃ（ＮＲ１０）−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）−、Ｒ１０ＯＣ（Ｏ）−、Ｎ ３ 、−Ｎ（Ｒ１０）２、およびＲ１１ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１０−から選択され、およ
び ｃ）非置換または置換アリール； Ｒ３およびＲ４は、独立してＨおよびＣＨ３から選択され； Ｒ２は、Ｈ；ＯＲ１０；
【０１００】
【化５】 または、非分岐または分岐し下記１）〜５）の１種または２種以上で置換された
または置換されていないＣ１〜５アルキルから選択され： １）アリール、 ２）ヘテロ環、 ３）ＯＲ６、 ４）ＳＲ６ａ、ＳＯ２Ｒ６ａ、または ５）
【０１０１】
【化６】 および、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は任意に同じ炭素原子に付加し； Ｒ６およびＲ７は、独立して、Ｈ；下記ａ）〜ｃ）で置換されたまたは置換さ
れていないＣ１〜４アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキル、アリール、ヘテロ環か
ら選択され： ａ）Ｃ１〜４アルコキシ、 ｂ）ハロゲン、または ｃ）アリールまたはヘテロ環； Ｒ６ａは、下記ａ）〜ｃ）で置換されたまたは置換されていないＣ１〜４アル
キルまたはＣ３〜６シクロアルキルから選択され： ａ）Ｃ１〜４アルコキシ、 ｂ）ハロゲン、または ｃ）アリールまたはヘテロ環； Ｒ８は、独立して、下記ａ）〜ｃ）から選択され： ａ）水素、 ｂ）Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ１〜 ６ パーフルオロアルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｒ１０Ｏ−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０−、
ＣＮ、ＮＯ２、（Ｒ１０）２Ｎ−Ｃ（ＮＲ１０）−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（
Ｒ１０）２またはＲ１１ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１０−、および ｃ）Ｃ１〜６パーフルオロアルキル、Ｒ１０Ｏ−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０ −、（Ｒ１０）２Ｎ−Ｃ（ＮＲ１０）−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ１０）２ またはＲ１１ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１０−により置換されているＣ１〜６アルキル； Ｒ９ａは水素またはメチルを表し； Ｒ１０は、独立して、水素、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６パーフルオロアルキ
ル、２，２，２−トリフルオロエチル、ベンジルおよびアリールから選択され； Ｒ１１は、独立してＣ１〜６アルキルおよびアリールから選択され； Ｒ１２は、Ｈ；非置換または置換Ｃ１〜８アルキル、非置換または置換アリー
ルまたは非置換または置換ヘテロ環から選択され、ここで置換アルキル、置換ア
リールまたは置換へテロ環は、下記１）〜１８）の１種または２種以上で置換さ
れており： １）下記ａ）〜ｈ）で置換されているまたは置換されていないアリールまた
はヘテロ環、 ａ）Ｃ１〜４アルキル、 ｂ）（ＣＨ２）ｐＯＲ６、 ｃ）（ＣＨ２）ｐＮＲ６Ｒ７、 ｄ）ハロゲン、 ｅ）ＣＮ、 ｆ）アリールまたはヘテロアリール、 ｇ）パーフルオロ−Ｃ１〜４アルキル、 ｈ）ＳＲ６ａ、Ｓ（Ｏ）Ｒ６ａ、ＳＯ２Ｒａ、 ２）Ｃ３〜６シクロアルキル、 ３）ＯＲ６、 ４）ＳＲ６ａ、Ｓ（Ｏ）Ｒ６ａまたはＳＯ２ ａ、 ５）−ＮＲ６Ｒ７、
【０１０２】
【化７】 １５）Ｎ３、 １６）Ｆ、 １７）パーフルオロ−Ｃ１〜４−アルキル、または １８）Ｃ１〜６−アルキル； Ａ１およびＡ２は、独立して、結合、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ≡Ｃ−、−Ｃ（Ｏ
）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０−、−ＮＲ１０Ｃ（Ｏ）−、Ｏ、−Ｎ（Ｒ１０）−、
またはＳ（Ｏ）ｍから選択され； Ｖは、下記ａ）〜ｅ）から選択され： ａ）水素、 ｂ）ピロリジニル、イミダゾリル、ピリジニル、チアゾリル、ピリドニル、
２−オキソピペリジニル、インドリル、キノリニル、イソキノリニルおよびチエ
ニルから選択されるヘテロ環、 ｃ）アリール、 ｄ）０〜４の炭素原子がＯ、ＳおよびＮから選択されるヘテロ原子で置換さ
れているＣ１〜Ｃ２０アルキル、および ｅ）Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、 但し、Ａ１がＳ（Ｏ）ｍの場合はＶは水素でなく、Ａ１が結合の場合はＶは水素
でなく、ｎは０、およびＡ２はＳ（Ｏ）ｍであり； Ｘは−ＣＨ２−または−Ｃ（＝Ｏ）−を表し； Ｘ１は結合、−Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＲ６Ｃ（＝Ｏ）−、−ＮＲ６−、−Ｏ−ま
たは−Ｓ（＝Ｏ）ｍ−を表し； Ｙは、下記ａ）〜ｃ）から選択され： ａ）水素 ｂ）Ｒ１０Ｏ−、Ｒ１１Ｓ（Ｏ）ｍ−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０−、（Ｒ１ ０ ）２Ｎ−Ｃ（Ｏ）−、ＣＮ、ＮＯ２、（Ｒ１０）２Ｎ−Ｃ（ＮＲ１０）−、Ｒ １２ Ｃ（Ｏ）−、Ｒ１０ＯＣ（Ｏ）−、Ｎ３、Ｆ、−Ｎ（Ｒ１０）２、またはＲ １１ ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１０−、 ｃ）非置換または置換Ｃ１〜６アルキル、ここで置換Ｃ１〜６アルキル上の
置換基は非置換または置換アリール、Ｒ１０Ｏ−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０−、
（Ｒ１０）２Ｎ−Ｃ（Ｏ）−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）−およびＲ１０ＯＣ（Ｏ）−から
選択され； Ｚは、非置換または置換アリール、ここで置換アリールは下記１）〜１１）の
１種または２種以上で置換されている： １）下記ａ）〜ｇ）で置換されているまたは置換されていないＣ１〜４アル
キル、 ａ）Ｃ１〜４アルコキシ、 ｂ）ＮＲ６Ｒ７、 ｃ）Ｃ３〜６シクロアルキル、 ｄ）アリール、置換アリールまたはヘテロ環、 ｅ）ＨＯ、 ｆ）−Ｓ（Ｏ）ｍＲ６ａ、または ｇ）−Ｃ（Ｏ）ＮＲ６Ｒ７、 ２）アリールまたはヘテロ環、 ３）ハロゲン、 ４）ＯＲ６、 ５）ＮＲ６Ｒ７、 ６）ＣＮ、 ７）ＮＯ２、 ８）ＣＦ３、 ９）−Ｓ（Ｏ）ｍＲ６ａ、 １０）−Ｃ（Ｏ）ＮＲ６Ｒ７、または １１）Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル； ｍは、０、１または２を表し； ｎは、０、１、２、３または４を表し； ｐは、０、１、２、３または４を表し；および ｒは、０〜５を表し、但し、Ｖが水素の場合はｒは０を表す；および ｖは、０、１または２を表す； （ｃ）下記式ＩＩＩで示される化合物
【０１０３】
【化８】 Ｒ１は、独立して、水素またはＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され； Ｒ２は、独立して、下記ａ）〜ｃ）から選択され： ａ）水素 ｂ）置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロ環、Ｃ３〜Ｃ１０ シクロアルキル、Ｒ１０Ｏ−またはＣ２〜Ｃ６アルケニル、 ｃ）アリール、ヘテロ環、Ｃ３〜Ｃ１０シクロアルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケ
ニル、Ｒ１０Ｏ−、または−Ｎ（Ｒ１０）２で置換されたまたは置換されていな
いＣ１〜Ｃ６アルキル； Ｒ３は、下記ａ）〜ｄ）から選択され： ａ）水素、 ｂ）Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｒ１０Ｏ−、Ｒ１１Ｓ（Ｏ）ｍ−、Ｒ１０Ｃ（
Ｏ）ＮＲ１０−、ＣＮ、Ｎ３、（Ｒ１０）２Ｎ−Ｃ（ＮＲ１０）−、Ｒ１０Ｃ（
Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ１０）２、またはＲ１１ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１０−により置換され
たまたは置換されていないＣ１〜Ｃ６アルキル、 ｃ）置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロ環、Ｃ３〜Ｃ１０ シクロアルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、フルオロ、クロロ、Ｒ１２Ｏ−、Ｒ１ １ Ｓ（Ｏ）ｍ−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０−、ＣＮ、ＮＯ２、（Ｒ１０）２Ｎ−
Ｃ（ＮＲ１０）−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）−、Ｎ３、−Ｎ（Ｒ１０）２、またはＲ１１ ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１０−、および ｄ）置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロ環およびＣ３〜Ｃ １０ シクロアルキルから選択される非置換または置換された基で置換されたＣ１ 〜Ｃ６アルキル； Ｒ４およびＲ５は、独立して、下記ａ）〜ｄ）から選択され： ａ）水素、 ｂ）Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｒ１０Ｏ−、Ｒ１１Ｓ（Ｏ）ｍ−、Ｒ１０Ｃ（
Ｏ）ＮＲ１０−、ＣＮ、Ｎ３、（Ｒ１０）２Ｎ−Ｃ（ＮＲ１０）−、Ｒ１０Ｃ（
Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ１０）２、またはＲ１１ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１０−により置換され
たまたは置換されていないＣ１〜Ｃ６アルキル、 ｃ）置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロ環、Ｃ３〜Ｃ１０ シクロアルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、フルオロ、クロロ、Ｒ１０Ｏ−、Ｒ１ １ Ｓ（Ｏ）ｍ−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０−、ＣＮ、ＮＯ２、（Ｒ１０）２Ｎ−
Ｃ（ＮＲ１０）−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）−、Ｎ３、−Ｎ（Ｒ１０）２、またはＲ１１ ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１０−、および ｄ）置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロ環およびＣ３〜Ｃ １０ シクロアルキルから選択される非置換または置換された基で置換されたＣ１ 〜Ｃ６アルキル； Ｒ６は、独立して、下記ａ）〜ｃ）から選択され： ａ）水素 ｂ）置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロ環、Ｃ１〜６アル
キル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ１〜６パーフルオロアルキ
ル、Ｆ、Ｃｌ、Ｒ１０Ｏ−、アリロキシ、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０−、ＣＮ、Ｎ
Ｏ２、（Ｒ１０）２Ｎ−Ｃ（ＮＲ１０）−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ１０） ２ 、（Ｒ１２）２ＮＣ（Ｏ）−またはＲ１１ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１０−、および ｃ）Ｃ１〜６パーフルオロアルキル、Ｒ１０Ｏ−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０ −、（Ｒ１０）２Ｎ−Ｃ（ＮＲ１０）−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）、−Ｎ（Ｒ１０）２、
またはＲ１１ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１０−で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル； Ｒ７は、独立して、下記ａ）〜ｅ）から選択され： ａ）水素、 ｂ）非置換または置換アリール、 ｃ）非置換または置換ヘテロ環、 ｄ）非置換または置換シクロアルキル、および ｅ）水素または、アリール、ヘテロ環およびシクロアルキルから選択される
非置換または置換された基で置換されたＣ１〜６アルキル；ここでヘテロ環は、
ピロリジニル、イミダゾリル、ピリジニル、チアゾリル、ピリドニル、インドリ
ル、キノリニル、イソキノリニル、およびチエニルから選択され； Ｒ８は、下記ａ）〜ｃ）から選択され： ａ）水素、 ｂ）Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ１〜 ６ パーフルオロアルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｒ１０Ｏ−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０−、
ＣＮ、ＮＯ２、（Ｒ１０）２Ｎ−Ｃ（ＮＲ１０）−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）−、Ｒ１０ ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ１０）２またはＲ１１ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１０−、および ｃ）Ｃ１〜６パーフルオロアルキル、Ｒ１０Ｏ−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０ −、（Ｒ１０）２Ｎ−Ｃ（ＮＲ１０）−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）−、Ｒ１０ＯＣ（Ｏ）
−、−Ｎ（Ｒ１０）２またはＲ１１ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１０−により置換されている
Ｃ１〜６アルキル； Ｒ９は、下記ａ）〜ｃ）から選択され： ａ）水素、 ｂ）Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ１〜６パーフルオロアル
キル、Ｆ、Ｃｌ、Ｒ１０Ｏ−、Ｒ１１Ｓ（Ｏ）ｍ−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０−
、ＣＮ、ＮＯ２、（Ｒ１０）２Ｎ−Ｃ（ＮＲ１０）−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）−、Ｒ１ ０ ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ１０）２、またはＲ１１ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１０−、およ
び ｃ）Ｃ１〜Ｃ６パーフルオロアルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｒ１０Ｏ−、Ｒ１１Ｓ（Ｏ） ｍ −、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０−、ＣＮ、（Ｒ１０）２Ｎ−Ｃ（ＮＲ１０）−、
Ｒ１０Ｃ（Ｏ）−、Ｒ１０ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ１０）２、またはＲ１１ＯＣ
（Ｏ）ＮＲ１０−により置換されたまたは置換されていないＣ１〜Ｃ６アルキル
； Ｒ１０は、独立して、水素、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６パーフルオロアルキ
ル、２，２，２−トリフルオロエチル、ベンジルおよびアリールから選択され； Ｒ１１は、独立して、Ｃ１〜６アルキルおよびアリールから選択され； Ｒ１２は、独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ＣＯ２Ｒ１０で置換された
Ｃ１〜Ｃ６アルキル、アリールで置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル、置換アリール
で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル、ヘテロ環で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル、
置換ヘテロ環で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル、アリールおよび置換アリールか
ら選択され； Ａ１およびＡ２は、独立して：結合、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ≡Ｃ−、−Ｃ（Ｏ
）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ７−、−ＮＲ７Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ７−、−Ｎ
Ｒ７Ｓ（Ｏ）２−、Ｏ、−Ｎ（Ｒ７）−、またはＳ（Ｏ）ｍから選択され； Ａ３は、結合、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ７−、−ＮＲ７Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ ７ −、−ＮＲ７Ｓ（Ｏ）２−、または−Ｎ（Ｒ７）−から選択され； Ａ４は、結合、Ｏ、−Ｎ（Ｒ７）−またはＳから選択され； Ｖは、下記ａ）〜ｅ）から選択され： ａ）水素、 ｂ）ピロリジニル、イミダゾリル、ピリジニル、チアゾリル、ピリドニル、
２−オキソピペリジニル、インドリル、キノリニル、イソキノリニルおよびチエ
ニルから選択されるヘテロ環、 ｃ）アリール、 ｄ）０〜４の炭素原子がＯ、ＳおよびＮから選択されるヘテロ原子で置換さ
れているＣ１〜Ｃ２０アルキル、および ｅ）Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、 但し、Ａ１がＳ（Ｏ）ｍの場合はＶは水素でなく、Ａ１が結合の場合はＶは水素
でなく、ｎは０、およびＡ２はＳ（Ｏ）ｍであり； Ｚは、独立して（Ｒ１）２またはＯを表し； ｍは０、１または２を表し； ｎは０、１、２、３または４を表し； ｐは０、１、２、３または４を表し； ｑは０または１を表し；および ｒは、０〜５を表し、但し、Ｖが水素の場合はｒは０を表す； （ｄ）下記式Ａで示される化合物：
【０１０４】
【化９】 式中 Ｒ１ａは、水素またはＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され； Ｒ１ｂは、独立して、下記ａ）〜ｃ）から選択され： ａ）水素 ｂ）アリール、ヘテロ環、シクロアルキル、Ｒ１０Ｏ−、−Ｎ（Ｒ１０）２ またはＣ２〜Ｃ６アルケニル、 ｃ）アリール、ヘテロ環、シクロアルキル、アルケニル、Ｒ１０Ｏ−または
−Ｎ（Ｒ１０）２により置換されたまたは置換されていないＣ１〜Ｃ６アルキル
； Ｒ２ａ、Ｒ２ｂおよびＲ３は、独立して、下記ａ）〜ｄ）から選択され： ａ）水素、 ｂ）Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｒ１０Ｏ−、Ｒ１１Ｓ（Ｏ）ｍ−、Ｒ１０Ｃ（
Ｏ）ＮＲ１０−、ＣＮ、Ｎ３、（Ｒ１０）２Ｎ−Ｃ（ＮＲ１０）−、Ｒ１０Ｃ（
Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ１０）２、またはＲ１１ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１０−により置換され
たまたは置換されていないＣ１〜Ｃ６アルキル、 ｃ）非置換または置換アリール、非置換または置換ヘテロ環、非置換または
置換されたシクロアルキル、アルケニル、Ｒ１０Ｏ−、Ｒ１１Ｓ（Ｏ）ｍ−、Ｒ １０ Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０−、ＣＮ、ＮＯ２、（Ｒ１０）２Ｎ−Ｃ（ＮＲ１０）−、
Ｒ１０Ｃ（Ｏ）−、Ｒ１０ＯＣ（Ｏ）−、Ｎ３、−Ｎ（Ｒ１０）２、ハロゲンま
たはＲ１１ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１０−、および ｄ）アリール、ヘテロ環およびＣ３〜Ｃ１０シクロアルキルから選択される
非置換または置換基で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル； Ｒ４は、
【０１０５】
【化１０】 を表し； Ｒ５は水素を表し； Ｒ８は、下記ａ）〜ｃ）から選択され： ａ）水素 ｂ）Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、
Ｃ１〜Ｃ６パーフルオロアルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｒ１０Ｏ−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ １０ −、ＣＮ、ＮＯ２、（Ｒ１０）２Ｎ−Ｃ（ＮＲ１０）−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）−
、Ｒ１０ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ１０）２、またはＲ１１ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１０−
、および ｃ）Ｃ１〜Ｃ６パーフルオロアルキル、Ｒ１０Ｏ−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ１ ０ −、（Ｒ１０）２Ｎ−Ｃ（ＮＲ１０）−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）−、Ｒ１０ＯＣ（Ｏ
）−、−Ｎ（Ｒ１０）２、またはＲ１１ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１０−で置換されたＣ１ 〜Ｃ６アルキル； Ｒ９ａは、独立して、Ｃ１〜Ｃ６アルキルおよびアリールから選択され； Ｒ１０は、独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６パーフルオロア
ルキル、２，２，２−トリフルオロエチル、ベンジルおよびアリールから選択さ
れ； Ｒ１１は、独立して、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ベンジルおよびアリールから選択
され； Ａ１およびＡ２は、独立して、結合、−ＣＨ＝ＣＨ−、−Ｃ≡Ｃ−、−Ｃ（Ｏ
）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ８−、−ＮＲ８Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｎ（Ｒ８）−、−
Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ８）−、−Ｎ（Ｒ８）Ｓ（Ｏ）２−、またはＳ（Ｏ）ｍから選
択され； Ｖは、下記ａ）〜ｅ）から選択され： ａ）水素、 ｂ）ピロリジニル、イミダゾリル、ピリジニル、チアゾリル、ピリドニル、
２−オキソピペリジニル、インドリル、キノリニル、イソキノリニルおよびチエ
ニルから選択されるヘテロ環、 ｃ）アリール、 ｄ）０〜４の炭素原子がＯ、ＳおよびＮから選択されるヘテロ原子で置換さ
れているＣ１〜Ｃ２０アルキル、および ｅ）Ｃ２〜Ｃ２０アルケニル、 但し、Ａ１がＳ（Ｏ）ｍの場合はＶは水素でなく、Ａ１が結合の場合はＶは水素
でなく、ｎは０、およびＡ２はＳ（Ｏ）ｍであり； ＺはＨ２またはＯを表し； ｍは、０、１または２を表し； ｎは、０、１、２、３または４を表し； ｐは、独立して０、１、２、３または４を表し； ｒは、０〜５を表し、但しＶが水素の場合はｒは０を表す； または、薬学的に許容できるそれらの塩。
【０１０６】 本発明の式Ｉで示される化合物のさらなる実施形態において、ファルネシルタ
ンパクトランスフェラーゼの阻害剤は、下記式Ｉ−ａで示される：
【０１０７】
【化１１】 式中 Ｒ１ｂは独立して下記ａ）〜ｃ）から選択され： ａ）水素 ｂ）アリール、ヘテロ環、シクロアルキル、Ｒ１０Ｏ−、−Ｎ（Ｒ１０）２ またはＣ２〜Ｃ６アルケニル、 ｃ）アリール、ヘテロ環、シクロアルキル、アルケニル、Ｒ１０Ｏ−または
−Ｎ（Ｒ１０）２により置換されたまたは置換されていないＣ１〜Ｃ６アルキル
； Ｒ２は、Ｈ；非置換または置換アリール、または、非分岐または分岐し非置換
または下記１）〜４）の１種または２種以上で置換されたＣ１〜５アルキルから
選択され： １）アリール ２）ヘテロ環 ３）ＯＲ６または ４）ＳＲ６ａ； Ｒ６およびＲ７は、独立して、下記ａ）〜ｄ）で置換されたまたは置換されて
いないＣ１〜４アルキル、アリール、ヘテロアリールから選択され： ａ）Ｃ１〜４アルコキシ、 ｂ）ハロゲン、 ｃ）パーフルオロ−Ｃ１〜４アルキル、または ｄ）アリールまたはヘテロ環； Ｒ６ａは、下記ａ）、ｂ）で置換されたまたは置換されていないＣ１〜４アル
キルから選択され： ａ）Ｃ１〜４アルコキシ、または ｃ）アリールまたはヘテロ環； Ｒ８は、独立して下記ａ）〜ｃ）から選択され： ａ）水素、 ｂ）Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ１〜 ６ パーフルオロアルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｒ１０Ｏ−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０−、
ＣＮ、ＮＯ２、（Ｒ１０）２Ｎ−Ｃ（ＮＲ１０）−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（
Ｒ１０）２またはＲ１１ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１０−、および ｃ）Ｃ１〜６パーフルオロアルキル、Ｒ１０Ｏ−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０ −、（Ｒ１０）２Ｎ−Ｃ（ＮＲ１０）−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ１０）２ またはＲ１１ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１０−により置換されているＣ１〜６アルキル； Ｒ１０は、独立して水素、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６パーフルオロアルキル
、２，２，２−トリフルオロエチル、ベンジルおよびアリールから選択され； Ｒ１１は、独立してＣ１〜６アルキルおよびアリールから選択され； Ｘは−ＣＨ２−または−Ｃ（＝Ｏ）−を表し； Ｚは、アリール、アリ−ルメチルおよびアリールスルホニルから選択される非
