JP2001505999A - Tshレセプター自己抗体を検出するためのレセプター結合アッセイ - Google Patents
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Abstract
Description
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1.反応混合物中の試料を、同時に又は順次、 (i)可溶化された天然の人又は動物又は組替えTSHレセプター調製物の形 のTSHレセプター、 (ii)試料中にあることが予測されるTSHレセプター自己抗体の少なくとも 一部に対するプライマリーコンペティター、及び (iii)TSHレセプターとTSHレセプターに結合されている反応混合物の成 分との複合体を液相から分離するための試薬、 と反応させ、そして その生物試料中で測定されるべきTSHレセプター自己抗体の存在及び/又は 量が、該液相から分離された該TSHレセプター複合体中のコンペティターの量 に基づいて、又は該液相中の結合していない該プライマリーコンペティターの残 りの量に基づいて決定され、但し、上記目的の為に該コンペティターは標識化さ れた形態で使用されるか又は固液分離後に標識化されるものである、生物試料中 のTSHレセプター自己抗体の測定の為の競争的レセプター結合アッセイ方法に 於て、 該反応が更に、該TSHレセプターの部分的なペプチド配列に対し特異的であ る少なくとも一つのモノクローナル又はポリクローナル抗体の存在下で実施され ること、そしてこの特異的な抗体がTSHレセプターとプライマリーコンペティ ターの複合体を固定するための固定剤として及び/又は試料中で存在することが 予測されるTSHレセプター自己抗体の更に別の部分に対するセカンダリーコン ペティターとして使用されること、及び、上記のプライマリー及びセカンダリー コンペティターが、標識されているか又は選択的に標識されることができるもの であること、を特徴とする競争的レセプター結合アッセイ方法。 2.該少なくとも一つの特異的な抗体が、固相に結合した形で使用され、そし てプライマリーコンペティターが標識されたTSH又は標識された別のTSHレ セプター抗体であることによって特徴づけられ、該固相に対し結合されている特 異的な抗体が、プライマリーコンペティターの結合によって影響を本質的に受け ないでTSHレセプターに結合することを特徴とする請求項1に記載のレセプタ ー結合アッセイ法。 3.同時に、該固相に結合された抗体が、プライマリーコンペティターのTS Hレセプターへの結合を妨げない、試料からのTSHレセプター自己抗体と、プ ライマリーコンペティターによって認識されないエピトープについて競争するセ カンダリーコンペティターであることを特徴とする請求項2に記載のレセプター 結合アッセイ方法。 4.該標識された更に別のTSHレセプター抗体が、TSHレセプターのエピ トープについてTSHと競争することを特徴とする請求項2に記載のレセプター 結合アッセイ方法。 5.該固相に結合した抗体が、グレーブス病に特徴的に存在するが、TSHと は競争しない試料からのTSHレセプター自己抗体と、セカンダリーコンペティ ターとして競争する、請求項3に記載のレセプター結合アッセイ方法。 6.該セカンダリーコンペティターと競争するTSHレセプター自己抗体が、 刺激性の自己抗体(TSI)に属することを特徴とする請求項5に記載のレセプ ター結合アッセイ方法。 7.該少なくとも一つの抗体が、液相中でセカンダリーコンペティターとして 標識された形態で使用され、そして該固相に結合したTSHがTSHレセプター とTSHレセプターに結合した反応混合物の成分の複合体を分離するための分離 剤としてそしてまたプライマリーコンペティターとして使用される請求項1に記 載のレセプター結合アッセイ方法。 8.該少なくとも一つの更に別の抗体が、組替え部分TSHレセプターを用い て、特にTSHレセプターの膜にアンカーをした領域の細胞外ループ又は細胞外 ドメインを用いて、適当な動物に対し、それ自体は知られている免疫化を行うこ と、そして免疫化に使用した該部分TSHレセプターの固定部分ペプチドの使用 によるアフィニティークロマトグラフィにより、生じる抗体を分画することによ って造られたものであることを特徴とする請求項1〜7のいずれか1に記載のレ セプター結合アッセイ方法。 9.該少なくとも一つの更に別の抗体が、組替え部分TSHレセプター、特に TSHレセプターの組替え細胞外部分、又はそのより短い部分ペプチドを用いた 、 適当な動物に対するそれ自体知られている免疫化、骨髄球による抗体生産スプレ ノサイトのそれ自体知られている融合、そして個々の抗体生産ハイブリッド細胞 のそれ自体は知られている選択、そしてその培養によって造られたモノクローナ ル抗体であることを特徴とする請求項1〜7のいずれか1に記載のレセプター結 合アッセイ方法。 10.該少なくとも一つの更に別の抗体が、完全なTSHレセプターのアミノ 酸配列のアミノ酸20〜39、32〜54、287〜301、361〜381又 は739〜758を有するペプチドから選択される部分TSHレセプターペプチ ドに対し形成された請求項8又は9いずれか1に記載のレセプター結合アッセイ 方法。 11.粒子、試験管又はプラスチック又はガラスのミクロタイタープレートの 形態、又は磁性重合体粒子、ポリマーゲル、又はフィルターの形態の基体が固相 として使用され、該少なくとも一つの抗体又はTSHがそのような基体に対し直 接又は間接的に結合した形態で使用される、請求項1〜10のいずれか1に記載 のレセプター結合アッセイ方法。 12.プライマリー又はセカンダリーコンペティターを標識するために、放射 性同位体、酵素及び酵素基質又は化学発光又は蛍光標識系の成分から選択され、 それ自体は知られているトレーサーが使用されることを特徴とする請求項1〜1 1のいずれか1に記載のレセプター結合アッセイ方法。 13.特定の結合系の成分に結合しているプライマリー又はセカンダリーコン ペティターが使用され、そして形成されるTSHレセプター複合体が、検出可能 なトレーサー又は固相に結合している該特定結合系の第2の成分を有している反 応体との反応によって、標識又は固定されることを特徴とする請求項1〜11の いずれか1に記載のレセプター結合アッセイ方法。 14.測定されるべきTSHレセプター自己抗体が、人の血清中に存在するこ とがグレーブス病の特徴とされるレセプター刺激性自己抗体であることを特徴と する、請求項1〜13のいずれか1に記載のレセプター結合アッセイ方法。 15. 下記と別の試薬キットの慣用成分に加えて、 (i)可溶化されたTSHレセプター調製物、 (ii)標識されたTSH又は標識された特異的TSHレセプター抗体、及び (iii)特異的TSHレセプター抗体又はTSHが結合している固相基体、 を含有していることを特徴としている請求項1〜14のいずれか1に記載の競争 的レセプター結合アッセイ法を実施するための試薬キット。
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