置換または置換された基であり、ここで置換された基は下記ａ）〜ｋ）の１種ま
たは２種以上で置換されている： ａ）Ｃ１〜４アルコキシ、ＮＲ６Ｒ７、Ｃ３〜６シクロアルキル、非置換ま
たは置換アリール、ヘテロ環、ＨＯ、−Ｓ（Ｏ）ｍＲ６ａまたは−Ｃ（Ｏ）ＮＲ ６ Ｒ７で置換されたまたは置換されていないＣ１〜４アルキル、 ｂ）アリールまたはヘテロ環、 ｃ）ハロゲン、 ｄ）ＯＲ６、 ｅ）ＮＲ６Ｒ７、 ｆ）ＣＮ、 ｇ）ＮＯ２、 ｈ）ＣＦ３、 ｉ）−Ｓ（Ｏ）ｍＲ６ａ、 ｊ）−Ｃ（Ｏ）ＮＲ６Ｒ７、または ｋ）Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル； ｍは、０、１または２を表し； ｐは、０、１、２、３または４を表し；および ｒは、０〜３を表す； または、薬学的に許容できるその塩である。
【０１０８】 本発明のさらなる実施形態において、ファルネシルタンパクトランスフェラー
ゼの阻害剤は下記式ＩＩ−ａにより示される：
【０１０９】
【化１２】 式中 Ｒ１ｂは、独立して下記ａ）〜ｃ）から選択され： ａ）水素 ｂ）アリール、ヘテロ環、シクロアルキル、Ｒ１０Ｏ−、−Ｎ（Ｒ１０）２ またはＣ２〜Ｃ６アルケニル、 ｃ）非置換または置換アリール、ヘテロ環、シクロアルキル、アルケニル、
Ｒ１０Ｏ−または−Ｎ（Ｒ１０）２により置換されたまたは置換されていないＣ １ 〜Ｃ６アルキル； Ｒ１ｃは、下記ａ）〜ｃ）から選択され： ａ）水素、 ｂ）非置換または置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ここで置換Ｃ１〜Ｃ６アルキル
上の置換基は、非置換または置換アリール、ヘテロ環、Ｃ３〜Ｃ１０シクロアル
キル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、Ｒ１０Ｏ−、Ｒ１１Ｓ（
Ｏ）ｍ−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０−、（Ｒ１０）２Ｎ−Ｃ（Ｏ）−、ＣＮ、（
Ｒ１０）２Ｎ−Ｃ（ＮＲ１０）−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）−、Ｒ１０ＯＣ（Ｏ）−、Ｎ ３ 、−Ｎ（Ｒ１０）２、およびＲ１１ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１０−から選択され、およ
び ｃ）非置換または置換アリール； Ｒ６、Ｒ７およびＲ７ａは、独立して、Ｈ；下記ａ）〜ｃ）で置換されたまた
は置換されていないＣ１〜４アルキル、Ｃ３〜６シクロアルキル、アリール、ヘ
テロ環から選択され： ａ）Ｃ１〜４アルコキシ、 ｂ）ハロゲン、または ｃ）アリールまたはヘテロ環； Ｒ６ａは、下記ａ）〜ｃ）で置換されたまたは置換されていないＣ１〜４アル
キルまたはＣ３〜６シクロアルキルから選択され： ａ）Ｃ１〜４アルコキシ、 ｂ）ハロゲン、または ｃ）アリールまたはヘテロ環； Ｒ８は、独立して、下記ａ）〜ｃ）から選択され： ａ）水素、 ｂ）Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ１〜 ６ パーフルオロアルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｒ１０Ｏ−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０−、
ＣＮ、ＮＯ２、（Ｒ１０）２Ｎ−Ｃ（ＮＲ１０）−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（
Ｒ１０）２またはＲ１１ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１０−、および ｃ）Ｃ１〜６パーフルオロアルキル、Ｒ１０Ｏ−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０ −、（Ｒ１０）２Ｎ−Ｃ（ＮＲ１０）−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ１０）２ またはＲ１１ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１０−により置換されているＣ１〜６アルキル； Ｒ１０は、独立して、水素、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６パーフルオロアルキ
ル、２，２，２−トリフルオロエチル、ベンジルおよびアリールから選択され； Ｒ１１は、独立してＣ１〜６アルキルおよび置換または非置換アリールから選
択され； Ｒ１２は、Ｈ；非置換または置換Ｃ１〜８アルキル、非置換または置換アリー
ルまたは非置換または置換ヘテロ環から選択され、ここで置換アルキル、置換ア
リールまたは置換へテロ環は、下記１）〜１０）の１種または２種以上で置換さ
れており： １）下記ａ）〜ｄ）で置換されているまたは置換されていないアリールまた
はヘテロ環、 ａ）Ｃ１〜４アルキル、 ｂ）ハロゲン、 ｃ）ＣＮ、 ｄ）パーフルオロ−Ｃ１〜４アルキル、 ２）Ｃ３〜６シクロアルキル、 ３）ＯＲ６、 ４）ＳＲ６ａ、Ｓ（Ｏ）Ｒ６ａまたはＳＯ２ ａ、
【０１１０】
【化１３】 ７）Ｎ３、 ８）Ｆ、 ９）パーフルオロ−Ｃ１〜４−アルキル、または １０）Ｃ１〜６−アルキル； Ｘ１は結合、−Ｃ（＝Ｏ）−またはＳ（＝Ｏ）ｍ−を表し； Ｙは、下記ａ）〜ｃ）から選択され： ａ）水素 ｂ）Ｒ１０Ｏ−、Ｒ１１Ｓ（Ｏ）ｍ−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０−、（Ｒ１ ０ ）２Ｎ−Ｃ（Ｏ）−、ＣＮ、ＮＯ２、（Ｒ１０）２Ｎ−Ｃ（ＮＲ１０）−、Ｒ １２ Ｃ（Ｏ）−、Ｒ１０ＯＣ（Ｏ）−、Ｎ３、Ｆ、−Ｎ（Ｒ１０）２、またはＲ １１ ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１０−、 ｃ）非置換または置換Ｃ１〜６アルキル、ここで置換Ｃ１〜６アルキル上の
置換基は非置換または置換アリール、Ｒ１０Ｏ−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０−、
（Ｒ１０）２Ｎ−Ｃ（Ｏ）−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）−およびＲ１０ＯＣ（Ｏ）−から
選択され； Ｚは、非置換または置換アリール、ここで置換アリールは下記１）〜１１）の
１種または２種以上で置換されている： １）下記ａ）〜ｇ）で置換されているまたは置換されていないＣ１〜４アル
キル、 ａ）Ｃ１〜４アルコキシ、 ｂ）ＮＲ６Ｒ７、 ｃ）Ｃ３〜６シクロアルキル、 ｄ）アリール、置換アリールまたはヘテロ環、 ｅ）ＨＯ、 ｆ）−Ｓ（Ｏ）ｍＲ６ａ、または ｇ）−Ｃ（Ｏ）ＮＲ６Ｒ７、 ２）アリールまたはヘテロ環、 ３）ハロゲン、 ４）ＯＲ６、 ５）ＮＲ６Ｒ７、 ６）ＣＮ、 ７）ＮＯ２、 ８）ＣＦ３、 ９）−Ｓ（Ｏ）ｍＲ６ａ、 １０）−Ｃ（Ｏ）ＮＲ６Ｒ７、または １１）Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル； ｍは、０、１または２を表し； ｐは、０または２を表し； ｒは、０〜３を表し；および ｖは、０、１または２を表す； または、薬学的に許容できるその塩である。
【０１１１】 本発明のさらなる実施形態において、ファルネシルタンパクトランスフェラー
ゼの阻害剤は下記式ＩＩＩ−ａにより示される：
【０１１２】
【化１４】 式中 Ｒ２は、独立して、下記ａ）〜ｃ）から選択され： ａ）水素 ｂ）アリール、ヘテロ環、シクロアルキル、Ｒ１０Ｏ−、Ｎ（Ｒ１０）２ま
たはＣ２〜Ｃ６アルケニル、 ｃ）アリール、ヘテロ環、シクロアルキル、アルケニル、Ｒ１０Ｏ−、また
は−Ｎ（Ｒ１０）２で置換されたまたは置換されていないＣ１〜Ｃ６アルキル；
Ｒ３は、下記ａ）〜ｄ）から選択され： ａ）水素、 ｂ）Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｒ１０Ｏ−、Ｒ１１Ｓ（Ｏ）ｍ−、Ｒ１０Ｃ（
Ｏ）ＮＲ１０−、ＣＮ、Ｎ３、（Ｒ１０）２Ｎ−Ｃ（ＮＲ１０）−、Ｒ１０Ｃ（
Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ１０）２、またはＲ１１ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１０−により置換され
たまたは置換されていないＣ１〜Ｃ６アルキル、 ｃ）置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロ環、Ｃ３〜Ｃ１０ シクロアルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、フルオロ、クロロ、Ｒ１２Ｏ−、Ｒ１ １ Ｓ（Ｏ）ｍ−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０−、ＣＮ、ＮＯ２、（Ｒ１０）２Ｎ−
Ｃ（ＮＲ１０）−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）−、Ｎ３、−Ｎ（Ｒ１０）２、またはＲ１１ ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１０−、および ｄ）置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロ環およびＣ３〜Ｃ １０ シクロアルキルから選択される非置換または置換された基で置換されたＣ１ 〜Ｃ６アルキル； Ｒ４およびＲ５は、独立して、下記ａ）〜ｄ）から選択され： ａ）水素、 ｂ）Ｒ１０Ｏ−または−Ｎ（Ｒ１０）２により置換されたまたは置換されて
いないＣ１〜Ｃ６アルキル、 ｃ）置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロ環、Ｃ３〜Ｃ１０ シクロアルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、フルオロ、クロロ、Ｒ１０Ｏ−、Ｒ１ １ Ｓ（Ｏ）ｍ−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０−、ＣＮ、ＮＯ２、（Ｒ１０）２Ｎ−
Ｃ（ＮＲ１０）−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）−、Ｎ３、−Ｎ（Ｒ１０）２、またはＲ１１ ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１０−、および ｄ）置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロ環およびＣ３〜Ｃ １０ シクロアルキルから選択される非置換または置換された基で置換されたＣ１ 〜Ｃ６アルキル； Ｒ６は、独立して、下記ａ）〜ｃ）から選択され： ａ）水素 ｂ）置換または非置換アリール、置換または非置換ヘテロ環、Ｃ１〜６アル
キル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ１〜６パーフルオロアルキ
ル、Ｆ、Ｃｌ、Ｒ１０Ｏ−、アリロキシ、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０−、ＣＮ、Ｎ
Ｏ２、（Ｒ１０）２Ｎ−Ｃ（ＮＲ１０）−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ１０） ２ 、（Ｒ１２）２ＮＣ（Ｏ）−またはＲ１１ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１０−、および ｃ）Ｃ１〜６パーフルオロアルキル、Ｒ１０Ｏ−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０ −、（Ｒ１０）２Ｎ−Ｃ（ＮＲ１０）−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）、−Ｎ（Ｒ１０）２、
またはＲ１１ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１０−で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル； Ｒ７は、独立して、下記ａ）〜ｅ）から選択され： ａ）水素、 ｂ）非置換または置換アリール、 ｃ）非置換または置換ヘテロ環、 ｄ）非置換または置換シクロアルキル、および ｅ）水素または、アリール、ヘテロ環およびシクロアルキルから選択される
非置換または置換された基で置換されたＣ１〜６アルキル；ここでヘテロ環は、
ピロリジニル、イミダゾリル、ピリジニル、チアゾリル、ピリドニル、インドリ
ル、キノリニル、イソキノリニル、およびチエニルから選択され； Ｒ８は、下記ａ）〜ｃ）から選択され： ａ）水素、 ｂ）Ｃ１〜６アルキル、Ｃ２〜６アルケニル、Ｃ２〜６アルキニル、Ｃ１〜 ６ パーフルオロアルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｒ１０Ｏ−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０−、
ＣＮ、ＮＯ２、（Ｒ１０）２Ｎ−Ｃ（ＮＲ１０）−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（
Ｒ１０）２またはＲ１１ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１０−、および ｃ）Ｃ１〜６パーフルオロアルキル、Ｒ１０Ｏ−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０ −、（Ｒ１０）２Ｎ−Ｃ（ＮＲ１０）−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ１０）２ またはＲ１１ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１０−により置換されているＣ１〜６アルキル； Ｒ１０は、独立して、水素、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６パーフルオロアルキ
ル、２，２，２−トリフルオロエチル、ベンジルおよびアリールから選択され； Ｒ１１は、独立して、Ｃ１〜６アルキルおよびアリールから選択され； Ｒ１２は、独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ＣＯ２Ｒ１０で置換された
Ｃ１〜Ｃ６アルキル、アリールで置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル、置換アリール
で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル、ヘテロ環で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル、
置換ヘテロ環で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル、アリールおよび置換アリールか
ら選択され； Ａ３は、結合、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ７−、−ＮＲ７Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ ７ −、−ＮＲ７Ｓ（Ｏ）２−、または−Ｎ（Ｒ７）−から選択され； Ｚは、独立してＨ２またはＯを表し； ｍは０、１または２を表し； ｎは０、１、２、３または４を表し； ｐは０、１、２、３または４を表し； ｑは０または１を表し；および ｒは、０〜３を表す； または、薬学的に許容できるその塩である。
【０１１３】 本発明の式Ａで示される化合物のさらなる実施形態において、ファルネシルタ
ンパクトランスフェラーゼの阻害剤は下記式Ａ−ｉで示される：
【０１１４】
【化１５】 式中 Ｒ１ｂは、独立して、下記ａ）〜ｃ）から選択され： ａ）水素 ｂ）アリール、ヘテロ環、シクロアルキル、Ｒ１０Ｏ−、−Ｎ（Ｒ１０）２ またはＣ２〜Ｃ６アルケニル、 ｃ）アリール、ヘテロ環、シクロアルキル、アルケニル、Ｒ１０Ｏ−または
−Ｎ（Ｒ１０）２により置換されたまたは置換されていないＣ１〜Ｃ６アルキル
； Ｒ２ａおよびＲ２ｂは、独立して、下記ａ）〜ｄ）から選択され： ａ）水素、 ｂ）Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｒ１０Ｏ−、Ｒ１１Ｓ（Ｏ）ｍ−、Ｒ１０Ｃ（
Ｏ）ＮＲ１０−、ＣＮ、Ｎ３、（Ｒ１０）２Ｎ−Ｃ（ＮＲ１０）−、Ｒ１０Ｃ（
Ｏ）−、Ｒ１０ＯＣ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ１０）２、またはＲ１１ＯＣ（Ｏ）ＮＲ １０ −により置換されたまたは置換されていないＣ１〜Ｃ６アルキル、 ｃ）非置換または置換アリール、非置換または置換ヘテロ環、非置換または
置換されたシクロアルキル、アルケニル、Ｒ１２Ｏ−、Ｒ１１Ｓ（Ｏ）ｍ−、Ｒ １０ Ｃ（Ｏ）ＮＲ１０−、ＣＮ、ＮＯ２、（Ｒ１０）２Ｎ−Ｃ（ＮＲ１０）−、
Ｒ１０Ｃ（Ｏ）−、Ｒ１０ＯＣ（Ｏ）−、Ｎ３、−Ｎ（Ｒ１０）２、ハロゲンま
たはＲ１１ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１０−、および ｄ）アリール、ヘテロ環およびＣ３〜Ｃ１０シクロアルキルから選択される
非置換または置換基で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル； Ｒ４は、
【０１１５】
【化１６】 であり； Ｒ５は水素を表し； Ｒ８は、独立して、下記ａ）〜ｃ）から選択され： ａ）水素 ｂ）Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニル、Ｃ２〜Ｃ６アルキニル、
Ｃ１〜Ｃ６パーフルオロアルキル、Ｆ、Ｃｌ、Ｒ１０Ｏ−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ １０ −、ＣＮ、ＮＯ２、（Ｒ１０）２Ｎ−Ｃ（ＮＲ１０）−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）−
、−Ｎ（Ｒ１０）２、またはＲ１１ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１０−、および ｃ）Ｃ１〜Ｃ６パーフルオロアルキル、Ｒ１０Ｏ−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）ＮＲ１ ０ −、（Ｒ１０）２Ｎ−Ｃ（ＮＲ１０）−、Ｒ１０Ｃ（Ｏ）−、−Ｎ（Ｒ１０） ２ 、またはＲ１１ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１０−で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル； Ｒ１０は、独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、置換または非置換Ｃ１〜Ｃ ６ アラルキル、および置換または非置換アリールから選択され； Ｒ１１は、独立して、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ベンジルおよびアリールから選択
され； ＺはＨ２またはＯを表し； ｍは、０、１または２を表し； ｎは、０、１、２、３または４を表し； ｐは、独立して０、１または２を表し；および ｒは、０〜５を表す； または、薬学的に許容できるその塩である。
【０１１６】 プレニルタンパクトランスフェラーゼの阻害剤であり、従って本発明において
有用である特定の化合物は以下のものを含む： １−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−２（Ｓ）−［（３−ピ
リジル）メトキシエチル）］−４−（１−ナフトイル）ピペラジン １−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−２（Ｓ）−（ベンジロ
キシメチル）−４−（１−ナフトイル）ピペラジン １−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−２（Ｓ）−（ベンジロ
キシメチル）−４−［７−（２，３−ジヒドロベンゾフロイル）］ピペラジン １−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−２（Ｓ）−（ベンズア
ミド）−４−（１−ナフトイル）ピペラジン １−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−２（Ｓ）−［４−（５
−ジメチルアミノ−１−ナフタレンスルホンアミド）−１−ブチル］−４−（１
−ナフトイル）ピペラジン Ｎ−［２（Ｓ）−（１−（４−ニトロフェニルメチル）−１Ｈ−イミダゾール
−５−イルアセチル）アミノ−３（Ｓ）−メチルフェニル]−Ｎ−１−ナフチル メチル−グリシル−メチオニン Ｎ−［２（Ｓ）−（１−（４−ニトロフェニルメチル）−１Ｈ−イミダゾール
−５−イルアセチル）アミノ−３（Ｓ）−メチルフェニル]−Ｎ−１−ナフチル メチル−グリシル−メチオニンメチルエステル Ｎ−［２（Ｓ）−［（１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５
−イル］アセチルアミノ）−３（Ｓ）−メチルフェニル]−Ｎ−（１−ナフチル メチル）−グリシル−メチオニン Ｎ−［２（Ｓ）−［（１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５
−イル］アセチルアミノ）−３（Ｓ）−メチルフェニル]−Ｎ−（１−ナフチル メチル）−グリシル−メチオニンメチルエステル ２（Ｓ）−ｎ−ブチル−４−（１−ナフトイル）−１−［１−（２−ナフチル
メチル）イミダゾール−５−イルメチル］−ピペラジン ２（Ｓ）−ｎ−ブチル−１−［（１−（４−シアノベンジル）イミダゾール−
５−イルメチル］−４−（１−ナフトイル）ピペラジン １−｛［１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］アセ
チル｝−２（Ｓ）−ｎ−ブチル−４−（１−ナフトイル）ピペラジン １−（３−クロロフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジル）イミダゾリ
ルメチル］−２−ピペラジノン １−フェニルー４−［１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−−イミダゾール−
５−イルエチル］−ピペラジン−２−オン １−（３−トリフルオロメチルフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジル
）−１Ｈ−イミダゾール−５−イルメチル］−ピペラジノン２−オン １−（３−ブロモフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イ
ミダゾール−５−イルメチル］−ピペラジノン２−オン ５（Ｓ）−２−［２，２，２−トリフルオロエトキシ］エチル）−１−（３−
トリフルオロメチルフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジル）−４−イミ
ダゾリルメチル］−ピペラジン−２−オン １−（５，６，７，８−テトラヒドロナフチル）−４−［１−（４−シアノベ
ンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イルメチル］−ピペラジン−２−オン １−（２−メチル−３−クロロフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジル
）−４−イミダゾリルメチル］−ピペラジン−２−オン ２（ＲＳ）−｛［１−（ナフト−２−イルメチル）−１Ｈ−イミダゾール−５
−イル）アセチル｝アミノ−３−（ｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−Ｎー（２
−メチルベンジル）プロピオンアミド Ｎ−｛１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イルメチル｝
−４（Ｒ）−ベンジロキシ−２（Ｓ）−｛Ｎ’−アセチル−Ｎ’−３−クロロベ
ンジル｝アミノメチルピロリジン Ｎ−｛１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イルエチル｝
−４（Ｒ）−ベンジロキシ−２（Ｓ）−｛Ｎ’−アセチル−Ｎ’−３−クロロベ
ンジル｝アミノメチルピロリジン １−［１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イルアセチル
｝ピロリジンー２（Ｓ）−イルメチル］−（Ｎ−２−メチルベンジル）−グリシ
ンＮ’−（３−クロロフェニルメチル）アミド １−［１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イルアセチル
｝ピロリジンー２（Ｓ）−イルメチル］−（Ｎ−２−メチルベンジル）−グリシ
ンＮ’−メチル−Ｎ’−（３−クロロフェニルメチル）アミド （Ｓ）−２−［（１−（４−シアノベンジル）−５−イミダゾリルメチル）ア
ミノ］−Ｎ−（ベンジロキシカルボニル）−Ｎ−（３−クロロベンジル）−４−
（メタンスルホニル）ブタンアミン １−（３，５−ジクロロベンゼンスルホニル）−３（Ｓ）−［Ｎ−（１−（４
−シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イルメチル）カルバモイル］ピ
ペリジン Ｎ−｛［１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］メチ
ル｝−４−（３−メチルフェニル）−４−ヒドロキシピペリジン Ｎ−｛［１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］メチ
ル｝−４−（３−クロロフェニル）−４−ヒドロキシピペリジン ４−［１−（４−シアノベンジル）−５−イミダゾリルメチル］−１−（２，
３−ジメチルフェニル）−ピペラジン−２，３−ジオン １−（２−（３−トリフルオロメトキシフェニル）−ピリド−５−イルメチル
）−５−（４−シアノベンジル）イミダゾール ４−｛５−［１−（３−クロローフェニル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ
−ピリジン−４−イルメチル］−イミダゾール−１−イルメチル｝−２−メトキ
シ−ベンゾニトリル ３（Ｒ）−３−［１−（４−シアノベンジル）イミダゾール−５−イル−エチ
ルアミノ］−５−フェニル−１−（２，２，２−トリフルオロエチル）−Ｈ−ベ
ンゾ［ｅ］［１，４］ジアゼピン ３（Ｓ）−３−［１−（４−シアノベンジル）イミダゾール−５−イル−エチ
ルアミノ］−５−フェニル−１−（２，２，２−トリフルオロエチル）−Ｈ−ベ
ンゾ［ｅ］［１，４］ジアゼピン Ｎ−［１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イルアセチル
）ピロリジン−２（Ｓ）−イルメチル］−Ｎ−（１−ナフチルメチル）グリシル
−メチオニン Ｎ−［１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イルアセチル
）ピロリジン−２（Ｓ）−イルメチル］−Ｎ−（１−ナフチルメチル）グリシル
−メチオニンメチルエステル Ｎ−［１−（１Ｈ−イミダゾール−４−イルプロピオニル）ピロリジン−２（Ｓ
）−イルメチル］−Ｎ−（２−メトキシベンジル）グリシル−メチオニン Ｎ−［１−（１Ｈ−イミダゾール−４−イルプロピオニル）ピロリジン−２（
Ｓ）−イルメチル］−Ｎ−（２−メトキシベンジル）グリシル−メチオニンメチ
ルエステル ２（Ｓ）−（４−アセトアミド−１−ブチル）−１−［２（Ｒ）−アミノ−３
−メルカプトプロピル］−４−（１−ナフトイル）ピペラジン ２（ＲＳ）−｛［１−（ナフト−２−イルメチル）−１Ｈ−イミダゾール−５
−イル）］アセチル｝アミノ−３−（ｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−Ｎ−シ
クロヘキシル−プロピオンアミド １−｛２（ＲＳ）−［１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５
−イル）］プロパノール｝−２（Ｓ）−ｎ−ブチル−４−（１−ナフトイル）ピ
ペラジン １−［１−（４−シアノベンジル）イミダゾール−５−イルメチル］−４−（
ジフェニルメチル）ピペラジン １−（ジフェニルメチル）−３（Ｓ）−［Ｎ−（１−（４−シアノベンジル）
−２−メチルー１Ｈ−イミダゾール−５−イルメチル）−Ｎ−（アセチル）アミ
ノメチル］ピペリジン Ｎ−[１−（１Ｈ−イミダゾール−４−イルプロピオニル）ピロリジン−２（ Ｓ）−イルメチル］−Ｎ−（２−クロロベンジル）グリシル−メチオニン Ｎ−[１−（１Ｈ−イミダゾール−４−イルプロピオニル）ピロリジン−２（ Ｓ）−イルメチル］−Ｎ−（２−クロロベンジル）グリシル−メチオニンメチル
エステル ３（Ｒ）−３−［１−（４−シアノベンジル）イミダゾール−５−イル−メチ
ルアミノ］−５−フェニルー１−（２，２，２−トリフルオロエチル）−Ｈ−ベ
ンゾ［ｅ］［１，４］ジアゼピン １−（３−トリフルオロメトキシフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジ
ル）イミダゾリルメチル］−２−ピペラジノン １−（２，５−ジメチルフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジル）イミ
ダゾリルメチル］−２−ピペラジノン １−（３−メチルフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジル）イミダゾリ
ルメチル］−２−ピペラジノン １−（３−ヨードフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジル）イミダゾリ
ルメチル］−２−ピペラジノン １−（３−クロロフェニル）−４−［１−（４−シアノ−３−メトキシベンジ
ル）イミダゾリルメチル］−２−ピペラジノン １−（３−トリフルオロメトキシフェニル）−４−［１−（４−シアノ−３−
メトキシベンジル）イミダゾリルメチル］−２−ピペラジノン ４−［（（１−（４−シアノベンジル）−５−イミダゾリル）メチル）アミノ
］ベンゾフェノン １−（１−｛［３−（４−シアノベンジル）−３Ｈ−イミダゾール−４−イル
]−アセチル｝−ピロリジン−２（Ｓ）−イルメチル）−３（Ｓ）−エチル−ピ ロリジン−２（Ｓ）−カルボン酸３−クロロ−ベンジルアミド または、薬学的に許容できるそれらの塩。
【０１１７】 ファルネシルタンパクトランスフェラーゼの阻害剤として先に記載されたが、
さらに、ファルネシルタンパクトランスフェラーゼの阻害剤として本アッセイに
より特定された本発明の範囲内の化合物は、すなわち本発明において有用であり
、その合成方法は、ここに参照により取り込まれる以下の特許、継続中の出願お
よび公報において見ることができる。
【０１１８】 米国特許Ｎｏ．５，７３６，５３９（１９９８年４月７日付）；ＷＯ９５／００
４９７（１９９５年１月５日付） 米国特許Ｎｏ．５，６５２，２５７（１９９７年７月２９日付）；ＷＯ９６／１
００３４（１９９６年４月４日付）、ＷＯ９６／３０３４３（１９９６年１０月
３日付）；１９９５年３月２９日付出願のＵＳＳＮ０８／４１２，８２９；およ
び１９９５年６月６日付出願のＵＳＳＮ０８／４７０，６９０；および１９９６
年２月２８日付出願のＵＳＳＮ０８／６００，７２８； 米国特許Ｎｏ．５，６６１，１６１（１９９７年８月２６日付）； 米国特許Ｎｏ．５，７５６，５２８（１９９８年５月６日付）；ＷＯ９６／３９
１３７（１９９６年１２月１２日付）； ＷＯ９６／３７２０４（１９９６年１１月２８日付）；１９９５年５月２４日付
出願のＵＳＳＮ０８／４４９，０３８；１９９６年５月１５日付出願のＵＳＳＮ
０８／６４８，３３０； ＷＯ９７／１８８１３（１９９７年５月２９日付）；１９９６年１１月１５日付
出願のＵＳＳＮ０８／７４９，２５４； ＷＯ９７／３８６６５（１９９７年１０月２３日付）；１９９７年４月１日付出
願のＵＳＳＮ０８／８３１，３０８； ＷＯ９７／３６８８９（１９９７年１０月９日付）；１９９７年３月２５日付出
願のＵＳＳＮ０８／８２３，９２３； ＷＯ９７／３６９０１（１９９７年１０月９日付）；１９９７年３月２７日付出
願のＵＳＳＮ０８／８２７，４８３； ＷＯ９７／３６８７９（１９９７年１０月９日付）；１９９７年３月２５日付出
願のＵＳＳＮ０８／８２３，９２０； ＷＯ９７／３６６０５（１９９７年１０月９日付）；１９９７年３月２５日付出
願のＵＳＳＮ０８／８２３，９３４； ＷＯ９８／２８９８０（１９９８年７月９日付）；１９９７年１２月２２日付出
願のＵＳＳＮ０８／９９７，１７１；および １９９６年４月３日付出願のＵＳＳＮ６０／０１４，７９１；１９９７年４月４
日付出願のＵＳＳＮ０８／８３１，３０８。
【０１１９】 確認される全ての特許、公報および継続中特許出願をここに参照により取り込
まれる。
【０１２０】 式ＩＩａ〜ＩＩｎの化合物に関しては、以下の定義が適用される。
【０１２１】 「アルキル」という用語は、特記しない限り１〜１５の炭素原子を含む一価ア
ルカン（炭化水素）誘導基を意味する。これは、直鎖、分岐または環式であって
よい。好ましい直鎖または分岐アルキル基は、メチル、エチル、プロピル、イソ
プロピル、ブチルおよびｔ−ブチルを含む。好ましいシクロアルキル基は、シク
ロペンチルおよびシクロヘキシルを含む。
【０１２２】 置換されたアルキルが存在する場合、これは、先に定義した直鎖、分岐または
環式アルキル基を意味し、各々について定義されたような１〜３の基で置換され
る。
【０１２３】 ヘテロアルキルは２〜１５の炭素原子を有し、Ｏ、ＳおよびＮから選択される
１〜４のヘテロ原子により中断されているアルキル基を意味する。
【０１２４】 「アルケニル」という用語は、２〜１５の炭素原子および少なくとも１つの炭
素炭素二重結合を含む直鎖、分岐または環式炭化水素基を意味する。好ましくは
、１つの炭素炭素二重結合が存在し、４までの非芳香族（非共鳴）炭素炭素二重
結合が存在してよい。アルケニル基の例は、ビニル、アリル、イソ−プロペニル
、ペンテニル、ヘキセニル、ヘプテニル、シクロプロペニル、シクロブテニル、
シクロペンテニル、シクロヘキセニル、１−プロペニル、２−ブテニル、２−メ
チル−２−ブテニル、イソプレニル、ファルネシル、ゲラニル、ゲラニルゲラニ
ル等を含む。好ましいアルケニル基は、エテニル、プロペニル、ブテニルおよび
シクロヘキセニルを含む。アルキルについて前述したように、アルケニル基の直
鎖、分岐または環式部分は二重結合を含んでよく、置換されたアルケニル基が提
供される場合は置換されてよい。
【０１２５】 「アルキニル」という用語は、２〜１５の炭素原子および少なくとも１つの炭
素炭素三重結合を含む直鎖、分岐または環式炭化水素基を意味する。３までの炭
素炭素三重結合が存在してよい。好ましいアルキニル基はエチニル、プロピニル
およびブチニルを含む。アルキルについて前述したように、アルキニル基の直鎖
、分岐または環式部分は三重結合を含んでよく、置換されたアルキニル基が提供
される場合は置換されてよい。
【０１２６】 アリールは、芳香族環、例えば、フェニル、置換フェニルおよび同様の基、な
らびに縮合している環、例えば、ナフチル等を意味する。すなわち、アリールは
、少なくとも６の原子を有する少なくとも１の環を含み、２までのそのような環
が存在し、その中に１０までの原子を含み、隣接炭素原子の間に交互（共鳴）二
重結合を有する。好ましいアリール基はフェニルおよびナフチルである。アリー
ル基は、同様に、以下に記載のように置換されてよい。好ましい置換されたアリ
ールは、１または２の基により置換されているフェニルおよびナフチルを含む。
ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤に関して、「アリール」は、少なくとも
１つの環が芳香族であり各環に７までの構成員を有する任意の安定な単環式、二
環式または三環式炭素環を含むことを意図している。アリール基の例は、フェニ
ル、ナフチル、アントラセニル、ビフェニル、テトラヒドロナフチル、インダニ
ルおよびフェナンスレニル等を含む。
【０１２７】 「ヘテロアリール」という用語は、少なくとも１のヘテロ原子Ｏ、ＳまたはＮ
を含んでおり、炭素または窒素原子が付加点であり、１つのさらなる炭素原子が
ＯまたはＳから選択されるヘテロ原子により任意に置換されており、１〜３のさ
らなる炭素原子が窒素へテロ原子により任意に置換されている、５または６の環
原子を有する単環式芳香族炭化水素基または８〜１０の原子を有する二環式芳香
族基を意味する。
【０１２８】 すなわち、ヘテロアリールは、１または２以上のヘテロ原子を含む芳香族およ
び部分的芳香族基を含む。このタイプの例は、チオフェン、プリン、イミダゾピ
リジン、ピリジン、オキサゾール、チアゾール、オキサジン、ピラゾール、テト
ラゾール、イミダゾール、ピリジン、ピリミジン、ピラジンおよびトリアジンで
ある。部分的芳香族基の例は、以下に定義するような、テトラヒドロイミダゾ[ ４，５−ｃ] ピリジン、フタリジルおよびサッカリニルである。
【０１２９】 ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤に関して、ここで用いられるヘテロ環
またはヘテロ環式という用語は、安定な５〜７員単環式、安定な８〜１１員二環
式または安定な１１〜１５員三環式へテロ環を意味し、これらは飽和または不飽
和であり、炭素原子およびＮ、ＯおよびＳからなる群より選択される１〜４のヘ
テロ原子からなり、任意の先に定義したヘテロ環式環がベンゼン環に縮合した任
意の二環式基を含む。ヘテロ環式環は任意のヘテロ原子または炭素に付加してよ
く、それにより安定な構造が形成される。そのようなヘテロ環式環の例は、アゼ
ピニル、ベンズイミダゾリル、ベンズイソキサゾリル、ベンゾフラザニル、ベン
ゾピラニル、ベンゾチオピラニル、ベンゾフリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾチ
エニル、ベンゾキサゾリル、クロマニル、シンノリニル、ジヒドロベンゾフリル
、ジヒドロ−ベンゾチエニル、ジヒドロベンゾチオピラニル、ジヒドロベンゾチ
オ−ピラニルスルホン、フリル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、イミダゾ
リル、インドリニル、インドリル、イソクロマニル、イソインドリニル、イソキ
ノリニル、イソチアゾリジニル、イソチアゾリル、イソチアゾリジニル、モルホ
リニル、ナフチリジニル、オキサジアゾリル、２−オキソアゼピニル、２−オキ
ソピペラジニル、２−オキソピペリジニル、２−オキソピロリジニル、ピペリジ
ル、ピペラジニル、ピリジル、ピリジルＮ−オキシド、ピリドニル、ピラジニル
、ピラゾリジニル、ピラゾリル、ピリミジニル、ピロリジニル、ピロリル、キナ
ゾリニル、キノリニル、キノリニルＮ−オキシド、キノキサリニル、テトラヒド
ロフリル、テトラヒドロイソキノリニル、テトラヒドロ−キノリニル、チアモル
ホリニル、チアモルホリニルスルホキシド、チアゾリル、チアゾリニル、チエノ
フリル、チエノチエニルおよびチエニルを含むが、これらに限定されない。好ま
しくは、ヘテロ環はイミダゾリル、２−オキソピロリジニル、ピペリジル、ピリ
ジルおよびピロリジニルから選択される。
【０１３０】 ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤に関して、「置換アリール」、「置換
ヘテロ環」および「置換シクロアルキル」という用語は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＦ ３ 、ＮＨ２、Ｎ（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）２、ＮＯ２、ＣＮ、（Ｃ１〜Ｃ６アルキ
ル）Ｏ−、−ＯＨ、（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）Ｓ（Ｏ）ｍ−、（Ｃ１〜Ｃ６アルキ
ル）Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、Ｈ２Ｎ−Ｃ（ＮＨ）−、（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）Ｃ（Ｏ）
−、（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）ＯＣ（Ｏ）−、Ｎ３、（Ｃ１〜Ｃ６アルキル）ＯＣ
（Ｏ）ＮＨ−およびＣ１〜Ｃ２０アルキルを限定されることなく含む群より選択
される１または２の置換基で置換されている環式基を含むことを意図している。
【０１３１】 本発明の方法において、開示されているアミノ酸は、従来の３文字、および以
下に示す１文字略号の両方により特定される。
【０１３２】 アラニン Ａｌａ Ａ アルギニン Ａｒｇ Ｒ アスパラギン Ａｓｎ Ｎ アスパラギン酸 Ａｓｐ Ｄ アスパラギンまたは アスパラギン酸 Ａｓｘ Ｂ システイン Ｃｙｓ Ｃ グルタミン Ｇｌｎ Ｑ グルタミン酸 Ｇｌｕ Ｅ グルタミンまたは グルタミン酸 Ｇｌｘ Ｚ グリシン ＧＩｙ Ｇ ヒスチジン Ｈｉｓ Ｈ イソロイシン Ｉｌｅ Ｉ ロイシン Ｌｅｕ Ｌ リシン Ｌｙｓ Ｋ メチオニン Ｍｅｔ Ｍ フェニルアラニン Ｐｈｅ Ｆ プロリン Ｐｒｏ Ｐ セリン Ｓｅｒ Ｓ トレオニン Ｔｈｒ Ｔ トリプトファン Ｔｒｐ Ｗ チロシン Ｔｙｒ Ｙ バリン Ｖａｌ Ｖ
【０１３３】 「ＣＡＡＸ」という用語に関して、文字「Ａ」は脂肪族アミノ酸を表し、アラ
ニンに限定されない。
【０１３４】 本方法において用いられる化合物は、非対称中心を有して良く、ラセミ体、ラ
セミ混合物、および個々にジアステレオマーとして発生し、光学的異性体を含む
全ての可能な異性体が本発明に含まれる。特記しない限り、列挙したアミノ酸は
天然の「Ｌ」型立体構造を有すると解される。
【０１３５】 Ｒ２とＲ３が組み合わさって−（ＣＨ２）ｕ−を形成すると、環式基が形成さ
れる。そのような環式基の例は、
【０１３６】
【化１７】 を含むが、これらに限定されない。
【０１３７】 さらに、そのような環式基は、任意にヘテロ原子を含んでよい。そのようなヘ
テロ原子含有環式基の例は、
【０１３８】
【化１８】 を含むが、これらに限定されない。
【０１３９】 Ｒ６とＲ７、Ｒ７とＲ７ａが組み合わさって−（ＣＨ２）ｕ−を形成すると、
環式基が形成される。そのような環式基の例は、
【０１４０】
【化１９】 を含むが、これらに限定されない。
【０１４１】 本発明の化合物の薬学的に許容できる塩は、例えば、非毒性無機または有機酸
から形成されるような本発明の化合物の従来の非毒性塩を含む。例えば、そのよ
うな従来の非毒性塩は、塩酸、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、硝
酸等のような無機酸から誘導されるもの；酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリ
コール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸
、パモイン酸（ｐａｍｏｉｃ ａｃｉｄ）、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸
、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、スルファニル酸、２−
アセトキシ安息香酸、フマル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタ
ンジスルホン酸、蓚酸、イセチオン酸、トリフルオロ酢酸等のような有機酸から
調製される塩を含む。
【０１４２】 分子内の特定の位置における任意の置換基または可変員（例えばＲ１０、Ｚ、
ｎ、等）の定義は、その分子の別の場所のその定義から独立しているものとされ
る。すなわち、−Ｎ（Ｒ１０）２は−ＮＨＨ、−ＮＨＣＨ３、−ＮＨＣ２Ｈ５等
を表す。本発明の化合物上の置換基および置換パターンは、化学的に安定であり
、以下に記載の方法のみならず当該分野で知られている技術により容易に合成す
ることができる化合物を提供するように当業者により選択され得ると解される。
【０１４３】 本発明の化合物の薬学的に許容できる塩は、従来の化学的方法により塩基性基
を含む本発明の化合物から合成することができる。通常、塩は、適当な溶媒また
は種々の組み合わせ溶媒中において、遊離塩基を化学量論量のまたは過剰の所望
の塩形成無機または有機酸と反応させることにより調製される。
【０１４４】 本発明の前記方法で用いられる化合物は、種々の薬学的に許容できる塩の状態
で有用である。「薬学的に許容できる」という用語は、薬学化学者に明白な塩状
態、すなわち、実質的に非毒性であり、所望の薬物動態特性、嗜好性、吸収性、
分散性、代謝性または***性を提供するものを意味する。選択においても重要な
、より実用的な性質の他の因子は、原料のコスト、結晶し易さ、収率、安定性、
吸湿性、および得られた薬塊の流動性である。従来、薬剤組成物は、薬学的に許
容できるキャリアと組み合わせた活性成分から調製することができる。
【０１４５】 薬学的に許容できる塩は、従来の非毒性塩または、例えば非毒性無機または有
機酸から形成される四級アンモニウム塩を含む。非毒性塩は、塩酸、臭化水素酸
、硫酸、スルファミン酸、リン酸、硝酸等のような無機酸から誘導されるもの；
酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸
、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、パモイン酸（ｐａｍｏｉｃ ａｃｉｄ）
、スルファニル酸、２−アセトキシ安息香酸、フマル酸、トルエンスルホン酸、
メタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、蓚酸、イセチオン酸、トリフルオロ酢
酸等のような有機酸から調製される塩を含む。
【０１４６】 本発明の薬学的に許容できる塩は、従来の化学的方法により合成することがで
きる。通常、塩は、適当な溶媒または種々の組み合わせ溶媒中において、遊離塩
基を化学量論量のまたは過剰の所望の塩形成無機または有機酸または塩基と反応
させることにより調製される。
【０１４７】 化学的説明および実施例で使用される略号を以下に示す：
【０１４８】 Ａｃ２Ｏ 無水酢酸； Ｂｏｃ ｔ−ブトキシカルボニル； ＤＢＵ １，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデク−７−エン； ＤＭＡＰ ４−ジメチルアミノピリジン； ＤＭＥ １，２−ジメトキシエタン； ＤＭＦ ジメチルホルムアミド ＥＤＣ １−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチル−カルボジイミ ド−塩酸塩 ＨＯＢＴ １−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物； Ｅｔ３Ｎ トリエチルアミン ＥｔＯＡｃ 酢酸エチル ＦＡＢ 高速原子衝突 ＨＯＯＢＴ ３−ヒドロキシ−１，２，２−ベンゾトリアジン−４（３Ｈ）− オン； ＨＰＬＣ 高性能液体クロマトグラフィー ＭＣＰＢＡ ｍ−クロロペルオキシ安息香酸 ＭｓＣｌ 塩化メタンスルホニル ＮａＨＭＤＳ ナトリウムビス（トリメチルシリル）アミド； Ｐｙ ピリジン ＴＦＡ トリフルオロ酢酸 ＴＨＦ テトラヒドロフラン
【０１４９】 式Ｉで示されるプレニルトランスフェラーゼ阻害剤は、文献において知られる
または実験手順において例示されるエステル加水分解、保護基の分解等のような
他の標準的操作に加えて、図式１〜１１により合成することができる。図式に示
す置換基Ｒ、ＲａおよびＲｂは置換基Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＲ５を表すが；そ
れらが環に付加する点は説明のためのみに示され限定されるものではない。
【０１５０】 これらの反応を一次的に連続的に用いて本発明の化合物を提供することができ
る、またはそれらを用いて、図式に記載のアルキル化反応によりその後に結合さ
れるフラグメントを合成することができる。
【０１５１】 図式１〜１１の概略： 求める中間体は、ある場合には市販されており、また、大部分の場合、文献の
手順により調製することができる。
【０１５２】 ピペラジン−５−オンは、図式１に示すように調製することができる。すなわ
ち、保護され適当に置換されたアミノ酸ＩＶは、まずアミドを形成し次にそれを
ＬＡＨで還元することにより対応するアルデヒドに転化することができる。Ｂｏ
ｃ−保護アミノアルデヒドＶを還元的にアミノ化することにより化合物ＶＩが得
られる。中間体ＶＩは、塩化クロロアセチルでアシル化してＶＩＩを得、次にＶ
ＩＩＩへの塩基誘発環化を行うことによりピペラジノンに転化することができる
。脱保護し、続いて保護イミダゾールカルボキサルデヒドで還元的にアルキル化
することによりＩＸを得、それをアリールメチルハライドでアルキル化してイミ
ダゾリウム塩Ｘを得ることができる。まず、メタノールのような低級アルキルで
加溶媒分解する、またはトリフルオロ酢酸の存在下に塩化メチレン中でトリエチ
ルシランで処理することにより保護基を除去して、最終生成物ＸＩを得る。
【０１５３】 中間体ＶＩＩＩは、ＸＩＩのような種々のアルデヒドを用いて還元的にアルキ
ル化することができる。アルデヒドは、適当なアミノ酸から、Ｏ．Ｐ．Ｇｏｅｌ
、Ｕ．Ｋｒｏｌｌｓ、Ｍ．ＳｔｉｅｒおよびＳ．Ｋｅｓｔｅｎ著，Ｏｒｇａｎｉ ｃ Ｓｙｎｔｈｅｓｅｓ 、１９８８年、第６７巻、６９〜７５頁に記載されてい
るような標準的手順を用いて調製することができる（図式２）。還元的アルキル
化は、ジクロロエタン、メタノールまたはジメチルホルムアミドのような溶媒中
において、トリアセトキシホウ水素化ナトリウムまたはシアノホウ水素化ナトリ
ウムのような種々の還元剤を用いてｐＨ５〜７において達成することができる。
生成物ＸＩＩＩは、塩化メチレン中、トリフルオロ酢酸を用いて脱保護して最終
化合物ＸＩＶを得ることができる。最終生成物ＸＩＶは、中でも例えばトリフル
オロ酢酸塩、塩酸塩または酢酸塩のような塩の状態で単離される。生成物ジアミ
ンＸＩＶは、さらに選択的に脱保護してＸＶを得ることができ、それは続いて２
次アルデヒドで還元的にアルキル化してＸＶＩを得ることができる。保護基を除
去し、ジヒドロイミダゾールＸＶＩＩのような環化生成物に転化することは、文
献の手順により達成することができる。
【０１５４】 また、標準的手順によりイミダゾール酢酸ＸＶＩＩＩを酢酸ＸＩＸに転化する
ことができ、ＸＩＸはまずハロゲン化アルキルと反応させ、次に還流下のメタノ
ールで処理して位置特異的にアルキル化されたイミダゾール酢酸エステルＸＸを
得ることができる（図式３）。加水分解し、１−（３−ジメチルアミノプロピル
）−３−エチルカルボジイミド（ＥＤＣ）のような縮合試薬の存在下にピペラジ
ノンＶＩＩＩと反応させることによりＸＸＩのようなアシル化生成物が得られる
。
【０１５５】 ピペラジノンＶＩＩＩを、図式４のＸＸＩＩのように保護ヒドロキシ基も有す
るアルデヒドで還元的にアルキル化すると、保護基が続いて除去されてヒドロキ
シル基を取り除くことができる（図式４、５）。アルコールを標準的条件下に酸
化して例えばアルデヒドにし、それを次にグリニア試薬のような種々の有機金属
試薬と反応させて、ＸＸＩＶのような２次アルコールを得ることができる。さら
に、充分に脱保護されたアミノアルコールＸＸＶを、種々のアルデヒドを用いて
還元的にアルキル化（先に記載の条件下）してＸＸＶＩ（図式５）のような２次
アミン、または３級アミンを得ることができる。
【０１５６】 Ｂｏｃ保護アミノアルコールＸＸＩＩＩを利用して、ＸＸＶＩＩ（図式６）の
ような２−アジリジニルメチルピペラジノンを合成することができる。ＸＸＩＩ
Ｉをジメチルホルムアミドのような溶媒中において１，１’−スルホニルジイミ
ダゾールおよび水素化ナトリウムで処理すると、アジリジンＸＸＶＩＩが得られ
る。塩基の存在下に、チオールのような求核試薬の存在下にアジリジンを反応さ
せると、開環生成物ＸＸＶＩＩＩが得られる。
【０１５７】 さらに、ピペラジノンＶＩＩＩを、標準的手順に従って、Ｏ−アルキル化チロ
シンのようなアミノ酸から誘導されたアルデヒドと反応させて、ＸＸＸ（図式７
）のような化合物を得ることができる。Ｒ’がアリール基である場合、ＸＸＸを
まず水素化してフェノールを取り除き、アミン基を酸で脱保護してＸＸＸＩを生
成することができる。また、ＸＸＸ中のアミン保護基を除去し、ＸＸＸＩＩのよ
うなＯ−アルキル化フェノールアミンを製造することができる。
【０１５８】 図式８は、任意に置換されたホモセリンラクトンをＸＸＸＩＩＩを用いてＢｏ
ｃ−保護ピペラジノンを調製することを説明している。中間体ＸＸＸＶＩＩは、
先の図式に説明しているように、脱保護し還元的にアルキル化またはアシル化す
ることができる。また、中間体ＸＸＸＶＩＩのヒドロキシル基をメシル化し、エ
タノールチオールのナトリウム塩のような適当な求核試薬により置換して、中間
体ＸＸＸＶＩＩＩを得ることができる。中間体ＸＸＸＶＩＩは酸化して中間体Ｉ
ＸＬ上にカルボン酸を提供し、それを利用してエステルまたはアミド基を形成す
ることができる。
【０１５９】 Ｎ−アラルキル−ピペラジン−５−オンを図式９に示すように調製することが
できる。Ｂｏｃ−保護アミノアルデヒドＶ（先の記載のようにＩＩＩから調製）
を還元的にアミノ化すると、化合物ＸＬが得られる。これを次に、Ｓｃｈｏｔｔ
ｅｎ−Ｂａｕｍａｎｎ条件下に臭化ブロモアセチルと反応させ；ジメチルホルム
アミドのような極性非プロトン性溶媒中において水素化ナトリウムのような塩基
で閉環させる。カルバメート保護基は、塩化メチレン中のトリフルオロ酢酸、ま
たはメタノールもしくは酢酸エチル中の塩化水素のような酸性条件下に除去され
、得られたピペラジンを次に図式１〜７に記載のように最終生成物上に運ぶこと
ができる。
【０１６０】 異性体のピペラジン−３−オンは、図式１０に記載のように調製することがで
きる。アリールカルボキサミドＸＬＩＩおよび２−アミノグリシナールジエチル
アセタール（ＸＬＩＩＩ）から形成されたイミンを、ジクロロエタン中のトリア
セトキシホウ水素化ナトリウムを含む種々の条件下に還元してアミンＸＬＩＶを
得ることができる。アミノ酸Ｉを標準的条件下にアミンＸＬＩＶに結合し、得ら
れたアミドＸＬＶを、テトラヒドロフラン中の水性酸で処理して不飽和ＸＬＶＩ
に環化することができる。標準的条件下に接触水素化することにより、所望の中
間体ＸＬＶＩＩが得られ、それを、図式１〜７に記載のように処理して最終生成
物が得られる。
【０１６１】 天然アミノ酸において見られない側鎖を有する一般的ＩＬのアミノ酸を、容易
に調製されるイミンＸＬＶＩＩＩから出発して、図式１１に記載のように反応さ
せることにより調製することができる。
【０１６２】
【化２０】
【０１６３】
【化２１】
【０１６４】
【化２２】
【０１６５】
【化２３】
【０１６６】
【化２４】
【０１６７】
【化２５】
【０１６８】
【化２６】
【０１６９】
【化２７】
【０１７０】
【化２８】
【０１７１】
【化２９】
【０１７２】
【化３０】
【０１７３】
【化３１】
【０１７４】
【化３２】
【０１７５】
【化３３】
【０１７６】
【化３４】
【０１７７】
【化３５】
【０１７８】 式（ＩＩ）で示される化合物を生じさせるために用いる反応は、文献において
知られる、または実験手順において例示されるエステル加水分解、保護基の分解
等のような他の標準的操作に加えて、図式１６〜３７に示すような反応を用いる
ことにより調製される。図式に示す置換基ＲａおよびＲｂは置換基Ｒ２、Ｒ３、
Ｒ４およびＲ５を表すが；置換基の「置換」は置換基Ｚ上の適当な置換基を表す
。そのような置換基が環に付加する点は説明のためのみに示され限定されるもの
ではない。
【０１７９】 これらの反応を一次的に連続的に用いて本発明の化合物を提供することができ
る、またはそれらを用いて、図式に記載のアルキル化反応によりその後に結合さ
れるフラグメントを合成することができる。
【０１８０】 図式１６〜３７の概略： 求める中間体は、ある場合には市販されており、また、文献の手順により調製
することができる。例えば、図式１６において、適当に置換されたＢｏｃ保護イ
ソニペコテートＬＩを脱プロトンし、次に、適当に置換された臭化ベンジルのよ
うな適当に置換されたアルキル化基で処理してｇｅｍ二置換中間体ＬＩＩＩを得
ることができる。脱保護および還元によりヒドロキシメチルピペリジンＬＩＶが
得られ、それは本発明の化合物の合成に利用することができる、または窒素保護
しメチル化して中間体ＬＶを得ることができる。
【０１８１】 図式１７に示されるように、保護ピペリジン中間体ＬＩＩＩを脱保護し、１−
トリチルー４−イミダゾリル−カルボキサルデヒドまたは１−トリチル−４−イ
ミダゾリルアセタルデヒドのようなアルデヒドで還元的にアルキル化してＬＶＩ
のような生成物を得ることができる。トリチル保護基を、ＬＶＩから除去してＬ
ＶＩＩを得る、またはＬＶＩをまずハロゲン化アルキルで処理し、次に脱保護し
てアルキル化イミダゾールＬＶＩＩＩを得ることができる。
【０１８２】 脱保護中間体ＬＩＩＩは、図式４〜７に示すように、種々の他のアルデヒドお
よび酸で還元的にアルキル化することもできる。
【０１８３】 別の、ヒドロキシメチル中間体ＬＩＶの合成および、好ましいイミダゾリル基
を組み込む本発明の化合物の合成におけるその中間体の利用が図式１８に説明さ
れている。図式１９は、中間体ＬＩＶを還元的にアルキル化して４−シアノベン
ジルイミダゾリル置換したピペリジンを得ることを説明している。シアノ基はホ
ウ酸ナトリウムで選択的に加水分解して、本発明の対応するアミド化合物を得る
ことができる。
【０１８４】 図式２０は、メチルエーテル中間体ＬＶの別の調製および適当に置換された塩
化イミダゾリルメチルでＬＶをアルキル化して本化合物を提供する方法を示す。
相同１−（イミダゾリルエチル）ピペリジンの調製を図式２１に説明する。
【０１８５】 本発明の化合物のピペリジン上の特異的置換を、図式２２に示すように達成す
ることができる。すなわち、ブチニル基からイソニコチネートへの金属−ハロゲ
ン交換結合およびその後の水素化により、２−ブチルピペリジン中間体が提供さ
れ、それは次に先に記載した反応に付されることにより本発明の化合物を提供す
ることができる。
【０１８６】 ＬＶのために４−アミド基を組み込むことが図式２３に示されている。
【０１８７】 図式２４は、Ｚ基がピペリジン環に直接付加された本発明の化合物の合成を説
明している。すなわち、ピペリドンＬＩＸを，適当に置換されたフェニルグリニ
ア試薬で処理することにより、ｇｅｍ二置換ピペリジンＬＸが得られる。脱保護
により重要な中間体ＬＸＩが得られる。中間体ＬＸＩは、先に記載のようにアセ
チル化して本化合物ＬＸＩＩを得ることができる（図式２５）。
【０１８８】 図式２６に示されるように、保護ピペリジンＬＸを脱水し、次にホウ水素化し
て３−ヒドロキシピペリジンＬＸＩＩＩを提供することができる。この化合物を
脱保護し、さらに誘導して本発明の化合物を提供する（図式２７に示すように）
、またはヒドロキシ基を図式２６に示すようにアルキル化してから脱保護および
さらに処理することができる。
【０１８９】 脱水生成物は、図式２８に示すように、接触還元してｄｅｓ−ヒドロキシ中間
体ＬＸＶを提供し、それを先の図式に記載の反応により加工することができる。
【０１９０】 図式２９および３０は、４−カルボン酸官能基をさらに化学的に処理して、置
換基Ｙがアセチルアミンまたはスルホンアミド基である本発明の化合物を提供す
ることを説明している。
【０１９１】 図式３１は、式ＩＩで示される化合物のピペリジンの４−位におけるニトリル
基の組み込みを説明している。すなわち、適当に置換された４−ヒドロキシピペ
リジンヒドロキシル基をニトリルで置換して中間体ＬＸＶＩを得、それを図式１
７−２１に先に記載した反応に付することができる。
【０１９２】 図式３２は、本発明の化合物を得るために図式１６の化合物ＬＩのようなピペ
リジン中間体と共に利用することができる幾つかのピリジル中間体の調製を説明
している。図式３３は、そのようなピリジル中間体を利用する一般的反応系列を
示している。
【０１９３】 Ｘ１がカルボニル基である本発明の化合物を図式３４に示すように調製するこ
とができる。中間体ＬＸＶＩＩは、図式１７〜２１に示すように次の反応に供さ
れて、本発明の化合物を提供することができる。Ｘ１が種々の酸化状態である硫
黄である本化合物の調製を図式３５に示す。中間体ＬＸＶＩＩＩ−ＬＸＸＩは、
先に記載の反応に供されて、本発明の化合物を提供することができる。
【０１９４】 図式３６は、Ｙが水素である式Ａで示される本化合物を提供する。すなわち、
適当に置換されたイソニペコン酸をＮ，Ｏ−ジメチルヒドロキシルアミンで処理
し、中間体ＬＸＸＩＩを適当に置換されたフェニルグリニア試薬と反応させて中
間体ＬＸＸＩＩＩを得ることができる。この中間体を図式１７−２１に先に記載
したような反応に供し、フェニルケトンの還元によりさらに修飾してアルコール
ＬＸＸＩＶを得ることができる。
【０１９５】 Ｘ１がアミン基である本発明の化合物を図式３７に示すように調製することが
できる。すなわちＮ−保護４−ピペリジノンをトリメチルシリルシアニドの存在
下に適当に置換されたアニリンと反応させて４−シアノ−４−アミノピペリジン
ＬＸＸＶを提供することができる。中間体ＬＸＸＶを次に順次、対応するアミド
ＬＸＸＶＩ、エステルＬＸＸＶＩＩ、およびアルコールＬＸＸＶＩＩＩに転化す
ることができる。中間体ＬＸＸＶＩ−ＬＸＸＶＩＩＩを脱保護し、次に図式１７
〜２１に先に記載された反応に供して本発明の化合物を提供することができる。
【０１９６】
【化３６】
【０１９７】
【化３７】
【０１９８】
【化３８】
【０１９９】
【化３９】
【０２００】
【化４０】
【０２０１】
【化４１】
【０２０２】
【化４２】
【０２０３】
【化４３】
【０２０４】
【化４４】
【０２０５】
【化４５】
【０２０６】
【化４６】
【０２０７】
【化４７】
【０２０８】
【化４８】
【０２０９】
【化４９】
【０２１０】
【化５０】
【０２１１】
【化５１】
【０２１２】
【化５２】
【０２１３】
【化５３】
【０２１４】
【化５４】
【０２１５】
【化５５】
【０２１６】
【化５６】
【０２１７】
【化５７】
【０２１８】
【化５８】
【０２１９】
【化５９】
【０２２０】 式（ＩＩＩ）で示される本発明の化合物は、文献において知られるまたは実験
手順において例示されるエステル加水分解、保護基の分解等のような他の標準的
操作に加えて、以下の反応図式３８−５１に示す反応を用いることにより調製さ
れる。幾つかの重要な結合形成およびペプチド修飾反応を以下に示す：
【０２２１】反応Ａ ： 標準的溶液または固相法を用いるアミド結合形成および保護基分解反応Ｂ ： シアノホウ水素化ナトリウムまたは他の還元剤を用いるアルデヒドに
よるアミンの還元的アルキル化による還元されたペプチドサブユニットの調製反応Ｃ ： アルキルまたはハロゲン化アルキルによる還元されたペプチドサブユ
ニットのアルキル化、またはシアノホウ水素化ナトリウムまたは他の還元剤を用
いるアルデヒドによる還元されたペプチドサブユニットの還元的アルキル化反応Ｄ ： 標準的溶液または固相法を用いるペプチド結合形成および保護基分解
反応Ｅ： アミド基のボラン還元による還元サブユニットの調製
【０２２２】 これらの反応を一次的に連続的に用いて本発明の化合物を提供することができ
る、またはそれらを用いて、これら反応図式および以下の反応図式４３−５１に
記載のアルキル化反応によりその後に結合されるフラグメントを合成することが
できる。
【０２２３】
【化６０】
【０２２４】
【化６１】
【０２２５】
【化６２】
【０２２６】
【化６３】
【０２２７】
【化６４】
【０２２８】 ここで、 ＲＡおよびＲＢならびにＲ２、Ｒ３またはＲ５は前述のように定義され；ＲＣ およびＲＤはＲ７またはＲ１２であり；ＸＬは脱離基、例えば、Ｂｒ−、Ｉ−ま
たはＭｓＯ−であり；およびＲｙはＲ７が還元的アルキル化プロセスにより生じ
るように定義される。
【０２２９】 反応図式２６〜３０に記載の反応に加えて、本発明の式（ＩＩＩ）で示される
化合物を生成するために用いられる他の反応を反応図式４３〜５１に示す。これ
ら反応図式に示す置換基が全てが先に定義したものと同じ置換基を表す。反応図
式における置換基「Ａｒ」は、炭素環式またはヘテロ環式の、置換されているま
たは置換されていない芳香族環を表す。
【０２３０】 これらの反応を一次的に連続的に用いて本発明の化合物を提供することができ
る、またはそれらを用いて、これら反応図式に記載のアルキル化反応によりその
後に結合されるフラグメントを合成することができる。置換基が化合物に組み込
まれる連続的順番は重要でないことが多く、反応図式に記載の反応の順番は説明
のためのみであり限定するものではない。
【０２３１】反応図式４３〜５１の概要 ： 必要な中間体は市販されている場合がある、または先の反応図式３８〜４２に
記載のものを含む既知の文献の手順に従って容易に調製することができる。
【０２３２】 反応図式４３は、還元されたプロリル基のような環式アミン基の、本発明の式
ＩＩＩで示される化合物への組み込みを説明する。アジドＬＸＸＸＩを還元する
とアミンＬＸＸＸＩＩが得られ、これは先に記載した技術を用いて一または二置
換することができる。例として、ナフチルメチル基およびアセチル基の組み込み
を説明する。
【０２３３】 反応図式４４に示されるように、ＬＸＸＸＩＩＩのような置換アミンへの芳香
族環の直接付加は、トリス（３−クロロフェニル）ビスマスのようなトリアリー
ルビスマス剤でカップリングすることにより達成される。
【０２３４】 反応図式４５は、環式アミンがアルコキシ基を含む本発明の化合物を調製する
ための保護基の使用を説明する。重要な中間体ＬＸＸＸＩＶａのヒドロキシ基を
、反応図式４６に示すように、さらにフルオロまたはフェノキシ基に転化するこ
とができる。次に、中間体ＬＸＸＸＶおよびＬＸＸＸＶＩをさらに処理して本化
合物を提供することができる。
【０２３５】 反応図式４７４は、可変要素−（ＣＲ４ ２）ｑＡ３（ＣＲ５ ２）ｎＲ６が適当
に置換されたα−ヒドロキシベンジル基である本化合物の合成を説明する。すな
わち、保護中間体アルデヒドを適当に置換されたフェニルグリニア試薬で処理し
てエナンチオマー混合物ＬＸＸＸＶＩＩを提供する。混合物を塩化２−ピロリニ
ルで処理することにより、化合物ＬＸＸＸＶＩＩＩおよびＩＸＣをクロマトグラ
フィーにより分解することができる。ピロリノイル基を除去し、続いて脱保護す
ることにより光学的に純粋な中間体ＸＣを提供し、それは先に記載したようにさ
らに加工して本化合物を得ることができる。
【０２３６】 可変要素ｐが０または１およびＺがＨ２である本化合物の合成において有用な
イミダゾール含有中間体の合成を反応図式４８および４９に示す。すなわち、メ
シレートＸＣＩを利用して適当に置換されたアミンまたは環式アミンをアルキル
化し、一方、アルデヒドＸＣＩＩを用いてそのようなアミンを同様に還元的にア
ルキル化することができる。
【０２３７】 反応図式５０は、−（ＣＲ２ ２）ｐ−Ｃ（Ｚ）−基のＷ（イミダゾリル）への
付加点がイミダゾール環窒素を介するものであるイミダゾール含有中間体の合成
を説明する。反応図式５１は、Ｒ２置換基がメチルである中間体の合成を説明す
る。
【０２３８】
【化６５】
【０２３９】
【化６６】
【０２４０】
【化６７】
【０２４１】
【化６８】
【０２４２】
【化６９】
【０２４３】
【化７０】
【０２４４】
【化７１】
【０２４５】
【化７２】
【０２４６】
【化７３】
【０２４７】
【化７４】
【０２４８】
【化７５】
【０２４９】
【化７６】
【０２５０】 式（Ａ）で示されるプレニルトランスフェラーゼ阻害剤は、文献において知ら
れる、または実験手順において例示されるエステル加水分解、保護基の分解等の
ような他の標準的操作に加えて、以下の反応図式に従って合成することができる
。本化合物のアミノジフェニル基の形成のために利用される幾つかの重要な反応
を示す。
【０２５１】 これらの反応を一次的に連続的に用いて本発明の化合物を提供することができ
る、またはそれらを用いて、これら反応図式に記載のアルキル化反応によりその
後に結合されるフラグメントを合成することができる。
【０２５２】 反応図式５２に示されるベンゾフェノン中間体を形成する方法は、アリールス
タンナンを用いるＳｔｉｌｌｅ反応である。次に、そのようなアミン中間体を、
先に説明したように、種々のアルデヒドおよびエステル／酸と反応させることが
できる。
【０２５３】
【化７７】
【実施例】
提示される実施例は、本発明のさらなる理解を助けることを意図する。用いら
れる特別の材料、種および条件は、本発明のさらなる説明を意図しており、本発
明の合理的範囲を制限するものではない。
【０２５４】 実施例で言及される標準的操作は、溶媒抽出、および１０％クエン酸、１０％
重炭酸ナトリウムおよび適当なブラインでの有機溶液の洗浄を意味する。溶液は
硫酸ナトリウムで乾燥され、ロータリーエバポレーター上で減圧下に蒸発される
。
【０２５５】 実施例１ １−（３−クロロフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジル）イミダゾリ
ルメチル］−２−ピペラジノン二塩酸塩（化合物１） 工程Ａ：１−トリフェニルメチルー４−（ヒドロキシメチル）−イミダゾール
の調製 乾燥ＤＭＦ２５０ｍＬ中に４−（ヒドロキシメチル）イミダゾール塩酸塩（３
５．０ｇ、２６０ｍｍｏｌ）を含む溶液に、室温で、トリメチルアミン（９０．
６ｍＬ、６５０ｍｍｏｌ）を添加した。白色固形物が溶液から沈殿した。ＤＭＦ
５００ｍＬ中のクロロトリフェニルメタン（７６．１ｇ、２７３ｍｍｏｌ）を滴
下した。反応混合物を２０時間攪拌し、氷に注ぎ、濾過し、氷水で洗った。得ら
れた生成物を冷たいジオキサンとスラリー化し、濾過し、減圧下に乾燥して表記
化合物を次の工程に用いるのに十分に純粋な白色固形物として得た。
【０２５６】 工程Ｂ：１−トリフェニルメチルー４−（アセトキシメチル）−イミダゾール
の調製 工程Ａからのアルコール（２６０ｍｍｏｌ、先に調製）をピリジン５００ｍＬ
中に懸濁させた。無水酢酸（７４ｍＬ、７８０ｍｍｏｌ）を滴下し、反応液を４
８時間攪拌すると、その間に反応液は均質になった。溶液を、ＥｔＯＡ２Ｌ中に
注ぎ、水（３×１Ｌ）、５％ＨＣｌ水溶液（２×１Ｌ）、飽和ＮａＨＣＯ３水溶
液、およびブラインで洗い、次に乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、減圧下に濃
縮して粗生成物を得た。酢酸塩を、次の反応に用いるのに充分に純粋である白色
粉末として単離した。
【０２５７】 工程Ｃ：１−（４−シアノベンジル）−５−（アセトキシメチル）−イミダゾ
ール臭化水素酸塩の調製 ＥｔＯＡｃ５００ｍＬ中に工程Ｂからの生成物（８５．８ｇ、２２５ｍｍｏｌ
）およびα−ブロモ−ｐ−トルニトリル（５０．１ｇ、２３２ｍｍｏｌ）を含む
溶液を６０℃で２０時間攪拌し、その間に淡黄色沈殿が形成された。反応液を室
温まで冷却し、濾過して固体臭化イミダゾリウム塩を得た。濾液を減圧下に体積
２００ｍＬまで濃縮し、６０℃で２時間再加熱し、室温まで冷却し、再び濾過し
た。濾液を減圧下に体積１００ｍＬまで濃縮し、６０℃でさらに２時間再加熱し
、室温まで冷却し、減圧下に濃縮して淡黄色固形物を得た。固形物の全てを併せ
、メタノール５００ｍＬに溶解し、６０℃に暖めた。２時間後、溶液を減圧下に
再濃縮して白色固形物を得、それをヘキサンと研和して可溶性材料を除去した。
残りの溶媒を減圧下に除去して、表記生成物の臭化水素酸塩を白色固形物として
得、さらに生成することなく次の工程に用いた。
【０２５８】 工程Ｄ：１−（４−シアノベンジル）−５−（ヒドロキシメチル）−イミダゾ
ールの調製 ３：１ＴＨＦ／水１．５Ｌ中に工程Ｃからの酢酸塩（５０．４ｇ、１５０ｍｍ
ｏｌ）を含む溶液に、０℃でリチウムヒドロキシド一水和物（１８．９ｇ、４５
０ｍｍｏｌ）を添加した。１時間後、反応液を減圧下に濃縮し、ＥｔＯＡｃ（３
Ｌ）で希釈し、水、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液およびブラインで洗った。次に溶液
を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、減圧下に濃縮して、さらに精製することな
く次の工程に用いるのに充分に純粋である粗生成物を淡黄色綿様固形物として得
た。
【０２５９】 工程Ｅ：１−（４−シアノベンジル）−５−イミダゾールカルボキサルデヒド
の調製 ＤＭＳＯ５００ｍＬ中に工程Ｄからのアルコール（２１．５ｇ、１０１ｍｍｏ
ｌ）を含む溶液に、室温でトリエチルアミン（５６ｍＬ、４０２ｍｍｏｌ）を添
加し、次にＳＯ３−ピリジン複合体（４０．５ｇ、２５４ｍｍｏｌ）を添加した
。４５分後、反応液をＥｔＯＡｃ２．５Ｌ中に注ぎ、水（４×１Ｌ）およびブラ
インで洗い、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、減圧下に濃縮してアルデヒドを
、さらに精製することなく次の工程に用いるのに充分に純粋な白色粉末として得
た。
【０２６０】 工程Ｆ：Ｎ−（３−クロロフェニル）エチレンジアミン塩酸塩の調製 ジクロロメタン５００ｍＬ中に３−クロロアニリン（３０．０ｍＬ、２８４ｍ
ｍｏｌ）を含む溶液に、０℃で１，４−ジオキサン（８０ｍＬ、３２０ｍｍｏｌ
ＨＣｌ）中に４ＮＨＣｌを含む溶液を滴下した。溶液を室温まで温め、次に減圧
下に濃縮乾燥して白色粉末を得た。この粉末と２−オキサゾリジノン（２４．６
ｇ、２８２ｍｍｏｌ）との混合物を窒素雰囲気下に１６０℃で１０時間加熱し、
その間に固形物が溶融しガス発生が観察された。反応液を冷却し、粗ジアミン塩
酸塩を淡褐色固形物として形成した。
【０２６１】 工程Ｇ：Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ’−（３−クロロフェニ
ル）エチレンジアミンの調製 工程Ｆからのアミン塩酸塩（約２８２ｍｍｏｌ、先に調製した粗生成物）をＴ
ＨＦ５００ｍＬおよび飽和ＮａＨＣＯ３水溶液５００ｍＬに取り込み、０℃に冷
却し、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルピロカーボネート（６１．６ｇ、２８２ｍｍｏｌ）
を添加した。３０時間後、反応液をＥｔＯＡｃに注ぎ、水およびブラインで洗い
、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、減圧下に濃縮して表記カルバメートを褐色
油状物として得、さらに精製することなく次の工程に用いた。
【０２６２】 工程Ｈ：Ｎ−［２−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルバモイル）エチル］−Ｎ−（３
−クロロフェニル）−２−クロロアセトアミドの調製 ＣＨ２Ｃｌ２５００ｍＬ中に工程Ｇからの生成物（７７ｇ、約２８２ｍｍｏｌ
）およびトリエチルアミン（６７ｍＬ、４８０ｍｍｏｌ）を含む溶液を０℃に冷
却した。塩化クロロアセチル（２５．５ｍＬ、３２０ｍｍｏｌ）を滴下し、反応
液を攪拌下に０℃に維持した。３時間後、さらなる塩化クロロアセチル（３．０
ｍＬ）を滴下した。３０分後、反応液をＥｔＯＡｃ（２Ｌ）に注ぎ、水、飽和Ｎ
Ｈ４Ｃｌ水溶液、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液およびブラインで洗った。溶液を乾燥
（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、減圧下に濃縮してクロロアセトアミドを褐色油状
物として得、それをさらに精製することなく次の工程に用いた。
【０２６３】 工程Ｉ：４−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルバモイル）−１−（３−クロロフェニ
ル）−２−ピペラジノンの調製 乾燥ＤＭＦ７００ｍＬ中に工程Ｈからのクロロアセトアミド（約２８２ｍｍｏ
ｌ）を含む溶液を、Ｋ２ＣＯ３（８８ｇ、０．６４ｍｏｌ）に添加した。溶液を
油浴中にて７０〜７５℃で２０時間加熱し、室温まで冷却し、減圧下に濃縮して
ＤＭＦ約５００ｍＬを除去した。残りの材料を３３％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンに注
ぎ、水およびブラインで洗い、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、減圧下に濃縮
して生成物を褐色油状物として得た。この材料をシリカゲルクロマトグラフィー
（２５〜５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して純生成物と共に、極性の
より低い不純物を含む生成物（ＨＰＬＣにより純度約６５％）のサンプルを得た
。
【０２６４】 工程Ｊ：１−（３−クロロフェニル）−２−ピペラジノンの調製 ＥｔＯＡｃ５００ｍＬ中に工程ＩからのＢｏｃ−保護ピペラジノン（１７．１
９ｇ、５５．４ｍｍｏｌ）を含む溶液に、−７８℃で、無水ＨＣｌガスを吹き込
んだ。飽和溶液を０℃まで温め、１２時間攪拌した。窒素ガスを反応液に吹き込
んで過剰のＨＣｌを除去し、混合物を室温まで暖めた。溶液を減圧下に濃縮して
塩酸塩を白色粉末として得た。この材料をＣＨ２Ｃｌ２３００ｍＬに取り込み、
希ＮａＨＣＯ３水溶液で処理した。水相を、ｔｌｃ分析が完全な抽出を示すまで
、ＣＨ２Ｃｌ２（８×３００ｍＬ）で抽出した。併せた有機混合物を乾燥（Ｎａ ２ ＳＯ４）し、濾過し、減圧下に濃縮して表記遊離アミンを淡褐色油状物として
得た。
【０２６５】 工程Ｋ：１−（３−クロロフェニル）−４−［１−（４−クロロベンジル）イ
ミダゾリルメチル］−２−ピペラジノン二塩酸塩の調製 １，２−ジクロロエタン２００ｍＬ中に工程Ｊからのアミン（５５．４ｍｍｏ
ｌ、先に調製）を含む溶液に、０℃で４Å粉末分子ふるい（１０ｇ）を添加し、
続いてトリアセトキシホウ水素化ナトリウム（１７．７ｇ、８３．３ｍｍｏｌ）
を添加した。実施例１の工程Ｅからのイミダゾールカルボキサルデヒド（１１．
９ｇ、５６．４ｍｍｏｌ）を添加し、反応液を０℃で攪拌した。２６時間後、反
応液をＥｔＯＡｃに注ぎ、希ＮａＨＣＯ３水溶液で洗い、水層をＥｔＯＡｃで逆
抽出した。併せた有機分をブラインで洗い、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、
減圧下に濃縮した。得られた生成物を５：１ベンゼン：ＣＨ２Ｃｌ２５００ｍＬ
に取り込み、プロピルアミン（２０ｍＬ）を添加した。混合物を１２時間攪拌し
、次に減圧下に濃縮して淡黄色油状物を得た。この材料をシリカゲルクロマトグ
ラフィー（２〜７％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）で精製し、得られた白色泡状物を
ＣＨ２Ｃｌ２に取り込み、２．１当量の１Ｍ ＨＣｌ／エーテル溶液で処理した
。減圧下に濃縮後、生成物の二塩酸塩を白色粉末として単離した。
【０２６６】 実施例２〜５（表１）の生成物を、構造的に関連する化合物である１−（３−
クロロフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジル）イミダゾリルメチル］−
２−ピペラジノン二塩酸塩の合成を記載している前記プロトコールを用いて調製
した。工程Ｆにおいて、３−クロロアニリンの代わりに適当に置換されたアニリ
ンを用いた。
【０２６７】 表１：１−アリール−４−［１−（４−シアノベンジル）イミダゾリルメチル
］−２−ピペラジノン
【０２６８】
【化７８】
【０２６９】
【表１】
【０２７０】 実施例６ １−（３−クロロフェニル）−４−［１−（４−シアノ−３−メトキシベンジ
ル）イミダゾリルメチル］−２−ピペラジノン二塩酸塩 工程Ａ；４−アミノ−３−ヒドロキシ安息香酸メチルの調製 乾燥メタノール２．０Ｌ中に４−アミノ−３−ヒドロキシ安息香酸（７５ｇ、
０．４９ｍｏｌ）を含む溶液に、室温で無水ＨＣｌガスを、溶液が飽和するまで
吹き込んだ。溶液を４８時間攪拌し、次に減圧下に濃縮した。生成物をＥｔＯＡ
ｃと飽和ＮａＨＣＯ３水溶液とに分け、有機層をブラインで洗い、乾燥（Ｎａ２ ＳＯ４）し、減圧下に濃縮して表記化合物（７９ｇ、収率９６％）を得た。
【０２７１】 工程Ｂ：３−ヒドロキシ−４−ヨード安息香酸メチルの調製 工程Ａからの生成物（７９ｇ、０．４７ｍｏｌ）、３Ｎ ＨＣｌ（７５０ｍＬ
）およびＴＨＦ（２５０ｍＬ）からなる濁った暗色溶液を０℃に冷却した。水１
１５ｍＬ中にＮａＮＯ２（３５．９ｇ、０．５２ｍｏｌ）を含む溶液を約５分間
かかって添加し、溶液をさらに２５分間攪拌した。ヨー化カリウム（３１２ｇ、
１．８８ｍｏｌ）を水２３５ｍＬ中に含む溶液を１度に添加し、反応液をさらに
１５分間攪拌した。混合液をＥｔＯＡｃに注ぎ、振とうし、層を分離した。有機
相を水およびブラインで洗い、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、減圧下に濃縮して粗生
成物（１４８ｇ）を得た。シリカゲルを通すカラムクロマトグラフィー（０％〜
５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して表記生成物（９６ｇ、収率７３％
）を得た。
【０２７２】 工程Ｃ：４−シアノ−３−ヒドロキシ安息香酸メチルの調製 乾燥ＤＭＦ４００ｍＬ中に工程Ｂからのヨウ化生成物（１０１ｇ、０．３６ｍ
ｏｌ）およびシアン化（ＩＩ）亜鉛（３０ｇ、０．２５ｍｏｌ）を含む混合物を
、アルゴンを２０分間溶液に吹き込むことにより脱気した。テトラキス（トリフ
ェニルホスフィン）パラジウム（８．５ｇ、７．２ｍｍｏｌ）を添加し、溶液を
８０℃で４時間加熱した。溶液を室温まで冷却し、次にさらに３６時間攪拌した
。反応液をＥｔＯＡｃ／水に注ぎ、有機層をブライン（４×）で洗い、乾燥（Ｎ
ａ２ＳＯ４）し、減圧下に濃縮して粗生成物を得た。シリカゲルを通すカラムク
ロマトグラフィー（３０％〜５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して表記
生成物（４８．８ｇ、収率７６％）を得た。
【０２７３】 工程Ｄ：４−シアノ−３−メトキシ安息香酸メチルの調製 水素化ナトリウム（９ｇ、０．２４ｍｏｌ、６０重量％鉱油分散液）を、室温
で、乾燥ＤＭＦ４００ｍＬ中に工程Ｃからのフェノール（３６．１ｇ、２０４ｍ
ｍｏｌ）を含む溶液に添加した。ヨードメタン（１４ｍＬ、０．２２ｍｏｌ）を
添加し、反応液を２時間攪拌した。混合液をＥｔＯＡｃ／水に注ぎ、有機層を水
およびブライン（４×）で洗い、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、減圧下に濃縮して表
記生成物（３７．６ｇ、収率９６％）を得た。
【０２７４】 工程Ｅ：４−シアノ−３−メトキシベンジルアルコールの調製 乾燥ＴＨＦ４００ｍＬ中に工程Ｄからのエステル（４８．８ｇ、２５５ｍｍｏ
ｌ）を含む溶液に、アルゴン雰囲気下、室温で、ホウ水素化リチウム（２５５ｍ
Ｌ、５１０ｍｍｏｌ、２Ｍ ＴＨＦ）を５分間かかって添加した。１．５時間後
、反応液を０．５時間加熱還流し、次に室温まで冷却した。溶液をＥｔＯＡｃ／
１Ｎ ＨＣｌ溶液に注いだ。［注意］、および層を分離した。有機層を水、飽和
Ｎａ２ＣＯ３溶液およびブライン（４×）で洗い、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、減
圧下に濃縮して表記生成物（３６．３ｇ、収率８７％）を得た。
【０２７５】 工程Ｆ：４−シアノ−３−メトキシベンジルブロミドの調製 乾燥ＴＨＦ５００ｍＬ中に工程Ｅからのアルコール（３５．５ｇ、２１８ｍｍ
ｏｌ）を含む溶液を０℃まで冷却した。トリフェニルホスフィン（８５．７ｇ、
３２７ｍｍｏｌ）を添加し、続いて、四臭化炭素（１０８．５ｇ、３２７ｍｍｏ
ｌ）を添加した。反応液を０℃で３０分間攪拌し、次に室温で２１時間攪拌した
。シリカゲル（約３００ｇ）を添加し、懸濁液を減圧下に濃縮した。得られた固
形物をシリカゲルクロマトグラフィーカラムにかけた。フラッシュクロマトグラ
フィー（３０％〜５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により精製して表記生成物（４
２ｇ、収率８５％）を得た。
【０２７６】 工程Ｇ：１−（４−シアノ−３−メトキシベンジル）−５−（アセトキシメチ
ル）−イミダゾール臭化水素酸塩の調製 実施例１の工程Ｃに概略した手順を用いて、工程Ｆからの臭化物（２１．７ｇ
、９６ｍｍｏｌ）を実施例１の工程Ｂからのイミダゾール生成物（３４．９ｇ、
９１ｍｍｏｌ）と反応させることにより表記生成物を調製した。粗生成物をヘキ
サンと研和して表記生成物の臭化水素酸塩（１９．４３ｇ、収率８８％）を得た
。
【０２７７】 工程Ｈ：１−（４−シアノ−３−メトキシベンジル）−５−（ヒドロキシメチ
ル）−イミダゾールの調製 実施例１の工程Ｄに概略する手順を用いて工程Ｇからの酢酸塩の加水分解によ
り表記生成物（１９．４３ｇ、６８．１ｍｍｏｌ）を調製した。粗い表記生成物
を低い収率（１１ｇ、収率６６％）で単離した。水性抽出物を濃縮して、１Ｈ
ＮＭＲ分光分析により判断してかなりの量の表記生成物を含む固形生成物（約１
００ｇ）を得た。
【０２７８】 工程Ｉ：１−（４−シアノ−３−メトキシベンジル）−５−イミダゾールカル
ボキサルデヒドの調製 実施例１の工程Ｅに概略する手順を用いて工程Ｈからのアルコール（１１ｇ、
４５ｍｍｏｌ）を酸化することにより表記生成物を調製した。表記アルデヒドを
、さらに精製することなく、次の工程に用いるのに充分に純粋な白色粉末（７．
４ｇ、収率６８％）として単離した。
【０２７９】 工程Ｊ：１−（３−クロロフェニル）−４−［１−（４−シアノ−３−メトキ
シベンジル）イミダゾリルメチル］−２−ピペラジノン二塩酸塩の調製 実施例１の工程Ｈに概略された手順を用いて、工程Ｉからのアルデヒド（８５
９ｍｇ、３．５６ｍｍｏｌ）および実施例１の工程Ｋからのアミン（塩酸塩）（
８００ｍｇ、３．２４ｍｍｏｌ）を還元的にアルキル化することにより表記生成
物を調製した。シリカゲルを通すフラッシュカラムクロマトグラフィー（５０％
〜７５％アセトンＣＨ２Ｃｌ２）により精製し、得られた白色泡状物をその二塩
酸塩に添加して表記生成物を白色粉末（７４３ｍｇ、収率４５％）として得た。
ＦＡＢ ｍｓ（ｍ＋１）４３７。 分析結果：Ｃ２３Ｈ２３ＣｌＮ５Ｏ２・２．０ＨＣｌ・０．３５ＣＨ２Ｃｌ２に
ついての計算値：Ｃ、５１．９７；Ｈ、４．８０；Ｎ、１２．９８。 実測値：Ｃ、５２．１１；Ｈ、４．８０；Ｎ、１２．２１。
【０２８０】 実施例７ １−（３−トリフルオロメトキシフェニル）−４−［１−（４−シアノ−３−
メトキシベンジル）イミダゾリルメチル］−２−ピペラジノン二塩酸塩 １−（３−トリフルオロメトキシフェニル）−２−ピペラジノン塩酸塩を、実
施例１の工程Ｆ〜Ｊを用いて３−トリフルオロメトキシアニリンから調製した。
このアミン（１．７５ｇ、５．９３ｍｍｏｌ）を、実施例１の工程Ｈに概略する
手順を用いて実施例６の工程Ｉからのアルデヒド（１．５７ｇ、６．５２ｍｍｏ
ｌ）に結合させた。シリカゲルを通すフラッシュカラムクロマトグラフィー（６
０％〜１００％アセトンＣＨ２Ｃｌ２）により精製し、得られた白色泡状物をそ
の二塩酸塩に添加することにより表記生成物を白色粉末（１．９５７ｇ、収率５
９％）として得た。 ＦＡＢ ｍｓ（ｍ＋１）４８６。 分析結果：Ｃ２４Ｈ２３Ｆ３Ｎ５Ｏ３・２．０ＨＣｌ・０．６０ＣＨ２Ｏについ
ての計算値：Ｃ、５０．６４；Ｈ、４．４６；Ｎ、１２．３０。 実測値：Ｃ、５０．６９；Ｈ、４．５２；Ｎ、１２．１３。
【０２８１】 実施例８ ４−［（（１−（４−シアノベンジル）−５−イミダゾリル）メチル）アミノ
］ベンゾフェノン塩酸塩 実施例１の工程Ｋに概略される手順を用いて、実施例１の工程Ｅからのアルデ
ヒド（１２４ｍｇ、０．５８８ｍｍｏｌ）および４−アミノベンゾフェノン（１
１６ｍｇ、０．５８８ｍｍｏｌ）を還元的にアルキル化することにより表記生成
物を調製した。シリカゲルを通すフラッシュカラムクロマトグラフィー（２％〜
６％ ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）により精製し、塩酸塩に転化することにより表
記生成物を白色固形物（１２６ｍｇ、収率５０％）として得た。 ＦＡＢ ｍｓ（ｍ＋１）３９３．１１。 分析結果：Ｃ２５Ｈ２０Ｎ５Ｏ・１．４０ＨＣｌ・０．４０Ｈ２Ｏについての計
算値：Ｃ、６６．６２；Ｈ、４．９６；Ｎ、１２．４３。 実測値：Ｃ、６６．７３；Ｈ、４．９４；Ｎ、１２．４６。
【０２８２】 実施例９ Ｎ−｛１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イルメチル｝
−４（Ｒ）−ベンジロキシ−２（Ｓ）−｛Ｎ’−アセチル−Ｎ’−３−クロロベ
ンジル｝アミノメチルピロリジン 工程Ａ：４（Ｒ）−ヒドロキシプロリンメチルエステル メタノール（５００ｍｌ）中に４（Ｒ）−ヒドロキシプロリン（３５．１２ｇ
、２６７．８ｍｍｏｌ）を含む懸濁液を、気体塩酸で飽和させた。得られた溶液
を１６時間放置し、溶媒を減圧下に蒸発させて表記化合物を白色固形物として得
た。１ Ｈ ＮＭＲ ＣＤ３ＯＤ δ４．６０（２Ｈ，ｍ）、３．８６（３Ｈ，ｓ）、
３．４８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝３．６および１２．０Ｈｚ）、３．２３（１Ｈ，ｄ
，Ｊ＝１２．０Ｈｚ）、２．４３（１Ｈ，ｍ）および２．２１（１Ｈ，ｍ）ｐｐ
ｍ。
【０２８３】 工程Ｂ：Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４（Ｒ）−ヒドロキシプロリンメチル
エステル ＣＨ２Ｃｌ２（５００ｍｌ）中に４（Ｒ）−ヒドロキシプロリンメチルエステ
ル（５３．５ｇ、２６８ｍｍｏｌ）およびトリメチルアミン（７５ｍｌ、５４０
ｍｍｏｌ）を含む溶液に、ＣＨ２Ｃｌ２（７５ｍｌ）中にジ−ｔ−ブチルジカー
ボネート（５８．４８、２６８ｍｍｏｌ）を含む溶液を添加した。得られた混合
物を室温で４８時間攪拌した。溶液を、１０％クエン酸水溶液、飽和ＮａＨＣＯ ３ 溶液で粗い、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、溶媒を減圧下に蒸発させた。表記化合
物を黄色油状物として得、それをさらに精製することなく次の工程に用いた。１ Ｈ ＮＭＲ ＣＤ３ＯＤ δ４．４０〜４．３０（２Ｈ，ｍ）、３．７５（３
Ｈ，ｍ）、３．６０〜３．４０（２Ｈ，ｍ）、２．３０（１Ｈ，ｍ）、２．０５
（１Ｈ，ｍ）および１．５５〜１．４０（９Ｈ，ｍ）ｐｐｍ。
【０２８４】 工程Ｃ：Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４（Ｒ）−ｔ−ブチルジメチルシリロ
キシプロリンメチルエステル ＣＨ２Ｃｌ２（５３６ｍｌ）中にＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−４（Ｒ）−ヒ
ドロキシプロリンメチルエステル（６５．８７ｇ、２６８ｍｍｏｌ）およびトリ
メチルアミン（４１ｍｌ、２９４ｍｍｏｌ）を含む溶液に、ＣＨ２Ｃｌ２（８６
ｍｌ）中にｔ−ブチルジメチルシリルクロライド（４２．４９ｇ、２８２ｍｍｏ
ｌ）を含む溶液を添加した。得られた混合物を室温で１６時間攪拌した。溶液を
１０％クエン酸水溶液、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で洗い、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）
し、溶媒を減圧下に蒸発させた。表記化合物を黄色油状物として得、さらに精製
することなく次の工程に用いた。１ Ｈ ＮＭＲ ＣＤ３ＯＤ δ４．６０〜４．４０（２Ｈ，ｍ）、３．７５（３
Ｈ，ｍ）、３．６０〜３．２０（２Ｈ，ｍ）、２．３０〜１．９０（２Ｈ，ｍ）
、１．４５〜１．４０（９Ｈ，ｍ）、０．９０〜０．８５（９Ｈ，ｍ）、０．１
０〜０．００（６Ｈ，ｍ）ｐｐｍ。
【０２８５】 工程Ｄ：Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４（Ｒ）−ｔ−ブチルジメチルシリロ
キシ−２（Ｓ）−ヒドロキシメチルピロリジン ＴＨＦ（１５０ｍｌ）中にＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−４（Ｒ）−ｔ−ブチ
ルジメチル−シリロキシプロリンメチルエステル（８６．６５ｇ、２４１ｍｍｏ
ｌ）を含む溶液を、アルゴン雰囲気下に、水素化リチウムアルミニウム（ＴＨＦ
中の１Ｍ溶液２４７ｍｌ、２４７ｍｍｏｌ）の溶液に、温度が１２℃を超えない
ようにして９０分間かかって添加した。攪拌を５０分間続け、次にＥｔＯＡｃ（
５００ｍｌ）を注意深く添加し、続いて硫酸ナトリウム十水和物（３４ｇ）を添
加し、得られた混合物を室温で１６時間攪拌した。無水Ｎａ２ＳＯ４（３４ｇ）
を添加し、混合物をさらに３０分間攪拌し、次に濾過した。固形物をＥｔＯＡｃ
（８００ｍｌ）で洗い、濾液を併せ、溶媒を減圧下に蒸発させた。表記化合物を
無色油状物として得、さらに精製することなく次の工程で用いた。
【０２８６】 工程Ｅ：Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４（Ｒ）−ｔ−ブチルジメチルシリロ
キシ−２（Ｓ）−メタンスルホニロキシメチルピロリジン ＣＨ２Ｃｌ２（１Ｌ）中にＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−４（Ｒ）−ｔ−ブチ
ルジメチルシリロキシ−２（Ｓ）−ヒドロキシメチルピロリジン（５０．０ｇ、
１５０．８ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（４２．０ｍｌ、３００ｍｍｏｌ
）を含む溶液に、メタンスルホニルクロライド（１２．４ｍｌ、１６０ｍｍｏｌ
）を５分間かかって添加し、１時間攪拌した。溶媒を減圧下に蒸発させ、ＥｔＯ
Ａｃ（８００ｍｌ）で希釈し、クエン酸水溶液およびＮａＨＣＯ３で順次洗った
。有機抽出液を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、減圧下に蒸発し、残さをクロマトグラ
フィー（ＳｉＯ２、ヘキサン中の１５％ＥｔＯＡｃ）により精製した。表記化合
物を淡黄色固形物として得た。 ＦＡＢ マススペクトル、ｍ／ｚ＝４１０（Ｍ＋１）。１ Ｈ ＮＭＲ ＣＤＣｌ３ δ４．６０〜４．００（４Ｈ，ｍ）、３．６０〜３
．３０（２Ｈ，ｍ）、２．９８（３Ｈ，ｓ）、２．０５〜２．００（２Ｈ，ｍ）
、１．４８〜１．４２（９Ｈ，ｍ）、０．９０〜０．８０（９Ｈ，ｍ）、０．１
０〜０．００（６Ｈ，ｍ）ｐｐｍ。
【０２８７】 工程Ｆ：Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４（Ｒ）−ｔ−ブチルジメチルシリロ
キシ−２（Ｓ）−アジドメチルピロリジンの調製 安全スクリーンで保護されたフラスコ中、トルエン（２５０ｍｌ）中にＮ−ｔ
−ブトキシカルボニル−４（Ｓ）−ｔ−ブチルジメチルシリロキシ−２（Ｓ）−
メタン−スルホニロキシメチルピロリジン（１０．４０ｇ、２５．３９ｍｍｏｌ
）およびテトラブチルアンモニウムアジド（８．１８ｇ、２８．７ｍｍｏｌ）を
含む溶液を８０℃で５時間攪拌した。反応液を室温まで冷却し、ＥｔＯＡｃ（２
５０ｍｌ）で希釈し、水およびブラインで洗い、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）した。溶
媒を減圧下に蒸発させて表記化合物を黄色油状物として得、それをさらに精製す
ることなく次の工程で用いた。１ Ｈ ＮＭＲ ＣＤＣｌ３ δ４．６０〜３．２０（６Ｈ，ｍ）、２．０５〜１
．９０（２Ｈ，ｍ）、１．４７（９Ｈ，ｓ）、０．８７（９Ｈ，ｓ）および０．
１０〜０．００（６Ｈ，ｍ）ｐｐｍ。
【０２８８】 工程Ｇ：Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４（Ｒ）−ｔ−ブチルジメチルシリロ
キシ−２（Ｓ）−アミノメチルピロリジンの調製 ＥｔＯＡｃ（１２０ｍｌ）中にＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−４（Ｒ）−ｔ−
ブチルジメチルシリロキシ−２（Ｓ）−アジドメチルピロリジン（９．０６ｇ、
２５．３９ｍｍｏｌ）を含む溶液をアルゴン置換し、炭素上１０％パラジウム（
１．０５ｇ）を添加した。フラスコを減圧し、水素雰囲気（４９ｐｓｉ）下に１
６時間攪拌した。水素をアルゴンで置き換え、触媒を濾過除去し、溶媒を減圧下
に蒸発させた。残さをクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、アセトニトリル中２．５
〜５％飽和ＮＨ４ＯＨ、グラジエント溶離）に付して表記化合物を油状物として
得た。１ Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ４．４０〜２．６０（６Ｈ，ｓ）
、２．０５〜１．８０（２Ｈ，ｍ）、１．４６（９Ｈ，ｓ）、１．３６（２Ｈ，
ｓ）、０．８７（９Ｈ，ｓ）、０．１０〜０．００（６Ｈ，ｍ）ｐｐｍ。
【０２８９】 工程Ｈ：Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４（Ｒ）−ｔ−ブチルジメチルシリロ
キシ−２（Ｓ）−｛Ｎ’−３−クロロベンジル｝アミノメチルピロリジンの調製
メタノール（１５０ｍｌ）中に３−クロロベンザルデヒド（１．２ｍｌ、１０
．６ｍｍｏｌ）、粉砕した３Ａ分子ふるい（９．５ｇ）および工程Ｇからのアミ
ン（３．５０ｇ、１０．６ｍｍｏｌ）を含むスラリーに、室温でシアノホウ水素
化ナトリウム（ＴＨＦ中の１Ｍ溶液１１．０ｍｌ、１１．０ｍｍｏｌ）を添加し
た。氷酢酸（０．６８ｍｌ、１２ｍｍｏｌ）の添加によりｐＨを７に調節し、反
応液を１６時間攪拌した。反応液を濾過し、濾液を減圧下に蒸発させた。残さを
ＥｔＯＡｃと飽和ＮａＨＣＯ３溶液とに分け、有機抽出液をブラインで洗い、乾
燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、溶媒を減圧下に蒸発させた。残さをクロマトグラフィー
（ＳｉＯ２、ＣＨ２Ｃｌ２中の２．５％ＭｅＯＨ）により精製して表記化合物を
油状物として得た。１ Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ７．４０〜７．１０（４Ｈ，ｍ）
、４．３６（１Ｈ，ｓ）、４．１５〜３．９０（２Ｈ，ｍ）、３．９０〜３．３
０（２Ｈ，ｍ）、２．８５〜２．６０（２Ｈ，ｍ）、２．０５〜１．９０（２Ｈ
，ｍ）、１．４４（９Ｈ，ｓ）、０．８７（９Ｈ，ｓ）および０．０６（６Ｈ，
ｍ）ｐｐｍ。
【０２９０】 工程Ｉ：Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４（Ｒ）−ｔ−ブチルジメチルシリロ
キシ−２（Ｓ）−｛Ｎ’−３−クロロベンジル−Ｎ’−アセチル｝アミノメチル
ピロリジンの調製 ＣＨ２Ｃｌ２（８５ｍｌ）およびトリメチルアミン（２．４０ｍｌ、１７．０
ｍｍｏｌ）中にＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−４（Ｒ）−ｔ−ブチルジメチルシ
リロキシ−２（Ｓ）−｛Ｎ’−３−クロロベンジル｝−アミノメチルピロリジン
（３．８０ｇ、８．３５ｍｍｏｌ）を含む溶液に、０℃で塩化アセチル（０．６
０ｍｌ、８．４４ｍｍｏｌ）を添加した。反応液を室温で１時間攪拌し、水で希
釈し、ＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。抽出液をブラインで洗い、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４ ）し、溶媒を減圧下に蒸発させた。残さをクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ＣＨ ２ Ｃｌ２中の１０〜２５％ＥｔＯＡｃ、グラジエント溶離）により精製した。１ Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ７．４０〜７．００（４Ｈ，ｍ）
、５．１０〜３．００（８Ｈ，ｍ）、２．２０〜１．７０（５Ｈ，ｍ）、１．５
０〜１．３０（９Ｈ，ｍ）、０．８７（９Ｈ，ｓ）および０．０６（６Ｈ，ｍ）
ｐｐｍ。
【０２９１】 工程Ｊ：Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４（Ｒ）−ヒドロキシ−２（Ｓ）−｛
Ｎ’−３−クロロベンジル−Ｎ’−アセチル｝アミノメチルピロリジンの調製 ＴＨＦ（８０ｍｌ）中にＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−４（Ｒ）−ｔ−ブチル
−ジメチルシリロキシ−２（Ｓ）−｛Ｎ’−３−クロロベンジル−Ｎ’−アセチ
ル｝アミノメチルピロリジン（４．０２ｇ、８．０９ｍｍｏｌ）を含む溶液に、
０℃でテトラブチルアンモニウムフルオライド（ＴＨＦ中の１Ｍ溶液９．００ｍ
ｌ、９．００ｍｍｏｌ）を添加した。反応液を０℃で１時間攪拌し、次に室温で
３０分間攪拌した。反応液を飽和Ｎａ４Ｃｌ溶液（５０ｍｌ）の添加によりクエ
ンチし、ＥｔＯＡｃで希釈した。有機抽出液をブラインで洗い、乾燥（Ｎａ２Ｓ
Ｏ４）し、溶媒を減圧下に蒸発させた。残さをクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、
ＣＨ２Ｃｌ２中の３〜５％ＭｅＯＨ、グラジエント溶離）により精製して表記化
合物を泡状物として得た。１ Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ７．４０〜７．００（４Ｈ，ｍ）
、５．００〜４．００（４Ｈ，ｍ）、４．００〜３．１０（４Ｈ，ｍ）、２．３
０〜１．６０（５Ｈ，ｍ）および１．５０〜１．３０（９Ｈ，ｍ）ｐｐｍ。
【０２９２】 工程Ｋ：Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−４（Ｒ）−ベンジロキロキシ−２（Ｓ
）−｛Ｎ’−アセチル−Ｎ’−３−クロロベンジル｝アミノメチルピロリジン ＤＭＦ（９ｍｌ）中にＮ−ｔ−ブトキシカルボニル−４（Ｓ）−ヒドロキシ−
２（Ｓ）−｛Ｎ’−アセチル−Ｎ’−３−クロロベンジル｝アミノメチルピロリ
ジン（７０１ｍｇ、１．８３ｍｍｏｌ）を含む溶液に、０℃で水素化ナトリウム
（鉱油中６０％分散液１１０ｍｇ、２．７５ｍｍｏｌ）を添加した。１５分後、
臭化ベンジル（０．４３５ｍｌ、３．６６ｍｍｏｌ）を添加し、反応液を室温で
１６時間攪拌した。反応液を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（２ｍｌ）でクエンチし、酢
酸エチルで抽出した。有機抽出液をブラインで洗い、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、
溶媒を減圧下に蒸発させた。残さをクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ＣＨ２Ｃｌ ２ 中の２５〜５０％ＥｔＯＡｃ、グラジエント溶離）により精製して表記化合物
を泡状物として得た。
【０２９３】 工程Ｌ：４（Ｓ）−ベンジロキシ−２（Ｓ）−｛Ｎ’−アセチル−Ｎ’−３−
クロロベンジル｝アミノメチルピロリジン塩酸塩 ＥｔＯＡｃ（２５ｍｌ）中に工程Ｋからの生成物（０．８３４ｇ、１．７６ｍ
ｍｏｌ）を含む溶液を、０℃で気体塩化水素で飽和させた。得られた溶液を室温
で３０分間放置した。溶媒を減圧下に蒸発させて表記化合物を白色固形物として
得た。
【０２９４】 工程Ｍ：１Ｈ−イミダゾール−４−酢酸メチルエステル塩酸塩の調製 メタノール（１００ｍｌ）中に１Ｈ−イミダゾール−４−酢酸塩酸塩（４．０
０ｇ、２４．６ｍｍｏｌ）を含む溶液を気体塩化水素で飽和させた。得られた溶
液を室温（ＲＴ）で１８時間放置した。溶媒を減圧下に蒸発させて表記化合物を
白色固形物として得た。１ Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ８．８５（１Ｈ，ｓ）、７．４５
（１Ｈ，ｓ）、３．８９（２Ｈ，ｓ）および３．７５（３Ｈ，ｓ）ｐｐｍ。
【０２９５】 工程Ｎ：１−（トリフェニルメチル）−１Ｈ−イミダゾール−４−イル酢酸メ
チルエステルの調製 ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（１１５ｍｌ）中に工程Ｍからの生成物（２
４．８５ｇ、０．１４１ｍｏｌ）を含む溶液に、トリエチルアミン（５７．２ｍ
ｌ、０．４１２ｍｏｌ）および臭化トリフェニルメチル（５５．３ｇ、０．１７
１ｍｏｌ）を添加し、懸濁液を２４時間攪拌した。この時間後、反応混合物を酢
酸エチル（ＥｔＯＡｃ）（１Ｌ）および水（３５０ｍｌ）で希釈した。有機相を
飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（３５０ｍｌ）で洗い、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、減圧
下に蒸発させた。残さをフラッシュクロマトグラフィー（ＳｉＯ２、ヘキサン中
の０〜１００％酢酸エチル、グラジエント溶離）により精製して表記化合物を白
色固形物として得た。１ Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ７．３５（１Ｈ，ｓ）、７．３１
（９Ｈ，ｍ）、７．２２（６Ｈ，ｍ）、６．７６（１Ｈ，ｓ）、３．６８（３Ｈ
，ｓ）および３．６０（２Ｈ，ｓ）ｐｐｍ。
【０２９６】 工程Ｏ：［１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］酢
酸メチルエステルの調製 アセトニトリル（７０ｍｌ）中に工程Ｎからの生成物（８．００ｇ、２０．９
ｍｍｏｌ）を含む溶液に、ブロモ−ｐ−トルニトリル（４．１０ｇ、２０．９２
ｍｍｏｌ）を添加し、５５℃で３時間加熱した。この時間後、反応液を室温まで
冷却し、得られたイミダゾリウム塩（白色沈殿物）を濾過により集めた。濾液を
５５℃で１８時間加熱した。反応混合物を室温まで冷却し、減圧下に蒸発させた
。残さにＥｔＯＡｃ（７０ｍｌ）を添加し、得られた白色沈殿を濾過により集め
た。沈殿したイミダゾリウム塩を併せ、メタノール（１００ｍｌ）中に懸濁させ
、３０分間加熱還流した。この時間後、溶媒を減圧下に除去し、得られた残さを
ＥｔＯＡｃ（７５ｍｌ）中に懸濁させ、固形物を濾過により単離し、洗った（Ｅ
ｔＯＡｃ）。固形物を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（３００ｍｌ）およびＣＨ２Ｃｌ ２ （３００ｍｌ）で処理し、室温で２時間攪拌した。有機層を分離し、乾燥（Ｎ
ａ２ＳＯ４）し、減圧下に蒸発させて表記化合物を白色固形物として得た。１ Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，４００ＭＨｚ）δ７．６５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ
）、７．５３（１Ｈ，ｓ）、７．１５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ）、７．０４（１
Ｈ，ｓ）、５．２４（２Ｈ，ｓ）、３．６２（３Ｈ，ｓ）および３．４５（２Ｈ
，ｓ）ｐｐｍ。
【０２９７】 工程ｐ：（１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）エ
タノールの調製 メタノール（２０ｍｌ）中に工程Ｏからのエステル（１．５０ｇ、５．８８ｍ
ｍｏｌ）を含む溶液に、０℃でホウ水素化ナトリウム（１．０ｇ、２６．３ｍｍ
ｏｌ）を５分かけて少しずつ添加した。反応液を０℃で１時間攪拌し、次に室温
でさらに１時間攪拌した。反応液を飽和Ｎａ４Ｃｌ溶液の添加によりクエンチし
、メタノールを減圧下に蒸発させた。残さをＥｔＯＡｃと飽和ＮａＨＣＯ３溶液
とに分け、有機抽出物を乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、減圧下に蒸発させた。残さを
クロマトグラフィー（ＳｉＯ２、塩化メチレン中の４〜１０％メタノール、グラ
ジエント溶離）により精製して表記化合物を固形物として得た。１ Ｈ ＮＭＲ ＣＤＣｌ３ δ７．６４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ）、７．５
７（１Ｈ，ｓ）、７．１１（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ）、６．９７（１Ｈ，ｓ
）、５．２３（２Ｈ，ｓ）、３．７９（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ）および２．
６６（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ）ｐｐｍ。
【０２９８】 工程Ｑ：１−（４−シアノベンジル）−イミダゾール−５−イル−エチルメタ
ンスルホネート 塩化メチレン（６．０ｍｌ）中に（１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イミ
ダゾール−５−イル）−エタノール（０．５００ｇ、２．２０ｍｍｏｌ）を含む
溶液を、０℃でＨｕｎｉｇ塩基（０．４６０ｍｌ、２．６４ｍｍｏｌ）および塩
化メタンスルホニル（０．２０４ｍｌ、２．６４ｍｍｏｌ）で処理した。２時間
後、反応液を飽和ＮａＨＣＯ３溶液（５０ｍｌ）の添加によりクエンチし、混合
物を塩化メチレン（５０ｍｌ）で抽出し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、溶媒を減圧
下に蒸発させた。表記化合物を、さらに精製することなく用いた。１ Ｈ ＮＭＲ ＣＤＣｌ３ δ７．６９（１Ｈ，ｓ）、７．６６（２Ｈ，ｄ，Ｊ
＝８．２Ｈｚ）、７．１５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ）、７．０４（１Ｈ，ｓ
）、５．２４（２Ｈ，ｓ）、４．３１（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．７Ｈｚ）、２．９６
（３Ｈ，ｓ）および２．８８（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ）ｐｐｍ。
【０２９９】 工程Ｒ：Ｎ｛１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イルエ
チル｝−４（Ｒ）−ベンジロキシオキシ−２（Ｓ）−｛Ｎ’−アセチル−Ｎ’−
３−クロロベンジル｝−アミノメチルピロリジン ＤＭＦ（１．５ｍｌ）中に４（Ｒ）−ベンジロキシ−２（Ｓ）−｛Ｎ’−アセ
チル−Ｎ’−３−クロロベンジル−アミノメチル｝ピロリジン（１９９ｍｇ、０
．４８６ｍｍｏｌ）、工程Ｑからのメチレート（１４０ｍｇ、０．４５８ｍｍｏ
ｌ）、炭酸カリウム（１６５ｍｇ、１．１９ｍｍｏｌ）およびヨー化ナトリウム
（２８９ｍｇ、１．９３ｍｍｏｌ）を含む混合物を５５℃で１６時間加熱した。
冷却した混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、ＮａＨＣＯ３溶液およびブラインで洗い
、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、溶媒を減圧下に蒸発させた。残さを分取ＨＰＬＣ（
Ｃ−１８、水／０．１％ＴＦＡ含有アセトニトリル９５：５〜５：９５、グラジ
エント溶離）。表記化合物を、凍結乾燥後に白色固形物として得た。 分析結果： Ｃ３４Ｈ３６Ｎ５Ｏ２Ｃｌ ３．００ＴＦＡ、０．８５Ｈ２Ｏについての計算値
：Ｃ、５１．１４；Ｈ、４．３７；Ｎ、７．４５。 実測値：Ｃ、５１．１５；Ｈ、４．４２；Ｎ、６．８６。 ＦＡＢ ＨＲＭＳ Ｃ３４Ｈ３７Ｎ５Ｏ２Ｃｌについて計算された正確な質量 ５８２．２６３５７９（ＮＨ＋）。 実測値： ５８２．２６３９００。
【０３００】 実施例１０ 生体外阻害 トランスフェラーゼアッセイ。プレニルタンパクトランスフェラーゼ活性アッ
セイは、特記しない限り３０℃で行う。典型的な反応は、（最終的体積５０μＬ
として）：［３Ｈ］ファルネシル二リン酸または［３Ｈ］ゲラニルゲラニル二リ
ン酸、Ｒａｓタンパク、５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、５ｍＭ ＭｇＣｌ ２ 、５ｍＭ ジチオスレイトール、１０μＭ ＺｎＣｌ２、０．１％ポリエチレ
ングリコール（ＰＥＧ）（分子量１５，０００〜２０，０００）およびイソプレ
ニルタンパクトランスフェラーゼを含む。１０ｍＭグリセロールリン酸または５
ｍＭ ＡＴＰのような調製アニオンもアッセイ媒体に添加してよい。アッセイで
用いるＦＰＴａｓｅは、Ｏｍｅｒ，Ｃ．Ａ．、Ｋｒａｌ，Ａ．Ｍ．、Ｄｉｅｈｌ
，Ｒ．Ｅ．、Ｐｒｅｎｄｅｒｇａｓｔ，Ｇ．Ｃ．、Ｐｏｗｅｒｓ，Ｓ．、Ａｌｌ
ｅｎ，Ｃ．Ｍ．、Ｇｉｂｂｓ，Ｊ．Ｂ．およびＫｏｈｌ，Ｎ．Ｅ．著、（１９９
３年）Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ第３２巻：５１６７頁〜５１７６頁に記載のよ
うな組換え発現により調製される。アッセイで用いられるゲラニルゲラニルタン
パクトランスフェラーゼＩ型は、ここに参考として取り込まれる米国特許Ｎｏ．
５，４７０，８３２に記載のように調製される。酵素の不存在下にアッセイ混合
物を熱的に予備平衡させた後、イソプレニルタンパクトランスフェラーゼの添加
により反応を開始し、エタノール中１Ｍ ＨＣｌ（１ｍＬ）の添加により間欠的
（典型的に１５分毎）に停止させる。クエンチされた反応液を１５分間放置する
（沈殿プロセスの完了のため）。１００％エタノール２ｍＬの添加後、反応液を
Ｗｈａｔｍａｎ ＧＦ／Ｃフィルターを通して減圧濾過する。フィルターを１０
０％エタノールの２ｍＬで４回洗い、シンチレーション液（１０ｍＬ）と混合し
、次に、Ｂｅｃｋｍａｎ ＬＳ３８０１シンチレーションカウンターにおいてカ
ウントする。
【０３０１】 阻害研究のために、阻害剤を１００％ジメチルスルホキシド中の濃厚溶液とし
て調製し、次に酵素アッセイ混合物中に２０倍希釈する以外は、前述のようにア
ッセイを行う。阻害剤のＩＣ５０の決定のための基質濃度を以下に示す：ＦＴａ
ｓｅ、６５０ｎＭ Ｒａｓ−ＣＶＬＳ（配列番号：２）、１００ｎＭ ファルネ
シル二リン酸、ＧＧＰＴａｓｅ−Ｉ、５００ｎＭ Ｒａｓ−ＣＡＩＬ（（配列番
号：３）、１００ｎＭ ゲラニルゲラニルニリン酸。
【０３０２】 実施例１１ 修正生体外ＧＧＴａｓｅ阻害アッセイ 修正ゲラニルゲラニルタンパクトランスフェラーゼ阻害アッセイを室温で行う
。典型的反応は、（最終的体積を５０μＬとして）：［３Ｈ］ゲラニルゲラニル
ニリン酸、ビオチニル化Ｒａｓペプチド、５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、
調整アニオン（例えば、１０ｍＭ グリセロリン酸または５ｍＭ ＡＴＰ）、７
ｍＭ ＭｇＣｌ２、１０μＭ ＺｎＣｌ２、０．１％ＰＥＧ（分子量１５，００
０〜２０，０００）、２ｍＭ ジチオスレイトール、およびゲラニルゲラニルタ
ンパクトランスフェラーゼＩ型（ＧＧＴａｓｅ−Ｉ）を含む。アッセイで用いら
れるＧＧＴａｓｅ−Ｉ型酵素は、参考として取り込まれる米国特許Ｎｏ．５，４
７０，８３２に記載のように調製される。ＲａｓペプチドはＫ４Ｂ−Ｒａｓタン
パクから誘導され、以下の配列を有する：ビオチニル−ＧＫＫＫＫＫＫＳＫＴＫ
ＣＶＩＭ（１本アミノ酸コード）（配列番号：１３）。反応はＧＧＴａｓｅの添
加により開始し、５０ｍＭ ＥＤＴＡおよび０．５％ＢＳＡを含む、ｐＨ４の０
．２Ｍリン酸ナトリウム中にストレプトアビジンＳＰＡビーズ（Ｓｃｉｎｔｉｌ
ｌａｔｉｏｎ Ｐｒｏｘｉｍｉｔｙ Ａｓｓａｙ ｂｅａｄｓ、Ａｍｅｒｓｈａ
ｍ製）を含む３ｍｇ／ｍＬ懸濁液２００μＬの添加により間欠的（典型的に１５
分毎）に停止する。クエンチされた反応液を２時間放置してから、Ｐａｃｋａｒ
ｄ ＴｏｐＣｏｕｎｔシンチレーションカウンターで分析した。
【０３０３】 阻害研究のために、阻害剤を１００％ジメチルスルホキシド中の濃厚溶液とし
て調製し、次に酵素アッセイ混合物中に２５倍希釈する以外は、前述のようにア
ッセイを行う。遅延結合阻害剤を用いた阻害研究のために、ＧＧＴａｓｅおよび
阻害剤を１時間予備インキュベートし、Ｊ．Ｆ．Ｍｏｒｒｉｓｏｎ、Ｃ．Ｔ．Ｗ
ａｌｓｈ著、Ａｄｖ．Ｅｎｚｙｍｏｌ ＆ Ｒｅｌａｔｅｄ Ａｒｅａｓ Ｍｏ
ｌ．Ｂｉｏｌ．、第６１巻 ２０１頁〜３０１頁（１９８８年）に記載の方法に
従って、ペプチド基質を添加することにより反応を開始する。ＩＣ５０はＫＭ濃
度に近いＲａｓペプチドを用いて決められる。阻害剤のＩＣ５０を決めるための
酵素および基質濃度は：７５ｐＭ ＧＧＴａｓｅ−Ｉ、１．６μＭ Ｒａｓペプ
チド、１００ｎＭゲラニルゲラニル二リン酸である。
【０３０４】 また、ＧＧＰＴａｓｅ−Ｉの阻害のための酵素学的Ｋｉ値は、Ｉ．Ｈ．Ｓｅｇ
ｅｌ（「Ｅｎｚｙｍｅ Ｋｉｎｅｔｉｃｓ」、３４２頁〜３４５頁；Ｗｉｌｅｙ
およびＳｏｎｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．（１９７５年）およびそこに引用
の参考文献）に記載の方法を用いて決めることができる。
【０３０５】 実施例１３ 細胞系生体外ｒａｓプレニル化アッセイ このアッセイで用いられる細胞系は、ウイルスＨ−ｒａｓにより形質転換され
るＲａｔ１またはＮＩＨ３Ｔ３細胞；ｖ−Ｈ−ｒａｓのＣ−末端超可変領域がＮ
−ｒａｓ遺伝子からの対応領域で置換されたＮ−ｒａｓキメラ遺伝子；またはＲ
ａｓ−ＣＶＬＬ（配列番号：１）、すなわちＣ−末端エキソンがセリンの代わり
にロイシンをコード化し、それによりコード化タンパクがＧＧＴａｓｅ−Ｉによ
るゲラニルゲラニル化のための基質にされるウイルス−Ｈ−ｒａｓ変異種からな
る。アッセイは、ヒトＨ−ｒａｓ、Ｎ−ｒａｓまたはＫ４Ｂ−ｒａｓで形質転換
した細胞系を用いて行うこともできる。アッセイは、本質的にＤｅＣｌｕｅ，Ｊ
．Ｅ．ら著、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓｅａｒｃｈ 第５１巻：７１２頁〜７１７頁
（１９９１年）に記載のように行われる。５０〜７５％融合性の１０ｃｍシャー
レ中の細胞を試験化合物で処理する（溶媒、メタノールまたはジメチルスルホキ
シドの最終的濃度は０．１％）。３７℃で４時間後、細胞を、１０％正規ＤＭＥ
Ｍ、２％ウシ胎児血清、４００μＣｉ［３５Ｓ］メチオニン（１０００Ｃｉ／ｍ
ｍｏｌ）および試験化合物を加えた３ｍｌのメチオニン非含有ＤＭＥＭ中で標識
化する。イソプレノイド生合成経路において速度制限工程を阻害することにより
細胞内でのＲａｓプロセッシングを阻害する化合物であるロバスタチンで処理（
Ｈａｎｃｏｃｋ，Ｊ．Ｆ．ら著、Ｃｅｌｌ、第５７巻：１１６７頁（１９８９年
）；ＤｅＣｌｕｅ，Ｊ．Ｅ．ら著、Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ、第５１巻：７１２頁
（１９９１年）；Ｓｉｎｅｎｓｋｙ，Ｍ．ら著、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ、第２
６５巻：１９９３７頁（１９９０年））された細胞は、このアッセイにおいて陽
性コントロールとして作用する。さらに２０時間後、細胞を１ｍｌの溶解緩衝液
（１％ ＮＰ４０／２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５／５ｍＭ ＭｇＣｌ２／
１ｍＭ ＤＴＴ／１０ｍｇ／ｍｌ アプロチニン／２ｍｇ／ｍｌ ロイペプチン
／２ｍｇ／ｍｌ アンチパイン／０．５ｍＭ ＰＭＳＦ）に溶解し、溶解物を１
００，０００×ｇで４５分間遠心分離することにより取り除く。また、標識化媒
体の添加から４時間後、媒体を除去し、細胞を洗い、同じまたは異なる試験化合
物を含む媒体３ｍｌを添加する。さらに１６時間のインキュベーション後、前述
のように溶解を行う。同数の酸沈殿性カウントを含む溶解物をＩＰ緩衝液（ＤＴ
Ｔを欠く溶解緩衝液）で１ｍｌにし、ｒａｓ特異的モノクローナル抗体Ｙ１３〜
２５９（Ｆｕｒｔｈ，Ｍ．Ｅ．ら著、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．第４３巻：２９４〜３０
４頁（１９８２年））を用いて免疫沈澱させる。４℃で２時間抗体をインキュベ
ーションしてから、ウサギ抗ラットＩｇＧで被覆したタンパクＡ−セファローズ
の２５％懸濁液２００μｌを４５分間で添加する。免疫沈澱物を、ＳＤＳ−ＰＡ
ＧＥサンプル緩衝液中で沸騰させ１３％アクリルアミドゲルを賦与したＩＰ緩衝
液（２０ｎＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５／１ｍＭ ＥＤＴＡ／１％ Ｔｒｉｔｏ
ｎ Ｘ−１００．０．５％デオキシコレート／０．１％／ＳＤＳ／０．１Ｍ Ｎ
ａＣｌ）で４回洗う。染料の先端が底部に到達すると、ゲルを固定し、Ｅｎｌｉ
ｇｈｔｅｎｉｎｇに浸漬し、乾燥し、放射線写真を撮る。プレニル化および非プ
レニル化Ｒａｓタンパクに対応するバンドの強さを比較して、タンパクへのプレ
ニルの転移の阻害％を決める。
【０３０６】 実施例１４ ＳＥＡＰリポータープラスミドｐＤＳＥ１００の組み立て ＳＥＡＰリポータープラスミドであるｐＤＳＥ１００を、ＳＥＡＰコード配列
を含む制限フラグメントをプラスミドｐＣＭＶ−ＲＥ−ＡＫＩに結合することに
より組み立てた。ＳＥＡＰ遺伝子は、プラスミドｐＳＥＡＰ２−Ｂａｓｉｃ（Ｃ
ｌｏｎｔｅｃｈ，パロ・アルト、カリフォルニア州）から誘導される。プラスミ
ドｐＣＭＶ−ＲＥ−ＡＫＩはＤｅｂｏｒａｈ Ｊｏｎｅｓ（Ｍｅｒｃｋ）により
組み立てられ、サイトメガロウイルス早期プロモーターから誘導された「ＣＡＴ
−ＴＡＴＡ」配列の上流でクローニングされた「染色対称反応要素」の５連続コ
ピーを含む。
【０３０７】 プラスミドｐＤＳＥ１００を以下のように組み立てた。ＳＥＡＰコード配列を
コード化する制限フラグメントを、制限酵素ＥｃｏＲ１およびＨｐａＩを用いて
、プラスミドｐＳＥＡＰ２−Ｂａｓｉｃから切り出した。線状ＤＮＡフラグメン
トの端部をＥ．ｃｏｌｉＤＮＡポリメラーゼＩのＫｌｅｎｏｗフラグメントで満
たした。ＳＥＡＰ遺伝子を含む「ブラント端」ＤＮＡを、アガロースゲル中の消
化物を電気泳動し、１６９４塩基対フラグメントを切り出すことにより単離した
。ベクタープラスミドｐＣＭＶ−ＲＥ−ＡＫＩを、制限酵素Ｂｇｌ−ＩＩを用い
て線状化し、端部をＫｌｅｎｏｗＤＮＡポリメラーゼＩで満たした。ＳＥＡＰ
ＤＮＡは、ｐＣＭＶ−ＲＥ−ＡＫＩベクター中に結合されたブラント端部であり
、結合産物をＤＨ５−αＥ．ｃｏｌｉ細胞（Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ）中に形質転換
した。形質転換物を、適当な挿入物についてスクリーニングし、制限フラグメン
ト配向について遺伝子地図を作成した。適当に配向された再組換え構造物を、ク
ローニング結合部を超えて配列させて、正しい配列を確認した。得られたプラス
ミドは、ＤＳＥおよびＣＡＴ−ＴＡＴＡプロモーター要素の下流かつＢＧＨｐｏ
ｌｙ−Ａ配列の上流であるＳＥＡＰコード配列を含む。
【０３０８】 ＳＥＡＰリポータープラスミドｐＤＳＥ１０１の別の組み立て ＳＥＡＰリポータープラスミドであるｐＤＳＥ１０１も、ＳＥＡＰコード配列
を含む制限酵素をプラスミドｐＣＭＶ−ＲＥ−ＡＫＩに結合することにより組み
立てる。ＳＥＡＰ遺伝子をプラスミドｐＧＥＭ７ｚｆ（−）／ＳＥＡＰから誘導
する。
【０３０９】 プラスミドｐＤＳＥ１０１を次のように組み立てた：ＳＥＡＰ遺伝子コード配
列の一部を含む制限フラグメントを、制限酵素ＡｐａＩおよびＫｐｎＩを用いて
プラスミドｐＧＥＭ７ｚｆ（−）／ＳＥＡＰから切り出した。線状ＤＮＡフラグ
メントの端部を、Ｅ．ｃｏｌｉＤＮＡポリメラーゼＩのＫｌｅｎｏｗフラグメン
トで押し戻した。截形ＳＥＡＰ遺伝子を含む「ブラント端」ＤＮＡを、アガロー
スゲル中の消化物を電気泳動し、１９１０塩基対フラグメントを切り出すことに
より単離した。この１９１０塩基対フラグメントを、ＢｇＩ−ＩＩで切断された
プラスミドｐＣＭＶ−ＲＥ−ＡＫＩ中に結合し、Ｅ．ｃｏｌｉＫｌｅｎｏｗフラ
グメントＤＮＡポリメラーゼで満たした。再組換えプラスミドを、挿入部配向に
ついてスクリーニングし、結合部を介して配列させた。プラスミドｐＣＭＶ−Ｒ
Ｅ−ＡＫＩはプラスミドｐＣＭＶＩＥ−ＡＫＩ−ＤＨＦＲ（Ｗｈａｎｇ，Ｙ．、
Ｓｉｌｂｅｒｋｌａｎｇ，Ｍ．、Ｍｏｒｇａｎ，Ａ．、Ｍｕｎｓｈｉ，Ｓ．、Ｌ
ｅｎｎｙ，Ａ．Ｂ．、Ｅｌｌｉｓ，Ｒ．Ｗ．、およびＫｉｅｆｆ，Ｅ．著（１９
８７年）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．、第６１巻、１７９６頁〜１８０７頁）から、ＤＨＦ
Ｒおよびネオマイシンマーカーを含むＥｃｏＲＩフラグメントを除去することに
より誘導される。ｆｏｓプロモーター結成反応要素の５つのコピーを、既述（Ｊ
ｏｎｅｓ，Ｒ．Ｅ．、Ｄｅｆｅｏ−Ｊｏｎｅｓ，Ｄ．、ＭｃＡｖｏｙ，Ｅ．Ｍ．
、Ｖｕｏｃｏｌｏ，Ｇ．Ａ．、Ｗｅｇｒｚｙｎ，Ｒ．Ｊ．、Ｈａｓｋｅｌｌ，Ｋ
．Ｍ．およびＯｌｉｆｆ，Ａ．著（１９９１年）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、第６巻、７
４５頁〜７５１頁）のように挿入してプラスミドｐＣＭＶ−ＲＥ−ＡＫＩを形成
した。
【０３１０】 プラスミドｐＧＥＭ７ｚｆ（−）／ＳＥＡＰを以下のようにして組み立てた。
ＳＥＡＰ遺伝子を、以下のオリゴ体を用いてヒト胎盤ｃＤＮＡライブラリー（Ｃ
ｌｏｎｔｅｃｈ製）からの２つのセグメントにＰＣＲした。
【０３１１】
【化７９】 Ｎ−末端オリゴ体（配列番号：４および配列番号：５）を用いて、端部にＥｃ
ｏＲＩおよびＨｐａＩ制限部位を含む１５６０ｂｐ Ｎ−末端ＰＣＲ産物を生成
した。アンチセンスＮ−末端オリゴ体（配列番号：５）は、ＨｐａＩ部位に沿っ
てＳＥＡＰ遺伝子内に内側翻訳ストップコドンを導入する。Ｃ−末端オリゴ体（
配列番号：６および配列番号：７）を用いて、ＨｐａＩおよびＨｉｎｄＩＩＩ制
限部位を含む４１２ｂｐ Ｃ−末端ＰＣＲ産物を増幅した。センス鎖Ｃ−末端オ
リゴ体（配列番号：６）はＨｐａＩ部位のみならず内側ストップコドンを導入す
る。次に、Ｎ−末端アンプリコンをＥｃｏＲＩおよびＨｐａＩで消化すると共に
、Ｃ−末端アンプリコンをＨｐａＩおよびＨｉｎｄＩＩＩで消化した。ＳＥＡＰ
遺伝子の各端部を含む２つのフラグメントを、アガロースゲル中の消化物を電気
泳動し、１５６０および４１２塩基対フラグメントを単離することにより単離し
た。これらの２つのフラグメントを、次に、ＥｃｏＲＩおよびＨｉｎｄＩＩＩで
制限消化され、アガロースゲル中に単離されたベクターｐＧＥＭ７ｚｆ（−）（
Ｐｒｏｍｅｇａ製）中に共結合した。得られたクローンｐＧＥＭ７ｚｆ（−）／
ＳＥＡＰは、アミノ酸からのＳＥＡＰ遺伝子のためのコード配列を含む。
【０３１２】 構成的に発現しているＳＥＡＰプラスミドｐＣＭＶ−ＳＥＡＰ−Ａの組み立て
ＳＥＡＰタンパクを構成的に発現している発現プラスミドを、サイトメガロウ
イルス（ＣＭＶ）ＩＥ−１プロモーターの下流の截形ＳＥＡＰ遺伝子をコード化
する配列を置くことにより形成した。発現プラスミドは、ウシ成長ホルモン遺伝
子３’〜ＳＥＡＰ遺伝子の３’非翻訳領域と共にＣＭＶイントロンＡ領域５’〜
ＳＥＡＰ遺伝子も含む。
【０３１３】 ＣＭＶ早期プロモーターを含むプラスミドｐＣＭＶＩＥ−ＡＫＩ−ＤＨＦＲ（
Ｗｈａｎｇ，Ｙ．、Ｓｉｌｂｅｒｋｌａｎｇ，Ｍ．、Ｍｏｒｇａｎ，Ａ．、Ｍｕ
ｎｓｈｉ，Ｓ．、Ｌｅｎｎｙ，Ａ．Ｂ．、Ｅｌｌｉｓ，Ｒ．Ｗ．、およびＫｉｅ
ｆｆ，Ｅ．著（１９８７年）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．、第６１巻：１７９６頁〜１８０
７頁）を、２つのフラグメントを生じるＥｃｏＲＩで切断した。ベクターフラグ
メントを、アガロースゲル電気泳動により単離し、再結合した。得られたプラス
ミドをｐＣＭＶ−ＡＫＩと呼ぶ。次に、サイトメガロウイルスイントロンＡヌク
レオチド配列を、ｐＣＭＶ−ＡＫＩ中のＣＭＶ−ＩＥＩプロモーターの下流に挿
入した。イントロンＡ配列を、ゲノムクローンバンクから単離し、ｐＢＲ３２２
中にサブクローニングしてプラスミドｐ１６Ｔ−２８６を生じた。イントロンＡ
配列を、ヌクレオチド１８５６で変異させて（Ｃｈａｐｍａｎ，Ｂ．Ｓ．、Ｔｈ
ａｙｅｒ，Ｒ．Ｍ．、Ｖｉｎｃｅｎｔ，Ｋ．Ａ．およびＨａｉｇｗｏｏｄ，Ｎ．
Ｌ．著、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．第１９巻、３９７９頁〜３９８６頁に記
載のようなヌクレオチド番号付け）、部位誘導変異を用いてＳａｃＩ制限部位を
除去した。変異されたイントロンＡ配列は、以下のオリゴ体を用いてプラスミド
ｐ１６Ｔ−２８７からＰＣＲに付した。
【０３１４】
【化８０】 これら２つのオリゴ体は、センスオリゴ体により組み込まれたＳａｃＩ部位お
よびアンチセンスオリゴ体により組み込まれたＢｇｌ−ＩＩフラグメントを有す
る９９１塩基対フラグメントを発生させる。ＰＣＲフラグメントをＳａｃＩおよ
びＢｇｌ−ＩＩで整え、アガロースゲル上で単離する。ベクターｐＣＭＶ−ＡＫ
Ｉを、ＳａｃＩおよびＢｇｌ−ＩＩで切断し、アガロースゲル電気泳動でより大
きなベクターフラグメントを単離する。２つのゲル単離フラグメントを、それぞ
れＳａｃＩおよびＢｇｌ−ＩＩ部位で結合してプラスミドｐＣＭＶ−ＡＫＩ−Ｉ
ｎＡを形成する。
【０３１５】 截形ＳＥＡＰ遺伝子をコード化するＤＮＡ配列を、ベクターのＢｇｌ−ＩＩ部
位においてｐＣＭＶ−ＡＫＩ−ＩｎＡプラスミドに挿入する。ＳＥＡＰ遺伝子を
ＥｃｏＲＩおよびＨｉｎｄＩＩＩを用いてプラスミドｐＧＥＭ７ｚｆ（−）／Ｓ
ＥＡＰ（前述）から切り出す。このフラグメントをＫｌｅｎｏｗＤＮＡポリメラ
ーゼおよび、アガロースゲル電気泳動によりベクターフラグメントから単離され
た１９７０塩基対フラグメントで満たす。ｐＣＭＶ−ＡＫＩ−ＩｎＡベクターを
、Ｂｇｌ−ＩＩで消化し、端部をＫｌｅｎｏｗＤＮＡポリメラーゼで満たすこと
により調製する。最終的構造物は、ｐＣＭＶ−ＡＫＩ−ＩｎＡベクター中にＳＥ
ＡＰフラグメントをブラント端結合することにより生じる。形質転換体を、適当
な挿入体についてスクリーニングし、次に制限フラグメント配向について遺伝子
地図を作成した。適当に配向された再組換え構造物を、クローニング結合部を超
えて配列させて、正しい配列を確認した。得られたプラスミドは、ｐＣＭＶ−Ｓ
ＥＡＰ−Ａ（１９９８年８月２７日にブダペスト条約の元にＡＴＣＣに寄託され
、ＡＴＣＣと表される）と呼ばれ、サイトメガロウイルス早期プロモーターＩＥ
−１およびイントロンＡ配列の下流、かつウシ成長ホルモンｐｏｌｙ−Ａ配列の
上流に修飾ＳＥＡＰ配列を含む。プラスミドは、哺乳動物細胞中に形質移入され
たときに構成的にＳＥＡＰを発現する。
【０３１６】 ＳＥＡＰプラスミドｐＣＭＶ−ＳＥＡＰ−Ｂを構成的に発現する別の構造物 ＳＥＡＰタンパクを構成的に発現する発現プラスミドは、サイトメガロウイル
ス（ＣＭＶ）ＩＥー１プロモーターの下流、かつウシ成長ホルモン遺伝子の３’
非翻訳領域の上流に截形ＳＥＡＰ遺伝子をコード化する配列を置くことにより形
成することができる。
【０３１７】 ＣＭＶ早期プロモーターおよびウシ成長ホルモンｐｏｌｙ−Ａ配列を含むプラ
スミドｐＣＭＶＩＥ−ＡＫＩ−ＤＨＦＲ（Ｗｈａｎｇ，Ｙ．、Ｓｉｌｂｅｒｋｌ
ａｎｇ，Ｍ．、Ｍｏｒｇａｎ，Ａ．、Ｍｕｎｓｈｉ，Ｓ．、Ｌｅｎｎｙ，Ａ．Ｂ
．、Ｅｌｌｉｓ，Ｒ．Ｗ．、およびＫｉｅｆｆ，Ｅ．著（１９８７年）Ｊ．Ｖｉ
ｒｏｌ．、第６１巻：１７９６頁〜１８０７頁）をＥｃｏＲＩで切断して２つの
フラグメントを発生させることができる。ベクターフラグメントは、アガロース
電気泳動で単離し再結合させることができる。得られたプラスミドはｐＣＭＶ−
ＡＫＩと呼ばれる。截形ＳＥＡＰ遺伝子をコードするＤＮＡ配列を、ベクター中
の独自Ｂｇｌ−ＩＩにおいてｐＣＭＶ−ＡＫＩプラスド中に挿入することができ
る。ＳＥＡＰ遺伝子が、ＥｃｏＲＩおよびＨｉｎｄＩＩＩを用いてプラスミドｐ
ＧＥＭｚｆ（−）／ＳＥＡＰ（前記）から切り出される。このフラグメントをＫ
ｌｅｎｏｗＤＮＡポリメラーゼ、およびアガロースゲル電気泳動によりベクター
フラグメントから単離された１９７０塩基対フラグメントで満たす。ｐＣＭＶ−
ＡＫＩベクターを、Ｂｇｌ−ＩＩで消化し、端部をＫｌｅｎｏｗＤＮＡポリメラ
ーゼで満たすことにより調製する。最終的構造物は、ベクター中にＳＥＡＰフラ
グメントをブラント端結合し、Ｅ．ｃｏｌｉＤＨ５α細胞中への結合反応を変質
させることにより生じる。形質転換体を、適当な挿入体についてスクリーニング
し、次に制限フラグメント配向について遺伝子地図を作成した。適当に配向され
た再組換え構造物を、クローニング結合部を超えて配列させて、正しい配列を確
認した。得られたプラスミドは、ｐＣＭＶ−ＳＥＡＰ−Ｂと呼ばれ、サイトメガ
ロウイルス早期プロモーターＩＥ１の下流、かつウシ成長ホルモンｐｏｌｙ−Ａ
配列の上流に修飾ＳＥＡＰ配列を含む。プラスミドは、哺乳動物細胞中に形質移
入されたときに構成的にＳＥＡＰを発現する。
【０３１８】 ミリスチル化されたウイルスＨ−ｒａｓ発現プラスミドｐＳＭＳ６００のクロ
ーニング ウイルス−Ｈ−ｒａｓを含むＤＮＡフラグメントを、以下のオリゴ体を用いて
、プラスミドＨＢ−１１（１９９７年８月２７日にブダペスト条約の元にＡＴＣ
Ｃに寄託され、ＡＴＣＣ２０９，２１８と表される）からＰＣＲを行うことがで
きる。
【０３１９】
【化８１】
【０３２０】 ミリスチル化部位を含むｖ−ｓｒｃ遺伝子の最初の１５アミノ酸をコード化す
る配列をセンス鎖オリゴ体に組み込む。センス鎖オリゴ体は、５’直後からＡＴ
Ｇ開始部位への「Ｋｏｚａｋ」翻訳開始配列を最適化する。ウイルス−ｒａｓＣ
−末端におけるプレニル化を防止するために、Ｃ−末端アンチセンスオリゴ体に
おいてＣ残基をＧ残基に置き換えることによりシステイン１８６がセリンに変異
される。ＰＣＲプライマーオリゴ体は、５’末端にＸｈｏＩ部位および３’末端
にＸｂａＩ部位を導入する。ＸｈｏＩおよびＸｂａＩフラグメントを、ＸｈｏＩ
およびＸｂａＩで切断した哺乳動物発現プラスミドｐＣＩ（Ｐｒｏｍｅｇａ製）
中に結合することができる。これにより、再組換えｍｙｒ−ウイルス−Ｈ−ｒａ
ｓ遺伝子がｐＣＩベクターのＣＭＶプロモーターから構成的に転写されているプ
ラスミドｐＳＭＳ６００が得られる。
【０３２１】 ウイルス−Ｈ−ｒａｓ−ＣＶＬＬ発現プラスミドｐＳＭＳ６０１のクローニン
グ アミノ酸ＣＶＬＬをコード化するＣ−末端配列を有するウイルス−Ｈ−ｒａｓ
クローンを、以下のオリゴ体を用いるＰＣＲによりプラスミド「ＨＢ−１１」か
らクローニングすることができる。
【０３２２】
【化８２】
【０３２３】 センス鎖オリゴ体は、「Ｋｏｚａｋ」配列を最適化しＸｈｏＩを付加する。ア
ンチセンス鎖はセリン１８９をロイシンに変異させ、ＸｂａＩを加える。ＰＣＲ
フラグメントはＸｈｏＩおよびＸｂａＩで調整し、ＸｈｏＩ−ＸｂａＩ切断ベク
ターｐＣＩ（Ｐｒｏｍｅｇａ製）中にされる。これにより、変異ウイルス−Ｈ−
ｒａｓＣＶＬＬ遺伝子がｐＣＩベクターのＣＭＶプロモーターから構成的に転写
されているプラスミドｐＳＭＳ６０１が得られる。
【０３２４】 細胞−Ｈ−ｒａｓ−Ｌｅｕ６１発現プラスミドｐＳＭＳ６２０のクローニング
ヒト細胞−Ｈ−ｒａｓ遺伝子を、以下のオリゴヌクレオチドプライマーを用い
てヒト大脳皮質ｃＤＮＡライブラリー（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ製）からＰＣＲするこ
とができる。
【０３２５】
【化８３】
【０３２６】 プライマーは、ｃ−Ｈ−Ｒａｓコード化ＤＮＡフラグメントを増幅し、最適化
された「Ｋｏｚａｋ」翻訳開始配列、Ｎ−末端におけるＥｃｏＲＩ部位およびＣ
−末端におけるＳａｌ Ｉ部位に貢献する。ＰＣＲ産物の端部をＥｃｏＲＩおよ
びＳａｌ Ｉで調整した後、ｃ−Ｈ−Ｒａｓフラグメントを、ＥｃｏＲＩ−Ｓａ
ｌ Ｉ切断変異誘発ベクターｐＡｌｔｅｒ−１（Ｐｒｏｍｅｇａ製）中に結合す
ることができる。グルタミン−６１からロイシンへの変異は、製造者のプロトコ
ールおよび以下のオリゴヌクレオチドを用いて達成することができる。
【０３２７】
【化８４】
【０３２８】 正確なヌクレオチド置換のために選択および配列を行った後、変異したｃ−Ｈ
−ｒａｓ−Ｌｅｕ６１を、ＥｃｏＲＩおよびＳａｌ Ｉを用いて、ｐＡｌｔｅｒ
−１ベクターから切除することができ、ＥｃｏＲＩおよびＳａｌ Ｉで消化され
たベクターｐＣＩ（Ｐｒｏｍｅｇａ製）中に直接結合することができる。新しい
再組換えプラスミドｐＳＭＳ６２０は、ｐＣＩベクターのＣＭＶプロモーターか
ら構成的にｃ−Ｈ−ｒａｓ−Ｌｅｕ６１を転写する。
【０３２９】 ｃ−Ｎ−ｒａｓ−Ｖａｌ−１２発現プラスミドｐＳＭＳ６３０のクローニング
ヒトｃ−Ｎ−ｒａｓ遺伝子は、以下のオリゴヌクレオチドプライマーを用いて
ヒト大脳皮質ｃＤＮＡライブラリー（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ製）からＰＣＲすること
ができる。
【０３３０】
【化８５】
【０３３１】 プライマーは、ｃ−Ｈ−Ｒａｓコード化ＤＮＡフラグメントを増幅し、最適化
された「Ｋｏｚａｋ」翻訳開始配列、Ｎ−末端におけるＥｃｏＲＩ部位およびＣ
−末端におけるＳａｌ Ｉ部位に貢献する。ＰＣＲ産物の端部をＥｃｏＲＩおよ
びＳａｌ Ｉで調整した後、ｃ−Ｎ−Ｒａｓフラグメントを、ＥｃｏＲＩ−Ｓａ
ｌ Ｉ切断変異誘発ベクターｐＡｌｔｅｒ−１（Ｐｒｏｍｅｇａ製）中に結合す
ることができる。グリシン−１２からバリンへの変異は、製造者のプロトコール
および以下のオリゴヌクレオチドを用いて達成することができる。
【０３３２】
【化８６】
【０３３３】 正確なヌクレオチド置換のために選択および配列を行った後、変異したｃ−Ｎ
−ｒａｓ−Ｖａｌ−１２を、ＥｃｏＲＩおよびＳａｌ Ｉを用いて、ｐＡｌｔｅ
ｒ−１ベクターから切除することができ、ＥｃｏＲＩおよびＳａｌ Ｉで消化さ
れたベクターｐＣＩ（Ｐｒｏｍｅｇａ製）中に直接結合することができる。新し
い再組換えプラスミドｐＳＭＳ６３０は、ｐＣＩベクターのＣＭＶプロモーター
から構成的にｃ−Ｎ−ｒａｓ−Ｖａｌ−１２を転写する。
【０３３４】 ｃ−Ｋ４Ｂ−ｒａｓ−Ｖａｌ−１２発現プラスミドｐＳＭＳ６４０のクローニ
ング ヒトｃ−Ｋ４Ｂ−ｒａｓ遺伝子は、以下のオリゴヌクレオチドプライマーを用
いてヒト大脳皮質ｃＤＮＡライブラリー（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ製）からＰＣＲする
ことができる。
【０３３５】
【化８７】
【０３３６】 プライマーは、ｃ−Ｋ４Ｂ−Ｒａｓコード化ＤＮＡフラグメントを増幅し、最
適化された「Ｋｏｚａｋ」翻訳開始配列、Ｎ−末端におけるＫｐｎ Ｉ部位およ
びＣ−末端におけるＳａｌ Ｉ部位に貢献する。ＰＣＲ産物の端部をＫｐｎ Ｉ
およびＳａｌ Ｉで調整した後、ｃ−Ｋ４Ｂ−Ｒａｓフラグメントを、Ｋｐｎ
Ｉ−Ｓａｌ Ｉ切断変異誘発ベクターｐＡｌｔｅｒ−１（Ｐｒｏｍｅｇａ製）中
に結合することができる。システイン−１２からバリンへの変異は、製造者のプ
ロトコールおよび以下のオリゴヌクレオチドを用いて達成することができる。
【０３３７】
【化８８】
【０３３８】 正確なヌクレオチド置換のために選択および配列を行った後、変異したｃ−Ｋ
４Ｂ−ｒａｓ−Ｖａｌ−１２を、Ｋｐｎ ＩおよびＳａｌ Ｉを用いて、ｐＡｌ
ｔｅｒ−１ベクターから切除することができ、Ｋｐｎ ＩおよびＳａｌ Ｉで消
化されたベクターｐＣＩ（Ｐｒｏｍｅｇａ製）中に直接結合することができる。
新しい再組換えプラスミドは、ｐＣＩベクターのＣＭＶプロモーターから構成的
にｃ−Ｋ４Ｂ−ｒａｓ−Ｖａｌ−１２を転写する。
【０３３９】 ｃ−Ｋ−ｒａｓ４Ａ−Ｖａｌ−１２発現プラスミドｐＳＭＳ６５０のクローニ
ング ヒトｃ−Ｋ４Ａ−ｒａｓ遺伝子は、以下のオリゴヌクレオチドプライマーを用
いてヒト大脳皮質ｃＤＮＡライブラリー（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ製）からＰＣＲする
ことができる。
【０３４０】
【化８９】
【０３４１】 プライマーは、ｃ−Ｋ４Ａ−Ｒａｓコード化ＤＮＡフラグメントを増幅し、最
適化された「Ｋｏｚａｋ」翻訳開始配列、Ｎ−末端におけるＫｐｎ Ｉ部位およ
びＣ−末端におけるＳａｌ Ｉ部位に貢献する。ＰＣＲ産物の端部をＫｐｎ Ｉ
およびＳａｌ Ｉで調整した後、ｃ−Ｋ−ｒａｓ４Ａフラグメントを、Ｋｐｎ
Ｉ−Ｓａｌ Ｉ切断変異誘発ベクターｐＡｌｔｅｒ−１（Ｐｒｏｍｅｇａ製）中
に結合することができる。システイン−１２からバリンへの変異は、製造者のプ
ロトコールおよび以下のオリゴヌクレオチドを用いて達成することができる。
【０３４２】
【化９０】
【０３４３】 正確なヌクレオチド置換のために選択および配列を行った後、変異したｃ−Ｋ
４Ａ−ｒａｓ−Ｖａｌ−１２を、Ｋｐｎ ＩおよびＳａｌ Ｉを用いて、ｐＡｌ
ｔｅｒ−１から切除することができ、Ｋｐｎ ＩおよびＳａｌ Ｉで消化された
ベクターｐＣＩ（Ｐｒｏｍｅｇａ製）中に直接結合することができる。新しい再
組換えプラスミドｐＳＭＳ６５０は、ｐＣＩベクターのＣＭＶプロモーターから
構成的にｃ−Ｋ４Ａ−ｒａｓ−Ｖａｌ−１２を転写する。
【０３４４】 ＳＥＡＰアッセイ ヒトＣ３３Ａ細胞（ヒト上皮癌−ＡＴＴＣ採取物）を、ＤＭＥＭ＋１０％ウシ
胎児血清＋１Ｘ Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ＋１Ｘグルタミン＋１Ｘ ＮＥＡＡ中の１
０ｃｍ組織媒体プレート中に接種する。細胞を、５０〜８０％の融合性に達する
まで５％ＣＯ２雰囲気中にて３７℃で成長させる。
【０３４５】 一時的形質移入を、ＣａＰＯ４法（Ｓａｍｂｒｏｏｋ等、１９８９年）により
行う。すなわち、Ｈ−ｒａｓ、Ｎ−ｒａｓ、Ｋ−ｒａｓ、Ｍｙｒ−ｒａｓまたは
Ｈ−ｒａｓ−ＣＶＬＬのための発現プラスミドを、ＤＳＥ−ＳＥＡＰリポーター
構造物と共沈降させる。（細胞にｐＣＭＶ−ＳＥＡＰプラスミドを形質移入した
場合、ｒａｓ発現プラスミドは含まれない。）１０ｃｍプレートについて、Ｃａ
Ｃｌ２−ＤＮＡ溶液６００μｌを攪拌下に２×ＨＢＳ緩衝液６００μｌに添加し
て、沈降溶液１．２ｍｌを得る（以下の方法を参照）。これを室温で２０〜３０
分間放置する。沈降形成中、Ｃ３３Ａ細胞の媒体をＤＭＥＭ（フェノールレッド
非含有；Ｇｉｂｃｏ ｃａｔ． Ｎｏ．３１０５３−０２８）＋０．５％木炭片
子ウシ血清＋１×（Ｐｅｎ／Ｓｔｒｅｐ，グルタミンおよび非必須アミノ酸）に
換える。ＣａＰＯ４−ＤＮＡ沈降物を細胞に滴下し、プレートを穏やかに振動さ
せて分散させる。ＤＮＡ取り込みを、５％ＣＯ２雰囲気下に３７℃で５〜６時間
進める。
【０３４６】 ＤＮＡインキュベーション期間に続いて、細胞をＰＢＳで洗い、０．０５％ト
リプシン１ｍｌでトリプシン処理する。トリプシン処理した細胞１ｍｌを１０ｍ
ｌのフェノールレッド非含有ＤＭＥＭ＋０．２％木炭片子ウシ血清＋１×（Ｐｅ
ｎ／Ｓｔｒｅｐ，グルタミンおよび非必須アミノ酸）中に希釈する。形質移入し
た細胞を、媒体に希釈した薬剤を予め１００μｌ添加しておいた９６ウエル微量
プレート（１００μｌ／ウエル）中に入れた。ウエル当りの最終体積は２００μ
ｌであり、半対数段階の範囲において各薬剤濃度を３回繰り返す。
【０３４７】 細胞および薬剤のインキュベーションは、ＣＯ２雰囲気下に３７℃で３６時間
である。インキュベーション期間の最後に、細胞を、顕微鏡で細胞疲労の証拠に
ついて実験する。次に、分泌されたアルカリホスファターゼを含む媒体１００μ
ｌを各ウエルから除去し、微小管列に移して６５℃で１時間熱処理して、内因性
アルカリホスファターゼを不活性化する（しかし、熱安定性分泌ホスファターゼ
は不活性化しない）。
【０３４８】 蛍光試薬ＣＳＰＤ（登録商標）（Ｔｒｏｐｉｘ，Ｂｅｄｆｏｒｄ，Ｍａｓｓ．
）を用いて蛍光アッセイによりアルカリホスファターゼについて熱処理媒体をア
ッセイする。媒体５０μｌをＣＳＰＤ２００μｌと併せ、室温で６０分間インキ
ュベートする。ＭＬ２２００マイクロプレート蛍光計（Ｄｙｎａｔｅｃｈ製）を
用いてルミネセンスをモニターする。ルミネセンスは、一時的発現タンパクによ
りｆｏｓリポーター構造物の活性化水準を反映する。
【０３４９】 細胞の１０ｃｍプレートについてのＤＮＡ−ＣａＰＯ４沈降 Ｒａｓ発現プラスミド（１μｇ／μｌ） １０μｌ ＤＳＥ−ＳＥＡＰプラスミド（１μｇ／μｌ） ２μｌ せん断子ウシ胸腺ＤＮＡ（１μｇ／μｌ） ８μｌ ２ＭＣａＣｌ２ ７４μｌ ｄＨ２Ｏ ５０６μｌ ２Ｘ ＨＢＳ Ｂｕｆｆｅｒ ２８０ｍＭ ＮａＣｌ １０ｍＭ ＫＣｌ １．５ｍＭ Ｎａ２ＨＰＯ４ ２Ｈ２Ｏ １２ｍＭデキストロース ５０ｍＭ ＨＥＰＥＳ 最終的ｐＨ＝７．０５
【０３５０】 ルミネセンス緩衝液（２６ｍｌ） アッセイ緩衝液 ２０ｍｌ Ｅｍｅｒａｌｄ ＲｅａｇｅｎｔＴＭ（Ｔｒｏｐｉｘ製） ２．５ｍｌ １００ｍＭホモアルギニン ２．５ｍｌ ＣＳＰＤ Ｒｅａｇｅｎｔ（登録商標）（Ｔｒｏｐｉｘ製） １．０ｍｌ
【０３５１】 アッセイ緩衝液 ０．０５Ｍ Ｎａ２ＣＯ３を０．０５Ｍ Ｎａ２ＨＣＯ３に添加してｐＨを９．
５にする。
【０３５２】 ＭｇＣｌ２中の１ｍＭにする。
【０３５３】 実施例１４ 別の発現プラスミド ミリスチル化ｃ−Ｈ−ｒａｓ発現プラスミドｐＳＭＳ６２１のクローニング ミリスチル化ｃ−Ｈ−ｒａｓ−Ｌｅｕ−６１発現プラスミドを、以下のプライ
マーを用いてプラスミドｐＳＭＳ６２０（前記）からＰＣＲによりクローニング
することができる。
【０３５４】
【化９１】 ミリスチル化部位を含むｖ−ｓｒｃ遺伝子の最初の１５アミノ酸をコード化す
る配列をセンス鎖オリゴ体に組み込む。センス鎖オリゴ体は、５’直後からＡＴ
Ｇ開始部位までの「Ｋｏｚａｋ」翻訳開始配列も最適化する。ｖ−Ｒａｓ Ｃ−
末端においてプレニル化を防止するために、Ｃ−末端アンチセンスオリゴ体にお
いてＣ残基をＧ残基に置きかえることにより、システイン１８６がセリンに変異
する。ＰＣＲプライマーオリゴ体は、ＥｃｏＲＩ部位を５’末端におよびＳａｌ
Ｉ部位を３’末端に導入する。ＥｃｏＲＩ−Ｓａｌ Ｉフラグメントを、Ｅｃ
ｏＲＩおよびＳａｌ Ｉで切断された哺乳動物発現プラスミドｐＣＩ（Ｐｒｏｍ
ｅｇａ製）中に結合することができる。これにより、再組換えｍｙｒ−ｃ−Ｈ−
ｒａｓ−Ｓｅｒ−１８６遺伝子が、ｐＣＩベクターのＣＭＶプロモーターから構
成的に転写されているプラスミドｐＳＭＳ６２１が得られる。
【０３５５】 ｃ−Ｈ−ｒａｓ−ＣＶＬＬ発現プラスミドｐＳＭＳ６２２のクローニング アミノ酸ＣＶＬＬをコード化しているＣ−末端配列を有するｃ−Ｈ−ｒａｓク
ローンは、以下のオリゴ体を用いてＰＣＲによりプラスミドｐＳＭＳ６２０（前
記）からクローニングすることができる。
【化９２】
【０３５６】 センス鎖オリゴは、「Ｋｏｚａｋ」配列を最適化し、ＥｃｏＲＩ部位を付加す
る。アンチセンス鎖は、セリン１８９をロイシンに変異させ、Ｓａｌ Ｉ部位を
加える。ＰＣＲフラグメントはＥｃｏＲＩおよびＳａｌ Ｉで調整し、ＥｃｏＲ
Ｉ−Ｓａｌ Ｉ切断ベクターｐＣＩ（Ｐｒｏｍｅｇａ製）中に結合することがで
きる。これにより、変異ｃ−Ｈ−ｒａｓ−Ｌｅｕ６１−ＣＶＬＬ遺伝子が、ｐＣ
ＩベクターのＣＭＶプロモーターから構成的に転写されているプラスミドｐＳＭ
Ｓ６２２が得られる。
【０３５７】 実施例１５ 生体内腫瘍成長阻害アッセイ（ヌードマウス） 癌細胞の成長の阻害剤としての生体内効果を、当該分野で良く知られている幾
つかのプロトコールにより特定することができる。そのような生体内効果研究の
例が、Ｎ．Ｅ．Ｋｏｈｌら著（Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，第１巻：７９
２〜７９７（１９９５年））およびＮ．Ｅ．Ｋｏｈｌら著（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．
Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．、第９１巻：９１４１〜９１４５（１９９４年
））により記載されている。
【０３５８】 腫瘍遺伝子により変異されたヒトＨａ−ｒａｓまたはＫｉ−ｒａｓで形質転換
されたげっ歯類（ＤＭＥＭ塩１ｍｌ中に１０６細胞／動物）を、０日目に８〜１
２週齢雌ヌードマウス（Ｈａｒｌａｎ製）の左わき腹に皮下注射する。各腫瘍遺
伝子群のマウスを無作為にビヒクル、化合物または組み合わせ処理群に割り当て
る。動物には１日目に皮下投与を開始し、実験継続中毎日投与する。また、ファ
ルネシルタンパクトランスフェラーゼ阻害剤を連続輸液ポンプにより投与するこ
とができる。化合物、化合物組み合わせまたはビヒクルを合計体積０．１ｍｌで
分配する。全てのビヒクル処理動物が直径０．５〜１．０ｃｍの病変を示したと
き、典型的には細胞を注射後１１〜１５日後に、腫瘍を切除し秤量する。各細胞
群について各処理群における腫瘍の平均重量を計算する。
【配列表】
【図面の簡単な説明】
【図１】 ＭＡＰＫシグナル導入経路、およびｆｏｓプロモーター／リポーター構造物の
活性化および分泌されたアルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）の発現につながる
転写因子Ｅｌｋ１の活性化の概略図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 31/495 Ａ６１Ｋ 31/495 ４Ｃ０８４ 31/496 31/496 ４Ｃ０８６ 31/5513 31/5513 38/00 Ａ６１Ｐ 35/00 Ａ６１Ｐ 35/00 43/00 43/00 Ｃ１２Ｎ 9/10 Ｃ１２Ｎ 9/10 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ｚ 15/09 ＺＮＡ Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ Ｃ１２Ｑ 1/68 33/50 Ｚ Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｃ０７Ｄ 233/64 １０６ 33/50 233/90 // Ｃ０７Ｄ 233/64 １０６ 241/04 233/90 401/06 241/04 401/12 401/06 403/06 401/12 403/14 403/06 Ａ６１Ｋ 37/02 403/14 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ) ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ， ＢＹ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＥＥ，ＧＥ，ＨＲ，Ｈ Ｕ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＧ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ， ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＧ，ＳＩ，Ｓ Ｋ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ ，ＶＮ，ＹＵ (72)発明者 デフオー−ジヨーンズ，デボラ アメリカ合衆国、ニユー・ジヤージー・ 07065、ローウエイ、イースト・リンカー ン・アベニユー・126 (72)発明者 オリフ，アレン・アイ アメリカ合衆国、ニユー・ジヤージー・ 07065、ローウエイ、イースト・リンカー ン・アベニユー・126 (72)発明者 スターデイバント，ステイーブン・エム アメリカ合衆国、ニユー・ジヤージー・ 07065、ローウエイ、イースト・リンカー ン・アベニユー・126 Ｆターム(参考） 2G045 AA26 AA40 BB20 CB01 CB02 DA36 DA78 FB01 4B024 AA11 BA11 BA80 CA02 DA03 EA04 GA11 GA18 HA11 4B050 CC03 CC10 DD11 LL03 4B063 QA01 QA05 QQ08 QQ13 QQ33 QQ43 QQ44 QQ61 QQ95 QR33 QR60 QR62 QR77 QR80 QS24 QS25 QX02 4C063 AA01 AA03 BB03 BB09 CC23 CC34 CC37 CC76 DD03 DD10 DD12 DD23 EE01 4C084 AA18 NA14 ZB262 4C086 AA01 AA02 BC38 BC50 BC56 GA07 GA08 GA12 MA01 MA04 NA14 ZB26

Claims (79)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 ファルネシルタンパクトランスフェラーゼおよびゲラニルゲ
    ラニルタンパクトランスフェラーゼＩ型の二重阻害剤である薬学的有効量の化合
    物を、それを必要としている哺乳動物に投与することを含んでなるプレニルタン
    パクトランスフェラーゼを阻害する方法であって、前記化合物は ａ）細胞中でのＭＡＰキナーゼのＫ４Ｂ−Ｒａｓ依存性活性化に対して１２μ
    Ｍより低い阻害活性（ＩＣ５０）、および ｂ）細胞中でのＭＡＰキナーゼのＭｙｒ−Ｒａｓ依存性活性化に対する阻害活
    性（ＩＣ５０）よりも５倍以上低い細胞中でのＭＡＰキナーゼのＫ４Ｂ−Ｒａｓ
    依存性活性化に対する阻害活性（ＩＣ５０） を特徴とするものである方法。
  2. 【請求項２】 前記化合物が、さらに、 ｃ）細胞中でのＭＡＰキナーゼのＨ−Ｒａｓ依存性活性化に対して１０ｎＭよ
    り低い阻害活性（ＩＣ５０） を特徴とするものである、請求項１に記載の方法。
  3. 【請求項３】 細胞中でのＭＡＰキナーゼのＫ４Ｂ−ＲａｓおよびＭｙｒ−
    Ｒａｓ依存性活性化に対する化合物の阻害活性（ＩＣ５０）を： ａ）ｒａｓ遺伝子のための発現プラスミドおよびリポーター遺伝子の産物をコ
    ード化するリポーター構造物のための発現プラスミドを細胞に共形質移入する工
    程、 ｂ）試験化合物の存在下に細胞をインキュベートする工程、および ｃ）リポーター遺伝子の産物の存在についてアッセイ媒体または細胞の溶解産
    物を分析する工程 からなるアッセイにより決める請求項１に記載の方法。
  4. 【請求項４】 リポーター遺伝子の産物が分泌されたアルカリホスファター
    ゼである請求項３に記載の方法。
  5. 【請求項５】 前記化合物が、さらに、 ｃ）細胞中でのＭＡＰキナーゼのＨ−Ｒａｓ依存性活性化に対して１０ｎＭよ
    り低い阻害活性（ＩＣ５０）を特徴とし、 細胞中でのＭＡＰキナーゼのＫ４Ｂ−ＲａｓおよびＭｙｒ−Ｒａｓ依存性活性
    化に対する化合物の阻害活性（ＩＣ５０）を前記アッセイにより決める、請求項
    ３に記載の方法。
  6. 【請求項６】 細胞がＣ３３ａ細胞である請求項３に記載の方法。
  7. 【請求項７】 細胞がＣ３３ａ細胞である請求項４に記載の方法。
  8. 【請求項８】 リポーター遺伝子の発現がＭＡＰキナーゼにより活性化され
    る転写因子により制御される請求項３に記載の方法。
  9. 【請求項９】 分泌されたアルカリホスファターゼをコード化するリポータ
    ー構造物のための発現プラスミドがｐＤＳＥ１０１プラスミドである請求項４に
    記載の方法。
  10. 【請求項１０】 分泌されたアルカリホスファターゼをコード化するリポー
    ター構造物のための発現プラスミドがｐＤＳＥ１０１プラスミドである請求項７
    に記載の方法。
  11. 【請求項１１】 Ｋ４Ｂ−Ｒａｓ遺伝子のための発現プラスミドがｐＳＭＳ
    ６４０プラスミドまたはｐＺｉｐ−ｒａｓＫ４Ｂプラスミドである請求項４に記
    載の方法。
  12. 【請求項１２】 Ｍｙｒ−Ｒａｓ遺伝子のための発現プラスミドがｐＳＭＳ
    ６００プラスミドである請求項５に記載の方法。
  13. 【請求項１３】 ファルネシルタンパクトランスフェラーゼおよびゲラニル
    ゲラニルタンパクトランスフェラーゼＩ型の二重阻害剤である薬学的有効量の化
    合物を、それを必要としている哺乳動物に投与することを含んでなるプレニルタ
    ンパクトランスフェラーゼを阻害する方法であって、前記化合物は ａ）細胞中でのＭＡＰキナーゼのＫ４Ｂ−Ｒａｓ依存性活性化に対して１２μ
    Ｍより低い阻害活性（ＩＣ５０）、および ｂ）構成的にＳＥＡＰタンパクを発現するｐＣＭＶ−ＳＥＡＰプラスミドを形
    質移入した細胞中でのＳＥＡＰタンパクの発現に対する阻害活性（ＩＣ５０）よ
    りも５倍以上低い細胞中でのＭＡＰキナーゼのＫ４Ｂ−Ｒａｓ依存性活性化に対
    する阻害活性（ＩＣ５０） を特徴とするものである方法。
  14. 【請求項１４】 ファルネシルタンパクトランスフェラーゼおよびゲラニル
    ゲラニルタンパクトランスフェラーゼＩ型の二重阻害剤である薬学的有効量の化
    合物を、それを必要としている哺乳動物に投与することを含んでなるプレニルタ
    ンパクトランスフェラーゼを阻害する方法であって、前記化合物は ａ）細胞中でのＭＰＡキナーゼのＨ−ｒａｓ−ＣＶＬＬ（配列番号：１）依存
    性活性化に対する阻害活性（ＩＣ５０）よりも２倍以上低いが２００００倍以下
    低い細胞中でのＭＡＰキナーゼのＨ−Ｒａｓ依存性活性化に対する阻害活性（Ｉ
    Ｃ５０）；および ｂ）構成的にＳＥＡＰタンパクを発現するｐＣＭＶ−ＳＥＡＰプラスミドを形
    質移入した細胞中でのＳＥＡＰタンパクの発現に対する阻害活性（ＩＣ５０）よ
    りも５倍以上低い細胞中でのＭＡＰキナーゼのＨ−ｒａｓ−ＣＶＬＬ依存性活性
    化に対する阻害活性（ＩＣ５０） を特徴とするものである方法。
  15. 【請求項１５】 ファルネシルタンパクトランスフェラーゼおよびゲラニル
    ゲラニルタンパクトランスフェラーゼＩ型の二重阻害剤である薬学的有効量の化
    合物を、それを必要としている哺乳動物に投与することを含んでなるプレニルタ
    ンパクトランスフェラーゼを阻害する方法であって、前記化合物は ａ）細胞中でのＭＰＡキナーゼのＨ−ｒａｓ−ＣＶＬＬ（配列番号：１）依存
    性活性化に対する阻害活性（ＩＣ５０）よりも２倍以上低いが２００００倍以下
    低い細胞中でのＭＡＰキナーゼのＨ−Ｒａｓ依存性活性化に対する阻害活性（Ｉ
    Ｃ５０）；および ｂ）細胞中でのＭＡＰキナーゼのＭｙｒ−Ｒａｓ依存性活性化に対する阻害活
    性（ＩＣ５０）よりも５倍以上低い細胞中でのＭＡＰキナーゼのＨ−ｒａｓ−Ｃ
    ＶＬＬ依存性活性化に対する阻害活性（ＩＣ５０） を特徴とするものである方法。
  16. 【請求項１６】 ファルネシルタンパクトランスフェラーゼおよびゲラニル
    ゲラニルタンパクトランスフェラーゼＩ型の二重阻害剤である薬学的有効量の化
    合物を、それを必要としている哺乳動物に投与することを含んでなるファルネシ
    ルタンパクトランスフェラーゼおよびゲラニルゲラニルタンパクトランスフェラ
    ーゼＩ型を阻害する方法であって、前記化合物は ａ）細胞中でのＭＰＡキナーゼのＫ４Ｂ−Ｒａｓ依存性活性化に対して１２μ
    Ｍより低い阻害活性（ＩＣ５０）；および ｂ）細胞中でのＭＡＰキナーゼのＭｙｒ−Ｒａｓ依存性活性化に対する阻害活
    性（ＩＣ５０）よりも５倍以上低い細胞中でのＭＡＰキナーゼのＫ４Ｂ−Ｒａｓ
    依存性活性化に対する阻害活性（ＩＣ５０） を特徴とするものである方法。
  17. 【請求項１７】 前記化合物が、さらに、 ｃ）細胞中でのＭＡＰキナーゼのＨ−Ｒａｓ依存性活性化に対して１０ｎＭよ
    り低い阻害活性（ＩＣ５０） を特徴とするものである、請求項１６に記載の方法。
  18. 【請求項１８】 細胞中でのＭＡＰキナーゼのＫ４Ｂ−ＲａｓおよびＭｙｒ
    −Ｒａｓ依存性活性化に対する化合物の阻害活性（ＩＣ５０）を： ａ）ｒａｓ遺伝子のための発現プラスミドおよびリポーター遺伝子の産物をコ
    ード化するリポーター構造物のための発現プラスミドを細胞に共形質移入する工
    程、 ｂ）試験化合物の存在下に細胞をインキュベートする工程、および ｃ）リポーター遺伝子の産物の存在についてアッセイ媒体または細胞の溶解産
    物を分析する工程 からなるアッセイにより決める請求項１６に記載の方法。
  19. 【請求項１９】 リポーター遺伝子の産物が分泌されたアルカリホスファタ
    ーゼである請求項１８に記載の方法。
  20. 【請求項２０】 前記化合物が、さらに、 ｃ）細胞中でのＭＡＰキナーゼのＨ−Ｒａｓ依存性活性化に対して１０ｎＭよ
    り低い阻害活性（ＩＣ５０）を特徴とし、 細胞中でのＭＡＰキナーゼのＫ４Ｂ−ＲａｓおよびＭｙｒ−Ｒａｓ依存性活性
    化に対する化合物の阻害活性（ＩＣ５０）を前記アッセイにより決める、請求項
    １８に記載の方法。
  21. 【請求項２１】 細胞がＣ３３ａ細胞である請求項１８に記載の方法。
  22. 【請求項２２】 細胞がＣ３３ａ細胞である請求項１９に記載の方法。
  23. 【請求項２３】 リポーター遺伝子の発現がＭＡＰキナーゼにより活性化さ
    れる転写因子により制御される請求項１９に記載の方法。
  24. 【請求項２４】 分泌されたアルカリホスファターゼをコード化するリポー
    ター構造物のための発現プラスミドがｐＤＳＥ１０１プラスミドである請求項１
    ９に記載の方法。
  25. 【請求項２５】 分泌されたアルカリホスファターゼをコード化するリポー
    ター構造物のための発現プラスミドがｐＤＳＥ１０１プラスミドである請求項２
    ３に記載の方法。
  26. 【請求項２６】 Ｋ４Ｂ−ｒａｓ遺伝子のための発現プラスミドがｐＳＭＳ
    ６４０プラスミドまたはｐＺｉｐ−ｒａｓＫ４Ｂプラスミドである請求項１８に
    記載の方法。
  27. 【請求項２７】 Ｍｙｒ−ｒａｓ遺伝子のための発現プラスミドがｐＳＭＳ
    ６００プラスミドである請求項１８に記載の方法。
  28. 【請求項２８】 ファルネシルタンパクトランスフェラーゼおよびゲラニル
    ゲラニルタンパクトランスフェラーゼＩ型の二重阻害剤である薬学的有効量の化
    合物を、それを必要としている哺乳動物に投与することを含んでなる癌を治療す
    る方法であって、前記化合物は ａ）細胞中でのＭＡＰキナーゼのＫ４Ｂ−Ｒａｓ依存性活性化に対して１２μ
    Ｍより低い阻害活性（ＩＣ５０）、および ｂ）細胞中でのＭＡＰキナーゼのＭｙｒ−Ｒａｓ依存性活性化に対する阻害活
    性（ＩＣ５０）よりも５倍以上低い細胞中でのＭＡＰキナーゼのＫ４Ｂ−Ｒａｓ
    依存性活性化に対する阻害活性（ＩＣ５０） を特徴とするものである方法。
  29. 【請求項２９】 前記化合物が、さらに、 ｃ）細胞中でのＭＡＰキナーゼのＨ−Ｒａｓ依存性活性化に対して１０ｎＭよ
    り低い阻害活性（ＩＣ５０） を特徴とするものである、請求項２８に記載の方法。
  30. 【請求項３０】 細胞中でのＭＡＰキナーゼのＫ４Ｂ−ＲａｓおよびＭｙｒ
    −Ｒａｓ依存性活性化に対する化合物の阻害活性（ＩＣ５０）を： ａ）ｒａｓ遺伝子のための発現プラスミドおよびリポーター遺伝子の産物をコ
    ード化するリポーター構造物のための発現プラスミドを細胞に共形質移入する工
    程、 ｂ）試験化合物の存在下に細胞をインキュベートする工程、および ｃ）リポーター遺伝子の産物の存在についてアッセイ媒体または細胞の溶解産
    物を分析する工程 からなるアッセイにより決める請求項２８に記載の方法。
  31. 【請求項３１】 リポーター遺伝子の産物が分泌されたアルカリホスファタ
    ーゼである請求項３０に記載の方法。
  32. 【請求項３２】 前記化合物が、さらに、 ｃ）細胞中でのＭＡＰキナーゼのＨ−Ｒａｓ依存性活性化に対して１０ｎＭよ
    り低い阻害活性（ＩＣ５０）を特徴とする請求項３０に記載の方法。
  33. 【請求項３３】 細胞がＣ３３ａ細胞である請求項３０に記載の方法。
  34. 【請求項３４】 細胞がＣ３３ａ細胞である請求項３１に記載の方法。
  35. 【請求項３５】 リポーター遺伝子の発現がＭＡＰキナーゼにより活性化さ
    れる転写因子により制御される請求項３０に記載の方法。
  36. 【請求項３６】 分泌されたアルカリホスファターゼをコード化するリポー
    ター構造物のための発現プラスミドがｐＤＳＥ１０１プラスミドである請求項３
    １に記載の方法。
  37. 【請求項３７】 分泌されたアルカリホスファターゼをコード化するリポー
    ター構造物のための発現プラスミドがｐＤＳＥ１０１プラスミドである請求項３
    ５に記載の方法。
  38. 【請求項３８】 Ｋ４Ｂ−Ｒａｓ遺伝子のための発現プラスミドがｐＳＭＳ
    ６４０プラスミドまたはｐＺｉｐ−ｒａｓＫ４Ｂプラスミドである請求項３０に
    記載の方法。
  39. 【請求項３９】 Ｍｙｒ−Ｒａｓ遺伝子のための発現プラスミドがｐＳＭＳ
    ６４０プラスミドまたはｐＳＭＳ６２１プラスミドである請求項３０に記載の方
    法。
  40. 【請求項４０】 癌が変異したＫ４Ｂ−Ｒａｓ遺伝子により特徴付けられる
    癌である請求項２８に記載の方法。
  41. 【請求項４１】 ファルネシルタンパクトランスフェラーゼおよびゲラニル
    ゲラニルタンパクトランスフェラーゼＩ型の二重阻害剤である薬学的有効量の化
    合物を、それを必要としている哺乳動物に投与することを含んでなる癌を治療す
    る方法であって、前記化合物は ａ）細胞中でのＭＡＰキナーゼのＫ４Ｂ−Ｒａｓ依存性活性化に対して１２μ
    Ｍより低い阻害活性（ＩＣ５０）、および ｂ）構成的にＳＥＡＰタンパクを発現するｐＣＭＶ−ＳＥＡＰプラスミドを形
    質移入した細胞中のＳＥＡＰタンパクの発現に対する阻害活性（ＩＣ５０）より
    も５倍以上低い細胞中でのＭＡＰキナーゼのＫ４Ｂ−Ｒａｓ依存性活性化に対す
    る阻害活性（ＩＣ５０） を特徴とするものである方法。
  42. 【請求項４２】 ファルネシルタンパクトランスフェラーゼおよびゲラニル
    ゲラニルタンパクトランスフェラーゼＩ型の二重阻害剤である薬学的有効量の化
    合物を、それを必要としている哺乳動物に投与することを含んでなる、癌を治療
    する方法であって、前記化合物は ａ）細胞中でのＭＰＡキナーゼのＨ−ｒａｓ−ＣＶＬＬ（配列番号：１）依存
    性活性化に対する阻害活性（ＩＣ５０）よりも２倍以上低いが２００００倍以下
    低い細胞中でのＭＡＰキナーゼのＨ−Ｒａｓ依存性活性化に対する阻害活性（Ｉ
    Ｃ５０）；および ｂ）構成的にＳＥＡＰタンパクを発現するｐＣＭＶ−ＳＥＡＰプラスミドを形
    質移入した細胞中でのＳＥＡＰタンパクの発現に対する阻害活性（ＩＣ５０）よ
    りも５倍以上低い細胞中でのＭＡＰキナーゼのＨ−ｒａｓ−ＣＶＬＬ依存性活性
    化に対する阻害活性（ＩＣ５０） を特徴とするものである方法。
  43. 【請求項４３】 ファルネシルタンパクトランスフェラーゼおよびゲラニル
    ゲラニルタンパクトランスフェラーゼＩ型の二重阻害剤である薬学的有効量の化
    合物を、それを必要としている哺乳動物に投与することを含んでなる、癌を治療
    する方法であって、前記化合物は ａ）細胞中でのＭＰＡキナーゼのＨ−ｒａｓ−ＣＶＬＬ（配列番号：１）依存
    性活性化に対する阻害活性（ＩＣ５０）よりも２倍以上低いが２００００倍以下
    低い細胞中でのＭＡＰキナーゼのＨ−Ｒａｓ依存性活性化に対する阻害活性（Ｉ
    Ｃ５０）；および ｂ）細胞中でのＭＡＰキナーゼのＭｙｒ−Ｒａｓ依存性活性化に対する阻害活
    性（ＩＣ５０）よりも５倍以上低い細胞中でのＭＡＰキナーゼのＨ−ｒａｓ−Ｃ
    ＶＬＬ依存性活性化に対する阻害活性（ＩＣ５０） を特徴とするものである方法。
  44. 【請求項４４】 前記化合物が、以下の化合物または薬学的に許容できるそ
    の塩から選択される請求項２８に記載の方法： １−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−２（Ｓ）−［（３−ピ
    リジル）メトキシエチル）］−４−（１−ナフトイル）ピペラジン １−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−２（Ｓ）−（ベンジロ
    キシメチル）−４−（１−ナフトイル）ピペラジン １−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−２（Ｓ）−（ベンジロ
    キシメチル）−４−［７−（２，３−ジヒドロベンゾフロイル）］ピペラジン １−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−２（Ｓ）−（ベンズア
    ミド）−４−（１−ナフトイル）ピペラジン １−［２（Ｒ）−アミノ−３−メルカプトプロピル］−２（Ｓ）−［４−（５
    −ジメチルアミノ−１−ナフタレンスルホンアミド）−１−ブチル］−４−（１
    −ナフトイル）ピペラジン Ｎ−［２（Ｓ）−（１−（４−ニトロフェニルメチル）−１Ｈ−イミダゾール
    −５−イルアセチル）アミノ−３（Ｓ）−メチルフェニル］−Ｎ−１−ナフチル
    メチル−グリシル−メチオニン Ｎ−［２（Ｓ）−（１−（４−ニトロフェニルメチル）−１Ｈ−イミダゾール
    −５−イルアセチル）アミノ−３（Ｓ）−メチルフェニル］−Ｎ−１−ナフチル
    メチル−グリシル−メチオニンメチルエステル Ｎ−［２（Ｓ）−［（１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５
    −イル］アセチルアミノ）−３（Ｓ）−メチルペンチル］−Ｎ−（１−ナフチル
    メチル）グリシル−メチオニン Ｎ−［２（Ｓ）−［（１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５
    −イル］アセチルアミノ）−３（Ｓ）−メチルペンチル］−Ｎ−（１−ナフチル
    メチル）グリシル−メチオニンメチルエステル ２（Ｓ）−ｎ−ブチル−４−（１−ナフトイル）−１−［１−（２−ナフチル
    メチル）イミダゾール−５−イルメチル］−ピペラジン ２（Ｓ）−ｎ−ブチル−１−［（１−（４−シアノベンジル）イミダゾール−
    ５−イルメチル］−４−（１−ナフトイル）ピペラジン １−｛［１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］アセ
    チル｝−２（Ｓ）−ｎ−ブチル−４−（１−ナフトイル）ピペラジン １−（３−クロロフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジル）イミダゾリ
    ルメチル］−２−ピペラジノン １−フェニルー４−［１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５
    −イルエチル］−ピペラジン−２−オン １−（３−トリフルオロメチルフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジル
    ）−１Ｈ−イミダゾール−５−イルメチル］−ピペラジン２−オン １−（３−ブロモフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イ
    ミダゾール−５−イルメチル］−ピペラジン２−オン ５（Ｓ）−２−［２，２，２−トリフルオロエトキシ］エチル）−１−（３−
    トリフルオロメチルフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジル）−４−イミ
    ダゾリルメチル］−ピペラジン−２−オン １−（５，６，７，８−テトラヒドロナフチル）−４−［１−（４−シアノベ
    ンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イルメチル］−ピペラジン−２−オン １−（２−メチル−３−クロロフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジル
    ）−４−イミダゾリルメチル］−ピペラジン−２−オン ２（ＲＳ）−｛［１−（ナフト−２−イルメチル）−１Ｈ−イミダゾール−５
    −イル）アセチル｝アミノ−３−（ｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−Ｎ−（２
    −メチルベンジル）プロピオンアミド Ｎ−｛１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イルメチル｝
    −４（Ｒ）−ベンジロキシ−２（Ｓ）−｛Ｎ’−アセチル−Ｎ’−３−クロロベ
    ンジル｝アミノメチルピロリジン Ｎ−｛１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イルエチル｝
    −４（Ｒ）−ベンジロキシ−２（Ｓ）−｛Ｎ’−アセチル−Ｎ’−３−クロロベ
    ンジル｝アミノメチルピロリジン １−［１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イルアセチル
    ｝ピロリジン−２（Ｓ）−イルメチル］−（Ｎ−２−メチルベンジル）−グリシ
    ンＮ’−（３−クロロフェニルメチル）アミド １−［１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イルアセチル
    ｝ピロリジン−２（Ｓ）−イルメチル］−（Ｎ−２−メチルベンジル）−グリシ
    ンＮ’−メチル−Ｎ’−（３−クロロフェニルメチル）アミド （Ｓ）−２−［（１−（４−シアノベンジル）−５−イミダゾリルメチル）ア
    ミノ］−Ｎ−（ベンジロキシカルボニル）−Ｎ−（３−クロロベンジル）−４−
    （メタンスルホニル）ブタンアミン １−（３，５−ジクロロベンゼンスルホニル）−３（Ｓ）−［Ｎ−（１−（４
    −シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イルメチル）カルバモイル］ピ
    ペリジン Ｎ−｛［１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］メチ
    ル｝−４−（３−メチルフェニル）−４−ヒドロキシピペリジン Ｎ−｛［１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イル］メチ
    ル｝−４−（３−クロロフェニル）−４−ヒドロキシピペリジン ４−［１−（４−シアノベンジル）−５−イミダゾリルメチル］−１−（２，
    ３−ジメチルフェニル）−ピペラジン−２，３−ジオン １−（２−（３−トリフルオロメトキシフェニル）−ピリド−５−イルメチル
    ）−５−（４−シアノベンジル）イミダゾール ４−｛５−［１−（３−クロローフェニル）−２−オキソ−１，２−ジヒドロ
    −ピリジン−４−イルメチル］−イミダゾール−１−イルメチル｝−２−メトキ
    シ−ベンゾニトリル ３（Ｒ）−３−［１−（４−シアノベンジル）イミダゾール−５−イル−エチ
    ルアミノ］−５−フェニル−１−（２，２，２−トリフルオロエチル）−Ｈ−ベ
    ンゾ［ｅ］［１，４］ジアゼピン ３（Ｓ）−３−［１−（４−シアノベンジル）イミダゾール−５−イル−エチ
    ルアミノ］−５−フェニル−１−（２，２，２−トリフルオロエチル）−Ｈ−ベ
    ンゾ［ｅ］［１，４］ジアゼピン Ｎ−｛１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イルアセチル
    ）ピロリジン−２（Ｓ）−イルメチル］−Ｎ−（１−ナフチルメチル）グリシル
    −メチオニン Ｎ−｛１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イルアセチル
    ）ピロリジン−２（Ｓ）−イルメチル］−Ｎ−（１−ナフチルメチル）グリシル
    −メチオニンメチルエステル Ｎ−［１−（１Ｈ−イミダゾール−４−イルプロピオニル）ピロリジン−２（
    Ｓ）−イルメチル］−Ｎ−（２−メトキシベンジル）グリシル−メチオニン Ｎ−［１−（１Ｈ−イミダゾール−４−イルプロピオニル）ピロリジン−２（
    Ｓ）−イルメチル］−Ｎ−（２−メトキシベンジル）グリシル−メチオニンメチ
    ルエステル ２（Ｓ）−（４−アセトアミド−１−ブチル）−１−［２（Ｒ）−アミノ−３
    −メルカプトプロピル］−４−（１−ナフトイル）ピペラジン ２（ＲＳ）−｛［１−（ナフト−２−イルメチル）−１Ｈ−イミダゾール−５
    −イル）］アセチル｝アミノ−３−（ｔ−ブトキシカルボニル）アミノ−Ｎ−シ
    クロヘキシル−プロピオンアミド １−｛２（Ｒ，Ｓ）−｛［１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール
    −５−イル）］プロパノール｝−２（Ｓ）−ｎ−ブチル−４−（１−ナフトイル
    ）ピペラジン １−［１−（４−シアノベンジル）イミダゾール−５−イルメチル］−４−（
    ジフェニルメチル）ピペラジン １−（ジフェニルメチル）−３（Ｓ）−［Ｎ−（１−（４−シアノベンジル）
    −２−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−イルメチル）−Ｎ−（アセチル）アミ
    ノメチル］ピペリジン Ｎ−［１−（１Ｈ−イミダゾール−４−イルプロピオニル）ピロリジン−２（
    Ｓ）−イルメチル］−Ｎ−（２−クロロベンジル）グリシル−メチオニン Ｎ−［１−（１Ｈ−イミダゾール−４−イルプロピオニル）ピロリジン−２（
    Ｓ）−イルメチル］−Ｎ−（２−クロロベンジル）グリシル−メチオニンメチル
    エステル ３（Ｒ）−３−［１−（４−シアノベンジル）イミダゾール−５−イル−メチ
    ルアミノ］−５−フェニルー１−（２，２，２−トリフルオロエチル）−Ｈ−ベ
    ンゾ［ｅ］［１，４］ジアゼピン １−（３−トリフルオロメトキシフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジ
    ル）イミダゾリルメチル］−２−ピペラジノン １−（２，５−ジメチルフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジル）イミ
    ダゾリルメチル］−２−ピペラジノン １−（３−メチルフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジル）イミダゾリ
    ルメチル］−２−ピペラジノン １−（３−ヨードフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジル）イミダゾリ
    ルメチル］−２−ピペラジノン １−（３−クロロフェニル）−４−［１−（４−シアノ−３−メトキシベンジ
    ル）イミダゾリルメチル］−２−ピペラジノン １−（３−トリフルオロメトキシフェニル）−４−［１−（４−シアノ−３−
    メトキシベンジル）イミダゾリルメチル］−２−ピペラジノン ４−［（（１−（４−シアノベンジル）−５−イミダゾリル）メチル）アミノ
    ］ベンゾフェノン １−（１−｛［３−（４−シアノベンジル）−３Ｈ−イミダゾール−４−イル
    ］−アセチル｝−ピロリジン−２（Ｓ）−イルメチル）−３（Ｓ）−エチル−ピ
    ロリジン−２（Ｓ）−カルボン酸３−クロロ−ベンジルアミド。
  45. 【請求項４５】 薬学的有効量の化合物を、それを必要としている哺乳動物
    に投与することを含んでなるプレニルタンパクトランスフェラーゼを阻害する方
    法であって、前記化合物は ａ）細胞中でのＭＡＰキナーゼのＫ４Ｂ−Ｒａｓ依存性活性化に対して１２μ
    Ｍより低い阻害活性（ＩＣ５０） を特徴とするものである方法。
  46. 【請求項４６】 Ｒａｓタンパクの生物学的活性の阻害剤として生体内で効
    果的であるプレニルタンパクトランスフェラーゼ阻害剤を特定するためのアッセ
    イであって、 ａ）ｒａｓ遺伝子のための発現プラスミドおよびリポーター遺伝子の産物をコ
    ード化するリポーター構造物のための発現プラスミドを細胞に共形質移入する工
    程、 ｂ）試験化合物の存在下に細胞をインキュベートする工程、および ｃ）リポーター遺伝子の産物の存在についてアッセイ媒体または細胞の溶解産
    物を分析する工程 を含んでなるアッセイ。
  47. 【請求項４７】 リポーター遺伝子の産物が分泌されたアルカリホスファタ
    ーゼである請求項４６に記載のアッセイ。
  48. 【請求項４８】 細胞がＣ３３ａ細胞である請求項４６に記載のアッセイ。
  49. 【請求項４９】 分泌されたアルカリホスファターゼをコード化するリポー
    ター構造物のための発現プラスミドがｐＤＳＥ１０１プラスミドである請求項４
    ７に記載のアッセイ。
  50. 【請求項５０】 ＲａｓタンパクがＫ４Ｂ−Ｒａｓである請求項４６に記載
    のアッセイ。
  51. 【請求項５１】 プレニルタンパクトランスフェラーゼ阻害剤がファルネシ
    ルタンパクトランスフェラーゼおよびゲラニルゲラニルタンパクトランスフェラ
    ーゼＩ型の二重阻害剤である請求項５０に記載のアッセイ。
  52. 【請求項５２】 分泌されたアルカリホスファターゼをコード化するリポー
    ター構造物のための発現プラスミドがｐＤＳＥ１０１プラスミドである請求項５
    ０に記載のアッセイ。
  53. 【請求項５３】 癌細胞の成長の阻害剤として生体内で効果的であるプレニ
    ルタンパクトランスフェラーゼ阻害剤を特定するための方法であって、 ａ）ｒａｓ遺伝子がＫ−ｒａｓである請求項４６のアッセイにおいて試験化合
    物を評価する工程； ｂ）ｒａｓ遺伝子がＭｙｒ−Ｒａｓである請求項４６のアッセイにおいて試験
    化合物を評価する工程；および ｃ）請求項４６のアッセイにおけるＭＡＰキナーゼのＭｙｒ−Ｒａｓ依存性活
    性化に対する試験化合物の活性を、請求項４６のアッセイにおけるＭＡＰキナー
    ゼのＫ−Ｒａｓ依存性活性化に対する試験化合物の活性と比較する工程 を含んでなる方法。
  54. 【請求項５４】 Ｋ−ｒａｓ遺伝子がＫ４Ｂ−ｒａｓである請求項５３に記
    載の方法。
  55. 【請求項５５】 プレニルタンパクトランスフェラーゼ阻害剤がファルネシ
    ルタンパクトランスフェラーゼおよびゲラニルゲラニルタンパクトランスフェラ
    ーゼＩ型の二重阻害剤である請求項５４に記載の方法。
  56. 【請求項５６】 ａ）ｒａｓ遺伝子のための発現プラスミドおよびリポータ
    ー遺伝子の産物をコード化するリポーター構造物のための発現プラスミドを細胞
    に共形質移入する工程、 ｂ）試験化合物の存在下に細胞をインキュベートする工程、および ｃ）リポーター遺伝子の産物の存在についてアッセイ媒体または細胞の溶解産
    物を分析する工程 を含んでなるアッセイにおいて試験化合物を評価するさらなる工程ｄ）をさらに
    含んでなり、ｒａｓ遺伝子がＨ−ｒａｓである請求項５４に記載の方法。
  57. 【請求項５７】 リポーター遺伝子の産物が分泌されたアルカリホスファタ
    ーゼである請求項５６に記載の方法。
  58. 【請求項５８】 ａ）ｒａｓ遺伝子のための発現プラスミドおよびリポータ
    ー遺伝子の産物をコード化するリポーター構造物のための発現プラスミドを細胞
    に共形質移入する工程、 ｂ）試験化合物の存在下に細胞をインキュベートする工程、および ｃ）リポーター遺伝子の産物の存在についてアッセイ媒体または細胞の溶解産
    物を分析する工程 を含んでなるアッセイにおいて試験化合物を評価するさらなる工程ｄ）をさらに
    含んでなり、ｒａｓ遺伝子がＨ−ｒａｓ−ＣＶＬＬである請求項５４に記載の方
    法。
  59. 【請求項５９】 リポーター遺伝子の産物が分泌されたアルカリホスファタ
    ーゼである請求項５８に記載の方法。
  60. 【請求項６０】 ａ）ｒａｓ遺伝子のための発現プラスミドおよびリポータ
    ー遺伝子の産物をコード化するリポーター構造物のための発現プラスミドを細胞
    に共形質移入する工程、 ｂ）試験化合物の存在下に細胞をインキュベートする工程、および ｃ）リポーター遺伝子の産物の存在についてアッセイ媒体または細胞の溶解
    産物を分析する工程 を含んでなるアッセイにおいて試験化合物を評価するさらなる工程ｄ） をさらに含んでなり、ｒａｓ遺伝子がＨ−ｒａｓ−ＣＶＬＬである請求項５６に
    記載の方法。
  61. 【請求項６１】 リポーター遺伝子の産物が分泌されたアルカリホスファタ
    ーゼである請求項６０に記載の方法。
  62. 【請求項６２】 癌細胞の成長の阻害剤として生体内で効果的であるプレニ
    ルタンパクトランスフェラーゼ阻害剤を特定するための方法であって、 ａ）ｒａｓ遺伝子がＨ−Ｒａｓである請求項４６のアッセイにおいて試験化合
    物を評価する工程； ｂ）ｒａｓ遺伝子がＨ−ｒａｓ−ＣＶＬＬである請求項４６のアッセイにおい
    て試験化合物を評価する工程； ｃ）ｒａｓ遺伝子がＭｙｒ−ｒａｓである請求項４６のアッセイにおいて試験
    化合物を評価する工程；および ｄ）請求項４６のアッセイにおけるＭＡＰキナーゼのＭｙｒ−Ｒａｓ依存性活
    性化に対する試験化合物の活性を、請求項４６のアッセイにおけるＭＡＰキナー
    ゼのＨ−Ｒａｓ依存性活性化および請求項４６のアッセイにおけるＭＡＰキナー
    ゼのＨ−ｒａｓ−ＣＶＬＬ依存性活性化に対する試験化合物の活性と比較する工
    程 を含んでなる方法。
  63. 【請求項６３】 リポーター遺伝子の産物が分泌されたアルカリホスファタ
    ーゼである請求項６２に記載の方法。
  64. 【請求項６４】 プレニルタンパクトランスフェラーゼ阻害剤がファルネシ
    ルタンパクトランスフェラーゼおよびゲラニルゲラニルタンパクトランスフェラ
    ーゼＩ型の二重阻害剤である請求項６２に記載の方法。
  65. 【請求項６５】 癌細胞の成長の阻害剤として生体内で効果的であるプレニ
    ルタンパクトランスフェラーゼ阻害剤を特定するための方法であって、 ａ）ｒａｓ遺伝子がＮ−Ｒａｓである請求項４６のアッセイにおいて試験化合
    物を評価する工程； ｂ）ｒａｓ遺伝子がＭｙｒ−ｒａｓである請求項４６のアッセイにおいて試験
    化合物を評価する工程；および ｃ）請求項４６のアッセイにおけるＭＡＰキナーゼのＭｙｒ−Ｒａｓ依存性活
    性化に対する試験化合物の活性を、請求項４６のアッセイにおけるＭＡＰキナー
    ゼのＮ−Ｒａｓ依存性活性化に対する試験化合物の活性と比較する工程 を含んでなる方法。
  66. 【請求項６６】 リポーター遺伝子の産物が分泌されたアルカリホスファタ
    ーゼである請求項６５に記載の方法。
  67. 【請求項６７】 癌細胞の成長の阻害剤として生体内で効果的であるプレニ
    ルタンパクトランスフェラーゼ阻害剤を特定するための方法であって、 ａ）ｒａｓ遺伝子がＨ−Ｒａｓである請求項４６のアッセイにおいて試験化合
    物を評価する工程； ｂ）ｒａｓ遺伝子がＨ−ｒａｓ−ＣＶＬＬである請求項４６のアッセイにおい
    て試験化合物を評価する工程； ｃ）ｒａｓ遺伝子がＭｙｒ−ｒａｓである請求項４６のアッセイにおいて試験
    化合物を評価する工程；および ｄ）請求項４６のアッセイにおけるＭＡＰキナーゼのＨ−ｒａｓ−ＣＶＬＬ依
    存性活性化に対する試験化合物の活性を、請求項４６のアッセイにおけるＭＡＰ
    キナーゼのＨ−Ｒａｓ依存性活性化に対する試験化合物の活性と比較する工程； ｅ）請求項４６のアッセイにおけるＭＡＰキナーゼのＭｙｒ−Ｒａｓ依存性活
    性化に対する試験化合物の活性を、請求項４６のアッセイにおけるＭＡＰキナー
    ゼのＨ−ｒａｓ−ＣＶＬＬ依存性活性化に対する試験化合物の活性と比較する工
    程 を含んでなる方法。
  68. 【請求項６８】 癌細胞の成長の阻害剤として生体内で効果的であるプレニ
    ルタンパクトランスフェラーゼ阻害剤を特定するための方法であって、 ａ）ｒａｓ遺伝子がＫ−Ｒａｓである請求項４６のアッセイにおいて試験化合
    物を評価する工程； ｂ）下記工程ａ）〜ｃ）を含んでなるアッセイにおいて試験化合物を評価する
    工程： ａ）ｐＣＭＶ−ＳＥＡＰプラスミドを細胞に形質移入する工程、 ｂ）試験化合物の存在下に細胞をインキュベートする工程、および ｃ）リポーター遺伝子の産物の存在についてアッセイ媒体または細胞の溶解
    産物を分析する工程； ｃ）ｐＣＭＶ−ＳＥＡＰプラスミドを形質移入した細胞におけるＳＥＡＰタン
    パクの発現に対する試験化合物を活性を、請求項４６のアッセイにおけるＭＡＰ
    キナーゼのＫ−ｒａｓ依存性活性化に対する試験化合物の活性と比較する工程 を含んでなる方法。
  69. 【請求項６９】 癌細胞の成長の阻害剤として生体内で効果的であるプレニ
    ルタンパクトランスフェラーゼ阻害剤を特定するための方法であって、 ａ）ｒａｓ遺伝子がＨ−Ｒａｓである請求項４６のアッセイにおいて試験化合
    物を評価する工程； ｂ）ｒａｓ遺伝子がＨ−ｒａｓ−ＣＶＬＬである請求項４６のアッセイにおい
    て試験化合物を評価する工程； ｃ）下記工程ａ）〜ｃ）を含んでなるアッセイにおいて試験化合物を評価する
    工程： ａ）ｐＣＭＶ−ＳＥＡＰプラスミドを細胞に形質移入する工程、 ｂ）試験化合物の存在下に細胞をインキュベートする工程、および ｃ）リポーター遺伝子の産物の存在についてアッセイ媒体または細胞の溶解
    産物を分析する工程； ｄ）請求項４６のアッセイにおけるＭＡＰキナーゼのＨ−ｒａｓ−ＣＶＬＬ依
    存性活性化に対する試験化合物の活性を、請求項４６のアッセイにおけるＭＡＰ
    キナーゼのＨ−ｒａｓ依存性活性化に対する試験化合物の活性と比較する工程； ｅ）ｐＣＭＶ−ＳＥＡＰプラスミドを形質移入した細胞におけるＳＥＡＰタン
    パクの発現に対する試験化合物を活性を、請求項４６のアッセイにおけるＭＡＰ
    キナーゼのＨ−ｒａｓ−ＣＶＬＬ依存性活性化に対する試験化合物の活性と比較
    する工程 を含んでなる方法。
  70. 【請求項７０】 プレニルタンパクトランスフェラーゼ阻害剤がファルネシ
    ルタンパクトランスフェラーゼおよびゲラニルゲラニルタンパクトランスフェラ
    ーゼＩ型の二重阻害剤である請求項６５に記載の方法。
  71. 【請求項７１】 癌細胞の成長の阻害剤として生体内で効果的であるゲラニ
    ルゲラニルタンパクトランスフェラーゼＩ型の選択的阻害剤とファルネシルタン
    パクトランスフェラーゼの選択的阻害剤との組み合せ物を特定するための方法で
    あって、 ａ）ｒａｓ遺伝子がＫ４Ｂ−ｒａｓおよびＮ−ｒａｓから選択される請求項４
    ６のアッセイにおいてゲラニルゲラニルタンパクトランスフェラーゼＩ型の選択
    的阻害剤とファルネシルタンパクトランスフェラーゼの選択的阻害剤との試験組
    み合せ物を評価する工程； ｂ）ｒａｓ遺伝子がＭｙｒ−ｒａｓである請求項４６のアッセイにおいてゲラ
    ニルゲラニルタンパクトランスフェラーゼＩ型の選択的阻害剤とファルネシルタ
    ンパクトランスフェラーゼの選択的阻害剤との試験組み合せ物を評価する工程；
    および ｃ）請求項４６のアッセイにおけるＭＡＰキナーゼのＭｙｒ−Ｒａｓ依存性活
    性化に対するゲラニルゲラニルタンパクトランスフェラーゼＩ型の選択的阻害剤
    とファルネシルタンパクトランスフェラーゼの選択的阻害剤との試験組み合せ物
    の活性を、請求項４６のアッセイにおける工程ａ）の遺伝子によりコード化され
    るタンパクによるＭＡＰキナーゼの依存性活性化に対するゲラニルゲラニルタン
    パクトランスフェラーゼＩ型の選択的阻害剤とファルネシルタンパクトランスフ
    ェラーゼの選択的阻害剤との試験組み合せ物の活性と比較する工程 を含んでなる方法。
  72. 【請求項７２】 リポーター遺伝子の産物が分泌されたアルカリホスファタ
    ーゼである請求項７１に記載の方法。
  73. 【請求項７３】 ｒａｓ遺伝子がＫ４Ｂ−ｒａｓである請求項７１に記載の
    方法。
  74. 【請求項７４】 ｒａｓ遺伝子がＮ−ｒａｓである請求項７１に記載の方法
    。
  75. 【請求項７５】 ｄ）ｒａｓ遺伝子がＨ−ｒａｓである請求項４６のアッセ
    イにおいてゲラニルゲラニルタンパクトランスフェラーゼＩ型の選択的阻害剤と
    ファルネシルタンパクトランスフェラーゼの選択的阻害剤との試験組み合せ物を
    評価するさらなる工程 をさらに含んでなる請求項７１に記載の方法。
  76. 【請求項７６】 ｄ）ｒａｓ遺伝子がＨ−ｒａｓ−ＣＶＬＬである請求項４
    ６のアッセイにおいてゲラニルゲラニルタンパクトランスフェラーゼＩ型の選択
    的阻害剤とファルネシルタンパクトランスフェラーゼの選択的阻害剤との試験組
    み合せ物を評価するさらなる工程 をさらに含んでなる請求項７１に記載の方法。
  77. 【請求項７７】 ｄ）ｒａｓ遺伝子がＨ−ｒａｓである請求項４６のアッセ
    イにおいてゲラニルゲラニルタンパクトランスフェラーゼＩ型の選択的阻害剤と
    ファルネシルタンパクトランスフェラーゼの選択的阻害剤との試験組み合せ物を
    評価するさらなる工程；および ｅ）ｒａｓ遺伝子がＨ−ｒａｓ−ＣＶＬＬである請求項４６のアッセイにおいて
    ゲラニルゲラニルタンパクトランスフェラーゼＩ型の選択的阻害剤とファルネシ
    ルタンパクトランスフェラーゼの選択的阻害剤との試験組み合せ物を評価するさ
    らなる工程 をさらに含んでなる請求項７１に記載の方法。
  78. 【請求項７８】 ａ）ｒａｓ遺伝子がＫ−Ｒａｓである請求項４６のアッセ
    イにおいて試験組み合せ物を評価する工程； ｂ）下記工程ａ）〜ｃ）を含んでなるアッセイにおいて試験組み合せ物を評価
    する工程： ａ）ｐＣＭＶ−ＳＥＡＰプラスミドを細胞に形質移入する工程、 ｂ）試験組み合せ物の存在下に細胞をインキュベートする工程、および ｃ）リポーター遺伝子の産物の存在についてアッセイ媒体または細胞の溶解
    産物を分析する工程； ｃ）ｐＣＭＶ−ＳＥＡＰプラスミドを形質移入した細胞におけるＳＥＡＰタン
    パクの発現に対する試験組み合せ物の活性を、請求項４６のアッセイにおけるＭ
    ＡＰキナーゼのＫ−ｒａｓ依存性活性化に対する試験組み合せ物の活性と比較す
    る工程 により請求項４６のアッセイにおいてゲラニルゲラニルタンパクトランスフェラ
    ーゼＩ型の選択的阻害剤とファルネシルタンパクトランスフェラーゼの選択的阻
    害剤との試験組み合せ物を評価することを含んでなる、癌細胞の成長の阻害剤と
    して生体内で効果的であるゲラニルゲラニルタンパクトランスフェラーゼＩ型の
    選択的阻害剤とファルネシルタンパクトランスフェラーゼの選択的阻害剤との組
    み合せ物を特定するための方法。
  79. 【請求項７９】 ａ）ｒａｓ遺伝子がＨ−Ｒａｓである請求項４６のアッセ
    イにおいて試験組み合わせ物を評価する工程； ｂ）ｒａｓ遺伝子がＨ−ｒａｓ−ＣＶＬＬである請求項４６のアッセイにおい
    て試験組み合わせ物を評価する工程； ｃ）下記工程ａ）〜ｃ）を含んでなるアッセイにおいて試験組み合せ物を評価
    する工程： ａ）ｐＣＭＶ−ＳＥＡＰプラスミドを細胞に形質移入する工程、 ｂ）試験組み合せ物の存在下に細胞をインキュベートする工程、および ｃ）リポーター遺伝子の産物の存在についてアッセイ媒体または細胞の溶解
    産物を分析する工程； ｄ）請求項４６のアッセイにおけるＭＡＰキナーゼのＨ−ｒａｓ−ＣＶＬＬ依
    存性活性化に対する試験組み合わせ物の活性を、請求項４６のアッセイにおける
    ＭＡＰキナーゼのＨ−ｒａｓ依存性活性化に対する試験組み合わせ物の活性と比
    較する工程；および ｅ）ｐＣＭＶ−ＳＥＡＰプラスミドを形質移入した細胞におけるＳＥＡＰタン
    パクの発現に対する試験組み合わせ物の活性を、請求項４６のアッセイにおける
    ＭＡＰキナーゼのＨ−Ｒａｓ−ＣＶＬＬ依存性活性化に対する試験組み合わせ物
    の活性と比較する工程 により請求項４６のアッセイにおいてゲラニルゲラニルタンパクトランスフェラ
    ーゼＩ型の選択的阻害剤とファルネシルタンパクトランスフェラーゼの選択的阻
    害剤との試験組み合せ物を評価することを含んでなる、癌細胞の成長の阻害剤と
    して生体内で効果的であるゲラニルゲラニルタンパクトランスフェラーゼＩ型の
    選択的阻害剤とファルネシルタンパクトランスフェラーゼの選択的阻害剤との組
    み合せ物を特定するための方法。
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